TR202020549A2 - Bi̇r canli hücre yüklü poli̇mer/ enzi̇m hi̇drojel üretme yöntemi̇ ve söz konusu yöntem i̇le üreti̇len bi̇r yapay kornea tabakasi - Google Patents

Bi̇r canli hücre yüklü poli̇mer/ enzi̇m hi̇drojel üretme yöntemi̇ ve söz konusu yöntem i̇le üreti̇len bi̇r yapay kornea tabakasi

Info

Publication number
TR202020549A2
TR202020549A2 TR2020/20549A TR202020549A TR202020549A2 TR 202020549 A2 TR202020549 A2 TR 202020549A2 TR 2020/20549 A TR2020/20549 A TR 2020/20549A TR 202020549 A TR202020549 A TR 202020549A TR 202020549 A2 TR202020549 A2 TR 202020549A2
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
enzyme
hydrogel
polymer
corneal
artificial
Prior art date
Application number
TR2020/20549A
Other languages
English (en)
Inventor
Gündüz Oğuzhan
Ekren Nazmi̇
Zeki̇ Şengi̇l Ahmet
Şengör Mustafa
Ulağ Songül
Original Assignee
Marmara Ueniv Strateji Gelis Dai Bsk Muhasebe Birimi
Univ Istanbul Medipol
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Marmara Ueniv Strateji Gelis Dai Bsk Muhasebe Birimi, Univ Istanbul Medipol filed Critical Marmara Ueniv Strateji Gelis Dai Bsk Muhasebe Birimi
Priority to TR2020/20549A priority Critical patent/TR202020549A2/tr
Priority to PCT/TR2021/051325 priority patent/WO2022132094A1/en
Publication of TR202020549A2 publication Critical patent/TR202020549A2/tr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/54—Biologically active materials, e.g. therapeutic substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/222—Gelatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
    • A61L27/3813—Epithelial cells, e.g. keratinocytes, urothelial cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
    • A61L27/3834—Cells able to produce different cell types, e.g. hematopoietic stem cells, mesenchymal stem cells, marrow stromal cells, embryonic stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3839—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by the site of application in the body
    • A61L27/3869—Epithelial tissues other than skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/52—Hydrogels or hydrocolloids
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B33—ADDITIVE MANUFACTURING TECHNOLOGY
    • B33Y—ADDITIVE MANUFACTURING, i.e. MANUFACTURING OF THREE-DIMENSIONAL [3D] OBJECTS BY ADDITIVE DEPOSITION, ADDITIVE AGGLOMERATION OR ADDITIVE LAYERING, e.g. BY 3D PRINTING, STEREOLITHOGRAPHY OR SELECTIVE LASER SINTERING
    • B33Y70/00—Materials specially adapted for additive manufacturing
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B33—ADDITIVE MANUFACTURING TECHNOLOGY
    • B33Y—ADDITIVE MANUFACTURING, i.e. MANUFACTURING OF THREE-DIMENSIONAL [3D] OBJECTS BY ADDITIVE DEPOSITION, ADDITIVE AGGLOMERATION OR ADDITIVE LAYERING, e.g. BY 3D PRINTING, STEREOLITHOGRAPHY OR SELECTIVE LASER SINTERING
    • B33Y80/00—Products made by additive manufacturing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/252—Polypeptides, proteins, e.g. glycoproteins, lipoproteins, cytokines
    • A61L2300/254—Enzymes, proenzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/16—Materials or treatment for tissue regeneration for reconstruction of eye parts, e.g. intraocular lens, cornea

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Manufacturing & Machinery (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Abstract

Buluş, kornea körlüğü veya yetersizliği tedavisinde kullanılmak üzere; - Önceden belirlenmiş oranlarda polimerin, önceden belirlenmiş bir oranda saf su içerisinde önceden belirlenmiş bir sıcaklık değerine ayarlanmış bir karıştırıcı kullanılarak çözdürülmesi (101) - Önceden belirlenmiş oranda bir enzimin polimerli solüsyona ilave edilmesi ve çözünmesinin beklenmesi (102) - Çözünme ardından enzimli polimerin önceden belirlenmiş sıcaklık değerinde tutulan sıcaklığı ayarlanabilen bir kabine konulup jelleşmenin beklenmesi ve hidrojelin elde edilmesi (103) - Önceden belirlenmiş miktarlarda hidrojele önceden belirlenmiş miktarda hücre ilavesi ve söz konusu karışımın homojen olana kadar karıştırılması (104) - Homojen hücre ilaveli ve enzimli hidrojelin üretimi (105) adımlarına göre karakterize edilen bir üretim yöntemi (100) ve söz konusu yöntem (100) ile üretilen hidrojelden bir 3D yazıcı yardımıyla üç boyutlu üretilen bir yapay kornea tabakası (1) ile ilgilidir.

Description

TARIFNAME BIR CANLI HÜCRE YÜKLÜ POLIMER/ ENZIM HIDROJEL ÜRETME YÖNTEMI YE SÖZ KONUSU YÖNTEM ILE ÜRETILEN BIR YAPAY KORNEA TABAKAsi Teknik Alan Bulus, bir canli hücre yüklü polimer/ enzim hidrojel üretme yöntemi ve bu yöntem kullanilarak üretilen üç boyutlu yapay bir kornea tabakasi ile ilgilidir. Önceki Teknik Kornca körlügü vakalarinin gittikçe arttigi ülkelerde saglikli donör doku nakli orani oldukça düsüktür. Nakil için keratoprotezler kullanilmakla birlikte söz konusu protezler, çok büyük avantajlara sahip olsa da implantasyon sonrasi ortaya çikan komplikasyonlar, keratoprotezlerin en büyük dezavantajidir. Bunun yaninda teknigin bilinen durumunda yapay kornea üretimi ile ilgili birkaç çalisma bulunsa da jelatin / mTG hidrojel tabanli mezenkimal kök hücre yüklü biyokornea dokusunun üretimi hiç çalisilmamistir. dokusunun, acryloyl-PEG-collagen hidrojel ile bes katmanli olarak olusturuldugundan bahsedilmistir. jelatin/mTG hidrojel porlu yapinin elde edildiginden bahsedilmistir. Fakat olusturulan hidrojelin kornea dokusu ile herhangi bir iliskisi bulunmamaktadir. Teknigin bir diger bilinen durumunda yer alan CN 109172604A numarali patent dokümaninda kardiyovasküler uygulamalar için, ankraj molekülü (PAAM) - glutamin transaminaz (mTG) ve jelatin, mezenkimal kök hücre (MSC) ile birlestirilerek üretilen hidrojelden bahsedilmistir. Teknigin bilinen durumunda mezenkimal kök hücre pek çok çalismanin konusu olmustur. Ancak bahsedilen bu kök hücrenin kornea dokusu olusturmak için ilk defa kullanilacak hidrojele eklenmesi ve söz konusu karisimdan üç boyutlu canli kornea dokusunun üretimi hiç çalisilmamistir. Dolayisiyla teknigin bilinen durumunda yer alan hiçbir çalismada jelatin/mTG hdrojel ile canli kök hücre yüklü kornea dokusunun üç boyutlu üretimi yer almamaktadir. Bulusun Kisa Açiklamasi: Bulusun amaci, bir canli hücre yüklü polimer / enzim hidrojel üretme yöiitemi ve bu yöntem kullanilarak üretilen üç boyutlu yapay bir kornea tabakasi ile ilgilidir. Bulusta uygun kosullarda üretilen hidrojele canli hücre ilave edilip, canli hücre yüklü biyokornea stroma tabakasi (veya dokusu) 3D olarak olusturulmustur. Bulus kapsaminda üretilen hidrojelle insan komeasinin boyut ve sekline uygun canli hücre yüklü yapay kornea gelistirilmekte ve üretilen yapilar kornea transplantasyonunda kullanilmaktadir. Böylece bulus ile elde edilen yapay biyokornea yapisi ile donör korneaya olan ihtiyaç azalacaktir. Üretilen kornea stroma yapilari, canli kök hücre içerdiklerinden doku reddi riski oldukça düsüktür. Sekillerin açiklamasi Sekil 1. (a) Gözün yapisi ve komeanin temsili Çizimidir. (b) bulus konusu yöntem ile üretilen soldan saga % 0.5, %1, %3 oranlarinda mTG içeren Jel/mTG hidrojellerin tüp içerisinde temsili çizimidir. Sekil 2. Üç boyutlu biyoyazici ile üretilen yapay kornea dokusunun üstten (a) ve yandan (b) temsili çizimidir. Sekil 3. Yapay kornea tabakasi üretmek için kullanilan canli hücreli hidrojel yönteminin akis diyagramidir. Sekillerdeki Referanslarin Açiklanmasi Bulusun daha iyi anlasilabilmesi için sekillerdeki numaralarin karsiligi asagida verilmistir: 1. Yapay kornea tabakasi 100. Yöntem Bulusun Detayli Açiklamasi: Kornea körlügü veya görme yetersizligi tedavisinde kullanilmak üzere yapay kornea tabakasini ( l) meydana getirmek için kullanilan solüsyon, en az bir enzim ve/veya en az bir polimer ve/veya en az bir canli hücre içermektedir. Söz konusu enzim; bir mTG enzimidir, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. Enzimin solüsyondaki orani % 0.5 ila 4 "tür, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. Enzimin oranlari tercihen % 0.5 veya % 1 veya % 3`tür, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. Söz konusu polimer; bir jelatin polimerdir, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. Polimerin orani % 8 ile %10 araliginda, tercihen % 8°dir, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. Söz konusu canli hücre; bir inezenkimal kök hücre veya kornea hücresidir, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. Kullanilan canli hücre miktari (2-6) X106 hücre/mL olup, uygulamada bununla sinirli degildir. Söz konusu yapay kornea tabakasini (1) üretmek için solüsyondaki polimer terciheiijelatin polimeri, mTG enzimi ile çapraz baglanmistir. Bulusta kullanilan jelatinin enzim ile çapraz baglanmasi hücre canliligi açisindan avantajdir. Çünkü söz konusu maddelerin çapraz baglanmasi, çapraz baglamak için kullanilan diger ajanlarin aksine hücreye zarar verecek toksik bir etkisi bulunmamaktadir. Solüsyon asagidaki yöntem (100) ile elde edildikten sonra 3D yazicinin haznesine doldurulmakta, üç boyutlu biyoyaziin teknigi ile yapay kornea tabakasi (1) üretilinektedir. Yapay kornea tabakasi (l), yapay bir kornea stroma dokusudur. Bulus; yapay kornea tabakasinin (l) tasarimi, üretimi ve karakterizasyonu asamalarindan olusmaktadir. Üç boyutlu yapay kornea tabakasinin (1) (Sekil 2) olusturulmasinda ilk adim tasarim asamasidir. Bulusun ilk asamasinda yetiskin insanin kornea boyutlari olan 12 mm dikey ve yatay çap degerlerine sahip kornea modeli (Temsili Gösterim-l), bir 3D çizim programinda (örnegin Solidworks) olusturulmustur. Söz konusu programda önceden belirlenmis boyutlarda tasarlanan yapay kornea modeli bir dilimleme programi (örnegin Simplify) yardimiyla cihazin içerdigi bir kontrol birimi vasitasiyla üretilmistir. 3D yapay koriiea tabakasiiiin (1) üretilebilmesi için kontrol birimi söz konusu yapay kornea modelini bir koda dönüstürmekte ve daha sonra olusturulan kod, üç boyutlu yaziciya (Temsili çizim 1-4) bir hafiza birimi yardimiyla aktarilmaktadir. Üç boyutlu üretim yapan cihaza yüklenen kod ile cihazin içerdigi bir diger kontrol birimi tarafindan yapay kornea tabakasi (1), (veya yapay biyokornea dokusu) 3D olarak üretilmektedir. Temsili Gösterim 1: Yapay kornea modeli Hidrojellerin (Sekil l-b) olusumu, enzim ilavesi ile baslamaktadir. Buna göre, bulus konusu yapay kornea tabakasinin (l ) üretiini için kullanilacak yöntemin (100) yöntem adimlari asagidaki gibidir: - Önceden belirlenmis oranlarda polimerin, önceden belirlenmis bir oranda saf su içerisinde önceden belirlenmis bir sicaklik degerine ayarlanmis bir karistirici kullanilarak çözdürülmesi (101) - Önceden belirlenmis oranda bir enzimin polimerli solüsyona ilave edilmesi ve çözünmesinin beklenmesi (102) - Çözünme ardindan enzimli polimerin önceden belirlenmis sicaklik degerinde tutulan Sicakligi ayarlanabilen bir kabine konulup jellesmenin beklenmesi ve hidrojelin elde edilmesi (103) - Önceden belirlenmis miktarlarda hidrojele önceden belirlenmis miktarda hücre ilavesi ve SÖZ konusu karisimm homojen olana kadar karistirilmasi (104) - Hoinojcn hücre ilavcli ve cnzimli hidrojclin üretimi (105) 101 . adimda sözü geçen polimer bir jelatindir; ancak uygulamada bununla sinirli degildir. 101 . adimda sözü geçen polimerin orani % 8 ile %10 araligindadir. ancak uygulamada bununla sinirli degildir. 101 . adimda sözü geçen polimerin orani tercihen % 8`dir, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. 101 . adimda sözü edilen sicaklik deger araligi 25-40 OCldir, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. 101 . adimda sözü geçen karistirici bir manyetik karistiricidir, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. 101 . adimda Sözü edilen karistiricinin Sicaklik degeri tercihen 37OC7dir, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. 102 . Adimda sözü geçen enzim bir mTG enzimidir. ancak uygulamada bununla sinirli degildir. 102 . Adimda sözü geçen enzimin orani her bir hidrojel yapisi için. % 0.5 - 4 araligindadir. 102 . adimda sözü geçen enzimin oranlari tercihen % 0.5 veya % 1 veya % 3 "tür, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. 103. adimda sözü geçen kabin, bir inkübatördür, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. 103 . adimda sözü geçen kabinin sicaklik degeri 37 oC`dir, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. 103. Adimda sözü geçen % 0.5, % 1 ve % 3 oranli enzimler için karisimin jellesme süresi sirasiyla 3 ila 4 saat, 2 ila 3 saat ve 1 ila 2 saattir, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. 104. Adimda sözü geçen hidrojel miktari 5 ila 10 ml olup, uygulamada bununla sinirli degildir. 104 . Adimda sözü geçen mezenkimal canli hücre miktari (2-6) xlO(j hücre/mL olup, uygulamada bununla sinirli degildir. 104 . adimda sözü edilen hücre tercihen bir mezenkiinal kök hücre veya bir canli kornea hücresidir, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. 105 . Adimdan sonra kök hücre içeren hidrojel, 3D cihazin haznesine yerlestirilmistir ve yapay kornea tabakasi (1), 3D biyoyazici ile 3D olarak üretilmistir. Dolayisiyla, yapay kornea tabakasi (1), yukaridaki yöntem (100) ile üretilen canli hücre ilaveli ve enzimli polimerik hidrojel"den üç boyutlu olarak 3D yazicida üretilmistir. Daha spesifik olarak yapay kornea tabakasi (l), yukaridaki yöntcin (100) ile üretilen canli mczenkimal kök hücre veya canli kornea hücresi ilavcli ve mTG enzimli/jelatin hidrojel°den üç boyutlu olarak 3D yazicida üretilmistir. Yöntemde (100) yer alan suda çözünebilen polimerin, tercihen jelatinin tek basina yani çapraz baglayici olmadan kullanimi uygun degildir. Çünkü hücrelerin besi yeri su bazli bir sividir. Eger suda kolaylikla çözünen bir yapi çapraz baglanmamissa hücre besiyerine eklenince direkt çözünmekte ve hiç verim alinamamaktadir. Bu nedenle jelatinin bir ajan ile inutlaka çapraz baglanmasi gerekmektedir. Bulusta tercihen kullanilan mTG enzimi, jelatini çapraz baglamak için mutlaka olmasi gereken bir inalzemedir. Çapraz baglama için kullanilan enzim, hücre canliligi için güvenilir olanidir. Öte yandan Jelatin/mTG hidrojeline kök hücre yüklenmesi canli hücre yüklü kornea dokusu üretmek için oldukça önemlidir. Buradaki kök hücre farklilasarak kornea hücresine dönüsebilmektedir. Fakat kök hücre yerine direkt kornea hücresi de yüklenebilmektedir. Sonuç olarakjelatin/mTG mutlaka olmali fakat hücre dogal korneada bulunan herhangi bir hücre hatti da olabilir. Hücre ilaveli ve enziinli hidrojelin yukaridaki yöntem (100) ile üretilmesinden sonra söz konusu biyoinürekkep, yapay kornea tabakasi (l) üretiini için biyoyazim yapan bir cihaza yükleninektedir. Biyoyazim süresince, önceden belirlenmis bir dis çapa sahip bir igne kullanilmistir. Söz konusu ignenin dis çapi 0.3 mm olup. uygulamada bununla sinirli degildir. Kullanilan igne plastik olup, uygulamada bununla sinirli degildir. Yapay kornea tabakasinin (1) üretimi için kullanilan parametreler, kök hücre yüklü hidrojelin akis orani, yazim hizi orani ve yazim sicakligidir. Söz konusu parametreler tercihen sirasiyla %100, 6 mm/sn ve 37 °C olarak ayarlanmistir, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. Üretimden sonra tloresan mikroskopta hücrelerin çekirdeklerini görüntülemek için DAPI (4',6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride) boyama kullanilmistir. Üretilen yapay kornea tabakasi (l), önceden belirlenmis bir süre zarfindaki inkübasyondan sonra görüntüleme tekniklerden biri ile görüntülenmistir. Bulusun tercih edilen uygulamasinda sözü edilen inkübasyon süreleri 1. 4, 7 gündür, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. Bahsedilen görüntüleme teknigi, floresans mikroskoptan alinan görüntüler (Görüntü-l a, b_v c; sirasiyla l, 4, 7 gün) olup, DAPI ile boyanan canli hücre sayisini göstermektedir. Buna göre, hidrojelin içerisine yüklenen kök hücrelerin yapi içinde canliliklarini koruduklari gözlemlenmistir. Hücrelerin kornea dokusu üzerindeki morfolojisi taramali elektron mikroskop (scanning electron microscope, SENI) ile ineelenmistir (Görüntü-l d, e, f). Karakterizasyon teknikleri kullanilarak, DAP] boyama ve SBM analizi ile hücrelerin hidrojel içinde canli kaldigi ispatlandi. Görüntü 1. Biyoyazim sonrasi bulusun bir uygulamasinda % 8 Jelatin / %1 mTG biyomürekkeplere ait Iloresan mikroskop görüntüleri: 1. gün (a), 4. gün (13), ve 7. gün (0); 1. gün tiksasyon sonrasi kök hücrelerin % 8 J elatin/ %1 mTG kornea doku içindeki morfolojileri (d, e, f). Bulus kapsaminda üretilen yapay biyokomea tabakasi (l), kornea transplatasyonunda saglanmaktadir. Bulusun Sanayiye Uygulanabilirligi: Bulus konusu yöntem (100), özellikle saglik sektöründe stroma kornea transplatasyonunda kullanilinak üzcrc sanayiye uygulanabilir nitcliktcdir. Bulus yukaridaki örnek uygulamalar ile sinirli olmayip, teknikte uzman bir kisi kolaylikla bulusun farkli diger uygulamalarini ortaya koyabilir. Bunlar bulusun istemler ile talep edilen koruma kapsaminda dcgcrlcndirilmelidir. su içerisinde ve önceden belirlenmis bir sicaklik degerine ayarlanmis bir karistirici kullanilarak Çözdürülmesi Önceden belirlenmis oranda bir enzimin polimerli solüsyona ilave edilmesi Jf 102 Önceden belirlenmis oranlarda polimerin, önceden belirlenmis bir oranda saf y 101 ve çözünmesinin beklenmesi tutulan sicakligi ayarlanabilen bir kabine konulup jellesmenin beklenmesi ve hidrnielin elde edilmesi Önceden belirlenmis miktarlarda hidroj ele önceden belirlenmis miktarda hücre ilavesi ve söz konusu karisimin homojen olana kadar karistirilmasi Homoj en hücre ilaveli ve enzimli hidrojelin üretimi Çözünme ardindan enzimli polimerin önceden belirlenmis sicaklik degerindei. TR TR TR TR TR

Claims (1)

1.
TR2020/20549A 2020-12-15 2020-12-15 Bi̇r canli hücre yüklü poli̇mer/ enzi̇m hi̇drojel üretme yöntemi̇ ve söz konusu yöntem i̇le üreti̇len bi̇r yapay kornea tabakasi TR202020549A2 (tr)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
TR2020/20549A TR202020549A2 (tr) 2020-12-15 2020-12-15 Bi̇r canli hücre yüklü poli̇mer/ enzi̇m hi̇drojel üretme yöntemi̇ ve söz konusu yöntem i̇le üreti̇len bi̇r yapay kornea tabakasi
PCT/TR2021/051325 WO2022132094A1 (en) 2020-12-15 2021-12-01 A production method for a viable cell loaded polymer/enzyme hydrogel and an artificial cornea layer produced by said method

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
TR2020/20549A TR202020549A2 (tr) 2020-12-15 2020-12-15 Bi̇r canli hücre yüklü poli̇mer/ enzi̇m hi̇drojel üretme yöntemi̇ ve söz konusu yöntem i̇le üreti̇len bi̇r yapay kornea tabakasi

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR202020549A2 true TR202020549A2 (tr) 2022-06-21

Family

ID=82059790

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2020/20549A TR202020549A2 (tr) 2020-12-15 2020-12-15 Bi̇r canli hücre yüklü poli̇mer/ enzi̇m hi̇drojel üretme yöntemi̇ ve söz konusu yöntem i̇le üreti̇len bi̇r yapay kornea tabakasi

Country Status (2)

Country Link
TR (1) TR202020549A2 (tr)
WO (1) WO2022132094A1 (tr)

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20150065697A (ko) * 2012-09-04 2015-06-15 안트로제네시스 코포레이션 조직 생성 방법
RU2017111686A (ru) * 2014-09-24 2018-10-24 Де Реджентс Оф Де Юниверсити Оф Калифорния Искусственная роговица, полученная путем трехмерной биопечати
CN111032687A (zh) * 2017-05-25 2020-04-17 普瑞利思生物制品公司 三维打印的器官、设备和基质
US11998658B2 (en) * 2019-02-08 2024-06-04 University Of New Hampshire Injectable porous hydrogels

Also Published As

Publication number Publication date
WO2022132094A1 (en) 2022-06-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2019122351A1 (en) Tissue-specific human bioinks for the physiological 3d-bioprinting of human tissues for in vitro culture and transplantation
CN107041969A (zh) 一种明胶基倒胶状晶体水凝胶三维支架及其制备方法与应用
CN106519632A (zh) 一种peg水凝胶及其制备方法以及用其制备的组织工程支架
Asim et al. Ultra-low content physio-chemically crosslinked gelatin hydrogel improves encapsulated 3D cell culture
WO2005014774A1 (ja) 動物細胞の培養担体と、該培養担体を用いた動物細胞の培養方法および移植方法
KR102085373B1 (ko) 3차원 형광 이미지화를 위한 생체조직 투명화 키트 및 이를 이용한 투명화 방법
Da Silva et al. Formalin-free fixation and xylene-free tissue processing preserves cell-hydrogel interactions for histological evaluation of 3D calcium alginate tissue engineered constructs
EP3921372B1 (en) Protein hydrogel, preparation method and use thereof
EP3063266B1 (de) Verfahren zur kultivierung von zellen in adhäsionskultur unter verwendung eines zellkultur-trägers in kapselform, sowie zellkultur-träger dafür
TR202020549A2 (tr) Bi̇r canli hücre yüklü poli̇mer/ enzi̇m hi̇drojel üretme yöntemi̇ ve söz konusu yöntem i̇le üreti̇len bi̇r yapay kornea tabakasi
Yang et al. Adapted cryosectioning method for hydrogels used in regenerative medicine
EP4499160B9 (en) Use of polymer-based microcarriers in the production of tissue scaffolds with complex geometry
KR102262206B1 (ko) 망막색소상피세포를 포함하는 하이드로겔 조성물 및 이의 용도
KR102129373B1 (ko) 모세혈관망을 포함하는 3차원 소장 융모 모사 구조체의 제조방법
CN109337383A (zh) 一种胶原基自修复水凝胶及其制备方法
JP2018126091A (ja) 保存対象物の保存方法、ゾルゲル転移体およびこれを含む保存剤
Wolf et al. Real-time 3-D dark-field microscopy for the validation of the cross-linking process of alginate microcapsules
CN120714100B (zh) 一种海藻酸钠基水凝胶及其制备方法
DE102017006372B4 (de) Kationisierte, proteinbasierte, makroporöse Gerüststrukturen und deren Verwendung zur Kultivierung von Zellen
CN105802251A (zh) 一种自组装胶原模板组织工程材料及其制备方法与应用
Kurtz PHASE SEPARATED HYDROGEL COATINGS FOR POROUS SCAFFOLDS IN BIOMEDICAL APPLICATIONS
Boch Effect of Silk-Based Hydrogel Topography on Intestinal Epithelial Cell Morphology and Wound Healing In Vitro
Valle-Pérez et al. Three-dimensional (3D) bioprinting of coral-polyp bio-skin using ultrashort and biofunctionalized peptide bioinks for transplantation on coral skeletons
CN117535235A (zh) 一种具有立体结构的复合物及其制备方法和应用
Sepúlveda Del Rio Hamacek et al. Additive Manufacturing of Metabolically Active Living Materials with Physicochemical Biocontainment