TW201242597A - A synergistic pharmaceutical combination for the treatment of pancreatic cancer - Google Patents

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201242597 六、發明說明： ’ 【發明所屬之技術領域】 [0001] 本發明有關一種用於治療胰臟癌的醫藥組合。本發明特 別有關一種用以治療胰臟癌且包含週期蛋白依賴型激酶 抑制劑以及能夠抑制表皮細胞生長因子受體（EGFR)激 酶活性的化合物的醫藥組合，該週期蛋白依賴型激酶抑 制劑選自分子式I化合物（如本文中所描述）或其藥學可 接受的鹽類或溶劑化物。本發明更有關對於所述組合包 括吉西他濱或其鹽類，以用於治療胰臟癌。本發明也有 關包含所述組合的醫藥組合物；用於在個體中治療胰臟 癌的方法，該方法包含將所述醫藥組合投藥至所述個體 〇 【先前技術】 [0002] 癌症是一群特徵為細胞生長的異常控制的疾病。癌細胞 可侵入附近的組織，並可經由血流以及淋巴系統擴散至 身體的其他部位。有不同類型的癌症，例如膀胱癌、乳 癌、大腸癌、直腸癌、頭頸癌、子宮内膜癌、腎（腎細 胞）癌、白血病、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胰臟癌 、前列腺癌、甲狀腺癌、皮膚癌、非何杰金氏淋巴瘤以 及黑色素瘤。雖然所有類型的癌症是致病的，胰臟癌仍 分別是北美以及歐洲癌症相關死亡率的第四以及第五常 見死因，估計在美國每年發生有38, 000個新案例，以及 在歐洲有接近58, 000個新案例（J. Clin. Oncol.; Volume 27 No. 13，2231 - 2237 (2009))。事實 上，胰臟癌具有極差的預後，其整體5年存活率低於5% 1013264167-0 (Pharmacol Ther 1 9 9 9; 82: 241 - 250 )。 1{)11。847产單編號A0101 第4頁/共90頁 201242597 此外，具有局’部晚期與轉移性胰臟癌的病患具有不佳的 預後，且一般太晚診斷出而來不及以手術或放射性療法 治療。化療對於一些具有晚期胰臟癌的病患可提供症狀 的缓解，但目前為止其對於存活的影響仍不太大。就歷 史上而言，5-氟脲嘧啶（5-FU)為晚期胰臟癌的系統性 治療的藥物選擇，但在以電腦斷層掃描（CT)評估腫瘤 反應的時期中所執行的單一用藥研究中，反應率很少超 過20%，中位數的存活時間為4. 2 - 5. 5個月（J.

Clin. Oncol.; 15:2403 - 241 3 (1 997))。相較於 ② 5-FU，使用吉西他濱（Gemzar )的第一線治療產生適 度的中位數存活優勢（5.7個月相對於4.4個月），且在 隨機的臨床試驗中對於有具有症狀、晚期疾病的病患的 緩和顯得較有效。 雖然吉西他濱的系統性投藥已與臨床益處以及具有晚期 疾病的病患中的存活延長有關，客觀的腫瘤反應發生在 少於10%的病患中，且存活時間一般少於6個月（J. Clin. Oncol.; 1 5:2403 - 2413 (1997))。然而， 因為大部分腫瘤細胞對於藥物的預先存在化學抗性或獲 得的化學抗性，在這時期，已觀察到使用吉西他濱治療 胰臟癌不能顯著地改善膜臟癌病患的病症（Oncogene ; 22(21): 3243-51 (2003))。在胰臟癌治療中使用吉 西他濱作為單一用藥的臨床試驗評論文章中，已報導了 在2, 704個病患中，使用世界衛生組織建議的毒性分級評 估肺毒性與過敏毒性。依照此研究，7. 4%的病患具有輕 微的症狀（等級1 )，7. 6%的病患經歷了活動時的呼吸 困難（等級2)，在3. 1%的治療病患中發生休息時的呼 1011084#單編號纽01 第5頁/共90頁 1013264167-0 201242597 吸困難（等級3)以及〇. 8%的病患需要絕對臥床休息（ 專級4) (J. pancreas (〇niine) 2008. 9(6):708-714 )。因此，由於在使用吉西他濱作為單_ 療法治療的病患中所報告的毒性作用，使用吉西他濱治 療引起了不安。已有嘗試結合吉西他濱與幾種其他的細 胞毒性藥物或藥劑，且來自在晚期與轉移性胰臟癌中吉 西他濱與順鉑、5-FU、愛萊諾迪肯以及奥沙利鉑結合的 第一期研究結果已暗示可增進功效。 然而，這些組合的第三期試驗尚未確認它們相對於單一 藥劑吉西他濱的優勢。此外，與吉西他濱/5_FU、吉西他 濱/愛萊諾迪肯、吉西他濱/順鉑以及吉西他濱/奥沙利鉑 組合有關的存活時間似乎相等於或只略為優於與吉西他 濱單一用藥有關的存活時間（J. Clin. 〇ncol.: ν〇1. 24 No. 3 327 - 329 (2006))。吉西他濱與埃羅替 尼（Tarceva®)( —種口服生物可利用的阢⑽酪胺酸抑 制劑）的組合當在動物模型中測試時只顯示出累加效果（ J Clin Invest 1 992; 90: 1 352 - 1 360 )。然而， 對於吉西他濱以及埃羅替尼的組合相比上吉西他濱單獨 使用，牽涉以吉西他濱以及埃羅替尼的組合治療569個具 有未治療不能動手術的胰臟癌病患的隨機第三期試驗展 現了小但顯著的存活優勢（〇nc〇1〇gy (Willist〇n

Park) 2003; 17: 11-16)。這是在胰臟癌中對於任 何組合療法顯示出存活優勢的第一個試驗，並導致食品 藥物管理局（FDA)在2005年核准在胰臟癌的前線療法中 的組合。更近期，比較具有晚期胰臟癌的病患隨機接受 吉西他濱加上EGFR抑制劑，埃羅替尼，或只接受吉西他 1013264167-0 10110847#單編號A01(n 第&頁/共90頁 201242597 濱的第三期‘床試驗分別顯示了 6. 2比上5. 9個月的中位 數存活以及23%比上17%的一年存活率的顯著改進（

Semin. Oncol· 2005;32:5-6)。已有涉及將第二標 靶劑（即貝伐單抗）加至吉西他濱與厄洛替尼的組合的臨 床試驗，以進一步改善具有轉移性胰臟癌的病患的後果 的報告。然而，觀察到的是，將貝伐單抗加至吉西他濱_ 埃羅替尼組合在具有轉移性胰臟癌的病患中並未導致整 體存活率在統計學上的顯著改善〇.(：1丨11.〇11(：〇1.; 27: 2231 - 2237 (2009))。 此外，已發現CDK抑制劑，特別是黃_衍生物，有協同作 用地使人類胰臟細胞株中的吉西他濱的細胞毒性反應變 得可能（PCT申請公開編號w〇 2008/139271 )。在美國 公開專利申請編號US 201 0-0048503中報導了包含VEGF 受體激酶抑制劑以及埃羅替尼或吉西他濱的組合，該組 合展現良好的抗腫瘤活性。 Ο 基於可用於胰臟癌，特別是用於局部晚期或轉移性的胰 臟癌的現有治療選擇的討論，很顯然不管至今所做過的 努力’仍有需要找到新的醫療方法，不僅提供功效的改 進’也對於受胰臟癌之苦的病患提供增加的存活優勢。 1011084?#單編號 此外’從上述的討論，也很清楚的是，雖然涉及具有不 同作用機制的抗癌劑組合的規則可在一些組合的例子中 有作用，以相同的方式對於其他抗癌劑的組合可能沒有 作用’且這種組合可能不總是導致具有有利醫療效果的 組合。然而’本文中所描述的本發明提供了具有改進功 效的藥物組合以及用以在胰臟癌的治療中使用該藥物組 合的方法°本案發明人已發現已知抗癌劑的組合，包含 10101 第 7 頁 / 共 90 頁 1013264167-0 201242597 能夠抑制EGFR激酶活性的化合物以及選自分子式I (如本 文中所描述）所表示的化合物的週期蛋白依賴型激酶抑 制劑；當使用於胰臟癌的治療中時提供了出乎意料之外 的較佳功效。當用於胰臟癌的治療中時，將已知細胞毒 性劑，吉西他濱，加入前述組合更改進了該組合的功效 【發明内容】 [0003] 在一方面中，本發明有關一種醫藥組合，該醫藥組合包 含選自分子式I表示的化合物的週期蛋白依賴型激酶（ CDK)抑制劑以及能夠抑制EGFR激酶活性的化合物；用於 治療胰臟癌。 在另一方面中，本發明有關一種用於在個體中治療胰臟 癌的方法，包含將醫療有效量的週期蛋白依賴型激酶（ CDK)抑制劑結合醫療有效量的能夠抑制EGFR激酶活性的 化合物投藥至該個體，該CDK抑制劑是選自分子式I表示 的化合物。 在更另一方面中，本發明有關一種醫藥組合物，包含醫 療有效量的選自分子式I表示的化合物的週期蛋白依賴型 激酶（CDK)抑制劑以及醫療有效量的能夠抑制EGFR激酶 活性的化合物；用於治療胰臟癌。 在另一進一步方面中，本發明有關一種醫藥組合’包含 選自分子式I表示的化合物的週期蛋白依賴型激酶（CDK )抑制劑；以及能夠抑制EGFR激酶活性的化合物；其中 所述組合在胰臟癌的治療中展現協同作用。

在更另一進一步方面中，本發明有關該醫藥組合，包含 選自分子式I表示的化合物的週期蛋白依賴型激酶（CDK 10110847#單編號 AQ1Q1 ^ 8 I / * 90 1 1013264167-0 201242597 以及能夠抑制EGFR激酶活性的化合物；更包 含吉西他濱；用於治療胰臟癌。 面中，本發明有關該醫藥組合物，包含醫療 有效里的選自分子式1表示的化合物的週期蛋白依賴型激 酶（CDK)抑制劑以及醫療有效量的能夠抑制EGFR激酶活 I·生的化。物，更包含醫療有效量的吉西他濱；用於治 胰臟癌。 在更另 臟癌的方、去/ 關一種用於在個體中治療胰 〇 [0004] 1011084?#單編號 (CDK)抑：含將醫療有效量的週期蛋白依賴型數酶 1劑結合醫療有效量的能夠抑制EGFR激酶 的化合物投“該㈣；更與吉西他私合投藥。/ =另一進1方面中，本發明有關—種套組，包 刀子式I表不的化合物的週期蛋白依賴型激酶 抑制劑’能夠抑制EG_酶活性的化合物以撰 西=濱；其中所述套組可更包括包裝說明書，該包袭= 二:不使用組合治療作為用以治療 : 的印刷指令。 乃电 從以下的詳細_，本發賴其財面 用範圍將變得顯而易見。 夕的應'

L貫施方式J ^發明部分基於CDK抑制劑使能夠抑制表皮細胞生長因子 受體（EGFR)激酶活性的化合物變得可化、斑 同作用、增強該化合物的效力、^叱並與其產生協 進”袭化合物的耐受膚 及/或減少該化合物所導致的副作 用的磯別，以用於户恭 胰臟癌，該CDK抑制劑選自分子式I的化八 ’、 本發明所包含的為具有協同作用的磐遂^ 瞧 第9頁/共90¥樂組合，其中當用 1013264167-0 201242597 於治療胰臟癌時，該組合的醫療功效大於加成。較佳地 ，這種組合也減少或避免不想要的或反效果。在某些具 體實施例中，相對於投藥CDK抑制劑或能夠抑制表皮細胞 生長因子受體（EGFR)激酶活性的化合物或吉西他濱， 本發明所包含的組合提供了改進的整體治療。 因此，本發明有關設計用以在個體中治療或控管胰臟癌 的醫藥組合，其中該組合包含選自分子式I化合物的CDK 抑制劑與能夠抑制表皮細胞生長因子受體（EGFR )激酶 活性的化合物的組合，以及所述組合更包含加入其中的 吉西他濱。特別是，本發明提供了在個體中預防或控管 胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的選自分子式I化合物 的CDK抑制劑與醫療有效量的能夠抑制表皮細胞生長因子 受體（EGFR)激酶活性的化合物的組合投藥至所述個體 〇 除非另外指出，此揭露内容上下文内的前文以及後文中 所使用的一般用語較佳具有下述意義。因此，本發明上 下文中所使用的一般用語的定義提供於下文中： 除非上下文清楚地另外指出，單數形式「一（a)」、「 一（an)」以及「該」包括複數指稱。 如本文中所使用的用辭「週期蛋白依賴型激酶（CDK)抑 制劑」或「CDK抑制劑」意指展現對抗一或更多種已知週 期蛋白依賴型激酶活性的化合物。在本發明的上下文中 ，CDK抑制劑是一種美國申請案公開編號 2007001 5802A1 以及PCT專利公開編號W020071481 58 中 所揭露的吡咯啶取代的黃酮化合物，其應用的全部内容 併入於本文中以作為參考。根據本發明的CDK抑制劑特別 10110847^ W^A〇101 第10頁/共90頁 1013264167-0 201242597 選自如下文中所描述的分子式I化合物或其藥學可接受的 鹽類或溶劑化物。此外’如本文中所使用的用語「⑽抑 制劑」可意指分子式I化合物及/或如分子式IA (如本文 下面所描述）中所指出的分子式丨化合物的（+ )_反式異構 物及/或該分子式I化合物的藥學可接受鹽類或溶劑化物 或5玄分子式I化合物的（ + )_反式異構物。 如本文中所使用的用辭「能夠抑制“⑽激酶活性的化合 物」意札藉由在細胞以及組織中抑制、阻斷、對抗或以 其他方式阻斷EGFR激酶活性而作用的化合物。「表皮細 胞生長因子咬體（EGFR)」是穿膜路胺酸激酶受體的 ErbB家族的一員，其包括訏咖（或HER1，或egfr)、

ErbB2 (或HER2/neu)、ErbB3 (或HER3)以及ErbB4 (或HER4)。驗的表現在許多正常上皮組織中是常見 的，且EGFR的表現在包括胰臟癌的數種實體腫瘤中是提 升的。 如本文中所使用的’用語「組合」或「醫藥組合」，意 指抗癌劑’即CDK抑制劑以及能夠抑制EGFR激酶活性的化 合物的組合投藥’或抗癌劑’即該CDK抑制劑以及能夠抑 制EGFR激酶活性的化合物以及古西他濱的組合投藥；該 抗癌劑可同_立地祕，或在4允許肋合伙伴顯 現協同作用的時間間隔内分開投藥。 用辭「雙重組合」一般意指兩種已知抗癌劑的組合，包 含選自分子式I所表示的化合物的週期蛋白依賴型激酶抑 制劑以及能夠抑制EGFR激酶活性的化合物。該用語也可 意指抗癌齊K即CDK抑制劑以及能夠抑制EGFR激酶活性的 化合物）的組合投藥。 *單編號 10110847» A0101 第11頁/共90頁 1013264167-0 201242597 用辭一重組合」意指已知抗癌劑的組合，抗癌劑包含 吉西他濱、能夠抑制EGFR激酶活性的化合物以及選自分 子式I所表示的化合物的週期蛋白依賴型激酶抑制劑。該 用浯也可意指抗癌劑（即吉西他濱、^⑽抑制劑以及能夠 抑制EGFR激酶活性的化合物）的組合投藥。 如本文中所使用的，用語「協同作用的」意指使用此發 明的方法以及組合所達成的效果大於使用抗癌劑（即CDK 抑制劑、能夠抑制EGFR激酶活性的化合物以及吉西他濱） 作為單一療法所造成的效果的加成。有利的是，這種協 同作用在相同的劑量提供了較好的功效，及/或預防或延 遲多重藥物抗性的增強。 關於治療胰臟癌的「醫療有效量」意指能夠在接受本發 明組合的個體中引起一或更多個下述效果的量：抑 制腫瘤生長至某種程度，包括，減緩以及完全的生長停 滯；（ii)減少腫瘤細胞數；（iii)減小腫瘤大小；（ iv)抑制（即，減少、減緩或完全停止）腫瘤細胞浸潤 至週邊器官中；（v)抑制（即減少、減緩或完全停止） 轉移；（vi)增強抗腫瘤的免疫反應，其可，但不一定 導致腫瘤的退化或排斥；及/或（vii)緩解一或更多種 與胰喊癌相關的症候至某種程度。 如本文中所使用的用語「個體」意指動物，較佳為哺乳 動物，最佳為人類，其需要胰臟癌的治療。在本發明的 上下文中，該用語個體可與用語病患交換使用。 如本文中所使用的，用辭「無反應的/難治的」用以描述 具有胰臟癌的個體或病患已使用目前可用以治療胰臟癌 的癌症療法治療，例如化療、放射性療法、手術、荷爾 10110847#單編號A0101 第12頁/共90頁 1013264167-0 201242597 蒙療法及/或生物療法/免疫療法，其中該療法在臨床上 不足以治療該病患’使得這些病患需要額外的有效療法 ，例如維持對療法不敏感。該用辭也可描述對療法具有 反應但遭受副作用、復發、發展出抗性等等之苦的個體 或病患。在各種具體實施例中，「無反應的/難治的」意 指癌細胞的至少一些重要部分沒被殺死，或它們的細胞 分裂停滯。在這種上下文中使用本技術領域所接受的「 難治的」的意義，可藉由本技術領域已知用於分析對於 癌細胞治療有效性的任何方法而在活體中或試管中做出 癌細胞是否為「無反應的/難治的」的決定。在各種具體 實施例中，癌症為「無反應的/難治的」，其中癌細胞數 沒有被顯著地減少或已增加。 如本文中所使用的，用語「使…變得可能」意指醫療劑 在其常用或核准的劑量下在功效上的改進。在本發明的 上下文中，該醫療劑為抗癌劑，例如能夠抑制EGFR激酶 活性的化合物或吉西他濱。 如本文中所使用的，用語「控管（manage)」、「控管 (managing)」以及「控管（management)」意指當 投藥至病患或個體時，所述病患或個體得自本發明醫藥 組合的有利效果，以預防胰臟癌的進展或惡化。 如本文中所使用的，用語「過度表現」意指在細胞中， 例如癌細胞，基因及/或其編碼的蛋白質的過度表現。「 過度表現」蛋白質的癌細胞是相較於相同組織類型的非 癌細胞，具有顯著較高的那種蛋白質量的細胞。 如本文中所使用的用語「劑量形式」應意指藥物被製造 以及配給的物理形式，例如錠劑、膠囊或注射劑。 10110847,單編號 A_ 第13頁/共90頁 1013264167-0 201242597 如本文中所使用的用語「活性成分」應意指選自分子式i 化合物的CDK抑制劑或能夠抑制EGFR激酶活性的化合物或 吉西他濱。當以複數形式（即active ingredients) 使用時，該用語「活性成分」應意指選自分子式I化合物 的CDK抑制劑與能夠抑制EGFR激酶活性的化合物以及吉西 他濱的組合。該用語「活性成分」可與用語「醫療劑」 交換使用。 用語「藥學可接受的」意指由聯邦或州政府的管理機構 核准，或列於美國藥典或其他一般識別的藥典中以用於 在動物中使用，且更特別是在人類中使用。用語「載體 」意指本發明化合物用以投藥的稀釋液、佐劑、賦形劑 或運送工具。 現在已發現，包含選自分子式I化合物（如本文中所描述 )的CDK抑制劑以及能夠抑制EGFR激酶活性的化合物的醫 藥組合；當使用於治療癌症，特別是胰臟癌時，展現了 協同作用。特別是，比起當埃羅替尼以及該分子式I的 CDK抑制劑中的任一種單獨用以治療胰臟癌時，當與分子 式I的CDK抑制劑組合使用時，能夠抑制EGFR激酶活性的 化合物（例如埃羅替尼）產生了顯著較好的效果。 本發明人也已觀察到的是，包含選自分子式I化合物（如 本文中所描述）的CDK抑制劑以及能夠抑制EGFR激酶活性 的化合物的醫藥組合的協同作用更藉由將已知細胞毒性 劑、吉西他濱或其藥學可接受的鹽類加至所述組合而被 增強。因此，本發明也在其範圍中包含一醫藥組合，該 醫藥組合包含選自分子式I化合物（如本文中所描述）的 CDK抑制劑；能夠抑制EGFR激酶活性的化合物以及吉西他 1〇1腿#單編號施01 第14頁/共90頁 1013264167-0 201242597 濱或其藥學可接受的鹽類；用於治療胰臟癌。 用於本發明醫藥組合中的CDK抑制劑選自如本文下面所描 述的分子式I化合物。該分子式I化合物為有希望的CDK抑 制劑，其可抑制許多癌細胞的增殖。 在一個具體實施例中，本發明醫藥組合中所使用的CDK抑 制劑選自下述分子式I所表示的化合物， [0005]

ΟΗ 〇

Ο 其中Ar是苯基，其為未取代的或被1、2或3個相同或不同 的取代基取代，該取代基選自：i素；硝基、氰基、 C1-C4-烷基、三氟曱基、羥基或C1-C4-烷氧基；或其藥 學可接受的鹽類或溶劑化物。 在本發明的具體實施例中，CDK抑制劑是分子式I化合物 的（ + )-反式異構物，如同下面分子式IA中所指出， 10110847#單編號 A0101 第15頁/共90頁 1013264167-0 201242597 [0006] OH Ο

分子式ΙΑ 其中Ar是苯基，其為未取代的或被1、2或3個相同或不同 的取代基取代，該取代基選自：鹵素、硝基、氰基、 C1-C4-烷基、三氟甲基、羥基或H-C4-烷氧基；或其藥 學可接受的鹽類或溶劑化物。 在另一個具體實施例中，本發明醫藥組合中所使用的CDK 抑制劑是分子式I化合物，其中苯基被1、2或3個相同或 不同的取代基取代，該取代基選自：氯、溴、氟或碘、 C1-C4-烷基或三氟甲基；或其藥學可接受的鹽類或溶劑 化物。 在另一個具體實施例中，本發明醫藥組合中所使用的CM 抑制劑是分子式I化合物，其中苯基被1、2或3個鹵素取 代，該鹵素選自氯、溴、氟或碘；或其藥學可接受的鹽 類或溶劑化物。 在另一個具體實施例中，本發明醫藥組合中所使用的CDK 抑制劑是分子式I化合物，其中苯基被氣取代；或其藥學 可接受的鹽類或溶劑化物。 在另一個具體實施例中，本發明醫藥組合中所使用的CDK 抑制劑是分子式I化合物，其中苯基被2個不同的取代基 10110847#單編號 A〇101 第16頁/共90頁 1013264167-0 201242597 取代，該取代基選自氯錢三氟甲基；或錢學可接受 的鹽類或溶劑化物。 本領域的技術人㈣領略的是，由分子式丨化合物所表示 的CDK抑制劑含有至少兩個掌性中心，且因此以兩種不 同光學異構物（即⑴或㈠鏡像異構物）的形式存在。 所有的這種鏡像異構物以及其混合物（包括消旋混合物） 被包括在本發_範_。該分子式丨化合㈣鏡像異構 物可藉㈣人於本文巾以作為參考的pcT中請案公開編號 卯2004004632、WO20080071 69以及w〇2〇〇7148158 中 所揭露的方法而獲得，或該分子式I化合物的鏡像異構物 也可藉由本技術領域所熟知的方法來獲得，例如掌性 HPLC以及酵素騎。或者，該分子式1化合物的鏡像異構 物可藉由使用光學活性的起始材料來合成。 刀子式I化合物的製造，該分子式丨化合物可為藥學可接 艾的鹽類以及溶劑化物的形式，以及含有上述化合物的 口服及/或非口服醫藥組合物的製造大體上揭露於pCT申 凊案公開編號W02004004632中。此專利（其併入於本文 中以作為參考）揭露了由分子式丨所表示的CM抑制劑展現 了顯著的抗癌功效。 如同本文上述中所指出，分子式I的CDK抑制劑可以它們 的鹽類形式來使用。較佳的分子式丨化合物的鹽類包括鹽 酸鹽、甲磺酸以及三氟醋酸鹽。 因此，在另一個具體實施例中，本發明醫藥組合中所使 用的CDK抑制劑選自（ + )_反式_2_(2一氣一苯基）_5, 7_二 羥基-8-(2-羥基-甲基-卜甲基_吡咯啶_3_基）一苯並哌 或（+ )-反式 1013264167-0 喃-4-酮鹽酸鹽（本文中指稱為化合物A) 10110847#单編號A0101 第口頁/共90頁 201242597 [2[(2氣-4 -二氣曱基-苯基）_5，了一二經基一8_(2_ '甲基1曱基吡洛咬-3~基）—苯並0底味-4-酮鹽酸鹽 (本文中指稱為化合物B)。 在另一個進一步的具體實施例中，本發明醫藥組合中所 使用的CDK抑制劑是（ + )-反式-2-(2-氯_苯基）_5 7_ _ 羥基-8-(2-羥基-曱基-卜曱基—吡咯啶—3_基）_苯並哌 喃-4-酮鹽酸鹽（化合物a)。 在另一個具體實施例中，本發明醫藥組合中所使用的CM 抑制劑是（ + )-反式-3-[2[(2-氣-4-三氟甲基—苯基 )-5, 7-二羥基-8-(2-羥基曱基-1-甲基一吡咯啶_3_基）_ 笨並底0鹽酸鹽（化合物B) ^

根據本發明，包括在本發明醫藥組合中能夠抑制阢邝激 酶活性的化合物可選自下述所組成的群組：吉非替尼（ 也已知為IRESSA®或ZD1 839 ;阿斯特捷利康）、埃羅替 尼（也已知為TARCEVA®或0SI-774 ; 0SI

Pharmaceuticals, Inc.)'拉帕替尼或二甲笨績酸拉 帕替尼（也已知為GW57201 6或TYKERB®;葛蘭素史克藥 廠）、AG 1478 (4-(3-氣苯胺基）-6,7-二曱氧基喧峻 啉；A.G.科技股份有限公司）、EKB-569 (培利替尼； 惠氏製藥公司）、EKI-785 (惠氏製藥公司）、PKI_166 (諾華製藥公司）、二鹽酸卡奈替尼（也已知為CI-i〇33 ;輝瑞）、D-69491 (也已知為SU11464 ;百特醫療產品 股份有限公司（Baxter Oncology))、凡德他尼（也已 知為ZD6474或ZACTIMA® ;阿斯特捷利康）、xl-147 ( 也已知為SAR-245408，艾克塞里克斯公司（Exelixis， Inc.))、阿法替尼（百靈佳殷格翰公司（Boehringer 1013264167-0 则84#單編號A〇101 第18頁/共90胃 201242597

Ingelheim Corp ) \ rilnr .、、 .））CUDC~l〇l (克里斯公司（Curii

Inc. ) ) x S-22261 1 r u, i(鹽野義製藥股份有限公司）、 AZD-8931 (阿斯特捷 寸提利康）或來那替尼（惠氏製藥公司 )° 本發月的具體實施例，可於本發明醫藥組合中使用 的Γ抑制EGFR激酶活性的化合物是選自埃羅替尼或拉 帕替尼或其藥學可接受的鹽類。 :羅替士尼是EGFR抑制劑。此藥物仿傚吉非替尼 (Iressa p 。非替尼為此_的第—個藥物。埃羅替尼特異性 ’ 土也錄表皮細胞生長因子受體（EGFR)路胺酸激酶，該 激酶在各種形式的癌症巾高度表現，且有時是突變的。 其以可逆的方式結合至該受體的三鱗酸料⑷ρ)結合 位置（J Clin Oncol 2007 ; 25: 1960-1966 )。埃羅 替尼是商業可得的。 拉帕替尼是能夠可逆地抑制EGFR以及臟2⑽胺酸激酶 活的4-苯胺基啥琳衍生物。如同其他的小分子酷胺酸 _抑制劑’拉帕替尼與ATp競爭其在路胺酸激酶區域上 的結合位置。在無細胞的生化激酶分析法中，拉帕替尼 刀另J在10. 8以及9. 3 nmol/1的浪度下抑制了重組的 EGFR以及HER2酪胺酸激酶達50% (IC50)。其作用為可 逆的抑制劑，對於EGFR以及HER2分別具有3以及13 nm〇l/l 的估計解離常數（Ki)值〔Drugs6() Suppl 1: i5-23〕。拉帕替尼是商業可得的。 1013264167-0 吉西他濱是指定為2，-去氧-2，，2，_二氟胞嘧啶的學名。 其作為單鹽酸鹽以及作為召_異構物為商業可得的。吉西 他濱也已知為健擇®，且為細胞毒性劑。其為一種導致 1011084#料號删1 帛19頁/共9〇頁 201242597 DNA合成受到抑制的抗代謝物。在美國專利編號 4,808, 614以及5, 464, 826中揭露了吉西他濱，它們關 於如何合成以及使用吉西他濱用以治療敏感性癌症的教 導併入於本文中以作為參考。作為單一藥劑的吉西他濱 鹽酸鹽的商業配方被指出為用於具有胰臟局部晚期或轉 移性腺癌的病患的第一線治療。吉西他濱為商業可得的 〇 在一個具體實施例中，本發明有關一種用於治療胰臟癌 的醫藥組合，其中該組合包含選自分子式I化合物或其藥 學可接受的鹽類或溶劑化物的週期蛋白依賴型激酶（CM )抑制劑；選自埃羅替尼或拉帕替尼且能夠抑制EGFR激 酶活性的化合物或其藥學可接受的鹽類。 在另一個具體實施例中，本發明針對一種用於治療胰臟 癌的醫藥組合，其中該組合包含選自分子式I化合物或其 藥學可接受的鹽類或溶劑化物的週期蛋白依賴型激酶（ CDK)抑制劑以及埃羅替尼或其藥學可接受的鹽類。 在另一個具體實施例中，本發明針對一種用於治療胰臟 癌的醫藥組合，其中該組合包含選自分子式I化合物或其 藥學可接受的鹽類或溶劑化物的週期蛋白依賴型激酶（ CDK )抑制劑以及拉帕替尼或其藥學可接受的鹽類。 在另一個具體實施例中，本發明針對一種用於治療胰臟 癌的醫藥組合，其中該組合包含選自化合物A或化合物B 的CDK抑制劑以及選自埃羅替尼或拉帕替尼且能夠抑制 EGFR激酶活性的化合物或其藥學可接受的鹽類。 在另一個具體實施例中，本發明針對一種用於治療胰臟 癌的醫藥組合，其中該組合包含化合物A以及埃羅替尼或 1〇11〇847#單編號施〇1 1013264167-0 第20頁/共90頁 201242597 其藥學可接受的鹽類。 在另一個具體實_巾，本發 癌的醫藥組合，其中該組合包含化人 ^種用於治療姨臟 其藥學可接受的鹽類。 。偏以及拉帕替尼或 體實施例中，本發明在其範圍内將吉西他濱 及撰白垃㈣ 刀子式1化合物的CDK抑制劑以 =選自埃羅替尼或拉㈣尼或其藥學可 =_激酶活性的化合物的醫藥組合。因此，在It ° 含選自分子式丨化合物二::合’_組合包 —選自埃=::::_或_物

呶m ㈣尼次拉帕替尼且能夠抑制EGFR 的化合物或其藥學可接受的鹽類；以及吉西他 濱。 » =醫施例中，本發明針對—種用於治療姨職 癌的醫樂組合’其中該組合包含

=受_或溶劑化物的避期;二物:(其 ㈣演或其藥學可接受的㈣以及吉 在另一個具體實施例中，本I 癌_組合，其中·合二::;―臟 :二化物的週期蛋白依賴型激酶（ ):制劑⑽替尼或其藥學可接受的鹽類以及吉西 他m或其藥學可接受的鹽類。 =個具體實施例中’本發明針對—種用

=組合，其中該組合包含選自化合㈣化合物B #單編號1 ㈣_ (m)抑她㉞埃羅替尼或

1011084#單編號删1 * 21 I / go I 1013264167-0 201242597 拉帕替尼且能夠抑制EGFR激酶活性的化合物或其藥學可 接受的鹽類；以及吉西他濱或其藥學可接受的鹽類。 在另一個具體實施例中，本發明針對一種用於治療胰臟 癌的醫藥組合，其中該組合包含化合物A ;埃羅替尼或其 藥學可接受的鹽類以及吉西他濱或其藥學可接受的鹽類 〇 在另一個具體實施例中，本發明針對一種用於治療胰臟 癌的醫藥組合，其中該組合包含化合物A ;拉帕替尼或其 藥學可接受的鹽類以及吉西他濱或其藥學可接受的鹽類 〇 在一個具體實施例中，包含選自分子式I化合物以及埃羅 替尼或拉帕替尼的CDK抑制劑的醫藥組合，或包含該CDK 抑制劑；埃羅替尼或拉帕替尼以及吉西他濱的醫藥組合 ;不專門限於那些藉由所述成分的物理聯結而獲得的組 合，但也包含那些允許可同時、連續或在一段時間期間 間隔而分開投藥的組合，以獲得該組合的最大功效。因 此，該醫藥組合可同時或在一段時間期間間隔地投藥， 用以有效治療胰臟癌。 在一個具體實施例中，本發明有關一種醫藥組合物，該 醫藥組合物包含選自分子式I化合物或其藥學可接受的鹽 類或溶劑化物的CDK抑制劑，以及選自埃羅替尼或拉帕替 尼且能夠抑制EGFR激酶活性的化合物或其藥學可接受的 鹽類；與藥學可接受的賦形劑或載體相結合。 在另一個具體實施例中，本發明有關一種醫藥組合物， 該醫藥組合物包含選自分子式I化合物或其藥學可接受的 鹽類或溶劑化物的C D K抑制劑以及埃羅替尼或其藥學可接 1〇腫47#單編號删1 第22頁/共90頁 1013264167-0 201242597 受的鹽類；與藥學可接受的賦形劑或載體相結合。 在另一個進一步的具體實施例中，本發明有關一種醫藥 組合物’該醫藥組合物包含選自分子式I化合物或其藥學 可接受的鹽類或溶劑化物的CDK抑制劑以及拉帕替尼或其 藥學可接受的鹽類；與藥學可接受的賦形劑或載體相結 合0 在另一個進一步的具體實施例中，本發明有關一種醫藥 組合物’該醫藥組合物包含選自化合物A或化合物B的CDK 0 抑制劑以及選自埃羅替尼或拉帕替尼的能夠抑制EGFR激 酶活性的化合物或其藥學可接受的鹽類；與藥學可接受 的賦形劑或載體相結合。 在另一個進一步的具體實施例申，本發明有關一種醫藥 組。物，该醫藥組合物包含化合物A以及埃羅替尼或其藥 學可接受的鹽類；與藥學可接受的賦形劑或載體相結合 〇 在另一個進一步的具體實施例中，本發明有關一種醫藥 Q 組u物，该醫藥組合物包含化合物A以及拉帕替尼或其藥 學可接受的鹽類；與藥學可接受的賦形劑或載體相結合 〇 根據一個具體實施例，本發明有關—種醫藥組合物，該 醫藥組合物包含選自該分子式I化合物或其藥學可接受的 鹽類或溶劑化物的⑽抑制劑以及選自埃羅替尼或拉帕替 尼的能夠抑制EGFR激酶活性的化合物或其藥學可接受的 鹽類；與藥學可接受的賦形劑或載體相結合；該組合物 更包含吉西他濱或其藥學可接受的鹽 體實施例中’本發明有關醫藥組合物 10110847#單編號屬1 第23頁/共90頁 類。因此，在此具 ’該醫藥組合物包 1013264167-0 201242597 含選自分子式i化合物或其藥學可接受的鹽類或溶劑化物 的CDK抑制劑；選自埃羅替尼或拉帕替尼的能夠抑制EGFR 激酶活性的化合物或其藥學可接受的鹽類；以及吉西他 濱；與藥學可接受的賦形劑或載體相結合。 在另一個具體實施例中，本發明有關一種醫藥組合物， 該醫藥組合物包含選自分子式I化合物或其藥學可接受的 鹽類或溶劑化物的CDK抑制劑；埃羅替尼或其藥學可接受 的鹽類以及吉西他濱或其藥學可接受的鹽類；與藥學可 接受的賦形劑或載體相結合。 在另一個進一步的具體實施例中，本發明有關一種醫藥 組合物，該醫藥組合物包含選自分子式I化合物或其藥學 可接受的鹽類或溶劑化物的CDK抑制劑；拉帕替尼或其藥 學可接受的鹽類；以及吉西他濱或其藥學可接受的鹽類 ;與藥學可接受的賦形劑或載體相結合。 在另一個具體實施例中，本發明有關一種醫藥組合物， 該醫藥組合物包含選自該化合物A或化合物B的CDK抑制劑 ;選自埃羅替尼或拉帕替尼的能夠抑制EGFR激酶活性的 化合物或其藥學可接受的鹽類；以及吉西他濱或其藥學 可接受的鹽類；與藥學可接受的賦形劑或載體相結合。 在另一個進一步的具體實施例中，本發明有關一種醫藥 組合物，該醫藥組合物包含化合物A ;埃羅替尼或其藥學 可接受的鹽類；以及吉西他濱或其藥學可接受的鹽類； 與藥學可接受的賦形劑或載體相結合。 在另一個進一步的具體實施例中，本發明有關一種醫藥 組合物，該醫藥組合物包含化合物A ;拉帕替尼或其藥學 可接受的鹽類；以及吉西他濱或其藥學可接受的鹽類； l〇n0847产單編號A0101 第24頁/共90頁 1013264167-0 201242597 與藥學可接受的賦形劑或载體相結合。 根據-個具體實施例’本發明針對一種用於在個體中治 療騰臟癌的方法，包含將醫療有效量的選自分子式！化合 物或其藥學可接受的鹽類的CDK抑制劑；以及醫療有效量 的選自埃羅替尼或拉帕替尼的能夠抑制EGFR激酶活性的 化合物或其藥學可接受的鹽類投藥至所述個體；其中所 述CDK抑制劑以及能夠抑制EGFR激酶活性的所述化合物被 同時或循序投藥。 0 在另一個具體實施例中，本發明針對一種用於在個體中 ⑺療胰臟癌的方法，其包含將醫療有效量的選自分子式^ 化合物或其藥學可接受的鹽類的CDK抑制劑，以及醫療有 效量的埃羅替尼或其藥學可接受的鹽類投藥至所述個體 :其中所述CDK抑制劑以及埃羅替尼被同時或循序投藥。 在另一個進一步的具體實施例中，本發明針對一種用於 在個體中治療胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的選自 分子式I化合物或其藥學可接受的鹽類的CDK抑制劑，以 ^ 及醫療有效量的拉帕替尼或其藥學可接.受的鹽類投藥至 所述個體，其中所述CDK抑制劑以及拉帕替尼被同時或循 序投藥。 在另一個進一步的具體實施例中，本發明針對一種用於 在個體中治療胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的選自 化合物A或化合物B的CDK抑制劑以及醫療有效量的選自埃 羅替尼或拉帕替尼的能夠抑制EGFR激酶活性的化合物或 其藥學可接受的鹽類投藥至所述個體；其中所述化合#A 或化合物B以及埃羅替尼被同時或循序投藥。 在另一個進一步的具體實施例中，本發明針對一種用於 10110847产單編號第25頁/共90頁 1013264167-0 201242597 在個體中治療胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的化合 物A以及醫療有效量的埃羅替尼或其藥學可接受的鹽類投 藥至所述個體；其中所述化合物A以及埃羅替尼被同時或 循序投藥。 在另一個進一步的具體實施例中，本發明針對一種用於 在個體中治療胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的化合 物A以及醫療有效量的拉帕替尼或其藥學可接受的鹽類投 藥至所述個體；其中所述化合物A以及拉帕替尼被同時或 循序投藥。 在另一個具體實施例中，本發明針對一種用於在個體中 治療胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的該化合物A以及 醫療有效量的埃羅替尼或其藥學可接受的鹽類投藥至所 述個體；其中所述化合物A以及埃羅替尼被循序投藥，使 得該化合物A在埃羅替尼之前或之後投藥。 在另一個進一步的具體實施例中，本發明針對一種用於 在個體中治療胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的化合 物A以及醫療有效量的拉帕替尼或其藥學可接受的鹽類投 藥至所述個體；其中化合物A以及拉帕替尼被循序投藥， 使得該化合物A在拉帕替尼之前或之後投藥。 根據本發明的一個具體實施例，用於在個體中治療胰臟 癌的所述方法；除了將醫療有效量的選自分子式I化合物 或其藥學可接受的鹽類的C D K抑制劑以及醫療有效量的選 自埃羅替尼或拉帕替尼且能夠抑制E G F R激酶活性的化合 物或其藥學可接受的鹽類投藥至所述個體之外；更包含 將醫療有效量的吉西他濱或其藥學可接受的鹽類投藥至 該個體。因此，在此具體實施例中，本發明也有關一種 10110847^^'« A0101 第26頁/共90頁 1013264167-0 201242597 用於在個體中治療胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的 選自分子式I化合物或其藥學可接受的鹽類的CDK抑制劑 :醫療有效量的選自埃羅替尼或拉帕替尼且能夠抑制 EGFR激酶活性的化合物或其藥學可接受的鹽類；以及醫 療有效量的吉西他濱或其藥學可接受的鹽類投藥至所述 個體；其中所述CDK抑制劑、能夠抑制EGFR激酶活性的所 述化合物以及吉西他濱被同時或循序投藥。 在另一個具體實施例中，本發明有關一種用於在個體中 治療胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的選自分子式I化 合物或其藥學可接受的鹽類的CDK抑制劑；醫療有效量的 選自埃羅替尼或拉帕替尼且能夠抑制EGFR激酶活性的化 合物或其藥學可接受的鹽類；以及醫療有效量的吉西他 濱或其藥學可接受的鹽類投藥至所述個體；其中所述CDK 抑制劑、能夠抑制EGFR激酶活性的所述化合物以及吉西 他濱被同時投藥。 在另一個具體實施例中，本發明有關一種用於在個體中 治療胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的選自分子式I化 合物或其藥學可接受的鹽類的CDK抑制劑；醫療有效量的 選自埃羅替尼或拉帕替尼且能夠抑制EGFR激酶活性的化 合物或其藥學可接受的鹽類；以及醫療有效量的吉西他 濱或其藥學可接受的鹽類投藥至所述個體；其中所述CDK 抑制劑；能夠抑制EGFR激酶活性的所述化合物以及吉西 他濱被循序投藥，使得吉西他濱在投藥所述CDK抑制劑以 及能夠抑制EGFR激酶活性的所述化合物之前或之後被投 藥。 根據另一個具體實施例，本發明針對一種用於在個體中 10麗4#單編號綱01 第27頁/共90頁 1013264167-0 201242597 治療胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的選自分子式i化 合物或其藥學可接受的鹽類的CDK抑制劑；醫療有效量的 埃羅替尼或其藥學可接受的鹽類；以及醫療有效量的吉 西他濱或其藥學可接受的鹽類投藥至所述個體；其中該 CDK抑制劑、埃羅替尼以及吉西他濱被同時或循序投藥。 根據另一個具體實施例，本發明針對一種用於在個體中 治療胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的選自分子式I化 合物或其藥學可接受的鹽類的CDK抑制劑；醫療有效量的 拉帕替尼或埃羅替尼的藥學可接受的鹽類；以及醫療有 效量的吉西他濱或其藥學可接受的鹽類投藥至所述個體 ;其中該CDK抑制劑、拉帕替尼以及吉西他濱被同時或循 序投藥。 根據另一個具體實施例，本發明針對一種用於在個體中 治療胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的選自分子式I化 合物或其藥學可接受的鹽類的CDK抑制劑；醫療有效量的 埃羅替尼或其藥學可接受的鹽類；以及醫療有效量的吉 西他濱或其藥學可接受的鹽類投藥至所述個體；其中該 CDK抑制劑、埃羅替尼以及吉西他濱被同時投藥。 根據另一個具體實施例，本發明針對一種用於在個體中 治療胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的選自分子式I化 合物或其藥學可接受的鹽類的CDK抑制劑；醫療有效量的 埃羅替尼或其藥學可接受的鹽類；以及醫療有效量的吉 西他濱或其藥學可接受的鹽類投藥至所述個體；其中該 CDK抑制劑、埃羅替尼以及吉西他濱被循序投藥，使得吉 西他濱在投藥該CDK抑制劑以及埃羅替尼之前或之後被投 藥。 謝麵#單編號謝01 1013264167-0 第28頁/共90頁 201242597 根據另一個具體實施例，本發明針對一種用於在個體中 治療胰臟癌的方法’包含將醫療有效量的選自分子式“匕 合物或其藥學可接受的鹽類的(：1)](抑制劑；醫療有效量的 拉帕替尼或其藥學可接受的鹽類；以及醫療有效量的吉 西他濱或其藥學可接受的鹽類投藥至所述個體；其中該 CDK抑制劑、拉帕替尼以及吉西他濱被循序投藥，使得吉 西他濱在投藥該CDK抑制劑以及拉帕替尼之前或之後被投 藥。 根據另一個具體實施例，本發明有關一種用於在個體中 治療胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的選自化合物A或 化合物B的CDK抑制齊j ;醫療有效量的選自埃羅替尼或拉 帕替尼且能夠抑制EGFR激酶活性的化合物或其藥學可接 爻的鹽類，以及醫療有效量的吉西他濱或其藥學可接受 的鹽類投藥至所述個體；其中所述⑽抑制劑、能夠抑制 EGFR激酶活性的所述化合物以及吉西他濱被同時或循序 投藥。 ❹ 根據另-個具體實施例，本㈣有關—種驗在個體中 治療胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的化合物A ;醫療 有，量的埃羅替尼或其藥學可接受的鹽類；以及醫療有 效量的α ®他濱或其藥學可接受的鹽紐藥至所述個體 ;其中所述化合物A、埃羅替尼以及吉西他濱被同時或循 序投藥。 根據另-個具體實施例，本發料關—則於在個體中 治療騰臟癌的方法，包含將醫療有效量的化合物A ;醫療 有效量的埃羅替尼或其藥學可接受的鹽類；以及醫療有 101_产號 效量的吉西他濱鮮可接受的義投藥至所述個體 10101 帛29頁/共90頁 1013264167-0 201242597 :其中所述化合物A、埃羅替尼以及吉西他濱被同時投藥 〇 根據另一個具體實施例，本發明有關一種用於在個體中 治療胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的化合物A ;醫療 有效量的埃羅替尼或其藥學可接受的鹽類；以及醫療有 效量的吉西他濱或其藥學可接受的鹽類投藥至所述個體 :其中所述化合物A、埃羅替尼以及吉西他濱被循序投藥 ，使得吉西他濱在投藥化合物A以及埃羅替尼之前或之後 被投藥。 根據另一個具體實施例，本發明有關一種用於在個體中 治療胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的化合物A ;醫療 有效量的拉帕替尼或其藥學可接受的鹽類；以及醫療有 效量的吉西他濱或其藥學可接受的鹽類投藥至所述個體 ;其中所述化合物A、拉帕替尼以及吉西他濱被同時或循 序投藥。 根據另一個具體實施例，本發明有關一種用於在個體中 治療胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的化合物A ;醫療 有效量的拉帕替尼或其藥學可接受的鹽類；以及醫療有 效量的吉西他濱或其藥學可接受的鹽類投藥至所述個體 ;其中所述化合物A、拉帕替尼以及吉西他濱被同時投藥 〇 根據另一個具體實施例，本發明有關一種用於在個體中 治療胰臟癌的方法，包含將醫療有效量的化合物A ;醫療 有效量的拉帕替尼或其藥學可接受的鹽類；以及醫療有 效量的吉西他濱或其藥學可接受的鹽類投藥至所述個體 :其中所述化合物A、拉帕替尼以及吉西他濱被循序投藥 1〇1腦#單編號應01 1013264167-0 第30頁/共90頁 201242597 ，使得吉西他濱在投藥化合物A以及拉帕替尼之前或之後 被投藥。 由分子式I的CDK抑制劑、選自埃羅替尼或拉帕替尼且能 夠抑制EGFR激酶活性的化合物以及吉西他濱組成的三重 組合的投藥可產生比單獨使用該分子式I的CM抑制劑、 埃羅替尼/拉帕替尼以及吉西他濱的任何一個所達成的致 果還好，比該分子式I的CDK抑制劑以及埃羅替尼或該分 子式I的CDK抑制劑以及拉帕替尼的組合所達成的效果還 好的效果，例如抗癌效果。 在一個具體實施例中，包含在組合中的成分可能因為它 們不同的物理以及化學特性而必須以不同的途徑投藥。 例如’分子式I的CDK抑制劑可被口服地或非口服地投藥 ，以產生並維持好的其金中含量’而吉西他濱以及能夠 抑制EGFR激酶的化合物可被口服地或非口服地、藉由靜 脈内、皮下或肌肉内途徑來投藥。

G 意欲用於藥學用途的組合以及組合物可根據本技術領域 中已知用以製造醫藥組合以及組合物的任何方法來製備 ，例如Remington - The Science and Practice of Pharmacy (第 21 版）（ 2005 ) 'Goodman &

Gilman’ s The Pharmacological Basis of Therapeutics (第 11 版）（ 2006 )以及由 Allen et al.，Lippincott Williams & ffilkins編輯的Ansel ’ s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (第 9版）（2011)、

Solid-State Chemistry of Drugs (第 2版）（1999 )，其每個併入於本文中以作為參考。 *單煸號 10110847^ A0101 第31頁/共90頁 1013264167-0 201242597 本文中所描述的組合物可為適合用於口服投藥的形式， 例如為錠劑或膠囊，用於鼻腔投藥或藉由吸入投藥，例 如為粉末或溶液，用於非口服注射（包括靜脈内、皮下 、肌肉内、血管内或輸注），例如為無菌溶液、懸浮液 或乳狀液，用於局部投藥，例如為軟膏或乳霜，用於直 腸投藥，例如為栓劑，或投藥途徑可為藉由直接注射入 腫瘤中或藉由區域性運送或藉由局部運送。 對於口服用途，分子式I的CDK抑制劑可以，例如，錠劑 或膠囊、粉末、可分散的顆粒或膠囊的形式，或為水溶 液或懸浮液而投藥。在用於口服用途的錠劑的例子中， 常使用的載體包括乳糖、玉米澱粉、碳酸鎂、滑石以及 糖，以及常加入潤滑劑，例如硬脂酸鎂。對於以膠囊形 式的口服投藥，有用的載體包括乳糖、玉米澱粉、碳酸 鎂、滑石以及糖。 對於肌肉内、腹膜内、皮下以及靜脈内的用途，常使用 活性成分（如本文中所描述的CDK抑制劑或該能夠抑制 EGFR激酶活性的化合物或吉西他濱）的無菌溶液，且該 溶液的pH應被適當地調整以及緩衝。 在較佳的具體實施例中，本發明組合中含有的醫療劑是 按照常規程序而配製成適合靜脈内投藥至人類的醫藥組 合物。典型地，用於靜脈内投藥的本發明組合中含有的 醫療劑為在無菌等張水缓衝液中的溶液。當必要時，該 組合物可也包括助溶劑。用於靜脈内投藥的組合物可隨 選地包括局部麻醉劑，例如利諾卡因，以減輕在注射部 位的疼痛。一般而言，以單位劑量形式分開或混合在一 起而供應成分，例如，作為在密封容器中的洗乾粉末或 101腦7产單編號A〇101 第32頁/共90頁 1013264167-0 201242597 無水濃縮劑，例如指出活性劑的量的安瓿或囊袋。當本 發明組合中含有的一或更多種醫療劑是藉由輸注而投藥 時，其可，例如，使用含有無菌藥學等級的水或食鹽水 的輸注瓶來配施。當本發明組合中含有的醫療劑是藉由 注射而投藥時，可提供用於注射的無菌水或食鹽水的安 瓿，以使該成分可在投藥之前混合。 用於口服運送的組合物可為錠劑、菱形錠、水性或油狀 懸浮液、顆粒、粉末、乳狀液、膠囊、糖漿或酏劑的形 式。口服投藥的組合物可含有一或更多種隨選的藥劑， 例如，甜味劑，例如果糖、阿斯巴甜或糖精；調味劑， 例如薄菏、冬青油或櫻桃；著色劑；以及防腐劑，以提 供製藥上可口的製備品。此外，其中錠劑或藥丸形式， 可塗層組合物以延遲在腸胃道中的崩解以及吸收，藉此 在延長的時間期間提供持續的作用。在滲透性活性驅動 化合物周圍的選擇性穿透膜也適合用於包含在本發明組 合中的口服投藥化合物或抗癌劑。在這些後者的平台中 ，來自該膠囊附近環境的流體被該驅動化合物（抗癌劑 )吸收，該驅動化合物膨脹以經由孔洞取代該劑或劑組 合物。這些運送平台可提供必要零級運送的特徵，相反 於立即釋放配方的尖峰特徵。也可使用時間延遲材料， 例如單硬脂酸甘油或硬脂酸甘油。口服組合物可包括標 準的運送工具，例如甘露糖醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂 、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。這種運送工具較佳為製 藥等級。 此外，此發明醫藥組合中含有的化合物（抗癌劑）的效 果可藉由適當的配方來延遲或延長。例如，可製備該化 單編號A0101 第33頁/共90頁 1013264167-0 201242597 合物的緩慢可溶的小顆粒，並併入錠劑或膠囊中。該技 術可藉由製造數種不同溶解速率的小顆粒並以該小顆粒 的混合物填充膠囊來改進。可使用抗溶解一段可預測時 間的薄膜來塗層錠劑或膠囊。甚至是非口服的製備品可 藉由將該化合物（抗癌劑）溶解或懸浮於允許其可在血 清中緩慢分散的油狀或乳化運送工具中而做成為長效的 〇 藉由相同或不同的途徑以及以廣泛的各種不同的劑量形 式，能夠抑制EGFR激酶活性的化合物當在雙重組合中使 用時可與分子式I的CM抑制劑一起或當在三重組合中使 用時可與分子式I的C D K抑制劑以及吉西他濱一起或分開 投藥。例如，能夠抑制E G F R激酶活性的化合物較佳以口 服或非口服投藥，其中當能夠抑制EGFR激酶活性的化合 物是埃羅替尼HC1 (TARCEVA®)時，口服投藥是較佳的 〇 能夠抑制EGFR激酶活性的化合物可使用為錠劑、膠囊、 菱形錠、喉片、硬糖果、粉末、喷霧、乳霜、油膏、栓 劑、果凍、凝膠、膏狀物、乳液、軟膏、酏劑、糖漿以 及諸如此類形式的各種藥學可接受的鈍性載體來投藥。 這種劑量形式的投藥以單一或多重劑量來進行。載體包 括固體稀釋劑或填充劑、無菌水介質以及各種無毒有機 溶劑，等等。口服的醫藥組合物可被適當地增甜及/或調 味。 在另一個具體實施例中，本發明有關一種用於治療胰臟 癌的方法，該方法包含將醫療有效量的所述組合投藥至 需要這種治療的個體。因此，在本發明的方法中，藉由 10110847#單編號 A0101 第34頁/共90頁 1013264167-0 201242597 將用以治療癌症的醫療量的吉西他濱與醫療有效量的選 自分子式I化合物或其藥學可接受鹽類或溶劑化物的CDK 抑制劑以及能夠抑制E G F R激酶活性化合物的組合投藥至 個體（其中產生協同作用）而在該個體中治療騰臟癌。 當組合使用時’醫療劑（抗癌劑），即選自分子式I化合 物的CDK抑制劑、能夠抑制EGFR激酶活性的化合物（例如 埃羅替尼或拉帕替尼以及吉西他濱）之間的協同作用在所 選擇的胰臟細胞株中分析。實質上如實驗部分中所描述 的，相較於任一醫療劑單獨使用，當以指出協同作用的 〇 組合使用時，使用固定或改變的醫療劑比例而在該細胞 株中執行標準細胞毒性分析法。使用組合指數（CI )方 法來分析結果，藉由該組合指數方法，小於1的CI值表示 協同作用，等於1表示加成效果，以及大於1表示拮抗作 用。 本發明包含用以在病患中治療或控管胰臟癌的方法，包 含將選自分子式I化合物的抑制劑與能夠抑制EGFR激 酶的化合物以及進一步與吉西他濱的組合投藥至該病患 ❹ 。該用語「組合」不限於在確切相同的時間投藥醫療劑 (抗癌劑），其更意指選自分子式I化合物的CDK抑制劑 以及其他的醫療劑循序並在一個時間間隔内被投藥至個 體，使得該CDK抑制劑可與該其他的醫療劑_起作用，以 提供比起如果它們是以另外的方法投藥還要多的好處。 例如，可在相同的時間或在不同的時間點以任何順序相 繼投藥每個醫療劑；然而’如果不在相同的時間投藥， 它們應在足夠近的時間内被投藥，以提供想要的醫療效 果。可以任何適當的形式以及藉由任何適合的投藥途徑 1013264167-0 10110847#單編號A0101 第35頁/共90頁 201242597 來分別投藥每個醫療劑。 在本發明的具體實施例中，該組合中含有的抗癌劑可以 交錯的療法投藥，即，在週期療程期間在與能夠抑制 EGFR激酶活性的化合物以及吉西他濱不同的時間給予CM 抑制劑。至少兩個抗癌劑的投藥時間差的範圍可為數分 鐘、小時、天、週或更久。因此，該用語組合（或結合 的）不一定意指在相同的時間或作為單一劑量或單一組 合物而投藥，而是每個成分在想要的治療時期期間投藥 。也可藉由不同的途徑來投藥抗癌劑。在一個具體實施 例中，1個「週期」包括21天。這些療法或週期可依據期 望而被重複或改變。其他的劑量療法以及改變是可預見 的’並經由醫生的指導而決定。 在特定的具體實施例中，在其中兩種藥劑仍具活性的時 段中投藥醫療劑。本領域的技術人員將能夠藉由決定所 投藥的醫療劑的半衰期而決定這種時段。 如同本文先前所指出，可同時或循序投藥該醫秦組合物 中含有的活性成分。 為了本發明醫藥組合中含有的醫療劑的有效投藥，特別 疋备使用雙重組合時，包括在25 mg至3〇〇 mg的一般劑 量範圍中投藥埃羅替尼；以及在100 rag/m2/天至185 mg/m2/天的一般劑量範圍中投藥分子式I的CDK抑制劑， 例如化合物A。 為了本發明醫藥組合中含有的醫療劑的有效投藥，特別 疋當使用二重組合時，包括在25 fflg至3〇〇 mg的一般劑 量範圍中投藥埃羅替尼；以及在1〇〇 mg/ra2/天至2〇〇 mg/m2/天的一般劑量範圍中投藥分子式I的CDK抑制劑， 1〇11〇847产單編號A0101 第36頁/共9〇頁 1013264167-0 201242597 例如化合物A，以及在200rag/m2劑量至1 000rag/m2劑量 的一般劑量範圍中投藥吉西他濱。 本領域的技術人員將承認，在此發明的範圍以及精神内 ，數種改變是可能的。藉由參照下述非限制性的範例， 將更詳細地描述本發明。下述範例進一步描繪了本發明 ，但當然不應以任何方式被理解為限制其範圍。 範例1 : A)用於製備CDK抑制劑分子式I化合物的一般程序： 可根據PCT專利公開編號W02004004632以及PCT專利公 開編號W 0 2 0 0 714 815 8中所揭露的方法來製備分子式I化 合物，其併入於本文中以作為參考。 用於製備分子式I化合物或其藥學可接受鹽類的一般製程 包含下述步驟： (a)在路易氏酸催化劑的存在下，使用醋酸酐處理分子式 VIA的中間產物化合物的解析的鏡像異構性純的（-)-反式 鏡像異構物，

以獲得解析的分子式VIIA的乙酷化化合物， 10Π0847#單編號舰01 第37頁/共90頁 1013264167-0 3201242597 [0008]

OCH

CH3O

3COCH OH,CH2OCOCH3 CH3

VIIA (b)在驗以及溶劑的存在下，將解析的分子式VIIA的乙 醯化化合物與分子式ArCOOH的酸或分子式ArCOCl的酸性 氣化物或分子式（ArC0)90的酸酐或分子式ArC00CHq的酯 u Ο 反應，其中Ar是如同上述本文中關於分子式I化合物的定 義，以獲得解析的分子式VIIIA化合物；

ch3o

VEHA (c)在適合的溶劑中以鹼處理該解析的分子式VI11A化 合物，以獲得相應的解析的b-二酮分子式IXA化合物； 101刪#單編號删1 1013264167-0 第38頁/共90頁 CH3、〇 0 ◦

ch3 201242597 [0009] ΊΚΑ 其中Ar是如同上述所定義； Ο [0010] (d)以酸（例如氫氣酸）處理該解析的b-二酮分子式IXA 化合物，以獲得相應的分子式XA環化化合物，

XA

(e)藉由在範圍為1 20-1 80 °C的溫度下將分子式XA化合 物與脫烷劑加熱而進行分子式XA化合物的脫烷作用，以 獲得分子式I化合物的（ + )-反式鏡像異構物以及，隨選地 ，將該標題化合物轉變成其藥學可接受的鹽類。 上述步驟（a)中所使用的路易氏酸催化劑可選自：BF3、 E12 0、氣化鋅、氯化銘以及氣化鈦。 製程步驟（b)中所使用的鹼可選自三乙胺、吡啶以及 DCC-DMAP組合（Ν, Ν’ -二環己基二亞胺以及4-二曱基 胺基吡啶的組合）。 HHIOM#單編號繼01 第39頁/共90頁 1013264167-0 201242597 對於本領域的技術人員將顯而易見的是，分子式 VIIIA化合物變成相應的b-二酮分子式IXA化合物的重排 已知為貝克-文卡塔拉曼（Baker-Venkataraman)重排 (J. Chem. Soc.，1381 (1933)以及Curr. Sci.， 4， 214 (1933))。 製程步驟（c)中所使用的鹼可選自：六曱基二矽 基胺基链、六曱基二矽基胺基鈉、六甲基二矽基胺基鉀 、氫化鈉以及氫化鉀。較佳的鹼是六甲基二矽基胺基鋰 〇 製程步驟（e)中用於分子式IXA化合物的脫烷作用 的脫烷劑可選自：吡啶鹽酸鹽、三溴化硼、三氟化硼乙 謎以及三氣化鋁。較佳的脫烷劑是吡啶鹽酸鹽。 起始分子式VIA化合物的製備涉及將卜甲基-4-哌啶_與 在冰醋酸中的1，3,5-三曱氧基笨溶液反應，以產出卜曱 基-4-(2, 4, 6-三甲氧基笨基）— ；[，2, 3, 6-四氫吼啶，其 與二氟化蝴二乙謎、碼氫化納以及四氫吱σ南反應，以產 出1-甲基-4-(2,4,6-三曱氧基苯基）旅咬_3-醇。1__甲 基4 (2，4，6-二甲乳基笨基）〇底咬_3_醇變成分子式γι' 化合物的轉變涉及在氧親核劑（例如三乙胺、吡啶、碳酸 鉀或碳酸鈉）的存在下，藉由以適當的試劑（例如甲笨 磺醯氣、曱烷磺醯氣、三氟曱磺酸酐或五氣化磷）進行處 理，接著在氧親核劑的存在下，例如在醇類溶劑（例如 異丙醇、乙醇或丙醇）中的醋酸鈉或醋酸鉀，藉由縮環 作用而將存在於化合物卜曱基—4_(2 4 6_三曱氧基^基 )錢-3-醇㈣㈣上_基轉變為脫離基，例如甲^ 嶒醯基、甲磺醯基、三氟甲磺酸鹽或鹵化物。 1011〇84#單編號A0101 第4〇頁/共90頁 1013264167-0 201242597 β) ( + )-反式-2-(2-氣苯基）-5，7-二經基-8-(2-經基 曱基-1-甲基-吡咯啶-3-基）-笨並哌喃-4-酮鹽酸鹽（化 合物A)的製備 將溶融的α比咬鹽酸鹽（4.1 g，35.6 mmol)加至（+ )-反式-2-(2-氣-苯基）-8-(2-經基甲基-1-甲基-α比略咬 -3-基）-5,7-二甲氧基-笨並旅嗔-4-酮（〇.4 g，0.9 mmol)中’並在180°C下加熱1.5 h。將反應混合物冷卻 至25°C，以MeOH (10 mL)稀釋，並使用Na9C0Q鹼化至 pH 10。過濾該混合物’並濃縮有機層。將殘餘物懸浮於 水中（5 mL) ’攪拌30 min，將其過濾以及乾燥，以獲 得化合物（ + )-反式-2-(2-氣-苯基）-5, 7-二羥基-8-(2-輕基甲基-1-曱基-π比洛咬-3-基）-苯並娘喃-4-網。 產量：0. 25 g (70%); IR (KBr)： 3422, 3135, 1664, 1623, 1559 cra-1; 1H NMR (CDC13, 300MHz): δ 7.56 (d, 1H), 7.36 (m, 3H), 6.36 (s, 1H), 6.20 (s, 1H), 4.02 (ra> 1H), 3.70 (m, 2H), 3.15 (m, 2H), 2-88 (m, 1H), 2.58 (s, 3H), 2.35 (m, 1H), 1-88 (m, 1H); MS (ES+): m/z402 (M+l); 分析：C21H20C1NO5 C，62.24 (62.71 ); H, 5.07 (4·97); N，3.60 (3,48); Cl，9.01 (8.83)。 將如上所獲得的化合物（0.2 g，0.48 mmol)懸浮於 IPA (5 mL)中，並加入3. 5 % HC1 (25 mL)。將該 懸浮液加熱以得到澄清的溶液。將該溶液冷卻，並過濾 固體’以獲得化合物（ + )-反式-2-(2-氣苯基）-5, 7-二 經基-8-(2-羥基甲基-1-甲基-吡咯啶-3-基）_苯並哌喃 10110847^·單編號 A0101 第41頁/共90頁 1013264167-0 201242597 -4-嗣鹽酸鹽。 產量：0.21 g (97 %) ; mp: 188 - 1 92 °C ;[ a]D25 = +21.3° (c = 0. 2，甲醇）； 1H NMR (CD30D, 300MHz)： δ 7.80 (d, 1H), 7.60 (in, 3H), 6.53 (s, 1H), 6.37 (s, 1H), 4.23 (m, 1H), 3.89 (m, 2H), 3.63 (m, 1H), 3.59 (dd, 1H), 3.38 (in, 1H), 2.90 (s, 3H), 2.45 (m, 1H), 2.35 (in, 1H)； MS (ES + )： m/z 402 (M +1)(游離鹼）。 將此化合物進行掌性HPLC。使用管柱手性柱 OD-H ( 250 X 4. 6 ram)以及具有TFA ( 0. 4% )的溶劑 系統己烷：乙醇（92 : 08 )來完成掌性HPLC。以 lmL/min的溶劑流速在264nm下記錄結果。如第3圖中所 描繪的，該掌性HPLC顯示了 100% e. e的化合物（+ )-反 式- 2- (2 -氣-苯基）-5, 7 -二經基-8-(2 -經基-甲基-1-曱 基-吡咯啶-3-基）-苯並哌喃-4-酮鹽酸鹽。 C) ( + )-反式- 2-(2 -氣-4-三氟曱基-苯基）-5, 7 -二經基 -8-(2-羥基甲基-1-曱基-吡咯啶-3-基）-苯並哌喃-4-酮鹽酸鹽（化合物B)的製備 將化合物（ + )-反式- 2- (2 -氣-4-三氟曱基笨基）-8-(2-羥基曱基-1-曱基吡咯啶-3-基）-5, 7-二甲氧基-苯並哌 喊-4-_ (0.25 g，0.5 mmol)、°比咬鹽酸鹽（0.25 g，2.16 mmol)以及催化量的喹啉的混合物於180°C下 加熱2 · 5小時的時間。以甲醇（2 5 mL )稀釋反應混合物 ，並以固體Na9COq鹼化至pH 10。過濾該反應混合物，並 以曱醇沖洗。濃縮有機層，並使用在氣仿中的0. 1 %氨以 m_产單編號麵 第42頁/共90頁 1013264167-0 201242597 及4. 5%甲醇作為洗提液，而藉由管柱層析純化殘餘物， 以產出為黃色固體的化合物（ + )-反式-2-(2-氣-4-三氟 甲基苯基）-5, 7-二羥基-8-（2-羥基-甲基-1-曱基吡咯 咬_3-基）-苯並旅喃_4_嗣。 產量：0. 15 g (63. 7%); 1H NMR (CDC13, 300MHz): <5 7.99 (m, 2H), 7. 83 (d, 1H), 6. 65 (s, 1H), 6. 41 (s, 1H), 4.24 (m，1H)，3.90 (m，2H)，3.70 (m，1H), 3.60 (in, 1H), 3.41 (ra, 1H), 2.99 (s, 3H), 2.54 (m, 1H), 2.28 (m, 1H); MS (ES+): m/z470 (M+l)。 將上述獲得的化合物（0.1 g，0.2 mmol)懸浮於甲醇 (2 mL)中，並以醚化HC1處理以及將有機溶劑揮發，以 產出化合物（ + )-反式-2-(2-氣-4-三氟曱基-笨基 )-5,7-二經基-8-(2-經基甲基-1-甲基-π比咯咬_3_基）_ 苯並旅嗔-4-酮鹽酸鹽。 產量：0. lg (92. 8%); Ο 1H NMR (CDC13, 300MHz)： 5 8.02 (d, 2H), 7.83 (d, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.41 (s, 1H), 4.23 (ra, 1H), 3.73 (m, 2H), 3.68 (m, 1H), 3.51 (m, 1H), 3.39 (m, 1H), 2.99 (s, 3H), 2.54 (m， 1H), 2.31 (m， 1H)。 涉及使用由化合物A以及埃羅替尼組成的雙重組合的試管 内研究 範例2 : 10110847#單編號 使用碘化丙啶（PI)在細胞毒性分析法中化合物A與埃羅 A0101 第43頁/共90頁 1013264167-0 201242597 替尼的組合研究 根據 Anticancer Drugs，1995，6，522 - 32 中所提 及的程序執行碘化丙啶螢光分析法（PI)，其併入於本 文中以作為參考。 該分析法被發展用以定出人類腫瘤細胞株的試管 内生長特徵’以及用以測試抗癌劑（「測試化合物」） 的細胞毒性活性。使用碘化丙啶（PI)作為染料，其只 穿透受損的細胞膜。由PI與雙股DNA形成嵌入錯合物，其 造成螢光的放大。在將細胞於-70°C冷凍24 h之後，PI 已進入導致總細胞族群數的總DNA。從只含有培養基以及 碘化丙啶的無細胞孔洞中獲得背景讀值。 將人類胰臟癌細胞株，Panc-Ι以及AsPc-1 (來 源ATCC (美國菌種保存中心））以1 500-3000個細胞/孔 的密度播種於96孔盤中的180 pL的MEM (最小必需培養 基 ’ SAFC，USA)以及RPMI 1460 (Sigma，美國）中， 其具有10% FCS (胎牛血清），並培養大約16 h，以允 許細胞貼附。如第1 a、1 b、2a以及2b圖中所示，然後以 相應於IC3Q、IC5Q或IC7()的不同濃度的化合物A與相應於 IC30、IC50或1C70的不同濃度的埃羅替尼（LC Laboratories，美國）處理該細胞，或單獨以不同濃度 (IC3〇、IC5〇或1C7〇)的化合物4或單獨以不同濃度（ IC3〇、1(：5〇或1(：7〇)的埃羅替尼處理該細胞。用於 Panc-Ι以及AsPc-1細胞的化合物A以及埃羅替尼的ic 30 、IC5()以及IC7〇濃度被具體描述於如本文下面中所呈現 的表3中。處理時期為7 2小時或9 6小時。將培養盤培養於 37°C±1 °C、潮濕的5%(：〇2培養箱中。以運送工具（DMS0 10110847#單編號 A0101 第44頁/共90頁 1013264167-0 201242597 )處理控制組孔洞。在培養時期結束時，從該孔洞移除 培養基，並以填酸鹽緩衝鹽水（PBS)沖洗。每個孔洞加 入100 pL的PI工作溶液（7 pg/mL)，並將該培養盤儲 存於-80°C達大約16小時。將該培養盤解來，並使用 POLARstar optima plate reader (USA)於536 nm 的激發光以及590 nm的發散光測量螢光。 計算抑制百分比（％)，並使用Compusyn軟體（

ComboSyn，Inc. USA)決定組合指數。見

Therapeutical Basis, Experimental Design f) and Computerized Simulation of Synergism and

Antagonism in Drug Combination Studies, CHOU, Ting-Chao. Pharmacol. Rev., vol. 58, no· 3，pgs. 621-681 (2006)，其併入於本文中以作 為參考。組合指數（C· I)用以評估2個或更多個化合物 之間的協同作用。C. I < 1代表該組合有協同作用，c. j =1代表該組合是加成的，.以及C I 代表該組合是拮 ◎ 抗的。在本發明的一個具體實施例中，c. j是〈1。 (藉由將1 mg PI溶解於！ mL的蒸餾水中來製備丨即/乩 的pi儲備溶液。藉由將140此的儲備溶液加至pBS中並 將體積補足至220 mL而製備？1工作溶液（7叫/眈）） 結果呈現於下述表la、lb、2a以及2b中。此外 ，第la以及lb圖中的圖表分別提供了在72小時以及⑽小 時結束時，在Panc-“田胞中化合物A以及埃羅替尼的單一 與組合劑量的百纽抑制結果12a以及⑪圖分別提供 了在72小時以及96小時結束時，在AsPc-1細胞中化合物 A以及埃羅替尼的單—與組合劑量的百分比抑制結果的圖 10110847#單編號A01〇l 第45頁/共9〇頁 1013264167-0 201242597 表。 在下述表la、lb、2a以及2b中，符號「+」代表 同時使用抗癌劑（測試化合物）。 表la -在72 h的處理之後，在Pane-1細胞中對於化合物 A (以不同的濃度）與埃羅替尼（以不同的濃度）的組合 的組合指數（C. I )計算 化合物A以及埃羅替尼的組合 組合指數（C.I)値 IC30化合物A+IC5〇埃羅替尼 0.5 IC30化合物A+IC7Q埃羅替尼 0.2 ic50化合物A+rc30埃羅替尼 0.8 IC50化合物A+IC5G埃羅替尼 0.4 IC50化合物A+IC7Q埃羅替尼 0.1 IC70化合物A+IC3G埃羅替尼 0.7 IC70化合物A+IC5G埃羅替尼 0.5 ic70化合物a+ic7C埃羅替尼 0.2

[0011] 表lb-在96 h的處理之後，在Pane-Ι細胞中對於化合物A (以不同的濃度）與埃羅替尼（以不同的濃度）的組合 的組合指數（C· I )計算 化合物A以及埃羅替尼的組合 組合指數（C.I)値 IC30化合物八+1(：50埃羅替尼 0.5 IC30化合物八+1。70埃羅替尼 0.1 IC50化合物A+IC3G埃羅替尼 0.8 IC50化合物A+IC5Q埃羅替尼 0.4 IC50化合物A+IC70埃羅替尼 0.1 IC70化合物A+IC3G埃羅替尼 0.7 IC70化合物A+IC5Q埃羅替尼 0.4 ic70化合物A+IC7G埃羅替尼 0.1 第46頁/共90頁 1013264167-0 谢腦#單編號删1 201242597 [0012] 表2a-在72 h的處理之後，在AsPc-1細胞中對於化合物A (以不同的濃度）與埃羅替尼（以不同的濃度）的組合 • 的組合指數（C. I )計算 化合物A以及埃羅替尼的組合 組合指數（C.I)値 IC30化合物A+IC3G埃羅替尼 0.6 IC30化合物a+ic50埃羅替尼 0.3 IC50化合物A+IC30埃羅替尼 0.3 IC50化合物A+IC5G埃羅替尼 0.3 IC70化合物A+IC3G埃羅替尼 0.5 IC70化合物a+ic50埃羅替尼 0.6

[0013] 表2b-在96 h的處理之後，在AsPc-1細胞中對於化合物A (以不同的濃度）與埃羅替尼（以不同的濃度）的組合 的組合指數（C. I )計算 化雜A以及埃羅替尼的組合 組合指數（C.I)値 IC30化合物a+ic30埃羅替尼 0.4 IC30化合物A+IC5Q埃羅替尼 0.1 IC50化合物A+IC3Q埃羅替尼 0.3 IC50化合物A+IC5G埃羅替尼 0.2 IC70化合物A+IC30埃羅替尼 0.4 IC70化合物A+IC50埃羅替尼 0.4 [0014] 表3 -在Panc-Ι以及AsPc-1細胞株中，化合物A以及埃羅 替尼的30、50以及70百分比抑制濃度（ICQn、ICKn以及

0 U D U 10110847#單編號 A〇101 第47頁/共90頁 1013264167-0 201242597 細胞株 化雜 Wf# r ..τΰΓ\——--——— wia. v. μΜ ) ------—j 儿3〇 1^50 IC70 Panc-1 化A 0.4 0.6 0.7 埃羅#尼 ’ 圓—--- 5 12 22 — AsPc-1 化合物A 一 —— 0.7 1.5 3.0 埃羅替尼 10 -—— 30 - 涉及使用由化合物A、埃羅替尼/拉帕替尼以及吉西他濱 組成的三重組合的試管内研究 範例3 : 材料：吉西他濱、拉帕替尼以及埃羅替尼是從美國LC實 驗室獲得。CCK-8細胞毒性套組是由日本D〇 jind〇 Molecular Technologies製造。培養基以及胎牛血清 (FBSpha&Sigma(Si：.Louis，M〇h：^Gibco (Paisley ’ 蘇格蘭）獲得。panc — i 以及Mia Paca_2細 胞疋攸美國fe種保存中心（ATCC，Manassas, VA)獲 得。將細胞維持在補充有l〇%FBS、盤尼西林-鏈黴素溶 液穩定的、無菌過濾的、具有5, 〇〇〇單位盤尼西林以及5 mg鏈黴素/mL (P-4458，Sigma-Aldrich，美國）的 Dulbecco’ s Modified Eagle Medium (MEM)中。 將該細胞生長於75-cm2培養瓶中，並維持在潮濕的（37 °C，5%C02)培養箱中。將細胞傳代而達到80%的聚滿 度。 細胞增殖分析法：將對數生長的細胞以3 X 103細胞/孔 的密度分盤，並允許其隔夜恢復。以範圍為10 nM至30 μΜ的不同濃度的不同抗癌劑（吉西他濱、化合物A、拉帕 替尼以及埃羅替尼）刺激該細胞，以及控制組細胞接受 單編號 A0101 第48頁/共90頁 1013264167-0 201242597 具有10%血清、含有0. 2%濃度的二甲基亞砜（DMSO) 運送工具的Dulbecco’s modi ed Eagle’s medium (DMEM)。72小時之後，藉由cck-8試劑（Dojindo Molecular Technologies，日本）決定細胞毒性；（ WST-1 [2-(2 -甲氧基- 4-石肖基苯基）-3-（4 -碗基苯基 )-5-(2，4-二續苯基）]-2H-四氮唑單鈉鹽類分析法） 。按照製造商的指示’加入5μ1/孔的CCK-8試劑，並將 培養盤培養2小時。藉由在Tecan Sapphire多重蝥光微 孔盤讀取儀（Tecan，德國，GmbH)上在450 nm校正至 650 nm的波長下測量吸光度而決定毒性，並標準化至控 制組。 執行CCK-8 (細胞計數套組-8)非放射性比色分析法，以 定出Panel以及Mia Paca2細胞的試管内生長特徵，並測 試抗癌劑，吉西他濱、化合物A、拉帕替尼以及埃羅替尼 當組合使用時的細胞毒性活性^ CCK-8允許方便的分析法 ，該分析法使用Dojindo’s四氮唑鹽類，WST 8-(2-(2-曱氧基-4-硝基苯基）-3-(4-硝基苯基）-5-(2, 4-二磺笨 基）-2H-四氮唑單鈉鹽，其在電子載體（1-甲氧基PMS)的 存在下在生物還原作用之後產生可溶於水的甲璜染料。 將CCK-8溶液直接加至該細胞中；不需要成分的預混合。 CCK-8是用於決定細胞增殖中存活細胞數的敏感非放射性 比色分析法以及細胞毒性分析法。WST-8被細胞去氫酶生 物還原成橘色的曱瓚產物，該甲瓚產物可溶於組織培養 基中。所產生的曱瓚量直接正比於活細胞數。使用WST-8 的細胞增殖分析法的偵測敏感度高於使用其他四氮唑鹽 類的分析法，例如MTT、XTT、MTS或WST-1 (PCT專利公 1013264167-0 第49頁/共90頁 201242597 開案W097/38985 )。在450nm的測量波長以及630nm的 參考波長下決定光學密度。

Panc-Ι 細胞、Mia Paca-2細胞、HPAC細胞以及Capanl 細胞中化合物A、埃羅替尼/拉帕替尼以及吉西他濱的50 百分比抑制濃度（IC^n)的決定

D U 為了決定Panc-Ι細胞、Mia Paca-2細胞、HPAC細胞以 及Capanl細胞中的吉西他濱、化合物A、埃羅替尼以及拉 帕替尼的ic5Q ’以下述提及濃度的特定抗癌劑（「測試 化合物」）處理細胞。對於最終濃度〇. 03 、0. 1 μΜ 、0.3 μΜ、1 μΜ、3 μΜ、10 μΜ、30 μΜ以及 100 μΜ的 下述劑量的所有抗癌劑分析它們展現細胞毒性的能力， 特別是展現5 0 %細胞毒性的能力。將細胞以3 〇 〇 〇細胞/孔 的密度播種於200 μι於組織培養等級的96孔盤中，並讓 該細胞在潮濕的5%±0. 2 CO培養箱於37吣±0. 50(：下恢 L· 復2 4小時。2 4小時之後’將1 μ L溶解於純二曱基亞職（ DMSO)中的200Χ測試化合物（吉西他濱' 化合物a、埃 羅替尼以及拉帕替尼（比所需濃度高200倍被指稱為2〇〇χ )加至細胞中。孔中的最終DMSO濃度為0. 5%。將培養盤 於潮濕的5%±0. 2 C02培養箱在37±0. 5〇C下培養48小時 。48小時之後’將該培養盤從C〇2培養箱移出，並在每孔 加入5 pL的細胞計數套組（CCK-8)。將相同的培養盤 維持在在370C達3小時，並讓其回到室溫《在Tecan Multimode safire上讀取450nm波長的吸光度。使用下 述方程式計算百分比細胞毒性。 百分比細胞毒性=@MS〇控制組的OD -處理細朐的ΩΤη X100)

DMSO控鳓且的OD 10110847# 單編號i A0101 第50頁/共90頁 1013264167-0 201242597 [0015] 在panc-1細胞中在72 hr時的劑量反應研究顯示吉西他 濱、化合物A、埃羅替尼以及拉帕替尼分別在0. 0 6 μ Μ、 0. 51 μΜ、7. 0 μΜ以及4. 8 μΜ抑制50% 生長（IC5())。 結果呈現於表4a中，並繪圖於第3a圖中。 在MiaPaca-2細胞中在72 hr時的劑量反應研究顯示吉西 他濱、化合物A、埃羅替尼以及拉帕替尼分別在0.22 μΜ 、0. 72 μΜ、9. 0 μΜ以及7. 6 μΜ抑制50%生長（IC5()) 。結果呈現於表4b中，並繪圖於第3b圖中。 在HPAC細胞中在72 hr時的劑量反應研究顯示吉西他濱 、化合物A以及埃羅替尼分別在1.6 μΜ、1.1 μΜ以及 2. 3 μΜ抑制50%生長（IC5Q)。結果呈現於表4c中。 u 在Capanl細胞中在72 hr時的劑量反應研究顯示吉西他 濱、化合物A以及埃羅替尼分別在2.9 μΜ、3.6 μΜ以及 3.9 μΜ抑制50%生長（IC5Q)。結果呈現於表4d中。 同樣地，從其中特定化合物在細胞毒性分析法中分別顯 示30%、70%以及90%活性的劑量而建立出對於所有測 試化合物（抗癌化合物）的ic30、ic7Q以及ic90濃度。 表4a-在Panc-1細胞中吉西他濱、化合物A、埃羅替尼以 及拉帕替尼的30%、50%、70%以及90%抑制濃度（ IC30、IC50、％〇以及I、） [0016] 抗癌劑 Panc-1細胞（抑制濃度μΜ) IC3〇 IC5〇 IC7〇 IC90 化雜A 0.1 0.5 3.1 9.4 吉西他濱 0.02 0.06 3 7.3 埃羅替尼 1.6 4.8 12 26 拉帕替尼 2.8 7 10 35 第51頁/共90頁 1084#單編號A_ 1013264167-0 201242597 [0017] 表4b-在MiaPaca-2細胞中吉西他濱、化合物A、埃羅替 尼以及拉帕替尼的30%、50%、70%以及90%抑制濃度 (IC3〇、^5〇、IC7〇 以及 ICg〇) 抗癌劑 MiaPaca-2細胞（抑制翻 ?μΜ) ~ ---~~--- IC3〇 IC5O IC7〇 ’ IC9〇 化合物A 0.3 0.72 5.3 ---- 9.5 吉西他濱 0.05 0.22 3.1 ----~~ 7.1 埃羅替尼 2.6 7.6 15 "----- 34 拉帕替尼 3 9 20 ~~—--- 45 [0019] 表4c-在HPAC細胞中吉西他濱、化合物A、埃羅替尼以及 拉帕替尼的30%、50%、70%以及90%抑制濃度（ic 30 、IC5〇、iC7〇 以及1C90) 抗癌劑 HPAC細胞（抑制濃度μΜγ-- 1。30 IC5〇 IC7〇 IC90 化雜A 0.4 1.1 —-- 4.6 21.4 吉西他濱 0.9 1.6 8.7 28.9 埃羅替尼 1.4 2.3 6.3 10.7 [0021] 表4d-在Capanl細胞中吉西他濱、化合物A、埃羅替尼以 及拉帕替尼的30%、50%、70%以及90%抑制濃度（ IC30 ' IC50、1。7〇以及ICg〇) 抗癌劑 Capanl * (抑制濃度 μΜ) —~ ' ic3〇 IC5〇 IC70 IC9O 也合物A 1.6 3.6 7.8 22.3 吉西他濱 1.1 2.9 11.7 23.7 埃羅替尼 1.1 3.9 12.6 20.6 第52頁/共90頁 [0022] 1013264167-0 10110847产單編# A0101 201242597 [0023]範例4 : 在Panc-1細胞中吉西他濱與化合物A以及埃羅替尼或與化 合物A以及拉帕替尼的組合研究 對於0· 02 μΜ ( IC3〇)或〇. 〇6 μΜ ( 1C )最終 濃度劑量的吉西他濱、0. 1 μΜ ( IC3Q)最終濃度劑量的 化合物A、2. 8 μΜ ( IC3())最終濃度劑量的拉帕替尼以及 1.6 μΜ (IC3G)最終濃度劑量的埃羅替尼分析該三種特 定抗癌劑的連續組合。後續的處理順序如下：以IC 或 30 IC5()的吉西他濱處理Panc-l細胞達〇至24小時。在24小 時結束時，將細胞以不參雜的最小必需培養基（MEM )沖 洗兩次。加入具有10%血清（200 μίν孔）的新鮮最小 必需培養基，接著從24小時至96小時以化合物Α以及埃羅 替尼或化合物A以及拉帕替尼處理。在9 6小時時，使用 CCK-8方法測量細胞毒性。使用Combosyn軟體決定組合 指數。組合指數（C. I)用以評估2或更多個化合物之間 的協同作用。CI <1代表該組合有協同作用，CI = 1代 表該組合是加成的，以及CI > 1代表該組合是拮抗的。 發現在IC3Q濃度的吉西他濱與化合物A以及拉帕替尼分別 在每個化合物的1(：30濃度下的組合是有協同作用的。在 1〇30的吉西他濱顯示12%的細胞毒性，以及在1C的化 合物A與拉帕替尼IC3Q的組合顯示26%的細胞毒性。然而 ’注意到當以吉西他濱ICqn處理24hrs，接著以1(：。„的化 〇 U 3 0 合物A與在IC3()的拉帕替尼的組合處理72小時的組合使用 時’顯示了 73%程度的細胞毒性增加，其比加成效果多 了 35%的細胞毒性，暗示.著在Panc-1細胞中該三種抗癌 劑之間的協同作用。結果呈現於表5a中，並繪圖於第4a 1013264167-0 10110847#單編號A01〇l 第53頁/共90頁 201242597 圖中。 發現吉西他濱與化合物A以及埃羅替尼的組合分別在每種 抗癌劑的ic3〇濃度下有協同作用.在1(：3〇的吉西他濱顯 示了 1 2 %細胞毒性，以及化合物Α的丨c與埃羅替尼J c 3〇 、、 30 的組合顯示了 2 8 %的細胞毒性。然而，當以I c濃度的 吉西他濱處理24hrs，接著以ic3()濃度的化合物人與丨匸⑼ 濃度的埃羅替尼的組合處理72小時的組合使用時，顯示 了 72%程度的細胞毒性增加，其比加成效果多了 32%的 細胞毒性，暗示著在Panc-Ι細胞中該三種抗癌劑之間的 協同作用。結果呈現於表5a中，並繪圖於第4a圖中。 在下表中，符號「+」代表同時使用抗癌劑（測試化合物 )° 表5a-在Panc-Ι細胞中IC3{)濃度的吉西他濱與化合物a以 及埃羅替尼或與化合物A以及拉帕替尼的組合研究 序號 抗癌劑 %細胞毒性 組合指數（C.I) 値 1 吉西他濱IC30 12 2 化合物aic30 13 - 3 拉帕替尼IC30 14 - 4 化合物A ic30+拉帕替尼IC30 26 - 5 埃羅替尼IC30 15 - 6 化合物A rc30+埃羅替尼IC30 28 - 7 吉西他濱ic30 + (化合物A IC30+拉 帕替尼IC30) 73 0.44 8 吉西他濱IC3C+ (化合物A ic3()+埃 羅替尼IC30) 72 0.17 3 0 [0024]

發現IC5Q濃度的吉西他濱與IC3()濃度的化合物A以及1C 濃度的拉帕替尼的組合在Panc-l細胞中有協同作用。 IC50濃度的吉西他濱顯示了 21 %的細胞毒性，以及ic 30 10U084#單編號 A0101 第54頁/共90頁 1013264167-0 201242597 濃度的化合物A與IC3()濃度的拉帕替尼的組合顯示了 26% 的細胞毒性。然而，當以I(^n濃度的吉西他濱處理24hrs ’接著以IC3Q濃度的化合物A與IC3()濃度的拉帕替尼的組 合處理72小時的組合使用時，顯示了 89%程度的細胞毒 性增加’其比加成效果多了 4 2 %的細胞毒性，暗示著在 Panc-Ι細胞中該三種抗癌劑之間的協同作用。結果呈現 於表5b中，並繪圖於第4b圖中。 發現1C濃度的吉西他濱與1C濃度的化合物A以及1C。 濃度的埃羅替尼的組合在Pane-1細胞中更具有協同作用 〇 。IC5()濃度的吉西他濱顯示了 21%的細胞毒性，以及 IC30濃度的化合物A與IC3()濃度的埃羅替尼的組合顯示了 28%的細胞毒性。然而，當以ic 濃度的吉西他濱處理

0 U 24hrs、接著以IC3Q濃度的化合物A與IC3Q濃度的埃羅替 尼的組合處理72小時的組合使用時，顯示了至86%程度 的細胞毒性增加，其比加成效果多了 37%的細胞毒性， 暗示著在Pane-Ι細胞中該三種抗癌劑之間的協同作用。 Q 結果呈現於表5b中，並繪圖於第4b圖中。 表5b-在Pane-Ι細胞中IC5Q濃度的吉西他濱與化合物a以 及埃羅替尼或與化合物A以及拉帕替尼的組合研究 1〇ll〇847#單蝙號 A0101 第55頁/共90頁 1013264167-0 201242597 [0025] 序 號 抗癌劑 %細胞毒性 ^ 組合指數 __(c.i)値 —_ 1 吉西他濱IC50 21 1 化雜Arc30 ' — ~~~~~~:—__ 3 拉帕替尼iC3〇 14 -——_ 4 也合物A IC30+拉帕替尼IC30 —— 26 ~^--- 5 埃羅替尼ic30 ^ 6 化合物AIC30+埃羅替尼IC30 ----------- _ 28 一——S ---__ 7 吉西他濱IC5G+ (化合物A IC3〇+拉帕替 尼 IC30 ) 89 ~~~~- 0.19 8 吉西他濱IC50+ (化合物A IC30+埃羅替 尼 IC30 ) ~~~^~~~一 0.11 範例5 : 在MiaPaca-2細胞中吉西他濱與化合物纽及埃羅替尼或 與化合物A以及拉帕替尼的組合研究 對於0.05 μΜ (IC3〇)以及0.22 μΜ ο、）最終濃度劑 量的吉西他濱、0.3 μΜ(Ι(：3。）最終濃度劑量的化合偏 、3·0 μΜ(Ι〇3{))最終濃度劑量的拉帕替尼、2 6 υΜ( IC”）最終濃度劑量的埃羅替尼分析上述三種特定抗癌 劑的連續組合。後續的處理順序如下：以IC或丨 30一 υ50的 吉西他濱處理MiaPaca2細胞達0至24小時。在24小時、妹 束時’將細胞以不參雜的最小必需培養基（Mem )沖洗兩 次。加入具有10%血清（2〇〇 UL/孔）的新鮮最小必需 培養基，接著從2 4小時至9 6小時以化合物A以及埃羅替尼 或化合物A以及拉帕替尼處理。在96小時時，使用cck-8 方法測量細胞毒性。使用Combosyn軟體決定組合指數。 組合指數（C · I )用以評估2或更多個化合物之間的協同 作用。CI <1代表該組合有協同作用，CI = 1代表該組 合是加成的’以及CI > 1代表該組合是拮抗的。 第56頁/共90頁 1013264167-0 201242597

發現在IC3()濃度的吉西他濱與化合物A以及拉帕替尼分別 在每個化合物的ic30濃度下的組合是有協同作用的。在 1C 濃度的吉西他濱顯示16%的細胞毒性，以及在1C

Q U 濃度的化合物A與在Ι(^η濃度的拉帕替尼Ι(^η濃度的組合 y U 3 0 顯示26%的細胞毒性。然而，當以1C的吉西他濱處理

〇 U 24hrs，接著以IC3()的化合物A與在IC3()的拉帕替尼的組 合處理72小時的組合使用時，顯示了 64%程度的細胞毒 性增加，其比加成效果多了 22%的細胞毒性，暗示著在 MiaPaca-2細胞中該三種抗癌劑之間的協同作用。結果 呈現於表6a中，並繪圖於第5a圖中。 發現在IC3Q濃度的吉西他濱與化合物A以及埃羅替尼的組 合分別在每種化合物的ICqn濃度下有協同作用。在 濃度的吉西他濱顯示了 16%細胞毒性，以及在ICQn濃度 的化合物A與在IC3()濃度的埃羅替尼的組合顯示了 27%的 細胞毒性。然而，當以IC3()濃度的吉西他濱處理24hrs， 接著以IC3()濃度的化合物A與IC3()濃度的埃羅替尼的組合 處理72小時的組合使用時，顯示了 69%程度的細胞毒性 增加，其比加成效果多了 26%的細胞毒性，暗示著在 MiaPaca-2細胞中該三種抗癌劑之間的協同作用。結果 呈現於表6a中，並繪圖於第5a圖中。在下表中，符號「+ 」代表同時使用抗癌劑（測試化合物）。 表6a-在MiaPaca-2細胞中IC3{)濃度的吉西他濱與化合物 A以及埃羅替尼或與化合物A以及拉帕替尼的組合研究 101麵7夢單編號A()101 第57頁/共90頁 1013264167-0 201242597 序號 抗癌劑 %細胞毒性 組合指數（C.I)値 1 吉西他濱丨c30 16 . 2 化合物A IC30 14 3 拉帕替尼IC30 17 4 化合物A K30+拉帕替尼IC30 26 5 埃羅替尼1C30 19 6 化合物AIC30+埃羅替尼IC30 27 7 吉西他濱K：30+ (化合物A ICBoigiftf 替尼ic30) 64 0.29 8 吉西他濱IC30+ (化合物A IC30+埃羅 替尼K：3〇) 69 0.32 發現IC5〇濃度的吉西他濱與1c3〇濃度的化合物A以及IC3() 濃度的拉帕替尼的組合在MiaPaca2細胞中更有協同作用 。IC5Q濃度的吉西他濱顯示了 21 %的細胞毒性，以及 IC3〇濃度的化合物A與IC3Q濃度的拉帕替尼的組合顯示了 26%的細胞毒性。然而’當以IC5Q濃度的吉西他濱處理 24hrs，接著以IC3()濃度的化合物A與IC3()濃度的拉帕替 尼的組合處理72小時的組合使用時，顯示了 91%程度的 細胞毒性增加，其比加成效果多了 44%的細胞毒性，暗 示著在MiaPaca-2細胞中該三種抗癌劑之間的協同作用 。結果呈現於表6b中，並繪圖於第5b圖中。 發現吉西他濱（IC5Q)與化合物A (IC3Q)以及埃羅替尼 (IC3())的組合在MiaPaca2細胞中更具有協同作用。 1匚5〇濃度的吉西他濱顯示了21%的細胞毒性，以及1(^。 濃度的化合物A與IC3()濃度的埃羅替尼的組合顯示了 2 7% 的細胞毒性。然而，當以1C。濃度的吉西他濱處理24hrs ，接著以IC3()濃度的化合物A與IC3()濃度的埃羅替尼的組 合處理72小時的組合使用時，顯示了 88%程度的細胞毒 性增加’其比加成效果多了 4 0 %的細胞毒性，暗示著在 1013264167-0 1Q11Q847f單編號A0101 第58頁/共90頁 201242597

MiaPaca-2細胞中該三種抗癌劑之間的協同作用。結果 呈現於表6b中，並繪圖於第5b圖中。在下表中，符號「+ 」代表同時使用抗癌劑（測試化合物）。 表6b-在MiaPaca-2細胞中ICEn濃度的吉西他濱與化合物

D U A以及埃羅替尼或與化合物A以及拉帕替尼的組合研究 序號 抗癌劑 %細胞毒性 組合指數（C.I)値 1 吉西他濱IC50 21 - 2 化合物AIC30 14 - 3 拉帕替尼ic30 17 - 4 化合物aic3〇+拉帕替尼IC30 26 - 5 埃羅替尼ic3〇 19 - 6 化合物AIC30+埃羅替尼IC30 27 - 7 Gem IC5Q+ (化合物A IC3Q+拉帕替 Ik IC^n ) 91 0.14 8 Gem IC5〇+ (化合物A IC3G+埃羅替 fp, IC-ϊπ ) 88 0.15

[0027]範例6 : 在HPAC細胞中吉西他濱與化合物A以及埃羅替尼的組合研 究 發現在吉西他濱與化合物A以及埃羅替尼的組合分別在每 種抗癌劑的ic3()濃度下有協同作用。在ic3()濃度的吉西 他濱顯示了 17%細胞毒性，以及在IC3()濃度的化合物A與 在IC3()濃度的埃羅替尼的組合顯示了 33%的細胞毒性。 然而，當以IC3()濃度的吉西他濱處理24hrs，接著以IC3() 濃度的化合物A與IC3()濃度的埃羅替尼的組合處理72小時 的組合使用時，顯示了 88%程度的細胞毒性增加，其比 加成效果多了 38%的細胞毒性，暗示著在HPAC細胞中該 三種抗癌劑之間具有0.21的組合指數（C. I)的協同作用 。結果呈現於表7中，並繪圖於第6圖中。 表7-在HPAC細胞中在ICgn4ICKn濃度的吉西他濱與化合

〇 U 〇 U 10110847#單編號皿01 第59頁/共90頁 1013264167-0 201242597 物A (在IC3Q或IC5Q濃度）以及埃羅替尼（在IC3()或IC5() 濃度）的組合研究 序號 抗癌劑 在96 hr的細 胞毒性％ 組合指數 (C.I)値 第1天 第2天 1 吉西他濱IC30 - 17.29 - 2 吉西他濱IC50 - 21.82 - 3 化合物A IC30 - 16.95 - 4 化合物aic50 - 23.48 - 5 埃羅替尼ic30 - 14.21 - 6 埃羅替尼IC50 - 24.84 - 7 吉西他濱IC30 化雜A IC30 51.83 0.92 8 吉西他濱IC30 化合物aic50 62.37 0.57 9 吉西他濱IC50 化合物a IC30 63.47 0.66 10 吉西他濱IC50 化合物aic50 71.47 0.42 11 埃羅替尼ic30 化合物A ：IC30 47.44 0.96 12 埃羅替尼κ30 化合物aic50 54.99 0.65 η 埃羅替尼IC50 化合物ακ:30 64.10 0.88 14 埃羅替尼IC50 化合物aic50 73.37 0.59 15 無吉西他濱 化合物a IC3〇+埃羅替 ίκ IC-^n 33.29 - 16 無吉西他濱 化合物A IC3G+埃羅替 ^ IC.n 39.94 _ 17 吉西他濱IC30 化合物A IC3〇+埃羅替 尼 IC30 88.42 0.21 18 吉西他濱IC30 化合物A IC3〇+埃羅替 尼 1。50 89.53 0.27 19 吉西他濱IC50 化合物A IC3()+埃羅替 尼 iC30 87.34 0.57 20 吉西他濱IC50 化合物A IC3Q+埃羅替 尼 ICso 96.51 0.63 [0028]範例 7 在Capanl細胞中吉西他濱與化合物A以及埃羅替尼的組合 研究 發現在吉西他濱與化合物A以及埃羅替尼的組合分別在每 種抗癌劑的ic3()濃度下有協同作用。在ic3()濃度的吉西 他濱顯示了 11%細胞毒性，以及在IC3()濃度的化合物A與 在IC3()濃度的埃羅替尼的組合顯示了 28%的細胞毒性。 然而，注意到當以ICqn濃度的吉西他濱處理24hrs，接著 以ICQi1濃度的化合物A與ICgn濃度的埃羅替尼的組合處理

〇 U 〇 U 10110847# 單編號 A〇101 第60頁/共90頁 1013264167-0 201242597 72小時的組合使用時，顯示了 78%程度的細胞毒性增加 ，其比加成效果多了 40%的細胞毒性，暗示著在Capanl 細胞中該三種抗癌劑之間具有0. 34的組合指數（C. I )的 協同作用。結果呈現於表8中，並繪圖於第7圖中。 表8-在Capanl細胞中在1(^或1(^。濃度的吉西他濱與化 合物Α (在ICqn或Ι(：ςη濃度）以及埃羅替尼（在ICqn4

ο I) a U 〇 U IC5〇濃度）的組合研究 序 號 抗癌劑 在％ hr的細胞 毒性％ 組合指數 (C.I)値 第1天 第2天 1 吉西他濱IC30 - 11.78 - 2 吉西他濱IC50 - 19.67 - 3 化合物aic30 - 17.94 - 4 化合物aic50 - 28.50 - 5 埃羅替尼ic30 - 17.00 - 6 埃羅替尼rc50 - 27.42 - 7 吉西他濱ic30 化合物aic30 48.00 0.81 8 吉西他濱rc30 化合物aic50 63.81 0,9 9 吉西他濱ic50 化合物aic30 66.01 0.47 10 吉西他濱ic50 化合物aic50 74.07 0.71 11 埃羅替尼ic30 化合物aic30 41.20 0.95 12 埃羅替尼IC30 化合物aic50 47.79 1.75 13 埃羅替尼IC50 化合物aic30 53.68 0.96 14 埃羅替尼IC50 化合物AIC50 67.31 1.02 15 無吉西他濱 化合物A IC3〇+埃羅替尼 1C,η 28.14 - 16 無吉西他濱 化合物A IC3G+埃羅替尼 IC.n 36.12 - 17 吉西他濱IC30 化合物A IC3G+埃羅替尼 ic,n 78.01 0.34 18 吉西他濱IC30 化合物A IC3C)+埃羅替尼 ic.n 84.81 0.39 19 吉西他濱IC50 化合物A IC3Q+埃羅替尼 1C,η 81.66 0.45 20 吉西他濱IC50 化合物A IC3G+埃羅替尼 ΤΓ.Λ 91.06 0.46

[0029]範例 8 蛋白質表現的決定 A)高含量篩選（藉由Cellomics VTI陣列掃瞄的試管内 蛋白質估計） 1〇1腦#單編號A0101 第61頁/共90頁 1013264167-0 201242597 將細胞以7.5 X i〇3個細胞/孔的密度播種於96孔盤中。 播種後2 4 h，以具有1 〇 %血清的新鮮最小必需培養基（ MEM)取代最小必需培養基。以某個特定濃度處理抗癌劑 並將細胞分別培養4小時以及12小時。在每個時間點結 束日守’為了決定蛋白質表現’將該細胞以在PBS中的3. 7 %曱醛（Sigma St. Louis, MO)在室溫下固定1〇分鐘 ，接著以0. 15% TritonX-100 (Sigma St. Louis， MO)透化（permeabilizationMO分鐘。在透化之後， 以5%牛血清白蛋白阻斷細胞達2小時。在阻斷步驟之後 ，加人特異性的一級抗體達1 h。在一級抗體溫育之後， 以Hoechst 3342 (藍色）將核染色’並藉由標記有 Dylight548 (紅色）的二級抗趙而將不同蛋白質（ PEGFRY1171 pEGFRY875 pAKT'pRB以及週期蛋白D)

的一級抗體定位。藉由在Cellomics陣列掃瞄©¥11 HCS 讀取儀（Thermo Fisher Scientific Inc.

Waltham，MA)上掃瞄該培養盤而決定pEGFRY1171 pEGFRY875 pAKT、pRB以及週期蛋白D的免疫螢光。使 用Cel lomics的目標啟動以及分子易位生物演算法來分 析所有的資料點，且定量資料被表示為相較於DMS0控制 組細胞的百分比（％)活化。對於每個二重複的孔計數 1 000個細胞或二十個視野，並將結果呈現為平均±5£。 B)使用陣列掃瞄在Panc-Ι細胞中的不同蛋白質表現的分 析 對於0· 02 μΜ ( IC3Q)或0. 06 μΜ ( IC5())最終濃度劑量 的吉西他濱、〇. 1 μΜ ( IC3())最終濃度劑量的化合物A、 2. 8 μΜ ( IC3() )最終濃度劑量的拉帕替尼、1. 6 μΜ ( 1013264167-0 10110847^ 單_ Α()1ϋ1 * 62 1 7 * 90 1 201242597 IC3〇)最終濃度劑量的埃羅替尼分析上述三種特定抗癌 劑的連續組合。因為在抗癌劑的三重組合中，使用了埃 羅替尼或拉帕替尼’故已稱為三種抗癌劑。處理順序如 下；以IC3()或IC5()的吉西他濱處理Panc-Ι細胞達〇至24 小時。在24小時結束時，將細胞以不參雜的最小必需培 養基沖洗兩次。加入具有10%血清（200 yL/孔）的新 鮮最小必需培養基’接著以化合物A以及埃羅替尼或化合 物A以及拉帕替尼分別處理4小時以及12小時。在4小時以 及1 2小時之後，使用如上所述的相同方法而將每個培養 盤固定並對特定的蛋白質進行染色。 C) 對於pEGFR_Y1173在Pane-1細胞中的蛋白質表現分 析 發現在Pane-Ι細胞中，吉西他濱與化合物A以及拉帕替尼 或化合物A與埃羅替尼的組合在每個化合物（抗癌劑）的 ic3Q濃度下具有協同作用。在ic3()或ic50濃度下的吉西 他濱以及在1C濃度的化合物A沒有顯示PEGFR-YU73的 30 抑制。在1C 濃度下的單一抗癌劑’埃羅替尼以及拉帕 替尼，只分別顯示了 40%以及47%的抑制；而吉西他濱 1(^„與（化合物A以及埃羅替尼）或（化合物A以及拉帕 替尼）任一者的組合在Panc-Ι細胞中在8小時時分別顯示 了59.2&72.5%卩£6?1^-¥1173量的抑制。結果繪圖於 第8a圖中。 D) 對於pEGFR-Y845在Panc-Ι細胞中的蛋白質表現分析 發現在Panc-Ι細胞中，吉西他濱與化合物A以及拉帕替尼 或化合物A與埃羅替尼的組合在每個抗癌劑的IC3()濃度下 10110847#單、編號纖01 第63頁/共90頁 1013264167-0 201242597 具有協同作用。在IC3Q㈣5G濃度下的吉西他濱以及在 濃度的化合物a沒有顯示pEGFR_Y845的抑制。在 IC30濃度下的單一藥物埃羅替尼以及拉帕替尼只顯示了 33%以及31%的抑制，而吉西他濱IC⑽與（化合以及 埃羅替尼）或（化合物A以及拉帕替尼）任一者的組合在

Panc-1細胞中在8小時時分別顯示了 65. 2 & 78.2% PEGFR-Y1845量的抑制。結果繪圖於第81)圖中。 E )對於pAKT-S473在Panc-Ι細胞中的蛋白質表現分析 發現在Panc-Ι細胞中，吉西他濱與化合物a以及拉帕替尼 或化合物A與埃羅替尼的組合在每個抗癌劑的IC濃度下 3 0 具有協同作用。在IC3()濃度下的化合物A、埃羅替尼以及 拉帕替尼在1 2小時時沒有顯示顯著的抑制，而在I [以 3 0 及IC5〇濃度下的吉西他濱顯示了 19. 5%以及25. 7% PAKT-S473的抑制。化合物A與埃羅替尼以及化合物a與 拉帕替尼在IC3()濃度的組合只顯示了 32. 9%以及29. 1% 的抑制’而吉西他濱IC5()與（化合物A或埃羅替尼）或〔 化合物A以及拉帕替尼〕任一者的組合在pane — 〗細胞中在 12小時時分別顯示了62.5&72.2%?人1(1'-3473量的抑 制。結果繪圖於第8b圖中。 F)對於pRB-S780在Panc-Ι細胞中的蛋白質表現分析 發現在Panc-Ι細胞中，吉西他濱與化合物a以及拉帕替尼 或化合物A與埃羅替尼的組合在每個抗癌劑的濃度下 具有協同作用。在IC3Q以及IC5〇濃度下的吉西他濱、埃 羅替尼以及拉帕替尼在12小時時沒有顯示顯著的抑制， 而在〖(^濃度下的化合物A顯示了 25%pRB-S780的抑制 10110847^^'^ A〇101 第64頁/共90頁 1013264167-0 201242597 。化合物A與埃羅替尼以及化合物A與拉帕替尼在IC3()濃 度的組合只顯示了 17%以及23. 5%的抑制，而吉西他濱 IC c n與（化合物A或埃羅替尼）或（化合物A以及拉帕替 尼）任一者的組合在Pane-1細胞中在1 2小時時分別顯示 了卩1^-8480量的53.4&72.1%抑制。結果繪圖於第 8d圖中。 G)對於週期蛋白D在Pane-1細胞中的蛋白質表現分析 發現在Pane-Ι細胞中，吉西他濱與化合物A以及拉帕替尼 或或埃羅替尼的組合在每個抗癌劑的Ic3()濃度下具有協 同作用。當相比於控制組時，在1(^。或1(^。濃度下的吉 西他濱以及在IC3()濃度下的化合物A分別顯示了 27. 7%、 20. 3以及27. 8%的臨界抑制。抗癌劑，埃羅替尼以及拉 帕替尼單獨或與化合物A組合在12小時時沒有顯示任何顯 著的抑制，而吉西他濱ICKn與（化合物A或埃羅替尼）或 (化合物A以及拉帕替尼）任一者的組合在Pane-1細胞中 在12小時時分別顯示了 69.8 & 63.6%週期蛋白D量的抑 制。結果繪圖於第8e圖中。 範例9 切割過的硫胱氨酸蛋白酶-3表現量的分析 執行此研究以評估由吉西他濱、（埃羅替尼或拉帕替尼 )與化合物A組成的三重組合阻斷增殖的機制以及其是否 可誘導胰臟癌細胞中的細胞凋亡。 將細胞以7.5 X 103個細胞/孔的密度播種於96孔盤中。 播種之後24 h，以具有10%血清的新鮮最小必需培養基 取代最小必需培養基。如下述提及的特定濃度在Pane-1 以及Miapaca-2細胞中處理抗癌劑（吉西他濱、埃羅替 1013264167-0 10110847#單編號A〇101 第65頁/共90頁 201242597 尼或拉帕替尼以及化合物A)，並培養48小時。在48小時 結束時，為了決定蛋白質表現，將在96孔盤中的細胞以 800g離心5分鐘。移除培養上清液，並加入2〇〇 的硫 胱氨酸蛋白酶-3分析緩衝液，並將培養盤再次以800g離 心5分鐘。移除上清液’並以10〇 硫胱氨酸蛋白酶-3 裂解緩衝液裂解細胞，並在室溫下在迴轉式振盪器中以 300 rpm振盪30 min。進一步將培養盤於8〇〇g離心10分 鐘’並將90 uL的上清液轉置入新的黑色孔盤中。在9〇 μί的裂解溶液中加入1〇〇 a的硫胱氨酸蛋白酶_3受質， 並於37C溫育30分鐘。在溫育結束時，將培養盤於

Tecan Safire多重模式讀取儀中以485 nm的激發光波 長以及535 nm的發散光波長讀取。 A) 在Panc-1細胞中用於評估硫胱氨酸蛋白酶_3活性的 處理模式 對於0. 02 ( IC3G)以及〇. 〇6 UM ( IC5())最終濃度劑 罝的吉西他濱、〇. 1 μΜ ( IC3())最終濃度劑量的化合物a 、2. 8 μΜ ( IC3())最終濃度劑量的拉帕替尼、丨.6 ( 1匸3〇)最終濃度劑里的埃羅替尼分析上述三種抗癌劑的 連續組合。處理順序如下；以1(：3〇或1(：5〇以吉西他濱處 理Panc-1細胞0至24小時。在24小時結束時，將細胞以 不參雜的MEM培養基沖洗兩次。加入具有1〇%血清（2〇〇 μι/孔）的新鮮MEM，接著以化合物A以及埃羅替尼或化合 物A以及拉帕替尼處理48小時。48小時之後，如上所描述 的以硫胱氨酸蛋白酶-3活性分析法處理該培養盤。 B) 在MiaPaca-2細胞中用於評估硫胱氨酸蛋白酶—3活性 的處理模式 0847#單編號删1 第66頁/共90頁 1013264167-0 201242597 對於0.05 μΜ (IC3〇)以及〇.22 uM (!、）最終濃度劑 量的吉西他濱、G.3 μΜ (IC30)最終濃度劑量的化合物a 、3. 〇 μΜ ( IC30)最終濃度劑量的拉帕替尼、2. 6 μΜ ( IC^)最終濃度劑量的埃羅替尼分析上述三種抗癌劑的 連續組合。處理順序如下；以^⑽或^^以吉西他濱處 理MiaPaCa2細胞〇至24小時。在24小時結束時，將細胞 以不參雜的MEM培養基沖洗兩次。加入具有1〇%血清（ 200 pL/孔）的新鮮MEM，接著以化合物a以及埃羅替尼 或化合物A以及拉帕替尼處理48小時。48小時之後，如上 所描述的以硫胱氨酸蛋白酶-3活性分析法處理該培養盤 C)在Panc-Ι以及MiaPaca-2細胞中對於硫胱氨酸蛋白 酶-3活性的蛋白質表現分析 經由顯著的細胞凋亡誘導，吉西他濱與化合物A並與拉帕 替尼的組合，或化合物A與埃羅替尼的組合在胰臟癌細胞 中增強了吉西他濱的細胞凋亡化學抗性。 在IC3〇或1C5〇濃度以吉西他濱、埃羅替尼、拉帕替尼以 及化合物A的單次處理未顯示顯著的硫胱氨酸蛋白酶_3活 性誘導。當相較於Panc-Ι以及MiaPaca-2細胞中的控制 組時，化合物A與埃羅替尼以及與拉帕替尼在iC濃度的 3 0 組合只顯不了 30%至35%的硫脱氨酸蛋白酶3活化。而吉 西他濱以及化合物Α與埃羅替尼或拉帕替尼在48小時時， 在兩種細胞中都顯示了高達75%至80%硫胱氨酸蛋白酶3 量的顯著誘導。結果繪圖於第9圖中。 【圖式簡單說明】 [麵]第1 a圖提供了在72小時結束時在Pane-1細胞中化合物a 1013264167-0 10110847#單編號A〇1〇l 第67頁/共90頁 201242597 與埃羅替尼的單一以及組合劑量的百分比抑制結果的圖 表。 第lb圖提供了在96小時結束時在Panc-l細胞中化合物A 與埃羅替尼的單一以及組合劑量的百分比抑制結果的圖 表。 第2a圖提供了在72小時結束時在AsPc-l細胞中化合物A 與埃羅替尼的單一以及組合劑量的百分比抑制結果的圖 表。 第2b圖提供了在96小時結束時在AsPc-l細胞中化合物a 與埃羅替尼的單一以及組合劑量的百分比抑制結果的圖 表。 第3a圖提供了在Panc-l細胞中決定化合物a、埃羅替尼 、拉帕替尼以及吉西他濱的ic5Q的圖表。 第3b圖提供了在MiaPaca-2細胞中決定化合物a、埃羅替 尼、拉帕替尼以及吉西他濱的1C 的圖表。

0 U 第4a圖提供了Pane-1細胞中吉西他濱（1C )、化合物 3 0 A ( IC30)以及埃羅替尼（IC3G ) /拉帕替尼（1C )的 30 單一以及組合劑量的百分比細胞毒性結果的圖表。 第4b圖提供了 Pane-Ι細胞中吉西他濱（ic )、化合物 5 0 A ( IC3〇)以及埃羅替尼（IC3()) /拉帕替尼（ic3(])的 單一以及組合劑量的百分比細胞毒性結果的圖表。 第5a圖提供了 MiaPaca-2細胞中吉西他濱（1C )、化 3 0 合物A (ICqn)以及埃羅替尼（ICQn) /拉帕替尼（ICon )的單一以及組合劑量的百分比細胞毒性結果的圖表。 第5b圖提供了MiaPaca-2細胞中吉西他濱（1C )、化

D U 合物A (IC30)以及埃羅替尼（IC3()) /拉帕替尼（IC3() 10110847#單編號A〇101 第68頁/共90頁 201242597 )的單一以及組合劑量的百分比細胞毒性結果的圖表。 第6圖提供了 HPAC細胞中吉西他濱（ic或ic )、化合 3 0 5 0 物A (IC3〇或1C5〇)以及埃羅替尼（IC3()或IC5())的單一 以及組合劑量的百分比細胞毒性結果的圖表。 第7圖提供了 CAPAN細胞中吉西他濱（1C或1C )、化 3 0 5 0 合物A (IC3()或IC5{))以及埃羅替尼（IC或1(：)的單

〇 U 〇 U 一以及組合劑量的百分比細胞毒性結果的圖表。 第8a圖提供了 Pane-1細胞中以吉西他濱（ic )與化合 30 物A +埃羅替尼或與化合物A+拉帕替尼的組合在8小時時抑 〇 制pEGFR- Y1173的圖表。 第8b圖提供了 Pane-Ι細胞中以吉西他濱（ic或1C ) 與化合物A+埃羅替尼或與化合物A+拉帕替尼的組合在8小 時時抑制pEGFR-Y845的圖表。 第8c圖提供了Pane -1細胞中以吉西他濱（ic 或1C ) 30 5 0 與化合物A+埃羅替尼或與化合物A +拉帕替尼的組合在12 小時時抑制pAKT - S473的圖表。 第8d圖提供了 Pane-Ι細胞中以吉西他濱（ic 或1C ) Ο 30 50 與化合物A+埃羅替尼或與化合物A +拉帕替尼的組合在12 小時時抑制PRB-S780的圖表。 第8e圖提供了 Pane-Ι細胞中以吉西他濱（1C 或1C ) 3 0 5 0 與化合物A+埃羅替尼或與化合物A +拉帕替尼的組合在12 小時時抑制週期蛋白D的圖表。 第9圖提供了 Pane-Ι細胞以及MiaPaca-2細胞中以吉西 他濱（IC3()或IC5())與化合物A+埃羅替尼或與化合物A + 拉帕替尼的組合在48小時時活化硫胱氨酸蛋白酶3的圖表 101麵7夢單· A0101 第69頁/共90頁 1013264167-0 201242597 【主要元件符號說明】 [0031]無 HH1084#單編號皿01 第70頁/共90頁 1013264167-0

Claims (1)

1. 201242597 七、申請專利範圍： 1 . 一種醫藥組合f包含選自分子式I化合物的一 C D K抑制劑 ; OH 〇

   其中Ar是一苯基，其為未取代的或被1、2或3個相同或不 同的取代基取代，該取代基選自：A素；硝基、氰基、 C,-C厂烷基、三氟甲基、羥基或^-。-烷氧基；或其藥 14 14 學可接受的鹽類或溶劑化物；以及能夠抑制表皮細胞生長 因子受體（EGFR)激酶活性的一化合物。 2 .如申請專利範圍第1項所述的醫藥組合，其中在該分子式I 化合物中，該苯基由1、2或3個相同或不同的取代基取代 ，該取代基選自：氣、溴、氟或碘、q-c,-烷基或三氟曱 1 4 基；或其藥學可接受的鹽類或溶劑化物。 3 .如申請專利範圍第2項所述的醫藥組合；其中在該分子式I 化合物中，該苯基被氣取代。 4 .如申請專利範圍第3項所述的醫藥組合；其中該分子式I化 合物是（ + )-反式- 2- (2 -氣-苯基）-5，7 -二經基-8-(2 -經 基-甲基-1-甲基比嘻咬-3 -基）-苯並派D南-4-嗣鹽酸鹽 (化合物A )。 5 .如申請專利範圍第2項所述的醫藥組合；其中在該分子式I 10110847#單編號廳01 第71頁/共90頁 1013264167-0 201242597 化合物中，該苯基是被2個不同的取代基取代的一取代基 ’該2個不同的取代基選自氯以及三氟甲基。 •如申請專利範圍第5項所述的醫藥組合；其中該分子式I化 合物是（ + )-反式-3-[2[(2-氣-4-三氟甲基-苯基）一5, 7_ 二羥基-8-(2-羥基曱基-1-甲基-吡咯啶—3 —基）_笨並哌 喃-4-酮鹽酸鹽（化合物b)。 .如申請專利範圍第1項所述的醫藥組合，其中能夠抑制表 皮細胞生長因子受體（EGFR)激酶活性的該化合物選自 埃羅替尼或拉帕替尼。 .如申請專利範圍第7項所述的醫藥組合，其中能夠抑制表 皮細胞生長因子受體（EGFR)激酶活性的該化合物是埃 羅替尼。 .如申請專利範圍第7項所述的醫藥組合，其中能夠抑制表 皮細胞生長因子受體（EGFR)激酶活性的該化合物是拉 帕替尼。 10 ·如申請專利範圍第1項所述的醫藥組合；其中所述組 包含吉西他濱》 根據申請專利範圍第2項所述的醫藥組合； 更包含吉西他濱。 根據申請專利第4項所述的醫藥組合；其中所述組合 更包含吉西他濱。 13.如申請專利範圍第6項所述的醫藥組合；其中所述組合更 包含吉西他濱。 .如申請專利範圍第7項所述的 包含吉西他濱。 15 .如申請專利範圍第1項所述的 10110847#單編號 A0101 更 11 12 其中所述組合 醫藥組合；其中所述組合更 醫藥組合；其中所述組合適 第72頁/共90頁 1013264167-0 201242597 用於治療胰臟癌。 16 .如申請專利範圍第10項所述的醫藥組合；其中所述組合適 用於治療胰臟癌。 17 . —種用於在一個體中治療胰臟癌的方法，包含將一醫療有 效量的一CDK抑制劑與一醫療有效量的能夠抑制EGFR激酶 活性的一化合物結合投藥至所述個體，該CDK抑制劑選自 分子式I化合物； OH 〇

   其中Ar是一苯基，其為未取代的或被1、2或3個相同或不 同的取代基取代，該取代基選自：齒素；硝基、氰基、 C,-C,-烷基、三氟甲基、羥基烷氧基；或其藥 14 14 學可接受的鹽類或溶劑化物。 18 .如申請專利範圍第17項所述的方法；其中在該分子式I化 合物中，該苯基被氣取代。 19 .如申請專利範圍第18項所述的方法；其中該分子式I化合 物是（ + )-反式-2-(2-氣-苯基）-5, 7-二羥基-8-(2-羥基 -甲基_1_甲基_σ比洛咬_3_基）-苯並π底喃_4_洞鹽酸鹽（ 化合物A )。 20 .如申請專利範圍第17項所述的方法；其中在該分子式I化 10110847#單編號 A_ 第73頁/共90頁 1013264167-0 201242597 合物中，該苯基是被2個不同取代基取代的一取代基，該2 個不同取代基選自氣以及三氟曱基。 21 .如申請專利範圍第20項所述的方法；其中該分子式I化合 物是（ + )-反式_3-[2[(2 -氯-4-三氟甲基-苯基）- 5，7 -二 羥基-8-(2-羥基甲基-1-甲基-吡咯啶-3-基）-苯並哌喃 -4-酮鹽酸鹽（化合物B )。 22 .如申請專利範圍第17項所述的方法，其中能夠抑制表皮細 胞生長因子受體（EGFR)激酶活性的該化合物選自埃羅 替尼或拉帕替尼。 23 .如申請專利範圍第22項所述的方法其中能夠抑制表皮細胞 生長因子受體（EGFR)激酶活性的該化合物是埃羅替尼 〇 24 .如申請專利範圍第22項所述的方法其中能夠抑制表皮細胞 生長因子受體（EGFR)激酶活性的該化合物是拉帕替尼 〇 25 . —種用於在一個體中治療胰臟癌的方法，包含將一醫療有 效量的一CDK抑制劑與一醫療有效量的能夠抑制EGFR激酶 活性的一化合物結合投藥至所述個體，該CDK抑制劑選自 分子式I化合物； OH 〇

   10110847^^'^^ A〇101 ^ 74 1 / * 90 I 1013264167-0 201242597 其中Ar是-苯基，其為未取代的或被l、印個相同或不 同的取代基取代，該取代基選自：齒素；石肖基、氛基、 W烧基、三氟甲基、經基或^今烧氧基；或其藥 學可接受的鹽類或溶劑化物。 26 ·如申請專利範圍第25項所述的方法；其中在該分子幻化 合物中’該苯基被氣取代。 27 ·如申請專利範圍第26項所述的方法；其中該分子式 物是⑴-反式-2-(2-氣-苯基）_57一二經基1(2_經基 甲基1甲基叫咬-3-基）_苯並娘喃_4,鹽酸鹽（ Ο 化合物A)。 28 .如申請專利範圍第25項所述的方法；其中在該分子幻化 合物中’該苯基是被2個不同取代基取代的一取代基，該2 個不同取代基選自氣以及三氟甲基。 29 .如申請專利範圍第28項所述的方法；其中該分子式工化人 物是⑴-反式-3-[2[(2 —氣+三敦甲基_苯基）_5，卜二 羥基-8-(2-經基甲基-卜甲基_鱗咬_3_基）一苯並旅喃 _4-酮鹽酸鹽（化合物。。 ◎ 30 .如申請專利範圍第25項所述的方法，其中能夠抑制表皮細 胞生長因子受體（EGFR)激酶活性的該化合物選自埃羅 替尼或拉帕替尼。 .如申請專利範圍第30項所述的方法，其中能夠抑制表皮细 胞生長因子受體（EGFR)激酶活性的該化合物是埃羅替 尼。 32.如申請專利範圍第30項所述的方法，其中能夠抑制表皮细 胞生長因子受體（EGFR)激酶活性的該化合物是拉 尼。 _847产單編號_ 第75頁/共90頁 1013264167-