TW202014191A - 具有選擇性ｂａｃｅ１抑制活性的四氫哌喃并衍生物 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種化合物，其具有抑制類澱粉β蛋白產生的功效，尤其是抑制BACE1的功效，及其可使用作為由類澱粉β蛋白的產生、分泌及/或沈積所誘發的疾病之治療劑或預防劑。

一種式(I)化合物，其中R³各自獨立地為視需要經以鹵素、氰基、烷基氧基、鹵烷基氧基、或非芳香族碳環基取代的烷基等；t為0至3之整數；R⁵為氫原子或鹵素；R⁶係選自於由氫原子、鹵素、及經取代或未經取代烷基所組成的組群；環B為經取代或未經取代之吡

等；或其醫藥上可接受之鹽。

Description

具有選擇性BACE1抑制活性的四氫哌喃并衍生物

本發明係有關於一種化合物，其具有類澱粉β蛋白抑制活性，及可使用作為由類澱粉β蛋白的產生、分泌及/或沈積所誘發的疾病之治療劑或預防劑。

於阿茲海默氏症患者的腦中，廣泛地觀察得稱作為類澱粉β蛋白的(由約40個胺基酸殘基所組成的)胜肽堆積而在神經細胞外部形成不可溶的斑點(老人斑)。擔憂此等老人斑殺死神經細胞，引發阿茲海默氏症，故目前正在進行有關阿茲海默氏症的治療劑，諸如類澱粉β蛋白之分解劑及類澱粉蛋白疫苗的研究。

分泌酶為一種在細胞中裂解稱作類澱粉β前驅蛋白(APP)的蛋白質而產生類澱粉β蛋白的酶。調控類澱粉β蛋白之N端產生的酶稱作為β-分泌酶(β-位點APP-裂解酶1，BACE1)。相信抑制此酶，導致類澱粉β蛋白的產生的減少，及相信因抑制作用故，將能製作出阿茲海默氏症的治療劑或預防劑。

專利文件1至10揭示具有結構式類似本發明之化合物之結構式的化合物。此等文件各自揭示各種化合物係可使用作為阿茲海默氏症、阿 茲海默氏相關症狀、糖尿病等的治療劑，但實質上揭露之化合物各自具有與本發明之化合物不同的結構式。

[引用列表]

[專利文獻]

[PTL 1]

JP2017/071603

[PTL 2]

WO2015/156421

[PTL 3]

JP2014/101354

[PTL 4]

WO2014/065434

[PTL 5]

WO2014/001228

[PTL 6]

WO2013/041499

[PTL 7]

US2013/0072478

[PTL 8]

JP2012/250933

[PTL 9]

WO2012/107371

[PTL 10]

WO2011/071135

本發明提供化合物，其具有減少產生類澱粉β蛋白之功效，尤其是選擇性BACE1抑制活性，及其可使用作為由類澱粉β蛋白的產生、分泌及/或沈積所誘發的疾病之治療劑。

舉例言之，本發明提供描述於下列項目中之發明。

(1)一種式(I)化合物：

其中R³各自獨立地為視需要經以選自於鹵素、氰基、烷基氧基、鹵烷基氧基、及非芳香族碳環基之一個或多個基團取代的烷基；或視需要經以烷基取 代的雜環基；附接至同一個碳原子的兩個R³可與其所附接的碳原子一起形成視需要經以選自於鹵素、烷基、及鹵烷基之一個或多個基團取代的3員至5員非芳香族碳環；t為0至3之整數；R⁵為氫原子或鹵素；R⁶為氫原子、鹵素、及經取代或未經取代之烷基；

其中R^7a為鹵素；氰基；視需要經以選自於氰基、鹵素、羥基、非芳香族碳環基、及芳香族雜環基之一個或多個基團取代的烷基氧基；視需要經以一個或多個鹵素取代的烷基；視需要經以選自於氰基及鹵素之一個或多個基團取代的非芳香族碳環基；視需要經以選自於氰基及芳香族雜環基之一個或多個基團取代的非芳香族雜環基；視需要經以選自於氰基、鹵素、及羥基之一個或多個基團取代的烯基氧基；視需要經以選自於氰基、鹵素、及羥基之一個或多個基團取代的炔基氧基；或視需要經以一個或多個烷基取代的芳香族雜環基；及R^7b為氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、或胺基；或其醫藥上可接受之鹽。

(1)’一種式(I)化合物

其中R³各自獨立地為選自於由下列所組成之組群：視需要經以鹵素、氰基、烷基氧基、鹵烷基氧基、或非芳香族碳環基取代的烷基；及視需要經以烷基取代的雜環基；t為0至3之整數；R⁵為氫原子或鹵素；R⁶為氫原子、鹵素、或經取代或未經取代之烷基；

其中R^7a為鹵素；氰基；視需要經以氰基、鹵素、羥基、或芳香族雜環基取代的烷基氧基；視需要經以鹵素取代的烷基；視需要經以氰基或鹵素取代的非芳香族碳環基；視需要經以氰基或芳香族雜環基取代的非芳香族雜環基；芳香族雜環基；及R^7b為氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、或胺基；或其醫藥上可接受之鹽。

(2)如項目(1)或(1)’之化合物，其中

或其醫藥上可接受之鹽。

(2)’如項目(1)或(1)’之化合物，其中

或其醫藥上可接受之鹽。

(3)如項目(1)、(2)、(2)’及(1)’中任一項之化合物，其中R⁶為氟或氯，或其醫藥上可接受之鹽。

(3-2)如項目(1)、(2)、(2)’及(1)’中任一項之化合物，其中R⁶為氟，或其醫藥上可接受之鹽。

(4)如項目(1)至(3)、(1)’、(2)’及(3-2)中任一項之化合物，其中R⁵為氫 原子或氟，或其醫藥上可接受之鹽。

(4-2)如項目(4)之化合物，其中R⁵為氫原子，或其醫藥上可接受之鹽。

(5)如項目(1)至(4)、(1)’、(2)’、(3-2)及(4-2)中任一項之化合物，其中R³各自獨立地為視需要經以一個或多個鹵素取代的烷基，或其醫藥上可接受之鹽。

(5-2)如項目(5)之化合物，其中R³為甲基，或其醫藥上可接受之鹽。

(5-3)如項目(5)之化合物，其中R³為鹵甲基，或其醫藥上可接受之鹽。

(6)如項目(1)至(5)、(1)’、(2)’、(3-2)、(4-2)、(5-2)及(5-3)中任一項之化合物，其中

或其醫藥上可接受之鹽。

(7)如項目(1)至(6)、(1)’、(2)’、(3-2)、(4-2)、(5-2)及(5-3)中任一項之化合物，其中R^7a為氰基或視需要經以一個或多個鹵素取代的烷基氧基，及R^7b為氫原子、鹵素、或胺基，或其醫藥上可接受之鹽。

(7-2)如項目(7)之化合物，其中R^7a為視需要經以一個或多個鹵素取代的甲基氧基，或其醫藥上可接受之鹽。

(7-3)如項目(7)之化合物，其中R^7a為C1-C2烷基氧基，或其醫藥上可接受之鹽。

(7-4)如項目(7)之化合物，其中R^7a為經以一個或多個鹵素取代的C1-C2烷基氧基，或其醫藥上可接受之鹽。

(8)如項目(1)至(5)、(1)’、(2)’、(3-2)、(4-2)、(5-2)及(5-3)中任一項之化合物，其中

或其醫藥上可接受之鹽。

(8-2)如項目(1)至(5)、(1)’、(2)’、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)及(8)中任一項之化合物，其中R^7a為視需要經以一個或多個鹵素取代的烷基，及R^7b為氫原子或烷基，或其醫藥上可接受之鹽。

(9)如項目(1)至(8)、(1)’、(2)’、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、及(8-2)中任一項之化合物，其中

其中R³為視需要經以一個或多個鹵素取代的烷基，R⁵為氫原子，R⁶為鹵素，

及R^7a為視需要經以一個或多個鹵素取代的烷基氧基，或其醫藥上可接受之鹽。

(9-2)如項目(1)至(9)、(1)’、(2)’、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、及(8-2)中任一項之化合物，其中該化合物係由式(IA)表示：

其中各個符號係與如上項目(1)中之定義相同，或其醫藥上可接受之鹽。

(9-2)’由式(IB)表示之化合物：

其中各個符號係與如上項目(1)至(9)、(1)’、(2)’、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、及(8-2)中任一項中之定義相同，或其醫藥上可接受之鹽。

(9-3)如項目(1)至(9)、(1)’、(2)’、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(9-2)’、及(8-2)中任一項之化合物，其中該化合物係由式(IA)表示：

其中R^7a為視需要經以一個或多個鹵素取代的C1-C3烷基氧基；R³為視需要經以一個或多個鹵素取代的C1-C3烷基；及t為0或1，或其醫藥上可接受之鹽。

(9-4)如項目(9)、(9-2)、(9-2)’、及(9-3)中任一項之化合物，其中R^7a為C1-C2烷基氧基，或其醫藥上可接受之鹽。

(9-5)如項目(9)、(9-2)、(9-2)’、及(9-3)中任一項之化合物，其中R^7a為經以一個或多個鹵素取代之C1-C2烷基氧基，或其醫藥上可接受之鹽。

(10)如項目(1)至(9)、(9-2)’、(1)’、(2)’、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-3)、(9-4)及(9-5)中任一項之化合物，其係選自於由下列所組成之組群：

或其醫藥上可接受之鹽。

(10)’如上項目(9-2)’之化合物，其係選自於由下列所組成之組群：

或其醫藥上可接受之鹽。

(10)”如項目(1)至(9)、(1)’、(2)’、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-2)’、(9-3)、(9-4)、及(9-5)中任一項之化合物，其係選自於由I-007、I-008、I-009、I-010、I-047、I-059、I-067、及I-076所組成之組群，或其醫藥上可接受之鹽。

(10)’”如上項目(10)’之化合物，其係選自於如上「化學式15」中描述 的化合物中任一者的光學異構物，或其醫藥上可接受之鹽。

(11)一種醫藥組成物，其包含如項目(1)至(10)、(1)’、(2)’、(10)’、(10)”、(10)’”、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-2)’、(9-3)、(9-4)、及(9-5)中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽。

(12)具有BACE1抑制活性之醫藥組成物，其包含如項目(11)之化合物，或其醫藥上可接受之鹽。

(13)如項目(11)或(12)之醫藥組成物，其係用於治療或預防阿茲海默失智症、輕度認知障礙、或早期阿茲海默氏症，用於預防阿茲海默失智症、輕度認知障礙、或早期阿茲海默氏症的進展，或用於預防有阿茲海默失智症風險的無症狀患者的進展。

(14)如項目(1)至(10)、(1)’、(2)’、(10)’、(10)”、(10)’”、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-2)’、(9-3)、(9-4)、及(9-5)中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其係用於抑制BACE1活性之方法。

(15)如項目(1)至(10)、(1)’、(2)’、(10)’、(10)”、(10)’”、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-2)’、(9-3)、(9-4)、及(9-5)中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其係用於治療或預防阿茲海默失智症、輕度認知障礙、或早期阿茲海默氏症，用於預防阿茲海默失智症、輕度認知障礙、或早期阿茲海默氏症的進展，或用於預防有阿茲海默失智症風險的無症狀患者的進展之用途。

(16)一種用於抑制BACE1活性之方法，其係包含投予如項目(1)至(10)、(1)’、(2)’、(10)’、(10)”、(10)’”、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-2)’、(9-3)、(9-4)、及(9-5)中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽。

(17)一種用於治療或預防阿茲海默失智症、輕度認知障礙、或早期阿茲海默氏症，用於預防阿茲海默失智症、輕度認知障礙、或早期阿茲海默氏症的進展，或用於預防有阿茲海默失智症風險的無症狀患者的進展之方法，其係包含投予如項目(1)至(10)、(1)’、(2)’、(10)’、(10)”、(10)’”、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-2)’、(9-3)、(9-4)、及(9-5)中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽。

(18)一種BACE1抑制劑，其係包含如項目(1)至(10)、(1)’、(2)’、(10)’、(10)”、(10)’”、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-2)’、(9-3)、(9-4)、及(9-5)中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽。

(19)一種項目(1)至(10)、(1)’、(2)’、(10)’、(10)”、(10)’”、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-2)’、(9-3)、(9-4)、及(9-5)中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽之用途，其係用於製造抑制BACE1活性之藥物。

(20)如項目(11)或(12)之醫藥組成物，其係用於治療或預防由類澱粉β蛋白之產生、分泌或沈積所誘發的疾病。

(21)一種用於治療或預防由類澱粉β蛋白之產生、分泌或沈積所誘發的疾病之方法，其係包含投予如項目(1)至(10)、(1)’、(2)’、(10)’、(10)”、(10)’”、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-2)’、(9-3)、(9-4)、及(9-5)中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽。

(22)如項目(1)至(10)、(1)’、(2)’、(10)’、(10)”、(10)’”、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-2)’、(9-3)、(9-4)、及(9-5)中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其係用於治療或預防由類澱粉β蛋白之產生、分泌或沈積所誘發的疾病。

(23)一種項目(1)至(10)、(1)’、(2)’、(10)’、(10)”、(10)’”、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-2)’、(9-3)、(9-4)、及(9-5)中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽之用途，其係用於製造用於治療或預防由類澱粉β蛋白之產生、分泌或沈積所誘發的疾病之藥物。

(24)如項目(11)或(12)之醫藥組成物，其係用於治療或預防阿茲海默失智症。

(25)一種用於治療或預防阿茲海默失智症之方法，其係包含投予如項目(1)至(10)、(1)’、(2)’、(10)’、(10)”、(10)’”、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-2)’、(9-3)、(9-4)、及(9-5)中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽。

(26)如項目(1)至(10)、(1)’、(2)’、(10)’、(10)”、(10)’”、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-2)’、(9-3)、(9-4)、及(9-5)中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其係用於治療或預防阿茲海默失智症。

(27)一種項目(1)至(10)、(1)’、(2)’、(10)’、(10)”、(10)’”、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-2)’、(9-3)、(9-4)、及(9-5)中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽之用途，其係用於製造用於治療或預防阿茲海默失智症之藥物。

(28)一種包含如項目(1)至(10)、(1)’、(2)’、(10)’、(10)”、(10)’”、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-2)’、(9-3)、(9-4)、及(9-5)中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽的醫藥組成物，其係用於經口投予。

(29)如項目(28)之醫藥組成物，其為錠劑、散劑、粒劑、膠囊劑、丸劑、膜劑、懸浮液劑、乳液劑、酏劑、糖漿劑、檸檬水劑、烈酒劑、芳香水劑、 萃取液劑、煎劑、或酊劑。

(30)如項目(29)之醫藥組成物，其為糖衣錠、膜衣錠、腸衣錠、持續釋放錠、片劑、舌下錠、頰用錠、咀嚼錠、口腔崩散錠、乾糖漿、軟膠囊、微型膠囊、或持續釋放膠囊。

(31)一種包含如項目(1)至(10)、(1)’、(2)’、(10)’、(10)”、(10)’”、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-2)’、(9-3)、(9-4)、及(9-5)中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽的醫藥組成物，其係用於經腸道外投予。

(32)如項目(31)之醫藥組成物，其係用於經皮、皮下、靜脈、動脈、肌肉、腹內、穿黏膜、吸入、經鼻、經眼、內耳、或經陰道投予

(33)如項目(31)或(32)之醫藥組成物，其為注射劑、輸注劑、眼用滴劑、鼻用滴劑、耳用滴劑、噴霧劑、吸入劑、洗劑、浸漬劑、擦劑、漱口劑、灌腸劑、軟膏劑、硬膏劑、膠漿劑、乳膏劑、貼片劑、糊劑、外用散劑或栓劑。

(34)一種包含如項目(1)至(10)、(1)’、(2)’、(10)’、(10)”、(10)’”、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-2)’、(9-3)、(9-4)、及(9-5)中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽的醫藥組成物，其係用於小兒或老年患者。

(35)一種醫藥組成物，其係由如項目(1)至(10)、(1)’、(2)’、(10)’、(10)”、(10)’”、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-2)’、(9-3)、(9-4)、及(9-5)中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽與乙醯膽鹼酯酶抑制劑、NMDA拮抗劑、或阿茲海默失智症用其它藥物的組合組成。

(36)一種包含如項目(1)至(10)、(1)’、(2)’、(10)’、(10)”、(10)’”、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(5-3)、(7-2)、(7-3)、(7-4)、(8-2)、(9-2)、(9-2)’、(9-3)、 (9-4)、及(9-5)中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽的醫藥組成物，其係用於與乙醯膽鹼酯酶抑制劑、NMDA拮抗劑、或阿茲海默失智症用其它藥物的合併療法。

本發明之化合物具有選擇性BACE1抑制活性，及其可使用作為由類澱粉β蛋白的產生、分泌及/或沈積所誘發的疾病諸如阿茲海默失智症之治療劑及/或預防劑。

(較佳實施例之詳細說明)

後文中，將參考具體例描述本發明。須瞭解於全文說明書中，除非另行載明，否則單數型表示法包括其複數型構思。據此，須瞭解除非另行載明，否則單數型冠詞(例如，於英文中「一(a)」、「一(an)」、「該」等包括其複數型構思。再者，須瞭解除非另行載明，否則於本文中使用的術語係以業界通用的意義使用。如此，除非另行定義，否則於本文中使用的技術與科學術語具有本發明相關領域中之熟諳技藝人士通常瞭解的相同意義。若有矛盾衝突，則以本說明書(包括定義)為優先。

於本文中使用的術語之各自定義描述如下。除非另行註明，否則當單獨使用時及組合使用時，各個術語皆係以相同意義使用。

於本說明書中，術語「其組成為」表示只有僅有的組成分。

於本說明書中，術語「包含」表示不限制組成分且不排除未描述的因子。

於本說明書中，「鹵素」包括氟、氯、溴、及碘。以氟及氯為較佳。以氟為更佳。

於本說明書中，「烷基」包括1至15之碳數，例如1至10之碳數，例如1 至6之碳數，例如1至4之碳數，較佳地1至3之碳數，及更佳地1或2之碳數之線性或分支烷基。實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、異戊基、新戊基、己基、異己基、正庚基、異庚基、正辛基、異辛基、正壬基、及正癸基。實例為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、及正戊基。

於一個具體例中，「烷基」為甲基、乙基、正丙基、異丙基、或第三丁基。以甲基為較佳。

術語「鹵烷基」包括其中附接至如上「烷基」之一個或多個碳原子的一個或多個氫原子係經以一個或多個如上「鹵素」置換的基團。實例為一氟甲基、一氟乙基、一氟丙基、二氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、三氟甲基、三氟乙基、三氟丙基、五氟丙基、一氯甲基、一氯乙基、一氯丙基、二氯甲基、二氯乙基、二氯丙基、三氯甲基、三氯乙基、三氯丙基、五氯丙基、1-氟乙基、2-氟乙基、1,1-二氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、1-氯乙基、2-氯乙基、1,1-二氯乙基、2,2-二氯乙基、2,2,2-三氯乙基、1,2-二溴乙基、1,1,1-三氟丙烷-2-基、及2,2,3,3,3-五氟丙基。實例為一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、1-氟乙基、1,1-二氟乙基、及2,2-二氟乙基。實例為一氟甲基、二氟甲基、1-氟乙基、1,1-二氟乙基、及2,2-二氟乙基。以二氟甲基、三氟甲基、及2,2-二氟乙基為較佳。

術語「烯基」包括在任何可用位置具有一個或多個雙鍵的2至15之碳數，例如2至10之碳數，例如2至6之碳數，及例如2至4之碳數之線性或分支烯基。實例包括乙烯基、烯丙基、丙烯基、異丙烯基、丁烯基、異丁烯基、異戊二烯基、丁二烯基、戊烯基、異戊烯基、戊二烯基、己烯基、異己烯基、己二烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基、十一碳烯基、十二碳烯基、十三碳烯基、十四碳烯基、及十五碳烯基。實例為乙烯基、烯丙基、 丙烯基、異丙烯基、及丁烯基。

術語「炔基」包括在視需要的位置具有一個或多個參鍵的2至15之碳數，例如2至10之碳數，例如2至8之碳數，例如2至6之碳數，及例如2至4之碳數之線性或分支炔基。特定實例包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、庚炔基、辛炔基、壬炔基、及癸炔基。此等可在任何可用位置又具有雙鍵。實例為乙炔基、丙炔基、丁炔基、及戊炔基。

術語「伸烷基」包括1至15之碳數，例如1至10之碳數，例如1至6之碳數，例如1至3之碳數之線性或分支二價碳鏈。實例為亞甲基、二亞甲基、及三亞甲基。

式(I)、(IA)、或(IB)化合物中之伸烷基的一個或多個氫可以氫同位素²H(氘)置換。

術語「烷基氧基」包括其中氧原子係以如上「烷基」取代的基團。實例為甲基氧基、乙基氧基、正丙基氧基、異丙基氧基、正丁基氧基、第三丁基氧基、異丁基氧基、第二丁基氧基、戊基氧基、異戊基氧基、及己基氧基。

於一個具體例中，「烷基氧基」為甲基氧基、乙基氧基、正丙基氧基、異丙基氧基、或第三丁基氧基。

術語「烯基氧基」包括其中氧原子係以如上「烯基」取代的基團。實例為乙烯基氧基、烯丙基氧基、1-丙烯基氧基、2-丁烯基氧基、2-戊烯基氧基、2-己烯基氧基、2-庚烯基氧基、及2-辛烯基氧基。

術語「炔基氧基」包括其中氧原子係以如上「炔基」取代的基團。實例為乙炔基氧基、1-丙炔基氧基、2-丙炔基氧基、2-丁炔基氧基、2-戊炔基氧基、2-己炔基氧基、2-庚炔基氧基、及2-辛炔基氧基。

於一個具體例中，「炔基氧基」為乙炔基氧基、1-丙炔基氧基、及2-丙 炔基氧基。

術語「碳環」包括非芳香族碳環及芳香族碳環。

術語「非芳香族碳環」包括飽和碳環或不飽和非芳香族碳環，其為單環系或其由二個或更多個環組成。二個或更多個環之「非芳香族碳環」包括稠合環基，其中非芳香族單環系碳環或兩個或多個環之非芳香族碳環係與如上「芳香族碳環」的環稠合。

此外，「非芳香族碳環」也包括具有橋基或環基以形成如下螺環的環系基：

術語「非芳香族單環系碳環」包括具有3至16個碳原子，例如3至12個碳原子，例如3至8個碳原子，及例如3至5個碳原子的基團。實例為環丙烷、環丁烷、環戊烷、環己烷、環庚烷、環辛烷、環壬烷、環癸烷、環丙烯、環丁烯、環戊烯、環己烯、環庚烯、及環己二烯。

由二個或更多個環組成的非芳香族碳環之實例包括具有6至14個碳原子之基團，及實施例為二氫茚、茚滿、苊烯、四氫萘、及芴。

術語「芳香族碳環」包括其為單環系或其由二個或更多個環組成的芳香族烴環。實例為6至14個碳數之芳香族烴基，及特定實例為苯、萘、蒽、及菲。

於一個具體例中，「芳香族碳環」為苯。

於一個具體例中，「碳環」為環丙烷、環丁烷、及環戊烷。

術語「雜環」包括非芳香族雜環及芳香族雜環。

術語「非芳香族雜環」包括非芳香族基團，其為單環系，或其由二個或更多個環組成，其含有獨立地選自於氧、硫、及氮原子中之一個或多個雜原子。

二個或更多個環之「非芳香族雜環」包括稠合環基，其中非芳香族單環系雜環或二個或更多個環之非芳香族雜環係與如上「芳香族碳環」、「非芳香族碳環」及/或「芳香族雜環」的環稠合。

此外，「非芳香族雜環」也包括具有橋基或環基以形成如下螺環的環系環：

術語「非芳香族單環系雜環」包括3員至8員環，及例如4、5、或6員環。實例為二氧雜環己烷、硫雜環丙烷、氧雜環丙烷、氧雜環丁烷、氧硫雜環戊烷、氮雜環丁烷、硫雜環己烷、噻唑啶、吡咯啶、吡咯啉、咪唑啶、咪唑啉、吡唑啶、吡唑啉、哌啶、哌

、嗎啉基、嗎啉、硫嗎啉、二氫吡啶、四氫吡啶、四氫呋喃、四氫哌喃、二氫噻唑啉、四氫噻唑啉、四氫異噻唑啉、二氫

、六氫氮呯、四氫二氮呯、四氫嗒

、六氫嘧啶、二氧雜環戊烷、二

、氮雜環丙烷、二

啉、氧雜環庚烷、硫雜環戊烷、硫雜苯、及噻

。

二個或更多個環之非芳香族雜環之實例包括9員至14員基團，及實例為吲哚啉、異吲哚啉、色滿、及異色滿。

術語「芳香族雜環」包括芳香族環，其為單環系，或其由二個 或更多個環組成，其含有獨立地選自於氧、硫、及氮原子中之一個或多個雜原子。

二個或更多個環之「芳香族雜環」包括稠合環基，其中芳香族單環系雜環基或由二個或更多個環組成的非芳香族雜環係與如上「芳香族碳環」的環稠合。

術語「芳香族單環系雜環」包括5至8員基團，及例如5至6員環。實例為吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、嗒

、嘧啶、吡

、三唑、三

、四唑、呋喃、噻吩、異

唑、

唑、

二唑、異噻唑、噻唑、及噻二唑。

芳香族二環系雜環之實例包括9至10員環，及實例為吲哚啉、異吲哚啉、吲唑啉、吲哚

、喹啉、異喹啉、噌啉、酞

、喹唑啉、萘啶、喹

啉、嘌呤、喋啶、苯并咪唑、苯并異

唑、苯并

唑、苯并

二唑、苯并異噻唑、苯并噻唑、苯并噻二唑、苯并呋喃、異苯并呋喃、苯并噻吩、苯并三唑、咪唑并吡啶、三唑并吡啶、咪唑并噻唑、吡

并嗒

、

唑并吡啶、及噻唑并吡啶。

三個或更多個環之芳香族雜環之實例包括13員至14員基團，及實例為咔唑、吖啶、氧雜蒽、啡噻

、啡

噻、啡

、及二苯并呋喃。

於一個具體例中，「雜環」為1,4-氧雜硫雜環己烷。

「經取代或未經取代之烷基」之取代基的實例為選自於以下取代基α中之一個或多個基團。

取代基α為由鹵素、羥基、氰基、烷基氧基所組成的組群，「經取代或未經取代之烷基」之取代基為例如鹵素等。

R²中之「經取代或未經取代之烷基」之取代基為例如鹵素等。

R³中之「經取代或未經取代之烷基」之取代基為例如鹵素、烷基氧基等。

「經取代或未經取代之烷基氧基」之取代基的實例為選自於 以下取代基β中之一個或多個基團。

取代基β為由鹵素、羥基、氰基、視需要經取代之烷基(取代基：羥基、非芳香族碳環基、氰基非芳香族碳環基、鹵基非芳香族碳環基、非芳香族雜環基、烷基非芳香族雜環基、鹵基非芳香族雜環基、芳香族雜環基)所組成的組群。

R²中之「經取代或未經取代之烷基」之取代基為例如鹵素等。

R³中之「經取代或未經取代之烷基」之取代基為例如鹵素、烷基氧基等。

R^7a中之「經取代或未經取代之烷基氧基」之取代基為，例如，視需要經取代之烷基(取代基：羥基、非芳香族碳環基、氰基非芳香族碳環基、鹵基非芳香族碳環基、非芳香族雜環基、烷基非芳香族雜環基、鹵基非芳香族雜環基、芳香族雜環基)等。

「經取代或未經取代之非芳香族碳環基」及「經取代或未經取代之非芳香族雜環基」可經以「側氧基」取代。包括其中附接至同一個碳原子的兩個氫原子被側氧基置換的基團如下：

「經取代或未經取代之碳環」及「經取代或未經取代之雜環」之取代基的實例包括選自於取代基α中之基團。

式(I)、(IA)、或(IB)化合物並不限於特定異構物，而包括全部可能的異構物，諸如酮基-烯醇異構物、亞胺-烯胺異構物、非對映異構物、光學異構物及旋轉異構物、外消旋體及其混合物。舉例言之，式(I)化合物包括下列互變異構物。

於本實施方式中，由下式表示之基團：

意指由下式表示之基團：

式(I)、(IA)、或(IB)化合物之一個或多個氫、碳、及/或其它原子分別地可以氫、碳、及/或其它原子的同位素置換。同位素之實例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘、及氯的同位素，諸如，分別地為²H(D)、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F、¹²³I、及³⁶Cl。式(I)、(IA)、或(IB)化合物也包括以此等同位素置換的化合物。以此等同位素置換 的化合物也可用作為藥物，及包括式(I)、(IA)、或(IB)化合物之全部放射性標記化合物。本發明包括用於製造「放射性標記化合物」的「放射性標記方法」，及該方法可用作為代謝性藥動學研究、結合分析試驗研究、及/或診斷的工具。式(I)、(IA)、或(IB)化合物之放射性標記化合物可藉業界已知之方法製造。舉例言之，式(I)、(IA)、或(IB)之氚化化合物可藉將氚導入式(I)、(IA)、或(IB)之特定化合物製造，諸如藉由使用氚催化脫鹵化製造。此方法可包括於合宜催化劑諸如Pd/C之存在下，於有或無鹼之存在下，讓式(I)、(IA)、或(IB)化合物之經合宜地鹵化的前驅物與氚氣體反應。用於製造氚化化合物的其它適當方法可參考「物理及生醫科學之同位素」，第1卷，標記化合物(部分A)，第6章(1987年)(Isotopes in the Physical and Biomedical Sciences,Vol.1,Labeled Compounds(Part A),Chapter 6(1987))。經¹⁴C標記的化合物可藉採用具有¹⁴C碳的起始物料製造。

至於式(I)、(IA)、或(IB)化合物之醫藥上可接受之鹽，實例包括與下列所生成的鹽類：鹼金屬類(例如，鋰、鈉、及鉀)、鹼土金屬類(例如，鈣及鋇)、鎂、過渡金屬類(例如，鋅及鐵)、氨、有機鹼類(例如，三甲基胺、三乙基胺、二環己基胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、甲基葡胺、二乙醇胺、伸乙基二胺、吡啶、甲基吡啶、喹啉)、及胺基酸類；及與下列所生成的鹽類：無機酸類(例如，氫氯酸、硫酸、硝酸、碳酸、氫溴酸、磷酸、及氫碘酸)、及有機酸類(例如，甲酸、乙酸、丙酸、三氟乙酸、檸檬酸、乳酸、酒石酸、草酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸、丁二酸、扁桃酸、戊二酸、蘋果酸、苯甲酸、酞酸、抗壞血酸、苯磺酸、對-甲苯磺酸、甲烷磺酸、及乙烷磺酸)。特定實例為與氫氯酸、硫酸、磷酸、酒石酸、丁二酸、或甲烷磺酸所生成的鹽類。此等鹽類可藉尋常方法生成。

由式(I)、(IA)、或(IB)表示的本發明之化合物或其醫藥上可接受之鹽可 形成溶劑合物(例如，水合物等)及/或晶體多形物。本發明涵蓋該等各種溶劑合物及晶體多形物。「溶劑合物」可以是其中任何數目的溶劑分子(例如，水分子等)與由式(I)、(IA)、或(IB)表示之化合物配位者。當允許式(I)表示之化合物或其醫藥上可接受之鹽放置於大氣中時，化合物可吸收水，導致吸附水的附接或水合物的形成。式(I)表示之化合物或其醫藥上可接受之鹽的再結晶可產生晶體多形物。

由式(I)、(IA)、或(IB)表示的本發明之化合物或其醫藥上可接受之鹽可形成前驅藥。本發明也涵蓋此等各種前驅藥。前驅藥為具有化學上或代謝上可降解基的本發明化合物的衍生物，且為經由溶劑分解作用或於活體內的生理條件下，被轉化成本發明之醫藥上活性化合物的化合物。前驅藥包括於活體內的生理條件下，經由酶催化氧化、還原、水解等，而被轉化成由式(I)、(IA)、或(IB)表示之化合物的化合物；及經由藉胃酸等水解，而被轉化成由式(I)、(IA)、或(IB)表示之化合物的化合物。選擇及製造合宜前驅藥衍生物之方法係描述於例如「前驅藥之設計」，愛思維爾，阿姆斯特丹1985年(Design of Prodrugs,Elsevier,Amsterdam 1985)。前驅藥本身可以是活性化合物。

當式(I)、(IA)、或(IB)化合物或其醫藥上可接受之鹽具有羥基時，前驅藥包括醯基氧基衍生物及磺醯基氧基衍生物，其可經由具有羥基之化合物與合宜酸鹵、合宜酸酐、合宜磺醯氯、合宜磺醯基酐、及混合酐反應製備；或與縮合劑反應製備。實例為CH₃COO-、C₂H₅COO-、t-BuCOO-、C₁₅H₃₁COO-、PhCOO-、(m-NaOOCPh)COO-、NaOOCCH₂CH₂COO-、CH₃CH(NH₂)COO-、CH₂N(CH₃)₂COO-、CH₃SO₃-、CH₃CH₂SO₃-、CF₃SO₃-、CH₂FSO₃-、CF₃CH₂SO₃-、p-CH₃-O-PhSO₃-、PhSO₃-、及p-CH₃PhSO₃-。

式(I)、(IA)、或(IB)化合物可藉如下描述之方法，連同熟諳技 藝人士已知之合成方法製造。

起始物料為市售可購得，或可根據已知方法製造。

於如下合成中之任何期間，可能需要保護或較佳地保護任何分子的敏感基團或反應性基團。於此種情況下，此等保護可利用習知保護基達成，諸如描述於Greene的「有機合成保護基」，約翰威利父子公司，2007年(Greene’s Protective Group in Organic Synthesis,John Wily & Sons,2007)。

熟諳技藝人士將瞭解下述化合物將生成為非對映異構物及/或對映異構物之混合物，其可使用習知技術，諸如結晶化、矽膠層析術、對掌性或非對掌性高效液相層析術(HPLC)、及對掌性超臨界流體(SFC)層析術，在如下程序的相關階段分離，以提供本發明之單一對映異構物。

於以下全部步驟期間，步驟之進行順序可經適當改變。於各個步驟中，中間產物可經分離及然後使用於次一步驟。反應時間、反應溫度、溶劑、試劑、及保護基等全部皆僅為例示性而非限制性，只要其對反應不造成不良效應即可。

通用程序A

其中P為保護基，諸如苯甲醯基或苄基，及其它符號係與如上(1)之定義相同。

通用程序A為經由步驟1至步驟8之多個步驟而自化合物A-1製造化合物A-9之方法。熟諳技藝人士將瞭解保護基P可取決於後來步驟中使用的反應條件加以選用。

步驟1

化合物A-2可利用1,3-偶極環加成製備。此類型反應可使用描述於J.Am.Chem.Soc.,1960,82,5339-5342或J.Org.Chem.1998,63,5272-5274中之相似條件進行。此等1,3-偶極環加成可使用環系化合物A-1及自對應硝基烷類於原位生成的對應腈氧化物進行，該反應係使用適當脫水劑諸如，異氰酸苯酯、二異氰酸苯酯、或(Boc)₂O，及適當鹼諸如三乙基胺、二丙基乙基胺、或N-甲基嗎啉。另外，腈氧化物可使用適當鹼諸如三乙基胺、二丙基乙基胺、或N-甲基嗎啉，於原位自對應羥肟醯氯生成。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要不干擾反應即可。溶劑之實例包括四氫呋喃、1,4-二氧雜環己烷、1,2-二甲氧基乙烷、乙醚、甲苯、苯、及其混合溶劑。反應溫度較佳地為室溫至120℃。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

步驟2

化合物A-3可利用適當芳基鋰試劑或格利雅(Grignard)試劑之親核加成至化合物A-2製備。此類型反應可使用描述於J.Am.Chem.Soc.,2005,127,5376-5384中之相似條件進行。較佳地，芳基鋰試劑或格利雅試劑可使用適當鹼，諸如正-、第二-或第三-丁基鋰、溴化異丙基鎂、或金屬鎂，而自對應芳香族鹵化物製備；其然後可使用路易士酸諸如BF₃-OEt₂，反應至化合物A-2而獲得化合物A-3。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括四氫呋喃、1,4-二氧雜環己烷、1,2-二甲氧基乙烷、乙醚、甲苯、苯、及其混合溶劑。反應溫度較佳地為-78℃至室溫。反 應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

步驟3

化合物A-4可藉化合物A-3之N-O鍵的還原裂解反應製備。此還原裂解可使用鋅與適當酸，諸如乙酸、甲酸、或氫氯酸進行。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括甲醇、乙醇、四氫呋喃、水、及其混合溶劑。反應溫度較佳地為-20℃至溶劑回流溫度。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

另外，此反應可使用金屬催化劑諸如氧化鉑於氫氣下進行。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括甲醇、乙醇、水、及其混合溶劑。反應溫度較佳地為室溫至50℃。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

再者，此類型反應也可使用氫化鋁鋰進行。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括四氫呋喃、1,4-二氧雜環己烷、1,2-二甲氧基乙烷、乙醚、及其混合溶劑。反應溫度較佳地為-20℃至室溫。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

步驟4

化合物A-5可藉由於原位自化合物A-4形成對應的硫脲類，隨後接著進行環化反應製備。此類型反應為熟諳技藝人士所已知，及可於WO2014/065434描述的條件下進行。硫脲可使用適當異硫氰酸酯類，諸如異硫氰酸苯甲醯或異硫氰酸苄酯，於原位得自化合物A-4；然後，環化可藉添加試劑諸如m-CPBA、過氧化氫、或碳二亞胺試劑(例如，DCC、DIC、或EDC)進行。另外，此環化可使用烷化劑諸如甲基碘，及適當鹼諸如氫化鈉、碳酸氫鈉、及碳酸鉀進行。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其 不干擾反應即可。溶劑之實例包括氯仿、二氯甲烷、二氯乙烷、四氫呋喃、及其混合溶劑。反應溫度通常為0℃至60℃。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

步驟5

化合物A-6可藉化合物A-5之脫保護製備。此脫保護反應為熟諳技藝人士已知，及可於描述於Green的有機合成保護基(Protective Groups in Organic Synthesis)，第4版之條件下進行。當保護基為苯甲醯基時，脫保護反應可於酸性條件下諸如硫酸或氫氯酸進行；或於鹼性條件下諸如肼、DBU、或氫氧化鈉進行。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括二氯甲烷、四氫呋喃、1,4-二氧雜環己烷、甲醇、甲苯、苯、及其混合溶劑。反應溫度較佳地為室溫至100℃。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

步驟6

化合物A-7可藉化合物A-6之硝化製備。典型程序涉及使用硝醯陽離子來源諸如硝酸鉀或硝酸，處理溶解於硫酸及三氟乙酸之化合物A-6。反應溫度較佳地為-20℃至0℃。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至5小時，較佳地為30分鐘至2小時。

步驟7

化合物A-8可經由化合物A-7之還原製備。還原可藉合宜催化劑，諸如鈀/碳於氫氣氛下進行；或使用還原劑諸如氯化鐵、氯化鋅或氯化錫(II)進行。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括四氫呋喃、甲醇、乙醇、水、及其混合溶劑。反應溫度通常為室溫至80℃，及較佳地為室溫至60℃。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

步驟8

化合物A-9可經由化合物A-8之適當酸鹽與對應羧酸類進行醯胺偶合反應製備。化合物A之酸鹽可在進行縮合反應之前，使用一當量適當酸諸如HCl製備。此反應可藉熟諳技藝人士已知之方法進行，及合宜偶合條件可參考Chem.Rev.2011,111,6557-6602，其包括：a)使用縮合試劑之反應；b)使用醯氯或醯氟之反應。此反應須在未添加用於在苯胺位置的化學選擇性醯胺偶合的任何鹼之下進行。

反應a)可藉使用縮合試劑進行，諸如二環己基碳二亞胺(DCC)、二異丙基碳二亞胺(DIC)、1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC鹽酸鹽)、O-(7-氮雜-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HATU)、及1H-苯并三唑-1-基氧基-三(吡咯啶基)鏻六氟磷酸鹽(PyBOP)。當使用脲鎓鹽或鏻鹽諸如HATU或PyBOP時，反應可於鹼諸如三乙基胺及二異丙基乙基胺之存在下進行。反應可藉使用催化劑加速，諸如1-羥基-苯并三唑(HOBt)及1-羥基-7-氮雜-苯并三唑(HOAt)。反應中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括二氯甲烷、N,N-二甲基甲醯胺(DMF)、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、及四氫呋喃。反應溫度通常為0℃至50℃，及較佳地為室溫。

反應b)可於鹼，諸如，三乙基胺、二異丙基乙基胺、吡啶、及N,N-二甲基-4-胺基吡啶之存在下，於溶劑中，諸如二氯甲烷、四氫呋喃、及乙酸乙酯，藉使用市售醯氯或藉熟諳技藝人士已知之方法合成者進行。反應溫度通常為0℃至60℃，及較佳地為0℃至室溫。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為20分鐘至6小時。

通用程序B

其中R^3’及R^3”各自獨立地為選自於由視需要地經以鹵素、氰基、烷基氧基、鹵烷基氧基、或非芳香族碳環基取代的烷基、及視需要地經以烷基取代的雜環基所組成的組群，及其它符號係與如上定義相同。

通用程序B為經由多個步驟而自化合物B-1製備化合物B-5之方法。使用化合物B-4，及化合物B-5可根據通用程序A中描述之方法製備。

步驟1

化合物B-2可利用1,3-偶極環加成製備。此類型反應可使用描述於J.Am.Chem.Soc.1960,82,5339-5342或J.Org.Chem.1998,63,5272-5274的相似條件進行。此等1,3-偶極環加成可使用環系化合物B-1及自對應硝基烷類於原位生成的對應腈氧化物進行，該反應係使用適當脫水劑諸如，異氰酸苯酯、二異氰酸苯酯、或(Boc)₂O，及適當鹼諸如三乙基胺、二異丙基乙基胺、或N-甲基嗎啉進行。另外，腈氧化物可使用適當鹼諸如三乙基胺、二異丙基乙基胺、或N-甲基嗎啉，於原位自對應羥肟醯氯生成。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括四氫呋喃、 1,4-二氧雜環己烷、1,2-二甲氧基乙烷、乙醚、甲苯、苯、及其混合溶劑。反應溫度較佳地為室溫至120℃。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

步驟2

當R^3’為氫原子時，化合物B-3可藉化合物B-2之羰基還原製備。此類型反應可利用親核氫陰離子加成至化合物B-2，使用適當金屬氫化物進行，例如，DIBAL-H、氫化三-第三-丁氧基鋁鋰、或氫化貳(2-甲氧基乙氧基)鋁鈉。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括二氯甲烷、四氫呋喃、1,4-二氧雜環己烷、1,2-二甲氧基乙烷、乙醚、甲苯、苯、及其混合溶劑。反應溫度較佳地為-78℃至室溫。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

當R^3’非為氫原子時，化合物B-3可藉親核加成至化合物B-2製備。此類型反應可使用適當親核物，諸如有機鋰、鎂、鋅、或矽基試劑，有或無使用路易士酸諸如BF₃-OEt₂、AlCl₃或TiCl₄進行。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括二氯甲烷、四氫呋喃、1,4-二氧雜環己烷、1,2-二甲氧基乙烷、乙醚、甲苯、苯、及其混合溶劑。反應溫度較佳地為-78℃至室溫。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

步驟3

當R^3”為氫原子時，化合物B-4可藉化合物B-3之還原製備。此類型反應可使用適當還原劑，例如，三乙基矽烷、硼氫化鈉，有或無使用路易士酸諸如BF₃-OEt₂進行。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括二氯甲烷、乙腈、四氫呋喃、1,4-二氧雜環己烷、1,2-二甲氧基乙烷、乙醚、甲苯、苯、及其混合溶劑。反應溫度較佳地為-20℃ 至室溫。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

當R^3”非為氫原子時，化合物B-4可藉親核加成至化合物B-2製備。此類型反應可使用適當親核物，諸如有機鋰、鎂、鋅、或矽基試劑，有或無使用路易士酸諸如BF₃-OEt₂、AlCl₃或TiCl₄進行。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括二氯甲烷、四氫呋喃、1,4-二氧雜環己烷、1,2-二甲氧基乙烷、乙醚、甲苯、苯、及其混合溶劑。反應溫度較佳地為-78℃至室溫。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

通用程序C

其中P為保護基諸如苯甲醯基或苄基，R^3’”為乙基或環丙基，及其它符號係與如上(1)之定義相同。

通用程序C為經由多個步驟從化合物B-1製備化合物C-5之方法。化合物C-3及化合物C-5可根據通用程序A中描述之方法而從化合物C-2及C-5製 備。

步驟1

化合物C-1可藉烯丙基部份之親核加成至化合物B-2的羰基製備。此類型反應可使用適當市售的或原位生成的烯丙基試劑，諸如烯丙基矽烷、鋰、鎂、鋅試劑，有或無使用路易士酸諸如BF₃-OEt₂、AlCl₃或TiCl₄進行。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括二氯甲烷、四氫呋喃、1,4-二氧雜環己烷、1,2-二甲氧基乙烷、乙醚、甲苯、苯、及其混合溶劑。反應溫度較佳地為-78℃至室溫。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

步驟2

化合物C-2可藉化合物C-1之還原製備。此類型反應可使用適當還原劑，例如，三乙基矽烷或硼氫化鈉，有或無使用路易士酸諸如BF₃-OEt₂進行。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括二氯甲烷、乙腈、四氫呋喃、1,4-二氧雜環己烷、1,2-二甲氧基乙烷、乙醚、甲苯、苯、及其混合溶劑。反應溫度較佳地為-20℃至室溫。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

步驟3

當R^3’”為乙基時，化合物C-5可藉化合物C-4之氫化獲得。氫化可使用合宜催化劑，諸如鈀/碳於氫氣氛下進行。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括四氫呋喃、甲醇、乙醇、水、及其混合溶劑。反應溫度通常為室溫至80℃，及較佳地為室溫至60℃。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

當R^3’”為環丙基時，化合物C-5可藉化合物C-4之環丙烷化獲得。此類型反應可使用適當試劑諸如重氮甲烷，有或無合宜催化劑，或席夢斯-史密斯 (Simmons-Smith)反應條件，諸如二碘甲烷與二乙基鋅進行。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括二氯甲烷、乙醚、甲苯、苯、及其混合溶劑。反應溫度通常為-30℃至室溫。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

通用程序D

其中P為保護基諸如苯甲醯基或苄基，R^3””為經以氟取代之烷基或烷基氧基，及其它符號係與如上(1)之定義相同。

通用程序D為經由多個步驟從化合物C-3製備化合物D-3之方法。化合物D-3可根據通用程序A中描述之方法而從化合物D-2製備。

步驟1

化合物D-1可藉化合物C-3之臭氧分解，隨後接著所得醛之還原製備。此反應可藉熟諳技藝人士已知之方法進行。臭氧分解可於用於還原後續處 理的氮氣氛下，使用適當試劑諸如三苯基膦、吡啶、二甲基硫化物、及三甲基胺，於臭氧氣氛下，於合宜溶劑諸如二氯甲烷、甲醇、及其混合溶劑中進行。用於生成臭氧化物之溫度較佳地為-78℃，然後讓溫度溫熱至室溫用於還原後續處理。反應時間並無特殊限制，及通常為30分鐘至5小時，較佳地為30分鐘至2小時。所得醛之還原可於單一容器內，使用適當還原劑諸如硼氫化鈉或氫化鋁鋰進行。反應溫度較佳地為0℃至室溫。反應時間並無特殊限制，及通常為30分鐘至5小時，較佳地為30分鐘至2小時。

步驟2

當R³””為CF₃、CHF₂或CH₂F時，化合物D-2可藉二步驟順序獲得：化合物D-1氧化成醛或羧酸，隨後接著氟化；或化合物D-1之直接氟化。此反應可藉熟諳技藝人士已知方法進行。舉例言之，化合物D-1可於適當氧化條件下，諸如TEMPO、Dess-Martin或Swern氧化條件下，被氧化成對應醛。對應羧酸可藉所得醛之氧化獲得，或使用適當條件諸如Pinnick、TEMPO或Jones氧化，直接氧化化合物D-1獲得。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。反應溫度較佳地為-78℃至室溫。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。氟化反應可使用適當試劑諸如DAST、Deoxofluor、或四氟化硫進行。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括二氯甲烷、四氫呋喃、1,4-二氧雜環己烷、1,2-二甲氧基乙烷、乙醚、甲苯、苯、及其混合溶劑。反應溫度較佳地為-78℃至50℃。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

當R³””為烷基氧基時，化合物D-2可利用化合物D-1之端末醇的烷基化獲得。此反應可使用適當鹼諸如氫化鈉，與對應親電子物諸如烷基鹵、甲烷磺酸酯、或三氟甲烷磺酸酯進行。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要 其不干擾反應即可。溶劑之實例包括丙酮、乙腈、四氫呋喃、DMF、DMA、DMSO、甲苯、及其混合溶劑。反應溫度較佳地為0℃至100℃。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

通用程序E

其中P為保護基諸如苯甲醯基或苄基，R^3””’為乙基或環丙基，X為離去基諸如鹵素、甲烷磺酸根、或三氟甲烷磺酸根，及其它符號係與如上(1)之定義相同。

通用程序E為經由多個步驟從化合物D-1製備化合物E-4之方法。化合物E-4可根據通用程序A中描述之方法而從化合物E-2製備。

步驟1

化合物E-1可藉將化合物D-1的端末醇轉化成離去基製備。此反應可藉 熟諳技藝人士已知方法進行。化合物E-1可於下述條件下獲得，合宜鹵化條件諸如使用SOX₂、POX₃(X=Cl或Br)；或Appel反應條件諸如三苯基膦與CX₄(X=Cl或Br)或碘。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括二氯甲烷、四氫呋喃、甲苯、及其混合溶劑。反應溫度較佳地為0℃至100℃。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

步驟2

化合物E-2可藉將化合物D-1的端末醇轉化成離去基製備。此反應可藉熟諳技藝人士已知方法進行。化合物E-1可於合宜鹵化條件諸如使用SOX₂、POX₃(X=C1或Br)；或Appel反應條件諸如三苯基膦與CX₄(X=Cl或Br)或碘獲得。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括二氯甲烷、四氫呋喃、甲苯、及其混合溶劑。反應溫度較佳地為0℃至100℃。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

步驟3

化合物E-2可利用化合物E-1的消去反應製備。此反應可藉熟諳技藝人士已知方法進行。化合物E-2可使用適當鹼獲得，例如，第三-丁氧化鈉或鉀、三乙基胺、二異丙基乙基胺、DBU、或吡啶。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括二氯甲烷、四氫呋喃、甲苯、及其混合溶劑。反應溫度較佳地為0℃至60℃。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

步驟4

當R^3’””為乙基時，化合物E-3可藉化合物E-2之氫化獲得。氫化可使用合宜催化劑，諸如鈀/碳於氫氣氛下進行。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制， 只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括四氫呋喃、甲醇、乙醇、水、及其混合溶劑。反應溫度通常為室溫至80℃，及較佳地為室溫至60℃。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

當R^3’””為環丙基時，化合物E-3可藉化合物C-4之環丙烷化獲得。此類型反應可使用適當試劑諸如重氮甲烷，有或無合宜催化劑，或席夢斯-史密斯反應條件諸如二碘甲烷與二乙基鋅進行。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括二氯甲烷、乙醚、甲苯、苯、及其混合溶劑。反應溫度通常為-30℃至室溫。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

通用程序F

其中P為保護基諸如苯甲醯基或苄基，R^3”””為經以氟取代之烷基或烷基氧基，及其它符號係與如上(1)之定義相同。

通用程序F為經由多個步驟從化合物E-2製備化合物F-3之方法。化合物F-3可根據通用程序A中描述之方法而從化合物F-2製備。

步驟1

化合物F-1可藉化合物F-3之臭氧分解，隨後接著所得醛之還原製備。此反應可藉熟諳技藝人士已知之方法進行。臭氧分解可於用於還原後續處理的氮氣氛下，使用適當試劑諸如三苯基膦、吡啶、二甲基硫化物、及三甲基胺，於臭氧氣氛下，於合宜溶劑諸如二氯甲烷、甲醇、及其混合溶劑中進行。臭氧化物之生成溫度較佳地為-78℃，然後讓溫度溫熱至室溫用於還原後續處理。反應時間並無特殊限制，及通常為30分鐘至5小時，較佳地為30分鐘至2小時。所得醛之還原可於單一容器內，使用適當還原劑諸如硼氫化鈉或氫化鋁鋰進行。反應溫度較佳地為0℃至室溫。反應時間並無特殊限制，及通常為30分鐘至5小時，較佳地為30分鐘至2小時。

步驟2

當R³”””為CF₃、CHF₂或CH₂F時，化合物F-2可藉二步驟順序獲得：化合物F-1氧化成醛或羧酸，隨後接著氟化；或化合物F-1之直接氟化。此反應可藉熟諳技藝人士已知方法進行。舉例言之，化合物F-1可於適當氧化條件下，諸如TEMPO、Dess-Martin或Swern氧化條件下氧化成對應醛。對應羧酸可藉所得醛之氧化獲得，或使用適當條件諸如Pinnick、TEMPO或Jones氧化，直接氧化化合物F-1獲得。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。反應溫度通常為-78℃至室溫。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。氟化反應可使用適當試劑諸如DAST、Deoxofluor、或四氟化硫進行。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括二氯甲烷、四氫呋喃、1,4-二氧雜環己烷、1,2-二甲氧基乙烷、乙醚、甲苯、苯、及其混合溶劑。 反應溫度較佳地為-78℃至50℃。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

當R³”””為烷基氧基時，化合物F-2可利用化合物F-1之端末醇的烷基化獲得。此反應可使用適當鹼諸如氫化鈉，與對應親電子物諸如烷基鹵、甲烷磺酸酯、或三氟甲烷磺酸酯進行。此步驟中使用的溶劑並無特殊限制，只要其不干擾反應即可。溶劑之實例包括丙酮、乙腈、四氫呋喃、DMF、DMA、DMSO、甲苯、及其混合溶劑。反應溫度較佳地為0℃至100℃。反應時間並無特殊限制，及通常為5分鐘至24小時，較佳地為30分鐘至24小時。

本發明之化合物具有BACE1抑制活性，及可有效地用於因類澱粉β蛋白的產生、分泌及/或沈積所誘發的疾病之治療及/或預防、症狀的改善、與疾病之進展的預防，該等疾病諸如阿茲海默氏症、阿茲海默失智症、阿茲海默型老年失智症、輕度認知障礙(MCI)、早期阿茲海默氏症(例如，因阿茲海默氏症所致之MCI)、唐氏症候群、記憶障礙、普利昂病(庫賈氏症)、荷蘭型帶有類澱粉蛋白變性病之遺傳性腦出血、腦部類澱粉蛋白血管病、其它型退行性失智症、混合型失智症諸如阿茲海默氏症與血管型失智症並存、帶有帕金森氏症的失智症、帶有進行性核上麻痺的失智症、帶有皮質基底核退化症的失智症、帶有瀰漫性路易小體病的阿茲海默氏症、年齡相關性黃斑部退化、帕金森氏症、類澱粉蛋白血管病或其類。

再者，本發明之化合物有效地用於預防有阿茲海默失智症風險的無症狀病人的進展(臨床前期阿茲海默氏症)。

「有阿茲海默失智症風險的無症狀病人」包括認知上及功能上正常的個體，但具有阿茲海默氏症之潛在極早期病癥或典型年齡相關的變化(例如，MRI呈現輕度白質強度過高)，及/或如由低腦脊髓液Aβ_1-42濃度驗證，具有類澱粉蛋白沈積證據。舉例言之，「有阿茲海默失智症風險的無症狀病人」 包括下述個體，其臨床失智分級量表(CDR)或臨床失智分級量表-日本版本(CDR-J)的分數為0，及/或其功能評估量表(FAST)的分期為第1期或第2期。

本發明之化合物不僅具有BACE1抑制活性，同時也具有作為藥物的效益。該化合物較佳地具有下列優異性質中之任一者或多者。

a)化合物對CYP酶諸如CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4具有弱抑制活性。

b)化合物顯示優異的藥動學模式，諸如高生物利用率或低廓清率。

c)化合物具有高代謝穩定性。

d)在本實施方式中描述的測量條件之濃度範圍中，化合物對CYP酶諸如CYP3A4並未顯示不可逆性抑制作用。

e)化合物並不顯示誘突變作用。

f)化合物對心血管系統的風險低。

g)化合物顯示高溶解度。

h)化合物顯示高腦分布。

i)化合物具有高口服吸收。

j)化合物具有長半生期。

k)化合物具有高蛋白質未結合比例。

l)於Ames試驗中，化合物為陰性。

m)化合物具有BACE1選擇性高於BACE2。

n)化合物對CYP酶具有弱的基於抑制的機轉。例如，化合物的反應性代謝產物對CYP酶具有弱抑制。

o)化合物極少產生反應性代謝產物。

p)化合物為弱P-gp酶受質。

因本發明之化合物對BACE1具有高抑制活性，及/或對其它酶例如， BACE2具有高選擇性，故其可作為具有減低副作用的藥物。又復，因化合物對減少細胞系統中之類澱粉β蛋白的產生具有高功效，特別地，對減少腦中之類澱粉β蛋白的產生具有高功效故，其可以是優異的藥物。此外，藉將化合物轉化成具有合宜立體化學的旋光性化合物，該化合物可以是對副作用具有較寬的安全邊際之藥物。

當投予本發明之醫藥組成物時，其可經口或經腸道外投予。經口投予之組成物可以尋常劑型投予，諸如口服固體配方(例如，錠劑、散劑、粒劑、膠囊劑、丸劑、膜劑等)、口服液體配方(例如，懸浮液劑、乳液劑、酏劑、糖漿劑、檸檬水劑、烈酒劑、芳香水劑、萃取液劑、煎劑、酊劑等)及其類可根據尋常方法製備及投藥。錠劑可以是糖衣錠、膜衣錠、腸衣錠、持續釋放錠、片劑、舌下錠、頰用錠、咀嚼錠、或口腔崩散錠。散劑及粒劑可以是乾糖漿。膠囊劑可以是軟膠囊、微型膠囊、或持續釋放膠囊。

經腸道外投予之組成物可以尋常非經腸道劑型投予，諸如經皮、皮下、靜脈、動脈、肌肉、腹內、穿黏膜、吸入、經鼻、經眼、內耳、或經陰道投予等。以經腸道外投予為例，較佳地可投予尋常使用的任何劑型，諸如注射劑、滴劑、外用製劑(例如，眼用滴劑、鼻用滴劑、耳用滴劑、噴霧劑、吸入劑、洗劑、輸注劑、擦劑、漱口劑、灌腸劑、軟膏劑、硬膏劑、膠漿劑、乳膏劑、貼片劑、糊劑、外用散劑、栓劑等)等。注射劑可以是乳液劑，其類型有O/W、W/O、O/W/O、W/O/W等。

由於具有高口服吸收性故，本發明之化合物較佳地係以口服劑型投予。

若有所需，經由混合適合用來與有效量之本發明之化合物配方的各種醫藥用添加劑，諸如賦形劑、黏結劑、崩散劑、及潤滑劑，可配方成醫藥組成物。再者，藉由妥適地改變有效量之本發明之化合物、配方、及/或各種醫藥添加劑，醫藥組成物能够用於小兒患者、老年患者、重症患者、或手術 病人。小兒用醫藥組成物較佳地投予12歲或15歲以下的患者。此外，小兒用醫藥組成物可投予出生後27日齡、出生後28日至23個月齡、2至11歲、12至16歲、或18歲的患者。老人用醫藥組成物較佳地投予65歲或以上的患者。

本發明之醫藥組成物的劑量須考慮患者年齡及體重、疾病類別及嚴重程度、投藥途徑等決定。成人尋常口服劑量係於0.05至100毫克/千克/日之範圍，及較佳地為0.1至10毫克/千克/日。用於經腸道外投藥，劑量依投藥途徑而有高度變化，尋常劑量係於0.005至10毫克/千克/日之範圍，及較佳地為0.01至1毫克/千克/日。劑量可每日投予一次或數次。

本發明之化合物可與用來治療阿茲海默氏症、阿茲海默失智症、或其類的其它藥物組合使用，諸如乙醯膽鹼酯酶抑制劑(後文稱作合併用藥)，用於加強化合物之活性，或用於減少化合物之投藥量等目的。於此種情況下，投予本發明之化合物及合併用藥的時間並無限制，而可同時或以規則間隔投予個體。再者，本發明之化合物及合併用藥可呈含有各自活性成分的兩種不同組成物投予，或呈含有兩者活性成分的單一組成物投予。

合併用藥的劑量可基於臨床上使用的劑量合宜地選用。再者，本發明之化合物與合併用藥之混合比可考慮投藥個體、投予途徑、目標疾病、症狀、組合等合宜地選用。舉例言之，當投藥個體為人體時，相對於1份重量比之本發明之化合物，可使用於0.01至100份重量比範圍之合併用藥。

合併用藥之實例有鹽酸東波齊(Donepezil hydrochloride)、塔克靈(Tacrine)、加蘭沙明(Galanthamine)、利瓦史堤明(Rivastigmine)、查那波齊(Zanapezil)、米曼亭(Memantine)、及文波西亭(Vinpocetine)。

以下實施例及試驗例以進一步細節例示本發明，但本發明並非受限於此等實施例。

於實施例中，各個縮寫之意義如下： Ac：乙醯基

Et：乙基

Bz：苯甲醯基

DCC：二環己基碳二亞胺

DIC：二異丙基碳二亞胺

iPr：異丙基

Me：甲基

Ph：苯基

t-Bu：第三-丁基

TBS：第三-丁基二甲基矽基

AIBN：偶氮貳異丁腈

ADDP：1,1’-(偶氮二羰基)二哌啶

AIBN：2,2’-偶氮貳(異丁腈)

(Boc)₂O：二碳酸二-第三-丁酯

BOMCl：苄基氯甲基醚氧基甲基氯

DAST：N,N-二乙基胺基硫三氟化物

DBU：1,8-二氮雜二環[5.4.0]-7-十一碳烯

DCM：二氯甲烷

DEAD：偶氮二羧酸二乙酯

DIAD：偶氮二羧酸二異丙酯

DIBAL：氫化二異丁基鋁

DIPEA：N,N-二異丙基乙基胺

DMA：N,N-二甲基乙醯胺

DMAP：4-二甲基胺基吡啶

DMF：N,N-二甲基甲醯胺

DMSO：二甲亞碸

EDC：1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺

HATU：O-(7-氮雜-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽

HOAt：1-羥基-7-氮雜-苯并三唑

HOBt：1-羥基-苯并三唑

LDA：二異丙基胺化鋰

LHMDS：貳(三甲基矽基)胺化鋰

mCPBA：間-氯過氧基苯甲酸

NCS：N-氯丁二醯亞胺

NMP：N-甲基吡咯啶酮

PPTS：對-甲苯磺酸吡啶鎓

PyBOP：1H-苯并三唑-1-基氧基-三(吡咯啶基)鏻六氟磷酸鹽

TEMPO：2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基

TFA：三氟乙酸

THF：四氫呋喃

THP：2-四氫哌喃基

¹H NMR光譜係記錄在Bruker Advance 400MHz分光計上，化學移位係相對於四甲基矽烷或殘餘溶劑峰報告(CDCl₃=7.26ppm，DMSO-d₆=2.50ppm)。

分析LC/MS(ESI陽性或陰性，滯留時間(RT))資料係在下列條件下記錄在島津(Shimadzu)UFLC或瓦特士(Waters)UPLC系統上：

方法A

管柱：XBridge(註冊商標)C18(5μm，i.d.4.6 x 50mm)(瓦特士)

流速：3mL/min

UV檢測波長：254nm

移動相：[A]為0.1%甲酸溶液，及[B]為0.1%甲酸於乙腈溶劑

梯度：進行10%至100%溶劑[B]之線性梯度3分鐘，及維持100%溶劑[B]1分鐘。

方法B

管柱：Shim-pack XR-ODS(2.2μm，i.d.50 x 3.0mm)(島津)

流速：1.6mL/min

管柱烤爐：50℃

UV檢測波長：254nm

移動相：[A]含0.1%甲酸之水性溶液；[B]含0.1%甲酸之乙腈溶液

梯度：10%至100%溶劑[B]之線性梯度3分鐘，及100%溶劑[B]1分鐘。

方法C

管柱：BEH C18(1.7μm，2.1 x 50mm)(瓦特士)

流速：0.8mL/min

UV檢測波長：254nm

移動相：[A]為10mM CH₃COONH₄於95% H₂O+5% CH₃CN，及[B]為乙腈

梯度：進行5%至95%溶劑[B]之線性梯度1.3分鐘，及維持95%溶劑[B]0.7分鐘。

方法D

管柱：HSS T3(1.8μm，2.1 x 100mm)(瓦特士)

流速：0.7mL/min

UV檢測波長：254nm

移動相：[A]為10mM CH₃COONH₄於95% H₂O+5% CH₃CN，及[B]為乙腈

梯度：進行0%至95%溶劑[B]之線性梯度2.1分鐘，及維持95%溶劑[B]0.5分鐘。

[實施例1]

化合物I-007之合成

步驟1：化合物7-2之合成

於100℃於3,6-二氫-2H-哌喃7-1(6.20g，73.7mmol)及Et₃N(10.2ml，73.7mmol)於甲苯(60ml)之溶液中加入(Z)-2-氯2-(羥基亞胺基)乙酸乙基酯(22.3g，147mmol)於甲苯(120ml)。於回流溫度攪拌4小時後，於反應混合物內加入Et₃N(10.2ml，73.7mmol)。於回流溫度攪拌6小時後，於反應混合物內加入(Z)-2-氯2-(羥基亞胺基)乙酸乙基酯(11.2g，73.7mmol)及Et₃N(10.2ml，73.7mmol)。於回流溫度攪拌5小時後，於反應混合物內加入(Z)-2-氯2-(羥基亞胺基)乙酸乙基酯(5.58g，36.9mmol)及Et₃N(5.1ml，36.9mmol)。於回流溫度攪拌1小時後，反應混合物冷卻至室溫。於混合物中加水，及水層以EtOAc萃取。有機層以水洗滌，以硫酸鈉脫水及過濾。濾液於真空濃縮。粗產物添加至矽膠管柱，及以己烷/EtOAc 0%至40%洗提。收集的洗提分經蒸發，獲得化合物7-2(5.10g，25.6mmol，35%)呈橙色油。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.38(3H,t,J=7.2Hz),2.07-2.12(2H,m),3.43(1H,dd,J=14.6,7.9Hz),3.55(1H,dd,J=11.8,7.9Hz),3.66(1H,dt,J=15.7,5.3Hz),3.77-3.82(1H,m),4.04(1H,dd,J=11.9,6.3Hz),4.32-4.38(2H,m),4.78-4.83(1H,m).

步驟2：化合物7-3之合成

於0℃於NaBH₄(3.26g，86.0mmol)於EtOH(140ml)之溶液中加入化合物7-2(14.3g，71.9mmol)於EtOH(140mL)之溶液。反應混合物於40℃攪拌3小時，及於0℃以AcOH處理。反應混合物於真空濃縮。粗產物添加至矽膠管柱，及以己烷/EtOAc 50%至70%洗提。收集的洗提分經蒸發，獲得化合物7-3(7.24g，46.1mmol，64%)呈無色油。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.88-2.08(2H,m),3.25(1H,q,J=6.9Hz),3.64-3.76(3H,m),3.94(1H,dd,J=12.0,6.0Hz),4.44-4.49(2H,m),4.67-4.70 (1H,m).

步驟3：化合物7-4之合成

於-78℃於化合物7-3(7.24g,46.1mmol)於CH₂Cl₂(109ml)之溶液中加入90% DAST(13.5ml，92.0mmol)。反應混合物於室溫攪拌2.5小時，及於0℃以碳酸鉀水溶液處理。混合物以氯仿萃取及以硫酸鈉脫水，過濾及濃縮。粗產物添加至矽膠管柱，及以己烷/EtOAc 20%至40%洗提。收集的洗提分經蒸發，獲得化合物7-4(4.39g，27.6mmol，60%)呈黃色油。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.91-2.02(1H,m),2.02-2.12(1H,m),3.29-3.31(1H,m),3.62(1H,dd,J=12.2,7.0Hz),3.71(2H,dd,J=7.0,4.5Hz),3.95(1H,dd,J=12.2,6.0Hz),4.70-4.74(1H,m),5.12-5.23(2H,m).

步驟4：化合物7-5之合成

於-78℃於1-溴-2-氟苯(4.39g，27.6mmol)於甲苯(176mL)及THF(44mL)之溶液中加入n-BuLi(1.64M於正-己烷，50.5mL，83.0mmol)，及反應混合物於同溫攪拌5分鐘。於-78℃於反應混合物中加入BF₃-OEt₂(4.2ml，33.1mmol)及化合物7-4(4.39g，27.6mmol)於甲苯(97mL)之溶液，及反應混合物於同溫攪拌10分鐘。於反應混合物中加入氯化銨水溶液，及水層以乙酸乙酯萃取。有機層以水洗滌及於真空濃縮。粗產物添加至矽膠管柱，及以己烷/EtOAc 10%至20%洗提。收集的洗提分經蒸發，獲得化合物7-5(4.91g，19.2mmol，70%)呈黃色油。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.91-1.85(2H,m),2.89-2.95(1H,m),3.60-3.66(1H,m),3.69-3.74(1H,m),3.76-3.82(1H,m),4.01-4.04(1H,m),4.08-4.13(2H,m),4.54(1H,dd,J=47.9,10.2Hz),5.04(1H,dd,J=47.2,10.2Hz),6.46(1H,br s),7.03-7.09(1H,m),7.19-7.22(1H,m),7.28-7.34(1H,m),7.92-7.96(1H,m).

步驟5：化合物7-6之合成

於室溫於化合物7-5(4.91g，19.2mmol)於AcOH(49ml)之溶液中添加鋅(12.6g,192mmol)。於60℃攪拌1小時後，反應混合物冷卻至室溫，及通過矽藻土(Celite)(註冊商標)墊過濾。於濾液中添加碳酸鉀水溶液。混合物通過Celite(註冊商標)墊過濾，及濾液以乙酸乙酯萃取。有機層以水洗滌及於真空濃縮。粗產物添加至矽膠管柱，及以己烷/EtOAc 50%洗提。收集的洗提分經蒸發，獲得化合物7-6(3.80g，14.8mmol，77%)呈無色油。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.51-1.55(1H,m),1.61-1.69(1H,m),2.38-2.43(1H,m),3.57(1H,br s),3.67(1H,dd,J=11.0,5.1Hz),3.81-3.87(1H,m),3.94(1H,t,J=11.2Hz),4.02-4.07(1H,m),4.45(1H,dd,J=47.7,9.3Hz),4.97(1H,ddd,J=48.1,9.3,3.7Hz),7.08(1H,dd,J=12.4,8.2Hz),7.22-7.24(1H,m),7.33-7.37(1H,m),7.62-7.63(1H,m).

步驟6：化合物7-7之合成

於0℃於化合物7-6(3.80g，14.8mmol)於CH₂Cl₂(38ml)之溶液中加入異硫氰酸苯甲醯(2.18ml，16.2mmol)。於室溫攪拌19小時後，於同溫於反應混合物中添加EDC-HCl(5.66g，29.5mmol)。於40℃攪拌3小時後，反應混合物於真空濃縮。粗產物添加至矽膠管柱，及以己烷/EtOAc 10%至40%洗提。收集的洗提分經蒸發，獲得化合物7-7(4.22g，10.9mmol，74%)呈白色固體。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.85-1.93(1H,m),2.04-2.08(1H,m),2.87-2.92(1H,m),3.74(1H,t,J=11.7Hz),3.80-3.84(2H,m),4.04-4.09(1H,m),4.37(1H,br s),4.70-4.98(2H,m),7.13-7.25(2H,m),7.38-7.46(4H,m),7.51-7.54(1H,m),8.28(2H,d,J=7.5Hz),12.14(1H,s).

步驟7：化合物7-8之合成

於室溫於化合物7-7(4.22g，10.9mmol)於MeOH(42ml)之溶液中加入DBU(1.81ml，12.0mmol)。於60℃攪拌7小時後，於反應混合物中添加2mol/L HCl及Et₂O。有機層以水回萃取。水層以K₂CO₃(pH=8)鹼化及以乙酸乙酯萃取。有機層以水洗滌及於真空濃縮。粗產物以氯仿濕磨，獲得化合物7-8(2.39g，8.47mmol，78%)呈黃色固體。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.71-1.85(2H,m),2.69-2.74(1H,m),3.58-3.65(2H,m),3.75(1H,dd,J=11.5,5.0Hz),4.00-4.04(2H,m),4.25(2H,s),4.54-4.74(2H,m),7.04(1H,dd,J=12.3,8.2Hz),7.14-7.17(1H,m),7.27-7.31(1H,m),7.43-7.47(1H,m).

步驟8：化合物7-9之合成

於-15℃於化合物7-8(3.00g，10.6mmol)於TFA(17.2ml)之溶液中加入硫酸(4.25ml，80mmol)。於同溫攪拌10分鐘後，於反應混合物內添加HNO₃(0.712ml，15.9mmol)。於同溫攪拌15分鐘後，反應混合物以碳酸鉀水溶液處理。水層以乙酸乙酯萃取。有機層以鹽水洗滌，以硫酸鈉脫水及過濾。濾液於真空濃縮，獲得化合物7-9呈淺黃色固體，其未經純化即用於次一步驟。

步驟9：化合物7-10之合成

於室溫於氫氣氛下攪拌化合物7-9及10% Pd-C(674mg，3.00mmol)於MeOH(101ml)之溶液。於同溫攪拌2小時後，混合物通過Celite(註冊商標)墊過濾。濾液於真空濃縮。粗產物藉超臨界流體層析術(SFC)(Chiralpak(註冊商標)IC；40%乙醇含0.1%二乙基胺)SFC純化獲得化合物7-10(1.35g,4.56mmol,44%)呈黃色固體。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.71-1.85(2H,m),2.68-2.73(1H,m),3.55-3.64(4H,m),3.75(1H,dd,J=11.5,5.1Hz),3.98-4.03(1H,m),4.07(1H,br s),4.25(2H,br s),4.49-4.72(2H,m),6.53-6.56(1H,m),6.74(1H,dd,J=6.7,3.0Hz),6.83(1H,dd,J=11.7,8.6Hz).

步驟10：化合物I-007之合成

於0℃於化合物7-10(31.6mg，0.106mmol)於MeOH(2ml)之溶液中加入5-(氟甲氧基)吡

-2-羧酸(18.3mg，0.106mmol)及2mol/L HCl(0.053ml，0.106mmol)。於同溫於反應混合物內添加EDC-HCl(9.86mg，0.0370mmol)。於室溫攪拌30分鐘後，以水性碳酸氫鈉溶液處理反應混合物。水層以乙酸乙酯萃取。有機層以水及鹽水洗滌，以硫酸鈉脫水及過濾。濾液於真空濃縮。粗產物以乙酸乙酯/己烷濕磨，獲得化合物I-007(32.1mg，0.071mmol，67%)呈黃色固體。

MS(方法B)：m/z=452[M+H]⁺

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.73-1.84(2H,m),2.74-2.78(1H,m),3.58-3.66(2H,m),3.75-3.79(1H,m),4.00-4.05(1H,m),4.09(1H,br s),4.32(2H,br s),4.63(2H,d,J=46.9Hz),6.15(2H,dd,J=51.1,7.5Hz),7.10(1H,dd,J=11.4,9.0Hz),7.49(1H,dd,J=6.9,2.6Hz),7.98-8.03(1H,m),8.29(1H,s),9.08(1H,s),9.50(1H,s).

[實施例2]

化合物I-008之合成

步驟1：化合物8-2之合成

於110℃於根據已知程序製備的化合物8-1(4.10g，36.6mmol)及異氰 酸苯酯(12.0ml，110mmol)於甲苯(80ml)之溶液內，加入2-(2-硝基乙氧基)四氫-2H-哌喃(9.62g，54.9mmol)及DIPEA(0.320ml，1.83mmol於甲苯(30ml)。於回流溫度攪拌2小時後，於反應混合物內加入DIPEA(0.639ml，3.66mmol)及異氰酸苯酯(12.0ml，110mmol)。於回流溫度攪拌4小時後，反應混合物冷卻至室溫。混合物經過濾，及濾液於真空濃縮。粗產物添加至矽膠管柱，及以己烷/EtOAc 10%至30%洗提。收集的洗提分經蒸發，獲得化合物8-2(8.05g，29.9mmol，82%)呈橙色油。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.41(3H,dd,J=6.3,1.5Hz),1.60-1.74(5H,m),1.78-1.86(2H,m),2.17-2.21(1H,m),3.53-3.57(1H,m),3.82-3.94(1H,m),4.25(1H,dd,J=12.5,6.9Hz),4.37-4.41(1H,m),4.50-4.59(2H,m),4.70-4.76(1H,m),5.07-5.11(1H,m).

步驟2：化合物8-3之合成

於室溫於化合物8-2(8.05g，29.9mmol)於EtOH(81ml)之溶液內加入PPTS(1.50g，5.98mmol)。於60℃攪拌2小時後，反應混合物於真空濃縮。粗產物添加至矽膠管柱，及以己烷/EtOAc 10%至80%洗提。收集的洗提分經蒸發，獲得化合物8-3(4.46g，29.9mmol，81%)呈褐色油。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.44(3H,d,J=6.3Hz),1.83-1.91(1H,m),2.21-2.25(1H,m),2.47-2.50(1H,m),4.41(1H,d,J=10.9Hz),4.51(2H,dd,J=13.9,6.7Hz),4.55-4.63(1H,m),5.06-5.10(1H,m).

步驟3：化合物8-4之合成

於-78℃於化合物8-3(4.93g，26.6mmol)於CH₂Cl₂(49ml)之溶液中加入90% DAST(5.86ml，39.9mmol)。反應混合物於室溫攪拌2小時，及以碳酸鉀水溶液處理。混合物以二氯甲烷萃取。有機層以硫酸鈉脫水及於真空濃縮。粗產物添加至矽膠管柱，及以己烷/EtOAc 10%至30%洗提。收集的 洗提分經蒸發，獲得化合物8-4(4.50g，24.1mmol，90%)呈黃色油。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.43(3H,d,J=6.4Hz),1.85-1.92(1H,m),2.25(1H,d,J=15.3Hz),4.39(1H,dd,J=11.0,3.0Hz),4.54-4.58(1H,m),5.16-5.27(3H,m).

步驟4：化合物8-5之合成

於-78℃於化合物8-4(4.50g，24.1mmol)於CH₂Cl₂(45ml)之溶液中加入DIBAL(1.03mol/L於己烷，24.5ml，10.9mmol)。於同溫攪拌20分鐘後，於反應混合物內加入羅謝爾鹽。於室溫攪拌3小時後，於混合物內加入2mol/L HCl(pH=4)。於混合物內加入氯化鈉，其然後以二氯甲烷及乙酸乙酯萃取。組合有機層以硫酸鈉脫水及過濾。濾液於真空濃縮。粗產物添加至矽膠管柱，及以己烷/EtOAc 30%至50%洗提。收集的洗提分經蒸發，獲得化合物8-5(2.65g，14.0mmol，58%)呈白色固體，呈非對映異構物混合物。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.30(3H,d,J=6.3Hz),1.76-1.84(1H,m),2.11-2.15(1H,m),3.06(1H,t,J=7.7Hz),3.14(1H,d,J=4.5Hz),3.83-3.91(1H,m),4.71-4.74(1H,m),4.77(1H,dd,J=7.1,4.7Hz),5.16-5.26(2H,m).

步驟5：化合物8-6之合成

於0℃於化合物8-5(2.55g，13.5mmol)及三乙基矽烷(10.8ml，67.5mmol)於DCM(41ml)及MeCN(41ml)之溶液中加入BF₃-OEt₂(8.56ml，67.5mmol)。於同溫攪拌40分鐘後，反應混合物以碳酸鈉水溶液處理。水層以二氯甲烷萃取，及有機層以硫酸鈉脫水及過濾。濾液於真空濃縮，獲得化合物8-6呈黃色油，其未經純化即用於次一步驟。

步驟6：化合物8-7之合成

於-78℃於1-溴-2-氟苯(6.11g，34.9mmol)於甲苯(128mL)及THF(16mL)之溶液中加入n-BuLi(1.64M於正-己烷，21.3mL，34.9mmol)，及反 應混合物於同溫攪拌5分鐘。於反應混合物中加入BF₃-OEt₂(1.77ml，14.0mmol)。於同溫攪拌10分鐘後，於-78℃於混合物中加入粗產物化合物8-6於THF(16mL)及甲苯(32ml)之溶液，及反應混合物於同溫攪拌15分鐘。於反應混合物中加入氯化銨水溶液，及水層以乙酸乙酯萃取。有機層以水洗滌及於真空濃縮。粗產物添加至矽膠管柱，及以己烷/EtOAc 0%至20%洗提。收集的洗提分經蒸發，獲得化合物8-7(3.19g，11.8mmol，85%)呈黃色油。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.18(3H,d,J=6.1Hz),1.45-1.54(1H,m),1.91-1.94(1H,m),2.89-2.95(1H,m),3.58-3.66(1H,m),3.68-3.76(1H,m),3.92-3.93(1H,m),4.15-4.21(1H,m),4.49(1H,dd,J=48.2,10.4Hz),5.03(1H,dd,J=46.9,10.4Hz),6.50(1H,br s),7.04-7.10(1H,m),7.19-7.23(1H,m),7.29-7.34(1H,m),7.90-7.94(1H,m).

步驟7：化合物8-8之合成

於室溫於化合物8-7(3.19g，11.9mmol)於AcOH(31.9ml)之溶液中添加鋅(7.74g,118mmol)。於60℃攪拌2小時後，反應混合物冷卻至室溫，及通過Celite(註冊商標)墊過濾。濾液以碳酸鉀水溶液處理，及混合物以乙酸乙酯萃取。有機層以水洗滌及於真空濃縮，獲得化合物8-8(3.07g)，其未經進一步純化即用於次一步驟。

步驟8：化合物8-9之合成

於0℃於粗產物化合物8-8(11.3g)於CH₂Cl₂(30.7ml)之溶液中加入異硫氰酸苯甲醯(1.67ml，12.5mmol)。於室溫攪拌14小時後，於反應混合物內添加EDC-HCl(4.34g，22.7mmol)。於40℃攪拌5小時後，反應混合物於真空濃縮。粗產物添加至矽膠管柱，及以氯仿/乙酸乙酯20%洗提。收集的洗提分經蒸發，獲得化合物8-9(3.73g，9.32mmol，82%)呈黃色固體。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.20(3H,d,J=6.3Hz),1.50(1H,td,J=10.0, 4.8Hz),2.10-2.14(1H,m),2.83-2.86(1H,m),3.80(1H,t,J=11.7Hz),3.86-3.94(1H,m),4.07(1H,dd,J=12.7,6.1Hz),4.36(1H,br s),4.70-4.82(1H,m),4.92(1H,dd,J=46.2,9.5Hz),7.16(1H,dd,J=12.3,8.3Hz),7.20-7.24(1H,m),7.38-7.46(4H,m),7.50-7.54(1H,m),8.27-8.29(2H,m),12.13(1H,br s).

步驟9：化合物8-10之合成

於室溫於化合物8-9(3.73g，9.32mmol)於MeOH(37ml)及THF(37ml)之溶液中加入肼水合物(4.53ml,93.0mmol)。於同溫攪拌14小時後，反應混合物經濃縮。所得殘餘物添加至胺基矽膠管柱，及以己烷/EtOAc 40%洗提。收集的洗提分經蒸發，獲得化合物8-10(2.30g，7.77mmol，83%)呈白色固體。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.16(3H,d,J=6.3Hz),1.37-1.44(1H,m),1.82-1.77(1H,m),2.64-2.68(1H,m),3.65-3.73(2H,m),4.00-4.04(2H,m),4.25(2H,br s),4.59-4.71(2H,m),7.04(1H,dd,J=12.3,8.0Hz),7.14-7.17(1H,m),7.29-7.31(1H,m),7.43-7.47(1H,m).

步驟10：化合物8-11之合成

於-17℃於化合物8-10(2.30g，7.76mmol)於TFA(12.6ml)之溶液中加入硫酸(3.10ml，58.2mmol)。於同溫攪拌10分鐘後，於反應混合物內添加硝酸(0.520ml，11.6mmol)。於同溫攪拌20分鐘後，反應混合物以碳酸鉀水溶液處理，及水層以乙酸乙酯萃取。有機層以水洗滌及於真空濃縮，獲得化合物8-11(2.83g)，其未經進一步純化即用於次一步驟。

步驟11：化合物8-12之合成

化合物8-11(2.83g，7.76mmol)及10% Pd-C(566mg)於MeOH(85ml)之溶液於室溫於氫氣氛下攪拌。於室溫攪拌2小時後，混合物通過Celite(註 冊商標)墊過濾。濾液於真空濃縮。殘餘物以乙酸乙酯濕磨，然後所得固體經收集，以乙酸乙酯洗滌，及於減壓下脫水，獲得化合物8-12(1.50g，4.83mmol，62%)呈白色固體。濾液經濃縮，及然後殘餘物藉管柱層析術純化(矽膠AcOEt/MeOH=10/1)，獲得化合物8-12(374mg，1.20mmol，16%)呈白色固體。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.16(3H,d,J=6.3Hz),1.38-1.45(1H,m),1.78-1.83(1H,m),2.62-2.67(1H,m),3.58(2H,br s),3.62-3.73(2H,m),3.99-4.03(1H,m),4.07(1H,br s),4.23(2H,br s),4.51-4.71(2H,m),6.52-6.56(1H,m),6.74(1H,dd,J=6.7,2.9Hz),6.83(1H,dd,J=11.8,8.5Hz).

步驟12：化合物I-008之合成

於0℃於化合物8-12(50.1mg，0.161mmol)於MeOH(3.0ml)之溶液中加入5-(氟甲氧基)吡

-2-羧酸(27.7mg，0.161mmol)及2mol/L HCl(0.080ml，0.177mmol)。於同溫於反應混合物內添加EDC-HCl(33.9mg，0.177mmol)。於室溫攪拌30分鐘後，以碳酸氫鈉水溶液處理反應混合物。水層以乙酸乙酯萃取。有機層以水及鹽水洗滌，以硫酸鈉脫水及於真空濃縮。所得殘餘物添加至胺基矽膠管柱，及以己烷/EtOAc 50%至100%洗提。收集的洗提分經蒸發。殘餘物以乙酸乙酯/己烷濕磨，獲得化合物8-13(45.5mg，0.098mmol，61%)呈白色固體。

MS(方法B)：m/z=466[M+H]⁺

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.17(3H,d,J=6.0Hz),1.40-1.47(1H,m),1.80-1.84(1H,m),2.68-2.73(1H,m),3.65-3.74(2H,m),4.01-4.08(2H,m),4.32(2H,br s),4.64(2H,d,J=47.2Hz),6.07-6.23(2H,m),7.10(1H,dd,J=11.4,8.7Hz),7.48(1H,dd,J=6.8,2.8Hz),7.98-8.02(1H,m),8.29(1H,d,J=1.3Hz),9.08(1H,d,J=1.3Hz),9.51(1H,br s).

[實施例3]

化合物I-009之合成

步驟1：化合物9-5之合成

化合物9-5係以類似如上方案(實施例7，步驟1至步驟4)之方式自化合物9-1合成。

步驟2：化合物9-6之合成

於0℃於化合物9-5(8.85g，50.50mmol)及烯丙基三甲基矽烷(28.90g，253.0mmol)於CH₂Cl₂(177ml)與MeOH(177ml)之混合物之溶液中加入三氟化硼乙醚錯合物(32.0ml，253.0mmol)。混合物於室溫攪拌1小時後，及以飽和碳酸氫鈉水溶液處理。混合物以乙酸乙酯萃取，及有機層以硫酸鎂脫水及過濾。濾液於真空濃縮。粗產物添加至矽膠管柱，及以己烷/EtOAc 30%洗提。收集的洗提分經蒸發，獲得化合物9-6(6.43g，32.28mmol，64%)呈無色油。

¹H NMR(CDCl₃)δ：2.04-2.07(2H,m),2.25-2.32(1H,m),2.50(1H,d,J=16.2Hz),2.98(1H,dd,J=9.6,7.7Hz),3.29-3.34(1H,m),3.59(1H,td,J=11.1,4.6Hz),3.91-3.95(1H,m),4.57-4.60(1H,m),5.05-5.26(4H,m),5.82-5.92(1H,m).

步驟3：化合物9-7之合成

化合物9-7係以類似如上方案(實施例1，步驟7)之方式製備(產率：63%)。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.78-1.89(2H,m),2.33-2.41(1H,m),2.58-2.67(2H,m),3.53(1H,td,J=11.0,5.1Hz),3.77(2H,ddd,J=11.0,7.4,5.1Hz),3.95(1H,dd,J=7.4,3.4Hz),4.48(1H,dd,J=48.9,11.0Hz),5.08-5.22(3H,m),5.93-6.03(1H,m),6.50(1H,d,J=3.1Hz),7.04-7.07(1H,m),7.21(1H,td,J=7.9,1.8Hz),7.29-7.35(1H,m),7.94(1H,td,J=7.9,1.8Hz).

步驟4：化合物9-8之合成

化合物9-8係以類似如上方案(實施例1，步驟8)之方式製備(產率：粗產物)。

MS(方法B)：m/z=298[M+H]⁺.

步驟5：化合物9-9之合成

化合物9-9係以類似如上方案(實施例1，步驟9)之方式製備(產率：70%)。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.76-1.84(1H,m),2.01-2.06(1H,m),2.38-2.45(1H,m),2.59(2H,dt,J=13.6,5.5Hz),3.84(3H,tt,J=13.6,5.5Hz),4.41(1H,d,J=2.8Hz),4.90-5.00(2H,m),5.17-5.20(2H,m),5.92-6.03(1H,m),7.12-7.24(2H,m),7.38-7.46(4H,m),7.53-7.58(1H,m),8.28(2H,t,J=4.1Hz),12.10(1H,s).

步驟6：化合物9-10之合成

於-78℃臭氧通氣入化合物9-9(6.40g，15.01mmol)於CH₂Cl₂(224ml)之溶液中。經1.5小時後，氮氣通氣入此溶液中歷時1.5小時，同時反應溫度徐緩升高至室溫。添加PPh₃(9.05g，34.50mmol)，及所得混合物於室溫攪拌。經1小時後，於0℃加入MeOH(64ml)及NaBH₄(1.70g，45.0mmol)。於室溫攪拌後，反應混合物藉飽和氯化銨水溶液淬熄。混合物以乙酸乙酯萃取，及有機層以硫酸鎂脫水及過濾。濾液於真空濃縮。粗產物添加至矽膠管柱，及以己烷/EtOAc 70%洗提。收集的洗提分經蒸發，獲得化合物9-10(4.84g，11.24mmol，75%)呈白色固體。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.78-1.97(2H,m),2.08(1H,t,J=1.8Hz),2.41-2.44(1H,m),2.59(1H,dd,J=10.3,2.4Hz),3.84-3.89(5H,m),4.04(1H,t,J=10.3Hz),4.41(1H,d,J=2.4Hz),4.91(2H,d,J=46.7Hz),7.17(1H,dd,J=12.4,8.0Hz),7.21-7.25(1H,m),7.38-7.54(5H,m),8.28(2H,t,J=4.3Hz),12.09(1H,s).

步驟7：化合物9-11之合成

於0℃於化合物9-10(4.41g，10.25mmol)於THF(88ml)之溶液中加入PPh₃(5.37g，20.49mmol)、咪唑(1.40g，20.49mmol)及碘(5.20g，20.49mmol)。混合物於同溫攪拌1小時及以2%亞硫酸氫鈉水溶液處理。混合物以乙酸乙酯萃取，及有機層以硫酸鎂脫水及過濾。濾液於真空濃縮。粗產物添加至矽膠管柱，及以氯仿/EtOAc 20%洗提。收集的洗提分經蒸發，獲得化合物9-11(5.22g，9.66mmol，94%)呈白色固體。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.75-1.87(1H,m),2.07-2.16(2H,m),2.23-2.31(1H,m),2.52(1H,d,J=8.0Hz),3.35-3.39(2H,m),3.78-3.84(3H,m),4.40(1H,d,J=2.8Hz),4.90(2H,d,J=46.7Hz),7.16(1H,dd,J=12.5,8.0Hz),7.23(1H,t,J=8.0Hz),7.42-7.51(5H,m),8.29(2H,d,J=7.3Hz),12.13(1H,s).

步驟8：化合物9-12之合成

化合物9-12係以類似如上方案(實施例1，步驟11)之方式製備(產率：98%)。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.84-1.88(1H,m),2.05-2.07(1H,m),2.70(1H,dd,J=10.3,1.8Hz),3.85-3.97(2H,m),4.13-4.18(1H,m),4.43(1H,d,J=2.8Hz),4.70-4.97(2H,m),5.54(2H,dd,J=38.6,13.7Hz),6.00-6.09(1H,m),7.16-7.21(2H,m),7.38-7.47(4H,m),7.53(1H,tt,J=7.3,1.7Hz),8.29-8.30(2H,m),12.13(1H,s).

步驟9：化合物9-13之合成

化合物9-13係以類似如上方案(實施例2，步驟1)之方式製備。因產物未經純化即用於次一步驟，故未測定產率。

MS(方法B)：m/z=415[M+H]⁺.

步驟10：化合物9-14之合成

化合物9-14係以類似如上方案(實施例1，步驟15)之方式製備。因產物未經純化即用於次一步驟，故未測定產率。

MS(方法B)：m/z=311[M+H]⁺.

步驟11：化合物9-15之合成

化合物9-15係以類似如上方案(實施例1，步驟16)之方式製備。因產物未經純化即用於次一步驟，故未測定產率。

MS(方法B)：m/z=356[M+H]⁺.

步驟12：化合物9-16之合成

化合物9-16係以類似如上方案(實施例1，步驟17)之方式製備。粗產物藉超臨界流體層析術(SFC)(Chiralpak(註冊商標)IC；40%乙醇含0.1%二乙基胺)純化獲得化合物9-16(產率：36%，4步驟)。

MS(方法B)：m/z=326[M+H]⁺.

步驟13：化合物I-009之合成

化合物I-009係以類似如上方案(實施例1，步驟18)之方式製備(產率：77%)。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.06(3H,t,J=7.2Hz),1.56-1.89(4H,m),2.41(1H,d,J=10.2Hz),3.61-3.71(3H,m),4.12(1H,s),4.39(2H,br s),4.66-4.78(2H,m),6.15(2H,dd,J=51.1,9.3Hz),7.09(1H,dd,J=10.9,9.3Hz),7.46(1H,dd,J=6.8,2.3Hz),7.99-8.00(1H,m),8.27(1H,s),9.06(1H,s),9.50(1H,s).

[實施例4]

化合物I-010之合成

步驟1：化合物10-2之合成

化合物10-2係以類似如上方案(實施例7，步驟5)之方式製備(產率：77%)。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.79-1.84(1H,m),2.05-2.08(1H,m),2.23-2.25(1H,m),2.87(1H,dd,J=10.3,2.5Hz),3.75-3.99(5H,m),4.45(1H,d,J=2.5Hz),4.93(2H,dd,J=46.7,2.5Hz),7.16(1H,dd,J=12.3,8.0Hz),7.23(1H,t,J=8.0Hz),7.38-7.55(4H,m),7.67(1H,dt,J=12.3,4.3Hz),8.27(2H,t,J=4.3Hz),12.10(1H,s).

步驟2：化合物10-3之合成

化合物10-3係以類似如上方案(實施例3，步驟1)之方式製備(產率：32%)。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.85-1.88(1H,m),2.04-2.06(1H,m),2.97(1H,dd,J=10.4,1.9Hz),3.90-3.97(3H,m),4.48(1H,s),4.78-4.98(4H,m),7.17(1H,dd,J=11.9,8.2Hz),7.22-7.24(1H,m),7.41-7.45(4H,m),7.53(1H,t,J=7.3Hz),8.27(2H,d,J=7.3Hz),12.10(1H,s).

步驟3：化合物10-4之合成

化合物10-4係以類似如上方案(實施例1，步驟15)之方式製備。因產物未經純化即用於次一步驟，故未測定產率。

MS(方法B)：m/z=315[M+H]⁺.

步驟4：化合物10-5之合成

化合物10-5係以類似如上方案(實施例1，步驟16)之方式製備。因產物未經純化即用於次一步驟，故未測定產率。

MS(方法B)：m/z=360[M+H]⁺.

步驟5：化合物10-6之合成

化合物10-6係以類似如上方案(實施例1，步驟17)之方式製備。粗產物藉超臨界流體層析術(SFC)(Chiralpak(註冊商標)IC；40%異丙醇含0.1%二乙基胺)純化獲得化合物10-6(產率：50%)。

MS(方法B)：m/z=330[M+H]⁺.

步驟6：化合物I-010之合成

化合物10-7係以類似如上方案(實施例1，步驟18)之方式製備(產率：71%)。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.73-1.84(2H,m),2.75-2.77(1H,m),3.75-3.87 (3H,m),4.19(1H,d,J=2.5Hz),4.41(2H,s),4.54-4.92(4H,m),6.15(2H,dd,J=51.1,8.3Hz),7.10(1H,dd,J=11.3,8.8Hz),7.54(1H,dd,J=6.8,2.8Hz),7.95(1H,dt,J=8.8,2.8Hz),8.28(1H,d,J=1.3Hz),9.07(1H,d,J=1.3Hz),9.50(1H,s).

[實施例5]

化合物I-011之合成

步驟1：化合物11-2之合成

化合物11-2係以類似如上方案(實施例1，步驟13)之方式製備(產率： 88%)。

MS(methodB)：m/z=527[M+H]⁺.

步驟2：化合物11-3之合成

化合物11-3係以類似如上方案(實施例1，步驟14)之方式製備(產率：75%)。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.47(3H,d,J=5.8Hz),1.77-1.85(1H,m),2.02-2.06(1H,m),2.46(1H,d,J=9.9Hz),3.78-3.91(3H,m),4.39(1H,d,J=2.5Hz),4.84-4.99(2H,m),7.16(1H,dd,J=12.3,8.2Hz),7.23(1H,td,J=7.6,1.0Hz),7.38-7.46(4H,m),7.50-7.54(1H,m),8.28(2H,t,J=4.3Hz),12.10(1H,s).

步驟3：化合物11-4之合成

化合物11-4係以類似如上方案(實施例1，步驟15)之方式製備。因產物未經純化即用於次一步驟，故未測定產率。

MS(methodB)：m/z=297[M+H]⁺.

步驟4：化合物11-5之合成

化合物11-5係以類似如上方案(實施例1，步驟16)之方式製備。因產物未經純化即用於次一步驟，故未測定產率。

MS(methodB)：m/z=342[M+H]⁺.

步驟5：化合物11-6之合成

化合物11-6係以類似如上方案(實施例1，步驟17)之方式製備。粗產物藉超臨界流體層析術(SFC)(Chiralpak(註冊商標)IC；40%乙醇含0.1%二乙基胺)純化獲得化合物11-6(產率：32%，3步驟)。

MS(方法B)：m/z=312[M+H]⁺.

步驟6：化合物I-011之合成

化合物11-8係以類似如上方案(實施例1，步驟18)之方式製備(產率：71%)。

¹H NMR(CDCl₃)δ：1.45(3H,d,J=5.8Hz),1.73(2H,s),2.32(1H,d,J=9.9Hz),3.64-3.79(3H,m),4.11(1H,s),4.59-4.76(4H,m),6.15(2H,dd,J=51.1,9.2Hz),7.09(1H,dd,J=10.9,9.4Hz),7.50(1H,t,J=3.3Hz),7.98-7.99(1H,m),8.25(1H,s),9.05(1H,s),9.51(1H,s).

下列化合物係以類似如上方式製備。於表中，tR表示LC/MS滯留時間(分鐘)。

本發明之化合物之試驗例敘述如下。

藥理實施例

本發明提供之化合物為β位點APP裂解酶1(BACE1)抑制劑。一種天冬酸蛋白酶BACE1的抑制，咸信係與用於治療阿茲海默氏症(AD)相關。來自於類澱粉β前驅蛋白(APP)的類澱粉β蛋白(Aβ)的產生與積聚，相信在AD的發症與進展上扮演要角。分別地藉BACE1及γ-分泌酶，經由在Aβ域的N端及C端的循序裂解，可自類澱粉β前驅蛋白(APP)產生Aβ。

由於相較於BACE2，本發明化合物選擇性地結合至BACE1；及相較於BACE2，其抑制BACE1酶催化活性故，預期相較於BACE2，本發明之化合 物選擇性地在BACE1發揮其功效。此種抑制劑之表現係使用，適合用於識別此等化合物的生物化學競爭性放射性配體結合分析試驗、以生物化學螢光共振能量轉移(FRET)為基礎的分析試驗、及細胞性αLisa分析試驗(描述如下)測試。

(試驗例1：BACE1及BACE2生物化學競爭性放射性配體結合分析試驗)

為了探討BACE1相較於BACE2酶選擇性，於競爭性放射性配體結合分析試驗中，亦即，於與氚化的非選擇性BACE1/BACE2抑制劑的競爭中，測定對個別已純化酶的結合親和力(Ki)。

簡言之，於試管中，關注化合物與放射性配體及含BACE1或含BACE2的HEK 293衍生膜組合。競爭性結合反應係於pH 6.2進行，及於室溫孵育直到達到平衡為止。其後，藉使用布蘭德(Brandell)96收穫機，將自由態放射性配體與結合態放射性配體分開。過濾器以洗滌緩衝液洗四次，及過濾板被穿孔入閃爍計數小瓶內。添加末金(Ultima Gold)閃爍計數混合液及樣本經振搖。次日，小瓶於崔卡(Tricarb)閃爍計數器中計數，以獲得結合態放射性配體的每分鐘崩散(dpm)。

計算%CTL=(樣本/HC)*100，HC為高調控，亦即放射性配體的全部結合，使其能經由試驗化合物之不同劑量的資料點而匹配曲線。經計算得pIC₅₀或IC₅₀，及可藉式K_i=IC₅₀/(1+([RL]/K_d))而被轉換成K_i，[RL]為所使用的放射性配體濃度，及K_d為經測定的放射性配體-膜複體的解離常數。

(試驗例2)

(1)BACE1生物化學以FRET為基礎的分析試驗

此分析試驗為以螢光共振能量轉移(FRET)為基礎的分析試驗。此分析試驗的受質為APP衍生的13胺基酸肽，其含有類澱粉前驅蛋白(APP)β位點分泌酶裂解位點的「瑞典」Lys-Met/Asn-Leu突變。此受質也含有兩個螢光 基團：(7-甲氧基香豆素-4-基)乙酸(Mca)為螢光供體，激發波長於320nm及發射於405nm；及2,4-二硝基酚(Dnp)為專有淬滅劑受體。該等二基團間之距離業經選擇，因此當光激發時，經由共振能量轉移，供體螢光能量顯著地被受體淬滅。當藉BACE1裂解時，螢光基團Mca與淬滅基團Dnp分開，恢復供體的完整螢光產量。螢光的增加係與蛋白質分解速率呈線性相關。

簡言之，於384孔格式中，終濃度0.04微克/毫升的重組BACE1蛋白質，係於無或有化合物之存在下，與20μM酶受質於孵育緩衝液(終濃度：33.3mM檸檬酸鹽緩衝液pH 5.0，0.033% PEG，3% DMSO)中，於室溫孵育450分鐘。其次，於T=0’-120’及T=450’(激光於320nm及發光於405nm)藉螢光測量直接量測蛋白質分解量。結果係以RFU(相對螢光單位)表示，作為T450與Tx(取決於反應速度T在0分鐘至120分鐘間選取)間之差。

最佳匹配曲線係藉最小平方和方法，匹配至% Controlmin相較於化合物濃度之作圖。由此，可獲得IC₅₀值(導致50%活性抑制的抑制濃度)。

LC=低調控值之中位數=低調控：無酶反應

HC=高調控值之中位數=高調控：與酶反應

%功效=100-[(樣本-LC)/(HC-LC)*100]

%調控=(樣本/HC)*100

%Controlmin=(樣本-LC)/(HC-LC)*100

預期本發明之化合物具有BACE1抑制活性，該化合物能抑制BACE1受體即充足。

特定言之，藉如上顯示之方案，IC₅₀較佳地為5000nM或以下，更佳地為1000nM或以下，又更佳地為100nM或以下。

(2)BACE2生物化學以FRET為基礎的分析試驗

此分析試驗為以螢光共振能量轉移(FRET)為基礎的分析試驗。用於此分析試驗的受質含有類澱粉前驅蛋白(APP)β-分泌酶裂解位點的「瑞典」Lys-Met/Asn-Leu突變。此受質也含有兩個螢光基團：(7-甲氧基香豆素-4-基)乙酸(Mca)為螢光供體，激發波長於320nm及發射於405nm；及2,4-二硝基酚(Dnp)為專有淬滅劑受體。該等二基團間之距離業經選擇，因此當光激發時，經由共振能量轉移，供體螢光能量顯著地被受體淬滅。當藉β-分泌酶裂解時，螢光基團Mca與淬滅基團Dnp分開，恢復供體的完整螢光產量。螢光的增加係與蛋白質分解速率呈線性相關。

簡言之，於384孔格式中，終濃度0.4微克/毫升的重組BACE2蛋白質，係於無或有化合物之存在下，與10μM受質於孵育緩衝液(終濃度：33.3mM檸檬酸鹽緩衝液pH 5.0，0.033% PEG，2% DMSO)中，於室溫孵育450分鐘。其次，於T=0及T=450(激光於320nm及發光於405nm)藉螢光測量直接量測蛋白質分解量。結果係以RFU(相對螢光單位)表示，作為T450與T0間之差。

最佳匹配曲線係藉最小平方和方法，匹配至% Controlmin相較於化合物濃度之作圖。由此，可獲得IC₅₀值(導致50%活性抑制的抑制濃度)。

LC=低調控值之中位數=低調控：無酶反應

HC=高調控值之中位數=高調控：與酶反應

%功效=100-[(樣本-LC)/(HC-LC)*100]

%控制=(樣本/HC)*100

%Controlmin=(樣本-LC)/(HC-LC)*100

下列例示化合物大致上係如前述試驗，及具有如下活性：

(試驗例3-1：於大鼠對腦類澱粉β蛋白之降低效果)

本發明之化合物懸浮於0.5%甲基纖維素中，終濃度調整至2毫克/毫升，及此以10毫克/千克經口投予雄Crl：SD大鼠(7至9週齡)。於載媒劑對照組中，只投予0.5%甲基纖維素，及投予試驗係以每組3至8頭動物施行。投予後3小時分離出腦，分離腦半球，稱量其重量，腦半球於液態氮中快速冷凍，及貯存於-80℃直到萃取日為止。冷凍的腦半球存以冰冷卻下轉移到鐵氟龍(Teflon)(註冊商標)製造的均化器，加入4倍體積重量的萃取緩衝液(含有1% CHAPS({3-[(3-氯醯胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙烷磺酸酯})，20mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)，150mmol/L NaCl，完全(羅氏(Roche)蛋白酶抑制劑)，重複上下移動，及此經均化至溶解歷時2分鐘。懸浮液轉移到離心管，讓其於冰上放置3小時或以上，及其後，於100,000 x g，4℃離心歷時20分鐘。離心之後，上清液轉移到用於測定類澱粉β蛋白40的ELISA多孔板(產品編號294-62501，和光純藥工業(Wako Junyaku Kogyo))。根據所附的指示進 行ELISA測量。降低效果係呈比較各個試驗的載媒劑對照組的腦類澱粉β蛋白40濃度之比值計算。

(試驗例3-2：於小鼠對腦類澱粉β蛋白之降低效果)

本發明之化合物溶解於20%羥基-β-環糊精中，終濃度調整至2毫克/毫升，及此以1至10毫克/千克經口投予雄Crl：CD1(ICR)小鼠(6至8週齡)。於載媒劑對照組中，只投予20%羥基-β-環糊精，及投予試驗係以每組3至6頭動物施行。投予後1至6小時分離出腦，分離腦半球，稱量其重量，腦半球於液態氮中快速冷凍，及貯存於-80℃直到萃取日為止。

冷凍的腦半球轉移到均化管，其含有陶瓷珠粒於8倍體積重量之萃取緩衝液(含有0.4% DEA(二乙基胺)，50mmol/L NaCl，完全蛋白酶抑制劑(羅氏))，及於冰上孵育20分鐘。其後，均化係使用MP BIO FastPrep(註冊商標)-24含有溶解基體D 1.4mm陶瓷珠粒進行(以6米/秒歷時20秒)。然後，均化管自旋沈降1分鐘，上清液轉移到離心管，於221,000 x g，4℃離心歷時50分鐘。離心後，上清液轉移到，用於測量總類澱粉β蛋白的被覆以抗類澱粉β蛋白之N端的抗體之，Nunc Maxisorp(註冊商標)多孔板(奢莫費雪科學(Thermo Fisher Scientific))，及多孔板於4℃孵育隔夜。多孔板以TBS-T(含0.05% Triton X-100之Tris緩食鹽水)洗滌，及與HRP-接合的4G8溶解於含0.1%酪蛋白的PBS(pH 7.4)添加入多孔板內，及於4℃孵育1小時。以TBS-T洗滌之後，SuperSigna1 ELISA Pico Chemiluminescent Substrate(奢莫科學(Thermo Scientific))添加入多孔板內。然後，儘快地藉ARVO(註冊商標)MX 1420多重標籤計數器(Multilabel Counter)(鉑金埃爾默(Perkin Elmer))測量化學冷光計數。降低效果係呈比較各個試驗的載媒劑對照組的腦總類澱粉β蛋白濃度之比值計算。

(試驗例4-1：CYP3A4螢光MBI試驗)

CYP3A4螢光MBI試驗乃研究藉代謝反應提升化合物的CYP3A4抑制的試驗。7-苄基氧基三氟甲基香豆素(7-BFC)係藉CYP3A4酶(於大腸桿菌表達的酶)去苄基化，及產生7-羥基三氟甲基香豆素(7-HFC)作為螢光代謝產物。試驗係使用7-HFC製造反應作標記反應進行。

反應條件如下：受質，5.6μmol/L7-BFC；預反應時間，0或30分鐘；酶受質反應時間，15分鐘；反應溫度，25℃(室溫)；CYP3A4含量(於大腸桿菌表達)，於預反應時間62.5pmol/mL，於反應時間6.25pmol/mL(10倍稀釋)；本發明之化合物之濃度，0.625、1.25、2.5、5、10、20μmol/L(6個點)。

酶於K-Pi緩衝液(pH 7.4)及本發明之化合物溶液作為預反應溶液，係以預反應組成添加至96-孔板。部分預反應溶液轉移至另一片96-孔板，及藉受質於K-Pi緩衝液稀釋10倍。添加作為輔因子的NADPH，以便起始標記反應(未經預孵育)。經預定時間之標記反應之後，加入乙腈/0.5mol/L Tris(參羥基胺基甲烷)=4/1(v/v)溶液，以結束標記反應。另一方面，NADPH也添加至其餘預反應溶液，以便起始預反應(經預孵育)。經預定時間之預反應之後，部分轉移至另一片96-孔板，及藉受質於K-Pi緩衝液稀釋10倍，以便起始標記反應。經預定時間之標記反應之後，加入乙腈/0.5mol/L Tris(參羥基胺基甲烷)=4/1(v/v)溶液，以結束標記反應。作為代謝產物7-HFC之螢光值，係以螢光板判讀器(Ex=420nm，Em=535nm)於各個指數反應孔板中測量。

樣本添加DMSO至反應系統，而非添加本發明之化合物溶液，被採用作為對照(100%)，原因在於DMSO係被使用作為溶劑以溶解本發明之化合物。剩餘活性(%)係在呈溶液添加的本發明之化合物之各個濃度計算，及IC₅₀值係使用邏輯模型以濃度及抑制率藉反轉推定求出。當從未經預孵育之值扣 除經預孵育之IC₅₀值的差為5μM或以上時，此係定義為陽性(+)。當差為3μM或以下時，此係定義為陰性(-)。

(試驗例4-2：CYP3A4(MDZ)MBI試驗)

CYP3A4(MDZ)MBI試驗為研究化合物用於CYP3A4抑制的基於機轉之抑制(MBI)潛力試驗。CYP3A4抑制係使用咪達唑侖(midazolam)藉滙集人肝微粒體之1-羥基化反應作為標記反應加以評估。

反應條件如下：受質，10μmol/L MDZ；預反應時間，0或30分鐘；受質反應時間，2分鐘；反應溫度，37℃；滙集人肝微粒體的蛋白質含量，於預反應時間0.5mg/mL，於反應時間0.05pmg/mL(10倍稀釋)；本發明之化合物之濃度，1、5、10、20μmol/L(4個點)。

滙集人肝微粒體於K-Pi緩衝液(pH 7.4)及本發明之化合物溶液作為預反應溶液，係以預反應組成添加至96-孔板。部分預反應溶液轉移至另一片96-孔板，及藉受質於K-Pi緩衝液稀釋10倍。添加作為輔因子的NADPH，以便起始標記反應(未經預孵育)。經預定時間之標記反應之後，加入甲醇/乙腈=1/1(v/v)溶液，以結束標記反應。另一方面，NADPH也添加至其餘預反應溶液，以便起始預反應(經預孵育)。經預定時間之預反應之後，部分轉移至另一片96-孔板，及藉受質於K-Pi緩衝液稀釋10倍，以便起始標記反應。經預定時間之標記反應之後，加入甲醇/乙腈=1/1(v/v)溶液，以便結束標記反應。以3000rpm離心15分鐘後，上清液中之1-羥基咪達唑侖係藉LC/MS/MS定量。

樣本添加DMSO至反應系統，而非添加本發明之化合物溶液，被採用作為對照(100%)，原因在於DMSO係被使用作為溶劑以溶解本發明之化合物。剩餘活性(%)係在呈溶液添加的本發明之化合物之各個濃度計算，及IC₅₀值係使用邏輯模型以濃度及抑制率藉反轉推定求出。移位IC值係被計算為「未 經預孵育的IC值(0分鐘)/經預孵育的IC值(30分鐘)」。當移位IC值為1.5或以上時，此係定義為陽性。當移位IC值為小於1.1時，此係定義為陰性。

(試驗例5：CYP抑制試驗)

CYP抑制試驗為評比本發明之化合物對人肝微粒體中之CYP酶的典型受質代謝反應的抑制效果的試驗。使用對人類主要五種CYP酶(CYP1A2、2C9、2C19、2D6、及3A4)的標記反應如下：7-乙氧基試鹵靈(resorufin)O-去乙基化(CYP1A2)、甲苯磺丁脲(tolbutamide)甲基-羥基化(CYP2C9)、美芬妥因(mephenytoin)4’-羥基化(CYP2C19)、右美沙芬(dextromethorphan)O-去甲基化(CYP2D6)、及特非那定(terfenadine)羥基化(CYP3A4)。市售的滙集人肝微粒體係用作為酶來源。

反應條件如下：受質，0.5μmol/L乙氧基試鹵靈(CYP1A2)、100μmol/L甲苯磺丁脲(CYP2C9)、50μmol/LS-美芬妥因(CYP2C19)、5μmol/L右美沙芬(CYP2D6)、1μmol/L特非那定(CYP3A4)；反應時間，15分鐘；反應溫度，37℃；酶，滙集人肝微粒體0.2mg蛋白質/mL；本發明之化合物之濃度，1、5、10、20μmol/L(4個點)。

五種受質、人肝微粒體、及本發明之化合物於50mmol/L Hepes緩衝液之溶液，以如前述作為反應溶液的組成添加至96-孔板。添加作為輔因子的NADPH至96-孔板，以便起始標記反應。於37℃孵育15分鐘後，加入甲醇/乙腈=1/1(v/v)溶液，以結束標記反應。以3000rpm離心15分鐘後，上清液中之試鹵靈(CYP1A2代謝產物)係藉螢光孔板判讀器或LC/MS/MS定量；及上清液中之羥基甲苯磺丁脲(CYP2C9代謝產物)、4’-羥基美芬妥因(CYP2C19代謝產物)、右歐爾芬(dextrorphan)(CYP2D6代謝產物)、及特非那定醇代謝產物(CYP3A4代謝產物)係藉LC/MS/MS定量。

樣本添加DMSO至反應系統而非添加本發明之化合物溶液，被採用作為對照(100%)，原因在於DMSO係被使用作為溶劑以溶解本發明之化合物。剩餘活性(%)係在呈溶液添加的本發明之化合物之各個濃度計算，及IC₅₀值係使用邏輯模型以濃度及抑制率藉反轉推定求出。

(試驗例6：波動艾姆斯(Ames)試驗)

各20微升冷凍貯存的鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)(TA98菌株及TA100菌株)接種於10毫升液體營養培養基(2.5%胰蛋白腖(Oxoid)營養肉湯2號)，及培養物於37℃於振搖下孵育10小時。7.70至8.00毫升TA98培養物經離心(2000xg，10分鐘)以去除培養基，及細菌懸浮於7.70毫升微F(Micro F)緩衝液(K₂HPO₄：3.5g/L、KH₂PO₄：1g/L、(NH₄)₂SO₄：1g/L、檸檬酸三鈉二水合物：0.25g/L、MgSO₄ 7H₂O：0.1g/L)，及懸浮液添加至120毫升暴露(Exposure)培養基(微F緩衝液含有生物素：8μg/mL、組胺酸：0.2μg/mL、葡萄糖：8mg/mL)。3.10至3.42毫升TA100培養物添加至130毫升暴露培養基，以製備試驗用細菌溶液。588微升試驗用細菌溶液(或以有代謝活化系統為例，498微升試驗用細菌溶液與90微升S9混合的混合溶液)與各12微升之以下溶液混合：本發明之化合物之DMSO溶液(以2-至3-倍比， 自最大劑量50mg/mL之數個階段稀釋)；DMSO作為陰性對照；無代謝活化系統，50μg/mL 4-硝基喹啉-1-氧化物DMSO溶液作為TA98的陽性對照；無代謝活化系統，0.25μg/mL 2-(2-呋喃基)-3-(5-硝基-2-呋喃基)丙烯醯胺DMSO溶液作為TA100的陽性對照；有代謝活化系統，40μg/mL 2-胺基蒽DMSO溶液作為TA98的陽性對照；或有代謝活化系統，20μg/mL 2-胺基蒽DMSO溶液作為TA100的陽性對照。混合溶液於37℃於振搖下孵育90分鐘。460微升暴露至本發明之化合物的細菌溶液與2300微升指示劑培養基(微F緩衝液含有生物素：8μg/mL、組胺酸：0.2μg/mL、葡萄糖：8mg/mL、溴甲酚紫：37.5μg/mL)混合，各50微升分配入微孔板中，每劑量48孔，及於37℃接受靜態培養3日。含細菌的孔，其已經藉胺基酸(組胺酸)編碼基因合成酶中之突變而獲得增殖能力，因pH改變故，顏色從紫色變成黃色。每劑量共48孔中之黃色孔數目經計數，藉與陰性對照組比較，以評估誘突變性。(-)表示誘突變性為陰性，及(+)表示誘突變性為陽性。

(試驗例7：溶解度試驗)

各個本發明化合物之溶解度係於1% DMSO添加條件下測定。10mmol/L化合物溶液係使用DMSO製備，及將2微升本發明之化合物溶液分別地添加到198微升JP第一流體(加水至2.0克氯化鈉及7.0毫升鹽酸以達1000毫升)及JP第二流體(1體積水添加至1體積溶液，於其中3.40克磷酸二氫鉀及3.55克無水磷酸氫二鈉溶解於水以達1000毫升)。混合物任其於25℃靜置16小時，或於室溫振搖1小時，及混合物經真空過濾。濾液以甲醇/水=1/1(v/v)或MeCN/MeOH/H₂O(=1/1/2)稀釋十倍或一百倍，及藉絕對校準方法以LC/MS或固相萃取(SPE)/MS測定濾液中之化合物濃度。

(試驗例8：代謝穩定性試驗)

使用市售滙集人肝微粒體，本發明之化合物反應歷經常數時間，藉由比 較已反應樣本與未反應樣本，計算剩餘率，藉此評估於肝臟中的代謝程度。

於含0.5mg蛋白質/mL人肝微粒體的1mmol/L NADPH於0.2mL緩衝液(50mmol/L Tris-HCl pH 7.4，150mmol/L氯化鉀，10mmol/L氯化鎂)之存在下，於37℃進行反應(氧化反應)歷時0分鐘或30分鐘。反應之後，添加50微升反應溶液至100微升甲醇/乙腈=1/1(v/v)，經混合及於3000rpm離心15分鐘。上清液中之本發明之化合物係藉LC/MS/MS或固相萃取(SPE)/MS定量，及計算反應後之本發明之化合物的剩餘量，設於0分鐘反應時間的化合物量為100%。

(試驗例9：hERG試驗)

為了評估心電圖QT間隔延長的風險，使用表達人類乙醚阿哥哥(ether-a-go-go)相關基因(hERG)通道的CHO細胞，研究對延遲整流器K+電流(I_Kr)的效應，I_Kr其在本發明之化合物的心室再極化過程中扮演要角。

使用自動化膜片鉗系統(QPatch；蘇菲恩生科公司(Sophion Bioscience A/S))，細胞藉全細胞膜片鉗方法，維持於-80mV膜電位。施加-50mV漏電位後，紀錄於+20mV歷時2秒的去極化脈衝刺激，及進一步，於-50mV歷 時2秒的再極化脈衝刺激所誘發的I_Kr。

產生的電流穩定之後，於室溫條件下歷時10分鐘，將於其中已經以目標濃度溶解本發明之化合物的胞外溶液(NaCl：145mmol/L，KCl：4mmol/L，CaCl₂：2mmol/L MgCl₂：1mmol/L，1mmol/L，HEPES(4-(2-羥基乙基)-1-哌

乙烷磺酸)：10mmol/L，葡萄糖：10mmol/L pH=7.4)施加至細胞。從紀錄得的I_Kr，使用分析軟體(QPatch分析試驗軟體；蘇菲恩生科公司)，基於在靜止膜電位的電流值，測量尾峰值電流。又復，計算施加本發明之化合物之前相對於尾峰值電流之%抑制，及與載媒劑施用組(0.1%二甲亞碸溶液)作比較，以評估本發明之化合物對I_Kr的影響。

以下資料顯示於3μM本發明之化合物的抑制。

(試驗例10：粉末溶解度試驗)

適量之本發明之化合物置於適當容器內。200微升JP第一流體(加水至2.0克氯化鈉及7.0毫升鹽酸以達1000毫升)，200微升JP第二流體(1體積水添加至1體積溶液，於其中3.40克磷酸二氫鉀及3.55克無水磷酸氫二鈉溶解於 水以達1000毫升)，200微升空腹狀態人工腸液(FaSSIF)、及200微升餵食狀態人工腸液(FeSSIF)添加至個別容器。添加測試液後，當本發明之化合物之總量皆溶解時，視是否適當，添加化合物。容器經密封，及於37℃振搖歷時1小時及/或24小時。混合物經過濾，及100微升甲醇添加至各個濾液(100微升)，使得濾液經兩倍稀釋。若有所需，稀釋比可經改變。確證稀釋液中無氣泡及沈澱物之後，容器經密封及振搖。量化係使用絕對校準方法藉HPLC進行。

(試驗例11：藥動學研究)

用於口服吸收研究之材料及方法

(1)動物：小鼠或大鼠

(2)飼養條件：讓小鼠或大鼠可自由飲用自來水及食用固體食物

(3)劑量與分組：以預定劑量經口或經靜脈投予；分組如下(劑量取決於化合物)

經口投予：約1至30毫克/千克(n=2至3)

靜脈投予：約0.5至10毫克/千克(n=2至3)

(4)投予配方：經口投予，呈溶液態或懸浮液態；靜脈投予，呈溶解態

(5)投予方法：經口投予，使用附軟性餵食管的注射器強制投予；靜脈投予，使用附針頭的注射器從尾靜脈投予

(6)評估項目：於排程時間採集血液，及藉LC/MS/MS測量本發明之化合物的血漿濃度

(7)統計分析：有關本發明之化合物之血漿濃度的變遷，血漿濃度-時間曲線下方面積(AUC)係藉梯形法計算；及本發明之化合物的生物利用率(BA)係自經口投予組及靜脈投予組的AUC計算。

(試驗例12：腦分布研究)

本發明之化合物以約0.5毫克/毫升/千克劑量經靜脈投予大鼠。30分鐘後，在異氟烷(isoflurane)麻醉下放血致死，自腹腔主動脈抽取出全部血液。

摘取出腦，及以蒸餾水製備20%至25%之均化物。

所得血液於離心後用作為血漿。對照血漿以1：1添加至腦樣本。對照腦均化物以1：1添加至血漿樣本。各個樣本係使用LC/MS/MS測量。所得面積比(腦/血漿)用於腦Kp值。

(試驗例13：艾姆斯試驗)

進行艾姆斯試驗，使用沙門氏菌(鼠傷寒沙門氏菌)TA 98、TA100、TA1535、及TA1537及大腸桿菌WP2uvrA作為試驗菌株，於預孵育方法中經或未經代謝活化，以檢驗本發明之化合物是否存在有基因誘突變性。

(試驗例14：P-gp受質試驗)

1.細胞系：

a.MDR1/LLC-PK1(貝克頓廸金森(Becton Dickinson))

b.LLC-PK1(貝克頓廸金森)

2.參考受質：

a.地高辛(Digoxin)(2μM)

方法與程序

1.表達MDR1的LLC-PK1細胞及其親代細胞係於37℃於5% CO2/95% O2氣體下，於培養基A(培養基199(英維崔真(Invitrogen))補充以10% FBS(英維崔真)、健它黴素(gentamycin)(0.05毫克/毫升，英維崔真)、及吸濕黴素(hygromycin)B(100微克/毫升，英維崔真))中例行地培養。用於轉運實驗，此等細胞以1.4x10⁴細胞/插子之密度播種於穿孔(Transwell)(註冊商標)插子上(96孔，孔隙大小：0.4微米，柯斯特(Coaster))，及添加培養基B(培養基199補充以10% FBS及0.05毫克/毫升健它黴素)至飼養器托盤。此等細 胞於二氧化碳孵化器(5% CO2/95% O2氣體，37℃)中孵育，及播種後每48-72小時更換頂側及底外側培養基。此等細胞係在播種後4至6日間使用。

2.以表達MDR1的細胞或親代細胞播種的培養插子中之培養基，係藉抽吸去除及以HBSS清洗。頂側(140微升)或底外側(175微升)係以含參考受質及本發明的轉運緩衝液置換，及然後，於供體側的一液分(50微升)之轉運緩衝液經收集來評估參考受質及本發明的初始濃度。於37℃孵育指定時間後，在供體側及受體側的一液分(50微升)之轉運緩衝液經收集。分析試驗係藉二重複或三重複進行。

3.液分中之參考受質及本發明係藉LC/MS/MS量化。

計算

測定跨MDR1表達細胞單層及親代細胞單層的通透量，及使用Excel 2003自娖下方程式計算通透係數(Pe)：Pe(cm/sec)=通透量(pmol)/細胞膜面積(cm²)/初始濃度(nM)/孵育時間(sec)式中，通透量係自孵育歷經預定時間(秒)後物質的通透度(nM，受體側之濃度)乘以體積(毫升)計算，及細胞膜面積係使用0.1433(平方厘米)。

流出比係使用下式計算：流出比=底外側至頂側Pe/頂側至底外側Pe

淨通量係使用下式計算：淨通量=MDR1表達細胞之流出比/親代細胞之流出比

(試驗例15：對P-gp轉運的抑制效果)

材料

1.細胞系：

a.MDR1/LLC-PK1(貝克頓廸金森)

b.LLC-PK1(貝克頓廸金森)

2.參考受質：

a.[³H]地高辛(1μM)

b.[¹⁴C]甘露糖醇(1μM)

3.參考抑制劑：

維拉帕米(Verapamil)(1μM)

材料與程序

1.表達MDR1之LLC-PK1細胞及其親代細胞係，於37℃於5% CO2/95% O2氣體下，於培養基A(培養基199(英維崔真)補充以10% FBS(英維崔真)、健它黴素(gentamycin)(0.05毫克/毫升，英維崔真)、及吸濕黴素 (hygromycin)B(100微克/毫升，英維崔真))中例行地培養。用於轉運實驗，此等細胞以1.4x10⁴細胞/插子之密度播種於穿孔(註冊商標)插子上(96孔，孔隙大小：0.4微米，柯斯特)，及添加培養基B(培養基199補充以10% FBS及0.05毫克/毫升健它黴素)至飼養器托盤。此等細胞於二氧化碳孵化器(5% CO2/95% O2氣體，37℃)中孵育，及播種後每隔48-72小時，更換頂側及底外側培養基。此等細胞係在播種後6至9日間使用。

2.以表達MDR1之細胞或親代細胞播種的培養插子中的培養基係藉抽吸去除及以HBSS清洗。頂側(150微升)或底外側(200微升)係以有或無本發明之化合物的含參考受質的轉運緩衝液置換，及然後，於供體側的一液分(50微升)之轉運緩衝液經收集，來評估參考受質的初始濃度。於37℃孵育指定時間後，供體側及受體側的一液分(50微升)之轉運緩衝液經收集。分析試驗係藉三重複進行。

3.一液分(50微升)之轉運緩衝液係與5毫升閃爍計數混合液混合，及放射性係使用液體閃爍計數器測量。

計算

測定跨MDR1表達細胞單層及親代細胞單層的通透量，及使用Excel 2003自娖下方程式計算通透係數(Pe)：Pe(cm/sec)=通透量(pmol)/細胞膜面積(cm²)/初始濃度(nM)/孵育時間(sec)式中，通透量係自孵育歷經預定時間(秒)後物質的通透度(nM，受體側之濃度)乘以體積(毫升)計算，及細胞膜面積係使用0.33(平方厘米)。

流出比係使用下式計算：流出比=底外側至頂側Pe/頂側至底外側Pe

淨通量係使用下式計算： 淨通量=MDR1表達細胞之流出比/親代細胞之流出比

控制百分比係以於本發明之化合物存在下相對於無本發明之化合物存在下，參考化合物的淨流出比計算。

IC₅₀值係使用曲線匹配程式XLfit計算。

(試驗例16：使用mdr1a/1b(-/-)B6小鼠之P-gp受質試驗)

材料

動物：mdr1a/1b(-/-)B6小鼠(KO小鼠)或C57BL/6J小鼠(野生小鼠)

方法與程序

1.投予本發明之化合物前，動物可經餵飼。

2.針對各個時間點，本發明之化合物投予三頭動物，及於投予後的擇定時間點(例如，15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時、或24小時)移出血樣及腦樣。以含抗凝血劑(EDTA及肝素)的注射筒透過軀幹採血收集血液(0.3-0.7毫升)。血液及組織(例如，腦)樣本即刻置於融冰上。

3.血樣經離心(1780xg歷時10分鐘)用以去除細胞而獲得血漿。然後，血漿樣本轉移到乾淨試管，及於-70℃冰箱內貯存直到分析為止。

4.組織(例如，腦)樣本係以組織重量對蒸餾水的毫升數為1：3之比均化，轉移到乾淨試管，及於-70℃冰箱內貯存直到分析為止。

5.血漿及組織(例如，腦)樣本係使用蛋白質沈澱製備，及藉LC/MS/MS分析。分析方法係藉涵括標準曲線校準，該標準曲線係使用空白血漿或腦樣本與已知量之被分析物建構。涵括品質管制樣本以監視該方法的準確度及精度。

6.血漿及腦濃度值(奈克/毫升及奈克/克)被導入用來計算藥動學參數的適當數學工具內。常見平台為WinNonlin(註冊商標)藥動學軟體模型化程式。

計算

Kp：組織對血漿濃度比

Kp比=KO小鼠的Kp/野生小鼠的Kp

AUC組織/AUC血漿之KO/野生比={AUC組織/AUC血漿(KO小鼠)}/{AUC組織/AUC血漿(野生小鼠)}

(試驗例17：已麻醉天竺鼠之心血管研究)

動物種屬：天竺鼠(Slc：Hartley，4-5週齡，雄性)，N=4

研究設計：

劑量：3、10、及30毫克/千克(原則上)

(本發明之化合物係累進投予)

配方：

載媒劑之組成：二甲基乙醯胺(DMA)；聚乙二醇400

(PEG400)：蒸餾水(D.W.)=1：7：2(原則上)。

本發明之化合物以DMA溶解，及然後加入PEG400及蒸餾水。最後，製備1.5、5、及15毫克/毫升溶液。

投予途徑及時程：

靜脈輸注歷時10分鐘(2毫升/千克)。

0至10分鐘：3mg/kg，30至40分鐘：10mg/kg，60至70分鐘：30mg/kg

載媒劑係藉如上相同的時程投予。

群組組成：

載媒劑組及本發明之化合物組(每組4頭天竺鼠)。

評估方法：

評估項目：

平均血壓[mmHg]，心搏率(衍生自血壓波形[脈拍/分鐘]，QTc(毫秒)， 及毒物動力學。

實驗程序：

藉脲烷(urethane)(1.4g/kg,i.p.)麻醉天竺鼠，將聚乙烯管插入頸動脈(用於測量血壓及採集血樣)及頸靜脈(用於輸注試驗化合物)。電極經皮下附接(導線2)。使用PowerLab(註冊商標)系統(AD儀器(ADInstruments))測量血壓、心搏率、及心電圖(ECG)。

毒物動力學：

使用含肝素鈉的注射筒自頸動脈抽取約0.3毫升血液(約120微升血漿)，及在各個評估點即刻以冰冷卻。藉離心(4℃，10000rpm，9300 ×g，2分鐘)獲得血漿樣本。血漿之分離程序係於冰上或於4℃進行。所得血漿(TK樣本)係貯存於深度冷凍器(設定溫度：-80℃)。

分析方法：在各個評估時間點，求取30秒週期的平均血壓及心搏率平均值。ECG參數(QT間隔[毫秒]及QTc)係被推導為在評估時間點10秒鐘連續心搏的平均波形。QTc[Fridericia’s算式：QTc=QT/(RR)1/3)]係使用PowerLab(註冊商標)系統計算。對全部四頭動物，針對全部ECG紀錄(自投藥前0.5小時至實驗結束)目測評估心律不整的發生率。

評估時間點：

之前(投藥前)，及初次投藥後10、25、40、55、70、及85分鐘。

QTc之資料分析：

QTc與投藥前數值之變化百分比(%)經計算出(投藥前數值被視為100%)。相對QTc係與在相同評估點的載媒劑值作比較。

(試驗例18：米格魯犬的藥理學)

試驗化合物經測試來評估於投予單劑之後，對犬的腦脊髓液(CSF)中之類澱粉β蛋白資料之影響，組合藥動學(PK)追蹤及限制安全性評估。

以下示化合物為例，2或4頭米格魯犬(1或2頭雄性，1或2頭雌性)被投予載媒劑(1mL/kg 20%環糊精水溶液)，及每個投藥組有4頭米格魯犬(2頭雄性及2頭雌性)，以表20中指示的劑量而被投予試驗化合物於水性20%環糊精溶液，濃度以mg/mL表示係與空腹時以mg/kg指示的劑量相同。

在投藥之前及之後4、8、25、及49小時，透過栓在顱骨且以皮下組織及皮膚覆蓋的套管，於清醒動物直接從側腦室採集CSF。投藥後8小時允許動物食用其常規膳食歷時30分鐘。採血用於PK追蹤(0.5、1、2、4、8、25及49小時)，用於生物化學的血清樣本係在投藥之前及之後8及25小時採集。CSF樣本係用於測量Aβ1-37、Aβ1-38、Aβ1-40、及Aβ1-42。結果摘述於下表：

%減低指示於8小時及於觀察得相關減低(>20%減低)的最末時間點。

(試驗例19：端磺醯基(Dansyl)GSH捕集試驗)

端磺醯基麩胱甘肽(麩胱甘肽)捕集為研究反應性代謝產物的試驗。

反應條件如下：受質，50μmol/L本發明之化合物；捕集試劑，0.1mmol/L丹磺醯基GSH；滙集人肝微粒體之蛋白質含量，1mg/mL；預反應時間，5分鐘；反應時間，60分鐘；反應溫度，37℃。

滙集人肝微粒體及本發明之化合物於K-Pi緩衝液(pH 7.4)之溶液作為預反應溶液，係以預反應組成添加至96-孔板。添加作為輔因子的NADPH以起始反應。經預定反應時間後，部分被轉移至另一片96-孔板，及添加涵括5mmol/L二硫蘇糖醇的乙腈溶液來中止反應。於3000rpm離心15分鐘後，端磺醯基GSH捕集的代謝產物之螢光峰值面積係藉HPLC以螢光檢測定量。

(試驗例20：[¹⁴C]-KCN捕集試驗)

[¹⁴C]-氰化鉀(KCN)捕集為研究反應性代謝產物的試驗。

反應條件如下：受質，10或50μmol/L本發明之化合物；捕集試劑，0.1mmol/L[¹⁴C]-KCN(11.7μCi/試管；滙集人肝微粒體之蛋白質含量，1mg/mL；預反應時間，5分鐘；反應時間，60分鐘；反應溫度，37℃。

滙集人肝微粒體及本發明之化合物於K-Pi緩衝液(pH 7.4)之溶液作為預反應溶液，係以預反應組成添加至96-孔板。添加作為輔因子的NADPH以起始反應。經預定時間後，終止代謝反應，及[¹⁴C]-KCN捕集的代謝產物係藉自旋管柱而被萃取至100微升甲醇溶液。[¹⁴C]-KCN捕集的代謝產物的放射性峰面積係藉放射性HPLC系統定量。

配方例

以下配方例僅用於例示性，而非意圖限制本發明之範圍。

配方例1：錠劑

以上全部成分經均勻混合，但硬脂酸鈣除外。然後，混合物經軋碎、造粒及乾燥，以獲得合宜尺寸的顆粒。然後，硬脂酸鈣添加至顆粒。最後，於壓縮力下進行打錠。

配方例2：膠囊劑

以上成分經均勻混合以獲得粉末或細粒，及然後，將所得混合物填充於膠囊內。

配方例3：粒劑

以上全部成分經均勻混合後，混合物經壓縮。已壓縮物料經軋碎、造粒及過篩而獲得合宜尺寸的粒劑。

配方例4：口服崩散錠劑

本發明之化合物與結晶纖維素混合、造粒，及壓錠而獲得口服崩散錠劑。

配方例5：乾糖漿劑

本發明之化合物與乳糖混合、軋碎、造粒及過篩而獲得合宜尺寸的乾糖漿劑。

配方例6：注射劑

本發明之化合物與磷酸鹽緩衝液混合而獲得注射劑。

配方例7：輸注液劑

本發明之化合物與磷酸鹽緩衝液混合而獲得注射劑。

配方例8：吸入劑

本發明之化合物與乳糖混合及精細地軋碎而獲得吸入劑。

配方例9：軟膏劑

本發明之化合物與石蠟混合而獲得軟膏劑。

配方例10：貼片劑

本發明之化合物與基劑諸如黏著性硬膏等混合而獲得貼片劑。

[工業應用]

本發明之化合物能够作為藥物，其可使用於由類澱粉β蛋白的產生、分泌及/或沈積所誘發的疾病之治療劑或預防劑。

Claims (18)

1. 一種式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，

   

   其中R³各自獨立地為視需要經以選自於鹵素、氰基、烷基氧基、鹵烷基氧基、及非芳香族碳環基之一個或多個基團取代的烷基；或視需要經以烷基取代的雜環基；附接至同一個碳原子的兩個R³可與其所附接的碳原子一起形成視需要經以選自於鹵素、烷基、及鹵烷基之一個或多個基團取代的3員至5員非芳香族碳環；t為0至3之整數；R⁵為氫原子或鹵素；R⁶為氫原子、鹵素、及經取代或未經取代之烷基；

   

   其中R^7a為鹵素；氰基；視需要經以選自於氰基、鹵素、羥基、非芳香族碳環基、及芳香族雜環基之一個或多個基團取代的烷基氧基；視需要經以 一個或多個鹵素取代的烷基；視需要經以選自於氰基及鹵素之一個或多個基團取代的非芳香族碳環基；視需要經以選自於氰基及芳香族雜環基之一個或多個基團取代的非芳香族雜環基；視需要經以選自於氰基、鹵素、及羥基之一個或多個基團取代的烯基氧基；視需要經以選自於氰基、鹵素、及羥基之一個或多個基團取代的炔基氧基；或視需要經以一個或多個烷基取代的芳香族雜環基；及R^7b為氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、或胺基。
2. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中

   
3. 如申請專利範圍第1或2項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R⁶為氟或氯。
4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R⁵為氫原子或氟。
5. 如申請專利範圍第1至4項中任一項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R³各自獨立地為視需要經以一個或多個鹵素取代的烷基。
6. 如申請專利範圍第1至5項中任一項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中

   
7. 如申請專利範圍第6項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R^7a為氰基或視需要經以一個或多個鹵素取代的烷基氧基，及R^7b為氫原子或鹵素。
8. 如申請專利範圍第1至5項中任一項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中

   
9. 如申請專利範圍第8項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R^7a為視需要經以一個或多個鹵素取代的烷基，及R^7b為氫原子或烷基。
10. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中[化學式6]

    

    其中R³為視需要經以一個或多個鹵素取代的烷基，R⁵為氫原子，R⁶為鹵素，

    

    及R^7a為視需要經以一個或多個鹵素取代的烷基氧基。
11. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係選自於由下列所組成之組群：[化學式8]

    
12. 一種醫藥組成物，其包含如申請專利範圍第1至11項中任一項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
13. 一種BACE1抑制劑，其包含如申請專利範圍第1至11項中任一項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
14. 一種申請專利範圍第1至11項中任一項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽的用途，其係使用於抑制BACE1活性之方法。
15. 如申請專利範圍第12或13項所述之醫藥組成物，其係用於治療或預防阿茲海默失智症、輕度認知障礙、或早期阿茲海默氏症，用於預防阿茲海默失智症、輕度認知障礙、或早期阿茲海默氏症的進展，或用於預 防有阿茲海默失智症風險的無症狀患者的進展。
16. 如申請專利範圍第1至11項中任一項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係用於治療或預防阿茲海默失智症、輕度認知障礙、或早期阿茲海默氏症，用於預防阿茲海默失智症、輕度認知障礙、或早期阿茲海默氏症的進展，或用於預防有阿茲海默失智症風險的無症狀患者的進展。
17. 一種用於抑制BACE1活性之方法，其係包含投予如申請專利範圍第1至11項中任一項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
18. 一種方法，該方法係用於治療或預防阿茲海默失智症、輕度認知障礙、或早期阿茲海默氏症，用於預防阿茲海默失智症、輕度認知障礙、或早期阿茲海默氏症的進展，或用於預防有阿茲海默失智症風險的無症狀患者的進展，其係包含投予如申請專利範圍第1至11項中任一項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽。