TW200414902A - Novel antibiotic compound, muraminomicin - Google Patents

Description

200414902 玖、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種新穎化合物，其具有優異抗菌活性， 或作爲導致增強抗菌活性目的之相關衍生物之合成原料上 爲可能的，含有該化合物作爲有效成分之醫藥（特別是抗菌 劑），該化合物之製造方法’及生產該化合物之新穎微生物。 【先前技術】 向來細菌感染症之預防及治療上使用各種yg -內醯胺抗生 素、胺基配糖體、巨環類、肽聚醣、睦啉酮等，最近顯示 感染菌對此等抗生素之耐受性增加，因此冀望不同於先前 型式之抗生素。 細菌細胞壁構成成分上，關於肽聚糖生合成之轉位酵素 (translocase) I爲細菌生長上之必須酵素，近年，基於對 轉位酵素I之抑制活性，已報告對於分枝桿菌屬 (M y c o b a c t e r i u m )之細菌顯示抗菌活性之化合物，利波希 朵黴素（liposidomycin)類及卡派拉黴素（caprazamycin)類等 (例如參閱專利文獻1、非專利文獻1及非專利文獻2)。 (專利文獻1) 國際公開第0 1 / 1 2643號公報 (非專利文獻1) 抗生素雜誌，1 98 5年，第38卷，P.1617-1621 (J. Antibiotics, 1 9 8 5, 3 8, pl617-1621) (非專利文獻2) 農業生.物化學，1 989年，第53卷，P.1811-1815 200414902 (Agric.Biol.Chem，1 98 9，53，ρ·1811-1815) 【發明內容】 本發明者們於培養液中發現新穎化合物，不斷進行此等 化合物之藥理活性硏究之結果，發線此等化合物具有對轉 位酵素I抑制活性之抗菌活性，而與先前型式之藥劑無交叉 耐受性’同時又發現較先前已知化合物有較優異之抗菌活 性’確立生產該化合物之新穎微生物及該化合物之製造方 法，因而完成本發明。 本發明爲： (1)下列一般式（I)，

[式中，R爲煙鏈]所示化合物或其鹽。 (2) 如（1)記載之化合物或其鹽，R爲飽和烴鏈。 (3) 如（2)記載之化合物或其鹽，r爲直鏈狀飽和烴鏈。 (4) 如（3)記載之化合物或其鹽，r爲碳數？至17之直鏈狀飽和 烴鏈。 (5) 如（4)sg載之化合物或其鹽，&爲碳數卩至。之直鏈狀飽和 烴鏈。 (6) 如（5)記載之化合物或其鹽，R表示_(CH2)9CH3或- (ch2)10ch3。 (7) 如（2)記載之化合物或其鹽，r表示彳ch2)8CH(CH3)2。 (8) 如（1)記載之化合物或其鹽，r爲直鏈狀不飽和烴鏈。 (9) 如（8)記載之化合物或其鹽，&表示- (ch2)3ch = ch(ch2)5cH3、 _CH2CH = CH(CH2)7CH3、- (CH2)3CH = CHCH2CH = CH(CH2)4CH3、或_ (ch2)3ch = ch(ch2)6cH3。 (10) 下列一般式（II)，

[式中’ R爲烴鏈]所示化合物或其鹽。 (1 1)如（10)記載之化合物或其鹽，R爲直鏈狀飽和烴鏈。 (12) 如（1 1)記載之化合物或其鹽，R爲碳數7至丨7之直鏈狀飽 和烴鏈。 (13) 如（12)記載之化合物或其鹽，r爲碳數9至15之直鏈狀飽 和烴鏈。 (1 4 )如（1 3 )記載之化合物或其鹽 ，R表示（CH2)10CH3。 (15)下列一般式（III)，

[式中，R爲烴鏈]所示化合物或其鹽。 (16) 如（15)記載之化合物或其鹽，R爲直鏈狀飽和烴鏈。 (17) 如（16)記載之化合物或其鹽，R爲碳數7至17之直鏈狀飽 和烴鏈。 (18) 如（17)記載之化合物或其鹽，R爲碳數9至15之直鏈狀飽 和烴鏈。 (19) 如（18)記載之化合物或其鹽，R表示-(CH2)1()CH3。 (20) 下列一般式（IV)，

[式中，R爲烴鏈]所示化合物或其鹽。 200414902 (21) 如（2〇)記載之化合物或其鹽 (22) 如（21)記載之化合物或其= 和烴鏈。 (2 3 )如（2 2)記載之化合物或其臨 和烴鏈。 ，R爲直鏈狀飽和烴鏈。 ，R爲碳數7至17之直鏈狀飽 ，R爲碳數9至15之直鏈狀飽 (24) 如（23)記載之化合物或其鹽，r表示 (25) 下列一般式（V)所示化合物或其鹽，

(V) (26)下列一般式（VI)所示化合物或其鹽，

(2 7 )下列一般式（V11)所7^化合物或其鹽， -10- 200414902

(VII) (28)下列一般式（VIII)所示化合物或其鹽，

(VIII) (2 9)—種如（1)至（28)或⑴至（xii)中任1項記載之化合物之製 造方法，其特徵爲培養生產（1)至（28)或（i)至（xii)中任1 項記載之化合物之生產菌鏈孢囊菌屬 (Streptosporangium)，由其培養物中收集（1)至（28) 或（i)至（X i i)中任1項記載之化合物。 (3 0)如（2 9)記載之製造方法，其中該培養係於含脂肪酸之培 養基中進行。 (3 1)如（3 0)記載之製造方法，其中該脂肪酸爲碳數10至20之 直鏈狀飽和脂肪酸。 (32)如（31)記載之製造方法，其中脂肪酸.爲碳數I2至18之直 -11- 200414902 鏈狀飽和脂肪酸。 (3 3)如（29)至（3 2)中任1項記載之製造方法，其中培養生產（1) 至（28)或（i)至（XII)中任1項記載之化合物之生產菌鏈孢 囊菌屬（Streptosporangium)，爲鏈孢囊菌屬 (S treptosporangium sp . ) S ANK6 05 0 1 (FERM BP_ 7984) ° (34) —種特徵爲生產（1)至（28)或⑴至（xii)中任l項記載之化 合物之微生物鏈孢囊菌屬（Streptosporangium sp)。 (35) — 種鏈孢囊菌屬（Streptosporan gium sp ) S ANK60 5 0 1 (FERM BP-7984)。 (36) —種製造如（21)或（viii)中之記載化合物之方法，其係 將（1)至（19)、（i)至（Vii)及（X)至（Xi)中任1項記載之化合 物水解或還原。 (37) —種製造如（22)或（ix)中記載之化合物之方法，其係將（1) 至（19)、（i)至（vii)及（X)至（xi)中任〗項記載之化合物水 解或還原。 (38) —種製造如（27)中記載之化合物之方法，其係將（2〇)至 (24)及（xii)中任1項記載之化合物水解或還原。 (39) —種製造如（28)中記載之化合物之方法，其係將（20)至 (24)及（xii)中任丨項記載之化合物水解或還原。 (40) —種醫藥組成物，其含有（1)至（28)或⑴至（xii)中任^頁 記載之化合物或其藥理學上容許鹽爲有效成分。 (41) 如（4〇)中記載之醫藥組成物，其爲一種抗菌劑。 (42) —種細菌感染症之治療方法，其包含將有效量之（1)至 -12- 200414902 (28)或⑴至（xii)中任1項記載之化合物或其藥理學上容 許鹽投與病患。 (43)—種如（1)至（28)或⑴至（xii)中任！項記載之化合物或其 藥理學上容許鹽之用途，其用於製造抗菌劑。 又，本發明係關於下列記載之化合物： ⑴ 一種具有下述物理化學性狀之化合物或其鹽： 1) 物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞碾，不溶於氯仿 3) 分子式：C55H85N 50 2 3 4) 分子量：1183(以FAB質譜法測定） 5 )依高分解能F A B質譜法測定之精密質量，[μ + Η ] +如下列 表示： 實測値：1 1 84.5 69 9 計算値：1 1 8 4 · 5 7 1 3 6) 紫外線吸收光譜： 於甲醇中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表示： 263nm( ε 9200) 7) 旋光度： 於甲醇中測定旋光度，如下列所示値表示： [α]〇29 ： +7.5° ( c0.5) 8) 紅外線吸收光譜： 以溴化鉀（ΚΒι:)錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下列所 示之極大吸收表示： -13- 200414902 3414,2928,2856,1738,1696,1631，1465,1384,1273,1161， 1 1 27,1 1 04,1 0 1 5,960cm·1 9) 1H-核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞楓（2.4 9ppm)測 定’以下所示爲其1H-核磁共振光譜： 〇.84(6H，t)，〇.9 1(3H，d，J = 6.2Hz)，1.2-1.3(10H，m)，1.42(lH， m)，1.57(2H，m)，1.71(lH，m),2.0(7H，m)，2.12(lH，m)，2.16(lH， m)，2.26(3H，s)，2.3(3H，m)，2.4 1(lH，m)，2.46(2H，m)，2.6(4H， m)，2.80(lH，dd，J = 6.6，12.8Hz)，2.92(3H，s)，2.94(lH，m)52.98 (lH，br.m)，3.26(lH，t，J = 9.2Hz)，3.36(3H，s)，3.37(3H，s)，3.4 (2H，m)，3.53(lH，m)，3.83(lH，d，J = 8.4Hz)，3.9(3H，m)，4.13(l H，m)，4.19(2H，m)54.96(lH，dd，J = 2.9,9.2Hz)，5.12(lH，m)，5.3 (2H，m)，5.37(2H，m)，5.65(lH，d，J = 7.7Hz)，5.90(lH，t，J = 5.9H z)，5.93(lH，m)，7.82(lH，d，J = 7.7)ppm 10) 13c_核磁共振光譜： 重一甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞碾（3 9 · 5 p p m )測 定’以下所示爲其13C -核磁共振光譜： 9.5(q)，14.〇(q)，1 9.0(q)，22. 1 (t )，23.9 (t)，24.8(t)，26·3(〇,26·6 (t)，27.1(d)，28.3(t)，2 8.7(t)，29.1(t)，9.2(t)，3 1 .2(t)，3 2.9(t)，3 6.4(q)，3 7.8(q)，3 8.8(t)，9.8(t)，39.9(t)，40.2(t)，40.6(t)，4 1.5( t)，5 6.6(t)，8.7(q)56 0.0 (q),62.3(d)，66.5(d)，69.0(d)，69.9(d)· 70.6(d)，72.7(d)，73.0(d)，74·1(d).76.6(d),77.3(d)，77.5(d)，8 2.〇(d) 5 8 3.9 (d),87.4(d),90.5(d), 101.3(d) ,106.8(d),129.1(d), 13 0.1(d), 140.5(d), 150.2 (s)?163.3 (s),16 8.7(s)? 169.2(s)5l 7 -14- 200414902 0.1(s)，170.7(s)，171 .l(s).171.g(s).173.6(s) ppm 11) 高速液體色層分析法： 管柱· CAPCELLPAKC18UG120,4.6px 150mm (資生堂股 份有限公司製） 溶劑：含有1 〇 m Μ重碳酸銨之4 0 %乙腈水溶液 流速：1 · 〇 m 1 /分鐘 檢出：紫外線吸收260nm 保持時間：9.3分鐘 (Π) ^ 具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽： 1) 物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞碾，不溶於氯仿 3) 分子式：C55H85N5 023 4) 分子量：1171(以FAB質譜法測定） 5) 依高分解能FAB質譜法測定之精密質量，[Μ + ΗΓ如下歹 表不: 實測値：1 1 7 2.5 7 0 4 計算値：1 1 7 2.5 7 1 3 6) 紫外線吸收光譜： 於甲醇中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表$ . 263 nm( ε 9 1 00) 7) 旋光度： 於甲醇中測定旋光度，如下列所示値表示： [a ]D29 : +6.3。 （ c0.2 ) -15- 200414902 8) 紅外線吸收光譜： 以溴化鉀（KB r )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下列所 示之極大吸收表示： 3403,2927,2855,1 738,1691，163 1，1466,1385, 1273,1 161， 1 104,1014,961cm'1 9) 4-核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞碾（2.49ppm )測 定’以下所示爲其1H-核磁共振光譜： 0.84(6H，t)，0.92(3H，d，J = 5.9Hz)，1.2-1.3(16H，m)，1.42(lH， φ m)，1.5 5(2H，m)，1.7 1(lH，m)，2.0(3H，m)，2.14(2H，m)，2.26(3H， s)，2.3(3H，m)，2.4 1(lH，m)，2.47(2H，m)，2.6(4H，m)，2.80(lH，d d5J = 6.9，13.7Hz)，2.92(3H，s)，2.93(lH，bi:.m)，3.01(lH5dd，J = 2· 9,13.7Hz)，3.27(lH，t，J = 9.3Hz)，3.3 6(3H，s)，3.37(3H，s)，3.38 (lH，m)53.40(lH，m)，3 .53(1 H，t，J = 2.4Hz)，3.86(1 H，d，J = 8.8H z)，3.9(2H，m)，3.97(lH，m)，4.13(lH，m)，4.18(2H,m)，4.96(lH， dd5J = 2.9,9.3Hz)，5.11(lH5m),5.38(2H，m)，5.66(lH，d，J = 8.3H z)，5·90(1Η，t，J = 5.9Hz)，5.93(1 H，m)，7.82(lH，d，J = 8.3 Hz )p pm _ 1 0 )13 c -核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞礪（3 9.5 ppm )測 定，以下所示爲其13C -核磁共振光譜： 9.5(q)，14.0(q)，19.0(q)，22.1(t)，23.9(t)，24.5(t)，27.2(d)，2 8· 7(t)，28.9(0).29.0(t)，29.1(d)，3 1.3(t)，3 3.3(t)，36.4(q)，37.8 U)，3 9.4(t)，3 9.6(t)，3 9.8(t)，39.9(t)，40.7(t)，41.5(t)，5 6.5(t)， 58.7(q)，60.〇(q)，62.3(d)，66.6(d),69.1(d)，70.0(d)，70.7(d)，7 -16- 200414902 2.7(d)，73.0(d)，74.1(d)，76.6(d)，77.3(d)，77.6 (d)，82.0(d)，8 4.0(d)，87.4(d)，90.4(d)，101.3(d)，106.8 (d)，140.5(d)，150.2 (s)，163.3(s)，168.5(s).169.3(s)，170.1(s)，170.6(s)，171.1(s)， 171 .8(s)51 73.5(s)ppm 1 1)高速液體色層分析法： 管柱：CAPCELLPAK C18UG120,4.6px 150mm (資生堂股 份有限公司製） 溶劑：含有l〇mM重碳酸銨之40%乙腈水溶液 流速：1.0ml/分鐘 檢出：紫外線吸收260nm 保持時間：9.8分鐘 (iii) 具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽： 1 )物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞楓，不溶於氯仿 3) 分子式：C55H85N5 023 4) 分子量：1183(以FAB質譜法測定） 5) 依高分解能FAB質譜法測定之精密質量，[Μ + ΗΓ如下列 表示： 實測値：1 1 84.5 72 3 計算値：1 1 8 4.5 7 1 4 6) 紫外線吸收光譜： 於甲醇中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表示： 26 3 nm( ε 8 100) 200414902 7)旋光度： 於甲醇中測定旋光度，如下列所示値表示： [a ]D29 : +6·5。（ c0.2 ) 8 )紅外線吸收光譜： 以溴化鉀（KBr )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下列所 不之極大吸收表示： 3403,292 7,2855,1738,1690,1 63 1，1466,1385,1273,1 162， 1 1 〇45 1 0 1 5,962cm'1 9) 4-核磁共振光譜： 鲁 重二甲亞楓中，內部標準使用重二甲亞碾（2.4 9ppm )測 定，以下所示爲其1H-核磁共振光譜： 0.84(6H，t)，0.91(3H，d，J = 6.0Hz)，1.2-1.3(12H，m)，1.42(lH， m)，1.70(lH，m)，2.0(5H，m),2.14(2H，m)，2.26(3H，s)，2.3(4H， m)，2.42(lH，m)，2.5(2H，m)，2.6(4H，m)，2.80(lH，dd，J = 6.8，12. 8Hz)，2.9 1(3H，s)，2.95(lH，br.m)，3.0 1(lH，dd，J = 2.6，12.8Hz)， 3.27(lH，t，J = 9.0Hz)，3.36(3H，s)，3.37(3H，s)，3.4(2H，m)，3.53 (lH，m)，3.85(lH，d，J = 8.1Hz)，3.9(2H，m)，3.96(lH，m)，4.13(l · H，m)，4.19(2H，m).4.96(lH，dd5J = 2.6,9.4Hz)，5.13(lH,m)，5.3 0(lH，dt，J = 7.3,9.8Hz)，5.38(2H，m)，5.47(lH，dt，J = 7.3,9.8Hz)， 5.66(lH，d，J = 8.1Hz)55.90(lH，t,J = 5.6Hz)，5.93(lH，m)，7.82(l H，d，J = 8 .lHz)ppm 10) 13C-核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞碾（39.5ppm)測 定，以下所示爲其13C -核磁共振光譜： -18- 200414902 9.5(q)，14.0(q)，19.0(q)，22.1(t)，23.9(t)，26.7(t)，27.1(d)，28. 7(t)，28.7(t).28.9(t)，28.9(t)529.0(t)，29.0(t)，29.1(t)，3 1.3(t)， 33.1(t)，36.4(q)，3 7.8(q)，3 8.2(t)，39.8(t)，3 9.9(t)，40.2(t)，40. 7(t)，4 1 .5(t)，5 6.6(t)，5 8.7(q)，60.0(q)，62· 3(d)，66.5(d)，69· 1( d)，69.8(d)，70.7(d)，72.7(d)，73 ·0(〇[)，74· 1(d)，76.6(d)，77.3(d )，77.5(d)，82.0(d)，84.0(d)，87.4(d)，90.5(d)，101.3(d)，106.8 (d)，123.6(d)，133.1(d)，140.5(d)，150.2(s)，163.3(s)，168.6(s)， 169.3(s)，170.2(s)，170.6(s)，171.0(s)，171.8(s)，173.5(s)ppm 1 1)高速液體色層分析法： 管柱：CAPCELLPAK C18UG120,4.6px 150mm (資生堂股 份有限公司製） 溶劑：含有10mM重碳酸銨之40%乙腈水溶液 流速：1 . 0 m 1 /分鐘 檢出：紫外線吸收260nm 保持時間：1 〇 . 9分鐘 (iv) 具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽： 1) 物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞楓，不溶於氯仿 3) 分子式：C57H87N5023 6) 分子量：1 209(以FAB質譜法測定） 7) 依高分解能FAB質譜法測定之精密質量，[M + H] +如下列 表示： 實測値：1 2 1 0.5 8 6 7 200414902 計算値：1210.5870 6) 紫外線吸收光譜： 於甲醇中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表示： 263nm( ε 9900) 7) 旋光度： 於甲醇中測定旋光度，如下列所示値表示： [a ]D29 : +1 3.2。（ c0.2 ) 8) 紅外線吸收光譜： 以溴化鉀（KBr )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下列所 示之極大吸收表示： 3383，2957,2930,1738,1695,1629,1464,1384，1273，ll61 1 1 04,1 0 1 4,960cm·1 9) 1H-核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞楓（2.49ppm >測 定，以下所示爲其1 Η -核磁共振光譜：

0.84(6H，t)，0.9 1(3H,d，J = 6.0Hz)，1.2-1.3(8H，m)，1.42(1H 1.57(2H，m)，1.70(lH，m),2.0(7H，m)，2.11(lH，m)52,l7(1H m) 2.26(3H，s),2.3(3H，m)，2.4(3H5m)，2.5-2.6(4H，m)，2,7l(2H d d，J = 6.OHz)，2.80(lH，dd，J = 7.0，12.8Hz)，2.9 1(3H，s)，2 93(1 H br.m)，2.98(lH，dd，J = 2.7，12.8Hz),3.26(lH，t,J = 9.2Hz) 3 36 (3H，s)，3.37(3H，s)，3.4(2H，m)，3.52(lH5m)，3.84(lH,d，J = 8 m z)，3.9(2H，m),3.94(lH5m)，4.14(lH,m)，4.2(2H，m)，4.96(1H d d，J = 2.9,9.5Hz)，5.12(lH,m)，5.30(4H，m)，5.37(2H5m) 5 6 6(1 H，d，J = 8.1Hz),5.90(lH，t，J = 5.9Hz)，5.93(lH，m)，7.82(lH d J = •20- 200414902 8 . lHz)ppm 1 0 ) 13 C -核磁共振光譜： 重二甲亞礪中，內部標準使用重二甲亞碾（39.5ppm)測 定，以下所示爲其13C -核磁共振光譜： 9.4(q)，13.9(q)，19.0(q)，22.0(t)，23.9(t)，24.6(t)，25.2(t)，26. 3(t)，26.6(t)，27· 1(d)，28.7(t)，29.3(t)，29.4(t)，30.9(t),32.9(t)， 36.4(q)，37.8(q)，3 8.8(t)，39.8(t)，39.9(t)，40.2(t)，40.7(t)，4 1. 5(t)，56.6(t)，58.7(q)，60.0(q)，62.3(d)，66.7(d)，69.0(d)，69·9 (d)，70.6(d)，72.7(d)，73 .1(d)，74. l(d)，76.6(d)_77.3(d)，77·4 φ (d)，82.2(d)，83.9(d)，87.5(d)，90.5(d)，101.3(d)，106.7(d)，127. 6(d)，128.2(d)，129.2(d)，129.8(d)，140.5(d)，150.3(s)，163.3 (s)，168.6(s)，169.2(s)，170.1(s)，170.8(s),171.1(s)，171.9(s)， 173.8(s)ppm 1 1)高速液體色層分析法： 管柱· CAPCELLPAK C18UG120,4.6 φχ 150mm (資生堂股 份有限公司製） 溶劑：含有10mM重碳酸銨之40%乙腈水溶液 修 流速：1 .Oml/分鐘 檢出：紫外線吸收260nm 保持時間：1 4.8分鐘 (v) 具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽： 1) 物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞珮，不溶於氯仿 -21- 200414902 3) 分子式：C55H87N5 02 3 4) 分子量：1 1 8 5 (以F A B質譜法測定） 5) 依高分解能fab質譜法測定之精密質量，[m + H] +如下列 表示： 實測値：1 1 8 6 · 5 8 2 8 計算値：1 1 8 6 · 5 8 7 0 6) 紫外線吸收光譜= 於甲醇中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表示： 263ηχη(ε 1 1000) 7) 旋光度： 於甲醇中測定旋光度，如下列所示値表示： [a ]D29 : +13.9° ( c0.2 ) 8) 紅外線吸收光譜： 以溴化鉀（KBr )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下列所 示之極大吸收表示： 3393,2953,2927,1738,1 695 ,1 632,1466,1384,1273,1 162， 1 1 04,1 0 1 4,960cm·1 9) 1H-核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞® ( 2.49ppm)測 定，以下所示爲其1H-核磁共振光譜： 0.83(6H，t，J = 6.6Hz)，0.84(3H，t，J = 7.3Hz)，0.92(3H，d，J = 6.2H z),1.12(2H，dt，J = 6.6Hz)，l，2-1.3(12H，m)，1.4-1.5(2H，m)，1.5 5(2H，m)，1.70(lH，m)，2.0(3H，m)，2.11(lH，m)52.17(lH，m)，2.2 6(3H，s)，2.3(3H，m)，2.4-2.5(3H，m)，2.5-2.6(3H，m)，2.79(lH， 200414902 dd，卜6.6，12.8Hz)，2.9 1(3H，s)，2.94(lH，br.m)，2.99(lH，dd，J = 2.8，l2.8Hz)，3.27(lH，t，J = 9.3Hz)，3.36(3H，s)，3.37(3H，s)，3. 40(2H，m)，3,52(lH，m)，3.84(lH，d，J = 8.8Hz)，3.87(2H，m)，3.9 4(1H，m)，4.13(lH，m)，4.19(2H，m)，4.96(lH5dd，：n9,9.2HZ)， 5*11(lH5m)?5.37(2H?m)55.37(2H?m)?5.66(lH?d?J = 8.1Hz)55. 90(lH，t，J = 5.5Hz)，5.93(lH，m)，7.83(lH，d，J = 8.1Hz)ppm 1 0) 13 C -核磁共振光譜： 重二甲亞®中，內部標準使用重二甲亞碾（39.5ppm)測 定’以下所示爲其13C -核磁共振光譜： _ 9.5(q)，19.0(q)，22.5(q)，23.9(t)，24.5(t)，26.8(t)，27.1(d)，27· 4(d)，28.7(t),28.9(d)，28.9(d)，29.3(t)，29.3(t),29.5(t)，33.2 (t)，36.4(q)，37.8(q)，3 8.5(t)，3 8.8(t)，39.8(t)，39.9(t)，40.1(t)， 40.2(t)，4 1.5(t)，56.6(t)，58.7(q)，60.0(q)，62.3(d)，67.3(d)，69. l(d)，70,〇(d)，70.6(d)，72.7(d)，73.1(d)，74.1(d)，76.6(d)，77.2 (d)，77.5(d)，82.2(d)，83.9(d)，87.6(d)，90.5(d)，101 .3(d)，106. 6 ⑷，140.5(d)，150.3(s)，163.3(s)，168.5(s)，169.3(s)，170.1 (s)，170.8(s)，171.1(s)，172.0(s)，173.8(s)ppm · 11)局速液體色層分析法： 管柱：CAPCELLPAK C18UG120,4.6(/)X 1 5 0mm (資生堂股 份有限公司製） 溶劑：含有10mM重碳酸銨之42%乙腈水溶液 流速：1 .Oml/分鐘 檢出·紫外線吸收2 6 0 n m 保持時間：9.5分鐘 -23- 200414902 (Vi) 具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽： 1) 物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞碾，不溶於氯仿 3) 分子式· C56H87N5023 6) 分子量：1197(以FAB質譜法測定） 7) 依高分解能FAB質譜法測定之精密質量，[M + H] +如下列 表示： 實測値：1 1 9 8 · 5 8 7 5 # 計算値：1 1 9 8 · 5 8 7 0 6) 紫外線吸收光譜： 於甲醇中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表示： 263 nm( ε 8 7 0 0) 7) 旋光度： 於甲醇中測定旋光度，如下列所示値表示·· [a]D29: — 6.8 ( c 0.2 ) 8) 紅外線吸收光譜： · 以溴化鉀（KBr )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下列所 示之極大吸收表示： 3414，2928，2856,1738,1689,1632,1465,1394,1273，1161 1 1 26,1 1 04,1 0 1 4,959cm1 9) iH-核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞® ( 2.49Ppm)測 定，以下所示爲其1H-核磁共振光譜： •24- 200414902 0·84(6Η，t),0.92(3H，d，J = 6.2Hz)，1，2-1.3(1 2H，m)5 1.42(1 Η, m)，1.57(2H，m)，1.71(lH,m)，2.0(7H，m)，2.11(lH，m)，2.17(lH， m)，2.25(3H，s)，2.3(3H，m)，2.41(lH，m)，2.43(2H，m)，2.6(4H， m)，2.80(lH，dd，J = 6.6，13.6Hz)，2.91(3H，s)，2.93(lH，m)，2.98 (lH，dd，3.3，13.6Hz)，3.27(lH，t，J = 9.5Hz)，3.36(3H，s)，3.37(3 H，s)，3.4(2H，m)，3.5 2(lH，m)，3.84(lH，d，J = 8.4Hz)，3.87(2H， m)，3.94(lH，m)54.13(lH，m)，4.19(2H，m)54.96(lH，dd，J = 3.3,9. 5Hz)，5.90(lH，t，J = 5.9Hz)，5.37(2H，m)，5.66(lH，d，J = 8.1Hz)， 5.90(lH，t，J = 5.9Hz)，5.93(lH，m)，7.8 3(lH，d，J = 8.1Hz)ppm · 10) 13c-核磁共振光譜： 重二甲亞楓中，內部標準使用重二甲亞碾（39.5ppm)測 定，以下所示爲其13C -核磁共振光譜： 9.5(q)，1 4.0(q)，1 9.0(q)，22. l(q)，23.9(t)，24.8(t)，26.3( t)，26. 6(q)，27.1(d)，28.6(t)，28.6(t)，29.0(t)，29.1(t)，29.3(t)，3 1.3 (t)，32.9(t)，3 6.4(q)，3 7.8(q)，38.9(t)，39.8(t)，39.9(t)，40.2 (t)，40.7(t)，4 1.5(t)，56.6(t)，5 8.7(q)，60.0(q)，62.3(d)，66.7 (d)，69.0(d)，69.9(d)，70.5(d)，72.7(d)，73.2(d)，74· 1(d)，76.6 籲 (d)，77.2(d)，77.5(d)，82.2(d)，83.9(d)，89.1(d)，90.5 (d)，10 1. 3(d)，106.6(d)，129.1(d)，130.1(d)，140.6(d)，150.3(s)，163.3 (s)，168.4(s)，169.2(s)，170.1(s)，170.8(s)，171.1(s)，172.0(s)， 173.8(s)ppm 1 1)高速液體色層分析法： 管柱：CAPCELLPAK C18UG12 0,4.6(/)x 1 5 0mm (資生堂股 份有限公司製） -25- 200414902 溶劑：含有10mM重碳酸銨之42%乙腈水溶液 流速.1. 〇 ιώ 1 /分鐘 檢出：紫外線吸收2 6 0 n m 保持時間：1 〇 . 2分鐘 (vii ) 具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽： 1 )物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞楓，不溶於氯仿 3) 分子式：C55H87N5 02 3 4) 分子量：1185(以FAB質譜法測定） 5) 依高分解能FAB質譜法測定之精密質量，[M + H] +如下列 表示： 實測値：1 1 8 6.5 9 1 2 計算値：1186.5870 6) 紫外線吸收光譜： 於甲醇中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表示： 2 63 nm( ε 3600) 7) 旋光度： 於甲醇中測定旋光度，如下列所示値表示： [a]D29: + 4.3。（c0.5) 8 )紅外線吸收光譜： 以溴化鉀（KBr )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下列 所示之極大吸收表示： 3371，2926,2855,1 738,1691 ,1628, 1466.1384,1273,1 161， -26- 200414902 1 1 04,1 0 1 6,962cm-1 9) iH-核磁共振光譜： 重二甲亞楓中，內部標準使用重二甲亞碾（2.05ppm )測 定，以下所示爲其1 Η -核磁共振光譜： 0.84(6H，t)，0.92(3H，d，J = 5.5Hz)，1.2-1 .3(1 8H，m)，1.42(lH， m)，1.5 5(2H，m)，1.70(lH5m)，2.0(3H，m)52.14(2H，m)，2.26(3H， s)，2.3(3H，m)，2.4 1(lH，m)，2.47(2H，m)，2.6(4H，m)，2.80(lH，d d，J = 6,2，13.6Hz)，2.92(3H，s)，2.94(lH，br.m),3.0 1(lH.dd，J = 2. 2，13.6Hz)，3.27(lH，t，J = 8.8H2)，3.36(3H，5)，3.37(3H，5)，3.40 (2H,m)，3.53(1 H，m)，3.86(lH，d，J = 9.5Hz)，3.9(3H，m)，4· 13(1 H，m)，4.19(2H，m)，4.96(lH，dd，J= 1.859.2Hz),5.11(lH，m),5.3 7(2H，m)，5.65(lH，d，J = 7.7Hz)，5.90(lH，t，J = 5.0Hz)，5.93(lH， m)，7.8 1 (lH，d，J = 7.7Hz)ppm 10) 13c-核磁共振光譜： 重二甲亞楓中，內部標準使用重二甲亞碾（39.5ppm )測 定，以下所示爲其13C -核磁共振光譜： 9.5(q)，14.0(q)，19.0(q)，22.1(t)，23.9(t)，24.5(t),27.2(d)，28. 7(t)52 8.7 (0)，2 8.9(t)，2 8.9(t)，2 9.0(t)，29.0(t)，29.1(d).3 1.3 (t)，3 3.3(t),3 6.4(q)，3 7.8(q)，3 8.8(t)，3 9.8(t)，39.9(t)，40.2(t)， > 40.7(t)，4 1.5(t)，56.S(t)，5 8.7(q),60.0(q)，62.4(d)，66.5(d)，69. 0(d)，70.6(d)，72.7(d),72.9(d)，74.1(d)，76.6(d)，77.3(d)，77.5 (d)，82.0(d),84.0(d)，87.3(d)，90.4(d)，101.3(d)，106.9(d)，140. 5(d)，150.2(s)，163.3(s)，168.7(s)，169.3(s)，170.1(s)，170.6 (s)，171.1(s),171.8(s)，173.5(s)ppm -27· 200414902 1 1)高速液體色層分析法： 管柱：CAPCELLPAK C18UG120,4.6 p X 1 50mm (資生堂股 份有限公司製） 溶劑：含有1 〇 m Μ重碳酸銨之4 2 %乙腈水溶液 流速：1.0ml/分鐘 檢出：紫外線吸收260nm 保持時間：1 1 .2分鐘 (viii) 具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽： 1) 物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於水，不溶於氯仿 3) 分子式： 4) 分子量：5 43 (以FAB質譜法測定） 5) 依高分解能FAB質譜法測定之精密質量，[M + H] +如下列 表示： 實測値·· 544.2240 計算値：5 4 4 · 2 2 5 5 6) 紫外線吸收光譜： 於水中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表示： 263nm(ε 8700) 7) 旋光度： 於水中測定旋光度，如下列所示値表示： [a ]D29 : + 6 2.7 0 ( c0.2) 8 )紅外線吸收光譜： 200414902 以溴化鉀（K B r )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下列 所示之極大吸收表示： 3393,2929,1688, 1 620. 1468,1394,12 7 4.1094,1065,1019， 962cm -1 9) iH-核磁共振光譜： 重水中，內部標準使用重水（4.75Ppm)測定，以下所示 爲其1H-核磁共振光譜： 2.2 1(lH，ddd，J = 3.3,5.9，14.7Hz)，2.3-2.4(3H，m)，2.44(3H，s)， 2.86(lH，dd，J = 9.2，13.6Hz)，2.97(lH，d，J = 14.7Hz)，3.07(3H， s)，3.13(lH，d，J=14.7Hz)，3.24(lH，dd，J = 4.4，l 3.6Hz)，3.80(1 H，d，J = 9.9Hz)，3.93(lH，d，J = 6.6Hz)，4.20(lH，d，J = 5.1Hz)，4.2 5(lH，dt，J = 7.0Hz)，4.3 8(lH，m)，4.4 1(lH，d，J = 9.9Hz)，4.44(lH， m)，5.56(lH，dd，J = 3.3,5.9Hz)，5.8 1(lH，d，J = 8.1Hz)，6.00(lH，t， J = 5.5Hz)，7.74(lH，d，J = 8.1Hz)ppm 10) 13c-核磁共振光譜： 重水中，內部標準使用二噚烷（66.5 ppm)測定，以下所 示爲其13C -核磁共振光譜： 36.4(q)，38.6( q)，38.7(t)，40· l(t)，40.4(t)，58.6(t)，63.1(d),68. 7(d)，69.1(d)，69.4(d)，71.8(d)，76.9(d),81.6(d)，85.0(d)，85.3 (d)，101.3(d)，109.0(d)，142.2(d)，151.4(5)，166.5(5)，172.3(5 )?173.5(5)ppm 11) 高速液體色層分析法： 管柱：CAPCELLPAK C18UG12O,4.60x 150mm (資生堂股 份有限公司製） -29- 200414902 溶劑：10mM重碳酸銨 流速：1.0ml/分鐘 檢出：紫外線吸收2 60nm 保持時間：9 · 2分鐘 (iX) 具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽： 1) 物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞碾，不溶於氯仿 3) 分子式：C22H31N5O10 4) 分子量：5 25 (以FAB質譜法測定） 5) 依高分解能FAB質譜法測定之精密質量，[m + H] +如下列 表示： 實測値：5 2 6 · 2 1 5 3 計算値：5 2 6.9 1 4 9 6) 紫外線吸收光譜： 於水中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表示： 260nm( ε 8700) 7) 旋光度： 於水中測定旋光度，如下列所示値表示： [a ]D 2 9 : + 6 5.5 ° ( c0.2 ) 8) 紅外線吸收光譜： 以溴化鉀（KBr )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下列 所示之極大吸收表示： 3403,2953,1690,1633,1467,1382,1361,1274,1098,1067, -30- 200414902 1 0 1 3.9 64cm·1 9) 1H-核磁共振光譜： 重水中，內部標準使用重水（4.7 5 ppm)測定，以下所示 爲其1H-核磁共振光譜： 2.2-2.4(4H，m)，2.43(3H，s)，2.86(lH，dd，J = 9.9，13.6Hz)，2.92 (lH，dd，J = 6.6，12.7Hz)，2.97(3H，s)，3.23(lH，dd，J = 4.0，13.6H z)，3·32(1Η，dd，J = 7.3, 12.7Hz)，3.87(1 H，d，J = 9.5Hz)，4.08(1 Η， m)，4.18(lH，m)，4.3 1(lH，dt，J = 5.8Hz)，4.35(lH，m)，4.3 8(lH， m)，5.56(1 H，dd，J = 2.6，5·9Ηζ)，5.80(1 H，d，J = 8.1 Hz)，6.06(1 H， t，J = 5.9Hz),6.47( lH，dd，J = 6.6,7.3Hz)，7.64(lH，d，J = 8.1Hz)p pm 10) 13c-核磁共振光譜： 重水中，內部標準使用二噚烷（66.5ppm)測定，以下所 示爲其13C -核磁共振光譜： 32.7(q),3 8.6(t)，40.0(q)，40.5(t)，40.9(t)，5 1.0(t)，63.2(d)，69. 8(d)，71.7(d)，76.7(d)，82.4(d)，85.2(d)，85.6(d)，101.8(d), 107. 7(d)，123.1(d)，141.4(d)，144.2(s)，152.4(s)，167.7(s)，168.6(s )，171.0(s)ppm 11) 高速液體色層分析法： 管柱：CAPCELLPAK C18UG120,4.6 0 X 1 5 0mm (資生堂股 份有限公司製） 溶劑：含有10mM重碳酸銨之3%乙腈水溶液 流速：1 · 0 m 1 /分鐘 檢出：紫外線吸收2 60nm -31- 200414902 保持時間：13 ·0分鐘 具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽 1)物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞礙，不溶於氯仿 3) 分子式· C42H67N5016 4) 分子量：8 9 7(以FAB質譜法測定） [Μ + ΗΓ如下列

5)依高分解能FAB質譜法測定之精密質量 表示： 實測値：8 9 8 · 4 6 6 9 計算値：8 9 8 · 4 6 6 1 6)紫外線吸收光譜： 於甲醇中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表示 263nm( £ 7500) 7) 旋光度： 於甲醇中測定旋光度’如下列所示値表示：

[a ]D29 : + 19.8 ° ( c0.2) 8) 紅外線吸收光譜= 以溴化鉀（KBr )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下列 所示之極大吸收表示： 3394，2926，2855，1737，1691，1629,1467,1397,1274,1203， 1 131,1 094,1 0 1 3,962cm·1 9) 1H-核磁共振光譜： 重二甲亞楓中，內部標準使用重二甲亞碾（2.49ppm )測 、32- 200414902 定，以下所示爲其1Η-核磁共振光譜： 0.84(3H，t，J = 7.1Hz)，0.88(3H，d，J = 6.3Hz)，1.2-1.3(18H，m)，l. 57(2H，m)，1.9-2.2(8H，m)，2.24(3H，s)52.43 (lH，dd，J = 5.5-15. lHz)，2.54(lH，dd，J = 8.2，15.4Hz)，2.66(lH，dd，J = 4.4，15.4Hz)， 2.74(lH，dd，J = 6.3，12.6Hz)，2.91(3H，s)，2.93(lH，m)，2.99(lH， dd，J = 3.8，12.6Hz),3.30(lH，m)，3.83(1 H，d，J = 9.1Hz)，3.9-4.0 (3H，m)，4.12(lH，dt，J = 5.2,5.5Hz)，4.2(2H,m)，5.08(lH，m),5· 38(2H，m)，5.6 7(lH，d，J = 8.0Hz)，5.90(lH，t，J = 6.0Hz)，7.8 1(l H，d，J = 8.0Hz)，5.90(lH，t，J = 6.0Hz)，7.8 1(lH，d，J = 8.0)ppm 10) 13c-核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞楓（39.5ppm )測 定，以下所示爲其13C -核磁共振光譜： 14.0(q)，19.4(q)，22.1(t)，24.6(t)，27.1(d)，28.7(t)，28.7(t)，28. 9(t)，29.0(t)，3 1.3(t)，3 3.2(t)，36.4(q)，37.8(q)，3 8.9(t)，39.8 (t)，3 9.9(t)，40.1(t)，40.4(t)，41.5(t)，56.6(t)，62.3(d)，66.6(d)， 69·1(d)，69.9(d)，70.7(d)，72.8(d)，77.6(d)，82.0(d)，83.9(d)，8 7.4(d)，101.3(d)，107.0(d)，140.5(d)，150.2(d)，163.3(s)，168· 5(s), 1 69.3(s)? 1 7 0.7 (8),1 7 1 .5 (8),1 7 3.8 (s)ppm 11 )高速液體色層分析法： 管柱：CAPCELLPAK C18UG12O,4.6 0 X 1 50mm (資生堂股 份有限公司製） 溶劑：含有ο.2%三乙基胺-磷酸緩衝液，調節ρΗ3·3255〇/〇 乙膪水溶液 流速：1 · 0 m 1 /分鐘 33- 200414902 檢出：紫外線吸收2 60nm 保持時間：4.0分鐘 (xi) 具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽： 1)物質之性狀：無色粉末狀物質 2 )溶解性：可溶於甲醇、二甲亞珮，不溶於氯仿 3) 分子式：C54H85N5 023 4) 分子量：1171(以FAB質譜法測定） 5 )依高分解能F A B質譜法測定之精密質量，[μ + Η ] +如下列 表示ζ 實測値：1 1 7 2 · 5 7 3 1 計算値：1 1 7 2.5 7 1 3 6) 紫外線吸收光譜： 於甲醇中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表示： 263nm( £ 1 0400) 7) 旋光度： 於甲醇中測定旋光度，如下列所示値表示： [a ]D29 : + 1 0.6。（ c0.3 ) 8) 紅外線吸收光譜= 以溴化鉀（KBr )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下列 所示之極大吸收表示： 3403,2926,2855,1 739,1695,1628,1467,1 384,1273,1 1 62, 1 1 03,1 0 1 3,966cm·1 9) 1H-核磁共振光譜： •34- 200414902 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞楓（2.4 9ppm )測 定，以下所示爲其1H-核磁共振光譜：. 0.83(3H.t，J = 6.6Hz)，0.9 1(3H,d，J = 6.3Hz)，1.17(3H，d，J = 6.0 Hz)，l.2-1.3(18H，m),1.55(2H，m)，1.9-2.1(3H，m)，2.13(2H. m)，2.26(3H，s),2.3-2.4(3H，m)，2_4 1(lH，dd5J = 6.0,15.4Hz)，2. 47(2H，m)，2.6(4H，m)，2,80(lH，dd，J = 5.8，12.6Hz)，2.92(3H，s)， 2.9-3.0(2H，m)，3.20(lH，dd，J = 9.059.6Hz)，3.32(lH，m)，3.36 (3H5s)，3.37(lH，m)，3.3 8(3H，s)，3.4 1(lH，m)，3.52(lH，m)，3.5 9(lH，dq,J = 6.0,9.0Hz)，3.80(lH，d，J = 8.5Hz)53.9(2H，m)53.9 4(lH，d，J = 3.3Hz)，4.10(lH，m)，4.2 1(2H,m),4.94(lH，dd，J = 3. 0,9.6Hz)，5.11(lH，m)，5.37(2H，m)55.66(lH，d5J = 8.0Hz)，5.89 (lH，t，J = 5.5Hz)55.90(lH，d,J=1.4Hz)，7.8 1(lH，d，J = 8.0Hz)pp m 10) 13c-核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用二甲亞碾（39.5ppm)測定， 以下所示爲其13C -核磁共振光譜： I4.0(q)，i7.7(q)，19.0(q)，22.1(t)，24.6(t)，27.1(d)，28.7(t)，28. 7(t)，28.9(t)，29.0(t)，2 9. l(t)，3 1 .3(t)，33.3(t)，3 6.3(q)，3 7.8 U)，3 8.8(t)，39.8(t).39.9(t)，40.0(t)，40.2(t)，4 1.4(t)，56.6(t)， 5 8.7 (q) ? 6 0.2 (q)? 6 2.4(d), 6 6.4(d) ,6 9.0(d), 6 9.6(d), 7 0.0(d) ,7 0.5(d),72.5(d),72.8(d),76.7(d),77.4(d),79.2(d),82.0(d),84. 〇(d)，87.2(d)，90.4(d)，101.2(d)，107.0(d)，140.4(d)，150.2(5)， 163·3(5)，169·0(5)，169·3(5)，170·2(5)·170·7(5)，171·2(5)，17 1.8(5),173.5(5)ppm -35- 200414902 1 l)高速液體色層分析法： 管柱：資生堂股份有限公司製 溶劑：含有0.2%三乙基胺-磷酸緩衝液，調節pH33255% 乙腈水溶液 流速：1 .〇ml/分鐘 檢出·紫外線吸收2 6 0 n m 保持時間：6.5分鐘 (χϋ ) 具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽： 1 )物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞®，不溶於氯仿 3) 分子式：C54H85N5 02 3 4) 分子量：1171(以FAB質譜法測定） 5) 依高分解能FAB質譜法測定之精密質量，[M + H] +如下列 表示： 實測値：1 1 72.5 73 1 計算値：1 1 7 2 · 5 7 1 3 6) 紫外線吸收光譜： 於甲醇中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表禾· 262nm( ε 1 1 000) 7) 旋光度： 於甲醇中測定旋光度，如下列所不値表不· ：+ 14.2° ( c0.2) 8 )紅外線吸收光譜： 200414902 以溴化鉀（KB r )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下列 所示之極大吸收表示： 3368,2927,2856,1735,1707,1674,1 651，161 5, 1466,1378， 1 2 7 6,1 1 6 1,1 1 04,95 1 cm-1 9) iH-核磁共振光譜： 重甲醇中，內部標準使用重甲醇（4.7 8ppm )測定，以下 所示爲其1H-核磁共振光譜：. 〇.76(3H，t，J = 7.0Hz),0.8 1(3H，d，J = 7.4Hz)，0.90(3H，d，J = 6.4 Hz)，1.2-1.3(18H，m)，1.37(lH5m)，1.51(2H，m)，1.68(lH，m)，2· l-2.2(4H，m)，2.2-2.4(5H，m)，2.42(3H,s)，2.5-2.6(6H，m)，2.8 5(lH，dd，J=8.3，13.4Hz)，3.0(2H，bi:，d)53.09(lH，dd，J = 4.0，13· 4Hz)，3.22(lH，dd，J = 9.0,9.0Hz)，3.32(3H，s)，3.34(3H，s)，3.3 7(lH，m)，3.49(lH，dd，J = 2.3,3.3Hz)，3.8(lH，bir，d)，4.0(2H，m)， 4.10(lH，dd5J = 6.0,6.4Hz)54.2(2H5m)54.26(lH，dd，J = 2.0,8.7 Hz)，4.96(1 H，dd，J = 3.3,9.0Hz)，5· 14(lH，m)，5.2-5.4(1 H，br m)，5.41(lH，t，J = 4.9Hz)，5.94(lH，t，J = 5.0Hz)，7.71(lH，d，J = 8· 〇Hz)ppm 1 0 ) 13 C -核磁共振光譜： 重二甲亞颯中，內部標準使用重甲醇（49. Oppm)測定， 以下所示爲其13C -核磁共振光譜： 1 0. 1 (q)，14.5(q)，20. l(q)，23.8(t)，25.6(t)，26.3(t)，28.9(d)，29. 8(t)，3 0.3(t)，30.4(t)，30.5(t)，30.6(t)，30.7(t)，30.8(t)533.9(t)， 35.3(t)，37.0(q)，40.7(t)，40.8(t),41.2(t)，41.5(t)，58.4(t)559· 7U),6 l.〇(q)，62.6(d)，66.3(d)，68.8(d)，69.4(d)，69.7(d)，72.0 -37- 200414902 (d)，72.9(d)，73 ·0(〇!)，74.8(d)，76.2(d)，78.6(d)，79.3(d)，84.2( d)，86.6(d)，87·1(d)，92.4(d)，103.3(d)，109.1(d)，144.3(d)，14 1.9(s)?164.4(s)5165.8(s)5l 70. l(s)?171.0(s)?172.2(s)5173.6 (s)，175.9(s)ppm 1 1)筒速液體色層分析法： 管柱：CAPCELLPAK C18UG120,4.6 0 χ 1 50mm (資生堂股 份有限公司製） 溶劑：含有〇 · 2 %三乙基胺-憐酸緩衝液，ρ Η 3 · 3之5 5 °/〇乙腈 水溶液調節 φ 流速：l.Onil /分鐘 檢出：紫外線吸收2 60nm 保持時間：7.0分鐘 本發明係關於一般式（I)乃至（IV)中任1項之一般式所表示 之構造所形成之化合物，或，具有⑴乃至（vii)及（x)乃至（xii) 中記載之物理化學性狀之化合物，稱爲「姆拉明黴素類抗 生素」之化合物。 本發明之姆拉明黴素類抗生素包含一般式（I)乃至（IV)中 鲁 任1項之一般式所表示之全部化合物，較佳者中R爲烴鏈之 化合物，前述烴鏈並未特別限定，可爲含有直鏈狀烴、分 枝狀烴、飽和烴、不飽和烴等，較佳爲直鏈狀烴鏈，更較 佳爲直鏈狀飽和烴鏈。烴鏈之長度未特別限定，但較佳爲 碳數7至17者，更佳者爲碳數9至15者。 本發明之姆拉明黴素類抗生素之具體例，可列舉下列％ 但未限定於此。 -38- 200414902 姆拉明黴素A(Muraminomicin A)爲上述一般式（I)中R爲― (CH2)3CH = CH(CH2)5CH3之化合物或有上述（i)中記載所示物 理化學性狀之化合物。同樣地，姆拉明黴素B(Miiramin〇micin B)係R爲-(CH2)9CH3之化合物或含有上述（ii)中記載所示物 理化學性狀之化合物，姆拉明黴素C(Muramin〇micin C)係R 爲- CH2CH = CH(CH2)7CH3之化合物或含有上述（iii)中記載之 物理化學性狀之化合物，姆拉明黴素D(Muraminomicin D) 係&爲-((^2)'11 = (：11(：112(^ = (：11((：112)，1之化合物或含有 上述（i v)中記載之所示物理化學性狀之化合物，姆拉明黴素 El(Muraminomicin E1)係 R爲 _ (CH2)8CH(CH3)2 之化合物或含 有上述（v)中記載之所示物理化學性狀之化合物，姆拉明黴 素 E2(Mui:aminomicin E2)係 R爲-(CH2)3CH = CH (CH2)6CH3 之 化合物或含有上述（vi)中記載之所示物理化學性狀之化合 物’姆拉明黴素F(Muraminomicin F)係R爲-(CH2)1QCH3之化 合物或含有上述（vii)中記載之所示物理化學性狀之化合 物。 又’姆拉明黴素類抗生素中，姆拉明黴素G(Muramin〇micin G)係上述一般式（II)中，r爲-(CH2)1()CH3之化合物或含有上 述（X)中記載之所示物理化學性狀之化合物，姆拉明黴素Η (Muraminomicin Η)係上述一般式（ΠΙ)中 R爲·（{：Η2)1()(：Η3 之化 合物或含有上述（xi)中記載之所示物理化學性狀之化合物、 姆拉明黴素I(Mui:aminomicin I)係上述一般式（IV)中R爲-(CH2) 10CH3之化合物或含有上述（xii)中記載之所述物理化 學性狀之化合物。 -39- 200414902 本發明中，式（v)乃至（VIII)中任1項中所表示之化合物稱 爲「姆拉明黴素母核物質」、姆拉明黴素母核物質中’姆 拉明黴素Zl(Muraminomicin Z1)爲上述式（V)所表不之化合 物或含有如上述（v i i i)中記載之物理化學性狀之化合物，姆 拉明黴素Z2(Muraminomicin Z2)係上述式（VI)所不之化合物 或含有如上述（ix)中記載之物理化學性狀之化合物，姆拉明 徵素23(]\411^111丨11〇111丨(：丨1123)係上述式（^11)所75化合物’姆 拉明黴素Z4(Muraminomicin Z4)爲上記式（VIII)所不化合 物。 鲁 本發明中，姆拉明黴素類抗生素及姆拉明黴素母核物質 統稱爲「姆拉明黴素物質」。 本發明化合物對於現在問題包含迫切對耐性菌提供細菌 感染症之預防及治療爲可能的。又，該化合物作爲具有較 優異抗菌活性之衍生物時之起始原料亦爲可能。 本發明之化合物含有至少一個不對稱碳原子，而存有各 種光學異構物，一般式⑴乃至（IV)及式（V)乃至（VIII)中， 係以此等異構物之單一式表示，但本發明爲含有外消旋化 鲁 合物之異構物、及其異構物之混合物方式。此等異構物依 立體特異的合成法，若光學活性化合物作爲原料化合物合 成時則能夠製造，或，以異構物之混合物製造後，使用色 層分析等習用方法分離爲可製造所冀望之異構物。 由於本發明化合物具有羧基、胺基等，使用此項業者中 習知方法能夠做成酸或鹼之鹽類，而本發明亦包含此等鹽。 本發明化合物之鹽作爲醫藥使用之場合，醫學上使用時， -40- 200414902 只要是藥理學上容許者則未特別限定。又’本發明之化合 物之鹽使用於醫藥以外用途之場合時’例如作爲中間體使 用之場合，只要能使用於該用途者，未特別限定。 此等鹽可列舉例如鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽等之鹼金屬鹽；鈣 鹽、鎂鹽等之鹼土金屬鹽；鋁鹽、鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、鎳 鹽、鈷鹽等之金屬鹽；銨鹽等之無機鹽；t-辛基胺鹽、二 苄胺鹽、嗎啉鹽、葡糖胺、苯基甘胺酸烷基酯鹽、乙二胺 鹽、N-甲基葡糖胺鹽、胍鹽、二乙基胺鹽、三乙基胺鹽、 二環己基胺鹽、N，N’-二苄基乙二胺鹽、氯普羅卡因鹽、普 鲁 羅卡因鹽、二乙醇胺鹽、N-苄基-苯乙基胺鹽、哌畊鹽、四 甲基氨鹽、參（羥基甲基）胺甲烷鹽等之有機胺鹽；甘胺酸 鹽、離胺酸鹽、精胺酸鹽、鳥胺酸鹽、天冬醯胺酸鹽等之 胺基酸鹽；乙酸鹽、溴化物鹽、氯化物鹽、鹽酸鹽、溴酸 鹽、碘化物鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、二磷酸鹽等之無機鹽； 及檸檬酸鹽、順丁烯二酸鹽、雙羥萘酸鹽、酒石酸鹽等之 有機酸鹽等。較佳者爲藥理學上容許鹽，更佳者爲鈉鹽、 鉀鹽、鹽酸鹽、銨鹽、雙羥萘酸鹽。 籲 又，本發明之化合物及其鹽，於大氣中放置會與水或有 機溶劑混和而與水或溶劑結合，可形成水合物或溶劑化物 時，本發明亦包含此等水合物及溶劑化物之「藥理上容許 鹽」。 本發明之姆拉明黴素物質，較佳爲姆拉明黴素類抗生素， 係培養屬於鏈孢囊菌屬之菌株，可自此種培養液中得到。 又，姆拉明黴素母核物質可爲單獨姆拉明黴素類抗生素或 -41- 200414902 於混合物狀態經還原或水解而得到。 本發明之姆拉明黴素物質之製造法中使用屬於鏈孢囊菌 (Streptosporangium)屬之菌株’例如可列舉如鏈孢囊菌屬 (Streptosporangium sp.)SANK60501 株。SANK60501 株之囷 學特徵說明如下。 1 .形態學特徵 SANK60501株以ISP[國際鏈黴菌計畫，International streptomyces Project]規定之瓊脂培養基，於28°C培養Μ 日後之形態學特徵表示，以光學顯微鏡觀察，顯示 鲁 SANK6 0 5 0 1株之基礎菌絲有良好之伸長性，分枝，褐色、 淺褐色、淡紅褐色至褐紫色，但未觀察到奴卡氏菌 (Nocardia)屬菌株之菌絲斷裂或鋸齒形伸長樣，氣菌絲 之形成爲比較貧弱之單純分枝，顯示白色至粉白色，氣菌 絲之頂端或側生孢子之柄上著生球狀之孢子囊孢子，其大 小爲2至ll#m，孢子囊孢子呈橢圓形，爲0.9x 1.4//m， 不認爲孢子囊孢子有遊走性。 2 .各種培養基上之諸性質 ® 以各種培養基2 8 °C培養1 4日後之性狀示於表1， SANK6 0 5 0 1株菌於瓊脂培養基中多數產生紫色之針狀結 晶。依據曼賽努（Munsell)方式之日本色彩硏究所版「標準 色票」之色卡號碼表示其色調。 -42- 200414902 【表1】 培養基之種類 項目* 1 SANK60501株之性狀 蔗糖•硝酸鹽瓊脂 G 不怎麼良好，隆起狀，褐白色 (2.5Y 9/1)* 2 AM 不良，絲絨狀，粉白色（10YR9/2) R 淺粉紅色（10R8/3) SP 未產生 葡萄糖•天冬胺酸瓊脂 G 不良，無色 AM 未著生 R 無色 SP 未產生 甘油·天冬胺酸瓊脂（ISP G 不良，隆起狀，褐白色（2.5Y 9/1) 5) AM 不良，原痕跡的，白色 R 褐白色（2.5Y 9/1) SP 未產生 澱粉•無機鹽瓊脂（ISP G 不怎麼良好，隆起狀，褐色 4) (7.5YR4/4) AM 未著生 R 暗褐色（7.5YR3/3) SP 未產生 酪胺酸瓊脂（ISP 7) G 不良，隆起狀，淡紅褐色 (10R5/4) AM 不良，原痕跡著生，白色 R 灰紅褐色（10R4/4) SP 未產生 營養瓊脂（Difco) G 不怎麼良好，隆起狀，亮褐色 (5YR5/8) 200414902 AM 未著生 R 灰橄欖色（5Y4/4) SP 未產生 酵母菌提取物•麥芽提 G 良好，隆起狀，褐紫色（1()R3/3) 取物（ISP 2) AM 未著生 R 暗紅紫色（10R3/4) SP 未產生 燕麥片瓊脂（ISP 3) G 不怎麼良好，平坦，暗紅褐色 (2.5YR3/3) AM 未著生 R (5YR3/4) SP 未產生 水瓊脂 G 不良，褐白色（10YR 9/1) AM 不良’原痕跡的’粉白色（10R 9/2) R 黃灰色（10Y 9/1) SP 未產生 馬鈴薯提取物•人參提 G 不良好，淡黃橙色（10YR 8/3) 取物瓊脂 AM 未著生 R 淡黃褐色（l〇YR 7M) SP 未產生 * 1 「G」代表生長 、「AM」 代表氣菌絲、「R」代表裡 面、「SP」代表可溶性色素。 * 2 性狀欄內之（） 內爲曼賽努方式之色調表示。 3. 生理學性質 28°C培養後，於2至21日間觀察SANK6050 1株之生理 -44- 200414902 學性狀如表2所示。 表2_ 澱粉之水解 陽性 明膠之液化 陰性 硝酸鹽之還原 陰性 牛奶之腺化 陰性 牛奶之凝固 陰性 黑色素樣色素之生產性陰性 (培養基1 ) 1 (培養基2) *陰性 (培養基3 ) *陰性 基質分解性 酪蛋白 陽性 酪胺酸 陽性 黃嘌呤 陰性 生長溫度範圍 (培養基4 ) 1 1 2 - 3 8 °C 生長適合溫度 (培養基4 ) 1 3 0 - 3 6 °C 食鹽耐性 3% -45- 1 :培養基1 :胰蛋白•酵母菌提取物·肉汁培養基 (ISP 1 ) 培養基2 :腺·酵母菌提取物·鐵瓊脂（ISP 6 ) 培養基3 :酪胺酸瓊脂（IS P 7 ) 培養基4 :酵母菌提取物·麥芽提取物瓊脂（ISP 2 ) 200414902 又，使用 Pridham and Gottlieb 瓊脂培養基（ISP 9) ，28 °C培養1 4日後觀察本菌株碳源之消化性示於表3中。 表3 D-葡萄糖 + D-果糖 + L-阿戊糖 + L-鼠李糖 土 D-木醣 + 蔗糖 士 肌醇 — 棉實糖 — D -甘露糖醇 士 對照 — 表3中「+」表示利用，「土」表示較弱利用，「—」表示 不利用。 4 · 化學分類學性質 SANK6 05 0 1株之化學分類學性狀依據「放線菌之分類與 鑑定」（日本放線菌學會編，日本學會事務中心，200 1年， Ρ·49-82 )如下所示。全細胞中主要檢測出糖成分，細胞壁 肽聚糖中胞壁酸（muramicacid)之醯基型爲乙醯基型。又， 主要甲基萘醒類（維生素K3類，menaquinon)分子種爲檢 測出 MK-9 ( H。）、MK-9 ( H2 )及被 MK-9 ( H4 )，磷脂質 爲PIV型，未檢測出黴菌酸。 本菌株之分類係依據ISP [國際鏈黴菌計畫，lute national streptomycesProject]基準、渥克斯著，「放線菌」，第2 卷（S. A.Waksman，’’The Actinomycetes’’，2)，布奇納與奇柏 編，「伯格氏參考指南」，第8版，1 974年（R.E.Buchananand、 N.E. Gibbons, MBergey!s Manual of Determinative Bacteriology’’，8th edition，1974)， 「伯格氏參考指南」，第 -46- 200414902 4 卷，1989 年（Bergey’s Manual of System ati’c Bacte riol〇gy，4，1 9 8 9)，「放線菌之分類與鑑定」，日本放線菌學 會編，日本學會事務中心，2001年（Identification Manual of Actinomycetes)及鏈孢囊菌（Streptosporangium)屬放線菌相 關之最近文獻，放線菌中爲鏈孢囊菌（Streptosporangium) 屬。因此，鑑定本菌株鏈孢囊菌屬（Streptosporangium sp·) SANK60501 株（本說明書中稱爲「SANK60501 株」）。又，本 菌株於2002年3月27日國際寄託於日本茨城縣筑波市東1丁 目1番地1之獨立行政法人產業技術綜合硏究所專利生物寄 存中心，授與受託編號FERM BP-79 84號。 放線菌於自然界中或人工操作（例如紫外線照射、放射線 照射、化學藥品處理等）後，容易產生變異爲周知之事，本 發明之SANK60 5 0 1株亦同樣地，但本發明之SANK6050 1株， 包含此等變異株之全部。又，此等變異株亦包含以遺傳學 學之方法，例如重組、形質導入、形質轉等得到者。 因此’ SANK605 0 1株生產姆拉明黴素物質，較佳爲姆拉 明黴素類抗生素，其變異株及與其無法明確區別之菌株， 全部包含於SANK605 0 1株中。 又’本發明包含屬於鏈孢囊菌屬之生產姆拉明黴素物質， 較佳爲生產姆拉明黴素類抗生素之全部菌株。 培養本發明之姆拉明黴素物質之生產菌時使用之培養 基’可含有選擇自碳源、氮源、無機離子及有機營養源等 之適宜培養基，合成或天然培養基中任一種皆可使用。 該營養源爲先前公知之真菌類或放線菌類菌株之培養所 -47- 200414902 利用者，可使用微生物可代謝之碳源、氮源及無機鹽。 具體而言，作爲碳源者爲葡萄糖、果糖、麥芽糖、蔗糖、 甘露糖醇、甘油、糊精、燕麥、黑麥、玉米澱粉、馬鈴薯、 玉米粉、大豆粉、棉實油、水飴、糖蜜、大豆油、檸檬酸、 酒石酸等爲單一或合倂使用。一般性之上述碳源可使用培 養基之量之1至10重量％，但並未限定其範圍。 又，氮源可使用含有蛋白質或其水解物之物質，或含氮 無機鹽類，較佳之氮源，例如可使用大豆粉、_、落花生 粉、綿實粉、脫脂奶粉、酪蛋白水解物、法嗎明（pharmamin)、 φ 魚粉、玉米浸漬液、腺、肉提取物、生酵母菌、乾燥酵母 菌、酵母菌提取物、馬路托（m a r u t 〇 )提取物、馬鈴薯、 硫酸錢、硝酸銨、硝酸鈉等。該氮源於單一或合倂使用， 較佳使用培養基量之0.2乃至6重量％之範圍。 再者，營養無機鹽可使用包含鈉、銨、鈣、磷酸根、硫 酸根、氯化物、碳酸根等離子之習用鹽類。 又，爲液體培養基時，可使用作爲消泡劑之砂油、植物 油、界面活性劑等。 # 培養SANK6 050 1株生產姆拉明黴素物質之培養基pH値較 佳爲5.0至8.0。 SANK6 0501株之生長溫度爲12乃至38t，但爲了生產姆 拉明黴素物質，培養該菌株培養於18乃至36t爲較佳，更 佳爲培養於20乃至32°C。 姆拉明黴素物質係好氣性培養SANK6〇5〇l株所得者，而 此等培養法可以通常習用之好氣培養法，例如可使用固體 -48- 200414902 培養法、震盪培養法、通氣攪拌培養法等。 於小規模之培養，進行2 0至3 2 °C震盪培養數日爲較佳， 此培養隔以折流板（水流調節壁），或者不隔於三角燒瓶中， 以1或2個階段之種培養步驟開始。 種培養階段之培養基中可倂用碳源及氮源。種培養於20 乃至3 2 °C之恆溫培養箱中，8日間震盪，或震盪至充分成長 後進行。生長之種於第二種培養基或生產培養基中接種。 使用中間生長步驟時，可進行與種培養同樣之方法。中 間生長步驟所得之種，將其一部份接種於生產培養基中。 生產之培養可將此種接種於生產培養用燒瓶中於一定溫 度下數日震盪培養進行。 進行大量生產培養時，以攪絆機、通氣裝置附隨於發酵 器或槽中培養者爲較佳。其中，首先將營養培養基於121乃 至1 3 0 °C加熱滅菌，將其冷卻，之後，將以前述方法生長之 種接種於該滅菌培養基。之後培養於20乃至32°C通氣攪絆 下進行，以此方法可適當獲得多量化合物。 培養終了後，將燒瓶內之培養物離心分離或過濾，或提 取使用之培養物全體，經由純化可得到目的化合物。 伴隨培養經過所生產之姆拉明黴素物質之量，採取培養 液之一部份而提取該化合物群，測定轉位酵素I抑制活性而 確認該化合物之總活性量，又，進行高速液體色層分析， 可個別監測以測定該化合物群。姆拉明黴素物質之生產量 通常以3至15日達到最局値。 培養終了後，培養液中之液體部分及菌體內，或存在於 • 49- 200414902 雙方之姆拉明黴素物質，將培養終了液之全部，或菌株， 其他固形部分，分別以矽藻土之助過濾劑過濾或離心分離， 所彳守濾液或上淸液及囷體中’以轉位酵素I抑制活性或高速 液體色層分析爲指標，利用其物理化學性狀提取而純化。 濾、液或上淸液中存在之姆拉明黴素物質，於中性Ρ Η條件 下’以與水不能混和之有機溶劑，例如以乙酸乙酯、氯仿、 二氯乙烷、氯化苯乙烯、丁醇等之單獨或此等之組合提取 純化。又’作爲吸著劑者，例如可使用活性碳或吸著用樹 脂阿姆伯拉特又八0-2、父八0-4(登錄商標，&〇}1111&11(11^&5公 司製）等或 DiaionHP-10、HP-20、CHP-20P、ΗΡ-50、 SEPABEADS SP-207(登錄商標，三菱化學公司製）等提取純 化。使用吸著劑提取純化時，將含目的化合物之溶液通過 吸著劑之層，不純物會被吸著劑吸著而去除，又，吸著目 的化合物之不純物洗去流出後，使用甲醇水溶液、乙腈水 溶液、丁醇水溶液等將目的化合物洗析出，可提取純化目 的化合物。 可以50乃至90 %之含乙腈或含水甲醇中提取，去除濃縮操 作之有機溶劑後，進行上述同樣之提取純化操作而得到菌 體內存在之姆拉明黴素物質，例如，於培養終了後取適當 量（較佳爲終濃度5 0 %)，添加乙腈或甲醇可提取目的化合 物。提取終了後，不進行以矽藻土之助過濾劑之過濾操作， 得到之提取液與濾液相同的提取純化操作進行提取純化目 的化合物。 依上述方法提取純化之含姆拉明黴素物質之溶液使用矽 -50- 200414902 膠、交聯葡聚糖（Sephadex)LH-20(Amershambiosciences公 司製）、砂酸鎂固相萃取（Florisil)(NacalaiTesque公司製）等 載體分配管柱色層分析；使用Diaion CHP-20P(三菱化學公 司製）等之載體吸著管柱色層分析；使用交聯葡聚糖G-10(Amershambiosciences公司製）、TOYOPEARLHW40F(Toso 公司製）等之膠體過濾色層分析；使用DOWEX50(日產化學 公司製）DOWEX 1(日產化學公司製）、Diaion PK216(三菱化 學公司製）、Diaion ΡΑ316(三菱化學公司製）、CM交聯葡聚 糖 C -25(Amershambiosciences公司製）、DEAE交聯葡聚糖 A 一25(Amershambiosciences公司製）等之離子交換色層分 析，及使用順層、逆層管柱之局速液體色層分析等進一步 純化。 以上之分離、純化方式可單獨或適宜組合使用，依據場 合反覆使用可分離純化本發明之姆拉明黴素物質。 以業者周知之方法，將姆拉明黴素A、姆拉明黴素B、姆 拉明黴素C、姆拉明黴素D、姆拉明黴素E1、姆拉明黴素E2、 姆拉明黴素F、姆拉明黴素G或姆拉明黴素Η等，如一般式（I) 乃至（III)中任1項所示之姆拉明黴素類抗生素之單獨或混合 物狀態還原或水解而得到姆拉明黴素Ζ 1或姆拉明黴素Ζ2。 姆拉明黴素Ζ3或姆拉明黴素Ζ4，可以業者周知之方法， 將姆拉明黴素I等，如一般式（IV)所示姆拉明黴素類抗生素 之單獨或混合物狀態還原或水解而得到。 還原，例如可於溶劑中，將姆拉明黴素類抗生素以氫氧 化硼鋰或氫化硼鈉等作用而達成。 -51- 200414902 所使用之溶劑可列舉如甲醇、乙醇等之醇或四氫呋喃等， 較佳爲四氫呋喃。 水解係於例如有機溶劑之存在下或不存在下，將姆拉明 徵素A、姆拉明黴素B、姆拉明黴素姆拉明黴素〇、姆拉 明黴素E 1、姆拉明黴素E 2或姆拉明黴素F於鹼性或酸性條件 下而達成。 所使用之溶劑可列舉水；甲醇、乙醇、異丙醇之醇類； 四氫咲喃或此等溶劑之2種以上之混合物，較佳爲水。 驗性化合物可列舉如鈉、鉀、鋰等之鹼金屬氫氧化物或 其弱酸鹽；鈣鹽、鎂鹽等之鹼土金屬氫氧化物或其弱酸鹽； 氨等之無機鹼性化合物或所示鹼性鹽；t_辛基胺、二苄基 胺、嗎啉、葡糖胺、苯基甘胺酸烷基酯、乙二胺、N_甲基 葡糖胺、胍、二乙基胺、三乙基胺、二環己基胺、N，N，-二 ;基乙二胺、氯普羅卡因、普羅卡因、二乙醇胺鹽、N —苄 基-苯乙基胺鹽、哌畊鹽、四甲基氨鹽、參（羥基甲基）胺甲 院鹽等之有機胺；或所示鹼基之鹽。又此等鹼金屬離子； 含有驗土金屬離子、氨等之無機離子、有機胺離子等之鹼 性緩衝液可使用’較佳者爲鹼金屬氫氧化物，更佳者爲氫 氧化鈉或氫氧化鉀。 酸性化合物可列舉鹽酸、氫溴酸、硫酸、過氯酸、磷酸 等之無機酸或乙酸、甲酸、荏酸、甲烷磺酸、P-甲苯磺酸、 樟腦磺酸'三氟乙酸、三氟甲烷磺酸等之有機酸等布氏酸 (Bronsted acid);氯化鋅、四氯化錫、三氯化硼、三氟化硼、 三溴化硼等之路易士酸。 -52- 200414902 又，上述中，可將將姆拉明黴素A、姆拉明黴素B、姆拉 明黴素C、姆拉明黴素D、姆拉明黴素E1、姆拉明黴素E2、 姆拉明黴素F、姆拉明黴素G或姆拉明黴素Η中，如一般式（I) 乃至（ΠΙ)中任一者所示之姆拉明黴素類抗生素以金屬醇鹽 作用得到姆拉明黴素Ζ 1或姆拉明黴素Ζ 2。 又，姆拉明黴素Ζ3或姆拉明黴素Ζ4，如姆拉明黴素I之一 般式（IV)所示姆拉明黴素類抗生素以金屬醇鹽作用得可得 到。 所使用之溶劑可列舉如甲醇、乙醇、t- 丁醇等之醇類或 四氫呋喃。 醇金屬鹽可列舉如爲鈉甲醇鹽、鉀甲醇鹽、鈉乙醇鹽、 鉀乙醇鹽、鈉第三丁醇鹽、鉀第三丁醇鹽等，較佳爲鈉甲 醇鹽或鈉乙醇鹽。 所得到之姆拉明黴素Z1或姆拉明黴素Z2以 COSMOSIL(Nacalai Tesque公司製）等之載體之分配管柱色 層分析；使用Diai〇nCHP-20P(三菱化學公司製）等之載體之 吸者管柱色層分析；父聯葡聚糖G-10(Amershambiosciences 公司製）、TOYOPEARLHW40F(Toso公司製）等膠體5週色層 分析；DOWEX50(日產化學公司製）DOWEX 1(日產化學公 司製）、DiaionPK2 16(三菱化學公司製）、DiaionPA316(三 菱化學公司製）、CM交聯葡聚糖C-25(AmerShambi〇SCienCes 公司製）、DEAE父聯葡聚糖A-25(Amershambiosciences公司 製）等Diai on交換色層分析；或可使用順層、逆層管柱之高 速液體色層分析等純化。 -53- 200414902 以上之分離、純化手段單獨或適宜組合，依場合反覆使 用，可分離純化本發明之姆拉明黴素母核物質。 以上說明姆拉明黴素物質之製造法之代表性方法，但其 製造方法並未以此限定，亦可使用此等方法以外之業者已 知之其它製造方法。 本發明進一步係關於具有所冀望構造之姆拉明黴素類抗 生素之製造方法。 關於上述姆拉明黴素物質生產菌之培養，使用通常之培 養基中添加所望之脂肪酸，一般式（I)乃至（IV)，較佳爲一般 式（I)，其中R爲前述脂肪酸中對應烴鏈之姆拉明黴素類抗 生素之生產量增加而產出。所使用之脂肪酸爲主鏈之碳數 爲3以上者而未特別限定，可使用直鏈脂肪酸、分枝鏈脂肪 酸、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸等，較佳爲直鏈狀飽和脂 肪酸。直鏈狀飽和脂肪酸之鏈長爲碳數3以上而未特別限 定，但較佳爲碳數10至20，更佳爲碳數12至18。 例如，使用下述一般式（IX)所示脂肪酸時，生產量會增 加之姆拉明黴素類抗生素爲一般式（I)乃至（IV)中R = R1者，

(IX) 具體而s ’關於當該之方法中，作爲脂肪酸者，使用十 二酸時，一般式⑴乃至（IV)中R爲-(CH2)8CH3之姆拉明黴素 200414902 類抗生素之生產量會增加，脂肪酸中使用十三酸時，一般 式（I)乃至（IV)中R爲-(CH2)9CH3之姆拉明黴素類抗生素之生 產量會增加（最顯著者爲姆拉明黴素B)，脂肪酸使用十四酸 之場合，一般式（I)乃至（IV)中R爲-(CH2)1QCH3之姆拉明黴素 類抗生素之生產量會增加（最顯著者爲姆拉明黴素F)。 又，本發明之上述方法，即具有所冀望構造之姆拉明黴 素類抗生素之製造方法，包含由其製造出之全部姆拉明黴 素類抗生素。 以上所得之本發明化合物，對一般革蘭氏陽性細菌及革 鲁 蘭氏陰性細菌之最少生長抑制濃度（MIC)，可使用普通瓊脂 培養基（營硫化學公司製）或穆勒-因頓納賈瓊脂（Mueller-Hintonagar)培養基（BBL公司製）等，以業者周知之瓊脂平板 稀釋法測定。 又，對於本發明化合物之轉位酵素I之酵素抑制活性，使 用酵素與UDP-N-乙醯基-L-丙胺醯基-r-D-麩胺醯基-m-二胺 基庚二醯基- (Ne-丹醯）-D-丙胺醯基-D-丙胺酸（110?->^ acetylmuramyl-L-Ala-r - D-Glu-m-DAP-(N£-dansyl)-D-Ala- ® D-Ala)及磷酸 '院異戊二燒酯（undecaprenylphosphate)之 反應來測定。 又’對於本發明之化合物之轉位酵素I之酵素抑制活性， 可以業者周知之方法進行測定。 本發明之姆拉明黴素物質，較佳爲姆拉明黴素A、姆拉明 黴素B、姆拉明黴素C、姆拉明黴素D、姆拉明黴素E1、姆 拉明黴素E2、姆拉明黴素F、姆拉明黴素G、姆拉明黴素Η、 -55- 200414902 姆拉明黴素I、姆拉明黴素Z 1或姆拉明黴素Z2、或其藥理學 上容許鹽，可以各種形態投與。其投與形態可列舉例如以 錠劑、膠囊劑、顆粒劑、乳劑、九劑、粉末劑、糖漿劑（液 劑）等經口投與，或注射劑（靜脈內、肌肉內、皮下或腹腔 內投與），點滴劑、栓劑（直腸投與）等之非經口投與。此等 各種製劑，依據習用方法使用主藥製劑化之醫藥製劑技術 領域中通常使用之賦形劑、結合劑、崩解劑、潤滑劑、矯 味矯臭劑、助溶劑、懸浮劑、塗覆劑等。 使用錠劑時，載劑可列舉如使用乳糖、白糖、氯化鈉、 _ 蔔萄糖、尿素、源粉、碳酸鈣、高嶺土、結晶纖維素、石夕 酸等之賦形劑；水、乙醇、丙醇、單糖漿液、葡萄糖液、 澱粉液；明膠溶液、羧甲基纖維素、蟲膠（sheila)、甲基纖 維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷等之結合劑；乾燥澱粉、褐 藻酸鈉、瓊脂末、昆布多糖末、碳酸水素鈉、碳酸鈣、聚 氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、月桂基硫酸鈉、硬脂酸單甘 油酯、澱粉、乳糖等之崩解劑；白糖、硬脂酸、可可脂油、 氫添加油等之崩解抑制劑；第4級銨鹽類、月桂基硫酸鈉等 ® 之吸收促進劑；甘油、澱粉等之保濕劑；澱粉、乳糖、高 嶺土、皂土、膠體狀矽酸等之吸著劑；純化滑石、硬脂酸 鹽、硼酸末、聚乙二醇等之潤滑劑等。又，必要時施與所 需通常包覆劑之錠劑，例如可爲糖衣錠、明膠塗覆錠、腸 衣塗覆錠、膜塗覆錠或二層錠、多層錠等。 使用九劑時，作爲載劑體者可使用例如葡萄糖、乳糖、 可可油脂、澱粉、硬化植物油、高嶺土、滑石等之賦形劑； -56- 200414902 阿拉伯樹膠末、西黃耆膠末、明膠、乙醇等之結合劑；昆 布多糖瓊脂等之崩解劑等。 使用栓劑時，可廣泛使用作爲載劑之技術領域中習用者’ 可列舉例如聚乙二醇、可可油脂、高級醇、高級醇之酯類、 明膠、半合成甘油酯等。 作爲注射劑使用時，可使用液劑、乳劑或懸滑劑，此等 液劑、乳劑或懸滑劑較佳爲經滅菌、與血液等張，以此等 液劑、乳劑或懸滑劑製造之溶液，只要是醫療用之稀釋劑 皆可使用而未特別限定，特別是可列舉例如水、乙醇、丙 鲁 二醇、乙氧基化異硬脂醯醇、聚氧基化異硬脂醯醇、聚氧 乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯。又，此時，調製等張性溶液中 可於製劑中含有充分量之食鹽、葡萄糖或甘油，或習用之 溶解補助劑、緩衝劑、無痛劑等。 又，上述製劑中，必要時可含有著色劑、保存劑、香料、 風味劑、甘味劑等，再者，可含有其它醫藥品。 上述製劑中所含有效成分化合物之量未特別限定，可於 廣範圍中適宜選擇，但通常爲全部組成物中1至70重量％， · 較佳爲含有1至3 0重量％。 使用量會依症狀、年齡、體重、投與方法及劑形等而異， 但通常相對應於症狀，成人中1日之上限爲2000mg(較佳爲 100mg)，下限爲0.1mg(較佳爲lmg，更佳者爲l〇mg)，可一 曰1回或分成數回投與。 【實施方式】 [產業上之利用可能性] -57- 200414902 由以上之結果，本發明化合物群係爲包含革蘭氏陽性菌 之各種細菌感染症之預防藥或治療藥，及以各種細菌感染 症之預防藥或治療藥爲目的，作爲使用有機化學及微生物 變換之衍生物之合成原料上爲有用的。 [發明之實施中之最佳形態] 以下中以實施例具體說明本發明，但無意以此限制本發 明之範疇於此。 [實施例] (實施例1)鏈孢囊菌屬3人1^反6()501株之培養 (1 ) 一次培養 斜面培養基上中生長之SANK6050 1株，添加滅菌水， 使用白金圈取菌絲，均質化此菌絲懸濁液後，以下列記 載組成之前培養培養基5 00 ml加入7瓶2L之三角燒瓶（種 燒瓶）中，無菌接種，其次將該燒瓶於Caudalie震盪機中 28°C、210rpm，8日間震盪培養，進行一次前培養。 前培養之培養基 [表4] 葡萄糖 30g 生酵母菌 l〇g 大豆粉 30g CaC03 4g MgS04.7H20 2g 消泡劑（CB442) 1 0 m g 自來水 1000ml -58- 200414902 滅菌前之pH値爲7.2 滅菌，121°C 30分鐘滅菌。 (2 )二次培養 以該一次前培養液，經滅菌之上記組成之前培養培養基 30L放入60L容量槽培養機2中於5%(V/V)植菌，溫度28°C， 通氣量lvvm，旋轉數次數爲1〇〇至2〇〇 rpm，溶液含氧量爲 5.0ppm，於2日間二次前培養。 (3 )本培養 滅菌下述組成之本培養培養基，400L放入600L容器培養 機2基中二次前培養液以5%(V/V)植菌，溫度28°C，通氣量 lvvm，旋轉次數83至200rpm，溶液含氧量5.0ppm，以11日 間培養。 本培養培養基 [表5] 可溶性澱粉 7〇g Pharmamedia 3〇g C.S.L. 5g CaC03 4g MgS04-7H20 2g 消泡劑（CB442) 1 Oir 自來水 1000ml 滅菌前之pH値爲7.2 滅菌，121°C 30分鐘滅菌。 (實施例2)姆拉明黴素A、姆拉明黴素B、姆拉明黴素C、姆 -59- 200414902 拉明黴素D、姆拉明黴素E1、姆拉明黴素E2、姆拉明黴素之 粗粉末之分離 以下之純化中，以下列高速液體色層分析（Η P L C)監測活 性成分。

(i)姆拉明黴素A、姆拉明黴素Β、姆拉明黴素C、姆拉明黴 素D 管柱： CAPCELL PAK C18UG120 4.60x150mm(資生堂股份有限公司製） 溶劑： 含10mM重碳酸銨之40%乙腈水溶液 流速： 1 .Oml/分鐘 檢出： 紫外光吸收2 6 0 n m 保持時間： 9·3分鐘（姆拉明黴素A) 9·8分鐘（姆拉明黴素B) 1〇·9分鐘（姆拉明黴素C) 14.8分鐘（姆拉明黴素D) (ii)姆拉明黴素E1、姆拉明黴素E2、姆拉明黴素F 管柱： CAPCELL PAK C18UG120 4.6 0 X 150mm(資生堂股份有限公司製） 溶劑： 含10m Μ重碳酸銨之42 %乙腈水溶液 流速： 1 .Oml/分鐘 檢出： 紫外光吸收260nm 保持時間： 9.5分鐘（姆拉明黴素El) 1〇·2分鐘（姆拉明黴素E2) 1 1.2分鐘（姆拉明黴素F) -60- 200414902 (l)混合粗粉末之提取 實施例1所得之培養終了液（800 L)中添加水，稀釋爲 9 0 0L，稀釋液中加入乙腈1 8 00 L後，添加助過濾劑矽藻土 (Celite)545 (45.4kg)，以壓力過濾器過濾，將所得到之溶液 及洗液合倂（2810L)並減壓濃縮後，加入水（ 1 400L)稀釋，放 入以水平衡之DiaionHP20管柱（110L)中，管柱以水（400L)及 30%乙腈水溶液（400L)洗滌後，以50%乙腈水溶液（400L)將 活性物質洗析出，減壓濃縮此洗析液後，冷凍乾燥得到粗 粉末（129g)。 將此粗粉末懸浮於含有〇·〇2 %三氟乙酸之30%乙腈水溶液 (3L)，供給於以相同溶劑系平衡之Diaion CHP20P管柱中 (50L)，以30%乙腈水溶液（150L)洗滌後，進行依次以40%乙 腈水溶液（150L)及50%乙腈水溶液（150L)洗析活性物質，將 40%乙腈水溶液及50%乙腈水溶液溶出之部分個別減壓濃縮 後冷凍乾燥，40%乙腈水溶液溶出之部分得到粗粉末36.5g， 5 0%乙腈水溶液溶出之部分得到粗粉末17.3g。 接著，將50%乙腈水溶液溶出之部分所得粗粉末17.3g懸 浮於甲醇500ml中，放入TOYOPEARLHW-40F管柱（2L)中， 以相同溶劑展開。 洗析液以每5 0 0 m 1劃分各部分，收集濾分8至1 1，減壓濃 縮得到粗粉末6.2g，將此粗粉末溶解於甲醇（l〇〇ml)中，將 其中之50ml供給於以含10mM重碳酸銨之45%乙腈水溶液平 衡 HPLC管柱（YMC Pack)ODS-20AM，l〇〇0x 500mm)中。管 柱以流速220ml/分鐘展開，目的物質於2 6 0nm紫外光吸收檢 200414902 出，保持時間1 9.2分鐘至2 3 · 8分鐘洗析之部分’ 2 3 · 8分鐘至 26.8分鐘之部分及26.8分鐘至30.0分鐘之洗析部分分2次分 別取得，2次分別取得相同保持時間之部分，將各部分分別 減壓濃縮後，冷凍乾燥，保持時間19.2分鐘至23.8分鐘洗析 出之部分得到含姆拉明黴素A、姆拉明黴素B及姆拉明黴素 €之粗粉末1(48611^)，23.8分鐘至26.8分鐘洗析出之部分含 姆拉明黴素D、姆拉明黴素E1及姆拉明黴素E2之粗粉末 2(199mg)，26.8分鐘至30.0分鐘洗析出之部分含姆拉明黴素 F之粗粉末F(445mg)。 (2)姆拉明黴素A、姆拉明黴素B及姆拉明黴素C之分離 將上述粗粉末1溶解甲醇（3〇ml)中，將其中之3 00 // 1供給 於經含10mM重碳酸銨之40%乙腈水溶液平衡之HPLC管柱 (CAPCELL PAK C18UG120，2〇 0 x 250mm)中。管柱以流速 l(KOml/分鐘展開，於260nm之紫外光吸收檢出目的物質， 於保持時間21.1分鐘析出之部分、22.6分鐘析出之部分及 24.6分鐘析出部分分成100回取得，合倂相同保持時間所得 之部分，將各部分分別減壓濃縮後冷凍乾燥，保持時間2 1 . 1 分鐘洗析之部分得到含有姆拉明黴素A之粗粉末 八（25.1111§)，24.6分鐘洗析之部分含有姆拉明黴素（：之粗粉 末0(42.511^)。又，22.6分鐘洗析之部分之冷凍乾燥粗粉末 (88.0m9)再溶解於甲醇（5ml)中，其中之80//1供給於含有 10mM甲酸銨之44.4%乙腈水溶液平衡之^^1^管柱〇6¥61〇811 030-1；0-5,20(^15〇111111)中。管柱以流速1〇.〇1111/分鐘展開， 於26 Onm紫外光吸收檢出目的物質，保持時間21.1分鐘洗析 200414902 之部分分成62回分次收取，得到相同保持時間之部分，經 減壓濃縮後冷凍乾燥，得到含姆拉明黴素B之粗粉末 B(29.9mg) 〇 (3)姆拉明黴素D、姆拉明黴素E1及姆拉明黴素E2之分離 將上述粗粉末2溶解於甲醇（15ml)中，將其中3 00 // 1供給 於經含10mM甲酸銨之48.4%乙腈水溶液平衡之HP LC管柱 (Develosil C30-UG-5，2〇0x 150mm)。管柱以流速 10.0ml/ 分鐘展開，於26 Onm之紫外光吸收檢出目的物質，保持時間 19.0分鐘洗析之濾分及20.1分鐘洗析之部分分成50次分次收 φ 取。將保持時間20.1分鐘洗析之部分經減壓濃縮後，冷凍 乾燥，得到含姆拉明黴素E2之粗粉末E2 (29.7mg)。又，將19.0 分鐘洗析之部分合倂並減壓濃縮後，冷凍乾燥得到粗粉末 (85mg)，再溶解於甲醇（5ml)，將其中80 // 1供給於經含10mM 重碳酸銨之42%乙腈水溶液平衡之1^1^管柱（€八？€£1^?八：^ C18UG120, 2O0X 250mm)中。管柱以流速10.0ml/分鐘展開， 於260nm之紫外光吸收檢出目的物質，保持時間23.4分鐘洗 析部分及24.5分鐘洗析之部分分成62次分次收取，所得相 鲁 同保持時間之濾分經減壓濃縮後，冷凍乾燥，保持時間23.4 分鐘洗析之部分得到含姆拉明黴素D之粗粉末D(11.2mg)。 一方面，24.5分鐘洗析之部分減壓濃縮後，凍結乾燥得到 粗粉末（22.7mg)再溶解於甲醇（2 ml)，將其中80 // 1供給於經 含10mM甲酸銨42.8%乙腈水溶液HPLC管柱（DevelosilC30-UG-5,2O0x 150mm)。管柱以流速10.0ml/分鐘展開，於260nm 紫外光吸收檢出目的物質，保持時間19· 9分鐘洗析之部分 -63- 200414902 分成25回分次收取。得到之相同保持時間之部分，經減壓 濃縮後冷凍乾燥，得到姆拉明黴素E1之粗粉末El(13.3mg)° (實施例3)姆拉明黴素A之純化 將含上述姆拉明黴素A之粗粉末A (2 5.1m g)溶解於甲醇 (2ml)中，將其中80/zl供給於經含10mM甲酸銨之42.8%乙腈 水溶液平衡之 HPLC 管柱（DevelosilC3O-UG-5,2O0x 150mm) 中，管柱以流速10.〇ml/分鐘展開，260nm之紫外光吸收檢 出目的物質，保持時間22.4分鐘洗析之部分以25回分次收 取，將所得相同保持時間之部分，減壓濃縮後，冷凍乾燥’ 得到姆拉明黴素A(12.4mg)之無色粉末。 (實施例4)姆拉明黴素B之純化 將含上述姆拉明黴素B之粗粉末B ( 29.9mg)溶解於甲醇 (2ml)，將其中80 // 1供給於經含10mM甲酸銨之42%乙腈水溶 液平衡之 HPLC管柱（Develosil C30-UG-5，20 0 X 1 50mm)中， 管柱以流速10.Ornl/分鐘展開，260nm之紫外光吸收檢出目 的物質，保持時間18.3分鐘洗析之部分以25回分次收取， 將所得相同保持時間之部分，減壓濃縮後，冷凍乾燥，得 到姆拉明黴素B(13.7mg)之無色粉末。 (實施例5)姆拉明黴素C之純化 將含上述姆拉明黴素C之粗粉末B ( 42.5mg)溶解於甲醇 (3ml)，將其中80 # 1供給於經含10mM甲酸銨之42.8%乙腈水 溶液平衡之 HPLC 管柱（Develosil C30-UG-5，2〇0x 150mm) 中，管柱以流速10.0ml/分鐘展開，260nm之紫外光吸收檢 出目的物質，保持時間22.3分鐘洗析之部分以37回分次收 -64- 200414902 取，將所得相同保持時間之部分，減壓濃縮後，冷凍乾燥， 得到姆拉明黴素C(12.7mg)之無色粉末。 (貫施例6 )姆拉明徽素D之純化 將含上述姆拉明黴素D之粗粉末D ( 1 1 .2mg )溶解於甲醇 (lml)，將其中80 // 1供給於經含1 OmM甲酸銨之42%乙腈水溶 液平衡之 HPLC 管柱（CAPCELLPAKC18UG12O,2O0x 250mm) 中，管柱以流速ΙΟ.ΟπιΙ/分鐘展開，2 60nm之紫外光吸收檢 出目的物質，保持時間20.6分鐘洗析之部分以12回分次收 取，將所得相同保持時間之部分，減壓濃縮後，冷凍乾燥’ 得到姆拉明黴素D(9.0mg)之無色粉末。 (實施例7 )姆拉明黴素E 1之純化 將含上述姆拉明黴素E 1之粗粉末E 1 ( 1 3.3 mg )溶解於甲 醇（lml)，將其中80 /z 1供給於經含10mM甲酸銨之40%乙腈水 溶液平衡之 HPLC 管柱（CAPCELL PAK C18UG120，2〇θχ 25〇111111)中，管柱以流速10.〇1111/分鐘展開，26〇11111之紫外光 吸收檢出目的物質，保持時間21.7分鐘洗析之部分以12回 分次收取，將所得相同保持時間之部分，減壓濃縮後，冷 凍乾燥，得到姆拉明黴素El(10.3mg)之無色粉末。 (實施例8)姆拉明黴素E2之純化 將含上述姆拉明黴素E2之粗粉末E2(29.7mg)溶解於甲 醇（21111)，將其中80//1供給於經含1〇111^1甲酸銨之47.6%乙膪 水溶液平衡之 HPLC 管柱（DevelosilC30-UG-5,20(/)X 150mm) 中，管柱以流速10.0ml/分鐘展開，2 60nm之紫外光吸收檢 出目的物質，保持時間1 8.3分鐘洗析之部分以2 5回分次收 -65- 200414902 取，將所得相同保持時間之部分，減壓濃縮後’冷凍乾燥’ 得到姆拉明黴素E2(19.0mg)之無色粉末。 (實施例9)姆拉明黴素F之純化 將含上述姆拉明黴素F之粗粉末F( 445mg)中之l〇〇mg溶 解於甲醇（6ml)，將其中80 // 1供給於經含1 OmM重碳酸銨之 40%乙腈水溶液平衡之HPLC管柱（Develosil C30-UG-5，20 0x 150mm)中，管柱以流速l〇.〇ml/分鐘展開，260nm之紫外 光吸收檢出目的物質’保持時間2 1 · 1分鐘洗析之部分以7 5 回分次收取，將所得相同保持時間之部分’減壓濃縮後’ 冷凍乾燥，得到姆拉明黴素F(57.7mg)之無色粉末。 (實施例10)姆拉明黴素Z1及姆拉明黴素Z2之取得及純化 關於以下之純化，係活性濾分已下列高速液體色層分析 (HPLC)監測。 ⑴姆拉明黴素Z1 管柱： CAPCELL PAKC18UG120 4.60X l5〇mm (資生堂股份有限公司製） 溶劑 10mM重碳酸銨水溶液 流速 1 . 0 m 1 /分鐘 檢出 紫外光吸收260nm 保持時間：9.2分鐘 (ii)姆拉明黴素Z2 CAPCELL PAKC18UG120 4.6 (/) X 150mm (資生堂股份有限公司製） 溶劑： 含有10mM重碳酸銨水之3%乙腈水溶液 200414902 流速： 1 . 0 m 1 /分鐘 檢出： 紫外光吸收2 6 0 n m 保持時間：1 3.0分鐘 管柱：CAPCELL PAK C18UG120 將以實施例9所得到之姆拉明黴素F( 8 Omg)溶解於含有 〇·2Ν氫氧化鈉之50%甲醇水（10ml)中，攪拌6小時。以鹽酸 中和後，減壓濃縮，餾去甲醇。將此濃縮液以乙酸乙酯（5m 1 ) 洗滌2次後，冷凍乾燥。所得之粗粉末溶解於1〇mM重碳酸 銨水溶液（2ml)，將其中100//1供給於經含10mM重碳酸銨水 ^itzFfj^HPLCl;ft(CAPCELLPAKC18UG12〇J 20 φχ 2 5 Omm)中。於23分鐘洗析出之溶劑於含l〇mM重碳酸銨之5% 乙腈水溶液等之管柱以流速10.Oml/分展開，於260nm紫外 光吸收檢出目的物質，保持時間16.0分鐘洗析出之部分及 2 1.9分鐘洗析出之部分分20回分次收取。將相同保持時間 鐘洗析出之部分合倂，分別減壓濃縮後冷凍乾燥，將保持 時間1 6 · 0分鐘洗析出之部分得到爲無色粉末之姆拉明黴素 冗1(11.8111§)，保持時間21.9分鐘洗析出部分得到爲無色粉末 姆拉明黴素Z2(5.8mg)。 (試驗例1 )抗菌活性之測定（抗革蘭氏陽性菌活性） 本發明之姆拉明黴素A、姆拉明黴素B、姆拉明黴素C、 姆拉明黴素D、姆拉明黴素E1、姆拉明黴素E2、姆拉明黴素 F、姆拉明黴素Z1及姆拉明黴素Z 2對於黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)FDA2 09P JC-1 株（以下略稱爲對於 黃色葡萄球菌2 09 P株）及枯草桿菌（Bacillus -67- 200414902 subtilis)ATCC6633株（以下略稱爲枯草桿菌6633株）之最小 生長抑制濃度（MIC)之測定係以下列方法進行。檢體水溶液 以l〇〇〇//g/ml之濃度作2倍稀釋，調製14次階段（ 1 000 # g/ml、500//g/ml、250//g/ml、125/zg/ml、62.5//g/ml、31·3 //g/ml> 15.6//g/mL· 7.8//g/mL· 3.9/ig/mL· 2//g/mL· l//g/ml ^ 〇.5//g/ml、0.24//g/ml、〇.12//g/ml)之稀釋液。各稀釋液於 圓形 Petri disd(9〇0x 20mm，Terumo 公司製）中分注 lml 後， 加入9ml穆勒-因頓納賈瓊脂培養基（BBL公司製）混合，作成 平板。被檢菌黃色葡萄球菌2 09 P株及枯草桿菌6 6 3 3株於胰 蛋白酶酪蛋白腺肉汁培養基（T SB)培養基（榮硏化學公司製） 中3 7°C前一夜培養。試驗當日，所得菌液使用TSB稀釋100 倍’以1白金圈之菌塗抹平板培養基兩線塗抹。此兩線塗抹 之平板培養基於3 7 °C培養1 8小時後，判定ΜIC。 試驗化合物 被檢菌：黃色葡萄球菌 枯草桿菌 姆拉明黴素A 25 25 姆拉明黴素B 6.25 6.25 姆拉明黴素C 25 6.25 姆拉明黴素D 6.25 6.25 姆拉明黴素E 1 6.25 6.25 姆拉明黴素E 2 6.25 6.25 姆拉明黴素F 6.25 6.25 [表6]抗菌活性（抗革蘭氏陽性菌活性） _ MIC ( β g/ml ) -68- 200414902 由以上結果，顯示出姆拉明黴素A、姆拉明黴素B、姆拉 明黴素C、姆拉明黴素D、姆拉明黴素E1、姆拉明黴素E2及 姆拉明黴素F對黃色葡萄球菌209 P株及枯草桿菌66 3 3株具有 抗菌活性。 (試驗例2)轉位酵素I酵素抑制活性之測定 本發明之各化合物對轉位酵素I之酵素抑制活性，使用酵 素與UDP-N -乙醯基-L-丙胺醯基-r-D-麩胺醯基-m-二胺基庚 二醯基- (Νε-丹醯）-D-丙胺醯基-D-丙胺酸（110?-1^-acetylixiurainyl-L-Ala - 7 - D- Glu-m-DAP-(N ε - dansyl)-D-Ala_ D-Ala)及憐酸 --院異戊二儲酯（undecaprenylphosphate)之 反應來測定。 即’將含編碼轉位酵素I之質體之大腸菌E.C〇li/pTA5株培 養所得菌體於T r i s鹽酸緩衝液（p Η 8 · 0 )中以超音波震碎後， 將粗提取液離心，得到之沉澱以界面活性化劑溶化之溶液 作爲酵素源來使用’ UDP-N-乙醯基-L-丙胺醯基-r-D-魅胺 醯基-m-二胺基庚二醯基-(Νε_丹醯广卜丙胺醯基-D_丙胺酸 及磷酸十一烷異戊二烯酯與酵素液培育後，酵素反應所增 加之螢光度’以激發波長3 5 5 nm，檢出波長5 3 8 nm之條件定 量爲酵素活性，50%酵素抑制濃度（IC5。）由同時添加抑制劑 之濃度計算出抑制率而求出。 [表7]轉位酵素I抑制活性_ g式驗化合物 IC 5 Q ( // g / m 1) 姆拉明黴素A 0.0105 姆拉明黴素B 0.0068 -69- 200414902 姆拉明黴素c 0, ,0 104 姆拉明黴素D 0, .00 9 9 姆拉明黴素El 〇( .0115 姆拉明黴素E2 0, .0 109 姆拉明黴素F 0, .00 8 9 姆拉明黴素Z 1 0 • 03 13 姆拉明黴素Z2 0 .125 姆拉明黴素A、姆拉明黴素B、姆拉明黴素C、姆拉明黴 素D、姆拉明黴素E 1、姆拉明黴素E2、姆拉明黴素F、姆拉 明黴素Z 1及姆拉明黴素Z2對轉位酵素I顯示出有抑制活性。 (實施例1 1)SANK6050 1株之十四酸添加培養 (1 )前培養 在斜面培養基上生長之SANK6050 1株，以白金圈取之 1 · 5 c m角落之菌絲片，將此菌絲片於生理食鹽水均質化之均 質物，將下表8中記載之組成之前培養培養基80ml放入500ml 容量之1個三角燒瓶（種燒瓶）中’無菌接種’其次將該燒 瓶於Caudalie震盪機中，28°C，21〇rpm震盪培養6日，進行 一次前培養。 [表8]前培養培養基Τ -1 2培養基_ 葡萄糖 3()g 生酵母菌 lQg 大豆粉 3()g

CaC03 4§

MgS04-7H20 2g -70- 200414902 消泡齊!ί (C B 4 4 2 ) 0 · 〇 5 g___ ※預先於100 °C煮沸30分鐘後使用 自來水 1000ml 滅菌前之pH値爲7·2 滅菌，121 °C滅菌分鐘。 (2)本培養 下列於表9及表1 〇中記載之2種類組成之滅菌結束後各自 將本培養培養基8 0 m 1放入5 0 0 m 1容量之燒瓶中種入（1)所得 到之前培養液5% ( V/V )植菌，以溫度28°C，210rpm培養12 曰。 本培養培養基 [表9]PCG-3培養基 _ 可溶性澱粉 7〇g Pharmamedia 3〇g C.S.L. 5g CaC03 4g MgS04.7H20 2g FeS0,7H20 ig 消泡劑（CB442) 0.05g 自來水 1000ml 滅菌前之pH値爲7.2， 滅菌，1 21 °C 3 0分鐘滅囷 0 [表10]PCG-4培養基 可溶性澱粉 7〇g 200414902

Pharmamedia 3 〇 g C . S . L . 5 g

CaC03 4g

MgS04*7H20 2g

FeS04*7H20 1 g 十四酸 5g

消泡劑（CB442)_〇.〇5g 自來水 1000ml 滅菌前之pH値爲7.2， 滅菌，121°C30分鐘滅菌。 於所得培養液3ml中加入乙腈6ml震盪10分鐘進行乙腌提 取，於離心分離（3000rpm，10分鐘）之上淸液中分離菌體， 此上淸液於 Automatic Environmental Speed V a c ( S e r v a n t 公^ 司製）中將乙腈f留出，注入SepPakPlusPS-2(Waters公司 製），以1 〇%乙腈水溶液3ml洗滌後，於50%乙腈水溶液3mi 中洗析出。此50%乙腈水溶液洗析液於Automatic Environmental Speed Vac中濃縮乾固。乾固物中加入二甲 亞楓0.3 m 1溶解，所得培養液換算1 〇倍濃縮樣本以下列高速 液體色層分析（HPLC)監測結果，示於第1圖，添加十四酸， 可增加姆拉明黴素F之生產量。 管柱： YMC-ODS-AM(S-3 //m) 12nm 2 5 0x 6mm I.D.(Wai.m.si) 溶劑： 含有〇 · 〇 5 %之三氟乙酸之5 3 %乙腈水溶液 流速： 1 . 0 m 1 /分鐘 200414902 檢出： 紫外光吸收260nm 保持時間： 45.1分鐘（姆拉明黴素F) (實施例12)SANK60501株之大容量培養 1) 一次培養 以白金圈取於斜面培養基上生長之SANK6 05 0 1株，將此 菌絲片於生理食鹽水均質化，將實施例1 1之表8記載之組成 之前培養培養基5 0 0ml加入7瓶2L之三角燒瓶（種燒瓶）中， 無菌接種，其次將該燒瓶於Caudalie震盪機中28°C、210rpm， 7曰間震盪培養，進行一次前培養。 2) 二次培養 該一次前培養液，將實施例1 1之表8中記載之組成之前培 養培養基滅菌終了後，30L放入60L容量槽培養機1基中以 5%(¥^)植菌，溫度28(：，通氣量1”111，槽內壓1〇〇1^&，回 轉數100至150rpm，溶解含氧量5ppm，2日間二次前培養。 3) 三次培養 將該二次前培養液，將實施例1 1之表8中記載之組成之前 培養培養基滅菌終了後，3 00L放入60L容量槽培養機1基中 以5%(V/V)植菌，溫度28C，通氣量lvvm，槽內壓l〇〇kPa， 回轉數8 5 r p m，2日間三次培養。 4) 本培養 將實施例1 1之表8中記載之組成之本培養培養基，4000L 放入60 00L容量槽培養機每1基之三次前培養液以7%(V/V)植 菌，溫度28C，通氣量lvvm，槽內壓l〇〇kPa，回轉數60至 120rpm，以溶解含氧量5ppm進行本培養，培養開始第5曰追 200414902 加滅菌水，第7日追加30%蔗糖液200L，培養1 1日間。 本培養培養基 [表 ll]PCG-5 改變培養基 可溶性澱粉 9〇g Pharmamedia 3〇g C.S.L. 5g CaC03 4g MgS04.7H20 2g FeS04*7H20 ig 十四酸 5g 反丁烯二酸 2,5g 消泡劑（CB442) 〇.2g 自來水 1000ml 滅菌前之pH値爲7.2， 滅菌，121〜125 X： 30分間滅菌。 (實施例13)姆拉明黴素G、姆拉明黴素Η、姆拉明黴素I之純 化 以下之純化中，活性濾分以下列高速液體色層分析（HP LC) 監測。 管柱： CAPCELL PAK C18UG120 4·6(/)χ 150mm(資生堂股份有限公司製） 溶劑： 含有〇·2%三基胺-磷酸緩衝液，以PH3.3調 節之5 5 %乙腈水溶液 流速： 1.0ml/分鐘 200414902 檢出； 紫外光吸收260nm 保持時間： 4.0分鐘（姆拉明黴素G) 6.5分鐘（姆拉明黴素H) 7·〇分鐘（姆拉明黴素I) 1)粗純化濾分之提取 實施例12所得培養終了液中加入水，以全量爲7 3 00 L稀 釋，此稀釋液添加矽藻土 5 45 ( 1 3 6.2kg)助過濾劑，以壓力過 濾器過濾，得到之菌體（681kg)中添加50%含水乙腈4200L 後，以壓力過濾器過濾。將所得之溶液及洗析液合倂 鲁 (46 6 0L)，pH以7 5 %硫酸（2· 6L)調整爲3後，以乙酸乙酯240 0L 進行2次提取，乙酸乙酯提取液（6 70 0L)以飽和食鹽水2000L 洗滌後，減壓濃縮至5 0 0L。所得濃縮液以磷酸緩衝液-水 (1 〇〇 L)調整pH至7,添加3回提取，接著將所得逆提取液（31 1L) 等分成2等分，送入以水平衡之Diaion HP20管柱（8L)中，管 柱以水（32L)及30%乙腈水溶液（32L)洗滌後，以90%乙腈水 溶液（4 0L)將活性物質洗析出，進行脫鹽。進行相同管柱色 層分析2次，將洗析液減壓濃縮得到油（3 3 7.6g)。 β 將此油溶於2L甲醇與乙腈1 : 1溶液中，取其中1L，供給 於以含有0.5%三乙基胺磷酸緩衝液調節pH爲3.4之40%乙腈 水溶液平衡之COSMOSIL管柱（36L)中，管柱以相同溶劑80L 洗滌後，以含0.5%三乙基胺磷酸緩衝液pH調節爲3.4之45% 乙腈水溶液（120L)，接著爲含0.5 %三乙基胺磷酸緩衝液pH 調節爲3.4之50%乙腈水溶液（120L)進行活性物質洗析，洗 析溶以每20L爲一部分，pH調節爲7之濾份4及5合倂，爲含 -75- 200414902 姆拉明黴素G之粗純化部份1 (4 0 L)，同樣地，濾份9中含姆 拉明黴素Η之粗純化部份2(2 0L)，及濾份10中含姆拉明黴素 1之粗純化部分3(20L)。 2)姆拉明黴素G之分離 上述粗純化部分1中取20 Oml減壓濃縮，得到之濃縮液 (100ml)供給於經水平衡之Diaion HP20管柱（10ml)中，以水 (50ml)洗滌管柱後’以90%乙腈水溶液（50ml)將活性物質洗 析進行脫鹽，所得洗析液經減壓濃縮後冷凍乾燥，得粗純 化粉末3 4 · 4 m g，將此粗純化粉末溶解於乙腈與甲醇1 : 1溶 液（2 m 1 )中，取其中1 5 0 // 1供給於經含〇 · 5 %三乙基胺磷酸緩 衝液調節p Η 3 · 3之4 8 · 4 %乙腈水溶液平衡之η P L C管柱 (CAPCELL PAK C18UG120，2〇0x 250mm)中，管柱以流速 9.0ml/分鐘展開，於260nm紫外光吸收檢出目的物質，保持 時間2 1 · 0分鐘洗析出之濾分分別取出，分別進行此操作1 3 次’將相同保持時間之部分合倂，調節p Η爲7後，經減壓濃 縮，供給於以水平衡之D i a i ο η Η Ρ 2 0管柱（1 〇 m 1)中，管柱以 水（50ml)洗滌後，以90%乙腈水溶液（50ml)將活性物質洗析 脫鹽。所得洗析液經減壓濃縮後冷凍乾燥，得到無色粉末 之姆拉明黴素G(17.8mg)。 (3)姆拉明黴素Η之分離 上述粗純化部分2中取60ml減壓濃縮，得到之濃縮液（3()nii) 供給於經水平衡之Sep pak Plus筒型管柱（iml)中，以水（5ml) 洗滌筒型管柱後，以90%乙腈水溶液（5ml)將活性物質洗析 進行脫鹽，所得洗析液經減壓濃縮後冷凍乾燥，得粗純化 -76- 200414902 粉末26.3mg，將此粗純化粉末溶解於乙腈與甲醇1 : 2溶液 (3ml)中，取其中2 5 0 // 1供給於經含0.5%三乙基胺磷酸緩衝 液調節？113.3之54.8%乙腈水溶液平衡之《^1^管柱 (CAPCELL PAK C18UG120，20 φ X 25 0mm)中，管柱以流速 9.0ml/分鐘展開，於260nm紫外光吸收檢出目的物質，保持 時間23.9分鐘洗析出之部分分別取出，分別進行此操作1 2 次，將相同保持時間之部分合倂，調節pH爲7後，經減壓濃 縮，供給於以水平衡之Sep pak Plus筒型管柱（5 ml)中，管柱 以水（5ml)洗滌後，以90%乙腈水溶液（5ml)將活性物質洗析 脫鹽。所得洗析液經減壓濃縮後冷凍乾燥，得到無色粉末 之姆拉明黴素H(14.0mg)。 (4)姆拉明黴素I之分離 上述粗純化部分3中取600ml減壓濃縮，得到之濃縮液 (300ml)供給於經水平衡之Diaion HP20管柱（l〇ml)中，以水 (5〇ml)洗滌管柱後，以90%乙腈水溶液（50ml)將活性物質洗 析進行脫鹽，所得洗析液經減壓濃縮後冷凍乾燥，得粗純 化粉末1 5 3 · 2mg，將此粗純化粉末溶解於乙腈與甲醇1 : 1溶 液（2ml)中，再以10mM重碳酸銨水（6ml) 3倍稀釋，取其 中200 μ 1供給於經水平衡之HPLC管柱（CAPCELL PAK C18UG120，20 0 X 2 5 0mm)中，管柱以流速9 · 0 ml /分鐘展開， 於26 0 nm紫外光吸收檢出目的物質，保持時間22.5分鐘洗析 出之部分分別取出，分別進行此操作40次，將相同保持時 間之部分合倂，經減壓濃縮，冷凍乾燥，得到含姆拉明黴 素I之醇化粉末7 · 7 m g，將此粗醇化粉末溶解於乙腈與甲醇 -77- 200414902 1 : 1溶液（6 0 0 // 1)中，再以調節ρ Η爲3 . 3之0.5 %三乙基胺磷 酸水（6 0 0 // 1)作2倍稀釋，取其中1 5 0 // 1供給於經含〇 . 5 %三乙 基胺磷酸緩衝液調節pH3.3之54%乙腈水溶液平衡之HPLC管 柱（CAPCELL PAK C18UG120，20 0 X 25 0mm)中，管柱以流 速9.Oml/分鐘展開，於260nm紫外光吸收檢出目的物質，分 別取出保持時間22.2分鐘洗析之部分，分別進行此操作8 次，所得相同保持時間之部分合倂，調節p Η爲7後，減壓濃 縮，供給於經水平衡之Sep pak Plus PS-2筒型（lml)中，筒 型以水（5ml)洗滌後，以90%乙腈水溶液（5ml)溶出活性物質 脫鹽，所得溶出液經減壓濃縮後，冷凍乾燥，得到無色粉 末之姆拉明黴素I(1.9mg)。 (實施例14) SANK6 605 0 1株之十三酸添加培養 (1 )前培養 在斜面培養基上生長之SANK60 5 0 1株，以白金圈取之 1.5 cm角落之菌絲片，將此菌絲片於生理食鹽水均質化之均 質物，將實施例1 1之表8中記載之組成之前培養培養基8 Oml 放入5 0 0 m 1容量之1個三角燒瓶（種燒瓶）中，無菌接種’ 其次將該燒瓶於Caudalie震盪機中，28°C，210rpm震盪培養 6曰，進行一次前培養。 (2)本培養 將實施例1 1之表9記載之組成之本培養培養基滅菌結束 後，或於此1 L中加入〇 . 5 %十三酸之培養基（表1 2 ) ’各自 將8 0 m 1前培養液放入5 0 0 m 1容量之燒瓶中，以5 % ( V / V )植 菌，以溫度28°C，210rpm培養12日。 200414902 本培養培養基 [表12]PCG-3T培養基 可溶性澱粉 70g Pharmamedia 3〇g C.S.L. 5g CaC03 4g MgS04*7H20 2g FeS04.7H20 1 g 十三酸 5g 消泡劑（CB442) 0.05g 自來水 1 000ml 滅菌前之pH値爲7.2， 滅菌，1 2 1°C 3 0分鐘滅菌。 依據實施例1 1之方法調製HP LC樣品，活性部分以下列高 速液體色層分析（HP LC)監測之結果示於第2圖中，十三 酸之添加會增加姆拉明黴素B之生產量。 管柱： YMC-ODS-AM(S-3//m) 12nm 2 5 0x 6mm I. D . (W a i. m . s i) 溶劑： 含有0.0 5 %之三氟乙酸之5 3 %乙腈水溶液 流速： 1 · 0 m 1 /分鐘 檢出： 紫外光吸收260nm 保持時間： 28.5分鐘（姆拉明黴素F) (試驗例3)姆拉明黴素G、Η、I之轉位酵素〗酵素抑制活性之 測定 -79- 200414902 本發明之各化合物對於轉位酵素i之酵素抑制活性，使用 酵素與UDP-N -乙醒基-L-丙胺醯基- 魅胺醯基·πι-二胺基 庚一Μ基- (Νε-丹薩）-D -丙胺薩基-D-丙胺酸（110?-：^-acetylmuramyl-L-Ala - γ - D-Glu-m-DAP-(Ne-dansyl)-D-Ala-D-Ala)及磷酸十一院異戊二嫌酯（undecaprejlyiph〇Sphate)之 反應來測定。 即’將含編碼轉位酵素I之質體之大腸菌E · c ο 1 i / p T A 5株培 養所得菌體於Tris鹽酸緩衝液（pH8.0)中以超音波震碎後， 將粗提取液離心，得到之沉澱以界面活性劑溶化之溶液作 爲酵素源來使用，UDP-N-乙醯基-L-丙胺醯基-T-D-麩胺醯 基-I二胺基庚二醯基-(N\丹醯）-D-丙胺醯基-D-丙胺酸及 磷酸十一烷異戊二烯酯與酵素液培育後，酵素反應所增加 之螢光度，以激發波長3 5 5 nm，檢出波長5 3 8nm之條件定量 爲酵素活性’ 50%酵素抑制濃度（IC5Q)由同時添加抑制劑之 濃度與自抑制率計算而求出。其結果示於表i 3。 [表13]轉位酵素I抑制活性 試驗化合物 IC50( β g/ml) • 姆拉明黴素G 0.0134 姆拉明黴素Η 0.0186 姆拉明黴素I 0.0094 顯示出姆拉明黴素G、姆拉明黴素Η及姆拉明黴素I對轉位 酵素I有抑制活性。 (實施例15)姆拉明黴素Ζ3及姆拉明黴素ζ 4之取得及純化 二乂 Τ列方法，將姆拉明黴素I作爲起始材料可取得姆拉明 -80- 200414902 黴素Z3及姆拉明黴素Z4。 以實施例13所得姆拉明黴素I溶解於含〇.2N氫氧化鈉之 5 〇%甲醇水中，攪拌6小時之溶液以鹽酸中和後，減壓濃縮 餾去甲醇，此濃縮液以乙酸乙酯洗滌2次後冷凍乾燥，將所 得粗粉末溶解於10mM重碳酸銨水溶液中，將此溶液供給於 經含10mM重碳酸銨水平衡之HPLC管柱（CAPCELL PAK C18UG120，20 0 X 250mm) ^洗析溶劑於23分鐘含有10 mM重 碳酸銨之5%乙腈水溶液之梯度，管柱於流速10.Oml/分鐘展 開，於260nm紫外光吸收檢出目的物質，保持時間所溶出之 部分分數回分別收取，將相同保持時間所溶出之部分合倂， 各別經減壓濃縮後冷凍乾燥，可得到姆拉明黴素Z3或姆拉 明黴素Z4之粉末。關於保持時間之決定，基於HPLC圖表可 由業者選擇。 (製劑例）膠囊劑 姆拉明黴素F 1000 mg 乳糖 1 00η ig 玉米澱粉 148. 8mg 硬脂酸鎂 1.2m g 全量 3 5 0η ig 混合上述處方之粉末，通過60網眼之篩子後，將此粉末 裝入膠囊中。 【圖式簡單說明】 第1圖 實施例1 1所得部分之Η P L C圖表（1 - A :未添加十四 酸、：UB :添加十四酸）。箭號表示姆拉明黴素ρ之高峰。 •81- 200414902 第2圖 實施例14所得部分之HPLC圖表（2-A :未添加十三 酸、2-B :添加十三酸）。箭號表示姆拉明黴素B之高峰。

-82-

Claims (1)

1. 200414902 拾、申請專利範圍： 1.〜種下列一般式⑴ 、J所不之化合物或其鹽

   (I) [式中，R爲烴鏈]。 2·如申請專利範圍第i項之化合物或其鹽，其中11爲飽和烴 鏈。 3. 如申請專利範圍第2項之化合物或其鹽，其中直鏈狀 飽和烴鏈。 4. 如申請專利範圍第3項之化合物或其鹽，其中R爲碳數7至 1 7之直鏈狀飽和烴鏈。 5 ·如申g靑專利範圍第4項之化合物或其鹽，其中R爲碳數9至 1 5之直鏈狀飽和烴鏈。 6. 如申請專利範圍第5項之化合物或其鹽，其中r表示_ (CH2)9CH3 或-(CH2)10CH3。 7. 如申請專利範圍第2項之化合物或其鹽，其中r表示_ (CH2)8CH(CH3)2 〇 8 ·如申請專利範圍第1項之化合物或其鹽，其中r爲直鏈狀 不飽和烴鏈。 -83- 200414902 9 ·如申請專利範圍桌8項之化合物或其鹽，宜中&表示 (CH2)3CH = CH(CH2)5CH3、 -CH2CH = CH(CH2)7CH3、 - (CH2)3CH = CHCH2CH = CH(CH2)4CH3 > (CH2)3CH = CH(CH2)6CH3。 1 0 . —種下列一般式（π )所不之化合物或其鹽，

   [式中，R爲烴鏈]。 1 1 ·如申請專利範圍第1 0項之化合物或其鹽，其中R爲直鏈 狀飽和烴鏈。 1 2 .如申g靑專利範圍桌1 1項之化合物或其鹽，其中R爲碳數7 至1 7之直鏈狀飽和烴鏈。 1 3 ·如申|靑專利範圍桌1 2項之化合物或其鹽，其中r爲碳數9 至1 5之直鏈狀飽和烴鏈。 1 4 ·如申S靑專利範圍桌1 3項之化合物或其鹽，其中R表示 (ch2)i〇ch3。 I5· —種下列一般式（m)所示之化合物或其鹽， -84- 200414902

   [式中，R爲烴鏈]。 1 6 .如申請專利範圍第1 5項之化合物或其鹽，其中R爲直鏈 狀飽和烴鏈。 17. 如申請專利範圍第16項之化合物或其鹽，其中R爲碳數7 至1 7之直鏈狀飽和烴鏈。 18. 如申請專利範圍第17項之化合物或其鹽，其中R爲碳數9 至1 5之直鏈狀飽和烴鏈。 1 9 .如申請專利範圍第1 8項之化合物或其鹽，其中11表示-(CH2)10CH3。 20.—種下列一般式（IV)所示之化合物或其鹽，

   -85- 200414902 [式中，R爲烴鏈]。 2 1 ·如申S靑專利範圍第2 〇項之化合物或其鹽，其中r爲直鏈 狀飽和經鏈。 21·如申請專利範圍第11項之化合物或其鹽，其中r爲碳數7 至1 7之直鏈狀飽和烴鏈。 23·如申請專利範圍第22項之化合物或其鹽，其中r爲碳數9 至1 5之直鏈狀飽和烴鏈。 24·如申請專利範圍第23項之化合物或其鹽，其中r表示_ (ch2)10ch3。 25.—種下列一般式（V)所不之化合物或宜臨，

   (V)

   〇 26·—種下列一般式（VI)所示之化合物或其鹽

   (VI) -86- 1 7·—種下列一般式（VII)所示之化合物或其鹽， 200414902

   (V I I ) o 28.—種下列一般式（VIII)所示之化合物或其鹽，

   (VIII) 〇 2 9.—種具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽， 1 )物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞碾，不溶於氯仿 3) 分子式：C55H85N5 02 3 4) 分子量：1183(以FAB質譜法測定） 5) 依高分解能FAB質譜法測定之精密質量，[M + H] +如下 列表示： 實測値：1 1 8 4.5 6 9 9 計算値：1 1 8 4.5 7 1 3 6) 紫外線吸收光譜： -87- 200414902 於甲醇中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表 示： 263nm(e9200) 7) 旋光度： 於甲醇中測定旋光度，如下列所示値表示： [a ]D29 : +7.5 ° ( c0.5 ) 8) 紅外線吸收光譜： 以溴化鉀（KBr )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下 列所示之極大吸收表示： 3414，2928,2856,1738,1696,163 1，1465,1 384,1273, il6l 1 1 27,1 1 04,1 0 1 5,9 60cm·1 9) iH-核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞碾（2.49ppm } 測定，以下所示爲其1 H-核磁共振光譜： 0.84(6H，t)，0.9 1(3H，d，J = 6.2Hz)，1.2-1.3(10H，m)，1.42(lH，m)，1.57(2H，m),1.7 1(lH，m)，2.0(7 H5m)，2.12(lH，m)，2.16(lH，m)，2.26(3H,s)，2.3(3H5m)2 4 1(lH，m)，2.46(2H5m)52.6(4H，m)，2.80(lH，dd，J = 6.6，l2 8Hz)，2.92(3H，s)，2.94(lH，m)，2.98(lH，bi*.m)，3.26(lH t J = 9.2Hz),3.36(3H5s),3.37(3H?s)?3.4(2H?m)?3.53(iH m )，3.83(lH，d，J = 8.4Hz)53.9(3H，m)，4.13(lH，m)，4.l9(2H m)，4.96(1 H，dd，J = 2.9,9.2Hz)，5· 12(lH，m)，5.3(2H，m)5 37(2H，m)，5.65(lH，d，J = 7.7Hz)，5.90(lH，t，J = 5.9HZ)，5 9 3(lH，m)，7.82(lH，d，J = 7.7)ppm -88- 200414902 10) 13C-核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞楓（39.5ppm) 測定，以下所示爲其13C -核磁共振光譜： 9.5(q)，14.0(q)，19.0(q)，22.1(t)，23.9(t)，24.8(t)，26.3(t)， 26.6(t)，27. 1 (d)，28.3(t)，28.7(t)，29. 1 (t)，9.2(t),3 1 ·2(〇, 32.9(t)，3 6.4(q)，3 7.8(q)，3 8.8(t)，9.8(t)，3 9.9(t)，40.2(t)， 40.6(t)，41.5(t)，56.6(t)，8.7( q)，60.0( q)，62.3(d)，66.5(d)， 69.0(d)?69.9(d).70.6(d) ,72.7(d) ,73.0(d) ,74.1(d).76.6( d)，77.3(d)，77.5(d)，82.0(d)，83.9(d)，87.4(d)，90.5(d)，10 1 .3(d) 5 106.8(d), 129.1(d), 13 0. 1(d) ,140.5(d), 150.2(8), 163.3(s)，168.7(s)，169.2(s)，170.1(s)，170.7(s)，171.1(s)· 1 7 1 . g ( s). 1 7 3.6 (s) ppm 11) 高速液體色層分析法： 管柱：CAPCELLPAK C18UG120,4.6 (/) X 1 5 0mm (資生 堂股份有限公司製） •溶劑：含有10mM重碳酸銨之40%乙腈水溶液 流速：1 .Oml/分鐘 檢出：紫外線吸收260nm 保持時間：9.3分鐘 3 〇 · —種具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽， 1) 物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞楓，不溶於氯仿 3) 分子式：C55H85N5 02 3 4) 分子量：1171(以FAB質譜法測定） -89- 200414902 5) 依高分解能FAB質譜法測定之精密質量’ [Μ + ΗΓ如下 列表示： 實測値：1 172·5 7 04 計算値：1172.5713 6) 紫外線吸收光譜： 於甲醇中測定紫外光吸收光譜，如下所不極大吸收表 示： 263ηχη(ε9100) 7) 旋光度： 於甲醇中測定旋光度，如下列所示値表示： [a ]D29 : +6.3。（ C〇.2 ) 8) 紅外線吸收光譜： 以溴化鉀（KBr )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下 列所示之極大吸收表示 3403，2927，2855，1 738，1691，163 1，1466,1385,1273，"61， 1 104,1014,961cm-1 9) iH-核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞楓（2 49ppm) 測疋’以下所不爲其1 Η -核磁共振光譜： 〇.84(6H,t)，〇.92(3H，d，J = 5.9Hz)，1.2.1 .3(1 6Η，χη)，1.42(1Η， m)，1.55(2H，m)，1.71(lH，m)，2.0(3H，m)，2.14(2H，m)，2.26 (3H，s)，2.3(3H5m)，2.4 1(lH，m)，2.47(2H，m)，2.6(4H，m),2· 80(1H? dd,J = 6.9,13.7Hz)52.92(3H5s)?2.93(1 H5br.m)53.〇l (lH，dd，J = 2.9，13.7Hz)，3.27(lH，t，J = 9.3HZ)，3.36(3H，s)，3. 200414902 37(3H，s)，3 .38(1 H，m)，3.40(lH，m)，3.53(1 H，t，J = 2.4Hz)，3· 86( 1H，d，J = 8.8Hz)53.9(2H，m)，3.97(1 H，m),4· 13(lH，m)，4. 18(2H，m)，4.96(lH，dd，J = 2.9,9.3Hz)，5.11(lH，m)，5.38(2H， m)，5.66(lH，d，J = 8.3Hz)，5.90(lH，t，J = 5.9Hz)，5.93(lH，m)， 7.82(lH5d, J = 8.3Hz)ppm 1 0)13 C -核磁共振光譜： 重二甲亞礪中，內部標準使用重二甲亞碾（39.5ppm ) 測定’以下所示爲其i3C —核磁共振光譜： 9.5(q)514.0(q)?i9.0(q)?22.1(t)?23.9(t)524.5(t)?27.2(d),2 _ 8.7(t)，28.9(0).29.0(t)，29.1(d)，31.3(t)，33.3(t)，36.4(q),3 7.8(q)，3 9.4(t)，39.6(t)，39.8(t)，39.9(t)，40.7(t)，4 1 ·5(〇,5 6.5(t)，5 8.7(q)，60.0(q)，62.3(d)，66.6(d)，69.1(d)，70.0(d)， 70.7(d)，72.7(d)，73.0(d)，74.1(d)，76.6(d)，77.3(d)，77.6 (d),82.0(d),84.0(d),87.4(d),90.4(d), 101.3(d),106.8 (d)5 1 40.5(d)，1 5 0.2(s)，163.3 (s)，168.5 (s).169.3 (s)5 170· l(s)， 170.6(s)517 1.1(s)5171.8(s)?173.5(s)ppm 1 1)高速液體色層分析法： φ 管柱：CAPCELLPAK C18UG120,4.6px 150mm (資生堂 股份有限公司製） 溶劑：含有10mM重碳酸銨之40%乙腈水溶液 流速：1 . 0 m 1 /分鐘 檢出：紫外線吸收2 6 0 n m 保持時間：9.8分鐘 3 1 ·—種具有下列物理化學性狀之化合物或#鹽， -91- 200414902 1) 物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞楓，不溶於氯仿 3) 分子式：C55H85N5 02 3 4) 分子量：1183(以FAB質譜法測定） 5) 依高分解能FAB質譜法測定之精密質量，[M + H] +如下 列表示： 實測値：1 1 84.5 723 計算値：1 1 8 4 · 5 7 1 4 6) 紫外線吸收光譜： _ 於甲醇中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表 示： 263nm( ε 8100) 7) 旋光度：於甲醇中測定旋光度，如下列所示値表示： [a ]D29 : +6.5 ° ( c0.2 ) 8) 紅外線吸收光譜： 以溴化鉀（KBr )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下 列所示之極大吸收表示： φ 3403,2927,2855, 1 738,1690,1631,1466,1385,1273，il62 1 1 04,1 0 1 5,962cm-1 WH-核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞珮（2.49Ppm ) 測定，以下所示爲其1Η-核磁共振光譜： 0.84(6H，t)，0.9 1(3H，d，J = 6.〇Hz)，1.2-1.3(12H，m)，l.42(1H m)，1.7 0(lH，m)，2.0(5H5m)，2.14(2H，m)，2.26(3H，s),2 3(4 200414902 H，m),2.42(lH，m),2.5(2H，m)，2.6(4H,m),2.80(lH，dd，J = 6· 8，12.8Hz)，2.9 1(3H,s)，2.95(lH，br.m)，3.0 1(lH，dd，J = 2.6，l 2.8Hz)，3.27(lH，t，J = 9.0Hz)，3.36(3H，s)，3.37(3H，s)，3.4(2 H，m)，3 .53(1 H，m)，3.85(1 H，d，J = 8.1Hz)，3.9(2H，m)，3.96(1 H，m)54.13(lH，m)，4.19(2H，m).4.96(lH，dd，J = 2.6,9.4Hz)， 5. 13(lH，m)，5.30(1 H，dt，J = 7.3,9.8Hz)，5.38(2H，m)，5.47(l H，dt，J = 7.3,9.8Hz)，5.66(lH，d，J = 8.1Hz)，5.90(lH，t，J = 5.6H z)，5.93(lH,m)，7.82(lH，d，J = 8.1Hz)ppm 10)13c-核磁共振光譜： _ 重二甲亞楓中，內部標準使用重二甲亞楓（39.5ppm) 測定，以下所示爲其13 C -核磁共振光譜： 9.5(q)，14.0(q)，19.0(q)，22.1(t)，23.9(t)，2 6.7(t)，27.1(d)，2 8.7(t)，28.7(t).28.9(t)，28.9(t)，29.0(t)，29.0(t)，29.1(t)，3 1· 3(t),33 · 1 (t)，36.4( q)，37.8( q)，3 8.2(t)，39.8(t)，39·9(〇，40· 2(t)，40.7(t)，41.5(t)，56.6(t)，58.7(q)，60.0(q)，62.3(d)，66. 5(d)，69· 1(d)，69· 8(d)，70.7(d),72.7(d)，73 ·0((!)，74· 1(d)，7 6.6(d)，77.3(d)，77.5(d)，82.0(d)，84.0(d)，87.4(d)，90.5(d)， ® 1 01.3(d), 1 06.8 (d)，123.6(d)，133. 1(d)，140.5(d)，150.2(s)，163.3(s)，168.6 (s)，169.3(s)，170.2(s)，170.6(s)，171.0(s),171.8(s) ,173.5( s)ppm 1 1)高速液體色層分析法： 管柱：c APCELLPAK C18UG120,4.6 φ X 1 50mm (資生堂 股份有限公司製） -93- 200414902 溶劑：含有10mM重碳酸銨之40%乙腈水溶液 流速：1.0ml/分鐘 檢出：紫外線吸收260nm 保持時間：10.9分鐘 3 2 . —種具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽， 1) 物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞楓，不溶於氯仿 3) 分子式：C57H87N5 02 3 4) 分子量：1 209(以FAB質譜法測定） 5) 依高分解能FAB質譜法測定之精密質量，[M + H] +如下 列表示： 實測値：1 2 1 0 · 5 8 6 7 計算値：1210.5870 6) 紫外線吸收光譜： 於甲醇中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表 示： 263nm( ε 9900) 7) 旋光度： 於甲醇中測定旋光度，如下列所示値表示： [a ]D29 : +13.2 ° ( c0.2 ) 8) 紅外線吸收光譜： 以溴化鉀（KBr )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下 列所示之極大吸收表示_· 3383,295 7,2930，1738，1695,1629,1464，1 384，1273，1 161， 200414902 1 104,1014,960cm·1 9) 核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞碾（2.49ppm ) 測定，以下所示爲其1Η-核磁共振光譜： 〇.84(6H，t)，0.9 1(3H，d，J = 6.0Hz),1.2-1.3(8H,m)，1.42(lH， m)，1.57(2H，m)，1.70(lH，m)，2.0(7H，m)，2.11(lH，m)，2.17 (lH，m)，2.26(3H，s)，2.3(3H，m)，2.4(3H，m)，2.5-2.6(4H，m)， 2.7 1(2H5dd，J = 6.OHz)，2.80(lH，dd，J = 7.0，12.8Hz)，2.9 1(3 H，s)，2.93(lH，br.m)，2.98(lH，dd，J = 2.7，12.8Hz)，3.26(lH， t，J = 9.2Hz)，3.36(3H，s)，3.37(3H，s)，3.4(2H，m)，3.52(lH, m)，3.84(lH，d，J = 8.1Hz)，3.9(2H，m)，3.94(lH，m)，4.14(lH， m)，4.2(2H，m)，4.96(lH，dd，J = 2.9,9.5Hz)，5.12(lH，m)，5.30 (4H，m)，5.37(2H，m)，5.66(lH，d，J = 8.1Hz)，5.90(lH，t，J = 5.9 Hz)，5.93(lH，m)，7.82(lH，d,J = 8.1Hz)ppm 10) 13c-核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞碾（39.5ppm ) 測定’以下所示爲其-核磁共振光譜： 9.4(q)，l 3.9(q)，i9.0(q)，22.0(t)，23.9(t)，24.6(t)，25.2(t)52 6.3(t)，26.6(t)，27.1(d)，28.7(t)，29.3(t)，29.4(t)，30.9(t)，3 2.9(t)，36.4(q)，37.8(q)，38.8(t)，39.8(t)，39.9(t)，40.2(t)，4 〇·7(0,4 1 .5(t)，5 6.6(t)，5 8.7(q)，60.0(q)，62.3(d)，66.7(d)，6 9.0(d)，69.9(d)，70.6( d)，7 2.7(d)，73.1(d)，74· 1(d)，76.6(d). 77.3(d)，7 7.4(d)，82.2(d)，83.9(d)，87.5(d)，90.5(d)，101.3 (d)，106.7(d)，127.6(d)，128.2(d)，129.2(d)，129.8(d)，140.5 -95- 200414902 (d)，150.3(s)，163.3(s)，168.6(s)，169.2(s)，170.1(s)，170.8 (s)?171. l(s)?171.9(s)?173.8(s)ppm 1 1)高速液體色層分析法： 管柱·· CAPCELLPAK C18UG120,4.6px 150mm (資生堂 股份有限公司製） 溶劑：含有10mM重碳酸銨之4〇%乙腈水溶液 流速：1 .Oml/分鐘 檢出：紫外線吸收260nm 保持時間：14.8分鐘 籲 3 3 ·具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽： 1) 物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞碾，不溶於氯仿 3) 分子式：C55H87N50 2 3 4) 分子量：1185(以FAB質譜法測定） 5) 依高分解能FAB質譜法測定之精密質量，[Μ + ΗΓ如下 列表示： 實測値：1 1 8 6 · 5 8 2 8 ^ 計算値：1 1 8 6 · 5 8 7 0 6) 紫外線吸收光譜z 於甲醇中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表 示： 263nm(£ 11000) 7) 旋光度： 於甲醇中測定旋光度，如下列所示値表示： -96- 200414902 [α ]D” ： +;i3.9° ( c0.2 ) 8 )紅外線吸收光譜： 以溴化鉀（KB I·)錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下列 所示之極大吸收表示： 3393,2953,2927,1 738,1695,1632,1466,1 384,1273,1 162， 1 1 04,1 0 1 4,960cm·1 9)4-核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞楓（2.49ppm ) 測定，以下所示爲其1Η-核磁共振光譜·· _ 0.83(6H，t，J = 6.6Hz)，0.84(3H,t，J = 7.3Hz)，0.92(3H，d，J = 6.2 Hz)，1.12(2H，dt，J = 6.6Hz)，l，2-1.3(12H，m)，1.4-1.5(2H，m)， 1.55(2H，m)，1.70(lH，m)，2.0(3H，m),2.11(lH，m)，2.17(lH， m)，2.26(3H，s)，2.3(3H，m)，2.4-2.5(3H，m)，2.5-2.6(3H，m)， 2.7 9(1 H，dd，J = 6.6，12.8Hz)，2.9 1(3H，s)，2.94(l H，bi*.m)52.9 9(lH，dd，J = 2.8，12.8Hz)53.27(lH，t，J = 9.3Hz)，3.36(3H，s)，3. 37(3H，s)，3,40(2H，m)，3.52(lH，m)，3.84(lH，d，J = 8.8Hz)，3. 87(2H，ni)53.94(lH，m)，4.13(lH，m)，4.19(2H，m),4.96(lH5d · d，J = 2.9,9.2Hz)，5.11(lH，m)，5.3 7(2H，m)，5.37(2H,m)，5.66 (lH，d，J = 8.1Hz)，5.90(lH，t，J = 5.5Hz)，5.93(lH，m)，7.83(lH， d, J = 8 .lHz)ppm i 〇)13 c -核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞楓（39.5ppm) 測定’以下所示爲其-核磁共振光譜： 9*5(q)?19.〇(q)922.5(q))23.9(t)?24.5(t),26.8(t)527.1 (d)?2 -97- 200414902 7.4(d)528.7(t)，28.9(d)，28.9(d)，29.3(t)，29.3(t)，29.5(t)，3 3.2(t)，36.4(q)，3 7.8(q)，3 8.5(t)，3 8.8(t)，39.8(t)，39.9(t),40. 1 (t)，40.2(t)，4 1 .5(t)，56.6(t),5 8.7(q)560.0(q)562.3(d)，67. 3(d)，69· 1(d)，70.0(d)，70.6(d)，72.7(d)，73· 1(d)，74· 1(d)，76. 6(d)，77.2(d)，77.5(d)，82.2(d)，83.9(d)，87.6(d)，90.5(d)，10 1 .3(d)，1 06.6(d)，140.5(d)，150.3(s)，163.3(s)，l68.5(s)，169. 3(s)，170.1 (s)，170.8(s)，171· l(s)，172.0(s)，173.8(s)ppm 11)高速液體色層分析法： 管柱：CAPCELLPAK C18UG120,4.6 φ X 1 50mxn (資生堂鲁 股份有限公司製） 溶劑：含有10mM重碳酸銨之42%乙腈水溶液 流速：1 .Oml/分鐘 檢出：紫外線吸收260nm 保持時間：9.5分鐘 34.—種具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽： 1) 物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞®，不溶於氯仿 · 3) 分子式：C56H87N5023 4) 分子量：1197(以FAB質譜法測定） 5) 依高分解能FAB質譜法測定之精密質量，[M + H] +如下列 表示： 實測値：1 1 9 8.5 8 7 5 計算値：1 1 9 8.5 8 7 0 6) 紫外線吸收光譜： -98- 200414902 於甲醇中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表 示： 2 6 3 nm ( ε 8 7 0 0) 7) 旋光度：於甲醇中測定旋光度，如下列所示値表示： [a]D29 : — 6.8 ( c 0.2 ) 8) 紅外線吸收光譜= 以溴化鉀（KBr )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下列 所示之極大吸收表示： 3414,2928,2856,1738,1689, 1632,1465,1394,1273,1 161， 1 126，1 1 04,1 0 1 4,959cm·1 Ρ)1：»-核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞碾（2.49ppm) 測定，以下所示爲其1Η-核磁共振光譜： 0.84(6H，t)，0.92(3H，d，J = 6.2Hz)，l，2-1.3(12H，m)，1.42(lH， m)，1.57(2H5m)，1.71(lH，ni)，2.0(7H，m)，2.11(1 H, m)，2.17(1 H，m)，2.25(3H，s)，2.3(3H，m),2.4 1(lH，m),2.43(2H,m)，2.6 (4H，m) ,2.80(1 H，dd，J = 6.6，13.6Hz)，2.91(3H，s)，2.93(lH，m)， 2.98(1 H，dd，3.3，13·6Ηζ)，3.27(lH，t，J = 9.5Hz)，3.36(3H，s)，3· 37(3H，s)，3.4(2H，m)53.52(m，m)，3.84(lH，d，J = 8.4Hz)，3.87 (2H，m)，3.94(lH，m)，4.13(lH，m)，4.19(2H，m)，4.96(lH，dd，J = 3.3,9.5Hz)，5.90(lH，t，J = 5.9Hz)，5.37(2H，m)，5.66(lH，d，J = 8」Hz)，5.90(lH，t，J = 5.9Hz)，5.93(lH，m)，7.83(lH，d，J = 8.1H z)ppm 1 0 ) 13 C -核磁共振光譜： -99- 200414902 重二甲亞楓中，內部標準使用重二甲亞碾（39.5ppm) 測定’以下所示爲其i3C -核磁共振光譜： 9.5(q)5l4.〇(q)5 ! 9.0( q) 5 2 2. l(q),23.9( t),24.8(t),26.3(t)526. 6(q)，27.1(d)528.6(t)，28.6(t)，29.0(t)，29.1(t)，29.3(t)，3 1.3 (t),32.9(t)，36.4( q)，37.8( q)，38.9(t)，39.8(t)，39.9(t)，40.2 (t)，40.7(t)，4 1 .5 (t)，56.6(t)，5 8.7(q)，60.0(q)，62.3(d)，66.7 (d)，69.0(d)，69· 9(d)，70.5(d)，72.7(d)，73.2(d)，74.1(d)，76.6 (d)，7 7.2(d)，77.5(d)，82.2(d)，83.9(d),89.1(d)，90.5 (d)，10 1.3(d)，106.6(d)，129.1(d)，130.1(d)，140.6(d)，150.3(s)，163. φ 3(s)，168.4(s)，169.2(s)，170.1(s)，170.8(s)，171.1(s)，172.0 (s)，173.8(s)ppm 1 1)高速液體色層分析法： 管柱：CAPCELLPAK C18UG120,4.6 φ X 1 50mm (資生堂 股份有限公司製） 溶劑：含有10mM重碳酸銨之42%乙腈水溶液 流速：1.0ml /分鐘 檢出：紫外線吸收2 6 0 n m _ 保持時間：10.2分鐘 3 5 · —種具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽： 1) 物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞碾，不溶於氯仿 3) 分子式：C55H87N5023 4) 分子量：1185(以FAB質譜法測定） 5) 依高分解能FAB質譜法測定之精密質量，[m + h] +如下 -100- 200414902 列表示： 實測値：1 1 8 6 · 5 9 1 2 計算値：1 1 8 6 · 5 8 7 0 6) 紫外線吸收光譜： 於甲醇中測.定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表 不： 263nm( ε 3600) 7) 旋光度： 於甲醇中測定旋光度，如下列所示値表示： 鲁 [a ]D29 : + 4.3。（ c0.5 ) 8) 紅外線吸收光譜： 以溴化鉀（KBr )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下列 所示之極大吸收表示： 3371，2926,2855,1738,1691，1628,1466,1 384,1273,1 161， 1 1 04,1 0 1 6,962cm*1 9) 屮-核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞楓（2.05ppm ) ® 測定’以下所示爲其iH-核磁共振光譜： 〇.84(6H，t)，〇.92(3H，d，J = 5.5Hz)，1.2-1.3(18H，m)，1.42(lH，m)，1.55(2H，m),1.70(lH，m)，2.0(3H， m)，2.14(2H，m)，2.26(3H，s)，2.3(3H，m)，2.41 (lH，m)，2.47(2 H，m)，2.6(4H，m)，2.80(lH，dd，J = 6.2，13.6Hz)，2.92(3H，s)，2· 94(lH?br.m)53.01(lH.dd5J = 2.2?13.6Hz)53.27(lH5t5J = 8.8 H2)，3.30(3H，5)，3.37(3H55)，3.40(2H，m)，3.53(lH，m)，3.8 -101- 200414902 6(lH，d，J = 9.5Hz)，3.9(3H，mM.13(lH，m),4.19(2H，m)，4.9 6(lH，dd，J=1.8,9.2Hz)，5.11(lH，m)，5.37(2H，m)，5.65(lH，d, J = 7.7Hz)?5.90(lH?t?J = 5.0Hz)?5.93(lH,m)?7.81(lH?d?J = 7. 7 H z) p p m 1 0 ) 13 c -核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞楓（39.5ppm) 測定，以下所示爲其13C -核磁共振光譜： 9.5(q)，14.0(q)，19.0(q)，22.1(t)，23.9(t)，24.5(t)，27.2(d)， 28.7(t)，28.7(0)，28.9(t)，28.9(t)，29.0(t)，29.0(t)，29.1(d). 3 1.3(t),33.3(t)，36.4(q)，37.8(q)，3 8.8(t)，39.8(t)，39.9(t)， 40.2(t),40.7(t)，4 1.5(t)，5 6.S(t),5 8.7(q)，60.0(q)，62.4(d )，66.5(d)，69.0(d)，70.6(d)，72.7(d)，72.9(d)，74.1(d)，76. 6(d)，77.3(d)，77.5(d)，82.0(d)，84.0(d)，87.3(d)，90.4(d)， 101.3(d)，106.9(d)，140.5(d)，1 50.2(s)，163.3(s)，168.7(s)， 169.3(s)，170.1(s)，170.6(s)，171.1(s)，171.8(s)，173.5(s) ppm 1 1)高速液體色層分析法： 管柱：C APCELLPAK C18UG120,4.6 ¢) x 1 50mm (資生 堂股份有限公司製） 溶劑：含有10mM重碳酸銨之42%乙腈水溶液 流速：1.0ml/分鐘 檢出：紫外線吸收260nm 保持時間：1 1 . 2分鐘 3 6. —種具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽， -102- 200414902 1) 物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於水，不溶於氯仿 3) 分子式： 4) 分子量：543 (以FAB質譜法測定） 5) 依高分解能FAB質譜法測定之精密質量，[Μ + ΗΓ如下 列表示： 實測値：5 4 4.2 2 4 0 計算値：544.2255 6) 紫外線吸收光譜： _ 於水中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表 示： 2 6 3 nm( ε 8 70 0) 7) 旋光度： 於水中測定旋光度，如下列所示値表示： [a ]D2 9 : + 6 2.7 ° ( c0.2) 8) 紅外線吸收光譜z 以溴化鉀（KB 〇錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下 鲁 列所示之極大吸收表示： 3393,2929,1688,1620.1468,1394,1274.1094,1065,1019， 9 6 2 cm ~ 1 9) 1^核磁共振光譜： 重水中，內部標準使用重水（4.75ppm )測定，以下 所示爲其1H-核磁共振光譜： 2.2 1(lH，ddd，J = 3.3,5.9，14.7Hz)，2.3- -103- 200414902 2.4(3H，m),2.44(3H，s)，2.86(lH，dd，J = 9.2，13.6Hz)，2.97( lH，d，J = 14.7Hz)，3.07(3H，s)，3.13(lH，d，J=14.7Hz)，3.24( 1 H,dd,J = 4.4，l 3.6Hz)，3.80(lH，d，J = 9.9Hz)，3.93(1 H,d，J = 6.6Hz)，4.20(lH,d，J = 5 ·1Ηζ),4.25(lH，dt，J = 7.0Hz) ,4.38(1 H，m)，4.4 1(lH，d,J = 9.9Hz)，4.44(lH，m)，5.56(lH，dd，J = 3.3, 5 ·9Ηζ)，5.8 l(lH，d，J = 8.1Hz)，6.00(lH，t，J = 5.5Hz)，7·74(1 H， d，J = 8.1Hz)ppm 10) 13c-核磁共振光譜： 重水中，內部標準使用二噚烷（66.5PPm )測定，以 下所示爲其-核磁共振光譜： 36.4(q)，38.6(q)，38.7(t)，40.1(t)，40.4(t)，58.6(t)，63.1(d )，6 8.7(d)，69.1(d)，69.4(d)，7 1.8(d)，76.9(d)，8 1.6(d)，85. 0(d),85.3(d), 101.3(d),109.0(d), 142.2(d),15 1.4(5),166. 5 (5 ),1 7 2.3 (5 ),1 7 3.5 (5 )ppm 11) 高速液體色層分析法： 管柱：CAPCELLPAK C18UG120,4.6 0 X 1 50mm (資生堂 股份有限公司製） 溶劑：10mM重碳酸銨 流速：1 . 〇 m 1 /分鐘 檢出：紫外線吸收260nm 保持時間：9 · 2分鐘 3 7·—種具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽： 1) 物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞碾，不溶於氯仿 -104- 200414902 3) 分子式：C22H31N5O10 4) 分子量：5 2 5 (以FAB質譜法測定） 5) 依高分解能FAB質譜法測定之精密質量，[M + H] +如下 列表示： 實測値：5 2 6.2 1 5 3 計算値：526.9149 6) 紫外線吸收光譜： 於水中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表 示·· 260nm( £ 8700) 7) 旋光度： 於水中測定旋光度，如下列所示値表示： [a ]D2 9 : + 6 5.5。（ c0.2 ) 8 )紅外線吸收光譜： 以溴化鉀（KBr )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下 列所示之極大吸收表示： 3403，2953，1 690,1633,1467,1382,1361，1 274，1098，1067, 1 0 1 3.9 64cm'1 9) iH-核磁共振光譜： 重水中，內部標準使用重水（4.7 5PPm)測定，以下 所示爲其1H-核磁共振光譜： 2.2- 2 ·4(4Η，m)，2·43(3Η，s)，2.86(1 H，dd，J = 9.9,13.6Hz)，2.92(1 H，dd，J = 6.6，12.7Hz),2.97(3H，s)，3.23(lH，dd，J = 4.0，i36 -105· 200414902 Hz)53.3 2(lH，dd，J = 7.3, 12·7Ηζ)，3.87(1 H，d，J = 9.5Hz)，4.0 8(lH，m)，4.18(lH，m)，4.3 1(lH，dt，J = 5.8Hz)，4.35(lH，m)，4. 38(lH，m)，5.56(lH，dd，J = 2.6,5.9Hz)，5.80(lH，d，J = 8.1Hz )，6.06(1 H，t，J = 5.9Hz)，6.47(1 H，dd，J = 6 ·6,7.3Hz)，7.64(l H，d，J = 8.1Hz)ppm 10) 13 C -核磁共振光譜： 重水中，內部標準使用二噚烷（66.5PPm)測定，以 下所示爲其-核磁共振光譜： 32.7(q)，38.6(t)，40.0(q)，40.5(t)，40.9(t)，5 1.0(t)，63.2(d)， 69.8(d)，71.7(d)，76.7(d)，82.4(d)，85.2(d)，85.6(d)，101.8( d)5 107.7(d)，123.1(d)，141.4(d)，144.2(s)，152.4(s)，167.7 (s),168.6(s)，171.0(s)ppm 11) 高速液體色層分析法： 管柱：CAPCELLPAK C18UG120,4.6<;6x 150mm (資生堂 股份有限公司製） 溶劑：含有1 〇 Π1Μ重碳酸銨之3 %乙腈水溶液 流速：1.0ml/分鐘 檢出：紫外線吸收2 60nm 保持時間：13.0分鐘 3 8 · —種具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽， 1) 物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞®，不溶於氯仿 3) 分子式：C42H67N5016 4) 分子量：897(以FAB質譜法測定） -106- 200414902 5) 依高分解能FAB質譜法測定之精密質量，[Μ + ΗΓ如下 列表示：實測値：8 9 8.46 6 9計算値：89 8.466 1 6) 紫外線吸收光譜： 於甲醇中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表 示： 263nm( ε 7500) 7) 旋光度：於甲醇中測定旋光度，如下列所示値表示： [a ]d29 ·· + 19.8 ° ( c0.2 ) 8) 紅外線吸收光譜： $ 以溴化鉀（KBr )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下 列所示之極大吸收表示： 3394,2926,2855,1 737, 1 691，1629,1467,1397,1274,12〇3 1 131,1 094,1 0 1 3,962cm-1 9) iH-核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重二甲亞楓（2·49Ρρη〇 測定’以下所示爲其^Η-核磁共振光譜： 0.84(3H，t，J = 7.1Hz)，0.88(3H,d，J = 6.3Hz)，1.2- # 1.3(18H，m)，1.57(2H，m)，1.9-2.2(8H，m)，2.24(3H，s)，2.43(lH，dd，J = 5.5- 15.1Hz)，2.54(lH，dd，J = 8.2，15.4Hz)，2.66(lH，dd，J = 4.4，i 5.4Hz)，2.7 4(lH，dd，J = 6.3，12.6Hz)，2.91(3H，s)，2.93(iH m)，2.99(lH，dd,J = 3.8，12.6Hz)，3.30(lH，m)，3.83(lH5d，j = 9.1Hz)53.9- 4.0(3H，m)，4.12(lH，dt，J = 5.2,5.5Hz),4.2(2H，m)，5.〇8(1H -107- 200414902 m )55.38(2H?m)55.67(1 H?d,J = 8.0Hz),5.90(1 H?t?J = 6.0Hz)? 7.8l(lH，d.〇Hz)，5.90(lH，t5J = 6.0Hz)，7.8 1(lH，d，J = 8. 0)ppm 1〇) I3C_核磁共振光譜·· 重二甲亞®中，內部標準使用重二甲亞楓（39.5PPm) 測定’以下所示爲其13C -核磁共振光譜： 14.0U)，19.4(q)，22.1(t)，24.6(t)，27.1(d)，28.7(t)，28.7(t )，28.9(t)，29.〇(t)，3i.3(t)，33.2(t)，36.4(q)，3 7.8(q)，3 8.9( t)，39.8(t)，39.9(t)，40.1(t),40.4(t)，4 1.5(t)，5 6.6(t)，62.3( d)’66.6(d)，69 .1(d)，69.9(d)，70.7(d)，72.8(d)，77.6(d)，82. 〇(d),83.9(d)，87.4(d)，101.3(d)，107.0(d)，140.5(d)，150. 2(d)，163.3(s)，168.5(s)，169.3(s)，170.7(s)，171.5(s)，173· 8 (s)ppm 1 1) 高速液體色層分析法： 管柱：CAPCELLPAK C18UG120,4.64x 150mm (資生 堂股份有限公司製） 溶劑：含有〇·2%三乙基胺-磷酸緩衝液，調節pH33之 5 5 %乙腈水溶液 流速：1 . 〇 m 1 /分鐘 檢出：紫外線吸收2 6 0 n m 保持時間：4.0分鐘 3 9·—種具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽， i )物質之性狀：無色粉末狀物質 2)溶解性：可溶於甲醇、二甲亞碾，不溶於氯仿 -108- 200414902 3) 分子式· C54H85N5023 4) 分子量：U71(以FAB質譜法測定） 5 )依高分解能F A B質|普法測定之精密質量’ [M + Η ] +如下 列表示： 實測値：1 1 72.5 7 3 1 計算値：1 1 7 2 · 5 7 1 3 6) 紫外線吸收光譜： 於甲醇中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表 示： 263nm( ε 1 0400) 7) 旋光度： 於甲醇中測定旋光度，如下列所示値表示： [a ]D29 : + 1 0·6 c ( c0.3 ) 8 )紅外線吸收光譜： 以溴化鉀（KBr )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以下 列所示之極大吸收表示： 3403,2926,2855,1 739,1695,1628,1467,1 384,1 273,1 162, 1 103,1013,966cm'1 9) 1H-核磁共振光譜： 重二甲亞珮中，內部標準使用重二甲亞碾（2.49Ppm) 測定’以下所示爲其ιΗ-核磁共振光譜： 0.83(3H.t，J = 6.6Hz)，0,9 1(3H，d，J = 6.3Hz)，1.17(3H，d，J = 6 0Hz)，l.2-1.3(18H，m)，1.55(2H，m)，1.9-2.1(3H，m)，2,13(2 H.m)，2.26(3H，s)，2.3-2.4(3H,m)，2.4 1(lH，dd，J = 6.0，l5.4 •109- 200414902 Hz)，2.47(2H,m)，2.6(4H，m)，2,80(lH，dd，J = 5.8，12.6Hz)，2· 92(3H，s)，2.9-3.0(2H，m)，3.20(lH，dd，J = 9.0,9.6Hz)，3.32 (lH，m)，3.36(3H，s)，3.37(lH，m)，3.38(3H，s)，3.41(lH，m)， 3.52(1 H，m)，3.5 9(lH,dq，J = 6.0,9.0Hz)，3.80(lH，d，J = 8.5 Hz)，3.9(2H，m)，3.94(lH，d，J = 3.3Hz)，4.10(lH，m)，4.21(2 H，m)，4.94(lH，dd，J = 3.0,9.6Hz),5.11(lH，m)，5.37(2H，m)5 5.66(1 H，d，J = 8.0Hz)，5.89(lH，t，J = 5.5Hz)，5.90(lH，d，J=l, 4Hz)，7.8 1(lH，d，J = 8.0Hz)ppm 10) 13c-核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用二甲亞碾（39.5ppm) 測定，以下所示爲其13C -核磁共振光譜： 1 4.0(q)，17.7(q)，19.0(q)，22. l(t)，24.6(t)，27. l(d)，28.7(t )，28.7(t)，28.9(t)，29.0(t)，29.1(t)，3 1.3(t)，3 3.3(t)，36.3( q)，37.8(q)，3 8.8(t)，39.8(t).39.9(t)，40.0(t)，40.2(t)，4 1.4 (t)，56.6(t)，5 8.7(q)，60.2(q)，62.4(d)，66.4(d)，69.0(d)，69. 6(d)，70.0(d)，70.5(d)，72.5(d)，72.8(d)，76.7(d)，77.4(d)， 79.2(d)，82.0(d)，84.0(d)，87.2(d)，90.4(d)，101.2(d)，107· 0(d)，140.4(d)，150.2(5)，163.3(5)，169.0(5)，169.3(5)，17 0.2(5). 170.7(5),171.2(5), 171.8(5),1 73.5(5)ppm 11) 高速液體色層分析法： 管柱：CAPCELLPAK C18UG120,4.6 φ X 1 50mm (資生 堂股份有限公司製） 溶劑：含有0.2%三乙基胺-磷酸緩衝液，調節ρΗ3·3之 5 5 %乙腈水溶液 -110- 200414902 流速：1 .0ml/分鐘 檢出：紫外線吸收260nm 保持時間：6.5分鐘 4〇·—種具有下列物理化學性狀之化合物或其鹽， 1) 物質之性狀：無色粉末狀物質 2) 溶解性：可溶於甲醇、二甲亞楓，不溶於氯仿 3) 分子式：C54H85N5 02 3 4) 分子量：1171(以FAB質譜法測定） 5) 依高分解能FAB質譜法測定之精密質量，[M + H] +如下 列表示： 實測値：1 1 7 2.5 7 3 1 計算値：1 1 7 2.5 7 1 3 6) 紫外線吸收光譜： 於甲醇中測定紫外光吸收光譜，如下所示極大吸收表 示： 262nm(ε 11000) 7) 旋光度： 於甲醇中測定旋光度，如下列所示値表示： [a ]D29 : + 14.2 ° ( c0.2 ) 8) 紅外線吸收光譜： 以溴化鉀（KBr )錠劑法測定之紅外線吸收光譜以τ 列所示之極大吸收表示： 3368，2927，2856，1735,1707,1674,1 65 1，161 5,1466，1378 1 276,1 1 6 1,1 1 04,95 1 cm·1 -111- 200414902 9 ) 1Η -核磁共振光譜： 重甲醇中，內部標準使用重甲醇（4.7 8ppm)測定， 以下所示爲其iH-核磁共振光譜： 0.76(3H，t，J = 7.0Hz)，0.8 1(3H5d，J = 7.4Hz)，0.90(3H，d，J = 6. 4Hz)，1.2-1.3(1 8H，m)，1.37(lH，ni),1.51(2H，m)，1.68(lH, m)，2.1-2.2(4H，m)，2.2-2.4(5H,m)，2.42(3H，s),2.5-2.6(6 H，m)，2.85(lH，dd，J = 8.3，13.4Hz)，3.0(2H，br，d)，3.09(lH， dd，J = 4.0，13.4Hz)，3.22(lH，dd，J = 9.0,9.0Hz)，3.32(3H，s)， 3·34(3Η，s)，3.37(1 H，m)，3.49(1 H，dd，J = 2.3,3.3Hz)，3.8(1 H，br，d)，4.0(2H，m)，4.10(lH，dd，J = 6.0,6.4Hz)，4.2(2H，m)， 4·26(1 H，dd，J = 2.0,8 ·7Ηζ)，4.96( lH，dd，J = 3.3,9.0Hz)，5.1 4(1H，m)，5.2-5.4(1H，br m)，5.41 (lH，t，J = 4.9Hz)，5.94(1 H， t，J = 5.0Hz)，7.71(lH，d，J = 8.0Hz)ppm 10) 13c-核磁共振光譜： 重二甲亞碾中，內部標準使用重甲醇（49.0ppm )測 定，以下所示爲其13C -核磁共振光譜： 1 0· 1 (q)，1 4.5(q)，20· l(q)，23.8(t)，25.6( t)，26.3( t)，28.9(d)， 29.8(t)，30.3(t)，30.4(t)，30.5(t)，30.6(t)，3 0.7(t)，30.8(t), 3 3.9(t)，3 5.3(t)，37.0(q)，40.7(t)，40.8(t)541.2(t)，4 1.5(t)， 58.4(t)，59.7(q)，61.0(q)，62.6(d)，66.3(d)，68.8(d)，69.4(d )，69.7(d)，72.0(d)，72.9(d)，73.0(d)，74.8(d),76.2(d)，78.6 (d)，79.3(d)，84.2(d)，86.6(d)，87.1(d)，92.4(d)，103.3(d)，l 09.1(d)，144.3(d)，141.9(s)，164.4(s)，165.8(s)，170.1(s)，l 71.0(s),172.2(s)，173.6(s)，175.9(s)ppm •112· 200414902 11) 高速液體色層分析法： 目柱· CAPCELLPAK C18UG12O,4.60x 150mm (資生堂 股份有限公司製） 溶劑：含有0.2%三乙基胺-磷酸緩衝液，pH 3.3之55% 乙腈水溶液調節 流速：1 · 0 m 1 /分鐘 檢出：紫外線吸收260nm 保持時間：7.0分鐘 4 1 . 一種如申請專利範圍第1至4 〇項中任1項化合物之製造方 法’其特徵爲培養屬於鏈孢囊菌屬（Streptosp o r an gi um ) 之生產申請專利範圍第1至4 0項中任1項化合物之生產 菌’自培養物中收取申請專利範圍第1至4 〇項中任i項之 化合物。 42·如申請專利範圍第41項之製造方法，其中該培養係於含 脂肪酸之培養基中進行。 4 3 ·如申請專利範圍第4 2項之製造方法，其中該脂肪酸爲碳 數10至20之直鏈狀飽和脂肪酸。 44 ·如申請專利範圍第4 2項之製造方法，其中脂肪酸爲碳數 12至18之直鏈狀飽和脂肪酸。 4 5 ·如申請專利範圍第4 1至4 4項中任1項之製造方法，其中 屬於鏈孢囊菌屬（Streptosporangium)之生產申請專利 範圍第1至4 〇項中任1項之化合物之生產菌爲鏈孢囊菌 (Streptosporangium sp.) S AN K6 0 5 0 1 (F E RM B P - 7 9 8 4)。 46·—種生產申請專利範圍第1至40項中任丨項化合物之微生 200414902 物，其屬於鏈孢囊菌屬（Streptosporangium sp)。 47· —種鏈孢囊菌（Streptosporangium sp)SANK6〇501(FERM BP-7984)。 4 8 . —種製造申請專利範圍第2 5或3 6項化合物之方法，其係 將申請專利範圍第1至1 9、2 9至3 5及3 8至3 9中任1項之化 合物水解或還原。 49· 一種製造申請專利範圍第26或3 7項化合物之方法，其係 將申請專利範圍第1至1 9、2 9至3 5及3 8至3 9中任1項之化 合物水解或還原。 5 〇·—種製造申請專利範圍第27項化合物之方法，其係將申 請專利範圍第2〇至24及4 0項中任1項之化合物水解或還 原。 5 1 · —種製造申請專利範圍第2 8項化合物之方法，其係將申 請專利範圍第2 〇至2 4及4 0項中任1項之化合物水解或還 原。 5 2 · —種醫樂組成物，其含有申請專利範圍第丨至4 〇項中任工 項之化合物或其藥理學上容許鹽爲有效成分。 5 3 ·如申請專利範圍第5 3項之醫藥組成物，其爲一種抗菌 劑。 54·—種細菌感染症之治療方法，其包含將有效量之申請專 利範圍第1至40項中任丨項之化合物或其藥理學上容許鹽 投與病患。 5 5·—種如申g靑專利範圍第2至4〇項中任i項之化合物或其藥 理學上容許鹽之用途，其用於製造抗菌劑。