TW536623B

TW536623B - Methods for performing fibrinogen assays using dry chemical reagents containing ecarin and magnetic particles

Info

Publication number: TW536623B
Application number: TW088110325A
Authority: TW
Inventors: Patrick D Mize; William B Studabaker
Original assignee: Cardiovascular Diagnostics Inc
Priority date: 1998-06-25
Filing date: 1999-06-21
Publication date: 2003-06-11
Also published as: US6165795A; JP2002519635A; CA2335825A1; JP2008224687A; AU763074B2; BR9911467A; AU4954699A; AR020096A1; JP5016554B2; WO1999067630A1; KR20010071593A; EP1088223A4; EP1088223A1

Description

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 536623 A7 B7 五、發明說明（1 ) 發明背景發明範疇本發明關於用於使用含有艾卡侖，且呈乾化學或液難化學形式之試劑，進行纖維蛋白原測定的方法及分析系統。背景之論述一般用做爲臨床分析之凝血作用測定，係測量形成血纖維蛋白凝塊所需的時間。凝血作用測定尤其被用於薛檢、診斷、及監測正接受抗凝血治療之患者。有許多類型之凝血作用測定法。此等包括：凝血酶原時間（PT);部分凝血酶原時間（PTT);經活化部分凝血酶原時間（ΑΡΤΤ);纖維蛋白原測定（亦即，測量樣本中可凝塊纖維蛋白原之濃度）；凝血酶時間，亦已知稱爲凝血酶凝固時間（TCT);經活化凝塊時間（ACT);等。此等測定法中最常進行者爲凝血酶原時間。凝血酶原時間測試及經活化部分凝血酶原時間測試，爲各別常用於測定患者形成凝塊能力之臨床測試。此等測試，及其他以上所提及之測試，已廣泛由醫院、診所、及實驗室使用，以對心臟病患者及其他患者進行手術前許估，與決定抗凝血劑療法之施用。此等測試各係以時間測量爲基礎，且大部分係測量所謂的終點或凝血時間，其發生於纖維蛋白原被聚合成血纖維蛋白凝塊時。血漿或含檸檬酸鹽全血中可凝塊纖維蛋白原濃度之測足，對研究患者凝血障礙，及對於依循（監測）影響纖維蛋白原之藥物治療方面爲重要的。免疫學方法與凝血作用 -4- 摊國國家標準（CNS)A4規格⑵G χ 297公爱y -----』---·.----------訂---------· (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 536623 A7

536623 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（3 ) 游理學廣疗（1974) 61 (6):828-833 )，力普斯康（美國專利案第4,720,787號），赛圖等人（美國專利案第4,217J07 號），包爾曼等人（美國專利案第4,289,498號），葛羅斯等人（美國專利案第3,458,287號），艾奇柏格等人（美國專利案第4,047,890號），貝克等人（美國專利案第4,692,406 號），卡拉漢等人，”得自RT凝塊反應之半定量纖維蛋白原測定法”，技術會報Tech· THR8804，著作權1988屬有機技術公司，德罕，N.C·，USA，及卡羅等人”凝塊特徵與凝集測試之新穎層面” 1989年7月，正診斷系統股份有限公司，拉里坦，N.J,，USA。除可於如上所述之克勞斯方法中，藉由凝血速率方法進行測定外，纖維蛋白原可藉由於經章麥倫等次C/iw. Chem. deία (1963) 8:418-424 )所修飾之克勞斯方法中的凝血速率方法，或藉由亞硫酸鹽沈澱法，雷普林等人（C/m. C/ (1976) 67:43 )，或藉由雷特諾夫等人之總可凝集纖維蛋白原方法（J· L政 C//«· JWW· (1951) 37.316-320 )，或藉由度邦所販售以測量纖維蛋白原轉化成纖維蛋白聚合物之混濁速率爲主的分析系統（度邦Aca tm，度邦臨床系統，威明頓，Del· USA )進行測定。章麥倫等人之方法係使用玻璃勾或白金環，於凝集混合物中持續進出移動，直到指示到達終點之纖維蛋白網狀物出現。藤床背景現今，在美國每年有750,〇〇〇件急性心肌梗塞個案，且有超過百萬件其他動脈栓塞性事件、肺栓塞（pE)與深部 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 ----訂--------- -6 -

536623 A7 B7 五、發明說明（4 ) 靜脈血栓形成（DVT)之組合個案。此等個案之大約25%至 35%爲血栓溶解療法之可能施用者。此項療法包含靜酿内投藥纖維蛋白溶解劑，以促進閉合之血塊溶解。然而，該項療法導致0.5%比例之心臟内出血，及1%至2〇0/〇比例之明顯心臟外出血。目前，仍無方便、可靠且快速之診斷儀器可供監測血栓溶解療法。現正面臨之一項挑戰爲，如何對血栓溶解療法進行較佳控制，以使其功效達最大，而使出血問題之危險減至最小。雖然尚未有簡便診斷分析已對此項挑戰做出回應，但是具有其他指示劑之纖維蛋白原診斷分析，可改善該療雖然纖維蛋白原測量在臨床上難以正確且方便地達成，其於血栓溶解療法上仍爲一項重要參數，尤其是關於出血危險之評估，及-旦發生出血時之治療管理。測量原始纖維蛋白原減少，甚至其係與纖維蛋白選擇性試劑例如重組型組織胞漿素原活㈣㈣A)相關，铸可料確定溶解程序已經開始。此對其他纖維蛋白選擇性試劑例如鍵 ^直尿激酶及阿尼鏈菌酶同樣重要，因爲此等藥劑係藉由全身性溶解功效進行作用。在許多現存用於纖維蛋白原測定之先前技#方必需將血液濃縮，因爲血液細胞會干擾結象產::離耗時，而增加分析所需之總時數。此寺人爲假象產生自胞漿素對各種與血液凝集質，包括纖維蛋<蛋白原本身的作用。此於活體外發生於血液 :297公釐） # 本赚^度適用中國國家蘇 536623 A7 B7 五、發明說明（5 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製樣本已經採收之後。甚至達數分鐘之延遲產生不正確之結果。欲解決此問題之一項方法係使用胞漿素或胞漿素原活化劑做爲添加劑’加至血液收集管中以使樣本於試驗之前保持完整。然而，抑制劑之使用增加額外的花費，且亦限制可能於後續對該樣本所進行功能性分析之範園。如本文前述所指，過去曾使用以鏈激酶進行之凝血酶時間測試’確立於DVT及PE中存在溶解功效，而其中對抗鏈激酶之抗體會中和一部分功效。能夠藉由將一滴全血加至乾式化學測試卡’而進行之方便、快速且正確的纖維蛋白原測定’係對現今有助於使血栓溶解療法最適用於特殊患者之診斷潛能的_著改良。此外，此類系統之診斷能力可幫助許多現今正進行研發之新穎血栓溶解藥劑進行臨床試驗。因此，顯然有需要此類分析。去纖維蛋白劑安克洛酶（一種得自馬來半島洞穴毒蛇 /*/2〇而1^〃〇/^)經純化之蛇毒組成分）之治療應用，包括治療局部缺血性休克、罹患肝素謗導性血小板減少（HIT)患者之肝素替代療法、不穩定心絞痛、及再狹窄。局部缺血性休克爲腦中血流因血塊或血栓造成阻斷所成之結果。纖維蛋白原爲凝血酶之天然受質。凝血酶會將纖維蛋白原肤A與B 一者裂解，而使所成之纖維蛋白進行聚合及交聯作用，伴随纖維蛋白凝塊產生。纖維蛋白原亦藉由安克洛酶（一種絲胺酸蛋白酶，其裂解纖維蛋白原肽A而非裂解B)啓動作用。此不完全加工產生一種經聚合，而不進 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 ----訂--------- 4. -8- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 536623 五、發明說明（6 ) 行又聯作用之纖維蛋白。安克洛酶亦具有其他蛋白酶活 11，並催化纖維蛋白A鏈上其他位置之裂解。由安克洛酶所造成纖維蛋白原之不完全加工，及纖維蛋白之進一步分解可造成活體外胞漿素原活化作用，而依序進一步分解纖維蛋白’並導致纖維蛋白分解產物（FDP)被肝臟去除。纖維蛋白原濃度之顯著減低造成血栓形成減少，並降低血液黏度。此二種因子（與纖維蛋白溶解級聯之可能活化作用）’可增加於造成絕血性休克之凝塊區域中的血液流動。此對患者而言似乎增加正面的結果。正面結果係與顯著減低（但未完全消除纖維蛋白原）相關，因爲若無纖維蛋白原存在，會造成無法控制之出血。因此，需要進行護理點（POC)測試，以幫助計量安克洛酶之灌流，並確保使纖維蛋白原濃度保持在適當程度。將血液樣本運送至測試中心實驗室實在浪費時間，且抑制醫師應用療法之能力。將樣本運送至中央實驗室亦使安克洛酶有時間進一步將 I本去纖維蛋白原。此可能誤導醫師使用所需將患者維持於有效治療範園内之安克洛酶量。POC類型分析將使能立即測定出纖維蛋白原濃度，並正確判斷所需之療法。使用乾式化學方法之POC測試業經揭示於美國專利案第 4,849,340 ; 5，110,727，· 5,350,676 ; 5,601，991 ; 5,658,723 號；5,670,329及5,677，133，其内容皆併入本文做爲參考文獻。美國專利案第5,350,676號揭示一種使用振動磁場及乾式化學試劑之纖維蛋白原測試。美國專利案第5,67〇,329 號揭示一種使用旋轉磁場之纖維蛋白原測試，其可提供高 -9- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -----------7—^^ 裝---- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂--------- 536623 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明σ ) 度正確ι纖维蛋白原測量，而彼等係與使用纖維蛋白計 (工業上之w金成色，，）的測量法高度相關。不幸地’此等方法（代表性地使用凝血酶或蛇毒凝血酶試劑）易受血細胞比容混淆。因此，需要使用此類乾式化學技術’但不受血細胞比容混淆之p〇c分析法。發明概述於是’本發明之一目的在於提供，以不受血細胞比容混淆之纖維蛋白原爲主的乾式化學法。本發明之一目的在於提供，使用適用於習知克勞斯類型液態分析之艾卡侖的纖維蛋白原測定法。本發明之一目的在於提供，相對上對肝素較不靈敏之纖維蛋白原測定法。本發明之一目的在於提供，用以進行該纖維蛋白原測定法之套組。本發明之此等及其他目的已藉由發現供進行該纖維蛋白原測定之方法達成，其包含：將全血或自血液衍生得之樣本，與包含艾卡侖之纖維蛋白原測定試劑接觸，而藉此形成纖維蛋白凝塊或血塊，並將纖維蛋白凝塊之形成與樣本中之纖維蛋白原含量產生關聯，其中該纖維蛋白原測定試劑可爲乾式化學或液態化學形式，且以適用於此類測定之裝備與反應玻片進行。圖式之簡诚經由參照以下詳細説明，並結合所附之相關圖式，可更 -10- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） • t—I -----；—Aw -----—訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 536623 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（8 ) 完整呈現本發明，且可更清楚瞭解其所附隨之優點，其中數圖式中所具有之相同或相對應部分，係已類似之參考數字表示。圖1爲可用於進行本發明供測量血液或自血液衍生得之樣本中可凝結纖維蛋白原濃度之（終點或動力學）方法的可組合式反應玻片之展開表現圖；圖2爲反應玻片與供使用磁粒子測量該反應之裝置的縱向垂直剖面圖；圖3説明用於纖維蛋白原測定之凝血曲線，其中a代表粒子振動之最大振幅，而B代表後續粒子振動之後高峰最小振幅；圖4顯示額外可用做爲用以建構供測量纖維蛋白原之特別演算法的參數，之動力學凝血波形性質。圖5列示用於艾卡侖測定法對巴托索賓測定法之a/b比値的比較。圖6列示對含有各種纖維蛋白原濃度之血漿樣本，之艾卡命與巴托索賓乾式化學測定法的凝血時間倒數反應。圖7列示以液體爲主之艾卡侖測定法的凝血時間倒數反應。圖8列示使用以巴托索賓爲主乾式化學測定法測量反應之A/B所得的劑量-反應曲線。圖9列示使用以艾卡侖爲主乾式化學測定法測量反應之 A/B所得的劑量-反應曲線。較佳具體實施例之詳述 -11- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） —t—.—^裝--------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 536623 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製、發明說明（9 逐漸有需要研發出用以有助於抗凝血劑療法施用之診斷万法。快速檢定纖維蛋白原測量之發展，爲確定對患者可產生幫助之領域。此外，簡單、快速、方便之纖維蛋白原’則4 ’除了血栓溶解療法範圍以外，尚可具有其他應用例如·用於處理手術後出血·，用於手術前評估·，用於罹患肝病之患者或肝臟移植後患者，用於彌漫性血管内凝血 jDlC)患者，用於監測絕血性休克之安克洛酶療法與肝素謗導性血小板減少，以及做爲供評估患者臨床上出血之一般工具。本發明説明並解決於此等現存測定系統中所發現之缺點。已顯示血細胞比容爲纖維蛋白原分析之一項混淆因素了藉由將血漿樣本稀釋10-20倍，而使血細胞比容對克勞斯類型分析之影響減至最低。本發明之測定法提供一種對血細胞比容相對上較不靈敏之纖維蛋白原測量。此項測定法之關鍵在於使用非直接作用於纖維蛋白原之試劑，而是間接地以艾卡侖做爲該試劑之方式進行。已顯示肝素會加長克勞斯類型分析之凝血時間，特別是在间濃度下（>〇.5U/亳升）。此導致人爲上減低由習知分析所計算得之纖維蛋白原濃度。可調整分析組成，以消除肝素之影響。纖維蛋白原測定之另一項關注點爲纖維蛋白分解產物（FDP>之一般影響，且特別是安克洛酶治療所產生者。FDP已知會影響克勞斯類型分析，以致此干擾可能見於參考方法以及乾式_化學方法中。可藉由選擇正確凝集酵素而使FDP影響減至最低。纖維蛋白原結構可能因 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 -12 - 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 536623 A7 ______ B7 五、發明說明（1〇 ) 人而異，且於不同分析中影響所存在之纖維蛋白原濃度。本發明提供使用艾卡侖做爲分析試劑，且以偵測所併入該測定反應之磁性粒子移動爲主的新穎纖維蛋白原測疋。艾卡命’爲一種得自毒蛇之蛋白質凝血酶原活化劑，係由科那利克等人於1969年所分離。艾卡命藉由凝血酶原之鈣-依賴性活化作用，而使含檸檬酸鹽全血或血漿產生凝塊。艾卡侖已由莫利塔等人特徵化，且由科那利克與布隆貝克鑑定爲具有分子量爲55-6〇千遒耳頓之單鏈糖蛋白，其呈現受EDTA、谷胱甘肽、半胱胺酸、及巯基乙醇所抑制之金屬蛋白酶活性。共通之絲胺酸蛋白酶抑制劑例如二異丙基-氟磷酸（DFP)、大豆胰蛋白酶抑制劑（SBTI)、卵類黏蛋白及抑蛋白酶肽並不使艾卡侖失活。艾卡侖催化人類凝血酶原分子中323Arg-324Ile键結之水解性裂解，藉此產生凝血酶活性而不會釋出任何酶原片 #又°此具活性之凝血酶原形式經命名爲縮減型凝血酶。縮減型凝血酶不受肝素-ATIII複合物抑制。縮減型凝血酶作用於纖維蛋白原，而於纖維蛋白原測定中形成凝塊。於本發明纖維蛋白原測定中使用艾卡佘實有助益，因爲： lm艾卡命及縮減型凝血酶不受肝素（爲通用之抗凝血劑）抑制。肝素會混淆許多使用凝集劑凝血酶（其直接作用於纖維蛋白原）之市售測定法的結果。 2·艾卡侖於整個測定過程中產生縮減型凝血酶，其增加用於含有低（20_100毫克/分升）及高（2〇〇-3〇〇毫克/分升） 1 ‘---^--裝--------訂------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 禮· -13-

136623 五、發明說明（11 消 =維蛋白原濃度之臨床樣本，的A/B (見下文）値間之變〜3·相較於許多市售测定法，本發明以艾卡侖爲主之測足法’對纖維蛋白原之靈敏度增加，可重複性增加，且動力學範園增加。如上所指，於本發明之测定法中，係將其中包埋入多數磁f粒子之乾燥試劑基質，接受振動或旋轉磁場，較佳係接受振動磁場。振動或旋轉磁場可根據先前所引述併入參考之美國專利案第5,350,676號或第5,670,329號。 *、、：後將全血或自血液衍生得之樣本加至該試劑中，使其變爲可溶，而藉此使粒子以受振動磁場謗發之振動圖型自由運動。如美國專利案第5，110,727號所詳細論述者，於磁場之影響下，呈自由態之粒子形成圓柱形結構或堆積，其 (於振動磁場之影響下）由於此等圓柱形結構或堆積之位向改變，而產生閃爍圖案。粒子之振動係藉由使該等粒子接受入射光，並偵測反射 (散射）光線而以g測法測定得。在將樣本加至乾燥試劑基質之前’受陷於該乾燥試劑基質中之磁粒子並無法振動。待磁粒子因樣本添加至乾燥試劑基質中而呈自由後，可觀察到極大多數以粒子爲主之圓柱形結構或堆積振動達最大程度，而給予最大振動幅度，如圖3之A中示。當反應進行時，血塊形成限制所增加數量之，以粒子爲主圓柱形結構或堆積的振動程度。此於閃爍圖案之少，產生殘餘之後高峰最小振幅，如圖3中之B所示。態已所減訂 14 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 536623 A7

五、發明說明（12 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製於本發明測定法中，係偵測相對於該振動磁場之粒子運動程度，以測量該項測定之起始時間與終止時間，或使用該動力學曲線之一或多項性質（非指凝血時間），以測量樣本中纖維蛋白原濃度。於本發明血液凝集監測系統中，據認爲較高之纖維蛋白原濃度產生限制粒子振動達較大程度之纖維蛋白凝塊，而因此導致高峰訊號後之最小振動訊號降低。如圖4中所示，凝血曲線複雜。於1開始，出現粒子振動之第一次指示。磁粒子振動之數値明顯。以目測偵測得磁粒子振動之數値，從位於1之分析起始點增加至分別位於波包跡面上方及下方之2與2’處高峰。位於高峰處之振動訊號振幅，係以A表示並以介於2與2, 之訊號差列示圖4中。A所發生之時間（tA )爲凝血時間。沿著位於頂點之波形包跡面軌跡而下，振幅在“後減少。列示出叫、m2、及m3三點。點mi&m3係於任意但固定時間選得。點m2係選擇爲折反點。於點叫、m2、或m3所採之曲線斜率可用做爲纖維蛋白原之測量，因爲此等斜率於最1¾纖維蛋白原濃度下爲最陡靖（負値最大），並隨著減低纖維蛋白原而變得較不陡峭。於ΓΠ3後，振動訊號振幅隨著時間增加而持續減低，最後達到漸進線値B。纖維蛋白原濃度對A/B及對（A-B)/A成比例。纖維蛋白原濃度相反地亦對B成比例，且直接對A-B 成比例，但是一般此等參數單獨較A/B或（A_B)/A不準確。其他較準確纖維蛋白原濃度之測量，爲藉由將動力學曲 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） . ， ^裝·-------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 536623 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（13 ) 各部分整合所得之面積。例如’以左邊介於長度或振 -〈2與2’間所延伸的直線；右邊之振幅b，（其中：&爲 2於時間tB，處之曲線振幅；且代表性地tB，係、於介於t^i〇二間且爲tB(至多90%’而更具代表性地爲。之6〇%的時知處取得）’而藉由位於頂點與底點之波形包跡面所定義 I面積係命名爲阿伐，且與樣本中之纖維蛋自原濃度成反比。可使用另一種命名爲β之面積。β等於具有以量A爲長邊，及以量4爲短邊所成矩形之面積減去命名爲α之面積所得之値。於圖4中β經列示係由兩部份所組成：一爲上部 β!及下部β2。經由振幅Β延伸，並與於點2與2。處和量八直線垂直所得之平行線4及4,交叉所得之直線，有助於界定出β的右邊界。β直接與纖維蛋白原濃度成正比，且非常準確。 β與α亦可組合使用，亦即以指示纖維蛋白原濃度之比例或差値取彳于。此外，α與/或β可獨立於時間計算得，例如藉由通常使用tB爲供面積計算之水平測量値（參見圖4)。圖5顯示對於併入蛇毒凝血酶之乾式試劑玻片，及由所匯集正常血漿所組成，經稀釋於各種量缺乏纖維蛋白原血漿中之含擰檬酸鹽血漿樣本，某些凝血曲線之動力學參數如何隨著纖維蛋白原濃度而變化。本發明因此提供使用磁粒子乾式化學技術之纖維蛋白原測量法。此用此途徑，纖維蛋白原可以下列任一種方法進行測量。 -16- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

^ ^ 裝--------訂------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 536623 A7 五、發明說明（14 雖然毛細管玻片幾何學，例如於美國專利案第 4,849,340 ； 5,110,727 ； 5,350,676 ； 5,601,991 ; 5,658,723 號；5,67〇,3；29或5,677，1；33，其内容皆併入本文做爲參考文獻，理想地適用於產生適當之成圖形式、掩蓋試劑、及監測樣本，但是本發明之測定法可藉由，簡單地將預定量含有磁粒子之乾試劑，加至任何固體表面（例如，微量滴走平盤槽或實質上平整之表面）而完美進行。雖然本技術之較佳具體實施例爲乾化學形式，該使用艾卡命之測定法亦可以液態化學形式於習知實驗室分析儀（例如”血纖維蛋白計”，爲工業上使用之金成色纖維蛋白原分析儀，或血栓分解儀（市售可購自歐岡諾（〇rgan〇n)科技公司）上進行。訂重要地係將乾燥試劑製備成，使其於添加血液或自血液衍生得樣本時可快速溶解者。以於表面（甚或較佳地）於兩介於毛細距離，或幾近毛細距離之表面，間進行冷凍乾燥所得結果最佳。此產生具有低物質含量，而能夠使樣本快速穿透並溶解之物質。雖然冷凍乾燥提供用以製備含有試劑之乾式磁粒子的優良結果，仍可使用室溫、眞空、乾燥劑、對流、或其他類型乾燥法，以達到良好結果。例如，將置於反應玻片（於適當位置裝設隔片）上之試劑進行室溫乾燥，隨後加蓋而可獲得含有自我計量乾燥試劑之組件。於一種較佳具體實施例中，係使用如圖⑴所説明之反應玻片。圖1爲列示該玻片之蓋（10)、覆蓋板（2〇)及基惠㈣ 17- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 536623 A7 __ B7 五、發明說明〇5 ) 組成相關位置之剖開圖。蓋（10)包含對光透明之薄玻璃或聚合物薄板，其中具有樣本接受開口（14)，與幾近於蓋子末端（16)之細長開口（ 12)。覆蓋板（20)包含代表性爲透明之薄玻璃或聚合物薄板，其中具有開口（該開口具有實際上如所示形成樣本槽 (22)之幾何形狀），反應室（24)及將反應室與樣本接受開口相連之視需要導管（26)。因此，覆蓋板（20)之開口可具有形成樣本槽（22)與反應小室（24)彼此相連之幾何形狀，或實質上如所示包含樣本槽（22)、反應室（24)與導管（26)之幾何形狀。反應室（24)於將蓋子、覆蓋板及基底組合時，可限定反應之體積。有利地，逐漸縮減之壁（25)形成導管（26)與樣本槽（22)，或若未使用導管（26)時，其與反應室（24)間之過渡段。如所示覆蓋板遠端於（29)處閉合。基底（30)包含代表性爲透明之玻璃薄板或聚合物材料，其多少較蓋（10)或覆蓋板（20)厚。如圖中所示，蓋（10)之長度（圖中之左邊至右邊）與大約覆蓋板（20)的長度相同，而蓋（10)之寬度（圖中之頂點至基底）與覆蓋板（20)的寬度大約相同，且代表性地小於基底（30)的寬度。當蓋子、覆蓋板及基底組合時，蓋（1〇) 之底面（面向基底（30)者），與基底（30)上表面間之距離小至，足以使相當於反應室體積之樣本體積可藉由毛細作用同時吸入反應體積中。此作用可因通口（12)之存在而可行。於使用時，將反應室（24)充以含有均勻分散之磁顆粒 β ^--------訂------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -18-

536623 Α7 Β7 五、發明說明（16 ) 的乾燥試劑。圖2提供反應玻片與用以使用磁粒子測量該項分析之裝置的縱向垂直剖面圖。於此圖中，反應玻片係裝置於緊鄰固定式磁石（195)處。於磁石（195)下方爲由電力供應來源（199)所驅動之電磁鐵（196)，使電壓以所欲頻率進行開與關之循環。於實施本發明時，可使用上述之固定式磁石 (無電磁石），藉由將該固定式磁石沿著實質上與反應玻片平面平行之平面來回移動，而以該固定式磁石產生振動磁場。於另一種具體實施例中，係使用上述之電磁石以產生振動磁場。又另一種具體實施例中，實質上如圖2所示係使用之此等磁石。可發散一級光之光源，例如紅外光、近紅外光，適用於對反應室提供入射光，並且裝設偵測器或感應器，以於反應體積（66)中，自樣本所反射（散射）出之光線。反射光 (以箭號（198)表示）係經由偵測器（4〇〇)偵測得。偵測器 (400)可位於任何使能偵測出反射（散射）光線之位置上，但是以介於90。與10。位置較佳，而以介於9〇。與45。位置爲更佳，且以介於90。與75。位置爲最佳。凝塊形成動力璺徐溽經濟部智慧財產局員工消費合作社印製與足以將pH値控制於習知技藝已知之範園（代表性地 6·5至8.0)内的緩衝液一起，用於本測定法之試劑含有其量足以造成正常血漿或含擰檬酸鹽全血凝集，具有幾近最小之Β値加磁粒子，代表性地爲8 3亳克每毫升，但可於廣範圍内變化（參見美國專利5，11〇 727 )。血液樣本正常下益 -19-

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五、發明說明（17 ) (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 不需要稀釋，且可直接加至乾式化學測定混合物中。然而可對此具體實施例而言，亦可能進行某程度稀釋，至1:2 (以體積計）之内，且最佳不超過1:4 (以體積計），且若希望可以此使用。於某些個案中，例如於非常高纖維蛋白原濃度下，可有利地使用稀釋達1:10 (以體積計）或甚至達1:20 (以體積計）。爲此理由，各種用於調配供與磁粒子組合，之乾式試劑的凝集試劑正確量並無法詳加記載，但如各具體實施例所述，可以功能性測定此等凝血試劑之定量。緩衝液種類與濃度可能較pH値不重要。一般可使用通用於血液凝集反應之緩衝液。而其中以〇wrens、HEPES、及Tris爲較佳。於本發明中，乾式_化學配劑較佳地含有艾卡侖，與視需要存在之成分例如纖維蛋白聚合抑制劑、鈣、一或多種緩衝劑、及/或一或多種安定劑。該等組成可較佳地以下列濃度使用：（所述之濃度爲添加樣本及重建該乾式-化學試劑後之最終分析濃度）：艾卡侖或其他凝血酶原抑制劑-0.1至5.0 U/亳升，較佳係〇·4至1.6 U/毫升，最佳係約0.8 U/毫升。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製纖維蛋白聚合抑制劑（較佳係Gly-Pro-Arg-Pro ) _ 1 .〇至1000微克/毫升，較佳係5至100微克/亳升，最佳係約25 微克/毫升。躬· 1 ·〇至12.5 mM，較佳係1 ·0至6·0 mM，最佳係3.0 mM。順磁性氧化鐵粒子（PI〇P)_ L0毫克/亳升至5〇毫克/亳升，較佳係3至15毫克/毫升，最佳係約8.3毫克/亳升。 -20- 本紙張尺度適財國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐) -- 536623 A7

五、發明說明（18 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製一或多種供冷凍乾燥之添加劑與/或安定劑，包括分子量爲5〇0-50,000之聚乙二醇（PEG)，量爲i至1〇〇〇毫克/毫升之糖類包括乳糖、麥芽糖、蔗糖等類，量爲〇1至1〇毫克/ 亳升之牛血清白蛋白（BSA)。一或多種用以使pH値保持於6·5至8·〇 (較佳地7.0至 8.0，最佳地約7.8)之緩衝液。緩衝劑可爲任何適於與血液產品（特別是該等如上所列示者）使用之習知緩衝劑。其他因素可能影響效能，例如上數所列舉之添加劑。而且’選擇最適之pH値與緩衝劑，有時可視所選之試劑而定。亦方便地使用特定添加劑，以增進該乾試劑之溶解特性，且使磁粒子於溶解時可分散較佳。正確量可取決於凝血劑之性質，並可隨各組之數目而有所不同。於本文所述之架構中，此等變數之最適化係習於該項技藝之能力範園内0 爲使用凝塊形成動力學測量纖維蛋白原，較佳地不使用凝血時間。而是，利用反應出凝血曲線（列示於圖3及4 ) 中性質之動力學參數。於圖3中，A爲高峰高度之最大値（最大振幅，B爲最小値（剩餘高峰最小値），其係於到達a 之後觀察得。 A與B(或僅B )係用於測定與樣本中纖維蛋白濃度成比例之因數。可使用下列測量値：（i) B單獨；（ii) A/B (或 B/A ) ; (iii) A-B ;或（iv) (A-B)/A或 A/(A-B)。另供選擇地，如圖4中所示，可使用介於A與B間之負斜率（例如位於或幾近折反點者）。如圖4中所示，又另供選擇者爲由凝血 -21 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 ——訂--------- 536623 A7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制农五、發明說明（19 ) 曲線所涵括之面積。此面積可以位於高峰處及A後所設足之時間點（例如45秒）的垂直軸爲邊界。其中：a經正常化而因此使其對各分別之測定曲線而言爲相等。查LA時間方法（克勞斯猶剞）所使用試劑含有其量足以控制pH値之緩衝劑，以及其濃度足以造成正常血漿或含檸檬酸鹽全血凝集之艾卡侖，而隨著艾卡侖濃度增加具有些許高於所得絕對最小値之B 値’且磁粒子濃度代表性地爲8 · 3毫克每亳升，但可於廣範園内變化（參見美國專利5，110,727 )。於此具體實施例中，首先將欲雙測定之血液樣本以緩衝劑-受質組合物稀釋。緩衝劑可爲任何習用之缓衝劑，較佳係〇wrens緩衝劑、HEPES、及TRIS。艾卡侖之受質爲凝血酶原（ιυ/毫升）。然後將經稀釋之樣本添加至，存於適當分析器之乾式化學測定混合物中。接著測量得凝血時間。對於克勞斯類型方法而言（以凝血時間爲主），需要將樣本稀釋以達到足夠之動力學範圍，如費麥侖等人，C/M.

Wcia’（1963) 8:4 18-424所論述。於本發明之系統中，此係藉由將樣本預先稀釋而達成纖維蛋白原篩選測試（以凝血時間E太）於此具體實施例中所使用之試劑含有艾卡命，以及緩衝劑與/或安定劑。血液樣本應不必經稀釋，而直接加入乾式化學混合物中。然後測量得凝血時間。此等篩選試驗一般可用於測定血纖維蛋白原異常者。於第一種（動力學）較佳具體實施例中，本發明用於測 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） Μ Ϊ--Αν --------^----- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 者- 536623 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 A7 B7 五、發明說明（2〇 ) 量血液或血液-衍生得樣本（進行纖維蛋白原測定）中，可凝集纖維蛋白原濃度之方法，包含下列步驟⑴至。 (i) 將具有（1)供接受液體樣本之樣本槽，及（2)含有其包含艾卡侖之乾式試劑基質，於其中包埋著許多均勻遍佈於該試劑基質之磁粒子，的反應玻片置於振動或旋轉磁場， (ii) 將全血或血液-衍生得樣本加至樣本槽中，而藉此使樣本同時導入反應室中，將試劑溶解而使顆粒因對磁場之反應而自由移動， (iii) 以光學儀器監測該反應室，以測量粒子振動之最大振幅（A)，以及粒子振動之後續剩餘高峰後最小振幅（B)， (iv) 使用至少B，或由介於a與B間之動力學凝血曲線所界定之面積，以測量樣本中之纖維蛋白原濃度。圖5列示對於以艾卡侖爲主纖維蛋白原測定法之a/b對纖維蛋白原濃度的反應曲線。於第二種（終點）較佳具體實施例中，進行纖維蛋白原測定之方法，包含下列步驟（i，）至（iv，）。 (i’)將具有（1)供接受液體樣本之樣本槽，及（2)含有其包含艾卡侖之乾式試劑基質，於其中包埋著許多均勻遍佈於該試劑基質之磁粒子，的反應玻片置於振動或旋轉磁場，其中樣本槽肖反應室係、經由，#有使置於樣本槽中且相當於反應室體積之液體分析樣本體冑，自該樣本槽同時轉送至反應室中疋幾何形狀的運用帶，而形成液體相連。 (ii)將全血或血液·衍生得樣本（例如2至20倍稀釋（以體積計）於HEPES緩衝劑與凝血酶原中）加至樣本槽中，一 _ --------訂------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •23- 536623 A7 五、發明說明（21 ) 藉此使樣本同時導入反應室中，將試劑溶解而使顆粒因對磁場之反應而自由移動， (iii) 以光學儀器監測該反應室，以測量纖維蛋白原測定之起始時間與終止時間，相當於相對該磁場之粒子移動的變化程度， (iv) 使用該起始時間與終止時間，以測量樣本中之纖維蛋白原濃度。應瞭解，第一種具體實施例（以凝塊形成動力學爲主）可代表性地使用較第二種具體實施例（以凝血時間爲主）低濃度之凝塊形成劑。然而，所使用試劑之正確濃度會隨該類型，及其中所示之功效而有所變化。而且，第二種具體實施例將頃向於具有較狹窄之利用範園，因爲其結果在較低纖維蛋白原濃度下，會變得較不可信。又另一種具體實施例係使用可與第一種具體實施例相比擬之試劑濃度，但其係對未經稀釋樣本測量凝塊時間 (如第二種具體實施例），而非測量凝血動力學參數（如第一種具體實施例）。此種方法提供對臨床上最有用纖維蛋白原濃度範園（低正常至低於正常量）具靈敏度之定量篩選試驗’且可用於自未經稀釋之全血或血漿樣本，快速評估纖維蛋白原異常。此種具體實施例當與供説明之標準曲線共用時，提供與凝血酶時間、蛇毒凝血酶時間、當量測試類似的結果或纖維蛋白原値。使用纖維蛋白原對凝血時間倒數（1/凝血時間）之圖，爲該項技藝中已知。以上已一般敘述本發明，其可藉由參考本文所提供之特 -24 ‘紙張尺度柳悄S家標準（CNS)A4規格（21G X 297 f請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) |裝訂-------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 536623 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ---------B7______ 五、發明說明（22 ) 別實施例做進一步瞭解，而該等實施例僅爲説明之目的，而無意於限定本發明（除非另行特別指示）。實施例藉由下列一般程序製得供使用艾卡侖或巴托索賓偵測纖維蛋白原之乾式化學反應玻片：將25微升含有〇.8U/亳升艾卡侖（潘塔藥學公司）或3.0 U/亳升巴托索賓（潘塔藥學公司）、3.0 mM氣化鈣（亞德力奇化學公司）、50 mM HEPES，pH 7.8、8.3亳克/亳升 PIOP，與適當添加劑及安定劑之溶液，注射入已組裝完成之反應玻片裝置（如圖1>中，將其冷凍、並凍乾而產生乾式化學配劑。將反應玻片置於TAS (血栓溶解評估系統）分析儀，其爲一種供測量順磁性粒子運動之儀器（市售可購得自心血管診斷股份有限公司，且經描述於美國專利案5,1 10,727 ) 中，並將30微升血漿、含檸檬酸鹽全血或血液衍生得樣本，加入該反應玻片板中。將TAS分析儀程式設定爲用以偵測凝血類型波形及A/B比値。此外，以電子設備記錄波形供後續之分析使用。將經冷凍之所匯集得人類血漿（FACT，250毫克/分升纖維蛋白原’赫舍那實驗室）與天然缺乏纖維蛋白原之人類血漿樣本（< 15毫克/分升）於37°C下融解，並保持於包圍溫度下。將FACT與缺乏纖維蛋白原之血漿一同稀釋，以產生具有0、20、40、60、80及100% FACT含量之血製樣本。將30微升之各樣本加至反應玻片，置於tas分 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ----訂---------線. -25 536623 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（23 ) 析儀中，並測定凝血時間及A/B比値。圖5列示以艾卡侖及巴托索賓乾式化學測定法，分析含有不同濃度纖維蛋白原所得A/B反應的比較。以艾卡侖爲主之纖維蛋白原測定法顯示，較以巴托索賓爲主之纖維蛋白原測定法具有較大直線性，及對凝血時間倒數之 — — J 反應。圖5及6説明使用艾卡侖（相較於巴托索賓）在活化酵素時’在靈敏度及動力學範園方面之顯著優點。、液-麗.以艾卡命爲主之纖維番合眉滿丨佘法將含檸檬酸鹽全血於15〇〇 rpm下離心15分鐘。將血漿自沈積之紅血球取出並丟棄。將沈積之紅血球以上述所製備得之血漿樣本稀釋加入，而產生具有不同纖維蛋白原濃度之含檸檬酸鹽全血樣本。將此等具有不同纖維蛋白原濃度之含檸檬酸鹽血液樣本，以如下所述之稀釋緩衝液稀釋 1:1。將50微升經稀釋之樣本，與5〇微升以艾卡侖爲主之液體試劑，組合於STAGOST4凝集分析儀中之反應室内，並記錄凝血時間。圖7列示以液體爲主之艾卡侖測定法的凝血時間倒數反應。由數據顯示對於所測試之纖維蛋白原濃度具有良好直線性。用於上述實施例中製備經稀釋血液或血漿樣本（血液所衍生樣本）之稀釋試劑，原則上爲5〇 HEPES緩衝劑、鈣3.0mM，pH7.8及1.0U/毫升凝血酶原（艾卡侖受質）。可將血液或血漿樣本以稀釋緩衝劑稀釋1: i至i :2〇。 C請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁}

-26- 536623 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（24 ) 亦將上述所製備仔之血液（經離心以產生血漿）及血漿樣本置於SYSMEX CA1000凝集分析儀上，以經修飾之克勞斯測定法（達德凝血酶試劑，達德_貝林）進行試驗，以測定參考纖維蛋白原値。塵床上之樣本及處理程庠克勞斯方法：如參考文獻方法，使用經修飾之克勞斯測定法（FiblastinTM，歐岡諾科技公司）。藉由離心自血液分離得含檸檬酸鹽血漿，並將血漿與FiMastinTM(凝血酶）試劑混合。使用血栓分解儀（歐岡諾科技公司）測量凝血時間。乾式-化學纖維蛋白原試驗：如上所述製備得乾式化學反應玻片，並如較佳具體實施例中調製得。患者測試：使十二名健康自願者以歷時六小時之單一灌流’接受1U/公斤艾卡侖。於開始灌流前，先自個別自願者收集得含檸檬酸鹽全血樣本，並於開始灌流後以固定間隔進行收集直到灌流開始後72小時。使用以艾卡侖爲主之反應破片，較以巴托索賓爲主之反應玻片，及藉由參考方法對各樣本進行重複測定。亦測量各樣本之血細胞比容。圖8及圖9列示使用A/B以巴托索賓爲主，及以艾卡侖爲主測定法測量反應，之含檸檬酸鹽全血中測量纖維蛋白原所得的劑量·反應曲線。比較圖8與圖9顯示，含友艾卡侖之反應玻片具有顯著較大之靈敏度。而且，樣本之血細胞比容範園自35%至47%。於圖9中所列示之良好關聯性，證明對分析進行產生最小血細胞比容影響。 •27- 本、，氏張尺度適用中國國家標準（CNs)A4規格（210 X 297公釐） ^ ^ ^裝--------訂------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 536623 κι _Β7 五、發明說明（25) 顯然，在明瞭上述技術後，可對本發明進行額外修飾與變異。因此，須瞭解在所附之申請專利範園内，除了本文所特別列述之方法外，亦可以其他方法實施本發明。 ----------V----------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -28 、本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

Claims

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1· 一種進行纖維蛋白原測定之方法，其包含：第088110325號專利申請案中文申請專利範圍巷_太(92_年左且) 申請專利範圍 (i)將具有（1)供接受液體樣本之樣本槽，及（2)含有包含艾卡侖之乾式試劑基質之反應室（於其中包埋著許多均句遍佈於該試劑基質之磁粒子）的反應玻片置於振動或旋轉磁場；其中樣本槽與反應室係經由一幾何形狀的傳輸帶而形成液體相連’該置於樣本槽中且相當於反應室體積之液體分析樣本體積係自樣本槽同時轉送至反應室中； (ii) 於適合進行纖維蛋白原測定之條件下，將全血或血液-衍生的樣本加至該樣本槽中，而藉此使該樣本同時導入該反應室中，將試劑溶解並使該等粒子因對磁場之反應而自由移動，其中該振動圖案具有起始時間與終止時間，相當於粒子運動相對該振動磁場之程度變化； (iii) 以光學儀器監測該反應室，並測量得一或多項下列參數：（iiia)纖維蛋白原測定之起始時間與終止時間’或（iiib)該粒子振動之最大振幅a，及後續剩餘之粒子振動的後高峰最小振幅B，或（iiic)該粒子振動曲線的斜率，或由該介於A與B間區域内之曲線所定義面積；及 (iv)使用該起始時間與終止時間，或至少b，或該斜率，或該面積’使參數（iii a)-(iiic)之至少一者與標準樣本中之可凝塊纖維蛋白原相關連，以測量該全血或本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐） 536623 A8 B8 C8 D8 申請專利範圍血液-衍生樣本中可凝塊纖維蛋白原之濃度。 2·根據申請專利範圍第1項之方法，其中該乾式試劑進一步包含至少一種選自緩衝劑與黏著劑之成員。 3· —種進行纖維蛋白原測定之方法，其包含： (i) 將具有（1)供接受液體樣本之樣本槽，（2)反應室及（3) 置於該樣本槽與反應室之間並使液體相通的導管設備的反應破片置於振動磁場；該反應室含有包含艾卡侖之乾式試劑基質，其係包埋許多均句遍佈於該試劑基質之磁粒子，其中該乾式試劑基質僅存在該反應室中； (ii) 於適合進行纖維蛋白原測定之條件下，將一定體積之全血或血液-衍生的樣本加至該樣本槽中，而該樣本之體積足以實質上充滿該導管設備，而不進入該反應室中，或與該乾式試劑基質接觸； (iii) 將一定體積之緩衝稀釋劑與凝血酶原加至該樣本槽中，而該緩衝劑之體積足以將該樣本沖洗入該反應室中’藉此造成該試劑溶解，並使粒子以因該振動磁場所誘發之振動圖案而自由移動，其中該振動圖案具有起始時間與終止時間，相當於粒子運動相對該振動磁場之程度變化； (iv) 以光學儀器監測該反應室，以測量對應該項纖維蛋白原測定之起始時間與終止時間；及 (v) 將該起始時間與終止時間與標準樣本中之可凝塊纖維蛋白原相關連，以測量該全血或血液-衍生樣本 -2- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇χ 297公釐） 536623 A B c D 六、申請專利祀圍中可凝塊纖維蛋白原之濃度。 4. 一種進行纖維蛋白原測定之方法，其包本： (i) 將具有（1)供接受液體樣本之樣本槽及（2)含有包含艾卡侖之乾式試劑基質（於其中包埋著許^均勻4 佈於該試劑基質之磁粒子）的反應破片置於振動或旋轉磁場；其中樣本槽與反應室係經由一幾何形狀的傳輸帶而形成液體相連，該置於樣本槽中且相當於反應室體積之液體分析樣本體積係自樣本槽同時轉送至反應室中； (ii) 於適合進行纖維蛋白原測定之條件下，將全血或血液-衍生的樣本加至該樣本槽中，而藉此使該樣本導入該反應室中，將試劑溶解並使該等粒子以因該振動磁場所誘發之振動圖案而自由移動，其中該振動圖案具有起始時間與終止時間，相當於粒子運動相對該振動磁場之程度變化； (iii) 以光學儀器監測該反應室，以測量該粒子振動之最大振幅A，及後續剩餘之粒子振動的後高峰最小振幅B ;及 (iv) 使用至少B，使至少B與標準樣本中之可凝塊纖維蛋白原相關連’以測量該全血或血液-衍生樣本中可凝塊纖維蛋白原之濃度。 5. 根據申請專利範圍第4項之方法，其中僅使用B以測量該樣本中的纖維蛋白原濃度。本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210 X 297公釐） 536623 A8 B8 C8

6. 7. 8· 其中係使用比值Α/Β 白原濃度。其中係使用Α-Β以測根據申請專利範圍第4項之方法，或Β/Α，以測量該樣本中的纖維蛋根據申請專利範圍第4項之方法，量該樣本中的纖維蛋白原濃度。根據申請專利範圍第4項之方法，其中係使用比值 (A-BVA或Α/(Α-Β) ’以測量該樣本中的纖維蛋白原濃度0 9·根據申請專利範圍第4項之方法，其中係使用Α/Β或 (Α-Β)/Α，以測量該樣本中的纖維蛋白原濃度。 10·根據申請專利範圍第4項之方法，其中係使用所採介於 Α與Β間區域之振動曲線的斜率，以測量該樣本中的纖維蛋白原濃度。 11·根據申請專利範圍第4項之方法，其中係使用由介於A 與B間區域所定義之振動曲線以上或以下的面積，以測一量該樣本中的纖維蛋白原濃度。 12·根據申請專利範圍第4項之方法，其中該乾式試劑進一步包含至少一種選自緩衝劑與黏著劑之成員。 13· —種進行纖維蛋白原測定之方法，其包含： (i)將具有（1)供接受液體樣本之樣本槽，（2)反應室及（3) 置於該樣本槽與反應室之間並使液體相通的導管設備的反應玻片置於振動磁場；該導管設備含有包含艾卡侖之乾式試劑基質，其包埋著許多均勻遍佈於該試劑基質之磁粒子，其中該乾式試劑基質僅存在該導管中；本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 536623 A8 B8 C8 p-_____ _D8 _______ 六、申請專利範圍 (ii) 於適合進行纖維蛋白原測定之條件下，將一定體積之全血或血液-衍生的樣本加至該樣本槽中，而該樣本之體積足以實質上充滿該導管設備及該反應室，而可與該試劑混合，並將該試劑沖洗入該反應室中，藉此造成該試劑溶解，並使粒子以因該振動磁場所誘發之振動圖案而自由移動，其中該振動圖案具有起始時間與終止時間，相當於粒子運動相對該振動磁場之程度變化，自該振動圖案衍生得動力學粒子振動曲線，以定出粒子振動之最大振幅，其減少至粒子振動的後高峰最小振幅，且該動力學粒子振動曲線具有可測量之斜率及位於該振動曲線下方之面積； (iii) 以光學儀器監測該反應室，並測量得一或多項下列參數：（iiia)纖維蛋白原測定之起始時間與終止時間’或（i i i b)該粒子振動之最大振幅a ,及後續剩餘之粒子振動的後高峰最小振幅B，或（iiic)該粒子振動曲線的斜率，或由該介於A與B間區域内之曲線所定義面積；及 (iv) 將該起始時間與終止時間，或至少b，或該斜率，或該面積，使參數（iiia)-(iiic)之至少一者與標準樣本中之可凝塊纖維蛋白原相關連，以測量該全血或血液-衍生樣本中可凝塊纖維蛋白原之濃度。 14.根據申請專利範圍第13項之方法，其中於^驟（丨丨）之前’係將一定體積之蒸餾水加至，姨樣本槽中，而足以本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) "' " ------ ABCD 536623 六、申請專利範圍藉由毛細作用進入該導管設備中，藉此使該乾式試劑溶解，而於添加該全血或血液-衍生樣本之前即釋出該等磁性粒子。 15. —種進行纖維蛋白原測定之方法，其包含： ⑴於適合進行纖維蛋白原測定之條件下，將全血或血液-衍生的樣本加至反應玻片之樣本槽中，該反應玻片具有（1)供接受液體樣本之樣本槽，（2)反應室及（3) 置於該樣本槽與反應室之間並使液體相通的導管設備；該導管設備含有包含艾卡侖之乾式試劑基質，其係包埋許多均句遍佈於該試劑基質之磁粒子，其中該乾式試劑基質僅存在該導管中；其中該所添加至該反應槽之該全血或血液-衍生樣本的體積，係足以實質上充滿該導管設備及該反應室，並將該試劑沖洗入該反應室中，藉此釋出造成該等磁性粒子； (ii) 將該反應玻片於該全血或血液-衍生的樣本添加至該反應槽之前，或於其稍後置於振動磁場，其中該振動磁場使該等已釋出之粒子以振動圖案移動，其中該振動圖案具有起始時間與終止時間，相當於粒子運動相對該振動磁場之程度變化，及 (iii) 以光學儀器監測該反應室以提供粒子振動曲線，並測量一或多項下列參數：（i i i a)至少一種該磁粒子振動的後鬲峰最小振幅（B)，或（i i i b)該粒子振動曲線本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 536623 A8 B8 C8 申請專利範園的斜率，或（Ilic)介於該粒子振動之最大振幅八及3 之間的粒子振動曲線所定義面積，以使參數 (iiiaMiiic)之至少一者與標準樣本中之可凝塊纖維蛋白原相關連，以測量該全血或血液·衍生樣本中可凝塊纖維蛋白原之濃度。 16·—種進行纖維蛋白原測定之方法，其包含·· (i)將由艾卡侖所組成，且於其中均勻包埋著許多遍佈於該試劑基質之磁粒子的乾式試劑基質（包含於反應室中且置於由包含將磁場之北極與南極圍繞中心點旋轉所產生的旋轉磁場下），與一定量足以充滿該反應室之經稀釋血液樣本接觸，藉此釋出該等磁性粒子，以使其於旋轉磁場之影響下進行運動； (u)於該血液樣本凝血期間，以光學儀器監測該該磁性粒子對該旋轉磁場之反應，產生凝血時間相關於纖維蛋白原濃度之反應曲線； (出）自該反應曲線測定其凝血時間終點；及 (iv)將自步騾（iii)所得之凝血時間終點與以含已知纖維蛋白原含量所製備之纖維蛋白原濃度之儲備標準才父正曲線進行比對，以定出樣本中的可凝塊纖維蛋白原之含量。 17·根據申凊專利知圍第1 6項之進行纖維蛋白原測定之方法’其中該經稀釋之血液樣本為經稀釋之全血。 18·根據申請專利範圍第1 7項之進行纖維蛋白原測定之方法’其中該經稀釋之血液樣本為經稀釋之血漿。本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 536623 A8 B8 C8 D8

έ人卡余做為具活性之凝血·誘發劑。 25.根據申請專利範圍第24 24項之纖維蛋白原測定方法，其

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1…π扎A芊試劑。 26.根據申^專利範圍第24項之纖維蛋白中認纖維蛋白原測定試劑為液體試劑。 ‘ 其 27.一種供進行纖維蛋白原敎之反應坡^ . 供接受㈣樣本之樣本槽，及含有包含艾卡中包埋煮許多均勻遍体於該試劑基質之磁粒子之乾式試劑基質，該樣本槽與反應室係經由-幾何形狀的傳輸帶而形成液體相連’該置於樣本槽中且相當於反應室體積〈液體分析樣本體積係自該樣本槽同時轉送至反應室中。 28.根據申請專利範圍第27項之反應玻片，其中該乾式試劑進一步包含至少一種選自緩衝劑與凍乾安定劑之成員。 9- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)