TR201907389T4 - Meme kanserinden kaynaklanan metastazlı kemik kanserinin prognozu ve tedavisine yönelik yöntem. - Google Patents

Abstract

Mevcut buluş, bir primer tümör numunesinde MAF geninin amplifiye olup olmadığının belirlenmesini içeren, HER2+ meme kanserinde kemik metastazının prognozuna yönelik bir yöntem ile ilgilidir. Benzer şekilde mevcut buluş ayrıca, MAF geni ekspresyon seviyesinin, amplifikasyonunun veya translokasyonunun belirlenmesini içeren, diğer organlardaki metastaza göre kemik metastazı geliştirme eğiliminin belirlenmesine yönelik bir yöntem ile ilgilidir. Mevcut buluş ayrıca, meme kanserinden muzdarip olan bir denekte erken kemik metastazının tahmin edilmesine yönelik bir yöntem ile ilgilidir. Mevcut buluş ayrıca, HER2+ meme kanseri metastazının tedavisinde kullanılmak üzere terapötik ajan olarak c-MAF inhibitör ajanı ile ilgilidir. Mevcut buluş, kemik metastazının tahmin edilmesine yönelik veya kemik metastazından muzdarip bir deneğin klinik sonucunun tahmin edilmesine yönelik kitler ile ilgidir. Son olarak, mevcut buluş, meme kanserinden muzdarip bir deneğin tiplenmesine yönelik ve meme kanserinden muzdarip bir deneğin bir kohorta sınırlandırılmasına yönelik bir yöntem ile ilgilidir.

Description

TARIFNAME MEME KANSERINDEN KAYNAKLANAN METASTAZLI KEMIK KANSERININ PROGNOZU VE TEDAVISINE YÖNELIK YÖNTEM BULUSUN ARKA PLANI Bulusun Alani Bir yönde mevcut belge, bir primer tümör numunesinde MAF geninin seviyelerinin belirlenmesine bagli olarak, ERBBZ pozitif (insan epidermal reseptörü 2 pozitif, HER2+) meme kanserinde kemik metastazinin prognozu ile ilgilidir. Benzer sekilde, bir yönde lokusu amplifikasyonunun veya translokasyonunun belirlenmesini içeren, ERBBZ pozitif (insan epidermal reseptörü 2 pozitif, HER2+) meme kanserli bir denekte özellestirilmis bir terapi tasarlanmasina yönelik bir yöntem ile ilgilidir. Son olarak, bir diger yönünde mevcut belge, bir c-Maf inhibitörünün HER2+ meme kanseri metastazinin, özellikle kemik metastazinin tedavisinde bir terapötik ajan olarak kullanimi ile ilgilidir.

Teknigin Bilinen Durumu Meme kanseri, dünya çapinda en yaygin ikinci kanser türüdür (%10.4; akciger kanserinden sonra) ve kanser nedeniyle ölümün en yaygin besinci nedenidir (akciger kanseri, mide kanseri, karaciger kanseri ve kolon kanserinden sonra). Kadinlar arasinda meme kanseri, kanser nedeniyle ölümün en yaygin nedenidir. 2005 yilinda meme kanseri, dünya çapinda 502,000 ölüme (kanser nedenli ölümlerin %7'si; tüm ölümlerin neredeyse %l'i) neden olmustur. Dünya çapinda vaka sayisi, kismi olarak Bati dünyasindaki modern hayat tarzindan kaynaklanan bir olgu olarak 1970'lerden itibaren önemli derecede artmistir.

Meme kanseri, TNM sistemine göre evreler halinde siniflandirilmaktadir. (Bkz. American Joint Committee on Cancer. AJCC Cancer Staging Manual. 6th ed. New York, NY: Springer, 2002). Prognoz, evre siniflandirmasinin sonuçlari ile yakindan ilgilidir ve evre siniflandirmasi ayni zamanda, klinik deneylerde ve tibbi uygulamalarda hastalar Için tedavileri belirlemede kullanilmaktadir. Evreler halinde siniflandirmaya yönelik bilgiler asagidaki gibidir: . TX: Primer tümör degerlendirilememektedir. TO: herhangi bir tümör belirtisi yoktur. Tis: /n s/tu karsinom, invazyon yok. T1: Tümör, 2 cm veya daha küçüktür. T2: Tümör, 2 cm'den büyük ancak 5 cm'den küçüktür. T3: Tümör, 5 cm'den büyüktür. T4: Meme duvari veya ciltte büyüyen herhangi bir boyutta tümör veya inflamatuvar meme kanseri.

. NX: Yakindaki lenf dügümleri degerlendirilememektedir. NO: Kanser, bölgesel lenf dügümlerine yayilmamistir. N1: Kanser, 1 ila 3 aksiller lenf dügümüne veya bir iç meme lenf dügümüne yayilmistir. N2: Kanser, 4 ila 9 aksiller lenf dügümüne veya birçok iç meme lenf dügümüne yayilmistir. N32 Asagidakilerden biri geçerlidir: - Kanser, 10 veya daha fazla aksiller lenf dügümüne yayilmistir veya kanser, infraklaviküler lenf dügümlerine yayilmistir veya kanser, supraklaviküler lenf dügümlerine yayilmistir veya kanser, aksiller lenf dügümlerini etkilemektedir ve iç meme lenf dügümlerine yayilmistir veya kanser, 4 veya daha fazla aksiller lenf dügümünü etkilemektedir ve iç meme dügümlerinde veya sentinel lenf dügümü biyopsisinde minimum miktarlarda kanser vardir.

. MX: Uzak yayilmanin (metastaz) varligi degerlendirilememektedir. M0: Herhangi bir uzak yayilma yoktur. M1: supraklaviküler lenf dügümünü içermeyen uzak organlara yayilma olusmustur.

Solid tümör kanseri olan hastalarin çogunun metastazdan sonra ölmesi, bir tümörün metastaz yapmasina olanak saglayan moleküler ve hücresel mekanizmalarin anlasilmasinin önemli oldugu anlamina gelmektedir. Son yayinlarda, metastaza kompleks olmakla birlikte az bilinen mekanizmalarin nasil neden oldugu ve ayni zamanda farkli metastatik hücre türlerinin spesifik organlara dogru bir tropizme nasil sahip oldugu gösterilmistir. Bu dokuya özgü metastatik hücreler, bunlarin spesifik organlara kolonilesmesine olanak saglayan bir dizi edinilmis fonksiyona sahiptir.

Bütün hücreler, yüzeylerinde, stoplazmalarinda ve hücre çekirdeklerinde reseptörlere sahiptir. Hormonlar gibi belirli kimyasal haberciler, söz konusu reseptörlere baglanmaktadir ve bu, hücrede degisikliklere neden olmaktadir. Meme kanseri hücrelerini etkileyebilen üç önemli reseptör mevcuttur: östrojen reseptörü (ER), progesteron reseptörü (PR) ve HER2/neu. Bu reseptörlerden herhangi birine sahip olan hücrelerin adlandirilmasi amaciyla reseptör mevcut oldugunda bir arti isareti ve bunun mevcut olmamasi halinde bir eksi isareti buraya yerlestirilmektedir: ER pozitif (ER+), ER negatif (ER-), PR pozitif (PR+), PR negatif (PR-), HER2 pozitif (HER2+) ve HER2 negatif (HER2-). Reseptör durumu, spesiûk tedavilerin, örnegin tamoksifen veya trastuzumab kullaniminin uygunlugunu belirlemesi nedeniyle bütün meme kanserlerine yönelik kritik bir degerlendirme haline gelmistir.

Denetlenmemis gen ekspresyon sekansi profillemesi, Iuminal A, Iuminal B, HER2+/ER- ve bazal benzeri alt tip gibi yapisal alt tiplerin tanimlanmasi sayesinde meme kanserinin heterojenligine yönelik biyolojik kanit saglamistir.

HER2+ kanserleri, farkli seviyelerde asiri ekspresyon dahil olmak üzere HER2 genini asiri eksprese eden tümörler olarak tanimlanmistir. Bu alt grup, tüm meme kanseri tiplerinin %30'una tekabül etmektedir Artan hastalik nüksetmesi ve kötü prognozla son derece iliskilidir. Asiri ekspresyonun ayni zamanda yumurtaliklarda, midede ve rahim seröz endometrial kanser gibi agresif rahim kanseri formlarinda meydana geldigi bilinmektedir.

Tümör olasi adjuvan hormon terapisi (tamoksifen veya bir aromataz inhibitörü ile), kemoterapi ve/veya radyoterapi ile lokalize edildiginde meme kanserinin tedavi edilmesine yönelik temel ilke ameliyattir. Mevcut olarak ameliyattan (adjuvan terapisi) sonra tedaviye yönelik öneriler bir modeli takip etmektedir. Bu model, dünya çapinda çok merkezli çalismalarin asil sonuçlarini tartismak üzere iki yilda bir dünya çapinda bir konferansin St. Gallen, Isviçre'de gerçeklesmesi nedeniyle degisime tabidir. Benzer sekilde söz konusu model ayrica, Ulusal Saglik Enstitüsü'nün (NIH) fikir birligi kriterine göre gözden geçirilmektedir. Bu kriterlere bagli olarak lenf dügümlerinde metastaz bulunmayan hastalarin %85-90'indan fazlasi, adjuvan sistemik terapi alma adaylari olacaktir. HER2+ hastalari, HER2'ye karsi adjuvan hedefli bir terapiye yatkindir. HER2, monoklonal antikor trastuzumabin (Herceptin olarak satilmaktadir) hedefidir.

Trastuzumab, yalnizca HERZ'nin asiri eksprese edildigi kanserlerde etkilidir. HER2 ve HER3 reseptörlerinin dimerizasyonunu inhibe eden Pertuzumab gibi alternatif monoklonal antikorlar, ilaçlarla birlestirilen antikorlar, T-DM1 ve küçük inhibitörler potansiyel hedefli terapötik seçeneklerdir. Prognozu degerlendirmek ve trastuzumab terapisine uygunlugu belirlemek üzere meme kanserli hastalarda HER2 testi yapilmaktadir. Pahali oldugu için ve kardiyak toksisitesi ile iliskili oldugu için trastuzumabin HER2-pozitif kisilerle sinirlanmasi önem arz etmektedir. HER2- tümörleri için, trastuzumabin riskleri açik bir biçimde faydalarindan agir basmaktadir.

Testler genellikle ince igne aspirasyonu, kalin igne (core needle) biyopsisi, vakum destekli meme biyopsisi veya cerrahi eksizyon ile elde edilen biyopsi numunelerinde gerçeklestirilmektedir. Numunede bulunan HER2 proteininin miktarini ölçmek için immünohistokimya kullanilmaktadir. Alternatif olarak, mevcut olan genlerin kopya sayisini ölçmek için floresan in situ hibridizasyon (FISH) kullanilmaktadir.

Mevcut durumda örnegin Oncotype DX gibi PCR testleri veya örnegin MammaPrint gibi mikrodizi testleri, spesifik genlerin ekspresyonuna bagli olarak meme kanserinin nüksetme riskini tahmin edebilmektedir. Subat 2007'de MammaPrint testi, Gida ve Ilaç Kurumu'ndan resmi onay alma konusunda ilk meme kanseri göstergesi olmustur.

EP1961825-A1 sayili patent basvurusu, bir tümör dokusu numunesinde, aralarinda MAF'nin de bulundugu bir veya daha fazla markerin ekspresyon seviyelerinin bir kontrol numunesinde karsilik gelen ekspresyon seviyelerine göre belirlenmesini içeren, meme kanserinin kemik, akciger, karaciger veya beyine metastazinin meydana geldiginin tahmin edilmesine yönelik bir yöntemi açiklamaktadir. Ancak bu belge, meme kanseri hastalarinin sagkaliminin belirlenmesini saglamak üzere es zamanli olarak birkaç genin belirlenmesini gerektirmektedir ve kemik metastazi olmadan sagkalimin tahmin edilmesine yönelik gen imzasinin kapasiteleri arasindaki iliski istatistiksel olarak anlamli degildir. benzeri meme kanserinin prognozunun tahmin edilmesine yönelik bir yöntemi açiklamaktadir. edilen veya asagi regüle edilen bir dizi genin ekspresyon seviyelerinin saptanmasini içeren, üçlü negatif meme kanseri olan bir denekte kanserin prognozuna yönelik bir yöntemle ilgilidir. prognozunda faydali marker genlerin tanimlanmasi ile ilgilidir. Üçlü negatif meme kanserinden muzdarip olan bir denegin metastaz gelistirme olasiliginin tahmin edilmesine olanak veren yeni markerlerin tanimlanmasina ihtiyaç bulunmaktadir. Yeni prognoz faktörlerinin tanimlanmasi, en uygun tedavilerin seçilmesinde bir kilavuz olarak islev görecektir.

BULUSUN KISA AÇIKLAMASI Bir yönde mevcut bulus, söz konusu kanserden muzdarip olan bir denekte HER2+ meme kanserinin kemik metastazi riskinin ve/veya HER2+ meme kanserinin klinik sonucunun tahmin edilmesine yönelik bir in vitro yöntem ile ilgili olup, bu yöntem asagidakileri içermektedir: i) söz konusu denege ait bir HER2+ meme kanseri numunesinde MAF geninin amplifikasyonunun veya kopya sayisinin belirlenmesi ve ii) i) adiminda elde edilen amplifikasyonun veya kopya sayisinin bir referans degerle karsilastirilmasi, burada söz konusu genin söz konusu referans degere göre artan kopya sayisi veya amplifikasyon derecesi, artan kemik metastazi gelistirme riskinin ve/veya kötü klinik sonucun göstergesidir.

Bir baska yönünde bulus, HER2+ meme kanserinden muzdarip olan bir denek için özellestirilmis bir terapinîn tasarlanmasina yönelik bir in vitro yöntem ile ilgili olup, bu yöntem asagidakileri içermektedir: i) söz konusu denege ait bir HER2+ meme kanseri numunesinde MAF geni amplifikasyonunun veya kopya sayisinin ölçülmesi ve ii) i)'de elde edilen amplifikasyonun veya kopya sayisinin bir referans degerle karsilastirilmasi, burada eger kopya sayisi veya amplifikasyon derecesi söz konusu referans degere göre artmissa, söz konusu denek kemik metastazini önlemeyi ve/veya tedavi etmeyi amaçlayan bir terapi ve/veya kemik yikiminin önüne geçmeyi ve/veya bunu önlemeyi amaçlayan bir terapi almaya yatkindir, burada eger kopya sayisi veya amplifikasyon derecesi söz konusu referans degere göre artmamissa, söz konusu denek kemik metastazini önlemeyi ve/veya tedavi etmeyi amaçlayan bir terapi ve/veya kemik yikiminin önüne geçmeyi ve/veya bunu önlemeyi amaçlayan bir terapi almaya yatkin degildir.

Bir baska yönünde bulus, bir referans deger ile kiyaslandiginda MAF geninin amplifikasyonunun veya artan kopya sayisinin oldugu belirlenmis olan bir denekte HER2+ meme kanserinden kaynaklanan kemik metastazinin önlenmesinde, inhibisyonunda veya tedavisinde veya HER2+ meme kanserinde kemik yikiminin önüne geçilmesinde veya bunun önlenmesinde kullanilmak üzere kemik yikiminin önüne geçebilen veya bunu önleyebilen bir ajanla ilgilidir, burada kemik yikiminin önüne geçebilen veya bunu önleyebilen ajan, bir bisfosfonat, bir RANKL inhibitörü, bir PTH veya bir PTHLH inhibitörünün bloke edici antikorlari veya bunlarin rekombinat formlari dahil olmak üzere, bir PRG analogu, stronsiyum ranelat, bir DKK-1 inhibitörü, bir çifte MET ve VEGFR2 inhibitörü, bir östrojen reseptör modülatörü, kalsitonin, bir katepsin K inhibitörü ve alfaradin arasindan seçilmektedir.

Bir baska yönünde bulus, HER2+ meme kanserinden muzdarip olan bir denege ait bir numunenin tiplemesine yönelik bir in vitro yöntem ile ilgili olup, bu yöntem asagidakileri içermektedir: (a) söz konusu denekten alinan bir HER2+ meme kanseri numunesinin saglanmasi; (b) söz konusu numunede MAF amplifikasyonunun veya kopya sayisinin ölçülmesi; (c) ölçülen MAF amplifikasyonunun veya kopya sayisinin önceden belirlenmis bir MAF referans seviyesi ile karsilastirilmasi yoluyla söz konusu numunenin tiplenmesi; burada söz konusu tipleme, söz konusu denekteki kemik metastazi riski ile baglantili prognostik bilgiler saglamaktadir.

Bir baska yönünde bulus, HER2+ meme kanserinden muzdarip olan bir denegin bir kohorta siniflandirilmasina iliskin bir yöntem ile ilgili olup, sunlari içermektedir: a) söz konusu denege ait bir HER2+ meme kanseri numunesinde MAF'nin amplifikasyonunun veya kopya sayisinin belirlenmesi; b) söz konusu numunedeki MAF amplifikasyonunun veya kopya sayisinin önceden belirlenmis bir MAF referans seviyesi ile karsilastirilmasi; ve c) numunedeki söz konusu MAF amplifikasyonuna veya kopya sayisina göre söz konusu denegin bir kohorta siniflandirilmasi.

SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI Sekil 1: meme kanseri primer tümörlerinde kemik metastazi görülmesi ile MAF geni iliskisini içeren 16q22-24. a) HER2+ primer meme kanseri dokularinda 16q22-24 DNA amplifikasyonunu olmadan ve 16q23 amplifikasyonu (vaka2, ile hasta numunesinin temsili görüntüleri. b) Evre I, II ve III meme kanseri insan primer tümör veri setinde (n=334) rekabetçi bir olay olarak kemikte nüksetme öncesinde ölüm kullanilarak, herhangi bir zamanda kemik metastazinin kümülatif insidansi. Hastalar, hücre (< grubuna ayrilmistir. Çekirdek basina minimum 50 hücre ve tümör basina 3 çekirdek skorlanmistir.

HR-tehlike orani, CI-Güven Araligi.

BULUSUN AYRINTILI AÇIKLAMASI Genel terim ve ifadelerin tanimlari Burada kullanildigi haliyle “ve/veya", belirtilen iki özelligin veya bilesenin her birinin, diger ile birlikte veya diger olmadan spesifik açiklamasi olarak alinmalidir. Örnegin 'A ve/veya B', her biri burada ayri olarak verilmis gibi, (i) A, (ii) B ve (iii) A ve B'den her birinin spesifik açiklamasi olarak alinmalidir.

Burada kullanildigi haliyle “kemik yikiminin önüne geçmeye veya bunu önlemeye yönelik ajan”, osteoblast proliferasyonunu stimüle ederek veya osteoklast proliferasyonunu inhibe ederek veya kemik yapisini onararak kemik yikimini önleyebilen, inhibe edebilen, tedavi edebilen, azaltabilen veya durdurabilen herhangi Burada kullanildigi haliyle “bir genin amplifikasyonu” terimi, bir genin veya bir gen fragmaninin çesitli kopyalarinin ayri bir hücrede veya bir hücre hattinda olusturuldugu bir prosesi ifade etmektedir. Genin kopyalarinin ayni kromozomda bulunmasi gerekli degildir. Çogaltilan bölge genel olarak bir “amplikon” olarak adlandirilmaktadir.

Normalde, üretilen mRNA miktari, yani gen ekspresyon seviyesi ayni zamanda belirli bir genin kopya sayisi ile orantili olarak artmaktadir.

Burada kullanildigi haliyle HER2+”, epidermal büyüme faktörü reseptörü tip 2'nin (HER2 veya ErbBZ) saptanabilir ekspresyonu olan ve/veya normalde hücre yüzeyinde bulunan bir reseptör olan HER2 genine yönelik amplifikasyon olan tümör hücreleri ile karakterize edilen bir meme kanserini ifade etmektedir. Burada kullanildigi haliyle tümör hücreleri, bir poliklonal anti-HER2 primer antikorunu kullanan bir yari-kantitatif immünohistokimya testi olan bir a HercepTestTM Kiti (Code K5204, Dako North America, skoru verdiklerine ya da HER2 FISH negatif olduklarinda HER2 asiri ekspresyonu için negatif olarak degerlendirilmektedir.

Burada kullanildigi haliyle “c-MAF geni” veya “MAF” (MAF veya MGC71685 olarak da bilinen v-maf müsküloaponörotik fibrosarkom onkogen homolog (avian)), bir homodimer veya bir heterodimer gibi hareket eden bir Iösin fermuari içeren bir transkripsiyon faktörüdür. DNA baglama bölgesine bagli olarak kodlanan protein, bir transkripsiyonal aktivatör veya represör olabilmektedir. MAF'yI kodlayan DNA sekansi, erisim numarasi NG_ altinda NCBI veri tabaninda açiklanmaktadir. MAF'nin genomik sekansi, SEKANS TANIM NO:13'te verilmistir. Mevcut bulusa ait yöntemler, ya kodlama sekansindan ya da genomik DNA sekansindan faydalanabilmektedir. Iki haberci RNA söz konusu DNA sekansindan transkribe edilmekte olup, bunlarin her biri, ci izoformu ve B izoformu olmak üzere iki MAF protein izoformundan birine yol açacaktir. Söz konusu izoformlarin her birine yönelik tamamlayici DNA sekanslari, sirasiyla erisim numaralari NM_005360.4 (SEKANS TANIM NO: 2) ve NM_ altinda NCBI veri tabanlarinda açiklanmaktadir. MAF geninin kanser prognozunu tahmin etmek için kullanilmasi örnegin, Uluslararasi Basvuru içerisinde bulunmaktadir.

Burada kullanildigi haliyle bir “MAF inhibitör ajani”, hem söz konusu genin ekspresyon ürününün üretilmesi önlenerek (MAF geni transkripsiyonu kesilerek ve/veya MAF gen ekspresyonundan gelen mRNA'nin translasyonu bloke edilerek) hem de dogrudan c- MAF protein aktivitesi inhibe edilerek MAF geni ekspresyonunu tamamen veya kismen inhibe edebilen herhangi bir molekülü ifade etmektedir. MAF geni ekspresyon hücrelerde bir inhibitörün veya test bilesiginin, siklin D2 promotörünün kontrolü altinda veya c-MAF'ye yanit veren bölgeyi içeren (MARE veya c-Maf'ye yanit veren eleman) bir promotörün kontrolü altinda bir haberci genin transkripsiyon kapasitesini bloke etme c-MAF'nin in i//tro hücre proliferasyonunu artirma kapasitesine göre yöntemler kullanilarak tanimlanabilmektedir. c-Maf'nin varyantlari ayrica, USZOO9/048117A sayili ABD yayininda açiklandigi gibi NFATc2 ve c-Maf'yi eksprese eden hücrelerde bir inhibitörün, PMA/iyonomisin ile stimülasyona yanit olarak IL-4 promotörünün kontrolü altinda haberci gen ekspresyonunu bloke etme kapasitesine göre tanimlanabilmektedir.

Burada kullanildigi haliyle memeli rapamisin hedefi (mTOR) veya "mTor”, EC 2.7.11.1'e karsilik gelen proteinleri ifade etmektedir. mTor enzimleri, serin/treonin protein kinazlari olup, hücre proliferasyonunu, hücre motilitesini, hücre büyümesini, hücre sagkalimini ve transkripsiyonu regüle etmektedir.

Burada kullanildigi haliyle bir “mTor inhibitörü”, hem söz konusu genin ekspresyon ürününün üretilmesi önlenerek (mTor geni transkripsiyonu kesilerek ve/veya mTor gen ekspresyonundan gelen mRNA'nin translasyonu bloke edilerek) hem de dogrudan mTor protein aktivitesi inhibe edilerek mTor geni ekspresyonunu tamamen veya kismen inhibe edebilen herhangi bir molekülü ifade etmektedir. Ikili veya daha fazla hedefi olan ve aralarinda mTor protein aktivitesi bulunan inhbitörler dahildir.

Burada kullanildigi haliyle “Src”, EC 2.7.10.2'ye karsilik gelen proteinleri ifade etmektedir. Src, bir reseptör olmayan tirozin kinaz ve bir proto-onkogendir. Src, hücre büyümesinde ve embriyonik gelisimde rol oynayabilmektedir.

Burada kullanildigi haliyle bir “Src inhibitörü”, hem söz konusu genin ekspresyon ürününün üretilmesi önlenerek (Src geni transkripsiyonu kesilerek ve/veya Src gen ekspresyonundan gelen mRNA'nin translasyonu bloke edilerek) hem de dogrudan Src protein aktivitesi inhibe edilerek Src geni ekspresyonunu tamamen veya kismen inhibe edebilen herhangi bir molekülü ifade etmektedir.

Burada kullanildigi haliyle "Prostaglandin-endoperoksidaz sentaz 2", "siklooksigenaz-Z" veya "COX-2", EC 1.14.99.1'e karsilik gelen proteinleri Ifade etmektedir. COX-2, arasidonik asidi prostaglandin endoperoksidaz H2'ye dönüstürmekten sorumludur.

Burada kullanildigi haliyle bir “COX-2 inhibitörü”, hem söz konusu genin ekspresyon ürününün üretilmesi önlenerek (COX-2 geni transkripsiyonu kesilerek ve/veya COX-2 gen ekspresyonundan gelen mRNA'nin translasyonu bloke edilerek) hem de dogrudan COX-2 protein aktivitesi inhibe edilerek COX-Z geni ekspresyonunu tamamen veya kismen inhibe edebilen herhangi bir molekülü ifade etmektedir.

Burada kullanildigi haliyle “sonuç” veya “klinik sonuç", ortaya çikan hastalik seyrini ve/veya hastalik ilerlemesini ifade etmektedir ve örnegin nüksetme, nüksetme durumuna kadar olan süre, metastaz, metastaza kadar olan süre, metastaz sayisi, metastaz bölgesi sayisi ve/veya hastalik deneyiyle ölüm ile karakterize edilebilmektedir. Örnegin iyi bir klinik sonuç iyilesmeyi, nüksetmenin önlenmesini, metastazin önlenmesini ve/veya belirli bir süre içerisinde (nüksetme olmadan) sagkalimi içermektedir ve kötü bir klinik sonuç, hastaligin ilerlemesini, metastazi ve/veya belirli bir süre içerisinde ölümü içermektedir.

Burada kullanildigi haliyle bir genin “ekspresyon seviyesi" terimi, denege ait bir numunede genin ürettigi gen ürününün ölçülebilir miktarini ifade etmektedir, burada gen ürünü bir transkripsiyonel ürün veya bir translasyonel ürün olabilmektedir. Buna göre, ekspresyon seviyesi mRNA veya cDNA gibi bir nükleik asit gen ürünü veya bir polipeptit gen ürünü ile iliskili olabilmektedir. Ekspresyon seviyesi bir denegin numunesinden ve/veya bir referans numuneden veya numunelerden elde edilmektedir ve örnegin de novo saptanabilmektedir veya önceki bir belirlemeye karsilik gelebilmektedir. Ekspresyon seviyesi örnegin, alanda uzman kisi tarafindan bilindigi gibi mikrodizi yöntemleri, PCR yöntemleri (mesela qPCR) ve/veya antikor bazli yöntemler kullanilarak belirlenebilmektedir veya ölçülebilmektedir.

Burada kullanildigi haliyle “gen kopya sayisi" terimi, bir hücrede bir nükleik asit molekülünün kopya sayisini ifade etmektedir. Gen kopya sayisi, bir hücrenin genomik (kromozomal) DNA'sindaki gen kopya sayisini içermektedir. Normal bir hücrede (tümöral olmayan hücre) gen kopya sayisi normalde iki kopyadir (kromozom çiftinin her bir elemaninda birer kopya). Gen kopya sayisi bazi durumlarda bir hücre popülasyonunun numunelerinden alinan gen kopya sayisinin yarisini içermektedir. numunesindekilerden daha büyük MAF geni seviyelerine atifta bulundugundaki ekspresyon seviyesi olarak anlasilmaktadir. Artan seviyelere, diger mekanizmalari hariç translokasyonu neden olabilmektedir. Özellikle, hastadan izole edilen numunedeki ekspresyon seviyesi, referansa veya kontrole göre en az yaklasik 1.1 kat, yaklasik 1.5 yaklasik 100 kat veya hatta daha fazla oldugunda, bir numunenin yüksek MAF ekspresyon seviyesine sahip oldugu düsünebilmektedir.

Burada kullanildigi haliyle “prob”, ilgili spesifik nükleik asit sekansina tamamlayici olan bir oligonükleotid sekansini ifade etmektedir. Bazi yapilandirmalarda problar, translokasyona ugradigi bilinen kromozomlarin bölgelerine spesifik olabilmektedir. Bazi yapilandirmalarda problar spesifik bir etikete veya künyeye sahiptir. Bazi yapilandirmalarda künye florofordur. Bazi yapilandirmalarda prob, etiketlemesi platinin nükleik asitlere ve proteinlere kararli koordineli baglanmasina dayali olan bir DNA /n situ hibridizasyon probudur. Bazi yapilandirmalarda prob, 12/067532 sayili ABD patent basvurusunda ve 12/181,399 sayili ABD patent basvurusunda açiklanmaktadir ve Swennenhuis ve ark. "Construction of repeat-free fluorescence in situ hybridization probes" Nucleic Acids Research 40(3):e20 (2012) içerisinde açiklandigi gibidir.

Burada kullanildigi haliyle “künye" veya “etiket”, bir probla dogrudan veya dolayli olarak iliskilendirilen, probun veya prob yerinin görsellestirilmesine, isaretlenmesine veya herhangi bir baska sekilde yakalanmasina olanak veren herhangi bir fiziksel molekülü ifade etmektedir.

Burada kullanildigi haliyle “translokasyon”, kromozomlar arasinda esit olmayan veya esit miktarlarda kromozomal malzeme degisimini ifade etmektedir. Bazi durumlarda translokasyon ayni kromozom üzerindedir. Bazi durumlarda translokasyon farkli kromozomlar üzerindedir. Translokasyonlar, meme kanseri ve lösemi dahil olmak üzere pek çok kanser türünde yüksek siklikta meydana gelmektedir. Translokasyonlar, primer karsilikli translokasyonlar olabilecegi gibi, daha kompleks sekonder translokasyonlar da olabilmektedir. Pek çok kanserde tetikleyici olayi olusturduguna inanilan immünoglobin agir zincir (IgH) lokusunu içeren birkaç primer translokasyon vardir. (Eychene, A., Rocques, N., and Puoponnot, C., A new MAFia in cancer. 2008. Nature Reviews: Cancer. 8: 683-693.) Burada kullanildigi haliyle “poliploid” veya “poliploidi”, hücrenin ilgili genin ikiden fazla kopyasini içerigini göstermektedir. Bazi durumlarda ilgili gen MAF'clir. Bazi yapilandirmalarda poliploidi, ilgili genin ekspresyonunun birikmesi ile iliskilidir. Bazi yapilandirmalarda poliploidi, genomik kararsizlik ile iliskilidir. Bazi yapilandirmalarda genomik kararsizlik, kromozom translokasyonlarina yol açabilmektedir.

Burada kullanildigi haliyle "tam genom sekanslamasi", bir organizmanin tüm genomunun tek seferde sekanslandigi bir prosestir.Bkz. örnegin Ng., P.C. amd Kirkness, E.F., Whole Genome Sequencing. 2010. Methods in Molecular Biology. 628: 215-226.

Burada kullanildigi haliyle “ekzom sekanslamasi”, bir organizmanin DNA'sinin tüm kodlama bölgesinin sekanslandigi bir prosestir. Ekzom sekanslamasinda mRNA sekanslanmaktadir. Genomun translate olmamis bölgeleri ekzom sekanslamasina dahil edilmemektedir. Bkz. Örnegin Choi, M. ve ark., Genetic diagnosis by whole exome Burada kullanildigi haliyle “metastaz”, bir kanserin basladigi organdan farkli bir organa yayilmasi olarak anlasilmaktadir. Bu, genel olarak kan veya Ienfatik sistem araciligiyla meydana gelmektedir. Kanser hücreleri yayildiginda ve yeni bir tümör olusturdugunda ikincisi, sekonder veya metastatik tümör olarak adlandirilmaktadir. Sekonder tümörü olusturan kanser hücreleri, orijinal tümörünkülere benzerdir. Örnegin bir meme kanserinin akcigere yayilmasi (metastaz yapmasi) halinde, sekonder tümör, kötü huylu meme kanseri hücrelerinden olusmaktadir. Akcigerdeki hastalik, metastatik meme kanseri olup, akciger kanseri degildir. Mevcut bulusun yöntemin belirli bir yapilandirmasinda metastaz, kemige yayilan (metastaz yapan) HER2+ meme kanseridir.

Burada kullanildigi haliyle “tahmin etme”, HER2+ meme kanserinden muzdarip olan denegin uzak bir organa metastaz gelistirme ihtimalinin belirlenmesini ifade etmektedir.

Burada kullanildigi haliyle “iyi prognoz”, denegin sag kalacaginin ve/veya belirli bir süre içerisinde nüksetme veya uzak metastaz riskinin olmayacaginin veya düsük riskinin olacaginin beklendigini (yani tahmin edildigini) göstermektedir. “Düsük” terimi göreceli bir terimdir ve bu basvuru baglaminda, klinik bir sonuca (nüksetme, uzak metastaz vb.) göre “düsük” ekspresyon grubu riskini ifade etmektedir. “Düsük” bir risk, heterojen bir kanser hastasi popülasyonu için ortalama riskten daha düsük bir risk olarak düsünülebilir. Paik ve arkadaslarina ait çalismada (2004), genel bir “düsük" nüksetme riskinin %15'ten düsük oldugu degerlendirilmistir. Bu risk ayrica sürenin fonksiyonu olarak degisiklik gösterecektir. Süre örnegin, ilk kanser tanisindan sonra veya prognoz yapildiktan sonra bes yil, on yil, on bes yil ve hatta yirmi yil olabilmektedir.

Burada kullanildigi haliyle "kötü prognoz", denegin sag kalmayacaginin ve/veya belirli bir süre içerisinde nüksetme veya uzak metastaz riskinin olacaginin veya yüksek riskinin olacaginin beklendigini, yani tahmin edildigini göstermektedir. “Yüksek” terimi göreceli bir terimdir ve bu basvuru baglaminda, klinik bir sonuca (nüksetme, uzak metastaz vb.) göre “yüksek” ekspresyon grubu riskini ifade etmektedir. “Yüksek" bir risk, heterojen bir kanser hastasi popülasyonu için ortalama riskten daha yüksek bir risk olarak düsünülebilir. Paik ve arkadaslarina ait çalismada (2004), genel bir “yüksek" nüksetme riskinin %15'ten fazla oldugu degerlendirilmistir. Bu risk ayrica sürenin fonksiyonu olarak degisiklik gösterecektir. Süre örnegin, ilk kanser tanisindan itibaren veya prognoz yapildiktan sonra bes yil, on yil, on bes yil ve hatta yirmi yil olabilmektedir.

Burada kullanildigi haliyle “referans degeri”, hastalarin veya hastalardan toplanan numunelerin laboratuvar incelemeleri ile elde edilen degerlere/verilere yönelik bir referans olarak kullanilan bir laboratuvar degerini ifade etmektedir. Referans degeri veya referans seviyesi bir mutlak deger; bir göreceli deger; bir üst ve/veya alt limiti olan bir deger; bir degerler araligi; bir ortalama deger; bir medyan deger; bir orta deger veya belirli bir kontrole veya taban hatti degerine göre bir deger olabilmektedir.

Bir referans degeri, örnegin test edilen denekten alinan bir numuneden, erken bir zaman noktasinda elde edilen bir deger gibi ayri bir numune degerini esas alabilmektedir. Referans degeri, kronolojik yasa göre eslestirilmis grubun deneklerinin bir popülasyonundan alinanlar gibi çok sayida numuneyi esas alabilmektedir veya test edilen numuneyi kapsayan veya hariç tutan bir numune havuzunu esas alabilmektedir.

Burada kullanildigi haliyle “denek” veya "hasta", memeliler olarak siniflandirilan bütün hayvanlari ifade etmektedir ve bunlarla sinirli olmamak üzere evcil hayvanlari ve çiftlik hayvanlarini, primatlar ve insanlari, örnegin insanlari, insan olmayan primatlari, inekleri, atlari, domuzlari, koyunlari, keçileri, köpekleri, kedileri veya kemirgenleri içermektedir.

Tercihen denek, her yastan veya irktan insan olan bir erkek veya kadindir.

Burada kullanildigi haliyle “tedavi” terimi, burada açiklandigi gibi bir klinik duruma yatkinligin sonlandirilmasini, önlenmesini, iyilestirilmesini veya azaltilmasini amaçlayan herhangi bir tür terapiyi ifade etmektedir. Tercih edilen bir yapilandirmada tedavi terimi, burada tanimlandigi gibi bir rahatsizligin veya durumun profilaktik tedavisi (yani klinik bir duruma yatkinligi azaltmak için bir terapi) ile ilgilidir. Dolayisiyla, “tedavi”, patolojik bir durumun veya bozuklugun herhangi bir tedavisini kapsayan, istenen farmakolojik veya fizyolojik etkinin elde edilmesini ifade etmektedir. Bu etki, bir bozuklugun veya bunun bir semptomunun tamamen veya kismen önlenmesi bakimindan profilaktik olabilmektedir ve/veya bir bozukluk ve/veya bu bozukluga atfedilebilecek yan etki için kismi veya tam bir iyilesme bakimindan terapötik olabilmektedir. Yani, “tedavi" (1) bozuklugun bir denekte görülmesinin veya nüksetmesinin önlenmesini, (2) örnegin gelisimini durdurarak bozuklugun inhibe edilmesini, (3) konagin artik bozukluktan veya bunun semptomlarindan muzdarip olmayacagi sekilde, örnegin kaybolan, eksik olan veya kusurlu fonksiyonun düzeltilmesi veya onarilmasi yoluyla bozuklugun veya semptomlarinin gerilemesine neden olarak bozuklugun veya en azindan bununla baglantili semptomlarin durdurulmasini veya sonlandirilmasini veya (4) bozuklugun veya bununla baglantili semptomlarin teskin edilmesini, hafifletilmesini veya iyilestirilmesini içermektedir, burada iyilestirme, genis anlamda, örnegin inflamasyon, agri veya immün yetmezligi gibi en azinda bir parametrenin siddetindeki bir azalmayi ifade etmek için kullanilmaktadir.

Burada kullanildigi haliyle, “numune" veya "biyolojik numune”, bir denekten izole edilen biyolojik materyal anlamina gelmektedir. Biyolojik numune, MAF geninin ekspresyon seviyesinin belirlenmesine uygun herhangi bir biyolojik materyali içerebilmektedir.

Numune, örnegin tümör dokusu, kan, kan plazmasi, serum, idrar veya serebral omurilik sivisi (CSF) gibi herhangi bir uygun biyolojik doku veya akiskandan izole edilebilmektedir. numunesi olarak anlasilmaktadir. Söz konusu numune, ilgili tibbi tekniklerde uzman kisiler tarafindan iyi bilinen yöntemler kullanilarak geleneksel yöntemlerle, örnegin biyopsi ile elde edilebilmektedir. kaybi) tümör hücreleri tarafindan osteoklast aktivitesinin stimülasyonundan kaynaklanan metastazin yakininda olustugu ve siddetli agri, patolojik fraktürler, hiperkalsemi, omurilik sikismasi ve sinir sikismasi kaynakli diger sendromlar ile karakterize edilen bir metastaz türüdür.

MAF ekspresyon seviyesine göre HER2+ me_me kanserinin kemik metastazinin tahmin edilmesine yönelik yöntem HER2+ meme kanseri numunelerdeki MAF ekspresyon seviyesi, kemik metastazindan muzdarip olma riski ile iliskilidir. Ayrica, HER2+ primer tümörlerinde MAF'nin gen ekspresyonu, kemik metastazi nüksetmesi ile önemli ölçüde ve kemik metastazsiz sagkalim ve sagkalim ile ters iliskilidir. Ayrica, MAF ekspresyon seviyeleri doza bagimli bir biçimde kemik metastazini tahmin etmektedir.

Bir birinci yönünde mevcut belge, söz konusu kanserden muzdarip olan bir denekte bir HER2+ meme kanserinin kemik metastazinin tahmin edilmesine yönelik bir in vitro yöntem (bundan böyle mevcut belgenin birinci yöntemi olacak anilacaktir) ile ilgili olup, bu yöntem asagidakileri içermektedir: i) söz konusu denege ait bir numunede MAF geninin ekspresyon seviyesinin belirlenmesi ve ii) i) adiminda elde edilen ekspresyon seviyesinin bir referans degerle karsilastirilmasi, burada söz konusu genin söz konusu referans degere göre artan ekspresyon seviyesi, artan kemik metastazi gelistirme riskinin göstergesidir.

Mevcut belgenin yöntemi, birinci adimda, bir denekten alinan bir numunede MAF geni ekspresyon seviyesinin belirlenmesini içermektedir. Tercih edilen bir yönde numune, bir tümör dokusu numunesidir.

Bir biyopsi numunesinin elde edilmesine yönelik yöntemler, bir tümörün büyük parçalara bölünmesini veya mikrodiseksiyonu veya teknikte bilinen diger hücre ayirma yöntemlerini içermektedir. Tümör hücreleri ayrica küçük ölçekli bir igne ile aspirasyon araciligiyla Sitoloji ile elde edilebilmektedir. Numunenin korunmasini ve islenmesini kolaylastirmak için numuneler, formalin içinde fikse edilebilmekte ve parafin içinde islatilabilmektedir veya ilk olarak dondurulmakta ve ardindan hizli donmaya olanak saglayan yüksek derecede kriyojenik ortama batirma araciligiyla OCT bilesigi gibi bir doku dondurma ortaminda islatilabilmektedir.

Tercih edilen bir yönde mevcut belgenin birinci yöntemi, tek bir marker olarak sadece MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesini içermektedir, diger bir ifadeyle yöntem, herhangi bir ilave markerin ekspresyon seviyesinin belirlenmesini içermemektedir.

Teknikte uzman kisi tarafindan anlasilabilecegi üzere gen ekspresyon seviyesi, söz konusu genin veya söz konusu gen tarafindan kodlanan proteininin haberci RNA seviyelerinin yani sira, söz konusu geni içeren genomik bölge kopyalarinin veya translokasyonlarinin sayisi ölçülerek belirlenebilmektedir.

Bu amaçla biyolojik numune, doku veya hücre yapisini fiziksel olarak veya mekanik olarak parçalayarak intraselüler bilesenleri nükleik asitlerin hazirlanmasina yönelik bir sulu veya organik çözelti içinde serbest birakmak üzere islemden geçirilebilmektedir.

Nükleik asitler, teknikte uzman kisi tarafindan bilinen ticari olarak temin edilebilen yöntemler araciligiyla ekstrakte edilebilmektedir (Sambrook, J., ve ark., "Molecular cloning: a Laboratory Manual", 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, N.Y., Vol. 1-3).

Bu nedenle MAF geni ekspresyon seviyesi, söz konusu genin transkripsiyonundan ortaya çikan RNA'dan (haberci RNA veya mRNA) veya alternatif olarak söz konusu genin komplementer DNA'sindan (cDNA) ölçülebilmektedir. Bu nedenle, mevcut belgenin belirli bir yönde, MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesi, MAF geninin haberci RNA'sinin veya söz konusu mRNA'nin bir fragmaninin, MAF geninin komplementer DNA'sinin veya söz konusu cDNA'nin bir fragmaninin veya bunlarin karisimlarinin ölçülmesini içermektedir.

Hemen hemen her geleneksel yöntem, MAF geni tarafindan kodlanan mRNA seviyelerinin veya bunun karsilik gelen cDNA'sinin tespit edilmesine ve ölçülmesine yönelik olarak mevcut belgenin kapsaminda kullanilabilmektedir. Sinirlayici olmayan örnekleme araciligiyla söz konusu gen tarafindan kodlanan mRNA seviyeleri, geleneksel yöntemler kullanilarak, örnegin mRNA amplifikasyonunu ve söz konusu mRNA amplifikasyon ürününün ölçümünü Içeren yöntemler, örnegin elektroforez ve boyama kullanilarak veya alternatif olarak Southern blot ve uygun problar kullanilarak, Northern blot ve söz konusu genin (MAF) mRNA'sinin veya bunun karsilik gelen cDNA'sinin spesifik problari kullanilarak, Sl nükleaz ile eslestirme, RT-PCR, hibridizasyon, mikrodiziler vb. kullanilarak, tercihen uygun bir marker kullanilarak gerçek zamanli kantitatif PCR araciligiyla ölçülebilmektedir. Benzer sekilde MAF geni tarafindan kodlanan söz konusu mRNA'ya karsilik gelen cDNA seviyeleri ayni zamanda geleneksel teknikler araciligiyla ölçülebilmektedir; bu durumda mevcut belgenin yöntemi, karsilik gelen mRNA'nin ters transkripsiyonu (RT) araciligiyla karsilik gelen cDNA'nin sentezlenmesine yönelik bir adimi ve ardindan gelen söz konusu cDNA amplifikasyon ürününün amplifikasyonunu ve ölçümünü içermektedir. Ekspresyon seviyesinin ölçülmesine yönelik geleneksel yöntemler, örnegin Sambrook ve ark., 2001 içinde bulunabilmektedir. (yukarida alinti yapilmistir). Bu yöntemler alanda bilinmektedir ve alanda uzman bir kisi, her teknik için gereken normalizasyonlara asina olacaktir. Örnegin, multipleks PCR ile üretilen ekspresyon ölçümleri, ölçülen genlerin ekspresyonunun, ekspresyonu tüm numunelerde sabit olmasi gereken, böylece karsilastirma için bir taban hatti ekspresyonu saglayan anildigi haliyle “hamarat" genlerle veya ekspresyonunun kanserle modüle edildigi bilinen diger kontrol genleriyle karsilastirilmasi yoluyla normallestirilmelidir.

Belirli bir yönde MAF geni ekspresyon seviyesi, kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) veya bir DNA/RNA sekansi veya nükleotid hibridizasyon teknigi araciligiyla ölçülmektedir.

Ayrica MAF geni ekspresyon seviyesi ayni zamanda söz konusu gen tarafindan kodlanan proteinin, yani c-Maf proteininin (c-Maf) [NCBI, erisim numarasi 075444] veya c-Maf proteininin fonksiyonel olarak esdeger olan herhangi bir varyantinin ekspresyon seviyesi ölçülerek ölçülebilmektedir. 403 amino asitten (SEKANS TANIM izoformu vardir. MAF geni ekspresyon seviyesi, c-Maf protein izoformlarindan herhangi birinin ekspresyon seviyesi ölçülerek ölçülebilmektedir. Bu nedenle, belirli bir yönde, MAF geni tarafindan kodlanan proteinin seviyesinin ölçümü, c-Maf proteininin ölçümünü içermektedir.

Mevcut belge baglaminda, "c-Maf proteininin fonksiyonel olarak esdeger varyanti”, (i) bir veya daha fazla amino asit kalintisinin korunumlu veya korunumlu olmayan bir amino asit kalintisi ile (tercihen korunumlu bir amino asit kalintisi) ile sübstitüe edildigi c-Maf proteini (SEKANS TANIM NO: 4 veya SEKANS TANIM NO: 5) varyantlari, burada bu sübstitüe edilmis amino asit kalintisi, genetik kod ile kodlanmis veya kodlanmamis olabilmektedir veya (ii) bir veya daha fazla amino asidin bir eklentisini veya bir delesyonunu içeren ve c-Maf proteini ile ayni fonksiyona sahip olan, yani bir DNA baglayici transkripsiyon faktörü olarak islev gören varyantlar olarak anlasilmaktadir. c- gösterildigi üzere c-Maf'nin in vitro hücre proliferasyonunu artirma kapasitesine göre, siklin D2 promotörünün veya c-MAF'ye duyarli bölgeyi (MARE veya c-MAF'ye duyarli eleman) içeren bir promotörün kontrolü altinda bir raportör genin transkripsiyon üzere inhibitörün, NFATc2 ve c-MAF'yi eksprese eden hücrelerde PMA/iyonomisin ile stimülasyona yanit olarak IL-4 promotörünün kontrolü altinda raportör gen ekspresyonunu bloke etme kapasitesine göre yöntemler kullanilarak tanimlanabilmektedir.

Mevcut belgeye göre varyantlar c-Maf protein izoformlarinin (SEKANS TANIM NO: 4 veya SEKANS TANIM NO: 5) herhangi birinin amino asit sekansi ile tercihen en az sekans benzerligine sahiptir Varyantlar ile daha önceden tanimlanan spesifik c-Maf protein sekanslari arasindaki benzerlik derecesi, teknikte uzman kisiler tarafindan yaygin olarak bilinen algoritmalar ve bilgisayar prosesleri kullanilarak belirlenmektedir.

Iki amino asit sekansi arasindaki benzerlik tercihen BLASTP algoritmasi kullanilarak belirlenmektedir [BLAST Manual, Altschul, S., ve ark., NCBI NLM NIH Bethesda, Md. c-Maf protein ekspresyon seviyesi, bir denekten alinan bir numunede söz konusu proteinin tespit edilmesine ve ölçülmesine olanak saglayan herhangi bir geleneksel yöntem ile ölçülebilmektedir. Sinirlayici olmayan örnekler olarak söz konusu protein seviyeleri, örnegin c-Maf baglama kapasitesi olan antikorlar (veya bunun bir antijenik belirleyiciyi içeren bir fragmani) ve olusturulan komplekslerin sonraki ölçümü kullanilarak ölçülebilmektedir. Bu testlerde kullanilan antikorlar etiketlenmis veya etiketlenmemis olabilmektedir. Kullanilabilecek markerlerin açiklayici örnekleri, radyoaktif izotoplari, enzimleri, floroforlari, kemiluminesans reaktifleri, enzim substratlarini veya kofaktörleri, enzim inhibitörlerini, partikülleri, boyalari vb. içermektedir. Etiketlenmemis antikorlari (primer antikorlar) ve etiketlenmis antikorlari (sekonder antikorlar) kullanan, mevcut belgede kullanilabilecek çok çesitli bilinen test mevcuttur; bu teknikler, Western blot veya Western transfer, ELISA (enzime bagli bagisiklik testi), RIA (radyoimmünolojik test), rekabetçi EIA (rekabetçi enzim immüno test), DAS-ELISA (çift antikor sandviç ELISA), immünositokimyasal ve immünohistokimyasal teknikler, spesifik antikorlari içeren protein mikro dizilerinin veya biyoçiplerinin kullanimina dayali teknikleri veya ölçme çubuklari gibi formatlarda koloidal presipitasyona dayali testleri içermektedir. Söz konusu c-Maf proteininin tespit edilmesine ve ölçülmesine yönelik diger yollar, afinite kromatografisi tekniklerini, Iigand baglama testlerini vb. içermektedir. Immünolojik bir yöntem kullanildiginda c-Maf proteinine yüksek bir afinite ile baglandigi bilinen herhangi bir antikor veya reaktif, bunun miktarinin tespit edilmesine yönelik kullanilabilmektedir. Bununla birlikte bir antikorun, örnegin poliklonal serumlarin, hibridomlarin veya monoklonal antikorlarin süpernatantlarinin, antikor fragmanlari Fv, Fab, Fab' ve F(ab')2, scFv'nin, insanlastirilmis diabody'lerin, triabody'lerin, tetrabody'lerin, alfabody'lerin, zimbali peptitlerin, sikopeptitlerin ve antikorlarin kullanimi tercih edilmektedir. Örnegin Science Park, Cambridge CB4 OFL, Birlesik Krallik), AbD Serotec'e ait 075444 monoklonal antikor (Fare Anti-Insan MAF Azit içermeyen Monoklonal antikor, Konjuge olmamis, Klon 6b8), vb. gibi mevcut belge baglaminda kullanilabilecek piyasada mevcut olan anti-c-Maf protein antikorlari mevcuttur. Abnova Corporation, Bethyl Laboratories, Santa Cruz Biotechnology, Bioworld Technology, GeneTex vb. gibi anti-c-Maf antikorlarini sunan birçok ticari sirket mevcuttur.

Belirli bir yönde c-MAF protein seviyeleri, western blot, ELISA veya bir protein sekansi araciligiyla ölçülmektedir.

Bir baska belirli yönde c-Maf protein seviyeleri, eksosomlardan, sirküle DNA'dan veya sirküle tümör hücrelerinden ölçülmektedir. Eksosomlar, çogu hücre tipi tarafindan in w'i/o ve in vitro salgilanan 40 - 100 nm membran vezikülleridir. Eksosomlar, bölmenin lümenine içe dogru geliserek multiveziküler cisimler (MVB'ler) olarak adlandirilan endosomlarin belirli bir popülasyonunda olusmaktadir. MVB'lerin plazma membrani ile füzyonu sonrasinda, bu iç veziküller salgilanmaktadir. Eksosomlar farkli hücre hatlarindan veya vücut sivilarindan alanda iyi bilinen birkaç yöntemle izole edilebilmektedir (Théry C. ve ark., Curr Protoc Cell Biol. 2006 Apr;Chapter 3:Unit 3.22).

Eksosomlarin izolasyonu için ExoQuickTM veya ExoTestTM gibi birkaç ticari kit mevcuttur.

Mevcut belgenin birinci yöntemi, ikinci adimda, denekten alinan numunede (örn. tümör numunesi) MAF geni ekspresyon seviyesinin bir referans degerle karsilastirilmasini içermektedir.

Meme kanseri, örnegin HER2+ meme kanseri olan bir denekten alinan bir numunede MAF geni ekspresyon seviyeleri ölçüldügünde ve referans numunesi ile karsilastirildiginda, eger söz konusu genin ekspresyon seviyesi, söz konusu referans numunesine göre artmissa, söz konusu denegin büyük bir kemik metastazi gelistirme egilimi oldugu sonucuna varilabilmektedir.

MAF geni ekspresyon seviyesinin belirlenmesinin, referans deger ile iliskilendirilmesi gerekmektedir.

Bir yönde, burada amaçlanan referans degeri/degerleri MAF'nin mutlak miktarlarini aktarabilmektedir. Bir baska yönde, test edilen bir denekten alinan bir numunede herhangi bir veya daha fazla biyomarkerin miktari, dogrudan referans degerine göre (yani artis veya azalma veya kat olarak artma veya kat olarak azalma) belirlenebilmektedir. Avantajli bir biçimde, bu, denekten alinan numunede herhangi bir veya daha fazla biyomarkerin miktarinin, ilk önce söz konusu bir veya daha fazla biyomarkerin ilgili mutlak miktarlarini belirmeye gerek olmadan referans degeri ile karsilastirilmasina (diger bir deyisle, denekten alinan numunede herhangi bir veya daha fazla biyomarkerin göreceli miktarinin referans degerine karsi ölçülmesine) olanak verebilmektedir.

Tercih edilen bir yönde referans degeri, bir kontrol numunesinde veya referans numunesinde MAF geni ekspresyon seviyesidir. Analiz edilecek tümörün türüne bagli olarak kontrol veya referans numunesinin tam yapisi degisiklik gösterebilmektedir. Bu nedenle bir prognozun degerlendirilecek olmasi durumunda referans numunesi, metastaz yapmamis HER2+ meme kanseri olan bir denekten alinan bir numunedir veya metastaz yapmamis HER2+ meme kanseri olan deneklerden alinan biyopsi numunelerinde bir tümör dokusu koleksiyonunda ölçülen MAF geni ekspresyon seviyelerinin medyan degerine karsilik gelen numunedir.

Söz konusu referans numunesi tipik olarak, bir denek popülasyonundan alinan numunelerin esit miktarlari kombine edilerek elde edilmektedir. Genel olarak tipik referans numuneleri, klinik olarak iyi belgelenmis ve metastaz olmadigi iyi karakterize edilmis deneklerden elde edilecektir. Bu tür numunelerde biyomarkerin (MAF geni) normal konsantrasyonlari (referans konsantrasyonu), örnegin referans popülasyonda ortalama konsantrasyon saglanarak belirlenebilmektedir. Markerin referans konsantrasyonu belirlenirken çesitli hususlar göz önünde bulundurulmaktadir. Bu tür hususlar arasinda hastanin yasi, kilosu, cinsiyeti, genel fiziksel durumu ve benzeri bulunmaktadir. Örnegin tercihen yukaridaki hususlara göre, örnegin çesitli yas kategorilerine göre siniflandirilan en az yaklasik 2, en az yaklasik 10, en az yaklasik 100 ila tercihen yaklasik 1000'den fazla denekten olusan bir grubun esit miktarlari, referans grubu olarak alinmaktadir. Referans seviyesinin elde edildigi numune koleksiyonu, tercihen çalisma konusu hasta ile ayni kanser türünden muzdarip olan deneklerden olusacaktir.

Belirli bir yönde MAF ekspresyonunun “artan" veya “azalan" ekspresyonuna yönelik referans degerleri, hastaligi MAF ekspresyon seviyesine iliskin yukarida bahsedilen yöntemlerden herhangi biri ile iyi bir sekilde belgelenmis deneklerden izole edilen bir veya birkaç numunede analizlerin gerçeklestirilmesini içeren geleneksel yollarla yüzdelik dilimleri hesaplanarak belirlenmektedir. Ardindan MAF'nin "azalan" seviyesi tercihen numunelere tahsis edilebilmektedir, burada MAF ekspresyon seviyesi, örnegin normal popülasyonda yaklasik yüzde 60'a esit veya bundan düsük olan, normal popülasyonda yaklasik yüzde 70'e esit veya bundan düsük olan, normal popülasyonda yaklasik yüzde 80'e esit veya bundan düsük olan, normal popülasyonda yaklasik yüzde 90'a esit veya bundan düsük olan ve normal popülasyonda yaklasik yüzde 95'e esit veya bundan düsük olan ekspresyon seviyesi dahil olmak üzere normal popülasyonda yaklasik yüzde 50'ye esit veya bundan düsüktür. Ardindan “artan" MAF geni ekspresyon seviyeleri tercihen numunelere tahsis edilebilmektedir, burada MAF ekspresyon seviyesi, örnegin normal popülasyonda yaklasik yüzde 60'a esit veya bundan fazla olan, normal popülasyonda yaklasik yüzde 70'e esit veya bundan fazla olan, normal popülasyonda yaklasik yüzde 80'e esit veya bundan fazla olan, normal popülasyonda yaklasik yüzde 90'a esit veya bundan fazla olan ve normal popülasyonda yaklasik yüzde 95'e esit veya bundan fazla olan ekspresyon seviyeleri dahil olmak üzere normal popülasyonda yaklasik yüzde 50'ye esit veya bundan fazladir.

Teknikte uzman kisi, bir primer meme tümörünün metastaz yapma egilimi tahmininin, belirlenecek tüm denekler (yani deneklerin %100'ü) için dogru olmasinin gerekmedigini anlayacaktir. Yine de bu terim, deneklerin istatistiksel olarak önemli bir kisminin (örnegin, bir kohort çalismasinda bir kohortun) tanimlanmasina olanak saglanmasini gerektirmektedir. Bir kismin istatistiksel olarak önemli olup olmadigi, örnegin güven araliklarinin belirlenmesi, p degerlerinin belirlenmesi, Student T testi, Mann-Whitney testi vb. gibi iyi bilinen çesitli istatistiksel degerlendirme araçlari kullanilarak teknikte uzman kisi tarafindan kolay bir sekilde belirlenebilmektedir. Detaylar, Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley and Sons, New York 1983 kaynaginda verilmistir. Tercih edilen güven araliklari, en az yaklasik %90, en az yaklasik %95, en az yaklasik %97, en az yaklasik %98 veya en az yaklasik %99'dur. p degerleri tercihen deneklerinin en az yaklasik %60'i, en az yaklasik %70'i, en az yaklasik %80'si veya en az yaklasik %90'i, mevcut belgenin yöntemi ile uygun bir sekilde tanimlanabilmektedir.

Bir diger yönde kemige metastaz, bir osteolitik kemik metastazidir.

Bir diger yönde ortalamanin üzerinde olan bir MAF ekspresyon seviyesi, artan kemik metastazi riskini belirtmektedir, söz konusu risk MAF ekspresyon seviyelerine orantilidir.

Bu nedenle, meme kanserinden muzdarip olan bir denekte kemik metastazi riski doza bagimlidir.

MAF ekspresyon seviyesine göre HER2+ meme kanserinden kaynaklanan kemik metastazindan muzdarip bir hastanin klinik sonucunun tahmin edilmesine yönelik yöntem Bir baska yönünde mevcut belge, kemik metastatik HER2+ meme kanserinden muzdarip olan bir hastanin klinik sonucunun tahmin edilmesine yönelik bir in vitro yöntem (bundan böyle mevcut belgenin ikinci yöntemi olacak anilacaktir) ile ilgili olup, bu yöntem asagidakileri içermektedir: i) söz konusu denege ait bir numunede MAF geninin ekspresyon seviyesinin ölçülmesi ve ii) i) adiminda elde edilen ekspresyon seviyesinin bir referans degerle karsilastirilmasi, burada söz konusu genin söz konusu referans degere göre artan ekspresyon seviyesi, kötü bir klinik sonucun göstergesidir.

Mevcut belgenin ikinci yöntemi, birinci adimda, HER2+ meme kanserinden muzdarip olan bir denege ait bir numunede MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesini içermektedir. Tercih edilen bir yönde numune, bir tümör dokusu numunesidir.

Tercih edilen bir yönde mevcut belgenin ikinci yöntemi, tek bir marker olarak sadece MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesini içermektedir, diger bir ifadeyle yöntem, herhangi bir ilave markerin ekspresyon seviyesinin belirlenmesini içermemektedir.

Ikinci adimda denege ait tümör numunesinde elde edilen MAF geni ekspresyon seviyesi, bir referans degeri ile karsilastirilmaktadir. Tercih edilen bir yönde referans degeri, bir kontrol numunesinde söz konusu genin ekspresyon seviyesidir. MAF geni ekspresyon seviyesinin belirlenmesinin, bir kontrol numunesi veya referans numunesinin degerleri ile iliskili olmasi gerekmektedir. Analiz edilecek tümörün türüne bagli olarak kontrol numunesinin tam yapisi degisiklik gösterebilmektedir. Bu nedenle mevcut belgenin ikinci yönteminin dahil edilmesi durumunda referans numunesi, kemik metastazindan muzdarip olmayan meme kanserli bir denege ait bir numunedir veya metastazdan muzdarip olmayan meme kanserli deneklerin biyopsi numunelerinde bir tümör dokusu koleksiyonunda ölçülen MAF geni ekspresyon seviyelerinin medyan degerine karsilik gelen bir numunedîr. Numunedeki MAF geni ekspresyon seviyesi ölçülüp kontrol numunesi ile karsilastirildiktan sonra, eger söz konusu genin ekspresyon seviyesi, kontrol numunesindeki ekspresyon seviyesine göre artmissa, kötü bir klinik sonucun göstergesidir.

Belirli bir yönde kemik metastazi, osteolitik metastazdir.

Bir baska belirli yönde, MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesi, söz konusu genin haberci RNA'sinin (mRNA) veya söz konusu mRNA'nin bir fragmaninin, söz konusu genin komplementer DNA'sinin (cDNA) veya söz konusu cDNA'nin bir fragmaninin ölçülmesini içermektedir. Daha fazla tercih edilen bir yönde, ekspresyon seviyesi kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) veya bir DNA veya RNA dizisi araciligiyla ölçülmektedir.

Bir baska yönde MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesi, söz konusu gen tarafindan kodlanan proteininin veya bunun bir varyantinin seviyesinin ölçülmesini içermektedir.

Daha fazla tercih edilen bir yönde protein seviyesi, Western blot, immünohistokimya, ELISA veya bir protein dizisi araciligiyla belirlenmektedir.

Bir baska yönde referans numunesi, metastazdan muzdarip olmayan bir denekten alinan, HER2+ meme kanserli bir tümör dokusu numunesidir.

Sinirlama olmaksizin asagidakiler dahil olmak üzere bir hastanin klinik sonucunun belirlenmesi için yaygin olarak kabul gören herhangi bir parametre kullanilabilmektedir: . burada kullanildigi haliyle, çalisma süresi esnasinda hastalik nüksetmesi yasamamis olan, tam gerileme durumundaki deneklerin oranini belirten hastaliksiz ilerleme, . burada kullanildigi haliyle, bir hastaligin tedavisinden sonra hastalik belirtisi olmadan bir denegin sag kaldigi süre olarak anlasilan hastaliksiz sagkalim . mevcut belgede kullanildigi haliyle, tam veya kismi yanit gözlemlenen tedavi edilen deneklerin oranini belirten objektif yanit, . mevcut belgede kullanildigi haliyle, tam yanit, kismi yanit, önemsiz yanit veya stabil hastalik 2 6 ay gözlemlenen tedavi edilen deneklerin orani ile ilgili olan tümör kontrolü, . burada kullanildigi haliyle, tedavinin baslangicindan kanser büyümesinin ilk ölçümüne kadar olan süre olarak tanimlanan ilerleme olmadan sagkalim.

. Burada kullanildigi haliyle, ilerleme zamani (TI'P), bir hastalik tedavi edildikten sonra hastalik kötülesmeye baslayana kadar olan süre ile ilgilidir. "Ilerleme” terimi daha önce tanimlanmistir. . burada kullanildigi haliyle, terapinin baslangicindan sonra ilk alti ayda ilerleme olmamis deneklerin yüzdesi ile ilgili olan alti aylik ilerleme olmadan sagkalim veya "PFS6" orani, ve . burada kullanildigi haliyle, çalismaya kaydolan deneklerin yarisinin hala canli oldugu süre ile ilgili olan ortalama sagkalim.

Burada klinik sonucu ifade etmek için kullanildigi haliyle “kötü” veya “iyi” terimleri, denegin olumlu veya olumsuz bir sonuç gösterecegi anlamina gelmektedir. Alanda uzman kisilerce anlasilacagi üzere, bu olasilik degerlendirmesi, dogru olmasi tercih edilmesine ragmen, tani koyulacak deneklerin yaklasik %100'ü için dogru olmayabilir.

Bununla birlikte, bu terim, deneklerin istatistiksel olarak önemli bir kisminin, belirli bir sonuç için yatkinligi oldugu seklinde tanimlanabilmesini gerektirmektedir. Bir kismin istatistiksel olarak önemli olup olmadigi, örnegin güven araliklarinin belirlenmesi, p degerlerinin belirlenmesi, Student T testi, Mann-Whitney testi vb. gibi iyi bilinen çesitli istatistiksel degerlendirme araçlari kullanilarak teknikte uzman kisi tarafindan kolay bir sekilde belirlenebilmektedir. Detaylar, Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley and Sons, New York 1983 kaynaginda verilmistir. Tercih edilen güven araliklari, en az yaklasik %50, en az yaklasik %60, en az yaklasik %70, en az yaklasik veya 0.0001 veya daha azdir. Daha çok tercihen bir popülasyonun deneklerinin en az yaklasik %60'i, en az yaklasik %70'i, en az yaklasik %80'i veya en az yaklasik %90'i, mevcut belgenin yöntemi ile dogru bir sekilde tanimlanabilmektedir.

HER2+ meme tümörleri olan hastalarda özellestirilmLs terapinin tasarlanmasina yönelik yöntem Teknigin bilinen durumunda bilindigi üzere kanserden muzdarip olan bir denege uygulanacak tedavi, kanserin maling tümör olup olmadigina, diger bir ifadeyle metastaz yapma ihtimalinin yüksek olup olmadigina ya da kanserin benign tümör olup olmadigina bagli olmaktadir. Birinci varsayimda seçilen tedavi, kemoterapi gibi sistemik bir tedavidir ve ikinci varsayimda seçilen tedavi, radyoterapi gibi bölgesel bir tedavidir.

Bu nedenle mevcut belgede açiklandigi üzere HER2+ meme kanseri hücrelerinde MAF geninin asiri ekspresyonunun kemik metastazi varligi ile ilgili oldugu göz önünde bulunduruldugunda, MAF geni ekspresyon seviyesi, söz konusu kanserden muzdarip olan denek için en uygun terapi açisindan karar alinmasina olanak saglamaktadir.

Bu nedenle bir baska yönünde mevcut belge, HER2+ meme kanserinden muzdarip olan bir denek için özellestirilmis bir terapi tasarlanmasina yönelik bir in vitro yöntem (bundan böyle mevcut belgenin üçüncü yöntemi olacak anilacaktir) ile ilgili olup, bu yöntem asagidakileri içermektedir i) söz konusu denege ait bir tümör numunesinde (örn. tümör dokusu numunesi, sirküle tümör hücresi, sirküle tümör DNA'si veya tümör türevli eksosomlar) MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesi ve ii) i)'de elde edilen ekspresyon seviyesinin bir referans degerle karsilastirilmasi, burada eger ekspresyon seviyesi, söz konusu referans degerine göre artmissa, söz konusu denek kemik metastazini önlemeyi ve/veya tedavi etmeyi amaçlayan bir terapi almaya yatkindir. Eger ekspresyon seviyesi, söz konusu referans degerine göre artmamissa, söz konusu denek kemik metastazini önlemeyi ve/veya tedavi etmeyi amaçlayan bir terapi almaya yatkin degildir. Bazi yönlerde numune, bir tümör numunesi, bir sirküle tümör numunesi, bir sirküle tümör DNA'si veya tümör türevli eksosomlar dahil olmak üzere bir tümör türevli numunedir.

Belirli bir yönde kemik metastazi, osteolitik metastazdir.

Mevcut belgenin üçüncü yöntemi, birinci adimda, HER2+ meme kanserinden muzdarip olan bir denege ait bir numunede MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesini içermektedir. Tercih edilen bir yönde numune, bir tümör dokusu numunesidir.

Bir baska belirli yönde mevcut belgenin üçüncü yöntemi, tek bir marker olarak sadece MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesini içermektedir, diger bir ifadeyle yöntem, herhangi bir ilave markerin ekspresyon seviyesinin belirlenmesini içermemektedir.

Mevcut belgenin üçüncü yöntemi durumunda numune, denege ait bir primer tümör dokusu numunesi olabilir.

Ikinci adimda denege ait tümör numunesinde elde edilen MAF geni ekspresyon seviyesi, bir referans degeri ile karsilastirilmaktadir. Tercih edilen bir yönde referans degeri, bir kontrol numunesinde söz konusu genin MAF geni ekspresyon seviyesidir.

MAF geni ekspresyon seviyesinin belirlenmesinin, bir kontrol numunesi veya referans numunesinin degerleri ile iliskili olmasi gerekmektedir. Analiz edilecek tümörün türüne bagli olarak kontrol numunesinin tam yapisi degisiklik gösterebilmektedir. Bu nedenle tercihen referans numunesi, metastaz yapmamis olan HER2+ meme kanseri olan bir denege ait bir numune veya metastaz yapmamis olan HER2+ meme kanseri olan deneklerin biyopsi numunelerinde bir tümör dokusu koleksiyonunda ölçülen MAF geni ekspresyon seviyelerinin medyan degerine karsilik gelen bir numunedir.

Numunedeki MAF geni ekspresyon seviyesi ölçülüp referans degeri ile karsilastirildiktan sonra, eger söz konusu genin ekspresyon seviyesi, referans degerine göre artmissa, söz konusu denegin metastazi önlemeyi (eger denek henüz metastaz yasamamissa) ve/veya tedavi etmeyi veya metastazi önlememeyi ve/veya tedavi etmemeyi (eger denek halihazirda metastaz yasamissa) amaçlayan bir terapi almaya veya terapi almamaya yatkin oldugu sonucuna varilabilmektedir.

Kanser metastaz yaptiginda, bunlarla sinirli olmamak üzere kemoterapi, hormon tedavisi, immünoterapi veya bunlarin bir kombinasyonunu içeren sistemik tedaviler kullanilabilmektedir. Ek olarak radyoterapi ve/veya ameliyat kullanilabilmektedir.

Tedavinin seçimi genel olarak primer kanser türüne, boyutuna, metastazin konumuna, hastanin yasina, genel sagligina ve daha önceden kullanilan tedavi türlerine baglidir.

Sistemik tedaviler, tüm vücuda ulasan tedavilerdir ve metastazi önlemeyi veya inhibe etmeyi (eger denek henüz metastaz yasamamissa) ve/veya tedavi etmeyi (eger denek halihazirda metastaz yasamissa) amaçlayan terapileri temsil edebilmektedir, mesela: . Kemoterapi, kanser hücrelerini imha etmek için ilaç kullanilmasidir. Ilaçlar genel olarak oral veya intravenöz yolla uygulanmaktadir. Bazi durumlarda kemoterapi, radyasyon tedavisi ile birlikte kullanilmaktadir. Meme kanseri için uygun kemoterapötik tedaviler arasinda sinirlama olmaksizin antrasiklinler (doksorubisin, epirubisin, pegile Iiposomal doksorubisin), Taksanlar (paklitaksel, dosetaksel, albumin nano-parçacik bagli paklitaksel), 5-fl0r0ürasil (sürekli infüzyon 5-FU, kapesitabin), Vinka alkaloidler (vinorelbin, vinblastin), Gemsitabin, Platin tuzlari (sisplatin, karboplatin), siklofosfamid, Etoposide ve yukaridakilerin bir veya daha fazlasinin kombinasyonlari, mesela Siklofosfamid/antrasiklin +/- 5-fl0r0ürasil rejimleri (mesela doksorubisin/ siklofosfamid (AC), epirubisin/siklofosfamid, (EC) siklofosfamid/epirubisin/S- floroürasil (CEF), siklofosfamid/doksorubisin/S-floroürasil (CAF), 5-floroürasil /epirubisin/siklofosfamid (FEC)), siklofosfamid/metotreksat/S-floroürasiI (CMF), antrasiklinler/taksanlar (mesela doksorubisin/paklitaksel veya doksorubisin/dosetaksel), DosetakseI/kapesitabin, Gemsitabin/paklitaksel, Taksan/platin rejimleri (mesela paklitaksel/karboplatin veya dosetakseI/karboplatin) yer almaktadir.

. Immünoterapi, hastanin kanserle mücadele etmesi için kendi bagisiklik sistemine yardim eden bir tedavidir. Hastalarda metastazi tedavi etmek için kullanilan birkaç immünoterapi türü mevcuttur. Bunlar arasinda sitokinler, monoklonal antikorlar ve antitümör asilari yer almakla birlikte bunlarla sinirli degildir.

Bir baska yönde tedavi, Alfaradin (radyum-223 diklorür) seklindedir. Alfaradin, kanser hücrelerini öldürmek için radyum-223 bozulmasindan gelen alfa radyasyonu kullanmaktadir. Radyum-223, kalsiyum taklidi gibi özellikleri sayesinde kemik metastazini dogal olarak kendiliginden hedef almaktadir Alfa radyasyonunun (beta veya gamma radyasyonunu temel alan mevcut radyasyon terapisine kiyasla) 2-10 hücrelik çok kisa bir menzili vardir ve bu nedenle çevredeki saglikli dokulara (özellikle kemik iligine) daha az zarar vermektedir. Kalsiyuma benzer özellikleri olan radyum-223, ileri, kastrasyona dirençli prostat kanseri olan erkeklerin iskeletsel metastazinda görüldügü gibi daha hizli ve anormal kemik büyümesi bölgesi dahil olmak üzere kalsiyumun vücutta kemik olusumu için kullanildigi yerlere çekilmektedir. Radyum-223, enjeksiyondan sonra, kan dolasimiyla anormal kemik büyümesi bölgelerine tasinmaktadir. Bir kanserin vücutta basladigi yer, primer tümör olarak bilinmektedir. Bu hücrelerden bazilari kopabilmekte ve kan dolasimiyla vücudun farkli bir bölümüne tasinabilmektedir. Ardindan kanser hücreleri vücudun bu bölümüne yerleserek yeni bir tümör olusturabilmektedir. Bu durumun ortaya çikmasi, sekonder kanser veya metastaz olarak adlandirilmaktadir. Ileri evre prostat kanseri olan çogu hasta, hastaligin maksimum yükünü kemiklerinde yasamaktadirlar. Radyum-223 ile amaç, bu sekonder kanseri selektif olarak hedef almaktir. Kemiklerin almadigi herhangi bir radyum-223 hizla bagirsaklara yönlendirilip atilmaktadir.

Bir baska yönde tedavi, bir mTor inhibitörüdür. Bazi yönlerde mT0r inhibitörü, bir çifte mTor/PI3kinaz inhibitörüdür. Bazi yönlerde mTor inhibitörü, metastazi önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde mTor inhibitörü, asagidakilerden olusan gruptan seçilmektedir: ABIOO9 (sirolimus), rapamisin (sirolimus), Abraxane (paklitaksel), Absorb (everolimus), Afinitor (everolimus), Afinitor with Gleevec, (umirolimus), BioMatrix (umirolimus), BioMatrix flex (umirolimus), CC115, CC223, Combo Bio-engineered Sirolimus Eluting Stent ORBUSNEICH (sirolimus), Curaxin Endeavor Resolute (zotarolimus), Femara (letrozole), Hocena (antrokinonol), INK128, SF, Taltorvic (ridaforolimus), Tarceva (erlotinib), Torisel (temsirolimus), Xience Prime (everolimus), Xience V (everolimus), Zomaxx (zotarolimus), Zortress (everolimus), Zotarolimus LOR, 582602, Sirolimus PNP XL388, Advacan (everolimus), AZD8055, Cypher Select Plus Sirolimus kapli Koroner Stent Sirolimus), Cypher Sirolimus kapli koroner stent (Sirolimus), Ilaç Kapli Balon (Sirolimus), E-Magic Plus (sirolimus), Emtor (Sirolimus), Esprit (everolimus), Evertor (everolimus), HBF, mTOR Inhibitörü CELLZOME, Nevo Sirolimus kapli Koroner Stent (Sirolimus), nPT-mTOR, Rapacan (Sirolimus), Renacept (Sirolimus), ReZolve (Sirolimus), Rocas (Sirolimus), SF, Sirolimus RANBAXY (Sirolimus), Sirolimus WATSON (Sirolimus) Siropan (Sirolimus), Sirova (Sirolimus), Supralimus (Sirolimus), Supralimus-Core (Sirolimus), Tacrolimus WATSON (takrolimus), TAFA93, Temsirolimus ACCORD (temsirolimus), Temsirolimus SANDOZ (temsirolimus), TOP216, Xience Prime (everolimus), Xience V (everolimus). Belirli bir yönde mTor inhibitörü, Afinitor (everolimus)'tür inhibitörü ile kombine edilmektedir. (Bkz. örnegin Baselga, J., ve ark., Everolimus In Postmenopausal Hormone-Receptor Positive Advanced Breast Cancer. 2012. N. Engl. J. tanimlanabilmektedir. (Bkz. örnegin Zhou, H. ve ark. Updates of mTor inhibitors. 2010.

Anticancer Agents Med. Chem. 10(7): 571-81). Bazi yönlerde mTor inhibitörü, hormon reseptörü için pozitif olan bir hastada metastazi tedavi etmek veya önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. (Bkz. örnegin Baselga, J., ve ark., Everolimus in Postmenopausal Hormone-Receptor Positive Advanced Breast Cancer. 2012. N. Engl. J. ileri meme kanseri olan bir hastada metastazi tedavi etmek veya önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde mTor inhibitörü, ikinci bir tedavi ile kombinasyon halinde kullanilmaktadir. Bazi uygulamalarda ikinci tedavi burada açiklanan herhangi bir tedavidir.

Bir baska yönde tedavi, bir Src kinaz inhibitörüdür. Bazi yönlerde Src inhibitörü, metastazi önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde Src inhibitörü, asagidakilerden olusan gruptan seçilmektedir: AZD0530 (sarakatinib), Bosulif (bosutinib), ENMD, HETERO (dasatinib), Dasatinib VALEANT (dasatinib), Fontrax (dasatinib), Src Kinaz Inhibitörü KINEX, VX680,(tozasertib laktat), XL228 ve SUNK706. Bazi yönlerde Src kinaz inhibitörü, dasatinibdir. Bir baska yönde Src kinaz inhibitörleri alanda bilinen yöntemlerle tanimlanabilmektedir (Bkz. örnegin Sen, B. and Johnson, F.M. Regulation sayfa). Bazi yönlerde Src kinaz inhibitörü, SRC'ye yanit veren imza (SRS) için pozitif olan bir hastada metastazi tedavi etmek veya önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde hasta, SRS+ ve ER-'dir. (Bkz. örnegin, Zhang, CH.-F, ve ark. Latent Bone Metastasis in Breast Cancer Tied to Src-Dependent survival signals. olan bir hastada metastazi tedavi etmek veya önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde Src kinaz inhibitörü, ikinci bir tedavi ile kombinasyon halinde kullanilmaktadir. Bazi uygulamalarda ikinci tedavi burada açiklanan herhangi bir tedavidir.

Bir baska yönde tedavi, bir COX-2 inhibitörüdür Bazi yönlerde COX-2 inhibitörü, metastazi önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde COX-Z inhibitörü, asagidakilerden olusan gruptan seçilmektedir: ABT963, Asetaminofen ER JOHNSON (asetaminofen), Acular X (ketorolak trometamin), BAY1019036 (aspirin), BAY, BCIBUCH001 (ibuprofen), Capoxigem (aprikoksib), CSSOZ, C5670 (pelubiprofen), Diclofenac HPBCD (diklofenak), Diractin (ketoprofen), GW, Hyanalgese-D (diklofenak), HydrocoDeX (asetaminofen, dekstrometorfan, hidrokodon), (asetaminofen, ibuprofen), Impracor (ketoprofen), IP880 (diklofenak), IP940 (indometasin), ISV205 (diklofenak sodyum), JN5013 (asetaminofen, tramadol hidroklorür), Ketoprofen TDS (ketoprofen), LTNSOOl (naproksen etemesil), Mesalamine SALIX (mesalamin), Mesalamine SOFAR (mesalamin), Mesalazine (mesalamin), ML3000 (likofelon), MRX7EAT (etodolak), Naproxen IROKO (naproksen), NCX4016 (nitroaspirin), NCX, OMSlO3HP (amitriptilin hidroklorür, ketoprofen, oksimetazolin hidroklorür), Oralease (diklofenak), OxycoDeX (dekstrometorfan, oksikodon), PS4, PercoDex (asetaminofen, dekstrometorfan, oksikodon), PL3100 (naproksen, fosfatidil kolin), PSD508, R- Ketoprofen (ketoprofen), Remura (bromfenak sodyum), ROX828 (ketorolak trometamin), RP, TDS943 (diklofenak sodyum), TDT, TT063 (S- propranolol), XPZOB (asetaminofen, dekstropropoksifen), XPZIB (diklofenak potasyum), XP21L (diklofenak potasum), Zoenasa (asetilsistein, mesalamin), Acephen, Actifed Plus, Actifed-P, Acular, Acular LS, Acular PF, Acular X, Acuvail, Advil, Advil Allergy Sinus ,Advil Cold and Sinus ,Advil Congestion Relief ,Advil PM, Advil PM Capsule, Air Salonpas, Airtal, AIcohoI-Free NyQuil Cold & Flu Relief, Aleve ,Aleve ABDI Seltzer Lemon-Lime, AIka-Seltzer Original, Alka-Seltzer Plus, AIka-Seltzer plus Cold and Cough, AIka-Seltzer plus Cold and Cough Formula, Alka-Seltzer Plus Day and Night Cold Formula,, AIka-Seltzer Plus Day Non-Drowsy Cold Formula, Alka-Seltzer Plus Flu Formula, AIka-Seltzer Plus Night Cold Formula, AIka-Seltzer Plus Sinus Formula, Alka- Seltzer Plus Sparkling Original Cold Formula, Alka-Seltzer PM, Alka-Seltzer Wake-Up Call, Anacin, Anaprox, Anaprox MINERVA, Ansaid, Apitoxin, Apranax, Apranax abdi, Arcoxia, Arthritis Formula Bengay, Arthrotec, Asacol, Asacol HD, Asacol MEDUNA ARZNEIMITFEL, Asacol ORIFARM, Aspirin BAYER, Aspirin Complex, Aspirin Migran, Benadryl Allergy, Benadryl Day and Night, Benylin 4 Flu, Benylin Cold and Flu, Benylin Cold and Flu Day and Night, Benylin Cold and Sinus Day and Night, Benylin Cold and Sinus Plus, Benylin Day and Night Cold and Flu Relief, Benylinl AII-In-One, Brexin, Brexin ANGELINI, Bromday, Bufferin, Buscopan Plus, Caldolor, Calmatel, Cambia, Canasa, Capoxigem, Cataflam, Celebrex, Celebrex ORIFARM, Children's Advil Allergy Sinus, Children's Tylenol, Children's Tylenol Cough and Runny Nose, Children's Tylenol plus cold, Children's Tylenol plus Cold and Cough, Children's Tylenol plus cold and stuffy nose, Children's Tylenol plus Flu, Children's Tylenol plus cold & allergy, Children's Tylenol plus Cough & Runny Nose, Children's Tylenol plus Cough & Sore Throat, Children's Tylenol plus multi symptom cold, Clinoril, Codral Cold and Flu, Codral Day and Night Day Tablets, Codral Day and Night Night Tablets, Codral Nightime, Colazal, Combunox, Contac Cold plus Flu, Contac Cold plus FIu Non-Drowsy, Coricidin D, Coricidin HBP Cold and Flu, Coricidin HBP Day and Night Multi-Symptom Cold, Coricidin HBP Maximum Strength Flu, Coricidin HBP Nighttime Multi-Symptom Cold, Coricidin II Extra Strength Cold and Flu, CSSO2, C5670, Daypro, Daypro Alta, DDSOGC, Demazin Cold and Flu, Demazin Cough, Cold and Flu, Demazin day/night Cold and Flu, Demazin PE Cold and Flu, Demazin PE day/night Cold and Flu, Diclofenac HPBCD, Dimetapp Day Relief, Dimetapp Multi-Symptom Cold and Flu, Dimetapp Night Relief, Dimetapp Pain and Fever Relief, Dimetapp PE Sinus Pain, Dimetapp PE Sinus Pain plus Allergy, Dipentum, Diractin, Disprin Cold 'n' Fever, Disprin Extra, Disprin Forte. Disprin Plus, Dristan Cold, Dristan Junior, Drixoral Plus, Duexis, Dynastat, Efferalgan, Efferalgan Plus Vitamin C, Efferalgan Vitamin C, Elixsure IB, Excedrin Back and Body, Excedrin Migraine, Excedrin PM, Excedrin Sinus Headache, Excedrin Tension Headache, Falcol, Fansamac, Feldene, FeverAIl, Fiorinal, Fiorinal with Codeine, Flanax, Flector Patch, Flucam, Fortagesic, Gerbin, Giazo, Gladio, Goody's Back and Body Pain, Goody's Cool Orange, Goody's Extra Strength, Goody's PM, Greaseless Bengay, GW406381, HCT1026, He Xing YI, Hyanalgese-D, HydrocoDex, Ibuprofen Sodium PFIZER, Motrin, Ketoprofen TDS, Lemsip Max, Lemsip Max All In One, Lemsip Max All Night, Lemsip Max Cold and Flu, Lialda, Listerine Mouth Wash, Lloyds Cream, Lodine, Lorfit P, Loxonin, LTNSOOl, Mersyndol, Mesalamine SALIX, Mesalamine SOFAR, Mesalazine, Mesasal GLAXO, Mesasal SANOFI, Mesulid, Metsal Heat Rub, Midol Complete, Midol Extended Relief, Midol Liquid Gels, Midol PM, Midol Teen Formula, Migranin COATED TABLETS, ML3000, Mobic, Mohrus, Motrin, Motrin Cold and Sinus Pain, Motrin PM, Movalis ASPEN, MRX7EAT, Nalfon, Nalfon PEDINOL, Naprelan, Naprosyn, Naprosyn RPG LIFE SCIENCE, Naproxen IROKO, NCX4016, NCX701, NeoProfen LUNDBECK, Nevanac, Nexcede, Niflan, Norgesic MEDICIS, Novalgin, Nuprin SCOLR, Nurofen, Nurofen Cold and Flu, Nurofen Max Strength Migraine, Nurofen Plus, Nuromol, NyQuil with Vitamin C, Ocufen, OMSlO3HP, Oralease, Orudis ABBO'I'I' JAPAN, Oruvail, Osteluc, OxycoDex, PS4, Panadol, Panadol Actifast, Paradine, Paramax, Parfenac, Pedea, Pennsaid, Pentasa, Pentasa ORIFARM, Peon, Percodan, Percodan-Demi, PercoDex, Percogesic, Perfalgan, PLZZOO, PL3100, Ponstel, Prexige, Prolensa, PSD508, R- Ketoprofen, Rantudil, Relafen, Remura, Robaxisal, Rotec, Rowasa, ROX828, RP19583, Shinbaro, Sinumax, Sinutab, Sinutab,, sinus, Spalt, Sprix, Strefen, Sudafed Cold and Cough, Sudafed Head Cold and Sinus, Sudafed PE Cold plus Cough, Sudafed PE Pressure plus Pain, Sudafed PE, Severe Cold, Sudafed PE Sinus Day plus Night Relief Day Tablets, Sudafed PE Sinus Day plus Night Relief Night Tablets, Sudafed PE Sinus plus Anti-inflammatory Pain Relief, Sudafed Sinus Advance, Surgam, Synalgos-DC, Synflex, Tavist allergy/sinus/headache, TDS943, TDT070, Theraflu Cold and Sore Throat, Theraflu Daytime Severe Cold and Cough, Theraflu Daytime Warming Relief,Theraflu Warming Relief Caplets Daytime Multi-Symptom Cold, Theraflu Warming Relief Cold and Chest Congestion, Thomapyrin, Thomapyrin C, Thomapyrin Effervescent, Thomapyrin Medium, Tilcotil, Tispol, Tolectin, Toradol, TPR100, TQ1011, Trauma-Salbe, Trauma-Salbe Kwizda, Treo, Treximet, Trovex, 'l'l'063, Tylenol, Tylenol Allergy Multi-Symptom, Tylenol Back Pain, Tylenol Cold & Cough Daytime, Tylenol Cold Tylenol Cold Head Congestion Severe, Tylenol Cold Multi Symptom Daytime, Tylenol Cold Multi Symptom Nighttime Liquid, Tylenol Cold Multi Symptom Severe, Tylenol Cold Non-Drowsiness Formula, Tylenol Cold Severe Congestion Daytime, Tylenol Complete Cold, Cough and Flu Night time, Tylenol Flu Nighttime, Tylenol Menstrual, Tylenol PM, Tylenol Sinus Congestion & Pain Daytime, Tylenol Sinus Congestion & Pain Nighttime, Tylenol Sinus Congestion & Pain Severe, Tylenol Sinus Severe Congestion Daytime, Tylenol Ultra Relief, Tylenol with Caffeine and Codeine phosphate, Tylenol with Vicks NyQuil Cold and Flu Relief, Vicoprofen, Vimovo, Voltaren Emulgel, Voltaren GEL, Voltaren NOVARTIS CONSUMER HEALTH GMBH, Voltaren XR, VT122, Xefo, Xefo Rapid, Xefocam, Xibrom, XL3, Xodol, XP20B, XPZIB, XP21L, Zipsor ve Zoenasa. Bir baska yönde COX-2 inhibitörleri alanda bilinen yöntemlerle tanimlanabilmektedir (Bkz. örnegin Dannhardt, G. and Kiefer, W. Cyclooxygenase inhibitors- current status and inhibitörü, ileri meme kanseri olan bir hastada metastazi tedavi etmek veya önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde COX-2 inhibitörü, ikinci bir tedavi ile kombinasyon halinde kullanilmaktadir. Bazi uygulamalarda ikinci tedavi burada açiklanan herhangi bir tedavidir. Bazi yönlerde COX-2 inhibitörü, asagidakilerden olusan gruptan seçilen ikinci bir tedavi ile kombinasyon halinde kullanilmaktadir. Denosumab, Zometa (http://www.us.zometa.com/index.jsp?usertrack.filter_applied=true&NovaId=2935376 peptit bloke edici PTHLH (paratiroid hormon benzeri hormon) veya PTHrP (paratiroid hormonu baglantili protein) ve Everolimus.

Bir baska yönde, kemik yikiminin önüne geçmek ve/veya bunu önlemek için kullanilan tedavi ajanlari arasinda sinirlama olmaksizin sunlar yer almaktadir: Paratiroid hormon (PTH) ve Paratiroid benzeri hormon (PTHLH) inhibitörleri (bloke edici antikorlar dahil) veya bunlarin rekombinant formlari (PTH'ye ait amino asitler 7-34'e karsilik gelen teriparatid). Bu hormon, osteoklastlari stimüle ederek ve bunlarin aktivitesini artirarak hareket etmektedir.

Stronsiyum ranelat: alternatif bir oral tedavidir ve osteoblast proliferasyonunu stimüle ettiklerinden ve osteoklast proliferasyonunu inhibe ettiklerinden “çift etkili kemik ajanlari” (DABA'Iar) olarak anilan ilaç grubunun bir parçasini olusturmaktadir. östrojenlerin reseptöre baglanmasina müdahale eden veya bunu inhibe eden bilesikleri ifade etmektedir. Östrojen reseptörü modülatörlerinin örnekleri arasinda digerlerinin yani sira, östrojenler progestojen, estradiol, droloksifen, piperidiniI)etoksi]feniI]-2H-1-ben20piran-3-iI]-fenil-2,2-dimetilpr0pan0at 4,4'dihidroksibenzofenon-2,4-dinitrofenil-hidrazon ve SH646 yer almaktadir.

Kalsitonin: kalsitonin reseptörü araciligiyla osteoklast aktivitesini dogrudan inhibe etmektedir. Kalsitonin reseptörleri, osteoklastlarin yüzeyinde tanimlanmistir.

Bisfosfonatlar: meme kanseri ve prostat kanseri ile iliskilendirilen, osteoporoz gibi kemik rezorpsiyonu ve reabsorpsiyonu olan hastaliklarin ve hiperkalsemi ile veya hiperkalsemi olmadan kemik metastazi olan kanserin önlenmesi ve tedavisine yönelik kullanilan tibbi ürünlerin bir grubudur. Mevcut belgenin besinci yöntemi araciligiyla tasarlanan terapide kullanilabilecek bisfosfonatlarin örnekleri arasinda, bunlarla sinirli olmamakla birlikte azotlu biyofosfonatlar (örnegin, pamidronat, neridronat, olpadronat, alendronat, ibandronat, risedronat, inkadronat, zoledronat veya zoledronik asit vb.) ve azotlu olmayan bisfosfonatlar (örnegin, etidronat, klodronat, tiludronat, vb.) yer almaktadir. bilesikleri ifade etmektedir. Katepsin K inhibitörlerinin sinirli olmayan örnekleri arasinda 4-amino-pirimidin-2-karbonitril türevleri (Novartis Pharma GMBH adi altinda WO 03/020278 sayili Uluslararasi patent basvurusunda açiklanmistir), WO ve WO 04/000843sayili yayinda (ASTRAZENECA AB) açiklanan pirroIo-pirimidinlerin yani sira, Axys Pharmaceuticals'e ait olan PCT WO 00/55126, Merck Frosst Canada & Co. and Axys Pharmaceuticals'e ait olan WO 01/49288 yayinlarinda açiklanan inhibitörler yer almaktadir.

Burada kullanildigi haliyle “DKK-1(Dickkopf-1) inhibitörü", DKK-1 aktivitesini azaltabilen herhangi bir bilesigi ifade etmektedir. DKK-1, agirlikli olarak yetiskin kemiginde eksprese edilen ve osteolitik Iezyonlari olan miyelom hastalarinda upregüle edilen, bir çözünür Wnt yolagi antagonistidir. DKK-1'i hedef alan ajanlar, multipl miyelom hastalarinda osteolitik kemik hastaligini önlemede bir rol oynayabilmektedir. Novartis'ten BHQ880, birinci sinif, tamamen insan, anti- DDK-1 nötrlestirici antikordur. Ön klinik çalismalar, BHQ880'in kemik formasyonunu destekledigi ve böylece tümöre bagli osteolitik hastaligi inhibe ettigi hipotezini desteklemektedir (Ettenberg S. ve ark., American Association for Cancer Research Annual Meeting. Nisan 12-16, 2008; San Diego, Calif. kaçisini bloke etmek için tasarlanmis MET ve VEGF yolaklarinin güçlü bir çifte inhibitörü olan herhangi bir bilesigi ifade etmektedir. MET, yalnizca tümör hücrelerinde ve endotelyal hücrelerde degil, ayni zamanda osteoblastlarda (kemik yapici hücreler) ve osteoklastlarda (kemik çikarici hücreler) eksprese edilmektedir. HGF, tüm bu hücre tiplerinde MET'e baglanarak MET yolagina multipl otokrin ve parakrin döngülerinde önemli bir rol saglamaktadir. MET'in tümör hücrelerinde aktivasyonu, metastatik kemik Iezyonlarinin yerlesiminde önemli gözükmektedir. Ayni zamanda MET yolaginin osteoblastlarda ve osteoklastlarda aktivasyonu, anormal kemik büyümesi (yani blastik lezyonlar) veya yikimi (yani litik lezyon) dahil kemik metastazlarinin patolojik özelliklerine yol açabilmektedir. Bu nedenle MET yolaginin hedeflenmesi, metastatik kemik olabilmektedir. Önceden XL olarak bilinen Cabozantinib (Exelixis, Inc), MET'e bagli tümör kaçisini bloke etmek için tasarlanmis MET ve VEGF yolaklarinin güçlü bir çifte inhibitörüdür. Çok sayida ön klinik çalismada cabozantinib'in tümör hücrelerini öldürdügü, metastazi azalttigi ve anjiyogenezi (tümör büyümesini desteklemek için gereken yeni kan damarlarinin olusumu) inhibe ettigi gösterilmistir. Diger uygun çifte inhibitörler E7050 (N-[2-Floro-4- ({2-[4-(4-metilpiperazin-1-iI)piperidin-1-il] karbonilaminopiridin-4-il} oksi) fenil]- bilinmektedir) seklindedir.

Burada kullanildigi haliyle “RANKL inhibitörleri", RANK aktivitesini azaltabilen herhangi bir bilesigi ifade etmektedir. RANKL, stroma ve T-lenfosit hücrelerinin osteoblast membraninin yüzeyinde bulunmaktadir ve bu T-Ienfosit hücreleri, bunun salgilanmasina yönelik kapasite gösteren tek hücrelerdir. Bunun temel fonksiyonu, kemik rezorpsiyonuna katilan hücreler olan osteoklastlarin aktivasyonudur. RANKL inhibitörleri, RANKL'nin kendi reseptörüne (RANK) baglanmasini bloke ederek, RANK aracili sinyallemeyi bloke ederek veya RANKL'nin transkripsiyonu veya translasyonunu bloke ederek RANKL'nin ekspresyonunu azaltarak etki edebilmektedir. Mevcut belgede kullanima uygun olan RANKL antagonistleri veya inhibitörleri, sinirlama olmaksizin asagidakileri içermektedir: o RANKL'yi baglayabilen ve bir RANK proteininin ekstrasülüler domeninin tamamini veya bir fragmanini içeren uygun bir RANK proteini. Çözünür RANK, murin veya insan RANK polipeptidlerinin sinyal peptidini ve ekstrasülüler domenini Içerebilmektedir veya alternatif olarak sinyal peptidi çikarilmis olan proteininin olgunlasmis formu kullanilabilmektedir. o Osteoprotegerin veya bunun RANKL baglama kapasitesi olan bir varyanti. o RANKL-spesifik antisens moleküller o RANKL'nin transkribe ürünlerini isleyebilen ribozimler o Spesifik anti-RANKL antikorlari. "Anti-RANKL antikoru veya RANKL'ye karsi yönlendirilmis antikor” burada bir veya daha fazla RANKL fonksiyonunu inhibe eden nükleer faktör KB'ye (RANKL) yönelik aktive edici reseptörün ligandina spesifik olarak baglanabilen bütün antikorlar olarak anlasilmaktadir. Antikorlar, teknikte uzman kisi tarafindan bilinen yöntemlerden herhangi biri kullanilarak hazirlanabilmektedir. Bu nedenle poliklonal antikorlar, bir hayvana inhibe edilecek proteinle bagisiklik kazandirilmasi yoluyla hazirlanmaktadir. Monoklonal antikorlar, Kohler, yöntem kullanilarak hazirlanmaktadir. Mevcut belge baglaminda uygun olan antikorlar arasinda, bir degisken antijen baglama bölgesini ve sabit bir bölgeyi içeren dokunulmamis antikorlar, "Fab", "F(ab')2" ve "Fab'", Fv, scFv fragmanlari, diabody'ler ve bispesifik antikorlar yer almaktadir. 0 Spesifik anti-RANKL nanobody'leri. Nanobody'ler, dogal olusumlu agir zincirli antikorlarin benzersiz yapisal ve fonksiyonel özelliklerini içeren antikor türevli terapötik proteinlerdir. Nanobody teknolojisi aslen devegillerin (develer ve lamalar) haûf zincirlerden yoksun olan tam fonksiyonel antikorlara sahip oldugu kesfini takiben gelistirilmistir.

Nanobody'lerin genel yapisi FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4 seklindedir, burada FR1 ila FR4, çerçeve bölgeleri 1 ila 4'tür, CDR1 ila CDR3, komplementarite belirleyici bölgeler 1 ila 3'tür. Bu agir zincirli antikorlar, bir tek degisken domen (VHH) ve iki sabit domen (CH2 ve CH3) içermektedir. Önemli bir sekilde klonlanmis ve izole edilmis VHH domeni, orijinal agir zincirli antikorun tam antijen baglama kapasitesini barindiran mükemmel kararli bir polipeptiddir. Benzersiz yapisal ve fonksiyonel özellikleri olan bu yeni kesfedilmis VHH domenleri, Ablynx'in Nanobody'ler olarak adlandirdigi yeni nesil terapötik antikorlarin temelini olusturmaktadir.

Bir yönde RANKL inhibitörü, bir RANKL spesifik antikoru, bir RANKL spesiûk nanobody ve osteoprotegerinden olusan gruptan seçilmektedir. Spesifik bir yönde anti-RANKL antikoru bir monoklonal antikordur. Yine daha spesifik bir yönde anti-RANKL antikoru 615258-40-7). Denosumab, RANKL'ye baglanan ve bunun aktivasyonunu önleyen (RANK reseptörüne baglanmamaktadir) tamamen insan monoklonal antikordur. patentlerinde açiklanmaktadir. Bir baska yönde RANKL inhibitörü, Denosumab ile ayni epitopu baglayan bir antikor, antikor fragmani veya füzyon yapisidir. nanobody'lerden herhangi biridir. Yine daha çok tercih edilen bir yönde anti-RANKL antikoru ALX-0141'dir (Ablynx). ALX-0141, menopoz sonrasi osteoporoz, romatoid artrit, kanser ve belirli ilaçlarla iliskilendirilmis kemik kaybini inhibe etmek ve saglikli kemik metabolizmasi dengesini yeniden saglamak üzere tasarlanmistir.

Tercih edilen bir yönde kemik yikimini önleyen ajan, bir bifosfonat, bir RANKL inhibitörü, PTH ve PTHLH Inhibitörü veya bir PRG analogu, stronsiyum ranelat, bir DKK- 1 inhibitörü, bir çift MET ve VEGFRZ inhibitörü, bir östrojen reseptörü modülatörü, Radyum-223 kalsitonin ve bir katepsin K inhibitöründen olusan gruptan seçilmektedir.

Daha çok tercih edilen bir yönde, kemik yikimini önleyen ajan bir bifosfonattir. Yine daha çok tercih edilen bir yönde bifosfonat, zoledronik asittir.

Bir yönde bir CCR5 antagonisti, primer meme kanseri tümörünün kemige metastazini önlemek veya inhibe etmek üzere uygulanmaktadir. Bir yönde CCR5 antagonisti, büyük bir moleküldür. Bir baska yönde CCR5 antagonisti, küçük bir moleküldür. Bazi yönlerde CCR5 antagonisti, Maraviroc'tur (Velasco-Velâquez, M. ve ark. 2012. CCR5 Antagonist yönlerde CCR5 antagonisti, Vicriviroc'tur. Velasco-Velaquez, M. ve ark. 2012. CCR5 Antagonist Blocks Metastasis of Basal Breast Cancer Cells. Cancer Research. 72:3839- 3850.). Bazi yönlerde CCR5 antagonisti, Aplaviroc'tur (Demarest J.F. ve ark. 2005.

Update on Aplaviroc: An HIV Entry Inhibitor Targeting CCR5. Retrovirology 2(Suppl. 1): 513). Bazi yönlerde CCR5 antagonisti, bir spiropiperidin CCR5 antagonistidir. (Rotstein D.M. ve ark. 2009. Spiropiperidine CCR5 antagonists. Bioorganic & Medicinal Chemistry (Kuritzkes, D.R. : 82-7).

Tercih edilen bir yönde çifte MET ve VEGFRZ inhibitörü, Cabozantinib, Foretinib ve E7050'den olusan gruptan seçilmektedir.

Tercih edilen bir yönde Radyum 223 terapisi, alfaradin'dir.

Alternatif olarak yukarida bahsedilenler arasindan birden fazla ajanin metastazi tedavi etmek ve/veya önlemek üzere kombine edildigi veya söz konusu ajanlarin kalsiyum veya D vitamini gibi diger takviyeler ile veya bir hormon tedavisi ile kombine edilebildigi kombine bir tedavi gerçeklestiriIebilmektedir.

Meme kanseri hastalarinda erken kemik metastazinin tahmin edilmesine yonelik yöntem Bir baska yönünde mevcut belge, HER2+ meme kanseri gibi meme kanserinden muzdarip olan bir denekte kemik metastazi riskinin belirlenmesine yönelik bir in vitro yöntem ile ilgili olup, yöntem söz konusu denege ait bir numunede MAF geninin ekspresyon seviyesinin belirlenmesini Içermektedir, burada söz konusu genin ortalama deger arti bir standart sapma üzerindeki bir ekspresyon seviyesi erken kemik metastazinin artik riskinin göstergesidir.

Tercih edilen bir yönde kemik metastazi, çok erken kemik metastazdir.

Tercih edilen bir yönde kemik metastazi, osteolitik metastazdir.

Burada kullanildigi haliyle “erken kemik metastazi”, meme kanserli bir hastada ameliyattan sonraki 5 yildan önce görülen kemik metastazidir.

Burada kullanildigi haliyle “çok erken kemik metastazi”, meme kanserli bir hastada ameliyattan sonraki 3 yildan önce görülen kemik metastazidir.

Mevcut belgenin dördüncü yöntemi, birinci adimda, HER2+ meme kanseri gibi meme kanserinden muzdarip olan bir denege ait bir numunede MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesini içermektedir. Tercih edilen bir yönde numune, bir tümör dokusu numunesidir.

Tercih edilen bir yönde mevcut belgenin dördüncü yöntemi, tek bir marker olarak sadece MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesini içermektedir, diger bir ifadeyle yöntem, herhangi bir ilave markerin ekspresyon seviyesinin belirlenmesini içermemektedir. MAF geni ekspresyon seviyesi, mevcut bulusun birinci yöntemi için daha önce açiklandigi gibi ölçülebilmektedir.

Tercih edilen bir yönde meme kanseri, HER2+ meme kanseridir.

Ikinci bir adimda, söz konusu genin ortalama deger arti bir standart sapma üzerindeki bir ekspresyon seviyesi, erken kemik metastazinin artan riskinin göstergesidir. özetleyen veya temsil eden, MAF ekspresyon seviyesinin tek bir degeriyle (ortalama, tepe deger veya medyan) ilgilidir. Tercih edilen bir yönde ortalama seviye, meme kanseri tümörlerinin bir temsili kohortundan elde edilen ekspresyon seviyelerinin ortalamasina karsilik gelmektedir. Hasta kohortu, degerlendirilmeye çalisilan bagimsiz hastayi temsil eden yasla tanimlanmaktadir ölçülmesiyle ilgilidir. Örnegin MAF'nin ortalama normal seviyesi için standart sapma, meme tümör numunelerinde bulunan MAF seviyelerinin bir koleksiyonunun dagilimidir.

Veriler ne kadar yayilirsa sapma o kadar yüksek olur. Standart sapma, gözlemlenen degerlerin kare sapmalarinin ortalamasinin karekökünün, siklik dagilimindaki ortalamalarindan çikarilmasiyla elde edilebilmektedir.

Meme kanseri, örnegin HER2+ meme kanseri olan bir denekten alinan bir numunede MAF geni ekspresyon seviyesi ölçüldügünde ve ortalama seviye ile karsilastirildiginda, eger söz konusu genin ekspresyon seviyesi, ortalama degere göre ortalama arti bir standart sapma üzerindeyse, söz konusu denegin büyük bir kemik metastazi gelistirme egilimi oldugu sonucuna varilabilmektedir.

Kemik metastazi olan HER2+ meme kanseri hastalarinda özellestirilmis terapinin tasarlanmasina vönelik vöntem Bir baska yönünde mevcut belge, HER2+ meme kanseri olan bir denek için özellestirilmis bir terapinin tasarlanmasina yönelik bir in vitro yöntem (asagida mevcut belgenin besinci yöntemi olarak anilmaktadir) ile ilgili olup, bu yöntem asagidakileri içermektedir: i) söz konusu denege ait bir kemik metastatik numunesinde MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesi ve ii) (i) adiminda elde edilen ekspresyon seviyesinin bir referans degerle karsilastirilmasi, burada eger MAF geni ekspresyon seviyesi, söz konusu referans degerine göre artmissa, söz konusu denek kemik yikimini önlemeyi amaçlayan bir terapi almaya yatkindir.

Tercih edilen bir yönde kemik metastazi, osteolitik metastazdir.

Mevcut belgenin besinci yöntemi, birinci adimda, HER2+ meme kanserinden muzdarip olan bir denege ait bir numunede MAF geni ekspresyon seviyesinin (veya MAF translokasyonunun veya amplifikasyonunun) ölçülmesini içermektedir. Mevcut belgenin besinci yöntemi durumunda numune, kemik metastazindan alinan bir doku numunesi olabilmektedir.

Tercih edilen bir yönde mevcut belgenin besinci yöntemi, tek bir marker olarak sadece MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesini içermektedir, diger bir ifadeyle yöntem, herhangi bir ilave markerin ekspresyon seviyesinin belirlenmesini içermemektedir.

Ikinci adimda denege ait tümör numunesinde elde edilen MAF geni ekspresyon seviyesi (veya MAF translokasyonu veya ampliûkasyonu) bir referans degeri ile karsilastirilmaktadir. Tercih edilen bir yönde referans degeri, bir kontrol numunesinde MAF geni ekspresyon seviyesidir. Analiz edilecek tümörün türüne bagli olarak kontrol numunesinin tam yapisi degisiklik gösterebilmektedir. Bu nedenle mevcut belgenin besinci yönteminin dahil edilmesi durumunda referans numunesi, metastazdan muzdarip olmayan HER2+ meme kanserli bir denege ait bir numunedir veya metastazdan muzdarip olmayan HER2+ meme kanserli deneklerin biyopsi numunelerinde bir tümör dokusu koleksiyonunda ölçülen MAF geni ekspresyon seviyelerinin medyan degerine karsilik gelen bir numunedir.

Numunede MAF geni ekspresyon seviyesi ölçüldügünde ve referans degeri (örnegin bir kontrol numunesinin MAF geni ekspresyon seviyesi) ile karsilastirildiginda, eger söz konusu genin ekspresyon seviyesi, referans degere göre artmissa, bu, söz konusu denegin kemik yikiminin önüne geçmeyi veya bunu önlemeyi amaçlayan bir terapi almaya yatkin oldugunun göstergesidir.

Kemik yikiminin önüne geçmeye ve/veya bunu önlenmeye yönelik kullanilan ajanlarin açiklayici örnekleri, bunlarla sinirli olmamakla birlikte asagidakileri içermektedir: Paratiroid hormon (PTH) ve Paratiroid benzeri hormon (PTHLH) inhibitörleri (bloke edici antikorlar dahil) veya bunlarin rekombinant formlari (PTH'ye ait amino asitler 7-34'e karsilik gelen teriparatid). Bu hormon, osteoklastlari stimüle ederek ve bunlarin aktivitesini artirarak hareket etmektedir.

Stronsiyum ranelat: alternatif bir oral tedavidir ve osteoblast proliferasyonunu stimüle ettiklerinden ve osteoklast proliferasyonunu inhibe ettiklerinden “çift etkili kemik ajanlari” (DABA'Iar) olarak anilan ilaç grubunun bir parçasini olusturmaktadir. östrojenlerin reseptöre baglanmasina müdahale eden veya bunu inhibe eden bilesikleri ifade etmektedir. Östrojen reseptörü modülatörlerinin örnekleri arasinda digerlerinin yani sira, östrojenler progestojen, estradiol, droloksifen, piperidinil)etoksi]feniI]-2H-1-benzopiran-3-iI]-fenil-2,2-dimetilpropanoat 4,4'dihidroksibenzofenon-2,4-dinitrofenil-hidrazon ve SH646 yer almaktadir.

Kalsitonin: kalsitonin reseptörü araciligiyla osteoklast aktivitesini dogrudan inhibe etmektedir. Kalsitonin reseptörleri, osteoklastlarin yüzeyinde tanimlanmistir.

Bisfosfonatlar: meme kanseri ve prostat kanseri ile iliskilendirilen, osteoporoz gibi kemik rezorpsiyonu ve reabsorpsiyonu olan hastaliklarin ve hiperkalsemi ile veya hiperkalsemi olmadan kemik metastazi olan kanserin önlenmesi ve tedavisine yönelik kullanilan tibbi ürünlerin bir grubudur. Mevcut belgenin besinci yöntemi araciligiyla tasarlanan terapide kullanilabilecek bisfosfonatlarin örnekleri arasinda, bunlarla sinirli olmamakla birlikte azotlu biyofosfonatlar (örnegin, pamidronat, neridronat, olpadronat, alendronat, ibandronat, risedronat, inkadronat, zoledronat veya zoledronik asit vb.) ve azotlu olmayan bisfosfonatlar (örnegin, etidronat, klodronat, tiludronat, vb.) yer almaktadir.

Alfaradin (radyum-223 diklorür). Alfaradin, kanser hücrelerini öldürmek için radyum-223 bozulmasindan gelen alfa radyasyonu kullanmaktadir. Radyum- 223, kalsiyum taklidi gibi özellikleri sayesinde kemik metastazini dogal olarak kendiliginden hedef almaktadir Alfa radyasyonunun (beta veya gamma radyasyonunu temel alan mevcut radyasyon terapisine kiyasla) 2-10 hücrelik çok kisa bir menzili vardir ve bu nedenle çevredeki saglikli dokulara (özellikle kemik iligine) daha az zarar vermektedir. Kalsiyuma benzer özellikleri olan radyum-223, ileri, kastrasyona dirençli prostat kanseri olan erkeklerin iskeletsel metastazinda görüldügü gibi daha hizli ve anormal kemik büyümesi bölgesi dahil olmak üzere kalsiyumun vücutta kemik olusumu için kullanildigi yerlere çekilmektedir. Radyum-223, enjeksiyondan sonra, kan dolasimiyla anormal kemik büyümesi bölgelerine tasinmaktadir. Bir kanserin vücutta basladigi yer, primer tümör olarak bilinmektedir. Bu hücrelerden bazilari kopabilmekte ve kan dolasimiyla vücudun farkli bir bölümüne tasinabilmektedir. Ardindan kanser hücreleri vücudun bu bölümüne yerleserek yeni bir tümör olusturabilmektedir.

Bu durumun ortaya çikmasi, sekonder kanser veya metastaz olarak adlandirilmaktadir. Ileri evre prostat kanseri olan çogu hasta, hastaligin maksimum yükünü kemiklerinde yasamaktadirlar. Radyum-223 ile amaç, bu sekonder kanseri selektif olarak hedef almaktir. Kemiklerin almadigi herhangi bir radyum-223 hizla bagirsaklara yönlendirilip atilmaktadir. bilesikleri ifade etmektedir. Katepsin K inhibitörlerinin sinirli olmayan örnekleri arasinda 4-amino-pirimidin-2-karb0nitril türevleri (Novartis Pharma GMBH adi altinda WO 03/020278 sayili Uluslararasi patent basvurusunda açiklanmistir), WO ve WO 04/000843sayili yayinda (ASTRAZENECA AB) açiklanan pirrolo-pirimidinlerin yani sira, Axys Pharmaceuticals'e ait olan PCT WO 00/55126, Merck Frosst Canada & C0. and Axys Pharmaceuticals'e ait olan WO 01/49288 yayinlarinda açiklanan inhibitörler yer almaktadir.

Burada kullanildigi haliyle "DKK-1(Dickk0pf-1) inhibitörü”, DKK-1 aktivitesini azaltabilen herhangi bir bilesigi ifade etmektedir. DKK-1, agirlikli olarak yetiskin kemiginde eksprese edilen ve osteolitik lezyonlari olan miyelom hastalarinda upregüle edilen, bir çözünür Wnt yolagi antagonistidir. DKK-1'i hedef alan ajanlar, multipl miyelom hastalarinda osteolitik kemik hastaligini önlemede bir rol oynayabilmektedir. Novartis'ten BHQ880, birinci sinif, tamamen insan, anti- DDK-l nötrlestirici antikordur. Ön klinik çalismalar, BHQ880'in kemik formasyonunu destekledigi ve böylece tümöre bagli osteolitik hastaligi inhibe ettigi hipotezini desteklemektedir (Ettenberg S. ve ark., American Association for Cancer Research Annual Meeting. Nisan 12-16, 2008; San Diego, Calif. kaçisini bloke etmek için tasarlanmis MET ve VEGF yolaklarinin güçlü bir çifte inhibitörü olan herhangi bir bilesigi Ifade etmektedir. MET, yalnizca tümör hücrelerinde ve endotelyal hücrelerde degil, ayni zamanda osteoblastlarda (kemik yapici hücreler) ve osteoklastlarda (kemik çikarici hücreler) eksprese edilmektedir. HGF, tüm bu hücre tiplerinde MET'e baglanarak MET yolagina multipl otokrin ve parakrin döngülerinde önemli bir rol saglamaktadir. MET'in tümör hücrelerinde aktivasyonu, metastatik kemik lezyonlarinin yerlesiminde önemli gözükmektedir. Ayni zamanda MET yolaginin osteoblastlarda ve osteoklastlarda aktivasyonu, anormal kemik büyümesi (yani blastik lezyonlar) veya yikimi (yani litik lezyon) dahil kemik metastazlarinin patolojik özelliklerine yol açabilmektedir. Bu nedenle MET yolaginin hedeflenmesi, metastatik kemik lezyonlarinin yerlesimini ve ilerlemesini önlemede geçerli bir strateji olabilmektedir. Önceden XL olarak bilinen Cabozantinib (Exelixis, Inc), MET'e bagli tümör kaçisini bloke etmek için tasarlanmis MET ve VEGF yolaklarinin güçlü bir çifte inhibitörüdür. Çok sayida ön klinik çalismada cabozantinib'in tümör hücrelerini öldürdügü, metastazi azalttigi ve anjiyogenezi (tümör büyümesini desteklemek için gereken yeni kan damarlarinin olusumu) inhibe ettigi gösterilmistir. Diger uygun çifte inhibitörler E7050 (N-[2-Floro-4- ({2-[4-(4-metilpiperazin-1-iI)piperidin-1-il] karbonilaminopiridin-4-iI} oksi) fenil]- bilinmektedir) seklindedir.

Burada kullanildigi haliyle "RANKL inhibitörleri”, RANK aktivitesini azaltabilen herhangi bir bilesigi ifade etmektedir. RANKL, stroma ve T-lenfosit hücrelerinin osteoblast membraninin yüzeyinde bulunmaktadir ve bu T-Ienfosit hücreleri, bunun salgilanmasina yönelik kapasite gösteren tek hücrelerdir. Bunun temel fonksiyonu, kemik rezorpsiyonuna katilan hücreler olan osteoklastlarin aktivasyonudur. RANKL inhibitörleri, RANKL'nin kendi reseptörüne (RANK) baglanmasini bloke ederek, RANK aracili sinyallemeyi bloke ederek veya RANKL'nin transkripsiyonu veya translasyonunu bloke ederek RANKL'nin ekspresyonunu azaltarak etki edebilmektedir. Mevcut belgede kullanima uygun olan RANKL antagonistleri veya inhibitörleri, sinirlama olmaksizin asagidakileri içermektedir: o RANKL'yi baglayabilen ve bir RANK proteininin ekstrasülüler domeninin tamamini veya bir fragmanini içeren uygun bir RANK proteini. Çözünür RANK, murin veya insan RANK polipeptidlerinin sinyal peptidini ve ekstrasülüler domenini içerebilmektedir veya alternatif olarak sinyal peptidi çikarilmis olan proteininin olgunlasmis formu kullanilabilmektedir. o Osteoprotegerin veya bunun RANKL baglama kapasitesi olan bir varyanti. o RANKL-spesifik antisens moleküller o RANKL'nin transkribe ürünlerini isleyebilen ribozimler o Spesifik anti-RANKL antikorlari. "Anti-RANKL antikoru veya RANKL'ye karsi yönlendirilmis antikor” burada bir veya daha fazla RANKL fonksiyonunu inhibe eden nükleer faktör KB'ye (RANKL) yönelik aktive edici reseptörün Iigandina spesifik olarak baglanabilen bütün antikorlar olarak anlasilmaktadir. Antikorlar, teknikte uzman kisi tarafindan bilinen yöntemlerden herhangi biri kullanilarak hazirlanabilmektedir. Bu nedenle poliklonal antikorlar, bir hayvana inhibe edilecek proteinle bagisiklik kazandirilmasi yoluyla hazirlanmaktadir. Monoklonal antikorlar, Kohler, yöntem kullanilarak hazirlanmaktadir. Mevcut belge baglaminda uygun olan antikorlar arasinda, bir degisken antijen baglama bölgesini ve sabit bir bölgeyi içeren dokunulmamis antikorlar, "Fab", "F(ab')2" ve "Fab'", Fv, scFv fragmanlari, diabody'ler ve bispesifik antikorlar yer almaktadir. o Spesifik anti-RANKL nanobody'leri. Nanobody'ler, dogal olusumlu agir zincirli antikorlarin benzersiz yapisal ve fonksiyonel özelliklerini içeren antikor türevli terapötik proteinlerdir. Nanobody teknolojisi aslen devegillerin (develer ve lamalar) hafif zincirlerden yoksun olan tam fonksiyonel antikorlara sahip oldugu kesfini takiben gelistirilmistir.

Nanobody'lerin genel yapisi FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4 seklindedir, burada FR1 ila FR4, çerçeve bölgeleri 1 ila 4'tür, CDRl ila CDR3, komplementarite belirleyici bölgeler 1 ila 3'tür. Bu agir zincirli antikorlar, bir tek degisken domen (VHH) ve iki sabit domen (CH2 ve CH3) içermektedir. Önemli bir sekilde klonlanmis ve izole edilmis VHH domeni, orijinal agir zincirli antikorun tam antijen baglama kapasitesini barindiran mükemmel kararli bir polipeptiddir. Benzersiz yapisal ve fonksiyonel özellikleri olan bu yeni kesfedilmis VHH domenleri, Ablynx'in Nanobody'ler olarak adlandirdigi yeni nesil terapötik antikorlarin temelini olusturmaktadir.

Bir yönde RANKL inhibitörü, bir RANKL spesifik antikoru, bir RANKL spesifik nanobody ve osteoprotegerinden olusan gruptan seçilmektedir. Spesifik bir yönde anti-RANKL antikoru bir monoklonal antikordur. Yine daha spesifik bir yönde anti-RANKL antikoru 615258-40-7). Denosumab, RANKL'ye baglanan ve bunun aktivasyonunu önleyen (RANK reseptörüne baglanmamaktadir) tamamen insan monoklonal antikordur. patentlerinde açiklanmaktadir. Bir baska yönde RANKL inhibitörü, Denosumab ile ayni epitopu baglayan bir antikor, antikor fragmani veya füzyon yapisidir. nanobody'lerden herhangi biridir. Yine daha çok tercih edilen bir yönde anti-RANKL antikoru ALX-0141'dir (Ablynx). ALX-0141, menopoz sonrasi osteoporoz, romatoid artrit, kanser ve belirli ilaçlarla iliskilendirilmis kemik kaybini inhibe etmek ve saglikli kemik metabolizmasi dengesini yeniden saglamak üzere tasarlanmistir.

Tercih edilen bir yönde kemik yikimini önleyen ajan, bir bifosfonat, bir RANKL inhibitörü, PTH ve PTHLH inhibitörü veya bir PRG analogu, stronsiyum ranelat, bir DKK- 1 inhibitörü, bir çift MET ve VEGFR2 inhibitörü, bir östrojen reseptörü modülatörü, Radyum-223 kalsitonin ve bir katepsin K inhibitöründen olusan gruptan seçilmektedir.

Daha çok tercih edilen bir yönde, kemik yikimini önleyen ajan bir bifosfonattir. Yine daha çok tercih edilen bir yönde bifosfonat, zoledronik asittir.

Bir yönde bir CCR5 antagonisti, primer meme kanseri tümörünün kemige metastazini önlemek veya inhibe etmek üzere uygulanmaktadir. Bir yönde CCR5 antagonisti, büyük bir moleküldür. Bir baska yönde CCR5 antagonisti, küçük bir moleküldür. Bazi yönlerde CCR5 antagonisti, Maraviroc'tur (Velasco-Velâquez, M. ve ark. 2012. CCR5 Antagonist yönlerde CCR5 antagonisti, Vicriviroc'tur. Velasco-Velâquez, M. ve ark. 2012. CCR5 Antagonist Blocks Metastasis of Basal Breast Cancer Cells. Cancer Research. 72:3839- 3850.). Bazi yönlerde CCR5 antagonisti, Aplaviroc'tur (Demarest J.F. ve ark. 2005.

Update on Aplaviroc: An HIV Entry Inhibitor Targeting CCR5. Retrovirology 2(Suppl. 1): 513). Bazi yönlerde CCR5 antagonisti, bir spiropiperidin CCR5 antagonistidir. (Rotstein D.M. ve ark. 2009. Spiropiperidine CCR5 antagonists. Bioorganic & Medicinal Chemistry (Kuritzkes, D.R. : 82-7).

Tercih edilen bir yönde çifte MET ve VEGFR2 inhibitörü, Cabozantinib, Foretinib ve E7050'den olusan gruptan seçilmektedir.

Tercih edilen bir yönde Radyum 223 terapisi, alfaradin'dir.

Alternatif olarak yukarida bahsedilenler arasindan birden fazla ajanin metastazi tedavi etmek ve/veya önlemek üzere kombine edildigi veya söz konusu ajanlarin kalsiyum veya D vitamini gibi diger takviyeler ile veya bir hormon tedavisi ile kombine edilebildigi kombine bir tedavi gerçeklestirilebilmektedir.

MAF geni amplifikasvonunun tespit edilmesine bagli olarak HER2+ meme kanserinde metastazin prognozuna vönelik vöntem Bir baska yönünde mevcut bulus, söz konusu kanserden muzdarip olan bir denekte HER2+ meme kanseri kemik metastazi riskinin tahmin edilmesine yönelik bir in vitro yöntem (asagida mevcut bulusun altinci yöntemi olarak anilmaktadir) ile ilgilidir, yöntem bir referans degere göre söz konusu denege ait bir HER2+ meme kanseri numunesinde MAF geninin amplifikasyonunun ve kopya sayisinin belirlenmesini içermektedir, burada söz konusu referans degere göre MAF geninin artan kopya sayisi veya amplifikasyon derecesi artan kemik metastazi gelistirme riskinin göstergesidir.

Bazi yapilandirmalarda amplifikasyon, 16q23 Iokusundaki bölgededir. Bazi 79,663,806 bp (sentromerden telomere kadar) arasindaki kromozomal bölgenin herhangi bir kismindadir. Bazi yapilandirmalarda amplifikasyon, DNA tekrar elemanlari bölgededir. Bazi yapilandirmalarda amplifikasyon, bu bölge için spesifik bir prob kullanilarak ölçülmektedir.

Belirli bir yapilandirmada MAF geninin amplifikasyon derecesi, söz konusu geni içeren bir kromozom bölgesinin amplifikasyonunun belirlenmesi araciligiyla belirlenebilmektedir. Tercihen, amplifikasyonu MAF geninin amplifikasyonunun varliginin göstergesi olan kromozom bölgesi MAF genini içeren 16q22-q24 lokusudur. ile bant 24 arasinda bir aralikta bulunmaktadir. Bu bölge, NCBI veri tabaninda bir yapilandirmada MAF geninin amplifikasyon derecesi, söz konusu gene spesifik olan bir prob kullanilmasi araciligiyla belirlenebilmektedir. Bir baska tercih edilen yapilandirmada MAF geninin amplihkasyonu, 14q32 ve 16q23'e karsi bir probu içeren Vysis LSI IGH/MAF Çift Renkli çifte füzyon probu kullanilarak belirlenmektedir.

Mevcut bulusun altinci yöntemi, birinci adimda, bir denege ait bir numunede MAF geninin amplifiye olup olmadiginin belirlenmesini içermektedir. Tercih edilen bir yapilandirmada numune, bir tümör dokusu numunesidir. Bu amaçla tümör numunesinde MAF geninin amplifikasyonu, bir kontrol numunesi ile karsilastirilmaktadir.

Belirli bir yapilandirmada HER2+ meme kanseri olan bir denekte kemik metastazi gelistirme egiliminin prognozuna yönelik mevcut bulusun altinci yöntemi, söz konusu denege ait bir numunede MAF geni kopya sayisinin belirlenmesini ve söz konusu kopya sayisinin bir kontrol veya referans numunesinin kopya sayisi ile karsilastirilmasini içermektedir, burada eger MAF kopya sayisi, bir kontrol numunesinin MAF kopya sayisina göre daha fazla ise, denegin daha büyük bir kemik metastazi gelistirme egilimi Kontrol numunesi, metastazdan muzdarip olmayan HER2+ meme kanseri olan bir denege ait bir numuneyi veya sirasiyla metastazdan muzdarip olmayan HER2+ meme kanseri olan deneklerin biyopsi numunelerinde bir tümör dokusu koleksiyonunda ölçülen MAF geni ekspresyon seviyelerinin meydan degerine karsilik gelen bir numuneyi ifade etmektedir. Söz konusu referans numunesi tipik olarak bir denek popülasyonundan alinan numunelerin esit miktarlari kombine edilerek elde edilmektedir. Eger MAF geni kopya sayisi, kontrol numunesinde söz konusu genin kopya sayisina göre artmissa, denegin daha büyük bir metastaz gelistirme egilimi Tercih edilen bir yapilandirmada MAF geni kopya sayisi, bir referans numunesinin veya kontrol numunesinin sahip oldugu kopya sayisindan daha yüksek oldugu zaman, MAF geni bir referans gen kopya sayisina göre amplifiye olmus olmaktadir. Bir örnekte MAF geninin genomik kopya sayisi bir kontrol numunesine göre bir test numunesinde en az yaklasik 2 (örn. yaklasik 6 kopya), yaklasik 3 (örn. yaklasik 8 kopya), yaklasik 4, 50 kat artmissa MAF geninin "amplifiye oldugu” söylenmektedir. Bir baska örnekte hücre basina MAF geninin genomik kopya sayisi en az yaklasik 3, yaklasik 4, yaklasik 5, yaklasik 27, yaklasik 28, yaklasik 29, yaklasik 30 ve benzeri ise MAF geninin “amplifiye oldugu” söylenmektedir.

Belirli bir yapilandirmada amplifikasyon veya kopya sayisi, 177 situ hibridizasyon veya PCR araciligiyla belirlenmektedir.

MAF geninin veya 16q22-q24 kromozom bölgesinin amplifiye olup olmadiginin belirlenmesine yönelik yöntemler teknigin bilinen durumunda yaygin olarak bilinmektedir. Söz konusu yöntemler arasinda, sinirlama olmaksizin /n situ hibridizasyon (ISH) (örnegin floresan in s/tu hibridizasyon (FISH), kromajenik /n sin/hibridizasyon (CISH) veya gümüs in si'tuhibridizasyon (SISH)), genomik karsilastirmali hibridizasyon veya polimeraz zinciri reaksiyonu (örnegin gerçek zamanli kantitatif PCR) yer almaktadir. Herhangi bir ISH yöntemine yönelik olarak amplifikasyon veya kopya sayisi, kromozomlardaki veya çekirdekteki floresan noktalarinin, renkli noktalarin veya gümüslü noktalarin sayisi sayilarak belirlenebilmektedir.

Floresan in situ hibridizasyonu (FISH), kromozomlarda spesifik DNA sekanslarinin varligi veya yoklugunun tespit edilmesine veya saptanmasina yönelik kullanilan bir sitogenetik tekniktir. FISH, yalnizca yüksek derecede sekans benzerligi gösterdikleri belirli kromozom parçalarina baglanan floresan problari kullanmaktadir. Tipik bir FISH yönteminde DNA probu, çentik (nick) translasyonu veya PCR gibi enzimatik reaksiyonlari kullanarak DNA'ya dahil edilen genellikle flor-dUTP, digoksijenin-dUTP, biotin-dUTP veya hapten-dUTP formunda olan bir hapten veya floresan molekülüyle etiketlenmektedir. Genetik malzemeyi (kromozomlar) içeren numune, cam Iamlarin üzerine yerlestirilmektedir ve bir formamid islemi ile denatüre hale getirilmektedir.

Etiketlenmis prob akabinde teknikte uzman kisi tarafindan belirlenecek uygun kosullar altinda genetik malzemeyi içeren numune ile hibridize edilmektedir. Hibridizasyondan sonra numune ya dogrudan (florin ile etiketlenen bir prob durumunda) ya da dolayli olarak (hapteni tespit etmek üzere floresanla etiketlenen antikorlar kullanilarak) görüntülenmektedir.

CISH durumunda prob, digoksigenin, biyotin veya floresin ile etiketlenmektedir ve uygun kosullar altinda genetik malzemeyi içeren numune ile hibridize edillmektedir.

Bir DNA'ya baglanabilen herhangi bir isaretleme veya etiketleme molekülü, mevcut bulusun dördüncü yönteminde kullanilan problari etiketlemek Üzere kullanilabilmektedir, böylece nükleik asit moleküllerinin tespitine olanak saglamaktadir.

Etiketlemeye yönelik etiketlerin örnekleri arasinda, bunlarla sinirli olmamakla birlikte radyoaktif izotoplar, enzim substratlar, kofaktörler, ligandlar, kemiluminesans ajanlar, floroforlar, haptenler, enzimler ve bunlarin kombinasyonlari yer almaktadir.

Etiketlemeye yönelik yöntemler ve farkli amaçlar için uygun olan etiketlerin seçilmesine yönelik kilavuz, örnegin Sambrook ve arkadaslari (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York, 1989) and Ausubel ve ark. (Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, New York, 1998) kaynaginda bulunabilmektedir.

Dogrudan MAF geninin amplifikasyonu, 16q23 Iokusunun amplifikasyonu belirlenerek veya 16q22-q24 Iokusunun amplifikasyonu belirlenerek amplifikasyonun varligi belirlendiginde ve kontrol numunesinde söz konusu genin amplifikasyonu ile karsilastirildiginda, eger MAF geninde amplifikasyonun tespit edilmisse, bu, denegin daha büyük bir kemik metastazi gelistirme egilimi oldugunun göstergesidir.

MAF geninin amplifikasyon belirlenmesinin, metastazdan muzdarip olmayan HER2+ meme kanseri olan bir denege ait bir numunede ölçülen MAF geninin amplifikasyon seviyesine karsilik gelen veya metastazdan muzdarip olmayan HER2+ meme kanseri olan deneklerin biyopsi numunelerinde bir tümör dokusu koleksiyonunda ölçülen MAF geninin amplifikasyonunun medyan degerine karsilik gelen, bir kontrol numunesinin veya referans numunesinin degerleri ile iliskilendirilmesi gerekmektedir. Söz konusu referans numunesi tipik olarak bir denek popülasyonundan alinan numunelerin esit miktarlari kombine edilerek elde edilmektedir. Genel olarak tipik referans numuneleri, klinik olarak iyi belgelenmis ve metastaz olmadigi iyi karakterize edilmis deneklerden elde edilecektir. Referans seviyesinin elde edildigi numune koleksiyonu, tercihen çalisma konusu hasta ile ayni kanser türünden muzdarip olan deneklerden olusacaktir.

Bu medyan deger olusturuldugunda hastalarin tümör dokularindaki c-MAF'nin amplifikasyon seviyesi, bu medyan deger ile karsilastirilabilmektedîr ve böylece eger amplifikasyon varsa, denegin daha büyük bir metastaz gelistirme egilimi vardir.

Tercih edilen bir yapilandirmada kemik metastazi, osteolitik kemik metastazidir. Burada kullanildigi haliyle, “osteolitik kemik metastazi" ifadesi, kemik rezorpsiyonunun (kemik yogunlugunun progresif kaybi) tümör hücreleri tarafindan osteoklast aktivitesinin stimülasyonundan kaynaklanan metastazin yakininda olustugu ve siddetli agri, patolojik fraktürler, hiperkalsemi, omurilik sikismasi ve sinir sikismasi kaynakli diger sendromlar ile karakterize edilen bir metastaz türüdür.

MAF geni translokasvonunun tespit edilmesine bagli olarak HER2+ meme kanserinde metastazin grognozuna yönelik yöntem Bir baska yönünde mevcut belge, HER2+ meme kanserinden muzdarip olan bir hastanin klinik sonucunun tahmin edilmesine yönelik bir in vitro yöntem ile ilgili olup, yöntem söz konusu denege ait bir numunede MAF geninin transloke olup olmadiginin belirlenmesini içermektedir, burada MAF geninin translokasyonu kötü klinik sonucunun göstergesidir.

Bir baska yönünde mevcut belge, HER2+ meme kanserinden muzdarip olan bir hastanin klinik sonucunun tahmin edilmesine yönelik bir in vitro yöntem ile ilgili olup, yöntem söz konusu denege ait bir numunede MAF geninin transloke olup olmadiginin belirlenmesini içermektedir, burada MAF geninin translokasyonu kötü klinik sonucunun göstergesidir.

Bazi yönlerde transloke olmus gen, 16q23 Iokusundaki bölgedendir. Bazi yönlerde (sentromerden telomere kadar) arasindaki kromozomal bölgenin herhangi bir kismindadir. Bazi yönlerde transloke olmus gen, DNA tekrar elemanlari hariç yaklasik yönlerde translokasyon, bu bölge için spesifik bir prob kullanilarak ölçülmektedir.

Belirli bir yönde MAF geninin translokasyonu, söz konusu geni içeren bir kromozom bölgesinin translokasyonunun belirlenmesi araciligiyla belirlenebilmektedir. Bir yönde translokasyon, t(14,16) translokasyonudur. Bir baska yönde transloke olan kromozom kolunda kromozom 16'da ve bant 22 ile bant 24 arasinda bir aralikta bulunmaktadir. Bu gelmektedir. Tercih edilen bir yönde MAF geni, Iokus 14q32'deki kromozom 14'e transloke olarak, translokasyon t(14,16)(q32,q23)'e yol açmaktadir. Bu translokasyon, MAF genini IgH Iokusundaki güçlü arttiricilarin yanina yerlestirmektedir, bu da bazi durumlarda MAF'nin asiri ekspresyonuna yol açmaktadir. (Eychéne, A., Rocques, N., and Puoponnot, C., A new MAFia in cancer. 2008. Nature Reviews: Cancer. 8: 683- 693.) Tercih edilen bir yönde MAF geninin translokasyonu, söz konusu translokasyona spesifik olan bir prob kullanilarak belirlenebilmektedir. Bazi yönlerde translokasyon, iki renkli bir prob kullanilarak ölçülmektedir. Bazi yönlerde translokasyon, bir çifte füzyon probu kullanilarak ölçülmektedir. Bazi yönlerde translokasyon, iki renkli, çifte füzyon probu kullanilarak ölçülmektedir. Bazi yönlerde translokasyon, iki ayri prob kullanilarak ölçülmektedir.

Bir baska tercih edilen yönde MAF geninin translokasyonu, 14q32 ve 16q23'e karsi bir prob içeren Vysis LSI IGH/MAF Iki Renkli, çifte füzyon probu (http://www.abbottmolecular.com/us/pr0ducts/analyte-specific-reagent/fish/vysis-lsi- igh-maf-duaI-coIor-dual-fusion-probe.html; son erisim tarihi 5/11/2012) kullanilarak belirlenmektedir. Bir baska tercih edilen yönde MAF geninin translokasyonu, Kreatech diagnostics MAF/IGH gt(14; 16) Füzyon probu (http://www.kreatech.c0m/products/repeat-freetm-poseidontm-fîsh- Abnova MAF FISH probu (http://www.abn0va.c0m/products/products_detail.asp?CataIog_id=FA0375; son erisim tarihi 5/11/2012), Cancer Genetics Italia IGH/MAF Iki Renkli, Iki Füzyon translokasyon probu (http://www.cancergeneticsitalia.com/dna-fish-probe/ighmaf/; son erisim tarihi FISH probu (http://www.creative-bioarray.com/products.asp?cid=35&page=10; son erisim tarihi /11/2012), FISH ile bir Arup Laboratories multipl miyelom paneli (http://www.aruplab.c0m/files/technical- http://www.genomics.agilent.c0m/ProductSearch.aspx?Pageid=3000&Pr0ductID=637; ou ntry; son erisim tarihi 5/11/2012), bir Cytocell IGH/MAF Translokasyon, Çifte Füzyon Probu (http://www.zentech.be/uploads/docs/products_info/prenatalogy/cytocelI%202012- international.com/index.php?opti0n=c0m_joodb&view=article&j00base=5&id=12%3Ad 100pl, IGH /MAFB (https://www.micro- Genycell Biotech IGH/MAF Çift Füzyon Probu (http://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=1&ved=0CCQQ FjAA&urI=http°/o3A°/02F%2Fwww.genycell.es%2Fimages%2Fpr0ductos%2Fbr0chures QGjJbi9riEf31VgoFTFQ&sigZ=V5158juEMVHBl8Mv2Xx_Ww; son erisim tarihi /11/2012) kullanilarak belirlenmektedir.

Bazi yönlerde prob üzerindeki etiket florofordur. Bazi yönlerde prob üzerindeki florofor turuncudur. Bazi yönlerde prob üzerindeki florofor yesildir. Bazi yönlerde prob üzerindeki florofor kirmizidir. Bazi durumlarda prob üzerindeki florofor saridir. Bazi yönlerde bir prob, bir kirmizi floroforla ve bir prob bir yesil floroforla etiketlenmektedir.

Bazi yönlerde bir prob, bir yesil floroforla ve bir prob bir turuncu floroforla etiketlenmektedir. Bazi durumlarda prob üzerindeki florofor saridir. Örnegin MAF spesifik prob bir kirmizi floroforla ve IGH spesifik prob bir yesil floroforla etiketlenmektedir; beyaz görülürse sinyallerin örtüstügüne ve translokasyonun gerçeklestigine isaret etmektedir.

Bazi yönlerde florofor SpectrumOrange'dir. Bazi yönlerde florofor SpectrumGreen'dir.

Bazi yönlerde florofor DAPI'dir. Bazi yönlerde florofor PlatinumBright405'tir. Bazi yönlerde florofor PIatinumBright415'tir. Bazi yönlerde florofor PIatinumBright495'tir.

Bazi yönlerde florofor PlatinumBrightSOS'tir. Bazi yönlerde florofor PlatinumBrightSSO'dir. Bazi yönlerde florofor PlatinumBright547'dir. Bazi yönlerde florofor PlatinumBright570'tir. Bazi yönlerde florofor PlatinumBright590'dir. Bazi yönlerde florofor PIatinumBright647'dir. Bazi yönlerde florofor yönlerde florofor DAPI/PlatinumBright495/550'dir. Bazi yönlerde florofor FITC'dir. Bazi yönlerde florofor Texas Red'dir. Bazi yönlerde florofor DEAC'tir. Bazi yönlerde florofor R6G'dir. Bazi yönlerde florofor Cy5'tir. Bazi yönlerde florofor FITC, Texas Red ve DAPI'dir. Bazi yönlerde bir DAPI karsi boyamasi, translokasyonu, amplifikasyonu veya kopya sayisi degisikligini görsellestirmek için kullanilmaktadir.

Mevcut belgenin bir yönü, birinci adimda MAF geninin bir denege ait bir numunede transloke olup olmadiginin belirlendigi bir yöntemi içermektedir. Tercih edilen bir yönde numune, bir tümör dokusu numunesidir.

Belirli bir yönde HER2+ meme kanseri olan bir denekte kemik metastazi gelistirme egiliminin prognozuna yönelik mevcut belgenin bir yöntemi, MAF geninin transloke oldugu söz konusu denege ait bir numunede MAF geni kopya sayisinin belirlenmesini ve söz konusu kopya sayisinin bir kontrol veya referans numunesinin kopya sayisi ile karsilastirilmasini içermektedir, burada eger MAF kopya sayisi, bir kontrol numunesinin MAF kopya sayisina göre daha fazla ise, denegin daha büyük bir kemik metastazi gelistirme egilimi vardir.

MAF geninin veya 16q22-q24 kromozom bölgesinin transloke olup olmadiginin belirlenmesine yönelik yöntemler teknigin bilinen durumunda yaygin olarak bilinmektedir ve MAF'nin amplifikasyonuna yönelik daha önce açiklanan yöntemleri içermektedir. Söz konusu yöntemler arasinda, sinirlama olmaksizin in situ hibridizasyon (ISH) (örnegin floresan in s/tuhibridizasyon (FISH), kromajenik in s/tuhibridizasyon (CISH) veya gümüs in sin/hibridizasyon (SISH)), genomik karsilastirmali hibridizasyon veya polimeraz zinciri reaksiyonu (örnegin gerçek zamanli kantitatif PCR) yer almaktadir. Herhangi bir ISH yöntemine yönelik olarak amplifikasyon, kopya sayisi veya translokasyon kromozomlardaki veya çekirdekteki floresan noktalarinin, renkli noktalarin veya gümüslü noktalarin sayisi sayilarak belirlenebilmektedir. Diger yönlerde, kopya sayisi degisikliklerinin ve translokasyonlarin saptanmasi, tam genom sekanslama, ekzom sekanslama yoluyla veya herhangi bir PCR türevli teknolojinin kullanilmasiyla saptanabilmektedir. Örnegin PCR, translokasyonun saptanmasi için genomik DNA'nin numunelerinde gerçeklestirilebilmektedir. Bir yönde kantitatif PCR kullanilmaktadir. Bir yönde PCR, MAF genine spesifik olan bir primerle ve IGH promotör bölgesine spesifik bir primerle gerçeklestirilmektedir; eger bir ürün üretilmisse, translokasyon meydana gelmistir.

Bazi yönlerde MAF geninin amplifikasyonu ve kopya sayisi, MAF geninin translokasyonu belirlendikten sonra belirlenmektedir. Bazi yönlerde prob, hücrenin MAF geni için poliploid olup olmadigini belirlemek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde poliploidin belirlenmesi, ilgili genden 2 sinyalden fazlasinin olup olmadiginin belirlenmesiyle yapilmaktadir. Bazi yönlerde poliploid ilgili gene spesifik olan probdan sinyalin ölçülmesiyle ve bunun bir sentromerik probla veya farkli bir probla karsilastirilmasiyla belirlenmektedir.

MAF geni amplifikasvonunun tespit edilmesine bagli olarak HER2+ meme kanserinde klinik sonucun prognozuna yönelik yöntem Bir baska yönünde mevcut bulus, HER2+ meme kanserinden muzdarip olan bir hastanin klinik sonucunun tahmin edilmesine yönelik bir in vitro yöntem (asagida mevcut bulusun yedinci yöntemi olarak anilmaktadir) ile ilgili olup, yöntem bir referans degere göre söz konusu denege ait bir HER2+ meme kanseri numunesinde MAF geninin amplifikasyonunun ve kopya sayisinin belirlenmesini içermektedir, burada söz konusu referans degere göre MAF geninin artan kopya sayisi veya amplifikasyon derecesi kötü bir klinik sonucun göstergesidir.

Mevcut bulusun yedinci yöntemi, birinci adimda, bir denege ait bir numunede MAF geninin amplifiye olup olmadiginin belirlenmesini içermektedir. MAF'nin amplifikasyonunun belirlenmesi, esasen mevcut bulusun besinci yönteminde açiklandigi gibi yürütülmektedir. Tercih edilen bir yapilandirmada numune, bir tümör dokusu numunesidir. Tercih edilen bir yapilandirmada MAF geninin amplifikasyonu, 16q23 veya 16q22-q24 lokusunun amplifikasyonunun belirlenmesi yoluyla belirlenmektedir. Bir baska tercih edilen yapilandirmada MAF geninin amplifikasyonu, bir MAF genine spesifik probun kullanilmasiyla belirlenmektedir.

Ikinci adimda mevcut bulusun yedinci yöntemi, söz konusu kopya sayisinin, bir kontrol veya referans numunesinin kopya sayisiyla karsilastirilmasini içermektedir, burada MAF kopya sayisi bir kontrol numunesinin MAF kopya sayisina göre daha büyükse, bu durum kötü bir klinik sonucun göstergesidir.

Tercih edilen bir yapilandirmada MAF geni kopya sayisi, bir referans numunesinin veya kontrol numunesinin sahip oldugu kopya sayisindan daha yüksek oldugu zaman, MAF geni bir referans gen kopya sayisina göre amplifiye olmus olmaktadir. Bir örnekte MAF geninin genomik kopya sayisi bir kontrol numunesine göre bir test numunesinde en az yaklasik 2 (örn. yaklasik 6 kopya), yaklasik 3 (örn. yaklasik 8 kopya), yaklasik 4, 50 kat artmissa MAF geninin “amplifiye oldugu" söylenmektedir. Bir baska örnekte hücre basina MAF geninin genomik kopya sayisi en az yaklasik 3, yaklasik 4, yaklasik 5, yaklasik 27, yaklasik 28, yaklasik 29, yaklasik 30 ve benzeri ise MAF geninin “amplifiye oldugu” söylenmektedir.

Bir baska yapilandirmada referans gen kopya sayisi, kemik metastazindan muzdarip olmayan bir denekten alinan, HER2+ meme kanserli bir numunede gen kopya sayisidir.

Bir baska yapilandirmada amplifikasyon, in situ hibridizasyon veya PCR araciligiyla belirlenmektedir.

HER2+ meme tümörleri olan hastalarda özellgtirilmig teraninin tasarlanmasina vörielik yöntem Teknigin bilinen durumunda bilindigi üzere kanserden muzdarip olan bir denege uygulanacak tedavi, kanserin maling tümör olup olmadigina, diger bir ifadeyle metastaz yapma ihtimalinin yüksek olup olmadigina ya da kanserin benign tümör olup olmadigina bagli olmaktadir. Birinci varsayimda seçilen tedavi, kemoterapi gibi sistemik bir tedavidir ve ikinci varsayimda seçilen tedavi, radyoterapi gibi bölgesel bir tedavidir.

Bu nedenle mevcut belgede açiklandigi üzere HER2+ meme kanseri hücrelerinde MAF geni amplifikasyonunun veya translokasyonunun kemik metastazi varligi ile ilgili oldugu göz önünde bulunduruldugunda, MAF geni amplifikasyonu veya translokasyonu, söz konusu kanserden muzdarip olan denek için en uygun terapi açisindan karar alinmasina olanak saglamaktadir. Tercih edilen bir yapilandirmada MAF geninin ampliûkasyonu, belirlenmektedir. Bir baska tercih edilen yapilandirmada MAF geninin amplifikasyonu, bir MAF genine spesifik probun kullanilmasiyla belirlenmektedir.

Bu nedenle bir baska yönünde mevcut bulus, HER2+ meme kanserinden muzdarip olan bir denek için özellestirilmis bir terapi tasarlanmasina yönelik bir in vitro yöntem (bundan böyle mevcut bulusun sekizinci yöntemi olacak anilacaktir) ile ilgili olup, bu yöntem asagidakileri içermektedir: i) söz konusu denege ait bir HER2+ meme kanseri numunesinde MAF geni amplifikasyonunun veya kopya sayisinin ölçülmesi ve ii) i)'de elde edilen gen amplifikasyonunun veya kopya sayisinin bir referans degerle karsilastirilmasi, burada eger kopya sayisi veya amplifikasyon derecesi söz konusu referans degere göre artmissa, söz konusu denek kemik metastazini önlemeyi ve/veya tedavi etmeyi amaçlayan bir terapi ve/veya kemik yikiminin önüne geçmeyi ve/veya bunu önlemeyi amaçlayan bir terapi almaya yatkindir, burada eger kopya sayisi veya amplifikasyon derecesi söz konusu referans degere göre artmamissa, söz konusu denek kemik metastazini önlemeyi ve/veya tedavi etmeyi amaçlayan bir terapi ve/veya kemik yikiminin önüne geçmeyi ve/veya bunu önlemeyi amaçlayan bir terapi almaya yatkin degildir. lokusunun amplifikasyonunun belirlenmesi yoluyla belirlenmektedir. Bir baska tercih edilen yapilandirmada MAF geninin amplifikasyonu, bir MAF genine spesifik probun kullanilmasiyla belirlenmektedir.

Belirli bir yapilandirmada kemik metastazi, osteolitik metastazdir.

Mevcut bulusun bir baska yöntemi, HER2+ meme kanserinden muzdarip bir denekte HER2+ meme kanseri numunesinde MAF geni amplifikasyonunun ölçülmesini içermektedir. Tercih edilen bir yapilandirmada numune, bir tümör dokusu numunesidir.

Bir baska belirli yapilandirmada mevcut bulusun yöntemi, tek bir marker olarak sadece MAF geni amplifikasyonunun ölçülmesini içermektedir, diger bir ifadeyle yöntem, herhangi bir ilave markerin ekspresyon seviyesinin belirlenmesini içermemektedir.

Mevcut bulusun bu belirli yöntemi durumunda numune, denege ait bir HER2+ meme kanseri numunesidir.

Ikinci adimda denege ait tümör numunesinde elde edilen MAF geni amplifikasyonu, bir referans degeri ile karsilastirilmaktadir. Tercih edilen bir yapilandirmada referans degeri, bir kontrol numunesinde söz konusu genin MAF geni amplifikasyonudur. MAF geninin belirlenmesinin, bir kontrol numunesi veya referans numunesinin degerleri ile iliskili olmasi gerekmektedir. Analiz edilecek tümörün türüne bagli olarak kontrol numunesinin tam yapisi degisiklik gösterebilmektedir. Bu nedenle tercihen referans numunesi, metastaz yapmamis olan HER2+ meme kanseri olan bir denege ait bir numune veya metastaz yapmamis olan HER2+ meme kanseri olan deneklerin biyopsi numunelerinde bir tümör dokusu koleksiyonunda ölçülen MAF genine karsilik gelen numunedir.

Numunedeki MAF geni amplifikasyonu ölçülüp referans degeri ile karsilastirildiktan sonra, eger söz konusu genin amplifikasyonu, referans degerine göre artmissa, söz konusu denegin metastazi önlemeyi (eger denek henüz metastaz yasamamissa) ve/veya tedavi etmeyi veya metastazi önlememeyi ve/veya tedavi etmemeyi (eger denek halihazirda metastaz yasamissa) amaçlayan bir terapi almaya veya terapi almamaya yatkin oldugu sonucuna varilabilmektedir.

Kanser metastaz yaptiginda, bunlarla sinirli olmamak üzere kemoterapi, hormon tedavisi, Immünoterapi veya bunlarin bir kombinasyonunu içeren sistemik tedaviler kullanilabilmektedir. Ek olarak radyoterapi ve/veya ameliyat kullanilabilmektedir.

Tedavinin seçimi genel olarak primer kanser türüne, boyutuna, metastazin konumuna, hastanin yasina, genel sagligina ve daha önceden kullanilan tedavi türlerine baglidir.

Sistemik tedaviler, tüm vücuda ulasan tedavilerdir ve metastazi önlemeyi (eger denek henüz metastaz yasamamissa) ve/veya tedavi etmeyi (eger denek halihazirda metastaz yasamissa) amaçlayan terapileri temsil etmektedir, mesela: . Kemoterapi, kanser hücrelerini imha etmek için ilaç kullanilmasidir. Ilaçlar genel olarak oral veya intravenöz yolla uygulanmaktadir. Bazi durumlarda kemoterapi, radyasyon tedavisi ile birlikte kullanilmaktadir. Meme kanseri için uygun kemoterapötik tedaviler arasinda sinirlama olmaksizin antrasiklinler (doksorubisin, epirubisin, pegile liposomal doksorubisin), Taksanlar (paklitaksel, dosetaksel, albumin nano-parçacik bagli paklitaksel), 5-flor0ürasil (sürekli infüzyon 5-FU, kapesitabin), Vinka alkaloidler (vinorelbin, vinblastin), Gemsitabin, Platin tuzlari (sisplatin, karboplatin), siklofosfamid, Etoposide ve yukaridakilerin bir veya daha fazlasinin kombinasyonlari, mesela Siklofosfamid/antrasiklin +/- 5-flor0ürasil rejimleri (mesela doksorubisin/ siklofosfamid (AC), epirubisin/siklofosfamid, (EC) siklofosfamid/epirubisin/S- floroürasil (CEF), siklofosfamid/doksorubisin/5-floroürasil (CAF), 5-floroürasil /epirubisin/siklofosfamid (FEC)), siklofosfamid/metotreksat/S-floroürasil (CMF), antrasiklinler/taksanlar (mesela doksorubisin/paklitaksel veya doksorubisin/dosetaksel), DosetakseI/kapesitabin, Gemsitabin/paklitaksel, Taksan/ platin rejimleri (mesela paklitakseI/karboplatin veya dosetaksel/karboplatin) yer almaktadir.

. Immünoterapi, hastanin kanserle mücadele etmesi için kendi bagisiklik sistemine yardim eden bir tedavidir. Hastalarda metastazi tedavi etmek için kullanilan birkaç immünoterapi türü mevcuttur. Bunlar arasinda sitokinler, monoklonal antikorlar ve antitümör asilari yer almakla birlikte bunlarla sinirli degildir.

Bir baska yönde tedavi, Alfaradin (radyum-223 diklorür) seklindedir. Alfaradin, kanser hücrelerini öldürmek için radyum-223 bozulmasindan gelen alfa radyasyonu kullanmaktadir. Radyum-223, kalsiyum taklidi gibi özellikleri sayesinde kemik metastazini dogal olarak kendiliginden hedef almaktadir Alfa radyasyonunun (beta veya gamma radyasyonunu temel alan mevcut radyasyon terapisine kiyasla) 2-10 hücrelik çok kisa bir menzili vardir ve bu nedenle çevredeki saglikli dokulara (özellikle kemik iligine) daha az zarar vermektedir. Kalsiyuma benzer özellikleri olan radyum-223, ileri, kastrasyona dirençli prostat kanseri olan erkeklerin iskeletsel metastazinda görüldügü gibi daha hizli ve anormal kemik büyümesi bölgesi dahil olmak üzere kalsiyumun vücutta kemik olusumu için kullanildigi yerlere çekilmektedir. Radyum-223, enjeksiyondan sonra, kan dolasimiyla anormal kemik büyümesi bölgelerine tasinmaktadir. Bir kanserin vücutta basladigi yer, primer tümör olarak bilinmektedir. Bu hücrelerden bazilari kopabilmekte ve kan dolasimiyla vücudun farkli bir bölümüne tasinabilmektedir. Ardindan kanser hücreleri vücudun bu bölümüne yerleserek yeni bir tümör olusturabilmektedir. Bu durumun ortaya çikmasi, sekonder kanser veya metastaz olarak adlandirilmaktadir. Ileri evre prostat kanseri olan çogu hasta, hastaligin maksimum yükünü kemiklerinde yasamaktadirlar. Radyum-223 ile amaç, bu sekonder kanseri selektif olarak hedef almaktir. Kemiklerin almadigi herhangi bir radyum-223 hizla bagirsaklara yönlendirilip atilmaktadir.

Bir baska yönde tedavi, bir mTor inhibitörüdür. Bazi yönlerde mTor inhibitörü, bir çifte mTor/PI3kinaz inhibitörüdür. Bazi yönlerde mTor inhibitörü, metastazi önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde mTor inhibitörü, asagidakilerden olusan gruptan seçilmektedir: ABIOOQ (sirolimus), rapamisin (sirolimus), Abraxane (paklitaksel), Absorb (everolimus), Afinitor (everolimus), Afinitor with Gleevec, (umirolimus), BioMatrix (umirolimus), BioMatrix flex (umirolimus), CC115, CC223, Combo Bio-engineered Sirolimus Eluting Stent ORBUSNEICH (Sirolimus), Curaxin Endeavor Resolute (zotarolimus), Femara (Ietrozole), Hocena (antrokinonol), INK128, SF, Taltorvic (ridaforolimus), Tarceva (erlotinib), Torisel (temsirolimus), Xience Prime (everolimus), Xience V (everolimus), Zomaxx (zotarolimus), Zortress (everolimus), Zotarolimus LOR, 582602, Sirolimus PNP XL388, Advacan (everolimus), AZD8055, Cypher Select Plus Sirolimus kapli Koroner Stent Sirolimus), Cypher Sirolimus kapli koroner stent (Sirolimus), Ilaç Kapli Balon (Sirolimus), E-Magic Plus (Sirolimus), Emtor (Sirolimus), Esprit (everolimus), Evertor (everolimus), HBF, mTOR Inhibitörü CELLZOME, Nevo Sirolimus kapli Koroner Stent (Sirolimus), nPT-mTOR, Rapacan (Sirolimus), Renacept (Sirolimus), ReZolve (Sirolimus), Rocas (Sirolimus), SF, Sirolimus RANBAXY (Sirolimus), Sirolimus WATSON (Sirolimus) Siropan (Sirolimus), Sirova (Sirolimus), Supralimus (sirolimus), Supralimus-Core (Sirolimus), Tacrolimus WATSON (takrolimus), TAFA93, Temsirolimus ACCORD (temsirolimus), Temsirolimus SANDOZ (temsirolimus), TOP216, Xience Prime (everolimus), Xience V (everolimus). Belirli bir yönde mTor inhibitörü, Afinitor (everolimus)'tür inhibitörü ile kombine edilmektedir. (Bkz. örnegin Baselga, J., ve ark., Everolimus in Postmenopausal Hormone-Receptor Positive Advanced Breast Cancer. 2012. N. Engl. J. tanimlanabilmektedir. (Bkz. örnegin Zhou, H. ve ark. Updates of mTor inhibitors. 2010.

Anticancer Agents Med. Chem. 10(7): 571-81). Bazi yönlerde mTor inhibitörü, hormon reseptörü için pozitif olan bir hastada metastazi tedavi etmek veya önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. (Bkz. örnegin Baselga, J., ve ark., Everolimus in Postmenopausal Hormone-Receptor Positive Advanced Breast Cancer. 2012. N. Engl. J. inhibitörü, ileri meme kanseri olan bir hastada metastazi tedavi etmek veya önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde mTor inhibitörü, ikinci bir tedavi ile kombinasyon halinde kullanilmaktadir. Bazi uygulamalarda ikinci tedavi burada açiklanan herhangi bir tedavidir.

Bir baska yönde tedavi, bir Src kinaz inhibitörüdür. Bazi yönlerde Src inhibitörü, metastazi Önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde Src inhibitörü, asagidakilerden olusan gruptan seçilmektedir: AZD0530 (sarakatinib), Bosulif (bosutinib), ENMD, HETERO (dasatinib), Dasatinib VALEANT (dasatinib), Fontrax (dasatinib), Src Kinaz Inhibitörü KINEX, VX680,(tozasertib Iaktat), XL228 ve SUNK706. Bazi yapilandirmalarda Src kinaz inhibitörü, dasatinibdir. Bir baska yönde Src kinaz inhibitörleri alanda bilinen yöntemlerle tanimlanabilmektedir (Bkz. örneg/h Sen, B. and Johnson, F.M. Regulation sayfa). Bazi yönlerde Src kinaz inhibitörü, SRC'ye yanit veren imza (SRS) için pozitif olan bir hastada metastazi tedavi etmek veya önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde hasta, SRS+ ve ER-'dir. (Bkz. örnegin, Zhang, CH.-F, ve ark. Latent Bone Metastasis in Breast Cancer Tied to Src-Dependent survival signals. olan bir hastada metastazi tedavi etmek veya önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde Src kinaz inhibitörü, ikinci bir tedavi ile kombinasyon halinde kullanilmaktadir. Bazi uygulamalarda ikinci tedavi burada açiklanan herhangi bir tedavidir.

Bir baska yönde tedavi, bir COX-2 inhibitörüdür Bazi yönlerde COX-2 inhibitörü, metastazi önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde COX-2 Inhibitörü, asagidakilerden olusan gruptan seçilmektedir: ABT963, Asetaminofen ER JOHNSON (asetaminofen), Acular X (ketorolak trometamin), BAY1019036 (aspirin), BAY, BCIBUCHOOI (ibuprofen), Capoxigem (aprikoksib), C5502, C5670 (pelubiprofen), Diclofenac HPBCD (diklofenak), Diractin (ketoprofen), GW, Hyanalgese-D (diklofenak), HydrocoDex (asetaminofen, dekstrometorfan, hidrokodon), (asetaminofen, ibuprofen), Impracor (ketoprofen), IP880 (diklofenak), IP940 (indometasin), ISV205 (diklofenak sodyum), JNSOl3 (asetaminofen, tramadol hidroklorür), Ketoprofen TDS (ketoprofen), LTNSOOl (naproksen etemesil), Mesalamine SALIX (mesalamin), Mesalamine SOFAR (mesalamin), Mesalazine (mesalamin), ML3000 (likofelon), MRX7EAT (etodolak), Naproxen IROKO (naproksen), NCX4016 (nitroaspirin), NCX, OMSlO3HP (amitriptilin hidroklorür, ketoprofen, oksimetazolin hidroklorür), Oralease (diklofenak), OxycoDex (dekstrometorfan, oksikodon), P54, PercoDex (asetaminofen, dekstrometorfan, oksikodon), PL3100 (naproksen, fosfatidil kolin), PSD508, R- Ketoprofen (ketoprofen), Remura (bromfenak sodyum), ROX828 (ketorolak trometamin), RP, TDS943 (diklofenak sodyum), TDT, TT063 (S- propranolol), XPZOB (acetaminophen, dekstropropoksifen), XP21B (diklofenak potasyum), XP21L (diklofenak potasum), Zoenasa (asetilsistein, mesalamin), Acephen, Actifed Plus, Actifed-P, Acular, Acular LS, Acular PF, Acular X, Acuvail, Advil, Advil Allergy Sinus ,Advil Cold and Sinus ,Advil Congestion Relief ,Advil PM, Advil PM Capsule, Air Salonpas, Airtal, AIcohoI-Free NyQuil Cold & Flu Relief, Aleve ,Aleve ABDI Seltzer Lemon-Lime, Alka-Seltzer Original, Alka-Seltzer Plus, Alka-Seltzer plus Cold and Cough, Alka-Seltzer plus Cold and Cough Formula, Alka-Seltzer Plus Day and Night Cold Formula,, AIka-Seltzer Plus Day Non-Drowsy Cold Formula, AIka-Seltzer Plus Flu Formula, Alka-Seltzer Plus Night Cold Formula, AIka-Seltzer Plus Sinus Formula, Alka- Seltzer Plus Sparkling Original Cold Formula, Alka-Seltzer PM, Alka-Seltzer Wake-Up Call, Anacin, Anaprox, Anaprox MINERVA, Ansaid, Apitoxin, Apranax, Apranax abdi, Arcoxia, Arthritis Formula Bengay, Arthrotec, Asacol, Asacol HD, Asacol MEDUNA ARZNEIMITTEL, Asacol ORIFARM, Aspirin BAYER, Aspirin Complex, Aspirin Migran, Benadryl Allergy, Benadryl Day and Night, Benylin 4 Flu, Benylin Cold and Flu, Benylin Cold and Flu Day and Night, Benylin Cold and Sinus Day and Night, Benylin Cold arid Sinus Plus, Benylin Day and Night Cold and Flu Relief, Benylinl AII-In-One, Brexin, Brexin ANGELINI, Bromday, Bufferin, Buscopan Plus, Caldolor, Calmatel, Cambia, Canasa, Capoxigem, Cataflam, Celebrex, Celebrex ORIFARM, Children's Advil Allergy Sinus, Children's Tylenol, Children's Tylenol Cough and Runny Nose, Children's Tylenol plus cold, Children's Tylenol plus Cold and Cough, Children's Tylenol plus cold and stuffy nose, Children's Tylenol plus Flu, Children's Tylenol plus cold & allergy, Children's Tylenol plus Cough & Runny Nose, Children's Tylenol plus Cough & Sore Throat, Children's Tylenol plus multi symptom cold, Clinoril, Codral Cold and Flu, Codral Day and Night Day Tablets, Codral Day and Night Night Tablets, Codral Nightime, Colazal, Combunox, Contac Cold plus FIu, Contac Cold plus Flu Non-Drowsy, Coricidin D, Coricidin HBP Cold and Flu, Coricidin HBP Day and Night Multi-Symptom Cold, Coricidin HBP Maximum Strength Flu, Coricidin HBP Nighttime Multi-Symptom Cold, Coricidin II Extra Strength Cold and Flu, CSSOZ, C5670, Daypro, Daypro Alta, DDSOöC, Demazin Cold and Flu, Demazin Cough, Cold and FIu, Demazin day/night Cold and Flu, Demazin PE Cold and FIu, Demazin PE day/night Cold and Flu, Diclofenac HPBCD, Dimetapp Day Relief, Dimetapp Multi-Symptom Cold and Flu, Dimetapp Night Relief, Dimetapp Pain and Fever Relief, Dimetapp PE Sinus Pain, Dimetapp PE Sinus Pain plus Allergy, Dipentum, Diractin, Disprin Cold 'n' Fever, Disprin Extra, Disprin Forte. Disprin Plus, Dristan Cold, Dristan Junior, Drixoral Plus, Duexis, Dynastat, Efferalgan, Efferalgan Plus Vitamin C, Efferalgan Vitamin C, Elixsure IB, Excedrin Back and Body, Excedrin Migraine, Excedrin PM, Excedrin Sinus Headache, Excedrin Tension Headache, Falcol, Fansamac, Feldene, FeverAIl, Fiorinal, Fiorinal with Codeine, Flanax, Flector Patch, Flucam, Fortagesic, Gerbin, Giazo, Gladio, Goody's Back and Body Pain, Goody's Cool Orange, Goody's Extra Strength, Goody's PM, Greaseless Bengay, GW406381, HCT1026, He Xing Yi, Hyanalgese-D, HydrocoDex, Ibuprofen Sodium PFIZER, Motrin, Ketoprofen TDS, Lemsip Max, Lemsip Max All in One, Lemsip Max All Night, Lemsip Max Cold and Flu, Lialda, Listerine Mouth Wash, Lloyds Cream, Lodine, Lorfit P, Loxonin, LTNSOOl, Mersyndol, Mesalamine SALIX, Mesalamine SOFAR, Mesalazine, Mesasal GLAXO, Mesasal SANOFI, Mesulid, Metsal Heat Rub, Midol Complete, Midol Extended Relief, Midol Liquid Gels, Midol PM, Midol Teen Formula, Migranin COATED TABLETS, ML3000, Mobic, Mohrus, Motrin, Motrin Cold and Sinus Pain, Motrin PM, Movalis ASPEN, MRX7EAT, Nalfon, Nalfon PEDINOL, Naprelan, Naprosyn, Naprosyn RPG LIFE SCIENCE, Naproxen IROKO, NCX4016, NCX701, NeoProfen LUNDBECK, Nevanac, Nexcede, Niflan, Norgesic MEDICIS, Novalgin, Nuprin SCOLR, Nurofen, Nurofen Cold and Flu, Nurofen Max Strength Migraine, Nurofen Plus, Nuromol, NyQuil with Vitamin C, Ocufen, OMSlO3HP, Oralease, Orudis ABBO'I'I' JAPAN, Oruvail, Osteluc, OxycoDeX, PS4, Panadol, Panadol Actifast, Paradine, Paramax, Parfenac, Pedea, Pennsaid, Pentasa, Pentasa ORIFARM, Peon, Percodan, Percodan-Demi, PercoDex, Ketoprofen, Rantudil, Relafen, Remura, Robaxisal, Rotec, Rowasa, ROX828, RP19583, Shinbaro, Sinumax, Sinutab, Sinutab,, sinus, Spalt, Sprix, Strefen, Sudafed Cold and Cough, Sudafed Head Cold and Sinus, Sudafed PE Cold plus Cough, Sudafed PE Pressure plus Pain, Sudafed PE, Severe Cold, Sudafed PE Sinus Day plus Night Relief Day Tablets, Sudafed PE Sinus Day plus Night Relief Night Tablets, Sudafed PE Sinus plus Anti-inflammatory Pain Relief, Sudafed Sinus Advance, Surgam, Synalgos-DC, Synflex, Tavist allergy/sinus/headache, TDS943, TDT070, Theraflu Cold and Sore Throat, Theraflu Daytime Severe Cold and Cough, Theraflu Daytime Warming Relief,Theraflu Warming Relief Caplets Daytime Multi-Symptom Cold, Theraflu Warming Relief Cold and Chest Congestion, Thomapyrin, Thomapyrin C, Thomapyrin Effervescent, Thomapyrin Medium, Tilcotil, Tispol, Tolectin, Toradol, TPR100, TQ1011, Trauma-Salbe, Trauma-Salbe Kwizda, Treo, Treximet, Trovex, 'l'l'063, Tylenol, Tylenol Allergy Multi-Symptom, Tylenol Back Pain, Tylenol Cold & Cough Daytime, Tylenol Cold Tylenol Cold Head Congestion Severe, Tylenol Cold Multi Symptom Daytime, Tylenol Cold Multi Symptom Nighttime Liquid, Tylenol Cold Multi Symptom Severe, Tylenol Cold Non-Drowsiness Formula, Tylenol Cold Severe Congestion Daytime, Tylenol Complete Cold, Cough and Flu Night time, Tylenol Flu Nighttime, Tylenol Menstrual, Tylenol PM, Tylenol Sinus Congestion & Pain Daytime, Tylenol Sinus Congestion & Pain Nighttime, Tylenol Sinus Congestion & Pain Severe, Tylenol Sinus Severe Congestion Daytime, Tylenol Ultra Relief, Tylenol with Caffeine and Codeine phosphate, Tylenol with Vicks NyQuil Cold and Flu Relief, Vicoprofen, Vimovo, Voltaren Emulgel, Voltaren GEL, Voltaren NOVARTIS CONSUMER HEALTH GMBH, Voltaren XR, VT122, Xefo, Xefo Rapid, Xefocam, Xibrom, XL3, Xodol, XP20B, XPZIB, XP21L, Zipsor ve Zoenasa. Bir baska yönde COX-2 inhibitörleri alanda bilinen yöntemlerle tanimlanabilmektedir (Bkz. örnegin Dannhardt, G. and Kiefer, W. Cyclooxygenase inhibitors- current status and inhibitörü, ileri meme kanseri olan bir hastada metastazi tedavi etmek veya önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde COX-2 inhibitörü, ikinci bir tedavi ile kombinasyon halinde kullanilmaktadir. Bazi uygulamalarda ikinci tedavi burada açiklanan herhangi bir tedavidir. Bazi yönlerde COX-2 inhibitörü, asagidakilerden olusan gruptan seçilen ikinci bir tedavi ile kombinasyon halinde kullanilmaktadir. Denosumab, Zometa (http://www.us.zometa.com/index.jsp?usertrack.filter_applied=true&NovaId=2935376 peptit bloke edici PTHLH (paratiroid hormon benzeri hormon) veya PTHrP (paratiroid hormonu baglantili protein) ve Everolimus.

Bir baska yönde, kemik yikiminin önüne geçmek ve/veya bunu önlemek için kullanilan tedavi ajanlari arasinda sinirlama olmaksizin sunlar yer almaktadir: . Paratiroid hormon (PTH) ve Paratiroid benzeri hormon (PTHLH) inhibitörleri (bloke edici antikorlar dahil) veya bunlarin rekombinant formlari (PTH'ye ait amino asitler 7-34'e karsilik gelen teriparatid). Bu hormon, osteoklastlari stimüle ederek ve bunlarin aktivitesini artirarak hareket etmektedir.

. Stronsiyum ranelat: alternatif bir oral tedavidir ve osteoblast proliferasyonunu stimüle ettiklerinden ve osteoklast proliferasyonunu inhibe ettiklerinden "çift etkili kemik ajanlari” (DABA'Iar) olarak anilan ilaç grubunun bir parçasini olusturmaktadir. . “Östrojen reseptörü modülatörleri” (SERM), mekanizmaya bakilmaksizin östrojenlerin reseptöre baglanmasina müdahale eden veya bunu inhibe eden bilesikleri ifade etmektedir. Östrojen reseptörü modülatörlerinin örnekleri arasinda digerlerinin yani sira, östrojenler progestojen, estradiol, droloksifen, piperidiniI)etoksi]feniI]-2H-1-benzopiran-3-iI]-feniI-2,2-dimetilpropanoat 4,4'dihidroksibenzofenon-2,4-dinitrofeniI-hidrazon ve SH646 yer almaktadir.

Kalsitonin: kalsitonin reseptörü araciligiyla osteoklast aktivitesini dogrudan inhibe etmektedir. Kalsitonin reseptörleri, osteoklastlarin yüzeyinde tanimlanmistir.

Bisfosfonatlar: meme kanseri ve prostat kanseri ile iliskilendirilen, osteoporoz gibi kemik rezorpsiyonu ve reabsorpsiyonu olan hastaliklarin ve hiperkalsemi ile veya hiperkalsemi olmadan kemik metastazi olan kanserin önlenmesi ve tedavisine yönelik kullanilan tibbi ürünlerin bir grubudur. Mevcut bulusun sekizinci yöntemi araciligiyla tasarlanan terapide kullanilabilecek bisfosfonatlarin örnekleri arasinda, bunlarla sinirli olmamakla birlikte azotlu biyofosfonatlar (örnegin, pamidronat, neridronat, olpadronat, alendronat, ibandronat, risedronat, inkadronat, zoledronat veya zoledronik asit vb.) ve azotlu olmayan bisfosfonatlar (örnegin, etidronat, klodronat, tiludronat, vb.) yer almaktadir. bilesikleri ifade etmektedir. Katepsin K inhibitörlerinin sinirli olmayan örnekleri arasinda 4-amino-pirimidin-2-karbonitril türevleri (Novartis Pharma GMBH adi altinda WO 03/020278 sayili Uluslararasi patent basvurusunda açiklanmistir), WO ve WO 04/000843sayili yayinda (ASTRAZENECA AB) açiklanan pirroIo-pirimidinlerin yani sira, Axys Pharmaceuticals'e ait olan PCT WO 00/55126, Merck Frosst Canada & Co. and Axys Pharmaceuticals'e ait olan WO 01/49288 yayinlarinda açiklanan inhibitörler yer almaktadir.

Burada kullanildigi haliyle “DKK-1(Dickkopf-1) inhibitörü", DKK-1 aktivitesini azaltabilen herhangi bir bilesigi ifade etmektedir. DKK-1, agirlikli olarak yetiskin kemiginde eksprese edilen ve osteolitik Iezyonlari olan miyelom hastalarinda upregüle edilen, bir çözünür Wnt yolagi antagonistidir. DKK-1'i hedef alan ajanlar, multipl miyelom hastalarinda osteolitik kemik hastaligini önlemede bir rol oynayabilmektedir. Novartis'ten BHQ880, birinci sinif, tamamen insan, anti- DDK-1 nötrlestirici antikordur. Ön klinik çalismalar, BHQ880'in kemik formasyonunu destekledigi ve böylece tümöre bagli osteolitik hastaligi inhibe ettigi hipotezini desteklemektedir (Ettenberg S. ve ark., American Association for Cancer Research Annual Meeting. Nisan 12-16, 2008; San Diego, Calif. kaçisini bloke etmek için tasarlanmis MET ve VEGF yolaklarinin güçlü bir çifte inhibitörü olan herhangi bir bilesigi ifade etmektedir. MET, yalnizca tümör hücrelerinde ve endotelyal hücrelerde degil, ayni zamanda osteoblastlarda (kemik yapici hücreler) ve osteoklastlarda (kemik çikarici hücreler) eksprese edilmektedir. HGF, tüm bu hücre tiplerinde MET'e baglanarak MET yolagina multipl otokrin ve parakrin döngülerinde önemli bir rol saglamaktadir. MET'in tümör hücrelerinde aktivasyonu, metastatik kemik Iezyonlarinin yerlesiminde önemli gözükmektedir. Ayni zamanda MET yolaginin osteoblastlarda ve osteoklastlarda aktivasyonu, anormal kemik büyümesi (yani blastik lezyonlar) veya yikimi (yani litik lezyon) dahil kemik metastazlarinin patolojik özelliklerine yol açabilmektedir. Bu nedenle MET yolaginin hedeflenmesi, metastatik kemik olabilmektedir. Önceden XL olarak bilinen Cabozantinib (Exelixis, Inc), MET'e bagli tümör kaçisini bloke etmek için tasarlanmis MET ve VEGF yolaklarinin güçlü bir çifte inhibitörüdür. Çok sayida ön klinik çalismada cabozantinib'in tümör hücrelerini öldürdügü, metastazi azalttigi ve anjiyogenezi (tümör büyümesini desteklemek için gereken yeni kan damarlarinin olusumu) inhibe ettigi gösterilmistir. Diger uygun çifte inhibitörler E7050 (N-[Z-FIoro-4- ({2-[4-(4-metilpiperazin-1-iI)piperidin-1-il] karbonilaminopiridin-4-iI} oksi) fenil]- bilinmektedir) seklindedir.

Burada kullanildigi haliyle “RANKL inhibitörleri”, RANK aktivitesini azaltabilen herhangi bir bilesigi ifade etmektedir. RANKL, stroma ve T-lenfosit hücrelerinin osteoblast membraninin yüzeyinde bulunmaktadir ve bu T-Ienfosit hücreleri, bunun salgilanmasina yönelik kapasite gösteren tek hücrelerdir. Bunun temel fonksiyonu, kemik rezorpsiyonuna katilan hücreler olan osteoklastlarin aktivasyonudur. RANKL inhibitörleri, RANKL'nIn kendi reseptörüne (RANK) baglanmasini bloke ederek, RANK aracili sinyallemeyi bloke ederek veya RANKL'nin transkripsiyonu veya translasyonunu bloke ederek RANKL'nin ekspresyonunu azaltarak etki edebilmektedir. Mevcut bulusta kullanima uygun olan RANKL antagonistleri veya inhibitörleri, sinirlama olmaksizin asagidakileri içermektedir: o RANKL'yi baglayabilen ve bir RANK proteininin ekstrasülüler domeninin tamamini veya bir fragmanini içeren uygun bir RANK proteini. Çözünür RANK, murin veya insan RANK polipeptidlerinin sinyal peptidini ve ekstrasülüler domenini içerebilmektedir veya alternatif olarak sinyal peptidi çikarilmis olan proteininin olgunlasmis formu kullanilabilmektedir. o Osteoprotegerin veya bunun RANKL baglama kapasitesi olan bir varyanti. o RANKL-spesifik antisens moleküller o RANKL'nin transkribe ürünlerini isleyebilen ribozimler o Spesifik anti-RANKL antikorlari. "Anti-RANKL antikoru veya RANKL'ye karsi yönlendirilmis antikor” burada bir veya daha fazla RANKL fonksiyonunu inhibe eden nükleer faktör KB'ye (RANKL) yönelik aktive edici reseptörün Iigandina spesifik olarak baglanabilen bütün antikorlar olarak anlasilmaktadir. Antikorlar, teknikte uzman kisi tarafindan bilinen yöntemlerden herhangi biri kullanilarak hazirlanabilmektedir. Bu nedenle poliklonal antikorlar, bir hayvana inhibe edilecek proteinle bagisiklik kazandirilmasi yoluyla hazirlanmaktadir. Monoklonal antikorlar, Kohler, yöntem kullanilarak hazirlanmaktadir. Mevcut bulus baglaminda uygun olan antikorlar arasinda, bir degisken antijen baglama bölgesini ve sabit bir bölgeyi içeren dokunulmamis antikorlar, "Fab", "F(ab')2" ve "Fab'", Fv, scFv fragmanlari, diabody'ler ve bispesifik antikorlar yer almaktadir. 0 Spesifik anti-RANKL nanobody'leri. Nanobody'ler, dogal olusumlu agir zincirli antikorlarin benzersiz yapisal ve fonksiyonel özelliklerini içeren antikor türevli terapötik proteinlerdir. Nanobody teknolojisi aslen devegillerin (develer ve lamalar) hafif zincirlerden yoksun olan tam fonksiyonel antikorlara sahip oldugu kesfini takiben gelistirilmistir.

Nanobody'lerin genel yapisi FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4 seklindedir, burada FR1 ila FR4, çerçeve bölgeleri 1 ila 4'tür, CDR1 ila CDR3, komplementarite belirleyici bölgeler 1 ila 3'tür. Bu agir zincirli antikorlar, bir tek degisken domen (VHH) ve iki sabit domen (CH2 ve CH3) içermektedir. Önemli bir sekilde klonlanmis ve izole edilmis VHH domeni, orijinal agir zincirli antikorun tam antijen baglama kapasitesini barindiran mükemmel kararli bir polipeptiddir. Benzersiz yapisal ve fonksiyonel özellikleri olan bu yeni kesfedilmis VHH domenleri, Ablynx'in Nanobody'ler olarak adlandirdigi yeni nesil terapötik antikorlarin temelini olusturmaktadir.

Bir yapilandirmada RANKL inhibitörü, bir RANKL spesiûk antikoru, bir RANKL spesifik nanobody ve osteoprotegerinden olusan gruptan seçilmektedir. Spesiûk bir yapilandirmada anti-RANKL antikoru bir monoklonal antikordur. Yine daha spesifik bir yapilandirmada anti-RANKL antikoru Denosumab'tur (Pageau, Steven C. (2009). mAbs 1 (3): . Denosumab, RANKL'ye baglanan ve bunun aktivasyonunu önleyen (RANK reseptörüne baglanmamaktadir) tamamen insan 7,364,736 sayili ABD patentlerinde açiklanmaktadir. Bir baska yapilandirmada RANKL inhibitörü, Denosumab ile ayni epitopu baglayan bir antikor, antikor fragmani veya füzyon yapisidir. nanobody'lerden herhangi biridir. Yine daha çok tercih edilen bir yapilandirmada anti- RANKL antikoru ALX-0141'dir (Ablynx). ALX-0141, menopoz sonrasi osteoporoz, romatoid artrit, kanser ve belirli ilaçlarla iliskilendirilmis kemik kaybini inhibe etmek ve saglikli kemik metabolizmasi dengesini yeniden saglamak üzere tasarlanmistir.

Tercih edilen bir yapilandirmada kemik yikimini önleyen ajan, bir bifosfonat, bir RANKL inhibitörü, PTH ve PTHLH inhibitörü veya bir PRG analogu, stronsiyum ranelat, bir DKK- 1 inhibitörü, bir çifte MET ve VEGFR2 inhibitörü, bir östrojen reseptörü modülatörü, Radyum-223 kalsitonin ve bir katepsin K inhibitöründen olusan gruptan seçilmektedir.

Daha çok tercih edilen bir yapilandirmada, kemik yikimini önleyen ajan bir bifosfonattir.

Daha fazla tercih edilen bir yapilandirmada bisfosfonat, zoledronik asittir.

Bir yönde bir CCR5 antagonisti, primer meme kanseri tümörünün kemige metastazini önlemek veya inhibe etmek üzere uygulanmaktadir. Bir yapilandirmada CCR5 antagonisti, büyük bir moleküldür. Bir baska yapilandirmada CCR5 antagonisti, küçük bir moleküldür. Bazi yapilandirmalarda CCR5 antagonisti, Maraviroc'tur (Velasco- Velâquez, M. ve ark. 2012. CCR5 Antagonist Blocks Metastasis of Basal Breast Cancer Vicriviroc'tur. Velasco-Velaquez, M. ve ark. 2012. CCR5 Antagonist Blocks Metastasis of antagonisti, Aplaviroc'tur (Demarest J.F. ve ark. 2005. Update on Aplaviroc: An HIV Entry Inhibitor Targeting CCR5. Retrovirology 2(Suppl. 1): 513). Bazi yönlerde CCR5 antagonisti, bir spiropiperidin CCR5 antagonistidir. (Rotstein D.M. ve ark. 2009.

Spiropiperidine CCR5 antagonists. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 19 (18): Tercih edilen bir yapilandirmada çifte MET ve VEGFRZ inhibitörü, Cabozantinib, Foretinib ve E7050'den olusan gruptan seçilmektedir.

Tercih edilen bir yapilandirmada Radyum 223 terapisi, alfaradin'dir.

Alternatif olarak yukarida bahsedilenler arasindan birden fazla ajanin metastazi tedavi etmek ve/veya önlemek üzere kombine edildigi veya söz konusu ajanlarin kalsiyum veya D vitamini gibi diger takviyeler ile veya bir hormon tedavisi ile kombine edilebildigi kombine bir tedavi gerçeklestirilebilmektedir. c-Maf inhibitör aianlarini kullanarak HER2+ meme kanserinden kaynaklanan kemik metastazinin tedavi edilmesine yönelik yöntemler Bir baska yönde mevcut belge, HER2+ meme kanserinden kaynaklanan kemik metastazinin tedavisi veya önlenmesinde kullanima yönelik bir c-MAF inhibitör ajani (bundan böyle mevcut belgenin inhibitör ajani olarak anilacaktir) ile ilgilidir.

Bir baska yönde mevcut belge, c-MAF inhibitör ajaninin HER2+ meme kanserinden kaynaklanan kemik metastazinin tedavisi veya önlenmesi için bir ilacin üretimine yönelik kullanilmasi ile ilgilidir.

Bir baska yönde mevcut belge, bir c-MAF inhibitör ajaninin söz konusu denege uygulanmasini içeren, buna ihtiyaci olan bir denekte HER2+ meme kanserinden kaynaklanan kemik metastazinin tedavisi veya önlenmesine yönelik bir yöntem ile Bir baska yönde mevcut belge, HER2+ meme kanserinden muzdarip olan bir denekte kemik metastazi riskini önlemeye veya azaltmaya yönelik bir yöntem ile ilgili olup, söz konusu yöntem söz konusu denege kemik metastazini önleyen veya azaltan bir ajanin uygulanmasini içermektedir, burada söz konusu ajan söz konusu denekteki c-Maf ekspresyon seviyesinin miktarinin ölçülmesiyle belirlenen bir tedavi rejimine göre uygulanmaktadir.

Sinirlandirici olmayan örnekler olarak mevcut belgede kullanima uygun olan c-MAF inhibitör ajanlari arasinda antisens oligonükleotidler, interferans RNA'Iar (siRNA'Iar), katalitik RNA'Iar, spesifik ribozimler, inhibitör antikorlar veya nanobody'ler, bir dominant negatif c-Maf varyanti veya Tablo 1 veya Z'den bir bilesik yer almaktadir.

Antisens oligonükleotidler Mevcut belgenin ilave bir yönü, örnegin aktivitesi inhibe edilecek c-Maf'yi kodlayan bir nükleik asidin transkripsiyonunu ve/veya translasyonunu inhibe etmek için ekspresyonu inhibe etmek üzere izole edilmis “antisens” nükleik asitlerin kullanimi ile ilgilidir.

Antisens nükleik asitler, geleneksel baz komplementaritesi araciligiyla veya örnegin çift sarmalin büyük olugunda spesifik etkilesim araciligiyla çift iplikli DNA'ya baglanma durumunda ilacin potansiyel hedefine baglanabilmektedir. Genel olarak bu yöntemler, teknikte genel olarak kullanilan bir dizi teknigi ifade etmektedir ve bunlar, oligonükleotid sekanslarina spesifik baglanmayi temel alan herhangi bir yöntemi içermektedir.

Mevcut belgenin bir antisens yapisi, örnegin hücre içinde transkribe edildiginde, c- Maf'yi kodlayan selüler mRNA'nin en az bir benzersiz parçasina komplementer RNA üreten bir ekspresyon plazmidi olarak dagitilabilmektedir. Alternatif olarak antisens yapisi, hücreye verildiginde bir hedef nükleik asidin mRNA'siyIa ve/veya gen sekanslariyla hibridize olan gen ekspresyonunun inhibisyonunu Üreten ex V/'vo üretilen bir oligonükleotid probudur. Bu tür oligonükleotid problari tercihen endojen nükleazlara, örnegin ekzonükleazlara ve/veya endonükleazlara karsi dirençli olan ve bu nedenle in i//i/o olarak stabil olan modiüye edilmis oligonükleotidlerdir. Bunun antisens oligonükleotidler olarak kullanimina yönelik nükleik asit moleküllerinin örnekleri, fosforamidat, fosfotiyonat ve metilfosfonatin DNA analoglaridir (bakiniz örnegin US olan oligomerlerin olusturulmasina yönelik genel yaklasimlar degerlendirilmistir, örnegin Antisens oligonükleotide iliskin olarak, örnegin hedef genin yaklasik -10 ve yaklasik +10'u arasinda olmak üzere translasyonun baslangiç bölgesinden türetilen oligodeoksiribonükleotid bölgeleri tercih edilmektedir. Antisens yaklasimlari, hedef polipeptidi kodlayan mRNA'ya komplementer olan oligonükleotid tasarimini (DNA veya RNA) içermektedir. Antisens oligonükleotid, transkribe edilmis mRNA'ya baglanacaktir ve translasyon önlenecektir. Örnegin translate edilmemis 5' sekansina kadar ve baslangiç kodonu AUG dahil olmak üzere mRNA'nin 5' ucuna komplementer olan oligonükleotidlerin, translasyonu inhibe etmek üzere en etkili sekilde islev göstermesi gerekmektedir. Bununla birlikte, mRNA'nin translate edilmemis 3' sekanslarina komplementer olan sekanslarin da mRNA translasyonunu inhibe etmek için etkili oldugu son zamanlarda gösterilmistir (Wagner, edilmemis 5' veya 3' bölgelerinde, bu mRNA'nin translasyonunu inhibe etmek üzere bir antisens yaklasiminda bir genin kodlayici olmayan bölgelerinde kullanilabilmektedir. mRNA'nin translate edilmemis 5' bölgesine komplementer olan oligonükleotidlerin baslangiç kodonu AUG'un komplementerini içermesi gerekmektedir. mRNA'nin kodlama bölgesine komplementer olan oligonükleotidler, daha az etkili translasyon inhibitörleri olmakla birlikte bunlar da mevcut belgeye göre kullanilabilmektedir. Bunlarin mRNA'nin ' bölgesi, 3' bölgesi veya kodlama bölgesi ile hibridize olacak sekilde tasarlanmasi halinde, antisens nükleik asitlerin en az alti nükleotid uzunlugunda olmasi ve tercihen nükleotid uzunluguna sahip olmasi gerekmektedir.

Tercihen in vitro çalismalar, ilk olarak antisens oligonükleotidlerin gen ekspresyonunu inhibe etme kapasitesini ölçmek Üzere gerçeklestirilmektedir. Tercihen bu çalismalar, antisens gen inhibisyonu ile oligonükleotidlerin spesifik olmayan biyolojik etkilerini ayirt eden kontrolleri kullanmaktadir. Ayni zamanda tercihen bu çalismalar, hedef RNA veya proteinin seviyelerini RNA'nin veya proteinin bir iç kontrolünün seviyeleri ile karsilastirmaktadir. Antisens oligonükleotidler kullanilarak elde edilen sonuçlar, bir kontrol oligonükleotidi kullanilarak elde edilenler ile karsilastirilabilmektedir. Tercihen kontrol oligonükleotidi, test edilecek oligonükleotid ile yaklasik olarak ayni uzunluktadir ve oligonükleotid sekansi, antisens sekansindan hedef sekansa spesifik hibridizasyonu önlemek için gerekli görülenden daha fazla farklilik göstermemektedir.

Antisens oligonükleotid, tek veya çift iplikli DNA veya RNA veya bunlarin kimerik karisimlari veya türevleri veya modifiye edilmis versiyonlari olabilmektedir.

Oligonükleotid, örnegin molekülün stabilitesini, bunun hibridizasyon kapasitesini vb. gelistirmek üzere baz grubunda, seker grubunda veya fosfat omurgasinda modifiye edilebilmektedir. Oligonükleotid, diger bagli gruplari, örnegin peptidleri (örnegin bunlarin konak hücrelerin reseptörlerine yönlendirilmeleri için) veya hücre membranindan (bakiniz örnegin, Letsinger ve ark., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86: Yayin No. WO 88/09810) veya kan beyin bariyerinden (bakiniz örnegin PCT Yayin No.

WO 89/10134) tasinmalarinin kolaylastirilmasina yönelik ajanlari, araya giren ajanlari oligonükleotid, diger bir moleküle, örnegin bir peptide, bir tasima ajanina, hibridizasyon tetikli klevaj ajanina vb. konjuge edilebilmektedir.

Antisens oligonükleotidler, en az bir modifiye edilmis baz grubu içerebilmektedir.

Antisens oligonükleotid ayni zamanda, bunlarla sinirli olmamakla birlikte arabinoz, 2- floroarabinoz, ksiluloz ve heksoz içeren gruptan seçilen en az bir modifiye edilmis seker grubunu içerebilmektedir. Antisens oligonükleotid ayni zamanda bir nötr peptid ile benzer olan bir omurga içerebilmektedir. Bu tür moleküller peptid nükleik asit (PNA) oligomerleri olarak bilinmektedir ve örnegin Perry-O'Keefe ve ark., Proc. Natl. Acad. Sci. açiklanmaktadir.

Diger bir açiklamada antisens oligonükleotid, en az bir modifiye edilmis fosfat omurgasini içermektedir. Diger bir açiklamada antisens oligonükleotid, bir alfa- anomerik oligonükleotittir.

Hedef mRNA sekansinin kodlama bölgesine komplementer olan antisens oligonükleotidler kullanilabilirken transkribe edilmis, traslate edilmemis bölgeye komplementer olanlar da kullanilabilmektedir.

Bazi durumlarda endojen mRNA translasyonunu baskilamak üzere antisensin yeterli intraselüler konsantrasyonunun elde edilmesi zor olabilmektedir. Bu nedenle tercih edilen bir yaklasim, antisens oligonükleotidin güçlü bir pol III veya ml 11 promotörünün kontrolü altina yerlestirildigi bir rekombinant DNA yapisini kullanmaktadir.

Alternatif olarak hedef gen ekspresyonu, vücutta hedef hücrelerde gen transkripsiyonunu önleyen üçlü sarmal yapilar olusturmak üzere gen düzenleyici bölgeye (diger bir ifadeyle, promotör ve/veya artiricilar) komplementer olan deoksiribonükleotid sekanslari yönlendirilerek azaltilabilmektedir (bakiniz genel antisens oligonükleotidler, antisens morfolinlerdir.

Küçük interferans RNA veya siRNA, RNA interferansi araciligiyla bir hedef genin ekspresyonunu inhibe edebilen ajanlardir. Bir siRNA kimyasal olarak sentezlenebilmektedir, in vitro transkripsiyon araciligiyla elde edilebilmektedir veya hedef hücrede in V/'vo olarak sentezlenebilmektedir. Tipik olarak siRNA, 15 ile 40 nükleotid uzunlugunda olan çift iplikli bir RNA'dan olusmaktadir ve 1 ila 6 nükleotidin 3' ve/veya 5' çikintili bölgesini içerebilmektedir. Çikintili bölgenin uzunlugu, siRNA molekülünün toplam uzunlugundan bagimsizdir. siRNA, transkripsiyondan sonra hedef habercinin parçalanmasi veya bastirilmasi araciligiyla etki etmektedir.

Mevcut belgenin siRNA, MAF kodlayici genin mRNA'sina veya söz konusu proteini kodlayan gen sekansina büyük ölçüde homologtur. “Büyük ölçüde homolog”, siRNA'nin hedef mRNA'yi RNA müdahalesi ile parçalara ayirabildigi sekilde hedef mRNA'ya yeterince komplementer veya benzer olan bir sekansa sahip olarak anlasilmaktadir. Söz konusu müdahaleye yol açmaya uygun olan siRNA, RNA tarafindan olusturulan siRNA'nin yani sira, asagidaki gibi farkli kimyasal modifikasyonlari içeren siRNA'yi içermektedir: . fosforotiyonat baglari gibi nükleotidler arasindaki baglarin, dogada görünenlerden farkli oldugu siRNA.

. Florofor gibi bir fonksiyonel reaktifle RNA ipligi konjugatlari. . 2' pozisyonunda farkli hidroksil fonksiyonel gruplari ile modifikasyon araciligiyla özellikle 3' ucu olmak üzere RNA ipliklerinin uçlarinin modifikasyonlari. . 2'-O-metilriboz veya 2'-O-fl0roriboz gibi 2' pozisyonunda O-alkillenmis kalintilar gibi modifiye edilmis sekerlerle nükleotidler. o Halojenli bazlar (örnegin 5-b0rom0urasil ve 5-iy0dourasil), alkillenmis bazlar (örnegin, 7-metilguanozin) gibi modifiye edilmis bazlarla nükleotidler. siRNA, oldugu haliyle, diger bir ifadeyle yukarida bahsedilen özelliklere sahip çift iplikli bir RNA formunda kullanilabilmektedir. Alternatif olarak siRNA'nin sens ve antisens iplik sekansini içeren vektörlerin kullanimi, söz konusu hücre içinde bunun ekspresyonuna uygun promotörlerin kontrolü altinda mümkündür. siRNA'yi eksprese etmeye uygun vektörler, siRNA'nin iki ipligini kodlayan iki DNA bölgesinin, transkripsiyon sonrasinda bir döngü olusturan bir ayirici bölge tarafindan ayrilmis tek ve ayni DNA ipliginde art arda düzenlenmis oldugu vektörlerdir ve burada tek bir promotör DNA molekülünün transkripsiyonunu yönlendirerek shRNA'ya yol açmaktadir.

Alternatif olarak siRNA'yi olusturan ipliklerin her birinin bir farkli transkripsiyonel birimin transkripsiyonundan olusturuldugu vektörlerin kullanilmasi mümkün olmaktadir. Bu vektörler ise iraksak ve yakinsak transkripsiyon vektörlerine ayrilmaktadir. Iraksak transkripsiyon vektörlerinde siRNA'yi olusturan DNA ipliklerinin her birini kodlayan transkripsiyonal birimler, her bir DNA ipliginin transkripsiyonunun ayni veya farkli olabilecek kendi promotörüne bagli olacagi sekilde bir vektörde art arda transkripsiyon vektörlerinde siRNA'ya yol açan DNA bölgeleri, iki revers promotör tarafindan yandan desteklenen bir DNA bölgesinin sens ve antisens ipliklerini olusturmaktadir. Sens ve antisens RNA ipliklerinin transkripsiyonundan sonra antisens RNA iplikleri, bir fonksiyonel siRNA'nin olusturulmasi için hibrit olusturacaktir. 2 U6 promotörleri (Tran, N. ve ark., , bir fare U6 promotörü ve bir insan HI promotörü (Zheng, L., ve ark., 2004, Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 135- (Kaykas, A. and Moon, R., kullanildigi revers promotör sistemleri olan vektörler açiklanmistir. kullanimlarina uygun olan promotörler arasinda siRNA'nin eksprese edilecegi hücrelerle uyumlu olan herhangi bir promotör veya promotör çifti yer almaktadir. Bu nedenle uygun promotörler arasinda, polioma virüsü, adenovirüs, SV40, CMV, avian sarkoma virüsü, hepatit B virüsü, metallotiyonein gen promotörü, herpes simplex virüsünün timidin kinaz geni promotörü, retrovirüs LTR bölgeleri, immünoglobülin gen promotörü, aktin gen promotörü, EF-lalfa gen promotörü gibi ökaryotik virüslerin genomlarindan elde edilenler gibi konstitüf promotörlerin yani sira, protein ekspresyonunun tetrasiklin sistem, NFkappaB/UV isigi sistemi, Cre/Lox sistemi ve isi sok geni promotörü, promotörleri gibi bir molekülün veya bir eksojen sinyalinin eklenmesine bagli oldugu basvuruda açiklanan PSA promotörü) yer almakla birlikte bunlarla sinirli degildir. Tercih edilen bir yapilandirmada promotörler, konstitütif olarak hareket eden RNA polimeraz snRNA gibi sinirli sayida gende bulunmaktadir. Diger RNA polimeraz III promotörlerinin aksine tip III promotörleri, herhangi bir intragenik sekansa ihtiyaç duymamaktadir; daha ziyade pozisyon -34 ve -24'te bir TATA kutusunu, -66 ve -47 arasinda bir proksimal sekans elemanini veya PSE'yi ve bazi durumlarda pozisyon -265 ve -149 arasinda bir distal sekans elemanini veya DSE'yi içeren 5' yönünde sekanslara ihtiyaç duymaktadir. Tercih edilen bir yapilandirmada tip III RNA polimeraz III promotörleri, insan veya murin H1 ve U6 gen promotörleridir. Daha fazla tercih edilen bir yapilandirmada promotörler, 2 insan veya murin U6 promotörleri, bir fare U6 promotörü ve bir insan H1 promotörü veya bir insan U6 promotörü ve bir fare H1 promotörüdür. Mevcut belge baglaminda ER alfa gen promotörleri veya siklin D1 gen promotörleri özellikle uygundur ve bu nedenle bunlarin özellikle meme tümörlerinde, tercihen HER2+ meme tümörlerinde söz konusu genleri spesiük olarak eksprese etmesi tercih edilmektedir. siRNA, siRNA'yi olusturan antiparalel ipliklerin bir ilmek veya firkete bölgesiyle baglanmasi ile karakterize edilen shRNA'dan (kisa firkete RNA) intrasellüler olarak üretilebilmektedir. shRNA'lar, plazmidler veya virüsler, özellikle retrovirüsler tarafindan ve bir promotörün kontrolü altinda kodlanabilmektedir. shRNA'larieksrese etmeye uygun olan promotörler, siRNA'yi eksprese etmeye yönelik olarak yukaridaki paragrafta gösterilenlerdir. siRNA'yi ve shRNA'yi eksprese etmeye uygun olan vektörler arasinda, prokaryotik ekspresyon vektörleri, örnegin pUC18, pUC19, Bluescript ve bunun türevleri, mp18, pAT28, maya ekspresyon vektörleri, örnegin 2-mikron plazmid tipi vektörler, entegrasyon plazmidleri, YEP vektörleri, sentromerik plazmidler ve benzeri, böcek hücre ekspresyon vektörleri, örnegin pAC serisi vektörleri ve pVL serisi vektörleri, bitki ekspresyon vektörleri, örnegin pIBI, pEarIeyGate, pAVA, pCAMBIA, pGSA, pGWB, pMDC, pMY, pORE serisi vektörleri ve benzeri ve viral vektör bazli (adenovirüs, adenovirüslerle ile iliskili virüslerin yani sira retrovirüsler ve özellikle Ientivirüsler) daha yüksek ökaryotik hücre ekspresyon vektörleri veya viral olmayan vektörler, örnegin pcDNA3, pHCMV/Zeo, pCR3.1, pEFl/His, pIND/GS, pRc/HCMVZ, pSV40/Ze02, pTRACER-HCMV, pUB6/V5-His, pVAXl, pZeoSVZ, pCI, pSVL ve pKSV-IO, pBPV-l, pMLZd ve pTDT1 yer almaktadir. Tercih edilen bir yapilandirmada vektörler, Ientiviral vektörlerdir.

Mevcut belgedeki siRNA ve shRNA, teknikte uzman kisiler tarafindan bilinen bir dizi teknik kullanilarak elde edilebilmektedir. siRNA'nin tasarlanmasi için baz olarak alinan nükleotid sekansinin bölgesi sinirlayici degildir ve bu, kodlama sekansinin (baslangiç kodonu ve bitis kodon arasinda) bir bölgesini içerebilmektedir veya alternatif olarak tercihen 25 ile 50 arasinda nükleotid uzunlugunda olan ve baslangiç kodonuna göre 3' yönü pozisyonunda herhangi bir pozisyonda olan translate edilmemis 5' veya 3' bölgesinin sekanslarini içerebilmektedir. Bir siRNA'nin tasarlanmasinin bir yolu, N'nin MAF geni sekansinda herhangi bir nükleotid olabildigi AA(N19)'IT motiflerinin tanimlanmasini ve yüksek bir G/C içerigine sahip olanlarin seçimini içermektedir. Söz konusu motifin bulunmamasi halinde, N'nin herhangi bir nükleotid olabildigi NA(N21) motifinin tanimlanmasi mümkündür.

MAF spesifik siRNA'lar, ipliklerden biri ACGGCUCGAGCAGCGACAA (SEKANS TANIM NO: spesifik siRNA sekanslari arasinda sinirlama olmaksizin CUUACCAGUGUGUUCACAA (SEKANS TANIM NO: 7), UGGAAGACUACUACUGGAUG (SEKANS TANIM NO: 8), AUUUGCAGUCAUGGAGAACC (SEKANS TANIM NO: 9), CAAGGAGAAAUACGAGAAGU (SEKANS TANIM NO: 10), ACAAGGAGAAAUACGAGAAG (SEKANS TANIM NO: 11) ve ACCUGGAAGACUACUACUGG (SEKANS TANIM NO: 12) yer almaktadir.

DNA Enzimleri Diger taraftan mevcut belge ayrica, mevcut belgenin MAF geninin ekspresyonunu inhibe etmek üzere DNA enzimlerinin kullanimini öngörmektedir. DNA enzimleri, antisens ve ribozim teknolojilerinin mekanistik özelliklerinden bazilarini içermektedir.

DNA enzimleri, antisens oligonükleotide benzer olan belirli bir hedef nükleik asit sekansini taniyacaklari sekilde tasarlanmaktadir, bununla birlikte ribozom gibi katalitiktirler ve spesifik olarak hedef nükleik asidi klive etmektedirler.

Ribozimler Aktivitesi inhibe edilecek MAF'yi kodlayan mRNA'nin translasyonunu önlemek üzere bir hedef mRNA'nin transkripsiyon ürünlerinin katalitik olarak klevaji için tasarlanan ribozim moleküleri de kullanilabilmektedir. Ribozimler, spesifik RNA klevajini katalize edebilen enzimatik RNA molekülleridir (degerlendirme için bakiniz, Rossi, Current Biology 4: 469- 471, 1994). Ribozim etki mekanizmasi, ribozim molekül sekansinin, komplementer hedef RNA'ya spesifik hibridizasyonunu ve ardindan bir endonükleolitik klevaj olayini içermektedir. Ribozim moleküllerinin bilesimi tercihen hedef mRNA'ya komplementer olan bir veya daha fazla sekansi ve mRNA'nin klevajindan sorumlu olan iyi bilinen sekansi veya fonksiyonel olarak esdeger olan bir sekansi içermektedir (bakiniz örnegin, US patent No. 5093246).

Mevcut belgede kullanilan ribozimler arasinda, çekiç basli ribozimler, endoribonükleaz RNA (bundan sonra “Cech tipi ribozimler") yer almaktadir (Zaug ve ark., Science Ribozimler, modifiye edilmis oligonükleotidler (örnegin stabiliteyi, hedeflemeyi vb. gelistirmek üzere) tarafindan olusturulabilmektedir ve bunlarin in w'i/o olarak hedef geni eksprese eden hücrelere dagitilmasi gerekmektedir. Tercih edilen bir dagitim yöntemi, transfekte hücrelerin endojen hedef habercilerini imha etmek ve translasyonu inhibe etmek için yeterli ribozim miktarlarini üretecegi sekilde güçlü bir konstitütif pol III veya pol II promotörünün kontrolü altinda ribozimi “kodlayan” bir DNA yapisinin kullanilmasini içermektedir. Ribozimler katalitik oldugundan diger antisens moleküllerinden farkli olarak, verimliligi için düsük bir intrasellüler konsantrasyon gerekmektedir.

Inhibitör antikorlar Mevcut belge baglaminda “inhibitör antikor”, spesifik olarak c-Maf proteinine baglanabilen ve tercihen transkripsiyon ile ilgili olanlar olmak üzere söz konusu proteininin fonksiyonlarindan bir veya daha fazlasini inhibe edebilen herhangi bir antikor olarak anlasilmaktadir. Antikorlar, bazilari yukarida bahsedilmis olan, teknikte uzman kisi tarafindan bilinen yöntemlerden herhangi biri kullanilarak hazirlanabîlmektedir. Bu nedenle poliklonal antikorlar, bir hayvana inhibe edilecek proteinle bagisiklik kazandirilmasi yoluyla hazirlanmaktadir. Monoklonal antikorlar, kullanilarak hazirlanmaktadir. Mevcut belge baglaminda uygun olan antikorlar, bir degisken antijen baglama bölgesini ve sabit bir bölgeyi içeren dokunulmamis antikorlari, "Fab", "F(ab')2" ve "Fab'", Fv, scFv fragmanlarini, diabody'leri ve bispesifik antikorlari içermektedir. c-Maf proteini baglama kapasitesi olan antikorlar tanimlandiktan sonra, bu proteinin aktivitesini inhibe edebilenler, bir inhibitör ajan tanimlama testi kullanilarak seçilecektir.

Burada kullanildigi haliyle “inhibitör peptid” terimi, c-Maf proteinine baglanabilen ve yukarida açiklandigi gibi aktivitesini inhibe edebilen, yani c-Maf'nin gen transkripsiyonunu aktive edebilmesini önleyebilen peptidleri ifade etmektedir.

Negatif c-Maf dominantlari MAF ailesinden proteinler, Fos ve Jun gibi AP-1 ailesinin diger üyeleriyle homodimerize ve heterodimerize olabildiklerinden c-Maf aktivitesini inhibe etmenin yollarindan biri, c- Maf ile dimerizasyon kabiliyeti olan ancak transkripsiyonu aktive etme kabiliyeti olmayan negatif dominantlarin kullanilmasidir. Bu nedenle negatif c-Maf dominantlari, hücre içinde mevcut olan ve transaktivasyon domenini (örnegin, mafK, mafF, mafg ve pi 8) içeren amino terminal ucunun üçte ikisinden yoksun olan küçük c-Maf proteinlerinden herhangi biri olabilmektedir (Fujiwara ve ark (1993) Oncogene 8, 2371- Alternatif olarak negatif c-Maf dominantlari, diger proteinlerle dimerize olma kapasitesini koruyan ancak transkripsiyonu aktive etme kapasitesinden yoksun olan c- Maf varyantlarini içermektedir. Bu varyantlar, örnegin proteinin N-terminal ucunda bulunan c-Maf transaktivasyon domeninden yoksun olanlardir. Bu nedenle negatif c- Maf dominant varyantlari, örnekleyici bir sekilde en azindan amino asitler 1 ila 122'nin, en azindan amino asitler 1-187'nin veya en azindan amino asitler 1 ila 257'nin (U56274338 sayili belgede açiklandigi gibi insan c-Maf'sinin numaralandirilmasi göz önünde bulundurularak) uzaklastirildigi varyantlari içermektedir.

Bu belge, hem negatif c-Maf dominant varyantlarinin hem de c-Maf'yi kodlayan polinükleotidlerin hedef hücrede ekspresyon için uygun olan bir promotörün operatif kontrolü altinda kullanilmasini öngörmektedir. Mevcut belgedeki polinükleotid transkripsiyonunun düzenlenmesi için kullanilabilecek promotörler, konstitütif promotörler, yani transkripsiyonu bazal seviyede yönlendiren promotörler veya transkripsiyonel aktivitenin bir harici sinyali gerektirdigi indüklenebilir promotörler olabilmektedir. Transkripsiyonun düzenlenmesine yönelik uygun konstitütif promotörler, digerlerinin arasinda CMV promotörü, SV40 promotörü, DHFR promotörü, fare memeli tümör virüs (MMTV) promotörü, 1a elongasyon faktör (Efla) promotörü, albümin promotörü, ApoAl promotörü, keratin promotörü, CD3 promotörü, immünoglobülin agir veya hafif zincir promotörü, nörofilament promotörü, nöron spesifik enolaz promotörü, L7 promotörü, CD2 promotörü, miyosin hafif zincir kinaz promotörü, HOX geni promotörü, timidin kinaz promotörü, RNA polimeraz II promotörü, MyoD gen promotörü, fosfogliserat kinaz (PGK) gen promotörü, düsük yogunluklu lipoprotein (LDL) promotörü, aktin gen promotörüdür. Tercih edilen bir açiklamada transaktivatör ekspresyonunu düzenleyen promotör, PGK gen promotörüdür. Tercih edilen bir açiklamada, mevcut belgedeki polinükleotid transkripsiyonunu düzenleyen promotör, T7 fajinin RNA polimeraz promotörüdür.

Tercihen mevcut belge baglaminda kullanilabilecek indüklenebilir promotörler, bir indükleyici ajanin yoklugunda sifir veya göz ardi edilebilir bazal ekspresyon gösteren bir indükleyici ajana yanit verenlerdir ve 3' pozisyonunda bulunan genin aktivasyonunu destekleyebilmektedir. Indükleyici ajanin türüne bagli olarak indüklenebilir promotörler, Tet açma/kapama promotörleri (Gossen, M. and H. Bujard (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. ekdizona bagli promotörler (Christopherson ve ark., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, metallotiyonene bagli promotör (W08604920) ve rapamisine bagli promotörler (Rivera Negatif c-Maf dominant varyantini kodlayan polinükleotidi eksprese etmeye uygun olan vektörler arasinda, prokaryotik ekspresyon vektörlerinden türetilen vektörler, örnegin pCRl, RP4, fajlar ve mekik vektörleri, örnegin pSA3 ve pAT28, maya ekspresyon vektörleri, örnegin 2-mikron tipi plazmid vektörleri, entegrasyon plazmidleri, YEP vektörleri, sentromerik plazmidler ve benzeri, böcek hücre ekspresyon vektörleri, örnegin pAC serisi vektörleri ve pVL serisi vektörleri, bitki ekspresyon vektörleri, örnegin pIBI, pEarleyGate, pAVA, pCAMBIA, pGSA, pGWB, pMDC, pMY, pORE serisi vektörleri ve benzeri ve viral vektör bazli (adenovirüs, adenovirüslerle iliskili virüslerin yani sira retrovirüsler ve özellikle Ientivirüsler) daha yüksek ökaryotik hücre ekspresyon vektörleri ve viral olmayan vektörler, örnegin pSilencer , pcDNA3, pcDNA3.1/hyg pHCMV/Zeo, pCR3.1, pEFl/His, pIND/GS, pRc/HCMVZ, pSV40/Ze02, pTRACER-HCMV, pUBG/VS-His, pVAXI, pZeoSVZ, pCI, pSVL ve pKSV-10, pBPV-1, Küçük moleküller Diger uygun c-Maf inhibitör bilesikleri sunlari içermektedir: Tablo 1: c-Maf inhibisyon kapasitesi olan küçük moleküller H türevleri R1 ve R2, birbirlerinden bagimsiz olarak 1.0 H veya 2.0 bir - O-Ci-Ce'alkll, -O-Cz-Ce-alkenildir, -O-Cz-Cs-alkinil veya - O-Cs-Cio'aril grubu, burada alkil, alkenil ve alkinil düz zincirli veya dallanmistir ve burada alkil, alkenil ve alkinil gruplari, asagidakiler ile mono- veya disübstitüelidir: 2.1 -OH, 2.2 :0, 2.3 -0- Ci-Cg-alkil, burada alkil düz zincirlidir veya dallanmistir, 2.4 0- Cz-Ce-alkenil, burada alkenil düz zincirlidir veya dallanmistir, 2.5 Ce-Cio-arîl, 2.6 NH-Ci-Ce-alkil, burada alkil düz zincirlidir veya dallanmistir, 2.7 -NH-Cz-Ce-alkenil, burada alkenil düz zincirlidir veya dallanmistir, 2.8 -NH2 veya 2.9 halojen, ve burada aril grubu istege bagli olarak sübstitüent 2.1 veya 2.3 veya 2.9 ile mono- veya disübstitüelidir, burada sübstitüentler 2.3, 2.4, 2.6 ve 2.7 ayrica - CN, -amid veya -oksim fonksiyonlariyla sübstitüe edilebilmektedir ve 2.5 ayrica -CN veya amid fonksiyonlariyla sübstitüe edilebilmektedir veya R1 ve R2 birlikte bir halka olusturmaktadir, burada R1 ve R2 bir - O-[(C1-Cs)-alkilen]-O- grubu anlamina gelmektedir, 1.0 H veya 2.0 bir - O-Ci-Ce-alkil, -O-Cz-Cs-alkenil, -O-Cz-Ce-alkinil veya - O-Cs-Cio-aril grubudur, burada alkil, alkenil ve alkinil düz zincirli veya dallanmistir ve burada alkil, alkenil ve alkinil gruplari, asagidakiler ile mono- veya disübstitüelidir: 2.1 -OH, 2.2 :0, 2.3 -0- Ci-Cö-alkil, burada alkil düz zincirlidir veya dallanmistir, 2.4 0- Cz-Ce-alkenil, burada alkenil düz zincirlidir veya dallanmistir, 2.5 -Cs-Cm-aril, 2.6 NH-Ci-Cs-alkil, burada alkil düz zincirlidir veya dallanmistir, 2.7 -NH-Cz-Ce-alkenil, burada alkenil düz zincirlidir veya dallanmistir, 2.8 -NHz veya 2.9 halojen, ve burada aril grubu istege bagli olarak sübstitüent 2.1 veya 2.3 veya 2.9 ile mono- veya disübstitüelidir, burada sübstitüentler 2.3, 2.4, 2.6 ve 2.7 ayrica -CN, -amid veya -oksim fonksiyonlari ile sübstitüe edilebilmektedir ve 2.5 ayrica -CN veya amid fonksiyonlari ile sübstitüe edilebilmektedir R4, C3, CHzßr, CHzCN'dIr, burada R3, yukarida tanimlandigi gibidir, ve özellikle bilesikler türevleri R1, N02, NHz, NH(C1-Ca-alkil) ve N(C i-Cs-alkil)(C1-Ce-alkil)'den olusan gruptan seçilmektedir; R2, H, halojen, Ci-Ce alkil ve floro-sübstitüeli Ci-Cöalkilden seçilmektedir, R1, Cl'dir ve R2, Br veya H'dir, ve tercihen bilesikler NH2 N02 ==-:-:-:, bir tek veya çift bagdir, R1, H, C1'C4 alkil, C(O)O Ci-C4alkil, C(O)C1'C4 alkil ve C(O)NH C1'C4 alkilden olusan gruptan seçilmektedir; V R2, H ve Ci-C4 alkilden seçilmektedir; R3, H ve C1-C4 alkilden seçilmektedir; veya R2 ve R3, bunlarin bir piperidin halkasini olusturmak üzere baglandiklari karbon ve azot atomlari ile birlikte baglanmaktadir, R4 ve R5 bagimsiz olarak H, halojen, hidroksi, Ci-C4alkil, floro-sübstitüeli C1- C4 alkil ve Ci-C4 alkoksiden seçilmektedir; ve X, C ve N'den seçilmektedir, ve tercih edilen bilesikler, mesela Siproheptadin (4-(5H-dibenzo-[a,d]siklohepten- -iliden)-1-metilpiperidin hidroklorür), Amitriptilin (3-(10,11-dihidr0-5H-dibenzo[[a,dJ]siklohepten-S-iliden)-N,N-dimetil- 1-propanamin), iIiden)-1-piperidinkarb0ksilat, Siklobenzrapin (3-(5H-dibenzo[a,d]siklohepten-5-iliden)-N,N-dimetil-1- propanamin). tetrahidroksitrikotek-9-en-8-on) sayili patent basvurusunda açiklanmaktadir.

Tablo 2: c-MAF inhibitörleri Antagonist Purin Analoglari Sigma-Aldrich'ten Purvalanol A ticari adiyla temin edilebilen C19H25CIN60 molekül formülüne sahip 2-(1R-IzopropiI-2-hidroksietilamin0)-6-(3- kloroanilin)-9-izopr0pilpurin (#P4484, Sigma- Aldrich, St. Louis, MO), Purvalanol B, aminopurvalanol, bilesik 52 (burada purvalanol A'nin izopropili H ile yer degistirmektedir) gibi purvalanoller Sigma-Aldrich'ten Olomoucine (#00886) ticari adiyla temin edilebilen C15H18N60 molekül formülüne sahip 2-(Hidroksietilamino)-6- benzilamin0-9-metilpurin, Sigma-Aldrich'ten N9- izopropilolomusin (#10763) ticari adiyla temin edilebilen C17H22N60 moleküler formülüne sahip 2-(2'-Hidroksietilamin0)-6-benzilamin0-9- izopropilpurin; CVT-313 Sigma-Aldrich'ten Roscovitine (#R7772) ticari adiyla temin edilebilen C19H25N50 molekül formülüne sahip 6-(Benzilamino)-2(R)-[[1- (hidroksimetiI)propil]amino]-9-izopropilpurin 2- (R)-[[9-(1-metiletiI)-6-[(fenilmetil)amino]-9H- purIn-Z-il]amino]-1-butan0l, metoksiroskovitin cdk2 inhibitör aktivitesi için referans Gray, N.S. ve ark., Science, Chang, Y.T. ve ark., Chem.

Vesely, J., ve ark., (1994) Eur. J. Biochem., 224, 771- 86,11; Brooks, E.E., ve ark., (1997) J. Biol. Chem., 272, 29207- Wang, D. ve ark., J. Virol., (2001); McCIue, S.J, ve ark., (2002); Meijer, L., ve ark., (1997) Eur. J. Biochem., 243, 527-90 Sigma-Aldrich'ten CGP74514 (#C3353) ticari adiyla temin edilebilen CigHi4ClN7 molekül formülüne sahip N2-(cis-2-Aminosiklohekzil)-N6- (3-kl0r0fenil)-9-etil-9H-purIn-2,6-dIamin purin analogu (Yukaridaki) CGP74514'ün bir purin analogu olan CGP79807, burada Cl CN ile yer degistirmektedir, OH çikarilmaktadir ve siklohekzan halkasinin oito pozisyonu NHz'dir.

Oö-siklohekzilmetil guanin NU2058 gibi purin analogu NU6102 gibi purin analog izopentenil-adenin Med. Chem. Lett., 9, 91-96 (1999); Dreyer, M.K. ve ark., J. Med.

Med. Chem. Lett., 9, 91-96 (1999); Dreyer, M.K. ve ark., J. Med.

Arris, C.E. ve ark., J. Med. (2000); Davies ve ark, Nature Structural Biology, 9:10, Arris, C.E. ve ark., J. Med. (2000); Davies, T.G. ve ark., (2002).

Vesely, J., ve ark., (1994) Eur. J. Biochem., 224, 771-91 Non-purin bazli maddeler Sigma-Aldrich'ten (#I0404) ticari adiyla temin Davies, T.G. ve ark., Indirubin-3'-monoksim gibi indirubinler, indirubin (2001); -sulfonat, 5-kl0r0 indirubin Marko, D. ve ark., Br. J.

Hoessel, R., ve ark., (1999) Nat. Cell Biol., 1, 60-7; PCT/U502/30059, Hellberg ve ark., WO 03/027275 olarak yayimlanmistir.

Bu tablonun 2. sütununda atifta bulunulan Porcs-Makkay, M., ve ark., Chemical, 5893; Org. Process Res.

Indenopirazoller Nugiel, D.A. ve ark., J. Med. (2001); Nugiel, D.A. ve ark., J. Med. Chem., 45, 5224- 5232 (2002); Yue, E.W. ve ark., J. Med. Chem., 45, Pirido(2,3-d)pirimidin-7-onlar, Fischer'e ait Barvian, M. ve ark., J. Med. (2000); Toogood, P.L., Med. (2001).

Anilinokuinazolin gibi kuinazolinler Sigma-Aldrich'ten GW8510 (#G7791) ticari adiyla temin edilebilen C21H15N503S2 molekül formülüne sahip kaynasik tiyazol, 4-{[(7-Okso- 6,7-dihidr0-8H-[1,3]tiyazol[5,4-e]indol-8- iIiden)metil]amino}-N-(2- piridil)benzenesulfonamid gibi tiyazoller Cancer Institute, Bethesda, MD) gibi flavopiridoller ve bir dekloro türevi Staurosporin (#51016, A.G. Scientific, San Diego, CA) veya UCN-Ol (7- hidroksistaurosporin) National Cancer Institute, Bethesda, MD gibi alkaloidler Sielecki, T.M. ve ark., Bioorg. Med. Chem. Lett., Mettey ve ark., J. Med.

Davis, S.T. ve ark., Science, PCT/USOZ/30059, Hellberg ve ark., WO 03/027275 olarak yayimlanmistir.

Carlson, B.A., ve ark., (1996) Cancer Res., 56, 2973-8 Rialet, V., ve ark., (1991) Anticancer Res., 11, 1581- Wang, Q., ve ark., (1995) Cell Growth Differ., 6, 927- 36, Akiyama, T., ve ark., (1997) Cancer Res., 57, 1495-501, Kawakami, K., ve ark., (1996) Biochem.

Biophys. Res.

Sigma-Aldrich'ten kenpaullone (#K3888) ticari adiyla temin edilebilen CieHiiBrNzo molekül formülüne sahip 9-Br0mo-7,12-dihidroind0l[3,2- d][1]benzazepin-6(5H)-on veya Sigma- Aldrich'ten alsterpaullone (#A4847) ticari adiyla temin edilebilen CieHii N303 molekül formülüne sahip 9-Nitro-7,12-dihidroindoI-[3,2- d][1]benzazepin-6(5)-0n gibi paulloneler Bir alkaloid olan CGP 41251 A.G. Scientific, Inc'nin bir bölümü olan Biochemicals.net'ten temin edilebilen CiiHwBrN502 moleküler formülüne sahip 102- himenialdizin gibi himenialdizinler (San Diego, Bir fenilaminopirimidin olan CGP60474 Tiyazolopirimidin 2 Zaharevitz, D.W. ve ark., (1999); Schultz, C. ve ark., J. Med. Chem., 42,2909- 2919 (1999); Zaharevitz, D.W., ve ark., (1999) Cancer Res., 59,2566-9; PCT/USOZ/30059, Hellberg ve ark., WO 03/027275 olarak yayimlanmistir.

Begemann, M., ve ark., (1998) Anticancer Res., 18, 2275-82; Fabbro ve ark., Pharmacol Ther. 1999 May-Jun;82(2- 3):293-301 Meijer, L., ve ark., (1999) Chemistry & Biology, 7, 51- PCT/USOZ/30059, Hellberg ve ark., WO 03/0272 75 olarak yayimlanmistir. 21; WO95/09853, Zimmermann ve ark., September 21, 1994 Attaby ve ark., Z.

Naturforsch. 54b, 788-798 (1999) Diarilüre Honma, T. ve ark., J. Med. (2001), Honma, T. ve ark., J. Med. Chem., 44, 4615- 4627 (2001).

Sigma-Aldrich'ten Butyrolactone-I (87930) ticari Kitagawa, M. ve ark., formülüne sahip (2R)-2,5-Dihidro-4-hidroksi-Z- (1993). (4-hidroksifenil)-5-okso-2-furankarboksilik asit metil ester Aloizin A, Kat No. 128125 (Calbiochem, San Mettey ve ark., J. Med.

Tercih edilen bir açiklamada kemik metastazi, osteolitik metastazdir. c-Maf inhibitör ajanlari, tipik olarak farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici ile kombinasyon halinde uygulanmaktadir. ifade etmektedir. Bu tür farmasötik tasiyicilar su ve yag, petrol, hayvan, bitki veya sentetik kökenli yaglar, örnegin yer fistigi yagi, soya fasülyesi yagi, mineral yagi, susam yagi ve benzeri gibi steril sivilar olabilmektedir. Su veya sulu salin çözeltileri ve sulu dekstroz ve gliserol çözeltileri, özellikle enjekte edilebilir çözeltiler için olanlar tercihen tasiyicilar olarak kullanilmaktadir. Uygun farmasötik tasiyicilar, "Remington's Pharmaceutical Sciences" kaynaginda E.W. Martin, 1995 tarafindan açiklanmistir.

Tercihen mevcut belgedeki tasiyicilar, devlet veya federal hükümet düzenleme kurumu tarafindan onaylanmistir veya Amerika Birlesik Devletleri Farmakopesi veya hayvanlarda ve özellikle insanlarda kullanimlari için genel olarak kabul edilmis diger farmakopelerde listelenmistir.

Mevcut belgedeki farmasötik bilesimin istenen farmasötik dozaj formunun üretilmesi için gerekli olan tasiyicilar ve yardimci maddeler, diger faktörlerin yani sira seçilen farmasötik dozaj formuna bagli olacaktir. Farmasötik bilesimin söz konusu farmasötik dozaj formlari, teknikte uzman kisi tarafindan bilinen geleneksel yöntemlere göre üretilecektir. Kullanilacak etken maddelerin, eksipiyanlarin uygulanmasina yönelik farkli yöntemlerin ve bunlarin üretilmesine yönelik proseslerin bir degerlendirmesi, "Tratado de Farmacia Galénica", C. Fauli i Trillo, Luzan 5, S.A. 1993 Edition içinde bulunabilmektedir. Farmasötik bilesimlerin örnekleri, oral, topikal veya parenteral uygulama için herhangi bir kati bilesimi (tabletler, haplar, kapsüller, granüller, vb.) veya sivi bilesimi (çözeltiler, süspansiyonlar veya emülsiyonlar) içermektedir. Ayrica farmasötik bilesim, gerekli görüldügünde stabilizatörleri, süspansiyonlari, koruyuculari, sürfaktanlari ve benzerlerini içerebilmektedir.

Tip alaninda kullanima yönelik c-Maf inhibitör ajanlari, izole edilmis veya ek aktif ajanlar ile kombinasyon halinde olmak üzere bir ön ilaç, tuz, solvat veya klatrat formunda bulunabilmektedir ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir eksipiyan ile birlikte formüle edilebilmektedir. Kullanimina yönelik tercih edilen eksipiyanlar arasinda sekerler, nisastalar, selülozlar, kauçuklar ve proteinler yer almaktadir. Belirli bir yapilandirmada mevcut belgedeki farmasötik bilesim, bir kati farmasötik dozaj formunda (örnegin tabletler, kapsüller, haplar, granüller, fitiller, steril kristal veya sivi formlari saglamak üzere yeniden olusturulabilen amorf katilar vb.), sivi farmasötik dozaj formunda (örnegin çözeltiler, süspansiyonlar, emülsiyonlar, eliksirler, losyonlar, merhemler vb.) veya yari kati farmasötik dozaj formunda (jeller, merhemler, kremler ve benzerleri) formüle edilecektir. Farmasötik bilesimler bunlarla sinirli olmamak üzere oral yol, intravenöz yol, intramasküler yol, intraarteriyel yol, intramedüler yol, intratekal yol, intraventriküler yol, transdermal yol, subkütanöz yol, intraperitoneal yol, intranazal yol, enterik yol, topikal yol, sublingual yol veya rektal yol dahil olmak üzere herhangi bir yolla uygulanabilmektedir. Etken maddelerinin uygulanmasina yönelik farkli yollarin, kullanilacak eksipiyanlarin ve bunlarin üretim proseslerinin bir degerlendirmesi, Tratado de Farmacia Galénica, C. Fauli' i Trillo, Luzén 5, S.A., 1993 Edition and in Remington's Pharmaceutical Sciences (A.R. Gennaro, Ed.), 20th edition, Williams & Wilkins PA, USA (2000) içinde bulunabilmektedir. Farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyicilarin örnekleri, teknigin bilinen durumunda bilinmektedir ve aralarinda fosfat tamponlu salin çözeltileri, su, emülsiyonlar, örnegin yag/su emülsiyonlari, farkli türlerde islatma ajanlari, steril çözeltiler vb. bulunmaktadir. Söz konusu tasiyicilari içeren bilesimler, teknigin bilinen durumunda bilinen geleneksel prosesler ile formüle edilebilmektedir.

Nükleik asitlerin (siRNA, siRNA veya shRNA'yi kodlayan polinükleotidler veya negatif MAF dominantlarini kodlayan polinükleotidler) uygulanmasi durumunda mevcut belge, özellikle söz konusu nükleik asitlerin uygulanmasina yönelik hazirlanan farmasötik bilesimleri öngörmektedir. Farmasötik bilesimler, söz konusu çiplak nükleik asitleri, diger bir ifadeyle transfeksiyon için kullanilan reaktifler ile iliskilendirilen toksisitenin ortadan kaldirilmasi avantajini sunan, nükleik asitleri vücuttaki nükleazlar tarafindan parçalara ayrilmaktan koruyan bilesikler olmadan, içerebilmektedir. Çiplak bilesiklere yönelik uygun olan uygulama yollari arasinda intravasküler yol, intratümör yol, intrakraniyal yol, intraperitoneal yol, intraplenik yol, intramüsküler yol, subretinal yol, subkütanöz yol, mukozal yol, topikal yol ve oral yol yer almaktadir (Templeton, 2002, belgede açiklandigi gibi kolesterole konjuge edilen veya HIV-1 TAT proteininden türetilen Tat peptidi, D. melanogasterantennapedia proteininin homeodomeninin üçüncü sarmali, herpes simplex virüsü VP22 proteini, arjinin oligomerleri ve peptidleri gibi hücre membranlarindan translokasyonu destekleyebilen bilesiklere konjuge edilen olarak polinükleotid, adeno ile iliskili virüslerde veya murin lösemi virüsü (MLV) veya viral vektör, tercihen adenovirüs bazli vektörlerin parçasini olusturacak sekilde uygulanabilmektedir. c-Maf inhibitör ajanlari veya bunlari içeren farmasötik bilesimler, vücut agirliginin kilogrami basina 10 mg'den az, tercihen vücut agirliginin kg'si basina yaklasik, yaklasik 0.00001 mg'den az bir dozda uygulanabilmektedir. Birim doz, enjeksiyon, inhalasyon veya topikal uygulama ile uygulanabilmektedir.

Doz, tedavi edilecek durumun siddetine ve yanitina baglidir ve birkaç gün ile ay arasinda veya durum normale dönene kadar olan süre arasinda degisiklik gösterebilmektedir. Optimum dozaj, hastanin vücudundaki ajanin konsantrasyonlari periyodik olarak ölçülerek belirlenebilmektedir. Optimum doz, hayvan modellerinde önceki in vitro veya in i/i'i/o testler araciligiyla elde edilen EC50 degerlerinden belirlenebilmektedir. Birim doz, günde bir kere veya günde bir kereden az, tercihen yaklasik her 2, yaklasik her 4, yaklasik her 8 veya yaklasik her 30 günde bir kereden az uygulanabilmektedir. Alternatif olarak bir baslangiç dozunun akabinde genel olarak baslangiç dozundan daha az bir miktarda bir veya birkaç idame dozunun uygulanmasi mümkündür. Idame rejimi, gün basina vücut agirliginin yaklasik 0.01 1.19 ile yaklasik 1.4 mg/kg'si araliginda degisen bir dozla, örnegin gün basina vücut agirliginin kg'si basina 0.00001 mg dozla hastanin tedavi edilmesini içerebilmektedir. Idame dozlari tercihen en fazla yaklasik her 5, yaklasik her 10 veya yaklasik her 30 günde bir uygulanmaktadir. Tedavinin hastanin muzdarip oldugu bozuklugun türü, bunun siddeti ve hastanin durumuna göre degisiklik gösterecek bir süre boyunca devam ettirilmesi gerekmektedir. Tedaviden sonra hastanin seyri, hastaligin tedaviye cevap vermemesi halinde dozun artirilip artirilmayacagini belirlemek veya doz azaltilirsa hastalikta bir iyilesme görülüp görülmedigini veya istenmeyen yan etkilerin gözlemlenip gözlemlenmedigini belirlemek için izlenmek zorundadir.

Yüksek MAF seviyelerine sahip; olan kemik metastazli meme kanseri hastalarinda kemik vikiminin tedavisi veva önlenmesi Bir baska yönünde mevcut belge, bir kontrol numunesi ile kiyaslandiginda MAF geninin amplifikasyonunun veya artan kopya sayisinin oldugu belirlenmis olan HER2+ meme kanserinden muzdarip olan bir denekte HER2+ meme kanserinden kaynaklanan kemik metastazinin önlenmesinde, inhibisyonunda veya tedavisinde veya HER2+ meme kanserinde kemik yikiminin önüne geçilmesinde veya bunun önlenmesinde kullanilmak üzere kemik yikiminin önüne geçebilen veya bunu önleyebilen bir ajanla ilgilidir, burada kemik yikiminin önüne geçebilen veya bunu önleyebilen ajan, bir bisfosfonat, bir RANKL inhibitörü, bir PTH veya bir PTHLH inhibitörünün bloke edici antikorlari veya bunlarin rekombinat formlari dahil olmak üzere, bir PRG analogu, stronsiyum ranelat, bir DKK-1 inhibitörü, bir çifte MET ve VEGFRZ inhibitörü, bir östrojen reseptör modülatörü, kalsitonin, bir katepsin K inhibitörü ve alfaradin arasindan seçilmektedir.

Bir baska yönde, mevcut belge HER2+ meme kanserinden muzdarip olan ve bir kontrol numunesine göre bir metastatik numunede yüksek MAF seviyelerine sahip olan bir denekte bir c-Maf inhibitör ajaninin veya kemik metastazinin tedavisine yönelik bir ilacin üretimine yönelik kemik degradasyonunun önüne geçebilen veya bunu önleyebilen bir ajanin kullanimi ile ilgilidir.

Alternatif olarak mevcut belge, HER2+ meme kanserinden muzdarip olan ve bir kontrol numunesine göre bir metastatik numunede yüksek MAF seviyelerine sahip olan bir denekte yikimin önlenmesi ve/veya tedavisine yönelik bir yöntem ile ilgili olup, yöntem söz konusu denege kemik yikiminin önüne geçmeye veya bunu önlemeye yönelik bir c- Maf inhibitör ajaninin uygulanmasini içermektedir.

Belirli bir yapilandirmada kemik metastazi, osteolitik metastazdir.

Mevcut belgede açiklanan terapötik yönteme uygun olan kemik yikiminin önüne geçebilen veya bunu önleyebilen ajanlar, özellestirilmis terapi yöntemi baglaminda yukarida detayli olarak açiklanmistir.

Referans veya kontrol numunesi, metastazdan muzdarip olmayan HER2+ meme kanseri olan bir denege ait bir numunedir veya metastazdan muzdarip olmayan HER2+ meme kanseri olan deneklerin biyopsi numunelerinde bir tümör dokusu koleksiyonunda ölçülen MAF geni ekspresyon seviyesinin medyan degerine karsilik gelen bir numunedir.

MAF seviyelerinin bir kontrol numunesine göre yüksek olup olmadiginin belirlenmesine veya ölçülmesine yönelik yöntemler, mevcut bulusun birinci yöntemi ile ilgili olarak detayli bir sekilde açiklanmistir ve kemik yikiminin önüne geçmeye veya önlemeye yönelik ajana esit derecede uygulanabilirdir.

Alternatif olarak yukarida bahsedilenlerden kemik yikiminin önüne geçmeye veya bunu önlemeye yönelik birden fazla ajanin metastazi tedavi etmek ve/veya önlemek üzere kombine edildigi veya söz konusu ajanlarin kalsiyum veya D vitamini gibi diger takviyeler ile veya bir hormon ile kombine edilebildigi bir kombine tedavi gerçeklestirilebilmektedir.

Kemik yikiminin önüne geçmeye veya bunu önlemeye yönelik ajanlar, tipik olarak farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici ile kombinasyon halinde uygulanmaktadir. doz, c-Maf inhibitör ajanina yönelik yukarida tanimlanmistir ve kemik yikiminin önüne geçmeye veya bunu önlemeye yönelik ajana esit derecede uygulanabilirdir.

Asagidaki örnekler mevcut bulusu açiklamakta ve bunun kapsamini sinirlandirmamaktadir.

Mevcut belgenin kitleri Bir baska yönde mevcut belge, söz konusu kanserden muzdarip olan bir denekte HER2+ meme kanserinin kemik metastazini tahmin etmeye yönelik bir kit ile ilgili olup, kit asagidakileri içermektedir: a) söz konusu denegin bir numunesinde MAF ekspresyon seviyesinin ölçülmesine yönelik araçlar ve b) söz konusu numunedeki MAF'nin ölçülmüs ekspresyon seviyesinin bir referans MAF ekspresyon seviyesiyle karsilastirilmasina yönelik araçlar.

Bir baska yönde mevcut belge, HER2+ meme kanserinden kaynaklanan kemik metastazindan muzdarip olan bir denegin klinik sonucunu tahmin etmeye yönelik bir kit ile ilgili olup, kit asagidakileri içermektedir: a) söz konusu denegin bir numunesinde MAF ekspresyon seviyesinin ölçülmesine yönelik araçlar ve b) söz konusu numunedeki MAF'nin ölçülmüs ekspresyon seviyesinin bir referans MAF ekspresyon seviyesiyle karsilastirilmasina yönelik araçlar.

Bir baska yönde mevcut belge, HER2+ meme kanserinden muzdarip olan bir denek için bir terapinin belirlenmesine yönelik bir kit ile ilgili olup, kit asagidakileri içermektedir: a) söz konusu denegin bir numunesinde MAF ekspresyon seviyesinin ölçülmesine yönelik araçlar; b) söz konusu numunedeki MAF'nin ölçülmüs ekspresyon seviyesinin bir referans MAF ekspresyon seviyesiyle karsilastirilmasina yönelik araçlar; ve c) ölçülmüs ekspresyon seviyesinin referans ekspresyon seviyesi ile karsilastirmasina bagli olarak söz konusu denekte kemik metastazinin önlenmesine ve/veya azaltilmasina yönelik bir terapinin belirlenmesine yönelik araçlar.

Bir baska yönde mevcut belge, asagidakileri içeren bir kit ile ilgilidir: i) HER2+ meme kanserinden muzdarip bir denege ait bir numunede MAF ekspresyon seviyesinin ölçülmesine yönelik bir reaktif ve ii) önceden kemik metastazi riskiyle iliskili olduklari belirlenmis olan bir veya birden fazla MAF geni ekspresyon seviyesi indeksi.

Söz konusu denege ait bir numunede MAF ekspresyon seviyesinin ölçülmesine yönelik önceden ayrintili olarak açiklanmistir.

Tercih edilen bir yönde ekspresyonun ölçülmesine yönelik araçlar, MAF genine spesiûk olarak baglanan ve/veya MAF genini amplifiye eden bir dizi probu ve/veya primeri içermektedir.

Belirli bir yönde meme kanseri, HER2+ meme kanseridir.

Mevcut bulusun ve belgenin yöntemlerinin tüm belirli yapilandirmalari ve yönleri, mevcut belgenin kitlerine ve bunlarin kullanimlarina uygulanabilmektedir.

Meme kanserinden muzdarip bir denegin bir numunesini tiplendirme Bir baska yönde mevcut bulus, HER2+ meme kanserinden muzdarip olan bir denege ait bir numunenin tiplendirilmesine yönelik bir in vitro yöntemle ilgili olup, bu yöntem asagidakileri içermektedir: a) söz konusu denekten alinan bir HER2+ meme kanseri numunesinin saglanmasi; b) söz konusu numunede MAF amplifikasyonunun veya kopya sayisinin ölçülmesi; c) ölçülen MAF amplirikasyonunun veya kopya sayisinin önceden belirlenmis bir MAF referans seviyesi ile karsilastirilmasi yoluyla söz konusu numunenin tiplenmesi; burada söz konusu tipleme, söz konusu denekteki kemik metastazi riski ile baglantili prognostik bilgiler saglamaktadir.

Söz konusu denege ait bir numunede MAF ekspresyon seviyesinin ölçülmesine yönelik önceden ayrintili olarak açiklanmistir.

Tercih edilen bir yönde numune, bir tümör dokusu numunesidir.

Meme kanserinden muzdarip bir denegin siniflandirilmasina vönelik yöntem Bir baska yönünde mevcut bulus, HER2+ meme kanserinden muzdarip olan bir denegin bir kohorta siniflandirilmasina yönelik bir yöntem ile ilgili olup, yöntem asagidakileri içermektedir: a) söz konusu denege ait bir HER2+ meme kanseri numunesinde MAF'nin amplifikasyonunun veya kopya sayisinin belirlenmesi; b) söz konusu numunedeki MAF amplifikasyonunun veya kopya sayisinin önceden belirlenmis bir MAF referans seviyesi ile karsilastirilmasi; ve c) numunedeki söz konusu MAF ekspresyon seviyesine göre söz konusu denegin bir kohorta siniflandirilmasi.

Söz konusu denege ait bir numunede MAF ekspresyon seviyesinin ölçülmesine yönelik önceden ayrintili olarak açiklanmistir.

Tercih edilen bir yapilandirmada numune, bir tümör dokusu numunesidir.

Tercih edilen bir yapilandirmada söz konusu kohort, söz konusu referans ekspresyon seviyesine kiyasla MAF'nin bir karsilastirilabilir ekspresyon seviyesi oldugu belirlenmis olan en az bir diger kisiyi içermektedir.

Bir baska tercih edilen yönde, söz konusu numunedeki MAF'nin ekspresyon seviyesi, söz konusu önceden belirlenmis referans seviyesine göre artmaktadir ve burada kohoit üyeleri, artan kemik metastazi riski olanlar olarak siniflandirilmaktadir.

Bir baska tercih edilen yapilandirmada, söz konusu kohort, bir klinik deneme yapilmasi içindir. Tercih edilen bir yapilandirmada numune, bir tümör dokusu numunesidir. ÖRNEKLER ÖRNEKi Deneysel prosedürler ve veri setleri Meme kanseri primer tümör numunesi kohortu: Kullanilan meme kanseri kohortu, evre I, II veya III meme kanseri olan ve metastaz bölgesi dahil olmak Üzere klinik takip notu olan hastalardan alinan 334'ten fazla primer 1164). Bu mikrodiziler standart prosedürler uyarinca islenmistir. Meme kanseri tümörleri ER+, Üçlü Negatif ve HER2+ dahil olmak üzere çesitli alt tiplerde siniflandirilmistir ve ardindan MAF (MAF) ekspresyonunun ve bu tümörlerdeki 16q22-24 amplifikasyonunun ilgili alt riplerdeki kemik metastazi olaylari ile iliskili olup olmadigini test etmek için uygun istatistikler analizler yapilmistir.

Bu kohorttaki istatistiksel analizler asagidaki öncüllere dayali olmustur: A) Kümülatif görülme orani Sekil 1b için, Cox nedene özgü orantisal tehlike modellerini rekabetçi olaylara (herhangi bir zamanda kemik metastazindan önce ölüm) uyarladiktan ve olasilik orani testlerini yaptiktan sonra p-degerleri elde edilmistir.

B) Taban hatti özelliklerinin karsilastirilmasi (Tablo 51) Student t testi ile yas farkliliklari test edilmistir. Tüm diger degiskenler Fisher'in tam testi ile test edilmistir.

FISH belirlemesi ile 16q22-24 DNA genomik amplifikasyonunun kemik metastazini tahmin etmek için prognostik kapasitenin validasyonu 16q22-24 genomik amplifîkasyonunun kemik metastaz riskini spesifik olarak tahmin etme yetenegini ayrica dogrulamak için, evre I, II veya III meme kanseri bulunan ve takip notu olan hastalardan alinan 334 primer meme kanseri numunesinden olusan bir genomik bölgesini belirleyen ticari olarak mevcut bir tani probunu, yani IGH/MAF Abbot Vysis probunu kullandik ve sentomerik kr. 16 probunu, yani 'u 1156-1164). Bu mikrodiziler standart prosedürler uyarinca islenmistir. Lamlar MAF (16q23) ile inkübe edilmis ve CEP16 probunu kullarak bagimsiz olarak boyanmistir.

DAPI karsi boyamasi uygulanmis ve yeterli mikroskopla görüntüler alinmistir. Hastalar, Evre 1, II ve III meme kanseri insan primer tümör setinde (n=334) herhangi bir zamanda kemik metastazi için (kesintisiz çizgi) ve kemikte nüksetme öncesi ölüm (kesikli çizgi) için kümülatif görülme orani grafigi (Sekil 1b) belirlenmis ve istatistiksel önem göstermistir.

MAF ekspresvon seviyelerine göre HER2+ tanisi kovulan denekte tedavi rejiminin belirlenmesi HER2+ meme kanseri oldugu tanisi koyulan bir denekten bir tümör dokusu numunesi alinmistir. Numune, ince doku dilimler olarak kesilmis ve parafin içine gömülmüstür.

Her parafin kesiti bir lam üzerine monte edilmistir. Lamlar anti-MAF antikoru ile inkübe edilmistir. MAF'ye baglanan antikorlarin görsellestirilmesi ve tespit edilmesi için, floresan boya konjugeli antikorlar kullanilmistir. Lamlar, floresan boyalara uyarici isinlar saglanarak görsellestirilmistir. Floresan sinyallerinin görüntüleri floresan mikroskoplari ile alinmistir. Tümör numunesinde MAF'nin göreceli ekspresyon seviyesi, tümör dokusundaki floresan sinyalinin bir referans numunesininki ile karsilastirilmasi ile elde edilmektedir. Tümör numunesindeki yogunluk, referans numunesindeki yogunlukla iliskilendirilmistir, burada referans numunesine kiyasla tümör numunesindeki daha yüksek bir yogunluk, primer meme kanseri olan denekte kemige metastaza iliskin artan amplifikasyonu veya translokasyonu, bir in situ hibridizasyon teknigi veya benzeri kullanilarak belirlenmektedir.

Artan kemik metastazi riskinin prognozuna dayali olarak, denege kemik metastazi için bir profilaktik tedavi olarak anti-RANKL antikoru Denosumab verilmektedir. 120mg Denosumab, 6 ay boyunca ayda bir seklinde denege subkütanöz (SC) olarak verilmektedir. Sonraki 4 ay ve yarim yil boyunca her 3 ayda bir 120mg SC. 5 yil boyunca oral kalsiyum (en az 500 mg) ve vitamin D (en az . 5 yildan sonra denekte herhangi bir kemik metastazi kaniti yoktur. Arkan kemik metastazi riski olmamasina dayali olarak, hastaya bu anti-RANKL antikoru verilmemektedir.

Burada açiklanan örneklerin ve yapilandirmalarin yalnizca açiklama amacina yönelik oldugu ve alanda uzman kisiler için çesitli modifikasyonlarin veya degisiklerin bunlar isiginda açik olacagi ve bu basvurunun özü ve kapsami içine girecegi anlasilmaktadir.

Claims (1)

ISTEMLER

1. Söz konusu kanserden muzdarip bir denekte HER2+ meme kanserinin kemik metastazi riskinin ve/veya HER2+ meme kanserinin klinik sonucunun tahmin edilmesine yönelik bir in vitro yöntem olup, i) söz konusu denege ait bir HER2+ meme kanseri numunesinde MAF geninin amplifikasyonunun veya kopya sayisinin belirlenmesi ve ii) i) adiminda elde edilen amplifikasyonun veya kopya sayisinin bir referans degerle karsilastirilmasini içerir, burada söz konusu genin söz konusu referans degere göre artan kopya sayisi veya amplifikasyon derecesi, artan kemik metastazi gelistirme riskinin ve/veya kötü klinik sonucun göstergesidir. . HER2+ meme kanserinden muzdarip bir denek için özellestirilmis bir terapinin tasarlanmasina yönelik bir in vitro yöntem olup, i) söz konusu denege ait bir HER2+ meme kanseri numunesinde MAF geni amplifikasyonunun veya kopya sayisinin ölçülmesi ve ii) i)'de elde edilen amplifikasyonun veya kopya sayisinin bir referans degerle karsilastirilmasini içerir, burada eger kopya sayisi veya amplifikasyon derecesi söz konusu referans degere göre artmissa, söz konusu denek kemik metastazini önlemeyi ve/veya tedavi etmeyi amaçlayan bir terapi ve/veya kemik yikiminin önüne geçmeyi ve/veya bunu önlemeyi amaçlayan bir terapi almaya yatkindir, eger kopya sayisi veya amplifikasyon derecesi söz konusu referans degere göre artmamissa, söz konusu denek kemik metastazini önlemeyi ve/veya tedavi etmeyi amaçlayan bir terapi ve/veya kemik yikiminin önüne geçmeyi ve/veya bunu önlemeyi amaçlayan bir terapi almaya yatkin degildir. . Istem 1'e göre kemik metastazi riskinin tahmin edilmesine yönelik in vitro yöntem olup, söz konusu genin ortalama deger arti bir standart sapma üzerinde olan kopya sayisi veya amplifikasyon derecesi, erken kemik metastazinin artan riskinin göstergesidir. . Istem Z'ye göre yöntem olup, kemik yikiminin önüne geçmeyi veya bunu önlemeyi amaçlayan terapi, bir bisfosfonat, bir RANKL inhibitörü, bir PTH inhibitörü, bir PTHLH inhibitörü, bir PRG analog, stronsiyum ranelat, bir DKK-1 inhibitörü, bir çifte MET ve VEGFR2 inhibitörü, bir östrojen reseptör modülatörü, kalsitonin, radyum- 223 ve bir katepsin K inhibitöründen olusan gruptan seçilir ve/veya metastazi önlemeyi ve/veya tedavi etmeyi amaçlayan terapi bir c-MAF inhibitör ajani; kemoterapi, hormon terapisi, immünoterapi, radyoterapi, ameliyat, bir mTor inhibitörü, bir Src kinaz inhibitörü, bir CCRS antagonisti, bir COX-2 inhibitörünü içeren ancak bunlarla sinirli olmayan sistemik tedavilerden ve Alfaradinden olusan gruptan seçilir. . Istem 4'e göre yöntem olup, RANKL inhibitörü, bir RANKL spesifik antikor, bir RANKL-spesifik nanobody, osteoprotegerin, bisfosfonat zoleclronik asit ve çifte MET ve VEGFR2 inhibitörü Cabozantinib'den olusan gruptan seçilir. . Istemler 1-5'ten herhangi birine göre yöntem olup, MAF amplifikasyonunun veya kopya sayisinin belirlenmesi, söz konusu gen tarafindan kodlanan proteinin veya bunun bir varyantinin kopya sayisinin veya amplifikasyonunun ölçülmesini içerir, ki burada proteinin kopya sayisi veya amplifikasyonu, western blot, ELISA, FISH, immünohistokimya veya bir protein dizisi araciligiyla ölçülür, veya söz konusu genin haberci RNA'sinin (mRNA) veya söz konusu mRNA'nin bir fragmaninin, söz konusu genin komplementer DNA'sinin (cDNA) veya söz konusu cDNA'nin bir fragmaninin ölçülmesini içerir. . Istem 1'e göre kemik metastazi riskinin tahmin edilmesine ve/veya HER2+ meme kanserinden kaynaklanan klinik sonucun tahmin edilmesine yönelik in vitro yöntem olup, söz konusu denege ait HER2+ meme kanseri numunesinde MAF geninin bir referans gen kopya sayisina göre amplifiye olup olmadiginin belirlenmesini içerir, burada söz konusu referans gen kopya sayisina göre MAF geninin ampliûkasyonu, artan kemik metastazi gelistirme riskinin ve/veya kötü klinik sonucun göstergesidir. . Bir referans deger ile kiyaslandiginda MAF geninin amplifikasyonu veya artan kopya sayisina sahip oldugu belirlenen bir denekte HER2+ meme kanserinden kaynaklanan kemik metastazinin önlenmesinde, inhibisyonunda veya tedavisinde veya HER2+ meme kanserinde kemik yikiminin önüne geçilmesinde veya bunun önlenmesinde kullanilmak üzere kemik yikiminin önüne geçebilen veya bunu önleyebilen bir ajan olup, kemik yikiminin önüne geçebilen veya bunu önleyebilen ajan, bir bisfosfonat, bir RANKL inhibitörü, bir PTH veya bir PTHLH inhibitörünün bloke edici antikorlari veya bunlarin rekombinat formlari dahil olmak üzere, bir PRG analogu, stronsiyum ranelat, bir DKK-1 inhibitörü, bir çifte MET ve VEGFR2 inhibitörü, bir östrojen reseptör modülatörü, kalsitonin, bir katepsin K inhibitörü ve alfaradinden olusan gruptan seçilir. . Istem 8'e göre HER2+ meme kanserinden kaynaklanan kemik metastazinin veya kemik yikiminin tedavisinde, inhibisyonunda veya önlenmesinde kullanilmak üzere kemik yikiminin önüne geçebilen veya bunu önleyebilen bir ajan olup, söz konusu ajan bisfosfonat, bir RANKL inhibitörü, bir PTH inhibitörü, bir PTHLH inhibitörü veya bir PRG analogu, stronsiyum ranelat, bir DKK-1 inhibitörü, bir çifte MET ve VEGFR2 inhibitörü, bir östrojen reseptör modülatörü, kalsitonin, Radyum-223 ve bir katepsin K inhibitöründen olusan gruptan seçilir. 10.Istem 9'a göre HER2+ meme kanserinden kaynaklanan kemik metastazinin veya kemik yikiminin tedavisinde, inhibisyonunda veya önlenmesinde kullanilmak üzere kemik yikiminin önüne geçebilen veya bunu önleyebilen bir ajan olup, RANKL inhibitörü, bir RANKL spesifik antikor, bir RANKL-spesifik nanobody, osteoprotegerin, bisfosfonat zoledronik asit ve çifte MET ve VEGFR2 inhibitörü Cabozantinib'den olusan gruptan seçilir. 11.HER2+ meme kanserinden muzdarip bir denege ait bir numunenin tiplenmesine yönelik bir in vitro yöntem olup, yöntem (a) söz konusu denekten alinan bir HER2+ meme kanseri numunesinin saglanmasi; (b) söz konusu numunede MAF amplifikasyonunun veya kopya sayisinin ölçülmesi; (c) ölçülen MAF amplifikasyonunun veya kopya sayisinin önceden belirlenmis bir MAF referans seviyesi ile karsilastirilmasi yoluyla söz konusu numunenin tiplenmesini içerir; burada söz konusu tipleme, söz konusu denekteki kemik metastazi riskine iliskin prognostik bilgiler saglar. 12.HER2+ meme kanserinden muzdarip bir denegin bir kohorta siniflandirilmasina iliskin bir yöntem olup, a) söz konusu denege ait bir HER2+ meme kanseri 5 numunesinde MAF'nin amplifikasyonunun veya kopya sayisinin belirlenmesi; b) söz konusu numunedeki MAF amplifikasyonunun veya kopya sayisinin önceden belirlenmis bir MAF referans seviyesi ile karsilastirilmasi ve c) numunedeki söz konusu MAF amplifikasyonuna veya kopya sayisina göre söz konusu denegin bir kohorta siniflandirilmasini içerir.