UA112203C2 - Злитий білок біоспецифічного антитіла, який зв'язується з ox40 людини та сироватковим альбуміном людини - Google Patents

Злитий білок біоспецифічного антитіла, який зв'язується з ox40 людини та сироватковим альбуміном людини Download PDF

Info

Publication number
UA112203C2
UA112203C2 UAA201404941A UAA201404941A UA112203C2 UA 112203 C2 UA112203 C2 UA 112203C2 UA A201404941 A UAA201404941 A UA A201404941A UA A201404941 A UAA201404941 A UA A201404941A UA 112203 C2 UA112203 C2 UA 112203C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antibody
fusion protein
light chain
sequence
human
Prior art date
Application number
UAA201404941A
Other languages
English (en)
Inventor
Ральф Адамс
Паллаві Бхатта
Сем Філіп Хейвуд
Девід Пол Хамфріс
Original Assignee
Юсб Фарма С.А.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=47388492&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA112203(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Юсб Фарма С.А. filed Critical Юсб Фарма С.А.
Publication of UA112203C2 publication Critical patent/UA112203C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/624—Disulfide-stabilized antibody (dsFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Винахід стосується злитого білка біоспецифічного антитіла, який зв'язується з ОХ40 людини та сироватковим альбуміном людини, виділеної молекули нуклеїнової кислоти, що його кодує, вектора, клітини-хазяїна, способу одержання даного білка. Винахід також стосується фармацевтичної композиції, що його містить, та застосування злитого білка у виготовленні лікарського препарату для лікування або профілактики патологічного порушення, опосередкованого ОХ40.

Description

Даний винахід стосується молекул антитіл, які мають специфічність щодо антигенних детермінант ОХ40, і композицій, які містять такі. Даний винахід також стосується терапевтичних застосувань молекул антитіл, композицій і способів одержання зазначених молекул антитіл.
ОХ40 (також відомий як СО134, ТМЕК5Е4, АСТЗ35 або ТХОРІІ) є членом суперсімейства рецепторів ТМЕ, яке включає 4-188, С027, СО30 і 2040. Позаклітинний ліганд-зв'язувальний домен ОХ40 складається з З повних багатих цистеїном доменів (СКО) і неповного четвертого С- кінцевого СКО (Воатег еї а!., 2002, Тгепаз Віоспет. збі., 27, 19-26).
Лігандом для ОХ40 є ОХ40Ї, а З копії ОХ40 зв'язуються із тривимірним лігандом з утворенням комплексу ОХ40-ОХ401 (Сотраап апа Нутом/ії;, 2006, Зтисіште, 14, 1321-1330).
ОХ40 є мембранозв'язаним рецептором; однак, також була виявлена розчинна ізоформа (ТауїЇог апа Зспулаг7, 2001, У. Іттипої. Меїйодв», 255, 67-72). Функціональне значення розчинної форми на цей час невідоме. ОХ40 не експресується на спочиваючих Т-клітинах, але тимчасово експресується на активованих Т-клітинах після зв'язування Т-клітинного рецептора (ТОК).
Ліганд для ОХ40, ОХ401І є членом сімейства ТМЕ і експресується на активованих клітинах, що представляють антиген (АРС), у тому числі на В-клітинах, макрофагах, ендотеліальних клітинах і дендритних клітинах (ОС).
ОХ40 є одним з основних костимулюючих рецепторів з наступним залученням СО28, при цьому ОХ40 є необхідним для оптимальної проліферації та виживання Т-клітин. Зв'язування
ОХ40 на активованих Т-клітинах приводить до підвищеного продукування цитокінів і проліферації як СО4», так і СО8- Т-клітин (Сгатадіїйа еї аї., 2000, 9. Іттипої., 165, 3043-3050,
Вапза!-Ракаїа еї а!., 2004, 9. Іттипої., 172, 4821-425), і може приймати участь як у ТИ, так і Тп2 відповідях, що відбуваються (сгаптадіїа еї аї., 1998, 9. Іттипо., 161, 6510-6517, Агезійдез еї аї., 2002, Биг. У. Іттипої. 32, 2874-2880). Костимуляція ОХ40 продовжує виживаність Т-клітин на початковій ефекторній фазі імунної відповіді та збільшує кількість Т-клітин пам'яті за допомогою інгібування загибелі ефекторних Т-клітин.
Коли імунна активація є надмірною або неконтрольованою, то може виникнути патологічна алергія, астма, запалення, автоїмунні та інші споріднені захворювання. Оскільки ОХ40 діє для підсилення імунної відповіді, це може ускладнити автоімунні та запальні захворювання.
Роль взаємодій ОХ40/ОХ40ІЇ у моделях захворювання була продемонстрована на ОХ 40-
Зо нокаутних мишах. При експериментальному алергійному енцефаломієліті (ЕАЕ), моделі розсіяного склерозу, в ОХ 40-нокаутних мишей були відмічені менш важкі клінічні ознаки захворювання та зменшення запального інфільтрату в ЦНС (Сагропі еї аї., 2003, 9.
Мешйгоіїттипо!іоду, 145, 1-11). Також ОХ 40-нокаутні миші, первинно вакциновані та імунізовані овальбуміном, демонструють зменшене запалення легенів (80-90 95 зниження еозинофілії), зменшене продукування слизу та значно зменшену гіперреактивність дихальних шляхів (Чептбег еї аїІ., 2001, У. Ехр. Медй., 193, 387-392). Моноклональні антитіла до мишачого ліганду ОХ40 показали позитивні ефекти на моделі колаген-індукованого артриту, а саме ревматоїдного артриту (уозпіока еї аї., 2000, Еиг. У. Іттипої., 30, 2815-2823), ЕАЕ (Мопага еї аї., 2001, 9.
Іттипої!., 166, 2108-2115), у мишей з діабетом, які не страждають ожирінням (МОБ) (РакКаїа еї а!., 2004, Еиг. У. Іттипої., 34, 3039-3046), при коліті у мишей з відновленими Т-клітинами (Маїтвіот еї аї., 2001, У. Іттипої., 166, 6972-6981, ТоївиКа єї аЇ., 2003, Ат. У. РНувіої.
Савігоїпіеві. І їмег РНувзіої!., 284, 1595-5603) і на моделях запалення легенів (ЗаІек-АгдакКапі єї а!., 2003, У. Ехр. Меа., 198, 315-324, Новпіпо евї аї!., 2003, Єиг. У. Іттипої, 33, 861-869). Визначали профіль антитіла до ОХ40Ї людини на моделі запалення легенів у макак-резусів і отримали в результаті знижені рівні ІІ -5, І -13 ї ефекторних Т-клітин пам'яті в рідині бронхоальвеолярного лаважа після імунізації алергеном (Зезпазауее еї а!., 2007, 9. Сііп. Іпмезі, 117, 3868-3878).
Підвищення експресії ОХ40 було відмічене при деяких автоїмунних і запальних захворюваннях. Сюди входить підвищення експресії ОХ40 на Т-клітинах, виділених із синовіальної рідини пацієнтів з ревматоїдним артритом (Вгидпопі 0. еї аї!., 1998, Вг. У. Впеит., 37, 584-585; Хо5піокКа еї а!., 2000, Єиг. у. Іттипої!., 30, 2815-2823; Сіасотеїі В. єї а!., 2001, Сіїп.
Ехр. АНешйтаїйо!., 19, 317-320). Аналогічно, підвищення експресії ОХ40 було відмічене в шлунково-кишковій тканині пацієнтів з виразковим колітом та хворобою Крона (5017а еї аї., 1999, сімї, 45, 856-863; 5Шбег евї аї!., 2000, Єик. У. Сііп. Іпмеві., 30, 594-599) і в активних осередках ураження пацієнтів з розсіяним склерозом (Сагбропі еї аї., 2003, У. Меигоіїттипоїоду, 145, 1-11).
ОХ40Ї також може бути виявлений на гладких м'язах дихальних шляхів людини (А5М), а клітини АБМ хворих на астму демонструють більш сильну запальну реакцію на зв'язування
ОХ, ніж такі у здорових донорів, що вказує на роль каскаду ОХ40/ОХ401. при астмі (Вигде55 еї аї., 2004, У. АПегду Сіїп. Іттипої., 113, 683-689; Вигдезв5 еї а!., 2005, у. АПегоду Сіїп. Іттипої)., 115, 302-308). Крім того, стало відомо, що СО4- Т-клітини, виділені з периферичної крові пацієнтів із системним червоним вовчаком (5ІЕ), експресують підвищені рівні ОХ40, які пов'язані з активністю захворювання (Раїзспап еї аї., 2006, Сііп. Ехр. Іттипої., 145, 235-242).
Враховуючи роль ОХ40 при алергії, астмі та захворюваннях, пов'язаних з автоімунітетом і запаленням, один із підходів щодо терапії при цих захворюваннях полягає в блокуванні передачі сигналу ОХ40-ОХ401І із застосуванням антитіл до ОХ401Ї або антагоністичних антитіл до ОХ40.
Див., наприклад, УМО2006/029879, де були описані антитіла до ОХ40Ї.
Були описані численні агоністичні антитіла до ОХ40, але відомі далеко не всі антагоністичні антитіла до ОХ40. Було отримане поліклональне антитіло кролика до ОХ40 миші, еФибег еї аї., 1996, У. Ехр. Мед, 183, 979-989, яке блокує взаємодію між ОХ40 і ОХ401Ї. Були створені моноклональні антитіла 131 і 315 миші, які зв'язують ОХ40 людини, Ітига еї аї., 1996, 9. Ехр.
Мед, 2185-2195.
Повністю антагоністичні антитіла людини були описані в УМО2007/062245, при цьому найвищою афінністю цих антитіл була афінність по відношенню до експресованого на клітинній поверхні ОХ40 (активовані Т-клітини) в 11 нМ.
Гуманізовані антагоністичні антитіла були описані в УЛО2008/106116, при цьому антитіло з найкращою афінністю по відношенню до ОХ40 мало афінність 0,94 нМ.
Були описані інші антитіла до ОХ40, у тому числі 1106 миші (патент США Мо 6277962) і
АСТЗ5 миші, комерційно доступні від еВіоб5сіепсе.
Раніше у міжнародній заявці на патент під номером УУО2010/096418 були описані високоафінні антагоністичні антитіла до ОХ40.
Також раніше в міжнародній заявці на патент під номером УУО2010/035012 була описана нова злита молекула мультиспецифічного антитіла, яка надалі в даному документі згадується як Рар-а5ЕРм і проілюстрована на Фігурі 1. В цій же заявці передбачені корисні варіабельні ділянки для зв'язування з альбуміном, які можуть бути використані для продовження періоду напіврозпаду молекули.
У даному винаході ці варіабельні ділянки для зв'язування з альбуміном були вдосконалені та об'єднані в формат Рар-йа5Ем з антитілами до ОХ40, описаними в УУО2010/096418.. Нова біспецифічна молекула за даним винаходом у ряді описаних у даному документі аналізів іп міго
Зо та іп ммо має покращену ефективність у порівнянні з ефективністю раніше описаної в
ММО2010/096418 молекули РабБ'-РЕС. Відповідно, даний винахід передбачає злитий білок біспецифічного антитіла, який зв'язує як ОХ40 людини, так і сироватковий альбумін людини, та придатний для застосування в лікуванні або профілактиці патологічних порушень, опосередкованих ОХ40 або пов'язаних з підвищеним рівнем ОХ40.
Короткий опис графічних матеріалів
На Фігурі 1 показане злите біспецифічне антитіло за даним винаходом (формат Рар-авгем).
На Фігурах 2-8 показані певні послідовності амінокислот або ДНК, що стосуються антитіла згідно даному розкриттю.
На Фігурі 9а показане зв'язування А26б Еар-азЕм, міченого АЇІехагБіцог 488, з активованими
СраУОХ40: Т-клітинами людини.
На Фігурі 95 показане зв'язування А26 Рар'", А26 Рар-Рм і А26 Рар"-РЕС при наявності 5 Фо
НЗА на активованих СО4-, ОХ40: Т-клітинах людини.
На Фігурі 10а показаний вплив А26б Рар-а5Ем на продукування цитокінів з РВМС, підданих дії алергенного екстракту Оептагрпадоїдез ріегопузв5іпив5.
На Фігурі 100 показана здатність А26 Рар-азЕм інгібувати проліферацію СО4: ії СО8: Т-клітин у моделі мишей Ни-М5а.
На Фігурі 11а показане інгібування зв'язування ОХ40Ї з активованими СО4ОХ40: Т- клітинами людини за допомогою А26 ЕРар-азвнгу.
На Фігурі 115 показане інгібування зв'язування ОХ40Ї з активованими СО4чОХ40: Т- клітинами людини за допомогою А26бРар', А26 Рар-азЕм, А26 Рар'"-РЕС і двох контролів.
На Фігурі 12а показане інгібування А26 Рар-Рм реакції змішаних лімфоцитів (МІК) людини.
На Фігурі 120 показане інгібування А26 Рар-Рм продукування ІЕМ-гама під час МІК людини.
На Фігурі 13 показане зниження А2б6 Рар-ЕРм відсотка активованих (СО25:) Са» Т-клітин після вторинної рестимуляції антигеном за допомогою алергенного екстракту Оегта(рпадоїдев5 ріегопуввіпив.
На Фігурі 14 показане інгібування проліферації СО4: ї СО8: Т-клітин у моделі Ни-М5О за допомогою ЕРар-Рм і Рар-РЕС, уведеними до клітинного переносу залежним від дози способом.
Гуманізоване антитіло до ОХ40 САО44 00026 згадується в даному документі як А26.
Злита молекула антитіла за даним винаходом, згадана в даному документі як ЕБар-азЕм, бо проілюстрована на Фігурі 1. У даному винаході Гар-фрагмент (що містить перші варіабельні ділянки важкого та легкого ланцюгів і константні домени) зв'язується з ОХ40 людини, а азЕм- фрагмент (що містить другі варіабельні ділянки важкого та легкого ланцюгів, з'єднані дисульфідним зв'язком) зв'язується із сироватковим альбуміном людини. Зокрема, Еар- фрагмент містить СОК, отримані з антагоністичного антитіла до ОХ40, а Ем-фрагмент містить варіабельні ділянки важкого та легкого ланцюгів гуманізованого антитіла до альбуміну, причому такі альбумін-зв'язувальні варіабельні ділянки з'єднані дисульфідним зв'язком.
Відповідно, даний винахід передбачає злитий білок біспецифічного антитіла, який зв'язується з ОХ40 людини та сироватковим альбуміном людини та містить: важкий ланцюг, що містить у послідовності від М-кінця перший варіабельний домен важкого ланцюга (Мн), СН1-домен і другий варіабельний домен важкого ланцюга (Унг), легкий ланцюг, що містить у послідовності від М-кінця перший варіабельний домен легкого ланцюга (Мі1), СІ -домен і другий варіабельний домен легкого ланцюга (Міг), де зазначені важкий та легкий ланцюги вирівняні таким чином, що Мні і М утворюють перший антиген-зв'язувальний центр, а Мн2 і Мі2 утворюють другий антиген-зв'язувальний центр, де антигеном, що зв'язується першим антиген-зв'язувальним центром, є ОХ40 людини, а антигеном, що зв'язується другим антиген-зв'язувальним центром, є сироватковий альбумін людини, зокрема, де перший варіабельний домен важкого ланцюга (Ун1) містить послідовність, наведену в
ЗЕО ІО МО:1 для СОК-НІ, послідовність, наведену в ЗЕО ІЮО МО:2 для СОК-НАа, і послідовність, наведену в ЗЕО ІЮ МО:З для СОБК-НЗ, а перший варіабельний домен легкого ланцюга (Мі) містить послідовність, наведену в ЗЕО ІЮО МО:4 для СОК-1 1, послідовність, наведену в ЗЕО ІЮ
МО:5 для СОК-Ї1 2, і послідовність, наведену в 5ЗЕО ІЮ МО:6 для СОК-Ї 3, де другий варіабельний домен важкого ланцюга (Унг) має послідовність, наведену в ЗЕО ІЮ
МО:11, а другий варіабельний домен легкого ланцюга (Мі2) має послідовність, наведену в ХЕО
ІО МО:12, і другий варіабельний домен важкого ланцюга (Ун2) і другий варіабельний домен легкого ланцюга (Мі2) з'єднані дисульфідним зв'язком.
Залишки у варіабельних доменах антитіла умовно пронумеровані згідно із системою,
Зо розробленою КарБбаї єї а). Ця система викладена в КарБбаї еї аї., 1987, в Зедиепсез ої Ргоїеїіп5 ої
Іттипоіодіса! Іпїегевії, О5 ЮОерайтепі ої Неайй апа Нитап 5егмісе5, МІН, ОА (далі "Кабаї еї а). (вище)"). Ця система нумерації використовується в даному описі, якщо не зазначене інше.
Позначення залишків за Караї не завжди чітко відповідають лінійній нумерації амінокислотних залишків. Фактична лінійна амінокислотна послідовність може містити меншу кількість амінокислот або додаткові амінокислоти у порівнянні зі строгою нумерацією за Кабаї, що відповідає укорочуванню або вставці в структурний компонент, будь то каркасна або гіперваріабельна ділянка (СОК), основної структури варіабельного домену. Правильна нумерація залишків за Кабраї може бути визначена для даного антитіла шляхом вирівнювання залишків по гомології в послідовності антитіла зі "стандартною" послідовністю, пронумерованої за Кабаї.
СОК варіабельного домену важкого ланцюга розташовані в положенні залишків 31-35 (СОВ-
НІ), залишків 50-65 (СОВ-Н2) і залишків 95-102 (СОВ-НЗ) згідно із системою нумерації за Кабаї.
Проте, згідно зі СпоїШіа (Споїйіа С. апа Гезк А.М., у). Мої. Віої!., 196, 901-917 (1987)) петля, еквівалентна СОК-НІ, простягається від залишку 26 до залишку 32. Таким чином, якщо не зазначене інше, "СОК-НІТ", використане в даному документі, призначене для позначення залишків з 26 по 35, як описано при поєднанні системи нумерації за Кабаї і топологічного визначення петлі за Споїпіа.
СОР варіабельного домену легкого ланцюга розташовані в положенні залишків 24-34 (СОВ- 11), залишків 50-56 (СОВ-1І 2) і залишків 89-97 (СОВ-ЇІ 3) згідно із системою нумерації за Кабаї.
Біспецифічний злитий білок за даним винаходом містить Раб-фрагмент антагоністичного антитіла до ОХ40, раніше описаного в УМО2010/096418. Використаний у даному документі термін "антагоністичний" описує злитий білок антитіла, який здатний інгібувати та/або нейтралізувати біологічну сигнальну активність ОХ40, наприклад, блокуючи зв'язування або суттєво зменшуючи зв'язування ОХ40 з лігандом ОХ40 і, таким чином, інгібуючи активацію
ОХх40.
Скринінг антитіл для виявлення тих, які зв'язуються з ОХ40, можна виконати із використанням аналізів для вимірювання зв'язування з ОХ40 людини та/або аналізів для вимірювання здатності блокувати зв'язування ОХ40 з його лігандом, ОХ40Ї. Прикладом аналізу на основі зв'язування є ЕГІ5А, зокрема із використанням злитого біль»а ОХ40 людини та Ес 60 людини, який імобілізують на планшетах, і з використанням кон'югованого вторинного антитіла для виявлення антитіла до ОХ40, зв'язаного зі злитим білком. Прикладом аналізу на основі блокування є аналіз на основі проточної цитометрії з вимірюванням блокування зв'язування злитого білка ОХ 40-ліганда з ОХ40 на С04 клітинах людини. Флуоресцентно мічене вторинне антитіло використовують для визначення кількісного показника зв'язування злитого білка ОХ 40- ліганда із клітиною. За допомогою цього аналізу шукають зниження сигналу, оскільки антитіло в супернатанті блокує зв'язування злитого білка ліганда з ОХ40. Ще одним прикладом аналізу блокування є аналіз, де блокування костимуляції наївних Т-клітин людини, опосередковане злитим білком ОХ 40-ліганда, нанесеним на планшет, вимірюють шляхом вимірювання включення міченого тритієм тимідину.
У даному винаході варіабельні ділянки є гуманізованими. Гуманізовані антитіла (які включають СОК-привиті антитіла) є молекулами антитіл, що мають одну або декілька гіперваріабельних ділянок (СОК) від видів за винятком людини та каркасну ділянку із молекули імуноглобуліну людини (див., наприклад, патент США Мо 5585089; УМО91/09967). Слід мати на увазі, що може бути необхідно перенести тільки залишки СОК, які визначають специфічність, а не весь СОК (див., наприклад, Казптігі еї аїЇ., 2005, Меїшйод5, 36, 25-34). Гуманізовані антитіла можуть необов'язково додатково містити один або декілька каркасних залишків, отриманих від видів за винятком людини, від яких були отримані СОМ.
У даному винаході СОК з Мні їі Мі1 отримані з антитіла, відомого як А26 та описаного в
ММО2010/096418. Відповідно, у злитому білку біспецифічного антитіла за даним винаходом перший варіабельний домен важкого ланцюга (Мн!) містить послідовність, наведену в ЗЕО ІЮ
МО:1 для СОК-НІ, послідовність, наведену в ЗЕО ІЮ МО:2 або 5ЕО ІЮ МО:23 для СОБ-НІ, і послідовність, наведену в 5ЕО ІЮ МО:З для СОК-НЗ, а перший варіабельний домен легкого ланцюга (Мі1) містить послідовність, наведену в 5ХЕО ІЮ МО:4 або 5ЕО ІЮ МО:24 для СОВ-І11, послідовність, наведену в ЗЕО ІЮ МО:5 для СОК-12, і послідовність, наведену в ЗЕО ІЮ МО:6б для СОК-Ї 3.
Слід мати на увазі, що заміни однієї або декількох амінокислот, додавання та/або делеції можуть бути зроблені в СОК, передбачених даним винаходом, без значної зміни здатності антитіла до зв'язування з ОХ40 і нейтралізації активності ОХ40. Вплив будь-яких амінокислотних замін, додавань і/або делецій може бути легко перевірений фахівцем у даній галузі, наприклад, з використанням способів, описаних в У/О2010/096418, для визначення зв'язування ОХ40 та інгібування взаємодії ОХ40/ОХ401. Відповідно, даний винахід передбачає біспецифічне антитіло, яке має специфічність по відношенню до ОХ40 людини, що містить
СОВН- (ЗЕО ІЮ МО), СОВН-2 (ЗЕО Ір МО:2), СОВН-З (5ЕО І МО:3), СОВІ-1 (ЗЕО ІЮ МО:4),
СОВІ-2 (ЗЕО ІО МО:5) і СОКІ -3 (ЗЕО ІО МО:6), як показано на Фігурі 2(с), наприклад, у якому одна або декілька амінокислот, наприклад, 1 або 2 амінокислоти, в одному або декількох з СОК була замінена іншою амінокислотою, такою як подібна амінокислота, визначена в даному документі нижче.
В одному варіанті здійснення злитий білок біспецифічного антитіла за даним винаходом містить важкий ланцюг, де перший варіабельний домен важкого ланцюга містить три СОК, де послідовність СЮОМКН-Ї має щонайменше 90 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в 5ЕО ІЮ МО: 1, СОКН-2 має щонайменше 90 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в ЗЕО ІЮ МО:2, і/або СОКН-3 має щонайменше 90 95 ідентичність або подібність з послідовністю, наведеною в 5ЕО ІЮ МО:3. В іншому варіанті здійснення злитий білок біспецифічного антитіла за даним винаходом містить важкий ланцюг, де варіабельний домен важкого ланцюга містить три СОЕ, де послідовність СОЕН-1 має щонайменше 95 95 або 98 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в 5ЗЕО ІЮ МО:1, СОВЕН-2 має щонайменше 95 95 або 98 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в 5ЕО ІЮ
МО:2, і/або СОМКН-3 має щонайменше 9595 або 9895 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в 5ЕО ІЮ МО:3. "Ідентичність", використана в даному документі, означає, що в будь-якому конкретному положенні у вирівнюваних послідовностях амінокислотний залишок ідентичний серед послідовностей. "Подібність", використана в даному документі, означає, що в будь-якому конкретному положенні у вирівнюваних послідовностях амінокислотний залишок серед послідовностей є залишком аналогічного типу. Наприклад, лейцин може бути замінений на ізолейцин або валін. Інші амінокислоти, які часто можуть бути замінені одна на одну, включають без обмеження: - фенілаланін, тирозин і триптофан (амінокислоти, що мають ароматичні бічні ланцюги); - лізин, аргінін і гістидин (амінокислоти, що мають основні бічні ланцюги); - аспартат і глутамат (амінокислоти, що мають кислотні бічні ланцюги); бо - аспарагін і глутамін (амінокислоти, що мають амідні бічні ланцюги) та
- цистеїн і метіонін (амінокислоти, що мають сірковмісні бічні ланцюги). Ступені ідентичності та подібності можуть бути легко розраховані (Сотршиїаййопа! Моїесшіаг Віоіоаду, І езК, А.М., ед.,
Охгога Опімегейу Ргез5, Мем Могїк, 1988; Віосотриййпд. Іптоптаїйсз апа Сепоте Ргоі|есі5, Зтій,
ОМ., єд., Асадетіс Ргезв5, Мем Моїк, 1993; Сотршиег Апаїувзів ої Зедиепсе Оаїа, Рап 1, Стініп,
А.М. апа Стініп, Н.С., єдв5., Нитапа Ргез5, Мем/ Уегзеу, 1994; бедиєпсе Апаїузів іп МоїІесшаг
Віоіоду, моп Неїіп)є, С., Асадетіс Ргезв5, 1987, Зедиепсе Апаїузів Ріїтег, Сиір5Ком, М. апа
Оемегеих, 9., ед5., М біосКіоп Ргеб55, Мем/ МогКк, 1991, програмне забезпечення ВІ АБ5Т", доступне від МСВІ (Ак5спиї, 5.Р. еї аїЇ., 1990, 9У. Мої. Віої. 215:403-410; Сівп, МУ. в іаїев, 0... 1993, Маїшге Сепеї. 3:266-272. Мадаеєп, Т./. єї а!., 1996, Меїйн. Епгутої. 266:131-141; Айвсйиї,
З.Е. еї аї!., 1997, Мисієїс Асідх Ве5. 25:3389-3402; 7Напд у. 6 Мадаеєп, Т.Г. 1997, Сепоте Вез. 7:649-656).
В іншому варіанті здійснення злитий білок біспецифічного антитіла за даним винаходом містить легкий ланцюг, де перший варіабельний домен легкого ланцюга містить три СОК, де послідовність СОМКІ-1 має щонайменше 90 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в ЗЕО ІЮ МО:4, СОМКІ-2 має щонайменше 90 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в ЗЕО ІЮ МО:5, і/або СОКІ -3 має щонайменше 90 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в ЗЕО ІЮ МО:6. В іншому варіанті здійснення злитий білок біспецифічного антитіла за даним винаходом містить легкий ланцюг, де перший варіабельний домен легкого ланцюга містить три СОЖК, де послідовність СОКІ-1 має щонайменше 95 95 або 98 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в ЗЕО ІЮ
МО:4, СОВІ-2 має щонайменше 95 95 або 98 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в 5ЕО ІЮ МО:5, і/або СОМКІ-3 має щонайменше 95 95 або 98 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в 5ЕО ІЮ МО:6.
В одному варіанті здійснення Рар-фрагмент злитого білка біспецифічного антитіла, передбачений даним винаходом, є гуманізованою або СОК-щепленою молекулою антитіла, яка містить один або декілька СОРК, представлених у 5ЕО ІЮО МО: 1, 2, 3, 4, 5 і/або 6 (Фігура 2(с)), або її варіантами. Використовуваний у даному документі термін "молекула СОК-привитого антитіла" стосується молекули антитіла, у якій важкий та/або легкий ланцюг містить один або декілька СОК (у тому числі, якщо бажано, один або декілька модифікованих СОК) з донорного
Зо антитіла (наприклад, моноклонального антитіла миші), привитого на каркас варіабельної ділянки важкого та/або легкого ланцюга акцепторного антитіла (наприклад, антитіла людини). У якості огляду див. Мацдпап еї аї, Маїиге Віоїесппоіоду, 16, 535-539, 1998. В одному варіанті здійснення замість переносу повного СОК, на каркас антитіла людини переносять тільки один або декілька залишків, що визначають специфічність, із будь-якого з СОК, описаних у даному документі вище (див., наприклад, КазПппіїгі еї аіІ., 2005, МеїШйоа5, 36, 25-34). В одному варіанті здійснення на каркас антитіла людини переносять тільки залишки, що визначають специфічність, із одного або декількох СОМ, описаних у даному документі вище. В іншому варіанті здійснення на каркас антитіла людини переносять тільки залишки, що визначають специфічність, із кожного з СОК, описаних у даному документі вище.
Якщо СОК або залишки, що визначають специфічність, є привитими, то може бути використана будь-яка прийнятна акцепторна послідовність каркаса варіабельної ділянки з урахуванням класу/гтипу донорного антитіла, з якого отримані СОК, включаючи каркасні ділянки миші, примата та людини. Відповідно, СОК-привите антитіло згідно з даним винаходом має варіабельний домен, який містить акцепторні каркасні ділянки людини, а також один або декілька СОК або залишків, що визначають специфічність, описаних вище. Таким чином, в одному варіанті здійснення передбачене нейтралізуюче СОК-привите антитіло, де варіабельний домен містить акцепторні каркасні ділянки людини та донорні СОК, отримані не від людини.
Прикладами каркасів людини, які можуть бути використані в даному винаході, є КОЇ., МЕМУМ,
ЕЕЇ, БО, ТОМ, ТЕЇ, ГАМ ї РОМ (КаБвбаї єї аїІ., вище). Наприклад, КОЇ і МЕМУМ можуть бути використані для важкого ланцюга, КЕЇ може бути використаний для легкого ланцюга, а БО, ГАМУ і РОМ можуть бути використані як для важкого ланцюга, так і для легкого ланцюга.
Альтернативно, можуть бути використані послідовності зародкової лінії людини; вони доступні за адресою:пЕер:/и/базе.тгс-сре.сат.ас.ик/.
В СОК-привитому антитілі за даним винаходом акцепторні важкі та легкі ланцюги не обов'язково повинні бути отримані з того ж антитіла та можуть, якщо бажано, містити складені ланцюги, які мають каркасні ділянки, отримані з різних ланцюгів.
Придатну каркасну ділянку для першого варіабельного домена важкого ланцюга (УНІ) за даним винаходом одержують із послідовності 1-3 3-07 підгрупи МНЗ людини разом з УНА. 60 Придатну каркасну ділянку легкого ланцюга для першого варіабельного домена легкого ланцюга (МІ-1) одержують із послідовності зародкової лінії людини 2-1 1-02 підгрупи МК1 разом з ка.
Крім того, у варіабельній ділянці СОМ-привитого антитіла за даним винаходом каркасні ділянки не повинні мати точно ту ж саму послідовність, що і каркасні ділянки акцепторного антитіла. Наприклад, нетипові залишки можуть бути замінені на залишки, що більш часто зустрічаються в акцепторному ланцюзі цього класу або типу. Альтернативно, вибрані залишки в акцепторних каркасних ділянках можуть бути змінені таким чином, щоб вони відповідали залишку, виявленому в тому ж положенні в донорному антитілі (див. Кеісптапп еї аї., 1998,
Маїшиге, 332, 323-324). Такі зміни мають бути зведені до мінімуму, необхідного для відновлення афінності донорного антитіла. Протокол для вибору залишків в акцепторних каркасних ділянках, які необхідно змінити, викладені в МО 91/09967.
Відповідно, у першій варіабельній ділянці важкого ланцюга (УНІ) за даним винаходом, якщо акцепторний важкий ланцюг має послідовність 1-3 3-07 МНЗ людини разом з УНА4, то акцепторні каркасні ділянки важкого ланцюга містять, на додаток до одного або декількох донорних СОК, донорний залишок у щонайменше одному з положень 37, 73, 78 або 94 (відповідно до КаБбаї єї а!І. (вище)). Таким чином, забезпечується злитий білок біспецифічного антитіла, де щонайменше залишки в положеннях 37, 73, 78 і 94 першого варіабельного домена важкого ланцюга є донорними залишками.
Відповідно, у першій варіабельній ділянці легкого ланцюга (МІ 1) за даним винаходом, якщо акцепторний легкий ланцюг має послідовність 2-1 1-02 підгрупи МК1Т людини разом з УКА, то акцепторні каркасні ділянки легкого ланцюга містять, на додаток до одного або декількох донорних СОК, донорний залишок у щонайменше одному з положень 64 або 71. Таким чином, забезпечується злитий білок біспецифічного антитіла, де щонайменше залишки в положеннях 64 і 71 першого варіабельного домена легкого ланцюга є донорними залишками.
Донорні залишки є залишками з донорного антитіла, тобто антитіла, з якого були спочатку отримані СОК.
В одному варіанті здійснення злитий білок біспецифічного антитіла за даним винаходом містить важкий ланцюг, де перший варіабельний домен важкого ланцюга (Мн1і) містить послідовність, наведену в ЗЕО ІЮ МО:8 Фігури 2 (Б).
Зо Слід розуміти, що в перших варіабельних доменах важкого та легкого ланцюгів, передбачених даним винаходом, можуть бути зроблені заміни, додавання та/або делеції по одній або декільком амінокислотам, наприклад, 1 або 2 амінокислотам, без значної зміни здатності злитого білка антитіла до зв'язування з ОХ40 і нейтралізації активності ОХ40. Вплив будь-яких амінокислотних замін, додавань і/або делецій може бути легко перевірений фахівцем у даній галузі, наприклад, із застосуванням способів, описаних в УМО2010/096418, для визначення зв'язування з ОХ40 і блокування ліганда.
В одному варіанті здійснення злитий білок біспецифічного антитіла за даним винаходом містить важкий ланцюг, де перший варіабельний домен важкого ланцюга містить послідовність, що має щонайменше 60 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в 5ЕО ІЮ
МО:8 Фігури 2(5). В одному варіанті здійснення злитий білок антитіла за даним винаходом містить важкий ланцюг (МНІ), де перший варіабельний домен важкого ланцюга містить послідовність що має щонайменше 7095, 8095, 9095, 95595 або 9895 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в 5ЕО ІЮ МО: 8.
В одному варіанті здійснення злитий білок біспецифічного антитіла за даним винаходом містить легкий ланцюг, де перший варіабельний домен легкого ланцюга (МІ) містить послідовність, наведену в ЗЕО ІЮ МО:7 Фігури 2 (а).
В іншому варіанті здійснення злитий білок біспецифічного антитіла за даним винаходом містить легкий ланцюг, де перший варіабельний домен легкого ланцюга містить послідовність, що має щонайменше 60 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в ЗЕО ІЮ
МО:7. В одному варіанті здійснення злитий білок антитіла за даним винаходом містить легкий ланцюг, де перший варіабельний домен легкого ланцюга містить послідовність, що має щонайменше 70 95, 80 9», 90 95, 95 95 або 98 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в 5ЕО ІЮ МО:7.
В одному варіанті здійснення злитий білок біспецифічного антитіла за даним винаходом містить важкий ланцюг, де перший варіабельний домен важкого ланцюга (МНІ) містить послідовність, наведену в ЗЕО ІЮ МО:8, і легкий ланцюг, де перший варіабельний домен легкого ланцюга (МІ 1) містить послідовність, наведену в 5ХЕО ІЮ МО:7.
В іншому варіанті здійснення даного винаходу злитий білок антитіла містить важкий ланцюг і легкий ланцюг, де перший варіабельний домен важкого ланцюга містить послідовність, що має 60 щонайменше 60 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в ЗЕО ІЮ МО:8, а перший варіабельний домен легкого ланцюга містить послідовність, що має щонайменше 60 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в 5ЕО І МО:7. Відповідно, злитий білок антитіла містить важкий ланцюг, де перший варіабельний домен важкого ланцюга містить послідовність що має щонайменше 7095, 8095, 9095, 95595 або 9895 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в ЗЕ ІО МО:8, і легкий ланцюг, де перший варіабельний домен легкого ланцюга містить послідовність, що має щонайменше 70 95, 80 95, 90 95, 95 95 або 98 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в ЗЕО ІЮ МО:7.
У злитому білку біспецифічного антитіла за даним винаходом важкий ланцюг містить СНІ - домен, а легкий ланцюг містить Сі -домен, каппа або лямбда.
В одному варіанті здійснення злитий білок біспецифічного антитіла за даним винаходом містить важкий ланцюг, де важкий ланцюг містить послідовність, наведену в ЗЕО ІЮ МО:10, і легкий ланцюг, де легкий ланцюг містить послідовність, наведену в 5ЕО ІЮ МО:9.
Слід розуміти, що у варіабельних та/або константних доменах антитіла, передбачених даним винаходом, можуть бути зроблені заміни, додавання та/або делеції по одній або декільком амінокислотам, наприклад, ї або 2 амінокислотам, без значної зміни здатності антитіла до зв'язування з ОХ40 і нейтралізації активності ОХ40. Вплив будь-яких амінокислотних замін, додавань і/або делецій може бути легко перевірений фахівцем у даній галузі, наприклад, із застосуванням способів, описаних у УМО2010/096418, для визначення зв'язування з ОХ40 і блокування взаємодії ОХ4А0/ОХ401І..
В одному варіанті здійснення даного винаходу злитий білок антитіла містить важкий ланцюг, де МНІ1- і СНІ-домени важкого ланцюга містять послідовність, що має щонайменше 60 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в ЗЕО І МО:10. Відповідно, злите антитіло містить важкий ланцюг, де МНІ1- ії СНІ-домени важкого ланцюга містять послідовність, що має щонайменше 7095, 8095, 9095, 95595 або 9895 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в 5ЕО ІЮ МО:10.
В одному варіанті здійснення злита молекула біспецифічного антитіла згідно із даним винаходом містить легкий ланцюг, що містить послідовність, наведену в ЗЕО ІЮ МО:9 Фігури 2(4).
В одному варіанті здійснення даного винаходу злитий білок антитіла містить легкий ланцюг, де Мі1- Її СНІ- домени легкого ланцюга містять послідовність, що має щонайменше 60 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в 5ЕО ІЮ МО: 9. Наприклад, злитий білок антитіла містить легкий ланцюг, де Мі1- і Сі-домени легкого ланцюга містять послідовність що має щонайменше 7095, 8095, 9095, 95595 або 9895 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в 5ЕО ІЮ МО:9.
Другим антигеном, що зв'язується злитим білком біспецифічного антитіла за даним винаходом, є сироватковий альбумін людини. З ним зв'язується Ем-фрагмент із Рар-азЕм, який складений із других варіабельних доменів важкого та легкого ланцюга, Мн2 і МіІ2. У даному винаході Мн2 і Мі2 отримані із одного з описаних в М/О2010/035012 антитіл і являють собою покращений, більш гуманізований трансплантат цього антитіла.
В одному варіанті здійснення другий варіабельний домен важкого ланцюга (Мн2) має послідовність, наведену в 5ЕО ІЮ МО:11 Фігури За).
В одному варіанті здійснення другий варіабельний домен легкого ланцюга (Мі2) має послідовність, наведену в 5ЕО ІЮ МО:12 Фігури З(Б).
Таким чином, даний винахід передбачає злитий білок біспецифічного антитіла, який зв'язується з ОХ40 людини та сироватковим альбуміном людини та містить: важкий ланцюг, що містить у послідовності від М-кінця перший варіабельний домен важкого ланцюга (мні), СН1-домен і другий варіабельний домен важкого ланцюга (Мнг), легкий ланцюг, що містить у послідовності від М-кінця перший варіабельний домен легкого ланцюга (Мі1), СІ -домен і другий варіабельний домен легкого ланцюга (Міг), де зазначені важкий та легкий ланцюги вирівняні таким чином, що Мні і М утворюють перший антиген-зв'язувальний центр, а Мн2 і Мі2 утворюють другий антиген-зв'язувальний центр, де антигеном, що зв'язується першим антиген-зв'язувальним центром, є ОХ40 людини, а антигеном, що зв'язується другим антиген-зв'язувальним центром, є сироватковий альбумін людини, де перший варіабельний домен важкого ланцюга (Ун1) містить послідовність, наведену в
ЗЕО ІО МО:1 для СОК-НІ, послідовність, наведену в ЗЕО ІЮО МО:2 для СОК-НАа, і послідовність, наведену в ЗЕО ІЮ МО:З для СОБК-НЗ, а перший варіабельний домен легкого ланцюга (Мі) містить послідовність, наведену в ЗЕО ІЮО МО:4 для СОК-1 1, послідовність, наведену в ЗЕО ІЮ 60 МО:5 для СОК-Ї1 2, і послідовність, наведену в 5ЗЕО ІЮ МО:6 для СОК-Ї 3,
де другий варіабельний домен важкого ланцюга (Унг) має послідовність, наведену в ЗЕО ІЮ
МО:11, а другий варіабельний домен легкого ланцюга (Мі2) має послідовність, наведену в ХЕО
ІО МО:12, і другий варіабельний домен важкого ланцюга (Ун2) і другий варіабельний домен легкого ланцюга (Мі2) з'єднані дисульфідним зв'язком.
Переважно СНІ-домен і другий варіабельний домен важкого ланцюга (Мнаг) з'єднані за допомогою лінкера, а СІ -домен і другий варіабельний домен легкого ланцюга (МІі2) з'єднані за допомогою лінкера. Може бути використана будь-яка придатна послідовність пептидного лінкера, і вона в кожному ланцюзі може бути однаковою або ж відрізнятися. Придатні лінкери раніше були описані в М/О2010/035012 і включені в даний документ за допомогою посилання.
Приклади придатних лінкерів показані на Фігурах З(с) і (4). В одному варіанті здійснення лінкер між СН1-доменом і другим варіабельним доменом важкого ланцюга (Унг) містить послідовність, наведену в 5ЕО ІЮ МО:13 фігури З (с), або складається з такої. В одному варіанті здійснення лінкер між СНІ-доменом і другим варіабельним доменом важкого ланцюга (Мн2) містить послідовність, наведену в 5ЕО ІЮ МО:14 Фігури З(с), або складається з такої. В одному варіанті здійснення лінксер між Сі-доменом і другим варіабельним доменом легкого ланцюга (Мі2) містить послідовність, наведену в 5ЕО ІЮ МО:14 Фігури З(а), або складається з такої.
В одному варіанті здійснення лінкером у легкому ланцюзі є послідовність із 15 амінокислот, зокрема ОСОСО5БОСОСс5ООСОСО5 (ЗЕО ІЮ МО:29).
В одному варіанті здійснення лінкером у важкому ланцюзі є послідовність із 16 амінокислот, зокрема БОСОсО5ОСООстТОоОсОсО5 (5ЕО ІЮО МО:30).
В одному варіанті здійснення даний винахід передбачає злитий білок біспецифічного антитіла, у якому важкий ланцюг містить послідовність, наведену на Фігурі З(е) (ЗЕО ІЮ МО:15), або складається з такої, а легкий ланцюг містить послідовність, наведену на Фігурі З3(О (ЗЕО ІЮ
МО:16), або складається з такої.
В одному варіанті здійснення даного винаходу злитий білок біспецифічного антитіла містить важкий ланцюг і легкий ланцюг, де важкий ланцюг містить послідовність, що має щонайменше 60 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в 5ЕО ІЮ МО:15, а легкий ланцюг містить послідовність, що має щонайменше 60 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в 5ЕО ІЮ МО: 16. Як правило, злите антитіло містить важкий ланцюг, де важкий ланцюг містить послідовність що має щонайменше 7095, 8095, 9095, 95595 або 9895 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в 5ЕО ІЮ МО':15, і легкий ланцюг, де легкий ланцюг містить послідовність, що має щонайменше 70 95, 80 95, 90 95, 95 95 або 98 95 ідентичність або подібність із послідовністю, наведеною в 5ЕО ІЮ МО:16.
Злиті молекули антитіла за даним винаходом відповідно мають високу афінність зв'язування, зокрема, пікомолярну афінність по відношенню до ОХ40 людини та наномолярну афінність по відношенню до сироваткового альбуміну людини. Афінність може бути виміряна із застосуванням будь-якого придатного способу, відомого в даній галузі техніки, включаючи поверхневий плазмонний резонанс, наприклад, Віасоге"М, як описано для ОХ40 в
УМО2010096418 і для сироваткового альбуміну в УМО2010/035012, із застосуванням виділеного природного або рекомбінантного ОХ40, або сироваткового альбуміну, або придатного злитого білка/поліпептиду.
В одному прикладі афінність вимірюють із використанням позаклітинного домена рекомбінантного ОХ40 людини, як описано в ММО2010/096418. В одному прикладі використаний позаклітинний домен рекомбінантного ОХ40 людини являє собою димер, наприклад, злитий димер Ес. Відповідно, злиті молекули антитіла за даним винаходом мають афінність зв'язування по відношенню до виділеного ОХ40 людини приблизно 200 пМ або менше. В одному варіанті здійснення молекула антитіла за даним винаходом має афінність зв'язування приблизно 100 пМ або менше. В одному варіанті здійснення молекула антитіла за даним винаходом має афінність зв'язування приблизно 50 пМ або менше. В одному варіанті здійснення злита молекула антитіла за даним винаходом має афінність зв'язування приблизно 40 пМ або менше.
Злиті молекули антитіла за даним винаходом відповідно мають високу афінність зв'язування по відношенню до ОХ40 людини, експресованого на поверхні активованих Т-клітин, наприклад, наномолярну або пікомолярну афінність. Афінність може бути виміряна із застосуванням будь- якого придатного способу, відомого в даній галузі техніки, включаючи спосіб, описаний в
УММО2010096418, із застосуванням активованих СО4-0Х40: Т-клітин людини. Зокрема, злиті молекули антитіла за даним винаходом мають афінність зв'язування по відношенню до експресованого на клітинній поверхні ОХ40 людини приблизно 2 нМ або більше. В одному прикладі молекули антитіла за даним винаходом мають афінність зв'язування по відношенню 60 до експресованого на клітинній поверхні ОХ40 людини приблизно 1 нМ або більше. В іншому прикладі молекули антитіла за даним винаходом мають афінність зв'язування по відношенню до експресованого на клітинній поверхні ОХ40 людини приблизно 0,5 нМ або більше. В іншому прикладі молекули антитіла за даним винаходом мають афінність зв'язування по відношенню до експресованого на клітинній поверхні ОХ40 людини приблизно 0,2 нМ або більше.
Відповідно, злиті молекули антитіла за даним винаходом мають афінність зв'язування по відношенню до виділеного сироваткового альбуміну людини приблизно 50 нМ або менше.
Відповідно, злиті молекули антитіла за даним винаходом мають афінність зв'язування по відношенню до виділеного сироваткового альбуміну людини приблизно 20 нМ або менше. В одному варіанті здійснення молекула антитіла за даним винаходом має афінність зв'язування приблизно 10 нМ або менше. В одному варіанті здійснення молекула антитіла за даним винаходом має афінність зв'язування приблизно 5 нМ або менше. В одному варіанті здійснення злита молекула антитіла за даним винаходом має афінність зв'язування приблизно 2 нМ або менше.
Злиті молекули антитіла за даним винаходом можуть зв'язуватися із сироватковим альбуміном людини та сироватковим альбуміном яванського макака, миші та пацюка. В одному варіанті здійснення злитий білок антитіла за даним винаходом зв'язується із сироватковим альбуміном яванського макака з афінністю 5 нМ або менше. В одному варіанті здійснення злитий білок антитіла за даним винаходом зв'язується із сироватковий альбумін миші з афінністю 5 нМ або менше.
Злиті молекули антитіла за даним винаходом здатні одночасно зв'язуватися з ОХ40 людини та сироватковим альбуміном людини.
Переважно злиті молекули за даним винаходом мають високу афінність по відношенню до
ОХ40, а також мають достатній період напіврозпаду іп мімо для того, щоб бути терапевтично придатними, наприклад, період напіврозпаду в діапазоні 5-15 днів, наприклад, 7-11 днів.
Слід мати на увазі, що афінність злитого білка антитіла, передбаченого даним винаходом, по відношенню до ОХ40 людини та/або сироваткового альбуміну людини може бути змінена із застосуванням будь-якого придатного способу, відомого в даній галузі техніки. Тому даний винахід також стосується варіантів молекул антитіла за даним винаходом, які мають поліпшену афінність по відношенню до ОХ40 або сироваткового альбуміну людини. Такі варіанти можуть
Зо бути отримані за допомогою ряду протоколів дозрівання афінності, включаючи мутацію СОМ (Мапу сеї аїЇ., У. Мої. Віої., 254, 392-403, 1995), перетасування ланцюгів (Магк5 еї аї.,
Віо/Гесппо!іоду, 10, 779-783, 1992), застосування штамів-мутаторів Е. сої (І ому еї а1., У. Мо. Віої., 250, 359-368, 1996), перетасування ДНК (Рацеп еї аї., Сигг. Оріп. Віотесппої., 8, 724-733, 1997), фаговий дисплей (Тпотрзхоп еї аї., У. Мої. Віої., 256, 77-88, 1996) і "статеву" ПЛР (Статегі еї аї.,
Маїшге, 391, 288-291, 1998). МацднНап еї а!. (вище) розглядають ці способи дозрівання афінності.
В одному варіанті здійснення злиті молекули біспецифічного антитіла за даним винаходом блокують взаємодію між ОХ40 і ОХ40І. Численні аналізи, придатні для визначення здатності антитіла блокувати цю взаємодію, описані в М/О2010/096418. В одному варіанті здійснення даний винахід передбачає злитий білок антитіла, що має специфічність по відношенню до ОХ40 людини, який здатний на 50 95 інгібувати зв'язування ОХ40Ї людини (досліджують при кінцевій концентрації 2 мкг/мл) з активованими СО4-ОХ40-- Т-клітинами людини при концентрації менше 0,5 нМ. В одному варіанті здійснення ОХ40ї людини, використаний в аналізі, є природним ОХ40 людини. В одному варіанті здійснення ОХ40 людини, використаний в аналізі, є рекомбінантним
ОХ40 людини.
Якщо необхідно, антитіло для застосування в даному винаході може бути кон'юговане з однією або декількома ефекторними молекулами. Слід мати на увазі, що ефекторна молекула може включати одну ефекторну молекулу, або дві або більше таких молекул, зв'язаних з утворенням єдиного фрагмента, який може бути приєднаний до антитіл за даним винаходом.
Якщо необхідно одержати фрагмент антитіла, з'єднаний з ефекторною молекулою, то його можна отримати за допомогою стандартних хімічних процедур або процедур рекомбінантної
ДНК, у яких фрагмент антитіла з'єднують з ефекторною молекулою або безпосередньо, або через фактор сполучення. Методики кон'югації таких ефекторних молекул з антитілами добре відомі в даній галузі техніки (див. Неїїбігот еї аї., Сопігоїейа Огид Оеїїмегу, 2па Еа., Кобіпзоп еї а!., едв., 1987, рр. 623-53; ТПпогре сеї а!., 1982, Іттипої. Нем., 62:119-58, та Оиром/спік еї аї., 1999,
Рпаптасоіоду апа Тнегарешіісв, 83, 67-123). Конкретні хімічні процедури включають, наприклад, описані в УМО 93/06231, УМО 92/22583, УМО 89/00195, УМО 89/01476 і УМО 03/031581.
Альтернативно, якщо ефекторна молекула являє собою білок або поліпептид, з'єднання можна досягти із застосуванням процедур рекомбінантної ДНК, наприклад, як описано в УМО 86/01533 і
ЕРОЗ92745.
Термін "ефекторна молекула", використаний у даному документі, включає, наприклад, протипухлинні засоби, лікарські засоби, токсини, біологічно активні білки, наприклад ферменти, інші антитіла або фрагменти антитіл, синтетичні або природні полімери, нуклеїнові кислоти та їх фрагменти, наприклад, ДНК, РНК та їх фрагменти, радіонукліди, зокрема радіоктивний йод, радіоїзотопи, хелатні метали, наночастинки та репортерні групи, такі як флуоресцентні сполуки або сполуки, які можуть бути виявлені за допомогою ЯМР або ЕЗК-спектроскопії.
Приклади ефекторних молекул можуть включати цитотоксини або цитотоксичні засоби, у тому числі будь-який засіб, який завдає шкоди клітинам (наприклад, убиває). Приклади включають комбрестатини, доластатини, епотилони, стауроспорин, майтанзиноїди, спонгістатини, ризоксин, галіхондрини, роридини, геміастерліни, таксол, цитохалазин В, граміцидин 0, бромід етидію, еметин, мітоміцин, етопозид, тенопозид, вінкристин, вінбластин, колхіцин, доксорубіцин, даунорубіцин, дигідроксіантрациндіон, мітоксантрон, мітраміцин, актиноміцин 0, 1-дегідротестостерон, глюкокортикоїди, прокаїн, тетракаїн, лідокаїн, пропранолол і пуроміцин та їх аналоги або гомологи.
Ефекторні молекули також включають, але без обмеження, антиметаболіти (наприклад, метотрексат, б-меркаптопурин, 6-тіогуанін, цитарабін, 5-фторурацил декарбазин), алкілувальні засоби (наприклад, мехлоретамін, тіоепахлорамбуцил, мелфалан, кармустин (В5МИ) і ломустин (ССМИ), циклотосфамід, бусульфан, дибромоманітол, стрептозотоцин, мітоміцин С і цис- дихлордіамін платина (Ії) (БОР) цисплатин), антрацикліни (наприклад, даунорубіцин (раніше дауноміцин) і доксорубіцин), антибіотики (наприклад, дактиноміцин (раніше актиноміцин), блеоміцин, мітраміцин, антраміцин (АМС), каліхеаміцини або дуокарміцини) та антимітотичні засоби (наприклад, вінкристин і вінбластин).
Інші ефекторні молекули можуть включати хелатні радіонукліди, такі як "п ї 90, 17, вісмут-2!3, каліфорній-2»5г2, іридій-!922 і вольфрам-'88/реній-!88: або лікарські засоби, такі як, але без обмеження, алкілфосфохоліни, інгібітори топоізомерази І, таксоїди та сурамін. Інші ефекторні молекули включають білки, пептиди та ферменти. Ферменти, що представляють інтерес, включають, але без обмеження, протеолітичні ферменти, гідролази, ліази, ізомерази, трансферази. Білки, поліпептиди та пептиди, що представляють інтерес, включають, але без обмеження, імуноглобуліни, токсини, такі як абрин, рицин А, екзотоксин синьогнійної палички
Зо або дифтерійний токсин, білок, такий як інсулін, фактор некрозу пухлини, с-інтерферон, ВД- інтерферон, фактор росту нервів, тромбоцитарний фактор росту або тканинний активатор плазміногена, тромботичний засіб або антиангіогенний засіб, наприклад, ангіостатин або ендостатин, або модифікатор біологічної відповіді, такий як лімфокін, інтерлейкін-1 (1-1), інтерлейкін-2 (1-2), гранулоцитарно-макрофагальний колонієстимулюючий фактор (ЗМ-С5БЕ), гранулоцитарний колонієстимулюючий фактор (5-С5Е), фактор росту нервів (МОРЕ) або інший фактор росту та імуноглобуліни.
Інші ефекторні молекули можуть включати виявлювані речовини, корисні, наприклад, у діагностиці. Приклади виявлюваних речовин включають різні ферменти, простетичні групи, флуоресцентні матеріали, люмінесцентні матеріали, біолюмінесцентні матеріали, радіонукліди, позитронно-активні метали (для застосування в позитронно-емісійній томографії) та іони нерадіоактивних парамагнітних металів. Щодо іонів металів, які можуть бути кон'юговані з антитілами для застосування в якості діагностичних, див. здебільшого патент США Мо 4741900.
Придатні ферменти включають пероксидазу хріну, лужну фосфатазу, бета-галактозидазу або ацетилхолінестеразу; придатні простетичні групи включають стрептавідин, авідин і біотин; придатні флуоресцентні матеріали включають умбеліферон, флуоресцеїн, ізотіоціанат флуоресцеїну, родамін, дихлортриазиніламін флуоресцеїн, дансилхлорид і фікоеритрин; придатні люмінесцентні матеріали включають люмінол; придатні біолюмінесцентні матеріали включають люциферазу, люциферин та екворин; а придатні радіонукліди включають 7251, 191І,
Пп і 99Те.
Якщо ефекторна молекула є полімером, то вона, як правило, може бути синтетичним або природним полімером, наприклад, необов'язково заміщеним поліалкіленом із прямим або розгалуженим ланцюгом, поліалкюенільним або поліоксіалкіленовим полімером або розгалуженим або нерозгалуженим полісахаридом, наприклад, гомо- або гетерополісахаридом.
Конкретні необов'язкові замісники, які можуть бути представлені на зазначених вище синтетичних полімерах, включають одну або декілька гідроксигруп, метилових груп або метоксигруп.
Конкретні приклади синтетичних полімерів включають необов'язково заміщений із прямим або розгалуженим ланцюгом полі(етиленгліколь), полі(пропіленгліколь), полі(вініловий спирт) або їх похідні, особливо необов'язково заміщений полі(етиленгліколь), такий як 60 метоксиполі(етиленгліколь), або їх похідні.
Конкретні природні полімери включають лактозу, амілозу, декстран, глікоген або їх похідні.
Передбачається, що термін "похідні", використаний у даному документі, включає реакційно- здатні похідні, наприклад тіол-селективні реакційно-здатні групи, такі як малеїміди та подібні.
Реакційно-здатна група може бути з'єднана з полімером безпосередньо або за допомогою лінкерного сегмента. Слід мати на увазі, що залишок такої групи буде в деяких випадках утворювати частину продукту у вигляді сполучної групи між фрагментом антитіла та полімером.
Розміром полімеру можна при бажанні варіювати, але зазвичай він перебуває в діапазоні середньої молекулярної ваги від 500 Да до 50000 Да, наприклад, від 5000 до 40000 Да, а саме від 20000 до 40000 Да.
В одному прикладі придатні ефекторні молекули можуть бути приєднані через будь-який доступний амінокислотний бічний ланцюг або кінцеву амінокислотну функціональну групу, розташовану в злитому білку антитіла, наприклад, через будь-яку вільну аміно-, іміногрупу, тіолову, гідроксильну або карбоксильну групу. Такі амінокислоти у фрагменті антитіла можуть бути природного походження, або ж їх можна вбудовувати у фрагмент із застосуванням способів рекомбінантної ДНК (див., наприклад, 05 5219996; 05 5667425, МО98/25971).
Даний винахід також забезпечує виділену послідовність ДНК, що кодує важкий та/або легкий ланцюг(и) молекули антитіла за даним винаходом. Відповідно, послідовність ДНК кодує важкий або легкий ланцюг молекули антитіла за даним винаходом. Послідовність ДНК за даним винаходом може містити синтетичну ДНК, наприклад, отриману в результаті хімічної обробки,
КДНК, геномну ДНК або будь-яку їх комбінацію. Послідовності ДНК, які кодують молекулу антитіла за даним винаходом, можуть бути отримані способами, добре відомими фахівцям у даній галузі. Наприклад, послідовності ДНК, що кодують частину або всі з важких та легких ланцюгів антитіла, можуть бути синтезовані відповідно до побажань із визначених послідовностей ДНК або на основі відповідних амінокислотних послідовностей.
ДНК, що кодує акцепторні каркасні послідовності, широко доступна фахівцям у даній галузі та може бути легко синтезована на основі її відомих амінокислотних послідовностей.
Для підготовки послідовностей ДНК, що кодують молекулу антитіла за даним винаходом, можуть бути використані стандартні методики молекулярної біології. Бажані послідовності ДНК можуть бути синтезовані повністю або частково із використанням методик синтезу
Зо олігонуклеотидів. При необхідності можуть бути використані сайт-направлений мутагенез і методики полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР).
Приклади придатних послідовностей наведені в 5ЕО ІЮО МО:21 Фігури 5 (а); БЕО ІЮ МО:22
Фігури 5 (65); ЗЕО ІЮ МО:23 Фігури 6 (а); БЕО ІЮ МО:24 Фігури 6 (Б). Нуклеотиди 1-63 в 5ЕО ІЮ
МО21 ї 1-63 в 5ЕБО І МО:23 кодують послідовність сигнального пептиду ОтрА, який розщеплюється з одержанням злитої молекули антагоністичного антитіла за даним винаходом.
Даний винахід також передбачає виділену послідовність ДНК, яка кодує важкий ланцюг злитого білка антитіла за даним винаходом, що містить ЗЕО ІЮ МО:21 або 5ЕО ІО МО:22. Даний винахід також передбачає виділену послідовність ДНК, яка кодує легкий ланцюг злитої молекули антитіла за даним винаходом, що містить ЗЕО ІЮ МО:23 або 5ЕО ІЮ МО:24.
Інші приклади придатних послідовностей наведені в 5622 ІЮ МО:25 Фігури 7 (а); БЕО ІЮ
МО:26 Фігури 7 (Б); 5ЕО ІО МО:27 Фігури 8 (а); БЕО ІО МО:28 Фігури 6 (Б). Нуклеотиди 1-57 в
ЗЕО ІЮ МО:25 і 1-60 в 5ЕО ІЮ МО:27 кодують послідовність сигнального пептиду з антитіла миші
В72.3 (М/піШе еї а!., 1987, Ргоївїп Епа. 1 (6) 499-505.), що розщеплюється із одержанням злитої молекули антагоністичного антитіла за даним винаходом. Даний винахід також передбачає виділену послідовність ДНК, яка кодує важкий ланцюг злитого білка антитіла за даним винаходом, що містить 5ЕО ІЮ МО:25 або 5ЕБО ІО МО:26. Даний винахід також передбачає виділену послідовність ДНК, яка кодує легкий ланцюг злитої молекули антитіла за даним винаходом, що містить ЗЕО ІЮ МО:27 або 5ЕО ІЮ МО:28.
Даний винахід також стосується векторів клонування або експресії, що містять одну або декілька послідовностей ДНК за даним винаходом. Таким чином, забезпечується вектор клонування або експресії, що містить одну або декілька послідовностей ДНК, які кодують злитий білок антитіла за даним винаходом. Відповідно, вектор клонування або експресії містить дві послідовності ДНК, що кодують легкий ланцюг і важкий ланцюг молекули антитіла за даним винаходом, відповідно. Таким чином, вектор згідно із даним винаходом містить послідовності, представлені в ЗЕО ІЮ МО:С21 ії БЕО І МО:23. Нуклеотиди 1-63 в ЗЕО ІО МО:21 ї 1-63 в 5ЕО І
МО:23 кодують послідовність сигнального пептиду з ОтрА.
Загальні способи, за допомогою яких можуть бути сконструйовані вектори, способи трансфекції та способи культивування добре відомі фахівцям у даній галузі. Щодо цього робиться посилання на "Сигтепі Ргоїосої5 іп МоїІесціаг Віоіоду", 1999, РЕ. М. А!,зибеї (єа.), Умієу 60 Іпіегесіепсе, Мем/ МогкК, і Мапіайіз Мапиаї, представлений Соїа Зргіпуд Нагрог Рибіїзпіпа.
Також забезпечується клітина-хазяїн, яка містить один або декілька векторів клонування або експресії, що містять одну або декілька послідовностей ДНК, які кодують злитий білок антитіла за даним винаходом. Для експресії послідовностей ДНК, що кодують молекулу антитіла за даним винаходом, може бути використана будь-яка придатна клітина-хазяїн/векторна система.
Можуть бути використані бактеріальні, наприклад Е.соїї, та інші мікробні системи, або ж також можуть бути використані еукаріотичні системи експресії на основі клітини-хазяїна, наприклад клітини ссавців. Придатні клітини-хазяї ссавців включають СНО, клітини мієломи або гібридоми.
Даний винахід також передбачає спосіб одержання злитої молекули антитіла згідно із даним винаходом, який включає культивування клітини-хазяїна, що містить вектор за даним винаходом, в умовах, придатних для забезпечення експресії білка із ДНК, яка кодує молекулу антитіла за даним винаходом, і виділення молекули антитіла.
Для одержання продуктів, що містять як важкі, так і легкі ланцюги, клітинна лінія може бути трансфікована двома векторами, при цьому перший вектор кодує поліпептид легкого ланцюга, а другий вектор кодує поліпептид важкого ланцюга. Альтернативно, можна використовувати один вектор, при цьому вектор містить послідовності, що кодують поліпептиди легкого ланцюга та важкого ланцюга.
Оскільки злиті білки антитіла за даним винаходом є корисними для лікування та/або профілактики патологічного стану, даний винахід також передбачає фармацевтичну або діагностичну композицію, що містить молекулу антитіла за даним винаходом у комбінації з одним або декількома із фармацевтично прийнятного наповнювача, розріджувача або носія.
Відповідно, передбачається застосування злитого білка антитіла за даним винаходом для виготовлення лікарського препарату. Композиція зазвичай поставлятиметься як частина стерильної фармацевтичної композиції, яка, як правило, буде включати фармацевтично прийнятний носій. Фармацевтична композиція за даним винаходом може додатково містити фармацевтично прийнятний ад'ювант.
Даний винахід також передбачає спосіб підготовки фармацевтичної або діагностичної композиції який включає додавання та змішування злитої молекули антитіла за даним винаходом з одним або декількома із фармацевтично прийнятного наповнювача, розріджувача або носія.
Зо Злита молекула антитіла може бути єдиним активним інгредієнтом у фармацевтичній або діагностичній композиції, або ж може доповнюватися іншими активними інгредієнтами, у тому числі іншими інгредієнтами-антитілами, наприклад, антитілом до ТМЕ, антитілом до 1-18, антитілом до Т-клітин, антитілом до ІЕМу або антитілом до І РБ5, або інгредієнтами, що не є антитілами, такими як ксантини. Інші придатні активні інгредієнти включають антитіла, здатні індукувати толерантність, наприклад, антитіла до СОЗ або антитіла до СО4.
У додатковому варіанті здійснення використовують злитий білок антитіла або композицію згідно розкриттю в комбінації з додатковим фармацевтично активним засобом, наприклад, кортикостероїдом (таким як флутиказону пропіонат) і/або бета-2-агоністом (таким як сальбутамол, сальметерол або формотерол), або інгібіторами росту та проліферації клітин (такими як рапаміцин, циклофосфамід, метотрексат), або альтернативним інгібітором СО28 або СОр40. В одному варіанті здійснення інгібітор являє собою невелику молекулу. В іншому варіанті здійснення інгібітор є антитілом, специфічним до мішені.
Фармацевтичні композиції відповідно містять терапевтично ефективну кількість злитого білка антитіла за даним винаходом. Термін "т"ерапевтично ефективна кількість", використаний у даному документі, стосується кількості терапевтичного засобу, необхідного для лікування, полегшення або профілактики цільового захворювання або стану, або для досягнення виявлюваного терапевтичного або профілактичного ефекту. Для будь-якого антитіла терапевтично ефективна кількість спершу може бути оцінена або в аналізах на клітинних культурах, або на тваринних моделях, як правило, у гризунів, кроликів, собак, свиней або приматів. Тваринна модель також може бути використана для визначення відповідного діапазону концентрацій і шляху введення. Така інформація згодом може бути використана для визначення придатних доз і шляхів уведення у людей.
Точна терапевтично ефективна кількість для суб'єкта-людини буде залежати від тяжкості хворобливого стану, загального стану здоров'я суб'єкта, віку, ваги та статі суб'єкта, від дієти, часу та частоти введення, комбінації (комбінацій) лікарського засобу, чутливості реакції та толерантності/відповіді на терапію. Ця кількість може бути визначена шляхом рутинного експериментування та є в компетенції лікаря-клініциста. Як правило, терапевтично ефективна кількість буде становити від 0,01 мг/кг до 50 мг/кг, наприклад, від 0,1 мг/кг до 20 мг/кг.
Фармацевтичні композиції задля зручності можуть бути представлені у формі стандартних доз, 60 що містять заздалегідь визначену кількість активного засобу за даним винаходом на дозу.
Композиції можна вводити пацієнтові окремо, або можна вводити у комбінації (наприклад, одночасно, послідовно або роздільно) з іншими засобами, лікарськими засобами або гормонами.
Доза, у якій уводять злиту молекулу антитіла за даним винаходом, залежить від природи стану, що підлягає лікуванню, від наявного ступеня запалення і від того, використовується молекула антитіла профілактично або для лікування існуючого стану.
Частота дозування буде залежати від періоду напіврозпаду злитої молекули антитіла та тривалості її ефекту. Якщо молекула антитіла має короткий період напіврозпаду (наприклад, від 2 до 10 годин), то може бути необхідним уводити одну або декілька доз на день.
Альтернативно, якщо молекула антитіла має тривалий період напіврозпаду (наприклад, від 2 до днів), то може бути необхідним уводити дозу тільки один раз на день, один раз на тиждень або навіть один раз в 1 або 2 місяці.
Фармацевтично прийнятний носій не повинен сам по собі викликати продукування антитіл, шкідливих для суб'єкта, що одержує композицію, і не повинен бути токсичним. Придатні носії 15 можуть бути великими, повільно метаболізованими макромолекулами, такими як білки, поліпептиди, ліпосоми, полісахариди, полімери молочної кислоти, полігліколева кислота, полімерні амінокислоти, співполімери амінокислот і неактивні вірусні частинки.
Можуть бути використані фармацевтично прийнятні солі, наприклад, солі мінеральних кислот, такі як гідрохлориди, гідроброміди, фосфати та сульфати, або солі органічних кислот, такі як ацетати, пропіонати, малонати та бензоати.
Фармацевтично прийнятні носії в терапевтичних композиціях можуть додатково містити рідини, такі як воду, фізіологічний розчин, гліцерин і етанол. Крім того, у таких композиціях можуть бути наявні допоміжні речовини, такі як змочувальні або емульгувальні засоби або буферні речовини, що регулюють рн. Такі носії дозволяють складати фармацевтичні композиції у вигляді таблеток, пігулок, драже, капсул, рідин, гелів, сиропів, зависей і суспензій для прийому внутрішньо пацієнтом.
Придатні форми для введення включають форми, придатні для парентерального введення, наприклад, шляхом ін'єкції або інфузії, наприклад, шляхом болюсної ін'єкції або тривалої інфузії. У випадках, коли продукт призначений для ін'єкції або інфузії, йому можна придати
Зо форму суспензії, розчину або емульсії в масляному або водному носії, а також він може містити засоби для складання, такі як суспендуючі, консервуючі, стабілізуючі та/або диспергуючі засоби.
Альтернативно, зважаючи на те, що молекула антитіла може бути у сухій формі, то перед застосуванням її відновлюють за допомогою відповідної стерильної рідини.
Після складання, композиції за даним винаходом можна безпосередньо вводити суб'єктові.
Суб'єктами, що підлягають лікуванню, можуть бути тварини. Однак в одному або декількох варіантах здійснення композиції адаптують для введення людям.
Відповідно, у складах згідно із даним розкриттям рН кінцевого складу не аналогічний величині ізоелектричної точки антитіла або фрагмента; наприклад, якщо рН складу дорівнює 7, то доцільною може бути рі 8-9 або вище. Не бажаючи бути зв'язаними теорією, вважають, що це, зрештою, може забезпечити кінцевий склад з покращеною стабільністю, наприклад, коли антитіло або фрагмент залишається в розчині.
В одному аспекті переважно, щоб злита молекула за даним розкриттям не мала рі, яка б відповідала повністю нейтральній молекулі. Це робить молекулу менш схильною до агрегації.
Фармацевтичні композиції за даним винаходом можна вводити найрізноманітнішими шляхами, включаючи, але без обмеження, пероральний, внутрішньовенний, внутрішньом'язовий, внутрішньоартеріальний, інтрамедулярний, інтратекальний, інтравентрикулярний, трансдермальний, через шкіру (див., наприклад, УУО98/20734), підшкірний, внутрішньочеревинний, інтраназальний, ентеральний, місцевий, сублінгвальний, вагінальний або ректальний шлях. Для введення фармацевтичних композицій за даним винаходом також може бути використаний безголююовий інжектор. Як правило, терапевтичні композиції можуть бути підготовлені у вигляді лікарських засобів для ін'єкцій, або як рідкі розчини, або як суспензії. Також можуть бути підготовлені тверді форми, придатні для розчинення або суспендування в рідких носіях перед ін'єкцією.
Безпосередня доставка композицій зазвичай буде здійснюватися шляхом ін'єкції, підшкірно, внутрішньочеревинно, внутрішньовенно або внутрішньом'язово, або ж композиція доставлятиметься в інтерстиціальний простір тканини. Композиції також можуть бути введені в місце ураження. Лікування за допомогою дозування лікарського засобу може являти собою схему з однократним уведенням дози або схему з багаторазовим уведенням дози.
Слід мати на увазі, що активним інгредієнтом у композиції буде молекула антитіла. Сама по бо собі вона буде схильна до руйнування в шлунково-кишковому тракті. Таким чином, якщо композиція призначена для введення шляхом шлунково-кишкового тракту, то композиція повинна містити засоби, які захищають антитіло від руйнування, але які вивільняють антитіло після його усмоктування зі шлунково-кишкового тракту.
Докладне обговорення фармацевтично прийнятних носіїв доступне в Кептіпдаоп'є
Рпагтасеціїса! Зсіеєпсез (Маск Рибіїзпіпуд Сотрапу, Мем Уегзеу, 1991).
В одному варіанті здійснення склад забезпечується у вигляді складу для місцевих уведень, включаючи інгаляцію.
Придатні препарати для інгаляції включають порошки для інгаляції, дозувальні аерозолі, що містять гази-пропеленти, або розчини для інгаляції без газів-пропелентів. Порошки для інгаляції згідно із даним розкриттям, що містять активну речовину, можуть складатися тільки із зазначених вище активних речовин або із суміші зазначених вище активних речовин з фізіологічно прийнятним наповнювачем.
Ці порошки для інгаляції можуть включати моносахариди (наприклад, глюкозу або арабінозу), дисахариди (наприклад, лактозу, сахарозу, мальтозу), оліго- та полісахариди (наприклад, декстрани), поліспирти (наприклад, сорбіт, маніт, ксиліт), солі (наприклад, хлорид натрію, карбонат кальцію) або їх суміші один з одним. Придатними для застосування є моно- або дисахариди, особливо застосування лактози або глюкози, зокрема, але не винятково, у формі їх гідратів.
Розмір частинок для відкладання в легенях має становити менше 10 мікронів, наприклад 1-9 мікронів, наприклад, від 0,1 до 5 мкм, зокрема, від Її до 5 мкм. Розмір частинок активного інгредієнта (такого як антитіло або фрагмент) має першорядне значення.
В даній галузі техніки відомі гази-пропеленти, які можуть бути використані з метою підготовки аерозолів для інгаляції. Придатні гази-пропеленти вибирають серед вуглеводнів, таких як н-пропан, н-бутан або ізобутан, і галогенвуглеводнів, таких як хлоровані та/або фторовані похідні метану, етану, пропану, бутану, циклопропану або циклобутану. Зазначені вище гази-пропеленти можуть бути використані самі по собі або в їх сумішах.
Особливо придатними газами-пропелентами є галогеновані похідні алканів, вибрані з ТО 11,
ТО 12, То 134а та 10227. Серед вказаних вище галогенованих вуглеводнів особливо придатними є ТО134а (1,1,1,2-тетрафторетан), 715227 (1,1,1,2,3,3,3-гептафторпропан) та їх
Зо суміші.
Аерозолі для інгаляції, які містять газ-пропелент, також можуть містити інші інгредієнти, такі як співрозчинники, стабілізатори, поверхнево-активні речовини (сурфактанти), антиоксиданти, змащувальні речовини та засоби для регулювання рн. Усі ці інгредієнти відомі в даній галузі техніки.
Аерозолі для інгаляції згідно із даним винаходом, які містять газ-пропелент, можуть містити до 5 95 за вагою активної речовини. Аерозолі згідно із даним винаходом містять, наприклад, від 0,002 до 5 95 за вагою, від 0,01 до З 95 за вагою, від 0,015 до 2 95 за вагою, від 0,1 до 2 95 за вагою, від 0,5 до 2 95 за вагою або від 0,5 до 1 95 за вагою активного інгредієнта.
Альтернативно, місцеві введення у легені можуть також здійснюватися шляхом введення рідкого розчину або складу суспензії, наприклад, з використанням пристрою, такого як небулайзер, наприклад, небулайзер, з'єднаний з компресором (наприклад, небулайзер Рагі І С-
Уєї Ріив (К), з'єднаний з компресором виробництва Рагі Кезрігаїогу Едиіртепі, Іпс., Кісптопа, ма.)
Злитий білок антитіла за даним винаходом може бути доставлений диспергованим у розчиннику, наприклад, у вигляді розчину або суспензії. Він може бути суспендований у відповідному фізіологічному розчині, наприклад, сольовому розчині або іншому фармацевтично прийнятному розчиннику або буферному розчині. Відомі в даній галузі техніки буферні розчини можуть містити від 0,05 мг до 0,15 мг динатрію едетату, від 8,0 мг до 9,0 мг Масі, від 0,15 мг до 0,25 мг полісорбату, від 0,25 мг до 0,30 мг безводної лимонної кислоти та від 0,45 мг до 0,55 мг цитрату натрію на 1 мл води, щоб досягти рН від приблизно 4,0 до 5,0. У суспензії можна використовувати, наприклад, ліофілізоване антитіло.
Терапевтичні суспензії або склади розчинів можуть також містити один або декілька наповнювачів. Наповнювачі добре відомі в даній галузі техніки та включають буфери (наприклад, цитратний буфер, фосфатний буфер, ацетатний буфер і бікарбонатний буфер), амінокислоти, сечовину, спирти, аскорбінову кислоту, фосфоліпіди, білки (наприклад, сироватковий альбумін), ЕОТА, хлорид натрію, ліпосоми, маніт, сорбіт і гліцерин. Розчини або суспензії можуть бути інкапсульовані в ліпосоми або мікросфери, що піддаються біорозкладанню. Склад, як правило, буде забезпечуватися практично в стерильній формі з використанням стерильних процесів виробництва.
Це може включати одержання та стерилізацію шляхом фільтрування буферного розчинника/розчину, використовуваного для складу, асептичне суспендування антитіла в стерильному розчині буферного розчинника та розподіл складу в стерильні ємкості за допомогою добре відомих фахівцям у даній галузі способів.
Склад, що розпилюється, згідно із даним розкриттям може бути забезпечений, наприклад, у вигляді разових дозованих одиниць (наприклад, герметичних пластикових контейнерів або флаконів), упакованих у обгортку з фольги. Кожний флакон містить стандартну дозу буферного розчинника/розчину об'ємом, наприклад, 2 мл.
Злиті білки антитіла, розкриті в даному документі, можуть бути придатні для доставки шляхом розпилення.
Також передбачається, що антитіло за даним винаходом можна вводити із застосуванням генної терапії. Щоб цього досягти, послідовності ДНК, які кодують важкий і легкий ланцюги молекули антитіла під контролем відповідних компонентів ДНК, уводять пацієнтові таким чином, що ланцюги антитіла експресуються із послідовностей ДНК і збираються іп 5йи.
Даний винахід також передбачає злиту молекулу антитіла (або композиції, що містять Її) для застосування при контролі запальних захворювань, наприклад, гострого або хронічного запального захворювання. Відповідно, молекула антитіла (або композиції, що містять її) може бути використана для полегшення запального процесу або для профілактики запального процесу. В одному варіанті здійснення передбачається зменшення кількості іп мімо активованих
Т-клітин, зокрема тих, які приймають участь у нетипових запальних імунних відповідях, наприклад, залучених у зону/місце розташування такої відповіді.
Зменшення кількості активованих Т-клітин, як використовується в даному документі, може являти собою зменшення кількості на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 або більше відсотків у порівнянні з кількістю до лікування або за відсутності лікування. Переважно, лікування з використанням антитіла, фрагмента або композиції згідно із даним винаходом може забезпечити зниження рівня активованих Т-клітин без зниження загального рівня Т-клітин (неактивованих Т-клітин) у пацієнта. Це може привести до зменшення побічних ефектів і, можливо, до запобігання виснаження Т-клітин у пацієнта.
Даний винахід також передбачає злиту молекулу антитіла за даним винаходом для
Зо застосування в лікуванні або профілактиці патологічного порушення, яке опосередковане ОХ40 або пов'язане з підвищеним рівнем ОХ40. Патологічний стан може бути вибраний, наприклад, із групи, що складається з інфекцій (вірусних, бактеріальних, грибкових і паразитарних), ендотоксичного шоку, пов'язаного з інфекцією, артриту, ревматоїдного артриту, астми, СОРО, запалення органів тазу, хвороби Альцгеймера, запального захворювання кишечнику, хвороби
Крона, виразкового коліту, хвороби Пейроні, целіакії захворювання жовчного міхура, пілонідальної хвороби, перитоніту, псоріазу, васкуліту, хірургічних спайок, інсульту, цукрового діабету І типу, хвороби Лайма, артриту, менінгоенцефаліту, автоїмунного увеїту, імунно- опосередкованих запальних порушень центральної та периферичної нервової системи, таких як розсіяний склероз, вовчаку (наприклад, системного червоного вовчаку та вовчакового нефриту) і синдрому Гієна-Барра, атопічного дерматиту, автоїмунного гепатиту, фіброзуючого альвеоліту, хвороби Грейвса, ІдА-нефропатії, ідіопатичної тромбоцитопенічної пурпури, хвороби Меньєра, пухирниці, первинного біліарного цирозу, саркоїдозу, склеродермії, гранулематозу Вегенера, інших автоїмунних захворювань, панкреатиту, травми (хірургічної операції), реакції "трансплантат проти хазяїна", відторгнення трансплантата, хвороби серця, включаючи ішемічні захворювання, такі як інфаркт міокарда, а також атеросклероз, внутрішньосудинного згортання, резорбції кістки, остеопорозу, остеоартриту, періодонтиту та гіпохлоргідрії.
В одному варіанті здійснення злитий білок антитіла згідно із даним винаходом використовують при лікуванні алергії СОРО, автоїмунного захворювання, ревматоїдного артриту, астми, реакції "трансплантат проти хазяїна", хвороби Крона, виразкового коліту, цукрового діабету 1 типу, розсіяного склерозу, системного червоного вовчаку, вовчакового нефриту, міастенії, хвороби Грейвса, відторгнення трансплантата, гранулематозу Вегенера, пурпури Шенлейна-Геноха, системної склеродермії або спричиненого вірусом запалення легенів.
В одному варіанті здійснення злитий білок антитіла згідно із даним винаходом використовують при лікуванні захворювання, вибраного із групи, що складається з алергії,
СОР, автоїмунного захворювання, ревматоїдного артриту, астми, реакції "трансплантат проти хазяїна", хвороби Крона, виразкового коліту, цукрового діабету 1 типу, розсіяного склерозу, системного червоного вовчаку, вовчакового нефриту, міастенії, хвороби Грейвса, відторгнення трансплантата, гранулематозу Вегенера, пурпури Шенлейна-Геноха, системної склеродермії бо або спричиненого вірусом запалення легенів.
Даний винахід також передбачає злиту молекулу антитіла згідно із даним винаходом для застосування в лікуванні або профілактиці болю, особливо болю, пов'язаного із запаленням.
В одному варіанті здійснення механізм, за допомогою якого функціонують злиті молекули за даним розкриттям, включає одне або декілька з інгібування проліферації або виживання Т- клітин, підвищення вироблення ТКед, погіршення диференціювання В-клітин і/або зменшення продукування цитокінів.
Даний винахід додатково передбачає застосування злитої молекули антитіла або композиції згідно із даним винаходом при виготовленні лікарського препарату для лікування або профілактики патологічного порушення, яке опосередковане ОХ40 або пов'язане з підвищеним рівнем ОХ40, зокрема, патологічного порушення, яке являє собою ревматоїдний артрит, астму або СОРО.
Даний винахід додатково передбачає застосування молекули антитіла, фрагмента або композиції згідно із даним винаходом при виготовленні лікарського препарату для лікування або профілактики одного або декількох медичних показань, описаних у даному документі.
Злита молекула антитіла або композиція за даним винаходом може бути використана в будь-якій терапії, де бажано зменшити вплив ОХ40 на організм людини або тварини. ОХ40 може циркулювати в організмі або ж може бути представлений на небажано високому рівні, локалізуючись у певному місці в організмі, наприклад, у місці запалення.
В одному варіанті здійснення злиту молекулу антитіла за даним винаходом або композицію, що містить її, використовують для контролю запального захворювання, наприклад, описаного в даному документі.
Даний винахід також передбачає спосіб лікування людей або тварин, що страждають від опосередкованого ОХ40 порушення або піддані ризику його виникнення, причому спосіб включає введення суб'єктові ефективної кількості злитої молекули антитіла за даним винаходом або композиції, що містить таку.
В одному варіанті здійснення передбачається очищений злитий білок біспецифічного антитіла, що зв'язується з ОХ40 людини та сироватковим альбуміном людини, в практично очищеній формі, а саме, без або практично без ендотоксину та/або білка або ДНК клітини- хазяїна.
Зо Передбачається, що термін "очищена форма", який використано вище, стосується щонайменше 90 95 чистоти, такої як 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 95 вага/вага або більша чистота.
Передбачається, що термін "практично без ендотоксину" у цілому стосується вмісту ендотоксину, що складає 1 ЕЄШ на мг продукту антитіла або менше, наприклад, 0,5 або 0,1 ЄО на мг продукту.
Передбачається, що термін "практично без білка або ДНК клітини-хазяїна" у цілому стосується вмісту білка та/або ДНК клітини-хазяїна, що складає 400 мкг на мг продукту антитіла або менше, наприклад, 100 мкг на мг або менше, зокрема 20 мкг на мг, в залежності від конкретного випадку.
Злита молекула антитіла за даним винаходом також може бути використана у діагностиці, наприклад, у діагностиці іп мімо, та при візуалізації хворобливих станів за участю ОХ40.
Переважно дані злиті молекули у належній терапевтичній дозі вважаються безпечними для введення людям, зокрема через те, що вони не є суперагоністами і навряд можуть викликати цитокіновий шторм.
Термін "суперагоніст", використаний у даному документі, стосується антитіла, яке приводить до розмноження Т-клітин без залучення ТС.
В одному варіанті здійснення А26 Рар-ЕРм знижує індекс поділу, вказуючи на те, що менша кількість клітин у популяції піддається поділу; цей ефект, імовірно, опосередкований МК- клітинами, які експресують ОХ40. Індекс поділу представляє середню кількість клітинних поділів, яких зазнала клітина у вихідній популяції, і включає клітини, що не зазнали поділу.
Індекс проліферації відображає лише проліферацію тієї популяції, що відреагувала, і в одному варіанті здійснення інгібіторний ефект А2б6 Рар-Ем при використанні цієї величини є відносно зниженим.
Передбачається, що термін "який містить" у контексті даного опису припускає значення "який включає".
Технічно придатні варіанти здійснення даного винаходу можуть бути об'єднані.
Варіанти здійснення описані в даному документі як такі, що включають певні ознаки/елементи. Розкриття також поширюється на окремі варіанти здійснення, які складаються або по суті складаються із зазначених ознак/елементів.
Даний винахід додатково описується лише за допомогою ілюстрації в нижченаведених прикладах, які посилаються на супровідні графічні матеріали, де продемонстровано наступне.
ПРИКЛАДИ
Докладний опис графічних матеріалів
Фігура 1: злитий білок біспецифічного антитіла за даним винаходом, названий ЕРаб-авнгу.
Фігура 2: а) М-ділянка легкого ланцюга антитіла А26 (ЗЕО ІЮ МО':7), р) М-ділянка важкого ланцюга антитіла А26 (5ЕО ІО МО:8), с) СОВНІ (5ЕО ІЮ МО 1), СОВН2 (5ЕО Ір МО:2), СОВНЗ (5ЕО ІЮ МО:3), СОВІ1 (5ЕО І
МО:4), СОВІ 2 (ЗЕО ІО МО:5) і СОМІ З (5ЕО ІЮО МО:6) антитіла А26, а) легкий ланцюг Рар-компонента антитіла А26 (5ЕО ІЮО МО:9), е) важкий ланцюг Рар-компонента антитіла А26(5ЕО ІЮ МО:10).
Фігура 3: а) важкий ланцюг ЕРм-компонента 64549Н5 до альбуміну (ЗЕО ІЮ МО:11), р) легкий ланцюг Ру-компонента 64541 4 до альбуміну (ЗЕО ІЮ МО:12), с) лінкер 1 (ЗЕО ІО МО:13), а) лінкер 2 (ЗЕО ІО МО:14), е) важкий ланцюг Бар-авЕм (ЗЕО ІЮ МО:15),
І) легкий ланцюг Рар-авзЕм (ЗЕО ІО МО:16).
Фігура 4: а) варіабельний домен важкого ланцюга 64591 (ЗЕО ІЮ МО:17), р) варіабельний домен легкого ланцюга 64591 (ЗЕО ІЮО МО:18), с) 6459Н1 А26 Раб-авЕм (5ЕО ІЮ МО':19), а) 6450911 А26 Раб-авзЕм (ЗЕО І МО 20).
Фігура 5: а) ДНК, що кодує важкий ланцюг Рар-а5Ем, включаючи лідерну послідовність ОтрА (ЗЕО ІЮ
МО:21), р) ДНК, що кодує важкий ланцюг Рар-а5Ем, без лідерної послідовності ОтрА (5ЕО ІЮ
МО:22).
Зо Фігура 6: а) ДНК, що кодує легкий ланцюг ЕРар-азЕм, включаючи лідерну послідовність ОтрА (ЗЕО ІЮ
МО:23),
Б) ДНК, що кодує легкий ланцюг Рабр-азЕм, без лідерної послідовності ОтрА (ЗЕО ІО МО:24).
Фігура 7: а) ДНК, що кодує важкий ланцюг Рар-азЕм, включаючи лідерну послідовність В72.3 (ЗЕО ІЮ
МО:25), р) ДНК, що кодує важкий ланцюг Рар-азЕм, без лідерної послідовності В72.3 (5ЕО ІЮ МО:26).
Фігура 8: а) ДНК, що кодує легкий ланцюг Рар-а5Ем, включаючи лідерну послідовність 872.3 (ЗЕО ІЮ
МО:27), р) ДНК, що кодує легкий ланцюг Рар-азЕм, без лідерної послідовності В72.3 (ЗЕО ІО МО:28).
На Фігурі 9а показане зв'язування А26б Еар-азЕм, міченого АЇІехагБіцог 488, з активованими
СраАОХ40: Т-клітинами людини.
На Фігурі 965 показане зв'язування А26бРар", А26 Рар-Рм і А2б6 Рар'-РЕС при наявності 5 95
НЗА на активованих СО4-, ОХ40--Т-клітинах людини.
На Фігурі 10а показаний вплив А26 Рар-аз5Ем на продукування цитокінів в РВМС, підданих дії алергенного екстракту Оептаїрпадоїдез ріегопузв5іпив5.
На Фігурі 10р показана здатність А26 Рар-д5Рм інгібувати проліферацію СО4»- і СОвТ-клітин у моделі мишей Ни-М5а.
На Фігурі 11а показане інгібування зв'язування ОХ40Ї з активованими СО4-ОХ40т- клітинами людини за допомогою А26 Еар-азвнгу.
На Фігурі 116 показане інгібування зв'язування ОХ40Ї з активованими СО4-ОХ40тТ- клітинами людини за допомогою А26бРар", А26 Рар-азЕм, А26 Рабр-РЕС і двох контролів.
На Фігурі 12а показане інгібування А26 Рар-Рм реакції змішаних лімфоцитів (МІК) людини.
На Фігурі 120 показане інгібування А26 Рар-Ем продукування ІЕМ-гама в ході МІ Є людини.
На Фігурі 13 показане зниження А26 ЕРар-Рм відсотка активованих (С025-4) СО4кТ-клітин після вторинної рестимуляції антигеном за допомогою алергенного екстракту Оептафрпадоїде5 ріегопузвіпив.
На Фігурі 14 показане інгібування проліферації СО4- і СОвЖТ-клітин у моделі Ни-М5О за 60 допомогою Еар-Рм і Рар-РЕС, уведених до клітинного переносу залежним від дози способом.
Обробка ДНК і загальні способи
Для трансформацій і рутинного культивування використовували компетентні штами Е. соїї.
Ферменти для рестрикції та модифікації ДНК одержали від Коспе Оіадповііс5 (ЦЯ. та Мем
Епоіапа Віоїар5. Плазмідні препарати одержували, використовуючи набори Махі Ріазтіа ригіїйсайоп (ОІАСЕМ, номер за каталогом 12165). Реакції секвенування ДНК проводили із використанням набору АВІ Ргіхт Від бує їеппіпайг зедиепсіпд (номер за каталогом 4304149) і проганяли на автоматичному секвінаторі АВІ 3100 (Арріїеа Віозузіет5). Дані аналізували за допомогою програми Зедиепспег (Сепесоде5). Олігонуклеотиди одержали від Зітда або
Іпмігодеп. Гени, що кодують початкові послідовності М-ділянки, конструювали способом автоматизованого синтезу за допомогою ЮМА2.0 ї модифікували з метою створення привитих версій шляхом олігонуклеотид-направленого мутагенезу. Концентрацію ЕРар-Рм визначили способом НРІ С на основі білка 5.
ПРИКЛАД 1
Створення та аналіз різних гуманізованих трансплантатів 645 в А2бРар-645а5Ем
Раніше в УМО2010/035012 був описаний формат антитіла Рар-а5Ем (Фігура 1) (іноді називаний у даному документі просто як Рар-Ем) і гуманізоване антитіло до альбуміну, відоме як "6459Н191 1". Також раніше в УМО2010/096418 було описане створення гуманізованого антагоністичного антитіла до ОХ40, відомого як "А26", і його пегільованого Бар'-ррагмента. В даному документі описується створення нового покращеного гуманізованого трансплантата антитіла "645", відомого як 645й59Н5а1 4, і створення молекули антитіла Бар-азЕм, що містить цей трансплантат в Еу-компоненті та варіабельні ділянки "А26' в Рар-компоненті. Варіабельні ділянки А26 наведені на Фігурах 2аї 6 (ЗЕО І МО: 7 і 8).
Послідовності варіабельної та константної ділянки А26 спільно наведені на Фігурах 2д іі е (ЗЕОІЮ 9110).
Послідовності 645Д9НІ1 і 9/1 наведені на Фігурах 4 (а) і (Б), 5ЕО ІЮО МО 17 і 18. Якщо використовується термін Габ'-РЕсС або А2б РарРЕС, то мова йде про А26 Рар-40К РЕ, описаний в УУО2010/096418. 11 Конструювання лінкерних плазмід А26Рар-645а5ЕмМ(Ч9Н1 а 1) і А26бгРар- 645а5ЕУ(аНоа! 4)с45
Зо Усю ділянку кодування легкого ланцюга А2бЕРар-645ах5Ем(аі 1) (ЗЕО ІЮО МО:20) клонували у вектор експресії ссавців СВ під контролем промотору НОСММ-МІЕ їі послідовності поліаденілювання 5М40Е. Варіабельну ділянку легкого ланцюга з 645а5Ем (а1.1) (ЗЕО ІЮ МО:18) мутували в 645а5Ем (914) (ЗЕО ІЮ МО:12) способом ПЛР, що перекривається. Усю ділянку кодування важкого ланцюга А2бРар-645а5ЕемМ(9НІ) (ЗЕО ІО МО:19) клонували у вектор експресії ссавців ШСВ під контролем промотору НСМУ-МІЕ їі послідовності поліаденілюваннязм40Е.
Варіабельну ділянку важкого ланцюга з 64505ЕмМ(9НІ) (5ЕО ІЮ МО:17) мутували в 645а5Ем(анз5) (ЗЕО ІО МО:11) способом ПЛР, що перекривається. Конструкції підтверджували секвенуванням.
Обидві конструкції містили лінкер 3х045, наведений в ЗЕО ІЮ МО:14 Фігури З(9). 1.2 Експресія А2б6Рар-645а5ЕмМ(ЧНІ 1 1) ії А2б6Рар-645а5Ем(9Н5аї 4) у ссавців
Клітини НЕК293 трансфікували плазмідами з важким та легким ланцюгами із використанням реагенту для трансфекції 2937тесіїп від Іпмігодеп відповідно до інструкцій виробника. Коротко, 25 мкг плазміди з важким ланцюгом і 25 мкг плазміди з легким ланцюгом інкубували зі 100 мкл 293тТесііп і 1700 мкл середовища Оріїрго протягом 20 хвилин при кімнатній температурі. Потім суміш додали до 50 х 105 клітин НЕК293 в 50 мл суспензії та інкубували протягом 6 днів зі струшуванням при 37 "С. Через 6 днів супернатант зібрали центрифугуванням при 1500 хд протягом 10 хвилин для видалення клітин, а потім простерилізували через 0,22 мкм фільтр. 1.3 Очищення А2бЕРар-645аз5Ем(антаі 1) і А2б6Рар-645а5ЕУ(9Н5аЇ 4) білком о - 50 мл пропущених через 0,22 мкм фільтр супернатантів концентрували до - 2 мл за допомогою концентраторів Атісоп ШКга-15 з мембраною відсічення молекулярної ваги 10 кДа та центрифугування при 4000 худ у поворотному роторі. 1,8 мл концентрованого супернатанта застосували при 1 мл/хв у 1 мл колонці Сатютабріпа Ріиє Зерпагохзе (СЕ Неайсаге), урівноваженій 20 мМ фосфату, 40 мм Масі, рН 7,4. Колонку промивали 20 мМ фосфату, 40 мм масі, рН 7,4, а зв'язаний матеріал елюювали 0,1 М гліцином/НСІ, рН 2,7. Отримували пік елюювання та доводили рН до -- рН 7 за допомогою 2 М Ттгіз/НСІ, рН 8,5. Елюат з доведеним рН концентрували та піддавали діафільтрації в 20 мМ фосфату, 150 мм масі, рН 7,4, за допомогою концентраторів Атісоп ШОКга-145 з мембраною відсічення молекулярної ваги 10 кДа та центрифугування при 4000 хд у поворотному роторі до кінцевого об'єму -- 0,3 мл. 1.4 Аналіз А2бРар-64545Ем(9НІ1а1 1) ї А2бЕРар-64545ЕмМ(дН5а1І 4) за допомогою ексклюзійної хроматографії бо Очищені білком С зразки аналізували за допомогою ексклюзійної НРІ С. Зразки розділяли на колонці 10/300 (| Ттгісогп Зирегдех 200 (БЕ Неайсаге), спроектованій з ізократичним градієнтом РВ5З, рН 7,4, при швидкості 1 мл/хв. Виявлення піків проводили при 280 НМ і розраховували істинну молекулярну вагу шляхом порівняння зі стандартною кривою білків з відомою молекулярною вагою проти об'єму елюювання. Зміна гуманізованого трансплантата 6б45а5Ем з ОоНіЯЇ1 вна оН5ЯЇ4 привела до збільшення відсоткового вмісту мономера експресованого А2бРар-645а5Ем з 59 95 до 71 95, тобто на 12 95, без будь-якої зміни термічної стабільності а5Ем (дані не показані) або афінності зв'язування й5Ем з НБ5БА (дані не показані).
Приклад 2 2.1 Кінетики зв'язування А26 Рар-ахЕм (6459Н591 4) з ОХ40 по ВІАсоге
У цьому та всіх наступних прикладах А2б6 Рар-азЕм 645аН5Ба1 4 мало послідовність важкого ланцюга, наведену в 5ЕО ІЮ МО:15 (Фігура З(е)), і послідовність легкого ланцюга, наведену в
ЗЕО І МО:16 (Фігура 3(І)), тобто важкий ланцюг містив лінкер 545, 54Т, 545, наведений в 5ЕО
ІО МО:13, Фігура З(с).
ВІА (аналіз біомолекулярної взаємодії) виконували з використанням ВіАсоге Т200 (СЕ
НеайНсаге). Е(ар')2-фрагмент антитіла кози до (ДО людини від АйЙіпіриге, специфічний Е(абв')»- фрагмент (даскхоп ІттипоКезеагсі), імобілізували на сенсорний чіп СМ5 за допомогою хімії зв'язування амінів до рівня захоплення «5000 одиниць відповіді (КО). Буфер НВЗ-ЕР (10 мМ
НЕРЕ5З, рН 7,4, 0,15 М Масі, 3 мМ ЕОТА, 0,0595 сурфактант Р20, СЕ Неайсаге) використовували в якості рухливого буфера зі швидкістю потоку 10 мкл/хв. Ін'єкцію 10 мкл А26
Бар' при 0,5 мкг/мл або А26бРар-азЕм при 1 мкг/мл використовували для захоплення іммобілізованим Е(аб)»2 до ДС людини. ОХ40 людини титрували захоплене А26 у різних концентраціях (від 25 нМ до 1,5625 нМ) при швидкості потоку 30 мкл/хв. Поверхню регенерували за допомогою ін'єкції 2 х 10 мкл 50 мМ Неї з наступною ін'єкцією 5 мкл 5 мМ
Маон при швидкості потоку 10 мкл/хв. Криві зв'язування з відніманням фону аналізували за допомогою програмного забезпечення Т200 емаїцчаїйоп (версія 1.0), дотримуючись стандартних процедур. Кінетичні параметри визначили, виходячи з алгоритму підганяння.
Таблиця 1 нний
Середнє 4 визначень
Зо 2.2. Кінетика зв'язування А26 Раб-азЕм (6459Н5а|! 4) з альбуміном по ВІіАсоге
ВІА (аналіз біомолекулярної взаємодії) виконували з використанням ВіАсоге Т200 (СЕ
НеайНсаге). Е(ар')2-фрагмент антитіла кози до ЇдДо людини від АйЙіпіриге, специфічний Е(ар')»- фрагмент (Часкзоп Іттипогезеагсії), імобілізували на сенсорний чіп СМ5 за допомогою хімії зв'язування амінів до рівня захоплення «5000 одиниць відповіді (КО). Буфер НВ5З-ЕР (10 мМ
НЕРЕ5З, рН 7,4, 0,15 М Масі, 3 мМ ЕОТА, 0,0595 сурфактант Р20, СЕ Неайсаге) використовували в якості рухливого буфера зі швидкістю потоку 10 мкл/хв. Ін'єкцію 10 мкл Рар-
Ем при 0,75 мкг/мл використовували для захоплення іммобілізованим Е(аб)г2 до до людини.
Сироватковим альбуміном людини (НЗА), сироватковим альбуміном миші (М5А) і сироватковим альбуміном яванського макака (С5А) титрували захоплене Рар-Рм при різних концентраціях (від 50 НМ до 6,25 нМ) при швидкості потоку 30 мкл/хв. Поверхню регенерували за допомогою ін'єкції 2 х 10 мкл 50 мМ НСЇІ з наступною ін'єкцією 5 мкл 5 мМ Маон при швидкості потоку 10 мкл/хв. Криві зв'язування з відніманням фону аналізували за допомогою програмного забезпечення 1200 емаїчайоп (версія 1.0), дотримуючись стандартних процедур. Кінетичні параметри визначили, виходячи з алгоритму підганяння.
Таблиця 2
Середнє З визначень
2.3. Демонстрація одночасного зв'язування А26 Рар-азЕм (6459Н58Ї 4) з ОХ40 і альбуміном
Оцінювали одночасне зв'язування ОХ40 людини та сироваткового альбуміну людини з А26
Еар-азЕм. Конструкцію А26 Рар-д5Рм захоплювали на поверхні сенсорного чіпа, як зазначено в способі для кінетики зв'язування А2б Рар-да5Ем з альбуміном по ВіАсоге. 50 НМ НА5, 25 нм
ОХ40 або змішаним розчином з кінцевою концентрацією 50 нМ НЗА і 25 нМ ОХ40 окремо титрували захоплене А26 Рар-аб5Ем. Відповідь зв'язування для комбінованого розчину
НЗА/ОХ40 була еквівалентна сумі відповідей незалежних ін'єкцій. Це підтверджує, що Рар-й5Ем здатний до одночасного зв'язування як ОХ40 людини, так і НА.
Таблиця З охо 7777711171Ї1117125 д2б Бар-гм НА 777777111111111111111Ї11181111 2.4 Аналіз афінності А26 Рар-азЕм (645д9Н5Баї 4) за допомогою клітин
Способи
Зв'язування А26 Рар-Рм з активованими СО4-ОХ40- Т-клітинами людини
РВМС виділяли шляхом розділення в градієнті Рісої! і активували 4 мкг/мл РНА-Ї. протягом З днів при 37 "С, 595 СО», 100 95 вологості. СО4- Т-клітини виділяли шляхом негативної селекції за допомогою магнітних гранул (СО4-Т сеї! ІзоЇайоп КИ І юг Нитап; Мінепуї Віоїес). Приблизно 1 х 105 клітин інкубували при наявності антитіла або в буфері Расз (РВ5З/0,2 95 ВБА/0,09 95 Мам3) або в буфері Расз5 з додаванням 5 95 НБ5ЗА при 4 "С. Кінцева концентрація антитіла коливалася в межах від 48 нМ до 0,0005 нМ. Клітини промили в РВ5 перед аналізом методом проточної цитометрії з використанням РАСзсаїїйриг (Весіоп рісКіпзоп). В умовах обох буферів одержували два набори даних титрування, один з А26 Рар-ав5Ем, а другий з невідповідним контрольним Еар-
Ем, щоб визначити неспецифічне зв'язування. Число молів зв'язаного антитіла розрахували з використанням інтерпольованих значень зі стандартної кривої, отриманої з використанням гранул, що містять різні, але відомі кількості флуоресцентного барвника. Геометричні середні значення флуоресценції визначали в аналізі проточної цитометрії клітин і гранул. Неспецифічне зв'язування віднімали від значень для А26 Еар-а5Ем, а отримані таким чином криві специфічного зв'язування аналізували за допомогою нелінійної регресії, використовуючи рівняння зв'язування з одним центром (сгарпраай Ргізт)) для визначення Ко.
Для визначення афінності А26 Рар-азЕм до антигену, експресованого на клітинній поверхні,
Зо проводили експерименти щодо насичення зв'язування з використанням активованих СО4-ОХ40-
Т-клітин ії А26 Рар-азЕм, міченого АїЇеха Бійог 488. Специфічне зв'язування антитіла з рецептором при рівновазі в діапазоні концентрацій антитіла використовували для визначення
Ко за умови, що тільки дуже незначна фракція антитіла була зв'язана з рецептором у будь-якій точці на кривій зв'язування. Кк
Рівноважне зв'язування описується зЗаздопомогою наступного рівняння: --
Рецептор вільний Ж Антитіло вільне Ко Рецептор-Антитіло
Швидкість асоціації антитіла з рецептором :- Коп х |Рецептор вільний) х (Антитіло вільне
Швидкість дисоціації комплексу рецептор-антитіло - Кок х (Рецептор-Антитіло)|.
При рівновазі швидкості асоціації та дисоціації рівні, при цьому можна одержати рівняння, яке описує ізотерму зв'язування; на напівлогарифмічному графіку зв'язування є сигмоїдальним.
Ко визначається як Кок / Коп і може бути розрахована із кривої зв'язування як концентрація, при якій відбувається половина від максимального зв'язування.
Зв'язування А2б Рар-Рм, міченого АЇІехаРіІног488, з активованими СО4-ОХ40: Т-клітинами людини виміряли за допомогою проточної цитометрії в 5-Іод діапазоні концентрацій.
Репрезентативна крива зв'язування для А26б Рар-Рм показана на Фігурі 9А.
Середнє значення Ко, отримане на активованих клітинах від 5 різних донорів, становить 145
ПМ.
Компаратор кривої зв'язування для А26 Рар, А26 Рар-Рм і А2б6 Бар-РЕС показано на Фігурі 98.
Графіки представляють середнє 4 або 5 експериментів, де у кожному експерименті використовували різних донорів.
РВМС виділили шляхом розділення в градієнті Рісої! і активували з 4 мкг/мл РНА-Ї. протягом
З днів при 37 "С, 5 965 СО», 100 95 вологості. Потім ці СО4- Т-клітини виділили шляхом негативної селекції за допомогою магнітних гранул (СО04-Т сеї! ІзоЇаййоп Кії Ії г Нитап; Мінепуї Віоїес).
Приблизно 1 х 105 клітин інкубували при наявності антитіла або в буфері Рас5 (РВБ/О,2 95
ВБЗА/0,09 95 МамМ3), або в буфері Рас5 з додаванням 5 95 НЗА при 4 "С. Кінцева концентрація антитіла коливалася в межах від 48 нМ до 0,0005 нМ. Клітини промили в РВ5 перед аналізом методом проточної цитометрії з використанням ЕАСбзсаїїриг (Весіоп ОісКіп5оп). Також були отримані набори даних титрування для ізотопних контрольних антитіл до кожного формату А26, щоб визначити неспецифічне зв'язування. Число молів зв'язаного антитіла розрахували з використанням інтерпольованих значень зі стандартної кривої, отриманої з використанням гранул, що містять різні, але відомі кількості флуоресцентного барвника. Геометричні середні значення флуоресценції визначали в аналізі проточної цитометрії клітин і гранул. Неспецифічне зв'язування віднімали від значень для А26 Рар-азЕм, а отриману таким чином криву специфічного зв'язування аналізували за допомогою нелінійної регресії, використовуючи рівняння зв'язування з одним центром (Ссгарпраай РгізтФ)) для визначення Ко.
Таблиця 4
Середні значення Ко для антитіл А26 в аналізах афінності на клітинах людини : Клітинна афінність НБА Клітинна афінність МО НБА
Приклад 3: Модулювання А2б Рар-Ем продукування цитокінів у РВМС, підданих впливу алергенного екстракту Оеппафрпадоїдев ріегопувзвіпив5
РВМС виділяли у добровольців з алергією шляхом розділення у градієнті РісоїЇ. Очищені
РВМС піддавали впливу 25 мкг/мл алергенного екстракту Оегтагрпадоїдез ріегопуззіпи5 при наявності випробовуваного антитіла (діапазон концентрацій від 50 мкг до 0,0005 мкг/мл) у кінцевому об'ємі 200 мкл на лунку в 9б-лунковому круглодонному планшеті. Через б днів інкубації при 37 "С, 5 95 СО», 100 95 вологості, супернатанти збирали та аналізували на вміст ІЇ - 13 за допомогою М50. Графік на Фігурі 10 (а) показує репрезентативні дані 1-го репрезентативного донора з 4, де середнє значення ЕСво для інгібування продукування 1-13 складало 0,87 НМ (діапазон від 0,6 нМ до 1,07 нМ).
Таблиця 5
Середні значення ЕСбо для антитіл А26 в аналізах іп міго на НОМ людини
Значення ЕСво розрахували із кривих інгібування від окремих донорів за допомогою нелінійної регресії з використанням програмного забезпечення Сгарпраай РгізтФ : Інгібування продукування 1-13 |Інгібування продукування 1-5 ЕСво (НМ)
А26 Рар-ЕРм знижує відсоток активованих (С0257) СО4» Т-клітин після вторинної антигенної
Зо рестимуляції алергенним екстрактом Оеппагрпадоїдез ріегопуззіпи5 бра Т-клітини від донорів з алергією стимулювали іп мйго протягом 7 днів з 25 мкг/мл алергенного екстракту ЮОептайорпадоіде5 ріегопуззіпи5 (Сгеег) і аутологічними АРС за відсутності антитіла або при наявності 10 мкг/мл А2б6 Рар'РЕС, А26 Рар-ГРм або контрольного
Еар (АЗЗ Бар). Клітини промивали та залишили на З дні, а потім рестимулювали екстрактом
Вептайорпадоїде5 ріегопуззіпи5 як раніше (Фігура 13). Через З дні клітини промивали та флуоресцентно фарбували для виявлення поверхневих СОЗ3, СО4 і СО25. Потім клітини аналізували методом проточної цитометрії на проточному цитометрі ЕАС5З Сапіо (ВО). Клітини запускали на виявлення живих лімфоцитів і експресію СО3-С0б0О04: до аналізу. Дані представляють п-З3 донора, включаючи середнє. п.5, А26 Рар-Рм у порівнянні з контрольним
Еаб' (значимість вимірювали з використанням парного двостороннього Т-критерію).
Приклад 4: Інгібування А26 Рар-ЕРм проліферації СО4: ії СО8: Т-клітин у моделі мишей Ни-
Ма
Мишам уводили підшкірно 0,03, 0,3, З або 30 мг/кг А26 Рар-Рм за один день до переносу 1 х 107 РВМС людини в черевну порожнину. Через 14 днів у мишей брали кров шляхом серцевої пункції під термінальною анестезією, а потім умертвляли зсувом шийних хребців. Після цього в крові визначали число СО4: і СО8: клітин людини за допомогою аналізу ЕАС5 (Фігура 10 (Б)).
Дані (п-10) виражені як середнє ж 5ЕМ, а статистичний аналіз виконували однобічним АМОМА з наступним тестом Бонфероні. Значення представляють 95 інгібування хх ЕМ.
Результати показані на Фігурі 14.
Модель Ни-М5О демонструє, що А26 Рар-Рм повністю інгібує проліферацію Т-клітин людини іп мімо і підтверджує А26 Рар-Рм у якості життєздатного терапевтичного кандидата на інгібування опосередкованих Т-клітинами патологій. Крім того, формат Рар-ЕРм надає більшу ефективність при нижчих дозах, ніж формат РБар'-РЕС. Зменшення даної ксено-проліферативної відповіді донорних Т-клітин може надати докази, які підтверджують, що А26 ЕБар-ЕРм може бути доцільним терапевтичним засобом при СМНО.
Приклад 5: Ліганд-блокувальна здатність
Здатність А26 Рар-а5Ем блокувати взаємодію між експресованим на клітинній поверхні ОХ40 і рекомбінантним ОХ40Ї виміряли з використанням аналізу блокування ліганда на основі методу проточної цитометрії. Коротко, активовані СЮО4-ОХ40: Т-клітини людини попередньо інкубували з титруванням А2б Рар-ЕРм. Потім рекомбінантний ОХ40Ї поступово додавали до клітин і залишали для зв'язування при наявності А2б6 Рар-азЕм. Після цього визначали долю зв'язаного ОХ40Ї за допомогою методу проточної цитометрії з використанням міченого вторинного реагенту. На Фігурі 11 показана крива інгібування, що представляє об'єднані дані від
З незалежних донорів і демонструє, що А26 Рар-йа5Ем здатне повністю блокувати зв'язування
ОХ40Ї. Середнє значення ІСзхо для інгібування зв'язування рекомбінантного ОХ40Ї. складає 0,44
НМ (п-З донора).
Способи: Інгібування зв'язування ОХ40І з активованими СО4-ОХ40" Т-клітинами людини за допомогою А26 Бар-Ем
РВМС виділяли шляхом розділення у градієнті Рісої!І і активували з 4 мкг/мл РНА-Ї (Зідта)
Ко) протягом З днів при 37 С, 595 СО», 100 95 вологості. Потім СО4- Т-клітини очищали від культури шляхом негативної селекції з використанням колонок МАС5З (Мійнепуії Віотесп, СО4-Т сеї! іоїайоп КИ І). 2 х 105 604 я Т-клітин інкубували при наявності А2б6 ЕРар-д5Ем (діапазон кінцевої концентрації 10 мкг/мл - 0,000056 мкг/мл (136,6 нм - 0,000765 нМ)) протягом 30 хвилин при 4 "С. ОХ401Ї (біотинілований СО252-тиСОв8, АпсеїЇ) додавали при кінцевій концентрації 2 мкг/мл та інкубували ще протягом 30 хвилин при 4 "С. Клітини промивали, а зв'язування ОХ40І. виявляли за допомогою інкубації з РЕ-міченим стрептавідином (Часкбоп Іттипогезеагсі) до аналізу шляхом методу проточної цитометрії з використанням ЕАС5 Сапіо (Весіоп РіскКіп5оп). В якості контролю використовували відповідне Рар-і5Ем, що не зв'язує ОХ40. Криву інгібування аналізували за допомогою нелінійної регресії (сгарпрайд Ргізітт), щоб визначити ІСво. Крива інгібування, що представляє об'єднані дані від З незалежних донорів, показана на Фігурі 11, де точки даних представляють середнє значення, а планки погрішностей представляють ЗЕМ.
Середнє значення ЕСвзо для інгібування зв'язування рекомбінантного ОХ40Ї з ОХ40 за допомогою А26 Рар-Ем складає 0,445 нМ. Для порівняння, А2б Рар'РЕсС було дещо менш активним при блокуванні ліганда (ЕС5о-0,739 нМ), тоді як А26 Раб" було ненабагато активнішим (ЕСво-0,242 нМ) за Рар-Ру, як показано нижче.
Таблиця 6
Значення ЕсСбо для інгібування зв'язування ОХ401І з активованими СО4-ОХ40: Т-клітинами людини за допомогою антитіл А26 . ЕСвхо блокування ліганда (нМ)
Значення ЕСво розраховували із кривих інгібування окремих донорів за допомогою нелінійної регресії з використанням програмного забезпечення Сгарпраа Ргібто).
Приклад 6. Вплив А26 Рар-Рм у функціональних аналізах іп міїго на клітинах людини
Вплив А26 Рар-Ем на залежні від ОХ40-ОХ401. клітинні взаємодії оцінювали в ряді аналізів на стимульованих антигеном лімфоцитах людини. Ці аналізи проводили при наявності 5 95 сироватки людини, щоб забезпечити насичення альбумін-зв'язувального центру Ру-ділянки, яке, як можна передбачити, відбувається іп мімо.
Інгібування А26 Рар-Ем реакції змішаних лімфоцитів
Однонаправлена реакція алогенних змішаних лімфоцитів (МІК) є моделлю іп міїго активації та проліферації алореактивних Т-клітин (Васі еї аї., 1964, О'Ріапегу еї аї., 2000). Донорні Т- клітини активують за допомогою розпізнавання алогенних антигенів МНС на неспоріднених донорних стимулюючих РВМС, приводячи до клітинної проліферації та продукування цитокінів (Гикас5 еї аї.,, 1993). Алореакція Т-лімфоцитів, як було показано, викликана одночасно алогенним антигеном МНС і зв'язаним пептидом (Зпегтап еї аї., 1993). Величина відповіді МІК корелює зі ступенем неправильного добору МНС між парою респондер-стимулятор (Роітевієег еї аі., 2004). Відповідь МІК приводить до проліферації клітин відповідаючого донора і продукування як ТА1 (1-2, ІЕМ-у ії ТМЕ-а), так ї ТН2 (І--4, 1-5, 11-10 ї І--13) Т-клітинних цитокінів.
Точний цитокіновий профіль в МІК вважають специфічним при утворенні пари респондер- стимулятор (дЧогдап еї аї., 2002). Аналізи МІК широко використовують у дослідженнях з вивчення шляхів активації Т-клітин, при скринінгу імунодепресантних лікарських засобів і для прогнозування можливого відторгнення донорного органа у реципієнтів із трансплантацією (Вготеїйом» єї аї., 2001).
Вплив А26 Рар-Рм на активацію та проліферацію алореактивних Т-клітин людини іп міїго досліджували з використанням аналізу МІ ЕК, по суті, як описано О'Ріапегіу еї аї., 2000. РВМС від двох неспоріднених донорів спільно культивували при наявності або за відсутності А26 Рар-Рм,
А26 Рар'або А26 Рар'РЕеС і виміряли клітинну проліферацію по включенню ЗН-тимідину. Як показано на Фігурі 12, А26 Рар-Рм інгібувало клітинну проліферацію залежним від концентрації способом при значенні ЕСво 0,56 нМ (40,9 нг/мл) і максимальному інгібуванню на 55 95 (п-З3 донорних пар). А26 Рар-Рм було дещо активнішим за А26 Бар'РЕсС, яке мало значення ЕСзо 0,88
НМ, тоді як А26 Рар' мало значення ЕсСозо 0,25 нМ, як показано в Таблиці 7.
РВМС людини від двох неспоріднених донорів виділяли із цільної крові. Клітини від одного донора інактивували у-опроміненням з одержанням популяції стимулятора. Клітини від донора,
Зо що залишився, утворювали популяцію респондера. Популяції стимулятора та респондера змішували у співвідношенні 1:1 (1 х 105 клітин/донор) і культивували за наявності А26 Раб", А26
Еар-Ем або А26 Рар'РЕС (0,4 нг-25 мкг/мл) протягом 6 днів. Реагент власного виробництва
СА1Т62-01297.1 Рар-Рм використовували в якості підібраного за ізотипом контролю. Клітинну проліферацію виміряли в день б по включенню ЗН-тимідину (0,5 нСі/лунка). Дані показані як відсоток інгібування відносно відповіді респондера плюс стимулятора за відсутності біологічного реагенту, і є об'єднаними даними трьох донорних пар. Значення ЕСв5хо розраховували з використанням програмного забезпечення Сгарпраа Ргізт Ф).
Таблиця 7
Значення ЕсСобо для інгібування проліферативної відповіді МІК людини за допомогою антитіл А26 . ЕСово (нМ) середнє
Супернатанти від МІ К людини також аналізували для дослідження впливу А26 Рар-ЕРм на продукування цитокінів. Як показано на Фігурі 5.4, А26 Рар-Рм суттєво інгібувало продукування
ІЕМ-у при МІК у середньому на 81 95 (п-З донорні пари).
РВМС людини від двох неспоріднених донорів виділяли із цільної крові. Клітини від одного донора інактивували у-опроміненням з одержанням популяції стимулятора. Клітини від донора, що залишився, утворювали популяцію респондера. Популяції стимулятора та респондера змішували у співвідношенні 1:1 (1 х 105 клітин/донор) і культивували при наявності 25 мкг/мл
А26 Раб", А26 Рар-Ем, А26 Рар'РЕС або контролів (АЗЗ Рар'або СА162.01297.1) протягом 6 днів.
Супернатанти збирали та аналізували на вміст ІЕМ-у з використанням аналізу М50О. Відсоток інгібування розраховували щодо клітин, культивованих без антитіла. Графіки представляють об'єднані дані від трьох донорів (середнє значення - ЗЕМ). "7 - Р «0,01; А26 Рар-Рм у порівнянні з контрольним ЕРар-Рм (значимість вимірювали за допомогою парного двостороннього Т- критерію).
Приклад 7. Зв'язування А26б Рар-Ем з МК-клітинами в МІК людини
Досліджували вплив А2б Рар-Рм на поділ МК-клітин в МІК. Алореакція Т-лімфоцитів стимулює відповідь змішаних лімфоцитів, а А2б Рар-Рм повністю інгібує поділ Т-клітин і продукування ІЕМ у у цій системі. Інгібування поділу МК-клітин також може сприяти зниженню продукування ІЕМу. Використовуючи клітини-респондери, мічені СЕЗЕ, за допомогою аналізу
ЕАС5 демонстрували інгібування поділу МК-клітин у популяції, що ділиться "Фігура 5.6".
Показані два різні вимірювання поділу клітин. Індекс поділу представляє середню кількість клітинних поділів, яких зазнала клітина у вихідній популяції, і включає клітини, що не поділилися; А2б6 Рар-Ем знижує індекс поділу, указуючи на те, що менша кількість клітин у популяції піддається поділу; цей вплив, імовірно, опосередкований МК-клітинами, які експресують ОХ40. Індекс проліферації відображає проліферацію лише відповідаючої популяції, а інгібіторний ефект А26 Рабр-Рм при використанні цього виміру є відносно зниженим.
Приклад 8. Середні значення Ко/ЕСзхо для А26 Рар-Рм в аналізах іп міо на клітинах людини
Ко/ЕСзо (НМ) - 5.Е.М. Ко/ЕСво (мкг/мл) проліферації (п-3)
Кліщ домашнього пилу - інгібування
Має бути зрозумілим, звісно ж, що даний винахід був описаний лише як приклад, що жодним чином не повинно означати обмеження, і що в межах обсягу наведеної нижче формули винаходу можуть бути зроблені модифікації подробиць. Переважні особливості кожного з варіантів здійснення даного винаходу є дійсними для кожного з інших варіантів здійснення тшиаїйі5 тшиапаіїі5. Усі публікації, включаючи без обмеження патенти та патентні заявки, які були процитовані в цьому описі, включені в даний документ за допомогою посилання, як ніби кожна окрема публікація конкретно та окремо вказана, щоб бути включеною у даний документ за допомогою посилання, як ніби є повністю викладеною.
ПЕВЕНІК КВОТ ЕМ
«Ух ЖЕ ОВАВМА Со дх «Ой» МодвкулИи аНІНтТія, що мають собцийічність щодо Ох людини «і БО
КЕ а а и
КК Б ба авету «В МІЯ «МЕ яв о Е Ух ж мое «хх ЕХ Кк ке Раса верст За «а її «її 5 «ій» Білак «віух штучний ер» «св КМ с-ще і дай ТУ щію ів нів «Ві У «ії» 47 «їй» БІлЛЮК
І преУ а «еф Ту чнНиЙ «ее «иа СОВНЕ «НМ Я ее дів ощек ВР Зв оБіу бРу ву о тТвР тує тує Ага аз щвг оваї був ії 5 їо 15 «МО «ії» 5 «іо» Білак «еіїх штучНнИМ «ех «ех НІ «Ні З шої ся о и а ИН ша ка «іу ші бів біу 1 Не вер о Туг ї 5 «Ць 4 «Кіїз 13 «ВІї2 БідОах
ЛЕТ зужкекокако их «кі» Штучний ха АК» «вай СОВОЇ
«НІ» й аку ав тТвгР зів БегБ фі тус Аа дів Сеча
З В 10 «М 5 сії У «війх вік «ех щтУМнНий «вай»
Трою: оку яку «ВЗ СИК «Ох ап вів АВ ота офац нт Те «МЕ Б «і» БІЛОК «Ай» ЩтТучниВ «ВР» лю ЮУ. хедхахі «їх КОВЬЇ а х «НМ в «іп обі» ТУг тег ар Ту Во ве тТНе
Х | 5 «ВЕ У «аю Ой «па БІЛІ «її» штучним
ТЕ
СК Кх. й Ух
ТТЛ и и хх ча о но НН не уза Ка кл кжжи» йВріЗОельна ділянка легкого яз а антТитТійВ хв «ЯК
Код а и р нь в на НЯ їм Бу уж й шу Мои ше п дж мя. чи я: ав тліє бів ме ївгобій Зеб о бко беб бер фен бек оАїв Хег УВІ 1у
К х Зх ЗЕ ї 5 о їх пох Кока их Кв и Уфа хек ох «чо иь соя ча хх ЗНИК неня шк хії- дав дк Ві ТНК же ТВ Су деоаід ТВ обій Заг хів ту Ак АЇа а а Зо во АТ тро тує бій Бій рук РгОо біУ гу5 аїв Бга Бу5 Квн обу їв їх Б 45 бр доу хо Мах Ме як кю в. ж т х меч Жжиху. Союз «хи І ау АС
ТУуг дахи лій Ас ТВАР оіву Ні ТВБОбІУ УЗі Рг его АР БВе хег дів
Зо за ЕВ г а сеифею ня, Зі ки со Б «ер ах мух пи ит вя вЕуу
Зегосіу Заг ціу Тег од его тв бец ТвВе ів 5егб дек о бев бів го
КК. іх че Ну 55 га Кк ко бін аб вне дія їв оту Тур СУ Бій Бій Тує тує АВ тує ВГ в ву в 5
Жвеовве їв єї ді ТР ої Уді пі їТео іже вка тп вп Бі бу шіу ВЕН МУ щі ЗЕ іш жа АКГО
10 105 «КО» В «Ме ОВК «вій» БІК з» жк піч щи «аі3» штучниК ей
ТЕ Е і х я М Кт: в щ уч с я с пк що щ ФОТКУ «ик» ВапіаОельНа йілЕнка важ ланцюгЯ яднтитіла ав «М» В маш З ее ИН бук ях Хаву ку ух кує ут їх зе и в муху г ля щи чаї ім ів маі бів а: мату віу ві сви ом ФІ Б піУ Ру ї 5 10 ї5 как сен Аг ав зе сух дів Аз Бак обіу Ре оте вве о тВР деп Бук
Ко 25 за сі тів ові5 те оїтв ар бін діз го і їж сіу іже дію те омаі 35 Б ЗУ м нен но чн Хе МОЯ Кк АК КОН ННЯ в ша а КО НН а НН йо ба ух щівз Зак Жіюк зб Бк; хек Сі Біу вд оте Ту Тук Ага ас пек озай 55 що
Бу сім йго ВНе тТвг їі хег Ага АБО АБО вій УЖ АБ БеК ВКО Тут їх) то їх БО гер осів меї ай сдеборем дра дів Бі Або Те ага УВІ ТжК тТуУК Су ща Зо З
З очах туя уко в юю Ки тічки дош жу ек ви ек ую Кіа ліз тб обі пі бів бі їі Ре йо їжк тео Бі Бій сі Тк обер мах ЩІ я:
Уа вк Ууді БшгоБег 115 «ВМ а хх З «о й же вінок хек Щтучник
ЕН
ПЕТ. гікжі:г3г3и чи зажи .-у плівку кре «дор ат вті ї ще Укр «вах дДегкии лавця гав-коміонента зититтла до Ох
Аз їі сіп меї ТАБ обія зер орко бек обеб ієн Звгбодів его омаї Ту - - хх Н РЕЯ У
З 5 КО х5 дзроАгиа Ма ТНК оїів твкосСух Ага дів твВгобій бегоїів тег ов від м Й жк ЗА
КЛ «я ех ї З о Е- ОХ ек ії аУУу їі пою їх А пух Кал яба їж си їжи Ата їкротує Бій бів руб его біу Уж дів вБО руб вец фей її
Б 45
Тує Ази АТа ака ТВгогбе) ніх ТВ обі Узі Бго бе одк бВе бег віз 5а 55 щ хх кн ша их ВА м сур: СЖіми жо їжу тва умо Її щи ім Вр зак ові го о І У тТВкК йазв БЕК так бе їМе жів бве хек о бвц Бій Ро пу ще ЗЕ В ве т й Б - ; і оз о и НН АН уко: зу іх аа ут в ечо омуву із Ар овве Аіа тв о Тук ТуК Су зів бів Тжг о Тжг АБО БУК ГО ЖИ
В ща Б твг вве біу чім бі тВгогух ді зів Ті БУ5 аг тав Уві! АТ дія
У р с т М ат й же ьЯ кю це що с су ч ї Ех пах бтзмах г ще Фо Ж 2; в їхух ї хУш пгкуа о є
Бго чего Уді вве ІБ вне вго РБо Зеб або він ій іен оіув Звкобію 113 Її ВК
Твг о аіз Звке о Ущі Уві Сув во івБн о дуй Аа Ве тк Рг аг ові Аа 130 135 ї50 ув чаї спів ТР су УВІ Авр АБА дів їв бій вк обіу дей бек ій 45 їі ї55 їво
І Мшунх їв су со в кн НІ НИК че она пут схе зх их щім век у! Тв обі бій А5робег фу Ар 5 Те тує БОБ оре бе! ще Е я де їз ї7о їх кат оте о мац Тиг без хег ож діа Ах Тук оЗі бух НІ Бу хі ту! зай 155 БО
Трав суху іки сх з кут їі У Фо ух у жу ух ау ах ху Уж ех с Ук доку діа сух бів Уві Те ні Бій біу цу Заг обегбовгео маі ТвгобУух ЩЕ
МО ОО 205 вне дах вага бі пін сСух ій «В» їй ма де «вх Ка кій БРЛОК «ії» Щтучнимй «ЖК «3335» йджкенй пани Бабокоюнанантй анти іва во пхай
ОКХ важким ланцкж Бабсокемпанентя антятІіпа дО НЯ «ню сини ши нин иа ин нн в нн нь І и и НИ піц Уаі бів баб жа б Бак ові У 5 | У їх У Бац уд Бі вка БіУ ЦіУ і З ї0 І5
Бек вен вага рев бек сук А! дій бек бір РА Тве о БНа тТвгБ аа Тер аа 25 зо сі жів нНіз ТО хів ага біз від вгОо бі рух ві їжи бі їгвоУд! їх в Я
Є зх тів хек Вр ще ф ба ж і хх фам сті сраху стю досту са дв и ій лег чі 5ег БгОо Зетб вію іЖ ем тає Бже тТУК Аг АЮ Кг ді з 2 5 сн М жахи і ее не Си ех ду дж п ши с шк, ча іже Кі аг Бл тТве 16 ск Аг АВ АВ Дід ву Аа баг Бгто Ту?
се з ЗЕ яв ї55 РЕ м й
К: с Н . З. тт У Кв т ж те ух
Мец цій Меї аа Заг обей Аго дів біз АзЗротпг Ав Уа! тує Туб Сух
З ЕН У
З й сек жу бі; совуїх жд с Же пк щі ін рн сжвню іі
Аіа тк оту Фі ші біу бів пе АЗрОТУуК ТК о ЗТу Зо ях УВК вв 190 105 вн й тк ие у чи з Фор ЕК таз 33» чу бе и касу Вк Рец
УВІ ТнгоУдІ Бег бег ліз зер тк гу ФІУу го Бр ох я впе го ев
Мк їла 125 дів го Зк баб імя еб тк Заг о Б1у зі ТВ вів лів ва БіУ Суб
І ах; й з у ат ї30 135 140
З; соолутуа в КЕ ух ях: жу рок ців ск у БЖ Б п мезо заі уз же тег Ве вка біб его оУЯІ ТВ оУді 5еб ТРБодяи ее ях 7 й В з Кт ЕЕ зда ї що Ії а ї5 Я. й х Н зумію их ху кі хх їх фйух Її; жи М. хх І грі І Тан І пі ат цемоївб бек Ту УВІ Ніж ТВК Ббе вето АТБ УТ Бер бі Бе 165 175 1975 чі стю з; жа дух ві» ложу Ю ШІ т хащі же їз кту Шаг же ща звгозіу їеш тТУк бЕгоїбви Зегобвг омві я! Твг о УДЕ го тег Заг ще т «5 х З пл 185 155 153 ї ї з тут ве сток т їх же ка у Ше ие шу бен Бі таб осів Те тую ів Су амп УВІ АВ Ні БУЄ Бго его дав
Кен о щіу тТагосів тТВтгОту СУЄ я ї55 «що ОХ
ТВк вух Уаї Ар губ Суб ха Бім РР рух 5еК Се іо 215 яко ауд «ії ЛЕ ха БР «ві» ШтУЧННИ чи «ай» М жа пажквй павов КУ-комленентд знтитіяа дб занбУміну чеких БАЖКии ланцюг кеекомнНнЕній ЗетТитТтАа ДО алюжуі ну «НН ТЕ піз Уаії бій їез ре Об его єїу Ту сіу без УшЕ бів во біу Фу ї З 15 ї5 з. в ххх Кам жи Же Мод У: щаху АК Тих его іец Аг вжи Зекгосух Аїв Узі Зек обі Тів Ахроїен бек АБ ту "Уа пе з ж хо Ж
Й Е ТЕ ри а аАТщд рег сві їх буку фак Ку ЧЕ Зою дів їі ява ТРроУДі АгЕобвій Ай РКО РУ бу Ух мен обі ткрохів
Бе о ві їіє ті Тс дід бек діє Те їн ВНе тТук аіВ Те тр ваз Ех
Жду ! й пає сх зо 55 о
Фіу аг ве Твгоїіе 5ег АБО АЗр ода баг рух вел Те УВІ ТУ вец
Ку гук МУ у Хутх М чи в це 7 ма ще го хйх МК ху 5 ху А: ОМ « рух АТ У вух пух куки А зіп Мат ап Щек рег аго дів бів ао Те дів УЗ Туб туго Сух ді
Зо З
У Є еще що руч ру сумі мак су хи КЗ - пу бе Уха ок оз: ем 1 ага ївг Узі вго сту Тугб щ5аеб тТве діа Бго Тук РЕ ав обем ТР ОіУ щюЮ 5 МО
А Ки ск ее ВАС УКфухх за. ких ко т зі обі їпг ово уд Їтвне УЗі хат хв 115 120 кое ач а тр «аю 4. «ії ТЕ «їй БІЛОК
ЯН інжхла вій ее шеУчиМЕ «СЕВЕ ши Це тують Фоми: КТ пед ни НН - вскди їх; де МУ перги лавцює гУ-компонента антЕтійвВ до вазСуМміну «нн» 15 дію ті щі )Зп'маї тв гу «ев Бк Жахи Жуам и ІН ск й З хода у їх
АБИ ОІВ БІВ МеК ББгб ові ЗБ ОБГ Зб озег о Уві зб одліВв Зб Ві ваіу і ге їв їз кох - у М вав оага Уді ТНК охів твеоСух вів Бак ощек рго Зак УВІ Тев ощаК ден
ЗЕ Ук з кА ск щи ан нн и кину кни са кове АЛЬ ще хм ж за сошки пев обевц Баг тТгО ТУуК бій бій оту ВгО сі бух дів го БУ Се їео їх І я їІ Ту сій Діаз его руб БО ТВг хек овіу Узі еко хевг дру ев оег
ЗУ ща пі бак осі жЖве Бі ТВе до» вве о тТвг ого Те тів Кеб ем вва бів ой : пе лк Кі 055 КЕ: во хо зт» ША З род ЮВІУх А Ск В ши балу: ра і сек ее в УК ї ост аю ких і ех го п АВ ов ді Та тує тук Су шіУу ру пу Ту чего хв ТІК году п нн нн с в в и НН о и Не НН Не заг де оте тв вве біб Суз ЩІУ тт ов ма біб жі Бук де ТВ ее 105 що «21 13 «їх 15 ше віпОок «їз ШЕУ ЧНИВ «ее» х?23» лінкер 1 «НУ
Фах ук мае и КЕ, жаху» У Ух яти ку сум КУткУ ау у а юн
ЗВГ ОБбТУу БІ БІ БіЖж У Бу і БІЖ БІіУ ГЦ БІ БІУ ші БІ ЗВ в З та 5 вач З «ах а «У1ї» 15 «гій БІДОВ «ей» ШТУЧНИМ «КМх хо» лінка о «Ві» 38 піч бі і єї дак обі ді бі біб как бір ту бе сію свв
ВТУ лу ші БІ ЗК о БіжЖ шітУ ЗРУ Бі 5 ОоБіУ БіЖ Бі БРуУ ще і ій 10 їз ке «ім ЗУ ках БЕЛЕН хх штучний єваДх «геї» Важкий ланцюг ЯЗ Або вав ої аа аа и ек Не
Зі уві шій іно уві Ян двері бі біт іви ті бів вго сім іх пів Уві БІВ Бу УВІ Біш ЗБ оБЗіЖ Беж ві СВО Уві Б БгОо дж щу ї 5 та 15 цвгоіва; дер оіу хек су» дів ліз баб ці Ве о їве БВ о твкгодов туг по Н -Е й тку й
В аа їа хх: У і о перо Зах уч сті хі до кчУ а Уч пі м іа п ростатух зді яаМ ЩІ НЕ тб Ре Аг Бій лів го У Бу бі еВ БІВ ТТГ УВІ її а щО х кіз хек її бек Бгто Зк ІіУ діу Бе о тТвВе оту тТук ага АБО 5ег м 5 55 БО іжжх РУ Ага БВе тТВк її 5аг о АгОо АБО дао діа ух дп хат вка тТук 65 7 75 за сви бій меж дей Бек сви ага віз бін або тв ад УДІ Туг ТУБ сСую 5 дО З т3 чн і жу у и Кл Си ме зрізах ках; сля Ж ок ОНИ кіз тик обі шіУу бів Бі тів вВпе АБО ТУ ТКО Бі бів ші ТВг огец а ке у цю їО5 ще
Ма! тТВг УЗ бврохекодів ев Таб був ЗУ го хаб омщі вве ву фев 115 о 125
Се ква Фет Щеує Вс Ма ж кв тії ті ах й я гір У ТУ ТАТ дів вго беб бегоїув ек о тТВгоЗеК о Біу Біу ТВг о АТяЯ дій ра біу Сух ії 15 140 зви Уві уз дав тТУК ВВ вгОо БІВ го УЗ) ТВкКоУуді Зак ото вел зве ч У 7 «КІМ че 7 жу 145 150 155 Мо кове Ук їх піку МКеку и: ні вмбе скКь мо гіч ля ії ду гу Мо ку шокує ці Аїз ев тТве хек осі узі Ні ТВ РвВа оБко дід Уді ев бій є; «щи Й трхх т
ЗУ 17О ї75 щегобБіУу це) тує хеб обер) его хе Уа! УЗ ТВ оОУДІ РКО его ве 5 во вх ВК
ЩО ї55 КБ
Н не У ОНА сор ден і НН ОН о ех тай р руш дух кт івц віх Тв бів те о Тує Тіз Суз дв Узі да нія руб ВКо 5ег Ага 135 в КЕН чі ім зи джує фо комхі ях СУ чн во фаху тки су вжує ву Ту ху
ТВг ру Уві Аз обУХ Бу УВІ і Вб фіух декоСує авг обіу БІУ Бу ух 535 нку
ША Кк ї5 кіЖ. ЕВ
Ка ен и нн ях КН и НЕ АН НК ин ниви нич не нин нших ЧИ
Зі ев о біу Біу ці і ТвРгопі біу бБіх бі Бек бін узі бів без
АХ : - не ще ех ше 23 ех АВ ч Я: бю ух утіх вх кох пе НИ ВУ сич со и НН НА НН ся щі
Бей ошіц бег ОіУ бі Бім ів Узі Бій в ЄтТу сбіуУу его ге АБО Се 845 Ка ях
ХМ тн док шоку ти ке ня сю аку пу жу Зк оре чаті
Зет сСув від УЗ) бег осі Хі ар оіву зго оажий Туб аїв іє ап о їРво; 7 Зх т тп й ресри Й
КЕН ав В чі де тіж в і з Вге Еш І «інв ЄМ ів й Зв ох З лк Ге хе В; лу т во фе
МР АРКИ ж хя гер ул о юув БЕ БІВ гро БІ ЕК АРК ВЕ ще не Ух
Ке «М З т сок ко лю ее ча ху Ж суку ЗА кує бух тоюаує у жоемий Куй І аїа зак сіу ТВгоОтТвг вне Тугк ата ТВ тро іа губ Ту Ага вве те
КТ а ЗО їі его ака ашв аж дегосує ай Твг Ома! тТУуК без біб мех дегошак 305 ЯКО ЗІ зх рема чи Че ен НЯ ач чи ; лк вм ве Уретвю тат АТ Б меч га их їви ага дій біз ахи тТнгоаія УДі ТУБ тТук бух Віа Аг тТваг жа его й жк Ту й 535
З ЗО ЗУ
І ту хвр отв дів о вга гГу ВЕ А їв БО БІУ Бі СБУ Вкогво 3 345 355 яку «Кк с - пткоуюю Джо
Уві тТвг Уві хаб я
З
Кене Же ШКО «ех їй ве ее Я «1» З «еф» БІЛЮЕЖ «Же шт УчнНиЙ «ее
Мк зн КУ У меня СТЕ нин я зн иа и «ЙїЇ» легЕни ланцюг Бай веб езЗхоа 5 База КМС Я «НІ ІВ хв їі бів веж тТВве оБів зав о вБга вав хек ре хек Аза кас умі ді
А ОІВ іп ОВНС ІБК обі шко шг ЗК ЕКО зе АЗК У цу : й рх ще ї 5 10 15 дів два Ууді жВкЕ о їїх В косу вва Аїд тв ій дек тів тер дк Мі:
Аз ОАГОЯ УВІ ЖИ дж о Рфйиб Су ГО А РИ о сій зе ов БУК А5М ж хх Кк Ка «0 КЗ З 4 зе пен о и ЧИН чи ре ду ту тех ек: ті Ух сви від Те» ТУЄ БРІВ їжа вБгО оту БУ А їй вва суб Ме ге 31 35 Я з
Хуст х ш-- суч С її ць: Кк о жі «вк ди ух ак ук сут 5 саду я
Тук вки Аа АБИ ТК оїву Ні ТВгоОБіу УДі вРо Зак да Бі чек дів х о т х Кк х з БО
ЩІ я детрит уу у я Ко фони их гу зі м. ЧОН аИчия п Букі
Бак осі Жак обі твг ойжь его Твб орен ТагБ оті баб 5 рве цій вто па Бе 5 хо ті ши - оо рф ую сти рі стих т ная заг ст Же вет їм сів Ах вне дів тТВК тує Тук сух ШЩІВ сій туго Ту! АЩВ тут вго Сей о У -х ее У вел ру с сум меді БУ хх г су из З й ше х. ін мя ївг вне сту б5іУ Біу ТАг Су УДіІ 5 же ук АРЕНН ві дів Аа ши а ЗУ
ТО ЕК мо су в у) ше; оса дже ві; ої» ов: гак кв (Ох
Бго ще оУді вве тів вве ог вро щеє дар о єїв 513 сви ме Баг ту зе ть тк 135 120 125
За д ш ее ша най ОН с Я пт в'я фЖМхУ СТІ ФУ мк їх ді
ТВк АТа бег омні уд! сух рец ббм аха АБИ Ре туго Рг АК Бін Авіа ех кт 5 ї30 М їха муз УДІ Зі їгр Ку УЗ! ав ап Аїа Бен сій ек сі Ай ев ств 145 156 155 16а січ бак УВІ ТР обпів 5Ник АВ его бух АВ Зак ТР тує От Ге ве; вх ях нка ї653 не ТУ . ке х Я ку хо па й каш я хХогкро сів 931,5 ок ке ни ин ен Ша У зак ої фа те обец об5ес БУу5 АВ лев ТУуКк бів грже НІХ вуз маг огу; зо 455 13
З ще я г Кіа за ке ув ех сту Жууюмо «ори ух у Му в ше дід схе 1 УВІ ТК нія сій бі ів беб бвг о еге а ОоТлкОог Ж 8 м пон уж Ух ух 155 о зп
Ве дхв ага Бі бів бух сі Бі «ТУ бу бек бі Бу ту піу ще:
НУ се во, сх Жаг деки ія сф й мав вве і» жде ми, Вик ще ма сію Бі ді біу Заг оачо КіЄ Бій Мет тв щіІпоОе? вгО оз Ба ув ї 228 ре «5 ЩО вк із Бак УЗІ і йхзв ага Уві тВЕ жів тТве СУ чі Бак «ве вгв зак ді вег УВІ: б5іу АЗОВ ОАБЦ УВІ Їй ос ВК осСух Бій о Зег веб го о їх ха тет 245 «5О 55
ЗвгоУЗ! ТгО его оАжхп ВВ ів) бег отгвоТує бів сів бух Бо дію бух й ЕН г І ще ЯК ді: БВгК щих ми фен тів тек біз віз хаг рії ви отїнг дек о бім Ууді дів ВУ КУ Бан бец бі БУК цій від оз був Ге ТЕ Заг щу ж з МУ зак й ї З я ЕК.
ВвРа чвг дк рве ве Бі 5ве щі ер обіУ Твб ща Ве ТвВг ре те го ЗК Аг вла Заг обі Веб оБіжЖ Зег оОБРу їв ЗВ КИНЕ Бо веМмо й 290 5 Зо їі Зек 5вг оре) бій го біз АБО вве АЇв ТК отже тТее сСже РУ ПІ о що 35 ї3о я с - Зк че схе зум сю Кф ух. ке ях єожтітах шу рах кох цк
РУ Тут ек щак Ті бег аа ТЕ о ТНг вв обіу Суб пі ТВг рух У й т щі ло Й пкт туту Є н ту т їх 125 330 315 бін Ті бух Ага ТВг ка» ЇУ «ЕК КО «бій БІНОК «33» цтучНнИиЙ е-де ля же и ку око ваш зх зів ОК мії «сеї» Варіабкльний демен важкого лавцюєа База «Ну 17
Ка УТ ке; Ши зму Фбакаж «тт: и ух у: їж жо су ду із жаї бій бе фею бін дек біб Біб бі без уві ій Бе бі Ру
Я є ме тк х Ві ії 15 чаг ів) го сви его Сук йаїд маі 5егб обі їі Ах обу вк оааий Ту о 5 БІ 73 ет ще пф хх хх дошк НТК жи Ос хх они на и нина ШЕ дів тів Ап Тур Ущі аг Бій від вто іУ фу СУБ іа бін тер лів 15 40 35 ці ків лі Тер Аів явг о біж тТигботТпР ОБОВ тТУК Аа Те Те оАія ух в 5 о ко дових Кі ефе с и А в ІН В А З НН он м
ЗіУу аг5 ве тБг о зів Зб дге Ащо Зег о тТВе оте УВІ Туб Без бій Ме о 75 щ дяп дак оівзч ага АВ Бін аа тТВг АЇвВ о ЗАії Тук Тут Сух Аа Ага тв 5 З Зх с ат они нон и ним Не їх бух бючащ АК кт о на тові г ма! РК; сім їжб вас о тТНг оаів вго тб вне дщеіку твор обіЖ вій іх
БРУК «Км " --х шх В
МК Но Зв г обео Уві те УВІ бюг бе: 5 «са ЇВ «В1їх 110 «іш БІЛОК
Кельн ; зе ізіваціх «кії» ШТУЧНИМ
КК» туту нн у ух пізааевмої ге іт НН Ка
Ес варізбаельнии домен люгкого ядзницюга Я «Я. 18
Чи ЧИ що кі мк у диву бал бах ту мо У хі Ж ву. дл ут ех
Ав тів УдвЕ меї Твеобій баб Бге Зекобак Уві Зк о дізв его Уа є у ї З 10 їз
Ач ага УВІ ТВР Ов тТвВгосу5 Бій Заг Бек Бгто зве омаі ТР вк АВ і: ЩІ Е зе щі
ЕЕ Ка Хо пан а АН А В ИН и НН и а І А ПН НИ ЧАН и НИ вне осіви его тТРе о тТУк бі оБіп вух РО піу фу від ВР Бу Ву БВ
БЕ ах на и ОВ Око КЕН бі Фе ву ую ил уд» славу й у М орки
Ті тує біз дія бег обу геву ТК охвб Бі УдДі ргО хвг арРу впе г ух 5 км Кк йпіУу двк обі Баг бі ТВгОоАЗО Ве Твен тТВг жів бЗегобег бе бів 5 то 5 що
Є че сс фа ск о влу фе ух о фе Мо жуки шу в фе ки ик кю др в
Рко бін дав Ба дід тТвБотук ту су пі БУ 5 Е У ТшЖк ваг ме Те
Ха жу тех
КЗ ЗО щі ес аа ТНРОТВе вне 5іУу Ст Сі ТК їх ЩІ бів тів гу й зр х т й й З й «вух щі 105 О «ЕМ» 18 кни так «Кі» 55 м: чихе Кі ми кеш БІЛОК «й» штучний хро «їв Важкий ланцюг гай ев іхбаі- Бач «ню З тру а 5 м сен ау ху им ше жі ДУ узи лях ух ів маі іп би баі бів баг одіУу БіУу іу без уді бій рго ціу піу ке З ЕКО ке в У не НН ка в а и НН кт пз я хо фура жи джу Ше о как іву Ага іви ек сСух ад вій его бі БЕ о тТве вна тТАг ОА Ту
КЗ; 5 КІ сте тів ні ТР о її ака бів аїд вро сі ух пі іви бін тво тд
Бі бів Ні тк Гі Ага Б вія ВО сєЯРру УК щі ви БР ОТГ ді чі З І ХЕ У СЕ і 35 Б За паче шНь яку в жк Фах ух в кову. току Фі тує сус Ак могу б чих дів Заг жтв зак о вРбБ Бак БіУ БіУу ж ТВ ТУР ТУ дк ар ве ха
У За щи : ок доп іх чу СМ де а коюча ко дк ке ск щ- дк туш ких ів піч ага Бл тб Ті хес Аге авр ай АТЗ вух дай хек ов Ту мо і ЩА ах ре.
ВУ То ха ВО : их ж че Со 1 сх М я ху нн А и З НН ИН
Бей бів Мет Аха ЗеБ їм ага ав бів аб Те дід Уді Ту Ту" Суб
КЗ ФО 55 чн кож Ж Уа їх се Ге щ- зчам ке они Шон не нин від тик Біб Бі біц біУу Хів вне а ТУ Тео У Бій бі ТО ев що з05 о
Уа троха Бек бак дія Ве Тйг о гбУух пі БкБОо 5ве уд вва вро рев 15 25 7 га Сет щи хх пух фах соту туї хх зах я ії п иа и я
Ата го Бек БЕК і Бек Бгеозе іш не у ж від Кх ід ри ві Ж КУХ що ї135 БМ ін Уві вже й тТУук Ве ко бів вро Зав о тТве УБР бек отого лав Зм п чкк дек вона зах 150 ї55 БО 21 їх Божі: Ж бра вх га дмах сту ЕМ ах бвечу Ж згх ї вм їх Я чіт іа їву тТБг жає біу Уді ні Тиб ве вВкго Ята Узі фев біл олек 15 170 І ев БІ Се ТУК щаг Ка йпег оба о Ууді Узі С ївВг УВІ РРО аб бер Берг їх ї155 що мен сту тТВк бів тТВг о їУЄ 16 Суб жа Уві дев ніх був га Берк овал бю Я ту З 55 зо КН 3 и - с і чо з-х ках ту тегу Живу ух шооєотуют КУТ Ук з, щу г
Тв був щі др гу Бу5 УВІТ бі БР вух Ваг Сух век Фіу єту пу
З г т Й зе У;
Ка А «ок г: ке їх я пень и и НН и в и АНА ОН и В НН НЯ сі ЗвгоБіб «і бі Бі аг обі щі я БУ ау зго А І Бе ц пу в; х; Ж ху ? Е чт Е зай
Ка : З хз де. Ему івн бів зво обі біб Біт сен УР бів Рг біУ біу Бек овен ак Бей зах Й 25 ЕЕ ета дз я ще Кк і: нщ; кран у ин те НЯ ому дм ж Чем ко оч я ож кі за" одух Вів УДі ХвгопіУ хів хв оіво Щек АБ ту ДІВ тів Аж Тр
У кв ян п т -х тх
БО шах Ж з х. що ау че тре ве с охо вуж кова у скат Ку «хх кро ско чві дга бік аїа вБго сіУу Уу5 Сух сви Біб Тер жів бі їТе тів те Не о схуу т т геї "І ев с - о шт пев ши ей, ке и ке Не «що ічом г доусу КМУ СККох віз бак обіу їй ТВ Ве ТУг дід ТВг отгройіа бу Бі Ак Ре ТР: сих 7 ее тус
Ка щ ГЯ я і Ш п ОО
У дх ман в В АН а НН З НУ ЖК дес Кок і св доз. їів 5еб ага АБ щег о тТВае їВг Уві Туг сви бій МОЇ Ахп Бегб обай Ага са ук в и те т сгускодх оз я
ЕНН що 315 32о т ий хи ТУ Ка ех ЕК Ас в а не и А Как хи мах хи фун о бю ух ій біз ар о ївгоаїа УдіЇ ТуБ ТУг Сув Ді АГРО ОЇВРг УДІ БгО о бішЖ Ту? їх 350 5 ек тв АїЗ вго ТУК РНЕ АзЗВ ро ТР бі бів бі тк вер о Уді ТВе - У 7 й ож т 7 кт
З З ух. АЛ - - Ко
Уа век ее зве «ев го ха ЗО «іх Білок «АЖ ШТУЧНИМ «ай х ие Ве Рісзубітіхій прю Зі С З ча се ЖИ ні кути ямі ВХ хайіїх Легкий лами Бай аебосіхай Банку с І «НН ей дез її бів мес те офі Зак о бго Бар о чего рен сег дія чекові дію
Х 5 10 ІЗ «мгу МТ жах Ж Жах чек ков Ж зжмію вки ко ж кутя ж ак сю я
АВ АКЦ УВІ ТЕ ОЗІіВ ТР оСуУ5 Аго іа їВеобіп Звг ЩЗіє тує Ай дід з а 30
ЧК Ом хомута КВ ах ои ох че я хи ої хи АТ. соки поря чн кчИ оо ін ага тк оту ШІ біп бух Бго бі У АВ вгОо фу вм о рец Її ї5 І 45 шк хх Чек БУХ еф ах З чення Кей Уч хх даму окт тк св кс
Ту ака АВ аа Тв оре нія тТВг б ТУ УДді Бгто Бег Ага вне как дів т пт я ще ми
ЗО 5 Б пед еф ду рт ЖК ся соту уж сут я хх КИ у СоОЖогукх Ума ве гу хек сту Заг обі ТВгоазр бек тТве Бон твк ої бек бек зе сів рго 05 М 5 КО ча ке паб Зх Кеш зи чуми оно он Не ума Жугх КІ є зів ве вне дія Таг о Туг їжг о Сух вів ої Ту тб АБО ТУ его еВ 85 З 5
Те ве бі і бі Твгоруз Уді бім її бух Ас отТнк УВІ Аа лід зо 15 М ї Ка че ж я пок о є ани мч -- Ко де дж В пк ца
ВР баг Узі Ве хів бе вБко бро Бек аю бін бій зем бух БвгоБіх 115 130 їях шк ч а што шноя дж ТЕ гежі 7 ач В н кож де мох кій чи сах Кк ку, з К
ВгоАТа Баг оуаі УДІ Сух ів ів) дБ АБИ вва о Тук РГО АГРО ОІВ БУК а тк то
АОАХ Я КК
Анни и и ЧИ те нд у же сої яву ат ж у жим аву км
Був УЩІ б ів З гвобух жд! АВ АБ АВ СМ З їв чек Бі У вп звговБій 14 М хз зо
Сів как оуУуВІ ТВЕ ОбіО бай Азродег вух АЮ бат ТВГОТуг щБК веб охег «шк 7 акт х й че 1655 178 175
ФвротТВе бе) бе ву бер огує Від аеро тук Рв фу Мі Бу хар тег іо і155 о зі сте ім мві тв ні бів Біу зво ев зер Все ді їве дух Баг 7 спри БУ ча М їз ВО я се щ-х ач Я суха мом ву ву жи у таж кв ект жи в вБе деп Ага іх Сів сСух Звг обі Зі бі бі 5ек БІТуУ БРУ ФУ 51У яку т 7 т прах М В й 7 ззЗмА З й й й ж КА БЕЖ -к джу шт ки ких Ук че Є ую ку ж че Не 7 хх «оку оз ек дек біу бі «і іш Заг Ах її мі Веї їВгодів его вта вк ав так 7 й Й 7 тек Й ЗУ зай « Й 5 ло КІЗ «НЕ
З окоуух п. дев их у йому ду зим Мах ку сно шу сх кІхт ті хек АТа бек узі Біу ав Аг УМ Ту її тк обу» вій хвке охег я дк ко я ва вро їве Узі Те» хег дал Ба фу Баг тер оту Бій бій Ух Бк Є1У а ЕК Й 273
ЕЕ А Ба -к лох Ук їж щік й я КЛ біт ах АТ ож НН я чия сх флит и я
Буш Дт РІ КУ ВМ бу СТВ тує СІ Ав Зв вух Ба та пу ах зоа зи
З Ко Яй5
КУ ск Ткбж хх зе ЗБ; чен у же тв ху судам тв кі су Ген зе чі щ
Уа Бр Зег айва Не Бух Біу 5ег обі его обі ТВК Або вне о тТАг Бу тркїку т й Я ї т "Ії й
ЩО я Ю не ше: чи мчч я ен ЧАН я щ ; Зх сопла тух ек кеОче:
Те жів 5ег дак рво біб р Біб дхо бе Аї Ве тТуК Те Су» БіУ 05 що 35 З бі біу ТУК чегБ о5ег їі бег Ач ТВк о ТВве овве Бі Ку бік Твг ог ув 385 КИ 305
Уді січ її ух
«8100х 1 «аїї» ЩІ «в12» ДНЕ «каї32 Штучна «КОХ «В8ї» Важкий ланцюг дгБ-Ба5(ЦНУ, що включає підерну послідовність швА Косої «400 1 Що зідзадаазоаа стосізтаВс ззвісзсадіз осоасівассЯа зії сассас соіоососав 5
Фствзазвактс застуоісоа чістооаозс дося асзсокоЗасо овЗсстосох 1284 сІстстІоїд саосазоасєчи їіжсасаттс ассзастаса діяіссвсто пас сву 15 «сагсадота азовістода атапотасс їстатстстс сасскуок кстЯвсоКАЄ 240 тассотоавст стоїсазаааа сет свсе аїстстсоата збвасосоза вввсекстеко З тасстосааа їчаастстст ЗсоїосваЗав овівссосаО хоатвстаста соствсуц 100 поатчавоуців тет сааста стозчсаїсЗО Заївсссссоо застосо опвосЗсесих о зсзаазццачзсс сзаЗсасткк сссвсжцест ссоксестста авіссасстк соазтовкасе ва якасастоо ЗсассКоах озназастає гісссадаає сао ВвеКУЄ спо Ве 540 кстаЧчецсас хоасстстУд соїтсзсасє сттссзасвао тстссадіє сістоЗТск ВОЮ тастссстоат стадсоатоаці тассаттссо сте сто тодатвстса застає БО тасвасоісв зссасвавссо зкЕссзасаєс запоїсовса адазаасікоа оОссовантоє 20 тагачтвачао ізо зозсодазУє додассЗато чедасавсай спас я "ВО стосікуваї стзозозаУЗ ссізЗсссав сстодаЗзоЗа аестосест стсттосасв ха зказосаоаса ксофасстдаЯ сСявіїтасаск атсяяктаао гас гссудочааЗ МІВ, їдіктадвах чзавісозчгаї загтаторосс адіосодасоа єсттітатоє аску БІО; зайздаловт ттасавтїац ссоподсяаах зосдлаваса ссатокаЕст ссаватоаає 1020 чссітсржкоза сядзадасас пдосодтіятас таттотуссс Зсастаїссс аддгтатаас 105о астасассст австтсовієт чтадосасав дочассстоо тоааскотсїс заЗеїва ТУ «210» 22 «Ії» 074 «зах ДНК «-1їх штучна «ей» | вин «23» Важкий ланцюг АеБ-БЯа5г НУ «3005 22 чаацтітсяєс тоздтссаціс сболезсчоЯ сстуутссаЗс стдазоавац сс сг Бо хетЕодїноао сааосааткх сзсоттсвес аасізсЗЯтв кссастодах торба 1585 ссапаїзаво ассжосзако опївесетсх вестстесса ствутуоксх асо кає 18о «асаАстстО ссвзавостся сКтсассзес КТС огЗата зсзсеязвзава стос све ве си ааатод ветстстУсо гусаззазат ассосаоз асівссаєос асо З чавоаостакст їсовсктасто зчоохсвеюеє ассктозтва стятстсава сосестаєз МО звасзсссав асчгтттссс вості ссо тсссєтавві скасстскою кощасаєх 20 зсгастодотІ осстоЗідаз вазстаєктс ссадзассвоа ссассвє стдаааккесх ЧО закчасвстоаз сстсгозсак сасвостеЕ ссацсвЯсЕс їссвакстжс такса є 50 тссстатств зсатоакссас сотка к сок псїсКвр как сеове стасвестухє м засоїєдисс всаавсесцтс сзасзссазо чїсЗасзнав вавссчасс вас ооо зчтоцачаса сроотсазоа тебЗазесоза ассочотоазадй ЗтЯпсавсова ага 728 сітодвісту озуазоЗдсск аасссвасс зЗапоазаакс сосок созкасвока 790 длдссвсоассв асстожнсад їжасЗссяіс австоЗзатоа басавостос чадолацтої Ба тізсазсчав їсоротатвак зЕЧвОссаВі зЗоасуасст крівхасівс всдоусдана ЗО зоазоазтсха сваттвасса оЗасзаївоє азааасєзсся гебзкстска загтазаєтеоє збо гтдсдацсва водасасозс Фхоаквктаї есе тсвса стос стаз сасх мно чсІвссстВвсї тсозіссО ЧозасвзЗзча ассскчасол сіток саао гва 1078 «М: 83 «й1їх з1ОоКЗ «212» ДНК «2ї3з штучнВА «0 «ййЗ3х Легкий памуюг АЯВ-ВА50М Я), що включає лідерну послідовність тра косо «Нюх 23 акфдалазази казстаксоє авітасазтв осухтовсто згасає судна БО іонів сс зодізассса ввосссванеє арікістссоа сао тава сао оки 120 зстйттІасст дікакосзас ссвовоасатс ївсзасоасто соасктасн гово чаа 1 сесії назо сессазавсоє єсідаксітає звсозоваасв стккосвіяс кофе ко КЕ сітка їст сіЗсваїстЯй біс Ккизса аВсІстасеЄ тоазссахстес стсістссВа 330 ссоазазатт їсзсавсста сстастассмь сазсвстасо авісасссакт засад ї36п «щізЗчівсси аваціїфвшщає саазсвіасо згасає тс сабо свтстїссв 42 ссозтстоасо засзасісна вістовтаєт зстстоксвя КТС стсск заст 50 тзтссзста яаосозавої ссвліЗЗава пісзасвасв сасіссвокс гаусазстех В сацдвастстоЗ іїпассдаасв оцвстссвай засіссаскж асестктас каасасскто во астстзсся ваЗзсазастіз сазодавсас здазтотаєсо сікосозаце тасссатсац БО чжскцваост скссоаЗзесвЄ свзаїссттї забєвдазвоЗ аа сзастудкац я сесозізазе стіссозваз тост а зчасакасааа коасскаоцвоа тесттсатсва ко жівкіссасає ссзїтозсоа заФфзатоаея аїкасвізксо ваапеєтсоїо свасЗі сою що апсдатжттс татсстїЗута ссазвказдчава сенат стссалавст ства ою зззасктсца ваєтсвссац тапажЕтсса тсаяпаттса атоадстстов яснах че ззвЕсїсзсої їозсваїсвй їтсостасав ссадачеасх стосодсста статтотооу 1020. зЗазоітасз зіаасатвав тот асцпяся фін кОосо стастадюе зраватсайа 1050 сотасстав їз «ах 24 «й11з 31026 кизо» ДНК кві» йтУучна «ее «ййй» Легкий ланцюг а285- 64514 «А 084 пататссача тоасссвоаа сссаасяНЕ стос сота савя СОТ АС 5. аттасстУтс зіосаассса даЗсатстве Масосжтстов сЕтоотажся осавнаассЗ ї5О
Фа: канаасЕссї зЗасстасває зспаасасЕс пис аАсТ БСК 18 со стстО состав Зоб совас сетасесЕЗа сеАТсСсСсСТС СЕЛО 4 жщннешвтетКоа совКстастА стОКсаВсяя тастасцЗатЕ всссастцас ЗУЄ БУК етассяано став тсав встає зсавстса сут св ссо 360 тстозсзавс пЗстсанатс тата стест сет сс стода Каса 420) сснтодаєв содваавісса отозаанвіс засаасосас сссаустою гтавстссяо зво
Чааєстотсоя ссодисацча стссядацає їссасстас сс сао 340 стеєссвааво сазастасоза задасасава оч асасюх чсчайаєкас ссассаує БОЮ стозасстс сооттассяя атсстттаах йоду є зо сшасою созсацєцох БО позах ссооаоохос соотсацас ніасазакоа сссадазсс сао та ссосотссо тЕшасюакаю сенс какк асакиксаая стою зе скенаНає 280 дасттестаЄ ссснраєся ясадеяассв сопе аастк сазаасесе Застава чай шестстаас саше ацетескся зо ссаако зескстоакс кс З ктсавсеєтив саатсаетс встоснасса падоавсттта садестаєта сен ЗО шчестасаата осатаяотоа баса гас осоота став авесааасце Мо всестад зе «ай» 25 кезі» 31 «вій» ДНК кхкій» штучна «аа «акї» Вджкий ланцюг вебБ-бБЯ5санНЬ, що еключає лідерну послідозиність ВУй. З «щК: о5 І ацюдатецЕ сосну скЕ сота Екс сткЕстаКса сдАсСссах ЗсясаВс БО часа стса ксозаЕстев засос оксеснрьКежо ас ст зсЗкесске 125 тагоасвоасаа чсцдастсас зкссвссядс гасочтатсс астодаттсоа сода сся 15 часазадатс хтадвасодає зодсстстатс кстссакста дбавсствас ясастассує 40 засестосса зазцссЯес сасєсатстст соутуаєсднсЯ сдавзнавнстс сссотасста 300 сауатоааст стстосуєдес аовадатаєс осачтотасе астосостає годсоаадтоуна 3060 зусаїстісо астастудод тсвооотасс стоотааєто ссксваЗзсас сскссасаяа 42 засссатсцц гстЕссссст Зусасссісс гссавазоаса сстстоЗзою сасаосодсс во стадчастдєс ходісзаода стасітсссс дзаассачтаз саодіЧЕСсУКОо овааскслоде 5 чЧсесстазсса дсабдсодстаса саєсттссса асідієстає звуїсстстоо асісгдссс 6пю сісвосаусо бодоїдассок оссстссвас аосттодаса сссадасєста сатссосаде во псоазігаєса адсссвоєаз саєсаацота дасаадавао стодаодсєсад ассккоттес 72о ззадотодсо атхссоддадо тоаасцатаєс дусоосоЗото оахссозасю сеадстосьє 78 зчзаатссоддао зсачастсаї асвасссода Часадісттс оса ссста соастраксх А чадаассцчасс тодлосазеса соссзсзає сідчтавзас абвчдсаєсстой чдааагсске Од) чаасоацчатс ссаттатато доставсодчаоа асдасстттї атоастасатоа васодадоаух 60 апактсасай тстсассюа їаатафаао засасавтох аєстоясацат оазастссстоу 4020 сааосадзаз агассассої їтастаттуї осісдсаста тсессачеєта гаасастоса 1080 ссстасттта асстасадоз дсааЗзасаєт стддксассу тстІсдацета а 1131 «2105 26 х«а1ї» 1074 - «212» ДНК Х «215» штучна . «20 . «223 Важкий ланцюг А26-б45сдноУЇ «4005 26 чашиносаос ссатсозосс стозацосцо сттодєссаде стодавовад сстасатсе бо їстКобусзоа садусоЗксо сасестсасє аастзвсозіа гссастодах ссатсадаєса 120 ссазоїаавно устано Збтазссксх акстскссос сстзогоксє дасотаєтає 159 соїдасксто ксададоатса сжжсассатс тстсаголго асоєдадада сістескає 240 стосазатуа астстссоса тосвдаадах ассдсадтоє ассассосос састоатувї. 300 ззазосасст ссдассассу ддоссаддоаї ассстдоатаа статстсавц састссіаса 360 зачоччсссес сучестссс сстодсассс тсстссазаа дсоасстстен одосзсвоса 420
ФфоссспрюсЕ асстуассав одчастасттс сссоозассоЗ тост тодазстсд во часассстоайа ссазсоцсц освсвсстЕс ссоЗсУксс тасацієсто тудаєтетає ха їссстсвоса осотодтдає сатдсєсстсс вдодсзосєстуд дсасссаоає стасатстос БО засусзпаєс асавоасссвя сзасассаво отодасааоа аазстоваєс сааатсттої ббо хссоададото зсоустсосоЗ зодічасопї ассадісасо доза ссоа адтесадсту йо сксОтоаасєссо зафкресодаст серсосаєссс пдаадсадіс тссесттотс стосостота Во тстадзатса асстдацсай стасопссатєс застддцдатаз дасзоосасс годуаааїуде 840
А стсцаакцца тсцосаскак асуоцстацх зодасоассх тЕтатастас цес одау КИ пчізоактка сзасстсасо зозЕзасазх аядласасао тесасетоаса зас Б стпсопацсво водакассеє свЕстастат статастсеся сесотсссаснь стакацеаКе зіо2Оа пкакссстисх тсСазЕсКоКО зеоЗсесвевк астссвекса сс ссцав спа чп74 «ах 87 «Вії» Щ0Б «212 ДК «гІї3з ВжУЧНЗ «ей» | Щщ Щ «бах Легкий йанцюг АБ-бБаЗ(3і43, ще включає лідврну песпідавність ВУ2.3 «НН» 7 Щ ас с ссовсасВеВХ сс стос сс косе Ба пзівієсвоз бозсссвово бссазвасва ссстссвсса асан сс 120 зІїІзсесатс остоасзвскКа ЗВсзсствк зве стев состав св сао 180 пдціззавоасас сззаастеск ззсстзсває зсвазсвете тесасаскОО сессКксскх ВЕ скаттїсіска сао с созтвсоаває ссСтастстов секс стаз 300 пзадатєстса созвсстаєта стоссзосвоа їастасовтх асссастоас зо оЗЕ 350 чаїзссзаза спооацатсаз зсоатасоата Зстосассат став сттсссссса 420 сстазсовосЄ застозВОкс коосзскєє сссостасех зсссоєкава свасексуас Ко ссхзововоб ссзаайтссвз зсоодзазако батазвсаскк сссавсссо ааМокссова 540 ззазвсокса сізавосавдаов сссазаоває зсссасстака осскзоаєао сзсвсетоавса. щ сковзосавод стозстасоз оаазвсвсава зіссзсаєсї осот вовісєвзводе їм сіоаоастсвс ссотозвсваав запсєкттаає зозпавоаоХ отоотодаао кас скадє м: зУакоотдпасєт ссооапосоао зозазосоає аїссвовтов сссвовассє кксстскота То зкоссзоато зсодзазсап зобіоаєтатх асстоссвавз остссссхіє аЗтсїосє що зажтїїстак «сгоЗзіассв оСапаавассє опазвазосїсє ставах смстасова Зю зсадосвдасє їсассзОсо0 сатвсссавес апоїтсаєбко осзпатоЗзокє бЗвазвсковає аро
КЕтасккстоа слатсісстс асіссадссє здаодасттєю ссассіатіа стосоді во 1п2о заїїдсвоаїа зсаївазкЗа їасозасаіїї зоатасодса ставазтдба заксаадєсаї 1080 ассІда 1050
Ук «ії» 3036 каїй» ДНК «ІЗ» дтучна «вед» І «23» Легкий ланцюг АгБ-БЯ5 НЯ «4005 28 Щ чаїтавіссВвоз тазсссзодва посзаасва стстеснсв осасвозсов сспроТавЄх по зктаєстатс чідсавсссвз дзосатстас яаасастстовЗ сота са ЗзсяЗаваско 120 ппізазосас сазазстссс дасстасвас зсопвасастс госатесою СОТ ссс 155 ститтсіста свістачЕс стоадізсооас Кстасісєтаа сеатстсстс тс 4 пазаастіка казок соєве о зсєтасовії авсссаскоає ЗК ка посассавнае стдзузссва зсатаєоокта остоасвккає стаксхтжсах сттссссссв їцо тстзаіншс застава тост сс їстоітатаї дсстоастоааа їавстїстає Я сствразаою ссзаавссса Зіозаозс звіавсассс стсваїссва ававсїєсссво 350 садацівся стуаЗсазаа стсазазааас сссасстата Зссттзосва сасвстоаса 540 стззасавоз стоастасов заязасасааа зсстасассс осо чвс асзусваое ГЕН стозвасксає ссезіоасадв заостотанс Зододазчазе запо стос є оо потоотоцеї ссефауаоцсоо допазосояс атссадатоя сссвдваессс ттссжстота т авсоскачіп їсспазазсзо засос зЗсстассаая ЗСсЕсККсТКС аск "Во зактїїстївї ссіовізссв дсззазаєсс ззаааоастс стадажттосе затстасома ло зсзаацсваає їсассвесуа соатосссвос ват свосЯ сао топа Зп їїтассстуа сзвЕстсстє астссваєсс озоЗасттєе ссзсстакта стасоЗгода Зо чассзсзака зкасазоакна саксавсактї пуазхосоЗоса стаазустез заставу 105о вста МЕ

Claims (5)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Злитий білок біспецифічного антитіла, що зв'язується з ОХ40 людини та сироватковим альбуміном людини, який містить: важкий ланцюг, що містить у послідовності від М-кінця перший варіабельний домен важкого ланцюга (Мні1), СН1-домен і другий варіабельний домен важкого ланцюга (Унг), легкий ланцюг, що містить у послідовності від М-кінця перший варіабельний домен легкого ланцюга (Мі1), СІ -домен і другий варіабельний домен легкого ланцюга (Міг), де зазначені важкий та легкий ланцюги вирівняні таким чином, що МНІ і МІ 1 утворюють перший антигензв'язувальний центр, а МНа2 і МІ2 утворюють другий антигензв'язувальний центр, де антигеном, що зв'язується першим антигензв'язувальним центром, є ОХ40 людини, а антигеном, що зв'язується другим антигензв'язувальним центром, є сироватковий альбумін людини, де перший варіабельний домен важкого ланцюга (Ун1) містить послідовність, наведену в ЗЕО ІО МО: 1 для СОВ-НІ, послідовність, наведену в 5ЕО ІЮ МО: 2 для СОВ-НЕІ, і послідовність, наведену в 5ЕО ІЮ МО: З для СОВ-НЗ, а перший варіабельний домен легкого ланцюга (Мі) містить послідовність, наведену в 5ЕО ІЮ МО: 4 для СОВ-І 1, послідовність, наведену в 5ЕО ІЮ МО: 5 для СОНВ-І 2, і послідовність, наведену в 5ЕО ІО МО: 6 для СОНВ-Ї 3, де другий варіабельний домен важкого ланцюга (Ун2) має послідовність, наведену в 5ЕО ІЮ МО: 11, а другий варіабельний домен легкого ланцюга (Мі2) має послідовність, наведену в ЗЕО ІО МО: 12, ї другий варіабельний домен важкого ланцюга (Мн2) і другий варіабельний домен легкого ланцюга (Мі2) з'єднані дисульфідним зв'язком.
2. Злитий білок біспецифічного антитіла за п. 1, який перешкоджає зв'язуванню ОХ40 з ОХ401.
3. Злитий білок біспецифічного антитіла за п. 1 або п. 2, у якому є пептидний лінкер між СНІ1- доменом і другим варіабельним доменом важкого ланцюга (МУнг).
4. Злитий білок біспецифічного антитіла за будь-яким із пп. 1-3, у якому є пептидний лінкер між Зо СІ -доменом і другим варіабельним доменом легкого ланцюга (Міг).
5. Злитий білок антитіла за будь-яким із пп. 1-4, де перший варіабельний домен важкого ланцюга (Мні) містить послідовність, наведену в ФЕО ІЮ МО: 8.
6. Злитий білок антитіла за будь-яким із пп. 1-5, де перший варіабельній домен легкого ланцюга (Мт) містить послідовність, наведену в 5ЕО ІЮ МО: 7.
7. Злитий білок антитіла за будь-яким із пп. 1-6, де важкий ланцюг містить послідовність, наведену в 5ЕО ІО МО: 15, або складається з такої.
8. Злитий білок антитіла за будь-яким із пп. 1-7, де легкий ланцюг містить послідовність, наведену в 5ЕО ІО МО: 16, або складається з такої.
9. Злитий білок біспецифічного антитіла, що зв'язується з ОХ40 людини та сироватковим альбуміном людини, який має важкий ланцюг, що містить послідовність, наведену в 5ЕО 10 МО: 15, і легкий ланцюг, що містить послідовність, наведену в БЕО ІЮ МО: 16.
10. Виділена послідовність ДНК, що кодує важкий та/або легкий ланцюг(и) злитого білка антитіла за будь-яким із пп. 1-9.
11. Вектор клонування або експресії, що містить одну або декілька послідовностей ДНК за п. 10.
12. Вектор за п. 11, де вектор містить послідовності, наведені в ХЕО ІЮО МО: 22 і БЕО ІО МО: 24.
13. Клітина-хазяїн, що містить один або декілька векторів клонування або експресії за п. 11 або п. 12.
14. Спосіб одержання злитого білка антитіла за будь-яким із пп. 1-9, що включає культивування клітини-хазяїна за п. 13 і виділення злитого білка антитіла.
15. Фармацевтична композиція, що містить злитий білок біспецифічного антитіла за будь-яким із пп. 1-9 у комбінації з одним або декількома з фармацевтично прийнятного наповнювача, розріджувача або носія.
16. Фармацевтична композиція за п. 15, що додатково містить інші активні інгредієнти.
17. Злитий білок біспецифічного антитіла за будь-яким із пп. 1-9 або фармацевтична композиція за п. 15 або п. 16 для застосування в терапії.
18. Злитий білок біспецифічного антитіла за будь-яким із пп. 1-9 або фармацевтична композиція за п. 15 або п. 16 для застосування в лікуванні або профілактиці патологічного порушення, яке опосередковане ОХ40 або яке пов'язане з підвищеним рівнем ОХ40.
19. Застосування злитого білка біспецифічного антитіла за будь-яким із пп. 1-9 у виготовленні лікарського препарату для лікування або профілактики патологічного порушення, яке опосередковане ОХ40 або яке пов'язане з підвищеним рівнем ОХ40. Зо 20. Застосування за п. 19, яке відрізняється тим, що патологічним порушенням є захворювання, вибране із групи, що складається з алергії, СОРО, автоїмунного захворювання, ревматоїдного артриту, астми, реакції "трансплантат проти хазяїна", хвороби Крона, виразкового коліту, цукрового діабету 1 типу, розсіяного склерозу, системного червоного вовчака, вовчакового нефриту, тяжкої міастенії, хвороби Грейвса, відторгнення трансплантата, гранулематозу Вегенера, пурпури Шенлейна-Геноха, системної склеродермії та вірусного запалення легенів.
Фігура 1 о ет» Ех З у Перша вщнабетьна лілянка легкого ланцюта МІ Перша варіабельна ділянка важкого ланцюга УНІ Константні ділянки сКарра Б сні г Друга варіабельна ділянка легкого ланцюга МІ З Друга каріабельна ділянка важкого ланцюга УНІ () Дисульфідний зв'язок Шо
Фігура 2 (а) Варіабельна ділянка легкого ланцюга антитіла Аг6 (520 10 МО:7І рРІОМТОБРОБІВАБУСОКУТІТСВАТОБІТУМАГСАМУООКРОКАРКОТІ УМАМТОНТОУВЕВЕ БАБСБОТООТОТІВБТОРЕОКАТУУСООУХУОУРІТЕОООТКУВТКА. (5) Варіабельна ділянка важкого ланцюга антитіла А26 (5ЕО 10 МОЯ) ЕУОГУВООСОБУОРСОБСВСОЗСААБОКТЕТМУСІНИТВОАРОКИаПІМУАВІВВБОСССТУХО ЗУКОКЕТІВКООАКМВРУСОММЗКАВЕОТАМУХУСАТОоОСЕСТКОТИСОСТЬУТУВа (с) СОКНІ: мУсІН (5БО ОО МОЇ) СІНО: чІБРЕОССІТУТВрБУКСО (5ЕО ІЮ МО) СсОКиЗ; сОоЕСІКОУ (5ЕО ТО МО:3) СсОК; ВАТОБІХМАМА (5ЕО І МО:4) СсоКіІо: МАМТЬНТ (ЗЕО І МО:5) СОКУ: ООУхрУРЬТ (КО ІЮ МО:б) ше (9) Легкий ланцюг Бай-компонента антиліла до ОХ4О (5БО 1 МО:9) рРІОМТОВБРОБВІВАВУСВЕМТІТСВАТОВІУМАГАЙУООКРОКАРКІКІ УМАМТЬНТСМУРОВЕ ЗАБОВОТОБТІТІВБСОРЕОКАТУХУСООУХУОУРІОТЕООСТКУВІКАТМААРБУКІКРРЗОКО ЕСКВОТАВУУСТОММЕУРКЕБАКУЮСЧКУОМАПОВОМБОВЗУТЕОрОКрБТУВОВВТОТЬВКАВУ ЕКНКУХАСЕУТНОСТОВРУТКВЕМНВОВС (г) Важкий ланцювє Рар-компонента антитіла до ОЖЯО(5ЕО 1 МО:10) вУОСуВВОасЬМОРОСБІОКСОСААВОКТЕТМХОІНМІ КОАРОКОПЕМУАВІВРЕОсИТ КО ЗУКОВЕТІБВВРРАКМВРУТОМИБІКАВОТАУУУСАТОоСКО ТОЖ ТІУТУВвБАВвТКОРО УКРГАРОЗВКБТВОСТААВОСІУКОУКРЕРУТУВМЧМНВОСАГТОЗОУНТЕРАУТОВБВОГУБІ БУМ тувваООагОтусМучнкКР.аМНТКУуУрККУВРКиС
Фігура З (а) Важкий ланцюг Ру-комповнента антитіла до альбуміну (З5ЕО ПО МО) ЕФОІЛЕБОССІМОВОСЯБВІБСАУВСІРІОЗМУАІКИУКОАРОКСІВМІСІІТМАВСТТЕУАТИАКСиКТІДВОМОК МТУХІОММЧСВАБОТАУЧУСАВТУРОУВТАРУКрІМООсТЬУТУВВ (в) Легкий ланшог Гу-компонента антитіла до альбуміну (ЗО І МО:12) ПІОМТОВРЕЯУВАВУСОІВОТІТСОВІВВУЧВМЕСВИХООКРОКАРКІПІУКАЗКОТВОУРВКЕВОВИаВОУВОЮтУ ІБЕКОРЕОГАТУУСООСТВВІЗОТТЕОСОТКУВІКВТ (с)/Никер І (БО 1 ОМО:13) зссссзсосстосося (а) Лінкер 2 150 1 МО:14) еще еененевнеек (ге) Важкий панцюг Аз.
Раб-(О45,04,С45)-6454а5РкеНУ.ЗЕО 1 МО:15) ЕУОГУЕВОСОБУОРОСВЬВИВСААБСЕТЕТМУСІНКІВОАРОКОБЕКУАВІБРЕСССЬТУУВОБУКОКЕТІЕВОВА КМЧРУБОМИБЬНАВОТАУУУСАТОСЕСТЕОУМСОСТЬУГУВБАЗТКОВВУМЕРБАВВВКЕТЯССТААЛОСЬМУКИХЕ РЕВУТУВИМЕСАТТОСУНТЕРАУСОВВОСІУБІВВУУТУРаЕВЯБОТОТУІСМУМНЕРОМТКУРККУЕРКОСВОСОЄ вВосостОобОобБЕУССЬЕВОССЬУОРООВІВІЬВСАУВСІТОНХУАІМЧУВОАРОКСІЕМІЙІІМАВОТРЕУАТИАК СЕЕТІВВОМЕКНТУУСОММВІВАЕРТАУХУСАВ Ура ТАРУКОІМСОСТЬУТУВЕ (0 Легкий ланцюг А2О КаїмізхОа5)д-вамі Кн ЯКО 10 МО:16) ОІОМТОВРЕЯБЕАВУСОНУТІТСВАТОВІХМАСАЙХООКРОКАРКІЇУМАМТІНТОУРБВЕВАВОВСТО ВІЇ 5ВІОРЕОКАТУУСООУХрУРОТРООСТКУКІКВТУААРЕУКІКРРАОБООКВОТАБУХСІІНМЕХТАБАКУОНКУ оМАГОБСМБОКОУТКООЗКОБТУВЬЯЕТОТОВКАОУЕКНКУХАСЕУТНОСІВБРУТКВЕМВСЕССОСОвОСОСВО ОбОЗБІОМТОБРЕУВАВУСОВУТІТСОВВРВУМВМНЕВНУООКРОКАРКОСІУЕАВКІТВОУРВВЕВОВОДСТЮ ЕТОТІВБІОРЕОКАТУУССОСУБВІВОГЕРсССТКУВІКВТ
Фігура 4 (А) Варіабельний домен важкого ланцюга 6458НІ (560 1 МО:17) ЕУОТЬЕБСОСІУОРОСВЬНЬВСАУВСІВЬВМУАІМННУВОАРОКСЬВНІСІІМАЗСТТЕУАТИАКОВЕТІВВОВТТ УЧІОММБІВАКОТАУУУСАВТУРОУВТАРУКрІМООСТіУтТУВЕ (8) Варіабельний домен легкого ланцюга бабі (5ЕО 1» МО:15) ПІУМТОБРОВУЄАВУСОВУТІТСОВАРЕУНВМРЬВИТООКРОКАРКЬСІУВАБКОТЕСУРЕВЕКОВСВоТОЕТЬТ ІББІОРЕОРАТУТССССЖВБІБОТТРОСОТКУВІК (с) Важкий ланцюг Аг2О Раб-(3х045)-64545Е4(2Н1) (БО 10 МО:19) ЕУОПУКЕОССГМОРОСВІНЬЕСААЄСЕТЕТНУСІННІВОАРОКОСЕНУАВТВРЕССІТУУВОВУКСВКТІВВОВА КМБРУБОММВЬААКРТАУХУСАТОСЕСІРОХИООСТЬУТУВБАБТКОРБУЕРІАРБВКВТВОСТААрОСІУКОТЕ РЕРУТУВММЕСАГТОСУНТЕРАУБОВБСЬУВІВБВУУТУрЕББІСТОТУІОМУМНКРеМТКУуВККуКРкВсВообо ЗСсСоБССССЗЕУОМОЕБСОСІУОРССВІВЬБСАУВОІ0І,ЗМУАІМИУВОАРОКСЬЕМІСІТКАВОТТЕТАТИАК СВЕТІБАОБТТУХСОММВОКАВОТАУХУУСАВТУРСУЄТАРУКОЬМСОСТЬУТУВБ (4) 0 Легкий ланцюг А?о Раб-єЗхО45)-64545м 21) (БО 10 МО:20) ПІОМТОБРУВІВЗАВУСОВУТІТСВАТОВІУМАГАЙХООКРОКАРКІ І ЯМАМТІНТОУРЕВЕВАВОВСТОВТИТІ ВБТОРЕОТАТУУСООУУОУРЬТЕОССТКУВІКАТУААРБУРІЕРРІВЕСІКОЗОСТАВУУСЬСММЕУРЕБАКУСНКУ ОМАСОБСМЕОВБУТВОрЕКОЕТУВІ ВТО ТІ ВКАРУКЕНКУХАСЕУТНОСЬКАРУТКЕЕНВСВСВССООБОбОСЕ сОСОБРІУМТОБВВБУВАВУСОВУТІТСОВЕВРВУЧВМКІВИХООКРСКАРКІЛІХЕАВКІТеСУРЕВРКОВОВИТ ПЕТІТІВЗВІОРЕВРАТУХССОСУВВІВОТТРОСОТКУЮІК Ї
Фігура 5 шо а) ДНК, яка кодує важкий ланцюг А2о-б45(еН), що включає лідерну послідовність ОтрА Б.со (550 10 МО) ше АТОААСААСАСТОСТАТАЦССАТСОСАСТОССОСТАОСТОСТТТООССАСССТОДСОСАЛОСТОВАСТТСВОСТО СТССАСТСТОСАСОСОСОСТТСТОСАОССТОВАСОСАСССТОССТСТСТСТТОТОСЛОСААССОСТТТСАСОТТО АССАВСТАССОТАТОСАСТОСАТТССТСАСОСАССЛОСТАААОСТСТОСААТОССТАСССТСТАТСТСТОСВТСТ ОбТОСТОТСАСОТАСТАССОТОАСТСТОТСАЛАВОТСОТТТСАССАТСТОТСОТОАТОАСОССАААААСТСТОСО ТАССТОСАААТОААСТОТОТОССТОСАСААСАТАССОСАСТОТАСТАСТОСОСТАСТОСТОСТОААСОТАТСТТИ САСТАСТОСОСТСАСОСТАСССТОСТААСТОТОТСОАОСОСТТСТАСАААСОССССАДОСОсТтТтТтТсСсоАСТОССТ ССОТОСТСТАВАТССАССТОТОСТОСТАСООСТОСАСТООСТТОССТОСТОАААОАСТАСТТОССАОААССАОТТ АСССТОТСТТОСААСТОТОаТОСАСТОАССТОТОСТОТТСАСАССТТТССАССАСТЕСТОСАСТСТТСТОСТОВО ТАСТОССТОТСТАОСОТОСТТАССОТТОССТСТЕСТТСТОТОССТАСТСАСАССТАСАТСТОСАДСОТСААССАС АДАСССТОСААСАССААССТОСАСААААААСТОСАССССАААТОСТОТАСТОСАССТосоосостТовестосАоИс ООСАССОСТОСАССТИОСАСССАСОТТСААСТОСТТОАОТСТОСАССАСОССТАСТОСАСССТОСАСОСАлОСТО СОТСТСТСТТоТОСАСТАВССООСАТООАССТОВОСАВТТАСОССАТСААСТОЮСТОАСАСАдОСТоСоСОоСААС ТОТТТАСААТОСАТОССТАТААТАТОСОССАСТООСАСОАССТТТТАТОСТАСАТОВОСОАААСОЛАССТТТАСА АКРТАСССОИСАСААТАССАААААСАСССТОТАТСТОСАААТОСААСТОСТТОСОАССАСАССАСАСОССООТОТАЄ ТАТТИТОСТСОСАСТОСТОССАССТТАТАЙСАСТССАСССТАСТТССАТСТСТОСССАСААСОСАСОСТОоСТОАСТ СТТТСААСТТАА Ь) ДНК, яка кодує важкий ланцютА26-645(еНЗ) (50 10 МО:22) СААСТТСАССТООТС сдптстосАсосссоссттотТесАсС стасаАсиАОСтТОоСОТОТИТИ тт ТОП АОСААСКИ ОСТТТСАСОТТСАССААСТАСОСТАТССАСТОСАТТССТСАОССАССАСОТАВАСОТСТОСВАТОСОТАСССТС АТСТСТОСОТСТОСТОЧТСТОАСИТАСТАСССТОАСТСТОТСААЛОСТСОТТТСАССАТСТСТСОТОАТОДСОСЯ ЗАВААСТСТСОСТАССТОСАЛАТОААСТСТСТОССТОСАСААСАТАССССАСТОТАСТАСТОСОСТЬСТОСТОСТ САДОСТАТСТТССАСТАСТОСССТСАСООТАСОСТОСТААСТОТСТССАОСОСТТСТАСАВАЦОССОСААССЯ ТТ ТТСССАСТООСТОСОТОСТОТАААТОСАССТОТИСТОСТАСОССТОСАСТО ОТТО ОТ АААСАСТАСТТО ССАОААССАСТТАСОСТОТСТТССААСТСТОСТОСАСТО ОСТ То ТО ТТ САСАССТРТОСАССАСТТСТеСАс ТСТТСТОСТОТОТАСТОССТОТСТАОСОТОСТТАССОТТССОТСТТСТТСТОСТ ОО ТАТА СВОСТАСАТСТОС ААСОТСААССАСАААСССТОСААСАССАДОСТООАСААААААСТССАССООАААТОСТОТАСТОСВООТОСОСОС ТСАССТОСАСОСССОСАССОСТОСАССТСССАСОСАССТТСААСТОСТТСАСТСТОСАССАСОССТАСТОСАВОСТ ССАВОСАСССТИСОТСТСТОТТСТССВСТААССООСАТССАССТОВОСААТТАССССАТСААСТОССТОАСАСАА ССТССООООААСТОТРТАСААТОСАТСОСТАТААТАТОСОССВОТООСАСОАССТТТТАТИСТАСАТОСОСОААА ПСААСОТТТАСААТТАСССОССАСААТАССАААААСАСССТСТАТСТОСАААТСААСТОСТТОССАССВСВОСАС ВСБССССТОТАСТАТТСТОСТСОСАСТОТСССАССТТАТАССАСТОСАСОСТАСТТСОАТСТСТОСОСАСАЛОСС АСССТООТОАСТСТТТСААСТТАА
Фігура 6 а) ДНК, яка кодує легкий ланцюг Аг26-645(р14), шо включає лідерну пос пдовшеть ОтрА Е.сон (5ЕО 10 МО:23) АТСАДАААСАСАССТАТСОСААТТОСАОТОСССТРТСОСТОСТТТССССАССОТТОСОСААССТОАТАТОСАСАТО АСССАСАССССААССАСТОТСТССОССАОССТАСОССАТСОТОТОАСТАТТАССТОТССТОСААСССАСАОСАТО ТАСАДСОСТСТССОСТТОСТАТСАССАСАААСССССТВААССОССААДААСТОСТСАТОТАСААСССОААСАСТОТО САТАСТОСТСТРОСОТСТССТЕТСТСТОССтТоТаСТІСТОСтТАСССАСТСТАСТОРСАССАТОТОСТСТСТССАЄ ССОСААСАТТТСОССАССТАСТАСТОССАССАСТАСТАССАТТАСССАСТОВССТТТОСТОСТЕСТАССАААСТТ САСАТСАААСОТАСОСТТОСАОСТОСАРТОСОТСТТСАТСТТТССАССОТОТОАССААСАССТОАААТСТОСТАЄТ ССТЕСТОТССтТТТОССТОСТСААСААСТТСТАТССОССТСААСССАААСТССАСТОСАЛАСТОСАСААСССАСТИ САСТСТОСТААСТСТСАССААТСТОТСАСССААСАССАСТОСАААСАСТОСАССТАСТСТСТОТСТАБСАСССТО АСТСТСТССАААССАСАСТАССАСАААСАСАААСТОТАСОСТТОССААСТЛАСССАТСАСОСТСТОАССТСТОСС СТТАССАААТССТТТААТАСАССОСАСТСТОСТООСССТОССАСТОСТОСТОСАбОТТССООАОСТООСОСТТСА САСАТАСАЛАТСАСССАСАСТОСТТСАТСОСТАТССОСОТСОСТ ТО СССАТАСССТОАСТАТТАСАТОТСАААОС ТСТССТАССОТСТОСАССААТТТТСТАТССТОСТАТСААСАСЛААССОСОСАДСОСТССААААСТТСТОАТТТАТ СААСССТОСАААСТСАССАСТОСАСТТСССТСААСАТТСАСТООСТОТОССАТСАСССАСАСАСТТСАССТТОАСА АТСАСТТСОСТОСААССАСАССАСТТТОССАССТАСТАТТСТОСТОСАССТТАСАСТАССАТААСТСАТАССАСА ТІТОВ ТОСООТАСТААСОТСОАААТСАВАСОТАССТАА Б) ДНК, яка кодує легкий ланцюг А206-645(в143(5ЕО І МО:24) САТАТССАБАТСАСССАСАССССАЛОСАСТСТСТОССОССАСССТАСОССАТОСТОТОАСТАТТАССТОТООТОСА вВСССАСАОСАТСТАСААСОСТОТООСТТООТАТСАССАСАААССООСТАААОСОССААААСТОСТОАТСТАСААС СССААСАСТСТОСАТАСТОСТСТТОСОТСТОСТТТСТИТОоСотТСтТОоСтТТСтТОСТАСССАСТСТАСТСТОАССАТО ТОСТСТСТОСАСОССОСААСАТТТСОССАССТАСТАСТОССАССАСТАСТАССАТТАСССАСТОАССТІТОСТОСТ ССТАССАААСТТОАСАТСАААСОТАСОСТТОСАОСТОСАТССОТСТТСАТСТТТССАССОТСТОАССААСАССТО АААТСТООТАСТОСТІСТОТСОТТТОССТОСТОСААСААСТТСТАТССОСОТОААСССАААСТССАСТОСАААСТО БАСАВСОСАСТССАСТСТООТААСТСТОАССААТСТОТОАССОААСАОССАСТССАВАБАСТОСАССТАСТСТОСТО ТСТАССАСССТСАСТСТОТОСАААССАСАСТАССАСАААСАСАААСТОТАСОСТТОССААСТТАСССАТСАСОСТ СТСАССТСТОСССТТАССАААТССТТТААТАСАСССОАСТОТОСТООСОССТОбСАСТОСТОСТОСАССТІССССА СОТОССОСТТСАСАСАТАСАААТСАСССАБАСТССТТІСАТСОСТАТССОСОТОСОТТООСОАТАСОСТОАСТАТТ АСАТаТСАААОСТОТОСТАССОТСТОСАССААТТТТСТАТОСТООРТАТСААСАСАААССИЗААООССТОСВААА СТТСТОАТЕТАТСААСССТОССАДАСТОСАССАСТОСАСТРИССТСААСАТТСАСТОССТСТОСАТСАСССАСАСАС ТТСАССТТОАСААТСАСТТСИСТОСААССАСАССАСТТТОССАССТАСТАТТСТОСТОСАОСТТАСАСТАССАТА АСТОАТАССАСАТТТОССТОСОСТАСТААОСТОСАААТСАААССТАССТАА
Фігура 7 а) ДНК, яка кодує важкий ланцюг А26-645(РН5), що включає лідерну послідовність В723(56О 10 МО:25) АТОСААТОСТОСТоВОТСТТССТОТТТТТССТРЕСТеТСАСААЛСССсвотТосАСВОССВАСОТИСАВСТСИТОВАЄ ТОТОСАБОСОБОСТТСТОСАСССТОСАССОВОССТОСОТСТОТИТТОТОСАССАВОССОТТТСАССТРСАССАДО ТАСФСТАТОССАСТОСАТТСОТСАСОСАССАССТАААССТСТОСААТОСОТАСССТСТАТСТОТССОТСТОСТоЦЯ СТОАССТАСТАССОТОАСТСТСТОАААОСТОСТТТСАССАТСТСТССТОАТодсоссАААААСТоТоССсТАССТО САСАТОСААСТСТСТОСОТОСАСААСАТАССОСАСТОТАСТАСТОСОСТАСТОСТОСТОААССТАТОТВТССАСТАС ТОСОСТСАССОТАСССТОСТААСТОТСТОААССОСТТСТАСАААСОССССАТСОСТоТТСССССТООСАСССТОС ФССААСАССАССТСТОССОССАСАССООСССТОСОСТОССТОСТОААССАСТАСТТОСОООСААССООСТСАСОСТО ТСОТОСААСТСАСОСОСССТОАССАССООССТОСАСАССТТСССООСТОТССТАСАСТОСТСТОСАСТСТАЄТОС СТСАССАСССТОСТОАССИТОСОСТОСАССАССТТОСССАСОССАСАССТАСАТОТОСААССТОААТСАСААСОСО ДОСААСАССААОСТОСАСААСААВСТТОВОСССАААТСТТоТтТосоСАоСТоСсСсооттесСосАсстосСсостАСС ОСТОССОСТОоСАТОССАВОТССАОСТОСТТОСААТССООАСОСОСАСТОСТОСАСССОСССАСОСАСТОРТОССТТО ТОСТОСОСТОТАТСТОСААТССАССТСАССААТТАССССАТСААСТОССТСАСАСАСаСАССТОСОСАААТОССТО СААТОСАТССОСАТТАТАТОСОСТАСТОССАСОСАССТРЕТТАТОСТАСАТОССССААОСОТАСАТЕСАСААТОСТСА СООСАТААТАСТААСААСАСАСТОТАССТОСАСАТОААСТОСОТОССАОСАСАССАТАССОССОТТТАСТАТТИТ ССТОССАСТОТСССАССТТАТАССАСТОСАСССТАСТРТСАТСТСТОСоСОоСАССОСАСТоТОСТОДОСОТСТоВ АСТТОА ! Її» ДНК, яка кодує важкий ланцюг АЗо-045(2Н5) (ЗО 1 МО:26) САСОТОСАССТОСТОСАСТСТОСАСССОСОСТТОТОСАСССТОВАЧОСАСССТоСОТСТСТСТТОТОСАССАОС ОСТТТСАССТТСАССААСТАСОСТАТССАСТОСАТТСОТСАСОСАССАСОТАЛАСОТСТОСААТОООТАСОСТСТ АТОТСТОСОТСТОСТОСТОТСАССТАСТАСОСТОАСТСТОТСАААСОСТСОТТТСАСОАТСТСТСОСТСАТОАСОСОЮ АВАДАСТОТОССТАССТОСАСАТСААСТОТСТОСОТОСАСАДОАТАССОСАСТОТАСТАСТОСОСТАСТОСТООТ СААОСТАТСТТСОАСТАСТОСОСТОАСОСТАСССТОСТААСТОТСТОАВОСОСТТСТАСАВАССОСССАТОВОТС ТтТСССССТаОСАСССТОСТССАВБАССАССТОСТООССОСАСАСССОСОСТоСОСТОССТОСТСААССАСТАСТТС СССОААСООСТОАССОТОТССТОСААСРТСАСССОСССТОАССАСССОССТОСАСАССТТСССОООСТОТОСТАСАЄ ТССТОТОСАСВСТАСТСССТСАССАСССТОСТСАСОСТОСССТОСАССАССТТОСОСАСОСАСАССТАСАТОТОС ААССТОЛАТСАСААССССАБСААСАССААОСТОСАСААСАААСТТСАОСССАААТСТТОВТССосСАСОТОССоСТ теСсобАОосТаОсостАССОСТСОСОСРОСАТССОААОСТОСАССТОСТТОААТОСОСвОоССОСАСТССТОСАССО ОСАСОСАСТОТТСОСТТОТОСТОСОСТОТАТСТССААТССАССТОАССААТТАСОССАТСААСТИССТОАСАСАЄ ССАССТОСОСАЛАТОССТССААТОСАТСООСАТТАТАТОООСТАСТОССАССАССТТТТАТОСТАСАТОСОССВАКО СОТАСАТТСАСААТСТСАСОСОАТААТАСТААСААСАСАСТОТАССТОСАСАТСААСТОССТОССАБСАСАССАТ АССОССОТТТАСТАТТОТОСТоОСАСТОТОССАОСТТАТАССАСТОСАСОСТАСТЕТОАТСТОТОоСОоСОСАССОС АСТСТОСТСАССОТСТООАСТТИВ,
Фігура 8 а) ДНК, яка кодує легкий ланцюг Аг6-645(рі 4), що включає лілерну послідовність
872.3 (ЗО 10 МО:27) АТСТСАСТІСССАСЬСАЄСТоСТОвеССтТоСтТТСТаттТотоастТсАСССАТОСТАСОТСТОАТАТОСАСАТСАСЄ САБАСТССАДОСАСТСТСТСССССАОССТАСОССАТООТОТОАСТАТТАССТОТООТОСААСССАСАССАТСТАС ААМСОСТСТСОСТТОСТАТСАОСВСАААССОССТАААССОССАЛААСТОСТОАТСТАСААСОСОААСАСТСТОСАТ АсСОстТОоТтТоссотстТостеТСтСтосотстоотеСТОЗТАСОСАСТСТАСТСТОАССАТСТОСТСТСТОСАвССО САВСАТТТСООСАССТАСТАСТОССАОСАСТАСТАССАТТАСССАСТОАСИТТТОСТОСТОСТАССААЛОТТОДО АТСААДАСОТАСОСОТООСТОСАССАТСТОТСТТСАТСТРОССОСССАТСТСАТОАССАСТТОДАСТСТОССАСТИСС ТОСТОТРОТСТОССТОСТОААТААСТРСТАСССТАСАСАССССАЛАСТОСАСТОСААССТОСАТАВСОССОТТСАА ТССОБАДАСТОСССАССАСАСТОТСАСТОАССАССАСТСАААССАСТОСАССТАТАСССТТАССАССАСАСТОАОХ СТСАССААСОСТОАСТАССАСАААСАСААССТОТАСОССТОССААСТОАСАСАТСААСОССТОВОСТОАССоСТо АСАААСАССТТТААСАОСОСАСАСТОТОСТОСАОСТОВСТСТООСОСТОСТОССТОСССАСССИСАКСАЛИСОСАС АТССАСАТОАСССАОАОСССТТССТОТОТААССОССАСТОТСОСАСАСАСАСТСАСТАТТАССТОССАААОСТОС СОРТСАСТСТОСОТОСААТТТТСТАТОСТОСТАССАССААААОСССОСАААСОСТОСТААЛАТТОСТОАТСТАСОАА ССААОСАААСТСАССАСССОССТОСССАССАССТТСАСССОСАСТОСОТСТОСААСТСАСТТТАСССТСАСААТС ТеСТОАСТОСАПСССОАОСАСТТОСОССАССТАТТАСТОСОСТООАОСТТАСАСТАССАТААСТОАТАСОАСАТТТ СПВАТОССОСАСТАААСТОСАЛАТСААССИТАССТОА Ь) ДНК, яка кодує легкий ланцюг А2Оо-645(р14) (БО ТО МОБ, САТАТССАСАТСАСССАСАСТОСААОСАСТОТСТОСССГАБСОСТАССССАТСОТОТСАСТАТТАЄСТОТСОТОСА АСССАСАССАТСТАСААСОСТОТОССТТОСТАТСАОСАСАЛАСССОЧТАААССОССААААСТОСТОАТСТАСААС ССОААСАСТСТОСАТАССОСТОтТТССстТОТоСстТтТТСТСтТооСтТотТОСтТТСТОСтТАСОСАСТСТАСТСТОВОСАТ ТеСТОТСТОСАСССОСААСАТТТСОССАССТАСТАСТОССАССАСТАСТАССАТТАСОСАСТСАСОТТТОСТОСТ ОСТАССАААСТТОСАСАТСАААССТАСОСТООСТОСАССАТСТОТСТТСАТСТТССОСОСАТОТСАТОДОСАСЕТО ААСТСТОСОСАСТОССТОТСТРСТаТОССтТОСтТОААТААСТТСТАСССТАСАСАОСССАЛАСТОСАСТОСААССТО САТААСОСССТТСААТССОСАВАСТСССАОСАСАСТОТСАСТОВОСАССАСТСАААССАСТОСАССТАТАВССТІ ДССАССАСАСТОАСАСТОСАССААСОССТСАСТАССАСАААСАСААССТСТАСОССТИСОААОТОАСАСАТСАВОСС СТОВОСТСАСССОСТОАСАААСАОСТТТААСАСОССАСАСТОТОСТОСАвОТОоССТОТОовСвОтОоСТооСТоСоов СССООАССААСССАСАТССАСАТОАСССАСАСОССТТОСТСТОТААОСОССАСТОТСОСАСАСАСАСТОАСТАТТ АССТОССАААОСТОСОСТТСАСТСТОСТССААТТТТСТАТССТОСТАССАССАВААССССССАААСОСТОСТААА ТТаСТОАТСТАСИААИСАЛИСАДАСТСАССАСОСЯССТОСССАССАСОТТСАСОСОСАСТОВОТО ТОЮ ЛАСТОВО ТТТАСССТОАСВАТСТССТСАСТССАВССССАОСАСТТСОССАССТАТТАСТОСОСТОСАССРТАСАСТАССЬТА АСТОАТАСОАСАТТТОСАТОСООСАСТАААСТОСАВАТСААССОТАССТОА фігура 9 А Специфічне зв'язування А26 Габ-ГУ в 595 НЗА х -ї ох ; ж 30" 4 У В З зохі" з БОЮ" З ен о 0 0,00010,001 001 0 ' то 100 Всього (фрагмент антитіла|, нм в 120 х хо во ж а- А26 Габв т- 80 р й ул , 4 -- А26 ЕвБ-Гу Е во Ії те Адо БВ РКО З / - 40 / не ; й, : Ай 2 20 щи вна 0 0,001 0,01 01 і 10 100 ІФрагмент антитіла), мМ
Фігура 10 (а) . АдЬ гБВБВ-гу о Таб-Ру - негативний т БО кантроль - у ке Бе й І -В -В -й -й 0 Логарифм концентрації актитіла, меМ (в) Сім Т-клітини 20000- щ- ! до 16бо0оч ! Е м 40000 Ї ї- ХХ я С - в МКК ОО вовбо й С й вав СОКАХ й я ав ща сх Ї щі щи ше М вк Мт т ш То дов Енр-Ке
Фігура 11
А . інгібування зв'язування ОХ. з активованими СІЯ ОХА0 т. клітинами людини за допомогою Ало Каву 126 І 400 555 " що КЕ уче и що - й З 23 80 і те Бар-БУ Або Ге Е «о В Контрольне Бай-гу ЖЕ га 40 " Я-- Без антитіла макс.) вх Ж та- Без ОХ. (мін.) с 20 Ї -20 - веттттт - У т вв 5 5 5 5 55 5 5 з »? С) щ Іс па й -, і-ї що - - т -, ІЇбав-РМ|, М в 120 і. ее Аге га: їй жування Ж -- АБ ЕМ ВЕО х / яко АБ БаБ-ГУ Я во т -8- Контр. аб да В г, шо ТЕ а / -е- Контр. Бар-Ру Е у їж іа в 20 щу я, -20 ей бонни ; ке - оо ее а о е 5 2 о бе е х як о. ре Ф Ф с як - седйики Коннентрація антитіла (НМ)
Фігура 12 А Інгібування реакції змішаних лімфоцитів людини за допомогою АЛо Бар-гу 7 ш ЕСво 7 0,56 НМ Ф АО6 Кар-Бу бо Е т- с що і ш Контр. Баб-Бу пз 50 7
В
2. 40 Ки З дн 20 х 10 і ши п т т т їсу
5. 404 ння нн К «З БО ди 1 7 190 оо їй Концентрація антитіла (НМ) В інгібування продукування ІЕМ-у під час МІ. людини за допомогою А2о ЕвінЕх Уж рах 0,0027 ДОЮ 0/0 рення, 80 шк щ Я сть Шан А о дО Еар-РУ щ- Я КОНЯ щи ра Я з | 0000 ЩО контр, вор-гу с у щ З ш -2О й 4 ! -50 фігура 15 п. де щОБЯО БО І |! г Е М У г: 40» и е У іє; г І НН зо ї. Я х а м зв а емгмемеффомюок х мем. "А м В м що 16
Ф і. 2 5 - зм. і Безлнційла ДЯН РЕ АБ Бар е Ковнтро Баби Фігура 13А Інгібування проліферації СІЯ" Т-клітин у моделі Ни-М5О за допомогою А26 Бцб-Бу, введеного до клітинного переносу залежним від дози способом Кров 23 х т - МОЯ - «КЕ ! -- щ | " ш | ; Ж 15 ! до юю и З І їх і ших
І . яко ще ! Ж Ж Уч ш й | Бе Й | Ї: з, зга У Е 5 е5 Е Е 2 т 5 з Е а БЕ Я от х ОХ х 2 до - т а - с їй Аде гав Гу А? Гав РЕ
Фігура 148 Інгібунання проліферації СЮВ' Т-клітин у моделі Ни- Ма за допомогою Азе Бар-Ех, введеного до клітинноко переносу залежним від дози способом Кров ЯКО жк т ж ММ Щи х т Е - Е п й З жВКХ 3 Ж о гі г хе ун й фчичі ск 7» ! я ж вче сяк з се Фу. я я я в 5 7 55 5 ЕД - г ре : 5 ЕЕ шт А х ш га Ж Еаавалаванькикканкикиваальникикикккиькькикий зоййікнювввювттовтвввавнювєтевовввтиннихим». Або гав гу Ав вв РЕС
Фігура 146 Інгібування проліферації СІЯ" Т-ютин у моделі Ни-М5О за допомогою А Бай- Ех, введеного до клітинного переносу залежним від дози способом Селезінка З обо г т Ка Ж їж В "в КО а Ж че о о | . че «х - Ж хе же з4х й я ; ши ни ни: нини и ше: Си и жшрни нш Н Пи нЕ що ш -- й - - й "НИНИКНННННН НИКИ ннин, інн інн вив сни Ав Гай БУ Аге Кав РЕС
«Фігура 19) Інгібування проліферації СІМЯ Т-клітин у маделі НО-М5О за допомогов Але Ба т», нведеного до клітинного переносу залежним від дози способом Селезінка вони хюю й я 13000. щі в) ї Ж ї ж Її хх | ; ї Ко Е. дощ ! ща мух то ще ; Шшш це Бе о кв ГУ їх : е 5 - й д ак ж У г З х х щ - я й х вк С и шк и ни ше: ж и г ш рос , ке «ех нн сннннаканнньвавалнаннкававлниния ПІДП доводів ко йккь.
Азегавге діетваврРЕО
UAA201404941A 2011-11-11 2012-09-11 Злитий білок біоспецифічного антитіла, який зв'язується з ox40 людини та сироватковим альбуміном людини UA112203C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161558545P 2011-11-11 2011-11-11
PCT/EP2012/072325 WO2013068563A2 (en) 2011-11-11 2012-11-09 Antibody molecules having specificity for human ox40

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA112203C2 true UA112203C2 (uk) 2016-08-10

Family

ID=47388492

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201404941A UA112203C2 (uk) 2011-11-11 2012-09-11 Злитий білок біоспецифічного антитіла, який зв'язується з ox40 людини та сироватковим альбуміном людини

Country Status (35)

Country Link
US (2) US9040048B2 (uk)
EP (1) EP2776469B1 (uk)
JP (1) JP6367714B2 (uk)
KR (1) KR102071054B1 (uk)
CN (1) CN103946240B (uk)
AP (1) AP2014007668A0 (uk)
AR (1) AR088820A1 (uk)
AU (1) AU2012333997B2 (uk)
BR (1) BR112014011404A2 (uk)
CA (1) CA2855174C (uk)
CL (1) CL2014001193A1 (uk)
CO (1) CO7010784A2 (uk)
CY (1) CY1122073T1 (uk)
DK (1) DK2776469T3 (uk)
EA (1) EA035112B1 (uk)
EC (1) ECSP14000329A (uk)
ES (1) ES2737998T3 (uk)
HR (1) HRP20191219T1 (uk)
HU (1) HUE044333T2 (uk)
IL (1) IL232420B (uk)
LT (1) LT2776469T (uk)
MA (1) MA35724B1 (uk)
MX (1) MX358391B (uk)
MY (1) MY183795A (uk)
PE (1) PE20141995A1 (uk)
PH (1) PH12014500946A1 (uk)
PL (1) PL2776469T3 (uk)
PT (1) PT2776469T (uk)
SG (1) SG11201402093RA (uk)
SI (1) SI2776469T1 (uk)
TN (1) TN2014000206A1 (uk)
TR (1) TR201910721T4 (uk)
TW (1) TWI588155B (uk)
UA (1) UA112203C2 (uk)
WO (1) WO2013068563A2 (uk)

Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8614295B2 (en) * 2009-02-17 2013-12-24 Ucb Pharma S.A. Antibody molecules having specificity for human OX40
US20120283415A1 (en) * 2009-09-10 2012-11-08 Ucb Pharma S.A. Multivalent Antibodies
SMT201700185T1 (it) 2010-08-23 2017-05-08 Univ Texas Anticorpi anti-ox40 e metodi di uso degli stessi
SG10201701055WA (en) * 2011-09-16 2017-03-30 Ucb Pharma Sa Neutralising antibodies to the major exotoxins tcda and tcdb of clostridium difficile
GB201116092D0 (en) 2011-09-16 2011-11-02 Bioceros B V Antibodies and uses thereof
GB201223276D0 (en) * 2012-12-21 2013-02-06 Ucb Pharma Sa Antibodies and methods of producing same
SMT201800503T1 (it) 2013-03-18 2018-11-09 Janssen Pharmaceuticals Inc Anticorpi anti-cd (ox40) umanizzati e loro usi
WO2015041515A1 (en) 2013-09-19 2015-03-26 N.V. Nutricia Improved process for the humanization of animal skim milk
RU2016142476A (ru) 2014-03-31 2018-05-07 Дженентек, Инк. Комбинированная терапия, включающая антиангиогенезные агенты и агонисты, связывающие ох40
GB201411320D0 (en) * 2014-06-25 2014-08-06 Ucb Biopharma Sprl Antibody construct
GB201412658D0 (en) 2014-07-16 2014-08-27 Ucb Biopharma Sprl Molecules
MX2017011194A (es) 2015-03-03 2018-04-10 Kymab Ltd Anticuerpos, usos y métodos.
US20180044429A1 (en) 2015-03-09 2018-02-15 Celldex Therapeutics, Inc. Cd27 agonists
GB201506870D0 (en) 2015-04-22 2015-06-03 Ucb Biopharma Sprl Method
GB201506868D0 (en) * 2015-04-22 2015-06-03 Ucb Biopharma Sprl Method for protein purification
GB201506869D0 (en) 2015-04-22 2015-06-03 Ucb Biopharma Sprl Method
CA2984794A1 (en) 2015-05-07 2016-11-10 Agenus Inc. Anti-ox40 antibodies and methods of use thereof
GB201601073D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
GB201601077D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibody molecule
PE20240096A1 (es) * 2015-10-02 2024-01-18 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecificos especificos para un receptor de tnf coestimulador
WO2017063162A1 (zh) * 2015-10-15 2017-04-20 苏州丁孚靶点生物技术有限公司 抗ox40抗体及其应用
IL299072A (en) * 2015-12-02 2023-02-01 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibodies and methods for using them
GB201521389D0 (en) 2015-12-03 2016-01-20 Ucb Biopharma Sprl Method
GB201521382D0 (en) 2015-12-03 2016-01-20 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
US20200079862A1 (en) * 2015-12-03 2020-03-12 Agenus Inc. Anti-ox40 antibodies and methods of use thereof
KR102379464B1 (ko) 2016-06-20 2022-03-29 키맵 리미티드 항-pd-l1 항체
EP3534947A1 (en) 2016-11-03 2019-09-11 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods
MA46770A (fr) * 2016-11-09 2019-09-18 Agenus Inc Anticorps anti-ox40, anticorps anti-gitr, et leurs procédés d'utilisation
WO2018119142A1 (en) 2016-12-21 2018-06-28 Amgen Inc. Anti-tnf alpha antibody formulations
CN112638375A (zh) 2018-06-15 2021-04-09 旗舰创业创新五公司 通过后细胞信号传导因子的调节来增加免疫活性
WO2020227159A2 (en) 2019-05-03 2020-11-12 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Methods of modulating immune activity
BR112021023542A2 (pt) 2019-08-02 2022-03-22 UCB Biopharma SRL Métodos para purificar anticorpos
JP2023509359A (ja) 2019-12-17 2023-03-08 フラグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ，インコーポレーテッド 鉄依存性細胞分解の誘導物質との併用抗癌療法
MX2022007712A (es) 2019-12-17 2022-09-26 Amgen Inc Agonista doble de interleucina-2/receptor de tnf para uso en terapia.
JP2023532339A (ja) 2020-06-29 2023-07-27 フラグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ，インコーポレーテッド サノトランスミッションを促進するためにエンジニアリングされたウイルス及び癌の処置におけるそれらの使用
JP2024512669A (ja) 2021-03-31 2024-03-19 フラグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ，インコーポレーテッド タノトランスミッションポリペプチド及び癌の処置におけるそれらの使用
US20240316104A1 (en) 2021-06-29 2024-09-26 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Immune cells engineered to promote thanotransmission and uses thereof
WO2024077191A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Nucleic acid molecules encoding trif and additionalpolypeptides and their use in treating cancer
WO2024151687A1 (en) 2023-01-09 2024-07-18 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Genetic switches and their use in treating cancer
WO2025248017A1 (en) 2024-05-31 2025-12-04 UCB Biopharma SRL Method of purifying recombinant proteins

Family Cites Families (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4741900A (en) 1982-11-16 1988-05-03 Cytogen Corporation Antibody-metal ion complexes
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
DK336987D0 (da) 1987-07-01 1987-07-01 Novo Industri As Immobiliseringsmetode
GB8719042D0 (en) 1987-08-12 1987-09-16 Parker D Conjugate compounds
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
GB8720833D0 (en) 1987-09-04 1987-10-14 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
GB8907617D0 (en) 1989-04-05 1989-05-17 Celltech Ltd Drug delivery system
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
GB9112536D0 (en) 1991-06-11 1991-07-31 Celltech Ltd Chemical compounds
GB9120467D0 (en) 1991-09-26 1991-11-06 Celltech Ltd Anti-hmfg antibodies and process for their production
US5821332A (en) 1993-11-03 1998-10-13 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Receptor on the surface of activated CD4+ T-cells: ACT-4
FR2716640B1 (fr) 1994-02-28 1996-05-03 Procedes Machines Speciales Dispositif de centrage et de blocage d'une pièce en vue de son rodage à l'aide d'un rodoir à expansion.
US5980898A (en) 1996-11-14 1999-11-09 The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command Adjuvant for transcutaneous immunization
GB9625640D0 (en) 1996-12-10 1997-01-29 Celltech Therapeutics Ltd Biological products
US6908963B2 (en) 2001-10-09 2005-06-21 Nektar Therapeutics Al, Corporation Thioester polymer derivatives and method of modifying the N-terminus of a polypeptide therewith
GB0124317D0 (en) 2001-10-10 2001-11-28 Celltech R&D Ltd Biological products
US20040146948A1 (en) 2002-10-18 2004-07-29 Centenary Institute Of Cancer Medicine And Cell Biology Compositions and methods for targeting antigen-presenting cells with antibody single-chain variable region fragments
GB0303337D0 (en) 2003-02-13 2003-03-19 Celltech R&D Ltd Biological products
ITRM20030601A1 (it) 2003-12-24 2005-06-25 Lay Line Genomics Spa Metodo per l'umanizzazione di anticorpi e anticorpi umanizzati con esso ottenuti.
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
US7592429B2 (en) 2005-05-03 2009-09-22 Ucb Sa Sclerostin-binding antibody
ITRM20050290A1 (it) 2005-06-07 2006-12-08 Lay Line Genomics Spa Uso di molecole in grado di inibire il legame tra ngf e il suo recettore trka come analgesici ad effetto prolungato.
TWI461436B (zh) 2005-11-25 2014-11-21 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd 人類ｃｄ１３４（ｏｘ４０）之人類單株抗體及其製造及使用方法
EP2314619A1 (en) 2005-12-05 2011-04-27 Symphogen A/S Anti-orthopoxvirus recombinant polyclonal antibody
WO2007112054A2 (en) 2006-03-23 2007-10-04 Sea Lane Biotechnologies, Llc Facilitation of translocation of molecules through the gastrointestinal tract
US20100136030A1 (en) 2007-02-27 2010-06-03 Lamhamedi-Cherradi Salah-Eddine Antagonist ox40 antibodies and their use in the treatment of inflammatory and autoimmune diseases
WO2009040562A1 (en) 2007-09-26 2009-04-02 Ucb Pharma S.A. Dual specificity antibody fusions
HRP20170374T1 (hr) * 2008-09-26 2017-05-05 Ucb Biopharma Sprl Biološki proizvodi
US8614295B2 (en) 2009-02-17 2013-12-24 Ucb Pharma S.A. Antibody molecules having specificity for human OX40
US20120283415A1 (en) 2009-09-10 2012-11-08 Ucb Pharma S.A. Multivalent Antibodies
GB201005063D0 (en) 2010-03-25 2010-05-12 Ucb Pharma Sa Biological products
GB201000467D0 (en) 2010-01-12 2010-02-24 Ucb Pharma Sa Antibodies
JP5522668B2 (ja) 2010-02-03 2014-06-18 株式会社ブリヂストン タイヤ構成部材の切断装置及び製造方法
AU2012335496B2 (en) * 2011-11-11 2017-05-11 Ucb Biopharma Sprl Albumin binding antibodies and binding fragments thereof

Also Published As

Publication number Publication date
CN103946240B (zh) 2018-02-23
US9040048B2 (en) 2015-05-26
JP2015506910A (ja) 2015-03-05
EP2776469A2 (en) 2014-09-17
HUE044333T2 (hu) 2019-10-28
SG11201402093RA (en) 2014-06-27
AU2012333997B2 (en) 2017-08-31
KR20140097329A (ko) 2014-08-06
WO2013068563A2 (en) 2013-05-16
TR201910721T4 (tr) 2019-08-21
PL2776469T3 (pl) 2019-10-31
ECSP14000329A (es) 2016-01-29
US20160031974A1 (en) 2016-02-04
DK2776469T3 (da) 2019-07-29
CL2014001193A1 (es) 2014-12-26
US20130243772A1 (en) 2013-09-19
CN103946240A (zh) 2014-07-23
AR088820A1 (es) 2014-07-10
EA201400565A1 (ru) 2014-12-30
WO2013068563A9 (en) 2014-06-19
HRP20191219T1 (hr) 2019-10-04
TN2014000206A1 (en) 2015-09-30
IL232420A0 (en) 2014-06-30
WO2013068563A3 (en) 2013-06-27
NZ624583A (en) 2015-05-29
PT2776469T (pt) 2019-07-25
BR112014011404A2 (pt) 2017-05-30
PE20141995A1 (es) 2014-12-06
TW201326205A (zh) 2013-07-01
AU2012333997A1 (en) 2014-05-29
AP2014007668A0 (en) 2014-05-31
MY183795A (en) 2021-03-16
CA2855174A1 (en) 2013-05-16
TWI588155B (zh) 2017-06-21
JP6367714B2 (ja) 2018-08-01
MX2014005564A (es) 2014-11-10
MX358391B (es) 2018-08-17
SI2776469T1 (sl) 2019-09-30
KR102071054B1 (ko) 2020-01-29
IL232420B (en) 2019-02-28
CA2855174C (en) 2021-11-02
CO7010784A2 (es) 2014-07-31
CY1122073T1 (el) 2020-11-25
EP2776469B1 (en) 2019-04-24
EA035112B1 (ru) 2020-04-28
MA35724B1 (fr) 2014-12-01
PH12014500946A1 (en) 2014-06-09
US9873735B2 (en) 2018-01-23
LT2776469T (lt) 2019-08-12
ES2737998T3 (es) 2020-01-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA112203C2 (uk) Злитий білок біоспецифічного антитіла, який зв'язується з ox40 людини та сироватковим альбуміном людини
TWI853077B (zh) 新型抗ｃｄ３９抗體
JP7545438B2 (ja) Ｖｉｓｔａ抗原結合性分子
CN105829349B (zh) 肽嵌合抗原受体t细胞开关和其用途
ES2750649T3 (es) Construcciones de anticuerpos multiespecíficos
US11873346B2 (en) VISTA antigen-binding molecules
JP7102670B2 (ja) 抗ｐｄ‐ｌ１抗体とｉｌ‐７との融合
US20110200627A1 (en) Anti-cd147 antibodies, methods and uses
TW200927760A (en) Monoclonal antibodies that bind to hGM-CSF and medical compositions comprising same
TW201930355A (zh) 結合物件(三)
JP2021524478A (ja) 抗体分子
CN111032086B (zh) Cd38抗体
BRPI1008692B1 (pt) anticorpo antagonista tendo especificidade para ox40 humano, sequência de dna isolado, vetor de clonagem ou de expressão, célula hospedeira, processo para a produção do referido anticorpo, composição farmacêutica, uso do 5 referido anticorpo e proteína de fusão
JP2020505438A (ja) インテグリン結合性ポリペプチド−Ｆｃ融合タンパク質および免疫調節物質を用いる併用がん治療法
EA032222B1 (ru) Молекулы антител, обладающие связывающей специфичностью в отношении il-13 человека
ES2898650T3 (es) Proteínas de unión a IL-21 y usos de las mismas
KR20250067121A (ko) Cnx 항원-결합 분자
CN109929037B (zh) 针对程序性死亡配体的结合物及其应用
KR20250059415A (ko) B7-h3 항원-결합 분자
US12479908B2 (en) Antibodies against programmed cell death protein 1 (PD1) and uses thereof
CN119866227A (zh) 用于靶向调节性t细胞以治疗化脓性汗腺炎的瓜氨酸化抗原特异性嵌合抗原受体
EP4652203A2 (en) Ph-selective antibody-based checkpoint inhibitors for conditional antibody-dependent cellular cytotoxicity
WO2024035341A1 (en) Cd30 antigen-binding molecules
EP4568999A1 (en) Chimeric antigen receptor domains
HK40089750A (zh) 包含sting激动剂的抗体药物缀合物