TW201225962A - Composition for oral use - Google Patents

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TW201225962A TW100133446A TW100133446A TW201225962A TW 201225962 A TW201225962 A TW 201225962A TW 100133446 A TW100133446 A TW 100133446A TW 100133446 A TW100133446 A TW 100133446A TW 201225962 A TW201225962 A TW 201225962A
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Description

201225962 六、發明說明 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於有效的預防齲齒之抑制生物被膜形成之 口腔用組成物,尤其係關於藉由利用口腔微生物之聚量感 應,使用新穎的抑制生物被膜形成的方法之口腔用組成 物。 【先前技術】 物體表面附著的微生物並非單獨存在,而是於具有特 徵的結構中與其他微生物形成生物被膜。此生物被膜係見 於固定化微生物的利用,對人類有益的運作,另一方面, 相反地亦顯示成爲引起齲齒或食品污染的原因,近年來硏 究盛行。 口腔生物被膜係由700種類以上的細菌所構成,lmg 中存在1 〇8個以上的菌。其中佔有多數(2 0 %〜4 0 %)之 Streptococci係基於藉由口腔表面之動態的細菌間活性物 質之細菌間交流,形成生物被膜。其中Streptococcus mutans(S. mutans)產生具有黏著性之菌體外多糖,扮演形 成具有病原性生物被膜的中心角色。已知口腔生物被膜係 成爲齲齒或牙周病原因,掌握此等疾病係以S. mutans爲 首之細菌之微生物感染症。 傳統的齲齒預防係藉由殺死S · m u t a n s,或抑制葡糖 基轉移酶(glucosyltransferase)等酵素,防止牙斑的形成以 抑制齲齒的想法爲主流。然而,因爲實際的齲齒病灶係藉 201225962 由覆蓋生物被膜表層之菌體外多糖妨礙抗生素、 物質或抗生素等之滲透,多不能得到預期的效果 用抗菌劑、酵素抑制劑、抗生素等常伴隨著抗藥 現的危險性。另外,雖有藉由刷牙或洗牙等機械 抑制生物被膜的方法,但對於難以如此機械性地 生物被膜之需介護高齡者等,現在的方法難以正 口腔護理。 就此等觀點,期望開發與至今不同的發想以 被膜、預防齲齒的方法。另外,對於控制口腔生 因爲期望日常習慣地繼續實施,所以利用口香糖 牙膏等口腔組成物係有效的。 作爲候補的新的口腔生物被膜去除法,可舉 聚量感應。近年來,顯示細菌相互間訊號傳遞系 機制之聚量感應(QS;細菌密度依賴性基因發生扣 係作用於S. mutans之形成生物薄膜或發生病原1 mutans之 Q S係由感受刺激多肽(C S P,C 〇 stimulating peptide)所控制。現在,以此QS爲 制生物薄膜形成或病原性發現之硏究,期待與以 爲首之開發微生物感染病之預防方法相連繫,嘗 究,但尙未達成實用化。 例如非專利文獻1揭示稱爲S . s a 1 i v a r i u s的ί mutans形成生物薄膜之要旨、及特定基因表 expression)而可控制CSP要旨。但是,導入微生 內有安全性的問題.,並且控制基因發表大多伴隨 抑制酵素 。甚至使 耐性菌出 性去除以 控制口腔 確地實踐 去除生物 物被膜, 等食品及 例如抑制 統之分子 ]制系統) 生、或S. mpetence 標的,控 口腔疾病 試各種硏 證阻礙S. i 現(gene 物於口腔 困難。因
-6- S 201225962 此,期望開發安全性更高,而且簡便的生物被膜形成阻礙 方法。 [先前技術文獻] [非專利文獻 1 ] Or al Microbiology And Immunology, 2009 24(2):pp 1 52-6 1 【發明內容】 發明之揭示 發明所欲解決之課題 傳統以來使用某種抗菌劑、酵素抑制劑或抗生物之齲 齒抑制法,因爲口腔生物被膜之菌體外多糖阻礙抗菌劑、 酵素抑制劑、抗生素等之滲透,難以顯示目標之抑制齲齒 的效果。並且,因爲使用抗菌劑、酵素抑制劑、抗生素 等,出現抗藥耐性菌的危險性高,所以並不適宜。因此, 本發明並非進行控制齲齒原因菌,而是以提供進行控制由 齲齒原因菌形成的生物被膜,而更安全且效果高之齲齒抑 制用之口腔用組成物爲目的。 課題之解決手段 本發明者等努力硏究的結果,發現藉由控制聚量感應 之組成物而可抑制生物被膜形成,因而完成本發明。 發明之功效 藉由本發明之口腔用組成物,抑制齲齒原因菌形成生 201225962 物被膜。此等口腔用組成物係可添加於飲食品、醫藥品、 潔牙劑等,安全地使用於齲齒預防治療用。 用以實施發明之最佳型態 依據非專利文獻1所記載之傳統的硏究,可知S. mu tans之聚量感應(QS)係由特定的微生物或基因表現所 控制。然而,就摻合於口香糖等食品及潔牙劑等之口腔用 組成物,進行日常習慣地控制齲齒生物被膜之觀點,於安 全或簡便性方面有許多應解決的問題,此等中任一種QS 控制方法皆尙未達成實用化。 針對於此,本發明者等努力硏究的結果,發現 S. mutans之聚量感應爲日常中可安全攝取的特定物質所控 制,因此,實現藉由控制聚量感應以抑制齲齒生物被膜的 形成。 亦即,本發明係以藉由含豆類萃取物之口腔用組成物 抑制聚量感應關連之齲齒生物被膜形成爲特徵。 依據有關本發明的口腔用組成物,因CSP依賴性之S. mutans之生物被膜形成被抑制,所以病原性細菌不能附 著於口腔內。因此,不藉由刷牙或洗牙等機械方法而可抑 制生物被膜形成。 另外,亦不發生如傳統之使用抗菌劑、酵素抑制劑或 抗生素等之齲齒抑制法,口腔生物被膜之菌體外多糖阻礙 抗菌劑、酵素抑制劑、抗生素等之滲透而難以出現抑制齲 齒的效果之問題。
S -8- 201225962 進而,因爲不使用抗菌劑、酵素抑制劑、抗生素等而 可抑制齲齒’所以可抑制對抗菌物質或抗生素之抗藥耐性 菌出現的可能性。 本發明中使用的豆類種類雖無特別的限制,但以使用 至少1種以上的豆類選自豇豆、小紅豆、紫花豆、白花 豆、黑四季豆、金時豆所萃取之萃取物爲宜。 對於本發明之得到有效成份之豆類萃取物之方法,雖 無特別限定,但藉由將前述豆類的種子或果實(豆),以適 當的粉碎方法粉碎,溶劑萃取等之方法,調製萃取物。作 爲萃取溶劑,可使用水及甲醇、乙醇、正丙醇及正丁醇等 之低級醇、醚'氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甘油、丙二醇等 之有機溶劑中之1種或混合2種以上,但以使用熱水或親 水性有機溶劑爲宜。另外,若考慮本發明之萃取物多作爲 飲食品使用時’作爲萃取溶劑,就安全性上,以組合水及 乙醇使用爲宜。以90%以下之乙醇萃取爲宜,以60%以下 之乙醇萃取尤佳’以30%以下之乙醇萃取更好,以熱水萃 取最好。 作爲萃取條件,雖可以高溫、室溫、低溫中任—種溫 度進行萃取’但以5 0〜9 0 °C,萃取1〜5小時程度爲宜》 所得萃取物亦可過濾,餾去萃取溶劑後,於減壓下濃縮或 冷凍乾燥。並且,亦可使用將此等萃取物藉由有機溶劑、 色譜法等分離精製者。 另外’因爲本發明之口腔用組成物安全性高,所以可 摻合於例如漱口藥、牙膏、消臭噴劑等之口腔用組成物、 -9 - 201225962 或口香糖、硬糖、錠果、軟糖、巧克力、餅乾、零食等點 心、冰淇淋、冰沙、冰果等之冷果、飲料、麵包、熱餅、 乳製品、火腿、香腸等之畜肉製品類、魚板、竹輪等之魚 肉製品、熟食類、布丁、湯以及果醬等之飲食品,可日常 上使用。 作爲該摻合量,雖可依各種製造條件而改變,但相對 於口腔用組成物,以摻合豆類萃取物爲0.01重量%以上, 2.0重量%以下,進而以〇 . 〇 1重量%以上,1 · 〇重量%以下 爲宜。 因爲本發明係使用傳統以來食用物之萃取物,所以即 使口腔內或體內攝取,對於其安全性沒有問題。另外,使 口香糖等之食品或牙膏等含有而可簡便地攝取,因爲無須 如調製基因表現之複雜步驟,所以可於日常上持續而控制 生物被膜。 【實施方式】 實施例 以下係使用實施例說明關於本發明,但本發明之範圍 並不受此等實施例任何限制。 [實施例1 ] 1、調製萃取物 使用豇豆、小紅豆(大納言)、小紅豆(襟裳小紅豆)、 紫花豆、白花豆、黑四季豆、金時豆7種作爲植物樣品。
S -10- 201225962 各植物樣品係購買市售品,以粉碎機細細粉碎2 0 g 後,以200ml水,70 °C,萃取2小時。所得之萃取液係以 3 OOOrpm ’離心10分鐘,將上清液過濾後,冷凍乾燥物作 爲各植物熱水萃取物,供予實驗。 2、評估抑制生物薄膜形成之活性 2-1、形成生物薄膜 將 159 株 S. mutans UA,於 5ml 之 Brain Heart Infusi〇n(BHI)液體培養基,於37°C下嫌氣培養10小時, 以3000rpm,離心10分鐘,將所收集細菌,藉由磷酸緩 衝生理食鹽水(PBS),調製成OD55Gnnl=0.5,將此作爲試 驗菌懸濁液。 生物被膜形成係使用96 .孔微孔細胞培養盤,進行試 驗。各孔中,添加 60μ1之植物熱水萃取物、20μ1之 CSP' 20μ1之S. mutans試驗菌懸濁液、ΙΟΟμΙ之添加 0.1%蔗糖之 Todd Hewitt Broth,於 37°C、5%C02 之條件 下’進行培養16小時,形成CSP衍生組之生物被膜。 CSP濃度係最終濃度爲1 μΜ,各樣品之熱水萃取物之濃度 係最終濃度爲lmg/ml。 比較用係不添加CSP,除此以外與前述相同條件進行 培養,形成C S P非衍生組之生物被膜。 進而,作爲對照組,對於各CSP衍生組及CSP非衍 生組,不添加樣品之熱水萃取物,除此以外與前述相同條 件進行培養。 2-2、定量生物被膜
-11 - S 201225962 對於各CSP衍生組及CSP非衍生組,去除培養後之 上清液,以PBS進行清洗各孔2次》洗淨後,於各孔中 添加0.25%之藏紅溶液,靜置15分鐘後,去除多餘的藏 紅溶液,以PBS進行清洗各孔2次。洗淨後於各孔添加 乙醇,振盪30分鐘使溶出使染色的藏紅,使用微量盤式 分析儀測定492nm的吸光度,定量生物被膜形成量。 該結果如圖1及圖2所不。 圖1係表示對於各CSP衍生組及CSP非衍生組之加 入植物萃取物進行培養組(樣品組)及對照組之生物被膜形 成量。另外,圖2係表示對於各CSP衍生組及CSP非衍 生組之以對照組之生物被膜形成量爲1 00時之樣品組之生 物被膜形成量之比例。 依據圖1,對照組中CSP衍生組亦比CSP非衍生組 之生物被膜形成量增加。認爲此增加部份係藉由以CSP 爲自誘導物(autoinducer)之聚量感應之生物被膜增加部 份。 另外,樣品組中,CSP衍生物(黑棒)的生物被膜形成 量係比對照組少,但CSP非衍生物(白棒)的生物被膜形成 量則與對照組無改變。此事亦可由圖2顯示,CSP衍生物 (黑棒)中樣品組之生物被膜形成量比對照組少(未滿 1 00%),但C SP非衍生物(白棒)中樣品組之生物被膜形成 量則與對照組無改變(約1 00%)。由此認爲,藉由樣品組 所添加的植物萃取物,控制以 CSP爲自誘導物之S. mu tans聚量感應,生物被膜形成量未增加。
S -12- 201225962 另外,於圖1中,CSP衍生組係添加大納言小紅豆、 襟裳小紅豆、紫花豆、金時豆之熱水萃取物,進行培養時 (樣品組之cSP + ),比CSP及植物萃取物皆未添加組(對照 組之CSP-)的生物被膜形成量減少。 進而,使用實施例1調製的小紅豆萃取物,以常法調 製口香糖、硬糖、牙膏。以下係表示該配方。另外,本發 明品之範圍並不受此等任何限制。 [實施例2 ] 依據下述配方調製口香糖。 膠基材 20.0 重 砂糖 55.0 葡萄糖 15.0 水飴 9.0 香料 0.5 襟裳小紅豆熱水萃取物(實施例1) 0.5 100.0 [實施例3] 依據下述配方調製硬糖。 -13- 201225962 5 0 · 0 重量。/〇 34.0 0.5 0.5 剩餘量 100.0 5 0.0重量% 20.0 2.0 2.0 1.0 0.1 1.0 0.01 剩餘量 100.0 砂糖 水飴 香料 大納言小紅豆熱水萃取物(實施例1 ) 水 [實施例4] 依據下述配方調製牙膏。 碳酸鈣 甘油 羧甲基纖維素 月桂基硫酸鈉 香料 糖稩 襟裳小紅豆熱水萃取物(實施例1) 雙氯苯雙胍己院(Chlorhexidine) 水 【圖式簡單說明】 [圖1]實施例1中各對照組與樣品組之csp衍生組與 CSP非衍生組之生物被膜形成量表示圖。 [圖2]實施例1中各CSP衍生組與CSP非衍生組,添 - 加植物萃取物時之生物被膜形成量變化比例表示圖。
S -14-

Claims (1)

  1. 201225962 七、申請專利範圍 1 · 一種用以抑制生物被膜形成之口腔用組成物,其 特徵爲摻合有控制藉由CSP(感受刺激多肽,Competence stimulating peptide)所控制之 Streptococcus mutans 之聚 量感應之物質。 2. 如申請專利範圍第1項之用以抑制生物被膜形成 之口腔用組成物,其中控制聚量感應之物質爲豆類萃取 物。 3. 如申請專利範圍第1項或第2項之用以抑制生物 被膜形成之口腔用組成物,其中豆類萃取物係至少1種以 上選自小紅豆、豇豆、白花豆、紫花豆、黑四季豆、金時 豆之豆類萃取物。 4 ·如申請專利範圍第1項或第2項之用以抑制生物 被膜形成之口腔用組成物,其中豆類萃取物係至少1種以 上選自大納言小紅豆、襟裳小紅豆、紫花豆、金時豆之豆 類萃取物。 5. 如申請專利範圍第1項或第2項之用以抑制生物 被膜形成之口腔用組成物,其係未添加抗菌劑、酵素抑制 劑及抗生素。 6. 如申請專利範圍第3項之用以抑制生物被膜形成 之口腔用組成物,其係未添加抗菌劑、酵素抑制劑及抗生 素。 7·如申請專利範圍第4項之用以抑制生物被膜形成之 口腔用組成物’其係未添加抗菌劑、酵素抑制劑及抗生素。 -15-
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