TW201919711A - 預防免疫結合物中之甲硫胺酸氧化之方法 - Google Patents

預防免疫結合物中之甲硫胺酸氧化之方法 Download PDF

Info

Publication number
TW201919711A
TW201919711A TW107133293A TW107133293A TW201919711A TW 201919711 A TW201919711 A TW 201919711A TW 107133293 A TW107133293 A TW 107133293A TW 107133293 A TW107133293 A TW 107133293A TW 201919711 A TW201919711 A TW 201919711A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
pharmaceutical composition
ala
antibody
amino acid
seq
Prior art date
Application number
TW107133293A
Other languages
English (en)
Inventor
麥可 佛萊明
阿米特 剛格
尼可拉斯 C 優得
晨 白
史考特 艾倫 西得伯朗德
班傑明 M 胡金斯
Original Assignee
美商伊繆諾金公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商伊繆諾金公司 filed Critical 美商伊繆諾金公司
Publication of TW201919711A publication Critical patent/TW201919711A/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • External Artificial Organs (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本發明大體上係關於預防免疫結合物中之甲硫胺酸氧化之方法。本發明亦係關於其中甲硫胺酸氧化量減至最少之免疫結合物的醫藥組合物。

Description

預防免疫結合物中之甲硫胺酸氧化之方法
本發明大體上係關於預防免疫結合物中之甲硫胺酸氧化之方法。本發明亦係關於其中甲硫胺酸氧化量減至最少之免疫結合物的醫藥組合物。
細胞結合劑-藥物結合物(諸如抗體-藥物結合物(ADC))為一類新興的對多種癌症具有效力的強效抗腫瘤劑。細胞結合劑-藥物結合物(諸如ADC)通常由三個不同的要素構成：細胞結合劑(例如，抗體)；連接基；及細胞毒性部分。細胞毒性藥物部分可共價連接至抗體上之離胺酸從而產生結合物，所述結合物為攜帶連接於抗體分子上不同位置處之不同數目之藥物的ADC的非均質混合物。或者，細胞毒性藥物部分可經由諸如馬來醯亞胺基之硫醇反應性基團共價連接至抗體上之半胱胺酸硫醇基而形成位點特異性ADC。
已採用苯并二氮呯化合物，包括諸如吡咯并苯并二氮呯(PBD)之三環苯并二氮呯及諸如吲哚啉并苯并二氮呯之四環苯并二氮呯作為細胞毒性劑與抗體連接以產生ADC，該等ADC已顯示出有前景之抗腫瘤活性。此等苯并二氮呯化合物含有亞胺鍵，由此可能結合至DNA小溝並干擾DNA功能，從而引起細胞死亡。
因此，需要開發用於製備細胞結合劑與含亞胺之苯并二氮呯藥物之結合物的新方法，以及此等結合物之在製造過程及/或儲存期間穩定之新醫藥組合物。
本發明係基於令人驚訝地發現包含苯并二氮呯細胞毒性劑之免疫結合物可能易於發生甲硫胺酸氧化，尤其是在存在光的情況下。與裸抗體之比較資料表明甲硫胺酸氧化至少部分由存在苯并二氮呯細胞毒性劑而誘導。令人驚訝地發現抗體-苯并二氮呯免疫結合物之醫藥組合物中存在甲硫胺酸可減少所觀測之甲硫胺酸氧化量。另外，抗體與苯并二氮呯細胞毒性劑之間的結合反應中存在甲硫胺酸抗氧化劑可顯著減少所產生之免疫結合物中的甲硫胺酸氧化量。
本發明之一個態樣提供一種醫藥組合物，該醫藥組合物包含本文中所描述之免疫結合物及0.1 mM至20 mM甲硫胺酸。
在某些實施例中，本發明之醫藥組合物中之免疫結合物係由下式表示：(IA)， CBA為抗體或其抗原結合片段； WC 為1或2；且 CyCys 係由下式表示：， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： 介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H或(C1 -C4 )烷基；並且當其為單鍵時，X為-H或胺保護部分，Y為-OH或-SO3 H； R1 為-H或(C1 -C3 )烷基； P1 為胺基酸殘基或含有2至5個胺基酸殘基之肽； Ra 及Rb 在每次出現時獨立地為-H、(C1 -C3 )烷基或帶電取代基或可離子化基團Q； m為1至6之整數； LC 係由表示，s1為與CBA共價連接之位點，且s2為與CyCys 上之-C(=O)-基團共價連接之位點；其中： R2 為-H或(C1 -C3 )烷基； R3 及R4 在每次出現時獨立地為-H或(C1 -C3 )烷基；且 n為介於1與10之間的整數。
在某些實施例中，本發明之醫藥組合物中之免疫結合物係由下式表示：(IB)， 其中： CBA為抗體或其抗原結合片段； WL 為1至20之整數；且 CyLys1 係由下式表示：； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： 介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H或(C1 -C4 )烷基；並且當其為單鍵時，X為-H或胺保護部分且Y為-OH或-SO3 H； Rx 獨立地為(C1 -C6 )烷基； W'為-NRe ； Re 為-(CH2 -CH2 -O)n1 -Rk ； n1為2至6之整數； Rk 為-H或-Me； Zs 係選自以下諸式中之任一者：(b1)；(b2)；(b3)；(b4)；(b5)；(b6)；(b7)；(b8)；(b9)；及(b10)， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中q為1至5之整數。
在某一實施例中，本發明提供一種醫藥組合物，該醫藥組合物包含1 mM至4 mM甲硫胺酸及由下式表示之免疫結合物：(IIA)； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： Y為-SO3 H或其鈉鹽； WC 為2；且 CBA為抗CD123抗體，該抗CD123抗體包含：a)具有SEQ ID NO:8中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白重鏈；及b)具有SEQ ID NO:10中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。
在某些實施例中，本發明提供一種醫藥組合物，該醫藥組合物包含1 mM至4 mM甲硫胺酸及由下式表示之免疫結合物：(IIB)； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： Y為-SO3 H或其鈉鹽； WL 為1至10之整數；且 CBA為抗CD33抗體，該抗CD33抗體包含具有SEQ ID NO:18中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白重鏈及具有SEQ ID NO:20中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。
本發明之另一態樣提供一種減少本文中所描述之免疫結合物中之甲硫胺酸氧化量的方法，該方法包括將該免疫結合物與0.1 mM至20 mM甲硫胺酸混合以獲得包含該免疫結合物及甲硫胺酸之醫藥組合物。
在某些實施例中，該免疫結合物係由以上所描述之式(IA)表示。
在某些實施例中，該免疫結合物係由以上所描述之式(IB)表示。
在另一態樣中，本發明提供一種製備本文中所描述之免疫結合物的方法，該方法包括使細胞結合劑(CBA)與本文中所描述之細胞毒性劑或細胞毒性劑-連接基化合物在抗氧化劑存在下反應以減少該等免疫結合物中之甲硫胺酸氧化量。
在某些實施例中，本發明提供一種製備由下式表示之免疫結合物的方法：(IA)， 該方法包括使CBA與由下式表示之細胞毒性劑：或其醫藥學上可接受之鹽在抗氧化劑存在下反應，其中： CBA為抗體或其抗原結合片段； WC 為1或2；且 CyCys 係由下式表示：, 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： 介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H或(C1 -C4 )烷基；並且當其為單鍵時，X為-H或胺保護部分，Y為-OH或-SO3 H； R1 為-H或(C1 -C3 )烷基； P1 為胺基酸殘基或含有2至5個胺基酸殘基之肽； Ra 及Rb 在每次出現時獨立地為-H、(C1 -C3 )烷基或帶電取代基或可離子化基團Q； m為1至6之整數； LC 係由表示，s1為與CBA共價連接之位點，且s2為與CyC1 上之-C(=O)-基團共價連接之位點； R2 為-H或(C1 -C3 )烷基； R3 及R4 在每次出現時獨立地為-H或(C1 -C3 )烷基；且 n為介於1與10之間的整數；且 LC '係由表示。
在某一實施例中，本發明提供一種製備由下式表示之免疫結合物的方法：， 其中： CBA為抗體或其抗原結合片段； WL 為1至20之整數；且 CyLys1 係由下式表示：； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： 介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H或(C1 -C4 )烷基；並且當其為單鍵時，X為-H或胺保護部分且Y為-OH或-SO3 H； Rx 獨立地為(C1 -C6 )烷基； W'為-NRe ； Re 為-(CH2 -CH2 -O)n1 -Rk ； n1為2至6之整數； Rk 為-H或-Me； Zs 係選自以下諸式中之任一者：(b1)；(b2)；(b3)；(b4)；(b5)；(b6)；(b7)；(b8)；(b9)；及(b10)， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中q為1至5之整數， 該方法包括以下步驟： (a) 使由下式表示之細胞毒性劑：， 或其醫藥學上可接受之鹽與選自以下之雙官能交聯劑：(a1L)；(a2L)；(a3L)；(a4L)；(a5L)；(a6L)；(a7L)；(a8L)；(a9L)；及(a10L)， 反應以形成細胞毒性劑-連接基化合物，其中X為鹵素；JD 為-SH、-SSRd 或-SC(=O)Rg ；Rd 為苯基、硝基苯基、二硝基苯基、羧基硝基苯基、吡啶基或硝基吡啶基；Rg 為烷基；q為1至5之整數；且U為-H或SO3 H；及 (b) 使該CBA與該細胞毒性劑-連接基化合物在抗氧化劑存在下反應以形成該免疫結合物。
在某些實施例中，本發明提供一種製備由下式表示之免疫結合物的方法：； 或其醫藥學上可接受之鹽，該方法包括使該CBA與由下式表示之細胞毒性劑：或其醫藥學上可接受之鹽在抗氧化劑存在下反應，其中： Y為-SO3 H或其鈉鹽； WC 為2；且 CBA為抗CD123抗體，該抗CD123抗體包含：a)具有SEQ ID NO:8中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白重鏈；及b)具有SEQ ID NO:10中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。
在某些實施例中，本發明提供一種製備由下式表示之免疫結合物的方法：； 或其醫藥學上可接受之鹽，該方法包括以下步驟： (a) 使由下式表示之細胞毒性劑：， 或其醫藥學上可接受之鹽與由下式表示之雙官能交聯劑4-(2-吡啶基二硫)-2-磺基丁酸N -琥珀醯亞胺酯(磺基-SPDB)：反應以形成由下式表示之細胞毒性劑-連接基化合物：， 或其醫藥學上可接受之鹽；及 (b) 使該CBA與該細胞毒性劑-連接基化合物在抗氧化劑存在下反應以形成該免疫結合物，其中： Y為-SO3 H； WL 為1至10之整數；且 CBA為抗CD33抗體，該抗CD33抗體包含具有SEQ ID NO:18中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白重鏈及具有SEQ ID NO:20中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。
預期除非明確否認或不適用，否則本文中所描述之任一實施例，包括僅在本發明之一個態樣中加以描述(而在其他態樣中未描述或在其他態樣中未重複)之彼等實施例以及僅在實例中加以描述之彼等實施例，均可與本發明之任何一或多個其他實施例組合。
1. 定義
為了促進理解本發明，以下定義許多術語及片語。
除非另外指示，否則如本文中可互換使用之術語「(人類) IL-3Rα」、「介白素-3受體α」或「CD123」係指任何天然(人類)IL-3Rα或CD123。CD123蛋白為異源二聚細胞因子受體(IL-3受體，或IL-3R)之介白素3特異性次單元。IL-3R係由配位體特異性α次單元及由介白素3 (IL3)、群落刺激因子2 (CSF2/GM-CSF)及介白素5 (IL5)之受體共用之信號轉導共同β次單元(亦稱為CD131)構成。CD123/IL-3Rα與IL3之結合視β次單元而定。β次單元係由配位體結合活化，且對於IL3之生物活性為需要的。
針對CD123之此等以上術語均可指如本文中所指示之蛋白質或核酸序列。術語「CD123/IL-3Rα」涵蓋「全長」未處理CD123/IL-3Rα以及由在細胞內進行處理而產生之CD123/IL-3Rα之任何形式。該術語亦涵蓋CD123/IL-3Rα蛋白或核酸之天然存在之變異體，例如剪接變異體、等位基因變異體及同功型。本文中所描述之CD123/IL-3Rα多肽及聚核苷酸可自多種來源，諸如自諸多人類組織類型或自另一來源分離，或者藉由重組或合成方法來製備。CD123/IL-3Rα序列之實例包括但不限於NCBI參考號NP_002174及NM_002183 (人類CD123變異體1之蛋白質及核酸序列)以及NP_001254642及NM_001267713 (人類CD123變異體2之蛋白質及核酸序列)。
術語「抗體」意謂免疫球蛋白分子，其可經由該免疫球蛋白分子之可變區內的至少一個抗原識別位點識別且特異性結合標靶，諸如蛋白質、多肽、肽、碳水化合物、聚核苷酸、脂質或上述之組合。如本文中所使用，術語「抗體」涵蓋完整多株抗體、完整單株抗體、抗體片段(諸如Fab、Fab'、F(ab')2 及Fv片段)、單鏈Fv (scFv)突變體、諸如雙特異性抗體之多特異性抗體、嵌合抗體、人類化抗體、人類抗體、包含抗體之抗原決定部分的融合蛋白質，及包含抗原識別位點之任何其他經修飾免疫球蛋白分子，只要該等抗體展現所要生物活性即可。抗體基於其重鏈恆定域(分別稱為α、δ、ε、γ及μ)之一致性可屬於五個主要免疫球蛋白類別中之任一個：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，或其亞類(同型) (例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)。不同類別之免疫球蛋白具有不同且熟知之次單元結構及三維構形。抗體可為裸抗體或與諸如毒素、放射性同位素等其他分子結合。
在一些實施方案中，抗體為非天然存在之抗體。在一些實施例中，抗體係自天然組分中純化而來。在一些實施例中，抗體為重組產生。在一些實施例中，抗體係由雜交瘤產生。
「阻斷」抗體或「拮抗性」抗體為抑制或降低其所結合之諸如CD123/IL-3Rα之抗原的生物活性的抗體。在某一實施例中，阻斷抗體或拮抗性抗體實質上或完全抑制抗原之生物活性。理想地，該生物活性降低10%、20%、30%、50%、70%、80%、90%、95%或甚至100%。
術語「抗CD123抗體」、「抗IL-3Rα抗體」或「(特異性)結合CD123/IL-3Rα之抗體」係指能夠以充分親和力結合CD123/IL-3Rα之抗體，使得該抗體適用作診斷及/或治療劑用於靶向CD123/IL-3Rα。除非另外規定，否則抗CD123/IL-3Rα抗體與無關非CD123/IL-3Rα蛋白之結合程度小於該抗體與CD123/IL-3Rα結合之約10%，如例如藉由放射性免疫分析法(RIA)所量測。在某些實施例中，結合CD123/IL-3Rα之抗體具有≤0.5 nΜ、≤0.3 nM、≤0.1 nM、≤0.05 nM或≤0.01 nM之解離常數(Kd )。在一個實施例中，抗CD123/IL-3Rα抗體不結合共同β鏈CD131。在一個實施例中，抗CD123/IL-3Rα抗體不結合CD123中由諸如7G3 (小鼠IgG2a )、6H6 (小鼠IgG1 )及9F5 (小鼠IgG1 )之已知及市售CD123抗體結合之相同抗原決定基(Sun等人,Blood 87(1): 83-92, 1996)。
本發明之抗CD123/IL-3Rα抗體及其抗原結合片段之序列提供於本文中。以下單獨提供本發明之多種抗體及免疫結合物的命名法。
術語「抗體片段」係指完整抗體之一部分並且係指完整抗體之抗原決定可變區。抗體片段之實例包括但不限於Fab、Fab'、F(ab')2 及Fv 片段、線性抗體、單鏈抗體及由抗體片段形成之多特異性抗體。術語抗體之「抗原結合片段」包括抗體中保留特異性結合抗原之能力的一或多個片段。已顯示抗體之抗原結合功能可由全長抗體之某些片段來執行。術語抗體之「抗原結合片段」內所涵蓋之結合片段的實例包括(但不限於)：(i)Fab片段，即由VL 、VH 、CL 及CH1 結構域組成之單價片段(例如，由木瓜蛋白酶消化之抗體產生三個片段：兩個抗原結合Fab片段及一個不結合抗原之Fc片段)；(ii)F(ab')2 片段，即包含在鉸鏈區由二硫橋連接之兩個Fab片段的二價片段(例如，由胃蛋白酶消化之抗體產生兩個片段：二價抗原結合F(ab')2 片段，以及不結合抗原之pFc'片段及其相關F(ab')單價單元；(iii)由VH 及CH1 結構域組成的Fd 片段(亦即，包括在Fab中之重鏈部分)；(iv)由抗體之單一臂之VL 及VH 結構域組成的Fv 片段，及相關二硫鍵連接之Fv ；(v)dAb (域抗體)或sdAb (單域抗體)片段(Ward等人,Nature 341:544-546, 1989)，其由VH 結構域組成；及(vi)分離之互補性決定區(CDR)。
「單株抗體」係指涉及單一抗原決定子或抗原決定基之高度特異性識別及結合的均質抗體群體。此與典型地包括針對不同抗原決定子之不同抗體的多株抗體相反。術語「單株抗體」涵蓋完整及全長單株抗體以及抗體片段(諸如Fab、Fab'、F(ab')2 、Fv )、單鏈(scFv)突變體、包含抗體部分之融合蛋白質及包含抗原識別位點之任何其他經修飾免疫球蛋白分子。此外，「單株抗體」係指以許多方式製造之此種抗體，包括但不限於藉由雜交瘤、噬菌體選擇、重組表現及轉殖基因動物。
術語「人類化抗體」係指非人類(例如鼠類)抗體之形式，其為含有最小非人類(例如鼠類)序列之特定免疫球蛋白鏈、嵌合免疫球蛋白或其片段。典型地，人類化抗體為人類免疫球蛋白，其中互補決定區(CDR)之殘基經非人類物種(例如小鼠、大鼠、兔、倉鼠)之CDR中具有所要特異性、親和力及容量之殘基置換(Jones等人,Nature 321:522-525, 1986；Riechmann等人,Nature 332:323-327, 1988；Verhoeyen等人,Science 239:1534-1536, 1988)。
在一些情況下，人類免疫球蛋白之Fv 構架區(FR)殘基經來自非人類物種之具有所要特異性、親和力及容量之抗體中的相應殘基置換。人類化抗體可藉由取代Fv 構架區中及/或經置換之非人類殘基內之其他殘基來進行進一步修飾，以改進並優化抗體特異性、親和力及/或容量。一般而言，人類化抗體將包括實質上所有至少一個且典型地兩或三個含有所有或實質上所有對應於非人類免疫球蛋白之CDR區的可變域，而所有或實質上所有FR區為人類免疫球蛋白一致序列之FR區。人類化抗體亦可包含免疫球蛋白恆定區或域(Fc )，典型地人類免疫球蛋白恆定區或域之至少一部分。用於產生人類化抗體之方法的實例描述於以下文獻中：美國專利5,225,539及5,639,641；Roguska等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91(3):969-973, 1994；及Roguska等人, Protein Eng. 9(10):895-904, 1996 (均以引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，「人類化抗體」為表面重整抗體。在一些實施例中，「人類化抗體」為CDR移植抗體。
抗體之「可變區」係指單獨或組合之抗體輕鏈可變區或抗體重鏈可變區。重鏈及輕鏈之可變區各自由以三個互補性決定區(CDR，亦稱為高變區)連接之四個構架區(FR)組成。FR維持各鏈中之CDR與另一鏈之CDR緊密鄰近一起，有助於形成抗體之抗原結合位點。存在至少兩種對於測定CDR之技術：(1)基於物種間序列變異性之方法(亦即，Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest , 第5版, 1991, National Institutes of Health, Bethesda Md.)；及(2)基於抗原-抗體複合物之結晶學研究的方法(Al-lazikani等人,J. Molec. Biol. 273:927-948, 1997)。另外，此項技術中有時使用此兩種方法之組合來測定CDR。
當提及可變域(約輕鏈中之殘基1至107及重鏈中之殘基1至113)中之殘基時一般使用Kabat編號系統(例如Kabat等人,Sequences of Immunological Interest , 第5版, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))。
如Kabat中之胺基酸位置編號係指用於Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest , 第5版, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)(以引用之方式併入本文中)中之抗體編集之重鏈可變域或輕鏈可變域的編號系統。使用此編號系統，實際線性胺基酸序列可含有對應於可變域FR或CDR之縮短或插入的更少或額外胺基酸。舉例而言，重鏈可變域可包括處於H2中殘基52之後的單一胺基酸插入(殘基52a，根據Kabat)及處於重鏈FR殘基82之後的多個插入殘基(例如,殘基82a、82b及82c等，根據Kabat)。對於指定抗體，殘基之Kabat編號可藉由在抗體序列之同源性區域上與「標準」Kabat編號序列進行比對來確定。而Chothia係指結構環之位置(Chothia及Lesk,J. Mol. Biol. 196:901-917,1987)。當使用Kabat編號轉化進行編號時，Chothia CDR-H1環之末端視環長度而在H32與H34之間變化。此係因為Kabat編號方案將插入物置於H35A及H35B處，若35A或35B均不存在，則環末端在32處；若僅存在35A，則環末端在33處；若35A或35B均存在，則環末端在34處。AbM高變區表示Kabat CDR與Chothia結構環之間的摺衷，且由Oxford Molecular之AbM抗體建模軟體使用。
術語「人類抗體」意謂由人類產生之抗體或使用此項技術中已知的任何技術製造之具有對應於由人類產生之抗體的胺基酸序列的抗體。在某些實施例中，人類抗體不具有非人類序列。人類抗體之此定義包括完整或全長抗體，或其抗原結合片段。
術語「嵌合抗體」係指免疫球蛋白分子之胺基酸序列來源於兩個或更多個物種之抗體。典型地，輕鏈及重鏈兩者之可變區對應於來源於一個哺乳動物物種(例如，小鼠、大鼠、兔等)且具有所要特異性、親和力及容量之抗體的可變區，而恆定區與來源於另一物種(通常人類)之抗體中的序列同源，以避免或減少在該物種(例如人類)中引發免疫反應之機會。在某些實施例中，嵌合抗體可包括包含至少一個人類重鏈及/或輕鏈多肽之抗體或其抗原結合片段，諸如，例如包含鼠類輕鏈及人類重鏈多肽之抗體。
術語「抗原決定基」或「抗原決定子」在本文中可互換用於指抗原中能夠由特定抗體識別且特異性結合之部分。當抗原為多肽時，抗原決定基可由連續胺基酸及藉由蛋白質之三級摺疊而毗鄰之非連續胺基酸形成。由連續胺基酸形成之抗原決定基典型地在蛋白質變性後得以保留，而由三級摺疊形成之抗原決定基典型地在蛋白質變性後喪失。在獨特空間構形下，抗原決定基典型地包括至少3個且更通常至少5或8至10個胺基酸。
「結合親和力」一般係指分子(例如抗體)之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間的總非共價相互作用總和的強度。除非另外指示，否則如本文中所使用，「結合親和力」係指體現結合對之成員(例如抗體及抗原)之間的1:1相互作用的內在結合親和力。分子X對其搭配物Y之親和力一般可由解離常數(Kd )或半最大有效濃度(EC50 )表示。親和力可藉由此項技術中已知的常用方法，包括本文中所描述之方法來量測。低親和力抗體一般緩慢結合抗原且傾向於容易解離，而高親和力抗體一般更快結合抗原且傾向於保持結合較久。量測結合親和力之多種方法在此項技術中為已知的，出於本發明之目的可使用其中之任一種。本文中描述特定說明性實施例。
「或更佳」當在本文中用於指結合親和力時係指分子與其結合搭配物之間的更強結合。「或更佳」當在本文中用於指更強結合時由較小數值Kd 值表示。舉例而言，對抗原具有「0.3 nM或更佳」親和力之抗體係指抗體對抗原之親和力≤0.3 nM，例如，0.29 nM、0.28 nM、0.27 nM等，或者等於或小於0.3 nM之任何值。在一個實施例中，如由Kd 決定之抗體親和力將介於約10-3 至約10-12 M之間、介於約10-6 至約10-11 M之間、介於約10-6 至約10-10 M之間、介於約10-6 至約10-9 M之間、介於約10-6 至約10-8 M之間或介於約10-6 至約10-7 M之間。
「特異性結合」一般意謂抗體經由其抗原結合域來結合抗原決定基且該結合需要抗原結合域與抗原決定基之間存在一定互補性。根據此定義，與抗體將結合隨機無關抗原決定基相比，據稱當其經由其抗原結合域結合抗原決定基時，抗體更容易「特異性結合該抗原決定基」。術語「特異性」在本文中用於考核某一抗體結合某一抗原決定基之相對親和力。舉例而言，可認為抗體「A」與抗體「B」相比對指定抗原決定基具有較高特異性，或可稱抗體「A」以比其對相關抗原決定基「D」所具有的特異性高的特異性結合抗原決定基「C」。
在某些實施例中，本發明之抗體或抗原結合片段「特異性結合」CD123抗原，因為其對CD123抗原(來自任何物種)比對非CD123抗原具有更高結合特異性。在某些實施例中，本發明之抗體或抗原結合片段「特異性結合」人類CD123抗原，因為其對人類CD123抗原比對非人類CD123抗原(例如小鼠或大鼠CD123)具有更高結合特異性。
「優先結合」意謂抗體特異性結合抗原決定基比其結合相關相似同源或類似抗原決定基更容易。因此，與相關抗原決定基相比，「優先結合」指定抗原決定基之抗體將更可能結合該抗原決定基，縱使此種抗體可與該相關抗原決定基交叉反應。舉例而言，在某些實施例中，相對於小鼠CD123，本發明之抗體或抗原結合片段「優先結合」人類CD123抗原。
若抗體優先結合抗原決定基達到其可在某種程度上阻斷參考抗體與該抗原決定基結合之程度，則稱其「競爭性抑制」參考抗體與指定抗原決定基之結合。競爭性抑制可藉由此項技術中已知的任何方法來測定，例如競爭ELISA分析法。可稱抗體競爭性抑制參考抗體與指定抗原決定基之結合至少90%、至少80%、至少70%、至少60%或至少50%。
如本文中所使用之片語「實質上相似」或「實質上相同」表示兩個數值(一般而言，一個與本發明之抗體相關而另一個與參考/比較抗體相關)之間的相似性程度之高足以使得熟習此項技術者將認為該兩個值之間的差異在藉由該等值(例如，Kd 值)量度生物學特徵之情形下具有極小或不具有生物學及/或統計顯著性。作為隨參考/比較抗體之值而變化的函數，該兩個值之間的差異小於約50%、小於約40%、小於約30%、小於約20%及/或小於約10%。
如本文中所使用之術語「免疫結合物」、「結合物」或「ADC」係指連接至細胞結合劑(亦即，抗CD123/IL-3Rα抗體或其片段)之化合物或其衍生物且由以下通式定義：A-L-C，其中C=細胞毒素，L=連接基，且A=細胞結合劑(CBA)，諸如抗CD123/IL-3Rα抗體抗體或抗體片段。免疫結合物亦可由該通式之倒序形式定義：C-L-A。
「連接基」為能夠以穩定共價方式將諸如本文中所描述之細胞毒性劑之化合物(通常為藥物) (例如IGN (吲哚啉并苯并二氮呯)化合物)連接至諸如抗體或其片段之細胞結合劑的任何化學部分。連接基可在化合物或抗體保持活性之條件下對酸誘導之裂解、光誘導之裂解、肽酶誘導之裂解、酯酶誘導之裂解及二硫鍵裂解敏感或具有實質性抗性。適合之連接基在此項技術中為熟知的且包括例如二硫基、硫醚基、酸不穩定基團、光不穩定基團、肽酶不穩定基團及酯酶不穩定基團。連接基亦包括如本文中所描述且如此項技術中已知的帶電連接基及其親水性形式。
術語「癌症」及「癌性」係指或描述哺乳動物中之生理狀況，其中細胞群體以不受調節之細胞生長為特徵。「腫瘤」及「贅瘤」係指由過度細胞生長或增殖引起且為良性(非癌性)或惡性(癌性)之一或多個細胞，包括癌前病變。
癌症之實例包括淋巴瘤及白血病。可藉由本發明之方法及試劑(例如抗CD123抗體、其抗原結合片段或其免疫結合物)加以治療及/或預防之癌症或腫瘤生成疾病的實例包括AML、CML、ALL (例如，B-ALL)、CLL、骨髓發育不良症候群、母細胞性漿細胞樣DC贅瘤(BPDCN)白血病、B細胞淋巴瘤包括非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin lymphomas，NHL)、前驅B細胞淋巴母細胞性白血病/淋巴瘤及成熟B細胞贅瘤，諸如B細胞慢性淋巴細胞性白血病(B-CLL)/小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)、B細胞前淋巴細胞性白血病、淋巴漿細胞性淋巴瘤、套細胞淋巴瘤(MCL)、濾泡性淋巴瘤(FL)包括低等級、中級及高級FL、皮膚濾泡中心淋巴瘤、邊緣區B細胞淋巴瘤(MALT型、結節及脾臟型)、毛細胞白血病(HCL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、伯特基氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、漿細胞瘤、漿細胞骨髓瘤、移植後淋巴組織增生性病症、瓦爾登斯托姆氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia)、退行性大細胞淋巴瘤(ALCL)及霍奇金氏白血病(HL)。
術語「個體」係指任何動物(例如哺乳動物)，包括但不限於人類、非人類靈長類、囓齒動物及其類似物，其將為特定治療之受體。典型地，術語「個體」及「患者」在本文中在提及人類個體時可互換使用。
術語「醫藥調配物」係指呈允許活性成分之生物活性有效且不含對將投與該調配物之個體具有不可接受之毒性的額外組分的形式的製劑。此種調配物可為無菌的。
如本文中所揭示之抗體或免疫結合物之「有效量」為足以進行特定陳述之目的之量。「有效量」可相對於所陳述之目的憑經驗且以常規方式確定。
如本文中所使用之「烷基」係指具有一至二十個碳原子之飽和直鏈或分支鏈單價烴基。烷基之實例包括但不限於甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-甲基-1-丙基、-CH2 CH(CH3 )2 )、2-丁基、2-甲基-2-丙基、1-戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基)、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基、3,3-二甲基-2-丁基、1-庚基、1-辛基及其類似基團。烷基較佳具有一至十個碳原子。烷基更佳具有一至四個碳原子。
基團中之碳原子數目在本文中可藉由字首「Cx-xx 」指定，其中x及xx為整數。舉例而言，「C1-4 烷基」為具有1至4個碳原子之烷基。
術語「化合物」或「細胞毒性化合物」可互換使用。其意欲包括其結構或化學式或任何衍生物已揭示於本發明中或其結構或化學式或任何衍生物已以引用之方式併入的化合物。該術語亦包括本發明中所揭示之所有化學式之化合物的立體異構體、幾何異構體、互變異構體、溶劑合物、代謝物及鹽(例如醫藥學上可接受之鹽)。該術語亦包括上述任一者之任何溶劑合物、水合物及多晶型物。本申請案中所描述之某些本發明態樣中之「立體異構體」、「幾何異構體」、「互變異構體」、「溶劑合物」、「代謝物」、「鹽」、「結合物」、「結合物鹽」、「溶劑合物」、「水合物」或「多晶型物」之特定敍述不應解釋為在其他本發明態樣中在未敍述此等其他形式之情況下意欲省略此等形式。
術語「手性」係指具有鏡像搭配物之不可疊加性的分子，而術語「非手性」係指可疊加於其鏡像搭配物上之分子。
術語「立體異構體」係指具有一致化學組成及連接性但其原子在空間中之取向不同，從而不能藉由繞單一鍵旋轉來相互轉化的化合物。
「非對映異構體」係指具有兩個或更多個手性中心且其分子彼此不為鏡像的立體異構體。非對映異構體具有不同的物理性質，例如熔點、沸點、光譜性質及反應性。非對映異構體之混合物可在諸如結晶、電泳及層析之高解析度分析程序下分離。
「對映異構體」係指彼此為不可疊加之鏡像的兩種化合物立體異構體。
本文中所使用之立體化學定義及規定大體上遵循S. P. Parker編, McGraw-Hill,Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York；以及Eliel, E.及Wilen, S.,Stereochemistry of Organic Compounds , John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994。本發明化合物可含有不對稱或手性中心，且因此以不同的立體異構形式存在。意欲本發明化合物之所有立體異構形式，包括但不限於非對映異構體、對映異構體及阻轉異構體以及其混合物，諸如外消旋混合物，形成本發明之一部分。許多有機化合物以光學活性形式存在，亦即其能夠使平面偏振光之平面旋轉。在描述光學活性化合物時，字首D及L或R及S用於表示分子關於其手性中心之絕對構型。字首d及l或(+)及(-)用於指定由化合物所致之平面偏振光旋轉標識，其中(-)或l意謂該化合物左旋。以(+)或d為字首之化合物右旋。對於指定化學結構，此等立體異構體為相同的，但其彼此為鏡像。特定立體異構體亦可稱為對映異構體，且此類異構體之混合物通常稱為對映異構混合物。對映異構體之50:50混合物稱為外消旋混合物或外消旋物，其可在化學反應或過程中無立體選擇或立體特異性之情況下存在。術語「外消旋混合物」及「外消旋物」係指缺乏光學活性之兩種對映異構種類的等莫耳混合物。
術語「互變異構體」或「互變異構形式」係指具有不同能量之結構異構體，其可經由低能量屏障相互轉化。舉例而言，質子互變異構體(亦稱為質子移變互變異構體)包括經由質子遷移而相互轉化，諸如酮-烯醇及亞胺-烯胺異構化。原子價互變異構體包括藉由一些鍵結電子之重組而相互轉化。
如本文中所使用之片語「醫藥學上可接受之鹽」係指本發明化合物之醫藥學上可接受之有機或無機鹽。例示性鹽包括但不限於硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、丹寧酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、龍膽酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、糖酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲烷磺酸鹽「甲磺酸鹽」、乙烷磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽及雙羥萘酸鹽(亦即，1,1'-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘甲酸鹽))鹽、鹼金屬(例如鈉及鉀)鹽、鹼土金屬(例如鎂)鹽及銨鹽。醫藥學上可接受之鹽可涉及包括另一分子，諸如乙酸根離子、琥珀酸根離子或其他相對離子。相對離子可為使母體化合物上之電荷穩定的任何有機或無機部分。此外，醫藥學上可接受之鹽可在其結構中具有多於一個帶電原子。多個帶電原子為醫藥學上可接受之鹽的一部分的情形下可具有多個相對離子。因此，醫藥學上可接受之鹽可具有一或多個帶電原子及/或一或多個相對離子。
若本發明化合物為鹼，則所要醫藥學上可接受之鹽可藉由本領域中可利用之任何適合方法來製備，例如用以下各物處理游離鹼：無機酸，諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸及其類似酸；或有機酸，諸如乙酸、馬來酸、琥珀酸、杏仁酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水楊酸、哌喃糖基酸(諸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸)、α醇酸(諸如檸檬酸或酒石酸)、胺基酸(諸如天冬胺酸或麩胺酸)、芳族酸(諸如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(諸如對甲苯磺酸或乙磺酸)或其類似物。
若本發明化合物為酸，則所要醫藥學上可接受之鹽可藉由任何適合方法來製備，例如用以下各物處理游離酸：無機或有機鹼，諸如胺(一級胺、二級胺或三級胺)、鹼金屬氫氧化物或鹼土金屬氫氧化物或其類似物。適合鹽之說明性實例包括但不限於來源於諸如甘胺酸及精胺酸之胺基酸、氨、一級胺、二級胺及三級胺以及諸如哌啶、嗎啉及哌嗪之環胺的有機鹽，及來源於鈉、鈣、鉀、鎂、錳、鐵、銅、鋅、鋁及鋰之無機鹽。
如本文中所使用，術語「溶劑合物」意謂進一步包括藉由非共價分子間力結合之化學計算量或非化學計算量之諸如水、異丙醇、丙酮、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸及乙醇胺二氯甲烷、2-丙醇或其類似物之溶劑的化合物。藉由向化合物中添加至少一莫耳當量之諸如甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇或水之羥基溶劑以溶解或水合該亞胺部分而容易地製備化合物之溶劑合物或水合物。
片語「醫藥學上可接受」指示物質或組合物必須在化學上及/或在毒理學上與構成調配物之其他成分及/或用其治療之哺乳動物相容。
術語「胺基酸」係指天然存在之胺基酸或非天然存在之胺基酸。在一個實施例中，胺基酸由NH2 -C(Raa' Raa )-C(=O)OH表示，其中Raa 及Raa' 各自獨立地為H、具有1至10個碳原子之視情況經取代之直鏈、分支鏈或環狀烷基、烯基或炔基、芳基、雜芳基或雜環基，或Raa 與N末端氮原子可共同形成雜環狀環(例如，如在脯胺酸中)。術語「胺基酸殘基」係指當自胺基酸之胺及/或羧基端移除一個氫原子時的相應殘基，諸如-NH-C(Raa' Raa )-C(=O)O-。
術語「陽離子」係指具有正電荷之離子。陽離子可為單價(例如Na+ 、K+ 、NH4 + 等)、二價(例如Ca2+ 、Mg2+ 等)或多價(例如Al3+ 等)。陽離子較佳為單價。
術語「甲硫胺酸氧化」係指位於細胞結合劑(例如抗體或其抗原結合片段)上之一或多個甲硫胺酸殘基之氧化。在某些實施例中，氧化發生在位於抗體Fc區處之一或多個甲硫胺酸殘基處(例如在Met252、Met358、Met428處，依據EU編號)。在某一實施例中，甲硫胺酸氧化，尤其是抗體Fc區處之甲硫胺酸氧化，可減少與新生兒Fc受體(FcRn)之抗體結合，從而又可影響抗體之循環半衰期。
應理解，在本文中以措辭「包含」描述實施例之情況下，亦提供以「由…組成」及/或「基本上由…組成」加以描述之在其他方面類似之實施例。
如本文中在諸如「A及/或B」之片語中所使用之術語「及/或」意欲包括「A及B」、「A或B」、「A」及「B」。同樣，如本文中在諸如「A、B及/或C」之片語中所使用之術語「及/或」意欲涵蓋以下實施例中之每一者：A、B及C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A及C；A及B；B及C；A(單獨)；B(單獨)；及C(單獨)。抗體、化合物及免疫結合物命名法
如本文中所使用，用於抗體、細胞毒性化合物及其免疫結合物之命名法一般採用以下含義。
本發明之例示性抗體或其抗原結合片段示於下表中。舉例而言，G4723A抗體為在EU編號位置442處具有半胱胺酸、具有SEQ ID NO:8之重鏈全長序列及SEQ ID NO:10之輕鏈全長序列的人類化抗CD123抗體。
本發明之抗體或其抗原結合片段可經由具有Lys側鏈胺基或Cys側鏈硫醇基之鍵聯與某些細胞毒性劑結合。以下出於說明之目的列出本說明書(包括實例)中所描述之某些代表性(非限制性)細胞毒性劑及免疫結合物。注意：大部分化合物，諸如DGN462、DGN549-C及DGN549-L，可能經磺化(分別示為sDGN462及sDGN549-C)。 Y為-SO3 H或其鈉鹽；WC 為2；且WL 為1至10之整數。 2. 醫藥組合物
在第一態樣中，本發明提供一種醫藥組合物，該醫藥組合物包含本文中所描述之免疫結合物(例如以下所描述之第一特定實施例至第二十六特定實施例之免疫結合物)及0.1 mM至20 mM甲硫胺酸。驚訝地發現在本發明之免疫結合物之製備及/或儲存期間發生顯著量之甲硫胺酸氧化。特定言之，曝光較長時段，諸如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、24、48、72小時或更久，使免疫結合物中產生大量甲硫胺酸氧化。在相似條件下，在曝光及/或儲存後觀測到相應裸抗體不存在顯著量之甲硫胺酸氧化。包含本文中所描述之免疫結合物之本發明醫藥組合物中存在甲硫胺酸使該等免疫結合物中之甲硫胺酸氧化量與不含甲硫胺酸之醫藥組合物相比有所減少，尤其在曝光後。
在第一實施例中，本發明之醫藥組合物包含本文中所描述之免疫結合物(例如，式(IA)、式(IB)或式(IC)之免疫結合物，或者以下所描述之第一特定實施例至第二十六特定實施例之免疫結合物)及0.1 mM至10 mM甲硫胺酸。
在某些實施例中，本發明之醫藥組合物包含本文中所描述之免疫結合物(例如，式(IA)、式(IB)或式(IC)之免疫結合物，或者以下所描述之第一特定實施例至第二十六特定實施例之免疫結合物)及0.5 mM至5 mM甲硫胺酸。
在某些實施例中，本發明之醫藥組合物包含本文中所描述之免疫結合物(例如，式(IA)、式(IB)或式(IC)之免疫結合物，或者以下所描述之第一特定實施例至第二十六特定實施例之免疫結合物)及1.0 mM至4.0 mM甲硫胺酸。在某些實施例中，該醫藥組合物中之甲硫胺酸濃度為3 mM。
在某些實施例中，當以上所描述之本發明之醫藥組合物在室溫下曝光6小時或更久時，該免疫結合物具有少於50%、少於40%、少於35%、30%、少於25%、少於20%或少於15%、少於10%、少於5%、少於4%、少於3%、少於2%或少於1%之甲硫胺酸氧化。
在第二實施例中，本發明之醫藥組合物包含1 mM至4 mM甲硫胺酸及由下式表示之免疫結合物：(IIA)； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： Y為-SO3 H或其鈉鹽； WC 為2；且 CBA為抗CD123抗體，該抗CD123抗體包含：a)具有SEQ ID NO:8中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白重鏈；及b)具有SEQ ID NO:10中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。
在第三實施例中，本發明之醫藥組合物包含1 mM至4 mM甲硫胺酸及由下式表示之免疫結合物：(IIB)； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： Y為-SO3 H或其鈉鹽； WL 為1至10之整數；且 CBA為抗CD33抗體，該抗CD33抗體包含具有SEQ ID NO:18中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白重鏈及具有SEQ ID NO:20中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。
在第四實施例中，該第一實施例、第二實施例或第三實施例之醫藥組合物包含3 mM甲硫胺酸。
在第五實施例中，當該第一實施例、第二實施例、第三實施例或第四實施例之醫藥組合物在室溫下曝光6小時時，該免疫結合物具有少於15%、少於10%、少於5%、少於4%、少於3%、少於2%或少於1%之甲硫胺酸氧化。
在第六實施例中，該第一實施例、第二實施例、第三實施例、第四實施例或第五實施例之醫藥組合物處於防止該醫藥組合物曝光之容器中。可使用任何適合之容器(例如小瓶或注射器)。舉例而言，可使用耐光(例如琥珀色、黃-綠色或藍色)容器，諸如有色玻璃或有色塑膠容器(例如小瓶或注射器)來減少曝光。或者，若以諸如紙箱、塑膠箱或鋁箔之耐光不透明覆蓋物保護無色或半透明容器，則可使用無色或半透明容器。另外，阻擋400-435 nm以下之光從而防止具有與細胞毒性有效負載(例如DGN462、DGN549)之吸收光譜類似之波長的光進入醫藥組合物的任何容器、過濾器或小瓶均適用於本發明。另外，可向調配物中添加光吸收添加劑以便在曝光時保護醫藥組合物。
在第七實施例中，該第一實施例、第二實施例、第三實施例、第四實施例、第五實施例或第六實施例之醫藥組合物包含1 mg/mL至10 mg/mL、1 mg/mL至5 mg/mL、1 mg/mL至3 mg/mL或1.5 mg/mL至2.5 mg/mL免疫結合物。在某些實施例中，該第二實施例、第三實施例、第四實施例、第五實施例或第六實施例之醫藥組合物包含2 mg/mL免疫結合物。
在第八實施例中，該第一實施例、第二實施例、第三實施例、第四實施例、第五實施例、第六實施例或第七實施例之醫藥組合物更包含亞硫酸氫鈉。在某些實施例中，該醫藥組合物中之亞硫酸氫鈉濃度為10 µM至100 µM、20 µM至90 µM、30 µM至80 µM、30 µM至70 µM、40 µM至60 µM或45 µM至55 µM亞硫酸氫鈉。在某些實施例中，該第二實施例、第三實施例、第四實施例、第五實施例、第六實施例或第七實施例之醫藥組合物更包含50 µM亞硫酸氫鈉。
在第九實施例中，該第一實施例、第二實施例、第三實施例、第四實施例、第五實施例、第六實施例、第七實施例或第八實施例之醫藥組合物更包含一或多種醫藥學上可接受之媒劑(例如載劑、賦形劑) (Remington, The Science and Practice of Pharmacy第20版, Mack Publishing, 2000)。適合之醫藥學上可接受之媒劑包括但不限於無毒緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、組胺酸及其他有機酸；鹽，諸如氯化鈉；防腐劑(例如十八基二甲基苯甲基氯化銨；氯化六甲雙銨；氯化苯銨；氯化苯釷；苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥苯甲酸烷基酯，諸如對羥苯甲酸甲酯或對羥苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量多肽(例如少於約10個胺基酸殘基)；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩胺醯胺、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；碳水化合物，諸如單糖、二糖、葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及非離子表面活性劑，諸如TWEEN或聚乙二(PEG)。
在某些實施例中，該第一實施例、第二實施例、第三實施例、第四實施例、第五實施例、第六實施例、第七實施例或第八實施例之醫藥組合物更包含亞硫酸氫鈉、緩衝液、糖及非離子表面活性劑。在某些實施例中，本發明之醫藥組合物更包含亞硫酸氫鈉、琥珀酸鹽或組胺酸緩衝液、海藻糖及聚山梨醇酯20。
在某些實施例中，該醫藥組合物中之緩衝液(例如琥珀酸鹽或組胺酸)濃度處於5 mM至50 mM、5 mM至25 mM、5 mM至15 mM、10 mM至25 mM或15 mM至25 mM之範圍內。在某些實施例中，該緩衝液濃度為10 mM或20 mM。
在某些實施例中，該醫藥組合物中之糖(例如海藻糖)濃度處於5%至10%、6%至8%、6.5%至7.5%、7.0%至7.4%、7.1%至7.3% (w/v)之範圍內。在某些實施例中，該醫藥組合物中之糖(例如海藻糖)濃度為7.2% (w/v)。
在某些實施例中，該醫藥組合物中之非離子表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)濃度處於0.01%至0.1%、0.01%至0.05%或0.01%至0.03% (w/v)之範圍內。在某些實施例中，該醫藥組合物中之非離子表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)濃度為0.02% (w/v)。
在第十實施例中，該第一實施例、第二實施例、第四實施例、第五實施例、第六實施例、第七實施例、第八實施例或第九實施例之醫藥組合物之pH值為4至5、4至4.5、4至4.4或4.1至4.3。在某些實施例中，該pH值為4.2。
在第十一實施例中，該第一實施例、第三實施例、第四實施例、第五實施例、第六實施例、第七實施例、第八實施例或第九實施例之醫藥組合物之pH值為5.5至6.5、5.9至6.3或6.0至6.2。在某些實施例中，該pH值為6.1。
在第十二實施例中，本發明之醫藥組合物包含2 mg/mL式(IIA)免疫結合物、3 mM甲硫胺酸、10 mM琥珀酸鹽、50 µM亞硫酸氫鈉、7.2% (w/v)海藻糖(或8.0% (w/v)二水合海藻糖)及0.01% (w/v)聚山梨醇酯20，且該醫藥組合物之pH值為4.2。
在第十三實施例中，本發明之醫藥組合物包含2 mg/mL式(IIB)免疫結合物、3 mM甲硫胺酸、20 mM組胺酸、50 µM亞硫酸氫鈉、7.2% (w/v)海藻糖(或8.0% (w/v)二水合海藻糖)、0.02% (w/v)聚山梨醇酯20，且該醫藥組合物之pH值為6.1。 3. 減少甲硫胺酸氧化之方法
在第二態樣中，本發明提供一種減少本文中所描述之免疫結合物(例如式(IA)、式(IB)或式(IC)之免疫結合物，或者以下所描述之第一特定實施例至第二十六特定實施例之免疫結合物)中之甲硫胺酸氧化量的方法，該方法包括將該免疫結合物與0.1 mM至20 mM甲硫胺酸混合，以獲得包含該免疫結合物及甲硫胺酸之醫藥組合物。
在第一實施例中，該第二態樣之方法包括將本文中所描述之免疫結合物(例如式(IA)、式(IB)或式(IC)之免疫結合物，或者以下所描述之第一特定實施例至第二十六特定實施例之免疫結合物)與0.5 mM至5 mM甲硫胺酸混合。
在某些實施例中，該第二態樣之方法包括將本文中所描述之免疫結合物(例如式(IA)、式(IB)或式(IC)之免疫結合物，或者以下所描述之第一特定實施例至第二十六特定實施例之免疫結合物)與1.0 mM至4.0 mM甲硫胺酸混合。
在某些實施例中，當藉由以上所描述之本發明第二態樣之方法製備之醫藥組合物在室溫下曝光6小時或更久時，該免疫結合物具有少於50%、少於40%、少於35%、30%、少於25%、少於20%或少於15%、少於10%、少於5%、少於4%、少於3%、少於2%或少於1%之甲硫胺酸氧化。
在第二實施例中，該第二態樣之方法包括將1 mM至4 mM甲硫胺酸與由下式表示之免疫結合物混合：(IIA)； 或其醫藥學上可接受之鹽，獲得包含該免疫結合物及甲硫胺酸之醫藥組合物，其中： Y為-SO3 H或其鈉鹽； WC 為2；且 CBA為抗CD123抗體，該抗CD123抗體包含：a)具有SEQ ID NO:8中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白重鏈；及b)具有SEQ ID NO:10中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。
在第三實施例中，該第二態樣之方法包括將1 mM至4 mM甲硫胺酸與由下式表示之免疫結合物混合：(IIB)； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： Y為-SO3 H或其鈉鹽； WL 為1至10之整數；且 CBA為抗CD33抗體，該抗CD33抗體包含具有SEQ ID NO:18中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白重鏈及具有SEQ ID NO:20中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。
在第四實施例中，該第二態樣之第一實施例、第二實施例或第三實施例之方法包括將3 mM甲硫胺酸與該免疫結合物混合。
在第五實施例中，當藉由該第二態樣之第一實施例、第二實施例、第三實施例或第四實施例之方法製備之醫藥組合物在室溫下曝光6小時時，該免疫結合物具有少於15%、少於10%、少於5%、少於4%、少於3%、少於2%或少於1%之甲硫胺酸氧化。
在第六實施例中，藉由該第二態樣之第一實施例、第二實施例、第三實施例、第四實施例或第五實施例之方法製備之醫藥組合物處於防止該醫藥組合物曝光之容器中。可使用任何適合之容器(例如小瓶或注射器)。舉例而言，可使用耐光(例如琥珀色、黃-綠色或藍色)容器，諸如有色玻璃或有色塑膠容器(例如小瓶或注射器)來減少曝光。或者，若無色或半透明容器受諸如紙箱或塑膠箱之耐光不透明覆蓋物保護，則可使用無色或半透明容器。
在第七實施例中，藉由該第二態樣之第一實施例、第二實施例、第三實施例、第四實施例、第五實施例或第六實施例製備之醫藥組合物包含1 mg/mL至10 mg/mL、1 mg/mL至5 mg/mL、1 mg/mL至3 mg/mL或1.5 mg/mL至2.5 mg/mL免疫結合物。在某些實施例中，藉由該第二態樣之第二實施例、第三實施例、第四實施例、第五實施例或第六實施例之方法製備之醫藥組合物包含2 mg/mL免疫結合物。
在第八實施例中，藉由該第二態樣之第一實施例、第二實施例、第三實施例、第四實施例、第五實施例、第六實施例或第七實施例之方法製備之醫藥組合物更包含亞硫酸氫鈉。在某些實施例中，該醫藥組合物中之亞硫酸氫鈉濃度為10 µM至100 µM、20 µM至90 µM、30 µM至80 µM、30 µM至70 µM、40 µM至60 µM或45 µM至55 µM亞硫酸氫鈉。在某些實施例中，藉由該第二態樣之第二實施例、第三實施例、第四實施例、第五實施例、第六實施例或第七實施例之方法製備之醫藥組合物更包含50 μM亞硫酸氫鈉。
在第九實施例中，藉由該第二態樣之第一實施例、第二實施例、第三實施例、第四實施例、第五實施例、第六實施例、第七實施例或第八實施例之方法製備之醫藥組合物更包含一或多種醫藥學上可接受之媒劑(例如載劑、賦形劑) (Remington, The Science and Practice of Pharmacy第20版, Mack Publishing, 2000)。適合之醫藥學上可接受之媒劑包括但不限於無毒緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、組胺酸及其他有機酸；鹽，諸如氯化鈉；防腐劑(例如十八基二甲基苯甲基氯化銨；氯化六甲雙銨；氯化苯銨；氯化苯釷；苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥苯甲酸烷基酯，諸如對羥苯甲酸甲酯或對羥苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量多肽(例如少於約10個胺基酸殘基)；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩胺醯胺、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；碳水化合物，諸如單糖、二糖、葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及非離子表面活性劑，諸如TWEEN或聚乙二(PEG)。
在某些實施例中，藉由該第二態樣之第一實施例、第二實施例、第三實施例、第四實施例、第五實施例、第六實施例、第七實施例或第八實施例之方法製備之醫藥組合物更包含亞硫酸氫鈉、緩衝液、糖及非離子表面活性劑。在某些實施例中，藉由該第二態樣之第一實施例、第二實施例、第三實施例、第四實施例、第五實施例、第六實施例、第七實施例或第八實施例之方法製備之醫藥組合物更包含亞硫酸氫鈉、琥珀酸鹽或組胺酸緩衝液、海藻糖及聚山梨醇酯20。
在某些實施例中，該醫藥組合物中之緩衝液(例如琥珀酸鹽或組胺酸)濃度處於5 mM至50 mM、5 mM至25 mM、5 mM至15 mM、10 mM至25 mM或15 mM至25 mM之範圍內。在某些實施例中，該緩衝液濃度為10 mM或20 mM。
在某些實施例中，該醫藥組合物中之糖(例如海藻糖)濃度處於5%至10%、6%至8%、6.5%至7.5%、7.0%至7.4%、7.1%至7.3% (w/v)之範圍內。在某些實施例中，該醫藥組合物中之糖(例如海藻糖)濃度為7.2% (w/v)。
在某些實施例中，該醫藥組合物中之非離子表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)濃度處於0.01%至0.1%、0.01%至0.05%或0.01%至0.03% (w/v)之範圍內。在某些實施例中，該醫藥組合物中之非離子表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)濃度為0.02% (w/v)。
在第十實施例中，藉由該第二態樣之第一實施例、第二實施例、第三實施例、第四實施例、第五實施例、第六實施例、第七實施例、第八實施例或第九實施例之方法製備之醫藥組合物之pH值為4至5、4至4.5、4至4.4或4.1至4.3。在某些實施例中，該pH值為4.2。
在第十一實施例中，藉由該第二態樣之第一實施例、第二實施例、第三實施例、第四實施例、第五實施例、第六實施例、第七實施例或第八實施例或第九實施例之方法製備之醫藥組合物之pH值為5.5至6.5、5.9至6.3或6.0至6.2。在某些實施例中，該pH值為6.1。
在第十二實施例中，藉由該第二態樣之第二實施例、第四實施例、第五實施例、第六實施例、第七實施例或第八實施例或第九實施例之方法製備之醫藥組合物包含2 mg/mL式(IIA)免疫結合物、3 mM甲硫胺酸、10 mM琥珀酸鹽、50 µM亞硫酸氫鈉、7.2% (w/v)海藻糖(或8.0% (w/v)二水合海藻糖)及0.01% (w/v)聚山梨醇酯20，且該醫藥組合物之pH值為4.2。
在第十三實施例中，藉由該第二態樣之第三實施例、第四實施例、第五實施例、第六實施例、第七實施例、第八實施例或第九實施例之方法製備之醫藥組合物包含2 mg/mL式(IIB)免疫結合物、3 mM甲硫胺酸、20 mM組胺酸、50 µM亞硫酸氫鈉、7.2% (w/v)海藻糖(或8.0% (w/v)二水合海藻糖)、0.02% (w/v)聚山梨醇酯20，且該醫藥組合物之pH值為6.1。 4. 製備免疫結合物之方法
在第三態樣中，本發明提供一種製備本發明之免疫結合物的方法，該方法包括使CBA與細胞毒性劑或細胞毒性劑-連接基化合物在抗氧化劑存在下反應。
在該第三態樣之第一實施例中，本發明提供一種製備由下式表示之免疫結合物的方法：(IA)， 該方法包括使CBA與由下式表示之細胞毒性劑：或其醫藥學上可接受之鹽在抗氧化劑存在下反應，其中LC '係由表示；且其餘變數如以上針對式(IA)或以上所描述之第一特定實施例至第十三特定實施例所描述。
在某些實施例中，該抗氧化劑使該免疫結合物中之甲硫胺酸氧化量減少。
在某些實施例中，該抗氧化劑為具有胺及/或羧基保護基(例如N-乙醯基、茀基甲氧基羰基(Fmoc)、第三丁氧基羰基(Boc)及羧基苯甲基(Cbz))之甲硫胺酸衍生物、水溶性非親核性硫醚或二甲硫醚。
在某些實施例中，該抗氧化劑為N-乙醯基甲硫胺酸。
在該第三態樣之第二實施例中，本發明提供一種製備由下式表示之免疫結合物的方法：(IB)， 該方法包括以下步驟： (a) 使由下式表示之細胞毒性劑：， 或其醫藥學上可接受之鹽與選自以下之雙官能交聯劑：(a1L)；(a2L)；(a3L)；(a4L)；(a5L)；(a6L)；(a7L)；(a8L)；(a9L)；及(a10L)， 反應以形成細胞毒性劑-連接基化合物，其中X為鹵素；JD 為-SH、-SSRd 或-SC(=O)Rg ；Rd 為苯基、硝基苯基、二硝基苯基、羧基硝基苯基、吡啶基或硝基吡啶基；Rg 為烷基；q為1至5之整數；且U為-H或SO3 H；及 (b) 使該CBA與該細胞毒性劑-連接基化合物在抗氧化劑存在下反應以形成免疫結合物，其中其餘變數如以上針對式(IB)或第十四特定實施例至第十九特定實施例所描述。
在某些實施例中，該細胞毒性劑-連接基化合物在步驟(b)中與該CBA反應之前未經純化。
在某些實施例中，該抗氧化劑使該免疫結合物中之甲硫胺酸氧化量減少。
在某些實施例中，該抗氧化劑為具有胺及/或羧基保護基(例如N-乙醯基、茀基甲氧基羰基(Fmoc)、第三丁氧基羰基(Boc)及羧基苯甲基(Cbz))之甲硫胺酸衍生物、水溶性非親核性硫醚或二甲硫醚。
在某一實施例中，該抗氧化劑為N-乙醯基甲硫胺酸甲酯。
在該第三態樣之第三實施例中，本發明提供一種製備由下式表示之免疫結合物的方法：(IC)， 該方法包括使該CBA與由下式表示之細胞毒性劑：， 或其醫藥學上可接受之鹽反應，其中C(=O)E為反應性酯基，諸如N-羥基琥珀醯亞胺酯、N-羥基磺基琥珀醯亞胺酯、硝基苯基(例如2-硝基苯基或4-硝基苯基)酯、二硝基苯基(例如，2,4-二硝基苯基)酯、磺基四氟苯基(例如，4-磺基-2,3,5,6-四氟苯基)酯或五氟苯基酯，較佳為N-羥基琥珀醯亞胺酯；且其餘變數如以上第二十特定實施例至第二十六特定實施例中所描述。
在某些實施例中，該抗氧化劑使該免疫結合物中之甲硫胺酸氧化量減少。
在某些實施例中，該抗氧化劑為具有胺及/或羧基保護基(例如N-乙醯基、茀基甲氧基羰基(Fmoc)、第三丁氧基羰基(Boc)及羧基苯甲基(Cbz))之甲硫胺酸衍生物、水溶性非親核性硫醚或二甲硫醚。
在某些實施例中，該抗氧化劑為N-乙醯基甲硫胺酸甲酯。
在該第三態樣之第四實施例中，本發明提供一種製備由下式表示之免疫結合物的方法：； 或其醫藥學上可接受之鹽，該方法包括使CBA與由下式表示之細胞毒性劑：或其醫藥學上可接受之鹽在抗氧化劑存在下反應，其中： Y為-SO3 H或其鈉鹽； WC 為2；且 CBA為抗CD123抗體，該抗CD123抗體包含：a) SEQ ID NO:8之免疫球蛋白重鏈完全序列；及b) SEQ ID NO:10之免疫球蛋白輕鏈完全序列。
在某些實施例中，該抗氧化劑使該免疫結合物中之甲硫胺酸氧化量減少。
在某些實施例中，該抗氧化劑為具有胺及/或羧基保護基(例如N-乙醯基、茀基甲氧基羰基(Fmoc)、第三丁氧基羰基(Boc)及羧基苯甲基(Cbz))之甲硫胺酸衍生物、水溶性非親核性硫醚或二甲硫醚。
在某一實施例中，該抗氧化劑為N-乙醯基甲硫胺酸。
在該第三態樣之第五實施例中，本發明提供一種製備由下式表示之免疫結合物的方法：； 或其醫藥學上可接受之鹽，該方法包括以下步驟： (a) 使由下式表示之細胞毒性劑：， 或其醫藥學上可接受之鹽與由下式呈現之雙官能交聯劑磺基-SPDB：反應以形成由下式表示之細胞毒性劑-連接基化合物：， 或其醫藥學上可接受之鹽；及 (b) 使該CBA與該細胞毒性劑-連接基化合物在抗氧化劑存在下反應以形成該免疫結合物，其中： Y為-SO3 H； WL 為1至10之整數；且 CBA為抗CD33抗體，該抗CD33抗體包含具有SEQ ID NO:18中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白重鏈及具有SEQ ID NO:20中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。
在某些實施例中，該細胞毒性劑-連接基化合物在步驟(b)中與該CBA反應之前未經純化。
在某些實施例中，該抗氧化劑使該免疫結合物中之甲硫胺酸氧化量減少。
在某些實施例中，該抗氧化劑為具有胺及/或羧基保護基(例如N-乙醯基、茀基甲氧基羰基(Fmoc)、第三丁氧基羰基(Boc)及羧基苯甲基(Cbz))之甲硫胺酸衍生物、水溶性非親核性硫醚或二甲硫醚。
在某一實施例中，該抗氧化劑為N-乙醯基甲硫胺酸甲酯。
在第六實施例中，本發明提供一種製備由下式表示之免疫結合物的方法：(IIC)， 或其醫藥學上可接受之鹽，該方法包括使該CBA與由下式表示之細胞毒性劑：， 或其醫藥學上可接受之鹽反應，其中： Y為-SO3 H； WL 為1至10之整數；且 CBA為抗體或其抗原結合片段。
在某些實施例中，該抗氧化劑使該免疫結合物中之甲硫胺酸氧化量減少。
在某些實施例中，該抗氧化劑為具有胺及/或羧基保護基(例如N-乙醯基、茀基甲氧基羰基(Fmoc)、第三丁氧基羰基(Boc)及羧基苯甲基(Cbz))之甲硫胺酸衍生物、水溶性非親核性硫醚或二甲硫醚。
在某些實施例中，該抗氧化劑為N-乙醯基甲硫胺酸甲酯。
在第七實施例中，該第三態樣之第一實施例、第二實施例、第三實施例、第四實施例、第五實施例或第六實施例之方法更包括將該免疫結合物純化至調配物緩衝液中以獲得包含該免疫結合物及0.1 mM至20 mM、0.1 mM至10 mM、0.5 mM至5 mM或1 mM至4 mM甲硫胺酸之醫藥組合物。在某些實施例中，該調配物緩衝液包含3 mM甲硫胺酸。
在第八實施例中，該第三態樣之第七實施例之醫藥組合物更包含亞硫酸氫鈉。在某些實施例中，該醫藥組合物中之亞硫酸氫鈉濃度為10 µM至100 µM、20 µM至90 µM、30 µM至80 µM、30 µM至70 µM、40 µM至60 µM或45 µM至55 µM亞硫酸氫鈉。在某些實施例中，該醫藥組合物中之亞硫酸氫鈉濃度為50 µM。
在第九實施例中，該第三態樣之第七實施例或第八實施例之醫藥組合物更包含一或多種醫藥學上可接受之媒劑(例如載劑、賦形劑) (Remington, The Science and Practice of Pharmacy第20版, Mack Publishing, 2000)。適合之醫藥學上可接受之媒劑包括但不限於無毒緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、組胺酸及其他有機酸；鹽，諸如氯化鈉；防腐劑(例如十八基二甲基苯甲基氯化銨；氯化六甲雙銨；氯化苯銨；氯化苯釷；苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥苯甲酸烷基酯，諸如對羥苯甲酸甲酯或對羥苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量多肽(例如少於約10個胺基酸殘基)；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩胺醯胺、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；碳水化合物，諸如單糖、二糖、葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及非離子表面活性劑，諸如TWEEN或聚乙二(PEG)。
在某些實施例中，該第三態樣之第九實施例之醫藥組合物更包含亞硫酸氫鈉、緩衝液、糖及非離子表面活性劑。在某些實施例中，該第三態樣之第九實施例之醫藥組合物更包含亞硫酸氫鈉、琥珀酸鹽或組胺酸緩衝液、海藻糖及聚山梨醇酯20。
在某些實施例中，該醫藥組合物中之緩衝液(例如琥珀酸鹽或組胺酸)濃度處於5 mM至50 mM、5 mM至25 mM、5 mM至15 mM、10 mM至25 mM或15 mM至25 mM之範圍內。在某些實施例中，該緩衝液濃度為10 mM或20 mM。
在某些實施例中，該醫藥組合物中之糖(例如海藻糖)濃度處於5%至10%、6%至8%、6.5%至7.5%、7.0%至7.4%、7.1%至7.3% (w/v)之範圍內。在某些實施例中，該醫藥組合物中之糖(例如海藻糖)濃度為7.2% (w/v)。
在某些實施例中，該醫藥組合物中之非離子表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)濃度處於0.01%至0.1%、0.01%至0.05%或0.01%至0.03% (w/v)之範圍內。在某些實施例中，該醫藥組合物中之非離子表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)濃度為0.02% (w/v)。
在第十實施例中，對於該第三態樣之第七實施例、第八實施例或第九實施例之方法，該醫藥組合物中之免疫結合物濃度處於1 mg/mL至10 mg/mL、1 mg/mL至5 mg/mL、1 mg/mL至3 mg/mL或1.5 mg/mL至2.5 mg/mL之範圍內。在某些實施例中，該免疫結合物之濃度為2 mg/mL。
在第十一實施例中，對於該第三態樣之第七實施例、第八實施例、第九實施例或第十實施例之方法，該醫藥組合物之pH值為4至5、4至4.5、4至4.4或4.1至4.3。在某些實施例中，該pH值為4.2。
在第十二實施例中，對於該第三態樣之第七實施例、第八實施例、第九實施例或第十實施例之方法，該醫藥組合物之pH值為5.5至6.5、5.9至6.3或6.0至6.2。在某些實施例中，該pH值為6.1。
在第十三實施例中，對於該第三態樣之第七實施例、第八實施例或第九實施例之方法，該醫藥組合物包含2 mg/mL式(IIA)免疫結合物、3 mM甲硫胺酸、10 mM琥珀酸鹽、50 µM亞硫酸氫鈉、7.2% (w/v)海藻糖(或8.0% (w/v)二水合海藻糖)及0.01% (w/v)聚山梨醇酯20，且該醫藥組合物之pH值為4.2。
在第十四實施例中，藉由該第三態樣之第七實施例、第八實施例或第九實施例之方法製備之醫藥組合物包含2 mg/mL式(IIB)免疫結合物、3 mM甲硫胺酸、20 mM組胺酸、50 µM亞硫酸氫鈉、7.2% (w/v)海藻糖(或8.0% (w/v)二水合海藻糖)、0.02% (w/v)聚山梨醇酯20，且該醫藥組合物之pH值為6.1。
在某些實施例中，對於以上所描述之方法，在CBA與細胞毒性劑或細胞毒性劑-連接基化合物之反應中可使用任何適合量之抗氧化劑。在某些實施例中，可使用相對於CBA過量之抗氧化劑。抗氧化劑相對於CBA之例示性莫耳比處於200:1至1.5:1、150:1至1.5:1、100:1至1.5:1、50:1至1.5:1、20:1至2:1、15:1至2:1、10:1至2:1或10:1至5:1之範圍內。在某一實施例中，抗氧化劑相對於CBA之比率為10:1。
在某些實施例中，在一或多種適合之溶劑中進行CBA與細胞毒性劑或細胞毒性劑-連接基化合物之反應。在某些實施例中，該一或多種溶劑包含N,N-二甲基乙醯胺(DMA)及/或丙二醇。在某些實施例中，在DMA、丙二醇及緩衝水溶液中進行CBA與細胞毒性劑或細胞毒性劑-連接基化合物之反應。可使用任何適合之緩衝水溶液。例示性緩衝液包括但不限於磷酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽及組胺酸。
在某些實施例中，在適合之溫度下進行CBA與細胞毒性劑或細胞毒性劑-連接基化合物之反應。在某些實施例中，在15℃至25℃之間、5℃至15℃之間、20℃至25℃之間的溫度下進行反應。在某些實施例中，在室溫下進行反應。 5. 細胞結合劑
本發明之免疫結合物中之細胞結合劑可屬於當前已知或已知的任何種類，包括肽及非肽。一般而言，此等可為抗體(諸如多株抗體及單株抗體，尤其單株抗體)、淋巴因子、激素、生長因子、維生素(諸如葉酸等，其可結合至其細胞表面受體，例如葉酸受體)、營養物轉運分子(諸如轉鐵蛋白)或者任何其他細胞結合分子或物質。
在某些實施例中，該細胞結合劑為抗體、單鏈抗體、特異性結合靶細胞之抗體片段、單株抗體、單鏈單株抗體、特異性結合靶細胞之單株抗體片段(或「抗原結合部分」)、嵌合抗體、特異性結合靶細胞之嵌合抗體片段(或「抗原結合部分」)、結構域抗體(例如sdAb)或特異性結合靶細胞之結構域抗體片段。
在某些實施例中，該細胞結合劑為人類化抗體、人類化單鏈抗體或人類化抗體片段(或「抗原結合部分」)。
在某些實施例中，該細胞結合劑為表面重整抗體、表面重整單鏈抗體或表面重整抗體片段(或「抗原結合部分」)。
在某些實施例中，其中該細胞結合劑為抗體或其抗原結合部分(包括抗體衍生物)，該CBA可結合靶細胞上之配位體，諸如細胞表面配位體，包括細胞表面受體。
在某些實施例中，該細胞結合劑為抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段：(a)結合人類CD123/IL3-Rα抗原之胺基酸101至346內之抗原決定基，及(b)抑制抗原陽性TF-1細胞中之IL3依賴性增殖(參見WO2017/004026，該案係以引用之方式整體併入本文中)。
在某些實施例中，該細胞結合劑為如WO2017/004026中所描述之抗CD123抗體或其抗原結合片段，該案係以引用之方式併入本文中。
在某些實施例中，該抗CD123抗體或其抗原結合片段可包含：a)至少一個重鏈可變區或其片段，其包含三個序列互補性決定區(CDR)，分別為CDR1、CDR2及CDR3，其中CDR1具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列，CDR2具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列，且CDR3具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列；及b)至少一個輕鏈可變區或其片段，其包含三個序列互補性決定區(CDR)，分別為CDR1、CDR2及CDR3，其中CDR1具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列，CDR2具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列，且CDR3具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列。
在某些實施例中，該抗CD123抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列的重鏈可變區及具有SEQ ID NO:9之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在某些實施例中，該抗CD123抗體具有SEQ ID NO:8之重鏈全長序列及SEQ ID NO:10之輕鏈全長序列。
在某些實施例中，該細胞結合劑為如美國專利第7,342,110號及第7,557,189號中所描述之抗CD33抗體或其抗原結合片段，該案係以引用之方式併入本文中。
在某些實施例中，該抗CD33抗體或其抗原結合片段可包含：a)至少一個重鏈可變區或其片段，其包含三個序列互補性決定區(CDR)，分別為CDR1、CDR2及CDR3，其中CDR1具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列，CDR2具有SEQ ID NO:15之胺基酸序列，且CDR3具有SEQ ID NO:16之胺基酸序列；及b)至少一個輕鏈可變區或其片段，其包含三個序列互補性決定區(CDR)，分別為CDR1、CDR2及CDR3，其中CDR1具有SEQ ID NO:11之胺基酸序列，CDR2具有SEQ ID NO:12之胺基酸序列，且CDR3具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列。
在某些實施例中，該抗CD33抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列的重鏈可變區及具有SEQ ID NO:19之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在某些實施例中，該抗CD33抗體具有SEQ ID NO:18之重鏈全長序列及SEQ ID NO:20之輕鏈全長序列。
在某些實施例中，該抗CD33抗體為huMy9-6抗體。
在某些實施例中，本文中所描述之抗體為鼠類抗體、非人類哺乳動物抗體、嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。舉例而言，該人類化抗體可為CDR移植抗體或表面重整抗體。在某些實施例中，該抗體為全長抗體。在某些實施例中，其抗原結合片段為Fab、Fab'、F(ab')2 、Fd 、單鏈Fv或scFv、二硫鍵連接之Fv 、V-NAR結構域、IgNar、內抗體、IgGΔCH2 、迷你抗體、F(ab')3 、四功能抗體、三功能抗體、雙功能抗體、單結構域抗體、DVD-Ig、Fcab、mAb2 、(scFv)2 或scFv-Fc。 6. 免疫結合物
本發明之免疫結合物包含與一或多個本文中所描述之細胞毒性劑分子共價連接之本文中所描述之細胞結合劑(例如抗體或其抗原結合片段)。
在某些實施例中，該細胞毒性劑為苯并二氮呯化合物，諸如吡咯并苯并二氮呯(PBD)或吲哚啉并苯并二氮呯(IGN)化合物。
如本文中所使用，「苯并二氮呯」化合物為具有苯并二氮呯核心結構之化合物。苯并二氮呯核心可經一或多個環結構取代或未經取代及/或與一或多個環結構稠合。其亦包括具有藉由連接基連接之兩個苯并二氮呯核心之化合物。作為苯并二氮呯核心之一部分之亞胺官能基(-C=N-)可經還原。
如本文中所使用，「吡咯并苯并二氮呯」(PBD)化合物為具有吡咯并苯并二氮呯核心結構之化合物。吡咯并苯并二氮呯可經取代或未經取代。其亦包括具有藉由連接基連接之兩個吡咯并苯并二氮呯核心之化合物。作為吲哚啉并苯并二氮呯核心之一部分之亞胺官能基(-C=N-)可經還原。
在某些實施例中，該等吡咯并苯并二氮呯化合物包含由表示之核心結構，該核心結構可視情況經取代。
在某些實施例中，該等吡咯并苯并二氮呯化合物包含由表示之核心結構，該核心結構可視情況經取代。
如本文中所使用，「吲哚啉并苯并二氮呯」(IGN)化合物為具有吲哚啉并苯并二氮呯核心結構之化合物。吲哚啉并苯并二氮呯可經取代或未經取代。其亦包括具有藉由連接基連接之兩個吲哚啉并苯并二氮呯核心之化合物。作為吲哚啉并苯并二氮呯核心之一部分之亞胺官能基(-C=N-)可經還原。
在某些實施例中，該吲哚啉并苯并二氮呯化合物包含由表示之核心結構，該核心結構可視情況經取代。
在一些實施例中，該吲哚啉并苯并二氮呯化合物包含由表示之核心結構，該核心結構可視情況經取代。
在某些實施例中，本發明之免疫結合物包含本文中所描述之細胞結合劑(包括抗體或其抗體片段)，該細胞結合劑係經由位於該細胞結合劑上之一或多個半胱胺酸殘基之硫醇基(-SH)共價連接至本文中所描述之細胞毒性劑(諸如以下第一特定實施例至第十三特定實施例中所描述之彼等免疫結合物)。
在第一特定實施例中，該免疫結合物係由下式表示：(IA)， CBA為抗體或其抗原結合片段，其中CBA係經由位於該CBA上之一或多個半胱胺酸殘基之硫醇基而連接至CyCys ； WC 為1或2；且 CyCys 係由下式表示：， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： 介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H或(C1 -C4 )烷基；並且當其為單鍵時，X為-H或胺保護部分，Y為-OH或-SO3 H； R1 為-H或(C1 -C3 )烷基； P1 為胺基酸殘基或含有2至5個胺基酸殘基之肽； Ra 及Rb 在每次出現時獨立地為-H、(C1 -C3 )烷基或帶電取代基或可離子化基團Q； m為1至6之整數； LC 係由表示，s1為與CBA共價連接之位點，且s2為與CyCys 上之-C(=O)-基團共價連接之位點；其中： R2 為-H或(C1 -C3 )烷基； R3 及R4 在每次出現時獨立地為-H或(C1 -C3 )烷基；且 n為介於1與10之間的整數。
在第二特定實施例中，對於式(IA)之免疫結合物，Ra 及Rb 均為H；且R1 為H或Me；並且其餘變數如以上第一特定實施例中所描述。
在第三特定實施例中，對於式(IA)之免疫結合物，P係選自Gly-Gly-Gly、Ala-Val、Val-Ala、Val-Cit、Val-Lys、Phe-Lys、Lys-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp、Cit、Phe-Ala、Phe-N9 -甲苯磺醯基-Arg、Phe-N9 -硝基-Arg、Phe-Phe-Lys、D-Phe-Phe-Lys、Gly-Phe-Lys、Leu-Ala-Leu、Ile-Ala-Leu、Val-Ala-Val、Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:21)、b-Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:22)、Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID NO:23)、Val-Arg、Arg-Val、Arg-Arg、Val-D-Cit、Val-D-Lys、Val-D-Arg、D-Val-Cit、D-Val-Lys、D-Val-Arg、D-Val-D-Cit、D-Val-D-Lys、D-Val-D-Arg、D-Arg-D-Arg、Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala、D-Ala-D-Ala、Ala-Met及Met-Ala；且其餘變數如第一特定實施例或第二特定實施例中所描述。
在第四特定實施例中，對於式(IA)之免疫結合物，P為Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala或D-Ala-D-Ala；且其餘變數如第一特定實施例或第二特定實施例中所描述。
在第五特定實施例中，對於式(IA)之免疫結合物，Q為-SO3 H；且其餘變數如第一特定實施例、第二特定實施例、第三特定實施例或第四特定實施例中所描述。
在第六特定實施例中，對於式(IA)之免疫結合物，Q為H；且其餘變數如第一特定實施例、第二特定實施例、第三特定實施例或第四特定實施例中所描述。
在第七特定實施例中，對於式(IA)之免疫結合物，R3 及R4 均為H；n為1至6之整數；且其餘變數如第一特定實施例、第二特定實施例、第三特定實施例、第四特定實施例、第五特定實施例或第六特定實施例中所描述。
在第八特定實施例中，對於式(IA)之免疫結合物，-LC -係由下式表示：； 且其餘變數如第一特定實施例、第二特定實施例、第三特定實施例、第四特定實施例、第五特定實施例、第六特定實施例或第七特定實施例中所描述。
在第九特定實施例中，對於式(IA)之免疫結合物，該免疫結合物係由下式表示：； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H；並且當其為單鍵時，X為-H且Y為-OH或-SO3 H；且其餘變數如第一特定實施例中所描述。
在某些實施例中，介於N與C之間的雙線表示單鍵，X為-H且Y為-SO3 H。
在第十特定實施例中，對於第一特定實施例至第九特定實施例之免疫結合物，該細胞結合劑(CBA)為抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段(a)結合人類CD123/IL3-Rα抗原之胺基酸101至346內之抗原決定基，及(b)抑制抗原陽性TF-1細胞中之IL3依賴性增殖。
在第十一特定實施例中，對於第一特定實施例至第十特定實施例之免疫結合物，該CBA為抗CD123抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段包含： a) 免疫球蛋白重鏈可變區，其包含具有SEQ ID NO:4中所示之胺基酸序列的CDR1、具有SEQ ID NO:5中所示之胺基酸序列的CDR2及具有SEQ ID NO:6中所示之胺基酸序列的CDR3；以及 b) 免疫球蛋白輕鏈可變區，其包含具有SEQ ID NO:1中所示之胺基酸序列的CDR1、具有SEQ ID NO:2中所示之胺基酸序列的CDR2及具有SEQ ID NO:3中所示之胺基酸序列的CDR3。
在第十二特定實施例中，對於第一特定實施例至第十一特定實施例之免疫結合物，該CBA為抗CD123抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:7之VH 序列及SEQ ID NO:9之VL 序列。
在第十三特定實施例中，對於第一特定實施例至第十一特定實施例之免疫結合物，該CBA為抗CD123抗體，該抗CD123抗體包含：a)具有SEQ ID NO:8中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白重鏈；及b)具有SEQ ID NO:10中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。
在某些實施例中，對於第一特定實施例至第十三特定實施例中所描述之免疫結合物，wC 為2。
在某一實施例中，對於本文中所描述之免疫結合物(例如，以上所描述之第一特定實施例至第十三特定實施例中所描述之免疫結合物)，在包含該等免疫結合物之組合物中，每個抗體分子之由CyCys 表示之細胞毒性劑分子之數目之平均比率(即，wC 之平均值，亦稱為「DAR」)處於1.5至2.1、1.6至2.1、1.7至2.1、1.8至2.1、1.5至2.0、1.6至2.0、1.7至2.0或1.8至2.0之範圍內。在某些實施例中，DAR為1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0或2.1。
在某些實施例中，本發明之免疫結合物包含本文中所描述之細胞結合劑(包括抗體或其抗體片段)，該細胞結合劑係經由位於該細胞結合劑(CBA)上之一或多個離胺酸殘基之ε-胺基而共價連接至本文中所描述之細胞毒性劑(諸如以下第十四特定實施例至第二十六特定實施例中所描述之免疫結合物)。
在第十四特定實施例中，該免疫結合物係由下式表示：(IB)， 其中： CBA為抗體或其抗原結合片段； WL 為1至20之整數；且 CyLys1 係由下式表示：； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： 介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H或(C1 -C4 )烷基；並且當其為單鍵時，X為-H或胺保護部分且Y為-OH或-SO3 H； Rx 獨立地為(C1 -C6 )烷基； W'為-NRe ； Re 為-(CH2 -CH2 -O)n1 -Rk ； n1為2至6之整數； Rk 為-H或-Me； Zs 係選自以下諸式中之任一者：(b1)；(b2)；(b3)；(b4)；(b5)；(b6)；(b7)；(b8)；(b9)；及(b10)， 其中： q為1至5之整數；且 M+ 為-H+ 或陽離子。
在第十五特定實施例中，對於式(IB)之免疫結合物，Rx 獨立地為-(CH2 )p -(CRf Rg )-，其中Rf 及Rg 各自獨立地為-H或(C1 -C4 )烷基；且p為0、1、2或3；並且其餘變數如第十四特定實施例中所描述。
在第十六特定實施例中，對於式(IB)之免疫結合物，Rf 與Rg 相同或不同且係選自-H及-Me；並且其餘變數如第十五特定實施例中所描述。
在第十七特定實施例中，對於式(IB)之免疫結合物，該免疫結合物係由下式表示：；或； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中WL 為1至10之整數；介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H；並且當其為單鍵時，X為-H且Y為-OH或-SO3 H；並且其餘變數如第十四特定實施例中所描述。
在某些實施例中，介於N與C之間的雙線表示單鍵，X為-H且Y為-SO3 H。
在第十八特定實施例中，對於式(IB)之免疫結合物，該免疫結合物係由下式表示：； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中變數如第十三特定實施例中所描述。
在第十九特定實施例中，對於第十四特定實施例至第十八特定實施例之免疫結合物，該CBA為抗CD33抗體，該抗CD33抗體包含具有SEQ ID NO:18中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白重鏈及具有SEQ ID NO:20中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。
在第二十特定實施例中，該免疫結合物係由下式表示：(IC)， 其中： CBA為抗體或其抗原結合片段，其中CBA經由位於該CBA上之一或多個離胺酸殘基之ε-胺基而連接至CyLys1 ； WL 為1至20之整數；且 CyLys1 係由下式表示：， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： 介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H或(C1 -C4 )烷基；並且當其為單鍵時，X為-H或胺保護部分，Y為-OH或-SO3 H； R1 為-H或(C1 -C3 )烷基； P1 為胺基酸殘基或含有2至5個胺基酸殘基之肽； Ra 及Rb 在每次出現時獨立地為-H、(C1 -C3 )烷基或帶電取代基或可離子化基團Q； m為1至6之整數。
在第二十一特定實施例中，對於式(IC)之免疫結合物，Ra 及Rb 均為H；且R1 為H或Me；並且其餘變數如第二十特定實施例中所描述。
在第二十二特定實施例中，對於式(IC)之免疫結合物，P係選自Gly-Gly-Gly、Ala-Val、Val-Ala、Val-Cit、Val-Lys、Phe-Lys、Lys-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp、Cit、Phe-Ala、Phe-N9 -甲苯磺醯基-Arg、Phe-N9 -硝基-Arg、Phe-Phe-Lys、D-Phe-Phe-Lys、Gly-Phe-Lys、Leu-Ala-Leu、Ile-Ala-Leu、Val-Ala-Val、Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:21)、b-Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:22)、Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID NO:23)、Val-Arg、Arg-Val、Arg-Arg、Val-D-Cit、Val-D-Lys、Val-D-Arg、D-Val-Cit、D-Val-Lys、D-Val-Arg、D-Val-D-Cit、D-Val-D-Lys、D-Val-D-Arg、D-Arg-D-Arg、Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala、D-Ala-D-Ala、Ala-Met及Met-Ala；且其餘變數如第二十特定實施例或第二十一特定實施例中所描述。
在第二十三特定實施例中，對於式(IC)之免疫結合物，P為Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala或D-Ala-D-Ala；且其餘變數如第二十或第二十一特定實施例中所描述。
在第二十四特定實施例中，對於式(IC)之免疫結合物，Q為-SO3 H；且其餘變數如第二十特定實施例、第二十一特定實施例、第二十二特定實施例或第二十三特定實施例中所描述。
在第二十五特定實施例中，對於式(IA)之免疫結合物，Q為H；且其餘變數如第二十特定實施例、第二十一特定實施例、第二十二特定實施例或第二十三特定實施例中所描述。
在第二十六特定實施例中，對於式(IC)之免疫結合物，該免疫結合物係由下式表示：(IIC)； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H；並且當其為單鍵時，X為-H且Y為-OH或-SO3 H；並且其餘變數如第二十特定實施例中所描述。
在某些實施例中，介於N與C之間的雙線表示單鍵，X為-H且Y為-SO3 H。在某些實施例中，CBA為抗體或其抗原結合片段。
在某些實施例中，對於本文中所描述之免疫結合物(例如，以上所描述之第十四特定實施例至第二十六特定實施例中所描述之免疫結合物)，在包含該等免疫結合物之組合物中，每個抗體分子之由CyLys1 或CyLys2 表示之細胞毒性劑分子之數目(即，wL 之平均值)之平均比率(亦稱為「DAR」)處於1.0至 5.0、1.5至 4.0、2.0至 3.5或 2.5至 3.0之範圍內。在某些實施例中，DAR為2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0。在某些實施例中，DAR為2.8或2.7。
在一個實施例中，第十九特定實施例中所描述之免疫結合物之DAR值處於2.4至3.0之範圍內。在一個實施例中，DAR為2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0。在另一實施例中，該DAR值為2.8。 7. 使用方法
本文中所描述之醫藥組合物可用眾多方式投與以用於局部或全身治療。投與可經局部(諸如投與至黏膜，包括經陰道及直腸遞送)，諸如經皮貼劑、軟膏、洗劑、乳膏、凝膠、滴劑、栓劑、噴霧、液體及粉劑；經肺(例如藉由吸入或吹入粉劑或氣霧劑，包括藉由噴霧器；經氣管內、經鼻內、經表皮及經皮)；經口；或非經腸，包括經靜脈內、經動脈內、經皮下、經腹膜內或經肌肉內注射或輸注；或經顱內(例如，經鞘內或經心室內)投與。在一些特定實施例中，投與係經靜脈內進行。本文中所描述之醫藥組合物亦可在活體外或離體使用。
本發明之醫藥組合物可與第二化合物，諸如已知在治療相關疾病或病症方面有效之化合物一起作為組合療法加以使用。在一些實施例中，該第二化合物為抗癌劑。在一些實施例中，該等方法涵蓋投與第二化合物及本發明之醫藥組合物，從而獲得與單獨投與該醫藥組合物相比更佳之效力。該第二化合物可經由眾多方式投與，包括例如經局部、經肺、經口、非經腸或經顱內投與。在一些實施例中，該投與係經口進行。在一些實施例中，該投與係經靜脈內進行。在一些實施例中，該投與係經口與經靜脈內進行。
本發明之醫藥組合物亦可與鎮痛劑或其他藥物組合於醫藥組合調配物或給藥方案中作為組合療法。
本發明之醫藥組合物可與具有抗癌性之第二化合物組合於醫藥組合調配物或給藥方案中作為組合療法。該醫藥組合調配物或給藥方案之第二化合物可與該組合之ADC具有互補活性，以便使其不會對彼此造成不利影響。
本發明包括一種在哺乳動物(例如人類)中抑制異常細胞生長或治療增殖性病症之方法，該方法包括向該哺乳動物投與治療有效量之單獨或與第二治療劑組合之本發明之醫藥組合物。
在某些實施例中，哺乳動物之異常細胞生長或增殖性病症為癌症，包括血液癌症、白血病或淋巴瘤。在某些實施例中，該增殖性病症為淋巴器官癌症或血液惡性病。
舉例而言，該癌症可選自由以下組成之群：急性骨髓性白血病(AML，包括低CD33型AML、P-糖蛋白陽性AML、復發性AML或難治性AML)、慢性骨髓性白血病(CML，包括CML急性危象及與CML相關之Abelson致癌基因(Bcr-ABL易位))、骨髓發育不良症候群(MDS)、急性淋巴母細胞性白血病(ALL，包括但不限於急性B淋巴母細胞性白血病或B細胞急性淋巴母細胞性白血病(B-ALL))、慢性淋巴細胞性白血病(CLL，包括里氏症候群(Richter's syndrome)或CLL里氏轉化)、毛細胞白血病(HCL)、急性前骨髓細胞性白血病(APL)、B細胞慢性淋巴組織增生性疾病(B-CLPD)、非典型慢性淋巴細胞性白血病(較佳存在顯著CD11c表現)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、急性漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤(BPDCN)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL，包括套細胞白血病(MCL)及小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL))、霍奇金氏淋巴瘤、系統性肥大細胞病及伯基特氏淋巴瘤。
在某些實施例中，該B-ALL為CD19陽性B-ALL。在某些其他實施例中，該B-ALL為CD19陰性B-ALL。
在某些實施例中，該癌症具有至少一個負面預後因素，例如P-糖蛋白過度表現、EVI1過度表現、p53變化、DNMT3A突變、FLT3內部串聯重複。
癌症療法及其劑量、投與途徑及推薦用法在此項技術中為已知的且已描述於諸如Physician's Desk Reference (PDR)之文獻中。PDR揭示治療各種癌症時已使用之藥劑劑量。此等上述化學治療藥物之治療上有效之給藥方案及劑量將視所治療之特定癌症、疾病程度及熟習此項技術之醫師所熟知的其他因素而定，且可由醫師決定。PDR之內容明確以全文引用之方式併入本文中。熟習此項技術者可回顧PDR，使用以下參數中之一或多個來確定可根據本發明之教示加以使用之化學治療劑及結合物之給藥方案及劑量。此等參數包括：綜合指數；製造商；產品(公司或註冊商標之藥物名稱)；分類索引；一般/化學指標(非商標普通藥物名稱)；藥物之彩色影像；符合FDA標記之產品資訊；化學資訊；功能/作用；適應症及禁忌；試驗研究、副作用、警告。
活體外用途之實例包括處理自體骨髓隨後將其移植至相同患者中以殺死患病或惡性細胞：處理骨髓隨後對其進行移植以便殺死勝任T細胞且預防移植物對抗宿主疾病(GVHD)；處理細胞培養物以便殺死除不表現靶抗原之所要變異體以外的所有細胞；或殺死表現非所要抗原之變異體。
非臨床活體外使用之條件由熟習此項技術者容易地確定。
臨床離體使用之實例為自骨髓中移出腫瘤細胞或淋巴樣細胞隨後進行自體移植用於癌症治療或自體免疫性疾病治療，或自自體或同種異體骨髓或組織中移出T細胞及其他淋巴樣細胞隨後進行移植以便預防GVHD。可如下進行治療。自患者或其他個體收集骨髓，且隨後在含有血清之培養基中培育，向其中添加本發明之醫藥組合物，其中免疫結合物之濃度在約10 μΜ至1 pM之範圍內，在約37℃下持續約30分鐘至約48小時。濃度及培育時間之準確條件，亦即，劑量，由熟習此項技術者容易地確定。在培育之後，用含有血清之培養基洗滌骨髓細胞且根據已知方法經靜脈內返至患者。在患者於收集骨髓之時間與再輸注經處理之細胞之間接受諸如摘除化學療法或總體照射過程之其他治療的情形下，使用標準醫學設備將經處理之骨髓細胞冷凍儲存於液氮中。
對於臨床活體內使用，測試無菌性及內毒素水準之本發明細胞毒性化合物或結合物將作為溶液或凍乾粉末供應。
用於在所選細胞群體中誘導細胞死亡、用於抑制細胞生長及/或用於治療癌症之本發明方法可在活體外、活體內或離體實施。 實例 實例 1. 在 IMGN632 結合反應中添加基於甲硫胺酸之抗氧化劑
藉由用已知方法進行完全還原且使鏈間二硫鍵重新氧化來製備呈還原狀態之攜帶兩個經工程改造之半胱胺酸殘基(處於重鏈CH3區中之C442位置上)之G4723A抗體。向此中間物於50 mM磷酸鉀、50 mM氯化鈉pH 6.0中之溶液中添加10莫耳當量之N -乙醯基甲硫胺酸、N,N -二甲基乙醯胺(DMA)、丙二醇及10莫耳當量之sDGN549-C，得到具有含2% v/v DMA及38% v/v丙二醇之50 mM磷酸鉀、50 mM氯化鈉pH 6.0的最終溶劑組成的反應混合物。使反應在25℃下進行隔夜。
使用Sephadex G25脫鹽管柱將結合物純化至10 mM琥珀酸鹽、8%二水合海藻糖、1 mM甲硫胺酸、0.01% Tween-20、50 µM亞硫酸氫鈉pH 4.2調配物緩衝液中，藉由穿過具有10 kDa分子量截止值之再生纖維素膜進行超濾來加以濃縮，並且經由0.22 µm注射器式過濾器加以過濾。使用具有10 kDa分子量截止值之透析卡匣針對相同調配物緩衝液對結合物進行透析，並且再次經由0.22 µm注射器式過濾器加以過濾。
經純化之結合物據發現藉由UV-Vis具有平均2 mol sDGN549/mol抗體、藉由SEC具有97.7%單體且藉由串聯SEC-C18 RPLC具有0.7%未結合DGN549。如表1中可見，與無甲硫胺酸添加劑之結合反應相比，該等添加劑不影響結合產率或結合物品質。另外，反應中包括甲硫胺酸添加劑及調配物中包括甲硫胺酸看似使Met256氧化百分比(絕對編號或EU編號中之Met252)降低。
抗體與細胞毒性劑之離胺酸連接之結合遵循類似反應條件，但使用10莫耳當量之N -乙醯基甲硫胺酸甲酯及5莫耳當量之DGN549-L (在25℃下，在DMA與50 mM琥珀酸鹽pH 5.5之95:5混合物中用5倍過量之亞硫酸氫鈉預處理4小時)。 表1. 反應中+/- N-乙醯基甲硫胺酸及調配物中+/-甲硫胺酸之情況下的IMGN632結合 實例 2. IMGN632 之甲硫胺酸氧化及耐光性研究
為了進一步研究IMGN632樣品中觀測到高甲硫胺酸氧化水準之原因且為了確定降低甲硫胺酸氧化水準之方法，進行三個實驗：1)冷凍解凍及穩定性研究；2)甲硫胺酸摻加研究；及3)白光實驗研究。
在研究1中，評定儲存小瓶類型對氧化水準之可能影響，確定氮氣覆蓋對降低氧化水準之用途，評定溫度對氧化之影響，評定對不同波長的光的曝露，並且評定冷凍解凍循環之影響。如表2中可見，初步實驗趨勢顯示小瓶類型對甲硫胺酸氧化水準無明確顯著影響。氮氣覆蓋可能具有保護性，但此等實驗之結果不具結論性。溫度對甲硫胺酸氧化亦無顯著影響。表3提供UV光及工作台頂部光曝露對甲硫胺酸氧化水準之結果。曝露於工作台頂部之光或UV光在6小時之後引起高甲硫胺酸氧化水準。此等結果表明藉由將小瓶包裝在鋁箔中來避光可能為防止氧化水準隨時間變化之有效方法。表4顯示在冷凍解凍期間(2小時/循環)曝露於光導致氧化，但冷凍解凍本身在避光情況下對甲硫胺酸氧化無顯著影響。 表2. 小瓶類型及氮氣覆蓋表3. UV光及工作台頂部光曝露表4. 冷凍解凍結果
在研究2中，在室溫下在UV曝露6小時之情況下測試在IMGN632調配物及單獨抗體(G4723A)中摻加不同濃度的甲硫胺酸及其對氧化之影響。如表5中可見，將甲硫胺酸以1-3 mM之水準摻加於調配物緩衝液中可防止免疫結合物調配物中之甲硫胺酸氧化。令人驚訝地，稀釋於免疫結合物調配物緩衝液中並且曝露於光之單獨G4723A抗體未發生氧化，表明當抗體呈免疫結合物形式存在於溶液中時，抗體中之甲硫胺酸氧化與結合過程或有效負載之存在有關。 表5. 甲硫胺酸摻加及抗體對照
在研究3中，免疫結合物樣品在調配物中存在0 mM、1 mM或3 mM甲硫胺酸之情況下在25℃下曝露於4千勒克司之白光，持續72小時。量測甲硫胺酸氧化百分比、單體百分比、高分子量物質百分比、游離藥物濃度及DAR。
圖1顯示在調配物中添加至少1 mM甲硫胺酸可在溶液曝露於光時在一定時間內使甲硫胺酸氧化水準降低。此等結果進一步支持在含有諸如DGN549之DNA烷基化有效負載之免疫結合物之調配物中添加甲硫胺酸(介於1 mM至3 mM甲硫胺酸之間)。
圖2及圖3顯示一定時間內之光曝露引起單體百分比在調配物中存在或不存在甲硫胺酸之情況下稍微降低及高分子量物質百分比在調配物中存在或不存在甲硫胺酸之情況下有所增加。
圖4顯示光曝露引起有效負載(DGN549)降解，從而使游離藥物增加。然而，如表6中可見，光曝露對濃度/DAR存在極小影響至無影響。 表6. 濃度(mg/mL)及DAR結果 實例 3. 藉由 UV 偵測來監測免疫結合物中之甲硫胺酸氧化
開發藉由UV偵測來監測攜帶兩個經工程改造之半胱胺酸殘基(處於重鏈CH3區中之位置442處)之G4723A抗體之甲硫胺酸氧化的分析方法。對利用質譜偵測方法進行平台肽作圖之條件加以最佳化，以便用UV偵測替代質譜偵測步驟。如圖5A及圖5B中可見，原理上可使用質譜以及UV偵測方法來鑑定氧化胰蛋白酶肽及天然胰蛋白酶肽，因此對平台方法進行最佳化將允許互換使用UV偵測來監測甲硫胺酸氧化。該平台方法之最佳化條件由以下步驟組成： 　 在70℃下使用4.5 M鹽酸胍、1.2 M Tris、10 mM EDTA、7 mM DTT pH 7.8進行樣品變性，持續10至15分鐘 　 在室溫下於暗處使用7 µL 1 M吲哚-3-乙酸(IAA)進行樣品烷基化，持續45分鐘，不進行DTT淬滅 　 用負載完全反應體積(507 µL)之Illustra NAP-5純化管柱進行緩衝液交換，用400 µL洗滌且用300 µL在50 MM Tris、10 mM氯化鈣、5 mM甲硫胺酸pH 8.0中加以溶析 　 在37℃下利用胰蛋白酶以1:33之胰蛋白酶:抗體比消化1小時，用TFA淬滅樣品並且轉移至HPLC小瓶 　 基於UPLC與UV偵測進行樣品分析 使用以上步驟，可藉由UPLC-UV偵測成功地定量甲硫胺酸氧化，獲得與肽作圖-質譜偵測方法類似之處於相關氧化範圍內之結果。特定言之，在樣品製備及樣品運作時間方面對肽作圖步驟進行最佳化(亦即，縮短製備及運作時間)。此外，藉由對緩衝液交換溶析/收集體積進行最佳化(亦即，收集更濃之樣品)及增加樣品注入體積(亦即，介於10至50 µL之間的注入體積)來改良UV偵測步驟之敏感度。 實例 4. IMGN632 及 IMGN779 之耐光性研究
在室溫下將含甲硫胺酸或無甲硫胺酸之IMGN632及IMGN779免疫結合物樣品曝露於約1000勒克斯之白光一段時間。在一定時間內量測Met252處之甲硫胺酸氧化百分比。測試以下免疫結合物之耐光性： (1) 無甲硫胺酸之IMGN779：2 mg/ml IMGN779、20 mM組胺酸、8.0% (w/v)二水合海藻糖(亦稱為7.2% w/v海藻糖)、0.02% (w/v)聚山梨醇酯20及50 µM亞硫酸氫鈉，pH 6.1 (2) 含甲硫胺酸之IMGN779：2 mg/ml IMGN779、20 mM組胺酸、8.0% (w/v)二水合海藻糖(亦稱為7.2% w/v海藻糖)、0.02% (w/v)聚山梨醇酯20、50 µM亞硫酸氫鈉及3 mM甲硫胺酸，pH 6.1 (3) 無甲硫胺酸之IMGN632：2 mg/mL IMGN632、10 mM琥珀酸鹽、50 µM亞硫酸氫鈉、8.0% (w/v)二水合海藻糖(亦稱為7.2% (w/v)海藻糖)及0.01% (w/v)聚山梨醇酯20，pH 4.2。 (4) 含甲硫胺酸之IMGN632：2 mg/mL IMGN632、10 mM琥珀酸鹽、50 µM亞硫酸氫鈉、8.0% (w/v)二水合海藻糖(亦稱為7.2% (w/v)海藻糖)、0.01% (w/v)聚山梨糖醇酯20及3 mM甲硫胺酸，pH 4.2。
如圖6中所示，當IMGN779調配物(無3 mM甲硫胺酸)在室溫下曝露於約1000勒克司之白光時，Met252殘基氧化在7天內自18%增至74%。在類似條件下，對於含3 mM甲硫胺酸之IMGN779調配物，觀測到甲硫胺酸氧化稍有增加或並無增加。對於IMGN632免疫結合物觀測到類似結果。
圖1顯示含甲硫胺酸及無甲硫胺酸之IMGN632樣品中之甲硫胺酸氧化百分比在72小時過程中之變化。
圖2顯示含甲硫胺酸及無甲硫胺酸之IMGN632樣品中之單體百分比在72小時過程中之變化。
圖3顯示含甲硫胺酸及無甲硫胺酸之IMGN632樣品中之高分子量物質百分比在72小時過程中之變化。
圖4顯示含甲硫胺酸及無甲硫胺酸之IMGN632樣品中之游離藥物量在72小時過程中之變化。
圖5A及圖5B顯示利用UPLC質譜(A)及UV偵測(B)偵測之氧化胰蛋白酶肽及天然胰蛋白酶肽之層析譜。甲硫胺酸氧化% (如在EU編號位置252處所量測)計算為[100×氧化面積/(氧化面積+天然面積)]。
圖6顯示含甲硫胺酸及無甲硫胺酸之IMGN632及IMGN779樣品中之甲硫胺酸氧化百分比在7天過程中之變化。

Claims (150)

  1. 一種醫藥組合物，其包含免疫結合物及0.1 mM至20 mM甲硫胺酸，其中該免疫結合物係由下式表示：， CBA為抗體或其抗原結合片段； WC 為1或2；且 CyCys 係由下式表示：， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： 介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H或(C1 -C4 )烷基；且當其為單鍵時，X為-H或胺保護部分，Y為-OH或-SO3 H； R1 為-H或(C1 -C3 )烷基； P1 為胺基酸殘基或含有2至5個胺基酸殘基之肽； Ra 及Rb 在每次出現時獨立地為-H、(C1 -C3 )烷基或帶電取代基或可離子化基團Q； m為1至6之整數； LC 係由表示，s1為與CBA共價連接之位點，且s2為與CyCys 上之-C(=O)-基團共價連接之位點；其中： R2 為-H或(C1 -C3 )烷基； R3 及R4 在每次出現時獨立地為-H或(C1 -C3 )烷基；且 n為介於1與10之間的整數。
  2. 如申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中Ra 及Rb 均為H；且R1 為H或Me。
  3. 如申請專利範圍第1項或第2項之醫藥組合物，其中P係選自Gly-Gly-Gly、Ala-Val、Val-Ala、Val-Cit、Val-Lys、Phe-Lys、Lys-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp、Cit、Phe-Ala、Phe-N9 -甲苯磺醯基-Arg、Phe-N9 -硝基-Arg、Phe-Phe-Lys、D-Phe-Phe-Lys、Gly-Phe-Lys、Leu-Ala-Leu、Ile-Ala-Leu、Val-Ala-Val、Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:21)、b-Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:22)、Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID NO:23)、Val-Arg、Arg-Val、Arg-Arg、Val-D-Cit、Val-D-Lys、Val-D-Arg、D-Val-Cit、D-Val-Lys、D-Val-Arg、D-Val-D-Cit、D-Val-D-Lys、D-Val-D-Arg、D-Arg-D-Arg、Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala、D-Ala-D-Ala、Ala-Met及Met-Ala。
  4. 如申請專利範圍第3項之醫藥組合物，其中P為Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala或D-Ala-D-Ala。
  5. 如申請專利範圍第1項至第4項中任一項之醫藥組合物，其中Q為-SO3 H。
  6. 如申請專利範圍第1項至第4項中任一項之醫藥組合物，其中Q為H。
  7. 如申請專利範圍第1項至第6項中任一項之醫藥組合物，其中R3 及R4 均為H；且n為1至6之整數。
  8. 如申請專利範圍第1項至第7項中任一項之醫藥組合物，其中-LC -係由下式表示：。
  9. 如申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該免疫結合物係由下式表示：； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H；且當其為單鍵時，X為-H且Y為-OH或-SO3 H。
  10. 如申請專利範圍第1項至第9項中任一項之醫藥組合物，其中CBA為抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段(a)結合人類CD123/IL3-Rα抗原之胺基酸101至346內之抗原決定基，及(b)抑制抗原陽性TF-1細胞中之IL3依賴性增殖。
  11. 如申請專利範圍第10項之醫藥組合物，其中該抗體或其抗原結合片段包含： a) 免疫球蛋白重鏈可變區，其包含具有SEQ ID NO:4中所示之胺基酸序列的CDR1、具有SEQ ID NO:5中所示之胺基酸序列的CDR2及具有SEQ ID NO:6中所示之胺基酸序列的CDR3；以及 b) 免疫球蛋白輕鏈可變區，其包含具有SEQ ID NO:1中所示之胺基酸序列的CDR1、具有SEQ ID NO:2中所示之胺基酸序列的CDR2及具有SEQ ID NO:3中所示之胺基酸序列的CDR3。
  12. 如申請專利範圍第10項之醫藥組合物，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:7之VH 序列及SEQ ID NO:9之VL 序列。
  13. 如申請專利範圍第10項之醫藥組合物，其中該抗體包含： a) 免疫球蛋白重鏈，其具有SEQ ID NO:8中所示之胺基酸序列；及 b) 免疫球蛋白輕鏈，其具有SEQ ID NO:10中所示之胺基酸序列。
  14. 一種醫藥組合物，其包含免疫結合物及0.1 mM至20 mM甲硫胺酸，其中該免疫結合物係由下式表示：， 其中： CBA為抗體或其抗原結合片段； WL 為1至20之整數；且 CyLys1 係由下式表示：； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： 介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H或(C1 -C4 )烷基；且當其為單鍵時，X為-H或胺保護部分且Y為-OH或-SO3 H； Rx 獨立地為(C1 -C6 )烷基； W'為-NRe ； Re 為-(CH2 -CH2 -O)n1 -Rk ； n1為2至6之整數； Rk 為-H或-Me； Zs 係選自以下諸式中之任一者：(b1)；(b2)；(b3)；(b4)；(b5)；(b6)；(b7)；(b8)；(b9)；及(b10)， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中q為1至5之整數。
  15. 如申請專利範圍第14項之醫藥組合物，其中Rx 獨立地為-(CH2 )p -(CRf Rg )-，其中Rf 及Rg 各自獨立地為-H或(C1 -C4 )烷基；且p為0、1、2或3。
  16. 如申請專利範圍第15項之醫藥組合物，其中Rf 與Rg 相同或不同，且係選自-H及-Me。
  17. 如申請專利範圍第14項之醫藥組合物，其中該免疫結合物係由以下表示：；或； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中WL 為1至10之整數；介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H；且當其為單鍵時，X為-H且Y為-OH或-SO3 H。
  18. 如申請專利範圍第17項之醫藥組合物，其中該免疫結合物係由下式表示：； 或其醫藥學上可接受之鹽。
  19. 如申請專利範圍第14項至第18項中任一項之醫藥組合物，其中該抗體為抗CD33抗體，該抗CD33抗體包含具有SEQ ID NO:18中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白重鏈及具有SEQ ID NO:20中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。
  20. 如申請專利範圍第1項至第19項中任一項之醫藥組合物，其中介於N與C之間的雙線表示單鍵，X為-H且Y為-SO3 H。
  21. 如申請專利範圍第1項至第20項中任一項之醫藥組合物，其中Y為-SO3 H或者其鈉鹽或鉀鹽。
  22. 如申請專利範圍第1項至第21項中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含0.1 mM至10 mM甲硫胺酸。
  23. 如申請專利範圍第22項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含0.5 mM至5 mM甲硫胺酸。
  24. 如申請專利範圍第22項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含1.0 mM至4.0 mM甲硫胺酸。
  25. 如申請專利範圍第24項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含3.0 mM甲硫胺酸。
  26. 如申請專利範圍第1項至第25項中任一項之醫藥組合物，其中當該醫藥組合物在室溫下曝光6小時或更久時，該免疫結合物具有少於40%、少於35%、30%、少於25%、少於20%或少於15%之甲硫胺酸氧化。
  27. 如申請專利範圍第1項至第26項中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物處於防止該醫藥組合物曝光之容器中。
  28. 如申請專利範圍第1項至第27項中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含1 mg/mL至10 mg/mL之該免疫結合物。
  29. 如申請專利範圍第1項至第27項中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含1 mg/mL至5 mg/mL之該免疫結合物。
  30. 如申請專利範圍第1項至第29項中任一項之醫藥組合物，其更包含亞硫酸氫鈉。
  31. 如申請專利範圍第30項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物更包含10 µM至100 µM、20 µM至90 µM或30 µM至80 µM亞硫酸氫鈉。
  32. 如申請專利範圍第30項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物更包含40 µM至60 µM亞硫酸氫鈉。
  33. 如申請專利範圍第30項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物更包含50 µM亞硫酸氫鈉。
  34. 一種醫藥組合物，其包含1 mM至4 mM甲硫胺酸及由下式表示之免疫結合物：； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： Y為-SO3 H或其鈉鹽； WC 為2；且 CBA為抗CD123抗體，該抗CD123抗體包含：a)具有SEQ ID NO:8中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白重鏈；及b)具有SEQ ID NO:10中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。
  35. 如申請專利範圍第34項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含3 mM甲硫胺酸。
  36. 如申請專利範圍第34項或第35項之醫藥組合物，其中當該醫藥組合物在室溫下曝光6小時時，該免疫結合物具有少於15%之甲硫胺酸氧化。
  37. 如申請專利範圍第34項至第36項中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物處於防止該醫藥組合物曝光之容器中。
  38. 如申請專利範圍第34項至第37項中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含1 mg/mL至5 mg/mL之該免疫結合物。
  39. 如申請專利範圍第38項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含1 mg/mL至3 mg/mL之該免疫結合物。
  40. 如申請專利範圍第38項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含1.5 mg/mL至2.5 mg/mL之該免疫結合物。
  41. 如申請專利範圍第38項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含2 mg/mL之該免疫結合物。
  42. 如申請專利範圍第34項至第41項中任一項之醫藥組合物，其更包含亞硫酸氫鈉。
  43. 如申請專利範圍第42項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物更包含10 µM至100 µM、20 µM至90 µM或30 µM至80 µM亞硫酸氫鈉。
  44. 如申請專利範圍第43項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物更包含40 µM至60 µM亞硫酸氫鈉。
  45. 如申請專利範圍第43項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物更包含50 µM亞硫酸氫鈉。
  46. 如申請專利範圍第34項至第45項中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物更包含海藻糖、聚山梨糖醇酯20及琥珀酸酯。
  47. 如申請專利範圍第34項至第41項中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物更包含10 mM琥珀酸酯、50 µM亞硫酸氫鈉、7.2% (w/v)海藻糖及0.01% (w/v)聚山梨糖醇酯20。
  48. 如申請專利範圍第34項至第47項中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物之pH值為4至4.5。
  49. 如申請專利範圍第48項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物之pH值為4.2。
  50. 一種醫藥組合物，其包含1 mM至4 mM甲硫胺酸及由下式表示之免疫結合物：； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： Y為-SO3 H或其鈉鹽； WL 為1至10之整數；且 CBA為抗CD33抗體，該抗CD33抗體包含具有SEQ ID NO:18中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白重鏈及具有SEQ ID NO:20中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。
  51. 如申請專利範圍第50項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含3 mM甲硫胺酸。
  52. 如申請專利範圍第50項或第51項之醫藥組合物，其中當該醫藥組合物在室溫下曝光6小時時，該免疫結合物具有少於15%之甲硫胺酸氧化。
  53. 如申請專利範圍第50項至第52項中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物處於防止該醫藥組合物曝光之容器中。
  54. 如申請專利範圍第50項至第53項中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含1 mg/mL至5 mg/mL之該免疫結合物。
  55. 如申請專利範圍第54項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含1 mg/mL至3 mg/mL之該免疫結合物。
  56. 如申請專利範圍第55項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含1.5 mg/mL至2.5 mg/mL之該免疫結合物。
  57. 如申請專利範圍第56項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含2 mg/mL之該免疫結合物。
  58. 如申請專利範圍第50項至第57項中任一項之醫藥組合物，其更包含亞硫酸氫鈉。
  59. 如申請專利範圍第58項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物更包含10 µM至100 µM、20 µM至90 µM或30 µM至80 µM亞硫酸氫鈉。
  60. 如申請專利範圍第59項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物更包含40 µM至60 µM亞硫酸氫鈉。
  61. 如申請專利範圍第59項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物更包含50 µM亞硫酸氫鈉。
  62. 如申請專利範圍第50項至第61項中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物更包含組胺酸、海藻糖及聚山梨糖醇酯20。
  63. 如申請專利範圍第50項至第57項中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物更包含20 mM組胺酸、50 µM亞硫酸氫鈉、7.2% (w/v)海藻糖、0.02% (w/v)聚山梨糖醇酯20。
  64. 如申請專利範圍第50項至第63項中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物之pH值為5.5至6.5。
  65. 如申請專利範圍第64項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物之pH值為6.1。
  66. 一種減少免疫結合物中之甲硫胺酸氧化之量的方法，該方法包括將該免疫結合物與0.1 mM至20 mM甲硫胺酸混合以獲得包含該免疫結合物及甲硫胺酸之醫藥組合物，其中該免疫結合物係由下式表示：， CBA為抗體或其抗原結合片段； WC 為1或2；且 CyCys 係由下式表示：， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： 介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H或(C1 -C4 )烷基；且當其為單鍵時，X為-H或胺保護部分，Y為-OH或-SO3 H； R1 為-H或(C1 -C3 )烷基； P1 為胺基酸殘基或含有2至5個胺基酸殘基之肽； Ra 及Rb 在每次出現時獨立地為-H、(C1 -C3 )烷基或帶電取代基或可離子化基團Q； m為1至6之整數； LC 係由表示，s1為與CBA共價連接之位點，且s2為與CyC1 上之-C(=O)-基團共價連接之位點；其中： R2 為-H或(C1 -C3 )烷基； R3 及R4 在每次出現時獨立地為-H或(C1 -C3 )烷基；且 n為介於1與10之間的整數。
  67. 如申請專利範圍第66項之方法，其中Ra 及Rb 均為H；且R1 為H或Me。
  68. 如申請專利範圍第66項或第67項之方法，其中P係選自Gly-Gly-Gly、Ala-Val、Val-Ala、Val-Cit、Val-Lys、Phe-Lys、Lys-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp、Cit、Phe-Ala、Phe-N9 -甲苯磺醯基-Arg、Phe-N9 -硝基-Arg、Phe-Phe-Lys、D-Phe-Phe-Lys、Gly-Phe-Lys、Leu-Ala-Leu、Ile-Ala-Leu、Val-Ala-Val、Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:21)、b-Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:22)、Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID NO:23)、Val-Arg、Arg-Val、Arg-Arg、Val-D-Cit、Val-D-Lys、Val-D-Arg、D-Val-Cit、D-Val-Lys、D-Val-Arg、D-Val-D-Cit、D-Val-D-Lys、D-Val-D-Arg、D-Arg-D-Arg、Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala、D-Ala-D-Ala、Ala-Met及Met-Ala。
  69. 如申請專利範圍第68項之方法，其中P為Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala或D-Ala-D-Ala。
  70. 如申請專利範圍第66項至第69項中任一項之方法，其中Q為-SO3 H。
  71. 如申請專利範圍第66項至第69項中任一項之方法，其中Q為H。
  72. 如申請專利範圍第66項至第71項中任一項之方法，其中R3 及R4 均為H；且n為1至6之整數。
  73. 如申請專利範圍第66項至第72項中任一項之方法，其中-LC -係由下式表示：。
  74. 如申請專利範圍第66項之方法，其中該免疫結合物係由下式表示：； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H；且當其為單鍵時，X為-H且Y為-OH或-SO3 H。
  75. 如申請專利範圍第66項至第74項中任一項之方法，其中CBA為抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段(a)結合人類CD123/IL3-Rα抗原之胺基酸101至346內之抗原決定基，及(b)抑制抗原陽性TF-1細胞中之IL3依賴性增殖。
  76. 如申請專利範圍第75項之方法，其中該抗體或其抗原結合片段包含： a) 免疫球蛋白重鏈可變區，其包含具有SEQ ID NO:4中所示之胺基酸序列的CDR1、具有SEQ ID NO:5中所示之胺基酸序列的CDR2及具有SEQ ID NO:6中所示之胺基酸序列的CDR3；以及 b) 免疫球蛋白輕鏈可變區，其包含具有SEQ ID NO:1中所示之胺基酸序列的CDR1、具有SEQ ID NO:2中所示之胺基酸序列的CDR2及具有SEQ ID NO:3中所示之胺基酸序列的CDR3。
  77. 如申請專利範圍第75項之方法，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:7之VH 序列及SEQ ID NO:9之VL 序列。
  78. 如申請專利範圍第75項之方法，其中該抗體包含： a) 免疫球蛋白重鏈，其具有SEQ ID NO:8中所示之胺基酸序列；及 b) 免疫球蛋白輕鏈，其具有SEQ ID NO:10中所示之胺基酸序列。
  79. 一種減少免疫結合物中之甲硫胺酸氧化之量的方法，該方法包括將該免疫結合物與0.1 mM至20 mM甲硫胺酸混合以獲得包含該免疫結合物及甲硫胺酸之醫藥組合物，其中該免疫結合物係由下式表示：， 其中： CBA為抗體或其抗原結合片段； WL 為1至20之整數；且 CyLys1 係由下式表示：； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： 介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H或(C1 -C4 )烷基；且當其為單鍵時，X為-H或胺保護部分且Y為-OH或-SO3 H； Rx 獨立地為(C1 -C6 )烷基； W'為-NRe ； Re 為-(CH2 -CH2 -O)n1 -Rk ； n1為2至6之整數； Rk 為-H或-Me； Zs 係選自以下諸式中之任一者：(b1)；(b2)；(b3)；(b4)；(b5)；(b6)；(b7)；(b8)；(b9)；及(b10)， 其中： q為1至5之整數；且 M+ 為-H+ 或陽離子。
  80. 如申請專利範圍第79項之方法，其中Rx 獨立地為-(CH2 )p -(CRf Rg )-，其中Rf 及Rg 各自獨立地為-H或(C1 -C4 )烷基；且p為0、1、2或3。
  81. 如申請專利範圍第80項之方法，其中Rf 與Rg 相同或不同，且係選自-H及-Me。
  82. 如申請專利範圍第79項之方法，其中該免疫結合物係由以下表示：；或； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中WL 為1至10之整數；介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H；且當其為單鍵時，X為-H且Y為-OH或-SO3 H。
  83. 如申請專利範圍第82項之方法，其中該免疫結合物係由下式表示：； 或其醫藥學上可接受之鹽。
  84. 如申請專利範圍第79項至第83項中任一項之方法，其中該抗體為抗CD33抗體，該抗CD33抗體包含具有SEQ ID NO:18中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白重鏈及具有SEQ ID NO:20中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。
  85. 如申請專利範圍第66項至第84項中任一項之方法，其中介於N與C之間的雙線表示單鍵，X為-H且Y為-SO3 H。
  86. 如申請專利範圍第66項至第85項中任一項之方法，其中Y為-SO3 H或者其鈉鹽或鉀鹽。
  87. 如申請專利範圍第66項至第86項中任一項之方法，其中該醫藥組合物包含0.1 mM至10 mM甲硫胺酸。
  88. 如申請專利範圍第87項之方法，其中該醫藥組合物包含0.5 mM至5 mM甲硫胺酸。
  89. 如申請專利範圍第87項之方法，其中該醫藥組合物包含1.0 mM至4.0 mM甲硫胺酸。
  90. 如申請專利範圍第89項之方法，其中該醫藥組合物包含3.0 mM甲硫胺酸。
  91. 如申請專利範圍第66項至第90項中任一項之方法，其中當該醫藥組合物在室溫下曝光6小時或更久時，該免疫結合物具有少於40%、少於35%、少於30%、少於25%、少於20%或少於15%之甲硫胺酸氧化。
  92. 如申請專利範圍第66項至第91項中任一項之方法，其中該醫藥組合物處於防止該醫藥組合物曝光之容器中。
  93. 如申請專利範圍第66項至第92項中任一項之方法，其中該醫藥組合物包含1 mg/mL至10 mg/mL之該免疫結合物。
  94. 如申請專利範圍第66項至第92項中任一項之方法，其中該醫藥組合物包含1 mg/mL至5 mg/mL之該免疫結合物。
  95. 如申請專利範圍第66項至第94項中任一項之方法，其更包含亞硫酸氫鈉。
  96. 如申請專利範圍第95項之方法，其中該醫藥組合物更包含10 µM至100 µM、20 µM至90 µM或30 µM至80 µM亞硫酸氫鈉。
  97. 如申請專利範圍第95項之方法，其中該醫藥組合物更包含40 µM至60 µM亞硫酸氫鈉。
  98. 如申請專利範圍第95項之方法，其中該醫藥組合物更包含50 µM亞硫酸氫鈉。
  99. 一種製備免疫結合物之方法，該免疫結合物係由下式表示：， 該方法包括使CBA與由下式表示之細胞毒性劑：或其醫藥學上可接受之鹽在抗氧化劑存在下反應，其中： CBA為抗體或其抗原結合片段； WC 為1或2；且 CyCys 係由下式表示：， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： 介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H或(C1 -C4 )烷基；且當其為單鍵時，X為-H或胺保護部分，Y為-OH或-SO3 H； R1 為-H或(C1 -C3 )烷基； P1 為胺基酸殘基或含有2至5個胺基酸殘基之肽； Ra 及Rb 在每次出現時獨立地為-H、(C1 -C3 )烷基或帶電取代基或可離子化基團Q； m為1至6之整數； LC 係由表示，s1為與CBA共價連接之位點，且s2為與CyC1 上之-C(=O)-基團共價連接之位點； R2 為-H或(C1 -C3 )烷基； R3 及R4 在每次出現時獨立地為-H或(C1 -C3 )烷基；且 n為介於1與10之間的整數；且 LC '係由表示。
  100. 如申請專利範圍第99項之方法，其中該抗氧化劑使該免疫結合物中之甲硫胺酸氧化之量減少。
  101. 如申請專利範圍第99項之方法，其中該抗氧化劑為N-乙醯基甲硫胺酸。
  102. 如申請專利範圍第99項至第101項中任一項之方法，其中Ra 及Rb 均為H；且R1 為H或Me。
  103. 如申請專利範圍第99項至第102項中任一項之方法，其中P係選自Gly-Gly-Gly、Ala-Val、Val-Ala、Val-Cit、Val-Lys、Phe-Lys、Lys-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp、Cit、Phe-Ala、Phe-N9 -甲苯磺醯基-Arg、Phe-N9 -硝基-Arg、Phe-Phe-Lys、D-Phe-Phe-Lys、Gly-Phe-Lys、Leu-Ala-Leu、Ile-Ala-Leu、Val-Ala-Val、Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:21)、b-Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:22)、Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID NO:23)、Val-Arg、Arg-Val、Arg-Arg、Val-D-Cit、Val-D-Lys、Val-D-Arg、D-Val-Cit、D-Val-Lys、D-Val-Arg、D-Val-D-Cit、D-Val-D-Lys、D-Val-D-Arg、D-Arg-D-Arg、Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala、D-Ala-D-Ala、Ala-Met及Met-Ala。
  104. 如申請專利範圍第103項之方法，其中P為Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala或D-Ala-D-Ala。
  105. 如申請專利範圍第99項至第104項中任一項之方法，其中Q為-SO3 H。
  106. 如申請專利範圍第99項至第104項中任一項之方法，其中Q為H。
  107. 如申請專利範圍第99項至第106項中任一項之方法，其中R3 及R4 均為H；且n為1至6之整數。
  108. 如申請專利範圍第99項至第107項中任一項之方法，其中-LC -係由下式表示：；且 -LC '係由下式表示：。
  109. 如申請專利範圍第99項至第101項中任一項之方法，其中該免疫結合物係由下式表示：； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H；且當其為單鍵時，X為-H且Y為-OH或-SO3 H。
  110. 如申請專利範圍第99項至第109項中任一項之方法，其中CBA為抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段(a)結合人類CD123/IL3-Rα抗原之胺基酸101至346內之抗原決定基，及(b)抑制抗原陽性TF-1細胞中之IL3依賴性增殖。
  111. 如申請專利範圍第110項之方法，其中該抗體或其抗原結合片段包含： a) 免疫球蛋白重鏈可變區，其包含具有SEQ ID NO:4中所示之胺基酸序列的CDR1、具有SEQ ID NO:5中所示之胺基酸序列的CDR2及具有SEQ ID NO:6中所示之胺基酸序列的CDR3；以及 b) 免疫球蛋白輕鏈可變區，其包含具有SEQ ID NO:1中所示之胺基酸序列的CDR1、具有SEQ ID NO:2中所示之胺基酸序列的CDR2及具有SEQ ID NO:3中所示之胺基酸序列的CDR3。
  112. 如申請專利範圍第110項之方法，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:7之VH 序列及SEQ ID NO:9之VL 序列。
  113. 如申請專利範圍第110項之方法，其中該抗體包含： a) 免疫球蛋白重鏈，其具有SEQ ID NO:8中所示之胺基酸序列；及 b) 免疫球蛋白輕鏈，其具有SEQ ID NO:10中所示之胺基酸序列。
  114. 一種製備免疫結合物之方法，該免疫結合物係由下式表示：， 其中： CBA為抗體或其抗原結合片段； WL 為1至20之整數；且 CyLys1 係由下式表示：； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： 介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H或(C1 -C4 )烷基；且當其為單鍵時，X為-H或胺保護部分且Y為-OH或-SO3 H； Rx 獨立地為(C1 -C6 )烷基； W'為-NRe ； Re 為-(CH2 -CH2 -O)n1 -Rk ； n1為2至6之整數； Rk 為-H或-Me； Zs 係選自以下諸式中之任一者：(b1)；(b2)；(b3)；(b4)；(b5)；(b6)；(b7)；(b8)；(b9)；及(b10)， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中q為1至5之整數，該方法包括以下步驟： (a) 使由下式表示之細胞毒性劑：， 或其醫藥學上可接受之鹽與選自以下之雙官能交聯劑：(a1L)；(a2L)；(a3L)；(a4L)；(a5L)；(a6L)；(a7L)；(a8L)；(a9L)；及(a10L)， 反應以形成細胞毒性劑-連接基化合物，其中X為鹵素；JD 為-SH、-SSRd 或-SC(=O)Rg ；Rd 為苯基、硝基苯基、二硝基苯基、羧基硝基苯基、吡啶基或硝基吡啶基；Rg 為烷基；q為1至5之整數；且U為-H或SO3 H；及 (b) 使該CBA與該細胞毒性劑-連接基化合物在抗氧化劑存在下反應以形成該免疫結合物。
  115. 如申請專利範圍第114項之方法，其中該細胞毒性劑-連接基化合物在步驟(b)中與該CBA反應之前未經純化。
  116. 如申請專利範圍第114項或第115項之方法，其中該抗氧化劑使該免疫結合物中之甲硫胺酸氧化之量減少。
  117. 如申請專利範圍第116項之方法，其中該抗氧化劑為N-乙醯基甲硫胺酸甲酯。
  118. 如申請專利範圍第114項至第117項中任一項之方法，其中Rx 獨立地為-(CH2 )p -(CRf Rg )-，其中Rf 及Rg 各自獨立地為-H或(C1 -C4 )烷基；且p為0、1、2或3。
  119. 如申請專利範圍第118項之方法，其中Rf 與Rg 相同或不同，且係選自-H及-Me。
  120. 如申請專利範圍第114項至第117項中任一項之方法，其中該免疫結合物係由下式表示：；或； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中WL 為1至10之整數；介於N與C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，限制條件為當其為雙鍵時，X不存在且Y為-H；且當其為單鍵時，X為-H且Y為-OH或-SO3 H。
  121. 如申請專利範圍第114項至第120項中任一項之方法，其中該抗體為抗CD33抗體，該抗CD33抗體包含具有SEQ ID NO:18中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白重鏈及具有SEQ ID NO:20中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。
  122. 如申請專利範圍第99項至第121項中任一項之方法，其中介於N與C之間的雙線表示單鍵，X為-H且Y為-OH或-SO3 H。
  123. 如申請專利範圍第99項至第122項中任一項之方法，其中Y為-SO3 H或者其鈉鹽或鉀鹽。
  124. 如申請專利範圍第99項至第123項中任一項之方法，其中該方法更包括將該免疫結合物純化至調配物緩衝液中以獲得包含該免疫結合物及0.1 mM至10 mM甲硫胺酸之醫藥組合物。
  125. 如申請專利範圍第124項之方法，其中該醫藥組合物包含0.5 mM至5 mM甲硫胺酸。
  126. 如申請專利範圍第124項之方法，其中該醫藥組合物包含1 mM至4 mM甲硫胺酸。
  127. 如申請專利範圍第124項之方法，其中該醫藥組合物包含3 mM甲硫胺酸。
  128. 如申請專利範圍第124項至第127項中任一項之方法，其中該醫藥組合物更包含亞硫酸氫鈉。
  129. 如申請專利範圍第128項之方法，其中該醫藥組合物更包含10 µM至100 µM、20 µM至90 µM或30 µM至80 µM亞硫酸氫鈉。
  130. 如申請專利範圍第129項之方法，其中該醫藥組合物更包含40 µM至60 µM亞硫酸氫鈉。
  131. 如申請專利範圍第129項之方法，其中該醫藥組合物更包含50 µM亞硫酸氫鈉。
  132. 一種製備免疫結合物之方法，該免疫結合物係由下式表示：； 或其醫藥學上可接受之鹽，該方法包括使CBA與由下式表示之細胞毒性劑：或其醫藥學上可接受之鹽在抗氧化劑存在下反應，其中： Y為-SO3 H或其鈉鹽； WC 為2；且 CBA為抗CD123抗體，該抗CD123抗體包含：a)具有SEQ ID NO:8中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白重鏈；及b)具有SEQ ID NO:10中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。
  133. 如申請專利範圍第131項之方法，其中該抗氧化劑使該免疫結合物中之甲硫胺酸氧化之量減少。
  134. 如申請專利範圍第131項之方法，其中該抗氧化劑為N-乙醯基甲硫胺酸。
  135. 如申請專利範圍第131項至第134項中任一項之方法，其中該方法更包括將該免疫結合物純化至調配物緩衝液中以獲得包含該免疫結合物及1 mM至4 mM甲硫胺酸之醫藥組合物。
  136. 如申請專利範圍第135項之方法，該醫藥組合物包含3 mM甲硫胺酸。
  137. 如申請專利範圍第135項或第136項之方法，其中該醫藥組合物更包含10 µM至100 µM、20 µM至90 µM或30 µM至80 µM亞硫酸氫鈉。
  138. 如申請專利範圍第137項之方法，其中該醫藥組合物更包含40 µM至60 µM亞硫酸氫鈉。
  139. 如申請專利範圍第138項之方法，其中該醫藥組合物更包含50 µM亞硫酸氫鈉。
  140. 如申請專利範圍第135項之方法，其中該醫藥組合物更包含10 mM琥珀酸酯、50 µM亞硫酸氫鈉、7.2% (w/v)海藻糖及0.01% (w/v)聚山梨糖醇酯20。
  141. 一種製備免疫結合物之方法，該免疫結合物係由下式表示：； 或其醫藥學上可接受之鹽，該方法包括以下步驟： (a) 使由下式表示之細胞毒性劑：， 或其醫藥學上可接受之鹽與由下式呈現之雙官能交聯劑磺基-SPDB：反應以形成由下式表示之細胞毒性劑-連接基化合物：， 或其醫藥學上可接受之鹽；及 (b) 使CBA與該細胞毒性劑-連接基化合物在抗氧化劑存在下反應以形成該免疫結合物，其中： Y為-SO3 H； WL 為1至10之整數；且 CBA為抗CD33抗體，該抗CD33抗體包含具有SEQ ID NO:18中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白重鏈及具有SEQ ID NO:20中所示之胺基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。
  142. 如申請專利範圍第141項之方法，其中該細胞毒性劑-連接基化合物在步驟(b)中與該CBA反應之前未經純化。
  143. 如申請專利範圍第141項或第142項之方法，其中該抗氧化劑使該免疫結合物中之甲硫胺酸氧化之量減少。
  144. 如申請專利範圍第141項或第142項之方法，其中該抗氧化劑為N-乙醯基甲硫胺酸甲酯。
  145. 如申請專利範圍第141項至第144項中任一項之方法，其中該方法更包括將該免疫結合物純化至調配物緩衝液中以獲得包含該免疫結合物及1 mM至4 mM甲硫胺酸之醫藥組合物。
  146. 如申請專利範圍第145項之方法，該醫藥組合物包含3 mM甲硫胺酸。
  147. 如申請專利範圍第145項或第146項之方法，其中該醫藥組合物更包含10 µM至100 µM、20 µM至90 µM或30 µM至80 µM亞硫酸氫鈉。
  148. 如申請專利範圍第147項之方法，其中該醫藥組合物更包含40 µM至60 µM亞硫酸氫鈉。
  149. 如申請專利範圍第148項之方法，其中該醫藥組合物更包含50 µM亞硫酸氫鈉。
  150. 如申請專利範圍第145項之方法，其中該醫藥組合物更包含20 mM組胺酸、50 µM亞硫酸氫鈉、7.2% (w/v)海藻糖、0.02% (w/v)聚山梨糖醇酯20。
TW107133293A 2017-09-22 2018-09-21 預防免疫結合物中之甲硫胺酸氧化之方法 TW201919711A (zh)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762562049P 2017-09-22 2017-09-22
US62/562,049 2017-09-22
US201762573322P 2017-10-17 2017-10-17
US62/573,322 2017-10-17
US201862712584P 2018-07-31 2018-07-31
US62/712,584 2018-07-31

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW201919711A true TW201919711A (zh) 2019-06-01

Family

ID=63794732

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW107133293A TW201919711A (zh) 2017-09-22 2018-09-21 預防免疫結合物中之甲硫胺酸氧化之方法

Country Status (12)

Country Link
US (3) US20190111147A1 (zh)
EP (2) EP3684412B1 (zh)
JP (2) JP7203834B2 (zh)
KR (1) KR20200070254A (zh)
CN (2) CN117065043A (zh)
AU (1) AU2018335780A1 (zh)
CA (1) CA3075896A1 (zh)
IL (2) IL273384B2 (zh)
MA (1) MA50266A (zh)
SG (1) SG11202002116YA (zh)
TW (1) TW201919711A (zh)
WO (1) WO2019060707A1 (zh)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SMT202100092T1 (it) * 2015-06-29 2021-03-15 Immunogen Inc Anticorpi anti-cd123 e loro coniugati e derivati
WO2020223351A1 (en) * 2019-04-29 2020-11-05 Immunogen, Inc. Therapeutic combinations comprising anti-cd123 immunoconjugates
JP7788859B2 (ja) * 2019-06-26 2025-12-19 メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター がんを処置するための抗ｃｄ３３抗体
WO2024222841A1 (zh) * 2023-04-27 2024-10-31 石药集团巨石生物制药有限公司 一种抗体药物偶联物
WO2025064944A1 (en) * 2023-09-20 2025-03-27 Vor Biopharma Inc. Anti-cd45 antibody-drug conjugate pharmaceutical compositions

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
HUE026914T2 (en) 2002-11-07 2016-08-29 Immunogen Inc Anti-CD33 antibodies and a method of treating acute myeloid leukemia
US20100030670A1 (en) * 2008-08-04 2010-02-04 Mastercard International, Inc. Method of monitoring different debit card transactions associated with a single funding source
MX2011002372A (es) * 2008-09-10 2011-04-04 Genentech Inc Composiciones y metodos para la prevencion de la degradacion oxidativa de proteinas.
JP2010241718A (ja) * 2009-04-03 2010-10-28 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd 安定な抗体の水溶液製剤
AR080301A1 (es) * 2010-02-24 2012-03-28 Immunogen Inc Anticuerpos e inmunoconjugados del receptor 1 de folato y sus usos
KR20150132332A (ko) * 2013-03-15 2015-11-25 글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 (넘버 2) 리미티드 저농도 항체 제형
JP6517468B2 (ja) * 2014-01-10 2019-05-22 日本電気株式会社 情報処理システム、情報処理装置、監視装置、監視方法、及び、プログラム
SMT202100092T1 (it) * 2015-06-29 2021-03-15 Immunogen Inc Anticorpi anti-cd123 e loro coniugati e derivati
US20170189548A1 (en) * 2015-11-25 2017-07-06 Immunogen, Inc. Pharmaceutical formulations and methods of use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
IL273384B1 (en) 2023-08-01
EP3684412A1 (en) 2020-07-29
SG11202002116YA (en) 2020-04-29
RU2020113280A3 (zh) 2022-04-11
US20220202947A1 (en) 2022-06-30
CN111372610A (zh) 2020-07-03
JP2023036874A (ja) 2023-03-14
JP7203834B2 (ja) 2023-01-13
CN117065043A (zh) 2023-11-17
CN111372610B (zh) 2023-05-30
EP3684412B1 (en) 2024-02-14
RU2020113280A (ru) 2021-10-25
US20190111147A1 (en) 2019-04-18
IL273384A (en) 2020-05-31
JP2020534326A (ja) 2020-11-26
US20240350652A1 (en) 2024-10-24
EP4374850A2 (en) 2024-05-29
AU2018335780A1 (en) 2020-03-26
WO2019060707A1 (en) 2019-03-28
CA3075896A1 (en) 2019-03-28
IL304551A (en) 2023-09-01
MA50266A (fr) 2020-07-29
IL273384B2 (en) 2023-12-01
KR20200070254A (ko) 2020-06-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240238440A1 (en) Preparation method for and application of antibody conjugated drug
TWI851552B (zh) 磷脂醯肌醇蛋白聚醣(glypican)3抗體及其結合物
US20240350652A1 (en) Methods of preventing methionine oxidation in immunoconjugates
AU2024234194A1 (en) Panras inhibitor antibody-drug conjugates and methods of use thereof
JP6581279B2 (ja) 抗ｆｏｌｒ１免疫抱合体投薬レジメン
JP2021102648A (ja) 抗ｆｏｌｒ１免疫複合体投与計画
TWI757759B (zh) 細胞毒性苯并二氮呯衍生物
WO2021035310A1 (en) Targeted dendrimer conjugates
JP2025510606A (ja) Ｂ７ｈ４抗体薬物複合体及びその使用
TWI864640B (zh) Gpc3抗體藥物偶聯物及其用途
AU2023221516A1 (en) Combination therapies for treatment of cancer comprising b7-h4 antibody drug conjugate
RU2803119C2 (ru) Способы предотвращения окисления метионина в иммуноконъюгатах
WO2024213081A1 (zh) 抗体药物偶联物在制备预防和/或治疗癌症的药物中的用途