TR202012135A2 - Gastri̇k bi̇yopsi̇ örneği̇nden ve bakteri̇ kültüründen h. pylori̇ tespi̇ti̇ i̇çi̇n antosi̇yani̇n i̇çeri̇kli̇ hizli ve hassas üreaz testi̇ - Google Patents

Abstract

Buluş, gastrik biyopsi örneğinden antosiyanin indikatörü kullanılarak H. pylori tespiti yapan bir hızlı ve hassas üreaz testi ile ilgilidir. Buluş, H. pylori enfeksiyonuyla doğrudan veya dolaylı olarak ilgisi bulunan hastalıklarda tanı koyma amacıyla uygulanabilecektir.

Description

TARIFNAME GASTRIK BIYOPSI ÖRNEGINDEN VE BAKTERI KÜLTÜRÜNDEN H. PYLORI TESPITI IÇIN ANTOSIYANIN IÇERIKLI HIZLI VE HASSAS ÜREAZ- TESTI Bulusun Ilgili Oldugu Teknik Alan Bulus, gastrik biyopsi ömeginden antosiyanin indikatörü kullanilarak H. pylori tespiti yapan bir hizli ve hassas üreaz testi ile ilgilidir. Bulus, H. pylori enfeksiyonuyla dogrudan veya dolayli olarak ilgisi bulunan hastaliklarda tani koyma amaciyla uygulanabilecektir.

Bulusla Ilgili Teknigin Bilinen Durumu (Önceki Teknik) Gastrik mukozayi kolonize eden gram negatif, mikroaerofilik, çubuk seklindeki Helicobaeter pylori (H. pylori), insanlarda en sik görülen bakteriyel enfeksiyonlardan biridir. H. pylori enfeksiyonu dünya çapinda yetiskin nüfusun yarisindan fazlasini etkilemekle birlikte gelismekte olan ülkelerde enfeksiyon prevalansi %90”lara çikarken Japonya hariç gelismis ülkelerde prevalans %40'1n altindadir. H. pylori enfeksiyonu, kronik gastrit, peptik ülser, atrofik gastrit, mukozaya bagli lenfoma (MALT), mide kanseri ve gastroduodenal hastaliga sebep olmaktadir. Peptik ülser hastaliklarinin %80'inden fazlasinda etken H. pyloriidir.

Mide kanseri dünya çapinda kansere bagli ölüinlerde üçüncü sirada yer almaktadir. Ayrica H. pylori enfeksiyonu tüm kardiyak olmayan mide kanseri vakalarinin %74,7'sinden soruinludur.

Mide kanseri ve peptik ülserle birlikte dünyada yilda bir milyondan fazla ölüme neden olmasi sebebiyle önemli bir saglik sorunu haline gelmistir. Gastrointestinal hastaliklara ek olarak, yapilan son çalismalar mikroorganizmanin tekrarlayan aftöz stomatit, anemi, degisen lipoprotein seviyeleri ve koroner ateroskleroz gibi hastaliklarla da iliskisi olabilecegini öne sürülmektedir.

H. pylori varligini saptamak için çesitli yöntemler mevcuttur ve klinik uygulamada H. pylori enfeksiyonunun dogru teshisi için %90'1 asan yüksek duyarlilik ve özgüllüge sahip teshis testleri gereklidir. Teshis testleri genellikle invaziv (endoskopik bazli) ve noninvaziv yöntemler olmak üzere ikiye ayrilir. Invaziv tani testleri endoskopi sirasinda elde edilen doku üzerinde gerçeklestirilen testler olup, histoloji, hizli üreaz testi, kültür ve PCR gibi inoleküler yöntemleri içerir. Invaziv olmayan tani testleri üre nefes testi, diski antijen testi ve serolojik yöntemlerdir.

Hizli üreaz testlerinde günümüzde indikatör olarak fenol kirmizisi veya bromtimol mavisi içeren testler kullanilmakla birlikte bu indikatörleri içeren EP3240907B1 referans numarali patent dokümani bulunmaktadir. Söz konusu dokümanda endoskopi sirasinda alinan doku örneginden bakteri varligini test etmek için indikatör olarak fenol kirmizisi veya bromtimol mavisi kullanilmaktadir. Fenol kirmizisi hem asindirici hem de toksik özelliklere sahiptir.

Teinas halinde ciltte, gözde irritasyona sebep olabilir. Inhale edilmesi durumunda solunum sisteminde irritasyona sebep olabilir. Buhar veya gaz halde solumaktan kaçinilmalidir.

Solunum sistemi organlari ve böbrekler hedef organlari arasindadir. El, yüz ve gözle temasini önlemek için koruyucu materyaller kullanilmalidir. Bromtimol mavisinde de cilt temasindan ve inhale edilmesinden kaçinilmalidir. Uzun süre inhale edilmesi durumunda akciger hasarina sebep olmaktadir. Bahsedilen indikatörler dogal olarak bulunmayip kimyasal prosesle laboratuar ortaminda sentezlenmektedir.

Helicobacter pylori'nin saptanmasi için bir kompozisyondan bahsedilmektedir. Söz konusu dokümanda antosiyanin kullanimindan bahsedilmekte ve kompozisyon Spray kateter yoluyla veya kapsülle mideye gönderilerek mide ortaininda H. pylori ile etkilesimi sonucu biyopsi örnegi almadan tani koyma üzerinedir. Spray kateter veya kapsül yoluyla test etmek çesitli dezavantajlara sahip olmasi sebebiyle günümüzde klinikte kullanilmamaktadir. Hazirlanan kompozisyonun spray katater ile mideye sikilinasiyla inidenin yikanmasi ve yikandiktan sonra degerlendirme yapilmasi peristaltizm nedeni ile her zaman mümkün olmamaktadir. Bunun disinda mide pH”i oldukça asidik bir ortamdir. Bu patentte verilen sivinin mide asitinden etkilenme ihtimali çok yüksektir. Bazi hastalarda aklorhidri olabilir ve mide pH”i daha bazik olabilir. Hazirlanan kompozisyonun bu durumun önüne geçememesi en büyük dezavantajlarindan biridir. Ayrica üst gastrointestinal sistem kanamasi sebebiyle midesinde kan bulunan hastalarda Spray ile sivi testin uygulanmasi müinkün olmamakta ve biyopsi örneginden test yapilinasi gerekmektedir. H. pylori mide mukozasini kaplayan mukus ve mide mukozasi arasinda yasamaktadir. Islem aninda verilen bu sivinin bakteriye istenilen oranda ulasinasi mümkün olmamakla birlikte bu durumda testin yanlis negatif çikma olasiligi olabilir. Biyopsi örnegi kullanilarak yapilan testlerde ise alinan doku tamamen testle etkilesime girdiginden bu durumun önüne geçilmektedir.

Asagida belirtilen mevcut yöntemlerin, hizli üreaz testi ile karsilastirildiginda kullanimini kisitlayan çesitli dezavantajlari mevcuttur: Histoloji; gastrik atrofî veya bagirsak metaplazisi olan hastalar için düsük hassasiyet göstermekle birlikte, zaman alici ve maliyetlidir. Ayrica gözlemcinin becerilerine bagli olmasi sebebiyle sonuç gözlemciler arasi degiskenlik gösterebilir. Kültür yönteminde besiyeri C'de en az 5-7 gün süreyle inkübe edilir. Ayrica H. pylori tanisi için pozitif katalaz, oksidaz sonuçlari ve morfolojik özelliklerin incelenmesi sebebiyle zaman alici bir prosedürdür. Düsük örnek kalitesi, numunenin naklinin geciktirilmesi, aerobik çevreye maruz kaliria gibi durumlarin kültürün performansi üzerinde olumsuz etkisi vardir ve tanisal dogrulugu azaltir.

PCR kullanimi H. pylori enfeksiyonunu tespit etmek için diger konvansiyonel testlere kiyasla uzman personel gerektirmesi sebebiyle kullanimi kisitlanmaktadir. Serolojik yöntemlerde eradikasyon tedavisinden sonra bile konakta antikorlar uzun süreli varligini devam ettirmektedir ve buna bagli olarak pozitif sonuç daha önceki enfeksiyondan kaynakli olabilmektedir. Bu sebeple serolojik yöntemlerde mevcut ve geçmis enfeksiyon ayirt edilememektedir.

Diski antijen testinde ise numune alma hasta uyuncu açisindan zordur. Diskinin durumu ve antijenlerdeki farkliliklar dogrulugu etkileyebilir. Üre nefes testinde ise genellikle nefes numunelerinde l3C-üre Ölçülür ancak kullanilan cihaz pahalidir. 14C-üre kullanimi için radyoaktif reaktiflerin depolanmasi ve atilmasi için lisansli bir nükleer tip bölümünün kullanilmasini gerekir. Bu sistem yerel validasyona ihtiyaç duyar.

Dolayisiyla personel ve cihaz gerektirmesi sebebiyle maliyeti yüksektir ve gelismemis ülkelerde kulllanimi kisitlidir.

Hizli üreaz testi, H. pylori'nin enfeksiyon teshisi için temel olarak üreaz aktivitesinden yararlanir. Endoskopi sirasinda elde edilen biyopsiler, üre ve pH indikatörü içeren bir ortama konulur. Bakteriden kaynakli olarak üreaz mevcutsa, üre karbon dioksit ve amonyaga ayrilir, bu da ortamin pH'ini arttirir ve daha sonra pH göstergesinde renk degisikligine neden olur.

Hizli üreaz testi, biyopsi içindeki bakteri sayisina bagli olarak birkaç dakikadan 24 saate kadar sürede sonuç verebilir. Nispeten uygun maliyette, hizli ve son derece spesifiktir.

Serolojiye göre aktif haldeki enfeksiyonu belirlemesi sebebiyle etkin kullanim saglar. Biyopsi örneginde bulunan bakteri yogunlugu da hizli üreaz testinin reaksiyon süresini ve tanisal dogrulugunu etkileinekle birlikte, pozitif bir hizli üreaz testi sonucu için yaygin kullanilan testlerde en az 100000 (105) hücre gereklidir. Önceki teknikte, indikatör olarak fenol kirmizisi veya bromtimol mavisi içeren jel bazli testler (CLOtest, HpFast), kâgit bazli testler (PyloriTek, ProntoDry) ve sivi bazli testler (UFT300, Endosch) dahil olmak üzere birçok ticari üreaz testi mevcuttur. Mevcut testlerin kullanimini kisitlayacak dezavantajlarin bulunmasi sebebiyle antosiyanin içerikli hizli ve hassas üreaz testi gelistirilmesine ihtiyaç duyulmaktadir.

Bulusun Kisa Açiklamasi ve Amaçlari Bulus biyopsi örnegi kullanilan hizli ve hassas üreaz testinde indikatör amaciyla kullanilan fenol kirmizisi ve bromtimol mavisi indikatörleri yerine antosiyanin indikatörünü kullanmaya yönelik bir hizli ve hassas üreaz testi ortamidir. Bulus, H. Pylori kaynakli hastaliklarda biyopsi ömeginden ve bakteri kültüründen H. pylori varligini tespit etmek için antosiyanin içerikli hizli ve hassas üreaz testi gelistirilmesi ile ilgilidir.

Bulusta, Önceki teknikte mevcut ve ciddi irritasyon ve hasar olusturma tehlikesi bulunan fenol kirmizisi ve bromtimol mavisi indikatörleri yerine antosiyanin yönünden oldukça zengin olan kirmizi lahana ekstresi pH indikatörü olarak kullanilmaktadir. Laboratuar ortaminda sentezlenen toksik ve irritan indikatörler yerine günlük hayatta tüketilen kirmizi lahanada dogal olarak bulunan antosiyaninler kullanilmaktadir.

Bulus ile, antosiyanin içerikli hizli ve hassas üreaz testi sayesinde tamamen güvenilir ve biyouyumlu bir test içerigi hazirlanmaktadir. Laboratuar ortamlarinda hazirlanan oldukça maliyetli olan indikatörlere karsi; dogal kaynakli, kolaylikla ulasilabilir, uygun maliyetli ve uzun süre kararli olan antosiyanin indikatörü iyi bir alternatif olarak sunulmustur.

Diger yöntemlere göre daha genis kitlelerde uygulanan hizli üreaz testlerine, mevcut bulus sayesinde biyouyumlu içerik ve düsük maliyet avantajlari eklenmistir. Test ortaminda bulunan üre, üreaz aktivitesine sahip H. pylori tarafindan NH3”e dönüstürülmektedir. NH3 çikisina bagli olarak ortam güçlü alkali pH”a kaymakta ve antosiyanin negatif yüklenmektedir. Buna bagli olarak mavi renkli test ortami yesile döninektedir. Bu renk degisikligi ortamda üreaz aktivitesi; buna bagli olarak H. pylori bulundugunu kanitlamaktadir.

Ayrica bakterinin üreaz aktivitesi sayesinde NH3 çikisina olan duyarliligi ile renk degistiren vermesiyle duyarliligi 10 kat hücre düzeyinde arttirmistir. üre içermesi benzer olmasina ragmen temel farklilik biyopsi ömeginden alinacak olan doku parçasinin etkilesime girecegi bir hizli üreaz testi hazirlanmasi üzerinedir. Ayrica patentte katater yoluyla mide ortainina midenin duvarini yikayacak miktarda sivi gönderilmesi sebebiyle tespiti kolaylastirmak için yüksek oranda (%5-20) üre içerecek sekilde hazirlanmaktadir. Bulusta ise sadece 100 uL ile hem bakteri kültürü hem biyopsi örnegi test edildigi için düsük miktarda (%2) üre kullaniini testin pozitif sonuç vermesi için yeterli olinaktadir. Bulusta kullanilan test ortami %2 üre içeren ve patentten farkli sekilde koruyucu madde olarak sodyum azit ve fosfat tamponunun kullanildigi, %20 antosiyanin içeren (kirmizi lahana) test ortamidir. Bulusta biyopsi örneginin test edilmesi sebebiyle ortamda diger mikroorganizmalarin test sonucuna etkisini ortadan kaldirmak için koruyucu olarak sodium azit eklenmistir. Ayrica pH degisimi tespit edileceginden dolayi sodium fosfat tamponu ideal ortami saglamaktadir.

Ayrica bulusta test ortami sivi, agar ve 4 farkli destek (kati) materyale emdirilmis formda kullanilabilmektedir. Önceki teknik dokümanlarinda tespit için sivi ortam kullanimindan bahsedilmistir. Bulusta hazirlanan test ortami sivi veya destek materyali olarak agar ve kati membranlara emdirilerek çalisilmistir. Bulus kit, test solüsyonu destek materyaline emdirilerek, siviya oranla tasima kolayligi ve uygulama kolayligi saglayacak formlara getirilmeye çalisilmistir. Bulusun klinikte agar veya kati membranlarda kullanimi daha kolay olacaktir, ayrica laboratuvarlarda sivi haliyle de kullanilabilecektir.

Bulus, endoskopi sirasinda alinan doku Ömeginden tani koymaya yöneliktir. Ayrica bakteri kültüründen de H. pylori`nin ayirt edilmesi için de bulustaki test ortami kullanilabilir.

Bulusun temel mekanizmasinin üreaz aktivitesine dayanmasi sebebiyle, üreaz pozitif olan tüm bakterilerin teshisinde kullanima uygundur.

Spray ile tam koyarken ortaya çikan renk skalasini tanimlamak biyopsi örneginden yapilan testlere kiyasla oldukça zordur. Bunun için endoskopun renk duyarliligi, renk kalitesi ve endoskopistin bu renk degisimini anlayip degerlendirmesi konusunda tecrübeli olmasi gerekmektedir. Tüm bu durumlar göz önünde bulunduruldugunda gelistirdigimiz biyopsi örneginden bakteri varligini tespit etmenin birçok açidan avantajli oldugu ve en önemlisi klinikte kullanilabilecek etkili bir yöntem oldugu görülmektedir.

Diger invaziv ve noninvaziv testlerle karsilastirildiginda bulusta ekipman, cihaz, personel ihtiyacinin minimum olmasi, üreaz testi olmasi sebebiyle oldukça spesifik olmasi, yenilebilir bitki kaynakli olmasi, düsük maliyetli ve yenilikçi olmasi, sanayiye kolaylikla uygulanabilirligi, daha az kimyasal atik olusturmasi, yüksek yurt içi kullanimi, ihracat potansiyeli tasimasi, ülke genelinde ve dünyada çok genis bir popülasyonda ihtiyaca çözüm niteliginde kullanilacak olmasi bulusun üstün niteliklerindendir.

Bulusu Açiklayan Sekillerin Tanimlari Sekil 1: Hizli ve hassas üreaz testinin çalisma mekanizmasi gösterimi (l: %2 üre l mM sodyum azit ve %20”lik kirmizi lahana ekstresi içeren 0,01 M sodyuin fosfat tamponu (inavi renkli test ortami), 2: Üre, 3: Midede kolonize olmus H. Pylori, 4: Amonyak, 5: %2 üreden bakterinin üreaz aktivitesi sonucu olusan NH3, 1 mM sodyum azit ve %20”lik kirmizi lahana ekstresi içeren 0,01 M sodyum fosfat tamponu (yesil renkli test ortami)) Sekil 2: Kitin Çözeltide Tayin Siniri-Renk Degisimi (A. Saline çözeltisi (kontrol), B.l koloni, Sekil 3: Kitin Selüloz Asetat Filtre Kagidinda Tayin Siniri- Renk Degisimi (A. 1 koloni, B.10 Sekil 4: Bakteri Solüsyonunun (0,5 Mcfarland) Farkli Hacimlerinin 100 ul°lik Test Ortamina uL, H.luL, 1. Saline çözeltisi (kontrol)) Sekil 5: Kitin Önceki Teknik ile Karsilastirmali Analizi-Renk Degisimi Bulusun Ayrintili Açiklamasi Bulus H. pylori enfeksiyonunun tanisi için üre ve antosiyanin indikatörü içeren biyopsi örneginden ve bakteri kültüründen tani koymaya yönelik test ortami gelistirilmesi üzerinedir.

Temel çalisma mekanizmasi, ürenin bakteri kaynakli üreaz aktivitesi sonucu NH3 çikisinin antosiyaninlerin negatif yüklenmesi sonucu renk degistirmesi prensibine dayanmaktadir.

Bulus prensibi sekil 1”de gösterilmektedir. %2 üre, 1 mM sodyum azit ve %20”lik kirinizi lahana ekstresi, 0,01 M sodyum fosfat tainponu içeren test solüsyonunun, midede kolonize olmus bakteri ile etkilesimi sonucunda, bakteri tarafindan ürenin parçalanip NH3”e dönüsmesiyle renk degisimi gözlenmektedir. Bulus kapsaminda test solüsyonu direkt olarak sivi formda kullanilabilecegi gibi bir destek materyale emdirilmis/eklenmis sekilde de kullanilabilir. Burada bahsi geçen destek materyali selüloz asetat, nitroselüloz membran, süper absorban polimer, silika kapli tabaka veya agar olabilir. l-Kirrnizi lahana ekstresinin hazirlanmasi Kirmizi lahana yapraklari bir robottan geçirilerek küçük parçalara ayrilir. 100 gram materyal tartilir ve 100 ml distile su ile (hacimde agirlikça 1:1 oraninda olacak sekilde) bir beher içerisine alinir. Karisim 30 dk kadar kaynatilarak ekstre edilir. Elde edilen antosiyanin ekstresi filtre edilir ve çalisma anina kadar -20 0C7de bekletilir. 2-Antosiyanin içerikli hizli ve hassas üreaz test solusyonunun hazirlanmasi Test ortami tampon ortami olarak hazirlanmis olup 0,01 M pH 8 olan sodyum fosfat tamponu otoklavda l2l °C°de 15 dakika steril edilir. 0,45 um por açikligina sahip filtreden süzülmüs üre hacimde agirlikça (W/v) %2°lik ve sodyum azit l mM olacak sekilde eklenir. Bakteri tarafindan ürenin parçalanip NH3”e dönüsmesiyle renk degistirecek olan indikatör için kirinizi lahana ekstresi test ortaminda son hacme oranla hacimce %20 olacak sekilde eklenir. 3-H. pylori”nin kültüre edilmesi H. pylori`yi kültür ortaminda çogaltmak için bakteri, %5 koyun kani içeren triptic soy agara ekilmistir. Anaerobic kültür sartlarini saglamak için anaerob kap sistemi torbaciklari ve anaerob jar kullanilarak 3-7 gün inkübasyona birakilmistir. 4- Antosiyanin içerikli hizli ve hassas üreaz test solusyonunun test edilmesi 100 ML test solüsyonuna 50 uL bakteri solüsyonu eklendiginde test ortamindaki üre bakteri kaynakli üreaz aktivitesi ile NH3 çikisina bagli olarak ortam güçlü alkali pHia kaymakta ve mavi renkli test solüsyonu yesile dönmektedir. Ertesi gün reaksiyon devam etmekte ve sari renkli çözelti gözlemlenmektedir.

- Antosiyanin içerikli hizli ve hassas üreaz test ortaininin destek materyalde hazirlanmasi ve kullanilabilirliginin test edilmesi tamponu (test solüsyonu) çapi 1 cm olan selüloz asetata, nitroselüloz membrana, süper absorban polimere ve silika kapli tabakaya 50 ”L emdirilir. Üzerine 50 ”L 0,5 McFarland bakteri solüsyonu damlatilir ve 15 dk sonunda renk degisimi baslamis olup 20 dk sonucunda net sekilde yesil renk görülmektedir. 6- Antosiyanin içerikli hizli ve hassas üreaz test solüsyonunun tayin sinirinin belirlenmesi bakteri solüsyonlarindan 50 uL olacak sekilde test solüsyonu ve test solüsyonu emdirilmis selüloz asetat, nitroselüloz membran, süper absorban polimer ve silika kapli tabaka test edilir. pozitif sonuç vermektedir.

Ayrica 0,5 McFarland bakteri solüsyonu gelistirilen test solüsyonunda standart olarak 50 uL ekleniyorken daha düsük miktarda eklenen bakteri solüsyonlarinin etkisini test etmek için solüsyonu eklenen test pozitif sonuç verirken, 45 dk sonucunda 50-40-30 uL bakteri solüsyonu eklenenler, 3 saat sonunda ise 20 uL dahil olmak üzere diger testlerden pozitif sonuç görülinüstür. 7- Antosiyanin içerikli hizli ve hassas üreaz test ortaminin destek materyali olarak agar seklinde hazirlanmasi ve kullanilabilirliginin test edilmesi tamponu agar seklinde hazirlanarak test edilmistir.1 litrede 15 gram agar içerecek sekilde 0,01 M pH 8 sodyum fosfat tamponu hazirlanmistir. Otoklavda 121 oC'de 15 dk steril edildikten sonra 0,45 um por açikligina sahip filtreden süzülmüs üre ve sodyum azit sirasiyla %2°lik ve 1 mM olacak sekilde eklenmistir. Sicaklik 45°C9nin altina düsineyecek sekilde hazirlanan agar test ortami egik tüplere bölünmüstür. 50 tiL bakteri solüsyonu eklenerek inkübasyona birakilmistir. 1 saat sonucunda agar testin üst yüzeyi tamamen yesile dönüp pozitif sonuç vermekle birlikte 1 günlük inkübasyon sonucu tüpün tamami mavi renkten yesile dönmüstür. 8- Antosiyanin içerikli hizli ve hassas üreaz test ortaminin biyopsi örneginde test edilmesi tamponu (test solüsyonu) emdirilmis selüloz asetata, nitroselüloz membrana, süper absorban polimere ve silika kapli tabakaya, agara ve sivi test ortamina olmak üzere 6 farkli test ile endoskopi sirasinda alinan biyopsi örnekleri test edilmistir. H. pylori yogunluguna göre farkli zamanlarda pozitif sonuçlar alinmistir.

Bulus kit ile bakteri yogunluguna göre daha hizli sonuç alinabilmektedir. Çogunlukla ilk 1 saatte sonuç alinabilmektedir. Çalisilan en düsük konsantrasyon 3 saatte sonuç vermistir. Bu durum piyasadaki diger testlerde benzerdir.

Farkli test ortamlari (sivi veya destek materyali ile) hazirlansa da her defasinda kit, bakteri solüsyonunu veya biyopsi örnegini test etmek için kullanilmistir. Test Örnegi, bakteri solüsyonu veya biyopsi örnegi olabilir. Biyopsi örnegi test edilecekse endoskopi sirasinda alinan standart doku büyüklügü yeterlidir. Biyopsi örnegi dogrudan test ortamlarina konulmalidir, ek isleme gerek yoktur. Piyasadaki diger biyopsi ömeginden yapilan testlerde de her defasinda ayni büyüklükte doku örnegi alinmaktadir. Bakteri solüsyonu test edilecek ise, 100 uL test ortamina 50 uL bakteri solüsyonu eklenmelidir.

Claims (1)

1. ISTEMLER . Helicobacter pylori (H. pylori) tespiti için üreaz testi solüsyonu olup özelligi; 0,01 M pH 8 olan sodyum fosfat tamponu, hacimde agirlikça %2”lik üre, l mM sodyum azit ve son hacme oranla hacimce %20 oraninda olacak sekilde kirmizi lahana ekstresi içermesidir. . H. pylori tespit kiti olup özelligi; istem 1'de bahsi geçen solüsyonu içermesidir. . Istem 2”ye göre kit olup özelligi; istem 1”de bahsi geçen solüsyonun emdirildigi tasiyici materyal içermesidir. Istem 3*e göre kit olup özelligi, bahsi geçen tasiyici materyalin selüloz asetat, nitroselüloz membran, süper absorban polimer, silika kapli tabaka veya agar olmasidir. Istem 2”ye göre kit olup özelligi; H. pylori tespit limitinin en az 10000 (104) hücre olmasidir. Helicobacter pylori (H.pylori) tespit yöntemi olup özelligi; - Kara lahana ve distile suyun (hacimde agirlikça 121 oraninda olacak sekilde) karistirilip ekstre edilmesi ile kirmizi lahana ekstresinin hazirlanmasi, o Steril 0,01 M pH 8 olan sodyum fosfat tamponuna, hacimde agirlikça %2°1ik üre, l mM sodyum azit ve son hacme oranla hacimce %20 oraninda olacak sekilde kirinizi lahana ekstresi eklenmesi ile test solüsyonunun hazirlanmasi, 0 Test solüsyonunun ve test edilecek örnegin etkilesimi ile renk degisiminin gözlenmesi, Islem adimlarini içermesidir. Istem 6°ya göre yöntem olup özelligi; ayrica, test solüsyonunun hazirlanmasi adimindan sonra bahsi geçen test solüsyonunun destek materyaline emdirilmesi islem adimini içermesidir. Istem 7”ye göre yöntein olup özelligi, bahsi geçen destek materyalinin selüloz asetat, nitroselüloz membran, süper absorban polimer, silika kapli tabaka veya agar olmasidir. 8. Istem 6”ya göre yöntem olup özelligi bahsi geçen test edilecek örnegin bakteri solüsyonu . Istem 8,e göre yöntem olup Özelligi; bahsi geçen test edilecek örnegin biyopsi Örnegi olmasidir.