TW200804364A - New compounds - Google Patents

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200804364 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於通式（1)之新穎2,4-二胺基喷0定

其中基團R1至R6、X及Y皆具有申請專利範圍及本說明書 中給出之含義，關於其同分異構體，關於用來製備該等嘧 啶之方法及其作為醫藥組合物之用途。 【先前技術】 腫瘤細胞完全或部分地不受身體之調節及控制並且特徵 為生長不受控制。此一方面係由於喪失控制蛋白，例如 (舉例而言）Rb、P16、p21&p53，且另外係由於細胞週期 之所謂加速劑即細胞週期調節蛋白依賴性激酶之活化。 模型生物體（例如稷酒裂殖酵母⑽ pombe、，黑腹果蠅（Dr〇s〇phila melan〇gas⑽）氟奴讀 (B灿/aevb))中之研究以及人類細胞中之研究已表明 由G2期轉變至核分裂係由CDK1/細胞週期調節蛋白B激酶 調節（Nurse 1990, 344: 503-508)。該激酶（其亦稱為 "促核分裂因子"（MPF))可磷酸化且從而調節複數種蛋白， 118131.doc 200804364 例如（舉例而言）核纖層、驅動蛋白樣馬達蛋白、凝縮蛋白 (condensin)及高爾基體基質蛋白，該等蛋白在核外殼分解 中、在中心體分離、有絲分裂紡錘體之結構、染色體縮合 及高爾基體分解中起著重要的作用（Nigg. E. 2001，及⑼ Mo/ Ce// 5b/· 2(1): 21-32)。含有溫度-敏感 CDK-1 激酶突 變體之鼠類細胞系在溫度升高後於CDK-1激酶中表現出快 速裂解且隨後停留在G2/M期（TlTng等人，1990，Ce//· 63(2): 313-24)。用CDK1/細胞週期調節蛋白B之抑制劑（例 如，舉例而言丁内酯）處理人類腫瘤細胞可使其停留在 G2/M期且隨後細胞死亡（Nishio等人，1996，训cer 細· 16(6B): 3387-95) 〇

此外，吾人亦已闡述蛋白激酶Aurora B在進入核分裂期 間具有至關重要的作用。Aurora B構酸化Seri0上之組蛋白 H3且從而引發染色體縮合（Hsu等人，2000，Ce// 102: 279-91)。然而，停留在G2/M期之特定細胞週期亦（例如）藉由 抑制專一性磷酸酶（例如，舉例而言Cdc25C)而引發 (Russell 及 Nurse 1986，Ce" 45:145-53)。具有缺陷性 Cdc25 基因之酵母停留在G2期，而Cdc25之過度表現導致過早進 入核分裂期（Russell 及 Nurse，1987，Ce// 49:559-67)。另 外，停留在G2/M期亦可由抑制專一性馬達蛋白即所謂的 驅動蛋白（例如，舉例而言Eg5)引發（Mayer等人，1999, 286: 971-4)，或由微管穩定或去穩定試劑（例如， 秋水仙素、紫杉醇、表鬼桕毒素、長春花鹼、長春新鹼） 而引發（Schiff及 Horwitz 1980，TVai/ 5W U S A 118131.doc 200804364 77:1561-5)。 除細胞週期調節蛋白依賴性激酶及Aurora激酶外，所謂 的polo樣激酶（PLK)即一小族絲胺酸/蘇胺酸激酶在真核細 胞週期調節中亦扮演著重要的角色。迄今，該等polo樣激 酶PLK-1、PLK-2、PLK-3及PLK-4已闡述於文獻中。具體 而言已發現PLK-1在核分裂期調節中起著關鍵作用。PLK-1係中心體成熟、磷：酸酶Cdc25C活化以及Anaphase Promoting Complex活化的主要原因（Glover 等人，1998, Dev· 12:3777-87 ; Qian等人，2001，Mo/ CW/· 12:1791-9)。PLK-1抗體之注射使得未轉化細胞中的G2停 滞，而腫瘤細胞在核分裂期期間停滯（Lane及Nigg 1996， Cell Biol 135:1701-13)。PLK-1之過度表現已在各類腫瘤 中得到證實，例如非小細胞肺癌瘤、扁平上皮癌瘤、乳癌 瘤及結腸直腸癌瘤（Wolf等人，1997，Οπαγ⑽14:543-549 ; Knecht等人，1999, Cancer Res. 59:2794-2797 ； Wolf 等人，2000，iVaci· 196:753-759 ; Takahashi等 人，2003，C⑽cer *SW· 94:148-52)。因此，該類蛋白亦為 增生疾病之治療性幹預提供令人感興趣之突破點（Liu及 Erikson 2003, /Voc dead 5W ί/ S / 100:5789-5794) 〇 許多類型腫瘤之抗藥性需要研究新藥來抗擊腫瘤。因 此，本發明之目的係指明可用來預防及/或治療特徵為過 度或異常細胞增殖之疾病之新穎活性物質。 【發明内容】

現在吾人已出乎意料地發現，其中基團R1至R6、X及Y 118131.doc 200804364 皆如下文所定義之通式⑴化合物用作專一性細胞週 之抑制劑。因此 ^ 口此本發明化合物可用來（例如）治療鱼 性細胞週:Sj、、红給 〃 4 /激酶之活性有關且特徵為過度或異常細胞择 之疾病。 曰腹 本發明係關於通式（1)化合物

x 表示氧或氮，及 Y 表示_ch2或c = 0，及 R1及R1'各自相互獨立地表示氫或視情況選自下列之中之 單取代或多取代基團：Cl_5_烷基、C36_環烷基、芳基、雜 環基及雜芳基，其中該（等）取代基可相同或不同且選自下 列之中：鹵素、-ORa、-C(=〇)Ra、_c(=〇)〇Ra、-c(=〇)nw 、-NRaRa、-NRaC(=0)Ra、_NRac(=〇)〇Ra、-NRac(=〇)NRaRa 、-NRaS02Ra、-N=CRaRa、-SRa、-SORa、-S〇2Ra、-S02NRaRa 、-NRaS02NRaRa、-0S02NRaRa及擬 _ 素， 或同一碳原子上兩個R1’基團視情況可與它們與之連接之碳 原子一起形成C3·7環烷基環，或視情況Ri可與Ri·基團一起 118131.doc -9- 200804364 形成飽和或部分飽和的3至6員烷基橋鍵，其視情況可包含 1至2個雜原子，及 3 R2 表示視情況經單取代或多取代之雜環基，其中該 (等）取代基可相同或不同且選自Cl.5_烷基、C2_5_烯基、X Cy快基、烧基-C0·3-燒基之中，及 r3 表示氫或Ci小烷基，或 R2與R3—起形成視情況經單取代或多取代之雜環基環，該 雜環基環視情況可包含1至2個另外雜原子，其中該（等）取 代基可相同或不同且選自Cl·5 —烷基、Gy烯基、Gy炔基 及C：3·6-環烷基-Co·3·烷基之中，或選自下列之中之適宜取 代基·鹵素、-〇Ra、-C(=0)Ra、-C(=0)0Ra、-C(=〇)NRaRa、 -NRaRa ^ -NRaC( = 0)Ra . -NRaC(=0)ORa > -NRaC(=〇)NRaRa 、-NRaS02Ra、-N=CRaRa、-SRa、-SORa、-S02Ra、-S02NRaRa 、-NRaS02NRaRa、-〇S〇2NRaRa及擬鹵素，及 R4 各自相互獨立地表示選自下列之中之基團：鹵素、 N02、_〇Ra、-C(=0)Ra、_c(=〇)〇Ra、-C(=0)NRaRa、-NRaRa 、-NRaCORa、-NRaC(=0)〇Ra、_NRaC(=0)NRaRa、_NRaC(=0)〇NRaRa 、-NRaS02Ra、-N=CRaRa、-SRa、-SORa、-S02Ra、-S02NRaRa 、-NRaS02NRaRa、-〇S〇2NRaRa及擬齒素；及 R 表示氫、鹵素、Ci_3-烧基、C2-3-稀基、C2-3-快基、 鹵素-Cn烧基、-〇Ra或擬_素，及 R6 各自相互獨立地表示選自鹵素、Cu-烷基、-〇Ra及 擬鹵素之中之基團，及

Ra 各自相互獨立地表示氫或選自下列之中之基團：視 118131.doc -10- 200804364 情況經取代之Cl·8·烷基、Cw烯基、c2_8-炔基、c3_1G-環 烷基、芳基、雜環基及雜芳基，而該（等）取代基可相同或 不同且選自鹵素、-NH2、_〇H及擬鹵素之中；及 m 表示〇、1或2 ;及 n 各自相互獨立地表示〇、1或2 視情況呈以下形式：互變異構體、外消旋異構體、對映 異構體、非對映異構體及其混合物，以及視情況呈其藥理 上可接受之鹽，但須下列除外： 2-(2-甲氧基-4-六氫吼嗪β1_基-苯基胺基）_4_(3,3_二甲基_5_ 氧代-2,3,4,5-苯并[/][l54]氧氮呼_6_基胺基_5_三氟甲基_嘧 咬， 2-(2_甲氧基_4_六氫η比嗪小基_苯基胺基）—4_(⑻_心氧 代-2,3，10，l〇a-四氫-丨好,4丑_9_氧雜_3卜氮雜_苯并⑺甘菊 環-5-基胺基-5-三氟甲基_嘴咬， 2-[4_(4-乙基-六氫π比嗪_丨_基）_2_甲氧基__苯基胺基]_4_((s)_ 4-氧代-2,3，10，10a-四氫丑,4丑_…氧雜_3a氮雜-苯并^甘 韌壞^-基胺基^-三氟甲基-喊咬， 2-[4-(4-甲基-六氫吨嗪甲氧基-苯基胺基]_4_((s)_ 4-氧代_2,3，10，10a-四氫」好，477_9_氧雜_3a_氮雜苯并w甘 韌環-5-基胺基-5-三I甲基密咬， 3,3-二甲基-6-{2·[4-(4-甲基_六氫〇比嗪-^基）·苯基胺基卜5· 二氟甲基-嘧啶-4-基胺基卜3,4-二氫苯并[/][1，4]氧氮 呼-5-姻， 6-{2_[4-(4·乙基-六氫η比嗪4_基）_苯基胺基]三氟曱基_嘧 118131.doc -11 - 200804364 唆-4-基胺基}-3,3-二甲基-3,4-二氫-2/ί-苯并[/][1，4]氧氮 呼-5 -酮， 3,3-二曱基-6-{2-[4-(4-丙-2-快基-六鼠11比17秦-1-基）-苯基胺 基]-5-三氟曱基-喊唆-4 -基胺基}-3,4-二氫-2/7-苯并[/] [ 1，4] 氧氮呼-5 - ί同， 6-{2-[4-(4·異丙基-六氮π比嗓-1-基）-苯基胺基]-5-三氟曱基· ‘ 嘧啶-4·基胺基}-3,3-二甲基·3,4-二氫-2/ί-苯并[/][1，4]氧氮 呼-5 -酮， (S)-3 -甲基-6-[2-(4_六氫°比°秦-1-基-苯基胺基）-5-三氟甲基_ 嘧啶-4-基胺基]-3,4-二氫-27/-苯并[/][1，4]氧氮呼-5-酮， (S)-3-甲基-6-{2-[4-(4-甲基-六氫σ比唤-1_基）_苯基胺基卜5_ 三氟甲基-癌σ定-4 -基胺基}-3,4-二鼠-2/7-苯并[y][i，4]氧氮 呼-5 -酮， (S)-6-{2-[4-(4-異丙基-六氮ϋ比嗓-1-基）-苯基胺基]_5_三I甲 基- η密σ定-4-基胺基}-3·甲基- 3,4·二氫-2i/-苯并[yj[i，4]氧氮 呼-5 -酮， (S)-3_甲基-6-{2-[4-(4-丙-2 -快基-六鐵^比嗅-；!-基）_苯基胺 基]-5-三氟甲基-。密唆-4-基胺基}-3,4-二氫-2汉-苯并[ 1，4 ] ’ 氧氮呼-5-嗣， (S)-3·乙基- 6_[2-(4 -六氮啦17秦-1-基-苯基胺基）_5_三氟甲基· 嘧啶-4·基胺基]-3,4-二氫-2丑-苯并[/][1，4]氧氮呼-5-酮， (8)-6-[2-(4-六氫°比唤-1-基-苯基胺基）-5-三氟甲基定_心 基胺基]-3-丙基-3,4-二氫-2/ί-苯并氧氮呼_5_酮， (S)-6_{2_[4-(4 -丙-2_快基-六氮11比唤-1-基）-苯基胺基]·%二 118131.doc -12- 200804364 氟甲基-嘧啶-4-基胺基}-1，2,3,11 a-四氫-10丑-苯并[e]吡咯並 [1，2-α][1，4]二氮呼-5，11-二酮， (S)-6-{2-[4-(4-乙基-六氫吼嗪-卜基）-苯基胺基]-5-三氟曱 基-嘧啶-4-基胺基}-l，2,3，lla-四氫-10//-苯并Μ吡咯並 [1，2-α][1，4]二氮呼-5，11-二酮， (S)-6-{2-[4-(4-異丁基-六氫吼嗪-1-基）-苯基胺基]-5-三氟甲 基-嘧啶-4-基胺基卜l，2,3，lla_四氫-1〇//_苯并[e]吡咯並 [1，2-α][1，4]二氮呼·5，11-二酮， (S)-6-{2-[4-(4-曱基-六氮σ比唤-1-基）-苯基胺基]-5-二氧甲 基·嘧啶-4-基胺基}-l，2,3，lla-四氫-10//•苯并Μ吡咯並 [1，2-α][1，4]二氮呼-5，11-二酮， 6-{2-[4-(4_乙基-六氫处嗪-1-基）-苯基胺基]-5-三氟甲基-嘧 啶·4·基胺基}-3,3-二甲基-3,4_二氫-Ι/f-苯并M[l，4]二氮 呼-2,5-二酮， 3.3- 二甲基-6-{2-[4-(4-甲基-六鼠11比11秦-1-基）-苯基胺基]-5-三氟甲基-嘧啶-4-基胺基}-3,4-二氫-177-苯并〇][1，4]二氮 呼-2,5-二酉同， 6-{2-[4-(4 -異丙基-六氣ϋ比0秦-1-基）-苯基胺基]-5-三氟甲基_ 。密。定-4 -基胺基}-3,3-二甲基- 3,4-二氫-17/-苯并[e][l，4]二氮 呼-2,5-二酮， 3.3- 二甲基-6-{2-[4-(4-丙-2-快基-六氫〇比唤-1-基）-苯基胺 基]_5_三I曱基-。密唆-4-基胺基}-3,4-二氫-1 苯并[e][l，4] 二氮呼-2,5-二酮， (S)-6-{2-[4-(4-異丙基-六氫u比嘻-1-基）-苯基胺基]-5-三氟曱 118131.doc -13- 200804364 基-嘴咬基胺基}_l，2,3，lla_四氫- ίο//-苯并吡咯並 [1，2-α][1，4]二氮呼 _5，u_ 二酮， 異丙基_六氫^比嗪-丨-基卜苯基胺基]_5_三氟甲 基-嘧啶_4_基胺基卜3-甲基-3,4-二氫_1仏苯并二氮 呼-2,5-二 _， (S)-3-甲基-6_{2·[4_(‘甲基-六氫0比嗪-卜基 >苯基胺基]_5_ 三氟曱基-嘧啶_4_基胺基}-3,4-二氫·17/_苯并[β][1，4]二氮 呼-2,5-二 _， (S)-3-曱基-6_{2_[4-(4_丙-2-炔基-六氫π比嗪-^基兴苯基胺 基]_5_三氟曱基-嘧啶-4_基胺基卜3,4-二氫苯并 二氮呼-2,5-二酮， (S)-6-{2-[4-(4-乙基-六氫η比嗪-丨—基卜苯基胺基]_5•三氟甲 基选唆-4 -基胺基}-3 -甲基-3,4-二氫-Ι/f-苯并[e][l，4]二氮 呼-2,5-二酮及 {(S)-2,5-二氧代_6-[2-(4-六氫吼嗪-1-基-苯基胺基）-5·三氟 甲基-嘧啶-4-基胺基]-2,3,4,5-四氫-1//-苯并[4[1，4]二氮 呼-3-基卜乙酸甲酯。 在本發明一態樣中係關於通式（1)化合物，其中R5表示 鹵素或-CF3。 在本發明另一態樣中係關於通式（1)化合物，其中 X 表不氧及 y 表示-ch2-。 在本發明另一態樣中係關於通式（1)化合物，其中 X 表示氮及 118131.doc •14- 200804364 γ 表示〇〇。 (Α)與R1’有關之態樣 (A1)在本發明一態樣中係關於通式（1)化合物，其中Ri·表 不Ci_5-烧基且m=l。 (A2)在本發明一態樣中係關於通式（1)化合物，其中Ri·表 示Ci_5_烧基且^^之。 _ (A3)在本發明一態樣中係關於通式（1)化合物，其中兩個 R1’一起形成環烷基。 (A4)在本發明另一態樣中係關於通式（1)化合物，其中Ri與 W形成環戊基環。 (B)與R2及R3有關之態樣 (B1)在本發明一態樣中係關於通式（1)化合物，其中R2表示 視情況經單取代之六氫吡啶基。 (B2)在本發明另一態樣中係關於通式（！）化合物，其中r2表 示在氮上經取代之六氫吡啶基。 (B3)在本發明另一態樣中係關於通式（1)化合物，其中r2表 示在氮上經甲基、乙基或環丙基甲基取代之六氫吼咬基。 (B4)在本發明再一態樣中係關於通式（1)化合物，其中R2與 R3—起形成視情況經單取代或多取代之六氫吡嗪基。 (B5)在本發明另一態樣中係關於通式（1)化合物，其中&2與 R3—起表示在氮上經取代之六氫吡嗪基。 (B6)在本發明另一態樣中係關於通式（1)化合物，其中…及 R3-起表示在氮上經甲基、乙基、異丙基或環丙基甲基取 代之六氫吡嗪基。 118131.doc -15- 200804364 (c)與X及Y有關之態樣 (Cl)在本發明一態樣中係關於通式（1)化合物，其中X表示 氧且Y表示-CH2-。 (C2)在本發明另一態樣中係關於通式（丨）化合物，其中X表 示氮且Y表示c = o。 若需要’所有上述態樣即對於Rl’之（Al)至（A4)、對於R2 及R3之（B1)至（B6)及對於χ及γ之（C1)及（C2)可相互組合。 下表列不式（1)新穎化合物之各個態樣的較佳組合： 實施例 ------- R1· R2 及 R3 X及Y Μ A1 B1 Cl 1-2 A1 B2 Cl 1-3 A1 B3 Cl 1-4 A1 B4 Cl 1-5 A1 B5 Cl 1-6 A1 B6 Cl 1_7 A2 B4 Cl 1_ 8 A2 B5 Cl 1-9 A2 B6 Cl I-1 0 A3 B4 C2 Ml A4 B4 Cl M2 A4 B5 Cl M3 A4 B6 Cl 1-14 A4 B4 C2 M5 A4 B5 C2 1-16 A4 B6 C2 118131.doc -16- 200804364 在本發明另一態樣中係關於通式（1)化合物或其藥理上 接艾之鹽-作為醫藥組合物。 在本發明再—態樣中係關於通式（1)化合物或其藥理上 可接X之鹽_用來製備具有抗增殖活性之醫藥組合物。 在本發明另一態樣中係關於通式（1)化合物或其藥理上 可接文之鹽-用來製備具有抗增殖活性及選擇性激酶抑制 活性機理之醫藥組合物。 在本發明另一態樣中係關於通式1化合物用於製備用來 /σ療及/或預防癌症、感染、炎症及自身免疫疾病之醫藥 組合物之用途。 在本發明另一態樣中係關於包含視情況與習用賦形劑及/ 或載劑組合之作為活性物質之通式（1)之一種或多種化合物 或其藥理上可接受之鹽之藥物製劑。 在本發明另一態樣中係關於一種藥物製劑，其包含：通 式（1)化合物，視情況呈以下形式：互變異構體、外消旋異 構體、對映異構體、非對映異構體及其混合物，以及視情 況其藥理上可接受之酸加成鹽；及至少一其他活性抑制細 胞生長或細胞毒性活性物質。 定義 本文所用下列定義皆適用，除非另有說明。 每一情況下，烷基取代基意指飽和、不飽和直鏈或支鏈 脂肪烴基團（烷基基團）且該定義包括飽和烷基基團及不飽 和烯基及炔基基團二者。每一情況下，烯基取代基係具有 至少一個雙鍵之直鏈或支鏈不飽和烷基基團。每一情況 118131.doc -17- 200804364 下，炔基取代基意指具有至少一個三鍵之直鏈或支鏈不飽 和燒基基團。 雜烧基表示包含1至3個雜原子之直鏈或支鏈脂肪烴鏈， 而該雜烧基鏈中每個可用碳原子及雜原子各自皆可視情況 相互獨立地經取代且該等雜原子相互獨立地選自由下列組 成之群：Ο、N、P、P〇、p〇2、S、S〇及 s〇2(例如，二曱 基胺基甲基、二甲基胺基乙基、二甲基胺基丙基、二乙基 胺基甲基、二乙基胺基乙基、二乙基胺基丙基、2_二異丙 基胺基乙基、雙_2_甲氧基乙基胺基、[2_(二甲基胺基_乙 基）-乙基-胺基]•甲基、3-[2-(二甲基胺基_乙基乙基_胺 基]-丙基、羥甲基、2-羥乙基、3-羥丙基、曱氧基、乙氧 基、丙氧基、甲氧基曱基、2-甲氧基乙基）。 鹵素係指氟、氯、溴及/或碘原子。 鹵代烷基係指其中一個或多個氫原子由_素原子取代之 烷基基團。齒代烷基包括飽和烷基基團及不飽和烯基及炔 基基團二者，例如（舉例而言）-CF3 ' -CHF2、-CH2F、 、-CHFCF3、-CH2CF3、-CF2CH3、-CHFCH3、-CF2CF2CF3 CF2CH2CH3 ^ -CF-CF2 ' -CC1=CH2 λ -CBr=CH2 x -CJ=CH2 、《-CF3、-CHFCH2CH3及-CHFCH2CF3。 擬鹵素意指下列基團：-OCN、-SCN、-CF3及_CN。 %烷基意指單環狀或多環狀環，其中該環系統可係飽和 環但亦可不飽和、非芳香族環或螺化合物，該環視情況亦 可包含雙鍵，例如（舉例而言）環丙基、環丙烯基、環丁 基、環丁烯基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、 118131.doc •18- 200804364 %庚烧基、ί衣庚稀基、降旋烧基、降获稀基、二氫節基、 金鋼烷基、螺庚烷基及螺[4.2]庚烷基。 環烷基烷基包括其中鍵結至碳原子之氫原子由環烧基取 代之非環狀烷基。 芳基係關於具有6-12個碳原子之單環狀或二環狀環，例 如（舉例而言）苯基及萘基。 芳基烧基包括其中鍵結至碳原子之氫原子由芳基取代之 非環狀烷基。 雜芳基意指包含一個或多個可相同或不同的雜原子（例 如，舉例而言，氮、硫或氧原子）替代一個或多個碳原子 之單環狀或多環狀環。實例包括呋喃基、噻吩基、σ比咯 基、噁唑基、噻唑基、異噁唑基、異噻唑基、吡唑基、咪 嗤基、三唑基、四唑基、噁二唑基、噻二唑基、吡啶基、 鳴咬基、嗒嗪基、吼嗪基及三嗪基。二環雜芳基之實例係 °引σ木基、異叫丨°朵基、苯并σ夫喃基、苯并σ塞吩基、苯并禮0坐 基、苯并噻唑基、苯并異噁唑基、苯并異噻唑基、苯并咪 唾基、吲唑基、異喹啉基、喹啉基、喹噁啉基、啐啉基、 吹嗓基、喹唑啉基及苯并三嗪基、吲嗪基、噁唑并吡啶 基、咪唾并u比唆基、萘σ定基、吲哚琳基、異色滿基、色滿 基、四氫異喹啉基、異吲哚啉基、異苯并四氫呋喃基、異 本并四氫嗟吩基、異笨并嗟吩基、苯并3惡吐基、0比咬并吼 啶基、苯并四氫呋喃基、苯并四氫噻吩基、嘌呤基、苯并 間二氧環戊烯基、三嗪基、吩噁嗪基、吩噻唤基、喋啶 基、苯并噻唑基、咪唑并吼啶基、咪唑并噻唑基、二氫苯 118131.doc -19- 200804364 并異噁嗪基、苯并異噁嗪基、苯并噁嗪基、二氫苯并異噻 嗓基、苯并σ比喃基、苯并σ塞喃基、香豆素基、異香豆素 基、色滿基、色滿酮基、°比咬基氧化物、四氫喧琳 基、二氫喹淋基、二氫喹琳酮基、二氫異喹琳酮基、二氫 香豆素基、二氫異香豆素基、異吲哚啉酮基、苯并二噁烷 基、苯并噁唑啉酮基、吡咯基氧化物、嘧啶基-iV-氧化 物、塔唤基氧化物、吼嗓基氧化物、喧琳基-Λ^氧化 物、吲哚基-沁氧化物、吲哚啉基氧化物、異喹啉基-沁 氧化物、喹唑琳基氧化物、喹噁淋基氧化物、呔唤 基I-氧化物、咪唑基—TV-氧化物、異噁唑基氧化物、噁 唾基-iV-氧化物、噻唑基氧化物、吲嗪基氧化物、吲 唾基氧化物、苯并噻唑基氧化物、苯并咪唑基^氧 化物、吡咯基-I氧化物、噁二唑基氧化物、噻二唑基-氧化物、三唑基I-氧化物、四唑基-沁氧化物、苯并噻 喃基氧化物及苯并噻喃基心二氧化物。 雜芳基烧基涵蓋其中鍵結至碳原子之氫原子由雜芳基取 代之非環狀烷基。 雜環基係關於包括3_12個碳原子之飽和或不飽和、非芳 香族單環狀、多環狀或橋接多環狀環或螺環化合物，彼等 帶有雜原子（例如氮、氧或硫）替代一個或多個碳原子。此 專雜環基之實例係四氫吱喃基、α比洛σ定基、。比洛琳基、口米 坐疋基、味唾琳基、吨唾唆基、°比σ坐琳基、六氫11比唆基、 氣比σ秦基、,η朵淋基、異叫丨u朵琳基、嗎淋基、硫嗎琳 基、高嗎琳基、高六氫σ比啶基、高六氫吡嗪基、高硫嗎啉 H8131.doc 200804364 基、硫嗎啉基-义氧化物、硫嗎啉基二氧化物、四氫 口比喃基、四氫噻吩基、高硫嗎啉基尽二氧化物、噁唑啶 酮基、二氫吡唑基、二氫吡咯基、二氫吡嗪基、二氫吡啶 基、二氫嘧啶基、二氫呋喃基、二氫吡喃基、四氫噻吩 基氧化物、四氫噻吩基二氧化物、高硫嗎啉基_义 氧化物、2-氧雜-5_氮雜二環[2.2.1]庚烷、8-氧雜-3-氮雜_ 二環[3.2.1]辛烷、3,8_ 二氮雜 _ 二環[3·2.1]辛烷、2,5-二氮 雜-二環[2.2.1]庚烷、3,8_ 二氮雜 _ 二環[3.2.1]辛烷、3,9-二 氮雜-二環[4·2· 1]壬烷及2,6-二氮雜-二環[3.2_2]壬烷。 雜環烧基烧基係關於其中鍵結至碳原子之氫原子由雜環 烷基取代之非環狀烷基。 【實施方式】 本發明化合物之製備 本發明化合物可根據下文中所述合成Α或Β之方法製 備，其中通式（I至VI)之取代基具有上文所述之含義。用作 起始材料之化合物某些情況下可由文獻得知或由自該文獻 得知之方法獲得。該等方法應理解為本發明之解釋，而非 將其限定於其内容。

方法A 步驟1A 中間體化合物III係藉由在雜芳香族系統I中由親核劑11取 代離去基團LG(例如鹵素、SCN或甲氧基，較佳氣）而製 備。

方案1A 118131.doc -21- 200804364

2Λα;χχ:

III 使1當量化合物I及1至1.5當量化合物II在溶劑（例如， 1,4-一氧雜環己烷、四氫呋喃、#，，二甲基甲醯胺或况， 二甲基乙酿胺）中攪拌。在15至25°C之溫度下，添加2至2.5 s里驗例如碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸铯、乙基二 丙胺或_乙胺。使該反應混合物在1 5至2 5。〇之溫度下授 拌12至72小時。然後蒸餾掉溶劑且使殘餘物與用無機酸 (例如氫氯酸或硫酸）調節至小於4之酸性pH之水混合。用 有機办劑（例如，舉例而言，乙鱗、乙酸乙醋或二氯甲烧） 提取4混合物2次或3次。使經合併有機提取物乾燥並基餵 掉溶劑。藉由層析法純化殘餘物。

步驟2A 敢終化合物V係藉由在雜关巷故多

/方香無系統III中由親核劑^取

代離去基團LG(例如鹵素、sckt -¾田β甘X CN或甲虱基，較佳氯）而製 備。 方案2Α

使1 田里化口物111與1至3當量化合物IV在溶劑(例如 118131.doc -22- 200804364 i，4_一氧雜環己烷' 二甲基甲醯胺、二甲基乙醯 私或^^曱基比咯啶酮）中攪拌。在15至40。〇之溫度下， 添加1至2當量無機酸，例如硫酸或氫氣酸。使該反應混合 物在2〇至l〇0°C之溫度下攪拌12至72小時。隨後蒸餾掉溶 劑並藉由層析法純化殘餘物。

方法B

步驟1B

中間體化合物VI係藉由在雜芳香族系統工中由親核劑IV 中取代離去基團LG(例如鹵素、SCN4甲氧基，較佳氯）而 製備。

方案1B

使1當量化合物_至3當量驗（例如，三乙胺或乙基二 異丙胺）在溶劑（例如，M_二氧雜環己烷、四氫呋喃、 况尽一甲基甲醯胺或％ 二甲基乙醯胺）中攪拌。在至 〇°C之溫度下，添加0.8M.5當量化合物IV。使該反應混合 物在15至25°C之溫度下再料12至72小時。然後蒸顧掉溶 劑並藉由層析法純化殘餘物。

步驟2B 最終化合物V係藉由在雜 取代離去基團LG(例如鹵素 芳香族系統VI中由親核劑II中 SCN或甲氧基，較佳氯)而製 118131.doc -23- 200804364

方案2B + R2〆

、x

I

A 使1當ϊ化合物VI與1至1·5當量化合物H在溶劑（例如， 1，4-二氧雜環己烷、 从#-二甲基甲醯胺、愚沁二曱基乙醯 月女或’甲基_2_吡咯啶酮）中攪拌。在15至4〇。〇之溫度下， 添加1至2當量酸，例如硫酸或氫氣酸。使該反應混合物在 20至100 C之溫度下再攪拌12至72小時。然後蒸餾掉溶劑 並藉由層析法純化殘餘物。 方法1 (S)_6-胺基乙基_3,4_二氫_2丑_苯并m[1，4]氧氮呼酮

a) 2-胺基-6-(2-(S)_胺基丁氧基）_苄腈 使5.01克（51.3毫莫耳）（8)-2-胺基-1-丁醇溶於3〇毫升1，4_ 二氧雜環己烷中，與2·1〇克（52·5毫莫耳）氫化鈉組合並在 環境溫度下攪拌30分鐘。向該反應混合物中添加5〇〇克 (3 6.7毫莫耳）2-胺基-6-氟苄腈並使該混合物在5〇〇c下攪拌 24小時。隨後在真空中去除溶劑並藉由層析法純化粗產 118131.doc -24- 200804364 物。所使用載劑材料係矽膠且洗脫液係已向其中添加90〇/〇 甲醇與1 0%氨水飽和溶液之5%混合物的二氯甲燒。 產率·· 5.55克 MS(ESI): 206 (M+H)+ b) 2-胺基-6-(2-(S)-胺基丁氧基苯甲酸 使5.53克（27.05¾莫耳）（S )-2-胺基- 6-(1-胺基甲基丙氧 基）-苄腈溶於70毫升20%乙醇KOH中並在l〇〇°C下授拌5 天。然後在真空中去除溶劑並藉由層析法純化粗產物。所 使用載劑材料係矽膠且洗脫液係已向其中添加9〇0/〇甲醇與 10%氨水飽和溶液之12%混合物的二氯甲烧。 產率： 4.76克 MS(ESI): 225(M+H)+ c) (S)-6-胺基_3_乙基-3,4-二氫-；2Η-苯并[f][i，4]氧氮呼-5-酮 使4.76克（21.23毫莫耳）（S)_2_胺基_6-(1_胺基甲基-丙氧 基笨甲酸溶於6〇〇毫升四氫吱喃中，與125克（637毫莫 耳）1-(3-一甲基-胺基丙基-乙基碳化二亞胺氫氯酸鹽及 11.11毫升（63.7毫莫耳）二異丙基_乙胺組合並在5〇。〇下攪拌 3小時。隨後在真空中去除溶劑並藉由層析法純化粗產 物。所使用載劑材料係石夕膠且洗脫液係已向其中添加 曱醇與10%氨水飽和溶液之4%混合物的二氯曱烷。 產率： 1.839克 MS(ESI): 207 (M+H)+ 以下化合物係由類似於該方法之方法製備。這裏， 1-胺基-2-丁醇係由相應的胺基醇取代。 118131.doc -25- 200804364

方法2 (R)-6_胺基-11a-甲基- i，2,3，lla-四氫-10H-苯并[e]吡洛並 [l，2-a][l，4]二氮呼-5，11·二酮

a) (R)-1-(2-胺基-6-硝基-苯甲醯基）_2-甲基-吼咯啶-2_甲酸 甲酯 使1.18克（6.5¾莫耳）2-胺基-6-硝基苯甲酸、0.83克（4 6 毫莫耳）(R)-2-甲基-吡咯啶-2-甲酯氫氣酸鹽、4 〇5毫升 (23.2耄莫耳）ΛΓ-乙基二異丙胺與2·5毫升四氫吱喃組合。向 该反應混合物中添加1.71克（5 · 1毫莫耳）四ι侧酸〇_(苯并二 唾-1-基）四甲基脲鏽且將該混合物加熱至5代並 持續12小時。隨後在真空中去除溶劑並藉由層析法純化粗 產物。所使用載劑材料係矽膠且所使用洗脫液係由環己 烷：乙酸乙酯（50:50)組成之混合物。 產率： 930毫克 MS(ESI): 308 (M+H)+ b) (R)-1-(2-胺基-6-硝基-苯曱醯基）-2-甲基-吡咯咬_2_甲酸 118131.doc -26- 200804364 使930毫克（3.02毫莫耳）(R)小(2_胺基_6_石肖基_苯甲醯 基）-2-甲基-吡咯啶_2_甲酸甲酯溶於3毫升2〇% k〇h之乙醇 ㈣中並在5代下攪拌1>5小時。隨後在真空中去除溶劑並 藉由層析法純化粗產物。所使用載劑材料係矽膠且所使用 洗脫液係已添加15%含90%甲醇與1〇%飽和氨水溶液之混 合物的二氣甲烷。 產率： 557毫克 MS(ESI): 294 (M+H)+ )(R) 1 (2,6 一月女基本甲酿基）-2 -甲基- π比洛咬甲酸 使366毫克（1.25毫莫耳）(R)_ 1-(2-胺基_6_硝基-苯甲醯 基）-2-甲基·咕咯啶_2_甲酸溶於5〇毫升曱醇中並使其與毫 克碳/鈀（10% Pd)組合。使該反應混合物在5巴氫氣壓力及 25°C下氫化9小時。隨後過濾掉觸媒，在真空中去除溶劑 並藉由層析法純化粗產物。所使用載劑材料係cl8_Rp_矽 膠並以起點由95%水及5%乙腈組成且終點由5%水及95%乙 腈組成之梯度溶離。 產率： 76毫克 MS(ESI): 264 (M+H)+ d) (R)-6-胺基-11a-曱基-l，2,3，lla-四氫-10H-苯并[e]吡咯並 [1，24][1，4]二氮呼-5，11-二酮 使76¾克（0.29毫莫耳）2(R)-l-(2,6_二胺基苯甲醯基）_2_ 曱基-°比洛咬-2-曱酸溶於2毫升四氫咬喃中，與143毫克 (0.9¾莫耳）1-(3-二甲基-胺基丙基乙基碳化二亞胺氫氯 酸鹽及103微升（0.6毫莫耳）二異丙基_乙胺組合並在5〇。〇下 118131.doc -27- 200804364 攪拌1 7小¥。隨後在真空中去除溶劑並藉由層析法純化粗 產物。所使用載劑材料係矽膠且所使用洗脫液係已向其中 添加90%甲醇與1〇%氨水飽和溶液之5%混合物的二氯甲 烷。 產率： 20毫克 MS(ESI): 246 (M+H)+ 以下化合物係以類似方法製備： MS(ESI)(M+H)+: 動 232 Η、〇 264 方法3 4-(4·胺基-苯基）_六氫^比嗪_丨_甲酸苄酯

a) 4-(4-硝基-苯基）_六氫π比嗪-；1_曱酸苄酯 使3.76毫升（3 5.082毫莫耳）4_氟硝基苯溶於4〇毫升£)]^八 中並與9.25毫升（52.62毫莫耳）iv_乙基二異丙胺及7·6毫升 (38.59毫料）^氡基组合。㈣反應混 合物在8Q°C下攪拌18小時。隨後在真空中去除溶劑並藉由 層析法純化粗產物。所使用載劑材料係㈣且所使用洗脫 118131.doc -28- 200804364 液係由環己烷：乙酸乙酯（50:50)組成之混合物。 產率： 11.28克 MS(ESI)： 342 (M+H)+ b) 4-(4-胺基-苯基）_六氫吡嗪_ι_甲酸苄酯 使11·28克（33.04毫莫耳）4·(4_硝基-苯基）-六氫σ比嗪_丨_甲 酸节S旨溶於500毫升曱醇中並與1克Raney鎳組合。使該混 合物在5巴氫氣壓力下氫化丨8小時。然後過濾掉觸媒且使 殘餘物與70毫升1 N氳氯酸水溶液組合並在真空中去除溶 劑。 產率： 10.89克 MS(ESI): 312 (M+H)+ 以下化合物係以類似於該方法之方法而：

118131.doc -29· 200804364 層析法 對於中壓層析（MPLC)，採用由Millipore製備之矽膠（名 稱：Granula Silica Si-60A 35-70微米）或由 Macherey Nagel 製備之 C-18 RP-矽膠（名稱：Polygoprep 100-50 C18)。 對於製備型高壓層析，採用由Waters製備之管柱（名稱·· 又丁61*仏？^?.1^8 0：18,5微米，30*100毫米或8711111^{7(：18, 5微米，19*100毫米）。 核磁共振（NMR)光譜 量測係在氘代二甲亞砜-d6中實施。若使用其他溶劑， 則該等溶劑已在該等實例或該等方法中明確提及。量測值 以ppm為單位以δ標度記錄。四曱基石夕烧用作標準溶液。藉 助由 Bruker Biospin GmbH 製備之 Avance 400 (400 ΜΗζ-NMR-光譜計）得到該等量測值。 質譜分析/UV-光譜測定 該等數據係藉助由Agilent製備之HPLC-MS裝置（使用質 量檢測儀之高效液相層析）產生。構造該裝置以使二極管 陣列檢測儀（由Agilent製造之G1315B)與質量檢測儀（1100 LS-MSD SL; G1946D; Agilent)串連連接於層析裝置（管 柱：Zorbax SB-C8，3.5微米，2.1*50, Agilent)下游。 以1.2毫升/分鐘之流速運作該裝置。對於分離製程，在 3.5分鐘内進行梯度溶離（起始梯度：95%水與5%乙腈；結 束時梯度：5%水與95%乙腈；兩種情況下皆將0.1%甲酸添 加至兩種溶劑中）。 實例1 118131.doc -30- 200804364 2-(4-六氫^秦-1-基_苯基胺基）_4_((8)_4_氧代_2,3，1〇，1〇&_四 氫-1H.4H-9-氧雜_3a-氮雜.苯并[f]甘菊環_5_基胺基）_5·三說 曱基^密咬

使12.64克（32.89毫莫耳）4-(4-胺基-苯基）_六氫α比嗪巧—甲 酸苄酯（方法3)懸浮於與28毫升（164·4毫莫耳）minig鹼組合 之1 〇毫升一氧雜環己烷中並冷卻至〇°C。緩慢添加5克（23 笔莫耳）2,4·二氣-5-三氟嘧啶。於環境溫度下攪拌16小時 後，用200¾升二氣甲烷及2〇〇毫升氣化鈉溶液稀釋該反應 混合物。分離有機相並在真空中去除溶劑。如此所得之粗 產物由兩種區域異構體組成。藉由管柱層析分離該等區域 異構體。所使用載劑材料係Cis-Rp-矽膠並以起點由95% 水及5%乙腈組成且終點由5%水及95%乙腈組成之梯度溶 離。將0.2%甲酸添加至該等兩種洗脫液中。使包含2_(4_六 氫吡嗪-1-基-苯基胺基）-4_氣_5_三氟甲基_嘧啶之部分冷凍 乾無。使如此所得4〇〇毫克（〇·813毫莫耳）中間體產物及ι85 毫克（0.895毫莫耳）（s)_5_胺基_2,3，1〇，1〇a_四氫氧 雜-3a-氮雜-苯并[f]甘菊環-4_酮（方法丨）溶於〇·5毫升尽甲 基-2-吼π各咬g同中並與溶於丨，4_二氧雜環己烷中之ι〇〇微升4 M HC1溶液（0.406毫莫耳）組合。使該混合物在1〇0。〇下攪拌 118131.doc -31- 200804364 1.5小時。然後添加30毫升} N氫氯酸水溶液並藉由抽濾去 除沉澱。使其乾燥且與溶有5〇毫克碳/鈀及5〇毫克氫氧化 鈀之20毫升DMF及1毫升水組合並在7巴氫氣壓力下氫化3 小時。然後過渡掉觸媒並在真空中去除溶劑。藉由管柱層 析純化粗產物。所使用載劑材料係C18-RP-矽膠並以起點 由95%水及5%乙腈組成且終點由45%水及55%乙腈組成之 梯度溶離。將0.2%曱酸添加至該等兩種洗脫液中。 產率： 167毫克 UV最大值： 282奈米 MS(ESI): 540(M+H) b-NMR : 1.57-1.70 (m，1H)，1.82-2.06 (m，3H)，3.17- 3.37 (m，8H)，3.37-3.53 (m，2H)，6.87-6.99 (m，3H), 7·37_7.55 (m，3H)，7.97-8.25 (m， lH)，8.40(s，lH)，9.04-9.27 (m，2H)，9.60-9.99 (m，1H)，10.30-10.47 (m，1H) 實例2 2-(4-(4-甲基-六氫外b嗪-1-基）-苯基胺基）-4_((s)-4-氧 代_2,3，10，10a_四氫-1H，4H_9-氧雜-3a_氮雜-苯并[f]甘菊 環-5_基胺基）-5-三氟甲基-嘧啶

118131.doc -32- 200804364 使50毫克（0.077毫莫耳）2-(4-六氫啦嗪-1-基·苯基胺 基）-4-((8)_4-氧代-2,3，10，10心四氫_111，411-9-氧雜-3&-氮雜-本并[幻甘轫環-5-基胺基）-5-三氟甲基哺σ定溶於〇·5毫升二 甲基甲醯胺中並與12微升（0.154毫莫耳）甲醛及2微升（〇.039 毫莫耳）乙酸組合。將86毫克（0.385毫莫耳）三乙醯氧基硼 氫化納計量加至該混合物中並在環境溫度下攪拌16小時。 •然後在真空中去除溶劑。藉由管柱層析純化粗產物。所使 用載劑材料係C18-RP-矽膠並以起點由95%水及5%乙腈組 成且終點由5%水及95%乙腈組成之梯度溶離。將〇·2%甲酸 添加至該等兩種洗脫液中。使適宜部分與1 Ν氫氯酸水溶 液組合並冷凍乾燥。 產率： 49毫克 UV最大值：278奈米 MS(ESI): 554(M+H) lH"NMR ： 1.58-1.72 (m, 1H)5 1,84^2,10 (m5 3H)? 2.87 (s，3H)，2_95_3·08 (m，2H)，3.12-3.26 (m， 2H)，3.38-3.48 (m，1H)，3.49-3.59 (m，2H)， 3.63-3.73 (m，1H)，3.75-3.89(m，3H)，4.07-4.24 (m，2H)，6.91-7.05 (m，3H)，7.36-7.52 (m5 3H), 7.90-8.20 (Sj ih)5 8.37-8.60 (s, 1H)，10.05-10.90 (m，2H) 實例3至27 以下化合物可藉助如實例丨中所述之類似方法製備。相 應的苯胺闌述於方法1、2或3中或可購得。 118131.doc -33 - 200804364

F

118131.doc -34- 200804364 # A Rx υν最大值 [奈米] MS(ESI) (M+H)+ 11 HNU 286, 306 560 12 Λ hnu 246, 286 617 13 A ΗΝΌη 286 590 14 A ΗΝΌη 286 578 15 Η 0 "Όη 246, 286 613 i 16 282 586 17 282 574 18 Η 0 Λ "Όη 246, 286 631 19 Λ "Όη 282 604 118131.doc -35- 200804364

以下化合物可藉由與實例2中戶斤$方法類似之方法得 到。相應的起始材料係藉由與實例1 +所述方法類似之方 118131.doc -36- 200804364 法製備。

F

118131.doc -37- 200804364

118131.doc -38- 200804364 # A Rx UV最大值 [奈米] MS(ESI) (M+H)+ 44 办 :xr ό I 282 586 45 :xr 0 I 282 574 46 :矿 cy 1 246, 286 631 47 ▼ cy 1 282 604 48 :矿 1 282 592 49 、:XT ό 1 246, 286 627 50 、:XT ό I 282 600 51 、:XT ό 1 282 588 52 Η 0 0F 1 246, 286 645 118131.doc -39- 200804364

118131.doc -40- 200804364 # A Rx uv最大值 [奈米】 MS(ESI) (M+H)+ 62 ό k 282 600 63 ό k 282 588 64 Η Ο :矿 όρ k 246, 286 645 65 0F k 282 618 66 cy k 282 606 67 、:XT ό k 246, 286 641 68 办 、:xr ό k 282 614 69 、:XT' ό k 282 602 70 Η Ο 、::ςτ 0F k 246, 286 659 118131.doc -41 200804364 # A Rx uv最大值 [奈米] MS(ESI) (M+H)+ 71 όΎ k 282 632 72 、:：ςτ 0F k 282 620 73 Η 0 ΰ N 1 246, 282 581 74 ό5< 、pi 282-286 642 75 282 570 76 x. Q 人， ^Nxx, 282-286 582 77 、N^ 282 542 78 282 556 79 I ^Nxx, 282 582 118131.doc •42- 200804364 # A Rx υν最大值 [奈米】 MS(ESI) (M+H) + 80 Χι 9 Η 0 250, 286 581 81 f； 1η 0. Η 〇 248, 286 613 實例82至91 以下化合物可藉由與實例2中所述方法類似之方法得 到。相應的起始材料係藉由與實例1中所述方法類似之方 法製備。

# A Rx uv最大值 [奈米】 MS(ESI) (M+H)+ 82 UOlX2 318 575 83 unX2 250-254 614 84 〇 240/284 559 118131.doc -43 - 200804364

下列實例闡述本發明化合物之生物活性而非將本發明限 定於該等實例。 本發明化合物對各種激酶（例如對絲胺酸·蘇胺酸激酶 PLK])之活性係藉由在活體外激酶分析中使用以重組方式 產生之蛋白測定。在此分析中，料化合物對㈣呈現 118131.doc -44. 200804364 良好至極好的效果，即（例如）IC50值低於1微莫耳/公升， 通常低於0.1微莫耳/公升。 實例PLK-1激酶分析 使在其N-末端連接至GST之重組人類PLK1酵素與受桿狀 病毒感染之昆蟲細胞（Sf21)分離。在谷胱甘肽瓊脂糖凝膠 管柱上進行親和性層析法純化。 使存於200毫升Sf-900 II無血清昆蟲細胞培養基（Life Technologies)中之 4x107個 Sf21 細胞（草地黏蟲 心））接種至旋轉燒瓶中。在27°C及70 fpm下培育72 小時後，使lxl〇8個Sf21細胞接種至新旋轉燒瓶之共180毫 升培養基中。再經24小時後，添加20毫升重組桿狀病毒原 液懸浮液並使該等細胞在27°C及70 i:pm下培養72小時。在 收集前3小時，添加岡田酸（okadaic acid)(Calbiochem，最 終濃度0.1 μΜ)並繼續培育該懸浮液。測定細胞數，藉由 離心去除該等細胞（5分鐘，4°C，800 rpm)並用PBS(8克 NaCl/公升、0.2 克 KC1/公升、1.44 克 Na2HP04/公升、0.24 克ΚΗ2Ρ04/公升）洗滌1次。再次離心後，使沉殿物在液氮 中迅速冷凍。然後使該沉澱物快速解凍並再懸浮於冰冷溶 胞緩衝液（50 mM HEPES pH 7.5、10 mM MgCl2、1 mM DTT、5微克/毫升抗纖維蛋白溶酶肽（leupeptin)、5微克/毫 升抑肽酶、100 μΜ NaF、100 μΜ PMSF、10 mM 磷酸 β-甘 油、0·1 mM Na3V04、30 mM磷酸4-硝基苯基酯）中以得到 1χ108個細胞/17.5毫升。使該等細胞在冰上溶胞30分鐘。 藉由離心去除細胞碎片（4000 rpm，5分鐘）後，使透明上清 118131.doc -45- 200804364 液與谷胱甘肽瓊脂糖凝膠珠組合（1毫升經再懸浮及經洗滌 之小珠/50毫升上清液）並使該混合物在4°C下於一旋轉板上 培育30分鐘。然後用溶胞緩衝液洗滌該等小珠並用1毫升 洗脫缓衝液/毫升再懸浮小珠（洗脫缓衝液：100 mM Tris/HCl ρΗ=8·0、120 mM NaC卜 20 mM經還原谷胱甘肽 (Sigma G-4251)、10 mM MgCl2、1 mM DTT)自該等珠洗脫 出重組蛋白。藉由Bradford分析法測定蛋白質濃度。 激酶分析 使下列組份在96-孔圓底培養皿（Greiner bio-one，PS微滴 定板650101號）之孔中組合：

-10微升含不同濃度試驗化合物（例如開始時為300 μΜ， 且稀釋至1:3)之6% DMSO、0.5毫克/毫升酪蛋白（Sigma C-5890)、60 mM 磷酸 β-甘油、25 mM MOPS ρΗ=7·0、5 mM EGTA、15 mM MgCl2、1 mM DTT -20微升基質溶液（25 mM MOPS pH=7_0、15 mM MgCl2、 1 mM DTT、2.5 mM EGTA、30 mM磷酸 β-甘油、〇·25 毫克 /毫升酪蛋白） -20微升酵素稀釋液（存於25 mM MOPS ρΗ=7·0、15 mM MgCl2、1 mM DTT中之酵素原液的1:100稀釋液） - 10 微升 ATP 溶液（45 μΜ ATP 及 l.llxlO6 Bq/毫升 γ-Ρ33-ΑΤΡ)。 藉由添加ATP溶液開始反應並在30°C及輕微振盪（在ΙΚΑ MTS2振盪器上650 rpm)下繼續45分鐘。藉由添加125微升 冰冷5% TCA/孔停止該反應並在冰上培育至少30分鐘。藉 118131.doc -46- 200804364 由收集於濾板（96-孔微量滴定濾板：UniFilter-96，GF/B; Packard; 6005177號）上轉移沉澱，然後用1% TCA洗滌4次 並在60°C下乾燥。每孔添加35微升閃爍溶液（Ready-Safe; Beckmann)後，用密封帶密封該板並用Wallac Betacounter 量測所沉澱P33之量。藉助標準Graphpad軟體（Levenburg-Marquard算法）評價該等量測數據。 實例Aurora-B激酶分析 放射性酵素抑制分析係借助在N末端位置配備有組胺酸 (6)表位（His-)之經桿狀病毒表現的重組人類Aurora B野生 型蛋白進行研究，該蛋白得自經感染的昆蟲細胞（SF21)並 經純化。 表現及純化 為此，舉例而言，在27°C下用適宜量的桿狀病毒溶液培 育存於SF-900 II昆蟲細胞培養基（Invitrogen)中之300xl06 個SF21細胞1小時（Fernbach燒瓶擾拌器，50 rpm)。然後添 加250毫升SF-900 II培養基並攪拌3天（100 rpm，27°C)。收 集前 3 小時，添加岡田酸（C44H68013，Calbiochem 495604 號）（最終濃度為〇·1 μΜ)以穩定重組Aurora B上之磷酸化位 點。藉由離心沉澱該等細胞（1〇〇〇 rpm，5分鐘，4°C)，丟 棄上清液並使沉澱物在液氮中冷凍。使該沉澱物解凍 (37°C，5分鐘）並再懸浮於解離緩衝液中。40毫升解離缓衝 液（25 mM Tris/Cn、10 mM MgCl2、300 mM NaC卜 20 mM 口米嗤，pH 8.0、0.07% 2-M 基乙醇及得自 Roche Diagnostics 之Protease-Inhibitor-Complete)用於體積為200毫升的起始 118131.doc -47- 200804364 培養物。兩個快速冷凍/解凍循環（液氮，在37°C)後，使解 離液在冰上保持30分鐘，然後用經洗滌Ni-NTA珠（Ni-NTA Superflow Beads，4毫升/200毫升起始培養物）培育（2小 時，4°C)並置於 Econo-Pac 管柱（Biorad732-1010號）中。洗 滌5次，每次皆用10管柱體積的洗滌缓衝液（25 mM Tris/C卜 10 mM MgCl2，1000 mM NaC卜 20 mM咪唑，pH 8.0，0.07% 2_ 魏基乙醇及得自 Roche Diagnostics 之

Pro tease-Inhibitor-Complete)洗滌，然後用 8 毫升（每 200 毫 升起始培養物）洗脫緩衝液（25 mM Tris/Cl pH 8.0，300 mM NaCM，10 mM MgCl2，0.03% Brij-35，10%甘油，0.07% 2-魏基乙醇，400 mM味嗤）實施洗脫。藉助Sephadex G25管 柱使經合併洗脫液部分脫鹽並轉移至冷凍缓衝液（50 mM tris/Cl pH 8.0、150 mM NaCl、0·1 mM EDTA、0·03% Brij-35、10%甘油、1 mM DTT)中。 激酶分析

將測試物質置於聚丙烯平皿（96孔，Greiner 655 201號） 中以涵蓋10 μΜ至0.0001 μΜ之濃度範圍。分析中DMSO之 最終濃度為5%。將30微升蛋白混合物（50 mM tris/Cl pH 7.5、25 mM MgCl2、25 mM NaCM、167 μΜ ATP、200 奈克 His-Aurora B於冷凍緩衝液中）移液至提供於25% DMSO中 之10微升測試物質中並使其在室溫下培育15分鐘。然後添 加 10 微升肽混合物（100 mM tris/Cl pH 7.5、50 mM MgCl2 ^ 50 mM NaCl ' 5 μΜ NaF - 5 μΜ DTT > 1 μΟί γ-Ρ33-ATP [Amersham]、50 μΜ基質肽[生物素-EPLERRLSLVPDS 118131.doc -48- 200804364 或其多體、或生物素-EPLERRLSLVPKM或其多體、或生 物素-LRRWSLGLRRWSLGLRRWSLGLRRWSLG])。使該反 應培育75分鐘（環境溫度）且藉由添加180微升6.4%三氯乙 酸停止並在冰上培育20分鐘。首先用100微升70%乙醇且 隨後用180微升三氣乙酸平衡多篩濾板（Millipore，MAIP NOB 10)並藉助適宜抽吸裝置去除液體。然後施加已停止 的激酶反應物。在用180微升1%三氯乙酸實施5次洗滌步 驟後，每一情況下皆使平孤之下半部分乾燥（在55°C下10 至20分鐘）並添加25微升閃燦混合劑（Microscint，Packard 6013611 號）。所納入γ-磷酸酯藉助 Wallac 1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter進行定量。不含測試物質或不 含基質肽之樣品用作對照樣品。藉助Graph Pad Prism軟體 得到IC5〇值。 本發明化合物之抗增殖活性係在細胞毒性測試中於經培 養人類腫瘤細胞上及/或在FACS分析中於（例如）HeLa S3細 胞上測定。在兩種測試方法中，該等化合物呈現良好至極 好的活性，即（例如）在HeLa S3細胞毒性測試中EC50值低 於5微莫耳/公升，通常低於1微莫耳/公升。 經培養人類腫瘤細胞上細胞毒性之量測 為量測對經培養人類腫瘤細胞之細胞毒性，使子宮頸癌 瘤腫瘤細胞系HeLa S3之細胞（得自American Type Culture Collection (ATCC))在 Ham's F12 培養基（Life Technologies) 及10%胎牛血清（Life Technologies)中培養並在對數生長期 收集。然後將該等HeLa S3細胞以1000個細胞/孔之密度置 118131.doc -49- 200804364 於96-孔板（Costar)中並在培育箱（在37°c及5% C02下）中培 育過夜，同時在每個板上僅用培養基填充6個孔（3個孔作 為培養基對照樣’ 3個孔用還原AlamarBlue試劑培育）。將 活性物質以不同濃度（溶於DMS0中；DMS0最終濃度： 0· 1 %)添加至該等細胞中（每一情況下重複量測三次）。培育 72小時後，將20微升AlamarBlue試劑（AccuMed International)添加至每個孔中，並使該等細胞再培育5至7 小時。作為對照，將20微升還原AlamarBlue試劑添加至3 個孔之每個孔中（AlamarBlue試劑，使其高壓滅菌30分 鐘）。培育後，各個孔中AlamarBlue試劑之顏色變化係在 Perkin Elmer螢光光譜儀（激發波長530奈米，發射波長590 奈米，狹縫15個，整合時間0.1)中測定。所反應 AlamarBlue試劑之量表示該等細胞之代謝活性。相對細胞 活性作為對照樣（不含抑制劑之HeLa S3細胞）百分數計算 並推導出將細胞活性抑制50%之活性物質濃度（IC50)。該 等值自三次單獨量測之平均值計算一並修正虚擬值（培養 基對照樣）。 FACS分析 碘化丙錠（PI)以化學計量方式鍵結至雙鏈DNA，且因此 適合根據細胞DNA含量測定細胞週期之Gl、S及G2/M期中 細胞之比例。G0及G1期中細胞具有兩倍的DNA含量 (2N)，而G2或核分裂期中細胞具有4N DNA含量。 對於PI染色，舉例而言，使1x1 〇6個HeLa S3細胞接種於 75 cam細胞培養燒瓶上，且24小時後，或者添加0.1〇/〇 118131.doc -50- 200804364 DMSO作為對照樣或者以不同濃度（溶於〇. 1% DMSO中）添 加該物質。用該物質或用DMS〇培育細胞24小時，然後用 PBS洗滌該等細胞2次且隨後用胰蛋白酶/EDTA使之解離。 使該等細胞離心（1000 rpm ’ 5分鐘’ 4°c)，且用PBS洗務該 細胞沉澱物2次，然後使該等細胞再懸浮於0·1毫升PBS 中。然後在4°c下用80%乙醇固定該等細胞16小時或者 在-20°C下固定2小時。使該等經固定細胞離心（1000 rpm ’ 5分鐘，4°C )，用PBS洗滌且隨後再次離心。使細胞沉澱物 再懸浮於存於PBS中之2毫升0.25% Triton X-100中，且在 冰上培育5分鐘’然後添加5毫升PBS並使該滿合物再次離 心。使細胞沉澱物再懸浮於350微升PI染色溶液（存於 lxPBS 中之 0.1 毫克/毫升 RNase A (Sigma’ R-4875號）、10 微克/毫升蛾化丙錠（si§ma ’ p·4864號））中。在黑暗中用染 色缓衝液培育該等細胞20分鐘，然後轉移至樣品量測容器 中用於FACS掃描。DNA量測係在Becton Dickinson FACS Analyzer中用氬氣鐳射器（500毫瓦，發射波長488奈米）及 DNA Cell Quest Programme (BD)實施。對數PI螢光度係使 用帶通濾波器（BP 585/42)測定。各個細胞週期時期中細胞 群係藉助由 Becton Dickinson製造之ModFit LT Programme 定量。 亦照此測試本發明化合物對其他腫瘤細胞之作用。舉例 而言，該等化合物對各種組織（例如乳腺（MCF7)、結腸 (HCT116)、頭頸（FaDu)、肺（NCI-H460)、胰腺（BxPC-3)、 前列腺（DU145))之癌瘤、肉瘤（例如，SK-UT-1B)、白血病 118131.doc -51- 200804364 及淋巴瘤（例如，HL-60 ; jurkat，ΤΗΡ-l)及其他腫瘤（例 如’黑素瘤（BRO))、神經膠質瘤（u_87Mg)皆有效且可用 於此等適應症。此證明本發明化合物廣泛適用於治療各種 腫瘤類型。 根據其通式（I)新穎化合物之生物特性，其同分異構體及 其生理上可接受之鹽適合治療特徵為過度或異常細胞增殖 之各種疾病。 此等疾病包括（例如）：病毒感染（例如，HIV及Kaposi，s 肉瘤），炎症及自身免疫疾病（例如，結腸炎、關節炎、阿 兹海默氏病（Alzheimer’s disease)、腎小球腎炎及傷口癒 合），細菌、真菌及/或寄生感染；白血病、淋巴瘤及實體 腫瘤（例如，癌瘤及肉瘤）、皮膚疾病（例如牛皮癣）；特徵 為細胞（例如纖維母細胞、肝細胞、骨及骨髓細胞、軟骨 或平滑肌細胞或上皮細胞（例如子宮内膜增生））數量增加以 增生為主之疾病；骨疾病及心企管疾病（例如再狹窄症及 肥大）。 舉例而言，可用本發明化合物治療以下癌症（但不限 於）··腦腫瘤例如（舉例而言）聽神經瘤，星形細胞瘤例如毛 細胞型星形細胞瘤、原纖維性星形細胞瘤、原漿型星形細 胞瘤、飼肥星形細胞瘤、間變性星形細胞瘤及膠質細胞 瘤，腦淋巴瘤，腦轉移，垂體性腫瘤例如催乳素瘤、 HGH(人類生長激素）產生腫瘤及ACTH產生腫瘤（促腎上腺 皮質激素），顧咽管瘤，成神經管細胞瘤，腦膜瘤及少突 神經膠質瘤；神經腫瘤（贅瘤）例如（舉例而言）植物神經系 118131.doc •52- 200804364 統腫瘤例如交感神經系統神經母細胞瘤、神經節瘤、神經 節細胞瘤（嗜鉻細胞瘤（pheochromocytoma)，畐彳細胞節瘤 (chromaffinoma))及頸動脈小球腫瘤，末梢神經系統上腫 瘤例如截斷神經瘤、神經纖維瘤、神經細胞瘤 (neurinoma)(神經鞘瘤（neurilemmoma)，許旺氏細胞瘤 (Schwannoma))及惡性許旺氏細胞瘤，以及中樞神經系統 腫瘤例如腦瘤及骨趙腫瘤；腸癌例如（舉例而言）直腸、結 腸、肛門、小腸及十二指腸之癌瘤；眼險腫瘤例如基底細 胞癌或基礎細胞癌瘤；胰癌或胰腺癌瘤；膀胱癌或膀胱癌 瘤；肺癌（支氣管癌瘤）例如（舉例而言）小細胞支氣管癌瘤 (燕麥細胞癌瘤）及非小細胞支氣管癌瘤例如扁平上皮癌 瘤、腺癌瘤及大細胞支氣管癌瘤；乳腺癌例如（舉例而言） 乳房癌瘤例如浸潤性腺管癌瘤、膠樣癌瘤、小葉侵襲性癌 瘤、管狀癌瘤、腺囊性癌瘤及乳頭狀癌瘤；非霍奇金氏 (non-Hodgkin’s)淋巴瘤（NHL)例如（舉例而言）伯基特氏 (Burkitt’s)淋巴瘤、低惡性非霍奇金氏淋巴瘤及輩樣 肉芽腫病；子宮癌或子宮内膜癌瘤或子宮體癌瘤；症 候群（未知原發性癌症）；卵巢癌或卵巢癌瘤，例如黏液 癌、子呂内膜癌或漿液癌；膽囊癌；膽管癌，例如（舉例 而言）Klatskin腫瘤；睪丸癌，例如（舉例而言）精原細胞瘤 及非精原細胞瘤；淋巴瘤（淋巴肉瘤），例如（舉例而言）吳 性淋巴瘤，何傑金氏病（Hodgkin、disease)，非霍奇金氏淋 巴瘤（NHL)例如慢性淋巴管白血病、白血性網狀内皮組織 增殖、免疫細胞瘤、漿細胞瘤（多發性骨髓瘤）、免疫母細 118131.doc -53- 200804364 胞癌，伯基特氏淋巴瘤、τ_區蕈樣真菌病、大細胞間變性 成淋巴細胞瘤及成淋巴細胞瘤；喉癌，例如（舉例而言）聲 帶腫瘤、聲門上、聲門及聲門下喉腫瘤；骨癌，例如（舉 例而s )骨軟骨瘤、軟骨瘤、軟骨母細胞瘤、軟骨黏液樣 纖維瘤、骨瘤、骨樣骨瘤、骨母細胞瘤、嗜曙紅細胞肉芽 腫、巨細胞腫瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤 (Ewing s sarcoma)、網狀細胞肉瘤、漿細胞瘤、巨細胞腫 瘤、纖維性結構不良、青少年骨囊腫及動脈瘤骨囊腫；頭 頸腫瘤’例如（舉例而言）唇、舌、口底、口腔、齒齦、上 顎、唾液腺、咽、鼻腔、鼻旁竇、喉及中耳之腫瘤；肝 癌，例如（舉例而言）肝細胞癌瘤（liver cell carcin〇ma或 hepatocellular carcinoma，HCC);白血病，例如（舉例而 言）急性白血病例如急性淋巴管/成淋巴細胞白血病 (ALL)、急性骨髓白血病（AML);慢性白血病，例如慢性 淋巴官白血病（Cll)、慢性骨髓白血病（CML);胃癌或胃 癌瘤，例如（舉例而言）乳頭狀、管狀及黏液腺癌瘤、印戎 細胞癌瘤、腺鱗狀癌瘤、小細胞癌瘤及未分化癌瘤；黑素 瘤’例如（舉例而言）表淺擴散性黑素瘤、結節性黑素瘤、 雀斑-惡性黑素瘤及肢端著色斑性黑素瘤；腎癌，例如（舉 例而δ )腎臟細胞癌瘤或腎上腺樣瘤或Grawitz，s腫瘤；食 管癌或食管癌瘤；陰莖癌；前列腺癌；喉癌或咽癌瘤，例 如（舉例而言）鼻咽癌瘤、口咽癌瘤及下嚥癌瘤；成視網膜 細胞瘤，陰道癌或陰道癌瘤；扁平上皮癌瘤，腺癌瘤，原 位性癌瘤，惡性黑素瘤及肉瘤；甲狀腺瘤，例如（舉例而 118131.doc -54- 200804364 言）乳頭狀、濾胞及脊髓甲狀腺癌瘤，以及間變性癌瘤； 脊趙瘤、皮膚之表皮樣癌及扁平上皮癌；胸腺瘤，尿道癌 及外陰癌。 該等新穎化合物視情況亦可與放射療法或其他”業内習 知π化合物（例如，舉例而言，抑制細胞生長或細胞毒性物 質、細胞增生抑制劑、抗血管生成物質、類固醇或抗體） 組合用來預防、短期或長期治療上述疾病。 通式（1)之化合物可單獨使用或與本發明其他活性物質 組合使用，視情況亦可與其他醫藥活性物質組合使用。 可與本發明化合物組合投與之化學治療劑包括（但不限 於）激素、激素類似物及抗激素（例如，他莫昔芬 (tamoxifen)、托瑞米芬（toremifene)、雷洛昔芬 (raloxifene)、氟維司群（fulvestrant)、乙酸甲地孕酮 (megestrol acetate)、氟硝 丁酿胺（flutamide)、尼魯米特 (nilutamide)、比卡魯胺（bicalutamide)、胺魯米特 (amino glut ethimide)、 乙酸環 丙孕酮(cyproterone acetate)、非那雄胺（finasteride)、乙酸布舍瑞林（buserelin acetate)、氣氫可的松（fludrocortisone)、氟經甲睾酮 (fluoxymesterone)、甲經孕酮（medroxyprogesterone)、奥曲 肽（octreotide))，芳香酶抑制劑（例如，阿那曲吐 (anastrozole)、來曲嗤（letrozole)、利阿唆（liarozole)、伏 氯嗤（vorozole)、依西美坦（exemestane)、阿他美坦 (atamestane))，LHRH激動劑及拮抗劑（例如，乙酸戈舍瑞 林（goserelin acetate)、乙酸亮丙瑞林（luprolide))，生長因 118131.doc -55- 200804364 子抑制劑（生長因子（例如，舉例而言血小板衍生生長因子 及肝細胞生長因子）抑制劑係（例如）生長因子抗體、生長因 子受體抗體及酪胺酸激酶抑制劑，例如（舉例而言）吉非替 尼（gefitinib)、伊馬替尼（imatinib)、拉帕替尼（lapatinib)及 曲司佐單抗（trastuzumab));抗代謝物（例如，抗葉酸製劑 例如胺甲蝶呤（methotrexate)、雷替曲塞（raltitrexed)，喊唆 類似物例如5_氟尿喊咬（5-fluorouracil)、卡培他濱 (capecitabin)及吉西他濱（gemcitabin)，嗓呤（purine)及腺苦 類似物例如疏嗓吟（mercaptopurine)、硫鳥嘌呤 (thioguanine)、克拉屈濱（cladribine)及喷托他丁 (pentostatin)、阿糖胞皆（cytarabine)、氟達拉濱 (fludarabine));抗腫瘤抗生素（例如，蒽環抗生素例如多柔 比星（doxorubicin)、柔紅黴素（daunorubicin)、表柔比星 (epirubicin)及伊達比星（idarubicin)、絲裂黴素-C(mitomycin-C)、博萊黴素（bleomycin)、更生黴素 (dactinomycin)、普卡黴素（plicamycin)、鏈脲黴素 (streptozocin));鈷衍生物（例如，順顧（cisplatin)、奥沙利 麵（oxaliplatin)、卡麵（carboplatin));院基化試劑（例如， 福莫司汀（estramustin)、氮芥、美法侖（melphalan)、苯丁 酸氮芥（chlorambucil)、白消安（busulphan)、達卡巴口秦 (dacarbazin)、環構醯胺、異環磷:醢胺（ifosfamide)、替莫 峻胺（temozolomide)，亞确基脲例如（舉例而言）卡莫司汀 (carmustin)及洛莫司汀（lomustin)，嚷替娘（thiotepa));抗 有絲分裂試劑（例如，長春花生物鹼類例如（舉例而言）長春 118131.doc -56- 200804364 花鹼、長春地辛（vindesin)、長春瑞濱（vinoreibin)及長春 新驗，·及紫杉烧類例如紫杉醇（paclitaxel)、多西他赛 (docetaxel));拓撲異構酶抑制劑（例如，差向鬼臼毒素類 (epipodophyllotoxins)例如（舉例而言）表鬼桕毒素及依託泊 苷（etopophos)、替尼泊苷（teniposide)、安吖啶 (amsacrin)、拓撲替康（topotecan)、伊立替康（irin〇tecan)、 米托恩S昆（mitoxantron))及各種化學治療劑，例如氨磷汀 (amifostm)、阿那袼雷（anagrelid)、氯膦酸鹽（cl〇dr〇nat)、 非格司汀（filgrastin)、α干擾素、爾可福鈣（leuc〇v〇rin)、 利妥昔單抗（rituximab)、丙卡巴肼（pr〇carbazine)、左旋四 咪唑（levamisole)、美司鈉（mesna)、米托坦（mit〇tane)、帕 米膦酸鹽（pamidronate)及卟吩姆（p〇rfimer)。 、溶液-尤其用於

適宜製劑包括（例如）錠劑、膠囊、栓劑、 注射（s.c·，i.v·，i.m·)及輸注之溶液、酏劑 粉劑。該（等）醫藥活性化合物之含量應介3 劑量分成若干次服用。

118131.doc 200804364 因此’包衣錠劑可藉由用通常用於疑劑塗層之物質（例 如可力酮（collidone)或蟲膠、阿拉伯樹膠、滑石粉、鈦白 或糖）塗覆以類似於錠劑方式產生之核而製備。為達成延 時釋放或預防不相容性，該核亦可由多層組成。同樣，錠 劑塗層亦可借助於上述用於錠劑之賦形劑由多層組成以達 成延時釋放。 匕S本I明活性物質或其組合 (例如糖精、甜精、甘油或糖）及口味改良劑（例如，調味品 如香草醛或柑桔提取物p其亦可包含懸浮液佐劑或增稠 劑（例如羧甲基纖維素鈉），濕潤劑（例如，舉例而言脂肪醇 與％氧乙烷之縮合產物)或防腐劑(例如對羥基苯甲酸酯)。 用於注射及輸注之溶液按常規方式製備，例如添加等滲 劑、防腐劑（例如對經基苯甲酸醋）或穩定劑（例如乙二胺四 乙酸驗金屬鹽），視情況使用乳化劑及/或分散劑，同時（舉 例而言）若將水用作稀釋劑，則視情況有機溶劑可用作溶 合劑或溶解助劑，並鏟銘 4 勺入一 〗並轉移至注射瓶或安瓿或輸注瓶中。 包含一種或多種活性物質或活性物質組合 匕0並將其裝入明膠膠囊中而製備。 ； 適宜栓劑可(例如)藉由與出於此目的 性脂肪哎臂7 ^』 八載劍（例如中 mu其衍生物）混合來m 可用之職形劑包括（例如）水；醫藥上可接 劑，例如石蠟（例& 又之有機溶 麻油)、單宫:ΤΓ出份)、植物油(例如落花生或芝 早吕此或多官能醇(例如乙醇或 义之 w /由），载劑，例如 118l31.doc -58- 200804364 (舉例而言）天然礦物粉末（例如高嶺土、黏土、滑石粉、白 要）合成鑛物粉末（例如高分散石夕酸及石夕酸鹽）、糖（例如 薦糖、乳糖及葡萄糖）、乳化劑（例如木素、亞硫酸鹽廢 液、甲基纖維素、激粉及聚乙烯基吡略啶酮）及潤滑劑（例 如硬脂酸鎂、滑石粉、硬脂酸及月桂基硫酸鈉）。 。亥等製劑係藉由習用方法投與，較佳藉由經口或經皮路 徑、更佳藉由經口路徑投與。對於經口投與而言，錠劑除 上述載劑外當然還可包含諸如檸檬酸鈉、碳酸鈣及磷酸二 鈣加劑以及諸如澱粉（較佳馬鈴薯澱粉）、明膠及諸如此 類之各種添加劑。此外，潤滑劑（例如，硬脂酸鎂、月桂 基硫酸鈉及滑石粉）可同時用於製錠製程。在水性懸浮液 之情形下，除上述賦形劑外活性物質亦可與各種口味改良 劑或著色劑組合使用。 對於非經腸使用而言，可播用、壬姓* 」便用活性物質與適宜液體載劑 之溶液。 靜脈内使用之劑量係自1至1000毫克/小時，較佳介於5 與500毫克/小時之間。 、 然而，端視體重、投與路徑、個體對藥物之響應、其调 配物之性質及藥物投與時間或間隔，有時可能需要偏離指 :篁。因&，在某些情形下’使用低於上文給出之最低劑 莖可能已^矣’而在其他情形下可能不得不超出上限。舍 大量投與時，可建議在—天内將其分成許多小劑量。田 下文之調配物實例閣明本發明而非限制其範圍： 醫藥調配物之實例 118131.doc -59- 200804364 A) 錠刺 每錠 活性物質 100毫克 乳糖 140毫克 玉米澱粉 240毫克 聚乙烯基％ π各淀酮 15毫克 硬脂酸鎖 5 ^ 500毫克 將經精細研磨之活性物質、乳糖及部分玉米澱粉混合在 一起。使該混合物過薛，然後用聚乙烯基吡咯啶酮之水溶 液將其潤濕，捏合，濕法造粒並乾燥。將該等顆粒、剩餘 玉米澱粉及硬脂酸鎂過篩並混合在一起。壓製該混合物以 產生適宜形狀及大小之鍵劑。 B) 錠劑 每鍵 活性物質 80毫克 乳糖 55毫克 玉米殿粉 190毫克 微晶纖維素 35毫克 聚乙稀基°比嘻咬酮 15毫克 羧甲基澱粉鈉 23毫克 硬脂酸鎂 400毫克 將精細研磨之活性物質、部分玉米澱粉、乳糖、微晶纖 維素及聚乙浠基吡咯啶酮混合在一起，使該混合物過篩並 與剩餘玉米殿粉及水一起處理以形成顆粒，對該顆粒實施 118131.doc -60- 200804364 乾燥並篩選。添加羧甲基澱粉鈉及硬脂酸鎂且加以混合教 壓製該混合物以形成適宜尺寸之旋劑。 C) 安瓿溶液 活性物質 50毫克 氯化鈉 50毫克 注射用水 5毫升 將活性物質在其自身pH下或視情況在pH 5·5至6·5下溶 於水中並添加氯化鈉使其等滲。過濾所得溶液使之不含致 熱源並將濾液在無菌條件下轉移至安瓿中，然後對安瓿實 施滅菌並藉由熔化密封。該等安瓿分別含有5毫克、25毫 克及5 0毫克活性物質。 118131.doc -61- 200804364 序列表 <110> 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 <120> 新穎化合物 <130> Case 12-0252 <140> <141> 096105940 2007-02-16 <150> 06110303.2 <151> 2006-02-22 <160> 3 <170> Patentln version 3.1 <210> 1 <211> 13 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 合成肽 <400> 1

Glu Pro Leu Glu Arg Arg Leu Ser Leu Val Pro Asp Ser 1 5 10

<210> 2 <211> 13 <212> PRT 118131 200804364 <213〉人工序列 <220> <223〉合成肽 <400> 2

Glu Pro Leu Glu Arg Arg Leu Ser Leu Val Pro Lys Met 1 5 10 <210> 3 <211> 28 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 合成肽 <400> 3

Leu Arg Arg Trp Ser Leu Gly Leu Arg Arg Trp Ser Leu Gly Leu Arg 1 5 10 15

Arg Trp Ser Leu Gly Leu Arg Arg Trp Ser Leu Gly 20 25 2- 118131

Claims (1)

1. 200804364 十、申請專利範圍： 1. 一種通式（1)化合物

   其中 x 表示氧或氮，及 y 表示-ch2或c=o，及 R及R各自相互獨立地表示氫或視情況經單取代或多 取代之選自下列之基團：Ci4基、C36_環烧基、芳 基雜％基及雜芳基，其中該（等）取代基可相同或不同 且選自下列：鹵素、-ORh _C( = 〇)Ra、_c( = 〇)〇Ra、 c( 0)NR R、_NRaRa、-NRaC(=〇)Ra、-NRaC(=0)0Ra、 NR C(~〇)NRaRa λ -NRaS02Ra > -N=CRaRa - -SRa - -SORa SO2R、-S02NRaRa、-NRaS02NRaRa、-〇s〇2NRaRa及 擬鹵素， 或同一碳原子上兩個R1’基團視情況可與其所連接之碳原 子起形成Cw環烧基環，或視情況Ri可與Rr基團一起 形成飽和或部分飽和的3至6員烷基橋鍵，其視情況可包 含1至2個雜原子，及 118131.doc 200804364 r2表示視情況經單取代或多取代雜環基，其中該（等） 取代基可相同或不同且選自Ci_5_烷基、C2 5_烯基、 炔基、C3_6_環燒基-C0-3_燒基，及 R3 表示氫或心·^烷基，或 R2及R3 —起形成視情況經單取代或多取代雜環基環， 其視情況可包含1至2個另外雜原子，其中該（等）取代基 • 可相同或不同且選自烷基、cy烯基、c2_5_炔基及 C3-6-環烷基-C0_3·烷基，或選自下列之適宜取代基：鹵 - . 素、-OR、-C(-〇)R、_c(=〇)〇Ra、_c(=〇)NRaRa、_NRaRa 、-NRaC( = 〇)Ra、-NRaC卜0)0Ra、_NRaC( = 〇)NRaRa、 -NRaS02Ra、-N = CRaRa、_SRa、-SORa、-S02Ra、 -S02NRaRa、-NRaS02NRaRa、_〇s02NRaRa及擬齒素，及 R4各自相互獨立地表示選自下列之基團：鹵素、n〇2、 -ORa、-C( = 0)Ra、一C(=〇)〇Ra、-C(=0)NRaRa、-NRaRa、 -NRaCORa、-NRaC( = 〇)〇Ra、-NRaC( = 0)NRaRa、 -NRaC( = 0)0NRaRa、_NRaS02Ra、-N = CRaRa、-SRa、 -SORa、-S02Ra、_s〇2NRaRa、-NRaS02NRaRa、 -0S02NRaRa及擬_素；及 R5表示氫、鹵素、Cb3·烷基、C2-3-稀基、C2-3-炔基、 • 鹵素-Ci-3_烧基、-〇Ra或擬鹵素，及 R 各自相互獨立地表示選自下列之基團：_素、Ci-3_ 烷基、-ORa及擬鹵素，及 Ra 各自相互獨立地表示氫或選自下列之基團：視情況 經取代之Cu-烧基、C2-8-稀基、C2-8-快基、匚3-10_壞烧 118131.doc * 2 - 200804364 芳基雜缞基及雜芳基，而該（等）取代基可相同或 不同且選自# f、·Νη2、·〇Η及擬_素；及 m 表示0、1或2 ;及 n 各自相互獨立地表示〇、1或2， 視情況呈以下形式··互變異構體、外消旋異構體、對 映/、構體、非對映異構體及其混合物，以及視情況呈其 藥理上可接受之鹽，但須下列除外： 2_(孓甲氧基-4-六氫吼嗪小基_苯基胺基）_4-(3,3_二甲 基5氧代_2,3,4,5-苯并[/][1，4]氧氮呼-6_基胺基_5_三氟甲 基-ϋ密咬， 2-(2·甲氧基-4-六氫吨嗪小基·苯基胺基）_4_(⑻_4氧 代_2,3，l〇，10a四氫_17/，4丑_9_氧雜_3a-氮雜苯并⑺甘菊 環-5-基胺基_5_三氟甲基_嘧啶， 2_[4-(4-乙基_六氫n比嗪基）_2_甲氧基-苯基胺基卜4_ ((S)-4_氧代_2,3，1〇，1〇a-四氫·丨丑，4//_9·氧雜-氮雜苯并 W甘菊環-5-基胺基-5-三氟曱基-嘧啶， 2-[4-(4-甲基·六氫„比嗪小基）_2_甲氧基-苯基胺基]_4_ ((S)_4-氧代-^^⑺心四氫“丑/仏…氧雜士-氮雜-苯并 W甘菊環-5-基胺基-5-三氟甲基_嘧啶， 3,3_二T基-6-{2-[4-(4-甲基-六氫π比嗪]基）苯基胺 基]_5-三氟甲基-嘧啶-4-基胺基卜3,4_二氫_2丑_苯并 L/][l，4]氧氮呼_5_酮， 6 (2 [4-(4-乙基-六氫π比嗪_丨_基）_苯基胺基]巧·三氟曱基· 治定-扣基胺基}_3,3-二曱基_3,4-二氫苯并⑺以⑷氧 118131.doc 200804364 氮呼-5-g同， 3,3-二甲基_6-{2-[4_(4-丙-2-炔基·六氫吼嗪-：[•基）_苯基胺 基]-5-三氟曱基-嘧啶_4_基胺基卜3,4_二氫-2/7-苯并 Ι/1Π，4]氧氮呼-54同， 6-{2-[4-(4-異丙基-六氫吼嗪-1_基）-苯基胺基]·5_三氟甲 基-嘧啶_4-基胺基}·3,3-二甲基-3,4-二氫_2丑_苯并[/][1，4] 氧氮呼-5 - _， (S)-3 -曱基_6_[2_(4-六氫。比嗪-1-基·苯基胺基）-5-三氟甲 基-嘧啶-4-基胺基]-3,4-二氫-2/Λ苯并[/][1，4]氧氮呼-5-酮， ⑻-3-曱基_6-{2-[4-(4-甲基-六氫σ比嗪-1·基）_苯基胺 基]-5_三氟曱基·嘧啶-4_基胺基卜3,4_二氫_2好_苯并 L/H1，4]氧氮呼-5-酮， (8)-6_{2-[4-(4-異丙基-六氫吼嗪-1-基）_苯基胺基卜5_三氟 甲基-嘧啶-4-基胺基}-3-甲基-3,4-二氫-2丑-苯并[/][1，4]氧 氮呼-5-酮， (S)-3 -甲基_6-{2-[4-(4-丙-2-炔基-六氫η比嗓-1-基）_苯基胺 基]_5-三氟曱基-嘧啶-4-基胺基}-3,4-二氫-2丑-苯并 C/H1，4]氧氮呼-5-iq， (S)_3-乙基_6_[2_(心六氫吼嗪+基一苯基胺基）_5_三氟曱 基-嘧啶-4-基胺基]-3,4-二氫-2//-苯并[/][1，4]氧氮呼-5- 酮， (S)-6_[2-(4_六氫η比嗪小基·苯基胺基）_5_三i甲基·哺 啶-4-基胺基]-3_丙基_3,4_二氫·2丑_苯并⑺以，^氧氮呼巧_ 118131.doc -4- 200804364 酉同， (S)-6-{2-[4-(4 -丙_2·炔基·六氫π比嗪-^基）_笨基胺基]_5_ 二氟甲基-嘧啶-4-基胺基}-1，2,3，11&-四氫_1〇//_苯并[^]吡 口各並[1，2-α][1，4]二氮呼-5，11-二酮， (S)-6-{2-[4_(4-乙基-六氫°比嗓-1-基）-苯基胺基卜5-三氟甲 基-鳴啶-4-基胺基}-l，2,3，lla-四氫-10//-苯并⑷吡咯並 [l，2w][i，4]二氮呼-5，11-二酮， (S)-6-{2-[4-(4-異丁基-六氫吨嗪-1-基）-苯基胺基]三敦 曱基-嘧啶-4_基胺基卜l，2,3，lla-四氫-10/f-苯并[e]吡洛並 Π，2_α][1，4]二氮呼-5，11_ 二酮， (S)-6-{2-[4-(4 -甲基-六氫π比嗓-1-基）-苯基胺基]_5_三氣曱 基-’ °定_4-基胺基}-l，2,3，lla-四氫-1 〇i/-苯并⑷σ比嘻並 [1，2-(2][1，4]二氮呼-5，11-二酮， 6-{2-[4-(4-乙基-六氫《比唤-1-基）-苯基胺基卜5-三氟甲 基-嘧啶-4-基胺基卜3,3-二曱基-3,4-二氫-1//-苯并[e][1，4] 二氮呼-2,5_二酮， 3.3- 一甲基_6-{2-[4-(4-甲基-六氫0比唤-1-基）_苯基胺 基]-5-三氟甲基-癌咬-4-基胺基}_3,4-二氫-i/f-苯并 [己][1，4]二氮呼-2,5-二酮， 6-{2-[4-(4-異丙基-六氫吼嗪-1-基）-苯基胺基；]-5_三敦曱 基- π密σ定-4 -基胺基}-3,3·二曱基- 3,4·二氮-17/•苯并[已][1，4] 二氮呼-2,5-二酮， 3.3- 二甲基-6-{2-[4-(4-丙-2-快基-六氫咐*嘻-1-基）_苯基胺 基]-5-三氟曱基-喊咬-4-基胺基}_3,4_二氫-I//·苯并 118131.doc 200804364 1>][1，4]二氮呼 _2,5-二酮， (S)-6-{2-[4-(4-異丙基-六氫啦嗪-1-基）_苯基胺基卜5-三氟 甲基-喷啶-4-基胺基}-l，2,3，lla_四氫-10丑-苯并[e]吡咯並 二氮呼-5，11-二酮， (S) 6 {2-[4-(4-異丙基-六氫吨嗓-1-基）-苯基胺基]_5-三敗 甲基嘴σ定_4_基胺基}_3 -甲基-3,4-二氫-1//"-苯并[β][ι，4] 二氮呼_2,5_二酮， (S) 3-甲基_6_{2-[4·(4-甲基-六氫η比嗪-1-基）·苯基胺 基]二氟甲基·嘴σ定-4-基胺基}-3,4-二氫-1//-苯并 [泛][1，4]二氮呼 _2,5_ 二酮， (S) 3 -甲基_6_{2-[4-(4-丙_2_炔基·六氫吼嗪_1_基）_苯基胺 基卜三氟曱基-,°定_4_基胺基}_3,4-二氫笨并 1>][1，4]二氮呼 _2,5_二酮， (S) 6·{2-[4-(4 -乙基-六氫11比嗓-1-基）-苯基胺基]_5_三ι甲 基喷咬-4-基胺基}-3_曱基-354-二氫-1//-苯并[β][ι，4]二 氮坪-2,5-二酮及 {(S)-2,5-二氧代-6-[2-(4-六氫吼嗪_1_基_苯基胺基）-5_三 氟甲基-嘧啶-4-基胺基]_2,3,4,5_四氫-1//-苯并^][14]二 鼠呼-3-基卜乙酸曱g旨。 2·如清求項1之化合物，其中r5表示鹵素或_cf3。 3·如請求項1或2之化合物，其中 x 表示氧及 γ 表示-ch2-。 4.如請求項1或2之化合物，其中 118131.doc -6 - 200804364 X 表示氮及 y 表示c=o。 5·如睛求項1或2之化合物或其藥理上可接受之鹽，其呈〒 藥組合物形式。 6·如請求項1或2之化合物或其藥理上可接受之鹽，其用來 製備具有抗增殖作用之醫藥組合物。 7·如請求項1或2之化合物或其藥理上可接受之鹽，其用來 製備具有抗增殖作用及選擇性激酶抑制活性機理之醫藥 組合物。 8. -種以如請求項山中任—項之化合物於製備治療及/或 預防癌症、感染、炎症及自身免疫疾病之醫藥組合物之 用途。 9· -種醫藥製劑’其包含作為活性物質之一種或多種如靖 求項1至4中任一項之通式⑴之化合物或其藥理上可接受 之鹽’視情況與習用賦形劑及/或載劑組合。 又 1〇. -種醫藥製劑，其包含：如請求項⑴中任—項之、甬式 ⑴化合物，視情況呈以下形式：互變異構體、外二 構體、對映異構體、非對映異韻及其混合物，以及視 情況呈其藥理上可接受夕疏 竹^ , 伐又之鹽；及至少另一種抑 長或細胞毒性活性物質。 制、、，田胞生 118131.doc 200804364 七、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

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