TW201930268A - 吲哚胺2,3-雙加氧酶抑制劑以及它們在醫學上的應用 - Google Patents

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Abstract

本發明涉及式I所示的化合物，包含所述式I化合物的藥物組合物，其抑制吲哚胺2,3-雙加氧酶的方法以及其在醫學上的用途。

Description

吲哚胺2,3-雙加氧酶抑制劑以及它們在醫學上的應用
本發明要求於2017年12月29日提交中國專利局、申請號為201711478307.2、發明名稱為“吲哚胺2,3-雙加氧酶抑制劑以及它們在醫學上的應用”的中國專利申請，以及於2018年6月29日提交中國專利局、申請號為201810754253.6、發明名稱為“吲哚胺2,3-雙加氧酶抑制劑以及它們在醫學上的應用”的中國專利申請的優先權，其全部內容通過引用結合在本發明中。
本發明涉及一種對色氨酸代謝具有抑制活性的新型吲哚胺2,3-雙加氧酶抑制劑，以及包含其作為活性成分的藥物組合物。
色氨酸(TRP)是一種用於蛋白質生物合成的α-氨基酸。它含有α-氨基、α-羧酸基團和側鏈吲哚。它在人類必不可少的，人的身體不能合成它，而必須從飲食中獲得。色氨酸也是合成神經遞質5-羥色胺(serotonin)和激素N-乙醯-5-甲氧基色胺(melatonin)的前體。血紅素依賴酶吲哚胺2,3-雙加氧酶(也叫IDO，或IDO1)是肝外負責將色氨酸轉換為N-甲醯基-犬尿氨酸的代謝酶，這是色氨酸代謝過程中的第一步，也是整個過程的限速步驟。N-甲醯基-犬尿氨酸是多種生物活性分子犬尿氨酸(kynurenine，或Kyn)的前體，犬尿氨酸具有免疫調節功能(Schwarcz et al,Nat Rev Neurosci.2012；13(7)：465)。
吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)廣泛表達於實體腫瘤(Uyttenhove et al,Nat Med.2003；10：1269)，在原發癌和轉移癌細胞中也均有表達。在腫瘤中IDO由促炎因數誘導產生，包括由浸潤淋巴細胞產生的I型和II型干擾素(Tnani and Bayard,Biochim Biophys Acta.1999；1451(1)：59；Mellor and Munn,Nat Rev Immunol 2004；4(10)：762；Munn,Front Biosci.2012；4：734)和轉化生長因數-β(TGF-β)(Pallotta et al, Nat Immunol.201 1；12(9)：870)。近年來，越來越多的證據表明，IDO作為一種誘導型酶，在免疫細胞調節中起著主要作用。色氨酸水準的降低和犬尿氨酸的增加會抑制免疫效應細胞，並通過誘導和維持調節性T細胞促進適應性免疫抑制(Tregs；Munn,Front Biosci.2012；4：734)；免疫系統中色氨酸的濃度和T細胞正性相關。在腫瘤免疫微環境中，活化或過表達的IDO導致色氨酸耗竭，而後導致T細胞死亡、免疫系統失活，並最終導致發生腫瘤免疫耐受和免疫逃逸。現有研究表明，由IDO所導致的免疫平衡失調深入的參與了腫瘤的生成和進展。因而IDO受體已成為腫瘤等免疫治療的重要靶點。IDO除了和腫瘤相關外，也和病毒感染、抑鬱、器官移植排斥或自身免疫性疾病相關(Johnson and Munn,Immunol Invest 2012；41(6-7)：765)。因而，靶向IDO的藥物對於治療上述疾病也具有巨大價值。總之，開發具有活性和選擇性的IDO抑制劑，通過調節犬尿氨酸通道並維持身體內色氨酸水準來有效地治療由於犬尿氨酸途徑中的有害物質而產生的疾病，無論是作為單劑或聯合療法都很有必要。
大量發表的臨床前資料也進一步證實了IDO在抗腫瘤免疫反應中的作用。IDO抑制劑可用於啟動T細胞，因而提高T細胞被妊娠、惡性腫瘤或HIV等病毒抑制時T細胞的啟動。在癌細胞中強迫IDO誘導被證明具有生存優勢(Uyttenhove et al,Nat Med.2003；10：1269)。另有體內研究表明，IDO抑制劑在腫瘤生長中通過降低犬尿氨酸水準而減少對淋巴細胞的依賴(Liu et al,Blood.2010；115(17)：3520)。臨床前研究還表明IDO抑制劑如果與其他腫瘤藥物聯用，如放療、化療或疫苗等等具有協同效果。(Koblish et al,Mol Cancer Ther.2010；9(2)：489,Hou et al,Cancer Res.2007；67(2)：792；Sharma et al,Blood.2009；1 13(24)：6102).
IDO抑制劑類抗腫瘤藥物的研究目前在全球範圍內已取得重要進展，如INCB024360，NLG919和BMS-986205均已進入臨床。但INCB024360由於存在毒副作用問題，致使現有臨床研究劑量(50mg bid，或100mg bid)是最佳劑量(300mg bid,600mg bid)的30%左右，臨床活性受到很大限制；同時INCB024360的毒性基團又是藥效團，INCB024360及其衍生物存在毒性較大的問題。NLG919的安全性較好，但NLG919的生物活性較差。BMS-986205目前也已 經進入臨床，但是臨床資料有限，基於BMS-986205，開展具有高生物活性、高安全性的新型化合物研究，這對於發現臨床治療活性更好如可能治癒腫瘤而非僅僅抑制腫瘤的新型IDO類腫瘤免疫治療藥物，具有非常重要的現實意義。
本發明一方面提供一種如式I所示的化合物，
其中表示：-、或者；A表示-C(O)-、-S(O)2-或者-S(O)-；其中，每個R1各自獨立地選自氫原子、鹵素、羥基、硝基、氰基、磺酸基、C1-6烷基、C3-6環烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、鹵代C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷氧基、鹵代C1-C6環烷基、C1-6烷基硫基、C1-6烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、二(C1-6烷基)氨基C2-6烷氧基羰基、氨基、C1-6烷基氨基、二(C1-6烷基)氨基、氨基甲醯基、C1-6烷基氨基甲醯基、二(C1-6烷基)氨基甲醯基、二(C1-6烷基)氨基C2-6烷基氨基甲醯基、氨磺醯基、C1-6烷基氨磺醯基、二(C1-6烷基)氨磺醯基、二(C1-6烷基)氨基C2-6烷基氨磺醯基、C1-6烷基磺醯基、C1-6烷基亞硫醯基、二(C1-6烷基)膦醯基、羥基C1-6烷基、羥基羰基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基磺醯基C1-6烷基、C1-6烷基亞硫醯基C1-6烷基、二(C1-6烷基)膦醯基C1-6烷基、羥基C2-6烷氧基、C1-6烷氧基C2-6烷氧基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基乙醯基、氨基C2-6烷氧基、C1-6烷基氨基C2-6烷氧基、二(C1-6烷基)氨基C2-6烷氧基、羥基C2-6烷基氨基、C1-6烷氧基C2-6烷基氨基、氨基C2-6烷基氨基、C1-6烷基氨基C2-6烷基氨基、二(C1-6烷基)氨基C2-6烷基氨基；或者相鄰的R1相互環合形成3-8元環，該環中含有0、1、2、3個雜原子； Cy1選自被任意取代基取代的5-15元橋環基、5-15元螺環基、5-15元橋雜環基、或5-15元螺雜環基，所述的取代基為：鹵素、羥基、C1-6烷基、氨基、鹵代C1-6烷基、巰基、C1-6烷基巰基、C1-6烷基氨基、二(C1-6烷基)氨基、氰基；Ra、Rb、R2各自獨立地選自氫、C1-C6烷基或C3-6環烷基；Cy2為含有一個或兩個以上的取代基的C5-C10芳基、C5-C10雜芳基、C5-C10環烷基、C5-C10雜環烷基；所述的取代基可以選自鹵素、羥基、硝基、氰基、磺酸基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環烷基、C1-6烷氧基、鹵代C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷氧基、C1-6烷基硫基、C1-6烷基羰基、C1-6烷基羰基氧基、C1-6烷氧基羰基、二(C1-6烷基)氨基C2-6烷氧基羰基、氨基、C1-6烷基氨基、二(C1-6烷基)氨基、氨基甲醯基、C1-6烷基氨基甲醯基、二(C1-6烷基)氨基甲醯基、二(C1-6烷基)氨基C2-6烷基氨基甲醯基、氨磺醯基、C1-6烷基氨磺醯基、二(C1-6烷基)氨磺醯基、二(C1-6烷基)氨基C2-6烷基氨磺醯基、C1-6烷基磺醯基、C1-6烷基亞硫醯基、二(C1-6烷基)膦醯基、羥基C1-6烷基、羥基羰基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基磺醯基C1-6烷基、C1-6烷基亞硫醯基C1-6烷基、二(C1-6烷基)膦醯基C1-6烷基、羥基C2-6烷氧基、C1-6烷氧基C2-6烷氧基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基乙醯基、氨基C2-6烷氧基、C1-6烷基氨基C2-6烷氧基、二(C1-6烷基)氨基C2-6烷氧基、羥基C2-6烷基氨基、C1-6烷氧基C2-6烷基氨基、氨基C2-6烷基氨基、C1-6烷基氨基C2-6烷基氨基、二(C1-6烷基)氨基C2-6烷基氨基、-S(O)C1-6烷基；或者當兩個取代基相鄰時，能夠形成3-8元環，該3-8元環可以含有0、1、2、3個O、S、N原子；m、n為0、1、2、3、4。
在本發明的另一技術方案中，Cy1選自被取代基取代的8-12元螺環基或8-12元螺環基、8-12元橋雜環基、或8-12元螺雜環基，所述的取代基為：鹵素、羥基、C1-6烷基、氨基、鹵代C1-6烷基、巰基、C1-6烷基巰基、C1-6烷基氨基、二(C1-6烷基)氨基、氰基。
在本發明的另一技術方案中，Cy1選自以下基團： 、、、，上述基團可以被選自鹵素、羥基、C1-6烷基、氨基、鹵代C1-6烷基、巰基、C1-6烷基巰基、C1-6烷基氨基、二(C1-6烷基)氨基、氰基的取代基取代。
在本發明的另一個技術方案中，Cy1選自以下基團： 、、、、，上述基團可以被選自鹵素、羥基、C1-6烷基、氨基、鹵代C1-6烷基、巰基、C1-6烷基巰基、C1-6烷基氨基、二(C1-6烷基)氨基、氰基的取代基取代。
本發明一方面提供一種如式(II)所示的化合物，
其中，R1、R2、Ra、Rb、Cy2、m、n、A如式I所定義；X選自(CRcRd)o，其中任意地CRcRd可以被O或NRe所替代；Y選自CRf或N；其中Rc、Rd、Re、Rf分別各自獨立地選自氫或者C1-6烷基；o選自0、1、2、3、4、5。
本發明一方面提供一種如式(III)所示的化合物，
其中，W，Q選自CRcRd或NRe，或O；A、R1、R2、Ra、Rb、Rc、Rd、Re、Cy2、m、n、Y如上述式(II)所定義。
本發明另一方面還提供了一種如式(IV)所示的化合物，
其中，R1、R2、Ra、Rb、Cy2、m、n、X、Y、A如上述式(II)所定義；Z選自(CRg)p，其中任意的CRg可以被N所替代；Rg分別各自獨立地選自氫或者C1-6烷基；p選自0、1、2、3、4、5。
在本發明的優選技術方案中，具有如式(V)結構：
其中R1、R2、Rc、Rd、Rf、Cy2、m、A如上述式(II)所定義。
在本發明的優選技術方案中，具有如式(VI)結構：
其中R1、R2、Rc、Rd、Cy2、m、A如上述式(II)所定義。
在本發明的優選技術方案中，具有如式(VII)結構：
其中R1、R2、Rc、Rd、Cy2、m、A如上述式(II)所定義。
在本發明的優選技術方案中，具有如式(VIII)結構：
其中R1、R2、Rc、Rd、Rf、Cy2、m、A如上述式(II)所定義。
在本發明的優選技術方案中，具有如式(IX)結構：
其中R1、R2、Rc、Rd、Re、Rf、Cy2、m、A如上述式(II)所定義。
在木發明的技術方案中，表示-、或者；在本發明的技術方案中，優選為。
在本發明的技術方案中，A選自-C(O)-或S(O)2-。
本發明還提供了一種具有式(X)結構的化合物的製備方法：
在路徑I反應中：其中步驟(1)所使用的鹼選自無機鹼或有機鹼，包括但不限於：氫化鈉、氫化鈣、氨基鈉、甲醇鈉、乙醇鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鋰、氫化鋁鋰、叔丁基鋰、叔丁基鉀、叔丁醇鉀、二異丙基氨基鋰、氫氧化鋇或其任意組合；其中步驟(1)所使用的有機溶劑包括但不限於：1,4-二氧六環、N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、氯仿、DMSO、DMF、THF、丙酮、甲醇、乙醇或其任意組合；其中步驟(2)所使用的內鎓鹽選自硫葉立德或者磷葉立德；其中步驟(3)所使用的格氏試劑選自CH3MgCl、CH3MgBr、C2H5MgCl、C2H5MgBr、i-PrMgCl、i-PrMgBr，PhCH2MgCl、PhCH2MgBr或其任意組合。
本發明還提供了一種具有式(XI)結構的化合物的製備方法：
在路徑II反應中：其中步驟(1)所使用的催化劑選自鈦酸甲酯、鈦酸乙酯、鈦酸正丙酯、鈦酸異丙酯、鈦酸丁酯或其任意組合；其中步驟(2)所使用的鹼選自無機鹼或有機鹼，包括但不限於：氫化鈉、氫化鈣、氨基鈉、甲醇鈉、乙醇鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鋰、氫化鋁鋰、叔丁基鋰、叔丁基鉀、叔丁醇鉀、二異丙基氨基鋰、氫氧化鋇或其任意組合；其中步驟(2)所使用的有機溶劑包括但不限於：1,4-二氧六環、N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、氯仿、DMSO、DMF、THF、丙酮、甲醇、乙醇或其任意組合；其中步驟(2)所使用的內鎓鹽選自硫葉立德或者磷葉立德；其中步驟(3)的水解是在酸性條件下進行的，所述的酸選自但不限於鹽酸、硫酸、氫溴酸、草酸、檸檬酸、甲酸、乙酸或者其任意組合；其中步驟(4)所使用的有機溶劑包括但不限於：1,4-二氧六環、N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、氯仿、DMSO、DMF、、THF、丙酮、甲醇、乙醇或其任意組合。
本發明還提供了一種具有式(XII)結構的化合物的製備方法：
在路徑III中：其中步驟(1)所使用的催化劑選自鈦酸甲酯、鈦酸乙酯、鈦酸正 丙酯、鈦酸異丙酯、鈦酸丁酯或其任意組合；其中步驟(2)所非親核性強鹼作用下進行的，所述的非親核性強鹼選自但不限於二異丙基氨基鋰、二乙基氨基鋰、異丙基環己基氨基鋰、二環己基氨基鋰、2,2,6,6-四甲基呱啶子基鋰、六甲基二矽基氨基鋰；其中步驟(3)所述的水解反應是在酸性條件下進行的，所述的酸選自但不限於鹽酸、硫酸、氫溴酸、草酸、檸檬酸、甲酸、乙酸或者其任意組合；其中步驟(4)所使用的格氏試劑選自CH3MgCl、CH3MgBr、C2H5MgCl、C2H5MgBr、i-PrMgCl、i-PrMgBr，PhCH2MgCl、PhCH2MgBr或其任意組合；其中，當進行步驟(5)中所述的烷基化反應時，所述的烷基化反應試劑選自鹵代烷基，所述反應是在路易士酸作為催化劑下進行的，所述路易士酸優選為AlCl3、FeCl2、CuCl2。
本發明還提供了一種具有式(XIII)結構的化合物的製備方法：
在路徑IV中：其中步驟(1)和步驟(3)中所使用的鹼選自無機鹼或有機鹼，包括但不限於：氫化鈉、氫化鈣、氨基鈉、甲醇鈉、乙醇鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鋰、氫化鋁鋰、叔丁基鋰、叔丁基鉀、叔丁醇鉀、二異丙基氨基鋰、氫氧化鋇或其任意組合；其中步驟(1)至步驟(3)中所使用的有機溶劑包括但不限於：1,4-二氧六環、N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、氯仿、DMSO、DMF、、THF、丙酮、 甲醇、乙醇或其任意組合；其中步驟(2)所使用的氧化劑選自但不限於間氯過氧苯甲酸、CrO3、KMnO4、MnO2、NaCr2O7、HIO4、PbAc4、OsO4、雙氧水或其任意組合；其中步驟(4)所述的水解反應是在酸性條件下進行的，所述的酸選自但不限於鹽酸、硫酸、氫溴酸、草酸、檸檬酸、甲酸、乙酸或者其任意組合；其中步驟(5)所使用的格氏試劑選自CH3MgCl、CH3MgBr、C2H5MgCl、C2H5MgBr、i-PrMgCl、i-PrMgBr，PhCH2MgCl、PhCH2MgBr或其任意組合。
本發明還提供了一種具有式(XIV)結構的化合物的製備方法：
在路徑V中：其中步驟(1)是在鹼金屬氟化物或鹼土金屬氟化物存在下進行的，所述的鹼金屬氟化物選自但不限於LiF、NaF、KF、MgF2、CaF2；其中步驟(2)的還原反應可以為鈀碳催化加氫還原，也可以為Na/液氨還原；其中步驟(3)所使用的格氏試劑選自CH3MgCl、CH3MgBr、C2H5MgCl、C2H5MgBr、i-PrMgCl、i-PrMgBr，PhCH2MgCl、PhCH2MgBr或其任意組合；其中，當進行步驟(4)中所述的烷基化反應時，所述的烷基化反應試劑選自鹵代烷基，所述反應是在路易士酸作為催化劑下進行的，所述路易士酸優選為AlCl3、FeCl2、CuCl2。
在本文中，當提及具有特定結構式的“化合物”時，一般地還涵蓋其立體異構體、非對映異構體、對映異構體、外消旋混合物和同位素衍生物。本領域技術人員公知，一種化合物的鹽、溶劑合物、水合物是化合物的替代性存在形式，它們都可以在一定條件下轉化為所述化合物，因此在本文中當提到一種化合物時，一般地還包括它的可藥用鹽，進而還包括其溶劑合物和水合物。相似地，在本文中當提到一種化合物時，一般地還包括其前藥、代謝產物和氮氧化物。
當本發明的化合物形成藥學上可接受的鹽的形式，所述鹽使用但不限於以下的無機酸或有機酸而形成：鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、乙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富馬酸、蘋果酸、扁桃酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、棕櫚酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯甲酸、羥基苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸、水楊酸、甲磺酸、苯磺酸和甲苯磺酸。
本發明的藥學上可接受的鹽可通過常規方法製備，例如通過將本發明的化合物溶解於與水可混溶的有機溶劑(例如丙酮、甲醇、乙醇和乙腈)，向其中添加過量的有機酸或無機酸水溶液，以使得鹽從所得混合物中沉澱，從中除去溶劑和剩餘的游離酸，然後分離所沉澱的鹽。
本發明提供了本發明化合物在製備用於預防或治療癌症、腫瘤、炎症性疾病、自身免疫性疾病或免疫介導性疾病的藥物中的用途。
此外，本發明提供了用於預防或治療癌症、腫瘤、炎症性疾病、自身免疫性疾病或免疫介導性疾病的藥物組合物，其包含本發明化合物作為活性成分。
此外，本發明提供了一種用於預防或治療癌症、腫瘤、炎症性疾病、自身免疫性疾病或免疫介導性疾病的方法，其包括向有此需要的哺乳動物施用本發明化合物。
其中，腫瘤或癌症選自但不限於皮膚癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、結腸癌、肺癌、骨癌、腦癌、神經細胞瘤、直腸癌、 結腸癌、家族性腺瘤性息肉性癌、遺傳性非息肉性結直腸癌、食管癌、唇癌、喉癌、下嚥癌、舌癌、唾液腺癌、胃癌、腺癌、甲狀腺髓樣癌、乳頭狀甲狀腺癌、腎癌、腎實質癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮體癌、子宮內膜癌、絨毛膜癌、胰腺癌、前列腺癌、睾丸癌、泌尿癌、黑素瘤、腦腫瘤諸如成膠質細胞瘤、星形細胞瘤、腦膜瘤、成神經管細胞瘤和外周神經外胚層腫瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急性淋巴性白血病(ALL)、慢性淋巴性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性粒細胞白血病(CML)、成人T細胞白血病淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、肝細胞癌、膽囊癌、支氣管癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、多發性骨髓瘤、基底細胞瘤、畸胎瘤、成視網膜細胞瘤、脈絡膜黑素瘤、精原細胞瘤、橫紋肌肉瘤、顱咽管瘤、骨肉瘤、軟骨肉瘤、肌肉瘤、脂肪肉瘤、纖維肉瘤、尤因肉瘤或漿細胞瘤。
當將本發明化合物或其可藥用鹽與另一種用於治療癌症或腫瘤的抗癌劑組合施用時，本發明化合物或其可藥用鹽可提供增強的抗癌作用。
用於治療癌症或腫瘤的抗癌劑的代表性實例可包括但不限於細胞信號轉導抑制劑(例如苯丁酸氮芥、美法侖、環磷醯胺、異環磷醯胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、鏈脲佐菌素、順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、達卡巴嗪、替莫唑胺、丙卡巴肼、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他濱、巰基嘌呤、氟達拉濱、長春鹼、長春新鹼、長春瑞濱、紫杉醇、多西紫杉醇、拓撲替康、伊立替康、依託泊苷、曲貝替定、更生黴素、多柔比星、表柔比星、道諾黴素、米托蒽醌、博來黴素、絲裂黴素C、伊沙匹隆、他莫昔芬、氟他胺、戈那瑞林類似物、甲地孕酮、強的松、地塞米松、甲潑尼龍、沙利度胺、干擾素α、亞葉酸鈣、西羅莫司、西羅莫司脂化物、依維莫司、阿法替尼、alisertib、amuvatinib、阿帕替尼、阿西替尼、硼替佐米、波舒替尼、布立尼布、卡博替尼、西地尼布、crenolanib、克卓替尼、達拉菲尼、達可替尼、達努塞替、達沙替尼、多維替尼、厄洛替尼、foretinib、ganetespib、吉非替尼、依魯替尼、埃克替尼、伊馬替尼、iniparib、拉帕替尼、lenvatinib、linifanib、linsitinib、馬賽替尼、momelotinib、莫替沙尼、來那替尼、尼祿替尼、niraparib、oprozomib、olaparib、帕唑帕尼、pictilisib、普納替尼、quizartinib、瑞格菲尼、rigosertib、rucaparib、盧梭利替尼、塞卡替尼、saridegib、 索拉非尼、舒尼替尼、替拉替尼、tivantinib、替沃紮尼、托法替尼、曲美替尼、凡德他尼、維利帕尼、威羅菲尼、維莫德吉、volasertib、阿侖單抗、貝伐單抗、貝倫妥單抗維多汀、卡妥索單抗、西妥昔單抗、地諾單抗、吉妥珠單抗、伊匹單抗、尼妥珠單抗、奧法木單抗、帕尼單抗、利妥昔單抗、托西莫單抗、曲妥珠單抗或它們的任意組合)。
本發明還涉及一種抑制吲哚胺2,3-雙加氧酶的方法，包括使本發明所述的化合物或者藥物組合物暴露於吲哚胺2,3-雙加氧酶。
本發明的化合物或其可藥用鹽可作為活性成分通過口服或腸胃外施用，其有效量的範圍為在哺乳動物包括人(體重約70kg)的情況下0.1至2,000mg/kg體重/天、優選1至1,000mg/kg體重/天，並且每天以單次或4次分次劑量，或者遵循/不遵循預定時間施用。活性成分的劑量可根據多個相關因素(例如待治療物件的情況、疾病類型和嚴重性、施用速率和醫生意見)進行調整。在某些情況下，小於以上劑量的量可能是合適的。如果不引起有害的副作用則可使用大於以上劑量的量並且該量可以每天以分次劑量施用。
可根據常規方法中的任何一種將本發明藥物組合物配製成用於口服施用或腸胃外施用(包括肌內、靜脈內和皮下途徑)的片劑、顆粒、粉末、膠囊、糖漿、乳劑或微乳劑的形式。
用於口服施用的本發明藥物組合物可通過將活性成分與例如以下的載體混合來製備：纖維素、矽酸鈣、玉米澱粉、乳糖、蔗糖、右旋糖、磷酸鈣、硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、明膠、滑石、表面活性劑、助懸劑、乳化劑和稀釋劑。在本發明的注射組合物中採用的載體的實例是水、鹽溶液、葡萄糖溶液、葡萄糖樣溶液(glucose-like solution)、醇、二醇、醚(例如，聚乙二醇400)、油、脂肪酸、脂肪酸酯、甘油酯、表面活性劑、助懸劑和乳化劑。
實施例
設計和反應實例
本發明的化合物可參照下面說明通過所知步驟合成得到。所有購買的溶劑和試劑都未經過處理而直接使用。所有合成的化合物可以通過，但不限於以下方法分析驗證：LCMS(liquid chromatography mass spectrometry，液相質譜)和NMR(nuclear magnetic resonance，核磁共振)。核磁共振(NMR)由Bruker AVANCE-500核磁儀測定，測定時所用的氘代溶劑為氘代二甲基亞碸(d 6-DMSO)、氘代氯仿(CDCl3)，四甲基矽烷(TMS)作為內標物。以下縮寫表示各種類型的分裂峰：單峰(s)、雙重峰(d)、三重峰(t)、多重峰(m)、寬峰(br)。質譜(MS)的測定採用Thermo Fisher-MSQ Plus液質聯用儀。通用合成分析和實例描述如下：
實施例1
N-(4-chlorophenyl)-6-(6-fluoroquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
N-(4-氯苯基)-6-(6-氟喹啉-4-基)螺[2.5]辛烷-1-甲醯胺
第一步：將1,4-環己二酮單乙二醇縮酮(10.0g,64.03mmol)溶於250mL甲基叔丁基醚中，加入N-苯基雙(三氟甲烷磺醯)亞胺(22.9g,64.03mmol)。將反應液冷卻至-78℃，在氮氣氛下往反應液中滴加雙(三甲基矽基)氨基鈉(2mol/L四氫呋喃溶液)(32mL,64.03mmol)。滴加完畢後反應液在該溫度下繼續攪拌60分鐘，然後將反應液升至室溫，攪拌過夜直至TLC檢測反應原料消耗完全。反應液用3mL硫酸氫鉀水溶液淬滅，過濾除去固體，濃縮濾液。向殘餘液中加入3mL甲基叔丁基醚，有機層用45mL氫氧化鈉(5%)溶液洗三次，50mL飽和食鹽水洗一次。有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到化合物1a(17.23g)，橘紅色油狀液體，收率93%。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 5.66(J=4.0Hz,1H),4.01-3.96(m,4H),2.56-2.52(m,2H),2.42-2.40(m,2H),1.90(t,J=6.5Hz,2H).
第二步：將化合物1a(13g,45.1mmol)溶於100mL二氧六環中，依次加入聯硼酸頻那醇酯(14.9g,58.64mmol)，醋酸鉀(13.3g,135.3mmol)和Pd(dppf)Cl2(1.65g,2.26mmol)。反應混合物在氮氣氛下回流反應過夜。然後蒸幹反應溶劑二氧六環，加入乙酸乙酯，用矽藻土過濾，濾液濃縮之後用快速過柱機分離得到化合物1b(7.6g)，淡黃色固體，收率63%。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 6.48-6.45(m,1H),3.98(s,4H),2.40-2.34(m,4H),1.73(t,J=6.5Hz,2H),1.25(s,12H).
第三步：將化合物1b(5.7g,21.48mmol)溶於60mL/15mL二氧六環/水中，依次加入4-氯-6-氟喹啉(3.0g,16.53mmol)，碳酸鉀(6.8g,49.56mmol)和Pd(PPh3)4(954mg,0.83mmol)。反應混合物在氮氣氛下回流反應過夜。然後濃縮反應液，用乙酸乙酯萃取，有機相濃縮之後用快速過柱機分離得到化合物1c(2.42g)，淡黃色液體，收率51%。MS(ESI)：m/z 286.1(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.81(d,J=4.5Hz,1H),8.15(dd,J=9.0,5.5Hz,1H),7.65(dd,J=10.0,2.5Hz,1H),7.49(td,J=9.0,2.5Hz,1H),7.26(d,J=4.5Hz,1H),5.77(t,J=3.5Hz,1H),4.08-40.6(m,4H),2.65-2.60(m,2H),2.56-2.53(m,2H),2.00(t,J=6.5Hz,2H).
第四步：將化合物1c(2.42g,8.49mmol)溶於45mL異丙醇中，加入10%鈀碳(300mg)。反應混合物在氫氣氛下加熱至55℃反應過夜。然後用矽藻土濾除鈀碳，濾液濃縮得到粗品化合物1d(2.04g)，漿狀液體，收率84%，直接用 於下一步反應。MS(ESI)：m/z 288.1(M+H)+.
第五步：將化合物1d(2.04g,7.11mmol)溶於36mL丙酮中，加入9mL 4mol/L鹽酸。反應混合物加熱至45℃反應過夜。然後蒸除溶劑，水溶液用6mol/L氫氧化鈉中和至pH=9，用乙酸乙酯萃取水相。有機相合併後用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物1e(1.17g)，淡黃色固體，收率67%。MS(ESI)：m/z 244.3(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.85(d,J=4.5Hz,1H),8.22(dd,J=9.0,5.5Hz,1H),7.74(dd,J=10.0,2.5Hz,1H),7.57-7.50(m,1H),7.33(d,J=4.5Hz,1H),3.74-3.66(m,1H),2.72-2.58(m,4H),2.41-2.34(m,2H),2.11-2.00(m,2H).
第六步：將膦醯基乙酸三乙酯(968mg,4.32mmol)溶於16mL超幹四氫呋喃中，在0℃冰浴下加入叔丁醇鈉(415mg,4.32mmol)。10分鐘後，將化合物1e(1g,4.12mmol)的四氫呋喃(4mL)溶液加入反應液中。反應2小時後，用水淬滅。水溶液用20mL乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用20mL飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物1f(1.18g)，白色固體，收率92%。MS(ESI)：m/z 314.0(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.81(d,J=4.5Hz,1H),8.17(dd,J=9.0,5.5Hz,1H),7.72(dd,J=10.0,2.5Hz,1H),7.53-7.47(m,1H),7.28(d,J=4.5Hz,1H),5.75(s,1H),4.19(q,J=7.0Hz,2H),3.52-3.42(m,1H),2.54-2.48(m,2H),2.26-2.11(m,4H),1.80-1.68(m,2H),1.30(t,J=7.0Hz,3H).
第七步：將NaH(383mg,9.57mmol)加入15mL二甲基亞碸中，向該懸濁液中加入三甲基碘化亞碸(2.11g,9.57mmol)。混合物在室溫下攪拌1.5小時。然後將化合物1f(1.0g,3.19mmol)的二甲基亞碸(5mL)溶液加入到反應液中。反應在室溫條件下攪拌過夜。然後用水淬滅，用乙酸乙酯萃取，用快速過柱機分離得到化合物1g(820mg)，無色油狀液體，收率78%。MS(ESI)：m/z 328.1(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.83(d,J=4.5Hz,1H),8.24(dd,J=9.0,5.5Hz,1H),7.71(dd,J=10.0,2.5Hz,1H),7.55-7.49(m,1H),7.35(d,J=4.5Hz,1H),4.19(q,J=7.0Hz,2H),3.32-3.24(m,1H),2.17(td,J=13.0,3.5Hz,1H),2.07-1.90(m,4H),1.87-1.78(m,1H),1.58(dd,J=8.0,5.5Hz,1H),1.46-1.37(m,1H),1.30(t,J=7.0Hz, 3H),1.28-1.24(m,2H),1.16-1.11(m,1H),1.00(dd,J=8.0,4.5Hz,1H).
第八步：將4-氯苯胺(94mg,0.73mmol)溶於5mL四氫呋喃中，在0℃冰浴下加入2mol/L異丙基氯化鎂的四氫呋喃溶液(0.4mL,0.73mmol)。混合物在室溫下攪拌5分鐘，將化合物1g(60mg,0.18mmol)的四氫呋喃(2mL)溶液加入該混合物中。反應液在室溫下攪拌過夜，然後用飽和氯化銨溶液淬滅，乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物1(16.04mg)，白色固體，產率21%。MS(ESI)：m/z 408.9(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.37(s,1H),8.81(s,1H),8.11-8.05(m,1H),8.02(d,J=11.0Hz,1H),7.69-7.63(m,3H),7.38-7.31(m,3H),3.48-3.40(m,1H),2.20(t,J=12.0Hz,1H),1.97-1.84(m,4H),1.78(d,J=12.5Hz,1H),1.72(t,J=6.5Hz,1H),1.35-1.26(m,1H),1.17-1.08(m,2H),0.96-0.90(m,1H).
實施例2
N-(4-fluorophenyl)-6-(6-fluoroquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
N-(4-氟苯基)-6-(6-氟喹啉-4-基)螺[2.5]辛烷-1-甲醯胺
化合物2的合成同化合物1，將4-氟苯胺替代實施例1中的4-氯苯胺。得到化合物2(16.97mg)，白色固體，收率22%。MS(ESI)：m/z 393.3(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.28(s,1H),8.81(s,1H),8.10-8.05(m,1H),8.03(d,J=11.0Hz,1H),7.69-7.60(m,3H),7.37(s,1H),7.13(t,J=8.0Hz,2H),3.49-3.40(m,1H),2.20(t,J=12.0Hz,1H),1.98-1.85(m,4H),1.78(d,J=11.0Hz,1H),1.72(t,J=6.5Hz,1H),1.37-1.28(m,1H),1.17-1.07(m,2H),0.94-0.89(m,1H).
實施例3
N-(4-chlorobenzyl)-6-(6-fluoroquinolin-4-yl)spiro[2.5]octame-1- carboxamide
N-(4-氯苄基)-6-(6-氟喹啉-4-基)螺[2.5]辛烷-1-甲醯胺
化合物3的合成從實施例1中的中間體1g出發，經由以下步驟製備：
第一步：將化合物1g(200mg,0.61mmol)溶於10mL乙醇中，加入4mL 2mol/L氫氧化鈉溶液。反應液加熱至50℃，反應2小時。待反應液冷卻至室溫，用4mol/L鹽酸溶液中和至pH=1。用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用製備薄層層析分離得到化合物3a(150mg)，白色固體，產率83%。MS(ESI)：m/z 300.0(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 12.02(br,1H),8.83(d,J=4.5Hz,1H),8.10(dd,J=9.0,5.5Hz,1H),8.03(dd,J=10.0,2.5Hz,1H),7.71-7.64(m,1H),7.38(d,J=4.5Hz,1H),3.48-3.41(m,1H),2.21-2.13(m,1H),2.01-1.80(m,4H),1.75-1.65(m,1H),1.51(dd,J=8.0,5.5Hz,1H),1.38-1.32(m,1H),1.11-1.05(m,1H),1.04-0.99(m,1H),0.95(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
第二步：將化合物3a(40mg,0.13mmol)溶於5mL N,N-二甲基甲醯胺中，依次加入二異丙基乙胺(52mg,0.39mmol)和HATU(61mg,0.16mmol)，在室溫下攪拌30分鐘。然後加入4-氯苄胺(57mg,0.39mmol)，繼續在室溫下攪拌反應2小時。向反應液中加入20mL水淬滅，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物3(6.34mg)，白色固體，收率11%。MS(ESI)：m/z 423.4(M+H)+.1H NMR(500MHz, d 6-DMSO)δ 8.81(s,1H),8.68(s,1H),8.12-8.07(m,1H),8.00(d,J=11.0Hz,1H),7.67(t,J=8.5Hz,1H),7.36-7.31(m,4H),7.14(s,1H),4.44(dd,J=15.0,6.5Hz,1H),4.18(dd,J=15.0Hz,5.0Hz,1H),3.42-3.34(m,1H),2.13(t,J=12.5Hz,1H),1.86-1.74(m,4H),1.63(d,J=12.5Hz,1H),1.54-1.48(m,1H),1.25-1.15(m,1H),1.08-0.96(m,2H),0.82-0.76(m,1H).
實施例4
N-(4-chlorophenethyl)-6-(6-fluoroquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
N-(4-氯苯乙基)-6-(6-氟喹啉-4-基)螺[2.5]辛烷-1-甲醯胺
化合物4的合成同化合物3，將4-氯苯乙胺替代實施例3中的4-氯苄胺。得到化合物4(17.15mg)，白色固體，收率29%。MS(ESI)：m/z 437.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 8.84(d,J=4.5Hz,1H),8.19(t,J=5.5Hz,1H),8.12-8.07(m,1H),7.99(d,J=11.0Hz,1H),7.67(t,J=8.5Hz,1H),7.27(d,J=4.1Hz,1H),7.25-7.21(m,4H),3.49-3.42(m,1H),3.30-3.22(m,2H),2.74(t,J=6.5Hz,2H),2.11(t,J=12.5Hz,1H),1.85-1.75(m,4H),1.67(d,J=12.5Hz,1H),1.46-1.41(m,1H),1.26-1.14(m,1H),1.03-0.95(m,2H),0.75-0.70(m,1H).
實施例5
6-(6-fluoroquinolin-4-yl)-N-(4-(trifluoromethyl)phenyl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
6-(6-氟喹啉-4-基)-N-(4-(三氟甲基)苯基)螺[2.5]辛烷-1-甲醯胺
化合物5的合成從實施例3 中的中間體3a出發，經由以下步驟製備：
將化合物3a(40mg,0.13mmol)溶於5mL乙酸乙酯中，依次加入吡啶(32mg,0.39mmol)和三丙基磷酸酐(127mg,0.33mmol)，在室溫下攪拌10分鐘。然後加入4-三氟甲基苯胺(65mg,0.39mmol)，繼續在室溫下攪拌反應過夜。向反應液中加入2mL 2mol/L氫氧化鈉溶液，再加入20mL水稀釋，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物5(2.65mg)，白色固體，收率5%。MS(ESI)：m/z 437.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.63(s,1H),8.80(d,J=4.5Hz,1H),8.10-8.05(m,1H),8.03(d,J=11.0Hz,1H),7.84(d,J=8.0Hz,2H),7.69-7.63(m,3H),7.36(s,1H),3.48-3.41(m,1H),2.25-2.17(m,1H),1.99-1.85(m,4H),1.80-1.74(m,2H),1.35-1.25(m,1H),1.21-1.09(m,2H),0.99-0.95(m,1H).
實施例6
N-(4-cyanophenyl)-6-(6-fluoroquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
N-(4-氰基苯基)-6-(6-氟喹啉-4-基)螺[2.5]辛烷-1-甲醯胺
化合物6的合成同化合物5，將4-氨基苯腈替代實施例5中的 4-三氟甲基苯胺。得到化合物6(28.36mg)，白色固體，收率53%。MS(ESI)：m/z 400.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.70(s,1H),8.80(d,J=4.5Hz,1H),8.10-8.06(m,1H),8.03(d,J=11.0Hz,1H),7.82(d,J=8.5Hz,2H),7.75(d,J=8.5Hz,2H),7.66(t,J=9.0Hz,1H),7.35(d,J=3.5Hz,1H),3.48-3.40(m,1H),2.25-2.17(m,1H),1.99-1.83(m,4H),1.81-1.74(m,2H),1.33-1.23(m,1H),1.21-1.10(m,2H),1.02-0.96(m,1H).
實施例7
N-(6-chloropyridin-3-yl)-6-(6-fluoroquinolin-4-yl)spiro[2.5]octame-1-carboxamide
N-(6-氯吡啶-3-基)-6-(6-氟喹啉-4-基)螺[2.5]辛烷-1-甲醯胺
化合物7的合成同化合物5，將3-氨基-6-氯吡啶替代實施例5中的4-三氟甲基苯胺。得到化合物7(7.07mg)，白色固體，收率13%。MS(ESI)：m/z 410.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.62(s,1H),8.81(s,1H),8.63(s,1H),8.15-8.06(m,2H),8.03(d,J=11.0Hz,1H),7.66(t,J=8.5Hz,1H),7.45(d,J=8.0Hz,1H),7.38(s,1H),3.48-3.41(m,1H),2.25-2.16(m,1H),1.99-1.82(m,4H),1.82-1.72(m,2H),1.35-1.26(m,1H),1.20-1.09(m,2H),1.00-0.95(m,1H).
實施例8
N-(5-chloropyridin-2-yl)-6-(6-fluoroquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
N-(5-氯吡啶-2-基)-6-(6-氟喹啉-4-基)螺[2.5]辛烷-1-甲醯胺
化合物8的合成同化合物5，將2-氨基-5-氯吡啶替代實施例5中的4-三氟甲 基苯胺。得到化合物8(19.54mg)，白色固體，收率36%。MS(ESI)：m/z 410.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 11.04(s,1H),8.80(s,1H),8.38(s,1H),8.13(d,J=8.5Hz,1H),8.07(t,J=8.0Hz,1H),8.02(d,J=11.0Hz,1H),7.85(d,J=9.0Hz,1H),7.66(t,J=8.0Hz,1H),7.34(s,1H),3.47-3.40(m,1H),2.19(t,J=12.5Hz,1H),2.02-1.84(m,5H),1.78(d,J=11.0Hz,1H),1.33-1.22(m,1H),1.21-1.15(m,1H),1.08(d,J=12.5Hz,1H),0.98-0.92(m,1H).
實施例9
N-(4-chlorophenyl)-6-(6-fluoro-7-methylquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
N-(4-氯苯基)-6-(6-氟-7-甲基喹啉-4-基)-螺[2.5]辛烷-1-甲醯胺
化合物9的合成從實施例1中的中間體1g出發，經由以下步驟製備：
第一步：在-78℃條件下，將正丁基鋰(2.5M,0.5mL,1.22mmol)滴加到二異丙胺(123mg,1.22mmol)的四氫呋喃(5mL)溶液中。再向其中滴加化合物1g(200mg,0.61mmol)的四氫呋喃(2mL)溶液。反應在-78℃下攪拌1小時。然後向反應液中滴加碘甲烷(173mg,1.22mmol)的四氫呋喃(2mL)溶液，反應維持在 -78℃半小時後升至室溫，攪拌過夜。用飽和氯化銨溶液淬滅，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用製備薄層層析分離得到化合物9a(24mg)，無色油狀液體，收率12%。MS(ESI)：m/z 342.4(M+H)+.
第二步：將4-氯苯胺(36mg,0.28mmol)溶於四氫呋喃(2mL)中，在0℃冰浴下加入2.0mol/L異丙基氯化鎂的四氫呋喃溶液(0.2mL,0.28mmol)。混合物在室溫下攪拌5分鐘，將化合物9a(24mg,0.07mmol)的四氫呋喃(1mL)溶液加入該混合物中。反應液在室溫下攪拌過夜，然後用飽和氯化銨溶液淬滅，乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物9(12.01mg)，白色固體，收率41%。MS(ESI)：m/z 423.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.37(s,1H),8.75(s,1H),7.99-7.91(m,2H),7.80-7.56(m,3H),7.34(d,J=8.0Hz,2H),7.28(s,1H),3.44-3.37(m,1H),2.44(s,3H),2.23-2.14(m,1H),1.98-1.84(m,4H),1.78-1.69(m,2H),1.17-1.07(m,2H),0.95-0.92(m,1H).
實施例10
(S)-N-(4-chlorophenyl)-6-(6-fluoroquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide(10a)
(S)-N-(4-氯苯基)-6-(6-氟喹啉-4-基)螺[2.5]辛烷-1-甲醯胺(10a)
(R)-N-(4-chlorophenyl)-6-(6-fluoroquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide(10b)
(R)-N-(4-氯苯基)-6-(6-氟喹啉-4-基)螺[2.5]辛烷-1-甲醯胺(10b)
化合物10a和化合物10b由實施例1中化合物1經過手性柱拆分得到，絕對構型未確定。其中，化合物10a對應手性拆分中的前者(保留時間3.027分鐘)，化合物10b對應手性拆分中的後者(保留時間3.842分鐘)。
化合物10a：MS(ESI)：m/z 409.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.37(s,1H),8.81(s,1H),8.11-8.05(m,1H),8.02(d,J=11.0Hz,1H),7.69-7.63(m,3H),7.38-7.31(m,3H),3.48-3.40(m,1H),2.20(t,J=12.0Hz,1H),2.00-1.85(m,4H),1.78(d,J=12.0Hz,1H),1.72(d,J=6.5Hz,1H),1.36-1.28(m,1H),1.17-1.08(m,2H),0.96-0.90(m,1H).
化合物10b：MS(ESI)：m/z 409.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.37(s,1H),8.81(s,1H),8.10-8.05(m,1H),8.02(d,J=11.0Hz,1H),7.69-7.63(m,3H),7.38-7.31(m,3H),3.48-3.40(m,1H),2.20(t,J=12.0Hz,1H),1.98-1.84(m,4H),1.78(d,J=12.0Hz,1H),1.72(d,J=6.5Hz,1H),1.37-1.28(m,1H),1.17-1.08(m,2H),0.96-0.90(m,1H).
實施例11
N-(4-bromophenyl)-6-(6-fluoroquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
N-(4-溴苯基)-6-(6-氟喹啉-4-基)螺[2.5]辛烷-1-甲醯胺
化合物11的合成同化合物5，得到化合物11(22.4mg)，白色固體，收率45%。MS(ESI)：m/z 454.1(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.40(s,1H),8.80(d,J=4.5Hz,1H),8.08(dd,J=9.0,6.0Hz,1H),8.03(dd,J=11.0,2.5Hz,1H),7.69-7.64(m,1H),7.63-7.58(m,2H),7.50-7.44(m,2H),7.35(d,J=4.5Hz,1H),3.44(t,J=11.5Hz,1H),2.20(td,J=12.5,4.0Hz,1H),2.00-1.84(m,4H),1.77(d,J=12.5Hz,1H),1.72(dd,J=7.5,5.5Hz,1H),1.35-1.25(m,1H),1.17-1.13(m,1H), 1.10(d,J=12.5Hz,1H),0.93(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
實施例12
N-(4-chloro-3-fluorophenyl)-6-(6-fluoroquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
N-(4-氯-3-氟苯基)-6-(6-氟喹啉-4-基)螺[2.5]辛烷-1-甲醯胺
化合物12的合成同化合物5，得到化合物12(20.8mg)，白色固體，收率48%。MS(ESI)：m/z 428.1(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.62(s,1H),8.80(d,J=3.5Hz,1H),8.10-8.05(m,1H),8.02(d,J=10.5Hz,1H),7.82(d,J=12.0Hz,1H),7.66(t,J=8.5Hz,1H),7.49(t,J=8.5Hz,1H),7.37(d,J=9.5Hz,2H),3.47-3.41(m,1H),2.23-2.15(m,1H),1.97-1.82(m,4H),1.77(d,J=12.5Hz,1H),1.71(t,J=6.0Hz,1H),1.32-1.21(m,1H),1.18-1.14(m,1H),1.11(d,J=12.5Hz,1H),0.98-0.94(m,1H).
實施例13
N-(5-chlorothiophen-2-yl)-6-(6-fluoroquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
N-(5-氯噻吩-2-基)-6-(6-氟喹啉-4-基)螺[2.5]辛烷-1-甲醯胺
化合物13的合成同化合物5，得到化合物13(17.8mg)，白色固體，收率42%。MS(ESI)：m/z 415.3(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 11.71(s,1H),8.81(d,J=4.0Hz,1H),8.10-8.06(m,1H),8.03(d,J=11.0Hz,1H),7.67(t,J =8.5Hz,1H),7.36(d,J=4.0Hz,1H),6.86(d,J=3.5Hz,1H),6.50(d,J=3.5Hz,1H),3.48-3.40(m,1H),2.23-2.16(m,1H),1.97-1.74(m,5H),1.72-1.67(m,1H),1.28-1.16(m,2H),1.11(d,J=12.5Hz,1H),1.02-0.98(m,1H).
實施例14
N-(4-chlorophenyl)-6-(6-fluoroquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-sulfonamide
N-(4-氯苯基)-6-(6-氟喹啉-4-基)螺[2.5]辛烷-1-磺醯胺
化合物14的合成從實施例1中的中間體1e出發，經由以下步驟製備：
第一步：將甲磺酸乙酯(2.45g,19.75mmol)溶於超幹四氫呋喃(30mL)中，在-78℃乾冰浴和氮氣保護下加入雙三甲基矽基胺基鋰(1.0Min THF,19.8 mL,19.75mmol)，在該溫度下攪拌反應30分鐘。然後將化合物1e(4.0g,16.46mmol)的四氫呋喃(20mL)溶液加入反應液中，並在-78℃反應3小時。用水淬滅反應，濃縮蒸幹溶劑得到化合物14a(6.2g)，白色固體，收率100%。不需要純化直接用於下一步。MS(ESI)：m/z 368.4(M+H)+.
第二步：將化合物14a(2.0g,5.45mmol)溶於吡啶(10mL)中，並將溶液冷卻至0℃，滴加氯化亞碸(1.30g,10.90mmol)，反應在0℃攪拌2小時後升至室溫過夜。加入飽和碳酸氫鈉水溶液淬滅反應，中和至鹼性。水相用乙酸乙酯萃取，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物14b(216mg)，黃色油狀液體，收率11%。MS(ESI)：m/z 350.4(M+H)+.
第三步：將化合物14b(216mg,0.62mmol)溶於乙二醇二甲醚/水(5/5mL)的混合溶劑中，加入硫氰化鉀(60mg,0.62mmol)。反應混合物加熱至90℃過夜。冷卻至室溫，加入10mL稀釋，用乙酸乙酯萃取三次，水相濃縮蒸幹得到粗品固體。將該固體溶於氯化亞碸(5mL)中，再滴加N,N-二甲基甲醯胺(0.5mL)，加熱至80℃反應3小時。蒸幹溶劑，用乾燥二氯甲烷重蒸三次。殘留物溶於乾燥二氯甲烷(5mL)中，冰水浴冷卻至0℃，加入苯酚(117mg,1.24mmol)，再加入三乙胺(313mg,3.10mmol)。反應在0℃攪拌1小時後升至室溫過夜。加入飽和氯化銨水溶液淬滅反應。水相用乙酸乙酯萃取，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用製備薄層層析分離得到化合物14c(124mg)，黃色固體，收率50%。MS(ESI)：m/z 398.4(M+H)+.
第四步：將NaH(37mg,0.93mmol)加入二甲基亞碸(15mL)中，向該懸濁液中加入三甲基碘化亞碸(205mg,0.93mmol)。混合物在室溫下攪拌1小時。然後將化合物14c(124mg,0.31mmol)的二甲基亞碸(5mL)溶液加入到反應液中。反應在60℃攪拌反應3小時。然後用水淬滅，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用製備薄層層析分離得到化合物14d(65mg)，白色固體，收率51%。MS(ESI)：m/z 412.4(M+H)+.
第五步：將化合物14d(50mg,0.12mmol)溶於乙醇(5mL)中，加入40%氫氧化鉀水溶液(3mL)。反應混合物在80℃下攪拌48小時。冷卻至室溫， 加入4.0mol/L鹽酸溶液調節pH至1~3，蒸幹水溶液，得到白色固體。加入甲醇，過濾，濾液濃縮得到化合物14e(35mg)，黃色固體，收率87%，不需要純化直接用於下一步。MS(ESI)：m/z 336.5(M+H)+.
第六步：將化合物14e(35mg,0.10mmol)加入到氯化亞碸(5mL)中，再滴加N,N-二甲基甲醯胺(0.5mL)，加熱至80℃反應3小時。蒸幹溶劑，用乾燥二氯甲烷重蒸三次。濃縮得到化合物14f(30mg)，白色固體，收率85%，不需要純化直接用於下一步。MS(ESI)：m/z 354.5(M+H)+.
第七步：將化合物14f(30mg,0.08mmol)溶於吡啶(2mL)中，依次加入4-氯苯胺(20mg,0.16mmol)，4-二甲氨基吡啶(12mg,0.01mmol)，反應混合物加熱至100℃過夜。蒸幹溶劑，加入20mL水，水溶液用乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物14(5.69mg)，白色固體，收率16%。MS(ESI)：m/z 445.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.10(br,1H),8.82(d,J=4.5Hz,1H),8.09(dd,J=9.0,6.0Hz,1H),8.02(dd,J=11.0,2.5Hz,1H),7.71-7.64(m,1H),7.40(d,J=9.0Hz,2H),7.27(d,J=9.0Hz,2H),7.16(d,J=4.5Hz,1H),3.45-3.40(m,1H),2.56(dd,J=8.0,5.5Hz,1H),2.13(d,J=13.5Hz,1H),2.08-1.98(m,2H),1.88-1.74(m,3H),1.52-1.42(m,1H),1.20-1.12(m,2H),1.09(d,J=13.5Hz,1H).
化合物15,16,17,18,19的合成同化合物14。
實施例20
N-(4-chlorophenyl)-6-(6-fluoroquinolin-4-yl)-1-azaspiro[2.5]octane-1-carboxamide
N-(4-氯苯基)-6-(6-氟喹啉-4-基)-1-氮雜螺[2.5]辛烷-1-甲醯胺
化合物20的合成從實施例1中的中間體1e出發，經由以下步驟製備：
第一步：將化合物1e(500mg,2.06mmol)溶於20mL超幹四氫呋喃中，在氮氣條件下加入四乙氧基鈦(2.81g,12.36mmol)，然後加入叔丁基亞磺醯胺(747mg,6.18mmol),。反應混合物在60℃下反應4小時。將反應冷卻至室溫，混合物倒入等體積的飽和食鹽水中並攪拌，得到的懸濁液用矽藻土過濾，濾餅用乙酸乙酯洗。有機層用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物20a(510mg)，收率86%。MS(ESI)：m/z 347.4(M+H)+.
第二步：將三甲基碘化亞碸(486mg,2.21mmol)加入20mL超幹二甲亞碸中，再加入NaH(88mg,2.21mmol)，在室溫下攪拌20分鐘。然後向反應液中加入化合物20a(510mg,1.47mmol)的2mL二甲亞碸溶液。反應混合物在室溫下攪拌反應1小時。用水淬滅反應，水相用乙酸乙酯萃取(3x20mL)，合併有機相，用20mL飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物20b(320mg)，收率60%。MS(ESI)：m/z 361.4(M+H)+.
第三步：將化合物20b(320mg,0.89mmol)溶於20mL四氫呋喃中，向其中滴加57%氫碘酸水溶液(3mL)，反應混合物在室溫下攪拌反應30分鐘。然後反應冷卻至0℃，用2M KOH中和反應液至pH=12-14，繼續在室溫下攪 拌45分鐘。用乙酸乙酯萃取反應液(3x20mL)，合併有機相，用20mL飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到化合物20c(200mg)，收率88%，不需要純化直接用於下一步。MS(ESI)：m/z 257.5(M+H)+.
第四步：將化合物20c(100mg,0.39mmol)溶於10mL四氫呋喃中，冰水浴冷卻至0℃，加入三乙胺(118mg,1.17mmol)，然後加入4-氯苯基異氰酸酯(60mg,0.39mmol)。反應混合物升至室溫攪拌反應3小時。用10mL飽和氯化銨淬滅反應，水溶液用乙酸乙酯萃取(3x10mL)，合併有機相，用10mL飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物20(70mg)，白色固體，收率44%。MS(ESI)：m/z 410.4(M+H)+.
化合物21,22,23,24,25的合成同化合物20。
實施例26
N-(4-chlorophenyl)-6-(6-fluoroquinolin-4-yl)-1-azaspiro[2.5]octane-1-sulfonamide
N-(4-氯苯基)-6-(6-氟喹啉-4-基)-1-氮雜螺[2.5]辛烷-1-磺醯胺
化合物26的合成從實施例20中的中間體20c出發，經由以下步驟製備：
第一步：將4-氯苯胺(3.0eq)溶於二氯甲烷中，並用冰水浴冷卻至0℃。向反應液中慢慢滴加氯磺酸(1.0eq)的二氯甲烷溶液。反應在0℃下繼續攪拌30分鐘，然後撤去冰水浴，在室溫下攪拌1小時。過濾收集反應產生的沉澱並真空乾燥得到淡紅色固體。將該固體加入到甲苯中，再加入五氯化磷(1.0eq)，反應混合液在75℃下加熱反應2小時。反應冷卻至室溫，過濾掉固體，固體用甲苯洗，濾液濃縮乾燥後得到化合物26a，收率72%，不需要純化直接用於下一步。
第二步：將化合物20c(1.0eq)溶於四氫呋喃中，冰水浴冷卻至0℃，加入三乙胺(2.0eq)，然後加入化合物26a(1.2eq)。反應混合物升至室溫攪拌反應3小時。用飽和氯化銨淬滅反應，水溶液用20mL乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用20mL飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物26，白色固體。
化合物27,28,29,30,31的合成同化合物26。
實施例32
N-(4-chlorophenyl)-7-(6-fluoroquinolin-4-yl)spiro[3.5]nonane-1-carboxamide
N-(4-氯苯基)-7-(6-氟喹啉-4-基)螺[3.5]壬烷-1-甲醯胺
化合物32的合成從實施例1中的中間體1e出發，經由以下步驟製備：
第一步：將(環丙基甲基)三苯基溴化膦(2.0eq)加入到超幹四氫呋喃中，向該懸濁液中加入NaH(2.0eq)，然後再室溫下攪拌2小時。再向反應液中加入化合物1e(1.0eq)和三(3,6-二氧雜庚基)胺(0.1eq)。反應混合物在室溫下攪拌10分鐘，然後加熱至62℃反應4小時。旋幹反應溶劑，殘留物用快速過柱機分離得到化合物32a，收率75%。MS(ESI)：m/z 268.3(M+H)+.
第二步：將化合物32a(1.0eq)溶於二氯甲烷中，在0-5℃條件下分批加入間氯過氧苯甲酸(1.4eq)。反應混合物在0-5℃下反應40分鐘，然後升至室溫反應1小時。用二氯甲烷稀釋反應液，有機相依次用10%氫氧化鈉水溶液和飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物32b，收率35%。MS(ESI)：m/z 284.3(M+H)+.
第三步：將化合物32b(1.0eq)和對甲基苯磺醯甲基異腈(2.0eq)溶於1,2-二甲氧基乙烷和甲醇(v/v：16/1)中，在0-5℃條件下加入叔丁醇鉀(3.0eq)。反應混合物在室溫下攪拌4小時，然後將其倒入水中，用1M鹽酸溶液中和至pH=6-7。水溶液用乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物32c，收率20%。MS(ESI)：m/z 295.3(M+H)+.
第四步：將化合物32c(1.0eq)溶於乙醇中，加入40%氫氧化鈉溶液(10.0eq)，混合物在95℃下加熱反應3小時。用水稀釋反應液，用4M鹽酸 溶液中和至pH=1-2。用乙酸乙酯萃取水相，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到化合物32d，收率82%，不需要純化直接用於下一步。MS(ESI)：m/z 314.3(M+H)+.
第五步：將化合物32d(1.0eq)溶於乙酸乙酯中，依次加入吡啶(3.0eq)和三丙基磷酸酐(2.5eq)，在室溫下攪拌10分鐘。然後加入4-氯苯胺(3.0eq)，繼續在室溫下攪拌反應過夜。向反應液中加入2M氫氧化鈉溶液，再加入水稀釋，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物32，白色固體.
化合物33,34,35,36,37的合成同化合物32。
實施例38
N-(4-chlorophenyl)-7-(6-fluoroquinolin-4-yl)spiro[3.5]nonane-1-sulfonamide
N-(4-氯苯基)-7-(6-氟喹啉-4-基)螺[3.5]壬烷-1-磺醯胺
化合物38的合成從實施例32中的中間體32b出發，經由以下步驟製備：
第一步：將化合物32b(1.0eq)溶於甲醇中，用冰水浴冷卻至0℃，向反應液中分批加入硼氫化鈉(1.2eq)。反應混合物在0-5℃下攪拌1小時。TLC檢測反應結束後，蒸除反應溶劑甲醇，加入飽和食鹽水，用乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物38a，收率86%。MS(ESI)：m/z 286.3(M+H)+.
第二步：將化合物38a(1.0eq)溶於四氫呋喃中，用冰水浴冷卻至0℃，向反應液中依次加入三苯基膦(2.0eq)和四氯化碳(2.0eq)。反應混合液在0℃攪拌1小時後，升至室溫繼續反應2小時。用乙醚稀釋反應液，過濾，濃縮濾液，殘留物用快速過柱機分離得到化合物38b，收率51%。MS(ESI)：m/z 348.4(M+H)+.
第三步：將化合物38b(1.0eq)的無水乙醚溶液分批加入到鎂屑(1.7eq)的無水乙醚懸濁液中。待反應液放熱結束後，加熱至回流反應30分鐘。將反應懸濁液冷卻至25℃，並在0℃條件下緩慢滴加至磺醯氯(3.0eq)的無水二氯甲烷溶液中。反應混合物升至25℃，濃縮，殘留物用正己烷萃取並濃縮。得到化合物38c，不需要純化直接用於下一步。
第四步：將上一步得到的化合物38c(1.0eq)溶於無水二氯甲烷中，用冰水浴冷卻至0℃，向反應液中依次加入4-氯苯胺(1.0eq)和三乙胺(1.1eq)。反應混合物在25℃下繼續攪拌30分鐘，然後濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物38，白色固體。MS(ESI)：m/z 459.4(M+H)+.
化合物39,40,41,42,43的合成同化合物38。
實施例50
N-(4-chlorophenyl)-7-(6-fluoroquinolin-4-yl)-1-oxaspiro[3.5]nonane-3-carboxamide
N-(4-氯苯基)-7-(6-氟喹啉-4-基)-1-氧雜螺[3.5]壬烷-3-甲醯胺
化合物50的合成從實施例1中的中間體1e出發，經由以下步驟製備：
第一步：將3-羥基丙酸乙酯(1.0eq)溶於乾燥的二氯甲烷中，加入咪唑(1.5eq)。在冰浴條件下向反應液中加入叔丁基二甲基氯矽烷(1.2eq)。將反應升至室溫攪拌2小時，用飽和氯化銨淬滅反應，水溶液用乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物快速過柱機分離得到化合物50a，收率88%。
第二步：將二異丙胺(2.0eq)溶於超幹四氫呋喃中，在-78℃乾冰浴和氮氣保護下滴加2.5M正丁基鋰(2.0eq)。然後向反應液中慢慢滴加化合物50a(2.0eq)的四氫呋喃溶液。反應繼續在-78℃下攪拌1小時，接著加入化合物1e(1.0eq)的四氫呋喃溶液，反應緩慢升至室溫，在室溫下反應3小時。用飽和氯化銨淬滅反應，水溶液用乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物50b，收率54%。MS(ESI)：m/z 476.4(M+H)+.
第三步：將化合物50b(1.0eq)溶於四氫呋喃中，加入1M四丁基氟化銨的四氫呋喃溶液(10.0eq)。反應混合物在60℃下反應4小時。向反應液中加入水，水溶液用乙酸乙酯萃取，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到化合物50c，收率76%，不需要純化直接用於下一步。MS(ESI)：m/z 362.3(M+H)+.
第四步：將化合物50c(1.0eq)溶於吡啶中，加入對甲基苯磺醯氯(1.5eq)，反應混合物在80℃下反應過夜。蒸除反應溶劑，殘留物用快速過柱機分離得到化合物50d，收率41%。MS(ESI)：m/z 344.4(M+H)+.
第五步：將4-氯苯胺(4.0eq)溶於四氫呋喃中，在0℃冰浴下加入2mol/L異丙基氯化鎂的四氫呋喃溶液(4.0eq)。混合物在室溫下攪拌5分鐘，將化合物50d(1.0eq)的四氫呋喃溶液加入該混合物中。反應液在室溫下攪拌過夜，然後用飽和氯化銨溶液淬滅，乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物50，白色固體。
化合物51,52,53,54,55的合成同化合物50。
實施例62
N-(4-chlorophenyl)-7-(6-fluoroquinolin-4-yl)-2-oxaspiro[3.5]nonane-1-carboxamide
N-(4-氯苯基)-7-(6-氟喹啉-4-基)-2-氧雜螺[3.5]壬烷-1-甲醯胺
化合物62的合成從實施例1中的中間體1e出發，經由以下步驟製備：
第一步：將甲氧基甲基三苯基氯化膦(1.1eq)加入到超幹四氫呋喃中，冷卻至-78℃。向反應液中滴加1M雙三甲基矽基胺基鋰(1.1eq)的四氫呋喃溶液。反應混合物在-78℃繼續攪拌2小時，然後向其中滴加化合物1e(1.0eq)的四氫呋喃溶液。將反應溫度升至室溫，攪拌過夜。向反應液中加入2N HCl溶液，攪拌反應1小時。水溶液用乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物快速過柱機分離得到化合物62a，收率90%。MS(ESI)：m/z 258.4(M+H)+.
第二步：將二異丙胺(2.0eq)溶於超幹四氫呋喃中，在-78℃乾冰浴和氮氣保護下滴加2.5M正丁基鋰(2.0eq)。然後向反應液中慢慢滴加化合物62a(1.0eq)的四氫呋喃溶液。反應繼續在-78℃下攪拌1小時，接著加入草醯氯單乙酯(2.0eq)的四氫呋喃溶液，反應緩慢升至室溫，在室溫下反應3小時。用飽和氯化銨淬滅反應，水溶液用乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物62b，收率51%。MS(ESI)：m/z 358.4(M+H)+.
第三步：將化合物62b(1.0eq)溶於乙醇中，冷卻至-18℃。向反 應液中加入硼氫化鈉(2.0eq)。反應混合物在-18℃下攪拌30分鐘。用飽和氯化銨淬滅反應，水溶液用乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物快速過柱機分離得到化合物62c，收率83%。MS(ESI)：m/z 362.4(M+H)+.
第四步：將化合物62c(1.0eq)溶於吡啶中，加入對甲基苯磺醯氯(1.5eq)，反應混合物在80℃下反應過夜。蒸除反應溶劑，殘留物用快速過柱機分離得到化合物62d，收率50%。MS(ESI)：m/z 344.4(M+H)+.
第五步：將4-氯苯胺(4.0eq)溶於四氫呋喃中，在0℃冰浴下加入2mol/L異丙基氯化鎂的四氫呋喃溶液(4.0eq)。混合物在室溫下攪拌5分鐘，將化合物62d(1.0eq)的四氫呋喃溶液加入該混合物中。反應液在室溫下攪拌過夜，然後用飽和氯化銨溶液淬滅，乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物62，白色固體。
化合物63,64,65,66,67的合成同化合物62。
實施例68
N-(4-chlorophenyl)-7-(6-fluoroquinolin-4-yl)-1-azaspiro[3.5]nonane-1-carboxamide
N-(4-氯苯基)-7-(6-氟喹啉-4-基)-1-氮雜螺[3.5]壬烷-1-甲醯胺
化合物68的合成從實施例1中的中間體1e出發，經由以下步驟製備：
第一步：將甲基三苯基溴化膦(1.5eq)加入到超幹四氫呋喃中，冰水浴冷卻至0℃。向該懸濁液中滴加2.5M正丁基鋰(1.3eq)溶液。混合物在室溫條件下攪拌4小時，然後加入化合物1e(1.0eq)的四氫呋喃溶液，反應繼續在室溫下攪拌過夜。用飽和氯化銨淬滅反應，水溶液用乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物68a，收率90%。MS(ESI)：m/z 242.3(M+H)+.
第二步：在0℃冰水浴條件下，將氯磺醯異氰酸酯(1.0eq)滴加至化合物68a(1.0eq)的乙醚溶液中。反應混合物在室溫下攪拌20小時。向反應液中加入飽和亞硫酸鈉溶液，再加入10%氫氧化鉀溶液，繼續攪拌1小時。水溶液用乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物68b，收率56%。MS(ESI)：m/z 285.3(M+H)+.
第三步：將化合物68b(1.0eq)溶於四氫呋喃溶液中，在0℃冰水浴條件下，加入氫化鋁鋰(2.0eq)。反應混合物在室溫條件下攪拌2小時。向反應液中加入2當量的水，然後加入無水硫酸鎂。得到的懸濁液用矽藻土過濾，濾餅用乙酸乙酯洗，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物68c，收率75%。MS(ESI)：m/z 271.3(M+H)+.
第四步：將化合物68c(1.0eq)溶於四氫呋喃中，冰水浴冷卻至0℃，加入三乙胺(3.0eq)，然後加入4-氯苯基異氰酸酯(1.0eq)。反應混合物升至室溫攪拌反應3小時。用飽和氯化銨淬滅反應，水溶液用乙酸乙酯萃取，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物68，白色固體，收率44%。MS(ESI)：m/z 424.4(M+H)+.
化合物69,70,71,72,73的合成同化合物68。
實施例74
N-(4-chlorophenyl)-7-(6-fluoroquinolin-4-yl)-1-azaspiro[3.5]nonane-1-sulfonamide
N-(4-氯苯基)-7-(6-氟喹啉-4-基)-1-氮雜螺[3.5]壬烷-1-磺醯胺
化合物74的合成從實施例68中的中間體68c出發，經由以下步驟製備：
將化合物68c(1.0eq)溶於四氫呋喃中，冰水浴冷卻至0℃，加入三乙胺(2.0eq)，然後加入化合物26a(1.2eq)。反應混合物升至室溫攪拌反應3小時。用飽和氯化銨淬滅反應，水溶液用乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物74，白色固體。MS(ESI)：m/z 460.4(M+H)+.
化合物75,76,77,78,79的合成同化合物74。
實施例80
6-(6-fluoro-7-methylquinolin-4-yl)-N-(4-fluorophenyl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
化合物80的合成從實施例1中的中間體1d出發，經由以下步 驟製備：
第一步：在-78℃條件下，將正丁基鋰(2.5M in hexane,6.0mL,15.0mmol)滴加到2,2,6,6-四甲基呱啶(2.12g,15.0mmol)的四氫呋喃(30mL)溶液中。再向其中滴加化合物1d(2.87g,10.0mmol)的四氫呋喃(20mL)溶液。反應在-78℃下攪拌2小時。然後向反應液中滴加碘甲烷(1.3mL,20.0mmol)，反應維持在-78℃半小時後升至室溫，繼續攪拌2小時。用飽和氯化銨溶液淬滅，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物80a(2.27g)，白色固體，收率75%。MS(ESI)：m/z 302.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.76(d,J=4.5Hz,1H),7.95(d,J=7.5Hz,1H),7.62(d,J=11.5Hz,1H),7.28(d,J=4.5Hz,1H),4.02(s,4H),3.24-3.17(m,1H),2.49(s,3H),2.04-1.80(m,8H).
第二步：將化合物80a(2.5g,8.31mmol)溶於丙酮(40mL)中，加入4mol/L鹽酸(10mL)。反應混合物加熱至45℃反應過夜。然後蒸除溶劑，水溶液用6mol/L氫氧化鈉中和至pH=9，用乙酸乙酯萃取水相。有機相合併後用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物80b(1.9g)，淡黃色固體，收率89%。MS(ESI)：m/z 258.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.80(d,J=4.5Hz,1H),7.99(d,J=7.5Hz,1H),7.67(d,J=11.0Hz,1H),7.24(d,J=4.5Hz,1H),3.67(t,J=12.0Hz,1H),2.72-2.59(m,4H),2.52(s,3H),2.36(d,J=13.0Hz,2H),2.10-1.98(m,2H).
第三步：將膦醯基乙酸三乙酯(1.74g,7.76mmol)溶於超幹四氫呋喃(20mL)中，在0℃冰浴下加入叔丁醇鈉(745mg,7.76mmol)。10分鐘後，將化合物80b(1.9g,7.39mmol)的四氫呋喃(10mL)溶液加入反應液中。反應2小時後，用水淬滅。水溶液用50mL乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用50mL飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物80e(2.1g)，白色固體，收率87%。MS(ESI)：m/z 328.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.76(d,J=4.5Hz,1H),7.94(d,J=7.5Hz,1H),7.64(d,J=11.5Hz,1H),7.18(d,J=4.5Hz,1H),5.74(s,1H),4.18(q,J=7.0Hz,2H),4.14-4.06(m,1H),3.48- 3.39(m,1H),2.53-2.47(m,5H),2.22-2.12(m,3H),1.78-1.66(m,2H),1.30(t,J=7.0Hz,3H).
第四步：將NaH(697mg,17.43mmol)加入二甲基亞碸(20mL)中，向該懸濁液中加入三甲基碘化亞碸(3.83g,17.43mmol)。混合物在室溫下攪拌1.5小時。然後將化合物80c(1.9g,5.81mmol)的二甲基亞碸(10mL)溶液加入到反應液中。反應在40℃下攪拌過夜。然後用水淬滅，用乙酸乙酯萃取，用快速過柱機分離得到化合物80d(1.1g)，白色固體，收率56%。MS(ESI)：m/z 342.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.77(d,J=4.5Hz,1H),7.97(d,J=8.0Hz,1H),7.64(d,J=11.5Hz,1H),7.25(d,J=4.5Hz,1H),4.18(q,J=7.0Hz,2H),3.24(t,J=12.0Hz,1H),2.50(s,3H),2.15(t,J=12.0Hz,1H),2.03-1.90(m,4H),1.85-1.76(m,1H),1.59-1.54(m,1H),1.44-1.35(m,1H),1.30(t,J=7.0Hz,3H),1.27-1.24(m,1H),1.12(d,J=13.5Hz,1H),1.02-0.97(m,1H).
第五步：將4-氯苯胺(76mg,0.60mmol)溶於5mL四氫呋喃中，在0℃冰浴下加入2.0mol/L異丙基氯化鎂的四氫呋喃溶液(0.3mL,0.60mmol)。混合物在室溫下攪拌5分鐘，將化合物80d(50mg,0.15mmol)的四氫呋喃(2mL)溶液加入該混合物中。反應液在室溫下攪拌過夜，然後用飽和氯化銨溶液淬滅，乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物80(27.27mg)，白色固體，收率45%。MS(ESI)：m/z 407.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.30(s,1H),8.75(d,J=4.5Hz,1H),7.99-7.92(m,2H),7.65-7.60(m,2H),7.29(d,J=5.0Hz,1H),7.13(t,J=9.0Hz,2H),3.44-3.37(m,1H),2.45(s,3H),2.22-2.15(m,1H),1.97-1.86(m,4H),1.79-1.74(m,1H),1.70(dd,J=7.5,5.0Hz,1H),1.30(dd,J=12.0,4.0Hz,1H),1.15-1.12(m,1H),1.11-1.07(m,1H),0.91(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
化合物81,82,83,84,85,86的合成同化合物80。
實施例87
N-(4-chlorophenyl)-8-(6-fluoroquinolin-4-yl)-2-methyl-2-azaspiro[4.5]decane-4-carboxamide
N-(4-氯苯基)-8-(6-氟喹啉-4-基)-2-甲基-2-氮雜螺[4.5]癸烷-4-甲醯胺
化合物87的合成從實施例1中的中間體1f出發，經由以下步驟製備：
第一步：將化合物1f(400mg,1.28mmol)溶於乙腈(15mL)中，加入N-甲氧基甲基-N-(三甲基矽烷)苄基胺(3.03g,12.8mmol)，再加入氟化鋰(998mg,38.4mmol)。反應混合物在60℃反應24小時。反應冷卻至室溫，加入50mL水，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用製備薄層層析分離得到化合物87a(376mg)，無色油狀液體，收率66%。MS(ESI)：m/z 447.4(M+H)+.
第二步：將化合物87a(400mg,0.90mmol)溶於甲醇(20mL)中，加入10%鈀碳催化劑(40mg)，反應在氫氣氛圍下反應過夜。然後用矽藻土濾除鈀碳，濾液濃縮得到粗品化合物87b(300mg)，油狀液體，收率94%，不需要純化直接用於下一步。MS(ESI)：m/z 357.3(M+H)+.
第三步：將化合物87b(300mg,0.84mmol)溶於二氯乙烷(10mL)中，依次加入甲醛水溶液(50mg,0.84mmol)、三乙醯基硼氫化鈉(178mg,0.84mmol)，向反應溶液中加入2滴醋酸，混合物在室溫下攪拌過夜。加入20mL水，用二氯甲烷萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用製備薄層層析分離得到化合物87c(136mg)，淡黃色液體，收率44%。MS(ESI)：m/z 371.3(M+H)+.
第四步：將化合物87c(136mg,0.37mmol)溶於乙醇(10mL)中， 加入2mol/L氫氧化鈉(4.0mL,8.0mmol)溶液。反應液加熱至50℃，反應24小時。待反應液冷卻至室溫，用4.0mol/L鹽酸溶液中和至pH=1。用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用製備薄層層析分離得到化合物87d(98mg)，白色固體，收率78%。MS(ESI)：m/z 343.3(M+H)+.
第五步：將化合物87d(40mg,0.12mmol)溶於乙酸乙酯(5mL)中，依次加入吡啶(28mg,0.36mmol)和三丙基磷酸酐(50% wt in EA,114mg,0.18mmol)，在室溫下攪拌10分鐘。然後加入4-氯苯胺(23mg,0.18mmol)，繼續在室溫下攪拌反應過夜。向反應液中加入2mol/L氫氧化鈉(2mL)溶液，再加入20mL水稀釋，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物87(12.68mg)，白色固體，收率23%，順反混合物。MS(ESI)：m/z 452.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.50(s,1H),8.72(d,J=4.5Hz,1H),8.09-8.03(m,1H),7.98(dd,J=11.0,2.5Hz,1H),7.72-7.63(m,3H),7.40-7.35(m,2H),7.31-7.27(m,1H),3.35-3.30(m,2H),3.24-3.18(m,1H),2.99-2.92(m,1H),2.64-2.58(m,1H),2.38-2.29(m,4H),2.06-1.96(m,2H),1.93-1.51(m,5H),1.50-1.41(m,1H).
化合物88,89,90,91的合成同化合物87。
實施例92
(1S)-N-(4-chlorophenyl)-6-(6-fluoro-7-methylquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
(1S)-N-(4--氯苯基)-6-(6-氟-7-甲基喹啉-4-基)-螺[2.5]辛烷-1-甲醯胺
實施例93
(1R)-N-(4-chlorophenyl)-6-(6-fluoro-7-methylquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
(1R)-N-(4-氯苯基)-6-(6-氟-7-甲基喹啉-4-基)-螺[2.5]辛烷-1-甲醯胺
化合物92和化合物93由實施例9中化合物9經過手性柱拆分得到，絕對構型未確定。其中，化合物92對應手性拆分中的前者，化合物93對應手性拆分中的後者。
化合物92：MS(ESI)：m/z 423.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.39(s,1H),8.75(d,J=4.5Hz,1H),7.97(d,J=12.0Hz,1H),7.94(d,J=8.0Hz,1H),7.65(d,J=9.0Hz,2H),7.34(d,J=9.0Hz,2H),7.28(d,J=4.5Hz,1H),3.44-3.38(m,1H),2.44(s,3H),2.24-2.14(m,1H),1.97-1.82(m,4H),1.80-1.74(m,1H),1.73-1.69(m,1H),1.32-1.24(m,1H),1.17-1.12(m,1H),1.10(d,J=13.0Hz,1H),0.93(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
化合物93：MS(ESI)：m/z 423.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.39(s,1H),8.75(d,J=4.5Hz,1H),7.97(d,J=12.0Hz,1H),7.94(d,J=8.0Hz,1H),7.65(d,J=9.0Hz,2H),7.34(d,J=9.0Hz,2H),7.28(d,J=4.5Hz,1H),3.45-3.38(m,1H),2.45(s,3H),2.24-2.14(m,1H),1.97-1.82(m,4H),1.80-1.74(m,1H),1.73-1.69(m,1H),1.32-1.24(m,1H),1.16-1.13(m,1H),1.10(d,J=13.0Hz,1H),0.93(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
實施例94
6-(6-fluoro-7-methylquinolin-4-yl)-N-(4-(2-methoxyethoxy)phenyl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
化合物94的合成從實施例9中的中間體80d出發，經由以下步驟製備：
第一步：將化合物80d(200mg,0.59mmol)溶於乙醇(10mL)中，加入2.0mol/L氫氧化鈉溶液(4mL)。反應液加熱至50℃，反應2小時。待反應液冷卻至室溫，用4.0mol/L鹽酸溶液中和至pH=1。用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用製備薄層層析分離得到化合物94a(150mg)，白色固體，產率81%。MS(ESI)：m/z 314.4(M+H)+.
第二步：將化合物94b(1.0g,4.78mmol)和2-溴乙基甲基醚(1.33g,9.56mmol)溶於丙酮(20mL)中，然後向其中加入碳酸鉀(1.98g,14.34mmol)，將反應液加熱到60℃攪拌2小時。過濾濃縮，殘留物用快速過柱機分離得到化合物94c(1.2g)，白色固體，收率94%。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.25(d,J=9.0Hz,2H),6.86(d,J=9.0Hz,2H),6.36(s,1H),4.08(t,J=4.5Hz,2H),3.73(t,J=4.5Hz,2H),3.44(s,3H),1.50(s,9H).
第三步：將化合物94c(1.2g,4.49mmol)溶於二氯甲烷(3mL)中，在0℃冰浴下加入4.0mol/L鹽酸二氧六環溶液(6mL)。室溫下反應2小時，過濾產生的固體，乾燥得到化合物94d(900mg)，白色固體，收率98%。直接用於下一步反應。1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.26(br,3H),7.32(d,J=9.0Hz,2H),7.04(d,J=9.0Hz,2H),4.10(t,J=4.0Hz,2H),3.65(t,J=4.0Hz,2H),3.30(s,3H).
第四步：將化合物94a(53mg,0.17mmol)溶於無水二氯甲烷(2mL)中，加入二氯亞碸(5mL)，反應混合物回流攪拌2小時。蒸去反應溶劑，減壓乾燥殘留物得到淡黃色的固體。將該固體溶於無水二氯甲烷(3mL)中，在冰水浴條件下加入化合物94d(30mg,0.17mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液，加入三乙胺(52mg,0.51mmol)，在冰水浴下攪拌10分鐘，升至室溫繼續攪拌2小時。加水淬滅反應，用二氯甲烷萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物94(43.60mg)，白色固體，收率56%。MS(ESI)：m/z 463.7(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.07(s,1H),8.75(d,J=4.5Hz,1H),7.98-7.92(m,2H),7.49(d,J=9.0Hz,2H),7.29(d,J=4.5Hz,1H),6.87(d,J=9.0Hz,2H),4.03(t,J=4.5Hz,2H),3.63(t,J=4.5Hz,2H),3.44-3.37(m,1H),3.29(s,3H),2.45(s,3H),2.22-2.14(m,1H),1.99-1.85(m,4H),1.76(d,J=12.0Hz,1H),1.70-1.65(m,1H),1.37-1.28(m,1H),1.14-1.06(m,2H),0.88(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
實施例95
N-(6-chloropyridin-3-yl)-6-(6-fluoro-7-methylquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
化合物95的合成從實施例94中的中間體94a出發，經由以下步驟製備：
將化合物94a(53mg,0.17mmol)溶於無水二氯甲烷(5mL)中，加入二氯亞碸(2.5mL)，反應混合物回流攪拌2小時。蒸去反應溶劑，殘留物用無水二氯甲烷重蒸兩次。將得到的淡黃色固體溶於無水四氫呋喃(5mL)中，加入3-氨基-6-氯吡啶(44mg,0.34mmol)，在冰水浴條件下滴加三乙胺(52mg,0.51mmol)。反應混合物在冰水浴下攪拌30分鐘，升至室溫繼續攪拌2小時。加水淬滅反應，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物95(24.07mg)，白色固體，收率33%。MS(ESI)：m/z 424.6(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.61(s,1H),8.75(d,J=4.5Hz,1H),8.63(d,J=3.0Hz,1H),8.11(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),7.99-7.91(m,2H),7.45(d,J=8.5Hz,1H),7.30(d,J=4.5Hz,1H),3.45-3.37(m,1H),2.44(s,3H),2.24-2.16(m,1H),1.97-1.82(m,4H),1.80-1.71(m,2H),1.34-1.25(m,1H),1.19-1.09(m,2H),0.97(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
化合物96,97的合成同化合物95。
實施例98
(S)-6-(6-fluoro-7-methylquinolin-4-yl)-N-(4-(2-methoxyethoxy)phenyl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
實施例99
(R)-6-(6-fluoro-7-methylquinolin-4-yl)-N-(4-(2-methoxyethoxy)phenyl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
化合物98和化合物99由實施例94中化合物94經過手性柱拆 分得到，絕對構型未確定。其中，化合物98對應手性拆分中的前者，化合物99對應手性拆分中的後者。
化合物98：MS(ESI)：m/z 463.7(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.07(s,1H),8.75(d,J=4.5Hz,1H),7.98-7.92(m,2H),7.49(d,J=9.0Hz,2H),7.29(d,J=4.5Hz,1H),6.87(d,J=9.0Hz,2H),4.03(t,J=4.5Hz,2H),3.63(t,J=4.5Hz,2H),3.44-3.37(m,1H),3.29(s,3H),2.45(s,3H),2.22-2.14(m,1H),1.99-1.85(m,4H),1.76(d,J=12.0Hz,1H),1.70-1.65(m,1H),1.37-1.28(m,1H),1.14-1.06(m,2H),0.88(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
化合物99：MS(ESI)：m/z 463.7(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.07(s,1H),8.75(d,J=4.5Hz,1H),7.98-7.92(m,2H),7.49(d,J=9.0Hz,2H),7.29(d,J=4.5Hz,1H),6.87(d,J=9.0Hz,2H),4.03(t,J=4.5Hz,2H),3.63(t,J=4.5Hz,2H),3.44-3.37(m,1H),3.29(s,3H),2.45(s,3H),2.22-2.14(m,1H),1.99-1.85(m,4H),1.76(d,J=12.0Hz,1H),1.70-1.65(m,1H),1.37-1.28(m,1H),1.14-1.06(m,2H),0.88(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
實施例100
N-(4-chlorophenyl)-6-(6,7-difluoroquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
化合物100的合成從實施例1中的中間體1d出發，經由以下步驟製備：
第一步：在-78℃條件下，將正丁基鋰(2.5M,1.1mL,2.61mmol)滴加到2,2,6,6-四甲基呱啶(368mg,2.61mmol)的四氫呋喃(20mL)溶液中。再向其中滴加化合物1d(500mg,1.74mmol)的四氫呋喃(10mL)溶液。反應在-78℃下攪拌2小時。然後向反應液中滴加N-氟代雙苯磺醯胺(1.1g,3.48mmol)的四氫呋喃(10mL)溶液，反應維持在-78℃半小時後升至室溫，繼續攪拌2小時。用飽和氯化銨溶液淬滅，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物101a(410mg)，白色固體，收率77%。MS(ESI)：m/z 306.5(M+H)+.
第二步：將化合物100a(410mg,1.34mmol)溶於丙酮(10mL)中，加入4mol/L鹽酸(3mL)。反應混合物加熱至45℃反應4小時。然後蒸除溶劑，水溶液用6mol/L氫氧化鈉中和至pH=9，用乙酸乙酯萃取水相。有機相合併後用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物100b(190mg)，白色固體，收率54%。MS(ESI)：m/z 262.5(M+H)+.
第三步：將膦醯基乙酸三乙酯(172mg,0.77mmol)溶於超幹四氫呋喃(10mL)中，在0℃冰浴下加入叔丁醇鈉(74mg,0.77mmol)。10分鐘後，將化合物100b(190mg,0.73mmol)的四氫呋喃(5mL)溶液加入反應液中。反應2小時 後，用水淬滅。水溶液用20mL乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用20mL飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物100c(180mg)，白色固體，收率74%。MS(ESI)：m/z 332.5(M+H)+.
第四步：將NaH(65mg,1.62mmol)加入二甲基亞碸(10mL)中，向該懸濁液中加入三甲基碘化亞碸(356mg,1.62mmol)。混合物在室溫下攪拌1.5小時。然後將化合物100c(180mg,0.54mmol)的二甲基亞碸(5mL)溶液加入到反應液中。反應在40℃下攪拌過夜。然後用水淬滅，用乙酸乙酯萃取，用快速過柱機分離得到化合物100d(80mg)，無色油狀液體，收率43%。MS(ESI)：m/z 346.5(M+H)+.
第四步：將4-氯苯胺(117mg,0.92mmol)溶於5mL四氫呋喃中，在0℃冰浴下加入2mol/L異丙基氯化鎂的四氫呋喃溶液(0.5mL,0.92mmol)。混合物在室溫下攪拌5分鐘，將化合物100d(80mg,0.23mmol)的四氫呋喃(2mL)溶液加入該混合物中。反應液在室溫下攪拌過夜，然後用飽和氯化銨溶液淬滅，乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物100(36.20mg)，白色固體，收率37%。MS(ESI)：m/z 427.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.38(s,1H),8.83(d,J=4.5Hz,1H),8.33(dd,J=12.5,9.0Hz,1H),8.00(dd,J=11.5,8.5Hz,1H),7.65(d,J=8.5Hz,2H),7.39-7.30(m,3H),3.49-3.41(m,1H),2.23-2.15(m,1H),1.98-1.83(m,4H),1.76(d,J=13.0Hz,1H),1.73-1.69(m,1H),1.33-1.24(m,1H),1.16-1.13(m,1H),1.10(d,J=13.0Hz,1H),0.93(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
實施例101
N-(4-chlorophenyl)-1-cyano-6-(6-fluoroquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
化合物101的合成同化合物1，將4-氯-6,7-二甲氧基喹啉替代實施例1中4-氯-6-氟喹啉。
化合物101：MS(ESI)：m/z 451.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.41(s,1H),8.58(s,1H),7.65(d,J=8.0Hz,2H),7.40(s,1H),7.37-7.33(m,3H),7.14(s,1H),3.94(s,3H),3.91(s,3H),3.47-3.42(m,1H),2.24-2.15(m,1H),1.96-1.86(m,4H),1.82-1.76(m,1H),1.75-1.70(m,1H),1.34-1.24(m,1H),1.16-1.09(m,2H),0.95-0.90(m,1H).
實施例102
N-(4-chlorophenyl)-6-(7-cyano-6-fluoroquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
化合物102的合成從實施例1中的中間體1d出發，經由以下步驟製備：
第一步：在-78℃氮氣保護條件下，將正丁基鋰(2.5M in hexane,2.8mL,6.97mmol)滴加到2,2,6,6-四甲基呱啶(983mg,6.97mmol)的四氫呋喃(50mL)溶液中。再向其中滴加化合物1d(2.0g,6.97mmol)的四氫呋喃(20mL)溶液。反應在-78℃下攪拌2小時。然後向反應液中滴加碘(3.54g,13.94mmol)的四氫呋喃(10mL)溶液，反應維持在-78℃半小時後升至室溫，繼續攪拌2小時。用飽和氯化銨溶液淬滅，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物102a(2.0g)，白色固體，收率69%。MS(ESI)：m/z 414.4(M+H)+.
第二步：將化合物102a(1.0g,2.42mmol)溶於丙酮(30mL)中，加入4mol/L鹽酸(9mL,36mmol)。反應混合物加熱至45℃反應過夜。然後蒸除溶劑，水溶液用6mol/L氫氧化鈉中和至pH=9，用乙酸乙酯萃取水相。有機相合併後用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物102b(700mg)，白色固體，收率78%。MS(ESI)：m/z 370.3(M+H)+.
第三步：將膦醯基乙酸三乙酯(430mg,1.92mmol)溶於超幹四氫呋喃(16mL)中，在0℃冰浴下加入叔丁醇鈉(184mg,1.92mmol)。10分鐘後，將化合物102b(700mg,1.90mmol)的四氫呋喃(4mL)溶液加入反應液中。反應2小時後，用水淬滅。水溶液用乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物102c(730mg)，白色固體，收率88%。MS(ESI)：m/z 440.4(M+H)+.
第四步：將NaH(199mg,4.98mmol)加入二甲基亞碸(15mL)中，向該懸濁液中加入三甲基碘化亞碸(1.10g,4.98mmol)。混合物在室溫下攪拌1.5小時。然後將化合物102c(730mg,1.66mmol)的二甲基亞碸(5mL)溶液加入到反應液中。反應在40℃下攪拌過夜。然後用水淬滅，用乙酸乙酯萃取，用快速過柱機分離得到化合物102d(400mg)，白色固體，收率53%。MS(ESI)：m/z 454.3(M+H)+.
第五步：將4-氯苯胺(447mg,3.52mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，在0℃冰浴下加入異丙基氯化鎂的四氫呋喃溶液(2.0mol/L in THF,1.8mL,3.52mmol)。混合物在室溫下攪拌5分鐘，將化合物102d(400mg,0.88mmol)的四氫呋喃(2mL)溶液加入該混合物中。反應液在室溫下攪拌過夜，然後用飽和氯化銨溶液淬滅，乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物102e(400mg)，白色固體，收率85%。MS(ESI)：m/z 535.4(M+H)+.
第六步：將化合物102e(50mg,0.09mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(5mL)中，加入氰化亞銅(20mg,0.22mmol)，混合物加熱至160℃反應1小時。冷卻至室溫，用飽和氯化銨溶液淬滅反應，乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物102(17.23 mg)，白色固體，收率44%。MS(ESI)：m/z 434.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.38(s,1H),8.96(d,J=4.5Hz,1H),8.72(d,J=7.0Hz,1H),8.37(d,J=11.5Hz,1H),7.65(d,J=9.0Hz,2H),7.51(d,J=4.5Hz,1H),7.34(d,J=9.0Hz,2H),3.53-3.43(m,1H),2.23-2.15(m,1H),1.96-1.83(m,4H),1.77(d,J=12.0Hz,1H),1.74-1.69(m,1H),1.34-1.24(m,1H),1.16-1.07(m,2H),0.93(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
實施例103
N-(4-chlorophenyl)-6-(2,3-dihydro-[1,4]dioxino[2,3-g]quinolin-9-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
化合物103由以下步驟製備：
第一步：將4-氯-6,7-二甲氧基喹啉(1.0g,4.48mmol)溶於二氯甲烷(30mL)中，在冰浴條件下滴加三溴化硼(1.0mol/L,12.0mL,12.0mmol)的二氯甲烷溶液，繼續攪拌2小時，升至室溫攪拌過夜。LCMS檢測反應結束，加入50mL水，用二氯甲烷(40mLx2)萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到化合物103a(800mg)，黃色固體，產率92%。MS(ESI)：m/z 196.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.33(s,2H),8.47(d,J=5.0Hz,1H),7.42(d,J=5.0Hz,1H),7.36(s,1H),7.30(s,1H).
第二步：將化合物103a(800mg,4.10mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(30ml)中，加入碳酸鉀(2.12g,15.38mmol)和1,2-二溴乙烷(3.84g,20.45mmol)。反應混合物在60℃下攪拌2小時。加水淬滅反應，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物103b(520mg)，白色固體，收率57%。MS(ESI)：m/z 222.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.59(d,J=4.5Hz,1H),7.62(s,1H),7.58(s,1H),7.33(d,J=4.5Hz,1H),4.40(s,4H).
第三步：將化合物硼酸酯(664mg,2.50mmol)溶於40mL/10mL二氧六環/水中，依次加入化合物103b(460mg,2.08mmol)，碳酸鉀(861mg,6.24mmol)，Pd2(dba)3(95mg,0.104mmol)和PCy3(70mg,0.25mmol)。反應混合物在氮氣氛下回流反應過夜。然後濃縮反應液，用乙酸乙酯萃取，有機相濃縮之後用快速過柱機分離得到化合物103c(550mg)，白色固體，收率81%。MS(ESI)：m/z 326.6(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.65(d,J=4.5Hz,1H),7.56(s,1H),7.42(s,1H),7.06(d,J=4.5Hz,1H),5.72(t,J=3.5Hz,1H),4.41-4.34(m,4H),4.09-4.03(m,4H),2.64-2.57(m,2H),2.54-2.49(m,2H),1.97(t,J=6.5Hz,2H).
第四步：將化合物103c(500mg,1.54mmol)溶於25mL異丙醇中，加入10%鈀碳(70mg)。反應混合物在氫氣氛下加熱至55℃反應過夜。然後用矽藻土濾除鈀碳，濾液濃縮得到粗品化合物103d(500mg)，白色固體，收率99%。直接用於下一步反應。MS(ESI)：m/z 328.4(M+H)+.
第五步：將化合物103d(500mg,1.53mmol)溶於丙酮(36mL)中，加入4mol/L鹽酸(9mL,36mmol)。反應混合物加熱至45℃反應過夜。然後蒸除 溶劑，水溶液用6mol/L氫氧化鈉中和至pH=9，用乙酸乙酯萃取水相。有機相合併後用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物103e(250mg)，棕色固體，收率58%。MS(ESI)：m/z 284.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.68(d,J=4.5Hz,1H),7.60(s,1H),7.49(s,1H),7.10(d,J=4.5Hz,1H),4.41(s,4H),3.68-3.61(m,1H),2.68-2.57(m,4H),2.39-2.31(m,2H),2.07-1.96(m,2H).
第六步：將膦醯基乙酸三乙酯(214mg,0.89mmol)溶於超幹四氫呋喃(10mL)中，在0℃冰浴下加入叔丁醇鈉(85mg,0.89mmol)。10分鐘後，將化合物103e(250mg,0.88mmol)的四氫呋喃(4mL)溶液加入反應液中。反應2小時後，用水淬滅。水溶液用20mL乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用20mL飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物103f(168mg)，白色固體，收率54%。MS(ESI)：m/z 354.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.65(d,J=4.5Hz,1H),7.59(s,1H),7.49(s,1H),7.07(d,J=4.5Hz,1H),5.73(s,1H),4.40(s,4H),4.18(q,J=7.0Hz,2H),4.10-4.05(m,1H),3.46-3.39(m,1H),2.51-2.45(m,2H),2.22-2.10(m,3H),1.77-1.65(m,2H),1.30(t,J=7.0Hz,3H).
第七步：將NaH(40mg,0.99mmol)加入二甲基亞碸(10mL)中，向該懸濁液中加入三甲基碘化亞碸(249mg,1.13mmol)。混合物在室溫下攪拌1.5小時。然後將化合物103f(100mg,0.28mmol)的二甲基亞碸(5mL)溶液加入到反應液中。反應在40℃下攪拌過夜。然後用水淬滅，用乙酸乙酯萃取，用快速過柱機分離得到化合物103g(70mg)，白色固體，收率68%。MS(ESI)：m/z 368.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.66(d,J=4.5Hz,1H),7.63(s,1H),7.48(s,1H),7.14(d,J=4.5Hz,1H),4.40(s,4H),4.18(q,J=7.0Hz,2H),3.27-3.19(m,1H),2.13(td,J=13.5,3.5Hz,1H),2.03-1.88(m,4H),1.84-1.74(m,1H),1.56(dd,J=7.5,5.5Hz,1H),1.41-1.34(m,1H),1.29(t,J=7.0Hz,3H),1.25-1.22(m,1H),1.14-1.07(m,1H),0.98(dd,J=7.5,4.5Hz,1H).
第八步：將4-氯苯胺(81mg,0.64mmol)溶於5mL四氫呋喃中，在0℃冰浴下加入2mol/L異丙基氯化鎂的四氫呋喃溶液(0.3mL,0.64mmol)。混 合物在室溫下攪拌5分鐘，將化合物103g(60mg,0.16mmol)的四氫呋喃(2mL)溶液加入該混合物中。反應液在室溫下攪拌過夜，然後用飽和氯化銨溶液淬滅，乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物103(7.59mg)，白色固體，收率11%。1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.37(s,1H),8.58(d,J=4.5Hz,1H),7.64(d,J=9.0Hz,2H),7.57(s,1H),7.36(s,1H),7.34(d,J=9.0Hz,2H),7.10(d,J=4.5Hz,1H),4.38(s,4H),3.36-3.33(m,1H),2.20-2.12(m,1H),1.97-1.84(m,4H),1.77-1.68(m,2H),1.33-1.24(m,1H),1.16-1.06(m,2H),0.92(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
實施例104
N-(4-chlorophenyl)-6-(6-fluoroquinolin-4-yl)-6-hydroxyspiro[2.5]octane-1-carboxamide
化合物104由以下步驟製備：
第一步：將4-溴-6-氟喹啉(500mg,2.21mmol)溶於無水四氫呋喃(5mL)中，在-78℃下向溶液中滴加1.6M正丁基鋰(2.8mL,4.42mmol)，反應液維持在-78℃下攪拌5分鐘。然後向反應液中滴加化合物104b(345mg,2.21mmol)的無水四氫呋喃(4mL)溶液。反應在-78℃下攪拌1小時。用飽和氯化銨水溶液淬滅，水溶液用乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物104c(83mg)，黃色固體，收率12%。MS(ESI)：m/z 304.6(M+H)+.
第二步：將化合物104c(370mg,1.22mmol)溶於四氫呋喃(4mL)中，加入3.0mol/L鹽酸(3mL)。反應混合物加熱至50℃攪拌12小時。冷卻至室溫，用飽和碳酸鈉溶液中和至pH=8，用乙酸乙酯萃取水相。有機相合併後用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物104d(230mg)，黃色液體，收率73%。MS(ESI)：m/z 260.6(M+H)+.
第三步：將膦醯基乙酸三乙酯(280mg,1.25mmol)溶於無水四氫呋喃(10mL)中，在0℃冰浴下加入叔丁醇鈉(120mg,1.25mmol)。10分鐘後，將化合物104d(295mg,1.14mmol)的四氫呋喃(2mL)溶液加入反應液中。反應2小時後，用水淬滅。水溶液用乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物104e(183mg)，白色固體，收率49%。MS(ESI)：m/z 330.5(M+H)+.
第四步：將NaH(67mg,1.68mmol)加入二甲基亞碸(5mL)中，向該懸濁液中加入三甲基碘化亞碸(370mg,1.68mmol)。混合物在室溫下攪拌1.5小時。然後將化合物104e(183mg,0.56mmol)的二甲基亞碸(2mL)溶液加入到反應液中。反應在室溫條件下攪拌過夜。然後用水淬滅，用乙酸乙酯萃取，用製備薄層層析分離得到化合物104f(23mg)，無色油狀液體，收率12%。MS(ESI)：m/z 344.5(M+H)+.
第五步：將化合物104f(23mg,0.07mmol)溶於乙醇(5mL)中，加入2mol/L氫氧化鈉溶液(1mL)。反應液加熱至50℃，反應2小時。待反應液 冷卻至室溫，用2mol/L鹽酸溶液中和至pH=5~6。蒸幹水溶液，殘留物用甲醇溶解，抽濾固體，濾液濃縮得到化合物104g(20mg)，白色固體，收率91%。MS(ESI)：m/z 316.5(M+H)+.
第六步：將化合物104g(20mg,0.06mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(2mL)中，依次加入二異丙基乙胺(24mg,0.18mmol)和HATU(34mg,0.09mmol)，在室溫下攪拌1小時。然後加入4-氯苯胺(23mg,0.18mmol)，繼續在室溫下攪拌反應2小時。向反應液中加入水淬滅，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物104(5.85mg)，白色固體，收率20%。MS(ESI)：m/z 425.6(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.34(s,1H),8.80(d,J=4.5Hz,1H),8.57(d,J=12.0Hz,1H),8.07(dd,J=9.0,6.0Hz,1H),7.65-7.58(m,3H),7.52(d,J=4.5Hz,1H),7.32(d,J=9.0Hz,2H),5.49(s,1H),2.45-2.41(m,1H),2.30-2.17(m,2H),2.07(d,J=13.5Hz,1H),1.93(d,J=13.5Hz,1H),1.76-1.66(m,3H),1.16-1.11(m,1H),0.95-0.88(m,2H).
實施例105
N-(4-chlorophenyl)-6-(6-fluoro-7-methoxyquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
化合物105的合成從實施例102中的中間體102e出發，經由以下步驟製備：
將化合物102e(50mg,0.09mmol)溶於甲醇(2mL)中，在氮氣氛 圍下依次加入碘化亞銅(2mg,0.01mmol)，鄰菲囉啉(4mg,0.02mmol)，碳酸銫(59mg,0.18mmol)。反應液加熱至100℃攪拌過夜。向反應液中加入水淬滅，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物105(15.90mg)，白色固體，收率40%。MS(ESI)：m/z 439.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.38(s,1H),8.72(d,J=4.5Hz,1H),8.04(d,J=13.0Hz,1H),7.65(d,J=8.5Hz,2H),7.56(d,J=9.0Hz,1H),7.34(d,J=8.5Hz,2H),7.21(d,J=4.5Hz,1H),3.99(s,3H),3.43-3.38(m,1H),2.22-2.14(m,1H),1.98-1.82(m,4H),1.78-1.69(m,2H),1.34-1.24(m,1H),1.16-1.06(m,2H),0.93(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
實施例106
N-(4-chlorophenyl)-6-(6-fluoroquinolin-4-yl)-1-methylspiro[2.5]octane-1-carboxamide
化合物106的合成從實施例1中的中間體1e出發，經由以下步驟製備：
第一步：將NaH(986mg,24.6mmol)溶於超幹四氫呋喃(25mL)中，在0℃冰浴下滴加化合物三乙基2-膦醯基丙酯(5.9g,24.6mmol)，混合物在0 ℃下攪拌30分鐘。將化合物1e(2.0g,8.2mmol)的超幹四氫呋喃(10mL)溶液滴加到反應液中。反應在室溫下攪拌反應2小時後，用飽和氯化銨溶液淬滅，用50mL乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用50mL飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物106a(2.5g)，白色固體，收率93%。MS(ESI)：m/z 328.3(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.81(d,J=4.5Hz,1H),8.26-8.18(m,1H),7.74(dd,J=10.5,2.5Hz,1H),7.56-7.48(m,1H),7.31(d,J=4.5Hz,1H),4.23(q,J=7.0Hz,2H),3.50-3.40(m,1H),3.32-3.25(m,1H),2.94-2.87(m,1H),2.24-2.10(m,4H),1.94(s,3H),1.78-1.65(m,2H),1.33(t,J=7.0Hz,3H).
第二步：將NaH(734mg,18.36mmol)加入二甲基亞碸(20mL)中，向該懸濁液中加入三甲基碘化亞碸(4.04g,18.36mmol)。混合物在室溫下攪拌1.5小時。然後將化合物106a(1.5g,4.59mmol)的二甲基亞碸(10mL)溶液加入到反應液中。反應在70℃下攪拌過夜。然後用水淬滅，用乙酸乙酯萃取，用快速過柱機分離得到化合物106b(726mg)，淺黃色固體，收率46%。MS(ESI)：m/z 342.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.82(d,J=4.5Hz,1H),8.15(dd,J=9.0,6.0Hz,1H),7.70(dd,J=10.5,2.5Hz,1H),7.51-7.46(m,1H),7.31(d,J=4.5Hz,1H),4.18(q,J=7.0Hz,2H),3.30-3.23(m,1H),2.06-1.97(m,2H),1.96-1.87(m,2H),1.80-1.74(m,1H),1.70-1.62(m,2H),1.54-1.47(m,1H),1.46(s,3H),1.44(d,J=5.0Hz,1H),1.28(t,J=7.0Hz,3H),0.56(d,J=5.0Hz,1H).
第三步：將化合物106b(250mg,0.73mmol)溶無水乙醇(10mL)中，加入40%氫氧化鈉水溶液(365mg,3.65mmol)。反應混合物在90℃下攪拌5小時。待反應液冷卻至室溫，用6.0mol/L鹽酸溶液中和至pH=1。用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用製備薄層層析分離得到化合物106c(103mg)，白色固體，收率45%。MS(ESI)：m/z 314.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 12.19(s,1H),8.83(d,J=4.5Hz,1H),8.09(dd,J=9.0,6.0Hz,1H),8.03(dd,J=11.0,3.0Hz,1H),7.70-7.65(m,1H),7.37(d,J=4.5Hz,1H),3.49-3.42(m,1H),2.08-2.00(m,1H),2.00-1.88(m,2H),1.80(d,J=13.0Hz,1H),1.75-1.68(m,1H),1.64-1.55(m,2H),1.46-1.40(m,1H),1.39(s,3H),1.20(d,J=4.0Hz,1H),0.55(d,J=4.0Hz,1H).
第四步：將化合物106c(50mg,0.16mmol)溶於無水二氯甲烷(5mL)中，加入二氯亞碸(2.5mL)，反應混合物回流攪拌2小時。蒸去反應溶劑，殘留物用無水二氯甲烷重蒸兩次。將得到的淡黃色固體溶於無水四氫呋喃(5mL)中，加入4-氯苯胺(41mg,0.32mmol)，在冰水浴條件下滴加三乙胺(48mg,0.48mmol)。反應混合物在冰水浴下攪拌30分鐘，升至室溫繼續攪拌2小時。加水淬滅反應，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物106(40.24mg)，白色固體，收率60%。MS(ESI)：m/z 423.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 9.69(s,1H),8.87(s,1H),8.11-8.06(m,1H),8.03(d,J=11.0Hz,1H),7.70-7.64(m,3H),7.55(s,1H),7.35(d,J=7.5Hz,2H),3.45-3.38(m,1H),2.06-1.82(m,4H),1.72-1.67(m,1H),1.64-1.60(m,1H),1.54(s,3H),1.38-1.33(m,1H),1.32-1.28(m,1H),0.96-0.88(m,1H),0.48-0.43(m,1H).
實施例107
N-(4-chlorophenyl)-1-cyano-6-(6-fluoroquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
化合物107的合成從實施例1中的中間體1e出發，經由以下步驟製備：
第一步：將化合物1e(1.5g,6.17mmol)溶於甲苯(30mL)中，依次加入氰基乙酸乙酯(1.05g,9.25mmol)，呱啶(105mg,1.23mmol)，乙酸(74mg,1.23mmol)，混合物在120℃下攪拌1小時。旋幹甲苯，加入100mL水，用二氯甲烷萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物107a(1.8g)，黃色固體，收率86%。MS(ESI)：m/z 339.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.83(d,J=4.5Hz,1H),8.16(dd,J=9.0,6.0Hz,1H),7.70(dd,J=10.5,3.0Hz,1H),7.52(ddd,J=10.5,9.0,3.0Hz,1H),7.26(d,J=4.5Hz,1H),4.32(q,J=7.0Hz,2H),4.27-4.21(m,1H),3.56(tt,J=12.0,3.0Hz,1H),3.36-3.30(m,1H),2.64(td,J=14.0,4.5Hz,1H),2.42-2.27(m,3H),1.93-1.84(m,1H),1.84-1.75(m,1H),1.38(t,J=7.0Hz,3H).
第二步：將化合物107a(1.8g,5.33mmol)溶於乙腈(30mL)中，依次加入硝基甲烷(486mg,7.98mmol)，DBU(972mg,6.38mmol)混合物在25℃下攪拌過夜。旋幹乙腈，加入100mL水，用二氯甲烷萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物107b(1.5g)，黃色固體，收率80%。MS(ESI)：m/z 353.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 9.06(d,J=4.5Hz,1H),8.38-8.29(m,2H),7.98-7.90(m,1H),7.71(d,J=4.5Hz,1H),4.27(q,J=7.0Hz,2H),3.78-3.70(m,1H),2.46-2.36(m,1H),2.22-2.13(m,1H),2.11-2.04(m,1H),1.96-1.89(m,1H),1.88-1.77(m,3H),1.76-1.66(m,1H),1.65-1.58(m,1H),1.34-1.29(m,1H),1.27(t,J=7.0Hz,3H).
第三步：將化合物107b(100mg,0.28mmol)溶於乙醇(20mL)中，加入2mol/L的LiOH水溶液(10mL)，混合物在25℃下攪拌4小時。旋幹乙醇，用4mol/L的HCl水溶液(10mL)調節pH至4~5，濃縮。殘留物用製備薄層層析分離得到化合物107c(50mg)，白色固體，收率54%。MS(ESI)：m/z 325.5(M+H)+.
第四步：將化合物107c(50mg,0.15mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，依次加入吡啶(36mg,0.45mmol)和三丙基磷酸酐(50% wt in EA,146mg,0.23mmol)，在室溫下攪拌10分鐘。然後加入4-氯苯胺(57mg,0.45mmol)，繼續在室溫下攪拌反應過夜。向反應液中加入20mL水稀釋，用乙酸乙酯萃取水相。合併 有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物107(4.34mg)，白色固體，收率7%。MS(ESI)：m/z 434.3(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.85(s,1H),8.91(d,J=4.5Hz,1H),8.12-8.07(m,2H),7.71-7.63(m,4H),7.41(d,J=9.0Hz,2H),3.56-3.49(m,1H),2.39-2.32(m,1H),2.18-2.06(m,2H),1.97-1.91(m,2H),1.79-1.73(m,1H),1.63-1.58(m,2H),1.57-1.51(m,1H),1.44-1.38(m,1H).
實施例108
(1S)-N-(4-chlorophenyl)-6-(6-fluoro-7-methoxyquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
實施例109
(1R)-N-(4-chlorophenyl)-6-(6-fluoro-7-methoxyquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
化合物108和化合物109由實施例105中化合物105經過手性柱拆分得到，絕對構型未確定。
化合物108：MS(ESI)：m/z 439.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.38(s,1H),8.72(d,J=4.5Hz,1H),8.04(d,J=13.0Hz,1H),7.65(d,J=8.5Hz,2H),7.56(d,J=9.0Hz,1H),7.34(d,J=8.5Hz,2H),7.21(d,J=4.5Hz,1H),3.99(s,3H),3.43-3.38(m,1H),2.22-2.14(m,1H),1.98-1.82(m,4H),1.78-1.69(m, 2H),1.34-1.24(m,1H),1.16-1.06(m,2H),0.93(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
化合物109：MS(ESI)：m/z 439.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.38(s,1H),8.72(d,J=4.5Hz,1H),8.04(d,J=13.0Hz,1H),7.65(d,J=8.5Hz,2H),7.56(d,J=9.0Hz,1H),7.34(d,J=8.5Hz,2H),7.21(d,J=4.5Hz,1H),3.99(s,3H),3.43-3.38(m,1H),2.22-2.14(m,1H),1.98-1.82(m,4H),1.78-1.69(m,2H),1.34-1.24(m,1H),1.16-1.06(m,2H),0.93(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
實施例110
6-([1,3]dioxolo[4,5-g]quinolin-8-yl)-N-(4-chlorophenyl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
化合物110的合成從實施例103中的中間體103a出發，經由以下步驟製備：
第一步：將化合物103a(1.0g,5.13mmol)溶於N,N-二甲基甲醯 胺(20mL)中，依次加入氯溴甲烷(986mg,7.70mmol)，碳酸銫(2.51g,7.70mmol)。混合物加熱至110℃反應2小時。冷卻至室溫，向反應液中加入水淬滅，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物110a(480mg)，白色固體，收率45%。MS(ESI)：m/z 208.4(M+H)+.
第二步：將化合物硼酸酯(741mg,2.78mmol)溶於二氧六環/水(40mL/10mL)中，依次加入化合物110a(480mg,2.32mmol)，碳酸鉀(960mg,6.96mmol)，Pd2(dba)3(106mg,0.116mmol)和PCy3(78mg,0.28mmol)。反應混合物在氮氣氛下回流反應過夜。然後濃縮反應液，用乙酸乙酯萃取，有機相濃縮之後用快速過柱機分離得到化合物110b(540mg)，白色固體，收率75%。MS(ESI)：m/z 312.5(M+H)+.
第三步：將化合物110b(500mg,1.61mmol)溶於異丙醇(25mL)中，加入10%鈀碳(70mg)。反應混合物在氫氣氛下加熱至55℃反應過夜。然後用矽藻土濾除鈀碳，濾液濃縮得到粗品化合物110c(500mg)，白色固體，收率99%。直接用於下一步反應。MS(ESI)：m/z 314.4(M+H)+.
第四步：將化合物110c(500mg,1.60mmol)溶於丙酮(36mL)中，加入4mol/L鹽酸(9mL,36mmol)。反應混合物加熱至45℃反應過夜。然後蒸除溶劑，水溶液用6mol/L氫氧化鈉中和至pH=9，用乙酸乙酯萃取水相。有機相合併後用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物110d(255mg)，白色固體，收率59%。MS(ESI)：m/z 270.5(M+H)+.
第五步：將膦醯基乙酸三乙酯(235mg,1.05mmol)溶於超幹四氫呋喃(10mL)中，在0℃冰浴下加入叔丁醇鈉(101mg,1.05mmol)。10分鐘後，將化合物110d(255mg,0.95mmol)的四氫呋喃(4mL)溶液加入反應液中。反應2小時後，用水淬滅。水溶液用乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物110e(210mg)，白色固體，收率65%。MS(ESI)：m/z 340.5(M+H)+.
第六步：將NaH(35mg,0.87mmol)加入二甲基亞碸(10mL)中， 向該懸濁液中加入三甲基碘化亞碸(191mg,0.87mmol)。混合物在室溫下攪拌1.5小時。然後將化合物110e(100mg,0.29mmol)的二甲基亞碸(5mL)溶液加入到反應液中。反應在40℃下攪拌過夜。然後用水淬滅，用乙酸乙酯萃取，用快速過柱機分離得到化合物110f(78mg)，白色固體，收率76%。MS(ESI)：m/z 354.5(M+H)+.
第七步：將4-氯苯胺(86mg,0.68mmol)溶於5mL四氫呋喃中，在0℃冰浴下加入2.0mol/L異丙基氯化鎂的四氫呋喃溶液(0.4mL,0.68mmol)。混合物在室溫下攪拌5分鐘，將化合物110f(60mg,0.17mmol)的四氫呋喃(2mL)溶液加入該混合物中。反應液在室溫下攪拌過夜，然後用飽和氯化銨溶液淬滅，乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物110(10.28mg)，白色固體，收率14%。MS(ESI)：m/z 435.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.36(s,1H),8.56(d,J=4.5Hz,1H),7.65(d,J=9.0Hz,2H),7.58(s,1H),7.37(s,1H),7.34(d,J=9.0Hz,2H),7.11(d,J=4.5Hz,1H),5.02(s,2H),3.36-3.32(m,1H),2.21-2.12(m,1H),1.97-1.85(m,4H),1.78-1.68(m,2H),1.32-1.24(m,1H),1.17-1.06(m,2H),0.91(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
實施例111
Methyl 2-(4-(6-(6-fluoro-7-methylquinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamido)phenoxy)acetate
化合物111的合成從實施例94中的中間體94a出發，經由以下步驟製備：
第一步：將化合物94b(1.0g,4.78mmol)和溴乙酸甲酯(1.46g,9.56mmol)溶於丙酮(15mL)中，然後向其中加入碳酸鉀(1.98g,14.34mmol)，將反應液加熱到60℃攪拌2小時。過濾濃縮，殘留物用快速過柱機分離得到化合物111a(822mg)，白色固體，收率61%。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.27(d,J=9.0Hz,2H),6.85(d,J=9.0Hz,2H),6.36(s,1H),4.60(s,2H),3.80(s,3H),1.51(s,9H).
第二步：將化合物111a(822mg,2.92mmol)溶於二氯甲烷(3mL)中，在0℃冰浴下加入4mol/L鹽酸二氧六環溶液(6mL)。室溫下反應2小時，過濾析出的固體，乾燥得到化合物111b(550mg)，白色固體，收率86%。直接用於下一步反應。
第三步：將化合物94a(53mg,0.17mmol)溶於無水二氯甲烷(2mL)中，加入二氯亞碸(5mL)，反應混合物回流攪拌2小時。蒸去反應溶劑，減壓乾燥殘留物得到淡黃色固體。將該固體溶於無水二氯甲烷(3mL)中，在冰水浴條件下加入化合物111b(30mg,0.17mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液，加入三乙胺(52mg,0.51mmol)，在冰水浴下攪拌10分鐘，升至室溫繼續攪拌2小時。加水淬滅反應，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物111(32.56mg)，白色固體，收率40%。MS(ESI)：m/z 477.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.13(s,1H),8.75(d,J= 4.5Hz,1H),7.98-7.92(m,2H),7.50(d,J=9.0Hz,2H),7.29(d,J=4.5Hz,1H),6.87(d,J=9.0Hz,2H),4.74(s,2H),3.69(s,3H),3.48-3.39(m,1H),2.45(s,3H),2.19(td,J=13.0,3.5Hz,1H),2.00-1.84(m,4H),1.77(d,J=12.0Hz,1H),1.69(dd,J=7.5,5.0Hz,1H),1.39-1.28(m,1H),1.14-1.06(m,2H),0.88(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
實施例112
6-(6-fluoro-7-methylquinolin-4-yl)-N-(4-(2-hydroxyethoxy)phenyl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
化合物112的合成從實施例94中的中間體94a出發，經由以下步驟製備：
第一步：將化合物94b(5.0g,23.90mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(50mL)中，加入(2-溴乙氧基)-叔丁基二甲基矽烷(6.86g,28.68mmol)和碳酸鉀(5.0g,23.90mmol)。反應混合物加熱至80℃攪拌過夜。TLC檢測反應結束，加入200mL水，水溶液用100mL乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用50mL飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物112a(8.0g)，白色固體，收率91%。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.24(d,J=9.0Hz,2H), 6.84(d,J=9.0Hz,2H),6.34(s,1H),4.02-3.98(m,2H),3.96-3.93(m,2H),1.51(s,9H),0.90(s,9H),0.09(s,6H).
第二步：將化合物112a(300mg,0.82mmol)溶於二氯甲烷(2mL)中，在0℃冰浴下加入三氟乙酸/二氯甲烷(v/v=1：1,10mL)混合溶液，在室溫下攪拌過夜。濃縮反應液，得到化合物112b(70mg)，黃色油狀液體，收率56%。直接用於下一步反應。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 6.77(d,J=8.5Hz,2H),6.65(d,J=8.5Hz,2H),4.03-3.99(m,2H),3.94-3.89(m,2H).
第三步：將化合物94a(85mg,0.27mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(5mL)中，加入二異丙基乙胺(138mg,1.07mmol)和HATU(122mg,0.32mmol)，反應混合物在室溫下攪拌30分鐘。再向反應液中加入化合物112b(60mg,0.39mmol)，反應混合物在40℃下攪拌2小時。LCMS檢測反應結束，用水(20mL)淬滅反應，水溶液用乙酸乙酯(20mLx3)萃取，合併有機相，用飽和食鹽水(20mL)洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物112(69.60mg)，白色固體，收率58%。MS(ESI)：m/z 449.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.08(s,1H),8.76(d,J=4.5Hz,1H),7.99-7.91(m,2H),7.50(d,J=9.0Hz,2H),7.29(d,J=4.5Hz,1H),6.87(d,J=9.0Hz,2H),4.85(br,1H),3.93(t,J=5.0Hz,2H),3.72-3.66(m,2H),3.45-3.37(m,1H),2.45(s,3H),2.22-2.14(m,1H),1.98-1.83(m,4H),1.76(d,J=11.5Hz,1H),1.70-1.65(m,1H),1.38-1.27(m,1H),1.14-1.05(m,2H),0.88(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
實施例113
6-(6,7-dimethoxyquinolin-4-yl)-N-(4-(2-methoxyethoxy)phenyl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
化合物113的合成從實施例101中的中間體101e出發，經由以下步驟製備：
第一步：將化合物101e(200mg,0.54mmol)溶於乙醇(10mL)中，加入2.0mol/L氫氧化鈉溶液(4mL)。反應液加熱至50℃，反應2小時。待反應液冷卻至室溫，用4.0mol/L鹽酸溶液中和至pH=1。用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用製備薄層層析分離得到化合物113a(130mg)，白色固體，產率71%。MS(ESI)：m/z 342.5(M+H)+.
第二步：將化合物113a(58mg,0.17mmol)溶於無水二氯甲烷(2mL)中，加入二氯亞碸(5mL)，反應混合物回流攪拌2小時。蒸去反應溶劑，減壓乾燥殘留物得到淡黃色的固體。將該固體溶於無水二氯甲烷(3mL)中，在冰水浴條件下加入化合物94d(30mg,0.17mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液，加入三乙胺(52mg,0.51mmol)，在冰水浴下攪拌10分鐘，升至室溫繼續攪拌2小時。加水淬滅反應，用二氯甲烷萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物113(40.86mg)，白色固體，收率49%。MS(ESI)：m/z 491.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.08(s,1H),8.58(d,J=4.5Hz,1H),7.49(d,J=9.0Hz,2H),7.40(s,1H),7.34(d,J=4.5Hz,1H),7.14(s,1H),6.87(d,J=9.0Hz,2H),3.94(s,3H),3.91(s,3H),4.03(t,J=4.5Hz,2H),3.63(t,J=4.5Hz,2H),3.44-3.37(m,1H),3.29(s,3H),2.22-2.14(m,1H),1.99-1.85(m,4H),1.76(d,J=12.0Hz,1H),1.70-1.65(m,1H),1.37-1.28(m,1H),1.14-1.06(m,2H),0.88(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
實施例114
N-(4-chlorophenyl)-6-(6-fluoro-7-(hydroxymethyl)quinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
化合物114的合成從實施例102中的化合物102出發，經由以下步驟製備：
第一步：將化合物102(200mg,0.46mmol)溶於二甲基亞碸/水(5mL/1mL)的混合溶劑中，加入氫氧化鋰(200mg,0.54mmol)。反應混合物在50℃攪拌3小時。用水稀釋反應液，用乙酸乙酯萃取2次，棄去有機相。水相用2.0mol/L鹽酸溶液調至pH=5~6，再用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用製備薄層層析分離得到化合物114a(120mg)，白色固體，產率58%。MS(ESI)：m/z 453.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.38(s,1H),8.80(d,J=4.5Hz,1H),8.26(d,J=7.5Hz,1H),7.96(d,J=12.0Hz,1H),7.65(d,J=9.0Hz,2H),7.38-7.31(m,3H),3.48-3.39(m,1H),2.23-2.16(m,1H),1.96-1.84(m,4H),1.77(d,J=11.0Hz,1H),1.74-1.69(m,1H),1.35-1.27(m,1H),1.17-1.07(m,2H),0.92(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
第二步：將化合物114a(60mg,0.13mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，加入二異丙基乙胺(34mg,0.26mmol)，再加入碘甲烷(28mg,0.20mmol)。反 應在室溫下攪拌2小時。加水淬滅反應，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用薄層層析分離得到化合物114b(40mg)，白色固體，產率66%。MS(ESI)：m/z 467.5(M+H)+.
第三步：將化合物114b(40mg,0.09mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，冰水浴冷卻至0℃，加入氫化鋁鋰(7mg,0.18mmol)。反應緩慢升至室溫攪拌2小時。加水淬滅反應，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物114(13.74mg)，白色固體，收率35%。MS(ESI)：m/z 439.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.37(s,1H),8.78(d,J=4.5Hz,1H),8.07(d,J=7.5Hz,1H),7.97(d,J=12.5Hz,1H),7.65(d,J=9.0Hz,2H),7.34(d,J=9.0Hz,2H),7.31(d,J=4.5Hz,1H),5.51(t,J=5.5Hz,1H),4.74(d,J=5.0Hz,2H),3.46-3.38(m,1H),2.23-2.15(m,1H),1.98-1.83(m,4H),1.77(d,J=11.5Hz,1H),1.74-1.69(m,1H),1.34-1.25(m,1H),1.17-1.13(m,1H),1.10(d,J=13.0Hz,1H),0.93(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
實施例115
N-(4-chlorophenyl)-6-(6-fluoro-7-(methoxymethyl)quinolin-4-yl)spiro[2.5]octane-1-carboxamide
化合物115的合成從實施例1中的中間體1d出發，經由以下步驟製備：
第一步：在-78℃氮氣保護條件下，將正丁基鋰(2.5M in hexane,4.2mL,10.46mmol)滴加到2,2,6,6-四甲基呱啶(1.47g,10.46mmol)的四氫呋喃(50mL)溶液中。再向其中滴加化合物1d(2.0g,6.97mmol)的四氫呋喃(20mL)溶液。反應在-78℃下攪拌2小時。然後向反應液中滴加超幹N,N-二甲基甲醯胺(1.02g,13.94mmol)的四氫呋喃(10mL)溶液，反應維持在-78℃半小時後升至室溫，繼續攪拌2小時。用飽和氯化銨溶液淬滅，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物115a(1.8g)，白色固體，收率82%。MS(ESI)：m/z 316.5(M+H)+.
第二步：將化合物115a(1.0g,3.17mmol)溶於乙醇(10mL)中，冰水浴冷卻至0℃，加入硼氫化鈉(241mg,6.35mmol)。反應緩慢升至室溫攪拌1小時。加水淬滅反應，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥， 過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物115b(980mg)，白色固體，收率97%。MS(ESI)：m/z 318.5(M+H)+.
第三步：將化合物115b(980mg,3.09mmol)溶於超幹N,N-二甲基甲醯胺(10mL)中，冰水浴冷卻至0℃，加入氫化鈉(247mg,6.18mmol)，在0℃下攪拌30分鐘。然後再加入碘甲烷(527mg,3.71mmol)。反應升至室溫下攪拌3小時。加水淬滅反應，用乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物115c(760mg)，白色固體，產率74%。MS(ESI)：m/z 332.5(M+H)+.
第四步：將化合物115c(760mg,2.30mmol)溶於四氫呋喃(20mL)中，加入4.0mol/L鹽酸(6mL,24mmol)。反應混合物在室溫下攪拌5小時。然後蒸除溶劑，水溶液用6.0mol/L氫氧化鈉中和至pH=9，用乙酸乙酯萃取水相。有機相合併後用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物115d(423mg)，白色固體，收率64%。MS(ESI)：m/z 288.4(M+H)+.
第五步：將膦醯基乙酸三乙酯(345mg,1.54mmol)溶於超幹四氫呋喃(15mL)中，在0℃冰浴下加入叔丁醇鈉(148mg,1.54mmol)。10分鐘後，將化合物115d(423mg,1.47mmol)的四氫呋喃(5mL)溶液加入反應液中。反應2小時後，用水淬滅。水溶液用乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用快速過柱機分離得到化合物115e(500mg)，白色固體，收率95%。MS(ESI)：m/z 358.4(M+H)+.
第六步：將NaH(67mg,1.68mmol)加入二甲基亞碸(15mL)中，向該懸濁液中加入三甲基碘化亞碸(370mg,1.68mmol)。混合物在室溫下攪拌1.5小時。然後將化合物115e(200mg,0.56mmol)的二甲基亞碸(5mL)溶液加入到反應液中。反應在40℃下攪拌過夜。然後用水淬滅，用乙酸乙酯萃取，用快速過柱機分離得到化合物115f(145mg)，白色固體，收率70%。MS(ESI)：m/z 372.4(M+H)+.
第七步：將4-氯苯胺(66mg,0.52mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，在0℃冰浴下加入異丙基氯化鎂的四氫呋喃溶液(2.0mol/L in THF,0.3mL,0.52 mmol)。混合物在室溫下攪拌5分鐘，將化合物115f(50mg,0.13mmol)的四氫呋喃(2mL)溶液加入該混合物中。反應液在室溫下攪拌過夜，然後用飽和氯化銨溶液淬滅，乙酸乙酯萃取水相。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘留物用反向製備色譜提純得到化合物115(15.06mg)，白色固體，收率26%。MS(ESI)：m/z 453.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d 6-DMSO)δ 10.38(s,1H),8.77(d,J=4.5Hz,1H),8.07(d,J=7.5Hz,1H),7.97(d,J=12.5Hz,1H),7.65(d,J=9.0Hz,2H),7.34(d,J=9.0Hz,2H),7.31(d,J=4.5Hz,1H),4.72(s,2H),3.46-3.38(m,1H),3.28(s,3H),2.23-2.15(m,1H),1.98-1.83(m,4H),1.77(d,J=11.5Hz,1H),1.74-1.69(m,1H),1.34-1.25(m,1H),1.17-1.13(m,1H),1.10(d,J=13.0Hz,1H),0.93(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
本發明的化合物在Hela細胞中的活性研究
將Hela細胞接種於96孔培養板中，在37℃，100%相對濕度，5% CO2培養箱中培養24小時。將化合物溶解於DMSO並稀釋至合適濃度，再用含有干擾素-γ及10%胎牛血清的DMEM培養基將候選化合物稀釋100倍至作用終濃度。吸棄96孔板中的舊培養基，每孔加200ul上一步含有化合物和干擾素-γ的培養基。培養基中色氨酸含量為16mg/l，干擾素-γ濃度50ng/ml。細胞置於37℃，100%相對濕度，5% CO2培養箱中培養48小時後，吸取140ul細胞培養上清與15ul三氯乙酸混合，並置於52℃反應30min後，室溫離心取離心上清與等體積Ehrlich’s試劑混合，測定480nm下的光吸收，計算IC50值。
本發明的化合物在高表達人IDO1蛋白的HEK293細胞中的活性研究。
利用電轉化製備高表達人IDO1蛋白的HEK293-IDO細胞，並將細胞接種於96孔培養板中，在37℃，100%相對濕度，5% CO2培養箱中培養24小時。將化合物溶解於DMSO並稀釋至合適濃度，再用含有10%胎牛血清的DMEM培養基將候選化合物稀釋100倍至作用終濃度。吸棄96孔板中的舊培養基，每孔加200ul上一步含有化合物的培養基。培養基中色氨酸含量為16mg/l。細胞置於37℃，100%相對濕度，5% CO2培養箱中培養24小時後，吸取140ul細胞培養上清與15ul三氯乙酸混合，並置於52℃反應30min後，室溫離心取離心上清與等體積Ehrlich’s試劑混合，測定480nm下的光吸收，計算IC50值。

Claims (21)

  1. 一種如式(I)所示的化合物， 其中 表示：-、 或者 ；A表示-C(O)-、-S(O) 2-或者-S(O)-；其中，每個R 1各自獨立地選自氫原子、鹵素、羥基、硝基、氰基、磺酸基、C 1-6烷基、C 3-6環烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 1-6烷氧基、鹵代C 1-C 6烷基、鹵代C 1-C 6烷氧基、鹵代C 1-C 6環烷基、C 1-6烷基硫基、C 1-6烷基羰基、C 1-6烷氧基羰基、二(C 1-6烷基)氨基C 2-6烷氧基羰基、氨基、C 1-6烷基氨基、二(C 1-6烷基)氨基、氨基甲醯基、C 1-6烷基氨基甲醯基、二(C 1-6烷基)氨基甲醯基、二(C 1-6烷基)氨基C 2-6烷基氨基甲醯基、氨磺醯基、C 1-6烷基氨磺醯基、二(C 1-6烷基)氨磺醯基、二(C 1-6烷基)氨基C 2-6烷基氨磺醯基、C 1-6烷基磺醯基、C 1-6烷基亞硫醯基、二(C 1-6烷基)膦醯基、羥基C 1-6烷基、羥基羰基C 1-6烷基、C 1-6烷氧基C 1-6烷基、C 1-6烷基磺醯基C 1-6烷基、C 1-6烷基亞硫醯基C 1-6烷基、二(C 1-6烷基)膦醯基C 1-6烷基、羥基C 2-6烷氧基、C 1-6烷氧基C 2-6烷氧基、氨基C 1-6烷基、C 1-6烷基氨基C 1-6烷基、二(C 1-6烷基)氨基C 1-6烷基、二(C 1-6烷基)氨基乙醯基、氨基C 2-6烷氧基、C 1-6烷基氨基C 2-6烷氧基、二(C 1-6烷基)氨基C 2-6烷氧基、羥基C 2-6烷基氨基、C 1-6烷氧基C 2-6烷基氨基、氨基C 2-6烷基氨基、C 1-6烷基氨基C 2-6烷基氨基、二(C 1-6烷基)氨基C 2-6烷基氨基；或者相鄰的R 1相互環合形成3-8元環，該環中含有0-3個雜原子；Cy 1選自被任意取代基取代的5-15元橋環基、5-15元螺環基、5-15元橋雜環基、或5-15元螺雜環基，所述的取代基為：鹵素、羥基、C 1-6烷基、氨基、鹵代C 1-6烷基、巰基、C 1-6烷基巰基、C 1-6烷基氨基、二(C 1-6烷基)氨基、氰基；其中，每個R a、R b、R 2各自獨立地選自氫、C 1-C 6烷基或C 3-6環烷基；Cy 2為含有一個或兩個以上的取代基的C 5-C 10芳基、C 5-C 10雜芳基、C 5-C 10環烷基、C 5-C 10雜環烷基；所述的取代基可以選自鹵素、羥基、硝基、氰基、磺酸基、 C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-6環烷基、C 1-6烷氧基、鹵代C 1-C 6烷基、鹵代C 1-C 6烷氧基、C 1-6烷基硫基、C 1-6烷基羰基、C 1-6烷基羰基氧基、C 1-6烷氧基羰基、二(C 1-6烷基)氨基C 2-6烷氧基羰基、氨基、C 1-6烷基氨基、二(C 1-6烷基)氨基、氨基甲醯基、C 1-6烷基氨基甲醯基、二(C 1-6烷基)氨基甲醯基、二(C 1-6烷基)氨基C 2-6烷基氨基甲醯基、氨磺醯基、C 1-6烷基氨磺醯基、二(C 1-6烷基)氨磺醯基、二(C 1-6烷基)氨基C 2-6烷基氨磺醯基、C 1-6烷基磺醯基、C 1-6烷基亞硫醯基、二(C 1-6烷基)膦醯基、羥基C 1-6烷基、羥基羰基C 1-6烷基、C 1-6烷氧基C 1-6烷基、C 1-6烷基磺醯基C 1-6烷基、C 1-6烷基亞硫醯基C 1-6烷基、二(C 1-6烷基)膦醯基C 1-6烷基、羥基C 2-6烷氧基、C 1-6烷氧基C 2-6烷氧基、氨基C 1-6烷基、C 1-6烷基氨基C 1-6烷基、二(C 1-6烷基)氨基C 1-6烷基、二(C 1-6烷基)氨基乙醯基、氨基C 2-6烷氧基、C 1-6烷基氨基C 2-6烷氧基、二(C 1-6烷基)氨基C 2-6烷氧基、羥基C 2-6烷基氨基、C 1-6烷氧基C 2-6烷基氨基、氨基C 2-6烷基氨基、C 1-6烷基氨基C 2-6烷基氨基、二(C 1-6烷基)氨基C 2-6烷基氨基、-S(O)C 1-6烷基；或者當兩個取代基相鄰時，能夠形成3-8元環，該3-8元環可以含有0-3個O、S、N原子；m、n為0-4的整數。
  2. 如申請專利範圍第1項所述的式(I)結構的化合物，其中：Cy 1選自被取代基取代的8-12元螺環基或8-12元螺環基、8-12元橋雜環基、或8-12元螺雜環基，所述的取代基為：鹵素、羥基、C 1-6烷基、氨基、鹵代C 1-6烷基、巰基、C 1-6烷基巰基、C 1-6烷基氨基、二(C 1-6烷基)氨基、氰基。
  3. 如申請專利範圍第1或2項所述的式(I)結構的化合物，其中：Cy 1選自 、 、 、 ，上述基團可以被選自鹵素、羥基、C 1-6烷基、氨基、鹵代C 1-6烷基、巰基、C 1-6烷基巰基、C 1-6烷基氨基、二(C 1-6烷基)氨基和氰基的取代基取代。
  4. 如申請專利範圍第1或2項所述的式(I)結構的化合物，其中：Cy 1選自 、 、 、 、 ，上述基團可以被選自鹵素、羥基、C 1-6烷基、氨基、鹵代C 1-6烷基、巰基、C 1-6烷基巰基、C 1-6烷基氨基、二(C 1-6烷基)氨基和氰基的取代基取代。
  5. 一種如式(II)所示的化合物， 其中，A、R 1、R 2、R a、R b、Cy 2、m、n如申請專利範圍第1項所定義；X選自(CR cR d) o，其中任意地CR cR d可以被O或NR e所替代；Y選自CR f或N；其中R c、R d、R a、R f分別各自獨立地選自氫或者C 1-6烷基；o選自0-5的整數。
  6. 一種如式(III)所示的化合物， 其中，W，Q選自CR cR d,NR e，或O；A、R 1、R 2、R a、R b、R c、R d、R e、Cy 2、m、n、Y如申請專利範圍第5項所定義。
  7. 一種如式(IV)所示的化合物， 其中，R 1、R 2、R a、R b、Cy 2、m、n、X、Y、A如申請專利範圍第5項所定義；Z選自(CR g) p，其中任意的CR g可以被N所替代；R g分別各自獨立地選自氫或者C 1-6烷基；p選自0-5的整數。
  8. 一種如式(V)所示的化合物， 其中，R 1、R 2、R c、R d、R f、Cy 2、m、A如申請專利範圍第5項所定義。
  9. 一種如式(VI)所示的化合物， 其中R 1、R 2、R c、R d、Cy 2、m、A如申請專利範圍第5項所定義。
  10. 一種如式(VII)所示的化合物， 其中R 1、R 2、R e、R f、Cy 2、m、A如申請專利範圍第5項所定義。
  11. 一種如式(VIII)所示的化合物， 其中R 1、R 2、R c、R d、R f、Cy 2、m、A如申請專利範圍第5項所定義。
  12. 一種如式(IX)所示的化合物， 其中R 1、R 2、R c、R d、R e、R f、Cy 2、m、A如申請專利範圍第5項所定義。
  13. 如申請專利範圍第1-12項任一項所述的化合物，其中A為-C(O)-或-S(O) 2-。
  14. 如申請專利範圍第1-5項任一項所述的化合物，其具有如下結構：
  15. 如申請專利範圍第1-14項任一項所述的化合物，其中 表示-、 或者 ；優選為 。
  16. 一種藥物組合物，其包含如申請專利範圍第1至15項任一項所述的化合物，以及藥學上可接受的載體。
  17. 如申請專利範圍第16項所述的藥物組合物，其進一步包括另一種治療劑，所述另一種治療劑優選為苯丁酸氮芥、美法侖、環磷醯胺、異環磷醯胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、鏈脲佐菌素、順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、達卡巴嗪、替莫唑胺、丙卡巴肼、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他濱、巰基嘌呤、氟達拉濱、長春鹼、長春新鹼、長春瑞濱、紫杉醇、多西紫杉醇、拓撲替康、伊立替康、依託泊苷、曲貝替定、更生黴素、多柔比星、表柔比星、道諾黴素、米托蒽醌、博來黴素、絲裂黴素C、伊沙匹隆、他莫昔芬、氟他胺、戈那瑞林類似物、甲地孕酮、強的松、地塞米松、甲潑尼龍、沙利度胺、干擾素α、亞葉酸鈣、西羅莫司、西羅莫司脂化物、依維莫司、阿法替尼、alisertib、amuvatinib、阿帕替尼、阿西替尼、硼替佐米、波舒替尼、布立尼布、卡博替尼、西地尼布、crenolanib、克卓替尼、達拉菲尼、達可替尼、達努塞替、達沙替尼、多維替尼、厄洛替尼、foretinib、ganetespib、吉非替尼、依魯替尼、埃克替尼、伊馬替尼、iniparib、拉帕替尼、lenvatinib、linifanib、linsitinib、馬賽替尼、momelotinib、莫替沙尼、來那替尼、尼祿替尼、niraparib、oprozomib、olaparib、帕唑帕尼、pictilisib、普納替尼、quizartinib、瑞格菲尼、rigosertib、rucaparib、盧梭利替尼、塞卡替尼、saridegib、索拉非尼、舒尼替尼、替拉替尼、tivantinib、替沃紮尼、托法替尼、曲美替尼、凡德他尼、維利帕尼、威羅菲尼、維莫德吉、volasertib、阿侖單抗、貝伐單抗、 貝倫妥單抗維多汀、卡妥索單抗、西妥昔單抗、地諾單抗、吉妥珠單抗、伊匹單抗、尼妥珠單抗、奧法木單抗、帕尼單抗、利妥昔單抗、托西莫單抗、曲妥珠單抗或它們的任意組合。
  18. 一種如申請專利範圍第1-15項任一項所述的化合物或者如申請專利範圍第16-17項任一項所述的藥物組合物在製備治療腫瘤、癌症、病毒感染、器官移植排斥或自身免疫性疾病的藥物中的用途。
  19. 如申請專利範圍第18項所述的用途，其中所述腫瘤或癌症選自皮膚癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、結腸癌、肺癌、骨癌、腦癌、神經細胞瘤、直腸癌、結腸癌、家族性腺瘤性息肉性癌、遺傳性非息肉性結直腸癌、食管癌、唇癌、喉癌、下嚥癌、舌癌、唾液腺癌、胃癌、腺癌、甲狀腺髓樣癌、乳頭狀甲狀腺癌、腎癌、腎實質癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮體癌、子宮內膜癌、絨毛膜癌、胰腺癌、前列腺癌、睾丸癌、泌尿癌、黑素瘤、腦腫瘤諸如成膠質細胞瘤、星形細胞瘤、腦膜瘤、成神經管細胞瘤和外周神經外胚層腫瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急性淋巴性白血病(ALL)、慢性淋巴性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性粒細胞白血病(CML)、成人T細胞白血病淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、肝細胞癌、膽囊癌、支氣管癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、多發性骨髓瘤、基底細胞瘤、畸胎瘤、成視網膜細胞瘤、脈絡膜黑素瘤、精原細胞瘤、橫紋肌肉瘤、顱咽管瘤、骨肉瘤、軟骨肉瘤、肌肉瘤、脂肪肉瘤、纖維肉瘤、尤因肉瘤或漿細胞瘤。
  20. 一種預防或治療腫瘤、癌症、病毒感染、器官移植排斥或自身免疫性疾病的方法，其包括向有此需要的哺乳動物施用如申請專利範圍第1-15項任一項所述化合物或者如申請專利範圍第16-17項任一項所述的藥物組合物。
  21. 一種抑制吲哚胺2,3-雙加氧酶的方法，其包括使如申請專利範圍第1-15項任一項所述化合物或者如申請專利範圍第16-17項任一項所述的藥物組合物暴露於吲哚胺2,3-雙加氧酶。
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