TW201215405A - Antibodies against IL-18R1 and uses thereof - Google Patents

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201215405 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於抗人類IL-18R1抗體（IL-18R1抗體或IL-18Ra抗體）、不結合補體因子Clq之此等抗體、產生該等抗 體之方法、含有該等抗體之醫藥組合物、及該等抗體之用 途。 【先前技術】 IL-18為IL-1細胞激素超家族之成員。其為先天及繼承免 疫性之重要調控因子，其與IL-12協同誘導Thl/Tcl譜系分 化，誘導T細胞及NK細胞成熟，刺激IFNY、TNF-a及 GM-CSF產生，調控巨噬細胞及嗜中性白血球累積、功能 及細胞凋亡，且藉由在IL-4或IL-2存在下刺激IgE產生及 Th2分化而促成Th2反應。IL-18受體（IL-18R1)由配位體結 合次單元（IL-18R1)及信號轉導次單元（IL-18R1)組成（評述 於Nakanishi, K·等人，Ann· Rev. Immunol. 19 (2001) 423-474 中）。 IL-18似乎在多個檢查點（checkpoint)調節發炎且視為一 種潛在治療目標。先前研究已證明IFNa及CD8 T細胞在肺 氣腫（pulmonary emphysema)之發病機制中起重要作用 (Grumelli，S.等人，PLoS Medicine 1 (2004) 75-83 ; Ma等 人，J. Clin. Invest. 115 (2005); 3460-3472 ; Wang，Ζ·等 人，J. Exp. Med. 192 (2000) 1587-1599 ; Sutherland及 Cherniack，N. Engl. J. Med. 350 (2004) 2689-2697)。IL-18 在Thl/Tcl譜系分化及細胞激素產生中起重要作用。 157810.doc 201215405

Hoshino，T.等人，Am. J. Respir. Crit. Care Med. 176 (2007) 49-62。在鼠類模型中，香菸煙霧（CS)誘導及活化 小鼠中之IL-18，IL-18Rla在發病機制、CS誘導之發炎及 肺泡破壞中起關鍵作用（Kang，M.J.等人，J. Immunol. 178 (2007) 1948-1959 ； Kang, M.J., J. Clin. Invest. 118 (2008) 2771-2784)。 人類IL-18R1(介白素-18受體1，CD218抗原樣家族成員 A，CD218a，UniProtKB/Swiss-Prot Q13478)為介白素 18(IL-18)之受體且為第I型單次跨膜蛋白》與促效劑結合 會使NF-κ-Β活化。IL-18R1表現於肺、白血球、脾、肝、 胸腺、前列腺、小腸、結腸、胎盤及心臟中，且不存在於 腦、骨路肌、胰腺及腎中。在霍奇金病（Hodgkin disease) 細胞株中可見高表現量。IL-18R1在Parnet，P.等人，J. Biol. Chem. 271 (1996) 3967-3970 ； Torigoe, K.等人，J. Biol. Chem. 272 (1997) 25737-25742)中提及。 IL-18R1 及抗 IL-18R1 抗體在 US 7704945、US 7615220、 US 7169581 、 US 7141393 、 US 6600022 、 EP 1047781 、 WO 2010011697 ' WO 2009015284 ' WO 2009015284 ' WO 2009074634、WO 2009015284、WO 2007117577、 WO 2008027236、WO 2007117577、WO 2007096398、 WO 2005097998A3 ' WO 2006009114、WO 2005097998 ' WO 2005012352、WO 2003080104、WO 2003057821、 WO 2003008452A3、WO 2003012061、WO 2001085201、 WO 2002008272、WO 1999037772 中提及。 157810.doc -4- 201215405 本發明之目標在於提供適用作用於治療發炎性疾病（如 TH1介導之疾病，尤其COPD)、自體免疫性疾病、類風濕 性關節炎、狼瘡（lupus)及牛皮癬疾病之治療劑的抗IL-18R1抗體。 【發明内容】 本發明係關於一種與人類IL-18R1結合且特徵在於與單 株抗體1G12所結合相同之人類IL-18R1抗原決定基結合的 經分離抗體，其包含SEQ ID ΝΟ:1作為可變重鏈區之胺基 酸序列及SEQ ID NO:5作為可變輕鏈區之胺基酸序列，其 中該抗體與人類IL-18R1結合之結合親和力為1〇_8 Μ或1(Γ8 Μ以下。 本發明係關於一種經分離抗體，其與人類IL-18R1結合 且特徵在於包含SEQ ID NO: 2或SEQ ID ΝΟ:1〇之CDRH1 區、SEQ ID ΝΟ:3之 CDRH2 區及 SEQ ID ΝΟ:4之 CDRH3 區 作為重鏈可變區CDR ;及SEQ ID ΝΟ:6之CDRL1區、SEQ ID NO:7之CDRL2區及SEQ ID NO:8之CDRL3區作為輕鏈可 變區CDR。因此，抗體1G12與2D11中僅CDRH1區不同且 其他CDR區相同（參見III.序列表說明）。 本發明之一實施例為一種與人類IL-18R1結合且特徵在

於包含 SEQ ID NO:2 或 SEQ ID NO:10 之 CDRH1 區、SEQ ID NO:3之CDRH2區及SEQ ID NO:4之CDRH3區作為重鍵可變 區 CDR ;及 SEQ ID NO:6 之 CDRL1 區、SEQ ID NO:7 之 CDRL2區及SEQ ID NO:8之CDRL3區作為輕鏈可變區CDR 的經分離抗體或其人類化型式。在一實施例中，本發明抗 157810.doc 201215405 體之特徵在於重鏈可變域包含以下作為CDR : a) SEQ ID NO:2之 CDRH1 區、SEQ ID NO:3 之 CDRH2 區及 SEQIDNO:4之 CDRH3 區，或 b) SEQ ID NO:1〇 之 CDRH1 區、SEQ ID NO:3 之 CDRH2 區及 SEQIDNO:4tCDRH3g; 或其人類化型式° 在另一實施例中，本發明抗體之特徵在於輕鏈可變域包 含 SEQ ID NO:6之 CDRL1 區、SEQ ID NO:7之 CDRL2 區及 SEQ ID NO:8之 CDRL3 區作為 CDR ; 或其人類化型式。 在另一實施例中’本發明抗體之特徵在於重鍵可變域及 輕鏈可變域包含以下作為CDR : a) SEQ ID NO:2之CDRH1 區、SEQ ID NO:3之CDRH2區及 SEQ ID NO:4 之 CDRH3 區；及 SEQ ID NO:6 之 CDRL1 區、SEQ ID NO:7之 CDRL2 區及 SEQ ID NO:8之 CDRL3 區’或 b) SEQ ID NO:1〇 之 CDRH1 區、SEQ ID NO:3 之 CDRH2 區及 SEQ ID NO:4 之 CDRH3 區；及 SEQ ID NO:6 之 CDRL1 區、SEQ ID NO:7之 CDRL2 區及 SEQ ID NO:8之 CDRL3 區； 或其人類化型式β 本發明係關於一種與人類IL-18R1結合且特徵在於包含 SEQ ID ΝΟ:1作為重鏈可變區及SEQ ID ΝΟ:5作為可變輕 鍵區；或SEQ ID ΝΟ:9作為重鍵可變區及SEQ ID ΝΟ:11作 157810.doc -6 · 201215405 為可變輕鏈區的抗體； 或其人類化型式。 在一實施例中，本發明之人類化抗體的特徵在於包含： a) SEQ ID NO:30之 CDRH1 區、SEQ ID NO:31 之 CDRH2 區 及SEQ ID NO:32之CDRH3區作為重鏈可變區CDR;及 SEQ ID NO:34之 CDRL1 區、SEQ ID NO:35之 CDRL2 區 及SEQ ID NO:3 6之CDRL3區作為輕鏈可變區CDR ; b) SEQ ID NO:38 之 CDRH1 區、SEQ ID NO:39 之 CDRH2 區 及SEQ ID NO:40之CDRH3區作為重鏈可變區CDR;及 SEQ ID NO:42 之 CDRL1 區、SEQ ID NO:43 之 CDRL2 區 及SEQ ID NO:44之CDRL3區作為輕鏈可變區CDR ; c) SEQ ID NO:46之 CDRH1 區、SEQ ID NO:47之 CDRH2 區 及SEQ ID NO:48之CDRH3區作為重鏈可變區CDR;及 SEQ ID NO:50之 CDRL1 區、SEQ ID NO:51 之 CDRL2 區 及SEQIDNO:5 2之CDRL3區作為輕鏈可變區CDR; d) SEQ ID NO:54 之 CDRH1 區、SEQ ID NO:55 之 CDRH2 區 及SEQ ID NO:56之CDRH3區作為重鏈可變區CDR;及 SEQ ID NO:58之 CDRL1 區、SEQ ID NO:59之 CDRL2區 及SEQIDNO:60之CDRL3區作為輕鏈可變區CDR;或 e) SEQ ID NO:62之 CDRH1 區、SEQ ID NO:63 之 CDRH2 區 及SEQ ID NO:64之CDRH3區作為重鏈可變區CDR ;及 SEQ ID NO:66之 CDRL1 區、SEQ ID NO:67之 CDRL2 區 及SEQ ID NCh68之CDRL3區作為輕鏈可變區CDR。 在一實施例中，本發明之人類化抗體的特徵在於包含： 157810.doc 201215405 a) SEQ ID NO:29作為重鏈可變區及SEQ ID NO:33作為可 變輕鏈區； b) SEQ ID N〇:37作為重鏈可變區及SEQ ID NO:41作為可 變輕鏈區； c) SEQ ID NO:45作為重鏈可變區及SEQ ID NO:49作為可 變輕鏈區； d) SEQ ID NO:53作為重鏈可變區及SEQ ID ΝΟ··57作為可 變輕鏈區；或 e) SEQ ID ΝΟ:61作為重鏈可變區及SEQ ID ΝΟ:65作為可 變輕鏈區。 本發明係關於一種與人類IL-18R1結合且特徵在於與單 株抗體1G12所結合相同之IL-18R1抗原決定基結合的抗 體。因此’抗體與IL-18R1之域2結合。一例示性抗體為抗 體2D1卜 抗體較佳為單株抗體’且此外亦為包含人類恆定鏈之嵌 合抗體’或人類化抗體。人類化抗體尤其較佳。本發明之 抗體較佳包含來源於人類來源之Fc部分。本發明抗體之重 鏈可變域及輕鏈可變域較佳具有人類λ同型。本發明之一 較佳實施例為抗體1G12或抗體2D11之嵌合或人類化變異 體。較佳地，本發明抗體之特徵在於具有上述胺基酸序列 或胺基酸序列片段及性質。 較佳地’本發明之抗體具有人類IgG14IgG4同型。本發 明之抗體較佳具有在CH1與CH2之間大致胺基酸位置 216-240處、較佳大致胺基酸位置220-240處之鉸鏈區中及/ 157810.doc 201215405 或在CH2與CH3之間大致胺基酸位置327-331處之第二域間 區中經修飾的IgG 1同型》較佳地，本發明抗體之特徵在於 具有人類IgGl同型，較佳包含胺基酸位置234處之白胺酸 經丙胺酸替代的突變L234A，及胺基酸位置235處之白胺 酸經丙胺酸替代的突變L235A。該等胺基酸位置對於不同 異型可能在約一或兩個數值内變化，因此在該種異型中， 胺基酸位置234處之白胺酸可位於例如位置235處。因此， 「胺基酸位置234處之白胺酸」意謂位於胺基酸位置234處 或向上或向下一或兩個位置處之白胺酸。 本發明之抗體較佳具有含或不含突變S228P之人類igG4 同型。 抗體之特徵較佳進一步在於與人類IL-18R1結合之親和 力為10'8 M(KD)或10_8 Μ以下、較佳為約ΙΟ·8至1〇·13 μ、 較佳為約1 〇 9至1 〇 13 Μ。較佳地’本發明之抗體亦與獼狼 (cynomolgus)IL-18Rl結合。 本發明進一步提供重組產生此等抗體之方法。本發明進 一步包含一種產生本發明之重組抗體之方法，其特徵在於 在CHO宿主細胞中表現編碼與IL-18R1結合之抗體的核酸 及自該細胞回收該抗體。本發明進一步提供一種編碼本發 明抗體之核酸° 本發明進一步包含本發明抗體用於治療慢性阻塞性肺病 (COPD)、發炎性疾病、自體免疫性疾病、類風濕性關節 炎、狼瘡、牛皮癬或骨病之用途。本發明進一步包含本發 明抗體用於製造用於治療疾病，較佳治療發炎性疾病、自 157810.doc 201215405 體免疫性疾病、狼瘡、牛皮癣或f病之藥劑的用途。本發 明進-步包含—種製造用於治療疾病，較佳治療慢性阻塞 性肺病(COPD)、發炎性疾病、自體免疫性疾病、類風濕 性關節炎、狼瘡、牛皮癖或骨病之藥劑的方法，其特徵在 於包含本發明之抗體。本發明抗體之特徵在於具有上述性 質。 ' 本發明進一步提供治療慢性阻塞性肺病（c〇pD)、發炎 性疾病、自體免疫性疾病、類風濕性關節炎、狼瘡、牛皮 癬或骨病之方法，其包含向診斷為患有此疾病（且因此需 要該種療法）之患者投與本發明之抗江_18111抗體。抗體可 單獨、以醫藥組合物形式或者與用於治療慢性阻塞性肺病 (COPD)、發炎性疾病、自體免疫性疾病、類風濕性關節 炎、狼瘡、牛皮癖或骨病之其他藥劑組合投與。抗體以醫 藥有效量投與。 本發明進-步包含本發明抗體用於治療慢性阻塞性肺病 (COPD)、發炎性疾病、自體免疫性疾病、類風濕性關節 炎、狼瘡、牛皮癬或骨病及用於製造本發明之醫藥組合物 的用途。此外，本發明包含一種製造本發明之醫藥組合物 之方法。 本發明進一步包含一種用於治療慢性阻塞性肺病 (C0PD)、發炎性疾病、自體免疫性疾病、類風濕性關節 炎 '狼瘡、牛皮癬或骨病之本發明抗體。 本發明進一步包含一種含有本發明抗體、視情況連同適 用於出於醫藥目的調配抗體之緩衝劑及/或佐劑的醫藥皴 157810.doc 201215405 合物。 本發明進一步包含一種包含本發明抗體之醫藥組合物。 本發明進一步提供包含此等抗體於醫藥學上可接受之載 劑中之醫藥組合物。在一實施例中，醫藥組合物可包括在 製品或套組中。本發明進一步提供本發明抗體用於製造用 於治療癌症或慢性阻塞性肺病（COPD)、發炎性疾病、自 體免疫性疾病、類風濕性關節炎、狼瘡、牛皮癬或骨病之 醫藥組合物的用途。抗體係以醫藥有效量使用。 本發明進一步包含本發明抗體用於製造用於治療慢性阻 塞性肺病（COPD)、發炎性疾病、自體免疫性疾病、類風 濕性關節炎、狼瘡、牛皮癖或骨病之醫藥組合物的用途。 抗體係以醫藥有效量使用。 本發明抗體具有可對罹患與IM8受體介導之信號傳導及 NFkB路控活化相關之疾病t患者產生益處的新穎及 性質。 本發明抗體具有新穎及獨創性質且與IL-18R1結合並抑 制IL 18與IL-18R1之結合。因此’ iLi8RaiL_激之 門的複。物形成爻到抑制且由受體複合物引起之信 號傳導又到抑制。此舉抑制NFkB路徑活化。 【實施方式】 I·定義 出於本文中之目的 人類免疫球蛋白構架 鏈可變域（VL)構架或 ’接受者人類構架」為包含來源於 或如以下所定義之人類共同構架之輕 4鏈可變域（VH)構架之胺基酸序列的 157810.doc -11- 201215405 構架。「來源於」人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之 接受者人類構架可包含人類免疫球蛋白構架或人類共同構 架之相同胺基酸序列，或其可含有胺基酸序列變化。在一 些實施例中，胺基酸變化之數目為10或10以下、9或9以 下、8或8以下、7或7以下、6或6以下、5或5以下、4或4以 下、3或3以下、或2或2以下。在一些實施例中，VL接受 者人類構架序列與VL人類免疫球蛋白構架序列或人類共 同構架在序列上相同。 「親和力」係指分子（例如抗體）之單一結合位點與該分 子之結合搭配物（例如抗原）之間非共價相互作用總和的強 度。除非另外指示’否則如本文所用，「結合親和力」係 指反映結合對（例如抗體與抗原）成員之間1:1相互作用之固 有結合親和力。分子X對其搭配物Y之親和力通常可由解 離常數（Kd)表示。親和力可藉由此項技術中已知之常用方 法（包括本文所述之方法）量測。量測結合親和力之具體說 明性及例示性實施例描述於下文中。 術語「抗IL-18R1抗體」及「與IL-18R1結合之抗體」係 指能夠以足夠親和力結合人類IL-18R1之抗體，以使得該 抗體適用作靶向IL-18R1之診斷劑及/或治療劑。在一實施 例中，抗IL-18R1抗體與無關非IL-18R1蛋白質結合之程度 小於該抗體與IL-1 8R1結合的約1 〇%，如藉由表面電漿子共 振所量測。在某些實施例中，與比_18111結合之抗體之解 離常數（Kd)為1〇·8 Μ或ΙΟ·8 Μ以下，例如ι〇·8 ]^至1〇-13 M， 例如 ΙΟ·9 Μ至 ίο-13 Μ。 157810.doc •12· 201215405 術語「抗體」在本文中以最廣泛意義使用且涵蓋各種抗 體結構，包括（但不限於）單株抗體、多株抗體、多特異性 抗體（例如雙特異性抗體）及抗體片段，只要其展現所要抗 原結合活性即可。 「抗體片段」係指除完整抗體以外之分子，其包含完整 抗體中結合該完整抗體所結合之抗原的部分。抗體片段之 實例包括（但不限於）Fv、Fab、Fab，、Fab'-SH、F(ab，）2 ;雙 功lb抗體，線性抗體；單鍵抗體分子（例如scfv);及自抗 體片段形成之多特異性抗體。 如本文所用之術語「癌症」係指增生性疾病，諸如淋巴 瘤、淋巴球性白血病、肺癌、非小細胞肺（NSCL)癌、細支 氣管肺泡細胞肺癌（bronchioloalviolar cell lung cancer)、 骨癌、胰臟癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚或眼内黑素瘤、子 &癌、印巢癌、直腸癌、肛門區癌、胃癌（st〇niach cancer)、胃癌（gastric cancer)、結腸癌、乳癌、子宮癌、 輸卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍 奇金氏病（Hodgkin’s Disease)、食道癌、小腸癌、内分泌 系統癌、甲狀腺癌、副曱狀腺癌（cancer of the parathyroid gland)、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列 腺癌、膀脱癌、腎癌或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、間 皮瘤（mesothelioma)、肝細胞癌、膽癌、中樞神經系統 (CNS)腫瘤、脊柱轴腫瘤、腦幹神經膠質瘤、多形性膠質 母細胞瘤（glioblastoma multiforme)、星形細胞瘤 (astrocytomas)、神經鞘瘤（schwanomas)、室管膜瘤 157810.doc •13- 201215405 (ependymonas)、神經管胚細胞瘤（medulloblastomas)、脊 膜瘤（meningiomas)、鱗狀細胞癌、垂體腺瘤及尤文氏肉瘤 (Ewings sarcoma)，包括任何以上癌症之難治型式或一或 多種以上癌症之組合。 術語「嵌合」抗體係指重鏈及/或輕鏈之一部分來源於 特定來源或物種，而重鏈及/或輕鏈之其餘部分來源於不 同來源或物種之抗體。 抗體之「類別」係指其重鏈所具有之恆定域或恆定區之 類型。存在5種主要抗體類別：IgA、IgD、IgE、IgG及 IgM，且若干此等類別可進一步分成子類（同型），例如 IgG〗、IgG2、IgG3、IgG4、IgA丨及IgA2。對應於免疫球蛋 白之不同類別之重鍵怪定域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。本 發明抗體之特徵較佳在於具有含突變PVA236、 L234A/L235A及/或GLPSS331之人類子類IgGl ;或子類 IgG4。在本發明之另一較佳實施例中，抗體之特徵在於屬 於任何IgG類別，較佳為IgGl或IgG4，在E233、L234、 L235 、 G236 、 D270 、 N297 、 E318 、 K320 、 K322 、 A327、A330、P331及/或P329(根據EU索引編號）中含有至 少 1 個突變。IgGl 突變 PVA236、L234A/L235A 及 / 或 GLPSS331以及IgG4突變L235E尤其較佳。屬於IgG4子類之 抗體含有突變S228P或突變S228P及L235E進一步較佳 (Angal, S.等人，Mol. Immunol. 30 (1993) 105-108)。因 此，本發明抗體較佳為屬於人類子類IgGl之抗體，含有 PVA236、GLPSS331 及/或 L234A/L235A(根據EU 索弓| 編號） 157810.doc • 14· 201215405 之一或多個突變。 「效應功能」係指可歸因於抗體之Fc區之彼等生物活 性’ §亥效應功能隨抗體同型而變化。抗體效應功能之實例 包括：C1 q結合及補體依賴性細胞毒性（CDC) ; Fc受體結 合’抗體依賴性細胞介導之細胞毒性（adcc);吞嗟作 用；細胞表面受體（例如B細胞受體）之下調；及B細胞活 化0 藥劑（例如醫藥調配物）之「有效量」係指在必要劑量下 且持續必要時期，有效達成所要治療或防治結果之量。 術ef「相同抗原決定基」係指特徵在於抑制抗體1G12與 IL-18R1之結合之本發明抗體。若某一抗體與抗體1G12結 合IL-18R1之相同抗原決定基結合，則該抗體與仄_18111之 結合受到抑制，或該抗體由於此參考抗體造成之結合位阻 而與IL-18R之結合受到抑制。可藉由SpR(BIAC〇RE)檢定 偵測IL-18R1與待研究抗體之間的結合的抑制。待研究之 抗IL-18R1抗體在6 pg/ml(對應於4〇 nM)之濃度下由與晶片 表面偶合之抗物種抗體捕捉。接著於經抗體塗佈之表面上 注射 2.5 pg/ml IL-18R1 蛋白（對應於 2〇 nM IL-18R1 Fc 融合 物）至20 nM之濃度。為進行分析，於此表面上歷時2分鐘 添加抗體1G12至50 nM之濃度且量測結合。在注射時，任 何4§號降低或無信號變化指示待研究之抗體會抑制igi2與 IL-18R1之結合。若此外在相同但其中抗體1(^2經固定且 添加待研究之抗體的檢定中獲得相同結果，則待研究之抗 體與「相同抗原決定基」結合。相反，在該兩種檢定之至 157810.doc 201215405 少一者中，藉由抗體注射獲得信號增加至少10%表明待研 究之抗體不抑制1G12與IL-18R1之結合。 進一步發現與抗體1G12結合相同抗原決定基的抗體亦與 突變由以下組成之突變型IL-18R1結合：D1-SRIAL(SEQ ID NO:19)突變成 PRVTF(SEQ ID NO:20)、D1-MKNYTQK (SEQ ID NO:21)突變成 VGNDRRN(SEQ ID NO:22)、 D2-QTLVNSTS(SEQ ID NO:23)突變成 EELIQDTW(SEQ ID NO:24)、D2-NPTIKKN(SEQ ID NO:25)突變成 TPRILKD (SEQ ID NO:26)、或 D2-HFLHHNGKLF(SfiQ ID NO:27)突 變成FSVHHNGTRY(SEQ ID NO:28)。進一步發現與抗體 1G12結合相同抗原決定基的抗體不與域D1及D2缺失之突 變型IL-18R1結合。根據以上所述，與該種突變型IL-18R1 結合之SPR的信號偏差不超過藉由與非突變型IL-1 8R1結合 獲得之信號的20%表明待研究之抗體亦與該種突變型 IL-1R1變異體結合。 「抗體之Fc部分或區」為熟習此項技術者所熟知之術語 且基於抗體之木瓜蛋白酶（papain)裂解進行定義。該術語 定義免疫球蛋白重鏈之含有至少一部分恆定區的C端區》 該術語包括天然序列Fc區及變異型Fc區。在一實施例中， 人類IgG重鏈Fc區自Cys226或自Pro23 0延伸至重鏈之羧基 端。然而，Fc區之C端離胺酸（Lys447)可存在或可不存 在。除非本文中另外規定，否則Fc區或恆定區中胺基酸殘 基之編號係根據EU編號系統，亦稱為EU索引，如Kabat等 人，Sequences of Proteins of Immunological Interest > 第 5 157810.doc -16- 201215405 版，Public Health Service，National Institutes of Health, Bethesda，MD (1991)中所述。較佳地，Fc部分為人類Fc部 分且尤其較佳來自人類IgG4子類，較佳在鉸鏈區中具有突 變（例如S228P及/或L235E)，或為來自人類IgGl子類之突 變型Fc部分。包含選自SEQ ID NO:14、15、16、17及18中 所示之區域之重鍵丨亙定區的Fc部分最佳。較佳輕鍵恆定區 展示於SEQIDNO:12及13中。 「構架」或「FR」係指除高變區（HVR)殘基以外之可變 域殘基。可變域之FR通常由4個FR域：FR1、FR2、FR3及 FR4組成。因此，CDR及FR序列在VH(或VL)中通常以以下 順序出現：FR1-CDR1(L1)-FR2-CDR2(L2)-FR3-CDR3(L3)-FR4。 術語「全長抗體」、「完整抗體」及「完全抗體」在本文 中可互換使用來表示結構實質上類似於天然抗體結構或具 有含有如本文所定義之Fc區之重鏈的抗體。 術語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養 物」可互換使用且表示其中已引入了外源性核酸之細胞， 包括此等細胞之子代。宿主細胞包括「轉型體」及「經轉 型細胞」，其包括初級轉型細胞及由其獲得之子代而不考 慮繼代次數。子代在核酸成分方面可能不完全與親本細胞 相同，而可能含有突變。本文中包括具有與在原始轉型細 胞中所篩檢或選擇相同之功能或生物活性的突變型子代。 「人類共同構架」為代表所選人類免疫球蛋白VL或VH 構架序列中最常出現之胺基酸殘基的構架。一般而言，人 157810.doc •17- 201215405 類免疫球蛋白VL或VH序列選自可變域序列之子群。一般 而言’序列子群為如Kabat等人’ Sequences of pr〇teins of

Immunological Interest，第 5 版，NIH 出版物 91-3242,

Bethesda MD (1991) ’第1-3卷中之子群。在一實施例中， 對於VL ’子群為如Kabat等人（同上）中之子群K j。在一實 施例中’對於VH ’子群為如Kabat等人（同上）中之子群 III» 「人類化」抗體係指包含來自非人類CDR之胺基酸殘基 及來自人類FR之胺基酸殘基的嵌合抗體。在某些實施例 中，人類化抗體將包含至少1個且通常2個可變域之實質上 全部，其中全部或貫質上全部CDR皆對應於非人類抗體之 CDR，且全部或實質上全部FR皆對應於人類抗體之FR。 人類化抗體視情況可包含來源於人類抗體之抗體恆定區的 至少一部分。抗體（例如非人類抗體）之「人類化形式」或 「人類化型式」或「人類化抗體」係指已進行人類化之抗 體。在一實施例中，來源於非人類物種（例如倉鼠）之抗體 之1至全部6個CDR被移植至人類抗體之構架區中以製備 「人類化抗體」。參見例如Riechmann，L等人，Nature 332 (1988) 323-327 ;及 Neuberger，M.S.等人，Nature 314 (1985) 268-270 〇在一實施例中，本發明之「抗體之人類 化型式」（其具有非人類來源）係指基於以下非人類抗體序 列之抗體.其中vH及vL藉由標準技術（包括CDR移植）人類 化且視情況隨後對構架區及CDR中之某些胺基酸進行突變 誘發》在一實施例中，構架區中之丨至5個胺基酸（例如多 157810.doc .18- 201215405 達3個）及/或CDR中之1至3個胺基酸（例如多達2個）可藉由 進一步突變進行修飾。舉例而言，突變誘發可基於如由 Riechmann，L.等人，Nature 332 (1988) 323-327及 Queen， C·等人，Proc. Natl· Acad. Sci. USA 86 (1989) 10029-10033 所述之分子模型化或其他技術。此等突變之適合位置可例 如藉由序列或同源性分析、藉由選擇人類構架（固定構架 方法；同源性匹配或最佳配合）、藉由使用共同序列、藉 由自若干不同生殖系選擇FR、或藉由用人類抗體中所發現 之最常見殘基置換三維表面上之非人類殘基、或基於空間 最佳化相互作用來鑑別。在一實施例中，此人類化型式嵌 合有人類恆定區。 如本文所用之術語「互補決定區」或「CDR」係指抗體 可變域中在序列上高度可變及/或形成結構確定之環（「高 變環」）的各區（Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第 5 版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)； Chothia，C.及 Lesk，A.M.，J. Mol. Biol. 196 (1987) 901-917))。除VH中之CDR1之外，CDR通常包含形成高變環之 胺基酸殘基。一般而言，天然四鏈抗體包含6個CDR; 3個 在 VH 中（HI、H2、H3)，且 3 個在 VL 中（LI、L2、L3)。 HVR通常包含來自高變環及/或來自「互補決定區」（CDR) 之胺基酸殘基，互補決定區具有最高序列可變性及/或參 與抗原識別。例示性CDR存在於胺基酸殘基26-32(Ll)、 50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(Η1)、53-55(H2)及 96-101 157810.doc -19- 201215405 (H3)處（Chothia，C.及 Lesk，Α·Μ·，J. Mol· Biol· 196 (1987) 901-917)或LI之胺基酸殘基24-34、L2之胺基酸殘基50-56、L3之胺基酸殘基89-97、HI之胺基酸殘基31-35B、H2 之胺基酸殘基50-65及H3之胺基酸殘基95-102處（Kabat, E.A.等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第 5 版 Public Health Service, National Institutes of Health，Bethesda，MD (1991), NIH 出版物 91-3242)。除 VH中之CDR1之外，CDR通常包含形成高變環之胺基酸殘 基。SDR包含於CDR之稱為簡化-CDR(abbreviated-CDR)或 a-CDR 的區域内。例示性 a-CDR(a-CDR-Ll、a-CDR-L2、 a-CDR-L3、a-CDR-Hl、a-CDR-H2 及 a-CDR-H3)存在於 LI 之胺基酸殘基31-34、L2之胺基酸殘基50-55、L3之胺基酸 殘基89-96、H1之胺基酸殘基31-35B、H2之胺基酸殘基 50-58及H3之胺基酸殘基95-102處。（參見Almagro，J.C.及 Fransson，J.，Front. Biosci. 13 (2008) 1619-1633)。除非另 外指示，否則CDR殘基及可變域中之其他殘基（例如FR殘 基）在本文中係根據Kabat等人（同上）進行編號。 「免疫結合物」為與一或多個異源分子結合之抗體。 「個體」為哺乳動物。哺乳動物包括（但不限於）馴化動 物（例如母牛、綿羊、貓、狗及馬）、靈長類動物（例如人類 及非人類靈長類動物，諸如猴）、兔及齧齒動物（例如小鼠 及大鼠）。在某些實施例中，個體為人類。 「經分離」抗體為已與其天然環境之組分分離之抗體。 在一些實施例中，如藉由例如層析（例如離子交換或逆相 157810.doc -20- 201215405 HPLC)方法所測定，抗體純化至純度大於95%或99% 〇關 於評估抗體純度之方法之評述，參見例如Flatman, S.等 人，J. Chromatogr. B 848 (2007) 79-87) ° 「經分離」核酸係指已與其天然環境之組分分離之核酸 分子。經分離核酸包括如下核酸分子：該核酸分子含於通 常含有該核酸分子之細胞中，但該核酸分子存在於染色體 外或不同於其天然染色體位置之染色體位置處。 「編碼抗IL-1 8R1抗體之經分離核酸」係指編碼抗體重 鏈及輕鏈（或其片段）之一或多種核酸分子，包括在單一載 體或各別載體中之此（此等）核酸分子及存在於宿主細胞中 之一或多個位置之此（此等）核酸分子。 本文所用之術語「單株抗體」係指自實質上均質抗體之 群體獲得的抗體’亦即該群體包含之個別抗體相同及/或 結合相同抗原決定基，除可能之變異抗體之外，例如含有 天然產生之突變或在產生單株抗體製劑期間出現，此等變 異體通常以小量存在。相對於通常包括針對不同決定子 (抗原決定基）之不同抗體之多株抗體製劑，單株抗體製劑 之各單株抗體針對抗原上之單一決定子。因此，修飾語 「單株」指示抗體係自實質上均質之抗體群體獲得之特 性’不應解釋為需要藉由任何特定方法產生抗體。舉例而 § ’根據本發明使用之單株抗體可藉由多種技術製備，該 等技術包括（但不限於）融合瘤法、重組DNA法、噬菌體呈 現法’及利用含有所有或部分人類免疫球蛋白基因座之轉 殖基因動物的方法’此等方法及其他製備單株抗體之例示 157810.doc •21 · 201215405 性方法在本文中描述。 「裸抗體」係指未與異源部分結合之抗體。裸抗體可存 在於醫藥調配物中。 「天然抗體」係指天然產生之具有不同結構之免疫球蛋 白分子。舉例而言’天然IgG抗體為約150,000道爾頓 (daltons)之雜四聚醣蛋白，由2條相同輕鍵及2條相同重鍵 經二硫鍵結合構成。自N端至C端，各重鏈具有可變區 (VH) ’亦稱為可變重域或重鏈可變域，繼而為3個恆定域 (CHI、CH2及CH3)。類似地，自n端至C端，各輕鏈具有 可變區（VL)，亦稱為可變輕域或輕鏈可變域，繼而為恆定 輕（CL)域。抗體之輕鏈可基於其恆定域之胺基酸序列歸屬 於稱為κ及λ之兩種類型之一。 術語「包裝插頁」用於表示通常包括在治療產品之商業 包裝中之說明書，其含有關於使用此等治療產品有關之適 應症、用法、劑量、投藥、組合療法、禁忌症及/或警告 之資訊。 相對於參考多肽序列之「胺基酸序列一致性百分比 (%)」定義為在比對序列且必要時引入間隙以達成最大序 列一致性百分比，且不將任何保守性取代視為序列一致性 之部分之後，候選序列中之胺基酸殘基與參考多肽序列中 之胺基酸殘基一致之百分比。為確定胺基酸序列一致性百 分比之目的之比對可以此項技術中技能範圍内的各種方式 達成，例如使用公開可得之電腦軟體，諸如blast、 BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體。熟習此項 157810.doc -22· 201215405 技術者可決定適於比對序列之參數，包括在所比較序列之 全長上達成最大比對所需的任何演算法。然而，為本文之 目的，使用序列比較電腦程式ALIGN-2來產生胺基酸序列 一致性百分比值。ALIGN-2序列比較電腦程式係由 Genentech，Inc.創作，且原始碼已與使用說明書一起在美 國版權局（U.S. Copyright Office, Washington D.C., 20559) 申請，以美國版權登記號TXU5 10087登記。ALIGN-2程式 可自 Genentech，Inc., South San Francisco, California公開 獲得，或可自原始碼編譯。ALIGN-2程式應經編譯以用於 UNIX操作系統，包括數位UNIX V4.0D。所有序列比較參 數皆由ALIGN-2程式設定且不變化。 在採用ALIGN-2進行胺基酸序列比較之情況下，如下計 算指定胺基酸序列A對於、與、或相對於指定胺基酸序列 B之胺基酸序列一致性％(或者可表述為指定胺基酸序列A 對於、與、或相對於指定胺基酸序列B具有或包含某一胺 基酸序列一致性％):

l〇〇x 分數 X/Y 其中X為序列比對程式ALIGN-2在A與B之彼程式比對中計 分為一致匹配之胺基酸殘基的數目，且其中Y為B中胺基 酸殘基的總數。應瞭解，當胺基酸序列A之長度與胺基酸 序列B之長度不相等時，A與B之胺基酸序列一致性％將不 等於B與A之胺基酸序列一致性％。除非另外明確規定，否 則本文中使用之所有胺基酸序列一致性％值皆使用ALIGN-2 電腦程式如前一段落中所述獲得。 157810.doc •23· 201215405 術語「醫藥調配物」係指以下製劑：其呈使得允許其 所含之活性成分之生物活性有效的形式， 八 ^且具不含有對該 調配物將投與之個體具有不可接受之毒性的其他組分。 「醫藥學上可接受之載劑」係指除活性成分以外刀，醫藥 調配物中對個體無毒之成分。醫藥學上可接受之載劑包括 (但不限於）緩衝劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。 如本文所用之術語「IL-18R1」係指人類江_18]11(介白 素-18受體1 ’ IL-18RCX ’ CD218抗原樣家族成員A， CD218a，UniProtKB/Swiss-Prot Q13478)。 如本文所用，「治療」（及其語法變化形式）係指試圖改 變所治療個體之天然病程之臨床介入，且可出於防治目的 或在臨床病理學之進程期間執行。治療之所需效果包括 (但不限於）預防疾病發生或復發、減輕症狀、減弱疾病之 任何直接或間接病理學後果、降低疾病進展速率、改善或 緩和疾病病況。在一些實施例中，本發明抗體用於延遲疾 病發展或減緩疾病進展。 術語「可變區」或「可變域」係指抗體重鏈或輕鏈中參 與抗體與抗原之結合的域。天然抗體之重鏈及輕鏈之可變 域（分別為VH及VL)通常具有類似結構，其中各域包含4個 保守構架區（FR)及3個高變區（HVR)(參見例如Kindt等人，

Kuby Immunology ’ 第 6版，W.H. Freeman and Co.，第 91 頁（2007)) ^單一 VH或VL域可足以賦予抗原結合特異 性。此外’結合特定抗原之抗體可使用來自結合該抗原之 抗體的VH或VL域分別篩檢互補VL域或VH域之文庫進行 157810.doc -24· 201215405 分離（參見例如 Portolano，S.等人，J· Immunol· 150 (1993) 880-887 ; Clarkson，T.等人，Nature 352 (1991) 624-628)。 如本文所用之術語「載體」係指一種核酸分子，其能夠 使與其連接之另一核酸增殖。該術語包括呈自我複製型核 酸結構（self-replicating nucleic acid structure)形式之載體 以及併入其所引入之宿主細胞之基因組中的載體。某些載 體能夠引導其可操作地連接之核酸之表現。此等載體在本 文中稱為「表現載體」。 II.組合物及方法 在一態樣中，本發明係基於與IL-18R1結合之抗體。本 發明之抗體適用於例如診斷或治療慢性阻塞性肺病 (COPD)、發炎性疾病、自體免疫性疾病、類風濕性關節 炎、狼瘡、牛皮癬或骨病。 A.例示性抗IL-18R1抗逋 在本發明之另一態樣中’根據任何以上實施例之抗 IL-18R1抗體為單株抗體’包括嵌合或人類化抗體。在一 實施例中’抗IL-18R1抗體為抗體片段，例如Fv、Fab、 Fab1、scFv、雙功能抗體或F(ab，)2片段。在另一實施例 中’抗體為全長抗體’例如完整IgGl抗體或如本文中所定 義之其他抗體類別或同型。 在另一態樣中，根據任何以上實施例之抗IL_18R1抗體 可併有任何如以下部分中所述之特徵中的一者或任何特徵 之組合： 在一實施例中’本發明之人類化抗體的特徵在於包含 157810.doc -25- 201215405 SEQ ID NO:2或 SEQ ID NO:10之CDRH1 區、SEQ ID NO:3 之CDRH2區及SEQ ID NO:4之CDRH3區作為重鍵可變區 CDR ;及 SEQ ID NO:6 之 CDRL1 區、SEQ ID NO:7 之 CDRL2區及SEQ ID NO:8之CDRL3區作為輕鏈可變區 CDR， 或其人類化型式。 在一實施例中，本發明之人類化抗體的特徵在於包含 SEQ ID ΝΟ··1作為重鏈可變區及SEQ ID NO:5作為可變輕 鍵區；或SEQ ID NO:9作為重键可變區及seq id ΝΟ:11作 為可變輕鏈區， 或其人類化型式。 在一實施例中，本發明抗體之特徵在於包含： a) SEQ ID NO:30之CDRH1 區、SEQ ID N〇.3l2CDRH2g 及SEQ ID NO:32之CDRH3區作為重鏈可變區cdr ;及 SEQ ID NO:34之 CDRL1 區、SEQ ID N〇:35之 CDRL2 區 及SEQ ID NO:36之CDRL3區作為輕鍵可變區cdr ; b) SEQ ID NO:38 之 CDRH1 區、SEQ ID N〇:39 之 CDRH2 區 及SEQ ID NO :40之CDRH3區作為重鏈可變區cdr ;及 SEQIDNO:42>^CDRLlg、SEQII)N〇.432CDRL2g 及SEQ ID NO:44之CDRL3區作為輕鏈可變區CDR ; c) SEQ ID NO:46之 CDRH1 區、SEQ ID N〇:47之 CDRH2 區 及SEQ ID NO:48之CDRH3區作為重鏈可變區CDR;及 SEQ ID NO:50之CDRL1 區、SEQ ID n〇:512CDRL2區 及SEQ ID NO:52之CDRL3區作為輕鏈可變區CDR ; 157810.doc -26- 201215405 d) SEQ ID NO:54之CDRH1 區、SEQ ID NO:55之CDRH2區 及SEQ ID N〇:56之CDRH3區作為重鏈可變區CDR;及 SEQ ID NO:58之 CDRL1 區、SEQ ID NO:59之 CDRL2 區 及SEQ ID NO:6〇之CDRL3區作為輕键可變區CDR ;或 e) SEQ ID NO:62之CDRH1 區、SEQ ID NO:63之CDRH2區 及SEQ ID N〇:64之CDRH3區作為重鏈可變區CDR;及 SEQ ID NO:66之 CDRL1 區、SEQ ID NO:67之 CDRL2 區 及SEQ ID NO:68之CDRL3區作為輕鏈可變區CDR。 在一實施例中，本發明抗體之特徵在於包含： a) SEQ ID NO:29作為重鍵可變區及SEQ ID NO:33作為可 變輕鍵區； b) SEQ ID NO:37作為重鏈可變區及SEQ ID NO:41作為可 變輕鍵區； c) SEQ ID NO··45作為重鏈可變區及SEQ ID NO:49作為可 變輕鏈區； d) SEQ ID NO:53作為重鏈可變區及SEQ ID NO:57作為可 變輕鏈區；或 e)SEQ ID NO:61作為重鏈可變區及SEQ ID NO:65作為可 變輕鏈區。 1.抗體親和力 在某些實施例中’本文提供之抗體之解離常數（KD)為1〇·8 Μ或 1CT8 Μ以下’例如 ΙΟ-8 Μ至 1CT13 μ，例如 ΙΟ·9 Μ至 1CT13 Μ。 KD係使用表面電漿子共振檢定，使用BIACORE®-T10〇 157810.doc -27- 201215405 或 BIACORE®-A100(GE Healthcare，Freiburg，Germany)， 在25°C下，用固定抗原CM5晶片，在10個反應單位（RU)下 量測。簡言之，根據供應商之說明書用乙基-ΛΤ-(3-二曱 基胺基丙基）-碳化二亞胺鹽酸鹽（EDC)及羥基丁二醢亞 胺（NHS)活化羧甲基化葡聚糖生物感測器晶片（CM5，GE Healthcare)。抗原或適合捕捉抗體用10 mM乙酸鈉（pH 4.8) 稀釋至5 pg/ml，隨後以5微升/分鐘之流速注射以達成約1〇 個反應單位（RU)之偶合蛋白質。在注射蛋白質之後，注射 1 Μ乙醇胺以阻斷未反應之基團。在量測結合事件之前， 一種結合搭配物已固定於表面上或藉由適合捕捉系統（例 如用於捕捉人類IgG之人類IgG特異性抗體）捕捉。對於動 力學量測，在25°C下以約30 μΐ/min之流速注射於含0.05% 聚山梨醇酯20(TWEEN-20tm)界面活性劑之PBS(PBST)中兩 倍連續稀釋的Fab/抗體/抗原（0.78 nM至500 nM)。在結合 事件之後，再生表面以用於下一循環。使用簡單一對一朗 學爾結合模型（Langmuir binding model)(BIACORE®評估軟 體第 4·1 版（BIACORE Evaluation Software version 4.1))藉 由同時擬合締合及解離曲線來計算締合速率（ka)及解離速 率（kd)。平衡解離常數（KD)計算為比率kd/ka。參見例如 Chen，Y.等人，J. Mol. Biol. 293 (1999) 865-881。若藉由 以上表面電漿子共振檢定測得1超過106 M·1 s·1，則締合 速率（on-rate)可藉由使用螢光淬滅技術測定，該技術量測 在遞增濃度之抗原存在下，在25°C下於PBS(pH7.2)中之20 nM抗抗原抗體（Fab形式）之螢光發射強度（激發=295 nm ; 157810.doc •28- 201215405 發射=340 nm，16 nm帶通）的增加或減小，如在光譜計， 諸如停流光譜光度計（stop-flow equipped spectrophometer) 中所量測。 2.抗體片段 在某些實施例中，本文提供之抗體為抗體片段。抗體片 段包括（但不限於）Fab、Fab’、Fab'-SH、F(ab')2、Fv及 scFv 片段及下文所述之其他片段。關於某些抗體片段之評述， 參見 Hudson, P.J.等人，Nat. Med. 9 (2003) 129-134。關於 scFv片段之評述，參見例如 Plueckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第 113 卷，Rosenburg及 Moore (編），Springer-Verlag，New York (1994)，第 269-315 頁；亦 參見WO 93/16185 ;及美國專利第5,571，894號及第 5,587,458號。關於包含救助受體結合抗原決定基殘基且具 有增加之活體内半衰期之Fab及F(abJ2片段的論述，參見 美國專利第5,869,046號。 雙功能抗體為具有2個抗原結合位點之可具有二價或雙 特異性的抗體片段。參見例如EP 404,097 ; WO 1993/01161 ; Hudson，P.J.等人，Nat. Med. 9 (2003) 129-134 ;及

Holliger，Ρ·等人，Proc. Natl· Acad. Sci. USA 90 (1993) 6444-6448。三功能抗體及四功能抗體亦描述於Hudson， P.J.等人，Nat. Med. 9 (2003) 129-134 中。 單域抗體為包含抗體之全部或部分重鏈可變域或全部或 部分輕鏈可變域的抗體片段。在某些實施例中，單域抗體 為人類單域抗體（Domantis，Inc·，Waltham, MA;參見例如 157810.doc -29· 201215405 美國專利第6,248,516 B1號）。 抗體片段可藉由各種技術製備，包括（但不限於）蛋白水 解4化完整抗體以及藉由重組宿主細胞（例如大腸桿菌（五. co/〇或嗟菌體）產生，如本文所述。 3.多特異性抗體 在某些實施例中’本文提供之抗體為多特異性抗體，例 如雙特異性抗體。多特異性抗體為對至少2個不同位點具 有結合特異性之單株抗體。在某些實施例中，結合特異性 之一係針對IL-18R1且另一結合特異性係針對任何其他抗 原。在某些實施例中’雙特異性抗體可與IL_ 1 8R1之2個不 同抗原決定基結合。雙特異性抗體可製備成全長抗體或抗 體片段。 製備多特異性抗體之技術包括（但不限於）重組共表現具 有不同特異性之兩個免疫球蛋白重鏈·輕鏈對（參見

Milstein，C.及 Cuello，A.C·，Nature 305 (1983) 537-540 ; WO 93/08829 ;及Traunecker，A.等人，EMBO J. 10 (1991) 3655-3659);及「孔中鈕（knob-in-hole)」工程改造（參見例 如美國專利第5,731，168號）。多特異性抗體亦可藉由以下 方式製備.工程改造靜電牽引（electrostatic steering)效應 以製備抗體Fc雜二聚分子（WO 2009/089004A1);交聯兩個 或兩個以上抗體或片段（參見例如美國專利第4,676,98〇 號’及Brennan，M.等人 ’ Science 229 (1985) 81-83);使用 白胺酸拉鏈以產生雙特異性抗體（參見例如Kostelny，S.A. 等人 ’ J. Immunol. 148 (1992) 1547-1553);使用「雙功能 157810.doc •30· 201215405 抗體」技術以製備雙特異性抗體片段（參見例如Holliger，P. 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90 (1993) 6444-6448); 及使用單鏈Fv(sFv)二聚體（參見例如Gruber，M.等人，J. Immunol., 152 (1994) 5368-5374);及如例如 Tutt，A.等 人，J. Immunol. 147 (1991) 60-69中所述製備三特異性抗 體。 具有3個或3個以上功能性抗原結合位點之經工程改造抗 體（包括「章魚抗體（Octopus antibody)」）亦包括在本文中 (參見例如 US 2006/0025576A1)。 本文之抗體或片段亦包括包含與IL-18R1以及另一不同 抗原結合之抗原結合位點的「雙重作用FAb」或「DAF」 (參見例如 US 2008/0069820)。 4.抗體變異體 a)糖基化變異體 在某些實施例中’本文提供之抗體經改變以增加或減小 抗體糖基化之程度。在抗體上添加糖基化位點或使抗體缺 失糖基化位點可藉由改變胺基酸序列以便產生或移除一或 多個糖基化位點來方便地達成。 當抗體包含Fc區時，可改變與其連接之碳水化合物。由 哺礼動物細胞產生之天然抗體通常包含分支雙觸角 (biantennary)寡醣，其通常藉由N鍵聯連接至&區之ch2 域的 Asn297(參見例如 Wright，A 等人，tibtech i 5 (i997) 26-32)。寡醣可包括各種碳水化合物，例如甘露糖、义乙 醯基葡糖胺（GlcNAc)、半乳糠及唾液酸，以及與雙觸角寡 157810.doc • 31 · 201215405 醣結構之「主幹」中之GlcNAc連接的海藻糖。在一些實 施例中，可對本發明抗體中之寡醣進行修飾以產生具有某 些經改良性質之抗體變異體。 如例如WO 2008/077546中所述，藉由相對於Asn 297所 連接所有醣結構（例如複合、雜交及高甘露糖結構）之總和 計算Asn297處糖鏈内海藻糖的平均量來測定海藻糖之量， 如藉由MALDI-TOF質譜所量測。Asn297係指位於Fc區中 約位置297(Fc區殘基之Eu編號）處之天冬醯胺殘基；然 而，歸因於抗體中之微小序列變化，Asn297亦可能位於位 置297之上游或下游約±3個胺基酸處，亦即介於位置294與 300之間。此等海藻糖基化變異體可具有改良之ADCC功 能。參見例如美國專利公開案第US 2003/0157108號 (Presta，L.)；第 US 2004/0093621 號（Kyowa Hakko Kogyo Co.，Ltd)。與「去海藻糖基化」或「海藻糖缺乏」抗體變 異體相關之公開案之實例包括：US 2003/0157108 ; WO 2000/61739 ； WO 2001/29246 ； US 2003/0115614 ； US 2002/0164328 ； US 2004/0093621 ； US 2004/0132140 ； US 2004/01 10704 ; US 2004/0110282 ; US 2004/0109865 ； WO 2003/085119 ； WO 2003/084570 ； WO 2005/035586 ； WO 2005/035778 ； WO 2005/053742 ； WO 2002/031140 ； Okazaki, A.等人，J. Mol. Biol· 336 (2004) 1239-1249 ; Yamane-Ohnuki，N.等人，Biotech. Bioeng· 87 (2004) 614-622。能 夠產生去海藻糖基化抗體之細胞株之實例包括缺乏蛋白質 海藻糖基化之Lecl3 CHO細胞（Ripka, J·等人，Arch. 157810.doc -32· 201215405

Biochem. Biophys. 249 (1986) 533-545;美國專利申請案 第US 2003/0157108 A1 號，Presta，L;及WO 2004/056312 Al，Adams等人，尤其在實例11)及基因剔除細胞株，諸如 α-1，6-海藻糖基轉移酶基因FUT8基因剔除CHO細胞（參見例 如 Yamane-Ohnuki，Ν.等人，Biotech. Bioeng. 87 (2004) 614-622 ; Kanda，Y.等人，Biotechnol. Bioeng. 94 (2006) 680-688 ;及 W02003/085107) ° 進一步提供具有對分寡醣之抗體變異體，例如其中與抗 體之Fc區連接之雙觸角寡醣由GlcNAc對分。此等抗體變 異體可具有降低之海藻糖基化及/或改良之ADCC功能。此 等抗體變異體之實例例如描述於WO 2003/0 11 878(Jean-Mairet等人）；美國專利第6,602,684號（Umana等人）；及US 2005/0123546(Umana等人）中。亦提供寡醣中至少1個半乳 糖殘基連接至Fc區之抗體變異體。此等抗體變異體可具有 改良之CDC功能。此等抗體變異體例如描述於WO 1997/30087(Patel等人）；WO 1998/58964(Raju，S·);及 WO 1999/22764(Raju，S.)中 ° b)Fc區變異體 在某些實施例中，一或多個胺基酸修飾可引入本文提供 之抗體之Fc區中，藉此產生Fc區變異體。Fc區變異體可包 含在一或多個胺基酸位置處包含胺基酸修飾（例如取代）之 人類Fc區序列（例如人類IgGl、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區）。 在某些實施例中，本發明涵蓋具有一些而非所有效應功 能之抗體變異體，該等效應功能使該抗體成為合乎多種應 157810.doc -33- 201215405 用之需要之候選物，在該等應用中，活體内抗體半衰期較 重要，而某些效應功能（諸如補體及ADCC)為不必要或有 害的。可進行活體外及/或活體内細胞毒性檢定以確認 CDC及/或ADCC活性之降低/缺失。舉例而言，可進行Fc受 體（FcR)結合檢定以確保抗體缺乏FcyR結合（由此可能缺乏 ADCC活性）但保留FcRn結合能力。介導ADCC之初級細胞 NK細胞僅表現Fc(RIII，而單核細胞表現Fc(RI、Fc(RII及 Fc(RIII。FcR在造血細胞上之表現概述於Ravetch, J.V.及 Kinet，J.P.，Annu. Rev. Immunol. 9 (1991) 457-492之第 464 頁上之表3中。評估相關分子之ADCC活性之活體外檢定的 非限制性實例描述於美國專利第5,500,362號（參見例如 Hellstrom，I.等人，Proc. Natl. Acad. Sci· USA 83 (1986) 7059-7063)及 Hellstrom, I.等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82 (1985) 1499-1502 ; US 5,821,337(參見Brueggemann， M.等人，J. Exp. Med. 166 (1987) 1351-1361)中。或者，可 採用非放射性檢定方法（參見例如用於流動式細胞測量術 之ACTI™非放射性細胞毒性檢定（CellTechnology，Inc. Mountain View，CA);及CytoTox 96®非放射性細胞毒性檢 定（Promega, Madison，WI))。適用於此等檢定之效應細胞 包括周邊血液單核細胞（PBMC)及自然殺手（NK)細胞。或 者或另外，相關分子之ADCC活性可例如於動物模型，諸 如 Clynes，R.等人 Proc· Natl. Acad. Sci· USA 95 (1998) 652-656中揭示之動物模型中進行活體内評估。亦可進行 Clq結合檢定以確認抗體不能結合Clq且因此缺乏CDC活 157810.doc • 34. 201215405 性。參見例如WO 2006/029879 及 WO 2005/100402 中之 Clq 及C3c結合ELISA。為評估補體活化，可進行CDC檢定（參 見例如 Gazzano-Santoro，H.等人，J. Immunol. Methods 202 (19969 163-171 ; Cragg，M.S.等人，Blood 101 (2003) 1045-1052 ;及 Cragg，M.S.及 M.J. Glennie，Blood 103 (2004) 273 8-2743)。亦可使用此項技術中已知之方法進行 FcRn結合及活體内清除率/半衰期測定（參見例如Petkova, S.B.等人，Inti. Immunol. 18 (2006) 1759-1769)。 效應功能降低之抗體包括Fc區殘基238、265、269、 270、297、327及329中之一或多者經取代的抗體（美國專 利第6,737,056號）。此等Fc突變體包括在胺基酸位置265、 269、270、297及327中之兩者或兩者以上處具有取代的Fc 突變體，包括殘基265及297取代成丙胺酸之所謂 「DANA」Fc突變體（美國專利第7,332,581號）。 與FcR之結合得到改良或減弱之某些抗體變異體已有描 述。（參見例如美國專利第6,737,056號；WO 2004/056312 ; 及 Shields，R.L.等人，J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604)° 在某些實施例中，抗體變異體包含具有改良ADCC之一 或多個胺基酸取代，例如Fc區之位置298、333及/或334(殘 基之EU編號）處之取代的Fc區。 在一些實施例中，在Fc區中進行產生改變（亦即改良或 減弱）之Clq結合及/或補體依賴性細胞毒性（CDC)的改變， 例如如美國專利第6,194,551號、翟0 99/51642及1(!118(^6, 157810.doc •35· 201215405 E.E.等人，J. Immunol. 164 (2000) 4178-4184 中所述。 半衰期增加且與負責將母體IgG轉移至胎兒之新生兒Fc 受體（FcRn)(Guyer，R.L.等人，J. Immunol· 117 (1976) 587-593 ;及Kim, J.K.等人，J. Immunol· 24 (1994) 2429-2434) 之結合改良的抗體描述於US2005/0014934Al(Hinton等人） 中。彼等抗體包含其中具有改良Fc區與FcRn之結合之一或 多個取代的Fc區。此等Fc變異體包括在以下Fc區殘基中之 一或多者處具有取代之Fc變異體：238、256、265、272、 286 、 303 、 305 、 307 、 311 、 312 、 317 、 340 、 356 、 360 、 3 62、3 76、3 78、380、382、413、424 或 434，例如 Fc 區殘 基434經取代（美國專利第7,371，826號）。 關於Fc區變異體之其他實例，亦參見Duncan, A.R.及 Winter，G.，Nature 332 (1988) 738-740 ;美國專利第 5,648,260號；美國專利第 5,624,821號；及 WO 94/29351。 c)半胱胺酸工程改造抗體變異體 在某些實施例中，可能需要產生半胱胺酸工程改造抗 體，例如「硫基MAb(thioMAb)」，其中抗體之一或多個殘 基經半胱胺酸殘基取代。在特定實施例中，經取代之殘基 存在於抗體之可達位點處。藉由用半胱胺酸取代彼等殘 基，反應性硫醇基藉此定位於抗體之可達位點處且可用於 使抗體與其他部分（諸如藥物部分或連接子-藥物部分）結合 以產生如本文中進一步描述之免疫結合物。在某些實施例 中，任一或多個以下殘基可經半胱胺酸取代：輕鏈之 V205(Kabat編號）；重鏈之A118(EU編號）；及重鏈Fc區之 157810.doc -36- 201215405 S400(EU編號）。半胱胺酸工程改造抗體可如例如美國專利 第7,521，541號中所述來產生。 d)抗體衍生物 在某些實施例中，本文提供之抗體可進一步修飾以含有 此項技術中已知且易於獲得之其他非蛋白質部分。適於衍 生化抗體之部分包括（但不限於）水溶性聚合物。水溶性聚 合物之非限制性實例包括（但不限於）聚乙二醇（PEG)、乙 二醇/丙二醇之共聚物、羧曱基纖維素、葡聚糖、聚乙烯 醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚二氧雜環戊烷、聚-^，^三 噁烷、乙烯/順丁烯二酸酐共聚物、聚胺基酸（均聚物或無 規共聚物）及葡聚糖或聚（N-乙烯基吡咯啶酮）聚乙二醇、丙 二醇均聚物、聚環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化 多几醇（例如甘油）、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛 物是否將用於確定條件下之療法等 由於其於水中之穩定性而可在製造上具有優勢。聚合物可 具有任何分子量，且可為分支鏈或未分支鏈。與抗體連接 之聚合物之數目可變化，且若連接一個以上聚合物，則該 等聚合物可為相同或不同分子。一般而言’用於衍生化^ 聚合物之數目及/或類型可基於包括（但不限於）以下之考慮 因素來較：欲改良之抗體之特枝質或功能、抗體衍生 貫施例中，乂供抗體與可藉由暴露於輕射來選擇 性加熱之非蛋白質部分的結合物。在一實施例中，非蛋白 質部分為碳奈米管（Kam，Nw等人，pr。。刪% A 102 (2005) 116〇〇_116()5)。輻射可具有任何波長，且 157810.doc -37- 201215405 包括（但不限於）不損傷普通細胞但可將非蛋白質部分加熱 至可殺死與抗體-非蛋白質部分鄰近之細胞之溫度的波 長》 B·重組方法及組合物 可使用例如如美國專利第4,816,567號中所述之重組方法 及組合物產生抗體。在一實施例中，提供本文中描述之編 碼抗IL-18R1抗體之經分離核酸。此核酸可編碼包含儿之 胺基酸序列及/或包含抗體之VH之胺基酸序列（例如抗體之 輕鏈及/或重鏈）。在另一實施例中，提供一或多種包含此 核酸之載體（例如表現載體）。在另一實施例中，提供包含 此核酸之宿主細胞。在一此類實施例中，宿主細胞包含 (例如已經以下轉型）：（1)包含某一核酸之載體，該核酸編 碼包含抗體VL之胺基酸序列及包含抗體vh之胺基酸序 列’或（2)包含編碼包含抗體VL之胺基酸序列之核酸的第 一載體；及包含編碼包含抗體VH之胺基酸序.列之核酸的 第二載體。在一實施例中，宿主細胞為真核細胞，例如中 國倉鼠卵巢（CHO)細胞或淋巴細胞（例如γ〇、NS0、Sp20細 胞）。在一實施例中，提供一種製備抗IL_18R1抗體之方 法’其中該方法包含在適於表現該抗體之條件下培養如上 文所提供之包含編碼該抗體之核酸的宿主細胞，及視情況 自該宿主細胞（或宿主細胞培養基)回收該抗體。 對於重組產生抗IL-18R1抗體，分離編碼例如如上所述 之抗體之核酸且插入一或多個載體中以供進一步在宿主細 胞中選殖及/或表現。此核酸可易於使用習知程序（例如藉 157810.doc -38 - 201215405 由使用能夠與編碼抗體之重鏈及輕鏈之基因特異性結合的 寡核苷酸探針）分離及定序。 適於選殖或表現抗體編碼載體之宿主細胞包括本文所述 之原核或真核細胞。舉例而言，抗體可於細菌中產生，特 定言之當不需要糖基化及Fc效應功能時。關於在細菌中表 現抗體片段及多肽’參見例如美國專利第5,648,237號、第 5,789，199 號及第 5,840,523 號（亦參見 charlton，K.A·， Methods in Molecular Biology，第 248 卷，Lo B.K.C.(編）， Humana Press，Totowa，NJ (2003)，第 245-254頁，其描述 在大腸桿菌中表現抗體片段）。在表現後，抗體可自細菌 細胞漿（bacterial cell paste)分離於可溶性部分中且可進一 步純化。 除原核生物外，諸如絲狀真菌或酵母之真核微生物為適 於選殖或表現抗體編碼載體之宿主，包括糖基化路徑已經 「人類化」’從而使得所產生之抗體具有部分或完全人類 糖基化型態的真鹵及酵母菌株。參見Gerngross，T.U., Nat.

Biotech. 22 (2004) 1409-1414及Li，Η.等人，Nat. Biotech. 24 (2006) 210-215 ° 適於表現糖基化抗體之宿主細胞亦來源於多細胞生物體 (無脊椎動物及脊椎動物）。無脊椎動物細胞之實例包括植 物及昆蟲細胞。已鑑別出眾多可與昆蟲細胞聯合使用之桿 狀病毋株’特疋§之用於轉染草地黏蟲 /Vwgipercia)細胞。 植物細胞培養物亦可用作宿主。參見例如美國專利第 157810.doc -39- 201215405 5,959,177 號、第 6,040,498 號、第 6,420,548 號、第 7，125,978號及第6,417,429號（描述用於在轉殖基因植物中 產生抗體之PLANTIBODIEStm技術）。

脊椎動物細胞亦可用作宿主。舉例而言，適於在懸浮液 中生長之哺乳動物細胞株可為適用的。適用哺乳動物宿主細 胞株之其他實例為經SV40轉型之猴腎CV1細胞株（COS-7); 人類胚腎細胞株（293或293細胞，如例如Graham, F.L.等 人，J. Gen Virol· 36 (1977) 59-74中所述）；幼小倉鼠腎細 胞（BHK);小鼠足細胞（TM4細胞，如例如Mather, J.p.， Biol· Reprod. 23 (1980) 243-252 中所述）；猴腎細胞 (CV1);非洲綠猴腎細胞（VERO-76);人類子宮頸癌細胞 (HELA);犬腎細胞（MDCK);布法羅大鼠（buffalo rat)肝細 胞（BRL 3A);人類肺細胞（W138);人類肝細胞（Hep G2); 小鼠乳腺腫瘤（MMT 060562) ; TRI細胞，如例如Mather等 人，Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)中所述；MRC 5細胞；及FS4細胞。其他適用哺乳動物宿主細胞株包括中 國倉鼠卵巢（CHO)細胞，包括DHFRXHO細胞（Urlaub，G.等 A * Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77 (1980) 4216-4220)；及 骨髓瘤細胞株，諸如Y0、NS0及Sp2/0。關於適於抗體產 生之某些哺乳動物宿主細胞株之評述，參見例如Yazaki， P.J.等人，Methods in Molecular Biology 248 (2003) 255-268 ° C.用於診斷及偵測之方法及組合物 在某些實施例中，本文提供之任何抗IL-18R1抗體皆適 157810.doc -40- 201215405 用於偵測生物樣品中IL-igR〗夕左尤 » . TIL 1SR1之存在。如本文所用之術語 「偵測」涵蓋定量或定性偵測。在某些實施例中，生物樣 品包含細胞或組織，諸如腫瘤組織。 在一實施例中，提供用於診斷或偵測方法中之抗 IL-18R1抗體。在另—態樣中，提供一種偵測生物樣品中 iL-18R1之存在之方法。在某些實施例中，方法包含使生 物樣品與如本文所述之抗IL_18R1抗體在允許抗江_18则抗 體與IL-18R1結合之條件下接觸，及偵測是否在抗比·“… 抗體與IL-18R1之間形成複合物。此方法可為活體外或活 體内方法》在一實施例中，抗IL_18R1抗體用於選擇適於 用抗IL-18R1抗體進行治療之個體，例如當IL]8R1為用於 選擇患者的生物標記時。 可使用本發明抗體診斷之例示性病症為慢性阻塞性肺病 (COPD)、發炎性疾病、自體免疫性疾病、類風濕性關節 炎、狼瘡、牛皮癣或骨病。 在某些實施例中，提供經標記之抗IL-18R1抗體。標記 包括（但不限於）直接偵測之標記或部分（諸如螢光標記、發 色標記、電子緻密標記、化學發光標記及放射性標記）、 • 以及例如經由酶促反應或分子相互作用間接偵測之部分 (諸如酶或配位體）。例示性標記包括（但不限於）放射性同 位素32P、14C、1251、3H及mI ;螢光團，諸如稀土螯合物 或螢光素（fluorescein)及其衍生物；若丹明（rhodamine)及 其衍生物；丹續酿基（dansyl);傘酮（umbelliferone);勞光 素酶（luceriferase)，例如螢火蟲螢光素酶及細菌螢光素酶 157810.doc •41- 201215405 (美國專利第4,737,456號）；螢光素（luciferin) ; 2,3-二氫酞 °秦一酮，辣根過氧化酶（HRP);鹼性磷酸酯酶（aikaiine phosphatase) ; β·半乳糖苷酶；葡糖澱粉酶；溶菌酶；醣氧 化酶，例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖_6_磷酸 去氫酶；雜環氧化酶’諸如尿酸酶及黃嘌呤氧化酶；與採 用過氧化氫來氧化染料前驅體之酶（諸如HRP、乳過氧化酶 (lactoperoxidase)或微過氧化酶）偶合；生物素/抗生蛋白 (avidin);自旋標記；噬菌體標記；穩定自由基及其類似 物。 D·醫藥調配物 如本文所述之抗IL-18R1抗體的醫藥調配物藉由混合具 有所要純度之此抗體與一或多種視情況選用之醫藥學上可 接受之載劑（Remington's Pharmaceutical Sciences，第 16 版’ Osol，A.(編）（1980))製備成凍乾調配物或水溶液形 式。醫藥學上可接受之載劑在所用劑量及濃度下對接受者 通常無毒’且包括（但不限於）：緩衝劑，諸如構酸鹽、擰 檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺 酸；防腐劑（諸如氣化十八烷基二甲基苯曱基銨；氯化六 羥季銨（hexamethonium chloride);氯化苯曱烴銨（benzalkonium chloride)，卡索氣按（benzethonium chloride);苯紛；丁醇 或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷酯，諸如對羥基苯甲酸曱酯或 對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3_戊 醇；及間甲紛）；低分子量（少於約1 〇個殘基）多肽；蛋白 質’諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合 157810.doc -42· 201215405 物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺 酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及 其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑， 諸如EDTA ;糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖 醇；成鹽相對離子，諸如納；金屬錯合物（例如Zn-蛋白質 錯合物）；及/或非離子型界面活性劑，諸如聚乙二醇 (PEG)。本文之例示性醫藥學上可接受之載劑另外包括間 質藥物分散劑，諸如可溶性中性-活性玻尿酸酶醣蛋白 (sHASEGP)，例如人類可溶性PH-20玻尿酸酶醣蛋白，諸 如 rHuPH20(HYLENEX®，Baxter International，Inc.)。某些 例示性sHASEGP及使用方法（包括rHuPH20)描述於美國專 利公開案第2005/0260186號及第2006/0104968號中。在一 態樣中，sHASEGP與一或多種其他葡糖胺聚糖酶 (glycosaminoglycanase)(諸如軟骨素酶（chondroitinase))組 合。 例示性凍乾抗體調配物描述於美國專利第6,267,958號 中。水性抗體調配物包括美國專利第6,171,586號及WO 2006/044908中所述之調配物，WO 2006/044908中之調配 物包括組胺酸乙酸鹽緩衝劑。 本文之調配物亦可含有一種以上為所治療之特定適應症 所必需的活性成分，較佳具有彼此不產生不利影響之補充 性活性的活性成分。此等活性成分適合以有效達成預定目 的之量組合存在。 活性成分可包覆在例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合製 157810.doc •43· 201215405 備之微膠囊（例如分別為羥曱基纖維素或明膠微膠囊及聚· (甲基丙烯酸甲酯）微膠囊）中；膠態藥物傳遞系統（例如脂 質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米粒子及奈米膠囊）中 或巨乳液中。此等技術揭示於Remington's Pharmaceutical

Sciences，第 16版，Osol，A.(編）（1980)中。 可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑之適合實例包括含 有抗體之固體疏水性聚合物半透基質，該等基質呈成形物 品（例如膜或微膠囊）形式。 欲用於活體内投藥之調配物通常無菌。無菌性可易於例 如藉由經由無菌過濾膜過濾來達成。 E.治療方法及組合物 本文提供之任何抗IL-1 8R1抗體皆可用於治療方法中。 在一態樣中，提供用作藥劑之抗IL_18R1抗體。在其他 態樣中，提供用於治療慢性阻塞性肺病（c〇pD)、發炎性 疾病、自體免疫性疾病、類風濕性關節炎、狼瘡、牛皮癖

中，方法進一 一種例如如

下所述之其他治療劑。— 用於阻斷IL-18與受體IL 性疾病、類風濕性關節炎、狼瘡、牛皮癬或 方法中的抗IL-18R1抗體，該方法包含向該 之該抗IL-18R1抗體。在一此類實施例 步包含向個體投與有效量之至少一種例如如 在其他實施例中，本發明提供一種 體 IL-18R1 及 il 18RAP(Uniprot寄存編號 157810.doc 201215405 〇95256)之間的相互作用且抑制11-18受體介導之信號傳導 及NFkB路徑活化的抗IL-18R1抗體。NFkB路徑及其活化 (信號傳導）例如描述於Kearns j D及Hoffmann，a.，J. Biol. Chem· 284 (2009) 5439-5443中。根據任何以上實施例之 「個體」較佳為人類。 在另一態樣中，本發明提供抗IL-1 8R1抗體用於製造或 製備藥劑之用途。在一實施例中，該藥劑係用於治療慢性 阻塞性肺病（COPD)、發炎性疾病、自體免疫性疾病、類 風濕性關節炎、狼瘡、牛皮癬或骨病。在另一實施例中， 3亥藥劑係用於治療慢性阻塞性肺病（c〇pD)、發炎性疾 病、自體免疫性疾病、類風濕性關節炎、狼瘡、牛皮癣或 骨病之方法中，該方法包含向患有慢性阻塞性肺病 (COPD)、發炎性疾病、自體免疫性疾病、類風濕性關節 炎、狼瘡、牛皮癬或骨病之個體投與有效量之該藥劑❶在 一此類實施例中，方法進一步包含向個體投與有效量之至 少一種例如如下所述之其他治療劑。在另一實施例中，藥 劑適用於在個體中阻斷IL-18與受體a_18R1及 IL18RAP(Unipr〇t寄存編號095256)之間的相互作用且抑制 II-18受體介導之信號傳導及nFkB路徑活化。根據任何以 上實施例之「個體」可為人類。 在另一態樣中，本發明提供一種治療慢性阻塞性肺病 (_)、發炎性疾病、自體免疫性疾病、類風濕性關節 炎、狼瘡、牛皮癬或骨病之方法。在一實施例中，該方法 包含向患有此慢性阻塞性肺病（COPD)、發炎性疾病、 157810.doc •45- 201215405 體免疫性疾病、類風濕性關節炎、狼瘡、牛皮癬或骨病之 個體投與有效量之抗IL-18R1抗體。在一此類實施例中， 方法進一步包含向個體投與有效量之至少一種如下所述之 其他治療劑。根據任何以上實施例之「個體」可為人類β 較佳地，本發明之抗體阻斷IL-18與受體IL-18R1及 11^1811八？(1；^^1'(^寄存編號095256)之間的相互作用且抑制 11-18受體介導之信號傳導及nFkB路徑活化。該種抗體為 抗體1G12或抗體2D11。在一實施例中，方法包含向個體 投與有效量之抗IL-18R1抗體。在一實施例中，「個體」為 人類。 在另一態樣中’本發明提供包含本文提供之任何抗 IL-18R1抗體之例如用於任何以上治療方法中的醫藥調配 物。在一實施例中，醫藥調配物包含本文提供之任何抗 IL-18R1抗體及醫藥學上可接受之載劑。在另一實施例 中’醫藥調配物包含本文提供之任何抗IL_18RU^體及至 少一種例如如下所述之其他治療劑。 本發明抗體可單獨或與其他藥劑組合用於療法中。舉例 而言，本發明之抗體可與至少一種其他治療劑共投與。 以上所述之此等組合療法涵蓋組合投藥（其中兩種或兩 種以上治療劑包括在同一或各別調配物中）；及分開投 藥，在此情況下，本發明抗體之投與可在投與另—治療^ 及/或佐劑之前、同時及/或之後進行。本發明之抗體亦可 與放射療法組合使用。 本發明抗體（及任何其他治療劑）可藉由任何適合方式投 157810.doc -46· 201215405 二 =式包括非經腸、肺内及鼻内投藥，且必要時對 靜Π病灶内投藥。非經腸輸注包括肌肉内、 為短期戍長冑膜内或皮下投樂。給藥可部分視投藥 諸月或長期而；t藉由任何適當途徑進行，例如藉由注射 =脈内或皮下注射)進行。各種給藥時程包括(但不限 ^早夂^或歷經多個時間點多次投藥，快速投藥⑽心 a ministration)及脈衝輸注涵蓋於本文中。 本發明抗體將以符合良好醫學規範之方式調配、給藥及 投與。在此情形中考慮之因素包括所治療之特定病症、所 治療乳動物、個別患者之臨床絲、病症之病 因、樂劑傳遞部位、投藥方法、投藥時程及醫師已知之其 他因素。抗體無需但視情況與__或多種當前用於預防或治 療所述病症之藥劑一起調配。此等其他藥劑之有效量視存 在於調㈣中之抗體之量、病症類型或治療類型及以上論 述之其他因素而此等藥劑通常以相同劑量且用如本文 所述之投藥途徑❹，或以本文所述劑量之約1%至99%使 用或以任何劑量且藉由憑經驗/臨床確定為適當的任何 途徑使用。 對於預防或治療疾病，本發明抗體之適當劑量（當單獨 或與或多種其他額外、治療劑級合使用時）將視欲治療疾 病之類f抗體類型、疾病之嚴重性及病程、投與抗體以 達成預防抑或治療目的、先前療法、患者之臨床病史及對 抗體之反應以及主治醫師之判斷*定。抗體適合—次性或 歷’里系列/α療投與患者。視疾病之類型及嚴重性而定， 157810.doc -47 201215405 無論例如藉由一或多次分開投藥或藉由連續輸注，約1 pg/kg至 15 mg/kg(例如01 mg/kg_1〇 mg/kg)之抗體可為用 於投與患者之初始候選劑量。視上述因素而定，一種典型 母曰劑量可在約1 pg/kg至1〇〇 mg/kg或1〇〇 mg/kg以上的範 圍内。對於歷經若干天或更長時間的重複投藥，視病狀而 定，治療通常將持續直至發生疾病症狀之所要抑制。抗體 之一種例示性劑量在約〇 〇5 mg/kg至約1〇 mg/kg之範圍 内。因此，可向患者投與約〇 5 mg/kg、2 〇 mg/kg、4 〇 mg/kg或10 mg/kg(或其任何組合）之一或多個劑量。此等劑 量可間歇投與，例如每週或每3週投與（例如以使患者接受 約2至約20或例如約6劑抗體）。可投與初始較高負載劑量 (loading dose)，隨後投與一或多個較低劑量。一例示性給 藥方案包含投與約4至1〇 mg/kg ^然而，其他給藥方案可 適用。此療法之進程容易藉由習知技術及檢定進行監測。 應瞭解任何以上調配物或治療方法皆可使用本發明之免

位於該容器上或與該容器相關之標記或包裝插頁。適合容 工乂溶液袋等。容器可由多 容器容納單獨或與有效治 組合物組合的纽合物，且 器包括例如瓶、小瓶、注射器、 種材料’諸如玻璃或塑料形成。 療、預防及/或診斷病狀之另一 157810.doc -48- 201215405 可具有無菌接取槔（例#容器可為具有可由皮下注射針刺 穿之塞子的靜脈内溶液袋或小瓶卜組合物中之至少一種 活性劑為本發明之抗體。標記或包裝插頁指示組合物用於 治療所選病狀。此外，製品可包含（a)内含組合物之第一容 器，其中該組合物包含本發明之抗體；及内含組合物之 第二容器，其中該組合物包含另一治療劑。本發明之此實 施例中之製品可進一步包含包裝插頁，其指示組合物可用 於治療特定病狀。或者或另外，製品可進一步包含含有醫 藥學上可接受之緩衝液（諸如注射用抑菌水（BWFI)、磷酸 鹽緩衝鹽水、林格氏溶液（Ringer，s s〇iuti〇n)及右旋糖溶液） 之第二（或第三）容器。其可進一步包括就商業及使用者觀 點而言合乎需要之其他物質，包括其他緩衝劑、稀釋劑、 過濾、器、針及注射器。 應瞭解任何以上製品皆可包括本發明之免疫結合物替代 抗IL-18R1抗體，或除抗IL-18R1抗體之外，亦包括本發明 之免疫結合物。 III.序列表說明 SEQ ID N0:1 MablG12之重鏈可變區（VH) SEQ ID N0:2 重鏈 CDRH1 MablG12 SEQ ID N0:3 重鏈CDRH2 MablG12 SEQ ID N0:4 重鏈CDRH3 MablG12 SEQ ID N0:5 MablG12之輕鏈可變區（VL) SEQ ID NO:6 輕鏈 CDRL1 MablG12 SEQ ID NO:7 輕鏈CDRL2 MablG12 157810.doc -49· 201215405 SEQ ID NO:8 輕鏈 CDRL3 MablG12 SEQ ID NO:9 Mab 2D11之重鏈可變區（VH) SEQ ID NO:10 重鏈 CDRH1 Mab2Dll SEQ ID NO:3 重鏈CDRH2 Mab2Dll SEQ ID NO:4 重鏈CDRH3 Mab2Dll SEQ ID NOrll Mab2Dll之輕鏈可變區（VL) SEQ ID NO:6 輕鏈 CDRL1 Mab2Dll SEQ ID NO:7 輕鏈 CDRL2 Mab2Dll SEQ ID NO:8 輕鏈 CDRL3 Mab2Dll SEQ ID NO:12 人類κ輕鏈 SEQ ID NO:13 人類λ輕鏈 SEQ ID NO:14 人類IgGl(高加索人（Caucasian)異型） SEQ ID NO:15 人類IgGl(美洲黑人（Afroamerican)異型） SEQ ID NO:16 人類IgGl LALA突變體（高加索人異型） SEQ ID NO.17 人類IgG4 SEQ ID NO:18 人類IgG4 SPLE突變體 8丑卩10 1^0:19至28:11^1811〇1之片段及突變型片段 SEQ ID NO:29 人類化MablG12-9.6之重鏈可變區（VH) SEQ ID NO:30 重鏈CDRH1 人類化MablG12-9.6 SEQ ID NO:31 重鏈 CDRH2人類化 MablG12-9.6 SEQ ID NO:32 重鏈 CDRH3人類化 MablG12-9.6 SEQ ID NO:33 人類化MablG12-9.6之輕鏈可變區（VL) SEQ ID NO:34 輕鏈 CDRL1 人類化MablG12-9.6 SEQ ID NO:35 輕鏈 CDRL2人類化 MablG12-9.6 157810.doc •50- 201215405 SEQ ID NO:36 SEQ ID NO:37 SEQ ID NO:38 SEQ ID NO:39 SEQ ID NO:40 SEQ ID NO:41 SEQ ID NO:42 SEQ ID NO:43 SEQ ID NO:44 SEQ ID NO:45 SEQ ID NO:46 SEQ ID NO:47 SEQ ID NO:48 SEQ ID NO:49 SEQ ID NO:50 SEQ ID NO:51 SEQ ID NO:52 SEQ ID NO:53 SEQ ID NO:54 SEQ ID NO:55 SEQ ID NO:56 SEQ ID NO:57 SEQ ID NO:58 SEQ ID NO:59 輕鏈 CDRL3 人類化 MablG12-9.6 人類化MablGl2-10.5之重鏈可變區（VH) 重鏈 CDRH1 人類化MablG12-10.5 重鏈 CDRH2人類化 MablG12-10.5 重鏈CDRH3人類化MablG12-10.5 人類化MablGl2-10.5之輕鏈可變區（VL) 輕鏈CDRL1 人類化MablGl 2-10.5 輕鏈 CDRL2人類化 MablGl2-10.5 輕鏈 CDRL3 人類化 MablGl2-10.5 人類化14&1?1〇12-10.6之重鏈可變區（\^11) 重鏈 CDRH1 人類化MablGl 2-10.6 重鏈 CDRH2人類化 MablGl 2-10.6 重鏈 CDRH3人類化MablGl 2-10.6 人類化MablG12-10.6之輕鏈可變區（VL) 輕鏈CDRL1 人類化MablG12-10.6 輕鏈 CDRL2人類化 MablG12-10.6 輕鏈 CDRL3 人類化 MablGl2-10.6 人類化MablGl2-11.6之重鏈可變區（VH) 重鏈 CDRH1 人類化MablGl 2-11.6 重鏈 CDRH2人類化 MablG12-11.6 重鏈CDRH3 人類化MablGl2-11.6 人類化MablG12-11.6之輕鏈可變區（VL) 輕鏈CDRL1 人類化MablGl 2-11.6 輕鏈 CDRL2人類化 MablGl 2-11.6 157810.doc -51- 201215405 SEQ ID NO:60 SEQ ID NO:61 SEQ ID NO:62 SEQ ID NO:63 SEQ ID NO:64 SEQ ID NO:65 SEQ ID NO:66 SEQ ID NO:67 SEQ ID NO:68 實例 輕鏈 CDRL3 人類化 Mab 1G12-11.6 人類化MablG12-12.6之重鏈可變區（VH) 重鏈CDRH1 人類化MablG12-12.6 重鏈 CDRH2人類化 MablG12-12.6 重鏈 CDRH3 人類化 MablG12-12.6 人類化Mab 1G12-12.6之輕鏈可變區（VL) 輕鏈CDRL1 人類化MablG12-12.6 輕鏈 CDRL2人類化 MablGl2-12.6 輕鏈 CDRL3人類化 MablG12-12.6 以下為本發明之方法及組合物之實例。應瞭解，鑒於以 上提供之一般性描述，可實施各種其他實施例。 儘管已出於清楚理解之目的藉由說明及實例之方式在一 疋程度上詳細地描述了前述發明，但該等描述及實例不應 理解為限制本發明之範疇。本文中引用之所有專利及科學 文獻之揭示内容以全文引用的方式明確併入本文中。 實例1 免疫 使用8-10週齡之]^1^111小鼠進行免疫。經由〇\八疫苗接 種進行免疫。簡言之’ 30 μΐ表現人類〗]^· 18受體之兩條鏈 (α及β)之DNA質體的水溶液直接皮内注射至經異氟烷麻醉 之小鼠的背部中，隨後進行電穿孔。在不使用任何佐劑下 每2週進行免疫。小鼠定期放血以確定是否已產生足夠抗 體反應。為此目的’自後眼眶竇收集血液且在11^18尺〇1特 157810.doc -52- 201215405 異性ELISA中以及在功能性KG-l/IFNy檢定中及在Biacore 中測試血清以選擇適用於融合之動物。在收集脾之前4天 對小鼠給予靜脈内抗原增強免疫以活化B細胞且增加位於 脾中之抗原陽性細胞之數目。臨融合前自經充分免疫之小 鼠收集脾。 實例2 抑制huIL-18與IL-18Rap複合物之結合（ELISA) 在室溫下在384孔微量滴定盤上進行測試。在各培育步 驟之後，各盤用PBST(磷酸鹽緩衝鹽水Tween®-20)洗滌3 次。開始時，各盤用0.5 gg/ml山羊抗人類IgG Fc片段 (Jackson Imm. Res.，US，目錄號 109-006-170)塗佈至少 2小 時（h)。此後，各孔用補充有0·1〇/〇 Tween®-20及2% BSA(Roche Diagnostics GmbH，DE)之PBS阻斷 1小時。捕 捉0.2 pg/ml重組人類IL-18Ra Fc嵌合體（R&D Systems，UK，目錄號816-LR)1小時。經純化抗體於含0.5% BSA及0.05% Tween®-20之PBS中之稀釋液與受體蛋白質一 起培育1小時。添加生物素化人類I1-18(MBL International， US，目錄號 B003-5)及 0.2 pg/ml IL-18Rp(R&D Systems,UK，目錄號118-AP)，再持續1小時以形成三聚複 合物。根據製造商之方案用硫基-NHS-LC-生物素（Thermo Scientific Pierce，US’ 目錄號21 327)對11-1 8進行生物素化 且使用ZebaTM去鹽旋轉管柱（Thermo Scientific Pierce,US，目錄號89889)進行純化。用以1:2000稀釋之抗 生蛋白鏈菌素（streptavidin) HRP(Roche Diagnostics GmbH, 157810.doc -53- 201215405 DE，目錄號11089153001)偵測生物素化IL-l8與複合物的 結合。1小時後，各盤用PBST洗滌6次且在室溫下用新鮮 製備之BM blue® POD受質溶液（BM blue® : 3,3·-5,5，-四甲 基聯苯胺，Roche Diagnostics GmbH，DE，目錄號 11484281001)顯色30分鐘。在370 nm下量測吸光度。陰性 對照定義為未添加IL-18Ra蛋白且陽性對照定義為含有所 有組分但無抗體。市售抗人類IL-18Ra鼠類MAb純系 70625(R&D Systems編號MAB840)用於比較。結果展示於 表1中： 表1 : 抗體 IC50(pg/mL) IC50(nM) F20.1G12 0.022 0.15 F20.2D11 0.029 0.19 Mab 840 0.044 0.29 IL-18R0 :人類IL-18受體輔助蛋白質IL-18RAP(Uniprot寄 存編號095256) 實例3 人類KG-1細胞的IL-18誘導之IFNy產生 a)試劑： KG1細胞株（ATCC編號CCL246) 培養基：補充有10% FCS及青黴素/鏈黴素（Pen/Strep)之 RPMI 1640 重組人類 IL-18(RnD systems編號 B003-2) BDOptEIA人類IFNγELISA套組（BD編號 555142) 157810.doc -54- 201215405 rhTNFa(R&D 目錄號 210-ΤΑ) b)程序： KG-1細胞在37°C下在5% C02/95%空氣混合物中在補充 有10%FCS及青黴素/鏈黴素之RPMI 1640中生長。當細胞 達到2x106個細胞/毫升之密度時，將細胞繼代且稀釋至 4χ105個細胞/毫升之密度。為測定IL-18之有效濃度，KG-1 細胞於含有各種劑量（0-200 ng/ml)之rhIL-18的生長培養基 中以lxlO6個細胞/毫升及100微升/孔再懸浮於96孔盤中， 收集上清液以進行IFNy ELISA分析。在1X106個細胞/毫升 及100微升/孔下，抗體與KG-1細胞一起在96孔盤中於生長 培養基中預培育60分鐘（最終濃度介於1 ng/ml與10 pg/ml之 間），添加rhIL -18( 10 ng/ml)及TNFa(5 ng/ml)至培養物中且 在37°C下培育16-20小時。收集上清液以進行IFNyELISA分 析。KG-1細胞用10 ng/ml TNFa刺激隔夜以誘導IL18R表 現。細胞接著與抗IL18R抗體一起培育不同時期，隨後a) 偵測結合之抗體或b)測定IL18R表面表現。結果展示於表2 中。抗 IL-18Ra Mab 840(R&D Systems)例如顯示 IC50 [pM] 值為798 » 表2 : 抗體 IC50 [pM] MablG12 27 Mab2Dll 43 實例4 測定抗IL-18Ra抗體與全長hIL-18R a(hFc嵌合體）之親和力 157810.doc -55- 201215405 儀器：BIACORE® A100 晶片：CM3(GE Healthcare BR-1006-36) 偶合：胺偶合

緩衝液：lxPBS(l〇xPBS，Ambion 目錄號 AM9625)，pH 7.4，37〇C 對於親和力量測，10 pg/ml抗小鼠Fey抗體（來自山羊， Jackson Immuno Reasearch JIR115-005-071)或 10 pg/ml抗 人類 Fey 抗體（來自山羊，Jackson Immuno Reasearch JIR109-005-098)已與晶片表面偶合以捕捉抗hIL-18Ra抗 體。以各種濃度添加含有0.1% BSA(Roche參考號 1023 8040001)之 hIL-18Ra(hFc嵌合體 R&D-Systems 816-LR) 溶液。藉由在37充下注射hIL-18Ra持續1.5分鐘來量測締 合；藉由在37°C下用緩衝液洗滌晶片表面10分鐘來量測解 離。為計算表觀KD及其他動力學參數，使用朗繆爾1:1模 型。結果展示於表3中。 表3 :藉由SPR(BIACORE® T100)在37°C下量測之親和力資料 抗體 表觀Kd(M) k^l/Ms) krf(l/s) 亡1/2(分鐘） Mab 1G12 2.7χ1〇·η 8.2χ106 2.0Χ10·4 58 Mab2Dll 2.7x10·" 7.〇χ106 1.9x1 O'4 62 MS 6.4xl0*n 5.1χ106 3.0Χ10*4 39 MS : WO 2007096396 之 SEQ ID NO:3 及 4 之抗體。 實例5a 利用SPR偵測交叉競爭 儀器：BIACORE® A100 157810.doc -56- 201215405 晶片：CM5(Biacore BR-1006-68) 偶合：胺偶合

缓衝液：lxPBS(l〇xPBS，Ambion 目錄號 AM9625)，pH 7.4，25〇C 對於經由交叉競爭進行之抗原決定基定位檢定，30 pg/ml抗小鼠Fey抗體或抗人類Fey抗體（來自山羊，Jackson Immuno Research 目錄號 115-005-071 及目錄號 109-005-098) 已與感測器晶片表面偶合以便呈現抗hIL-18Ra抗體。在捕 捉1-6 pg/ml抗hIL-18Ra單株抗體之後，捕捉抗體之游離結 合能力用250 pg/ml小鼠或人類免疫球蛋白（Jackson Immuno Research 015-000-003 或 009-000-003)阻斷 4 分鐘， 隨後注射 2.5 pg/ml hIL-18Ra(hFc 欲合體 R&D-Systems 目錄 號816-LR)2分鐘。0.6-3 pg/ml第二抗hIL-18Ra抗體之結合 藉由注射2分鐘進行分析，解離藉由用緩衝液洗滌2分鐘來 量測。檢定及量測在25°C下進行。第二抗hIL-18Ra抗體之 特異性結合相對於在用相同晶片設置但僅不注射hIL-18R 下獲得之斑點進行校準。交叉競爭資料計算為第二抗hlL-1 8Ra抗體之預期結合反應的百分比（％)。第二抗體之結合 之項目「預期結合反應的百分比（°/。）」藉由「l〇〇x相對反 應（後期樣品穩定性（sample_stability_late))/rMax j 來計 算，其中rMax藉由「抗原之相對反應（後期總體穩定性 (general_stability_late))x抗體分子量/抗原分子量」進行計 算，如Biacore抗原決定基定位說明書（用於 BIACORE®A100儀器）中所述。結果展示於表4a中。 I57810.doc •57_ 201215405 表4a:抗體2之預期結合反應之百分比 抗體1 抗體2 Mab 1G12 Mab 2D11 MS MablG12 0 0 52 Mab2Dll 0 0 48 MS 76 76 0 MS : WO 2007096396 之 SEQ ID NO:3 及 4 之抗體。 1G12與2D11之間的結合不可偵測，因為其在相同抗原 決定基簇内結合，而「MS」之結合可偵測（以第二抗 hIL_18Ra抗體之預期結合反應之（％)列出），表明相較於 1G12及2D11，「MS」與另一抗原決定基簇結合。此外，當 「MS」經預結合時，「MS」之結合不可偵測。 在第二實驗中，本發明抗體之結合與抗IL-18Ra Mab 840(R&D Systems)進行比較。結果展示於表4a中。 表4a:抗體2之預期結合反應之百分比 抗體1 抗體2 F20.1G12 F20.2D11 Mab840 MablG12 5 5 97 Mab2Dll 5 5 97 Mab840 119 121 13 1G12與2D11之間的結合不可偵測，因為其在相同抗原 決定基内結合，而相較於1G12及2D11，Mab 840與不同抗 原決定基結合。 實例6 a)利用經人類IL-18Ra/IL-18Rp轉染之HEK293細胞進行之 157810.doc -58 · 201215405 FACS檢定： 106個HEK293細胞經表現人類IL-18Ra+IL-18RP之質體 轉染。培育經轉染細胞1天。lxlO5個細胞於PBS緩衝液 +2% FCS中在冰上培育且用Mab_IL-18Ra(l gg/ml)染色。 以1:20稀釋度添加來自R&D Systems(F0102B)之抗小鼠 IgGl-PE作為二次抗體，且以1 pg/ml之濃度使用來自BD Pharmingen(557273)之小鼠IgGl作為同型對照。結果展示 於圖1中。 b)利用經獼猴IL-18Ra/IL-18Rp轉染之HEK293細胞進行之 FACS檢定： 106個HEK293細胞經表現獼猴IL-18Ra+IL-18Rp之質體 轉染。培育經轉染細胞1天。1〇5個細胞於PBS缓衝液+2% FCS中在冰上培育且用1 pg/ml濃度之Mab_IL-18Ra染色。 以1:20稀釋度添加來自R&D Systems (F0102B)之抗小鼠 IgGl-PE作為二次抗體，且以1 pg/ml之濃度使用來自BD Pharmingen(557273)之小鼠IgGl作為同型對照。結果展示 於圖2中。 實例7

利用表現獼猴IL-18Ra或獼猴IL-18Ra及p之CHO細胞進行 之細胞ELISA 在細胞ELISA中，表現獼猴IL-18Ra或獼猴IL-18Ra+p之 重組細胞株CHO-K1用Mab_IL-18R抗體染色。對照組為 CHO-K1未轉染細胞。細胞在含Glutamax-l(GIBCO目錄號 31331-028) + 10% FCS(PAN 目錄號 2802-P920707)之 F-12 培 157810.doc -59- 201215405 養基（GIBCO)中生長。對於重組細胞株之培養，添加250 pg/ml G418(遺傳黴素（Geneticin)，GIBCO，目錄號 10131-019)。添加抗hIL-18Ra抗體Mab840(小鼠單株IgGl，來自 R&D Systems，目錄號MAB 840)作為對照抗體及山羊抗小 鼠IgG (H+L)-HRP結合物（BioRad)作為偵測抗體。操作檢 定時，在第1天，於96孔盤中每孔接種於50 μΐ F-12中之 2χ104 個 CHO_CynoIL-18Ra、CHO_CynoIL-18Ra+p 或 CHO 細胞且在37°C下培育隔夜。在第2天，添加50 μΐ上清液或 於培養基中稀釋之（2x)經純化抗體或50 μΐ融合瘤上清液且 在4°C下培育2小時。吸出上清液且每孔添加100 μΐ戊二醛 固定溶液（25% ΕΜ級儲備溶液；最終濃度=0.05%於PBS中） 並在室溫下培育10分鐘。對於洗滌2次，每孔添加200 μΐ PBS並移除。添加50 μΐ於ELISA阻斷試劑（ELISA阻斷儲備 試劑以1:10稀釋於PBS中）中稀釋之ELISA偵測抗體。添加 以1:2000稀釋之山羊抗小鼠IgG(H及L)-HRP結合物且在室 溫下在振盪器上培育2小時。吸出溶液且用200 μΐ PBS洗滌 3次。添加50 μΐ ΤΜΒ，持續7-10分鐘。（直至藍色顯現）。 藉由添加25 μΐ 1 M H2S04來終止反應。使用ELISA讀取器 (TECAN)在450 nm-620 nm下量測MTP。結果展示於表5 中。 157810.doc 60· 201215405 表5 : 抗體 CHO CyIL-18Ra EC5〇(ng/ml) CHO CyIL-18Ra+p EC5〇(ng/ml) Mab 1G12 18,58 15,01 「Reg」 185,44 139,46 「MS」 >1000,00 >1000,00 對於毒性研究及PK/PD檢定而言，重要的是相較於抗體 與人類IL-18Ra之結合，抗體以類似EC50識別獼猴IL-1 8Ra。 實例8 人類PBMC t IL-18誘導之IFNy產生的研究 IL-18在自然殺手（NK)細胞及TH1細胞活化方面具有生物 功能，例如藉由在CD4+及其他T細胞、B細胞、NK細胞及 單核細胞中誘導干擾素-γ(ΙΡΝγ^與IL-Ιβ類似，IL-18亦在 人類Τ細胞中與IL-12協同誘導IFNY(無TCR嚙合）(Tominaga， K.等人，Int. Immunol. 12 (2000) 151-160)。因此，機制與 如關於TH1細胞而非TH2細胞所述之IL-12誘導的IL-18Ra 鏈表現相關。為評估抗IL-18 mAb對受體與配位體兩者之 功能性影響，藉由標準菲科帕克（Ficoll Paque)技術分離周 邊血液單核細胞。在5 ng/ml IL-12(Sigma)存在下於96平底 孔（200 μΐ體積）中預培養每孔2xl05個細胞3天。接著，添 加 IL-18(MBL，http://www.mblintl.com/)至最終濃度 10 ng/ml，再持續3天。為阻斷受體或中和配位體，此時添加 抗IL18/R mAb至最終濃度0.01-0.5/1.0 pg/ml。在總計6天 之後，藉由ELISA分析IFNy產量（以s/n計）。結果展示於表 157810.doc -61 - 201215405 6中0 表6 : 抗體 IC5〇 [ng/ml] Mab 1G12 0,76±0,5 Mab2Dll 1，71±0,3 Reg 2,3±3,2 MS 2,6±2,4 實例9 抗體與huIL-18Ra及其他IL-1受體家族蛋白質之結合 (ELISA) 在室溫下在384孔微量滴定盤（MaxiSorpTM，Thermo Scientific Nunc，DK，目錄號464718)上進行測試》在各培 育步驟之後，各盤用PBST洗滌3次。開始時，各盤用0.5 pg/ml 山羊抗人類 IgG Fc 片段（Jackson Imm. Res.，US，目錄 號109-006-170)塗佈至少2小時（h)。此後，各孔用補充有 0.2% Tween®-20及 2% BSA(Roche Diagnostics GmbH，DE) 之PBS阻斷1小時。0.2 pg/ml重組人類IL-18Ra Fc嵌合體 (R&D Systems,UK >目錄號 816-LR)捕捉於盤上1小時。 為測試抗體與IL-1受體家族之其他蛋白質之結合，捕捉0.2 pg/ml與人類Fc(hFc)結合之以下重組人類蛋白質： rhIL-lRI/hFc(R&D Systems，UK，目錄號269-1R) rhIL-lsRII/hFc(R&D Systems，UK，目錄號263-2R) rhIL-lR3/hFc(R&D Systems，UK，目錄號676-CP) rhIL-2Ra/hFc(R&D Systems，UK，目錄號 1020-RL) 157810.doc -62- 201215405 rhIL-7Ra/hFc(R&D Systems，UK，目錄號 306-IR) rhIL-15R/hFc(R&D Systems，UK，目錄號 147-IR) rhST-2/hFc(R&D Systems’UK，目錄號 523-ST) 在洗滌盤之後，經純化抗體於含0.05% BSA及0.2% Tween®-20之PBS中之稀釋液與受體蛋白質一起培育1小 時。用以1:2000稀釋之抗小鼠IgG辣根過氧化物酶（HRP)結 合物（GE Healthcare，UK，目錄號NA9310V)偵測抗體之結 合。1小時後，各盤用PBST洗滌6次且在室溫下用新鮮製 備之BM blue® POD受質溶液（BM blue® : 3,3，-5,5'四曱基 聯苯胺，Roche Diagnostics GmbH, DE，目錄號 11484281001)顯色30分鐘。在370 nm下量測吸光度。數值 相對於無抗體之對照進行校正。結果展示於表7中。 表 7(「/rhIL-lRI」意謂「rhIL-lRI/hFc」等） 抗體 rhlL- 1RI rhlL- lsRlI rhlL- 1R3 rhlL- 2Ra rhlL- 7Ra rhlL- 15R rhST- 2 rhlL- 18Ra MablG12 0.01 -0.03 0.00 -0.01 -0.01 0.04 -0.01 2.43 Mab2Dll 0.02 -0.05 0.02 0.02 -0.01 0.19 0.02 2.56 實例10 受體内化 KG-1細胞用10 ng/ml TNFtx刺激隔夜以誘導IL18R表現。 細胞接著與抗IL18R抗體一起培育不同時期，隨後a)偵測 結合之抗體或b)測定IL1 8R表面表現。本發明之所測試抗 體（2D11、2D12)皆不誘導受體内化或下調。 實例11 人類THi檢定 157810.doc -63· 201215405 藉由菲科泛影葡胺（Ficoll Hypaque)密度梯度自健康自願 者分離周邊血液單核細胞（PBMC)。細胞用RPMI洗滌後， 將其再懸浮於含0.5% BSA及2 mM EDTA之PBS(pH 7.2) 中。使用泛T細胞分離套組（Pan T cell isolation kit) (Miltenyi biotec)及藉由AutoMACSTM分離器進行磁性分離 自PBMC分離T細胞。所富集之T細胞使用完全RPMI 1640(補充有10% FCS、2-酼基乙醇、L-麩醯胺酸、HEPES 緩衝劑、丙酮酸鈉及青黴素/鏈黴素）洗滌3次，再懸浮且以 1 X 106個細胞/毫升塗鋪於經2 pg/ml抗CD3塗佈之6孔平底盤 中，在37°C 下與 1 pg/ml 可溶性抗 CD28(BD Biosciences)、 10 ng/ml IFN-γ、30 ng/ml IL-12 及 10 pg/ml 抗 IL-4 (Peprotech)—起培育4天。接著，細胞用完全RPMI洗條2次 且接著在2xl06個細胞/毫升下於含重組IL-2(50個單位/毫 升）之完全RPMI中靜息。細胞隨後用連續稀釋之抗IL-18Ra Ab或同型對照Ab(0-1 pg/ml)處理30分鐘，接著在每孔 1χ1〇5 個細胞下用 10 ng/ml IL-18、2 ng/ml IL-12 (Peprotech)再刺激，在37°C下在5% C〇2下於96孔平底盤中 培養隔夜。收集上清液以供使用BD OptEIA人類iFN-γ ELISA 套組（目錄號 555 142)(BD Biosciences)進行 lFN-γ ELISA分析。使用Spectromax微盤讀取器讀取吸光度且使 用PRISM(GraphPad Software)分析資料。結果展示於表8a 中〇 157810.doc •64· 201215405 表8a : 抗體 人類巧知檢定 IC,„ ΓρΜΙ MablG12 76.2 Mab2Dll 87.1 厂MSj 2914.5 Reg 2832.0 慢性阻塞性肺病（COPD)之發病機制中牽涉IThl/Tcl及 Th2/Tc2失衡，Thl/Tcl細胞表現較大量之IL_18Ra，且周 邊T細胞功能與COPD之嚴重性相關（Zhu，X.等人，J. Immunol. 182 (2009) 3270-3277 ; Freeman，C.M.等人，J.

Immunol. 184 (2010) 6504-6513 ; Shirai，Τ·等人，Allergol. Int. 59 (2010) 75-82) »此檢定關注T細胞，其中活化T細胞 並在Thl條件下培養且其表現較大量之IL-18Ra，因此，此 檢定需要最高量之抗IL-18Ra Ab以便中和。本發明抗體在 此人類TH1檢定中顯示改良之IC90值且因此為用於治療此 等疾病之有價值化合物。 在第二實驗中，測定人類化抗體之此人類TH1檢定中的 IC90值。結果展不於表8b中。 表8b : 抗體 人類THi檢定 IC9〇 [pMl MablG12-9.6 148.4 MablG12-10.5 283.2 MablG12-10.6 93.5 MablG12-11.6 77.0 MablG12-12.6 399.4 厂MSj 1431.57 Reg 2361.87 157810.doc -65- 201215405 同樣，本發明之人類化抗體在此人類ΤΗ 1檢定中顯示改 良之IC90值且因此為用於治療此等疾病之有價值化合物。 實例12 原發性人類COPD全血檢定之描述 收集來自健康非吸菸者及c〇PD(Gold第n_IV期）患者之 周邊血液於肝素鈉管中，用連續稀釋之抗1L_18Ra抗體或 同型對照Ab(0-0.5 pg/ml)處理30分鐘’接著在37°C下在5°/〇 C02下於 96孔盤中用 1〇 ng/ml IL-18、2 ng/ml IL-12刺激隔 夜。離心細胞且收集上清液以供使用BD 〇ptEIA人類ΙΡΝ·γ ELISA 套組（目錄號 555142)(BD Biosciences)進行 IFNy £1^18八分析。使用8卩6〇1：1*〇1113\微盤讀取器讀取吸光度且使 用PRISM(GraphPad Software)分析資料。結果展示於表9 中〇 表9 : 抗體 人類WB檢定 COPD患者 IC90 [pM] 人類WB檢定 健康非吸菸者 IC90 [pM] MablG12 42.1 12.2 Mab2Dll - 19.2 rMS j - 33.0 厂 Regj 21.6 實例13

MablG12及Mab2Dll與IL-18R變異體之結合 對於研究抗體結合位點’選殖1L-18Ra且表現為Fc融合 蛋白（CH3前之人類IgGl鉸鏈）。IL-18Ra由3個Ig樣域D1、 157810.doc -66 - 201215405 D2、D3構成。產生其若干變異體及突變體且測試AB 1G12 及2D11之殘餘結合。藉由用相應小鼠IL-18Ra序列交換人 類IL-18Rcx序列來引入突變。藉由分別選殖及將各域表現 為人類Fc融合蛋白來進行缺失。其他獼猴IL-18Ra選殖為 人類Fc融合蛋白。結果展示於表8中。抗體與不同IL18Ra 變異體之結合藉由使用BIAcore® 3000儀器（GE Healthcare) 在25°C下進行表面電漿子共振（SPR)進行量測。使用由GE Healthcare供應之胺偶合套組在pH 5.0下在CM3晶片上進行 約500個共振單位（RU)之捕捉系統（捕捉對人類IgG具有特 異性之mAB，Jackson Immunoresearch/109-005-098)的胺 偶合。為進行分析，藉由以10 μΐ/min之流速注射10 pg/ml 溶液持續2分鐘來捕捉不同經人類Fc標籤標記之IL18Ra變 異體。過量結合位點藉由注射1.25 μΜ濃度之人類Fc混合 物（Biodesign，50 175)加以阻斷。接著在10 μΐ/min之流速下 注射欲測試的抗體3分鐘至0.2 pg/ml之濃度。監測解離相 (dissociation phase)多達5分鐘且藉由自樣品溶液轉換成操 作緩衝液來觸發。若測試天然配位體IL18及IL18R0，則如 上文關於抗體所述注射兩種蛋白質之混合物至100 nM之濃 度。藉由在10 gL/min之流速下依次用100 mM填酸溶液洗 滌1分鐘及用5 mM NaOH洗滌1分鐘來使表面再生。整體折 射率差異藉由減去自空白偶合表面獲得之反應來校正。亦 減去空白注射（=雙重參考）。由抗體結合之與IL18Ra野生 型相當的IL18Ra變異體不影響此等抗體之結合且因此推斷 插入/改變之突變不促進結合（在表7中用+標記）。若相較於 157810.doc -67- 201215405 利用野生型所見之結合信號，結合信號降低20-50%，則表 示結合受影響。弱結合表示在信號以上10%但小於關於野 生型受體所述50%的明顯結合（標記為0)。若未偵測到結 合，則其在表10中用-標記。 shIL-18Ra:Fc之突變及變異體 1. WT 野生型 shIL-18Ra:Fc 2. cyno 獼狼 IL-18Ra:Fc 3. D3 缺失D1/D2 ;殘餘D3

4. Dl-1 D1-SRIAL突變成 PRVTF

5. Dl-2 D1-MKNYTQK突變成 VGNDRRN

6. D2-1 D2-QTLVNSTS突變成EELIQDTW

7. D2-2 D2-NPTIKKN突變成 TPRILKD

8. D2-3 D2-HFLHHNGKLF 突變成 FSVHHNGTRY 表10 : 1G12 2D11 Reg MS IL-18/ IL-18RP (對照） 1. WT + + + + + 2. cyno + + + + + 3.D3 - - + + - 4.D1-1 十 + + + + 5.D1-2 + + + + + 6. D2-1 + 7. D2-2 + 8. D2-3 + .d..d..d. n.n.n. •d-d-d n.n.d 合 合結 結測 之合债 合少結可 結減弱無 I57810.doc -68- 201215405 實例14 IL-18R肽之結合檢定 研究抗體與在US 20080063644中描述為SEQ ID NO:5及6 之肽的結合。此等肽在N端經生物素化且藉由SPR探測結 合。抗體與此等肽之結合藉由使用BIAcore® 3000儀器（GE Healthcare)且使用HBS-P+作為操作及稀釋緩衝液在25°C下 進行表面電漿子共振（SPR)來量測。生物素化肽藉由注射 若干次脈衝（60秒）之10 nM肽溶液，從而產生40 RU之反應 而固定於SA晶片上。藉由注射游離生物素至1 μΜ之濃度 使參考表面以及經塗佈表面去活化。分析時，在丨〇 μΐ/min 之流速下注射欲測試之抗體3分鐘至1 〇〇 ηΜ之濃度。監測 解離相（dissociation phase)多達2.5分鐘且藉由自樣品溶液 轉換成操作緩衝液來觸發。整體折射率差異藉由減去自空 白偶合表面獲得之反應來校正。亦減去空白注射（=雙重參 考）。對於抗體Mab 1G12，未偵測到與此等肽之結合。 【圖式簡單說明】 圖1 :針對經人類IL-18Ra/IL-18Rp轉染之HEK293細胞的 FACS ； 圖2 :針對經獼猴IL_18Ra/IL-18Rp轉染之HEK293細胞的 FACS。 157810.doc -69- 201215405 序列表 <110>瑞士商赫孚孟拉羅股份有限公司 <120>抗IL-18R1抗體及其用途

<130 26956 FT <140 100130170 <141> 2011/08/23 <150> EP 10174039.7 <151> 2010-08-25 <160> 68 <170> Patentln version 3.5 <210> 1 <211> 121 <212> PRT <213>小家鼠 <400> 1

Gin Val Gin Leu Gin Gin Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1. 5 10 15

Ser Val Arg Met Ser Cys Lys Thr Ser Asp Tyr Thr Phe Thr Ser Asn 20 25 30

Trp Met His Trp Val Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Thr lie Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Tyr Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Gin Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Thr Thr Ser Gly Asp Tyr Asp Ala Asp Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly 100 105 110

Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 5 <212> PRT <213>小家鼠 <400> 2

Asp Tyr Thr Phe Thr 1 5 <210> 3 <211> 17 <212> PRT <213>小家鼠 <400> 3

Thr lie Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Tyr Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 15 10 15 157810·序列表.doc 201215405 G1y <210> 4 <211> 12 <212> PRT <213>小家鼠 <400> 4

Ser Gly Asp Tyr Asp Ala Asp Arg Tyr Phe Asp Val 1 5 10 & 12 3 ▲ *1A Is <2<2<2<2 5 111

PRT 小家鼠 <400> 5

Asp lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Ser Leu Gly Val Ser Leu Gly 15 10 15

Gin Arg Ala Thr lie Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser 20 25 30

Gly Asp Ser Tyr Met His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro 35 40 45

Lys Leu Leu lie Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn lie His 65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Arg 85 90 95

Glu Leu Pro Leu Ser Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 110 <210> 6 <211> 15 <212> PRT <213>小家鼠 <400> 6

Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Asp Ser Tyr Met His 15 10 15 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213>小家鼠 <400> 7

Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser <210> 8 <211> 9 2- 157810-序列表.doc 201215405 <212> PRT <213>小家鼠 <400> 8

Gin Gin Ser Arg Glu Leu Pro Leu Ser <210> 9 <211> 121 <212> PRT <213>小家鼠 <400> 9

Gin Val Gin Leu Gin Gin Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Met Scr Cys Lys Ala Ser Asp Tyr Thr Phe Thr Ser Asn 20 25 30

Trp Met His Trp Val Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Thr lie Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Tyr Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Thr Thr Ser Gly Asp Tyr Asp Ala Asp Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly 100 105 110

Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 10 <211> 10 <212> PRT <213>小家鼠 <400> 10

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<210> 29 <211> 121 <212> PRT <213>人工 <220> <223>人類化MablG12-9.6之重鏈可變區（VH) <400> 29

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Asp Tyr Thr Phe Thr Ser Asn 20 25 30

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Gin Gin Ser Arg Glu Leu Pro Leu Ser

<210> 37 <211> 121 <212> PRT 14- 157810·序列表.doc 201215405 <213>人工 <220> <223>人類化MablG12-10.5之重鏈可變區（VH) <400> 37

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

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Ser Gly Asp Tyr Asp Ala Asp Arg Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 41 <211> 111 <212> PRT <213>人工 <220> <223>人類化MablG12-10.5之輕鏈可變區（VL) <400> 41

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Gin Gin Ser Arg Glu Leu Pro Leu Ser <210> 45 <211> 121 <212> PRT <213>人工 <220> <223>人類化MablG12-10.6之重鏈可變區（VH) <400> 45

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

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Le s Ly Γ Th

Ly 60 1 ΊΑ 5015Γ1 0>1>2>3> 11 1Λ 1J 11 <2<2<2<2 <220> <223〉輕鏈CDRL1 人類化MablG12-10.6 <400> 50 18- 1578丨0-序列表.doc 201215405

Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Asp Ser Tyr Met His 15 10 15 5,7^人 fe> Λ > Q 1 i 3 11 IX 11 11 <2<2<2<2 <220〉 <223> 輕鏈CDRL2人類化MablG12-10.6 <400> 51

Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr <210> 52 <211> 9 <212> PRT <213>人工 <220> <223> 輕鏈CDRL3人類化MablG12-10.6 <400> 52

Gin Gin Ser Arg Glu Leu Pro Leu Ser <210> 53 <211> 121 <212> PRT <213>人工 <220> <223>人類化MablG12-11.6之重鏈可變區（VH) <400> 53

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Asn 20 25 . 30

Trp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Thr lie Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Wet Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Thr Thr Ser Gly Asp Tyr Asp Ala Asp Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 19· 157810-序列表.doc 201215405 <210> 54 <211> 5 <212> PRT <213>人工 <220> <223> 重鏈CDRH1 人類化NtoblG12-11.6 <400> 54

Gly Tyr Thr Phe Thr 1 5 <210> 55 <211> 17 <212> PRT <213>人工 <220> <223> 重鏈CDRH2人類化MablG12-11.6 <400> 55

Thr lie Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala G]n Lys Phe Gin 15 10 15

Gly <210> 56 <211> 12 <212> PRT <213>人工 <220> <223> 重鏈CDRH3人類化MablG12-11.6 <400> 56

Ser Gly Asp Tyr Asp Ala Asp Arg Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 57 <211> 111 <212> PRT <213>人工 人類化MablGl：MI.6之輕鏈可變區（VL) <400> 57

Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser 20 25 30

Gly Asp Ser Tyr Met His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro 35 40 45

Arg Leu Leu He Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly He Pro Asp 50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser 65 70 75 80 •20- 157810·序列表.doc 201215405

Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Arg 85 90 95

Glu Leu Pro Leu Ser Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210> 58 <211> 15 <212> PRT <213>人工 <220> <223> 輕鏈CDRL1 人類化MablG12-11.6 <400> 58

Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Asp Ser Tyr Met His 15 10 15 <210> 59 <211> 7 <212> PRT <213>人工 <220> <223> 輕鏈CDRL2人類化MablG12-11.6 <400> 59

Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr <210> 60 <211> 9 <212> PRT <213>人工 <220> <223> 輕鏈CDRL3人類彳bMablG12-11.6 <400> 60

Gin Gin Ser Arg Glu Leu Pro Leu Ser 1汀工 12记」 61η Λ ^ > > > 012 3 11 —1 —Λ 11 2222 <220> <223>人類化MablG12-12.6之重鏈可變區（VH) <400> 61

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Asn 20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Thr He Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Gin Lys Leu 50 55 60 21 · 157810-序列表.doc 201215405

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Tlir Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Thr Thr Ser Gly Asp Tyr Asp Ala Asp Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 62 <211> 5 <212> PRT <213>人工 <220> <223> 重鏈CDRH1 人類化MablG12-12.6 <400> 62

Gly Tyr Thr Phe Thr <210> 63 <211> 17 <212> PRT <213>人工 <220> <223〉重鏈CDRH2人類化MablG12-12.6 <400> 63

Thr lie Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Gin Lys Leu Gin 15 10 15

Gly <210> 64 <211> 12 <212> PRT <213>人工 <220> <223> 重鏈CDRH3人類化MablG12-12.6 <400> 64

Ser Gly Asp Tyr Asp Ala Asp Arg Tyr Phe Asp Vai 1 5 10 5llRTa 1- p 人 0>1>2>3> <21<21<21<21 <220> <223>人類化MablG12-12.6之輕鏈可變區（VL) <400> 65

Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly •22· 157810·序列表.doc 201215405 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser 20 25 30

Gly Asp Ser Tyr Met His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro 35 40 45

Arg Leu Lea lie Tyr Leu Ala Ser Asti Leu Glu Thr Gly lie Pro Asp 50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser 65 70 75 80

Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Arg 85 90 95

Glu Leu Pro Leu Ser Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110 65CT L 61P人 >>>>> 01643 11 11 —1 1Λ <2<2<2<2 <220> <223> 輕鏈CDRL1 人類化MablG12-12.6 <400> 66

Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Asp Ser Tyr Met His 15 10 15 <210> 67 <211> 7 <212> PRT <213>人工 <220> <223> 輕鏈CDRL2人類彳bMablG12-12.6 <400> 67

Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr <210> 68 <211> 9 <212> PRT <213>人工 <220> <223> 輕鏈CDRL3人類化MablG12-12.6 <400> 68

Gin Gin Ser Arg Glu Leu Pro Leu Ser 23- 157810·序列表.doc

Claims (1)

1. 201215405 七、申請專利範圍： 1. 一種經分離之抗體，其與人類IL-18R1結合，且特徵在 於結合於單株抗體1G12所結合之相同人類IL-18R1抗原 決定基，其包含SEQ ID ΝΟ:1作為可變重鏈區之胺基酸 序列及SEQ ID NO:5作為可變輕鏈區之胺基酸序列，其 中該抗體與人類IL-18R1結合之結合親和力為1〇·8 μ或 10_8 Μ以下。 2. —種經分離之抗體，其與人類IL_18R1結合，且特徵在 於包含 SEQ ID NO:2 或 SEQ ID NO:10 之 CDRH1 區、SEQ ID ΝΟ··3之CDRH2區及SEQ ID NO:4之CDRH3區作為重鍵 可變區 CDRs ;及 SEQ ID NO:6 之 CDRL1 區、SEQ ID NO:7之CDRL2區及SEQ ID NO:8之CDRL3區作為輕鍵可 變區CDRs， 或其人類化型式。 3. 如請求項1之抗體，其中包含SEq id ΝΟ:1作為重鏈可變 區及SEQIDNO:5作為可變輕鍵區；或包含SEQIDN0.9 作為重鍵可變區及SEQIDNO:ll作為可變輕鏈區， 或其人類化型式。 4·如請求項2或3之抗體，其中包含： a) SEQ ID NO:30 之 CDRH1 區、SEQ ID N〇:3l 之 CDRH2區及SEQ ID NO:32之CDRH3區作為重鏈可變區 CDRs ;及 SEQ ID NO:34之 CDRL1 區、SEQ ID NO: 35之 CDRL2區及SEQ ID NO:36之CDRL3區作為輕鏈可變區 CDRs ； 157810.doc 201215405 b) SEQ ID NO:38 之 CDRH1 區、SEQ ID NO:39 之 CDRH2區及SEQ ID NO:40之CDRH3區作為重鏈可變區 CDRs ;及 SEQ ID NO:42之 CDRL1 區、SEQ ID NO: 43 之 CDRL2區及SEQ ID NO:44之CDRL3區作為輕鏈可變區 CDRs ； c) SEQ ID NO:46 之 CDRH1 區、SEQ ID NO:47 之 CDRH2區及SEQ ID NO:48之CDRH3區作為重鏈可變區 CDRs ;及 SEQ ID NO:50之 CDRL1 區、SEQ ID NO: 51 之 CDRL2區及SEQ ID NO:52之CDRL3區作為輕鏈可變區 CDRs ; d) SEQ ID NO:54 之 CDRH1 區、SEQ ID NO:55 之 CDRH2區及SEQ ID NO:56之CDRH3區作為重鏈可變區 CDRs ;及 SEQ ID NO:58之 CDRL1 區、SEQ ID NO: 59之 CDRL2區及SEQ ID NO:60之CDRL3區作為輕鏈可變區 CDRs ;或 e) SEQ ID NO:62 之 CDRH1 區、SEQ ID NO:63 之 CDRH2區及SEQ ID NO:64之CDRH3區作為重鏈可變區 CDRs ;及 SEQ ID NO:66之 CDRL1 區、SEQ ID NO: 67之 CDRL2區及SEQ ID NO:68之CDRL3區作為輕鏈可變區 CDRs。 5.如請求項2或3之抗體，其中包含： a) SEQ ID NO:29作為重鏈可變區及SEQ ID NO:33作為 可變輕鍵區； b) SEQ ID NO:37作為重鏈可變區及SEQ ID NO:41作 157810.doc 201215405 為可變輕鏈區； c) SEQ ID NO:45作為重鏈可變區及SEQ ID n〇:49作為 可變輕鏈區； d) SEQ ID NO:53作為重鏈可變區及SEq id NO:57作 為可變輕鏈區；或 e) SEQ ID NO:61作為重鏈可變區及SEq ID n〇:65作為 可變輕鏈區。 6. 如請求項1至3中任一項之抗體，其為人類IgG1同型 (isotype) ’包含胺基酸位置234之白胺酸經丙胺酸替代的 犬變L234A及胺基酸位置235之白胺酸經丙胺酸替代的突 變L235A。 7. 如請求項1至3中任一項之抗體，其為含或不含突變 S228P之人類igG4同型。 8_如請求項7之抗體，其中包含突變S228p&L235E。 9. 一種經分離之核酸，其編碼如請求項丨至8中任一項之抗 體。 10. —種宿主細胞，其包含如請求項9之核酸。 11. 一種產生與IL-18R1結合之重組抗體的方法，其特徵在 於在原核或真核宿主細胞中表現如請求項9之核酸及自 該細胞或該細胞培養物上清液回收該抗體。 12· —種醫藥調配物，其包含如請求項丨至8中任一項之抗體 及醫藥學上可接受之載劑。 13. 如請求項丨至3中任一項之抗體，其係用作藥劑。 14. 如凊求項1至3中任一項之抗體，盆你田认" 嗦I机镀其係用於治療慢性阻塞 157810.doc 201215405 性肺= (C〇PD)、發炎性疾病、自體免疫性疾病類風濕 性關節炎、狼瘡、牛皮癬或骨病。 15· —種如請求項丨至8中任一項之抗體之用途其係用於製 造藥劑》 16_如請求項15之用途，其中該藥劑係用於治療慢性阻塞性 肺病（COPD)、發炎性疾病、自體免疫性疾病、類風濕性 關卽炎、狼瘡、牛皮癬或骨病。 17.如請求項1至3中任一項之抗體，其部分經海藻糖基化或 未經海藻糖基化。 1 8·如請求項1至3中任一項之抗體，其係用於阻斷IL_丨8與 IL-18R1之間相互作用，及阻斷il-18R1與IL18RAP之間 複合物形成，及抑制11-18受體複合物介導之信號傳導及 NFkB路徑活化。 19.如請求項1至3中任一項之抗體，其係用於治療癌症。 2 0.如請求項15之用途，其中該藥劑係用於治療癌症。 157810.doc