TW202242111A - 用於調節因子xii之化合物及方法 - Google Patents

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蘇珊 M 弗瑞爾
賀恩 荷亞 比伊
陳光 趙
布萊特 P 孟尼亞
傑佛瑞 R 克羅斯比
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美商Ionis製藥公司
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Abstract

提供用於減少細胞或個體中FXII RNA之量或活性且在某些情況下減少細胞或個體中FXII蛋白質之量的化合物、方法及醫藥組合物。此類化合物、方法及醫藥組合物適用於預防、治療或改善血栓栓塞性疾患之至少一種症狀。此類血栓栓塞性疾患包括深靜脈血栓、靜脈或動脈血栓、肺栓塞、心肌梗塞及中風。此類症狀包括疼痛、呼吸短促、心臟灼熱、冷汗、疲勞、頭暈、暈眩、腫脹、痛痙及死亡。此類化合物、方法及醫藥組合物適用於預防、治療或改善遺傳性血管水腫之至少一種症狀。

Description

用於調節因子XII之化合物及方法
本文提供用於減少細胞或個體中因子XII (FXII) RNA之量且在某些情況下減少細胞或個體中FXII蛋白質之量的化合物、方法及醫藥組合物。此類化合物、方法及醫藥組合物適用於治療或預防血栓栓塞性疾患。此類血栓栓塞性疾患包括心肌梗塞(MI)、中風、肢體缺血與壞死及靜脈血栓性栓塞(VTE),包括深靜脈血栓(DVT)及肺栓塞(PE)。
人類 F12基因編碼FXII蛋白質,一種在血流中循環之酶原。酶原由血漿激肽釋放素(PK)或由其在結合至人工或生物表面後自體活化之獨特能力而轉化為活性酶(FXIIa)。活體內,FXIIa觸發激肽釋放素-激肽系統,從而釋放緩激肽(BK),該緩激肽誘導微血管滲透性、一氧化氮誘導之血管舒張、低血壓及發炎反應,諸如腫脹、高灌注及疼痛。FXIIa亦經由內在路徑起始凝結且經由包含高分子量激肽原(HK)及PK之激肽釋放素-激肽系統促進發炎。
FXII可導致多種炎性、威脅生命之疾病狀況,包括遺傳性血管水腫(HAE)及血栓。HAE為罕見的威脅生命之遺傳病症,其特徵在於因血管滲透性增加所致之多個器官之急性腫脹的反復發作。過量FXII活性可觸發過量BK形成或信號傳導,從而導致遺傳性血管水腫之血管滲透性。血栓為血管閉塞之不良適應過程且仍為與心肌梗塞(MI)、中風、肢體缺血與壞死及靜脈血栓性栓塞(VTE),包括深靜脈血栓(DVT)及肺栓塞(PE)相關之血管發病率及死亡率之主要原因。VTE為在MI及中風後血管相關死亡之第三大原因,且為癌症患者死亡之主要原因之一。儘管許多血栓栓塞性疾患歸因於獲得性外在問題(例如手術、癌症、不動),但其他血栓栓塞性疾患歸因於基因突變(例如抗磷脂症候群、因子V Leiden血栓好發症)。用於血栓栓塞性疾患之最常用治療(例如華法林(warfarin)、肝素)及較新之直接口服抗凝劑全部具有顯著缺點,諸如出血之風險增加。因此,本文之目的在於提供用於治療及預防此類血栓栓塞性疾患之化合物、方法及醫藥組合物。
本文提供用於減少FXII RNA之量且在某些實施例中減少細胞或個體中FXII蛋白質之量或活性的化合物、方法及醫藥組合物。在某些實施例中,本文所揭示之化合物、方法及醫藥組合物減少個體血液中之FXII RNA、FXII蛋白質、FXII活性或其組合。在某些實施例中,個體患有血栓栓塞性疾患或處於血栓栓塞性疾患之風險下。在某些實施例中,血栓栓塞性疾患為深靜脈血栓、靜脈血栓、動脈血栓、肺栓塞、心肌梗塞或中風。在某些實施例中,適用於減少FXII RNA之量、FXII蛋白質之量或FXII活性之化合物為寡聚化合物。在某些實施例中,寡聚化合物包含經修飾寡核苷酸。
本文亦提供適用於預防血栓栓塞性疾患之方法及適用於改善血栓栓塞性疾患之症狀的方法。血栓栓塞性疾患之示例性症狀包括但不限於疼痛、呼吸短促、心臟灼熱、冷汗、疲勞、頭暈、暈眩、腫脹、痛痙及死亡。
本文亦提供適用於治療遺傳性血管水腫之方法及適用於改善遺傳性血管水腫之症狀的方法。遺傳性血管水腫之示例性症狀包括但不限於腫脹、噁心、嘔吐、搔癢、頭痛、疲勞、腹痛、呼吸短促、鼻炎、過敏症及支氣管收縮。
序列表
本申請案與電子格式之序列表一起提交。序列表以2020年12月17日創建之題為BIOL0369USLSEQ_ST25.tst之文檔提供,其大小為1031 KB。電子格式之序列表之資訊以全文引用之方式併入本文中。
應了解,以上一般描述及以下詳細描述兩者僅為示例性及解釋性的而非限制性的。本文中,除非另有特別規定,否則單數之使用包括複數。除非另有規定,否則如本文所用,「或」之使用意指「及/或」。此外,術語「包括(including)」以及其他形式,諸如「包括(includes)」及「包括(included)」之使用不具限制性。又,除非另有特別規定,否則諸如「要素」或「組分」之術語涵蓋包含一個單元及要素之要素及組分以及包含多於一個次單元之要素及組分。
本文所用之章節標題僅用於組織目的且不應視為限制所述主題。本申請案中引用之所有文獻或文獻部分,包括但不限於專利、專利申請案、文章、書籍及論文,關於本文所論述之文獻部分以及其全文藉此以引用之方式明確併入。 定義
除非提供具體定義,否則與本文所述之分析化學、合成有機化學及藥物與醫藥化學結合使用之命名以及其程序及技術為此項技術中熟知及常用之彼等。在允許之情況下,本揭示案通篇提及之所有專利、申請案、公開申請案及其他公開案及其他資料以全文引用之方式併入本文中。
除非另有指示,否則以下術語具有以下含義: 定義
如本文所用,「2'-去氧核苷」意指包含2'-H(H)去氧核糖基糖部分之核苷。在某些實施例中,2'-去氧核苷為2'-β-D-去氧核苷且包含2'-β-D-去氧核糖基糖部分,該糖部分具有如天然存在之去氧核糖核酸(DNA)中所發現之β-D構型。在某些實施例中,2'-去氧核苷可包含經修飾核鹼基或可包含RNA核鹼基(尿嘧啶)。
如本文所用,「2'-MOE」或「2'-MOE糖部分」意指替代核糖基糖部分之2'-OH基團之2'-OCH 2CH 2OCH 3基團。「MOE」意指甲氧基乙基。除非另有指示,否則2'-MOE具有β-D立體化學構型。
如本文所用,「2'-MOE核苷」意指包含2'-MOE糖部分之核苷。
如本文所用,「2'-OMe」或「2'-O-甲基糖部分」意指替代核糖基糖部分之2'-OH基團之2'-OCH 3基團。除非另有指示,否則2'-OMe具有β-D立體化學構型。
如本文所用,「2'-OMe核苷」意指包含2'-OMe糖部分之核苷。
如本文所用,「2'-經取代核苷」意指包含2'-經取代糖部分之核苷。如本文所用,關於糖部分之「2'-經取代」意指除H或OH以外包含至少一個2'-取代基之糖部分。
如本文所用,「5-甲基胞嘧啶」意指經附接至5位之甲基修飾之胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶為經修飾核鹼基。
如本文所用,「投與」意指向個體提供醫藥劑。
如本文所用,關於治療之「改善」意指至少一種症狀相對於不存在治療之情況下之相同症狀的改善。在某些實施例中,改善為症狀之嚴重性或頻率降低或者症狀之嚴重性或頻率之發作延遲或進展減緩。
如本文所用,「反義活性」意指可歸因於反義化合物與其靶核酸雜交之任何可偵測及/或可量測之變化。在某些實施例中,反義活性為靶核酸或由此種靶核酸編碼之蛋白質之量或表現與不存在反義化合物之情況下之靶核酸水準或靶蛋白質水準相比減少。
如本文所用,「反義化合物」意指能夠達成至少一種反義活性之寡聚化合物。
如本文所用,「雙環核苷」或「BNA」意指包含雙環糖部分之核苷。
如本文所用,「雙環糖」或「雙環糖部分」意指包含兩個環之經修飾糖部分,其中第二個環經由連接第一個環之兩個原子之橋形成,從而形成雙環結構。在某些實施例中,雙環糖部分之第一個環為呋喃糖基部分。在某些實施例中,雙環糖部分不包含呋喃糖基部分。
如本文所用,「細胞靶向部分」意指與細胞或其一部分相互作用之接合部分。在某些實施例中,細胞靶向部分結合細胞表面上之受體。
如本文所用,「cEt核苷」意指包含cEt經修飾糖部分之核苷。
如本文所用,「掌性富集群體」意指複數個具有相同分子式之分子,其中若特定掌性中心為無規立構的,則群體內在特定掌性中心含有特定立體化學構型之分子的數目或百分比大於預期群體內在相同特定掌性中心含有相同特定立體化學構型之分子的數目或百分比。在各分子內具有多個掌性中心之分子之掌性富集群體可含有一或多個無規立構掌性中心。在某些實施例中,分子為經修飾寡核苷酸。在某些實施例中,分子為包含經修飾寡核苷酸之化合物。
如本文所用,「可裂解部分」意指在生理條件下,例如在細胞、個體或人體內裂解之鍵或原子團。
如本文所用,關於寡核苷酸之「互補」意指當寡核苷酸與其他核酸之核鹼基序列在相反方向上比對時,寡核苷酸或其一或多個部分之核鹼基與靶核酸或其一或多個部分之核鹼基的至少70%能夠彼此氫鍵結。如本文所用,互補核鹼基意指能夠彼此形成氫鍵之核鹼基。互補核鹼基對包括腺嘌呤(A)與胸腺嘧啶(T)、腺嘌呤(A)與尿嘧啶(U)、胞嘧啶(C)與鳥嘌呤(G)、5-甲基胞嘧啶(mC)與鳥嘌呤(G)。互補寡核苷酸及/或靶核酸無需在各核苷處具有核鹼基互補性。實際上,容許一些錯配。如本文所用,關於寡核苷酸或其部分之「完全互補」或「100%互補」意指寡核苷酸或其部分與另一個寡核苷酸或靶核酸在兩個寡核苷酸之較短者之各核鹼基處互補,或者若寡核苷酸具有相同長度,則在各核苷處互補。
如本文所用,「接合基團」意指直接或間接附接至寡核苷酸之原子團。接合基團包括接合部分及將接合部分附接至寡核苷酸之接合連接子。在某些實施例中,接合部分包含細胞靶向部分。
如本文所用,「接合連接子」意指將接合部分連接至寡核苷酸之單鍵或包含至少一個鍵之原子團。
如本文所用,「接合部分」意指經由接合連接子附接至寡核苷酸之原子團。
如本文所用,「受限乙基」或「cEt」或「cEt經修飾糖部分」意指β-D核糖基雙環糖部分,其中雙環糖之第二個環經由連接β-D核糖基糖部分之4'-碳與2'-碳之橋形成,其中該橋具有式4'-CH(CH 3)-O-2',且其中該橋之甲基呈 S構型。
如本文所用,在寡核苷酸之情形中「相連」係指彼此緊鄰之核苷、核鹼基、糖部分或核苷間鍵聯。舉例而言,「相連核鹼基」意指在序列中彼此緊鄰之核鹼基。
如本文所用,「FXII RNA」為人類 F12基因之RNA表現產物。
如本文所用,「FXII蛋白質」為FXII RNA之蛋白質表現產物,包括FXII蛋白質之酶原及活化形式。
如本文所用,「間隙聚體」意指具有位於5'-區與3'-區之間之中心區的寡核苷酸。5'-區及3'-區之各核苷包含經修飾糖部分。中心區之3'-最末及5'-最末核苷為2'-去氧核苷。「中心區」可稱作「間隙」,且「5'-區」及「3'-區」亦可稱作「翼」。間隙聚體與靶核酸之雜交引起RNase H介導之靶核酸裂解。
如本文所用,「熱點區」為靶核酸上可經受寡聚化合物介導之靶核酸量或活性減少之一系列核鹼基。
如本文所用,「雜交」意指互補寡核苷酸及/或核酸之配對或黏接。儘管不限於特定機制,但最常見之雜交機制涉及互補核鹼基之間的氫鍵結,其可為沃森-克里克(Watson-Crick)、胡斯坦(Hoogsteen)或反向胡斯坦氫鍵結。
如本文所用,「鑑定處於發展血栓栓塞性疾患風險下之個體」意指鑑定已診斷患有血栓栓塞性疾患之個體或鑑定具有發展血栓栓塞性疾患之風險因素之個體。
如本文所用,「核苷間鍵聯」意指寡核苷酸中之相連核苷之間的共價鍵聯。如本文所用,「經修飾核苷間鍵聯」意指除磷酸二酯核苷間鍵聯以外之任何核苷間鍵聯。「硫代磷酸酯核苷間鍵聯」為其中磷酸二酯核苷間鍵聯之非橋聯氧原子之一經硫原子置換之經修飾核苷間鍵聯。
如本文所用,「連接子-核苷」意指將寡核苷酸直接或間接連接至接合部分之核苷。連接子-核苷位於寡聚化合物之接合連接子內。連接子-核苷不應視為寡聚化合物之寡核苷酸部分之一部分,即使其與寡核苷酸相連。
如本文所用,「錯配」或「非互補」意指當第一寡核苷酸與第二寡核苷酸比對時,第一寡核苷酸之核鹼基不與第二寡核苷酸或靶核酸之相應核鹼基互補。
如本文所用,「模體」意指寡核苷酸中未經修飾及/或經修飾糖部分、核鹼基及/或核苷間鍵聯之模式。
如本文所用,「非雙環之經修飾糖部分」意指包含修飾,諸如取代基之經修飾糖部分,該糖部分不在糖之兩個原子之間形成橋以形成第二個環。
如本文所用,「核鹼基」意指未經修飾核鹼基或經修飾核鹼基。如本文所用,「未經修飾核鹼基」為腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)、尿嘧啶(U)或鳥嘌呤(G)。如本文所用,「經修飾核鹼基」為能夠與至少一個未經修飾核鹼基配對之除未經修飾A、T、C、U或G以外之原子團。「5-甲基胞嘧啶」為經修飾核鹼基。通用鹼基為可與五個未經修飾核鹼基中之任一者配對之經修飾核鹼基。如本文所用,「核鹼基序列」意指靶核酸或寡核苷酸中相連核鹼基之順序,與任何糖或核苷間鍵聯修飾無關。
如本文所用,「核苷」意指包含核鹼基及糖部分之化合物。核鹼基及糖部分各自獨立地未經修飾或經修飾。如本文所用,「經修飾核苷」意指包含經修飾核鹼基及/或經修飾糖部分之核苷。經修飾核苷包括無鹼基核苷,其缺乏核鹼基。「經連接核苷」為以相連序列連接之核苷(亦即,在經連接之彼等核苷之間不存在額外核苷)。
如本文所用,「寡聚化合物」意指寡核苷酸及視情況存在之一或多種額外特徵,諸如接合基團或末端基團。寡聚化合物可與與第一寡聚化合物互補之第二寡聚化合配對,或可未配對。「單股寡聚化合物」為未配對寡聚化合物。術語「寡聚雙鏈體」意指由兩種具有互補核鹼基序列之寡聚化合物形成之雙鏈體。寡聚雙鏈體之各寡聚化合物可稱作「雙鏈化寡聚化合物」。
如本文所用,「寡核苷酸」意指經由核苷間鍵聯連接之一股經連接核苷,其中各核苷及核苷間鍵聯可經修飾或未經修飾。除非另有指示,否則寡核苷酸由8-50個經連接核苷組成。如本文所用,「經修飾寡核苷酸」意指寡核苷酸,其中至少一個核苷或核苷間鍵聯經修飾。如本文所用,「未經修飾寡核苷酸」意指不包含任何核苷修飾或核苷間修飾之寡核苷酸。
如本文所用,「醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑」意指適合用於向個體投與之任何物質。某些此類載劑使醫藥組合物能夠調配成例如錠劑、丸劑、糖衣錠、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿液、懸浮液及口含錠以供個體經口攝取。在某些實施例中,醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑為無菌水、無菌鹽水或無菌緩衝溶液。在某些實施例中,醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑為磷酸鹽緩衝鹽水。
如本文所用,「醫藥學上可接受之鹽」意指化合物之生理學上及醫藥學上可接受之鹽。醫藥學上可接受之鹽保持母體化合物之所需生物活性且不賦予其非所需之毒理作用。
如本文所用,「醫藥組合物」意指適合向個體投與之物質之混合物。舉例而言,醫藥組合物可包含寡聚化合物及無菌水溶液。在某些實施例中,醫藥組合物在某些細胞株中之自由攝入檢定中顯示出活性。
如本文所用,「預防(prevent)」或「預防(preventing)」係指持續一段時間或無限期地延遲或阻止血栓栓塞性疾患之發作或發展。
如本文所用,「前藥」意指在體外呈一定形式之治療劑,該形式在個體或其細胞內轉化為不同形式。典型地,由細胞或組織中存在之酶(例如內源或病毒酶)或化學物之作用及/或由生理條件來促進前藥在個體內之轉化。
如本文所用,與基因轉錄物(RNA)相關聯之「減少量或活性」或「抑制量或活性」係指轉錄表現或活性相對於未經處理或對照樣品中之轉錄表現或活性減少或阻斷且不一定指示轉錄表現或活性之全部消除。
如本文所用,與蛋白質相關聯之「減少量或活性」或「抑制量或活性」係指蛋白質之表現或活性相對於未經處理或對照樣品中之蛋白質表現或活性減少或阻斷且不一定指示蛋白質表現或活性之全部消除。
除非另有指定,否則如本文所用,「RNA」意指RNA轉錄物且包括前mRNA及成熟mRNA。
如本文所用,「RNAi化合物」意指至少部分地經RISC或Ago2起作用以調節靶核酸及/或由靶核酸編碼之蛋白質的反義化合物。RNAi化合物包括但不限於雙股siRNA、單股RNA (ssRNA)及微小RNA,包括微小RNA模擬物。在某些實施例中,RNAi化合物調節靶核酸之量、活性及/或剪接。術語RNAi化合物不包括經RNase H起作用之反義化合物。
如本文所用,關於寡核苷酸之「自互補」意指至少部分地自身雜交之寡核苷酸。
如本文所用,「標準細胞檢定」意指實例1中所述之檢定及其合理變化。
如本文所用,在具有相同分子式之分子之群體的情形中「無規立構掌性中心」意指具有無規立體化學構型之掌性中心。舉例而言,在包含無規立構掌性中心之分子之群體中,具有無規立構掌性中心之( S)構型之分子數目不一定與具有無規立構掌性中心之( R)構型之分子數目相同。當掌性中心之立體化學構型為未設計成控制立體化學構型之合成方法的結果時,掌性中心之立體化學構型視為無規的。在某些實施例中,無規立構掌性中心為無規立構硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
如本文所用,「個體」意指人類或非人類個體。
如本文所用,「糖部分」意指未經修飾糖部分或經修飾糖部分。如本文所用,「未經修飾糖部分」意指如RNA中所發現之2'-OH(H) β-D-核糖基部分(「未經修飾RNA糖部分」)或如DNA中所發現之2'-H(H) β-D-去氧核糖基糖部分(「未經修飾DNA糖部分」)。未經修飾糖部分在1'位、3'位及4'位中之每一者處具有一個氫,在3'位具有氧,且在5'位具有兩個氫。如本文所用,「經修飾糖部分」或「經修飾糖」意指經修飾呋喃糖基糖部分或糖替代物。
如本文所用,「糖替代物」意指具有除呋喃糖基部分以外之經修飾糖部分,其可將核鹼基連接至另一個基團,諸如寡核苷酸中之核苷間鍵聯、接合基團或末端基團。包含糖替代物之經修飾核苷可併入寡核苷酸內之一或多個位置中,且此類寡核苷酸能夠雜交至互補寡聚化合物或靶核酸。
如本文所用,「症狀」意指指示疾病或病症之存在或程度的任何身體特徵或測試結果。在某些實施例中,症狀對於個體或對於檢查或測試該個體之醫療專業人員而言為顯而易見的。
如本文所用,「靶核酸」及「靶RNA」意指反義化合物經設計所影響之核酸。
如本文所用,「靶區」意指寡聚化合物經設計所雜交之靶核酸部分。
如本文所用,「末端基團」意指共價連接至寡核苷酸末端之化學基團或原子團。
如本文所用,「治療有效量」意指向個體提供治療效益之醫藥劑之量。舉例而言,治療有效量改善疾病之症狀。
如本文所用,「血栓栓塞性疾患」意指涉及血栓或栓塞之任何疾病或疾患。栓塞為血凝塊之病理發展,且當血凝塊遷移至身體另一部分且干擾器官功能時發生栓塞。發生血栓及/或栓塞之疾患統稱作血栓栓塞性疾患。視血凝塊發生或沈降之處而定,可能導致多種血栓栓塞性疾患,例如深靜脈血栓(DVT)、心肌梗塞(MI)、肺栓塞(PE)及中風。在某些實施例中,血栓栓塞性疾患包括深靜脈血栓、靜脈血栓、動脈血栓、肺栓塞、心肌梗塞或中風。血栓栓塞性疾患亦可稱作血栓栓塞事件或血栓事件。 某些實施例
本揭示案提供以下非限制性編號實施例:
實施例1. 一種包含由12至50個經連接核苷組成之經修飾寡核苷酸之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸之核鹼基序列與FXII RNA之等長度部分至少90%互補,且其中該經修飾寡核苷酸包含至少一個選自經修飾糖部分及經修飾核苷間鍵聯之修飾。
實施例2. 一種包含經修飾寡核苷酸之寡聚化合物,該經修飾寡核苷酸由12至50個經連接核苷組成且具有包含SEQ ID NO: 20-5042中之任一者之至少12、13、14、15、16、17、18、19或20個相連核鹼基之核鹼基序列。
實施例3. 一種包含經修飾寡核苷酸之寡聚化合物,該經修飾寡核苷酸由12至50個經連接核苷組成且具有包含SEQ ID NO: 3379及5006中之任一者之至少12、13、14、15、16、17或18個相連核鹼基之核鹼基序列。
實施例4. 一種包含經修飾寡核苷酸之寡聚化合物,該經修飾寡核苷酸由12至50個經連接核苷組成且具有包含與以下互補之至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個或至少20個相連核鹼基之核鹼基序列:SEQ ID NO: 1之核鹼基1,899-1,979之等長度部分;或SEQ ID NO: 1之核鹼基2,004-2,045之等長度部分。
實施例5. 一種包含經修飾寡核苷酸之寡聚化合物,該經修飾寡核苷酸由12至50個經連接核苷組成且具有包含選自以下之序列之至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個或至少18個相連核鹼基之核鹼基序列:SEQ ID NO: 92、156、270、271、345、346、420、421、496、497、571、572、653、654、728、729、802、803、877、951、1028、1103、1179、1253、1330、1407、1484、1560、1636、1710、1711、1784、1859、1860、1934、1935、2008、2009、2084、2085、2158、2232、2233、2307、2308、2393、2394、2395、2396、2397、2398、2461、2537、2538、2614、2615、2691、2692、2768、2769、2845、2846、2921、2922、2997、2998、3073、3074、3144、3145、3226、3227、3303、3304、3379、3380、3455、3456、3531、3607、3683、3759、3835、3911、4948、4949、4954、4955、4956、4957、4961、4965、4966、4967、4971、4972、4976、4994、4995、4996、4997、4998、4999、5024、5025、5026、5027、5028及5029;或SEQ ID NO: 95、159、162、163、164、165、347、422、498、573、953、1030、1105、1255、1332、1409、1486、1562、2309、2463、2540、2617、2694、2771、2848、2924、3000、3076、3147、3229、3306、3382、3457、3533、3609、3685、3761、3837、3913、5000、5001、5002、5003、5004、5005、5006、5031、5032、5033、5034、5035、5036及5037。
實施例6. 實施例1-5中任一項之寡聚化合物,其中當跨越該經修飾寡核苷酸之整個核鹼基序列量測時,該經修飾寡核苷酸具有與SEQ ID NO: 1-4中之任一者之核鹼基序列至少80%、85%、90%、95%或100%互補之核鹼基序列。
實施例7. 實施例1-6中任一項之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸包含至少一個經修飾核苷。
實施例8. 實施例7之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸包含至少一個包含經修飾糖部分之經修飾核苷。
實施例9. 實施例8之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸包含至少一個包含雙環糖部分之經修飾核苷。
實施例10. 實施例9之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸包含至少一個包含具有2'-4'橋之雙環糖部分之經修飾核苷,其中該2'-4'橋係選自-O-CH 2-;及-O-CH(CH 3)-。
實施例11. 實施例8-10中任一項之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸包含至少一個包含非雙環之經修飾糖部分之經修飾核苷。
實施例12. 實施例11之寡聚化合物,其中該非雙環之經修飾糖部分為2'-MOE糖部分或2'-OMe糖部分。
實施例13. 實施例7-8中任一項之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸包含至少一個包含糖替代物之經修飾核苷。
實施例14. 實施例1-13中任一項之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸為間隙聚體。
實施例15. 實施例1-14中任一項之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸具有包含以下之糖模體:由1-6個經連接5'-區核苷組成之5'-區;由6-10個經連接中心區核苷組成之中心區;及由1-6個經連接3'-區核苷組成之3'-區,其中該等5'-區核苷中之每一者及該等3'-區核苷中之每一者包含經修飾糖部分且該等中心區核苷中之每一者包含2'-β-D-去氧核糖基糖部分。
實施例16. 實施例15之寡聚化合物,其中該5'-區由3個經連接5'-區核苷組成;該中心區由10個經連接中心區核苷組成;且該3'-區由3個經連接3'-區核苷組成,且其中該等5'-區核苷中之每一者及該等3'-區核苷中之每一者包含cEt經修飾糖部分。
實施例17. 實施例1-16中任一項之寡聚化合物,其中该經修飾寡核苷酸包含至少一個經修飾核苷間鍵聯。
實施例18. 實施例17之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸之各核苷間鍵聯為經修飾核苷間鍵聯。
實施例19. 實施例17或18之寡聚化合物,其中各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
實施例20. 實施例17或18之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷間鍵聯。
實施例21. 實施例17之寡聚化合物,其中各核苷間鍵聯係獨立地選自磷酸二酯核苷間鍵聯及硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
實施例22. 實施例1-21中任一項之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸包含經修飾核鹼基。
實施例23. 實施例22之寡聚化合物,其中該經修飾核鹼基為5-甲基胞嘧啶。
實施例24. 實施例1-23中任一項之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸由12-30個、12-22個、12-20個、14-18個、14-20個、15-17個、15-25個、16-20個、18-22個或18-20個經連接核苷組成。
實施例25. 實施例1-23中任一項之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸由16個經連接核苷組成。
實施例26. 實施例1-25中任一項之寡聚化合物,該寡聚化合物由該經修飾寡核苷酸組成。
實施例27. 實施例1-25中任一項之寡聚化合物,該寡聚化合物包含有包含接合部分及接合連接子之接合基團。
實施例28. 實施例27之寡聚化合物,其中該接合連接子由單鍵組成。
實施例29. 實施例27之寡聚化合物,其中該接合連接子為可裂解的。
實施例30. 實施例27之寡聚化合物,其中該接合連接子包含1-3個連接子-核苷。
實施例31. 27之寡聚化合物,其中該寡聚化合物不包含連接子-核苷。
實施例32. 實施例28-31中任一項之寡聚化合物,其中該接合基團在該經修飾寡核苷酸之5'端附接至該經修飾寡核苷酸。
實施例33. 實施例28-31中任一項之寡聚化合物,其中該接合基團在該經修飾寡核苷酸之3'端附接至該經修飾寡核苷酸。
實施例34. 實施例1-33中任一項之寡聚化合物,該寡聚化合物包含末端基團。
實施例35. 實施例1-34中任一項之寡聚化合物,其中該接合基團包含GalNAc部分。
實施例36. 實施例1-35中任一項之寡聚化合物,其中該接合基團包含細胞靶向部分、接合連接子及可裂解部分,且其中該細胞靶向部分及該接合連接子一起具有以下化學結構:
Figure 02_image003
實施例37. 實施例1-36中任一項之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸為單股經修飾寡核苷酸。
實施例38. 一種根據以下化學結構之寡聚化合物:
Figure 02_image001
(SEQ ID NO: 3379),或其鹽。
實施例39. 實施例38之寡聚化合物,該寡聚化合物為鈉鹽或鉀鹽。
實施例40. 一種根據以下化學結構之寡聚化合物:
Figure 02_image006
(SEQ ID NO: 3379)。
實施例41. 一種根據以下化學結構之寡聚化合物:
Figure 02_image008
(SEQ ID NO: 5006),或其鹽。
實施例42. 實施例41之寡聚化合物,該寡聚化合物為鈉鹽或鉀鹽。
實施例43. 一種根據以下化學結構之寡聚化合物:
Figure 02_image006
(SEQ ID NO: 5006)。
實施例44. 一種根據以下化學記法之包含經修飾寡核苷酸之寡聚化合物:(THA-GalNAc 3)o Gks mCks Gks Gds Ads Ads Tds mCds Ads mCds mCds Ads Ads Gks Gks Ak (SEQ ID NO: 3379),其中: A = 腺嘌呤核鹼基, mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基, G = 鳥嘌呤核鹼基, T = 胸腺嘧啶核鹼基, k = cEt經修飾糖部分, d = 2'-β-D-去氧核糖基糖部分, = 磷酸二酯鍵聯,且 s = 硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
實施例45. 一種根據以下化學記法之包含經修飾寡核苷酸之寡聚化合物:(THA-GalNAc 3)o Gks mCks Aks mCds Ums Tds Tds Ads Tds Tds Gds Ads Gds Tks Tks mCk (SEQ ID NO: 5006),其中:A = 腺嘌呤核鹼基,mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基,G = 鳥嘌呤核鹼基,T = 胸腺嘧啶核鹼基,U = 尿嘧啶核鹼基,k = cEt經修飾糖部分,d = 2'-β-D-去氧核糖基糖部分,o = 磷酸二酯鍵聯,且s = 硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
實施例46. 一種寡聚雙鏈體,該寡聚雙鏈體包含實施例1-36中任一項之寡聚化合物。
實施例47. 一種反義化合物,該反義化合物包含實施例1-45中任一項之寡聚化合物或實施例46之寡聚雙鏈體或者由其組成。
實施例48. 一種醫藥組合物,該醫藥組合物包含實施例1-45中任一項之寡聚化合物、實施例46之寡聚雙鏈體或實施例47之反義化合物;及醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。
實施例49. 實施例48之醫藥組合物,其中該醫藥學上可接受之稀釋劑為磷酸鹽緩衝鹽水。
實施例50. 實施例49之醫藥組合物,其中該醫藥組合物基本上由該經修飾寡核苷酸及磷酸鹽緩衝鹽水組成。
實施例50. 一種方法,該方法包括向個體投與實施例48-50中任一項之醫藥組合物。
實施例51. 一種改善或預防血栓栓塞性疾患之方法,該方法包括向有需要之個體投與治療有效量之根據實施例48-50中任一項之醫藥組合物。
實施例51. 實施例52之方法,其中該血栓栓塞性疾患係選自心肌梗塞(MI)、中風、肢體缺血與壞死、靜脈血栓性栓塞(VTE)、深靜脈血栓(DVT)及肺栓塞(PE)。
實施例53. 實施例51-53中任一項之方法,其中該血栓栓塞性疾患之至少一種症狀得到改善。
實施例54. 實施例54之方法,其中該症狀為疼痛、呼吸短促、心臟灼熱、冷汗、疲勞、頭暈、暈眩、腫脹、痛痙及死亡。
實施例55. 實施例51-55中任一項之方法,該方法包括將該個體鑑定為患有該血栓栓塞性疾患或有罹患該血栓栓塞性疾患之風險因素。
實施例56. 實施例56之方法,其中該風險因素為手術、惡性病、懷孕、衰老、使用口服避孕藥、不動、敗血症、機械心臟瓣膜、心臟瓣膜疾病、心房震顫、動脈粥樣硬化、抗磷脂症候群、遺傳性凝血障礙或獲得性血栓前凝血障礙。
實施例57. 一種改善或預防遺傳性血管水腫之方法,該方法包括向有需要之個體投與治療有效量之根據實施例48-50中任一項之醫藥組合物。
實施例58. 一種實施例1-45中任一項之寡聚化合物之掌性富集群體,其中該群體富集有包含至少一個具有特定立體化學構型之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯之寡聚化合物。
實施例59. 實施例59之掌性富集群體,其中該群體富集有包含至少一個具有( Sp)構型之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯之寡聚化合物。
實施例60. 實施例59之掌性富集群體,其中該群體富集有包含至少一個具有( Rp)構型之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯之寡聚化合物。
實施例61. 實施例59之掌性富集群體,其中該群體富集有在各硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有特定獨立選擇之立體化學構型之寡聚化合物。
實施例62. 實施例62之掌性富集群體,其中該群體富集有在各硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有( Sp)構型之寡聚化合物。
實施例63. 實施例62之掌性富集群體,其中該群體富集有在各硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有( Rp)構型之寡聚化合物。
實施例64. 實施例62之掌性富集群體,其中該群體富集有在一個特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有( Rp)構型且在其餘硫代磷酸酯核苷間鍵聯中之每一者處具有( Sp)構型之寡聚化合物。
實施例65. 實施例59或實施例62之掌性富集群體,其中該群體富集有在5'至3'方向上具有至少3個呈 SpSpRp構型之相連硫代磷酸酯核苷間鍵聯之寡聚化合物。
實施例66. 一種實施例1-45中任一項之寡聚化合物之掌性富集群體,其中該等寡聚化合物之該等硫代磷酸酯核苷間鍵聯全部為無規立構的。 I. 某些寡核苷酸
在某些實施例中,本文提供包含由經連接核苷組成之寡核苷酸之寡聚化合物。寡核苷酸可為未經修飾寡核苷酸(RNA或DNA)或可為經修飾寡核苷酸。經修飾寡核苷酸相對於未經修飾RNA或DNA包含至少一個修飾。亦即,經修飾寡核苷酸包含至少一個經修飾核苷(包含經修飾糖部分及/或經修飾核鹼基)及/或至少一個經修飾核苷間鍵聯。 A. 某些經修飾核苷
經修飾核苷包含經修飾糖部分或經修飾核鹼基或者經修飾糖部分及經修飾核鹼基兩者。 1. 某些糖部分
在某些實施例中,經修飾糖部分為非雙環之經修飾糖部分。在某些實施例中,經修飾糖部分為雙環或三環糖部分。在某些實施例中,經修飾糖部分為糖替代物。此類糖替代物可包含對應於其他類型之經修飾糖部分之彼等的一或多個取代。
在某些實施例中,經修飾糖部分為非雙環之經修飾糖部分,其包含具有一或多個取代基之呋喃糖基環,該一或多個取代基中無一者橋聯呋喃糖基環之兩個原子以形成雙環結構。此類非橋聯取代基可在呋喃糖基之任何位置,包括但不限於在2'位、4'位及/或5'位之取代基。在某些實施例中,非雙環之經修飾糖部分之一或多個非橋聯取代基為分支的。適合於非雙環之經修飾糖部分之2'-取代基之實例包括但不限於:2'-F、2'-OCH 3(「OMe」或「O-甲基」)及2'-O(CH 2) 2OCH 3(「MOE」)。在某些實施例中,2'-取代基係選自:鹵基、烯丙基、胺基、疊氮基、SH、CN、OCN、CF 3、OCF 3、O-C 1-C 10烷氧基、O-C 1-C 10經取代烷氧基、O-C 1-C 10烷基、O-C 1-C 10經取代烷基、S-烷基、N(R m)-烷基、O-烯基、S-烯基、N(R m)-烯基、O-炔基、S-炔基、N(R m)-炔基、O-烯基-O-烷基、炔基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基、O-芳烷基、O(CH 2) 2SCH 3、O(CH 2) 2ON(R m)(R n)或OCH 2C(=O)-N(R m)(R n),其中各R m及R n獨立地為H、胺基保護基或經取代或未經取代C 1-C 10烷基,以及Cook等人, U.S. 6,531,584;Cook等人, U.S. 5,859,221;及Cook等人, U.S. 6,005,087中所述之2'-取代基。此等2'-取代基之某些實施例可經一或多個獨立地選自以下之取代基進一步取代:羥基、胺基、烷氧基、羧基、苯甲基、苯基、硝基(NO 2)、硫醇、硫烷氧基、硫烷基、鹵素、烷基、芳基、烯基及炔基。適合於非雙環之經修飾糖部分之4'-取代基之實例包括但不限於烷氧基(例如甲氧基)、烷基及Manoharan等人, WO 2015/106128中所述之彼等。適合於非雙環之經修飾糖部分之5'-取代基之實例包括但不限於:5-甲基(R或S)、5'-乙烯基及5'-甲氧基。在某些實施例中,非雙環之經修飾糖部分包含多於一個非橋聯糖取代基,例如2'-F-5'-甲基糖部分以及Migawa等人, WO 2008/101157及Rajeev等人, US2013/0203836中所述之經修飾糖部分及經修飾核苷。
在某些實施例中,2'-經取代非雙環之經修飾核苷包含有包含選自以下之非橋聯2'-取代基之糖部分:F、NH 2、N 3、OCF 3、OCH 3、O(CH 2) 3NH 2、CH 2CH=CH 2、OCH 2CH=CH 2、OCH 2CH 2OCH 3、O(CH 2) 2SCH 3、O(CH 2) 2ON(R m)(R n)、O(CH 2) 2O(CH 2) 2N(CH 3) 2及N-經取代乙醯胺(OCH 2C(=O)-N(R m)(R n)),其中各R m及R n獨立地為H、胺基保護基或經取代或未經取代C 1-C 10烷基。
在某些實施例中,2'-經取代核苷非雙環之經修飾核苷包含有包含選自以下之非橋聯2'-取代基之糖部分:F、OCF 3、OCH 3、OCH 2CH 2OCH 3、O(CH 2) 2SCH 3、O(CH 2) 2ON(CH 3) 2、O(CH 2) 2O(CH 2) 2N(CH 3) 2及OCH 2C(=O)-N(H)CH 3(「NMA」)。
在某些實施例中,2'-經取代非雙環之經修飾核苷包含有包含選自以下之非橋聯2'-取代基之糖部分:F、OCH 3及OCH 2CH 2OCH 3
某些經修飾糖部分包含橋聯環呋喃糖基環之兩個原子以形成第二個環,得到雙環糖部分之取代基。在某些此類實施例中,雙環糖部分包含介於4'與2'呋喃糖環原子之間的橋。此類4'至2'橋聯糖取代基之實例包括但不限於:4'-CH 2-2'、4'-(CH 2) 2-2'、4'-(CH 2) 3-2'、4'-CH 2-O-2' (「LNA」)、4'-CH 2-S-2'、4'-(CH 2) 2-O-2' (「ENA」)、4'-CH(CH 3)-O-2' (稱作「受限乙基」或「cEt」)、4'-CH 2-O-CH 2-2'、4'-CH 2-N(R)-2'、4'-CH(CH 2OCH 3)-O-2' (「受限MOE」或「cMOE」)及其類似物(參見例如Seth等人, U.S. 7,399,845;Bhat等人, U.S. 7,569,686;Swayze等人, U.S. 7,741,457;及Swayze等人, U.S. 8,022,193)、4'-C(CH 3)(CH 3)-O-2'及其類似物(參見例如Seth等人, U.S. 8,278,283)、4'-CH 2-N(OCH 3)-2'及其類似物(參見例如Prakash等人, U.S. 8,278,425)、4'-CH 2-O-N(CH 3)-2' (參見例如Allerson等人, U.S. 7,696,345;及Allerson等人, U.S. 8,124,745)、4'-CH 2-C(H)(CH 3)-2' (參見例如Zhou等人, J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134)、4'-CH 2-C(=CH 2)-2'及其類似物(參見例如Seth等人, U.S. 8,278,426)、4'-C(R aR b)-N(R)-O-2'、4'-C(R aR b)-O-N(R)-2'、4'-CH 2-O-N(R)-2'及4'-CH 2-N(R)-O-2',其中各R、R a及R b獨立地為H、保護基或C 1-C 12烷基(參見例如Imanishi等人, U.S. 7,427,672)。
在某些實施例中,此類4'至2'橋獨立地包含1至4個獨立地選自以下之經連接基團:-[C(R a)(R b)] n-、-[C(R a)(R b)] n-O-、-C(R a)=C(R b)-、-C(R a)=N-、-C(=NR a)-、-C(=O)-、-C(=S)-、-O-、-Si(R a) 2-、-S(=O) x-及-N(R a)-;
其中:x為0、1或2;n為1、2、3或4;各R a及R b獨立地為H、保護基、羥基、C 1-C 12烷基、經取代C 1-C 12烷基、C 2-C 12烯基、經取代C 2-C 12烯基、C 2-C 12炔基、經取代C 2-C 12炔基、C 5-C 20芳基、經取代C 5-C 20芳基、雜環基、經取代雜環基、雜芳基、經取代雜芳基、C 5-C 7脂環基、經取代C 5-C 7脂環基、鹵素、OJ 1、NJ 1J 2、SJ 1、N 3、COOJ 1、醯基(C(=O)-H)、經取代醯基、CN、磺醯基(S(=O) 2-J 1)或亞砜基(S(=O)-J 1);且
各J 1及J 2獨立地為H、C 1-C 12烷基、經取代C 1-C 12烷基、C 2-C 12烯基、經取代C 2-C 12烯基、C 2-C 12炔基、經取代C 2-C 12炔基、C 5-C 20芳基、經取代C 5-C 20芳基、醯基(C(=O)-H)、經取代醯基、雜環基、經取代雜環基、C 1-C 12胺基烷基、經取代C 1-C 12胺基烷基、或保護基。
額外雙環糖部分在此項技術中為已知的,參見例如:Freier等人, Nucleic Acids Research, 1997, 25( 22), 4429-4443;Albaek等人, J. Org. Chem., 2006, 71, 7731-7740;Singh等人, Chem. Commun., 1998, 4, 455-456;Koshkin等人, Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630;Kumar等人, Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222;Singh等人, J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039;Srivastava等人, J. Am. Chem. Soc., 2007, 129, 8362-8379;Wengel等人, U.S. 7,053,207;Imanishi等人, U.S. 6,268,490;Imanishi等人, U.S. 6,770,748;Imanishi等人, U.S. RE44,779;Wengel等人, U.S. 6,794,499;Wengel等人, U.S. 6,670,461;Wengel等人, U.S. 7,034,133;Wengel等人, U.S. 8,080,644;Wengel等人, U.S. 8,034,909;Wengel等人, U.S. 8,153,365;Wengel等人, U.S. 7,572,582;Ramasamy等人, U.S. 6,525,191;Torsten等人, WO 2004/106356;Wengel等人, WO 1999/014226;Seth等人, WO 2007/134181;Seth等人, U.S. 7,547,684;Seth等人, U.S. 7,666,854;Seth等人, U.S. 8,088,746;Seth等人, U.S. 7,750,131;Seth等人, U.S. 8,030,467;Seth等人, U.S. 8,268,980;Seth等人, U.S. 8,546,556;Seth等人, U.S. 8,530,640;Migawa等人, U.S. 9,012,421;Seth等人, U.S. 8,501,805;以及美國專利公開案號Allerson等人, US2008/0039618及Migawa等人, US2015/0191727。
在某些實施例中,雙環糖部分及併有此類雙環糖部分之核苷由異構構型進一步定義。舉例而言,LNA核苷(本文所述)可呈α-L構型或呈β-D構型。
Figure 02_image010
α-L-亞甲氧基(4'-CH 2-O-2')或α-L-LNA雙環核苷已併入顯示出反義活性之寡核苷酸中(Frieden等人, Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372)。本文中,雙環核苷之一般描述包括兩種異構構型。除非另有指定,否則當在本文所例示之實施例中鑑定特定雙環核苷(例如LNA或cEt)之位置時,其呈β-D構型。
在某些實施例中,經修飾糖部分包含一或多個非橋聯糖取代基及一或多個橋聯糖取代基(例如5'-經取代及4'-2'橋聯糖)。
在某些實施例中,經修飾糖部分為糖替代物。在某些此類實施例中,糖部分之氧原子經例如硫、碳或氮原子置換。在某些此類實施例中,此類經修飾糖部分亦包含如本文所述之橋聯及/或非橋聯取代基。舉例而言,某些糖替代物包含4'-硫原子以及在2'位(參見例如Bhat等人, U.S. 7,875,733;及Bhat等人, U.S. 7,939,677)及/或5'位之取代。
在某些實施例中,糖替代物包含具有除5個原子以外之環。舉例而言,在某些實施例中,糖替代物包含六員四氫哌喃(「THP」)。此類四氫哌喃可進一步經修飾或經取代。包含此類經修飾四氫哌喃之核苷包括但不限於己糖醇核酸(「HNA」)、安尼妥(anitol)核酸(「ANA」)、甘露糖醇核酸(「MNA」) (參見例如Leumann, CJ. Bioorg. & Med. Chem.2002, 10, 841-854)、氟代HNA:
Figure 02_image012
(「F-HNA」,參見例如Swayze等人, U.S. 8,088,904;Swayze等人, U.S. 8,440,803;Swayze等人, U.S. 8,796,437;及Swayze等人, U.S. 9,005,906;F-HNA亦可稱作F-THP或3'-氟代四氫哌喃),及包含具有下式之額外經修飾THP化合物之核苷:
Figure 02_image014
其中,獨立地,對於該經修飾THP核苷中之每一者: Bx為核鹼基部分; T 3及T 4各自獨立地為將經修飾THP核苷連接至寡核苷酸之其餘部分之核苷間鍵聯基團,或T 3及T 4中之一者為將經修飾THP核苷連接至寡核苷酸之其餘部分之核苷間鍵聯基團且T 3及T 4中之另一者為H、羥基保護基、經連接接合基團或5'或3'-末端基團; q 1、q 2、q 3、q 4、q 5、q 6及q 7各自獨立地為H、C 1-C 6烷基、經取代C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、經取代C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基或經取代C 2-C 6炔基;且 R 1及R 2中之每一者係獨立地選自:氫、鹵素、經取代或未經取代烷氧基、NJ 1J 2、SJ 1、N 3、OC(=X)J 1、OC(=X)NJ 1J 2、NJ 3C(=X)NJ 1J 2及CN,其中X為O、S或NJ 1,且各J 1、J 2及J 3獨立地為H或C 1-C 6烷基。
在某些實施例中,提供經修飾THP核苷,其中q 1、q 2、q 3、q 4、q 5、q 6及q 7各自為H。在某些實施例中,q 1、q 2、q 3、q 4、q 5、q 6及q 7中之至少一者不為H。在某些實施例中,q 1、q 2、q 3、q 4、q 5、q 6及q 7中之至少一者為甲基。在某些實施例中,提供經修飾THP核苷,其中R 1及R 2中之一者為F。在某些實施例中,R 1為F且R 2為H;在某些實施例中,R 1為甲氧基且R 2為H;且在某些實施例中,R 1為甲氧基乙氧基且R 2為H。
在某些實施例中,糖替代物包含具有多於5個原子及多於一個雜原子之環。舉例而言,包含N-嗎啉基糖部分之核苷及其在寡核苷酸中之用途已有報導(參見例如Braasch等人, Biochemistry, 2002, 41, 4503-4510;及Summerton等人, U.S. 5,698,685;Summerton等人, U.S. 5,166,315;Summerton等人, U.S. 5,185,444;及Summerton等人, U.S. 5,034,506)。如此處所用,術語「N-嗎啉基」意指具有以下結構之糖替代物:
Figure 02_image016
在某些實施例中,N-嗎啉基可例如藉由添加各種取代基或改變來自上述N-嗎啉基結構之各種取代基而修飾。此類糖替代物在本文中稱作「經修飾N-嗎啉基」。
在某些實施例中,糖替代物包含非環部分。包含此類非環糖替代物之核苷及寡核苷酸之實例包括但不限於:肽核酸(「PNA」)、非環丁基核酸(參見例如Kumar等人, Org. Biomol. Chem., 2013, 11, 5853-5865),及Manoharan等人, WO2011/133876中所述之核苷及寡核苷酸。
可用於經修飾核苷中之許多其他雙環及三環糖及糖替代物環系統在此項技術中為已知的。 2. 某些經修飾核鹼基
在某些實施例中,經修飾寡核苷酸包含一或多個包含未經修飾核鹼基之核苷。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸包含一或多個包含經修飾核鹼基之核苷。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸包含一或多個不包含核鹼基之核苷,稱作無鹼基核苷。
在某些實施例中,經修飾核鹼基係選自:5-經取代嘧啶、6-氮雜嘧啶、經烷基或炔基取代之嘧啶、經烷基取代之嘌呤,及N-2、N-6及O-6經取代嘌呤。在某些實施例中,經修飾核鹼基係選自:2-胺基丙基腺嘌呤、5-羥甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-胺基腺嘌呤、6-N-甲基鳥嘌呤、6-N-甲基腺嘌呤、2-丙基腺嘌呤、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶及2-硫胞嘧啶、5-丙炔基(-C≡C-CH 3)尿嘧啶、5-丙炔基胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、6-偶氮胞嘧啶、6-偶氮胸腺嘧啶、5-核糖基尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫尿嘧啶、8-鹵基、8-胺基、8-硫醇、8-硫烷基、8-羥基、8-氮雜及其他8-經取代嘌呤、5-鹵基(尤其5-溴)、5-三氟甲基、5-鹵尿嘧啶及5-鹵胞嘧啶、7-甲基鳥嘌呤、7-甲基腺嘌呤、2-F-腺嘌呤、2-胺基腺嘌呤、7-去氮鳥嘌呤、7-去氮腺嘌呤、3-去氮鳥嘌呤、3-去氮腺嘌呤、6-N-苯甲醯基腺嘌呤、2-N-異丁醯基鳥嘌呤、4-N-苯甲醯基胞嘧啶、4-N-苯甲醯基尿嘧啶、5-甲基4-N-苯甲醯基胞嘧啶、5-甲基4-N-苯甲醯基尿嘧啶、通用鹼基、疏水性鹼基、混雜鹼基、大小擴展鹼基及氟化鹼基。其他經修飾核鹼基包括三環嘧啶,諸如1,3-二氮雜啡噁嗪-2-酮、1,3-二氮雜啡噻嗪-2-酮及9-(2-胺基乙氧基)-1,3-二氮雜啡噁嗪-2-酮(G-鉗)。經修飾核鹼基亦可包括其中嘌呤或嘧啶鹼基經其他雜環置換之彼等,例如7-去氮-腺嘌呤、7-去氮鳥苷、2-胺基吡啶及2-吡啶酮。其他核鹼基包括Merigan等人, U.S. 3,687,808中所揭示之彼等; The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, Kroschwitz, J.I.編, John Wiley & Sons, 1990, 858-859;Englisch等人, Angewandte Chemie, 國際版, 1991, 30, 613;Sanghvi, Y.S., 第15章, Antisense Research and Applications, Crooke, S.T.及Lebleu, B.編, CRC Press, 1993, 273-288中所揭示之彼等;以及第6章及第15章, Antisense Drug Technology, Crooke S.T.編, CRC Press, 2008, 163-166及442-443中所揭示之彼等。
教示某些上文所提及之經修飾核鹼基以及其他經修飾核鹼基之製備的公開案包括但不限於Manoharan等人, US2003/0158403;Manoharan等人, US2003/0175906;Dinh等人, U.S. 4,845,205;Spielvogel等人, U.S. 5,130,302;Rogers等人, U.S. 5,134,066;Bischofberger等人, U.S. 5,175,273;Urdea等人, U.S. 5,367,066;Benner等人, U.S. 5,432,272;Matteucci等人, U.S. 5,434,257;Gmeiner等人, U.S. 5,457,187;Cook等人, U.S. 5,459,255;Froehler等人, U.S. 5,484,908;Matteucci等人, U.S. 5,502,177;Hawkins等人, U.S. 5,525,711;Haralambidis等人, U.S. 5,552,540;Cook等人, U.S. 5,587,469;Froehler等人, U.S. 5,594,121;Switzer等人, U.S. 5,596,091;Cook等人, U.S. 5,614,617;Froehler等人, U.S. 5,645,985;Cook等人, U.S. 5,681,941;Cook等人, U.S. 5,811,534;Cook等人, U.S. 5,750,692;Cook等人, U.S. 5,948,903;Cook等人, U.S. 5,587,470;Cook等人, U.S. 5,457,191;Matteucci等人, U.S. 5,763,588;Froehler等人, U.S. 5,830,653;Cook等人, U.S. 5,808,027;Cook等人, 6,166,199;及Matteucci等人, U.S. 6,005,096。 3. 某些經修飾核苷間鍵聯
在某些實施例中,可使用任何核苷間鍵聯將經修飾寡核苷酸之核苷連接在一起。由磷原子之存在或不存在來定義核苷間鍵聯基團之兩個主要類別。代表性含磷核苷間鍵聯包括但不限於含有磷酸二酯鍵(「P(O 2)=O」) (亦稱作未經修飾或天然存在之鍵聯)之磷酸二酯、磷酸三酯、甲基膦酸酯、胺基磷酸酯以及硫代磷酸酯及二硫代磷酸酯。代表性非含磷核苷間鍵聯基團包括但不限於亞甲基甲基亞胺基(-CH 2-N(CH 3)-O-CH 2-)、硫二酯、硫羰胺基甲酸酯(-O-C(=O)(NH)-S-);矽氧烷(-O-SiH 2-O-);及N,N'-二甲肼(-CH 2-N(CH 3)-N(CH 3)-)。相較於天然存在之磷酸酯鍵聯,經修飾核苷間鍵聯可用於改變(典型地,增加)寡核苷酸之核酸酶抗性。在某些實施例中,具有掌性原子之核苷間鍵聯可製備成外消旋混合物或各別對映體。含磷及非含磷核苷間鍵聯之製備方法為熟習此項技術者所熟知。
具有掌性中心之代表性核苷間鍵聯包括但不限於烷基膦酸酯及硫代磷酸酯。包含具有掌性中心之核苷間鍵聯之經修飾寡核苷酸可製備成包含無規立構核苷間鍵聯之經修飾寡核苷酸之群體或包含呈特定立體化學構型之硫代磷酸酯鍵聯之經修飾寡核苷酸之群體。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸之群體包含其中所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯皆為無規立構之硫代磷酸酯核苷間鍵聯。可使用得以隨機選擇各硫代磷酸酯鍵聯之立體化學構型之合成方法來產生此類經修飾寡核苷酸。儘管如此,如熟習此項技術者充分了解,各個別寡核苷酸分子之各個別硫代磷酸酯具有規定之立體構型。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸之群體富集有包含一或多個呈特定獨立選擇之立體化學構型之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯之經修飾寡核苷酸。在某些實施例中,特定硫代磷酸酯鍵聯之特定構型存在於群體中至少65%之分子中。在某些實施例中,特定硫代磷酸酯鍵聯之特定構型存在於群體中至少70%之分子中。在某些實施例中,特定硫代磷酸酯鍵聯之特定構型存在於群體中至少80%之分子中。在某些實施例中,特定硫代磷酸酯鍵聯之特定構型存在於群體中至少90%之分子中。在某些實施例中,特定硫代磷酸酯鍵聯之特定構型存在於群體中至少99%之分子中。可使用此項技術中已知之合成方法來產生經修飾寡核苷酸之此類掌性富集群體,例如Oka等人, JACS125, 8307 (2003),Wan等人 Nuc. Acid. Res. 42, 13456 (2014),及WO 2017/015555中所述之方法。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸之群體富集有具有至少一個呈( Sp)構型之指定硫代磷酸酯之經修飾寡核苷酸。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸之群體富集有具有至少一個呈( Rp)構型之硫代磷酸酯之經修飾寡核苷酸。在某些實施例中,包含( Rp)及/或( Sp)硫代磷酸酯之經修飾寡核苷酸分別包含下式中之一或多者,其中「B」指示核鹼基:
Figure 02_image018
除非另有指示,否則本文所述之經修飾寡核苷酸之掌性核苷間鍵聯可為無規立構的或呈特定立體化學構型。
中性核苷間鍵聯包括但不限於磷酸三酯、甲基膦酸酯、MMI (3'-CH 2-N(CH 3)-O-5')、醯胺-3 (3'-CH 2-C(=O)-N(H)-5')、醯胺-4 (3'-CH 2-N(H)-C(=O)-5')、甲縮醛(3'-O-CH 2-O-5')、甲氧基丙基(MOP)及硫甲縮醛(3'-S-CH 2-O-5')。其他中性核苷間鍵聯包括非離子鍵聯,其包含矽氧烷(二烷基矽氧烷)、羧酸酯、羧醯胺、硫化物、磺酸酯及醯胺(參見例如: Carbohydrate Modifications in Antisense Research; Y.S. Sanghvi及P.D. Cook編, ACS Symposium Series 580; 第3章及第4章, 40-65)。其他中性核苷間鍵聯包括非離子鍵聯,其包含混合N、O、S及CH 2組成部分。 B. 某些模體
在某些實施例中,經修飾寡核苷酸包含一或多個包含經修飾糖部分之經修飾核苷。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸包含一或多個包含經修飾核鹼基之經修飾核苷。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸包含一或多個經修飾核苷間鍵聯。在此類實施例中,經修飾寡核苷酸之經修飾、未經修飾及差異性修飾之糖部分、核鹼基及/或核苷間鍵聯定義模式或模體。在某些實施例中,糖部分、核鹼基及核苷間鍵聯之模式各自彼此獨立。因此,經修飾寡核苷酸可由其糖模體、核鹼基模體及/或核苷間鍵聯模體來描述(如本文所用,核鹼基模體描述對核鹼基之修飾,與核鹼基之序列無關)。 1. 某些糖模體
在某些實施例中,寡核苷酸包含沿寡核苷酸或其部分以規定模式或糖模體排列之經修飾糖及/或未經修飾糖部分之一或多種類型。在某些情況下,此類糖模體包括但不限於本文所論述之糖修飾中之任一者。
在某些實施例中,經修飾寡核苷酸具有間隙聚體模體,其由兩個外區或「翼」及中心或內區或「間隙」界定。間隙聚體模體之三個區(5'-翼、間隙及3'-翼)形成核苷之相連序列,其中各翼之核苷之至少一些糖部分不同於間隙之核苷之至少一些糖部分。具體而言,各翼最接近間隙之核苷(5'-翼之3'-最末核苷及3'-翼之5'-最末核苷)之至少糖部分不同於相鄰間隙核苷之糖部分,由此界定翼與間隙之間的邊界(亦即,翼/間隙交界)。在某些實施例中,間隙內之糖部分彼此相同。在某些實施例中,間隙包括一或多個具有與間隙之一或多個其他核苷之糖部分不同之糖部分的核苷。在某些實施例中,兩翼之糖模體彼此相同(對稱間隙聚體)。在某些實施例中,5'-翼之糖模體不同於3'-翼之糖模體(不對稱間隙聚體)。
在某些實施例中,間隙聚體之翼包含1-6個核苷。在某些實施例中,間隙聚體之各翼之各核苷包含經修飾糖部分。在某些實施例中,間隙聚體之各翼之至少一個核苷包含經修飾糖部分。在某些實施例中,間隙聚體之各翼之至少兩個核苷包含經修飾糖部分。在某些實施例中,間隙聚體之各翼之至少三個核苷包含經修飾糖部分。在某些實施例中,間隙聚體之各翼之至少四個核苷包含經修飾糖部分。在某些實施例中,間隙聚體之各翼之至少五個核苷包含經修飾糖部分。
在某些實施例中,間隙聚體之間隙包含7-12個核苷。在某些實施例中,間隙聚體之間隙之各核苷包含2'-β-D-去氧核糖基糖部分。在某些實施例中,間隙聚體之間隙之至少一個核苷包含經修飾糖部分。
在某些實施例中,間隙聚體為去氧間隙聚體。在某些實施例中,各翼/間隙交界之間隙側上之核苷包含2'-β-D-去氧核糖基糖部分且各翼/間隙交界之翼側上之核苷包含經修飾糖部分。在某些實施例中,間隙之各核苷包含2'-β-D-去氧核糖基糖部分。在某些實施例中,間隙聚體之各翼之各核苷包含經修飾糖部分。在某些實施例中,間隙之確切一個核苷包含經修飾糖部分且間隙之各其餘核苷包含2'-β-D-去氧核糖基糖部分。
在某些實施例中,經修飾寡核苷酸包含具有完全經修飾糖模體之部分或由其組成。在此類實施例中,經修飾寡核苷酸之完全經修飾部分之各核苷包含經修飾糖部分。在某些實施例中,完整經修飾寡核苷酸之各核苷包含經修飾糖部分。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸包含具有完全經修飾糖模體之部分或由其組成,其中完全經修飾部分內之各核苷包含相同經修飾糖部分,在本文中稱作均勻經修飾糖模體。在某些實施例中,完全經修飾寡核苷酸為均勻經修飾寡核苷酸。在某些實施例中,均勻經修飾之各核苷包含相同2'-修飾。
本文中,間隙聚體之三個區之長度(核苷數目)可使用記法[5'-翼中之核苷數] - [間隙中之核苷數] - [3'-翼中之核苷數]提供。因此,3-10-3間隙聚體由各翼中之3個經連接核苷及間隙中之10個經連接核苷組成。在此種命名後緊接有特異性修飾之情況下,彼修飾為各翼之各糖部分中之修飾且間隙核苷包含2'-β-D-去氧核糖基糖部分。因此,5-10-5 MOE間隙聚體由5'-翼中之5個經連接2'-MOE核苷、間隙中之10個經連接2'-β-D-去氧核苷及3'-翼中之5個經連接2'-MOE核苷組成。3-10-3 cEt間隙聚體由5'-翼中之3個經連接cEt核苷、間隙中之10個經連接2'-β-D-去氧核苷及3'-翼中之3個經連接cEt核苷組成。5-8-5間隙聚體由5'-翼中之5個包含經修飾糖部分之經連接核苷、間隙中之8個經連接2'-β-D-去氧核苷及3'-翼中之5個包含經修飾糖部分之經連接核苷組成。5-8-5混合間隙聚體具有5'-翼及/或3'-翼中之至少兩個不同經修飾糖部分。
在某些實施例中,經修飾寡核苷酸為5-10-5 MOE間隙聚體。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸為4-10-6 MOE間隙聚體。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸為6-10-4 MOE間隙聚體。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸為5-8-5 MOE間隙聚體。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸為6-8-4 MOE間隙聚體。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸為4-8-6 MOE間隙聚體。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸為X-Y-Z MOE間隙聚體,其中X及Z係獨立地選自1、2、3、4、5或6且Y為7、8、9、10或11。 2. 某些核鹼基模體
在某些實施例中,寡核苷酸包含沿寡核苷酸或其部分以規定模式或模體排列之經修飾及/或未經修飾核鹼基。在某些實施例中,各核鹼基經修飾。在某些實施例中,核鹼基中無一者經修飾。在某些實施例中,各嘌呤或各嘧啶經修飾。在某些實施例中,各腺嘌呤經修飾。在某些實施例中,各鳥嘌呤經修飾。在某些實施例中,各胸腺嘧啶經修飾。在某些實施例中,各尿嘧啶經修飾。在某些實施例中,各胞嘧啶經修飾。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸中之一些或所有胞嘧啶核鹼基為5-甲基胞嘧啶。在某些實施例中,所有胞嘧啶核鹼基為5-甲基胞嘧啶且經修飾寡核苷酸之所有其他核鹼基為未經修飾核鹼基。
在某些實施例中,經修飾寡核苷酸包含經修飾核鹼基之區塊。在某些此類實施例中,區塊在寡核苷酸之3'端。在某些實施例中,區塊在寡核苷酸之3'端之3個核苷內。在某些實施例中,區塊在寡核苷酸之5'端。在某些實施例中,區塊在寡核苷酸之5'端之3個核苷內。
在某些實施例中,具有間隙聚體模體之寡核苷酸包含有包含經修飾核鹼基之核苷。在某些此類實施例中,一個包含經修飾核鹼基之核苷在具有間隙聚體模體之寡核苷酸之中心間隙內。在某些此類實施例中,該核苷之糖部分為2'-β-D-去氧核糖基糖部分。在某些實施例中,經修飾核鹼基係選自:2-硫嘧啶及5-丙炔嘧啶。 3. 某些核苷間鍵聯模體
在某些實施例中,寡核苷酸包含沿寡核苷酸或其部分以規定模式或模體排列之經修飾及/或未經修飾核苷間鍵聯。在某些實施例中,各核苷間鍵聯基團為磷酸二酯核苷間鍵聯(P(O 2)=O)。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸之各核苷間鍵聯基團為硫代磷酸酯核苷間鍵聯(P(O 2)=S)。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸之各核苷間鍵聯係獨立地選自硫代磷酸酯核苷間鍵聯及磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中,各硫代磷酸酯核苷間鍵聯係獨立地選自無規立構硫代磷酸酯、( Sp)硫代磷酸酯及( Rp)硫代磷酸酯。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸之糖模體為間隙聚體且間隙內之核苷間鍵聯全部經修飾。在某些此類實施例中,翼中之一些或所有核苷間鍵聯為未經修飾磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中,末端核苷間鍵聯經修飾。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸之糖模體為間隙聚體,且核苷間鍵聯模體包含至少一個翼中之至少一個磷酸二酯核苷間鍵聯,其中至少一個磷酸二酯鍵聯不為末端核苷間鍵聯,且其餘核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在某些此類實施例中,所有硫代磷酸酯鍵聯皆為無規立構的。在某些實施例中,翼中之所有硫代磷酸酯鍵聯為(Sp)硫代磷酸酯,且間隙包含至少一個Sp、Sp、Rp模體。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸之群體富集有包含此類核苷間鍵聯模體之經修飾寡核苷酸。
在某些實施例中,經修飾核苷酸具有soooossssssssssooss之核苷間鍵聯模體,其中各「s」代表硫代磷酸酯核苷間鍵聯且各「o」代表磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中,經修飾核苷酸具有sooooossssssssssoss之核苷間鍵聯模體,其中各「s」代表硫代磷酸酯核苷間鍵聯且各「o」代表磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中,經修飾核苷酸具有soooosssssssssoss之核苷間鍵聯模體,其中各「s」代表硫代磷酸酯核苷間鍵聯且各「o」代表磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中,經修飾核苷酸具有sooosssssssssooss之核苷間鍵聯模體,其中各「s」代表硫代磷酸酯核苷間鍵聯且各「o」代表磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中,經修飾核苷酸具有sooossssssssssoooss之核苷間鍵聯模體,其中各「s」代表硫代磷酸酯核苷間鍵聯且各「o」代表磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中,經修飾核苷酸具有soosssssssssoooss之核苷間鍵聯模體,其中各「s」代表硫代磷酸酯核苷間鍵聯且各「o」代表磷酸二酯核苷間鍵聯。 C. 某些長度
有可能增加或減小寡核苷酸之長度而不消除活性。舉例而言,在Woolf等人 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7305-7309, 1992)中,測試一系列長度為13-25個核鹼基之寡核苷酸誘導靶RNA在卵母細胞注射模型中裂解之能力。長度為25個核鹼基且在寡核苷酸末端附近具有8或11個錯配鹼基之寡核苷酸能夠引導靶RNA之特異性裂解,儘管相比不含錯配之寡核苷酸程度較小。類似地,使用13核鹼基寡核苷酸,包括具有1或3個錯配之彼等來達成靶特異性裂解。
在某些實施例中,寡核苷酸(包括經修飾寡核苷酸)可具有多種長度範圍中之任一者。在某些實施例中,寡核苷酸由X至Y個經連接核苷組成,其中X代表範圍中核苷之最小數目且Y代表範圍中核苷之最大數目。在某些此類實施例中,X及Y各自獨立地選自8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49及50;前提條件為X≤Y。舉例而言,在某些實施例中,寡核苷酸由12至13個、12至14個、12至15個、12至16個、12至17個、12至18個、12至19個、12至20個、12至21個、12至22個、12至23個、12至24個、12至25個、12至26個、12至27個、12至28個、12至29個、12至30個、13至14個、13至15個、13至16個、13至17個、13至18個、13至19個、13至20個、13至21個、13至22個、13至23個、13至24個、13至25個、13至26個、13至27個、13至28個、13至29個、13至30個、14至15個、14至16個、14至17個、14至18個、14至19個、14至20個、14至21個、14至22個、14至23個、14至24個、14至25個、14至26個、14至27個、14至28個、14至29個、14至30個、15至16個、15至17個、15至18個、15至19個、15至20個、15至21個、15至22個、15至23個、15至24個、15至25個、15至26個、15至27個、15至28個、15至29個、15至30個、16至17個、16至18個、16至19個、16至20個、16至21個、16至22個、16至23個、16至24個、16至25個、16至26個、16至27個、16至28個、16至29個、16至30個、17至18個、17至19個、17至20個、17至21個、17至22個、17至23個、17至24個、17至25個、17至26個、17至27個、17至28個、17至29個、17至30個、18至19個、18至20個、18至21個、18至22個、18至23個、18至24個、18至25個、18至26個、18至27個、18至28個、18至29個、18至30個、19至20個、19至21個、19至22個、19至23個、19至24個、19至25個、19至26個、19至29個、19至28個、19至29個、19至30個、20至21個、20至22個、20至23個、20至24個、20至25個、20至26個、20至27個、20至28個、20至29個、20至30個、21至22個、21至23個、21至24個、21至25個、21至26個、21至27個、21至28個、21至29個、21至30個、22至23個、22至24個、22至25個、22至26個、22至27個、22至28個、22至29個、22至30個、23至24個、23至25個、23至26個、23至27個、23至28個、23至29個、23至30個、24至25個、24至26個、24至27個、24至28個、24至29個、24至30個、25至26個、25至27個、25至28個、25至29個、25至30個、26至27個、26至28個、26至29個、26至30個、27至28個、27至29個、27至30個、28至29個、28至30個或29至30個經連接核苷組成。 D. 某些經修飾寡核苷酸
在某些實施例中,將上述修飾(糖、核鹼基、核苷間鍵聯)併入經修飾寡核苷酸中。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸之特徵在於其修飾模體及總長度。在某些實施例中,此類參數各自彼此獨立。因此,除非另有指示,否則具有間隙聚體糖模體之寡核苷酸之各核苷間鍵聯可經修飾或未經修飾且可能或可能不遵循糖修飾之間隙聚體修飾模式。舉例而言,糖間隙聚體之翼區內之核苷間鍵聯可彼此相同或不同且可與糖模體之間隙區之核苷間鍵聯相同或不同。同樣地,此類糖間隙聚體寡核苷酸可包含一或多個經修飾核鹼基,與糖修飾之間隙聚體模式無關。除非另有指示,否則所有修飾與核鹼基序列無關。 E. 經修飾寡核苷酸之某些群體
其中群體之所有經修飾寡核苷酸具有相同分子式之經修飾寡核苷酸群體可為無規立構群體或掌性富集群體。所有經修飾寡核苷酸之所有掌性中心在無規立構群體中皆為無規立構的。在掌性富集群體中,至少一個特定掌性中心在群體之經修飾寡核苷酸中不為無規立構的。在某些實施例中,掌性富集群體之經修飾寡核苷酸富集有β-D核糖基糖部分,且所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯皆為無規立構的。在某些實施例中,掌性富集群體之經修飾寡核苷酸富集有β-D核糖基糖部分及至少一個呈特定立體化學構型之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯。 F. 核鹼基序列
在某些實施例中,寡核苷酸(未經修飾或經修飾寡核苷酸)由其核鹼基序列進一步描述。在某些實施例中,寡核苷酸具有與第二寡核苷酸或所鑑定之參考核酸(諸如靶核酸)互補之核鹼基序列。在某些此類實施例中,寡核苷酸之一部分具有與第二寡核苷酸或所鑑定之參考核酸(諸如靶核酸)互補之核鹼基序列。在某些實施例中,寡核苷酸之一部分或整個長度之核鹼基序列與第二寡核苷酸或核酸(諸如靶核酸)至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%互補。 II. 某些寡聚化合物
在某些實施例中,本文提供由寡核苷酸(經修飾或未經修飾)及視情況存在之一或多個接合基團及/或末端基團組成之寡聚化合物。接合基團由一或多個接合部分及將接合部分連接至寡核苷酸之接合連接子組成。接合基團可附接至寡核苷酸之任一端或兩端及/或任何內部位置處。在某些實施例中,接合基團附接至經修飾寡核苷酸之核苷之2'位。在某些實施例中,附接至寡核苷酸之任一端或兩端之接合基團為末端基團。在某些此類實施例中,接合基團或末端基團附接於寡核苷酸之3'端及/或5'端。在某些此類實施例中,接合基團(或末端基團)附接於寡核苷酸之3'端。在某些實施例中,接合基團附接於寡核苷酸之3'端附近。在某些實施例中,接合基團(或末端基團)附接於寡核苷酸之5'端。在某些實施例中,接合基團附接於寡核苷酸之5'端附近。
末端基團之實例包括但不限於接合基團、封端基團、磷酸酯部分、保護基、經修飾或未經修飾核苷及兩個或更多個獨立地經修飾或未經修飾之核苷。 A. 某些接合基團
在某些實施例中,寡核苷酸共價附接至一或多個接合基團。在某些實施例中,接合基團改變所附接之寡核苷酸之一或多種特性,包括但不限於藥效學、藥物動力學、穩定性、結合、吸收、組織分佈、細胞分佈、細胞攝入、電荷及清除率。在某些實施例中,接合基團向所附接之寡核苷酸賦予新特性,例如能夠偵測寡核苷酸之螢光團或報告基團。某些接合基團及接合部分先前已有描述,例如:膽固醇部分(Letsinger等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556);膽酸(Manoharan等人, Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4, 1053-1060);硫醚,例如己基-S-三苯甲基硫醇(Manoharan等人, Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660, 306-309;Manoharan等人, Bioorg. Med. Chem. Lett., 1993, 3, 2765-2770);硫膽固醇(Oberhauser等人, Nucl. Acids Res., 1992, 20, 533-538);脂族鏈,例如十二烷二醇或十一烷基殘基(Saison-Behmoaras等人, EMBO J., 1991, 10, 1111-1118;Kabanov等人, FEBS Lett., 1990, 259, 327-330;Svinarchuk等人, Biochimie, 1993, 75, 49-54);磷脂,例如二-十六烷基-rac-甘油或三乙銨1,2-二-O-十六烷基-rac-甘油-3-H-膦酸酯(Manoharan等人, Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654;Shea等人, Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777-3783);聚胺或聚乙二醇鏈(Manoharan等人, Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14, 969-973);或金剛烷乙酸棕櫚基部分(Mishra等人, Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264,229-237);十八烷胺或己基胺基-羰基-氧基膽固醇部分(Crooke等人, J. Pharmacol. Exp. Ther.,1996, 277, 923-937);生育酚基團(Nishina等人, Molecular Therapy Nucleic Acids, 2015 , 4, e220;及Nishina等人, Molecular Therapy, 2008, 16, 734-740);或GalNAc簇(例如WO2014/179620)。 1. 接合部分
接合部分包括但不限於嵌入劑、報告分子、聚胺、聚醯胺、肽、碳水化合物、維生素部分、聚乙二醇、硫醚、聚醚、膽固醇、硫膽固醇、膽酸部分、葉酸、脂質、磷脂、生物素、啡嗪、啡啶、蒽醌、金剛烷、吖啶、螢光素、玫瑰紅、香豆素、螢光團及染料。
在某些實施例中,接合部分包含活性原料藥,例如阿司匹靈(aspirin)、華法林、丁二苯吡唑二酮(phenylbutazone)、伊布洛芬(ibuprofen)、舒洛芬(suprofen)、芬布芬(fenbufen)、酮洛芬(ketoprofen)、( S)-(+)-普拉洛芬(pranoprofen)、卡洛芬(carprofen)、丹磺醯肌胺酸、2,3,5-三碘苯甲酸、芬戈莫德(fingolimod)、氟芬那酸(flufenamic acid)、醛葉酸(folinic acid)、苯并噻二嗪(benzothiadiazide)、氯苯噻(chlorothiazide)、二氮呯(diazepine)、吲哚美辛(indomethicin)、巴比妥酸鹽(barbiturate)、頭孢菌素(cephalosporin)、磺胺類藥物(sulfa drug)、抗糖尿病劑、抗細菌劑或抗生素。 2. 接合連接子
接合部分經接合連接子附接至寡核苷酸。在某些寡聚化合物中,接合連接子為單化學鍵(亦即,接合部分經單鍵直接附接至寡核苷酸)。在某些實施例中,接合連接子包含鏈結構,諸如烴基鏈,或諸如乙二醇、核苷或胺基酸單元之重複單元之寡聚物。
在某些實施例中,接合連接子包含一或多個選自烷基、胺基、側氧基、醯胺、二硫化物、聚乙二醇、醚、硫醚及羥胺基之基團。在某些此類實施例中,接合連接子包含選自烷基、胺基、側氧基、醯胺及醚基之基團。在某些實施例中,接合連接子包含選自烷基及醯胺基之基團。在某些實施例中,接合連接子包含選自烷基及醚基之基團。在某些實施例中,接合連接子包含至少一個磷部分。在某些實施例中,接合連接子包含至少一個磷酸酯基。在某些實施例中,接合連接子包括至少一個中性鍵聯基團。
在某些實施例中,接合連接子,包括上文所述之接合連接子,為雙官能鍵聯部分,例如此項技術中已知適用於將接合基團附接至母體化合物,諸如本文所提供之寡核苷酸之彼等。一般而言,雙官能鍵聯部分包含至少兩個官能基。選擇官能基中之一者以結合至母體化合物上之特定位點且選擇另一者以結合至接合基團。雙官能鍵聯部分中所用之官能基之實例包括但不限於用於與親核基團反應之親電體及用於與親電子基團反應之親核體。在某些實施例中,雙官能鍵聯部分包含一或多個選自胺基、羥基、羧酸、硫醇、烷基、烯基及炔基之基團。
接合連接子之實例包括但不限於吡咯啶、8-胺基-3,6-二氧雜辛酸(ADO)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸丁二醯亞胺酯(SMCC)及6-胺基己酸(AHEX或AHA)。其他接合連接子包括但不限於經取代或未經取代C 1-C 10烷基、經取代或未經取代C 2-C 10烯基或經取代或未經取代C 2-C 10炔基,其中較佳取代基之非限制性清單包括羥基、胺基、烷氧基、羧基、苯甲基、苯基、硝基、硫醇、硫烷氧基、鹵素、烷基、芳基、烯基及炔基。
在某些實施例中,接合連接子包含1-10個連接子-核苷。在某些實施例中,接合連接子包含2-5個連接子-核苷。在某些實施例中,接合連接子包含確切3個連接子-核苷。在某些實施例中,接合連接子包含TCA模體。在某些實施例中,此類連接子-核苷為經修飾核苷。在某些實施例中,此類連接子-核苷包含經修飾糖部分。在某些實施例中,連接子-核苷未經修飾。在某些實施例中,連接子-核苷包含視情況經保護之雜環鹼基,其係選自嘌呤、經取代嘌呤、嘧啶或經取代嘧啶。在某些實施例中,可裂解部分為選自尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、4-N-苯甲醯基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、4-N-苯甲醯基-5-甲基胞嘧啶、腺嘌呤、6-N-苯甲醯基腺嘌呤、鳥嘌呤及2-N-異丁醯基鳥嘌呤之核苷。連接子-核苷在達到靶組織後自寡聚化合物裂解典型地為理想的。因此,連接子-核苷典型地彼此連接且經可裂解鍵連接至寡聚化合物之其餘部分。在某些實施例中,此類可裂解鍵為磷酸二酯鍵。
本文中,連接子-核苷不應視為寡核苷酸之部分。因此,在其中寡聚化合物包含由指定數目或範圍之經連接核苷組成及/或與參考核酸具有指定百分比互補性之寡核苷酸且寡聚化合物亦包含有包含含有連接子-核苷之接合連接子之接合基團的實施例中,彼等連接子-核苷不計入寡核苷酸之長度且不用於確定寡核苷酸對於參考核酸之百分比互補性。舉例而言,寡聚化合物可包含(1)由8-30個核苷組成之經修飾寡核苷酸及(2)包含與經修飾寡核苷酸之核苷相連之1-10個連接子-核苷之接合基團。此種寡聚化合物中之相連經連接核苷之總數大於30。或者,寡聚化合物可包含由8-30個核苷組成且無接合基團之經修飾寡核苷酸。此種寡聚化合物中之相連經連接核苷之總數不大於30。除非另有指示,否則接合連接子包含不多於10個連接子-核苷。在某些實施例中,接合連接子包含不多於5個連接子-核苷。在某些實施例中,接合連接子包含不多於3個連接子-核苷。在某些實施例中,接合連接子包含不多於2個連接子-核苷。在某些實施例中,接合連接子包含不多於1個連接子-核苷。
在某些實施例中,接合基團自寡核苷酸裂解為理想的。舉例而言,在某些情況下,包含特定接合部分之寡聚化合物由特定細胞類型更好地攝入,但一旦已攝入寡聚化合物,接合基團裂解以釋放未接合或母體寡核苷酸為理想的。因此,某些接合連接子可包含一或多個可裂解部分。在某些實施例中,可裂解部分為可裂解鍵。在某些實施例中,可裂解部分為包含至少一個可裂解鍵之原子團。在某些實施例中,可裂解部分包含具有一個、兩個、三個、四個或多於四個可裂解鍵之原子團。在某些實施例中,可裂解部分在細胞或次細胞區室,諸如溶酶體內選擇性裂解。在某些實施例中,可裂解部分由內源酶,諸如核酸酶選擇性裂解。
在某些實施例中,可裂解鍵係選自醯胺、酯、醚、磷酸二酯之一或兩種酯、磷酸酯、胺基甲酸酯及二硫化物。在某些實施例中,可裂解鍵為磷酸二酯之酯中之一或兩者。在某些實施例中,可裂解部分包含磷酸酯或磷酸二酯。在某些實施例中,可裂解部分為寡核苷酸與接合部分或接合基團之間的磷酸酯或磷酸二酯鍵聯。
在某些實施例中,可裂解部分包含一或多個連接子-核苷或由其組成。在某些此類實施例中,一或多個連接子-核苷彼此連接及/或經可裂解鍵連接至寡聚化合物之其餘部分。在某些實施例中,此類可裂解鍵為未經修飾磷酸二酯鍵。在某些實施例中,可裂解部分為由磷酸二酯核苷間鍵聯附接至寡核苷酸之3'或5'-末端核苷且由磷酸酯或硫代磷酸酯鍵聯共價附接至接合連接子或接合部分之其餘部分之2'-去氧核苷。在某些此類實施例中,可裂解部分為2'-去氧腺苷。 3. 細胞靶向部分
在某些實施例中,接合基團包含細胞靶向部分。在某些實施例中,接合基團具有通式:
Figure 02_image020
其中n為1至約3,當n為1時m為0,當n為2或更大時m為1,j為1或0,且k為1或0。
在某些實施例中,n為1,j為1且k為0。在某些實施例中,n為1,j為0且k為1。在某些實施例中,n為1,j為1且k為1。在某些實施例中,n為2,j為1且k為0。在某些實施例中,n為2,j為0且k為1。在某些實施例中,n為2,j為1且k為1。在某些實施例中,n為3,j為1且k為0。在某些實施例中,n為3,j為0且k為1。在某些實施例中,n為3,j為1且k為1。
在某些實施例中,接合基團包含具有至少一個系鎖配位體之細胞靶向部分。在某些實施例中,細胞靶向部分包含兩個共價附接至分支基團之系鎖配位體。在某些實施例中,細胞靶向部分包含三個共價附接至分支基團之系鎖配位體。
在某些實施例中,細胞靶向部分包含分支基團,該分支基團包含一或多個選自烷基、胺基、側氧基、醯胺、二硫化物、聚乙二醇、醚、硫醚及羥胺基之基團。在某些實施例中,分支基團包含分支脂族基團,該分支脂族基團包含選自烷基、胺基、側氧基、醯胺、二硫化物、聚乙二醇、醚、硫醚及羥胺基之基團。在某些此類實施例中,分支脂族基團包含選自烷基、胺基、側氧基、醯胺及醚基之基團。在某些此類實施例中,分支脂族基團包含選自烷基、胺基及醚基之基團。在某些此類實施例中,分支脂族基團包含選自烷基及醚基之基團。在某些實施例中,分支基團包含單環或多環系統。
在某些實施例中,細胞靶向部分之各系鏈包含呈任何組合形式之一或多個選自烷基、經取代烷基、醚、硫醚、二硫化物、胺基、側氧基、醯胺、磷酸二酯及聚乙二醇之基團。在某些實施例中,各系鏈為直鏈脂族基團,該直鏈脂族基團包含呈任何組合形式之一或多個選自烷基、醚、硫醚、二硫化物、胺基、側氧基、醯胺及聚乙二醇之基團。在某些實施例中,各系鏈為直鏈脂族基團,該直鏈脂族基團包含呈任何組合形式之一或多個選自烷基、磷酸二酯、醚、胺基、側氧基及醯胺之基團。在某些實施例中,各系鏈為直鏈脂族基團,該直鏈脂族基團包含呈任何組合形式之一或多個選自烷基、醚、胺基、側氧基及醯胺之基團。在某些實施例中,各系鏈為直鏈脂族基團,該直鏈脂族基團包含呈任何組合形式之一或多個選自烷基、胺基及側氧基之基團。在某些實施例中,各系鏈為直鏈脂族基團,該直鏈脂族基團包含呈任何組合形式之一或多個選自烷基及側氧基之基團。在某些實施例中,各系鏈為直鏈脂族基團,該直鏈脂族基團包含呈任何組合形式之一或多個選自烷基及磷酸二酯之基團。在某些實施例中,各系鏈包含至少一個磷鍵聯基團或中性鍵聯基團。在某些實施例中,各系鏈包含長度為約6個至約20個原子之鏈。在某些實施例中,各系鏈包含長度為約10個至約18個原子之鏈。在某些實施例中,各系鏈包含鏈長約10個原子。
在某些實施例中,細胞靶向部分之各配位體對靶細胞上至少一種類型之受體具有親和力。在某些實施例中,各配位體對哺乳動物肝細胞表面上至少一種類型之受體具有親和力。在某些實施例中,各配位體對肝去唾液酸糖蛋白受體(ASGP-R)具有親和力。在某些實施例中,各配位體為碳水化合物。在某些實施例中,各配位體係獨立地選自半乳糖、N-乙醯半乳糖胺(GalNAc)、甘露糖、葡萄糖、葡萄糖胺及岩藻糖。在某些實施例中,各配位體為N-乙醯半乳糖胺(GalNAc)。在某些實施例中,細胞靶向部分包含3個GalNAc配位體。在某些實施例中,細胞靶向部分包含2個GalNAc配位體。在某些實施例中,細胞靶向部分包含1個GalNAc配位體。
在某些實施例中,細胞靶向部分之各配位體為碳水化合物、碳水化合物衍生物、經修飾碳水化合物、多醣、經修飾多醣或多醣衍生物。在某些此類實施例中,接合基團包含碳水化合物簇(參見例如Maier等人, 「Synthesis of Antisense Oligonucleotides Conjugated to a Multivalent Carbohydrate Cluster for Cellular Targeting」, Bioconjugate Chemistry, 2003, 14, 18-29;或Rensen等人, 「Design and Synthesis of Novel N-Acetylgalactosamine-Terminated Glycolipids for Targeting of Lipoproteins to the Hepatic Asiaglycoprotein Receptor」, J. Med. Chem.2004, 47, 5798-5808,其以全文引用之方式併入本文中)。在某些此類實施例中,各配位體為胺基糖或硫糖。舉例而言,胺基糖可選自此項技術中已知之許多化合物,諸如唾液酸、α-D-半乳糖胺、β-胞壁酸、2-去氧-2-甲基胺基-L-葡萄哌喃糖、4,6-二去氧-4-甲醯胺基-2,3-二- O-甲基-D-甘露哌喃糖、2-去氧-2-磺胺基-D-葡萄哌喃糖及 N-磺基-D-葡萄糖胺及 N-羥乙醯基-α-神經胺糖酸。舉例而言,硫糖可選自5-硫-β-D-葡萄哌喃糖、甲基2,3,4-三- O-乙醯基-1-硫-6- O-三苯甲基-α-D-葡萄哌喃糖苷、4-硫-β-D-半乳哌喃糖及乙基3,4,6,7-四- O-乙醯基-2-去氧-1,5-二硫-α-D- 葡萄-庚糖哌喃糖苷。
在某些實施例中,接合基團包含具有下式之細胞靶向部分:
Figure 02_image022
在某些實施例中,接合基團包含具有下式之細胞靶向部分:
Figure 02_image024
在某些實施例中,接合基團包含具有下式之細胞靶向部分:
Figure 02_image026
在某些實施例中,本文所述之化合物包含本文描述為「THA-GalNAac 3」之接合基團。以下示出THA-GalNAc 3,而在連接子區域之末端不具有視情況存在之可裂解部分:
Figure 02_image028
在某些實施例中,本文所述之化合物包含THA-GalNAc 3-磷酸酯,亦表示為(THA-GalNAc 3)o,其具有下式:
Figure 02_image030
其中經修飾寡核苷酸(modified oligonucleotide)代表經修飾寡核苷酸。
在某些實施例中,本文所述之化合物包含3'-THA-C6-GalNAc羥脯胺酸磷酸酯(「HPPO-GalNAc」)。3'- HPPO-GalNAc由以下結構表示,其中磷酸酯基附接至3'核苷之3'-氧原子:
Figure 02_image032
教示某些上文所提及之接合基團及包含接合基團、系鏈、接合連接子、分支基團、配位體、可裂解部分以及其他修飾之化合物之製備的代表性公開案包括但不限於US 5,994,517;US 6,300,319;US 6,660,720;US 6,906,182;US 7,262,177;US 7,491,805;US 8,106,022;US 7,723,509;US 9,127,276;US 2006/0148740;US 2011/0123520;WO 2013/033230及WO 2012/037254;Biessen等人, J. Med. Chem. 1995, 38, 1846-1852;Lee等人, Bioorganic & Medicinal Chemistry2011,19, 2494-2500;Rensen等人, J. Biol. Chem. 2001, 276, 37577-37584;Rensen等人, J. Med. Chem. 2004, 47, 5798-5808;Sliedregt等人, J. Med. Chem. 1999, 42, 609-618;及Valentijn等人, Tetrahedron,1997, 53 ,759-770,其各自以全文引用之方式併入本文中。
在某些實施例中,本文所述之化合物包含有包含間隙聚體或完全經修飾模體之經修飾寡核苷酸及包含至少一個、兩個或三個GalNAc配位體之接合基團。在某些實施例中,本文所述之化合物包含以下參考文獻中之任一者中所見之接合基團:Lee, Carbohydr Res, 1978, 67, 509-514;Connolly等人, J Biol Chem, 1982, 257, 939-945;Pavia等人, Int J Pep Protein Res, 1983, 22, 539-548;Lee等人, Biochem, 1984, 23, 4255-4261;Lee等人, Glycoconjugate J, 1987, 4, 317-328;Toyokuni等人, Tetrahedron Lett, 1990, 31, 2673-2676;Biessen等人, J Med Chem, 1995, 38, 1538-1546;Valentijn等人, Tetrahedron, 1997, 53, 759-770;Kim等人, Tetrahedron Lett, 1997, 38, 3487-3490;Lee等人, Bioconjug Chem, 1997, 8, 762-765;Kato等人, Glycobiol, 2001, 11, 821-829;Rensen等人, J Biol Chem, 2001, 276, 37577-37584;Lee等人, Methods Enzymol, 2003, 362, 38-43;Westerlind等人, Glycoconj J, 2004, 21, 227-241;Lee等人, Bioorg Med Chem Lett, 2006, 16(19), 5132-5135;Maierhofer等人, Bioorg Med Chem, 2007, 15, 7661-7676;Khorev等人, Bioorg Med Chem, 2008, 16, 5216-5231;Lee等人, Bioorg Med Chem, 2011, 19, 2494-2500;Kornilova等人, Analyt Biochem, 2012, 425, 43-46;Pujol等人, Angew Chemie Int Ed Engl, 2012, 51, 7445-7448;Biessen等人, J Med Chem, 1995, 38, 1846-1852;Sliedregt等人, J Med Chem, 1999, 42, 609-618;Rensen等人, J Med Chem, 2004, 47, 5798-5808;Rensen等人, Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2006, 26, 169-175;van Rossenberg等人, Gene Ther, 2004, 11, 457-464;Sato等人, J Am Chem Soc, 2004, 126, 14013-14022;Lee等人, J Org Chem, 2012, 77, 7564-7571;Biessen等人, FASEB J, 2000, 14, 1784-1792;Rajur等人, Bioconjug Chem, 1997, 8, 935-940;Duff等人, Methods Enzymol, 2000, 313, 297-321;Maier等人, Bioconjug Chem, 2003, 14, 18-29;Jayaprakash等人, Org Lett, 2010, 12, 5410-5413;Manoharan, Antisense Nucleic Acid Drug Dev, 2002, 12, 103-128;Merwin等人, Bioconjug Chem, 1994, 5, 612-620;Tomiya等人, Bioorg Med Chem, 2013, 21, 5275-5281;國際申請案WO1998/013381;WO2011/038356;WO1997/046098;WO2008/098788;WO2004/101619;WO2012/037254;WO2011/120053;WO2011/100131;WO2011/163121;WO2012/177947;WO2013/033230;WO2013/075035;WO2012/083185;WO2012/083046;WO2009/082607;WO2009/134487;WO2010/144740;WO2010/148013;WO1997/020563;WO2010/088537;WO2002/043771;WO2010/129709;WO2012/068187;WO2009/126933;WO2004/024757;WO2010/054406;WO2012/089352;WO2012/089602;WO2013/166121;WO2013/165816;美國專利4,751,219;8,552,163;6,908,903;7,262,177;5,994,517;6,300,319;8,106,022;7,491,805;7,491,805;7,582,744;8,137,695;6,383,812;6,525,031;6,660,720;7,723,509;8,541,548;8,344,125;8,313,772;8,349,308;8,450,467;8,501,930;8,158,601;7,262,177;6,906,182;6,620,916;8,435,491;8,404,862;7,851,615;公開之美國專利申請公開案US2011/0097264;US2011/0097265;US2013/0004427;US2005/0164235;US2006/0148740;US2008/0281044;US2010/0240730;US2003/0119724;US2006/0183886;US2008/0206869;US2011/0269814;US2009/0286973;US2011/0207799;US2012/0136042;US2012/0165393;US2008/0281041;US2009/0203135;US2012/0035115;US2012/0095075;US2012/0101148;US2012/0128760;US2012/0157509;US2012/0230938;US2013/0109817;US2013/0121954;US2013/0178512;US2013/0236968;US2011/0123520;US2003/0077829;US2008/0108801;及US2009/0203132;其各自以全文引用之方式併入。 B. 某些末端基團
在某些實施例中,寡聚化合物包含一或多個末端基團。在某些此類實施例中,寡聚化合物包含經穩定5'-磷酸酯。經穩定5'-磷酸酯包括但不限於5'-膦酸酯,包括但不限於5'-乙烯基膦酸酯。在某些實施例中,末端基團包含一或多個無鹼基核苷及/或反向核苷。在某些實施例中,末端基團包含一或多個2'-經連接核苷。在某些此類實施例中,2'-經連接核苷為無鹼基核苷。 III. 寡聚雙鏈體
在某些實施例中,本文所述之寡聚化合物包含寡核苷酸,該寡核苷酸具有與靶核酸之核鹼基序列互補之核鹼基序列。在某些實施例中,寡聚化合物與第二寡聚化合物配對以形成寡聚雙鏈體。此類寡聚雙鏈體包含具有與靶核酸互補之部分的第一寡聚化合物及具有與第一寡聚化合物互補之部分的第二寡聚化合物。在某些實施例中,寡聚雙鏈體之第一寡聚化合物包含(1)經修飾或未經修飾寡核苷酸及視情況存在之接合基團以及(2)第二經修飾或未經修飾寡核苷酸及視情況存在之接合基團,或由其組成。寡聚雙鏈體之任一個或兩個寡聚化合物可包含接合基團。寡聚雙鏈體之各寡聚化合物之寡核苷酸可包括非互補之懸垂核苷。 IV. 反義活性
在某些實施例中,寡聚化合物及寡聚雙鏈體能夠雜交至靶核酸,從而產生至少一種反義活性;此類寡聚化合物及寡聚雙鏈體為反義化合物。在某些實施例中,當在標準細胞檢定中反義化合物使靶核酸之量或活性減少或抑制25%或更大時,該等反義化合物具有反義活性。在某些實施例中,反義化合物選擇性地影響一或多個靶核酸。此類反義化合物包含核鹼基序列,該核鹼基序列雜交至一或多個靶核酸,從而產生一或多種所需反義活性,且不雜交至一或多個非靶核酸或不以產生顯著非所需反義活性之方式雜交至一或多個非靶核酸。
在某些反義活性中,反義化合物與靶核酸之雜交引起使靶核酸裂解之蛋白質募集。舉例而言,某些反義化合物引起RNase H介導之靶核酸裂解。RNase H為使RNA:DNA雙鏈體之RNA股裂解之細胞核酸內切酶。此種RNA:DNA雙鏈體中之DNA無需為未經修飾DNA。在某些實施例中,本文描述足夠「類DNA」以引發RNase H活性之反義化合物。在某些實施例中,容許間隙聚體之間隙中之一或多個非類DNA核苷。
在某些反義活性中,將反義化合物或反義化合物部分負載至RNA誘導之緘黙化複合體(RISC)中,最終引起靶核酸裂解。舉例而言,某些反義化合物引起靶核酸由阿爾戈蛋白(Argonaute)裂解。負載至RISC中之反義化合物為RNAi化合物。RNAi化合物可為雙股(siRNA)或單股(ssRNA)。
在某些實施例中,反義化合物與靶核酸之雜交不引起使彼靶核酸裂解之蛋白質募集。在某些實施例中,反義化合物與靶核酸之雜交引起靶核酸之剪接改變。在某些實施例中,反義化合物與靶核酸之雜交引起靶核酸與蛋白質或其他核酸之間的結合相互作用受抑制。在某些實施例中,反義化合物與靶核酸之雜交引起靶核酸之轉譯改變。
可直接或間接觀測反義活性。在某些實施例中,反義活性之觀測或偵測涉及靶核酸或由此種靶核酸編碼之蛋白質之量變化、核酸或蛋白質之剪接變異體之比率變化及/或細胞或個體中之表型變化的觀測或偵測。 V. 某些靶核酸
在某些實施例中,寡聚化合物包含有包含與靶核酸互補之部分的寡核苷酸或由其組成。在某些實施例中,靶核酸為內源RNA分子。在某些實施例中,靶核酸編碼蛋白質。在某些此類實施例中,靶核酸係選自:成熟mRNA,及前mRNA,包括內含子區、外顯子區及未轉譯區。在某些實施例中,靶RNA為反義轉錄物。在某些實施例中,靶RNA為成熟mRNA。在某些實施例中,靶核酸為前mRNA。在某些此類實施例中,靶區全部在內含子內。在某些實施例中,靶區跨越內含子/外顯子交界。在某些實施例中,靶區至少50%在內含子內。在某些實施例中,靶核酸為反轉錄基因之RNA轉錄產物。在某些實施例中,靶核酸為非編碼RNA。在某些此類實施例中,靶非編碼RNA係選自:長非編碼RNA、短非編碼RNA、內含子RNA分子。 A. 與靶核酸之互補性 / 錯配
有可能引入錯配鹼基而不消除活性。舉例而言,Gautschi等人 (J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, 2001年3月)展示與bcl-2 mRNA具有100%互補性且與bcl-xL mRNA具有3個錯配之寡核苷酸減少活體外及活體內bcl-2及bcl-xL兩者之表現的能力。此外,此寡核苷酸活體內展示強效抗腫瘤活性。Maher及Dolnick (Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358, 1988)測試一系列串聯14核鹼基寡核苷酸以及分別由兩個或三個串聯寡核苷酸之序列組成之28及42核鹼基寡核苷酸在兔網狀紅血球檢定中阻止人類DHFR轉譯之能力。三個14核鹼基寡核苷酸中之每一者單獨能夠抑制轉譯,儘管相比28或42核鹼基寡核苷酸水準較低。
在某些實施例中,寡核苷酸在寡核苷酸之整個長度上與靶核酸互補。在某些實施例中,寡核苷酸與靶核酸99%、95%、90%、85%或80%互補。在某些實施例中,寡核苷酸在寡核苷酸之整個長度上與靶核酸至少80%互補且包含與靶核酸100%或完全互補之部分。在某些實施例中,具有完全互補性之部分長度為6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個核鹼基。
在某些實施例中,寡核苷酸相對於靶核酸包含一或多個錯配核鹼基。在某些實施例中,此種錯配減少針對標靶之反義活性,但針對非標靶之活性減少之量更大。因此,在某些實施例中,改善寡核苷酸之選擇性。在某些實施例中,錯配特異性地位於具有間隙聚體模體之寡核苷酸內。在某些實施例中,錯配自間隙區之5'端處於1位、2位、3位、4位、5位、6位、7位或8位。在某些實施例中,錯配自間隙區之3'端處於9位、8位、7位、6位、5位、4位、3位、2位、1位。在某些實施例中,錯配自翼區之5'端處於1位、2位、3位或4位。在某些實施例中,錯配自翼區之3'端處於4位、3位、2位或1位。 B.   FXII
在某些實施例中,寡聚化合物包含與靶核酸互補之寡核苷酸或其部分或由該寡核苷酸或其部分組成,其中靶核酸為FXII核酸。在某些實施例中,FXII核酸具有人類FXII mRNA序列,本文中指定為SEQ ID NO: 1 (ENSEMBL ID ENST00000253496.3,來自ENSEMBL版本99:2020年1月)。在某些實施例中,FXII核酸具有人類 F12基因體序列,本文中指定為SEQ ID NO: 2 (ENSEMBL ID ENSG00000131187.9,來自ENSEML版本99:2020年1月,人類參考匯編版本GRCh38.p13,位於自位置177,402,140至177,409,576之染色體5之反向股上)。在某些實施例中,FXII核酸具有人類 F12基因體序列,本文中指定為SEQ ID NO. 3 (自核苷酸177399001至177413000截短之GENBANK寄存編號NC_000005.10之補體)。在某些實施例中,FXII核酸具有人類FXII mRNA序列,本文中指定為SEQ ID NO: 4 (GENBANK寄存編號NM_000505.3)。
在某些實施例中,與SEQ ID NO: 1-4中之任一者互補之寡聚化合物能夠減少細胞中之FXII RNA。在某些實施例中,與SEQ ID NO: 1-4中之任一者互補之寡聚化合物能夠減少細胞中之FXII蛋白質。在某些實施例中,細胞在活體外。在某些實施例中,細胞在個體中。在某些實施例中,與SEQ ID NO: 1-4中之任一者互補之寡聚化合物當向個體投與時能夠改善血栓栓塞性疾患之一或多種症狀。在某些實施例中,血栓栓塞性疾患為深靜脈血栓、靜脈血栓、動脈血栓、肺栓塞、心肌梗塞或中風。在某些實施例中,症狀係選自疼痛、呼吸短促、心臟灼熱、冷汗、疲勞、頭暈、暈眩、腫脹、痛痙及死亡。
在某些實施例中,與SEQ ID NO: 1-4中之任一者互補之寡聚化合物能夠使活體外FXII RNA之可偵測量減少至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或至少90%。在某些實施例中,與SEQ ID NO: 1-4中之任一者互補之寡聚化合物能夠使活體外FXII蛋白質之可偵測量減少至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或至少90%。在某些實施例中,與SEQ ID NO: 1-4中之任一者互補之寡聚化合物能夠使個體之生物樣品中之FXII RNA之可偵測量減少至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或至少90%。在某些實施例中,與SEQ ID NO: 1-4中之任一者互補之寡聚化合物能夠使個體之生物樣品中之FXII蛋白質之可偵測量減少至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或至少90%。在某些實施例中,生物樣品包含個體之血液、血漿/血清或細胞。 VI. 某些醫藥組合物
在某些實施例中,本文描述包含一或多種寡聚化合物之醫藥組合物。在某些實施例中,一或多種寡聚化合物各自由經修飾寡核苷酸組成。在某些實施例中,醫藥組合物包含醫藥學上可接受之稀釋劑或載劑。在某些實施例中,醫藥組合物包含無菌鹽水溶液及一或多種寡聚化合物或由其組成。在某些實施例中,無菌鹽水為醫藥級鹽水。在某些實施例中,醫藥組合物包含一或多種寡聚化合物及無菌水或由其組成。在某些實施例中,無菌水為醫藥級水。在某些實施例中,醫藥組合物包含一或多種寡聚化合物及磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)或由其組成。在某些實施例中,無菌PBS為醫藥級PBS。在某些實施例中,醫藥組合物包含一或多種寡聚化合物及人工腦脊髓液或由其組成。在某些實施例中,人工腦脊髓液為醫藥級。
在某些實施例中,醫藥組合物包含經修飾寡核苷酸及人工腦脊髓液。在某些實施例中,醫藥組合物由經修飾寡核苷酸及人工腦脊髓液組成。在某些實施例中,醫藥組合物基本上由經修飾寡核苷酸及人工腦脊髓液組成。在某些實施例中,人工腦脊髓液為醫藥級。
在某些實施例中,醫藥組合物包含一或多種寡聚化合物及一或多種賦形劑。在某些實施例中,賦形劑係選自水、鹽溶液、乙醇、聚乙二醇、明膠、乳糖、澱粉酶、硬脂酸鎂、滑石、矽酸、黏性石蠟、羥甲基纖維素及聚乙烯吡咯啶酮。
在某些實施例中,寡聚化合物可與醫藥學上可接受之活性及/或惰性物質混合以用於製備醫藥組合物或調配物。用於調配醫藥組合物之組合物及方法視許多準則而定,包括但不限於投藥途徑、疾病程度或欲投與之劑量。
在某些實施例中,包含寡聚化合物之醫藥組合物涵蓋寡聚化合物之任何醫藥學上可接受之鹽、寡聚化合物之酯或此類酯之鹽。在某些實施例中,包含有包含一或多種寡核苷酸之寡聚化合物之醫藥組合物在向個體(包括人類)投與後,能夠(直接或間接)提供生物活性代謝物或其殘餘物。因此,舉例而言,本揭示案亦針對寡聚化合物之醫藥學上可接受之鹽、前藥、此類前藥之醫藥學上可接受之鹽及其他生物等效物。適合之醫藥學上可接受之鹽包括但不限於鈉鹽及鉀鹽。在某些實施例中,前藥包含一或多個附接至寡核苷酸之接合基團,其中該接合基團在體內由內源核酸酶裂解。
脂質部分已在多種方法中用於核酸療法中。在某些此類方法中,將核酸,諸如寡聚化合物引入預形成之脂質體或由陽離子脂質與中性脂質之混合物製成之脂質複合體(lipoplex)中。在某些方法中,在不存在中性脂質之情況下形成與單陽離子或聚陽離子脂質之DNA複合體。在某些實施例中,選擇脂質部分以增加醫藥劑向特定細胞或組織之分佈。在某些實施例中,選擇脂質部分以增加醫藥劑向脂肪組織之分佈。在某些實施例中,選擇脂質部分以增加醫藥劑向肌肉組織之分佈。
在某些實施例中,醫藥組合物包含遞送系統。遞送系統之實例包括但不限於脂質體及乳液。某些遞送系統適用於製備某些醫藥組合物,包括包含疏水化合物之彼等。在某些實施例中,使用某些有機溶劑,諸如二甲亞砜。
在某些實施例中,醫藥組合物包含一或多種組織特異性遞送分子,其經設計以將一或多種本發明之醫藥劑遞送至特異性組織或細胞類型。舉例而言,在某些實施例中,醫藥組合物包括經組織特異性抗體包覆之脂質體。
在某些實施例中,醫藥組合物包含共溶劑系統。某些此類共溶劑系統包含例如苯甲醇、非極性表面活性劑、水混溶性有機聚合物及水相。在某些實施例中,此類共溶劑系統用於疏水化合物。此種共溶劑系統之非限制性實例為VPD共溶劑系統,其為包含3% w/v苯甲醇、8% w/v非極性表面活性劑Polysorbate 80™及65% w/v聚乙二醇300之絕對乙醇溶液。可相當大地改變此類共溶劑系統之比例,而不會顯著改變其溶解度及毒性特徵。此外,可改變共溶劑組分之身份:例如,可使用其他表面活性劑替代Polysorbate 80™;可改變聚乙二醇之分數大小;其他生物相容性聚合物可替換聚乙二醇,例如聚乙烯吡咯啶酮;且其他糖或多醣可取代右旋糖。
在某些實施例中,製備醫藥組合物以供經口投與。在某些實施例中,製備醫藥組合物以供經頰投與。在某些實施例中,製備醫藥組合物以供注射投與(例如靜脈內、皮下、肌肉內、鞘內(IT)、腦室內(ICV)等)。在某些此類實施例中,醫藥組合物包含載劑且在水溶液,諸如水或生理上相容緩衝液,諸如漢克氏溶液(Hanks's solution)、林格氏溶液(Ringer's solution)或生理鹽水緩衝液中調配。在某些實施例中,包括其他成分(例如有助於溶解度或充當防腐劑之成分)。在某些實施例中,使用適當液體載劑、懸浮劑及類似物製備可注射懸浮液。供注射用之某些醫藥組合物以單位劑型呈現,例如在安瓿中或多劑量容器中。供注射用之某些醫藥組合物為油性或水性媒劑中之懸浮液、溶液或乳液,且可含有調配劑,諸如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑。適合用於供注射用之醫藥組合物中之某些溶劑包括但不限於親脂溶劑及脂肪油,諸如芝麻油;合成脂肪酸酯,諸如油酸乙酯或甘油三酯;及脂質體。
在某些條件下,本文所揭示之某些化合物用作酸。儘管此類化合物可按質子化(游離酸)形式繪製或描述,或離子化且與陽離子(鹽)形式締合,但此類化合物之水溶液在此類形式之間平衡存在。舉例而言,水溶液中寡核苷酸之磷酸酯鍵聯在游離酸、陰離子及鹽形式之間平衡存在。除非另有指示,否則本文所述之化合物意欲包括所有此類形式。此外,某些寡核苷酸具有若干此類鍵聯,其中每一者處於平衡中。因此,溶液中之寡核苷酸以在多個位置處之所有形式之集合平衡存在。術語「寡核苷酸」意欲包括所有此類形式。所繪製之結構必然描繪單一形式。儘管如此,除非另有指示,否則此類繪圖同樣意欲包括相應形式。本文中,描繪化合物游離酸之結構後緊接有術語「或其鹽」明確包括完全或部分質子化/去質子化/與陽離子締合之所有此類形式。在某些情況下,鑑定一或多個特定陽離子。
在某些實施例中,經修飾寡核苷酸或寡聚化合物處於含鈉之水溶液中。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸或寡聚化合物處於含鉀之水溶液中。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸或寡聚化合物處於PBS中。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸或寡聚化合物處於水中。在某些此類實施例中,用NaOH及/或HCl調整溶液之pH以達到所需pH。 VII. 某些組合物1.    化合物編號1194357
在某些實施例中,化合物編號1194357表徵為由接合基團及經修飾寡核苷酸組成之寡聚化合物,其中該接合基團為經磷酸二酯鍵聯直接附接至經修飾寡核苷酸之5'端之THA-GalNAc 3,(THA-GalNAc 3)o;其中(THA-GalNAc 3)o由以下結構表示:
Figure 02_image034
; 其中該經修飾寡核苷酸為具有(自5'至3') GCGGAATCACCAAGGA之序列(以SEQ ID NO: 3379併入本文中)之3-10-3 cEt間隙聚體;其中核苷1-3及14-16中之每一者(自5'至3')包含cEt經修飾糖部分且核苷4-13中之每一者為2'-β-D-去氧核苷;其中各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯;且其中各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
在某些實施例中,化合物編號1194357由以下化學記法表示:(THA-GalNAc 3)o Gks mCks Gks Gds Ads Ads Tds mCds Ads mCds mCds Ads Ads Gks Gks Ak,其中: A = 腺嘌呤核鹼基, mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基, G = 鳥嘌呤核鹼基, T = 胸腺嘧啶核鹼基, k = cEt經修飾糖部分, d = 2'-β-D-去氧核糖基糖部分,且 s = 硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
在某些實施例中,提供根據以下化學記法之包含經修飾寡核苷酸及接合基團之寡聚化合物:(THA-GalNAc 3)o Gks mCks Gks Gds Ads Ads Tds mCds Ads mCds mCds Ads Ads Gks Gks Ak,其中: A = 腺嘌呤核鹼基, mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基, G = 鳥嘌呤核鹼基, T = 胸腺嘧啶核鹼基, k = cEt經修飾糖部分, d = 2'-β-D-去氧核糖基糖部分,且 s = 硫代磷酸酯核苷間鍵聯; 且其中(THA-GalNAc 3)o =
Figure 02_image034
在某些實施例中,化合物編號1194357由以下化學結構表示:
Figure 02_image001
(SEQ ID NO: 3379)。 結構 1. 化合物編號 1194357
在某些實施例中,化合物編號1194357之鈉鹽由以下化學結構表示:
Figure 02_image006
(SEQ ID NO: 3379)。 結構 2. 化合物編號 1194357 鈉鹽2. 化合物編號1270705
在某些實施例中,化合物編號1270705表徵為由接合基團及經修飾寡核苷酸組成之寡聚化合物;其中該接合基團為經磷酸二酯鍵聯直接附接至經修飾寡核苷酸之5'端之THA-GalNAc 3,(THA-GalNAc 3)o;其中(THA-GalNAc 3)o由以下結構表示:
Figure 02_image034
其中該經修飾寡核苷酸為具有(自5'至3') GCACUTTATTGAGTTC之序列(以SEQ ID NO: 5006併入本文中)之間隙聚體;其中核苷1-3及14-16中之每一者(自5'至3')包含cEt經修飾糖部分,核苷4及6-13中之每一者為2'-β-D-去氧核苷,且核苷5包含2'-O-甲基糖部分;其中各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯,且其中各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
在某些實施例中,化合物編號1270705由以下化學記法表示:(THA-GalNAc 3)o Gks mCks Aks mCds Uys Tds Tds Ads Tds Tds Gds Ads Gds Tks Tks mCk,其中: A = 腺嘌呤核鹼基, mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基, G = 鳥嘌呤核鹼基, T = 胸腺嘧啶核鹼基, U = 尿嘧啶核鹼基, k = cEt經修飾糖部分, y = 2'-O-甲基經修飾核糖基糖部分, d = 2'-β-D-去氧核糖基糖部分,且 s = 硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
在某些實施例中,提供根據以下化學記法之包含經修飾寡核苷酸及接合基團之寡聚化合物:(THA-GalNAc 3)o Gks mCks Aks mCds Uys Tds Tds Ads Tds Tds Gds Ads Gds Tks Tks mCk,其中: A = 腺嘌呤核鹼基, mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基, G = 鳥嘌呤核鹼基, T = 胸腺嘧啶核鹼基, U = 尿嘧啶核鹼基, k = cEt經修飾糖部分, y = 2'-O-甲基經修飾核糖基糖部分, d = 2'-β-D-去氧核糖基糖部分,且 s = 硫代磷酸酯核苷間鍵聯; 且其中(THA-GalNAc 3)o =
Figure 02_image034
在某些實施例中,化合物編號1270705由以下化學結構表示:
Figure 02_image008
(SEQ ID NO: 5006)。 結構 3. 化合物編號 1270705
在某些實施例中,化合物編號1270705之鈉鹽由以下化學結構表示:
Figure 02_image041
(SEQ ID NO: 5006)。 結構 4. 化合物編號 1270705 鈉鹽 VIII. 某些比較化合物
比較化合物編號1213029、1213030、1213034及1358035 (分別涉及化合物編號A-145667、A-145668、A-145676及A-145669)選作來自WO2017/120397 (以引用之方式併入本文中)之實例1之比較化合物。
在某些實施例中,化合物編號1213029 (其替代物(化合物A-145667)提供於WO2017/120397中)用作比較化合物,參見實例14。化合物編號1213029為間隙聚體,其具有(自5'至3') yyyyyddddddddddyyyyy之糖模體,其中各「y」代表2'-O-甲基糖部分且各「d」代表2'-β-D-去氧核糖基糖部分;具有(自5'至3') GAAUACCAAGGAGGGAAAG (SEQ ID NO: 5042)之序列,其中間隙之各「C」為5-甲基胞嘧啶;且其中各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
在某些實施例中,化合物編號1213030 (其替代物(化合物A-145668)提供於WO2017/120397中)用作比較化合物,參見實例14。化合物編號1213030為間隙聚體,其具有(自5'至3') yyyyyddddddddddyyyyy之糖模體,其中各「y」代表2'-O-甲基糖部分且各「d」代表2'-β-D-去氧核糖基糖部分;具有(自5'至3') UCUCACTGCGGAATCACCAA (SEQ ID NO: 5041)之序列,其中間隙之各「C」為5-甲基胞嘧啶;且其中各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
在某些實施例中,化合物編號1213034 (其替代物(化合物A-145676)提供於WO2017/120397中)用作比較化合物,參見實例14。化合物編號1213034為間隙聚體,其具有(自5'至3') yyyyyddddddddddyyyyy之糖模體,其中各「y」代表2'-O-甲基糖部分且各「d」代表2'-β-D-去氧核糖基糖部分;具有(自5'至3') CACUUTATTGAGTTCCUGCG (SEQ ID NO: 5039)之序列,其中間隙之各「C」為5-甲基胞嘧啶;且其中各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
在某些實施例中,化合物編號1358035 (其替代物(化合物A-145669)提供於WO2017/120397中)用作比較化合物,參見實例14。化合物編號1358035為間隙聚體,其具有(自5'至3') yyyyyddddddddddyyyyy之糖模體,其中各「y」代表2'-O-甲基糖部分且各「d」代表2'-β-D-去氧核糖基糖部分;具有(自5'至3') CCCCAGCCACTCTCTCACUG (SEQ ID NO: 5040)之序列,其中間隙之各「C」為5-甲基胞嘧啶;且其中各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
在某些實施例中,本文所述之化合物相對於WO2017/120397中所述之比較化合物更優越,此係因為其展示一或多種改善之特性,諸如活體外活性。
舉例而言,如本文所述,某些化合物,包括化合物編號1129485及化合物編號1213144,分別達到0.34及0.28之IC50值,而比較化合物化合物編號1213029、化合物編號1213030、化合物編號1213034及化合物編號1358035中之每一者分別達到>10、8.15、>10及8.59之IC50值(對於IC50值,參見實例14中之表154)。因此,在多劑量檢定中本文所述之某些化合物比比較化合物化合物編號1213029、化合物編號1213030、化合物編號1213034及化合物編號1358035更強效。
除化合物編號1194357包含接合基團以外,化合物編號1194357與化合物編號1129485相同;且除化合物編號1270705包含接合基團以外,化合物編號1270705與化合物編號1213144相同。因此,在多劑量檢定中化合物編號1129485及化合物編號1270705之未接合型式比比較化合物化合物編號1213029、化合物編號1213030、化合物編號1213034及化合物編號1358035更具活性。 IX. 某些熱點區
在某些實施例中,在下文所指定之範圍內之核鹼基包含FXII核酸之熱點區。在某些實施例中,與FXII核酸之熱點區互補之經修飾寡核苷酸活體外在標準細胞檢定中達到FXII RNA減少大於50%之平均值。 1.    SEQ ID NO: 1 之核鹼基 1,899-1,979
在某些實施例中,SEQ ID NO: 1之核鹼基1,899-1,979包含熱點區。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸與SEQ ID NO: 1之核鹼基1,899-1,979之一部分互補。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸長度為20個核鹼基。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸長度為16個核鹼基。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸為間隙聚體。在某些實施例中,間隙聚體為MOE間隙聚體。在某些實施例中,間隙聚體為cEt間隙聚體。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸之核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯及磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中,各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
SEQ ID NO: 92、156、270、271、345、346、420、421、496、497、571、572、653、654、728、729、802、803、877、951、1028、1103、1179、1253、1330、1407、1484、1560、1636、1710、1711、1784、1859、1860、1934、1935、2008、2009、2084、2085、2158、2232、2233、2307、2308、2393、2394、2395、2396、2397、2398、2461、2537、2538、2614、2615、2691、2692、2768、2769、2845、2846、2921、2922、2997、2998、3073、3074、3144、3145、3226、3227、3303、3304、3379、3380、3455、3456、3531、3607、3683、3759、3835、3911、4948、4949、4954、4955、4956、4957、4961、4965、4966、4967、4971、4972、4976、4994、4995、4996、4997、4998、4999、5024、5025、5026、5027、5028及5029之核鹼基序列與SEQ ID NO: 1之核鹼基1,899-1,979互補。
化合物編號:1125047、1125048、1125049、1125050、1125051、1125074、1125075、1125076、1125077、1125078、1129474、1129475、1129476、1129477、1129478、1129479、1129480、1129481、1129482、1129483、1129484、1129485、1129486、1129487、1129488、1129489、1129490、1129491、1129492、1129493、1129494、1129495、1129496、1129497、1129498、1129499、1129500、1129501、1129502、1129503、1129504、1129505、1129506、1131681、1131682、1131683、1131684、1131685、1131686、1131687、1131688、1131689、1131690、1131691、1131692、1131693、1131694、1131695、1131696、1131697、1131698、1131699、1131700、1131701、1131702、1131703、1131704、1131705、1131706、1131707、1131708、1131709、1131710、1131711、1131712、1131713、1131714、1131715、1131716、1131717、1131718、1131719、1131720、1131721、1131722、1131723、1131724、1131725、1206454、1206455、1206456、1206457、1206458、1206459、1206485、1206486、1206487、1206488、1206489、1206490、1206491、1206492、1206505、1206506、1206507、1206508、1206509、1206957、1206958、1206959、1206960、1206961、1206962、1206963、1206964、1206965、1206966、1206967、1206968、1206969、1206970、1206971、1206972、1206973、1206974、1206975、1206976、1206977、1206978、1206979、1206980、1206981、1206982、1206983、1206985、1206986、1206987、1206988、1207098、1207099、1207100、1207101、1207102、1207103、1207104、1207105、1207106、1207107、1207108、1207109、1207110、1207111、1207112、1207113、1207114、1207115、1207116、1207117、1207118、1207120、1207123、1207125、1207127、1207129、1207131、1207133、1207135、1207137、1207139、1207141、1207228、1207229、1207230、1207231、1207232、1207233、1207234、1207235、1207236、1207237、1207238、1207239、1207240、1207241、1207242、1207243、1207244、1207245、1207246、1207247、1207248、1207249、1207250、1207251、1207252、1207253、1207254、1207256、1207257、1207258、1207259、1207345、1207346、1207347、1207348、1207349、1207350、1207351、1207352、1207353、1207354、1207355、1207356、1207357、1207358、1207359、1207360、1207361、1207362、1207363、1207364、1207365、1207366、1207367、1207368、1207369、1207370、1207371、1207372、1207373、1207374、1207375、1207376、1207462、1207463、1207464、1207465、1207466、1207467、1207468、1207469、1207470、1207471、1207472、1207473、1207474、1207475、1207476、1207477、1207478、1207479、1207480、1207481、1207482、1207483、1207484、1207485、1207486、1207487、1207488、1207489、1207490、1207491、1207492、1207493、1213094、1213095、1213096、1213097、1213098、1213099、1213100、1213101、1213102、1213103、1213104、1213105、1213106、1213107、1213108、1213109、1213110、1213111、1213112、1213113、1213114、1213115、1213116、1213117、1213118、1213119、1213120、1213121、1213122、1213123、1213124、1213125、1213211、1213212、1213213、1213214、1213215、1213216、1213217、1213218、1213219、1213220、1213221、1213222、1213223、1213224、1213225、1213226、1213227、1213228、1213229、1213230、1213231、1213232、1213233、1213234、1213235、1213236、1213237、1213238、1213239、1213240、1213241及1213242之核鹼基序列與SEQ ID NO: 1之核鹼基1,899-1,979互補。
在某些實施例中,與SEQ ID NO: 1之核鹼基1,899-1,979互補之經修飾寡核苷酸活體外在標準細胞檢定中達到F12 mRNA減少78%之平均值。 2. SEQ ID NO: 1 之核鹼基 2,004-2,045
在某些實施例中,SEQ ID NO: 1之核鹼基2,004-2,045包含熱點區。在某些實施例中,經修飾寡核苷酸與SEQ ID NO: 1之核鹼基2,004-2,045互補。
SEQ ID NO: 95、159、162、163、164、165、347、422、498、573、953、1030、1105、1255、1332、1409、1486、1562、2309、2463、2540、2617、2694、2771、2848、2924、3000、3076、3147、3229、3306、3382、3457、3533、3609、3685、3761、3837、3913、5000、5001、5002、5003、5004、5005、5006、5031、5032、5033、5034、5035、5036及5037之核鹼基序列與SEQ ID NO: 1之核鹼基2,004-2,045互補。
化合物編號:462192、1125101、1125102、1125103、1125104、1129526、1129527、1129528、1129529、1129530、1129531、1129532、1129533、1129534、1129535、1129536、1129537、1129538、1129539、1129540、1129541、1129542、1129543、1129544、1129545、1131745、1131746、1131747、1131748、1131749、1131750、1131751、1131752、1131753、1131754、1131755、1131756、1131757、1131758、1131759、1131760、1131761、1131762、1131763、1206993、1206994、1206995、1206996、1206997、1206998、1206999、1207000、1207001、1207002、1207003、1207004、1207005、1207006、1207007、1207008、1207010、1207011、1207012、1207147、1207148、1207149、1207150、1207151、1207152、1207153、1207154、1207155、1207156、1207157、1207158、1207159、1207160、1207161、1207162、1207163、1207164、1207165、1207166、1207264、1207265、1207266、1207267、1207268、1207269、1207270、1207271、1207272、1207273、1207274、1207275、1207276、1207277、1207278、1207279、1207280、1207281、1207282、1207283、1207381、1207382、1207383、1207384、1207385、1207386、1207387、1207388、1207389、1207390、1207391、1207392、1207393、1207394、1207395、1207396、1207397、1207398、1207399、1207400、1207498、1207499、1207500、1207501、1207502、1207503、1207504、1207505、1207506、1207507、1207508、1207509、1207511、1207512、1207513、1207514、1207515、1207516、1207517、1213130、1213131、1213132、1213133、1213134、1213135、1213136、1213137、1213138、1213139、1213140、1213141、1213142、1213143、1213144、1213145、1213146、1213147、1213148、1213149、1213247、1213248、1213249、1213250、1213251、1213252、1213253、1213254、1213255、1213256、1213257、1213258、1213259、1213260、1213261、1213262、1213263、1213264、1213265及1213266之經修飾寡核苷酸與SEQ ID NO: 1之核鹼基2,004-2,045互補。
在某些實施例中,與SEQ ID NO: 1之核鹼基2,004-2,045互補之經修飾寡核苷酸活體外在標準細胞檢定中達到F12 mRNA減少80%之平均值。 X. 某些適應症
在某些實施例中,方法包括向患有血栓栓塞性疾患之個體投與本文所述之醫藥組合物。血栓栓塞性疾患包括但不限於心肌梗塞(MI)、中風、肢體缺血與壞死及靜脈血栓性栓塞(VTE),包括深靜脈血栓(DVT)及肺栓塞(PE)。
在某些實施例中,方法包括向具有發展血栓栓塞性疾患之風險因素之個體投與本文所述之醫藥組合物。在某些實施例中,風險因素為基因的、健康相關的或環境的或其組合。在某些實施例中,風險因素為手術、惡性病、懷孕、衰老、使用口服避孕藥、不動(包括旅行相關不動)、敗血症、具有機械心臟瓣膜、心臟瓣膜疾病、心房震顫、動脈粥樣硬化、抗磷脂症候群、遺傳性凝血障礙(例如因子V Leiden)或獲得性血栓前凝血障礙。鑑定具有發展血栓栓塞性疾患之風險因素之個體可藉由評估個體之醫學史及/或藉由進行標準臨床測試或評價來實現。
在某些實施例中,方法包括向已鑑定為需要抗凝血療法之個體投與本文所述之醫藥組合物。此類個體之非限制性實例包括經歷大型整形手術(例如髖/膝置換或髖骨折手術)之個體及具有心房震顫之個體。 非限制性揭示案及援引併入
本文所列之文獻及專利公開案中之每一者以全文引用之方式併入。
儘管本文所述之某些化合物、組合物及方法已根據某些實施例具體地描述,但以下實例僅用以說明本文所述之化合物且不欲限制其。本申請案中所列舉之參考文獻、GenBank寄存編號及類似文獻中之每一者以全文引用之方式併入本文中。
儘管本文檔附隨之序列表將各序列按需要鑑定為「RNA」或「DNA」,但實際上,彼等序列可用化學修飾之任何組合來修飾。熟習此項技術者將易於了解,作為「RNA」或「DNA」之此種命名以描述經修飾寡核苷酸在某些情況下為任意的。舉例而言,包含有包含2'-OH糖部分及胸腺嘧啶鹼基之核苷之寡核苷酸可描述為具有經修飾糖(2'-OH替代DNA之一個2'-H)之DNA或具有經修飾鹼基(胸腺嘧啶(甲基化尿嘧啶)替代RNA之尿嘧啶)之RNA。因此,本文所提供之核酸序列,包括但不限於序列表中之彼等,意欲涵蓋含有天然或經修飾RNA及/或DNA之任何組合之核酸,包括但不限於具有經修飾核鹼基之此類核酸。進一步舉例且不具限制性,具有核鹼基序列「ATCGATCG」之寡聚化合物涵蓋具有此種核鹼基序列之任何寡聚化合物,無論經修飾抑或未經修飾,包括但不限於包含RNA鹼基之此類化合物,諸如具有序列「AUCGAUCG」之彼等,及具有一些DNA鹼基及一些RNA鹼基,諸如「AUCGATCG」之彼等,及具有其他經修飾核鹼基,諸如「AT mCGAUCG」之寡聚化合物,其中 mC指示在5位包含甲基之胞嘧啶鹼基。
本文所述之某些化合物(例如經修飾寡核苷酸)具有一或多個不對稱中心且由此產生對映體、非對映體及其他立體異構構型,可依據絕對立體化學定義為( R)或( S)、α或β (諸如對於糖變旋異構體)、或(D)或(L) (諸如對於胺基酸),等等。繪製或描述於具有某些立體異構構型之本文所提供之化合物僅包括所指示之化合物。除非另有指定,否則以未定義之立體化學繪製或描述之本文所提供之化合物包括所有此類可能異構體,包括其無規立構及光學純形式。同樣地,除非另有指示,否則本文中亦包括化合物之互變異構形式。除非另有指示,否則本文所述之化合物意欲包括相應鹽形式。
本文所述之化合物包括其中一或多個原子經指定元素之非放射性同位素或放射性同位素置換之變化。舉例而言,本文中包含氫原子之化合物涵蓋 1H氫原子中之每一者之所有可能氘取代。本文中之化合物所涵蓋之同位素取代包括但不限於: 2H或 3H替代 1H, 13C或 14C替代 12C, 15N替代 14N, 17O或 18O替代 16O,及 33S、 34S、 35S或 36S替代 32S。在某些實施例中,非放射性同位素取代可向有益於用作治療或研究工具之寡聚化合物賦予新特性。在某些實施例中,放射性同位素取代可使得化合物適合於研究或診斷目的,諸如成像。 實例
以下實例說明本揭示案之某些實施例且不具限制性。此外,在提供特定實施例之情況下,本發明者已預期彼等特定實施例之通用應用。舉例而言,具有特定模體之寡核苷酸之揭示內容為具有相同或相似模體之額外寡核苷酸提供合理支持。又,舉例而言,除非另有指示,否則在特定高親和力修飾在特定位置出現之情況下,在同一位置之其他高親和力修飾視為適合的。 實例 1 :活體外單劑量 5-10-5 MOE 間隙聚體對人類 FXII RNA 之影響
合成與FXII核酸互補之經修飾寡核苷酸且活體外測試其對FXII RNA水準之影響。在一系列實驗中使用所指示之培養條件測試經修飾寡核苷酸。各獨立實驗之結果呈現於以下獨立表格中。
以下表格中之經修飾寡核苷酸為5-10-5 MOE間隙聚體(亦即,其具有在各側上由各自包含五個2'-MOE核苷之翼側接之十個2'-去氧核苷之中心區)。間隙聚體之模體為(自5'至3'):eeeeeddddddddddeeeee;其中「d」代表2'-β-D-去氧核糖基糖部分,且『e』代表2'-MOE糖部分。貫穿各經修飾寡核苷酸之核苷間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。貫穿各經修飾寡核苷酸之所有胞嘧啶核鹼基為5-甲基胞嘧啶。
「起始位點」指示與經修飾寡核苷酸互補之靶序列之5'-最末核苷。「終止位點」指示與經修飾寡核苷酸互補之靶序列之3'-最末核苷。如以下表格中所示,經修飾寡核苷酸與一或多個人類FXII靶序列100%互補,該等靶序列包括人類FXII mRNA序列,本文中指定為SEQ ID NO: 1 (ENSEMBL ID ENST00000253496.3,來自ENSEMBL版本99:2020年1月);人類FXII基因體序列,本文中指定為SEQ ID NO: 2 (ENSEMBL ID ENSG00000131187.9,來自ENSEML版本99:2020年1月);人類FXII基因體序列,本文中指定為SEQ ID NO: 3 (自核苷酸177399001至177413000截短之GENBANK寄存編號NC_000005.10之補體);及人類FXII mRNA序列,本文中指定為SEQ ID NO: 4 (GENBANK寄存編號NM_000505.3)。『N/A』指示經修飾寡核苷酸不以100%互補性與彼特定靶序列互補。
如以下表格中所指示,用脂質轉染劑(lipofectin)、寡聚轉染胺(oligofectamine)或藉由電穿孔轉染經培養之Huh7細胞。在一些情況下,使用脂質轉染劑以120 nM經修飾寡核苷酸轉染密度為8,000個細胞/孔之Huh7細胞。在其他情況下,使用寡聚轉染胺以200nM經修飾寡核苷酸轉染密度為5,000個細胞/孔之Huh7細胞。在其他情況下,使用電穿孔以5000nM經修飾寡核苷酸轉染密度為20,000個細胞/孔之Huh7細胞。約24小時處理時段後,自細胞中分離RNA且藉由定量即時RTPCR量測FXII RNA水準。人類引子探針組RTS2992 (正向序列GTCAACACTTTCGATTCCACCTT,本文中指定為SEQ ID NO: 5;反向序列TCCCCGGTGACAGTGAGAAC,本文中指定為SEQ ID NO: 6;探針序列AAGCCCCCAAGGAGCATAAGTACAAAGCTG,本文中指定為SEQ ID NO: 7)或人類引子探針組RTS40528 (正向序列GTGCACGGATCCTCCATC,本文中指定為SEQ ID NO: 8;反向序列CAGCTTGGTCCTCACACAC,本文中指定為SEQ ID NO: 9;探針序列AATCACCCTGGCACGCATCG,本文中指定為SEQ ID NO: 10)用於量測RNA水準。如由RIBOGREEN®所量測,將FXII RNA水準針對總RNA含量正規化。FXII RNA之減少在以下表格中呈現為FXII RNA相對於未經處理之對照細胞中之量的百分比(% UTC)。符號「 」指示經修飾寡核苷酸與引子探針組之擴增子區內之靶轉錄物互補。在此類情況下,必須進行使用替代性引子探針之額外檢定以準確評價此類經修飾寡核苷酸之效力及功效。 1. 具有完全 PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,脂質轉染劑,120nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image043
Figure 02_image045
Figure 02_image047
2. 具有完全 PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,寡聚轉染胺,200nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image049
Figure 02_image051
Figure 02_image053
3. 具有完全 PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,寡聚轉染胺,200nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image055
Figure 02_image057
Figure 02_image059
4. 具有完全 PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image061
Figure 02_image063
Figure 02_image065
5. 具有完全 PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image067
Figure 02_image069
6. 具有完全 PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image071
Figure 02_image073
7. 具有完全 PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image075
Figure 02_image077
8. 具有完全 PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image079
Figure 02_image081
9. 具有完全 PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,寡聚轉染胺,200nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image083
10. 具有完全 PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image085
11. 具有完全 PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image087
實例 2 :活體外單劑量 5-10-5 MOE 間隙聚體對人類 FXII RNA 之影響
合成與FXII核酸互補之經修飾寡核苷酸且活體外測試其對FXII RNA水準之影響。在一系列實驗中使用類似培養條件測試經修飾寡核苷酸。各獨立實驗之結果呈現於以下獨立表格中。
以下表格中之經修飾寡核苷酸為5-10-5 MOE間隙聚體(亦即,其具有在各側上由各自包含五個2'-MOE核苷之翼側接之十個2'-去氧核苷之中心區)。間隙聚體之模體為(自5'至3'):eeeeeddddddddddeeeee;其中「d」代表2'-β-D-去氧核糖基糖部分,且『e』代表2'-MOE糖部分。間隙聚體之核苷間鍵聯模體為(自5'至3'):soooossssssssssooss;其中『o』代表磷酸二酯核苷間鍵聯且『s』代表硫代磷酸酯核苷間鍵聯。各胞嘧啶殘基為5-甲基胞嘧啶。
「起始位點」指示與經修飾寡核苷酸互補之靶序列之5'-最末核苷。「終止位點」指示與經修飾寡核苷酸互補之靶序列之3'-最末核苷。如以下表格中所示,經修飾寡核苷酸與人類FXII靶序列中之一或多者100%互補,該等靶序列包括人類FXII mRNA序列,本文中指定為SEQ ID NO: 1 (ENSEMBL ID ENST00000253496.3,來自ENSEMBL版本99:2020年1月);人類FXII基因體序列,本文中指定為SEQ ID NO: 2 (ENSEMBL ID ENSG00000131187.9,來自ENSEMBL版本99:2020年1月);人類FXII基因體序列,本文中指定為SEQ ID No. 3 (自核苷酸177399001至177413000截短之GENBANK寄存編號NC_000005.10之補體);及人類FXII mRNA序列,本文中指定為SEQ ID No: 4 (GENBANK寄存編號NM_000505.3)。『N/A』指示經修飾寡核苷酸不以100%互補性與彼特定靶序列互補。
使用電穿孔以5000nM或2000nM經修飾寡核苷酸轉染密度為20,000個細胞/孔之經培養Huh7細胞。約24小時處理時段後,自細胞中分離RNA且藉由定量即時RTPCR量測FXII RNA水準。人類引子探針組RTS40528 (在本文中描述於上文)用於量測RNA水準。如由RIBOGREEN®所量測,將FXII RNA水準針對總RNA含量正規化。FXII RNA之減少在以下表格中呈現為FXII RNA相對於未經處理之對照細胞中之量的百分比(% UTC)。符號「 」指示經修飾寡核苷酸與引子探針組之擴增子區內之靶轉錄物互補。在此類情況下,必須進行使用替代性引子探針之額外檢定以準確評價此類經修飾寡核苷酸之效力及功效。 12. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image089
Figure 02_image091
13. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image093
Figure 02_image095
14. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image097
Figure 02_image099
15. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image101
Figure 02_image103
16. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image105
Figure 02_image107
17. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image109
Figure 02_image111
18. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image113
Figure 02_image115
19. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image117
Figure 02_image119
20. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image121
Figure 02_image123
21. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image125
Figure 02_image127
22. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image129
Figure 02_image131
23. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image133
Figure 02_image135
24. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image137
Figure 02_image139
25. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image141
Figure 02_image143
26. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image145
Figure 02_image147
27. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image149
Figure 02_image151
28. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image153
Figure 02_image155
29. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image157
Figure 02_image159
30. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image161
Figure 02_image163
31. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image165
Figure 02_image167
32. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image169
Figure 02_image171
33. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image173
Figure 02_image175
34. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image177
Figure 02_image179
35. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image181
Figure 02_image183
36. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image185
Figure 02_image187
37. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image189
Figure 02_image191
38. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image193
Figure 02_image195
39. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image197
Figure 02_image199
40. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,2000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image201
Figure 02_image203
41. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image205
42. 具有混合 PO/PS 核苷間鍵聯之 5-10-5 MOE 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,5000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image207
實例 3 :活體外單劑量 3-10-3 cET 間隙聚體對人類 FXII RNA 之影響
合成與FXII核酸互補之經修飾寡核苷酸且活體外測試其對FXII RNA水準之影響。在一系列實驗中使用類似培養條件測試經修飾寡核苷酸。各獨立實驗之結果呈現於以下獨立表格中。
以下表格中之經修飾寡核苷酸為3-10-3 cEt間隙聚體(亦即,其具有在各側上由各自包含三個cEt經修飾核苷之翼側接之十個2'-去氧核苷之中心區)。貫穿各經修飾寡核苷酸之核苷間鍵聯為硫代磷酸酯(P=S)鍵聯。貫穿各經修飾寡核苷酸之所有胞嘧啶核鹼基為5-甲基胞嘧啶。
「起始位點」指示與經修飾寡核苷酸互補之靶序列之5'-最末核苷。「終止位點」指示與經修飾寡核苷酸互補之靶序列之3'-最末核苷。如以下表格中所示,經修飾寡核苷酸與人類FXII靶序列中之一或多者100%互補,該等靶序列包括人類FXII mRNA序列,本文中指定為SEQ ID NO: 1 (ENSEMBL ID ENST00000253496.3,來自ENSEMBL版本99:2020年1月);人類FXII基因體序列,本文中指定為SEQ ID NO: 2 (ENSEMBL ID ENSG00000131187.9,來自ENSEML版本99:2020年1月);人類FXII基因體序列,本文中指定為SEQ ID No. 3 (自核苷酸177399001至177413000截短之GENBANK寄存編號NC_000005.10之補體);及人類FXII mRNA序列,本文中指定為SEQ ID No: 4 (GENBANK寄存編號NM_000505.3)。『N/A』指示經修飾寡核苷酸不以100%互補性與彼特定靶序列互補。
使用電穿孔以2000nM或3000nM經修飾寡核苷酸轉染密度為20,000個細胞/孔之經培養Huh7細胞。約24小時處理時段後,自細胞中分離RNA且藉由定量即時RTPCR量測FXII RNA水準。人類引子探針組RTS40528 (在本文中描述於上文)用於量測RNA水準。如由RIBOGREEN®所量測,將FXII RNA水準針對總RNA含量正規化。FXII RNA之減少在以下表格中呈現為FXII RNA相對於未經處理之對照細胞中之量的百分比(% UTC)。符號「 」指示經修飾寡核苷酸與引子探針組之擴增子區內之靶轉錄物互補。在此類情況下,必須進行使用替代性引子探針之額外檢定以準確評價此類經修飾寡核苷酸之效力及功效。 43. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image209
Figure 02_image211
44. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image213
Figure 02_image215
45. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image217
Figure 02_image219
46. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image221
Figure 02_image223
47. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image225
Figure 02_image227
48. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image229
Figure 02_image231
49. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image233
Figure 02_image235
50. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image237
Figure 02_image239
51. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image241
Figure 02_image243
52. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image245
Figure 02_image247
53. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image249
Figure 02_image251
54. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image253
Figure 02_image255
55. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image257
Figure 02_image259
56. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image261
Figure 02_image263
57. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image265
Figure 02_image267
Figure 02_image269
58. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image271
Figure 02_image273
Figure 02_image275
59. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image277
Figure 02_image279
Figure 02_image281
60. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image283
Figure 02_image285
61. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image287
Figure 02_image289
62. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image291
Figure 02_image293
63. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,2000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image295
Figure 02_image297
64. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,2000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image299
Figure 02_image301
65. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,2000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image303
Figure 02_image305
66. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,2000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image307
Figure 02_image309
67. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,2000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image311
Figure 02_image313
68. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,2000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image315
Figure 02_image317
69. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,2000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image319
Figure 02_image321
70. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,2000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image323
Figure 02_image325
71. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,2000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image327
Figure 02_image329
72. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,2000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image331
Figure 02_image333
73. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,2000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image335
Figure 02_image337
74. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,2000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image339
Figure 02_image341
75. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,2000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image343
Figure 02_image345
76. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image347
77. 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 3-10-3 cEt 間隙聚體對 FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,3000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image349
實例 4 :活體外單劑量之具有混合糖修飾及混合骨架之經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之影響
合成與FXII核酸互補之經修飾寡核苷酸且活體外測試其對FXII RNA水準之影響。在一系列實驗中使用類似培養條件測試經修飾寡核苷酸。各獨立實驗之結果呈現於以下獨立表格中。
以下表格中之化學記法欄指定經修飾寡核苷酸之特定化學記法;其中下標『d』代表2'-β-D-去氧核糖基糖部分,下標『e』代表2'-MOE糖部分,下標『y』代表2'-O-甲基糖部分,下標『k』代表cEt經修飾糖部分,下標『s』代表硫代磷酸酯核苷間鍵聯,下標『o』代表磷酸二酯核苷間鍵聯,且在胞嘧啶殘基( mC)之前的下標『m』代表5-甲基胞嘧啶。
「起始位點」指示與經修飾寡核苷酸互補之靶序列之5'-最末核苷。「終止位點」指示與經修飾寡核苷酸互補之靶序列之3'-最末核苷。如以下表格中所示,經修飾寡核苷酸與人類FXII靶序列中之一或多者100%互補,該等靶序列包括人類FXII mRNA序列,本文中指定為SEQ ID NO: 1 (ENSEMBL ID ENST00000253496.3,來自ENSEMBL版本99:2020年1月);人類FXII基因體序列,本文中指定為SEQ ID NO: 2 (ENSEMBL ID ENSG00000131187.9,來自ENSEML版本99:2020年1月,人類參考匯編版本GRCh38.p13,位於自位置177,402,140至177,409,576之染色體5之反向股上);人類FXII基因體序列,本文中指定為SEQ ID No. 3 (自核苷酸177399001至177413000截短之GENBANK寄存編號NC_000005.10之補體);及人類FXII mRNA序列,本文中指定為SEQ ID No: 4 (GENBANK寄存編號NM_000505.3)。『N/A』指示經修飾寡核苷酸不以100%互補性與彼特定靶序列互補。
使用電穿孔以2000nM或4000 nM經修飾寡核苷酸轉染密度為20,000個細胞/孔之經培養Huh7細胞。約24小時處理時段後,自細胞中分離RNA且藉由定量即時RTPCR量測FXII RNA水準。人類引子探針組RTS40528 (在本文中描述於上文)用於量測RNA水準。如由RIBOGREEN®所量測,將FXII RNA水準針對總RNA含量正規化。FXII RNA之減少在以下表格中呈現為FXII RNA相對於未經處理之對照細胞中之量的百分比(% UTC)。符號「 」指示經修飾寡核苷酸與引子探針組之擴增子區內之靶轉錄物互補。在此類情況下,必須進行使用替代性引子探針之額外檢定以準確評價此類經修飾寡核苷酸之效力及功效。 78. FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,4000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image351
Figure 02_image353
Figure 02_image355
Figure 02_image357
79. FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,4000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image359
Figure 02_image361
Figure 02_image363
Figure 02_image365
80. FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,4000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image367
Figure 02_image369
Figure 02_image371
Figure 02_image373
81. FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,4000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image375
Figure 02_image377
Figure 02_image379
Figure 02_image381
82. FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,4000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image383
Figure 02_image385
Figure 02_image387
Figure 02_image389
83. FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,4000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image391
Figure 02_image393
Figure 02_image395
Figure 02_image397
84. FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,4000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image399
Figure 02_image401
Figure 02_image403
Figure 02_image405
85. FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,4000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image407
Figure 02_image409
Figure 02_image411
Figure 02_image413
86. FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,2000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image415
Figure 02_image417
Figure 02_image419
Figure 02_image421
87. FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,2000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image423
Figure 02_image425
Figure 02_image427
Figure 02_image429
88. FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,2000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image431
Figure 02_image433
Figure 02_image435
Figure 02_image437
89. FXII RNA 之減少(Huh7,電穿孔,2000nM經修飾寡核苷酸)
Figure 02_image439
Figure 02_image441
Figure 02_image443
Figure 02_image445
實例 5 :活體外經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
選擇展現FXII RNA之顯著活體外抑制之以上研究中所述之某些經修飾寡核苷酸且在HepG2細胞中在各種劑量下測試。
在一系列實驗中使用相同培養條件測試經修飾寡核苷酸。各實驗之結果呈現於以下所示之獨立表格中。使用脂質轉染劑以稀釋至如以下表格中所指定之不同濃度之經修飾寡核苷酸轉染密度為10,000個細胞/孔之經培養HepG2細胞。約24小時處理時段後,如先前所述使用人類FXII引子-探針組RTS2976_MGB (正向序列CCGGGAGCACACCGTTT,本文中指定為SEQ ID NO: 11;反向序列GGAATCACCAAGGAGGGAAAG,本文中指定為SEQ ID NO: 12;探針序列CTGATTGCTCAGGGACT,本文中指定為SEQ ID NO: 13)量測FXII RNA水準。如由RIBOGREEN®所量測,將FXII RNA水準針對總RNA正規化。FXII RNA之減少在以下表格中呈現為FXII RNA相對於未經處理之對照細胞中之量的百分比(% UTC)。
在excel中對數據之對數/線性曲線使用線性回歸計算各經修飾寡核苷酸之半最大抑制濃度(IC 50)且亦呈現於以下表格中。 90. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image447
實例 6 :活體外經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
選擇展現FXII RNA之顯著活體外抑制之以上研究中所述之某些經修飾寡核苷酸且在Huh7細胞中在各種劑量下測試。
在一系列實驗中使用相同培養條件測試經修飾寡核苷酸。各實驗之結果呈現於以下所示之獨立表格中。使用寡聚轉染胺以稀釋至如以下表格中所指定之不同濃度之經修飾寡核苷酸轉染密度為5,000個細胞/孔之經培養Huh7細胞。約24小時處理時段後,如先前所述使用人類FXII引子-探針組RTS2992量測FXII RNA水準。如由RIBOGREEN®所量測,將FXII RNA水準針對總RNA正規化。FXII RNA之減少在以下表格中呈現為FXII RNA相對於未經處理之對照細胞中之量的百分比(% UTC)。
在excel中對數據之對數/線性曲線使用線性回歸計算各經修飾寡核苷酸之半最大抑制濃度(IC 50)且亦呈現於以下表格中。符號「 」指示經修飾寡核苷酸與引子探針組之擴增子區內之靶轉錄物互補。在此類情況下,必須進行使用替代性引子探針之額外檢定以準確評價此類經修飾寡核苷酸之效力及功效。 91. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image449
92. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image451
實例 7 :活體外經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
選擇展現FXII RNA之顯著活體外抑制之以上研究中所述之某些經修飾寡核苷酸且在Huh7細胞中在各種劑量下測試。
在一系列實驗中使用相同培養條件測試經修飾寡核苷酸。各實驗之結果呈現於以下所示之獨立表格中。使用電穿孔以稀釋至如以下表格中所指定之不同濃度之經修飾寡核苷酸轉染密度為20,000個細胞/孔之經培養Huh7細胞。約24小時處理時段後,如先前所述使用人類FXII引子-探針組RTS40528量測FXII RNA水準。如由RIBOGREEN®所量測,將FXII RNA水準針對總RNA正規化。FXII RNA之減少在以下表格中呈現為FXII RNA相對於未經處理之對照細胞中之量的百分比(% UTC)。
在excel中對數據之對數/線性曲線使用線性回歸計算各經修飾寡核苷酸之半最大抑制濃度(IC 50)且亦呈現於以下表格中。 93. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image453
94. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image455
95. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image457
96. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image459
97. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image461
98. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image463
99. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image465
100. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image467
101. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image469
102. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image471
103. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image473
104. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image475
105. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image477
106. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image479
107. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image481
108. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image483
109. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image485
110. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image487
111. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image489
112. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image491
113. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image493
114. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image495
115. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image497
116. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image499
117. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image501
實例 8 :與人类 FXII 核酸互補之寡聚化合物之設計
如以下表格中所指示設計寡聚化合物。藉由在經修飾寡核苷酸之5'端添加THA-C6-GalNAc3接合物(以下表格中指定為[THA-GalNAc])或藉由在經修飾寡核苷酸之3'端添加3'-THA-C6-GalNAc羥脯胺酸PO接合物(以下表格中指定為3'- HPPO-GalNAc)來進一步修飾以上實例中所述之經修飾寡核苷酸(母體化合物)。THA-GalNAc由以下結構表示,其中磷酸酯基附接至5'核苷之5'-氧原子:
Figure 02_image503
3'- HPPO-GalNAc由以下結構表示,其中磷酸酯基附接至3'核苷之3'-氧原子:
Figure 02_image032
以下表格中之化學記法欄指定經修飾寡核苷酸之特定化學記法;其中下標『d』代表2'-β-D-去氧核糖基糖部分,下標『e』代表2'-MOE糖部分,下標『y』代表2'- O-甲基糖部分,下標『k』代表cEt經修飾糖部分,下標『s』代表硫代磷酸酯核苷間鍵聯,下標『o』代表磷酸二酯核苷間鍵聯,且在胞嘧啶殘基( mC)之前的下標『m』代表5-甲基胞嘧啶。 118. 與人類 FXII 互補之 GalNAc 接合之經修飾寡核苷酸之設計
Figure 02_image506
Figure 02_image508
Figure 02_image510
Figure 02_image512
實例 9 :與人類 FXII 核酸互補之寡聚化合物之設計
如以下表格中所指示設計經修飾寡核苷酸。以下表格中之化學記法欄指定經修飾寡核苷酸之特定化學記法;其中下標『d』代表2'-β-D-去氧核糖基糖部分,下標『e』代表2'-MOE糖部分,下標『y』代表2'-O-甲基糖部分,下標『k』代表cET經修飾糖部分,下標『s』代表硫代磷酸酯核苷間鍵聯,下標『o』代表磷酸二酯核苷間鍵聯,且在胞嘧啶殘基( mC)之前的下標『m』代表5-甲基胞嘧啶。
「起始位點」指示與經修飾寡核苷酸互補之靶序列之5'-最末核苷。「終止位點」指示與經修飾寡核苷酸互補之靶序列之3'-最末核苷。如以下表格中所示,經修飾寡核苷酸與以下互補:人類FXII mRNA,本文中指定為SEQ ID NO: 1 (在本文中描述於上文);或人類FXII基因體序列,本文中指定為SEQ ID NO: 2 (在本文中描述於上文);或兩者。『N/A』指示經修飾寡核苷酸不以100%互補性與彼特定靶序列互補。 119. 與人類 FXII 互補之 5-10-5 2'O- 甲基經修飾寡核苷酸
Figure 02_image514
實例 10 CD-1 小鼠中靶向人類 FXII經修飾寡核苷酸之耐受性
CD-1小鼠為頻繁用於安全性及功效測試之多用途小鼠模型。用自以上所述之研究中選擇之經修飾寡核苷酸處理小鼠且評估各種血漿化學標誌物之水準變化。 研究1
用80 mg/kg經修飾寡核苷酸皮下注射四隻7至8週齡雄性CD-1小鼠之組,每週一次,持續六週(總共6次處理)。用鹽水注射四隻雄性CD-1小鼠之一組。在最末投藥之後72小時將小鼠安樂死。
為評估經修飾寡核苷酸對肝及腎功能之影響,使用自動化臨床化學分析儀(Hitachi Olympus AU400c, Melville, NY)量測天冬胺酸轉胺酶(AST)、丙胺酸轉胺酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、血尿素氮(BUN)、肌酐(CRT)及白蛋白之血漿水準。結果呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起肝或腎功能標誌物中之任一者之水準變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之經修飾寡核苷酸。 120. 雄性 CD-1 小鼠中之血漿化學標誌物
Figure 02_image516
第1天及第40天量測CD-1小鼠之體重,且各組之平均體重呈現於以下表格中。在研究結束時量測肝、腎及脾重量且呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起器官重量之任何變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之經修飾寡核苷酸。 121. 體重及器官重量 ( 公克 )
Figure 02_image518
研究2
用80 mg/kg經修飾寡核苷酸皮下注射四隻7至8週齡雄性CD-1小鼠之組,每週一次,持續六週(總共6次處理)。用鹽水注射四隻雄性CD-1小鼠之一組。在最末投藥之後72小時將小鼠安樂死。
為評估經修飾寡核苷酸對肝及腎功能之影響,使用自動化臨床化學分析儀(Hitachi Olympus AU400c, Melville, NY)量測天冬胺酸轉胺酶(AST)、丙胺酸轉胺酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、血尿素氮(BUN)、肌酐(CRT)及白蛋白之血漿水準。結果呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起肝或腎功能標誌物中之任一者之水準變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之經修飾寡核苷酸。 122. 雄性 CD-1 小鼠中之血漿化學標誌物
Figure 02_image520
第1天及第39天量測CD-1小鼠之體重,且各組之平均體重呈現於以下表格中。在研究結束時量測肝、腎及脾重量且呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起器官重量之任何變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之經修飾寡核苷酸。 123. 體重及器官重量 ( 公克 )
Figure 02_image522
研究3
用50 mg/kg經修飾寡核苷酸皮下注射兩隻8至10週齡雄性CD-1小鼠之組,一次(總共1次處理)。用鹽水注射兩隻雄性CD-1小鼠之一組。在投藥之後4天將小鼠安樂死。
為評估經修飾寡核苷酸對肝及腎功能之影響,使用自動化臨床化學分析儀(Hitachi Olympus AU400c, Melville, NY)量測天冬胺酸轉胺酶(AST)、丙胺酸轉胺酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、血尿素氮(BUN)、肌酐(CRT)及白蛋白之血漿水準。結果呈現於以下表格中。檢定包括組中之兩隻動物,例外為符號「ǂ」指示僅1隻動物用於特定檢定。在進一步研究中排除引起肝或腎功能標誌物中之任一者之水準變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之經修飾寡核苷酸。 124. 雄性 CD-1 小鼠中之血漿化學標誌物
Figure 02_image524
Figure 02_image526
研究4
用40 mg/kg經修飾寡核苷酸皮下注射四隻7至8週齡雄性CD-1小鼠之組,每週一次,持續6週(總共6次處理)。用鹽水注射四隻雄性CD-1小鼠之一組。在最末投藥之後2天將小鼠安樂死。
為評估經修飾寡核苷酸對肝及腎功能之影響,使用自動化臨床化學分析儀(Hitachi Olympus AU400c, Melville, NY)量測天冬胺酸轉胺酶(AST)、丙胺酸轉胺酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、血尿素氮(BUN)、肌酐(CRT)及白蛋白之血漿水準。結果呈現於以下表格中。檢定包括組中之四隻動物,例外為符號「ǂ」指示3隻或更少之動物用於特定檢定。在進一步研究中排除引起肝或腎功能標誌物中之任一者之水準變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之經修飾寡核苷酸。 125. 雄性 CD-1 小鼠中之血漿化學標誌物
Figure 02_image528
第1天及第35天量測CD-1小鼠之體重,且各組之平均體重呈現於以下表格中。在研究結束時量測肝、腎及脾重量且呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起器官重量之任何變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之經修飾寡核苷酸。 126. 體重及器官重量 ( 公克 )
Figure 02_image530
實例 11 :史 - 道二氏大鼠 (Sprague-Dawley rat) 中靶向人類 FXII 之經修飾寡核苷酸之耐受性
史-道二氏大鼠為用於安全性及功效評估之多用途模型。用以上實例中所述之Ionis經修飾寡核苷酸處理大鼠且評估各種血漿化學標誌物之水準變化。 研究1
用80 mg/kg Ionis寡核苷酸每週皮下注射各4隻史-道二氏大鼠之組,持續6週(總共6次劑量)。將大鼠安樂死;且在最末劑量之後3天收集器官、尿液及血漿用於進一步分析。 血漿化學標誌物
為評估Ionis寡核苷酸對肝功能之影響,使用自動化臨床化學分析儀(Hitachi Olympus AU400c, Melville, NY)量測轉胺酶之血漿水準。量測ALT (丙胺酸轉胺酶)及AST (天冬胺酸轉胺酶)之血漿水準且結果呈現於以下表格中,以IU/L表述。使用相同臨床化學分析儀亦量測總膽紅素(TBIL)、肌酐(CREA)、白蛋白(ALB)及血尿素氮(BUN)之血漿水準且結果亦呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起肝功能之任何標誌物之水準變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之Ionis經修飾寡核苷酸。在一些情況下,在少於4個樣品可用於組中時,化合物以符號「ǂ」作標記。 127. - 道二氏大鼠中之血漿化學標誌物
Figure 02_image532
將第6週自大鼠組獲得之血液送至IDEXX BioResearch用於量測血球計數。所獲取之計數包括紅血球(RBC)計數、白血球(WBC)計數、血紅素(HGB)、血容比(HCT)、平均紅血球容量(MCV)、平均紅血球血紅素(MCH)、平均紅血球血紅素濃度(MCHC),及個別白血球計數,諸如單核細胞(MON)、嗜中性球(NEU)、淋巴細胞(LYM)及血小板(PLT)之計數。結果呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起血球計數之變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之Ionis寡核苷酸。 128. - 道二氏大鼠中之血球計數
Figure 02_image534
為評估Ionis寡核苷酸對腎功能之影響,使用自動化臨床化學分析儀(Hitachi Olympus AU400c, Melville, NY)量測微總蛋白(MTP)及肌酐之尿液水準。MTP與肌酐之比率(MTP/C比率)呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起比率之水準變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之Ionis寡核苷酸。 129. - 道二氏大鼠中之 MTP 與肌酐比率
Figure 02_image536
第1天及第38天量測大鼠之體重,且各組之平均體重呈現於以下表格中。在研究結束時量測肝、脾及腎重量,且呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起器官重量之任何變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之Ionis寡核苷酸。 130. 體重及器官重量 (g)
Figure 02_image538
研究2
用80 mg/kg Ionis寡核苷酸每週皮下注射各4隻史-道二氏大鼠之組,持續6週(總共6次劑量)。將大鼠安樂死;且在最末劑量之後3天收集器官、尿液及血漿用於進一步分析。 血漿化學標誌物
為評估Ionis寡核苷酸對肝功能之影響,使用自動化臨床化學分析儀(Hitachi Olympus AU400c, Melville, NY)量測轉胺酶之血漿水準。量測ALT (丙胺酸轉胺酶)及AST (天冬胺酸轉胺酶)之血漿水準且結果呈現於以下表格中,以IU/L表述。使用相同臨床化學分析儀亦量測總膽紅素(TBIL)、肌酐(CREA)、白蛋白(ALB)及血尿素氮(BUN)之血漿水準且結果亦呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起肝功能之任何標誌物之水準變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之Ionis經修飾寡核苷酸。在一些情況下,在少於4個樣品可用於組中時,化合物以符號「ǂ」作標記。 131. - 道二氏大鼠中之血漿化學標誌物
Figure 02_image540
將第6週自大鼠組獲得之血液送至IDEXX BioResearch用於量測血球計數。所獲取之計數包括紅血球(RBC)計數、白血球(WBC)計數、血紅素(HGB)、血容比(HCT)、平均紅血球容量(MCV)、平均紅血球血紅素(MCH)、平均紅血球血紅素濃度(MCHC),及個別白血球計數,諸如單核細胞(MON)、嗜中性球(NEU)、淋巴細胞(LYM)及血小板(PLT)之計數。結果呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起血球計數之變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之Ionis寡核苷酸。 132. - 道二氏大鼠中之血球計數
Figure 02_image542
為評估Ionis寡核苷酸對腎功能之影響,使用自動化臨床化學分析儀(Hitachi Olympus AU400c, Melville, NY)量測微總蛋白(MTP)及肌酐之尿液水準。MTP與肌酐之比率(MTP/C比率)呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起比率之水準變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之Ionis寡核苷酸。 133. - 道二氏大鼠中之 MTP 與肌酐比率
Figure 02_image544
第1天及第35天量測大鼠之體重,且各組之平均體重呈現於以下表格中。在研究結束時量測肝、脾及腎重量,且呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起器官重量之任何變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之Ionis寡核苷酸。 134. 體重及器官重量 (g)
Figure 02_image546
研究3
用40 mg/kg Ionis寡核苷酸每週皮下注射各4隻史-道二氏大鼠之組,持續6週(總共6次劑量)。用80 mg/kg化合物編號1194391皮下處理4隻大鼠之組。將大鼠安樂死;且在最末劑量之後2天收集器官、尿液及血漿用於進一步分析。 血漿化學標誌物
為評估Ionis寡核苷酸對肝功能之影響,使用自動化臨床化學分析儀(Hitachi Olympus AU400c, Melville, NY)量測轉胺酶之血漿水準。量測ALT (丙胺酸轉胺酶)及AST (天冬胺酸轉胺酶)之血漿水準且結果呈現於以下表格中,以IU/L表述。使用相同臨床化學分析儀亦量測總膽紅素(TBIL)、肌酐(CREA)、白蛋白(ALB)及血尿素氮(BUN)之血漿水準且結果亦呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起肝功能之任何標誌物之水準變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之Ionis經修飾寡核苷酸。 135. - 道二氏大鼠中之血漿化學標誌物
Figure 02_image548
將第6週自大鼠組獲得之血液送至IDEXX BioResearch用於量測血球計數。所獲取之計數包括紅血球(RBC)計數、白血球(WBC)計數、血紅素(HGB)、血容比(HCT)、平均紅血球容量(MCV)、平均紅血球血紅素(MCH)、平均紅血球血紅素濃度(MCHC),及個別白血球計數,諸如單核細胞(MON)、嗜中性球(NEU)、淋巴細胞(LYM)及血小板(PLT)之計數。結果呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起血球計數之變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之Ionis寡核苷酸。 136. - 道二氏大鼠中之血球計數
Figure 02_image550
為評估Ionis寡核苷酸對腎功能之影響,使用自動化臨床化學分析儀(Hitachi Olympus AU400c, Melville, NY)量測微總蛋白(MTP)及肌酐之尿液水準。MTP與肌酐之比率(MTP/C比率)呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起比率之水準變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之Ionis寡核苷酸。 137. - 道二氏大鼠中之 MTP 與肌酐比率
Figure 02_image552
第1天及第38天量測大鼠之體重,且各組之平均體重呈現於以下表格中。在研究結束時量測肝、脾及腎重量,且呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起器官重量之任何變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之Ionis寡核苷酸。 138. 體重及器官重量 (g)
Figure 02_image554
研究4
用40 mg/kg Ionis寡核苷酸每週皮下注射各4隻史-道二氏大鼠之組,持續6週(總共6次劑量)。將大鼠安樂死;且在最末劑量之後3天收集器官、尿液及血漿用於進一步分析。 血漿化學標誌物
為評估Ionis寡核苷酸對肝功能之影響,使用自動化臨床化學分析儀(Hitachi Olympus AU400c, Melville, NY)量測轉胺酶之血漿水準。量測ALT (丙胺酸轉胺酶)及AST (天冬胺酸轉胺酶)之血漿水準且結果呈現於以下表格中,以IU/L表述。使用相同臨床化學分析儀亦量測總膽紅素(TBIL)、肌酐(CREA)、白蛋白(ALB)及血尿素氮(BUN)之血漿水準且結果亦呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起肝功能之任何標誌物之水準變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之Ionis經修飾寡核苷酸。 139. - 道二氏大鼠中之血漿化學標誌物
Figure 02_image556
將第6週自大鼠組獲得之血液送至IDEXX BioResearch用於量測血球計數。所獲取之計數包括紅血球(RBC)計數、白血球(WBC)計數、血紅素(HGB)、血容比(HCT)、平均紅血球容量(MCV)、平均紅血球血紅素(MCH)、平均紅血球血紅素濃度(MCHC),及個別白血球計數,諸如單核細胞(MON)、嗜中性球(NEU)、淋巴細胞(LYM)及血小板(PLT)之計數。結果呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起血球計數之變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之Ionis寡核苷酸。 140. - 道二氏大鼠中之血球計數
Figure 02_image558
為評估Ionis寡核苷酸對腎功能之影響,使用自動化臨床化學分析儀(Hitachi Olympus AU400c, Melville, NY)量測微總蛋白(MTP)及肌酐之尿液水準。MTP與肌酐之比率(MTP/C比率)呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起比率之水準變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之Ionis寡核苷酸。 141. - 道二氏大鼠中之 MTP 與肌酐比率
Figure 02_image560
第1天及第35天量測大鼠之體重,且各組之平均體重呈現於以下表格中。在研究結束時量測肝、脾及腎重量,且呈現於以下表格中。在進一步研究中排除引起器官重量之任何變化處於經修飾寡核苷酸之預期範圍外之Ionis寡核苷酸。 142. 體重及器官重量 (g)
Figure 02_image562
實例 12 :基因轉殖小鼠中單劑量之與人類 FXII 互補之經修飾寡核苷酸之活性
使用Fosmid NCBI Clone DB ID:ABC12-49040200E6內部開發基因轉殖小鼠模型。在AgeI及NdeI限制位點處消化純系以產生含有人類 F12基因之整個約23kb部分之區域,包括 F12基因上游12kb及下游4kb之區域。藉由原核注射將基因區段引入來自C57Bl/6小鼠之受精卵中以產生FXII創始株系。在本文所述之實驗中使用株系16459。在肝中發現人類FXII RNA表現且在血漿中發現循環蛋白質。 研究1 處理
將基因轉殖小鼠分成各2隻雌性小鼠之組用於經修飾寡核苷酸處理。組接受2.5 mg/kg劑量之經修飾寡核苷酸之皮下注射,每週兩次,持續兩週(4次處理)。兩隻小鼠之一組接受PBS之皮下注射,每週兩次,持續兩週(4次處理)。PBS注射組充當與寡核苷酸處理組相比較之對照組。 RNA 分析
在最末處理之後48小時,將小鼠處死且自肝中提取RNA用於FXII RNA表現之即時RTPCR分析。人類FXII引子探針組RTS2992 (在本文中描述於上文)及RTS40528 (在本文中描述於上文)用於量測人類FXII RNA水準。如由RIBOGREEN®所量測,將FXII RNA水準針對總RNA含量正規化。FXII RNA之減少在以下表格中呈現為FXII RNA相對於PBS對照動物中之量的百分比(%對照)。 143. 基因轉殖小鼠中人類 FXII RNA 之減少
Figure 02_image564
蛋白質分析
使用Abcam FXII ELISA套組(ab192144)確定血漿中之人類FXII蛋白質水準。FXII蛋白質之減少在以下表格中呈現為FXII蛋白質相對於PBS對照動物中之量的百分比(%對照)。 144. 基因轉殖小鼠中人類 FXII 蛋白質之減少
Figure 02_image566
研究2 處理
將基因轉殖小鼠分成各4隻小鼠(2隻雄性及2隻雌性)之組用於經修飾寡核苷酸處理。組接受1.5 mg/kg劑量之經修飾寡核苷酸之皮下注射,每週兩次,持續兩週(4次處理)。四隻小鼠(2隻雄性及2隻雌性)之一組接受PBS之皮下注射,每週兩次,持續兩週(4次處理)。PBS注射組充當與寡核苷酸處理組相比較之對照組。 RNA 分析
在最末處理之後48小時,將小鼠處死且自肝中提取RNA用於FXII RNA表現之即時RTPCR分析。人類FXII引子探針組RTS2992 (在本文中描述於上文)及RTS40528 (在本文中描述於上文)用於量測人類FXII RNA水準。如由RIBOGREEN®所量測,將FXII RNA水準針對總RNA含量正規化。FXII RNA之減少在以下表格中呈現為FXII RNA相對於PBS處理動物中之量的百分比(%對照)。 145. 基因轉殖小鼠中人類 FXII RNA 之減少
Figure 02_image568
蛋白質分析
使用Abcam FXII ELISA套組(ab192144)確定血漿中之人類FXII蛋白質水準。FXII蛋白質之減少在以下表格中呈現為FXII蛋白質相對於PBS處理動物中之量的百分比(%對照)。 146. 基因轉殖小鼠中人類 FXII 蛋白質之減少
Figure 02_image570
Figure 02_image572
實例 13 :基因轉殖小鼠中多劑量之與人類 FXII 互補之經修飾寡核苷酸之活性
使用Fosmid NCBI Clone DB ID:ABC12-49040200E6內部開發基因轉殖小鼠模型。在AgeI及NdeI限制位點處消化純系以產生含有人類 F12基因之整個約23kb部分之區域,包括 F12基因上游12kb及下游4kb之區域。藉由原核注射將基因區段引入來自C57Bl/6小鼠之受精卵中以產生FXII創始株系。在本文所述之實驗中使用株系16459。在肝中發現人類FXII RNA表現且在血漿中發現循環蛋白質。 研究1 處理
將基因轉殖小鼠分成各2隻雌性小鼠之組用於經修飾寡核苷酸處理。組接受以下表格中所指示之劑量之經修飾寡核苷酸之皮下注射,每週兩次,持續兩週(4次處理)。兩隻小鼠之一組接受PBS之皮下注射,每週兩次,持續兩週(4次處理)。PBS注射組充當與寡核苷酸處理組相比較之對照組。 RNA 分析
在最末處理之後48小時,將小鼠處死且自肝中提取RNA用於FXII RNA表現之即時RTPCR分析。人類FXII引子探針組RTS2992 (在本文中描述於上文)用於量測人類FXII RNA水準。如由RIBOGREEN®所量測,將FXII RNA水準針對總RNA含量正規化。FXII RNA之減少在以下表格中呈現為FXII RNA相對於PBS處理動物中之量的百分比(%對照)。 147. 基因轉殖小鼠中人類 FXII RNA 之減少
Figure 02_image574
蛋白質分析
使用Abcam FXII ELISA套組(ab192144)確定血漿中之人類FXII蛋白質水準。FXII蛋白質之減少在以下表格中呈現為FXII蛋白質相對於PBS處理動物中之量的百分比(%對照)。 148. 基因轉殖小鼠中人類 FXII 蛋白質之減少
Figure 02_image576
研究2 處理
將基因轉殖小鼠分成各4隻小鼠(2隻雄性及2隻雌性)之組用於經修飾寡核苷酸處理。組接受以下表格中所指示之劑量之經修飾寡核苷酸之皮下注射,每週兩次,持續兩週(4次處理)。四隻小鼠(2隻雄性及2隻雌性)之一組接受PBS之皮下注射,每週兩次,持續兩週(4次處理)。PBS注射組充當與寡核苷酸處理組相比較之對照組。 RNA 分析
在最末處理之後48小時,將小鼠處死且自肝中提取RNA用於FXII RNA表現之即時RTPCR分析。人類FXII引子探針組RTS2992 (在本文中描述於上文)用於量測人類FXII RNA水準。如由RIBOGREEN®所量測,將FXII RNA水準針對總RNA含量正規化。FXII RNA之減少在以下表格中呈現為FXII RNA相對於PBS處理動物中之量的百分比(%對照)。 149. 基因轉殖小鼠中人類 FXII RNA 之減少
Figure 02_image578
Figure 02_image580
蛋白質分析
使用Abcam FXII ELISA套組(ab192144)確定血漿中之人類FXII蛋白質水準。FXII蛋白質之減少在以下表格中呈現為FXII蛋白質相對於PBS處理動物中之量的百分比(%對照)。 150. 基因轉殖小鼠中人類 FXII 蛋白質之減少
Figure 02_image582
Figure 02_image584
Figure 02_image586
研究3 處理
將基因轉殖小鼠分成各四隻小鼠(2隻雄性及2隻雌性)之組用於經修飾寡核苷酸處理。組接受以下表格中所指示之劑量之經修飾寡核苷酸之皮下注射,每週兩次,持續兩週(4次處理)。四隻小鼠(2隻雄性及2隻雌性)之一組接受PBS之皮下注射,每週兩次,持續兩週(4次處理)。PBS注射組充當與寡核苷酸處理組相比較之對照組。 RNA 分析
在最末處理之後72小時,將小鼠處死且自肝中提取RNA用於FXII RNA表現之即時RTPCR分析。人類FXII引子探針組RTS2992 (在本文中描述於上文)用於量測人類FXII RNA水準。如由RIBOGREEN®所量測,將FXII RNA水準針對總RNA含量正規化。FXII RNA之減少在以下表格中呈現為FXII RNA相對於PBS處理動物中之量的百分比(%對照)。 151. 基因轉殖小鼠中人類 FXII RNA 之減少
Figure 02_image588
實例 14 :活體外多劑量之經修飾寡核苷酸對人類 FXII mRNA 之影響
在Huh7細胞中在各種劑量下測試自以上實例中選擇之經修飾寡核苷酸。藉由電穿孔,用如以下表格中所指定之各種濃度之經修飾寡核苷酸轉染密度為20,000個細胞/孔之經培養Huh7細胞。約24小時處理時段後,自細胞中分離總RNA,且藉由定量即時RTPCR量測FXII mRNA水準。人類FXII引子探針組RTS40528 (在本文中描述於上文)用於量測RNA水準。如由RIBOGREEN®所量測,根據總RNA含量調整FXII水準。FXII RNA之減少在以下表格中呈現為FXII RNA相對於未經處理之對照細胞中之量的百分比(% UTC)。在GraphPad Prism中使用對數(抑制劑)對比正規化反應 - 可變斜率方法計算各經修飾寡核苷酸之半最大抑制濃度(IC 50)。
將來自WO 2017/120397之四種比較化合物添加至研究中。此等化合物包括化合物編號1213034、1358035、1213030及1213029,在WO 2017/120397中分別指定為A-145676、A-145669、A-145668及A-145667。 152. 經修飾寡核苷酸對人類 FXII RNA 之劑量依賴性減少
Figure 02_image590

          <![CDATA[<110>  美商IONIS製藥公司(Ionis Pharmaceuticals, Inc.)]]>
          <![CDATA[<120>  用於調節因子XII之化合物及方法]]>
          <![CDATA[<130>  BIOL0369US.L]]>
          <![CDATA[<150>  63/127,616]]>
          <![CDATA[<151>  2020-12-18]]>
          <![CDATA[<160>  5042  ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn version 3.5]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  2049]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          ctattgatct ggactcctgg ataggcagct ggaccaacgg acggatgcca tgagggctct       60
          gctgctcctg gggttcctgc tggtgagctt ggagtcaaca ctttcgattc caccttggga      120
          agcccccaag gagcataagt acaaagctga agagcacaca gtcgttctca ctgtcaccgg      180
          ggagccctgc cacttcccct tccagtacca ccggcagctg taccacaaat gtacccacaa      240
          gggccggcca ggccctcagc cctggtgtgc taccaccccc aactttgatc aggaccagcg      300
          atggggatac tgtttggagc ccaagaaagt gaaagaccac tgcagcaaac acagcccctg      360
          ccagaaagga gggacctgtg tgaacatgcc aagcggcccc cactgtctct gtccacaaca      420
          cctcactgga aaccactgcc agaaagagaa gtgctttgag cctcagcttc tccggttttt      480
          ccacaagaat gagatatggt atagaactga gcaagcagct gtggccagat gccagtgcaa      540
          gggtcctgat gcccactgcc agcggctggc cagccaggcc tgccgcacca acccgtgcct      600
          ccatgggggt cgctgcctag aggtggaggg ccaccgcctg tgccactgcc cggtgggcta      660
          caccggagcc ttctgcgacg tggacaccaa ggcaagctgc tatgatggcc gcgggctcag      720
          ctaccgcggc ctggccagga ccacgctctc gggtgcgccc tgtcagccgt gggcctcgga      780
          ggccacctac cggaacgtga ctgccgagca agcgcggaac tggggactgg gcggccacgc      840
          cttctgccgg aacccggaca acgacatccg cccgtggtgc ttcgtgctga accgcgaccg      900
          gctgagctgg gagtactgcg acctggcaca gtgccagacc ccaacccagg cggcgcctcc      960
          gaccccggtg tcccctaggc ttcatgtccc actcatgccc gcgcagccgg caccgccgaa     1020
          gcctcagccc acgacccgga ccccgcctca gtcccagacc ccgggagcct tgccggcgaa     1080
          gcgggagcag ccgccttccc tgaccaggaa cggcccactg agctgcgggc agcggctccg     1140
          caagagtctg tcttcgatga cccgcgtcgt tggcgggctg gtggcgctac gcggggcgca     1200
          cccctacatc gccgcgctgt actggggcca cagtttctgc gccggcagcc tcatcgcccc     1260
          ctgctgggtg ctgacggccg ctcactgcct gcaggaccgg cccgcacccg aggatctgac     1320
          ggtggtgctc ggccaggaac gccgtaacca cagctgtgag ccgtgccaga cgttggccgt     1380
          gcgctcctac cgcttgcacg aggccttctc gcccgtcagc taccagcacg acctggctct     1440
          gttgcgcctt caggaggatg cggacggcag ctgcgcgctc ctgtcgcctt acgttcagcc     1500
          ggtgtgcctg ccaagcggcg ccgcgcgacc ctccgagacc acgctctgcc aggtggccgg     1560
          ctggggccac cagttcgagg gggcggagga atatgccagc ttcctgcagg aggcgcaggt     1620
          accgttcctc tccctggagc gctgctcagc cccggacgtg cacggatcct ccatcctccc     1680
          cggcatgctc tgcgcagggt tcctcgaggg cggcaccgat gcgtgccagg gtgattccgg     1740
          aggcccgctg gtgtgtgagg accaagctgc agagcgccgg ctcaccctgc aaggcatcat     1800
          cagctgggga tcgggctgtg gtgaccgcaa caagccaggc gtctacaccg atgtggccta     1860
          ctacctggcc tggatccggg agcacaccgt ttcctgattg ctcagggact catctttccc     1920
          tccttggtga ttccgcagtg agagagtggc tggggcatgg aaggcaagat tgtgtcccat     1980
          tcccccagtg cggccagctc cgcgccagga tggcgcagga actcaataaa gtgctttgaa     2040
          aatgctgag                                                             2049
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  7437]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          ctattgatct ggactcctgg ataggcagct ggaccaacgg acggatgcca tgagggctct       60
          gctgctcctg gggttcctgc tggtgagctt ggagtcaaca ctttcggtga gtgctgtggg      120
          aaccaggatt gtcccaggat tgttctgggg ggtcgctatc acagccatga gccatggcct      180
          ctgctcatga cctgtgggtc caggtgacta ggaggcctat gtggaaaggt gaggccagcc      240
          cggaaggccc aggcagagga gacagacaac cagactgggt ggatacaagg gcacagcctg      300
          catttctggg ggagatgggc cttaagaaga caacgggggg aggtagaaag ggtttgggtc      360
          ttgggaagaa atctctgcat ttctgggctg tgagaggaag ctgcagacta gcaacagatc      420
          ggtggcaggc tatgacttat agtcagttcc ctgccttctt ctctcccttg tagattccac      480
          cttgggaagc ccccaaggag cataagtaca aagctgaaga gcacacagtc ggtaagtggc      540
          ctggctcctc ctcccgggaa cccttgggtg gggatgtgta tggtgcagtg tgtgcagtct      600
          cagggcagtc tagtctagtg cctacctggt gctaggtctt atgcccatgg gcactagagt      660
          gatcgtgagc tgtgtgatcc ttgagggcag ggtatgggct gtgtctaagt gcccacgagc      720
          ctggctcgga gcaggtgctt gagatatgtg ctgctggcgc catcacacct gggctcctgc      780
          cagccttcct cagtttcccc agcttctccc cttcttttcc tttccccagt acgtctcatg      840
          ggcatcattc atgccacaca gaggccaggg ccttcaatgg gcaaggaagg atcaagagct      900
          tgtctctggc atctgaatgc ctctgaagcc cagctttatc acttatgagc tgggtgactc      960
          tgggcgaggg atttgagttc tccaagcttc aatttcccct tctgtgaaac caggttgata     1020
          acagtaaacc tcttagggtt gttgagaagg gaaacccatg tgaggtattc agcccatcac     1080
          ctggtgcatg gaaatgcttt acaaatatta gcttttatta tgaaactacc ttttagatga     1140
          agggtacctg ccatttcccc cttcctcaag ctctgccata gctccccatt gctttcattc     1200
          ttccagacac taaattacct acatgccagg catggtggct catgcctgta atcccagcac     1260
          tttgggaggc caaggtcggt ggatcatgag gtcaggagtt cgagaccagc ctggccaaca     1320
          tggtgaaatg ctgtctctac taaaagtaca aaaattagcc aggcatggtg gcatgcgcca     1380
          gtagtcccag ctactcggga ggctgaggca gaagaattgc ttgaacctgg gaggtgaagg     1440
          ttgcagtgaa cgaagatcac accattgcac tccagcttgg gcaacacagc aagactccgt     1500
          ctcaaaaaaa aaaaaaaaat ttacctagag tgtggcacat agcagggcct gtgaaccaga     1560
          tggaccttac cctggtgggc ctgacttggt ggggttgagt ctctaagcat ggcgttgagg     1620
          cccagcacat tccaaccctg gactccctca gcctcctctc ttcaccccac acccaaaagt     1680
          ttctcctctc tcttgcctta cccaaacttg gtgccctatc cttgcctaat cccctgccta     1740
          aggtccccct cctctctgtc cgtccatccc atctgcatct tttttttttt ttgagatgga     1800
          gtctcgctct gtcccctagg ctagagtgca atggcgcgat cttggctcat tgcaacctcc     1860
          gcctcctggg ttcaagcgat tctctgcctc agcctcccga gttgctggga ttacaggcac     1920
          acaacttcat gctcagctaa tttttgtatt ttttagtaga gacagggttt caccatgttg     1980
          gccaggctgg tctcgaactc ctgccctcag gtggtccgcc caccttagcc tcccaaagtg     2040
          ctgggattac aggcgtgagc caccgcgcct ggcccccatt tgcatcttaa aggtccatct     2100
          cagatccatt tccatttact gtcctagttc tggtttggtc cttggcaagt gcactttgcc     2160
          ttgaacaaaa tagtggcaaa agcttattga gcaggtactt tgtgccagac actgctcagc     2220
          atttcatggc attatctcat gaagccccac gacaattcct ctgaagaaga cacaggcaat     2280
          tctcattatt cgcgatggtt atgttctata aaatcacagt gaacattgaa ctagcaaaca     2340
          gtattaggtt cctgtgagcc tctggtcaca acattttcat caaccaacag catataatct     2400
          ggttttatgt atgattctgt ttaaagacat tttatttagt atatgtgttg ctgattcatc     2460
          aatgctaagc tgatggcact atagcacaca cctgaatcaa gtgtctaaca cacgctttct     2520
          ccctaaggta gccttcttgt gcttaggaac tacacagctc ttcagcagga ggctcagagg     2580
          ccatttccaa aagccaaatc cccagcaaaa gcacaaagtg tgaaaaacgt tgcactaagt     2640
          agactgagaa ggacactcat tcaataggag agctgaaaca agcagcagca gcgtgacgcc     2700
          ttgttgaacc ttaactggga atgtgcaaat ttttcactgc tctgtgcatg cccacaaatg     2760
          gccatgaaaa catttcaagt attgacttgg gagttacaaa taaaattcag caagtaggca     2820
          cattctcaat gtagaaccag agaagaatga ggatcaactg tactattatt actgccgttt     2880
          tacagataag gaaaccaagg ctcagatcag agtggttaac agtgacttca acattcaaca     2940
          agtattatta agtgcctact ttgtggcaag tgctcttcct ggccttggga ctgaagactt     3000
          acccaaggtc acacagctag caggttgtgg agtcaggagt ctactccagc tatctgactc     3060
          ctgaacccaa gttttttttt ttttctttaa gatggagtct cactctgtca cccaggctgg     3120
          agtgcagtgg cgcgatctcg gctcactgca agctccgcct cccgggttca caccattctc     3180
          ctgcctcggc ctcccgagta gctgggacta caggcacctg ccaccacccc cagctaattt     3240
          ttttgtattt ttagtagaga gggggtttca ctgtattagc caggatggtc ttgatctcct     3300
          gacctcgtga tctgcccgcc ttggcctccc aaagtgctgg gattacaggc ttgagccacc     3360
          gcgcccggcc ctgaacccaa cttttagagc agaaagtgtt ttcaatgcac agcgaccttt     3420
          ttgagggtct gtccttttcc tgaccagacc ctgagggaca gtgcctgagc agttgagtac     3480
          aggggaagtc ctcagagagt gtgttgtccc tgcagttctc actgtcaccg gggagccctg     3540
          ccacttcccc ttccagtacc accggcagct gtaccacaaa tgtacccaca agggccggcc     3600
          aggccctcag ccctggtaag actacgcaga ggagttggag caggggcctg ggagacatgt     3660
          accctgcctg tccttctgtc caaggaactc tgcttggaga gaggggactg tgatagggca     3720
          gggtgggcca ggcccctggg tagagcaggg aagccttgtc tctttctaca ggtgtgctac     3780
          cacccccaac tttgatcagg accagcgatg gggatactgt ttggagccca agaaagtgaa     3840
          aggtgctaca cacagcctct ggggtggcct ggggctctct cctcccgcct cattactctc     3900
          ctggtatcac cagaccccac acacctggga ttctggaccc agccccttct ctccctccac     3960
          aatacccttt ggaagtccag agggagagtt ctgggaagga gtggtcccat tttgcaggtg     4020
          ggtaaaccaa gcttggaaac ttggagtagc aaggtcacaa ggcaagtagg ttcaagaagg     4080
          gccttggccc ccagctgtgt gactcagctc cctgctcttc cttccaccat gtccatctct     4140
          cagaccactg cagcaaacac agcccctgcc agaaaggagg gacctgtgtg aacatgccaa     4200
          gcggccccca ctgtctctgt ccacaacacc tcactggaaa ccactgccag aaaggtgagg     4260
          agatgtggag gacctgggcg gggtgctggg ggacaggggc aaccctgggc ctacagaata     4320
          ggttgctgga tactcggaga cttggcatgg tcctagactc tcctgagacc actatccctc     4380
          tttgtcccca gagaagtgct ttgagcctca gcttctccgg tttttccaca agaatgagat     4440
          atggtataga actgagcaag cagctgtggc cagatgccag tgcaagggtc ctgatgccca     4500
          ctgccagcgg ctggccagcc agggtgagca gatggttggg aacgggccag ggaggagcgt     4560
          caggaagaca ggctggcagg aggccgggtg gtgtgccagg aaggagagct ctctgggggg     4620
          gtctttaggc ccaggggtgg ctcactgcgt tccctcccca agcctgccgc accaacccgt     4680
          gcctccatgg gggtcgctgc ctagaggtgg agggccaccg cctgtgccac tgcccggtgg     4740
          gctacaccgg agccttctgc gacgtgggtg agtgagggtc tggggcaagc agaaggccag     4800
          cccccaggtg ggacgggctt gccaggaagg aggagggaga gtgcggaaag cagatgagag     4860
          ggaggcagga gagcccagcc ttggctgccc agggagcccc ctttctcctc agacaccaag     4920
          gcaagctgct atgatggccg cgggctcagc taccgcggcc tggccaggac cacgctctcg     4980
          ggtgcgccct gtcagccgtg ggcctcggag gccacctacc ggaacgtgac tgccgagcaa     5040
          gcgcggaact ggggactggg cggccacgcc ttctgccggt gcgccgcgtg gggctgggtg     5100
          acccctccgc cccagggctc cgggctcccg gcgctctaac ggcgccccgt cgtgtggcta     5160
          caggaacccg gacaacgaca tccgcccgtg gtgcttcgtg ctgaaccgcg accggctgag     5220
          ctgggagtac tgcgacctgg cacagtgcca gaccccaacc caggcggcgc ctccgacccc     5280
          ggtgtcccct aggcttcatg tcccactcat gcccgcgcag ccggcaccgc cgaagcctca     5340
          gcccacgacc cggaccccgc ctcagtccca gaccccggga ggttaggaag tggggggggg     5400
          aaggaggagc cgagagggcg ccgggcgagc tagattccgg ccagccggcc gcgggctctc     5460
          cgtcctcagc ccctgctcct ccacagcctt gccggcgaag cgggagcagc cgccttccct     5520
          gaccaggaac ggcccactga gctgcgggca gcggctccgc aagagtctgt cttcgatgac     5580
          ccgcgtcgtt ggcgggctgg tggcgctacg cggggcgcac ccctacatcg ccgcgctgta     5640
          ctggggccac agtttctgcg ccggcagcct catcgccccc tgctgggtgc tgacggccgc     5700
          tcactgcctg caggaccggc gagtacccgc ccgcccagag ccgccccagg ggccgcggct     5760
          cctccgtctc ccagcgcagc ttccacgctg cacccgaacc cgtgccctac cttctcccgc     5820
          cccacccttc tttccacgcc cctccggagc tcccggggag gaagctggaa cacgggattg     5880
          gggttcggga gcagggggct tccccagaac gcttgtggcc aggtctgaga gcgctgcctc     5940
          tcccctaccc cccccgcagg cccgcacccg aggatctgac ggtggtgctc ggccaggaac     6000
          gccgtaacca cagctgtgag ccgtgccaga cgttggccgt gcgctcctac cgcttgcacg     6060
          aggccttctc gcccgtcagc taccagcacg acctgggtgc gtgggggcgc cccgcgggga     6120
          cgggaagaga gcttggggcc ccggcgtccc cgcctcacgc tcctctccgc ccgggttagc     6180
          tctgttgcgc cttcaggagg atgcggacgg cagctgcgcg ctcctgtcgc cttacgttca     6240
          gccggtgtgc ctgccaagcg gcgccgcgcg accctccgag accacgctct gccaggtggc     6300
          cggctggggc caccagttcg agggtaggca caactgctag gggcaggggt aggggaggag     6360
          acctttgatc actgggttag gcggaagaag cccgcgactt tggtatcgtt ccgggtgcct     6420
          acagaatggg tggcgctgac ctgatgggtt gtgagaatgt gtaggtgaat cccaggtaga     6480
          atcccagggc ctgggattca ctgctgggat ccccaaatct cctggggata cagggagaat     6540
          cgaacttgct cttggttccc tctgggcgcc gggctgcaaa ggccaactag gacgctggcc     6600
          ccgcgctccg ggctagtgtg ggagccaggt tctgcgactc tggatgggtg gtgggggagg     6660
          ggtttctgtt tccgctccgc ccattcaaat cctggctttt ctctggacct cagcctcctt     6720
          gcctatgaaa ttgaattaat ggcacctcct ccccttcggg cttgctgcga gagaggaagg     6780
          gcatgagtgg gtttacaagc gcctggagca gctttgtcca tcgtccgggc ggcaagcgtt     6840
          gtcagatggg gtgtgaagaa ggcgctctgt gttcgcaggg gcggaggaat atgccagctt     6900
          cctgcaggag gcgcaggtac cgttcctctc cctggagcgc tgctcagccc cggacgtgca     6960
          cggatcctcc atcctccccg gcatgctctg cgcagggttc ctcgagggcg gcaccgatgc     7020
          gtgccaggtg agctcttagc ccggttggcg cccttccccg aggccgtcag gcacaaatct     7080
          caggtccaca gcgctgagct gcgtgtttcc gacccagggt gattccggag gcccgctggt     7140
          gtgtgaggac caagctgcag agcgccggct caccctgcaa ggcatcatca gctggggatc     7200
          gggctgtggt gaccgcaaca agccaggcgt ctacaccgat gtggcctact acctggcctg     7260
          gatccgggag cacaccgttt cctgattgct cagggactca tctttccctc cttggtgatt     7320
          ccgcagtgag agagtggctg gggcatggaa ggcaagattg tgtcccattc ccccagtgcg     7380
          gccagctccg cgccaggatg gcgcaggaac tcaataaagt gctttgaaaa tgctgag        7437
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  14000]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          ggaacagctg ccttctcccc aagaggaagg agccaatgtg ggagtggcct tagggccagg       60
          gtctatactc aggagcaatc aagaactgac agagccaggc atgatggcat gaacctgtaa      120
          tcccagctat tcaggaggat gaagcgagag gatcacttgc gcccagaagt tccaggctag      180
          cctgggcaac ttaataagac cgagtctctt tgaaacaaca aaaaaggtga caaaggtagt      240
          ttcgctttaa tgactcgtca atatatctaa tagtttcact ttcatcatgg agttaacagc      300
          tgtcacgtca atgactttga aaccagttac ctttgaaacc agtggttgga aaggtgcccc      360
          tcctctcctg ccctcctctt tctgtgtttc tgttccaaga agtcttccac agcctgcctc      420
          tcttccagca gaattaataa attgctacac tcagtcttca tttcccataa attactttgt      480
          ataacttagg actttgtata actgaaagtg acagaagtcc actcaaattg gttttattgg      540
          ctcatataac tgagaagtct attttttttt ttttttggag atacagtctc agtctgcttc      600
          ccagactgga gtgcagtggc acaatcacgg ctcacagcat tttggacctc tgggctcaag      660
          caatcctcct gcctcagact cacaagtagc cggaactaca ggcacgcgcc accatgcctg      720
          gctaatgtta aatttttttg gagagatggg atctcactat gttgcctaca tcagtctgga      780
          actcctgggc tcaagtgatc ctcaagtgat ccccagcctc ccagagtgtt gggattacag      840
          gcgtgagcca ctgtgcctag ccataactga ccaagtctta aggatacttc tagttttagg      900
          atgtaggctc tcaaagtcat gagaaatcaa tccatcagta ctagttctca aatgtcgtgt      960
          aacaaatcac cctaacttgt ggcttaaagc aacaacattt aatgatgatt tatcacagtt     1020
          tctgatggtc agttttgcct tgaggtcttt cataagattg caagccaaat gtcagcgagg     1080
          gctgcagtat ccacttccaa ggcagcttat tcatgtggct gtccaattgg cactggctgt     1140
          cagcagggtg ctttcctttc tccctacatg ggcttctctg cagggctgca tgtgtgtcct     1200
          cacaacacag tggctggctt cctccagagt gagcaaccta agagaccgag gcagaaactg     1260
          caatgtcttt tatgacctgg gcttggaagt ccaacaccct cacttctgcc atattttttt     1320
          tttttttgag acagtccctg tcgcccaggc tggagtgcaa tggcacaatc tctgctcact     1380
          acaacctcca cttcctgggt tcaagcgatt ctcctgcctc agcctcacgg gtagctggga     1440
          ttacaggcac acgccactac gcccggctaa tttttgtatt tttcatagag atggggtttg     1500
          gccaacacgt tggccaggcc ggtcttgaac tcctgaccta gagtgatctg cctgccttgg     1560
          catcccaaag tgctgggatt acaggtgtga gccaccacac ccagccactt ctgtcatatt     1620
          ctgatggaca cacagaacag ccctaactca atgtgggaag acaccataca agggcatgaa     1680
          tcctaggtgg tgaggatcaa tgggggctgt ctttgaggct gtctaccaca gcatctttcc     1740
          atccttcctg ccctgtttgc tttgcttttc ctatgtgtag gcttcattct caaacaggcc     1800
          ctccctagag agtgacaaag gtgatcatca atgtgttcag acccacatgc tctgtgctta     1860
          gtaaccccag tgcaactttt ttgctttccc aaaagttctg gcaaaagtcc caagctagca     1920
          ctttaattgg cctaaattgt gtatatgctt atctctgaac caatcactgt ggattagaga     1980
          tgtcatgctc tgattgacca gacctaggcc acatctctag ccctagctct gagggtagag     2040
          ttggcagcac tagagcccat ggaagaagta agagaggagt cgttgctaaa ggaaaaatca     2100
          aagtgtcatt accgaaccag gacagatgct gggcagcaca tgtgcacccc gtcttcttct     2160
          catgttccag ctgcacatct tagtgcccct tggtttagca cttttctcat taaatcattt     2220
          gctttcttgc ctcacttcct gtggttggta gaatgctaag atggccccaa gatctctacc     2280
          cctggtgttt gcacacctcc cagttattct gtcaaacatg aatgtagatg cttctgtgaa     2340
          agaattttgc acatgtaatt taagtcccaa attgtttgac cttaaaataa ggagaatggc     2400
          agggccaggc atggtggctc atacctgtaa tcccagcact ttgggaggcc aaggcgggca     2460
          gatcacgagg tcaggagatc gagaccatcc tggctaacac agtgaaaccc catctctact     2520
          aaaaatacaa aaaattagct gggcgtggtg gcgggtgcct gtattcccag ctacccagga     2580
          ggctgaggca ggagaatggc gtgaacccgg gaggcgtagc ttgcagtgag ccaagatcgt     2640
          gccactgcac tccagcctgg gtgacagagc cagactctgt ctcaaaaaaa aaaaaaaaaa     2700
          ggagaatggc tttggtgggc ctgacctagt caggtgagtt cttaaaaggc gacacatggc     2760
          ccggtgcagt ggctcaggcc tgtaatccca gcactttggg aggccgaggc gggtggatca     2820
          cgaggtcagg agatcgagac catcctggct aacatggtga aaccccgtct ctactaaaaa     2880
          gacaaaaaat tagctgggcg tggtggtggg ctcctgtagt cccagctact cgggaggctg     2940
          aggcaggaga atggcgtgaa cccgggaggc ggagcttgca gtgagcggag attgcgccac     3000
          tgcactccag cctgggcgac agagcgagac tccgtctcaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaga     3060
          aaattaaaag tgggtattgt tgtaagatgc tgagtttatg gtagtttgtt acatgacaat     3120
          agaaaatgaa cacacttcac agtggactcc aagatcccca tgatctttga tctccttaac     3180
          ctcctgatct ccacaggacc cagagcataa gaatgtccct tcttctgctt ccagtcccac     3240
          tatctagaaa agagaggagg agcccagctc ttcatttcac ccccacccac aaactcccaa     3300
          ctttccggcc ctcaaggggt gaccaaggaa gttgctccac ttggctttcc acaaacagcc     3360
          tgtgccccac caggctcagg agggcagctt gaccaatctc tatttccaag acctttggcc     3420
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          gagtgatcgt gagctgtgtg atccttgagg gcagggtatg ggctgtgtct aagtgcccac     4140
          gagcctggct cggagcaggt gcttgagata tgtgctgctg gcgccatcac acctgggctc     4200
          ctgccagcct tcctcagttt ccccagcttc tccccttctt ttcctttccc cagtacgtct     4260
          catgggcatc attcatgcca cacagaggcc agggccttca atgggcaagg aaggatcaag     4320
          agcttgtctc tggcatctga atgcctctga agcccagctt tatcacttat gagctgggtg     4380
          actctgggcg agggatttga gttctccaag cttcaatttc cccttctgtg aaaccaggtt     4440
          gataacagta aacctcttag ggttgttgag aagggaaacc catgtgaggt attcagccca     4500
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          attcttccag acactaaatt acctacatgc caggcatggt ggctcatgcc tgtaatccca     4680
          gcactttggg aggccaaggt cggtggatca tgaggtcagg agttcgagac cagcctggcc     4740
          aacatggtga aatgctgtct ctactaaaag tacaaaaatt agccaggcat ggtggcatgc     4800
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          ccgtctcaaa aaaaaaaaaa aaatttacct agagtgtggc acatagcagg gcctgtgaac     4980
          cagatggacc ttaccctggt gggcctgact tggtggggtt gagtctctaa gcatggcgtt     5040
          gaggcccagc acattccaac cctggactcc ctcagcctcc tctcttcacc ccacacccaa     5100
          aagtttctcc tctctcttgc cttacccaaa cttggtgccc tatccttgcc taatcccctg     5160
          cctaaggtcc ccctcctctc tgtccgtcca tcccatctgc atcttttttt ttttttgaga     5220
          tggagtctcg ctctgtcccc taggctagag tgcaatggcg cgatcttggc tcattgcaac     5280
          ctccgcctcc tgggttcaag cgattctctg cctcagcctc ccgagttgct gggattacag     5340
          gcacacaact tcatgctcag ctaatttttg tattttttag tagagacagg gtttcaccat     5400
          gttggccagg ctggtctcga actcctgccc tcaggtggtc cgcccacctt agcctcccaa     5460
          agtgctggga ttacaggcgt gagccaccgc gcctggcccc catttgcatc ttaaaggtcc     5520
          atctcagatc catttccatt tactgtccta gttctggttt ggtccttggc aagtgcactt     5580
          tgccttgaac aaaatagtgg caaaagctta ttgagcaggt actttgtgcc agacactgct     5640
          cagcatttca tggcattatc tcatgaagcc ccacgacaat tcctctgaag aagacacagg     5700
          caattctcat tattcgcgat ggttatgttc tataaaatca cagtgaacat tgaactagca     5760
          aacagtatta ggttcctgtg agcctctggt cacaacattt tcatcaacca acagcatata     5820
          atctggtttt atgtatgatt ctgtttaaag acattttatt tagtatatgt gttgctgatt     5880
          catcaatgct aagctgatgg cactatagca cacacctgaa tcaagtgtct aacacacgct     5940
          ttctccctaa ggtagccttc ttgtgcttag gaactacaca gctcttcagc aggaggctca     6000
          gaggccattt ccaaaagcca aatccccagc aaaagcacaa agtgtgaaaa acgttgcact     6060
          aagtagactg agaaggacac tcattcaata ggagagctga aacaagcagc agcagcgtga     6120
          cgccttgttg aaccttaact gggaatgtgc aaatttttca ctgctctgtg catgcccaca     6180
          aatggccatg aaaacatttc aagtattgac ttgggagtta caaataaaat tcagcaagta     6240
          ggcacattct caatgtagaa ccagagaaga atgaggatca actgtactat tattactgcc     6300
          gttttacaga taaggaaacc aaggctcaga tcagagtggt taacagtgac ttcaacattc     6360
          aacaagtatt attaagtgcc tactttgtgg caagtgctct tcctggcctt gggactgaag     6420
          acttacccaa ggtcacacag ctagcaggtt gtggagtcag gagtctactc cagctatctg     6480
          actcctgaac ccaagttttt ttttttttct ttaagatgga gtctcactct gtcacccagg     6540
          ctggagtgca gtggcgcgat ctcggctcac tgcaagctcc gcctcccggg ttcacaccat     6600
          tctcctgcct cggcctcccg agtagctggg actacaggca cctgccacca cccccagcta     6660
          atttttttgt atttttagta gagagggggt ttcactgtat tagccaggat ggtcttgatc     6720
          tcctgacctc gtgatctgcc cgccttggcc tcccaaagtg ctgggattac aggcttgagc     6780
          caccgcgccc ggccctgaac ccaactttta gagcagaaag tgttttcaat gcacagcgac     6840
          ctttttgagg gtctgtcctt ttcctgacca gaccctgagg gacagtgcct gagcagttga     6900
          gtacagggga agtcctcaga gagtgtgttg tccctgcagt tctcactgtc accggggagc     6960
          cctgccactt ccccttccag taccaccggc agctgtacca caaatgtacc cacaagggcc     7020
          ggccaggccc tcagccctgg taagactacg cagaggagtt ggagcagggg cctgggagac     7080
          atgtaccctg cctgtccttc tgtccaagga actctgcttg gagagagggg actgtgatag     7140
          ggcagggtgg gccaggcccc tgggtagagc agggaagcct tgtctctttc tacaggtgtg     7200
          ctaccacccc caactttgat caggaccagc gatggggata ctgtttggag cccaagaaag     7260
          tgaaaggtgc tacacacagc ctctggggtg gcctggggct ctctcctccc gcctcattac     7320
          tctcctggta tcaccagacc ccacacacct gggattctgg acccagcccc ttctctccct     7380
          ccacaatacc ctttggaagt ccagagggag agttctggga aggagtggtc ccattttgca     7440
          ggtgggtaaa ccaagcttgg aaacttggag tagcaaggtc acaaggcaag taggttcaag     7500
          aagggccttg gcccccagct gtgtgactca gctccctgct cttccttcca ccatgtccat     7560
          ctctcagacc actgcagcaa acacagcccc tgccagaaag gagggacctg tgtgaacatg     7620
          ccaagcggcc cccactgtct ctgtccacaa cacctcactg gaaaccactg ccagaaaggt     7680
          gaggagatgt ggaggacctg ggcggggtgc tgggggacag gggcaaccct gggcctacag     7740
          aataggttgc tggatactcg gagacttggc atggtcctag actctcctga gaccactatc     7800
          cctctttgtc cccagagaag tgctttgagc ctcagcttct ccggtttttc cacaagaatg     7860
          agatatggta tagaactgag caagcagctg tggccagatg ccagtgcaag ggtcctgatg     7920
          cccactgcca gcggctggcc agccagggtg agcagatggt tgggaacggg ccagggagga     7980
          gcgtcaggaa gacaggctgg caggaggccg ggtggtgtgc caggaaggag agctctctgg     8040
          gggggtcttt aggcccaggg gtggctcact gcgttccctc cccaagcctg ccgcaccaac     8100
          ccgtgcctcc atgggggtcg ctgcctagag gtggagggcc accgcctgtg ccactgcccg     8160
          gtgggctaca ccggagcctt ctgcgacgtg ggtgagtgag ggtctggggc aagcagaagg     8220
          ccagccccca ggtgggacgg gcttgccagg aaggaggagg gagagtgcgg aaagcagatg     8280
          agagggaggc aggagagccc agccttggct gcccagggag ccccctttct cctcagacac     8340
          caaggcaagc tgctatgatg gccgcgggct cagctaccgc ggcctggcca ggaccacgct     8400
          ctcgggtgcg ccctgtcagc cgtgggcctc ggaggccacc taccggaacg tgactgccga     8460
          gcaagcgcgg aactggggac tgggcggcca cgccttctgc cggtgcgccg cgtggggctg     8520
          ggtgacccct ccgccccagg gctccgggct cccggcgctc taacggcgcc ccgtcgtgtg     8580
          gctacaggaa cccggacaac gacatccgcc cgtggtgctt cgtgctgaac cgcgaccggc     8640
          tgagctggga gtactgcgac ctggcacagt gccagacccc aacccaggcg gcgcctccga     8700
          ccccggtgtc ccctaggctt catgtcccac tcatgcccgc gcagccggca ccgccgaagc     8760
          ctcagcccac gacccggacc ccgcctcagt cccagacccc gggaggttag gaagtggggg     8820
          ggggaaggag gagccgagag ggcgccgggc gagctagatt ccggccagcc ggccgcgggc     8880
          tctccgtcct cagcccctgc tcctccacag ccttgccggc gaagcgggag cagccgcctt     8940
          ccctgaccag gaacggccca ctgagctgcg ggcagcggct ccgcaagagt ctgtcttcga     9000
          tgacccgcgt cgttggcggg ctggtggcgc tacgcggggc gcacccctac atcgccgcgc     9060
          tgtactgggg ccacagtttc tgcgccggca gcctcatcgc cccctgctgg gtgctgacgg     9120
          ccgctcactg cctgcaggac cggcgagtac ccgcccgccc agagccgccc caggggccgc     9180
          ggctcctccg tctcccagcg cagcttccac gctgcacccg aacccgtgcc ctaccttctc     9240
          ccgccccacc cttctttcca cgcccctccg gagctcccgg ggaggaagct ggaacacggg     9300
          attggggttc gggagcaggg ggcttcccca gaacgcttgt ggccaggtct gagagcgctg     9360
          cctctcccct accccccccg caggcccgca cccgaggatc tgacggtggt gctcggccag     9420
          gaacgccgta accacagctg tgagccgtgc cagacgttgg ccgtgcgctc ctaccgcttg     9480
          cacgaggcct tctcgcccgt cagctaccag cacgacctgg gtgcgtgggg gcgccccgcg     9540
          gggacgggaa gagagcttgg ggccccggcg tccccgcctc acgctcctct ccgcccgggt     9600
          tagctctgtt gcgccttcag gaggatgcgg acggcagctg cgcgctcctg tcgccttacg     9660
          ttcagccggt gtgcctgcca agcggcgccg cgcgaccctc cgagaccacg ctctgccagg     9720
          tggccggctg gggccaccag ttcgagggta ggcacaactg ctaggggcag gggtagggga     9780
          ggagaccttt gatcactggg ttaggcggaa gaagcccgcg actttggtat cgttccgggt     9840
          gcctacagaa tgggtggcgc tgacctgatg ggttgtgaga atgtgtaggt gaatcccagg     9900
          tagaatccca gggcctggga ttcactgctg ggatccccaa atctcctggg gatacaggga     9960
          gaatcgaact tgctcttggt tccctctggg cgccgggctg caaaggccaa ctaggacgct    10020
          ggccccgcgc tccgggctag tgtgggagcc aggttctgcg actctggatg ggtggtgggg    10080
          gaggggtttc tgtttccgct ccgcccattc aaatcctggc ttttctctgg acctcagcct    10140
          ccttgcctat gaaattgaat taatggcacc tcctcccctt cgggcttgct gcgagagagg    10200
          aagggcatga gtgggtttac aagcgcctgg agcagctttg tccatcgtcc gggcggcaag    10260
          cgttgtcaga tggggtgtga agaaggcgct ctgtgttcgc aggggcggag gaatatgcca    10320
          gcttcctgca ggaggcgcag gtaccgttcc tctccctgga gcgctgctca gccccggacg    10380
          tgcacggatc ctccatcctc cccggcatgc tctgcgcagg gttcctcgag ggcggcaccg    10440
          atgcgtgcca ggtgagctct tagcccggtt ggcgcccttc cccgaggccg tcaggcacaa    10500
          atctcaggtc cacagcgctg agctgcgtgt ttccgaccca gggtgattcc ggaggcccgc    10560
          tggtgtgtga ggaccaagct gcagagcgcc ggctcaccct gcaaggcatc atcagctggg    10620
          gatcgggctg tggtgaccgc aacaagccag gcgtctacac cgatgtggcc tactacctgg    10680
          cctggatccg ggagcacacc gtttcctgat tgctcaggga ctcatctttc cctccttggt    10740
          gattccgcag tgagagagtg gctggggcat ggaaggcaag attgtgtccc attcccccag    10800
          tgcggccagc tccgcgccag gatggcgcag gaactcaata aagtgctttg aaaatgctga    10860
          gaaggaaagc tcttttcttc atgggtcccg ccgggaaatg ccaagacaga aaagcgattc    10920
          acagcttctc cacagctctc agagaacaag gtctatgaga tcttaacgtg caaaatctag    10980
          atgccagccc agctaatgtt tactgagcct aggatactgt ataccaagcc ctgtgcaagg    11040
          agaagctgca tgttattcct tatgagaaac taacattttg tttacagagc agtagttctc    11100
          agaccataca ttaagatcac ttggggagcg ttttgagcca atctatgccc aagttccacc    11160
          tcagaccaat taaatcagta tgtctaggga tggggcatgg gtagtggtat atttgtaaaa    11220
          ctccccagat aattccatgt acagccaagg ttgagaatcg tggttagaaa tacttagcat    11280
          tggccgggcg cggtggctca cgcctgtaat cctagcactt taagaggcca aggcaggtgg    11340
          attgctcagg agttcgaaac cagcctgggc aacacgatga aaccccgtct ctactaaaat    11400
          acaagaaatt agccgggcac ggcggcgtgc gcctgtagtc ccagctactc aggaggctga    11460
          ggcaggagaa tcacttgaac cggcaggaag gaaggaagga aggaacagag ggagggaaag    11520
          agagagacag aaagaaaaga aaaaagaaaa tagaaaaaaa gagcattgac tgtggcgtgg    11580
          accctaaggg ctgggtgaca tatcgttgtc cccaccccaa cacgcactag tgtagtgggt    11640
          ctgagagtcc cttggctagc agtaccatca ccagggaact tgttacacat aacaaattct    11700
          cgggctacac tttatactgc tgaacagaaa gtctggggtg gggcccagca atctgtttaa    11760
          cagccttgcg ggggattctg atgttctctc atgcttaaga accacaatct gggggttgaa    11820
          tggttggttc ccttacaagt gaaggtctgg ctgtccagac acaacatcct tttttcacaa    11880
          aaccagcttt ttaaaattaa aaatagattg gccagatgcg gtggttcacg cctgtaatct    11940
          cgtcactttg agaggctgag gcgggaggat tgtttgagct caagacttcc tgacccgcct    12000
          gggcaacata gtgagacctc atctcaaaaa aatttttttt aattaaaatt tgtttttgct    12060
          tttttagaga cggggcctcg ctctgtggct caggctggcg tgcagcgaca cgatcctata    12120
          atagtttact ataatctcgc tactgagttc aagcgatccg cccgcctcgg cctcccaaag    12180
          cgctgggatt acaggagtga gccgctgcgc tctgccaaac ccatcctaca ggataacctt    12240
          agaactgcga cagcactaaa cgcccacgcc ccacgtgccc cagcctgggt ggtcgctccg    12300
          ggacggcgcc ttgtgtgacg tcacagcccc gcccagcctg cctcacagcg ccgcaggcct    12360
          tccccgcgtg gcgcctctat atttccccga gaggtgcgag gcggctgggc gcactcggag    12420
          cgcgatgggc gactggaagg tctacatcag tgcagtgctg cgggaccagc gcatcgacga    12480
          cgtggccatc gtgggccatg cggacaacag ctgcgtgtgg gcttcgcggc ccgggggcct    12540
          gctggcggcc atctcgccgc aggaggtggg cgtgctcacg gggccggaca ggcacacctt    12600
          cctgcaggcg ggcctgagcg tggggggccg ccgctgctgc gtcatccgcg accacctgct    12660
          ggccgagggt gacggcgtgc tggacgcacg caccaagggg ctggacgcgc gcgccgtgtg    12720
          cgtgggccgt gcgccgcgcg cgctcctggt gctaatgggc cgacgcggcg tacatggggg    12780
          catcctcaac aagacggtgc acgaactcat acgcgggctg cgcatgcagg gcgcctagcc    12840
          ggccagccag gccgcccact ggtagcgcgg gccaaataaa ctgtgacctg ggcgcggctg    12900
          gctcctcctc cacttgcgcg gtggggggag ttgtaaataa ggaaactggt ctttgcaaga    12960
          cggttacctg gtggagccgg gattttgagt ctagaggctg ccaggcccct gtgccctaca    13020
          ccctgctctc ccatggacgc cttgcagagg ctcctggcct gactgctgct ccttggcgcg    13080
          ttcccagggt cctagggact ccgcagctga ggaagagtcc aagggtgggg gcttctcaaa    13140
          gtctgtttca gccttagcgt cctttctcag agatattccc acacattagg caggacaagt    13200
          aaagggagcc ccctccccat cccgcgaaca cctctcccca tcagggtgtc aggctggagg    13260
          ccaatttgct cctcccccct ccactcatac ctcaagcact agcaagttgt gagtgggtga    13320
          caggatgggc ttggtggctt gtaaagcagt tctggggctc acaggcctct gcatctctgc    13380
          ccacattcct ccaaggggag cctactgaga gggctcatgt ccaagaccat cgcaattggg    13440
          tttgagacct tacatcctgc cttccccagg ccttcgaaaa ggccccgcag gagtccctgg    13500
          actagaggga ggaactctgg catccctacc cgggagtctc actctgcagg cctcagtttc    13560
          agggtgacct atggaggagg gggaattgaa aagcttgggt aagtttgagg cctggtttat    13620
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          tggggcccag ggcatggcct ctcttgccca cccccaccct tcccgtcccc tcccccagcg    13740
          gccctgatgg cagaccccac ctgtcactta ttctggagcc ctgatcttat cccagcagga    13800
          aggagtgatg tgtggctgag gtgggtgaat ttagagggca gagggagacc agaggaagtt    13860
          cagccaggtg ggggtcaggg ggtgggggtg cagaatcctc cttacacttg ccttgggggt    13920
          ggccccaggc ctaggagggg cttccaggga gtttgaattg tggtttggac tcactaaggt    13980
          agggccaggc agatggttgg                                                14000
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  2060]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          ctattgatct ggactcctgg ataggcagct ggaccaacgg acggatgcca tgagggctct       60
          gctgctcctg gggttcctgc tggtgagctt ggagtcaaca ctttcgattc caccttggga      120
          agcccccaag gagcataagt acaaagctga agagcacaca gtcgttctca ctgtcaccgg      180
          ggagccctgc cacttcccct tccagtacca ccggcagctg taccacaaat gtacccacaa      240
          gggccggcca ggccctcagc cctggtgtgc taccaccccc aactttgatc aggaccagcg      300
          atggggatac tgtttggagc ccaagaaagt gaaagaccac tgcagcaaac acagcccctg      360
          ccagaaagga gggacctgtg tgaacatgcc aagcggcccc cactgtctct gtccacaaca      420
          cctcactgga aaccactgcc agaaagagaa gtgctttgag cctcagcttc tccggttttt      480
          ccacaagaat gagatatggt atagaactga gcaagcagct gtggccagat gccagtgcaa      540
          gggtcctgat gcccactgcc agcggctggc cagccaggcc tgccgcacca acccgtgcct      600
          ccatgggggt cgctgcctag aggtggaggg ccaccgcctg tgccactgcc cggtgggcta      660
          caccggagcc ttctgcgacg tggacaccaa ggcaagctgc tatgatggcc gcgggctcag      720
          ctaccgcggc ctggccagga ccacgctctc gggtgcgccc tgtcagccgt gggcctcgga      780
          ggccacctac cggaacgtga ctgccgagca agcgcggaac tggggactgg gcggccacgc      840
          cttctgccgg aacccggaca acgacatccg cccgtggtgc ttcgtgctga accgcgaccg      900
          gctgagctgg gagtactgcg acctggcaca gtgccagacc ccaacccagg cggcgcctcc      960
          gaccccggtg tcccctaggc ttcatgtccc actcatgccc gcgcagccgg caccgccgaa     1020
          gcctcagccc acgacccgga ccccgcctca gtcccagacc ccgggagcct tgccggcgaa     1080
          gcgggagcag ccgccttccc tgaccaggaa cggcccactg agctgcgggc agcggctccg     1140
          caagagtctg tcttcgatga cccgcgtcgt tggcgggctg gtggcgctac gcggggcgca     1200
          cccctacatc gccgcgctgt actggggcca cagtttctgc gccggcagcc tcatcgcccc     1260
          ctgctgggtg ctgacggccg ctcactgcct gcaggaccgg cccgcacccg aggatctgac     1320
          ggtggtgctc ggccaggaac gccgtaacca cagctgtgag ccgtgccaga cgttggccgt     1380
          gcgctcctac cgcttgcacg aggccttctc gcccgtcagc taccagcacg acctggctct     1440
          gttgcgcctt caggaggatg cggacggcag ctgcgcgctc ctgtcgcctt acgttcagcc     1500
          ggtgtgcctg ccaagcggcg ccgcgcgacc ctccgagacc acgctctgcc aggtggccgg     1560
          ctggggccac cagttcgagg gggcggagga atatgccagc ttcctgcagg aggcgcaggt     1620
          accgttcctc tccctggagc gctgctcagc cccggacgtg cacggatcct ccatcctccc     1680
          cggcatgctc tgcgcagggt tcctcgaggg cggcaccgat gcgtgccagg gtgattccgg     1740
          aggcccgctg gtgtgtgagg accaagctgc agagcgccgg ctcaccctgc aaggcatcat     1800
          cagctgggga tcgggctgtg gtgaccgcaa caagccaggc gtctacaccg atgtggccta     1860
          ctacctggcc tggatccggg agcacaccgt ttcctgattg ctcagggact catctttccc     1920
          tccttggtga ttccgcagtg agagagtggc tggggcatgg aaggcaagat tgtgtcccat     1980
          tcccccagtg cggccagctc cgcgccagga tggcgcagga actcaataaa gtgctttgaa     2040
          aatgctgaga aaaaaaaaaa                                                 2060
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  23]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  引子]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          gtcaacactt tcgattccac ctt                                               23
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  引子]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          tccccggtga cagtgagaac                                                   20
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  30]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  探針]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          aagcccccaa ggagcataag tacaaagctg                                        30
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  18]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  引子]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          gtgcacggat cctccatc                                                     18
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  引子]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          cagcttggtc ctcacacac                                                    19
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  探針]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          aatcaccctg gcacgcatcg                                                   20
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  引子]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          ccgggagcac accgttt                                                      17
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  引子]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          ggaatcacca aggagggaaa g                                                 21
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  探針]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          ctgattgctc agggact                                                      17
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          000
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          000
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          000
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          000
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          000
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          000
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          ccaggagtcc agatcaatag                                                   20
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          tcaccagcag gaaccccagg                                                   20
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          ggaatcgaaa gtgttgactc                                                   20
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          ggtgacagtg agaacgactg                                                   20
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          tccccggtga cagtgagaac                                                   20
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          gggtacattt gtggtacagc                                                   20
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  26]]>
          cggcccttgt gggtacattt                                                   20
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          agggcctggc cggcccttgt                                                   20
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          gtatccccat cgctggtcct                                                   20
          <![CDATA[<210>  29]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  29]]>
          tgcagtggtc tttcactttc                                                   20
          <![CDATA[<210>  30]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  30]]>
          ttgtggacag agacagtggg                                                   20
          <![CDATA[<210>  31]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  31]]>
          cagtgaggtg ttgtggacag                                                   20
          <![CDATA[<210>  32]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  32]]>
          agaagctgag gctcaaagca                                                   20
          <![CDATA[<210>  33]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  33]]>
          gaaaaaccgg agaagctgag                                                   20
          <![CDATA[<210>  34]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  34]]>
          tggcatctgg ccacagctgc                                                   20
          <![CDATA[<210>  35]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  35]]>
          tgcactggca tctggccaca                                                   20
          <![CDATA[<210>  36]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  36]]>
          aggacccttg cactggcatc                                                   20
          <![CDATA[<210>  37]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  37]]>
          agtgggcatc aggacccttg                                                   20
          <![CDATA[<210>  38]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          acggctgaca gggcgcaccc                                                   20
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          gtccccagtt ccgcgcttgc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          tggccgccca gtccccagtt                                                   20
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          tccgggttcc ggcagaaggc                                                   20
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          catgagtggg acatgaagcc                                                   20
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          gagccgctgc ccgcagctca                                                   20
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          acagactctt gcggagccgc                                                   20
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          gatgaggctg ccggcgcaga                                                   20
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          ggcgcaacag agccaggtcg                                                   20
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          gcagctgccg tccgcatcct                                                   20
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          gacaggagcg cgcagctgcc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  72]]>
          gcaggcacac cggctgaacg                                                   20
          <![CDATA[<210>  73]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  73]]>
          gcgccgcttg gcaggcacac                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          tcgaactggt ggccccagcc                                                   20
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          cctgcgcaga gcatgccggg                                                   20
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          ctcgaggaac cctgcgcaga                                                   20
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          gccgccctcg aggaaccctg                                                   20
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          gtcctcacac accagcgggc                                                   20
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          <![CDATA[<400>  80]]>
          gcttggtcct cacacaccag                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  82]]>
          gatgccttgc agggtgagcc                                                   20
          <![CDATA[<210>  83]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          gcggtcacca cagcccgatc                                                   20
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          ttgttgcggt caccacagcc                                                   20
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          <![CDATA[<400>  85]]>
          cctggcttgt tgcggtcacc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          ggccacatcg gtgtagacgc                                                   20
          <![CDATA[<210>  87]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          tagtaggcca catcggtgta                                                   20
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          ccaggtagta ggccacatcg                                                   20
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          <![CDATA[<400>  89]]>
          ccaggccagg tagtaggcca                                                   20
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          cggatccagg ccaggtagta                                                   20
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          agtccctgag caatcaggaa                                                   20
          <![CDATA[<210>  92]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          gggaaagatg agtccctgag                                                   20
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          atcctggcgc ggagctggcc                                                   20
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          ttcctgcgcc atcctggcgc                                                   20
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          ctttattgag ttcctgcgcc                                                   20
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          tttcaaagca ctttattgag                                                   20
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          agcattttca aagcacttta                                                   20
          <![CDATA[<210>  98]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<400>  98]]>
          actcttgcgg agccgctgcc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<400>  99]]>
          cgggtcatcg aagacagact                                                   20
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          acgcgggtca tcgaagacag                                                   20
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          acgacgcggg tcatcgaaga                                                   20
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          ccaacgacgc gggtcatcga                                                   20
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          gccaccagcc cgccaacgac                                                   20
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          ccccagtaca gcgcggcgat                                                   20
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          ctgcgcctcc tgcaggaagc                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  136]]>
          tacctgcgcc tcctgcagga                                                   20
          <![CDATA[<210>  137]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  137]]>
          aaccctgcgc agagcatgcc                                                   20
          <![CDATA[<210>  138]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  138]]>
          aggaaccctg cgcagagcat                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  139]]>
          gaggaaccct gcgcagagca                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          gtgccgccct cgaggaaccc                                                   20
          <![CDATA[<210>  143]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  143]]>
          ggtgccgccc tcgaggaacc                                                   20
          <![CDATA[<210>  144]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          aggccacatc ggtgtagacg                                                   20
          <![CDATA[<210>  146]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<210>  148]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  148]]>
          gtccctgagc aatcaggaaa                                                   20
          <![CDATA[<210>  149]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  149]]>
          gagtccctga gcaatcagga                                                   20
          <![CDATA[<210>  150]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  150]]>
          tgagtccctg agcaatcagg                                                   20
          <![CDATA[<210>  151]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          gaaagatgag tccctgagca                                                   20
          <![CDATA[<210>  152]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          ggaaagatga gtccctgagc                                                   20
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          agggaaagat gagtccctga                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  154]]>
          gagggaaaga tgagtccctg                                                   20
          <![CDATA[<210>  155]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          ggagggaaag atgagtccct                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          tgccttccat gccccagcca                                                   20
          <![CDATA[<210>  157]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          gccatcctgg cgcggagctg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
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          tttattgagt tcctgcgcca                                                   20
          <![CDATA[<210>  162]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          actttattga gttcctgcgc                                                   20
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          <![CDATA[<400>  163]]>
          cactttattg agttcctgcg                                                   20
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          gcactttatt gagttcctgc                                                   20
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          aaagcacttt attgagttcc                                                   20
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          ctcagcattt tcaaagcact                                                   20
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          <![CDATA[<400>  267]]>
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          gagacaaggc ttccctgctc                                                   20
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          gataccagga gagtaatgag                                                   20
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          aagcttggtt tacccacctg                                                   20
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          gagagatgga catggtggaa                                                   20
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          ccagcaacct attctgtagg                                                   20
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          ctccctggcc cgttcccaac                                                   20
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          aacgcagtga gccacccctg                                                   20
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          <![CDATA[<400>  303]]>
          ctgggctctc ctgcctccct                                                   20
          <![CDATA[<210>  304]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<400>  304]]>
          ttcccccccc cacttcctaa                                                   20
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          gagacggagg agccgcggcc                                                   20
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          aacccgggcg gagaggagcg                                                   20
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          ggcttcttcc gcctaaccca                                                   20
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          tgaatcccag gccctgggat                                                   20
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          gagtcgcaga acctggctcc                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          atttcatagg caaggaggct                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          cttcacaccc catctgacaa                                                   20
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          gaatcaccct gggtcggaaa                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          gtccgggttc cggcagaagg                                                   20
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          catggcatcc gtccgttggt                                                   20
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          ttgactccaa gctcaccagc                                                   20
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          gctcttcagc tttgtactta                                                   20
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          ggcagggctc cccggtgaca                                                   20
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          gaggtgttgt ggacagagac                                                   20
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          ccaaggacca aaccagaact                                                   20
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          <![CDATA[<400>  362]]>
          ctgtgtcttc ttcagaggaa                                                   20
          <![CDATA[<210>  363]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          tgttggttga tgaaaatgtt                                                   20
          <![CDATA[<210>  364]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          cttgattcag gtgtgtgcta                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          tttgtgggca tgcacagagc                                                   20
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          atcctcattc ttctctggtt                                                   20
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          aagtaggcac ttaataatac                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<210>  372]]>
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          <![CDATA[<210>  373]]>
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          <![CDATA[<210>  374]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          tccaagcttg gtttacccac                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          tctgagagat ggacatggtg                                                   20
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          ctcctccctg gcccgttccc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          aggctgggct ctcctgcctc                                                   20
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          tccttccccc ccccacttcc                                                   20
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          gtggcagggc tccccggtga                                                   20
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          aggtggaatc tacaagggag                                                   20
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          atgcaccagg tgatgggctg                                                   20
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          actcaacccc accaagtcag                                                   20
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          ccatttgtgg gcatgcacag                                                   20
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          agctggcata ttcctccgcc                                                   20
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          gcgctccagg gagaggaacg                                                   20
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          agcttggtcc tcacacacca                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  493]]>
          cccgatcccc agctgatgat                                                   20
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          <![CDATA[<400>  494]]>
          agtaggccac atcggtgtag                                                   20
          <![CDATA[<210>  495]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          gaaacggtgt gctcccggat                                                   20
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          tgcggaatca ccaaggaggg                                                   20
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          acaatcttgc cttccatgcc                                                   20
          <![CDATA[<210>  498]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<400>  498]]>
          tattgagttc ctgcgccatc                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  499]]>
          ttcccacagc actcaccgaa                                                   20
          <![CDATA[<210>  500]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  500]]>
          cacctggacc cacaggtcat                                                   20
          <![CDATA[<210>  501]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  501]]>
          tgcaggctgt gcccttgtat                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  502]]>
          ctctcacagc ccagaaatgc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  503]]>
          ccaaggtgga atctacaagg                                                   20
          <![CDATA[<210>  504]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  504]]>
          caccaggtag gcactagact                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          cctgctccga gccaggctcg                                                   20
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          tccttgccca ttgaaggccc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  507]]>
          ttggagaact caaatccctc                                                   20
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          <![CDATA[<400>  508]]>
          tccatgcacc aggtgatggg                                                   20
          <![CDATA[<210>  509]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  509]]>
          catgtaggta atttagtgtc                                                   20
          <![CDATA[<210>  510]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          gagactcaac cccaccaagt                                                   20
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          <![CDATA[<400>  511]]>
          cagatgggat ggacggacag                                                   20
          <![CDATA[<210>  512]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          cacttgccaa ggaccaaacc                                                   20
          <![CDATA[<210>  513]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          aattgcctgt gtcttcttca                                                   20
          <![CDATA[<210>  514]]>
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          atatgctgtt ggttgatgaa                                                   20
          <![CDATA[<210>  515]]>
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          tagacacttg attcaggtgt                                                   20
          <![CDATA[<210>  516]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  516]]>
          gtgtccttct cagtctactt                                                   20
          <![CDATA[<210>  517]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          tggccatttg tgggcatgca                                                   20
          <![CDATA[<210>  518]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          cagttgatcc tcattcttct                                                   20
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          ttgggttcag gagtcagata                                                   20
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          gcactgtccc tcagggtctg                                                   20
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          gtacatgtct cccaggcccc                                                   20
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          gtgcacttgc caaggaccaa                                                   20
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          <![CDATA[<400>  588]]>
          gagaattgcc tgtgtcttct                                                   20
          <![CDATA[<210>  589]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  589]]>
          attatatgct gttggttgat                                                   20
          <![CDATA[<210>  590]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  590]]>
          gctaccttag ggagaaagcg                                                   20
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          <![CDATA[<400>  591]]>
          tgagtgtcct tctcagtcta                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  592]]>
          tcatggccat ttgtgggcat                                                   20
          <![CDATA[<210>  593]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<400>  593]]>
          agtacagttg atcctcattc                                                   20
          <![CDATA[<210>  594]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  594]]>
          gagcacttgc cacaaagtag                                                   20
          <![CDATA[<210>  595]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  595]]>
          aacttgggtt caggagtcag                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          caggcactgt ccctcagggt                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  597]]>
          ggcagggtac atgtctccca                                                   20
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          gcacacctgt agaaagagac                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  599]]>
          cagaatccca ggtgtgtggg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          ctccaagttt ccaagcttgg                                                   20
          <![CDATA[<210>  601]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  601]]>
          ctgcagtggt ctgagagatg                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          caagtctccg agtatccagc                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          cgggttggtg cggcaggctt                                                   20
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          ccctgggcag ccaaggctgg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          tttccttctc agcattttca                                                   20
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          cactgcggaa tcaccaagga                                                   20
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          acacaatctt gccttccatg                                                   20
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          cagaaatgca ggctgtgccc                                                   20
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          tgcagcttcc tctcacagcc                                                   20
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          attgaatgag tgtccttctc                                                   20
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          atgttttcat ggccatttgt                                                   20
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          actctaggta aatttttttt                                                   20
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          aatgtgctgg gcctcaacgc                                                   20
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          aagttgtgtg cctgtaatcc                                                   20
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          <![CDATA[<400>  817]]>
          caaggcaaag tgcacttgcc                                                   20
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          gcgaataatg agaattgcct                                                   20
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          taaaaccaga ttatatgctg                                                   20
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          cacaagaagg ctaccttagg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          cctattgaat gagtgtcctt                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          cttgaaatgt tttcatggcc                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          agtaataata gtacagttga                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          ctgctctaaa agttgggttc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          agaaggacag gcagggtaca                                                   20
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          ctaggaccat gccaagtctc                                                   20
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          ttgccccaga ccctcactca                                                   20
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          ccttggtgtc tgaggagaaa                                                   20
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          accctcgaac tggtggcccc                                                   20
          <![CDATA[<210>  839]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  839]]>
          acccggaacg ataccaaagt                                                   20
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          cccctccccc accacccatc                                                   20
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          catattcctc cgcccctgcg                                                   20
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          ctatccagga gtccagatca                                                   20
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          tctcactgcg gaatcaccaa                                                   20
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          ctgggacaat cctggttccc                                                   20
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          cataggcctc ctagtcacct                                                   20
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          taaggcccat ctcccccaga                                                   20
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          ttgctagtct gcagcttcct                                                   20
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          aggccactta ccgactgtgt                                                   20
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          catgggcata agacctagca                                                   20
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          agcacatatc tcaagcacct                                                   20
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          atcaacctgg tttcacagaa                                                   20
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          tatttgtaaa gcatttccat                                                   20
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          cacactctag gtaaattttt                                                   20
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          atgaagttgt gtgcctgtaa                                                   20
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          gttcaaggca aagtgcactt                                                   20
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          acataaaacc agattatatg                                                   20
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          tctcctattg aatgagtgtc                                                   20
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          caatacttga aatgttttca                                                   20
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          ggcagtaata atagtacagt                                                   20
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          tttctgctct aaaagttggg                                                   20
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          cgtgctggta gctgacgggc                                                   20
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          <![CDATA[<400>  945]]>
          gaactggtgg ccccagccgg                                                   20
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          tcctgcagga agctggcata                                                   20
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          gaaccctgcg cagagcatgc                                                   20
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          cgctctgcag cttggtcctc                                                   20
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          ccacagcccg atccccagct                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          gcaatcagga aacggtgtgc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          tctctcactg cggaatcacc                                                   20
          <![CDATA[<210>  952]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          aatgggacac aatcttgcct                                                   20
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          agcactttat tgagttcctg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  954]]>
          atcctgggac aatcctggtt                                                   20
          <![CDATA[<210>  955]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          ccacataggc ctcctagtca                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          tcttaaggcc catctccccc                                                   20
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          ctgttgctag tctgcagctt                                                   20
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          gccaggccac ttaccgactg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          gcccatgggc ataagaccta                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          agcagcacat atctcaagca                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          cagagacaag ctcttgatcc                                                   20
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          gttatcaacc tggtttcaca                                                   20
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          aaaagctaat atttgtaaag                                                   20
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          tgccacactc taggtaaatt                                                   20
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          ggttggaatg tgctgggcct                                                   20
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          agcatgaagt tgtgtgcctg                                                   20
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          tttgttcaag gcaaagtgca                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          accatcgcga ataatgagaa                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          catacataaa accagattat                                                   20
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          <![CDATA[<400>  970]]>
          tagttcctaa gcacaagaag                                                   20
          <![CDATA[<210>  971]]>
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          agctctccta ttgaatgagt                                                   20
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          agtcaatact tgaaatgttt                                                   20
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          aacggcagta ataatagtac                                                   20
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          ggcacgggtt ggtgcggcag                                                   20
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          ggcggtggcc ctccacctct                                                   20
          <![CDATA[<210>  1008]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1008]]>
          gcagcttgcc ttggtgtcca                                                   20
          <![CDATA[<210>  1009]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1009]]>
          tcctggccag gccgcggtag                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          gttccggtag gtggcctccg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          cagcacgaag caccacgggc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1012]]>
          cactgtgcca ggtcgcagta                                                   20
          <![CDATA[<210>  1013]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1013]]>
          aggcttcggc ggtgccggct                                                   20
          <![CDATA[<210>  1014]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1014]]>
          gtcagggaag gcggctgctc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1015]]>
          gactcttgcg gagccgctgc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1016]]>
          cgccaccagc ccgccaacga                                                   20
          <![CDATA[<210>  1017]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1017]]>
          cgatgaggct gccggcgcag                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1018]]>
          cgttcctggc cgagcaccac                                                   20
          <![CDATA[<210>  1019]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1019]]>
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          <![CDATA[<210>  1020]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1021]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1022]]>
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          <![CDATA[<210>  1023]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1024]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1025]]>
          accacagccc gatccccagc                                                   20
          <![CDATA[<210>  1026]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1026]]>
          gccaggtagt aggccacatc                                                   20
          <![CDATA[<210>  1027]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1027]]>
          agcaatcagg aaacggtgtg                                                   20
          <![CDATA[<210>  1028]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1028]]>
          ctctctcact gcggaatcac                                                   20
          <![CDATA[<210>  1029]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1029]]>
          gaatgggaca caatcttgcc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1030]]>
          aagcacttta ttgagttcct                                                   20
          <![CDATA[<210>  1031]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1031]]>
          acaatcctgg gacaatcctg                                                   20
          <![CDATA[<210>  1032]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1032]]>
          tttccacata ggcctcctag                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
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          tcttcttaag gcccatctcc                                                   20
          <![CDATA[<210>  1034]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          gatctgttgc tagtctgcag                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          ggagccaggc cacttaccga                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          agtgcccatg ggcataagac                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1037]]>
          gccagcagca catatctcaa                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
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          tgccagagac aagctcttga                                                   20
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          ttcataataa aagctaatat                                                   20
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          ccctgagcaa tcaggaaacg                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1103]]>
          ccactctctc actgcggaat                                                   20
          <![CDATA[<210>  1104]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1104]]>
          gcggagctgg ccgcactggg                                                   20
          <![CDATA[<210>  1105]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1105]]>
          caaagcactt tattgagttc                                                   20
          <![CDATA[<210>  1106]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1106]]>
          cccagaacaa tcctgggaca                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1107]]>
          ctcacctttc cacataggcc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1108]]>
          ccgttgtctt cttaaggccc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1109]]>
          gccaccgatc tgttgctagt                                                   20
          <![CDATA[<210>  1110]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1110]]>
          ccgggaggag gagccaggcc                                                   20
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          cactctagtg cccatgggca                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1112]]>
          caggagccca ggtgtgatgg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1113]]>
          ttcagatgcc agagacaagc                                                   20
          <![CDATA[<210>  1114]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1114]]>
          aggtttactg ttatcaacct                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1115]]>
          ggtagtttca taataaaagc                                                   20
          <![CDATA[<210>  1116]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1116]]>
          cctgctatgt gccacactct                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1117]]>
          ggaggctgag ggagtccagg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1118]]>
          aattagctga gcatgaagtt                                                   20
          <![CDATA[<210>  1119]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1119]]>
          ctcaataagc ttttgccact                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1120]]>
          tagaacataa ccatcgcgaa                                                   20
          <![CDATA[<210>  1121]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1121]]>
          atgtctttaa acagaatcat                                                   20
          <![CDATA[<210>  1122]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          agagctgtgt agttcctaag                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1123]]>
          gcttgtttca gctctcctat                                                   20
          <![CDATA[<210>  1124]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1124]]>
          taactcccaa gtcaatactt                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          agtcttcagt cccaaggcca                                                   20
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          cattgaaaac actttctgct                                                   20
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1128]]>
          tgaggacttc ccctgtactc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          cagagttcct tggacagaag                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          aggctgtgtg tagcaccttt                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          ctctggactt ccaaagggta                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          cctacttgcc ttgtgacctt                                                   20
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          ctccacatct cctcaccttt                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          tggtcaggga aggcggctgc                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1167]]>
          agactcttgc ggagccgctg                                                   20
          <![CDATA[<210>  1168]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1168]]>
          gcgccaccag cccgccaacg                                                   20
          <![CDATA[<210>  1169]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1169]]>
          gcgatgaggc tgccggcgca                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1170]]>
          tcacagctgt ggttacggcg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1171]]>
          aaggcgcaac agagccaggt                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<400>  1172]]>
          cgtaaggcga caggagcgcg                                                   20
          <![CDATA[<210>  1173]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<400>  1173]]>
          gcctcctgca ggaagctggc                                                   20
          <![CDATA[<210>  1174]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1174]]>
          tcgaggaacc ctgcgcagag                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          ccttgcaggg tgagccggcg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          caccacagcc cgatccccag                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          ggccaggtag taggccacat                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1178]]>
          ctgagcaatc aggaaacggt                                                   20
          <![CDATA[<210>  1179]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1179]]>
          actctctcac tgcggaatca                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1180]]>
          ggaatgggac acaatcttgc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1181]]>
          agaacaatcc tgggacaatc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
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          acctttccac ataggcctcc                                                   20
          <![CDATA[<210>  1183]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1183]]>
          ttgtcttctt aaggcccatc                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          accgatctgt tgctagtctg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          ggaggaggag ccaggccact                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          tctagtgccc atgggcataa                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1187]]>
          gagcccaggt gtgatggcgc                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1188]]>
          agatgccaga gacaagctct                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          tttactgtta tcaacctggt                                                   20
          <![CDATA[<210>  1190]]>
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          agtttcataa taaaagctaa                                                   20
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          gctatgtgcc acactctagg                                                   20
          <![CDATA[<210>  1192]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
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          agtccagggt tggaatgtgc                                                   20
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          tagctgagca tgaagttgtg                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
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          aataagcttt tgccactatt                                                   20
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          aacataacca tcgcgaataa                                                   20
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          cagaatcata cataaaacca                                                   20
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          gctgtgtagt tcctaagcac                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1199]]>
          ctcccaagtc aatacttgaa                                                   20
          <![CDATA[<210>  1200]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1200]]>
          ttatctgtaa aacggcagta                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1201]]>
          cttcagtccc aaggccagga                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1202]]>
          tgaaaacact ttctgctcta                                                   20
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          ggacttcccc tgtactcaac                                                   20
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          agttccttgg acagaaggac                                                   20
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          ctgtgtgtag cacctttcac                                                   20
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          tggacttcca aagggtattg                                                   20
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          acttgccttg tgaccttgct                                                   20
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          <![CDATA[<400>  1208]]>
          cacatctcct cacctttctg                                                   20
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          <![CDATA[<400>  1209]]>
          tctcaggaga gtctaggacc                                                   20
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          <![CDATA[<400>  1210]]>
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          <![CDATA[<400>  1212]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1214]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
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          cattctgtag gcacccggaa                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          aggagcagca gagccctcat                                                   20
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          <![CDATA[<210>  1224]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          gtgagaacga ctgtgtgctc                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          actttcttgg gctccaaaca                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          tgttcacaca ggtccctcct                                                   20
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          tttctggcag tggtttccag                                                   20
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          tggcaggagc ccaggtgtga                                                   20
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1263]]>
          gcattcagat gccagagaca                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1264]]>
          aagaggttta ctgttatcaa                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1265]]>
          aaaggtagtt tcataataaa                                                   20
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          <![CDATA[<400>  1266]]>
          ggccctgcta tgtgccacac                                                   20
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          agaggaggct gagggagtcc                                                   20
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          <![CDATA[<400>  1268]]>
          acctttaaga tgcaaatggg                                                   20
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          ctgctcaata agcttttgcc                                                   20
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          ttatagaaca taaccatcgc                                                   20
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          catatactaa ataaaatgtc                                                   20
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          tgaagagctg tgtagttcct                                                   20
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          gctgcttgtt tcagctctcc                                                   20
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1274]]>
          ttgtaactcc caagtcaata                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1275]]>
          ctctgatctg agccttggtt                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1276]]>
          gtaagtcttc agtcccaagg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1277]]>
          gtgcattgaa aacactttct                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1278]]>
          ctctgaggac ttcccctgta                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1279]]>
          aagcagagtt ccttggacag                                                   20
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          cagaggctgt gtgtagcacc                                                   20
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          gaacctactt gccttgtgac                                                   20
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          tagtggtctc aggagagtct                                                   20
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          <![CDATA[<400>  1327]]>
          cggtcaccac agcccgatcc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1328]]>
          atccaggcca ggtagtaggc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1329]]>
          gatgagtccc tgagcaatca                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1330]]>
          cccagccact ctctcactgc                                                   20
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          ttttcaaagc actttattga                                                   20
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          tagcgacccc ccagaacaat                                                   20
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          cgggctggcc tcacctttcc                                                   20
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          tacctccccc cgttgtcttc                                                   20
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          acacatcccc acccaagggt                                                   20
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1338]]>
          gctcacgatc actctagtgc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1339]]>
          ggaaggctgg caggagccca                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1340]]>
          gcttcagagg cattcagatg                                                   20
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          aaccctaaga ggtttactgt                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          catctaaaag gtagtttcat                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1343]]>
          ttcacaggcc ctgctatgtg                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
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          ggagaaactt ttgggtgtgg                                                   20
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          agatggacct ttaagatgca                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          tgtgatttta tagaacataa                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          aatcagcaac acatatacta                                                   20
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          cttcttgaac ctacttgcct                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          gagggatagt ggtctcagga                                                   20
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          agaggagaaa cttttgggtg                                                   20
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          ctgagatgga cctttaagat                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1423]]>
          tggcacaaag tacctgctca                                                   20
          <![CDATA[<210>  1424]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1424]]>
          cactgtgatt ttatagaaca                                                   20
          <![CDATA[<210>  1425]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1425]]>
          atgaatcagc aacacatata                                                   20
          <![CDATA[<210>  1426]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1426]]>
          gcctcctgct gaagagctgt                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1427]]>
          cacgctgctg ctgcttgttt                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1428]]>
          gaattttatt tgtaactccc                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1429]]>
          tgttaaccac tctgatctga                                                   20
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          tgaccttggg taagtcttca                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          aaggtcgctg tgcattgaaa                                                   20
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          <![CDATA[<400>  1432]]>
          caacacactc tctgaggact                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1433]]>
          cctctctcca agcagagttc                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1434]]>
          aggccacccc agaggctgtg                                                   20
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1435]]>
          ccagaactct ccctctggac                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1436]]>
          gcccttcttg aacctacttg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<400>  1437]]>
          cccgcccagg tcctccacat                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
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          aaagagggat agtggtctca                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1439]]>
          cagagagctc tccttcctgg                                                   20
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
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          tccttcctgg caagcccgtc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          tcacccagcc ccacgcggcg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          gaggacggag agcccgcggc                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          tcccgaaccc caatcccgtg                                                   20
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          ctacccctgc ccctagcagt                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          attctcacaa cccatcaggt                                                   20
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          tttgaatggg cggagcggaa                                                   20
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
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          taaacccact catgcccttc                                                   20
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          ttcaaagcac tttattgagt                                                   20
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          <![CDATA[<400>  1487]]>
          cgacccccca gaacaatcct                                                   20
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          gctggcctca cctttccaca                                                   20
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          <![CDATA[<400>  1489]]>
          ctccccccgt tgtcttctta                                                   20
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          tagcctgcca ccgatctgtt                                                   20
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          catccccacc caagggttcc                                                   20
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          cacgatcact ctagtgccca                                                   20
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          aggctggcag gagcccaggt                                                   20
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          gaggcattca gatgccagag                                                   20
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          tggaccttta agatgcaaat                                                   20
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          tacctgctca ataagctttt                                                   20
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          attttataga acataaccat                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          gctgctgctt gtttcagctc                                                   20
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          tatttgtaac tcccaagtca                                                   20
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          atcctcctga aggcgcaaca                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          cactgttaac cactctgatc                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1583]]>
          acaacctgct agctgtgtga                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1584]]>
          aaaaaggtcg ctgtgcattg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1585]]>
          ggacaacaca ctctctgagg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
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          <![CDATA[<400>  1586]]>
          tcccctctct ccaagcagag                                                   20
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          ccccaggcca ccccagaggc                                                   20
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          ttcccagaac tctccctctg                                                   20
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          <![CDATA[<400>  1589]]>
          aaggcccttc ttgaacctac                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1590]]>
          caccccgccc aggtcctcca                                                   20
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          ccccagagag ctctccttcc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<400>  1596]]>
          tgctcccgaa ccccaatccc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<400>  1597]]>
          cccctacccc tgcccctagc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          cacattctca caacccatca                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
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          ggatttgaat gggcggagcg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          ctcattcttg tggaaaaacc                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1615]]>
          ggcagtggca caggcggtgg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1616]]>
          cccgcggcca tcatagcagc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1617]]>
          ggctgacagg gcgcacccga                                                   20
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          agtgggacat gaagcctagg                                                   20
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          gccgttcctg gtcagggaag                                                   20
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          gtggccccag tacagcgcgg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          gtctcctctg cctgggcctt                                                   20
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          aaccctttct acctcccccc                                                   20
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          gactataagt catagcctgc                                                   20
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          ctgcaccata cacatcccca                                                   20
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          gatcacacag ctcacgatca                                                   20
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          ggaaactgag gaaggctggc                                                   20
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          tgataaagct gggcttcaga                                                   20
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          ggtacccttc atctaaaagg                                                   20
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          caagagagag gagaaacttt                                                   20
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          atggatctga gatggacctt                                                   20
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          ttcaatgttc actgtgattt                                                   20
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          aggagggaaa gatgagtccc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1711]]>
          tccatgcccc agccactctc                                                   20
          <![CDATA[<210>  1712]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1712]]>
          tcagcatttt caaagcactt                                                   20
          <![CDATA[<210>  1713]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1713]]>
          ggctcatggc tgtgatagcg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1714]]>
          ttgtctgtct cctctgcctg                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1715]]>
          gacccaaacc ctttctacct                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1716]]>
          ggaactgact ataagtcata                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1717]]>
          gcacacactg caccatacac                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1718]]>
          ctcaaggatc acacagctca                                                   20
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          <![CDATA[<400>  1719]]>
          gcatgaatga tgcccatgag                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1720]]>
          cataagtgat aaagctgggc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          ggtttccctt ctcaacaacc                                                   20
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          <![CDATA[<400>  1722]]>
          atggcaggta cccttcatct                                                   20
          <![CDATA[<210>  1723]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1723]]>
          gtaaggtcca tctggttcac                                                   20
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          <![CDATA[<400>  1724]]>
          gtaaggcaag agagaggaga                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          tgctagttca atgttcactg                                                   20
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          gagaatgtgc ctacttgctg                                                   20
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          tgttgaagtc actgttaacc                                                   20
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          gggagctgag tcacacagct                                                   20
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          tgctcaccct ggctggccag                                                   20
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          gcgggccggt cctgcaggca                                                   20
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          tgaagtcact gttaaccact                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1807]]>
          gactccacaa cctgctagct                                                   20
          <![CDATA[<210>  1808]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1808]]>
          accctcaaaa aggtcgctgt                                                   20
          <![CDATA[<210>  1809]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1809]]>
          gaactgcagg gacaacacac                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1810]]>
          tcacagtccc ctctctccaa                                                   20
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1811]]>
          gagagagccc caggccaccc                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1812]]>
          cactccttcc cagaactctc                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1813]]>
          agctgagtca cacagctggg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1814]]>
          ccccagcacc ccgcccaggt                                                   20
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          <![CDATA[<400>  1815]]>
          tcaccctggc tggccagccg                                                   20
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          agaccccccc agagagctct                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1817]]>
          actctccctc ctccttcctg                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1818]]>
          gcgccgggag cccggagccc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1819]]>
          ggcaaggctg tggaggagca                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1820]]>
          gccccctgct cccgaacccc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1821]]>
          aaggtctcct cccctacccc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1822]]>
          cacctacaca ttctcacaac                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1823]]>
          cctagttggc ctttgcagcc                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1824]]>
          aagccaggat ttgaatgggc                                                   20
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          <![CDATA[<400>  1825]]>
          gacaaagctg ctccaggcgc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          agtggtcttt cactttcttg                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          gccgcttggc atgttcacac                                                   20
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          agcacttctc tttctggcag                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
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          atatctcatt cttgtggaaa                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          cccttgcact ggcatctggc                                                   20
          <![CDATA[<210>  1838]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1840]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1841]]>
          gagcccgcgg ccatcatagc                                                   20
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          gtttgggtaa ggcaagagag                                                   20
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          taaatggaaa tggatctgag                                                   20
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          <![CDATA[<400>  1903]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1905]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1934]]>
          caaggaggga aagatgagtc                                                   20
          <![CDATA[<210>  1935]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1935]]>
          cttccatgcc ccagccactc                                                   20
          <![CDATA[<210>  1936]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1936]]>
          gcgccatcct ggcgcggagc                                                   20
          <![CDATA[<210>  1937]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1937]]>
          ggccatggct catggctgtg                                                   20
          <![CDATA[<210>  1938]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1938]]>
          gtctggttgt ctgtctcctc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1939]]>
          tcccaagacc caaacccttt                                                   20
          <![CDATA[<210>  1940]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1940]]>
          aggcagggaa ctgactataa                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1941]]>
          gagactgcac acactgcacc                                                   20
          <![CDATA[<210>  1942]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1942]]>
          cctgccctca aggatcacac                                                   20
          <![CDATA[<210>  1943]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<400>  1943]]>
          tgtgtggcat gaatgatgcc                                                   20
          <![CDATA[<210>  1944]]>
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1944]]>
          ccagctcata agtgataaag                                                   20
          <![CDATA[<210>  1945]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1945]]>
          cctcacatgg gtttcccttc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1946]]>
          tggcagagct tgaggaaggg                                                   20
          <![CDATA[<210>  1947]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1947]]>
          accagggtaa ggtccatctg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1948]]>
          caagtttggg taaggcaaga                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1949]]>
          cagtaaatgg aaatggatct                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1950]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1951]]>
          actgtttgct agttcaatgt                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          gccatcagct tagcattgat                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          ttttggaaat ggcctctgag                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1955]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          aaaggacaga ccctcaaaaa                                                   20
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          tgacagtgag aactgcaggg                                                   20
          <![CDATA[<210>  1960]]>
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          cctgccctat cacagtcccc                                                   20
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          aggcgggagg agagagcccc                                                   20
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          ccagggttgc ccctgtcccc                                                   20
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          accatctgct caccctggct                                                   20
          <![CDATA[<210>  1966]]>
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          <![CDATA[<400>  1967]]>
          tctgctttcc gcactctccc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1968]]>
          ccgggttcct gtagccacac                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1969]]>
          cgccggtcct gcaggcagtg                                                   20
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          <![CDATA[<400>  1970]]>
          gctctcagac ctggccacaa                                                   20
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          cctgggattc acctacacat                                                   20
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          cccacactag cccggagcgc                                                   20
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1999]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  2000]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
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          <![CDATA[<400>  2001]]>
          gtggtctcgg agggtcgcgc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          taggcagcga cccccatgga                                                   20
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          gagtcaccca gctcataagt                                                   20
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          <![CDATA[<400>  2095]]>
          tgaatacctc acatgggttt                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  2096]]>
          gagctatggc agagcttgag                                                   20
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          <![CDATA[<400>  2097]]>
          aggcccacca gggtaaggtc                                                   20
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          ggatagggca ccaagtttgg                                                   20
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          ctaggacagt aaatggaaat                                                   20
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          catgagataa tgccatgaaa                                                   20
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          tatagtgcca tcagcttagc                                                   20
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          tttggctttt ggaaatggcc                                                   20
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          aaaaatttgc acattcccag                                                   20
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          ctggagtaga ctcctgactc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<400>  2108]]>
          tcaggaaaag gacagaccct                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          ccccggtgac agtgagaact                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          gcccaccctg ccctatcaca                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          gtaatgaggc gggaggagag                                                   20
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          gaaggaagag cagggagctg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          gtaggcccag ggttgcccct                                                   20
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          ttcccaacca tctgctcacc                                                   20
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          aggctgaggt ccagagaaaa                                                   20
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          ttcagctttg tacttatgct                                                   20
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          tcctgcgcca tcctggcgcg                                                   20
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          atgagcagag gccatggctc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          atccacccag tctggttgtc                                                   20
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          gagatttctt cccaagaccc                                                   20
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          <![CDATA[<400>  2191]]>
          ccacttccta acctcccggg                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
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          gcgggtactc gccggtcctg                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  2193]]>
          agctctcttc ccgtccccgc                                                   20
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          cgcctaaccc agtgatcaaa                                                   20
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          aacctggctc ccacactagc                                                   20
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          cttgccgccc ggacgatgga                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          ctccaagctc accagcagga                                                   20
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          <![CDATA[<400>  2202]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  2204]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          gtgttgtgga cagagacagt                                                   20
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          ctcccgcttc gccggcaagg                                                   20
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          atattcctcc gccccctcga                                                   20
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          cttaataata cttgttgaat                                                   20
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          agatagctgg agtagactcc                                                   20
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          gtctggtcag gaaaaggaca                                                   20
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          acatggtgga aggaagagca                                                   20
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          tttgctagtt caatgttcac                                                   20
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          atagcagctt gccttggtgt                                                   20
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<400>  2383]]>
          accaagagca agttcgattc                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  2384]]>
          aaccaagagc aagttcgatt                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  2385]]>
          ggaaccaaga gcaagttcga                                                   20
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          gggaaccaag agcaagttcg                                                   20
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          gagggaacca agagcaagtt                                                   20
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          <![CDATA[<400>  2388]]>
          agagggaacc aagagcaagt                                                   20
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          cagagggaac caagagcaag                                                   20
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          ccagagggaa ccaagagcaa                                                   20
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          cccagaggga accaagagca                                                   20
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          ttgtggtaca gctgccggtg                                                   20
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          atcaccaagg agggaaagat                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  2394]]>
          actgcggaat caccaaggag                                                   20
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          <![CDATA[<211>  20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  2395]]>
          ctctcactgc ggaatcacca                                                   20
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          cactctctca ctgcggaatc                                                   20
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          gccactctct cactgcggaa                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          accgactgtg tgctcttcag                                                   20
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          cttaccgact gtgtgctctt                                                   20
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          acttaccgac tgtgtgctct                                                   20
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          ggaacctaat actgtttgct                                                   20
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          gaaaaatttg cacattccca                                                   20
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          agcttggttt acccacctgc                                                   20
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          cttgctactc caagtttcca                                                   20
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          ggtgtctgag gagaaagggg                                                   20
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  2892]]>
          cacgggttgg tgcggc                                                       16
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          taggcagcga ccccca                                                       16
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          tagcccaccg ggcagt                                                       16
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          tcatagcagc ttgcct                                                       16
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          <![CDATA[<220>]]>
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          gatggaggat ccgtgc                                                       16
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          cagcttggtc ctcaca                                                       16
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          caccacagcc cgatcc                                                       16
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          ggaaagatga gtccct                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<400>  2925]]>
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          tgggattcac ctacac                                                       16
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          tgaacctact tgcctt                                                       16
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          cccggatcca ggccag                                                       16
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          tctcactgcg gaatca                                                       16
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          cgcggagctg gccgca                                                       16
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          tgagttcctg cgccat                                                       16
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          ctcaccgaaa gtgttg                                                       16
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          ctccccccgt tgtctt                                                       16
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          gactataagt catagc                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          actagactag actgcc                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          aatacctcac atgggt                                                       16
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          <![CDATA[<220>]]>
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          ggtaaggtcc atctgg                                                       16
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          cattgatgaa tcagca                                                       16
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          gtgcctactt gctgaa                                                       16
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          gtacatgtct cccagg                                                       16
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          acttcctaac ctcccg                                                       16
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          atctacaagg gagaga                                                       16
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          acactctagg taaatt                                                       16
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          aggaccaaac cagaac                                                       16
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          gtcaatactt gaaatg                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  4067]]>
          atttgtaact cccaag                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<400>  4068]]>
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          caactgctca ggcact                                                       16
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          actctctgag gacttc                                                       16
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          tattgtggag ggagag                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          taaagacccc cccaga                                                       16
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          gaaccaagag caagtt                                                       16
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          ttgaagcttg gagaac                                                       16
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          aagaggttta ctgtta                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<400>  4195]]>
          gatgggctga atacct                                                       16
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          agcttttgcc actatt                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          tgtttgctag ttcaat                                                       16
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          attgaatgag tgtcct                                                       16
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          ccaagtcaat acttga                                                       16
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          tgttatcaac ctggtt                                                       16
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          aaatggcagg taccct                                                       16
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          cgtttttcac actttg                                                       16
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          agttaaggtt caacaa                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          gcttcagagg cattca                                                       16
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          ccacccagtc tggttg                                                       16
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          tacauttgtg gtacag                                                       16
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          cactcuctca ctgcgg                                                       16
          <![CDATA[<210>  5029]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  在此等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<400>  5029]]>
          gccacuctct cactgc                                                       16
          <![CDATA[<210>  5030]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  在此等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<400>  5030]]>
          cgccaucctg gcgcgg                                                       16
          <![CDATA[<210>  5031]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  在此等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<400>  5031]]>
          gttccugcgc catcct                                                       16
          <![CDATA[<210>  5032]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  在此等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<400>  5032]]>
          tgagtucctg cgccat                                                       16
          <![CDATA[<210>  5033]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  在此等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<400>  5033]]>
          ttgagutcct gcgcca                                                       16
          <![CDATA[<210>  5034]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  在此等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<400>  5034]]>
          ctttautgag ttcctg                                                       16
          <![CDATA[<210>  5035]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  在此等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<400>  5035]]>
          cacttuattg agttcc                                                       16
          <![CDATA[<210>  5036]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  在此等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<400>  5036]]>
          gcactutatt gagttc                                                       16
          <![CDATA[<210>  5037]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  在此等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<400>  5037]]>
          agcacuttat tgagtt                                                       16
          <![CDATA[<210>  5038]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  在此等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<400>  5038]]>
          agcatuttca aagcac                                                       16
          <![CDATA[<210>  5039]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<222>  (1)..(5)]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<222>  (7)..(7)]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (10)..(12)]]>
          <![CDATA[<223>  在此等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (15)..(20)]]>
          <![CDATA[<223>  在此等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<400>  5039]]>
          cacuutattg agttccugcg                                                   20
          <![CDATA[<210>  5040]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(10)]]>
          <![CDATA[<223>  在此等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (12)..(12)]]>
          <![CDATA[<223>  在此等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (14)..(14)]]>
          <![CDATA[<223>  在此等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (16)..(20)]]>
          <![CDATA[<223>  在此等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<400>  5040]]>
          ccccagccac tctctcacug                                                   20
          <![CDATA[<210>  5041]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  在此等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (8)..(13)]]>
          <![CDATA[<223>  在此等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (15)..(20)]]>
          <![CDATA[<223>  在此等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<400>  5041]]>
          ucucactgcg gaatcaccaa                                                   20
          <![CDATA[<210>  5042]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  RNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  5042]]>
          gaaucaccaa ggagggaaag                                                   20
          
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Claims (94)

  1. 一種包含由12至50個經連接核苷組成之經修飾寡核苷酸之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸之核鹼基序列與FXII RNA之等長度部分至少90%互補,且其中該經修飾寡核苷酸包含至少一個選自經修飾糖部分及經修飾核苷間鍵聯之修飾。
  2. 一種包含經修飾寡核苷酸之寡聚化合物,該經修飾寡核苷酸由12至50個經連接核苷組成且具有包含SEQ ID NO: 20-5042中之任一者之至少12、13、14、15、16、17、18、19或20個相連核鹼基之核鹼基序列。
  3. 一種包含經修飾寡核苷酸之寡聚化合物,該經修飾寡核苷酸由12至50個經連接核苷組成且具有包含SEQ ID NO: 3379及5006中之任一者之至少12、13、14、15、16、17或18個相連核鹼基之核鹼基序列。
  4. 一種包含經修飾寡核苷酸之寡聚化合物,該經修飾寡核苷酸由12至50個經連接核苷組成且具有包含與以下互補之至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個或至少20個相連核鹼基之核鹼基序列: SEQ ID NO: 1之核鹼基1,899-1,979之等長度部分;或 SEQ ID NO: 1之核鹼基2,004-2,045之等長度部分。
  5. 一種包含經修飾寡核苷酸之寡聚化合物,該經修飾寡核苷酸由12至50個經連接核苷組成且具有包含選自以下之序列之至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個或至少18個相連核鹼基之核鹼基序列: SEQ ID NO: 92、156、270、271、345、346、420、421、496、497、571、572、653、654、728、729、802、803、877、951、1028、1103、1179、1253、1330、1407、1484、1560、1636、1710、1711、1784、1859、1860、1934、1935、2008、2009、2084、2085、2158、2232、2233、2307、2308、2393、2394、2395、2396、2397、2398、2461、2537、2538、2614、2615、2691、2692、2768、2769、2845、2846、2921、2922、2997、2998、3073、3074、3144、3145、3226、3227、3303、3304、3379、3380、3455、3456、3531、3607、3683、3759、3835、3911、4948、4949、4954、4955、4956、4957、4961、4965、4966、4967、4971、4972、4976、4994、4995、4996、4997、4998、4999、5024、5025、5026、5027、5028及5029;或 SEQ ID NO: 95、159、162、163、164、165、347、422、498、573、953、1030、1105、1255、1332、1409、1486、1562、2309、2463、2540、2617、2694、2771、2848、2924、3000、3076、3147、3229、3306、3382、3457、3533、3609、3685、3761、3837、3913、5000、5001、5002、5003、5004、5005、5006、5031、5032、5033、5034、5035、5036及5037。
  6. 如請求項1至5中任一項之寡聚化合物,其中當跨越該經修飾寡核苷酸之整個核鹼基序列量測時,該經修飾寡核苷酸具有與SEQ ID NO: 1-4中之任一者之核鹼基序列至少80%、85%、90%、95%或100%互補之核鹼基序列。
  7. 如請求項1至6中任一項之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸包含至少一個經修飾核苷。
  8. 如請求項7之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸包含至少一個包含經修飾糖部分之經修飾核苷。
  9. 如請求項8之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸包含至少一個包含雙環糖部分之經修飾核苷。
  10. 如請求項9之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸包含至少一個包含具有2'-4'橋之雙環糖部分之經修飾核苷,其中該2'-4'橋係選自-O-CH 2-;及-O-CH(CH 3)-。
  11. 如請求項8至10中任一項之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸包含至少一個包含非雙環之經修飾糖部分之經修飾核苷。
  12. 如請求項11之寡聚化合物,其中該非雙環之經修飾糖部分為2'-MOE糖部分或2'-OMe糖部分。
  13. 如請求項7至8中任一項之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸包含至少一個包含糖替代物之經修飾核苷。
  14. 如請求項1至13中任一項之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸為間隙聚體。
  15. 如請求項1至14中任一項之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸具有包含以下之糖模體: 由1-6個經連接5'-區核苷組成之5'-區; 由6-10個經連接中心區核苷組成之中心區;及 由1-6個經連接3'-區核苷組成之3'-區, 其中該等5'-區核苷中之每一者及該等3'-區核苷中之每一者包含經修飾糖部分且該等中心區核苷中之每一者包含2'-β-D-去氧核糖基糖部分。
  16. 如請求項15之寡聚化合物,其中 該5'-區由3個經連接5'-區核苷組成; 該中心區由10個經連接中心區核苷組成;且 該3'-區由3個經連接3'-區核苷組成,且 其中該等5'-區核苷中之每一者及該等3'-區核苷中之每一者包含cEt經修飾糖部分。
  17. 如請求項1至16中任一項之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸包含至少一個經修飾核苷間鍵聯。
  18. 如請求項17之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸之各核苷間鍵聯為經修飾核苷間鍵聯。
  19. 如請求項17或18之寡聚化合物,其中各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
  20. 如請求項17或18之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷間鍵聯。
  21. 如請求項17之寡聚化合物,其中各核苷間鍵聯係獨立地選自磷酸二酯核苷間鍵聯或硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
  22. 如請求項1至21中任一項之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸包含經修飾核鹼基。
  23. 如請求項22之寡聚化合物,其中該經修飾核鹼基為5-甲基胞嘧啶。
  24. 如請求項1至23中任一項之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸由12-30個、12-22個、12-20個、14-18個、14-20個、15-17個、15-25個、16-20個、18-22個或18-20個經連接核苷組成。
  25. 如請求項1至23中任一項之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸由16個經連接核苷組成。
  26. 如請求項1至25中任一項之寡聚化合物,該寡聚化合物由該經修飾寡核苷酸組成。
  27. 如請求項1至25中任一項之寡聚化合物,該寡聚化合物包含有包含接合部分及接合連接子之接合基團。
  28. 如請求項27之寡聚化合物,其中該接合連接子由單鍵組成。
  29. 如請求項27之寡聚化合物,其中該接合連接子為可裂解的。
  30. 如請求項27之寡聚化合物,其中該接合連接子包含1-3個連接子-核苷。
  31. 如請求項27之寡聚化合物,其中該寡聚化合物不包含連接子-核苷。
  32. 如請求項27之寡聚化合物,其中該接合連接子為磷酸酯。
  33. 如請求項29至32中任一項之寡聚化合物,其中該接合基團在該經修飾寡核苷酸之5'端附接至該經修飾寡核苷酸。
  34. 如請求項29至32中任一項之寡聚化合物,其中該接合基團在該經修飾寡核苷酸之3'端附接至該經修飾寡核苷酸。
  35. 如請求項1至34中任一項之寡聚化合物,該寡聚化合物包含末端基團。
  36. 如請求項1至35中任一項之寡聚化合物,其中該接合基團包含GalNAc部分。
  37. 如請求項1至36中任一項之寡聚化合物,其中該接合基團包含細胞靶向部分、接合連接子及可裂解部分,且其中該細胞靶向部分及該接合連接子一起具有以下化學結構:
    Figure 03_image592
  38. 如請求項1至37中任一項之寡聚化合物,其中該經修飾寡核苷酸為單股經修飾寡核苷酸。
  39. 一種根據以下化學結構之寡聚化合物:
    Figure 03_image001
    (SEQ ID NO: 3379),或其鹽。
  40. 如請求項39之寡聚化合物,該寡聚化合物為鈉鹽或鉀鹽。
  41. 一種根據以下化學結構之寡聚化合物:
    Figure 03_image006
    (SEQ ID NO: 3379)。
  42. 一種根據以下化學結構之寡聚化合物:
    Figure 03_image008
    (SEQ ID NO: 5006),或其鹽。
  43. 如請求項42之寡聚化合物,該寡聚化合物為鈉鹽或鉀鹽。
  44. 一種根據以下化學結構之寡聚化合物:
    Figure 03_image597
    (SEQ ID NO: 5006)。
  45. 一種根據以下化學記法之包含經修飾寡核苷酸之寡聚化合物:(THA-GalNAc 3)o Gks mCks Gks Gds Ads Ads Tds mCds Ads mCds mCds Ads Ads Gks Gks Ak (SEQ ID NO: 3379),其中: A = 腺嘌呤核鹼基, mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基, G = 鳥嘌呤核鹼基, T = 胸腺嘧啶核鹼基, k = cEt經修飾糖部分, d = 2'-β-D-去氧核糖基糖部分, o = 磷酸二酯鍵聯,且 s = 硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
  46. 一種根據以下化學記法之包含經修飾寡核苷酸之寡聚化合物:(THA-GalNAc 3)o Gks mCks Aks mCds Uys Tds Tds Ads Tds Tds Gds Ads Gds Tks Tks mCk (SEQ ID NO: 5006),其中: A = 腺嘌呤核鹼基, mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基, G = 鳥嘌呤核鹼基, T = 胸腺嘧啶核鹼基, U = 尿嘧啶核鹼基, k = cEt經修飾糖部分, y = 2'-O-甲基經修飾核糖基糖部分, d = 2'-β-D-去氧核糖基糖部分, o = 磷酸二酯鍵聯,且 s = 硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
  47. 一種寡聚雙鏈體,該寡聚雙鏈體包含第一寡聚化合物及包含第二經修飾寡核苷酸之第二寡聚化合物,其中該第一寡聚化合物為如請求項1至37中任一項之寡聚化合物。
  48. 如請求項47之寡聚雙鏈體,其中該第二寡聚化合物包含由8至80個經連接核苷組成之第二經修飾寡核苷酸,且其中該第二經修飾寡核苷酸之核鹼基序列包含與該第一經修飾寡核苷酸之等長度部分至少90%互補之至少8個核鹼基之互補區。
  49. 如請求項47或48之寡聚雙鏈體,其中該第一寡聚化合物之該經修飾寡核苷酸包含5'-經穩定磷酸酯基。
  50. 如請求項49之寡聚雙鏈體,其中該經穩定磷酸酯基包含環丙基膦酸酯或乙烯基膦酸酯。
  51. 如請求項47至50中任一項之寡聚雙鏈體,其中該第二經修飾寡核苷酸之至少一個核苷包含經修飾糖部分。
  52. 如請求項51之寡聚雙鏈體,其中該第二經修飾寡核苷酸之該經修飾糖部分包含雙環糖部分。
  53. 如請求項52之寡聚雙鏈體,其中該第二經修飾寡核苷酸之該雙環糖部分包含選自-O-CH 2-及-O-CH(CH 3)-之2'-4'橋。
  54. 如請求項51之寡聚雙鏈體,其中該第二經修飾寡核苷酸之該經修飾糖部分包含非雙環經修飾糖部分。
  55. 如請求項54之寡聚雙鏈體,其中該第二經修飾寡核苷酸之該非雙環經修飾糖部分為2'-MOE糖部分、2'-F糖部分或2'-OMe糖部分。
  56. 如請求項47至55中任一項之寡聚雙鏈體,其中該第二經修飾寡核苷酸之至少一個核苷包含糖替代物。
  57. 如請求項47至56中任一項之寡聚雙鏈體,其中該第二經修飾寡核苷酸之至少一個核苷間鍵聯為經修飾核苷間鍵聯。
  58. 如請求項57之寡聚雙鏈體,其中該第二經修飾寡核苷酸之至少一個經修飾核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
  59. 如請求項47至58中任一項之寡聚雙鏈體,其中該第二經修飾寡核苷酸之至少一個核苷間鍵聯為磷酸二酯核苷間鍵聯。
  60. 如請求項47至59中任一項之寡聚雙鏈體,其中該第二經修飾寡核苷酸之各核苷間鍵聯係獨立地選自磷酸二酯或硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
  61. 如請求項47至60中任一項之寡聚雙鏈體,其中該第二經修飾寡核苷酸包含至少一個經修飾核鹼基。
  62. 如請求項61之寡聚雙鏈體,其中該第二經修飾寡核苷酸之該經修飾核鹼基為5-甲基胞嘧啶。
  63. 如請求項47至62中任一項之寡聚雙鏈體,其中該第二經修飾寡核苷酸包含接合基團。
  64. 如請求項63之寡聚雙鏈體,其中該接合基團包含接合連接子及接合部分。
  65. 如請求項63或64之寡聚雙鏈體,其中該接合基團在該第二經修飾寡核苷酸之5'端附接至該第二經修飾寡核苷酸。
  66. 如請求項63或64之寡聚雙鏈體,其中該接合基團在該第二經修飾寡核苷酸之3'端附接至該第二經修飾寡核苷酸。
  67. 如請求項63至66中任一項之寡聚雙鏈體,其中該接合基團包含GalNAc 3
  68. 如請求項47至62中任一項之寡聚雙鏈體,其中該第二經修飾寡核苷酸包含末端基團。
  69. 如請求項68之寡聚雙鏈體,其中該末端基團為無鹼基糖部分。
  70. 如請求項47至69中任一項之寡聚雙鏈體,其中該第二經修飾寡核苷酸由10至25個、10至30個、10至50個、12至20個、12至25個、12至30個、12至50個、13至20個、13至25個、13至30個、13至50個、14至20個、14至25個、14至30個、14至50個、15至20個、15至25個、15至30個、15至50個、16至18個、16至20個、16至25個、16至30個、16至50個、17至20個、17至25個、17至30個、17至50個、18至20個、18至25個、18至30個、18至50個、19至20個、19至25個、19至30個、19至50個、20至25個、20至30個、20至50個、21至25個、21至30個、21至50個、22至25個、22至30個、22至50個、23至25個、23至30個或23至50個經連接核苷組成。
  71. 一種反義化合物,該反義化合物包含如請求項1至37中任一項之寡聚化合物或如請求項47至70之寡聚雙鏈體或者由其組成。
  72. 一種如請求項1至46中任一項之寡聚化合物之掌性富集群體,其中該群體富集有包含至少一個具有特定立體化學構型之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯之寡聚化合物。
  73. 如請求項72之掌性富集群體,其中該群體富集有包含至少一個具有( Sp)構型之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯之寡聚化合物。
  74. 如請求項72之掌性富集群體,其中該群體富集有包含至少一個具有( Rp)構型之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯之寡聚化合物。
  75. 如請求項72之掌性富集群體,其中該群體富集有在各硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有特定獨立選擇之立體化學構型之寡聚化合物。
  76. 如請求項72之掌性富集群體,其中該群體富集有在各硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有( Sp)構型之寡聚化合物。
  77. 如請求項72之掌性富集群體,其中該群體富集有在各硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有( Rp)構型之寡聚化合物。
  78. 如請求項72之掌性富集群體,其中該群體富集有在一個特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有( Rp)構型且在其餘硫代磷酸酯核苷間鍵聯中之每一者處具有( Sp)構型之寡聚化合物。
  79. 如請求項72至74中任一項之掌性富集群體,其中該群體富集有在5'至3'方向上具有至少3個呈 SpSpRp構型之相連硫代磷酸酯核苷間鍵聯之寡聚化合物。
  80. 一種如請求項1至46中任一項之寡聚化合物之群體,其中該等寡聚化合物之該等硫代磷酸酯核苷間鍵聯全部為無規立構的。
  81. 一種醫藥組合物,該醫藥組合物包含如請求項1至46中任一項之寡聚化合物、如請求項47至70中任一項之寡聚雙鏈體、如請求項71之反義化合物或如請求項72至80中任一項之群體;及醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。
  82. 如請求項81之醫藥組合物,其中該醫藥學上可接受之稀釋劑為磷酸鹽緩衝鹽水。
  83. 如請求項82之醫藥組合物,其中該醫藥組合物由該經修飾寡核苷酸及磷酸鹽緩衝鹽水組成或基本上由其組成。
  84. 一種方法,該方法包括向個體投與如請求項81至83中任一項之醫藥組合物。
  85. 一種改善或預防血栓栓塞性疾患之方法,該方法包括向有需要之個體投與治療有效量之如請求項81至83中任一項之醫藥組合物。
  86. 如請求項85之方法,其中該血栓栓塞性疾患係選自心肌梗塞(MI)、中風、肢體缺血與壞死、靜脈血栓性栓塞(VTE)、深靜脈血栓(DVT)及肺栓塞(PE)。
  87. 如請求項84至86中任一項之方法,其中該血栓栓塞性疾患之至少一種症狀得到改善。
  88. 如請求項87之方法,其中該症狀為疼痛、呼吸短促、心臟灼熱、冷汗、疲勞、頭暈、暈眩、腫脹、痛痙及死亡。
  89. 如請求項84至88中任一項之方法,該方法進一步包括將該個體鑑定為患有該血栓栓塞性疾患或有罹患該血栓栓塞性疾患之風險因素。
  90. 如請求項89之方法,其中該風險因素為手術、惡性病、懷孕、衰老、使用口服避孕藥、不動、敗血症、機械心臟瓣膜、心臟瓣膜疾病、心房震顫、動脈粥樣硬化、抗磷脂症候群、遺傳性凝血障礙或獲得性血栓前凝血障礙。
  91. 一種改善或預防遺傳性血管水腫之方法,該方法包括向有需要之個體投與治療有效量之如請求項81至83中任一項之醫藥組合物。
  92. 如請求項1至46中任一項之寡聚化合物、如請求項47至70中任一項之寡聚雙鏈體、如請求項71之反義化合物或如請求項72至80中任一項之群體,其係用於療法中。
  93. 如請求項1至46中任一項之寡聚化合物、如請求項47至70中任一項之寡聚雙鏈體、如請求項71之反義化合物或如請求項72至80中任一項之群體,其係用於改善或預防血栓栓塞性疾患。
  94. 如請求項1至46中任一項之寡聚化合物、如請求項47至70中任一項之寡聚雙鏈體、如請求項71之反義化合物或如請求項72至80中任一項之群體,其係用於改善或預防遺傳性血管水腫。
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