TW202128761A

TW202128761A - 抗garp抗體與免疫調節劑之組合

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Publication number: TW202128761A
Application number: TW109136828A
Authority: TW
Inventors: 林新子; 石田佐央里; 佐藤一紀; 秦真人
Original assignee: 日商第一三共股份有限公司
Priority date: 2019-10-25
Filing date: 2020-10-23
Publication date: 2021-08-01
Also published as: CA3155172A1; KR20220088425A; TWI887285B; EP4049675A4; JPWO2021079958A1; US20240190961A1; EP4049675A1; WO2021079958A1; BR112022007632A2; CN114630679A

Abstract

本發明之課題為提供使用於癌症的治療或預防之醫藥組成物等。本發明之解決手段為提供一種用於癌症的治療之醫藥組成物或治療方法，其特徵為組合抗GARP抗體與免疫調節劑而進行投予。

Description

抗GARP抗體與免疫調節劑之組合

本發明係關於一種用於癌症的治療之醫藥組成物及癌症的治療方法，其特徵為組合特定之抗GARP抗體與免疫調節劑而進行投予。

調節性T細胞(regulatory T cell) (Treg)，係導致在癌症患者的腫瘤區域可觀察到的免疫耐受性(immunotolerance)之主要原因細胞。亦即，在癌症患者中，藉由被腫瘤活性化的Treg，而原本應作動的抗腫瘤免疫細胞群處於被抑制之狀態，此係與腫瘤的增殖相關(非專利文獻1)。

以醣蛋白A為主的重複結構(Glycoprotein-A Repetitions Predominant) (GARP)，係具有1次跨膜結構之蛋白質(非專利文獻2)，表現於經活性化之Treg的細胞表面，且形成與潛轉化生長因子-β (latent TGF-β)(為免疫耐受性誘導的重要分子之TGF-β的前驅物)之複合體(非專利文獻3)。

藉由Treg與表現αvβ6整合素(integrin)之DC等細胞的細胞-細胞間相互作用，而經由GARP自停留在Treg的細胞表面的latent TGF-β分泌成熟化TGF-β，TGF-β的免疫抑制訊息被直接傳遞至標的細胞(非專利文獻4、5)。顯示GARP之在細胞膜上的表現對於此TGF-β的成熟化是必要的(非專利文獻5)，但在另一方面，即使將跨膜區域缺損的可溶性GARP直接添加於CD4陽性T細胞之情形，CD4陽性T細胞的增殖亦被抑制(非專利文獻6)，因此亦無法否定存在不經由在細胞膜上的TGF-β成熟化機制的利用GARP之免疫抑制機制。

GARP除了在源自末梢血液之活性化Treg可觀察到表現之外，在臨床上，可觀察到在存在於癌症患者的已浸潤至腫瘤患部之T細胞(腫瘤浸潤T細胞(Tumor Infiltrating Tcells))中之Treg (非專利文獻7)、及存在於腹水中之Treg (非專利文獻8)、或存在於患者末梢血液中之Treg的表現(非專利文獻9)。

作為抗GARP抗體，已知有WO2017/051888 (專利文獻1)中記載之抗體或WO2015/015003(專利文獻2)、WO2016/125017(專利文獻3)、WO2018/206790(專利文獻4)中記載之MHG-8、LHG-10(非專利文獻10)。

免疫調節劑係使抗腫瘤免疫活性化的藥劑(非專利文獻11～13)。就免疫調節劑而言，已知有作為免疫檢查點抑制劑(immune checkpoint inhibitor)而為人所知的抗PD-1抗體(納武單抗(Nivolumab)(專利文獻5)、派立珠單抗(Pembrolizumab)(專利文獻6)等)或抗PD-L1抗體(阿特珠單抗(Atezolizumab)(專利文獻7)、德瓦魯單抗(Durvalumab)(專利文獻8)、阿維魯單抗(Avelumab)(專利文獻9)等)、抗CTLA-4抗體(伊匹單抗(Ipilimumab)(專利文獻10)、曲美木單抗(Tremelimumab)(專利文獻11)等)。

然而，並未知曉抗GARP抗體與免疫調節劑之具體的併用效果。 [先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]WO2017/051888 [專利文獻2]WO2015/015003 [專利文獻3]WO2016/125017 [專利文獻4]WO2018/206790 [專利文獻5]WO2006/121168 [專利文獻6]WO2008/156712 [專利文獻7]WO2010/077634 [專利文獻8]WO2011/066389 [專利文獻9]WO2013/079174 [專利文獻10]WO2001/014424 [專利文獻11]WO2000/037504 [非專利文獻]

[非專利文獻1]Int J Cancer. 2010 Aug 15;127(4): 759-67. [非專利文獻2]PLoS One. 2008;3(7):e2705. [非專利文獻3]Proc Natl Acad Sci U S A. 2009; 106(32):13445-50. [非專利文獻4]Eur J Immunol. 2009;39(12):3315-22. [非專利文獻5]Mol Biol Cell. 2012;23(6):1129-39. [非專利文獻6]Blood. 2013;122(7):1182-91. [非專利文獻7]Eur J Immunol. 2012 Jul;42(7):1876-85. [非專利文獻8]Clin Immunol. 2013 Oct;149(1):97-110. [非專利文獻9]Cancer Res. 2013;73:2435. [非專利文獻10]Sci Transl Med. 2015 Apr 22;7(284) [非專利文獻11]Cancers. 2016 Nov8(12);106. [非專利文獻12]Nat Rev Cancer. 2012 Mar12(4);252-264 [非專利文獻13]Cell.2015 Aug 162(5);937.

[發明欲解決之課題]

本發明提供：一種用於癌症的治療之醫藥組成物，其特徵為組合抗GARP抗體與免疫調節劑而進行投予；一種癌症的治療方法，其特徵為組合抗GARP抗體與免疫調節劑而進行投予。 [用以解決課題之手段]

本發明人等為了解決上述課題而專心致力進行研究，結果發現藉由組合抗GARP抗體與免疫調節劑來進行投予，而顯示優異之抗腫瘤效果。

即，本發明係關於以下者。 [1]一種用以治療癌症的醫藥組成物，其特徵為組合以具有下述(1)～(3)之特性為特徵的抗體或其抗原結合片段及免疫調節劑而進行投予： (1)與以醣蛋白A為主的重複結構(GARP)特異性地結合； (2)具有對調節性T細胞的免疫抑制機能之抑制活性；及 (3)具有抗體依賴性細胞毒性(ADCC)活性。 [2]如[1]記載之醫藥組成物，其特徵為抗體在活體內具有抗腫瘤活性。 [3]如[1]或[2]記載之醫藥組成物，其中抗體係包含以下(1)或(2)記載之包含CDRH1、CDRH2及CDRH3的重鏈、以及包含CDRL1、CDRL2及CDRL3的輕鏈而成： (1)包含序列識別號13之胺基酸編號45～54記載之胺基酸序列的CDRH1、包含序列識別號13之胺基酸編號69～78記載之胺基酸序列的CDRH2及包含序列識別號13之胺基酸編號118～125記載之胺基酸序列的CDRH3、以及包含序列識別號15之胺基酸編號44～54記載之胺基酸序列的CDRL1、包含序列識別號15之胺基酸編號70～76記載之胺基酸序列的CDRL2及包含序列識別號15之胺基酸編號109～117記載之胺基酸序列的CDRL3；或 (2)包含序列識別號17之胺基酸編號45～54記載之胺基酸序列的CDRH1、包含序列識別號17之胺基酸編號69～77記載之胺基酸序列的CDRH2及包含序列識別號17之胺基酸編號117～128記載之胺基酸序列的CDRH3、以及包含序列識別號19之胺基酸編號44～54記載之胺基酸序列的CDRL1、包含序列識別號19之胺基酸編號70～76記載之胺基酸序列的CDRL2及包含序列識別號19中胺基酸編號109～117記載之胺基酸序列的CDRL3。 [4]如[1]～[3]之任一者中記載之醫藥組成物，其中抗體包含以下(1)～(3)記載之重鏈可變區及輕鏈可變區： (1)包含序列識別號21之胺基酸編號20～136記載之胺基酸序列的重鏈可變區及包含序列識別號25之胺基酸編號21～129記載之胺基酸序列的輕鏈可變區； (2)包含序列識別號23之胺基酸編號20～136記載之胺基酸序列的重鏈可變區及包含序列識別號27之胺基酸編號21～129記載之胺基酸序列的輕鏈可變區；或 (3)包含序列識別號29之胺基酸編號20～139記載之胺基酸序列的重鏈可變區及包含序列識別號31之胺基酸編號21～129記載之胺基酸序列的輕鏈可變區。 [5]如[1]～[4]之任一者中記載之醫藥組成物，其中抗體為嵌合抗體。 [6]如[1]～[4]之任一者中記載之醫藥組成物，其中抗體為人源化抗體。 [7]如[1]～[6]之任一者中記載之醫藥組成物，其中抗體包含人類IgG1、人類IgG2或人類IgG4的重鏈恆定區。 [8]如[6]或[7]記載之醫藥組成物，其中抗體包含以下(1)～(3)記載之重鏈及輕鏈： (1)具有序列識別號21之胺基酸編號20～466記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號25之胺基酸編號21～234記載之胺基酸序列的輕鏈； (2)具有序列識別號23之胺基酸編號20～466記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號27之胺基酸編號21～234記載之胺基酸序列的輕鏈；或 (3)具有序列識別號29之胺基酸編號20～469記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號31之胺基酸編號21～234記載之胺基酸序列的輕鏈。 [9]如[1]記載之醫藥組成物，其中抗體係與如[2]～[8]之任一者中記載之抗體在對GARP的結合上競爭。 [10]如[1]～[9]之任一者中記載之醫藥組成物，其中抗體包含選自包含N-鍵結型糖鏈附加、O-鍵結型糖鏈附加、N末端的加工、C末端的加工、脫醯胺化、天冬胺酸的異構化、甲硫胺酸的氧化、N末端上之甲硫胺酸殘基的附加、脯胺酸殘基的醯胺化、及重鏈的羧基末端上之1個或2個胺基酸殘基的缺失之群組的1或2以上之修飾。 [11]如[10]記載之醫藥組成物，其中於重鏈的羧基末端有1個或數個胺基酸殘基缺失。 [12]如[10]或[11]記載之醫藥組成物，其中在2條重鏈雙方於羧基末端有1個胺基酸殘基缺失。 [13]如[10]～[12]之任一者中記載之醫藥組成物，其中重鏈的羧基末端之脯胺酸殘基進一步被醯胺化。 [14]如[1]～[13]之任一者中記載之醫藥組成物，其中免疫調節劑為抗PD-1抗體或者其抗原結合片段、抗PD-L1抗體或者其抗原結合片段、抗PD-L2抗體或者其抗原結合片段、抗CTLA-4抗體或者其抗原結合片段、包含前述抗體或其抗原結合片段的多重特異性抗體、放射線療法、化學放射線療法或此等之組合。 [15]如[14]記載之醫藥組成物，其中抗PD-1抗體為納武單抗、派立珠單抗、拉立珠單抗(Lambrolizumab)、MK-3475、AMP-224、皮立珠單抗(Pidilizumab)或LOPD18。 [16]如[14]記載之醫藥組成物，其中抗PD-L1抗體為阿特珠單抗、德瓦魯單抗或阿維魯單抗。 [17]如[14]記載之醫藥組成物，其中抗CTLA-4抗體為伊匹單抗或曲美木單抗。 [18]如[1]～[17]之任一者中記載之用以治療癌症的醫藥組成物，其特徵為抗體與免疫調節劑係各自含於不同的製劑作為有效成分，於同時或於不同時間進行投予。 [19]一種用以治療癌症的醫藥組成物，其包含如[1]～[13]之任一者中記載之抗體，且係用以與免疫調節劑併用。 [20]一種用以治療癌症的醫藥組成物，其包含如[1]～[13]之任一者中記載之抗體，且係用以治療經投予免疫調節劑的癌症患者。 [21]一種用以治療癌症的醫藥組成物，其包含免疫調節劑，且藉由與如[1]～[13]之任一者中記載之抗體併用，而使該抗體的作用上升。 [22]一種用以治療癌症的醫藥組成物，其包含免疫調節劑，且係用以與如[1]～[13]之任一者中記載之抗體併用。 [23]一種用以治療癌症的醫藥組成物，其包含免疫調節劑，且係用以治療經投予如[1]～[13]之任一者中記載之抗體的癌症患者。 [24]一種用以治療癌症的醫藥組成物，其包含如[1]～[13]之任一者中記載之抗體，且藉由與免疫調節劑併用，而使免疫調節劑的作用上升。 [25]如[1]～[24]之任一者中記載之醫藥組成物，其係用以治療選自包含肺癌、腎癌、尿道上皮癌(urothelial carcinoma)、大腸癌、前列腺癌、多形性神經膠質母細胞瘤、卵巢癌、胰臟癌、乳癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌、胃癌、食道癌、頭頸部癌、血液癌(hematological malignancy)、皮膚癌、甲狀腺癌、膽道癌、唾液腺癌、小腸癌、腎上腺瘤、睾丸癌、子宮頸癌、子宮體癌、子宮肉瘤、胸腺瘤、間皮瘤、肉瘤及彼等之轉移性形態之群組的至少一種癌症。 [26]一種癌症的治療方法，其特徵為組合以具有下述(1)～(3)之特性為特徵的抗體或其抗原結合片段及免疫調節劑而進行投予： (1)與以醣蛋白A為主的重複結構(GARP)特異性地結合； (2)具有對調節性T細胞的免疫抑制機能之抑制活性；及 (3)具有抗體依賴性細胞毒性(ADCC)活性。 [27]一種癌症的治療方法，其特徵為抗體在活體內具有抗腫瘤活性。 [28]如[26]或[27]記載之治療方法，其中抗體係包含以下(1)或(2)記載之包含CDRH1、CDRH2及CDRH3的重鏈、以及包含CDRL1、CDRL2及CDRL3的輕鏈而成： (1)包含序列識別號13中胺基酸編號45～54記載之胺基酸序列的CDRH1、包含序列識別號13中胺基酸編號69～78記載之胺基酸序列的CDRH2及包含序列識別號13中胺基酸編號118～125記載之胺基酸序列的CDRH3、以及包含序列識別號15中胺基酸編號44～54記載之胺基酸序列的CDRL1、包含序列識別號15中胺基酸編號70～76記載之胺基酸序列的CDRL2及包含序列識別號15中胺基酸編號109～117記載之胺基酸序列的CDRL3；或 (2)包含序列識別號17中胺基酸編號45～54記載之胺基酸序列的CDRH1、包含序列識別號17中胺基酸編號69～77記載之胺基酸序列的CDRH2及包含序列識別號17中胺基酸編號117～128記載之胺基酸序列的CDRH3、以及包含序列識別號19中胺基酸編號44～54記載之胺基酸序列的CDRL1、包含序列識別號19中胺基酸編號70～76記載之胺基酸序列的CDRL2及包含序列識別號19中胺基酸編號109～117記載之胺基酸序列的CDRL3。 [29]如[26]～[28]之任一者中記載之治療方法，其中抗體包含以下(1)～(3)記載之重鏈可變區及輕鏈可變區： (1)包含序列識別號21之胺基酸編號20～136記載之胺基酸序列的重鏈可變區及包含序列識別號25之胺基酸編號21～129記載之胺基酸序列的輕鏈可變區； (2)包含序列識別號23之胺基酸編號20～136記載之胺基酸序列的重鏈可變區及包含序列識別號27之胺基酸編號21～129記載之胺基酸序列的輕鏈可變區；或 (3)包含序列識別號29之胺基酸編號20～139記載之胺基酸序列的重鏈可變區及包含序列識別號31之胺基酸編號21～129記載之胺基酸序列的輕鏈可變區。 [30]如[26]～[29]之任一者中記載之治療方法，其中抗體為嵌合抗體。 [31]如[26]～[29]之任一者中記載之治療方法，其中抗體為人源化抗體。 [32]如[26]～[31]之任一者中記載之治療方法，其中抗體包含人類IgG1、人類IgG2或人類IgG4的重鏈恆定區。 [33]如[31]或[32]記載之治療方法，其中抗體包含以下(1)～(3)記載之重鏈及輕鏈： (1)具有序列識別號21之胺基酸編號20～466記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號25之胺基酸編號21～234記載之胺基酸序列的輕鏈； (2)具有序列識別號23之胺基酸編號20～466記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號27之胺基酸編號21～234記載之胺基酸序列的輕鏈；或 (3)具有序列識別號29之胺基酸編號20～469記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號31之胺基酸編號21～234記載之胺基酸序列的輕鏈。 [34]如[26]記載之治療方法，其中抗體係與如[27]～[33]之任一者中記載之抗體在對GARP的結合上競爭。 [35]如[26]～[34]之任一者中記載之治療方法，其中抗體包含選自包含N-鍵結型糖鏈附加、O-鍵結型糖鏈附加、N末端的加工、C末端的加工、脫醯胺化、天冬胺酸的異構化、甲硫胺酸的氧化、N末端上之甲硫胺酸殘基的附加、脯胺酸殘基的醯胺化、及重鏈的羧基末端上之1個或2個胺基酸殘基的缺失之群組的1或2以上之修飾。 [36]如[35]記載之治療方法，其中於重鏈的羧基末端有1個或數個胺基酸殘基缺失。 [37]如[35]或[36]記載之治療方法，其中在2條重鏈雙方於羧基末端有1個胺基酸殘基缺失。 [38]如[35]～[36]之任一者中記載之治療方法，其中重鏈的羧基末端之脯胺酸殘基進一步被醯胺化。 [39]如[26]～[38]之任一者中記載之治療方法，其中免疫調節劑為抗PD-1抗體或者其抗原結合片段、抗PD-L1抗體或者其抗原結合片段、抗PD-L2抗體或者其抗原結合片段、抗CTLA-4抗體或者其抗原結合片段、包含前述抗體或其抗原結合片段的多重特異性抗體、放射線療法、化學放射線療法或此等之組合。 [40]如[39]記載之治療方法，其中抗PD-1抗體為納武單抗、派立珠單抗、拉立珠單抗、MK-3475、AMP-224、皮立珠單抗或LOPD18。 [41]如[39]記載之治療方法，其中抗PD-L1抗體為阿特珠單抗、德瓦魯單抗或阿維魯單抗。 [42]如[39]記載之治療方法，其中抗CTLA-4抗體為伊匹單抗或曲美木單抗。 [43]一種治療方法，其係以與免疫調節劑併用為特徵的癌症的治療方法，包含對需要其之癌症患者投予如[26]～[38]之任一者中記載之抗體的有效量。 [44]一種治療方法，其係經投予免疫調節劑的癌症患者的治療方法，包含對需要其之患者投予如[26]～[38]之任一者中記載之抗體的有效量。 [45]一種治療方法，其係藉由與如[26]～[38]之任一者中記載之抗體併用，而使該抗體的作用上升之方法，包含對需要其之患者投予免疫調節劑的有效量。 [46]一種治療方法，其係以與如[26]～[38]之任一者中記載之抗體併用為特徵的癌症的治療方法，包含對需要其之患者投予免疫調節劑的有效量。 [47]一種治療方法，其係經投予如[26]～[38]之任一者中記載之抗體的癌症患者的治療方法，包含對需要其之患者投予免疫調節劑的有效量。 [48]一種治療方法，其係藉由與免疫調節劑併用，而使免疫調節劑的作用上升之方法，包含對需要其之患者投予如[26]～[38]之任一者中記載之抗體的有效量。 [49]如[26]～[48]之任一者中記載之治療方法，其係用以治療選自包含肺癌、腎癌、尿道上皮癌、大腸癌、前列腺癌、多形性神經膠質母細胞瘤、卵巢癌、胰臟癌、乳癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌、胃癌、食道癌、頭頸部癌、血液癌、皮膚癌、甲狀腺癌、膽道癌、唾液腺癌、小腸癌、腎上腺瘤、睾丸癌、子宮頸癌、子宮體癌、子宮肉瘤、胸腺瘤、間皮瘤、肉瘤及彼等之轉移性形態之群組的至少一種癌症。 [50]一種用以治療癌症的套組製劑，其包含如[1]～[12]之任一者中記載之抗體、及選自包含抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗PD-L2抗體及抗CTLA-4抗體之群組的1或2以上之免疫調節劑。 [51]如[50]記載之製劑，其進一步包含用以使用套組的操作說明書。 [52]如[14]記載之醫藥組成物，其中抗PD-1抗體為納武單抗。 [53]如[14]記載之醫藥組成物，其中抗PD-1抗體為派立珠單抗。 [54]如[39]記載之治療方法，其中抗PD-1抗體為納武單抗。 [55]如[39]記載之治療方法，其中抗PD-1抗體為派立珠單抗。 [56]如[1]～[13]之任一者中記載之醫藥組成物，其中免疫調節劑為抗PD-1抗體或者其抗原結合片段、抗PD-L1抗體或者其抗原結合片段、抗PD-L2抗體或者其抗原結合片段、抗CTLA-4抗體或者其抗原結合片段、包含前述抗體或其抗原結合片段的多重特異性抗體、放射線療法、化學放射線療法、化學治療劑或此等之組合。 [57]如[26]～[38]之任一者中記載之治療方法，其中免疫調節劑為抗PD-1抗體或者其抗原結合片段、抗PD-L1抗體或者其抗原結合片段、抗PD-L2抗體或者其抗原結合片段、抗CTLA-4抗體或者其抗原結合片段、包含前述抗體或其抗原結合片段的多重特異性抗體、放射線療法、化學放射線療法、化學治療劑或此等之組合。 [發明之效果]

藉由本發明，可提供醫藥組成物及治療方法，該等係藉由組合特定之抗GARP抗體與免疫調節劑來進行投予，而抗腫瘤效果與安全性方面優良。

[用以實施發明的形態]

以下，針對用以實施本發明之適宜的形態，一面參照圖式一面進行說明。此外，以下所說明的實施形態，係呈示本發明之代表性實施形態之一例，本發明之範圍不因此而被狹義地解釋。

1.GARP 人類GARP之胺基酸序列係記載於序列表的序列識別號1 (NP_001122394)。又，於上述GARP之胺基酸序列中包含1或數個胺基酸經取代、缺失及/或附加之胺基酸序列，且具有與該蛋白質同等之生物活性的蛋白質，亦包含在GARP中。已除去訊息序列的成熟人類GARP，係相當於包含序列識別號1所示胺基酸序列之第20號至第662號之胺基酸殘基的胺基酸序列。又，於序列表的序列識別號1所示胺基酸序列、或已由此等序列除去訊息序列的胺基酸序列中包含1或者數個胺基酸經取代、缺失或附加之胺基酸序列，且具有與GARP同等之生物活性的蛋白質，亦包含在GARP中。再者，由人類GARP基因座所轉錄之剪接變異體(splicing variant)所編碼的胺基酸序列或於該胺基酸序列中包含1或者數個胺基酸經取代、缺失或附加之胺基酸序列，且具有與GARP同等之生物活性的蛋白質，亦包含在GARP中。

2.抗GARP抗體就本發明之抗體的機能而言，可舉出抗原結合活性、中和抗原活性之活性、增強抗原活性之活性、效應活性(effector activity) (ADCC活性、抗體依賴性細胞媒介吞噬作用(ADCP)活性及補體依賴性細胞毒性(CDC)活性等)，但不限於此。

本發明之抗體較佳為具有對GARP之特異的結合活性、效應活性、Treg機能抑制活性、細胞毒性活性(抗腫瘤活性)中任一者或彼等之組合，更佳為具有對GARP之特異的結合活性、利用經由效應活性(較佳為ADCC活性)之Treg機能抑制活性的細胞毒性活性(抗腫瘤活性)及彼等之組合。

於本發明中，「癌症」、「癌」及「腫瘤」係以相同的意義來使用。

本發明之抗體係辨識GARP蛋白質。換言之，本發明之抗體係與GARP蛋白質結合。此種抗體被標記為「抗GARP抗體」。又，本發明之適宜的抗體係特異性地辨識GARP蛋白質。換言之，本發明之適宜的抗體係與GARP蛋白質特異性地結合。

於本發明中，「特異性的辨識」亦即「特異性的結合」，係意指並非為非特異性的吸附之結合。就結合是否為特異性的判定基準而言，可舉出例如解離常數(Dissociation Consitant：以下稱為「KD」)。本發明之適宜的抗體之對GARP蛋白質的KD值為1×10^-5 M以下、5×10^-6 M以下、2×10^-6 M以下或1×10^-6 M以下，更適宜為5×10^-7 M以下、2×10^-7 M以下或1×10^-7 M以下，更進一步適宜為5×10^-8 M以下、2×10^-8 M以下或1×10^-8 M以下，再更進一步適宜為5×10^-9 M以下、2×10^-9 M以下或1×10^-9 M以下。

本發明中之抗原與抗體的結合，可藉由ELISA法、RIA法、表面電漿共振(Surface Plasmon Resonance，以下稱為「SPR」)解析法等來測定或判定。就用於SPR解析的機器而言，可例示BIAcore^TM (GE Healthcare公司製)、ProteOn^TM (BioRad公司製)、SPR-Navi^TM (BioNavis公司製)、Spreeta^TM (Texas Instruments公司製)、SPRi-PlexII^TM (HORIBA公司製)、Autolab SPR^TM (Metrohm公司製)等。細胞表面上表現之抗原與抗體的結合，可藉由流式細胞分析技術、Cell ELISA法等來測定。

於本發明中ADCC(抗體依賴性細胞毒性(antibody dependent cellular cytotoxicity))係指表現Fcγ受體的非特異性細胞毒性細胞(例如NK細胞、嗜中性球及巨噬細胞等)辨識結合在標的細胞上的抗體，然後引起標的細胞的溶解之細胞媒介性反應。

於本發明中ADCP(抗體依賴性細胞吞噬作用(antibody dependent cell phagocytosis))係指表現Fc受體的吞噬細胞(例如巨噬細胞、嗜中性球等)辨識結合在標的細胞上的抗體，然後將標的細胞吞噬至細胞內之細胞媒介性反應。

於本發明中CDC(補體依賴性細胞毒性(complement dependent cytotoxicity))係指補體經由抗體而毒殺腫瘤細胞等之標的細胞的作用活性。

ADCC活性、CDC活性及ADCP活性可藉由公知的方法來測定。

ADCC活性之測定中係使用表現作為目的之抗原的細胞(標的細胞)、與殺死該標的細胞的效應細胞(effector cell)。效應細胞係經由Fcγ受體而辨識結合在標的細胞上之抗體的Fc區域。藉由從Fcγ受體所傳遞的訊息，而效應細胞殺死標的細胞。測定具有源自人類之Fc區域的抗體的ADCC活性之情形，係使用人類NK細胞作為效應細胞。人類NK細胞可由人類末梢血液單核細胞(peripheral blood mononuclear cell) (PMBC)藉由公知的方法來製備。或者亦可直接使用PBMC作為效應細胞。

ADCP活性之測定中係使用表現作為目的之抗原的細胞(標的細胞)、與吞噬該標的細胞的單核球或巨噬細胞等之效應細胞。此等效應細胞，可使由人類末梢血液單核細胞(PMBC)藉由公知的方法所分離之單核球部分(fraction)，藉由公知的方法而分化誘導成巨噬細胞來製備。

CDC活性之測定中係使用表現作為目的之抗原的細胞(標的細胞)、與補體成分。補體成分係與結合在標的細胞上之抗體結合而被活性化，在細胞表面引起一連串反應，形成膜攻擊複合體(membrane attack complex)而殺死標的細胞。可使用人類血清等作為此補體成分。

＜抗GARP抗體之製造＞可藉由將GARP或選自GARP之胺基酸序列的任意之多肽對動物進行免疫，並採集、純化活體內所產生的抗體而獲得。

(1)抗原之製備就用以製作抗GARP抗體之抗原而言，可舉出GARP或包含其至少6個連續之部分胺基酸序列的多肽、或者於此等附加任意之胺基酸序列或載體(carrier)的衍生物。

GARP可由人類的腫瘤組織或者腫瘤細胞直接純化而使用，又可藉由於活體外合成GARP、或者藉由利用基因操作使其於宿主細胞產生而獲得。基因操作具體而言，可將GARP的cDNA組入能夠表現的載體之後，藉由在包含轉錄與轉譯所需要之酵素、基質及能量物質的溶液中進行合成，或者藉由利用使其他原核生物或真核生物的宿主細胞轉形而使GARP表現，而獲得抗原。

又，亦能夠藉由使連結有為膜蛋白質之GARP的細胞外區域與抗體的恆定區之融合蛋白質於適當的宿主・載體系統中表現，而作為分泌蛋白質來獲得抗原。

(2)抗GARP單株抗體之製造本發明之抗體可藉由公知的手段取得。例如，可藉由使用此領域中所通常實施的方法，將成為抗原之GARP或選自GARP之胺基酸序列的任意之多肽對動物進行免疫，並採集、純化活體內所產生的抗體而獲得。抗原的來源不限定於人類，亦可將源自小鼠、大鼠等之人類以外的動物的抗原對動物進行免疫。於此情形，可藉由試驗與所取得之異種抗原結合之抗體、和人類抗原的交叉性，而分選能夠適用於人類之疾病的抗GARP抗體。

又，亦可藉由使產生對抗原之抗體的抗體產生細胞與骨髓瘤細胞融合來建立融合瘤，獲得單株抗體(例如，Kohler and Milstein, Nature (1975) 256, p.495-497；Kennet, R. ed., Monoclonal Antibodies, p.365-367, Plenum Press, N.Y.(1980))。

就如此地進行所建立的融合瘤株之例而言，可舉出GARP融合瘤151D及198D。此外，於本說明書中，將GARP融合瘤151D及198D所產生之抗體記載為「151D抗體」或者「198D抗體」，或僅記載為「151D」或者「198D」(參照US2018258184)。

151D抗體的重鏈可變區具有序列識別號3所示胺基酸序列。又，151D抗體的輕鏈可變區具有序列識別號5所示胺基酸序列。此外，序列識別號3所示重鏈可變區的胺基酸序列係藉由序列識別號2所示核苷酸序列所編碼。又，序列識別號5所示輕鏈可變區的胺基酸序列係藉由序列識別號4所示核苷酸序列所編碼。

198D抗體的重鏈可變區具有序列識別號7所示胺基酸序列。又，198D抗體的輕鏈可變區具有序列識別號9所示胺基酸序列。此外，序列識別號7所示重鏈可變區的胺基酸序列係藉由序列識別號6所示核苷酸序列所編碼。又，序列識別號9所示輕鏈可變區的胺基酸序列係藉由序列識別號8所示核苷酸序列所編碼。

(3)其他的抗體作為本發明之抗體，可舉出與和前述151D抗體或198D抗體相同的抗原決定位(epitope)結合之抗體。151D抗體(人源化151D抗體等)係辨識該序列中胺基酸編號352～392，及198D抗體(人源化198D抗體等)係辨識該序列中胺基酸編號18～112而結合，因此可舉出GARP之胺基酸序列中之該區域作為抗原決定位。

若新製作的單株抗體與上述151D抗體等所結合之部分胜肽或部分立體結構結合，則可判定該單株抗體與和上述151D抗體等之抗體相同的抗原決定位結合。又，藉由確認相對於上述151D抗體等之抗體對GARP的結合，該單株抗體係競爭(亦即，該單株抗體妨礙上述151D抗體等與GARP的結合)，即使並未確定具體的抗原決定位之序列或結構，亦可判定該單株抗體與和上述151D抗體等之抗體相同的抗原決定位結合。已確認抗原決定位相同之情形，可強烈期待該單株抗體具有與上述151D抗體等之抗體同等的特性。

於本發明之抗體，除了上述對GARP之單株抗體以外，亦包含以降低對人類之異種抗原性等作為目的而經人為改造的基因重組型抗體，例如嵌合(Chimeric)抗體、人源化(Humanized)抗體、及人類抗體等。此等抗體可使用已知的方法來製造。

又，就本發明之抗GARP抗體而言，可舉出下述之嵌合抗體及人源化抗體。

就嵌合抗體而言，可舉出抗體的可變區與恆定區互為異種之抗體，例如將源自小鼠或大鼠之抗體的可變區接合至源自人類之恆定區的嵌合抗體(參照Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A., 81, 6851-6855, (1984))。

源自大鼠抗人類GARP抗體151D的嵌合抗體，係包含含下述重鏈可變區的重鏈及含下述輕鏈可變區的輕鏈之抗體，且可具有任意之源自人類的恆定區：包含序列識別號3記載之胺基酸序列的重鏈可變區、及包含序列識別號5記載之胺基酸序列的輕鏈可變區。

又，源自大鼠抗人類GARP抗體198D的嵌合抗體，係包含含下述重鏈可變區的重鏈及含下述輕鏈可變區的輕鏈之抗體，且可具有任意之源自人類的恆定區：包含序列識別號7記載之胺基酸序列的重鏈可變區、及包含序列識別號9記載之胺基酸序列的輕鏈可變區。

作為此種嵌合抗體之例，可舉出：包含具有序列識別號13之胺基酸編號第20～466號記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號15之胺基酸編號第21～234號記載之胺基酸序列的輕鏈之抗體；及包含具有序列表的序列識別號17之胺基酸編號第20～469號記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號19之胺基酸編號第21～234號記載之胺基酸序列的輕鏈之抗體。

此外，在序列表的序列識別號13所示重鏈序列中，第1～19號記載之胺基酸序列為訊息序列，第20～136號記載之胺基酸序列為可變區，第137～466號記載之胺基酸序列為恆定區。

又，在序列表的序列識別號15所示輕鏈序列中，第1～20號記載之胺基酸序列為訊息序列，第21～129號記載之胺基酸序列為可變區，第130～234號記載之胺基酸序列為恆定區。

再者，在序列表的序列識別號17所示重鏈序列中，第1～19號記載之胺基酸序列為訊息序列，第20～139號記載之胺基酸序列為可變區，第140～469號記載之胺基酸序列為恆定區。

又，在序列表的序列識別號19所示輕鏈序列中，第1～20號記載之胺基酸序列為訊息序列，第21～129號記載之胺基酸序列為可變區，第130～234號記載之胺基酸序列為恆定區。

就人源化抗體而言，可舉出：僅將互補性決定區(CDR；complementarity determining region)組入源自人類之抗體的抗體(參照Nature (1986) 321, p.522-525)；藉由CDR移植法，而除了CDR之序列以外，亦將一部份框架(framework)之胺基酸殘基移植至人類抗體的抗體(WO90/07861)。

但是，就源自151D抗體的人源化抗體而言，只要保持151D抗體的6種全部的CDR序列，且具有抗腫瘤活性，則不限定於特定之人源化抗體。

此外，151D抗體的重鏈可變區保有：包含序列表的序列識別號3之胺基酸編號26～35記載之胺基酸序列的CDRH1(GFTFSNYYMA)、包含序列識別號3之胺基酸編號50～59記載之胺基酸序列的CDRH2(SIGTVGGNTY)、及包含序列識別號3之胺基酸編號99～106記載之胺基酸序列的CDRH3 (EDYGGFPH)。

又，151D抗體的輕鏈可變區保有：包含序列表的序列識別號5之胺基酸編號24～34記載之胺基酸序列的CDRL1(KASQNVGTNVD)、包含序列識別號5之胺基酸編號50～56記載之胺基酸序列的CDRL2(GASNRYT)、及包含序列識別號5之胺基酸編號89～97記載之胺基酸序列的CDRL3(LQYKYNPYT)。

再者，198D抗體的重鏈可變區保有：包含序列表的序列識別號7之胺基酸編號26～35記載之胺基酸序列的CDRH1(GFSLTSFHVS)、包含序列識別號7之胺基酸編號50～58記載之胺基酸序列的CDRH2(TISSGGGTY)、及包含序列識別號7之胺基酸編號98～109記載之胺基酸序列的CDRH3 (ISGWGHYYVMDV)。

又，198D抗體的輕鏈可變區保有：包含序列表的序列識別號9之胺基酸編號24～34記載之胺基酸序列的CDRL1(QASEDIYSGLA)、包含序列識別號9之胺基酸編號50～56記載之胺基酸序列的CDRL2(GAGSLQD)、及包含序列識別號9之胺基酸編號89～97記載之胺基酸序列的CDRL3(QQGLKFPLT)。

就大鼠抗體151D的人源化抗體之實例而言，可舉出包含由下述(1)～(3)中任一者所構成的重鏈可變區之重鏈、以及包含由下述(4)～(6)中任一者所構成的輕鏈可變區之輕鏈的任意之組合：(1)序列表的序列識別號21 (h151D-H1)或序列識別號23 (h151D-H4)之胺基酸編號第20～136號記載之胺基酸序列、(2)於上述(1)之序列中對各CDR序列以外的框架區之序列具有至少95%以上的同源性之胺基酸序列、及(3)於上述(1)之序列中之各CDR序列以外的框架區之序列中有1或數個胺基酸經缺失、取代或附加之胺基酸序列；以及(4)序列識別號25 (h151D-L1)或序列識別號27 (h151D-L4)之胺基酸編號第21～129號記載之胺基酸序列、(5)於上述(4)之序列中對各CDR序列以外的框架區之序列具有至少95%以上的同源性之胺基酸序列、及(6)於上述(4)之序列中之各CDR序列以外的框架區之序列中有1或數個胺基酸經缺失、取代或附加之胺基酸序列。

又，就大鼠抗體198D的人源化抗體之實例而言，可舉出包含由下述(1)～(3)中任一者所構成的重鏈可變區之重鏈、以及包含由下述(4)～(6)中任一者所構成的輕鏈可變區之輕鏈的任意之組合：(1)序列表的序列識別號29 (h198D-H3)之胺基酸編號第20～139號記載之胺基酸序列、(2)於上述(1)之序列中對各CDR序列以外的框架區之序列具有至少95%以上的同源性之胺基酸序列、及(3)於上述(1)之序列中之各CDR序列以外的框架區之序列中有1或數個胺基酸經缺失、取代或附加之胺基酸序列；以及(4)序列識別號31 (h198D-L4)之胺基酸編號第21～129號記載之胺基酸序列、(5)於上述(4)之序列中對各CDR序列以外的框架區之序列具有至少95%以上的同源性之胺基酸序列、及(6)於上述(4)之序列中之各CDR序列以外的框架區之序列中有1或數個胺基酸經缺失、取代或附加之胺基酸序列。

就人源化151D抗體的重鏈及輕鏈之適宜的組合而言，可舉出：包含具有重鏈可變區之重鏈及具有輕鏈可變區之輕鏈的抗體，該重鏈可變區包含序列識別號21之胺基酸編號第20～136號記載之胺基酸序列，該輕鏈可變區包含序列識別號25之胺基酸編號第21～129號記載之胺基酸序列；以及包含具有重鏈可變區之重鏈及具有輕鏈可變區之輕鏈的抗體，該重鏈可變區包含序列識別號23之胺基酸編號第20～136號記載之胺基酸序列，該輕鏈可變區包含序列識別號27之胺基酸編號第21～129號記載之胺基酸序列。

就進一步適宜的組合而言，可舉出：包含具有序列識別號21之胺基酸編號20～466記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號25之胺基酸編號21～234記載之胺基酸序列的輕鏈之抗體(h151D-H1L1)；以及包含具有序列識別號23之胺基酸編號20～466記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號27之胺基酸編號21～234記載之胺基酸序列的輕鏈之抗體(h151D-H4L4)。

就人源化198D抗體的重鏈及輕鏈之適宜的組合而言，可舉出包含具有下述重鏈可變區之重鏈及具有下述輕鏈可變區之輕鏈的抗體：包含序列識別號29之胺基酸編號第20～139號記載之胺基酸序列的重鏈可變區、及包含序列識別號31之胺基酸編號第21～129號記載之胺基酸序列的輕鏈可變區。

就進一步適宜的組合而言，可舉出：包含具有序列識別號29之胺基酸編號20～469記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號31之胺基酸編號21～234記載之胺基酸序列的輕鏈之抗體(h198D-H3L4)。

能夠藉由組合顯示與上述之重鏈胺基酸序列及輕鏈胺基酸序列高同源性之序列，而選擇具有與上述之各抗體同等的細胞毒性活性之抗體。此種同源性一般而言為80%以上的同源性，較佳為85%以上的同源性，更佳為90%以上的同源性，進一步更佳為95%以上的同源性，最佳為99%以上的同源性。又，能夠藉由組合重鏈或輕鏈的胺基酸序列中有1～數個胺基酸殘基經取代、缺失或附加之胺基酸序列，而選擇具有與上述之各抗體同等的細胞毒性活性之抗體。

此外，本說明書中之「數個」意指1～10個、1～9個、1～8個、1～7個、1～6個、1～5個、1～4個、1～3個、或1或者2個。

二種類的胺基酸序列間的同源性，可藉由使用Blast演算法2.2.2版(Altschul, Stephen F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Zheng Zhang, Webb Miller, and David J. Lipman (1997),「Gapped BLAST and PSI-BLAST:a new generation of protein database search programs」, Nucleic Acids Res.25:3389-3402)的系統內定參數來確定。Blast演算法亦可藉由於網際網路存取www.ncbi.nlm.nih.gov/blast來使用。此外，關於本發明之抗體的核苷酸序列與其他抗體的核苷酸序列之間的同源性，亦可藉由Blast演算法來確定。

此外，在人源化151D抗體之序列表的序列識別號21或序列識別號23所示重鏈胺基酸序列中，第1～19號記載之胺基酸序列為訊息序列，第20～136號記載之胺基酸序列為可變區，由第137～466號記載之胺基酸殘基所構成的胺基酸序列為恆定區。

又，在人源化151D抗體之序列表的序列識別號25或序列識別號27所示輕鏈胺基酸序列中，第1～20號記載之胺基酸序列為訊息序列，第21～129號記載之胺基酸序列為可變區，第130～234號記載之胺基酸序列為恆定區。

再者，在人源化198D抗體之序列表的序列識別號29所示重鏈胺基酸序列中，第1～19號記載之胺基酸序列為訊息序列，第20～139號記載之胺基酸序列為可變區，第140～469號記載之胺基酸序列為恆定區。

又，在人源化198D抗體之序列表的序列識別號31所示輕鏈胺基酸序列中，第1～20號記載之胺基酸序列為訊息序列，第21～129號記載之胺基酸序列為可變區，第130～234號記載之胺基酸序列為恆定區。

人源化151D抗體之序列表的序列識別號21或序列識別號23所示重鏈胺基酸序列係各自藉由序列表的序列識別號20或序列識別號22所示核苷酸序列所編碼。

人源化198D抗體之序列表的序列識別號29所示重鏈胺基酸序列係藉由序列表的序列識別號28所示核苷酸序列所編碼。

人源化151D抗體之序列表的序列識別號25或序列識別號27所示輕鏈胺基酸序列係各自藉由序列表的序列識別號24或序列識別號26所示核苷酸序列所編碼。

人源化198D抗體之序列表的序列識別號31所示輕鏈胺基酸序列係藉由序列表的序列識別號30所示核苷酸序列所編碼。

作為本發明之抗GARP抗體之一例，可舉出人類抗體。人類抗體可藉由使用具有包含人類抗體之重鏈與輕鏈之基因的人類染色體片段之人類抗體產生小鼠的方法(參照Nature Genetics (1997) 16, p.133-143；Nucl.Acids Res. (1998) 26, p.3447-3448；Animal Cell Technology: Basic and Applied Aspects vol.10, p.69-73 (Kitagawa, Y., Matsuda, T. and Iijima, S. eds.), Kluwer Academic Publishers, 1999.；Proc.Natl.Acad.Sci.USA (2000) 97, p.722-727等)來取得。

又，可藉由取得從人類抗體庫分選之源自噬菌體顯示(phage display)之人類抗體的方法(參照Investigative Ophthalmology & Visual Science. (2002) 43(7), p.2301-2308；Briefings in Functional Genomics and Proteomics (2002), 1(2), p.189-203；Ophthalmology (2002) 109(3), p.427-431；Nature Biotechnology (2005), 23, (9), p.1105-1116等)來獲得。

可藉由將因與抗原結合而選出的噬菌體的基因進行解析，而確定編碼與抗原結合之人類抗體的可變區的DNA序列。若明白與抗原結合之scFv的DNA序列，則可藉由連結抗體的恆定區的DNA序列而製作具有該序列的IgG表現載體，並導入至適當的宿主而使其表現，藉此而取得人類抗體(WO92/01047、WO92/20791、WO93/06213、WO93/11236、WO93/19172、WO95/01438、WO95/15388、Annu. Rev. Immunol (1994) 12, p.433-455、Nature Biotechnology (2005) 23(9), p.1105-1116)。

就本發明之人類抗體而言，進一步可舉出與和人源化151D抗體或人源化198D抗體相同的抗原決定位結合之人類抗體。

本發明之抗體中亦包含抗體的修飾體。該修飾體意指對本發明之抗體施加化學性或生物學性的修飾而成者。化學性的修飾體中包含：對胺基酸骨架之化學部分的結合、N-鍵結或O-鍵結碳水化合物鏈的化學修飾體等。生物學性的修飾體中包含：經轉譯後修飾(例如，對N-鍵結或O-鍵結的糖鏈附加、N末端或C末端的加工、脫醯胺化、天冬胺酸的異構化、甲硫胺酸的氧化)者、藉由使用原核生物宿主細胞來使其表現而於N末端附加有甲硫胺酸殘基者等。又，為了能夠進行本發明之抗體或抗原的檢測或單離而經標識者，例如酵素標識體、螢光標識體、親和性標識體亦包含於此種修飾物的意義中。此種本發明之抗體的修飾物，係對於原本的本發明之抗體的穩定性及血中滯留性的的改善、抗原性的減低、此種抗體或抗原的檢測或單離等有用。

能夠藉由調節與本發明之抗體結合的糖鏈修飾(醣苷化、去岩藻醣化等)，而增強抗體依賴性細胞毒性活性。就抗體之糖鏈修飾的調節技術而言，已知有WO99/54342、WO00/61739、WO02/31140、WO2007/133855等，但不限定於此等。本發明之抗體中亦包含該糖鏈修飾經調節之抗體。

就為了本發明之目的而使用者而言，包含「抗體的機能性片段」或者「抗體的抗原結合片段」。「抗體的機能性片段」意指發揮原本的抗體所發揮之機能的至少一部份之抗體片段。就「抗體的機能性片段」或者「抗體的抗原結合片段」而言，可舉出例如Fab、F(ab’)2、scFv、Fab’、單鏈免疫球蛋白等，但不限定於彼等。此種抗體的機能性片段，除了藉由將抗體蛋白質的全長分子以木瓜酵素、胃蛋白酶等之酵素處理所得者以外，亦可為使用重組基因而於適當的宿主細胞中所產生的重組蛋白質。

本發明之抗體亦包含具有2個以上之抗原結合部位的抗體。即，能夠與1個抗原上的2個以上之彼此相異的抗原決定位或2個以上之抗原上的彼此相異的抗原決定位結合之抗體，且包著複數之彼此相異的抗原結合片段。此種多重特異性抗體中包含IgG型多重特異性抗體；具有2種類以上之可變區的多重特異性抗體，例如串連scFv (tandem scFv)、單鏈雙功能抗體(single-chain diabody)、雙功能抗體及三功能抗體(triabody)之類的抗體片段、進行共價鍵結或非共價鍵結而連結的抗體片段；但不限定於此等。多重特異性抗體亦可包含Fc。

本發明之抗體可藉由基因重組技術，利用各自編碼本發明之抗體的重鏈及輕鏈的cDNA，較佳為利用包含該cDNA的載體而將真核細胞轉形，並培養產生基因重組人類單株抗體的轉形細胞，藉此而自培養上清中獲得該抗體。

於一旦將抗體基因單離以後，導入至適當的宿主而製作抗體之情形，可使用適當的宿主與表現載體之組合。就抗體基因之具體例而言，可舉出組合編碼本說明書中所記載之抗體的重鏈序列之基因、及編碼輕鏈序列之基因而成者。於將宿主細胞轉形之際，重鏈序列基因與輕鏈序列基因能夠被插入至相同的表現載體，而且亦能夠被插入至個別的表現載體。

使用真核細胞作為宿主之情形，可使用動物細胞、植物細胞、真核微生物。尤其就動物細胞而言，可舉出哺乳類細胞，例如為猴細胞之COS細胞(Gluzman, Y. Cell (1981) 23, p.175-182，ATCC CRL-1650)、小鼠纖維母細胞NIH3T3 (ATCC：No.CRL-1658)或中國倉鼠卵巢細胞(CHO細胞，ATCC CCL-61)的二氫葉酸還原酵素缺損株(Urlaub, G. and Chasin, L.A.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. (1980) 77, p.4126-4220)。

使用原核細胞之情形，可舉出例如大腸桿菌、枯草桿菌。將作為目的之抗體基因藉由轉形而導入至此等細胞，且在活體外培養經轉形之細胞，藉此而可得到抗體。於該培養中有依抗體之序列而產量相異之情形，能夠由具有同等之結合活性的抗體之中以產量為指標而分選作為醫藥的生產為容易者。因此，本發明之抗體中亦包含藉由以包含下述步驟為特徵之該抗體之製造方法而得到的抗體：培養上述經轉形之宿主細胞的步驟；及由該步驟所得到的培養物採集目的之抗體的步驟。

已知以哺乳類培養細胞所生產之抗體的重鏈的羧基末端之離胺酸殘基係缺失(Journal of Chromatography A, 705:129-134 (1995))，而且已知同樣地重鏈羧基末端之甘胺酸、離胺酸的2胺基酸殘基係缺失，且新位於羧基末端之脯胺酸殘基被醯胺化(Analytical Biochemistry, 360:75-83 (2007))。然而，此等重鏈序列的缺失及修飾，對於抗體的抗原結合能力及效應功能(effector function)(補體的活性化或抗體依賴性細胞毒性作用等)並不造成影響。因此，本發明中亦包含受到該修飾之抗體，可舉出於重鏈羧基末端有1或2個胺基酸缺失的缺失體、及被醯胺化的該缺失體(例如，羧基末端部位之脯胺酸殘基被醯胺化的重鏈)等。但是，只要保持抗原結合能力及效應功能，則本發明之抗體的重鏈的羧基末端之缺失體並不限定於上述之種類。構成本發明的抗體之2條重鏈，可為選自包含全長及上述之缺失體之群組的重鏈之任一種，亦可為組合任二種而成者。各缺失體的量比係受到產生本發明的抗體之哺乳類培養細胞的種類及培養條件影響，但就本發明的抗體的主成分而言，可舉出在2條重鏈雙方，羧基末端之1個胺基酸殘基缺失之情形。具體而言，可舉出下述(1)〜(3)記載之抗體。 (1)具有序列識別號21之胺基酸編號20～465記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號25之胺基酸編號21～234記載之胺基酸序列的輕鏈； (2)具有序列識別號23之胺基酸編號20～465記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號27之胺基酸編號21～234記載之胺基酸序列的輕鏈；或 (3)具有序列識別號29之胺基酸編號20～468記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號31之胺基酸編號21～234記載之胺基酸序列的輕鏈。

就本發明之抗體的同型(isotype)而言，可舉出例如IgG (IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)等，但較佳可舉出IgG1、IgG2或IgG4。

本發明之抗體亦可為經多聚化而提高對抗原的親和性者。就多聚化之抗體而言，可為1種類的抗體，亦可為辨識相同抗原之複數的抗原決定位之複數的抗體。就將抗體多聚化之方法而言，可舉出IgG CH3結構域(domain)與2個scFv(單鏈抗體)的結合、與鏈親和素(streptavidin)的結合、螺旋-轉折-螺旋模體(helix-turn-helix motif)的導入等。

本發明之抗體亦可為多株抗體。就多株抗體之一例而言，可舉出CDR相異之複數種類之抗體的混合物。就該種的多株抗體而言，可使用：培養產生不同抗體之細胞的混合物，並自該培養物所純化的抗體(參照WO2004/061104號)。

作為抗體之修飾物，亦可使用與聚乙二醇(PEG)等之各種分子鍵結之抗體。

本發明之抗體進一步可為此等抗體與其他藥劑形成結合物者(免疫結合物(Immunoconjugate))。就此種抗體之例而言，可舉出該抗體與放射性物質或具有藥理作用的化合物結合者(Nature Biotechnology (2005) 23, p.1137-1146)，可舉出例如，銦(¹¹¹ In)卡羅單抗噴地肽(Indium (¹¹¹ In) Capromab pendetide)、鎝(^99m Tc)巰諾莫單抗(Technetium (^99m Tc) Nofetumomab merpentan)、銦(¹¹¹ In)替伊莫單抗(Indium (¹¹¹ In) Ibritumomab)、釔(⁹⁰ Y)替伊莫單抗(Yttrium (⁹⁰ Y) Ibritumomab)、碘(¹³¹ I)托西莫(Iodine (¹³¹ I) Tositumomab)等。

2.免疫調節劑於本發明中，「免疫調節劑」為使抗腫瘤免疫活性化之藥劑，包含免疫檢查點抑制劑、免疫誘導劑或者免疫刺激劑等。

於本發明中，「免疫檢查點抑制劑」係表示抑制免疫抑制系統，且使抗腫瘤免疫活性化之藥劑。

本發明中所使用的免疫檢查點抑制劑並無特別限制，但適宜地可舉出抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗PD-L2抗體及抗CTLA-4抗體，更適宜地可舉出抗PD-1抗體及抗PD-L1抗體。

於本發明中，「抗PD-1抗體」係表示藉由與PD-1 (計劃性細胞死亡蛋白1 (Programmed cell death-1)；CD279；PDCD1)特異性地結合，而具有減低、抑制及/或干涉由PD-1與為其結合對象的PD-L1或PD-L2之相互作用產生的訊息傳遞之作用的抗體。就本發明中所使用的抗PD-1抗體而言，若確認臨床上的有效性與安全性，則無特別限制，但適宜地可舉出納武單抗(Nivolumab) (WO2006/121168等)、派立珠單抗(Pembrolizumab) (WO2008/156712等)、拉立珠單抗、MK-3475、AMP-224、皮立珠單抗、LOPD18等，更適宜地可舉出納武單抗、派立珠單抗。又，以於臨床前研究中確認與本發明中所使用的抗GARP抗體之併用效果為目的，亦可使用市售的研究用抗PD-1抗體(例：clone RMP1-14)等。

於本發明中，「抗PD-L1抗體」係表示藉由與PD-L1 (計劃性細胞死亡配體1 (Programmed cell death ligand 1)；CD274；B7-H1)特異性地結合，而具有減低、抑制及/或干涉由PD-L1與為其結合對象的PD-1或B7.1 (CD80)之相互作用產生的訊息傳遞之作用的抗體。就本發明中所使用的抗PD-L1抗體而言，若確認臨床上的有效性與安全性，則無特別限制，但適宜地可舉出阿特珠單抗(Atezolizumab)(國際公開第2010/077634號等)、德瓦魯單抗(Durvalumab)(國際公開第2011/066389號等)及阿維魯單抗(Avelumab)(國際公開第2013/079174號等)。又，以於臨床前研究中確認與本發明中所使用的抗GARP抗體之併用效果為目的，亦可使用市售的研究用抗PD-L1抗體(例：clone 10F.9G2)等。

於本發明中，「抗CTLA-4抗體」係表示藉由與CTLA-4 (細胞毒性T淋巴球相關蛋白4 (Cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4)；CD152)特異性地結合，而具有減低、抑制及/或干涉由CTLA-4與為其結合對象的B7.1 (CD80)或B7.2 (CD86)之相互作用產生的訊息傳遞之作用的抗體。就本發明中所使用的抗CTLA-4抗體而言，若確認臨床上的有效性與安全性，則無特別限制，但適宜地可舉出伊匹單抗(Ipilimumab)(國際公開第2001/014424號等)及曲美木單抗(Tremelimumab)(國際公開第2000/037504號等)。又，以於臨床前研究中確認與本發明中所使用的抗GARP抗體之併用效果為目的，亦可使用市售的研究用抗CTLA-4抗體(例：clone 9H10)等。

本發明中所使用的免疫檢查點抑制劑包含多重特異性抗體。此種多重特異性的分子中包含IgG型多重特異性分子；具有2種類以上之可變區的多重特異性分子，例如串連scFv、單鏈雙功能抗體、雙功能抗體及三功能抗體之類的抗體片段、進行共價鍵結或非共價鍵結而連結的抗體片段；但不限定於此等。多重特異性的分子亦可包含Fc。具體而言，可舉出包含選自包含抗PD-1抗體或者其抗原結合片段、抗PD-L1抗體或者其抗原結合片段、抗PD-L2抗體或者其抗原結合片段、及抗CTLA-4抗體或者其抗原結合片段之群組的2以上之抗體或者其抗原結合片段的多重特異性抗體，更佳可舉出包含抗PD-1抗體或者其抗原結合片段與抗CTLA4抗體或者其抗原結合片段的雙重特異性抗體，但不限於此。

於本發明中，「免疫誘導劑」並無特別限制，但適宜地可舉出放射線療法(放射線照射)或化學放射線療法、化學治療劑。於本發明中，「化學治療劑」係指引起Treg之去除或骨髓來源抑制細胞(myeloid-derived suppressor cells，MDSC)之減少等抗腫瘤免疫的藥劑。可舉出例如舒尼替尼(Sunitinib)、環磷醯胺、奧沙利鉑(Oxaliplatin)、順鉑(Cisplatin)、阿黴素(Doxorubicin)、米托蒽醌(Mitoxantrone)、道諾黴素(Daunorubicin)、胺甲喋呤(Methotrexate)、米托蒽醌、吉西他濱(Gemcitabine)、多西他賽(Docetaxel)、紫杉醇(Paclitaxel)、長春花新鹼(Vincristine)、卡鉑(Carboplatin)、溫諾平(Vinorelbine)、厄洛替尼(Erlotinib)、伊馬替尼(Imatinib)、尼羅替尼(Nilotinib)、達沙替尼(Dasatinib)、索拉非尼(Sorafenib)、硼替佐米(Bortezomib)、ABT-737、5-FU、替莫唑胺(Temozolomide)、達卡巴仁(Dacarbazine)，但不限於此(Nat Rev Drug Discov. 2012 Feb 3;11(3):215-33、Front Immunol. 2019 Jul 17;10:1654、Clin Cancer Res 2009;15:2148-2157、Cancer Immunol Immunother (2007) 56:641-648)。

於本發明中，「免疫刺激劑」並無特別限制，但適宜地可舉出促效抗體(agonist antibody)、佐劑。

3.醫藥以下，說明以組合本發明的抗GARP抗體與免疫調節劑而進行投予為特徵之醫藥組成物及治療方法；以及以含有本發明的抗GARP抗體，且用於藉由使抗腫瘤免疫活性化之作用而被改善之疾病的治療為特徵之醫藥組成物及治療方法。

本發明之醫藥組成物及治療方法可為以抗GARP抗體與免疫調節劑各自含於不同的製劑作為有效成分、或者與免疫調節劑之放射線療法或者化學放射線療法組合，於同時或於不同時間進行投予為特徵者，亦可為以於單一製劑含有抗GARP抗體與免疫調節劑作為有效成分且被投予為特徵者。又，亦可為用於藉由使抗腫瘤免疫活性化之作用而被改善之疾病的治療，而於單一製劑含有本發明的抗GARP抗體作為有效成分並進行投予者。

於本發明中，「使抗體的作用上升」係表示相較於該抗體以單劑進行投予之情形，抗腫瘤效果增強。

於本發明中，「使免疫調節劑的作用上升」係表示相較於該免疫調節劑以單劑進行投予之情形，抗腫瘤免疫活性化作用增強。

本發明之醫藥組成物及治療方法可使用於癌症的治療用，適宜地可使用於選自包含肺癌、腎癌、尿道上皮癌、大腸癌、前列腺癌、多形性神經膠質母細胞瘤、卵巢癌、胰臟癌、乳癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌、胃癌、食道癌、頭頸部癌、血液癌、皮膚癌、甲狀腺癌、膽道癌、唾液腺癌、小腸癌、腎上腺瘤、卵巢癌、子宮頸癌、子宮體癌、子宮肉瘤、胸腺瘤、間皮瘤、肉瘤及彼等之轉移性形態之群組的至少一個疾病之治療用。更適宜地可使用於選自包含頭頸部癌、胃癌、食道癌及彼等之轉移性形態之群組的至少一個疾病之治療用。

本發明之醫藥組成物及治療方法，可被選擇作為用於為癌症之主要治療法的藥物療法的藥劑來使用，就其結果而言，可延遲癌細胞的成長，抑制增殖，進而破壞癌細胞。藉由此等作用，可於癌症患者達成從因癌症所致之症狀的解放、或QOL的改善，且保護癌症患者的生命而達成治療效果。即使為未到達癌細胞的破壞之情形，亦可藉由癌細胞的增殖之抑制或控制而於癌症患者達成更高的QOL，並且達成更長期的存活。

於此種藥物療法中之藥物單獨的使用之外，本發明之醫藥組成物及治療方法亦可於輔助療法中作為與其他療法組合的藥劑使用，可與外科手術、或放射線療法、荷爾蒙療法等組合。再者，亦可作為新輔助療法(neoadjuvant therapy)中之藥物療法的藥劑使用。

如以上之治療的使用之外，本發明之醫藥組成物及治療方法亦可期待壓制細微的轉移癌細胞的增殖，進而進行破壞等預防效果。可期待例如：抑制並破壞在轉移過程於體液中的癌細胞之效果；或對於剛著床於任一組織之細微的癌細胞的抑制、破壞等之效果。因此，尤其可期待於外科上去除癌之後之癌轉移的抑制、預防效果。

本發明之醫藥組成物及治療方法，除了對於患者適用作為全身療法之外，亦可局部性地適用於癌組織而期待治療效果。

本發明之醫藥組成物及治療方法可對哺乳動物適宜地使用，但更適宜為對人類使用。

本發明之醫藥組成物，可作為包含1種以上之藥學上適合性之成分的醫藥組成物來投予。就於本發明之醫藥組成物中所使用的物質而言，於投予量或投予濃度方面，可從此領域中所通常使用的製劑添加物等來適宜選擇而適用。例如，上述醫藥組成物，典型上係包含1種以上之醫藥載劑(例如，經滅菌的液體)。此處，液體包含例如水及油(石油、動物來源、植物來源、或合成來源之油)。油可為例如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。於上述醫藥組成物被靜脈內投予之情形，水係更為代表性的載劑。食鹽水溶液、以及右旋葡萄糖水溶液及甘油水溶液亦可作為液體載劑，而尤其可使用於注射用溶液用。適當的醫藥賦形劑可從此領域中公知者來適宜選擇。若期望，則上述組成物亦可包含微量的潤濕劑或者乳化劑、或pH緩衝劑。適當的醫藥載劑之例係記載於E. W. Martin著「Remington’s Pharmaceutical Sciences」。其處方係對應於投予之樣態。

公知有各種遞輸系統，可為了投予本發明之醫藥組成物而使用。就導入途徑而言，可舉出皮內、肌肉內、腹腔內、靜脈內及皮下之途徑，但並不限定於此等。投予可利用例如輸注或單次快速注射(bolus injection)。於特定之較佳的實施形態中，本發明中所使用的抗GARP抗體及免疫調節劑的投予係利用輸注。非經口的投予為較佳的投予途徑。

於代表性實施形態中，上述醫藥組成物係作為適合於對人類的靜脈內投予之醫藥組成物，而按照慣用的程序進行處方。典型上，用於靜脈內投予的組成物，係滅菌的等張性之水性緩衝液中的溶液。需要時，上述醫藥組成物還可包含助溶劑及用以緩和在注射部位之疼痛的局部麻醉劑(例如，利多卡因(Lignocaine))。上述成分一般係例如密封於顯示活性劑之量的安瓿或小袋(sachet)等中，作為被封口的容器中之乾燥的冷凍乾燥粉末或無水的濃縮物，而以個別、或在單位劑型中一起混合之任一者來供給。上述醫藥組成物為藉由輸注而被投予的形態之情形，其可藉由例如包含滅菌的製藥等級之水或食鹽水的輸注瓶來投藥。上述醫藥組成物係藉由注射而被投予之情形，注射用滅菌水或食鹽水的安瓿，能以例如上述成分可於投予前被混合的方式提供。

本發明之醫藥組成物及治療方法亦可包含本發明的抗GARP抗體及免疫調節劑以外的癌症治療劑。本發明之醫藥組成物及治療方法亦可與其他癌症治療劑併用而進行投予，可藉此而使抗腫瘤效果增強。以此種目的所使用的其他癌症治療劑，可與本發明之醫藥組成物同時地、分別地、或連續地投予至個體，亦可變更各自的投予間隔而投予。作為此種癌症治療劑，可舉出5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil，5-FU)、帕妥珠單抗(Pertuzumab)、曲妥珠單抗(Trastuzumab)、紫杉醇(Paclitaxel)、卡鉑(Carboplatin)、順鉑(Cisplatin)、吉西他濱(Gemcitabine)、卡培他濱(Capecitabine)、愛萊諾迪肯(Irinotecan) (CPT-11)、多西他賽(Docetaxel)、培美曲塞(Pemetrexed)、索拉非尼(Sorafenib)、長春花鹼(Vinblastin)、溫諾平(Vinorelbine)、依維莫司(Everolims)、坦螺旋黴素(Tanespimycin)、貝伐單抗(Bevacizumab)、奧沙利鉑(Oxaliplatin)、拉帕替尼(Lapatinib)、曲妥珠單抗-美坦新(Trastuzumab emtansine) (T-DM1)或國際公開第2003/038043號中記載之藥劑、還有LH-RH類似物(analogue)(亮丙瑞林(Leuprorelin)、戈舍瑞林(Goserelin)等)、磷酸雌莫司汀(Estramustine Phosphate)、雌激素拮抗劑(泰莫西芬(Tamoxifen)、雷洛昔芬(Raloxifene)等)、芳香酶抑制劑(阿那曲唑(Anastrozole)、來曲唑(Letrozole)、依西美坦(Exemestane)等)等，但只要為具有抗腫瘤活性的藥劑則不被限定。

此種醫藥組成物可作為具有所選擇之組成與需要之純度的製劑，而製劑化為冷凍乾燥製劑或液態製劑。於製劑化為冷凍乾燥製劑時，可為包含此領域中所使用之適當的製劑添加物之製劑。又，於液劑亦可同樣地進行，而製劑化為包含此領域中所使用之各種的製劑添加物之液態製劑。

本發明之醫藥組成物及治療方法的抗腫瘤效果可藉由測定免疫激活化活性或者腫瘤細胞增殖抑制活性等來確認。又，亦可藉由作成將腫瘤移植至受試動物的模式，且施予本發明之治療劑或治療方法來確認。本發明之治療劑及治療方法的抗腫瘤效果，於本發明之抗GARP抗體不與前述模式動物的GARP結合之情形，可使用替代抗體(surrogate antibody)來驗證。替代抗體期望係具有和本發明之抗GARP抗體相同或類似的結合活性或機能特性。再者，可藉由CANscript (MITRA RXDX, INC)等之離體(ex vivo)評價系統來預測效果(Nat Commun. 2015 Feb 27(6); 6169)。免疫激活化活性以及抗腫瘤效果可藉由WO2017/051888中記載之方法來測定。

再者，本發明之醫藥組成物及治療方法的抗腫瘤效果亦可在臨床試驗中確認。即，可對癌症患者施予本發明之治療劑或治療方法，且藉由實體腫瘤的療效評價標準(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors) (RECIST)評價法、WHO評價法、Macdonald評價法、體重測定及其他的手法來確認，可藉由完全緩解(Complete response；CR)、部分緩解(Partial response；PR)、疾病進展(Progressive disease；PD)、客觀緩解率(Objective Response Rate；ORR)、緩解持續時間(Duration of response；DoR)、無進展存活期(Progression-Free Survival；PFS)、整體存活期(Overall Survival；OS)等之指標來判定。

醫藥組成物之組成及濃度也因投予方法而變化，但本發明之醫藥組成物中所包含的抗GARP抗體及免疫調節劑，係在對抗原的親和性，即在對抗原的解離常數(KD值)之點上，親和性越高(KD值低)則即使為少量的投予量亦可發揮藥效。因此，抗GARP抗體及免疫調節劑的投予量，亦可基於與抗原之親和性的狀況來設定。於對人類投予本發明的抗GARP抗體及免疫調節劑時，只要例如將約0.001～100mg/kg 投予1次或以1～180日1次的間隔投予複數次即可。

本發明之抗GARP抗體之情形，例如作為投予方法，可舉出將0.01mg/kg～100mg/kg投予1或2次以上的方法。投予量可舉出例如0.01mg/kg、0.03mg/kg、0.1mg/kg、0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、30.0mg/kg、100mg/kg。又，投予亦可為1週1次(q1w)、2週1次(q2w)、3週1次(q3w)、或4週1次(q4w)。作為較佳的投予方法，可舉出例如將本發明之抗體以3週1次而將0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg或者10mg/kg投予1或2次以上的方法。

本發明中所使用的免疫檢查點抑制劑，例如，可1次將約1～20mg/kg(體重)或1次將約80～1500mg以2～6週間隔，費時約30分鐘、約60分鐘、約90分鐘、或約30分鐘以上或者約60分鐘以上進行靜脈內投予(例如，靜脈點滴)。作為每1次投予的體重換算之投予量，可舉出例如1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg或20mg/kg，另一方面，就每1次投予的投予量而言，可舉出例如80mg、200mg、240mg、250mg、280mg、300mg、320mg、350mg、360mg、400mg、420mg、450mg、480mg、500mg、540mg、560mg、600mg、640mg、700mg、720mg、750mg、800mg、840mg、900mg、1000mg、1080mg、1100mg、1120mg、1200mg或1500mg。就投予間隔而言，可舉出例如2週、3週、4週或6週，就1次的投予時間而言，可舉出例如約30分鐘、約60分鐘、約90分鐘、或約30分鐘以上或者約60分鐘以上。上述之用法・用量為例示，並不限定於此等。

於本發明中所使用的抗PD-1抗體為納武單抗之情形，作為例子可舉出以下述之用法・用量進行投予的方法，但不限定於此等。例如，就納武單抗而言將1次2mg/kg(體重)以3週間隔來進行靜脈點滴；或就納武單抗而言將1次3mg/kg(體重)以2週間隔來進行靜脈點滴。作為別的用法・用量，就納武單抗而言將1次1mg/kg(體重)以3週間隔來進行4次靜脈點滴，然後就納武單抗而言將1次3mg/kg(體重)以2週間隔來進行靜脈點滴。作為別的用法・用量，就納武單抗而言將1次3mg/kg(體重)以3週間隔來進行4次靜脈點滴，然後就納武單抗而言將1次3mg/kg(體重)以2週間隔來進行靜脈點滴。作為別的用法・用量，例如就納武單抗而言將1次240mg以2週間隔、或就納武單抗而言將1次480mg以4週間隔來進行靜脈點滴。作為別的用法・用量，例如就納武單抗而言將1次80mg以3週間隔來進行4次靜脈點滴，然後就納武單抗而言將1次240mg以2週間隔或將1次480mg以4週間隔來進行靜脈點滴。作為別的用法・用量，例如就納武單抗而言將1次240mg以3週間隔來進行4次靜脈點滴，然後就納武單抗而言將1次240mg以2週間隔或將1次480mg以4週間隔來進行靜脈點滴。納武單抗有費時30分鐘以上來進行靜脈點滴之情形。為手術後輔助療法之情形，例如投予期間有設至12個月為止之情形。

於本發明中所使用的抗PD-1抗體為派立珠單抗之情形，作為例子可舉出以下述之用法・用量進行投予的方法，但不限定於此等。例如，就派立珠單抗而言將1次2mg/kg(體重)以3週間隔來進行靜脈點滴。作為別的用法・用量，就派立珠單抗而言將10mg/kg(體重)以2週間隔來進行靜脈點滴。作為別的用法・用量，就派立珠單抗而言將10mg/kg(體重)以3週間隔來進行靜脈點滴。作為別的用法・用量，例如就派立珠單抗而言將1次200mg以3週間隔或將1次400mg以6週間隔來進行靜脈點滴。作為別的用法・用量，例如就派立珠單抗而言將1次200mg以3週間隔來進行靜脈點滴，然後就派立珠單抗而言將1次200mg以3週間隔來進行靜脈點滴。派立珠單抗有例如費時30分鐘來進行靜脈點滴投予之情形。因此，作為別的用法・用量，例如就派立珠單抗而言將1次200mg以3週間隔或將1次400mg以6週間隔而費時30分鐘來進行靜脈點滴。為手術後輔助療法之情形，例如投予期間有設至12個月為止之情形。

於本發明中所使用的抗PD-L1抗體為阿特珠單抗之情形，作為例子可舉出以下述之用法・用量進行投予的方法，但不限定於此等。例如，就阿特珠單抗而言將1次1200mg以3週間隔來進行靜脈點滴。作為別的用法・用量，例如就阿特珠單抗而言將1次840mg以2週間隔來進行靜脈點滴。作為別的用法・用量，例如就阿特珠單抗而言將1次1200mg以3週間隔來進行靜脈點滴，然後就阿特珠單抗而言將1次1200mg以3週間隔來進行靜脈點滴。阿特珠單抗有例如費時60分鐘來進行靜脈點滴之情形。因此，例如，就阿特珠單抗而言將1次1200mg費時60分鐘以3週間隔來進行靜脈點滴；或就阿特珠單抗而言將1次840mg費時60分鐘以2週間隔來進行靜脈點滴。此外，若首次投予的耐受性良好，則有第2次以後的投予時間可縮短至30分鐘之情形。

於本發明中所使用的抗PD-L1抗體為德瓦魯單抗之情形，作為例子可舉出以下述之用法・用量進行投予的方法，但不限定於此等。例如，就德瓦魯單抗而言將1次10mg/kg(體重)以2週間隔來進行靜脈點滴。作為別的用法・用量，例如就德瓦魯單抗而言將1次1500mg以3週間隔來進行4次靜脈點滴，然後就德瓦魯單抗而言將1次1500mg以4週間隔來進行靜脈點滴。德瓦魯單抗有費時60分鐘以上來進行靜脈點滴之情形。因此，作為別的用法・用量，例如就德瓦魯單抗而言將1次10mg/kg(體重)以2週間隔而費時60分鐘以上來進行靜脈點滴。又，作為別的用法・用量，例如就德瓦魯單抗而言將1次1500mg以3週間隔而費時60分鐘以上來進行4次靜脈點滴，然後就德瓦魯單抗而言將1次1500mg以4週間隔而費時60分鐘以上來進行靜脈點滴。體重30kg以下之情形的1次投予量有設為20mg/kg(體重)之情形。

於本發明中所使用的抗PD-L1抗體為阿維魯單抗之情形，作為例子可舉出以下述之用法・用量進行投予的方法，但不限定於此等。例如，就阿維魯單抗而言將1次10mg/kg(體重)以2週間隔來進行靜脈點滴。阿維魯單抗有費時1小時以上來進行靜脈點滴之情形。因此，作為別的用法・用量，例如就阿維魯單抗而言將1次10mg/kg(體重)以2週間隔而費時1小時以上來進行靜脈點滴。

於本發明中所使用的抗CTLA-4抗體為伊匹單抗之情形，作為例子可舉出以下述之用法・用量進行投予的方法，但不限定於此等。例如，就伊匹單抗而言將1次3mg/kg(體重)以3週間隔來進行4次靜脈點滴。作為別的用法・用量，例如就伊匹單抗而言將1次1mg/kg(體重)以3週間隔來進行4次靜脈點滴。伊匹單抗有費時30分鐘或費時90分鐘來進行靜脈點滴之情形。

本發明亦包含：本發明之抗體的用於製備用以治療癌症的醫藥組成物之使用、本發明之抗體的用以治療癌症之使用、用以治療癌症之包含本發明之抗體的套組。 [實施例]

藉由以下所示之例而具體地說明本發明，但本發明並不限定於此等。又，此等於任何意義上都不被限定地解釋。

參考例1.抗GARP抗體之製作按照WO2017/051888中記載之製造方法，而製作抗GARP抗體h151D_H1L1、h151D_H4L4、h198D_H3L4。

實施例1.抗GARP抗體與抗PD-1抗體之對於Teff細胞增殖激活化的併用效果 1)-1 Treg、Teff及輔助細胞(accessory cell)之製備將CD4陽性T細胞自健康人供給者的末梢血液單核細胞(PBMC)分離後，添加經螢光標識之抗CD4抗體及抗CD25抗體而進行染色，藉由使用流式細胞分析技術的分選，而分離CD4陽性CD25陰性(Teff)細胞及CD4陽性CD25強陽性(Treg)細胞。又，由PBMC將CD3陽性細胞除去後，照射曝露劑量0.35 C/kg的X射線而製備輔助細胞。

1)-2 共同培養(co-cultivation)分析將Teff細胞(200個細胞/孔)與輔助細胞(20000個細胞/孔)混合之後，進一步以成為1000、500、250或125個細胞/孔之方式添加Treg細胞。在抗CD3抗體及抗CD28抗體(各1 nM)的存在下，以各自最終濃度1μg/mL添加抗GARP抗體(h151D_H1L1)及抗PD-1抗體(納武單抗)，在37℃、5% CO₂ 之條件下培養5天。然後，添加[³ H]-胸苷(最終濃度18.5kBq/mL)，進一步繼續培養20小時。細胞回收後，使用閃爍計數器而以每1分鐘的修正計數值(CCPM，每分鐘校正數(corrected count perminute))來測量各孔之[³ H]-胸苷的細胞內攝入值。於圖11-1及圖11-2呈示4名之各供給者的各培養條件下的[³ H]-胸苷細胞內攝入量之平均值及標準誤差(6孔/組)。隨著Treg細胞對Teff細胞的存在比變大，而[³ H]-胸苷細胞內攝入量變小，顯示藉由Treg細胞而Teff細胞的增殖被抑制、在h151D_H1L1處理組及納武單抗處理組中[³ H]-胸苷細胞內攝入量增加且在併用組中進一步增加，確認到抗GARP抗體與抗PD-1抗體的併用效果。

1)-3 相對活性之計算及統計解析計算出相對於1)-2所得到之各供給者之培養基對照組的Teff:Treg=1:0(未添加Treg細胞)的平均計數之各自的相對平均計數。於Teff細胞與Treg細胞的共同培養比(Teff:Treg)為1:0、1:1/16、1:1/8、1:1/4、1:1/2之各自的培養所得之相對平均計數為A、B、C、D、E時，以下述之式來求得相對AUC。 AUC=(A+B×2+C×2+D×2+E)/2 使用所得之4名供給者的相對AUC值，針對將培養基對照組作為對象群組之際的h151D_H1L1處理組及納武單抗處理組、以及針對將併用組作為對象群組之際的h151D_H1L1處理組及納武單抗處理組，藉由參數鄧奈特檢定(parametric Dunnett‘s test)而實施統計解析(SAS System Release 9.2，SAS Institute Inc.)。

於圖12呈示4名供給者之相對AUC值及其平均值。為Teff細胞增殖激活化之指標的相對AUC值，係與培養基對照組進行比較，且在h151D_H1L1處理組(P=0.0102)及納武單抗處理組(P=0.0065)觀察到顯著的增加。再者，與h151D_H1L1處理組(P=0.0123)及納武單抗處理組(P=0.0180)進行比較，而在併用組觀察到顯著的增加。此外，於相對AUC之平均值上，對照IgG處理組為培養基對照組的1.08倍。

實施例2.使用CANscript(註冊商標)之抗GARP抗體與抗PD-1抗體的併用時臨床效果預測 CANscript(註冊商標)(MITRA RXDX, INC(以下，Mitra公司))為使用源自癌症患者之癌組織的離體(ex-vivo)培養模式，係源自癌症患者的癌組織(維持腫瘤微環境(tumor microenvironment)結構，且包含基質細胞、免疫細胞及癌細胞)、及源自相同患者的血清與PBMC之共同培養試驗(Nat Commun. 2015 Feb 27(6); 6169)。藥劑對於癌組織的反應性，係3天的共同培養後，基於病理組織影像及代謝活性來定量化。即，細胞增殖及細胞凋亡誘導係藉由Ki67及活性化凋亡蛋白酶3(Caspase-3)的免疫化學染色來評價，又，細胞形態的變化係藉由H&E(蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin))染色來評價。再者，藉由使用市售的代謝活性及細胞存活率判定分析套組之培養上清的評價，而實施時序性的定量化。此等全部的評價結果係使用由Mitra公司所開發的學習演算法(SVMpAUC演算法)而評分(M-score)。於SVMpAUC中，係藉由將相同患者之實際的臨床上的藥劑反應性與自CANscript所得之經定量化的結果進行比較學習，而能夠預測各藥劑的臨床效果。迄今已解析4000病例以上之數據，M-score高於25之情形，於臨床上顯示CR(完全緩解)或者PR(部分緩解)之機率(陽性預測值)為87%。

使用由20名頭頸部鱗狀細胞癌患者取得之樣本，藉由CANscript分析來評價、預測抗GARP抗體(h151D_H1L1)、抗PD-1抗體(納武單抗)、及h151D_H1L1與納武單抗的併用時之臨床效果。於共同培養開始前，藉由使用NanoString IO360 Panel的RNA表現解析來解析於癌組織內浸潤之免疫細胞的比例與組成的結果，免疫概貌(immune profile)在各個患者大不相同。對於此等具多樣性的源自HNSCC患者的樣本，h151D_H1L1及納武單抗單獨作用時，M-score顯示大於25之值的患者樣本之比例係各自為20% (4/20)及15% (3/20)，相對於此，在h151D_H1L1與納武單抗的併用時，則觀察到增加為30% (6/20)，預測到對於頭頸部鱗狀細胞癌之抗GARP抗體與抗PD-1抗體的併用效果(圖13)。

實施例3：使用CT26.WT皮下移植小鼠模式的抗腫瘤試驗及腫瘤浸潤白血球(Tumor infiltrating leukocytes) (TIL)之解析 3)-1 抗腫瘤試驗中之抗GARP替代抗體及抗PD-1替代抗體的併用效果將由美國典型培養物保藏中心(American Type Culture Collection) (ATCC)購入之小鼠大腸癌細胞株CT26.WT懸浮於生理食鹽水，將2.0×10⁵ 個細胞皮下移植至雌CD2F1小鼠(CHARLES RIVER LABORATORIES JAPAN, INC.)的右側腹部(第0天)。於第3天及第6天投予抗小鼠PD-1抗體(5mg/kg)，於第9天實施隨機分組(各組n=9)。進一步於第9天及第16天對各單劑投予組及併用組投予抗小鼠GARP抗體(1mg/kg)及抗小鼠PD-1抗體(5mg/kg)。對照組於第9天及第16天並未進行藥物處置。此外，各抗體係以D-PBS稀釋，且將10mL/kg的液量進行尾靜脈內投予。1週2次以電子式數位卡尺(Mitutoyo Corp.)測定腫瘤的長徑及短徑，且由以下之計算式來計算估計腫瘤體積。

估計腫瘤體積(mm³ )=1/2×長徑(mm)×[短徑(mm)]²

於第20天之估計腫瘤體積(平均值±標準誤差)上，抗小鼠PD-1抗體與抗小鼠GARP抗體之併用組係相對於抗小鼠PD-1抗體單獨投予組而表現顯著的抗腫瘤效果。

3)-2 對於TIL之抗GARP替代抗體及抗PD-1替代抗體的併用效果將CT26.WT懸浮於生理食鹽水，將2.0×10⁵ 個細胞皮下移植至雌CD2F1小鼠的右側腹部(第0天)，於第6天實施隨機分組(各組n=10)。於第6天及第10天對各單劑投予組及併用組投予抗小鼠GARP抗體(1mg/kg)及抗小鼠PD-1抗體(5mg/kg)。對照組並未進行藥物處置。此外，各抗體係以D-PBS稀釋，且將10mL/kg的液量進行尾靜脈內投予。於第14天摘除腫瘤，藉由研磨而獲得TIL。藉由流式細胞分析技術來求得CD8陽性T細胞中之誘導型T細胞共刺激分子(inducible T-cell co-stimulator) (ICOS)陽性細胞的比例(%)作為癌症免疫激活化之指標。觀察到併用組相對於各單劑組的ICOS陽性CD8陽性T細胞之顯著的增加。此時，關於CD4陽性T細胞中之GARP陽性Treg (GARP陽性FOXP3陽性CD4陽性T細胞)的比例(平均值±標準誤差)，確認到在GARP陽性Treg的抗小鼠GARP抗體投予組之顯著的減少與在抗小鼠PD-1抗體投予組之顯著的增加。再者，於併用組係較對照組顯著地減少。

3)-3 抗腫瘤試驗中之抗GARP替代抗體及抗PD-L1替代抗體的併用效果將CT26.WT懸浮於生理食鹽水，將2.0×10⁵ 個細胞皮下移植至雌CD2F1小鼠的右側腹部(第0天)。於第6天實施隨機分組(各組n=10)。進一步於第6天及第11天對各單劑投予組及併用組投予抗小鼠GARP抗體(1mg/kg)及抗小鼠PD-L1抗體(10mg/kg)。對照組並未進行藥物處置。此外，各抗體係以D-PBS稀釋，且將10mL/kg的液量進行尾靜脈內投予。1週2次以電子式數位卡尺測定腫瘤的長徑及短徑，且由以下之計算式來計算估計腫瘤體積。

估計腫瘤體積(mm³ )=1/2×長徑(mm)×[短徑(mm)]²

於第18天，在併用組中確認到相較於抗GARP抗體與抗PD-L1抗體各自單劑組之估計腫瘤體積的縮小。

實施例4：使用MC38皮下移植小鼠模式的抗腫瘤試驗 4)-1 抗GARP替代抗體及抗PD-1替代抗體的併用效果將由美國國家癌症研究院(National Cancer Institute) (NCI)取得之小鼠大腸癌細胞株MC38懸浮於生理食鹽水，將5.0×10⁵ 個細胞皮下移植至雌C57BL/6小鼠(CHARLES RIVER LABORATORIES JAPAN, INC.)的右側腹部(第0天)，於第4天實施隨機分組(各組n=10)。於第4天及第10天對各單劑投予組及併用組投予抗小鼠GARP抗體(1mg/kg)及抗小鼠PD-1抗體(1mg/kg)。對照組並未進行藥物處置。此外，各抗體係以D-PBS稀釋，且將10mL/kg的液量進行尾靜脈內投予。1週2次以電子式數位卡尺測定腫瘤的長徑及短徑，且由以下之計算式來計算估計腫瘤體積。

估計腫瘤體積(mm³ )=1/2×長徑(mm)×[短徑(mm)]²

於第18天，在併用組中確認到相較於抗GARP抗體與抗PD-1抗體各自單劑組之估計腫瘤體積的縮小。 4)-2 抗GARP替代抗體及抗CTLA-4替代抗體的併用效果將MC38懸浮於生理食鹽水，將5.0×10⁵ 個細胞皮下移植至雌C57BL/6小鼠的右側腹部(第0天)，於第4天實施隨機分組(各組n=10)。對於各單劑投予組及併用組，於第4天及第11天投予抗小鼠GARP抗體(1mg/kg)，於第4天、第7天、第11天及第14天投予抗小鼠CTLA-4抗體(10mg/kg)。此外，各抗體係以D-PBS稀釋，且將10mL/kg的液量進行尾靜脈內投予。對照組並未進行藥物處置。1週2次以電子式數位卡尺測定腫瘤的長徑及短徑，且由以下之計算式來計算估計腫瘤體積。

估計腫瘤體積(mm³ )=1/2×長徑(mm)×[短徑(mm)]²

於第18天，在併用組中確認到相較於抗GARP抗體與抗CTLA4抗體各自單劑組之估計腫瘤體積的縮小。 [產業上利用之可能性]

藉由使用本發明之抗GARP抗體，而各種癌症的治療或預防成為可能。 [序列表非關鍵詞文字]

序列識別號1：GARP的胺基酸序列序列識別號2：編碼151D之重鏈可變區之cDNA的核苷酸序列序列識別號3：151D之重鏈可變區的胺基酸序列序列識別號4：編碼151D之輕鏈可變區之cDNA的核苷酸序列序列識別號5：151D之輕鏈可變區的胺基酸序列序列識別號6：編碼198D之重鏈可變區之cDNA的核苷酸序列序列識別號7：198D之重鏈可變區的胺基酸序列序列識別號8：編碼198D之輕鏈可變區之cDNA的核苷酸序列序列識別號9：198D之輕鏈可變區的胺基酸序列序列識別號10：包含編碼人類輕鏈訊息序列及人類κ鏈恆定區的胺基酸之序列之DNA片段的核苷酸序列序列識別號11：包含編碼人類重鏈訊息序列及人類IgG1恆定區的胺基酸之序列之DNA片段的核苷酸序列序列識別號12：人類嵌合抗體c151D重鏈的核苷酸序列序列識別號13：人類嵌合抗體c151D重鏈的胺基酸序列序列識別號14：人類嵌合抗體c151D輕鏈的核苷酸序列序列識別號15：人類嵌合抗體c151D輕鏈的胺基酸序列序列識別號16：人類嵌合抗體c198D重鏈的核苷酸序列序列識別號17：人類嵌合抗體c198D重鏈的胺基酸序列序列識別號18：人類嵌合抗體c198D輕鏈的核苷酸序列序列識別號19：人類嵌合抗體c198D輕鏈的胺基酸序列序列識別號20：人源化抗體h151D-H1的核苷酸序列序列識別號21：人源化抗體h151D-H1的胺基酸序列序列識別號22：人源化抗體h151D-H4的核苷酸序列序列識別號23：人源化抗體h151D-H4的胺基酸序列序列識別號24：人源化抗體h151D-L1的核苷酸序列序列識別號25：人源化抗體h151D-L1的胺基酸序列序列識別號26：人源化抗體h151D-L4的核苷酸序列序列識別號27：人源化抗體h151D-L4的胺基酸序列序列識別號28：人源化抗體h198D-H3的核苷酸序列序列識別號29：人源化抗體h198D-H3的胺基酸序列序列識別號30：人源化抗體h198D-L4的核苷酸序列序列識別號31：人源化抗體h198D-L4的胺基酸序列

無。

[圖1]為呈示c151D抗體重鏈的胺基酸序列(序列識別號13)之圖。 [圖2]為呈示c151D抗體輕鏈的胺基酸序列(序列識別號15)之圖。 [圖3]為呈示c198D抗體重鏈的胺基酸序列(序列識別號17)之圖。 [圖4]為呈示c198D抗體輕鏈的胺基酸序列(序列識別號19)之圖。 [圖5]為呈示h151D-H1重鏈的胺基酸序列(序列識別號21)之圖。 [圖6]為呈示h151D-L1輕鏈的胺基酸序列(序列識別號25)之圖。 [圖7]為呈示h151D-H4重鏈的胺基酸序列(序列識別號23)之圖。 [圖8]為呈示h151D-L4輕鏈的胺基酸序列(序列識別號27)之圖。 [圖9]為呈示h198D-H3重鏈的胺基酸序列(序列識別號29)之圖。 [圖10]為呈示h198D-L4輕鏈的胺基酸序列(序列識別號31)之圖。 [圖11-1]為呈示供給者A及B之對照組、抗GARP抗體h151D_H1L1單劑處理組及抗PD-1抗體納武單抗單劑處理組、以及抗GARP抗體h151D_H1L1及納武單抗併用處理組之[³ H]-胸苷(thymidine)的Teff細胞內攝入量之平均值及標準誤差(6孔/組)之圖。 [圖11-2]為呈示供給者C及D之對照組、抗GARP抗體h151D_H1L1單劑處理組及抗PD-1抗體納武單抗單劑處理組、以及抗GARP抗體h151D_H1L1及納武單抗併用處理組之[³ H]-胸苷的Teff細胞內攝入量之平均值及標準誤差(6孔/組)之圖。 [圖12]為呈示4名供給者之對照組、抗GARP抗體h151D_H1L1單劑投予組及抗PD-1抗體納武單抗單劑投予組、以及抗GARP抗體h151D_H1L1及抗PD-1抗體納武單抗併用投予組之為Teff細胞增殖激活化之指標的相對AUC值之圖。 [圖13]為呈示使用CANscript(註冊商標)之抗GARP抗體(h151D_H1L1)與抗PD-1抗體納武單抗的併用時臨床效果預測之圖。

無。

Claims

一種用以治療癌症的醫藥組成物，其特徵為組合以具有下述(1)～(3)之特性為特徵的抗體或其抗原結合片段及免疫調節劑而進行投予： (1)與以醣蛋白A為主的重複結構(Glycoprotein-A Repetitions Predominant) (GARP)特異性地結合； (2)具有對調節性T細胞(regulatory T cell)的免疫抑制機能之抑制活性；及 (3)具有抗體依賴性細胞毒性(ADCC)活性。
如請求項1之醫藥組成物，其中抗體在活體內具有抗腫瘤活性。
如請求項1或2之醫藥組成物，其中抗體係包含以下(1)或(2)記載之包含CDRH1、CDRH2及CDRH3的重鏈、以及包含CDRL1、CDRL2及CDRL3的輕鏈而成： (1)包含序列識別號13之胺基酸編號45～54記載之胺基酸序列的CDRH1、包含序列識別號13之胺基酸編號69～78記載之胺基酸序列的CDRH2及包含序列識別號13之胺基酸編號118～125記載之胺基酸序列的CDRH3、以及包含序列識別號15之胺基酸編號44～54記載之胺基酸序列的CDRL1、包含序列識別號15之胺基酸編號70～76記載之胺基酸序列的CDRL2及包含序列識別號15之胺基酸編號109～117記載之胺基酸序列的CDRL3；或 (2)包含序列識別號17之胺基酸編號45～54記載之胺基酸序列的CDRH1、包含序列識別號17之胺基酸編號69～77記載之胺基酸序列的CDRH2及包含序列識別號17之胺基酸編號117～128記載之胺基酸序列的CDRH3、以及包含序列識別號19之胺基酸編號44～54記載之胺基酸序列的CDRL1、包含序列識別號19之胺基酸編號70～76記載之胺基酸序列的CDRL2及包含序列識別號19中胺基酸編號109～117記載之胺基酸序列的CDRL3。
如請求項1至3中任一項之醫藥組成物，其中抗體包含以下(1)～(3)記載之重鏈可變區及輕鏈可變區： (1)包含序列識別號21之胺基酸編號20～136記載之胺基酸序列的重鏈可變區及包含序列識別號25之胺基酸編號21～129記載之胺基酸序列的輕鏈可變區； (2)包含序列識別號23之胺基酸編號20～136記載之胺基酸序列的重鏈可變區及包含序列識別號27之胺基酸編號21～129記載之胺基酸序列的輕鏈可變區；或 (3)包含序列識別號29之胺基酸編號20～139記載之胺基酸序列的重鏈可變區及包含序列識別號31之胺基酸編號21～129記載之胺基酸序列的輕鏈可變區。
如請求項1至4中任一項之醫藥組成物，其中抗體為嵌合抗體。
如請求項1至4中任一項之醫藥組成物，其中抗體為人源化抗體。
如請求項1至6中任一項之醫藥組成物，其中抗體包含人類IgG1、人類IgG2或人類IgG4的重鏈恆定區。
如請求項6或7之醫藥組成物，其中抗體包含以下(1)～(3)記載之重鏈及輕鏈： (1)具有序列識別號21之胺基酸編號20～466記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號25之胺基酸編號21～234記載之胺基酸序列的輕鏈； (2)具有序列識別號23之胺基酸編號20～466記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號27之胺基酸編號21～234記載之胺基酸序列的輕鏈；或 (3)具有序列識別號29之胺基酸編號20～469記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號31之胺基酸編號21～234記載之胺基酸序列的輕鏈。
如請求項1之醫藥組成物，其中抗體係與如請求項2至8中任一項之抗體在對GARP的結合上競爭。
如請求項1至9中任一項之醫藥組成物，其中抗體包含選自包含N-鍵結型糖鏈附加、O-鍵結型糖鏈附加、N末端的加工、C末端的加工、脫醯胺化、天冬胺酸的異構化、甲硫胺酸的氧化、N末端上之甲硫胺酸殘基的附加、脯胺酸殘基的醯胺化、及重鏈的羧基末端上之1個或2個胺基酸殘基的缺失之群組的1或2以上之修飾。
如請求項10之醫藥組成物，其中於重鏈的羧基末端有1個或數個胺基酸殘基缺失。
如請求項10或11之醫藥組成物，其中在2條重鏈雙方於羧基末端有1個胺基酸殘基缺失。
如請求項10至12中任一項之醫藥組成物，其中重鏈的羧基末端之脯胺酸殘基進一步被醯胺化。
如請求項1至13中任一項之醫藥組成物，其中免疫調節劑為抗PD-1抗體或者其抗原結合片段、抗PD-L1抗體或者其抗原結合片段、抗PD-L2抗體或者其抗原結合片段、抗CTLA-4抗體或者其抗原結合片段、包含前述抗體或其抗原結合片段的多重特異性抗體、放射線療法、化學放射線療法、化學治療劑或此等之組合。
如請求項14之醫藥組成物，其中抗PD-1抗體為納武單抗(Nivolumab)、派立珠單抗(Pembrolizumab)、拉立珠單抗(Lambrolizumab)、MK-3475、AMP-224、皮立珠單抗(Pidilizumab)或LOPD18。
如請求項14之醫藥組成物，其中抗PD-L1抗體為阿特珠單抗(Atezolizumab)、德瓦魯單抗(Durvalumab)或阿維魯單抗(Avelumab)。
如請求項14之醫藥組成物，其中抗CTLA-4抗體為伊匹單抗(Ipilimumab)或曲美木單抗(Tremelimumab)。
如請求項1至17中任一項之用以治療癌症的醫藥組成物，其中抗體與免疫調節劑係各自含於不同的製劑作為有效成分，於同時或於不同時間進行投予。
一種用以治療癌症的醫藥組成物，其包含如請求項1至13中任一項之抗體，且係用以與免疫調節劑併用。
一種用以治療癌症的醫藥組成物，其包含如請求項1至13中任一項之抗體，且係用以治療經投予免疫調節劑的癌症患者。
一種用以治療癌症的醫藥組成物，其包含免疫調節劑，且藉由與如請求項1至13中任一項之抗體併用，而使該抗體的作用上升。
一種用以治療癌症的醫藥組成物，其包含免疫調節劑，且係用以與如請求項1至13中任一項之抗體併用。
一種用以治療癌症的醫藥組成物，其包含免疫調節劑，且係用以治療經投予如請求項1至13中任一項之抗體的癌症患者。
一種用以治療癌症的醫藥組成物，其包含如請求項1至13中任一項之抗體，且藉由與免疫調節劑併用，而使免疫調節劑的作用上升。
如請求項1至24中任一項之醫藥組成物，其係用以治療選自包含肺癌、腎癌、尿道上皮癌(urothelial carcinoma)、大腸癌、前列腺癌、多形性神經膠質母細胞瘤、卵巢癌、胰臟癌、乳癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌、胃癌、食道癌、頭頸部癌、血液癌(hematological malignancy)、皮膚癌、甲狀腺癌、膽道癌、唾液腺癌、小腸癌、腎上腺瘤、睾丸癌、子宮頸癌、子宮體癌、子宮肉瘤、胸腺瘤、間皮瘤、肉瘤及彼等之轉移性形態之群組的至少一種癌症。
一種癌症的治療方法，其特徵為組合以具有下述(1)～(3)之特性為特徵的抗體或其抗原結合片段及免疫調節劑而進行投予： (1)與以醣蛋白A為主的重複結構(GARP)特異性地結合； (2)具有對調節性T細胞的免疫抑制機能之抑制活性；及 (3)具有抗體依賴性細胞毒性(ADCC)活性。
如請求項26之治療方法，其中抗體在活體內具有抗腫瘤活性。
如請求項26或27之治療方法，其中抗體係包含以下(1)或(2)記載之包含CDRH1、CDRH2及CDRH3的重鏈、以及包含CDRL1、CDRL2及CDRL3的輕鏈而成： (1)包含序列識別號13中胺基酸編號45～54記載之胺基酸序列的CDRH1、包含序列識別號13中胺基酸編號69～78記載之胺基酸序列的CDRH2及包含序列識別號13中胺基酸編號118～125記載之胺基酸序列的CDRH3、以及包含序列識別號15中胺基酸編號44～54記載之胺基酸序列的CDRL1、包含序列識別號15中胺基酸編號70～76記載之胺基酸序列的CDRL2及包含序列識別號15中胺基酸編號109～117記載之胺基酸序列的CDRL3；或 (2)包含序列識別號17中胺基酸編號45～54記載之胺基酸序列的CDRH1、包含序列識別號17中胺基酸編號69～77記載之胺基酸序列的CDRH2及包含序列識別號17中胺基酸編號117～128記載之胺基酸序列的CDRH3、以及包含序列識別號19中胺基酸編號44～54記載之胺基酸序列的CDRL1、包含序列識別號19中胺基酸編號70～76記載之胺基酸序列的CDRL2及包含序列識別號19中胺基酸編號109～117記載之胺基酸序列的CDRL3。
如請求項26至28中任一項之治療方法，其中抗體包含以下(1)～(3)記載之重鏈可變區及輕鏈可變區： (1)包含序列識別號21之胺基酸編號20～136記載之胺基酸序列的重鏈可變區及包含序列識別號25之胺基酸編號21～129記載之胺基酸序列的輕鏈可變區； (2)包含序列識別號23之胺基酸編號20～136記載之胺基酸序列的重鏈可變區及包含序列識別號27之胺基酸編號21～129記載之胺基酸序列的輕鏈可變區；或 (3)包含序列識別號29之胺基酸編號20～139記載之胺基酸序列的重鏈可變區及包含序列識別號31之胺基酸編號21～129記載之胺基酸序列的輕鏈可變區。
如請求項26至29中任一項之治療方法，其中抗體為嵌合抗體。
如請求項26至29中任一項之治療方法，其中抗體為人源化抗體。
如請求項26至31中任一項之治療方法，其中抗體包含人類IgG1、人類IgG2或人類IgG4的重鏈恆定區。
如請求項31或32之治療方法，其中抗體包含以下(1)～(3)記載之重鏈及輕鏈： (1)具有序列識別號21之胺基酸編號20～466記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號25之胺基酸編號21～234記載之胺基酸序列的輕鏈； (2)具有序列識別號23之胺基酸編號20～466記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號27之胺基酸編號21～234記載之胺基酸序列的輕鏈；或 (3)具有序列識別號29之胺基酸編號20～469記載之胺基酸序列的重鏈及具有序列識別號31之胺基酸編號21～234記載之胺基酸序列的輕鏈。
如請求項26之治療方法，其中抗體係與如請求項27至33中任一項之抗體在對GARP的結合上競爭。
如請求項26至34中任一項之治療方法，其中抗體包含選自包含N-鍵結型糖鏈附加、O-鍵結型糖鏈附加、N末端的加工、C末端的加工、脫醯胺化、天冬胺酸的異構化、甲硫胺酸的氧化、N末端上之甲硫胺酸殘基的附加、脯胺酸殘基的醯胺化、及重鏈的羧基末端上之1個或2個胺基酸殘基的缺失之群組的1或2以上之修飾。
如請求項35之治療方法，其中於重鏈的羧基末端有1個或數個胺基酸殘基缺失。
如請求項35或36之治療方法，其中在2條重鏈雙方於羧基末端有1個胺基酸殘基缺失。
如請求項35至37中任一項之治療方法，其中重鏈的羧基末端之脯胺酸殘基進一步被醯胺化。
如請求項26至38中任一項之治療方法，其中免疫調節劑為抗PD-1抗體或者其抗原結合片段、抗PD-L1抗體或者其抗原結合片段、抗PD-L2抗體或者其抗原結合片段、抗CTLA-4抗體或者其抗原結合片段、包含前述抗體或其抗原結合片段的多重特異性抗體、放射線療法、化學放射線療法、化學治療劑或此等之組合。
如請求項39之治療方法，其中抗PD-1抗體為納武單抗、派立珠單抗、拉立珠單抗、MK-3475、AMP-224、皮立珠單抗或LOPD18。
如請求項39之治療方法，其中抗PD-L1抗體為阿特珠單抗、德瓦魯單抗或阿維魯單抗。
如請求項39之治療方法，其中抗CTLA-4抗體為伊匹單抗或曲美木單抗。
一種治療方法，其係以與免疫調節劑併用為特徵的癌症的治療方法，包含對需要其之癌症患者投予如請求項26至38中任一項之抗體的有效量。
一種治療方法，其係經投予免疫調節劑的癌症患者的治療方法，包含對需要其之患者投予如請求項26至38中任一項之抗體的有效量。
一種治療方法，其係藉由與如請求項26至38中任一項之抗體併用，而使該抗體的作用上升之方法，包含對需要其之患者投予免疫調節劑的有效量。
一種治療方法，其係以與如請求項26至38中任一項之抗體併用為特徵的癌症的治療方法，包含對需要其之患者投予免疫調節劑的有效量。
一種治療方法，其係經投予如請求項26至38中任一項之抗體的癌症患者的治療方法，包含對需要其之患者投予免疫調節劑的有效量。
一種治療方法，其係藉由與免疫調節劑併用，而使免疫調節劑的作用上升之方法，包含對需要其之患者投予如請求項26至38中任一項之抗體的有效量。
如請求項26至48中任一項之治療方法，其係用以治療選自包含肺癌、腎癌、尿道上皮癌、大腸癌、前列腺癌、多形性神經膠質母細胞瘤、卵巢癌、胰臟癌、乳癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌、胃癌、食道癌、頭頸部癌、血液癌、皮膚癌、甲狀腺癌、膽道癌、唾液腺癌、小腸癌、腎上腺瘤、睾丸癌、子宮頸癌、子宮體癌、子宮肉瘤、胸腺瘤、間皮瘤、肉瘤及彼等之轉移性形態之群組的至少一種癌症。
一種用以治療癌症的套組製劑，其包含如請求項1至12中任一項之抗體、及選自包含抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗PD-L2抗體及抗CTLA-4抗體之群組的1或2以上之免疫調節劑。
如請求項50之製劑，其進一步包含用以使用套組的操作說明書。
如請求項14之醫藥組成物，其中抗PD-1抗體為納武單抗。
如請求項14之醫藥組成物，其中抗PD-1抗體為派立珠單抗。
如請求項39之治療方法，其中抗PD-1抗體為納武單抗。
如請求項39之治療方法，其中抗PD-1抗體為派立珠單抗。