TW201728340A - 包含肽基之結合物及與其相關之方法 - Google Patents

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Abstract

在一些態樣中，本發明係關於一種抗體-藥物結合物，其包含抗體；連接子；及至少兩種活性劑。在較佳實施例中，連接子包含具有複數個胺基酸之肽序列，且活性劑中之至少兩者共價偶合於胺基酸之側鏈。抗體-藥物結合物可包含自消耗基團，較佳兩個自消耗基團。連接子可包含O取代之肟，例如其中肟之氧原子經將肟共價連接於活性劑之基團取代；且肟之碳原子經將肟共價連接於抗體之基團取代。

Description

包含肽基之結合物及與其相關之方法
本發明係關於一種抗體-藥物結合物(ADC)。特定言之，本發明係關於一種抗體-藥物結合物，其包含抗體；連接子；及至少兩種活性劑。
抗體-藥物結合物(ADC)技術為一種面向標靶之技術，其允許癌細胞之選擇性凋亡。通常，ADC藉由使用抗體靶向癌細胞且接著在細胞中釋放毒性物質(亦即藥物)，從而觸發細胞死亡來起作用。因為ADC技術允許藥物準確傳遞至標靶癌細胞且在特定條件下釋放，所以在對健康細胞之附帶損害減至最低的同時，ADC技術增加治療抗體之功效且降低不良反應之風險。 近來，已描述新的製備抗體-藥物結合物之方法，其使用C端胺基酸序列之蛋白質異戊烯化來安置經改質之類異戊二烯單元，該類異戊二烯單元允許藥物或其他活性劑以輕度及位點特異性方式附接至抗體(例如參見美國專利公開案第2012/0308584號)。可進一步優化。 仍然需要改善之ADC組態策略。
在一些態樣中，本發明係關於一種抗體-藥物結合物，其包含抗體；連接子；及至少兩種活性劑。在較佳實施例中，連接子包含具有複數個胺基酸之肽序列，且活性劑中之至少兩者共價偶合於胺基酸之側鏈。抗體-藥物結合物可包含自消耗基團，較佳兩個自消耗基團。連接子可包含O取代之肟，例如其中肟之氧原子經將肟共價連接於活性劑之基團取代；且肟之碳原子經將肟共價連接於抗體之基團取代。 在一些態樣中，本發明係關於一種抗體-藥物結合物，其包含抗體；共價偶合於抗體之連接子；及至少兩種共價偶合於連接子之活性劑。連接子可包含具有複數個胺基酸之肽序列。活性劑中之至少兩者可共價偶合於胺基酸之側鏈。 活性劑中之至少兩者可共價偶合於離胺酸、5-羥基離胺酸、4-氧雜離胺酸、4-硫雜離胺酸、4-硒雜離胺酸、4-硫雜高離胺酸、5,5-二甲基離胺酸、5,5-二氟離胺酸、反式- 4-去氫離胺酸、2,6-二胺基-4-己炔酸、順式- 4-去氫離胺酸、6-N -甲基離胺酸、二胺基庚二酸、鳥胺酸、3-甲基鳥胺酸、α-甲基鳥胺酸、瓜胺酸及/或高瓜胺酸之側鏈。舉例而言，活性劑中之至少兩者可共價偶合於離胺酸或鳥胺酸之側鏈。 複數個胺基酸可包含L-胺基酸或D-胺基酸。複數個胺基酸可包含α-胺基酸或β-胺基酸。複數個胺基酸可包含丙胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺、麩胺酸、麩醯胺酸、甘胺酸、組胺酸、離胺酸、鳥胺酸、脯胺酸、絲胺酸及/或蘇胺酸。在某些較佳實施例中，肽不包含異白胺酸、甲硫胺酸、白胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、酪胺酸或纈胺酸。肽可包含2至20個胺基酸。 在較佳實施例中，肽之N端或C端經將至少一種活性劑共價連接於肽之基團取代。在較佳實施例中，肽之N端或C端經將抗體共價連接於肽之基團取代。 在一些實施例中，連接子包含O取代之肟；該肟之氧原子經將肟共價連接於肽之基團取代；且該肟之碳原子經將肟共價連接於抗體之基團取代。在一些實施例中，連接子包含O取代之肟；該肟之碳原子經將肟共價連接於肽之基團取代；且該肟之氧原子經將肟共價連接於抗體之基團取代。 在一些實施例中，連接子包含具有1至100個碳原子之伸烷基。伸烷基可包含至少一個不飽和鍵。在較佳實施例中，伸烷基包含伸烷基之至少一個碳原子經一或多個選自氮(N)、氧(O)及硫(S)之雜原子置換。在某些實施例中，伸烷基經至少一個具有1至20個碳原子之烷基進一步取代。 在較佳實施例中，連接子藉由硫醚鍵共價結合於抗體，且硫醚鍵包含抗體之半胱胺酸之硫原子。 在一些實施例中，抗體包含由類異戊二烯轉移酶所識別之C端胺基酸模體；且硫醚鍵包含胺基酸模體之半胱胺酸之硫原子。 在一些實施例中，抗體包含胺基酸模體且胺基酸模體為選自CXX、CXC、XCXC、XXCC及CYYX之序列，其中C表示半胱胺酸；Y每次出現時均獨立地表示脂族胺基酸；且X每次出現時均獨立地表示麩醯胺酸、麩胺酸、絲胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸、丙胺酸或白胺酸。在某些較佳實施例中，連接子藉由包含胺基酸模體之半胱胺酸之硫原子的硫醚鍵共價結合於抗體。胺基酸模體可為序列CYYX；其中Y每次出現時均獨立地表示丙胺酸、異白胺酸、白胺酸、甲硫胺酸或纈胺酸。舉例而言，胺基酸模體可為CVIM或CVLL。在較佳實施例中，在胺基酸模體前之七個胺基酸中之至少一者為甘胺酸。 在一些實施例中，在胺基酸模體前之七個胺基酸中之至少三者各獨立地選自甘胺酸及脯胺酸。在某些較佳實施例中，在胺基酸模體前之一至十個胺基酸可為甘胺酸，較佳至少五個(例如GGGGG)，諸如其中在胺基酸模體前之五個、六個、七個、八個、九個或十個胺基酸各為甘胺酸。在某些較佳實施例中，在胺基酸模體前之七個胺基酸中之至少三者各獨立地選自甘胺酸、天冬胺酸、精胺酸及絲胺酸。 在某些較佳實施例中，抗體之C端包含胺基酸序列GGGGGGGCVIM。 在一些實施例中，連接子藉由硫醚鍵共價結合於抗體，且硫醚鍵包含至少一個由表示異戊二烯基單元之碳原子，例如其中n為至少2。連接子可包含肟，且至少一個異戊二烯基單元將肟共價連接於抗體。 在一些實施例中，連接子可包含或。 在一些實施例中，連接子包含：或。 在一些實施例中，連接子包含至少一個由或表示之聚乙二醇單元。 在一些實施例中，連接子包含有包含1至20個-OCH2 CH2 -單元之連接子。舉例而言，連接子可包含4至20個-OCH2 CH2 -單元。在某些較佳實施例中，連接子可包含1至12個-OCH2 CH2 -單元。在其他較佳實施例中，連接子可包含3至12個-OCH2 CH2 -單元。在一些實施例中，連接子包含肟，且至少一個聚乙二醇單元將肟共價連接於肽。 在一些實施例中，連接子包含由-(CH2 )r (V(CH2 )p )q -表示之連接單元，其中： r為整數0至10，較佳2； p為整數0至12，較佳2； q為整數1至20； V為單一鍵、-O-、-S-、-NR21 -、-C(O)NR22 -、-NR23 C(O)-、-NR24 SO2 -或-SO2 NR25 -，較佳-O-；且 R21 至R25 各獨立地為氫、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基(C6 -C20 )芳基或(C1 -C6 )烷基(C3 -C20 )雜芳基。 在一些實施例中，連接子包含由-(CH2 )r (V(CH2 )p )q -、-((CH2 )p V)q -、-(CH2 )r (V(CH2 )p )q Y-、-((CH2 )p V)q (CH2 )r -、-Y(((CH2 )p V)q -或-(CH2 )r (V(CH2 )p )q YCH2 -表示之連接單元， 其中： r為整數0至10； p為整數1至10； q為整數1至20； V及Y各獨立地為單一鍵、-O-、-S-、-NR21 -、-C(O)NR22 -、-NR23 C(O)-、-NR24 SO2 -或-SO2 NR25 -；且 R21 至R25 各獨立地為氫、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基(C6 -C20 )芳基或(C1 -C6 )烷基(C3 -C20 )雜芳基。 在此等連接子之某些較佳實施例中，q為整數4至20。在一些實施例中，q為整數6至20。在其他較佳實施例中，q為整數2至12。在一些實施例中，q為2、5或11。 在此等連接子之一些實施例中，r為2。在此等連接子之一些實施例中，p為2。在一些實施例中，V及Y各獨立地為-O-。在一些實施例中，r為2，p為2，q為2、5或11，且V為-O-。 在一些實施例中，連接子包含由-(CH2 CH2 X)w -表示之連接單元，其中： X表示-O-、(C1 -C8 )伸烷基或-NR21 -，較佳-O-； R21 表示氫、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基(C6 -C20 )芳基或(C1 -C6 )烷基(C3 -C20 )雜芳基，較佳氫；且 w為整數1至20，較佳4至12。 在一些實施例中，連接子包含藉由1,3-偶極環加成反應、雜狄爾斯-阿德反應(hetero-Diels-Alder reaction)、親核取代反應、非醇醛型羰基反應、碳-碳複鍵加成、氧化反應或點擊反應形成之結合單元。舉例而言，結合單元可藉由乙炔與疊氮化物之間的反應，或醛基或酮基與肼或烷氧基胺之間的反應來形成。 結合單元可由式A、B、C或D中任一者，較佳C或D表示：其中： L1 為單一鍵或具有1至30個碳原子，較佳12個碳原子之伸烷基； R11 為氫或具有1至10個碳原子之烷基，較佳甲基；且 L2 為具有1至30個碳原子，例如10或11個碳原子，較佳11之伸烷基。 在一些實施例中，連接子包含或；其中 V為單一鍵、-O-、-S-、-NR21 -、-C(O)NR22 -、-NR23 C(O)-、-NR24 SO2 -或-SO2 NR25 -，較佳-O-； R21 至R25 各獨立地為氫、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基(C6 -C20 )芳基或(C1 -C6 )烷基(C3 -C20 )雜芳基； r為整數1至10，較佳3； p為整數0至10，較佳2； q為整數1至20，較佳2至20；且 L1 為單一鍵。 在一些實施例中，抗體-藥物結合物包含式V之結構：(V) 其中： A表示抗體； P表示肽； B1 表示第一活性劑； B2 表示第二活性劑；且 n為整數1至20。 在一些實施例中，抗體-藥物結合物包含式VI之結構：(VI) 其中 A表示抗體； P表示肽； B1 表示第一活性劑； B2 表示第二活性劑；且 n為整數1至20。 在一些實施例中，結合物包含下式之結構：其中 A表示配位體； PP表示肽； B1 表示第一活性劑； B2 表示第二活性劑； L1 表示連接子，視情況包括裂解基團； L2 表示連接子，視情況包括裂解基團；且 n為整數1至20。 在一些實施例中，結合物包含下式之結構：其中 A表示配位體； PP表示肽； B1 表示第一活性劑； B2 表示第二活性劑； B3 表示第三活性劑； L1 表示連接子，視情況包括裂解基團； L2 表示連接子，視情況包括裂解基團； L3 表示連接子，視情況包括裂解基團；且 n為整數1至20。 在一些實施例中，結合物包含下式之結構：其中 A表示配位體； PP表示肽； B1 表示第一活性劑； B11 表示第二活性劑； B12 表示第三活性劑； L1 表示連接子； L2 表示連接子； L11 表示次要連接子，視情況包括裂解基團； L12 表示次要連接子，視情況包括裂解基團； BU表示分支單元；且 n為整數1至20。 在一些實施例中，結合物包含下式之結構：其中 A表示配位體； PP表示肽； B1 表示第一活性劑； B2 表示第二活性劑； L1 表示連接子，視情況包括裂解基團； L2 表示連接子，視情況包括裂解基團；且 n為整數1至20。 在一些實施例中，結合物包含下式之結構：其中 A表示配位體； PP表示肽； B1 表示第一活性劑； B2 表示第二活性劑； B3 表示第三活性劑； L1 表示連接子，視情況包括裂解基團； L2 表示連接子，視情況包括裂解基團； L3 表示連接子，視情況包括裂解基團；且 n為整數1至20。 在一些實施例中，結合物包含下式之結構：其中 A表示配位體； PP表示肽； B1 表示第一活性劑； B11 表示第二活性劑； B12 表示第三活性劑； L1 表示連接子； L2 表示連接子； L11 表示次要連接子，視情況包括裂解基團； L12 表示次要連接子，視情況包括裂解基團； BU表示分支單元；且 n為整數1至20。 在某些較佳實施例中，配位體為抗體。抗體可為單株抗體、多株抗體、抗體片段、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2 、Fv、單鏈Fv (「scFv」)、雙功能抗體、線抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體、嵌合抗體、人類化抗體、人類抗體或包含抗體之抗原結合部分的融合蛋白。 抗體可選自莫羅單抗-CD3阿昔單抗(muromonab-CD3 abciximab)、利妥昔單抗(rituximab)、達利珠單抗(daclizumab)、帕利珠單抗(palivizumab)、英利昔單抗(infliximab)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、依那西普(etanercept)、巴利昔單抗(basiliximab)、吉妥珠單抗(gemtuzumab)、阿侖單抗(alemtuzumab)、替伊莫單抗(ibritumomab)、阿達木單抗(adalimumab)、阿法賽特(alefacept)、奧馬珠單抗(omalizumab)、艾法珠單抗(efalizumab)、托西莫單抗(tositumomab)、西妥昔單抗(cetuximab)、ABT-806、貝伐單抗(bevacizumab)、那他珠單抗(natalizumab)、蘭比珠單抗(ranibizumab)、帕尼單抗(panitumumab)、艾庫組單抗(eculizumab)、利納西普(rilonacept)、賽妥珠單抗(certolizumab)、羅米司亭(romiplostim)、AMG-531、戈利木單抗(golimumab)、優特克單抗(ustekinumab)、ABT-874、貝拉西普(belatacept)、貝利單抗(belimumab)、阿塞西普(atacicept)、抗CD20抗體、康納單抗(canakinumab)、托西利單抗(tocilizumab)、阿利珠單抗(atlizumab)、美泊利單抗(mepolizumab)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、HuMax CD20、曲美單抗(tremelimumab)、替西單抗(ticilimumab)、伊派利單抗(ipilimumab)、IDEC-114、伊諾妥珠單抗(inotuzumab)、HuMax EGFR、阿柏西普(aflibercept)、HuMax-CD4、替利珠單抗(teplizumab)、奧昔珠單抗(otelixizumab)、卡托莫西單抗(catumaxomab)、抗EpCAM抗體IGN101、阿德卡單抗(adecatumomab)、奧戈伏單抗(oregovomab)、迪奴圖單抗(dinutuximab)、吉瑞昔單抗(girentuximab)、德諾單抗(denosumab)、貝頻珠單抗(bapineuzumab)、莫維珠單抗(motavizumab)、依夫單抗(efumgumab)、瑞昔單抗 (raxibacumab)、抗CD20抗體、LY2469298及維托珠單抗(veltuzumab)。 在一些實施例中，各活性劑獨立地選自化學治療劑及毒素。 各活性劑可獨立地選自： (a)埃羅替尼(erlotinib)、硼替佐米(bortezomib)、氟維司群(fulvestrant)、舒癌特(sutent)、來曲唑(letrozole)、甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate)、PTK787/ZK 222584、奧沙利鉑(oxaliplatin)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、甲醯四氫葉酸(leucovorin)、雷帕黴素(rapamycin)、拉帕替尼(lapatinib)、洛那法尼(lonafarnib)、索拉非尼(sorafenib)、吉非替尼(gefitinib)、AG1478、AG1571、噻替派(thiotepa)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)、哌泊舒凡(piposulfan)、苯唑多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、米特多巴(meturedopa)、尤利多巴(uredopa)、伸乙基亞胺、六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基三聚氰胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺、三羥甲基蜜胺(trimethylolomelamine)、布拉他辛(bullatacin)、布拉他辛酮(bullatacinone)、喜樹鹼(camptothecin)、拓朴替康(topotecan)、苔蘚蟲素(bryostatin)、海綿抑素(callystatin)、CC-1065、阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)、比折來新(bizelesin)、念珠藻素1、念珠藻素8、海兔毒素(dolastatin)、倍癌黴素(duocarmycin)、KW-2189、CB1-TM1、艾榴塞洛素(eleutherobin)、水鬼蕉鹼(pancratistatin)、沙考地汀(sarcodictyin)、海綿抑素(spongistatin)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、甲氮芥(mechlorethamine)、美法侖(melphalan)、新恩比興(novembichin)、芬司特瑞(phenesterine)、潑尼氮芥(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)、卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimnustine)、卡奇黴素(calicheamicin)、卡奇黴素γ1(calicheamicin gamma 1)、卡奇黴素Ω1(calicheamicin omega 1)、達內黴素(dynemicin)、達內黴素A、氯屈膦酸鹽(clodronate)、埃斯培拉黴素(esperamicin)、新抑癌蛋白發色團(neocarzinostatin chromophore)、阿克拉黴素(aclacinomysins)、放射菌素(actinomycin)、安麯黴素(antrmycin)、偶氮絲胺酸(azaserine)、博來黴素(bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、卡拉比辛(carabicin)、洋紅黴素(carninomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色黴素(chromomycins)、放線菌素D(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、德托黴素(detorubucin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、小紅莓(doxorubicin)、嗎啉基-小紅莓、氰基嗎啉基-小紅莓、2-吡咯啉基-小紅莓、脂質體小紅莓(liposomal doxorubicin)、去氧小紅莓(deoxydoxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素C(mitomycin C)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycins)、培洛黴素(peplomycin)、潑非黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、奎那黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黴素(streptomigrin)、鏈脲菌素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、左柔比星(zorubicin)、5-氟尿嘧啶、迪諾特寧(denopterin)、甲胺喋呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)、氟達拉賓(fludarabine)、6-巰基嘌呤(6-mercaptopurine)、硫米嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thiguanine)、安西他濱(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)、卡魯睾酮(calusterone)、屈他雄酮丙酸鹽(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾內酯(testolactone)、胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)、亞葉酸(folinic acid)、乙醯葡醛酯(aceglatone)、醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)、胺基乙醯丙酸(aminolevulinic acid)、恩尿嘧啶(eniluracil)、安吖啶(amsacrine)、貝塔布辛(bestrabucil)、比生群(bisantrene)、艾達曲克(edatraxate)、得弗伐胺(defofamine)、秋水仙胺(demecolcine)、地吖醌(diaziquone)、艾弗鳥胺酸(elfornithine)、依利醋銨(elliptinium acetate)、依託格魯(etoglucid)、硝酸鎵(gallium nitrate)、羥基脲(hydroxyurea)、蘑菇多醣(lentinan)、氯尼達明(lonidainine)、美登素(maytansine)、安絲菌素(ansamitocins)、丙脒腙(mitoguazone)、米托蒽醌(mitoxantrone)、莫比達摩(mopidanmol)、二胺硝吖啶(nitraerine)、噴司他丁(pentostatin)、蛋胺氮芥(phenamet)、吡柔比星(pirarubicin)、洛索蒽醌(losoxantrone)、2-乙基醯肼(2-ethylhydrazide)、丙卡巴肼(procarbazine)、多醣-k(polysaccharide-k)、雷佐生(razoxane)、根瘤菌素(rhizoxin)、西索菲蘭(sizofiran)、螺旋鍺(spirogermanium)、細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)、三亞胺醌(triaziquone)、2,2',2''-三氯三乙胺、T-2毒素、弗納庫林A(verracurin A)、桿孢菌素A(roridin A)及胺癸叮(anguidine)、胺基甲酸酯(urethane)、長春地辛(vindesine)、達卡巴嗪(dacarbazine)、甘露氮芥(mannomustine)、二溴甘露醇(mitobronitol)、二溴衛矛醇(mitolactol)、哌泊溴烷(pipobroman)、加西托星(gacytosine)、阿拉伯糖苷(arabinoside)、環磷醯胺、噻替派、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、太平洋紫杉醇經白蛋白工程改造之奈米粒子調配物、多西他賽(doxetaxel)、苯丁酸氮芥、吉西他濱(gemcitabine)、6-硫代鳥嘌呤、巰基嘌呤、順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、長春鹼(vinblastine)、鉑、依託泊苷(etoposide)、異環磷醯胺(ifosfamide)、米托蒽醌(mitoxantrone)、長春新鹼(vincristine)、長春瑞賓(vinorelbine)、諾凡特龍(novantrone)、替尼泊苷(teniposide)、依達曲沙(edatrexate)、道諾黴素、胺基喋呤(aminopterin)、希羅達(xeloda)、伊班膦酸鹽(ibandronate)、CPT-11、拓樸異構酶抑制劑RFS 2000、二氟甲基鳥胺酸(difluoromethylornithine)、視黃酸、卡培他濱(capecitabine)或前述任一者之醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物或酸； (b)單核因子(monokine)、淋巴因子(lymphokine)、傳統多肽激素、副甲狀腺激素(parathyroid hormone)、甲狀腺素(thyroxine)、鬆弛素(relaxin)、鬆弛素原(prorelaxin)、醣蛋白激素、促卵泡激素(follicle stimulating hormone)、促甲狀腺激素(thyroid stimulating hormone)、促黃體激素(luteinizing hormone)、肝生長因子纖維母細胞生長因子、促乳素(prolactin)、胎盤催乳激素(placental lactogen)、腫瘤壞死因子-α、腫瘤壞死因子-β、苗勒氏管抑制物質(mullerian-inhibiting substance)、小鼠促性腺激素相關肽、抑制素、活化素、血管內皮生長因子、血小板生成素、紅血球生成素、骨誘導因子、干擾素、干擾素-α、干擾素-β、干擾素-γ、群落刺激因子(「CSF」)、巨噬細胞-CSF、顆粒細胞-巨噬細胞-CSF、顆粒細胞-CSF、介白素(「IL」)、IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、腫瘤壞死因子、TNF-α、TNF-β、多肽因子、LIF、kit配位體或前述任一者之組合； (c)白喉毒素(diphtheria toxin)、肉毒桿菌毒素(botulium toxin)、破傷風毒素(tetanus toxin)、痢疾毒素、霍亂毒素、瓢菌素(amanitin)、α-瓢菌素、瓢菌素衍生物、吡咯并苯并二氮呯(pyrrolobenzodiazepine)、吡咯并苯并二氮呯衍生物、河豚毒素鹼(tetrodotoxin)、短裸甲藻毒素(brevetoxin)、雪卡毒素(ciguatoxin)、蓖麻毒素、AM毒素、妥布賴森(tubulysin)、格爾德黴素(geldanamycin)、類美登素(maytansinoid)、卡奇黴素、道諾黴素、小紅莓、甲胺喋呤、長春地辛、SG2285、海兔毒素、海兔毒素類似物、阿瑞他汀、念珠藻素(cryptophycin)、喜樹鹼、喜樹鹼衍生物及代謝物(例如SN-38)、根瘤菌素、根瘤菌素衍生物、CC-1065、CC-1065類似物或衍生物、倍癌黴素、烯二炔抗生素、埃斯培拉黴素、埃坡黴素(epothilone)、阿那非德(azonafide)、阿匹立定(aplidine)、類毒素或前述任一者之組合； (d)親和配位體，其中該親和配位體為受質、抑制劑、刺激劑、神經傳導物、放射性同位素或前述任一者之組合； (e)放射性標記、32 P、35 S、螢光染料、電子緻密試劑、酶、生物素、抗生蛋白鏈菌素、地高辛、半抗原、免疫原性蛋白質、具有與標靶互補之序列的核酸分子或前述任一者之組合； (f)免疫調節化合物、抗癌劑、抗病毒劑、抗細菌劑、抗真菌劑及抗寄生蟲劑或前述任一者之組合； (g)他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、曲洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、克肟昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)或托瑞米芬(toremifene)； (h)4(5)-咪唑、胺魯米特、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)、依西美坦(exemestane)、來曲唑或阿那曲唑(anastrozole)； (i)氟他胺(flutamide)、尼魯胺(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、亮丙立德(leuprolide)、戈舍瑞林(goserelin)或曲沙他濱(troxacitabine)； (j)芳香酶抑制劑； (k)蛋白激酶抑制劑； (l)脂質激酶抑制劑； (m)反義寡核苷酸； (n)核糖核酸酶； (o)疫苗；以及 (p)抗血管生成劑。 在一些實施例中，至少一種活性劑為塔托布林(taltobulin)或阿那非德(azonafide)。 在一些實施例中，結合物包含選自以下之部分： 在某些實施例中，各活性劑獨立地選自瓢菌素、阿瑞他汀、卡奇黴素、喜樹鹼、念珠藻素、道諾黴素、海兔毒素、小紅莓、倍癌黴素、埃坡黴素、埃斯培拉黴素、格爾德黴素、類美登素、甲胺喋呤、單甲基阿瑞他汀E (「MMAE」)、單甲基阿瑞他汀F (「MMAF」)、吡咯并苯并二氮呯、根瘤菌素、SG2285、妥布賴森、長春地辛及類毒素或以上任一者之衍生物。舉例而言，各活性劑可獨立地選自瓢菌素、MMAE及MMAF，或以上任一者之衍生物。 在較佳實施例中，至少一種活性劑經由裂解基團，例如具有式(I)之結構的基團偶合於連接子：(I) 其中： B表示活性劑； G表示糖或糖酸，較佳葡糖醛酸； W表示拉電子基團，較佳-C(O)NR'-，其中C(O)鍵結於該苯環且NR'鍵結於L； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3，較佳3； R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環；且 L表示與抗體之連接。 在一些實施例中，至少一種活性劑經由具有下式之裂解基團偶合於連接子：其中： G表示糖、糖酸或經改質之糖，較佳糖或糖酸，最佳葡糖醛酸； W表示-C(O)-、-C(O)NR'-、-C(O)O-、-S(O)2 NR'-、-P(O)R''NR'-、-S(O)NR'-或-PO2 NR'-，在各情況下其中該C(O)、S或P較佳直接結合於該苯環，且R'及R''各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基、單或二羧基(C1 -C8 )烷基、(C3 -C8 )環烷基、(C1 -C8 )烷氧基、(C1 -C8 )烷硫基、單或二(C1 -C8 )烷基胺基、(C3 -C20 )雜芳基或(C6 -C20 )芳基； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3； m為0或1，較佳1；且 R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環。 在一些實施例中，至少一種活性劑經由具有下式之裂解基團偶合於連接子：或其醫藥學上可接受之鹽，其中 G表示糖、糖酸或經改質之糖，較佳糖或糖酸，最佳葡糖醛酸； B為共價附接於活性劑之單元， W表示-C(O)-、-C(O)NR'-、-C(O)O-、-S(O)2 NR'-、-P(O)R''NR'-、-S(O)NR'-或-PO2 NR'-，在各情況下其中該C(O)、S或P直接結合於該苯環，且R'及R''各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基、(C3 -C8 )環烷基、(C1 -C8 )烷氧基、(C1 -C8 )烷硫基、單或二(C1 -C8 )烷基胺基、(C3 -C20 )雜芳基或(C6 -C20 )芳基； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3，較佳3； L表示包含肽序列之連接子； R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環。 糖或糖酸可為例如單醣。在一些實施例中， G為； R3 為氫或羧基保護基；且 各R4 獨立地為氫或羥基保護基。 舉例而言，R3 可為氫且各R4 可為氫。 W可為-C(O)-、-C(O)NR'-、-C(O)O-、-S(O)2 NR'-、-P(O)R''NR'-、-S(O)NR'-或-PO2 NR'-，在各情況下其中該C(O)、S或P直接結合於該苯環，且R'及R''各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基、(C3 -C8 )環烷基、(C1 -C8 )烷氧基、(C1 -C8 )烷硫基、單或二(C1 -C8 )烷基胺基、(C3 -C20 )雜芳基或(C6 -C20 )芳基。在較佳實施例中，W表示-C(O)NR'-，其中C(O)鍵結於該苯環且NR'鍵結於L。 替代裂解基團包括纈胺酸-瓜胺酸-對胺基苯甲基胺基甲酸酯(VC-PABC)。 在較佳實施例中，Z表示氫且n為3。 在較佳實施例中，R1 及R2 各表示氫。 在較佳實施例中，G表示葡糖醛酸；W表示-C(O)NR'-，其中C(O)鍵結於該苯環且NR'鍵結於L；各Z獨立地表示氫；且R1 及R2 各表示氫。 B、B1 及/或B2 可各獨立地選自、、、、、、 、、、、、、、或， 其中y為整數1至10。 在一些實施例中，抗體-藥物結合物包含共價偶合於抗體之2至4個如前述請求項中任一項中所闡述之連接子，其中各連接子較佳包含具有複數個胺基酸之肽序列，且至少兩種活性劑較佳共價偶合於各連接子之胺基酸之側鏈。各連接子可偶合於抗體(例如抗體重鏈及輕鏈)之C端。 在各種實施例中，各活性劑可為相同活性劑。或者，抗體-藥物結合物可包含至少兩種不同活性劑，諸如其中各連接子載有與其他連接子不同之活性劑。 相關抗體-藥物結合物之結構及組分揭示於以全文引用之方式併入本文中之PCT/KR2015/005299中，尤其關於抗體-藥物結合物之化學式及通用結構、其組成部分(例如連接子、裂解基團等)以及如其中所揭示之其製備及用途。在某些較佳實施例中，本發明之各種結合物及其他態樣特別排除PCT/KR2015/005299中揭示之各種結構及方法。 在一些態樣中，本發明係關於一種醫藥組合物，其包含如本文所描述之抗體-藥物結合物及醫藥學上可接受之賦形劑。醫藥組合物可進一步包含治療有效量之化學治療劑。 在一些態樣中，本發明係關於一種治療個體之癌症的方法，其包含向該個體投與如本文所描述之醫藥組合物。 個體可為哺乳動物。舉例而言，個體可選自嚙齒動物、兔類動物、貓科動物、犬科動物、豬科動物、綿羊科動物、牛類動物、馬科動物及靈長類動物。在較佳實施例中，個體為人類。 在一些態樣中，本發明係關於一種用於製備如本文所描述之抗體-藥物結合物的方法，其包含使生物分子與前藥反應。生物分子較佳包含抗體及酮或醛。前藥較佳包含烷氧基胺。反應可產生肟，因此將抗體共價連接於前藥。 該方法可進一步包含將抗體異戊二烯化，藉此產生生物分子。舉例而言，抗體可包含異戊二烯化序列，且將抗體異戊二烯化可包含將抗體與類異戊二烯轉移酶及類異戊二烯轉移酶受質一起培育。受質較佳包含酮或醛。類異戊二烯轉移酶可為例如法呢基轉移酶或四異戊二烯基轉移酶。 在一些實施例中，本發明係關於一種用於製備如本文所描述之抗體-藥物結合物的方法，其包含將抗體異戊二烯化。舉例而言，抗體可包含異戊二烯化序列，且將抗體異戊二烯化可包含將抗體與類異戊二烯轉移酶及類異戊二烯轉移酶受質一起培育。在較佳實施例中，受質包含至少一種如本文所描述之活性劑。 在一些實施例中，本發明係關於一種連接子-活性劑化合物，配位體(較佳抗體)可結合於其，產生本發明之結合物之一。因此，在此類連接子-活性劑化合物中，i)連接子包含具有複數個胺基酸之肽序列；且ii)至少兩種活性劑共價偶合於胺基酸之側鏈。在一些此類實施例中，各活性劑藉由可水解以自配位體-活性劑化合物釋放活性劑之裂解基團偶合於肽序列。裂解基團可具有下式之結構：(I) 其中： B表示活性劑； G表示糖或糖酸，較佳葡糖醛酸； W表示拉電子基團，較佳-C(O)NR'-，其中C(O)鍵結於該苯環且NR'鍵結於L； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3，較佳3； R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環；且 L表示與肽序列之連接。 在其他實施例中，裂解基團可具有下式之結構：其中： G表示糖、糖酸或經改質之糖，較佳糖或糖酸，最佳葡糖醛酸； W表示-C(O)-、-C(O)NR'-、-C(O)O-、-S(O)2 NR'-、-P(O)R''NR'-、-S(O)NR'-或-PO2 NR'-，在各情況下其中該C(O)、S或P較佳直接結合於該苯環，且R'及R''各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基、單或二羧基(C1 -C8 )烷基、(C3 -C8 )環烷基、(C1 -C8 )烷氧基、(C1 -C8 )烷硫基、單或二(C1 -C8 )烷基胺基、(C3 -C20 )雜芳基或(C6 -C20 )芳基； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3； m為0或1，較佳1；且 R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環。 在其他實施例中，裂解基團可具有下式之結構：或其醫藥學上可接受之鹽，其中 G表示糖、糖酸或經改質之糖，較佳糖或糖酸，最佳葡糖醛酸； B為共價附接於活性劑之單元， W表示-C(O)-、-C(O)NR'-、-C(O)O-、-S(O)2 NR'-、-P(O)R''NR'-、-S(O)NR'-或-PO2 NR'-，在各情況下其中該C(O)、S或P直接結合於該苯環，且R'及R''各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基、(C3 -C8 )環烷基、(C1 -C8 )烷氧基、(C1 -C8 )烷硫基、單或二(C1 -C8 )烷基胺基、(C3 -C20 )雜芳基或(C6 -C20 )芳基； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3，較佳3； L表示肽序列； R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環。 在另一態樣中，本發明係關於可偶合於活性劑及配位體(較佳抗體)，產生本發明之結合物的連接子化合物。因此，在此類連接子化合物中，i)連接子包含具有複數個胺基酸之肽序列；且ii)至少兩個裂解基團共價偶合於胺基酸之側鏈，其中各裂解基團具有能夠與活性劑反應之反應部分。裂解基團可具有下式之結構：(I) 其中： B表示能夠置換活性劑之離去基，諸如鹵素(尤其Cl或Br)或包含能夠偶合於活性劑之反應部分的單元，諸如異氰酸酯、酸氯化物、氯甲酸酯等； G表示糖或糖酸，較佳葡糖醛酸； W表示拉電子基團，較佳-C(O)NR'-，其中C(O)鍵結於該苯環且NR'鍵結於L；各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3，較佳3； R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環；且 L表示與肽序列之連接。 或者，裂解基團可具有下式之結構：其中： G表示糖、糖酸或經改質之糖，較佳糖或糖酸，最佳葡糖醛酸； W表示-C(O)-、-C(O)NR'-、-C(O)O-、-S(O)2 NR'-、-P(O)R''NR'-、-S(O)NR'-或-PO2 NR'-，在各情況下其中該C(O)、S或P較佳直接結合於該苯環，且R'及R''各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基、單或二羧基(C1 -C8 )烷基、(C3 -C8 )環烷基、(C1 -C8 )烷氧基、(C1 -C8 )烷硫基、單或二(C1 -C8 )烷基胺基、(C3 -C20 )雜芳基或(C6 -C20 )芳基； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3； m為0或1，較佳1；且 R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環。 或者，裂解基團可具有下式之結構：或其醫藥學上可接受之鹽，其中 G表示糖、糖酸或經改質之糖，較佳糖或糖酸，最佳葡糖醛酸； B為包含能夠偶合於活性劑之反應部分的單元， W表示-C(O)-、-C(O)NR'-、-C(O)O-、-S(O)2 NR'-、-P(O)R''NR'-、-S(O)NR'-或-PO2 NR'-，在各情況下其中該C(O)、S或P直接結合於該苯環，且R'及R''各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基、(C3 -C8 )環烷基、(C1 -C8 )烷氧基、(C1 -C8 )烷硫基、單或二(C1 -C8 )烷基胺基、(C3 -C20 )雜芳基或(C6 -C20 )芳基； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3，較佳3； L表示包含肽序列之連接子； R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環。 在一些此類實施例中，G為； 其中R3 為氫或羧基保護基；且 各R4 獨立地為氫或羥基保護基。 在一些實施例中，連接子包含由-(CH2 )r (V(CH2 )p )q -、-((CH2 )p V)q -、-(CH2 )r (V(CH2 )p )q Y-、-((CH2 )p V)q (CH2 )r -、-Y(((CH2 )p V)q -或-(CH2 )r (V(CH2 )p )q YCH2 -表示之連接單元， 其中： r為整數0至10； p為整數1至10； q為整數1至20； V及Y各獨立地為單一鍵、-O-、-S-、-NR21 -、-C(O)NR22 -、-NR23 C(O)-、-NR24 SO2 -或-SO2 NR25 -；且 R21 至R25 各獨立地為氫、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基(C6 -C20 )芳基或(C1 -C6 )烷基(C3 -C20 )雜芳基。
相關申請案之交叉參考 本申請案主張2015年11月25日申請之美國臨時申請案第62/259,997號及2015年11月25日申請之美國臨時申請案第62/260,006號的優先權益，各案以全文引用的方式併入本文中。 本發明係關於抗體-藥物結合物(ADC)，其中複數種藥物經由連接子結合於抗體。連接子較佳包含具有複數個胺基酸之肽序列，其中活性劑中之至少兩者共價偶合於胺基酸之側鏈。然而，如熟習此項技術者將認識到，此類結合物之抗體部分可經任何適合之配位體置換，且因此本發明同等地關於配位體-藥物結合物。因此，在上下文不矛盾下本文中提及及論述抗體-藥物結合物應理解為同等適用於配位體-藥物結合物及其對應中間物(例如配位體-連接子結合物)。在與本文所揭示之各種配位體-藥物結合物相關之所有態樣中，然而，配位體較佳為抗體。 在某些此類實施例中，兩個或兩個以上此類連接子結合於抗體，例如2-4個連接子，其各可偶合於抗體之重鏈或輕鏈的不同C端半胱胺酸。 活性劑可共價偶合於胺基酸(本文中稱為「連接胺基酸」)之側鏈。在某些較佳實施例中，連接胺基酸，諸如連接子中之各連接胺基酸，為離胺酸或鳥胺酸。然而，在本發明之各種實施例中，許多其他胺基酸可為連接胺基酸。舉例而言，連接胺基酸可選自離胺酸、5-羥基離胺酸、4-氧雜離胺酸、4-硫雜離胺酸、4-硒雜離胺酸、4-硫雜高離胺酸、5,5-二甲基離胺酸、5,5-二氟離胺酸、反式-4-去氫離胺酸、2,6-二胺基-4-己炔酸、順式-4-去氫離胺酸、6-N -甲基離胺酸、二胺基庚二酸、鳥胺酸、3-甲基鳥胺酸、α-甲基鳥胺酸、瓜胺酸及高瓜胺酸。連接胺基酸可為L-胺基酸或D-胺基酸。連接胺基酸可為α-胺基酸或β-胺基酸。連接胺基酸可為天然存在之胺基酸或非天然存在之胺基酸。 肽可包含2至20個胺基酸。肽之大部分胺基酸可獨立地選自丙胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺、麩胺酸、麩醯胺酸、甘胺酸、離胺酸、鳥胺酸、脯胺酸、絲胺酸及蘇胺酸。舉例而言，肽之各胺基酸可獨立地選自丙胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺、麩胺酸、麩醯胺酸、甘胺酸、離胺酸、鳥胺酸、脯胺酸、絲胺酸及蘇胺酸。 在較佳實施例中，例如除連接胺基酸之外，肽亦包含至少一種親水性胺基酸。親水性胺基酸可增加抗體-藥物結合物、連接子及/或抗體-藥物結合物之前驅物的水溶性。各親水性胺基酸可為天然存在之胺基酸或非天然存在之胺基酸。親水性胺基酸可為α-胺基酸或β-胺基酸。親水性胺基酸可為精胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺、麩胺酸、麩醯胺酸、組胺酸、離胺酸、鳥胺酸、脯胺酸、絲胺酸或蘇胺酸，且可為D-胺基酸或L-胺基酸。在較佳實施例中，肽包含選自天冬胺酸或麩胺酸之親水性胺基酸，諸如L-天冬胺酸或L-麩胺酸。在其他較佳實施例中，肽包含選自離胺酸或精胺酸之親水性胺基酸，諸如L-離胺酸或L-精胺酸。在某些實施例中，肽包含側鏈具有在水溶液中在中性pH值下載有電荷之部分(例如胺、胍或羧基部分)的親水性胺基酸。 肽可包含天然存在之胺基酸及/或非天然存在之胺基酸。肽可包含α-胺基酸及/或β-胺基酸。在一些實施例中，肽基本上由α-胺基酸組成。在一些實施例中，肽基本上由天然存在之胺基酸(亦即其中連接胺基酸為天然存在之胺基酸，諸如離胺酸或鳥胺酸，經包含活性劑之基團取代)組成。肽可包含選自以下之胺基酸、基本上由其組成或甚至由其組成：丙胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺、麩胺酸、麩醯胺酸、甘胺酸、離胺酸、鳥胺酸、脯胺酸、絲胺酸及蘇胺酸，其中任一者可為L-胺基酸及/或D-胺基酸。在一些實施例中，肽基本上由L-胺基酸組成。在某些實施例中，肽不包含疏水性胺基酸，諸如選自異白胺酸、甲硫胺酸、白胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、酪胺酸或纈胺酸之胺基酸；換言之，在此類實施例中，肽不含或基本上不含此等胺基酸。在較佳實施例中，肽不包含異白胺酸、甲硫胺酸、白胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、酪胺酸及纈胺酸中之任一者。 除肽之外，連接子亦可包含O取代之肟。在較佳實施例中，肟之氧原子經將肟共價連接於肽之基團取代，且肟之碳原子經將肟共價連接於抗體之基團取代。在其他實施例中，肟之碳原子經將肟共價連接於肽之基團取代，且肟之氧原子經將肟共價連接於抗體之基團取代。肟可將抗體共價連接於肽之N端或肽之C端，或肟可將抗體共價連接於肽之側鏈。在一些實施例中，連接子不包含肟。舉例而言，代替肟，連接子可包含環加成反應之產物，諸如經取代之三唑。 活性劑可藉由可裂解或不可裂解鍵、可水解或不可水解鍵偶合於連接子。在某些較佳實施例中，活性劑藉由可裂解鍵偶合於連接子。舉例而言，抗體-藥物結合物可包含自消耗基團，較佳用於各活性劑，例如以自ADC釋放活性劑之自消耗基團。 舉例而言，一或多種活性劑或甚至各活性劑可經由式(I)之裂解基團偶合於連接子(I) 其中 G為糖或糖酸，較佳葡糖醛酸或其衍生物； B表示活性劑，諸如藥物； W表示拉電子基團，較佳-C(O)NR'-，其中C(O)鍵結於該苯環且NR'鍵結於L； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數0至3，較佳3； L包含包含肽之至少一個胺基酸的20至100個原子之鏈，其將抗體共價連接於W；且 R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環。 或者，裂解基團可具有下式之結構：其中： G表示糖、糖酸或經改質之糖，較佳糖或糖酸，最佳葡糖醛酸； W表示-C(O)-、-C(O)NR'-、-C(O)O-、-S(O)2 NR'-、-P(O)R''NR'-、-S(O)NR'-或-PO2 NR'-，在各情況下其中該C(O)、S或P較佳直接結合於該苯環，且R'及R''各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基、單或二羧基(C1 -C8 )烷基、(C3 -C8 )環烷基、(C1 -C8 )烷氧基、(C1 -C8 )烷硫基、單或二(C1 -C8 )烷基胺基、(C3 -C20 )雜芳基或(C6 -C20 )芳基； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3； m為0或1，較佳1；且 R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環。 或者，裂解基團可具有下式之結構：或其醫藥學上可接受之鹽，其中 G表示糖、糖酸或經改質之糖，較佳糖或糖酸，最佳葡糖醛酸； B為包含能夠偶合於活性劑之反應部分的單元， W表示-C(O)-、-C(O)NR'-、-C(O)O-、-S(O)2 NR'-、-P(O)R''NR'-、-S(O)NR'-或-PO2 NR'-，在各情況下其中該C(O)、S或P直接結合於該苯環，且R'及R''各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基、(C3 -C8 )環烷基、(C1 -C8 )烷氧基、(C1 -C8 )烷硫基、單或二(C1 -C8 )烷基胺基、(C3 -C20 )雜芳基或(C6 -C20 )芳基； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3，較佳3； L表示包含肽序列之連接子； R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環。 拉電子基團W可-C(O)-、-C(O)NR'-、-C(O)O-、-SO2 NR'-、-P(O)R''NR'-、-SONR'-或-PO2 NR'-，較佳-C(O)NR'-，且R'及R''可各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基、(C3 -C8 )環烷基、(C1 -C8 )烷氧基、(C1 -C8 )烷硫基、單或二(C1 -C8 )烷基胺基、(C3 -C20 )雜芳基或(C6 -C20 )芳基，較佳氫。在此類實施例中，W較佳取向，使得羰基、磷醯基、磺醯基或亞磺醯基直接結合於苯環直接結合於苯環。在Z表示拉電子基團之情況下，Z可表示此段落中針對W描述之任一部分。 W可表示-C(O)NR'-，且W之氮可為連接胺基酸，諸如離胺酸或鳥胺酸之氮原子。類似地，W可表示-C(O)NR'-，且W之氮可為肽中N端胺基酸之氮原子，例如N-端胺基酸之胺氮(主鏈氮)。 裂解基團之糖或糖酸(亦即G)較佳例如藉由容易酶裂解之鍵連接於苯環，諸如藉由糖苷鍵連接於苯環上之氧取代基。糖或糖酸較佳為單醣，諸如葡糖醛酸或其衍生物，其能夠藉由酶，諸如β-葡糖苷酸酶，例如待由結合物靶向之細胞中存在之酶，自ADC裂解。葡糖醛酸及其衍生物可由式(II)表示：(II) 其中R3 為氫或羧基保護基，較佳為氫，且各R4 獨立地為氫或羥基保護基，較佳為氫。 羧基保護基可為例如有機合成中用於遮蔽羧酸之任何適合保護基，諸如甲基、甲氧基甲基、甲基硫基甲基、四氫哌喃基、苯甲氧基甲基、苯甲醯甲基、N-鄰苯二甲醯亞胺基甲基、2,2,2-三氯乙基、2-鹵基乙基、2-(對甲苯磺醯基)乙基、第三丁基、桂皮基、苯甲基、三苯基甲基、雙(鄰硝基苯基)甲基、9-蒽基甲基、2-(9,10-二側氧基)蒽基甲基、向日葵基、2-三甲基矽烷基乙基、三甲基矽烷基或第三丁基二甲基矽烷基。在一些實施例中，整個部分R3 -OC(=O)-經羧基遮蔽部分，諸如2-烷基-1,3-噁唑啉基置換。 羥基保護基可為例如有機合成中適合於遮蔽羥基之任何適合保護基，諸如乙醯基、甲基、乙氧基乙基、苯甲醯基、苯甲基、4-甲氧基苯甲基、3,4-二甲氧基苯甲基、四氫哌喃基(THP)、四氫呋喃基(THF)、第三丁基二甲基矽烷基(TBDMS)、三甲基矽烷基(TMS)、三乙基矽烷基(TES)、三異丙基矽烷基(TIPS)、第三丁基二苯基矽烷基(TBDPS)、三異丙基矽烷氧基甲基(TOM)、β-甲氧基乙氧基甲基(MEM)、甲氧基甲基(MOM)、烯丙基或三苯甲基。 L及/或連接子可包含經取代或未經取代之具有1至100個碳原子，較佳20至80個碳原子之伸烷基，且滿足以下(i)至(iv)中之至少一個，較佳至少兩個： (i)伸烷基包括至少一個不飽和鍵，較佳3或4個雙鍵且無參鍵， (ii)伸烷基包括至少一個伸雜芳基， (iii)伸烷基之至少一個碳原子經一或多個選自氮(N)、氧(O)及硫(S)之雜原子，較佳至少一個氮及至少一個氧(例如如肟中)置換，以及 (iv)伸烷基經具有1至20個碳原子之一或多個烷基、較佳2或3個甲基取代。 在較佳實施例中，較佳在抗體重鏈或輕鏈之C端的抗體之半胱胺酸與異戊二烯基單元之碳原子形成硫醚鍵，藉此將抗體共價連接於連接子。因此，在一些實施例中，L及/或連接子可包含至少一個各由式(III)表示之異戊二烯基單元，較佳兩個異戊二烯基單元，其較佳可藉由類異戊二烯轉移酶識別，例如作為類異戊二烯轉移酶之產物或受質之部分。(III) 在某些此類較佳實施例中，抗體包含能夠由類異戊二烯轉移酶識別之胺基酸模體。舉例而言，抗體之至少一個C端可包含能夠由類異戊二烯轉移酶識別(例如在形成抗體-藥物結合物前，作為類異戊二烯轉移酶之受質，或例如在形成抗體-藥物結合物後作為類異戊二烯轉移酶之產物)之胺基酸模體。抗體可進一步包含將抗體肽鏈連接於胺基酸模體之間隔子，諸如胺基酸或胺基酸段。間隔子可由1至20個連續胺基酸、較佳7個或更多個胺基酸組成。在一些實施例中，甘胺酸及脯胺酸為間隔子之較佳胺基酸，且可以任何組合使用，諸如一連串約7個甘胺酸。在其他實施例中，間隔子之胺基酸各獨立地選自甘胺酸、天冬胺酸、精胺酸及絲胺酸。例如相對於ADC中不包括之抗體形式，抗體可在羧基端包含添加或缺失。 類異戊二烯轉移酶之實例包括法呢基蛋白質轉移酶(FTase)及四異戊二烯基轉移酶(GGTase)，其可催化法呢基或四異戊二烯基轉移至標靶蛋白之至少一個C端半胱胺酸。GGTase可分類為GGTase I或GGTase II。FTase及GGTase I可識別CAAX模體，且GGTase II可識別XXCC、XCXC或CXX模體，其中C表示半胱胺酸，A表示脂族胺基酸(例如異白胺酸、纈胺酸、甲硫胺酸、白胺酸)，且各X獨立地表示例如麩醯胺酸、麩胺酸、絲胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸、丙胺酸或白胺酸(參見Nature Rev. Cancer、5(5):405-12 (2005)；Nature Chemical Biology 17:498-506 (2010)；Lane KT、Bees LS、J. Lipid Research、47:681-699 (2006)；Kasey PJ、Seabra MC、J. Biological Chemistry、271(10):5289-5292 (1996)，每一者以全文引用之方式併入本文中)。 根據本發明之抗體-藥物結合物可包含胺基酸模體，諸如CYYX、XXCC、XCXC或CXX，較佳CYYX (其中C表示半胱胺酸，Y表示脂族胺基酸，諸如白胺酸、異白胺酸、纈胺酸及/或甲硫胺酸，且X表示決定類異戊二烯轉移酶之受質特異性之胺基酸，諸如麩醯胺酸、麩胺酸、絲胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸、丙胺酸及/或白胺酸)。 可使用來自各種來源之類異戊二烯轉移酶。舉例而言，類異戊二烯轉移酶可獲自人類、動物、植物、細菌、病毒或其他來源。在一些實施例中，使用天然存在之類異戊二烯轉移酶。在一些實施例中，可使用天然修飾或人工修飾之類異戊二烯轉移酶。舉例而言，類異戊二烯轉移酶可包含一或多個胺基酸取代、添加及/或缺失，及/或類異戊二烯轉移酶可藉由添加以下至少一者來修飾：組胺酸-標籤、GST、GFP、MBP、CBP、Isopeptag、BCCP、Myc-標籤、調鈣蛋白-標籤、FLAG-標籤、HA-標籤、麥芽糖結合蛋白-標籤、Nus-標籤、麩胱甘肽-S-轉移酶-標籤、綠色螢光蛋白-標籤、硫氧還蛋白-標籤、S-標籤、Softag 1、Softag 3、Strep-標籤、SBP-標籤、Ty-標籤及其類似物。 類異戊二烯轉移酶識別異受質(isosubstrate)及/或受質。術語異受質係指包含化學改質之受質類似物。類異戊二烯轉移酶可將抗體C端之特定胺基酸模體(例如CAAX模體)烷基化(參見例如Duckworth、BP等人、ChemBioChem、8:98 (2007)；Uyen TT等人、ChemBioChem、8:408 (2007)；Labadie、GR等人、J. Org. Chem.、72(24):9291 (2007)；Wollack、JW等人、ChemBioChem、10:2934 (2009)，各以引用的方式併入本文中)。官能化抗體可使用可將C端半胱胺酸烷基化之類異戊二烯轉移酶及異受質產生。 異受質可為例如具有式IV之化合物：(IV) C端CAAX模體之半胱胺酸可使用類異戊二烯轉移酶結合於異受質。在一些實施例中，例如AAX之模體之一部分隨後可藉由蛋白酶移除，例如僅僅留下類異戊二烯結合之半胱胺酸。半胱胺酸可視情況在羧基端，例如藉由酶而甲基化(參見例如Bell、IM、J. Med. Chem.、47(8):1869 (2004)，其以引用的方式併入本文中)。 L及/或連接子可包含藉由1,3-偶極環加成反應、雜狄爾斯-阿德反應、親核取代反應、非醇醛型羰基反應、碳-碳複鍵加成、氧化反應或點擊反應形成之結合單元。結合單元可藉由乙炔與疊氮化物之間的反應，或非醇醛型羰基反應，諸如醛基或酮基與肼或烷氧基胺之間的反應來形成；此類結合單元可由式(A)、(B)、(C)或(D)表示。L1 為單一鍵或具有1至30個碳原子，較佳10、11、12、13、14、15或16個碳原子之伸烷基； R11 為氫或具有1至10個碳原子之烷基，較佳甲基；且 L2 為具有1至30個碳原子，較佳10、11、12、13、14、15或16個碳原子之伸烷基。 在一些實施例中，L1 及/或L2 可包含至少一個由式(III)表示之異戊二烯基單元，較佳兩個異戊二烯基單元。L2 可由至少一個由式(III)表示之異戊二烯基單元、較佳兩個異戊二烯基單元組成。在較佳實施例中，異戊二烯基單元之碳原子與最佳在重鏈或輕鏈C端之抗體之半胱胺酸的硫原子形成硫醚鍵，藉此共價連接抗體與連接子。(III) 抗體-藥物結合物可包含由上述式(D)表示之結合單元，其中L2 由至少一個異戊二烯基單元、較佳兩個異戊二烯基單元組成。結合單元可為O取代之肟，亦即結合單元之氮可共價鍵結於經取代之氧。異戊二烯基單元之碳原子可與最佳在重鏈或輕鏈C端之抗體之半胱胺酸的硫原子形成硫醚鍵，藉此共價連接結合單元與抗體。 L及/或連接子可包含由以下表示之異戊二烯基：或，例如其中異戊二烯基之碳原子與抗體之半胱胺酸之硫原子形成硫醚鍵，藉此共價連接異戊二烯基與抗體。異戊二烯基之氮可將異戊二烯基共價連接於L及/或連接子之聚乙二醇單元。 在一些實施例中，L及/或連接子可包含由或表示之異戊二烯基，例如其中異戊二烯基之碳原子與抗體之半胱胺酸之硫原子形成硫醚鍵，藉此共價連接異戊二烯基與抗體。異戊二烯基之氮可將異戊二烯基共價連接於L及/或連接子之聚乙二醇單元。 點擊化學反應可在溫和條件下進行，其可在抗體存在下在不使抗體變性下進行。點擊化學反應展示高反應特異性。因此，即使抗體具有各種官能基(例如胺、羧基、甲醯胺及胍鹽)，點擊化學反應亦可例如在不影響抗體之胺基酸側鏈下進行。疊氮基與乙炔基之間的點擊化學反應例如可在抗體存在下發生，不改質抗體之胺基酸側鏈官能基。此外，點擊化學反應可準確靶向特定官能基，諸如在自然界中很少發現之官能基，無論反應物之性質如何。在一些情況下，選擇反應物以提高整體反應效率。舉例而言，疊氮化物-乙炔點擊化學反應可產生高產量三唑(參見例如Hia、RK等人、Chem. Rev.、109:5620 (2009)；Meldal、M及Tornoe、CW、Chem Rev.、108:2952 (2008)；Kolb、HC等人、Angew. Chemie Int. Ed. Engl.、40:2004 (2001)，各以引用的方式併入本文中)。 疊氮化物及乙炔官能基不存在於天然蛋白質中。因此，胺基酸側鏈、N端胺或C端羧基中無一者受利用此等官能基之點擊化學反應影響。 式I之L部分及/或連接子可進一步包括由-(CH2 )r (V(CH2 )p )q -或-(CH2 CH2 X)w -表示之連接單元，其中 V為單一鍵、-O-、-S-、-NR21 -、-C(O)NR22 -、-NR23 C(O)-、-NR24 SO2 -或-SO2 NR25 -，較佳-O-； X為-O-、(C1 -C8 )伸烷基或-NR21 -，較佳-O-； R21 至R25 各獨立地為氫、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基(C6 -C20 )芳基或(C1 -C6 )烷基(C3 -C20 )雜芳基，較佳氫； r為整數1至10，較佳2或3； p為整數0至12，較佳1或2； q為整數1至20，較佳4至20；且 w為整數1至20，較佳4至20。 L及/或連接子較佳包含由式(A)、(B)、(C)或(D)表示之結合單元及由-(CH2 )r (V(CH2 )p )q -或-(CH2 CH2 X)w -表示之連接單元。 在較佳實施例中，L及/或連接子包含至少一個由或表示之聚乙二醇單元。抗體-藥物結合物可包含1至20個-OCH2 CH2 -單元，諸如1至12個-OCH2 CH2 -單元、5至12個-OCH2 CH2 -單元、6至12個-OCH2 CH2 -單元、5至20個-OCH2 CH2 -單元或6至20個-OCH2 CH2 -單元。在其中L及/或連接子包含肟之實施例中，聚乙二醇單元優先將肟共價連接於肽，例如肽之N端、肽之C端或肽之側鏈。 L及/或連接子較佳包含由-(CH2 CH2 O)n -表示之聚乙二醇基團，其中n為1至20，諸如1至12、5至12、6至12、5至20或6至20。在其中L及/或連接子包含肟之實施例中，聚乙二醇基團優先將肟共價連接於肽。 在一些實施例中，L及/或連接子較佳包含以下兩個結構之一：其中n為整數1至20，諸如4至20。 L及/或連接子可包含、或，其中 V表示單一鍵、-O-、-S-、-NR21 -、-C(O)NR22 -、-NR23 C(O)-、-NR24 SO2 -或-SO2 NR25 -，較佳-O-； R21 至R25 表示各獨立地為氫、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基(C6 -C20 )芳基或(C1 -C6 )烷基(C3 -C20 )雜芳基； r為整數1至10，較佳2或3； p為整數0至10，較佳1或2； q為整數1至20，較佳1至6；且 L1 為單一鍵。 在一些實施例中，至少兩種活性劑經由一或多個連接子共價偶合於胺基酸之側鏈，連接子視情況包括例如能夠在所需位置將活性劑自結合物釋放的如本文中揭示之裂解基團。任何或所有連接子可為分支連接子，例如其中連接子之各分支終止於活性劑(例如經由裂解基團連接)，或其中連接子之一或多個分支終止於活性劑(例如經由裂解基團連接)且一或多個其他分支包含聚乙二醇部分且不包括活性劑。在一些此類實施例中，各分支連接子偶合於至少兩種活性劑，其可相同或不同。在一些實施例中，至少兩個、三個或四個分支連接子共價偶合於肽。在其他實施例中，僅一個分支連接子偶合於肽。 分支連接子可包含分支單元，使得各活性劑經由次要連接子偶合於分支單元且分支單元藉由主要連接子偶合於肽。 分支單元可具有任何適合之結構，諸如：、、或， 其中L1 、L2 、L3 各獨立地為直接鍵或-Cn H2n -，其中n為整數1至30， 其中G1 、G2 、G3 各獨立地為直接鍵、、、或， 其中R3 為氫或C1 -C30 烷基； 其中R4 為氫或-L4 -COOR5 ，其中L4 為直接鍵或-Cn H2n -，其中n為整數1至10，且R5 為氫或C1 -C30 烷基。 次要連接子(例如將活性劑連接於肽)可包含藉由1,3-偶極環加成反應、雜狄爾斯-阿德反應、親核取代反應、非醇醛型羰基反應、碳-碳複鍵加成、氧化反應或點擊反應形成之結合單元。結合單元可藉由乙炔與疊氮化物之間的反應，或非醇醛型羰基反應，諸如醛基或酮基與肼或烷氧基胺之間的反應、允許活性劑及/或裂解基團輕度偶合於肽序列之反應來形成。此類結合單元可由式(A)、(B)、(C)或(D)表示。L1 為單一鍵或具有1至30個碳原子，較佳10、11、12、13、14、15或16個碳原子之伸烷基； R11 為氫或具有1至10個碳原子之烷基，較佳甲基；且 L2 為具有1至30個碳原子，較佳10、11、12、13、14、15或16個碳原子之伸烷基。 在一些實施例中，抗體-藥物結合物包含式(V)之結構：(V) 其中： A表示抗體； P表示肽； B1 表示第一活性劑； B2 表示第二活性劑；且 n為整數1至20。 在一些實施例中，抗體-藥物結合物包含式(VI)之結構：(VI) 其中： A表示抗體； P表示肽； B1 表示第一活性劑； B2 表示第二活性劑；且 n為整數1至20。 在一些實施例中，結合物包含下式之結構：其中 A表示配位體； PP表示肽； B1 表示第一活性劑； B2 表示第二活性劑； L1 表示連接子，視情況包括裂解基團； L2 表示連接子，視情況包括裂解基團；且 n為整數1至20。 在一些實施例中，結合物包含下式之結構：其中 A表示配位體； PP表示肽； B1 表示第一活性劑； B2 表示第二活性劑； B3 表示第三活性劑； L1 表示連接子，視情況包括裂解基團； L2 表示連接子，視情況包括裂解基團； L3 表示連接子，視情況包括裂解基團；且 n為整數1至20。 在一些實施例中，結合物包含下式之結構：其中 A表示配位體； PP表示肽； B1 表示第一活性劑； B11 表示第二活性劑； B12 表示第三活性劑； L1 表示連接子； L2 表示連接子； L11 表示次要連接子，視情況包括裂解基團； L12 表示次要連接子，視情況包括裂解基團； BU表示分支單元；且 n為整數1至20。 在一些實施例中，結合物包含下式之結構：其中 A表示配位體； PP表示肽； B1 表示第一活性劑； B2 表示第二活性劑； L1 表示連接子，視情況包括裂解基團； L2 表示連接子，視情況包括裂解基團；且 n為整數1至20。 在一些實施例中，結合物包含下式之結構：其中 A表示配位體； PP表示肽； B1 表示第一活性劑； B2 表示第二活性劑； B3 表示第三活性劑； L1 表示連接子，視情況包括裂解基團； L2 表示連接子，視情況包括裂解基團； L3 表示連接子，視情況包括裂解基團；且 n為整數1至20。 在一些實施例中，結合物包含下式之結構：其中 A表示配位體； PP表示肽； B1 表示第一活性劑； B11 表示第二活性劑； B12 表示第三活性劑； L1 表示連接子； L2 表示連接子； L11 表示次要連接子，視情況包括裂解基團； L12 表示次要連接子，視情況包括裂解基團； BU表示分支單元；且 n為整數1至20。 在一些實施例中，抗體-藥物結合物具有式(VII)之結構或其醫藥學上可接受之鹽：(VII) 其中B表示活性劑；mAb表示抗體；R表示胺基酸側鏈；J表示質子、醯基或包含活性劑之基團；m為整數0至10；n為整數0至10；p為整數0至10；q為整數1至20，較佳4至20；且r為整數0至10，較佳1。各B可為相同活性劑或各B可為不同活性劑。類似地，各R可為相同胺基酸側鏈或各R可為不同胺基酸側鏈。一或多個R可將一或多種額外活性劑共價連接於肽。各R基團可為L-胺基酸或D-胺基酸之R基團。式(VII)描繪肽之各胺基酸為α-胺基酸。然而，肽可包含一或多個β-胺基酸。結構展示各連接胺基酸為N-取代之離胺酸。然而，代替或除離胺酸以外，抗體-藥物結合物可包含其他連接胺基酸。在一些實施例中，J包含具有式(VIII)之結構的部分：(VIII) 其中K可為將式(VIII)之結構連接於肽之N-端醯胺的單一鍵，或K為-N(H)(CH2 CH2 O)k -，其中k為整數1至20，較佳1至10。 在一些實施例中，抗體-藥物結合物具有式(IX)之結構：(IX) 其中B表示活性劑；mAb表示抗體；R表示胺基酸側鏈；J表示羥基、醯胺基、胺或包含活性劑之基團；q為整數0至10，較佳1；r為整數0至20，較佳3-20；s為整數0至10；t為整數0至10；且 v為整數0至10。各B可為相同活性劑或各B可為不同 活性劑。類似地，各R可為相同胺基酸側鏈或各R可為不同胺基酸側鏈。一或多個R可將一或多種額外活性劑共價連接於肽。各R基團可為L-胺基酸或D-胺基酸之R基團。式(IX)描繪肽之各胺基酸為α-胺基酸。然而，肽可包含一或多個β-胺基酸。結構展示各連接胺基酸為N取代之離胺酸。然而，代替或除離胺酸以外，抗體-藥物結合物可包含其他連接胺基酸。在一些實施例中，J包含具有式(VIII)之結構的部分：(VIII) 其中K可為-N(H)(CH2 CH2 O)k (CH2 )m N(H)-，其中k為整數1至20且m為整數0至5。 本發明之抗體-藥物結合物可使用此項技術中已知之任何方法，包括分子生物學及細胞生物學方法製備。舉例而言，可使用短暫或穩定轉染方法。編碼能夠由類異戊二烯轉移酶識別之特定胺基酸模體的遺傳序列可使用標準PCR及/或接合技術插入已知之質體載體中，以便表現在C端具有特定胺基酸模體之抗體。因此，具有能夠由類異戊二烯轉移酶識別之至少一個胺基酸模體之抗體可在適合宿主中，例如CHO細胞或大腸桿菌中表現。 術語「抗體」係指經由免疫球蛋白分子可變區內之至少一個抗原識別位點識別且特異性結合於不同分子的免疫球蛋白分子。如本文所用，術語「抗體」包括完整多株抗體、完整單株抗體、抗體片段(例如Fab、Fab'、F(ab')2 、Fd及Fv片段)、單鏈Fv (scFv)突變體、多特異性抗體(諸如由兩種或兩種以上完整抗體產生之雙特異性抗體)、嵌合抗體、人類化抗體、人類抗體、包括抗體之抗原決定區之融合蛋白及包括抗原識別位點之任何其他經修飾之免疫球蛋白分子。抗體可為免疫球蛋白五個主要類別中之任一者：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM或其亞類(同型) (例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)，基於其重鏈恆定域之身分，分別稱為α、δ、ε、γ及μ。免疫球蛋白之不同類別具有不同且熟知之次單元結構及三維組態。術語「抗體」不指與免疫球蛋白序列無同源性之分子。舉例而言，如本文所用，術語「抗體」不包括「重複抗體(repebody)」。 術語「抗原結合片段」係指完整抗體之一部分且係指完整抗體之抗原決定可變區。抗體片段之實例包括Fab、Fab'、F(ab')2 、Fd及Fv片段、線性抗體、單鏈抗體及由抗體片段形成之多特異性抗體。 術語「單株抗體」係指涉及單一抗原決定子或抗原決定基之高度特異性識別及結合的均質抗體。此與多株抗體形成對比，多株抗體通常包括針對多種不同抗原決定子之不同抗體。術語「單株抗體」包括抗體片段(諸如Fab、Fab'、F(ab')2 、Fd、Fv)、單鏈(scFv)突變體、包括抗體部分之融合蛋白及包括抗原識別位點之任何其他經修飾之免疫球蛋白分子以及完整與全長單株抗體，但不限於此。此外，「單株抗體」係指以多種方法產生之此類抗體，該等方法包括(但不限於)融合瘤、噬菌體選擇、重組表現及轉殖基因動物。 術語「人類化抗體」係指非人類(例如鼠類)抗體之形式，其為特定免疫球蛋白鏈、嵌合免疫球蛋白或含有最少非人類(例如鼠類)序列之其片段。一般而言，人類化抗體為人類免疫球蛋白，其中互補決定區(CDR)中之殘基置換為具有所需特異性、親和力及能力之非人類物種(例如小鼠、大鼠、兔或倉鼠)之CDR的殘基(參見例如Jones等人, Nature, 321:522-525 (1986)；Riechmann等人, Nature, 332:323-327 (1988)；Verhoeyen等人, Science, 239:1534-1536 (1988))。在一些情況下，人類免疫球蛋白之Fv構架區(FR)殘基置換為具有所需特異性、親和力及結合能力之來自非人類物種之抗體的對應殘基。人類化抗體可利用Fv構架區及/或所置換之非人類殘基內之其他殘基之取代而進一步修飾，以優化及最佳化抗體特異性、親和力及/或結合能力。一般而言，人類化抗體包括至少一個及通常兩個或三個含有對應於非人類免疫球蛋白之所有或實質上所有CDR區之可變結構域的實質上全部，而所有或實質上所有構架區(FR)具有人類免疫球蛋白共同序列之FR。人類化抗體亦可包括通常人類免疫球蛋白之免疫球蛋白恆定區或結構域(Fc)之至少一部分。用於產生人類化抗體之方法之實例描述於以引用的方式併入本文中之美國專利第5,225,539號。 如本文所用，術語「人類抗體」係指由人類核苷酸序列編碼之抗體或具有對應於使用此項技術中已知之任何技術由人類產生之抗體之胺基酸序列的抗體。人類抗體之此定義包括完整全長抗體及/或其片段。 術語「嵌合抗體」係指其中免疫球蛋白分子之胺基酸序列來源於兩種或兩種以上物種之抗體，物種之一較佳為人類。一般而言，輕鏈與重鏈之可變區對應於來源於哺乳動物(例如小鼠、大鼠、兔等)之一種物種之具有所需特異性、親和力及能力的抗體的可變區，而恆定區與來源於另一物種(通常人類)之抗體中之序列同源，例如以避免引發該物種中免疫反應。 術語「抗原決定基」與「抗原決定子」在本文中可互換地使用且係指能夠由特定抗體識別且特異性結合之抗原部分。當抗原為或包含多肽或蛋白質時，抗原決定基可由相鄰及/或非相鄰胺基酸形成，例如藉由蛋白質二級、三級及/或四級摺疊而並置。由相鄰胺基酸形成之抗原決定基通常在蛋白質變性後保留，而藉由三級摺疊形成之抗原決定基可在蛋白質變性後喪失。抗原決定基通常包括呈獨特空間組態之3個或更多個、5個或更多個或者8至10個或更多個胺基酸。 抗體「特異性結合」於抗原決定基或抗原分子，此意謂與替代物質，包括不相關蛋白質相比，抗體與抗原決定基或抗原分子更頻繁、更迅速、更長持續時間、更大親和力或上述各者之某一組合相互作用或締合。在特定實施例中，「特異性結合」意謂例如抗體以約0.1 mM或更低、但更通常小於約1 μM之KD 結合於蛋白質。在特定實施例中，「特異性結合」意謂抗體有時以約0.1 μM或更低之KD 且其他時候以約0.01 μM或更低之KD 結合於蛋白質。因為不同物種中同源蛋白質之間的序列一致性，所以特異性結合可包括在超過一個物種中識別特定蛋白質之抗體。應瞭解特異性結合於第一標靶之抗體或結合殘基可或不可特異性結合於第二標靶。如上所述，「特異性結合」不一定需要(雖然其可包括)排他性結合，亦即結合於單個標靶。一般而言，但不一定，本文所用之術語結合意謂特異性結合。 抗體，包括其片段/衍生物及單株抗體，可使用此項技術中已知之方法獲得(參見例如McCafferty等人, Nature 348:552-554 (1990)；Clackson等人, Nature 352:624-628；Marks等人, J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991)；Marks等人, Bio/Technology 10:779-783 (1992)；Waterhouse等人, Nucleic Acids Res. 21:2265-2266 (1993)；Morimoto等人, J Biochemical & Biophysical Methods 24:107-117 (1992)；Brennan等人, Science 229:81(1985)；Carter等人, Bio/Technology 10:163-167 (1992)；Kohler等人, Nature 256:495 (1975)；Kilpatrick等人, Hybridoma 16(4):381-389 (1997)；Wring等人, J. Pharm. Biomed. Anal. 19(5):695-707 (1999)；Bynum等人, Hybridoma 18(5):407-411 (1999)；Jakobovits等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993)；Jakobovits等人, Nature, 362:255-258 (1993)；Bruggemann等人, Year Immuno. 7:33 (1993)；Barbas等人, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994)；Schier等人, Gene 169:147-155 (1995)；Yelton等人, J. Immunol. 155:1994-2004 (1995)；Jackson等人, J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995)；Hawkins等人, J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)；美國專利第4,816,567號、第5,514,548號、第5,545,806號、第5,569,825號、第5,591,669號、第5,545,807號；PCT專利申請公開案第WO 97/17852號，各以全文引用的方式併入本文中)。 抗體可為莫羅單抗-CD3阿昔單抗、利妥昔單抗、達利珠單抗、帕利珠單抗、英利昔單抗、曲妥珠單抗、依那西普、巴利昔單抗、吉妥珠單抗、阿侖單抗、替伊莫單抗、阿達木單抗、阿法賽特、奧馬珠單抗、艾法珠單抗、托西莫單抗、西妥昔單抗、ABT-806、貝伐單抗、那他珠單抗、蘭比珠單抗、帕尼單抗、艾庫組單抗、利納西普、賽妥珠單抗、羅米司亭、AMG-531、戈利木單抗、優特克單抗、ABT-874、貝拉西普、貝利單抗、阿塞西普、抗CD20抗體、康納單抗、托西利單抗、阿利珠單抗、美泊利單抗、帕妥珠單抗、HuMax CD20、曲美單抗、替西單抗、伊派利單抗、IDEC-114、伊諾妥珠單抗、HuMax EGFR、阿柏西普、HuMax-CD4、替利珠單抗、奧昔珠單抗、卡托莫西單抗、抗EpCAM抗體IGN101、阿德卡單抗、奧戈伏單抗、迪奴圖單抗、吉瑞昔單抗、德諾單抗、貝頻珠單抗、莫維珠單抗、依夫單抗、瑞昔單抗、抗CD20抗體、LY2469298或維托珠單抗。 當抗體包含至少一個輕鏈及至少一個重鏈時，抗體之至少一個輕鏈或抗體之至少一個重鏈或兩者可包含具有能夠由類異戊二烯轉移酶識別之胺基酸模體的胺基酸區域。因為抗體可包含四個多肽鏈(例如兩個重鏈及兩個輕鏈)，所以抗體可包含四個胺基酸模體，其中每一者可用於經由連接子將活性劑結合於抗體。因此，抗體-藥物結合物可包含4個各結合於至少一種活性劑之連接子。因此，抗體-藥物結合物可包含至少一個連接子及至少兩種活性劑。抗體-藥物結合物可包含至少兩個連接子，且抗體-藥物結合物可包含至少三種活性劑。抗體-藥物結合物可包含1、2、3或4個連接子。抗體-藥物結合物可包含1、2、3或4種肽。抗體-藥物結合物可包含2至100種活性劑，諸如2至50種活性劑、2至20種活性劑、2至16種活性劑、4至16種活性劑或4至8種活性劑。 活性劑可為藥物、毒素、親和配位體、偵測探針或前述任一者之組合。 活性劑可選自埃羅替尼；硼替佐米；氟維司群；舒癌特；來曲唑；甲磺酸伊馬替尼；PTK787/ZK 222584；奧沙利鉑；5-氟尿嘧啶；甲醯四氫葉酸；雷帕黴素(西羅莫司)；拉帕替尼；洛那法尼；索拉非尼；吉非替尼；AG1478；AG1571；烷基化劑(例如噻替派或環磷醯胺)；烷基磺酸酯(例如白消安、英丙舒凡或哌泊舒凡)；氮丙啶(例如苯唑多巴、卡波醌、米特多巴或尤利多巴)；伸乙基亞胺、甲基蜜胺、六甲蜜胺、三伸乙基三聚氰胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺、三羥甲基蜜胺；多聚乙醯(例如布拉他辛或布拉他辛酮)；喜樹鹼；拓朴替康；苔蘚蟲素；海綿抑素；CC-1065 (包括其阿多來新、卡折來新或比折來新合成類似物)；念珠藻環肽(例如念珠藻素1或念珠藻素8)；海兔毒素；倍癌黴素(包括合成類似物，例如KW-2189及CB1-TM1)；艾榴塞洛素；水鬼蕉鹼；沙考地汀；海綿抑素；氮芥(例如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷醯胺、雌氮芥、異環磷醯胺、甲氮芥、甲氮芥氧化物鹽酸鹽、美法侖、新恩比興、芬司特瑞、潑尼氮芥、曲磷胺或尿嘧啶氮芥)；亞硝基脲(例如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀或雷莫司汀)；抗生素(例如烯二炔抗生素，諸如選自卡奇黴素γ1I及卡奇黴素Ω1I之卡奇黴素或包括達內黴素A之達內黴素)；雙膦酸鹽(例如氯屈膦酸鹽；埃斯培拉黴素；新抑癌蛋白發色團或相關色蛋白烯二炔抗生素發色團、阿克拉黴素、放射菌素、安麯黴素、偶氮絲胺酸、博來黴素、放線菌素C、卡拉比辛、洋紅黴素、嗜癌菌素、色黴素、放線菌素D、道諾黴素、德托黴素、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、小紅莓(例如嗎啉基-小紅莓、氰基嗎啉基-小紅莓、2-吡咯啉基-小紅莓、脂質體小紅莓或去氧小紅莓)、表柔比星、依索比星、麻西羅黴素、絲裂黴素(例如絲裂黴素C、黴酚酸、諾加黴素、橄欖黴素、培洛黴素、潑非黴素、嘌呤黴素、奎那黴素、羅多比星、鏈黴素、鏈脲菌素、殺結核菌素、烏苯美司、淨司他丁或左柔比星)；抗代謝物(例如5-氟尿嘧啶)；葉酸類似物(例如迪諾特寧、甲胺喋呤、蝶羅呤或曲美沙特)；嘌呤類似物(例如氟達拉賓、6-巰基嘌呤、硫米嘌呤或硫鳥嘌呤)；嘧啶類似物(例如安西他濱、阿紮胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、雙去氧尿苷、去氧氟尿苷、依諾他濱或氟尿苷)；雄激素(例如卡魯睾酮、屈他雄酮丙酸鹽、環硫雄醇、美雄烷)或睾內酯)；抗腎上腺素(例如胺魯米特、米托坦或曲洛司坦)；葉酸補充劑(例如亞葉酸)；乙醯葡醛酯；醛磷醯胺糖苷；胺基乙醯丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；貝塔布辛；比生群；艾達曲克；得弗伐胺；秋水仙胺；地吖醌；艾弗鳥胺酸；依利醋銨；埃坡黴素；依託格魯；硝酸鎵；羥基脲；蘑菇多醣；氯尼達明；類美登素(例如美登素或安絲菌素)；單端孢黴烯(尤其T-2毒素、弗納庫林A、桿孢菌素A或胺癸叮)；丙脒腙；米托蒽醌；莫比達摩；二胺硝吖啶；噴司他丁；蛋胺氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；2-乙基醯肼；丙卡巴肼；多醣K複合物；雷佐生；根瘤菌素；西索菲蘭；螺旋鍺；細交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌；2,2',2''-三氯三乙胺；單端孢黴烯(尤其T-2毒素、弗納庫林A、桿孢菌素A及胺癸叮)；胺基甲酸酯；長春地辛；達卡巴嗪；甘露氮芥；二溴甘露醇；二溴衛矛醇；哌泊溴烷；加西托星；阿拉伯糖苷；環磷醯胺；噻替派；類紫杉醇(例如太平洋紫杉醇)、ABRAXANETM cremophor-free、太平洋紫杉醇經白蛋白工程改造之奈米粒子調配物、多西他賽；苯丁酸氮芥；吉西他濱；6-硫代鳥嘌呤；巰基嘌呤；鉑類似物(例如順鉑或卡鉑)；長春鹼；鉑；依託泊苷、異環磷醯胺；米托蒽醌；長春新鹼；長春瑞賓；諾凡特龍；替尼泊苷；依達曲沙；道諾黴素；胺基喋呤；希羅達；伊班膦酸鹽；CPT-11；拓樸異構酶抑制劑(RFS 2000)；二氟甲基鳥胺酸；類視黃素(例如視黃酸)；卡培他濱及其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物、酸或衍生物，但不一定限於此。 活性劑可選自(i)用於調控或抑制激素對腫瘤之作用的抗激素劑，諸如抗雌激素及選擇性雌激素受體調節劑，包括例如他莫昔芬、雷洛昔芬、曲洛昔芬、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬、克肟昔芬、LY117018、奧那司酮及托瑞米芬；(ii)抑制芳香酶之芳香酶抑制劑，其調節腎上腺中雌激素產生，例如4(5)-咪唑、胺魯米特、乙酸甲地孕酮、依西美坦、來曲唑及阿那曲唑；(iii)抗雄激素，諸如氟他胺、尼魯胺、比卡魯胺、亮丙立德及戈舍瑞林；以及曲沙他濱(1,3-二氧雜環戊烷核苷胞嘧啶類似物)；(iv)芳香酶抑制劑；(v)蛋白激酶抑制劑；(vi)脂質激酶抑制劑；(vii)反義寡核苷酸，尤其抑制涉及黏附細胞之信號傳導路徑的基因之表現的反義寡核苷酸，例如PKC-α、Raf、H-Ras；(viii)核糖核酸酶，例如VEGF抑制劑，諸如核糖核酸酶及HER2表現抑制劑；(ix)疫苗，諸如基因療法疫苗；ALLOVECTIN®疫苗、LEUVECTIN疫苗、VAXID疫苗；PROLEUKIN®rlL-2；LURTOTECAN®拓樸異構酶1抑制劑；ABARELIX®rmRH；(x)抗血管生成劑，諸如貝伐單抗；以及(xi)其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物、酸或衍生物。 另外，細胞因子可用作活性劑。細胞因子為小的細胞信號傳導蛋白分子，其藉由多個細胞分泌且為在細胞間通信中廣泛使用之信號傳導分子類別。細胞因子包括單核因子、淋巴因子、傳統多肽激素及其類似物。細胞因子之實例包括生長激素(例如人類生長激素、N-甲硫胺醯基人類生長激素或牛類生長激素)；副甲狀腺激素；甲狀腺素；胰島素；胰島素原；鬆弛素；鬆弛素原；醣蛋白激素(例如促卵泡激素(FSH)、促甲狀腺激素(TSH)或促黃體激素(LH))；肝生長因子；纖維母細胞生長因子；促乳素；胎盤催乳激素；腫瘤壞死因子-α、腫瘤壞死因子-β；苗勒氏管抑制物質；小鼠促性腺激素相關肽；抑制素；活化素；血管內皮生長因子；整合素、血小板生成素(TPO)；神經生長因子(例如NGF-β)；血小板生長因子；轉型生長因子(TGF)(例如TGF-α或TGF-β)；胰島素樣生長因子-I、胰島素樣生長因子-II；紅血球生成素(EPO)；骨誘導因子；干擾素(例如干擾素-α、干擾素-β或干擾素-γ)；群落刺激因子(CSF)(例如巨噬細胞-CSF (M-CSF)、顆粒細胞-巨噬細胞-CSF (GM-CSF)或顆粒細胞-CSF (G-CSF))；介白素(IL)(例如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11或IL-12)；腫瘤壞死因子(TNF)(例如TNF-α或TNF-β)；以及多肽因子(例如LIF或kit配位體)，但不限於此。此外，術語「細胞因子」亦包括來自天然來源或重組細胞培養基之細胞因子及天然序列細胞因子之生物活性相等物。 術語「毒素」係指對活細胞或生物體有毒之物質。毒素可為在與身體組織接觸或由身體組織吸收後，例如經由與一或多種諸如酶或細胞受體之生物大分子相互作用，能夠引起細胞功能異常或細胞死亡之小分子、肽或蛋白質。毒素包括植物毒素及動物毒素。動物毒素之實例包括白喉毒素、肉毒桿菌毒素、破傷風毒素、痢疾毒素、霍亂毒素、河豚毒素鹼、短裸甲藻毒素及雪卡毒素，但不限於此。植物毒素之實例包括蓖麻毒素及AM-毒素，但不限於此。 小分子毒素之實例包括阿瑞他汀、妥布賴森、格爾德黴素(Kerr等人, 1997, Bioconjugate Chem. 8(6):781-784)、類美登素(EP 1391213, ACR 2008, 41, 98-107)、卡奇黴素(美國專利公開案第2009/0105461號, Cancer Res. 1993, 53, 3336-3342)、道諾黴素、小紅莓、甲胺喋呤、長春地辛、SG2285 (Cancer Res. 2010, 70(17), 6849-6858)、海兔毒素、海兔毒素類似物阿瑞他汀(美國專利第5,635,483號)、念珠藻素、喜樹鹼、根瘤菌素衍生物、CC-1065類似物或衍生物、倍癌黴素、烯二炔抗生素、埃斯培拉黴素、埃坡黴素、吡咯并苯并二氮呯(PBD)衍生物、α-瓢菌素及類毒素，但不限於此。毒素可藉由微管蛋白結合、DNA結合、拓樸異構酶遏制及其類似作用來展現細胞毒性及細胞生長抑制活性。 術語「配位體」係指能夠與標靶生物分子形成複合物之分子。配位體之一實例為結合於標靶蛋白之預定位置以傳輸信號之分子。配位體可為受質、抑制劑、刺激劑、神經傳導物或放射性同位素。 「可偵測部分」或「標記」係指可藉由光譜法、光化學、生物化學、免疫化學、放射性或化學方式偵測之組合物。舉例而言，適用標籤包括32 P、35 S、螢光染料、電子緻密試劑、酶(例如ELISA中常用之酶)、生物素-抗生蛋白鏈菌素、地高辛、半抗原及可獲得抗血清或單株抗體之蛋白質或具有與標靶互補之序列的核酸分子。可偵測部分常常產生可用於定量樣品中結合之可偵測部分之量的可量測信號，諸如放射性、發色或螢光信號。信號定量可例如藉由閃爍計數、密度測定法、流動式細胞量測術、ELISA或藉由完整或隨後消化肽(可評估一或多種肽)之質譜分析進行直接分析來實現。 如本文所用，術語「探針」係指如下物質，其可(i)提供可偵測信號；(ii)與第一探針或第二探針相互作用，以改變由第一或第二探針提供之可偵測信號，諸如螢光共振能量轉移(FRET)；(iii)使與抗原或配位體之相互作用穩定化或增加結合親和力；(iv)藉由物理參數，諸如電荷、疏水性等，影響電泳遷移率或細胞侵入活性；或(v)控制配位體親和力、抗原-抗體結合或離子複合物形成。 活性劑可為免疫調節化合物、抗癌劑、抗病毒劑、抗菌劑、抗真菌劑、抗寄生蟲劑或其組合。 免疫調節化合物可選自胺基己酸、硫唑嘌呤、溴麥角環肽、苯丁酸氮芥、氯奎寧、環磷醯胺、環孢靈、環孢靈A、達那唑、脫氫表雄酮、地塞米松、依那西普、氫化可的松、羥基氯奎、英利昔單抗、美洛昔康、甲胺喋呤、麥考酚酸莫酯、潑尼松、西羅莫司及他克莫司。抗癌劑可選自1-甲基-4-苯基吡錠離子、5-乙炔基-1-β-D-呋喃核糖基咪唑-4-甲醯胺(EICAR)、5-氟尿嘧啶、9-胺基喜樹鹼、放線菌素D、天冬醯胺酶、比卡魯胺、雙氯乙基亞硝基脲(BCNU)、博萊黴素、博萊黴素A2、博萊黴素B2、白消安、喜樹鹼、卡鉑、卡莫司汀、CB1093、苯丁酸氮芥、順鉑、克立那托、環磷醯胺、阿糖胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷、賽特杉、達卡巴嗪、放線菌素D、道諾黴素、達卡巴嗪、去鐵胺、去甲氧基-竹紅菌素A、多烯紫杉醇、去氧氟尿苷、小紅莓、EB1089、表柔比星、依託泊苷、氟尿苷、氟達拉賓、氟他胺、吉西他濱、戈舍瑞林、羥基脲、艾達黴素、異環磷醯胺、干擾素-α、干擾素-γ、伊立替康、KH1060、亮丙立德乙酸鹽、洛莫司汀、洛伐他汀、甲地孕酮、美法侖、巰基嘌呤、甲胺喋呤、絲裂黴素、絲裂黴素C、米托蒽醌、黴酚酸、氮芥、亞硝基脲、太平洋紫杉醇、培洛黴素、感光劑Pe4、酞花青、吡柔比星、普卡黴素、丙卡巴肼、雷洛昔芬、雷替曲塞、雷利米得、利巴韋林、星形孢菌素、他莫昔芬、替尼泊苷、撒利多邁、毒胡蘿蔔素、硫鳥嘌呤、噻唑呋林、拓朴替康、曲奧舒凡、曲美沙特、腫瘤壞死因子、萬珂、維拉帕米、維替泊芬、長春鹼、長春新鹼、長春瑞賓及左柔比星。抗病毒劑可選自噴昔洛韋(pencicyclovir)、發昔洛韋(valacyclovir)、加昔洛韋(gancicyclovir)、膦甲酸、利巴韋林、碘苷、阿糖腺苷、曲氟尿苷、阿昔洛韋、發昔洛韋(famcicyclovir)、金剛胺、金剛乙胺、西多福韋(cidofovir)、反義寡核苷酸、免疫球蛋白及干擾素。抗菌劑可選自氯黴素(chloramphenicol)、萬古黴素(vancomycin)、甲硝噠唑(metronidazole)、甲氧苄啶(trimethoprin)、磺胺二甲噁唑(sulfamethazole)、奎奴普丁(quinupristin)、達福普汀(dalfopristin)、利福平(rifampin)、大觀黴素(spectinomycin)及呋喃妥因(nitrofurantoin)。抗真菌劑可選自兩性黴素B (amphotericin B)、康敵西丁(candicidin)、非律平(filipin)、哈黴素(hamycin)、遊黴素(natamycin)、制黴素(nystatin)、龜裂殺菌素(rimocidin)、聯苯苄唑(bifonazole)、布康唑(butoconazole)、克黴唑(clotrimazole)、益康唑(econazole)、芬替康唑(fenticonazole)、異康唑(isoconazole)、酮康唑(ketoconazole)、盧立康唑(luliconazole)、咪康唑(miconazole)、奧莫康唑(omoconazole)、奧昔康唑(oxiconazole)、舍他康唑(sertaconazole)、硫康唑(sulconazole)、噻康唑(tioconazole)、阿巴康唑(albaconazole)、氟康唑(fluconazole)、艾沙康唑(isavuconazole)、伊曲康唑(itraconazole)、泊沙康唑(posaconazole)、拉夫康唑(ravuconazole)、特康唑(terconazole)、伏立康唑(voriconazole)、阿巴芬淨(abafungin)、阿莫羅芬(amorolfin)、布替萘芬(butenafine)、萘替芬(naftifine)、特比萘芬(terbinafine)、阿尼芬淨(anidulafungin)、卡泊芬淨(caspofungin)、米卡芬淨(micafungin)、苯甲酸、環吡酮(ciclopirox)、氟胞嘧啶(flucytosine)、灰黃黴素(griseofulvin)、鹵苯炔醚(haloprogin)、托萘酯(tolnaftate)、十一碳烯酸、結晶紫、秘魯香脂(balsam of peru)、環吡酮乙醇胺(ciclopirox olamine)、啶酮乙醇胺鹽(piroctone olamine)、吡硫鋅(zinc pyrithione)及硫化硒。抗寄生蟲劑可選自甲苯噠唑(mebendazole)、噻嘧啶雙羥萘酸鹽(pyrantel pamoate)、腐絕(thiabendazole)、二乙碳醯嗪(diethylcarbamazine)、伊維菌素(ivermectin)、氯硝柳胺(niclosamide)、吡喹酮(praziquantel)、阿苯達唑(albendazole)、利福平(rifampin)、兩性黴素B (amphotericin B)、美拉胂醇(melarsoprol)、依氟鳥胺酸(eflornithine)、甲硝噠唑(metronidazole)、磺甲硝咪唑(tinidazole)及米替福新(miltefosine)。 抗體可包含選自Ab-HC-(G)z CVIM、Ab-HC-(G)z CVLL、Ab-LC-(G)z CVIM及Ab-LC-(G)z CVLL之胺基酸模體，其中Ab表示抗體，-HC-表示重鏈，-LC-表示輕鏈，G表示甘胺酸，C表示半胱胺酸，V表示纈胺酸，I表示異白胺酸，M表示甲硫胺酸，L表示白胺酸，且z為0至20之整數。 B、B1 及/或B2 (例如式(I)及(V)-(IX))各可獨立地選自任一以下結構： 其中y為1至10之整數。 抗體-藥物結合物可用於使用熟習此項技術者已知之製備組合物之方法將活性劑轉移至個體之標靶細胞以治療個體。在一些態樣中，本發明係關於一種組合物(例如醫藥組合物)，其包含如本文所描述之抗體-藥物結合物。 組合物可呈可注射形式，呈液體溶液或懸浮液形式製備。適合於注射之固體形式亦可製備為例如乳液，或其中抗體-藥物結合物囊封在脂質體中。抗體-藥物結合物可與醫藥學上可接受之載劑組合，該醫藥學上可接受之載劑包括不誘發對接受載劑之個體有害之抗體產生的任何載劑。適合載劑通常包含代謝緩慢之大分子，例如蛋白質、多醣、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合胺基酸、胺基酸共聚物、脂質凝聚體及其類似物。 組合物亦可含有稀釋劑，例如水、生理食鹽水、丙三醇及乙醇。其中亦可存在輔助物質，例如潤濕劑或乳化劑、pH緩衝物質及其類似物。組合物可藉由注射非經腸投與，其中此類注射可為皮下或肌肉內注射。在一些實施例中，組合物可投與腫瘤中。組合物可插入(例如注射)至腫瘤中。其他調配物適合於其他投與形式，諸如栓劑或經口投與。口服組合物可呈溶液、懸浮液、錠劑、丸劑、膠囊或持續釋放調配物投與。 組合物可以與劑量及調配物相容之方式投與。組合物較佳包含治療有效量之抗體-藥物結合物。術語「治療有效量」意謂有效治療或預防疾病或病症之單次劑量或以多劑量時程投與之組合物。劑量可視待治療之個體、個體之健康及身體狀況、希望保護之程度及其他相關因素而變化。活性成分(例如抗體-藥物結合物)之確切量可視醫生判斷而定。舉例而言，治療有效量之抗體-藥物結合物或含有其之組合物可投與罹患癌症或腫瘤之患者以治療癌症或腫瘤。 根據本發明之抗體-藥物結合物或含有其之組合物可呈醫藥學上可接受之鹽或其溶劑合物之形式投與。在一些實施例中，根據本發明之抗體-藥物結合物或含有其之組合物可與醫藥學上可接受之載劑、醫藥學上可接受之賦形劑及/或醫藥學上可接受之添加劑一起投與。醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物、賦形劑及添加劑之有效量及類型可使用標準方法量測(參見Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 第18版, 1990)。 關於癌症或腫瘤之術語「治療有效量」意謂如下之量，其可減少癌細胞數目；減小癌細胞尺寸；抑制癌細胞侵入周圍系統或減少侵入；抑制癌細胞擴展至其他系統或減少擴展；抑制癌細胞生長；及/或改善至少一種與癌症相關之症狀。在治療癌症中，藥物效力可藉由腫瘤進展時間(TTP)及/或反應率(RR)評估。 本文所用之術語「醫藥學上可接受之鹽」包括有機鹽及無機鹽。其實例包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、乙二酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸性磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸性檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、丹寧酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、丁二酸鹽、順丁烯二酸鹽、龍膽酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸酯、葡糖二酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽及雙羥萘酸鹽(亦即1,1'-亞甲基雙-(2-羥基-3-萘甲酸鹽))。醫藥學上可接受之鹽可包括另一分子(例如乙酸根離子、丁二酸根離子及/或其他相對離子)。 可用於本文所述之抗體-藥物結合物的醫藥學上可接受之溶劑合物的示例性溶劑合物包括水、異丙醇、乙醇、甲醇、二甲亞碸、乙酸乙酯、乙酸及乙醇胺。 術語「醯基」為此項技術中公認的且係指由通式烴基C(O)-、較佳烷基C(O)-表示之基團。 術語「醯胺基」為此項技術中公認的且係指經醯基取代之胺基，且可例如由式烴基C(O)NH-表示。 術語「醯氧基」為此項技術中公認的且係指由通式烴基C(O)O-、較佳烷基C(O)O-表示之基團。 術語「烷氧基」係指與氧附接之烷基、較佳低碳烷基。代表性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、第三丁氧基及其類似基團。 術語「烷氧基烷基」係指經烷氧基取代之烷基且可由通式烷基-O-烷基表示。 如本文所用，術語「烯基」係指含有至少一個雙鍵之脂族基且意欲包括「未經取代之烯基」與「經取代之烯基」，後者係指有取代基置換烯基之一或多個碳上之氫的烯基部分。此類取代基可存在於一或多個包括或不包括於一或多個雙鍵中之碳上。此外，此類取代基包括如下文所論述之對於烷基所涵蓋之所有取代基，除非穩定性不允許。舉例而言，涵蓋烯基經一或多個烷基、碳環基、芳基、雜環基或雜芳基取代。 「烷基」或「烷烴」為完全飽和之直鏈或分支鏈非芳族烴。通常，除非另外定義，否則直鏈或分支鏈烷基具有1至約20個碳原子，較佳1至約10個碳原子。直鏈及分支鏈烷基之實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、己基、戊基及辛基。C1 -C6 直鏈或分支鏈烷基亦稱為「低碳烷基」。 此外，如整個說明書、實例及申請專利範圍中所用之術語「烷基」(或「低碳烷基」)意欲包括「未經取代之烷基」與「經取代之烷基」，後者係指烴主鏈之一或多個碳上的氫經取代基置換的烷基部分。此類取代基在未另外規定時可包括例如鹵素、羥基、羰基(諸如羧基、烷氧基羰基、甲醯基或醯基)、硫羰基(諸如硫酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、磷醯基、磷酸酯、膦酸酯、亞膦酸酯、胺基、醯胺基、脒、亞胺、氰基、硝基、疊氮基、硫氫基、烷基硫基、硫酸酯、磺酸酯、胺磺醯基、磺醯胺基、磺醯基、雜環基、芳烷基或芳族或雜芳族部分。熟習此項技術者應瞭解烴鏈上經取代之部分本身在適當時可經取代。舉例而言，經取代烷基之取代基可包括胺基、疊氮基、亞胺基、醯胺基、磷醯基(包括膦酸酯及亞膦酸酯)、磺醯基(包括硫酸酯、磺醯胺基、胺磺醯基及磺酸酯)及矽烷基以及醚、烷基硫基、羰基(包括酮、醛、羧酸酯及酯)、-CF3 、-CN及其類似基團之經取代及未經取代形式。下文描述示例性經取代之烷基。環烷基可進一步經烷基、烯基、烷氧基、烷基硫基、胺基烷基、經羰基取代之烷基、-CF3 、-CN及類似基團取代。 術語「Cx-y 」當與諸如醯基、醯氧基、烷基、烯基、炔基或烷氧基之化學部分結合使用時意欲包括鏈中含有x至y個碳之基團。舉例而言，術語「Cx-y 烷基」係指鏈中含有x至y個碳的經取代或未經取代之飽和烴基，包括直鏈烷基及分支鏈烷基，包括鹵烷基，諸如三氟甲基及2,2,2-三氟乙基等。C0 烷基指示在基團在末端位置時係指氫，在內部時係指一鍵。術語「C2-y 烯基」及「C2-y 炔基」係指經取代或未經取代之不飽和脂族基，其長度及可能之取代與上述烷基類似，但分別含有至少一個雙鍵或參鍵。 如本文所用，術語「烷基胺基」係指經至少一個烷基取代之胺基。 如本文所用，術語「烷基硫基」係指經烷基取代之硫醇基且可由通式烷基S-表示。 如本文所用，術語「炔基」係指含有至少一個參鍵之脂族基且意欲包括「未經取代之炔基」與「經取代之炔基」，後者係指炔基之一或多個碳上之氫經取代基置換的炔基部分。此類取代基可存在於一或多個包括或不包括於一或多個參鍵中之碳上。此外，此類取代基包括如上文所論述之對於烷基所涵蓋之所有取代基，除非穩定性不允許。舉例而言，涵蓋炔基經一或多個烷基、碳環基、芳基、雜環基或雜芳基取代。 如本文所用，術語「醯胺」係指基團其中各R10 獨立地表示氫或烴基，或兩個R10 與其附接之N原子一起完成在環結構中具有4至8個原子之雜環。 術語「胺」及「胺基」為此項技術中公認的且係指未經取代與經取代之胺及其鹽，例如可由以下表示之部分：其中各R10 獨立地表示氫或烴基，或兩個R10 與其附接之N原子一起完成在環結構中具有4至8個原子之雜環。 如本文所用，術語「胺基烷基」係指經胺基取代之烷基。 如本文所用，術語「羧基」係指由式-CO2 H表示之基團。 如本文所用，術語「雜芳烷基(hetaralkyl)」及「雜芳烷基(heteroaralkyl)」係指經雜芳基取代之烷基。 如本文所用，術語「雜烷基」係指具有碳原子及至少一個雜原子之飽和或不飽和鏈，其中不存在相鄰之兩個雜原子。 術語「雜芳基(heteroaryl)」及「雜芳基(hetaryl)」包括經取代或未經取代之芳族單環結構，較佳5至7員環，更佳5至6員環，其環結構包括至少一個雜原子，較佳一至四個雜原子，更佳一個或兩個雜原子。術語「雜芳基」亦包括具有兩個或兩個以上環之多環系統，其中兩個或兩個以上碳為兩個鄰接環所共用，其中該等鄰接環中至少一個環為雜芳族環，例如其他環可為環烷基、環烯基、環炔基、芳基、雜芳基及/或雜環基。雜芳基包括例如吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、吡啶、吡嗪、噠嗪及嘧啶及其類似基團。 如本文所用，術語「雜原子」意謂除碳或氫之外的任何元素之原子。較佳雜原子為氮、氧及硫。 術語「雜環基」、「雜環(heterocycle)」及「雜環(heterocyclic)」係指經取代或未經取代之非芳族環結構，較佳3至10員環，更佳3至7員環，其環結構包括至少一個雜原子，較佳一至四個雜原子，更佳一或兩個雜原子。術語「雜環基」及「雜環」亦包括具有兩個或兩個以上環之多環環系統，其中兩個或兩個以上碳為兩個鄰接環所共用，其中至少一個環為雜環，例如其他環可為環烷基、環烯基、環炔基、芳基、雜芳基及/或雜環基。雜環基包括例如哌啶、哌嗪、吡咯啶、嗎啉、內酯、內醯胺及其類似基團。雜環基亦可經側氧基取代。舉例而言，「雜環基」涵蓋吡咯啶與吡咯啶酮。 如本文所用，術語「羥基烷基」係指經羥基取代之烷基。 術語「經取代」係指部分具有置換主鏈之一或多個碳上之氫的取代基。應瞭解，「取代」或「經……取代」包括如下隱含限制條件：此類取代係根據經取代之原子及取代基的容許價數，且取代產生穩定化合物，例如其不會諸如藉由重排、環化、消除等自發發生轉換。如本文所用，術語「經取代」預期包括有機化合物之全部容許取代基。 在一廣泛態樣中，可容許取代基包括有機化合物之非環狀及環狀、分支及未分支、碳環及雜環、芳族及非芳族取代基。可容許取代基對於適當有機化合物可為一或多個且相同或不同。出於本發明之目的，諸如氮之雜原子可具有氫取代基及/或本文所描述之滿足雜原子價數之有機化合物的任何可容許取代基。取代基可包括本文所述之任何取代基，例如鹵素、羥基、羰基(諸如羧基、烷氧基羰基、甲醯基或醯基)、硫羰基(諸如硫酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、磷醯基、磷酸酯、膦酸酯、亞膦酸酯、胺基、醯胺基、脒、亞胺、氰基、硝基、疊氮基、硫氫基、烷基硫基、硫酸酯、磺酸酯、胺磺醯基、磺醯胺基、磺醯基、雜環基、芳烷基或芳族或雜芳族部分。熟習此項技術者應瞭解，適當時，取代基可自身經取代。除非特別陳述為「未經取代」，否則在本文中提及化學部分應理解為包括經取代之變體。舉例而言，提及「芳基」基團或部分隱含地包括經取代與未經取代之變體。 如本文所用，術語「硫烷基」係指經硫醇基取代之烷基。 如本文所用，術語「硫酯」係指基團-C(O)SR10 或-SC(O)R10 ，其中R10 表示烴基。 如本文所用，術語「硫醚」等於醚，其中氧經硫置換。 「保護基」係指當附接至分子中之反應性官能基時遮蔽、降低或預防該官能基之反應性的一組原子。通常，在合成過程期間可根據需要選擇性移除保護基。保護基之實例可見於Greene及Wuts,Protective Groups in Organic Chemistry, 第3版, 1999, John Wiley & Sons, NY及Harrison等人,Compendium of Synthetic Organic Methods , 第1-8卷, 1971-1996, John Wiley & Sons, NY。代表性氮保護基包括(但不限於)甲醯基、乙醯基、三氟乙醯基、苯甲基、苯甲氧羰基(「CBZ」)、第三丁氧羰基(「Boc」)、三甲基矽烷基(「TMS」)、2-三甲基矽烷基-乙磺醯基(「TES」)、三苯甲基以及經取代之三苯甲基、烯丙氧基羰基、9-茀基甲氧基羰基(「FMOC」)、硝基-藜蘆基氧基羰基(「NVOC」)及其類似基團。代表性羥基保護基包括(但不限於)羥基經醯基化(酯化)或烷基化之基團，諸如苯甲基及三苯甲基醚，以及烷基醚、四氫哌喃基醚、三烷基矽烷基醚(例如TMS或TIPS基團)、二醇醚，諸如乙二醇及丙二醇衍生物及烯丙基醚。 「共價偶合」包括兩種化學物質之直接鍵結與間接鍵結(例如經由一系列插入原子)。舉例而言，胺基酸可例如藉由在胺基酸之羧基與聚乙二醇之羥基之間形成酯，而直接共價偶合於聚乙二醇，或例如藉由使聚乙二醇與表氯醇反應以形成環氧丙基醚且使所得環氧化物與胺基酸之胺基反應，藉此經由2-羥基丙基連接子共價連接胺基酸與聚乙二醇，而間接共價偶合於聚乙二醇。用於直接或間接偶合不同部分之各種部分及反應為此項技術中所熟知。在某些較佳實施例中，除非上下文另外指示，否則間接鍵結僅僅涉及1-10個插入原子(例如亞甲基、二丁醚、三肽等)，最佳1-6個插入原子。 如本文所用，「預防」病症或病狀之治療劑係指在統計樣本中，相對於未經治療之對照樣本，減少病症或病狀在經治療樣本中之發生率，或相對於未經治療之對照樣本，延緩病症或病狀之一或多種症狀之發作或降低病症或病狀之一或多種症狀之嚴重程度的化合物。 術語「治療」包括預防性及/或治療性治療。術語「預防性或治療性」治療為此項技術中公認的且包括向宿主投與目標組合物中之一或多者。若在臨床表現不希望之病症(例如，宿主動物之疾病或其他不希望之狀態)之前投與目標組合物則治療為預防性的(亦即，其保護宿主避免發展不希望之病症)，而若在表現不希望之病症之後投與，則治療為治療性的(亦即，其意欲減輕、改善或穩定現存不希望之病狀或其副作用)。 術語「前藥」意欲涵蓋在生理條件下轉化為治療活性劑的化合物。製備前藥之通用方法為包括一或多個在生理學條件下水解產生所要分子的所選部分。在其他實施例中，前藥藉由宿主動物之酶活性轉化。舉例而言，酯或碳酸酯(例如醇或羧酸之酯或碳酸酯)為較佳前藥。 在一些實施例中，本發明係關於一種治療個體之疾病，諸如癌症的方法，其包含向該個體投與包含如本文所描述之抗體-藥物結合物的醫藥組合物。醫藥組合物可進一步包含治療有效量之化學治療劑。在較佳實施例中，個體為哺乳動物。舉例而言，個體可選自嚙齒動物、兔類動物、貓科動物、犬科動物、豬科動物、綿羊科動物、牛類動物、馬科動物及靈長類動物。在某些較佳實施例中，個體為人類。 下文中，本發明之組態將經由實例來詳細描述，但以下實例僅僅幫助理解本發明。本發明之範疇不限於此。 範例 下表列出在整個以下實例中使用之縮寫： 實例 1. 製備化合物 1i 製備化合物 1b 在室溫下向5-甲醯基水楊酸1a (10.0 g，60.1 mmol)於THF (30 mL)中之懸浮液中添加DIPEA (29.8 mL，180 mmol)及苯甲基溴(7.15 mL，60.1 mmol)。接著反應混合物在回流下加熱。在回流下18小時後，將反應混合物用2 N HCl水溶液(100 mL)稀釋。將所得混合物用EtOAc (2×100 mL)萃取。合併之有機層經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物1b (12.9 g，83%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 11.38 (s, 1H), 9.86 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.01 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.44 (m, 5H), 7.12 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 5.42 (s, 2H)。製備化合物 1c 向化合物1b (5.0 g，19.5 mmol)及化合物M (8.5 g，21.4 mmol，參見實例66)於MeCN (100 mL)中之溶液中添加4 Å分子篩(10 g)及Ag2 O (18.0 g，78.0 mmol)。在N2 下在室溫下攪拌12小時後，濃縮反應混合物。接著將濃縮之反應混合物用H2 O (100 mL)稀釋且用EtOAc (2×200 mL)萃取。合併之有機層經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物1c (8.63 g，77%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 9.94 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.02 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.46-7.28 (m, 6H), 5.41-5.32 (m, 6H), 4.27 (d,J = 9.2 Hz, 1H), 3.71 (s, 3H), 2.05 (m, 9H)。製備化合物 1d 在0℃下向化合物1c (3.10 g，5.41 mmol)於i -PrOH/CHCl3 (9 mL/45 mL)中之溶液中添加矽膠(3 g)及NaBH4 (0.41 g，10.82 mmol)。在N2 下在0℃下攪拌2小時後，將反應混合物用H2 O (100 mL)淬滅且用EtOAc (200 mL)萃取。有機層經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生呈白色固體狀之化合物1d (2.73 g，87%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.74 (s, 1H), 7.48-7.34 (m, 6H), 7.16 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 5.35-5.26 (m, 5H), 5.15 (m, 1H), 4.17 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.04 (s, 9H), 1.73 (t, 1H)。製備化合物 1e 向化合物1d (2.40 g，4.17 mmol)於EtOH (150 mL)中之溶液中添加Pd/C (10 wt. %，240 mg)。在氫氣下在室溫下將反應混合物攪拌10分鐘。接著反應混合物經矽藻土墊過濾且用EtOH (100 mL)洗滌。濃縮濾液，得到呈白色固體狀之粗產物1e (2.10 g)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.06 (s, 1H) 7.61 (dd,J = 8.8 Hz, 1H), 7.23 (d,J = 8.0 Hz 1H), 5.43-5.29 (m, 5H), 4.17 (s, 2H), 4.32 (d,J = 8.4 Hz, 1H) 3.69 (s, 3H), 2.11-2.08 (t, 9H), 1.24 (t, 1H)。製備化合物 1f 在室溫下向粗化合物1e (2.10 g，4.33 mmol)於DMF (50 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (1.79 g，13.01 mmol)及烯丙基溴(0.41 mL，4.76 mmol)。在室溫下攪拌3小時後，將反應混合物用2 N HCl水溶液(100 mL)稀釋。將所得混合物用EtOAc (200 mL)萃取。有機層經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物1f (1.55 g，2步70%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.74 (s, 1H), 7.45 (dd,J = 8.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 7.16 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 6.02 (m, 1H), 5.40-5.26 (m, 5H), 5.16 (m, 1H), 4.76 (m, 2H), 4.66 (s, 2H), 4.19 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.07-2.05 (m, 9H), 1.68 (t, 1H)。製備化合物 1g 在0℃下在N2 下向化合物1f (2.50 g，4.77 mmol)於DMF (20 mL)中之溶液中添加碳酸雙(4-硝基苯基)酯(1.30 g，4.29 mmol)及DIPEA (0.80 mL，4.77 mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌30分鐘且使之升溫至室溫，歷時1小時。將反應混合物用H2 O (100 mL)稀釋且用EtOAc (200 mL)萃取。將有機層用鹽水(100 mL)洗滌且經無水MgSO4 乾燥。過濾及減壓濃縮後，所得粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物1g (2.80 g，85%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.28 (d,J = 15.2 Hz, 2H), 7.85 (d,J = 2.4 Hz ,1H), 7.55 (dd,J = 3.2 Hz, 2.4 Hz, 1H), 7.38 (d,J = 15.2 Hz, 2H), 7.20 (d,J = 8.8 Hz, 1H) 6.03 (m, 1H), 5.42-5.19 (m, 8H), 4.78 (d,J = 5.2 Hz, 2H), 4.12 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H)。 製備化合物 1h 在0℃下化合物1g (528 mg，0.77 mmol)、MMAE (500 mg，0.7 mmol)及無水HOBt (19 mg，0.14 mmol)溶於DMF (3 mL)中。接著添加吡啶(0.7 mL)及DIPEA (0.24 mL，1.39 mmol)。在N2 下在室溫下攪拌24小時後，將反應混合物用H2 O/飽和NH4 Cl水溶液(100 mL/50 mL)稀釋且用EtOAc (2×100 mL)萃取。合併之有機層經無水MgSO4 乾燥，過濾，且濃縮。殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物1h (600 mg，67%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1269.5, [M+Na]+ 1291.5。製備化合物 1i 在室溫下向化合物1h (600 mg，0.47 mmol)及三苯基膦(31 mg，0.12 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液中添加吡咯啶(0.047 mL，0.57 mmol)及Pd(PPh3 )4 (27 mg，0.02 mmol)。攪拌2小時後，將反應混合物用H2 O/1 N HCl水溶液(50 mL/50 mL)稀釋且用EtOAc (3×50 mL)萃取。合併之有機層經無水MgSO4 乾燥，過濾，且濃縮。殘餘物藉由管柱層析法(Hex/EtOAc 1/1至EtOAc)來純化，產生呈白色固體狀之化合物1i (480 mg，82%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1228.4, [M+Na]+ 1250.4。實例 2. 製備化合物 1j 化合物1j 係藉由實例1中製備化合物1i 之類似方法，自MMAF-OMe製備。實例 3. 製備化合物 2g 製備化合物 2a 在室溫下在氮氣下使2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙醇(10 g，59.3 mmol)溶於DMF (90 mL)中，且接著向其中添加NaN3 (5.78 g，88.9 mmol)。在100℃下攪拌13小時後，向其中添加氯仿(200 mL)及蒸餾水(300 mL)以萃取有機層，且經萃取之有機層經無水Na2 SO4 乾燥且減壓濃縮。殘餘物進行管柱層析法，產生化合物2a (10.3 g，99%)。1 H-NMR (600 MHz, CDCl3 ) δ 3.75-3.73 (m, 2H), 3.70-3.68 (m, 6H), 3.63-3.61 (m, 2H), 3.40 (t,J = 5.4 Hz, 2H), 2.20 (t,J = 6.0 Hz, 1H)。製備化合物 2b 在0℃下在氮氣下使CBr4 (21.4 g，64.6 mmol)溶於DCM (100 mL)中，且接著向其中添加含三苯基膦(16.9 g，64.6 mmol)之DCM (100 mL)及化合物2a (10.3 g，58.7 mmol)，且混合物在室溫下攪拌13小時。反應結束後，向其中添加DCM (300 mL)及蒸餾水(300 mL)以萃取有機層，且經萃取之有機層經無水Na2 SO4 乾燥且減壓濃縮。殘餘物進行管柱層析法，產生化合物2b (12 g，85%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.83 (t,J = 6.4 Hz, 2H), 3.72-3.67 (m, 6H), 3.48 (t,J = 6.0 Hz, 2H), 3.40 (t,J = 4.8 Hz, 2H)製備化合物 2c 在室溫下在氮氣下使化合物2b (1g，4.20 mmol)溶於MeCN中，且接著向其中添加N -Boc-羥基胺(643 mg，4.82 mmol)及DBU (0.66 mL，4.41mmol)。在60℃下攪拌13小時後，向其中添加DCM (300 mL)及蒸餾水(300 mL)以萃取有機層，且經萃取之有機層經無水Na2 SO4 乾燥且減壓濃縮。殘餘物進行管柱層析法，產生化合物2c (748 mg，70%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.55 (s, 1H), 4.05-4.03 (m, 2H), 3.76-3.74 (m, 2H), 3.74-3.69 (m, 6H), 3.42 (t,J = 4.8 Hz, 2H), 1.49 (s, 9H)。製備化合物 2d 使化合物2c (200 mg，0.688 mmol)溶於MeOH (5 mL)中，且接著向其中添加Pd/C (10% wt.，70 mg)且在氫氣下攪拌3小時。反應結束後，反應混合物經矽藻土過濾且減壓濃縮，產生化合物2d (180 mg，98%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.04-4.01 (m, 2H), 3.74-3.62 (m, 7H), 3.55 (t,J = 5.2 Hz, 1H), 2.88 (t,J = 5.2 Hz, 1H), 2.81 (t,J = 5.2 Hz, 1H), 1.64 (s, 2H), 1.48 (s, 9H)。 製備化合物 2e 將DIPEA (0.042 mL，0.32 mmol)及PyBOP (126 mg，0.24 mmol)添加至攪拌之化合物1i (200 mg，0.16 mmol)及化合物2d (51 mg，0.19 mmol)於DMF (4 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌4小時後，將反應混合物用H2 O (100 mL)稀釋且用EtOAc (2×100 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到化合物2e (142 mg，60%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1474.7。製備化合物 2f 在-20℃下向化合物2e (142 mg，0.096 mmol)於MeOH (2 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(36 mg，0.86 mmol)之H2 O (2 mL)。在0℃下攪拌1小時後，將反應混合物用H2 O/2 N HCl水溶液(50 mL/2 mL)稀釋且用CHCl3 (2×100 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到粗化合物2f (128 mg)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 1334.5。製備化合物 2g 在0℃下向粗化合物2f (105 mg，0.08 mmol)於DCM (3 mL)中之溶液中添加HCl (4 M之1,4-二噁烷溶液，1 mL)。1小時後，溶劑及過量HCl藉由N2 流移除且接著殘餘物藉由HPLC來純化，產生呈白色固體狀之化合物2g (47 mg，46%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1234.4。實例 4. 製備化合物 2h 化合物2h 係藉由實例3中製備化合物2g 之類似方法，自化合物1j 及化合物2d 製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 1248.9。實例 5. 製備化合物 3f 製備化合物 3a 將六乙二醇(1.0 g，3.54 mmol)、Ag2 O (1.23 g，5.31 mmol)及KI (117 mg，0.71 mmol)於DCM (10 mL)中之混合物進行音波處理15分鐘。懸浮液冷卻至-30℃且逐滴添加對甲苯磺醯氯(688 mg，3.61 mmol)於DCM (13 mL)中之溶液。混合物接著逐漸升溫至0℃且保持在此溫度下15分鐘。接著反應混合物經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮，產生糖漿狀殘餘物。接著，糖漿狀殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc至EtOAc/MeOH 10/1)來純化。純溶離份真空蒸發，得到化合物3a (1.18 g，77%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.80 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 7.34 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 4.16 (m, 2H), 3.72-3.58 (m, 22H), 2.97 (br, 1H), 2.45 (s, 3H)。製備化合物 3b 化合物3a (1.18 g，2.71 mmol)及NaN3 (264 mg，4.07 mmol)溶於DMF (3 mL)中。且接著將反應混合物在100℃下加熱。在100℃下15小時後，將反應混合物過濾且濃縮。殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc至EtOAc/MeOH 10/1)來純化，得到化合物3b (728 mg，87%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.75-3.70 (m, 2H), 3.69-3.63 (m, 18H), 3.62-3.60 (m, 2H), 3.39 (d,J = 5.2 Hz, 2H), 3.07 (br, 1H)。製備化合物 3c 在0℃下向攪拌的化合物3b (728 mg，2.36 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.73 mL，5.21 mmol)及甲烷磺酸酐(619 mg，3.55 mmol)。2小時後，將LiBr (1.03 g，11.8 mmol)添加至攪拌溶液且使所得反應混合物回流5小時。冷卻至室溫後，在減壓下濃縮反應混合物。殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc至EtOAc/MeOH 10/1)來純化，得到化合物3c (810 mg，92%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.81 (t,J = 6.4 Hz, 2H), 3.69-3.65 (m, 18H), 3.47 (t,J = 6.4 Hz, 2H), 3.39 (t,J = 5.2 Hz, 2H)。製備化合物 3d 在0℃下將NaH (60%於油中，564 mg，12.9 mmol)添加至攪拌之化合物3c (3.42 g，9.24 mmol)及N ,N -二Boc-羥基胺(2.80 g，12.0 mmol，藉由以引用的方式併入本文中的PCT公開案第WO2004/018466A2號中之程序合成)於DMF (20 mL)之混合物。反應混合物升溫至室溫且保持在此溫度下2小時。在減壓下蒸發溶劑且殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc/Hex 1/20至1/5)來純化，產生化合物3d (3.51 g，73%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.08 (t,J = 4.8 Hz, 2H), 3.73 (t,J = 4.8 Hz, 2H), 3.69-3.62 (m, 18H), 3.39 (t,J = 5.6 Hz, 2H), 1.53 (s, 18H)。製備化合物 3e 在0℃下向攪拌之化合物3d (123 mg，0.23 mmol)及Pd/C (10 wt. %，25 mg)於MeOH (5 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.05 mL，0.21 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌5小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (100 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈無色油狀之化合物3e (118 mg，95%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.98 (t,J = 4.4 Hz, 2H), 3.61-3.51 (m, 22H), 2.95 (br, 3H), 1.46 (s, 18H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 497.6。製備化合物 3f 化合物3f 係藉由實例3中製備化合物2g 之類似方法，自化合物1i 及化合物3e 製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 1366.6, [M+Na]+ 1389.6。實例 6. 製備化合物 3g 化合物3g 係藉由實例3中製備化合物2g 之類似方法，自化合物1j 及化合物3e 製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 1380.6, [M+Na]+ 1403.6。實例 7. 製備化合物 4f 製備化合物 4a 向攪拌的十二乙二醇(1.8 g，3.2 mmol)於DCM (18 mL)中之溶液中添加對甲苯磺醯氯(656 mg，3.4 mmol)、Ag2 O (1.13 g，4.9 mmol)及KI (108 mg，0.65 mmol)。在室溫下攪拌30分鐘後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用DCM (50 mL)洗滌。濃縮濾液。所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生呈淡黃色油狀之化合物4a (490 mg，21%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.81 (d, 2H), 7.35 (d, 2H), 4.16 (t, 2H), 3.72-3.58 (m, 46H), 2.82 (br s, 1H), 2.45 (s, 3H)。製備化合物 4b 使化合物4a (490 mg，0.69 mmol)及NaN3 (68 mg，1.04 mmol)溶於DMF (16 mL)中且反應混合物在100℃下加熱3小時。反應混合物過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，得到化合物4b (267 mg，67%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.72-3.60 (m, 46H), 3.39 (t, 2H), 2.84 (t, 1H), 3.40 (m, 2H)。製備化合物 4c 在0℃下向攪拌的化合物4b (265 mg，0.46 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中添加4-甲基嗎啉(0.066 mL，0.60 mmol)及甲烷磺酸酐(121 mg，0.69 mmol)。2小時後，將LiBr (120 mg，1.38 mmol)添加至攪拌溶液且使所得反應混合物回流6小時。冷卻至室溫後，在減壓下濃縮反應混合物。殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc至EtOAc/MeOH 10/1)來純化，得到化合物4c (178 mg，60%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.81 (t, 2H), 3.65 (m, 42H), 3.47 (t, 2H), 3.39 (t, 2H)。製備化合物 4d 在0℃下NaH (60%於油中，14 mg，0.33 mmol)添加至攪拌之化合物4c (175 mg，0.27 mmol)及N -Boc-羥基胺(47 mg，0.35 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物。反應混合物升溫至室溫且保持在此溫度下12小時。在減壓下蒸發溶劑且殘餘物藉由管柱層析法(MeOH/CHCl3 1/20至1.5/20)來純化，產生化合物4d (148 mg，78%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.00 (t, 2H), 3.66 (m, 44H), 3.39 (t, 2H), 1.47 (d, 9H)。製備化合物 4e 在0℃下向攪拌之化合物4d (148 mg，0.21 mmol)及Pd/C (10 wt. %，28 mg)於MeOH (5 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.053 mL，0.21 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌30分鐘後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (30 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈無色油狀之化合物4e (142 mg，96%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 4.00 (t, 2H), 3.92 (t, 2H), 3.76-3.64 (m, 42H), 3.18 (t, 2H) 1.47 (s, 9H)。製備化合物 4f 化合物4f 係藉由實例3中製備化合物2g 之類似方法，自化合物1i 及化合物4e 製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 1631.9。 實例8.  製備化合物4g 化合物4g 係藉由實例3中製備化合物2g 之類似方法，自化合物1j 及化合物4e 製備。EI-MS m/z: EI-MS m/z [M+H]+ 1645.3。實例 9. 製備化合物 5e 製備化合物 5a 在0℃下在N2 下向2-胺基乙醇(10 g，164 mmol)於DCM (70 mL)中之溶液中添加含三乙胺(3.9 mL，28.1 mmol)及氯甲酸苯甲酯(30 mL，213 mmol)之DCM (30 mL)。24小時後，濃縮反應混合物。將所得殘餘物用H2 O (50 mL)稀釋且用EtOAc (3×100 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物5a (17 g，53%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.40-7.27 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 3.72 (s, 2H), 3.56 (s, 2H), 2.13 (br s, 1H)。製備化合物 5b 在0℃下在N2 下向化合物5a (5.0 g，25.6 mmol)於DCM (70 mL)、三乙胺(3.9 mL，28.1 mmol)中之溶液中添加含DMAP (100 mg，5.12 mmol)及對甲苯磺醯氯(5.4 g，28.1 mmol)之DCM (30 mL)。在0℃下15小時後，將反應混合物用飽和NH4 Cl水溶液(100 mL)稀釋且用DCM (2×100 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物5b (8.29 g，92%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.77 (d,J = 7.6 Hz, 2H), 7.40-7.28 (m, 7H), 5.07 (s, 3H), 4.09 (s, 2H), 3.45 (s, 2H), 2.43 (s, 3H)。製備化合物 5c 在0℃下在N2 下向化合物5b (2.0 g，7.23 mmol)於THF (20 mL)中之溶液中添加N ,N -二Boc-羥基胺(1.7 g，7.44 mmol)及NaH (300 mg，6.86 mmol)。在室溫下攪拌17小時後，將反應混合物用飽和NH4 Cl水溶液(50 mL)稀釋且用EtOAc (3×50 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物5c (375 mg，16%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.45-7.27 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 4.01 (br s, 2H), 3.44 (d,J = 4.8 Hz, 2H), 1.52 (s, 18H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 410.7。製備化合物 5d 向化合物5c (187 mg，0.45 mmol)於MeOH (20 mL)中之溶液中添加Pd/C (10% wt. %，20 mg)且接著反應混合物在氫氣下在室溫下攪拌4小時。反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (20 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈無色油狀之化合物5d (120 mg)，其未經進一步純化即使用。製備化合物 5e 化合物5e 係藉由實例3中製備化合物2g 之類似方法，自化合物1i 及化合物5d 製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 1146.4。實例 10. 製備化合物 5f 化合物5f 係藉由實例3中製備化合物2g 之類似方法，自化合物1j 及化合物5d 製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 1160.3。實例 11. 製備化合物 6e 製備化合物 6a 將DIPEA (1.2 mL，9.96 mmol)及HBTU (1.69 g，6.22 mmol)添加至攪拌之Z-Asp(OMe)-OH (500 mg，1.78 mmol)及化合物2d (642 mg，2.98 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物。反應混合物在N2 下在室溫下攪拌22小時。將反應混合物用H2 O (100 mL)稀釋且用EtOAc (2×100 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到化合物6a (368 mg，40%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.85-7.70 (m, 1 H), 7.45-7.28 (m, 5H), 7.04 (s, 1H), 6.02 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.65-4.50 (m, 1H), 4.00 (d,J = 3.6 Hz, 2H), 3.72-3.30 (m, 10H), 2.80 (dd,J = 5.6 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H)。製備化合物 6b 在0℃下向攪拌之化合物6a (150 mg，0.28 mmol)及Pd/C (10 wt. %，20 mg)於MeOH (5 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.07 mL，0.28 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌2小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (20 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈無色油狀之化合物6b (169 mg)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+1]+ 393.7。 製備化合物 6c 將DIPEA (0.022 mL，0.12 mmol)及HBTU (20 mg，0.05 mmol)添加至攪拌之化合物1i (50 mg，0.04 mmol)及化合物6b (22 mg，0.05 mmol)於DMF (1 mL)中之混合物。反應混合物在N2 下在室溫下攪拌14小時。接著，將反應混合物用H2 O (10 mL)稀釋且用EtOAc (2×20 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到化合物6c (38 mg，60%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1604.5。製備化合物 6d 在0℃下向化合物6c (38 mg，0.023 mmol)於MeOH (1 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(5 mg，0.118 mmol)之H2 O (1 mL)。在0℃下2小時後，溶液pH值用AcOH調至4~5且減壓濃縮。殘餘物溶於DMSO (1.5 mL)中且藉由HPLC來純化，產生化合物6d (26 mg，78%)。 EI-MS m/z: [M+H]+ 1450.5。製備化合物 6e 將TFA (0.3 mL)添加至攪拌之化合物6d (26 mg，0.018 mmol)於DCM (1.5 mL)中之溶液。在0℃下攪拌2小時後，溶劑及過量TFA藉由N2 流移除。接著殘餘物溶於DMSO (1 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且凍乾，產生呈白色固體狀之化合物6e (19.5 mg，80%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1350.6。實例 12. 製備化合物 7e 製備化合物 7a 在0℃下將NaH (60 wt. %，500 mg，12.49 mmol)添加至攪拌之化合物4c (6.10 g，9.61 mmol)及N ,N -二Boc-羥基胺(2.69 g，11.53 mmol)於DMF (90 mL)中之混合物。反應混合物加熱達室溫且保持在此溫度下12小時。在減壓下蒸發反應混合物且所得殘餘物藉由管柱層析法來純化。純溶離份真空蒸發，得到化合物7a (5.70 g，75%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.05 (t, 2H), 3.71 (t, 2H), 3.64 (m, 42H), 3.37 (t, 2H), 1.51 (d, 18H)。製備化合物 7b 在0℃下向攪拌之化合物7a (5.70 g，7.21 mmol)及Pd/C (10 wt. %，570 mg)於MeOH (100 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，1.9 mL，7.2 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌30分鐘後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (30 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈無色油狀之化合物7b (5.10 g，87%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 4.21 (t, 2H), 4.07 (s, 2H), 3.95-3.78 (m, 42H), 3.32 (s, 2H) 1.63 (s, 18H)。 製備化合物 7c 將DIPEA (0.25 mL，1.42 mmol)及HBTU (337 g，0.89mmol)添加至攪拌之Z-Asp(OMe)-OH(100mg， 0.36 mmol)及化合物7b (340 mg，0.43 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物。反應混合物在N2 下在室溫下攪拌20小時。接著，將反應混合物用H2 O (100 mL)稀釋且用EtOAc (2×100 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到化合物7c (123 mg，58%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1024.2。製備化合物 7d 在0℃下向攪拌之化合物7c (120 mg，0.12 mmol)及Pd/C (10 wt. %，20 mg)於MeOH (5 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.03 mL，0.12 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌2小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (20 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈無色油狀之化合物7d (120 mg)，其未經進一步純化即使用。製備化合物 7e 化合物7e 係藉由實例11中製備化合物6e 之類似方法，自化合物1i 及化合物7d 製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 1747.1。實例 13. 製備化合物 8f 製備化合物 8a 向2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙醇(5.0 g，29.6 mmol)於丙酮(30 mL)中之溶液中添加NaI (13.3 g，88.9 mmol)。使反應混合物回流12小時。反應結束後，反應混合物過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物8a (7.0 g，91%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.80-3.73 (m, 4H), 3.72-3.65 (m, 4H), 3.63-3.61 (m, 2H), 3.27 (t,J = 6.4 Hz, 2H)。製備化合物 8b 在0℃下在N2 下將NaH (500 mg，12.49 mmol)添加至攪拌之化合物8a (2.0 g，7.69 mmol)及N ,N -二Boc-羥基胺(2.33 g，10.00 mmol)於DMF (20 mL)中之混合物。在室溫下攪拌17小時後，將反應混合物用飽和NH4 Cl水溶液(50 mL)稀釋且用EtOAc (3×50 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物8b (1.54 g，54%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.45-7.27 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 4.01 (br s, 2H), 3.44 (d,J = 4.8 Hz, 2H), 1.52 (s, 18H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 410.7。製備化合物 8c 在0℃下在N2 下向攪拌的化合物8b (123 mg，0.242 mmol)於DMSO (2 mL)及DCM (2 mL)中之溶液中添加SO3 ·吡啶複合物(116 mg，0.726 mmol)及三乙胺(0.17 mL，1.21 mmol)。1小時後，將反應混合物用飽和NH4 Cl水溶液(10 mL)稀釋且用DCM (2×10 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥，且過濾。在減壓下濃縮得到化合物8c (88 mg)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 9.74 (s, 1H), 4.19 (s, 2H), 3.77-3.69 (m, 6H), 3.42 (m, 2H)。 製備化合物 8d 在0℃下在N2 下向β-麩胺酸(500 mg，0.339 mmol)於MeOH (10 mL)中之溶液中添加亞硫醯氯(0.148 mL，2.04 mmol)。24小時後，濃縮反應混合物，產生化合物8d (697 mg)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.40-7.27 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 3.72 (s, 2H), 3.56 (s, 2H), 2.13 (br s, 1H)。製備化合物 8e 在室溫下在N2 下向化合物8d (34 mg，0.16 mmol)及化合物8c (88 mg，0.24 mmol)於MeOH (5 mL)中之溶液中添加NaCNBH3 (10 mg，0.16 mmol)。3小時後，反應混合物過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物8e (53 mg，63%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.45-7.25 (m, 10H), 5.60 (br s, 2H), 5.03 (s, 4H), 3.80-3.25 (m, 20H), 2.81 (s, 4H)。製備化合物 8f 化合物8f 係藉由實例11中製備化合物6e 之類似方法，自化合物1i 及化合物8e 製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 1365.0。實例 14. 製備化合物 9j 製備化合物 9a 在0℃下在N2 下向六乙二醇(10.48 g，37.12 mmol)於DCM (400 mL)中之溶液中添加咪唑(3.20 g，44.54 mmol)。5分鐘後，在相同溫度下在N2 氛圍下反應混合物逐滴添加至TBSCl (5.60 g，37.12 mmol)於DCM (50 mL)中之溶液。反應混合物在0℃下攪拌且在N2 下升溫至室溫，歷時21小時。反應結束後，將反應混合物用水(200 mL)稀釋且用DCM (2×100 mL)萃取。有機層經無水Na2 SO4 乾燥且減壓濃縮。所得殘餘物藉由管柱層析法來純化。純溶離份真空蒸發，得到化合物9a (6.70 g，46%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.77-3.71 (m, 4H), 3.66-3.60 (m, 18H), 3.56-3.54 (t, 2H), 0.89 (s, 9H), 0.06 (s, 6H)。製備化合物 9b 在0℃下在N2 下向化合物9a (3.32 g，8.37 mmol)於無水THF (40 mL)中之溶液中添加NaH (55%於油中，438 mg，10.05 mmol)。30分鐘後，在相同溫度下在N2 下MeI (0.78 mL，12.56 mmol)添加至反應混合物。攪拌反應混合物且在N2 下升溫至室溫，歷時18小時。反應結束後，用H2 O (10 mL)淬滅且用EA (3×10 mL)萃取。合併有機層，用飽和NH4 Cl水溶液(5 mL)及鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥且在減壓下蒸發。所得殘餘物藉由管柱層析法來純化。純溶離份真空蒸發，得到化合物9b (3.16 g，92%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.78-3.75 (t, 2H), 3.65 (s, 20H), 3.57-3.54 (t, 4H), 3.38 (s, 3H), 0.89 (s, 9H), 0.06 (s, 6H)。製備化合物 9c 在0℃下在N2 下向化合物9b (3.16 g，7.69 mmol)於丙酮(100 mL)中之溶液中添加瓊斯試劑(Jones reagent)(10 mL)。攪拌反應混合物且在N2 下升溫至室溫，歷時17小時。反應結束後，反應混合物過濾且在減壓下蒸發。將殘餘物用H2 O (100 mL)稀釋且用CHCl3 (3×50 mL)萃取。合併有機層，經無水Na2 SO4 乾燥且在減壓下蒸發。所得粗化合物9c (2.28 g，95%)未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.16 (s, 2H), 3.76-3.75 (t, 2H), 3.69-3.67 (m, 16H), 3.57-3.55 (t, 2H), 3.38 (s, 3H)。製備化合物 9d 將DIPEA (3.8 mL，22.03 mmol)、HOBt (1.29 g，9.55 mmol)及EDC∙HCl (1.83 g，9.55 mmol)添加至攪拌之化合物9c (2.28 g，7.34 mmol)及H-Lys(Z)-OMe鹽酸鹽(2.91 g，8.81 mmol)於DMF (30 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，濃縮反應混合物。藉由管柱層析法來純化，得到化合物9d (1.23 g，72%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.38-7.31 (m, 5H), 5.10 (s, 2H), 5.00 (s, 1H) 4.68-4.62 (m, 1H), 4.03 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.68-3.64 (m, 16H), 3.56 (t, 2H), 3.39 (s, 3H), 3.20 (m, 2H), 1.89 (m, 1H), 1.74 (m, 1H), 1.55(m, 1H), 1.40 (m, 1H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 586.8, [M+Na]+ 608.9。製備化合物 9e 在0℃下在N2 下向化合物9d (2.16 g，3.68 mmol)於THF/MeOH/H2 O (18 mL/6 mL/6 mL)中之溶液中添加LiOH單水合物(307 mg，7.31 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時。接著溶液pH值用1 N HCl水溶液調至2~3。將反應混合物傾倒至H2 O (20 mL)且用DCM (3×50 mL)萃取。合併有機層，經Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮產生化合物9e (2.28 g，99%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.34-7.30 (m, 5H), 5.08 (s, 2H), 4.66-4.60 (q, 1H), 4.01 (s, 2H), 3.67-3.55 (m, 18H), 3.37 (s, 3H), 3.20 (m, 2H), 1.87 (m, 1H), 1.72 (m, 1H), 1.53(m, 1H), 1.38 (m, 1H)。製備化合物 9f 將DIPEA (0.45 mL，2.63 mmol)、HOBt (154 mg，0.11 mmol)及EDC∙HCl (218 mg，0.11 mmol)添加至攪拌之化合物9e (502 mg，0.88 mmol)及化合物7b (700 mg，0.88 mmol)於DMF (8 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (20 mL)且用EtOAc (3×20 mL)萃取。合併之有機層用NaHCO3 水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾及減壓濃縮後，所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到化合物9f (499 mg，43%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.35-7.30 (m, 5H), 6.83 (s, 1H), 5.15 (s, 1H), 5.08 (s, 2H), 4.43 (q, 1H) 4.07 (t, 1H), 3.65-3.60 (m, 54H), 3.55-3.53 (m, 4H), 3.37 (s, 3H), 3.16 (m, 2H), 1.85 (m, 1H), 1.53-1.52 (d, 19H), 1.38(m, 2H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1337.5。製備化合物 9g 在0℃下向攪拌之化合物9f (499 mg，0.37 mmol)及Pd/C (10 wt. %，50 mg)於MeOH (20 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.1 mL，0.37 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌90分鐘後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (10 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈無色油狀之化合物9g (458 mg，98%)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 1218.6。 製備化合物 9h 將DIPEA (0.019 mL，0.11 mmol)及HBTU (18 mg，0.05 mmol)添加至攪拌之化合物1i (45 mg，0.04 mmol)及化合物9g (57 mg，0.05 mmol)於DMF (0.5 mL)中之混合物。反應混合物在N2 下在室溫下攪拌14小時。將反應混合物用H2 O/DMSO (1.5 mL/1.5 mL)稀釋且藉由HPLC來純化，得到化合物9h (65 mg，57%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1181.7。製備化合物 9i 在0℃下向化合物9h (65 mg，0.03 mmol)於MeOH (1.5 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(10 mg，0.24 mmol)之H2 O (1.5 mL)。在0℃下1小時後，溶液pH值用AcOH調至4~5且減壓濃縮。接著反應混合物溶於H2 O/DMSO (1.5 mL/1.5 mL)中且藉由HPLC來純化，得到化合物9i (45 mg，55%)。EI-MS m/z: 1/2[M+Na]+ 1098.7。製備化合物 9j 將TFA (0.2 mL)添加至攪拌的化合物9i (45 mg，0.02 mmol)於DCM (1 mL)中之溶液。在0℃下攪拌30分鐘後，溶劑及過量TFA藉由N2 流移除。接著殘餘物溶於H2 O/DMSO (1 mL/1 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且凍乾，產生呈白色固體狀之化合物9j (14 mg，32%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1026.3。實例 15. 製備化合物 10c 製備化合物 10a 將DIPEA (0.03 mL，0.17 mmol)、HOBt (10 mg，0.075 mmol)及EDC∙HCl (14 mg，0.075 mmol)添加至攪拌之化合物9e (33 mg，0.058 mmol)及化合物7d (54 mg，0.058 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (10 mL)且用EtOAc (3×10 mL)萃取。合併之有機層用1 N HCl水溶液(8 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(8 mL)及鹽水(8 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物10a (61 mg，73%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1445.0, [M+H-Boc]+ 1344.9。製備化合物 10b 在0℃下向攪拌之化合物10a (60 mg，0.04 mmol)及Pd/C (10 wt. %，30 mg)於MeOH (10 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.01 mL，0.01 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌3小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (40 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈無色油狀之化合物10b (56 mg，100%)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 1311.0, [M+Na+]+ 1332.9。製備化合物 10c 化合物10c 係藉由實例14中製備化合物9j 之類似方法，自化合物1i 及化合物10b 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1083.8。實例 16. 製備化合物 10d 化合物10d 係藉由實例14中製備化合物9j 之類似方法，自化合物1j 及化合物10b 製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 2181.3, 1/2[M+H]+ 1091.3。 實例 17. 製備化合物 11j 製備化合物 11a 在室溫下向化合物3a (8.0 g，18.3 mmol)於THF (50 mL)中之溶液中添加LiBr (7.9 g，91.6 mmol)。在回流下攪拌17小時後，反應混合物過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物11a (3.2 g，50%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.95-3.50 (m, 24H)。製備化合物 11b 在0℃下向化合物11a (3.2 g，12.3 mmol)於丙酮(20 mL)中之溶液中添加瓊斯試劑(20 mL)。在0℃下15小時後，反應混合物過濾且濃縮。將殘餘物用H2 O (50 mL)稀釋且用EtOAc (2×100 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物11b (3.2 g，72%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.16 (s, 2H), 3.95-3.30 (m, 20H)。製備化合物 11c 在0℃下在N2 下向化合物11b (3.2 g，8.90 mmol)於MeOH (30 mL)中之溶液中添加乙二醯氯(1.15 mL，13.3 mmol)。16小時後，濃縮反應混合物且藉由管柱層析法來純化，產生化合物11c (2.7 g，81%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.17 (s, 2H), 3.80-3.60 (m, 21H), 3.47 (t,J = 6.4 Hz, 2H)。製備化合物 11d 使化合物11c (1.0 g，2.67 mmol)及NaN3 (261 mg，4.01 mmol)溶於DMF (3 mL)中。將反應混合物在100℃下加熱5小時。反應結束後，反應混合物過濾且濃縮。殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc至EtOAc/MeOH 10/1)來純化，產生化合物11d (854 mg，95%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.17 (s, 2H), 3.76-3.64 (m, 21H), 3.39 (t,J = 5.2 Hz, 2H)。製備化合物 11e 在0℃下向攪拌的化合物11d (854 mg，2.54 mmol)於MeOH (25 mL)中之溶液中添加2 M NaOH水溶液(6.3 mL，12.64 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌3小時。溶液接著減壓濃縮。在0℃下冷卻的同時，將所得懸浮液用2 N HCl水溶液酸化。殘餘物藉由CHCl3 (8×50 mL)萃取。合併有機層，經Na2 SO4 乾燥且濃縮，產生化合物11e (783 mg，96%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.16 (s, 2H), 3.76-3.65 (m, 18H), 3.40 (t,J = 5.2 Hz, 2H)。 製備化合物 11f 將DIPEA (0.47 mL，2.72 mmol)、HOBt (160 mg，1.18 mmol)及EDC∙HCl (226 mg，1.18 mmol)添加至攪拌之化合物9e (520 mg，0.91 mmol)及化合物2d (270 mg，0.91 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (20 mL)且用EtOAc (3×30 mL)萃取。合併之有機層用1 N HCl水溶液(15 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(15 mL)及鹽水(15 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物11f (631 mg，85%)。 EI-MS m/z: [M+H]+ 819.1, [M+H-Boc]+ 719.1 [M+Na+]+ 841.1。製備化合物 11g 在0℃下向攪拌之化合物11f (300 mg，0.36 mmol)及Pd/C (10 wt. %，70 mg)於MeOH (20 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.08 mL，0.08 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌3小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (40 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈無色油狀之化合物11g (200 mg，99%)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 685.1, [M+Na]+ 707.1。製備化合物 11h 將DIPEA (0.024 mL，0.41 mmol)、HOBt (24 mg，0.18 mmol)及EDC∙HCl (34 mg，0.18 mmol)添加至攪拌之化合物11g (100 mg，0.14 mmol)及化合物11e (44 mg，0.14 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (10 mL)且用DCM (3×10 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物11h (73 mg，53%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 988.4, [M+Na-Boc]+ 888.2, [M+Na]+ 1010.4。製備化合物 11i 在0℃下向攪拌之化合物11h (73 mg，0.07 mmol)及Pd/C (10 wt. %，10 mg)於MeOH (7 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.018 mL，0.018 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌2小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (30 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈無色油狀之化合物11i (72 mg，99%)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 962.4, [M+Na]+ 984.4。製備化合物 11j 化合物11j 係藉由實例14中製備化合物9j 之類似方法，自化合物1i 及化合物11i 製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 1932.5。實例 18. 製備化合物 11k 化合物11k 係藉由實例14中製備化合物9j 之類似方法，自化合物1j 及化合物11i 製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 1947.1。實例 19. 製備化合物 12c 製備化合物 12a 將DIPEA (0.13 mL，0.77 mmol)及HBTU (110 mg，0.35 mmol)添加至攪拌之化合物9g (235 mg，0.1929 mmol)及Z-Asp(OMe)-OH (54 mg，0.212 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (20 mL)且用EtOAc (3×20 mL)萃取。合併之有機層用1 N HCl水溶液(7 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(7 mL)及鹽水(7 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物12a (260 mg，93%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.07 (t, 1H), 7.62 (t, 1H), 7.54-7.52 (m, 1H), 5.73 (s, 2H), 4.27-4.25 (q, 1H), 3.96 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.58-3.48 (m, 52H), 3.19-3.18 (m, 3H), 3.04-3.03 (m, 3H), 1.44 (s, 18H), 1.39-1.37 (m, 3H), 1.21-1.19 (m, 3H)。EI-MS m/z: [M+H-2Boc]+ 1031.6。製備化合物 12b 在0℃下向攪拌之化合物12a (260 mg，0.179 mmol)及Pd/C (10 wt. %，72 mg)於MeOH (20 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.040 mL，0.179 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌3小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (40 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈無色油狀之化合物12b (242 mg，100%)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 625.0, [M+H-Boc]+ 525.0, [M+H-2Boc]+ 424.9。製備化合物 12c 化合物12c 係藉由實例14中製備化合物9j 之類似方法，自化合物1i 及化合物12b 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1083.5。實例 20. 製備化合物 12d 化合物12d 係藉由實例14中製備化合物9j 之類似方法，自化合物1j 及化合物12b 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1090.5。實例 21. 製備化合物 13e 製備化合物 13a 將DIPEA (0.22 mL，1.25 mmol)及HBTU (356 mg，0.94 mmol)添加至攪拌之Z-Glu(OMe)-OH (222 mg，0.75 mmol)及化合物7b (500 mg，0.62 mmol)於DMF (5.0 mL)中之混合物。反應混合物在N2 下在室溫下攪拌14小時。將反應混合物用水(200 mL)稀釋且用EA (3×100 mL)萃取。有機層經無水MgSO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到化合物13a (370 mg，57%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.34 (br, 5H), 6.73 (br, 1H), 5.72 (d, J=7.6Hz, 1H), 5.06 (br, 2H), 4.28-4.18 (m, 1H), 4.07 (t, J=4.4Hz, 2H), 3.76-3.71 (m, 2H), 3.70-3.50 (m, 45H), 3.48-3.42 (m, 2H), 2.53-2.36 (m, 2H), 2.20-2.08 (m, 1H), 2.00-1.88 (m, 1H), 1.53 (s, 18H)。EI-MS m/z: [M+Na]+ 1061.2。製備化合物 13b 在0℃下將4N HCl之1,4-二噁烷溶液(0.08 mL，0.32 mmol)添加至攪拌之化合物13a (370 mg，0.35 mmol)及Pd/C (38 mg)於MeOH (8 mL)中之混合物。在氫氣下在室溫下攪拌20小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (400 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈黃色液體狀之化合物13b (301 mg，90%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.41 (br, 1H), 8.09 (br, 3H), 4.13 (br, 1H), 3.85-3.56 (m, 51H), 2.55 (br, 2H), 2.38-2.18 (m, 2H), 1.53 (s, 18H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 905.0。製備化合物 13c 將DIPEA (0.165 mL，0.96 mmol)及HBTU (279 mg，0.74 mmol)添加至攪拌的化合物13b (300 mg，0.32 mmol)及化合物9e (366 mg，0.64 mmol)於DMF (5.0 mL)中之混合物。反應混合物在N2 下在室溫下攪拌14小時。將反應混合物用水(200 mL)稀釋且用EtOAc (3×100 mL)萃取。有機層經無水MgSO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到化合物13c (290 mg，62%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.40-7.32 (m, 7H), 7.00 (br, 1H), 6.73 (br, 1H), 5.07 (br, 2H), 4.44-4.36 (m, 2H), 4.07 (t, J=4.8Hz, 2H), 4.02 (br, 2H), 3.73 (t,J = 5.2Hz, 2H), 3.71-3.52 (m, 68H), 3.24-3.14 (m, 2H), 2.52-2.34 (m, 3H), 2.18-2.06 (m, 2H), 1.98-1.82 (m, 4H), 1.76-1.64 (m, 3H), 1.53 (s, 18H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1459.7。製備化合物 13d 在0℃下將Pd/C (21 mg)添加至攪拌之化合物13c (290 mg，0.19 mmol)於MeOH (5 mL)中之混合物。在氫氣下在室溫下攪拌20小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (400 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈黃色液體狀之化合物13c (247 mg，94%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.20 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.74 (br, 1H), 7.30 (br, 1H), 4.66-4.48 (m, 2H), 4.07 (t,J = 5.2 Hz, 2H), 4.01 (br, 2H), 3.74-3.62 (m, 70H), 3.57-3.53 (m, 2H), 3.04-2.98 (m, 2H), 2.24-2.15 (m, 2H), 2.14-2.06 (m, 2H), 1.99-1.86 (m, 4H), 1.84-1.74 (m, 2H), 1.53 (s, 18H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1325.5。製備化合物 13e 化合物13e 係藉由實例14中製備化合物9j 之類似方法，自化合物1i 及化合物13d 製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 2181.5。實例 22. 製備化合物 13f 化合物13f 係藉由實例14中製備化合物9j 之類似方法，自化合物1j 及化合物13d 製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 2195.5。實例 23. 製備化合物 14m 製備化合物 14a 在室溫下向6-胺基-1-己醇(5.0 g，42.6 mmol)於DCM (30 mL)中之溶液中添加二碳酸二第三丁酯(9.3 g，42.6 mmol)。攪拌18小時後，在0℃下將三乙胺(8.7 mL，63.9 mmol)及第三丁基二甲基氯矽烷(7.7 g，51.2 mmol)添加至反應混合物。在室溫下24小時後，將反應混合物用飽和NH4 Cl水溶液(200 mL)稀釋。將所得混合物用EtOAc (100 mL)萃取。將有機層用鹽水(100 mL)洗滌且經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物14a (12 g，84%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.50 (br s, 1H), 3.58 (t,J = 6.8 Hz, 2H), 3.10 (d,J = 6.4 Hz, 2H), 1.72-1.20 (m, 17H), 0.88 (s, 9H), 0.04 (s,6H)。製備化合物 14b 在0℃下在N2 下向化合物14a (6.0 g，18.1 mmol)於THF (30 mL)中之溶液中添加NaH (60%於油中，2.4 g，54.2 mmol)及甲基碘(3.4 mL，54.2 mmol)。14小時後，將反應混合物用H2 O (50 mL)稀釋且用EtOAc (2×100 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物14b (4.3 g，69%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.59 (t,J = 6.4 Hz, 2H), 3.17 (br s, 2H), 2.82 (s, 3H), 1.62-1.21 (m, 17H), 0.88 (s, 9H), 0.04 (s,6H)。製備化合物 14c 在0℃下在N2 下向化合物14b (4.3 g，12.4 mmol)於THF (15 mL)中之溶液中添加TBAF (1 M THF溶液，15 mL，14.9 mmol)。5小時後，將反應混合物用H2 O (50 mL)稀釋且用乙醚(2×100 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物14c (3.0 g，98%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.63 (br s, 2H), 3.20 (br s, 2H), 2.82 (s, 3H), 1.65-1.23 (m, 17H)。製備化合物 14d 在0℃下在N2 下向化合物14c (3.0 g，12.9 mmol)於THF (30 mL)中之溶液中添加四溴化碳(6.4 g，19.4 mmol)及三苯基膦(5.1 g，19.4 mmol)。2小時後，反應混合物經矽膠過濾且用乙醚(100 mL)洗滌。濃縮濾液且藉由管柱層析法來純化，產生化合物14d (3.3 g，86%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.40 (t,J = 6.8 Hz, 2H), 3.19 (br s, 2H), 2.83 (s, 3H), 1.90-1.70 (m, 2H), 1.65-1.40 (m, 13H), 1.38-1.25 (m, 2H)。 製備化合物 14e 在0℃下將DIPEA (53.0 mL，302.5 mmol)及EDC•HCl (35.7 g，186.2 mmol)添加至攪拌之化合物2d (35.0 g，116.4 mmol)及5-甲醯基水楊酸(21.3 g，128.0 mmol)於DCM (1.6 L)中之混合物。反應混合物在N2 下在室溫下攪拌20小時。將反應混合物用飽和NH4 Cl水溶液(1.5 L)稀釋且用DCM (2×1.5 L)萃取。合併之有機層用鹽水(1.5 L)洗滌且經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物14e (28.2 g，59%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 13.37 (br s, 1H), 9.86 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.07 (br s, 2H), 7.90 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.07 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.06-4.01 (m, 2H), 3.79-3.66 (m, 10H), 1.47 (s, 9H)。製備化合物 14f 向化合物14e (28.0 g，67.9 mmol)於MeCN (500 mL)中之溶液中添加化合物M (29.7 g，74.7 mmol)、4 Å分子篩(30 g)及Ag2 O (62.9 g，272 mmol)。在N2 下在室溫下攪拌12小時後，濃縮反應混合物，用H2 O (800 mL)稀釋且用EtOAc (1 L)萃取。合併之有機層經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物14f (30.1 g，61%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 9.99 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.99 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.44 (br s, 1H), 7.18 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 5.45-5.30 (m, 4H), 4.26 (d,J = 9.2 Hz, 1H), 4.02-3.97 (m, 2H), 3.80-3.55 (m, 13H), 2.06 (s, 9H), 1.46 (s, 9H)。製備化合物 14g 在0℃下向化合物14f (29.0 g，39.8 mmol)於i -PrOH/CHCl3 (90 mL/450 mL)中之溶液中添加矽膠(16.7 g)及NaBH4 (3.70 g，99.5 mmol)。在N2 下在0℃下攪拌2小時後，將反應混合物用H2 O (500 mL)淬滅且用EtOAc (1 L)萃取。有機層經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物14g (24.1 g，83%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.98 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.46 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.41 (br, 1H), 7.04 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 5.41-5.24 (m, 4H), 4.67 (d,J = 6.6 Hz, 2H), 4.19 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 3.99-3.93 (m, 2H), 3.79-3.65 (m, 12H), 3.59-3.50 (m, 1H), 2.08-2.00 (m, 10H), 1.46 (s, 9H)。製備化合物 14h 在0℃下在N2 下向化合物14g (23.7 g，31.5 mmol)於DMF (50 mL)中之溶液中添加碳酸雙(4-硝基苯基)酯(8.9 g，29.3 mmol)及DIPEA (5.65 mL，31.5 mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌30分鐘且使之升溫至室溫，歷時1小時。將反應混合物用H2 O (500 mL)稀釋且用EtOAc (500 mL)萃取。將有機層用鹽水(2×200 mL)洗滌，經無水MgSO4 乾燥，過濾，且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生呈白色泡沫狀之化合物14h (22.4 g，77%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.28 (d,J = 7.2 Hz, 2H), 8.13 (s, 1H), 7.68 (br s, 1H), 7.52 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.47 (br, 1H), 7.38 (d,J = 7.2 Hz, 2H), 7.08 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 5.44-5.24 (m, 6H), 4.21 (d,J = 9.6 Hz, 1H), 4.00 (br s, 2H), 3.80-3.64 (m, 12 H), 3.64-3.54 (m, 1H), 2.06 (s, 9H), 1.47 (s, 9H)。 製備化合物 14i 使α-瓢菌素(60.0 mg，0.065 mmol)溶於DMSO (2 mL)中且在0℃下在N2 下添加化合物14d (114 mg，0.39 mmol)及第三丁醇鉀(0.065 mL，0.065 mmol)。在0℃下4小時後，溶液pH值用乙酸調至4~5。殘餘物溶於DMSO (1 mL)中且藉由HPLC來純化，產生呈白色固體狀之化合物14i (29 mg，39%)。EI-MS m/z: [M-Boc]+ 1032.4。製備化合物 14j 在0℃下向化合物14i (29 mg，0.026 mmol)於DCM (3 mL)中之溶液中添加TFA (0.5 mL)。在0℃下2小時後，溶劑及過量TFA藉由N2 流移除且所得殘餘物藉由HPLC來純化，產生呈白色固體狀之化合物14j (26 mg，99%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1032.3, [M+Na]+ 1054.3。製備化合物 14k 在0℃下使化合物14j (13 mg，0.011 mmol)、化合物14h (10 mg，0.011 mmol)及無水HOBt (0.3 mg，0.002 mmol)溶於DMF (0.5 mL)中。接著添加吡啶(0.2 mL)及DIPEA (0.004 mL，0.023 mmol)。在N2 下在室溫下攪拌24小時後，反應混合物溶於DMSO (1 mL)中且藉由HPLC來純化，產生化合物14k (11 mg，54%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1788.1。製備化合物 14l 在-20℃下向化合物14k (11 mg，0.006 mmol)於MeOH (0.2 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(1.3 mg，0.03 mmol)之H2 O (0.2 mL)。在0℃下1小時後溶液pH值用乙酸調至4~5。所得溶液溶於DMSO (1 mL)中且藉由HPLC來純化，產生呈白色固體狀之化合物14l (7.5 mg，75%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1648.6。製備化合物 14m 在0℃下向化合物14l (7.5 mg，0.0045 mmol)於DCM (3 mL)中之溶液中添加TFA (0.5 mL)。在0℃下2小時後，溶劑及過量TFA藉由N2 流移除。接著殘餘物藉由HPLC來純化，產生呈白色固體狀之化合物14m (6.2 mg，85%)。EI-MS m/z: [M+H]+ : 1548.5。實例 24. 製備化合物 15b 製備化合物 15a 化合物15a 係藉由與實例23之製備化合物14h 之方法類似的方法，自化合物3e 製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 1128.3, [M+H-Boc]+ 1028.3, [M+H-2Boc]+ 928.2。 製備化合物 15b 化合物15b 係藉由與製備實例23之化合物14m 之方法類似的方法，自化合物14j 及化合物15a 製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 1681.6。實例 25. 製備化合物 16f 製備化合物 16a 向攪拌的乙二醯氯(2.8 mL，32.5 mmol)於DCM (5 mL)中之溶液中添加含DMSO (3.08 mL，43.4 mmol)之DCM (15 mL)且接著反應混合物在-78℃下攪拌30分鐘。在-78℃下向此溶液添加化合物2a (3.8 g，21.7 mmol)且攪拌1小時。添加含三乙胺(15.1 mL，108 mmol)之DCM (20 mL)且接著使反應混合物升溫至室溫，用H2 O (100 mL)稀釋且用DCM (2×100 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物16a (1.8 g，48%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 9.74 (s, 1H), 4.19 (s, 2H), 3.77-3.69 (m, 6H), 3.42 (m, 2H)。製備化合物 16b 在0℃下向化合物16a (1.0 g，3.32 mmol)及化合物2d (1.72 g，9.96 mmol)於MeOH (15 mL)中之溶液中添加AcOH (0.19 mL，3.32 mmol)。在0℃下攪拌30分鐘後，添加NaCNBH3 (658 mg，9.96 mmol)且經2小時升溫至室溫。反應結束後，將反應混合物用H2 O (50 mL)稀釋且接著用DCM (3×100 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生呈淡黃色油狀之化合物16b (800 mg，41%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.78 (brs, 1H), 4.01 (m, 2H), 3.69-3.65 (m, 24H), 3.39 (m, 4H), 3.04 (m, 6H), 1.47 (s, 9H)。製備化合物 16c 向化合物16b (350 mg，0.60 mmol)於MeOH (10 mL)中之溶液中添加Pd/C (10 wt. %，300 mg)。在室溫下在氫氣下攪拌8小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (100 mL)洗滌。濃縮得到呈無色油狀之化合物16c (300 mg，94%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.02 (m, 2H), 3.71 (m, 2H), 3.65-3.55 (m, 22H), 2.92 (m, 4H), 2.76 (t,J = 5.2 Hz, 6H), 1.47 (s, 9H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 527.6。 製備化合物 16d 將DIPEA (0.40 mL，2.24 mmol)及PyBOP (711 mg，1.34 mmol)添加至攪拌之化合物1j (1.57 g，1.23 mmol)及化合物16c (300 mg，0.56 mmol)於DMF (15 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌4小時後，將反應混合物用H2 O (200 mL)稀釋且用EtOAc (3×100 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。殘餘物溶於H2 O/DMSO (5 mL/5 mL)中且藉由HPLC來純化，產生化合物16d (1.57 g，91.8%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1502.7。製備化合物 16f 在0℃下向化合物16d (1.10 g，0.36 mmol)於MeOH/THF (5 mL/10 mL)中之溶液中逐滴添加含NaOH (175 mg，4.32 mmol)之H2 O (3 mL)。在0℃下3小時後，溶液pH值使用2 N HCl水溶液調至pH 4且濃縮。在0℃下將殘餘物用DCM (12 mL)及TFA (3 mL)稀釋。在0℃下2小時後，溶劑及過量TFA藉由N2 流移除。殘餘物溶於H2 O/MeCN (7.5 mL/7.5 mL)中且藉由HPLC來純化，產生呈白色固體狀之化合物16f (432 mg，46%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1298.5。實例 26. 製備化合物 16g 化合物16g 係藉由實例25中製備化合物16f 之類似方法，自化合物1i 及化合物16c 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1284.5。實例 27. 製備化合物 17d 製備化合物 17a 向攪拌的乙二醯氯(0.62 mL，7.3 mmol)於DCM (4 mL)中之溶液中添加含DMSO (1.04 mL，14.6 mmol)之DCM (10 mL)且接著反應混合物在-78℃下攪拌30分鐘。在-78℃下向此溶液添加化合物3b (1.5 g，4.88 mmol)且攪拌1小時。添加含三乙胺(2.72 mL，19.50 mmol)之DCM (7 mL)且接著使反應混合物升溫至室溫。減壓濃縮後，殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc至EtOAc/MeOH 10/1)來純化，產生化合物17a (1.23 g，82%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 9.73 (s, 1H), 4.16 (s, 2H), 3.75-3.61 (m, 18H), 3.39 (t,J = 5.2 Hz, 2H)。製備化合物 17b 在0℃下將NaCNBH3 (257 mg，4.09 mmol)添加至攪拌之化合物17a (1.30 g，4.25 mmol)及化合物2d (492 mg，1.63 mmol)於MeOH (5 mL)中之混合物。反應混合物接著經2小時逐漸加熱達室溫。反應結束後，在減壓下濃縮反應混合物。殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc至EtOAc/ MeOH 10/1)來純化，產生化合物17b (620 mg，45%)。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.96 (br, 1H), 3.79 (t,J = 4.8 Hz, 2H) 3.59 (t,J = 4.8 Hz, 4H), 3.56-3.46 (m, 38H), 3.44-3.37 (m, 10H), 2.66-2.56 (m, 6H), 1.39 (s, 9H)。製備化合物 17c 向化合物17b (300 mg，0.35 mmol)於MeOH (7 mL)中之溶液中添加Pd/C (10 wt. %，38 mg)。在氫氣下在室溫下攪拌4小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (400 mL)洗滌。濃縮得到呈無色油狀之化合物17c (253 mg，90%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.79 (t, J=4.4Hz, 2H), 3.55-3.45 (m, 38H), 3.42 (t,J = 6.0 Hz, 10H), 2.66-2.56 (m, 10H), 1.39 (s, 9H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 791.0。製備化合物 17d 化合物17d 係藉由實例25中製備化合物16f 之類似方法，自化合物1i 及化合物17c 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1415.6。實例 28. 製備化合物 18c 製備化合物 18a 在0℃下將NaCNBH3 (197 mg，3.14 mmol)添加至攪拌之化合物17a (998 mg，3.26 mmol)及化合物3e (670 mg，1.25 mmol)於MeOH (4 mL)中之混合物。反應混合物接著經2小時逐漸加熱達室溫。反應結束後，在減壓下濃縮反應混合物。殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc至EtOAc/MeOH 10/1)來純化，產生化合物18a (668 mg，49%)。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.97 (m, 2H) 3.63-3.57 (m, 6H), 3.56-3.44 (m, 46H), 3.44-3.36 (m, 12H), 2.66-2.61 (m, 6H), 1.45 (s, 18H)。製備化合物 18b 向化合物18a (60 mg，0.055 mmol)於MeOH (1.2 mL)中之溶液中添加Pd/C (10 wt. %，6 mg)。在氫氣下在室溫下攪拌4小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (400 mL)洗滌。濃縮得到呈無色油狀之化合物18b (55 mg，96%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.97 (m, 2H), 3.62-3.57 (m, 4H), 3.54-3.45 (m, 50H), 3.45-3.39 (m, 10H), 2.66-2.61 (m, 10H), 1.46 (s, 18H)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1023.3。化合物18c 係藉由實例25中製備化合物16f 之類似方法，自化合物1i 及化合物18b 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1481.7。實例 29. 製備化合物 19c 製備化合物 19a 在0℃下將NaCNBH3 (197 mg，3.14 mmol)添加至攪拌之化合物17a (118 mg，0.16 mmol)及化合物4e (232 mg，0.76 mmol)於MeOH (1 mL)中之混合物。反應混合物接著經2小時逐漸加熱達室溫。反應結束後，反應混合物在減壓下蒸發。殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc至EtOAc/MeOH 10/1)來純化，產生化合物19a (135 mg，68%)。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.72 (br s, 1H) 4.02 (t, 2H), 3.72-3.53 (m, 86H), 3.39 (t, 4H), 2.77 (bs, 4H), 1.47 (s, 9H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1239.6。製備化合物 19b 在0℃下向化合物19a (133 mg，0.107 mmol)於MeOH (2 mL)中之溶液中添加Pd/C (10 wt. %，26 mg)及HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.054 mL，0.21 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌40分鐘後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (40 mL)洗滌。濃縮得到呈無色油狀之化合物19b (132 mg，97%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.79 (s, 1H), 4.06-4.02 (m, 8H), 3.88 (m, 2H), 3.73-3.64 (m, 80H), 3.22 (s, 4H), 1.47 (s, 9H)。EI-MS m/z: [M+H]+ : 1187.5。製備化合物 19c 化合物19c 係藉由實例25中製備化合物16f 之類似方法，自化合物1i 及化合物19b 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1614.5。實例 30. 製備化合物 20q 製備化合物 20a 向2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙醇(5.0 g，29.6 mmol)於丙酮(30 mL)中之溶液中添加NaI (13.3 g，88.9 mmol)。使反應混合物回流12小時。反應結束後，反應混合物過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物20a (7.0 g，91%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.80-3.73 (m, 4H), 3.72-3.65 (m, 4H), 3.63-3.61 (m, 2H), 3.27 (t,J = 6.4 Hz, 2H)。製備化合物 20b 在0℃下向化合物20a (7.0 g，26.9 mmol)於丙酮(200 mL)中之溶液中添加瓊斯試劑(20 mL)。在0℃下15小時後，反應混合物過濾且濃縮。將殘餘物用H2 O (150 mL)稀釋且用EtOAc (2×100 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物20b (7.0 g，94%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.22 (s, 2H), 3.85-3.70 (m, 6H), 3.35-3.25 (m, 2H)。製備化合物 20c 在0℃下在N2 下向化合物20b (7.0 g，25.5 mmol)於 MeOH (70 mL)中之溶液中添加乙二醯氯(3.2 mL，38.3 mmol)。16小時後，濃縮反應混合物且藉由管柱層析法來純化，產生化合物20c (5.7 g，77%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.19 (s, 2H), 3.80-3.67 (m, 9H), 3.27 (t,J = 6.8 Hz, 2H)。製備化合物 20d 在0℃下在N2 下向化合物20c (2.5 g，8.67 mmol)及N ,N -二Boc-羥基胺(2.6 g，11.2 mmol)於DMF (30 mL)中之溶液中添加NaH (60%於油中，454 mg，10.4 mmol)。15小時後，將反應混合物用H2 O (50 mL)稀釋且用EtOAc (3×100 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物20d (1.87 g，73%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.17 (s, 2H), 4.08 (m, 2H), 3.78-3.65 (m, 9H), 1.53 (s, 18H)。製備化合物 20e 在0℃下在N2 下向化合物20d (1.87 g，6.38 mmol)於THF/MeOH/H2 O (45 mL/15 mL/15 mL)中之溶液中添加NaOH (600 mg，15.9 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時。接著溶液pH值用1 N HCl水溶液調至4~5。將反應混合物傾倒至H2 O (100 mL)且用EtOAc (2×100 mL)萃取。合併有機層，經MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。產生呈無色油狀之化合物20e (1.6 g，90%)，且其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.17 (s, 2H), 4.08-4.02 (m, 2H), 3.80-3.67 (m, 6H), 1.48 (s, 9H)。 製備化合物 20f 將Pd/C (10 wt. %，1.0 g)添加至化合物2a (6.7 g，38.2 mmol)於MeOH (38 mL)中之溶液。在室溫下在氫氣下攪拌8小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (100 mL)洗滌。濃縮得到呈無色油狀之化合物20f (5.6 g，99%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.95-3.25 (m, 12H), 2.90 (s, 2H)。製備化合物 20g 在0℃下在N2 下將氯甲酸苯甲酯(6 mL，42.2 mmol)緩慢添加至化合物20f (5.6 g，38.2 mmol)及三乙胺(8 mL，57.6 mmol)於THF (200 mL)中之溶液，歷時30分鐘。在0℃下攪拌1小時後，濃縮反應混合物且粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物20g (5.7 g，53%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.45-7.20 (m, 5H), 5.61 (br s, 1H), 5.07 (s, 2H), 3.85-3.20 (m, 12H)。製備化合物 20h 在室溫下在N2 下向化合物20g (2.7 g，9.53 mM)於DCM (30 mL)中之溶液中添加三乙胺(1.9 mL，12.3 mmol)及對甲苯磺醯氯(2.3 g，10.4 mmol)。8小時後，將反應混合物用H2 O (50 mL)稀釋且用DCM (3×100 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物20h (3.51 g，84%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.78 (d,J = 7.2 Hz, 2H), 7.45-7.25 (m, 7H), 5.20 (br s, 1H), 5.09 (s, 2H), 4.20-4.05 (m, 2H), 3.75-3.25 (m, 10H), 2.43 (s, 3H)。製備化合物 20i 將化合物20h (3.51 g，8.02 mmol)及NaN3 (3.8 g，57.6 mmol)於DMF (27 mL)中之溶液在100℃下加熱15小時。反應結束後，反應混合物過濾且濃縮。將殘餘物用H2 O (50 mL)稀釋且用EtOAc (2×100 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物20i (2.05 g，83%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.45-7.25 (m, 5H), 5.20 (br s, 1H), 5.10 (s, 2H), 3.80-3.25 (m, 12H)。製備化合物 20j 在室溫下將三苯基膦(2.09 g，7.97 mmol)添加至化合物20i (2.05 g，6.64 mmol)於THF (27 mL)中之溶液。在N2 下攪拌2小時後，添加H2 O (0.6 mL，33.2 mmol)且使反應混合物回流3小時。接著濃縮反應混合物且藉由管柱層析法來純化，產生化合物20j (1.78 g，95%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.45-7.25 (m, 5H), 5.63 (br s, 1H), 5.10 (s, 2H), 3.80-3.25 (m, 10H), 2.88 (s, 2H)。 製備化合物 20k 向攪拌的乙二醯氯(1.4 mL，15.9 mmol)於DCM (14 mL)中之溶液中添加含DMSO (2.3 mL，31.9 mmol)之DCM (28 mL)且接著反應混合物在-78℃下攪拌30分鐘。在-78℃下向此溶液添加化合物20g (3.01 g，10.6 mmol)。在-78℃下在0℃下攪拌1小時後，添加三乙胺(7.4 mL，53.1 mmol)且使反應升溫至室溫。將反應混合物傾倒至H2 O (100 mL)且用EtOAc (2×100 mL)萃取。合併有機層，經MgSO4 乾燥。過濾且濃縮產生化合物20k (2.6 g)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400MHz, CDCl3 ) δ 9.70 (s, 1H), 7.45-7.25 (m, 5 H), 5.25 (br s, 1 H), 5.10 (s, 2 H), 3.80-3.25 (m, 10 H)。製備化合物 20l 在室溫下在N2 下向化合物20j (1.78 g，6.30 mmol)及化合物20k (2.13 g，7.56 mmol)於MeOH (63 mL)中之溶液中添加NaCNBH3 (674 mg，10.7 mmol)。3小時後，反應混合物過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物20l (2.01 g，58%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.45-7.25 (m, 10H), 5.60 (br s, 2H), 5.03 (s, 4H), 3.80-3.25 (m, 20H), 2.81 (s, 4H)。製備化合物 20m 將DIPEA (0.4 mL，2.28 mmol)及PyBOP (713 mg，1.36 mmol)添加至攪拌之化合物20l (500 mg，0.91 mmol)及化合物20e (306 mg，1.09 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液。在N2 下在室溫下攪拌6小時後，反應混合物用水(100 mL)稀釋且用EtOAc (3×100 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物20m (318 mg，43%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.45-7.25 (m, 10H), 5.47 (br s, 1H), 5.37 (br s, 1H), 5.09 (s, 4H), 3.80-3.25 (m, 34H), 1.46 (s, 9H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 808.9。製備化合物 20n 向化合物20m (318 mg，0.39 mmol)於MeOH (30 mL)中之溶液中添加Pd/C (10 wt. %，1.0 g)。在氫氣下在室溫下攪拌3小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (100 mL)洗滌。濃縮得到呈無色油狀之化合物20n (180 mg)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 541.2。 製備化合物 20o 在0℃下將DIPEA (0.034 mL，0.19 mmol)及PyBOP (63 mg，0.12 mmol)添加至攪拌之化合物1i (130 mg，0.10 mmol)及化合物20n (26 mg，0.04 mmol)於DMF (3 mL)中之溶液。在0℃下攪拌30分鐘後，在N2 下使反應經20小時升溫至室溫。將反應混合物傾倒至H2 O (50 mL)且用EtOAc (3×50 mL)萃取。將有機層合併，過濾且減壓濃縮。殘餘物溶於DMSO (1 mL)中且藉由HPLC來純化，產生呈白色固體狀之化合物20o (28 mg，10%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1481.5, 1/2[M+Na]+ 1503.8。製備化合物 20p 在-5℃下向化合物20o (28 mg，0.009 mmol)於MeOH (1 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(2 mg，0.047 mmol)之H2 O (1 mL)。反應混合物在-5℃下攪拌，歷時1小時。反應結束後，溶液pH值用乙酸調至4~5。殘餘物溶於DMSO (1 mL)中且藉由HPLC來純化，產生呈白色固體狀之化合物20p (16 mg，67%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ : 1341.4。製備化合物 20q 在0℃下向化合物20p (16 mg，0.0059 mmol)於DCM (2 mL)中之溶液中添加TFA (0.2 mL)。在0℃下2小時後，溶劑及過量TFA藉由N2 流移除。殘餘物溶於DMSO (1 mL)中且藉由HPLC來純化，產生呈白色固體狀之化合物20q (8.5 mg，56%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ : 1291.3。實例 31. 製備化合物 21i 製備化合物 21a 向化合物3b (9.0 g，29.2 mmol)於MeOH (146 mL)中之溶液中添加Pd/C (10 wt. %，3.0 g)且反應混合物在氫氣下在室溫下攪拌5小時。接著反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (100 mL)洗滌。濃縮得到呈無色油狀之化合物21a (8.2 g，100%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400MHz, CDCl3 ) δ 3.80-3.60 (m, 24H), 3.01 (t,J = 4.8 Hz, 2H)。製備化合物 21b 在0℃下在N2 下向化合物21a (8.24 g，29.2 mmol)於THF (190 mL)中之溶液中添加三乙胺(6.1 mL，43.9 mmol)及氯甲酸苯甲酯(4.6 mL 32.2 mmol)。濃縮反應混合物且粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物21b (5.59 g，46%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.45-7.20 (m, 5H), 5.61 (br s, 1H), 5.09 (s, 2H), 3.85-3.50 (m, 22H), 3.39 (m, 2H)。製備化合物 21c 在0℃下在N2 下向化合物21b (3.09 g，7.43 mmol)於THF (75 mL)中之溶液中添加4-甲基嗎啉(1.1 mL，9.66 mmol)及甲烷磺酸酐(1.43 g，8.18 mmol)。在0℃下5小時後，添加NaN3 (969 mg，14.9 mmol)及DMF (20 mL)。在回流下16小時後，反應混合物過濾且濃縮。將殘餘物用H2 O (50 mL)稀釋且用EtOAc (2×100 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物21c (2.62 g，80%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.45-7.20 (m, 5 H), 5.45 (br s, 1 H), 5.09 (s, 2 H), 3.85-3.25 (m, 24 H)。製備化合物 21d 在室溫下將三苯基膦(1.87 g，7.13 mmol)添加至化合物21c (2.62 g，5.94 mmol)於THF (30 mL)中之溶液。在N2 下攪拌2小時後，添加H2 O (0.54 mL，29.7 mmol)且使反應混合物回流3小時。濃縮反應混合物且藉由管柱層析法來純化，產生化合物21d (2.47 g，95%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.45-7.25 (m, 5 H), 5.63 (br s, 1 H), 5.09 (s, 2 H), 3.80-3.25 (m, 22 H), 3.00-2.80 (m, 2 H)。 製備化合物 21e 向攪拌的乙二醯氯(0.78 mL，9.02 mmol)於DCM (14 mL)中之溶液中添加含DMSO (1.3 mL，18.1 mmol)之DCM (6 mL)且接著反應混合物在-78℃下攪拌30分鐘。在-78℃下向此溶液添加化合物21b (2.5 g，6.01 mmol)。在-78℃下攪拌1小時後，添加三乙胺(4.2 mL，30.1 mmol)且使反應升溫至室溫。將反應混合物傾倒至H2 O (100 mL)且用EtOAc (2×100 mL)萃取。合併有機層，經MgSO4 乾燥。過濾且濃縮產生化合物21e (2.29 g)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400MHz, CDCl3 ) δ 9.70 (s, 1H), 7.45-7.25 (m, 5H), 5.25 (br s, 1H), 5.10 (s, 2H), 3.80-3.25 (m, 24H)。製備化合物 21f 在室溫下在N2 下向化合物21d (2.47 g，5.95 mmol)及化合物21e (2.29 g，5.52 mmol)於MeOH (50 mL)中之溶液中添加NaCNBH3 (530 mg，8.44 mmol)。3小時後，反應混合物過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物21f (2.05 g，51%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.45-7.25 (m, 10H), 5.47 (br s, 1H), 5.37 (br s, 1H), 5.09 (s, 4H), 3.80-3.25 (m, 48H)。製備化合物 21g 將DIPEA (0.27 mL，1.53 mmol)及HBTU (350 mg，0.92 mmol)添加至攪拌之化合物21f (380 mg，0.61 mmol)及化合物20e (206 mg，0.73 mmol)於DMF (6 mL)中之溶液。在N2 下在室溫下攪拌6小時後，反應混合物用水(100 mL)稀釋且用EtOAc (3×100 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物21g (210 mg，42%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.45-7.25 (m, 10 H), 5.47 (br s, 1 H), 5.37 (br s, 1 H), 5.09 (s, 4 H), 3.80-3.25 (m, 34 H), 1.46 (s, 9 H)。製備化合物 21h 向化合物21g (210 mg，0.19 mmol)於MeOH (30 mL)中之溶液中添加Pd/C (10 wt. %，1.0 g)且接著反應混合物在氫氣下在室溫下攪拌4小時。反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (50 mL)洗滌。濃縮得到呈無色油狀之化合物21h (30 mg)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 805.2, [M+Na]+ 827.2。製備化合物 21i 化合物21i 係藉由實例30中製備化合物20q 之類似方法，自化合物1i 及化合物21h 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1423.7, 1/2[M+Na]+ 1445.2。實例 32. 製備化合物 22h 製備化合物 22a 在室溫下向化合物3a (8.0 g，18.3 mmol)於THF (50 mL)中之溶液中添加LiBr (7.9 g，91.6 mmol)。在回流下攪拌17小時後，反應混合物過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物22a (3.2 g，50%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.95-3.50 (m, 24H)。製備化合物 22b 在0℃下向化合物22a (3.2 g，12.3 mmol)於丙酮(20 mL)中之溶液中添加瓊斯試劑(20 mL)。在0℃下15小時後，反應混合物過濾且濃縮。將殘餘物用H2 O (50 mL)稀釋且用EtOAc (2×100 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物22b (3.2 g，72%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.16 (s, 2H), 3.95-3.30 (m, 20H)。製備化合物 22c 在0℃下在N2 下向化合物22b (3.2 g，8.90 mmol)於MeOH (30 mL)中之溶液中添加乙二醯氯(1.15 mL，13.3 mmol)。16小時後，濃縮反應混合物且藉由管柱層析法來純化，產生化合物22c (2.7 g，81%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.17 (s, 2H), 3.80-3.60 (m, 21H), 3.47 (t,J = 6.4 Hz, 2H)。製備化合物 22d 在0℃下在N2 下將NaH (60%於油中，378 mg，8.63 mmol)添加至化合物22c (2.7 g，7.23 mmol)及N ,N -二Boc-羥基胺(2.2 g，9.4 mmol)於DMF (30 mL)中之溶液。17小時後，濃縮反應混合物。將殘餘物用H2 O (50 mL)稀釋且用EtOAc (3×100 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物22d (2.1 g，55%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.17 (s, 2H), 4.08 (t,J = 5.2 Hz, 2H), 3.78-3.60 (m, 21H), 1.53 (s, 18H)。製備化合物 22e 在0℃下在N2 下向化合物22d (2.1 g，3.99 mmol)於THF/MeOH/H2 O (30 mL/10 mL/10 mL)中之溶液中添加NaOH (400 mg，9.98 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌3小時。接著溶液pH值用1 N HCl水溶液調至4~5。將反應混合物傾倒至H2 O (50 mL)且用EtOAc (2×100 mL)萃取。合併有機層，經MgSO4 乾燥。過濾且濃縮產生呈無色油狀之化合物22e (1.6 g)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.90 (s, 1H), 4.15 (s, 2H), 4.03 (br s, 2H), 3.80-3.60 (m, 18H), 1.47 (s, 9H)。 製備化合物 22f 將DIPEA (0.13 mL，0.73 mmol)及HBTU (187 mg，0.49 mmol)添加至攪拌之化合物21f (200 mg，0.24 mmol)及化合物22e (152 mg，0.36 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液。反應混合物在N2 下在室溫下攪拌6小時。反應混合物用H2 O (100 mL)稀釋且用EtOAc (3×100 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物22f (100 mg，34%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1205.6。製備化合物 22g 向化合物22f (100 mg，0.08 mmol)於MeOH (20 mL)中之溶液中添加Pd/C (10 wt. %，20 mg)且接著反應混合物在氫氣下在室溫下攪拌4小時。反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (20 mL)洗滌。濃縮得到呈無色油狀之化合物22g (70 mg)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 937.4, [M+Na]+ 959.3。製備化合物 22h 化合物22h 係藉由實例30中製備化合物20q 之類似方法，自化合物1i 及化合物22g 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1489.4。實例 33. 製備化合物 23h 製備化合物 23a 向化合物4a (483 mg，0.69 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中添加LiBr (180 mg，2.06 mmol)。使反應混合物在N2 下回流12小時。接著在減壓下濃縮反應混合物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物23a (330 mg，78%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.81 (t,J = 6.4 Hz, 2H), 3.72-3.59 (m, 44H), 3.47 (t,J = 6.4 Hz, 2H)。製備化合物 23b 在0℃下向化合物23a (330 mg，0.54 mmol)於丙酮(2 mL)中之溶液中添加瓊斯試劑(2 mL)。在0℃下15小時後，反應混合物過濾且濃縮。將殘餘物用H2 O (15 mL)稀釋且用EtOAc (2×20 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。所得粗化合物23b 未經進一步純化即使用。製備化合物 23c 在0℃下在N2 下向粗化合物23b (266 mg，0.43 mmol)於MeOH (5 mL)中之溶液中添加乙二醯氯(0.054 mL，0.64 mmol)。16小時後，濃縮反應混合物且藉由管柱層析法來純化，產生化合物23c (200 mg，2步58%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.17 (s, 2H), 3.81 (t,J = 6.4 Hz, 2H), 3.79-3.64 (m, 43H), 3.48 (t,J = 6.4 Hz, 2H)。製備化合物 23d 在0℃下在N2 下向化合物23c (200 mg，0.31 mmol)於DMF (3 mL)中之溶液中添加N ,N -二Boc-羥基胺(95 mg，0.40 mmol)及NaH (60%於油中，16 mg，0.37 mmol)。17小時後，濃縮反應混合物。將殘餘物用H2 O (5 mL)稀釋且用EtOAc (3×10 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物23d (120 mg，49%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.17 (s, 2H), 4.13 (t,J = 8.0 Hz, 2H), 3.75-3.64 (m, 45H), 1.53 (s, 18H)。製備化合物 23e 在0℃下在N2 下向化合物23d (120 mg，0.15 mmol)於THF/MeOH/H2 O (3 mL/1 mL/1 mL)中之溶液中添加NaOH (15 mg，0.38 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1小時。接著溶液pH值用1 N HCl水溶液調至4~5。將反應混合物傾倒至H2 O (10 mL)且用CHCl3 (2×20 mL)萃取。合併有機層，經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮產生化合物23e (100 mg)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.23 (t,J = 8.0 Hz, 2H), 4.15 (s, 2H), 4.08 (t,J = 4.0 Hz, 1H), 4.01 (t,J = 4.0 Hz, 1H), 3.74-3.64 (m, 40H), 1.53 (s, 9H)。 製備化合物 23f 將DIPEA (0.052 mL，0.29 mmol)及HBTU (75 mg，0.20 mmol)添加至攪拌之化合物21f (80 mg，0.09 mmol)及化合物23e (100 mg，0.15 mmol)於DMF (3 mL)中之溶液。在N2 下在室溫下攪拌6小時後，將反應混合物用H2 O (50 mL)稀釋且用EtOAc (3×50 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物23f (140 mg，97%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.38-7.31 (m, 10 H), 5.44 (br, 2 H), 5.09 (s, 4 H), 4.34 (s, 2 H), 4.26-4.17 (m, 4 H), 4.09-4.08 (m, 1 H), 4.07 (br, 1 H), 3.73-3.47 (m, 76 H), 3.39-3.38 (m, 4 H), 1.53 (s, 9 H)。EI-MS m/z: [M+Na]+ 1491.6, [M+H-Boc]+ : 1369.6。製備化合物 23g 向化合物23f (140 mg，0.09 mmol)於MeOH (20 mL)中之溶液中添加Pd/C (10 wt. %，20 mg)且接著反應混合物在氫氣下在室溫下攪拌4小時。反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (20 mL)洗滌。濃縮得到呈無色油狀之化合物23g (120 mg)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 1201.7, [M+Na]+ 1223.7。製備化合物 23h 化合物23h 係藉由實例30中製備化合物20q 之類似方法，自化合物1i 及化合物23g 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1620.3, 1/2[M+Na]+ 1632.1。實例 34. 製備化合物 24l 製備化合物 24a 在0℃下將瓊斯試劑(90 mL)緩慢添加至化合物2-[2-(2-氯乙氧基)乙氧基]乙醇(15.0 g，88.9 mmol)於丙酮(600 mL)中之溶液。在0℃下15小時後，反應混合物過濾且濃縮。將殘餘物用H2 O (200 mL)稀釋且用CHCl3 (5×300 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥。濃縮得到化合物24a (20.0 g)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.18 (s, 2H), 3.81-3.64 (m, 8H)。製備化合物 24b 在N2 下在0℃下向化合物24a (20.0 g，88.9 mmol)於MeOH (500 mL)中之溶液中添加乙二醯氯(11.5 mL，133.4 mmol)，歷時30分鐘 。16小時後，濃縮反應混合物且藉由管柱層析法來純化，產生化合物24b (13.0 g，75%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.18 (s, 2H), 3.78-3.67 (m, 9H), 3.65 (t,J = 5.6 Hz, 2H)。製備化合物 24c 使化合物24b (13.0 g，66.1 mmol)及NaN3 (6.4 g，99.2 mmol)溶於DMF (130 mL)中。在100℃下攪拌2小時後，將反應混合物用鹽水(200 mL)稀釋且用CHCl3 (2×100 mL)萃取。合併有機層，經無水MgSO4 乾燥。濃縮得到化合物24c (11.7 g，87%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.18 (s, 2H), 3.76-3.67 (m, 9H), 3.41 (t,J = 5.6 Hz, 2H)。製備化合物 24d 在0℃下向化合物24c (11.5 g，56.6 mmol)於THF/MeOH/H2 O (300 mL/100 mL/100 mL)中之溶液中添加NaOH (4.53 g，113.2 mmol)。在0℃下在N2 下2小時後，溶液pH值用4 M HCl水溶液調至2。將反應混合物傾倒至H2 O (100 mL)且用CHCl3 (3×500 mL)萃取。合併有機層，經MgSO4 乾燥。過濾且濃縮產生呈無色油狀之化合物24d (10.7 g，99%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.19 (s, 2H), 3.79-3.77 (m, 2H), 3.72-3.70 (m, 4H), 3.44 (t,J = 5.2 Hz, 2H)。 製備化合物 24e 將三頸燒瓶連續負載H2 O (40 mL)、1,4-二噁烷(70 mL)及H-Lys(Z)-OH (10 g，35.7 mmol)。攪拌混合物直至完全溶解。pH藉由添加2 M Na2 CO3 水溶液調至約10.5。藉由同時添加2 M Na2 CO3 水溶液維持pH在約10-11下的同時添加氯甲酸苯甲酯(6.69 g，39.2 mmol)。添加結束後，將反應混合物在20℃下攪拌1小時。接著添加EtOAc (50 mL)且所得混合物之pH值用c-HCl調至2~3。分離有機層且將水層用EtOAc (50 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，且經Na2 SO4 乾燥。過濾且減壓濃縮，得到呈微黃色油狀之化合物24e (14.7 g，99%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.33-7.27 (m, 10H), 5.07-5.04 (d, 4H), 4.08 (m, 1H), 3.09 (t, 2H), 1.51 (br s, 1H), 1.49 (bs, 1H), 1.47-1.40 (m, 4H)。製備化合物 24f 將DIPEA (0.40 mL，2.37 mmol)、HOBt (143 mg，1.06 mmol)及EDC∙HCl (240 mg，1.25 mmol)添加至攪拌之化合物24e (400 mg，0.96 mmol)及化合物2d (261 mg，0.86 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (50 mL)，用EtOAc (3×50 mL)萃取，用NaHCO3 水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾及減壓濃縮後，所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到化合物24f (380 mg，59%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.16 (s, 1H), 7.34-7.28 (m, 10H), 7.49 (s, 1H) 5.08-5.07 (m, 5H), 4.17 (m, 1H), 3.99 (t, 2H), 3.68-3.16 (m, 10H), 3.17 (d, 2H), 1.66 (m, 1H), 1.51-1.27 (m, 14H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 661.0。製備化合物 24g 在0℃下向攪拌之化合物24f (370 mg，0.55 mmol)及Pd/C (10 wt. %，74 mg)於MeOH (10 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.27 mL，1.1 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌2小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (40 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈無色油狀之化合物24g (223 mg，87%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.02 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.22 (br, 2H), 7.90 (br, 2H), 3.81 (t, 2H), 3.56 (m, 4H), 3.46 (t, 2H), 3.39-3.27 (m, 26H), 2.75(m, 2H), 1.73 (q, 2H), 1.55 (p, 2H), 1.40-1.33 (m, 14H)。製備化合物 24h 將DIPEA (1.6 mL，9.45 mmol)、HOBt (746 mg，5.52 mmol)及EDC∙HCl (1.19 g，6.42 mmol)添加至攪拌之化合物24g (1.0 g，5.29 mmol)及化合物24d (1.1 g，2.35 mmol)於DMF (15 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (20 mL)中，用DCM (3×50 mL)萃取且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾及減壓濃縮後，所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到化合物24h (1.25 g，70%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.36 (s, 1H), 7.30 (d, 1H), 7.08 (s, 1H), 7.68 (t, 1H), 4.46 (q, 1H), 4.07-3.98-4.01 (m, 4H), 3.98 (s, 2H), 3.75-3.663 (m, H) 3.57(t, 2H), 3.44 (m, 6H), 3.28 (m, 2H), 1.87(m, 1H), 1.66 (m, 1H), 1.59-1.52 (p,2H), 1.48 (s, 9H), 1.41-1.33 (m, 2H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 735.0。製備化合物 24i 在0℃下向攪拌之化合物24h (1.2 g，0.163 mmol)及Pd/C (10 wt. %，250 mg)於MeOH (30 mL)中之混合物添加4 N HCl (1,4-二噁烷，0.81 mL，3.26 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌1.5小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (100 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈無色油狀之化合物24i (1.39 g，99%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.99 (s, 1H), 8.22 (t 1H) 7.74 (t, 1H), 7.61 (d, 1H), 4.31, (q, 1H), 3.93 (s, 2H), 3.86 (s, 2H), 3.79(t, 2H), 3.60-3.50 (m, 18H), 3.06 (q, 2H), 2.97 (p, 4H), 1.60-1.49 (m, 2H), 1.39 (m, 11H), 1.20 (m, 2H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 683。 製備化合物 24j 將DIPEA (0.021 mL，0.125 mmol)及HBTU (29 mg，0.078 mmol)添加至攪拌之化合物1i (85 mg，0.069 mmol)及化合物24i (23 mg，0.031 mmol)於DMF (0.7 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，反應混合物溶於H2 O/DMSO (1.5 mL/1.5 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且濃縮，產生化合物24j (67 mg，68%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1552.5。製備化合物 24k 在0℃下向化合物24j (67 mg，0.021 mmol)於MeOH (1.7 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(16 mg，0.388 mmol)之H2 O (1.7 mL)。在0℃下攪拌2小時後，反應混合物使用乙酸 (0.018 mL)中和且減壓濃縮。反應混合物溶於H2 O/DMSO (1.5 mL/1.5 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且濃縮，產生化合物24k (37 mg，62%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1412.3。製備化合物 24l 將TFA (0.4 mL)添加至攪拌之化合物24k (37 mg，0.013 mmol)於DCM (2.0 mL)中之溶液。在0℃下攪拌2小時後，溶劑及過量TFA用N2 吹走。殘餘物溶於H2 O/乙腈(1 mL/1 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且凍乾，產生呈白色固體狀之化合物24l (19.8 mg，53%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1362.3。實例 35. 製備化合物 25e 製備化合物 25a 使化合物22c (1.0 g，2.67 mmol)及NaN3 (261 mg，4.01 mmol)溶於DMF (3 mL)中。反應混合物在100℃下加熱5小時。反應結束後，反應混合物過濾且濃縮。殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc至EtOAc/MeOH 10/1)來純化，產生化合物25a (854 mg，95%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.17 (s, 2H), 3.76-3.64 (m, 21H), 3.39 (t,J = 5.2 Hz, 2H)。製備化合物 25b 在0℃下向攪拌的化合物25a (854 mg，2.54 mmol)於MeOH (25 mL)中之溶液中添加2 M NaOH水溶液(6.3 mL，12.64 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌3小時。溶液接著減壓濃縮。在冷卻在0℃下的同時將所得懸浮液用2 N HCl水溶液酸化。殘餘物藉由CHCl3 (8×500 mL)萃取。合併有機層，經Na2 SO4 乾燥且濃縮，產生化合物25b (783 mg，96%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.16 (s, 2H), 3.76-3.65 (m, 18H), 3.40 (t,J = 5.2 Hz, 2H)。製備化合物 25c 將DIPEA (0.30 mL，1.70 mmol)及HBTU (483 mg，1.27 mmol)添加至攪拌之化合物25b (337 mg，1.05 mmol)及化合物24g (198 mg，0.42 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，濃縮反應混合物且藉由管柱層析法(EtOAc至EtOAc/MeOH 10/1)來純化，產生化合物25c (358 mg，84%)。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.98 (s, 1H), 8.09 (t,J = 5.2 Hz, 1H), 7.63 (t,J = 5.2 Hz, 1H), 7.55 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.31-4.25 (m, 1H), 3.90 (s, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.80 (m, 2H), 3.62-3.46 (m, 34H), 3.42-3.36 (m, 6H), 3.25-3.17 (m, 2H), 3.08-3.03 (m, 2H), 1.61-1.51 (m, 2H), 1.39 (s, 9H), 1.26-1.10 (m, 7H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 999.1。製備化合物 25d 向化合物25c (358 mg，0.35 mmol)於MeOH (7 mL)中之溶液中添加Pd/C (10 wt. %，38 mg)及HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.18 mL，0.72 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌5小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (400 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈無色油狀之化合物25d (314 mg，93%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.98 (s, 1H), 8.10 (m, 1H), 7.68 (m, 1H), 7.57 (m, 1H), 4.31-4.25 (m, 1H), 3.90 (s, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.80 (m, 2H), 3.62-3.46 (m, 30H), 3.42-3.36 (m, 10H), 3.45-3.16 (m, 4H), 3.08-3.03 (m, 3H), 2.72-2.66 (m, 3H), 1.61-1.51 (m, 2H), 1.39 (s, 9H), 1.26-1.10 (m, 6H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 947.1。製備化合物 25e 化合物25e 係藉由實例34中製備化合物24l 之類似方法，自化合物1i 及化合物25d 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1493.7。實例 36. 製備化合物 25f 化合物25f 係藉由實例34中製備化合物24l 之類似方法，自化合物1j 及化合物25d 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1508.2。實例 37. 製備化合物 26e 製備化合物 26a 將DIPEA (0.65 mL，0.004 mmol)、HOBt (218 mg，1.61 mmol)及EDC∙HCl (364 mg，1.9 mmol)添加至攪拌之化合物24e (1.0 g，2.43 mmol)及化合物3e (810 mg，1.52 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (50 mL)中且用EtOAc (3×50 mL)萃取。合併之有機層用1 N HCl水溶液(30 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(30 mL)及鹽水(30 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物26a (988 mg，73%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.33-7.26 (m, 8 H), 6.85 (s, 1H), 5.63 (s, 1H), 5.08-5.02 (s, 4 H), 4.16-4.11 (m, 1 H), 4.09-4.05 (m, 2 H), 3.72-3.70 (m, 2 H), 3.62-3.59 (m, 14H), 3.53 (s, 2H), 3.44-3.43 (m, 2H), 3.18-3.16 (m, 2H), 1.82 (m, 1H), 1.72 (s, 7H), 1.66 (m, 1H), 1.52 (s, 18H), 1.38-1.36 (m, 2H), 1.24-1.27 (s, 1H)。EI-MS m/z: [M+H-2Boc]+ 693.1。製備化合物 26b 在0℃下向攪拌之化合物26a (988 mg，1.1 mmol)及Pd/C (10 wt. %，196 mg)於MeOH (6 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.55 mL，2.2 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌1.5小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (40 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈黃色泡沫狀之化合物26b (767 mg，99%)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 625.0, [M+H-Boc]+ 525.0, [M+H-2Boc]+ 424.9。製備化合物 26c 將DIPEA (0.2 mL，1.14 mmol)、HOBt (89 mg，0.66 mmol)及EDC∙HCl (142 mg，0.74 mmol)添加至攪拌之化合物26b (200 mg，0.29 mmol)及化合物25b (202 mg，0.63 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (10 mL)中且用DCM (3×10 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物26c (270 mg，77%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.07 (t, 1H), 7.62 (t, 1H), 7.54-7.52 (m, 1H), 5.73 (s, 2H), 4.27-4.25 (q, 1H), 3.96 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.58-3.48 (m, 52H), 3.19-3.18 (m, 3H), 3.04-3.03 (m, 3H), 1.44 (s, 18H), 1.39-1.37 (m, 3H), 1.21-1.19 (m, 3H)。EI-MS m/z: [M+H-2Boc]+ 1031.6。製備化合物 26d 在0℃下向攪拌之化合物26c (160 mg，0.13 mmol)及Pd/C (10 wt. %，28 mg)於MeOH (20 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.07 mL，0.28 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌30分鐘後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (30 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈無色油狀之化合物26d (140 mg，91%)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 1179.7。製備化合物 26e 化合物26e 係藉由實例34中製備化合物24l 之類似方法，自化合物1i 及化合物26d 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1560.6, 1/3[M+H]+ 1040.7。實例 38. 製備化合物 27e 製備化合物 27a 將DIPEA (0.19 ml，1.1 mmol)、HOBt (64 mg，0.47 mmol)及EDC∙HCl (91 mg，0.47 mmol)添加至攪拌之化合物24e (228 mg，0.55 mmol)及化合物4e (256 mg，0.36 mmol)於DMF (4 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌4小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (10 mL)且用EtOAc (3×15 mL)萃取。合併之有機層用1 N HCl水溶液(20 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物27a (327 mg，85%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.73 (s, 1H), 7.33-7.26 (m, 11 H), 6.91 (s, 1H), 5.67 (br, 1H) 5.08-5.07 (m, 5 H), 4.15 (m, 1 H), 4.02 (t, 2 H), 3.72-3.44 (m, 46H), 3.16 (d, 2H), 1.82 (m, 1H), 1.63 (m, 1H), 1.55-1.36 (m, 13H)。製備化合物 27b 在0℃下向攪拌之化合物27a (327 mg，0.309 mmol)及Pd/C (10 wt. %，65 mg)於MeOH (6 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.15 mL，0.618 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌1.5小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (40 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈無色油狀之化合物27b (244 mg，91%)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 789.2。製備化合物 27c 將DIPEA (0.19 ml，1.13 mmol)、HOBt (95 mg，0.707 mmol)及EDC∙HCl (135 mg，0.707 mmol)添加至攪拌之化合物25b (227 mg，0.707 mmol)及化合物27b (244 mg，0.283 mmol)於DMF (6 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌3小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (5 mL)中且用DCM (3×10 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物27c (339 mg，85%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.69 (s, 1H), 7.29 (d, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 4.39 (q, 1H), 3.99-3.94 (m, 6H), 3.69-3.58 (m, 80H), 3.51 (t, 2H), 3.44-3.34 (m, 8H), 3.25 (m, 2H), 1.68-1.64 (m, 1H). 1.53-1.48 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.33 (m, 2H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1395.6。製備化合物 27d 在0℃下向攪拌之化合物27c (339 mg，0.242 mmol)及Pd/C (10 wt. %，67 mg)於MeOH (6 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.12 mL，0.484 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌30分鐘後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (30 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈無色油狀之化合物27d (300 mg，87%)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 1343.5。製備化合物 27e 化合物27e 係藉由實例34中製備化合物24l 之類似方法，自化合物1i 及化合物27d 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1692.5。實例 39. 製備化合物 28d 製備化合物 28c 化合物28c 係藉由實例35中製備化合物25d 之類似方法，自H-D-Lys(Z)-OH製備。製備化合物 28d 化合物28d 係藉由實例35中製備化合物25e 之類似方法，自化合物1i 及化合物28c 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1494.9。實例 40. 製備化合物 28e 化合物28e 係藉由實例35中製備化合物25e 之類似方法，自化合物1j 及化合物28c 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1509.2。實例 41. 製備化合物 29j 製備化合物 29a 在0℃下在N2 下向六乙二醇(25.0 g，88.5 mmol)於DCM (100 mL)中之溶液中添加三乙胺(61.7 mL，443 mmol)及對甲苯磺醯氯(50.6 g，266 mmol)。在0℃下5小時後，將反應混合物傾倒至1 N HCl水溶液(200 mL)中且用DCM (2×200 mL)萃取。合併之有機層用飽和NaHCO3 水溶液(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生呈棕色油狀之化合物29a (45.0 g，87%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.79 (d,J = 7.6 Hz, 4H), 7.34 (d,J = 7.6 Hz, 4H), 4.16-4.14 (m, 4H), 3.69-3.67 (m, 4H), 3.64-3.56 (m, 16H), 2.44 (s, 6H)。製備化合物 29b 向化合物29a (17.6 g，29.7 mmol)於DMF (100 mL)中之溶液中添加NaN3 (9.65 g，148 mmol)及碘化四丁基銨(550 mg，1.49 mmol)。反應混合物加熱達80℃。在80℃下攪拌16小時後，使反應混合物冷卻至室溫。反應混合物經矽藻土墊過濾且用DCM (100 mL)洗滌。濃縮後，殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物29b (9.4 g，94%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.68 (m, 20H), 3.39 (t, 4H)。製備化合物 29c 向29b (8.4 g，24.9 mmol)於DCM (24 mL)及甲苯(24 mL)中之溶液中添加1 N HCl水溶液(40.3 mL)及三苯基膦(6.9 g，23.6 mmol)。反應混合物在室溫下在N2 下攪拌16小時。在減壓下移除溶劑後，H2 O (20 mL)添加至反應混合物，且將水層用EtOAc (20 mL)萃取。接著水相pH值調至13。將所得水相用DCM (3×30 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，且減壓濃縮，產生呈無色油狀之化合物29c (6.6 g，84%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.67 (m, 20H), 3.52 (t, 2H), 3.39(t, 2H), 2.86(t, 2H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 306.9。 製備化合物 29d 在0℃下將DIPEA (2.67 mL，15.4 mmol)及HBTU (3.49 g，9.21 mmol)添加至攪拌之L-麩胺酸二甲酯鹽酸鹽(1.3 g，6.14 mmol)及化合物20e (1.72 g，6.14 mmol)於DMF (15 mL)中之混合物。將反應混合物在0℃下攪拌30分鐘且在N2 下經16小時使之升溫至室溫。將反應混合物傾倒至水(50 mL)中且用DCM (3×50 mL)萃取。合併之有機層先後用0.5 N HCl (50 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾及減壓濃縮後，所得粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物29d (2.18 g，81%)。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.00 (s, 1H), 8.04 (d, 1H), 4.34 (m, 1H), 3.93 (s, 1H), 3.77 (s, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.58 (s, 9H), 3.38-3.34 (t, 2H), 2.14(m, H), 1.90 (m, 1H), 1.39 (s, 9H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 437.35。製備化合物 29e 在室溫下在N2 下向化合物29d (2.18 g，4.99 mmol)於THF:MeOH:H2 O (12 mL:4 mL:4 mL)中之溶液中添加NaOH (499 mg，12.5 mmol)。3小時後，反應混合物pH值調至4且濃縮。接著將殘餘物用DCM/MeOH (80 mL/20 mL)萃取。濃縮得到呈黃色油狀之化合物29e (1.0 g，49%)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H-Boc]+ 309.20。製備化合物 29f 在0℃下將DIPEA (1.7 mL，9.79 mmol)及HBTU (2.79 g，7.35 mmol)添加至攪拌之化合物29e (1.0 g，2.45 mmol)及化合物29c (2.25 g，7.35 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物。反應混合物在0℃下攪拌30分鐘且在N2 下經16小時使之升溫至室溫。將反應混合物傾倒至水(50 mL)中且用DCM (3×50 mL)萃取。合併之有機層先後用0.5 N HCl水溶液(50 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾及減壓濃縮後，所得粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物29f (611 mg，25%)。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.97 (s, 1H), 8.08 (t, 1H), 7.85 (t, 1H), 7.64 (d, 1H), 4.27 (m, 1H), 3.83 (s, 2H), 3.82-3.61 (m, 2H), 3.61-3.50 (m, 42H), 3.42-3.37 (m, 8H), 3.28-3.15 (m, 4H), 2.90 (s, H), 2.08-2.04(m,2 H), 1.88 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.39 (s, 9H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 986.73。製備化合物 29g 向攪拌之化合物29f (611 mg，0.62 mmol)於MeOH (50 mL)中之混合物添加Pd/C (10 wt. %，132 mg，0.62 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌2小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (40 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈無色油狀之化合物29g (518 mg，粗)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 933.85。 製備化合物 29h 將DIPEA (0.026 mL，0.150 mmol)及HBTU (40 mg，0.105 mmol)添加至攪拌之化合物29g (35 mg，0.037 mmol)及化合物1i (106 mg，0.086 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌16小時後，反應混合物用水(20 mL)稀釋且用EtOAc (3×10 mL)萃取。合併之有機層先後用0.5 N HCl (20 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾及減壓濃縮後，所得粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物29h (81.4 mg，65%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1677.94, 1/3[M+H]+ 1119.03。製備化合物 29i 在-10℃下向化合物29h (81 mg，0.024 mmol)於MeOH (1 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(8.1 mg，0.19 mmol)之H2 O (1 mL)。在-10℃下攪拌2小時後，反應混合物使用乙酸中和且減壓濃縮。接著反應混合物溶於H2 O/DMSO (1.5 mL/1.5 mL)中且藉由HPLC來純化，產生呈白色固體狀之化合物29i (53 mg，72%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1537.86, 1/3[M+H]+ 1025.66。製備化合物 29j 在0℃下將TFA (0.3 mL)添加至攪拌之化合物29i (53 mg，0.017 mmol)於DCM (1.0 mL)中之溶液。攪拌1小時後，溶劑及過量TFA藉由N2 流移除。接著殘餘物溶於H2 O/MeCN (1 mL/1 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且凍乾，產生呈白色固體狀之化合物29j (23.1 mg，43%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1487.99, 1/3[M+H]+ 992.40。實例 42. 製備化合物 29k 化合物29k 係藉由實例41中製備化合物29j 之類似方法，自化合物1j 及化合物29g 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1501.93, 1/3[M+H]+ 1001.69。實例 43. 製備化合物 30b 製備化合物 30a 化合物30a 係藉由實例41中製備化合物29g 之類似方法，自D-麩胺酸二甲酯鹽酸鹽製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 933.89。製備化合物 30b 化合物30b 係藉由實例41中製備化合物29j 之類似方法，自化合物1i 及化合物30a 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1488.07, 1/3[M+H]+ 992.40。實例 44. 製備化合物 30c 化合物30c 係藉由實例41中製備化合物29j 之類似方法，自化合物1j 及化合物30a 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1501.93, 1/3[M+H]+ 1001.69。實例 45. 製備化合物 31f 製備化合物 31a 將三頸燒瓶連續負載H2 O (18 mL)、1,4-二噁烷(30 mL)及L-鳥胺酸單鹽酸鹽(3.0 g，17.8 mmol)。攪拌混合物直至完全溶解。pH藉由添加2 M Na2 CO3 水溶液調至約10.5。在藉由同時添加2 M Na2 CO3 水溶液維持pH在約10-11下的同時添加氯甲酸苯甲酯(6.37 g，37.4 mmol)。添加結束後，將反應混合物在20℃下攪拌1小時。接著添加EtOAc (50 mL)且所得混合物pH值用c-HCl調至2~3。分離有機層且將水層用EtOAc (50 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，且經Na2 SO4 乾燥。過濾且減壓濃縮，得到化合物31a (7.1 g)。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 12.54 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.44-7.29 (m, 10H), 7.24-7.22 (m, 1H), 5.16-5.00 (d, 4H), 3.95-3.89 (m, 1H), 3.00-2.96 (m, 2H), 1.98-1.57 (m, 1H), 1.56-1.46(m, 3H)。製備化合物 31b 在0℃下將DIPEA (1.41 mL，8.12 mmol)及HBTU (1.85 g，4.87 mmol)添加至攪拌之化合物31a (1.30 g，3.25 mmol)及化合物2d (891 mg，3.57 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物。反應混合物在0℃下攪拌30分鐘且在N2 下經16小時使之升溫至室溫。將反應混合物傾倒至水(50 mL)中且用DCM (3×50 mL)萃取。合併之有機層先後用0.5 N HCl水溶液(50 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾及減壓濃縮後，所得粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物31b (1.2 g，57%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 647.54, [M+H-Boc]+ 547.47。製備化合物 31c 向攪拌之化合物31b (1.2 g，1.86 mmol)於MeOH (50 mL)中之混合物添加Pd/C (10 wt. %，59 mg，5.57 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌2小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (40 mL)洗滌。濃縮濾液，產生化合物31c (717 mg)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.93 (s, 1H), 3.81 (t, 2H), 3.55 (t, 2H), 3.51 (s, 5H), 3.42-3.22 (m, 13H), 1.37 (s, 9H)。製備化合物 31d 在0℃下將DIPEA (0.55 mL，3.17 mmol)及HBTU (902 mg，2.38 mmol)添加至攪拌之化合物31c (300 mg，0.79 mmol)及化合物25b (637 mg，1.98 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物。反應混合物在0℃下攪拌30分鐘且在N2 下經16小時使之升溫至室溫。將反應混合物傾倒至水(30 mL)且用DCM (3×30 mL)萃取。合併之有機層先後用0.5 N HCl水溶液(30 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(30 mL)及鹽水(30 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾及減壓濃縮後，所得粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物31d (551 mg，71%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 985.87。製備化合物 31e 向攪拌之化合物31d (491 mg，0.50 mmol)於MeOH (30 mL)中之混合物添加Pd/C (10 wt. %，106 mg 1.00 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌2小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (40 mL)洗滌。濃縮濾液，產生化合物31e (452 mg)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 933.94。製備化合物 31f 化合物31f 係藉由實例35中製備化合物25e 之類似方法，自化合物1i 及化合物31e 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1488.20, 1/3[M+H]+ 992.54。實例 46. 製備化合物 31g 化合物31g 係藉由實例35中製備化合物25e 之類似方法，自化合物1j 及化合物31e 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1502.23, 1/3[M+H]+ 1001.86。 實例 47. 製備化合物 32c 製備化合物 32a 將DIPEA (0.6 mL，7.07 mmol)及HBTU (972 mg，5.30 mmol)添加至攪拌之化合物24g (483 mg，0.855 mmol)及Fmoc-NH-PEG5-CH2 CH2 COOH (1.0 g，3.89 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (30 mL)中且用EtOAc (3×30 mL)萃取。合併之有機層先後用1 N HCl水溶液(10 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物32a (1.16 g，90%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.77 (d, 4H), 7.60(d, 4H), 7.39 (t, 4H), 7.31 (t, 4H), 4.39 (d, 4H), 4.33 (m, 1H), 4.22 (m, 2H), 4.09 (m, 2H), 3.71-3.39 (m, 52H), 3.19 (m, 2H), 2.51 (m, 4H), 1.50 (m, 1H), 1.46 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.25 (m, 2H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1520.0。製備化合物 32b 在室溫下向化合物32a (500 mg，0.328 mmol)於THF (8 mL)中之溶液中添加哌啶(2 mL)。攪拌20分鐘後，在減壓下濃縮反應混合物。所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物32b (175 mg，50%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.41 (m, 1H), 4.01 (m, 2H), 3.75-3.56 (m, 43H), 3.54 (m, 2H), 3.24 (m, 2H), 2.89 (m, 3H), 2.52 (m, 4H), 1.83 (m, 1H), 1.80 (m, 1H), 1.53 (s, 9H), 1.39 (m, 2H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 975.5。製備化合物 32c 化合物32c 係藉由實例35中製備化合物25e 之類似方法，自化合物1i 及化合物32b 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1508.8。實例 48. 製備化合物 32d 化合物32d 係藉由實例35中製備化合物25e 之類似方法，自化合物1j 及化合物32b 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1522.8。實例 49. 製備化合物 33e 製備化合物 33a 將DIPEA (1.98 mL，11.37 mmol)及HBTU (2.15 g，5.68 mmol)添加至攪拌之化合物24e (1.57 g，3.79 mmol)及化合物6b (1.30 g，3.15 mmol)於DMF (37 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (40 mL)且用EtOAc (3×40 mL)萃取。合併之有機層先後用1 N HCl水溶液(40 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(40 mL)及鹽水(40 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物33a (2.2 g，88%)。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.99 (s, 1H), 8.19 (d, 1H), 7.79 (t, 1H), 7.47 (d, 1H), 7.34-7.31 (m, 5H), 7.24 (t, 1H), 5.01 (d, 4H), 4.55 (q, 1H), 3.91 (q, 1H), 3.79 (t, 2H), 3.55-3.48 (m, 9H), 3.24-3.11 (m, 2H), 2.75-2.54 (m, 2H), 1.57-1.49 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.25 (m, 2H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 790.47, [M+Na]+ 812.4。製備化合物 33b 在0℃下向攪拌之化合物33a (2.2 g，2.78 mmol)及Pd/C (10 wt. %，400 mg)於MeOH (60 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，1.39 mL，5.56 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌3小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (40 mL)洗滌。濃縮濾液，產生化合物33b (1.67 g，99%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.98 (s, 1H), 8.87 (d, 1H), 8.28 (bs, 3H), 8.12 (1H), 7.96 (bs, 3H), 4.51 (q, 1H), 3.77 (t, 2H), 3.72 (bs, 1H), 3.57 (s, 3H), 3.52-3.47 (m, 7H), 3.12 (s, 3H), 2.76-2.61 (m,4H) 1.71 (q, 2H), 1.55 (q, 2H) 1.36 (s, 9H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 522.4, [M+Na]+ 544.3。製備化合物 33c 將DIPEA (1.95 mL，11.23 mmol)及HBTU (3.19 g，8.42 mmol)添加至攪拌之化合物25b (1.98 g，6.17 mmol)及化合物33b (1.67 g，2.80 mmol)於DMF (20 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，濃縮反應混合物且藉由管柱層析法來純化，產生化合物33c (2 g，63%)。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.97 (s, 1H), 8.28 (d, 1H), 7.82 (t, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 4.54 (q, 1H), 4.25 (q, 1H), 3.91 (s, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.80 (t, 2H), 3.60-3.49 (m, 48H), 3.26-3.12 (m,3H), 3.07 (q, 2H), 2.75-2.54 (m, 2H), 1.65-1.55 (m, 2H), 1.39 (s, 10H), 1.21 (m,3H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1128.8, [M+Na]+ 1150.7。製備化合物 33d 在0℃下向攪拌之化合物33c (1 g，0.88 mmol)及Pd/C (10 wt. %，200 mg)於MeOH (20 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.44 mL，0.88 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌3小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (20 mL)洗滌。濃縮濾液，產生化合物33d (936 mg，92%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.98 (s 1H), 8.30 (d, 1H), 7.70 (t, 2H), 4.54 (q, 1H), 4.26 (q, 1H), 3.93 (s, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.80 (t, 2H), 3.61-3.49 (m, 46H), 3.22-3.12 (m, 4H), 3.06 (q, 2H), 2.97 (q, 4H), 2.76-2.54 (m, 2H), 1.64-1.55 (m, 2H), 1.39 (s, 10H), 1.26 (m, 3H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1076.8。製備化合物 33e 化合物33e 係藉由實例35中製備化合物25e 之類似方法，自化合物1i 及化合物33d 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1552.2。實例 50. 製備化合物 33f 化合物33f 係藉由實例35中製備化合物25e 之類似方法，自化合物1j 及化合物33d 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1566.4。實例 51. 製備化合物 34e 製備化合物 34a 將DIPEA (0.8 mL，4.56 mmol)及HBTU (1.3 g，3.42 mmol)添加至攪拌之化合物24g (530 mg，1.14 mmol)及Z-Asp(OMe)-OH (704 mg，2.5 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (50 mL)中且用EtOAc (3×30 mL)萃取。合併之有機層先後用1 N HCl水溶液(40 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(40 mL)及鹽水(40 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物34a (713 mg，68%)。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) : δ 9.97 (s, 1H), 7.88 (m, 3H), 7.64 (d, 2H), 7.51 (d, 2H), 7.35 (m, 10H), 5.02 (m, 4H), 4.43-4.31 (m, 2H), 4.17 (m, 1H), 3.80 (t, 2H), 3.58-3.50 (m, 12H), 3.41-3.16 (m, 6H), 2.98 (m, 2H), 2.79-2.67 (m, 3H), 2.57 (m, 2H), 1.60-1.34 (m, 13H)。製備化合物 34b 向化合物34a (530 mg，0.58 mmol)於MeOH (5 mL)中之溶液中添加Pd/C (20 wt. %，106 mg)及HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.29 mL，1.16 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌3小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (30 mL)洗滌。濃縮濾液，產生化合物34b (420 mg，100%)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.97 (s, 1H), 8.62 (d, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.27 (m, 4H), 7.02 (s, 1H), 4.17 (m, 2H), 4.02 (m, 1H), 3.76 (t, 2H), 3.61 (m, 4H), 3.51-3.11 (m, 12H), 3.09-2.77 (m, 8H), 1.60-1.24 (m, 13H)。EI-MS m/z: [M+H]+ 651.5。製備化合物 34c 將DIPEA (0.4 mL，2.32 mmol)及HBTU (660 mg，1.74 mmol)添加至攪拌之化合物34b (420 mg，0.58 mmol)及化合物25b (299 mg，0.93 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (30 mL)中且用EtOAc (3×30 mL)萃取。合併之有機層先後用1 N HCl水溶液(20 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物34c (466 mg，70.8%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 8.28 (s, 1H), 7.78 (q, 1H), 7.31 (d, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.94 ( s, 1H), 4.85 (m, 2H), 4.35 (m, 1H), 4.07-4.03(m, 6H), 3.75-3.41 (m, 56H), 3.23 (q, 2H), 2.92-2.84 (m, 4H),1.91-1.32 (m, 15H)。EI-MS m/z: [M+2H]+ 1158.1。製備化合物 34d 在0℃下向攪拌之化合物34c (260 mg，0.21 mmol)及Pd/C (10 wt. %，52 mg)於MeOH (20 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.10 mL，0.41 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌2小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (50 mL)洗滌。濃縮濾液，產生化合物34d (249 mg，100%)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+2H]+ 1206.1。製備化合物 34e 化合物34e 係藉由實例35中製備化合物25e 之類似方法，自化合物1i 及化合物34d 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1610.4。實例 52. 製備化合物 34f 化合物34f 係藉由實例35中製備化合物25e 之類似方法，自化合物1j 及化合物34d 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1624.3。實例 53. 製備化合物 35g 製備化合物 35a 將DIPEA (0.61 mL，3.52 mmol)及HBTU (665 mg，1.175 mmol)添加至攪拌之Fmoc-D-Glu(OtBu)-OH (500 mg，1.17 mmol)及化合物2d (424 mg，1.404 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (30 mL)中且用EtOAc (3×30 mL)萃取。合併之有機層先後用1 N HCl水溶液(20 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物35a (708 mg，89%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 672.7。製備化合物 35b 在室溫下向化合物35a (708 mg，1.04 mmol)於THF (8 mL)中之溶液中添加哌啶(2 mL)。攪拌20分鐘後，在減壓下濃縮反應混合物。所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物35b (400 mg，85%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 450.1。製備化合物 35c 將DIPEA (0.19 mL，1.1 mmol)及HBTU (253 mg，0.66 mmol)添加至攪拌之化合物28a (203 mg，0.484 mmol)及化合物35b (200 mg，0.44 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (30 mL)中且用EtOAc (3×30 mL)萃取。合併之有機層先後用1 N HCl水溶液(10 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物35c (235 mg，63%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 847.0。製備化合物 35d 向化合物35c (235 mg，0.277 mmol)於MeOH (15 mL)中之溶液中添加Pd/C (10 wt. %，30 mg)。在氫氣下在室溫下攪拌2小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (50 mL)洗滌。濃縮濾液，產生化合物35d (160 mg，100%)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 578.7。製備化合物 35e 將DIPEA (0.145 mL，1.758 mmol)及HBTU (262 mg，1.465 mmol)添加至攪拌之化合物35d (160 mg，0.276 mmol)及化合物25b (187 mg，0.581 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (30 mL)且用EtOAc (3×30 mL)萃取。合併之有機層先後用1 N HCl水溶液(10 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物35e (260 mg，79%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1185.4。製備化合物 35f 向化合物35e (70 mg，0.059 mmol)於MeOH (5 mL)中之溶液中添加Pd/C (10 wt. %，15 mg)。在氫氣下在室溫下攪拌90分鐘後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (30 mL)洗滌。濃縮濾液，產生化合物35f (67 mg，100%)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ : 1133.3。製備化合物 35g 化合物35g 係藉由實例35中製備化合物25e 之類似方法，自化合物1i 及化合物35f 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1559.9。實例 54. 製備化合物 36e 製備化合物 36a 將DIPEA (0.3 mL，3.10 mmol)及HBTU (474 mg，2.275 mmol)添加至攪拌之Fmoc-D-Glu(OtBu)-OH (484 mg，1.138 mmol)及化合物28b (223 mg，0.569 mmol)於DMF (7 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (30 mL)中且用EtOAc (3×30 mL)萃取。合併之有機層用1 N HCl水溶液(20 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物36a (593 mg，86%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1208.3。製備化合物 36b 在室溫下向化合物36a (593 mg，0.49 mmol)於THF (8 mL)中之溶液中添加哌啶(1 mL)。攪拌20分鐘後，在減壓下濃縮反應混合物。所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物36b (166 mg，44%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 763.9。製備化合物 36c 將DIPEA (0.15 mL，0.84 mmol)及HBTU (247 mg，0.63 mmol)添加至攪拌之化合物36b (166 mg，0.21 mmol)及化合物25b (147 mg，0.441 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (30 mL)中且用EtOAc (3×30 mL)萃取。合併之有機層先後用1 N HCl水溶液(10 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物36c (195 mg，68%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1370.6。製備化合物 36d 向化合物36c (195 mg，0.14 mmol)於MeOH (10 mL)中之溶液中添加Pd/C (10 wt. %，30 mg)。接著反應混合物在氫氣下在室溫下攪拌90分鐘。反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (30 mL)洗滌。濃縮濾液，產生化合物36d (187 mg，100%)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 1318.6。製備化合物 36e 化合物36e 係藉由實例35中製備化合物25e 之類似方法，自化合物1i 及化合物36d 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1624.4。實例 55. 製備化合物 37d 製備化合物 37a 將DIPEA (0.083 mL，0.71 mmol)及HBTU (136 mg，0.36 mmol)添加至攪拌之炔丙基胺(0.018 mL，0.285 mmol)及化合物1j (300 mg，0.238 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (10 mL)中且用EtOAc (3×10 mL)萃取。合併之有機層先後用1 N HCl水溶液(10 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物37a (300 mg，97%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1294.0。製備化合物 37b 在0℃下向化合物37a (300 mg，0.24 mmol)於THF (2 mL)及MeOH (2 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(50 mg，1.20 mmol)之H2 O (2 mL)。在0℃下攪拌2小時後，反應混合物使用乙酸中和且減壓濃縮。接著殘餘物溶於H2 O/DMSO (1.5 mL/1.5 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且濃縮，產生化合物37b (165 mg，60%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1140.8。製備化合物 37c CuSO4 . 5H2 O (1 mg)及抗壞血酸鈉(2 mg)添加至攪拌之化合物37b (50 mg，0.042 mmol)及化合物25c (23 mg，0.02 mmol)於THF (2 mL)及H2 O (2 mL)中之混合物。pH值藉由添加1 M Na2 CO3 水溶液調至約7。在20℃下攪拌1小時後，反應混合物溶於H2 O/DMSO (1.5 mL/1.5 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且濃縮，產生化合物37c (32.4 mg，48%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1638.2。製備化合物 37d 將TFA (0.4 mL)添加至化合物37c (32.4 mg，0.01 mmol)於DCM (2 mL)中之溶液。在0℃下攪拌2小時後，溶劑及過量TFA藉由N2 流移除。接著殘餘物溶於H2 O/MeCN (1 mL/1 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且凍乾，產生呈白色固體狀之化合物37d (19.6 mg，62%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1590.2。實例 56. 製備化合物 38b 製備化合物 38a 將CuSO4 . 5H2 O (1 mg)及抗壞血酸鈉(2 mg)添加至攪拌之化合物37b (60 mg，0.052 mmol)及化合物16b (14 mg，0.025 mmol)於THF (2 mL)及H2 O (2 mL)中之混合物。pH值藉由添加1 M Na2 CO3 水溶液調至約7。在20℃下攪拌1小時後，反應混合物溶於H2 O/DMSO (1.5 mL/1.5 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且濃縮，產生化合物38a (61 mg，82%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1430.2。製備化合物 38b 將TFA (0.4 mL)添加至化合物38a (59.8 mg，0.02 mmol)於DCM (2.0 mL)中之溶液。在0℃下攪拌2小時後，溶劑及過量TFA藉由N2 流移除。接著殘餘物溶於H2 O/AN (1 mL/1 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且凍乾，產生呈白色固體狀之化合物38b (14.6 mg，24%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1380.1。實例 57. 製備化合物 38e 製備化合物 38c 將DIPEA (0.075 mL，0.428 mmol)及HBTU (122 mg，0.321 mmol)添加至攪拌之炔丙基胺(0.016 mL，0.256 mmol)及化合物1i (264 mg，0.214 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至H2 O (10 mL)中且用EtOAc (3×10 mL)萃取。合併之有機層先後用1 N HCl水溶液(10 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮後，殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物38c (270 mg，100%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1266.2。製備化合物 38d 在0℃下向化合物38c (270 mg，0.213 mmol)於THF (2 mL)及MeOH (2 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(36 mg，0.853 mmol)之H2 O (2 mL)。在0℃下攪拌2小時後，反應混合物使用乙酸中和且減壓濃縮。接著殘餘物溶於H2 O/DMSO (1.5 mL/1.5 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且濃縮，產生化合物38d (168 mg，70%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1126.1。製備化合物 38e 化合物38e 係藉由實例56中製備化合物38b 之類似方法，自化合物38d 及化合物16b 製備。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1366.2。實例 58. 製備化合物 39e 製備化合物 39a 在0℃下化合物1g (27 mg，0.039 mmol)、化合物14j (45 mg，0.039 mmol)及無水HOBt (1 mg，0.0078 mmol)溶於DMF (2 mL)中。接著添加吡啶(0.2 mL)及DIPEA (0.014 mL，0.078 mmol)。在N2 下在0℃下攪拌24小時至室溫後，反應混合物溶於DMSO (1 mL)中且藉由HPLC來純化，產生呈白色固體狀之化合物39a (36 mg，58%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1582.9, [M+Na]+ 1604.5。製備化合物 39b 化合物39a (35 mg，0.022 mmol)及三苯基膦(1.5 mg，0.005 mmol)溶於DCM (2 mL)中。在室溫下將吡咯啶(0.0025 mL，0.026 mmol)及Pd(PPh3 )4 (1.3 mg，0.001 mmol)添加至反應混合物且接著攪拌2小時。將反應混合物用H2 O (50 mL)稀釋且用正丁醇(2×50 mL)萃取。合併之有機層經無水MgSO4 乾燥，在減壓下蒸發。所得殘餘物溶於DMSO (1 mL)中且藉由HPLC來純化，產生呈白色固體狀之化合物39b (34 mg，粗)。EI-MS m/z: [M+H]+ : 1542.7。 製備化合物 39c 將DIPEA (0.0026 mL，0.039 mmol)及PyBOP (4.7 mg，0.023 mmol)添加至攪拌之化合物39b (15 mg，0.009 mmol)及化合物16c (2.0 mg，0.0038 mmol)於DMF (0.3 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌13小時後，反應混合物溶於DMSO (1.5 mL)中且藉由HPLC來純化，產生呈白色固體狀之化合物39c (12 mg，35%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1788.5。製備化合物 39d 在0℃下向化合物39c (12 mg，0.0033 mmol)於MeOH (1 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(1.4 mg，0.033 mmol)之H2 O (1 mL)。在0℃下2小時後，溶液pH值用乙酸調至4~5，且在減壓下濃縮反應混合物。所得殘餘物溶於DMSO (1.5 mL)中且藉由HPLC來純化，產生化合物39d (11 mg，98%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1648.6。製備化合物 39e 在0℃下將TFA (0.5 mL)添加至攪拌之化合物39d (11 mg，0.003 mmol)於DCM (3.0 mL)中之溶液。在0℃下2小時後，溶劑及過量TFA藉由N2 流移除。接著殘餘物溶於DMSO (1 mL)中且藉由HPLC來純化，產生呈白色固體狀之化合物39e (1.2 mg，11%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1598.3。實例 59. 製備化合物 40c 製備化合物 40a 將DIPEA (0.004 mL，0.021 mmol)及HBTU (5.0 mg，0.013 mmol)添加至攪拌之化合物39b (20 mg，0.012 mmol)及化合物25d (5.0 mg，0.005 mmol)於DMF (1.5 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，反應混合物溶於DMSO (1.0 mL)中且藉由HPLC來純化，產生化合物40a (14.5 mg，30%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1998.8。製備化合物 40b 在0℃下向化合物40a (10 mg，0.0025 mmol)於MeOH (1 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(1.0 mg，0.025 mmol)之H2 O (1 mL)。在0℃下2小時後，反應混合物使用乙酸中和且減壓濃縮。接著殘餘物溶於DMSO (1.5 mL)中且藉由HPLC來純化，產生化合物40b (6.9 mg，74%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1858.3。製備化合物 40c 將TFA (0.2 mL)添加至攪拌之化合物40b (6.9 mg，0.0018 mmol)於DCM (2.0 mL)中之溶液。在0℃下攪拌2小時後，溶劑及過量TFA藉由N2 流移除。接著殘餘物溶於DMSO (1 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且凍乾，產生呈白色固體狀之化合物40c (1.5 mg，23%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1808.6。實例 60. 製備化合物 41c 製備化合物 41a 將DIPEA (0.116 mL，0.66 mmol)及PyBOP (127 mg，0.24 mmol)添加至攪拌之化合物16c (280 mg，0.22 mmol)及化合物1j (587 mg，1.10 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌2小時後，將反應混合物用H2 O (200 mL)稀釋且用EtOAc (2×100 mL)萃取。合併之有機層經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物41a (250 mg，64%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 883.2, [M+H]+ 1766。製備化合物 41b 將DIPEA (0.0017 mL，0.0096 mmol)及PyBOP (2.0 mg，0.0038 mmol)添加至攪拌之化合物41a (5.7 mg，0.0032 mmol)及化合物39b (5.0 mg，0.0032 mmol)於DMF (0.5 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌3小時後，反應混合物溶於MeCN (1 mL)中且藉由HPLC來純化，產生化合物41b (8.0 mg，75%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1645。製備化合物 41c 在0℃下向化合物41b (8.0 mg，0.0024 mmol)於MeOH (0.5 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(1.2 mg，0.028 mmol)之H2 O (0.1 mL)。在0℃下2小時後，反應混合物使用2 N HCl水溶液中和且減壓濃縮。將所得殘餘物用DCM (2 mL)及H2 O (3滴)稀釋。接著在0℃下添加TFA (0.1 mL)。在0℃下2小時後，溶劑及過量TFA藉由N2 流移除。接著殘餘物溶於DMSO (1 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且凍乾，產生呈白色固體狀之化合物41c (3.1 mg，44%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1448, 1/2[M+Na]+ 1459。實例 61. 製備化合物 42d 製備化合物 42a 將DIPEA (0.026 mL，0.23 mmol)及HBTU (22 mg，0.06 mmol)添加至攪拌之化合物1j (60 mg，0.048 mmol)及化合物25d (214 mg，0.19 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，反應混合物溶於DMSO (1.0 mL)中且藉由HPLC來純化，產生化合物42a (64 mg，58%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 2286.8。製備化合物 42b 將DIPEA (0.011 mL，0.06 mmol)及HBTU (14 mg，0.036 mmol)添加至攪拌之化合物42a (68 mg，0.03 mmol)及化合物39b (46 mg，0.03 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，反應混合物溶於DMSO (1.0 mL)中且藉由HPLC來純化，產生化合物42b (60 mg，52%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1906.3。製備化合物 42c 在0℃下向化合物42b (60 mg，0.016 mmol)於MeOH (2 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(5 mg，0.126 mmol)之H2 O (2 mL)。在0℃下2小時後，反應混合物使用乙酸中和且減壓濃縮。接著殘餘物溶於DMSO (1 mL)中且藉由製備型HPLC來純化，產生化合物42c (37 mg，65%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1759.3。製備化合物 42d 將TFA (0.3 mL)添加至攪拌之化合物42c (37 mg，0.01 mmol)於DCM (3 mL)中之溶液。在0℃下攪拌2小時後，溶劑及過量TFA藉由N2 流移除。接著殘餘物溶於DMSO (1 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且凍乾，產生呈白色固體狀之化合物42d (15 mg，45%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1659.6。實例 62. 製備化合物 43i 製備化合物 43a 將DIPEA (10.4 mL，23.8 mmol)及HBTU (13.5 g，35.7 mmol)添加至攪拌之H-Lys(z)-OMe鹽酸鹽(7.0 g，23.8 mmol)及化合物24e (9.86 mg，23.8 mmol)於DMF (50 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌8小時後，反應混合物用水(100 mL)稀釋且用EtOAc (3×50 mL)萃取。合併之有機層先後用0.5 N HCl水溶液(50 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾及減壓濃縮後，所得粗產物藉由管柱層析法來純化，產生化合物43a (9.3 g，57%)。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.22 (d, 1H), 7.37-7.29 (m, 15H), 7.22 (m, 2H), 5.00 (s, 6H), 4.18 (m, 1H), 4.00 (m, 1H), 3.59 (s, 3H), 2.96 (m, 4H), 1.67-1.50 (m, 4H), 1.38-1.29 (m, 4H), 1.19-1.18 (m, 4H)。EI-MS m/z: [M+Na]+ 712.96。製備化合物 43b 在0℃下在N2 下向化合物43a (9.3 g，13.5 mmol)於THF:MeOH:H2 O (60 mL:30 mL:30 mL)中之溶液中添加LiOH單水合物(1.13 g，26.9 mmol)。2小時後，將反應混合物用1 N HCl水溶液酸化直至pH 4，且用EtOAc (3×100 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且減壓濃縮，得到化合物43b (9.1 g，粗)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 677.48, 2[M+H]+ 1353.82。製備化合物 43c 將DIPEA (1.47 mL，8.44 mmol)、HOBt (484 mg，3.58 mmol)及EDC∙HCl (809 mg，4.22 mmol)添加至攪拌之化合物43b (2.5 g，3.71 mmol)及化合物3e (1.8 g，3.38 mmol)於DMF (20 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至水(50 mL)且用EtOAc (3×50 mL)萃取。合併之有機層先後用0.5 N HCl水溶液(50 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾及減壓濃縮後，所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物43c (2.3 g，59%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1155.92, [M+H-Boc]+ 1055.83。製備化合物 43d 向攪拌之化合物43c (2.3 g，1.99 mmol)及Pd/C (10 wt. %，424 mg，3.98 mmol)於MeOH (200 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.99 mL，3.98 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌2小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (100 mL)洗滌。濃縮濾液，產生化合物43d (1.5 g，粗)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 753.29。製備化合物 43e 將DIPEA (0.14 mL，0.80 mmol)、HOBt (59 mg，0.43 mmol)及EDC∙HCl (102 mg，0.53 mmol)添加至攪拌之化合物43d (2.5 g，3.71 mmol)及化合物25b (150 g，0.46 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至水(50 mL)且用EtOAc (3×50 mL)萃取。合併之有機層先後用1 N HCl水溶液(30 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(30 mL)及鹽水(30 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾及減壓濃縮後，所得粗產物藉由管柱層析法來純化，產生呈無色油狀之化合物43e (100 mg，45%)。EI-MS m/z: [M+Na]+ 1685.11, 1/2[M+H-Boc]+ 731.82。製備化合物 43f 向攪拌之化合物43e (100 mg，0.06 mmol)及Pd/C (10 wt. %，20 mg 0.192 mmol)於MeOH (20 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.045 mL，0.18 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌2小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (30 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈棕色泡沫狀之化合物43f (95 mg)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 1586.30, 1/2[M+H]+ 793.02。 製備化合物 43g 將DIPEA (0.030 mL，0.170 mmol)及HBTU (36 mg，0.094 mmol)添加至攪拌之化合物43f (45 mg，0.028 mmol)及化合物1j (114 mg，0.091 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌16小時後，反應混合物溶於H2 O/DMSO (1.5 mL/1.5 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且濃縮，產生化合物43g (31 mg，21%)。EI-MS m/z: 1/3[M+H-Boc]+ 1705.74, 1/4[M+H-2Boc]+ 1254.79。製備化合物 43h 在-20℃下向化合物43g (31 mg，0.006 mmol)於MeOH (1 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(3.7 mg，0.088 mmol)之H2 O (1 mL)。在-20℃下攪拌2小時後，反應混合物使用乙酸中和且減壓濃縮。接著反應混合物溶於H2 O/DMSO (1.5 mL/1.5 mL)中且藉由HPLC來純化，產生呈白色固體狀之化合物43h (18 mg，64%)。EI-MS m/z: 1/3[M+H-Boc]+ 1735.19, 1/4[M+H]+ 1301.95, 1/5[M+H-Boc]+ 1021.71。製備化合物 43i 在0℃下將TFA (0.3 mL)添加至攪拌之化合物43h (18 mg，0.004 mmol)於DCM (1.0 mL)中之溶液 。攪拌1小時後，溶劑及過量TFA藉由N2 流移除。接著殘餘物溶於H2 O/MeCN (1 mL/1 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且凍乾，產生呈白色固體狀之化合物43i (6 mg，33%)。EI-MS m/z: 1/3[M+H]+ 1547.75, 1/4[M+H]+ 1161.14。實例 63. 製備化合物 43j 化合物43j 係藉由實例62中製備化合物43i 之類似方法，自化合物1i 及化合物43f 製備。EI-MS m/z: 1/3[M+H]+ 1532.37, 1/4[M+H]+ 1149.69。實例 64. 製備化合物 44i 製備化合物 44a 將DIPEA (1.9 mL，11.0 mmol)及HBTU (2.5 g，6.64 mmol)添加至攪拌之化合物H-Lys(z)-OMe鹽酸鹽(1.3 g，4.43 mmol)及化合物43b (3.0 g，4.43 mmol)於DMF (30 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，反應混合物用水(100 mL)稀釋且用EtOAc (3×50 mL)萃取。合併之有機層用0.5 N HCl水溶液(50 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾及減壓濃縮後，所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物44a (3.9 g，93%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 953.42。製備化合物 44b 在室溫下在N2 下向化合物44a (2.1 g，2.20 mmol)於THF:MeOH:H2 O (24 mL:8 mL:8 mL)中之溶液中添加LiOH單水合物(185 mg，4.40 mmol)。2小時後，將反應混合物用1 N HCl水溶液酸化直至pH 4，且用EtOAc (3×50 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且減壓濃縮，得到化合物44b (2.0 g)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 939.35, [M+Na]+ 961.37。製備化合物 44c 將DIPEA (0.93 mL，5.33 mmol)及HBTU (1.21 g，3.20 mmol)添加至攪拌之化合物44b (2.0 g，2.13 mmol)及化合物3e (1.14 g，2.13 mmol)於DMF (20 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物傾倒至水(50 mL)且用EtOAc (3×50 mL)萃取。合併之有機層先後用0.5 N HCl水溶液(50 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾及減壓濃縮後，所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物44c (2.60 g，86%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1418.44, [M+Na]+ 1440.39, [M+H-Boc]+ 1318.47。製備化合物 44d 向攪拌之化合物44c (2.60 g，1.83 mmol)及Pd/C (10 wt. %，781 mg 7.34 mmol)於MeOH (50 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.9 mL，3.67 mmol)。且接著反應在氫氣下在室溫下攪拌2小時。反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (50 mL)洗滌。濃縮濾液，產生呈黃色泡沫狀之化合物44d (1.73 g)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+H]+ 881.90。製備化合物 44e 將DIPEA (1.58 mL，9.08 mmol)及HBTU (2.58 g，6.81 mmol)添加至攪拌之化合物44d (1.0 g，1.13 mmol)及化合物25b (1.82 g，5.67 mmol)於DMF (20 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，反應混合物用水(100 mL)稀釋且用EtOAc (3×50 mL)萃取。合併之有機層先後用0.5 N HCl (50 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，且經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且減壓濃縮後，所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物44e (848 mg，36%)。EI-MS m/z: 1/2[M+H-2Boc]+ 947.63。製備化合物 44f 向攪拌之化合物44e (848 mg，0.40mmol)及Pd/C (10 wt. %，172 mg 1.62 mmol)於MeOH (50 mL)中之混合物添加HCl (4 N 1,4-二噁烷溶液，0.4 mL，1.62 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌2小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且用MeOH (50 mL)洗滌。濃縮濾液，產生化合物44f (625 mg，粗)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 996.40, 1/3[M+H]+ 664.59 製備化合物 44g 將DIPEA (0.067 mL，0.386 mmol)及HBTU (110 mg，0.289 mmol)添加至攪拌之化合物44f (96 mg，0.048 mmol)及化合物1j (303 mg，0.24 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌16小時後，反應混合物溶於H2 O/DMSO (1.5 mL/1.5 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且濃縮，產生化合物44g (67 mg，20%)。EI-MS m/z: 1/3[M+H]+ 2315.93, 1/4[M+H]+ 1737.60, 1/5[M+H]+ 1390.37。製備化合物 44h 在-20℃下向化合物44g (67 mg，0.009 mmol)於MeOH (1 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(8.1 mg，0.192 mmol)之H2 O (1 mL)。在-20℃下攪拌2小時後，反應混合物使用乙酸中和且減壓濃縮。接著反應混合物溶於H2 O/DMSO (1.5 mL/1.5 mL)中且藉由HPLC來純化，產生呈白色固體狀之化合物44h (27.9 mg，45%)。EI-MS m/z: 1/3[M+H]+ 2110.24, 1/4[M+H]+ 1582.97, 1/4[M+H-Boc]+ 1557.91。製備化合物 44i 在0℃下將TFA (0.3 mL)添加至攪拌之化合物44h (27.9 mg，0.004 mmol)於DCM (1.0 mL)中之溶液。攪拌1小時後，溶劑及過量TFA藉由N2 流移除。接著殘餘物溶於H2 O/MeCN (1 mL/1 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且凍乾，產生呈白色固體狀之化合物44i (13.6 mg，50%)。EI-MS m/z: 1/3[M+H]+ 2043.49, 1/4[M+H]+ 1532.96, 1/5[M+H]+ 1226.62。實例 65. 製備化合物 44j 化合物44j 係藉由實例64中製備化合物44i 之類似方法，自化合物1i 及化合物44f 製備。EI-MS m/z: 1/3[M+H]+ 2025.37, 1/4[M+H]+ 1519.10, 1/5[M+H]+ 1215.60。實例 66. 製備化合物 45k 製備化合物 L 在室溫下在氮氣下使D-葡糖醛酸基-6,3-內酯(25.0 g，141.9 mmol)溶於MeOH (250 mL)中，且緩慢向其中添加NaOH (141 mg)於MeOH (100 mL)中之溶液。攪拌24小時後，在減壓下濃縮反應混合物，且接著在低於10℃下添加吡啶(66 mL)及乙酸酐(71 mL)。在室溫下攪拌4小時後，在減壓下濃縮反應混合物且進行管柱層析法，產生化合物L (41.6 g，77%)。1 H-NMR (600 MHz, CDCl3 ) δ 5.77 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 5.31 (t,J = 9.6 Hz, 1H), 5.24 (t,J = 9.6 Hz, 1H), 5.14 (m, 1H), 4.17 (d,J = 9 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.04 (m, 9H)。製備化合物 M 在0℃下在氮氣下使化合物L (10.0 g，26.6 mmol)溶於HBr (33%於AcOH中，20 mL)中。反應混合物升溫至室溫。攪拌2小時後，向其中添加甲苯(50 mL)，且混合物在減壓下濃縮。所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物M (10.9 g，99%)。1 H-NMR (600 MHz, CDCl3 ) δ 6.64 (d,J = 3.6Hz, 1H), 5.61 (t,J = 3.6 Hz, 1H), 5.24 (t,J = 3.6 Hz, 1H), 4.85 (m, 1H), 4.58 (d, d,J = 10.2 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.05 (s, 3H)。 製備化合物 45a 在0℃下在氮氣下使3-胺基-1-丙醇(3.0 g，66.57 mmol)溶於DCM (150 mL)中，且向其中添加二碳酸二第三丁酯(16 g，73.23 mmol)。所得混合物在室溫下攪拌12小時。反應結束後，溶劑在減壓下濃縮。殘餘物進行管柱層析法，產生化合物45a (6.4 g，92%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.78 (s, 1H), 3.65 (m, 2H), 3.30 (m, 2H), 2.90 (s, 1H), 1.68 (m, 2H), 1.48 (s, 9H)。製備化合物 45b 在0℃下在氮氣下使化合物45a (6.04 g，34.47 mmol)及三乙胺(14.4 mL，103.4 mmol)溶於THF中且接著緩慢用甲烷磺酸酐(7.21 g，41.36 mmol)處理。所得混合物在室溫下在氮氣下攪拌12小時。反應結束後，溶劑在減壓下濃縮。殘餘物進行管柱層析法，產生化合物45b (9.01 g，98%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.73 (s, 1H), 4.30 (t,J = 5.9 Hz, 2H), 3.31-3.24 (m, 2H), 3.04 (s, 3H), 1.94 (t,J = 6.1 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H)。製備化合物 45c 在室溫下在氮氣下化合物45b (3.0 g，11.84 mmol)溶於DMF (40 mL)中，且接著用NaN3 (924 mg，14.21 mmol)處理，且所得混合物在60℃下攪拌12小時。反應結束後，向其中添加EtOAc (50 mL)、蒸餾水(50 mL)及1 N HCl水溶液(5 mL)。有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。殘餘物進行管柱層析法，產生化合物45c (2.3 g，99%)。1 H-NMR (600 MHz, CDCl3 ) δ 4.63 (s, 1H), 3.36 (t,J = 6.6 Hz, 2H), 3.24-3.18 (m, 2H), 1.80-1.75 (m, 2H), 1.45 (s, 9H)。製備化合物 45d 在0℃下在氮氣下使化合物45c (3.8 g，18.98 mmol)溶於DCM (10 mL)中，且接著緩慢向其中添加4 M-HCl之二噁烷溶液(10 mL)。攪拌12小時後，在減壓下濃縮反應混合物，產生化合物45d (2.5 g，99%)。1 H-NMR (600 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.06 (s, 3H), 3.47 (t,J = 6.6 Hz, 2H), 2.82 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 1.84-1.79 (m, 2H)。 製備化合物 45e 在0℃下在氮氣下使化合物45d (58 mg，0.42 mmol)及5-甲醯基水楊酸(100 mg，0.60 mmol)溶於DMF (2 mL)中，且接著添加DIPEA (0.2 mL，1.20 mmol)及PyBop (375 mg，0.72 mmol)至反應混合物。在室溫下攪拌3小時後，向其中添加EtOAc (30 mL)及蒸餾水(10 mL)。有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。殘餘物進行管柱層析法，得到化合物45e (82 mg，79%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 13.39 (s, 1H), 9.87 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.89 (dd,J = 1.6, 7.2 Hz. 1H), 7.60 (s, 1H), 7.10 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 3.63-3.57 (m, 2H), 3.48 (t,J = 6.4 Hz, 2H), 1.99-1.92 (m, 2H)。製備化合物 45f 在室溫下在氮氣下使化合物45e (78 mg，0.31 mmol)及化合物M (125 mg，0.31 mmol)溶於MeCN (3 mL)中，且接著向其中添加氧化銀(291 mg，1.26 mmol)及4 Å分子篩(125 mg)。在室溫下攪拌3小時後，混合物經矽藻土過濾，且濾液在減壓下濃縮。殘餘物進行管柱層析法，產生化合物45f (160 mg，90%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 10.00 (s, 1H), 8.66 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 8.02 (dd,J = 2.0, 6.4 Hz, 1H), 7.46 (t,J = 6.4 Hz, 1H), 7.14 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 5.48-5.33 (m, 4H), 4.28 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.73-3.64 (m, 1H), 3.50-3.42 (m, 3H), 2.09-2.07 (m, 9H), 2.00-1.92(m, 2H)。製備化合物 45g 在0℃下在氮氣下使化合物45f (160 mg，1.51 mmol)溶於2-丙醇(0.4 mL)及氯仿(2 mL)中，且接著向其中添加矽膠(2 g)及硼氫化鈉(27 mg，0.71 mmol)。在0℃下攪拌2小時後，反應物經矽藻土過濾，且濾液在減壓下濃縮。殘餘物進行管柱層析法，產生化合物45g (115 mg，71%)。1 H-NMR (600 MHz, CDCl3 ) δ 8.06 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 7.50-7.44 (m, 2H), 7.01 (d,J = 9.0 Hz, 1H), 5.45-5.31 (m, 4H), 4.38 (s, 2H), 4.22 (d,J = 9.0 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.67-3.61 (m, 1H), 3.46-3.41 (m, 3H), 2.07-2.04 (m, 9H), 1.97-1.91 (m, 2H)。製備化合物 45h 在0℃下在氮氣下使化合物45g (100 mg，0.18 mmol)溶於DMF (1 mL)中，且接著向其中添加碳酸雙(4-硝基苯基)酯(110 mg，0.35 mmol)及DIPEA (0.050 mL，0.27 mmol)。在室溫下攪拌2小時後，向其中添加EtOAc (30 mL)及蒸餾水(10 mL)。有機層經無水Na2 SO4 乾燥且減壓濃縮。殘餘物進行管柱層析法，產生化合物45h (75 mg，58%)。1 H-NMR (600 MHz, CDCl3 ) δ 8.29-8.27 (m, 2H), 8.23 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 7.54 (dd,J = 2.4, 6.6 Hz, 1H), 7.49 (t,J = 6.4 Hz, 1H), 7.39-7.37 (m, 2H), 7.04 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 5.45-5.29 (m, 4H), 5.28 (s, 2H), 4.23 (d,J = 9.0 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.68-3.64 (m, 1H), 3.46-3.42 (m, 3H), 2.08-2.05 (m, 9H), 1.98-1.93 (m, 2H)。製備化合物 45i 在室溫下在氮氣下化合物45h (50 mg，0.068 mmol)溶於DMF (0.8 mL)中，且接著向其中添加MMAF-OMe (51 mg，0.068 mmol)。所得混合物用HOBT (2 mg，0.013 mmol)、吡啶(0.24 mL)及DIPEA (0.012 mL，0.068 mmol)處理。在室溫下攪拌18小時後，向其中添加EtOAc (20 mL)及蒸餾水(10 mL)。有機層經無水Na2 SO4 乾燥且減壓濃縮。殘餘物進行管柱層析法，產生化合物45i (71 mg，78%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1339。製備化合物 45j 在室溫下在氮氣下化合物45i (30 mg，0.022 mmol)及苯基乙炔(3.7 mL，0.033 mmol)溶於EtOH (0.2 mL)及水(30 mL)中，且接著向其中添加0.1 M CuSO4 水溶液(30 mL)及1.0 M抗壞血酸鈉水溶液(30 mL)。所得混合物用HOBT (2 mg，0.013 mmol)、吡啶(0.24 mL)及DIPEA (12 mL，0.068 mmol)處理。在室溫下攪拌5小時後，向其中添加EtOAc (20 mL)及蒸餾水(5 mL)。有機層經無水Na2 SO4 乾燥且減壓濃縮。殘餘物進行管柱層析法，產生化合物45j (26 mg，81%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1441。製備化合物 45k 在0℃下在氮氣下化合物45j (20 mg，0.013 mmol)溶於MeOH (0.2 mL)中，且接著向其中添加含LiOH∙H2 O (6 mg，0.14 mmol)之水(0.2 mL)。在室溫下攪拌1小時後，向其中添加氯仿(10 mL)、MeOH (1 mL)、蒸餾水(10 mL)及0.5 N HCl水溶液(1 mL)。有機層經無水Na2 SO4 乾燥且減壓濃縮。殘餘物進行管柱層析法，產生化合物45k (17 mg，87%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1286。實例 67. 製備化合物 46b 製備化合物 46a 在0℃下在氮氣下使5-甲醯基水楊酸(1.0 g，6.02 mmol)溶於DMF (20 mL)中，且接著向其中添加N -溴代丁二醯亞胺(1.07 g，6.11 mmol)且混合物在70℃下攪拌3小時。反應結束後，向其中添加EtOAc (100 mL)、2 N HCl水溶液(2 mL)及蒸餾水(100 mL)。有機層經無水Na2 SO4 乾燥且減壓濃縮。殘餘物進行管柱層析法，產生化合物46a (1.2 g，84%)。1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.64 (s, 1H), 8.19 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 8.00 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 3.16 (s, 1H)。製備化合物 46b 化合物46b 係藉由實例4中製備化合物2h 之類似方法，自化合物46a 製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 1328。實例 68 至 70. 製備化合物 47a 、化合物 48a 及化合物 49a 化合物N 藉由韓國專利特許公開案第10-2014-0035393號中揭示之方法製備。實例 68. 製備化合物 47a 在室溫下在氮氣下使化合物2h (20 mg，0.014 mmol)溶於EtOH (0.7 mL)中，且接著向其中添加化合物N (3.7 mg，0.017 mmol)，且混合物在45℃下攪拌2小時。反應結束後，使用HPLC獲得化合物47a (10.2 mg，49%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1441。實例 69 及 70. 製備化合物 48a 及 49a 化合物48a (實例69)及化合物49a (實例70)藉由實例68中製備化合物47a 之類似方法製備。化合物48a 之EI-MS m/z: [M+H]+ 1353。化合物49a 之EI-MS m/z: [M+H]+ 1520。比較實例 66. 製備化合物 50k 製備化合物 50a 在室溫下在氮氣下使4-溴丁酸乙酯(5.0 mL，34.6 mmol)溶於MeOH (75 mL)中，且接著向其中添加含NaN3 (4.5 g，69.2 mmol)之水(25 mL)且在85℃下攪拌8小時。反應結束後，溶劑在減壓下濃縮，且向其中添加氯仿(300 mL)及蒸餾水(200 mL)。如上所述獲得之有機層經無水Na2 SO4 乾燥且減壓濃縮。殘餘物進行管柱層析法，產生化合物50a (5.1 g，94%)。1 H-NMR (600 MHz, CDCl3 ) δ 4.15 (q,J = 7.2 Hz, 2H), 3.36 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 2.41 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 1.94-1.89 (m, 2H), 1.28 (t,J = 8.4 Hz, 3H)。製備化合物 50b 在0℃下在氮氣下使化合物50a (2.0 g，12.7 mmol)溶於MeOH (32 mL)中，且接著緩慢向其中添加含KOH (3.56 g，63.6 mmol)之水(26 mL)。在室溫下攪拌6小時後，溶劑在減壓下濃縮，且向其中添加氯仿(300 mL)、1 N HCl水溶液(100 mL)及蒸餾水(100 mL)。如上所述獲得之有機層經無水Na2 SO4 乾燥且減壓濃縮。所得殘餘物進行管柱層析法，產生化合物50b (1.28 g，78%)。1 H-NMR (600 MHz, CDCl3 ) δ 3.38 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 2.48 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 1.95-1.90 (m, 2H)。製備化合物 50c 在0℃下在氮氣下使化合物50b (850 mg，6.58 mmol)溶於MeOH (10 mL)中，且接著向其中添加乙二醯氯(1.1 mL，13.2 mmol)及DMF (1滴)且在室溫下攪拌6小時。反應結束後，溶劑在減壓下濃縮，產生化合物50c (965 mg)，其未經進一步純化即使用。 製備化合物 50d 在0℃下在氮氣下使4-羥基-3-硝基苯甲酸(5.0 g，27.3 mmol)溶於THF (120 mL)中，且接著向其中添加1 M BH3 -THF複合物(54.6 mL，54.6 mmol)且在室溫下攪拌20小時。反應結束後，向其中添加EtOAc (200 mL)、0.5 N HCl水溶液(20 mL)及蒸餾水(100 mL)。如上所述獲得之有機層經無水Na2 SO4 乾燥且減壓濃縮。所得殘餘物進行管柱層析法，產生化合物50d (4.2 g，91%)。1 H-NMR (600 MHz, CD3 OD) δ 8.06 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 7.59 (dd,J = 1.2, 7.8 Hz, 1H), 7.12 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.83 (s, 2H)。製備化合物 50e 在室溫下在氮氣下使化合物50d (937 mg，5.54 mmol)溶於MeCN (15 mL)中，且向其中添加化合物M (2.0 g，5.04 mmol)、氧化銀(4.66 g，20.1 mmol)及4 Å分子篩(2.0 g)，且在室溫下攪拌14小時。反應結束後，混合物經矽藻土過濾，且濾液在減壓下濃縮。所得殘餘物進行管柱層析法，產生化合物50e (1.0 g，40%)。1 H-NMR (600 MHz, CDCl3 ) δ 7.81 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 7.54 (dd,J = 1.8, 6.6 Hz, 1H), 7.37 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 5.37-5.27 (m, 3H), 5.20 (d,J = 6.6 Hz, 1H), 4.72 (d,J = 6.0 Hz, 2H), 4.21 (d,J = 9.0 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.04-2.02 (m, 1H)。製備化合物 50f 使化合物50e (900 mg，6.35 mmol)溶於EtOAc (100 mL)中，且接著向其中添加氧化鉑(IV)(84.2 mg，0.370 mmol)且在室溫下在氫氣下攪拌3小時。反應結束後，混合物經矽藻土過濾，且濾液在減壓下濃縮，產生化合物50f (700 mg，83%)，其未經進一步純化即使用。製備化合物 50g 在0℃下在氮氣下使化合物50f (350 mg，0.77 mmol)溶於DCM (10 mL)中，且接著向其中添加化合物50c (136 mg，0.92 mmol)及DIPEA (0.27 mL，1.54 mmol)且在室溫下攪拌20分鐘。反應結束後，向其中添加EtOAc (50 mL)及蒸餾水(50 mL)。如上所述獲得之有機層經無水Na2 SO4 乾燥且減壓濃縮。所得殘餘物進行管柱層析法，產生化合物50g (280 mg，65%)。1 H-NMR (600 MHz, CDCl3 ) δ 8.37 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.07 (dd,J = 1.8, 6.6 Hz, 1H), 6.93 (d,J = 8.4Hz, 1H), 5.43-5.28 (m, 3H), 5.06 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 4.63 (s, 2H), 4.19 (d,J = 9.6 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.44-3.41 (m, 2H), 2.56 (t,J = 7.8 Hz, 2H), 2.17-2.00 (m, 12H)。製備化合物 50h 在0℃下在氮氣下使化合物50g (250 mg，0.44 mmol)溶於DMF (4 mL)中，且接著向其中添加碳酸雙(4-硝基苯基)酯(270 mg，0.88 mmol)及DIPEA (0.12 mL，0.66 mmol)，且在室溫下攪拌1小時。反應結束後，向其中添加EtOAc (50 mL)及蒸餾水(50 mL)。如上所述獲得之有機層經無水Na2 SO4 乾燥且減壓濃縮。所得殘餘物進行管柱層析法，產生化合物50h (290 mg，90%)。1 H-NMR (600 MHz, CDCl3 ) δ 8.54 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 8.28-8.25 (m, 2H), 8.02 (s, 1H), 7.40-7.36 (m, 2H), 7.11 (dd,J = 1.8, 6.6 Hz, 1H), 6.96 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 5.44-5.29 (m, 3H), 5.23 (s, 2H), 5.10 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 4.21 (d,J = 9.6 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.45-3.42 (m, 2H), 2.58 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 2.11-2.00 (m, 12H)。製備化合物 50i 在室溫下在氮氣下使化合物50h (250 mg，0.34 mmol)溶於DMF (4 mL)中，且接著向其中添加MMAF-OMe (255 mg，0.34 mmol)。所得混合物用HOBT (9 mg，0.068 mmol)、吡啶(1.2 mL)及DIPEA (0.060 mL，0.34 mmol)處理。在室溫下攪拌2天後，向其中添加EtOAc (50 mL)、 2 N HCl水溶液(5 mL)及蒸餾水(50 mL)。如上所述獲得之有機層經無水Na2 SO4 乾燥且減壓濃縮。殘餘物進行管柱層析法，產生化合物50i (340 mg，74%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1339。製備化合物 50j 在0℃下在氮氣下使化合物50i (210 mg，0.156 mmol)溶於MeOH (2 mL)中，且接著向其中添加含LiOH∙H2 O (66 mg，1.56 mmol)之水(2 mL)。在室溫下攪拌1.5小時後，向其中添加氯仿(50 mL)、MeOH (5 mL)、蒸餾水(50 mL)及0.5 N HCl水溶液(5 mL)。如上所述獲得之有機層經無水Na2 SO4 乾燥且減壓濃縮。所得殘餘物進行管柱層析法，產生化合物50j (107 mg，57%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1184。製備化合物 50k 在室溫下在氮氣下使化合物50j (10 mg，0.008 mmol)及苯基乙炔(0.92 mL，0.008 mmol)溶於EtOH (0.15 mL)及水(10 mL)中，且接著向其中添加0.1 M CuSO4 水溶液(10 mL)及1.0 M 抗壞血酸鈉水溶液(10 mL)。在室溫下攪拌5小時後，向其中添加EtOAc (10 mL)及蒸餾水(5 mL)。如上所述獲得之有機層經無水Na2 SO4 乾燥且減壓濃縮。所得殘餘物進行管柱層析法，產生化合物50k (5 mg，46%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1286。實例 71. 製備化合物 51h 製備化合物 51a 化合物51a 係藉由與實例23之製備化合物14h 之方法類似的方法，自化合物7b 製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 1392.8, [M+H-Boc]+ 1292.7, [M+Na]+ 1414.8。製備化合物 51b 在0℃下使化合物51a (1.8 g，1.29mmol)、炔丙基胺(0.1 mL，1.55 mmol)及無水HOBt (35 mg，0.25 mmol)溶於DMF (5 mL)中。接著添加吡啶(0.2 mL)及DIPEA (0.45 mL，2.59 mmol)。在N2 下在室溫下攪拌24小時後，將反應混合物用H2 O (100 mL)及飽和NH4 Cl水溶液(50 mL)稀釋。用EtOAc (2×100 mL)萃取後，合併之有機層經無水MgSO4 乾燥，過濾，且濃縮。殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物51b (1.15 g，68%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.01 (s, 1H), 7.48-7.31 (m, 2H), 7.02 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 5.45-5.20 (m, 4H), 5.09 (s, 2H), 4.19 (d,J = 9.2 Hz, 1H), 4.10-4.05 (m, 2H), 3.97 (s, 2H), 3.85-3.45 (m, 49H), 2.24 (s, 1H), 2.05 (s, 9H), 1.53 (s, 18H)。EI-MS m/z: [M+Na]+ 1330.3。製備化合物 51c 在0℃下向化合物51b (1.15 g，0.879 mmol)於THF/MeOH (20 mL/20 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(151 mg，3.603 mmol)之H2 O (20 mL)。在0℃下2小時後，反應混合物使用乙酸中和且減壓濃縮。所得殘餘物溶於DMSO (5 mL)中且藉由製備型HPLC來純化，產生化合物51c (600 mg，60%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1169.2。 製備化合物 51d 將DIPEA (0.92 mL，5.30 mmol)及HBTU (1.0 g，2.64 mmol)添加至攪拌之4-疊氮基丁酸(228 mg，1.76 mmol)及N -Me-Ala-OMe (298 mg，1.94 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物。在N2 下在室溫下攪拌14小時後，將反應混合物用H2 O (50 mL)稀釋且用EtOAc (2×50 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到化合物51d (310 mg，77%)。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.22 (q, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.39 (t,J = 6.6 Hz, 2H), 2.95 (s, 3H), 2.52-2.39 (m, 2H), 1.98-1.92 (m, 2H), 1.41 (d, 3H)。製備化合物 51e 在-20℃下向化合物51d (310 mg，1.36 mmol)於MeOH (3 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(114 mg，2.72 mmol)之H2 O (3 mL)。在0℃下攪拌1小時後，反應混合物用H2 O/2 N HCl水溶液(50 mL/2 mL)稀釋且用Et2 O (2×30 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥。過濾且濃縮產生化合物51e (246 mg)，其未經進一步純化即使用。1 H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.15 (q, 1H), 3.39 (t,J = 6.6 Hz, 2H), 2.98 (s, 3H), 2.49-2.45 (m, 2H), 1.98-1.92 (m, 2H), 1.41 (d, 3H)。 製備化合物 51f 在N2 下向美登醇(50 mg，0.088 mmol)及化合物51e (113 mg，0.528 mmol)於DCM (6 mL)中之溶液中添加DIC (0.087 mL，0.557 mmol)於DCM (1.4 mL)中之溶液。1分鐘後，添加ZnCl2 溶液(1 M Et2 O溶液，0.11 mL，0.11 mmol)。在室溫下攪拌2小時後，將反應混合物用EtOAc (10 mL)稀釋。將有機層用飽和NaHCO3 水溶液(4 mL)及鹽水(2 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥且在減壓下蒸發。所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到非對映異構體類美登素之混合物化合物51f (50 mg，74%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 761.7。製備化合物 51g 將CuSO4 . 5H2 O (2 mg)及抗壞血酸鈉(10 mg)添加至攪拌之化合物51f (78 mg，0.102 mmol)及化合物51c (132 mg，0.112 mmol)於DMSO (4 mL)及H2 O (1 mL)中之混合物。pH值藉由添加1 M Na2 CO3 水溶液調至約7。在20℃下攪拌1小時後，反應混合物溶於H2 O/DMSO (1.5 mL/1.5 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且濃縮，產生化合物51g (72.1 mg，37%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1930.9, [M+H-Boc]+ 1830.9。製備化合物 51h 將TFA (0.2 mL)添加至攪拌之化合物51g (72.1 mg，0.037 mmol)於DCM (1 mL)中之溶液。在0℃下攪拌2小時後，溶劑及過量TFA藉由N2 流移除。接著殘餘物溶於H2 O/MeCN (1 mL/1 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且凍乾，產生呈白色固體狀之化合物51h (極性較大異構體17 mg及極性較小異構體6.0 mg，36%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1730.8。實例 72. 製備化合物 52c 製備化合物 52a 在0℃下使塔托布林乙酯(TFA鹽，80 mg，0.029 mmol)、化合物14h (128 mg，0.0142 mmol)及無水HOBt (3.5 mg，0.026 mmol)溶於DMF (3 mL)中。接著添加吡啶(0.5 mL)及DIPEA (0.045 mL，0.26 mmol)。在N2 下在室溫下攪拌24小時後，將反應混合物用H2 O (10 mL)稀釋且用EtOAc (2×10 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到化合物52a (70 mg，43%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1258.6, [M+H-Boc]+ 1158.6。製備化合物 52b 在-20℃下向化合物52a (70 mg，0.055 mmol)於MeOH (1.4 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(11.7 mg，0.275 mmol)之H2 O (1.4 mL)。在0℃下1小時後溶液pH值用乙酸調至4~5。所得溶液溶於DMSO (1 mL)中且藉由HPLC來純化，產生呈白色固體狀之化合物52b (4.5 mg，8%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1090.4。製備化合物 52c 在0℃下向化合物52b (4.5 mg，0.0041 mmol)於DCM (1 mL)中之溶液中添加TFA (0.2 mL)。在0℃下2小時後，溶劑及過量TFA藉由N2 流移除。接著殘餘物藉由HPLC來純化，產生呈白色固體狀之化合物52c (2.4 mg，59%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 990.4。實例 73. 製備化合物 53f 製備化合物 53b 在0℃下化合物53a (300 mg，0.31 mmol，化合物53a 藉由專利WO2013/055987 A1中揭示之方法製備)、化合物15a (355 mg，0.31 mmol)及無水HOBt (10 mg，0.06 mmol)溶於DMF (0.5 mL)中。接著添加吡啶(0.3 mL)及DIPEA (0.14 mL，0.78 mmol)。在N2 下在室溫下攪拌23小時後，將反應混合物用H2 O/飽和NH4 Cl水溶液(100 mL/50 mL)稀釋且用EtOAc (2×100 mL)萃取。合併之有機層經無水MgSO4 乾燥，過濾，且濃縮。殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物53b (250 mg，41%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1943.6, [M+Na]+ 1965.6。製備化合物 53c 在0℃下在N2 下向化合物53b (300 mg，0.31 mmol)於THF/H2 O (2 mL/1 mL)中之溶液中添加乙酸(3 mL)。22小時後，將反應混合物用H2 O (100 mL)稀釋且用EtOAc (2×100 mL)萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到化合物53c (140 mg，68%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1713.6。製備化合物 53d 在室溫下在N2 下向化合物53c (120 mg，0.07 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液中添加氯鉻酸吡錠(158 mg，0.42 mmol)及4 Å分子篩(50 mg)。攪拌18小時後，反應混合物經矽藻土墊過濾且減壓濃縮。獲得呈無色油狀之所得化合物53d (95 mg，75%)，其未經進一步純化即使用。EI-MS m/z: [M+Na]+ 1732.8。製備化合物 53e 在0℃下向化合物53d (95 mg，0.056 mmol)於MeOH (1 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(12 mg，0.278 mmol)之H2 O (1 mL)。在0℃下2小時後，反應混合物使用乙酸中和且減壓濃縮。所得殘餘物溶於DMSO (1 mL)中且藉由製備型HPLC來純化，產生化合物53e (6 mg，7%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1569.7。製備化合物 53f 將TFA (0.2 mL)添加至攪拌之化合物53e (6 mg，0.004 mmol)於DCM (2 mL)中之溶液。在0℃下攪拌2小時後，溶劑及過量TFA藉由N2 流移除。接著殘餘物溶於DMSO (1 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且凍乾，產生呈白色固體狀之化合物53f (2.7 mg，53%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1251.3。實例 74. 製備化合物 54a 化合物54a 係藉由實例73中製備化合物53f 之類似方法，自化合物53a 及化合物14h 製備。實例 75. 製備化合物 55a 化合物55a 係藉由實例73中製備化合物53f 之類似方法，自化合物53a 及化合物51a 製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 1516.7, 1/2[M+H]+ 758.7。實例 76. 製備化合物 56d 製備化合物 56b 在0℃下化合物56a (HCl鹽，100 mg，0.27 mmol，化合物56a 藉由Curr. Med. Chem. 2009,16 , 1192-1213中揭示之方法製備)、化合物14h (242 mg，0.27 mmol)及無水HOBt (7.3 mg，0.05 mmol)溶於DMF (3 mL)中。接著添加吡啶(0.4 mL)及DIPEA (0.09 mL，0.60 mmol)。在N2 下在室溫下攪拌16小時後，將反應混合物用飽和NH4 Cl水溶液(10 mL)稀釋且用EtOAc (2×20 mL)萃取。合併之有機層經無水MgSO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由管柱層析法來純化，產生化合物56b (184 mg，63%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 1091.9, [M+H-Boc]+ 991.7。製備化合物 56c 在-20℃下向化合物56b (90 mg，0.08 mmol)於MeOH (2 mL)中之溶液中添加含LiOH單水合物(17 mg，0.41 mmol)之H2 O (2 mL)。在-20℃下攪拌2小時後，反應混合物使用乙酸中和且減壓濃縮。接著反應混合物溶於H2 O/DMSO (1.5 mL/1.5 mL)中且藉由HPLC來純化，產生呈黃色固體狀之化合物56c (35 mg，45%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 951.7, [M+H-Boc]+ 851.5。製備化合物 56d 在0℃下將TFA (0.3 mL)添加至攪拌之化合物56c (35 mg，0.04 mmol)於DCM (2.0 mL)中之溶液。攪拌1小時後，溶劑及過量TFA藉由N2 流移除。接著殘餘物溶於H2 O/MeCN (1 mL/1 mL)中且藉由HPLC來純化。將具有相同滯留時間之純溶離份合併且凍乾，產生呈黃色固體狀之化合物56d (24.9 mg，68%)。EI-MS m/z: [M+H]+ 851.6。實例 77. 製備化合物 57a 化合物57a 係藉由實例76中製備化合物56d 之類似方法，自化合物56a 及化合物15a 製備。EI-MS m/z: [M+H]+ 983.3。實例 78. ADC2 合成 實例 79. ADC2 合成 實例 80. ADC86 合成 實例 81. ADC86 合成 實例 82. ADC4 合成 實例 83. ADC4 合成 實例 84. ADC75 合成 實例 85. ADC75 合成 實驗實例 1. 相對於 β - 葡糖苷酸酶之反應性比較測試 為比較實例66之化合物45k及比較實例66之化合物50k彼此對β-葡糖苷酸酶的反應性，如下進行比較測試。 實例66之化合物45k及比較實例66之化合物50k各製備為500 μM及50 μM DMSO儲備溶液。製備其中880 μL磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)溶液分別與100 μL化合物45k及化合物50k儲備溶液彼此混合之反應溶液(其最終濃度分別為50 μM及5 μM)。在添加20 μL大腸桿菌β-葡糖苷酸酶(1 mg/ml，Sigma：E.C.3.2.1.31類型IX-A；PBS中1 mg/mL；3.6 μg、13 μmol)至反應溶液後，反應在恆定溫度水浴中在37℃下開始。分別在0 min、25 min、60 min及90 min，分配100 μL混合溶液，且向其中添加200 μL乙腈。使用LC-MS/MS，定量分析自藉由對混合物樣品進行離心(4℃，15 min，14000 rpm)所獲得之各上清液釋放的MMAF (實驗藉由類似於以引用的方式併入本文中之美國專利第8,568,728號中揭示之方法的方法進行)。 測試結果在圖2中說明，且自圖2證實，MMAF在藉由β-葡糖苷酸酶之酶反應後經由1,6-消除反應顯著迅速地自實例66之化合物45k及比較實例66之化合物50k每一者釋放(美國專利第8,568,728號，以引用的方式併入本文中)。實驗實例 2. 血漿穩定性比較測試連接子毒素 比較實例66之化合物45k及比較實例66之化合物50k的血漿穩定性。 使10 μL化合物45k或50k以5 mM溶解於DMSO中，且將各組合物與990 μL小鼠血漿混合，藉此製備50 μM樣品，用於評估血漿穩定性。在37℃下培育血漿/化合物溶液7天。在6天培育期間，在0、1、2及7天取100 μL等分試樣，且與200 μL含有內標之乙腈混合，用於監測血漿蛋白質沈澱。上清液藉由對乙腈/血漿樣品(4℃，15 min，14000 rpm)進行離心來獲得，且藉由對上清液進行LC-MS/MS，對各化合物及產物之量進行定量。(使用類似於J. Chromatography B, 780:451-457 (2002)中揭示之實驗進行實驗)。 使用LS-MS/MS，針對實例66之化合物45k及比較實例66之化合物50k獲得的結果在圖3及表1中說明。在第1天比較實例66之化合物50k之穩定性及實例66之化合物45k之穩定性分別為14%及80%。因此，實例66之化合物45k在小鼠血漿中之穩定性優於比較實例66之化合物50k。 表1. 化合物45k及化合物50k在小鼠血漿中之穩定性 化合物47a、48a及49a之血漿穩定性藉由使用上述方法進行(圖4-6)。實驗實例 3. 製備抗體 - 藥物結合物 步驟1. 異戊烯化抗體(根據韓國專利特許公開案第10-2014-0035393號之方法製備)之方法 製備抗體之異戊烯化反應混合物且在30℃下反應16小時。使用包含添加至各輕鏈之c端中之GGGGGGGCVIM序列(「G7CVIM」)的抗體。G7CVIM序列添加在重鏈(ADC86-91)或重鏈與輕鏈(ADC75-77)之C端。所用抗體序列來源如以下表2。 表2. 用於ADC製備之所用抗體列表 反應混合物由含有24 μM抗體、200 nM FTase (Calbiochem #344145)及144 μM LCB14-0606 (根據以引用的方式併入本文中之韓國專利特許公開案第10-2014-0035393號之方法自製)之緩衝溶液(50 mM Tris-HCl (pH 7.4)、5 mM MgCl2 、10 μM ZnCl2 、0.25 mM DTT)構成。反應完成後，異戊烯化抗體藉由FPLC來純化。 步驟2. 製備ADC之方法 藉由混合100 mM乙酸鈉緩衝液(pH 4.5，10% DMSO)、12 μM異戊烯化抗體及120 μM連接子-毒素(自製)來製備在異戊烯化抗體與連接子-毒素之間形成肟鍵的反應混合物，且在30℃下輕緩攪拌。 培育反應24小時後，藉由經由FPLC及疏水相互作用層析-HPLC去鹽來純化抗體-藥物結合物。 表3. 抗HER2 ADC (DAR2)之列表 表4. 抗HER2 ADC (DAR4)之列表 表5. 抗HER2 ADC (DAR4＜)之列表 表6. 使用瓢菌素作為有效負載之抗HER2 ADC之列表 表7. 使用靶向各種蛋白質之抗體的ADC之列表 實驗實例 4. 抗 HER2 ADC 之細胞毒性 使用市售人類乳癌細胞株MCF-7 (HER2陰性至正常)、OE-19 (HER2陽性)、NCI-N87 (HER2陽性)、SK-OV-3 (HER2陽性)、JIMT-1 (HER2陽性)及SK-BR-3 (HER2陽性)。根據隨市售細胞株一起提供之推薦說明書，培養細胞株。 量測抗體、藥物及結合物對癌細胞株之抗增殖活性。將細胞以每孔1×104 個細胞塗鋪在96孔組織培養盤中。培育24小時後，添加各種濃度之抗體、藥物及結合物。72小時後使用SRB分析計數活細胞之數目。在540 nm下，使用SpectraMax 190 (Molecular Devices, USA)量測吸光度。   表8. 不同抗HER2 ADC (DAR2)之IC50 值 表9. 不同PEG長度-ADC之IC50 值 表10. 具有不同類型連接子之MMAF ADC之IC50 值 表11. 具有不同類型連接子之MMAE ADC之IC50 值 表12. 雜交ADC之IC50 值 兩種不同毒素結合之ADC及相同毒素結合之ADC的比較 表13. 各種DAR-ADC之IC50 值 實驗實例5.Erbitux (LC)- 葡萄糖苷酸連接子 -MMAF 之細胞毒性 將表現高水準EGFR之A431細胞及表現低水準EGFR之MCF-7細胞於100 μL培養基中以每孔約1000個細胞塗鋪在96孔盤中。將表現中等水準EGFR之HCC-827細胞於100 μL培養基中以每孔約5000個細胞塗鋪在96孔盤中。在37℃下在5% CO2 中培育細胞24小時。接著，將單甲基阿瑞他汀F-OMe (MMAF-OMe)、Erbitux (LC)-G7CVIM及包含Erbitux (LC)-G7CVIM及MMAF之抗體藥物結合物ADC64以100至0.00128 nM之濃度添加至細胞中。將細胞培育72小時且接著在添加100 μL冰冷10%三氯乙酸至各孔後在4℃下固定1小時。使用SRB染料(磺醯羅丹明B，Sigma S1402)及Molecular Devices SpectraMax 190盤式讀取器操作Softmax Pro v5計數活細胞，在540 nm下監測吸光度(表14)。 Erbitux (LC)-G7CVIM針對各細胞株(A431、MCF-7及HCC-827)之IC50 超過100 nM。MMAF-OMe針對MCF-7細胞之IC50 為1.81 nM，針對HCC-827細胞之IC50 為1.99 nM，且針對A431細胞之IC50 為1.11 nM。抗體-藥物結合物ADC 64、65及66針對MCF-7細胞之IC50 超過100 nM，針對HCC-827細胞之IC50 分別為0.47、0.17及0.11 nM。ADC64展示針對A431細胞為1.3 nM，因此展示優於MMAF-OMe之特異性，及優於Erbitux (LC)-G7CVIM之效能。 表14. 基於抗EGFR mAb、Erbitux之ADC之IC50 值 實驗實例 6. ABT-806 (LC)- 葡萄糖苷酸連接子 -MMAF 之細胞毒性 基於ABT-806之ADC的細胞毒性針對Samsung Medical Center (Seoul, Republic of Korea)建立之患者來源之細胞株測試。細胞維持在補充L-麩醯胺酸(200 nM)、bFGF (20 ng/mL)、EGF (20 ng/mL)、N2補充劑及B27補充劑之Neurobasal®-A培養基(Thermo Fisher Scientific)中。對於存活力測試，細胞等分至96孔盤(5000細胞/孔)且在37℃下在5% CO2 中培育1天，接著進行處理。在ADC處理後，細胞培育72小時。將100 μL CellTiter-Glo®試劑(Promega)添加至各孔中以分析細胞存活率。培育10分鐘後，使用光度計分析發光信號。 如所預期，DAR4 ADC (ADC74、ADC75)之效能比DAR2 ADC (ADC73)佳。一些患者細胞對有效負載展示之敏感性少許不同。22及780細胞對MMAF比對MMAE更敏感，464細胞反之。 表15. 基於ABT-806之ADC針對患者來源之細胞株的細胞毒活性 實驗實例 7. 抗 CD19 ADC 之細胞毒性 將拉莫斯細胞(人類伯基特氏淋巴瘤細胞)於100 μL生長培養基中以20,000個細胞/孔接種於96孔盤中。在37℃下在5% CO2 中培育細胞1天。將抗CD19抗體DI-B4-(LC)-G7CVIM及ADC在100 μL培養基中自33.33 nM至5.1 pM之連續稀釋液添加至孔中，且細胞與抗體及ADC一起培育72小時。使用WST-1 (TaKaRa MK400)及Molecular Devices SpectraMax 190盤式讀取器操作Softmax Pro v5評估細胞存活率，在450 nm下監測吸光度(表16)。 拉莫斯細胞中之實驗與作為評估任何非特異性細胞毒性之陰性對照的K562細胞(不表現CD19之人類骨髓性白血病細胞)上之實驗平行進行。 ADC68及ADC69針對拉莫斯細胞顯示0.09 nM之IC50 ，優於未結合之DI-B4 (表16)。無抗體顯示針對K562對照細胞低於33.33 nM之細胞毒性。 表16. 基於抗CD19抗體之ADC之細胞毒活性 實驗實例 8. 基於 Rituxan 之 ADC 之細胞毒性 將拉莫斯細胞(人類伯基特氏淋巴瘤細胞)於100 μL生長培養基中以20,000個細胞/孔接種於96孔盤中。在37℃下在5% CO2 中培育細胞1天。將Rituxan (LC)-G7CVIM及ADC在100 μL培養基中自33.33 nM至5.1 pM之連續稀釋液添加至孔中，且細胞與抗體及ADC一起培育72小時。使用WST-1 (TaKaRa MK400)及Molecular Devices SpectraMax 190盤式讀取器操作Softmax Pro v5評估細胞存活率，在450 nm下監測吸光度(表17)。 拉莫斯細胞中之實驗與作為評估任何非特異性細胞毒性之陰性對照的K562細胞(不表現CD20之人類骨髓性白血病細胞)上之實驗平行進行。 ADC70、ADC71及ADC72針對拉莫斯細胞分別顯示4.56 nM、1.47 nM及1.78 nM之IC50 ，優於未結合之抗CD20抗體(表17)。無抗體顯示針對K562對照細胞低於33.33 nM之細胞毒性。 表17. 基於Rituxan之ADC之細胞毒活性 實驗實例 9. β 葡糖苷酸酶敏感性之差異 含ADC之0.06 M乙酸鈉緩衝液(pH 5.2)等分至1.5 mL微管中。混合物中ADC之最終濃度調整至12 µM。將0.001 µg人類β-葡糖苷酸酶(R&D systems：6144-GH-020)添加至各管中。接著混合物在37℃水浴下培育3小時。反應藉由添加冷PBS緩衝液(pH 7.4)至15倍稀釋來終止。ADC-模式藉由β-葡糖苷酸酶之改變藉由HIC-HPLC分析。藉由剩餘%目測酶活性之功效(圖10)。 敏感性似乎歸因於連接子-毒素部分之分支單元(BR)。當Lys位於BR中時，極其有效地發生毒素釋放。醯胺及胺展示比Lys更少之敏感性。實驗實例 10. ADC 之血漿穩定性 為在ADC2 (Herceptin-LBG-MMAF，DAR2)與Kadcyla之間比較血漿穩定性，將彼等ADC在小鼠及人類血漿中培育5秒(0h)或96小時(96h)，接著使用SK-BR3細胞進行SRB活體外細胞毒性測試72小時。血漿培育之ADC2保留有效細胞毒性(IC50 無改變；對於MP，為0.06 (0h)及0.07 nM (96h)，對於HP，為0.08 (0h)及0.08 nM (96h))，而血漿培育之Kadcyla顯示與0h Kadcyla相比，細胞毒性下降 (IC50 增加；對於MP，為0.26 (0h)及1.59 nM (96h)，對於HP，為0.29 (0h)及4.21 nM (96h)) (圖11)。為表徵由各種抗體製成之ADC之血漿穩定性，將ADC在人類血漿中培育5秒(0h)或168小時(168h)，接著使用SK-BR3細胞進行SRB活體外細胞毒性測試72小時。(表18-20及圖12)   表18. 基於Herceptin之ADC之血漿穩定性(nM) 表19. 基於抗CD19抗體之ADC之血漿穩定性(nM) 表20. 基於抗CD20抗體之ADC之血漿穩定性(nM) 實驗實例 11. Herceptin® 及 ADC 之藥物動力學 向雄性史泊格多利大鼠(Male Sprague Dawley rat)靜脈內給與3 mg/kg抗體或抗體-藥物結合物。在給藥後多個時間點，取血液樣品，在冰水中冷卻，且分離血漿。血漿冷凍在-80℃下，隨後進行LC/MS/MS分析。 將20 μL各樣品與340 μL PBS及60 μL 蛋白A磁性珠粒混合，且在室溫下在平緩震盪下培育2小時。用PBS洗滌珠粒三次。接著，將25 μL內標(10 μg/mL同位素標記肽)、75 μL RapiGest SF (Waters)及10 μL二硫蘇糖醇添加至珠粒中。將混合物震盪1分鐘且接著在60℃下培育1小時。將25 μL碘乙酸添加至混合物中，混合物震盪1分鐘，且接著在室溫下培育30分鐘。將10 μL定序級經修飾之胰蛋白酶(Promega)添加至混合物中，混合物震盪1分鐘，且在37℃下混合物培育隔夜。將15 μL鹽酸添加至混合物中，混合物震盪1分鐘，且接著在37℃下混合物培育30分鐘。將混合物在4℃下在5000×g下離心10分鐘且上清液轉移至HPLC小瓶中。 液相層析-質譜分析系統由兩個Shimadzu LC-20AD泵、Shimadzu CBM-20A HPLC泵控制器(Shimadzu Corporation, Columbia, MD, USA)、CTC HTS PAL自動進樣器(CEAP Technologies, Carrboro, NC, USA)及三重飛行時間5600質譜儀(Triple TOF MS) (AB Sciex, Foster City, CA, USA)組成。分析型管柱為Phenomenex Kinetex XB-C18管柱2.1 × 30 (2.6 μm)。HPLC用水/乙腈梯度進行且用0.1%甲酸酸化。注射體積為10 µL。裝備有DuosprayTM 離子源之Triple TOF MS用於完成高解析度實驗。Triple TOF MS以陽性離子模式操作。高純度氮氣用於噴灑器/DuosprayTM 及氣簾。源溫設定在500℃下，氣簾流速為30 L/min。離子噴霧電壓設定在5500 V下，去簇電壓為145 V，且碰撞能量為38V。產物離子模式用作掃描模式。用Windows® (Microsoft)操作之Analyst® TF 1.6版(AB Sciex)用於儀器控制及資料獲取。用MultiQuant® 2.1.1版(AB Sciex)進行峰整合。用MultiQuant® 2.1.1版計算峰面積比率、標準曲線線性回歸、樣品濃度值及描述統計。使用濃度為0.1、0.4、1、2、5、10、20、40、80及100 μg/mL之標準溶液，校準LC/MS/MS。代表性PK型態展示在圖13中。ADC2 (Herceptin (LC)-MMAF，DAR2)之PK型態極其類似於Herceptin。實驗實例 12. 分支連接子 - 毒素中 PEG( 連接單元 ) 組合作用 為鑑別影響ADC之PK型態之關鍵屬性，測試連接單元之不同長度及結構(PEG數目及配置)。用於PK分析之實驗如實驗實例9中所述進行。雖然ADC23 (一種DAR4 ADC)在活體外及活體內比DAR2 ADC更有效，但其在半衰期及AUC上之PK型態降低(圖14)。藉由連接子-毒素自16f替換為25f (附接其他連接單元(3個PEG)於分支單元(BR)後)，PK型態恢復多至Herceptin (圖14)。此等作用在基於MMAE之ADC、ADC24及ADC33中很好地再現(圖15)。因為MMAE比MMAF疏水性更大，所以如藉由ADC1及ADC24所示，基於MMAE之ADC的PK型態變差。添加更長PEG單元為延伸半衰期及AUC之傳統應用。然而，當將ADC1與ADC5比較時，PEG單元數目自3簡單伸長至12未展示大的差異。換言之，藉由直鏈連接單元(化合物2g或4f)替換為分支連接單元(化合物11j、ADC15)，PK型態顯著改善(圖16)，表明PK之關鍵屬性可能不僅僅為簡單的長度，而是連接單元之結構。實驗實例 13. 親水性連接單元對 ADC 之 PK 的作用 用於ADC之許多有效負載具有疏水性特徵，引起不良PK特性。為抵消疏水性，親水性化合物作為連接單元之一部分測試。插入諸如Asp之親水性化合物增強ADC之AUC及半衰期(圖17、18、19)。在DAR2之情況下，具有包括Asp之連接單元之ADC展示比Herceptin更高之AUC (圖17、18)。可在具有DAR4之ADC中觀測到諸如Asp或Glu之極性胺基酸的抵消作用(圖19、20)。ADC49 (2個Asp)及ADC52 (2個D-Glu)分別在AUC及半衰期方面優於ADC47 (1個Asp)及ADC51 (1D-Glu)。實驗實例 14. 活體內功效 使冷凍JIMT-1細胞儲備液解凍且在37℃、5% CO2 條件下培養。存活力超過95%之最佳條件之JIMT-1細胞用於植入。懸浮於50 μL冷生理食鹽水中之5×106 個細胞植入balb/c-裸小鼠之右後腿。每組5隻小鼠用於實驗。定期監測腫瘤形成及生長。藉由下式計算腫瘤體積；體積= (a2 b)/2，「a」意謂短直徑且「b」意謂長直徑。 當腫瘤體積達至約200 mm3 時，選擇具有平均值之小鼠且根據腫瘤體積分組。接著，小鼠用PBS (媒劑對照)或圖21及22中指示之ADC處理。在實驗時間期間腫瘤尺寸一週測定2次，時間間隔為3~4天。自第一天投與至最終日期量測之腫瘤體積繪製成腫瘤生長曲線。 藉由單次注射測試代表性ADC。一般而言，具有含有Lys之分支單元(BR)之ADC比具有含有醯胺之BR之ADC更好的功效。 以引用的方式併入 本文中所引用之專利、公開之專利申請案及非專利性參考文獻各以全文引用之方式併入本文中。 相等物 熟習此項技術者將認識到，或使用至多常規實驗即能夠確定本文所述之本發明之特定實施例的許多相等物。此類相等物意欲涵蓋於以下申請專利範圍。
圖 1說明活性藥物自基於β-葡萄糖苷酸之連接子釋放的機制。圖 2為描繪來自實驗實例1之連接子藉由β-葡糖苷酸酶水解的圖。圖 3為描繪來自實驗實例2之兩種藥物-連接子結合物之血漿穩定性的圖。圖 4為描繪實例68中描述之化合物47a之血漿穩定性的圖。圖 5為描繪實例70中描述之化合物49a之血漿穩定性的圖。圖 6為描繪實例69中描述之化合物48a之血漿穩定性的圖。圖 7由圖 7A 及圖 7B 兩個圖組成。圖 7A顯示用於將藥物結合於抗體(DAR2)之策略。圖 7B顯示用於將藥物結合於抗體(DAR4)之策略。圖 8展示在改變連接子中PEG長度下DAR2 MMAE-結合物針對JIMT-1 (HER2陽性)及MCF7細胞(HER2陰性)之相對活體外活性。圖 9展示在連接子部分具有不同PEG長度之DAR4 MMAE-結合物針對JIMT-1 (HER2陽性)及MCF7細胞(HER2陰性)之相對活體外活性。圖 10展示具有各種連接子類型之DAR4 ADC中人類β-葡糖苷酸酶反應性。將12 µM ADC與0.01 µg人類β-葡糖苷酸酶(R&D Systems)一起在37℃下培育3小時。圖 11 展示小鼠或人類血漿中ADC2及Kadcyla之血漿穩定性。圖 12 展示ADC33及ADC34之7天人類血漿穩定性。圖 13 展示Herceptin及ADC2之大鼠PK型態。圖 14 展示ADC23及ADC34之大鼠PK型態。圖 15 展示藉由自2g至11j，替換連接子-毒素之基於MMAE之ADC的大鼠PK型態改善。圖 16 展示藉由分支連接子單元之大鼠PK型態改善。圖 17 展示極性胺基酸對MMAE ADC之大鼠PK型態的影響。圖 18 展示在具有DAR2之ADC中有或無極性胺基酸下藉由分支連接子-毒素之大鼠PK型態改善。圖 19 展示連接子-毒素單元中之Asp對具有DAR4之ADC之大鼠PK型態的作用。圖 20 展示連接子-毒素單元中之Glu對具有DAR4之ADC之大鼠PK型態的作用。圖 21 展示使用MMAF (ADC23)或MMAE (ADC24)之代表性胺類型DAR4 ADC之活體內功效。圖 22 展示使用MMAF (ADC34)或MMAE (ADC33)之代表性醯胺類型DAR4 ADC之活體內功效。
無

Claims (127)

  1. 一種配位體-藥物結合物，其包含配位體；共價偶合於該配位體之連接子；及至少兩種共價偶合於該連接子之活性劑，其中： 該連接子包含具有複數個胺基酸之肽序列；且 該等活性劑中之至少兩者共價偶合於該等胺基酸之側鏈。
  2. 如請求項1之結合物，其中該配位體為抗體。
  3. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該等活性劑中之至少兩者共價偶合於離胺酸、5-羥基離胺酸、4-氧雜離胺酸、4-硫雜離胺酸、4-硒雜離胺酸、4-硫雜高離胺酸、5,5-二甲基離胺酸、5,5-二氟離胺酸、反式- 4-去氫離胺酸、2,6-二胺基-4-己炔酸、順式- 4-去氫離胺酸、6-N -甲基離胺酸、二胺基庚二酸、鳥胺酸、3-甲基鳥胺酸、α-甲基鳥胺酸、瓜胺酸及/或高瓜胺酸之側鏈。
  4. 如請求項3之結合物，其中該等活性劑中之至少兩者共價偶合於離胺酸或鳥胺酸之側鏈。
  5. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該複數個胺基酸包含L-胺基酸。
  6. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該複數個胺基酸包含D-胺基酸。
  7. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該複數個胺基酸包含α-胺基酸。
  8. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該複數個胺基酸包含β-胺基酸。
  9. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該複數個胺基酸包含丙胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺、麩胺酸、麩醯胺酸、甘胺酸、組胺酸、離胺酸、鳥胺酸、脯胺酸、絲胺酸及/或蘇胺酸。
  10. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該肽不包含異白胺酸、甲硫胺酸、白胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、酪胺酸或纈胺酸胺基酸。
  11. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該肽包含2至20個胺基酸。
  12. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該肽之N端或C端經將該等活性劑中之至少一者共價連接於該肽之基團取代。
  13. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該肽之N端或C端經將該配位體共價連接於該肽之基團取代。
  14. 如前述請求項中任一項之結合物，其中： 該連接子包含O取代之肟； 該肟之氧原子經將該肟共價連接於該肽之基團取代；且 該肟之碳原子經將該肟共價連接於該配位體之基團取代。
  15. 如前述請求項中任一項之結合物，其中： 該連接子包含O取代之肟； 該肟之碳原子經將該肟共價連接於該肽之基團取代；且 該肟之氧原子經將該肟共價連接於該配位體之基團取代。
  16. 如前述請求項中任一項之結合物，其中： 該連接子包含具有1至100個碳原子之伸烷基； 該伸烷基包含至少一個不飽和鍵； 該伸烷基之至少一個碳原子經一或多個選自氮(N)、氧(O)及硫(S)之雜原子置換；且 該伸烷基經至少一個具有1至20個碳原子之烷基進一步取代。
  17. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該連接子藉由硫醚鍵共價結合於該配位體，且該硫醚鍵包含該配位體之半胱胺酸之硫原子。
  18. 如請求項17之結合物，其中： 該配位體包含由類異戊二烯轉移酶所識別之C端胺基酸模體；且 該硫醚鍵包含該胺基酸模體之半胱胺酸之硫原子。
  19. 如請求項18之結合物，其中： 該胺基酸模體為序列CYYX； C表示半胱胺酸； Y每次出現時均獨立地表示脂族胺基酸； X每次出現時均獨立地表示麩醯胺酸、麩胺酸、絲胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸、丙胺酸或白胺酸；且 該硫醚鍵包含該胺基酸模體之半胱胺酸之硫原子。
  20. 如請求項19之結合物，其中： 該胺基酸模體為序列CYYX；且 Y每次出現時均獨立地表示丙胺酸、異白胺酸、白胺酸、甲硫胺酸或纈胺酸。
  21. 如請求項20之結合物，其中該胺基酸模體為序列CVIM或CVLL。
  22. 如請求項18至21中任一項之結合物，其中在該胺基酸模體前之七個胺基酸中之至少一者為甘胺酸。
  23. 如請求項22之結合物，其中在該胺基酸模體前之七個胺基酸中之至少三者各獨立地選自甘胺酸及脯胺酸。
  24. 如請求項23之結合物，其中在該胺基酸模體前之一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個胺基酸各為甘胺酸。
  25. 如請求項24之結合物，其中該配位體之C端包含胺基酸序列GGGGGGGCVIM。
  26. 如請求項17至25中任一項之結合物，其中該硫醚鍵包含至少一個由表示之異戊二烯基單元之碳原子。
  27. 如請求項26之結合物，其中n為至少2。
  28. 如請求項26或27之結合物，其中該連接子包含肟，且該至少一個異戊二烯基單元將該肟共價連接於該配位體。
  29. 如請求項28之結合物，其中該連接子包含：或。
  30. 如請求項28之結合物，其中該連接子包含：。
  31. 如請求項28之結合物，其中該連接子包含：。
  32. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該連接子包含至少一個由或表示之聚乙二醇單元。
  33. 如請求項32之結合物，其中該連接子包含1至20個-OCH2 CH2 -單元。
  34. 如請求項32之結合物，其中該連接子包含4至20個-OCH2 CH2 -單元。
  35. 如請求項32之結合物，其中該連接子包含3至12個-OCH2 CH2 -單元。
  36. 如請求項32之結合物，其中該連接子包含1至12個-OCH2 CH2 -單元。
  37. 如請求項32至36中任一項之結合物，其中該連接子包含肟，且該至少一個聚乙二醇單元將該肟共價連接於該肽。
  38. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該連接子包含由-(CH2 )r (V(CH2 )p )q -表示之連接單元，其中： r為整數0至10，較佳2； p為整數0至12，較佳2； q為整數1至20，較佳4至20； V為單一鍵、-O-、-S-、-NR21 -、-C(O)NR22 -、-NR23 C(O)-、-NR24 SO2 -或-SO2 NR25 -，較佳-O-；且 R21 至R25 各獨立地為氫、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基(C6 -C20 )芳基或(C1 -C6 )烷基(C3 -C20 )雜芳基。
  39. 如請求項1至37中任一項之結合物，其中該連接子包含由-(CH2 )r (V(CH2 )p )q -、-((CH2 )p V)q -、-(CH2 )r (V(CH2 )p )q Y-、-((CH2 )p V)q (CH2 )r -、-Y(((CH2 )p V)q -或-(CH2 )r (V(CH2 )p )q YCH2 -表示之連接單元， 其中： r為整數0至10； p為整數1至10； q為整數1至20； V及Y各獨立地為單一鍵、-O-、-S-、-NR21 -、-C(O)NR22 -、-NR23 C(O)-、-NR24 SO2 -或-SO2 NR25 -；且 R21 至R25 各獨立地為氫、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基(C6 -C20 )芳基或(C1 -C6 )烷基(C3 -C20 )雜芳基。
  40. 如請求項38或39之結合物，其中q為整數4至20。
  41. 如請求項38或39之結合物，其中q為整數6至20。
  42. 如請求項38或39之結合物，其中q為整數2至12。
  43. 如請求項38或39之結合物，其中q為2、5或11。
  44. 如請求項38至43中任一項之結合物，其中r為2。
  45. 如請求項38至44中任一項之結合物，其中p為2。
  46. 如請求項39至45中任一項之結合物，其中V及Y各獨立地為-O-。
  47. 如請求項38或39之結合物，其中： r為2； p為2； q為2、5或11，且 V為-O-。
  48. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該連接子包含由-(CH2 CH2 X)w -表示之連接單元，其中： X表示-O-、(C1 -C8 )伸烷基或-NR21 -，較佳-O-； R21 表示氫、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基(C6 -C20 )芳基或(C1 -C6 )烷基(C3 -C20 )雜芳基，較佳氫；且 w為整數1至20，較佳4至12。
  49. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該連接子包含藉由1,3-偶極環加成反應、雜狄爾斯-阿德反應(hetero-Diels-Alder reaction)、親核取代反應、非醇醛型羰基反應、碳-碳複鍵加成、氧化反應或點擊反應形成之結合單元。
  50. 如請求項49之結合物，其中該結合單元藉由乙炔與疊氮化物之間的反應，或醛基或酮基與肼或烷氧基胺之間的反應來形成。
  51. 如請求項50之結合物，其中該結合單元由式A、B、C或D中任一者，較佳C或D表示：其中： L1 為單一鍵或具有1至30個碳原子，較佳12個碳原子之伸烷基； R11 為氫或具有1至10個碳原子之烷基，較佳甲基；且 L2 為具有1至30個碳原子，較佳11個碳原子之伸烷基。
  52. 如請求項51之結合物，其中該連接子包含：或； V為單一鍵、-O-、-S-、-NR21 -、-C(O)NR22 -、-NR23 C(O)-、-NR24 SO2 -或-SO2 NR25 -，較佳-O-； R21 至R25 各獨立地為氫、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基(C6 -C20 )芳基或(C1 -C6 )烷基(C3 -C20 )雜芳基； r為整數1至10，較佳3； p為整數0至10，較佳2； q為整數1至20，較佳2至20；且 L1 為單一鍵。
  53. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該至少兩種活性劑各經由一或多個連接子共價偶合於該等胺基酸之側鏈。
  54. 如請求項53之結合物，其中將活性劑偶合於胺基酸側鏈之該等連接子中之至少一者包含如請求項49至52中任一項中所定義之結合單元。
  55. 如請求項53或54之結合物，其中該等連接子中之至少一者為分支連接子。
  56. 如請求項55之結合物，其中至少兩個分支連接子共價偶合於該肽。
  57. 如請求項56之結合物，其中三個分支連接子偶合於該肽。
  58. 如請求項56之結合物，其中四個分支連接子偶合於該肽。
  59. 如請求項53或54之結合物，其中僅一個分支連接子偶合於該肽。
  60. 如請求項55至59中任一項之結合物，其中各分支連接子偶合於至少兩種活性劑。
  61. 如請求項60之結合物，其中至少一個分支連接子偶合於兩種不同活性劑。
  62. 如請求項55至61中任一項之結合物，其中各分支連接子包含分支單元，且各活性劑經由次要連接子偶合於該分支單元且該分支單元藉由主要連接子偶合於該肽。
  63. 如請求項62之結合物，其中至少一個分支單元具有結構、、或， 其中L1 、L2 、L3 各獨立地為直接鍵或-Cn H2n -，其中n為整數1至30； 其中G1 、G2 、G3 各獨立地為直接鍵、、、或其中R3 為氫或C1 -C30 烷基； 其中R4 為氫或-L4 -COOR5 ，其中L4 為直接鍵或-Cn H2n -，其中n為整數1至10，且R5 為氫或C1 -C30 烷基。
  64. 如請求項1至63中任一項之結合物，其包含式V之結構：(V) 其中： A表示該配位體； P表示該肽； B1 表示第一活性劑； B2 表示第二活性劑；且 n為整數1至20。
  65. 如請求項1至63中任一項之結合物，其包含式VI之結構：(VI) 其中 A表示該配位體； P表示該肽； B1 表示第一活性劑； B2 表示第二活性劑；且 n為整數1至20。
  66. 如請求項1至63中任一項之結合物，其包含以下結構：其中 A表示該配位體； PP表示該肽； B1 表示第一活性劑； B2 表示第二活性劑； L1 表示連接子，視情況包括裂解基團； L2 表示連接子，視情況包括裂解基團；且 n為整數1至20。
  67. 如請求項66之結合物，其包含以下結構：其中 A表示該配位體； PP表示該肽； B1 表示第一活性劑； B2 表示第二活性劑； B3 表示第三活性劑； L1 表示連接子，視情況包括裂解基團； L2 表示連接子，視情況包括裂解基團； L3 表示連接子，視情況包括裂解基團；且 n為整數1至20。
  68. 如請求項66之結合物，其包含以下結構：其中 A表示該配位體； PP表示該肽； B1 表示第一活性劑； B11 表示第二活性劑； B12 表示第三活性劑； L1 表示連接子； L2 表示連接子； L11 表示次要連接子，視情況包括裂解基團； L12 表示次要連接子，視情況包括裂解基團； BU表示分支單元；且 n為整數1至20。
  69. 如請求項1至63中任一項之結合物，其包含以下結構：其中 A表示該配位體； PP表示該肽； B1 表示第一活性劑； B2 表示第二活性劑； L1 表示連接子，視情況包括裂解基團； L2 表示連接子，視情況包括裂解基團；且 n為整數1至20。
  70. 如請求項1至63中任一項之結合物，其包含以下結構：其中 A表示該配位體； PP表示該肽； B1 表示第一活性劑； B2 表示第二活性劑； B3 表示第三活性劑； L1 表示連接子，視情況包括裂解基團； L2 表示連接子，視情況包括裂解基團； L3 表示連接子，視情況包括裂解基團；且 n為整數1至20。
  71. 如請求項1至63中任一項之結合物，其包含以下結構：其中 A表示該配位體； PP表示該肽； B1 表示第一活性劑； B11 表示第二活性劑； B12 表示第三活性劑； L1 表示連接子； L2 表示連接子； L11 表示次要連接子，視情況包括裂解基團； L12 表示次要連接子，視情況包括裂解基團； BU表示分支單元；且 n為整數1至20。
  72. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該配位體為單株抗體、多株抗體、抗體片段、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2 、Fv、單鏈Fv (「scFv」)、雙功能抗體、線抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體、嵌合抗體、人類化抗體、人類抗體或包含抗體之抗原結合部分的融合蛋白。
  73. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該配位體選自莫羅單抗-CD3阿昔單抗(muromonab-CD3 abciximab)、利妥昔單抗(rituximab)、達利珠單抗(daclizumab)、帕利珠單抗(palivizumab)、英利昔單抗(infliximab)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、依那西普(etanercept)、巴利昔單抗(basiliximab)、吉妥珠單抗(gemtuzumab)、阿侖單抗(alemtuzumab)、替伊莫單抗(ibritumomab)、阿達木單抗(adalimumab)、阿法賽特(alefacept)、奧馬珠單抗(omalizumab)、艾法珠單抗(efalizumab)、托西莫單抗(tositumomab)、西妥昔單抗(cetuximab)、ABT-806、貝伐單抗(bevacizumab)、那他珠單抗(natalizumab)、蘭比珠單抗(ranibizumab)、帕尼單抗(panitumumab)、艾庫組單抗(eculizumab)、利納西普(rilonacept)、賽妥珠單抗(certolizumab)、羅米司亭(romiplostim)、AMG-531、戈利木單抗(golimumab)、優特克單抗(ustekinumab)、ABT-874、貝拉西普(belatacept)、貝利單抗(belimumab)、阿塞西普(atacicept)、抗CD20抗體、康納單抗(canakinumab)、托西利單抗(tocilizumab)、阿利珠單抗(atlizumab)、美泊利單抗(mepolizumab)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、HuMax CD20、曲美單抗(tremelimumab)、替西單抗(ticilimumab)、伊派利單抗(ipilimumab)、IDEC-114、伊諾妥珠單抗(inotuzumab)、HuMax EGFR、阿柏西普(aflibercept)、HuMax-CD4、替利珠單抗(teplizumab)、奧昔珠單抗(otelixizumab)、卡托莫西單抗(catumaxomab)、抗EpCAM抗體IGN101、阿德卡單抗(adecatumomab)、奧戈伏單抗(oregovomab)、迪奴圖單抗(dinutuximab)、吉瑞昔單抗(girentuximab)、德諾單抗(denosumab)、貝頻珠單抗(bapineuzumab)、莫維珠單抗(motavizumab)、依夫單抗(efumgumab)、瑞昔單抗(raxibacumab)、LY2469298及維托珠單抗(veltuzumab)。
  74. 如前述請求項中任一項之結合物，其中各活性劑獨立地選自化學治療劑及毒素。
  75. 如前述請求項中任一項之結合物，其中各活性劑獨立地選自： (a)埃羅替尼(erlotinib)、硼替佐米(bortezomib)、氟維司群(fulvestrant)、舒癌特(sutent)、來曲唑(letrozole)、甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate)、PTK787/ZK 222584、奧沙利鉑(oxaliplatin)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、甲醯四氫葉酸(leucovorin)、雷帕黴素(rapamycin)、拉帕替尼(lapatinib)、洛那法尼(lonafarnib)、索拉非尼(sorafenib)、吉非替尼(gefitinib)、AG1478、AG1571、噻替派(thiotepa)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)、哌泊舒凡(piposulfan)、苯唑多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、米特多巴(meturedopa)、尤利多巴(uredopa)、伸乙基亞胺、六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基三聚氰胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺、三羥甲基蜜胺(trimethylolomelamine)、布拉他辛(bullatacin)、布拉他辛酮(bullatacinone)、喜樹鹼(camptothecin)、拓朴替康(topotecan)、苔蘚蟲素(bryostatin)、海綿抑素(callystatin)、CC-1065、阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)、比折來新(bizelesin)、念珠藻素1、念珠藻素8、海兔毒素(dolastatin)、倍癌黴素(duocarmycin)、KW-2189、CB1-TM1、艾榴塞洛素(eleutherobin)、水鬼蕉鹼(pancratistatin)、沙考地汀(sarcodictyin)、海綿抑素(spongistatin)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、甲氮芥(mechlorethamine)、美法侖(melphalan)、新恩比興(novembichin)、芬司特瑞(phenesterine)、潑尼氮芥(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)、卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimnustine)、卡奇黴素(calicheamicin)、卡奇黴素γ1 (calicheamicin gamma 1)、卡奇黴素Ω1 (calicheamicin omega 1)、達內黴素(dynemicin)、達內黴素A、氯屈膦酸鹽(clodronate)、埃斯培拉黴素(esperamicin)、新抑癌蛋白發色團(neocarzinostatin chromophore)、阿克拉黴素(aclacinomysins)、放射菌素(actinomycin)、安麯黴素(antrmycin)、偶氮絲胺酸(azaserine)、博來黴素(bleomycin)、放線菌素C (cactinomycin)、卡拉比辛(carabicin)、洋紅黴素(carninomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色黴素(chromomycin)、放線菌素D (dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、德托黴素(detorubucin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、小紅莓(doxorubicin)、嗎啉基-小紅莓、氰基嗎啉基-小紅莓、2-吡咯啉基-小紅莓、脂質體小紅莓、去氧小紅莓(deoxydoxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素C (mitomycin C)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、潑非黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、奎那黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黴素(streptomigrin)、鏈脲菌素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、左柔比星(zorubicin)、5-氟尿嘧啶、迪諾特寧(denopterin)、甲胺喋呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)、氟達拉賓(fludarabine)、6-巰基嘌呤(6-mercaptopurine)、硫米嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thiguanine)、安西他濱(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)、卡魯睾酮(calusterone)、屈他雄酮丙酸鹽(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾內酯(testolactone)、胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)、亞葉酸(folinic acid)、乙醯葡醛酯(aceglatone)、醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)、胺基乙醯丙酸(aminolevulinic acid)、恩尿嘧啶(eniluracil)、安吖啶(amsacrine)、貝塔布辛(bestrabucil)、比生群(bisantrene)、艾達曲克(edatraxate)、得弗伐胺(defofamine)、秋水仙胺(demecolcine)、地吖醌(diaziquone)、艾弗鳥胺酸(elfornithine)、依利醋銨(elliptinium acetate)、依託格魯(etoglucid)、硝酸鎵(gallium nitrate)、羥基脲(hydroxyurea)、蘑菇多醣(lentinan)、氯尼達明(lonidainine)、美登素(maytansine)、安絲菌素(ansamitocins)、丙脒腙(mitoguazone)、米托蒽醌(mitoxantrone)、莫比達摩(mopidanmol)、二胺硝吖啶(nitraerine)、噴司他丁(pentostatin)、蛋胺氮芥(phenamet)、吡柔比星(pirarubicin)、洛索蒽醌(losoxantrone)、2-乙基醯肼(2-ethylhydrazide)、丙卡巴肼(procarbazine)、多醣-k (polysaccharide-k)、雷佐生(razoxane)、根瘤菌素(rhizoxin)、西索菲蘭(sizofiran)、螺旋鍺(spirogermanium)、細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)、三亞胺醌(triaziquone)、2,2',2''-三氯三乙胺、T-2毒素、弗納庫林A (verracurin A)、桿孢菌素A (roridin A)及胺癸叮(anguidine)、胺基甲酸酯(urethane)、長春地辛(vindesine)、達卡巴嗪(dacarbazine)、甘露氮芥(mannomustine)、二溴甘露醇(mitobronitol)、二溴衛矛醇(mitolactol)、哌泊溴烷(pipobroman)、加西托星(gacytosine)、阿拉伯糖苷(arabinoside)、環磷醯胺、噻替派、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、太平洋紫杉醇經白蛋白工程改造之奈米粒子調配物、多西他賽(doxetaxel)、苯丁酸氮芥、吉西他濱(gemcitabine)、6-硫代鳥嘌呤、巰基嘌呤、順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、長春鹼(vinblastine)、鉑、依託泊苷(etoposide)、異環磷醯胺(ifosfamide)、米托蒽醌(mitoxantrone)、長春新鹼(vincristine)、長春瑞賓(vinorelbine)、諾凡特龍(novantrone)、替尼泊苷(teniposide)、依達曲沙(edatrexate)、道諾黴素、胺基喋呤(aminopterin)、希羅達(xeloda)、伊班膦酸鹽(ibandronate)、CPT-11、拓樸異構酶抑制劑RFS 2000、二氟甲基鳥胺酸(difluoromethylornithine)、視黃酸、卡培他濱(capecitabine)或前述任一者之醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物或酸； (b)單核因子、淋巴因子、傳統多肽激素、副甲狀腺激素、甲狀腺素、鬆弛素、鬆弛素原、醣蛋白激素、促卵泡激素、促甲狀腺激素、促黃體激素、肝生長因子纖維母細胞生長因子、促乳素、胎盤催乳激素、腫瘤壞死因子-α、腫瘤壞死因子-β、苗勒氏管抑制物質、小鼠促性腺激素相關肽、抑制素、活化素、血管內皮生長因子、血小板生成素、紅血球生成素、骨誘導因子、干擾素、干擾素-α、干擾素-β、干擾素-γ、群落刺激因子(「CSF」)、巨噬細胞-CSF、顆粒細胞-巨噬細胞-CSF、顆粒細胞-CSF、介白素(「IL」)、IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、腫瘤壞死因子、TNF-α、TNF-β、多肽因子、LIF、kit配位體或前述任一者之組合； (c)白喉毒素(diphtheria toxin)、肉毒桿菌毒素(botulium toxin)、破傷風毒素(tetanus toxin)、痢疾毒素、霍亂毒素、瓢菌素(amanitin)、α-瓢菌素、瓢菌素衍生物、吡咯并苯并二氮呯(pyrrolobenzodiazepine)、吡咯并苯并二氮呯衍生物、河豚毒素鹼(tetrodotoxin)、短裸甲藻毒素(brevetoxin)、雪卡毒素(ciguatoxin)、蓖麻毒素、AM毒素、妥布賴森(tubulysin)、格爾德黴素(geldanamycin)、類美登素(maytansinoid)、卡奇黴素、道諾黴素、小紅莓、甲胺喋呤、長春地辛、SG2285、海兔毒素、海兔毒素類似物、念珠藻素(cryptophycin)、喜樹鹼、喜樹鹼衍生物及代謝物(例如SN-38)、根瘤菌素、根瘤菌素衍生物、CC-1065、CC-1065類似物或衍生物、倍癌黴素、烯二炔抗生素、埃斯培拉黴素、埃坡黴素(epothilone)、阿那非德(azonafide)、阿匹立定(aplidine)、類毒素或前述任一者之組合； (d)親和配位體，其中該親和配位體為受質、抑制劑、刺激劑、神經傳導物、放射性同位素或前述任一者之組合； (e)放射性標記、32 P、35 S、螢光染料、電子緻密試劑、酶、生物素、抗生蛋白鏈菌素、地高辛、半抗原、免疫原性蛋白質、具有與標靶互補之序列的核酸分子或前述任一者之組合； (f)免疫調節化合物、抗癌劑、抗病毒劑、抗細菌劑、抗真菌劑及抗寄生蟲劑或前述任一者之組合； (g)他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、曲洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、克肟昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)或托瑞米芬(toremifene)； (h) 4(5)-咪唑、胺魯米特、乙酸甲地孕酮、依西美坦、來曲唑或阿那曲唑； (i)氟他胺(flutamide)、尼魯胺(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、亮丙立德(leuprolide)、戈舍瑞林(goserelin)或曲沙他濱(troxacitabine)； (j)芳香酶抑制劑； (k)蛋白激酶抑制劑； (l)脂質激酶抑制劑； (m)反義寡核苷酸； (n)核糖核酸酶； (o)疫苗；以及 (p)抗血管生成劑。
  76. 如前述請求項中任一項之結合物，其中至少一種活性劑為塔托布林(taltobulin)。
  77. 如前述請求項中任一項之結合物，其中至少一種活性劑為阿那非德(azonafide)。
  78. 如前述請求項中任一項之結合物，其中各活性劑獨立地選自瓢菌素、阿瑞他汀(auristatin)、卡奇黴素、喜樹鹼、念珠藻素、道諾黴素、海兔毒素、小紅莓、倍癌黴素、埃坡黴素、埃斯培拉黴素、格爾德黴素、類美登素、甲胺喋呤、單甲基阿瑞他汀E (「MMAE」)、單甲基阿瑞他汀F (「MMAF」)、吡咯并苯并二氮呯、根瘤菌素、SG2285、妥布賴森、長春地辛及類毒素或前述任一者之衍生物。
  79. 如請求項73之結合物，其中各活性劑獨立地選自瓢菌素、MMAE及MMAF或前述任一者之衍生物。
  80. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該結合物包含一或多個包含選自以下之部分的分支連接子：、、、。
  81. 如前述請求項中任一項之結合物，其中至少一種活性劑經由具有式(I)之結構的裂解基團偶合於該連接子：(I) 其中： B表示活性劑； G表示糖或糖酸，較佳葡糖醛酸； W表示拉電子基團，較佳-C(O)NR'-，其中C(O)鍵結於該苯環且NR'鍵結於L； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3，較佳3； R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環；且 L表示與該配位體之連接。
  82. 如請求項1至80中任一項之結合物，其中至少一種活性劑經由具有下式之裂解基團偶合於該連接子：其中： G表示糖、糖酸或經改質之糖，較佳糖或糖酸，最佳葡糖醛酸； W表示-C(O)-、-C(O)NR'-、-C(O)O-、-S(O)2 NR'-、-P(O)R''NR'-、-S(O)NR'-或-PO2 NR'-，在各情況下其中該C(O)、S或P較佳直接結合於該苯環，且R'及R''各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基、單或二羧基(C1 -C8 )烷基、(C3 -C8 )環烷基、(C1 -C8 )烷氧基、(C1 -C8 )烷硫基、單或二(C1 -C8 )烷基胺基、(C3 -C20 )雜芳基或(C6 -C20 )芳基； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3； m為0或1，較佳1；且 R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環。
  83. 如請求項1至80中任一項之結合物，其中至少一種活性劑經由具有下式之裂解基團偶合於該連接子：或其醫藥學上可接受之鹽，其中 G表示糖、糖酸或經改質之糖，較佳糖或糖酸，最佳葡糖醛酸； B為共價附接於該活性劑之單元， W表示-C(O)-、-C(O)NR'-、-C(O)O-、-S(O)2 NR'-、-P(O)R''NR'-、-S(O)NR'-或-PO2 NR'-，在各情況下其中該C(O)、S或P直接結合於該苯環，且R'及R''各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基、(C3 -C8 )環烷基、(C1 -C8 )烷氧基、(C1 -C8 )烷硫基、單或二(C1 -C8 )烷基胺基、(C3 -C20 )雜芳基或(C6 -C20 )芳基； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3，較佳3； L表示包含該肽序列之連接子； R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環。
  84. 如請求項81至83中任一項之結合物，其中各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基、醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基。
  85. 如請求項84之結合物，其中各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基。
  86. 如請求項81至85中任一項之結合物，其中該糖或糖酸為單醣。
  87. 如請求項86之結合物，其中： G為； R3 為氫或羧基保護基；且 各R4 獨立地為氫或羥基保護基。
  88. 如請求項87之結合物，其中R3 為氫且各R4 為氫。
  89. 如請求項81至88中任一項之結合物，其中W為-C(O)-、-C(O)NR'-、-C(O)O-、-S(O)2 NR'-、-P(O)R''NR'-、-S(O)NR'-或-PO2 NR'-，在各情況下其中該C(O)、S或P直接結合於該苯環，且R'及R''各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基、(C3 -C8 )環烷基、(C1 -C8 )烷氧基、(C1 -C8 )烷硫基、單或二(C1 -C8 )烷基胺基、(C3 -C20 )雜芳基或(C6 -C20 )芳基。
  90. 如請求項89之結合物，其中W表示-C(O)NR'-，其中C(O)鍵結於該苯環且NR'鍵結於L。
  91. 如請求項81至90中任一項之結合物，其中各Z表示氫且n為3。
  92. 如請求項81至91中任一項之結合物，其中R1 及R2 各表示氫。
  93. 如請求項81至92中任一項之結合物，其中： G表示葡糖醛酸； W表示-C(O)NR'-，其中C(O)鍵結於該苯環且NR'鍵結於L； 各Z獨立地表示氫；且 R1 及R2 各表示氫。
  94. 如請求項64至93中任一項之結合物，其中B、B1 及/或B2 各獨立地選自：、、、、、、、、、、、、、或， 其中y為整數1至10。
  95. 如前述請求項中任一項之結合物，其包含共價偶合於該配位體的2至4個如前述請求項中任一項中所闡述之連接子，其中： 各連接子包含具有複數個胺基酸之肽序列；且 至少兩種活性劑共價偶合於各連接子之該等胺基酸之側鏈。
  96. 如請求項95之結合物，其中各連接子偶合於該配位體之C端。
  97. 如請求項96之結合物，其中該配位體為抗體且各連接子偶合於該抗體(例如該抗體之重鏈及輕鏈)之C端。
  98. 如前述請求項中任一項之結合物，其中各活性劑為相同活性劑。
  99. 如請求項1至97中任一項之結合物，其中該等活性劑包含至少兩種不同活性劑。
  100. 一種醫藥組合物，其包含如前述請求項中任一項之結合物及醫藥學上可接受之賦形劑。
  101. 如請求項100之醫藥組合物，其進一步包含治療有效量之化學治療劑。
  102. 一種治療個體之癌症之方法，其包含向該個體投與如請求項100或101之醫藥組合物。
  103. 如請求項102之方法，其中該個體為哺乳動物。
  104. 如請求項103之方法，其中該個體選自嚙齒動物、兔類動物、貓科動物、犬科動物、豬科動物、綿羊科動物、牛類動物、馬科動物及靈長類動物。
  105. 如請求項103之方法，其中該個體為人類。
  106. 一種用於製備如請求項1至99中任一項之配位體-藥物結合物的方法，其包含使生物分子與前藥反應，其中： 該生物分子包含配位體及酮或醛； 該前藥包含烷氧基胺；且 該反應產生肟，因此將該配位體共價連接於該前藥。
  107. 如請求項106之方法，其中該配位體為抗體。
  108. 如請求項106或107之方法，其進一步包含將該配位體異戊二烯化，藉此產生該生物分子，其中： 該配位體包含異戊二烯化序列； 將該配位體異戊二烯化包含將該配位體與類異戊二烯轉移酶及類異戊二烯轉移酶受質一起培育；且 該受質包含該酮或醛。
  109. 如請求項108之方法，其中該配位體為抗體。
  110. 如請求項108或109之方法，其中該類異戊二烯轉移酶為法呢基轉移酶或四異戊二烯基轉移酶。
  111. 一種用於製備如請求項1至99中任一項之配位體-藥物結合物的方法，其包含將配位體異戊二烯化，其中： 該配位體包含異戊二烯化序列； 將該配位體異戊二烯化包含將該配位體與類異戊二烯轉移酶及類異戊二烯轉移酶受質一起培育；且 該受質包含該活性劑。
  112. 如請求項111之方法，其中該配位體為抗體。
  113. 一種連接子-活性劑化合物，其中 i)該連接子包含具有複數個胺基酸之肽序列；且 ii)該至少兩種活性劑共價偶合於該等胺基酸之側鏈。
  114. 如請求項113之連接子-活性劑化合物，其中各活性劑藉由可水解以自該配位體-活性劑化合物釋放該活性劑之裂解基團偶合於該肽序列。
  115. 如請求項114之連接子-活性劑化合物，其中該裂解基團由具有下式之結構表示：(I) 其中： B表示活性劑； G表示糖或糖酸，較佳葡糖醛酸； W表示拉電子基團，較佳-C(O)NR'-，其中C(O)鍵結於該苯環且NR'鍵結於L； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3，較佳3； R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環；且 L表示與該肽序列之連接。
  116. 如請求項114之連接子-活性劑化合物，其中該裂解基團由具有下式之結構表示：其中： G表示糖、糖酸或經改質之糖，較佳糖或糖酸，最佳葡糖醛酸； W表示-C(O)-、-C(O)NR'-、-C(O)O-、-S(O)2 NR'-、-P(O)R''NR'-、-S(O)NR'-或-PO2 NR'-，在各情況下其中該C(O)、S或P較佳直接結合於該苯環，且R'及R''各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基、單或二羧基(C1 -C8 )烷基、(C3 -C8 )環烷基、(C1 -C8 )烷氧基、(C1 -C8 )烷硫基、單或二(C1 -C8 )烷基胺基、(C3 -C20 )雜芳基或(C6 -C20 )芳基； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3； m為0或1，較佳1；且 R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環。
  117. 如請求項114之連接子-活性劑化合物，其中該裂解基團由具有下式之結構表示：或其醫藥學上可接受之鹽，其中 G表示糖、糖酸或經改質之糖，較佳糖或糖酸，最佳葡糖醛酸； B為共價附接於該活性劑之單元， W表示-C(O)-、-C(O)NR'-、-C(O)O-、-S(O)2 NR'-、-P(O)R''NR'-、-S(O)NR'-或-PO2 NR'-，在各情況下其中該C(O)、S或P直接結合於該苯環，且R'及R''各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基、(C3 -C8 )環烷基、(C1 -C8 )烷氧基、(C1 -C8 )烷硫基、單或二(C1 -C8 )烷基胺基、(C3 -C20 )雜芳基或(C6 -C20 )芳基； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3，較佳3； L表示與該肽序列之連接； R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環。
  118. 如請求項115至117中任一項之連接子-活性劑化合物，其中各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基、醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基。
  119. 如請求項118之連接子-活性劑化合物，其中各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基。
  120. 一種連接子化合物，其中 i)該連接子包含具有複數個胺基酸之肽序列；且 ii)至少兩個裂解基團共價偶合於該等胺基酸之側鏈，其中各裂解基團具有能夠與活性劑反應之反應部分。
  121. 如請求項120之連接子化合物，其中該裂解基團由具有下式之結構表示(I) 其中： B表示能夠置換活性劑之離去基，諸如鹵素(尤其Cl或Br)，或包含能夠偶合於活性劑之反應部分的單元，諸如異氰酸酯、酸氯化物、氯甲酸酯等； G表示糖或糖酸，較佳葡糖醛酸； W表示拉電子基團，較佳-C(O)NR'-，其中C(O)鍵結於該苯環且NR'鍵結於L； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3，較佳3； R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環；且 L表示與該肽序列之連接。
  122. 如請求項120之連接子化合物，其中該裂解基團由具有下式之結構表示其中： G表示糖、糖酸或經改質之糖，較佳糖或糖酸，最佳葡糖醛酸； W表示-C(O)-、-C(O)NR'-、-C(O)O-、-S(O)2 NR'-、-P(O)R''NR'-、-S(O)NR'-或-PO2 NR'-，在各情況下其中該C(O)、S或P較佳直接結合於該苯環，且R'及R''各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基、單或二羧基(C1 -C8 )烷基、(C3 -C8 )環烷基、(C1 -C8 )烷氧基、(C1 -C8 )烷硫基、單或二(C1 -C8 )烷基胺基、(C3 -C20 )雜芳基或(C6 -C20 )芳基； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3； m為0或1，較佳1；且 R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環。
  123. 如請求項120之連接子化合物，其中該裂解基團由具有下式之結構表示：或其醫藥學上可接受之鹽，其中 G表示糖、糖酸或經改質之糖，較佳糖或糖酸，最佳葡糖醛酸； B為包含能夠偶合於該活性劑之反應部分的單元， W表示-C(O)-、-C(O)NR'-、-C(O)O-、-S(O)2 NR'-、-P(O)R''NR'-、-S(O)NR'-或-PO2 NR'-，在各情況下其中該C(O)、S或P直接結合於該苯環，且R'及R''各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基、(C3 -C8 )環烷基、(C1 -C8 )烷氧基、(C1 -C8 )烷硫基、單或二(C1 -C8 )烷基胺基、(C3 -C20 )雜芳基或(C6 -C20 )芳基； 各Z獨立地表示氫、(C1 -C8 )烷基或拉電子基團(諸如醯胺、羧酸、羧酸酯、鹵素、氰基或硝基)，較佳氫、(C1 -C8 )烷基、鹵素、氰基或硝基，最佳氫； n為整數1至3，較佳3； L表示包含該肽序列之連接子； R1 及R2 各獨立地為氫、(C1 -C8 )烷基或(C3 -C8 )環烷基，較佳氫，或R1 及R2 連同其附接之碳原子一起形成(C3 -C8 )環烷基環。
  124. 如請求項121至122中任一項之連接子化合物，其中： G為； R3 為氫或羧基保護基；且 各R4 獨立地為氫或羥基保護基。
  125. 如請求項121至124中任一項之連接子化合物，其中該連接子包含由-(CH2 )r (V(CH2 )p )q -、-((CH2 )p V)q -、-(CH2 )r (V(CH2 )p )q Y-、-((CH2 )p V)q (CH2 )r -、-Y(((CH2 )p V)q -或-(CH2 )r (V(CH2 )p )q YCH2 -表示之連接單元， 其中： r為整數0至10； p為整數1至10； q為整數1至20； V及Y各獨立地為單一鍵、-O-、-S-、-NR21 -、-C(O)NR22 -、-NR23 C(O)-、-NR24 SO2 -或-SO2 NR25 -；且 R21 至R25 各獨立地為氫、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基(C6 -C20 )芳基或(C1 -C6 )烷基(C3 -C20 )雜芳基。
  126. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該裂解基團能夠在標靶細胞內裂解。
  127. 如前述請求項中任一項之結合物，其中該裂解基團能夠釋放一或多種活性劑。
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