TW201420596A - 基於乙縮醛之用於製造巨環縮肽的方法及新穎中間物 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於採用乙縮醛中間物化學製造式I之縮肽之方法或製程，□其中各符號具有說明中所定義之含義；係關於新穎中間物及其製造以及相關之發明實施例。

Description

基於乙縮醛之用於製造巨環縮肽的方法及新穎中間物
本發明係關於製造巨環縮肽之方法或製程，係關於新穎中間物及其製造以及相關之發明實施例。
環縮肽在藥理學方面具有多種用途。作為實例，WO2009/024527中所揭示之縮肽可用於治療各種疾病。例如，WO2009/024527中所提及之式II之化合物可用於治療及預防發炎性及/或過度增生性及瘙癢性皮膚疾病(例如，異位性皮膚炎、牛皮癬、膿皰型牛皮癬、酒渣鼻、瘢痕瘤、肥厚性瘢痕、痤瘡、內塞頓症候群(Netherton’s syndrome)或其他瘙癢性皮膚病(例如，結節性癢疹、老年人之未指明疥瘡))以及具有上皮屏障功能障礙之其他疾病(例如，老化皮膚)。
先前自藍細菌念珠藻(cyanobacterium Nostoc)分離之Nostopeptin BN920亦自微胞藻屬(Microcystis)分離出。Nostopeptin BN920抑制IC50值為31nM之膠凝乳蛋白酶(參見J.Nat.Prod.68(9),1324-7(2005))。
該等化合物可藉由分別與包含所謂的ahp次結構(ahp：3-胺基-6-羥基-六氫吡啶-2-酮)及相應的脫氫ahp次結構(脫氫ahp：3-胺基-3,4-二氫-1H-吡啶-2-酮)(本文中亦稱為「脫水物」)之其他縮肽一起發酵(使 用番紅軟骨黴菌(chondromyces crocatus)，黏液細菌(myxobacteria))來產生。因此，關於該等化合物中之任何單一化合物之發酵產率相當低。
迄今，該等化合物之合成係基於溶液化學法或在共同待決的PCT申請案第PCT/IB2012/051977號中藉由固相及溶液肽化學之組合。
關鍵步驟係ahp次結構之形成。根據公開之先前技術，此結構主要係藉由經由不穩定性醛中間物氧化處理氧化閉合巨環內酯環中之開鏈前體胺基酸2-胺基-5-羥基-戊酸來形成(例如參見Yokohama等人，Tetrahedron 61(2005)，第1459-80頁，compound 23；Yokohama等人，Pept.Sci.38(2002).第33頁至第36頁；及Yokohama等人，Tetrahedron Lett.42(2001),5903-8)。
醛太不穩定而無法分離出。因此，不推薦其直接使用及合成。
亦已知醛衍生物(例如縮醛)具體而言在縮醛及(尤其游離)羧酸官能基同時存在之情形下或在(即使僅輕微)酸性條件下不穩定。
業內需要尋找更高產製程及對於包含ahp部分之巨環內酯環系統之製造易於處置之製程。
現已發現可用2-胺基-5-羥基戊酸結構單元置換前體並代之使用其呈縮醛形式之5-側氧基-類似物。
因此，本發明係關於允許獲得具有增加之產率及/或呈良好純度且具有較少量步驟之該等環縮肽之製程或方法。
鑒於在具有許多可能異構物之複雜分子之合成中的許多風險(例如，差向異構、互變異構及諸如此類)，已可找到較佳地包含固相肽合成與溶液中之反應之混合之製造製程，其允許以良好產率及/或所需立體異構純度(尤其兩者皆有)產生式I環縮肽，且其避開氧化前體分 子中之羥基之步驟。藉由將副產物(尤其脫氫ahp次結構及/或包含ahp之期望產物之類似物(具有五員環而非ahp))轉化成期望之最終產物可降低該等副產物之量且甚至可提高產率。目前為止，業內尚未關注利用固相肽合成之合成。另外，氧化步驟之消除容許代替製備昂貴且困難之經保護變化形式(例如第三丁基醚或其類似物)使用N-Me-酪胺酸或類似物。
(i/a)在第一實施例中，本發明係關於製備式I之環縮肽化合物之方法或製程，
尤其式IA之環縮肽化合物之方法或製程，
其中A1係具有末端羧基或胺甲醯基之胺基酸(尤其天冬醯胺或麩醯胺酸)之二價部分，且在式I中在其右手側處經由羰基(較佳地其α-羧基之羰基)結合至分子之其餘部分；或係C1-8-烷醯基或磷酸化之羥基-C1-8-烷醯基； X係經由A1之N結合且係醯基，或者若A1係C1-8-烷醯基或磷酸化之羥基-C1-8-烷醯基，則X不存在；R2係C1-8-烷基，尤其係甲基；R3係胺基酸、尤其白胺酸、異白胺酸或纈胺酸之側鏈；R5係胺基酸、較佳地苯丙胺酸、白胺酸、異白胺酸或纈胺酸之側鏈；R6係羥基胺基酸、尤其酪胺酸之側鏈；R7係胺基酸、較佳地胺基酸白胺酸、異白胺酸或纈胺酸之側鏈；且Y係氫或C1-8-烷基；或其鹽，該方法包含使式II之化合物去保護，
尤其式IIA之化合物，
其中醛保護基團Rk及Rl彼此獨立地係未經取代或經取代之烷基或與兩個結合O原子及兩個O原子所結合之碳原子一起形成未經取代或經取代之環(Rk及Rl然後較佳地形成未經取代或經取代之伸烷基橋，尤其未經取代或經取代之伸乙基，例如-CH2-CH2-或-CH2-CH2-CH2-)，Y係如針對式I之化合物所定義，且X*、A1*、R2*、R3*、R5*、R6*及R7*分別對應於式I中之X、A1、R2、R3、R5、R6及R7，但前提係該等部分上之反應性官能基(例如胺基、亞胺基、羥基、羧基、巰基、甲脒基、胍基、O-膦醯基(-O-P(=O)(OH)2))至少若可參與不期望之副反應則係以經保護形式存在，從而產生式I、尤其IA之化合物；且若需要，則將式I或尤其IA之游離化合物轉化成鹽，將式I之化合物之鹽轉化成式I或尤其IA之化合物之不同鹽或轉化成式I或尤其IA之游離化合物，及/或將式I或尤其IA之化合物之脫水物類似物及/或五員環類似物轉化成式I或尤其IA之相應化合物。
(ii/a)本發明之另一實施例係關於上述方法或製程，其另外包含藉由固相肽合成(尤其對於下文所給式III或III*或尤其IIIA或IIIA*之前 體之合成)及溶液相合成(尤其剛剛所提及之化合物至最終產物)之組合自相應起始胺基酸及側鏈前體製造式II或尤其IIA之化合物。
(i/b)本發明之再一實施例係關於如上所述之方法或製程，其對於上文式II之化合物之合成進一步包含在攜載N末端胺基及C末端羧基之式II或尤其式IIA之化合物之直鏈前體肽之內醯胺化(巨環內醯胺化)下進行環化，此係在允許自該胺基及該羧基形成醯胺鍵之反應條件下、較佳地使用溶液相化學進行。
(ii/b)本發明之另一實施例係關於根據前述段落(i/b)之方法或製程，其中直鏈前體肽具有式III，
尤其IIIA，
其中Rk、Rl、X*、A1*、R2*、R3*、R5*、R6*及R7*係如上文針對式II之化合物所定義，其可自固相肽合成直接獲得(例如如在步驟(iii/b)下所闡述)或藉由自相應式III*、尤其IIIA*之化合物去保護而獲得，
其中Rk、Rl、X*、A1*、R2*、R3*、R5*、R6*及R7*係如上文針對式II之化合物所定義，且其中Prot**部分中之每一者皆係可較佳地必須在不同於(iii/b)下之裂解條件之條件下藉由使經保護胺基去保護而去除之保護基團，尤其每一者皆係如針對式IV之化合物所定義之芳基烷基胺基保護基團。
(iii/b)另一實施例係關於根據前述段落(ii/b)之方法或製程，其對於式III或尤其IIIA之化合物或式III*、尤其IIIA*之化合物之合成進一步包含裂解式IV之化合物，
尤其式IVA之化合物，
其中Rk、Rl、X*、A1*、R2*、R3*、R5*、R6*及R7*係如上文針對式II之化合物所定義，L係可裂解連接體，RES係固體樹脂，n係不包括0之自然數，且Z係式NHProt*之經保護胺基，其中Prot*係保護基團，其在裂解反應之前或期間去除或在其後進一步去除，從而產生式III、尤其IIIA之化合物；或Z係式N(Prot**)2之經保護胺基，其中每一Prot**皆係胺基保護基團，其可(具體而言僅可)在不同於裂解反應條件之條件下去除，尤其每一者皆係芳基烷基胺基保護基團，從而產生式III*、尤其IIIA*之化合物。
(iv/b)本發明之另一實施例係關於根據前述段落(iii/b)之方法或製程，其對於式IV、尤其IVA之化合物之合成進一步包含使式V之胺基酸
尤其式VA之胺基酸，
其中Rk及Rl係如上文針對式II之化合物所定義，且Z係式NHProt*之經保護胺基，其中Prot*係保護基團，其可(且係)在(iii/b)下之裂解反應之前或期間去除或在隨後進一步去除；或Z係式N(Prot**)2之經保護胺基，其中每一Prot**皆係胺基保護基團，其可在不同於(iii/b)下之裂解反應條件之條件下去除，尤其每一者皆係芳基烷基胺基保護基團；或該式V或VA胺基酸之活化衍生物，與式VI之化合物，
尤其式VIA之化合物偶合，
其中X*、A1*、R2*、R3*、R5*、R6*及R7*係如上文針對式II之化合物所定義，L係可裂解連接體，RES係固體樹脂，且n係不包括0之自然數。
(v/b)本發明之再一實施例係關於根據前述段落(iv/b)之方法或製程，其對於式VI、尤其VIA之化合物之合成進一步包含使式VII之胺基酸，
尤其式VIIA之胺基酸，
其中R5*係如上文針對式II之化合物所定義，且Prot***係可選擇性裂解除去而不影響所存在之其他保護基團且偶合產物保留在樹脂上之胺基保護基團，或該胺基酸之反應性衍生物，與式VIII之化合物，
尤其式VIIIA之化合物偶合，
其中X*、A1*、R2*、R3*、R6*及R7*係如上文針對式II之化合物所定義，L係可裂解連接體，RES係固體樹脂，且n係不包括0之自然數；及去除保護基團Prot***。
(vi/b)在再一實施例中，本發明係關於根據前述段落(v/b)之方法或製程，其對於式VIII、尤其VIIIA之化合物之合成進一步包含使式IX之胺基酸，
尤其式IXA之胺基酸，
其中R6*及Y係如上文針對式II之化合物所定義，且Prot***係可選擇性裂解除去而不影響所存在之其他保護基團且偶合產物保留在樹脂上之胺基保護基團，或該胺基酸之反應性衍生物，與式X之化合物，
尤其式XA之化合物偶合，
其中X*、A1*、R2*、R3*及R7*係如上文針對式II之化合物所定義，L係可裂解連接體，RES係固體樹脂，且n係不包括0之自然數；及去除保護基團Prot***。
(vii/b)本發明之另一實施例係關於根據前述段落(vi/b)之方法或製程，其對於式X、尤其XA之化合物之合成進一步包含使式XI之胺基酸，
尤其式XIA之胺基酸，
其中Prot***係可選擇性裂解除去而不影響所存在之其他保護基團且產物保留在樹脂上之胺基保護基團，且R7*係如上文針對式II之化合物所定義，或該胺基酸之反應性衍生物，與式XII之化合物之羥基，
尤其式XIIA之化合物之羥基反應，
其中X*、A1*、R2*及R3*係如上文針對式II之化合物所定義，L係可裂解連接體，RES係固體樹脂，且n係不包括0之自然數；及去除保護基團Prot***。
(viii/b)在另一實施例中，本發明係關於根據前述段落(vii/b)之方法或製程，其對於式XII、尤其XIIA之化合物之合成進一步包含使由式XIII表示之樹脂結合二肽，
尤其式XIIIA表示之樹脂結合二肽，
其中Prot****係可選擇性裂解除去而不影響存在於如上文所定義式II之化合物中之其他保護基團且產物保留在樹脂上之保護基團，R2*及R3*係如上文針對式II之化合物所定義，L係可裂解連接體，RES係固體樹脂，且n係不包括0之自然數；在去除保護基團Prot****之後經由可由此獲得之游離胺基，與式XIV之胺基酸，
具體而言式XIV*之胺基酸
更具體而言式XIV**之胺基酸偶合，
其中X**係胺基保護基團或係X*，且其中X*及A1*係如上文針對式II之化合物所定義，或與該酸之反應性衍生物偶合；且若X**係胺基保護基團，則去除該胺基保護基團X**以產生式II之衍生物，其中存在H而非X*，並使用相應酸X*-OH或該酸之反應性衍生物使所得胺基與醯基X*偶合，其中X*係如上文針對式II之化合物所定義。
(ix/b)本發明之再一實施例係關於根據前述段落(viii/b)之方法或製程，其對於式XIII、尤其XIIIA之化合物之合成進一步包含使由式XV表示之樹脂結合胺基酸，
尤其式XVA表示之樹脂結合胺基酸，
其中R3*係如上文針對式II之化合物所定義，L係可裂解連接體，RES係固體樹脂，且n係不包括0之自然數；與式XVI之胺基酸，
尤其式XVIA之胺基酸偶合，
其中Prot****係可選擇性裂解除去而不影響所存在之其他保護基團且產物保留在樹脂上之保護基團，且R2*係如上文針對式II之化合物所定義，或與該胺基酸之反應性衍生物偶合。
(x/b)本發明之另一實施例係關於根據前述段落(ix/b)之方法或製程，其對於獲得式XV、尤其XVA之樹脂結合胺基酸進一步包含使式XVII之胺基酸，
尤其式XVIIA之胺基酸，
其中R3*係如上文或下文中針對式II之化合物所定義，且Prot***係可選擇性裂解除去而不影響所存在之其他保護基團且產物保留在樹脂上之胺基保護基團；或該式IX胺基酸之反應性衍生物偶合至結合至固體樹脂RES之可裂解連接體L，及去除保護基團Prot***。
(i/c)本發明之另一實施例係關於根據前述段落(i/a)至(x/b)中任一段落之方法或製程，其中符號A1、R2、R3、R5、R6、R7、X及Y或相應的未經保護或經保護部分R2*、R3*、R5*、R6*、R7*、X*及Y經選擇，以使得在式I之所得化合物或其鹽中，A1係L-麩醯胺酸之二價基團，其經由其α-羧基之羰基結合至式I中A1右側之胺基且經由其α-胺基結合至X，或係2S-(2-羥基-3-膦醯氧基)-丙醯基；R2係甲基；R3係異丙基、異丁基(任何地方使用時，皆為2-甲基-正-丙基)，尤其係異丁基；R5係第二丁基或苄基，尤其係第二丁基；R6係4-羥基苄基；R7係異丙基或第二丁基(任何地方使用時，皆為1-甲基-正-丙基)，尤其係第二丁基；X係乙醯基或異丁醯基，或者若A1係2S-(2-羥基-3-膦醯氧基)-丙醯基，則X不存在，且Y係甲基。
(i/d)在另一具體實施例中，本發明係關於將自式II、尤其IIa之化 合物獲得的自上文式II之化合物獲得或具體而言具有如前述段落(i/c)中所定義之取代基之給定式I之化合物的脫水物轉化成相應式I之化合物之方法或製程，其中該脫水物具有式XVIII，
尤其XVIIIA，
其中Y、X、A1、R2、R3、R5、R6及R7係如上文針對式I之化合物所定義；或尤其使式I之化合物及其相應脫水物及/或其具有五員環而非式I中之ahp結構之相應半胺縮醛類似物之混合物之平衡移位的方法或製程，該相應半胺縮醛類似物亦作為副產物形成且具有式XIX，
尤其式XIXA， 其中Y、X、A1、R2、R3、R5、R6及R7分別係如上文針對式I之化合物所定義；以有利於式I之化合物，該方法或製程包含使用酸水溶液作為反應性溶劑來驅動反應。此方法尤其除上下文所闡述之其他製程或方法以外使用，以增加產率或將式V、尤其VA之化合物及/或具有五員環而非式I中之ahp結構之類似物再轉化成式I之相應化合物。
所闡述用於將脫水物及/或五員環類似物(總與期望ahp環有關)轉化成式I或尤其IA之期望化合物(例如，將來自實例3B之化合物A脫水物轉化成化合物A)之方法使得能夠直接合成此類化合物。到目前為止，必須避開作為最後步驟之酸處理，以避免產物脫水。
(i/e)本發明之另一實施例係關於根據前述段落(i/d)之方法，其中該酸係羧酸，尤其係鹵基取代之C1-8烷酸，更尤其係三氟乙酸或三氯乙酸。
(i/f)在再一實施例中，本發明係關於式XX之化合物，
尤其式XXA之化合物，
其中Rk及Rl係如上文針對式II之化合物所定義，Y係如上文在第一情況中針對式I之化合物所定義或具體而言如上文在(i/c)下所定義，且X*、A1*、R2*、R3*、R5*、R6*及R7*分別對應於式I中如上文或下文或在段落(ia)中或尤其在上文給定(i/c)下所定義之X、A1、R2、 R3、R5、R6及R7，然而前提係該等部分上之反應性官能基較佳地以經保護形式存在。
(i/g)在另一實施例中，本發明係關於選自由以下組成之群之新穎化合物：式II、III、III*、IV及V且尤其式IIA、IIIA、IIIA*、IV及VA之化合物，再更尤其係關於由以下(尤其鏡像異構富集或純的)化合物組成之群：化合物2*、化合物3*、化合物5*、較佳地化合物2A*、化合物3A*、化合物4A*、化合物5A*，尤其呈實例中所給形式：化合物2、化合物3、化合物5、化合物6、化合物7、化合物8、化合物A、化合物9及化合物10及鏡像異構富集或尤其純的化合物4，以及化合物12、14、15、16及17。亦較佳者係下文所給式12*、12A*、14*、14A*、15*、15A*、16*、16A*、17*或17A*之化合物，其中Rl及Rk彼此獨立地係1-芳烷基，例如1-(C6-C12芳基)-C1-C7烷基，更尤其苄基，以及相應化合物，其中Rl及Rk一起形成未經取代或經取代之伸烷基，尤其-CH2-CH2-或-CH2-CH2-CH2-。
(i/h)在再一實施例中，本發明係關於合成上文所提及之式V、尤其式VA之化合物之方法或製程，其係根據以下達成：(a)(尤其)在合成式V之化合物之情形下，其中Rk及Rl一起形成未經取代或經取代之低碳數伸烷基橋，尤其-CH2-CH2-或-CH2-CH2-CH2-，係根據以下反應圖達成，另一選擇為經由路徑(i)1*->2*->3*、(ii)1*->2*->4*->5*或(iii)1*->2*->3*->5*達成：
(其中Rk、Rl具有剛剛所指示之含義，且尤其在化合物1*、2*及3*係如針對式V之化合物所定義之N(Prot**)2中，Z具有上文針對式V之化合物所提及之含義，尤其1-(C6-C12-芳基)-C1-C6-烷基，尤其苄基，且在化合物5*係如針對式V之化合物所定義之NHProt*中，Prot*尤其係醯基保護基團，例如茀-9-基-甲氧基羰基，且式3*及5*之化合物各自對應於式V之化合物；或尤其來獲得式VA化合物，此係根據以下反應圖達成，另一選擇為經由路徑(i)1A*->2A*->3A*、(ii)1A*->2A*->4A*->5A*或(iii)1A*->2A*->3A*->5A*達成：
(其中Rk、Rl具有剛剛所指示之含義，且Z及Prot*具有上文針對式V之化合物所提及之含義，尤其化合物1A*、2A*及3A*中之Z係1-(C6-C12-芳基)-C1-C6-烷基胺基，尤其苄基胺基，且化合物5A*中之Prot*係醯基保護基團，例如茀-9-基-甲氧基羰基，其中式3A*及5A*之化合物各自對應於式VA化合物；其中1*或1A*至2*或2A*之反應係在酸(例如甲苯磺酸)存在下，在(例如)分子篩存在下例如在適當溶劑(例如二氯甲烷)中利用未經取代或經取代之低碳數烷二醇、尤其乙二醇之縮醛形成反應；2*或2A*至3A或3A*之反應係在鹼(例如鹼金屬氫氧化物，例如LiOH)存在下，在醚(例如二噁烷)及水中水解；或在羧基及胺基去保護下之2*、尤其2A*至4*、尤其4A*之替代反應係藉由以下達成：在適當溶劑(例如醇，例如甲醇、乙醇或異丙醇)中進行氫化，例如催化氫化，例如利 用貴金屬觸媒(例如在諸如氧化鋁或碳等載體上之Pd或Pt)，隨後在(例如)醯化條件下或在如下文針對偶合至胺基之胺基酸或酸所提及之偶合劑存在下，尤其使用(例如Fmoc-)HOSU-酯、三級鹼(例如三乙胺)及適當溶劑(例如水及/或乙腈)，再引入胺基保護基團Prot**、尤其醯基保護基團(例如茀-9-基-甲氧基羰基)；其中另一選擇為，式4*、尤其4A*之化合物可藉由如剛剛所提及之催化氫化自式3*、尤其3A*之化合物獲得；且其中化合物1*或1A*可藉由Rodriguez及Taddei,Synthesis 2005,3，第493頁至第495頁中所提及之方法獲得或以類似於其之方法獲得)；或(b)(尤其在合成上文所提及之式V、尤其VA之化合物之情形下，其中Rk及Rl中之每一者皆係未經取代或經取代之烷基部分，尤其1-芳烷基，例如1-(C6-C12芳基)-C1-C7烷基，更尤其苄基)，係根據以下反應圖達成：
(其中Rk、Rl具有剛剛所指示之含義，且Prot*具有上文針對式V 之化合物所提及之含義，尤其在化合物17*中，Prot*係醯基保護基團，例如茀-9-基-甲氧基羰基，且式17*化合物對應於式V之化合物；或尤其來獲得式VA化合物，此係根據以下反應圖來達成：
(其中Rk、Rl具有剛剛所指示之含義，且Prot*具有上文針對式V之化合物所提及之含義，尤其在化合物17A*中，Prot*係醯基保護基團，例如茀-9-基-甲氧基羰基，且式17A*化合物對應於式VA化合物；其中較佳地，在適當溶劑(例如二氯甲烷)中利用溴化劑(例如三甲基溴矽烷)使11與12或12A*反應，隨後添加式Rk-OH及RI-OH之化合物(其較佳地相同)及混合物或三級鹼(例如吡啶及N,N-二甲基胺基吡啶)及酸酐(例如乙酸酐)；在適當溶劑(例如酸醯胺，例如二甲基甲醯胺)、強鹼(例如第三丁氧鉀)中使12*或12*之化合物與式13*或13A*之化合物反應；在適當溶劑(例如醇，例如乙醇)中利用鹼金屬氫氧化物(例如氫氧化鉀)水解所得式14*、尤其14A*之化合物，且隨後升溫以脫羧，從而得到式15*、尤其15A*之化合物，在例如pH 7至10範圍內之適當緩衝液中，例如在經鹼金屬氫氧化物(例如氫氧化鈉)滴定之水性檸檬酸鹽緩衝液中，利用醯化酶，(若需要)在輔助因子(例如氯化 鈷)存在下去除乙醯基，從而得到式16*、尤其16A*之化合物；並在適當溶劑(例如水及/或乙腈)中利用適當試劑(例如Fmoc-OSU)引入保護基團Prot**(例如醯基，例如9-茀基甲氧基羰基)。
以下定義(亦或上文已包括之定義)可替代上下文本發明實施例中所用之更一般術語，以定義本發明之其他實施例，其中一個、兩個或更多個或所有一般術語可由更特定術語來替代，以定義以下該等本發明實施例：在所有反應中，若適當或需要，則皆可使用保護性氣體，例如氮或氬，且溫度係如熟習此項技術者所知，例如在-25℃至各別反應混合物之回流溫度之範圍內，例如-20℃至正90℃。
若Rk及Rl各自彼此獨立地係未經取代或經取代之烷基，則此尤其係指C1-C7-烷基或尤其1-芳烷基，例如1-(C6-C12芳基)-C1-C7烷基，更尤其苄基。
若Rk及Rl與兩個結合O原子及兩個O原子所結合之碳原子一起形成未經取代或經取代之環，則Rk及Rl然後較佳地形成未經取代或經取代之伸烷基橋，尤其未經取代或經取代之伸乙基，例如-CH2-CH2-)，其中取代基可較佳地選自C1-C7-烷基，尤其兩個該等取代基，例如甲基、乙基、正丙基或異丙基。
具有末端羧基或胺甲醯基之胺基酸之二價部分較佳地係α-胺甲醯基或羧基-C1-8取代之胺基酸，尤其係天冬醯胺或麩醯胺酸之二價部分，且在式I中在其右手側處經由羰基(較佳地其α-羧基之羰基)結合至分子之其餘部分。
C1-8-烷醯基或磷酸化之羥基-C1-8-烷醯基(攜載羥基以及膦醯基(-O-P(=O)(OH)2)之C1-8-烷醯基)，A1係(例如)2,3-二羥基-丙醯基(較佳地呈S型)或2-羥基-3-膦醯基-丙醯基(較佳地呈S型)。
在任何地方提及時，R2及R2*皆係C1-8-烷基、尤其甲基。
R3係胺基酸、尤其天然胺基酸之側鏈。較佳地，其係可為具支鏈或直鏈之C1-8烷基。最尤其地，C1-8烷基係正-(2-甲基)丙基(異丁基)、正-(1-甲基)丙基(第二丁基)或甲基，即，攜載該部分之胺基酸係白胺酸、異白胺酸或纈胺酸。
若存在必須阻止其參與反應之官能基，則R3*係呈經保護形式之相應側鏈。較佳地，其係可為具支鏈或直鏈之C1-8烷基，尤其如前述段落中所定義。
「胺基酸之側鏈」可選自任何部分，例如，單環或多環、直鏈、飽和、不飽和(例如，具有共軛雙鍵)或部分飽和的有機部分，例如，在基礎結構中具有最多20個碳原子及0個至5個獨立選自N、O及S且置換相應數量之碳原子之雜原子，且可經最多三個選自胺基、亞胺基、羥基、羧基、胺甲醯基、巰基、甲脒基、胍基、O-膦醯基(-O-P(=O)(OH)2)之部分取代。較佳地，側鏈係選自彼等20種標準α-胺基酸：精胺酸、組胺酸、離胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、半胱胺酸、甘胺酸、丙胺酸、白胺酸、異白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、酪胺酸、纈胺酸及另外脯胺酸(因而具有包括α-胺基之內部環化)。
對於胺基酸，在本發明中依照下表使用其名稱或常規的三字母代碼：
R5係胺基酸、較佳地標準胺基酸之側鏈。較佳地，其係可為具支鏈或直鏈且未經取代或經苯基取代之C1-8烷基。最尤其地，其係苄基、正-(2-甲基)丙基、異丁基或甲基，即，攜載該部分之胺基酸係苯丙胺酸、白胺酸、異白胺酸或纈胺酸。
R6係羥基胺基酸、尤其酪胺酸之側鏈。
R7係胺基酸、尤其天然胺基酸之側鏈。較佳地，其係可為具支鏈或直鏈之C1-8烷基。最尤其地，其係正-(2-甲基)丙基(異丁基)、正-(1-甲基)丙基(第二丁基)或甲基，即，攜載該部分之胺基酸係白胺酸、異白胺酸或纈胺酸。
C1-8-烷基可為直鏈或經一或多次支化；例如，其可為正-(2-甲基) 丙基、正-(1-甲基)丙基或甲基。
若存在諸如鹼性基團(例如，胺基或亞胺基)或酸性基團(例如，羧基或酚羥基)等鹽形成基團，則以游離形式或以鹽或以鹽與游離形式之混合物來使用所有化合物。因此，在任何地方提及化合物時，此皆包括所有該等變化形式。例如，鹼性基團可與諸如氫鹵酸(例如，HCl)、硫酸或有機酸(例如乙酸或三氟乙酸)等酸形成鹽，而酸性基團可與陽離子例如，銨、烷基銨、三乙基胺、N-甲基嗎啉、二甲基胺基吡啶、鹼金屬或鹼土金屬鹽陽離子(例如，Ca、Mg、Na、K或Li陽離子)或諸如此類形成鹽，或可存在該等化合物之兩性離子鹽或內鹽。
在本發明中任何地方使用時，「或諸如此類」或「及諸如此類」係指以下事實：彼等在該表達之前所提及者之其他替代為熟習此項技術者所知且可添加至彼等所特別提及之表達中；在其他實施例中，「或諸如此類」及」及諸如此類」可在一或多個或所有本發明實施例中刪除。
縮醛保護基團尤其在水存在下對酸性條件高度敏感。縮醛保護基團在固相肽合成期間或在自固體載體裂解期間之裂解可生成游離醛官能基，該游離醛官能基可與游離胺基反應且經歷其他副反應。因此，重要的是保持縮醛保護基團直至實施寡肽之環化，來獲得巨環化合物II或IIA。
在本說明及申請專利範圍通篇任何地方提及時，部分A*、R2*、R3*、R5*、R6*、R7*、X*上所存在之保護基團Prot**、Prot***、Prot****及任何其他保護基團經選擇，以使得其允許正交保護。
正交保護係一種如下策略：允許使多個保護基團中之一者(或多者但非全部)在期望時且各自利用一組專用反應條件去保護，而不會影響其他保護基團或經由(例如)固體合成樹脂上之連接體至樹脂之 鍵。換言之：該策略使用藉由不同化學機制去除之不同類別保護基團，而且在固相肽合成之情形下使用適當連接體(其中連接體-樹脂鍵可一起視為羧基保護基團)。
較佳地，保護基團係如下來選擇：Prot*係以下保護基團：可在(iii/b)下之反應期間或於隨後在IV、尤其IVA之裂解期間去除(=適於去除)，但另一方面，可在樹脂上去除而不裂解其他鍵(不會裂解經由其(尤其)α-羧基之羰基結合至經由下文所提及連接體L之結合之胺基酸或肽)；亦不會裂解除去所存在之其他保護基團，尤其係以下保護基團：可在不同於彼等用於所存在之其他保護基團者之條件下去除而不裂解縮肽或縮肽前體中的酯(而非醯胺)鍵，同時保留經由連接體至樹脂RES(若存在)之結合；其較佳地可藉由弱鹼(例如六氫吡啶、嗎啉、二環己基胺、對-二甲基胺基-吡啶、二異丙基胺、六氫吡嗪、叁-(2-胺基乙基)胺在適當溶劑(例如N,N-二甲基-甲醯胺、二氯甲烷)中去除；Prot**係(例如)選自由茀-9-基甲氧基羰基(Fmoc)、2-(2’或4’-吡啶基)乙氧基羰基及2,2-雙(4’硝基-苯基)乙氧基羰基組成之群。
Prot**係可在不同於(iii/b)下之裂解反應條件之條件下(尤其自式III*或尤其IIIA*之化合物)去除之保護基團，尤其芳基烷基，尤其1-(C6-C12芳基)-C1-C4烷基，更尤其苄基，其可藉由(例如)在貴金屬觸媒(例如可在諸如氧化鋁或尤其碳等載體上之Pd或Pt)存在下利用(例如)氫催化氫化來去除。
Prot ***係可選擇性裂解除去而不影響所存在之其他保護基團且產物保留在樹脂上之胺基保護基團，其係選自彼等針對Prot*所提及者，例如茀-9-基甲氧基羰基(Fmoc)，其各自可(例如)如上文或下文所提及去除。
Prot****係可選擇性裂解除去而不影響所存在之其他保護基團之 保護基團，尤其如針對Prot***所定義。
此情形下之較佳正交合成方法利用對於肽合成通常所知的使用固相及液相肽合成之Fmoc-保護基團策略。
醛保護基團Rk及Rl(其與結合O原子及結合至該等O原子之碳一起形成經保護醛基(縮醛)可在水存在下藉由酸、尤其α-鹵基取代之烷酸(例如三氟乙酸或三氯乙酸)催化來去除。
所存在之其他保護基團以及至樹脂RES(若存在)之結合連接體較佳地在可去除Prot*、Prot**、Prot***及Prot****之條件下不可去除，例如在A*中，胺甲醯基可經例如三苯甲基(三苯基甲基)N-保護(例如用三氟乙酸(TFA)裂解)；(例如在R6*中)酪胺酸羥基可經Boc(第三丁氧基羰基)保護，或藉由第三丁基二甲基矽烷基、甲氧基甲基或芳基乙酸酯保護(例如用TFA裂解)；且更佳地，在較佳地不裂解至樹脂RES之連接體之鍵或(其中期望自樹脂至鍵同時去保護及裂解)之條件下亦裂解(例如用酸(例如TFA)裂解)。
適當保護基團以及其引入及去除之方法為業內所知。例如，保護基團、其引入及去除方法可選自彼等闡述於諸如「Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，T.W.Green及P.G.M.Wuts(編輯)J.Wiley & Sons公司，New York等，1999等標準教科書中者。
因此，保護基團Prot*、Prot**、Prot***、Prot****及其他保護基團並不限於彼等上文所提及者-而是其應滿足使其適於正交保護之條件，例如，如上文或下文所述。
建議避免過於鹼性而不能避免縮肽(酯)鍵裂解之條件(儘管針對Fmoc裂解所闡述之鹼(例如，六氫吡啶)通常係允許的)。
可在去保護步驟期間使用之適當溶劑或溶劑混合物可選自(例如)常規溶劑，例如N,N二烷基甲醯胺(例如二甲基甲醯胺)、鹵代烴(例如二氯甲烷)、烷醇(例如乙醇、丙醇或異丙醇)、腈(例如乙腈)、烷酸醯 胺(例如二甲基甲醯胺或二乙基甲醯胺)，或另外芳香族烴(例如甲苯)，或兩者或更多者之混合物，亦可存在水。溫度可為環境溫度或更低或更高，例如在-20℃至50℃範圍內。
在用於固相肽合成(SPPS)之可能固體載體中，尤其可提及以下載體：
- 不具或具有間隔物之凝膠型載體：該等係高度溶劑化且具有均衡分佈之官能基之聚合物。此類型之載體最為普遍，且包括：聚苯乙烯：與(例如)1%至2%二乙烯基苯交聯之苯乙烯；聚丙烯醯胺或聚甲基丙烯醯胺：作為聚苯乙烯之親水替代物；聚乙二醇(PEG)：PEG-聚苯乙烯(PEG-PS)較聚苯乙烯更穩定且將合成位點與聚合物主鏈間隔開；基於PEG之載體：由PEG-聚丙二醇網絡或PEG與聚醯胺或聚苯乙烯(該等已包括間隔物(PEG))組成；
- 表面型載體：針對表面官能化所研發之材料，包括受控孔隙玻璃、纖維素纖維及高度交聯之聚苯乙烯。
- 複合物：由剛性基質支撐之凝膠型聚合物。
通常，該等凝膠攜載可結合針對上下文各種前體所提及之連接體L之反應性基團。例如，該等基團包括胺基甲基、具有末端羥基之聚乙二醇基團及諸如此類。
在本發明之實施例中可使用任何該載體。
在本發明之另一特定實施例中使用凝膠型載體，在該等載體中，聚苯乙烯(經二乙烯基苯交聯)、聚丙烯醯胺及聚甲基丙烯醯胺樹脂尤佳。
在可能連接體中，尤其可使用所有普遍已知且適當者。
本發明之可能實施例中之實例係2-甲氧基-4-苄基氧基苄基醇連接體(Sasrin-連接體，Sasrin代表超強酸敏感樹脂，經由醇式OH結合胺基酸或肽)；三苯甲基連接體家族(例如，三苯甲基、2Cl-三苯甲 基，其經由OH結合胺基酸或肽)；4-(2,4-二甲氧基苯基羥甲基)苯氧基甲基-連接體(Rink-酸-連接體，經由OH結合胺基酸或肽)；或叁(烷氧基)苄基酯連接體(HAL-連接體，經由OH結合胺基酸或肽)。
連接體基團之引入及該等連接體基團與胺基酸之偶合可基本上如所闡述或以與實例類似之方式實施。例如，在三苯甲基酯形成之情形下，可將樹脂(例如二乙烯基苯交聯之胺基甲基聚苯乙烯樹脂)懸浮於適當溶劑(例如二烷基酸醯胺(例如二甲基甲醯胺)及/或醇(例如乙醇、丙醇或異丙醇))中，並在偶合劑(例如下文針對酸之偶合所提及者，例如1-羥基苯并三唑及二環己基碳二亞胺)存在下與羥基芳基-酸連接體(例如4-(二苯基羥基甲基)-苄酸)反應；或者，對於氯-(2’氯)三苯甲基-聚苯乙烯樹脂之製造，將樹脂懸浮於適當溶劑(例如二氯甲烷)中，添加氯化劑(例如乙醯氯)，且然後在(例如)鹼(例如三級胺基鹼，例如N-甲基-嗎啉)存在下與胺基酸(此術語總包括未經保護或經保護之胺基酸)之羧基反應。
然後，例如為達成式III、尤其IIIA或III*、尤其III*A之直鏈前體肽對所達成(經保護或未經保護之)肽之裂解可如下來實施：在弱酸性條件下，在(例如)有機烷酸(例如乙酸)存在下，在適當溶劑中，例如在二氯甲烷或三氟乙醇中。
固體載體之裂解條件必須經選擇以使分子中所存在之其他保護基團(例如三苯甲基保護基團、第三丁基保護基團且具體而言縮醛保護基團)不會裂解。縮醛保護基團尤其在水存在下對酸性條件高度敏感。縮醛保護基團在固相肽合成期間或在自固體載體裂解期間裂解可生成游離醛官能基，該游離醛官能基可與游離胺基反應且經歷其他副反應。
若提及酸、尤其胺基酸或肽(例如二肽)之反應性衍生物，則其可原位形成或可原樣使用。
原樣使用之反應性(或活性)衍生物包括鹵化物(例如氯化物)或硝基苯基酯(例如2,4-二硝基苯基酯)，或欲反應之酸之羧基之酸酐(對稱或(例如)與乙酸形成)。
對於原位形成，可施加常規偶合劑。該等試劑為熟習此項技術者所知且可方便地得自許多來源，例如，Aldrich ChemFiles-Peptide Synthesis(Aldrich Chemical公司，Sigma-Aldrich公司，Milwaukee,WI,USA)第7卷第2期，2007(參見http：//www.sigmaaldrich.com/etc/medialib/docs/Aldrich/Brochure/al_chemfile_v7_n2.Par.0001.File.tmp/al_chemfile_v7_n2.pdf)。在用於醯胺及酯鍵合成之可能偶合劑中，尤其可提及以下偶合劑：三唑、脲鎓或六氟鏻鎓衍生物，例如，1-羥基-苯并三唑(HOBt)、1-羥基-7-氮雜-苯并三唑(HOAt)、2-氰基-2-(羥基亞胺基)乙酸乙酯、六氟磷酸2-(1H-7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓甲銨(HATU)、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯啶基鏻鎓(PyBOP)、1-(均三甲苯-2-磺醯基)-3-硝基-1,2,4-三唑(MSNT)、六氟磷酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓(HBTU)、六氟硼酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓(TBTU)、四氟硼酸2-琥珀醯亞胺基-1,1,3,3-四甲基脲鎓(TSTU)、四氟硼酸2-(5-降莰烯-2,3-二醯亞胺基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓(TNTU)、四氟硼酸O-[(氰基(乙氧基羰基)-亞甲基)胺基]-1,1,3,3-四甲基脲鎓(TOTU)、六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-1,3-二甲基-1,3-二亞甲基脲鎓(HBMDU)、六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-雙(四亞甲基)脲鎓(HBPyU)、六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-雙(五亞甲基)脲鎓(HBPipU)、3-羥基-4-側氧基-3,4-二氫-1,2,3-苯并三嗪(HODhbt)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑及其相應脲鎓或鏻鎓鹽(所指定之HAPyU及AOP)、六氟磷酸1-氰基-2-乙氧基-2-側氧基亞乙基胺基氧基-二甲基胺基-嗎啉基-碳鎓(COMU)、六氟磷酸氯三吡咯啶基鏻鎓 (PyCloP)或諸如此類；碳二亞胺，例如，二環己基碳二亞胺、N-(3-二甲基胺基丙基)-N’-乙基碳二亞胺、1-第三丁基-3-乙基碳二亞胺、N-環己基-N’-2-嗎啉基乙基)碳二亞胺或二異丙基碳二亞胺(尤其用於經由形成羧基之O-醯基脲來形成酯)；或活性酯形成劑，例如，2-巰基苯并噻唑(2-MBT)，疊氮化物形成劑，例如，疊氮化二苯基磷醯，酸酐，例如丙烷膦酸酐，酸性鹵化劑，例如，1-氯-N,N,2-三苯基-1-丙烯基胺、四氟硼酸或六氟磷酸氯-N,N,N’,N’-雙(四亞甲基)甲脒鎓、六氟磷酸氯-N,N,N’,N’-四甲基甲脒鎓、六氟磷酸氟-N,N,N’,N’-四甲基甲脒鎓、六氟磷酸氟-N,N,N’,N’-雙(四亞甲基)甲脒鎓，或諸如此類或兩種或更多種該等試劑之混合物。
對於式XI或XIA之化合物分別與式XII或XIIA之化合物之酯偶合，亦可使用相應反應性羧基化合物或使其原位形成。本文中，MSNT作為偶合劑尤佳，此乃因此允許維持高立體特異性。
對於式III、尤其IIIA之化合物之巨環內酯化，亦可使用如針對胺基酸之偶合所闡述之偶合劑及條件。
可在每一情形下(若適當)在弱鹼(例如，N-甲基嗎啉、三烷基胺(例如乙基二異丙基胺)、二-(烷基)胺基吡啶(例如N,N-二甲基胺基吡啶)或諸如此類)存在下實施反應(注意：條件的鹼性不會強至使得式I之化合物之前體中所存在之酯基(例如縮肽酯基)水解)，若適當或需要在適當溶劑或溶劑混合物(例如，N,N二烷基甲醯胺(例如二甲基甲醯胺)、鹵化烴(例如二氯甲烷)、N-烷基吡咯啶酮(例如N-甲基吡咯啶酮)、腈類(例如乙腈)、醚(例如二噁烷或四氫呋喃)或另外芳香烴(例如甲苯)或兩者或更多者之混合物)存在下，在存在所提供之過量偶合 劑之情況下，亦可存在水。溫度可為環境溫度或更低或更高，例如在-20℃至50℃範圍內。
已知式VII、VIIA、IX、IXA、XI、XIA、XV、XVA、XVI、XVIA、XVII、XVII(可藉由(例如)溶液相肽合成獲得)之胺基酸或其可根據業內已知方法來合成，其可自市面購得及/或其可以類似於業內已知方法之方式合成。
亦已知其餘起始材料(例如式XIV酸)或其可根據業內已知方法來合成，其可自市面購得及/或其可以類似於業內已知方法之方式合成。
二肽之偶合反應利用呈游離形式或呈活化形式之胺基酸之相應羧基。
實例：以下實例闡釋本發明，而不限制其範圍。
縮寫
aq. 水性
Boc/BOC 第三丁氧基羰基
鹽水 存於水中之氯化鈉溶液(在RT下飽和)
Bzl 苄基
COMU 六氟磷酸1-氰基-2-乙氧基-2-側氧基亞乙基胺基氧基-二甲基胺基-嗎啉基-碳鎓
DCM 二氯甲烷
DIPEA N,N-二異丙基乙胺
DMAP 4-二甲基胺基吡啶
DMF N,N-二甲基甲醯胺
Fmoc/FMOC 9-茀基甲氧基羰基
Fmoc-OSu N-(9-茀基甲氧基羰基氧基)琥珀醯亞胺
Et 乙基
h 小時
HATU 六氟磷酸2-(1H-7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓甲銨
HOSU N-羥基琥珀醯亞胺
HPLC 高效液相層析法
HR-MS 高解析質譜法
IPC 製程中控制(In-Process Control)
IR 紅外光譜法
IT 內部溫度
Kaiser測試 基於茚三酮(ninhydrin)之測試監測SPPS中之去保護(參見E.Kaiser,R.L.Colescott,C.D.Bossinger,P.I.Cook,Analytical Biochemistry 34 595(1970))；若描述為OK，此意味著去保護成功。
Me 甲基
MED 二氯甲烷
MS 質譜法
MSNT 1-(均三甲苯-2-磺醯基)-3-硝基-1,2,4-三唑
NMR 核磁共振光譜法
PyBOP 六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯啶基鏻鎓
RP 反相
RT/rt 室溫
SPPS 固相肽合成
TBME 第三丁基甲基醚
TFA 三氟乙酸
對於胺基酸之縮寫，參見上表。
若未另外提及，則反應係在室溫下實施。
下文所提及化合物A之合成係根據以下簡化反應圖在溶液中達成，下文中進行更詳盡說明：
溶液相中之兩個步驟係巨環化及去保護/平衡。此反應及前述反應之細節係於以下實例中給出：下文反應圖及實例中所給化合物根據2004 IUPAC推薦之名稱如下：化合物1：(2S)-2-(二苄基胺基)-5-氧基戊酸苄基酯； 化合物2：(2S)-2-(二苄基胺基)-4-(1,3-二氧環戊-2-基)丁酸苄基酯；化合物3：(2S)-2-(二苄基胺基)-4-(1,3-二氧環戊-2-基)丁酸；化合物4：(2S)-2-胺基-4-(1,3-二氧環戊-2-基)丁酸；化合物5：(2S)-4-(1,3-二氧環戊-2-基)-2-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}丁酸；化合物6：N 2-(2-甲基丙醯基)-N 5-(三苯基甲基)-L-麩醯胺醯基-O-{N-[(2S)-2-(二苄基胺基)-4-(1,3-二氧環戊-2-基)丁醯基]-L-異白胺醯基-O-(第三丁基)-N-甲基-L-酪胺醯基-L-異白胺醯基}-L-蘇胺醯基-L-白胺酸；化合物7：N 2-(2-甲基丙醯基)-N 5-(三苯基甲基)-L-麩醯胺醯基-O-{N-[(2S)-2-胺基-4-(1,3-二氧環戊-2-基)丁醯基]-L-異白胺醯基-O-(第三丁基)-N-甲基-L-酪胺醯基-L-異白胺醯基}-L-蘇胺醯基-L-白胺酸；化合物8：2S)-N-[(3S,6S,9S,12S,15S,18S,19R)-3,9-二[(2S)-丁-2-基]-6-{[4-(第三丁氧基)苯基]甲基}-12-[2-(1,3-二氧環戊-2-基)乙基]-7,19-二甲基-15-(2-甲基丙基)-2,5,8,11,14,17-六側氧基-1-氧雜-4,7,10,13,16-五氮雜環十九烷-18-基]-2-(2-甲基丙醯胺基)-N'-(三苯基甲基)戊烷二醯胺；化合物9：N 2-(2-甲基丙醯基)-N 5-(三苯基甲基)-L-麩醯胺醯基-O-{N-[(2S)-2-胺基-5,5-雙(苄基氧基)戊醯基]-L-異白胺醯基-O-(第三丁基)-N-甲基-L-酪胺醯基-L-異白胺醯基}-L-蘇胺醯基-L-白胺酸；化合物10：(2S)-N-[(3S,6S,9S,12S,15S,18S,19R)-12-[3,3-雙(苄基氧基)丙基]-3,9-二[(2S)-丁-2-基]-6-{[4-(第三丁氧基)苯基]甲基}-7,19-二甲基-15-(2-甲基丙基)-2,5,8,11,14,17-六側氧基-1-氧雜-4,7,10,13,16-五氮雜環十九烷-18-基]-2-(2-甲基丙醯胺基)-N'-(三苯基甲基)戊烷二醯胺； 化合物12：1,1'-[(3-溴丙烷-1,1-二基)雙(氧基甲烷二基)]二苯；化合物13：2-乙醯胺基丙烷二酸1,3-二乙酯；化合物14：2-乙醯胺基-2-[3,3-雙(苄基氧基)丙基]丙烷二酸1,3-二乙酯；化合物15：2-乙醯胺基-5,5-雙(苄基氧基)戊酸；化合物16：(2S)-2-胺基-5,5-雙(苄基氧基)戊酸；化合物17：(2S)-5,5-雙(苄基氧基)-2-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}戊酸；化合物A：(2S)-N-[(2S,5S,8S,11R,12S,15S,18S,21R)-2,8-二[(2S)-丁-2-基]-21-羥基-5-[(4-羥基苯基)甲基]-4,11-二甲基-15-(2-甲基丙基)-3,6,9,13,16,22-六側氧基-10-氧雜-1,4,7,14,17-五氮雜雙環[16.3.1]二十二烷-12-基]-2-(2-甲基丙醯胺基)戊烷二醯胺。
實例1：化合物A之合成 1A)乙二醇-縮醛合成組元化合物3及化合物5之合成：
反應圖1
具有乙二醇-縮醛保護基團之非天然胺基酸係自已知醛中間物1起始來合成(反應圖1)，該醛中間物1係根據闡述於[Rodriguez及Taddei,Synthesis 2005,3，第493頁至第495頁]中之程序來製備。藉由在作為觸媒之p-TsOH及分子篩存在下用乙二醇處理將醛1轉化成乙二醇-縮醛2。用LiOH水解化合物2中之苄基-酯，從而獲得游離酸化合物3，使用該化合物3來製備相應寡肽化合物6。另一選擇為，藉由使用炭載鈀(10%)氫化來裂解化合物2中之苄基-保護基團，並用市售Fmoc-HOSU酯處理游離胺基酸中間物4，從而獲得非天然胺基酸之N-Fmoc保護之乙二醇-縮醛(化合物5)。值得提及的是，化合物3及5之穩定性未出現穩定性問題。不應將此穩定性視為一定會出現在此一包含縮醛及游離 羧酸官能基之分子中。
a)化合物2之合成：
向化合物1(29g；72.23mmol)存於DCM(700mL)乙二醇(133g,2.14莫耳)中之溶液中依序添加對甲苯磺酸單水合物(15g；78.86mmol)及分子篩(3埃，40g)。將反應混合物在室溫下攪拌18h。藉由過濾去除分子篩，用乙酸乙酯洗滌濾餅，並在減壓下蒸發濾液。將殘餘物溶解於乙酸乙酯(1L)中，用水(3×300mL)萃取，並在減壓下蒸發有機相，從而獲得33.3g粗製產物。藉由在矽膠上利用乙酸乙酯/己烷(4：6)層析來純化粗製產物，從而獲得28.0g純化合物2(87%產率)。
產物之1H-NMR證實所提出結構。
HR-MS：針對C28H31NO4來計算，[M+H]+=446.23259。測定值：446.23248。
b)化合物3之合成：
將化合物2(26.8g；60.15mmol)溶解於二噁烷(250mL)中。添加LiOH(10.1g；241.05mmol)及水(150mL)，並將混合物在室溫下攪拌72h。用水(200mL)及乙酸(32g)處理所形成之懸浮液，從而獲得2個澄清相。用乙酸乙酯(500mL)稀釋雙相混合物，並分離各相。分離水相並用乙酸乙酯(300mL)萃取。將有機相合併並用水(300mL)洗滌。在減壓下蒸發溶劑，得到29g黏性液體狀粗製產物。藉由在矽膠上利用DCM/異丙醇(9：1)作為洗脫劑進行急驟層析來純化粗製產物，從而獲得17.3g包含約10mol%異丙醇之產物(根據1H-NMR)。藉由溶解於乙酸異丙酯(200mL)中並用水(3×50mL)萃取乙酸異丙酯溶液來自產物去除殘餘異丙醇。最後，在減壓下去除溶劑，並在真空中在70℃下乾燥產物，從而獲得化合物3(16g；74.8%產率)。
產物之1H-及13C-NMR光譜證實所提出結構。
HR-MS：針對C21H25NO4來計算，[M+H]+：356.18564； [M+Na]+：378.16758。測定值：[M+H]+：356.18586；[M+Na]+：378.16748。
c)化合物4自化合物3之合成：
將化合物3(2.7g；7.596mmol)溶解於異丙醇(60mL)中，並添加觸媒(10%炭上Pd；300mg)。將反應混合物在室溫及大氣壓下氫化23h，此後完成氫化。用水(60mL)稀釋反應混合物，並在室溫下攪拌1h以溶解所沈澱產物。然後，過濾反應混合物以去除觸媒，並用水/異丙醇(1：1)(45mL)洗滌濾餅。在減壓下蒸發溶劑，且隨後在真空中在40℃下將產物乾燥過夜，得到化合物4(1.24g；93.18%產率)。
1H-及13C-NMR光譜證實化合物4之所提出結構。
HR-MS：針對C7H13NO4來計算，[M+H]+：176.09174；[M+Na]+：198.07368。測定值：[M+H]+：176.09173；[M+Na]+：198.07362。
d)化合物4自化合物2之合成：
化合物4係藉由在大氣氫壓下在作為溶劑之乙醇/水(1：1 v/v)中在室溫下使用10%炭載鈀作為觸媒氫化化合物2來製備。對於處理，藉由過濾去除觸媒並在減壓下蒸發溶劑。隨後，在真空中在45℃下乾燥產物，得到定量產率之化合物4。
該產物與自上文化合物3獲得之化合物4相同。
e)化合物5之合成：
將化合物4(1.2g；6.85mmol)溶解於水(7mL)中，並添加三乙胺(0.692g)。向此攪拌混合物中添加Fmoc-HOSU-酯(=2,5-二側氧基吡咯啶-1-基碳酸(9H-茀-9-基)甲基酯)(2.31g；6.85mmol)於乙腈(6g)中之溶液，並將反應混合物在室溫下攪拌約1h。藉由添加若干份三乙胺將所得反應混合物之pH值調整至8.5-9.0。總之，需要添加約0.7g三乙胺來維持8.5-9.0之pH。對於處理，藉由將反應混合物直接轉移於 矽膠管柱上來使反應混合物在矽膠上經受急驟層析。用乙酸乙酯/乙酸(98：2)洗脫，合併產物餾份並蒸發溶劑，得到濕化合物5。將濕產物懸浮於己烷中，在室溫下攪拌1h，並藉由過濾分離沈澱。將沈澱在真空中在50℃下乾燥過夜，從而獲得包含約20mol%乙酸之產物。將此產物在60℃下溶解於乙酸乙酯(50mL)中，並將溶液冷卻至室溫。在室溫下添加種晶(化合物5)，並攪拌懸浮液直至形成稀懸浮液為止。藉由在40℃及減壓下部分蒸發溶劑將懸浮液之體積減少至約15mL，並在室溫下經30分鐘將己烷(89mL)添加至懸浮液中。將懸浮液在室溫下再攪拌1h，並藉由過濾分離產物。將產物在真空中在50℃下乾燥過夜，從而獲得化合物5(2.31g；84.85%產率)。
HR-MS：針對C22H23NO6來計算，[M+H]+：398.15982；[M+NH4]+：415.18636；[M+Na]+：420.14176。測定值：[M+H]+：398.15991；[M+NH4]+：415.18655；[M+Na]+：420.14183。
1H-NMR(600MHz,d6-DMSO)：δ ppm 1.64(2H,m)；1.68(1H,m)；1.81(1H,m)；3.76(2H,m)；3.87(2H,m)；3.98(1H,m)；4.22(1H,m)；4.27(2H,m)；4.79(1H,m)；7.33(2H,t,J=7.3Hz)；7.42(2H,t,J=7.3Hz)；7.66(1H,d,J=8.1Hz)；7.73(2H,d，寬峰)；7.89(2H,d,J=7.3Hz)；12.59(1H,s，寬峰)。
13C-NMR(150MHz,d6-DMSO)：δ ppm 25.46(CH2),2993(CH2),46.67(CH),53.61(CH),64.27(2×CH2),65.65(CH2),103.12(CH),120.12(2×CH),125.30(2×CH),127.08(2×CH),127.67(2×CH),140.71(2×C),143.79(2×C),156.14(C),173.68(C)。
IR：3345,3321,3063,3021,2974,2963,2949,2767,1950,1914,1878,1741,1691,1682,1610,1541,1525,1477,1464,1451,1403,1367,1323,1285,1270,1249,1225,1188,1138,1104,1087,1055,1033,1008,983,963,939,925,873,836,798,782,759,740,648, 622。
1 B)化合物7藉由SPPS之合成
化合物7係藉由固相肽合成(SPPS)來合成，最後步驟係在以下簡化反應圖2中來簡略表示：反應圖2
在替代反應中，分別使用N-二苄基保護之化合物3以及N-Fmoc保護之化合物5二者進行相應寡肽6及7之SPPS合成，其包含具有以乙二醇-縮醛形式經保護之醛官能基之非天然胺基酸(反應圖2)。藉由在溶液中用炭載鈀(10%)氫化去除化合物6之苄基-保護基團，從而獲得化合物7(反應圖2)。另一選擇為，當在最後偶合步驟中使用化合物5作 為非天然胺基酸之合成組元時，亦可在氯三苯甲基-樹脂上自SPPS直接獲得化合物7。令人驚訝的是，在SPPS期間及之後自固體載體酸催化裂解寡肽6及7期間，縮醛保護基團之穩定性未出現問題。細節係於下文給出：
設備：
底部具有濾布之肽反應器。氮歧管容許經由濾布及底部閥使反應器排空。
連接體-樹脂結合之化合物B係如下來製造：
1 B)(A)三苯甲基-連接體至固體載體之偶合：
與若干份二甲基甲醯胺(1600mL)及異丙醇(1600mL)一起交替攪拌200g胺基甲基-聚苯乙烯樹脂(與1%二乙烯基苯交聯，胺基甲基之裝載量為1mmol/g)(供應商：Senn Chemicals AG,Dielsdorf/Switzerland)。在用二甲基甲醯胺進行最後兩次洗滌之後，用先前製得之4-(二苯基羥基甲基)-苄酸(91.3g，300mmol)、1-羥基-苯并三唑單水合物(45.9g,300mmol)及二異丙基碳二亞胺(75.7g,600mmol)存於二甲基甲醯胺(1600mL)中之溶液處理該樹脂。將反應混合物攪拌1.5h，並實施茚三酮測試。該測試仍顯示游離胺基，且因此添加另一二異丙基碳二亞胺(7.6g,60mmol)並將反應物攪拌過夜。早上之後續茚三酮測試為陰性，並將反應混合物過濾掉。利用二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌該樹脂。在真空中乾燥樹脂並產生257g之乾連接體-樹脂。該材料未經進一步分析即用於下一合成步驟。
1B)(B)Fmoc-Leu-OH之偶合 Fmoc-Leu-連接體-樹脂之製備
藉由攪拌使來自前述步驟之連接體-樹脂(190g,147.8mmol)在甲苯(1400mL)中溶脹。將溶劑過濾掉並經甲苯(1400mL)及乙醯氯(53mL,1478mmol)之溶液置換。將此混合物攪拌2h，過濾掉，經相同混 合物置換，將該相同混合物再攪拌2h，然後過濾掉。用甲苯將氯化之樹脂洗滌兩次並用二氯甲烷洗滌三次。
在圓底燒瓶中，製備Fmoc-Leu-OH(104.8g,296mmol)及N-甲基-嗎啉(49mL,444mmol)存於二氯甲烷(600mL)中之溶液。將此溶液添加至樹脂中並攪拌過夜。在早上，將溶液過濾掉，並用二氯甲烷及異丙醇交替洗滌樹脂。將樹脂在真空中乾燥並產生234.7g之乾Fmoc-Leu-連接體-樹脂。Fmoc基團之裝載量經測定為0.787mmol/g，此產生185mmol(為理論值之125%)之產量。外部承包商處之胺基酸分析證實<0.1% D-Leu對映體。
1 B)(C)Fmoc-Thr-OH之偶合 Fmoc-Thr-Leu-連接體-樹脂之製備
藉由攪拌使來自前述步驟之Fmoc-Leu-連接體-樹脂(140g,109mmol)相繼在兩份二甲基甲醯胺(1100mL)中各自溶脹30min。
藉由存於二甲基甲醯胺中之20%六氫吡啶連續洗滌兩次(分別5min及15min)來裂解Fmoc保護基團。用二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌若干次來洗滌樹脂。將酚酞及水添加至最終洗滌溶液之試樣中。不出現粉色證明成功去除六氫吡啶。
用四氫呋喃(1200mL)將樹脂洗滌三次，以為以下偶合步驟做準備。
在圓底燒瓶中，製備Fmoc-Thr-OH(112.1g,328mmol)、羥基苯并三唑單水合物(51.25g,334mmol)及二異丙基碳二亞胺(51mL,655mmol)存於四氫呋喃(600mL)中之溶液。
將溶液添加至樹脂中，並立即檢驗pH(pH=6.5)。將反應混合物攪拌1.5h，直至茚三酮測試顯示反應完全。將溶液過濾掉，並利用二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌樹脂。將樹脂之小試樣乾燥並運送用於胺基酸分析(0.13% D-Leu,<0.1% D-Thr,<0.1% L-allo-Thr,<0.1% D- allo-Thr)，大部分材料未經進一步乾燥即經受下一步驟。
1 B)(D)Fmoc-Gln(Trt)-OH之偶合 Fmoc-Gln(Trt)-Thr-Leu-連接體-樹脂之製備
藉由攪拌使來自先前步驟之Fmoc-Thr-Leu-連接體-樹脂連續在兩份二甲基甲醯胺(1100mL)中各自溶脹30min。
藉由用存於二甲基甲醯胺中之20%六氫吡啶連續洗滌兩次(分別5min及15min)來裂解Fmoc保護基團。藉由二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌若干次來洗滌樹脂。將酚酞及水添加至最終洗滌溶液之試樣中。不出現粉色證明成功去除六氫吡啶。
用二甲基甲醯胺(1100mL)將樹脂洗滌三次，以為以下偶合步驟做準備。
在圓底燒瓶中，製備Fmoc-Gln(Trt)-OH(138.6g,226mmol)、HATU(86.2g,226mmol)及乙基二異丙基胺(58.4g,452mmol)存於二甲基甲醯胺(400mL)中之溶液。
將溶液添加至樹脂中，並立即檢驗pH(pH=10)。將反應混合物攪拌3h，直至茚三酮測試顯示反應完全。將溶液過濾掉，並利用二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌樹脂。
將樹脂在真空中乾燥並產生170g之乾Fmoc-Gln(Trt)-Thr-Leu-連接體-樹脂。Fmoc基團之裝載量經測定為0.60mmol/g，此指示102mmol(經最後兩個步驟後為理論值之94%)之產量。外部承包商處之胺基酸分析產生以下值：(0.13% D-Leu,<0.1% D-Thr,<0.1% L-allo-Thr,<0.1% D-allo-Thr,<0.8% D-Gln)。
1 B)(E)異丁酸之偶合 異丁醯基-Gln(Trt)-Thr-Leu-連接體-樹脂之製備
藉由攪拌使來自前述步驟之Fmoc-Gln(Trt)-Thr-Leu-連接體-樹脂(169g,101mmol)連續在兩份二甲基甲醯胺(1300mL)中各自溶脹30 min。
藉由用存於二甲基甲醯胺(1300mL)中之20%六氫吡啶連續洗滌兩次(分別5min及15min)來裂解Fmoc保護基團。藉由二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌若干次來洗滌樹脂。將酚酞及水添加至最終洗滌溶液之試樣中。不出現粉色證明成功去除六氫吡啶。
用二甲基甲醯胺(1100mL)將樹脂洗滌三次，以為以下偶合步驟做準備。
在圓底燒瓶中，製備異丁酸(17.9g,203mmol)、PyBOP(105.5g,203mmol)及乙基二異丙基胺(52.4g,406mmol)存於二甲基甲醯胺(550mL)中之溶液。
將溶液添加至樹脂中，並立即檢驗pH(pH=9.5)。將反應混合物攪拌2.5h，直至茚三酮測試顯示反應完全。將溶液過濾掉，並利用二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌樹脂。
使該批料未經乾燥及進一步分析即直接經受下一步驟。
1 B)(F)Fmoc-Ile-OH之偶合(酯化) 異丁醯基-Gln(Trt)-Thr(Ile-Fmoc)-Leu-連接體-樹脂之製備
藉由攪拌使異丁醯基-Gln(Trt)-Thr-Leu-連接體-樹脂(濕的，來自前述步驟，101mmol)連續在三份二氯甲烷(1200mL)中各自溶脹20min。
將溶劑過濾掉，並添加固體形式之MSNT(88g,297mmol)及Fmoc-Ile-OH(105g,297mmol)。添加二氯甲烷(500mL)以及存於二氯甲烷(100mL)中之N-甲基咪唑(18.2g,223mmol)及乙基二異丙基胺(51.2g,396mmol)溶液。將反應混合物攪拌2h，直至HPLC製程中控制顯示反應完全為止。將溶液過濾掉，且隨後用三份二氯甲烷、三份二甲基甲醯胺及三份異丙醇洗滌樹脂。將樹脂在真空中乾燥並產生172g之乾異丁醯基-Gln(Trt)-Thr(Ile-Fmoc)-Leu-連接體-樹脂。Fmoc 裝載量經測定為0.418mmol/g，由此指示72mmol(經最後兩個步驟後為71%)之產量。
1 B)(G)Fmoc-N-甲基-Tyr(tBu)-OH之偶合 異丁醯基-Gln(Trt)-Thr(Ile-Tyr(tBu)Me-Fmoc)-Leu-連接體-樹脂之製備
藉由攪拌使來自前述步驟之異丁醯基-Gln(Trt)-Thr(Ile-Fmoc)-Leu-連接體-樹脂(172g,72mmol)連續在兩份二甲基甲醯胺(1300mL)中各自溶脹30min。
藉由用存於二甲基甲醯胺(1400mL)中之20%六氫吡啶連續洗滌兩次(分別5min及15min)來裂解Fmoc保護基團。藉由二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌若干次來洗滌樹脂。將酚酞及水添加至最終洗滌溶液之試樣中。不出現粉色證明成功去除六氫吡啶。
用二甲基甲醯胺(1100mL)將樹脂洗滌三次，以為以下偶合步驟做準備。
製備Fmoc-N-甲基-Tyr(tBu)-OH(68.7g,144mmol)及HATU(55.1g,144mmol)存於二甲基甲醯胺(700mL)中之溶液，並將其添加至樹脂中。於攪拌下添加乙基二異丙基胺(37.5g289mmol)存於二甲基甲醯胺(100mL)中之溶液。在剛剛添加偶合溶液後及在反應1h後之pH檢驗得到相同結果(pH 10)。將溶液攪拌2h直至茚三酮測試顯示反應完全為止。將溶液過濾掉，並利用二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌樹脂。
使該批料未經乾燥及進一步分析即直接經受下一步驟。
1B)(H)Fmoc-Ile-OH之偶合 異丁醯基-Gln(Trt)-Thr(Ile-Tyr(tBu)Me-Ile-Fmoc)-Leu-連接體-樹脂(連接體-樹脂結合之化合物B)之製備
藉由攪拌使來自前述步驟之濕異丁醯基-Gln(Trt)-Thr(Ile- Tyr(tBu)Me-Fmoc)-Leu-連接體-樹脂(72mmol)連續在兩份二甲基甲醯胺(1200mL及1300mL)中各自溶脹30min。藉由用存於二甲基甲醯胺(1400mL)中之20%六氫吡啶連續洗滌兩次(分別5min及15min)來裂解Fmoc保護基團。藉由二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌若干次來洗滌樹脂。將酚酞及水添加至最終洗滌溶液之試樣中。不出現粉色證明成功去除六氫吡啶。
用二甲基甲醯胺(1100mL)將樹脂洗滌三次，以為以下偶合步驟做準備。
在圓底燒瓶中，製備Fmoc-Ile-OH(103.9g,294mmol)、COMU(125.9g,294mmol)及乙基二異丙基胺(76g,588mmol)存於二氯甲烷(440mL)及二甲基甲醯胺(440mL)中之溶液。
將溶液添加至樹脂中，並將反應混合物攪拌20h。其後，進行茚三酮測試，顯示反應完全。將溶液過濾掉，並利用二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌樹脂。
將樹脂在真空中乾燥並產生185.5g之乾異丁醯基-Gln(Trt)-Thr(Ile-Tyr(tBu)Me-Ile-Fmoc)-Leu-連接體-樹脂。Fmoc基團之裝載量經測定為0.4mmol/g。由此獲得74mmol之定量產量。
1 C)化合物7之溶液相合成 1 C)(A)化合物6之合成
a)化合物3之偶合 藉由攪拌使來自先前步驟之異丁醯基-Gln(Trt)-Thr(Ile-Tyr(tBu)Me-Ile-Fmoc)-Leu-連接體-樹脂(10.4g,4.37mmol)連續在兩份二甲基甲醯胺(50mL)中各自溶脹30min。藉由用存於二甲基甲醯胺(50mL)中之20%六氫吡啶連續處理兩次(分別5min及15min)來裂解FMOC保護基團。用若干份二甲基甲醯胺及異丙醇以交替順序洗滌樹脂。最後，用二甲基甲醯胺(2×50mL)洗滌樹脂，以為下一偶合步驟做準備。在100mL玻璃瓶中，製備化合物3(3.1g,8.74 mmol)PyBOP(4.55g,8.74mmol)及乙基-二異丙基胺(2.2g,17.0mmol)存於二甲基甲醯胺(50mL)中之溶液。將該鹼性溶液(pH 11)攪動5min，之後將其添加至樹脂中。將反應混合物攪拌3h。然後，將溶液過濾掉，並利用二甲基甲醯胺及異丙醇洗滌樹脂。最後，用二氯甲烷(50mL)將樹脂洗滌三次，以為裂解肽做準備。
b)自樹脂裂解
向在偶合上文化合物3後獲得之濕肽-樹脂中添加乙酸(40mL)與二氯甲烷(10mL)之混合物，並將懸浮液攪拌5h。過濾懸浮液，並將濾液收集於圓底燒瓶中(濾液1)。用二氯甲烷(20mL)將樹脂洗滌兩次，並將洗滌液與濾液1合併。用一份新鮮乙酸(40mL)及二氯甲烷(10mL)處理樹脂，並將混合物攪拌過夜。過濾懸浮液，並將濾液收集於圓底燒瓶中(濾液2)。用二氯甲烷(20mL)將樹脂洗滌兩次，並將洗滌液與濾液2合併。合併所有濾液並在旋轉蒸發器中濃縮。藉由與甲苯(100mL)一起共沸蒸餾去除殘餘乙酸。完全蒸發溶劑，得到4.5g玻璃狀紅褐色殘餘物作為粗製產物。藉由RP-層析使用YMC ODS-AQ管柱純化粗製材料。使用HPLC評估各餾份，在旋轉蒸發器中濃縮富集餾份，並冷凍乾燥濃縮物。產量：2.86g化合物6(對於最後兩個步驟為44%)。
HR-MS：針對C85H112N8O14來計算：[M+H]+：1469.83708。測定值：1469.83691
1H-NMR光譜證實所提出結構。
1 C)(B)化合物7(化合物6經去保護之變化形式)之合成
將化合物6(0.5g,0.34mmol)溶解於異丙醇/水(95：5 v/v,15mL)中，並用氬吹掃溶液。在氬流下添加炭載鈀(10% Pd；0.25g)，並將懸浮液加熱至IT 35-40℃。將氫氣引入氣相中，並在氫之大氣壓下攪拌混合物，直至IPC(HPLC)指示反應完全(<5%起始材料)。
對於處理，藉由過濾去除觸媒，並用異丙醇洗滌過濾殘餘物。蒸發濾液，從而獲得500mg粗製產物。藉由在矽膠上使用乙酸乙酯/甲醇(93：7)進行急驟層析來純化粗製產物，從而獲得348mg化合物7。產率：79.3%。
HR-MS：針對C71H100N8O14來計算：[M+H]+：1289.74318；[M+Na]+：1311.72512。測定值：[M+H]+：1289.74308；[M+Na]+：1311.72487。
1 D)化合物7(化合物5經偶合之變化形式)之SPPS合成
製造氯三苯甲基樹脂結合之化合物C且如下加以使用：
1 D)(A)：Fmoc-Leu-OH至氯三苯甲基樹脂之偶合-Fmoc-Leu-氯三苯甲基樹脂之製備
藉由攪拌使氯-(2’-氯)三苯甲基-聚苯乙烯樹脂(47.15g,50mmol)在二氯甲烷(350mL)中溶脹過夜。將溶劑過濾掉並經二氯甲烷(330mL)及乙醯氯(19.75g,250mmol)之溶液置換。將此混合物攪拌3h 45min，過濾掉，經相同混合物置換，將該相同混合物再攪拌90min，之後過濾掉。經1h 45min將此處理再重複一次。用二氯甲烷將氯化樹脂洗滌三次。
在圓底燒瓶中，製備Fmoc-Leu-OH(35.4g,100mmol)及N-甲基-嗎啉(15.2g,150mmol)存於二氯甲烷(120mL)中之溶液。將此溶液添加至樹脂中並攪拌過夜。在早上，將溶液過濾掉，並利用二氯甲烷及異丙醇交替洗滌樹脂。將樹脂在真空中乾燥並產生69.1g乾Fmoc-Leu-氯三苯甲基樹脂。Fmoc基團之裝載量經測定為0.74mmol/g，此產生51mmol之產量(定量產量)。
1 D)(B)：Fmoc-Thr-OH之偶合-Fmoc-Thr-Leu-氯三苯甲基樹脂之製備
藉由攪拌使來自前述步驟之Fmoc-Leu-氯三苯甲基樹脂(67.1g, 49.7mmol)相繼在兩份二甲基甲醯胺(400mL及350mL)中分別溶脹30min及75min。
藉由存於二甲基甲醯胺中之20%六氫吡啶連續洗滌兩次(分別5min及15min)來裂解Fmoc保護基團。利用二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌若干次來洗滌樹脂。將酚酞及水添加至最終洗滌溶液之試樣中。不出現粉色證明成功去除六氫吡啶。
用四氫呋喃(330mL)將樹脂洗滌三次，以為以下偶合步驟做準備。
在圓底燒瓶中，製備Fmoc-Thr-OH(33.95g,99.4mmol)、羥基苯并三唑單水合物(23.31g,152mmol)及二異丙基碳二亞胺(37.6g,298mmol)存於四氫呋喃(285mL)中之溶液。
將溶液添加至樹脂中，並將反應混合物攪拌過夜。HPLC顯示反應完全。將溶液過濾掉，並利用二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌樹脂。最後，用TBME將樹脂洗滌5次，在真空中乾燥，且得到67.5g乾燥Fmoc-Thr-Leu-氯三苯甲基樹脂。Fmoc基團之裝載量經測定為0.58mmol/g，此產生39mmol(為理論值之79%)之產量。
1 D)(C)：Fmoc-Gln(Trt)-OH之偶合-Fmoc-Gln(Trt)-Thr-Leu-氯三苯甲基樹脂之製備
藉由攪拌使來自先前步驟之Fmoc-Thr-Leu-氯三苯甲基樹脂(49.4g,28.7mmol)連續在兩份二甲基甲醯胺(各350mL)中分別溶脹30min及70min。
藉由用存於二甲基甲醯胺中之20%六氫吡啶連續洗滌兩次(分別5min及15min)來裂解Fmoc保護基團。藉由二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌若干次來洗滌樹脂。將酚酞及水添加至最終洗滌溶液之試樣中。不出現粉色證明成功去除六氫吡啶。
用二甲基甲醯胺(250mL)將樹脂洗滌三次，以為以下偶合步驟做 準備。
在圓底燒瓶中，製備Fmoc-Gln(Trt)-OH(34.4g,57.3mmol)、HATU(21.5g,57.3mmol)及乙基二異丙基胺(14.8g,114.6mmol)存於二甲基甲醯胺(190mL)中之溶液。
將溶液添加至樹脂中，並立即檢驗pH(pH=>8)。將反應混合物攪拌2h 30min，之後HPLC製程中控制顯示反應完全。將溶液過濾掉，並利用二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌樹脂。
樹脂未經乾燥而直接引入下一步驟中。
1 D)(D)：異丁醯化-異丁醯基-Gln(Trt)-Thr-Leu-氯三苯甲基樹脂之製備
用二甲基甲醯胺(300mL)將Fmoc-Gln(Trt)-Thr-Leu-氯三苯甲基樹脂(濕的，來自前述步驟，28.7mmol)洗滌30min。
藉由用存於二甲基甲醯胺(400mL)中之20%六氫吡啶連續洗滌兩次(分別5min及15min)來裂解Fmoc保護基團。藉由二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌若干次來洗滌樹脂。將酚酞及水添加至最終洗滌溶液之試樣中。不出現粉色證明成功去除六氫吡啶。
用二甲基甲醯胺(250mL)將樹脂洗滌三次，以為以下偶合步驟做準備。
在圓底燒瓶中，製備異丁酸(5.01g,56.9mmol)、PyBOP(29.33g,56.4mmol)及乙基二異丙基胺(15.55,120mmol)存於二甲基甲醯胺(190mL)中之溶液。
將溶液添加至樹脂中，並立即檢驗pH(pH=11)。將反應混合物攪拌1h，之後HPLC製程中控制顯示反應完全。將溶液過濾掉，並利用二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌樹脂。
使該批料未經乾燥及進一步分析即直接經受下一步驟。
1 D)(E)：Fmoc-Ile-OH之偶合(酯化)-異丁醯基-Gln(Trt)-Thr(Ile- Fmoc)-Leu-氯三苯甲基樹脂之製備
在室溫下用兩份二氯甲烷且在氮下用另外兩份冷(0℃)二氯甲烷洗滌異丁醯基-Gln(Trt)-Thr-Leu-氯三苯甲基樹脂(濕的，來自前述步驟，28.7mmol)。
在圓底燒瓶中，在0℃及氮下製備Fmoc-Ile-OH(37.65g,106.5mmol)N-甲基咪唑(10.00g,121.8mmol)及MSNT(31.65g,106.8mmol)存於MED(210mL)中之溶液。將偶合溶液添加至冷樹脂中，並將反應混合物攪拌30min，之後再添加一定量之N-甲基咪唑(5.33g,64.9mmol)。將反應物再攪拌30min，之後HPLC製程中控制顯示反應完全。將溶液過濾掉，並利用二甲基甲醯胺異丙醇交替洗滌樹脂。最後，用TBME將樹脂洗滌5次，在真空中乾燥，且得到55.7g乾燥異丁醯基-Gln(Trt)-Thr(Ile-Fmoc)-Leu-氯三苯甲基樹脂。Fmoc裝載量經測定為0.43mmol/g，從而產生24.2mmol(經最後三個步驟後為84%)之產量。
1 D)(F)：Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH之偶合-異丁醯基-Gln(Trt)-Thr(Ile-Tyr(tBu)Me-Fmoc)-Leu-氯三苯甲基樹脂之製備
藉由攪拌使來自前述步驟之乾燥異丁醯基-Gln(Trt)-Thr(Ile-Fmoc)-Leu-氯三苯甲基樹脂(55.5g,24.1mmol)連續在兩份二甲基甲醯胺(各400mL)中各自溶脹30min。
藉由存於二甲基甲醯胺(450mL)中之20%六氫吡啶連續洗滌兩次(分別5min及15min)來裂解Fmoc保護基團。用二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌若干次來洗滌樹脂。將酚酞及水添加至最終洗滌溶液之試樣中。不出現粉色證明成功去除六氫吡啶。
用二甲基甲醯胺(280mL)將樹脂洗滌三次，以為以下偶合步驟做準備。
製備Fmoc-N-甲基-Tyr(tBu)-OH(22.12g,47.7mmol)及HATU (17.81g,46.8mmol)及乙基二異丙基胺(12.09g93.5mmol)存於二甲基甲醯胺(280mL)中之溶液，並將其添加至樹脂中。在添加偶合溶液(pH>8)後立即檢驗反應混合物之pH。將溶液攪拌2h，之後HPLC製程中控制顯示反應完全。將溶液過濾掉，並利用二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌樹脂。
使該批料未經乾燥及進一步分析即直接經受下一步驟。
1 D)(G)：Fmoc-Ile-OH之偶合-異丁醯基-Gln(Trt)-Thr(Ile-Tyr(tBu)Me-Ile-Fmoc)-Leu-氯三苯甲基樹脂之製備
用二甲基甲醯胺(400mL)將來自前述步驟之濕異丁醯基-Gln(Trt)-Thr(Ile-Tyr(tBu)Me-Fmoc)-Leu-氯三苯甲基樹脂(24.1mmol)洗滌30min。藉由用存於二甲基甲醯胺(450mL)中之20%六氫吡啶連續洗滌兩次(分別5min及15min)來裂解Fmoc保護基團。藉由二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌若干次來洗滌樹脂。將酚酞及水添加至最終洗滌溶液之試樣中。不出現粉色證明成功去除六氫吡啶。
用二甲基甲醯胺(280mL)將樹脂洗滌三次，以為以下偶合步驟做準備。
在圓底燒瓶中，製備Fmoc-Ile-OH(33.01,93.4mmol)、COMU(39.99g,93.4mmol)及乙基二異丙基胺(24.16g,187mmol)存於二氯甲烷(110mL)及二甲基甲醯胺(110mL)中之溶液。
將溶液添加至樹脂中，並檢驗pH(pH>8)。將反應混合物攪拌2h。在該時間後，HPLC製程中控制顯示反應完全。將溶液過濾掉，並利用二甲基甲醯胺及異丙醇交替洗滌樹脂。最後，用TBME將樹脂洗滌5次。
將樹脂在真空中乾燥並得到61.1g乾異丁醯基-Gln(Trt)-Thr(Ile-Tyr(tBu)Me-Ile-Fmoc)-Leu-氯三苯甲基樹脂。Fmoc基團之裝載量經測定為0.30mmol/g。由此產生18.3mmol之產量，經最後兩個步驟後對 應於76%。
1 D)(H)化合物5之偶合：化合物7之製備 a)偶合
藉由攪拌使異丁醯基-Gln(Trt)-Thr(Ile-Tyr(tBu)Me-Ile-Fmoc)-Leu-氯三苯甲基樹脂(6.5g,189mmol)連續在兩份二甲基甲醯胺(45mL及40mL)中各自溶脹30min。
藉由用存於二甲基甲醯胺(50mL及55mL)中之20%六氫吡啶連續處理兩次(分別5min及15min)來裂解FMOC保護基團。用若干份二甲基甲醯胺及異丙醇以交替順序洗滌樹脂。利用酚酞/水之色彩測試證實不存在鹼。最後，用二甲基甲醯胺(3×30mL)洗滌樹脂，從而為以下偶合步驟做準備。
在圓底燒瓶中，製備化合物5(1.50g,3.77mmol)PyBOP(1.96g,3.77mmol)及乙基-二異丙基胺(0.98g,7.54mmol)存於二甲基甲醯胺(20mL)中之溶液。將鹼性溶液(pH8)攪動5min，之後將其添加至樹脂中。將反應混合物攪拌2h，且藉由自樹脂裂解試樣監測反應進程。試樣之HPLC顯示轉化完全。將溶液過濾掉，並利用二甲基甲醯胺及異丙醇以交替順序洗滌樹脂。藉由用存於二甲基甲醯胺(60mL)中之20%六氫吡啶連續處理兩次(分別5min及15min)來自二甲基甲醯胺濕樹脂裂解FMOC保護基團。用若干份二甲基甲醯胺及異丙醇以交替順序洗滌樹脂。用酚酞/水檢驗洗滌之有效性。最後，用二氯甲烷(40mL)將樹脂洗滌三次，以為裂解肽做準備。
b)自樹脂裂解
向濕的異丁醯基-Gln(Trt)-Thr(Ile-Tyr(tBu)Me-Ile-化合物5-H)-Leu-連接體-樹脂中添加二氯甲烷(40mL)、乙酸(4.99mL)與三氟乙醇(4.96mL)之混合物，並將懸浮液攪拌3h。過濾懸浮液，並將濾液收集於圓底燒瓶中。用相同量的裂解混合液將裂解步驟重複兩次，每次 進行2h。合併所有濾液。用甲苯(40mL)將樹脂洗滌三次，並將洗滌液與濾液合併。
將含有產物之溶液在旋轉蒸發器中蒸發至乾燥。將殘餘固體溶解於乙腈/水中並冷凍乾燥。分離出2.95g凍乾粉末作為粗製產物。
藉由RP-層析使用Kromasil RP 4 10um管柱(Eka Chemicals AB,Bohus,Sweden)來純化粗製材料。使用HPLC評估各餾份，合併富集產物之餾份，並在旋轉蒸發器中濃縮，並冷凍乾燥濃縮物，從而獲得1.0g化合物7(對於最後兩個步驟為41%產率)。純度：92%a。
產物之1H-NMR光譜證實所提出結構係旋轉異構體之混合物。
HR-MS：針對C71H100N8O14來計算：[M+H]+：1289.74318；[M+Na]+：1311.72512。測定值：[M+H]+：1289.74292；[M+Na]+：1311.72473。
1 E)化合物A之合成
合成中之最後步驟顯示於以下反應圖中：反應圖3：
以下詳細闡述合成：
1 E)(A)巨環化：化合物8之製備
將4-DMAP(100mg,0.82mmol)及HATU(205.4mg,0.54mmol)溶解於乙腈(15mL)中。將該溶液冷卻至0℃。在10分鐘內向此溶液中逐滴添加化合物7(348mg,0.27mmol)存於乙腈(20mL)中之溶液。將反應混合物在0℃下再攪拌10分鐘以完成環化。對於處理，將反應混合物傾倒至水(50mL)上，並添加乙酸異丙酯(150mL)，隨後添加鹽水(10mL)。分離各相，並用稀釋NaCl水溶液(60mL)再次萃取有機相。分離有機相，並在旋轉蒸發器中在減壓下蒸發溶劑，從而獲得523mg 粗製產物。藉由在矽膠上利用乙酸乙酯作為流動相進行急驟層析來純化粗製產物，從而獲得278.9mg化合物8(81.3%產率)。
HR-MS：針對C71H98N8O13來計算：[M+H]+：1271.73261；[M+NH4]+：1288.75916；[M+Na]+：1293.71456。測定值：[M+H]+：1271.73210；[M+NH4]+：1288.75820；[M+Na]+：1293.71478。
1H-NMR(600MHz,d6-DMSO)：δ ppm 0.47(3H,m)；0.73(3H,m)；0.75-0.87(12H,m)；0.97-1.05(8H,m)；1.10(3H,m)；1.13(1H,m)；1.25(9H,m)；1.33(1H,m)；1.46(1H,m)；1.56(6H,m)；1.65(2H,m)；1.79(1H,m)；1.96(1H,m)；2.30(2H,m)；2.43(1H,m)；2.68(4H,m)；3.29(1H,m)；3.73-3.88(4H,m)；4.17(1H,m)；4.19(1H,m)；4.24(1H,m)；4.30(1H,m)；4.42(1H,m)；4.57(1H,m)；4.73(1H,m)；5.17(1H,m)；5.26(1H,m)；6.86(2H,m)；7.12-7.27(18H,m)；7.90(1H,m)；7.94(1H,m)；8.18(1H,m)；8.51(2H,m)；8.82(1H,m)。
IR：3637、3400、3306、3059、3031、2968、2934、2877、1738、1658、1509、1469、1449、1414、1388、1367、1339、1239、1162、1100、1066、1037、968、946、851、767、753、741、702、637、625。
1 E)(B)去保護及平衡
將化合物8(200mg,0.157mmol)溶解於二氯甲烷(40mL)中，並將溶液冷卻至0℃。將三氟乙酸(11.5g)在0℃下逐滴添加至溶液中，並將反應混合物在0℃下再攪拌3h。然後，用二氯甲烷(40mL)稀釋反應混合物，並添加水(2mL)。使反應溫度升高至20-25℃，並將混合物在此溫度下攪拌16h。然後，將反應混合物傾倒至存於水(80mL)中之乙酸鈉(16.3g)溶液上，並添加乙酸乙酯(40mL)。劇烈攪拌雙相混合物，並分離各相。用水(2×20mL)洗滌有機相，並用乙酸乙酯(40mL) 萃取水相。合併有機相，並經硫酸鎂乾燥。在40-45℃及減壓下蒸發溶劑，得到270mg粗製產物。藉由在矽膠上使用乙酸乙酯/異丙醇(9：1)作為洗脫劑進行急驟層析來純化粗製產物，從而獲得105mg化合物A。產率：71.8%。
藉由NMR數據證實結構。
HR-MS：針對C46H72N8O12來計算：[M+H]+：929.53425；[M+NH4]+：946.56080；[M+Na]+：951.51619。測定值：[M+H]+：929.53412；[M+NH4]+：946.56110；[M+Na]+：951.51611。
實例2：使用非環狀縮醛保護基團合成化合物A：採用二苄基縮醛
以下反應圖顯示使用化合物9作為實例1中化合物7之替代：
詳細地，該反應圖中之相應前體及反應物係如下來認識：
2 A)二苄基-縮醛合成組元(化合物17)之合成
化合物17係根據下文中顯示之合成反應圖來製備：
2 B)化合物12之合成：
在3L反應器中，在氮及0℃下，引入存於二氯甲烷(1.15kg)中之經乾燥丙烯醛(105.3g,1.78mol)，用滴液漏斗經30min逐滴添加三甲基溴矽烷(281.7g,1.78mol)，使溫度保持低於5℃。在攪拌1h 30min後，經45min逐滴添加苄基醇(311.1g,2.85mol)，並將混合物在0℃下攪拌16h。向橙色溶液中添加吡啶(29g,0.36mol)、乙酸酐(38g,0.36mol)及DMAP(4.4g,0.04mol)。將混合物在室溫下攪拌24h，冷卻至10℃，並添加10% NaHCO3溶液(750mL)直至pH=7為止。用水(2×500mL)洗滌有機層，並經無水硫酸鈉乾燥。蒸發溶劑得到化合物12(428g,90%)之粗製黃色油，其在冰箱中靜置幾小時時分離。在去除黏性橙色下相後，仍有6%乙酸苄基酯存在於該粗製材料中。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 2.2(q,2H),3.4(t,2H),4.5(d,2H),4.6(d,2H),4.9(t,1H),7.2(m,10H)。
2 C)化合物14之合成：
在3L反應器中，將乙醯胺基丙二酸二乙酯(化合物13,275g,1.241mol)在N2下引入無水DMF(800g)中。藉由滴液漏斗經10min添加溶解於無水DMF(424g)中之第三丁氧鉀(144g,1.241mol)。使溫度上升至45℃。將混合物加熱至80℃，並經1h逐滴添加粗製化合物12(428g,1.034mol)。使用另一DMF(125g)，並將混合物在80℃及惰性氣氛下攪拌2h。然後，蒸發溶劑。添加乙酸乙酯(1.2L)及水(2.5L)。用10% NaCl水溶液(3×1.5L)洗滌有機層，並將有機溶劑蒸餾掉。含有一些殘餘乙酸乙酯之殘餘物自第三丁基-甲基醚/庚烷之結晶得到化合物14(產率為87%)之白色固體(423g，純度：97%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 1.2(t,6H),1.6(m,2H),2.0(s,3H),2.5(m,2H),4.2(m,1H),4.55(d,2H),4.65(d,2H),4.7(t,1H),6.8(s,1H),7.3(m,10H)。
2 D)化合物15之合成：
在3L反應器中，引入化合物14(211g,434mmol)及950mL 95%乙醇。用滴液漏斗經25min添加存於150mL 95%乙醇中之氫氧化鉀(30g,477mmol)。漿液變成澄清溶液。將混合物在RT下攪拌3h 30min。藉由HPLC確定單酸/單酯中間物之完全轉化。將混合物加熱至回流並保持2h 30min用於脫羧。然後，添加存於150mL 95%乙醇中之更多氫氧化鉀(34g,564mmol)，並將混合物在75℃下攪拌2h。然後，經1h將乙醇蒸餾掉。將混合物冷卻至室溫；添加水，隨後添加第三丁基-甲基-醚，以萃取不溶性副產物。然後，用乙酸將水層酸化至pH 5.0，並用第三丁基-甲基-醚再次萃取產物，用水洗滌有機層，並在真空中濃縮。應注意，需要溫和濃縮，更準確地需要在低於50℃之溫度以及良好真空下極快速地濃縮；否則會分解為環狀衍生物。回收的油快速結晶。自第三丁基-甲基-醚/庚烷(1：2)再結晶，得到148.6g化合物15之白色固體(產率：87%，純度： 98%a)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 1.8(s,3H),1.9(m,2H),2.0(m,2H),4.5(q,1H),4.6(d,2H),4.7(d,2H),4.8(t,1H),6.4(d,1H),7.3(m,10H)。
2 E)化合物16之合成：
在3L反應器中，引入檸檬酸鹽緩衝液(1L,pH=5)。添加胺基酸化合物15(146g,385mmol)，並用30%氫氧化鈉(84g)及另一檸檬酸鹽緩衝液(130mL)將pH調整至8.0-8.5。添加1mM氯化鈷(150mL)，從而使輔助因子之濃度為0.1mM。最後，在30℃下添加酶(醯化酶「Amano」ACV12502(Amano Enzyme公司，Nagoya,Japan),7.25g,5% w/w)。攪拌褐色混合物直至HPLC顯示50%轉化率(約24h)。將白色漿液酸化至pH 7.0，將其過濾掉。應注意，粗製固體之過濾相當緩慢，且需要大漏斗才可適當地繼續進行。用水(3×)及丙酮(3×)洗滌固體，且最後在真空中進行乾燥。在甲醇/水中再結晶，得到51.6g化合物16之白色固體(41%分離產率，純度：99%)。mp 190℃，伴有分解。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 1.8(m,4H),2.5(s,2H),3.1(t,1H),4.5(d,2H),4.6(d,2H),4.7(t,1H),7.3(m,10H)。
2 F)化合物17之合成：
在750mL反應器中，在惰性氣氛下，引入存於水(320mL)及乙腈(80mL)中之化合物16(40.2g,120mmol)。經35min向此白色漿液中添加三乙胺(24.3g,240mmol)。在固體完全溶解後，添加Fmoc-OSu(40.5g,120mmol)。將混合物在室溫下攪拌3h 30。用乙酸乙酯實施萃取。用水洗滌有機層，並將大量溶劑蒸餾掉。添加少量水，並將混合物酸化至pH 4.6。保留有機層，用水(2×)洗滌，且最後在真空中濃縮。在第三丁基-甲基-醚/庚烷(1/3)中再結晶殘餘物，得到化合物17之 白色固體(58.2g，88%產率，純度：92%a，ee：藉由對掌性HPLC確認為100%)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ ppm 1.8(m,4H),4.0(m,1H),4.2(q,1H),4.3(d,2H),4.5(d,2H),4.6(d,2H),4.8(t,1H),7.3(m,11H),7.4(d,2H),7.6(d,1H),7.7(d,2H),7.9(d,2H)。
2 G)化合物9之合成：
在異丁醯基-Gln(Trt)-Thr(Ile-Tyr(tBu)Me-Ile-Fmoc)-Leu-連接體-樹脂(10.3g,4.33mmol)上偶合化合物17(8.388g,15.21mmol)，在連接體-樹脂結合之肽上裂解Fmoc保護基團，並根據上文針對化合物6之製備所闡述之程序自連接體-樹脂裂解產物。藉由RP層析使用YMC-ODS AQ管柱純化粗製產物。使用HPLC評估各餾份，合併富集產物之餾份，並在旋轉蒸發器中濃縮，並冷凍乾燥濃縮物，從而獲得2.3g化合物9(對於最後兩個步驟為36.8%產率)。HPLC-純度：92.9%a。
1H-NMR證實作為旋轉異構體之混合物之所提出結構。
HR-MS：針對C83H111N8O14來計算，[M+H]+：1443.82143。測定值：[M+H]+：1443.82166。
2 H)化合物10之合成(巨環化)：
將4-DMAP(256mg,2.09mmol)及HATU(527mg,1.39mmol)溶解於乙腈(20mL)中。將溶液冷卻至0℃。在10分鐘內向此溶液中逐滴添加化合物9(1.00g,0.693mmol)於乙腈(30mL)中之溶液。將反應混合物在0℃下再攪拌15分鐘以完成環化。對於處理，將反應混合物傾倒至水(100mL)上，並添加乙酸異丙酯(250mL)，隨後添加鹽水(20mL)。分離各相，並用稀釋NaCl水溶液(60mL)再次萃取有機相。將有機相經無水硫酸鎂乾燥，並在40-45℃及減壓下蒸發溶劑，從而獲得1.08g粗製產物。藉由在矽膠上使用乙酸乙酯作為洗脫劑進行急驟層析來純化粗製產物並在真空中在40-45℃下乾燥產物，得到0.62g化 合物10。
HR-MS：針對C83H108N8O13來計算，[M+H]+：1425.81086；[M+NH4]+：1442.83741；[M+Na]+：1447.79281；[M+K]+：1463.76675。測定值：[M+H]+：1425.81140；[M+NH4]+：1442.83728；[M+Na]+：1447.79248；[M+K]+：1463.76685。
1H-NMR(600MHz,d6-DMSO)：δ ppm 0.47(br.S.,1H),0.47-0.54(m,1H),0.63-0-70(m,2H),0.73-0.81(m,9H),0.85(d,J=6.6Hz,3H),0.97-1.05(m,7H),1.08(d,J=6.6Hz,2H),1.16-1.22(m,2H),1.23-1.31(m,3H),1.27(m,9H),1.46-1.52(m,1H),1.53-1.61(m,3H),1.65-1.73(m,3H),1.80-1.88(m,2H),1.94-2.01(m,1H),2.00(s,1H),2.32(m,2H),2.39-2.47(m,1H),2.49-2.55(m,2H),2.68-2.76(m,1H),2.72(s,2H),3.29(dd,J=14.3,7.7Hz,1H),3.36(m,8H)。4.20-4.24(m,1H),4.30-4.34(m,1H),4.48-4.56(m,3H),4.58-4.66(m,3H),4.71(m,1H),5.27-5.35(m,1H),6.84-6.91(m,2H),7.15-7.22(m,11H),7.25-7.31(m,8H),7.32-7.36(m,6H),7.90-7.98(m,2H),8.52(s,1H),8.74-8.83(m,1H)。
2 I)化合物A自化合物10之合成(去保護及平衡)：
將化合物10(400mg,0.281mmol)溶解於二氯甲烷(80mL)中，並將溶液冷卻至0℃。在劇烈攪拌及0℃下添加三氟乙酸(20.5g)。將反應混合物在此溫度下再攪拌3h，並用二氯甲烷(80mL)稀釋，隨後添加水(4.0mL)。然後，使溫度上升至室溫，並將反應物在室溫下劇烈攪拌20h。
然後，將反應混合物傾倒至乙酸鈉(29.3g)於水(160mL)中之溶液上，並添加乙酸乙酯(80mL)。劇烈攪拌雙相混合物，並分離各相。用水(2×40mL)洗滌有機相，並用乙酸乙酯(80mL)萃取水相。合併有機相，並經硫酸鎂乾燥。在40-45℃及減壓下蒸發溶劑，得到520 mg粗製產物。藉由在矽膠上使用乙酸乙酯/異丙醇(9：1)作為洗脫劑進行急驟層析來純化粗製產物，從而獲得171mg化合物A。產率：65.5%。
NMR及HR-MS數據證實所提出結構。
HR-MS：針對C46H72N8O12來計算，[M+H]+：929.53425；[M+NH4]+：946.56080；[M+Na]+：951.51619。測定值：[M+H]+：929.53345；[M+NH4]+：946.56045；[M+Na]+：951.51536。
實例3：平衡之移位
縮醛裂解之可能副反應及ahp之形成可產生化合物A之脫水物形式。此可易於使用繪示於以下反應圖中之用於脫水物形式之水合之簡單程序轉化(返回)成化合物A：反應圖6：
此允許提高化合物A在任何類型合成(無論是本發明中之化學合成抑或是藉由使用WO2009/024527中之發酵)中之產率。
例如，在包含ahp次單元之化合物(例如實例1之前之反應圖中之化合物A)中之酸敏感保護基團裂解期間，觀測到形成大量相應脫水副產物(化合物A脫水物)。通常藉由(例如)層析法將此副產物分離並加以處置。此導致有價值產物損失並導致此步驟之產率較低。例如，若使化合物8之去保護產物經受酸性條件以裂解三苯甲基-及第三丁基保護基團(反應圖4)，則形成大量化合物A脫水物作為副產物。端視酸濃度及反應條件而定，化合物A脫水物可甚至作為此產物混合物中之主要產物形成。
例如，當在氧化步驟(實例1 E(B))之後使用三氟乙酸/二氯甲烷(5：95 v/v)來裂解保護基團時，觀測到化合物A/化合物A脫水物之比率(1：2)。
因此，尋找將脫水物副產物轉化成期望產物之方式。現已發現，此可藉由在充分界定之條件下在水存在下產物混合物之酸催化平衡來達成。將水添加至實例1之反應混合物中，且隨後在室溫下攪拌19h，得到化合物A/化合物A脫水物之比率為約96：4之產物混合物。因此，在酸催化去保護步驟(反應圖4)之後將水添至反應混合物中將化合物A/化合物A脫水物之比率自水游離條件下之(1：2)改變至水添加及平衡後之(96：4)。
在酸性去保護條件下自化合物A形成化合物A脫水物係藉由使用存於DCM中之三氟乙酸之純化合物A至化合物A脫水物之轉化來證實。化合物A在室溫下經存於DCM中之33%(v/v)TFA處理2h，得到化合物A脫水物/化合物A之比率為78：22(根據HPLC)之產物混合物。當將吸水劑(例如分子篩)添加至反應混合物中時，可使脫水達到>95%之轉化率。因此，在分子篩存在下攪拌存於TFA/DCM之1：2混合物中之純化合物A，得到定量粗產率及約96面積% HPLC純度之脫水產物(實例3 B)。仍有約4面積%之化合物A存在於粗製產物中。
來自實例3 B之化合物A脫水物至化合物A之轉化係藉由在三氟乙酸及水存在下攪拌存於二氯甲烷中之化合物A脫水物(實例3 C)來證實。根據HPLC，由此獲得之產物包含95.6面積%化合物A及僅4.4面積%化合物A脫水物。
反應圖7：
對於化合物A之物理數據，參見實例1E(B)及2I)。
平衡亦使5員環半胺縮醛異構物轉化成化合物A，該化合物A係6員環半胺縮醛。該5員環半胺縮醛異構物係在醛官能基之去保護後作為動力學產物大量形成(反應圖3)。此異構物在平衡期間轉化成熱力學上更加穩定之化合物A。

Claims (19)

  1. 一種製備式I之環縮肽化合物之方法， 其中A1係具有末端羧基或胺甲醯基之胺基酸之二價部分，且在式I中在其右手側處經由羰基結合至分子之其餘部分；或係C1-8-烷醯基或磷酸化之羥基-C1-8-烷醯基；X係經由A1之N結合且係醯基，或者若A1係C1-8-烷醯基或磷酸化之羥基-C1-8-烷醯基，則X不存在；R2係C1-8-烷基；R3係胺基酸之側鏈；R5係胺基酸之側鏈；R6係羥基胺基酸之側鏈；R7係胺基酸之側鏈；且Y係氫或C1-8-烷基；或其鹽，該方法包含使式II之化合物去保護， 其中醛保護基團Rk及Rl彼此獨立地係未經取代或經取代之烷基或與兩個結合O原子及該兩個O原子所結合之碳原子一起形成未經取代或經取代之環，Y係如針對該式I之化合物所定義，且X*、A1*、R2*、R3*、R5*、R6*及R7*分別對應於式I中之X、A1、R2、R3、R5、R6及R7，但前提係該等部分上之反應性官能基至少若可參與不期望之副反應則係以經保護形式存在，從而產生該式I之化合物；且若需要，將該式I之游離化合物轉化成鹽，將該式I之化合物之鹽轉化成該式I之化合物之不同鹽，或轉化成該式I之游離化合物，及/或將該式I之化合物之脫水物類似物及/或五員環類似物轉化成該式I之相應化合物。
  2. 如請求項1之方法，其包含藉由固相肽合成及溶液相合成之組合自相應起始胺基酸及側鏈前體製造該式II之化合物。
  3. 如請求項1或2之方法，其對於如請求項1中所給該式II之化合物之合成包含在允許自N-末端胺基及C-末端羧基形成醯胺鍵之反應條件下，較佳地使用溶液相化學之攜載該胺基及該羧基之該 式II之化合物之直鏈未環化前體肽的內醯胺化下進行環化。
  4. 如請求項3之方法，其中該直鏈前體肽具有式III， 其中Rk、Rl、X*、A1*、R2*、R3*、R5*、R6*及R7*係如請求項1中針對該式II之化合物所定義，其可自固相肽合成直接獲得(例如如在步驟(iii/b)下所闡述)或藉由自相應式III*化合物去保護而獲得， 其中Rk、Rl、X*、A1*、R2*、R3*、R5*、R6*及R7*係如上文針對該式II之化合物所定義，且其中Prot**部分中之每一者皆係 可在適宜條件下藉由使該經保護胺基去保護去除之保護基團。
  5. 如請求項4之方法，其對於該式III之化合物或該式III*之化合物之合成進一步包含裂解式IV之化合物， 其中Rk、Rl、X*、A1*、R2*、R3*、R5*、R6*及R7*係如請求項1針對該式II之化合物所定義，L係可裂解連接體，RES係固體樹脂，n係不包括0之自然數，且Z係式NHProt*之經保護胺基，其中Prot*係保護基團，其可(且係)在該裂解反應之前或期間去除或之後進一步去除，從而得到該式III之化合物；或Z係式N(Prot**)2之經保護胺基，其中每一Prot**皆係可在不同於該裂解反應之條件下去除從而得到該式III*之化合物之胺基保護基團。
  6. 如請求項5之方法，其對於該式IV之化合物之合成進一步包含使式V之胺基酸， 其中Rk及Rl係如請求項1及上文針對該式II之化合物所定義， 且Z係該式NHProt*之經保護胺基，其中Prot*係保護基團，其可(且係)在(iii/b)下之該裂解反應之前或期間去除或之後進一步去除；或Z係該式N(Prot**)2之經保護胺基，其中每一Prot**皆係可在不同於如請求項5之裂解反應之條件下去除之胺基保護基團，或該胺基酸之活化衍生物，與式VI之化合物偶合， 其中X*、A1*、R2*、R3*、R5*、R6*及R7*係如請求項1中針對該式II之化合物所定義，L係可裂解連接體，RES係固體樹脂，且n係不包括0之自然數。
  7. 如請求項6之方法，其對於該式VI之化合物之合成進一步包含使式VII之胺基酸 其中R5*係如請求項1中針對該式II之化合物所定義，且Prot***係可選擇性裂解而不影響所存在之其他保護基團且產物保留在該樹脂上之胺基保護基團，或該胺基酸之反應性衍生物，與式VIII之化合物偶合， 其中X*、A1*、R2*、R3*、R6*及R7*係如請求項1中針對該式II之化合物所定義，L係可裂解連接體，RES係固體樹脂，且n係不包括0之自然數；及去除該保護基團Prot***。
  8. 如請求項7之方法，其對於該式VIII之化合物之合成進一步包含使式IX之胺基酸， 其中R6*及Y係如請求項1中針對該式II之化合物所定義，且Prot***係可選擇性裂解除去而不影響所存在之其他保護基團且產物保留在該樹脂上之胺基保護基團，或該胺基酸之反應性衍生物，與式X之化合物偶合， 其中X*、A1*、R2*、R3*及R7*係如請求項1中針對該式II之化合物所定義，L係可裂解連接體，RES係固體樹脂，且n係不包括0之自然數；及去除該保護基團Prot***。
  9. 如請求項8之方法，其對於該式X之化合物之合成進一步包含使式XI之胺基酸， 其中Prot***係可選擇性裂解除去而不影響所存在之其他保護基團且產物保留在該樹脂上之胺基保護基團，且R7*係如請求項1中針對該式II之化合物所定義，或該胺基酸之反應性衍生物，與式XII之化合物之羥基反應， 其中X*、A1*、R2*及R3*係如請求項1中針對該式II之化合物所定義，L係可裂解連接體，RES係固體樹脂，且n係不包括0之自然數；及去除該保護基團Prot***。
  10. 如請求項9之方法，其對於該式XII之化合物之合成進一步包含使由式XIII表示的樹脂結合二肽， 其中Prot****係可選擇性裂解除去而不影響如上文所定義該式II之化合物中所存在之其他保護基團且產物保留在該樹脂上之保護基團，R2*及R3*係如請求項1中針對該式II之化合物所定義，L係可裂解連接體，RES係固體樹脂，且n係不包括0之自然數；在去除該保護基團Prot****之後經由可由此獲得之游離胺基與式XIV之酸偶合， 其中X**係胺基保護基團或係X*，且其中X*及A1*係如請求項1中針對該式II之化合物所定義；或與該酸之反應性衍生物偶合；且，若X**係胺基保護基團，則去除該胺基保護基團X**以產生式II之衍生物，其中存在H而非X*，並使用相應酸X*-OH或該酸之反應性衍生物使所得胺基與醯基X*偶合，其中X*係如上文針對該式II之化合物所定義。
  11. 如請求項10之方法，其對於式XIII之化合物之合成進一步包含 使由式XV表示的樹脂結合胺基酸， 其中R3*係如請求項1中針對該式II之化合物所定義，L係可裂解連接體，RES係固體樹脂，且n係不包括0之自然數，與式XVI之胺基酸偶合， 其中Prot****係可選擇性裂解除去而不影響所存在之其他保護基團且產物保留在該樹脂上之保護基團，且R2*係如請求項1中針對該式II之化合物所定義；或與該胺基酸之反應性衍生物偶合。
  12. 如請求項11之方法，其對於式XIIIA之化合物之合成包含偶合由該式XV表示之樹脂結合胺基酸， 其中Prot****、R2*及R3*、L、RES及n係如請求項10中針對該式XIII之化合物所定義。
  13. 如請求項1或2之方法，其中符號A1、R2、R3、R5、R6、R7、X及Y或相應未經保護或經保護部分R2*、R3*、R5*、R6*、R7*、X*及Y3經選擇，以使得在所得該式I之化合物或其鹽中，A1係L-麩醯胺酸之二價基團，其經由其α-羧基之羰基結合至式I中A1右側之胺基且經由其α-胺基結合至X，或係2S-(2-羥基-3-膦醯氧基)-丙醯基；R2係甲基；R3係異丙基、異丁基或苄基，尤其係異丁基；R5係第二丁基或苄基，尤其係第二丁基；R6係4-羥基苄基； R7係異丙基或第二丁基，尤其係第二丁基；X係乙醯基或異丁醯基，或者若A1係2S-(2-羥基-3-膦醯氧基)-丙醯基，則X不存在，且Y係甲基。
  14. 一種將在每一情形下根據如請求項1之方法或製程獲得之如請求項1中所給或具有如請求項13中所定義之取代基之式I之化合物的脫水物轉化成相應的該式I之化合物之方法，其中該脫水物具有式V， 其中Y、X、A1、R2、R3、R5、R6及R7係如請求項1及11中任一項中針對該式I之化合物所定義；及/或轉化成其具有五員環而非式I中之ahp結構之相應半胺縮醛類似物，該類似物亦可作為副產物而形成且具有式V*， 其中Y、X、A1、R2、R3、R5、R6及R7分別係如請求項1及17中任一項中針對該式I之化合物所定義； 或一種使根據如請求項1之方法或製程獲得之該式I之化合物及其相應脫水物及/或半胺縮醛之混合物之平衡移位以有利於該式I之化合物的方法或製程，該方法或製程包含使用酸水溶液作為反應性溶劑來驅動該反應。
  15. 一種式XX之化合物， 其中Rk及Rl係如請求項1中針對該式II之化合物所定義，Y係如請求項1或具體而言如請求項14中針對該式I之化合物所定義，且X*、A1*、R2*、R3*、R5*、R6*及R7*分別對應於如請求項1中所定義之式I中之X、A1、R2、R3、R5、R6及R7，然而前提係該等部分上之反應性官能基係以經保護形式存在。
  16. 如請求項15之化合物，其係式XXA之化合物， 其中Rk及Rl係如請求項1中針對該式II之化合物所定義，Y係如請求項1或具體而言如請求項14中針對該式I之化合物所定義，且X*、A1*、R2*、R3*、R5*、R6*及R7*分別對應於如請求項1中所定義之式I中之X、A1、R2、R3、R5、R6及R7，然而前提係該等部分上之反應性官能基係以經保護形式存在。
  17. 一種合成如請求項6中所提及該式V之化合物之方法或製程，其：(a)在合成該式V之化合物之情形下，其中Rk及Rl一起形成未經取代或經取代之低碳數伸烷基橋，係根據以下反應圖來達成，另一選擇為經由路徑(i)1*->2*->3*、(ii)1*->2*->4*->5*或(iii)1*->2*->3*->5*來達成： 其中Rk、Rl具有剛剛所指示之含義，且Z具有如請求項6中針對該式V之化合物所提及之含義；或(b)在合成該式V之化合物之情形下，其中Rk及Rl中之每一者皆係未經取代或經取代之烷基部分，係根據以下反應圖來達成： 其中Rk、Rl具有剛剛所指示之含義，且Prot*具有如請求項6中針對該式V之化合物所提及之含義。
  18. 一種化合物，其係選自下列化合物之群：a)下式之化合物：，尤其，更尤其 下式之化合物： ，尤其，更尤其 下式之化合物：，尤其，更尤其 下式之化合物：，尤其，更尤其 其中若有所提及，則部分Prot*、Prot**、Rk及Rl係如請求項6中針對該式V之化合物所定義；b)式II之化合物， 其中各取代基係如請求項1中所定義，尤其下式之化合物， 或下式之化合物， c)式III之化合物， 其中各取代基係如請求項3中所定義，尤其下式之化合物， 或下式之化合物， 及d)式III*之化合物， 其中各取代基係如請求項4中所定義，尤其下式之化合物， 或在每一情形下其鹽。
  19. 一種化合物，其係選自以下化合物之群：下式之化合物， 尤其下式之化合物， 下式之化合物， 尤其下式之化合物， 下式之化合物， 尤其下式之化合物， 下式之化合物， 具體而言下式之化合物， 尤其下式之化合物， 及下式之化合物， 具體而言下式之化合物， 尤其下式之化合物， 其中若有所提及，則Rk及Rl係經取代之烷基部分，例如1-芳烷基；或一起形成未經取代或經取代之伸烷基橋，例如-CH2-CH2-或-CH2-CH2-CH2-；或在每一情形下其鹽。
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