TWI908723B - 含氮雜環類衍生物調節劑、其製備方法和應用 - Google Patents

含氮雜環類衍生物調節劑、其製備方法和應用

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Abstract

本發明涉及含氮雜環類衍生物調節劑、其製備方法和應用。特別地，本發明涉及通式( I )所示的化合物、其製備方法及含有該化合物的藥物組合物，及其作爲 KRAS G12C 突變抑制劑，在治療白血病、神經母細胞瘤、黑色素瘤、乳腺癌、肺癌及其結腸癌等疾病或病症的用途，其中通式( I )中的各取代基與說明書中的定義相同。

Description

含氮雜環類衍生物調節劑、其製備方法和應用
本發明屬於藥物合成領域，具體涉及一種含氮雜環類衍生物抑制劑及其製備方法和應用。
大鼠肉瘤(rat sarcoma，RAS)，由原癌基因HRAS，NRAS以及KRAS編碼，分爲4種蛋白HRAS，NRAS，KRAS4A和KRAS4B，是一種GTP(guanosine triphosphate)結合蛋白。RAS位於細胞膜內表面，上游爲受體酪胺酸激酶(RTK)，激活後調控下游的PI3K，RAF等信號通路，從而調控細胞的生長、存活、遷移和分化等功能。
RAS在機體內主要有兩種狀態：與GDP(guanosine diphosphate)結合的失活狀態和與GTP結合的激活狀態。其活性受兩個蛋白調控，鳥苷交換因子(guanine nucleotide exchange factor，GEF)促使GDP從RAS蛋白上釋放，使GTP結合激活RAS；GTP酶激活蛋白(GTPase activating protein，GAP)激活RAS蛋白的GTP酶活性，將結合在RAS蛋白上的GTP水解成GDP，使RAS失活。正常情况下，RAS蛋白處於非活化狀態，突變後構象發生改變，RAS處於持續激活狀態，且下游信號通路也被持續激活，從而導致多種癌症的發生。
RAS作爲第一個被確認的癌基因，是突變率最高的致癌基因，在人類癌症中平均占25%。RAS家族中最常見的致癌突變爲KRAS(85%)，而NRAS(12%)和HRAS(3%)則較爲少見。KRAS突變主要高發於胰腺癌(95%)、結直腸癌 (52%)和肺癌(31%)等一系列癌症。KRAS最常見的突變方式爲點突變，多發生在p-loop (aa 10~17)中的G12、G13和Switch II區(aa59-76)的Q61，其中以G12突變最爲常見(83%)。在非小細胞肺癌(NSCLC)和結直腸癌中，KRAS G12C是最常見的突變之一。
雖然存在極大的臨床需求，但至今沒有一個直接標靶KRAS的藥物上市，目前臨床治療KRAS突變的患者一般只能採取化療。KRAS抑制劑的研發困難主要有兩個因素，首先RAS 蛋白結構平滑，小分子難以結合到蛋白表面；其次RAS GTP酶對GTP的親和力高達皮莫耳(pM)級別，且內源性GTP水平高，小分子藥物難以阻斷二者結合。近期研究發現KRAS 12位甘胺酸(Glycine，Gly)突變爲半胱胺酸(Cysteine，Cys)後，構象改變，形成一個新的口袋供小分子共價結合，不可逆的將KRAS G12C鎖定在結合GDP 的非活化狀態。因此KRAS G12C抑制劑有望成爲首個直接標靶KRAS的藥物。
目前已有多個KRAS G12C抑制劑進入臨床研究階段，如Amgen 公司開發的AMG 510，Wellspring Biosciences公司開發的ARS-3248和Mirati公司開發的MTRX849，目前均處於臨床I 期研究階段，但還沒有一款開發上市的KRAS G12C抑制劑。
KRAS G12C目前沒有特異的標靶藥，存在較大的臨床需求，選擇性更高、活性更好、安全性更佳的KRAS G12C抑制劑有治療多種癌症的潜力，具有廣闊的市場前景。
本申請要求申請日爲 2019 年 5 月 29 日的中國專利申請 CN2019104571616、申請日爲 2019 年 9 月 26 日的中國專利申請 CN2019109185824、申請日爲 2019 年 10 月 24 日的中國專利申請 CN2019110189099、申請日爲 2019 年 11 月 8 日的中國專利申請 CN2019110901717、申請日爲 2019 年 12 月 27 日的中國專利申請 CN2019113821593、申請日爲 2020 年 5 月 25 日的中國專利申請 CN202010451270X 的優先權。本申請引用上述中國專利申請的全文。
本發明的目的在於提供一種通式( I )所示的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中通式( I )所示的化合物結構如下：其中：M 選自 CRaaR1或 NR1；X1和 X2各自獨立的選自 O、S、N、NR2、CR2或 CRaaR2；X3選自 N、NR3或 CR3；R1選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、烷基、烯基、炔基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基或 -(CH2)nC(O)CH=CHRaa，所述的烷基、烯基、炔基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，選擇性的可以進一步被取代；R2選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、烷基、烯基、炔基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，所述的烷基、烯基、炔基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，選擇性的可以進一步被取代；R3選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、烷基、烯基、炔基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中所述的烷基、烯基、炔基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，選擇性的可以進一步被取代；Ra選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、烷基、烯基、炔基、氧代基、硫代基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、氰基取代的烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，所述的烷基、烯基、炔基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、氰基取代的烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，選擇性的可以進一步被取代；Rb選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、烷基、烯基、炔基、氧代基、硫代基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、氰基取代的烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，所述的烷基、烯基、炔基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、氰基取代的烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，選擇性的可以進一步被取代；或者，任意兩個相鄰或不相鄰的 Rb鏈接形成環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，所述環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，選擇性的可以進一步被取代；Rc選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、烷基、烯基、炔基、氧代基、硫代基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、氰基取代的烷基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-CH=CH(CH2)nRbb、-CH=CH(CH2)nNRbbRcc、-O(CH2)nRbb、-OC(RbbRcc)n(CH2)mRdd、-CH=CH(CH2)nNRbb(CH2)mC(O)Rcc、-CH=CH(CH2)nNRbb(CH2)mC(O)NRccRdd、-NRbb(CH2)nRcc、-(CH2)n1-、-(CH2)nRbb、-(CH2)nORbb、 -(CH2)nSRbb、 -(CH2)nC(O)Rbb、 -(CH2)nC(O)ORbb、 -(CH2)n1S(O)mRbb、 -(CH2)nNRbbRcc、-(CH2)nC(O)NRbbRcc、-(CH2)nNRbbC(O)Rcc或-(CH2)nNRbbS(O)mRcc，所述的烷基、烯基、炔基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、氰基取代的烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜環基，選擇性的可以進一步被取代；Raa選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、烷基、烯基、炔基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，所述的胺基、烷基、烯基、炔基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、氰基取代的烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，選擇性的可以進一步被取代；Rbb和Rcc各自獨立的選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、烷基、烯基、炔基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、氰基取代的烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，所述的胺基、烷基、烯基、炔基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、氰基取代的烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，選擇性的可以進一步被取代；或者，Rbb與 Rcc同相鄰的原子形成環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，所述環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，選擇性的可以進一步被取代；Rdd選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、烷基、烯基、炔基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、氰基取代的烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，所述的胺基、烷基、烯基、炔基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、氰基取代的烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，選擇性的可以進一步被取代；或者，Rcc與 Rdd同相鄰的原子形成環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，所述環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，選擇性的可以進一步被取代；x爲 0~6 的整數；y爲 0~6 的整數；z 爲 0~6 的整數；m爲0、1、2或3；n爲0、1、2或3；n1爲0、1、2或3；其中，當X3爲NR3時，Rc爲氧代基或硫代基，且Rc連接在與X3相鄰的同環碳原子上，X1爲CH2，X2爲NR2；當X3爲N時，X1爲CH2，X2爲NR2；或者X1爲N，X2爲CR2。
在本發明一種較佳的實施方式中，當 X3爲 NR3時，Rc爲氧代基或硫代基，且 Rc連接在與 X3相鄰的同環碳原子上，X1選自 N、NR2或 CH2，X2選自 CR2或 NR2；或者，當 X3爲 N 時，X1選自 N、CH2或 NR2，X2選自 CR2或 NR2；較佳地，當 X3爲 NR3時，Rc爲氧代基或硫代基，X1爲 CH2，X2爲 NR2；當 X3爲 N 時，X1爲 CH2，X2爲 NR2，或者，X1爲 N，X2爲 CR2；另外，當 X1和 X2同爲 CR2或 NR2時，R2並不一定爲相同的基團，而是可以獨立的選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、烷基、烯基、炔基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，所述的烷基、烯基、炔基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，選擇性的可以進一步被取代。
在本發明一種較佳的實施方式中，R1選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、鹵代 C1-6烷氧基、C1-6羥烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基、5-12 元雜芳基或-(CH2)nC(O)CH=CHRaa；較佳為3-12元雜環基和-(CH2)nC(O)CH=CHRaa；更佳為3-10 元雜環基和-C(O)CH=CRaa；所述 3-10 雜環基選自含 1-2 個氮原子、氧原子或硫原子的 5-6 元雜環基，選擇性地，被氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、氧代基和甲烯基中的一個或多個取代基所取代；Raa選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、鹵代 C1-6烷氧基或 C1-6羥烷基；較佳為氫或 C1-3烷基。
在本發明一種較佳的實施方式中，R1選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、 C1-6 烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6烷氧基、鹵代C1-6 烷氧基、C1-6 羥烷基、C3-12 環烷基、3-12 元雜環基、C6-12 芳基、5-12 元雜芳基或-(CH2)nC(O)CH=CHRaa，所述的C1-6 烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C1-6氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、鹵代 C1-6 烷氧基、C1-6 羥烷基、C3-12 環烷基、3-12 元雜環基、C6-12 芳基和5-12元雜芳基，選擇性的被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、氧代基、亞甲基、C1-6 烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 鹵代烷氧基、C1-6 羥烷基、氰基取代的 C1-6 烷基、C3-12 環烷基、3-12 元雜環基、C6-12 芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代，進一步較佳為、、或；最佳為、或；Raa選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、鹵代 C1-6烷氧基或 C1-6羥烷基；較佳為氫或 C1-3烷基。
在本發明進一步較佳的實施方式中，R1選自3-12元雜環基或-(CH2)nC(O)CH=CHRaa， 所述的3-12元雜環基選擇性被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、氧代基和亞甲基中的一個或多個取代基所取代。
在本發明進一步較佳的實施方式中，R1選自 3-10 元雜環基或-C(O)CH=CHRaa，所述的 3-12 元雜環基選擇性被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、氧代基和亞甲基中的一個或多個取代基所取代。
在本發明一種較佳的實施方式中，R2選自 C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的 C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、羥基、鹵素、胺基和 C1-6烷基的一個或多個取代基所取代；較佳為苯基、吡啶基、萘基、聯苯基、苯并雜芳基、吡啶并苯基或吡唑并苯基，所述的苯基、吡啶基、萘基、聯苯基、苯并雜芳基、吡啶并苯基和吡唑并苯基，選擇性的被氫、羥基、鹵素、胺基和 C1-6烷基的一個或多個取代基所取代。
在本發明一種較佳的實施方式中，R2選自 C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的 C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、羥基、鹵素、胺基、氰基、巰基、C1-6羥烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷硫基-亞烷基、C1-6鹵代烷硫基、C3-12環烷基、C1-6烷基胺基、胺基甲醯基、C1-6烷基醯胺基、C1-6烷基磺醯胺基、C3-12環烷基胺基、C3-12環烷基磺胺基、C1-6烷基胺基甲醯基、C1-6烷基亞磺醯基、C1-6烷基磺醯基和 C1-6烷基中的一個或多個取代基所取代。
在本發明進一步較佳的實施方式中，R2選自苯基、吡啶基、萘基、吲哚基、聯苯基、苯并雜芳基、吡啶并苯基或吡唑并苯基，所述的苯基、吡啶基、萘基、吲哚基、聯苯基、苯并雜芳基、吡啶并苯基和吡唑并苯基，選擇性的被氫、羥基、鹵素、胺基、氰基、巰基、C1-6羥烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷硫基-亞烷基、C1-6鹵代烷硫基、C3-12環烷基、C1-6烷基胺基、胺基甲醯基、C1-6烷基醯胺基、C1-6烷基磺醯胺基、C3-12環烷基胺基、C3-12環烷基磺胺基、C1-6烷基胺基甲醯基、C1-6烷基亞磺醯基、C1-6烷基磺醯基和 C1-6烷基中的一個或多個取代基所取代。具體的，C1-6烷基胺基可以爲(CH3)2N-、 (CH3CH2)2NH-、，胺基甲醯基可以爲 NH2C(O)-，C1-6烷基醯胺基可以爲 CH3C(O)NH-，C1-6烷基磺醯胺基可以爲 CH3SO2NH-，C1-6烷基胺基甲醯基可以爲CH3CH2NHC(O)-、(CH3)2NC(O)-、CH3NHC(O)-，C1-6烷基亞磺醯基可以爲 CH3SO-，C1-6烷基磺醯基可以爲CH3SO2-等。
在本發明一種較佳的實施方式中，R3選自 C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的 C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、羥基、鹵素、胺基和 C1-6烷基的一個或多個取代基所取代；較佳為苯基和吡啶基，所述的苯基和吡啶基選擇性的被氫、羥基、鹵素、胺基和 C1-6烷基的一個或多個取代基所取代。
在本發明一種較佳的實施方式中，R3選自 C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或5-12 元雜芳基，所述的 C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、羥基、鹵素、胺基、巰基、C1-6烷硫基、C1-6烷硫基-亞烷基、C1-6鹵代烷硫基、C1-6烷基胺基羰基和 C1-6烷基中的一個或多個取代基所取代。
在本發明一種較佳的實施方式中，R3選自苯基、萘基、吲哚基或吡啶基，所述的苯基、萘基、吲哚基和吡啶基，選擇性的被氫、羥基、鹵素、胺基、巰基、C1-6烷硫基、C1-6烷硫基-亞烷基、C1-6鹵代烷硫基、C1-6烷基胺基羰基和 C1-6烷基中的一個或多個取代基所取代。
在本發明一種較佳的實施方式中，Ra選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、鹵代 C1-6烷氧基、C1-6羥烷基或氰基取代的 C1-6烷基。
在本發明進一步較佳的實施方式中，Ra選自氫、C1-3烷基或氰基取代的 C1-3烷基。
在本發明一種較佳的實施方式中，Ra選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷基亞磺醯基、C1-6烷基磺醯基、鹵代 C1-6烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的胺基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷基亞磺醯基、C1-6烷基磺醯基、鹵代 C1-6烷氧基、C1-6羥烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性地被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、羥基、巰基、硝基、氧代基、亞甲基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷基亞磺醯基、C1-6烷基磺醯基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代。
在本發明一種較佳的實施方式中，Rb選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、鹵代 C1-6烷氧基、C1-6羥烷基或氰基取代的 C1-6烷基。
在本發明進一步較佳的實施方式中，Rb選自氫、鹵素或 C1-3烷基；或者，兩個相鄰的 Rb同相鄰的碳原子形成 C3-8環烷基、3-8 元雜環基、C6-14芳基或5-14 元雜芳基。
在本發明進一步較佳的實施方式中，兩個相鄰的 Rb同相鄰的碳原子形成 C3-6環烷基。
在本發明進一步較佳的實施方式中，兩個相鄰的 Rb同相鄰的碳原子形成環丙基。
在本發明進一步較佳的實施方式中，Rc選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基、5-12 元雜芳基、-CH=CH(CH2)nRbb、-CH=CH(CH2)nNRbbRcc、-O(CH2)nRbb、-OC(RbbRcc)n(CH2)mRdd、-CH=CH(CH2)nNRbb(CH2)mC(O)Rcc、-CH=CH(CH2)nNRbb(CH2)mC(O)NRccRdd或-NRbb(CH2)nRcc；所述的 C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、羥基、鹵素、胺基、C1-6烷基和 3-12 元雜環基的一個或多個取代基所取代；較佳為氫、氧代基、硫代基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、-CH=CH(CH2)nRbb、-CH=CH(CH2)nNRbbRcc、-O(CH2)nRbb或-OC(RbbRcc)n(CH2)mRdd，所述 C3-12環烷基和 3-12 元雜環基選擇性的被氫、C1-6烷基和 3-12 元雜環基中的一個或多個取代基所取代；Rbb和 Rcc各自獨立的氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 鹵代烷氧基、C1-6 羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基、5-12 元雜芳基，所述的胺基、C1-6 烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、羥基、鹵素、胺基、C1-6烷基和 3-12 元雜環基的一個或多個取代基所取代；或者，Rbb與 Rcc同相鄰的原子形成 C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的 C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；Rdd選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基、5-12 元雜芳基，所述的胺基、C1-6烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 鹵代烷氧基、 C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、羥基、鹵素、胺基、氰基、C1-6烷基和 3-12 元雜環基的一個或多個取代基所取代；或者，Rcc與 Rdd同相鄰的原子形成C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12元雜芳基，所述的 C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代。
在本發明進一步較佳的實施方式中，Rc選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基、5-12 元雜芳基、-CH=CH(CH2)nRbb、-CH=CH(CH2)nNRbbRcc、-O(CH2)nRbb、-CH=CH(CH2)nNRbb(CH2)mC(O)Rcc、 -CH=CH(CH2)nNRbb(CH2)mC(O)NRccRdd、 -OC(RbbRcc)n(CH2)mRdd 或-NRbb(CH2)nRcc，所述的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、羥基、鹵素、胺基、C1-6烷基和 3-12 元雜環基中的一個或多個取代基所取代。
在本發明進一步較佳的實施方式中，Rc選自氫、C1-3烷基、C1-3烷氧基、氧代基、硫代基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、-CH=CH(CH2)nRbb、-CH=CH(CH2)nNRbbRcc、-O(CH2)nRbb或-O(CRbbRcc)n(CH2)mRdd，所述的 C1-3烷基、C1-3烷氧基、C3-12環烷基和 3-12 元雜環基，選擇性的被氫、C1-6烷基和 3-12 元雜環基中的一個或多個取代基所取代。
在本發明進一步較佳的實施方式中，Rbb和 Rcc各自獨立的選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的胺基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、 C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、羥基、鹵素、胺基、C1-6烷基和 3-12 元雜環基中的一個或多個取代基所取代；或者，Rbb與 Rcc同相鄰的原子形成 C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12元雜芳基，所述的 C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代。
在本發明進一步較佳的實施方式中，Rdd選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的胺基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、 3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、羥基、鹵素、胺基、氰基、C1-6烷基和 3-12 元雜環基的一個或多個取代基所取代；或者，Rcc與 Rdd同相鄰的原子形成 C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的 C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代。
在本發明進一步較佳的實施方式中，提供一種式(II)化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其具體結構如下：其中：L 選自鍵、-CH=CH(CH2)n-、-CH=CH(CH2)nNRbb-、-O(CH2)n-、 -CH=CH(CH2)nNRbb(CH2)mC(O)-、-CH=CH(CH2)nNRbb(CH2)mC(O)NRcc-、 -OC(RbbRcc)n(CH2)m-、-NRbb(CH2)nRcc、-(CH2)n1-、-(CH2)nRbb-、-(CH2)nORbb、 -(CH2)nS-、-(CH2)nC(O)-、-(CH2)nC(O)O-、-(CH2)n1S(O)m-、-(CH2)nNRbb-、 -(CH2)nC(O)NRbb-、-(CH2)nNRbbC(O)-或-(CH2)nNRbbS(O)m-；R4選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、 C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的胺基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、 C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代。
在本發明進一步較佳的實施方式中，提供一種式(III)化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其具體結構如下：。
在本發明進一步較佳的實施方式中，提供一種式(IV)化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其具體結構如下：。
在本發明進一步較佳的實施方式中，提供一種式(V)化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其具體結構如下：其中：環 A 選自 C3-12環烷基、3-14 元雜環基、C6-14芳基或 5-14 元雜芳基；較佳為 C6-12芳基和 5-12 元雜芳基；Rd選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的胺基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、 C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；p 爲 0~6 的整數。
在本發明進一步較佳的實施方式中，提供一種式(VI)化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其具體結構如下：其中：環 B 選自 C3-12環烷基、3-14 元雜環基、C6-14芳基或 5-14 元雜芳基；優 C3-12環烷基或 3-12 元雜環基；Re選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的胺基、C1-6 烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；q 爲 0~6 的整數。
在本發明進一步較佳的實施方式中，提供一種式(VII)化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其具體結構如下：。
在本發明進一步較佳的實施方式中，提供一種式(VIII)化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其具體結構如下：其中：R5選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基；較佳為氫、鹵素或 C1-3烷基；R6選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基；較佳為氫。
在本發明進一步較佳的實施方式中，提供一種式(IX)化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其具體結構如下：其中：環 A 選自 C3-12環烷基、3-14 元雜環基、C6-14芳基或 5-14 元雜芳基；較佳為 C6-12芳基或 5-12 元雜芳基；Rd選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的胺基、C1-6烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 鹵代烷氧基、 C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；較佳為氫、鹵素、羥基、胺基或 C1-3烷基；p 爲 0~6 的整數。
在本發明進一步較佳的實施方式中，提供一種式(X)化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其具體結構如下：。
在本發明進一步較佳的實施方式中，提供一種式(X-A)化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其具體結構如下：其中：R7選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的胺基、C1-6烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 鹵代烷氧基、 C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；較佳為 C1-3烷基或 C1-3鹵代烷氧基；R8和 R9各自獨立的選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 鹵代烷氧基、C1-6 羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的胺基、C1-6 烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、氧代基、硫代基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代。
在本發明的一個較佳方案中，一種通式( XI )所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽：其中：M1選自 CR12R13或 NR12；較佳為以下基團：、、或；較佳為以下基團：、或。環C選自C6-14芳基或5-14元雜芳基；較佳為苯基或吡啶基，更佳為以下基團：、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、或；進一步選自如下基團：、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、或；環D選自 C6-14芳基或 5-14 元雜芳基；較佳為苯基或吡啶基，更佳為以下基團：、、、、、、、、、或；進一步選自如下基團：、、、、、、或；R10和 R11各自獨立的選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或5-12 元雜芳基，所述的胺基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6 烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、氧代基、硫代基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；R12選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、鹵代 C1-6 烷氧基、C1-6 羥烷基、C3-12 環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基、5-12 元雜芳基或-(CH2)n2C(O)CRee=CRffRgg，所述的 C1-6烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、鹵代 C1-6 烷氧基、C1-6羥烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、氧代基、亞甲基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；較佳為3-12元雜環基或-(CH2)n2C(O)CRee=CRffRgg，所述的3-12元雜環基選擇性被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、氧代基和亞甲基中的一個或多個取代基所取代；R13選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的胺基、C1-6烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 鹵代烷氧基、 C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；Rf選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷基亞磺醯基、C1-6烷基磺醯基、鹵代 C1-6烷氧基、C1-6羥烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基、 5-12 元雜芳基或-(CH2)nC(O)CH=CHRaa，所述的 C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷基亞磺醯基、C1-6烷基磺醯基、鹵代 C1-6烷氧基、C1-6羥烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、氧代基、亞甲基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷基亞磺醯基、C1-6烷基磺醯基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；Rg選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基、5-12 元雜芳基、-O(CH2)n2Ree 、 -OC(ReeRff)n2(CH2)m1Rgg 、 -NRee(CH2)n2Rff 、 -(CH2)n2SRee 、 -(CH2)n2Ree 、 -(CH2)n2ORee、-(CH2)n2SRee 、-(CH2)n2C(O)Ree 、-(CH2)n2C(O)ORee 、-(CH2)n2S(O)m1Ree、 -(CH2)n2NRbbRee、-(CH2)n2C(O)NReeRff、-(CH2)n2NReeC(O)Rff 或-(CH2)n2NReeS(O)m1Rff，所述的胺基、C1-6 烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、 C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；Rh選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基、5-12 元雜芳基、-O(CH2)n2Ree 、 -OC(ReeRff)n2(CH2)m1Rgg 、 -NRee(CH2)n2Rff 、 -(CH2)n2SRee 、 -(CH2)n2Ree 、 -(CH2)n2ORee、-(CH2)n2SRee 、-(CH2)n2C(O)Ree 、-(CH2)n2C(O)ORee 、-(CH2)n2S(O)m1Ree、 -(CH2)n2NRbbRee、-(CH2)n2C(O)NReeRff、-(CH2)n2NReeC(O)Rff 或-(CH2)n2NReeS(O)m1Rff，所述的胺基、C1-6 烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、 C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；Raa選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、 C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的胺基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、 C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；Ree、Rff和 Rgg各自獨立的選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 鹵代烷氧基、C1-6 羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的胺基、C1-6 烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、氧代基、硫代基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；r 爲 0~5 的整數；s 爲 0~5 的整數；t 爲 0~5 的整數；n2 爲 0~5 的整數；且m1 爲 0、1 或 2。
在本發明一種較佳的實施方式中，選自；R14選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的胺基、C1-6 烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性的被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、氧代基、硫代基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；較佳為氫、鹵素、胺基、C1-3烷基或 3-8 元雜環基，所述的胺基、C1-3烷基和 3-8 元雜環基，選擇性進一步被選自氫、鹵素、C1-3烷氧基和 C3-8環烷基中的一個或多個取代基所取代；更佳為氫、氯、氟、溴、胺基、甲基、甲氧基、環丙基、氮雜環丁烷基、嗎啡啉基，所述的胺基、甲基、甲氧基、環丙基、氮雜環丁基和嗎啡啉基，選擇性的被氫、氟、氯、溴和環丙基中的一個或多個所取代；R15選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基；較佳為氫或 C1-3烷基；更佳為甲基。
在本發明一種較佳的實施方式中，本發明提供一種通式( XI-A )所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽：，其中，Rf各自獨立地選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、C1-3烷基、C2-4 烯基、C2-4 炔基、C1-3 氘代烷基、C1-3 鹵代烷基、C1-3 烷氧基、C1-3 烷硫基、C1-3 烷基亞磺醯基、C1-3烷基磺醯基、鹵代 C1-3烷氧基或 C1-3羥烷基，較佳為 C1-3烷基；R10和 R11各自獨立的選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-3烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、氧代基、硫代基、C1-3氘代烷基、C1-3鹵代烷基、C1-3烷氧基、C1-3鹵代烷氧基、C1-3羥烷基或氰基取代的 C1-3烷基，較佳為鹵素；Rg各自獨立地選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-3烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、氧代基、硫代基、C1-3氘代烷基、C1-3鹵代烷基、C1-3烷氧基、C1-3鹵代烷氧基、C1-3羥烷基或氰基取代的 C1-3烷基，較佳為羥基、胺基或鹵素；Rh各自獨立地選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-3烷基、C1-3烷硫基、C1-3 烷氧基、C2-4 烯基、C2-4 炔基、氧代基、硫代基、C1-3 氘代烷基、C1-3 鹵代烷基、C1-3 烷氧基、C1-3鹵代烷氧基、C1-3羥烷基、氰基取代的 C1-3烷基，較佳為 C1-3烷基或 C1-3烷硫基，更佳為甲硫基或異丙基；r 爲 1~3 的整數；s爲 1~3 的整數；t爲 1~3 的整數，較佳為2。
在本發明一種較佳的實施方式中，本發明提供一種通式( XI-A )所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽：，其中，Rf各自獨立地選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、C1-3烷基、C2-4 烯基、C2-4 炔基、C1-3 氘代烷基、C1-3 鹵代烷基、C1-3 烷氧基、C1-3 烷硫基、C1-3 烷基亞磺醯基、C1-3烷基磺醯基、鹵代 C1-3烷氧基或 C1-3羥烷基，較佳為 C1-3烷基；R10和 R11各自獨立的選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-3烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、氧代基、硫代基、C1-3氘代烷基、C1-3鹵代烷基、C1-3烷氧基、C1-3鹵代烷氧基、C1-3羥烷基或氰基取代的 C1-3烷基，較佳為鹵素；Rg各自獨立地選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-3烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、氧代基、硫代基、C1-3氘代烷基、C1-3鹵代烷基、C1-3烷氧基、C1-3鹵代烷氧基、C1-3羥烷基或氰基取代的 C1-3烷基，較佳為羥基、胺基或鹵素；Rh各自獨立地選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-3烷基、C1-3烷硫基、C1-3 烷氧基、C2-4 烯基、C2-4 炔基、氧代基、硫代基、C1-3 氘代烷基、C1-3 鹵代烷基、C1-3 烷氧基、C1-3鹵代烷氧基、C1-3羥烷基、氰基取代的 C1-3烷基，較佳為 C1-3烷基或 C1-3烷硫基，更佳為甲硫基或異丙基；r 爲 1~3 的整數；s 爲 1~4 的整數；t 爲 1~3 的整數，較佳為2。
在本發明一種較佳的實施方式中，提供一種式( XI-B )所示的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其結構如下：其中：R10各自獨立地選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、C1-3烷基、C2-4烯基、C2-4 炔基、C1-3 氘代烷基、C1-3 鹵代烷基、C1-3 烷氧基、C1-3 烷硫基、C1-3 烷基亞磺醯基、C1-3烷基磺醯基、鹵代 C1-3烷氧基或 C1-3羥烷基；較佳為氟或氯；R15選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、C1-3烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-3 氘代烷基、C1-3 鹵代烷基、C1-3 烷氧基、C1-3 烷硫基、C1-3 烷基亞磺醯基、C1-3 烷基磺醯基、鹵代 C1-3烷氧基或 C1-3羥烷基；較佳為甲基；R20選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、C1-3烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-3 氘代烷基、C1-3 鹵代烷基、C1-3 烷氧基、C1-3 烷硫基、C1-3 烷基亞磺醯基、C1-3 烷基磺醯基、鹵代 C1-3烷氧基或 C1-3羥烷基；較佳為氫或甲基；R21和 R22各自獨立地選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、C1-3烷基、C2-4 烯基、C2-4 炔基、C1-3 氘代烷基、C1-3 鹵代烷基、C1-3 烷氧基、C1-3 烷硫基、C1-3 烷基亞磺醯基、C1-3烷基磺醯基、鹵代 C1-3烷氧基或 C1-3羥烷基；較佳為氫、羥基、胺基、氟、甲基、三氟甲基、甲硫基、甲胺基、胺基醯基或二甲胺基；R23和 R24各自獨立地選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、C1-3烷基、C2-4 烯基、C2-4 炔基、C1-3 氘代烷基、C1-3 鹵代烷基、C1-3 烷氧基、C1-3 烷硫基、C1-3 烷基亞磺醯基、C1-3烷基磺醯基、鹵代 C1-3烷氧基或 C1-3羥烷基；較佳為氫、氯、氟或甲基；R25選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、C1-3烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-3 氘代烷基、C1-3 鹵代烷基、C1-3 烷氧基、C1-3 烷硫基、C1-3 烷基亞磺醯基、C1-3 烷基磺醯基、鹵代 C1-3烷氧基或 C1-3羥烷基；較佳為氫、氟或甲基；q 爲 0~2 的整數。
在本發明一種更佳的實施方式中，所述的式( XI-B )所示的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中：Rf選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、甲基、乙基、丙基、異丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代異丙基、鹵代甲基、鹵代乙基、鹵代丙基、鹵代異丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、甲硫基、乙硫基、丙硫基、異丙硫基、鹵代甲氧基、鹵代乙氧基、鹵代丙氧基、羥甲基、羥乙基、羥丙基、羥異丙基、環丙基、環丁基、環戊基或環己基，較佳為氫或甲基；R10選自氫、氘、氟、氯、溴、碘、胺基、羥基、氰基、硝基、甲基、乙基、丙基、異丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代異丙基、鹵代甲基、鹵代乙基、鹵代丙基、鹵代異丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、鹵代甲氧基、鹵代乙氧基、鹵代丙氧基、鹵代異丙氧基、羥甲基、羥乙基、羥丙基、羥異丙基、環丙基、環丁基、環戊基或環己基，較佳為氟或氯；R15選自甲基、乙基、丙基、異丙基、環丙基、環丁基、環戊基或環己基，較佳為甲基；R21和 R22各自獨立地選自氫、氘、氟、氯、溴、碘、胺基、羥基、氰基、硝基、甲基、乙基、丙基、異丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代異丙基、鹵代甲基、鹵代乙基、鹵代丙基、鹵代異丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基，羥甲基、羥乙基、羥丙基、羥異丙基、環丙基、環丁基、環戊基或環己基，較佳為羥基、胺基、氟、氯或甲基；R23和 R24各自獨立地選自氫、氘、氟、氯、溴、碘、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、C1-3烷基、甲基、乙基、丙基、異丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代異丙基、鹵代甲基、鹵代乙基、鹵代丙基、鹵代異丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基，羥甲基、羥乙基、羥丙基、羥異丙基、環丙基、環丁基、環戊基或環己基，較佳為氫、氟、氯或甲基；R25選自氫、氘、氟、氯、溴、碘、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、甲基、乙基、丙基、異丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代異丙基、鹵代甲基、鹵代乙基、鹵代丙基、鹵代異丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基，羥甲基、羥乙基、羥丙基或羥異丙基、環丙基、環丁基、環戊基或環己基，較佳為氫、氟或甲基。
在本發明一種進一步較佳的實施方式中，所述的式( XI-B )所示的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中：Rf選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、甲基、乙基、丙基、異丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代異丙基、鹵代甲基、鹵代乙基、鹵代丙基、鹵代異丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、甲硫基、乙硫基、丙硫基、異丙硫基、鹵代甲氧基、鹵代乙氧基、鹵代丙氧基、羥甲基、羥乙基、羥丙基或羥異丙基，較佳為氫或甲基；R10選自氫、氘、氟、氯、溴、碘、胺基、羥基、氰基、硝基、甲基、乙基、丙基、異丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代異丙基、鹵代甲基、鹵代乙基、鹵代丙基、鹵代異丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、鹵代甲氧基、鹵代乙氧基、鹵代丙氧基、鹵代異丙氧基、羥甲基、羥乙基、羥丙基或羥異丙基，較佳為氟或氯；R15選自甲基、乙基、丙基或異丙基，較佳為甲基；R21和 R22各自獨立地選自氫、氘、氟、氯、溴、碘、胺基、羥基、氰基、硝基、甲基、乙基、丙基、異丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代異丙基、鹵代甲基、鹵代乙基、鹵代丙基、鹵代異丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基，羥甲基、羥乙基、羥丙基或羥異丙基，較佳為羥基、胺基、氟、氯或甲基；R23和 R24各自獨立地選自氫、氘、氟、氯、溴、碘、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、C1-3烷基、甲基、乙基、丙基、異丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代異丙基、鹵代甲基、鹵代乙基、鹵代丙基、鹵代異丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基，羥甲基、羥乙基、羥丙基或羥異丙基，較佳為氫、氟、氯或甲基；R25選自氫、氘、氟、氯、溴、碘、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、甲基、乙基、丙基、異丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代異丙基、鹵代甲基、鹵代乙基、鹵代丙基、鹵代異丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基，羥甲基、羥乙基、羥丙基或羥異丙基，較佳為氫、氟或甲基。
在本發明一種較佳的實施方式中，提供一種式( XI-C )或( XI-D )所示的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其結構如下： 。
在本發明一種更佳的實施方式中，所述化合物式( XI-C )或( XI-D )的結構如下：或。
在本發明一種更佳的實施方式中，所述的式( XI-C )或( XI-D ) 所示的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中：R21和 R22各自獨立地選自胺基或氟，R23和 R24各自獨立地選自氫、氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基或異丙基；或者，R21和 R22各自獨立地選自羥基或氟，R23和 R24各自獨立地選自氫、氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基或異丙基。
較佳地，R21爲胺基、R22選自爲氟，或者 R21爲羥基、R22選自爲氟。
在本發明一種較佳的實施方式中，環 A 選自 C6-10芳基或 5-12 元雜芳基，其中 5-12 元雜芳基選自含有 1-3 個氮原子的雜芳基，較佳為 5-7 元含氮雜芳基、苯并 5-7 元含氮雜芳基或 5-7 元含氮雜芳基并苯基；更佳為以下基團：、、、、、、、或，選擇性地，被羥基、鹵素、胺基、巰基、C1-6羥烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷硫基-烷基、C1-6鹵代烷硫基、C1-6烷基胺基甲醯基、C1-6烷基亞磺醯基、C1-6烷基磺醯基和 C1-6烷基中的一個或多個取代基所取代。
在本發明一種較佳的實施方式中，環 B 選自含有 1-3 個氮原子的 5-12 元雜環基，包括如下基團：、、、、、、、、、、或。
在本發明進一步較佳的實施方式中，提供一種式(XII)化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其具體結構如下：R16選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的胺基、C1-6烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 鹵代烷氧基、 C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；較佳為氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、C1-3烷基、C2-5烯基、C2-5炔基、C1-3氘代烷基、C1-3鹵代烷基、C1-3羥烷基、C1-3烷氧基、C1-3鹵代烷氧基、C3-6環烷基、3-10 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基；更佳為氫、氘、氟、氯、溴、胺基、羥基、氰基、甲基、乙基、丙基、乙烯基、丙烯基、烯丙基、乙炔基、丙炔基、炔丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氟甲基、氟乙基、氟丙基、氯甲基、氯乙基、氯丙基、溴甲基、溴乙基、溴丙基、羥甲基、羥乙基、羥丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、氟代甲氧基、氟代乙氧基、氟代丙氧基、氯代甲氧基、氯代乙氧基、氯代丙氧基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環氧丙基、環氧丁基、環氧戊基、環氧己基、環氧庚基、氮雜環丙基、氮雜環丁基、氮雜環戊基、氮雜環己基、氮雜環庚基、噻吩基、吡咯基、吡啶基、吡喃基、呱嗪基、苯基或萘基；R17選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的胺基、C1-6烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 鹵代烷氧基、 C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；較佳為 C3-8環烷基、3-8 元雜環基、C6-10芳基或 5-10 元雜芳基，所述的 C3-8環烷基、 3-8 元雜環基、C6-10芳基和 5-10 元雜芳基，選擇性的進一步被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-3烷基、C2-3烯基、C2-3炔基、氧代基、硫代基、C1-3氘代烷基、C1-3鹵代烷基、C1-3烷氧基、C1-3鹵代烷氧基、C1-3羥烷基、氰基取代的 C1-3烷基、C3-10環烷基、3-10 元雜環基、C6-10芳基和 5-10 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；更佳為 C3-6環烷基、含 1-3 個 N、O 或 S 原子的 3-8 元雜環基、C6-10芳基或含 1-3 個 N、O 或 S 原子的 5-10 元雜芳基，選擇性的進一步被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-3烷基、C2-3烯基、C2-3炔基、氧代基、硫代基、C1-3氘代烷基、C1-3鹵代烷基、C1-3烷氧基、C1-3鹵代烷氧基、C1-3羥烷基、氰基取代的 C1-3烷基、C3-10環烷基、3-10 元雜環基、C6-10芳基和 5-10 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；進一步較佳為環己基、四氫吡喃基、苯基、嘧啶基、萘基、吡啶基或苯并咪唑基，所述的環己基、四氫吡喃基、苯基、嘧啶基、萘基、吡啶基和苯并咪唑基，選擇性進一步被氫、氟、氯、胺基、羥基或甲基中的一個或多個取代基所取代；R18選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基；較佳為氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、C1-3烷基、C2-5烯基、C2-5炔基、C1-3氘代烷基、C1-3鹵代烷基、C1-3羥烷基、C1-3烷氧基、C1-3鹵代烷氧基、C3-6環烷基、3-10 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基；更佳為氫、氘、氟、氯、溴、胺基、羥基、氰基、甲基、乙基、丙基、乙烯基、丙烯基、烯丙基、乙炔基、丙炔基、炔丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氟甲基、氟乙基、氟丙基、氯甲基、氯乙基、氯丙基、溴甲基、溴乙基、溴丙基、羥甲基、羥乙基、羥丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、氟代甲氧基、氟代乙氧基、氟代丙氧基、氯代甲氧基、氯代乙氧基、氯代丙氧基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環氧丙基、環氧丁基、環氧戊基、環氧己基、環氧庚基、氮雜環丙基、氮雜環丁基、氮雜環戊基、氮雜環己基、氮雜環庚基、噻吩基、吡咯基、吡啶基、吡喃基、呱嗪基、苯基或萘基；R19選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基或 5-12 元雜芳基，所述的胺基、C1-6烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C1-6 氘代烷基、C1-6 鹵代烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 鹵代烷氧基、 C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基，選擇性被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的 C1-6烷基、C3-12環烷基、3-12 元雜環基、C6-12芳基和 5-12 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；較佳為 C3-8環烷基、3-8 元雜環基、C6-10芳基或 5-10 元雜芳基，所述的 C3-8環烷基、 3-8 元雜環基、C6-10芳基和 5-10 元雜芳基，選擇性的進一步被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-3烷基、C2-3烯基、C2-3炔基、氧代基、硫代基、C1-3氘代烷基、C1-3鹵代烷基、C1-3烷氧基、C1-3鹵代烷氧基、C1-3羥烷基、氰基取代的 C1-3烷基、C3-10環烷基、3-10 元雜環基、C6-10芳基和 5-10 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；更佳為 C3-6環烷基、含 1-3 個 N、O 或 S 原子的 3-8 元雜環基、C6-10芳基或含 1-3 個 N、O 或 S 原子的 5-10 元雜芳基，選擇性的進一步被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-3烷基、C2-3烯基、C2-3炔基、氧代基、硫代基、C1-3氘代烷基、C1-3鹵代烷基、C1-3烷氧基、C1-3鹵代烷氧基、C1-3羥烷基、氰基取代的 C1-3烷基、C3-10環烷基、3-10 元雜環基、C6-10芳基和 5-10 元雜芳基中的一個或多個取代基所取代；進一步較佳為環己基、四氫吡喃基、苯基、嘧啶基、萘基、吡啶基或苯并咪唑基，所述的環己基、四氫吡喃基、苯基、嘧啶基、萘基、吡啶基和苯并咪唑基，選擇性的進一步被氫、氟、氯、胺基、羥基或甲基中的一個或多個取代基所取代。
在本發明最佳的實施方式中，包括以下具體化合物： 或。
較佳的是，當選自下列化合物結構時，其還可以進一步被分離成對映構型的軸手性化合物， ；進一步的，所述化合物的軸手性化合物結構分別如下： 。
作爲本發明的一種實施方案：當化合物結構爲時，其包含兩個軸手性異構體60-1 和60-2，其中化合物60-1 和60-2 具有以下的參數：化合物60-1 爲首先被沖洗下來的軸手性化合物，其保留時間早於化合物60-2，較佳的，化合物60-1 的保留時間t R =1.92 min，化合物60-2 的保留時間t R =2.43 min，檢測條件如下表 1
儀器 SFC Method Station (Thar, Waters)
柱型 Celluloe-SC 4.6×100mm, 5um (YMC)
柱壓 120 bar
流動相 A :CO2；B :Methanol [0.2%NH3(7M in methanol)]；A :B=60:40
流速 4 mL/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 40℃
；或者，當化合物結構爲時，其包含兩個軸手性異構體75-1 和75-2，其中化合物75-1 和75-2 具有以下的參數：化合物75-1 爲首先被沖洗下來的軸手性化合物，其保留時間早於化合物75-2，較佳的，化合物75-1 的保留時間t R =1.97 min，化合物75-2 的保留時間t R =3.75 min，檢測條件如下：表 2
儀器 SFC Method Station (Thar, Waters)
柱型 Celluloe-SC 4.6×100mm, 5um (YMC)
柱壓 120 bar
流動相 A :CO2；B :Methanol [0.2%NH3(7M in methanol)]；A :B=60:40
流速 4 mL/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 40℃
；或者，當化合物結構爲時，其包含兩個軸手性異構體114-1 和114-2，其中化合物114-1 和114-2 具有以下的參數：化合物114-1 爲首先被沖洗下來的軸手性化合物，其保留時間早於化合物114-2，較佳的，化合物114-1 的保留時間t R =1.99min，化合物114-2 的保留時間t R =2.87 min，檢測條件如下：表 3
儀器 SFC Method Station (Thar, Waters)
柱型 Celluloe-SC 4.6×100mm, 5um (YMC)
柱壓 120 bar
流動相 A :CO2；B :Ethanol [1.0%NH3(7M in methanol)]；A :B=65:35
流速 4 mL/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 40℃
；或者，當化合物結構爲時，其包含兩個軸手性異構體150-1 和150-2，其中化合物150-1 和150-2 具有以下的參數：化合物150-1 爲首先被沖洗下來的軸手性化合物，其保留時間早於化合物150-2，較佳的，化合物150-1 的保留時間t R =1.87min，化合物150-2 的保留時間t R =2.80min，檢測條件如下：表 4
儀器 SFC method station (Thar, Waters)
柱型 OX-H 4.6*100mm, 5 μm (Daicel)
柱壓 120 bar
流動相 A :CO2；B :Methanol [0.2%NH3(7M in methanol)]；A :B=65:35
流速 4 mL/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 40℃
；或者，當化合物結構爲時，其包含兩個軸手性異構體 165-1 和165-2，其中化合物 165-1 和 165-2 具有以下的參數：化合物 165-1 爲首先被沖洗下來的軸手性化合物，其保留時間早於化合物 165-2，較佳的，化合物 165-1 的保留時間 t R =1.74min，化合物 165-2 的保留時間 t R =2.49 min，檢測條件如下：表 5
儀器 SFC Method Station (Thar, Waters)
柱型 OX-H 4.6*100mm, 5 μm (Daicel)
柱壓 120 bar
流動相 A :CO2；B :Methanol [0.2%NH3(7M in methanol)]；A :B=65:35
流速 4 mL/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 40℃
；或者，當化合物結構爲時，其包含兩個軸手性異構體166-1和166-2，其中化合物 166-1 和 166-2 具有以下的參數：化合物 166-1 爲首先被沖洗下來的軸手性化合物，其保留時間早於化合物 166-2，較佳的，化合物 166-1 的保留時間 t R =2.46min，化合物 166-2 的保留時間 t R =3.08 min，檢測條件如下：表 6
儀器 SFC method station (Thar, Waters)
柱型 IC 4.6*100mm, 5 μm (Daicel)
柱壓 120 bar
流動相 A :CO2；B :Ethanol [1.0%NH3(7M in methanol)]；A :B=55:45
流速 4 mL/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 40℃
。
作爲本發明的一種實施方案：當化合物結構爲時，可透過下列 SFC 手性製備條件拆分得到兩個軸手性異構體 60-1 和 60-2，其中化合物 60-1 爲首先被沖洗下來的軸手性化合物，其保留時間早於化合物 60-2，較佳的，化合物 60-1 的保留時間 t R =1.92 min，化合物 60-2 的保留時間 t R =2.43 min，SFC 手性製備條件如下：表 7
儀器 SFC Method Station (Thar, Waters)
柱型 Celluloe-SC 4.6×100mm, 5um (YMC)
柱壓 120 bar
流動相 A :CO2；B :Methanol [0.2%NH3(7M in methanol)]；A :B=60:40
流速 4 mL/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 40℃
；或者，當化合物結構爲時，可透過下列 SFC 手性製備條件拆分得到兩個軸手性異構體 75-1 和 75-2，其中化合物 75-1 爲首先被沖洗下來的軸手性化合物，其保留時間早於化合物 75-2，較佳的，化合物 75-1 的保留時間 t R =1.97 min，化合物 75-2 的保留時間 t R =3.75 min，SFC 手性製備條件如下：表 8
儀器 SFC Method Station (Thar, Waters)
柱型 Celluloe-SC 4.6×100mm, 5um (YMC)
柱壓 120 bar
流動相 A :CO2；B :Methanol [0.2%NH3(7M in methanol)]；A :B=60:40
流速 4 mL/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 40℃
；或者，當化合物結構爲時，可透過下列 SFC 手性製備條件拆分得到兩個軸手性異構體 114-1 和 114-2，其中化合物 114-1 爲首先被沖洗下來的軸手性化合物，其保留時間早於化合物 114-2，較佳的，化合物 114-1 的保留時間 t R =1.99min，化合物 114-2 的保留時間 t R =2.87 min，SFC 手性製備條件如下：表 9
儀器 SFC Method Station (Thar, Waters)
柱型 Celluloe-SC 4.6×100mm, 5um (YMC)
柱壓 120 bar
流動相 A :CO2；B :Ethanol [1.0%NH3(7M in methanol)]；A :B=65:35
流速 4 mL/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 40℃
；或者，當化合物結構爲時，可透過下列 SFC 手性製備條件拆分得到兩個軸手性異構體 150-1 和 150-2，其中化合物 150-1 爲首先被沖洗下來的軸手性化合物，其保留時間早於化合物 150-2，較佳的，化合物 150-1 的保留時間 t R =1.87min，化合物 150-2 的保留時間 t R =2.80min，SFC 手性製備條件如下：表 10
儀器 SFC method station (Thar, Waters)
柱型 OX-H 4.6*100mm, 5 μm (Daicel)
柱壓 120 bar
流動相 A :CO2；B :Methanol [0.2%NH3(7M in methanol)]；A :B=65:35
流速 4 mL/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 40℃
；或者，當化合物結構爲時，可透過下列 SFC 手性製備條件拆分得到兩個軸手性異構體 165-1 和 165-2，其中化合物 165-1 爲首先被沖洗下來的軸手性化合物，其保留時間早於化合物 165-2，較佳的，化合物 165-1 的保留時間 t R =1.74min，化合物 165-2 的保留時間 t R =2.49 min，SFC 手性製備條件如下：表 11
儀器 SFC Method Station (Thar, Waters)
柱型 OX-H 4.6*100mm, 5 μm (Daicel)
柱壓 120 bar
流動相 A :CO2；B :Methanol [0.2%NH3(7M in methanol)]；A :B=65:35
流速 4 mL/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 40℃
；或者，當化合物結構爲時，可透過下列 SFC 手性製備條件拆分得到兩個軸手性異構體166-1和166-2，其中化合物166-1爲首先被沖洗下來的軸手性化合物，其保留時間早於化合物 166-2，較佳的，化合物 166-1 的保留時間 t R =2.46min，化合物 166-2 的保留時間 t R =3.08 min，SFC 手性製備條件如下：表 12
儀器 SFC method station (Thar, Waters)
柱型 IC 4.6*100mm, 5 μm (Daicel)
柱壓 120 bar
流動相 A :CO2；B :Ethanol [1.0%NH3(7M in methanol)]；A :B=55:45
流速 4 mL/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 40℃
。
本發明所屬技術領域中具有通常知識者所能理解的是，本發明軸手性異構體還可以透過其他常見的拆分方法或者不同的拆分條件進行拆分，同時不同的拆分方法或拆分條件可能會導致化合物的保留時間發生變化，本發明所屬技術領域中具有通常知識者可以透過常見的拆分方法方法獲得本發明對應化合物的軸手性異構體，對應消旋體及其不同條件下拆分所獲得的軸手性異構體均爲本發明所保護的內容。
作爲另一種實施的方案，本發明軸手性異構體具有如下抑制活性：（1）化合物 60 透過手性拆分得到兩個軸手性異構體 60-1 和 60-2，其中化合物 60-1 的 NCI-H358 細胞增殖抑制活性的 IC50值≤100nM，較佳≤50nm，更佳≤30 nM，進一步較佳爲 28 nM；或者，化合物 60-1 的 Mia PaCa-2 細胞增殖抑制活性的 IC50值≤100nM，較佳≤80 nM，更佳≤60 nM，進一步較佳爲 55 nM；或者，（2）化合物 75 透過手性拆分得到兩個軸手性異構體 75-1 和 75-2，其中化合物75-1的NCI-H358細胞增殖抑制活性的IC50值≤100nM，較佳≤50 nM，更佳≤30 nM，進一步較佳爲 25 nM；或者，化合物 75-1 的 Mia PaCa-2 細胞增殖抑制活性的 IC50值≤100nM，較佳≤80 nM，進一步較佳≤60 nM，更佳≤60 nM，最佳爲 36 nM；或者，（3）化合物 114 透過手性拆分得到兩個軸手性異構體 114-1 和 114-2，其中化合物 114-1 的 NCI-H358 細胞增殖抑制活性的 IC50值≤100nM，較佳≤50 nM，更佳≤40 nM，進一步較佳爲 35 nM；或者，化合物 114-1 的 Mia PaCa-2 細胞增殖抑制活性的 IC50值≤100nM，較佳≤80 nM，進一步較佳≤60 nM，更佳≤50 nM，更進一步較佳≤30nM 最佳爲 29 nM；或者，（4）化合物 150 透過手性拆分得到兩個軸手性異構體 150-1 和 150-2，其中化合物 150-1 的 NCI-H358 細胞增殖抑制活性的 IC50值≤100nM，較佳≤50 nM，更佳≤20 nM，進一步較佳≤10 nM，最佳爲 6.6 nM；或者，化合物 150-1 的 Mia PaCa-2 細胞增殖抑制活性的 IC50值≤100nM，較佳≤50nM，進一步較佳≤20 nM，更進一步較佳≤10 nM，最佳爲 3.5 nM；或者，（5）化合物 165 透過手性拆分得到兩個軸手性異構體 165-1 和 165-2，其中化合物 165-1 的 NCI-H358 細胞增殖抑制活性的 IC50值≤100nM，較佳≤50nm，進一步較佳≤30 nM，更進一步較佳≤10 nM，更佳爲 6.6 nM；或者，化合物 165-1 的 Mia PaCa-2 細胞增殖抑制活性的 IC50值≤80nM，較佳≤50 nM，進一步較佳≤20 nM，更進一步較佳≤10 nM，再進一步較佳≤5nM，最佳爲 3.3 nM；或者，（6）化合物 166 透過手性拆分得到兩個軸手性異構體 166-1 和 166-2，其中化合物 166-1 的 NCI-H358 細胞增殖抑制活性的 IC50值≤50nM，較佳≤30nm，進一步較佳 ≤20 nM，更佳爲 17 nM；或者，化合物 166-1 的 Mia PaCa-2 細胞增殖抑制活性的 IC50值≤50 nM，較佳≤30 nM，進一步較佳≤20 nM，更進一步較佳≤15 nM，最佳爲 11 nM。作爲本發明較佳的實施方案，NCI-H358 細胞增殖抑制活性和 Mia PaCa-2 細胞增殖抑制活性的檢測方法爲：透過細胞培養，向培養的細胞中加入不同濃度的化合物溶液，繼續培養一段時間後，測定細胞增殖情况；進一步的，細胞培養的方法爲，用完全培養基將細胞調整爲合適的細胞濃度，將細胞懸液鋪於孔板中進行培養；較佳的，培養條件爲 37℃，5% CO2培養箱過夜培養；較佳的，細胞懸液鋪於 96 孔板、48 孔板、24 孔板、12 孔板或 6 孔板中，更佳為 96 孔板；較佳的，合適的細胞濃度爲 1500-4000 細胞/孔，每孔加入 90uL 細胞懸液；進一步的，化合物溶液是用 DMSO 配製的，可以進一步用培養基稀釋； 較佳的，化合物溶液的濃度梯度爲 100uM 起始，4 倍稀釋，更佳為 30uM 起始，4 倍稀釋，最佳爲 10uM 起始，4 倍稀釋；進一步的，每孔加入化合物溶液或溶媒的體積爲 1-10 μL，較佳 10 μL；進一步的，加入化合物溶液後，繼續培養的條件爲 37℃，5% CO2培養箱；較佳的，培養時間爲 24-72h，更佳為 72h；進一步的，測定細胞增殖情况的方法爲 MTT、CCK8、CellTiter-Glo；較佳方法爲CellTiter-Glo；進一步的，細胞增殖情况是使用酶標儀進行讀數，更佳爲 BioTek Synergy H1 酶標儀。
作爲另一種實施的方案，本發明化合物軸手性異構體 114-1 在 Mia PaCa-2 細胞中pERK 抑制的 IC50值≤100nM，較佳≤50 nM，進一步較佳≤40 nM，最佳爲 38 nM；
或者，所述化合物軸手性異構體 150-1 在 Mia PaCa-2 細胞中 pERK 抑制的 IC50值≤50 nM，較佳≤30 nM，進一步較佳≤10 nM，更進一步較佳≤5 nM，最佳爲 5 nM；
或者，所述化合物軸手性異構體 165-1 在 Mia PaCa-2 細胞中 pERK 抑制的 IC50值≤50nM，較佳≤30nM，進一步較佳≤20 nM，更進一步較佳≤10 nM，再進一步較佳≤5 nM ，最佳爲 4.2 nM；
或者，所述化合物軸手性異構體 166-1 在 Mia PaCa-2 細胞中 pERK 抑制的 IC50值≤50 nM，較佳≤30 nM，進一步較佳≤20 nM，最佳爲 20 nM。
作爲本發明較佳的實施方案，磷酸化 ERK 水平抑制活性的檢測方法爲：透過細胞培養，向培養的細胞中加入不同濃度的化合物溶液，繼續培養一段時間後，細胞裂解，離心，測定化合物與酶的親和力；進一步的，細胞培養的方法爲，用完全培養基將細胞調整爲合適的細胞濃度，較佳細胞濃度爲 1×106/mL，將細胞懸液鋪於孔板中進行培養。較佳的，培養條件爲 37℃， 5% CO2培養箱過夜培養；較佳的，細胞懸液鋪於 96 孔板、48 孔板、24 孔板、12 孔板或6 孔板中，更佳為 96 孔板； 較佳的，合適的細胞濃度爲 50000 細胞/孔；進一步的，化合物溶液是用 DMSO 配製的，可以進一步用培養基稀釋；較佳的，化合物溶液的濃度梯度爲 100uM 起始，4 倍稀釋，更佳為 30 uM 起始，4 倍稀釋，最佳爲 10uM 起始，4 倍稀釋；進一步的，每孔加入化合物溶液或溶媒的體積爲 1-50 μL，較佳為 20-25 μL，更佳為 25 μL；進一步的，加入化合物溶液後，繼續培養的條件爲 37℃，5% CO2培養箱；較佳的，培養時間爲 1-6h，更佳為 2h；進一步的，細胞裂解爲加入裂解液，或者較佳裂解液加入 50-100μL，更佳為 50μL；或者較佳裂解是在室溫震盪條件下進行的，更佳裂解時間爲 30 分鐘；進一步的，離心條件爲：離心機 1000 rpm 離心 1 分鐘；進一步的，測定化合物與酶的親和力的方法爲，將上清轉移到孔板中，加入檢測混合液，反應後用酶標儀測定；較佳的，上清的體積爲 10-30μL，較佳 15μL；較佳的，檢測混合液爲 Eu-labeled anti-ERK1/2 (T202-Y204) Antibody 以及 ULight labeled anti-ERK1/2 Antibody；更佳的，檢測混合液爲檢測終濃度爲 0.5 nM 的 Eu-labeled anti-ERK1/2 (T202-Y204) Antibody 以及檢測終濃度爲 5 nM 的 ULight labeled anti-ERK1/2 Antibody；進一步較佳的，所述檢測混合液的體積爲 5-10 μL，更佳為 5 μL；進一步的，裂解離心後上清液與檢測混合溶液反應一段時間，較佳爲室溫反應過夜；進一步的，細胞增殖情况是使用酶標儀進行讀數，更佳爲 BioTek Synergy H1 酶標儀。
本發明所屬技術領域中具有通常知識者所能理解的是，本發明軸手性異構體還可以透過其他常見的活性測定方法測定抑制活性，不同的檢測方法或調整檢測條件會導致化合物的抑制活性發生波動或産生較大的變化，不同活性測定方法測定的軸手性異構體均爲本發明所保護的內容。
本發明還涉及一種製備通式( XI-A )所示的化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽的方法，其中包含以下步驟，通式（XI-A5）脫保護，得到通式（XI-A3）所示化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽；通式（XI-A3）與通式（XI-A4）發生縮合反應，得到通式（XI-A2）所示化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽；通式（XI-A2）與通式（XI-A1）發生偶聯反應，得到通式（XI-A）所示化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽；其中：Pg 爲胺基保護基，較佳為烯丙氧羰基、三氟乙醯基、三級丁基亞磺醯基 2,4-二甲氧基苄基、硝基苯磺醯基、三苯甲基、笏甲氧羰基、9-芴甲氧羰基、苄基、對甲苯磺醯基、對甲氧基苄基、甲酸酯、乙醯基、苄氧羰基、鄰苯二甲醯基、三級丁氧羰基、苄基或對甲氧苯基；更佳為三級丁氧羰基；X1選自鹵素；較佳為氟、氯、溴或碘；更佳為氯；R26選自鹵素、硼酸或硼酸酯；較佳為氟、氯、溴、碘、-B(OH)2或；當 X1爲鹵素時，R26選自硼酸或硼酸酯；當X1選自硼酸或硼酸酯時，R26爲鹵素；R27選自鹵素、羥基、或烷基羰基氧基；較佳為氯或羥基。
本發明還涉及一種製備通式( XI-A )所示的化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽的方法，其中包含以下步驟，通式（XI-A7）脫保護得到通式（XI-A6）所示化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽；通式（XI-A6）與通式（XI-A4）發生縮合反應，得到通式（XI-A）所示化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽。
本發明還涉及一種製備通式( XI-B )所示的化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽的方法，其中包含以下步驟，通式（XI-B4）脫保護，得到通式（XI-B3）所示化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽；通式（XI-B3）與通式（XI-A4）發生縮合反應，得到通式（XI-B2）所示化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽；通式（XI-B2）與通式（XI-B1）發生偶聯反應，得到通式（XI-B）所示化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽。
本發明還涉及一種製備通式( XI-B )所示的化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽的方法，其中包含以下步驟，通式（XI-B6）脫保護，得到通式（XI-B5）所示化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽；通式（XI-B5）與通式（XI-A4）發生縮合反應，得到通式（XI-B）所示化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽。
本發明還提供了一種較佳方案，還涉及一種藥用組合物，其包括治療有效劑量的所示的通式( I )化合物及其立體異構體或其藥學上可接受的鹽以及一種或多種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
本發明進一步涉及任一所示的通式( I )化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，或所述的藥用組合物在製備 KRAS 抑制劑藥物中的應用；較佳為在 KRAS G12C 突變藥物中的應用。
本發明還提供了一種較佳方案，還涉及所述的通式( I )化合物、及其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，或所述的藥用組合物在治療預防和/或治療預製備治療由 KRAS 抑制劑介導的病症的方法，該方法包括向患者施用治療有效劑量的通式(I)所示的化合物其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，或其藥用組合物。
在一些實施例中，本發明的化合物和組合物可用於治療在製備治療努南氏症候群、豹皮症候群、白血病、神經母細胞瘤、黑色素瘤、乳腺癌、食道癌、頭頸部腫瘤、胃癌、肺癌及其結腸癌等疾病或病症中的用途。
本發明的化合物和組合物可用於治療在製備治療努南氏症候群、豹皮症候群、白血病、神經母細胞瘤、黑色素瘤、乳腺癌、食道癌、頭頸部腫瘤、肺癌及其結腸癌等疾病或病症中的方法。
在一些實施例中，本發明提供一種治療癌症病症的方法，其包含將本發明的化合物或組合物給予患有癌症病症的患者。
在一些實施例中，由本發明的化合物或組合物治療的癌症爲努南氏症候群、豹皮症候群、白血病、神經母細胞瘤、黑色素瘤、乳腺癌、食道癌、頭頸部腫瘤、胃癌、肺癌及其結腸癌；較佳為非小細胞肺癌、結腸癌、食管癌、頭頸部腫瘤。
發明的詳細說明
除非有相反陳述，在說明書和申請專利範圍中使用的術語具有下述含義。
術語“烷基”指飽和脂肪族烴基團，其爲包含 1 至 20 個碳原子的直鏈或支鏈基團，較佳為含有 1 至 8 個碳原子的烷基，更佳為 1 至 6 個碳原子的烷基，最佳為 1 至 3 個碳原子的烷基。非限制性實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、三級丁基、二級丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、 2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各種支鏈異構體等。更佳的是含有 1 至 6 個碳原子的低級烷基，非限制性實施例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、三級丁基、二級丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，所述取代基較佳爲一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基，本發明較佳為甲基、乙基、異丙基、三級丁基、鹵代烷基、氘代烷基、烷氧基取代的烷基和羥基取代的烷基。
術語“亞烷基”是指烷基的一個氫原子進一步被取代，例如：“亞甲基”指-CH2-、“亞乙基”指-(CH2)2-、“亞丙基”指-(CH2)3-、“亞丁基”指-(CH2)4-等。術語“烯基”指由至少由兩個碳原子和至少一個碳-碳雙鍵組成的如上定義的烷基，例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、 1-、2-或 3-丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳爲一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基。
術語“環烷基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，環烷基環包含 3 至 20 個碳原子，較佳為包含 3 至 12 個碳原子，更佳為包含 3 至 6 個碳原子。單環環烷基的非限制性實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環庚三烯基、環辛基等；多環環烷基包括螺環、稠環和橋環的環烷基，較佳為環丙基、環丁基、環己基、環戊基和環庚基。
術語“螺環烷基”指 5 至 20 元的單環之間共用一個碳原子(稱螺原子)的多環基團，其可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的 π 電子系統。較佳爲 6 至 14 元，更佳爲 7 至 10 元。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺環烷基分爲單螺環烷基、雙螺環烷基或多螺環烷基，較佳爲單螺環烷基和雙螺環烷基。更佳爲 3 元/6 元、3 元/5 元、4 元/4 元、4 元/5 元、4 元/6 元、5 元/5 元或 5 元/6 元單螺環烷基。螺環烷基的非限制性實例包括：和等；也包含單螺環烷基與雜環烷基共用螺原子的螺環烷基，非限制性實例包括： 和等。術語“稠環烷基”指 5 至 20 元，系統中的每個環與體系中的其他環共享毗鄰的一對碳原子的全碳多環基團，其中一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的 π 電子系統。較佳爲 6 至 14 元，更佳爲 7 至 10 元。根據組成環的數目可以分爲雙環、三環、四環或多環稠環烷基，較佳爲雙環或三環，更佳爲 5 元/5 元或 5 元/6 元雙環烷基。稠環烷基的非限制性實例包括：和等。
術語“橋環烷基”指 5 至 20 元，任意兩個環共用兩個不直接連接的碳原子的全碳多環基團，其可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的 π 電子系統。較佳爲 6 至 14 元，更佳爲 7 至 10 元。根據組成環的數目可以分爲雙環、三環、四環或多環橋環烷基，較佳爲雙環、三環或四環，更有選爲雙環或三環。橋環烷基的非限制性實例包括： 和所述環烷基環可以稠合於芳基、雜芳基或雜環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環爲環烷基，非限制性實例包括茚滿基、四氫萘基、苯并環庚烷基等。環烷基可以是選擇性取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳爲一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
術語“雜環基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，其包含 3 至 20 個環原子，其中一個或多個環原子爲選自氮、氧或 S(O)m(其中 m 是整數 0 至 2)的雜原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的環部分，其餘環原子爲碳。較佳為包含 3 至 12 個環原子，其中 1～4 個是雜原子；更佳為包含 3 至 8 個環原子；最佳為包含 3 至 8 個環原子；進一步較佳為包含 1-3 氮原子的 3-8 元雜環基，選擇性地，被 1-2 個氧原子、硫原子、氧代基取代，包括含氮單環雜環基、含氮螺雜環基或含氮稠雜環基。
單環雜環基的非限制性實例包括吡咯烷基、咪唑烷基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、二氫咪唑基、二氫呋喃基、二氫吡唑基、二氫吡咯基、呱啶基、呱嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、高呱嗪基、吖庚基、1,4-二氮雜環庚基、吡喃基等，較佳為吡咯烷基、嗎啉基、呱啶基、吖庚基、1,4-二氮雜環庚基和呱嗪基。多環雜環基包括螺環、稠環和橋環的雜環基；其中涉及到的螺環、稠環和橋環的雜環基選擇性與其他基團透過單鍵相連接，或者透過環上的任意兩個或者兩個以上的原子與其他環烷基、雜環基、芳基和雜芳基進一步并環連接。
術語“螺雜環基”指 5 至 20 元的單環之間共用一個原子(稱螺原子)的多環雜環基團，其中一個或多個環原子爲選自氮、氧或 S(O)m(其中 m 是整數 0 至 2)的雜原子，其餘環原子爲碳。其可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的 π 電子系統。較佳爲 6 至 14 元，更佳爲 7 至 10 元。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺雜環基分爲單螺雜環基、雙螺雜環基或多螺雜環基，較佳爲單螺雜環基和雙螺雜環基。更佳爲 3 元/5 元、3 元/6 元、4 元/4 元、4 元/5 元、4 元/6 元、5 元/5 元或 5 元/6 元單螺雜環基。
螺雜環基的非限制性實例包括： 等。
術語“稠雜環基”指 5 至 20 元，系統中的每個環與體系中的其他環共享毗鄰的一對原子的多環雜環基團，一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的 π 電子系統，其中一個或多個環原子爲選自氮、氧或 S(O)m(其中 m 是整數 0 至 2)的雜原子，其餘環原子爲碳。較佳爲 6 至 14 元，更佳爲 7 至 10 元。根據組成環的數目可以分爲雙環、三環、四環或多環稠雜環基，較佳爲雙環或三環，更佳爲 5 元/5 元或5 元/6 元雙環稠雜環基。稠雜環基的非限制性實例包括： 和等。
術語“橋雜環基”指 5 至 14 元，任意兩個環共用兩個不直接連接的原子的多環雜環基團，其可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的 π 電子系統，其中一個或多個環原子爲選自氮、氧或 S(O)m(其中 m 是整數 0 至 2)的雜原子，其餘環原子爲碳。較佳爲 6 至 14 元，更佳爲 7 至 10 元。根據組成環的數目可以分爲雙環、三環、四環或多環橋雜環基，較佳爲雙環、三環或四環，更有選爲雙環或三環。橋雜環基的非限制性實例包括： 和等。
所述雜環基環可以稠合於芳基、雜芳基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環爲雜環基，其非限制性實例包括： 和等。
雜環基可以是選擇性取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳爲一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
術語“芳基”指具有共軛的π電子體系的6至14元全碳單環或稠合多環(也就是共享毗鄰碳原子對的環)基團，較佳爲6至12元，例如苯基和萘基。更佳為苯基。所述芳基環可以稠合於雜芳基、雜環基或環烷基環上，包括苯并5-10元雜芳基、苯并3-8元環烷基和苯并3-8元雜烷基，較佳為苯并5-6元雜芳基、苯并3-6元環烷基和苯并3-6元雜烷基，其中雜環基爲含1-3氮原子、氧原子、硫原子的雜環基；或者還包含含苯環的三元含氮稠環。
其中與母體結構連接在一起的環爲芳基環，其非限制性實例包括： 和等。
芳基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳爲一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。
術語“雜芳基”指包含1至4個雜原子、5至14個環原子的雜芳族體系，其中雜原子選自氧、硫和氮。雜芳基較佳爲5至12元，更佳爲5元或6元，例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基等，較佳爲三唑基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、嘧啶基或噻唑基；更有選吡唑基、吡咯基和噁唑基。所述雜芳基環可以稠合於芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環爲雜芳基環，其非限制性實例包括： 和等。
雜芳基可以是選擇性取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳爲一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。
術語“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的環烷基)，其中烷基的定義如上所述。烷氧基的非限制性實例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、環丙氧基、環丁氧基、環戊氧基、環己氧基。烷氧基可以是選擇性取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳爲一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。
術語“烷硫基”指-S-(烷基)和-S-(非取代的環烷基)，其中烷基的定義如上所述。烷氧基的非限制性實例包括：甲硫基、乙硫基、丙硫基、丁硫基、環丙硫基、環丁硫基、環戊硫基、環己硫基。烷硫基可以是選擇性取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳爲一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。
“烷硫基-烷基”指烷硫基與烷基相連，其中烷基和烷硫基如上所定義。
“烷基胺基羰基”指(烷基)-N-C(O)-，其中烷基的定義如上所述。
“鹵代烷基”指被一個或多個鹵素取代的烷基，其中烷基如上所定義。
“鹵代烷氧基”指被一個或多個鹵素取代的烷氧基，其中烷氧基如上所定義。
“鹵代烷硫基”指被一個或多個鹵素取代的烷硫基，其中烷硫基如上所定義。
“羥烷基”指被羥基取代的烷基，其中烷基如上所定義。
“烯基”指鏈烯基，又稱烯烴基，其中所述的烯基可以進一步被其他相關基團取代，例如：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。
“炔基”指(CH≡C-)，其中所述的炔基可以進一步被其他相關基團取代，例如：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。
術語“烯基羰基”指-C(O)-(烯基)，其中烯基的定義如上所述。烯基羰基的非限制性實例包括：乙烯基羰基、丙烯基羰基、丁烯基羰基。烯基羰基可以是選擇性取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳爲一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。
“羥基”指-OH基團。
“鹵素”指氟、氯、溴或碘。
“胺基”指-NH2。
“氰基”指-CN。
“硝基”指-NO2。
“羰基”指-C(O)-。
“羧基”指-C(O)OH。
“THF”指四氫呋喃。
“EtOAc”指乙酸乙酯。
“MeOH”指甲醇。
“DMF”指N,N-二甲基甲醯胺。
“DIPEA”指二異丙基乙胺。
“TFA”指三氟乙酸。
“MeCN”指乙晴。
“DMA”指N,N-二甲基乙醯胺。
“Et2O”指乙醚。
“DCE”指1,2二氯乙烷。
“DIPEA”指N,N-二異丙基乙胺。
“NBS”指N-溴代琥珀醯亞胺。
“NIS”指N-碘代丁二醯亞胺。
“Cbz-Cl”指氯甲酸苄酯。
“Pd2(dba)3”指三(二亞苄基丙酮)二鈀。
“Dppf”指1,1’-雙二苯基膦二茂鐵。
“HATU”指2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯。
“KHMDS”指六甲基二矽基胺基鉀。
“LiHMDS”指雙三甲基矽基胺基鋰。
“MeLi”指甲基鋰。
“n-BuLi”指正丁基鋰。
“NaBH(OAc)3”指三乙醯氧基硼氫化鈉。
“X選自A、B、或C”、“X選自A、B和C”、“X爲A、B或C”、“X爲A、B和C”等不同用語均表達了相同的意義，即表示X可以是A、B、C中的任意一種或幾種。
本發明所述的氫原子均可被其同位素氘所取代，本發明涉及的實施例化合物中的任一氫原子也均可被氘原子取代。
“選擇性”或“選擇性地”意味著隨後所描述的事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。例如，“選擇性被烷基取代的雜環基團”意味著烷基可以但不必須存在，該說明包括雜環基團被烷基取代的情形和雜環基團不被烷基取代的情形。
“取代的”指基團中的一個或多個氫原子，較佳爲最多5個，更佳爲1～3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基取代。不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學位置，本發明所屬技術領域中具有通常知識者能够在不付出過多努力的情况下確定(透過實驗或理論)可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的胺基或羥基與具有不飽和(如烯屬)鍵的碳原子結合時可能是不穩定的。
“藥物組合物”表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學上/可藥用的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物，以及其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。藥物組合物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。
“可藥用鹽”是指本發明化合物的鹽，這類鹽用於哺乳動物體內時具有安全性和有效性，且具有應有的生物活性。
具體實施方式
以下結合實施例進一步描述本發明，但這些實施例並非限制著本發明的範圍。
實施例
本發明的化合物結構是透過核磁共振 (NMR)或/和液質聯用色譜(LC-MS)來確定的。NMR化學位移(δ)以百萬分之一(ppm)的單位給出。NMR的測定是用Bruker AVANCE-400核磁儀，測定溶劑爲氘代二甲基亞碸 (DMSO-d6 )，氘代甲醇(CD3OD)和氘代氯仿(CDCl3)，內標爲四甲基矽烷 (TMS)。
液質聯用色譜LC-MS的測定用Agilent 1200 Infinity Series質譜儀。HPLC的測定使用安捷倫1200DAD高壓液相色譜儀(Sunfire C18 150 × 4.6 mm色譜柱)和Waters 2695-2996高壓液相色譜儀(Gimini C18150 × 4.6 mm色譜柱)。
薄層層析矽膠板使用烟臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，TLC採用的規格是0.15 mm～0.20 mm，薄層層析分離純化産品採用的規格是0.4 mm～0.5 mm。柱層析一般使用烟臺黃海矽膠200～300目矽膠爲載體。
本發明實施例中的起始原料是已知的並且可以在市場上買到，或者可以採用或按照本領域已知的方法來合成。
在無特殊說明的情况下，本發明的所有反應均在連續的磁力攪拌下，在乾燥氮氣或氬氣氛下進行，溶劑爲乾燥溶劑，反應溫度單位爲攝氏度。
實施例1
(S)-2-(1-丙烯醯-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(4-甲基呱嗪-1-羰基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)呱嗪-2-基)乙醯腈的製備
第一步：7-(三級-丁基) 2-甲基 4-羥基-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,7(6H)-二羧酸酯的製備
將1-(三級-丁基) 4-乙基 3-羰基呱啶-1,4-二羧酸酯(10 g，37 mmol)，2-胺基-2-亞胺基乙酸甲酯鹽酸鹽(5.1 g，37 mmol)溶於乙醇中(100 mL)，加入乙醇鈉(2.7 g，40 mmol)，加熱到75℃攪拌15小時，減壓濃縮除去多餘的溶劑，加入水，用1M稀鹽酸調節至中性，析出固體，過濾，水洗，乾燥得到目標産物7-(三級-丁基)2-甲基 4-羥基-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,7(6H)-二羧酸酯(3.8 g，産率：33%)。
MS m/z (ESI): 310.1 [M+H]+.
第二步：7-(三級-丁基) 2-甲基 4-(((三氟甲基)磺醯)氧代)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,7(6H)-二羧酸酯的製備
將7-(三級-丁基) 2-甲基 4-羥基-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,7(6H)-二羧酸酯(3.7 g，12.0 mmol)溶於二氯甲烷(100 mL)中，冷却到0℃，加入DIPEA(2.7 g，24.1 mmol)和Tf2O(5.1 g，18.1 mmol)，室溫攪拌過夜。濃縮，柱層析純化(EtOAc/Petro ether =5：1)得到目標産物7-(三級-丁基) 2-甲基 4-(((三氟甲基)磺醯)氧代)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,7(6H)-二羧酸酯(4.5 g，産率：85%)。
第三步：7-(三級-丁基) 2-甲基 (S)-4-(4-((苄氧基)羰基)-3-(氰基甲基)呱嗪-1-基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,7(6H)-二羧酸酯的製備
將7-(三級-丁基) 2-甲基 4-(((三氟甲基)磺醯)氧代)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,7(6H)-二羧酸酯(3.5 g，7.9 mmol)溶於DMF(50 mL)中，加入苯甲基 (S)-2-(氰基甲基)呱嗪-1-羧酸酯(2.5 g，9.7 mmol)，DIPEA(2.7 g，24.1 mmol)，氮氣保護下，加熱到100℃，攪拌3小時。冷却，加水和乙酸乙酯(3*50 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(EtOAc/Petro ether =3：1)純化得到目標産物7-(三級-丁基) 2-甲基 (S)-4-(4-((苄氧基)羰基)-3-(氰基甲基)呱嗪-1-基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,7(6H)-二羧酸酯(3.7 g，産率：85%)。
MS m/z (ESI): 551.1 [M+H]+.
第四步：(S)-4-(4-((苄氧基)羰基)-3-(氰基甲基)呱嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-羧酸甲酯的製備
將7-(三級-丁基) 2-甲基 (S)-4-(4-((苄氧基)羰基)-3-(氰基甲基)呱嗪-1-基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,7(6H)-二羧酸酯(1.5 g，2.7 mmol)溶於二氯甲烷(30 mL)中，加入TFA(2 mL，27.2 mmol)，室溫攪拌2小時。用飽和NaHCO3水溶液調節至中性，乙酸乙酯(3*50 mL)萃取三次。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到目標産物(S)-4-(4-((苄氧基)羰基)-3-(氰基甲基)呱嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-羧酸甲酯(1.3 g，粗製品)。
MS m/z (ESI): 451.1 [M+H]+.
第五步：(S)-4-(4-((苄氧基)羰基)-3-(氰基甲基)呱嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-羧酸甲酯的製備
將(S)-4-(4-((苄氧基)羰基)-3-(氰基甲基)呱嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-羧酸甲酯(1.3 g，2.7 mmol)溶於甲苯(50 mL)中，加入1-溴-8-甲基萘(1.2 g，5.4 mmol)，Pd2(dba)3(275 mg，0.3 mmol)，RuPhos(280 mg，0.6 mmol)和Cs2CO3(326 mg，1.0 mmol)，氮氣置換3次，反應液在100℃條件下，攪拌15小時。濃縮除掉甲苯，加入水和乙酸乙酯(3*30 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(EtOAc/Petro ether =3：1)純化得到目標産物(S)-4-(4-((苄氧基)羰基)-3-(氰基甲基)呱嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-羧酸甲酯(550 mg，産率：35%)。
MS m/z (ESI): 591.1 [M+H]+.
第六步：(S)-4-(3-(氰基甲基)呱嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-羧酸甲酯的製備
-70℃條件下，往MeOH(20 mL)中通入氨氣30分鐘，加入甲基 (S)-4-(4-((苄氧基)羰基)-3-(氰基甲基)呱嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-羧酸酯(500 mg，0.85 mmol)，Pd/C(250 mg，含水10%)，氫氣置換，在15Psi的氫氣下，室溫攪拌1小時。反應完全，過濾除掉催化劑，MeOH洗滌，有機相濃縮，得到目標産物(S)-4-(3-(氰基甲基)呱嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-羧酸甲酯(320 mg，産率：83%)。
MS m/z (ESI): 457.1 [M+H]+.
第七步：(S)-4-(4-丙烯醯-3-(氰基甲基)呱嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-羧酸甲酯的製備
將(S)-4-(3-(氰基甲基)呱嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-羧酸甲酯(300 mg，0.66 mmol)溶於二氯甲烷(10 mL)中，加入DIPEA(220 mg，2.0 mmol)，室溫滴加丙烯醯氯(66 mg，0.73 mmol)，加完繼續攪拌1小時。加水淬滅，二氯甲烷(10 mL)萃取三次。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(EtOAc/Petro ether =5：1)純化得到目標産物(S)-4-(4-丙烯醯-3-(氰基甲基)呱嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-羧酸甲酯(275 mg，産率：82%)。
MS m/z (ESI): 511.1 [M+H]+.
第八步：(S)-4-(4-丙烯醯-3-(氰基甲基)呱嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-羧酸的製備
將(S)-4-(4-丙烯醯-3-(氰基甲基)呱嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-羧酸甲酯(270 mg，0.53 mmol)溶於THF/H2O(10 mL /5 mL)中，加入LiOH·H2O(220 mg，5.3 mmol)，室溫攪拌5小時。1M鹽酸調節至中性，乙酸乙酯(3*20 mL)萃取三次，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品目標産物(S)-4-(4-丙烯醯-3-(氰基甲基)呱嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-羧酸(280 mg，粗製品)。
MS m/z (ESI): 497.1 [M+H]+.
第九步：(S)-2-(1-丙烯醯-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(4-甲基呱嗪-1-羰基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)呱嗪-2-基)乙醯腈的製備
將(S)-4-(4-丙烯醯-3-(氰基甲基)呱嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-羧酸(30 mg，0.05 mmol)溶於DMF (10 mL)中，加入DIPEA(0.5 mL)和HATU(20 mg，0.06 mmol)，室溫攪拌0.5小時。加入N-甲基呱嗪(10 mg，0.1 mmol)，繼續攪拌3小時，加入水，用二氯甲烷萃取(3*20 mL)，水洗(20 mL)，飽和食鹽水(20 mL)洗，有機層用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，柱層析(CH2Cl2/MeOH =10：1)純化得到目標産物(S)-2-(1-丙烯醯-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(4-甲基呱嗪-1-羰基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)呱嗪-2-基)乙醯腈(10 mg，産率：35%)。
MS m/z (ESI): 579.1 [M+H]+.
實施例2~20的製備參照實施例1。
實施例21
1-(4-(6-氯-7-(2-氟-6-羥基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)呱嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮的製備
第一步：2,5,6-三氯尼古丁醯胺的製備
將2,5,6-三氯尼古丁酸(8 g，35.5 mmol)溶在80mL無水四氫呋喃中，N'N-羰基二咪唑(6.3 g，39 mmol)分批加入反應液中，加熱到50℃攪拌1小時，加入甲苯減壓濃縮至50 mL。冷至0℃，氨水(9.5 mL，22 mmol)緩慢滴加至反應中，室溫攪拌1小時。反應結束，濃縮，用乙酸乙酯/石油醚(1/3)萃取三次，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到白色固體。用乙酸乙酯/石油醚(1/5)打漿純化得到目標産物2,5,6-三氯尼古丁醯胺(5.6 g，産率：70%)。
第二步：N-胺基甲醯-2,5,6-三氯尼克醯胺的製備
將2,5,6-三氯尼古丁醯胺(5 g，22.3 mmol)溶於40mL無水四氫呋喃中，在-78℃下滴加草醯氯(2.0 mL, 23.8 mmol)，加熱到60℃攪拌3.5小時。冷至-78℃，加入三乙胺(9.7 mL，68.9 mmol)，氨水 (22 mL，51 mmol)，室溫攪拌1小時，反應結束。濃縮，用乙酸乙酯萃取三次，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，用乙酸乙酯/石油醚(1/5)打漿純化得到目標産物N-胺基甲醯-2,5,6-三氯尼克醯胺(3.5 g，産率：58%)。
第三步：6,7-二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的製備
將N-胺基甲醯-2,5,6-三氯尼克醯胺(3.2 g，12.0 mmol)溶於THF(100 mL)中，氮氣保護，冰水浴下，滴加入KHMDS(24.0 mL，1M THF溶液，24.0 mmol)，滴完逐漸升至室溫，攪拌1小時。用飽和NH4Cl水溶液淬滅，乙酸乙酯(3*30 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(CH2Cl2/MeOH =10：1)純化得到目標産物6,7-二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(2.1 g，産率：76%)。
MS m/z (ESI): 232.1 [M+H]+，234.1 [M+H+2]+.
第四步：6-氯-7-(2-氟-6-甲氧苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的製備
將6,7-二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(2 g，8.6 mmol)溶於二氧六環(100 mL)中，加入2-氟-6-甲氧基苯硼酸(2.2 g，12.9 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(459 mg，0.5 mmol)、Xantphos(580 mg，1 mmol)以及Cs2CO3(8.5 g，25.9 mmol)，氮氣置換。將反應液加熱至110℃反應過夜。冷却至室溫後，用200 mL乙酸乙酯稀釋，用矽藻土過濾後，濾液旋乾，柱層析(CH2Cl2/MeOH =10：1)純化得到目標産物6-氯-7-(2-氟-6-甲氧苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(1.9 g，産率：68%)。
MS m/z (ESI): 322.1 [M+H]+，324.1 [M+H+2]+.
第五步：2,4,6-三氯-7-(2-氟-6-甲氧苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶的製備
將6-氯-7-(2-氟-6-甲氧苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(1.8 g，5.6 mmol)溶於POCl3(50 mL)中，氮氣保護下，加熱到80℃條件下，攪拌10小時。滴加入冰水淬滅，過濾得到固體産品，水洗，乾燥得到粗製品目標産物2,4,6-三氯-7-(2-氟-6-甲氧苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶(1.5 g，産率：75%)。
第六步：4-(2,6-二氯-7-(2-氟-6-甲氧苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)呱嗪-1-羧酸三級丁酯的製備
將2,4,6-三氯-7-(2-氟-6-甲氧苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶(1.5 g，4.2 mmol)溶於二氯甲烷(30 mL)中，加入N-三級丁基氧甲醯基-呱嗪(940 mg，5.0 mmol)，TEA(1.3 g，12.9 mmol)，反應液在0℃條件下，攪拌1小時。反應液倒入冰水，用二氯甲烷(30 mL)萃取三次。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(EtOAc/Petro ether =3：1)純化得到目標産物4-(2,6-二氯-7-(2-氟-6-甲氧苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)呱嗪-1-羧酸三級丁酯(1.4 g，産率：65%)。
MS m/z (ESI): 508.1 [M+H]+，510.1 [M+H+2]+.
第七步：2,6-二氯-7-(2-氟-6-甲氧苯基)-4-(呱嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶的製備
將4-(2,6-二氯-7-(2-氟-6-甲氧苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)呱嗪-1-羧酸三級丁酯(1.4 g，2.8 mmol) 溶於二氯甲烷(20 mL)中，加入TFA(2 mL)，室溫攪拌2小時。用飽和NaHCO3水溶液調節至中性，乙酸乙酯(3*50 mL)萃取三次。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到目標産物2,6-二氯-7-(2-氟-6-甲氧苯基)-4-(呱嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶(1.4 g，粗製品)。
MS m/z (ESI): 408.1 [M+H]+，410.1 [M+H+2]+.
第八步：1-(4-(2,6-二氯-7-(2-氟-6-甲氧苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)呱嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮的製備
將2,6-二氯-7-(2-氟-6-甲氧苯基)-4-(呱嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶(1.4 g，2.8 mmol)溶於二氯甲烷(30 mL)中，加入DIPEA(1.1 g，8.5 mmol)，室溫滴加丙烯醯氯(305 mg，3.4 mmol)，加完繼續攪拌1小時。加水淬滅，二氯甲烷(10 mL)萃取三次。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(EtOAc/Petro ether =3：1)純化得到目標産物1-(4-(2,6-二氯-7-(2-氟-6-甲氧苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)呱嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(1 g，産率：77%)。
MS m/z (ESI): 462.1 [M+H]+，464.1 [M+H+2]+.
第九步：1-(4-(6-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)呱嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮的製備
將1-(4-(2,6-二氯-7-(2-氟-6-甲氧苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)呱嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(200 mg，0.43 mmol)溶於THF(20 mL)中，加入(S)-(1-甲基吡咯烷-2-基)甲醇(100 mg，0.86 mmol)和三級丁醇鈉(124 mg，1.29 mmol)，氮氣保護下，室溫攪拌2小時。加水淬滅，乙酸乙酯(10 mL)萃取三次。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(CH2Cl2/MeOH =10：1)純化得到目標産物1-(4-(6-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)呱嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(40 mg，産率：18%)。
MS m/z (ESI): 541.1 [M+H]+，543.1 [M+H+2]+.
第十步：1-(4-(6-氯-7-(2-氟-6-羥基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)呱嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮的製備
將1-(4-(6-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)呱嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(40 mg，0.07 mmol)溶於二氯甲烷(10 mL)中，冷却到-40℃，滴加入BBr3(35 mg，0.14 mmol)，逐漸升至室溫，攪拌2小時。加入飽和NaHCO3水溶液淬滅，乙酸乙酯(10 mL)萃取三次。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，製備HPLC純化得到目標産物1-(4-(6-氯-7-(2-氟-6-羥基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)呱嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(13 mg，産率：33%)。
MS m/z (ESI): 527.1 [M+H]+，529.1 [M+H+2]+.
實施例22~30的製備參照實施例21。
實施例31
(S)-1-(4-(7'-(8-甲基萘-1-基)-2'-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7',8'-二氫-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶]-4'-基)呱嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮的製備
第一步：5-甲氧基-3-羰基-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸三級丁酯的製備
將3,5-二羰基呱啶-1-羧酸三級丁酯(10 g，46.9 mmol)，原甲酸三乙酯(6 mL)溶於甲醇/甲苯中(50 mL /150 mL)，加入對甲苯磺酸(400 mg，2.3 mmol)加熱到110℃攪拌5小時，冷至室溫，用10%的NaOH的NaCl飽和水溶液洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(EtOAc/Petro ether =10：1)純化得到目標産物5-甲氧基-3-羰基-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸三級丁酯(7.8 g，産率：73%)。
第二步：7-甲氧基-5-氮雜螺[2.5]辛-7-烯-5-羧酸三級丁酯的製備
將5-甲氧基-3-羰基-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸三級丁酯(7.6 g，33.5 mmol)溶於100 mL乙醚中，加入四異丙基氧鈦(10 mL)，室溫下滴加乙基溴化鎂(33.5 mL, 3M 乙醚溶液，100.5 mmol)，加完繼續攪拌3小時。反應結束，滴加入水淬滅，矽藻土過濾，乙酸乙酯洗滌，用乙酸乙酯萃取三次，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到目標産物7-甲氧基-5-氮雜螺[2.5]辛-7-烯-5-羧酸三級丁酯(8.8 g，粗製品)。
第三步： 7-羰基-5-氮雜螺[2.5]辛烷-5-羧酸三級丁酯的製備
將7-甲氧基-5-氮雜螺[2.5]辛-7-烯-5-羧酸三級丁酯(8.8 g，33.5 mmol)溶於THF(50 mL)中，氮氣保護下，加入對甲苯磺酸單水合物(2 g，10.5 mmol)，室溫攪拌15小時。用飽和NaHCO3水溶液洗滌，有機層用無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(EtOAc/Petro ether =10：1)純化得到目標産物7-羰基-5-氮雜螺[2.5]辛烷-5-羧酸三級丁酯(4.5 g，産率：60%)。
第四步： (Z)-8-((二甲胺基)亞甲基)-7-羰基-5-氮雜螺[2.5]辛烷-5-羧酸三級丁酯的製備
將7-羰基-5-氮雜螺[2.5]辛烷-5-羧酸三級丁酯(4.3 g，19.1 mmol)溶於DMF-DMA(10 mL)中，氮氣保護下，加熱到100℃，攪拌5小時。濃縮得到粗製品目標産物三級-丁基 (Z)-8-((二甲胺基)亞甲基)-7-羰基-5-氮雜螺[2.5]辛烷-5-羧酸三級丁酯(4.5 g)，直接用於下一步反應。
MS m/z (ESI): 281.1 [M+H]+.
第五步： 2'-羥基-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶]-7'(8'H)-羧酸三級丁酯的製備
將(Z)-8-((二甲胺基)亞甲基)-7-羰基-5-氮雜螺[2.5]辛烷-5-羧酸三級丁酯(4.5 g，19.1 mmol)溶於EtOH(20 mL)中，加入尿素(1.7 g，28.7 mmol)，加熱到100℃，攪拌15小時。冷却至室溫，加入水，乙酸乙酯(20 mL)萃取三次。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(CH2Cl2/MeOH =10：1)純化得到目標産物2'-羥基-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶]-7'(8'H)-羧酸三級丁酯(4.6 g，産率：69%)。
MS m/z (ESI): 278.1 [M+H]+.
第六步：三級-丁基 (S)-2'-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶]-7'(8'H)-羧酸三級丁酯的製備
將2'-羥基-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶]-7'(8'H)-羧酸三級丁酯(1 g，3.6 mmol)溶於DMF(100 mL)中，加入(S)-(1-甲基吡咯烷-2-基)甲基-甲磺酸酯(1 g，5.2 mmol)，K2CO3(1.5 g，10.8 mmol), 室溫攪拌15小時。加水，乙酸乙酯(30 mL)萃取三次。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(CH2Cl2/MeOH =10：1)純化得到目標産物三級-丁基 (S)-2'-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶]-7'(8'H)-羧酸酯(1.1 g，産率：82%)。
MS m/z (ESI): 375.1 [M+H]+.
第七步：(S)-7'-(8-甲基萘-1-基)-2'-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7',8'-二氫-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶]的製備
將(S)-2'-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶]-7'(8'H)-羧酸三級丁酯(1 g，2.7 mmol)溶於二氯甲烷(20 mL)中，加入三氟乙酸(2 mL)，室溫攪拌3小時，濃縮得到粗製品。溶於甲苯(20 mL)中，加入1-溴-8-甲基萘(1.2 g，5.4 mmol), Pd2(dba)3(275 mg，0.3 mmol), RuPhos(280 mg，0.6 mmol)和Cs2CO3(326 mg，1.0 mmol), 氮氣置換3次，反應液在100℃條件下，攪拌15小時。濃縮除掉甲苯，加入水和乙酸乙酯(3*30 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(CH2Cl2/MeOH =10：1)純化得到目標産物(S)-2'-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7',8'-二氫-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶] ///(S)-7'-(8-甲基萘-1-基)-2'-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7',8'-二氫-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶] (450 mg，産率：41%)。
MS m/z (ESI): 415.1 [M+H]+.
第八步：(S)-4'-氯-7'-(8-甲基萘-1-基)-2'-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7',8'-二氫-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶]的製備
將(S)-7'-(8-甲基萘-1-基)-2'-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7',8'-二氫-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶] (400 mg，0.97 mmol)溶於DMF(10 mL)中，氮氣保護下，加入NCS(150 mg，1.13 mmol), 80℃攪拌15小時。加入水，乙酸乙酯(20 mL)萃取三次。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(CH2Cl2/MeOH =10：1)純化得到目標産物(S)-4'-氯-7'-(8-甲基萘-1-基)-2'-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7',8'-二氫-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶] (180 mg，産率：41%)。
MS m/z (ESI): 449.1 [M+H]+.
第九步：(S)-4-(7'-(8-甲基萘-1-基)-2'-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7',8'-二氫-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶]-4'-基)呱嗪-1-羧酸三級丁酯的製備
將(S)-4'-氯-7'-(8-甲基萘-1-基)-2'-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7',8'-二氫-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶] (180 mg，0.40 mmol) 溶於DMF(10 mL)中，加入N-三級丁氧醯基呱嗪(224 mg，1.20 mmol)，DIPEA(155 mg，1.20 mmol)，氮氣保護下，加熱到80℃，攪拌3小時。冷却，加水和乙酸乙酯(3*20 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(CH2Cl2/MeOH =10：1)純化得到目標産物(S)-4-(7'-(8-甲基萘-1-基)-2'-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7',8'-二氫-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶]-4'-基)呱嗪-1-羧酸三級丁酯(120 mg，産率：50%)。
MS m/z (ESI): 599.1 [M+H]+.
第十步：(S)-7'-(8-甲基萘-1-基)-2'-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-4'-(呱嗪-1-基)-7',8'-二氫-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶]的製備
將(S)-4-(7'-(8-甲基萘-1-基)-2'-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7',8'-二氫-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶]-4'-基)呱嗪-1-羧酸三級丁酯(110 mg，0.18 mmol)溶於二氯甲烷(10 mL)中，加入TFA(0.5 mL)，室溫攪拌2小時。用飽和NaHCO3水溶液調節至中性，二氯甲烷(3*20 mL)萃取三次。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到目標産物(S)-7'-(8-甲基萘-1-基)-2'-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-4'-(呱嗪-1-基)-7',8'-二氫-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶] (130 mg，粗製品)。
MS m/z (ESI): 499.1 [M+H]+.
第十一步：(S)-1-(4-(7'-(8-甲基萘-1-基)-2'-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7',8'-二氫-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶]-4'-基)呱嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮的製備
將(S)-7'-(8-甲基萘-1-基)-2'-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-4'-(呱嗪-1-基)-7',8'-二氫-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶] (130 mg，0.18 mmol) 溶於二氯甲烷(10 mL)中，加入DIPEA(71 mg，0.55 mmol), 室溫滴加丙烯醯氯(20 mg，0.22 mmol)，加完繼續攪拌1小時。加水淬滅，二氯甲烷(10 mL)萃取三次。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，製備HPLC純化得到目標産物(S)-1-(4-(7'-(8-甲基萘-1-基)-2'-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7',8'-二氫-6'H-螺[環丙烷-1,5'-吡啶并[3,4-d]嘧啶]-4'-基)呱嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(32 mg，産率：32%)。
MS m/z (ESI): 553.1 [M+H]+.
實施例32~35的製備參照實施例31。
實施例36
4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-1-(4-氟-2-異丙基吡啶-3-基)-7-(2-氟-6-羥基苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
第一步：7-苯甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二酚的製備
將1-苯甲基-3-羰基呱啶-4-羧酸乙酯(10 g，38.3 mmol)溶於EtOH(100 mL)中，加入尿素(3.4 g，57.5 mmol)，加熱到100℃，攪拌15小時。冷却至室溫，加入水，乙酸乙酯(20 mL)萃取三次。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(CH2Cl2/MeOH =10：1)純化得到目標産物7-苯甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二酚(8.7 g，産率：89%)。
MS m/z (ESI): 258.1 [M+H]+.
第二步：7-苯甲基-4-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-酚的製備
將7-苯甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二酚(8 g，31.1 mmol)溶於100 mL二氧六環中，加熱到100℃，滴加入勞森試劑(6.3 g，15.5 mmol)的二氧六環溶液(20 mL)，加完繼續反應1小時；降至室溫，濃縮除去溶劑，固體用少量乙酸洗滌，再用水洗滌，乾燥，粗製品在冰水浴下加入SOCl2(50 mL)，逐漸升至室溫，攪拌10小時，濃縮除掉過量的SOCl2，得到粗製品目標産物7-苯甲基-4-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-酚(7.5 g，粗製品)，直接用於下一步反應。
MS m/z (ESI): 276.1 [M+H]+，278.1 [M+H+2]+.
第三步：(2R,5S)-4-(7-苯甲基-2-羥基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸三級丁酯的製備
將7-苯甲基-4-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-酚(7.5 g，粗製品) 溶於DMF(50 mL)中，加入三級-丁基 (2R,5S)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸酯(8.7 g，40.8 mmol)，DIPEA(10.5 g，81.6 mmol)，氮氣保護下，加熱到80℃，攪拌3小時。冷却，加水和乙酸乙酯(3*50 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(CH2Cl2/MeOH =10：1)純化得到目標産物(2R,5S)-4-(7-苯甲基-2-羥基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸三級丁酯(5.3 g，兩步産率：38%)。
MS m/z (ESI): 454.1 [M+H]+.
第四步：(2R,5S)-4-(7-苯甲基-1-(4-氟-2-異丙基吡啶-3-基)-2-羰基-1,2,5,6,7,8-六氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸三級丁酯的製備
將(2R,5S)-4-(7-苯甲基-2-羥基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸三級丁酯(1 g，2.2 mmol)溶於二氯甲烷(50 mL)中，加入(4-氟-2-異丙基吡啶-3-基)硼酸(806 mg，4.4 mmol)，醋酸銅(72 mg，0.4 mmol，吡啶(348 mg，4.4 mmol)和分子篩，敞口情况下，室溫攪拌過夜。用飽和Na2CO3水溶液洗滌，水洗，有機層用無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(CH2Cl2/MeOH =10：1)純化得到目標産物(2R,5S)-4-(7-苯甲基-1-(4-氟-2-異丙基吡啶-3-基)-2-羰基-1,2,5,6,7,8-六氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸三級丁酯(650 mg，産率：50%)。
MS m/z (ESI): 591.1 [M+H]+.
第五步：(2R,5S)-4-(1-(4-氟-2-異丙基吡啶-3-基)-2-羰基-1,2,5,6,7,8-六氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸三級丁酯的製備
將(2R,5S)-4-(7-苯甲基-1-(4-氟-2-異丙基吡啶-3-基)-2-羰基-1,2,5,6,7,8-六氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸三級丁酯(600 mg，1.0 mmol)溶於EtOH(20 mL)中，加入Pd(OH)2/C(60 mg)，氫氣置換3次，氫氣球下室溫攪拌15小時。過濾，乙醇洗滌，濃縮得到目標産物(2R,5S)-4-(1-(4-氟-2-異丙基吡啶-3-基)-2-羰基-1,2,5,6,7,8-六氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸三級-基酯(420 mg，産率：83%)。
MS m/z (ESI): 501.1 [M+H]+.
第六步：(2R,5S)-4-(1-(4-氟-2-異丙基吡啶-3-基)-7-(2-氟-6-甲氧苯基)-2-羰基-1,2,5,6,7,8-六氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸三級丁酯的製備
將(2R,5S)-4-(1-(4-氟-2-異丙基吡啶-3-基)-2-羰基-1,2,5,6,7,8-六氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸三級丁酯(400 mg，0.8 mmol)溶於甲苯(20 mL)中，加入2-溴-1-氟-3-甲氧基苯(326 mg，1.6 mmol)，Pd2(dba)3(92 mg，0.1 mmol)，RuPhos(93 mg，0.2 mmol)和Cs2CO3(105 mg，3.2 mmol)，氮氣置換3次，反應液在100℃條件下，攪拌15小時。濃縮除掉甲苯，加入水和乙酸乙酯(3*30 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(CH2Cl2/MeOH =10：1)純化得到目標産物(2R,5S)-4-(1-(4-氟-2-異丙基吡啶-3-基)-7-(2-氟-6-甲氧苯基)-2-羰基-1,2,5,6,7,8-六氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸三級丁酯(270 mg，産率：54%)。
MS m/z (ESI): 625.1 [M+H]+.
第七步：4-((2S,5R)-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-1-(4-氟-2-異丙基吡啶-3-基)-7-(2-氟-6-甲氧苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
將(2R,5S)-4-(1-(4-氟-2-異丙基吡啶-3-基)-7-(2-氟-6-甲氧苯基)-2-羰基-1,2,5,6,7,8-六氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸三級丁酯(250 mg，0.4 mmol)溶於二氯甲烷(10 mL)中，加入三氟乙酸(0.5 mL)，室溫攪拌3小時，濃縮得到粗製品目標産物4-((2S,5R)-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-1-(4-氟-2-異丙基吡啶-3-基)-7-(2-氟-6-甲氧苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2(1H)-酮(320 mg，粗製品)。
MS m/z (ESI): 525.1 [M+H]+.
第八步：4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-1-(4-氟-2-異丙基吡啶-3-基)-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
將4-((2S,5R)-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-1-(4-氟-2-異丙基吡啶-3-基)-7-(2-氟-6-甲氧苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2(1H)-酮(320 mg，0.4 mmol) 溶於二氯甲烷(10 mL)中，加入DIPEA(155 mg，1.2 mmol)，室溫滴加丙烯醯氯(45 mg，0.5 mmol)，加完繼續攪拌1小時。加水淬滅，二氯甲烷(10 mL)萃取三次。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(CH2Cl2/MeOH =10：1)純化得到目標産物4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-1-(4-氟-2-異丙基吡啶-3-基)-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2(1H)-酮 (170 mg，産率：74%)。
MS m/z (ESI): 579.1 [M+H]+.
第九步：4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-1-(4-氟-2-異丙基吡啶-3-基)-7-(2-氟-6-羥基苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
將4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-1-(4-氟-2-異丙基吡啶-3-基)-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2(1H)-酮(150 mg，0.26 mmol) 溶於二氯甲烷(10 mL)中，冷却到-40℃，滴加入BBr3(650 mg，2.60 mmol)，升至室溫攪拌1小時。用飽和NaHCO3水溶液淬滅，二氯甲烷(3*20 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，製備HPLC純化得到目標産物4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-1-(4-氟-2-異丙基吡啶-3-基)-7-(2-氟-6-羥基苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2(1H)-酮(52 mg，産率：36%)。
MS m/z (ESI): 565.1 [M+H]+.
實施例37~50的製備參照實施例36。
實施例51
6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-4-(4-(3-甲基-2-氧代吡咯烷-1-基)呱啶-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
第一步：4-(4-氯丁醯胺基)呱啶-1-羧酸三級丁酯的製備
將4-胺基呱啶-1-羧酸三級丁酯 (5 g，24.9 mmol)，4-氯丁醯氯(4.2 g，29.8 mmol)溶於CH2Cl2(50 mL)中，冰浴條件下加入DIPEA(6.5 g，49.8 mmol)，室溫攪拌4小時。加入水，CH2Cl2(50 mL)萃取三次。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗製品，柱層析(Petro ether/EtOAc =4：1)純化得到目標産物4-(4-氯丁醯胺基)呱啶-1-羧酸三級丁酯 (7.2 g，産率：94%)。
MS m/z (ESI): 305.2 [M+H]+.
第二步：4-(2-氧代吡咯烷-1-基)呱啶-1-羧酸三級丁酯的製備
將4-(4-氯丁醯胺基)呱啶-1-羧酸三級丁酯 (1.0 g，3.3 mmol)溶於THF(10 mL)中，冰浴下加入NaH(0.26 g，6.6 mmol)，溫度升至回流條件下攪拌16小時，加水和乙酸乙酯(50 mL)萃取三次。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗製品，柱層析(Petro ether/EtOAc =2：1)純化得到目標産物4-(2-氧代吡咯烷-1-基)呱啶-1-羧酸三級丁酯(0.85 g，産率：94%)。
MS m/z (ESI):269.1 [M+H]+.
第三步：4-(3-(乙氧基羰基)-2-氧代吡咯烷-1-基)呱啶-1-羧酸三級丁酯的製備
將4-(2-氧代吡咯烷-1-基)呱啶-1-羧酸三級丁酯(0.5 g，1.86 mmol)溶於無水THF(10 mL)中，氮氣保護下，冷却至-78℃，加入LiHMDS (3.8 mL，3.72 mmol)，攪拌1小時。加入碳酸二乙酯(0.44 g，3.72 mmol)，-78℃攪拌1小時，逐漸升至室溫。繼續攪拌2小時。加水淬滅，加水和乙酸乙酯(3*10 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗製品4-(3-(乙氧基羰基)-2-氧代吡咯烷-1-基)呱啶-1-羧酸三級丁酯 (0.6 g，粗製品)。
第四步：1-(1-(三級丁氧基羰基)呱啶-4-基)-2-氧代吡咯烷-3-羧酸的製備
將4-(3-(乙氧基羰基)-2-氧代吡咯烷-1-基)呱啶-1-羧酸三級丁酯(0.6 g，粗製品)溶於MeOH/H2O (1：1，20 mL)中，加入氫氧化鋰(89 mg，2.1 mmol)室溫攪拌過夜。加入20%醋酸水溶液，調節pH到5.0~6.0。加水和二氯甲烷(3*15 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗製品目標産物1-(1-(三級丁氧基羰基)呱啶-4-基)-2-氧代吡咯烷-3-羧酸(0.52 g，産率：79%)。
MS m/z (ESI): 311.1 [M-H]+.
第五步：4-(3-亞甲基-2-氧代吡咯烷-1-基)呱啶-1-羧酸三級丁酯的製備
將1-(1-(三級丁氧基羰基)呱啶-4-基)-2-氧代吡咯烷-3-羧酸 (0.5 g，粗製品)，多聚甲醛(72 mg，2.4 mmol) 溶於乙酸乙酯(10 mL)中，冰浴條件下，將二乙胺(0.14 g，1.9 mmol)加入反應液中，後將反應液移至加熱回流，攪拌3小時。冷却，加水和乙酸乙酯(3*10 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析(Petro ether/EtOAc =2：1)純化得到目標産物4-(3-亞甲基-2-氧代吡咯烷-1-基)呱啶-1-羧酸三級丁酯 (0.36 g，産率：80%)。
MS m/z (ESI): 281.1 [M+H]+.
第六步：3-亞甲基-1-(呱啶-4-基)吡咯烷-2-酮鹽酸鹽的製備
將三級-丁基 4-(3-亞甲基-2-氧代吡咯烷-1-基)呱啶-1-羧酸三級丁酯(100 mg，0.35 mmol)溶於2M的HCl/EtOH (5 mL)中，室溫攪拌2小時，濃縮除去溶劑；得粗製品3-亞甲基-1-(呱啶-4-基)吡咯烷-2-酮鹽酸鹽(80 mg，粗製品)。
MS m/z (ESI): 181.1 [M+H]+.
第七步：7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-4-(4-(3-甲基-2-氧代吡咯烷-1-基)呱啶-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
室溫下往7-氯6-氟-4-羥基-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(130 mg，0.37 mmol)的乙腈(10 mL)溶液裏加N,N-二異丙基乙胺(0.14 g，1.11 mmol)，再加三氯氧磷(167 mg，1.11 mmol)，80℃攪拌1小時。冷却至室溫。往反應液裏加N,N-二異丙基乙胺(0.14 g，1.11 mmol)，加完攪拌5分鐘，再加3-亞甲基-1-(呱啶-4-基)吡咯烷-2-酮鹽酸鹽 (80 mg，粗製品)，攪拌1小時。反應用氯化銨水溶液(10 mL)淬滅，乙酸乙酯(30 mL×3)萃取，有機相用氯化鈉水溶液(10 mL)洗，旋乾，製備色譜 [洗脫劑: 二氯甲烷:甲醇= 20:1]純化得到淡黃色固體産物7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-4-(4-(3-甲基-2-氧代吡咯烷-1-基)呱啶-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮 (52 mg，産率：27%)。
MS m/z (ESI): 511.2 [M+H]+.
第七步：6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-4-(4-(3-甲基-2-氧代吡咯烷-1-基)呱啶-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-4-(4-(3-甲基-2-氧代吡咯烷-1-基)呱啶-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(52 mg，0.10 mmol)，(2-氟-6-羥基苯基)硼酸(34 mg，0.2 mmol)，[1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲烷絡合物(9 mg，0.01 mmol)和碳酸銫(97 mg，0.3 mmol)在二氧六環(4 mL)和水(1 mL)中100℃微波攪拌1小時。旋乾反應液，製備HPLC純化得到黃色固體産物6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-4-(4-(3-甲基-2-氧代吡咯烷-1-基)呱啶-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(15 mg，産率：25%)。
MS m/z (ESI): 589.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.39 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 7.96 (d,J= 9.0 Hz, 1H), 7.30 (s, 2H), 6.82 – 6.57 (m, 2H), 6.04 (s, 1H), 5.39 (s, 1H), 4.75 (s, 2H), 4.50 (s, 1H), 3.45 (s, 4H), 2.83 (s, 2H), 2.06 (d,J= 29.5 Hz, 7H), 1.29 (s, 3H), 1.12 (s, 3H).
實施例52和實施例58~74的製備參照實施例51。
實施例60
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
第一步：4-氯-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-3-胺的製備
將2,4-二氯吡啶-3-胺(4.5 g，27.78 mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二噁硼戊環(5.13 g，30.56 mmol)、碳酸鉀(11.5 g，83.34 mmol)、Pd(PPh3)4加入二氧六環(120 mL)中，反應液均勻混合後，在油浴加熱100℃條件下攪拌過夜。減壓濃縮，所得粗製品用快速矽膠柱層析分離純化得到目標化合物4-氯-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-3-胺爲無色油狀液體(4.5 g，産率96 %)。
MS m/z (ESI): 169.1 [M+H]+.
第二步：4-(甲硫基)-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-3-胺的製備
將4-氯-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-3-胺(2 g，11.9 mmol)、甲硫醇鈉(10 mL，20%水溶液)加入二氧六環(3 mL)中，反應液均勻混合後，在100℃條件下反應2天，冷却至室溫，減壓濃縮，所得粗製品用快速矽膠柱層析分離純化得到化合物4-(甲硫基)-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-3-胺爲淡黃色液體(1.7 g，産率79%)。
MS m/z (ESI):181.2 [M+H]+.
第三步：2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-胺的製備
向4-(甲硫基)-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-3-胺(2 g，11.11 mmol)、Pd/C(4 g)加入甲醇(50 mL)，反應液均勻混合後，在室溫條件下反應過夜，減壓濃縮。所得粗製品加入由甲醇(5 mL)，N,N-二異丙基乙胺(0.5 mL)，丙烯腈(1 mL)混合的溶液中，在室溫下反應2小時。減壓濃縮，所得粗製品用快速矽膠柱層析分離純化得到化合物2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-胺爲無色液體(500 mg，産率25%)。
MS m/z (ESI):183.2 [M+H]+.
第四步：2,6-二氯-5-氟-N-((2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)胺基甲醯)尼克醯胺的製備
向2,6-二氯-5-氟尼克醯胺(500 mg, 2.44 mmol)、草醯氯(1.32 mL, 2.54 mmol)加入THF(10 mL)，反應液均勻混合後，在60℃條件下反應3小時，反應溫度降至室溫，加入三乙胺(680 mg, 6.6 mmol)、2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-胺(400 mg, 2.2 mmol), 室溫反應1小時，減壓濃縮，所得粗製品用快速矽膠柱層析分離純化得到化合物2,6-二氯-5-氟-N-((2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)胺基甲醯)尼克醯胺爲白色固體(800 mg，産率87%)。
MS m/z (ESI):417.1 [M+H]+.
第五步：7-氯-6-氟-4-羥基-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮 的製備
將2,6-二氯-5-氟-N-((2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)胺基甲醯)尼克醯胺 (800 mg，1.92 mmol)加入THF(20 mL)，反應液均勻混合後，在0℃條件下，緩慢加入KHMDS(4.8mL, 4.8 mmol), 室溫反應1小時，減壓濃縮，所得粗製品用快速矽膠柱層析分離純化得到化合物7-氯-6-氟-4-羥基-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮爲白色固體(600 mg，産率82%)。
MS m/z (ESI):381.1 [M+H]+.
第六步：三級-丁基 (S)-4-(7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸酯的製備
將7-氯-6-氟-4-羥基-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(300 mg，0.79 mmol)、三氯氧磷(600 mg, 3.95 mmil)、DIPEA(1 g, 7.9 mmol)加入THF(40 mL)，反應液均勻混合後，在80℃條件下反應1小時，反應溫度降至室溫，向反應液中緩慢加入三級-丁基(S)-3-甲基呱嗪-1-羧酸酯(240 mg, 1.19 mmol), 室溫反應1小時，減壓濃縮，所得粗製品用快速矽膠柱層析分離純化得到化合物三級-丁基 (S)-4-(7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸酯爲白色固體(400 mg，産率90%)。
MS m/z (ESI):563.1 [M+H]+.
第七步：(S)-4-(4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
將三級-丁基 (S)-4-(7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸酯(400 mg，0.71 mmol)、TFA(2 mL)加入CH2Cl2(30 mL)，反應液均勻混合後，在室溫條件下反應1小時，減壓濃縮，所得粗製品中加入CH2Cl2(20 mL)及DIPEA(0.3 mL), 反應溫度降至0℃，向反應液中緩慢加入丙烯醯氯(0.1 mL),室溫反應1小時，減壓濃縮。所得粗製品用快速矽膠柱層析分離純化得到化合物(S)-4-(4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮爲黃色固體(200 mg，産率55%)。
MS m/z (ESI):517.1 [M+H]+.
第八步：4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
將(S)-4-(4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(50 mg，0.1 mmol)、(2-氟-6-羥基苯基)硼酸(30 mg, 0.2 mmol), Pd(dppf)Cl2(16 mg, 0.02 mmol),碳酸銫(100 mg, 0.3 mmol)加入dixoane(1.5 mL)，反應液均勻混合後，在微波加熱100℃條件下反應1小時，減壓濃縮，所得粗製品中加入CH2Cl2(20 mL)及DIPEA(0.3 mL), 反應溫度降至0℃，向反應液中緩慢加入丙烯醯氯(0.1 mL), 室溫反應1小時，減壓濃縮。所得粗製品用Pre-HPLC分離純化得到化合物4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮爲白色固體(14 mg，産率：24%)。
MS m/z (ESI):593.1 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 )δ8.40 (d,J=5.6 Hz, 1H), 8.22-8.27 (m, 1 H),7.21-7.27 (m, 2H), 6.79-6.88(m, 1H), 6.58-6.66(m, 2H), 6.28-6.34 (m, 1H), 5.84(d,J=12.0 Hz, 1H), 5.06 (s, 1 H), 4.43-4.59 (m, 2H), 4.07-4.23 (s, 1H), 3.57-3.85 (m, 2 H), 3.20-3.48(m, 1H), 2.79-2.85(m, 1H), 2.41(s, 3H), 1.47(d,J=4.8 Hz, 3H), 1.20 (d,J=6.4 Hz, 3H), 1.06 (d,J=6.8 Hz, 3H).
實施例60-1和實施例60-2
(M/P-4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)
實施例60透過SFC拆分得到兩個軸手性異構體實施例60-1和實施例60-2，SFC：手性製備條件：
表13
儀器 SFC-150 (Thar, Waters)
柱型 IC 20*250mm, 10 μm (Daicel)
柱壓 100 bar
流動相 CO2/ Methanol (0.2% Methanol Ammonia) = 50/50
流速 120 g/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 35℃
手性分析條件：
表14
儀器 SFC Method Station (Thar, Waters)
柱型 Celluloe-SC 4.6×100mm, 5um (YMC)
柱壓 120 bar
流動相 A :CO2；B :Methanol [0.2%NH3(7M in methanol)]；A :B=60:40
流速 4 mL/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 40℃
實施例60-1：
t R =1.92 min
MS m/z (ESI):593.1 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 )δ8.40 (d,J=5.6 Hz, 1H), 8.22-8.27 (m, 1 H),7.21-7.27 (m, 2H), 6.79-6.88(m, 1H), 6.58-6.66(m, 2H), 6.28-6.34 (m, 1H), 5.84(d,J=12.0 Hz, 1H), 5.06 (s, 1 H), 4.43-4.59 (m, 2H), 4.07-4.23 (s, 1H), 3.57-3.85 (m, 2 H), 3.20-3.48(m, 1H), 2.79-2.85(m, 1H), 2.41(s, 3H), 1.47(d,J=4.8 Hz, 3H), 1.20 (d,J=6.4 Hz, 3H), 1.06 (d,J=6.8 Hz, 3H).
實施例60-2：
t R =2.43 min
MS m/z (ESI):593.1 [M+H]+.
1HNMR(400MHz, MeOD-d4 )δ8.40(d,J=5.6Hz, 1H), 8.25(t,J=10.8Hz, 1H), 7.21-7.27(m, 2H), 6.79-6.90(m, 1H), 6.58-6.66(m, 2H), 6.28-6.34(m, 1H), 5.83(dd,J=10.8Hz, 2.0Hz, 1H), 5.05-5.10(m, 1H), 4.41-4.57(m, 2H), 4.07-4.21(m, 1H), 3.61-3.87(m, 2H), 3.24-3.36(m, 1H), 2.77-2.83(m, 1 H), 2.41(s, 3H), 1.46-1.49 (m, 3H), 1.19(d,J=6.8Hz, 3H), 1.06(d,J=6.8Hz, 3H).
實施例71，81-84，114-117，130-134和實施例139-141的製備參照實施例60。
實施例75
(S)-4-(4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-(甲硫基)苯基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
第一步：(2-氟-6-(甲硫基)苯基)硼酸的製備
-78℃往(3-氟苯基)(甲基)硫烷(500 mg，3.52 mmol)的四氫呋喃(15 mL)溶液裏滴加二異丙基胺基鋰(5.3 mL，10.6 mmol)，加完撤掉乾冰浴，緩慢升至室溫繼續攪拌1小時。用鹽酸(2N，20 mmol)淬滅反應，再攪拌30分鐘。反應液用乙酸乙酯(40 mL×3)萃取，有機相用鹽水(30 mL)洗滌，濃縮後柱層析[洗脫劑：石油醚~乙酸乙酯/石油醚從0%到30%]純化得到(2-氟-6-(甲硫基)苯基)硼酸(73 mg，産率11%)白色固體。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.43 – 7.33 (m, 1H), 7.24 (d,J= 8 Hz, 1H), 7.01 – 6.93 (m, 1H), 6.08 (br, 2H), 2.51 (s, 3H).
第二步：(S)-4-(4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-(甲硫基)苯基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
(S)-4-(4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(50 mg, 0.103 mmol)，(2-氟-6-(甲硫基)苯基)硼酸(55 mg, 0.296 mmol)，[1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲烷絡合物(17 mg, 0.0206 mmol)和碳酸銫(100 mg, 0.309 mmol)在二氧六環(2.5 mL)和水(3滴)中100℃微波攪拌1小時。濃縮反應液，製備色譜[洗脫劑: 二氯甲烷/甲醇=12/1]純化得到4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-(甲硫基)苯基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(25 mg, 産率：41%)黃色固體。
MS m/z (ESI): 591.2 [M+H]+。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 ) δ 8.42 – 8.24 (m, 2H), 7.49 – 7.39 (m, 1H), 7.27 – 7.16 (m, 2H), 6.97 (t,J= 12 Hz, 1H), 6.85 (m, 1H), 6.31 (d,J= 12 Hz, 1H), 5.83 (d,J= 12 Hz, 1H), 5.22 – 5.00 (m, 1H), 4.65 – 4.37 (m, 2H), 4.28 – 4.02 (m, 1H), 3.99 – 3.54 (m, 2H), 3.49 – 3.35 (m, 1H), 2.94 – 2.70 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.60 – 1.41 (m, 3H), 1.18 (d,J= 8 Hz, 3H), 1.00 (s, 3H)。
實施例75-1和實施例75-2
(M/P-4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-(甲硫基)苯基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)
實施例75透過SFC拆分得到兩個軸手性異構體實施例75-1和實施例75-2 ，SFC：手性製備條件：
表15
儀器 SFC-150 (Thar, Waters)
柱型 IC 20*250mm, 10 μm (Daicel)
柱壓 100 bar
流動相 CO2/ Methanol (0.2% Methanol Ammonia) = 45/55
流速 110 g/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 35℃
手性分析條件：
表16
儀器 SFC Method Station (Thar, Waters)
柱型 Celluloe-SC 4.6×100mm, 5um (YMC)
柱壓 120 bar
流動相 A :CO2；B :Methanol [0.2%NH3(7M in methanol)]；A :B=60:40
流速 4 mL/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 40℃
實施例:75-1：
t R =1.97 min
MS m/z (ESI): 591.2 [M+H]+。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 ) δ 8.42 – 8.24 (m, 2H), 7.49 – 7.39 (m, 1H), 7.27 – 7.16 (m, 2H), 6.97 (t,J= 12 Hz, 1H), 6.85 (m, 1H), 6.31 (d,J= 12 Hz, 1H), 5.83 (d,J= 12 Hz, 1H), 5.22 – 5.00 (m, 1H), 4.65 – 4.37 (m, 2H), 4.28 – 4.02 (m, 1H), 3.99 – 3.54 (m, 2H), 3.49 – 3.35 (m, 1H), 2.94 – 2.70 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.60 – 1.41 (m, 3H), 1.18 (d,J= 8 Hz, 3H), 1.00 (s, 3H)。
實施例75-2：
t R =3.75 min
MS m/z (ESI): 591.2 [M+H]+。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 ) δ 8.40 – 8.23 (m, 2H), 7.48 – 7.38 (m, 1H), 7.25 – 7.16 (m, 2H), 6.96 (t,J= 12 Hz, 1H), 6.85 (m, 1H), 6.31 (d,J= 12 Hz, 1H), 5.82 (d,J= 12 Hz, 1H), 5.20 – 5.00 (m, 1H), 4.64 – 4.36 (m, 2H), 4.28 – 4.02 (m, 1H), 3.99 – 3.54 (m, 2H), 3.48 – 3.34 (m, 1H), 2.93 – 2.70 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.58 – 1.40 (m, 3H), 1.18 (d,J= 8 Hz, 3H), 1.00 (s, 3H)。
實施例77
(S)-4-(4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-7-(2-(甲磺醯-6-氟)苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
MS m/z (ESI): 623.1 [M+H]+。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 ) δ 8.37 (d,J= 4 Hz, 2H), 7.92 (d,J= 4 Hz, 1H), 7.86 – 7.73 (m, 1H), 7.62 (t,J= 8 Hz, 1H), 7.27 – 7.15 (m, 1H), 6.95 – 6.74 (m, 1H), 6.39 – 6.23 (m, 1H), 5.89 – 5.79 (m, 1H), 5.32 – 5.00 (m, 1H), 4.66 – 4.31 (m, 2H), 4.28 – 4.03 (m, 1H), 3.97 – 3.51 (m, 2H), 3.48 – 3.34 (m, 2H), 2.70 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 1.60 – 1.37 (m, 3H), 1.17 – 1.09 (m, 3H), 0.92 (d,J= 8 Hz, 3H).
實施例85
4-(4-丙烯醯-2-乙烯基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
第一步：三級-丁基 4-(7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-(羥甲基)呱嗪-1-羧酸酯的製備
室溫下往7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(1.5 g, 4.3 mmol)的乙腈(50 mL)溶液裏加N,N-二異丙基乙胺(1.63 g, 12.9 mmol)，再加三氯氧磷(1.94 g, 12.9 mmol)，80℃攪拌1小時。冷却至室溫。往反應液裏加N,N-二異丙基乙胺(1.63 g, 12.9 mmol)，加完攪拌5分鐘，再加三級-丁基 3-(羥甲基)呱嗪-1-羧酸酯(2.8 g，12.9 mmol)，攪拌1小時。反應用氯化銨水溶液(10 mL)淬滅，乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，有機相用氯化鈉水溶液(30 mL)洗，無水硫酸鈉乾燥, 過濾，濃縮，柱層析(CH2Cl2:MeOH= 10:1)純化得到目標産物三級-丁基 4-(7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-(羥甲基)呱嗪-1-羧酸酯(1.9 g，産率：81%)。
MS m/z (ESI): 547.1 [M+H]+, 549.1 [M+H+2]+.
第二步：三級-丁基 4-(7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲醯基呱嗪-1-羧酸酯的製備
將三級-丁基 4-(7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-(羥甲基)呱嗪-1-羧酸酯(1.8 g，3.3 mmol)溶於二氯甲烷(100 mL)中，室溫下分批加入Dess-Martin氧化劑DMP(1.7 g，4.0 mmol)，攪拌3小時，矽藻土過濾，濾液用飽和NaHCO3水溶液(30 mL)洗滌，再用飽和食鹽水(30 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗製品，柱層析(Petro ether/EtOAc =5:1-1:1)純化得到目標産物三級-丁基 4-(7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲醯基呱嗪-1-羧酸酯(1.2 g，産率：67%)。
MS m/z (ESI): 545.1 [M+H]+, 547.1 [M+H+2]+.
第三步：三級-丁基 4-(7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-乙烯基呱嗪-1-羧酸酯的製備
甲基三苯基溴化磷 (295 mg，0.83 mmol)溶於無水THF(20 mL)中，氮氣保護下，冷却至-78℃，加入n-BuLi (3 mL，0.75 mmol, 2.5M in hexane)，攪拌10分鐘，升至室溫，攪拌1小時。冷却至-78℃，滴加入三級-丁基 4-(7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲醯基呱嗪-1-羧酸酯(300 mg，0.55 mmol)的THF(5 mL)溶液，攪拌1小時。逐漸升至室溫，繼續攪拌2小時。加飽和氯化銨水溶液淬滅，加水和乙酸乙酯(3*10 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗製品，柱層析(Petro ether/EtOAc =5:1-1:1)純化得到三級-丁基 4-(7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-乙烯基呱嗪-1-羧酸酯(160 mg，産率：54%)。
MS m/z (ESI): 543.1 [M+H]+, 545.1 [M+H+2]+.
第四步：7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-4-(2-乙烯基呱嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
將三級-丁基 4-(7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-乙烯基呱嗪-1-羧酸酯(150 mg，0.28 mmol)溶於二氯甲烷(10 mL)中，加入三氟乙酸(1 mL)，室溫攪拌1小時，濃縮得到粗製品目標産物7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-4-(2-乙烯基呱嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(220 mg，粗製品)。
MS m/z (ESI): 443.1 [M+H]+, 445.1 [M+H+2]+.
第五步：4-(4-丙烯醯-2-乙烯基呱嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
將7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-4-(2-乙烯基呱嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(220 mg，0.28 mmol) 溶於二氯甲烷(10 mL)中，加入DIPEA(108 mg，0.84 mmol)，室溫滴加丙烯醯氯(30 mg，0.34 mmol)，加完繼續攪拌1小時。加水淬滅，二氯甲烷(10 mL)萃取三次。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(CH2Cl2/MeOH =10:1)純化得到目標産物4-(4-丙烯醯-2-乙烯基呱嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(75 mg，兩步總産率：54%)。
MS m/z (ESI): 497.1 [M+H]+, 499.1 [M+H+2]+.
第六步：4-(4-丙烯醯-2-乙烯基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
4-(4-丙烯醯-2-乙烯基呱嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(50 mg, 0.10 mmol)，(2-氟-6-羥基苯基)硼酸(34 mg, 0.2 mmol)，[1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲烷絡合物(9 mg, 0.01mmol)和碳酸銫(97 mg, 0.3 mmol)在二氧六環(4 mL)和水(1 mL)中100℃微波攪拌1小時。濃縮反應液，製備HPLC純化得到産物4-(4-丙烯醯-2-乙烯基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(8 mg，産率：14%)。
MS m/z (ESI): 573.1 [M+H]+.
實施例76-80、實施例85-113和實施例118-129的製備參照實施例75。
實施例114
4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
第一步：4,7-二氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
室溫下往7-氯-6-氟-4-羥基-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(200 mg, 0.526 mmol)的乙腈(10 mL)溶液裏加N,N-二異丙基乙胺(407 mg, 3.16 mmol)，再加三氯氧磷(242 mg, 1.58 mmol)，80℃攪拌1小時。冷却至室溫，直接用於下一步反應。
第二步：三級-丁基 (2R,5S)-4-(7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸酯的製備
往上一步反應液加N,N-二異丙基乙胺(678 mg, 5.26 mmol)和三級-丁基 (2R,5S)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸酯(224 mg, 1.005 mmol)，加完室溫攪拌1小時。加水(60 mL)，用乙酸乙酯(40 mL×3)萃取，有機相用氯化銨水溶液(40 mL)洗，再用氯化鈉水溶液(30 mL)洗，濃縮後柱層析[洗脫劑: 二氯甲烷~甲醇/二氯甲烷從0%到2.2%]純化得到三級-丁基 (2R,5S)-4-(7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸酯(200 mg, 2步産率66%)黃色固體。
MS m/z (ESI): 577.2 [M+H]+，579.2 [M+H+2]+
第三步：7-氯-4-((2S,5R)-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮三氟乙酸鹽的製備
往三級-丁基 (2R,5S)-4-(7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸酯(200 mg, 0.347 mmol)的二氯甲烷(6 mL)溶液裏加三氟乙酸(1.2 mL)，加完室溫攪拌1.5小時。低溫濃縮反應液得到7-氯-4-((2S,5R)-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮三氟乙酸鹽(200 mg)紅色油狀物，快速用於下一步反應。
MS m/z (ESI): 477.2 [M+H]+, 479.2 [M+H+2]+。
第四步：4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
往7-氯-4-((2S,5R)-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮三氟乙酸鹽(200 mg, 0.347 mmol)的二氯甲烷(15 mL)溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(447 mg, 3.47 mmol)，在0℃滴加丙烯醯氯(63 mg, 0.694 mmol)，加完攪拌1小時。反應用氯化銨水溶液(30 mL)淬滅，二氯甲烷(30 mL×3)萃取，二氯甲烷層用飽和NaCl水溶液(20 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後柱層析[洗脫劑: 二氯甲烷~甲醇/二氯甲烷從0%到2.5%]純化得到4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(130 mg, 2步産率71%)黃色固體。
MS m/z (ESI): 530.2 [M+H]+, 532.2 [M+H+2]+。
第五步：4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(130 mg, 0.246 mmol)，(2-氟-6-羥基苯基)硼酸(77 mg, 0.491 mmol)，[1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲烷絡合物(40 mg, 0.0491 mmol)和碳酸銫(240 mg, 0.738 mmol)加入二氧六環(8 mL)和水(1 mL)中，氮氣置換，100℃微波攪拌1小時。濃縮反應液，柱層析[洗脫劑: 二氯甲烷~甲醇/二氯甲烷從0%到2.5%]純化得到4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(90 mg, 産率60%)黃色固體。
MS m/z (ESI): 606.2 [M+H]+。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 ) δ 8.40 (d,J= 8 Hz, 1H), 8.29-8.18 (m, 1H), 7.30– 7.18 (m, 2H), 6.93–6.73 (m, 1H), 6.70–6.56 (m, 2H), 6.36–6.20 (m, 1H), 5.89–5.75 (m, 1H), 5.15–4.98 (m, 1H), 4.63–4.22 (m, 2H), 4.11–3.82 (m, 2H), 3.68–3.40 (m, 1H), 2.88–2.65 (m, 1H), 2.40 (d,J= 4 Hz, 3H), 1.53 – 1.43 (m, 3H), 1.36 (t,J= 8 Hz, 1H), 1.28 (t,J= 8 Hz, 2H), 1.23 – 1.16 (m, 3H), 1.10 – 1.01 (m, 3H).
實施例114-1和實施例114-2
(M/P-4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)
實施例114透過SFC拆分得到兩個軸手性異構體實施例114-1和實施例114-2，SFC：手性製備條件：
表17
儀器 SFC-150 (Thar, Waters)
柱型 IC 20*250mm, 10 μm (Daicel)
柱壓 100 bar
流動相 CO2/ Methanol (0.2% Methanol Ammonia) = 60/40
流速 100 g/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 35℃
手性分析條件：
表18
儀器 SFC Method Station (Thar, Waters)
柱型 Celluloe-SC 4.6×100mm, 5um (YMC)
柱壓 120 bar
流動相 A :CO2；B :Ethanol [1.0%NH3(7M in methanol)]；A :B=65:35
流速 4 mL/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 40℃
實施例114-1：
t R =1.99 min
MS m/z (ESI): 606.2 [M+H]+。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 ) δ 8.40 (d,J= 8 Hz, 1H), 8.29-8.18 (m, 1H), 7.30– 7.18 (m, 2H), 6.93–6.73 (m, 1H), 6.70–6.56 (m, 2H), 6.36–6.20 (m, 1H), 5.89–5.75 (m, 1H), 5.15–4.98 (m, 1H), 4.63–4.22 (m, 2H), 4.11–3.82 (m, 2H), 3.68–3.40 (m, 1H), 2.88–2.65 (m, 1H), 2.40 (d,J= 4 Hz, 3H), 1.53 – 1.43 (m, 3H), 1.36 (t,J= 8 Hz, 1H), 1.28 (t,J= 8 Hz, 2H), 1.23 – 1.16 (m, 3H), 1.10 – 1.01 (m, 3H).
實施例114-2：
t R =2.87 min
MS m/z (ESI): 606.2 [M+H]+。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 ) δ 8.40 (d,J= 8 Hz, 1H), 8.27-8.18 (m, 1H), 7.30 – 7.19 (m, 2H), 6.94 – 6.74 (m, 1H), 6.70 – 6.56 (m, 2H), 6.36 – 6.20 (d,J= 16 Hz, 1H), 5.90 – 5.75 (m, 1H), 5.14 – 4.98 (m, 1H), 4.63 – 4.22 (m, 2H), 4.12 – 3.82 (m, 2H), 3.68 – 3.41 (m, 1H), 2.87 – 2.65 (m, 1H), 2.40 (d,J= 4 Hz, 3H), 1.53 – 1.42 (m, 3H), 1.36 (t,J= 8 Hz, 1H), 1.28 (t,J= 8 Hz, 2H), 1.23 – 1.16 (d,J= 4 Hz, 3H), 1.10 – 1.01 (d,J= 4 Hz, 3H).
實施例115
4-((3S,5R)-4-丙烯醯-3,5-二甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
4-((3S,5R)-4-丙烯醯-3,5-二甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備參考實施例114。
MS m/z (ESI):607.1 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.39-8.34 (m, 2H), 7.25 – 7.20 (m, 2H), 6.86-6.80 (m, 1H), 6.67-6.58 (m, 2H), 6.32- 6.27 (dd,J= 16.6, 4.0 Hz, 1H), 5.83-5.79 (dd,J= 12.0, 4.0 Hz, 1H), 4.65-4.48 (m, 4H), 3.84-3.72 (m, 2H), 2.82-2.75 (m , 1H), 2.38 (s, 3H), 1.50-1.44 (dd,J= 16.0, 8.0Hz, 6H), 1.20-1.18 (d,J= 8.0 Hz, 3H), 1.07-1.05 (d,J= 8.0 Hz, 3H).
實施例133
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲磺醯)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
第一步：4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲磺醯)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
將4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(80 mg, 0.14 mmol), 過硫酸氫鉀複合鹽(520 mg, 0.84 mmol)加入溶劑(乙腈：水=2：1) (9 mL)中，在室溫條件下反應過夜，所得粗製品用製備-HPLC分離純化得到目標化合物4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲磺醯)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮爲白色固體(13 mg，産率15%)。
MSm/z(ESI):625.1 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 ) δ  8.88 (d,J=4.8Hz, 1H), 8.23-8.29 (m, 1 H),7.87 (d,J=5.2 Hz, 1H), 7.23(dd,J 1=14.8Hz,J 2=8.0Hz, 1H), 6.78-6.85 (m, 1H), 6.57-6.65 (m, 2H), 6.31(dd,J 1=16.4Hz,J 2=3.2Hz, 1H), 5.83(dd,J 1=10.8Hz,J 2=1.6Hz, 1H), 5.08 (s, 1H),4.43-4.55 (m, 2H), 4.06-4.23 (s, 1H), 3.61-3.86 (m，2H), 3.11-3.40 (m, 1H), 2.94-2.99(m, 4H), 1.46-1.50(m, 3H), 1.20-1.22(m, 3H), 1.07-1.09 (m, 3H).
實施例134
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
第一步：N-(4-氯-3-氟苯基)-2,2,2-三氟乙醯胺的製備
將4-氯-3-氟苯胺 (1.45 g, 0.01 mol)溶於THF(150 mL)，加入Na2CO3(3.18 g, 0.03 mol), 氮氣保護下，冷却到0℃，滴加三氟乙酸酐(4.2 mL，0.03 mol)，滴加完畢，室溫攪拌10小時。將反應液加到水(150mL)中。乙酸乙酯(100 mL)萃取三次。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(PE/EA=5：1)純化得到白色固體目標産物N-(4-氯-3-氟苯基)-2,2,2-三氟乙醯胺(2.3 g，産率95%)。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 ) δ 7.70 (dd,J= 11.1, 2.0 Hz, 1H), 7.49 – 7.40 (m, 2H);
19F NMR (376 MHz, MeOD-d4 ) δ -77.17 (s);
MS m/z (ESI): 242.1 [M+H]+。
第二步：(6-胺基-3-氯-2-氟苯基)硼酸的製備
將N-(4-氯-3-氟苯基)-2,2,2-三氟乙醯胺 (2.3 g, 9.5 mmol) 溶於THF(40 mL)， 氮氣保護下，冷却到-78℃，滴加n-BuLi(7.9 mL，19.0 mmol, 2.4M)，滴加完畢，在-50℃條件下攪拌50分鐘。反應液冷却到-78℃，滴加硼酸三異丙酯(2.3 g, 9.5 mmol) (4.8 mL，20.9 mmol)，滴加完畢，相同溫度下攪拌20分鐘，移去乾冰浴，室溫攪拌2小時。然後，將反應液冷却到0℃，滴加稀鹽酸(19 mL, 1M)，升溫到40℃，攪拌1小時。乙酸乙酯(100 mL)萃取三次。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗製品，柱層析(PE/EA=4：1)純化得到灰色固體目標産物(6-胺基-3-氯-2-氟苯基)硼酸(1.1 g，産率56 %)。
MS m/z (ESI): 190.0 [M+H]+。
第三步：(2-胺基-6-氟苯基)硼酸的製備
將(6-胺基-3-氯-2-氟苯基)硼酸(100 mg，0.53 mmol)溶於MeOH(20mL)中，加入Pd/C(20 mg), 氫氣置換三次，15psi下攪拌反應2小時，TLC(PE/EA 1：1)檢測反應完全。過濾，濃縮濾液，得到黃色固體目標産物(2-胺基-6-氟苯基)硼酸(80 mg，産率97%)，直接用於下一步反應，無需純化。
MS m/z (ESI): 156.0 [M+H]+。
第四步：4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
將(S)-4-(4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(26 mg，0.05 mmol), (6-胺基-3-氯-2-氟苯基)硼酸(23.2 mg,0.15 mmol)和碳酸銫(48.87 mg, 0.15 mmol)溶於dioxane/H2O(1.5 mL/0.3 mL)。氮氣置換1分鐘，微波100℃條件下，反應1小時。反應結束，濃縮反應液，柱層析(CH2Cl2/MeOH=20：1)純化得到粗製品，後用製備HPLC純化得到黃色固體目標産物4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(7.0 mg，産率24%)。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 ) δ 8.46 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.25 (dd,J= 21.2, 12.0 Hz, 1H), 7.27 (d,J= 5.5 Hz, 1H), 7.11 (dd,J= 14.7, 8.2 Hz, 1H), 6.84 (d,J= 14.2 Hz, 1H), 6.49 (d,J= 8.3 Hz, 1H), 6.41 – 6.27 (m, 2H), 5.83 (dd,J= 10.6, 1.6 Hz, 1H), 4.48 (dd,J= 52.4, 11.6 Hz, 2H), 4.30 – 3.83 (m, 2H), 3.74 (d,J= 9.7 Hz, 2H), 3.22 (s, 1H), 2.98 – 2.80 (m, 1H), 2.43 (d,J= 0.7 Hz, 3H), 1.56 – 1.40 (m, 3H), 1.22 (d,J= 6.6 Hz, 3H), 1.01 (d,J= 6.6 Hz, 3H).
19F NMR (376 MHz, MeOD-d4 ) δ -114.58 – -114.95 (m), -114.95 – -115.34 (m), -125.12 – -126.48 (m).
MS m/z (ESI): 592.2 [M+H]+。
實施例136
(S)-4-(4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-7-(2-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
第一步：6-氟-7-(2-氟吡啶-3-基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的製備
7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(200 mg, 0.575 mmol)，2-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡啶(192 mg, 0.862 mmol)，[1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲烷絡合物(47 mg, 0.0575 mmol)和碳酸銫(561 mg, 1.725 mmol)在二氧六環(8 mL)和水(1 mL)中100℃微波攪拌1小時。濃縮反應液，柱層析[洗脫劑: 二氯甲烷~甲醇/二氯甲烷從0%到3%]純化得到6-氟-7-(2-氟吡啶-3-基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(200 mg，産率：85%)黃色固體。
MS m/z (ESI): 410.1 [M+H]+
第二步：6-氟-7-(2-氟吡啶-3-基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的製備
6-氟-7-(2-氟吡啶-3-基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(170 mg, 0.416 mmol)和20%甲硫醇鈉水溶液(218 mg, 0.623 mmol)在二甲亞碸(5 mL)中85℃攪拌4小時。往反應液裏加水(40 mL)，用乙酸乙酯(30 mL×3)萃取，有機相用氯化鈉水溶液(30 mL)洗滌，濃縮後柱層析[洗脫劑: 二氯甲烷~甲醇/二氯甲烷從0%到2.5%]純化得到6-氟-7-(2-氟吡啶-3-基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(128 mg, 産率70%)黃色固體。
MS m/z (ESI): 438.1 [M+H]+
第三步：4-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-7-(2-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
室溫下往6-氟-7-(2-氟吡啶-3-基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(200 mg, 0.458 mmol)的乙腈(20 mL)溶液裏加N,N-二異丙基乙胺(354 mg, 2.75 mmol)，再加三氯氧磷(210 mg, 1.37 mmol)，80℃攪拌1小時。冷却至室溫，直接用於下一步反應。
第四步：三級-丁基 (S)-4-(6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-7-(2-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸酯的製備
往上一步反應液加N,N-二異丙基乙胺(588 mg, 4.58 mmol)和三級-丁基 (2R,5S)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸酯(183 mg, 4.5 mmol)，加完室溫攪拌0.5小時。用氯化銨水溶液(60 mL)淬滅反應，乙酸乙酯(40 mL×3)萃取，有機相用氯化鈉水溶液(30 mL)洗滌，濃縮後柱層析[洗脫劑: 二氯甲烷~甲醇/二氯甲烷從0%到2.8%]純化得到三級-丁基 (S)-4-(6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-7-(2-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸酯(220 mg, 2步産率78%)黃色固體。
MS m/z (ESI): 620.3 [M+H]+
第五步：(S)-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-4-(2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮三氟乙酸鹽的製備
往三級-丁基 (S)-4-(6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-7-(2-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸酯(75 mg, 0.121 mmol)的二氯甲烷(5 mL)溶液裏加三氟乙酸(1 mL)，加完室溫攪拌0.5小時。低溫濃縮反應液得到(S)-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-4-(2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮三氟乙酸鹽(80 mg)黃色油狀物，快速用於下一步反應。
MS m/z (ESI): 520.2 [M+H]+
第六步：(S)-4-(4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-7-(2-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
往(S)-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-4-(2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮三氟乙酸鹽(80 mg, 0.121 mmol)的二氯甲烷(10 mL)溶液加N,N-二異丙基乙胺(156 mg, 1.21 mmol)，在0℃加丙烯醯氯(33 mg, 0.363 mmol)，加完攪拌1小時。反應用氯化銨水溶液(30 mL)淬滅，二氯甲烷(30 mL×3)萃取，二氯甲烷層用飽和食鹽水溶液(20 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，製備色譜純化[洗脫劑: 二氯甲烷/甲醇=12/1]得到(S)-4-(4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-7-(2-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(26 mg，兩步産率37%)黃色固體。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 ) δ 8.50 – 8.45 (m, 1H), 8.40 (d,J= 4 Hz, 1H), 8.36 – 8.24 (m, 1H), 7.67 (d,J= 8 Hz, 1H), 7.26 (d,J= 8 Hz, 1H), 7.18 – 7.09 (m, 1H), 6.94 – 6.76 (m, 1H), 6.38 – 6.26 (m, 1H), 5.89 – 5.79 (m, 1H), 5.23 – 4.93 (m, 2H), 4.63 – 4.36 (m, 2H), 4.28 – 4.02 (m, 1H), 3.99 – 3.52 (m, 2H), 2.90 – 2.72 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.58 – 1.40 (m, 3H), 1.18 (d,J= 8 Hz, 3H), 1.01 (d,J= 8 Hz, 3H).
MS m/z (ESI): 574.2 [M+H]+。
實施例143
6-氟-7-(2-氟-6-(甲硫基)苯基)-4-((S)-4-(2-氟丙烯醯)-2-甲基呱嗪-1-基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
第一步：三級-丁基 (3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-(甲硫基)苯基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸酯的製備
三級-丁基 (S)-4-(7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸酯(250 mg, 0.472 mmol)，(2-氟-6-(甲硫基)苯基)硼酸(132 mg, 0.708 mmol)，[1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲烷絡合物(96 mg, 0.118 mmol)和碳酸銫(460 mg, 1.42 mmol)在二氧六環(8 mL)和水(1 mL)中100℃微波攪拌1小時。旋乾反應液，柱層析[洗脫劑: 二氯甲烷/甲醇從0%到3.5%]純化得到三級-丁基 (3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-(甲硫基)苯基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸酯(230 mg，産率77%)黃色固體。
MS m/z (ESI): 637.3 [M+H]+。
第二步：6-氟-7-(2-氟-6-(甲硫基)苯基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-4-((S)-2-甲基呱嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮三氟乙酸鹽的製備
往三級-丁基 (3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-(甲硫基)苯基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸酯(50 mg, 0.0786 mmol)的二氯甲烷(5 mL)溶液裏加三氟乙酸(1 mL)，加完室溫攪拌1小時。低溫旋乾反應液得到6-氟-7-(2-氟-6-(甲硫基)苯基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-4-((S)-2-甲基呱嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮三氟乙酸鹽(51 mg, 産率100%)紅色油狀物，快速用於下一步反應。
第三步：6-氟-7-(2-氟-6-(甲硫基)苯基)-4-((S)-4-(2-氟丙烯醯)-2-甲基呱嗪-1-基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
0℃往6-氟-7-(2-氟-6-(甲硫基)苯基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)-4-((S)-2-甲基呱嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮三氟乙酸鹽(51 mg, 0.0786 mmol)和N-甲基嗎啡啉(55 mg, 0.55 mmol)的二氯甲烷(10 mL)溶液裏加2-氟丙烯酸 (21 mg, 0.233 mmol)和1-正丙基磷酸酐(100 mg, 0.314 mmol)，加完0℃攪拌1小時。往反應液裏加水(20 mL)，用二氯甲烷萃取(20 mL*2)，有機相濃縮後用製備色譜 [洗脫劑: 二氯甲烷/甲醇=12/1]純化得到6-氟-7-(2-氟-6-(甲硫基)苯基)-4-((S)-4-(2-氟丙烯醯)-2-甲基呱嗪-1-基)-1-(2-異丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(35 mg，産率61%)黃色固體。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 ) δ 8.38 (d,J= 4 Hz, 1H), 8.35 – 8.25 (m, 1H), 7.49 – 7.39 (m, 1H), 7.26 – 7.17 (m, 2H), 6.98 (t,J= 8 Hz, 1H), 5.41 – 5.31 (m, 1H), 5.31 – 5.24 (m, 1H), 5.21 – 4.94 (m, 2H), 4.59 – 3.68 (m, 4H), 3.54 – 3.38 (m, 1H), 2.81 (s, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 1.59 – 1.42 (m, 3H), 1.18 (d,J= 8 Hz, 3H), 0.99(brd, 3H).
MS m/z (ESI): 609.2 [M+H]+。
實施例144-149的製備參照實施例143。
實施例150
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(6-胺基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
將(S)-4-(4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-氯-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(26.7 mg，0.05 mmol), (6-胺基-3-氯-2-氟苯基)硼酸(28.4 mg, 0.15 mmol)和乙酸鉀(15.0 mg, 0.15 mmol)溶於dioxane/H2O(1.5 mL/0.3 mL)。氮氣置換1分鐘，微波100℃條件下，反應1小時。反應結束，濃縮反應液，柱層析(CH2Cl2/MeOH=20：1)純化得到粗製品，後用製備HPLC純化得到黃色固體目標産物4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(3.7 mg，産率14%)。
MS m/z (ESI): 642.1 [M+H]+。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 ) δ 8.56 – 8.39 (m, 2H), 7.24 (t,J= 5.3 Hz, 1H), 7.15 (dd,J= 15.4, 6.9 Hz, 1H), 6.84 (d,J= 9.9 Hz, 1H), 6.53 – 6.46 (m, 1H), 6.32 (d,J= 15.9 Hz, 1H), 5.84 (d,J= 12.2 Hz, 1H), 4.68 – 4.36 (m, 3H), 4.10 (dd,J= 45.7, 31.6 Hz, 2H), 3.76 (s, 1H), 2.94 (s, 2H), 2.42 (d,J= 6.2 Hz, 3H), 1.57 – 1.43 (m, 3H), 1.22 (d,J= 6.7 Hz, 3H), 1.06 (dd,J= 42.4, 6.7 Hz, 3H).19F NMR (376 MHz, MeOD) δ -117.04 – -117.24 (m), -117.24 – -117.51 (m).
實施例150-1和實施例150-2
(M/P-4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)
實施例150透過SFC拆分得到兩個軸手性異構體實施例150-1和實施例150-2 ，SFC:手性製備條件：
表19
儀器 SFC-80 (Thar, Waters)
柱型 IC 20*250 mm, 10 μm (Daicel)
柱壓 100 bar
流動相 CO2/ Methanol (0.2% Methanol Ammonia) = 45/55
流速 80 g/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 35℃
手性分析條件：
表20
儀器 SFC method station (Thar, Waters)
柱型 OX-H 4.6*100mm, 5 μm (Daicel)
柱壓 120 bar
流動相 A :CO2；B :Methanol [0.2%NH3(7M in methanol)]；A :B=65:35
流速 4 mL/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 40℃
實施例150-1：
t R =1.87 min
MS m/z (ESI): 642.1 [M+H]+。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 ) δ 8.56 – 8.39 (m, 2H), 7.24 (t,J= 5.3 Hz, 1H), 7.15 (dd,J= 15.4, 6.9 Hz, 1H), 6.84 (d,J= 9.9 Hz, 1H), 6.53 – 6.46 (m, 1H), 6.32 (d,J= 15.9 Hz, 1H), 5.84 (d,J= 12.2 Hz, 1H), 4.68 – 4.36 (m, 3H), 4.10 (dd,J= 45.7, 31.6 Hz, 2H), 3.76 (s, 1H), 2.94 (s, 2H), 2.42 (d,J= 6.2 Hz, 3H), 1.57 – 1.43 (m, 3H), 1.22 (d,J= 6.7 Hz, 3H), 1.06 (dd,J= 42.4, 6.7 Hz, 3H).
19F NMR (376 MHz, MeOD-d4 ) δ -117.04 – -117.24 (m), -117.24 – -117.51 (m).
實施例150-2：
t R =2.80 min
MS m/z (ESI): 642.1 [M+H]+。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 ) δ 8.56 – 8.39 (m, 2H), 7.27 – 7.10 (m, 2H), 6.84 (dd, J = 28.3, 17.7 Hz, 1H), 6.50 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.32 (d, J = 16.9 Hz, 1H), 5.83 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 4.63 – 4.41 (m, 2H), 4.23 – 4.02 (m, 1H), 3.79 – 3.57 (m, 2H), 3.36 (s, 2H), 2.99 – 2.86 (m, 1H), 2.41 (d, J = 7.6 Hz, 3H),1.51 (d, J = 25.9 Hz, 3H), 1.21 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.05 (dd, J = 44.8, 6.7 Hz, 3H).
實施例151
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(6-胺基-3-氯-2-氟苯基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
將(S)-4-(4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(26 mg，0.05 mmol), (6-胺基-3-氯-2-氟苯基)硼酸(28.4 mg, 0.15 mmol)和碳酸銫(48.8 mg, 0.15 mmol)溶於dioxane/H2O(1.5 mL/0.3 mL)。氮氣置換1分鐘，微波100℃條件下，反應1小時。反應結束，將反應液旋乾，柱層析(CH2Cl2/MeOH=20：1)純化得到粗製品，後用製備HPLC純化得到黃色固體目標産物4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(4.4 mg，産率14%)。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 ) δ 8.47 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.38 – 8.24 (m, 1H), 7.27 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.17 (t,J= 8.6 Hz, 1H), 6.85 (d,J= 14.9 Hz, 1H), 6.49 (d,J= 8.9 Hz, 1H), 6.32 (d,J= 16.3 Hz, 1H), 5.84 (d,J= 10.5 Hz, 1H), 4.57 (d,J= 23.5 Hz, 2H), 4.42 (s, 1H), 4.24 – 3.89 (m, 2H), 3.73 (dd,J= 14.4, 7.9 Hz, 1H), 2.92 (s, 1H), 2.43 (s, 3H), 1.54 – 1.40 (m, 3H), 1.22 (d,J= 6.7 Hz, 3H), 1.01 (d,J= 6.6 Hz, 3H).
19F NMR (376 MHz, MeOD-d4 ) δ -116.46 – -116.73 (m), -116.87 (dd,J= 39.0, 8.4 Hz), -126.18 (dd,J= 24.9, 15.2 Hz).
MS m/z (ESI): 626.1 [M+H]+。
實施例152
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
第一步：6-溴-2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-胺的製備
將2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-胺 (1 g，5.5 mmol) 溶於乙腈 (15 mL)中，0℃加N-溴代丁二醯亞胺(970 mg，5.5 mmol)，室溫攪拌1小時。反應液冷却至0℃， 滴加飽和Na2SO3淬滅反應，加水和二氯甲烷(3*10 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗製品，柱層析(Petro ether/EtOAc =10：1到3：1) 純化得到目標産物6-溴-2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-胺 (480 mg，産率34%)。
MS m/z (ESI):261.1 [M+H]+.
第二步：2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-胺的製備
N2保護下，將6-溴-2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-胺(480 mg，1.85 mmol) 溶於1,4-二氧六環和水的混合液中(3 mL：0.1 mL)中，加入甲基硼酸(560 mg，9.25 mmol)，Pd(dppf)Cl2.DCM (100 mg，0.2 mmol)，K2CO3(510 mg，3.7 mmol)，100℃微波反應1小時。反應液加水和二氯甲烷(3*10 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗製品，柱層析(Petro ether/EtOAc =3：1到1：1) 純化得到目標産物2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-胺 (200 mg，産率55%)。
MS m/z (ESI):197.1 [M+H]+.
第三步：2,6-二氯-5-氟-N-((2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)胺基甲醯)尼克醯胺的製備
N2保護下，將2,6-二氯-5-氟尼克醯胺(220 mg，1.05mmol)溶於THF(20 mL)中，-78℃滴加草醯氯(0.6 mL，1.2 mmol) (2 M/L的二氯甲烷溶液)，-78℃攪拌10 分鐘，60℃攪拌3小時，反應液冷却至0℃， 滴加三乙胺(1 mL，3.2 mmol)，滴加2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-胺(200 mg，1.05 mmol)的THF溶液，室溫攪拌2小時。加鹽水淬滅，加水和乙酸乙酯(3*50 mL)萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗製品，柱層析(DCM/MeOH =100：1 到70：1)純化得到目標産物2,6-二氯-5-氟-N-((2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)胺基甲醯)尼克醯胺(320 mg，産率：67%)。
MS m/z (ESI):457.1 [M+H]+.
第四步：7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的製備
將2,6-二氯-5-氟-N-((2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)胺基甲醯)尼克醯胺(320 mg，0.75 mmol) 溶於無水THF(20 mL)中，氮氣保護下，冷却至0℃，滴加KHMDS(1.5 mL，1.5 mmol)，攪拌0.5小時。加飽和氯化銨水溶液淬滅，加水和乙酸乙酯(3*50 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗製品，柱層析(DCM/MeOH =200：1 到80：1)純化得到目標産物7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(270 mg，産率：91%)。
MS m/z (ESI): 395.1 [M+H]+.
第五步：4,7-二氯-6-氟-1-(2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
將7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(270 mg，0.57 mmol)溶於乙腈(10 mL)中，加入DIEA(1.2 mL，2.3 mmol), POCl3(0.12 mL, 1.1 mmol)，80℃攪拌0.5小時。直接用於下一步反應。
MS m/z (ESI): 413.1 [M+H]+.
第六步：三級-丁基 (S)-4-(7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸酯的製備
將4,7-二氯-6-氟-1-(2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(230 mg，0.57 mmol)的乙腈(10 mL)中，加入DIEA(1.2 mL，2.3 mmol)，加入三級-丁基 (S)-3-甲基呱嗪-1-羧酸酯(230 mg，1.1mmol)， 室溫攪拌1小時。加水淬滅，加水和乙酸乙酯(3*50 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗製品，柱層析(CH2Cl2/MeOH=30：1)純化得到目標産物三級-丁基 (S)-4-(7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸酯(290 mg，産率88%)。
MS m/z (ESI): 577.1 [M+H]+.
第七步：(S)-7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-4-(2-甲基呱嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
將三級-丁基 (S)-4-(7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸酯(290 mg，0.5 mmol)溶於二氯甲烷(6 mL)中，加入TFA(1 mL)，室溫攪拌1小時。濃縮得到粗製品目標産物(S)-7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-4-(2-甲基呱嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(240 mg，産率100%)。
MS m/z (ESI): 477.1 [M+H]+.
第八步：4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
將(S)-7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-4-(2-甲基呱嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(240 mg，0.5 mmol)溶於二氯甲烷(10 mL)中，加入DIEA(3 mL，5 mmol)，加入丙烯醯氯(45 mg，0.5 mmol)，室溫攪拌1小時。加水淬滅，加水和乙酸乙酯(3*50 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗製品，柱層析(CH2Cl2/MeOH =20：1)純化得到目標産物4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(300 mg，産率：100%)。
MS m/z (ESI): 531.1 [M+H]+.
第九步：4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
N2保護下，將4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(300 mg，0.57 mmol)，(2-氟-6-羥基苯基)硼酸(177 mg，1.1 mmol)溶於1,4-二氧六環和水的混合液中(6 mL：0.3 mL)中，Pd(dppf)Cl2.DCM (50 mg，0.06 mmol)，Cs2CO3(280 mg，0.86 mmol)，100℃ 微波反應1小時。加水淬滅，加水和乙酸乙酯(3*50 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗製品，柱層析(CH2Cl2/MeOH =200：1到80：1)純化得到目標産物4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(90 mg，産率26%)。
1H NMR (400 MHz, Methanol-d4 ) δ 8.38 (d,J= 5.0 Hz, 1H), 8.30-8.22 (m, 1H), 7.56- 7.41 (m, 3H), 7.25-7.19 (m, 2H), 6.91 – 6.80 (m, 1H), 6.34-6.29 (dd,J= 17.0, 5.6 Hz, 1H), 5.84-5.82 (dd,J= 10.6, 1.8 Hz, 1H), 5.11-5.04 (m, 2H), 4.53-4.46 (m, 2H), 4.23– 4.07 (m, 1H), 3.90-3.73 (m, 2H), 2.81-2.79 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 1.50-1.46 (m, 3H), 1.19-1.17 (d,J= 6.8 Hz, 3H), 1.01-0.99 (d,J= 6.8 Hz, 3H).
MS m/z (ESI): 573.1 [M+H]+.
實施例153
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2,3-二氟-6-羥基苯基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2,3-二氟-6-羥基苯基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備參考實施例114。
MS m/z (ESI):611.1 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 ) δ 8.41 (d,J= 5.6 Hz, 1H), 8.32 - 8.25 (m, 1H）, 7.25 (d,J= 5.6 Hz, 1H), 7.20 - 7.13 (m, 1H), 6.92 - 6.82 (m, 1H), 6.62 - 6.58 (m, 1H), 6.34 - 6.28 (m, 1H), 5.83 (d,J= 10.4 Hz, 1H), 5.14 - 5.04 (m, 1H), 4.64 - 4.42 (m, 2H), 4.25 - 4.07 (m, 1H), 3.89 - 3.61 (m, 3H), 2.88 - 2.77 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 1.52 - 1.46 (m, 3H), 1.20 (d,J= 6.4 Hz, 3H), 1.05 (d,J= 6.4 Hz, 3H).
實施例154
(S)-4-(4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2,6-二氟苯基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
(S)-4-(4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2,6-二氟苯基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備參考實施例114。
MS m/z (ESI):595.1 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.40 – 8.32 (m, 2H), 7.51 (t,J= 7.6 Hz, 1H), 7.22 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.05 (t,J= 8.4 Hz, 2H), 6.86 – 6.79 (m, 1H), 6.37 – 6.26 (m, 1H), 5.84 (d,J= 10.6 Hz, 1H), 5.08 (m, 2H), 4.56-4.46 (m, 2H), 4.21-4.08 (m, 1H), 3.85-3.62 (m, 2H), 2.86-2.82 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 1.47 (d,J= 6.6 Hz, 3H), 1.21 – 1.19 (d,J= 6.8 Hz, 3H), 1.04 (d,J= 6.8 Hz, 3H).
實施例155
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲磺醯)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲磺醯)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備參考實施例133。
MS m/z (ESI):641.1 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4 ) δ 8.86 (d,J=5.2Hz, 1H), 8.44-8.46 (m, 1 H),7.85 (d,J=4.8 Hz, 1H), 7.20(dd,J 1=15.2Hz,J 2=8.4Hz, 1H), 6.82-6.85 (m, 1H), 6.55-6.64 (m, 2H), 6.31(d,J=17.2Hz, 1H), 5.82(d,J=12.0 Hz, 1H), 5.07 (s, 1 H),4.43-4.58 (m, 2H), 4.06-4.23 (s, 1H), 3.38-3.86 (m，3H), 2.94-2.98(m, 4 H), 1.46-1.51(m, 3H), 1.18-1.22(m, 3 H), 1.07-1.09 (m, 3H).
實施例165
4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-7-(6-胺基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
第一步：2,5,6-三氯-N-((2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)胺基甲醯)尼克醯胺的製備
N2保護下，將2,5,6-三氯尼克醯胺(6.2 g，27.7 mmol)溶於THF(60 mL)中，-78℃滴加草醯氯(15.2 mL，31.5 mmol) (2 M/L的二氯甲烷溶液)，-78℃攪拌10分鐘，60℃攪拌3小時，反應液冷却至0℃，滴加三乙胺(18 mL，111 mmol)，滴加2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-胺(5 g，27.7 mmol)的THF溶液，室溫攪拌2小時。加鹽水淬滅，加水和乙酸乙酯(3*100 mL)萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗製品，柱層析(DCM/MeOH =100：1到70：1)純化得到目標産物2,5,6-三氯-N-((2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)胺基甲醯)尼克醯胺(8.6 g，産率72%)。
MS m/z (ESI):433.1 [M+H]+, 435.1 [M+H+2]+.
第二步：6,7-二氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的製備
將2,5,6-三氯-N-((2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)胺基甲醯)尼克醯胺(10.4 g，24.1 mmol)溶於無水THF(80 mL)中，氮氣保護下，冷却至0℃，滴加KHMDS(48 mL，48.2 mmol)，攪拌0.5小時。加飽和氯化銨水溶液淬滅，加水和乙酸乙酯(3*100 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗製品，用乙酸乙酯打漿純化得到目標産物6,7-二氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(8 g，産率84%)。
MS m/z (ESI): 397.1 [M+H]+, 399.1 [M+H+2]+.
第三步： 4,6,7-三氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
將6,7-二氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(5.2 g，13.1 mmol)溶於ACN (50 mL)中，加入DIEA(23 mL，66 mmol), POCl3(3 mL, 19.7 mmol)，80℃攪拌0.5小時。直接用於下一步反應。
MS m/z (ESI): 415.1 [M+H]+, 417.1 [M+H+2]+.
第四步：三級-丁基 (2R,5S)-4-(6,7-二氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸酯的製備
將4,6,7-三氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的乙腈 (50 mL)中，加入DIEA(23 mL，66 mmol)，加入三級-丁基 (2R,5S)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸酯(6.2 g，26.2 mmol)，室溫攪拌1小時。加水淬滅，加水和乙酸乙酯(3*100 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗製品，柱層析(CH2Cl2/MeOH =30：1)純化得到目標産物三級-丁基 (2R,5S)-4-(6,7-二氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸酯(6.1 g，産率77%)。
MS m/z (ESI): 593.1 [M+H]+, 595.1 [M+H+2]+.
第五步：6,7-二氯-4-((2S,5R)-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
將三級-丁基 (2R,5S)-4-(6,7-二氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基呱嗪-1-羧酸酯(6.1 g，10.3 mmol)溶於二氯甲烷(20 mL)中，加入TFA(20 mL)，室溫攪拌1小時。濃縮得到粗製品目標産物6,7-二氯-4-((2S,5R)-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(6.1 g，産率100%)。
MS m/z (ESI): 493.1 [M+H]+, 495.1 [M+H+2]+.
第六步：4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-6,7-二氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
將6,7-二氯-4-((2S,5R)-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(6 g，12.2 mmol)溶於二氯甲烷(30 mL)中，加入DIEA(30 mL，131 mmol)，加入丙烯醯氯(1.08 mL，13.13 mmol)，室溫攪拌1小時。加水淬滅，加水和乙酸乙酯(3*100 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗製品，柱層析(CH2Cl2/MeOH =20：1)純化得到目標産物4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-6,7-二氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(1.6 g，産率22%)。
MS m/z (ESI): 547.1 [M+H]+, 549.1 [M+H+2]+.
第七步：4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-7-(6-胺基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
N2保護下，將4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-6,7-二氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(700 mg，1.3 mmol)，(6-胺基-3-氯-2-氟苯基)硼酸(380 mg，2.6 mmol)溶於1,4-二氧六環和水的混合液中(6 mL：0.3 mL)中，Pd(dppf)Cl2.DCM (100 mg，0.1 mmol)，KOAc(400 mg，4 mmol)，100℃ 微波反應1小時。加水淬滅，加水和乙酸乙酯(3*50 mL)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗製品，柱層析(CH2Cl2/MeOH =200：1到80：1)純化得到目標産物4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-7-(6-胺基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(400 mg，産率48%)。
MS m/z (ESI): 656.1 [M+H]+, 658.1 [M+H+2]+.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.47 – 8.34 (m, 2H), 7.24-7.20 (m, 1H), 7.10-7.14 (m, 1H), 6.79-6.68 (m, 1H), 6.42 – 6.40 (d,J= 8.0 Hz, 1H), 6.24 – 6.17 (m, 1H), 5.75-5.71 (m, 1H), 5.01 –4.94 (m, 2H), 4.46-4.40 (m, 1H), 4.26-4.17 (m, 1H), 4.03-3.99 (m, 1H), 3.84-3.79 (m, 1H), 2.86-2.77 (m, 1H), 2.36 (s, 3H), 1.26-1.19 (m, 9H), 1.14-1.11 (m, 3H).
實施例165-1和實施例165-2
(M/P-4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-7-(6-胺基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)
實施例165透過SFC拆分得到兩個軸手性異構體實施例165-1和實施例165-2，SFC：手性製備條件：
表21
儀器 SFC-150 (Thar, Waters)
柱型 IC 20*250mm, 10 μm (Daicel)
柱壓 100 bar
流動相 CO2/ Methanol (0.2% Methanol Ammonia) = 40/60
流速 120 g/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 35℃
手性分析條件：
表22
儀器 SFC Method Station (Thar, Waters)
柱型 OX-H 4.6*100mm, 5 μm (Daicel)
柱壓 120 bar
流動相 A :CO2；B :Methanol [0.2%NH3(7M in methanol)]；A :B=65:35
流速 4 mL/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 40℃
實施例165-1：
t R =1.74 min
MS m/z (ESI): 656.1 [M+H]+, 658.1 [M+H+2]+.
1H NMR (400 MHz, MeOD-d 4) δ 8.47 – 8.34 (m, 2H), 7.24-7.20 (m, 1H), 7.10-7.14 (m, 1H), 6.79-6.68 (m, 1H), 6.42 – 6.40 (d,J= 8.0 Hz, 1H), 6.24 – 6.17 (m, 1H), 5.75-5.71 (m, 1H), 5.01 –4.94 (m, 2H), 4.46-4.40 (m, 1H), 4.26-4.17 (m, 1H), 4.03-3.99 (m, 1H), 3.84-3.79 (m, 1H), 2.86-2.77 (m, 1H), 2.36 (s, 3H), 1.26-1.19 (m, 9H), 1.14-1.11 (m, 3H).
實施例165-2：
t R =2.49 min
MS m/z (ESI): 656.1 [M+H]+, 658.1 [M+H+2]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.55 – 8.38 (m, 2H), 7.25-7.20 (m, 1H), 7.18-7.11 (m, 1H), 6.88-6.76 (m, 1H), 6.51– 6.47 (d,J= 8.0 Hz, 1H), 6.33 – 6.27 (m, 1H), 5.84-5.80 (m, 1H), 5.12 –5.10 (m, 2H), 4.46-4.23 (m, 2H), 4.15-3.89 (m, 2H), 3.64-3.50 (m, 1H), 2.89-2.82 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 1.51-0.99 (m, 12H).
實施例166
4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備參考實施例165。
MS m/z (ESI): 623.1 [M+H]+, 625.1 [M+H+2]+.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.47 – 8.34 (m, 2H), 7.21-7.20 (m, 2H), 6.89-6.77 (m, 1H), 6.64 – 6.55 (m, 2H), 6.32 – 6.26 (m, 1H), 5.84-5.80 (m, 1H), 5.08 –5.03 (m, 2H), 4.56-4.49 (m, 1H), 4.34-4.26 (m, 1H), 4.13-4.04 (m, 1H), 3.92-3.88 (m, 1H), 2.79-2.72 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 1.55 – 1.43 (m, 3H), 1.35-1.27 (m, 3H), 1.20-1.17 (m, 3H), 1.08-1.05 (t,J= 8.0 Hz, 3H).
實施例166-1和實施例166-2
(M/P-4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-羥基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)
實施例166透過SFC拆分得到兩個軸手性異構體實施例166-1和實施例166-2 ，SFC：手性製備條件：
表23
儀器 SFC-150 (Thar, Waters)
柱型 IC 20*250mm, 10 μm (Daicel)
柱壓 100 bar
流動相 CO2/ Methanol (0.2% Methanol Ammonia) = 50/50
流速 120 g/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 35℃
手性分析條件：
表24
儀器 SFC method station (Thar, Waters)
柱型 IC 4.6*100mm, 5 μm (Daicel)
柱壓 120 bar
流動相 A :CO2；B :Ethanol [1.0%NH3(7M in methanol)]；A :B=55:45
流速 4 mL/min
檢測波長 UV 214 nm
柱溫 40℃
實施例166-1：
t R =2.46 min
MS m/z (ESI): 623.1 [M+H]+, 625.1 [M+H+2]+.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.47 – 8.34 (m, 2H), 7.21-7.20 (m, 2H), 6.89-6.77 (m, 1H), 6.64 – 6.55 (m, 2H), 6.32 – 6.26 (m, 1H), 5.84-5.80 (m, 1H), 5.08 –5.03 (m, 2H), 4.56-4.49 (m, 1H), 4.34-4.26 (m, 1H), 4.13-4.04 (m, 1H), 3.92-3.88 (m, 1H), 2.79-2.72 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 1.55 – 1.43 (m, 3H), 1.35-1.27 (m, 3H), 1.20-1.17 (m, 3H), 1.08-1.05 (t,J= 8.0 Hz, 3H).實施例166-2：
t R =3.08 min
MS m/z (ESI): 623.1 [M+H]+, 625.1 [M+H+2]+.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.48 – 8.34 (m, 2H), 7.23-7.21 (m, 2H), 6.90-6.78 (m, 1H), 6.66 – 6.58 (m, 2H), 6.33 – 6.28 (m, 1H), 5.85-5.82 (m, 1H), 5.10 –5.06 (m, 2H), 4.58-4.50 (m, 1H), 4.34-4.27 (m, 1H), 4.13-4.06 (m, 1H), 3.93-3.88 (m, 1H), 2.79-2.71 (m, 1H), 2.41 (s, 3H), 1.56 – 1.46 (m, 3H), 1.37-1.29 (m, 3H), 1.21-1.18 (m, 3H), 1.07-1.05 (t,J= 8.0 Hz, 3H).
實施例169
(S)-4-(4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2,6-二氟苯基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
(S)-4-(4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2,6-二氟苯基)-6-氟-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備參考實施例114。
MS m/z (ESI):595.1 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.40 – 8.32 (m, 2H), 7.51 (t,J= 7.6 Hz, 1H), 7.22 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.05 (t,J= 8.4 Hz, 2H), 6.86 – 6.79 (m, 1H), 6.37 – 6.26 (m, 1H), 5.84 (d,J= 10.6 Hz, 1H), 5.08 (m, 2H), 4.56-4.46 (m, 2H), 4.21-4.08 (m, 1H), 3.85-3.62 (m, 2H), 2.86-2.82 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 1.47 (d,J= 6.6 Hz, 3H), 1.21 – 1.19 (d,J= 6.8 Hz, 3H), 1.04 (d,J= 6.8 Hz, 3H).
實施例191
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-3,5-二氯-6-氟苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-3,5-二氯-6-氟苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備參考實施例165。
MS m/z (ESI): 676.1 [M+H]+, 678.1 [M+H+2]+.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.40 – 8.32 (m, 2H), 7.51 (t,J= 7.6 Hz, 1H), 7.22 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.05 (t,J= 8.4 Hz, 2H), 6.86 – 6.79 (m, 1H), 6.37 – 6.26 (m, 1H), 5.84 (d,J= 10.6 Hz, 1H), 5.08 (m, 2H), 4.56-4.46 (m, 2H), 4.21-4.08 (m, 1H), 3.85-3.62 (m, 2H), 2.86-2.82 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 1.47 (d,J= 6.6 Hz, 3H), 1.21 – 1.19 (d,J= 6.8 Hz, 3H), 1.04 (d,J= 6.8 Hz, 3H).
實施例192
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-3,5-二氯-6-氟苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲基亞硫醯基＜亞磺醯＞)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-3,5-二氯-6-氟苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲基亞硫醯基＜亞磺醯＞)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備參考實施例165。
MS m/z (ESI): 692.1 [M+H]+, 694.1 [M+H]+.
實施例193
4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-3,5-二氯-6-氟苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-3,5-二氯-6-氟苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備參考實施例165。
MS m/z (ESI): 690.1 [M+H]+, 692.1 [M+H+2]+.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.46 – 8.34 (m, 2H), 7.25-7.21 (m, 1H), 7.11-7.14 (m, 1H), 6.44 – 6.42 (d,J= 8.0 Hz, 1H), 6.23 – 6.16 (m, 1H), 5.73-5.70 (m, 1H), 5.03 –4.97 (m, 2H), 4.47-4.42 (m, 1H), 4.25-4.16 (m, 1H), 4.06-4.02 (m, 1H), 3.86-3.83 (m, 1H), 2.84-2.79 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 1.27-1.19 (m, 9H), 1.16-1.14 (m, 3H).
實施例194
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-5-氯-3,6-二氟苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-5-氯-3,6-二氟苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備參考實施例165。
MS m/z (ESI): 660.1 [M+H]+, 662.1 [M+H+2]+.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.58 – 8.38 (m, 2H), 7.53 – 7.36 (m, 1H), 7.23 – 7.15 (m, 1H), 6.97 – 6.79 (m, 1H), 6.22 (d,J= 16 Hz, 1H), 5.77 (d,J= 8 Hz, 1H), 5.45 – 5.40 (m, 2H), 5.07 – 4.82 (m, 1H), 4.50 – 3.98 (m, 3H), 3.92 – 3.49 (m, 2H), 3.17 – 3.02 (m, 1H), 2.93 – 2.63 (m, 1H), 2.44 – 2.26 (m, 3H), 1.43 – 1.27 (m, 3H), 1.08 (d,J= 4 Hz, 3H), 1.04 – 0.86 (m, 3H).
實施例195
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-5,6-二氟-3-甲基苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-5,6-二氟-3-甲基苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備參考實施例165。
MS m/z (ESI): 640.1 [M+H]+, 642.1 [M+H+2]+.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.57 – 8.35 (m, 3H), 7.25 – 7.04 (m, 2H), 6.96 – 6.79 (m, 1H), 6.29 – 6.14 (m, 1H), 5.77 (d,J= 12 Hz, 1H), 5.09 – 4.82 (m, 1H), 4.76 – 4.58 (m, 2H), 4.48 – 3.98 (m, 3H), 3.94 – 3.59 (m, 2H), 2.93 – 2.69 (m, 1H), 2.44 – 2.29 (m, 3H), 2.10 – 1.95 (m, 3H), 1.42 – 1.26 (m, 3H), 1.08 (d,J= 4 Hz, 3H), 1.05 – 0.87 (m, 3H).
實施例196
4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-5-氯-3,6-二氟苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-5-氯-3,6-二氟苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備參考實施例165。
MS m/z (ESI): 674.1 [M+H]+, 676.1 [M+H+2]+.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.61 – 8.39 (m, 2H), 7.56 – 7.35 (m, 1H), 7.27 – 7.14 (m, 1H), 6.96 – 6.75 (m, 1H), 6.20 (d,J= 16 Hz, 1H), 5.82 – 5.71 (m, 1H), 5.53 – 5.38 (m, 2H), 4.95 – 4.69 (m, 1H), 4.57 – 4.30 (m, 1H), 4.24 – 4.00 (m, 2H), 3.98 – 3.79 (m, 2H), 2.95 – 2.60 (m, 1H), 2.44 – 2.25 (m, 3H), 1.40 – 1.13 (m, 6H), 1.10 – 0.87 (m, 6H).
實施例198
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-3,6-二氟苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-3,6-二氟苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備參考實施例165。
MS m/z (ESI): 626.1 [M+H]+, 628.1 [M+H+2]+.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.58 – 8.34 (m, 2H), 7.26 – 6.99 (m, 2H), 6.95 – 6.77 (m, 1H), 6.47 – 6.27 (m, 1H), 6.26 – 6.13 (m, 1H), 5.77 (d,J= 16 Hz, 1H), 5.22 (s, 2H), 5.09 – 4.80 (m, 1H), 4.50 – 3.99 (m, 3H), 3.95 – 3.53 (m, 2H), 3.20 – 2.98 (m, 1H), 2.94 – 2.65 (m, 1H), 2.42 – 2.24 (m, 3H), 1.43 – 1.25 (m, 3H), 1.09 (d,J= 4 Hz, 3H), 1.04 – 0.82 (m, 3H).
實施例201
4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-5,6-二氟-3-甲基苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-7-(2-胺基-5,6-二氟-3-甲基苯基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備參考實施例165。
MS m/z (ESI): 654.1 [M+H]+, 656.1 [M+H+2]+.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.58 – 8.31 (m, 2H), 7.25 – 7.03 (m, 2H), 6.94 – 6.73 (m, 1H), 6.19 (d,J= 16 Hz, 1H), 5.81 – 5.69 (m, 1H), 4.96 – 4.59 (m, 3H), 4.55 – 4.38 (m, 1H), 4.29 – 3.96 (m, 2H), 3.93 – 3.72 (m, 2H), 3.00 – 2.60 (m, 1H), 2.45 – 2.25 (m, 3H), 2.07 – 1.94 (m, 3H), 1.43 – 1.13 (m, 6H), 1.12 – 0.82 (m, 6H).
實施例206
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-甲基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-甲基苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備參考實施例165。
MS m/z (ESI): 607.1 [M+H]+, 609.1 [M+H+2]+.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.57 – 8.34 (m, 2H), 7.43 – 7.31 (m, 1H), 7.18 (d,J= 4 Hz, 1H), 7.15 – 7.01 (m, 2H), 6.95 – 6.78 (m, 1H), 6.28 – 6.14 (m, 1H), 5.77 (d,J= 12 Hz, 1H), 5.07 – 4.86 (m, 1H), 4.45 – 4.25 (m, 2H), 4.22 – 3.98 (m, 1H), 3.93 – 3.58 (m, 2H), 3.21 – 3.02 (m, 1H), 2.87 – 2.69 (m, 1H), 2.40 – 2.27 (m, 3H), 1.98 – 1.85 (m, 3H), 1.41 – 1.28 (m, 3H), 1.08 (d,J= 8 Hz, 3H), 1.02 – 0.79 (m, 3H).
實施例208
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氯-6-氟苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
4-((S)-4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氯-6-氟苯基)-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備參考實施例165。
MS m/z (ESI): 627.1 [M+H]+, 629.1 [M+H+2]+.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.56– 8.30 (m, 2H), 7.58-7.36 (m, 3H), 7.19 (s, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.24-6.19 (d,J= 20.0 Hz, 1H), 5.79-5.76 (d,J= 12.0 Hz, 1H), 4.97 (s, 1H), 4.32-4.04 (m, 3H), 3.80-3.49 (m, 3H), 2.72 (s, 1H), 2.35 (s, 3H), 1.34-0.91 (m, 9H).
實施例210
(S)-4-(4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-7-(o-苯甲基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
(S)-4-(4-丙烯醯-2-甲基呱嗪-1-基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-7-(o-苯甲基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備參考實施例165。
MS m/z (ESI): 589.1 [M+H]+, 591.1 [M+H+2]+.
實施例213
4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-7-(o-苯甲基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備
4-((2S,5R)-4-丙烯醯-2,5-二甲基呱嗪-1-基)-6-氯-1-(2-異丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-7-(o-苯甲基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的製備參考實施例165。
MS m/z (ESI): 603.1 [M+H]+, 605.1 [M+H+2]+.
生物學測試評價
以下結合測試例進一步描述解釋本發明，但這些實施例並非意味著限制本發明的範圍。
測試例1、NCI-H358/Mia PaCa-2細胞增殖活性抑制作用的測定
1.1 實驗目的：測定實施例化合物對KRAS G12C突變細胞株NCI-H358和Mia PaCa-2細胞增殖活性的抑制作用。
1.2. 實驗儀器和試劑：
1.2.1 儀器：酶標儀(BioTek Synergy H1)移液器(Eppendorf & Rainin)
1.2.2 試劑：NCI-H358購自南京科佰生物科技有限公司；Mia PaCa-2購自ATCC；Cell Titer-Glo細胞購自Promega公司，貨號爲G7573；RPMI 1640購自Gibco，貨號爲22400089；DMEM購自Gibco，貨號爲11995065；FBS購自Gibco，貨號爲10091148；PBS購自Gibco，貨號爲10010023；胰酶購自Gibco，貨號爲25200056；細胞培養板購自Corning公司，貨號爲3610。
1.3. 實驗方法：培養NCI-H358或Mia PaCa-2細胞至合適的融合度時，收集NCI-H358或Mia PaCa-2細胞，使用完全培養基將細胞調整爲合適的細胞濃度，將細胞懸液鋪於96孔板，每孔90 μL，放入37℃，5% CO2培養箱貼壁過夜，使用DMSO以及培養基配製不同濃度的化合物溶液，設置溶媒對照，將化合物溶液加入到96孔板中，每孔10 μL，放入37℃，5% CO2培養箱中繼續培養72 h後，加入CellTiter- Glo溶液，振蕩混合均勻後，避光孵育10分鐘，用BioTek Synergy H1酶標儀進行讀數。
1.4. 實驗數據處理方法：使用發光信號值計算抑制率，將濃度以及抑制率使用Graphpad Prism軟件進行非綫性回歸曲綫擬合，得到IC50值。
1.5. 實驗結果：實驗結果如表25所示，實施例化合物對NCI-H358和Mia PaCa-2細胞增殖抑制活性的IC50值。
表25
實施例編號 NCI-H358 IC50 (nM) Mia PaCa-2 IC50 (nM)
實施例60 40 60
實施例60-1 28 55
實施例75 24 34
實施例75-1 25 36
實施例77 117 120
實施例114 50 43
實施例114-1 35 29
實施例118 89 82
實施例130 14 41
實施例131 48 47
實施例133 25 46
實施例134 23 30
實施例138 67 104
實施例150 5.4 8.6
實施例150-1 6.6 3.5
實施例151 39 59
實施例152 45 91
實施例153 68 76
實施例154 79 68
實施例155 24 26
實施例156 95 86
實施例165 5.9 7.6
實施例165-1 6.6 3.3
實施例166 16 23
實施例166-1 17 11
實施例169 79 68
實施例191 32 16
實施例192 29 13
實施例193 NT 18
實施例194 NT 7
實施例195 NT 5.2
實施例196 NT 5.3
實施例198 NT 6.0
實施例201 NT 4.9
實施例206 NT 14
實施例208 NT 59
注：“NT”表示未檢測。
1.6. 實驗結論：根據數據顯示，本發明實施例化合物對NCI-H358和Mia PaCa-2細胞具有有良好的增殖抑制作用。
測試例2、本發明化合物結合提升KRAS G12C蛋白穩定性（熔解溫度）能力的測定
2.1. 實驗目的：測試化合物提升KRAS G12C蛋白穩定性的能力（蛋白熔解溫度上升的程度可以表徵化合物與KRAS G12C蛋白的結合能力）。
2.2. 實驗試劑和儀器：
2.2.1實驗儀器：定量PCR儀（Quantstudio6 Flex）購自Life公司；移液器購自Eppendorf或Rainin公司。
2.2.2實驗試劑：Protein Thermal Shift™ Dye Kit購自Thermofisher公司，貨號爲4461146；KRAS G12C蛋白購自北京義翹神州科技有限公司，貨號爲12259-H07E2；HEPES，1M Buffer Solution購自Thermofisher公司，貨號爲15630080；DTT購自Sigma公司，貨號爲43816-50mL；NaCl購自國藥集團化學試劑有限公司，貨號爲10019318。
2.3 實驗方法：本實驗透過thermal shift方法測試化合物結合前後KRAS G12C蛋白熔解溫度（Tm）的變化程度來表徵化合物提升KRAS G12C蛋白穩定性的能力。具體實驗操作如下：配製含20 μM HEPES (pH 7.5)、1 mM DTT、5X SYPRO Orange和150 mM NaCl的溶液作爲實驗緩衝液，同時加入終濃度爲5.37 μM的人KRAS G12C蛋白。將以上反應混合物分裝到8聯排PCR管中，每管19.5 μL，分別加入0.5 μL的測試化合物或者DMSO，則總反應體系爲20 μL，化合物終濃度爲10 μM，并設置2.5% DMSO爲溶媒對照。室溫避光孵育一小時後，將PCR管放入PCR儀中，打開QuantStudio Software v1.3軟件，選取melt curve功能檢測不同處理組中KRAS G12C蛋白的熔解溫度（從25℃加熱至95℃，0.03℃/s）。
2.4. 實驗數據處理方法：將PCR儀實驗數據文件導入至thermal shift軟件，得出每個處理組的熔解溫度(Tm)，並減去DMSO溶媒對照組的Tm，得到熔解溫度的變化值(ΔTm)。
2.5. 實驗結果：透過以上方案得出，本發明化合物結合提升KRAS G12C蛋白穩定性實驗中，顯示出如表26所示的蛋白熔解溫度上升的能力。
表26
實施例編號 Tm (℃)DMSO Tm (℃) ΔTm (℃)
實施例60 48.6 60.2 11.6
實施例73 48.6 55.5 6.9
實施例75 50.6 61.2 10.6
實施例77 50.6 60.4 9.8
實施例114 48.7 57.2 8.5
實施例115 48.6 55.2 6.6
實施例118 50.6 59.0 8.4
實施例130 50.6 61.5 10.9
實施例131 49.5 61.2 11.7
實施例134 48.6 64.4 15.8
實施例136 48.6 57.3 8.7
實施例138 50.6 59.4 8.8
實施例150 46.8 60.2 13.4
實施例152 48.6 60.0 11.4
實施例155 49.8 60.9 11.1
實施例156 49.8 61.4 11.6
實施例165 47.0 58.0 11.0
2.6 實驗結論：以上數據顯示，本發明實施例化合物與KRAS G12C蛋白有良好的結合能力。
測試例3、本發明化合物對Miapaca-2細胞p-ERK的抑制活性
3.1. 實驗目的：測定實施例化合物對KRAS G12C突變細胞Mia PaCa-2中磷酸化ERK水平的抑制活性。
3.2. 實驗儀器：
3.2.1 儀器：酶標儀(BioTek Synergy H1)；移液器(Eppendorf & Rainin)。
3.2.2 試劑：Phosphorylated ERK1/2 (T202-Y204) LANCE Ultra Cellular Detection Kit購自PerkinElmer公司，貨號爲TRF4000M；細胞培養板購自Corning公司，貨號爲3610；White opaque OptiPlate™-384板購自PerkinElmer公司，貨號爲6007290。
3.3. 實驗方法：培養Mia PaCa-2細胞至合適的融合度時，收集Mia PaCa-2細胞，使用完全培養基將細胞密度調整爲1×106/mL，將細胞懸液鋪於96孔板，每孔50 μL，放入37℃，5%CO2培養箱貼壁過夜，使用DMSO以及完全培養基配製不同濃度的化合物溶液，設置溶媒對照，將化合物溶液加入到96孔板中，每孔25 μL，放入37℃，5% CO2培養箱中繼續培養2小時後，細胞培養板弃去上清，每孔加入50 μL的裂解液，室溫振蕩裂解30分鐘，放入離心機1000 rpm離心1分鐘，轉移15 μL上清到384孔板中，每孔加入5 μL的檢測混合液（檢測終濃度爲0.5 nM的 Eu-labeled anti-ERK1/2 (T202-Y204) Antibody以及檢測終濃度爲5 nM的ULight labeled anti-ERK1/2 Antibody），1000 rpm離心1分鐘混合均勻，室溫反應過夜，用BioTek Synergy H1進行讀板，採用時間分辨螢光程序檢測620 nm以及665 nm發射波長處的信號值。
3.4. 實驗數據處理方法：計算665 nm與620 nm發射波長處信號值的比值，使用比值計算抑制率，將濃度以及抑制率使用Graphpad Prism軟件進行非綫性回歸曲綫擬合，得到IC50值。
3.5. 實驗結果：
表27 Mia PaCa-2細胞中pERK抑制的IC50值
實施例編號 Mia PaCa-2 pERK IC50 (nM)
實施例114-1 38
實施例134 30
實施例150-1 5.0
實施例165-1 4.2
實施例166-1 20
3.6. 實驗結論：以上數據顯示，本發明實施例化合物對Mia PaCa-2細胞中pERK具有良好的抑制作用。
測試例4、小鼠藥代動力學測定
4.1. 研究目的：以Balb/c小鼠爲受試動物，研究化合物口服給藥在小鼠體內（血漿）的藥代動力學行爲。
4.2. 試驗方案：
4.2.1 試驗藥品：本發明實施例化合物，自製；
4.2.2 試驗動物：Balb/c小鼠，雄性，購自上海杰思捷實驗動物有限公司，動物生産許可證號 (SCXK（滬）2013-0006 N0.311620400001794)。
4.2.3 藥物配製：稱取5 g羥乙基纖維素（HEC，CMC-Na，粘度：800-1200Cps），溶於1000 mL純淨水，加入10 g Tween80。混合均勻成澄清溶液。稱取實施例化合物，分別加入4-mL玻璃瓶，加入2.4 mL該溶液，超音波10分鐘，得到無色澄清溶液，濃度爲1 mg/mL。
4.2.4 給藥：Balb/c 小鼠，雄性；禁食一夜後分別PO，劑量爲10 mg/kg，給藥體積10mL/kg。
4.2.5 樣品採集：於給藥前和給藥後0.083 h、0.25 h、0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h、8 h採血，血液置於EDTA-2K試管中，4℃ 6000 rpm離心6 min分離血漿，於-80℃保存；給藥後4 h進食。
4.3 實驗結果：應用LCMS/MS方法得到最後測定結果見表28
表28：化合物的小鼠藥代動力學參數
實施例編號 Tmax (hr) Cmax (ng/mL) AUC0-∞ (ng/mL*hr) T1/2 (hr) MRT (hr)
實施例114 0.25 1529 1287 0.6 0.7
實施例114-1 0.25 1823 1373 0.6 0.7
實施例165-1 0.25 264 347 1.0 1.5
實施例165-FA 0.25 1064 1018 0.5 0.8
實施例165-1-FA 0.25 641 900 0.8 1.2
4.4 實驗結論：
以上數據顯示，本發明實施例化合物有良好的小鼠藥代動力學參數。
測試例5、MiaPaca 2移植瘤模型上對腫瘤的抑制實驗
5.1 實驗目的：以BALB/c裸小鼠爲受試動物，採用人胰腺癌細胞MiaPaca 2異種移植瘤（CDX）模型進行體內藥效實驗，評價受試化合物抗腫瘤作用。
5.2 實驗儀器與試劑：
5.2.1儀器：超淨工作臺（BSC-1300II A2，上海博訊實業有限公司醫療設備廠）；CO2培養箱（Thermo-311，Thermo）；離心機（Centrifuge 5720R，Eppendorf）；全自動細胞計數儀（Countess II，Life Technologies）；移液器（10-20 μL，Eppendorf）；顯微鏡（Ts 2，尼康）；游標卡尺（CD-6’’AX，日本三豐）；細胞培養瓶（T25/T75/T225，Corning）；恒溫水槽（HWS12，上海一恒科學）。
5.2.2試劑：DMEM（11995-065，Gibco）；胎牛血清（FBS）（10091-148，Gibco）；0.25%胰蛋白酶（25200-056，Gibco）；青鏈黴素雙抗（P/S）（SV30010，GE）；磷酸鹽緩衝液（PBS）（10010-023，Gibco）；Matrigel (356234，Corning)；Gln (25030-081，Gibco)。
5.3 實驗操作：從細胞庫中取出MiaPaca 2細胞，復蘇後加入DMEM培養基（含10%FBS、1%Glu、1% P/S）置於CO2培養箱中培養（培養箱溫度爲37℃，CO2濃度爲5%）。待細胞鋪滿培養瓶底部80-90%後傳代，傳代後細胞繼續置於CO2培養箱中培養。重複該過程直到細胞數滿足體內藥效接種需求量，開始收集對數生長期的細胞，用全自動細胞計數儀計數，根據計數結果用PBS和Matrigel (體積比爲1：1)重懸細胞，製成細胞懸液（密度8×107/mL），置於冰盒中待用。使用動物爲BALB/c裸小鼠，雌性，6-8周齡，體重約爲18-22克。將小鼠保持在一個無特殊病原體的環境中，且在單個通風籠中，每籠5只小鼠。所有的籠子、墊料和水在使用前進行消毒，所有動物可以自由獲取標準認證的商業實驗室飲食。實驗開始前用一次性大小鼠通用耳標標記裸鼠，接種前用75%醫用酒精消毒接種部位皮膚，每只小鼠在右後背皮下接種0.1ml （含8*106個細胞）MiaPaca 2腫瘤細胞。當平均腫瘤體積達到100-200 mm3時開始分組給藥。受試化合物每日經口灌胃給藥，給藥劑量/給藥頻次（6 mg/kg QD x 3w），實驗結束時各組藥效情况見表29。
5.4 數據處理：每周兩次用游標卡尺測量腫瘤體積（mm3），計算公式爲：V=0.5*D*d*d，其中D和d分別是腫瘤的長徑和短徑。抗腫瘤藥效是透過化合物處理過的動物的平均腫瘤增加體積除以未處理過動物的平均腫瘤增加體積來確定。抑瘤率計算公式爲：TGI(%)=1-[（Vt-V0）給藥組/（Vt-V0）溶劑對照組]*100%。實驗結束後將所有動物安樂死。
5.5 實驗結果：
表29：化合物的移植瘤小鼠藥效參數
分組 腫瘤體積 (mm3, Mean ± SD) ΔT/ΔC(%) TGI（%）
Day 0 Day 21 Day 21 Day 21
Vehicle QD x 3w 178±30 868±234 - -
實施例114-1 177±38 67±34 -62.36 162.36
實施例150-1 178±40 72±18 -59.56 159.56
實施例165-1 178±34 41±19 -76.76 176.76
5.6實驗結論：
以上數據顯示：口服連續給藥21天后，本發明實施例化合物在6 mg/kg口服每天給藥條件下能顯著抑制MiaPaca 2裸小鼠移植瘤生長。
測試例6、人肺癌NCI-H358細胞異種移植瘤模型上的體內藥效學研究
6.1 實驗目的：評價化合物在人肺癌NCI-H358細胞異種移植瘤模型上的體內藥效。
6.2 實驗儀器與試劑：
6.2.1儀器：1) 生物安全櫃（BSC-1300II A2，上海博訊實業有限公司醫療設備廠）；2) 超淨工作臺（CJ-2F，蘇州市馮氏實驗動物設備有限公司）；3) CO2培養箱（Thermo-311，Thermo）；4) 離心機（Centrifuge 5720R，Eppendorf）；5) 全自動細胞計數儀（Countess II，Life Technologies）；6) 游標卡尺（CD-6’’AX，日本三豐）；7) 細胞培養瓶（T75/T225，Corning）；8) 電子天平（CPA2202S，賽多利斯）；9) 電子天平（BSA2202S-CW，賽多利斯）；10) 電子天平（BS124S，賽多利斯）。
6.2.2試劑：1) RPMI-1640培養基（22400-089，Gibco）；2) DMEM培養基（ 11995-065，Gibco）；3) 胎牛血清（FBS）（10099-141C，Gibco）；4) 磷酸鹽緩衝液（PBS）（10010-023，Gibco）；5) 吐溫80（30189828，國藥試劑）；6) 羧甲基纖維素鈉（30036365，國藥試劑。）
6.3 實驗操作及數據處理：
6.3.1 動物：BALB/c裸小鼠，6-8周，雌性，購自上海西普爾－必凱實驗動物有限公司。
6.3.2 細胞培養及細胞懸液製備1) 從細胞庫中取出一株MiaPaca-2細胞，用DMEM培養基（DMEM + 10% FBS）復蘇細胞，復蘇後的細胞置細胞培養瓶中（在瓶壁標記好細胞種類、日期、培養人名字等）置於CO2培養箱中培養（培養箱溫度爲37℃，CO2濃度爲5%）（復蘇NCI-H358細胞方法同測試例5中MiaPaca -2 細胞，培養基改爲RPMI-1640培養基）。2) 每三到五天傳代一次，傳代後細胞繼續置於CO2培養箱中培養。重複該過程直到細胞數滿足體內藥效需求。3) 收集培養好的MiaPaca-2細胞，用全自動細胞計數儀計數，根據計數結果用PBS和Matrigel（比例爲1：1）重懸細胞，製成細胞懸液（細胞密度爲5×107/mL），置於冰盒中待用（NCI-H358細胞不需要加Matrigel，直接用PBS重懸，細胞密度爲1×108/mL）。
6.3.3 配樣：1）溶媒：溶劑(0.5%CMC-Na+1% Tween 80)，儲存條件：4℃。稱取0.5 g CMC-Na,加入一定體積 ddH2O中溶解，再加入1.0 mL Tween 80 攪拌混勻，最後定容至100 mL。2）待測化合物（10 mg/kg）配製：稱取8.42 mg  AMG510化合物，加入8.260 mL 溶劑，透過超音波、渦旋、攪拌得到均一溶液。稱取7.81 mg  實施例165-1化合物，加入7.654 mL 溶劑，透過超音波、渦旋、攪拌得到均一溶液。
6.3.3 細胞接種1) 接種前用一次性大小鼠通用耳標標記裸鼠；2) 接種時混勻細胞懸液，用1 mL注射器抽取0.1-1 mL細胞懸液、排除氣泡，然後將注射器置於冰袋上待用；3) 左手保定好裸鼠，用75%酒精消毒裸鼠右側背部靠右肩位置（接種部位），30秒後開始接種；4) 依次給試驗裸鼠接種（每只小鼠接種0.1 mL細胞懸液）；
6.3.4 荷瘤鼠量瘤、分組、給藥：1) 根據腫瘤生長情况，在接種後第18天量瘤、並計算腫瘤大小。腫瘤體積計算：腫瘤體積(mm3) = 長(mm)×寬(mm)×寬(mm) /22) 根據荷瘤鼠體重和腫瘤大小，採用隨機分組的方法進行分組。3) 根據分組結果，開始給予測試藥物（給藥方式：口服給藥；給藥劑量：10 mg/kg；給藥體積：10 mL/kg；給藥頻率：1次/天；給藥周期：21天；溶媒：0.5%CMC/1%吐溫80）。4) 開始給予測試藥物後每周兩次量瘤、稱重。5) 實驗結束後安樂死動物。6) 用Excel等軟件處理數據。
6.4數據處理：化合物抑瘤率TGI(%)的計算：當腫瘤無消退時，TGI(%) = [(1-（某處理組給藥結束時平均瘤體積－該處理組開始給藥時平均瘤體積）)/(溶劑對照組治療結束時平均瘤體積－溶劑對照組開始治療時平均瘤體積)]×100%。當腫瘤有消退時，TGI(%) = [1-（某處理組給藥結束時平均瘤體積－該處理組開始給藥時平均瘤體積）/該處理組開始給藥時平均瘤體積]×100%。
6.5 實驗結果：
表30：化合物的移植瘤小鼠藥效參數
分組 腫瘤體積 (mm3, Mean ± SD) ΔT/ΔC(%) TGI（%）
Day 0 Day 15 Day 15 Day 15
Vehicle QD x 3w 202±58 400±111 - -
實施例165-1 10 mpk 203±74 267±155 32.59 67.41
AMG-510 10 mpk 202±72 324±204 61.98 38.02
6.6實驗結論：
以上數據顯示：口服連續給藥15天后，本發明實施例化合物在10 mg/kg口服每天給藥條件下能顯著抑制人肺癌NCI-H358細胞的裸小鼠移植瘤生長，顯著優於參比數據。
測試例7、hERG鉀離子通道抑制活性測試
7.1 細胞準備
7.1.1 CHO-hERG細胞培養於175 cm2培養瓶中，待細胞密度生長到60~80%，移走培養液，用7 mL PBS洗一遍，然後加入3 mL Detachin消化。
7.1.2 待消化完全後加入7 mL培養液中和，然後離心，吸走上清液，再加入5 mL培養液重懸，以確保細胞密度爲2~5×106/mL。
7.2 溶液配製
表31： 細胞內液和外液的組成成分
試劑 細胞外液(mM) 細胞內液(mM)
CaCl2 2 5.374
MgCl2 1 1.75
KCl 4 120
NaCl 145 -
Glucose 10 -
HEPES 10 10
EGTA - 5
Na-ATP - 4
pH 7.40 (使用NaOH調整)，滲透壓~305 mOsm 7.25 (使用KOH調整)，滲透壓~290 mOsm
7.3 電生理記錄過程單細胞高阻抗封接和全細胞模式形成過程全部由Qpatch儀器自動完成，在獲得全細胞記錄模式後，細胞鉗制在-80毫伏，在給予一個5秒的+40毫伏去極化刺激前，先給予一個50毫秒的-50毫伏前置電壓，然後複極化到-50毫伏維持5秒，再回到-80毫伏。每15秒施加此電壓刺激，記錄2分鐘後給予細胞外液記錄5分鐘，然後開始給藥過程，化合物濃度從最低測試濃度開始，每個測試濃度給予2.5分鐘，連續給完所有濃度後，給予陽性對照化合物0.1 μM Cisapride。每個濃度至少測試3個細胞(n ≥ 3)。
7.4 化合物準備
7.4.1 將20 mM 的化合物母液用細胞外液進行稀釋，取5 μL 20 mM 的化合物母液加入2495 μL 細胞外液，500倍稀釋至40 μM，然後在含0.2% DMSO的細胞外液中依次進行3倍連續稀釋得到需要測試的最終濃度。
7.4.2 最高測試濃度爲40 μM，依次分別爲40，13.33，4.44，1.48，0.49，0.16 μM共6個濃度。
7.4.3 最終測試濃度中的DMSO含量不超過0.2%，此濃度的DMSO對hERG鉀通道沒有影響。
7.5 數據分析實驗數據由XLFit軟件進行分析。
7.6 質量控制環境：濕度20~50%，溫度22~25℃試劑：所用實驗試劑購買於Sigma公司，純度＞98%報告中的實驗數據必須滿足以下標準：全細胞封接阻抗 ＞ 100 MΩ尾電流幅度 ＞ 400 pA藥理學參數：多濃度Cisapride對hERG通道的抑制效應設爲陽性對照。
7.7 實驗結果：
表32：本發明實施例在多濃度對hERG電流的抑制結果
實施例編號 hERG (μM)
實施例114-1 ＞30
實施例150-1 ＞30
實施例165-1 ＞30
實施例166 -1 ＞30
7.8實驗結論：藥物對於心臟hERG鉀離子通道的抑制是藥物導致QT延長綜合症的主要原因。從實驗結果可以看出，本發明實施例化合物對於心臟hERG鉀離子通道沒有明顯抑制作用，可以避免高劑量時的心臟毒副作用。
測試例8、血漿穩定性試驗方案
8.1實驗目的本實驗的目的是檢測實施例化合物在小鼠、大鼠、犬和人血漿中的穩定性情况。
8.2實驗步驟
8.2.1溶液配製1）、血漿製備動物或人全血採集後，裝入含有抗凝劑的試管中，3500 rpm離心10 min ,收集上層淡黃色血漿。2）、10 μM 受試化合物（m/M/V=C）稱量化合物，儲備液用DMSO配置，工作液用100 mM磷酸緩衝液配置。3）、10 μM陽性對照（1）Propantheline (溴丙胺太林 Mr=449.4 Da)稱取2.36 mg溴丙胺太林，并用1 mL DMSO稀釋成 10 mM 儲備液；移取10μL of 10 mM儲備液至1 mL 100 mM磷酸緩衝液中，終濃度爲100 μM。（2）Mevinolin (洛伐他汀Mr=404.5 Da)稱取4.05 mg洛伐他汀，并用1 mL DMSO稀釋成10 mM儲備液；移取10 μL of 10 mM儲備液至1 mL 100 mM磷酸緩衝液中，終濃度爲100 μM。
8.2.2實驗流程：1）、在96孔板中，依次加入285 μL血漿、15 μL 10 μM化合物（受試化合物）, 37℃孵育。2）、在0、15、30、60、90、120 min(取點可微調)時分別取出40 μL，加入160 μL含有內標的乙腈終止液。3）、離心(3500 rpm，10 min)後取50 μL上清液，加入50 μL DDH2O 稀釋後LC-MS/MS進樣。
8.3色譜條件儀器：島津LC-20 AD色譜柱：Phenomenex Gemiu ® C18（50*4.6 mm ，5 μm粒徑）；流動相：A：乙腈，B：0.1% 甲酸溶液   0~8 min：5% A→95% A，2.0~2.1 min：90%A→5% A；流速：0.8 mL/min；運行時間：5.0 min；進樣體積：5 μL。
8.4質譜條件：儀器: API4000型液相色譜質譜聯用儀，美國AB公司；離子源爲電噴霧離子化源（ESI）；乾燥氣體（N2）溫度500℃；電噴霧電壓爲5500V；檢測方式爲正離子檢測；掃描方式爲選擇反應監測（MRM）方式；掃描時間爲0.1s。
8.4實驗結果：
表33：實施例化合物血漿穩定性結果
種屬 編號 剩餘率  (%) t 1/2 (min)
0 min 15 min 30 min 60 min 120 min
人 溴丙胺太林 100.00 79.98 50.52 14.65 0.72 21.03
實施例114-1 100.00 97.39 98.79 94.50 87.91 660.77
實施例150-1 100.00 97.95 100.46 97.37 93.81 1383.71
實施例166-1 100.00 99.15 94.74 89.14 78.85 338.58
實施例165-1 100.00 102.34 100.28 90.27 87.22 500.87
AMG 510 100.00 93.77 85.72 82.51 64.44 198.80
大鼠 洛伐他汀 100.00 21.15 1.77 0.36 0.30 6.69
實施例114-1 100.00 99.04 101.03 97.16 84.63 489.40
實施例150-1 100.00 97.08 94.54 90.84 82.91 453.73
實施例166-1 100.00 93.20 98.32 99.08 96.46 6505.51
實施例165-1 100.00 95.57 96.73 93.97 91.93 1159.17
AMG 510 100.00 100.85 93.03 77.54 56.77 137.24
小鼠 溴丙胺太林 100.00 79.79 48.66 23.39 6.66 27.74
實施例114-1 100.00 102.67 98.51 95.49 84.58 453.87
實施例150-1 100.00 103.68 104.44 97.95 88.36 551.41
實施例166-1 100.00 105.42 100.02 99.12 85.55 465.04
實施例165-1 100.00 100.58 99.52 99.64 92.32 1015.92
AMG 510 100.00 97.50 82.58 81.82 63.23 184.89
犬 洛伐他汀 100.00 95.25 95.45 75.66 36.25 80.22
實施例114-1 100.00 97.87 96.23 92.42 85.48 534.11
實施例150-1 100.00 96.78 94.25 92.45 89.54 830.19
實施例166-1 100.00 99.98 98.79 93.69 86.16 532.60
實施例165-1 100.00 97.71 96.32 94.86 92.49 1173.33
AMG 510 100.00 98.88 101.14 93.43 91.92 884.42
8.6實驗結論：以上數據顯示，本發明實施例化合物的血漿穩定性高，種屬差異小。
測試例9、CYP酶單點抑制試驗
9.1實驗目的採用人肝微粒體孵育體系，利用單點法快速預測化合物對CYP450酶亞型的抑制情况。
9.2實驗步驟
9.2.1溶液配製2.5 mM NADPH，稱重4.165 mg NADPH（還原型烟醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸）加100 mM磷酸緩衝液至2 mL。0. 25 mg/mL微粒體，50 µL 20 mg/mL微粒體，加4 mL 100 mM磷酸緩衝液，混勻。待測化合物反應液的配製稱取待測實施例化合物，用DMSO稀釋至10 mM ,再用100 mM磷酸緩衝液稀釋至100 µM。
9.2.2實驗流程：1.在96孔板中，加入40 µL 肝微粒體、10 µL底物、10 µL待測化合物，預孵育3 min。2.加入NADPH 40 µL。3.在20 min時加入300 µL含有內標的乙腈終止液。4.離心進樣。
9.3實驗結果：
表34：實施例化合物CYP酶單點抑制結果
編號 IC50 (μM)
1A2 2C9 2C19 2D6 3A4-M 3A4-T
Control 0.064 0.459 0.293 0.099 0.089 0.117
實施例114-1 ＞100 84.6 ＞100 ＞100 19.0 ＞100
實施例150-1 48.9 59.3 43.2 44.5 4.6 18.0
實施例165-1 66.7 58.8 28.8 21.2 4.7 9.1
注：强抑制：IC50＜1 μM；中等抑制：1 μM ＜IC50＜10 μM；弱抑制：IC50＞10 μM
9.4實驗結論：以上數據顯示，本發明實施例化合物對各CYP酶亞型沒有强抑制，DDI風險小。
測試例10、血漿蛋白結合率實驗
10.1實驗目的：本實驗方法的目的是檢測實施例化合物在血漿中的血漿蛋白結合情况。
10.2實驗儀器及材料：液相質譜聯用儀、離心機、渦旋儀、移液槍、連續加液器、96孔板、組織勻漿機（組織樣品分析時使用）、50%的甲醇水溶液，加入內標的乙腈溶液、空白基質（血漿、尿液或組織勻漿液等）
10.3實驗步驟：
10.3.1 待測物儲備液的配製A用DMSO將實施例化合物配製成1 mM溶液A.
10.3.2 血漿溶液的配製B取溶液A加入到血漿溶液中, 配製成5 uM溶液B.
10.3.3 處理流程1）在膜內加入200 uL溶液B.2） 在膜外加入350 uL PBS.3）在37℃水浴鍋內孵育6h.4） 樣品進行處理稀釋并進質譜檢測.
10.4色譜條件：儀器：島津LC-20 AD；色譜柱：Phenomenex Gemiu ® C18（50*4.6 mm ，5 μm粒徑）；流動相：A：乙腈，B: 0.1% 甲酸溶液   0~0.5 min：5% A→90% A，2.0~2.1 min：90%A→5% A；流速：0.8 mL/min；運行時間：5.0 min；進樣體積：5 μL。
10.5質譜條件：儀器: API4000型液相色譜質譜聯用儀，美國AB公司；離子源爲電噴霧離子化源（ESI）；乾燥氣體（N2）溫度500℃；電噴霧電壓爲5500V；檢測方式爲正離子檢測；掃描方式爲選擇反應監測（MRM）方式；掃描時間爲0.1s。
10.6 實驗結果：
表35：實施例化合物血漿蛋白結合率
編號 人 大鼠 小鼠 犬
實施例114-1 98.0 90.5 88.4 82.6
實施例150-1 99.8 94.9 90.1 98.7
實施例165-1 99.7 97.9 93.9 98.7
實施例166-1 96.8 95.4 96.3 92.5
10.7實驗結論：以上數據顯示：本發明實施例化合物顯示出高血漿蛋白結合率，種屬差異小。
測試例11、荷瘤小鼠藥代動力學測定
11.1. 研究目的：以MiaPaca 2荷瘤小鼠爲受試動物，研究化合物實施例165和AMG-510化合物，在6 mg/kg劑量下口服給藥在小鼠體內（血漿，腫瘤組織和腸道）的藥代動力學行爲。
11.2. 試驗方案
11.2.1 試驗藥品：本發明實施例165-1，AMG-510化合物，自製。
11.2.2 試驗動物：MiaPaca 2荷瘤小鼠24只，雌性。每個時間點3只（0h、1h、2h、4h、6h、8h、16h、24h）。上海西普爾-必凱實驗動物有限公司，動物生産許可證號(SCXK（滬） 2018-0006。
11.2.3 藥物配製：稱取5 g羥甲基纖維素，溶於1000 mL純淨水，加入10 g Tween80。混合均勻成澄清溶液。稱取實施例化合物165-1，AMG-510溶於該溶液中，搖勻，超音波15分鐘，得到均勻混懸液，濃度爲0.6 mg/mL。
11.2.4 給藥：MiaPaca 2荷瘤小鼠禁食後分別按體重p.o.（0h點動物不給藥），劑量爲6 mg/kg，給藥體積10mL/kg。
11.2.5 樣品採集：小鼠給藥前和給藥後，CO2處死，心臟採血0.5 ml，置於EDTA-2K試管中，4℃ 6000 rpm 離心6 min分離血漿，於-80℃保存；腫瘤組織稱重後，置於2 mL離心管中，於-80℃保存。十二指腸、迴腸、結腸組織取適量長度用剪刀剪開，去除內容物並用PBS清洗2遍，用吸水紙吸乾水分後稱重，置於2 mL離心管中，於-80℃保存。
11.3 實驗結果：應用LCMS/MS方法得到最後測定結果，見表36：
表36：本發明化合物的小鼠藥代動力學參數
化合物編號 Ratio (T/P) T1/2 (hr) MRT (hr)
AMG-510 Plasma血漿 0.42 0.3 0.8
Tumor腫瘤 0.3 0.7
實施例165-1 Plasma血漿 0.57 0.5 0.9
Tumor腫瘤 0.9 1.5
11.4實驗結論：6 mg/kg劑量下，本發明實施例化合物在小鼠腫瘤裏的暴露量和血液裏的暴露量比值高於AMG-510，T1/2和MRT更長。
雖然以上描述了本發明的具體實施方式，但是本發明所屬技術領域中具有通常知識者應當理解，這些僅是舉例說明，在不背離本發明的原理和實質的前提下，可以對這些實施方式做出多種變更或修改。因此，本發明的保護範圍由所附申請專利範圍限定。
無
無

Claims (18)

  1. 一種通式( XI )所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽：其中：M1選自或；環C選自苯基或吡啶基；選自；R10和R11各自獨立的選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基或氰基取代的C1-6烷基；R14選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的C1-6烷基、C3-12環烷基或3-12元雜環基，所述的胺基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的C1-6烷基、C3-12環烷基和3-12元雜環基，選擇性的被氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的C1-6烷基、C3-12環烷基和3-12元雜環基中的一個或多個取代基所取代；R15選自C1-6烷基；Rf選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷基亞磺醯基、C1-6烷基磺醯基、鹵代C1-6烷氧基或C1-6羥烷基；Rg選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氧代基、硫代基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基、氰基取代的C1-6烷基、-NRee(CH2)n2Rff、-(CH2)n2SRee或-(CH2)n2C(O)NReeRff；Ree和Rff各自獨立的選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6羥烷基或氰基取代的C1-6烷基；r爲0~5的整數；s爲0~5的整數；n2爲0~5的整數；且q爲0、1或2。
  2. 如請求項1中所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，環D選自、或。
  3. 如請求項1中所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，環C選自、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、或。
  4. 如請求項1中所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，R14選自氫、鹵素、胺基、C1-3烷基或3-8元雜環基，所述的胺基、C1-3烷基和3-8元雜環基，選擇性進一步被選自氫、鹵素、C1-3烷氧基和C3-8環烷基中的一個或多個取代基所取代；R15選自C1-3烷基。
  5. 如請求項1中所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，R14選自氫、氯、氟、溴、胺基、甲基、甲氧基、環丙基、氮雜環丁烷基、嗎啡啉基，所述的胺基、甲基、甲氧基、環丙基、氮雜環丁基和嗎啡啉基，選擇性的被氫、氟、氯、溴和環丙基中的一個或多個所取代；R15選自甲基。
  6. 如請求項1中所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，所述化合物進一步如通式( XI-B )所示：其中：Rf選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、甲基、乙基、丙基、異丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代異丙基、鹵代甲基、鹵代乙基、鹵代丙基、鹵代異丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、甲硫基、乙硫基、丙硫基、異丙硫基、鹵代甲氧基、鹵代乙氧基、鹵代丙氧基、羥甲基、羥乙基、羥丙基或羥異丙基；R10選自氫、氘、氟、氯、溴、碘、胺基、羥基、氰基、硝基、甲基、乙基、丙基、異丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代異丙基、鹵代甲基、鹵代乙基、鹵代丙基、鹵代異丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、鹵代甲氧基、鹵代乙氧基、鹵代丙氧基、鹵代異丙氧基、羥甲基、羥乙基、羥丙基或羥異丙基；R15選自甲基、乙基、丙基或異丙基；R21和R22各自獨立地選自氫、氘、氟、氯、溴、碘、胺基、羥基、氰基、硝基、甲基、乙基、丙基、異丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代異丙基、鹵代甲基、鹵代乙基、鹵代丙基、鹵代異丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基，羥甲基、羥乙基、羥丙基或羥異丙基；R23和R24各自獨立地選自氫、氘、氟、氯、溴、碘、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、C1-3烷基、甲基、乙基、丙基、異丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代異丙基、鹵代甲基、鹵代乙基、鹵代丙基、鹵代異丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基，羥甲基、羥乙基、羥丙基或羥異丙基；R25選自氫、氘、氟、氯、溴、碘、胺基、羥基、巰基、氰基、硝基、甲基、乙基、丙基、異丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代異丙基、鹵代甲基、鹵代乙基、鹵代丙基、鹵代異丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基，羥甲基、羥乙基、羥丙基或羥異丙基。
  7. 如請求項6中所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，Rf選自氫或甲基；R10選自氟或氯；R15選自甲基；R21和R22各自獨立地選自羥基、胺基、氟、氯或甲基；R23和R24各自獨立地選自氫、氟、氯或甲基；R25選自氫、氟或甲基。
  8. 如請求項6中所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，所述化合物進一步如通式( XI-C )或( XI-D )所示：或，較佳地，Rf選自氫或甲基；R10選自氫、氟、氯、溴或甲基；R21和R22各自獨立地選自胺基或氟，R23和R24各自獨立地選自氫、氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基或異丙基；或者，R21和R22各自獨立地選自羥基或氟，R23和R24各自獨立地選自氫、氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基或異丙基；R25選自氫、氟、氯、溴或甲基。
  9. 如請求項1～8中任一項所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，所述化合物的結構如下： 或。
  10. 如請求項1～9中任一項所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，當選自下列化合物結構時，其還可以進一步被分離成對映構型的軸手性異構體： 或。
  11. 如請求項10所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，所述化合物的軸手性異構體結構分別如下： 或。
  12. 一種製備請求項1所述的通式( XI-B )所示的化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽的方法，其中，其包含以下步驟：通式（XI-B4）脫保護，得到通式（XI-B3）所示化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽；通式（XI-B3）與通式（XI-A4）發生縮合反應，得到通式（XI-B2）所示化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽；通式（XI-B2）與通式（XI-B1）發生偶聯反應，得到通式（XI-B）所示化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽；Pg 爲三級丁氧羰基；R26爲-B(OH)2；R27爲鹵素。
  13. 一種製備請求項1所述的通式( XI-B )所示的化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽的方法，其中，其包含以下步驟：通式（XI-B6）脫保護，得到通式（XI-B5）所示化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽；通式（XI-B5）與通式（XI-A4）發生縮合反應，得到通式（XI-B）所示化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽；Pg 爲三級丁氧羰基；R27爲鹵素。
  14. 一種藥用組合物，其包括治療有效劑量的請求項1～11中任一項所示的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽以及一種或多種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
  15. 一種如請求項1～11中任一項所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽或請求項14所述的藥用組合物在製備KRAS抑制劑藥物中的應用。
  16. 如請求項15所述的應用，其中，所述的KRAS抑制劑藥物為KRAS G12C抑制劑藥物。
  17. 一種如請求項1～11中任一項所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽或請求項14所述的藥用組合物在製備治療努南氏症候群、豹皮症候群、白血病、神經母細胞瘤、黑色素瘤、食管癌、頭頸部腫瘤、乳腺癌、肺癌、胰臟癌及其結腸癌疾病或病症的藥物中的應用。
  18. 如請求項17所述的應用，其中，所述的疾病或病症為非小細胞肺癌、結腸癌、食管癌、胰臟癌和頭頸部腫瘤。
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