TARIFNAME SIGIR TÜRLERINDE ARTIRILMIS BAGISIKLIK YANITI BULU UN ALANI Mevcut bulus, sîgm türlerinin bir üyesinde baggklk aktivasyon yöntemi ile ilgilidir. Özellikle mevcut bulus, hayvanlara uygulama ve bulasEEhastalga karsjkoruma için uygun olan, sistemik, spesifik olmayan ve antijen spesifik bagIsiEIJl yanmarEiEi ortaya ç Rar JInas îia yönelik yöntemleri içermektedir. BULUSUN ARKA PLANI S gilar pek çok viral, bakteriyel ve parazit enfeksiyonunun temel hedefleridir. Et ve süt ürünleri sektörlerindeki sütten kesme, sLgLij sevkiyatLi soguk hava ve besin ihtiyaçlari_ gibi modern üretim uygulamalari ida hastaligin görülme oran ni iartt nan risk faktörleri olarak hizmet edebilmektedir. Sigri solunum hastal gi i(BRD) ya da daha siklikla an Tdgî gibi sigir solunum hastalig`i kompleksi, hem süt hem de et sigiîlariîida görülmektedir ve dünya genelinde sEgE sektöründeki ekonomik kaygilarß baslßa nedenlerinden biridir. Bu kayßlar morbidite, mortalite, kilo alEnEiiîi düsmesi, tedavi ve önleme maliyetleri, süt üretimi kaybEve karkas özellikleri üzerinde negatif etkilerden kaynaklanmaktad B. BRD patojenezinin yukarîla bahsedildigi gibi bulasßiajanlarla birlikte sayßüi çevresel ve Iizyolojik stres faktöründen kaynaklandEgD düsünülmektedir. Mannheimia (Pasteurella) haemoiytica, Pasteureiia multocida ve Histophiius somni (daha önceden Haemophilus somnus), sigir üst solunum yolunun normal floras n n bir parçasi Olarak düsünülmektedir. Bunun aksine, alt solunum yolu mikrobiyal girisin önlenmesini hedefleyen sayîsâ immünolojik yolagîi korudugu nispeten steril bir ortamdFr. Sigmar çevresel ve fizyolojik stres faktörlerine maruz kaldîgmda, hayvanm dogustan gelen ve kazanllnß bagßiklik fonksiyonlar [riske at Iarak yukar Ela bahsedilen bu organizmalariîi çogalmas îia ve akabinde alt solunum yolunda kolonize olmasiîia izin verilmektedir. Örnegin bulasEEsg] rhinotracheitis virüsü (IBRV, IBR veya BHV l), sEgE viral diyare virüsü (BVDV), sEgiI solunum sinsityal virüsü (BRSV) ve parainfluenza tip 3 virüsü (PI3) gibi çesitli sgi virüslerinin akcigerde immünosüpresif etkileri oldugu bilinmektedir. Bununla birlikte, Mannheimia haemolytica BRD vakalari iaras nda açik ara en yayg n bakteriyel patoj endir. BRD,nin mevcut önlenmesi ve tedavisi, besi yerlerine geldikten sonra sigî popülasyonlarîia antibiyotik uygulamas 3(yani metaflaksi), hasta sîgm için antibiyotik tedavisi ve BRD virüslerine ve M. Haemolytica dahil bakterilere karsjasüamadan olusmaktad 3. Mevcut asEIama programlarßß ve farmasötik tedavilerin, günümüzde sEgElarda BRD"nin kontrol edilmesi için ideal olmamasEiEi farkljnedenleri vardm. Ilk olarak, konak savunma sistemi stgmlarda bulasßE hastalikla mücadelede önemli bir rol oynamaktadbi Geleneksel tedaviler bakteriyel enfeksiyonlariedavi etmek veya kontrol etmek için antibiyotik uygulanmasini içermektedir. Ancak viral enfeksiyonlara karsi i herhangi bir onaylanmis farmasötik tedavi mevcut degildir. BRD*de, çogu durumda yalnîica bakteriyel enfeksiyon degil, aynFizamanda viral enfeksiyon da vardi. Ikinci olarak, asülama zamanjgenellikle ideal altîidadî. Bir respiratuvar asîsiîißi optimum sekilde etkili olmas Eiçin, ürünün stresten veya sevkiyattan 2-4 hafta önce uygulanmas: gerekmektedir ve bu, tipik olarak ticari sgi üretiminde uygulanabilir degildir. AsiIar, optimum olarak etkili olamayacak sekilde ya çok erken ya da çok geç inflamasyon ile baglantÜJEibir hastalüg, bir bulasßühastal& veya self-antijenin zararlü aktivitesi ile baglantlidbir durumdan korunmasUiçin bagLsLklLk aktivasyonuna yönelik alerjik inflamasyonla baglantili bir hastalik ve bir bulasici ihastaliktan korunmasi iiçin sistemik bagskl k aktivasyonuna yönelik bir yöntemle ilgilidir. Bu nedenle, bagßüglüg sistemini uyarmak ve hastalEga neden olan organizmalarü azaltmak veya ortadan kaldmmak üzere saldîgan bir yanîi olusturmak üzere bir yönteme yönelik bir ihtiyaç bulunmaktadm. Bu yöntemin uygulanmasEiEi kolay olmasü tek bas Eta ya da as [[arla kombinasyon halinde ise yaramas Eveya bu as [lhrm daha etkili hale getirilmesine yardßicîiolmasj uzun bir süresi olmas Dya da bagEElIgjmaksimize etmek için ek enjeksiyon gerektirmemesi önem arz etmektedir. Mevcut bulus, uygulanmas _kolay olan, tek bas Lna ya da asLlarla kombinasyon halinde ise yarayan, bir veya daha fazla bulas'd. ajana karsi koruyucu yanitii baslatabilen, sigiii türlerinde antij en spesifik olmayan bagSklk yantlnn ortaya çlkarlllnaslna iliskin bir yöntem saglamaktad Il. BULUSUN AYRINTILI AÇIKLAMASI Mevcut bulusa ait sgm türlerinin bir üyesinde bagsklk yanEfEiEi ortaya çikarlmas ßa iliskin yöntem, sEgm türlerinin üyesine, sgmlarda Mannheimia haemolytica'nlîi neden oldugu sEgE solunum hastalEglîiß (BRD) tedavisinde kullan ÜInak üzere bagSEklÜg yaniîûortaya çERarmak için bir immünomodülatör bilesiminin etkili bir miktarEiEi uygulanmas Il 3 içermektedir. Immünomodülatör bilesimi, [l-[2-[9-(Z)- oktadesenoiloksi]etil]-2-[8](Z)-heptadesenil]-3-[2-hidr0ksietil]imidazolyum klorür (DOTIM) ve kolestorel içeren bir katyonik lipozom iletim arac Jve bir nükleik asit molekülü içermektedir, burada nükleik asit molekülü, gen eklentisi içermeyen izole, bakteriden elde edilmis kodlayldl olmayan bir DNA plazmid vektörüdür. Ilaveten, immünomodülatör tek bas Tria etkili olan ya da bir asldan önce uygulandgîlda, bir as File birlikte uygulandEgEida, as [[amadan sonra uygulandfgßda veya as Eile karßtîüdgmda bir asEgibi en az bir biyolojik maddenin isleyisini arttEan, antijen spesifik olinayan bag 3 111 yan Ili :ortaya ç Earmaktad m. Yöntemler, sgm türlerini bulasßjhastalüllardan korumaya ve bulasBDhastalE tas &an popülasyonlarjtedavi etmeye yönelik yeni tedavi stratejileri saglamaktadî. Son olarak, mevcut bulusun yöntemi, immünomodülatör bir asj ile kombinasyon halinde kullanltlgijda bir hastalLga karsLl daha h2ll,l daha uzun ve daha iyi koruma saglamaktad 11. 1. Bilesim a. Immünomodülatör Bulusun bir uygulamas Eda immünomodülatör bilesimi, [1-[2-[9-(Z)- oktadesenoiloksi]etil]-2-[8](Z)-heptadesenil]-3-[2-hidroksietil]imidazolyum klorür (DOTIM) ve kolestorel içeren bir lipozom iletim aracEve bir nükleik asit molekülü içermektedir, burada nükleik asit molekülü, gen eklentisi içermeyen izole, bakteriden elde edilmis kodlay Zi :olmayan bir DNA plazmid vektörüdür. Uygun bir lipozom iletim aracl,l nükleik asit moleküllerini tedavi edilen denegin dokular na iletebilen bir lipid bilesimini içermektedir. Bir lipozom iletim aracl tercihen, bir nükleik asit molekülünü ve/veya bir biyolojik maddeyi iletmek için yeterli bir süre boyunca bir denekte kararlükalabilmektedir. Bir uygulamada lipozom iletim aracü alEE denekte en az yaklasÜî 5 dakika kararlElE. Bir baska uygulamada lipozom iletim aracü alBIJdenekte en az yaklasü& 1 saat kararlßE. Bir baska uygulamada lipozom iletim aracjalB :denekte en az yaklasü& 24 saat kararlEiE. Mevcut bulusa ait bir lipozom iletim aracü bir nükleik asit molekülünü bir hücreye iletmek için bir hücrenin plazma membranEile kaynasabilen bir lipid bilesimini içermektedir. Bir uygulamada, iletildiginde, mevcut bulusa ait bir nükleik asit: lipozom kompleksi, iletilen nükleik asidin her mikrograml (ug) için toplam doku proteininin miligraml (mg) bas na ifade edilen en az yaklas lt l pikogram (pg) proteindir. Bir baska uygulamada nükleik asit: lipozom kompleksinin transfeksiyon verimliligi, iletilen nükleik asidin her ug"si için toplam doku proteininin mg'Jbas îla ifade edilen en az yaklask 10 p proteindir; ve bir baska uygulamada iletilen nükleik asidin her ugssi için toplam doku proteininin mgûbasßa ifade edilen en az yaklasü& 50 pg proteindir. Kompleksin transfeksiyon verimliligi, iletilen nükleik asidin her ug,si için toplam doku proteininin mg`3 basîla ifade edilen 1 femtogram (fg) protein kadar düsük olabilmektedir; yukar Baki miktarlar daha fazla tercih edilmektedir. Mevcut bulusa ait tercih edilen lipozom iletim aracd çap olarak yaklasLk 100 ile 500 nanometre (nm) araslnda, bir baska uygulamada yaklasik 150 ile 450 nm araslnda ve bir baska uygulamada yaklas lt 200 ile 400 nm arasindadln. Burada ayrîia, örnegin alanda uzman kisilerce bilinen gen iletim yöntemlerinde yaygin olarak kullanühnlar gibi herhangi bir lipozomu içeren uygun lipozomlar da aç Rlanmaktad B. Örnegin, lipozom iletim araçlarjmultilameler vezikül (MLV) lipidleri ve ekstrüde lipidleri içermektedir. MLV,lerin hazßlanmas ma yönelik yöntemler alanda iyi bilinmektedir. Diger Örnekler ise, bir polikatyonik lipid bilesimine sahip lipozomlarE (örn. katyonik lipozomlar) ve/veya polietilen glikole konjuge bir kolesterol omurgas Ela sahip lipozomlarEiçermektedir. Örnek katyonik lipozom bilesimleri aras &da sEiElama olmakstln N-[l-( ve kolesterol, N-[1-( ve kolesterol, 1-[2-(oleoiloksi)etil]-2-oleil-3-(2-hidroksietil)imidazolinyum klorür (DOTIM) ve kolesterol, dimetildioktadesilamonyum bromür (DDAB) ve kolesterol ve bunlarîi kombinasyonlar _yer almaktad î. Burada ayrßa, uygun bir nükleik asit molekülü olarak, kodlayEiD veya kodlayüü olmayan sekans ve DNA veya RNA gibi herhangi bir nükleik asit sekansE aç Elanmaktad 3. KodlayEEnükleik asit sekanslarEbir proteinin veya peptidin en az bir kIslmßJkodlarken, kodlayEEolmayan sekans bir proteinin veya peptidin herhangi bir kimßjkodlamamaktadm. Mevcut bulusa göre "kodlayßEolmayan" nükleik asitler, bir promotör bölgesi gibi bir transkripsiyon biriminin düzenleyici bölgelerini içerebilmektedir. "Bos vektör" ifadesi, "kodlaydiolmayan" ifadesi ile degisimli olarak kullan labilmektedir ve özellikle bir gen eklentisi içermeyen bir plazmid vektörü gibi bir protein kodlaylcl kismi olmadan bir nükleik asit sekans ni ifade etmektedir. Bir nükleik asit molekülü taratTndan kodlanan bir proteinin ekspresyonu, antijen spesifik olmayan bagîslklk yanEfßEi ortaya çtkarüînasüiçin gerekli degildir; bu nedenle, nükleik asit molekülünün ille de bir transkripsiyon kontrol sekanslîia islevsel olarak baglDolmasD gerekli degildir. Bununla birlikte, bilesime bir immünojeni ve/veya bir sitokini kodlayan nükleik asit sekansßj (DNA veya RNA) ekleyerek baska avantajlar elde edilebilmektedir (örn. antij en spesifik ve artEJhiIsl baggllk). Bir lipozomun bir nükleik asit molekülü ile kompleks hale getirilmesi, alanda standart olan veya 6,693,086 sayLll_ ABD patentinde aç Jstlanan yöntemler kullanilarak elde edilebilmektedir. Bir lipozoma eklenecek nükleik asit molekülünün uygun konsantrasyonu, sistemik bir baglSlkllk yanltllnln ortaya çlkarllacag lsekilde bir denege nükleik asit molekülünün yeterli bir miktarmln iletilmesi için etkili bir konsantrasyonu içermektedir. Bir uygulamada yaklasüî 0.1 ug ila yaklasü'ç 10 ug nükleik asit molekülü, yaklasE 8 nmol lipozoinla birlestirilmektedir, bir baska uygulamada yaklasIt 0.5 ug ila yaklasll 5 ug nükleik asit molekülü yaklasl 8 nmol lipozomla birlestirilmektedir ve bir baska uygulamada yaklasÜ& 1.0 ug nükleik asit molekülü yaklask 8 nmol lipozomla birlestirilmektedir. Bir uygulamada bir bilesimdeki nükleik asitlerin lipidlere oranlug nükleik asit: nmol lipid), agßlüiça en az yaklasüî 121 nükleik asit: lipid (öm. 1 ug nükleik asit: 1 nmol lipid) seklinde ve bir baska uygulamada en az yaklasLk 1:5 seklinde ve bir baska uygulamada en az yaklaslk 1:10 seklinde ve baska bir uygulamada en az yaklask 1:20 seklindedir. Burada ifade edilen oranlar, bilesimdeki toplam lipid miktar na göre degil de, bilesimdeki katyonik lipid miktarlna göredir. Bir baska uygulamada bulusa ait bir bilesimdeki nükleik asitlerin lipidlere oranljl aglîllfkça yaklasE 121 ila yaklask 1:80 nükleik asit: lipid seklindedir ve bir baska uygulamada agilkça yaklastk l:2 ile yaklastk 1:40 nükleik asit: lipid seklindedir ve bir diger uygulamada agßlügça yaklasüêt 123 ila yaklasüg 1:30 nükleik asit: lipid seklindedir ve bir baska uygulamada agßllça yaklasE l:6 ila yaklask 1:15 nükleik asit: lipid seklindedir. b. Biyolojik madde Bulusun bir baska uygulamasElda immünomodülatör, bir lipozom iletim aracü bir nükleik asit molekülü ve en az bir biyolojik madde içermektedir. Uygun biyolojik maddeler s g ri hastallglnln önlenmesinde veya tedavisinde etkili olan ajanlard It Bu tür biyolojik maddeler araslrtda baglslkllk artlrtld { proteinler, immünojenler, asllar, antimikrobiyaller veya bunlarm herhangi bir kombinasyonu yer alinaktad 3. Uygun bagßklk art iii :proteinler bagßüîlîgîartîdîgîbilinen proteinlerdir. Siilandiîjolmayan bir örnek olarak protein ailesini içeren bir sitokin, bilinen bir bagglll artmßüprotein ailesidir. Uygun immünojenler, bir immünojenin bir denege uygulanmasii denegin dokularEiçerisinde karsüas Ian aynEveya benzer proteinlere karsjimmünojen spesifik bir bagßtßlk yanIJElÜbaslatacagEsekilde hümoral ve/veya hücresel baggüîlk yanlîlüît :lortaya çüîaran proteinlerdir. Bir immünojen, bir bakteri, bir virüs, bir parazit ve bir mantar tarafijdan ek5prese edilen bir patojenik antijeni içerebilmektedir. Tercih edilen antijenler bir denekte bulaslCl lbir hasta] ga neden olan antijenleri içennektedir. Mevcut bulusa göre bir immünojen, dogal olusumlu veya sentetik olarak elde edilmis olan, hümoral ve/veya hücresel bagFslRllR yan hi Flortaya çJEtaran bir proteinin herhangi bir kîslm Jolabilmektedir. Bu haliyle, bir antijenin veya immünojenin boyutu yaklasik 5-12 amino asit kadar küçük ve tam boy bir protein kadar büyük olabilmektedir; bunlarlîi arasEidaki boyutlar da dahildir. Antijen, bir multimer protein veya füzyon proteini olabilmektedir. Antijen, dokunulmamß veya rekombinant hücrelerden elde edilen saflastmühig peptit antijenleri olabilmektedir. Bagßtlîlüg artßßü proteinlerin ve immünojenlerin nükleik asit sekanslarü bir transkripsiyon kontrol sekansija islevsel olarak baglLdLr, öyle ki immünojen bir denegin dokusunda eksprese edilmektedir ve böylece spesifik olmayan bag S kl k yan tllna ek olarak denekte immünojen spesifik bir bag S kl k yan tl n Ortaya ç karabilmektedir. Bulusun bir baska uygulamas îida biyolojik madde bir asFdlî'L As`;l canlîbulasîlîlviral, bakteriyel veya parazit asEmEb/a da öldürülmüs, etkisizlestirilmis, Viral, bakteriyel veya parazit asßmj içerebilmektedir. Bir uygulamada canlEveya öldürülmüs viral as [Tar olmak üzere bir veya daha fazla asü mevcut bulusun immünomodülatör bilesimi ile kombinasyon halinde kullanEabilmektedir. Uygun asühr sgi türlerine yönelik alanda bilinen as Iarjçermektedir. Örnek as [Ilar aras Elda simlama olmaksâi bulasßüsfgî üst rhinotracheitis (IBR) (Tip 1 sEgE herpes virüsü (BHV1)), parainfluenza virüs tip 3 (PB), sgij solunum sinsityal virüsü (BRSV), sLgLt viral diyare virüsü (BVDV Tip 1 ve 2), HIStOphIIUS somni, Mycoplasma bOVIS ve alanda bilinen diger hastallklara karsi l koruma için alanda kullanllan asllar yer almaktad n. Örnek bir uygulamada Mannheimia haemolytica"ya karslTkorumaya yönelik bir asC mevcut bulusun immünomodülatör bilesimi ile kombinasyon halinde kullan Iabilmektedir. Bulusun bir baska uygulamaslIida biyolojik madde bir antimikrobiyaldir. Uygun antimikrobiyaller sunlarüiçermektedir: kinolonlar, tercihen florokinolonlar, ß-laktamlar ve makrolid-streptogramin-linkozamid (MLS) antibiyotikleri. Uygun kinolonlar arasEida benofloksasin, bintloksasin, sinoksasin, siprofloksasin, klinafloksasin, danoüoksasin, difloksasin, enoksasin, enroIloksasin, fleroksasin, gemiIloksasin, ibafloksasin, levofloksasin, lomefloksasin, marbofloksasin, moksifloksasin, norfloksasin, ofloksasin, orbifloksasin, pazufloksasin, pradofloksasin, perfloksasin, temafloksasin, tosufloksasin, sarafloksasin, gemifloksasin ve sparfloksasin yer almaktadi. Tercih edilen florokinolonlar arasmda siprofloksasin, enrofloksasin, moksifloksasin, danofloksasinn ve pradofloksasin yer alinaktad E. Uygun naftiridonlar aras îlda nalidiksik asit yer almaktad E. Uygun ß-laktamlar arasida penisilinler, mesela benzatin penisilin, benzilpenisilin (penisilin G), fenoksimetilpenisilin (penisili V), prokain penisilin, metisilin, oksasilin, nafsilin, kloksasilin, dikloksasilin, flukloksasilin, temosilin, amoksisilin, ampisilin, ko- amoksiklav (amoksisilin ve klavulanik asit), azlosilin, karbenisilin, tikarsilin, mezlosilin, piperasilin; sefaIOSporinler, mesela sefalonyum, sefaleksin, sefazolin, sefapririn, sefkuinom, seftiofur, sefalotin, sefaklor, sefuroksim, sefamandol, defotetan, sefoksitin, seftriakson, sefotaksim, sefpodoksim, sefiksim, seftazidim, sefepim, sefpirom; karbapenemler ve penemler, mesela imipenem, meropenem, ertapenem, faropenem, doripenem; monobaktamlar, mesela aztreonam (Azactam), tigemonam, nokardisin A, tabtoksinin-B-laktam; ve klavulanik asit, tazobaktam, ve sulbaktam gibi ß-laktamaz inhibitörleri yer almaktadm Tercih edilen ß-laktamlar arasmda sefalosporinler, özellikle sefazolin yer almaktadß. Uygun MLS antibiyotikleri arasßda her türlü makrolid, linkomisin, klindamisin, pirlimisin yer almaktad i Tercih edilen bir linkosamid pirlimisindir. Diger antimikrobiyaller arasiida 2-pirid0nlar, tetrasiklinler, sülfonamidler, aminoglikozidler, trimetoprim, dimetridazoller, eritromisin, framisetin, furazolidon, çesitli pleuromutilinler, mesela tiamulin, valnemulin, çesitli streptomisin, klopidol, salinomisin, monensin, halofuginon, narasin, robenidin vb. yer almaktad Fri. 2. Yöntemler a. Bagîsilll stimülasyon yöntemleri Bulusun bir uygulamasßda sEgE türlerinin üyesine bir immünomodülatör bilesiminin etkili bir miktarßß uygulanmasüyoluyla sEglI türlerinin bir üyesinde bir bagßügllk yanijortaya çüîarüinaktadm. Etkili miktar, sgi türlerinin üyesinde baggklk yanlîhîE ortaya çügarmak için yeterlidir. Immünomodülatör, bir lipozom iletim aracjve bir nükleik asit molekülü içermektedir. Bir uygulamada immünomodülatörün etkili miktarl,| hayvan basina yaklas li 1 mikrogram ile yaklasik 1000 mikrogram arasindadlri. Bir baska uygulamada iminünomodülatörün etkili miktarü hayvan bas Ba yaklaslk 5 mikrogram ile yaklasik 500 mikrogram aras ßdad m. Bir baska uygulamada immünomodülatörün etkili miktarü hayvan bas lila yaklask lO mikrogram ile yaklask lOO mikrogram aras mdad m. Bir diger uygulamada immünomodülatörün etkili miktar] hayvan bas Iia yaklask 10 mikrogram ile yaklasIt 50 mikrogram aras Eldad ß. Bulusun bir baska uygulamaslnda bir lipozom iletim arac ,| bir izole nükleik asit molekülü ve bir biyolojik madde içeren bir immünomodülatörün etkili bir miktarlnln uygulanmas`l yoluyla sFglî türlerinin bir üyesinde bir bagêlklk yanltllî ortaya çkarJInaktadm Biyolojik maddenin immünomodülatörle karIsltEIabilmesi veya birlikte uygulanmas :veya bundan bagîhsü uygulanmasDdüsünülmüstür. Bagühsü uygulama, immünomodülatörün uygulanmas idan önce veya sonra olabilmektedir. Aynüzamanda art EMS bagßllglzatmak için immünomüdolatörün veya biyolojik maddenin birden fazla uygulanmasl: da düsünülmüstür. Ayrßa, birden fazla biyolojik madde immmünomodülatörle birlikte uygulanabilmektedir, immünomodülatörden önce uygulanabilmektedir, immünomodülatörden sonra uygulanabilmektedir ve es zamanli_ olarak uygulanabilmektedir. b. Hastalllar Bulusun yöntemleri, denegin bagßlkllk yantlhîl ortaya çlêtarllnaslîla uygun olan bir hastalktan korunacagüsekilde bir denekte bagßEklEk yan Eßjortaya çEkarmaktad E. Burada kullanJHgEhaliyle "bir hastalEktan korunma" ifadesi, hastalEglIi semptomlarlîilîi azaltllnasîl] hastalgîi görülme oranîlîi azaltJInasîlj ve hastalîgß klinik veya patolojik siddetinin azaltühiasßüveya bir hastalZga neden olan patojenin bulasmasiß azaltJInasîl] ifade etmektedir. Bir denegin korunmasÇ bir denege uygulandEgElda mevcut bulusun terapötik bilesiminin hastalgm görülmesini önleme, hastalEgEl semptomlarin klinik belirtileri, patolojiyi veya nedenleri sagaltma ve/veya hafitletme veya azaltma yetenegini ifade etmektedir. BRD,nin klinik belirtilerinin örnekleri aras nda akciger lezyonlarl, sldakl lt art S ,ldepresyon (örn. anoreksiya, harici uyaranlara yanüverebilirligin azalmasC sarklk kulaklar), burun ak htsrlve solunum karakteri (örn. solunum hâüsolunum eforu) yer almaktad B. Bu haliyle, sEgE türlerinin bir üyesinin bir hastalEtan korunmasühem hastalgi olusmasîlîl önlenmesini (profilaktik tedavi) hem de hastalEgE tas Stan sEgE türlerinin üyesinin tedavi edilmesini (terapötik tedavi) içermektedir. Özellikle, bir denegin hastalltan korunmasl: baz Edurumlarda ayrBa as EE aktif veya zararlZbagßEklEk yan mßjaastîabilen, azaltabilen, inhibe edebilen veya bloke edebilen faydal] veya koruyucu bir bag IslÜîlEE yan Eßlîl uyarElhiasD yoluyla sEglI türlerinin üyesinde bagsklk yan iJLnn ortaya çLkarLIinasl_ ile gerçeklestirilmektedir. ifade etmektedir ve hastalik semptomlarlnln mevcut oldugu bir durumun yanl ls rla, bir sapmanln (öm. enfeksiyon, gen mutasyonu, genetik defekt vb.) meydana geldigi, ancak semptomlarîi henüz kendini göstermedigi durumlarTkapsamaktad IT. Bulusun yöntemleri, hastalEgîi önlenmesi, hastalEga karsüefektör hücre bagßügltgmm uyarîünasü hastalEgEi giderilmesi, hastalEglIi hafifletilmesi ve bir primer hastalEglIl olusmas fidan kaynaklanan bir sekonder hasta] gi önlenmesi için kullan Iabilmektedir. Mevcut bulus aynüzamanda, asEiß kendisinin uygulanmasüa kars Jbir asjile birlikte uygulandgßda hayvanEi kazanllmß bagßlklül yan Iîlj iyilestirebilmektedir. Genel olarak, bir asÇuygulandJîtan sonra, hayvan Jiemen korumamaktadE, çünkü kazanümg bagsklgn uyarllnasLlzaman almaktadLii "Iyilestirmek" terimi, mevcut bulusta, as|_| hayvan lkorumaya baslayana kadar hayvandaki dogustan gelen baglSlkllk yanltlnln ortaya çlkarllmaslnl ve/veya kazan lmls baglSlkllk aracllllglyla as ile saglanan koruma süresinin uzatllnaslh îfade etmektedir. Bulusun yöntemleri, çok çesitli patojenlerin enjeksiyonuna kars Ekoruma saglamak için bilesimin uygulanmaslîiüiçermektedir. Uygulanan bilesim spesifik bir yanißortaya çJlarmak için spesifik bir antijen içerebilmekte veya içermeyebilmektedir. Bulusun yöntemlerinin, alßjdenegi slhßlama olmaksîß virüsler, bakteriler, mantarlar ve parazitler dahil olmak üzere bulasîlümikrobiyal ajanlardan kaynaklanan hastallktan koruyacagj düsünülmektedir. Örnek viral bulasBD hastallklar arasida slhlîlama olmaksttii bulasLdUsLgLr rhinotracheitis (IBR) (Tip 1 sLgLi: herpes virüsü (BHV1)), parainfluenza virüs tip 3 (PI3), slgln solunum sinsityal virüsü (BRSV), slgln viral diyare virüsü (BVDV Tip 1 ve 2), slgln adenovirus, slglrt coronavirüs (BCV), s glrt kalisivirüs, sgi parvovirüs, BHV4, sfgE reovirüs, sfgîl enterovirüs, sgi lösemi virüsü, rabies virüs, Veziküler stomatit virüsü (VSV), bluetongue (Orbivirus), bunlarEl rekombinantlarj ve alanda bilinen diger virüsler yer almaktadi Örnek bakteriyel enfeksiyonlar araslîida sEiilama olmaksîi gram pozitif ve negatif bakterileri ve Escherichia coli, Pasteurella multocida, Clostridium perfringens. Clostridium colinum, Campylobacter jejuni, Clostridium botulinum. Clostridium novyi, Clostridium chauveoi, Clostridium septicum, Clostridium hemolyticum, Clostridium tetani, Mannheimia haemolytica, Ureaplasma diversum, Mycoplasma dispar, Mycoplasma bovis, Mycoplasma bovirhinis, Histophilus somni, Campylobacter fetus, Leptospira spp.,10 Arcanobacterium pyogenes, Bacillus anthrax, Fusobacterium necrophorum, Fusobacterium spp., Treponema spp., Corynebacterium, Brucella abortus, Mycobacterium paratuberculosis, Mycobacterium spp.,,HistophiIus spp., Moraxella spp., Muellerius spp., Mycoplasma spp., Salmonella spp., Bacillus anthracis gibi Mikobakteriler ve alanda bilinen diger bakterilerle enfeksiyondan kaynaklananlar yer almaktadît Örnek mantar ve küf enfeksiyonlar] arasîlda sßElama olmaksEEi Actinobacterim spp., Aspergillus spp. ve Histomonas spp. ve alanda bilinen diger bulasBjmantar veya küflerle enfeksiyondan kaynaklananlar yer almaktadiî. Örnek parazitler arasida siilama olmaksîi Neospora spp., Trichostrongylus, Cooperia, Anaplasma spp, Babesia spp, Chorioptes spp, Cysticercus spp, Dermatophilus spp, Damalinia bovis, Dictylocaulus spp, Eimeria spp, Eperythrozoon spp, Haemonchus spp,, Melophagus spp, Muellerius spp, Nematodirus spp, Oestrus spp, Ostertagia spp, Psoroptes spp, Sarcoptes spp, Serpens spp, Strongyloides spp, Toxoplasma spp, Trichuris spp, Trichophyton spp, and Tritrichomas spp, Fascioloides spp, Anaplasma marginale ve alanda bilinen diger parazitler yer almaktad m. c. Denekler Bulusun yöntemleri, ister evcil ister yabani olsun stgm türlerinden herhangi bir denege veya üyeye uygulanabilmektedir. Özellikle damâltk, et veya süt üretimi için ticari olarak yetistirilen deneklere uygulanabilmektedir. Uygun stgm türleri aras Eida sßßlama olmakstztn antiloplar, bufalolar, tibet öküzleri, sLgLijlar ve bizonlar yer almaktade. Bir uygulamada slgln türlerinin üyesi slgndln. S g 11 türleri araslnda slnlrlama olmaks zin inekler, bogalar, danalar, düveler, öküz, et slglrl veya süt slg nl !yer almaktadln. Alanda uzman kisi, bulusun yöntemlerinin bulasTdHajana çevresel maruziyete özellikle açik olduklaridan damllü'ç, et veya süt üretimi için yetistirilen sEgElar için büyük ölçüde d. Uygulama Çesitli uygulama yollarümevcuttur. Seçilen özel biçim, elbette seçilen belirli biyolojik maddelere, denegin yasßa ve genel sagltk durumuna, tedavi edilen belirli duruma ve terapötik etkinlik için gerekli olan dozaja bagliblacaktü. Bu bulusun yöntemleri, klinik olarak kabul edilebilir olmayan yan etkilere neden olmadan etkili bagLSLklLk yanLtJl_ seviyeleri üreten herhangi bir uygulama biçimi kullan larak uygulanabilmektedir. Bilesimler uygun bir biçimde, birim dozaj formunda sunulabilmektedir ve alanda iyi bilinen herhangi bir yöntemle hazmlanabilmektedir. Sgi türlerinin asühnmasj her yasta yapIabilmektedir. ASÇ intravenöz yolla, intramüsküler yolla, intradermal, intraperitoneal, subkütan yolla, sprey/aerosol yoluyla, oral yolla, intraoküler yolla, intratrakeal yolla, intranazal yolla veya alanda bilinen diger yöntemlerle uygulanabilmektedir. AyrBa, bulusun yöntemlerinin rutin asEama programlaria göre kullanEabilmesi de düsünülmüstür. Immünomodülatör de intravenöz yolla, intramüsküler yolla, subkütan yolla, sprey yoluyla, oral yolla, intraoküler yolla, intratrakeal yolla, nazal yolla veya alanda bilinen diger yöntemlerle uygulanabilmektedir. Bir uygulamada immünomodülatör subkütan yolla uygulanmaktad 11. Bir baska uygulamada immünomodülatör intramüsküler yolla uygulanmaktadi. Bir baska uygulamada immünomodülatör sprey olarak uygulanmaktad 3. Bir diger uygulamada iminünomodülatör oral yolla uygulanmaktad m. Bir uygulamada immünomodülatör, yükleme (veya enfeksiyon) öncesinde hayvana kendi basEla uygulanmaktad& Bir baska uygulamada immünomodülatör, yükleme (veya enfeksiyon) sonrasüda hayvana kendi bas Ba uygulanmaktad& Bir baska uygulamada immünomodülatör, yükleme (veya enfeksiyon) ile aynEanda hayvana kendi basîla uygulanmaktad& Bir diger uygulamada immünomodülatör bilesimi, yükleme öncesinde asl_| ile aynU anda birlikte uygulanmaktadLii Bir baska uygulamada immünomodülatör bilesimi, yükleme (veya enfeksiyon) ile aynl landa asl lile ayn' !anda birlikte uygulanmaktad 11. Birlikte uygulama, asl ve immünomodülatörün hayvanda aynl l genel yerde birbirinin yan Gida iki farklfbölgede (örnegin hayvan& boynunda birbirinin yanîida enjeksiyonlar), aynE genel yerde hayvanEi kars 1113 taraflarßda (örnegin boynun her taraf îlda) veya aynE hayvani farklE yerlerinde uygulanmasmE içerebilmektedir. Bir baska uygulamada immünomodülatör bilesimi, as Elve yüklemeden önce uygulanmaktad& Bir diger uygulamada immünomodülatör bilesimi, asÜJamadan sonra ancak yüklemeden önce uygulanmaktadi Bir diger uygulamada immünomodülatör bilesimi, yüklemeden (veya enfeksiyondan) önce as JyapEmS bir hayvana yüklemeden sonra uygulanmaktad Lti Bir uygulamada immünomodülatör, yüklemeden yaklaslk 1 ila yaklaslk 14 gün önce veya yüklemeden yaklaslk 1 ila yaklaslk 14 gün sonra uygulanmaktadlrt Bir baska uygulamada immünomodülatör, yüklemeden yaklasik 1 ila yaklasik 7 gün önce veya yüklemeden yaklasüî 1 ila yaklasEk 7 gün sonra uygulanmaktadm. Bir baska uygulamada immünoinodülatör, yüklemeden l, 2, 3, 4, 5, 6, 7 gün önce veya yüklemeden 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 gün sonra uygulanmaktadE. Diger iletim sistemleri, yavas salßEnlÇ geciktirilmis salîiiilEveya uzatElInB sallîißilü iletim sistemlerini içerebilmektedir. Bu tür sistemler bilesimlerin tekrar tekrar uygulanmasîîl önüne geçebilmekte, dolayßßlla uygunlugu artßmaktadi SalßEnlD iletim sistemlerinin pek çok türü mevcuttur ve alanda olagan tecrübe sahibi kisilerce bilinmektedir. Bunlar poli(1aktit-g1ik01id), kopolioksalatlar, polikaprolaktonlar, poliesteramidler, poliortoesterler, polihidroksibütirik asit ve polianhidritler gibi polimer bazlî sistemleri içermektedir. Yukarlda verilen polimerleri içeren ilaçlarîi mikro kapsülleri örnegin 5,075,109 saymüABD patentinde açERlanmIsltm Iletim sistemleri ayrBa, kolesterol, kolesterol esterleri ve yag asitleri veya nötr yaglar, mesela mono-di ve tri-gliseritler gibi sterolleri içeren lipidler olan polimer olmayan sistemleri; hidrojel salBi sistemlerini; silastik sistemleri; peptid bazlE sistemleri; vaks kaplamalarmü geleneksel baglayîilar] ve eksipiyanlarE içeren SERStEEmS tabletleri; klêmen kaynasmg implantlarEve benzerlerini içermektedir. Spesifik örnekler aras Eida sßßlama patentlerinde aç klananlar gibi bir matris içinde bir formda bulundugu erozyonal patentlerinde açlklandFgF gibi bir polimerden kontrollü hßda geçtigi difüzyonel sistemleri içermektedir. ilaveten, pompa bazlü donanlîh iletim sistemleri kullan Iabilmekte olup, bunlarîl baz [lhrîimplantasyon için adapte edilmistir. Yukarîlaki bilesimde, ürünlerde ve yöntemlerde bulusun kapsamEidan uzaklasmadan çesitli degisiklikler yapIabileceginden, yukarmaki açERlamada ve asagßa verilen örneklerde yer alan tüm konunun süilayß] anlamda degil de açEklayEE olarak yorumlanmas Iamaçlanm Et 3. TANIMLAR olan miktar l ifade etmektedir. Örnegin, bir bulas d l hastall g n tedavisine veya önlenmesine yönelik immünomodülatörün etkili miktarlî mikroba maruz kallîimasFl sonrasîlda bagßü'çlüg yanmßß gelismesine neden olmak, böylece denekteki mikrop miktariîi azalmasîiElve tercihen mikrobun kökünün kaz imasîllaglamak için gerekli miktard î!. Herhangi bir belirli uygulama için etkili miktar, tedavi edilen hastalEk veya durum, denegin büyüklügü veya hastalgi veya durumun siddeti gibi faktörlere göre degisiklik gösterebilmektedir. Alanda olagan tecrübe sahibi bir kisi, gereksiz deneyleri gerektirmeden immünomodülatörün etkili miktarEiEampirik olarak belirleyebilecektir. hematopoietik büyüme faktörünü, interlökinleri, interferonlarl,| immünoglobulin üst ailesi moleküllerini, tümör nekroz faktörü ailesi moleküllerini ve kemokinleri (öm. hücrelerin göçünü ve aktivasyonunu düzenleyen proteinler, özellikle fagositik hücreler) içermektedir. Örnek sitokinler aras Eda sEimlama olmaksüm interlökin-2 (IL-2), ve interferon-y (IF Ny) yer almaktad E. terimleri ile degisimli olarak kullan Iabilmektedir. Bir denekte "baggklk yanîii ortaya çkarüînasEl ifadesi, spesifik olarak bagßügltk yanjlnij aktivitesinin kontrol edilmesini veya etkilenmesini ifade etmektedir ve bagSklk yanltllnln aktive edilmesini, baglslkllk yan tllllll yukarl regüle edilmesini, bag s kl lt yari tlln n artlnlllnaslnl lve/veya baglslkllk yanltlnln degistirilmesini (mesela bir denekteki hakim bagßkllk yanltTtipini, zararvaeya etkisiz olandan faydaleeya koruyucu olana degistiren bir bagsüîlik yanEfD tipinin ortaya çüîarüînasjyoluyla) içerebilmektedir. hücreye transfekte edildiginde (örnegin transforme edildiginde, transdüse edildiginde veya transfekte edildiginde) eksprese edilebilecegi sekilde bir transkripsiyon kontrol sekansia baglanmashîE ifade etmektedir. Transkripsiyonel kontrol sekanslarE transkripsiyonun baslamas Ln L,J uzamas Ln U ve sonlanmas _Ü J kontrol eden sekanslard Lr. Özellikle önemli transkripsiyonel kontrol sekanslarl,lörnegin promotör, art Il d ,loperatör ve represör sekanslarl gibi transkripsiyon baslamaslnl kontrol eden sekanslardlrt Bu transkripsiyonel kontrol sekanslarlîilîi çesitleri alanda uzman kisilerce bilinmektedir. Tercih edilen transkripsiyonel kontrol sekanslarjkus, balEk, memeli, bakteri, bitki ve böcek hücrelerinde islev gösteren sekanslarü içermektedir. Bulusla herhangi bir transripsiyonel kontrol sekansEkullanÜhbilmekle birlikte, sekanslar bir immünojeni veya baggüglül uyarEEproteini kodlayan bir sekansla dogal olarak baglant ]]:blan dogal olusumlu transkripsiyon kontrol sekanslarßIçerebilmektedir. kullan Jlabilmektedir ve DNA, RNA7yl_ ya da DNA veya RNA'nLn türevlerini içerebilmektedir. Bu terimler ayrica oligonükleotidleri ve hem bir proteini veya bunun bir fragmanlnl kodlayan nükleik asit molekülleri hem de regülatör bölgelerini, intronlarl veya diger kodlayßrolmayan DNA veya RNAiniçeren nükleik asit molekülleri dahil olmak üzere daha büyük sekanslarü içermektedir. Tipik olarak, bir oligonükleotid yaklask 1 ila yaklasEk 500 nükleotid aras @da bir nükleik asit sekans îta sahiptir ve daha tipik olarak en az yaklask 5 nükleotid uzunlugundadm Nükleik asit molekülü memeliler, bal 1, bakteri, böcek, viral, bitki veya sentetik kaynaklar dahil olmak üzere herhangi bir kaynaktan elde edilebilmektedir. Bir nükleik asit molekülü, rekombinant DNA teknolojisi (öm. polimeraz zincir reaksiyonu (PCR), amplifikasyon, klonlama) veya kimyasal sentez gibi alanda yaygLn olarak bilinen yöntemlerle üretilebilmektedir. Nükleik asit molekülleri 5 n itlama olmakslzlln, dogal allelik varyantlarl lve bu tür modifikasyonlar n, nükleik asit molekülünün mevcut bulusun yöntemlerinde faydall olan bir immünojeni veya bagFsfkllk uyarîleroteini kodlama yetenegine büyük ölçüde müdahale etmeyecegi sekilde nükleotidlerin eklendigi, silindigi, sübstitüe edildigi veya tersine çevrildigi modifiye nükleik asit moleküllerini içeren dogal nükleik asit moleküllerini ve bunlar& homologlarlîiüçermektedir. Bir nükleik asit homologu alanda uzman kisilerce bilinen bir dizi yöntem kullanElarak üretilebilmektedir (bkz, örnegin Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Labs Press, 1989). Patojen antijen immünojenisitesi veya sitokin aktivitesi gibi immünojenisite için tarama teknolojileri alanda uzman kisilerce bilinmektedir ve çesitli in vitro ve in vivo testleri içermektedir. ÖRNEKLER Asag daki örnekler bulusun çesitli uygulamalarlnl göstermektedir. Örnek 1. Dogal sEgE' solunum hastaltgügörülmeden önce veya görüldükten sonra bir DNA immünomodülatörü alan inegin degerlendirilmesi. Bu çalßmanm amacü dogal BRD vakalarügörülmeden önce ve görüldükten sonra gilara uygulanan DNA immünomodülatörünün etkinligini belirlemektir. Immünomodülatör Bu çalgmada kullanIan immünomodülatör bir katyonik lipid ve kodlayßEolmayan DNA içeren bir bilesimdir. Sentetik immünomodülatör lipid bilesenleri [1-[2-[9-(Z)- oktadesenoiloksi]]-2-[8](Z)-heptadesenil]-3-[hidroksietil]imidazolinyum klorür (DOTIM) ve bir sentetik nötr lipid kolesterol formüle edilerek çapl yaklaslk 200 nm olan lipozomlar üretilmistir (Bkz., U.S. Patent 6,693,086). DNA bileseni, E. Coliide üretilmis 4242 baz çift kodlayÜFblmayan DNA plazmidi olup, bu, negatif yüklü olarak pozitif yüklü (katyonik) lipozomlarla birlesmektedir (Bkz., U.S. Patent 6,693,086). Çal gma Hayvanlar] Sütten kesme yasEida olan 84 Siyah-Alaca sgi] mevcut solunum hastalEgEgeçmisi olmayan bir sürüden seçilmistir. Her bir ayrüstgm ilk basta degerlendirilmis ve sagltlî durumunun iyi oldugu belirlenmistir. 84 sgi, her biri 12 sEgEdan olusan yedi tedavi grubuna bölünmüstür. Yalnâca Mannheimia haemolytica için asllanmamg olan hayvanlar çalLsmaya dahil edilmistir. Hayvanlarii hiç biri, DNA immünomodülatörünün uygulanmaslndan önceki 30 gün içerisinde bir antimikrobiyal ajan almamlst n. Tedavi gruplarha, yukarda açllitlanan DNA immünomodülatörünün degisen dozlarFl asagîia Tablo 1.1,de belirtildigi gibi tedavi gününde uygulanmßtß. DNA immünomodülatörünün seyreltme semasü Tablo 1.2'de verilmistir. DNA immünomodülatörü intramüsküler yolla ve sol omuza kraniyal olarak, nukal ligamente ventral olarak ve sgilarîl j uguler oluklarßa kaudo-dorsal olarak uygulanm Et& Asag da bahsedildigi gibi, Tedavi Gün -1, slglrlarln degerlendirildigi ve çallSma için uygun olarak belirlendigi ilk seçimden sonra çallSmanln baslangçl tarihini ifade etmektedir. Tedavi Gün 0, Gün -l"den bir gün sonrasldî ve bu sekilde devam etmektedir. Tablo 1.1. Immünomodülatörün Uygulama Program: Tedavi DNA Immünomodülatör Tedavi grubu sayßü Immünomodülatör Uygulama Günü bas Eia Dozu (ug) Hayvan 1 500 -l 12 2 200 -1 12 3 50 -l 12 4 500 0 12 200 0 12 6 50 0 12 Uygulanmaz 12 Sgilarîl büyük bir kßmlîzim, 0. Gün sabahEida degisen düzeylerde BRD yasadgü gözlemlenmistir. 5. Güne kadar çalßma popülasyonunda kalan sEgElarEi tümünün BRD morbiditesi için vaka tanEhîiIkarsiadEgEgözlemlenmistir. SEgElar, yaln Eca siddetli BRD nedeniyle ötenazi endike edilmisse çal Sma popülasyonundan çLliarLlmStLii Herhangi bir baska bulasld /bulasld blmayan hastallk gözlemlenmemistir ve dolaylslyla bu çal Smadan çkarma gerektirmemistir. Degerlendirme Çal slinan n 1-5. Gününde s glrllar çesitli sagllk göstergeleri açlslndan degerlendirilmistir. Örnegin, rektal sldakllk ve ortalama günlük kilo, çallsma uzunlugu boyunca her gün her slglîl için belirlenmistir. Hayvanlar, 1. Gün ila 5. Gün aras îlda her gün yaklasEk olarak ayni zamanda (+/- 3 saat) degerlendirilmistir. Uygulanan immünomodülatör dozuna göre rektal slîakllklarlîl ortalamas :lve ortalama günlük kilo al îh :analiz edilmistir. . Günde, tüm sEgmlara ötenazi uygulanmß ve otopsi yapJInßtîl. Otopsi sßas Eda her ayr] sEglî için akciger lezyon skorlarD belirlenmistir (görsel muayene ve manuel dokunma ile tahmin edilen akciger konsolidasyon derecesine göre). Uygulanan immünomodülatör dozuna göre akciger lezyon Skorlar _analiz edilmistir. Her uygulama günü için genel akciger lezyon skorlarl slraslyla Gün -1 ve Gün 0 için grubu ile tedavi edilen bir grup (200 ug) aras Ildaki en büyük fark yaklasEk %11 azalma olmustur. Modele uyarlanmg tahminler, tüm istatistiksel model kovaryantlar3(Örn. doz, gün ve doz x gün) için ve ayrßa sEgElarß çalßma boyunca baridîmdgjagl için uyarlanan ham ortalamalarü yansünaktadm. Bu nedenle, modele uyarlanmß tahminler ham ortalamalara nazaran farklarEgösterebilmektedir. Müteakiben bakteriyoloji (akciger kültürleri) ve Viroloji (nazal eküvyon çubuklar) da yap im srn 5. Günde ötenazi uygulanmis olan geri kalan slglnlar (69) arasindan görülmüstür. ÇalFsma hayvanlarîlül tümünden alman akciger kültürleri açFsIidan, Histophilus somni izole edilmemistir. Mycoplasma bovis için kültürler bu çalßmada yap Jinam @t 1. Sonuçlar Bu çal smada, DNA immünomodülatör dozu (öm. 500 ug, 200 ug ve 50 ug) negatif kontrole (P=0.1284) klyasla akciger lezyon Skorlar nda anlaml bir azalmaya ulasmlStlr. Bununla birlikte, DNA immünomodülatörü uygulama günü (Örn. Gün -1 veya 0) akciger lezyon skorlarE ile anlamli sekilde baglantmü olmamßti DNA immünomodülatör doz gruplarjaras lîlda akciger lezyon skorlarEida istatistiksel farklar gözlemlenmemistir. Rektal sßaklfk, DNA immünomodülatör (P=0.l 190) dozu ile anlamljsekilde baglantmüolma egilimi göstermis ancak uygulama günü ile baglantEUE olmamßt E. DNA immünomodülatör dozu ile negatif kontrol aras lîida ortalama günlük kilo aliiibakiißdan belirgin bir fark gözlemlenmemistir. DNA immünomodülatörünün negatif kontrolle kars lastijltlgnda akciger lezyonlarLiiLl azaltmaya yönelik güçlü bir egilimi olmustur, dolay slyla bu ürünün BRD salglnl s lias nda akciger dokusunu koruma potansiyeline sahip olduguna dair kan tl saglainaktad n. Bu çal @mada tedavi uygulama günü akciger lezyonlarîile baglantFlF olmamßti, dolayßglla inegin DNA immünomodülatörünü BRD ile baglantJDklinik belirtilerin baslamaslîidan önceki gün veya bununla aynE gün almasßß önemli olmadEgîljgöstermektedir. Bu sonuç, BRD patojenlerine maruz kalma zamanjgenel olarak tipik üretim sistemlerinde bilinmediginden ve üretim zinciri içerisinde inegin yasadîgjsesitli stres faktörlerinin etkisi ile daha da komplike hale geldiginden önem arz etmektedir. Bu nedenle, üreticilere BRD°nin baslamasEile iliskin olarak uygulamanEi zamanLaçLSandan esneklik sunan bir ürün sunulmasLJ et ve süt sektörlerinde son derece degerlidir. Örnek 2. Mannheimia haemolytica ile deneysel yükleme ile es zamanljolarak veya bundan bir gün sonra bir DNA immünomodülatörü alan inegin degerlendirilmesi Bu çalßmanm amacü Mannheimia haemolytica ile yükleme ile es zamanlElolarak veya bundan bir gün sonra sgilara uygulanan DNA immünomodülatörünün etkinligini belirlemektir. Immünomodülatör Bu çal Emada kullan Ian immünomodülatör Örnek 1'de yukarüa aç [klanan bilesimdir. gal'Sma Hayvanlar` | Sütten kesme yas nda olan ve ortalama agliillgl yaklaslk 300 lbs (136 kg) olan 84 Siyah- Alaca slglrl,|mevcut solunum hastallgl geçmisi olmayan bir sürüden seçilmistir. Her bir ayrîsglî ilk basta degerlendirilmis ve saglTt durumunun iyi oldugu belirlenmistir. 84 sgi, her biri 12 sîgmdan olusan yedi tedavi grubuna bölünmüstür. Yalnâca Mannheimia haemolytica için asûanmamß olan hayvanlar çalIslmaya dahil edilmistir. Hayvanlari hiç biri, DNA immünomodülatörünün uygulanmas îldan Önceki 30 gün içerisinde bir antimikrobiyal ajan almamStE. Tedavi gruplarßa, DNA immünomodülatörünün degisen dozlarEasagBa Tablo 2.1,de belirtildigi gibi tedavi gününde uygulanmßti DNA immünomodülatörünün seyreltme semasDTablo 2.2"de verilmistir. DNA immünomodülatörü intramüsküler yolla ve sol omuza kraniyal olarak, nukal ligamente ventral olarak ve slglrlarln juguler oluklar na kaudo-dorsal olarak uygulanmiSt n. Asagîla bahsedildigi gibi, Tedavi Gün 0, sFgFrlarFn degerlendirildigi ve sagllk durumlarîiîi iyi oldugunun belirlendigi ilk seçimden sonra çal @mani baslangßi tarihini ifade etmektedir. Tedavi Gün 1, Gün 01dan bir gün sonrasßm ve bu sekilde devam etmektedir. Tablo 2.1. Immünomodülatörün ve Mh Yüklemesinin Uygulama Programü Tedavi DNA Immünomodülatör MH Tedavi sayisi Immünomodülatör Uygulama Günü Yüklemesi grubu Dozu (ug) Uygulama bas ha Günü Hayvan l 500 0 0 12 2 200 O 0 12 3 50 0 0 12 4 500 1 0 12 200 1 0 12 6 50 1 0 12 Uygulanmaz 0 12 Deneysel Yükleme 0. Günde, slglrlara toplam Mannheimia haemolytica yüklenmistir. Solunum yolu araclTgýla inokülüm uygulanmstîl. 3. Güne kadar çal @ma popülasyonundaki sgîlarîi tümünün BRD morbiditesi için vaka tanEnmE kars Iadgîgözlemlenmistir (22). Ortalama baslangß günü bir gündür. Degerlendirme Önceki Örnekte oldugu gibi, çal Emanß 1-5. Gününde sIgBlar çesitli saglER göstergeleri açîslîldan degerlendirilmistir. Rektal sElaklER ve ortalama günlük kilo, çalßma uzunlugu boyunca her gün her bir sgî için belirlenmistir. Hayvanlar her gün yaklasüg aynü zamanda degerlendirilmistir. Uygulanan immünomodülatör dozuna göre rektal s dakl klar n ortalamalar ive ortalama günlük kilo al mlarl analiz edilmistir. . Günde, tüm slglrlara ötenazi uygulanmls ve otopsi yapllm St Il. Örnek l"de açlklanan formüle göre otopsi sîlas îida her ayn-s glîl için akciger lezyon skorlarl'belirlenmistir. Uygulanan immünomodülatör dozuna göre modele uyarlanmß akciger lezyon skorlarE analiz edilmistir. Sonuçlar Bu çalEmada, DNA immünomodülatör dozu (örn. 500 ug, 200 ug ve 50 ug) negatif kontrole kgiasla akciger lezyon skorlarElEanlamljölçüde azaltmgtß. Bununla birlikte, daha düsük dozlar (200 tig ve 50 ug) akciger lezyonlarijazaltmadan 500 uglden daha iyi performans göstermistir. DNA immünomodülatörü uygulama günü (örn. Gün 0 veya 1) akciger lezyon Skorlar I ile anlamli sekilde baglant ll | olmam Stlrt DNA immünomodülatör doz gruplar laraslnda akciger lezyon skorlarlnda istatistiksel farklar gözlemlenmemistir. Negatif kontrole kß/asla DNA immünomodülatörü uygulanan sgilarda rektal sEaklfk anlamlEölçüde azalmßtm, ancak dozla baglantlllEolmamßtE. DNA immünomodülatör dozu ile negatif kontrol arasîida ortalama günlük kilo allînü bak &imdan belirgin bir fark gözlemlenmemistir. DNA immünomodülatörünün negatif kontrolle kars Jhstildgida akciger lezyonlarßü azaltmaya yönelik güçlü bir egilimi olmustur, dolayIslßila bu ürünün BRD salgEiE10 s iias nda akciger dokusunu koruma potansiyeline sahip olduguna dair kan ti saglamaktad 11. Bu çalisimada tedavi uygulama günü akciger lezyonlar Iile baglantili olmami'stî, dolayisiyla inegin DNA immünomodülatörünü BRD ile baglantllîklinik belirtilerin baslamasmdan önceki gün veya bununla aynE gün almasEiEi önemli olmadîgîijgöstermektedir. Bu sonuç, BRD patojenlerine maruz kalma zamanjgenel olarak tipik üretim sistemlerinde bilinmediginden ve üretim zinciri içerisinde inegin yasadgîbesitli stres faktörlerinin etkisi ile daha da komplike hale geldiginden önem arz etmektedir. Bu nedenle, üreticilere BRDinin baslamasEile iliskin olarak uygulamanEi zamanEaçßmdan esneklik sunan bir ürün sunulmasü et ve süt sektörlerinde son derece degerlidir. Örnek 3. Mannheimia haemolyti'ca ile deneysel yüklemeden iki gün önce veya bununla es zamanlE olarak bir DNA immünomodülatörü alan inegin degerlendirilmesi Bu çalgmanm amac] Mannheimia haemoiytica ile deneysel yüklemeden iki gün Önce veya bununla es zamanlü olarak sgmlara uygulanan DNA immünomodülatörünün etkinligini belirlemektir. Immünomodülatör Bu çal Emada kullan Ian immünomodülatör Örnek l°de yukarEla açiklanan bilesimdir. gaISma Hayvanlari I mevcut solunum hastaligi geçmisi olmayan bir sürüden seçilmistir. Her bir ayr sigiii ilk basta degerlendirilmis ve saglik durumunun iyi oldugu belirlenmistir. 96 sigir, her biri 12 sigiFdan olusan sekiz tedavi grubuna bölünmüstür. Yalnßca Mannheimia haemolytica için as Ianmamß olan hayvanlar çalßmaya dahil edilmistir. Hayvanlar& hiç biri, DNA immünomodülatörünün uygulanmasiîidan önceki 30 gün içerisinde bir antimikrobiyal ajan almamßti Tedavi gruplaria, DNA immünomodülatörünün degisen dozlarjasagîia Tablo 3.1,de belirtildigi gibi tedavi gününde uygulanmStE. DNA immünomodülatörünün seyreltme semas] Tablo 3.2,de verilmistir. DNA immünomodülatörü intramüsküler yolla ve sol omuza kraniyal olarak, nukal ligamente ventral olarak ve s g nlar n juguler oluklarlna kaudo-dorsal olarak uygulanmlsltlr. Asagîla bahsedildigi gibi, Tedavi Gün -2, Tedavi GruplarTl l -3°e immünomodülatör uygulandgîlzaman çal Emanîi baslangm gününü ifade etmektedir. Tedavi Gün 0, Gün - 2sden iki gün sonrasi] ve bu sekilde devam etmektedir. Tablo 3.1. Immünomodülatörün ve Mh Yüklemesinin Uygulama Programü Tedavi DNA Immünomodülatör MH Tedavi saylsl Immünomodülatör Uygulama Günü Yüklemesi grubu Dozu (ug) Uygulama bas Iia Günü Hayvan l 200 -2 0 12 2 50 -2 0 12 3 25 -2 0 12 4 200 0 0 12 50 0 0 12 6 25 0 0 12 -2 0 12 Deneysel Yükleme 0. Günde, sgrilara toplam 1.9 X lOlOCFU yüklenmistir. Solunum yolu araclllglyla inokülüm uygulanin Et 3. Degerlendirme Önceki örneklerde oldugu gibi, çalßmanm 1-5. Gününde sEglIlar çesitli sagllk göstergeleri açßßdan degerlendirilmistir. 5. Günde, tüm sîg'ilara ötenazi uygulanmß ve otopsi yapÜInßtE. Otopsi sEasEida her ayrjsgîl için akciger lezyon skorlarE belirlenmistir. Uygulanan immünomodülatör dozuna göre modele uyarlanmls akciger lezyon skorlarnn yan lsrla immünomodülatör uygulama gününe göre modele uyarlanms akciger lezyon Skorlar-analiz edilmistir. Sonuçlar Bu çalßmada, DNA immünomodülatör dozu (örn. 200 ug, 50 ug ve 25 ug) negatif kontrollere kßlasla akciger lezyon skorlarîiîönemli ölçüde azaltm Sti Bununla birlikte, DNA immünomodülatör doz gruplarjarasüida akciger lezyon skorlarßda istatistiksel farklar gözlemlenmemistir. DNA immünomodülatör uygulama günü (örn. Gün -2 veya 0) akciger lezyon skorlarjile anlamljsekilde baglantmüolmustur. Immünomodülatör Gün -2 ile kars lastJjLldLgJida 0. Günde uygulandLgLuda akciger lezyonlarijda önemli azalma gözlemlenmistir. Örnek 4. Immünomodülatör ve öldürülmüs MH asEIB Mh Yüklemesi ile birlikte uygulanmas 3 Bu çal Emanß amacÇ Mannheimia haemolytica ile deneysel yüklemeye tabi tutulmus sgilara öldürülmüs MH asßüile birlikte uygulanan DNA immünomodülatörünün etkinligini belirlemektir. Immünomodülatör Bu çal Emada kullan Jhn immünomodülatör Örnek l°de yukarEla aç [klanan bilesimdir. gaISma Hayvanlar. | 12 haftalLk 81 Siyah-Alaca boga sLgJjLJ mevcut solunum hastalLgJgeçmisi olmayan bir sürüden seçilmistir. Her bir ayrl slglr degerlendirilmis ve sagllk durumunun iyi oldugu belirlenmistir. Yalniztca Mannheimia haemolytica için as lanmamls olan hayvanlar çal @maya dahil edilmistir. Hayvanlarln hiç biri, inokülüm uygulanmasmdan önceki 30 gün içerisinde bir antimikrobiyal ajan almam Et 3. Yükleme veya deneysel enfeksiyon Mannheimia haemolytica inokülüm maruziyetini zamanda bir baska solunum yoluyla bir sprey yüklenmistir. Sprey inokülümdaki organizmalarîî konsantrasyonu hayvan bas lîia 1.9Xl Ol0 olmustur. Yukarîla aç [klandEgE gibi sgilara uygulanan ve aridan Mannheimia haemolytica maruziyeti gelen immünomodülatörün etkinligi Tablo 3% ayrlIltEllEblarak verildigi gibi on iki tedavi grubu ile belirlenmistir. Tablo 4.3. Çal @ma Tedavi GruplarE Grup Hedeflenen Doz Tedavi Günü Hayvan Gün Temas Sayiü Tl Öldürülmüs MH (yag) asßüSC) 0 X 7 T2 Öldürülmüs MH (yag) asßl: + 0 X T3 Öldürülmüs MH (yag) asßüSC) 7 X 6 T4 Öldürülmüs MH (yag) asßE + 7 T5 Immünomodülatör 500 ug (SC) 7 X 7 T6 Immünomodülatör 500 ug (SC) 13 X 7 T7 Immünomodülatör 500 pg (IM) 13 X 7 T8 Immünomodülatör 500 ug (SC) 15* X 7 T9 Kontrol NC Uygulanmaz Uygulanmaz 7 T10 Kontrol CC Uygulanmaz X 5 Tll Kontrol SE Uygulanmaz X 7 T12 Öldürülmüs MH (sulu) asßE+ 0 X 7 Immünomodülatör 500 ug (SC) Yag MH : Mannheimia haemolytica asßlPulmo-Guard® PHM) Sulu MH = Mannheimia haemolytica asisJîOne Shot®) NC : Karßtmhnamß ve sprey yüklenmemis (geçmis gros patolojisi için) CC = Temas ve sprey yüklenmis SE = Ekici yüklemesi olarak kullanllfnlStlrÄ (Intratrakeal yolla yüklenmistir) SE ve NC hariç tüm hayvanlara, spreyle yükleme yap [[mßtE SC = Subkütan enjeksiyon yolu NA = Uygulanabilir degil * T8 grubundaki hayvanlar intranazal yüklemeden sonra tedavi edilecektir Çal slman ri O. Gününde, T1, T2 ve T12 gruplar ndaki tüm hayvanlara subkütan yolla immünomodülatör uygulanm stlrt Immünomodülatör T3, T4 ve TS gruplarlna 7. Günde subkütan yolla uygulanml'st TL Immünomodülatör T6 gruba 13. Günde subkütan yolla ve T7 grubuna intramüsküler yolla uygulanmßtm. Immünomodülatör T8 grubuna 15. Günde subkütan yolla uygulanm Et 1. As :alan tüm hayvanlar etiket talimatlarEla göre as Ianmßt i Immünomodülatör ve asü bir lenf dügümü (boyun) yakiîda birbirine oldukça yaki uygulanmßti - iki enjeksiyon (biri as [için ve digeri immünomodülatör için). Subkütan enjeksiyon yolunu alan tüm hayvanlara bir lenf dügümü yakßßda alt skapular bölgede enjeksiyon Çal slman n 10. gününde tüm T11 s g rllarl,lslglu1arl Stres altlnda bliiakmak için yaklaslk 24 saat süreyle bir hayvan kamyonunda bölge dlslna sevk edilmistir. ÇallSmanln 11. gününde, tüm Tll hayvanlarma Mannheimia haemolytica içeren bir inokülümun 20 mUsi transtrakeal yolla uygulanm& ve bunu 4 saat sonra 25 mL inokülüm izlemistir. Çalgmanîi 14. gününde, T9 hariç tüin gruplar karEtEJInE ve sEgElarEstres altîida bîlakmak için yaklastk 24 saat süreyle bir hayvan kamyonunda bölge dSEia sevk edilmistir. NC grubundakiler hariç tüm hayvanlar Çalßmanß 14. gününde 12 ila 16 saat süreyle büyük bir ag [Eda kargtmlng ve ardEidan kendi ayrligülarîia döndürülmüstür (her hayvani ayrjbir agmüvardß). Çalßmanm 15. gününde, 20 mL Mannheimia haemolytica, T9 ile Tll hariç tüm gruplara bir baska solunum yoluyla uygulanmLStLr. Hayvanlar çal Sma boyunca günlük olarak klinik anormallikler ve mortalite açls'liidan gözlemlenmistir. Tüm hayvanlar, hayvanlarln satin allrtmaslndan önceki taramada negatiftir veya düsük titreleri vardli. HayvanlarFri tedavi öncesinde yüksek titreleri olup, bu da hayvanlar& tedavi almadan önce serolojik olarak Mannheimia haemolytica*a dönüstüklerini göstermektedir. Grup T8"deki hayvanlari Önemli ölçüde düsük akciger lezyonlaerard E. Çal Ema, asE ile birlikte veya as 3 olmadan erken koruma basladgij (gün 7) ileri sürmektedir (T37e kýasla T4 ve TS gruplar& Örnek 5. Bir DNA immünomodülatörü ile birlikte uygulandgîida ticari-canlüasE ile as Ianan sgilarda kazan[[m 3 bagßklgîj degerlendirilmesi Bu çal l"smanm amacîl DNA immünomodülatörünün birlikte uygulanmaslîilîi modifiye- canlj viral (MLV) asEÜarîi sagladgü kazanEImS bagßtklEgE artEE› artîmadîgmE belirlemektir. Immünomodülatör Bu çal Emada kullan Ian immünomodülatör Örnek 1°de yukarüa aç [klanan bilesimdir. gaI'Sma Hayvanlar` l Sütten kesme yasßda olan 72 Siyah-Alaca inegi, mevcut solunum hastalEgEgeçmisi olmayan bir sürüden seçilmistir. 72 sLgLij, her biri 12 sgijdan olusan alt _tedavi grubuna bölünmüstür. Her bir ayrl lsigin degerlendirilmis ve sagllk durumunun iyi oldugu belirlenmistir. Sl girlarln tümü, BHV-l, BVDV tip 1 ve 2 ve BRSV için serum antikorundan arlîiiktlîl. ilaveten, sFgTrlarlîi tamamîiîi Pl-3,e karsl' serum antikor açîslîidan negatif oldugu bulunmustur. Akabinde sgilarîi, immünohistokimya ile sEgE viral diyare virüsü persistan enfeksiyonu için negatif oldugu belirlenmistir. Tedavi gruplarEia, asüile DNA immünomodülatörünün degisen dozlarüasag Ba Tablo .1"de belirtildigi gibi tedavi gününde intramüsküler yolla uygulanmßtm DNA immünomodülatörünün seyreltme semasü Tablo 5.2,de verilmistir. Çalßmanß 0. Gününde, T1-T4 gruplarmdaki tüm hayvanlara immünomodülatör uygulanmgtm. Asü alan tüm hayvanlar etiket talimatlaana göre asLlanmLStLr. Immünomodülatör ve asL,J omzun ön klslm na kraniyal olarak birbirine oldukça yakn uygulanm Stn - iki enjeksiyon (biri as için ve digeri immünomodülatör için). Tablo 5.1. Immünomodülatörün ve Aslnln Uygulama Programi Grup Hedeflenen Doz AsEl ve/veya Hayvan lmmünomodülatör (500 T2 MLV + 0 12 T3 MLV + 0 12 Immünomodülatör (100 T4 MLV + 0 12 T5 MLV 0 12 T6 Tedavi yok Uygulanmaz 12 MLV = Mannheimia haemolytica asßlBovi-shield®) - modifiye-cani Ü4-y011u viral . solunum yolu asßî Degerlendirme gelen örneklerde immünolojik test yathIEt E. Hücre arac [[Ebagßmlügt (CMI) ölçümleri her numune için yürütülmüstür. Bu çal Emaya yönelik hedef patojenler BHV-l, BVDV 1 ve 2 ve BRSV7dir. Laboratuvarlarda önceden belirtilen hedef patojenler için uygun olan standart prosedürler ve yöntemler kullanilmlst 11. Sonuçlar Tüm tedavi gmplarFaraslîlda her örnek toplama Gününde CMI sonuçlarlîla yönelik modele uyarlanmg veriler belirlenmistir. Tedavi gruplar: hücre tipleri ve antijenlerin tümü arasEida, DNA immünomodülatör tedavi gruplarj- MLV asjkombinasyonlarE yaln ztca MLV as 9 alan slglrilarla kars lastlnlldlglnda istatistiksel farklar (P0.10) tespit edilmemistir. Özellikle, 6 tedavi grubunun her biri için bes hücre tipinin tamaminda CD El ekspresyon indeksinin ölçümleri, 6 tedavi grubunun her biri için bes hücre tipinin tamam Elda IF Ny ekspresyon indeksinin ölçümleri ve 6 tedavi grubunun her biri için bes hücre tipinin tamamîida IL-4 ekspresyon indeksinin ölçümleri analiz edilmistir. 4 BRD viral patojenin her biri için tahminler olusturulmustur. Bu istatistiksel degerlendirmeler için tüm kars Iast îlmalar "yaln Eca MLV" tedavi grubu ile yap [[mlIstE. Istatistiksel olarak anlamlE(P< ve BVDV 2 (Gün 42) için tespit edilmistir. Listelenen zaman noktalarlîiß hiç birinde BHV-l için herhangi bir anlamlleulgu (P0.10) tespit edilmemistir. Negatif kontrol tedavi grubu içerisinde antikor serokoruma gözlemlendigi için BRSV verileri analizden ç kar im st 11. Tüm istatistiksel degerlendirmeler için tüm kars last nmalar n "yalnlzca MLV" tedavi grubu ile yapllhfs oldugunu unutmayallrh Tek tek hayvan agilklarjda çalßma sEasEida toplanmgti. Yalnâca MLV grubu ile kars Iastilldgîida tedavi gruplar: arasEida anlamlj bulgular (P0.10) tespit edilmemistir. Özetle, DNA immünomodülatörü, MLV asßîiß tek basEia uygulanmasE ile karSJhstBJJdgîlda MLV asßjile birlikte uygulandEgDzaman CMPyÜartîmamEtE. Bununla birlikte, DNA immünomodülatörünün 500 ugssi, MVL asßjile birlikte uygulandgnda hümoral bagLsklgJ artLijabilmektedir (özellikle BVDV). Bununla beraber, kazan lms baglSlkllkta tutarll ' bir iyilesme olmamas na ragmen, DNA uygulanmas`lMLV asTsHiEi indükledigi pozitif immünolojik etkileri bozmamlstrr. ilaveten, DNA immünomodülatörünün uygulanmas Dile performans (yani ADG) negatif olarak etkilenmemistir. Örnek 6. Bir DNA immünomodülatörü ile birlikte uygulandgiida ticari-asjile as lanan slg itlarda kazan limis bagisikllgln degerlendirilmesi Bu çal Emanîl amacü DNA immünomodülatörünün birlikte uygulanmasßß, etkisizlestirilmis antij en içeren as &ama sagladEgE kazanühiß bagßügltgü attigi art ijmad Lg n _belirlemektir10 Immünomodülatör Bu çal smada kullan lan immünomodülatör Örnek lsde yukarlda açlklanan bilesimdir. çal @ma Hayvanlari 3-5 aylEk olan 48 Siyah-Alaca disi sigm, mevcut solunum hastalggeçmisi olmayan bir sürüden seçilmistir. 48 sîgß, her biri 8 hayvandan olusan altü tedavi grubuna bölünmüstür. Her bir ayrihayvan degerlendirilmis ve sagli durumunun iyi oldugu belirlenmistir. Hayvanlari tümü, BHV-l, BVDV tip 1 ve 2 için serum antikorundan ariiti. Hayvanlari ayrßa PCR ile sgm viral diyare virüsü persistan enfeksiyonu için negatif oldugu da belirlenmistir. Hayvanlar, BRS Virüsü ve PIB' virüsüne karsESNT titrelerine göre seçilmemistir. Tedavi gruplarina, asl lile DNA immünomodülatörünün degisen dozlarl lasag da Tablo .1,de belirtildigi gibi tedavi gününde intramüsküler yolla uygulanmisltlri. Asl,l etkisizlestirilmis antijen olarak BHVl ve BVDV tip 1 ve 2 ve modifiye canl`l313 virüsü ve BRS virüsü içermistir. Immünomodülatör ve asEya omzun önüne kraniyal olarak hayvani ayn itarafEldan ayrDolarak ya da aynEbölgede hayvanli diger tarafmda ayrü olarak ya da bir smmgada karßü& olarak verilmistir. DNA immünomodülatörünün seyreltme semas ETablo 5.2,de verilmistir. Tablo 6.1. Immünomodülatörün ve Aslnln Uygulama Programi Grup Hedeflenen Doz Asü ve/veya Hayvan Uygulama Günü Tl Plasebo (Dekstroz %5) 0 8 TZ Asü+ Dekstroz IM, ayrEblarak 0 8 T3 Asü+ Immünomodülatör (20 0 8 ug) IM, karlêk T4 Asl |+ Immünomodülatör (200 O 8 ug) lM, karßk T5 Asü+ Immünomodülatör (200 0 8 ug) IM, aynü tarafta ayri T6 AsLl+ Immünomodülatör (200 0 8 ug) lM, diger tarafta ayrE As E: kombine (etkisizlestirilmis ve modifiye canlEB4-yollu viral solunum yolu (Rispoval®) Degerlendirme numunelerden gelen örneklerde immünolojik test yapÜInEti. Bu çalgmaya yönelik hedef patojenler BHV-l, BVDV 1 ve 2,dir. Bilgi için BRS virüsü ve Pl3 virüsüne karsü antikor titreleri de belirlenmistir. Laboratuvarlarda önceden belirtilen hedef patojenler için prosedürler olarak standart Serum Nötralizasyon testleri (SNT) kullanüinßtm. Sonuçlar Istatistiksel olarak anlamlüP< için tespit edilmistir. Listelenen zaman noktalaanLn herhangi birinde 23de BHVl için ve BVDV tip 1 için tüm diger zaman noktalar nda anlamll lbulgular (P0.10) tespit edilmemistir. BRSV ve Pl3 titrelerinin sonuçlar daha fazla degerlendirilmemistir çünkü hayvanlar çalismanin baslangdnda serolojik olarak negatif` degildir. Bu nedenle tedavinin etkisi dogrulanamamlst 11. Tüm istatistiksel degerlendirmeler için tüm karsTastîlmalarîi "Asi" ve Dekstroz%5" tedavi grubu ile yapllnFs oldugunu TR TR TR TR TR TR TR TR TR