TR201902875T4 - Plk-4 inhibitörünün tuz ve kristal formları. - Google Patents

Abstract

Mevcut buluş, PLK-4 inhibitörünün tuz ve kristal formları ile ilgilidir.

Description

TARIFNAME PLK-4 INHIBITORUNUN TUZ VE KRISTAL FORMLARI ARKA PLAN Serin/treonin kinazlarin polo-benzeri kinaz (PLK) ailesi, en az dört bilinen üye içermektedir: PLK1, PLK2 (Snk olarak da bilinir), PLK3 (Fnk veya Prk olarak da bilinir) ve PLK4 (Sak olarak da bilinir). PLK4'ü inhibe eden ajanlar, kanseri tedavi etme potansiyeline sahiptirler. Birkaç etkili PLK4 açiklanmaktadir. Bu patentlerde açiklanan bir inhibitör'ün yapisi, bilesik (l) olarak asagida gösterilmektedir: Bu bilesigin, kristal yapida bulunan ve farkli bir sekilde büyük ölçekli 'üretime müsait fiziksel özelliklere sahip olan tuz formlarina ihtiyaç bulunmaktadir. Ayrica, bu ilaç adayinin kararli oldugu ve hastaya etkili bir sekilde verildigi farmasötik formülasyonlara ihtiyaç vardir. BULUSUN OZETI Bilesik (I)'in 1:1 fumarik asit tuzunun ve 1:1 maleik asit tuzunun, higroskopik olmayan kristal formlar saglamak için iyi tanimlanmis kosullar altinda kristallestirilebilecegi bulunmustur. "1:1" gösterimi, asit (fumarik veya maleik) ve bilesik (I) arasindaki molar orandir. Fumarik asit ve maleik asit üzerindeki iki karboksilik asit grubundan dolayi, bilesik (I)'in bir 1:2 fumarik asit tuzunu ve bir 1:2 maleik asit tuzunu olusturmak da mümkün olmakta olup, burada, asit (fumarik veya maleik) ve bilesik (I) arasindaki molar oran 1:2'dir. Bilesik (I)'in 1:1 fumarik asit tuzu, burada "1:1 bilesik (I) fumarat" olarak ve 1:1 maleik asit tuzu, burada "1 :1 bilesik (I) maleat" olarak adlandirilmaktadir. 1:1 Bilesik (I) fumarat ve 1:1 bilesik (I) maleat, bilesik (I)'in diger tuzlariyla karsilastirildiginda birkaç avantajli özellige sahiptir. Ornek 1 ve 2'de gösterildigi gibi, hidroklor'ur tuzu, fosfat, sülfat ve sitrat dahil olmak 'üzere bilesik (l)'in birçok tuzu, kristal formda elde edilememistir. Ozellikle, 122 bilesik (I) fumarat ve 1:2 bilesik (I) maleat da kristal formda elde edilememistir. 1:1 Bilesik (I) fumarat ve 1:1 bilesik (I) maleat, hem higroskopik degildir hem de formüle edilmesi serbest baz ve diger tuzlardan daha kolaydir. Bu nedenle, bu olumlu özellikler; 1:1 bilesik (I) fumarat ve 1:1 bilesik (I) maleati, büyük Ölçekli `üretime ve bir ilaç adayi olarak formülasyona elverisli hale getirmektedir. Bir yönde, mevcut bulus, bilesik (I) ile fumarik asitarasindaki molar oranin 1:1 oldugu, bilesik (I)'in bir fumarat tuzunu saglamaktadir. Yukarida belirtildigi gibi, bu tuz da burada "1:1 bilesik (I) fumarat" olarak adlandirilmaktadir. Diger bir yönde, mevcut bulus, bilesik (I) ile maleik asit arasindaki molar oranin 1 :1 oldugu, bilesik (I)'in bir maleat tuzunu saglamaktadir. Yukarida belirtildigi gibi, bu tuz da burada "1:1 bilesik (I) maleat" olarak adlandirilmaktadir. Baska bir yönde, mevcut bulus; 1:1 bilesik (I) fumarat (veya 1:1 bilesik (l) maleat) ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici veya seyreltici içeren bir farmasötik bilesim sunmaktadir. Yine bir baska yönde, kanserli bir sujenin tedavi edilmesine yönelik olarak, sujeye etkili bir miktarda 1:1 bilesik (I) fumarat veya 1:1 bilesik (l) maleat verilmesini içeren bir yöntem tarif edilmektedir. Baska bir yönde, PLK4 aktivitesinin inhibe edilmesine ihtiyaç duyan bir sujede PLK4 aktivitesinin inhibe edilmesine yönelik olarak, sujeye etkili bir miktarda 1:1 bilesik (I) fumarat veya 1:1 bilesik (I) maleat verilmesini ihtiva eden bir yöntem tarif edilmektedir. Mevcut bulus ayrica, tibbi tedavide kullanim için 1:1 bilesik (I) fumarat veya 1:1 bilesik (l) maleat temin etmektedir. Bir yapilan mada, tibbi tedavi, kanserli bir sujenin tedavisine yöneliktir. Alternatif olarak, tedavi, PLK4 aktivitesinin inhibisyonuna ihtiyaç duyan bir sujede PLK4 aktivitesinin inhibe edilmesine yöneliktir. Mevcut bulusun bir baska yönü, kanserli bir sujenin tedavisinde kullanilmak üzere bir ilacin 'üretimi için 1:1 bilesik (I) fumarat veya 1:1 bilesik (I) maleat kullanimidir. Mevcut bulusun diger bir yönü, kanserli bir sujenin tedavisinde kullanilmak 'üzere 1:1 bilesik (I) fumarat veya 1:1 bilesik (I) maleattir. Mevcut bulusun baska bir yönü, PLK4 aktivitesinin inhibisyonuna ihtiyaç duyan bir sujede PLK4 aktivitesinin inhibe edilmesine yönelik bir ilacin imalati için 1:1 bilesik (I) fumarat veya 1:1 bilesik (I) maleat kullanilmasidir. Mevcut bulusun bir diger yönü, PLK4 aktivitesinin inhibisyonuna ihtiyaç duyan bir sujede PLK4 aktivitesinin inhibe edilmesine yönelik 1:1 bilesik (I) fumarat veya 1:1 bilesik (l) maleattir. ÇIZIMLERIN KISA AÇIKLAMASI termogramini göstermektedir. Sekil 2, 1:1 bilesik (I) fumaratin B formu için DSC termogramini göstermektedir. Sekil 3, 1:1 bilesik (I) fumaratin C formu için DSC termogramini göstermektedir. Sekil 4, 1:1 bilesik (I) fumaratin D formu için DSC termogramini göstermektedir. Sekil 5, 1:1 bilesik (I) maleatin A formu için DSC termogramini göstermektedir. Sekil 6, bilesik (I)'in fosfati için DSC termogramini göstermektedir. Sekil 7, modelini göstermektedir. Sekil 8, 1:1 bilesik (l) fumaratin B formu için XRPD modelini göstermektedir. Sekil 9, 1:1 bilesik (l) fumaratin C formu için XRPD modelini göstermektedir. Sekil 10, 1:1 bilesik (I) fumaratin D formu için XRPD modelini göstermektedir. Sekil 11, 1:1 bilesik (I) maleatin A formu için XRPD modelini göstermektedir. BULUSUN DETAYLI AÇIKLAMASI Mevcut bulus; 1:1 bilesik (l) fumarat, 1:1 bilesik (I) maleat, bunlarin benzersiz kristal formlarini ve bunlarin karsilik gelen farmasötik bilesimlerini saglamaktadir. Ayrica, kanserli bir sujeyi tedavi etme yöntemleri açiklanmaktadir. Ilave olarak, mevcut bulus, 1:1 bilesik (I) fumarat ve 1:1 bilesik (I) maleatin spesifik kristal formlarini hazirlamaya yönelik yöntemler ortaya koymaktadir. 1:1 Bilesik (I) fumarat ve 1:1 bilesik (I) maleatin kristal formlari Ozel bir yapilanmada, 1:1 bilesik (I) fumarat veya 1:1 bilesik (I) maleatin agirlikça en az belirli bir bilesik (I) fumarat veya 1:1 bilesik (I) maleatin agirlikça en az %80'i (örnegin, en az %90 veya bulus tarafindan kapsanmasi gerektigi anlasilmalidir. Diger bir özel yapilanmada, 1:1 bilesik (I) fumarat veya 1:1 bilesik (l) maleatin agirlikça en az belirli bir yüzdesi tek bir kristal yapidadir. Belli agirlik yüzdeleri arasinda; %70, %72, %75, %77, yapilanmada, 1:1 bilesik (I) fumarat veya 1:1 bilesik (I) maleatin agirlikça en az %80'i (Örnegin, en az %90 veya %99'u) tek bir kristal yapidadir. Bu degerler ve araliklar içerisindeki tüm degerlerin ve araliklarin, mevcut bulus tarafindan kapsanmasi gerektigi anlasilmalidir. Burada kullanildigi sekli ile "kristal yapi", münferit moleküllerin yüksek derecede homojen, düzenli bir kilitli kimyasal yapiya sahip oldugu bir kristal yapiya sahip bir katiyi ifade etmektedir. Kristal yapidaki 1:1 bilesik (I) fumarat ve kristal yapidaki 1:1 bilesik (l) maleat; 1:1 bilesik (I) fumarat ve 1:1 bilesik (l) maleatin tek bir kristal formundaki kristalleri veya farkli tek kristal formlarin kristallerinin bir karisimi olabilmektedir. Birtek kristal formu, 1:1 bilesik (I) fumarat veya 1:1 bilesik (I) maleatin tek bir kristal veya her bir kristalin ayni kristal forma sahip oldugu çok sayida kristal anlamina gelmektedir. 1:1 bilesik (I) fumaratin (veya 1:1 bilesik (l) maleatin) agirlikça belirli bir yüzdesi bir tek kristal formunda oldugunda, fumaratin (veya 1:1 bilesik (I) maleatin) geri kalani, amorf fumaratin (veya 1:1 bilesik (I) maleatin) ve/veya tek kristal formlari hariç 1:1 bilesik (I) fumaratin (veya 1:1 bilesik (I) maleatin) diger kristal formlarinin bir veya daha fazla kristal formlarinin bir kombinasyonudur. Kristal yapidaki 1:1 bilesik (I) fumarat (veya kristal yapidaki 1:1 bilesik (l) maleat), 1:1 bilesik (I) fumaratin (veya 1:1 bilesik (l) maleatin) belli ir kristal formunun belirli bir yüzdesi olarak tanimlandiginda, geri kalan, belirtilen bir veya daha fazla belirli form disinda amorf form ve/veya kristal formlardan olusmaktadir. Bir tek kristal formun 'Örnekleri, burada tartisildigi gibi 1:1 bilesik (I) fumaratin (veya 1:1 bilesik (I) maleatin) bir veya daha fazla 'Özellik ile karakterize edilen A formunu içermektedir. 1:1 Bilesik (I)fumarat (veya 1:1 bilesik (I) maleat), tamamen diger stereoizomerlere göre agirlikça stereoizomerlerin agirligina orani). 1:1 Bilesik (l) fumarat ve 1:1 bilesik (I) maleatin kristal formlarinin hazirlanisi 1:1 Bilesik (I) fumaratin veya 1:1 bilesik (I) maleatin belirli kati formlari, 'örnegin yavas buharlastirma, yavas sogutma ve anti-solvent çökeltmesi ile hazirlanabilmektedir. Burada kullanildigi sekliyle "anti-solvent", 1:1 bilesik (I)fumarat veya 1:1 bilesik (I) maleatin düsük çözünürlüge sahip oldugu ve fumarat veya maleatin ince toz veya kristal formunda çözeltiden çökelmesine neden oldugu bir solventi belirtmektedir. Alternatif olarak, 1:1 bilesik (I) fumarat veya 1:1 bilesik (I) maleat daha sonra, bir tohum kristali eklenerek veya eklenmeden uygun bir solventten yeniden kristallestirilebilmektedir. 1:1 Bilesik (I) fumaratin veya 1:1 bilesik (l) maleatin her bir spesifik kati formunun hazirlanmasi, asagidaki deney bölümünde açiklanmaktadir. 1:1 Bilesik (l) fumarat ve 1:1 bilesik (I) maleatin kristal formlarinin karakterizasyonu Ornekler, 40 kV/30 mA'da çalisan X-isini tüpü ile bakir K-alfa X-isinlari ile isinlanmaktadir. Bir yapilanmada, 1:1 bilesik (I) fumarat, bir tek kristal formundadir (A formu). Spesifik bir yapilanmada, 1:1 bilesik (l) fumaratin A formu, Sekil 7'de gösterilen X-isini toz kirinim modeli ile karakterize edilmektedir. Daha özel bir yapilanmada, 1:1 bilesik (I) fumaratin A formu, asagidaki seviyelerde tepe noktalarina (26 açilari) sahip olan bir X-isini toz kirinim modeli ile karakterize edilmektedir: Burada tarif edilen ana tepe noktalari, A formunda %50'nin 'üzerinde nispi bir yogunluga sahiptir. Belirli bir 20 açisinin, belirli degerin ± O,2°sini ifade ettigi anlasilmalidir. Bir baska spesifik yapilanmada, 1:1 bilesik (l) fumaratin A formu, diferansiyel taramali kalorimetre (DSC) tarafindan 112 'C ve 158 °C'lik tepe fazi geç is sicakliklari ile karakterize edilmektedir. Diger bir yapilanmada, 1:1 bilesik (l) fumarat, bir tek kristal formundadir (B formu). Spesifik bir yapilanmada, 1:1 bilesik (I) fumaratin B formu, Sekil 8'de gösterilen X-isini toz kirinim modeli ile karakterize edilmektedir. Daha özel bir yapilanmada, 1:1 bilesik (I) fumaratin B formu, asagidaki seviyelerde tepe noktalarina sahip olan bir X-isini toz kirinim modeli ile karakterize edilmektedir: Burada tarif edilen ana tepe noktalari, B formunda %75'in 'üzerinde nispi bir yogunluga sahiptir. Diger bir spesifik yapilanmada, 1:1 bilesik (I) fumaratin B formu, diferansiyel taramali kalorimetre (DSC) tarafindan 58 "C ve 162 °C'lik tepe fazi geçi s sicakliklari ile karakterize edilmektedir. Bir baska yapilanmada, 1:1 bilesik (I) fumarat, bir tek kristal formundadir (C formu). Spesifik bir yapilanmada,1 :1 bilesik (I) fumaratin C formu, tek kristal formun Sekil 9'da gösterilen X-isini toz kirinim modeli ile karakterize edilmektedir. Daha özel bir yapilanmada, 1:1 bilesik (I) fumaratin C formu, asagidaki seviyelerde tepe noktalarina sahip olan bir X-isini toz kirinim modeli ile karakterize edilmektedir: Burada tarif edilen ana tepe noktalari, C formunda %75'in `üzerinde nispi bir yogunluga sahiptir. Baska bir spesifik yapilanmada, 1:1 bilesik (I) fumaratin C formu, diferansiyel taramali kalorimetre (DSC) tarafindan 62 C ve 156 °C'Iik tepe fazi geçi s sicakliklari ile karakterize edilmektedir. Diger bir yapilanmada, 1:1 bilesik (I) fumarat, bir tek kristal formundadir (D formu). Spesifik bir yapilanmada, 1:1 bilesik (I) fumaratin D formu, Sekil 10'da gösterilen X-isini toz kirinim modeli ile karakterize edilmektedir. Daha spesifik bir yapilanmada, Form D'nin X-isini kirinim modeli, asagidaki seviyelerdeki tepe noktalarini ihtiva etmektedir: Burada tarif edilen ana tepe noktalari, D formunda %85'in üzerinde nispi bir yogunluga sahiptir. Bir diger spesifik yapilanmada, 1:1 bilesik (l) fumaratin D formunun agirlikça en az %90'i, diferansiyel taramali kalorimetre (DSC) tarafindan 219 °C`Iik tepe fazi geçis sicakligi ile karakterize edilmektedir. Diger bir yapilanmada, 1:1 bilesik (l) maleat, bir tek kristal formundadir (A formu). Spesifik bir yapilanmada, 1:1 bilesik (I) maleatin A formu, Sekil 11'da gösterilen X-isini toz kirinim modeli ile karakterize edilmektedir. Daha 'özel bir yapilanmada, 1:1 bilesik (I) maleatin A formu, asagidaki seviyelerde tepe noktalarina sahip olan bir X-isini toz kirinim modeli ile karakterize edilmektedir: Burada tarif edilen ana tepe noktalari, A formunda %90'nin 'üzerinde nispi bir yogunluga sahiptir. Bir baska spesifik yapilanmada, 1:1 bilesik (I) maleatin A formu, diferansiyel taramali kalorimetre (DSC) tarafindan 219 'C'Iik tepe fazi geçis sicakligi ile karakterize edilmektedir. Burada tarif edilen, bilesik (I)'in fumarat tuzu veya bilesik (I)'in maleat tuzu, ya amorf bir formda ya da kristal bir formdadir. Mevcut bulusta tarif edilen, bilesik (I)'in fumarat tuzu veya bilesik (I)'in maleat tuzu, hem çözünmemis bir form hem de bir solvat formu içermektedir. formunu belirtmekte olup, burada solvent, kati veya kristalin integral bir parçasi olarak bilesik (I)'in fumarat tuzu veya bilesik (I)'in maleat tuzu ile belirli bir oranda (örnegin 1:1 veya 12 molar orani) birlestirilmektedir. tuzu arasindaki kesin olmayan bir orani ifade etmekte ve solvent molekülü, bilesik (I)'in fumarat tuzu veya bilesik (I)'in maleat tuzu içinde büyük 'ölçüde mevcut degildir (agirlikça %10'dan daha az). Iyi bilinen solvent molekülleri arasinda; su, metanol, etanol, n-propanol ve izopropanol yer almaktadir. Mevcut bulusta, 1:1 bilesik (l) fumaratin A formu, bilesik (l) fumarat ve izopropanol arasinda 21 molar oranin bulundugu bir izopropanol solvatidir. Burada tarif edilen, 1:1 bilesik (l) fumaratin B- D formlari ve 1 :1 bilesik (I) maleatin A formu solvat degildirler, yani her biri çözünmemis birformda bulunmaktadir. Bilesik (I) fumarat ve bilesik (I) maleat kullanan tedavi yöntemleri 1:1 Bilesik (I) fumarat ve 1:1 bilesik (I) maleat, PLK4 dahil olmak üzere çesitli kinazlari inhibe edebilmektedir. Dolayisiyla, bulusa konu olan 1:1 bilesik (I) fumarat ve 1:1 bilesik (I) maleat, bu tür kinaz ile baglantili hastaliklarin veya durumlarin tedavisinde faydalidir. Ornegin, PLK4'ün hücresel mitotik gelisimde yer aldigina inanilmaktadir. Bu nedenle, bu enzimin küçük moleküllü inhibitörleri, potansiyel anti-tümör ajanlari olabilmektedir. Spesifik bir yapilanmada, 1:1 bilesik (I) fumarat ve 1:1 bilesik (I) maleat, PLK4 inhibitörleridir ve böyle bir kinaz ile iliskili kanser gibi hastaliklarin tedavisinde kullanislidir. Ayni zamanda, kanserli bir sujeyi tedavi etmeye yönelik olarak, sujeye etkili bir miktarda 1:1 bilesik (I) fumarat ve 1:1 bilesik (I) maleat verilmesini ihtiva eden bir yöntem açiklanmaktadir. Bir yapilanmada, 1:1 bilesik (l) fumarat ve 1:1 bilesik (I) maleat, bir tümörün büyümesini inhibe etmektedir. Spesifik olarak, 1:1 bilesik (I) fumarat ve 1:1 bilesik (I) maleat, PLK4`ü asiri eksprese eden bir tümörün büyümesini inhibe etmektedir. Baska bir yapilanmada, 1:1 bilesik (I) fumarat ve 1:1 bilesik (l) maleat, tümör hücrelerinin apoptozisini tetikleyerek veya tümör hücrelerinin proliferasyonunu inhibe ederek tümörün büyümesini inhibe etmektedir. Tedavi edilebilen veya önlenebilen kanserler arasinda; akciger kanseri, meme kanseri, kolon kanseri, beyin kanseri, nöroblastom, prostat kanseri, melanom, glioblastoma multiform, yumurtalik kanseri, Ienfoma, lösemi, melanom, sarkom, paraneoplazya, osteosarkom, germinoma, glioma ve mezotelyoma bulunmaktadir. Spesifik bir yapilanmada, kanser; akciger kanseri, meme kanseri, kolon kanseri, nöroblastom, prostat kanseri, melanom, glioblastoma multiform, yumurtalik kanseri, Ienfoma, lösemi, osteosarkom, germinoma, glioma, fibrosarkom, gastrointestinal sarkom, fibröz histiositom, yuvarlak hücre sarkomu, sinovyal sarkom, rahim agzi kanseri, anogenital kanser, bas ve boyun kanseri ve orofaringeal kanseridir. Spesifik bir yapilanmada, kanser; akciger kanseri, kolon kanseri, beyin kanseri, nöroblastom, prostat kanseri, melanom, glioblastoma multiform veya yumurtalik kanseridir. Diger bir spesifik yapilanmada, kanser; akciger kanseri, meme kanseri, kolon kanseri, beyin kanseri, nöroblastom, prostat kanseri, melanom, glioblastoma multiform veya yumurtalik kanseridir. Bir baska spesifik yapilanmada, kanser; akciger kanseri, meme kanseri ve kolon kanseridir. Yine bir baska spesifik yapilanmada, kanser, bir meme kanseridir. Yine diger bir spesifik yapilanmada, kanser, bir bazal alt türdeki meme kanseri veya bir Iuminal B alt türdeki meme kanseridir. Bir yapilanmada, bazal alt türdeki meme kanseri; ER (östrojen reseptörü), HER2 ve PR (progesteron reseptörü) negatif meme kanseridir. Yine bir baska spesifik yapilanmada, kanser, bir yumusak doku kanseridir. Bir kapsayan, teknolojide bilinen bir terimdir. Bu yumusak dokular; düz kas, iskelet kasi, tendonlar, lifli dokular, yag dokusu, kan ve lenf damarlari, perivasküler doku, sinirler, mezenkimal hücreler ve sinovyal dokular dahil, ancak bunlarla sinirli olmamak üzere vücudun çesitli yapilarini ve organlarini baglamakta, desteklemekte veya çevrelemektedir. Böylece, yumusak doku kanserleri; yag dokusu, kas dokusu, sinir dokusu, eklem dokusu, kan damarlari, lenf damarlari ve lifli dokular cinsinden olabilmektedir. Yumusak doku kanserleri, iyi huylu veya kötü huylu olabilmektedir. Genellikle, kötü huylu yumusak doku kanserleri, sarkom veya yumusak doku sarkomu olarak adlandirilmaktadir. Lipom, lipoblastoma, hibernoma, Iiposarkom, Ieiomyom, Ieiomyosarkom, rabdomyoma, rabdomyosarkom, nörofibrom, schwannom (nörilemmom), nöroma, schwannom, nörofibrosarkom, nörojenik sarkom, nodüler tenosinovit, sinovyal sarkom, hemanjiyom, glomus tümörü, hemanjiyoperisitom, hemanjiyodendotelyom, anjiyosarkom, Kaposi sarkomu, fibromatözis, dermatofibrosarkom protuberans (DFSP), kötü huylu fibröz histiositom (MFH), miksom, granüler hücre tümörü, kötü huylu mezankimom, alveoler yumusak kisim sarkomu, epiteliyoid sarkom, berrak hücreli sarkom ve dezmoplastik küçük hücreli tümör dahil olmak üzere yumusak doku tümörlerinin birçok türü bulunmaktadir. Ozel bir yapilanmada, yumusak doku kanseri; birfibrosarkom, bir gastrointestinal sarkom, bir Ieiomyosarkom, bir dediferansiye edilmis ve bir sinovyal sarkomdan olusan gruptan seçilen bir sarkomdur. Ayni zamanda, tümör hücreleri bulunan bir sujenin tedavi edilmesine yönelik olarak, sujede PLK4 aktivitesinin etkili bir sekilde azaltilmasi için etkili olan ve burada açiklanan bir bilesigin etkili bir miktarinin sujeye verilmesini ihtiva eden bir yöntem açiklanmaktadir. istenen sonuçlara yol açan, örnegin, bir kontrole göre sujede kanseri inhibe eden, baskilayan veya azaltan (örnegin klinik semptomlar veya kanser hücrelerinin miktari tarafindan belirlenen sekilde) bir miktar anlamina gelmektedir. Burada kullanildigi haliyle "kanserli bir sujenin tedavisi", asagidakilerden bir veya daha fazlasinin kismen veya büyük ölçüde elde edilmesini içermektedir: bir kanserin büyümesinin durdurulmasi, bir kanserin derecesinin azaltilmasi (örnegin, bir tümörün boyutunun küçültülmesi), bir kanserin büyüme hizinin inhibe edilmesi, kanserle iliskili klinik bir semptomun veya göstergenin iyilestirilmesi veya gelistirilmesi (doku veya serum bilesenleri gibi) veya sujenin ömrünün artirilmasi ve kanserin tekrarlama olasiliginin azaltilmasi. Burada kullanildigi sekliyle "bir kanserin tekrarlama olasiliginin azaltilmasi" terimi, bir remisyon süresinin ardindan kanserin bir birincil bölgede veya yakininda ve/veya bir ikincil bölgede geri gelmesinin inhibe edilmesi veya geciktirilmesi anlamina gelmektedir. Bu ayni zamanda, kanserin yoklugundan ziyade burada tarif edilen tedaviyle geri dönme ihtimalinin daha az olmasi anlamina gelmektedir. Burada kullanildigi haliyle "remisyon" terimi, tipik olarak sujenin basarili bir anti-kanser tedavisi ile tedavi edilmesinden sonra kanserle iliskili klinik semptomlarin veya göstergelerin kayboldugu veya tespit edilemedigi kanserin bir evresi anlamina gelmektedir. Genel olarak, bulusa konu olan bir bilesiginin etkili bir miktari; verilen ilaç veya bilesik, farmasötik formülasyon, uygulama yolu, hastalik veya rahatsizligin türü, tedavi edilen sujenin veya konagin kimligi ve benzerleri gibi çesitli faktörlere bagli olarak degismekte, ancak yine de teknikte uzman bir kisi tarafindan rutin olarak belirlenebilmektedir. Mevcut bulusa konu olan bir bilesigin etkili bir miktari, teknikte bilinen rutin yöntemlerle siradan uzmanliga sahip biri tarafindan kolayca belirlenebilmektedir. Bir yapilanmada, 1:1 bilesik (I) fumarat ve 1:1 bilesik (I) maleatin etkili bir miktari; vücut agirliginca 500 mg/kg, alternatif olarak vücut agirliginca yaklasik 0,1 ila yaklasik 100 mg/kg, alternatif olarak vücut agirliginca yaklasik 0,1 ila yaklasik 15 mg/kg, alternatif olarak vücut agirliginca yaklasik 1 ila yaklasik 5 mg/kg ve baska bir alternatif olarak vücut agirliginca yaklasik 2 ila yaklasik 3 mg/kg araliklarinda degismektedir. Uzman kisiler; bazi faktörlerin, kanserden mustarip olan bir sujeyi etkin bir sekilde tedavi etmek için gereken dozu etkileyebilecegini ve bu faktörler arasinda, bunlarla sinirli olmamak üzere hastalik veya rahatsizligin ciddiyetinin, önceki tedavilerin, sujenin genel sagligi ve/veya yasinin ve mevcut diger hastaliklarin bulunacagini takdir edecektir. Ayrica, bir sujenin, mevcut bulusa konu olan bilesigin etkili bir miktari ile bir "tedavi" rejimi, tek bir uygulamadan olusabilmekte veya alternatif olarak bir dizi uygulamayi ihtiva edebilmektedir. Omegin, 1:1 bilesik (I) fumarat ve 1 :1 bilesik (I) maleat, haftada en az bir kez uygulanabilmektedir. Bununla birlikte, baska bir yapilamada, bilesik, verilen bir tedavi için sujeye haftada yaklasik bir kez ila günde bir kez arasinda bir oranda verilebilmektedir. Tedavi süresinin uzunlugu; hastaligin ciddiyeti, hastanin yasi, mevcut bulusa konu olan bilesiklerin konsantrasyonu ve aktivitesi veya bunlarin bir kombinasyonu gibi çesitli faktörlere baglidir. Tedavi ya da profilaksi için kullanilan bilesigin etkili dozajinin, belirli bir tedavi ya da profilaksi rejimi boyunca artabilecegi ya da azalabilecegi takdir edilecektir. Dozajdaki degisiklikler, teknikte bilinen standart teshis tahlilleriyle sonuçlanabilmekte ve ortaya çikarilabilmektedir. Bazi durumlarda, kronik uygulama gerekli olabilmektedir. Bir "suje"; bir memeli, tercihen de bir insandir, fakat ayrica veterinerlik tedavisine ihtiyaç duyan bir hayvan, örnegin evcil hayvanlar (örn. köpekler, kediler ve benzerleri), çiftlik hayvanlari (örn. inekler, koyunlar, domuzlar, atlar ve benzerleri) ve laboratuvar hayvanlari (örn. siçanlar, fareler, kobaylar ve benzerleri) olabilmektedir. Bulusa konu olan bilesikler; teknikte uzman kisilerce anlasilacagi gibi, seçilen uygulama yoluna bagli olarak bir hastaya çesitli formlarda uygulanabilmektedir. Bulusa konu olan bilesikler; örnegin oral, parenteral, bukkal, sublingual, nazal, rektal, yama, pompa veya transdermal uygulama ile verilebilmekte ve farmasötik bilesimler buna göre formüle edilebilmektedir. Parenteral uygulama; intravenöz, intraperitoneal, subk'ütanöz, intrami'isk'üler, transepitelyal, nazal, intrapulmoner, intratekal, rektal ve topikal uygulama modlarini ihtiva etmektedir. Parenteral uygulama, seçilen bir süre boyunca sürekli infi'izyon yoluyla olabilmektedir. 1:1 bilesik (l) fumarat ve 1:1 bilesik (I) maleat içeren farmasötik bilesimler 1:1 Bilesik (l) fumarat veya 1:1 bilesik (I) maleat veya burada açiklanan kristal formlarin herhangi biri veya daha fazlasi, bir sujeye uygulama için farmasötik bilesimler halinde uygun sekilde formüle edilebilmektedir. Bir yapilanmada, mevcut bulus; yukarida tarif edildigi gibi 1:1 bilesik (l) fumarat veya 1:1 bilesik (I) maleat ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici veya seyrelticiyi içeren ve tuzun agirlikça en az %80'i (tercihen %90'i, daha tercihen %99'u) kristal formunda olan bir farmasötik bilesim sunmaktadir. Mevcut ögretilerin farmasötik bilesimleri; istege bagli olarak laktoz, nisasta, selüloz ve dekstroz gibi bir veya daha fazla farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyici ve/veya seyreltici ihtiva etmektedir. Aroma maddeleri, tatlandiricilar ve metil, etil, propil ve bütil parabenler gibi koruyucular gibi diger eksipiyanlar da dahil edilebilmektedir. Uygun eksipiyanlarin daha eksiksiz listeleri, Farmasötik Eksipiyanlar El Kitabi'nda bulunabilmektedir (5. Baski, Pharmaceutical Press (2005)). Teknikte uzman bir kisi, çesitli uygulama yollarina uygun formülasyonlarin nasil hazirlanacagini bilecektir. Uygun formülasyonlarin seçilmesi ve hazirlanmasina yönelik geleneksel prosedürler ve bilesenler, örnegin Remington's Pharmaceutical Sciences'da (2003 - . baski) ve 1999`da yayinlanan Amerika Birlesik Devletleri Farmak0pesi: Ulusal Kodeks'te (USP 24 NF19) açiklanmaktadir. Tasiyicilar, seyrelticiler ve/veya eksipiyanlar; farmasötik bilesimin diger bilesenleriyle uyumlu olmalari ve aliciya zararli olmamalari acilarindan "kabul edilebilir" bulunmaktadirlar. Tipik olarak, oral terap'otik uygulama için, mevcut ögretilere ait bir bilesik, eksipiyanla birlestirilebilmekte ve yutulabilir tabletler, bukkal tabletler, haplar, kapsüller, iksirler, süspansiyonlar, suruplar, gofretler ve benzerleri formunda kullanilabilmektedir. Parenteral uygulama için tipik olarak, mevcut ögretilerin bir bilesiginin çözeltileri, genellikle, hidroksipropilselüloz gibi bir sürfaktan ile uygun sekilde karistirilmis su içinde hazirlanabilmektedir. Dispersiyonlar ayrica; gliserol, sivi polietilen glikoller, DMSO ve bunlarin alkollü veya alkolsüz karisimlarinda ve yaglar içinde de hazirlanabilmektedir. Siradan depolama ve kullanim kosullari altinda, bu preparatlar, mikroorganizmalarin büyümesini önlemek için bir koruyucu ihtiva etmektedir. Tipik olarak, enjekte edilebilir kullanim için, steril enjekte edilebilir çözeltiler veya dispersiyonlarin ekstamporane hazirlanmasina yönelik olarak burada tarif edilen bir bilesigin steril sulu çözeltileri veya dispersiyonlari ve steril tozlari uygundur. Nazal uygulama için, mevcut ögretilerin bilesikleri; aerosoller, damlalar, jeller ve tozlar halinde formüle edilebilmektedir. Aerosol formülasyonlari, tipik olarak, etken maddenin fizyolojik olarak kabul edilebilir sulu veya susuz bir solvent içinde bir çözeltisini veya ince süspansiyonunu içermekte ve genellikle, bir atomizasyon cihaziyla kullanima yönelik bir kartus veya yedek formunda olabilen kapali bir kabin içinde steril formda tek veya çok dozlu miktarlarda sunulmaktadir. Alternatif olarak, kapali kap, tek dozlu bir nazal inhaler veya bir aerosol dagitici gibi kullanimdan sonra atilmasi amaçlanan ve bir ölçme valfi ile donatilmis üniter bir dagitim cihazi olabilmektedir. Dozaj formunun bir aerosol dagitici içerdigi durumda, sikistirilmis hava gibi sikistirilmis bir gaz veya floroklorohidrokarbon gibi bir organik itici gaz olabilen bir itici gaz içerecektir. Aerosol dozaj formlari ayrica, bir pompali atomizer formunu da alabilmektedir. Bukkal veya sublingual uygulama için, mevcut 'ögretilerin bilesikleri; tabletler, tablet pastiller veya pastiller gibi seker, akasya, kitre veya jelatin ve gliserin gibi bir tasiyici ile birlikte formüle edilebilmektedir. Rektal uygulama için, burada tarif edilen bilesikler, kakao yagi gibi geleneksel bir fitil bazini içeren fitiller formunda formüle edilebilmektedir. Bulus, herhangi bir sekilde sinirlayici olmasi amaçlanmayan asagidaki örneklerle açiklanmaktadir. DENEYSEL Kisaltmalar: BSA benzen sülfonik asit EtOAc etil asetat EtOH etanol 8 saat HPLC yüksek performansli sivi kromatografisi MeOH metanol MIBK metil izobütil keton MTBE metil tert-b'ütileter NMR nükleer manyetik rezonans pTSA para tolüensülfonik asit RBF yuvarlak dipli sise RH bagil nem Rel.lnt. bagil yogunluk rt oda sicakligi sic sicaklik TGA termogravimetrik analiz THF tetrahidrofuran wt% agirlikça yüzde XRPD X-isini toz kirinimi Analiz Kosullari Diferansiyel Taramali Kalorimetre Analizi (DSC) DSC analizleri, bir Mettler 822e diferansiyel taramali kalorimetre veya bir TA Instruments Q2000 cC ve 40-300 *C olmu stur. Termal Gravimetrik Analiz (TGA) TGA analizleri, bir Mettler 851e SDTA termogravimetrik analiz cihazinda gerçeklestirilmistir. °C'de analiz edilmistir. X-lsini Toz Kirinimi (XRPD) Ornekler, bir Panalytical CubiX-Pro X-isini toz difraktometresi veya bir Bruker AXS/Siemens DSOOO difraktometresi üzerinde analiz edilmistir. Panalytical Kosullari: Ornekler, silikonsuz geri dönüslü ultra mikro ornek tutucunun üzerine yerlestirilmistir. Ornekler, 40 kV/30 mA'da çalisan X-isini tüpü ile bakir K-alfa X-isinlari ile isinlanmistir. Ornekler, sürekli modda 3 ila 45°arali ginda taranmistir. Bruker AXS/Siemens D5000 Kosullari: 50kV/35mA'da çalisan yüksek güçlü bir Cu hedefi kullanilmistir. ikincil isin, kati hal bir Kevex detektorü ile monokromatize edilmistir. Ornekler, organik kristal bilesiklerin çogu için temsili tepe noktalarinin olustugu 2 - 35° (2 o) araliginda taranmistir. Gravimetrik Nem Emme Gravimetrik nem emme deneyleri, bir Hiden dinamik buhar emme analiz cihazinda ilk önce örnegi bir denge agirligina ulasana kadar veya maksimum dört saat boyunca %40 RH ve 25 °C'de tutarak gerçeklestirilmistir. Ornek, daha sonra %10'luk adimlarla %40 ila %90 RH arasinda bir izotermal (25 cC) adsorpsiyon taramasina tabi tutul mustur. Ornegin her noktada en fazla dört saat boyunca asimptotik bir agirliga dengelenmesine izin verilmistir. Adsorpsiyonun ardindan, yine asimptotik bir agirliga dengeleme için maksimum dört saat boyunca -%10'Iuk adimlarla 85 ila %5 RH (25 C'de) arasinda bir desorpsiyon taramasi ger çeklestirilmistir. Adsorpsiyon taramasi daha sonra, +%10 RH adimlariyla %0 RH ila %40 RH arasinda gerçeklestirilmistir. Raman Spektroskopisi Raman analizi için örnekler, PhAT Problu bir Kaiser RXN1 Makroskobu üzerinde analiz edilmistir. 96 kuyulu plaka kristalizasyonlarindan elde edilen katilar, asagidaki kosullar kullanilarak analiz edilmistir: Raman Kaynagi: 785 nm lazer Mikroskop Objektifi 1,2 mm Tek Pozlama Süresi: 12 sn Es ilaveler: 12 Mümkün Pozlama seçenekleri: Kozmik Isin filtreleme, Karanlik Çikarma, Yogunluk Kalibrasyonu Optik Mikroskopi Ornekler, bir dijital kamera (1600 x 1200 çözünürlük) ile birlestirilmis bir Leica DMRB polarize isik mikroskobu ile incelenmistir. Küçük miktarlardaki örnekler, Iamelli bir lam üzerindeki mineral yag içinde dagitilmis ve 100X veya daha yüksek orandaki büyütme ile görüntülenmistir. Çift-kirilim Çift-kirilim analizi için örnekler, bir Coleman Technologies çift-kirilim görüntüleyicide analiz edilmistir. 96 kuyulu plaka kristalizasyonlarindan elde edilen katilar, asagidaki kosullar kullanilarak analiz edilmistir: Aydinlatma: 37 Pozlama: 57,9 Polarizasyon: 0,0 Kuyu maskesi çapi: 6,2 Hedef Yogunlugu: 80 Hedef Persentil: 90,0 Maksimum Ortalama Yogunluk: 100 Nükleer Manyetik Rezonans Proton NMR için örnekler, bir Bruker 400 MHz spektrometresi kullanilarak analiz edilmistir. Ornek 1: Kombinasyonal Tuz Ekrani Alti solvent (lPA, THF, aseton, asetonitril, EtOH ve EtOAc) ve yirmi sekiz farmasötik olarak kabul asit, metan sülfonik asit, adipik asit, etan disülfonik asit, maleik asit, benzoik asit, L-malik asit, sitrik asit, L-Iaktik asit, hippurik asit, L-pirolütamik asit, süksinik asit. L-tartarik asit, formik asit, fumarik asit , glutarik asit, L-askorbik asit, sorbik asit, benzoik asit ve malonik asit) kullanilarak bir tuz ekrani gerçeklestirilmistir. 96 kuyulu bir plaka, her bir kuyuda MeOH içerisinde 200 pL'lik bir mg/mL bilesik (I) çözeltisi olacak sekilde doldurulmustur. Solvent daha sonra, bir azot akisi altinda buharlastirilarak her bir kuyuda yaklasik 4 mg baslangiç materyali birakilmistir. Ilgideki birincil solvent daha sonra, her bir kuyuya (500 i.iL) ilave edilmistir. Plakalar, 50 cC'ye isitilmis ve A'nin tamamen çözünmesini saglamak için 10 dakika boyunca manyetik olarak karistirilmistir. Daha sonra her bir kuyu, her bir asidin 1,05 esdegerine karsilik gelen bir hacimdeki belirli karsi yük çözeltisi ile doldurulmus ve 10 dakika boyunca sicaklikta dengelenmesine izin verilmistir. Plakalar daha sonra, 20 @[5 ile 25 cC'ye so gutulmus, bu noktada ana plaka, her bir kuyudan bir buharlasma plakasina 200 uL aktarilarak çogaltilmistir. Akabinde plakalar, ortam sicakligina sogutulmus, gece boyunca 5 °C'de bekletilmi s ve katilarin varligi kontrol edilmistir. Ana plakalardan gelen solvent, daha sonra sorbent kâgidi ile islatilarak uzaklastirilmistir. Ardindan ana ve buharlasma plakalari, gece boyunca azot altinda kurutulmustur. Daha sonra kati madde içeren kuyular puanlanmis ve çift-kirilim, benzersiz Raman spektrumu ve esik çözünürlügü açilarindan derecelendirilmistir. Uygun solvent ve karsi yük kombinasyonlari daha sonra, artan bir ölçekte A ile tuz olusumu için yeniden degerlendirilmistir. Ornek 2: Orta Ölçekli Tuz Olusumu Yaklasik 40 mg bilesik (I), manyetik bir karistirma çubugu içeren 8 mL'Iik bir sise içerisine tartilarak konmustur. Siseye, artirilan sicaklikta çözünmeyi saglamak için birincil solvent ilave damla eklenmistir. Tüm karisimlar, yüksek sicaklikta 15 dakika boyunca karismaya birakilmis, ardindan 10 °Cls hizinda oda sicakligina sogutulmus ve gece boyunca karistirilmistir. Sogutmadan sonra çökelme göstermeyen örnekler, çekirdeklenmeyi tetiklemek üzere bir spatula ile çizilmis ve -10 ila -20 cC'de bir dondurucuda saklanmistir. Siseler, 1 saat sonra kristal büyümesi için kontrol edilmistir. Katilari ortaya koyan kosullardan gelen örnekler santrifüjlenmis, filtrelenmis veya azot altinda buharlastirilmistir. Diger tüm örneklerin -20 cC'de 72 saat boyunca dengelenmesine müsaade edilmistir. Çökelme göstermeyen siseler daha sonra azot altinda kurutulmustur. Ortaya çikan katilar daha sonra, 5 gün boyunca IPA ile bulamaç haline getirilmistir. Bu deneylerden, fumarik asit tuzu haricindeki tüm karsi yükler için sadece amorf kati maddeler tanimlanmistir. Bilesik (I) fumarat tuzunun essiz polimorfik formlari, asagida tarif edilmektedir. Bilesik (l)'in Kristal Tuzlarinin Hazirlanisi Ornek 3: 1:1 bilesik (l) fumaratin A formunun hazirlanisi Bilesik (l) (42 mg, 0,078 mmol), asetonitril ( içinde çözülmüs ve 50 (Uye isitilmistir. Fumarik asit (IPA'da eklenmis ve karisim 15 dakika boyunca karistirilmistir. Çökelti filtrelenmis ve gözlenebilir çift-kirilimin olmamasindan dolayi amorf olduguna karar verilmistir. Amorf kati daha sonra, 5 gün boyunca IPA ( ile bulamaç haline getirilmistir. Bulamaçtan elde edilen kati, çift-kirilim göstermis ve ayrica XRPD, DSC, 1H NMR ve TGA ile bir IPA solvat olarak karakterize edilmis ve fumarat A formu olarak belirtilmistir. Tablo 1. Fumarat A Formunun XRPD'si açisi Rel. Int. ('70) 8,17 %43 9,69 %100 ,69 %33 11,51 %30 13,63 %25 14,89 %36 16,73 %61 18,09 %27 18,83 %23 ,05 %50 23,49 %34 24,45 %26 Örnek 4: 1:1 bilesik (l) fumaratin B formunun hazirlanisi Fumarat Aformundan 60 DSC termogrami ve XRPD ile B formu olarak belirtilen bir kristal malzemeyle sonuçlanmistir. B formu ayrica, amorf mono fumarat tuzunun EtOAc içerisinde çözünd'ürülmesi ve B formu kristalleri ile tohumlanmasiyla dogrudan hazirlanabilmektedir. Gravimetrik nem emilimi, tuz formunun higroskopik oldugunu ve %90 RH'de bir tetrahidrat olusturdugunu göstermektedir. Tablo 2. Fumarat B Formunun XRPD'si 26 açisi Rel. Int. ,51 39,5 ,91 38,7 11,91 100,0 14,93 83,5 16,71 40,2 17,35 40,4 18,73 42,8 21,53 41,0 23,41 43,3 Ornek 5: 1:1 bilesik (l) fumaratin C formunun hazirlanisi Üçüncü bir fumarat polimorf, amorf fumarat tuzunun THF içinde çözülmesi ve fumarat B formu kristalleri ile tohumlanmasi ile elde edilebilmektedir. Solvent, B formundan farkli bir XRPD modeli ve Raman Spektrumu sergileyen beyaz bir kati haline degin yavas yavas buharlastirilmis ve fumarat C formu olarak tanimlanmistir. Tablo 3. Fumarat C Formunun XRPD'si 26 açisi Rel. Int. 9,71 68,1 9,83 70,2 11,71 59,5 ,05 60,1 16,83 88,7 16,87 84,7 19,93 100,0 23,45 70,7 23,65 69,6 Ornek 6: 1:1 bilesik (I) fumaratin D formunun hazirlanisi Fumarat C formunun oda sicakliginda 10 gün boyunca asetonitril ile bulamaç hale getirilmesi; farkli bir Raman Spektrumu ve XRPD modeli gösteren ve D formu olarak belirtilen yeni bir kristal forma geçise neden olmustur. Faz geçisi DSC ile diger formlardan çok daha yüksek olmus ve tanimlanan dort polimorftan en yüksek stabiliteyi ortaya koymustur. Form D, dogrudan asagidaki sekilde hazirlanabilmektedir: Bir karistirma çubugu ile donatilmis 250 mL'Iik üç boyunlu bir RBF, ilave edilmis ve bulamaç, çözelti berraklasincaya kadar 50 c(Z`ye kadar isitilmi stir. 10 dakika sonra çökelme gözlenmis ve ilave bir 30 dakika daha karistirmaya devam edilmistir. MTBE (25 mL) eklenmis ve çözelti oda sicakligina sogutularak gece boyunca karistirilmistir. Katilar filtrelenmis ve beyaz bir kati (6,65 9, %91) halinde bilesik (I) adini verecek sekilde 2 gün boyunca 60 °C'de vakum altinda kurutulmustur. 1H NMR (, 7,50-7,45 (m, Tablo 4. D Formunun XRPD'si açisi Rel. Int. (%) 9,59 97,3 11,69 39,2 12,03 53,4 12,83 100,0 ,95 92,6 16,55 47,2 16,93 73,3 18,13 47,8 19,23 59,0 19,81 55,4 ,67 59,1 ,79 61,9 21,23 71,5 21,49 66,6 21,97 97,2 22,53 42,1 23,97 53,9 24,03 46,2 26,03 32,5 29,75 41,6 Fumarik asit tuzu, çesitli kosullar altinda D formunda üretilebilmektedir. Kristal form, Tablo 5'te gösterildigi gibi B veya D formundaki kristallerle tohumlama yoluyla üretilebilmektedir. Tuz; ana bilesik (I)'in etil asetat, aseton veya etanol gibi polar solventler içinde çözülmesi ve fumarik asidin, Tablo 6'da gösterildigi gibi metanol, etanol, THF ve izopropanol gibi polar solventlere aktarilmasi ile dogrudan kristallestirilebilmektedir. MTBE gibi bir antisolvent eklendiginde, verimler genellikle gelistirilmektedir. D formunu vermeyen kosullar, bilesik (I)'in asetonitril, 2-metiltetrahidrofuran ve metilizobütil keton gibi daha az polar solventler içinde çözüldügü durumlari ihtiva etmektedir. Ayrica, bir antisolvent olarak heksan ilavesi, kristal D formunu ilerletmemektedir. Tercih edilen D Formu ayrica; bilesik (I)'in metanol, etanol, THF veya aseton gibi uygun bir solvent içinde çözülmesi ve Tablo 7'de görüldügü gibi fumarik asidin dogrudan bir kati halde aktarilmasiyla da üretilebilmektedir. MTBE veya IBAo gibi bir antisolvent ilave edildiginde verimler artmaktadir. Primer solvent, etil asetat ve MTBE'de oldugu gibi daha az polar oldugunda, D Formu, bu yöntem ile olusmamaktadir. Bir 221 bilesik (I)/fumarik asit kristal tuz üretilememistir. Bilesik (I)'in iki esdegeri; EtOAc, EtOH, THF, IPA gibi bir primer solvent içinde çözülmüs ve fumarik asidin bir esdegeri, bir kati halinde veya IPA veya EtOH içeren bir çözelti içerisinde ilave edilmistir. Nihai çözeltiler, 30 dakika boyunca 50 °C'ye kadar isitilmis ve oda sicakligina kadar sogutulmustur. MTBE ilave edilmis ve karisim, 24 s boyunca bulamaç haline getirilmistir. Hem katinin hem de filtratin 1H NMR ile karakterizasyonu, sadece 121 bilesik (I)/fumarat tuzu elde edildigini göstermistir. Tablo 5. Fumarat tuzunun tohumlama ile kristallestirilmesi Birincil Aktarim Esdegerler Sic ('C) Tohum Verim Form Solvent Solventi ilavesi (%) EtOAc EtOH 1 ,05 50 B 77 D EtOAc EtOH 1 ,05 50 D 67 D Tablo 6. Fumarat tuzunun kristallestirilmesi Birincil Aktarim Esdegerler Sic ("C) Antisolvent Verim Form Solvent Solventi (%) EtOAc MeOH 1,05 50 MTBE 54 D EtOAc EtOH 1,05 50 MTBE 51 D EtOAc THF 1,05 50 MTBE 53 D EtOAc IPA 1,05 50 MTBE 50 D EtOAc THF 1,05 50 Heksan - - 2-MeTHF MeOH 1,05 50 MTBE - - 2-MeTHF EtOH 1,05 50 MTBE - - 2-MeTHF THF 1,05 50 MTBE - - Aseton MeOH 1,05 50 MTBE 75 D Aseton EtOH 1,05 50 Yok 40 D Aseton THF 1,05 50 MTBE 72 D Aseton THF 1,05 50 Heksan - - MIBK THF 1,05 50 MTBE - - EtOH THF 1,05 50 MTBE 69 D EtOH THF 1,05 50 Heksan - - THF THF 1,05 50 Heksan - - Tablo 7. Kati olarak eklenen fumarik asit ile kristallestirme Birincil Esdegerler Sic (`C) Antisolvent Verim Form Solvent (%) MeOH 1,01 50 Yok 43 D EtOH 1,05 50 MTBE 74 D EtOH 1,05 50 IBAC 74 D THF 1,01 50 MTBE 64 D Aseton 0,99 50 Yok 53 D Aseton 1,05 50 MTBE 82 D Aseton 1,05 50 IBAc 81 D EtOAc 1,01 50 Yok - - MTBE 1,01 50 Yok - - Kombinasyonal Tuz Ekrani Sonuçlarinin Yeniden Puanlanmasi Ilk kombinasyonal islemden sadece fumarat tuzu kristal yapida olarak tanimlanmistir. Yüksek çiktili ekrandan gelen sonuçlar, yeniden degerlendirilmis ve her bir karsi yük için solventten bagimsiz olan yeni Skorlar üretilmistir. Bu yeniden puanlama, önceki skorlarin (kati olusumunun görsel muayenesi, çift-kirilim, Raman spektrumu ile benzersizligi ve esik çözünürlük) tüm solventler üzerinden birlestirilmesi ve hem ana hem de buharlasma plakalari için toplanmasiyla farkli tuzlar için devam etmistir. En yüksek iki yeniden puanlanmis asit, maleik ve metan sülfonik asit, ilave solvent ve antisolvent kosullari altinda ayrica degerlendirilmistir. Metan sülfonik asitten elde edilen tuzlar, higroskopiklik göstermistir. Bununla birlikte, maleik asit içeren bir kristal tuz tanimlanmistir. Bilesik A'nin bir maleat tuzunun hazirlanmasi ve karakterizasyonu asagida tarif edilmistir. Ornek 7: 1:1 bilesik (l) maleatin Aformunun hazirlanisi Bir karistirma çubuguyla donatilmis (4,96 9, 9,3 mmol) ile doldurulmustur. Aseton (55 mL) ilave edilmis ve 50 cC'ye isitilmi stir. Maleik asit (aseton içinde 20 mL'Iik 0,5 M çözelti) ilave edilmis ve sonuç olarak, 1 dakika sonra bulanik hale gelen berrak bir çözelti elde edilmistir. Çözelti, oda sicakligina sogutulmus ve 24 saat boyunca kalin bir bulamaç halinde karistirilmistir. Katilar filtrelenmis, MTBE ile yikanmis ve beyaz bir kati ile bir kristal olarak karakterize edilmis ve A formu olarak adlandirilmistir. Tablo 8. Maleat A Formunun XRPD'sI 26 açisi rel. int. ,45 28,2 ,75 54,4 ,83 70,9 11,49 111,9 12,37 79,3 12,59 103,2 14,05 38,1 14,91 96,1 ,07 100,0 16,73 29,6 17,05 75,9 17,83 20,6 18,55 51,7 19,51 34,8 19,91 30,7 21,89 25,9 22,15 34,6 23,03 39,4 23,31 45,3 23,51 56,1 23,89 33,3 26,09 60,3 Maleat A formu, MTBE gibi polar olmayan bir antisolvent iIaveIi veya ilavesiz EtOH, aseton, izopropil asetat, etil asetat, izopropanol veya THF gibi bir polar solventten üretilebilmektedir. Bir 2:1 bilesik (I)/maleik asit kristal tuz üretilememistir. Bilesik (I)'in Amorf Tuzlarinin Hazirlanisi Ornek 8: Bilesik (I)'in HCI tuzunun hazirlanisi Bilesik (I) ( içinde 1M HC1, oda sicakliginda ilave edilmis ve çözelti, eterle ( birlikte seyreltilmistir. Karisim, 1 3 oda sicakliginda saklanmis ve elde edilen kati filtrelenmistir. Kati, dururken bir jel olusturmus ve su ( haline kurutulmustur. 1H NMR (, 7,48 (d, J = 8,0 Ornek 9: Bilesik (l)'in fosfat tuzunun hazirlanisi Bilesik (l) (148 mg, 0,27 mmol), EtOAc ( içindeki 0,5 M fosforik asit, 50 "C'de eklenmis ve çözelti, 15 dakika boyunca karistirilmis ve oda sicakligind sogutulmustur. Katilar filtrelenmis ve beyaz bir kati (149 mg, %85) halinde bilesik (l) adini verecek sekilde 4 gün boyunca 60 °C'de kurutulmu stur. Çözünürlük Testi ve Farmakokinetik Analizler Yöntemler: (l)'in HCI tuzu, fumarat D formu ve maleat A formu çözeltideki tek bir oral doz ve kapsül içinde toz olarak, 5 mg/kg ile disi Sprague-Dawley siçanlarina uygulanmistir. Kan örnekleri, lityum heparin varliginda toplanmis ve plazma olusturmak için santrifüjlenmistir. Plazma daha sonra, bilesik (I) plazma seviyeleri için LC/MS ile analiz edilmistir. Siçanlarda kapsülle dozlama için test parçasinin hazirlanisi: Dozlama programinda yer alan tüm hayvanlar tartilmis ve sayilar verilmistir. Dozajlanacak her hayvana karsilik gelen bütün kapsüller (9 büyüklükte sert domuz jelatini kapsüller, Torpac), ince uçlu bir Sharpie ile dikkatlice numaralandirilmistir. Tarti üzerine küçük bir plastik tarti kabi yerlestirilmis, bir kapsül kapagi kap üzerine konumlandirilmis ve kapsül yükleyicinin tabani kapsülün diger kismi ile birlikte hazneye yerlestirilmistir. Dara alinmistir. Kapsül yükleme aparatinin üzerine bir huni yerlestirilmis ve toplam kütle dikkatlice not edilmistir. Bir parça 4"x4" balmumu kagidi, orta kisimdan asagi bir kivrim yaratacak sekilde ikiye katlanmistir. Küçük bir miktardaki ince ögütülmüs bilesik (gerekirse bilesigi havan ve tokmak kullanarak Ögütün), balmumu kagidinin kivrimina birakilmis ve tekrar katlanmistir. Katlanmis balmumu kagidi, kapsül yükleyicinin huni aygitinin üzerine hafifçe açilandirilmistir. Bir miktar bilesik tozunun huni üzerine siyrilmasi ve yükleme bölmesine ve nihayetinde kapsül içine süzülmesine izin verilmesi için ince bir skapula kullanilmistir. Kütledeki toplam kütleye göre degisim, not edilmistir. Kapsül yükleme hunisi uzaklastirilmis ve kapsül içindeki bilesigin mutlak agirligini belirlemek için denge kapisi kapatilmistir. Huni, kapsül yükleme aparatina geri döndürülmüs ve istenen miktarda ilaç kapsülün içine girinceye kadar yükleme devam etmistir. Not: Kapsüle minik miktarlar eklerken, huni üzerine çöken ince tozlu ilaç basitçe yükleme kolonunun içine firçalanmistir. Huni uzaklastirilmis ve agirlik kaydedilmistir. Gerçek ilaç miktari, tartilan materyalin biyoesdegerlik orani ile çarpilmasi ile hesaplanmistir. Gerçek ilaç miktari kaydedilmistir. Tarti kabi üzerindeki kapsül kapagi, yerine oturdugunda tik sesi gelinceye kadar kapsülü sikica kapatmak için kullanilmistir. Tüm hayvanlara (n=3/grup), 5 mL/kg'lik bir hacimde oral yolla doz verilmistir. Dozlamanin ardindan, her bir siçandan, belirlenmis zaman noktalarinin her birinde kan alinmistir. Kontrol hayvanlari için, ayni prosedürle kan toplanmistir. Kan, lateral safanöz veninden alinmistir. Kan alikuotlari (~50 pL), Iityum heparin ile kapli tüplerde toplanmis, hafifçe karistirilmis, daha sonra buz üzerinde tutulmus ve alindiktan sonraki 1 saat içinde oda sicakliginda 15 dakika boyunca 2.500xg'de santrifüjlenmistir. Plazma katmani toplanmis, buz üzerinde tutulmus ve son olarak, ileri bir isleme kadar -80 °C`de dondurulmu s halde tutulmustur. Biyoanalitik Yöntemler Biyoanalitik miktar tayini, HPLC/tandem dörtlü kütle spektrometrisi (HPLC-MS) kullanilarak gerçeklestirilmistir. Plazma konsantrasyonlari ve T1/2 hesaplanmis ve rapor edilmistir. Plazma Tahlili: DMSO içindeki 5 mg/mL'Iik standart bir çözelti, 100 kat seyreltilmis ve daha sonra %50 DMSO içerisinde seri sekilde seyreltilmistir. Seri seyreltilerin alikuotlari (2 pL), standart bir egri olarak kullanilmak üzere 18 pL kontrol plazmasiyla (toplam 20 pL) karistirilmistir. Plazma örnekleri (20 pL) ve standart örnekler daha sonra, iç standart olarak (hacimce %80 asetonitril) olarak 100 ng/mL verapamil içeren buz gibi soguk asetonitril ile 5 kat seyreltilmistir. Asetonitril ile çökeltilmis örnekler ve standartlar, 96 kuyulu bir formatta 0,22 um zarlardan filtrelenmistir. Filtratlar daha sonra, suyla %30 asetonitrile degin seyreltilmistir. Doz Tahlili: Dozlama çözeltisi ( ile seyreltilmistir. Daha sonra, nominal konsantrasyonun LC-MS analizi için uygun olan 500 ng/mL seviyesinin altina getirilmesi için elde edilen çözeltinin %30 asetonitrile (dahili standart içeren) seyreltilmesi üç kere gerçeklestirilmistir. 5 mg/mL'Iik bir DMSO stogundan %30 asetonitrile (dahili standart içeren) seri seyreltme, uygun bir standart egri saglamistir. Örnekler ve standartlar (10 pL), asagida tarif edildigi gibi LC-MS sistemine enjekte edilmistir. Doz çözeltilerinin konsantrasyonlari, mglmL cinsinden rapor edilmistir. LC-MS analizi: LC: Her bir Örnegin ve standardin 10 pL'si, bir Acquity UPLC ile 0,6 mL/dak'da bir Waters Acquity dengelenmistir. Bilesikler, bir gradyan ile %99 asetonitrile elüte edilmistir. Tüm mobil fazlar, hacimce %0,1 formik asit içermistir. Kromatografik elüsyon: 0,75 5 4,5 99,9 99,9 MS: Kolon elüenti, tandem bir dört kutuplu kütle spek sistemine (Waters Xevo TQ) elektrosprey iyonizasyonu ile analiz edilmistir. Elüent bilesimi, iç standart için spesifik olan üç iyon çifti ve analit için spesifik olan üç iyon çifti için analiz edilmistir. Farmakokinetik Analizler Deneysel örnekler, bilesik konsantrasyonlarini belirlemek için standart egri örnekleri ile karsilastirilmistir. Her bir zaman noktasi için ortalama bilesik konsantrasyonlari (ug/mL +/- standart sapma olarak) bildirilmistir. Tespit Siniri (LLOQ), nominal konsantrasyonun %20'sinden daha az bir sapma gösteren en düsük standart egri örnegi olarak rapor edilmistir. PK analizi, Excel eklentisi PKfit tarafindan gerçeklestirilmis; Cmax, verilen bir zaman noktasinda gözlemlenen maksimum ortalama konsantrasyon olarak belirlenmis; egrinin altindaki alan (AUC) tiasi saatleri için rapor edilmistir. Plazma yari ömürleri, minimum 3 terminal zaman noktasi r2 0,8 ile birinci dereceden eliminasyon gösterdiginde rapor edilmistir. Tablo 9'da gösterildigi gibi, bilesik (l)'in kristal tuzlarinin deiyonize suda amorf fosfat ve HCI tuzlarina kiyasla daha az çözünür oldugu gösterilmistir. Bildirilen birçok vakada, amorf tuzlarin Çözünürlügünün artmasi, daha stabil bir kristal forma göre plazma konsantrasyonlarinda bir artisa farmakokinetik parametreleri ve plazma konsantrasyon-zaman profilleri, disi Sprague-Dawley siçanlarina kapsül içinde toz halinde (PIC) oral dozajlama sonrasinda karsilastirildiklarinda, farmakokinetik parametrelerdeki fark minimal olmustur (Tablo 10). Tablo 9: Bilesik (I) Tuzlarinin karakterizasyon özeti Karsit XRPD Bilesik (l):asit DSC TGA Kaybi Gravimetrik Nem DI suda yük orani (°C) (wt %) Emme çözünürlük ,5 wt% 90% RH 4,0 wt% 90% RH kadar 2,2 wt%, 90% RH gozlenmedi 179 10,9 wt% 90% RH HCI Amorf 2,3 (30- 2 1 x 105 150 T:) Tablo 10: Bilesik (I) Tuzlarinin Kapsül içinde Toz olarak SpragueDawley Siçanlarina PO Uygulamasindan sonra Farmakokinetik Parametreler Tuz formu HCI Fumarat (D formu) Maleat (A formu) Oral Doz (mg/kg) 5,0 5,0 5,0 metoksispiro[sîklopropan-1,3`-indolin]-2'-bîr fumarat A formunun DSC termogrami. TR TR TR TR TR TR

Claims (5)

ISTEMLER

1. Bilesik (I)`in asagidaki yapisal formülle temsil edilen bir fumarat tuzu olup, özelligi; Bilesik :I: bilesik (l) ile fumarik asit arasindaki molar oranin 1:1 olmasidir.

2. Istem 1'e uygun fumarat tuzu olup, özelligi; tuzun agirlikça en az %80'inin bir tek kristal formunda olmasidir.

3. istem 1 veya 2'ye uygun fumarat tuzu olup, özelligi; tuzun agirlikça en az %99'unun bir tek kristal formunda olmasidir.

4. Istemler 1 ila 3'ten herhangi birine uygun fumarat tuzu olup, özelligi; fumarat tuzunun agirlikça en az %90`inin, asagidaki seviyelerde tepe noktalarina sahip olan bir X-isini toz kirinim modeli ile karakterize edilen tek kristalli A formunda olmasidir:

5. Istemler 1 ila 3'ten herhangi birine uygun fumarat tuzu olup, özelligi; fumarat tuzunun agirlikça en az %90'inin, asagidaki seviyelerde tepe noktalarina sahip olan bir X-isini toz kirinim modeli ile karakterize edilen tek kristalli B formunda olmasidir: Istemler 1 ila 3'ten herhangi birine uygun fumarat tuzu olup, Özelligi; fumarat tuzunun agirlikça en az %75-80'inin, asagidaki seviyelerde tepe noktalarina sahip olan bir X-isini toz kirinim modeli ile karakterize edilen tek kristalli C formunda olmasidir: Istemler 1 ila 3'ten herhangi birine uygun fumarat tuzu olup, özelligi; fumarat tuzunun agirlikça en az %90'inin, asagidaki seviyelerde tepe noktalarina sahip olan bir X-isini toz kirinim modeli ile karakterize edilen tek kristalli D formunda olmasidir: Istemler 1 ila 4'ten herhangi birine uygun fumarat tuzu olup, özelligi; fumarat tuzunun agirlikça en az %90'inin, diferansiyel taramali kalorimetre (DSC) tarafindan 112 cC ve 158 cC'Iik tepe fazi geçis sicakliklari ile karakterize edilen tek kristalli A formunda olmasidir. Istemler 1 ila 3 ve 5'ten herhangi birine uygun fumarat tuzu olup, özelligi; fumarat tuzunun agirlikça en az %90'inin, diferansiyel taramali kalorimetre (DSC) tarafindan 58 C ve 162 C'Iik tepe fazi geçis sicakliklari ile karakterize edilen tek kristalli B formunda olmasidir. Istemler 1 ila 3 ve 6'dan herhangi birine uygun fumarat tuzu olup, özelligi; fumarat tuzunun agirlikça en az %90'inin, diferansiyel taramali kalorimetre (DSC) tarafindan 62 °C ve 156 °C'Iik tepe fazi geçis sicakliklari ile karakterize edilen tek kristalli C formunda olmasidir. Istemler 1 ila 3 ve 7`den herhangi birine uygun fumarat tuzu olup, özelligi; fumarat tuzunun agirlikça en az %90'inin, diferansiyel taramali kalorimetre (DSC) tarafindan 219 °C'Iik tepe fazi geçis sicakligi ile karakterize edilen tek kristalli D formunda olmasidir. Bilesik (l)`in asagidaki yapisal formülle temsil edilen bir maleat tuzu olup, özelligi; Bilesik :I: bilesik (I) ile maleik asit arasindaki molar oranin 1:1 olmasidir. Istem 12'ye uygun maleat tuzu olup, özelligi; tuzun agirlikça en az %90'inin bir tek kristal formunda olmasidir. istem 12 veya 13'e uygun maleat tuzu olup, özelligi; tuzun agirlikça en az %99'unun bir tek kristal formunda olmasidir. Istemler 12 ila 14'ten herhangi birine uygun maleat tuzu olup, özelligi; maleat tuzunun agirlikça en az %90'inin, asagidaki seviyelerde tepe noktalarina sahip olan bir X-isini toz kirinim modeli ile karakterize edilen tek kristalli A formunda olmasidir: Istemler 12 ila 15'ten herhangi birine uygun maleat tuzu olup, Özelligi; maleat tuzunun agirlikça en az %90'inin, diferansiyel taramali kalorimetre (DSC) tarafindan 219 'C'Iik tepe fazi geçis sicakligi ile karakterize edilen tek kristalli A formunda olmasidir. Istemler 1 ila 11'den herhangi birine uygun fumarat tuzunu veya Istemler 12 ila 16'dan herhangi birine uygun maleat tuzunu ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici veya seyrelticiyi içeren bir farmasötik bilesim olup, özelligi; tuzun agirlikça en az %80'inin kristal yapida olmasidir. Kanser tedavisinde kullanima yönelik olarak, Istemler 1 ila 16'dan herhangi birine uygun bir tuz veya bunun bir farmasötik bilesimi olup, özelligi; kanserin tercihen, akciger kanseri, meme kanseri, kolon kanseri, nöroblastom, prostat kanseri, melanom, glioblastoma multiform, yumurtalik kanseri, lenfoma, lösemi, osteosarkom, germinoma, glioma, fibrosarkom, gastrointestinal sarkom, fibröz histiositom, yuvarlak hücre sarkomu, sinovyal sarkom, rahim agzi kanseri, anogenital kanser, bas ve boyun kanseri ve orofaringeal kanserinden olusan gruptan seçilmesidir. istem 18'e uygun kullanima yönelik tuz olup, özelligi; kanserin, akciger kanseri, meme kanseri ve kolon kanserinden olusan gruptan seçilmesi ve tercihen meme kanseri olmasidir.