TW202128221A

TW202128221A - 抗體配製物

Info

Publication number: TW202128221A
Application number: TW109137726A
Authority: TW
Inventors: 法比安比克爾; 莉娜博阿多; 德克切利爾斯; 法蘭科斯格勞德; 卡洛琳希爾伯特; 弗里德克勒納; 裘根瑟吉; 拉吉瑟克哈爾保羅; 馬亞安科; 阿爾奧薩耶倫科
Original assignee: 瑞士商諾華公司
Priority date: 2019-10-30
Filing date: 2020-10-29
Publication date: 2021-08-01
Also published as: BR112022008097A2; AU2020373017A1; EP4051236A1; CN114828826A; PE20221276A1; CL2022001085A1; IL292403A; TWI893018B; AU2020373017B2; JP2023501155A; MY209141A; MX2022005044A; KR20220092917A; JOP20220097A1; PH12022551041A1; CA3158921A1; US20220378912A1; CO2022005207A2; ECSP22033601A; WO2021087050A1

Abstract

本發明關於針對人P-選擇蛋白的抗體特別是SEG101的，或與立贊利珠單抗具有最多3個胺基酸差異的抗體的新穎藥物配製物，及其製備方法和該配製物用途。

Description

抗體配製物

本發明關於針對人P-選擇蛋白的抗體特別是SEG101的，或與立贊利珠單抗(crizanlizumab)具有最多3個胺基酸差異的抗體的新穎藥物配製物，及其製備方法及該配製物用途。

P-選擇蛋白促成許多炎性疾病和血栓形成疾病。因此，靶向P-選擇蛋白的治療劑，例如WO 2008/069999中揭露的針對人P-選擇蛋白的抗體，尤其是SEG101(又名立贊利珠單抗和SelG1)，可以用作治療炎性疾病和血栓形成疾病的手段。

在儲存過程中，配製的抗體可能會因化學和物理不穩定而喪失生物學活性。抗體或甚至賦形劑的降解、電荷變體的形成和異構化反應係導致安全性問題以及隨時間推移配製物效力和功效降低的常見因素。

方便地，蛋白質治療劑的液體藥物配製物，例如抗體，應長期穩定並包含安全有效量的治療劑。除了與物理和化學穩定性有關的挑戰(例如聚集體的形成以及製造、儲存和遞送的困難)外，蛋白質治療劑液體配製物的問題係降解和電荷變體的形成，這可能會對目標蛋白質的活性和功能性產生負面影響，而且引起安全問題。因此，需要開發配製物，該配製物能夠長時間維持蛋白質治療劑穩定，最小化降解速率和其他分子種類如電荷變體和/或同種型的形成。

本發明之一個目的是提供一種抗P-選擇蛋白抗體配製物，特別是對於立贊利珠單抗或與立贊利珠單抗具有最多3個胺基酸差異的抗體，該配製物在儲存和遞送後是穩定的。進一步的目的是提供適合於靜脈內(i.v.)投與的穩定的液體抗體配製物。

在一個方面，本發明提供了包含立贊利珠單抗(該立贊利珠單抗具有分別為SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：9的輕鏈和重鏈胺基酸序列)以及立贊利珠單抗變體(異立贊利珠單抗(iso-crizanlizumab))(其中SEQ ID NO：10的位置32處的胺基酸天冬胺酸變為異天冬胺酸)的藥物組成物。合適且較佳的是，藥物組成物進一步包含緩衝液系統，導致藥物組成物的pH值為5.5至7.5，較佳的是為5.7至7.0，較佳的是為5.7至6.3。

藥物組成物必須適合投與於人受試者。除了從所含活性成分中產生的作用外，該藥物組成物還應適合與人組織接觸使用，而不會產生過多的毒性、刺激、過敏反應、或其他問題或併發症，且具有合理的獲益/風險比。

在一個方面，本發明關於新穎藥物組成物，其包含針對人P-選擇蛋白的抗體，較佳的是為立贊利珠單抗，或與立贊利珠單抗具有最多3個胺基酸差異的抗體，其中pH值為5.5至7.5、5.7至7.0，較佳的是5.7至6.3。

定義

為了可以更容易地理解本揭露內容，首先定義某些術語。另外的定義在整個具體實施方式中陳述。

如本文所用，術語「一個/種(a/an)」、「該(the)」以及在本揭露內容的上下文中使用的類似術語(尤其在申請專利範圍的上下文中)應被解釋為涵蓋單數和複數二者，本文中除非另外指示或與上下文明顯相矛盾。因此，術語「一個」(或「一種」)、「一個或多個」和「至少一個」在本文中可以互換使用。

「和/或」意指清單的組分或特徵中的每一者或兩者或全部、尤其是其中兩個或更多個係替代或累積方式的可能的變體。

與數值X相關的術語「約」表示例如X±10%、X±5%、X±3%，包括該範圍內的所有值。

本文使用的短語「藥學上可接受的」係指在合理的醫學判斷的範圍內，適合用於與人類和動物的組織接觸而不產生過度毒性、刺激、過敏反應、或其他問題或併發症，與合理的受益/風險比相稱的那些化合物、材料、組成物和/或劑型。

如本文所用，術語「患者」或「受試者」係指人。除非在指出時，否則術語「患者」或「受試者」在本文中可互換地使用。

如本文所用，如果受試者將在生物學上、在醫學上或在生活品質上從治療中獲益，則這樣的受試者係「需要」這種治療的。

術語「治療」包括：(1)預防或延遲可能患有或易患該狀態、障礙或病症但尚未經歷或展現出該狀態、障礙或病症的臨床或亞臨床症狀的動物、特別是哺乳動物並且尤其是人中正在發展的該狀態、障礙或病症的臨床症狀的出現；(2)抑制該狀態、障礙或病症(例如在維持治療的情況下阻止、減緩或延遲該疾病的發展或該疾病的復發、該疾病的至少一種臨床或亞臨床症狀之發展)；和/或(3)緩解該病症(即導致該狀態、障礙或病症或者其臨床或亞臨床症狀中的至少一種的消退)。對要治療的患者的益處係統計上顯著的，或者對於患者或醫師至少係可察覺的。然而，可以理解的是，當將藥物給予至患者以治療疾病時，結果可能並不總是有效的治療。

[圖1].配製物pH值對CZE主峰之影響。

[圖2].配製物pH值對CZE鹼性峰之影響。

[圖3].配製物pH值對CZE酸性峰之影響。

[圖4].藉由SEC測量的篩選的配製物之純度。

[圖5].立贊利珠單抗之pH依賴性異構化

蛋白質治療劑的液體配製物應保持蛋白質治療劑的完整生物學活性，並保護蛋白質治療劑之官能基在生產和保質期內不降解。蛋白質的降解途徑可能涉及化學不穩定(例如脫醯胺作用、氧化、修剪、異構化等)或物理不穩定(例如聚集體的形成)。抗體的不同降解產物可以藉由本領域眾所周知的方法例如毛細管等電聚焦(cIEF)、離子交換層析或毛細管區帶電泳(參見例如doi：10.1016/j.jchromb.2017.02.017和doi：10.4161/mabs.2.6.13333)作為電荷變體進行檢測。常見的電荷變體係唾液酸、脫醯胺、C末端離胺酸、N末端麩胺酸、未加工的前導序列、天冬胺酸的異構化和琥珀醯亞胺之形成(Yi Du等人，2012.DOI：10.4161/mabs.21328)。

立贊利珠單抗的微異質性與修飾或化學降解有關，該修飾和化學降解導致大量經不同修飾的變體。立贊利珠單抗的主要變體係藉由環醯亞胺中間體(琥珀醯亞胺)(其可以水解為莫耳比約1：3的天冬胺酸和異天冬胺酸)形成步驟經由輕鏈(CDR中)的位置32處的天冬胺酸異構化為異天冬胺酸而形成(產生在本文中稱為「異立贊利珠單抗」變體)。然而，出人意料地發現，儘管該修飾存在於CDR中，但是異立贊利珠單抗顯示出與立贊利珠單抗基本上相等之生物學活性。此外，相應的琥珀醯亞胺中間體在生理條件下能夠被水解為天冬胺酸和異天冬胺酸(分別產生立贊利珠單抗和異立贊利珠單抗)，這意味著將琥珀醯亞胺變體投與於患者後可以轉化為具有生物活性之形式。根據該發現，本發明之藥物組成物儘管包含立贊利珠單抗和大量不同的變體，但保留了立贊利珠單抗的生物活性並且長期穩定。另外，異立贊利珠單抗和立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺之存在沒有免疫原性問題。術語「免疫原性」係指在將本發明之藥物組成物投與於人受試者(例如有需要的健康志願者或患者)後能夠結合立贊利珠單抗的宿主抗體的產生。在接受本發明藥物組成物的所有受試者中，只有不到2%的人受試者產生抗立贊利珠單抗抗體。一方面，在生理條件下，合適地在藥物投與後一天，在患者中，總立贊利珠單抗及其所有變體的少於5%、合適地少於2%、合適地少於1%、適當少於0.5%係立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺。此外，出人意料地發現異立贊利珠單抗具有低免疫原性，與立贊利珠單抗基本上相同。在上下文中所用的術語「基本上相同」係指在相同條件下進行測試時，異立贊利珠單抗的免疫原性比立贊利珠單抗的免疫原性高不超過5倍、不超過3倍、合適地不超過2倍、合適地不超過1.5倍。可替代地，在上下文中使用的術語「基本上相同」係指當在相同的條件下進行測試時，異立贊利珠單抗的免疫原性相比立贊利珠單抗的免疫原性不低於20%、合適地不低於40%、合適地不低於70%。

因此，在一個方面，本發明提供了一種包含立贊利珠單抗(其分別具有SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：9的輕鏈和重鏈胺基酸序列)以及立贊利珠單抗變體(其中SEQ ID NO：10的位置32處的胺基酸天冬胺酸變為異天冬胺酸)(異立贊利珠單抗)之藥物組成物。

術語「異立贊利珠單抗」由同-異立贊利珠單抗(homo-iso-crizanlizumab)和雜-異立贊利珠單抗(hetero-iso-crizanlizumab)兩個種類組成。術語同-異立贊利珠單抗係其中兩個輕鏈的位置32處的天冬胺酸殘基被異天冬胺酸替代(即異構化為異天冬胺酸)之抗體。術語雜-異立贊利珠單抗係指其中僅一個輕鏈的位置32處的天冬胺酸殘基被異天冬胺酸替代之抗體。

就單個輕鏈而言，在位置32處具有天冬胺酸之輕鏈被稱為LC_D。在位置32處具有異天冬胺酸的輕鏈被稱為LC_isoD。在位置32處具有琥珀醯亞胺的輕鏈被稱為LC_succi。

在一個方面，本發明提供了一種藥物組成物，其包含與立贊利珠單抗(其具有分別為SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：9的輕鏈和重鏈胺基酸序列)具有最多3個、較佳的是2個、更較佳的是僅一個胺基酸差異的抗體及該抗體的變體(其中SEQ ID NO：10的位置32處的天冬胺酸變為異天冬胺酸)。

關於與立贊利珠單抗具有最多3個、較佳的是2個、更較佳的是僅一個胺基酸差異的抗體，該差異可以是錯配，即用不同的殘基替換殘基。差異也可以是立贊利珠單抗序列中胺基酸殘基的插入或缺失。差異可以在輕鏈和/或重鏈的序列中的任何地方，例如在抗體的不同結構域中(在CH1、CH2、CH3、VH、CL、VL、鉸鏈區、F_c和F_ab中)。較佳的是，該差異不干擾抗體的基本特性，例如其結合其抗原即人P-選擇蛋白之能力。較佳的是，差異不在對抗體功能至關重要的位置上，例如，CDR。特別地，在本發明之藥物組成物的上下文中，差異不在SEQ ID NO：10的位置32處。

在一個實施方式中，藥物組成物進一步包含變體(「立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺」)，該變體係在SEQ ID NO：10的位置32處為琥珀醯亞胺(即天冬胺酸的琥珀醯亞胺同種型)。立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺通常是以下抗體，其在至少一個輕鏈的位置32處具有琥珀醯亞胺並且在另一個輕鏈的位置32處具有天冬胺酸或異天冬胺酸，或在非常酸性的條件下(例如pH為約5)，兩個天冬胺酸可以被琥珀醯亞胺替代。包含具有琥珀醯亞胺的一個輕鏈包和在位置32處具有天冬胺酸的另一個輕鏈的抗體被稱為「立贊利珠單抗的D-琥珀醯亞胺」。包含具有琥珀醯亞胺的一個輕鏈包和在位置32處具有異天冬胺酸的另一個輕鏈的抗體被稱為「立贊利珠單抗的異D-琥珀醯亞胺」。

在一個實施方式中，藥物組成物在藥物組成物中包含總電荷變體的至少20%、合適地至少24%、至少30%、合適地至少35%、合適地至少40%立贊利珠單抗(即主峰)。典型地且較佳的是，可以藉由毛細管區帶電泳(CZE)分析電荷變體。曲線下面積(AUC)通常用於確定每個峰相對於總AUC之百分比。為了清楚起見，即使在包含立贊利珠單抗的峰在所有峰中都不具有最大的AUC的極少數情況下，包含立贊利珠單抗的峰也將在本申請中被稱為「主峰」。

本申請中使用的術語「電荷變體」係指可以藉由CZE鑒定的所有峰(包括立贊利珠單抗之峰)。本申請中使用的術語「鹼性變體」係指與CZE圖中的立贊利珠單抗相比，對應於較低時間值之峰。如本申請中使用的術語「酸性變體」係指與CZE圖中的立贊利珠單抗的峰相比，對應於較高時間值的峰。例如，可以如實例4中所述執行CZE。

有兩個主要的酸性變體峰。具有較低時間值的峰包含雜-異立贊利珠單抗，具有較高時間值的峰包含同-異立贊利珠單抗。藉由估計，總異立贊利珠單抗占酸性變體的約50%至約75%。

存在幾個鹼性變體峰，其中具有時間值較低的峰包含立贊利珠單抗的D-琥珀醯亞胺，並且另一個具有較高時間值的峰包含立贊利珠單抗的異D-琥珀醯亞胺。藉由估算，立贊利珠單抗的總琥珀醯亞胺占鹼性變體的約25%至約50%。

在一個實施方式中，當進行CZE時，藥物組成物顯示主峰，其AUC係總AUC的至少20%、合適地至少24%、至少30%、合適地至少35%、合適地至少40%。

在一個實施方式中，藥物組成物包含總電荷變體的至多70%、合適地至多60%、合適地至多50%、合適地至多45%立贊利珠單抗。

在一個實施方式中，當進行CZE時，藥物組成物顯示主峰，其AUC係總AUC的至多70%、合適地至多60%，合適地至多50%、合適地至多45%。

在一個實施方式中，藥物組成物包含總電荷變體的約20%至約50%、合適地約35%至約45%、合適地約37%至約42%立贊利珠單抗。

在一個實施方式中，藥物組成物包含總電荷變體的約20%至約50%、合適地約35%至約45%、合適地約37%至約42%主峰。

在一個實施方式中，藥物組成物包含總電荷變體的至少20%、至少30%異立贊利珠單抗。

在一個實施方式中，藥物組成物包含總電荷變體的至少30%、合適地至少40%酸性變體。

在一個實施方式中，藥物組成物包含總電荷變體的至多40%、合適地至多35%異立贊利珠單抗。

在一個實施方式中，藥物組成物包含總電荷變體的至多56%、合適地至多45%酸性變體。

在一個實施方式中，藥物組成物包含總電荷變體的約20%至約40%、合適地約25%至約35%異立贊利珠單抗。

在一個實施方式中，藥物組成物包含總電荷變體的約30%至約50%、合適地約35%至約45%、合適地約37%至約42%酸性變體。

在一個實施方式中，藥物組成物包含總電荷變體的至少5%、合適地至少10%立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺。

在一個實施方式中，藥物組成物包含總電荷變體的合適地至少10%鹼性變體、至少15%鹼性變體。

在一個實施方式中，藥物組成物包含總電荷變體的至多15%、合適地至多20%立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺。

在一個實施方式中，藥物組成物包含總電荷變體的至多20%、合適地至多25%、合適地至多35%鹼性變體。

在一個實施方式中，藥物組成物包含總電荷變體的約5%至約20%、合適地約10%至15%立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺。

在一個實施方式中，藥物組成物包含總電荷變體的約10%至約35%、合適地約15%至25%鹼性變體。

在一個實施方式中，藥物組成物包含總電荷變體的至少約55%、至少約60%立贊利珠單抗加上異立贊利珠單抗。

在一個實施方式中，藥物組成物包含總電荷變體的約55%至約85%、約60%至約80%、約65%至約75%立贊利珠單抗加上異立贊利珠單抗。

在一個實施方式中，本發明提供了一種包含立贊利珠單抗(該立贊利珠單抗分別具有SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：9的輕鏈和重鏈胺基酸序列)以及立贊利珠單抗變體(其中在SEQ ID NO：10的位置32處的胺基酸天冬胺酸變為異天冬胺酸(異立贊利珠單抗))和在SEQ ID NO：10的位置32處為琥珀醯亞胺的變體(立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺)的藥物組成物。

使用毛細管區帶電泳(CZE)，鑒定了電荷變體分佈的pH依賴性動力學行為。在pH值低於6.3的孵育過程中，發生了琥珀醯亞胺積聚。

孵育pH值越低，琥珀醯亞胺的積聚越多。pH值高於6.3時，會形成更多的異天冬胺酸，而琥珀醯亞胺的初始量降低到甚至比起始材料中觀察到的水平更低(圖5)。

抗體互補決定區(CDR)中的化學修飾會影響與靶分子之結合活性。已經報導了琥珀醯亞胺作為CDR中的異構化變體對結合活性之影響(Yan B等人，2009,doi：10.1002/jps.21655；Cacia J等人，1996,doi：10.1021/bi951526c；Valliere-Douglass J等人，2008,doi：10.1016/j.chroma.2008.10.078；Ouellette D等人，2013,doi：10.4161/mabs.24458)。另外，如果在CDR中存在，還顯示異天冬胺酸作為異構化變體會引起結合活性降低(Cacia J等人，1996,doi：10.1021/bi951526c；Harris RJ等人，2001,DOI：10.1016/s0378-4347(00)00548-x；Rehder DS等人，2008,doi：10.1021/bi7018223)。雖然發現與主峰(含有天冬胺酸，立贊利珠單抗)的效力相比，鹼性級分(含有琥珀醯亞胺)的效力降低，但出人意料的是，發現含有異立贊利珠單抗的酸性變體保留了基本上相等於立贊利珠單抗的生物活性。

因此，在一個方面，本發明提供了立贊利珠單抗的分離的變體，該立贊利珠單抗包含分別在SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：9中的輕鏈和重鏈胺基酸序列，其中在SEQ ID NO：10的位置32處的胺基酸天冬胺酸在抗體的一條輕鏈或兩條輕鏈中被異天冬胺酸替換(異立贊利珠單抗)。在一個實施方式中，藉由形成琥珀醯亞胺中間體來進行替換。在一個方面，本發明提供了包含立贊利珠單抗、異立贊利珠單抗和立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺的藥物組成物，其中異立贊利珠單抗對人P-選擇蛋白的結合親和力基本上相等於立贊利珠單抗對人P-選擇蛋白的結合親和力。立贊利珠單抗或異立贊利珠單抗對P-選擇蛋白的結合親和力可以藉由常規方法確定，例如藉由ELISA(例如，如實例2.1)。在上下文中的術語「基本上相等」應理解為立贊利珠單抗和異立贊利珠單抗的結合親和力相差不超過2倍、合適地不超過1.5倍、合適地不超過1.3倍、合適地不超過1.2倍。合適地，異立贊利珠單抗的結合親和力在立贊利珠單抗的結合親和力的80%至125%之內。

在一個實施方式中，異立贊利珠單抗的生物活性與立贊利珠單抗的生物活性基本上相等。術語「立贊利珠單抗的生物活性」係指立贊利珠單抗抑制人P-選擇蛋白與其配位基PSGL-1(P-選擇蛋白糖蛋白配位基-1)相互作用的能力，通常是抑制表現人P-選擇蛋白的細胞與PSGL-1相互作用。生物活性可以藉由常規方法確定。合適地，藉由測量微量滴定板的螢光信號來確定生物活性，該微量滴定板的孔首先被PSGL-1包被，然後在將在其表面表現人P-選擇蛋白的哺乳動物細胞進行螢光標記後與該細胞一起孵育，並與包含在本發明之藥物組成物中的SEG101一起孵育。實例2.1證明了測量SEG101或其變體的生物活性之合適方法。在上下文中的術語「基本上相等」應理解為立贊利珠單抗和異立贊利珠單抗的生物學活性相差不超過2倍、合適地不超過1.5倍、合適地不超過1.3倍、合適地不超過1.2倍。合適地，異立贊利珠單抗的生物活性在立贊利珠單抗的生物活性的80%至125%之內。

在另一方面，本發明提供了立贊利珠單抗的分離的變體(立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺)，該立贊利珠單抗分別包含SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：9中的輕鏈和重鏈胺基酸序列，其中SEQ ID NO：10的位置32處的胺基酸天冬胺酸在至少一個輕鏈中被琥珀醯亞胺替換，而在另一個輕鏈上的相應位置係天冬胺酸、異天冬胺酸或琥珀醯亞胺。

在一個方面，本發明提供了一種包含立贊利珠單抗、異立贊利珠單抗和立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺藥物組成物，其中立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺能夠水解為異立贊利珠單抗和立贊利珠單抗。在一個實施方式中，立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺能夠在pH 7.4±0.4下水解為異立贊利珠單抗和立贊利珠單抗。在一個實施方式中，立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺能夠在室溫下(典型地在約25℃下)在pH 7.4±0.4下水解為異立贊利珠單抗和立贊利珠單抗。在一個實施方式中，立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺能夠在生理條件下水解為異立贊利珠單抗和立贊利珠單抗。術語「生理條件」應理解為pH 7.4±0.4，溫度在約36.0℃至約40.0℃之間，較佳的是在36.5℃至38.0℃之間，較佳的是約36.5℃至37.5℃。在一個實施方式中，在生理條件下，在約2至約5小時內、合適地在約3至約5小時內、合適地在約3至約4小時內，約50%立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺水解為異立贊利珠單抗和立贊利珠單抗。在一個實施方式中，將立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺(例如靜脈內)注射至受試者後被水解為異立贊利珠單抗和立贊利珠單抗。

在一個實施方式中，在藥物組成物中，立贊利珠單抗係藉由CZE確定的主要種類。主要種類被理解為具有最大AUC。

在一個實施方式中，在藥物組成物中，異立贊利珠單抗係藉由CZE測定之主要種類。

在一個實施方式中，藥物組成物包含基本上相等量的立贊利珠單抗和異立贊利珠單抗。在上下文中使用的術語「基本上相等」係指異立贊利珠單抗的量在立贊利珠單抗的量的80%至125%之內，合適地在立贊利珠單抗的90%至110%之內。

在一個實施方式中，本發明之藥物組成物保持在約2℃至約8℃，合適地約5℃。藥物組成物合適地保存在冰箱中。在一個實施方式中，本發明之藥物組成物的溫度為約2℃至約8℃，合適地為約4℃至約6℃，合適地為5℃。發現在位置32處的天冬胺酸的異構化隨溫度升高以更高的速度發生(如例如表6中所示)。在這樣的溫度條件下，較佳的是如作為CZE測試中主峰的AUC所確定的，與起始原料相比(即在製備藥物組成物時的時間處)，立贊利珠單抗的減少經至少12個月的時間、合適地經18個月的時間，合適地經24個月的時間不超過25%、不超過20%、不超過15%、合適地不超過10%、合適地不超過5%。在這樣的溫度條件下，與起始原料相比，經至少12個月的時間、合適地經18個月的時間、合適地經24個月的時間，鹼性變體之總量變化不超過15%、不超過10%、不超過5%、合適地不超過3%、合適地不超過2%。在這樣的溫度條件下，與起始原料相比，經至少12個月的時間、合適地經18個月的時間、合適地經24個月的時間，酸性變體之總量不增加超過25%，不超過15%，合適地不超過10%，合適地不超過5%。如果藥物組成物具有適當pH範圍，則可以進一步最小化上述變化。例如pH在約5.5至約7.5之間、合適地pH在約5.5至約7之間、合適地pH在約6至約7之間、合適地約6±0.3。合適地，藥物配製物保持在pH約6。

在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其包含總電荷變體的至少24%、至少30%、至少35%主峰和至多56%、至多50%、至多45% 酸性變體，合適地在18個月或24個月保質期時，合適地藥物組成物保持在約2℃至約8℃，合適地約5℃。在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其包含總電荷變體的至少24%主峰和至多56%酸性變體，合適地在18個月或24個月保質期時，合適地藥物組成物保持在約2℃至約8℃，合適地約5℃。

在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其包含總電荷變體的至少24%、至少30%、至少35%主峰，至多56%、至多50%、至多45%酸性變體，至多35%、至多30%、至多25%鹼性變體，合適地在18個月或24個月保質期時，合適地藥物組成物保持在約2℃至約8℃，合適地約5℃。在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其包含總電荷變體的至少24%主峰、至多56%酸性變體和至多35%鹼性變體，合適地在18個月或24個月保質期時，合適地藥物組成物保持在約2℃至約8℃，合適地約5℃。

質譜分析(MS)用於鑒定化學修飾，包括LC_D、LC_isoD和LC_succi。在一個方面，本發明提供了一種藥物組成物，其包含藉由MS測定的LC_D、LC_isoD和LC_succi之總量中的至少50% LC_D。在一個實施方式中，本發明提供了藥物組成物，其包含LC_D、LC_isoD和LC_succi之總量中的約60%至約85% LC_D。在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其在保質期前3個月內包含LC_D、LC_isoD和LC_succi之總量的約70%至約85% LC_D。在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其在保質期的12個月、合適地保質期的18個月、合適地保質期24個月後包含LC_D、LC_isoD和LC_succi之總量的約60%至約70% LC_D。在一個實施方式中，本發明提供了一種包含LC_D的藥物組成物，其中從保質期開始到保質期結束(其中保質期係12個月、合適地為18個月、合適地為24個月)，LC_D的減少百分比相對於LC_D、LC_isoD和LC_succi之總量不超過約30%、不超過20%、合適地不超過15%。在一個實施方式中，本發明提供了一種包含LC_D的藥物組成物，其中對於至少約18個月的時間，LC_D的減少百分比相對於LC_D、LC_isoD和LC_succi之總量不超過約20%。合適地藥物組成物保持在約2℃至約8℃，合適地保持在約5℃。如果藥物組成物具有適當pH範圍，則可以進一步最小化上述變化。例如pH在約5.5至約7.5之間、合適地pH在約5.5至約7之間、合適地pH在約6至約7之間、合適地約6±0.3。合適地，藥物配製物保持在pH約6。

在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其包含藉由MS測定的LC_D、LC_isoD和LC_succi總量中的至少10% LC_isoD。在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其包含藉由MS測定的LC_D、LC_isoD和LC_succi總量中至多30% LC_isoD。在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其包含LC_D、LC_isoD和LC_succi總量的約10%至約30%、合適地約15%至約25%、合適地約20%至約30% LC_isoD。在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其在保質期前3個月內包含LC_D、LC_isoD和LC_succi總量的少於約25% LC_isoD。在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其在保質期12個月、合適地18個月、合適地保質期24個月後，包含LC_D、LC_isoD和LC_succi總量的約25% LC_isoD。在一個實施方式中，本發明提供了一種包含LC_isoD的藥物組成物，其中從保質期開始到保質期結束(其中保質期係12個月、合適地為18個月保質期、合適地為24個月)，LC_isoD的變化百分比相對於LC_D、LC_isoD和LC_succi之總量不超過30%、不超過20%、不超過10%、合適地不超過5%。在一個實施方式中，本發明提供了一種包含LC_isoD的藥物組成物，其中對於至少約18個月的時間，LC_D的變化百分比相對於LC_D、LC_isoD和LC_succi之總量不超過約20。合適地藥物組成物保持在約2℃至約8℃，合適地保持在約5℃。如果藥物組成物具有適當pH範圍，則可以進一步最小化上述變化。例如pH在約5.5至約7.5之間、合適地pH在約5.5至約7之間、合適地pH在約6至約7之間、合適地約6±0.3。合適地，藥物配製物保持在pH約6。

在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其包含藉由MS測定的LC_D、LC_isoD和LC_succi之總量中的至少1% LC_succi。在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其包含藉由MS測定的LC_D、LC_isoD和LC_succi之總量中至多10% LC_succi。在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其包含LC_D、LC_isoD和LC_succi之總量的約1%至約10% LC_succi。在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其在保質期前三個月內包含LC_D、LC_isoD和LC_succi總量的少於約3% LC_succi。在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其在保質期12個月、合適地18個月、合適地24個月後，包含LC_D、LC_isoD和LC_succi總量的約5% LC_succi。在一個實施方式中，本發明提供了一種包含LC_succi的藥物組成物，其中從保質期開始到保質期結束(其中保質期係12個月、合適地為18個月、合適地為24個月)，LC_succi的改變百分比相對於LC_D、LC_isoD和LC_succi之總量不超過約20%、不超過10%、合適地不超過5%。在一個實施方式中，本發明提供了一種包含LC_succi的藥物組成物，其中對於至少約18個月的時間，LC_succi的變化百分比相對於LC_D、LC_isoD和LC_succi之總量不超過約10%。合適地藥物組成物保持在約2℃至約8℃，合適地保持在約5℃。如果藥物組成物具有適當pH範圍，則可以進一步最小化上述變化。例如pH在約5.5至約7.5之間、合適地pH在約5.5至約7之間、合適地pH在約6至約7之間、合適地約6±0.3。合適地，藥物配製物保持在pH約6。

在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其包含藉由MS測定的LC_D、LC_isoD和LLC_succi之總量的約60%至80% LC_D、約15%至30% LC_isoD和約1%至10% LC_succi。在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其在保質期前三個月內包含LC_D、LC_isoD和LC_succi之總量的約70%至80% LC_D、約20%至25% LC_isoD和約1%至3% LC_succi。在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其在保質期12個月、合適地為18個月，合適地為24個月後，包含LC_D、LC_isoD和LC_succi之總量的約60%至70% LC_D、約20%至30% LC_isoD和約5%至10% LC_succi。合適地藥物組成物保持在約2℃至約8℃，合適地保持在約5℃。如果藥物組成物具有適當pH範圍，則可以進一步最小化上述變化。例如pH在約5.5至約7.5之間、合適地pH在約5.5至約7之間、合適地pH在約6至約7之間、合適地約6±0.3。合適地，藥物配製物保持在pH約6。

因此，在一個實施方式中，本發明之藥物組成物還包含緩衝液系統。

本發明關於一種新穎藥物組成物，其包含立贊利珠單抗或與立贊利珠單抗具有最多3個胺基酸差異的抗體作為活性成分，以及緩衝液系統，其中該藥物組成物的pH值為約5.0至7.5、約5.5至7.0、約5.5至7.5、約5.5至7.0、約5.5至6.8、約5.5至6.5、約5.7至6.8、約5.7至6.5、約5.7至6.3、約5.9至6.1、或約6.0。在一個特定的方面，pH係在以上列舉的那些之內的任何pH值；例如5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2和6.3。

適用於本發明之緩衝液系統包括但不限於有機酸鹽，例如檸檬酸、抗壞血酸、葡萄糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、乙酸或鄰苯二甲酸的鹽；Tris、胺丁三醇鹽酸鹽或磷酸鹽緩衝液。較佳的是，緩衝液系統係檸檬酸緩衝液或磷酸鹽緩衝液或其組合。另外，胺基酸組分(例如，甘胺酸)，也可用作緩衝劑。胺基酸可以D-和/或L-形式存在，但L-形式係典型的。較佳的是，緩衝液系統不包含精胺酸或組胺酸。

根據本發明，用於配製物的合適的緩衝液系統的濃度為約10mM至約100mM、約10mM至約50mM或約10mM至約40mM，這取決於例如緩衝液和所需的配製物穩定性。在一個較佳的實施方式中，緩衝液系統係檸檬酸鹽，並且檸檬酸鹽較佳的是以10mM至50mM，較佳的是為15mM至40mM、較佳的是20mM至30mM的濃度使用。在另一個較佳的實施方式中，緩衝液系統係磷酸鹽，並且磷酸鹽較佳的是以10mM至50mM、較佳的是15mM至40mM，較佳的是20mM至30mM的濃度使用。在一個實施方式中，檸檬酸鹽或磷酸鹽緩衝液的抗衡離子係鈉和/或鉀。在一個較佳的實施方式中，緩衝液係檸檬酸鈉緩衝液。

用於本發明之合適的穩定劑可以例如用作黏度增強劑、增溶劑、等滲劑和/或類似物。穩定劑可以是離子的，但是較佳的是非離子的(例如糖)。糖包括但不限於單糖，例如果糖、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖等；二糖，例如乳糖、蔗糖、海藻糖、纖維二糖等；多糖，例如棉子糖、松三糖、麥芽糖糊精、葡聚糖、澱粉等；以及糖醇，例如甘露醇、木糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇、木糖醇、山梨糖醇(葡萄糖醇)等。糖可以是糖醇或胺基糖。較佳的是，糖不是還原糖。還原糖包括但不限於所有單糖、乳糖、麥芽糖和纖維二糖。因此，糖較佳的是非還原糖，例如蔗糖、海藻糖、棉子糖、山梨糖醇和甘露糖醇。蔗糖特別有用。作為離子穩定劑，它們包括鹽例如NaCl或胺基酸組分。較佳的是，穩定劑不包含精胺酸或組胺酸。胺基酸可以D-和/或L-形式存在，但L-形式係典型的。根據本發明之配製物包含約50mM至400mM、約50mM至300mM，較佳的是180mM至300mM，最較佳的是約220mM的穩定劑，較佳的是為蔗糖。

除了立贊利珠單抗或與立贊利珠單抗具有最多3個胺基酸差異的抗體和緩衝系統外，本發明之藥物組成物還可包含其他組分，例如以下一種或多種：(i)穩定劑；(ii)表面活性劑；和(iii)鹽。

根據本發明之合適的表面活性劑係非離子型表面活性劑，包括但不限於聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20或80)；泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)；曲通(Triton)；辛基糖苷；肉豆蔻醯胺基丙基-、棕櫚醯丙基-或異硬脂醯胺基丙基-二甲基胺；聚乙二醇、聚丙二醇以及乙二醇與丙二醇的共聚物(例如普郎尼克(Pluronics)，PF68等)。在一個較佳的實施方式中，表面活性劑係聚山梨醇酯，較佳的是選自由以下組成之群組：聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80。更較佳的是，表面活性劑係聚山梨醇酯80。

用於根據本發明之配製物的表面活性劑(較佳的是聚山梨醇酯)的濃度為配製物的約0.01%至0.1%，較佳的是約0.01%至0.05%，最較佳的是約0.02%容積重量(w/v)。

等滲劑用於將根據本發明之配製物的滲透壓設定為生理上可接受的值。等滲劑係生理上可接受的組分，並且沒有特別限制。等滲劑的典型實例係例如無機鹽(例如氯化鈉、氯化鉀或氯化鈣等)。該等可以單獨使用或以其混合物使用。應當指出，某些試劑可能具有雙重作用，例如某些糖或糖醇既可以用作穩定劑又可以用作等滲劑。在一個實施方式中，等滲劑的濃度為約50mM至約300mM。在一個實施方式中，等滲劑係氯化鈉。在一個實施方式中，氯化鈉的濃度為約100mM至約250mM，特別是約190mM。

在一個實施方式中，本發明藥物組成物中抗體的濃度為約1mg/ml至100mg/ml、約5mg/ml至100mg/ml、約5mg/ml至75mg/ml、約5mg/ml至50mg/ml、約5mg/ml至30mg/ml。在一個實施方式中，抗體的濃度為至少5mg/ml。在一個實施方式中，抗體的濃度為至少10mg/ml。在一個實施方式中，抗體的濃度為至少20mg/ml。在一個實施方式中，抗體的濃度為約10mg/ml。除非上下文另有說明，否則本文中所用的術語「抗體(antibody)」或其可互換使用的術語「抗體(ANTIBODY)」包含由藥物組成物包含的立贊利珠單抗及其任何變體(例如立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺和異立贊利珠單抗)，該藥物組成物可被UV檢測並且因此與確定蛋白質濃度有關。

此外，本發明之藥物組成物係穩定的，使得即使在2℃-8℃下儲存36週(約9個月)後，按照測量(例如，藉由SEC-HPLC測量)，低於20%、 15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%的總抗體聚集。較佳的是，在2℃-8℃下儲存36週(約9個月)後，低於2%的總抗體聚集。

本發明之藥物組成物係穩定的，使得即使在2℃-8℃下儲存12個月後，按照測量(例如，藉由SEC-HPLC測量)，低於10%、5%、4%、3%、2%、1%的總抗體聚集。較佳的是，在2℃-8℃下儲存12個月後，低於2%的總抗體聚集。

本發明之藥物組成物係穩定的，使得即使在2℃-8℃下儲存15個月後，按照測量(例如，藉由SEC-HPLC測量)，低於10%、5%、4%、3%、2%、1%的總抗體聚集。較佳的是，在2℃-8℃下儲存15個月後，低於2%的總抗體聚集。

本發明之藥物組成物係穩定的，使得即使在2℃-8℃下儲存18個月後，按照測量(例如，藉由SEC-HPLC測量)，低於10%、5%、4%、3%、2%、1%的總抗體聚集。較佳的是，在2℃-8℃下儲存18個月後，低於2%的總抗體聚集。

本發明之藥物組成物係穩定的，使得即使在2℃-8℃下儲存24個月後，按照測量(例如，藉由SEC-HPLC測量)，低於10%、5%、4%、3%、2%、1%的總抗體聚集。較佳的是，在2℃-8℃下儲存24個月後，低於2%的總抗體聚集。

本發明之藥物組成物係穩定的，使得即使在25℃下儲存12週(約3個月)後，藉由SEC-HPLC測量，低於5%、4%、3%、2%、1%的總抗體聚集。較佳的是，在25℃下儲存12週(約3個月)後，低於2%的總抗體聚集。

本發明之藥物組成物係穩定的，使得即使在25℃下保存6個月後，如藉由SEC-HPLC測量，低於5%、4%、3%、2%、1%的總抗體聚集。較佳的是，在25℃下儲存6個月後，低於2%的總抗體聚集。

本發明之藥物組成物係穩定的，使得即使在40℃下儲存2週後，藉由SEC-HPLC測量，低於20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%的總抗體聚集。較佳的是，在40℃下儲存2週後，低於2%的總抗體聚集。

在一個方面，本發明提供了藥物組成物，其包含：

a)立贊利珠單抗及其任何變體，或與立贊利珠單抗及其任何變體具有最多3個胺基酸差異的抗體；以約5mg/ml至50mg/ml的濃度使用；

b)緩衝系統，較佳的是檸檬酸鹽(例如檸檬酸鈉)和/或磷酸鹽(例如磷酸鉀)緩衝液系統，其中緩衝液系統可以較佳的是以約10mM至50mM的濃度使用；並且其中緩衝液系統的pH為5.0至7.5，較佳的是為5.5至7.0，較佳的是5.7至6.3之內的任何pH值；

c)視需要，穩定劑，較佳的是蔗糖，其濃度較佳的是為約50mM至300mM；

d)視需要，非離子表面活性劑，較佳的是聚山梨醇酯80，其濃度較佳的是為約0.01% w/v(0.1mg/ml)至0.1% w/v(1mg/ml)；和

e)視需要，等滲劑，較佳的是NaCl，其濃度較佳的是為約50mM-300mM，更較佳的是為約100mM-250mM，特別是約190mM。

在一個較佳的實施方式中，本發明提供了一種配製物，其包含濃度為約10mg/ml的SEG101、約220mM蔗糖、約20mM檸檬酸鹽和約0.02% w/v聚山梨醇酯80，其中該配製物的pH為約6.0、較佳的是為5.7至6.3、更較佳的是5.9至6.1，例如6.0。

在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組成物，其包含立贊利珠單抗、異立贊利珠單抗和立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺(例如如上所述)，其中藥物組成物不是如下配製物，該配製物包含濃度約10mg/ml的立贊利珠單抗、約25mM磷酸鈉、pH約7、約190mM氯化鈉，約0.02% w/v聚山梨醇酯80和注射用水。

在一個方面，本發明提供了一種藥物組成物，其包含立贊利珠單抗、異立贊利珠單抗和立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺(例如如上所述)，其中該藥物組成物不包含甘胺酸。

在一個方面，本發明提供了一種藥物組成物，其包含立贊利珠單抗、異立贊利珠單抗和立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺(例如如上所述)，其中該藥物組成物不包含磷酸鈉。

在一個方面，本發明提供了一種藥物組成物，其包含立贊利珠單抗、異立贊利珠單抗和立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺(例如如上所述)，其中該藥物組成物不具有pH=7。

在一個方面，本發明提供了一種藥物組成物，其包含立贊利珠單抗、異立贊利珠單抗和立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺(例如如上所述)，以及至少一種藥學上可接受的賦形劑。

在一個方面，本發明提供了一種藥物組成物，其包含立贊利珠單抗、異立贊利珠單抗和立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺(例如如上所述)，其中該藥物組成物還包含蔗糖。在一個實施方式中，藥物組成物包含至少50mM蔗糖。

在一個方面，本發明提供了一種藥物組成物，其包含立贊利珠單抗、異立贊利珠單抗和立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺(例如如上所述)，其中立贊利珠單抗、異立贊利珠單抗和琥珀醯亞胺之總量為約5mM至50mM、合適地為5mM至30mM、合適地為10mM。

在一個方面，本發明提供了一種藥物組成物，其包含立贊利珠單抗、異立贊利珠單抗和立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺(例如如上所述)，其中該藥物組成物還包含表面活性劑。在一個實施方式中，表面活性劑係聚山梨醇酯。在一個實施方式中，表面活性劑係聚山梨醇酯80。在一個實施方式中，藥物組成物包含至少0.01%表面活性劑。

在一個方面，本發明提供了一種藥物組成物，其包含立贊利珠單抗、異立贊利珠單抗和立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺(例如如上所述)，其中該藥物組成物還包含緩衝系統。在一個實施方式中，緩衝系統係檸檬酸鹽緩衝液。在一個實施方式中，藥物組成物包含10mM至50mM的檸檬酸鹽緩衝液。

在一個較佳的實施方式中，本發明之藥物組成物呈液體形式。更較佳的是，該組成物係水性的，即溶劑係水。適用於藥物用途的配製物或組成物可以是無菌的、均質的和/或等滲的。在一個較佳的實施方式中，本發明之藥物組成物適合於靜脈內投與於人。但是，本發明之藥物組成物可能不適合皮下投與。

在一個實施方式中，液體形式的本發明之藥物組成物也適用於凍乾。典型地，凍乾形式比液體形式更穩定，並且將是較佳的儲存形式。但是，如果液體形式足夠穩定至少12個月、至少18個月或至少24個月的時間，理想地是12個月、18個月或24個月的時間，則液體形式係方便使用的較佳。

在一個實施方式中，本發明之藥物組成物為凍乾形式，其包含立贊利珠單抗或與立贊利珠單抗具有最多3個、較佳的是2個、更較佳的是僅一個胺基酸差異的抗體，較佳的是具有分別為SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：9中的輕鏈和重鏈胺基酸序列的立贊利珠單抗，以及立贊利珠單抗變體(異立贊利珠單抗)，在該立贊利珠單抗變體中，SEQ ID NO：10的位置32處的胺基酸天冬胺酸改變為異天冬胺酸。在一個實施方式中，藥物組成物還包含立贊利珠單抗的琥珀醯亞胺。

在一個實施方式中，經受凍乾的液體配製物(凍乾前配製物)進一步包含緩衝系統，其中藥物組成物的pH值為約5.0至7.5、約5.5至7.5、約5.5至7.0、約5.5至6.8、約5.5至6.5、約5.7至6.8、約5.7至6.5、約5.7至6.3、約5.9至6.1、或約6.0。在一個特定的方面，pH係在以上列舉的那些之內的任何pH值；例如5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2和6.3。

在另一個實施方式中，從凍乾配製物重構的配製物的pH值為約5.5至7.5、約5.5至7.0、約5.5至6.8、約5.5至6.5、約5.7至6.8、約5.7至6.5、約5.7至6.3、約5.9至6.1、或約6.0。在一個特定的方面，pH係在以上列舉的那些之內的任何pH值；例如5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2和6.3。

在一個實施方式中，緩衝液系統係檸檬酸鹽緩衝液或磷酸鹽緩衝液。在一個較佳的實施方式中，緩衝液系統係檸檬酸鹽，並且檸檬酸鹽較佳的是以10mM至50mM，較佳的是為15mM至40mM、較佳的是20mM至30mM的濃度使用。在另一個較佳的實施方式中，緩衝液系統係磷酸鹽，並且磷酸鹽較佳的是以10mM至50mM、較佳的是15mM至40mM，較佳的是20mM至30mM的濃度使用。

在一個實施方式中，凍乾形式的本發明之藥物組成物還包含賦形劑，包括但不限於本申請前面所教導的穩定劑、表面活性劑和等滲劑。在一個實施方式中，凍乾形式包含穩定劑。較佳的是，穩定劑係蔗糖。在一個實施方式中，凍乾前配製物中的蔗糖濃度在20mg/ml至120mg/ml之間、合適地在40mg/ml至100mg/ml之間、合適地在60mg/ml至90mg/ml之間。

在一個實施方式中，凍乾形式的本發明之藥物組成物還包含凍乾保護劑。通常，將凍乾保護劑添加到凍乾前配製物中。凍乾保護劑可以是無定形形式，例如蔗糖，或結晶形式，例如甘露糖醇，或其混合物。其他凍乾保護劑包括但不限於甘胺酸、聚乙二醇和山梨糖醇。在根據本發明之凍乾前配製物中總凍乾保護劑的濃度為20mg/ml-150mg/ml、合適地為40mg/ml-120mg/ml、合適地為60mg/ml-120mg/ml、合適地為60mg/ml-100mg/ml。例如，如果在凍乾前配製物中有40mg/ml蔗糖和60mg/ml甘露醇，則在凍乾前配製物中總凍乾保護劑的濃度為100mg/ml。在具有雙重功能的賦形劑的情況下，計算採用總量而不區分功能。例如，如果凍乾前配製物包含40mg/ml蔗糖，則凍乾保護劑的濃度為40mg/ml，並且同時穩定劑的濃度為40mg/ml。

在一個實施方式中，凍乾保護劑中的至少一種係蔗糖。在一個實施方式中，唯一的凍乾保護劑係蔗糖。

在一個實施方式中，凍乾保護劑與抗體的莫耳比為至少300、較佳的是至少500、較佳的是至少600、至少700、至少800或至少900。在其中凍乾保護劑中的至少一種係蔗糖的情況下，凍乾保護劑與抗體的莫耳比僅是指蔗糖與抗體的莫耳比。例如，在包含40mg/ml蔗糖和60mg/ml甘露醇的凍乾前配製物中，凍乾保護劑與抗體的莫耳比為553，這沒有考慮到甘露醇作為凍乾保護劑的量。在抗體的計算中，包括主峰在內的所有電荷變體都算在一起，其較佳的是藉由UV確定。例如，在包含30mg/ml SEG101的凍乾前配製物的情況下，這係指總電荷變體，包括主峰(立贊利珠單抗)。

在一個實施方式中，凍乾前配製物中抗體的濃度為約10mg/ml至100mg/ml、約10mg/ml至70mg/ml、約20mg/ml至70mg/ml、約30mg/ml至50mg/ml，例如約40mg/ml。

使用表面活性劑可以減少重構蛋白質的聚集和/或減少重構配製物中顆粒的形成。加入的表面活性劑的量應使其減少重構蛋白質的聚集並使重構後的顆粒形成最小化。

可以根據需要將表面活性劑添加至凍乾前配製物、凍乾配製物和/或重構的配製物中，合適地添加至凍乾前配製物中。

在一個實施方式中，表面活性劑係非離子表面活性劑。在一個實施方式中，表面活性劑係聚山梨醇酯，較佳的是聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯20。較佳的是，表面活性劑的濃度為0.01% w/v(0.1mg/mL)至0.1% w/v(1mg/mL)、較佳的是0.01% w/v(0.1mg/mL)至0.05% w/v(0.5mg/mL)、較佳的是0.02% w/v(0.2mg/mL)。

理想地，凍乾形式存儲在室溫下。可替代地，凍乾形式存儲在2℃-8℃。理想地，凍乾形式具有至少18個月、至少24個月或至少36個月的保質期。理想地，凍乾形式具有18個月、24個月或36個月的保質期。

凍乾配製物可以在投與於患者之前不久重構。在可接受的時間段(典型地少於10分鐘)內完成重構。與凍乾前配製物相比，重構導致更低、相同或更高的抗體濃度，但是通常導致更低的抗體濃度。重構的配製物在從重構到使用的一段時間內，通常幾小時到幾天，基本上保持了物理及化學穩定性和完整性。

重構介質選自水，即無菌水，注射用抑菌水(BWFI)或由以下組成之群組：乙酸、丙酸、琥珀酸、氯化鈉、氯化鎂、氯化鈉的酸性溶液、氯化鎂的酸性溶液、和精胺酸的酸性溶液，其量為約50mM至約100mM。最較佳的重構介質係無菌水。藉由在投與前用輸注溶液稀釋重構的配製物，重構的配製物可達到所需等滲性。

在一個方面，本發明提供了一種凍乾配製物，其可藉由凍乾pH值為約5.0至7.5，較佳的是為5.5至7.5的水性配製物而獲得，其中該凍乾配製物包含：

a)抗體(立贊利珠單抗及其任何變體)；

b)凍乾保護劑；和

c)緩衝液系統。

在一個實施方式中，凍乾配製物還包含表面活性劑，較佳的是聚山梨醇酯40或聚山梨醇酯80。較佳的是，表面活性劑以約0.01% w/v(0.1mg/mL)至0.1% w/v(1mg/mL)的濃度存在於水性配製物中。

在一個實施方式中，抗體以約10mg/mL至100mg/mL的濃度存在於水性配製物中。

在一個實施方式中，緩衝液系統係檸檬酸鹽，例如檸檬酸鈉。較佳的是，緩衝液系統以約10mM至50mM的濃度存在於水性配製物中。

在一個實施方式中，凍乾保護劑係蔗糖、甘露醇或其混合物。較佳的是，凍乾保護劑以約10mg/mL至100mg/mL的濃度存在於水性配製物中。

在一個實施方式中，凍乾保護劑(較佳的是蔗糖)與抗體的莫耳比為約200至1500。

在一個實施方式中，本發明提供了一種凍乾配製物，其包含

a)約25w/w%-40w/w%，較佳的是約28%至32w/w%的抗體；和

b)約55%至75w/w%，較佳的是約65%至71w/w%的蔗糖，

這係基於該凍乾配製物的總重量。

在一個實施方式中，凍乾配製物可藉由凍乾水性配製物獲得，其中水性配製物具有約5.7至6.3的pH並且包含

a)立贊利珠單抗及其任何變體，其濃度為約30mg/mL至約50mg/mL；

b)蔗糖，其濃度為約10mg/mL至100mg//mL；

c)視需要，甘露醇，其濃度高達100mg/mL；

d)檸檬酸鹽(例如檸檬酸鈉)，其濃度為約20mM；和

e)聚山梨醇酯80，其濃度為約0.02% w/v(0.2mg/mL)。

在一個實施方式中，凍乾配製物可藉由凍乾水性配製物獲得，其中水性配製物具有約5.7至6.3的pH，較佳的是約pH 6.0，並且包含

a)立贊利珠單抗及其任何變體，其濃度為約30mg/mL；

b)蔗糖，其濃度為約90mg/mL；

c)檸檬酸鹽(例如檸檬酸鈉)，其濃度為約20mM；和

d)聚山梨醇酯80，其濃度為約0.02% w/v(0.2mg/mL)。

a)立贊利珠單抗及其任何變體，其濃度為約40mg/mL；

b)蔗糖，其濃度為約90mg/mL；

c)檸檬酸鹽(例如檸檬酸鈉)，其濃度為約20mM；和

d)聚山梨醇酯80，其濃度為約0.02% w/v(0.2mg/mL)。

a)立贊利珠單抗及其任何變體，其濃度為約50mg/mL；

b)蔗糖，其濃度為約40mg/mL；

c)檸檬酸鹽(例如檸檬酸鈉)，其濃度為約20mM；和

d)聚山梨醇酯80，其濃度為約0.02% w/v(0.2mg/mL)。

a)立贊利珠單抗及其任何變體，其濃度為約30mg/mL；

b)蔗糖，其濃度為約20mg/mL；

c)甘露醇，其濃度為約40mg/mL；

d)檸檬酸鹽(例如檸檬酸鈉)，其濃度為約20mM；和

e)聚山梨醇酯80，其濃度為約0.02% w/v(0.2mg/mL)。

a)立贊利珠單抗及其任何變體，其濃度為約30mg/mL；

b)蔗糖，其濃度為約40mg/mL；

c)甘露醇，其濃度為約80mg/mL；

d)檸檬酸鹽(例如檸檬酸鈉)，其濃度為約20mM；和

e)聚山梨醇酯80，其濃度為約0.02% w/v(0.2mg/mL)。

a)立贊利珠單抗及其任何變體，其濃度為約30mg/mL；

b)蔗糖，其濃度為約40mg/mL；

c)甘露醇，其濃度為約60mg/mL；

d)檸檬酸鹽(例如檸檬酸鈉)，其濃度為約20mM；和

e)聚山梨醇酯80，其濃度為約0.02% w/v(0.2mg/mL)。

在一個方面，本發明提供了一種藉由重構如上所述之凍乾配製物而獲得的液體藥物組成物。

本發明之一個目的是提供在儲存時間內穩定的抗體配製物。根據本發明，穩定的配製物一種配製物，其中的抗體在儲存後基本上保留其效力以及物理/化學穩定性和完整性。抗體配製物的穩定性可以使用生物活性測定來測量。較佳的是，與開始時間相比(即T=0)，在長期儲存條件(2℃-8℃)下儲存24或36週、或12個月、15個月、18個月或24個月後，抗體活性的降低小於20%、更較佳的是小於15%、更較佳的是小於10%、更較佳的是小於5%。就SEG101而言，生物學活性基於其抑制表現人P-選擇蛋白的細胞與其配位基PSGL-1(例如經重組修飾以在其表面呈遞人P-選擇蛋白的哺乳動物細胞與重組人PSGL-1)相互作用的能力來測定。合適地，藉由測量微量滴定板的螢光信號來確定生物活性，該微量滴定板的孔首先被PSGL-1包被，然後在將在其表面表現人P-選擇蛋白的哺乳動物細胞進行螢光標記後與該細胞一起孵育，並與包含在本發明之藥物組成物中的SEG101一起孵育。實例2.1證明了測量SEG101或其變體的生物活性的合適方法。

在一個實施方式中、本發明之藥物組成物如上所述在長時間的儲存期間顯示出不可檢測的或僅非常低水平的抗體聚集。在較佳的實施方式中，例如藉由尺寸排阻層析(SEC)在2℃-8℃下儲存6週、12週、24週、36週、48週、一年或18個月或24個月後測定，配製物中至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的抗體分子以單體形式存在。最較佳的是，在2℃-8℃下儲存36週或一年、18個月或24個月後，配製物中至少97%的抗體分子以單體形式存在。較佳的是，如實例3中所述執行SEC。

較佳的是，液體抗體配製物應表現出6個月或更長的保質期。本發明之藥物組成物較佳的是在2℃-8℃下保存時，表現出保質期至少9個月(例如9個月)、至少一年(例如1年)、至少18個月(例如18個月)或長達2年(例如24個月)。較佳的是，藥物組成物表現出約12個月、18個月或合適地24個月的保質期。決定保質期主要因素通常是副產物和降解產物的形成以及生物活性的喪失。在其保質期內，立贊利珠單抗的生物活性應保持在原始活性的80%和125%之間。本發明之配製物達到該等所需的穩定性水平。

抗P-選擇蛋白抗體

針對人P-選擇蛋白的抗體從例如WO 2008/069999中是已知的和包括具有如下特徵的抗體：分別包含SEQ ID NO1、2和3的重鏈CDR1、CDR2和CDR3以及SEQ ID NO4、5和6的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3。針對人P-選擇蛋白的抗體的特徵還在於包含具有SEQ ID NO：7的胺基酸序列的V_H結構域和具有SEQ ID NO：8的胺基酸序列的V_L結構域。特別地，SEG101係針對P-選擇蛋白的人源化單株抗體，其包含SEQ ID NO：9的重鏈和SEQ ID NO：10的輕鏈。該抗體以高親和力和特異性結合至位於P-選擇蛋白胺基末端的凝集素結合結構域，並阻斷P-選擇蛋白與其受體P-選擇蛋白糖蛋白配位基1(PSGL-1)的相互作用。

立贊利珠單抗係針對人P-選擇蛋白的人源化單株抗體，並且在參考文獻WO 2018/083645 A1中也有所描述。立贊利珠單抗的特徵在於包含SEQ ID NO：9的重鏈和SEQ ID NO：10的輕鏈。表1總結了SEG101的序列特徵。

[表1].SEG101的胺基酸序列說明。

靶疾病和障礙

本發明之藥物組成物可用於治療、改善或預防多種疾病或障礙。本發明之藥物組成物特別可用於治療P-選擇蛋白介導的或P-選擇蛋白相關的障礙，特別是減少或消除與鐮狀細胞病有關的血管閉塞、炎症和疼痛危象；參見例如WO 2018/083645 A1和WO 2008/069999 A2。

在本發明之上下文中，術語「P-選擇蛋白介導的障礙」或「P-選擇蛋白相關的障礙」係指與P-選擇蛋白/PSGL-1複合物水平升高相關或以其為特徵的障礙。抗P-選擇蛋白抗體或其結合片段可以具有減少P-選擇蛋白/PSGL-1複合物形成的能力。它們還可以具有解離預先形成的P-選擇蛋白/PSGL-1複合物的能力。因此，應理解，使用本發明之包含抗P-選擇蛋白抗體或其結合片段的藥物組成物允許藉由抑制新的P-選擇蛋白/PSGL-1複合物的形成來預防P-選擇蛋白介導的障礙。還應理解，所述配製物的使用允許藉由解離預先形成的P-選擇蛋白/PSGL-1複合物來治療已有的P-選擇蛋白介導的障礙。合適地，減少P-選擇蛋白/PSGL-1複合物的形成和此類複合物的解離在細胞與細胞之間的相互作用期間發生。因此，合適地由本文所述之抗P-選擇蛋白抗體或其結合片段預防的障礙係與細胞和細胞之間的相互作用中P-選擇蛋白/PSGL-1複合物水平升高有關的障礙。

在廣泛的障礙和/或症狀中可以觀察到P-選擇蛋白/PSGL-1複合物的水平升高。尤其是在患有炎性疾病和/或血栓形成疾病和/或症狀的受試者中或來自患有炎性疾病和/或血栓形成疾病和/或症狀的受試者的樣本中觀察到它們。因此，包含抗P-選擇蛋白抗體或其結合片段的本發明藥物組成物可用於治療障礙，例如選自由以下組成之群組的炎性疾病和/或血栓形成疾病：鐮狀細胞病、鐮狀細胞痛危象、關節炎(例如類風濕性關節炎、骨關節炎和牛皮癬性關節炎)、移植物排斥、移植物抗宿主病、氣喘，慢性阻塞性肺疾病、牛皮癬、皮炎、敗血症、腎炎、紅斑狼瘡、硬皮病、鼻炎、過敏性反應、糖尿病、多發性硬化症、動脈粥樣硬化、血栓形成、腫瘤轉移、過敏反應、甲狀腺炎、缺血再灌注損傷(例如由於心肌梗塞、中風或器官移植引起)、癌症(例如多發性骨髓瘤)和與廣泛創傷或慢性炎症相關的病症(例如IV型遲發型超敏反應)、與例如結核桿菌感染相關的病症、或系統性炎性應答綜合症或多器官衰竭。

鐮狀細胞病患者可能經歷鐮狀細胞疼痛危象。本發明之包含抗P-選擇蛋白抗體或其結合片段的藥物組成物可在治療和預防受試者的鐮狀細胞病中的血管閉塞性疼痛危象中具有特殊用途。合適地，鐮狀細胞病患者具有選自下組的基因型，該組由以下組成：HbSS、HbSC、HbSβ0地中海貧血和HbSβ0+地中海貧血。

患者投與

本發明之目的是提供本發明之配製物在治療P-選擇蛋白介導的疾病或醫學病症中的用途。它提供了一種治療P-選擇蛋白介導的疾病或醫學病症(合適地是鐮狀細胞病)的方法，該方法包括將本發明之藥物組成物投與給需要其的受試者的步驟。本發明之藥物組成物可用於預防和治療P-選擇蛋白介導的疾病或醫學病症，例如炎性疾病和血栓形成疾病、腫瘤轉移，尤其是減少或消除與鐮狀細胞病相關的血管閉塞、炎症和疼痛危象，並較佳的是採用WO 2018/083645 A1第13頁第3段至第19頁第3段中所述之給藥方案，該頁面以引用方式併入本文。本發明之配製物可以作為單獨的治療或與可用於治療上文所述病症的其他藥物或療法聯合投與。

在一個方面，本發明關於藥物組成物，其用於治療和/或預防P-選擇蛋白介導的疾病或醫學病症，例如用於預防鐮狀細胞疼痛危象，其中首先在負荷階段提供該組成物，在負荷階段期間受試者接受以5mg/kg至7.5mg/kg的量的兩個負荷劑量的抗體，並且群眾兩個負荷劑量之間的時間間隔為2週(+/-3 天)，然後進一步在維持階段中提供該組成物，在維持階段期間受試者接受以5mg/kg至7.5mg/kg的量的多個維持劑量的抗體，並且其中多個維持劑量之間的時間間隔為4週。

在一個方面，本發明之藥物組成物在小瓶中。

在一個方面，藉由靜脈內途徑將本發明之藥物組成物投與於患者，典型地藉由將其經由注射器轉移至裝有等滲溶液(例如0.9% NaCl或5%右旋糖)的輸注容器(例如由塑膠製成的輸注袋)中以此進行輸注。

在一個實施方式中，本發明之藥物組成物較佳的是藉由靜脈內途徑，較佳的是以5mg/kg的量，較佳的是以相隔2週的2個負荷劑量，然後每4週的多個維持劑量，投與於受試者(通常為健康志願者或患者)。在一個實施方式中，測定了立贊利珠單抗及其任何變體在血清中的濃度，並且滿足以下PK參數中的一個或多個或所有：

a)在投與所述藥物組成物後t_max在0.4至10小時(h)的範圍內，較佳的是0.55h至6.25h，較佳的是中位數為1.5至2.5h，較佳的是1.92h；

b)首個劑量後C_max在116±91.3μg/mL的範圍內；或較佳的是在穩定狀態下為50μg/mL至200μg/mL，較佳的是為124μg/mL±31.6μg/mL；

c)表觀t_1/2在100h至300h的範圍內，較佳的是在150h至210h的範圍內，例如約183h(7.6天)；

d)AUC_tau,ss在10000至30000μg×h/mL的範圍內，較佳的是在第15週時為20400μg×h/mL，較佳的是變異係數為23.5%。「tau」在這裡係指給藥間隔，因此，AUCtau，穩定狀態(ss)係從第15週第1天輸注開始到第19週天輸注之前的AUC；

e)具有SCD且典型地體重為70kg的患者中在穩定狀態第15週的平均清除率在10mL/h至30mL/h的範圍內，較佳的是15mL/h至20mL/h，例如約17.2mL/h；

f)穩定狀態下每4週(尤其是從第7週到第27週)獲得的PK谷濃度在約3.78μg/mL至9.8μg/mL的範圍內。另外，在前次輸注後兩週的第3週，谷濃度為約12μg/mL至約24μg/mL，較佳的是約15μg/mL至約21μg/mL，較佳的是約18.2μg/mL。

立贊利珠單抗及其變體在血清中的濃度典型地在體外測定，並且典型地藉由ELISA測定，典型地使用P-選擇蛋白作為誘餌。因此，該方法測量了所有能夠與P-選擇蛋白結合並且較佳的是可以與測定中使用的抗人IgG抗體進一步結合的血清立贊利珠單抗及其變體。

典型地，夾心ELISA用於檢測人血清中的立贊利珠單抗及其任何變體。高結合免疫板包被有小鼠抗人P-選擇蛋白抗體。然後將板用人P-選擇蛋白包被。定量的立贊利珠單抗及其任何變體用於製備標準品和品質對照(QC)樣本，然後添加到指定的樣本孔中。結合的立贊利珠單抗的量可以藉由以下來視覺化：隨後添加生物素化的山羊抗人IgG、與辣根過氧化物酶共價軛合的鏈黴親和素蛋白(鏈黴親和素-HRP)和發色底物四甲基聯苯胺(TMB)，並用分光光度計在450nm處檢測該反應的產物。從標準校準曲線反算出血清樣本中立贊利珠單抗及其變體的濃度。

在一個實施方式中，本發明之藥物組成物較佳的是藉由靜脈內途徑，較佳的是以5mg/kg的量，較佳的是以相隔2週的2個負荷劑量，然後每4週的多個維持劑量，投與於受試者(通常為健康志願者或患者)，其中典型地由表面電漿共振(SPR)測定所確定，血清中的立贊利珠單抗及其變體實現對P-選擇蛋白與PSGL-1的結合的至少70%、至少80%、至少90%、至少95%的抑制。

表面電漿共振(SPR)測定係一種體外結合競爭測定。在不存在立贊利珠單抗及其任何變體的情況下，P-選擇蛋白與其靶PSGL-1的結合產生可量化的信號，設置為100%。立贊利珠單抗及其任何變體的添加(例如藉由添加本發明之藥物組成物，或藉由添加獲自接受了本發明之藥物組成物的人受試者的血清)抑制P-選擇蛋白與PSGL-1的結合，從而導致信號降低，可以將其計算為抑制百分比。

在SPR測定的一個實施方式中，P-選擇蛋白被與免疫球蛋白融合的P-選擇蛋白(PSel-Ig)取代，並且PSGL-1藉由糖硫肽6(GSP6)(它表示PSGL-1的最小肽形式)仍能夠結合PSel-Ig。

實例6描述了另一個SPR實施方式。

在一個方面，本發明之藥物組成物包含立贊利珠單抗和異立贊利珠單抗，其中藉由使用藥物組成物測定的IC50在約4μg/ml-7μg/ml的範圍內，典型地約4.6μg/ml-6.2μg/ml，典型地約5.0μg/ml至5.7μg/ml，典型地約5.2μg/ml。在一個實施方式中，IC50係在體外測定中確定的。

實例

實例1：SEG101的液體配製物的製備

SEG101可以例如藉由WO 2008/069999中從第15頁第20行至第18頁第29行中所述之方法來生產，該等頁面藉由引用併入本文。表2顯示了針對SEG101測試其適合性的配製物。樣本B和C，以及樣本F和G分別相同，以評估配製物中的變異性。

[表2].經測試的配製物。

1 結果

1.1 效力測定

對於所有樣本，藉由ELISA和基於細胞的測定法測量的效力在穩定性研究開始時在預期範圍之內。與參考物質相比，ELISA的當前規格係80%-125%相對生物學活性。

藉由結合ELISA進行的效力測定未顯示任何樣本或測定的穩定時間點的相關變化(表3)。在基於細胞的測定中(表4)，對於所有含組胺酸和/或精胺酸的樣本，在40℃/2週和25℃/12週時均觀察到效力顯著降低(表3)。磷酸鹽或檸檬酸鹽緩衝液中的樣本未顯示出效力降低。

在針對配製物K的單獨實驗中，藉由ELISA和基於細胞的測定(使用與其他配製物相同的方法)在不同時間點測量了效力(表5)。

[表3].藉由結合ELISA(結合P-選擇蛋白)測量的效力

[表4].基於細胞的測定的效力

[表5].藉由ELISA和基於細胞測定測量的配製物K的效力。

RH：相對濕度。

將樣本保存在密封的小瓶中。實際上，小瓶外部的濕度與藥物的穩定性無關。

1.2 CZE的電荷變體

在長期儲存條件下(2℃-8℃)，電荷變體譜隨時間的變化非常有限。但是，在加速(25℃)和壓力(40℃)條件下變化非常明顯。

1.2.1 pH值對降解途徑的影響

CZE主峰的變化主要由溫度驅動，並且在pH 6.0和pH 7.0設定點之間未觀察到相關差異(圖1，表6)。

[表6].配製物pH值對CZE主峰的影響。A-K列中的值表示CZE圖中的主峰%AUC。

RH：相對濕度。 1)主峰包括鹼性0峰。

與起始材料相比，觀察到鹼性變體在pH 6.0時增加，而在pH 7.0時隨時間減少(圖2，表7)。在pH值為6.0，在2℃-8℃時，鹼性峰的水平幾乎保持不變，而在pH值為7.0，在2℃-8℃時，則觀察到緩慢但恒定的下降。在pH 6.0和7.0的加速條件下(25℃)，似乎達到了平臺期。

[表7].配製物pH值對CZE鹼性峰的影響。A-K列中的值表示CZE圖中鹼性變體的%AUC的總和。

RH：相對濕度。 1)主峰包括鹼性0峰。

與pH依賴的鹼性峰的不同發展相反，與起始材料相比，酸性變體在兩個pH值時均隨時間增加(圖3)。在pH 7.0時，在所有溫度下觀察到的酸性變體的相對峰面積增加係pH 6.0時的量的兩倍。同樣，在pH 6.0時，在2℃-8℃可檢測到酸性變體的僅很小增加。

因此可以得出結論，與pH 7.0時的配製物相比，pH 6.0時的配製物顯示出電荷變體譜隨時間推移的更小絕對變化，並且在儲存期間提供了更一致的產物品質。

[表8].配製物pH值對CZE酸性峰的影響。A-K列中的值表示CZE圖中酸性變體的%AUC的總和。

RH：相對濕度。 1)主峰包括鹼性0峰。

在針對配製物K的單獨實驗中，藉由CZE(使用與其他配製物相同的方法)在不同時間點測量了電荷異質性(表9)。

[表9].配製物pH值對配製物K的CZE主峰、鹼性峰和酸性峰的影響。

RH：相對濕度。

1.3 藉由尺寸排阻層析(SEC)測量的純度

在所有測試條件下，對於pH 6.0時的配製物，聚集水平為1.5%-2%，對於pH 7.0時的10mg/mL配製物，聚集水平為2%-2.5%(圖4，表 10-12)。沒有觀察到聚集水平的相關變化。片段的存在量為約0.1%。單體峰為>96%，並且隨儲存時間推移也變化很小。pH 7.0時的50mg/mL配製物隨儲存時間推移表現出明顯更高的聚集水平，其中在壓力條件下高達約4%。

[表10].藉由SEC測量的篩選的配製物A-K的純度。該值表示對應於抗體的單體形式的%AUC。

RH：相對濕度。

[表11].藉由SEC測量的篩選的配製物A-K的純度。該值表示抗體聚集體形式的%AUC的總和。

RH：相對濕度。

[表12].藉由SEC測量的篩選的配製物A-K的純度。該值表示抗體片段的%AUC的總和。

RH：相對濕度。

在針對配製物K的單獨實驗中，藉由SEC(使用與其他配製物相同的方法)在不同時間點測量了純度(表13)。

[表13].藉由SEC測量的配製物K的純度。

RH：相對濕度。

實例2：用於測量SEG101生物活性的測定

2.1 ELISA

在ELISA中，根據SEG101樣本與重組人P-選擇蛋白結合的能力來測量其效力和身份。用重組人P-選擇蛋白包被ELISA板，並添加分級量的SEG101。使用偶聯至辣根過氧化物酶的抗人IgG抗體定量結合的SEG101，然後添加比色底物。比色反應的結果藉由光吸收來測量。藉由比較SEG101測試樣本及SEG101參考標準品與P-選擇蛋白的結合能力，量化SEG101測試樣本的效力。樣本和標準品根據蛋白質含量標準化。相對效力係根據歐洲藥典使用平行線測定法計算。最終結果表示為樣本與參考標準品相比的相對效力(以百分比)。

2.2 基於細胞的測定-表現P-選擇蛋白的Raji細胞與PSGL-1的黏附的抑制

用重組人PSGL-1包被V型底微量滴定板，然後添加分級量的SEG101。經重組修飾以在其表面上呈遞人P-選擇蛋白的Raji細胞可進行螢光標記並添加到板中。孵育後，將板離心，並且沒有黏附的細胞積聚在V形孔的底部，在此處使用螢光讀取器進行測量。藉由比較SEG101測試樣本及SEG101參考標準品抑制表現P-選擇蛋白的Raji細胞與PSGL-1黏附的能力，量化SEG101測試樣本的效力。樣本和標準品根據蛋白質含量標準化。相對效力係根據歐洲藥典使用平行線測定法計算。最終結果表示為樣本與參考標準品相比的相對效力(以百分比)。

[表14].立贊利珠單抗的不同電荷變體的生物活性。

實例3：藉由尺寸排阻層析(SEC)測量的純度

該測試基於具有UV檢測的尺寸排阻層析(SEC)。在天然條件下，藉由SEC在合適的柱上分離不同大小的變體(例如，較低和較高分子量變體和雜質)。確定主峰的純度以及聚集體和片段的數量，以每個層析圖中針對樣本獲得的總面積的百分比表示。

所用的HPLC系統係合適的高效液相層析系統，其配有泵、注射系統和線上脫氣機、帶有冷卻裝置的自動進樣器、柱加熱和能夠檢測210nm處的吸光度的UV檢測器。柱為TSKgel G3000SWXL，5μm；7.8mm×300mm，或等效物。

用流動相(150mM磷酸鉀溶液，pH 6.5±0.1)稀釋樣本溶液至最終濃度為約0.75mg SEG101/mL。為了製備參考溶液，參考物質用流動相稀釋至約0.75mg SEG101/mL的最終濃度。流動相用作空白。LOQ溶液藉由用抑肽酶溶液稀釋參考物質至終濃度為約0.75μg SEG101/mL，2mg抑肽酶/mL製成。

將層析條件調整為流速0.4mL/min，UV 210nm檢測，柱溫30℃±2℃，自動進樣器溫度約5℃，執行時間35分鐘和注射量10μL測試溶液和參考溶液，相當於參考溶液中約7.5μg SEG101。在空白層析圖中，在測試溶液的層析圖的積分範圍內，在空白中不應檢測到信號高度

LOQ信號高度的干擾峰。定量限(LOQ)應使SEG101峰的信噪比

10。峰面積的重現性應使PA_樣本除以PA_參考至少為0.80，並且最大為1.20。PA_樣本係指每個單獨樣本注射的總峰面積，單位為mAU×min。PA_參考係指樣本阻斷之前參考注射的總峰面積，單位mAU×min。

報告了純度(主峰的%P)，在相對保留時間為0.95時沒有峰情況下的聚集體(比主要組分更早洗脫)的總和(%)和片段的總和(%)(比主要組分更晚洗脫)進行。相對保留時間為0.95時的峰(保留時間相對於單體/主峰的保留時間)應單獨報告。

實例4：藉由CZE測量的身份和電荷異質性

毛細管區帶電泳(CZE)的分離原理基於在電場中具有不同淨電荷質量比的蛋白質的不同電泳遷移率。在低於其pI的pH值下，每種蛋白質都帶正電，並且會從陽極遷移到陰極。蛋白質變體與主峰相比的遷移速度隨著蛋白質變體的淨電荷質量比的增加而更高。為了清楚起見，術語「主峰」係指立贊利珠單抗，即使在某些條件下藥物組成物中的主要形式係異立贊利珠單抗形式。儘管出於各種原因可能導致不同的遷移率，但遷移速度快於主要變體的變體通常稱為「鹼性變體」，而遷移較慢的變體則稱為「酸性變體」。藉由UV吸收檢測後，電荷變體藉由相對時間校正的峰面積測定來定量。

藉由觀察共混物中的主峰型或藉由比較電泳圖來確定身份。

可以使用帶有能夠在214nm處進行檢測的UV檢測器的毛細管電泳系統。毛細管係未包被的熔融石英毛細管，內徑為50μm。

用樣本緩衝液(5mM磷酸鹽pH 7.3±0.1)稀釋樣本溶液至最終濃度為約3.0mg SEG101/mL。參考物質用樣本緩衝液稀釋至約3.0mg SEG101/mL的最終濃度。藉由用樣本緩衝液將參考物質稀釋至約60μg SEG101/mL的最終濃度來製備敏感性溶液。藉由將測試溶液與參考溶液以3：2(v/v)的比例混合來製備共混溶液。樣本緩衝液用作空白。

調節電泳條件，以使從入口到檢測器的毛細管長度為40cm，毛細管的總毛細管長度為50cm，電壓為20kV，極性為正，毛細管溫度為25℃±2℃，自動進樣器溫度為15℃±3℃，執行時間為45分鐘，數據速率為8Hz，在214nm處檢測，並且孔徑為100×800μm，並且注射時間為0.5psi，持續8s(4psi×s)。

在樣本的電泳圖譜的積分範圍內，在空白中不應檢測到信號高度

LOQ信號高度的干擾峰。解析度應為R_S

1.4，其中解析度R_S係針對參考溶液的第一次和最後一次注射計算，以評估毛細管性能。為了確定定量限(0.60%)，LOQ溶液(2.0%稀釋)中SEG101主峰的信噪比(S/N)必須

10。峰面積的重現性應使PA_樣本除以PA_參考至少為0.80，並且最大為1.20。PA_樣本係指針對測試溶液的每次單獨注射的總時間校正峰面積(mAU)，PA_參考係指針對參考溶液的第一次注射的總時間校正峰面積(mAU)。

對於純度，針對每個樣本記錄酸性變體的相對時間校正峰面積(相對於主峰的遷移時間>1.0)、鹼性變體的相對時間校正峰面積(相對於主峰的遷移時間<1.0)和主峰。電荷變體<0.60%(LOQ)不包括在酸性或鹼性變體總和的計算中。

對於身份，需要在共混溶液中觀察到主峰的單峰。另外，將樣本溶液的峰型與參考的峰型進行比較。

實例5：SEG101凍乾配製物的製備

表2顯示了針對SEG101測試其適合性的液體配製物。

SEG101還配製成6種不同的凍乾配製物，涵蓋一系列不同的蛋白質濃度，凍乾保護劑與蛋白質的莫耳比以及無定形凍乾保護劑(蔗糖)的單獨使用或與結晶填充劑(甘露醇)組合使用。表15中列出了配製物的確切組成。

[表15].SEG101凍乾前配製物的組成。

5.1 凍乾過程條件

由於配製物組成的不同，即無定形相比於部分結晶的配製物(表15)，進行了兩種不同的凍乾過程。

對於無定形配製物DP1、DP2和DP3選擇了表16中概述的第一運行。在表17中總結的第二運行中，將包含蔗糖和甘露醇的組合的配製物(即DP4、DP5和DP6)凍乾。在PD階段期間，兩個運行的腔室壓力均設置為0.133mbar。兩個運行的二次乾燥階段(SD)相同。由於候選配製物中的總乾物質含量相對較高(無定形配製物中高達443mg，部分結晶配製物中高達557mg)，因此存在殘留水分含量增加的風險。因此，SD期間的腔室壓力降至0.05mbar，並且設定的存儲溫度為30℃持續8h。

[表16].第一運行參數。

[表17].第二運行參數。

5.2 穩定性

凍乾穩定性研究的目的是比較六種凍乾的SEG101配製物的理化穩定性(表15)。將配製物暴露於預期的(5℃±3℃)、加速的(25℃±2℃、60%±5% r.h.；r.h.：相對濕度)和壓力(40℃±2℃，75%±5% rh)儲存條件下長達12個月並進行分析。

將進入凍乾過程的凍乾前溶液的結果與凍乾週期之後立即重構的溶液的結果進行比較，表明重構和凍乾週期本身實際上對配製物的物理化學性質沒有影響。

5.3 藉由SEC確定聚集體，並且藉由CZE確定電荷變體

將凍乾配製物在不同時間點在APW(另外純化的水)中重構，並藉由SEC(表18)和CZE(表19)進行分析。

[表18].SEC的穩定性數據。

[表19].CZE的穩定性數據。

5.4 對DP2的進一步研究

5.4.1 長期穩定性測試(5℃)

DP2在5℃下儲存6個月後，所有結果均在針對長期儲存條件設定的要求內。對於所有測試的品質特徵，未觀察到趨勢。

5.4.2 加速穩定性測試(25℃/60% RH)

DP2在25℃/60% RH下儲存6個月後，除表20中列出的結果外，對於所有品質特徵未觀察到趨勢。所有其他方法的結果都遵循加速條件下預期的趨勢。所有結果均在針對長期儲存條件設定的要求內。

[表20].如藉由CZE測量，在25℃存儲的在不同時間點的DP2中的電荷變體。

5.4.3 壓力穩定性測試(40攝氏度/75% RH)

DP2在40℃/75% RH下儲存6個月後，除表21中列出的結果外，對於所有品質特徵未觀察到趨勢。

所有其他方法的結果都遵循壓力條件下預期的趨勢。所有結果均在針對長期儲存條件設定的要求內。

[表21].DP2壓力測試期間觀察到的變化。

rRT：相對保留時間。

5.5 其他分析方法的結果

所有重構的配製物實際上在所有拉下點處都沒有可見的顆粒並且無色。在所有壓力條件下，UV含量和pH均保持不變(在方法變異性或預期的小瓶之間變異性內)。用ELISA和基於細胞的測定確定的配製物DP1、DP2和DP3的生物活性在40℃下6個月後沒有變化(在預期的方法變異性內)，並且在5℃和25℃下12個月後DP1和DP2的生物學活性沒有變化(表22)。

[表22].針對ELISA和生物測定的凍乾穩定性數據。

實例6：使用表面電漿共振分析(SPR)在人樣本(PD)中測量立贊利珠單抗及其任何變體對P-選擇蛋白的抑制

使用基於SPR的方法以測量來自使用立贊利珠單抗治療的人供體的人血清樣本中立贊利珠單抗的離體P-選擇蛋白抑制%。該PD測定法測量了血清中立贊利珠單抗及其變體阻斷P-選擇蛋白(抗原；配位基)與PSGL-1(配位基受體)結合的能力。立贊利珠單抗及其任何變體的阻斷作用係以與免疫球蛋白融合的加標P-選擇蛋白(Psel-Ig)與糖硫肽6(GSP-6)(其係模擬PSGL-1結合結構域的肽類似物)結合的抑制%來衡量。例如，將鏈黴親和素藉由標準胺偶聯固定在所用生物感測器晶片的2個通道(FC-2和FC-3)上，然後注射生物素化的GSP-6以固定肽進行分析。藉由阻斷生物素的鏈黴親和素製備了參考通道(FC-1)。對於每個受試者，預處理樣本建立了最大結合，這被用作在不同時間點使用來自受試者的給藥後血清樣本計算%抑制的基礎。使用以一系列稀釋的定量立贊利珠單抗及其任何變體來生成標準抑制曲線，其顯示在所有條件下立贊利珠單抗的IC₅₀值為5.2μg/mL。

來自SCD患者的血清樣本與不含Psel-Ig和含有Psel-Ig的阻斷緩衝液(分別作為陰性對照和陽性對照樣本)混合。

該測定表明從患者收集的血清中的立贊利珠單抗及其任何變體確實結合至靶。患者血清中的立贊利珠單抗及其任何變體阻斷98%的加標P-選擇蛋白(Psel-Ig)與糖硫肽6(GSP-6)的結合。

<110> 諾華公司(Novartis AG)

<120> 抗體配製物

<160> 10

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重鏈CDR1

<400> 1

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重鏈CDR2

<400> 2

<210> 3

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重鏈CDR3

<400> 3

<210> 4

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 輕鏈CDR1

<400> 4

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 輕鏈CDR2

<400> 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 輕鏈CDR3

<400> 6

<210> 7

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重鏈可變區(VH)

<400> 7

<210> 8

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 輕鏈可變區(VL)

<400> 8

<210> 9

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重鏈

<400> 9

<210> 10

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 輕鏈

<400> 10

Claims

一種藥物組成物，該藥物組成物包含立贊利珠單抗以及立贊利珠單抗變體(異立贊利珠單抗)，該立贊利珠單抗具有分別為SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：9的輕鏈和重鏈胺基酸序列，在該立贊利珠單抗變體中SEQ ID NO：10的位置32處的胺基酸天冬胺酸變為異天冬胺酸。
如請求項1所述之藥物組成物，該藥物組成物還包含立贊利珠單抗的在SEQ ID NO：10的位置32處的琥珀醯亞胺。
如請求項1或2所述之藥物組成物，其中該異立贊利珠單抗由同-異立贊利珠單抗和雜-異立贊利珠單抗組成。
如請求項1至3中任一項所述之藥物組成物，該藥物組成物包含該藥物組成物中總電荷變體的至少20%立贊利珠單抗。
如請求項1至4中任一項所述之藥物組成物，該藥物組成物包含該藥物組成物中總電荷變體的至多50%立贊利珠單抗。
如請求項1至5中任一項所述之藥物組成物，該藥物組成物包含該藥物組成物中總電荷變體的約20%至約50%立贊利珠單抗。
如前述請求項中任一項所述之藥物組成物，該藥物組成物還包含緩衝液系統，其中該組成物的pH為約5.5至約7.5。
如請求項7所述之藥物組成物，其中該pH為約5.5至約7、較佳的是約5.5至約6.5、較佳的是約5.7至約6.3。
如請求項7或8所述之藥物組成物，其中該pH為約5.9至約6.1。
如請求項7-9中任一項所述之藥物組成物，其中該緩衝液系統係檸檬酸鹽緩衝液。
如請求項7-9中任一項所述之藥物組成物，其中該緩衝液系統係磷酸鹽緩衝液。
如前述請求項中任一項所述之藥物組成物，該藥物組成物還包含穩定劑。
如請求項12所述之藥物組成物，其中該穩定劑係蔗糖。
如請求項13所述之藥物組成物，其中蔗糖的濃度為50mM至350mM，較佳的是為100mM至300mM。
如前述請求項中任一項所述之藥物組成物，該藥物組成物還包含等滲劑。
如請求項15所述之藥物組成物，其中該等滲劑係氯化鈉。
如請求項16所述之藥物組成物，其中氯化鈉的濃度為50mM至300mM。
如前述請求項中任一項所述之藥物組成物，該藥物組成物還包含表面活性劑。
如請求項18所述之藥物組成物，其中該表面活性劑係非離子表面活性劑。
如請求項18或19所述之藥物組成物，其中該表面活性劑係聚山梨醇酯，較佳的是聚山梨醇酯80。
如請求項18至20中任一項所述之藥物組成物，其中該表面活性劑，較佳的是聚山梨醇酯，係以0.01% w/v(0.1mg/mL)至0.1% w/v(1mg/mL)的濃度。
如前述請求項中任一項所述之藥物組成物，其中抗體的濃度為5mg/ml至50mg/ml。
一種藥物組成物，該藥物組成物包含濃度為約5mg/ml至約50mg/ml的抗體、和緩衝液系統，其中該組成物的pH為約5.5至約7.5。
如請求項23所述之藥物組成物，其中該pH為約5.7至約6.3。
如請求項23或24所述之藥物組成物，其中該緩衝液系統係檸檬酸鹽(例如檸檬酸鈉)和/或磷酸鹽(例如磷酸鉀)。
如請求項23-25中任一項的藥物組成物，該藥物組成物還包含穩定劑。
如請求項26所述之藥物組成物，其中該穩定劑係蔗糖。
如請求項26或27所述之藥物組成物，其中該穩定劑以約50mM至約300mM的濃度存在。
如請求項23-28中任一項所述之藥物組成物，該藥物組成物還包含非離子表面活性劑。
如請求項29所述之藥物組成物，其中該表面活性劑係聚山梨醇酯80。
如請求項29或30所述之藥物組成物，其中該表面活性劑以約0.01% w/v(0.1mg/ml)至0.1% w/v(1mg/ml)的濃度存在。
如請求項23-31中任一項所述之藥物組成物，該藥物組成物還包含等滲劑。
如請求項32所述之藥物組成物，其中該等滲劑係NaCl。
如請求項32或33所述之藥物組成物，其中該等滲劑以約50mM至300mM的濃度存在。
一種藥物組成物，該藥物組成物包含濃度為約5mg/ml至約50mg/ml的抗體(立贊利珠單抗及其任何變體)、濃度為約50mM至約350mM的蔗糖、以及緩衝液系統，其中該組成物的pH為約5.5至約7.5，並且其中該緩衝液系統係檸檬酸鹽緩衝液和/或磷酸鹽緩衝液。
如請求項35所述之藥物組成物，其中該藥物組成物的pH為約5.7至約6.3，例如約6.0。
如前述請求項中任一項所述之藥物組成物，該藥物組成物呈凍乾形式。
一種藉由將水性配製物凍乾可獲得的凍乾配製物，其中該凍乾配製物包含：

a)抗體(立贊利珠單抗及其任何變體)；

b)凍乾保護劑；和

c)緩衝液系統。
如請求項38所述之凍乾配製物，該凍乾配製物還包含表面活性劑。
如請求項39所述之凍乾配製物，其中該表面活性劑係聚山梨醇酯80。
如請求項38-40中任一項所述之凍乾配製物，其中抗體以約10mg/mL至100mg/mL的濃度存在於該水性配製物中。
如請求項38-41中任一項所述之凍乾配製物，其中該緩衝液系統係檸檬酸鹽，例如檸檬酸鈉。
如請求項38-42中任一項所述之凍乾配製物，該凍乾配製物還包含蔗糖和/或甘露醇作為凍乾保護劑。
如請求項38-43中任一項所述之凍乾配製物，其中該水性配製物包含濃度為約10mg/mL至100mg/mL的蔗糖。
如請求項43-44中任一項所述之凍乾配製物，其中蔗糖與抗體的莫耳比為約200至1500。
如請求項38-45中任一項所述之凍乾配製物，該凍乾配製物包含

a)約25w/w%-40w/w%，較佳的是約28w/w%-32w/w%的抗體；和

b)約55w/w%-75w/w%的蔗糖，較佳的是約65w/w%-71w/w%的蔗糖，

這係基於該凍乾配製物的總重量。
一種液體藥物組成物，該液體藥物組成物藉由重構如請求項37至46中任一項所述之凍乾配製物而獲得。
如前述請求項中任一項所述之藥物組成物，其中藉由使用該藥物組成物測定的IC50在約4.6-6.2μg/ml的範圍內。
如請求項48所述之藥物組成物，其中該IC50係在體外進行測定。
一種治療有需要的受試者的鐮狀細胞病，尤其是預防血管閉塞危象(VOC)的方法，該方法包括向受試者投與治療有效劑量的包含在如請求項1-47中任一項所述之藥物組成物中的抗體(立贊利珠單抗及其任何變體)，其中該治療有效劑量為5mg或7.5mg/千克受試者體重。
如請求項50所述之方法，其中前2個劑量隔開2週投與，然後每四週投與相同劑量。
如請求項50或51所述之方法，其中藉由靜脈內途徑將該藥物組成物投與於受試者。
如請求項50至52中任一項所述之方法，其中該治療有效劑量為5mg/千克受試者體重，其中前2個劑量隔開2週投與，然後每四週投與相同劑量，並且其中滿足以下PK參數中的一個或多個或所有：

a)在投與該藥物組成物後t_max在0.4至10小時(h)的範圍內，較佳的是0.55h至6.25h，其中較佳的是中位數為1.5至2.5h，較佳的是1.92h；

b)首個劑量後C_max在116±91.3μg/mL的範圍內；或較佳的是在穩定狀態下為50μg/mL至200μg/mL，較佳的是為124μg/mL±31.6μg/mL；

c)表觀t_1/2在100h至300h的範圍內，較佳的是在150h至210h的範圍內，例如約183h(7.6天)；

d)AUC_tau,ss在10000至30000μg×h/mL的範圍內，較佳的是在第15週時為20400μg×h/mL，較佳的是變異係數為23.5%；

e)較佳的是在具有SCD且體重為70kg的患者中，在穩定狀態第15週的平均清除率在10mL/h至30mL/h的範圍內，較佳的是15mL/h至20mL/h，例如約17.2mL/h；

f)穩定狀態下每4週，尤其是從第7週到第27週獲得的PK谷濃度範圍從約3.78μg/mL至9.8μg/mL。
如請求項50至52中任一項所述之方法，其中血清中的立贊利珠單抗及其任何變體實現對P-選擇蛋白與PSGL-1的結合的至少70%、至少80%、至少90%、至少95%的抑制。