TARIFNAME KIKIRDAK DOKUNUN ONARILMASINA YÖNELIK BILESIM, BILESIMIN ÜRETILMESINE VE BUNUN KULLANIMINA YÖNELIK YÖNTEM Teknik Alan Mevcut bulus kiElElak doku onarllüias. yönelik bir bilesim, bilesimin hazlEIlanmasI yönelik bir yöntem, ve bilesimin kullanllBias- yönelik bir yöntem, ve daha özellikle, kllZlRIak defekti bölgelerine nakledilebilen, bir enjekte edilebilen formda hazlEIlanan bir biyomalzeme olarak kolajene dayanan bir bilesim ile ilgilidir, ve böylelikle, bilesim bir slBElga ignesi araclIlgllýla doku onarn tesis edilmesini mümkün kllÜiak için bir cerrahi insizyon olmas- uygulama alanlarIEla dogrudan sokulabilmektedir, dolaylgîda etkili klElElak doku yenilenmesini endüklemektedir, ve böylelikle bir ürünün kalitesinin ve güvenilirliginin dikkate deger biçimde iyilestirilecegi, dolaylîlQa bunun kullanlîlglîblarak tüketicilerin çesitli isteklerini (ihtiyaçlarlm giderebilecegi ve böylelikle hastalarda iyi bir izlenim bßkacaglîlsekilde, insanlar haricinde hayvanlarda ameliyata baglEstresi azaltlElken, göreli olarak kolay ve hlZEklElEak onarIiEl/e yenilenmesini endüklemektedir. Önceki Teknik Iyi bilindigi üzere, klEIEak hasarlEla, bir düsme, bir dogrudan vurma, veya bir dönme kuvveti, ve arterit, osteonekroz, iltihaplEbrterit, veya osteokondrit dissekans gibi hastallglEheden olmaktadE Eklem kllZIEiaglÇlhiçbir nörovasküler yayllBianI olmad[g]lîrllokudur, diger dokulara klýasla kendi kendini iyilestirme kapasitesi önemli derecede düsüktür, ve lezyonun boyutuna ve konumuna baglßlarak çesitli cerrahi islemlerden kaynakllîiiarkllîtkiler sergilemektedir. Eklem kiElEiagÇl bir pürüzsüz, aslülîlderecede kaygan ve parlak beyaz malzemedir, ve sürtünmenin ve ylîiranma direncinin en aza indirilmesiyle mafsal hareketi sßasia korunmaktadlEl Bir kez hasar gördügünde, eklem kllZlÜlagII yenilenmedigi bilinmektedir. KlKlîillagI vücuttaki bir doku olarak hasarÇl günlük hayatta zorluklara neden olarak beraberinde siddetli agrEgetirmektedir, ve kronik olmaslZblurumunda hasar gören kIEEIak dejeneratif arterite ilerlemektedir. Dolaylîlsîla, hasarlEklEIEak dokunun yenilenmesine yönelik tedavinin, dejeneratif arterite Ilerlemesinin Önlenmesi Için kllZlîtilagI hasar aldlglüanda gerçeklestirilmesi gerekmektedir. HasarlEklKlEak defekti bölgesinin tedavisine yönelik olarak, ilaçlarI enjeksiyonu, fiziksel terapi, steroidlerin veya hiyalüronik asitin, veya benzerlerinin eklem içi enjeksiyonu, yalnlîta semptomlarüve agrlýühafifleten ancak hastallgiI tedavisinde hiçbir etkisi olmayan bir ameliyatsütedavi yöntemi olarak gerçeklestirilmektedir. Alternatif olarak, moel stimülasyonu ve yan osteokondral nakil bir ameliyatIEtedavi yöntemi olarak gerçeklestirilmektedir. Birincil kemik stimülasyonunun, kiEIîiiiagI yumusamak Üzere hasar aldigÜ/eya kemigin aç[gta çiEtigiD bir alan üzerinde gerçeklestirilmesinin ardIan, hasarlEkiiZlEiak onarilBwaktadlEl dolayElsîIa eklem s-I ayrlStEIIBiasIan ve eklem s-I kapasitesinin düsürülmesinden dolayü kemikten eklem s_ akan kan önlenmektedir ve agrljiahatlatllîhaktadß Bununla birlikte, kemik stimülasyonunun etkisi yetersizdir, ve hiyalüronik asit agriýlgeçici olarak azaltmaktadlEl ancak uygun yeni klKIEak dokular içerisinde endüksiyona yol açmamaktadlü Dahasi] osteokondral nakil ameliyat gerektirmektedir, ve maliyet açlîlEUan daha zor ve aglEl olmaktadE Son ylmarda, hasar görmüs eklem kllZlElagII tedavi edilmesi amacEla, bir hastanI klKIEak dokusunun ve buradan sonrasIa tekrar nakledilecek kültür klKlElak hücrelerinin izole edilmek üzere toplanacagEl sekilde, otolog kondrosit implantasyonu gerçeklestirilmistir. Bu prosedürün gerçeklestirilmesi uzun bir süre, iki kez operasyon, ve doku toplanmasEgerektirmektedir, ve dolaylîlýla hastalara ve sagliEl hizmetleri uzmanlarlEla getirdigi maliyet yükünden kolaylikla erisilebilir olmamaktadiîl Dolaylglýla, kolajene dayanan bir karisim bilesimi olan bir biyomalzemenin nakline yönelik yeni gelistirilen bir yöntem kllZlEak defekti bölgesi Için basit bir prosedür olarak gerekli olmaktadE Bu yöntem, erken safhada kMak defekti bölgesinin tedavisinde kullanlgllîl olmaktadE kondrosit nakli ve sonrasIa yapay mafsal ameliyatElgibi ciddi ameliyatlara gereksinim duyan hastalar. say-müsürebilmektedir. Son ylmarda, kiElîcliak defekti bölgesine uygulanan biyomalzemeler bakliüban birçok girisimde bulunulmustur. Insan vücudunun yaplîlîhücreler ve biyolojik olarak üretilen polimerlerden olusmaktadIE Insan vücudunda bulunan proteinler temsili malzemelerdir. Bunlar. dogal malzemeler olarak kullanilîhasEl durumunda, malzemeler, dogal bir duruma benzer bir biçimde uygulanabilmektedir, ve insan dokularII yenilenmesi beklenebîlmektedir. Dogal dokular, yapay malzemelerin saglayamadigiübiyolojik fonksiyonlarüsaglayabilen medikal biyolojik dokular olarak kullanilâbilmektedir, böylece dogal dokular insan vücudu içerisine, çevreleyen dokular arasIa bir biyouyumlu çevre saglamak üzere, ve dogal dokular gibi biyolojik dokular olarak islev görmesi için sokulmaktadlB Özellikle, kolajen yaplîlal proteinlerin bir bilesenidir ve dermis, Iif/ligament, kan damarÇlve kllZiRlak gibi yumusak dokulardan ve insan vücudunun sert dokularIan olusan bir memelinin tüm proteinlerinin 1/3'ünü belirlemektedir. Kolajen güncel olarak, bir stiptik, bir yara pansumanüve klEiEüZiiKl iyilestirme gibi çesitli medikal amaçlara yönelik olarak kullanllBiaktadlB Medikal olarak uzun bir süredir kullanllân kolajen ürünleri simdiye dek güvenlik problemi yaratmaks- kullanüBilStE Kolajen, düsük antijenlik, yüksek biyouyumluluk, biyosogurulabilirlik, hücrelere yaplgina, hücre büyümesi, hücre farklllâsmasüendüksiyonu, kan plEtllâsmasÇibir stiptik etki, ve diger polimerlerle biyouyumluluk gibi avantajlara sahiptir. Buna ek olarak, kolajene dayanan bir malzeme olarak, içinde kolajenin, hiyalüronik asitin, ve bir fibrin yaplSt-I karlSt-[gilîbir bilesim klElEdlagI onarIiEi/e yenilenmesinde dikkate deger etkiler sergileyebilmektedir. Bir biyomalzeme olarak hiyalüronik asit, biyopolimerin bir türü olan yüksek viskoziteli polisakkarid malzemesidir, ve horoz ibiklerinde, eklem s-a ve benzerlerinde bulunmustur. Hiyalüronik asit güncel olarak, oftalmoloji ameliyatlarlEla yönelik bir destekleyici ve yüksek yaglaylEDkuvvetine bagllîlolarak arterit deformansII bir tedavi ajanEioIarak kullanliîhaktadlü Güncel olarak piyasada bulunabilen 10 mg/mL oranlEtla bir hiyalüronik asit konsantrasyonuna sahip bir ürün, gonartroz ve donmus omuz hastal[g]II neden oldugu agrMIlortadan kaldlEiin bir mafsal fonksiyonu iyilestirme ajanllü ve geçici olarak agrgü azaltmaktad Eanca siddetli enflamasyon durumunda problem yaratmaktadE Yukarlâbki problemleri çözmek amaciyla, birtakIi önceki teknik dokümanlarlîiosyalanmlglve or Lesions in Articular Cartilage Using Synovial-Derived Tissue or Cells") ile yayIanmlstlÜ 0030837, "Method for Cartilage Regeneration Using Mesenchymal Stem Cells and Ultrasound Stimulation") ile kaydedilmistir. W002/36147A1 numarallîpatent dokümanüaldehit gruplara sahip bir degistirilmis ekzojen polisakkarid olusturmak için bir ekzojen polisakkaridin oksitlenmesine yönelik adnlarEilçeren doku onarIilElEdesteklemek üzere bir matrisin hazlEIlanmasl, ve söz konusu degistirilmis ekzojen polisakkarid ile minerallestirilmis kolajenin, bu sayede söz konusu aldehit gruplarII söz konusu matrisi olusturmasüçin minerallestirilmis kolajen ile çapraz bag olusturmak için kovalent olarak reaksiyona girecegi kosullar altlEtla reaksiyona sokulmasEla yönelik bir yöntem açlEIamaktadIE Bununla birlikte, yukarldb bahsedilen önceki teknige ait yöntemler asag-ki kusurlara sahiptir. Yani, önceki teknik, yeni kiElîrllak yenilenmesine yönelik biyouyumlu kolajen ile karlgtülân bir bilesimin saglanamadigllîctiddi bir soruna sahiptir. DahasÇlönceki teknik, bir karlglüli bilesiminin bir enjekte edilebilen biçimde uygulanmamasÇl böylelikle hasarlElkElZlEak dokusu aIanIarII uygun olarak ve etkili bir sekilde stabilize edilememesi problemine sahip olan ve dolaylglîila kmak yenilenmesinin endüksiyonunun kolaylastlîllâmamasian dolayßlverissiz bir duruma yol neden olmaktadlEl Bulusun AyrItmllçllilamasEl Teknik Problem Mevcut bulus, önceki teknikteki yukari bahsedilen problemlerin çözülmesine yönelik olarak yapllßîlgtü ve mevcut bulus, klEIRIak doku onarIiI yönelik bir bilesim, bilesimin hazlHianmaleb yönelik bir yöntem, ve bilesimin kullanHBialeb yönelik bir yöntem saglamaktadlB Buna uygun olarak, mevcut bulusun bir birinci yönü, kMak doku onarIilEb yönelik bir bilesim saglamaktE bilesim bir seyreltilmis 5 ila 60 mg/mL su veya bir fizyolojik fosfat tampon çözeltisi konsantrasyonuna sahip kolajen ve bir seyreltilmis 5 ila 20 mg/mL su veya bir fizyolojik fosfat tampon çözeltisi konsantrasyonuna sahip hiyalüronik asitin bir iki yönlü slElEga veya bir karlStEElîlkullanllârak karlgtiîllîhasûia hazlîiianmaktadm Yukari açliZlanan teknik özellik araciIJgilýla, mevcut bulusun bir Ikinci yönü, kolajene dayanan bir bilesimin bir biyomalzeme olarak, doku onarHIEl kolaylastlEinasEliçin kIJZJEIak defekti bölgelerinin içine nakledilebilecegi bir enjekte edilebilen formda hazlHlanmasDiialinde, klEEak doku yenilenmesinin etkili bir sekilde endüklenebilmesi, böylelikle, insanlar hariç hayvanlar üzerindeki ameliyata bagllîstres azaltliEken göreli olarak kolay ve hlîIElkliZlRlak onarIiII ve yenilenmesinin endüklenmesidir. Ilaveten, mevcut bulusun bir üçüncü yönü, yeni kiEIEak yenilenmesine yönelik biyouyumlu kolajene sahip bir karlglüli bilesimi gelistirmektedir. Özellikle, mevcut bulusun bir dördüncü yönü, karisim bilesiminin bir enjekte edilebilen formda uygulanmasü böylelikle uygun ve etkili olarak ameliyat yapliîhaks- hasarlEklElRlak doku alanlarII stabilize edilmesidir. Ilaveten, mevcut bulusun bir besinci yönü, kilZIEIak defektine baglügrII azaltiIBiasIiEI Ilaveten, mevcut bulusun bir altlülcü'önü, kiKlElak yenilenmesinin endüksiyonunun kolaylastiElliBwasIE Ilaveten, mevcut bulusun bir yedinci yönü, ürünün kalitesinin ve güvenilirliginin dikkate deger ölçüde iyilestirilmesi, böylelikle bunun kullanlEJBrEl olan tüketicilerin çesitli isteklerini (ihtiyaçlarlElDJgiderebilmesi ve dolaylîlýla hastalarda iyi bir izlenim bßkmasllrîl Teknik Çözüm Mevcut bulusun bir yönüne uygun olarak, kilZlEiak doku onarIi- yönelik bir bilesim saglanmaktadlü bilesim bir seyreltilmis 5 ila 60 mg/mL su veya bir fizyolojik fosfat tampon çözeltisi konsantrasyonuna sahip kolajen ve bir seyreltilmis 5 ila 20 mg/mL su veya bir fizyolojik fosfat tampon çözeltisi konsantrasyonuna sahip hiyalüronik asitin bir iki yönlü siîllüga veya bir karlStlEEElkullanHârak karlStlElllEwasüla hazlEIlanmaktadlEl Mevcut bulusun bir diger yönüne uygun olarak, klKIEiak doku onarIiI yönelik bir yöntem saglanmaktadlîi yöntem asaglkileri içermektedir: bir seyreltilmis 5 ila 60 mg/mL su veya bir fizyolojik fosfat tampon çözeltisi konsantrasyonuna sahip kolajenin hazlîlianmaslîi; bir seyreltilmis 5 ila 20 mg/mL su veya bir fizyolojik fosfat tampon çözeltisi konsantrasyonuna sahip hiyalüronik asitin hazlîllanmaslîl bir iki yönlü slEEga veya bir karlgtlElEIZlkullanUârak kolajen ve hiyalüronik asitin karlgtiîiilfnasüve bir santrifüj kullanllârak kiiZlElak doku onarIiiEb yönelik karighîii bilesiminin havalellElallEmasE] Talep edilen bilesim klEIEak doku onarl- yönelik bir yöntemde kullanllBiasEiçin uygun olmaktadß yöntem asaglahkileri içermektedir: bir altl[lZl üzerinde bir domuz bacagII sabitlenmesi, bir cerrahi alet kullanilarak eklem kiKIEagII hasara ugratllüiasü'e sonrasIda bir cerrahi matkap kullanilârak 2~4cm2 oranIa defekt bölgelerinin endüklenmesi; kolajen ile doldurulan bir slElEga kablEb bir slEIEga ignesinin baglanmasElve bir dikis ipligi ile kesim alanII dikilmesi, ve domuz dizinin glenoid kavitesinin (eklem slîlîEile dolu bir bosluk) dogrudan slîlügiada bulunan 5~60 mg/mL'IIk bir konsantrasyona sahip kolajenin, sIEIEgada bulunan 5~20 mg/mL'lik bir konsantrasyona sahip hiyalüronik asitin ve içinde kolajen ve hiyalüronik asitin karlSt-IgiEkiEIEak doku onarIiI yönelik bir bilesimin enjekte edilmesi. Avantajl [Etkiler Yukari ortaya konuldugu üzere, mevcut bulus kiEIEllak doku onar" yönelik bir bilesim saglamaktadß bilesim bir seyreltilmis 5 ila 60 mg/mL su veya bir fizyolojik fosfat tampon çözeltisi konsantrasyonuna sahip kolajen ve bir seyreltilmis 5 ila 20 mg/mL su veya bir fizyolojik fosfat tampon çözeltisi konsantrasyonuna sahip hiyalüronik asitin bir iki yönlü slülgja veya bir karlîstEEEkullanHârak karEtlEllIhasEla hazlEIlanmaktadE YukarlEIh açDZJanan teknik özellik araclllglsîla, mevcut bulusa göre, bir biyomalzeme olarak kolajene dayanan bir bilesimin kllZlEak defekti bölgelerine nakledilebilen bir enjekte edilebilen formda hazlEIlanmasEUurumunda, küîlîdlak doku yenilenmesinin etkili bir sekilde endüklenebilmektedir, böylelikle Insanlar hariç hayvanlar üzerindeki ameliyata baglElstres azaltllIlken, göreli olarak olay ve hlîIEl kilZlEak onarlII ve yenilenmesi endüklenebilmektedir. Ilaveten, mevcut bulusa göre, yeni kiEIElak yenilenmesine yönelik biyouyumlu kolajene sahip bir karlglfni bilesimi saglanabilmektedir. Özellikle, mevcut bulusa göre, karlgüi bilesimi bir enjekte edilebilen formda uygulanmaktadlEl böylelikle uygun ve etki olarak hasarlERlElEak doku bölgelerini stabilize etmektedir. Ilaveten mevcut bulusa göre, kIKIEak defektine baglügrüzaltlßbilmektedir. Ilaveten, kEEIEiak yenilenmesinin endüksiyonu kolaylastßllâbilmektedir. Mevcut bulusa göre, ürünün kalitesinin ve güvenilirligi yukarlilbki etkilere bagllîcblarak dikkate deger ölçüde iyilestirilebilmektedir, böylelikle bunun kullanlEllârlZlolarak tüketicilerin çesitli isteklerini (ihtiyaçlarILIl giderebilmektedir ve dolaylîlîla hastalarda iyi bir izlenim bßkmaktadß Dolaylîlýla mevcut bulus oldukça kullanlglßlmaktadß Sekillerin Klgla AçIIamasEI SEKIL 1, kllZlEak doku onarIi- yönelik bir bilesim içerisinde karStElnayEgösteren bir görünümdür. SEKIL 2, klKlRlak doku onarnlEb yönelik bir bilesim içerisinde bir iki yönlü slEElganI kullan [lârak karlStlEIlBiasIügiösteren bir görünümdür. SEKIL 3, bir enjekte edilebilen tipte hazlîlbnan bir kllZlElak onarIi malzemesini gösteren bir görünümdür. SEKIL 4, enjeksiyon sonrasEétkileri dogrulamasüamacßîla mavi olarak renklendirilen bir kiElEak onarIi malzemesini gösteren bir görünümdür. SEKIL 5, enjekte edilebilen klKlEak onarIi malzemesinin etkisini dogrulamasüiçin endüklenen klKlEak defektini gösteren bir görünümdür. SEKIL 6, vücuda dogrudan enjeksiyona yönelik bir slEIElga ignesinin baglant-Ejösteren bir görüntüdür. SEKIL 7, bir domuz dizinin bir kllîlüak defekti bölgesi içerisinde dogrudan enjeksiyonun gösteren bir görünümdür. SEKIL 8, enjeksiyon sonraslîletkilerin dogrulanmas- yönelik bir sonuç olarak klEIEak onarl malzemesi ile dolu klEIEak defekti bölgesini gösteren bir görünümdür. SEKIL 9, suda yilZlanmadan saklanan dolgu bilesimini gösteren bir görünümdür. SEKIL 10, bir kolajen ve fibrin yaplStlElEEkarlSIr-ni bilesiminin naklinin ardlEtlan bir nakle yönelik morfolojiyi gösteren bir görünümdür. SEKILLER 11 ve 12, bir fibrin yaplîstlElEEiçinde klKlRlak hücre proliferasyonunu gösteren fluoresan mikroskobik görüntülerdir. SEKILLER 13 ve 14, bir kolajen ve fibrin yapßtmîkarßlüli bilesimi içinde kllZlEak hücre proliferasyonunu gösteren flüoresan mikroskobik görüntülerdir. SEKILLER 15 ve 16, %6 oranlEUa bir kolajen ve fibrin yaplgtlElEllarlgEh bilesimi içinde klEIEiak hücre proliferasyonunu gösteren flüoresan mikroskobik görüntülerdir. Bulusun Gerçeklestirilmesi için Mod Bundan sonrasiEtla, mevcut bulusun yukarlöhki etkilere uIasmalela yönelik tercih edilen bir yapllând Elnasßkteki sekillerden hareketle detaylülarak açiKlanacaktlEl Mevcut bulusa göre kllîlfrllak doku onarIilEla yönelik bir bilesim, bilesimin hazlEllanmaleb yönelik bir yöntem, ve bilesimin kullanllBialela yönelik bir yöntem Sekiller 1 ila 10 arasIa gösterilmektedir. Asag-ki açElZlamada, mevcut bulus ile iliskilendirilen bilinen fonksiyonlar. ve yasalar. ayrlötlilßçllglamalarllöl, mevcut bulusun ana ükrini anlasllöiaz hale getirdigine karar verilmesi durumunda, bulusun ayrlEtllDâçlKlamalarEllZlarllâcaktlEl Buna ek olarak, daha sonra açllZlanacak kosullar mevcut bulusun degerlendirilmesi içinde belirlenmektedir, ve böylelikle kosullarI tannlarÇl kosullar üreticinin veya müsterinin amaçlar. göre yorumlanabileceginden mevcut sartname boyunca yorumlanacaktlB Öncelikle, mevcut bulus kilZlElak doku onarIilEla yönelik bir bilesim saglamaktadlü bilesim bir seyreltilmis 5 ila 60 mg/mL su veya bir fizyolojik fosfat tampon çözeltisi konsantrasyonuna sahip kolajen ve bir seyreltilmis 5 ila 20 mg/mL su veya bir fizyolojik fosfat tampon çözeltisi konsantrasyonuna sahip hiyalüronik asitin bir iki yönlü slEEga veya bir karlgtlîlüîkullanllârak karlgtlEllBwaslýla hazlElanmaktadlE KlElîcllak doku onarIi- yönelik bilesim su adllarülçererek hazlEllanmaktadlE bir seyreltilmis ila 60 mg/mL su veya bir fizyolojik fosfat tampon çözeltisi konsantrasyonuna sahip kolajenin hazlEIlanmaslîl bir seyreltilmis 5 ila 20 mg/mL su veya bir fizyolojik fosfat tampon çözeltisi konsantrasyonuna sahip hiyalüronik asitin hazthnmaslIlbir iki yönlü slElEga veya bir karlgtlHEllullanilârak kolajen ve hiyalüronik asitin karlgtülîhaslîlve bir santrifüj kullanilârak kllZIEiak doku onar" yönelik karlglEi bilesiminin havasII alümaslîl Özellikle, santrifüj ile santrifüjlü ayrIia, oda lelakllglEll ila 30°C'de korunurken 2,000 ila ,000 G'de gerçeklestirilmesi ile karakterize edilmektedir. Yukarlâbki gibi hazlHlanan kllZlîiIlak doku onarIIEh yönelik bilesimin asag-ki adllardan geçerek kullanllîhaslîatedaviye yönelik yöntem bulusun bir parçasülegildir) uygun olmaktadlîl bir altlllZJ üzerinde bir domuz bacagII sabitlenmesi, bir cerrahi alet kullanllârak eklem kMaglElI hasara ugratllîhasüve sonrasIa bir cerrahi matkap kullanüârak 2~4cm2 oranlElda defekt bölgelerinin endüklenmesi; kolajen ile doldurulan bir sElEga kab- bir slîllüja ignesinin baglanmaslîlve bir dikis ipligi ile kesim alanII dikilmesi, ve domuz dizinin glenoid kavitesinin (eklem slîlîljile dolu bir bosluk) dogrudan slEEgada bulunan 5~60 mg/mL'Iik bir konsantrasyona sahip kolajenin, sIEEgada bulunan 5~20 mg/mL'Iik bir konsantrasyona sahip hiyalüronik asitin ve içinde kolajen ve hiyalüronik asitin karlgt-[gllîl kHZIEak doku onarilüla yönelik bir bilesimin enjekte edilmesi. Bu süre içerisinde, mevcut bulusa göre, k[EIE adIiIarEiçererek haleIanabilmektedir: bir seyreltilmis 5 ila 60 mg/mL su veya bir fizyolojik fosfat tampon çözeltisi konsantrasyonuna sahip kolajeninin hazlIIlanmaslsîIbir seyreltilmis 5 ila mg/mL su veya bir fizyolojik fosfat tampon çözeltisi konsantrasyonuna sahip hiyalüronik asitin hazlEllanmasBve içinde 60 mg/mL kolajen ve 5 mg/mL hiyalüronik asitin 9:1 ila 1:9 bir oranda karlSt-[gllîbir numunenin veya 60 mg/mL kolajen ve 20 mg/mL hiyalüronik asitin :5 bir oranda karlSt-@Elbir numunenin hazlîllanmaslîl K[Klîiliak doku onarn uygun olan bilesim asaglki adIiIardan geçerek kullanllîhak Üzere uygun olmaktadlE (1) bir slEIEga kablEtla bulunan bir kolajen çözeltisinin ve bir fibrin yaplSIlEIEEürününün halelanmaslB (2) bir altlllZIüzerinde bir domuz bacagII sabitlenmesi, bir cerrahi alet kullanüârak eklem klKlEagII hasara ugratllüiasüve sonrasIa bir cerrahi matkap kullanilârak 2~4cm2'lik defekt bölgelerinin endüklenmesi; (3) SIEEgada bulunan kolajen ürününün, kDZIEak defekti bölgesini kolajen ürünüyle doldurmak üzere domuz dizinin defekt bölgesine enjekte edilmesi, ve fibrin yaplgt-I kolajeni kaplamasi ve sonrasIa jellesmesine, böylelikle kolajeni sm sabitlemesine olanak tan lütnasEl (4), adli (3)'ün aksine, fibrin yaplSI-I domuzun jellestirilecek kiEIEak defekti bölgesi üzerinde kaplanmasüve sonraleUa kllZlEHak defekti bölgesini doldurmak üzere kolajenin Hbrin yaplgtlüüjçine enjekte edilmesi; ve (5) bir slEIEIga (25 mL) kullanüârak, akan suya karsEdirenci dogrulamak ve jel direncini gözlemlemek üzere steril enjeksiyon suyunun enjeksiyon alan.. 10 cm yukar-a bir konumda asaglîdogru serpilmesi. Ilaveten, mevcut bulusa göre, kilZlElak doku onarIilEla yönelik bilesim, yüksek viskoziteli kolajen ve hiyalüronik asitin, veya bir kolajen ve hiyalüronik asit karlgü Übilesiminin kIKIEak onar" yönelik bir bilesim olarak bir önceden doldurulmus slEiEga içine enjekte edilecegi, böylelikle bir enjekte edilebilen formda kullanliâbilecegi sekilde hazlîllanmaktadlîl Ilaveten, mevcut bulusa göre, k[lZlElak doku onarIi- yönelik bilesim, bir siElElga ignesinin, bir enjekte edilebilen tipte kiKlîdlak enjeksiyon ajan. baglanabilecegi, ve slîlüga ignesinin cerrahi insizyon olmaks- slElEga ignesi kullanilârak bir uygulama alanEiçine sokulabilecegi, böylelikle kKIEIak onarIilEla yönelik bilesimin dogrudan domuz dizinin glenoid kavitesine (eklem sme dolu bir bosluk) enjekte edilebilecegi sekilde kullanllIhaktadlEl KiEJEilak doku onar" yönelik bilesim, bir örnegin 2~4cm2 oranIa bir kilaîrilak defekti bölgesinin yapay olarak olusturulmaslýla hazlîlianacagüsekilde kullanllB1asIZIiçin uygun olmaktadB klKlElak onar" yönelik bir bilesim maviye boyanmaktadlîl ve örnegin içine enjekte edilmektedir; ve sonraletla nakil yapüân bölge açilîhaktadlü böylelikle kiElEcllak defekti bölgesini dolduran bilesimin morfolojisi dogrulanmaktadlEl ve bilesimin suyla y[lZan[Iâbilirligi kiKIEak defekti bölgesine yaplglna derecesi araciEgllîLla dogrulanmaktadE Bununla birlikte, mevcut bulusun ayrliîtHJDaçlKlamada açiElanan spesifik yapüândlünalarla sIIIlHlandlEllüîas amaçlanmadiglü aksine ekteki istemlerde tanIiIanan, mevcut bulusun teknik fikrine ve teknik kapsam. ait olan tüm modifikasyonlarüesdegerleri veya ikameleri kapsama amacEliaslEllglügiöz önünde bulundurulmalIB KIKIElak doku onarl- yönelik bilesim, bilesimin hazlElianmas- yönelik yöntem ve bilesimin kullanilBiasI yönelik yöntem asagi açÜZIanmaktadlB Öncelikle, mevcut bulusa göre, bir biyomalzeme olarak kolajene dayanan bir bilesimin klKlElak defekti bölgelerine nakledilen bir enjekte edilebilen tipte haziEilanmasEdurumunda, kMak doku yenilenmesi etkili bir sekilde endüklenebilmektedir, böylelikle göreli olarak kolay ve hlZlükilZlElak onarIi ve yenilenmesi endüklenirken, insanlar hariç hayvanlar üzerindeki ameliyata baglßtresin azaltilîhasünümkün olmaktadE Ilaveten, mevcut bulusun bir parçasEblmayan kilZIEak defekti tedavisi, basit bir prosedür aracUJgiiýla, ve cerrahi insizyon ameliyatEyapHBiaks- basit enjeksiyon tipi bilesim naklinin gerçeklestirildigi, klElîrllak defekti tedavisinin erken bir safhada mümkün oldugu, dolayElýla mafsal ameliyatIEla ihtiyaç duyan hastalarlEl say-Bazalttiglüiygun bir prosedür aracUJgiMa mümkün olmaktadlEI Ilaveten, yukaridaki önleyici tedavi, osteoartrite sahip hastalar. say-da bir azalmaya yol açabilmektedir. Buna yönelik mevcut bulusun örnekleri asaglabki gibidir. Kolajen ve hiyalüronik asit-karlglmlîürünün hayvanI kllZIEak defekti bölgesine uygulanmaslîl Amaç: Enjekte edilebilen tipte kolajen ve hiyalüronik asit-karglm Ebilesiminin domuz dizinin klElEak kaybEliiölgesine uygulanabilirligi üzerine dogrulama mg/mL oranlarIla konsantrasyonlara sahip hiyalüronik asit hazlEllanmaktadE Kolajen konsantrasyonu: Mevcut ürünün bir kullanIiElolarak kilZIEak onarIllüla yönelik olarak, kolajenin kilZlElak defekti bölgesinin kolajen ile dolu oldugu bir durumu korumak amaclîda 5 mg/mL veya daha fazla bir konsantrasyona sahip olmaslîgerekmektedir. Proses niteliklerine baglEloIarak (aseptik preparasyon), medikal bir amaca yönelik bir ürünün hazlEIlanmaletla (enjekte edilebilen form), ultra-yüksek viskoziteye sahip 60 mg/mL üzeri kolajeninin hazlEIlanmasEiie bu tür bir kolajenin gerçekte kullanilö1aslZl/e uygulanmasElzor olmaktadE Bundan dolayü kolajenin konsantrasyonu bu degerler da dahil olmak üzere 5 mg/L ila 60 mg/L olacak sekilde ayarlanmaktadlü Hiyalüronik asit konsantrasyonu: 20 mg/mL oranIa hiyalüronik asitin, hiyalüronik asitin (viskozite, vb.) gibi dogal niteliklerinden dolayElmedikal bir amaca yönelik hazlElanmasü (aseptik olarak hazlEIIanmasm zor olmaktadlü ve hiyalüronik asitin kolajen ile karlgtlElBiasü kolay degildir. Buna ek olarak, hiyalüronik asitin, ürün için gerekli olan özelligi (viskozite) korumasüamaclýla en azIan 5 mg/mL oranlEtla bir konsantrasyona sahip olmasEl gerekmektedir. Buna ek olarak, kolajen baz. eklenen hiyalüronik asit klEIEliak bölgesi üzerinde hareket etmektedir, ve böylelikle yaglama kuvvetini iyilestirmektedir, dolaylîlîla klKlRlaglEl bükülmesine destek olmaktadlEl Yukarlahki sebeplerden ötürü, hiyalüronik asit kolajene eklenmektedir ve hiyalüronik asitin konsantrasyonu bu degerler de dahil olmak üzere 5 mg/L ila 20 mg/L olacak sekilde ayarlanmaktadlü Kolajen ve hiyalüronik asit-karlSEiEliiilesimi ve kolajenin preperasyonu Karlgtüna yöntemi A: Kolajen ve ham madde çözeltisinin karlStlîllBiasI yönelik yöntem 1) HazlEIlanan kolajen, istenilen bir konsantrasyona sahip bir kolajen çözeltisi hazlEIlanmaslZl için su veya bir fizyolojik fosfat tampon çözeltisi ile seyreltilmektedir. 2) HazlEllanan hiyalüronik asit (bir toz tipi) bir uygun konsantrasyona sahip olmak için su veya bir fizyolojik fosfat tampon çözeltisi ile seyreltilmektedir. 3) HazlHlanan çözeltiler, daha kisa bir süre boyunca karlgtlünayünümkün kilân bir iki yönlü sIElEga kullanilârak veya bir karlgtIEEIJsilindirleme) kullanilarak karlgtlîllîhaktadlîl (Sekiller 1 ve 2) . 4) Ham maddelerin ve çözeltilerin karlgtlîilna için kullanHBiasEl/e öncesinde bir sogutucu durumunda (2~8°C) depolanmasEl halinde, karlgtlîina kolayca ve sorunsuzca gerçeklestirilmektedir. Karlgtlîilna yöntemi B: Ham maddeyi (toz) dogrudan kolajen çözeltisi ile karEtlElnaya yönelik yöntem 1) HazlEIlanan kolajen, istenilen bir konsantrasyona sahip bir kolajen çözeltisi hazlEIlanmasEl için su veya bir fizyolojik fosfat tampon çözeltisi ile seyreltilmektedir. 2) Hiyalüronik asit (toz tipi) bir uygun konsantrasyona sahip kolajen çözeltisine konulmaktadlElardlEUan karßtßlüiaktadlü 3) HazlEIlanan çözelti, daha kEla bir süre boyunca karlgtlîilnayljlnümkün kllân bir iki yönlü slîliîga kullanilarak veya bir karlgtlEJEUbuk kullanüârak karlgtlîllliîaktadlü 4) Yukar-ki karlgtlEna sekli, yüksek-konsantrasyonlu bir ürün hazlîllamak için gerekli olmaktadE ve çevreleyen ortam karlgtüna süslütla düsük bir lelakliEta korunurken, karlgtlElna kolayca ve sorunsuzca gerçeklestirilmektedir. Kolajene dayanan bilesimin enjekte edilebilen formda preparasyonu 1) Kolajen ve kolajene dayanan bir karlgtlîllüîgbilesimin havasEbir santrifüj kullanilârak allElnaktadE 2) Santrifüj kosullarüida sEakllglII (1~30°C) korunmasül'e santrifüj etkisinin (G degeri) 2,2000 ila 5,000 G arasIa olmasIlEI 3) Bir slEEga kabÇl bir yüksek-viskoziteli pompa kullanilârak doldurulmaktadlE Burada, asaglöhn yukarlýla bir nozulun kademeli olarak çllZrnasEla bos alanlar olusturmamak adlEb bir önlem aIlEmaktadB 4) Bir vakum kullanilârak sBElga kabII bir arka yüzeyine sElEgayEtamamen sEdlîilnaz hale getirmek için bir conta konulmaktadlîl böylelikle bir 5.. süElga kabIan slîlnaslîl önlenmektedir. ) Dolu slîlElga kabIÇl kolajenin essiz niteliklerini korumak üzere oda slîlakllgJIa depolanmaktadEl(1 ila 30°C). Çözeltinin ne donmus ne de yüksek slaaklliîta denatüre olmaslîgljerekmektedir. 2. Vücuda enjeksiyonun ardIan etkinin dogrulanmas. yönelik olarak, hazlHlanmE bir numune az miktarda bir mavi boyama ajanEiIe boyanmaktadE(Tripan mavisi, proteine baglanmaktadE) (Sekil 4). 3. Yöntem ve etki dogrulamasII kullanIiEabulusun bir parçasljlegildir) 1) Bir aItIIE üzerinde bir domuz bacagII sabitlenmesinin ardlEUan, dizin eklem klKIEagEllJir cerrahi alet kullanllârak hasara ugratilBiaktadlEl ve büyük (yaklasllîl4 cm2) ve küçük (yaklaslEl 2 cm2) defekt bölgeleri bir cerrahi matkap kullanilârak endüklenmektedir (Sekil 5). 2) Bir sIEEga ignesi kolajen veya benzeri ile dolu olan bir slEIElga kablEb baglanmaktadlîl Burada, slElEga ignesi uzunlukça en azIan 1 1/2 inç (38 mm) olmaktadlE 3) Kesim aIanÇl bir dikis ipligi ile dikilmektedir, ve slElEgada bulunan her bir konsantrasyona sahip ürün dogrudan domuz dizinin glenoid kavitesinin (eklem slîlâlîl ile dolu alan bir bosluk) enjekte edilmektedir (Sekil 7). 4) Diz mafsalEhareketi (sürekli pasif hareket (CMP)) dogal olarak defekt bölgelerini dolduran enjekte edilen malzemenin hareketini kolaylastlElnak için gerçeklestirilmektedir. Buna ek olarak, dikilen alan, gözlem amaclýla ürünün enjekte edildigi klKEdlak bölümünün açlgla çlElnasEîbin kesilmektedir. 4.Sonuçlar: KlEIEiak defekti bölgelerine enjekte edilen ürün dogal olarak defektin endüklendigi bölgeleri doldurmaktadlü böylelikle bir cerrah tarafIan tercih edilen bir Kolajen ve hiyalüronik asit-karlgiüiilîliailesiminin yaplîskanliglllîlogrulamaya yönelik deney hiyalüronik asit Örnek 1'deki gibi aynlZlyöntem ile haziîilanmaktadlEl Buna ek olarak, 60 mg/mL kolajen ve 5 mg/mL hiyalüronik asitin 9:1 ila 1:9 bir oranda karlgt-[gilîlbir numune ve 60 mg/mL kolajen ve 20 mg/mL hiyalüronik asitin 525 bir oranda karlSt-Igilîhumune hazlîlianmaktadlîl Burada, kolajen ve hiyalüronik asit-karlglEliElbilesiminin etkisi kolajenin niteliklerine (biyouyumlu kiElElak bilesenleri ve biyolojik parçalanma) bagIlZbir etkinin ve hiyalüronik asitin niteliklerine (yaglanma kuweti) bagIElbir etkinin eklemelerine karsHJKl gelmektedir, ve böylelikle kilZIEak onarIilEla yönelik uygun olan bir bilesim hazlEIlanmaktadE 2.KOIajen ve hiyalüronik asitin kariglm oranlEb baglEliskozitenin ölçümü Her bir numunenin viskozitesi bir Viskometre (DV-1 +PRO) kullan [Iârak ölçülmektedir. Ölçüm maddesi: viskozite Ölçüm sükliglîl4°c Ölçüm DDS: 0.5 Numune Viskozite (CP, 10^3) Not 3. Kolajen ve hiyalüronik asitin karlgtlîilna oran. baglEýaplSkanlllZltesti Yaplglna karsllâstlülnaslîiher bir numune için bir malzeme yaplglna mesafesinin bir Reometre (CR- kullanilârak ölçülmesiyle yürütülmektedir. Numune tutucu hareket hlîlîlllo mm/sn) Yaplgmanl numune tutucunun hareketi esnasIa koptugu bir alana hareket mesafesi ölçülmektedir. Numune Malzeme yapEtna mesafesi (mm) Not Sonuçlar: Kolajen ve hiyalüronik asit-karlglElElbilesiminin yaplglnasüiogrulanmlgtlü ve kolajen konsantresi ne kadar yüksekse viskozitenin de 0 kadar yüksek oldugu gözlemlenmistir. Kolajen ve hiyalüronik asitin buraya naklin ardIan suyla yllZlanabilirliginin dogrulanmas- yönelik test Amaç: Defekt bölgelerine göre enjekte edilen ürünün kesintisiz yapSlnasIüsabitleme) ve doldurulmasIlIResintiye ugratan bir faktöre karsüiirenç üzerine dogrulama 1.SlEElgaIarda bulunan 30 ve 60 mg/mL (%3 ve 6) oranIa konsantrasyonlara sahip kolajen ve 10 ve 20 mg /mL (%1.0, ve 2.0) oranIia konsantrasyonlara sahip hiyalüronik asit Örnek 1'deki gibi aynlîyöntem ile hazlEllanmaktadlE 2.Bir altlilZJ üzerinde bir domuz bacagII sabitlenmesinin ardIan, eklem klElEagEbir cerrahi alet kullanilârak hasara ugratilîhaktadü ve büyük (yaklasilZI 4 cm2) ve küçük (yaklasliZlZ cm2) defekt bölgeleri bir cerrahi matkap kullanilarak endüklenmektedir. 3.SlEEgayüiolduran her bir konsantrasyona sahip bir ürün, domuz dizinin kiKlîrliak defekti bölgelerine enjekte edilemektedir ve bu bölgeleri doldurmaktadlü 4.Enjeksiy0n suyu bir slEElga (25 mL) kullanilârak enjeksiyon alan.. üzerinde 10 cm'lik bir konumda asagüiogru serpilmektedir. .K[lZlEIak defekti bölgelerini dolduran ürünün akan suya karsüdirenci çlîilak gözle gözlemlenmektedir. 6.Sonuçlar: KlKIEak defekti bölgelerini dolduran ürün akan suya karslîlirenç göstermistir (yilZlanamaz), ve böylelikle defekt bölgelerine kesintisiz olarak yaplginlgtß dolayßlýla ürün ile dolu olan defekt bölgelerinde bir durumu korumaktadlEI(Sekil 9). (Örnek 4) Mevcut bulusun bir parçasülegildir Kolajen ve fibrin yaplStlEElElI klElîcliak defekti bölgelerine uygulanma yöntemi ve bilesimdeki hücre proliferasyonu üzerine test Amaç: Enjekte edilebilen tipte kolajen ve fibrin yaplgtlEIElEllEl uygulanabilirligi üzerine ve kolajen ve fibrin yaplSt-I uygulanmaslýla klKIEak defekti onarIilZüzerine dogrulama 1.Bir slElEga kabIa bulunan %6 oranIa bir kolajen çözeltisi ve bir fibrin yaplStlElEEl ürününün, örnek 1'deki aynülöntem ile hazlEllanmaslZlBurada üretilen ve kullanilan fibrin yaplgt-I temel özellikleri, 71 ila 127 mg/mL oranIda bir fibrinojen konsantrasyonu ve 400 ila olmaktadlEl 2.Bir altIlEl üzerinde bir domuz bacagII sabitlenmesinin ardIan, dizin eklem kilZIEIIagEl bir cerrahi alet kullanilârak hasara ugratüîhaktadß ve büyük (yaklaslKl4 cm2) ve küçük (yaklasllîlZ cm2) defekt bölgeleri bir cerrahi matkap kullanllârak endüklenmektedir. 3.SlElElgada bulunan %6 oranlEUa bir konsantrasyona sahip kolajen ürünü, domuz dizinin defekt bölgesine enjekte edilmektedir ve bu bölgeyi doldurmaktadß ve sonrasIda fibrin yaplSt-I kolajeni kaplamasi ve sonrasIa jellesmesine, böylelikle kolajeni sliZlîla sabitlemesine olanak tan !Etnaktadlü 4.Madde "3"ün aksine, fibrin yaplîstlElElJdomuzun klEJRlak defekti bölgesi üzerinde kaplanmaktadEve sonrasIda jellestirilmektedir, ve sonrasIa klEIEak defekti bölgesini doldurmak üzere %6 oran [Eda kolajen fibrin yaplgtElElîçine enjekte edilmektedir. .Bir sIEEga (25 mL) kullanllârak, akan suya karsEUirenci dogrulamak ve böylelikle jel direncini gözlemlemek üzere steril enjeksiyon suyu enjeksiyon alanlElI 10 cm yukar-a bir konumda asagmogru serpilmektedir. Sonuçlar: KlEIîrllak defekti bölgelerini dolduran ürün sabit bir jel formunda korunmustur, ve akan suya karsEdirenç göstermistir, ve böylelikle defekt bölgelerine kesintisiz olarak yapgl'nlgtlü dolaylîlýla ürün ile dolu olan defekt bölgelerinde bir durumu korumaktadlîl 6.Kolajen ve fibrin yaplgtmîlkarlglmlîbilesimi içindeki liZIîrllak hücrelerinin proliferasyonu üzerine bir test yürütülmektedir. HazlEIlanan kllZlEllak hücreleri (1.2 X 107" hücreler/2mL) karglüil bilesiminde karlgtülîhlgtlîl C02 kültürü 37°C'de 7 gün boyunca yürütülmüstür. KlElîrllak hücrelerin proliferasyonu Calcein-AM analizi aracmîglüla bir fluoresan mikroskobu ile gözlemlenmektedir. (Soldan, fibrin yaplgtlEIEÇl0/o3 kolajen/fibrin yaplStBEEkarlgEh bilesimi, ve %6 kolajen/fibrin yaplgtEEERarElm bilesimi) SayEQGün 0) SEKIL 11 SEKIL 13 SEKIL 15 Sonuçlar: Bilesimdeki hücre proliferasyonunun dogrulanmas- yönelik bir sonuç olarak, hücre proliferasyonunun %3 oranIa kolajen ve fibrin yaplgtIEEEkarlgEiEbilesiminde ve %6 oranIda kolajen ve fibrin yaplgtlEIEElkarlglînlübilesiminde yalnlîta fibrin yaplgt-I oldugundan daha yüksek oldugu gözlemlenmistir. Endüstriyel Uygulanabilirlik Mevcut bulusa göre klKlElak doku onarIi- yönelik bilesim, bilesimin hazlHbnmalela ve bunun kullanilEb yönelik yöntemin teknik özü içerisinde, aynüsonuçlar büyük ölçüde tekrarlanabilir olmaktadlEl Özellikle, mevcut bulus teknolojik gelismeyi kolaylastlîilnasElve endüstriyel gelismeye katklâla bulunmasülsin yürütülmektedir, ve dolayElîla mevcut bulusun haklarlîibatent hukukunca korunmalIE TR TR TR TR TR TR