TW202246331A - 人源化補體５ａ受體１抗體及其使用方法 - Google Patents

人源化補體５ａ受體１抗體及其使用方法 Download PDF

Info

Publication number
TW202246331A
TW202246331A TW111101545A TW111101545A TW202246331A TW 202246331 A TW202246331 A TW 202246331A TW 111101545 A TW111101545 A TW 111101545A TW 111101545 A TW111101545 A TW 111101545A TW 202246331 A TW202246331 A TW 202246331A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
antibody
seq
antigen
c5ar1
binding fragment
Prior art date
Application number
TW111101545A
Other languages
English (en)
Inventor
卡提克 維斯瓦納坦
布萊恩 布斯
布帕希 拉瑪克里斯南
安卓 瓦勒考特
格高里 貝比卡克
查克里 席里弗
Original Assignee
美商威特拉公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商威特拉公司 filed Critical 美商威特拉公司
Publication of TW202246331A publication Critical patent/TW202246331A/zh

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本發明尤其提供針對人類補體組分5a受體I的兩種不同格式之人源化抗體。本發明亦提供一種治療患有C5a/C5aR1軸線路徑功能障礙之個體的方法，該等功能障礙包括但不限於ANCA相關血管炎，該方法包含向有需要之該個體投與有效量的本文所描述之抗體或編碼結合於C5aR1之抗體的核酸，且其中投與引起該個體中與C5a/C5aR1相關功能異常相關的症狀之減少。

Description

人源化補體5A受體1抗體及其使用方法
本發明揭示用於減少與補體5a/補體5a受體1 C5a/C5aR1介導之免疫炎症相關之自體免疫疾病及病症的組合物及方法。C5a-C5aR1軸對於治療性干預備受關注，以便阻斷嗜中性白血球對局部部位之吸引，抑制嗜中性白血球活化以及血管破壞。本文所揭示之組合物及方法可包括投與C5aR1拮抗劑之步驟，以及治療需要此治療之個體之方法。
本發明尤其提供對C5aR1具有增加之特異性的抗C5aR1抗體及此類抗體在有效治療與C5及其受體相關之疾病或病症中的治療性用途，該等疾病或病症諸如ANCA血管炎、典型的溶血性尿毒癥候群、年齡相關黃斑變性、類風濕性關節炎、敗血症、重度燒傷、抗磷脂症候群、哮喘、狼瘡性腎炎、古巴斯德氏症候群(Goodpasture's syndrome)及慢性阻塞性肺病。如本文所描述，本發明部分基於鑑別結合於C5aR1之位點I及/或位點II上之某些區且與C5aR2或任何其他G蛋白偶聯受體具有顯著降低之交叉反應性的人源化抗C5aR1特異性抗體。特定言之，本發明之抗C5aR1抗體之特徵在於對C5aR1具有高結合親和力(例如，具有小於50 nM之K D)及與C5aR2之最小交叉反應性。此為顯著的，因為本發明之C5aR1抗體允許在高C5a濃度之存在下有效抑制C5aR1傳訊。因此，相對於其他抗C5aR1抗體或C5a抗體，本發明之C5aR1抗體可以較低劑量使用以實現治療作用。如本文所描述，相對於先前技術抗體，此藉由在功能分析中觀測到的出人意料地高的效能來證實。此外，本發明之高效位點I C5aR1抗體彼此競爭位點I，且本發明之高效位點II C5aR1抗體彼此競爭位點II。另外，本發明提供藉由靶向C5aR1之位點I及位點II兩者來抑制C5aR1及/或C5a傳訊之方法及組合物。同時靶向位點I及位點II可顯著增強抑制活性。舉例而言，位點I與位點II抗體或雙特異性抗體(例如雙互補位)之組合，而非兩種位點II或兩種位點II抗體顯著增強活性。本發明之發明性抗C5aR1抗體承諾更有效的治療補體介導之疾病及病症，尤其ANCA血管炎。
另外，本發明尤其提供抗C5aR1-抗體，其包含Fc變體，該Fc變體具有顯著降低之ADCC、ADCP及CDC功能。如本文所描述，本發明之抗C5aR1抗體包含消除結合於所有FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa、FcγRIIIb及C1q且維持其結合於FcRn之能力的突變之新穎組合。
在一些實施例中，本文所提供之C5aR1抗體具有野生型IgG4 Fc域。在一些實施例中，本文所提供之C5aR1抗體具有經修飾之IgG4 Fc域。在一些實施例中，經修飾之C5aR1抗體包含Fab臂交換突變。在一些實施例中，經修飾之C5aR1抗體進一步包含Fc沉默突變。
C5a-C5aR1軸對於治療性干預備受關注，以便阻斷嗜中性白血球對局部部位之吸引，抑制嗜中性白血球活化以及血管破壞。本文所揭示之組合物及方法可包括投與C5aR1拮抗劑之步驟，以及治療需要此治療之個體之方法。
在一個態樣中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合於C5aR1之序列中之至少一者，該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合於C5aR1之SEQ ID NO: 1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合於C5aR1之SEQ ID NO: 2。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合於C5aR1之SEQ ID NO: 3。
在一個態樣中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合補體組分5a受體1 (C5aR1)，該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(VH)，其中VH包含與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少90%一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，VH包含與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少75%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少78%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少80%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少82%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少85%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少88%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少90%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少90%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少92%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少93%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少95%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少97%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少98%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少99%一致性的胺基酸序列。
在一個態樣中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合補體組分5a受體1 (C5aR1)，該抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變區(VL)，其中VL包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少90%一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，VL包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少75%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少78%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少80%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少82%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少85%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少88%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少90%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少90%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少92%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少93%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少95%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少97%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少98%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少99%一致性的胺基酸序列。
在一個態樣中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其包含VH區，其中該VH包含三個重鏈互補決定區(HCDR)，其中HCDR1、HCDR2及HCDR3序列分別包含SEQ ID No: 6 (NYWMH)、7 (YLNPSSGYTKYAQKFQG)及8 (SGGDNYGNPYYFDR)之胺基酸序列。
在一個態樣中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其包含VL區，其中該VL包含三個輕鏈互補決定區(LCDR)，其中LCDR1、LCDR2及LCDR3序列分別具有SEQ ID No: 9 (RASQSIVHSNGNTYLH)、10 (KVSNRFS)及11 (AQYTLVPLT)。
在一個態樣中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其包含VH區，其中該VH包含三個重鏈互補決定區(HCDR)，其中HCDR1、HCDR2及HCDR3序列分別包含SEQ ID No: 6 (NYWMH)、7 (YLNPSSGYTKYAQKFQG)及8 (SGGDNYGNPYYFDR)之胺基酸序列；及VL區，其中該VL包含三個輕鏈互補決定區(LCDR)，其中LCDR1、LCDR2及LCDR3序列分別具有SEQ ID No: 9 (RASQSIVHSNGNTYLH)、10 (KVSNRFS)及11 (AQYTLVPLT)。
在一個實施例中，根據本發明之抗體或抗體或其抗原結合片段進一步包含Fc區。
在一個實施例中，根據本發明之抗體或抗體或其抗原結合片段進一步包含Fc區，其中Fc域獨立地選自IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。
在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段抑制補體組分5a (C5a)與C5aR1之相互作用。
在一個實施例中，抗體或其抗原結合片段不結合於C5aR2或任何其他GPCR。
在一個實施例中，抗體或其抗原結合片段為人源化的。
在一個實施例中，抗體或其抗原結合片段之VH或VL已經修飾以增強分子之穩定性。
在一個實施例中，抗體或其抗原結合片段在SEQ ID NO: 5或SEQ ID NO: 25之位置96處包含絲胺酸或酪胺酸突變。
在一個實施例中，抗體或其抗原結合片段不與小鼠C5aR1交叉反應。
在一個實施例中，抗體或其抗原結合片段以10 pM至50 nM之間的親和力結合C5aR1。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約100 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約90 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約80 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約75 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約70 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約65 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約60 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約60 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約55 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約50 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約45 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約40 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約35 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約30 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約25 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約20 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約15 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約10 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約8 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約5 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約3 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約1 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約0.5 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約0.1 nM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約100 pM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約80 pM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約50 pM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約25 pM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段以小於約10 pM之解離常數(K D)結合C5aR1。在一個實施例中，抗體或其抗原結合片段以0.16 nM或更低之親和力結合C5aR1。
在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段抑制嗜中性白血球趨化性。
在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段在至少0.1 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段在至少0.5 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段在至少1 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段在至少3 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段在至少5 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段在至少7 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段在至少10 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段在至少15 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段在至少20 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段在至少25 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段在至少30 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段在至少40 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段在至少50 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段在至少60 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段在至少70 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段在至少80 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段在至少90 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段在至少100 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。
在一個實施例中，抗體或其抗原結合片段抑制C5a介導之C5aR1 Gα傳訊。
在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段抑制鈣傳訊。
在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段抑制CD11b表現。
在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段抑制嗜中性白血球減少症。
在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段抑制β-抑制蛋白傳訊。
在一個實施例中，結合於C5aR1之抗體或其抗原結合片段抑制嗜中性白血球中之ROS產生。
在一個實施例中，抗體或其抗原結合片段在一或多個凍融循環下在約4℃下穩定至多1週。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段在一或多個凍融循環下在約1至15℃下穩定至多1週。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段在一或多個凍融循環下在約2至10℃下穩定至多1週。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段在一或多個凍融循環下在約3至8℃下穩定至多2週。
在一個實施例中，抗體或其抗原結合片段在一或多個凍融循環下在約4℃下穩定至多2週。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段在一或多個凍融循環下在約1至15℃下穩定至多2週。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段在一或多個凍融循環下在約2至10℃下穩定至多2週。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段在一或多個凍融循環下在約3至8℃下穩定至多2週。
在一個實施例中，抗體或其抗原結合片段在一或多個凍融循環下在約4℃下穩定至多4週。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段在一或多個凍融循環下在約1至15℃下穩定至多4週。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段在一或多個凍融循環下在約2至10℃下穩定至多4週。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段在一或多個凍融循環下在約3至8℃下穩定至多4週。
在一個實施例中，抗體或其抗原結合片段在一或多個凍融循環下在約4℃下穩定至多8週。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段在一或多個凍融循環下在約1至15℃下穩定至多8週。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段在一或多個凍融循環下在約2至10℃下穩定至多8週。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段在一或多個凍融循環下在約3至8℃下穩定至多8週。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種核酸，其編碼本文所描述之任何抗體或其抗原結合片段。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種細胞，其包含編碼本文所描述之任何抗體或其抗原結合片段的核酸。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種製造本文所描述之抗體或其抗原結合片段之方法，該方法包含；培養包含編碼抗體或其抗原結合片段之核酸的宿主細胞，且在允許產生抗體或其抗原結合片段之條件下培養細胞。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種使用抗體或其抗原結合片段治療自體免疫疾病之方法，其中該抗體或其抗原結合片段結合補體成分5a受體1 (C5aR1)，該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(VH)，其中該VH包含與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少90%一致性的胺基酸序列，及/或結合人類補體成分5a受體1 (C5aR1)之抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變區(VL)，其中該VL包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少90%一致性的胺基酸序列。
在一個實施例中，治療自體免疫疾病之方法涵蓋使用抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段結合人類補體成分5a受體1 (C5aR1)，該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(VH)，其中該VH包含與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少90%一致性的胺基酸序列，及結合人類補體成分5a受體1 (C5aR1)之抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變區(VL)，其中該VL包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少90%一致性的胺基酸序列。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種使用抗體或其抗原結合片段治療自體免疫疾病之方法，其中該抗體或其抗原結合片段結合補體成分5a受體1 (C5aR1)，該抗體或其抗原結合片段包含三個重鏈互補決定區(HCDR)，其中HCDR1、HCDR2及HCDR3序列分別包含SEQ ID No: 6 (NYWMH)、7 (YLNPSSGYTKYAQKFQG)及8 (SGGDNYGNPYYFDR)之胺基酸序列，及三個輕鏈互補決定區(LCDR)，其中LCDR1、LCDR2及LCDR3序列分別具有SEQ ID No: 9 (RASQSIVHSNGNTYLH)、10 (KVSNRFS)及11 (AQYTLVPLT)。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種使用抗體或其抗原結合片段治療自體免疫疾病之方法，該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 4或與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少85%一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少70%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少75一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少78%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少80%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少82%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少85%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少87%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少90%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少93%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少95%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少97%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少98%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少99%一致性的胺基酸序列。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種使用抗體或其抗原結合片段治療自體免疫疾病之方法，該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 5或與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列具有至少85%一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列具有至少70%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列具有至少75一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列具有至少78%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列具有至少80%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列具有至少82%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列具有至少85%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列具有至少87%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列具有至少90%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列具有至少93%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列具有至少95%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列具有至少97%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列具有至少98%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少99%一致性的胺基酸序列。
在一個實施例中，本發明涵蓋一種由使用本文所描述之抗體或其抗原結合片段引起之嗜中性白血球減少症引起的疾病。
在一個實施例中，嗜中性白血球減少症由高含量之C5a引起。
在一個實施例中，疾病為ANCA血管炎或狼瘡。
在一個實施例中，病症為類風濕性關節炎。
在一個實施例中，病症為腎臟病症。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種使用結合於C5aR1之單株抗體抑制C5a傳訊的方法，該單株抗體包含重鏈可變區(VH)，其中該VH包含與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少90%一致性的胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL)，其中該VL包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少90%一致性的胺基酸序列。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其包含兩對抗原結合域，其中第一抗原結合域包含VH1及VL1，其中VH1及VL1在SEQ ID NO: 3處結合C5aR1，且其中第二抗原結合域包含VH2及VL2，其中VH2及VL2在SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2處結合C5aR1。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其包含兩對抗原結合域，其中抗原結合域包含VH1及VL1，其中VH1及VL1在SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2處結合C5aR1，且其中第二抗原結合域包含aVH2及VL2，其中VH2及VL2在SEQ ID NO: 3處結合C5aR1。
在一個實施例中，雙互補位抗體或其抗原結合片段包含VH1，其包含SEQ ID NO: 14或與SEQ ID NO: 14至少90%一致。
在一個實施例中，雙互補位抗體或其抗原結合片段包含VL，其中VL1包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列至少90%一致。在一些實施例中，VL1包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少75%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL1包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少78%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL1包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少80%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL1包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少82%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL1包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少84%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL1包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少85%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL1包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少86%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL1包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少88%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL1包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少90%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL1包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少92%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL1包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少94%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL1包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少95%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL1包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少96%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL1包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少97%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL1包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少98%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL1包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少99%一致性的胺基酸序列。
在一個實施例中，雙互補位抗體或其抗原結合片段包含VH2，其中VH2包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列至少90%一致。在一些實施例中，VH2包含與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少75%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH2包含與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少78%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH2包含與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少80%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH2包含與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少82%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH2包含與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少85%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH2包含與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少86%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH2包含與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少88%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH2包含與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少90%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH2包含與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少92%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH2包含與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少94%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH2包含與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少95%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH2包含與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少96%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH2包含與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少97%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH2包含與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少98%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH2包含與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少99%一致性的胺基酸序列。
在一個實施例中，雙互補位抗體或其抗原結合片段包含VL2，其中VL2包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列至少90%一致。在一些實施例中，VL2包含與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列具有至少75%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL2包含與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列具有至少78%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL2包含與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列具有至少80%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL2包含與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列具有至少82%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL2包含與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列具有至少84%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL2包含與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列具有至少85%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL2包含與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列具有至少86%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL2包含與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列具有至少88%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL2包含與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列具有至少90%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL2包含與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列具有至少92%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL2包含與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列具有至少94%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL2包含與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列具有至少95%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL2包含與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列具有至少96%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL2包含與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列具有至少97%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VH2包含與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列具有至少98%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，VL2包含與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列具有至少99%一致性的胺基酸序列。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其結合於SEQ ID NO: 3，該雙互補位抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 12或與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列至少85%一致的重鏈。在一些實施例中，重鏈包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列具有至少75%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，重鏈包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列具有至少78%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，重鏈包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列具有至少80%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，重鏈包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列具有至少82%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，重鏈包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列具有至少84%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，重鏈包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列具有至少85%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，重鏈包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列具有至少86%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，重鏈包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列具有至少88%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，重鏈包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列具有至少90%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，重鏈包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列具有至少92%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，重鏈包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列具有至少94%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，重鏈包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列具有至少95%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，重鏈包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列具有至少96%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，重鏈包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列具有至少98%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，重鏈包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列具有至少99%一致性的胺基酸序列。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其結合於SEQ ID NO: 3，該雙互補位抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 13或與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少85%一致的輕鏈。在一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列具有至少75%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列具有至少78%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列具有至少80%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列具有至少82%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列具有至少84%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列具有至少85%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列具有至少86%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列具有至少88%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列具有至少90%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列具有至少92%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列具有至少94%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列具有至少95%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列具有至少96%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列具有至少98%一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列具有至少99%一致性的胺基酸序列。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其包含SEQ ID NO: 12或與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列至少85%一致的重鏈及包含SEQ ID NO: 13或與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少85%一致的輕鏈。在一個態樣中，本發明涵蓋一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其包含SEQ ID NO: 12或與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列至少90%一致的重鏈及包含SEQ ID NO: 13或與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少90%一致的輕鏈。在一個態樣中，本發明涵蓋一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其包含SEQ ID NO: 12或與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列至少92%一致的重鏈及包含SEQ ID NO: 13或與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少92%一致的輕鏈。在一個態樣中，本發明涵蓋一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其包含SEQ ID NO: 12或與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列至少95%一致的重鏈及包含SEQ ID NO: 13或與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少95%一致的輕鏈。在一個態樣中，本發明涵蓋一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其包含SEQ ID NO: 12或與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列至少99%一致的重鏈及包含SEQ ID NO: 13或與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少99%一致的輕鏈。
在一個態樣中，本發明尤其提供一種抗C5aR1雙互補位抗體，其包含SEQ ID NO: 71之重鏈及SEQ ID NO: 72之輕鏈。在一些實施例中，抗C5aR1雙互補位抗體包含與SEQ ID NO: 71至少85%一致的重鏈。在一些實施例中，抗C5aR1雙互補位抗體包含與SEQ ID NO: 71至少90%一致的重鏈。在一些實施例中，抗C5aR1雙互補位抗體包含與SEQ ID NO: 71至少92%一致的重鏈。在一些實施例中，抗C5aR1雙互補位抗體包含與SEQ ID NO: 71至少95%一致的重鏈。在一些實施例中，抗C5aR1雙互補位抗體包含與SEQ ID NO: 71至少97%一致的重鏈。在一些實施例中，抗C5aR1雙互補位抗體包含與SEQ ID NO: 71至少98%一致的重鏈。在一些實施例中，抗C5aR1雙互補位抗體包含與SEQ ID NO: 71至少99%一致的重鏈。在一些實施例中，抗C5aR1雙互補位抗體包含與SEQ ID NO: 72至少85%一致的輕鏈。在一些實施例中，抗C5aR1雙互補位抗體包含與SEQ ID NO: 72至少90%一致的輕鏈。在一些實施例中，抗C5aR1雙互補位抗體包含與SEQ ID NO: 72至少92%一致的輕鏈。在一些實施例中，抗C5aR1雙互補位抗體包含與SEQ ID NO: 72至少95%一致的輕鏈。在一些實施例中，抗C5aR1雙互補位抗體包含與SEQ ID NO: 72至少97%一致的輕鏈。在一些實施例中，抗C5aR1雙互補位抗體包含與SEQ ID NO: 72至少98%一致的輕鏈。在一些實施例中，抗C5aR1雙互補位抗體包含與SEQ ID NO: 72至少99%一致的輕鏈。
在一個態樣中，本發明尤其提供一種抗C5aR1抗體，其包含SEQ ID NO: 69之重鏈及SEQ ID NO: 70之輕鏈。在一些實施例中，抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 69至少85%一致的重鏈。在一些實施例中，抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 69至少90%一致的重鏈。在一些實施例中，抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 69至少92%一致的重鏈。在一些實施例中，抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 69至少85%一致的重鏈。在一些實施例中，抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 69至少95%一致的重鏈。在一些實施例中，抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 69至少97%一致的重鏈。在一些實施例中，抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 69至少98%一致的重鏈。在一些實施例中，抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 69至少99%一致的重鏈。在一些實施例中，抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 70至少85%一致的輕鏈。在一些實施例中，抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 70至少90%一致的輕鏈。在一些實施例中，抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 70至少92%一致的輕鏈。在一些實施例中，抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 70至少85%一致的輕鏈。在一些實施例中，抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 70至少95%一致的輕鏈。在一些實施例中，抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 70至少97%一致的輕鏈。在一些實施例中，抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 70至少98%一致的輕鏈。在一些實施例中，抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 70至少99%一致的輕鏈。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中重鏈包含連接至Fc域之VH1。
在一個實施例中，雙互補位抗體或其抗原結合片段之Fc域進一步連接至scFv，其包含：VH2，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列至少90%一致之胺基酸序列，及/或VL2，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列至少90%一致的胺基酸序列。
在一個實施例中，Fc域獨立地選自IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。
在一個實施例中，scFv經由連接子連接至Fc域。
在一個實施例中，連接子包含至少5個胺基酸，其包含具有SEQ ID NO: 26-37中之任一者的胺基酸序列。在一個實施例中，連接子包含至少3個胺基酸，其包含具有SEQ ID NO: 26-37中之任一者的胺基酸序列。在一個實施例中，連接子包含至少4個胺基酸，其包含具有SEQ ID NO: 26-37中之任一者的胺基酸序列。在一個實施例中，連接子包含至少6個胺基酸，其包含具有SEQ ID NO: 26-37中之任一者的胺基酸序列。在一個實施例中，連接子包含至少7個胺基酸，其包含具有SEQ ID NO: 26-37中之任一者的胺基酸序列。
在一個實施例中，包含SEQ ID NO: 16及SEQ ID NO: 17的雙互補位抗體之VH2及VL2經由連接子彼此連接。
在一個實施例中，連接子包含SEQ ID NO: 31之1至10個重複。
在一個實施例中，包含SEQ ID NO: 16及SEQ ID NO: 17或與SEQ ID NO: 16及SEQ ID NO: 17 90%一致之胺基酸序列的雙互補位抗體之VH2及VL2進一步包含一或多個突變以改善雙互補位抗體之熱穩定性。
在一個實施例中，雙互補位抗體突變以改善雙互補位抗體之熱穩定性包含在SEQ ID NO: 12之位置559處且在SEQ ID NO: 12之位置630處併入半胱胺酸。
在一個實施例中，結合於C5aR1之雙互補位抗體或其抗原結合片段抑制補體組分5a (C5a)與人類C5aR1之相互作用。
在一個實施例中，雙互補位抗體或其抗原結合片段不結合於C5aR2。
在一個實施例中，雙互補位抗體為人源化的。
在一個實施例中，雙互補位抗體不與小鼠C5aR1交叉反應。
在一個實施例中，雙互補位抗體在一個凍融循環下在4℃下穩定至多2週。在一些實施例中，雙互補位抗體或其抗原結合片段在一或多個凍融循環下在約1至15℃下穩定至多2週。在一些實施例中，雙互補位抗體或其抗原結合片段在一或多個凍融循環下在約2至10℃下穩定至多2週。在一些實施例中，雙互補位抗體或其抗原結合片段在一或多個凍融循環下在約3至8℃下穩定至多2週。
在一個實施例中，結合於C5aR1之雙互補位抗體抑制嗜中性白血球趨化性。
在一個實施例中，結合於C5aR1之雙互補位抗體在高C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。
在一個實施例中，結合於C5aR1之雙互補位抗體在至少10 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。
在一個實施例中，結合於C5aR1之雙互補位抗體抑制C5a介導之C5aR1 Gα傳訊。
在一個實施例中，結合於C5aR1之雙互補位抗體抑制β-抑制蛋白傳訊。
在一個實施例中，結合於C5aR1之雙互補位抗體抑制嗜中性白血球中之ROS產生。
在一個實施例中，結合於C5aR1之雙互補位抗體抑制鈣傳訊。
在一個實施例中，結合於C5aR1之雙互補位抗體抑制CD11b表現。
在一個實施例中，結合於C5aR1之雙互補位抗體抑制嗜中性白血球減少症。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種核酸，其編碼本文所描述之雙互補位抗體。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種細胞，其包含編碼本文所描述之雙互補位抗體的核酸。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種製造本文所描述之雙互補位抗體之方法，該方法包含培養包含編碼抗體或其抗原結合片段之核酸的宿主細胞，且在允許產生抗體或其抗原結合片段之條件下培養細胞。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種使用雙互補位抗體治療自體免疫疾病之方法，其中抗體結合人類補體成分5a受體1 (C5aR1)，該包含：第一VH及第一VL：VH1及VL1，其中VH1包含SEQ ID NO: 14或與SEQ ID NO: 14具有至少90%一致性的胺基酸序列，且其中VL1包含SEQ ID NO: 15或與SEQ ID NO: 15具有至少具有至少90%一致性的胺基酸序列；以及第二VH及第二VL：VH2及VL2，其中VH2包含SEQ ID NO: 16或與SEQ ID NO: 16具有至少具有至少90%一致性的胺基酸序列且VL2包含SEQ ID NO: 17或與SEQ ID NO: 17具有至少具有至少90%一致性的胺基酸序列。
在一個實施例中，本發明涵蓋一種使用本文所描述之抗體或其抗原結合片段治療所引起之自體免疫疾病的方法，其中該自體免疫疾病由嗜中性白血球減少症引起。
在一個實施例中，嗜中性白血球減少症由高含量之C5a引起。
在一個實施例中，疾病為ANCA血管炎或狼瘡。
在一個實施例中，病症為類風濕性關節炎。
在一個實施例中，病症為腎臟病症。
在一個實施例中，病症為中風。
在一個實施例中，如前述實施例中任一者之單特異性或雙互補位C5aR1抗體，其中該抗體包含經修飾之IgG1、IgG4或IgG2恆定域。
在一個實施例中，抗體C5aR1包含經修飾之IgG4 Fc域。
在一個實施例中，經修飾之IgG4 Fc域包含位置F234、L235及/或D265處之取代。
在一個實施例中，位置F234處之IgG4 Fc取代為選自丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、苯丙胺酸或色胺酸之疏水性胺基酸。
在一個實施例中，位置F234處之IgG4 Fc取代為纈胺酸。
在一個實施例中，位置L235處之IgG4 Fc取代為酸性胺基酸。
在一個實施例中，位置L235處之IgG4 Fc取代為選自麩胺酸或天冬胺酸之酸性胺基酸。
在一個實施例中，位置L235處之IgG4 Fc取代為天冬胺酸。
在一個實施例中，位置D265處之IgG4 Fc取代為非極性胺基酸。
在一個實施例中，位置D265處之IgG4 Fc取代為選自丙胺酸、半胱胺酸、甘胺酸、異白胺酸、白胺酸、甲硫胺酸及纈胺酸之非極性胺基酸。
在一個實施例中，位置D265處之IgG4 Fc取代為甘胺酸。
在一個實施例中，先前實施例中之任一者之抗體進一步包含S228處之取代。
在一個實施例中，S228處之取代為脯胺酸。
在一個實施例中，如前述實施例中任一者之單特異性或雙互補位C5aR1抗體，其中抗體包含經修飾之IgG4恆定域，其包含F234V、L235E及D265G取代之組合。
在一個實施例中，本發明提供一種減小或預防抗體依賴性細胞毒性、抗體依賴性吞噬作用及/或補體依賴性細胞毒性的方法，其使用先前實施例中之任一者之單特異性或雙互補位C5aR1抗體。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種抗體或其抗原結合片段，其結合補體成分5a受體1 (C5aR1)，該抗體或其抗原結合片段包含：SEQ ID NO: 14之重鏈可變區(VH)；SEQ ID NO: 25之輕鏈可變區(VL)；及包含取代F234V、L235E及D265G的經修飾之Fc域。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種抗體或其抗原結合片段，其結合補體成分5a受體1 (C5aR1)，該抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區(VH)，其包含SEQ ID NO: 6 (NYWMH)之HCDR1、SEQ ID NO: 7 (YLNPSSGYTKYAQKFQG)之HCDR2及SEQ ID NO: 8 (SGGDNYGNPYYFDR)之HCDR3；輕鏈可變區(VL)，其包含SEQ ID NO: 9 (RASQSIVHSNGNTYLH)之LCDR1、SEQ ID NO: 10 (KVSNRFS)之LCDR2及SEQ ID NO: 11 (AQYTLVPLT)之LCDR3；及經修飾之Fc域，其包含取代F234V、L235E及D265G。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種抗體或其抗原結合片段，其結合補體成分5a受體1 (C5aR1)，該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 69之重鏈及SEQ ID NO: 70之輕鏈。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其結合補體組分5a受體(C5aR1)，該雙互補位抗體或其抗原結合片段包含：輕鏈，其包含SEQ ID NO: 9 (RASQSIVHSNGNTYLH)之LCDR1、SEQ ID NO: 10 (KVSNRFS)之LCDR2及SEQ ID NO: 21 (AQSTLVPLT)之LCDR3；以及 重鏈，其包含SEQ ID NO: 6 (NYWMH)之HCDR1、SEQ ID NO: 7 (YLNPSSGYTKYAQKFQG)之HCDR2及SEQ ID NO: 8 (SGGDNYGNPYYFDR)之HCDR3；經修飾之Fc域，其包含取代F234V、L235E及D265G；以及scFv，其包含SEQ ID NO: 22 (RSSQSLVHSNGNTYLN)之LCDR4、SEQ ID NO: 23 (KVSNRLS)之LCDR5、SEQ ID NO: 24 (SQSTHVPYT)之LCDR6、SEQ ID NO: 18 (AYAMS)之HCDR4、SEQ ID NO: 19 (SISTGGNTYYADSVKG)之HCDR5及SEQ ID NO: 20 (GYQRFSGFAY)之HCDR6，其中scFv連接至經修飾之Fc域。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其結合補體成分5a受體(C5aR1)，該雙互補位抗體或其抗原結合片段包含：SEQ ID NO: 15之第一輕鏈可變區(VL)；SEQ ID NO: 14之第一重鏈可變區；包含取代F234V、L235E及D265G之經修飾之Fc域；以及包含SEQ ID NO: 17之第二輕鏈可變區(VL)及SEQ ID NO: 16之SEQ ID NO之第二重鏈可變區(VH)， 其中scFv連接至經修飾之Fc域。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種結合補體組分5a受體(C5aR1)之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其包含SEQ ID NO: 72之輕鏈及SEQ ID NO: 71之重鏈。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其結合補體成分5a受體(C5aR1)，該雙互補位抗體或其抗原結合片段包含：SEQ ID NO: 25之第一輕鏈可變區(VL)；SEQ ID NO: 14之第一重鏈可變區(VH)；以及scFv，其包含SEQ ID NO: 17之第二輕鏈可變區(VL)及SEQ ID NO: 16之SEQ ID NO之第二重鏈可變區(VH)，其中scFv連接至Fc域。在一個實施例中，雙互補位抗體或其抗原結合片段包含經修飾之Fc域，其包含取代F234V、L235E及D265G，使得scFv連接至經修飾之Fc域。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種抗體或其抗原結合片段，其結合補體成分5a受體1 (C5aR1)，該抗體或其抗原結合片段包含：SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)；及SEQ ID NO: 48之輕鏈可變區(VL)。在一個實施例中，抗體進一步包含經修飾之Fc域，其包含取代F234V、L235E及D265G。
在一個態樣中，本發明涵蓋一種抗體或其抗原結合片段，其結合補體成分5a受體1 (C5aR1)，該抗體或其抗原結合片段包含：SEQ ID NO: 14之重鏈可變區(VH)；及SEQ ID NO: 15之輕鏈可變區(VL)。在一個實施例中，抗體進一步包含經修飾之Fc域，其包含取代F234V、L235E及D265G。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2021年1月13日申請之美國臨時申請案第63/137,089號及2021年11月02日申請之美國臨時申請案第63/274,748號之優先權，其中之每一者之揭示內容特此以全文引用之方式併入。 定義
抗體：如本文中所用，術語「抗體」係指免疫球蛋白分子及免疫球蛋白(Ig)分子之免疫活性部分，亦即含有結合抗原抗原(與抗原免疫反應)之抗原結合位點的分子。「結合」或「與...免疫反應」意謂抗體與所需之一或多個抗原決定子反應。抗體包括抗體片段。抗體亦包括但不限於多株、單株、嵌合dAb (域抗體)、單鏈、Fab、Fab'、F(ab')2片段、scFv及Fab表現庫。抗體可為完整抗體、或免疫球蛋白、或抗體片段。
抗體依賴性細胞毒性：如本文所用，術語「抗體依賴性細胞毒性」或「ADCC」係指在效應細胞之存在下，根據本發明之抗體對人類目標細胞之裂解。
Fab 臂交換：術語「Fab臂交換」係指IgG4抗體可交換『半分子』的現象，亦即在本文中稱為Fab臂交換的活動。尤其在雙特異性或雙互補位分子中，此產生具有未知特異性且因此潛在地降低之治療功效的官能性單價抗體。可將突變引入Fc域中以抑制Fab臂交換。眾所周知，S228P突變可防止IgG4 FAE在活體外及活體內達至不可偵測的含量。
Fc 域：如本文所用，術語「Fc區」係指含有恆定區之至少一部分的免疫球蛋白重鏈之C端區。術語包括天然序列Fc區及變體Fc區。在一個實施例中，人類IgG重鏈Fc區自Cys226或自Pro230延伸至重鏈之羧基端。然而，Fc區之C端離胺酸(Lys447)可存在或可不存在。除非本文另外說明，否則Fc區或恆定區中胺基酸殘基之編號係依據EU編號系統，亦稱為EU索引，如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991中所描述。
人源化抗體：術語「人源化抗體」包括作為特異性免疫球蛋白鏈、嵌合免疫球蛋白或其片段之非人類(例如，鼠類)抗體，其含有最少量的非人類(例如，鼠類)序列。通常，人源化抗體為人類免疫球蛋白，其中來自互補決定區(CDR)之殘基經來自具有所需特異性、親和力及能力之非人類物種(例如，小鼠、大鼠、兔、倉鼠)之CDR之殘基置換(Jones等人, Nature321:522-525, 1986；Riechmann等人, Nature332:323-327, 1988；Verhoeyen等人, Science239:1534-1536, 1988)。
增加的 ADCC：術語「增加的ADCC」定義為在上文測試之抗體濃度範圍內觀測到的特異性裂解之最大百分比的增加及/或為達成在上文測試之抗體濃度範圍內觀測到的特異性裂解最大百分比之一半所需的抗體之濃度的降低。ADCC之增加係相對於使用可接受的此項技術中公認之分析量測的ADCC。
單株抗體：術語「單株抗體」係指自實質上均質抗體群體獲得的抗體，亦即包含該群體之個別抗體除可以少量存在之可能天然產生突變以外為一致的。單株抗體針對單一抗原位點具高度特異性。修飾語「單株」指示抗體之特徵為自實質上均質抗體群體獲得，且不應理解為需要藉由任何特定方法來產生該抗體。
多特異性抗體：如本文所用，術語「多特異性抗體」係指能夠特異性結合於相同或不同目標上之兩個或更多個不同抗原決定基的結合分子、抗體或其抗原結合片段。
雙互補位抗體：如本文所用，術語「雙互補位抗體」係指能夠結合相同目標抗原分子上之2個不同非重疊抗原決定基的多特異性抗體。
K i 或 K d ：如本文所用，術語「 K d 」如本文所用係指如此項技術中已知之特定抗體-抗原相互作用之解離常數，且對於本發明之組合物將應用為靶向部分與其同源配位體之結合親和力的參數。
IC50：如本文所用，術語「IC50」係指抑制配位體促效劑之最大生物反應之一半所需的濃度，且一般藉由競爭結合分析來測定。
EC50：如本文所用，術語「EC50」係指半最大有效濃度。術語EC50係指在指定暴露時間之後在基線與最大值之間誘導一半反應的藥物、抗體或毒素之濃度。更簡言之，可將EC50定義為獲得50%所需作用所需之濃度。
C5a：如本文所用，術語「C5a」係指補體組分5a。
C5aR1：如本文所用，術語「C5aR1」係指補體組分5a受體1。在一些實施例中，人類C5aR1包含SEQ ID NO: 38。在一些實施例中，包含SEQ ID NO: 38之人類C5aR1之某些胺基酸具有天然變體，諸如(N2D及N279K)，以小寫字母形式展示於表1中。
連接子：如本文所用，術語「連接子」係指連接兩個分子且通常用以將兩個分子置於較佳組態中之分子或分子群(諸如單體或聚合物)。許多策略可用於將分子共價連接在一起。此等策略包括但不限於蛋白質或蛋白域之N端與C端之間的多肽連接、經由二硫鍵連接及經由化學交聯試劑連接。在此實施例之一個態樣中，連接子為藉由重組技術或肽合成產生之肽鍵。在一些實施例中，連接子可含有提供可撓性之胺基酸殘基。因此，連接子肽可主要包括以下胺基酸殘基：Gly、Ser、Ala或Thr。連接子肽應具有足以以使得兩個分子相對於彼此呈現正確構形之方式連接兩個分子的長度，使得其保留所需活性。用於此目的之適合長度包括至少一個且不超過30個胺基酸殘基。在一個實施例中，連接子之長度為約1至30個胺基酸。在另一實施例中，連接子之長度為約1至15個胺基酸。另外，經選擇以包括於連接子肽中之胺基酸殘基應展現不明顯干擾多肽之活性的特性。
嗜中性白血球：如本文所用，術語「嗜中性白血球」係指周邊血液中之白血球之主要類別。嗜中性白血球在吞噬且殺死細胞外病原體中起重要作用。
scFv：如本文所用，術語「scFv」係指免疫球蛋白之重鏈(VH)及輕鏈(VL)之可變區之融合蛋白，其與10至約25個胺基酸之短連接子肽連接。
Fab：如本文所用，術語「Fab」係指包含完整抗體之一部分的抗體片段，包含其抗原結合區或可變區。
嗜中性白血球減少症：如本文所用，術語「嗜中性白血球減少症」係指低嗜中性白血球計數。舉例而言，在人類個體中，嗜中性白血球減少症可在低於500 ANC至低於1500 ANC (絕對嗜中性白血球計數)範圍內。ANC係以每微升血液之細胞數進行量測。將小鼠之嗜中性白血球減少症定義為＜10個嗜中性白血球/mm 3血液。
活體外：如本文所用，術語「 活體外」係指在人工環境中，例如在試管或反應容器中、在細胞培養物中等，而非在多細胞生物體內發生的事件。
活體內：如本文所使用，術語「 活體內」係指在諸如人類及非人類動物之多細胞生物體內發生的事件。在基於細胞之系統的情形下，該術語可用於指在活細胞內(與例如活體外系統相反)發生的事件。
個體：如本文所用，術語「個體」係指人類或任何非人類動物(例如，小鼠、大鼠、兔、狗、貓、牛、豬、綿羊、馬或靈長類動物)。人類包括出生前及出生後的形式。在許多實施例中，個體為人類。個體可為患者，此係指前往醫療服務提供者為診斷或治療疾病的人類。術語「個體」在本文中可與「個人」或「患者」可互換使用。個體可罹患或易患疾病或病症，但可能顯示或可能不顯示該疾病或病症之症狀。
功能障礙：如本文所用，術語「功能障礙」係指異常功能。分子(例如，蛋白質)之功能障礙可由與此類分子相關的活性之增加或降低引起。分子之功能障礙可由與分子本身或與分子直接或間接相互作用或調節分子之其他分子相關的缺陷引起。
衍生物：如本文所用，術語「衍生物」在與抗體或C5aR1抗體結合使用時係指具有保留原始分子之至少一些功能及/或特性的原始分子之一些序列的一部分。
一致性：如本文所用，術語「一致性」係指如此項技術中已知的兩種或更多種多肽分子或兩種或更多種核酸分子之序列之間的關係，其比較此等分子之序列。藉由進行確定關係。在此項技術中，「一致性」亦意謂核酸分子或多肽之間的序列相關性程度，且在一些情況下超過一種核苷酸序列或超過一種。其可藉由胺基酸序列串之間的匹配來測定。「一致性」意謂在由特定數學模型或電腦程式(亦即，「演算法」)解決之間隙比對(若存在)與兩個或更多個序列之較小序列之間。量測一致性匹配百分比。
相似性或 類似：如本文所用，在此項技術中關於相關概念，但與「一致性」、「相似性」相反使用之術語「相似性」係指一致性及保守性取代匹配兩者。若兩個多肽序列具有例如20個胺基酸中之10個一致的胺基酸且其餘者均為非保守取代，則一致性百分比及相似性百分比均為50%。在同一實例中，若存在5個或更多個保守性取代，則一致性百分比仍為50%，但相似性百分比為75%。因此，若存在保守性取代，則兩種多肽之間的相似性百分比高於此等兩種多肽之間的一致性百分比。
治療：如本文所用，術語「治療(treat/treatment/treating)」係指用於部分或完全地減輕、改善、緩和、抑制、預防特定疾病、病症及/或病狀之一或多種症狀或特徵、延遲其發作、降低其嚴重性及/或降低其發生率的任何方法。治療可投與至未展現疾病之體徵及/或僅展現疾病之早期體徵的個體以便降低患上與疾病相關之病變的風險。
載體：術語「載體」係指用於人工攜帶外來遺傳物質至外來基因物質可在此處複製或表現之另一細胞的聚核苷酸(通常DNA)。非限制性例示性載體包括質體、病毒載體、黏質體及人工染色體。此類載體可衍生自多種來源，包括細菌及病毒來源。質體之非限制性例示性病毒來源為腺相關病毒。
本發明之各種態樣在以下章節中詳細描述。章節之使用並不意欲限制本發明。各章節可適用於本發明之任何態樣。在本申請案中，除非另有說明，否則「或」之使用意謂「及/或」。如本文所使用，除非上下文另外明確規定，否則單數形式「一(a/an)」及「該」包括單數及複數種指代物兩者。
本發明描述抗體、核酸及其製造系統以及用於治療與功能障礙C5a/C5aR1軸傳訊相關之疾病，特定言之自體免疫疾病的用途及方法，該等自體免疫疾病諸如但不限於ANCA相關血管炎、狼瘡、類風濕性關節炎、發炎性腸病、C3腎絲球病變(C3G)、化膿性汗腺炎(HS)、非典型性溶血性尿毒性症候群
狼瘡性腎炎、IgA腎病、重症肌無力、黃斑變性、阿茲海默氏病(Alzheimers Disease)、肌肉萎縮性脊髓側索硬化症、亨廷頓氏症(Huntington's Disease)、神經痛、COVID-19感染、過敏性哮喘、慢性阻塞性肺病、大皰性類天疱瘡、壞疽性膿皮病及牛皮癬。
ANCA相關血管炎為以小血管破壞及炎症為特徵的一組疾病(肉芽腫性血管炎、嗜酸性肉芽腫性血管炎及顯微鏡下多血管炎)。抗嗜中性白血球細胞質自體抗體(ANCA)為ANCA相關血管炎之病因。動物模型及活體外實驗中之實驗資料顯示，預致敏嗜中性白血球由ANCA活化，此產生與嗜中性白血球上之C5a受體接合的C5a。此吸引且轉而引發更多嗜中性白血球由ANCA活化。結合於C5aR1之C5a可在ANCA相關血管炎之發病機制中起主要作用。ANCA血管炎之一般示意圖展示於 圖 1中。標準治療為使用糖皮質激素之免疫抑制療法；此等療法與大量的短期及長期毒性相關。阿伐可泮(C5aR1結合拮抗劑小分子)近來由FDA接受用於ANCA相關血管炎。然而， 活體外資料表明可藉由高濃度之C5a來克服C5a之阿伐可泮拮抗作用。已知活性AAV中之炎症部位處之C5a濃度可達至100 nM。已知在此類條件下，可克服阿伐可泮對C5aR1之抑制。需要研發用於抵抗與此路徑之功能障礙相關之病症的C5a/C5aR1軸之穩固抑制劑。本發明提供使用生物學C5aR1拮抗劑治療C5a/C5aR1軸功能障礙相關病症的組合物及方法。
在一些態樣中，本文提供結合且拮抗C5aR1之兩組例示性抗體。本發明中之兩組抗體之示意圖展示於 圖 2中。
促效劑結合於細胞外域之能量將別構構形變化傳遞至跨膜及細胞內域，從而允許G-蛋白質結合及傳訊。C5aR1具有兩種已知促效劑：C5a及C5a desArg。C5a在血清中具有較短半衰期，此係因為C端精胺酸藉由羧肽酶N快速裂解以形成C5a desArg，其以降低之親和力結合於C5aR1且顯示偏置的傳訊。不同於C5a，C5a desArg不傳訊β-抑制蛋白路徑且不刺激顆粒球釋放。然而，C5a desArg確實刺激嗜中性白血球趨化性，因此亦有興趣阻斷C5a desArg結合以防止嗜中性白血球遷移至炎症部位。C5a desArg傳訊有利於趨化性且不易於去敏( 例如，嗜中性白血球繼續遷移直至到達高濃度之C5a，而非C5a desArg)。在一實施例中，阻斷C5a結合之正構拮抗劑( 例如，如本文所描述之抗體分子)亦抑制( 例如，阻斷) C5a desArg結合。在一些實施例中，在炎症部位處需要抑制C5a結合，同時在周邊處抑制C5a desArg且可防止嗜中性白血球遷移至炎症部位。靶向C5aR1通常使膜攻擊複合物路徑(C5b)不受影響。 單特異性 C5aR1 拮抗劑之設計
在一些實施例中，本文中提供之抗體結合由SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2定義之位點，亦稱作「位點I」。位點I通常包含C5aR1之N端殘基( 例如，N端37個殘基)且形成由SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2定義之可撓性無規線圈結構。結合於位點I之抗體分子通常可結合於位點I中之所有殘基或其子集。舉例而言，結合於位點I之抗體分子與位點I中之一或多個殘基接觸。在一實施例中，位點I一般包含多個硫酸化殘基( 例如，硫酸化酪胺酸殘基)及多個Asp殘基。
在一些實施例中，本文所提供之抗體結合由SEQ ID NO: 3定義之位點，亦稱為「位點II」。位點II通常包含額外細胞環2 (ECL2)及形成C5aR1之前庭的跨膜殘基。在一實施例中，結合於位點II之抗體分子結合於ECL2，但不結合於或實質上不結合於ECL1及/或ECL3。在一實施例中，結合於位點II之抗體分子結合於ECL2及ECL1，但不結合於或實質上不結合於ECL3。
在一些實施例中，本文所描述之抗體分子經設計以靶向由SEQ ID NO: 3之胺基酸定義的位點II。在一些實施例中，涵蓋SEQ ID NO: 38之R175至G189的胺基酸為用於本文所描述之位點II抗體分子之結合的核心抗原決定基。在一些實施例中，涵蓋SEQ ID NO: 38之E180至P183的胺基酸為用於本文所描述之位點II抗體分子之結合的核心抗原決定基。在一些實施例中，涵蓋SEQ ID NO: 38之E180至P184的胺基酸為用於本文所描述之位點II抗體分子之結合的核心抗原決定基。在一些實施例中，涵蓋SEQ ID NO: 38之E178至P183的胺基酸為用於本文所描述之位點II抗體分子之結合的核心抗原決定基。在一些實施例中，C5aR1 (SEQ ID NO:38)之殘基R35、H101、V176、V177、R178、E179、E180、Y181、F182、P183、P184、K185、L187、D191、193、H194、E266、P267、S268、F272、L273及/或K276中之一或多者對於本文所描述之位點II抗體之結合至關重要。在一些實施例中，SEQ ID NO: 38之殘基E180、Y181、F182及/或P183中之一或多者為用於本文所描述之位點II抗體之結合的關鍵抗原決定基。在一個實施例中，SEQ ID NO: 38之胺基酸殘基W102對於本文所描述之位點II抗體之結合至關重要。
SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2及SEQ ID NO: 3之序列提供於 表 1中。 表 1. 位點I、位點II及人類C5aR1之胺基酸序列。變體(N2D及N279K)展示為小寫字母。
位點I序列 MNSFNYTTPDYGHYDDKDTLDLNTPVDKTSNTLRVPD (SEQ ID NO: 1)
位點I序列 MDSFNYTTPDYGHYDDKDTLDLNTPVDKTSNTLRVPD (SEQ ID NO: 2)
位點II序列 RVVREEYFPPKVLCGVDYSHDKRRER (SEQ ID NO: 3)
hC5aR1 MnSFNYTTPDYGHYDDKDTLDLNTPVDKTSNTLRVPDILALVIFAVVFLVGVLGNALVVWVTAFEAKRTINAIWFLNLAVADFLSCLALPILFTSIVQHHHWPFGGAACSILPSLILLNMYASILLLATISADRFLLVFKPIWCQNFRGAGLAWIACAVAWGLALLLTIPSFLYRVVREEYFPPKVLCGVDYSHDKRRERAVAIVRLVLGFLWPLLTLTICYTFILLRTWSRRATRSTKTLKVVVAVVASFFIFWLPYQVTGIMMSFLEPSSPTFLLLnKLDSLCVSFAYINCCINPIIYVVAGQGFQGRLRKSLPSLLRNVLTEESVVRESKSFTRSTVDTMAQKTQAV (SEQ ID NO: 38)
在一些態樣中，本文中提供之例示性人源化位點I (SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2)結合抗體包含重鏈可變區(HCVR或VH)，其包含SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 39至SEQ ID NO: 43之胺基酸序列或與其具有至少80%、85%、90%、95%或99%一致性之序列，及/或輕鏈可變區(LCVR或VL)，其包含SEQ ID NO: 17或SEQ ID NO: 44至SEQ ID NO: 49之胺基酸序列或與其具有至少80%、85%、90%、95%或99%一致性之序列。 表 2a概述例示性位點I結合抗體之VH及VL之胺基酸序列。在一些實施例中，在HCVR或VH (SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 39至SEQ ID NO: 43)內發現三個重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3。在一些實施例中，在LCVR或VL (SEQ ID NO: 17或SEQ ID NO: 44至SEQ ID NO: 49)內發現三個輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3。應注意，例示性人源化全長位點I結合抗體可包含以下之任何組合：VH，其選自SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 39-43之胺基酸序列及VL，其選自SEQ ID NO: 17或SEQ ID NO: 44-49之胺基酸序列。
應注意，人源化全長位點I結合抗體可包含以下之任何組合：VH，其選自SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 39-43之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 39-43 80%、85%、90%、95%、98%、99%一致之胺基酸序列中之任一者及VL，其選自SEQ ID NO: 17或SEQ ID NO: 44-49之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 17或SEQ ID NO: 44-49 80%、85%、90%、95%、98%、99%一致之胺基酸序列中之任一者。
在一些實施例中，例示性位點I結合抗體e1711包含SEQ ID NO: 17或與SEQ ID NO: 17 80%、85%、90%、95%、98%、99%一致之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，例示性位點I結合抗體e1711包含SEQ ID NO: 16或與SEQ ID NO: 16 80%、85%、90%、95%、98%、99%一致之胺基酸序列的輕鏈。
在一些實施例中，例示性位點I結合抗體e1711包含SEQ ID NO: 43或與SEQ ID NO: 43 80%、85%、90%、95%、98%、99%一致之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，例示性位點I結合抗體e1711包含SEQ ID NO: 48或與SEQ ID NO: 48 80%、85%、90%、95%、98%、99%一致之胺基酸序列的輕鏈。
在一些實施例中，本文提供之例示性位點I結合抗體e1711包含e11L可變輕鏈及e11H可變重鏈，其包含：重鏈，其包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 77具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%一致性之序列，及/或輕鏈，其包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 78具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%一致性之序列。 表 2a. 例示性人源化位點I結合抗體之可變區
人源化位點 I 抗體：重鏈可變區 (SEQ ID NO: 16 ； SEQ ID NO: 39-43 )
e1H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCAASGFTFNAYAMSWVRQAPGQGLEWMGSISTGGNTYYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTRGYQRFSGFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 39)
e11H EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNAYAMSWVRQATGKGLEWVSSISTGGNTYYPGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAGDTAVYYCTRGYQRFSGFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 40)
e14H EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNAYAMSWVRQATGKGLEWVSSISTGGNTYYPGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAGDTAVYYCARGYQRFSGFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 41)
e16H EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNAYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISTGGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRGYQRFSGFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 42)
e17H EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFNAYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISTGGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRGYQRFSGFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 43)
e1711H EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFNAYAMSWVRQAPGKCLEWVSSISTGGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRGYQRFSGFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 16)
人源化位點 I 抗體：輕鏈可變區 (SEQ ID NO: 17 ； SEQ ID NO: 44-49 )
e3L DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIVHSNGNTYLNWYQQKPGKAPKLLIYKVSNRLSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCSQSTHVPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 44)
e5L DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVHSNGNTYLNWLQQRPGQPPRLLIYKVSNRLSGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 45)
e6L DVVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVHSNGNTYLNWYQQRPGQPPRLLIYKVSNRLSGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 46)
e8L DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVHSNGNTYLNWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRLSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 47)
e11L EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRSSQSLVHSNGNTYLNWYQQKPGQAPRLLIYKVSNRLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCSQSTHVPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 48)
e20L EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVVHSNGNTYLNWYQQKPGQAPRLLIYKVSNRLSGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCSQSTHVPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 49)
e1711L EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRSSQSLVHSNGNTYLNWYQQKPGQAPRLLIYKVSNRLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCSQSTHVPYTFGCGTKLEIK (SEQ ID NO: 17)
表 2b. 例示性人源化位點I結合抗體之重鏈及輕鏈
例示性位點I單特異性抗體e1711之重鏈 EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFNAYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISTGGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRGYQRFSGFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 77)
例示性位點I單特異性抗體e1711之輕鏈 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRSSQSLVHSNGNTYLNWYQQKPGQAPRLLIYKVSNRLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCSQSTHVPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 78)
在一些態樣中，本文提供之例示性位點II結合抗體包含：HCVR或VH，其包含SEQ ID NO: 14或SEQ ID NO: 50至SEQ ID NO: 59之胺基酸序列或與其具有至少80%、85%、90%、95%或99%一致性之序列，及/或LCVR或VL，其包含SEQ ID NO: 60至SEQ ID NO: 68之胺基酸序列或與其具有至少80%、85%、90%、95%或99%一致性之序列。 表 3概述例示性位點II結合抗體之VH及VL之胺基酸序列。在一些實施例中，在HCVR或VH (SEQ ID NO: 50至SEQ ID NO: 59)內發現三個重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3。在一些實施例中，在LCVR或VL (SEQ ID NO: 60至SEQ ID NO: 68)內發現三個輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3。
應注意，人源化全長位點II結合抗體可包含以下之任何組合：VH，其選自SEQ ID NO: 14或SEQ ID NO: 50-59之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 14或SEQ ID NO: 50-59中之任一者的胺基酸序列具有至少85%、90%、95%、99%或100%一致性，及VL，其選自SEQ ID NO: 15或SEQ ID NO: 25或SEQ ID NO: 60-68之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 15或SEQ ID NO: 25或SEQ ID NO: 60-68中之任一者的胺基酸序列具有至少85、90、95、99或100%一致性。 表 3. 例示性人源化位點II結合抗體之可變區
人源化位點 II 抗體：重鏈可變區 (SEQ ID NO: 14 ； SEQ ID NO: 50-59 )
a4H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFSSSWINWVRQAPGQGLEWMGRISAYDGDTRYAQKLQGRVTMTADKSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCVRFLITSTRYVMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 50)
a9H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFSSSWMNWVRQAPGQRLEWMGRISAGDGDTRYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCVRFLITSTRYVMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 51)
a16H QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGSFSSSWINWVRQAPGQGLEWMGRISPGDGDTRYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCVRFLITSTRYVMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 52)
a20H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFSSSWINWVRQATGQGLEWMGRMSPGDGDTRYAQKFQGRVTMTANKSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCVRFLITSTRYVMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 53)
a26H EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKASGYSFSSSWMNWVRQMPGKGLEWMGRISPGDGDTRYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYFCVRFLITSTRYVMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 54)
a30H EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSSSWINWVRQMPGKGLEWMGRISPGDGDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCVRFLITSTRYVMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 55)
c2H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWVRQAPGQGLEWMGYLNPSSGYTKYAQKLQGRVTMTADKSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCTRSGGDNYGNPYYFDRWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 56)
c13H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWVRQAPGQRLEWMGYLNPSSGYTKYSQKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRSGGDNYGNPYYFDRWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 57)
c32H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWIHWVRQATGQGLEWMGYMNPSSGYTKYAQKFQGRVTMTANKSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRSGGDNYGNPYYFDRWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 58)
c21H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWVRQAPGQGLEWMGYLNPSSGYTKYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTRSGGDNYGNPYYFDRWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 14)
c40H EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYTFTNYWIHWVRQMPGKGLEWMGYINPSSGYTKYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCTRSGGDNYGNPYYFDRWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 59)
人源化位點 II 抗體：輕鏈可變區 (SEQ ID NO: 15 ； SEQ ID NO: 25 ； SEQ ID NO: 60-68 )
a1L DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLVHSNGNTYLHWYQQKPGKAPKLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCSQSTLVPPTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 60)
a6L DVVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYQQRPGQPPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTLVPPTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 61)
a15L EVVMTQSPATLSVSPGERATLSCRSSQSLVHSNGNTYLHWYQQKPGQAPRLLIYKVSNRFSGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCSQSTLVPPTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 62)
c4L DVQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIVHSNGNTYLHWYQQKPGKAPKFLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCSQSTLVPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 63)
c6L DVVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYQQRPGQPPRFLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTLVPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 64)
c8L DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQFLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTLVPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 65)
c9 DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTLVPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 66)
c10L DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYQQRPGQSPRFLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTLVPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 67)
c38L DVQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIVHSNGNTYLHWYQQKPGKAPKFLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCSQYTLVPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 68)
c37L DVQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIVHSNGNTYLHWYQQKPGKAPKFLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQSTLVPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 15)
c39L DVQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIVHSNGNTYLHWYQQKPGKAPKFLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQYTLVPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 25)
在一些態樣中，例示性位點II結合抗體包含c39L (SEQ ID NO: 14)及c21H (SEQ ID NO: 25)之組合以產生抗體c2139。
在一些實施例中，本文提供之例示性位點II結合抗體c2139包含c39L可變輕鏈及c21H可變重鏈，其包含：重鏈，其包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 4具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%一致性之序列，及/或輕鏈，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 5具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%一致性之序列。
在一些實施例中，本文提供之例示性位點II結合抗體c2137包含c37L可變輕鏈及c21H可變重鏈，其包含：重鏈，其包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 4具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%一致性之序列，及/或輕鏈，其包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 75具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%一致性之序列。
在一些態樣中，本文提供之例示性位點II (SEQ ID NO: 3)結合抗體c2139包含重鏈，其包含HCVR或VH，其中HCVR或VH包含三個重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，其分別包含SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8。在一些實施例中，本文提供之例示性位點II結合抗體進一步包含LCVR或VL，其中LCVR或VL包含三個輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其分別包含SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10及SEQ ID NO: 11；或包含與SEQ ID NO: 6、7、8、9、10及/或11之胺基酸相差不超過5、4、3、2或1個胺基酸之序列。重鏈、輕鏈以及HCDR及LCDR之序列提供於 表 4a中。
在一些態樣中，本文提供之例示性位點II結合抗體c2139包含：HCVR或VH，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 14具有至少80%、85%、90%、95%或99%一致性之序列，及/或LCVR或VL，其包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 25具有至少80%、85%、90%、95%或99%一致性之序列。
在一個態樣中，本文描述一種例示性抗體分子c2139，其能夠結合於補體成分5a受體1 (C5aR1)，其中抗體分子與能夠結合於位點II (SEQ ID NO: 3)之胺基酸之一或多個殘基的C5aR1抗體分子競爭。
在一些實施例中，例示性位點II結合抗體包含VH之位置89處的甘胺酸或丙胺酸。在一些實施例中，例示性位點II結合抗體包含位置91處之酪胺酸。在一些實施例中，例示性位點II結合抗體包含VH之位置91處的酪胺酸及位置89處的甘胺酸或丙胺酸。 表 4a. 例示性人源化C5aR1位點II抗體之重鏈、輕鏈、HCDR及LCDR之胺基酸序列
c2139之重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWVRQAPGQGLEWMGYLNPSSGYTKYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTRSGGDNYGNPYYFDRWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 4)
c2139之輕鏈 DVQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIVHSNGNTYLHWYQQKPGKAPKFLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQYTLVPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 5)
c2139之HCDR1 NYWMH (SEQ ID NO: 6)
c2139之HCDR2 YLNPSSGYTKYAQKFQG (SEQ ID NO: 7)
c2139之HCDR3 SGGDNYGNPYYFDR (SEQ ID NO: 8)
c2139之LCDR1 RASQSIVHSNGNTYLH (SEQ ID NO: 9)
c2139之LCDR2 KVSNRFS (SEQ ID NO: 10)
c2139之LCDR3 AQYTLVPLT (SEQ ID NO: 11)
c2137之重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWVRQAPGQGLEWMGYLNPSSGYTKYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTRSGGDNYGNPYYFDRWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 4)
c2137之輕鏈 DVQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIVHSNGNTYLHWYQQKPGKAPKFLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQSTLVPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 75)
在一些實施例中，諸如(例如) c2139的例示性位點II結合抗體之HCVR及LCVR進一步連接至Fc域。Fc域進一步包含經由連接子彼此連接之CH2域及CH3域。然而，本發明亦涵蓋不含Fc域之位點II結合生物分子。
在一些實施例中，抗C5aR1之例示性位點I或位點II結合抗體以10 pM至50 nM之解離常數(Kd)結合C5aR1，藉此抑制C5aR1與C5a之締合，藉此拮抗C5a/C5aR1軸路徑。
在一些實施例中，藉由對Gα傳訊之抑制、對嗜中性白血球趨化性之抑制、對CD11b表現之抑制及對鈣傳訊之抑制來量測對C5a/C5aR1抗體之有效抑制。
在一些實施例中，抗C5aR1之例示性位點I或位點II結合抗體不結合於或實質上不結合於C5aR2或其他GPCR。
在一些實施例中，抗C5aR1之例示性位點I或位點II結合抗體能夠結合於人類嗜中性白血球。
在一些實施例中，抗C5aR1之例示性位點I或位點II結合抗體抑制β-抑制蛋白傳訊。
在一些實施例中，抗C5aR1之例示性位點I或位點II結合抗體抑制嗜中性白血球中之ROS產生。
在一些實施例中，抗C5aR1之例示性位點I或位點II結合抗體經內化。在一些實施例中，內化耗時至少6小時。在一些實施例中，內化耗時至少12小時。在一些實施例中，內化耗時少於6小時。 多特異性 C5aR1 拮抗劑之設計
在一些態樣中，本文提供之抗體為多特異性抗體。在一實施例中，多特異性抗體分子為多互補位抗體分子， 例如其包含複數個免疫球蛋白可變區序列，其中該複數個免疫球蛋白可變區序列之第一免疫球蛋白可變區序列對第一抗原決定基具有結合特異性且該複數個免疫球蛋白可變區序列之第二免疫球蛋白可變區序列對第二抗原決定基具有結合特異性。在一實施例中，第一及第二抗原決定基位於同一抗原上， 例如同一蛋白質(或多聚體蛋白質之次單元)上。雙特異性或雙互補位抗體對不超過兩種抗原或抗原決定基具有特異性。雙特異性或雙互補位抗體分子之通常以對第一抗原決定基具有結合特異性之第一免疫球蛋白可變區序列及對第二抗原決定基具有結合特異性之第二免疫球蛋白可變區序列為特徵。在一實施例中，雙特異性或雙互補位抗體分子包含對第一抗原決定基具有結合特異性之半抗體或其片段及對第二抗原決定基具有結合特異性之半抗體或其片段。在一實施例中，第一及第二抗原決定基位於同一抗原上， 例如同一蛋白質(或多聚體蛋白質之次單元)上。在一實施例中，第一抗原決定基位於C5aR1 (例如位點I，例如包含如本文所描述之N端區)上，且第二抗原決定基位於C5aR1 (例如位點II，例如包含如本文所描述之ECL2)上。在一實施例中，抗體為結合於C5aR1之位點I (SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2)及位點II (SEQ ID NO: 3)之雙互補位抗體。
在一些態樣中，雙互補位抗體包含來自表2a之一對VH及VL。在一些實施例中，雙互補位抗體包含來自表3之一對VH及VL。在一些實施例中，雙互補位抗體包含來自表2a之一對VH及VL及來自表3之一對VH及VL。在一些態樣中，雙互補位抗體包含：VH，其選自SEQ ID NO: 14或SEQ ID NO: 50-59之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 14或SEQ ID NO: 50-59中之任一者的胺基酸序列具有至少85%、90%、95%、99%或100%一致性，及VL，其選自SEQ ID NO: 15或SEQ ID NO: 25或SEQ ID NO: 60-68之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 15或SEQ ID NO: 25或SEQ ID NO: 60-68中之任一者的胺基酸序列具有至少85%、90%、95%、99%或100%一致性。在一些態樣中，雙互補位抗體包含：VH，其選自SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 39-43之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 39-43 80%、85%、90%、95% 98% 99%一致之胺基酸序列中之任一者，及VL，其選自SEQ ID NO: 17或SEQ ID NO: 44-49之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 17或SEQ ID NO: 44-49 80%、85%、90%、95%、98%、99%一致之胺基酸序列中之任一者。
在一些實施例中，本文所描述之雙互補位抗體之一個抗原決定基經設計以靶向由SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2定義的C5aR1之硫酸化N端肽或位點I。在一些實施例中，由本文所描述之抗體分子靶向的位點I殘基經硫酸化。在一些實施例中，胺基酸殘基T8 (蘇胺酸8)、D10 (天冬胺酸10)、Y11 (酪胺酸11)、Y14 (酪胺酸14)及/或D15 (天冬胺酸15)中之一或多者為關鍵位點I抗原決定基接觸點。在一些實施例中，Y11及/或Y14處之硫酸化對於本文所描述之位點I抗體分子之結合至關重要。在一些實施例中，對於本文所描述之位點I抗體分子之結合，核心抗原決定基跨越SEQ ID NO: 38之T7至D18的12個胺基酸。在一些實施例中，對於本文所描述之位點I抗體分子之結合，核心抗原決定基跨越SEQ ID NO: 38之T8至D18的胺基酸。
在一些實施例中，本文所描述之抗體分子經設計以靶向由SEQ ID NO: 3之胺基酸定義的位點II。在一些實施例中，涵蓋SEQ ID NO: 38之R175至G189的胺基酸為用於本文所描述之位點II抗體分子之結合的核心抗原決定基。在一些實施例中，涵蓋SEQ ID NO: 38之E180至P183的胺基酸為用於本文所描述之位點II抗體分子之結合的核心抗原決定基。在一些實施例中，涵蓋SEQ ID NO: 38之E180至P184的胺基酸為用於本文所描述之位點II抗體分子之結合的核心抗原決定基。在一些實施例中，涵蓋SEQ ID NO: 38之E178至P183的胺基酸為用於本文所描述之位點II抗體分子之結合的核心抗原決定基。在一些實施例中，C5aR1 (SEQ ID NO:38)之殘基R35、H101、V176、V177、R178、E179、E180、Y181、F182、P183、P184、K185、L187、D191、193、H194、E266、P267、S268、F272、L273及/或K276中之一或多者對於本文所描述之位點II抗體之結合至關重要。在一些實施例中，SEQ ID NO: 38之殘基E180、Y181、F182及/或P183中之一或多者為用於本文所描述之位點II抗體之結合的關鍵抗原決定基。在一個實施例中，SEQ ID NO: 38之胺基酸殘基W102對於本文所描述之位點II抗體之結合至關重要。
在一些實施例中，本發明中提供之雙互補位抗體包含Fab-Fc及單鏈可變片段(scFv)，其中Fc經由連接子連接至scFv。在一些實施例中，Fab域結合位點I且scFv結合位點II。
在一些實施例中，本發明中提供之雙互補位抗體包含Fab-Fc及單鏈可變片段(scFv)。在一些實施例中，Fab域結合位點II且scFv結合位點I，其中Fc經由連接子連接至scFv。
在一些實施例中，本發明中提供之雙互補位抗體為包含重鏈之四價抗體，其中重鏈包含連接至scFV域之VH-Fc，如 圖 3A中所展示。
在一些實施例中，雙互補位抗體之位點II結合臂包含VH之位置89處的甘胺酸或丙胺酸。在一些實施例中，雙互補位抗體之位點II結合臂包含位置91處之酪胺酸。在一些實施例中，雙互補位抗體之位點II結合臂包含VH之位置91處的酪胺酸及位置89處的甘胺酸或丙胺酸。
在一些實施例中，本發明中提供之雙互補位抗體為包含輕鏈之四價抗體，其中輕鏈包含連接至scFV域之VL，如 圖 3B中所展示。
在一些實施例中，雙互補位抗體為具有兩個臂單鏈Fab-Fc設計之雙特異性抗體，其包含CH3域中之「杵-臼(knobs-in-hole)」(KiH)突變，以組裝兩個半抗體(共同Fc雜二聚體及獨特VH-CH及VL-CL域)。在一些實施例中，KiH突變包含一個CH3域中之T366Y突變，可用於產生杵，而另一CH3域中之Y407T突變可用於產生臼。在一些實施例中，一個CH3域中之F405A突變可用於產生杵，而另一CH3域中之T394W突變可用於產生臼。在一些實施例中，一個CH3域中之T366W突變可用於產生杵而另一CH3域中之Y407A突變可用於產生臼。在一些實施例中，雙互補位scFv-Fc分子可使用杵-臼技術(例如，包括臼突變：Y349C、T366S、L368A、Y407V；杵突變：S354C、T366W)產生。
在一些實施例中，雙互補位抗體包含 表 4b中所描述之抗體格式。 表 4b. 雙互補位抗體之格式
(位點II) Fab-IgG-scFv (位點I)
(位點II) Fab-IgG-連接子-VL(位點I)-連接子-VH (位點I)
(位點II) Fab-IgG-連接子-VH(位點I)-連接子-VL (位點I)
(位點I) Fab-IgG-scFv (位點II)
在一實施例中，雙互補位抗C5aR1抗體分子包含兩個重鏈可變區及兩個輕鏈可變區。在一實施例中，抗C5aR1抗體分子包含Fab、F(ab')2、Fv、Fd或單鏈Fv片段(scFv)。
在一些實施例中，本申請案中所使用之Fc域包含或衍生於IgG、IgM、IgE、Fc部分。除上文所描述之KiH突變以外，Fc域包含S228P突變。在一些實施例中，S228P增強抗體之均質性。在一些實施例中，Fc域包含或衍生於IgG Fc域。在一些實施例中，IgG Fc域為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc域。在一些實施例中，Fc域衍生於或包含IgG4 Fc域。在一些實施例中，Fc域衍生於或包含具有S228P突變之IgG4 Fc域。在一些實施例中，Fc域衍生於或包含IgG1 Fc域。在一些實施例中，Fc域衍生於或包含具有S228P突變之IgG1 Fc域。
在一些實施例中，雙互補位抗體包含經由連接子彼此連接之兩個scFv區，其中第一scFv結合位點I且第二scFv結合位點II。
在一些實施例中，Fab-Fc-連接子-scFv雙互補位抗體為四價抗體，其包含SEQ ID NO: 12之重鏈序列及SEQ ID NO: 13之輕鏈序列或與SEQ ID NO: 12及SEQ ID NO 13至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%一致之任何序列。
在一些實施例中，Fab-Fc-連接子-scFv雙互補位抗體為四價抗體，其包含SEQ ID NO: 12之重鏈序列及SEQ ID NO: 76之輕鏈序列或與SEQ ID NO: 12及SEQ ID NO 76至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%一致之任何序列。
表4c提供雙互補位抗體之重鏈及輕鏈序列之序列 表 4c. 人源化C5aR1雙互補位抗體之重鏈及輕鏈之胺基酸序列
c2137-e1711之重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWVRQAPGQGLEWMGYLNPSSGYTKYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTRSGGDNYGNPYYFDRWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRSSQSLVHSNGNTYLNWYQQKPGQAPRLLIYKVSNRLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCSQSTHVPYTFGCGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFNAYAMSWVRQAPGKCLEWVSSISTGGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRGYQRFSGFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 12)
c2137-e1711之輕鏈 DVQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIVHSNGNTYLHWYQQKPGKAPKFLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQSTLVPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 13)
c2139-e1711之重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWVRQAPGQGLEWMGYLNPSSGYTKYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTRSGGDNYGNPYYFDRWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRSSQSLVHSNGNTYLNWYQQKPGQAPRLLIYKVSNRLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCSQSTHVPYTFGCGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFNAYAMSWVRQAPGKCLEWVSSISTGGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRGYQRFSGFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 12)
c2139-e1711之輕鏈 DVQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIVHSNGNTYLHWYQQKPGKAPKFLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQYTLVPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 76)
在一些實施例中，雙互補位具有兩個可變區：可變區1及可變區2。各可變區包含可變重鏈及可變輕鏈。
在一例示性實施例中，可變區1包含：包含SEQ ID NO: 14之可變重鏈1 (VH1)及包含SEQ ID NO: 15之可變輕鏈1 (VL1)。在一些實施例中，可變區1包含與VH1之序列85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之序列，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列。在一些實施例中，可變區1包含與VL1之序列85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之序列，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。
在一些例示性實施例中，可變區2包含可變重鏈2 (VH2)及可變輕鏈2 (VL2)，其分別包含SEQ ID NO: 16及SEQ ID NO: 17之胺基酸序列。在一些實施例中，可變區2包含與VH2之序列85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之序列，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列。在一些實施例中，可變區2包含與VL2之序列85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之序列，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列。
在一些例示性實施例中，包含SEQ ID NO: 14之VH1、SEQ ID NO: 15之VL1、SEQ ID NO: 16之VH2及SEQ ID NO: 17之VL2的雙互補位抗體被稱為c2137-e1711。
在一些例示性實施例中，VH1包含三個HCDR：HCDR1、HCDR2及HCDR3，其包含SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；或包含與SEQ ID NO: 6、7及/或8之胺基酸相差不超過5、4、3、2或1個胺基酸之序列。
在一些例示性實施例中，VH2包含三個HCDR：HCDR4、HCDR5及HCDR6，其包含SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19及SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；或包含與SEQ ID NO: 18、19及/或20之胺基酸相差不超過5、4、3、2或1個胺基酸之序列。
在一些例示性實施例中，VL1包含三個LCDR：LCDR1、LCDR2及LCDR3，其包含SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10及SEQ ID NO: 21之胺基酸序列；或包含與SEQ ID No: 9、10及/或21之胺基酸相差不超過5、4、3、2或1個胺基酸之序列。
在一些例示性實施例中，VL2包含三個LCDR：LCDR4、LCDR5及LCDR6，其包含SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23及SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；或包含與SEQ ID NO: 22、23及/或24之胺基酸相差不超過5、4、3、2或1個胺基酸之序列。 表 5提供VH1、VH2、VL1、VL2、HCDR1、HCDR2、HCDR3、HCDR4、HCDR5、HCDR6、LCDR1、LCDR2、LCDR3、LCDR4、LCDR5及LCDR6之胺基酸序列。
在一些例示性實施例中，HCDR1、HCDR2、HCDR3、HCDR4、HCDR5、HCDR6、LCDR1、LCDR2、LCDR3、LCDR4、LCDR5及LCDR6包含與SEQ ID NO: 16-21之胺基酸序列相差不超過5個胺基酸殘基之胺基酸序列。 表 5. 人源化C5aR1雙互補位抗體(c2137-e1711)可變域及CDR之胺基酸序列
HCDR1 NYWMH (SEQ ID NO: 6)
HCDR2 YLNPSSGYTKYAQKFQG (SEQ ID NO: 7)
HCDR3 SGGDNYGNPYYFDR (SEQ ID NO: 8)
HCDR4 AYAMS (SEQ ID NO: 18)
HCDR5 SISTGGNTYYADSVKG (SEQ ID NO: 19)
HCDR6 GYQRFSGFAY (SEQ ID NO: 20)
LCDR1 RASQSIVHSNGNTYLH (SEQ ID NO: 9)
LCDR2 KVSNRFS (SEQ ID NO: 10)
LCDR3 AQSTLVPLT (SEQ ID NO: 21)
LCDR4 RSSQSLVHSNGNTYLN (SEQ ID NO: 22)
LCDR5 KVSNRLS (SEQ ID NO: 23)
LCDR6 SQSTHVPYT (SEQ ID NO: 24)
在一些例示性實施例中，雙互補位抗體之可變區包含可變區1，其中可變區1包含VH1及VL1，其分別包含SEQ ID NO: 16及SEQ ID NO: 17之胺基酸序列。在一些實施例中，可變區1包含與VH1之序列85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之序列，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列。在一些實施例中，可變區1包含與VL1之序列85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之序列，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列。
在一些例示性實施例中，雙互補位抗體之可變區包含可變區2，其中可變區2包含：包含SEQ ID NO: 14之VH2及包含SEQ ID NO: 15之VL2。在一些實施例中，可變區2包含與VH2之序列85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之序列，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列。 在一些實施例中，可變區2包含與VL2之序列85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之序列，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。
在一些例示性實施例中，VH1包含三個HCDR：HCDR1、HCDR2及HCDR3，其包含SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19及SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；或包含與SEQ ID NO: 18、19及/或20之胺基酸相差不超過5、4、3、2或1個胺基酸之序列。
在一些例示性實施例中，VH2包含三個HCDR：HCDR4、HCDR5及HCDR6，其包含SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；或包含與SEQ ID NO: 6、7及/或8之胺基酸相差不超過5、4、3、2或1個胺基酸之序列。
在一些例示性實施例中，VL1包含三個LCDR：LCDR1、LCDR2及LCDR3，其包含SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23及SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；或包含與SEQ ID NO: 22、23及/或24之胺基酸相差不超過5、4、3、2或1個胺基酸之序列。
在一些例示性實施例中，VL2包含三個LCDR：LCDR4、LCDR5及LCDR6，其包含SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10及SEQ ID NO: 21之胺基酸序列；或包含與SEQ ID NO: 9、10及/或21之胺基酸相差不超過5、4、3、2或1個胺基酸之序列。 表 5提供VH1、VH2、VL1、VL2、HCDR1、HCDR2、HCDR3、HCDR4、HCDR5、HCDR6、LCDR1、LCDR2、LCDR3、LCDR4、LCDR5及LCDR6之胺基酸序列。
在一些例示性實施例中，HCDR1、HCDR2、HCDR3、HCDR4、HCDR5、HCDR6、LCDR1、LCDR2、LCDR3、LCDR4、LCDR5及LCDR6包含與SEQ ID NO: 16-21之胺基酸序列相差不超過5個胺基酸殘基之胺基酸序列。
在一些例示性實施例中，雙互補位抗體之可變區包含可變區1，其中可變區1包含VH1及VL1，其分別包含SEQ ID NO: 14及SEQ ID NO: 25之胺基酸序列。在一些實施例中，可變區1包含與VH1之序列85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之序列，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列。 在一些實施例中，可變區1包含與VL1之序列85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之序列，其包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列。
在一些例示性實施例中，雙互補位抗體之可變區包含可變區2，其中可變區2包含VH2及VL2，分別包含SEQ ID NO: 16及SEQ ID NO: 17之胺基酸序列。在一些實施例中，可變區2包含與VH2之序列85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之序列，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列。 在一些實施例中，可變區2包含與VL2之序列85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之序列，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列。
在一些例示性實施例中，包含SEQ ID NO: 14之VH1、SEQ ID NO: 25之VL1、SEQ ID NO: 16之VH2及SEQ ID NO: 17之VL2的雙互補位抗體被稱為c2139-e1711。
在一些例示性實施例中，結合C5aR1之例示性雙互補位抗體結合SEQ ID NO: 38中之胺基酸殘基T8 (蘇胺酸8)、D10 (天冬胺酸10)、Y11 (酪胺酸11)、Y14 (酪胺酸14)及/或D15 (天冬胺酸15)中之一或多者。
在一些例示性實施例中，結合C5aR1之例示性雙互補位抗體結合於SEQ ID NO: 38中之胺基酸殘基R175至G189。
在一些例示性實施例中，結合C5aR1之例示性雙互補位抗體結合於SEQ ID NO: 38中之胺基酸殘基E180至P183。
在一些例示性實施例中，結合C5aR1之例示性雙互補位抗體結合於SEQ ID NO: 38中之胺基酸殘基E180至P184。
在一些例示性實施例中，結合C5aR1之例示性雙互補位抗體結合於SEQ ID NO: 38中之胺基酸殘基E178至P183。
在一些實施例中，抗C5aR1之例示性雙互補位抗體抑制β-抑制蛋白傳訊。
在一些實施例中，抗C5aR1之例示性雙互補位抗體抑制嗜中性白血球中之ROS產生。
在一些實施例中，抗C5aR1之例示性雙互補位抗體經內化。在一些實施例中，內化耗時至少6小時。在一些實施例中，內化耗時至少12小時。在一些實施例中，內化耗時少於6小時。
在一些例示性實施例中，單特異性抗體及雙互補位抗體可經修飾或突變以增強抗體之熱穩定性。可藉由測定聚集起始溫度來評估抗體之熱穩定性。增加抗體穩定性之方式中之一者為如藉由差示掃描熱量測定(DSC)所量測使熱轉化中點(Tm)升高。一般而言，蛋白質Tm與其穩定性相關且與其在溶液中對展開及變性之易感性及視蛋白質展開趨勢而定之降解過程呈負相關。許多研究已發現在藉由DSC量測為熱穩定性之調配物之物理穩定性的等級與藉由其他方法量測之物理穩定性之間存在相關性(Maa等人, (1996) Int. J. Pharm. 140: 155-68；Remmele等人, (1997) Pharm. Res. 15: 200-8；Gupta等人, (2003) AAPS PharmSci. 5E8: 2003；Bedu-Addo等人, (2004) Pharm. Res. 21: 1353-61；Zhang等人, (2004) J. Pharm. Sci. 93: 3076-89)。調配物研究表明，Fab Tm牽涉對應mAb之長期物理穩定性。
在一些例示性實施例中，策略性引入二硫鍵可使單體蛋白質及多次單元蛋白質穩定，在增強抗體之熱穩定性方面起作用。
在一些例示性實施例中，策略性引入與芳族胺基酸(AA)，如色胺酸(TRP)、酪胺酸(TYR)、苯丙胺酸(PHE)及組胺酸(HIS)之π堆疊相互作用在增強抗體之熱穩定性方面起作用。
在一些實施例中，策略性引入出現在具有相反正或負全電子電荷之胺基酸側鏈之間的鹽橋，亦即(在中性pH下) Glu或Asp相比於Arg或Lys，增強了蛋白質，尤其抗體之穩定性。
在一些例示性實施例中，單特異性抗體或雙互補位抗體包含一或多種增強熱穩定性之修飾。在一些實施例中，增強熱穩定性之修飾為半胱胺酸殘基之引入。在一些實施例中，雙互補位抗體包含在SEQ ID NO: 12之位置559處及SEQ ID NO: 12之位置630處的半胱胺酸，以增強熱穩定性。
在一些實施例中，例示性雙互補位抗體之Tm大於65
Figure 02_image001
℃。在一些實施例中，例示性雙互補位抗體之Tm大於60
Figure 02_image001
℃，例示性雙互補位抗體之Tm大於55
Figure 02_image001
℃。在一些實施例中，例示性雙互補位抗體之Tm大於50
Figure 02_image001
℃。
一些類型之雙互補位抗體分子係藉由交聯位點I及位點II結合域或抗原結合片段產生，以產生雙特異性抗體。適合交聯劑包括異型雙官能(具有由適當間隔基( 例如間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基丁二醯亞胺酯)隔開的兩個不同反應性基團)或同型雙官能( 例如辛二酸二丁二醯亞胺酯)的彼等交聯劑。此類連接子可獲自Pierce Chemical Company, Rockford, Ill。
在一些實施例中，肽連接子用於將scFv或單鏈抗體連接至Fab之Fc域。適合連接子之若干實例包括單個甘胺酸(G)殘基；二甘醇肽(GG)；三肽(GGG)；具有四個甘胺酸殘基之肽(GGGG；SEQ ID NO: 26)；具有五個甘胺酸殘基之肽(GGGGG；SEQ ID NO: 27)；具有六個甘胺酸殘基之肽(GGGGGG；SEQ ID NO: 28)；具有七個甘胺酸殘基之肽(GGGGGGG；SEQ ID NO: 29)；具有八個甘胺酸殘基之肽(GGGGGGGG；SEQ ID NO: 30)。可使用胺基酸殘基之其他組合，諸如肽GGGGS (SEQ ID NO: 31)、肽GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 32)、肽GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 33)、肽GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 34)、肽GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 35)、QRIEG (SEQ ID NO: 36)及肽GQPKAAP (SEQ ID NO: 37)。其他適合連接子包括單個Ser及Val殘基；二肽RTQP、SS、TK、SL、TKGPS、TVAAP、QPKAA。以上所列之實例不意欲以任何方式限制本發明之範疇，且已展示包含選自由以下組成之群的隨機選擇之胺基酸的連接子適用於結合蛋白：纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、離胺酸、精胺酸、組胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、甘胺酸及脯胺酸。關於連接子序列之額外描述，參見例如WO2012135345。
連接子中胺基酸殘基之一致性及序列可視在連接子中實現所需的次級結構元件之類型而變化。舉例而言，甘胺酸、絲胺酸及丙胺酸最佳用於具有最大可撓性之連接子。若需要更具剛性及延伸之連接子，則甘胺酸、脯胺酸、蘇胺酸及絲胺酸之某些組合為適用的。視所需特性而定，視需要，可將任何胺基酸殘基視為與其他胺基酸殘基組合之連接子，以構築更大的肽連接子。 Fc 變體之設計
在一些態樣中，本文提供之單特異性及多特異性(包括雙特異性或雙互補位) C5aR1抗體包含Fc區中之變異或突變。在一些實施例中，Fc變體或突變體降低進行Fab臂交換之能力以供產生穩定的IgG1或IgG4雙特異性抗體。( 參見Stubenrauch等人, Drug Metabolism and Disposition 38, 84-91 (2010))。在一特定實施例中，Fc域為IgG1 Fc域。在另一實施例中，Fc域為IgG4 Fc域。在一更特定實施例中，Fc域為包含位置S228 (Kabat編號)處之胺基酸取代，尤其胺基酸取代S228P的IgG4 Fc域。
在一些實施例中，Fc區包含人類IgG4 Fc區，其包含一或多個選自由以下組成之群中的突變：S228P、L234V、L235A、G237A、D265G、A330S、P331S、L328R、H268A及N297Q突變(如根據Kabat等人, (1991)所指示)。在一些情況下，與野生型人類IgG4序列相比，人類IgG4 Fc變體總共具有至多10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個突變。在一個實施例中，Fc區包含F234V、L235E及D265G突變。在一些實施例中，Fc區包含F234V、L235E、D265G及S228P突變。
在一些實施例中，與野生型人類IgG Fc區相比，Fc變體展現降低的與個體之Fc受體之結合。在一些實施例中，與野生型人類IgG Fc區相比，Fc變體展現消除的與個體之Fc受體之結合。在一些實施例中，與野生型人類IgG Fc區相比，Fc變體展現吞噬作用之降低。在一些實施例中，與野生型人類IgG Fc區相比，Fc變體展現消除的吞噬作用。
在本文中亦稱為ADCC的抗體依賴性細胞介導之細胞毒性係指一種形式之細胞毒性，其中所分泌Ig結合於存在於某些細胞毒性細胞(例如，天然殺手(NK)細胞及嗜中性白血球)上之Fc受體(FcR)，從而使得此等細胞毒性效應細胞能夠特異性地結合於攜帶抗原之目標細胞且隨後殺死目標細胞。在本文中亦稱作ADCP的抗體依賴性細胞介導之吞噬作用係指一種形式之細胞毒性，其中所分泌Ig結合於存在於某些吞噬細胞(例如，巨噬細胞)上之Fc受體(FcR)，從而使得此等吞噬效應細胞能夠特異性地結合於攜帶抗原之目標細胞且隨後吞噬並消化目標細胞。針對目標細胞之表面的配位體特異性高親和力IgG抗體可刺激細胞毒性細胞或吞噬細胞且可用於此類殺死。在一些實施例中，與包含野生型Fc區之多肽構築體相比，包含如本文所描述之Fc變體的多肽構築體展現降低的ADCC或ADCP。在一些實施例中，與包含野生型Fc區之多肽構築體相比，包含如本文所描述之Fc變體的多肽構築體展現至少5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更高的ADCC或ADCP降低。在一些實施例中，與包含野生型Fc區之多肽構築體相比，包含如本文所描述之Fc變體的抗體展現消除的ADCC或ADCP。
在一些實施例中，與野生型人類IgG Fc區相比，Fc變體展現降低的與個體之Fc受體之結合。在一些實施例中，與野生型人類IgG Fc區相比，Fc變體展現消除的與個體之Fc受體之結合。在一些實施例中，與野生型人類IgG Fc區相比，Fc變體展現吞噬作用之降低。在一些實施例中，與野生型人類IgG Fc區相比，Fc變體展現消除的吞噬作用。
在本文中亦稱為ADCC的抗體依賴性細胞介導之細胞毒性係指一種形式之細胞毒性，其中所分泌Ig結合於存在於某些細胞毒性細胞(例如，天然殺手(NK)細胞及嗜中性白血球)上之Fc受體(FcR)，從而使得此等細胞毒性效應細胞能夠特異性地結合於攜帶抗原之目標細胞且隨後殺死目標細胞。在本文中亦稱為ADCP的抗體依賴性細胞介導之吞噬作用係指一種形式之細胞毒性，其中所分泌Ig結合於存在於某些吞噬細胞(例如，巨噬細胞)上之Fc受體(FcR，例如FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa及/或FcγRIIIb)上，從而使得此等吞噬效應細胞能夠特異性地結合於攜帶抗原之目標細胞且隨後吞噬並消化目標細胞。針對目標細胞之表面的配位體特異性高親和力IgG抗體可刺激細胞毒性細胞或吞噬細胞且可用於此類殺死。在一些實施例中，與包含野生型Fc區之多肽構築體相比，包含如本文所描述之Fc變體的多肽構築體展現降低的ADCC或ADCP。在一些實施例中，與包含野生型Fc區之多肽構築體相比，包含如本文所描述之Fc變體的多肽構築體展現至少5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更高的ADCC或ADCP降低。在一些實施例中，與包含野生型Fc區之多肽構築體相比，包含如本文所描述之Fc變體的抗體展現消除的ADCC或ADCP。
包含Fc變體之例示性單特異性位點II (SEQ ID NO: 3)結合抗體在本發明中亦稱為c2139-F cmod。包含Fc變體之例示性雙互補位抗體在本發明中亦稱為c2137-e1711-Fcmod。包含Fc變體之單特異性及雙互補位抗體之序列闡述於 表 6中。 表 6- Fc修飾之例示性單特異性抗體及雙互補位抗體之序列
重鏈： 輕鏈：
c2139-F cmod  
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWVRQAPGQGLEWMGYLNPSSGYTKYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTRSGGDNYGNPYYFDRWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEVEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVGVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK ( SEQ ID NO: 69) DVQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIVHSNGNTYLHWYQQKPGKAPKFLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQYTLVPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC ( SEQ ID NO: 70)
c2137-F cmod  
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWVRQAPGQGLEWMGYLNPSSGYTKYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTRSGGDNYGNPYYFDRWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEVEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVGVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK ( SEQ ID NO: 69) DVQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIVHSNGNTYLHWYQQKPGKAPKFLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQSTLVPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC ( SEQ ID NO: 79)
e1711-F cmod  
EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFNAYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISTGGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRGYQRFSGFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEVEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVGVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK ( SEQ ID NO: 80) EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRSSQSLVHSNGNTYLNWYQQKPGQAPRLLIYKVSNRLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCSQSTHVPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC ( SEQ ID NO: 81)
c2137-e1711-Fcmod  
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWVRQAPGQGLEWMGYLNPSSGYTKYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTRSGGDNYGNPYYFDRWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEVEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVGVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRSSQSLVHSNGNTYLNWYQQKPGQAPRLLIYKVSNRLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCSQSTHVPYTFGCGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFNAYAMSWVRQAPGKCLEWVSSISTGGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRGYQRFSGFAYWGQGTLVTVSS ( SEQ ID NO: 71) DVQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIVHSNGNTYLHWYQQKPGKAPKFLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQSTLVPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC ( SEQ ID NO: 72)
c2139-e1711-F cmod  
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWVRQAPGQGLEWMGYLNPSSGYTKYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTRSGGDNYGNPYYFDRWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEVEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVGVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRSSQSLVHSNGNTYLNWYQQKPGQAPRLLIYKVSNRLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCSQSTHVPYTFGCGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFNAYAMSWVRQAPGKCLEWVSSISTGGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRGYQRFSGFAYWGQGTLVTVSS ( SEQ ID NO: 71) DVQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIVHSNGNTYLHWYQQKPGKAPKFLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQYTLVPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC ( SEQ ID NO: 82)
可變區  
c2139-F cmod 之 VL c2139-F cmod 之 VH
DVQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIVHSNGNTYLHWYQQKPGKAPKFLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQYTLVPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 73) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWVRQAPGQGLEWMGYLNPSSGYTKYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTRSGGDNYGNPYYFDRWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 74)
在一些實施例中，單特異性抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 69具有至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之重鏈胺基酸序列。
在一些實施例中，單特異性抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 70具有至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施例中，雙互補位抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 71具有至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之重鏈胺基酸序列。
在一些實施例中，雙互補位抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 72具有至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之重鏈胺基酸序列。
在一些實施例中，單特異性抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 79具有至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施例中，單特異性抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 81具有至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施例中，單特異性抗C5aR1抗體包含與SEQ ID NO: 82具有至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之輕鏈胺基酸序列。 使用單特異性及雙互補位 C5aR1 拮抗劑治療疾病
本文描述治療與C5a/C5aR1軸功能障礙相關之疾病的方法。因此，在一些實施例中，本文所描述之抗C5aR1之單特異性及/或雙互補位抗體適用於治療患有與C5a/C5aR1軸相關之功能障礙，諸如ANCA相關血管炎的個體。
可藉由本文所描述之抗體分子治療或預防的例示性病症或病狀包括但不限於C5aR1相關病症或C5相關病症。在一實施例中，病症與嗜中性白血球募集、活化及/或NETosis相關。在一實施例中，病症與補體系統活化及/或凝血系統活化相關。在一實施例中，病症與C5aR介導之發炎反應相關。在一實施例中，病症與單核球趨化因子蛋白-1 (MCP-1)及/或腎臟炎症相關。在一實施例中，病症與趨化性( 例如，趨化性預致敏(chemotaxis priming))相關。在一實施例中，病症與內皮損傷相關。
治療方法包括向有需要之個體投與本文所描述之抗體。在一實施例中，例示性病症(例如，C5aR1相關病症)可使用能夠在位點II (SEQ ID NO: 3)處結合C5aR1之一或多個胺基酸殘基的抗體進行治療。
在一實施例中，例示性病症(例如，C5aR1相關病症)可使用能夠與在位點I (SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2)處或在位點II (SEQ ID NO: 3)處結合於C5aR1之抗體競爭的抗體進行治療。
在一實施例中，例示性病症(例如，C5aR1相關病症)可使用能夠與在位點I (SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2)處且在位點II (SEQ ID NO: 3)處結合於C5aR1之抗體競爭的抗體進行治療。
本文所描述之單特異性及/或雙互補位抗體可用於治療與C5a/C5aR1軸相關之功能障礙相關的任何疾病。
在一些實施例中，例示性病症(例如，C5aR1相關病症)可使用能夠結合於C5aR1之單特異性或雙互補位抗體進行治療，其中該抗體以10 pM至50 nM之親和力結合C5aR1。
在一些實施例中，抗體可經靜脈內、皮下、皮內或肌肉內投與至有需要之個體。
在一些實施例中，可使用適當的遞送方法向有需要之個體投與編碼本文所描述之單特異性或雙互補位抗體的核酸。文獻中已知用於遞送核酸之若干方法。舉例而言，可藉由靜脈內、腹膜內、皮下或真皮內投與向所投與之個體投與編碼本文所描述之單特異性或雙互補位抗體的rAAV載體。在一些實施例中，編碼抗體之核酸之遞送可使用「基因槍(gene gun)」(基因槍粒子遞送系統或非病毒脂質奈米粒子)來實現。
在一些實施例中，可向有需要之個體投與本文所描述之單特異性或雙互補位抗體以及額外治療劑。在一些實施例中，額外治療劑為小分子，諸如阿伐可泮、皮質類固醇或免疫抑制藥物。例示性皮質類固醇包括但不限於普賴蘇穠(prednisolone)、氫化可的松(hydrocortisone)、普賴松(prednisone)、地塞米松(dexamethasone)或可體松(cortisone)。例示性免疫抑制藥物包括但不限於甲胺喋呤(methotrexate)、硫唑嘌呤(Azathioprine)、黴酚酸酯(Mycophenolate mofetil)或環磷醯胺(cyclophosphamide)。
在一些實施例中，本文所描述之單特異性或雙互補位抗體在 活體內減輕嗜中性白血球減少症方面比阿伐可泮單藥療法更佳。
在一些實施例中，本文所描述之單特異性或雙互補位抗體在100 nM或更大濃度之C5a的存在下在拮抗C5aR1方面比阿伐可泮更佳。
在一些實施例中，本文所描述之單特異性或雙互補位抗體在 活體外抑制Gα傳訊方面比阿伐可泮更佳。
在一些實施例中，本文所描述之單特異性或雙互補位抗體在 活體外及 活體內抑制鈣傳訊方面比阿伐可泮更佳。
在一些實施例中，本文所描述之單特異性或雙互補位抗體在 活體外及 活體內抑制嗜中性白血球趨化性方面比阿伐可泮更佳。
在一些實施例中，在注射之後，本文所描述之單特異性或雙互補位抗體在血清中穩定持續至多500個小時。
在一些實施例中，本文所描述之單特異性或雙互補位抗體在 活體外及 活體內抑制CD11b表現方面比阿伐可泮更佳。 核酸、載體及製造方法
本發明之特徵亦在於核酸，其包含編碼如本文所描述之抗體分子(例如，抗體分子之重鏈及輕鏈可變區以及CDR)的核苷酸序列。
舉例而言，本發明之特徵在於第一及第二核酸，其分別編碼選自本文所揭示之抗體分子中之一或多者(例如，表1C之抗體分子)之抗體分子或抗體分子之一部分的重鏈及輕鏈可變區，例如本文所揭示之抗體中之任一者之可變區。核酸可包含編碼本文中之表中之胺基酸序列中之任一者的核苷酸序列，或與其大體上一致之序列(例如，與其至少約85%、90%、95%、99%或更多一致或與本文中之表中所展示之序列相差不超過3、6、15、30或45個核苷酸的序列)。
在某些實施例中，核酸包含編碼來自重鏈可變區之至少一個、兩個或三個CDR的核苷酸序列，該重鏈可變區具有如本文中之表中所闡述之胺基酸序列，或與其大體上同源的序列(例如，與其至少約85%、90%、95%、99%或更多一致及/或具有一或多個取代(例如保守取代)的序列)。在一實施例中，核酸包含編碼來自輕鏈可變區之至少一個、兩個或三個CDR的核苷酸序列，該輕鏈可變區具有如本文中之表中所闡述之胺基酸序列，或與其大體上同源的序列(例如，與其至少約85%、90%、95%、99%或更多一致及/或具有一或多個取代(例如保守取代)的序列)。在一實施例中，核酸包含編碼來自重鏈及輕鏈可變區之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個CDR的核苷酸序列，該等重鏈及輕鏈可變區具有如本文中之表中所闡述之胺基酸序列，或與其大體上同源的序列(例如，與其至少約85%、90%、95%、99%或更多一致及/或具有一或多個取代(例如保守取代)的序列)。
本文中揭示之核酸包括去氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，或其類似物。聚核苷酸可為單股或雙股的，且若為單股，則可為編碼股或非編碼(反義)股。聚核苷酸可包含經修飾之核苷酸，諸如甲基化核苷酸及核苷酸類似物。核苷酸之序列可間雜有非核苷酸組分。聚核苷酸可在聚合之後，諸如藉由與標記組分結合而經進一步修飾。核酸可為重組聚核苷酸，或為基因體、cDNA、半合成或合成來源之聚核苷酸，其不存在於自然界中或以非天然排列形式連接至另一聚核苷酸。
在一些態樣中，本申請案之特徵在於宿主細胞及載體，其含有本文所描述之核酸。核酸可存在於單個載體或存在於同一宿主細胞或單獨宿主細胞之單獨載體中，如下文中更詳細描述。 載體
本文進一步提供載體，其包含編碼如本文所描述之抗體分子(例如，抗體分子之重鏈及輕鏈可變區及CDR)的核苷酸序列。
在一實施例中，載體包含本文所描述之核酸。舉例而言，載體可包含第一及第二核酸，其分別編碼選自本文中所揭示之抗體分子中之一或多者(例如，本文所描述之抗體分子)之抗體分子或抗體分子之一部分的重鏈及輕鏈可變區，例如表1至4中之任一者之可變區。
在某些實施例中，載體包含編碼來自重鏈可變區之至少一個、兩個或三個CDR的核苷酸序列，該重鏈可變區具有如本文中之表中所闡述之胺基酸序列，或與其大體上同源的序列(例如，與其至少約85%、90%、95%、99%或更多一致及/或具有一或多個取代(例如保守取代)的序列)。在一實施例中，載體包含編碼來自輕鏈可變區之至少一個、兩個或三個CDR的核苷酸序列，該輕鏈可變區具有如本文中之表中所闡述之胺基酸序列，或與其大體上同源的序列(例如，與其至少約85%、90%、95%、99%或更多一致及/或具有一或多個取代(例如保守取代)的序列)。在一實施例中，載體包含編碼來自重鏈及輕鏈可變區之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個CDR的核苷酸序列，該等重鏈及輕鏈可變區具有如本文中之表中所闡述之胺基酸序列，或與其大體上同源的序列(例如，與其至少約85%、90%、95%、99%或更多一致及/或具有一或多個取代(例如保守取代)的序列)。
載體包括但不限於病毒、質體、黏質體、λ噬菌體或酵母人工染色體(YAC)。可採用多種載體系統。舉例而言，一類載體利用來源於動物病毒，諸如牛乳頭狀瘤病毒(bovine papilloma virus)、多瘤病毒(polyoma virus)、腺病毒、牛痘病毒、桿狀病毒(aculovirus)、反轉錄病毒(勞斯肉瘤病毒(Rous Sarcoma Virus)、MMTV或MOMLV)或SV40病毒之DNA元件。另一類載體利用來源於RNA病毒，諸如勝利基森林病毒(Semliki Forest virus)、東部馬腦炎病毒(Eastern Equine Encephalitis virus)及黃病毒(Flaviviruses)之RNA元件。
另外，可藉由引入一或多種允許選擇轉染宿主細胞之標記物來選擇將DNA穩定整合至其染色體中的細胞。標記物可以提供例如營養缺陷型宿主之原始營養型、殺生物劑抗性(例如，抗生素)或對重金屬(諸如銅)之抗性等。可選標記物基因可直接連接至待表現之DNA序列或藉由共轉化引入相同細胞中。mRNA之最佳合成亦可能需要其他元件。此等元件可包括剪接訊號以及轉錄啟動子、強化子及終止訊號。
一旦製備用於表現的含有構築體之表現載體或DNA序列，可將表現載體轉染或引入適當宿主細胞中。可採用多種技術來實現此，諸如原生質體融合、磷酸鈣沈澱、電致孔、反轉錄病毒轉導、病毒轉染、基因槍、基於脂質之轉染或其他習知技術。在原生質體融合之情況下，使細胞在培養基中生長且針對適當活性進行篩選。
培養所得轉染細胞且回收所產生抗體分子之方法及條件為熟習此項技術者已知的，且可基於本發明描述，視所採用之特定表現載體及哺乳動物宿主細胞而定進行改變或最佳化。 細胞
本發明亦提供細胞(例如，宿主細胞)，其包含編碼如本文所描述之抗體分子的核酸。舉例而言，宿主細胞可包含核酸分子，其具有編碼表1至5中之任一者中所描述之胺基酸序列之核苷酸序列、與其大體上同源之序列(例如，與其至少約85%、90%、95%、99%或更多一致及/或能夠在本文中所描述之嚴格條件下雜交的序列)或該等核酸中之一者之一部分。
在一實施例中，宿主細胞經基因工程改造以包含編碼本文所描述之抗體分子的核酸。
在某些實施例中，宿主細胞係藉由使用表現卡匣進行基因工程改造。片語「表現卡匣」係指核苷酸序列，其能夠影響與此類序列相容之宿主中的基因之表現。此類卡匣可包括啟動子、具有或不具有內含子之開讀框及終止訊號。亦可使用對實現表現所需或有幫助的額外因子，諸如誘導性啟動子。
本發明亦提供包含本文中所描述之載體的宿主細胞。
細胞可為但不限於真核細胞、細菌細胞、昆蟲細胞或人類細胞。適合的真核細胞包括但不限於Vero細胞、HeLa細胞、COS細胞、CHO細胞、HEK293細胞、BHK細胞及MDCKII細胞。適合的昆蟲細胞包括但不限於 Sf9細胞。在一實施例中，細胞(例如，宿主細胞)為經分離之細胞。 投與方法
本發明之組合物可經調配呈任何適合形式，諸如液體、半固體及固體劑型，諸如液體溶液(例如，可注射及可輸注溶液)、分散液或懸浮液及其類似物。任何組合物之最佳形式視既定投與模式、組合物或組合之性質及治療應用或其他預期用途而定。本發明之組合物的典型遞送模式係藉由非經腸投與(例如，靜脈內投與)。在一個態樣中，藉由靜脈內輸注或注射向人類患者投與本發明之組合物。
在一些態樣中，本發明提供組合物，例如醫藥學上可接受之組合物，其包括與醫藥學上可接受之載劑一起調配的本文所描述之抗體分子。如本文中所使用，「醫藥學上可接受之載劑」包括生理學上相容的任何及所有溶劑、分散介質、等張劑及吸收延遲劑及其類似物。載劑可適合於靜脈內、肌肉內、皮下、非經腸、經直腸、經脊椎或表皮投與(例如，藉由注射或輸注)。
如本文中所使用之片語「非經腸投與(parenteral administration)」及「非經腸投與(administered parenterally)」意謂通常藉由注射進行之除經腸及局部投與以外的投與模式，且包括但不限於靜脈內、肌肉內、動脈內、鞘內、囊內、眶內、心內、真皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛膜下、脊柱內、硬膜外及胸骨內注射及輸注。治療組合物通常應在製造及儲存條件下為無菌及穩定的。可將組合物調配為溶液、微乳液、分散液、脂質體或適合於高抗體濃度之其他有序結構。可藉由將所需量之活性化合物(亦即抗體或抗體部分)併入視需要具有以上所列舉之成分中之一者或組合的適當溶劑中，隨後過濾滅菌來製備無菌可注射溶液。一般而言，藉由將活性化合物併入含有鹼性分散介質及來自上述列舉之彼等的所需其他成分的無菌媒劑中來製備分散液。在用於製備無菌可注射溶液之無菌粉末的情況下，較佳的製備方法為真空乾燥及冷凍乾燥，其自其先前無菌過濾之溶液中產生活性成分加任何額外所需成分之粉末。可例如藉由使用諸如卵磷脂之包衣，藉由在分散液之情況下維持所需粒度且藉由使用界面活性劑來維持溶液之適當流動性。可藉由在組合物中包括延遲吸收的試劑，例如單硬脂酸鹽及明膠來達成可注射組合物之延長吸收。可藉由多種方法投與本文所描述之抗體分子。若干種方法此項技術中為已知的，且在許多治療性、防治性或診斷性應用中，適當投與途徑/模式為靜脈內注射或輸注。如熟習此項技術者所瞭解，投與途徑及/或模式將視所需結果而變化。 實例
本發明之其他特徵、目標及優點在以下實例中顯而易見。然而，應理解，實例雖然指示本發明之實施例，但僅以說明而非限制之方式給出。本發明之範疇內的各種改變及修改對於熟習此項技術者而言將自實例變得顯而易見。 實例 1. C5aR1 拮抗性人源化抗體之動力學分析
此實例描述本文所描述之位點II單特異性抗體及雙互補位抗體對C5aR1及C5aR2之結合親和力及特異性。 (a) 結合親和力
使用ELISA分析測定抗體對目標受體C5aR1之結合親和力。將C5aR1 VLP以30 µg/mL之濃度固定至MaxiSorp ELISA盤且在4℃下培育隔夜。次日早晨，將盤用1× PBS洗滌3次且藉由100 µL PBSA (1× PBS與3% BSA)將盤阻斷30分鐘。在PBSA之存在下進行抗C5aR1抗體之連續滴定且在室溫下培育1小時。將盤用PBSA洗滌6次。將抗人類HRP稀釋於PBSA中，添加至所有孔且在室溫下培育45分鐘。將盤用PBS洗滌6次。將TMB受質添加至所有孔且培育10分鐘，隨後添加停止溶液(0.1 M硫酸)。在標準盤讀取器上量測450 nm處之吸光度。使用四參數曲線擬合產生抗體滴定之EC50值(以nM為單位)。單特異性c2139抗體及雙互補位c2137-e1711抗體之親和力曲線示於 圖 4A中。
觀測到，在上文所描述之條件下，單特異性C5aR1抗體以約0.16 nM之親和力結合C5aR1且雙互補位抗體以約0.22 nM之親和力結合C5aR1。
在另一情況下，分析來自兩個不同抗體批次之位點II抗體c2139及雙互補位抗體c2137-e1711之結合以供結合於U937-C5aR1細胞( 圖 4B)及人類嗜中性白血球( 圖 4C)。結合於抗C5aR1抗體之不同蛋白質批次(c2139及c2137-e1711)的U937-C5aR1之EC50不同，展示於 表 6中。 表 6.結合於例示性C5aR1抗體的U937-C5aR1之EC50
抗體 EC50 (nM) R 平方
c2139製備1 3.64 0.99
c2139製備2 3.60 0.99
c2137-e1711製備1 2.47 0.98
c2137-e1711製備2 2.25 0.98
莫維珠單抗 未結合  不適用
結合於抗C5aR1抗體的不同蛋白批次(c2139及c2137-e1711)之人類嗜中性白血球之EC50不同，展示於 表 7中。 表 7.結合於例示性C5aR1抗體的人類嗜中性白血球之EC50
抗體 EC50 (nM) R 平方
c2139製備1 1.64 0.99
C2139製備2 1.66 0.99
c2137-e1711製備1 1.07 0.99
c2137-e1711製備2 1.05 0.99
莫維珠單抗 未結合  不適用
使用非C5aR1抗體莫維珠單抗作為對照。在多個抗體製備批次觀測到，位點II抗體c2139及雙互補位抗體c2137-e1711兩者結合U937及人類嗜中性白血球。 (b) 結合特異性
藉由量測抗C5aR1抗體對C5aR2之親和力來測定C5aR1拮抗性抗體之特異性。將C5aR2 VLP以30 µg/mL之濃度固定至MaxiSorp ELISA盤且在4℃下培育隔夜。次日早晨，將盤用1× PBS洗滌3次且藉由100 µL PBSA (1× PBS與3% BSA)將盤阻斷30分鐘。在PBSA之存在下進行抗C5aR1抗體之連續滴定且在室溫下培育1小時。將盤用PBSA洗滌6次。將抗人類HRP稀釋於PBSA中，添加至所有孔且在室溫下培育45分鐘。將盤用PBS洗滌6次。將TMB受質添加至所有孔且培育10分鐘，隨後添加停止溶液(0.1 M硫酸)。在標準盤讀取器上量測450 nm處之吸光度。使用四參數曲線擬合產生抗體滴定之EC50值(以nM為單位)。
單特異性抗體及雙互補位抗體之結合資料示於 圖 5中。觀測到，在上文所描述之條件下，例示性C5aR1拮抗性抗體不結合C5aR2。總體而言，此實例中之資料展示，本發明之抗C5aR1抗體以高親和力結合C5aR1，且以不可量測之親和力結合C5aR2，從而說明C5aR1抗體實際上對C5aR1具有特異性。 實例 2. Gα 傳訊之抑制
此實例描述使用GeneBLazer分析的本文所描述之C5aR1單特異性抗體及雙互補位抗體用於抑制Gα傳訊的功能態樣。
GeneBLAzer分析套組及C5aR1細胞株可購自Thermo Fisher (目錄號K1544)。如製造商所推薦進行分析。簡言之，將抗體或拮抗劑以增加的濃度在37℃下培育30分鐘。接著將C5a添加至細胞且在37℃下培育額外4至5小時。接著添加β-內醯胺酶受質且在室溫下培育2小時。量測具有409/460 (藍色)及409/530 (綠色)之激發/發射的各孔之螢光量測值。藍色與綠色比率之增加與C5aR1活化成比例且用於計算各孔中細胞之活化百分比。在增加的拮抗劑濃度下監測C5aR1活化概況。藉由將信號百分比與拮抗劑濃度作圖來測定IC50。
圖 6A中說明在10 nM C5a之情況下隨抗體濃度而變化的單特異性抗體及雙互補位抗體之Gα傳訊分析。在另一情況下，使用已知C5aR抗體(抗C5aR1對照Ab)作為用於抑制Gα傳訊之陽性對照( 圖 6C)。
圖 6B中說明在100 nM C5a之情況下隨抗體濃度而變化的單特異性抗體及雙互補位抗體之Gα傳訊分析。在另一情況下，使用已知C5aR抗體(抗C5aR1對照Ab)作為用於抑制Gα傳訊之陽性對照( 圖 6D)。觀測到，單特異性C5aR1拮抗劑之IC50在10 nM C5a之情況下為0.14 nM且在100 nM C5a之情況下為0.19 nM。雙特異性C5aR1拮抗劑之IC50在10 nM C5a之情況下為0.27 nM且在100 nM C5a之情況下為0.28 nM。觀測到，在所測試的C5a之所有濃度下，與阿伐可泮及抗C5aR1對照Ab相比，例示性抗體保持優良的抑制。 實例 3. 鈣傳訊之抑制
此實例描述使用鈣通量分析的本文所描述之C5aR1單特異性抗體及雙互補位抗體用於抑制C5a介導之鈣傳訊的功能態樣。
評定抗體在C5a之存在下抑制表現C5aR1之穩定C5aR1-U937細胞或自全血分離之嗜中性白血球中之細胞內鈣釋放之能力的效能。使用鈣敏感性染料之鈣通量分析用於偵測鈣濃度之胞溶質變化。將細胞與酯化(非活性)鈣染料一起培育。染料穿透細胞膜且一旦處於細胞內部即變得具有活性。染料之活性形式在結合於細胞內鈣之後變成螢光，且螢光用於測定回應於C5a添加之C5aR1傳訊。具體言之，在37℃下，將穩定的C5aR1-U937或自全血分離之嗜中性白血球用來自Thermo Fisher之Fluo-4直接鈣分析套組染色1小時。接著，將抗體或拮抗劑與細胞一起培育30分鐘。量測在494 nm處激發且在516 nm處發射之基礎螢光持續15秒。將C5a添加至細胞中且在四分鐘跨度內量測螢光。使用來自C5a刺激之前的基礎讀數及C5a刺激之後的最大訊號來計算反應比。使用穩定表現C5aR1之工程改造細胞以及使用人類嗜中性白血球進行鈣通量分析。
單特異性抗體( 圖 7A)及雙互補位拮抗性抗體( 圖 7B)的C5a介導之鈣傳訊分析之抑制顯示為鈣通量隨C5a濃度及抗體濃度增加的函數作圖。此外， 圖 7C中使用如上文所描述方案說明用已知C5aR1拮抗劑阿伐可泮抑制C5a介導之鈣傳訊。觀測到，測試抗體在抑制鈣傳訊方面比阿伐可泮更佳。 實例 4. 嗜中性白血球趨化性之抑制
此實例描述使用Boyden Chamber的本文所描述之C5aR1單特異性抗體及雙互補位抗體用於抑制已知由C5aR1活性誘導之嗜中性白血球趨化性的功能態樣。
首先，在無抗體(拮抗劑)或1、10或100 nM各抗體(拮抗劑)存在下將C5aR1-U937穩定細胞接種於96跨孔盤之頂部腔室中。底部腔室含有範圍介於10 -6至10 -9.5M的半對數滴定之C5a (趨化因子)。藉由膜隔開頂部腔室與底部腔室。預期C5a誘導U937細胞之遷移。然而，預期使用C5aR1拮抗劑來抑制此遷移。使用增加濃度之例示性抗體來測定趨化性之劑量依賴性抑制。此外，使用增加濃度之趨化因子(C5a)來測定趨化性之抑制是否可藉由使用高濃度之C5a來克服。在並行情況下，亦可使用已知C5aR1抑制劑阿伐可泮來評估嗜中性白血球之趨化性抑制及在過量C5a之存在下趨化性之可克服性。
其次，在無抗體(拮抗劑)或1、10或100 nM各抗體(拮抗劑)存在下將人類嗜中性白血球接種於96跨孔盤之頂部腔室中。底部腔室含有範圍介於10 -6至10 -9.5M的半對數滴定之C5a (趨化因子)。藉由膜隔開頂部腔室與底部腔室。預期C5a誘導U937細胞之遷移。然而，預期使用C5aR1拮抗劑來抑制此遷移。使用增加濃度之抗體來測定趨化性之劑量依賴性抑制。此外，使用增加濃度之趨化因子(C5a)來測定趨化性之抑制是否可藉由使用高濃度之C5a來克服。在並行情況下，亦可使用已知C5aR1抑制劑阿伐可泮來評估嗜中性白血球之趨化性抑制及在過量C5a之存在下趨化性之可克服性。
圖 8A 至圖 8C展示在不同濃度之抗C5aR1抗體存在下的螢光強度量與C5a濃度，此指示抗C5aR1抗體對趨化性之抑制。觀測到，抗C5aR1抗體一般以劑量依賴性方式抑制細胞趨化性。此外，觀測到，與阿伐可泮不同，在過量C5a之存在下，抗C5aR1抗體對嗜中性白血球趨化性之抑制係不可克服的。 實例 5. CD11b 表現之抑制
此實例描述本文所描述之C5aR1單特異性抗體及雙互補位抗體用於抑制CD11b表現的功能態樣。
CD11b (整合素受體)回應於C5a活化而移動至嗜中性白血球之表面且在嗜中性白血球移位之前介導血管內蠕動。CD11參與細胞(諸如單核球、巨噬細胞、自然殺手(NK)細胞及粒細胞)之間的大量黏附相關締合。
圖 9A 至圖 9B展示在100 nM C5a存在下的CD11b表現百分比與抗體(C5aR1拮抗劑)濃度。觀測到，抗體在預期的C5a生理濃度之整個範圍內有效抑制CD11b。 表 8展示在100 nM C5a存在下c2139及c2137-e1711之IC50。 表 8.使用例示性C5aR1抗體的CD11b表現抑制之IC50
拮抗劑 IC50 (nM)
100 nM C5a
C2139 1.85
C2137-e1711 1.47
在另一情況下，使用10 nM及100 nM抗C5aR1對照Ab作為對照以比較在人類嗜中性白血球中對本文所揭示之抗C5aR1抗體之抑制( 圖 9C)。觀測到，進一步觀測到阿伐可泮在抑制CD11b方面僅部分地有效。進一步觀測到，本發明之抗體為比抗C5aR1對照Ab更佳的抑制劑。 實例 6. β- 抑制蛋白募集之抑制
此實例描述本文所描述之C5aR1單特異性抗體及雙互補位抗體用於抑制β-抑制蛋白募集的功能態樣。
為了將前導mAb表徵為C5aR1之完整拮抗劑，吾等旨在評估前導mAb抑制β-抑制蛋白2募集之潛能。β-抑制蛋白分析利用專用雙次單元螢光素酶報導子系統：一個次單元與C5aR1融合且一個次單元與β-抑制蛋白2融合。當緊密鄰近時，兩個次單元形成產生螢光訊號之酶，其用作C5aR1介導之β-抑制蛋白2之募集的代理。在兩種不同C5a濃度(1 nM及10 nM)下，例示性抗體顯著減少C5aR1介導之β-抑制蛋白2之募集。 圖 10A 至圖 10C為展示在添加1 nM ( 圖 10A)、10 nM ( 圖 10B)及100 nM ( 圖 10C) C5a之後對螢光訊號之抑制的圖式。 表 9展示c2139、c2137-e1711及阿伐可泮介導之β-抑制蛋白之抑制之IC50。 表 9. 用於β-抑制蛋白傳訊的單特異性或雙互補位抗體之IC50
Figure 02_image003
當與小分子C5aR1抑制劑阿伐可泮相比時，例示性抗體c2139及c2137-e1711展示優良的訊號抑制，即使在阿伐可泮以比抗體高10倍的濃度使用時。值得注意地，阿伐可泮隨著C5a濃度增加至10 nM而失去效能，而c2139及c2137-e1711維持＞75%的對β-抑制蛋白2募集之抑制。資料表明，例示性C5aR1抗體(c2139及c2137-e1711)以比阿伐可泮低10倍的濃度抑制β-抑制蛋白。 實例 7. 藉由人源化抗 C5aR1 抗體抑制 ROS 產生
此實例展示例示性人源化單特異性抗體(c2139)及例示性雙互補位抗體(c2137-e1711)減少了反應性氧物種(ROS)。
藉由細胞ROS偵測分析套組(Abcam)遵循製造商的手冊偵測藉由嗜中性白血球進行之ROS產生。將RBC裂解之WB細胞在100 mL緩衝液中稀釋至3×10 5個細胞之濃度。在37℃，5% CO2下針對陰性對照組進行用ROS抑制劑(N-乙醯基-L-半胱胺酸)預處理，持續30分鐘。接著將ROS偵測抗體添加至抗體混合液中以用於基於流式細胞量測術的嗜中性白血球ROS產生之偵測。將ROS誘導劑(綠膿素(pyocyanin))添加至所有組且培育30分鐘，隨後在細胞計數器上獲取。 圖 11展示回應於用抗C5aR1抗體進行之處理，ANCA-及ANCA+組中作為回應的嗜中性白血球中之ROS產生。
觀測到，c2139及c2137-e1711抑制ANCA誘導之ROS產生。 實例 8. 人源化抗 C5aR1 抗體在 U937 細胞中之內化
此實例展示人源化單特異性抗體及雙互補位C5aR1抗體在hC5ar1-U937細胞中之內化。 人源化單特異性抗C5aR1抗體e1711及雙互補位抗體c2139-e1711與pH敏感性染料結合，該染料在低pH下發出明亮的螢光但在中性pH下無螢光。將結合的抗體與U937細胞及hC5aR1基因敲入U937細胞一起培育。 圖 12A 至圖 12D展示與各結合抗體一起培育24小時之後的螢光強度。 圖 12A 至圖 12B展示在10 nM抗體之情況下U037細胞或U937-C5aR1細胞之螢光強度；且 圖 12C 至圖 12D展示在100 nM抗體之情況下U037細胞或U937-C5aR1細胞之螢光強度。 實例 9. 人源化抗 C5aR1 抗體之交叉反應性
此實例展示人源化抗C5aR1抗體、e1711及雙互補位抗體c2139-e1711與松鼠猴及狗中之C5aR1的結合。
對範圍介於10 -7.5至10 -12M的半對數滴定之抗C5aR1抗體進行細胞表面結合及流式細胞量測術。如 圖 13A 至圖 13B中所展示，抗C5aR1人源化抗體結合松鼠猴及狗C5aR1。 實例 10. 松鼠猴之嗜中性白血球減少症之抑制
此實例展示在松鼠猴中C5aR1抗體對嗜中性白血球減少症之抑制。嗜中性白血球減少症係由細胞表面CD11b之快速表現引起，此致使嗜中性白血球暫時黏附於血管內皮，因此減少周邊嗜中性白血球計數。與小鼠相比，松鼠猴為用於評估嗜中性白血球減少症的生理學上相關模型，此係因為松鼠猴中之嗜中性白血球計數與人類相似(50至70%)，而小鼠僅具有10至20%。此外，松鼠猴允許可能在多個時間點進行血液收集，從而使得延長研究持續時間。進一步觀測到與松鼠猴C5aR1交叉反應，如 圖 13A中所展示。
圖 14A展示在松鼠猴中評估嗜中性白血球減少症之緩解的實驗設計。簡言之，評估三組松鼠猴對嗜中性白血球減少症之抑制。在第一組中，8隻松鼠猴靜脈內注射有PBS (媒劑)。在第二組中，8隻松鼠猴以10 mg/kg之劑量靜脈內注射有例示性抗體。在第三組中，8隻松鼠猴以30 mg/kg之劑量靜脈內注射有阿伐可泮。在注射PBS、例示性抗體或阿伐可泮後一小時，將0.1 mg/kg人類C5a注射至松鼠猴中。在注射人類C5a後1 min、5 min、15 min、2 hr及6 hr收集血液。計算所有三個組中嗜中性白血球之變化百分比及嗜中性白血球之平均變化且以散佈圖形式展示於 圖 14B中。嗜中性白血球之平均變化以長條圖形式展示於 圖 14C中。
觀測到，人類C5a之投與導致快速短暫的嗜中性白血球減少症，其係由嗜中性白血球黏附至內皮細胞引起。媒劑(PBS)組顯示穩固的嗜中性白血球減少症，在C5a注射後1 min，嗜中性白血球計數自基線平均減少89%。用例示性抗C5aR1抗體預處理時觀測到顯著的對嗜中性白血球減少症之抑制(對於媒劑，23%相比於89%)。進一步觀測到，嗜中性白血球計數在2至6小時之間開始消退。針對阿伐可泮，觀測到嗜中性白血球增多症。針對c2139，未觀測到嗜中性白血球增多症。阿伐可泮組亦以嗜中性白血球之59%平均減少作出回應。觀測到，當與阿伐可泮相比時，例示性抗C5aR1抗體具有優良的反應率。 實例 11. 人類 C5aR1 轉殖基因小鼠之嗜中性白血球減少症之抑制
此實例展示在轉殖基因人類C5aR1小鼠中C5aR1抗體對嗜中性白血球減少症之抑制。例示性C5aR1抗體不與小鼠C5aR1交叉反應。在傑克遜試驗室(Jackson Laboratory)，使用CRISPR技術來產生轉殖基因人類C5aR1 (hC5aR1)基因敲入小鼠。
圖 15A展示在小鼠中評估嗜中性白血球減少症之緩解的實驗設計。簡言之，評估五組hC5aR1小鼠對嗜中性白血球減少症之抑制。在第一組中，5隻hC5aR1小鼠靜脈內注射有PBS (媒劑)。在第二組中，5隻hC5aR1小鼠以20 mg/kg之劑量靜脈內注射有例示性單特異性抗C5aR1抗體c2139。在第三組中，5隻hC5aR1小鼠以20 mg/kg之劑量靜脈內注射有例示性雙互補位抗C5aR1抗體c2137-e1711。在第四組中，5隻hC5aR1小鼠以20 mg/kg之劑量靜脈內注射有非C5aR1抗體(莫維珠單抗)。在第五組中，5隻hC5aR1小鼠以30 mg/kg之劑量靜脈內注射有阿伐可泮。在注射PBS、例示性抗體、莫維珠單抗或阿伐可泮後一小時，將0.1 mg/kg人類C5a注射至hC5aR1小鼠中。在注射人類C5a後1 min、5 min及2 hr收集血液。計算所有三個組中嗜中性白血球之變化百分比及嗜中性白血球之平均變化且以散佈圖形式展示於 圖 15B 至圖 15C中。嗜中性白血球之平均變化展示於 圖 15C中。藉由閘控CD45+/CD11b+/Ly6G+細胞來評定嗜中性白血球細胞計數。
觀測到，人類C5a之投與導致快速短暫的嗜中性白血球減少症，其係由嗜中性白血球黏附至內皮細胞引起。媒劑(PBS)組顯示穩固的嗜中性白血球減少症，在C5a注射後1 min，嗜中性白血球計數自基線平均減少89%。用例示性抗C5aR1抗體預處理時觀測到顯著的對嗜中性白血球減少症之抑制(對於媒劑，23%相比於89%)。阿伐可泮組亦以嗜中性白血球之59%平均減少作出回應。
觀測到，當與阿伐可泮相比時，例示性抗C5aR1抗體具有優良的反應率。觀測到，人類C5a之投與導致人類C5aR1小鼠之快速短暫的嗜中性白血球減少症。媒劑(PBS)組顯示穩固的嗜中性白血球減少症，在C5a注射後1 min，嗜中性白血球計數自基線平均減少76%。用例示性單特異性C5aR1抗體預處理時觀測到顯著的對嗜中性白血球減少症之抑制(對於媒劑，11%相比於之89%)。針對例示性雙互補位C5aR1抗體，可見完全抑制。阿伐可泮組亦以嗜中性白血球之10%平均減少作出回應。 實例 12. hC5aR1 小鼠中例示性 C5aR1 抗體之藥物動力學研究
此實例展示小鼠中例示性C5aR1抗體之藥物動力學(PK)研究。
將5 mg/kg例示性單特異性抗體及雙互補位抗體靜脈內注射至Tg32小鼠中。在500小時之時段內，評估血清中抗體之量。 圖 16A展示例示性抗體之藥物動力學特性。 圖 16B 至圖 16D展示抗C5aR1抗體在5隻不同小鼠之血清中持續500小時的穩定性。觀測到，單特異性(c2139 - 圖 16C)抗體及雙互補位(c2137-e1711 - 圖 16D)抗體在血清中為穩定的且在Tg32小鼠中同等持久。在hC5aR1轉殖基因小鼠中，用c2139及c2137-e1711兩者觀測到TMDD。與單特異性抗體相比，四價抗體在血清中具有略微降低的持久性。使用莫維珠單抗作為對照。 實例 13. 人類中例示性 C5aR1 抗體之藥物動力學研究之預測
觀測到已知抗C5aR1抗體之非線性PK (Lee等人, 2006, PMID 16980984)。據報導，在10 mg/kg IV劑量下，觀測到＞90%受體佔有率持續4.3週，且在4 mg/kg皮下劑量下，觀測到＞90%受體佔有率持續1.8週。基於本發明之人源化抗C5aR1抗體之親和力資料，模型模擬展示，在IV投與之後，同上預測0.1至10 mg/kg抗體之間的非線性清除率引起＞90%受體佔有率持續24天。
不管生物可用性，預測4 mg/kg皮下劑量經預測具有＞90%受體佔有率持續約7至13天。
觀測到，與單特異性前導相比，四價抗體(雙互補位)在血清中具有略微降低的持久性。 實例 14. 例示性 C5aR1 抗體在 4
Figure 02_image005
下之穩定性
此實例展示例示性C5aR1抗體(單特異性及雙互補位兩者)在4
Figure 02_image007
下之穩定性，其間進行一個解凍循環。
在4
Figure 02_image007
下培育單特異性抗體及雙互補位抗體兩者，持續至多14天。在37
Figure 02_image007
下在一個解凍循環之後，藉由凝膠過濾、天然PAGE及動態光散射(DLS)評估完整抗體之量。 表 10展示與完整抗體百分比相比之抗體聚集體(HMW)百分比。 表 10. 在室溫/37
Figure 02_image009
下在1個解凍循環之後C5aR1雙特異性抗體之穩定性。
樣本資訊 T = 0 週 T = 1 週 T = 2 週 37c T1 天 F/T 1 個循環
格式 純化日期 / 實際時間點 批號 樣本名稱 溫度 HMW% 主要 % HMW% 主要 % HMW% 主要 % HMW% 主要 % HMW% 主要 %
9/29/2020 10077 c2139 2-8C 11.7 88.3 11.2 88.8 10.7 89.4 10.0 90.1 9.7 90.3
(1 、 2 、 3 、 5 週 ) RT     10.6 89.4 10.1 89.9        
四價，scFv格式 8/11/2002 9996 c2137-e1711 2-8C 8.5 91.5 8.4 91.6 8.3 91.7 8.1 91.9 8.1 91.9
(8 、 9 、 10 、 12 週 ) RT     8.4 91.6 8.3 91.7        
觀測到，單特異性抗體及雙互補位抗體兩者在4
Figure 02_image007
及RT下穩定至多2週及一個冷凍/解凍循環。 實例 15 - 具有經修飾之 Fc 域的 C5aR1 拮抗性人源化抗體之動力學分析。
此實例描述本文所描述的位點II單特異性抗體及雙互補位抗體對具有經修飾之Fc域的C5aR1及C5aR2之結合親和力及特異性。引入Fc域修飾以抵消效應功能，諸如ADCC或ADCP。另外，經修飾之Fc域包含突變以防止Fab臂交換。 表 11概述C5aR1抗體中之Fc修飾。 表 11-具有經修飾之Fc域的單特異性及雙互補位抗體C5aR1抗體之概述。
單特異性 雙互補位
名稱 c2139-F cmod c2137-e1711-F cmod
V H 區 V H區c2137 V H區c2137-e1711
Fc 沉默突變 F234V、L235E、D265G F234V、L235E、D265G
Fab 臂交換突變 S228P S228P
如實例1中所描述計算具有經修飾之Fc域的單特異性抗體及雙互補位抗體之結合親和力。具有經修飾之Fc域的單特異性抗體在下文中稱為「c2139-F cmod」；且具有經修飾之Fc域的雙互補位抗體在下文中稱為「c2137-e1711-F cmod」。 (a) 結合親和力
圖 17A中示出單特異性C5aR1抗體(c2139-Fcmod)及C5aR1雙互補位抗體(c2137-e1711-F cmod)之親和力曲線。
觀測到，在上文所描述之條件下，單特異性C5aR1單特異性抗體c2139-Fcmod以約0.31 nM之親和力結合C5aR1且C5aR1雙互補位抗體c2137-e1711-F cmod以約0.34 nM之親和力結合C5aR1。
結合於表現C5aR1之細胞的例示性動力學分析展示於( 圖 17B)中。動力學量測在2至3個劑量締合階段之後進行擬合，隨後解離。觀測到，Fc修飾之抗體之EC50與Fc未修飾抗體之EC50相當。舉例而言，如自 表 12所見，雙互補位抗體c2137-e1711及c2137-e1711-F cmod之EC50在U937-C5aR1細胞中均為約1 nM，且在嗜中性白血球中為約1 nM及2 nM且在巨噬細胞中為0.5 nM及0.6 mM。 表 12- c2137-e1711及c2137-e1711-F cmod之EC50之比較
U937-C5aR1 嗜中性白血球 巨噬細胞
c2137-e1711-F cmod Kon：2.6e4 (1/(M*s)) Koff：3.4e-5 (1/s) KD：約1 nM Kon：2.6e4 (1/(M*s)) Koff：3.4e-5 (1/s) KD：約1 nM Kon：8.8e4 (1/(M*s)) Koff：3.8e-5 (1/s) KD：約0.5 nM
c2137-e1711 Kon：1.5e4 (1/(M*s)) Koff：1.6e-5 (1/s) KD：約1 nM Kon：6.9e3 (1/(M*s)) Koff：2.0e-5 (1/s) KD：約2 nM Kon：9.7e4 (1/(M*s)) Koff：5.8e-5 (1/s) KD：約0.6 nM
(b) 結合特異性
藉由量測抗C5aR1抗體對C5aR2之親和力來測定Fc修飾之C5aR1拮抗性抗體之特異性。此如實例1中所描述進行測定。
圖 17C展示測定c2137-e1711-F cmod及c2139-Fcmod之特異性之親和力曲線。觀測到，Fc修飾之抗體並不對C5aR2顯示親和力。 實例 16 -C5aR1 抗體之內化。
該實例試圖驗證C5aR1抗體之內化具特異性且並非歸因於膜免疫球蛋白之非特異性群集。疊氮化鈉為代謝抑制劑，且抑制內化或胞吞作用，因為此等為能量依賴性過程。在存在或不存在20 mM疊氮化鈉之情況下，使用10 nM C5aR1抗體探測關於例示性C5aR1抗體之內化的任何代謝依賴性。觀測到例示性C5aR1抗體經歷基於代謝之內化。舉例而言，c2139在解離後若干小時經歷內化且c2139-e1711在締合期間經歷內化。單特異性C5aR1抗體c2139之解離常數在20 mM疊氮化鈉存在下為
Figure 02_image011
/秒，而在無疊氮化鈉的情況下之解離常數為
Figure 02_image013
/秒。雙互補位C5aR1 (c2137-e1711)之締合常數在20 mM疊氮化鈉存在下為
Figure 02_image015
/mol/秒，而在無疊氮化鈉的情況下之解離常數為
Figure 02_image017
/mol/秒。 圖 18A 至圖 18B顯示C5aR1抗體之內化增加。 圖 18A為展示在解離單特異性抗體c2139後若干小時之內化的例示性圖式。 圖 18B為展示在締合期間雙互補位抗體c2137-e1711之內化增加的例示性圖式。
觀測到，膜免疫球蛋白之非特異性群集並不僅僅引起例示性c5aR1抗體之內化。 實例 17 - 藉由 Fc 修飾之 C5aR1 抗體抑制 Gα 傳訊
此實例描述使用GeneBLazer分析的本文所描述之Fc修飾之C5aR1單特異性抗體及雙互補位抗體用於抑制Gα傳訊的功能態樣。
此實驗如實例2中所詳述進行。 圖 19A 至圖 19B展示與阿伐可泮及抗C5aR1對照Ab相比，在C5aR1 Fc-修飾之抗體(c2137-e1711-F cmod及c2139-F cmod)之存在下抑制Gα傳訊的結果。觀測到，c2137-e1711-F cmod及c2139-Fcmod兩者以劑量依賴性方式有效抑制Gα傳訊。
表 13概述與阿伐可泮及抗C5aR1對照Ab相比在10 nM及100 nM C5a濃度下之抑制。觀測到，與阿伐可泮及抗C5aR1對照Ab相比，即使在更高C5a濃度下，c2137-e1711-F cmod及c2139-Fcmod保持優良的抑制。 表 13 -與阿伐可泮及抗C5aR1對照Ab相比，在C5a之存在下c2137-e1711-F cmod及c2139-F c之抑制
拮抗劑 IC50 (nM)
10 nM C5a 100 nM C5a
c2139-Fcmod 0.09 0.05
c2137-e1711-F cmod 0.06 0.04
阿伐可泮 2.2 0.7*
抗C5aR1對照Ab 4.7 6.2
* 外推資料 - 使用阿伐可泮之先前資料表明其在高 C5a 濃度下並非極其有效 實例 18 - 藉由 Fc 修飾之 C5aR1 抗體抑制鈣傳訊
此實例描述使用鈣通量分析分本文所描述之C5aR1 Fc修飾之單特異性抗體及雙互補位抗體用於抑制C5a介導之鈣傳訊的功能態樣。
此實驗如實例3中所描述進行。 圖 20A 至圖 20B展示在U937-C5aR1細胞中，與阿伐可泮及抗C5aR1對照Ab相比，在C5aR1 Fc修飾之抗體(c2137-e1711-F cmod及c2139-F cmod)之存在下抑制鈣傳訊的結果。觀測到，c2137-e1711-F cmod及c2139-F cmod比阿伐可泮及抗C5aR1對照Ab更有效地抑制鈣通量。觀測到，需要至少10至100
Figure 02_image019
來達至藉由c2137-e1711-F cmod及c2139-F cmod展示之抑制水準。觀測到，Fc修飾之C5aR1抗體抑制人類嗜中性白血球以及U937-C5aR1細胞中之鈣傳訊。 圖 20A為展示例示性圖式之劑量反應曲線，該例示性圖式展示在增加濃度之抗體及100 nM C5a之存在下，使用如本發明中所描述之例示性Fc修飾之人源化位點II抗體抑制鈣傳訊。 圖 20B為展示在抗體及100 nM C5a之存在下，使用如本發明中所描述之例示性Fc修飾之人源化位點II抗體抑制鈣傳訊的抑制百分比圖。
圖 21A 至圖 21D展示與人類嗜中性白血球相比，U937-C5aR1細胞中之抑制。 圖 21A展示在10 nM C5a之存在下，對U937-C5aR1細胞中之鈣傳訊之抑制。 圖 21B展示在100 nM C5a之存在下，對U937-C5aR1細胞中之鈣傳訊之抑制。 圖 21C展示在10 nM C5a之存在下，對人類嗜中性白血球中之鈣傳訊之抑制。 圖 21D展示在100 nM C5a之存在下，對人類嗜中性白血球中之鈣傳訊之抑制。
此外，在以各種培育時間(例如，1 hr及3 hr)與指示濃度之拮抗性抗體一起培育之後，在U937-C5aR1細胞中探測Fc修飾之抗體對C5a介導之鈣傳訊之抑制。 圖 22A 至圖 22B概述使用各抑制劑之U937-C5aR1細胞之飽和水準。 圖 22A概述在1小時培育之後，與增加濃度之抗體(c2139-F cmod及c2137-e1711-F cmod)及100 nM C5a一起培育的U937-C5aR1細胞之飽和百分比及F範數。 圖 22B概述在3小時培育之後，與增加濃度之抗體(c2139-F cmod及c2137-e1711-F cmod)及100 nM C5a一起培育的U937-C5aR1細胞之飽和百分比及F範數。
圖 22A展示藉由c2137-e1711-F cmod及c2139-F cmod對鈣傳訊之抑制性劑量-反應。 圖 22B展示藉由c2137-e1711-F cmod及c2139-F cmod對鈣傳訊之抑制百分比。
觀測到，c2137-e1711-F cmod比阿伐可泮及抗C5aR1對照Ab更有效。此外，c2139-F cmod在較短拮抗劑培育時間下達至飽和點。此飽和度隨著拮抗劑培育時間延長而略微減輕。此現象僅在c2139-F cmod以及前驅體c2139下觀測到。 實例 19 - 藉由 Fc 修飾之 C5aR1 抗體抑制 β- 抑制蛋白傳訊 此實例描述本文所描述的Fc修飾之C5aR1單特異性抗體及雙互補位抗體用於抑制β-抑制蛋白募集的功能態樣。
此測定β-抑制蛋白募集之實驗細節描述於實例6中。 圖 23A 至圖 23B概述藉由c2137-e1711-F cmod及c2139-F cmod對C5a介導之β-抑制蛋白傳訊之抑制。觀測到， c2137-e1711-F cmod及c2139-F cmod比阿伐可泮及抗C5aR1對照Ab更有效地阻斷C5aR1之β-抑制蛋白募集。 表 14概述β-抑制蛋白募集之抑制之K D。 表 14- β-抑制蛋白抑制之K D
拮抗劑 100 nM C5a 下之 IC50 (nM)
c2139-Fcmod 1.9
c2137-e1711-F cmod 0.5
阿伐可泮 34
抗C5aR1對照Ab 12.7
實例 20 - 藉由 Fc 修飾之 C5aR1 抗體抑制嗜中性白血球趨化性
此實例描述使用Boyden Chamber的本文所描述之Fc修飾之C5aR1單特異性抗體及雙互補位抗體用於抑制已知由C5aR1活性誘導之嗜中性白血球趨化性的功能態樣。
此測定嗜中性白血球趨化性之實驗細節描述於實例4中。 圖 24A 至圖 24D展示在用C5aR1抗體、c2137-e1711-F cmod及c2139-F cmod處理之後對C5aR1-U937穩定細胞中之趨化性之抑制。觀測到，c2137-e1711-Fcmod及c2139-F cmod比阿伐可泮及抗C5aR1對照Ab更有效地抑制趨化性。 圖 24A展示在1 nM、3.16 nM及10 nM c2139-F cmod及增加濃度之C5a的存在下，對C5aR1-U937穩定細胞中之趨化性之抑制。 圖 24B展示在1 nM、3.16 nM及10 nM C5a c2137-e1711-F cmod及增加濃度之C5a的存在下，對C5aR1-U937穩定細胞中之趨化性之抑制。 圖 24C 至圖 24D展示在c2137-e1711-F cmod之存在下，在分別1 nM、3.16 nM及10 nM抗C5aR1對照Ab及阿伐可泮之存在下，對C5aR1-U937穩定細胞中之趨化性之抑制。 實例 21 - 藉由 Fc 修飾之 C5aR1 抗體抑制 CD11b 表現
此實例描述本文所描述的Fc修飾之C5aR1單特異性抗體及雙互補位抗體用於抑制CD11b表現的功能態樣。
此測定CD11表現之實驗細節描述於實例5中。 圖 25A 至圖 25B展示回應於用c2137-e1711-F cmod及c2139-F cmod處理，對CD11b傳訊之抑制。觀測到，與阿伐可泮及抗C5aR1對照Ab相比，c2137-e1711-F cmod及c2139-F cmod在廣泛範圍之C5a濃度下有效抑制CD11b表現。 圖 25A展示在增加濃度之C5aR1拮抗性抗體及10 nM C5a的存在下，對CD11b傳訊之抑制。 圖 25B展示在增加濃度之C5aR1拮抗性抗體及100 nM C5a的存在下，對CD11b傳訊之抑制。 實例 22 - 藉由 Fc 修飾之 C5aR1 抗體抑制 ROS 產生
此實例展示例示性人源化Fc修飾之單特異性抗體(c2139-F cmod)及例示性雙互補位抗體(c2137-e1711-F cmod)減少了反應性氧物種(ROS)。
此測定ROS產生之實驗細節描述於實例7中。 圖 26A 至圖 26B展示與c2139、c2137-e1711、抗C5aR1對照Ab及阿伐可泮相比，對用c2139-F cmod、c2137-e1711-F cmod處理之RBC裂解WB細胞中之ROS產生之抑制。觀測到，與阿伐可泮及抗C5aR1對照Ab類似，c2139-F cmod及c2137-e1711-F cmod在嗜中性白血球中維持低呼吸爆發(respiratory burst)活性。另外，與先前形式c2139及c2137-e1711相比，c2139-F cmod及c2137-e1711-F cmod具有降低的呼吸爆發活性。 圖 26A]展示增加濃度之單特異性C5aR1抗體(Fc修飾)對ROS產生之抑制。 圖 26B展示增加濃度之雙互補位C5aR1抗體(Fc修飾)對ROS產生之抑制。 實例 23. 藉由 Fc 修飾之 C5aR1 抗體抑制人類 C5aR1 轉殖基因小鼠之嗜中性白血球減少症
此實例展示在轉殖基因人類C5aR1小鼠中藉由Fc修飾之C5aR1抗體對嗜中性白血球減少症之抑制。如上文所描述(實例11)，例示性C5aR1抗體不與小鼠C5aR1交叉反應。在傑克遜試驗室，使用CRISPR技術來產生轉殖基因人類C5aR1 (hC5aR1)基因敲入小鼠。
圖 27A展示在小鼠中評估減輕嗜中性白血球減少症的實驗設計。此小鼠 活體內分析之實驗細節描述於實例11中。計算所有組中嗜中性白血球之變化百分比及嗜中性白血球之平均變化且展示於 圖 27B 至圖 27C中。嗜中性白血球之平均變化展示於 圖 27B中。嗜中性白血球計數之變化展示於 圖 27C中。觀測到，新Fc沉默前導恰好與非沉默c2139及c2137-e1711一樣有效。媒劑(PBS)組顯示穩固的嗜中性白血球減少症，在C5a注射後1 min，嗜中性白血球計數自基線平均減少65%。載劑對照組中之一隻動物並不對C5a起反應。 實例 24. 小鼠模型之中風保護
此實驗證實2139-F cmod及c2137-e1711-F cmod保護中風小鼠模型之梗塞體積的能力。在中風及創傷性腦損傷病理學中，包括在急性模型中，良好的記錄嗜中性白血球活性及對大腦之浸潤。
在tMCAO小鼠中投與各自20 mg/kg的c2139-F cmod及c2137-e1711-F c。使用1 mg/kg PMX53作為對照。將大腦切除，切割成切片且用TTC染色。藉由成像分析染色橫截面。
觀測到，與媒劑相比，用c2139-F cmod及c2137-e1711-F cmod處理之小鼠藉由顯著減小梗塞體積而提供對中風之保護。與媒劑組相比，c2137-e1711-F cmod處理展示顯著減小的梗塞體積。與媒劑組相比，c2139-F cmod處理展示減小的梗塞體積。與媒劑組相比，PMX53處理(充當陽性對照及比較物)展示僅略微減小的梗塞體積。 圖 28A展示梗塞體積之減小之圖示。 圖 28B展示在用c2139-F cmod、c2137-e1711-F cmod及PMX53處理之後梗塞體積之圖示。 實例 25. 例示性 C5aR1 抗體在具有經修飾之 Fc 域的 hC5aR1 小鼠中之藥物動力學研究
此實例展示具有經修飾之Fc域抗體的例示性C5aR1在小鼠中之藥物動力學(PK)研究。Tg32小鼠為其中人類FcRn替代天然小鼠FcRn之轉殖基因模型。FcRn為跨細胞障壁雙向轉運Ab所必需的，從而影響PK。已廣泛研究具有人類FcRn之Tg32小鼠且被認為與人類中之PK相關。此實驗之目的為評定FcRn介導的IgG-scFv與IgG格式之再循環且評定引入Fc域修飾對FcRn介導之再循環的任何影響。
將5 mg/kg例示性單特異性抗體及雙互補位抗體靜脈內注射至Tg32小鼠中。使用此項技術中公認的分析測定血清中抗體之百分比。使用MVZ-IgG4-VFc17 (具有IgG4 Fc及與C5aR1抗體相同之Fc修飾的莫維珠單抗抗體)作為對照。使用CERTARA進行其他PK/PD分析。
觀測到C-max (對於單特異性抗體及雙互補位抗體兩者，血液中抗體之最高濃度相似)。另外，觀測到，對於c2139-F cmod及c2137-e1711-F cmod，抗體之半衰期相似。
在500小時之時段內，評估血清中抗體之量。 表 15展示用於藥物動力學研究之劑量及取樣間隔。 表 15- 用於測定個別抗體之藥物動力學的例示性C5aR1 Fc修飾之抗體之給藥及取樣排程。
抗體 劑量 (mg/Kg) N 血液取樣
c2139-F cmod 5 5 1h、8h、1d、2d、3d、4d、6d、8d、10d、12d、15d、18d、21d
c2137-e1711-F cmod 5 5
MVZ-IgG4-VFc17 5 5
圖 29A 至圖 29B展示C5aR1-Fc修飾之抗體之藥物動力學特性。 圖 29A為Fc修飾之C5aR1抗體在血清中持續500小時的百分比之圖示。 圖 29B為在500小時內以µg抗體/ml血清為單位的平均濃度之圖示。此等觀察結果展示，c2137-e1711-F cmod與hFcRn高效地接合且以與c2139-F cmod類似之方式再循環。此外，PK資料亦類似於具有未修飾之Fc域的C5aR1抗體之PK。 表 16展示例示性Fc修飾之C5aR1抗體的PK參數。 表 16- Fc修飾之C5aR1抗體之藥物動力學參數。
參數
C max (µg/ml) t last (h) AUC 0-24 (µg*h/ml) AUC last (µg*h/ml) AUC inf (µg*h/ml) t 1/2 (h) CL (ml/h/kg) V (ml/kg)
Ab 劑量 幾何平均值 (Geo CV%)
c2139-Fcmod 5 mg/kg 52.6 (29.1%) 504 (504 - 504)* 904 (26.4%) 9230 (8.3%) 11100 (17.3%) 229 (89.2 - 242)* 0.449 (17.3%) 118 (38.2%)
c2137-e1711-Fcmod 5 mg/kg 40.8 (30.1%) 504 (504 - 504)* 699 (18%) 7550 (23.2%) 9500 (38.9%) 221 (67.1 - 390)* 0.526 (38.9%) 135 (45.1%)
同型CTL 5 mg/kg 131 (29.2%) 504 (504 - 504)* 1620 (7.7%) 13100 (7.5%) 16900 (10.4%) 259 (200 - 270)* 0.295 (10.4%) 104 (7.4%)
* 值表示為中位值 (Min - Max)
實例 26 - Fc 修飾之 C5aR1 抗體在人類 C5aR1 基因敲入小鼠中之多劑量藥物動力學
此實例展示例示性C5aR1抗體以及經修飾之Fc域抗體hC5aR1小鼠之多劑量藥物動力學(PK)研究。
表 17概述所測試抗體之給藥方案。目標介導之藥物安置(Target-Mediated Drug Disposition；TMDD)對於具有經修飾之Fc域的兩種例示性C5aR1抗體而言為明顯的。TMDD為其中藥物以高親和力結合於其藥理學目標位點(諸如受體)至影響其藥物動力學(PK)特徵之程度。藥物-目標複合物之目標結合及後續消除可能影響藥物分佈及消除兩者，且以劑量依賴性方式產生PK之非線性。
TMDD在高劑量水準主要觀測為線形PK，而在低劑量水準主要觀測為非線性PK。
正如對具有TMDD之抗體所預期，觀測到劑量依賴性清除。在5 mg/Kg及0.5 mg/Kg下，發現各抗體之最大濃度
Figure 02_image021
對於兩種抗體而言類似。另外，在5 mg/Kg及0.5 mg/Kg下，發現各抗體之半衰期(
Figure 02_image023
)類似。在20 mg/Kg下，相比於c2137-e1711，c2139具有更佳半衰期(
Figure 02_image023
)。 表 17-用於測定個別抗體之藥物動力學的例示性C5aR1 Fc修飾之抗體之給藥及取樣排程。
組 抗體 劑量(mg/Kg) N 血液取樣
1 c2139-Fcmod 0.5 4 1h、8h、1d、2d、3d、4d、6d、8d、10d、12d、15d、18d、21d
2 c2139-Fcmod 5 4
3 c2139-Fcmod 20 4
4 c2137-e1711-Fcmod 0.5 4
5 c2137-e1711-Fcmod 5 4
6 c2137-e1711-Fcmod 20 4
7 MVZ-IgG4-VFc17 20 4
藥物-目標複合物之目標結合及後續消除可能影響藥物分佈及消除兩者，且以劑量依賴性方式產生PK之非線性。 圖 30A 至圖 30F展示抗體持久性為劑量依賴性的。 表 18展示例示性Fc修飾之C5aR1抗體的PK參數。 圖 30A為c2139-Fcmod在血清中持續200小時的劑量反應曲線之圖示。 圖 30B為c2137-e1711-Fcmod在血清中持續200小時的劑量反應曲線之圖示。 圖 30C為c2139Fcmod、c2137-e1711-Fcmod及MVZ-IgG4之比較。 圖 30D為在500小時之時段內，三種不同濃度之c2139之 電腦模擬圖示。 圖 30E為在500小時之時段內，三種不同濃度之c2137-e1711之 電腦模擬圖示。 圖 30F為在20 mg/Kg之濃度下，在500小時之時段內，同型對照抗體之 電腦模擬圖示。在總計4週內，每週一次向非原生小鼠投與多個劑量之mAb。觀察到，c2139Fcmod、c2137-e1711-Fcmod兩者維持暴露於，以5 mg/kg每週一次IV給藥。每週一次給藥持續若干週之mAb未觀測到嚴重結果。
表 18- 例示性Fc修飾之C5aR1抗體的PK參數
C max (µg/ml) t last (h) AUC 0-24 (µg*h/ml) AUC last (µg*h/ml) AUC inf (µg*h/ml) t 1/2 (h) CL (ml/h/kg) V (ml/kg)
Ab 劑量 幾何平均值 (Geo CV%)
c2139-Fcmod 20 mg/kg 355 (12.2%) 504 (504 - 504)* 4880 (12%) 34200 (20.8%) 36700 (26.2%) 135 (105 - 163)* 0.545 (26.2%) 105 (14.2%)
c2137-e1711-Fcmod 20 mg/kg 510 (34.6%) 396 (288 - 504)* 6750 (23.2%) 30100 (28.9%) 30400 (29.8%) 31.6 (16.1 - 90.0)* 0.657 (29.8%) 32.6 (65.5%)
同型 CTL 20 mg/kg 453 (29.4%) 504 (288 - 504)* 7130 (22.1%) 55800 (23.4%) 66200 (20.8%) 127 (116 - 192)* 0.302 (20.8%) 60.0 (26.7%)
c2139-Fcmod 5 mg/kg 87.9 (23.7%) 264 (192 - 432)* 1180 (19.6%) 3680 (34%) 3780 (34.8%) 51.6 (24.7 - 72.0)* 1.32 (34.8%) 89.0 (27.1%)
c2137-e1711-Fcmod 5 mg/kg 84.3 (30%) 216 (144 - 288)* 1140 (10.3%) 3590 (15.4%) 4080 (23.1%) 49.7 (48.5 - 110)* 1.22 (23.1%) 113 (24.8%)
c2139-Fcmod 0.5 mg/kg 8.45 (33.4%) 24.0 (24.0 - 24.0)* 90.7 (19.6%) 90.7 (19.6%) 114 (20.7%) 10.5 (7.62 - 11.4)* 4.40 (20.7%) 62.8 (25.4%)
c2137-e1711-Fcmod 0.5 mg/kg 8.05 (21%) 24.0 (24.0 - 24.0)* 89.1 (10.2%) 89.1 (10.2%) 119 (9.5%) 11.7 (9.13 - 12.9)* 4.21 (9.5%) 68.4 (16.9%)
* 值表示為中位值 (Min - Max)
實例 27 - 藉由低劑量之 Fc 修飾之 C5aR1 抗體抑制人類 C5aR1 KI 小鼠之嗜中性白血球減少症
此實例展示c2139-Fcmod及c2137-e1711-Fcmod可以低劑量抑制人類C5aR1基因敲入小鼠之嗜中性白血球減少症。
表 19概述所測試抗體之給藥方案及測定嗜中性白血球減少症之採血時間。C5a投與後1 min時自基線的嗜中性白血球變化(-5 min出血)展示於 圖 31中。
觀測到，與媒劑對照相比，即使在0.1 mg/kg劑量下，c2139-Fcmod及c2137-e1711-Fcmod有效地抑制由C5a投與誘導之嗜中性白血球減少症。 表 19. 劑量方案
測試物品 小鼠數量 劑量 嗜中性白血球減少症出血
         -5min 0hr 1 min 5min 2hr
c2137-e1711-Fcmod 5 0.01 mg/kg IV 血液 0.1 mg/kg hC5a IV 血液 血液 血液
c2137-e1711-Fcmod 5 0.1 mg/kg IV
c2137-e1711-Fcmod 5 0.5 mg/kg IV
c2137-e1711-Fcmod 1 3 mg/kg IV
c2139-Fcmod 5 0.01 mg/kg IV
c2139-Fcmod 5 0.1 mg/kg IV
c2139-Fcmod 5 0.5 mg/kg IV
c2139-Fcmod 1 3 mg/kg IV
同型mAb CTL 5 0.5 mg/kg IV
媒劑(PBS) 5 不適用
實例 28 - Fc 修飾之 C5aR1 抗體之內化
此實例展示Fc修飾之人源化單特異性抗體及雙互補位C5aR1抗體在hC5ar1-U937細胞中之內化。
Fc修飾之人源化單特異性抗C5aR1抗體c2137-e1711-Fcmod及c2139-Fcmod與pH敏感性染料(DyLight488)結合，該染料在低pH下發出明亮的螢光但在中性pH下無螢光。將結合的抗體與U937細胞及hC5aR1基因敲入U937細胞一起培育。 圖 32A展示與各結合抗體一起培育6小時及24小時之後的螢光強度。
觀測到例示性Fc修飾之C5aR1抗體經歷基於代謝之內化。 圖 32B展示在300 min之時段內，如藉由尼康共焦實驗所觀測，c2137-e1711-Fcmod及c2139-Fcmod兩者在活細胞中之內化。 等效方案及範疇
熟習此項技術者將認識到或能夠僅使用常規實驗來確定本文中所描述之本發明之特定實施例之許多等效物。本發明之範疇並不意欲限於以上描述，而是如以下申請專利範圍中所闡述：
圖 1為展示ANCA血管炎之發病機制的例示性示意圖。
圖 2為本發明中描述之兩種種類之抗體之例示性示意圖。
圖 3A為本文所描述之包含連接至Fab之重鏈Fc域之scFv的例示性雙互補位抗體之例示性示意圖。 圖 3B為如本文所描述之包含連接至Fab之輕鏈的scFv之例示性雙互補位抗體之示意圖。
圖 4A為展示如本發明中所描述之使用ELISA之例示性人源化位點II抗體(c2139)及例示性雙互補位抗體(c2137-e1711)與C5aR1之結合的例示性圖式。 圖 4B為展示U937-C5aR1細胞中不同批次之例示性位點II抗體(c2139)及例示性雙互補位抗體(c2137-e1711)之結合的例示性圖式。圖4C為展示人類嗜中性白血球細胞中不同批次之例示性位點II抗體(c2139)及例示性雙互補位抗體(c2137-e1711)之結合的圖式。
圖 5為展示如本發明中所描述之使用ELISA之例示性人源化位點II抗體(c2139)及雙互補位抗體(c2137-e1711)與C5aR2之結合的例示性圖式。
圖 6A為展示在10 nM C5a之存在下使用GeneBLAzer分析使用如本發明中所描述之針對C5aR1之例示性人源化位點II抗體c2139及例示性雙互補位抗體c2137-e1711抑制G-α傳訊的例示性圖式。阿伐可泮(Avacopan)經展示作為陽性對照。 圖 6B為展示在100 nM C5a之存在下使用GeneBLAzer分析使用如本發明中所描述之針對C5aR1、c2137-e1711之例示性人源化位點II c2139抗體及例示性雙互補位抗體抑制G-α傳訊的例示性圖式。阿伐可泮經展示作為陽性對照。 圖 6C為展示在10 nM C5a之存在下使用GeneBLAzer分析使用如本發明中所描述之針對C5aR1之例示性人源化位點II抗體c2139及例示性雙互補位抗體c2137-e1711抑制G-α傳訊的例示性圖式。抗C5aR1對照Ab經展示作為陽性對照。 圖 6D為展示在100 nM C5a之存在下使用GeneBLAzer分析使用如本發明中所描述之針對C5aR1、c2137-e1711之例示性人源化位點II c2139抗體及例示性雙互補位抗體抑制G-α傳訊的例示性圖式。抗C5aR1對照Ab經展示作為陽性對照。
圖 7A為展示在增加濃度之C5a及增加濃度之抗體的存在下使用如本發明中所描述之例示性人源化位點II抗體抑制鈣傳訊的例示性圖式。 圖 7B為展示在增加濃度之C5a及增加濃度之抗體的存在下使用如本發明中所描述之例示性人源化雙互補位抗體抑制鈣傳訊的例示性圖式。 圖 7C為展示在增加濃度之C5a及增加濃度之抗體的存在下使用如本發明中所描述之阿伐可泮(已知C5aR1抑制劑)抑制鈣傳訊的例示性圖式。
圖 8A為展示在增加濃度之C5a及增加濃度之抗體的存在下使用如本發明中所描述之例示性人源化位點II抗體c2139抑制嗜中性白血球趨化性的例示性圖式。 圖 8B為展示在增加濃度之C5a及增加濃度之抗體的存在下使用如本發明中所描述之例示性人源化雙互補位抗體c2137-e1711抑制嗜中性白血球趨化性的例示性圖式。 圖 8C為展示在增加濃度之C5a及增加濃度之抗體的存在下使用如本發明中所描述之阿伐可泮(已知C5aR1抑制劑)抑制嗜中性白血球趨化性的例示性圖式。
圖 9A為展示與阿伐可泮相比且在100 nM C5a及增加抗體濃度之存在下，藉由如本文中所描述之例示性人源化位點II抗體c2139及例示性雙互補位抗體c2137-e1711抑制嗜中性白血球中之CD11b表現的例示性圖式。 圖 9B為展示與阿伐可泮相比且在10 nM之例示性人源化Site II抗體及例示性雙互補位抗體以及增加濃度之C5a的存在下，藉由如本文中所描述之例示性人源化位點II抗體c2139及例示性雙互補位抗體c2137-e1711抑制嗜中性白血球中之CD11b表現的例示性圖式。 圖 9C為展示與10 nM及100 nM抗C5aR1對照Ab相比且在10 nM例示性人源化位點II抗體及例示性雙互補位抗體以及增加濃度之C5a的存在下，藉由如本文中所描述之例示性人源化位點II抗體c2139及例示性雙互補位抗體c2137-e1711抑制嗜中性白血球中之CD11b表現的例示性圖式。
圖 10A為展示在各自劑量為1 nM之例示性人源化C5aR1抗體c2139及c2137-e1711之存在下，與10 nM阿伐可泮相比，在1 nM C5a之存在下抑制β抑制蛋白募集的例示性圖式。 圖 10B為展示在各自劑量為1 nM之例示性人源化C5aR1抗體c2139及c2137-e1711之存在下，與10 nM阿伐可泮相比，在10 nM C5a之存在下抑制β抑制蛋白募集的例示性圖式。 圖 10C為展示在各自劑量為1 nM之例示性人源化C5aR1抗體c2139及c2137-e1711之存在下，與10 nM阿伐可泮相比，在100 nM C5a之存在下抑制β抑制蛋白募集的例示性圖式。
圖 11為展示與c2139、c2137-e1711、莫維珠單抗(motavizumab)及阿伐可泮相比，抑制ANCA(-)及ANCA (+)細胞中之ROS傳訊的例示性圖式。
圖 12A為展示如藉由具有pH敏感性螢光染料之胺結合抗體所觀測，在C5aR1-U937細胞中，在0、6及12小時之後內化例示性人源化抗10 nM C5aR1抗體的例示性圖式。 圖 12B為展示如藉由具有pH敏感性螢光染料之胺結合抗體所觀測，在U937細胞中，在0、6及12小時之後內化例示性人源化抗10 nM C5aR1抗體的例示性圖式。 圖 12C為展示如藉由具有pH敏感性螢光染料之胺結合抗體所觀測，在C5aR1-U937細胞中，在0、6及12小時之後內化例示性人源化抗100 nM C5aR1抗體的例示性圖式。 圖 12D為展示如藉由具有pH敏感性螢光染料之胺結合抗體所觀測，在U937細胞中，在0、6及12小時之後內化例示性人源化抗100 nM C5aR1抗體的例示性圖式。
圖 13A為展示例示性人源化C5aR1抗體與松鼠猴之結合(交叉反應性)的例示性圖式。 圖 13B為展示例示性人源化C5aR1抗體與狗之結合(交叉反應性)的例示性圖式。
圖 14A為展示抽血及給藥之時間的松鼠猴中之研究設計之例示性示意圖。 圖 14B為媒劑、例示性人源化位點II抗體及阿伐可泮中嗜中性白血球計數自基線的變化百分比之例示性散佈圖。 圖 14C為媒劑、例示性人源化位點II抗體及阿伐可泮中嗜中性白血球計數自基線的變化百分比之長條圖。
圖 15A為展示抽血及給藥之時間的hC5aR1小鼠中之研究設計之例示性示意圖。 圖 15B為媒劑、人源化位點II抗體及阿伐可泮中嗜中性白血球計數自基線的變化百分比之例示性散佈圖。 圖 15C為媒劑、人源化位點II抗體及阿伐可泮中嗜中性白血球計數自基線的變化百分比之例示性長條圖。
圖 16A為展示例示性四價抗體(雙互補位抗體)及單特異性抗體之21天PK概況的例示性圖式。 圖 16B為展示莫維珠單抗在小鼠血清中之500小時PK概況的例示性圖式。 圖 16C為展示c2139在小鼠血清中之500小時PK概況的例示性圖式。 圖 16D為展示c2137-e1711在小鼠血清中之500小時PK概況的例示性圖式。
圖 17A 為展示單特異性C5aR1抗體(c2139-Fcmod)及C5aR1雙互補位抗體(c2137-e1711-F cmod)之親和力曲線的例示性圖式。 圖 17B為展示C5aR1雙互補位抗體(c2137-e1711-F cmod)之動力學參數的例示性圖式。 圖 17C為展示單特異性C5aR1抗體(c2139-Fcmod)及C5aR1雙互補位抗體(c2137-e1711-F cmod)與C5aR2之結合的例示性圖式。
圖 18A 至圖 18B顯示C5aR1抗體之內化增加。 圖 18A為展示在解離單特異性抗體c2139後若干小時之內化的例示性圖式。 圖 18B為展示在締合期間雙互補位抗體c2137-e1711之內化增加的例示性圖式。
圖 19A 至圖 19B 說明在C5aR1 Fc修飾之抗體的存在下抑制Gα傳訊。 圖 19A展示在10 nM C5a之存在下，在C5aR1 Fc修飾之抗體的存在下之Gα傳訊。 圖 19B展示在100 nM C5a存在下，在C5aR1 Fc修飾之抗體的存在下之Gα傳訊。
圖 20A 至圖 20B為說明在U937-C5aR1細胞中，與阿伐可泮及抗C5aR1對照Ab相比，在C5aR1 Fc修飾之抗體c2137-e1711-F cmod及c2139-Fcmod之存在下抑制鈣傳訊的例示性圖式系列。 圖 20A為展示例示性圖式之劑量反應曲線，該例示性圖式展示在增加濃度之抗體及100 nM C5a之存在下，使用如本發明中所描述之例示性Fc修飾之人源化位點II抗體抑制鈣傳訊。 圖 20B為展示在抗體及100 nM C5a之存在下，使用如本發明中所描述之例示性Fc修飾之人源化位點II抗體抑制鈣傳訊的抑制百分比圖。
圖 21A 至圖 21D展示與人類嗜中性白血球相比，對U937-C5aR1細胞中之鈣傳訊之抑制。 圖 21A展示在10 nM C5a之存在下，對U937-C5aR1細胞中之鈣傳訊之抑制。 圖 21B展示在100 nM C5a之存在下，對U937-C5aR1細胞中之鈣傳訊之抑制。 圖 21C展示在10 nM C5a之存在下，對人類嗜中性白血球中之鈣傳訊之抑制。 圖 21D展示在100 nM C5a之存在下，對人類嗜中性白血球中之鈣傳訊之抑制。
圖 22A概述在1小時培育之後，與增加濃度之抗體(c2139-Fcmod及c2137-e1711-Fcmod)及100 nM C5a一起培育的U937-C5aR1細胞之飽和百分比及F範數。 圖 22B概述在3小時培育之後，與增加濃度之抗體(c2139-Fcmod及c2137-e1711-Fcmod)及100 nM C5a一起培育的U937-C5aR1細胞之飽和百分比及F範數。
圖 23A 至圖 23B展示藉由c2137-e1711-F cmod及c2139-Fcmod對C5a介導之β-抑制蛋白傳訊之抑制。 圖 23A展示藉由c2137-e1711-F cmod及c2139-Fcmod對β-抑制蛋白傳訊之抑制性劑量-反應。 圖 23B展示藉由c2137-e1711-F cmod及c2139-Fcmod對β-抑制蛋白傳訊之抑制百分比。
圖 24A 至圖 24D展示與阿伐可泮及抗C5aR1對照Ab相比，用C5aR1抗體、c2137-e1711-F cmod及c2139-Fcmod處理之後對C5aR1-U937穩定細胞中之趨化性之抑制。 圖 24A展示在1 nM、3.16 nM及10 nM c2139-Fcmod及增加濃度之C5a的存在下，對C5aR1-U937穩定細胞中之趨化性之抑制。 圖 24B展示在1 nM、3.16 nM及10 nM C5a c2137-e1711-Fcmod及增加濃度之C5a的存在下，對C5aR1-U937穩定細胞中之趨化性之抑制。 圖 24C 至圖 24D展示在c2137-e1711-Fcmod之存在下，在分別1 nM、3.16 nM及10 nM抗C5aR1對照Ab及阿伐可泮之存在下，對C5aR1-U937穩定細胞中之趨化性之抑制。
圖 25A 至圖 25B展示回應於用c2137-e1711-F cmod及c2139-F cmod處理，對CD11b傳訊之抑制。 圖 25A展示在增加濃度之C5aR1拮抗性抗體及10 nM C5a的存在下，對CD11b傳訊之抑制。 圖 25B展示在增加濃度之C5aR1拮抗性抗體及100 nM C5a的存在下，對CD11b傳訊之抑制。
圖 26A 至圖 26B展示與c2139-F cmod、c2137-e1711-F cmod、莫維珠單抗及阿伐可泮相比，對ANCA(-)細胞及ANCA (+)細胞中之ROS傳訊之抑制。 圖 26A展示增加濃度之單特異性C5aR1抗體對ROS產生之抑制。 圖 26B展示增加濃度之雙互補位C5aR1抗體對ROS產生之抑制。
圖 27A為展示抽血及給藥之時間的hC5aR1小鼠中之研究設計之例示性示意圖。 圖 27B為媒劑、c2139、c2139-Fcmod、c2137-e1711及c2137-e1711-Fcmod中嗜中性白血球計數自基線的變化百分比之例示性散佈圖。 圖 27C為媒劑、c2139、c2139-Fcmod、c2137-e1711及c2137-e1711-Fcmod中嗜中性白血球計數自基線的變化百分比之例示性長條圖。
圖 28A為與1 mg/kg PMX53相比，這用指示劑量之Fc修飾之抗體處理之後小鼠腦中的梗塞大小之圖示。 圖 28B為與1 mg/kg PMX53相比，在用指示劑量之Fc修飾之抗體處理之後小鼠腦中的梗塞大小之圖示。
圖 29A 至圖 29B為Fc修飾之抗體之藥物動力學之圖示。 圖 29A為Fc修飾之C5aR1抗體在血清中持續500小時的百分比之圖示。 圖 29B為在500小時內以µg抗體/ml血清為單位的平均濃度之圖示。
圖 30A 至圖 30F為與MVZ-IgG4相比，Fc修飾之C5aR1抗體之PK研究及PD研究之圖示。 圖 30A為c2139Fcmod在血清中持續200小時的劑量反應曲線之圖示。 圖 30B為c2137-e1711-Fcmod在血清中持續200小時的劑量反應曲線之圖示。 圖 30C為c2139Fcmod、c2137-e1711-Fcmod及MVZ-IgG4之比較。 圖 30D為在500小時之時段內，三種不同濃度之c2139之 電腦模擬圖示。 圖 30E為在500小時之時段內，三種不同濃度之c2137-e1711之 電腦模擬圖示。 圖 30F為在20 mg/Kg之濃度下，在500小時之時段內，同型對照抗體之 電腦模擬圖示。
圖 31為在人類C5aR1小鼠中使用不同劑量之例示性C5aR1抗體c2139-Fcmod及c2137-e1711-Fcmod之嗜中性白血球計數的變化百分比之圖示。
圖 32A 至圖 32B為例示性C5aR1抗體、c2139-Fcmod及c2137-e1711-Fcmod之內化之圖示。 圖 32A展示在U937細胞中，在0 hr、6 hr及24 hr內c2139-Fcmod及c2137-e1711-Fcmod之螢光強度。 圖 32B展示在300 min之時段內，如藉由尼康共焦實驗(Nikon confocal experiment)所觀測，c2137-e1711-Fcmod及c2139-Fcmod兩者在活細胞中之內化。

Claims (107)

  1. 一種抗體或其抗原結合片段，其結合補體組分5a受體1 (C5aR1)，該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(VH)，其中該VH包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 14具有至少90%一致性之胺基酸序列。
  2. 一種抗體或其抗原結合片段，其結合補體組分5a受體1 (C5aR1)，該抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變區(VL)，其中該VL包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 25具有至少90%一致性之胺基酸序列。
  3. 一種抗體或其抗原結合片段，其包含VH區，其中該VH包含三個重鏈互補決定區(HCDR)，其中HCDR1、HCDR2及HCDR3序列分別包含SEQ ID No: 6 (NYWMH)、7 (YLNPSSGYTKYAQKFQG)及8 (SGGDNYGNPYYFDR)之胺基酸序列。
  4. 一種抗體或其抗原結合片段，其包含VL區，其中該VL包含三個輕鏈互補決定區(LCDR)，其中LCDR1、LCDR2及LCDR3序列分別具有SEQ ID No: 9 (RASQSIVHSNGNTYLH)、10 (KVSNRFS)及11 (AQYTLVPLT)。
  5. 一種抗體或其抗原結合片段，其包含VH區，其中該VH包含三個重鏈互補決定區(HCDR)，其中HCDR1、HCDR2及HCDR3序列分別包含SEQ ID No: 6 (NYWMH)、7 (YLNPSSGYTKYAQKFQG)及8 (SGGDNYGNPYYFDR)之胺基酸序列；及VL區，其中該VL包含三個輕鏈互補決定區(LCDR)，其中LCDR1、LCDR2及LCDR3序列分別具有SEQ ID No: 9 (RASQSIVHSNGNTYLH)、10 (KVSNRFS)及11 (AQYTLVPLT)。
  6. 如請求項1至5中任一項之抗體或抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段進一步包含Fc區。
  7. 如請求項1至6中任一項之抗體或抗體或其抗原結合片段，其中該Fc域獨立地選自IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。
  8. 如請求項1至7中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中結合於C5aR1之該抗體抑制補體組分5a (C5a)與C5aR1之相互作用。
  9. 如請求項1至8中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體不結合於C5aR2。
  10. 如請求項1至9中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段為人源化的。
  11. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該VH或該VL已經修飾以增強分子之穩定性。
  12. 如請求項11之抗體或其抗原結合片段，其中該VL在SEQ ID NO: 5或SEQ ID NO: 25之位置96處包含絲胺酸或酪胺酸。
  13. 如請求項1至12中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段不與小鼠C5aR1交叉反應。
  14. 如請求項1至13中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體以10 pM至50 nM之間的親和力結合C5aR1。
  15. 如請求項1至14中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體以0.16 nM或更低之親和力結合C5aR1。
  16. 如請求項1至15中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中結合於C5aR1之該抗體抑制嗜中性白血球趨化性。
  17. 如請求項1至15中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中結合於C5aR1之該抗體在至少10 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。
  18. 如請求項1至15中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中結合於C5aR1之該抗體抑制C5a介導之C5aR1 Gα傳訊。
  19. 如請求項1至15中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中結合於C5aR1之該抗體抑制鈣傳訊。
  20. 如請求項1至15中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中結合於C5aR1之該抗體抑制CD11b表現。
  21. 如請求項1至15中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中結合於C5aR1之該抗體抑制嗜中性白血球減少症。
  22. 如請求項1至15中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中結合於C5aR1之該抗體抑制β-抑制蛋白傳訊。
  23. 如請求項1至15中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中結合於C5aR1之該抗體抑制嗜中性白血球中之ROS產生。
  24. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體在一次凍融循環下在4℃下穩定至多2週。
  25. 一種核酸，其編碼如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段。
  26. 一種細胞，其包含如請求項23之核酸。
  27. 一種製造如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段之方法，該方法包含；培養包含編碼該抗體或其抗原結合片段之核酸的宿主細胞，且在允許產生該抗體或其抗原結合片段之條件下培養該細胞。
  28. 一種治療自體免疫疾病之方法，其包含向需要治療之個體投與抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段結合補體組分5a受體1 (C5aR1)且包含具有與SEQ ID NO: 14具有至少90%一致性之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)及具有與SEQ ID NO: 25具有至少90%一致性之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)。
  29. 一種治療自體免疫疾病之方法，其包含向需要治療之個體投與抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段結合人類補體組分5a受體1 (C5aR1)，該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(VH)，其中該VH包含與SEQ ID NO: 14至少90%一致性，及結合人類補體組分5a受體1 (C5aR1)之抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變區(VL)，其中該VL與SEQ ID NO: 15至少90%一致性。
  30. 一種治療自體免疫疾病之方法，其包含向需要治療之個體投與抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段結合補體組分5a受體1 (C5aR1)且包含： 重鏈，其包含：包含SEQ ID NO: 6 (NYWMH)之HCDR1、包含SEQ ID NO: 7 (YLNPSSGYTKYAQKFQG)之HCDR2及包含SEQ ID NO: 8 (SGGDNYGNPYYFDR)之HCDR3；以及 輕鏈，其包含：包含SEQ ID NO: 9 (RASQSIVHSNGNTYLH)之LCDR1、包含SEQ ID NO: 10 (KVSNRFS)之LCDR2及包含SEQ ID NO: 11 (AQYTLVPLT)之LCDR3。
  31. 一種治療自體免疫疾病之方法，其包含向需要治療之個體投與抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 4或與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少85%一致性之胺基酸序列的重鏈。
  32. 一種治療自體免疫疾病之方法，其包含向需要治療之個體投與抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 5或與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列具有至少85%一致性之胺基酸序列的輕鏈。
  33. 一種治療由嗜中性白血球減少症引起之疾病的方法，其包含向需要治療之個體投與如請求項1至24中任一項之抗體或其抗體結合片段。
  34. 如請求項33中任一項之方法，其中該嗜中性白血球減少症由高含量之C5a引起。
  35. 如請求項28至33中任一項之方法，其中該疾病為ANCA血管炎或狼瘡。
  36. 如請求項28至33中任一項之方法，其中該病症為類風濕性關節炎。
  37. 如請求項28至33中任一項之方法，其中該病症為腎臟病症。
  38. 一種使用結合於C5aR1之單株抗體抑制C5a傳訊之方法，其中該單株抗體包含： 重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 14具有至少90%一致性之胺基酸序列；以及 輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 25具有至少90%一致性之胺基酸序列。
  39. 一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其包含：第一抗原結合域，其包含在SEQ ID NO: 3處結合C5aR1之VH1及VL1；及第二抗原結合域，其包含在SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2處結合C5aR1之VH2及VL2。
  40. 一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其包含：第一抗原結合域，其包含在SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2處結合C5aR1之VH1及VL1；及第二抗原結合域，其包含在SEQ ID NO: 3處結合C5aR1之VH2及VL2。
  41. 如請求項39或請求項40之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中該VH1包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列至少90%一致。
  42. 如請求項39或請求項40之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中該VL1包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列至少90%一致。
  43. 如請求項39或請求項40之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中該VH2包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列至少90%一致。
  44. 如請求項39或請求項40之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中該VL2包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列至少90%一致。
  45. 一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其包含SEQ ID NO: 12或與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列至少85%一致的重鏈。
  46. 一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其包含SEQ ID NO: 13或與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少85%一致的輕鏈。
  47. 一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其包含SEQ ID NO: 12或與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列至少85%一致的重鏈，其進一步包含SEQ ID NO: 13或與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少85%一致的輕鏈。
  48. 如請求項39至47中任一項之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中該重鏈包含連接至Fc域之該VH1。
  49. 如請求項48之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中該Fc域進一步連接至scFv，其包含：VH2，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列至少90%一致的胺基酸序列，及/或VL2，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列至少90%一致的胺基酸序列。
  50. 如請求項48或請求項49之雙互補位抗體或抗體或其抗原結合片段，其中該Fc域獨立地選自IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。
  51. 如請求項49之雙互補位抗體或抗體或其抗原結合片段，其中該scFv經由連接子連接至該Fc域。
  52. 如請求項51之雙互補位抗體，其中該連接子包含至少5個胺基酸，其包含具有SEQ ID NO: 26-37中之任一者的胺基酸序列。
  53. 如請求項49之雙互補位抗體，其中包含SEQ ID NO: 16之該VH2及包含SEQ ID NO: 17之該VL2經由連接子彼此連接。
  54. 如請求項53之雙互補位抗體，其中該連接子包含SEQ ID NO: 31之1至10個重複。
  55. 如請求項49之雙互補位抗體，其中該VH2及該VL2進一步包含一或多個突變以改善該雙互補位抗體之熱穩定性。
  56. 如請求項55之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中該突變包含在SEQ ID NO: 12之位置559處且在SEQ ID NO: 12之位置630處併入半胱胺酸。
  57. 如請求項39至56中任一項之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中結合於C5aR1之該抗體抑制補體組分5a (C5a)與人類C5aR1之相互作用。
  58. 如請求項39至57中任一項之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中該抗體不結合於C5aR2。
  59. 如請求項39至58中任一項之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段為人源化的。
  60. 如請求項39至59中任一項之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段不與小鼠C5aR1交叉反應。
  61. 如請求項39至60中任一項之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中該抗體在一次凍融循環下在4℃下穩定至多2週。
  62. 如請求項39至61中任一項之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中結合於C5aR1之該抗體抑制嗜中性白血球趨化性。
  63. 如請求項39至62中任一項之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中結合於C5aR1之該抗體在高C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。
  64. 如請求項39至62中任一項之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中結合於C5aR1之該抗體在至少10 nM之C5a濃度之存在下抑制嗜中性白血球趨化性。
  65. 如請求項39至64中任一項之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中結合於C5aR1之該抗體抑制C5a介導之C5aR1 Gα傳訊。
  66. 如請求項39至65中任一項之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中結合於C5aR1之該抗體抑制鈣傳訊。
  67. 如請求項39至66中任一項之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中結合於C5aR1之該抗體抑制CD11b表現 。
  68. 如請求項39至67中任一項之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中結合於C5aR1之該抗體抑制嗜中性白血球減少症 。
  69. 如請求項39至61中任一項之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中結合於C5aR1之該抗體抑制β-抑制蛋白傳訊。
  70. 如請求項39至61中任一項之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其中結合於C5aR1之該抗體抑制嗜中性白血球中之ROS產生。
  71. 一種核酸，其編碼如請求項39至68中任一項之雙互補位抗體。
  72. 一種細胞，其包含如請求項71之核酸。
  73. 一種製造如請求項39至70中任一項之雙互補位抗體或其抗原結合片段的方法，該方法包含培養包含編碼該抗體或其抗原結合片段之核酸的宿主細胞，且在允許產生該抗體或其抗原結合片段之條件下培養該細胞。
  74. 一種使用雙互補位抗體治療自體免疫疾病之方法，其中該抗體結合人類補體組分5a受體1 (C5aR1)，該包含： a.   第一VH及第一VL，VH1及VL1，其中該VH1包含與SEQ ID NO: 14具有至少90%一致性之胺基酸序列且其中該VL1包含與SEQ ID NO: 15具有至少90%一致性之胺基酸序列，及 b.   第二VH及第二VL，VH2及VL2，其中該VH2包含與SEQ ID NO: 16具有至少90%一致性之胺基酸序列且VL2包含與SEQ ID NO: 16具有至少90%一致性之胺基酸序列。
  75. 一種治療由嗜中性白血球減少症引起之疾病的方法，其使用如前述請求項中任一項之雙互補位抗體的抗體或其抗原結合片段。
  76. 如請求項73至75中任一項之方法，其中該嗜中性白血球減少症由高含量之C5a引起。
  77. 如請求項73至76中任一項之方法，其中該疾病為ANCA血管炎或狼瘡。
  78. 如請求項73至77中任一項之方法，其中該病症為類風濕性關節炎。
  79. 如請求項73至78中任一項之方法，其中該病症為腎臟病症。
  80. 如請求項73至78或27至33中任一項之方法，其中該病症為中風。
  81. 一種如前述請求項中任一項之單特異性或雙互補位C5aR1抗體，其中該抗體包含經修飾之IgG1、IgG4或IgG2恆定域。
  82. 如請求項81之抗體，其中該C5aR1包含經修飾之IgG4 Fc域。
  83. 如請求項82之抗體，其中該經修飾之IgG4 Fc域包含位置F234、L235及/或D265處之取代。
  84. 如請求項83之抗體，其中位置F234處之該IgG4 Fc取代為選自丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、苯丙胺酸或色胺酸之疏水性胺基酸。
  85. 如請求項83之抗體，其中位置F234處之該IgG4 Fc取代為纈胺酸。
  86. 如請求項83之抗體，其中位置L235處之該IgG4 Fc取代為酸性胺基酸。
  87. 如請求項86之抗體，其中位置L235處之該IgG4 Fc取代為選自麩胺酸或天冬胺酸之酸性胺基酸。
  88. 如請求項86之抗體，其中位置L235處之該IgG4 Fc取代為天冬胺酸。
  89. 如請求項83之抗體，其中位置D265處之該IgG4 Fc取代為非極性胺基酸。
  90. 如請求項89之抗體，其中位置D265處之該IgG4 Fc取代為選自丙胺酸、半胱胺酸、甘胺酸、異白胺酸、白胺酸、甲硫胺酸及纈胺酸之非極性胺基酸。
  91. 如請求項89之抗體，其中位置D265處之該IgG4 Fc取代為甘胺酸。
  92. 如前述請求項中任一項之抗體，其中該抗體進一步包含S228處之取代。
  93. 如請求項92之抗體，其中S228處之該取代為脯胺酸。
  94. 如前述請求項中任一項之單特異性或雙互補位C5aR1抗體，其中該抗體包含經修飾之IgG4恆定域，其包含F234V、L235E及D265G取代之組合。
  95. 一種減小或預防抗體依賴性細胞毒性、抗體依賴性噬菌作用及/或補體依賴性細胞毒性之方法，其使用如請求項81至94中任一項之單特異性或雙互補位C5aR1抗體。
  96. 一種抗體或其抗原結合片段，其結合補體組分5a受體1 (C5aR1)，該抗體或其抗原結合片段包含： SEQ ID NO: 14之重鏈可變區(VH)； SEQ ID NO: 25之輕鏈可變區(VL)；以及 經修飾之Fc域，其包含取代F234V、L235E及D265G。
  97. 一種抗體或其抗原結合片段，其結合補體組分5a受體1 (C5aR1)，該抗體或其抗原結合片段包含： 重鏈可變區(VH)，其包含SEQ ID NO: 6 (NYWMH)之HCDR1、SEQ ID NO: 7 (YLNPSSGYTKYAQKFQG)之HCDR2及SEQ ID NO: 8 (SGGDNYGNPYYFDR)之HCDR3； 輕鏈可變區(VL)，其包含SEQ ID NO: 9 (RASQSIVHSNGNTYLH)之LCDR1、SEQ ID NO: 10 (KVSNRFS)之LCDR2及SEQ ID NO: 11 (AQYTLVPLT)之LCDR3；以及 經修飾之Fc域，其包含取代F234V、L235E及D265G。
  98. 一種抗體或其抗原結合片段，其結合補體組分5a受體1 (C5aR1)，該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 69之重鏈及SEQ ID NO: 70之輕鏈。
  99. 一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其結合補體組分5a受體(C5aR1)，該雙互補位抗體或其抗原結合片段包含： 輕鏈，其包含SEQ ID NO: 9 (RASQSIVHSNGNTYLH)之LCDR1、SEQ ID NO: 10 (KVSNRFS)之LCDR2及SEQ ID NO: 21 (AQSTLVPLT)之LCDR3；以及 重鏈，其包含SEQ ID NO: 6 (NYWMH)之HCDR1、SEQ ID NO: 7 (YLNPSSGYTKYAQKFQG)之HCDR2及SEQ ID NO: 8 (SGGDNYGNPYYFDR)之HCDR3； 經修飾之Fc域，其包含取代F234V、L235E及D265G；以及 scFv，其包含SEQ ID NO: 22 (RSSQSLVHSNGNTYLN)之LCDR4、SEQ ID NO: 23 (KVSNRLS)之LCDR5、SEQ ID NO: 24 (SQSTHVPYT)之LCDR6、SEQ ID NO: 18 (AYAMS)之HCDR4、SEQ ID NO: 19 (SISTGGNTYYADSVKG)之HCDR5及SEQ ID NO:20 (GYQRFSGFAY)之HCDR6， 其中該scFv連接至該經修飾之Fc域。
  100. 一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其結合補體組分5a受體(C5aR1)，該雙互補位抗體或其抗原結合片段包含： SEQ ID NO: 15之第一輕鏈可變區(VL)； SEQ ID NO: 14之第一重鏈可變區(VH)； 經修飾之Fc域，其包含取代F234V、L235E及D265G；以及 scFv，其包含SEQ ID NO: 17之第二輕鏈可變區(VL)及SEQ ID NO: 16之SEQ ID NO之第二重鏈可變區(VH)， 其中該scFv連接至該經修飾之Fc域。
  101. 一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其結合補體組分5a受體(C5aR1)，該雙互補位抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 72之輕鏈及SEQ ID NO: 71之重鏈。
  102. 一種雙互補位抗體或其抗原結合片段，其結合補體組分5a受體(C5aR1)，該雙互補位抗體或其抗原結合片段包含： SEQ ID NO: 25之第一輕鏈可變區(VL)； SEQ ID NO: 14之第一重鏈可變區(VH)；以及 scFv，其包含SEQ ID NO: 17之第二輕鏈可變區(VL)及SEQ ID NO: 16之SEQ ID NO之第二重鏈可變區(VH)， 其中該scFv連接至Fc域。
  103. 如請求項102之雙互補位抗體或其抗原結合片段，其進一步包含經修飾之Fc域，其包含取代F234V、L235E及D265G，使得該scFv連接至該經修飾之Fc域。
  104. 一種抗體或其抗原結合片段，其結合補體組分5a受體1 (C5aR1)，該抗體或其抗原結合片段包含： SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)；以及 SEQ ID NO: 48之輕鏈可變區(VL)。
  105. 如請求項104之抗體，其進一步包含經修飾之Fc域，其包含取代F234V、L235E及D265G。
  106. 一種抗體或其抗原結合片段，其結合補體組分5a受體1 (C5aR1)，該抗體或其抗原結合片段包含： SEQ ID NO: 14之重鏈可變區(VH)；以及 SEQ ID NO: 15之輕鏈可變區(VL)。
  107. 如請求項106之抗體，其進一步包含經修飾之Fc域，其包含取代F234V、L235E及D265G。
TW111101545A 2021-01-13 2022-01-13 人源化補體５ａ受體１抗體及其使用方法 TW202246331A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163137089P 2021-01-13 2021-01-13
US63/137,089 2021-01-13
US202163274748P 2021-11-02 2021-11-02
US63/274,748 2021-11-02

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202246331A true TW202246331A (zh) 2022-12-01

Family

ID=80225529

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW111101545A TW202246331A (zh) 2021-01-13 2022-01-13 人源化補體５ａ受體１抗體及其使用方法

Country Status (12)

Country Link
US (4) US11912781B2 (zh)
EP (1) EP4277931A1 (zh)
JP (1) JP2024502863A (zh)
KR (1) KR20230142831A (zh)
CN (1) CN120309734A (zh)
AU (1) AU2022207985A1 (zh)
CA (1) CA3173944A1 (zh)
IL (1) IL304249A (zh)
MX (1) MX2023008302A (zh)
TW (1) TW202246331A (zh)
WO (1) WO2022155340A1 (zh)
ZA (1) ZA202306343B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI869528B (zh) * 2020-01-13 2025-01-11 美商威特拉公司 C5ar1抗體分子及其用途
CA3173944A1 (en) 2021-01-13 2022-07-21 Visterra, Inc. Humanized complement 5a receptor 1 antibodies and methods of use thereof

Family Cites Families (84)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5480974A (en) 1993-06-18 1996-01-02 The Scripps Research Institute Antibodies to human C5a receptor
CA2463879C (en) 2001-10-25 2012-12-04 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US8071096B2 (en) 2002-01-25 2011-12-06 G2 Therapies Ltd Anti-C5aR antibodies and uses thereof
US8658773B2 (en) 2011-05-02 2014-02-25 Immunomedics, Inc. Ultrafiltration concentration of allotype selected antibodies for small-volume administration
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
EP1553975B8 (en) 2002-09-27 2023-04-12 Xencor, Inc. Optimized fc variants and methods for their generation
WO2004043223A2 (en) 2002-11-05 2004-05-27 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for the diagnosis and treatment of sepsis
CA2512729C (en) 2003-01-09 2014-09-16 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant fc regions and methods of using same
US8084582B2 (en) 2003-03-03 2011-12-27 Xencor, Inc. Optimized anti-CD20 monoclonal antibodies having Fc variants
WO2004082568A2 (en) 2003-03-17 2004-09-30 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with complement component 5a receptor (c5ar)
AU2004266159A1 (en) 2003-08-22 2005-03-03 Biogen Idec Ma Inc. Improved antibodies having altered effector function and methods for making the same
US8101720B2 (en) 2004-10-21 2012-01-24 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions and substitutions
US8399618B2 (en) 2004-10-21 2013-03-19 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions, and substitutions
WO2005050199A1 (en) 2003-10-31 2005-06-02 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with g protein- coupled receptor 77 (gpr77)
WO2005060739A1 (en) 2003-12-24 2005-07-07 G2 Inflammation Pty Ltd Transgenic non-human mammal comprising a polynucleotide encoding human or humanized c5ar
SI1706424T1 (sl) 2004-01-12 2010-01-29 Applied Molecular Evolution Variante fc regij
EP2471813B1 (en) 2004-07-15 2014-12-31 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
AU2005335714B2 (en) 2004-11-10 2012-07-26 Macrogenics, Inc. Engineering Fc antibody regions to confer effector function
US20100166741A1 (en) * 2006-07-13 2010-07-01 Genentech , Inc. Altered br-3 binding polypeptides
JP2010501165A (ja) 2006-08-22 2010-01-21 ジーツー インフラメイション プロプライエタリー リミテッド 抗体の作製方法
ES2570153T3 (es) 2006-08-22 2016-05-17 Novo Nordisk As Anticuerpos anti-C5aR con propiedades mejoradas
WO2009005651A2 (en) 2007-06-29 2009-01-08 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Complement-mediated thrombophilic assay
EP2229410A4 (en) 2007-12-05 2012-07-04 Massachusetts Inst Technology AGLYCOSYLATED IMMUNOGLOBULIN MUTANES
RU2010138612A (ru) * 2008-02-20 2012-03-27 Джи2 ИНФЛЕММЕЙШН ПТИ ЛТД (AU) ГУМАНИЗИРОВАННЫЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ C5аR
US8940299B2 (en) 2008-02-28 2015-01-27 Case Western Reserve University Method of treating cancer
US20180256646A1 (en) 2008-03-06 2018-09-13 Case Western Reserve University Compositions and methods for modulating toll like receptor signal
CA2766565A1 (en) 2009-06-23 2010-12-29 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Bispecific antibodies that bind to complement proteins
JP5898082B2 (ja) 2009-10-07 2016-04-06 マクロジェニクス，インコーポレーテッド フコシル化程度の変更により改良されたエフェクター機能を示すＦｃ領域含有ポリペプチドおよびその使用法
EP2327725A1 (en) 2009-11-26 2011-06-01 InflaRx GmbH Anti-C5a binding moieties with high blocking activity
US8961967B2 (en) 2009-11-30 2015-02-24 Janssen Biotech, Inc. Antibody Fc mutants with ablated effector functions
US10053513B2 (en) 2009-11-30 2018-08-21 Janssen Biotech, Inc. Antibody Fc mutants with ablated effector functions
WO2011100477A2 (en) 2010-02-10 2011-08-18 Taiga Biotechnologies, Inc. Antibodies and processes for preparing the same
TWI667257B (zh) 2010-03-30 2019-08-01 中外製藥股份有限公司 促進抗原消失之具有經修飾的ＦｃＲｎ親和力之抗體
EP2647706B1 (en) 2010-11-30 2023-05-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule capable of binding to plurality of antigen molecules repeatedly
US11130801B2 (en) 2011-01-13 2021-09-28 Case Western Reserve University Method for inhibiting platelet derived growth factor signaling with C3aR or C5aR antibodies
US8952132B2 (en) 2011-02-07 2015-02-10 Research Development Foundation Engineered immunoglobulin FC polypeptides
MX352889B (es) 2011-02-25 2017-12-13 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo de fc especifico para fcyriib.
TWI743461B (zh) 2011-03-28 2021-10-21 法商賽諾菲公司 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白
ES2692268T5 (en) 2011-03-29 2025-02-26 Roche Glycart Ag Antibody fc variants
AU2012233313C1 (en) 2011-03-30 2017-08-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for altering plasma retention and immunogenicity of antigen-binding molecule
DK3424953T3 (en) 2011-06-06 2020-11-02 Novo Nordisk As Terapeutiske antistoffer
TWI687439B (zh) 2011-06-30 2020-03-11 中外製藥股份有限公司 異源二聚化多胜肽
JP6454547B2 (ja) 2011-07-06 2019-01-16 ゲンマブ エー／エス 抗体重鎖のｃ末端の修飾による補体依存性細胞傷害の調節
SG11201404751UA (en) 2012-02-09 2014-09-26 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Modified fc region of antibody
US10011660B2 (en) 2012-04-30 2018-07-03 Medimmune, Llc Molecules with reduced effector function and extended half-lives, compositions, and uses thereof
JP6628966B2 (ja) 2012-06-14 2020-01-15 中外製薬株式会社 改変されたＦｃ領域を含む抗原結合分子
CN104736174B (zh) 2012-07-06 2019-06-14 根马布私人有限公司 具有三重突变的二聚体蛋白质
AU2013289883B2 (en) 2012-07-13 2018-11-01 Zymeworks Bc Inc. Bispecific asymmetric heterodimers comprising anti-CD3 constructs
SG10201709559PA (en) 2012-08-24 2017-12-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fcγriib-specific fc region variant
US9790268B2 (en) 2012-09-12 2017-10-17 Genzyme Corporation Fc containing polypeptides with altered glycosylation and reduced effector function
WO2014177459A2 (en) 2013-04-29 2014-11-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-receptor binding modified asymmetric antibodies and methods of use
JP2016523829A (ja) 2013-05-08 2016-08-12 ノヴォ ノルディスク アー／エス Ｃ５ａｒアンタゴニストの使用
KR102332303B1 (ko) 2013-05-31 2021-11-26 자임워크스 인코포레이티드 감소되거나 침묵화된 효과기 기능을 갖는 이종다량체
SI3011345T1 (sl) 2013-08-07 2017-12-29 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Biomarkerski proteini za atipični hemolitični uremični sindrom (ahus)
JP6668345B2 (ja) 2014-11-21 2020-03-18 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 修飾された重鎖定常領域を含む抗体
KR101860280B1 (ko) 2014-12-19 2018-05-21 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항-마이오스타틴 항체, 변이체 Fc 영역을 함유하는 폴리펩타이드, 및 사용 방법
US10526408B2 (en) 2015-08-28 2020-01-07 Research Development Foundation Engineered antibody FC variants
US20180243370A1 (en) 2015-09-14 2018-08-30 Children's Hospital Medical Center Methods and compositions for treatment of gaucher disease via modulation of c5a receptor
CN106957366B (zh) 2016-01-12 2022-02-01 上海昀怡健康科技发展有限公司 一种C5aR抗体及其制备方法和应用
HRP20260151T1 (hr) 2016-08-02 2026-03-27 Visterra, Inc. Modificirani polipeptidi i njihova uporaba
KR20190057083A (ko) 2016-10-06 2019-05-27 글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 디벨로프먼트 리미티드 공정 불순물에 대한 결합이 감소된 항체
FR3058159B1 (fr) 2016-10-28 2022-02-25 Lab Francais Du Fractionnement Variants de polypeptide fc presentant une demi-vie augmentee
EP3576793A4 (en) 2017-02-06 2021-03-31 Dana Farber Cancer Institute, Inc. COMPOSITIONS AND PROCEDURES FOR ENHANCING ANTIBODY-MEDIATED RECEPTOR SIGNALING
CN113603780B (zh) 2017-03-28 2022-07-01 礼进生物医药科技（上海）有限公司 用于增强肿瘤微环境中免疫应答的治疗剂和方法
TWI826364B (zh) 2017-04-03 2023-12-21 德商因夫萊亞斯有限公司 活性抑制劑於發炎性疾病之治療
CA3120566C (en) 2017-04-07 2023-12-12 Kookmin University Industry Academy Cooperation Foundation Antibody fc variants for increased blood half-life
US20200148779A1 (en) 2017-05-25 2020-05-14 Bristol-Myers Squibb Company MODIFIED IgG1 Fc DOMAINS AND ANTI-CD40 DOMAIN ANTIBODY FUSIONS THEREWITH
US20200299400A1 (en) 2017-05-25 2020-09-24 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies comprising modified heavy constant regions
EP3635005A1 (en) 2017-06-07 2020-04-15 Genmab B.V. Therapeutic antibodies based on mutated igg hexamers
TWI786132B (zh) 2017-06-23 2022-12-11 德商因夫萊亞斯有限公司 活性抑制劑於發炎性疾病之治療
CA3078732A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Chemocentryx, Inc. C5ar inhibitor reduction of urinary scd163
CA3274059A1 (en) * 2017-12-13 2026-03-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-c5 antibody combinations and uses thereof
CN117924477A (zh) 2017-12-19 2024-04-26 洛克菲勒大学 具有改进的效应子功能的人IgG Fc结构域变体
US20210070860A1 (en) 2018-03-21 2021-03-11 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Fc variant compositions and methods of use thereof
US20200376135A1 (en) 2018-10-23 2020-12-03 Magenta Therapeutics, Inc. Fc silenced antibody drug conjugates (adcs) and uses thereof
EP3887397A1 (en) 2018-11-28 2021-10-06 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies comprising modified heavy constant regions
JP7617012B2 (ja) 2019-03-14 2025-01-17 モルフォシス・アーゲー Ｃ５ａＲを標的とする抗体
MA55818A (fr) * 2019-04-29 2022-03-16 Immunogen Inc Anticorps et immunoconjugués de fr-alpha biparatopique
US20220306735A1 (en) 2019-08-30 2022-09-29 University Of Kansas Compositions including igg fc mutations and uses thereof
TWI869528B (zh) 2020-01-13 2025-01-11 美商威特拉公司 C5ar1抗體分子及其用途
WO2021180063A1 (en) 2020-03-09 2021-09-16 I-Mab Biopharma Co., Ltd. Methods for detecting and quantifying biological modifications in antibodies
PH12022552556A1 (en) 2020-03-27 2024-04-22 Inflarx Gmbh Inhibitors of c5a for the treatment of corona virus infection
CA3173944A1 (en) 2021-01-13 2022-07-21 Visterra, Inc. Humanized complement 5a receptor 1 antibodies and methods of use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
US20220356263A1 (en) 2022-11-10
US12264203B2 (en) 2025-04-01
US20240392029A1 (en) 2024-11-28
AU2022207985A1 (en) 2023-07-06
MX2023008302A (es) 2023-09-25
IL304249A (en) 2023-09-01
US20250002603A1 (en) 2025-01-02
CN120309734A (zh) 2025-07-15
US20250171555A1 (en) 2025-05-29
EP4277931A1 (en) 2023-11-22
JP2024502863A (ja) 2024-01-23
US12227587B2 (en) 2025-02-18
KR20230142831A (ko) 2023-10-11
WO2022155340A1 (en) 2022-07-21
CA3173944A1 (en) 2022-07-21
ZA202306343B (en) 2024-03-27
US11912781B2 (en) 2024-02-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7612658B2 (ja) 抗ｍｓ４ａ４ａ抗体、及びその使用方法
US20250171555A1 (en) Humanized complement 5a receptor 1 antibodies and methods of use thereof
JP7699927B2 (ja) 抗ｔｒｅｍ－１抗体およびその使用
JP2021511830A (ja) ＦｃＲｎへの増強された結合及び延長された半減期を有するＦｃ変異体
JP2025098167A (ja) Ｆｃｒｎアンタゴニストで抗体媒介性障害を処置する方法
WO2022002036A1 (zh) 一种双特异性抗体及其用途
CN115867352A (zh) 抗α4β7抗体
TW202315888A (zh) 抗vegfr1抗體及其用途
CN118546253A (zh) 针对人trem-1的抗体及其用途
WO2023108115A1 (en) Ph-selective antibody fc domains
CN117377688A (zh) 人源化补体5a受体1抗体和其使用方法
HK40128818A (zh) 人源化补体5a受体1抗体和其使用方法
EA052464B1 (ru) ГУМАНИЗИРОВАННЫЕ АНТИТЕЛА К РЕЦЕПТОРУ КОМПОНЕНТА КОМПЛЕМЕНТА 5a ТИПА 1 И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
TW202607021A (zh) 結合ｔｓｌｐ之抗體及使用方法
TW202409089A (zh) １型大麻素受體結合蛋白及其用途
CN118103404A (zh) 抗vegfr1抗体及其用途
WO2024032662A1 (zh) 一种靶向pd-1和vegf的抗体及其应用
WO2024226943A1 (en) Molecules for modulating the immune system and uses thereof
BR122024013054B1 (pt) Método in vitro para produzir um anticorpo humano antialfa-4-beta-7, usos terapêuticos de um anticorpo humano anti-alfa-4-beta-7 e composição farmacêutica compreendendo um anticorpo humano anti-alfa-4-beta-7
BR122024013054A2 (pt) Anticorpo monoclonal humano anti-alfa-4--beta-7
BR112023000718B1 (pt) Anticorpo monoclonal anti-alfa-4-beta-7 humano