UA125302C2 - Похідні [1,2,4]триазоло[1,5-a]піримідину як інгібітори pde2 - Google Patents

Abstract

Даний винахід стосується нових [1,2,4]триазоло[1,5-a]піримідинільних похідних як інгібіторів фосфодіестерази 2 (PDE2). Даний винахід також спрямований на фармацевтичні композиції, які містять сполуки, на способи одержання таких сполук і композицій та на застосування таких сполук і композицій для попередження та лікування розладів, до яких залучена PDE2, таких як неврологічні та психічні розлади.

Description

ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ

Даний винахід стосується нових (|1,2,тгриазоло|1,5-а|Іпіримідинільних похідних як інгібіторів фосфодіестерази 2 (РОЕ2). Даний винахід також спрямований на фармацевтичні композиції, які містять сполуки, на способи одержання таких сполук і композицій та на застосування таких сполук і композицій для попередження та лікування розладів, до яких залучена РОЕ2, таких як неврологічні та психічні розлади.

ПЕРЕДУМОВИ СТВОРЕННЯ ВИНАХОДУ

Фосфодіестерази (РОЕ) являють собою родину ферментів, які кодуються 21 геном і поділені на 11 окремих родин згідно зі структурними та функціональними властивостями. Ці ферменти здійснюють метаболічну інактивацію широко розповсюджених внутрішньоклітинних вторинних месенджерів, циклічного 35-аденозинмонофосфату /(САМР) і циклічного 35- гуанозинмонофосфату (сСОМР). Ці два месенджери регулюють різноманіття біологічних процесів, у тому числі вироблення та дію прозапальних медіаторів, функціонування іонних каналів, скорочення м'язів, комітування, диференціювання, апоптоз, ліпогенез, глікогеноліз і глюконеогенез. Вони здійснюють це за допомогою активації протеїнкінази А (РКА) і протеїнкінази З (РКО), які, у свою чергу, фосфорилюють велику кількість субстратів, у тому числі фактори транскрипції та іонні канали, які регулюють численні фізіологічні реакції. У випадку нейронів передбачається активація САМР- та сОоМР-залежних кіназ із наступним фосфорилюванням білків, залучених у швидку регуляцію синаптичної передачі, а також у диференціювання та виживання нейронів. Внутрішньоклітинні концентрації САМР і сСОМР точно регулюються швидкістю біосинтезу за допомогою циклаз і швидкістю розщеплення за допомогою РОЕ. РОЕ являють собою гідролази, які інактивують САМР і сОМР шляхом каталітичного гідролізу 3'-естерного зв'язку з утворенням неактивного 5'-монофосфату (схема

А).

СхемаА х х збі сх

ММ у Му 6; РОЕ о о -----2-

З то, Ме но-то

Ос р-0 Он ОН вно он о- сАМР Х - М, У - Н з АМР/Ме

СОМР Х - 0, У - МН»

Відповідно до субстратної специфічності родин РОЕ можна виділити три групи: і) САМР- специфічні РОЕ, які включають РОЕАЯ, 7 і 8; її) СаМР-селективні ферменти РОЕ5, 6 і 9 та ії) РОЕ, які діють на два субстрати, РОЕТ, 2 і 3, а також РОЕ10 та 11.

Окрім того, для РОЕ характерна диференційна експресія у всьому організмі, в тому числі в центральній нервовій системі. Таким чином, різні ізоферменти РОЕ можуть мати різні фізіологічні функції. Сполуки, які селективно інгібують родини або ізоферменти РОЕ, можуть виявляти особливу терапевтичну активність, меншу кількість побічних ефектів або і те, і інше.

Фосфодіестераза 2А (РОЕЗ2А) інактивує внутрішньоклітинні механізми передачі сигналів, які залежать від передачі сигналів за допомогою циклічних нуклеотидів, опосередкованої сАМР і сСОМР, завдяки їхньому розщепленню (шляхом гідролізу важливих із біологічного погляду вторинних месенджерів САМР і сСОМР із одержанням відповідно АМР і СМР, які не передають сигнали). Такі сигнальні шляхи, як відомо, відіграють роль у регуляції генів, залучених в індукцію синаптичної пластичності.

Фармакологічне інгібування РОЕ2, таким чином, зумовлює підвищення рівнів синаптичної пластичності (корелята, який лежить в основі навчання та формування пам'яті), що вказує на те, що модуляція РОЕ2А може являти собою мішень для полегшення порушень пізнавальних здібностей, які спостерігаються у людей, що страждають такими розладами, як, наприклад, шизофренія, хвороба Альцгеймера, хвороба Паркінсона та інші розлади ЦНС, асоційовані з когнітивною дисфункцією.

Фосфодіестераза 2А (РОЕ2А) експресується у головному мозку в великій кількості порівняно з периферичними тканинами. Високий рівень експресії РОЕ2 в лімбічній системі (ізокортексі,

гіпокампі, мигдалеподібному тілі, повідці епіталамуса, базальному ядрі) вказує на те, що РОЕ2 може модулювати передачу сигналу між нейронами, пов'язану з емоціями, сприйняттям, увагою, навчанням і пам'яттю. Окрім того, РОЕ2 експресується в прилеглому ядрі, нюховій цибулині, нюховому горбку та мигдалеподібному тілі, що підтверджує припущення, що РОЕ2 також може бути залучена до тривожності та депресії (див., наприклад, І акіс5, М. еї аї. (2010)

Опцапійайме сотрагізоп ої рпозрподіевієтазе тАМА аївіпршіоп іп питап Ббгаїп апа регірНнегаї їівие5. Меиторпаттасої. 59, 367-374).

Окрім того, було показано, що інгібітори РОЕ2 корисні для послаблення індукованої окиснювальним стресом тривожності, що підтверджує їх застосування в лікуванні тривожності при нейропсихічних та нейродегенеративних розладах, до яких залучений окиснювальний стрес, таких як хвороба Альцгеймера, хвороба Паркінсона та розсіяний склероз.

Було показано, що інгібітори РОЕ2 підсилюють довготривалу потенціацію синаптичної передачі та поліпшують запам'ятовування і консолідацію пам'яті під час розпізнавання об'єкта та в тестах соціальної орієнтації у щурів. Окрім того, було показано, що інгібітори РОЕ2 усувають послаблення короткочасної пам'яті, індуковане МК-801, в Т-подібному лабіринті у мишей. Також було показано, що інгібітори РОЕ2 виявляють активність у тесті примусового плавання та моделях із світлою/темною камерою; а також демонструють ефекти, аналогічні анксіолітикам, в тестах із трохи піднятим хрестоподібним лабіринтом, платформою з отворами та тесті відкритого поля і запобігають викликаним стресом змінам апоптозу та поведінки.

Таким чином, інгібітори РОЕ2 можуть бути застосовні у лікуванні послаблення пам'яті, порушень пізнавальних здібностей, тривожності, біполярного розладу та депресії.

У УМО2015/164508 (Оапй Мецйгозсіепсе, 11 С) розкриті заміщені /(|1,2,4|Ітриазоло!|1,5- а|Іпіримідинільні сполуки як інгібітори РОЕ2. У УМО2017/076900 (дапозеп Ріпаптасешіса ММ) розкривається ((35,4К)-3-(5-(дифторметил)-(1,2,4)Ігриазоло|1,5-а|піримідин-7-іл|-4-метил-1- піперидил)|-(2,6-диметил-4-піридил)метанон.

Усе ще існує необхідність у сполуках, які є інгібітором РОЕ2, з переважним поєднанням властивостей, наприклад, з покращеною ефективністю, кращою селективністю до РОЕЗ та/або

РОЕТ10 та/або кращою хімічною або метаболічною стабільністю.

КОРОТКИЙ ОПИС ВИНАХОДУ

Зо Метою даного винаходу є забезпечення нових інгібіторів РОЕ2, які можуть бути потенційно застосовні у лікуванні захворювань, пов'язаних із активністю ферменту РОЕ2.

Таким чином, даний винахід спрямований на сполуки формули (І), й у В

МАМ т (). та їх стереоіїзомерні форми, де

ВХ вибраний із групи, яка складається з Н, СНз, СМ і СНЕ»;

ВВ являє собою радикал, вибраний із групи, яка складається з (а), (Б) і (с): і

Кк чо; оно у в в (а), (5), (с), де

А! являє собою Н, Е або СНЗз;

В? являє собою Н або Сі-залкіл, зокрема метил або н-бутил; за умови, що якщо К? являє собою Н, то Е! являє собою Е або СНз;

ВЗ являє собою Аг, Неї або Аг-С2-лалкеніл; де

Аг являє собою феніл або нафтил, кожен із яких необов'язково заміщений 1, 2 або 3 замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; СМ;

МА2гАВ2В, де кожен із К2А і К28 незалежно вибраний із Н і СНз; ОН; Сі-валкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; С1- валкілу, заміщеного СМ; Сз-єциклоалкілу; С:і-єалкілокси, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; та піразолілу;

Неї являє собою () б-ч-ленний гетероарил, вибраний із групи, яка складається з 1Н-піролілу; тієнілу; фуранілу; 1Н-піразолілу; 1Н-імідазолілу; 1,2-оксазолілу; 1,3-оксазолілу та тіазолілу; кожен із яких може бути необов'язково заміщений 1, 2 або 3 замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; Сі-залкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; МАЗАВЗВ, де кожен із ВЗА і

ВЗВ незалежно вибраний із Н і СНз; та фуран-2-ілу; або (ї) б--ленний гетероарил, вибраний із групи, яка складається з піридилу, піримідинілу, піразинілу та піридазинілу; кожен із яких може бути необов'язково заміщений 1, 2 або З замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; ОН; СМ;

МАВ, де кожен із КА ії Е"8 незалежно вибраний із Н і СНз; С:і.4циклоалкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; С1- 4ациклоалкілу, заміщеного ОН; Сз-єциклоалкілу; Сзєциклоалкілокси; Сі-залкілокси, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; та

С:-«алкілоксисС:-залкілу; або (її) 8-10-ч-ленний біциклічний частково ненасичений гетероцикліл, вибраний із групи, яка складається з 2,3-дигідро-1-бензофуранілу; 2Н-хроменілу; 3,4-дигідро-2Н-хроменілу; 2,3- дигідро-1Н-індолілу, необов'язково заміщеного в положенні 1 С.:-4-алкілом, метилсульфонілом, 1- ацетилом або фторацетилом; 2,2-дифтор-1,3-бензодіоксолілу; 1,3-бензодіоксолілу, необов'язково заміщеного замісником, який являє собою метил; 3,4-дигідро-2Н-1,4- бензоксазинілу, необов'язково заміщеного Сі-«алкілом; 5,6,7,8-тетрагідроіїмідазо|1,2- а|Іпіридинілу; 5,6,7,8-тетрагідрохінолінілу, необов'язково заміщеного замісником, який являє собою атом галогену; та 2,3-дигідропіразолої5,1-5111,3|оксазолілу; або (м) 9-10-членний біциклічний гетероарил, вибраний із групи, яка складається з 1- бензофуранілу; 1-бензотіофенілу; 1Н-індолілу; 1,3-бензоксазолілу; /1,3-бензотіазолілу; індолізинілу; 1Н-бензімідазолілу; імідазо|(1,2-а|Іпіридинілу; піразоло|1,5-а|Іпіридинілу; 1Н- тієно|2,3-с|Іпіразолілу; імідазо|2,1-бІгіазолілу; піроло|2,3-с|Іпіридинілу; тієної|З3,2-б|піридинілу; хінолінілу; ізохінолінілу; хіноксалінілу; 1,85-нафтиридинілу та 1,6-нафтиридинілу; кожен із яких може бути необов'язково заміщений 1 або 2 замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; ОН; МЕ5АВЗВ, де кожен із К5А і 258 незалежно вибраний із Н і

СнНз; С:-залкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або 3 незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; та С:-4залкілокси, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; за умови, що сполука не являє собою сполуку

М

Її Ум з Чу о й А Е п в"

М й та їх М-оксиди й фармацевтично прийнятні солі та сольвати.

Ілюстрацією даного винаходу є фармацевтична композиція, що містить фармацевтично прийнятний носій та сполуку формули (І), описану в даному документі, або її фармацевтично прийнятні сіль або сольват. Ілюстрацією даного винаходу є фармацевтична композиція, одержана за допомогою змішування сполуки формули (І), описаної в даному документі, або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату та фармацевтично прийнятного носія.

Ілюстрацією даного винаходу є спосіб одержання фармацевтичної композиції, який передбачає змішування сполуки формули (І), описаної в даному документі, або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату та фармацевтично прийнятного носія.

Додатковою ілюстрацією даного винаходу є способи підвищення нейронної пластичності, які передбачають введення суб'єкту, який потребує цього, терапевтично ефективної кількості сполуки формули (І), описаної в даному документі, або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату, або фармацевтичних композицій, описаних у даному документі.

Прикладами даного винаходу є способи лікування розладу, опосередкованого ферментом

РОЕ2, які передбачають введення суб'єкту, який потребує цього, терапевтично ефективної кількості сполуки формули (І), описаної в даному документі, або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату, або фармацевтичних композицій, описаних у даному документі.

Додатковими прикладами даного винаходу є способи інгібування ферменту РОЕ2, які передбачають введення суб'єкту, який потребує цього, терапевтично ефективної кількості сполуки формули (І), описаної в даному документі, або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату, або фармацевтичних композицій, описаних у даному документі.

Прикладом даного винаходу є спосіб лікування розладу, вибраного із групи, яка складається з неврологічних та психічних розладів, який передбачає введення суб'єкту, який потребує цього, терапевтично ефективної кількості сполуки формули (І), описаної в даному документі, або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату, або фармацевтичних композицій, описаних у даному документі.

Прикладом даного винаходу є спосіб лікування розладу, вибраного із групи неврологічних та психічних розладів, вибраних із психотичних розладів і станів; тривожних розладів; рухових розладів; наркотичної залежності; афективних розладів; нейродегенеративних розладів; розладів або станів, які включають як симптом синдром дефіциту уваги та/"або порушення пізнавальної діяльності; інсульту та аутичних розладів, який передбачає введення суб'єкту, який потребує цього, терапевтично ефективної кількості сполуки формули (І), описаної в даному документі, або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату, або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату, або фармацевтичних композицій, описаних у даному документі.

Прикладом даного винаходу є спосіб лікування розладу, вибраного із групи, яка складається з неврологічних та психічних розладів, який передбачає введення суб'єкту, який потребує цього, терапевтично ефективної кількості сполуки формули (І), описаної в даному документі, або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату, або фармацевтичних композицій, описаних у даному документі.

Прикладом даного винаходу є спосіб лікування розладу, вибраного із групи неврологічних та

Зо психічних розладів, вибраних із психотичних розладів і станів; тривожних розладів; рухових розладів; наркотичної залежності; афективних розладів; нейродегенеративних розладів; розладів або станів, які включають як симптом синдром дефіциту уваги та/або порушення пізнавальної діяльності; розладів, пов'язаних із запам'ятовуванням і консолідацією пам'яті; інсульту та аутичних розладів, який передбачає введення суб'єкту, який потребує цього,

З5 терапевтично ефективної кількості сполуки формули (І), або її солі або сольвату, або фармацевтичних композицій, описаних у даному документі.

Також прикладом даного винаходу є сполука формули (І), або її сіль або сольват, або фармацевтична композиція, описані вище, для застосування як лікарського препарату.

Додатковим прикладом даного винаходу є сполука формули (І), або її сіль або сольват, або фармацевтична композиція згідно з даним винаходом для застосування у лікуванні, попередженні, зменшенні інтенсивності вияву, контролі або зниженні ризику виникнення різних неврологічних та психічних розладів, асоційованих із порушенням функції фосфодіестерази 2, у ссавця, у тому числі у людини, лікування або попередження яких залежить від інгібування фосфодіестерази 2 або полегшується ним.

Прикладом даного винаходу є сполука формули (І), або її фармацевтично прийнятні сіль або сольват згідно з даним винаходом, або фармацевтична композиція згідно з даним винаходом для застосування у лікуванні, попередженні, зменшенні інтенсивності вияву, контролі або зниженні ризику виникнення різних розладів, вибраних із психотичних розладів і станів; тривожних розладів; рухових розладів; наркотичної залежності; афективних розладів; нейродегенеративних розладів; розладів або станів, які включають як симптом синдром дефіциту уваги та/або порушення пізнавальної діяльності; розладів, пов'язаних із запам'ятовуванням і консолідацією пам'яті; інсульту й аутичного розладу.

Прикладом даного винаходу є спосіб лікування розладу, вибраного із групи, яка складається з хвороби Альцгеймера, помірного когнітивного порушення, старечої деменції, деменції, деменції з тільцями Леві, синдрому Дауна, деменції, асоційованої з інсультом, деменції, асоційованої з хворобою Паркінсона та деменції, асоційованої з відкладанням бета-амілоїду, переважно хвороби Альцгеймера, який передбачає введення суб'єкту, який потребує цього, терапевтично ефективної кількості сполуки формули (І), або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату, або фармацевтичних композицій, описаних у даному документі.

Іншим прикладом даного винаходу є сполука формули (І) або її фармацевтично прийнятні сіль або сольват, описані в даному документі, для застосування у лікуванні: (а) хвороби

Альцгеймера, (Б) помірного когнітивного порушення, (с) старечої деменції, (4) деменції, (е) деменції з тільцями Леві, (Її синдрому Дауна, (9) деменції, асоційованої з інсультом, (й) деменції, асоційованої із хворобою Паркінсона, (ї) деменції, асоційованої з відкладанням бета- амілоїду, (Ї) депресивних розладів і (К) тривожних розладів у суб'єкта, який потребує цього.

ОПИС ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛІВ

На фігурі 1 показаний ефект сполуки 110 щодо індукції за допомогою слабкої НЕ5 довготривалої потенціації (ТР) в синапсі моховитих волокон.

На фігурі 2 показаний план експерименту для тета-імпульсної стимуляції.

На фігурі З показаний ефект сполуки 70 щодо індукції за допомогою слабкої НЕ5 довготривалої потенціації (ТР) в синапсі моховитих волокон.

На фігурі 4 показаний ефект сполуки 25а щодо індукції за допомогою слабкої НЕ5 довготривалої потенціації (ТР) в синапсі моховитих волокон.

На фігурі 5 показаний ефект сполуки 220 щодо індукції за допомогою слабкої НЕ5 довготривалої потенціації (ТР) в синапсі моховитих волокон.

На фігурах 6-15 (сполуки 220, 110, 93, 32, 70, 25а, 281, 295, 356 та 335 відповідно) показане вимірювання рівнів СОМР в С5Е у собак породи Маггпаї! Веадіє. На фігурах 6-15 різні дози тестових сполук представлені наступним чином: ш 0 мг/кг; Ф 0,5 мг/кг; Ф 0,75 мг/кг; А 1 мг/кг; ж 1,25 мг/кг; 28 1,5 мг/кг; М 2,5 мг/кг.

На фігурі 16 показані короткочасні ефекти сполуки 110 на синаптичну функцію іп мімо на синапсі колатералей Шаффера (5С)-САТ. На фіг. 1ба показано схематичне зображення розташування біполярного стимулювального електрода на шляху колатералей Шаффера та монополярного реєструвального електрода у 5ігайшт гадіайшт області Согпи Аттопі5 СА гіпокампу; на фіг. 16р показаний короткий огляд кривих І/О, одержаних шляхом застосування стимуляції зі збільшенням інтенсивності та вимірювання початкових нахилів одержаних ТЕРБР, яке не виявило різниці у відношенні основної збудливості шляху 5С-СА1; на фіг. 16с показані морфології відповіді протягом початкового рівня, через 30 хв. після обробки та через 30 хв. після протоколу тетанічної НЕ5. Необхідно відзначити схожість у величині зареєстрованих

Зо даних відповідей ТЕРОР під час початкової реєстрації рівнів між групами обробки, які збільшувалися вище початкового рівня, та умови застосування середовища-носія у групі, яку обробляли за допомогою сполуки 110; на фіг. 164 показана залежність від часу нахилу ТЕР5Р через 30 хв. після реєстрації початкового рівня, через 30 хв. після введення сполуки 110, їі при цьому застосовували протокол тетанічної НЕ5 та реєстрували нахил ТЕРБР протягом ще 2 годин. Необхідно відзначити, що сполука 110 у дозі, яка становить 20 та 40 мг/кг, забезпечувала збільшення базальної синаптичної передачі до протоколу тетанічної НЕ5 та нахилу ТЕРЗР протягом 2 годин після протоколу НЕ5 (вставлений графік); на фіг. 1бе показано, що якщо

ТЕРБР усереднювали за інтервали часу, що становили 30 хв., сполука 110 (40 мг/кг) забезпечувала збільшення величини синаптичної передачі, та різниця з групою, яку обробляли середовищем-носієм, залишалася значною. Значення виражені у вигляді відсотка від значень, зареєстрованих перед НЕ5, та результати представлені у вигляді середніх значень хх 5ЕМ. Для порівнянь груп застосовувалися тести з однофакторним дисперсійним аналізом (АМОМА) і апостеріорним аналізом з найменшою достовірною різницею (І 50).

На фіг. 166 та с діаграми характеризуються наступними значеннями: ще середовище-носій (п-10); ши сполука 110 (мг/кг) (20) п-9; шк сполука 110 (мг/кг) (40) п-8; на фіг. 164 та 16бе діаграми характеризуються наступними значеннями: ш середовище-носій (п--10); сполука 110 (мг/кг), (20) п-:9; ш сполука 110 (мг/кг) (40) п-8

ДОКЛАДНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ

ВИЗНАЧЕННЯ

"Сі-лалкіл", використовуваний у даному документі окремо або як частина іншої групи, означає насичений вуглеводневий радикал із прямим або розгалуженим ланцюгом, який містить 1, 2, З або 4 атоми вуглецю, такий як метил, етил, 1-пропіл, 1-метил, бутил, 1-метилпропіл, 2- метил-1-пропіл, 1,1-диметилетил тощо. Термін "Сівалкіл", використовуваний у даному документі як група або частина групи, означає насичений вуглеводневий радикал із прямим або розгалуженим ланцюгом, який містить від 1 до 6 атомів вуглецю, такий як групи, визначені для

Сі-залкілу, та н-пентил, н-гексил, 2-метилбутил тощо. "Сі-залкілокси" буде позначати радикал у вигляді етеру, де С:і-4алкіл визначений у даному документі. "Сі-валкілокси" буде позначати радикал у вигляді етеру, де Сі-валкіл визначений у даному документі. "Галоген" буде позначати фтор, хлор і бром. "Сзєциклоалкіл" буде позначати циклопропіл, циклобутил, циклопентил та циклогексил. "Сзєциклоалкілокси" буде позначати радикал у вигляді етеру, де Сз-єциклоалкіл визначений у даному документі.

Передбачається, що термін "заміщений" в усіх випадках застосування в даному винаході означає, якщо інше не вказано або чітко не випливає з контексту, що один або декілька атомів водню, переважно від 1 до З атомів водню, або від 1 до 2 атомів водню, або 1 атом водню, при атомі або радикалі, позначеному з використанням виразу "заміщений", замінені вибраним із вказаної групи, за умови, що не перевищується нормальна валентність, і що заміщення забезпечує в результаті хімічно стабільну сполуку, тобто сполуку, яка є достатньо стійкою, щоб витримати виділення з реакційної суміші до придатного ступеня чистоти та складання в терапевтичний засіб.

Передбачається, що М-оксидні форми сполук згідно з формулою (І) включають ті сполуки формули (І), в яких один або декілька атомів азоту окиснені до так званого М-оксиду, зокрема ті

М-оксиди, в яких окисненим є атом азоту в піридинільному радикалі. М-оксиди можна одержувати згідно з процедурами, відомими фахівцю в даній галузі. Реакцію М-окиснення, як правило, можна проводити шляхом здійснення реакції вихідної речовини формули (І) з відповідним органічним або неорганічним пероксидом. Відповідні неорганічні пероксиди включають, наприклад, пероксид водню, пероксиди лужних металів або лужноземельних металів, наприклад, пероксид натрію, пероксид калію; відповідні органічні пероксиди можуть включати пероксикислоти, такі як, наприклад, бензолкарбопероксова кислота або галогензаміщена бензолкарбопероксова кислота, наприклад, З-хлорпероксибензойна кислота (або З-хлорпербензойна кислота), пероксоалканові кислоти, наприклад, пероксооцтова кислота, алкілгідропероксиди, наприклад, трет-бутилгідропероксид. Придатними розчинниками, наприклад, є, наприклад, вода, нижчі алканоли, наприклад етанол тощо, вуглеводні, наприклад толуол, кетони, наприклад 2-бутанон, галогеновані вуглеводні, наприклад дихлорметан, і суміші таких розчинників.

Таким чином, у конкретному варіанті здійснення даний винахід стосується сполуки формули (), де ВЗ являє собою Неї, і при цьому Неї являє собою оксид необов'язково заміщеного піридильного радикалу, описаного в даному документі, тобто необов'язково заміщений радикал у вигляді піридиніумілоксиду.

Зо Термін "суб'єкт", використовуваний у даному документі, стосується тварини, переважно ссавця, більш переважно людини, які є або були об'єктом лікування, спостереження або експерименту.

Термін "т"ерапевтично ефективна кількість", використовуваний у даному документі, означає таку кількість активної сполуки або фармацевтичного засобу, що викликає біологічний або медичний ефект у системі тканин, у тварини або людини, який бажає отримати дослідник, ветеринар, лікар або інший клініцист, що включає полегшення симптомів захворювання або розладу, лікування якого здійснюють.

Термін "композиція", використовуваний у даному документі, призначений для охоплення продукту, що містить визначені інгредієнти у визначених кількостях, а також будь-якого продукту, який одержують прямо або опосередковано в результаті комбінування визначених інгредієнтів у визначених кількостях.

Раніше й далі в даному документі мається на увазі, що термін "сполука формули ()" включає її солі приєднання, сольвати та стереоізомери.

Терміни "стереоїзомери" або "стереохімічно ізомерні форми" раніше та далі у даному документі використовуються взаємозамінно.

Даний винахід включає всі стереоїзомери сполуки формули (І) або у вигляді чистого стереоізомеру, або у вигляді суміші двох або більше стереоізомерів.

Енантіомери являють собою стереоізомери, які являють собою дзеркальні відображення, що не збігаються при накладанні одне на одне. Суміш 1:11 пари енантіомерів являє собою рацемат або рацемічну суміш. Діастереомери (або діастереоїзомери) являють собою стереоіїзомери, які не є енантіомерами, тобто вони не співвідносяться як дзеркальні відображення. Таким чином, даний винахід включає енантіомери, діастереомери, рацемати.

У сполуках згідно з даним винаходом зв'язки, показані у вигляді клину з паралельних ліній (уп), являють собою зв'язки, які проектуються під площиною графічного відображення, тоді як зв'язки, показані жирною клиновидною лінією ( --), являють собою зв'язки, які проектуються над площиною графічного відображення.

Абсолютну конфігурацію визначають згідно із системою Кана-Інгольда-Прелога.

Конфігурація при асиметричному атомі визначається як К або як 5. Розділені сполуки, абсолютна конфігурація яких невідома, можуть бути позначені як (5) або (-) залежно від 60 напрямку, в якому вони обертають плоскополяризоване світло.

Якщо вказаний конкретний стереоізомер, це означає, що вказаний стереоізомер практично не містить інші ізомери, тобто зв'язаний із менш ніж 5095, переважно менш ніж 2095, більш переважно менш ніж 1095, ще більш переважно менш ніж 595, зокрема менш ніж 295 і найбільш переважно менш ніж 195 інших ізомерів. Таким чином, якщо сполука формули (І) вказана, наприклад, як (К), це означає, що сполука практично не містить ізомеру (5).

Крім того, передбачається, що деякі з кристалічних форм для сполук за даним винаходом можуть існувати у вигляді поліморфів і як такі включені в даний винахід. Крім того, деякі сполуки за даним винаходом можуть утворювати сольвати з водою (тобто гідрати) або звичайними органічними розчинниками, при цьому також передбачається, що такі сольвати охоплюються обсягом даного винаходу.

Для застосування в медицині солі сполук за даним винаходом стосуються нетоксичних "фармацевтично прийнятних солей". Однак під час одержання сполук згідно з даним винаходом або їхніх фармацевтично прийнятних солей можуть бути застосовні інші солі. Придатні фармацевтично прийнятні солі сполук включають солі приєднання кислот, які можуть бути утворені, наприклад, шляхом змішування розчину сполуки з розчином фармацевтично прийнятної кислоти, такої як хлористоводнева кислота, сірчана кислота, фумарова кислота, малеїнова кислота, янтарна кислота, оцтова кислота, бензойна кислота, лимонна кислота, винна кислота, вугільна кислота або фосфорна кислота. Крім того, якщо сполуки за даним винаходом несуть кислотний фрагмент, то їх придатні фармацевтично прийнятні солі можуть включати солі лужних металів, наприклад, солі натрію або калію; солі лужноземельних металів, наприклад, солі кальцію або магнію; та солі, утворені за допомогою придатних органічних лігандів, наприклад, солі четвертинного амонію.

Типові кислоти, які можна застосовувати під час одержання фармацевтично прийнятних солей, включають без обмеження наступні: оцтову кислоту, 2,2-дихлор оцтову кислоту, ацильовані амінокислоти, адипінову кислоту, альгінову кислоту, аскорбінову кислоту, І- аспарагінову кислоту, бензолсульфонову кислоту, бензойну кислоту, 4-ацетамідобензойну кислоту, (ї)-камфорну кислоту, камфорсульфонову кислоту, капринову кислоту, капронову кислоту, каприлову кислоту, коричну кислоту, лимонну кислоту, цикламову кислоту, етан-1,2- дисульфонову кислоту, етансульфонову кислоту, 2-гідроксиетансульфонову кислоту, мурашину

Зо кислоту, фумарову кислоту, галактарову кислоту, гентизинову кислоту, глюкогептонову кислоту,

Ю-глюконову кислоту, Ю-глюкуронову кислоту, І!-глутамінову кислоту, бета-оксоглутарову кислоту, гліколеву кислоту, гіпурову кислоту, бромистоводневу кислоту, хлористоводневу кислоту, (ж)-І-молочну кислоту, (ж5)-ОЇ-молочну кислоту, лактобіонову кислоту, малеїнову кислоту, (-)-Ї -яблучну кислоту, малонову кислоту, (ж)-ОЇ -мигдальну кислоту, метансульфонову кислоту, нафталін-2-сульфонову кислоту, нафталін-1,5-дисульфонову кислоту, 1-гідрокси-2- нафтойну кислоту, нікотинову кислоту, азотну кислоту, олеїнову кислоту, оротову кислоту, щавлеву кислоту, пальмітинову кислоту, памову кислоту, фосфорну кислоту, І -піроглутамінову кислоту, саліцилову кислоту, 4-аміносаліцилову кислоту, себацинову кислоту, стеаринову кислоту, янтарну кислоту, сірчану кислоту, дубильну кислоту, (ж)-І-винну кислоту, тіоціанову кислоту, п-толуолсульфонову кислоту, трифторметилсульфонову кислоту та ундециленову кислоту. Типові основи, які можна застосовувати під час одержання фармацевтично прийнятних солей, включають без обмеження наступні: аміак, І -аргінін, бенетамін, бензатин, гідроксид кальцію, холін, диметилетаноламін, діетаноламін, діетиламін, 2-(діетиламіно)етанол, етаноламін, етилендіамін, М-метилглюкамін, гідрабамін, 1Н-імідазол, І -лізин, гідроксид магнію, 4-(2-гідроксиетил)морфолін, піперазин, гідроксид калію, 1-(2-гідроксиетил)піролідин, вторинний амін, гідроксид натрію, триетаноламін, трометамін і гідроксид цинку.

Назви сполук за даним винаходом були складені відповідно до правил номенклатури, прийнятих Хімічною реферативною службою (СА5), з використанням програмного забезпечення

Адуапсед Спетіса! ОемеІортепі, Іпс. (версія продукту АСО/Мате 10.01; Вийй 15494, 1 грудня 2006 р., або версія продукту АСО/СпетокКеїсі 12.5; Виїйа 47877, 20 квітня 2011), або відповідно до правил номенклатури, прийнятих Міжнародним союзом теоретичної та прикладної хімії (ШРАС), з використанням програмного забезпечення Адмапсед Спетіса! ОемеІюортепі, Іпс. (версія продукту АСО/Мате 10.01.0.14105, жовтень 2006). У випадку таутомерних форм складали назву представленої таутомерної форми структури. Інша не представлена таутомерна форма також включена в обсяг даного винаходу.

Даний винахід спрямований на сполуки формули (І), визначені у даному документі вище, та їх фармацевтично прийнятні солі та сольвати.

В одному варіанті здійснення даний винахід спрямований на сполуки формули (1),

М М в « 5 "ХХ ої т (), та їх стереоіїзомерні форми, де

ВХ вибраний із групи, яка складається з Н, СНз, СМ і СНЕ»;

ВВ являє собою радикал, вибраний із групи, яка складається з (а), (Б) і (с): а

Х КЕ чо; с Ї и у) ві ві ві (а), (5), (с), де

А! являє собою Н, Е або СНЗз;

В? являє собою Н або Сі-залкіл, зокрема метил або н-бутил; за умови, що якщо К? являє собою Н, то Е! являє собою Е або СНз;

ВЗ являє собою Аг або Неї; де

Аг являє собою феніл, необов'язково заміщений 1, 2 або З замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; СМ; ОН; Сі-валкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; С1- валкілу, заміщеного СМ; Сз-єциклоалкілу та С.:-валкілокси, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену;

Неї являє собою () б-ч-ленний гетероарил, вибраний із групи, яка складається з 1Н-піролілу; тієнілу; фуранілу; 1Н-піразолілу; 1Н-імідазолілу; 1,2-оксазолілу; 1,3-оксазолілу та тіазолілу; кожен із яких може бути необов'язково заміщений 1, 2 або 3 замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; Сі-залкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; МАЗАВЗВ, де кожен із ВЗА і

ВЗВ незалежно вибраний із Н і СНз; та фуран-2-ілу; або (ї) б--ленний гетероарил, вибраний із групи, яка складається з піридилу, піримідинілу, піразинілу та піридазинілу; кожен із яких може бути необов'язково заміщений 1, 2 або З замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; ОН; СМ;

МАВ, де кожен із ВЛА ї БВ незалежно вибраний із Н і СНз; Сі-4алкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; Сз-

Зо вциклоалкілу; Сз-єциклоалкілокси та Сі-алкілокси, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; або (її) 8-10-ч-ленний біциклічний частково ненасичений гетероцикліл, вибраний із групи, яка складається з 2,3-дигідро-1-бензофуранілу; 2Н-хроменілу; 3,4-дигідро-2Н-хроменілу; 2,3- дигідро-1Н-індолілу, необов'язково заміщеного в положенні 1 С.:-4-алкілом, метилсульфонілом, 1- ацетилом або фторацетилом; 2,2-дифтор-1,3-бензодіоксолілу; 1,3-бензодіоксолілу, необов'язково заміщеного замісником, який являє собою метил; 5,6,7,8-тетрагідроімідазо(1,2- а|Іпіридинілу; 5,6,7,8-тетрагідрохінолінілу, необов'язково заміщеного замісником, який являє собою атом галогену; та 2,3-дигідропіразолої5,1-5111,3|оксазолілу; або (м) 9-10-членний біциклічний гетероарил, вибраний із групи, яка складається з 1- бензофуранілу; 1-бензотіофенілу; М1Н-індолілу; 1,3-бензоксазолілу; /1,3-бензотіазолілу; індолізинілу; 1Н-бензімідазолілу; імідазо|(1,2-а|Іпіридинілу; піразоло|1,5-а|Іпіридинілу; 1Н- тієно|2,3-с|Іпіразолілу; тієноЇЗ,2-б|Іпіридинілу; хінолінілу; 1,8-нафтиридинілу -/ та 1,6- нафтиридинілу; кожен із яких може бути необов'язково заміщений 1 або 2 замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; ОН; МЕ5АВЗВ, де кожен із БА і 5 незалежно вибраний із Н і СНз; С:-лалкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; та С.:-4алкілокси, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену;

за умови, що сполука не являє собою сполуку

М

Її У м

М а р Кк та їх фармацевтично прийнятні солі та сольвати.

У конкретному варіанті здійснення КА являє собою СНз або СНЕ»; і решта змінних визначена в даному документі.

У конкретному варіанті здійснення РЕ? вибраний із групи, яка складається з (а) та (с), і решта змінних визначена в даному документі.

У конкретному варіанті здійснення БЕ" являє собою СНз або СНЕ»:; ВВ вибраний із групи, яка складається з (а) та (с), і решта змінних визначена в даному документі.

У конкретному варіанті здійснення Б' являє собою Н, та В? являє собою Сі-алкіл, зокрема метил або н-бутил; і решта змінних визначена в даному документі.

У конкретному варіанті здійснення КЗ являє собою Неї, і решта змінних визначена в даному документі.

У конкретному варіанті здійснення КЗ являє собою () б-членний гетероарил, вибраний із групи, яка складається з піридилу, піримідинілу, піразинілу та піридазинілу; кожен із яких може бути необов'язково заміщений 1, 2 або З замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; ОН; СМ;

МАВ, де кожен із ВЛА ї БВ незалежно вибраний із Н і СНз; Сі-4алкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; Сз- вциклоалкілу; Сз-єциклоалкілокси та Сі-алкілокси, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; або (ї) 9-10-членний біциклічний гетероарил, вибраний із групи, яка складається з 1- бензофуранілу; 1-бензотіофенілу; 1Н-індолілу; 1,3-бензоксазолілу; /1,3-бензотіазолілу; індолізинілу; 1Н-бензімідазолілу; імідазо|(1,2-а|Іпіридинілу; піразоло|1,5-а|Іпіридинілу; 1Н- тієно|2,3-с|Іпіразолілу; тієноЇЗ,2-б|Іпіридинілу; хінолінілу; 1,8-нафтиридинілу (та 1,6- нафтиридинілу; кожен із яких може бути необов'язково заміщений 1 або 2 замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; ОН; МЕ5АВЗВ, де кожен із БА і 5 незалежно вибраний із Н і СНз; С:-лалкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно

Ко) вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; та С:-4алкілокси, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; і решта змінних визначена в даному документі.

У додатковому варіанті здійснення ЕЗ являє собою () б-членний гетероарил, вибраний із групи, яка складається з піридилу, піримідинілу, піразинілу та піридазинілу; кожен із яких може бути необов'язково заміщений 1, 2 або З замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; МА"ЛЯВВ, де кожен із ВА та В"8 незалежно вибраний із Н та СН»; С.і-залкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; Сз-єциклоалкілу;

Сз-вциклоалкілокси та Сі-залкілокси, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; або (ї) 9-10-членний біциклічний гетероарил, вибраний із групи, яка складається з 1- бензофуранілу; 1-бензотіофенілу; 1Н-індолілу; 1,3-бензоксазолілу; /1,3-бензотіазолілу; індолізинілу; 1Н-бензімідазолілу; імідазо|/1,2-а|Іпіридинілу; піразоло|1,5-а|Іпіридинілу; 1Н- тієно|2,3-с|Іпіразолілу; тієноЇЗ,2-б|Іпіридинілу; хінолінілу; 1,8-нафтиридинілу (та 1,6- нафтиридинілу; кожен із яких може бути необов'язково заміщений 1 або 2 замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; МЕ5АВ?В, де кожен із ВА ії 5В незалежно вибраний із Н і СНз; С:-лалкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; та С.:-4алкілокси, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; і решта змінних визначена в даному документі.

В одному варіанті здійснення сполука формули (І), визначена в даному документі, являє собою, зокрема, сполуку формули (І-а) або (І-Б),

А А

М М Кк М М Кк "7 й: ше "ЗХ с С я й ве вЯ ї

Кк (І-а), (1-5), де всі змінні визначені в даному документі.

Більш конкретно, сполука формули (І), визначена в даному документі, характеризується формулою (1-01),

А

М Кк - ЗХ 5 м й й ві (І-51), де всі змінні визначені в даному документі.

У конкретному варіанті здійснення КЗ являє собою радикал, вибраний із групи, яка складається з (З-а), (3-5) та (3-с). : в !

АЖ. Ж хх ХУ З в'2 М в? в М в'є х-й (З-а), (3-5), (З-с); де кожен із БЗа і ВЗ» незалежно вибраний із групи, яка складається з водню; галогену; СМ;

МАВ, де кожен із ла і В незалежно вибраний із Н і СНз; Сі-алкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; Сз- вциклоалкілу та Сі-алкілокси, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; та

Вс вибраний із групи, яка складається з РЕ, СІ, С:і-залкілу, циклопропілу, С:-залкілокси, циклопропілокси та СЕз; та кожен із За і зе незалежно вибраний із групи, яка складається з водню, СІ, СМ, Сі-ззалкілу, циклопропілу, С:і-залкілокси, циклопропілокси, СНЕ», СЕз, ОСНЕ» та

ОСЕ:; за умови, що КЗ: і зе одночасно не являють собою водень.

Зокрема, кожен із За і ВЗ незалежно вибраний із групи, яка складається з водню; хлору; -

МН»; Сі-лалкілу; -«СЕз; циклопропілу; -«ОСНз; -ОСН(СНз)2г; -ОСНЕ» та -ОСЕ».

Більш конкретно, кожен із За і ВЗ» незалежно вибраний із групи, яка складається з хлору; Сч- 4алкілу; -«СЕз; циклопропілу; -ОСНз; -ОСН(СНз)2г; -ОСНЕ» та -ОСЕ:.

Зокрема, КЗа являє собою СІ або СН, і З вибраний із групи, яка складається з СНз, -ОСН»з, -СЕз та циклопропілу.

У додатковому варіанті здійснення За являє собою СІ або СН», і ЕЕ» являє собою СНз або -

Осн».

Зокрема, Еге вибраний із групи, яка складається з Е, СНз та -ОСН»з; ВЗ вибраний із групи, яка складається з водню, СНз, циклопропілу та -ОСНз; і зе вибраний із групи, яка складається з

СІ, СНз, циклопропілу, -ОСНз; -ОСН(СНЗз)»; циклопропілокси; СНЕ» та ОСНЕ». У додатковому варіанті здійснення КЗ: являє собою РЕ.

У додатковому варіанті здійснення сполука згідно з даним винаходом являє собою сполуку, яка характеризується формулою (І-а), де К? являє собою Сі-залкіл, зокрема метил або н-бутил.

ОДЕРЖАННЯ СПОЛУК

Експериментальна процедура 1 в: в:

А А

Кк М ІФ) (Ф) Кк М (Ф)

АД Н ва А » АД ва пе су не ху ож в мМ-/ (Іа) (ІЙ) М-/ 0 (ІА)

Схема реакції та

А / ві Мо «АЖ но () А АЙ ва от з

М М к

М М Кк т М

В; і

М--/ 0 (ІНос) (ІВ) М (ВС)

Схема реакції 10

А: сполучення з утворенням амідного зв'язку

Кінцеві сполуки, де КЗ являє собою радикал формули (а) або формули (Б) або (с), позначені у даному документі як сполуки формули (І-А) та формули (І-ВС), де ---- являє собою СН» або

СНесСнН»5» відповідно, можуть бути традиційно одержані шляхом проведення реакції з відповідною карбоновою кислотою (ІІІ) згідно з відомими в даній галузі техніки процедурами сполучення (стадія реакції А). Вказане перетворення традиційно можна проводити шляхом обробки функціональної групи піперидинового типу у проміжних сполуках формули (ІІ-а) або (1І-Б) за допомогою засобу для реакції сполучення, такого як НВТО або ЕОСІ, у присутності основи, такої як ОІРЕА та триетиламін, у придатному реакційно-інертному розчиннику, такому як, наприклад,

ОСМ або ОМЕ тощо, за придатної температури, наприклад, за кімнатної температури; альтернативно, проміжні сполуки формули (ІПІ-а) або (1-5) можуть реагувати з фосфоновим ангідридом, таким як 1-пропанфосфоновий ангідрид, у присутності відповідної основи, такої як триетиламін, у придатному реакційно-інертному розчиннику, такому як, наприклад, сухий АСМ.

Карбонові кислоти формули (ІІ) або є комерційно доступними, або можуть бути одержані згідно з процедурами, відомими у даній галузі техніки.

Зо Експериментальна процедура 2

Я 10 а в М Е о | оо в' РО (М-а) в Е ай

Е у Ї

У- ре (Уа) Ро (-в) с | Е в2 во

Е

М М вай ке Е вай ке! у М й Ч М й

Комо Ма) в: м--/ м-/ (м) в: в:

Е

МН Мн ваду Е ва у М й у М й в: в Іа?

Ми (а? Ми (аз)

Схема реакції 2

В: реакція з диметилацеталем М,М-диметилацетаміду

С, Е: реакція з гідрохлоридом 1 Н-1,2,4-триазол-3-аміну р: відщеплення захисної групи

Е: реакція з етиловим естером 2,2-дифтороцтової кислоти

Утворення проміжних сполук формули (ІІ-а), наприклад, де ВА являє собою метил або СНР», позначених у даному документі як проміжні сполуки формули (ІІ-а1) та (1І-аг), відповідно можна забезпечувати з проміжних сполук формули (ІМ-а), де Ра являє собою придатну захисну групу для аміногрупи, таку як, наприклад, трет-бутилоксикарбоніл (Вос).

Можна проводити реакцію з чистим диметилацеталем М,М-диметилацетаміду за температурних умов, таких як, наприклад, нагрівання при 100 "С.

Реакцію з етиловим естером 2,2-дифтороцтової кислоти можна проводити у присутності основи, такої як КОЇВи, у реакційно-інертному розчиннику, такому як толуол, за відповідної температури, такої як 0-5 "С, потім за к. т.

Біциклічне ядро може бути утворене за допомогою реакції проміжних сполук (М-а) або (М-Б) з гідрохлоридом 1ТН-1,2,4-триазол-З-аміну у реакційно-інертному розчиннику, такому як, наприклад, ОМЕ, за температурних умов, таких як, наприклад, нагрівання при 80 "С. У випадку з (М-65)-(МІ-Б), захисна група може бути нестійкою та може бути необхідною наступна стадія введення захисних груп.

Відщеплення захисної групи у проміжних сполуках (Мі-а) або (МІ-Ю) можна проводити згідно з процедурами, відомими у даній галузі техніки, наприклад, якщо захисна група являє собою Вос, відщеплення можна проводити в кислому середовищі, такому як, наприклад НСІ у МеОнН при

ЕТ, або ТРА у ОСМ.

Експериментальна процедура З п о

У ой Ка 2 - | 2 ьо

Кк о З Ре (М-Б) Кк о) М -д о Й си й Й іо (М-с) іс (У-9)

НІ | Н в: в:

З(о М й т ди тро АЙ,

М М М М їз і в: (Міс, є) ММ (Мід) м-7 й, 2 в: Кк

Мо М сх М Ро -ЧХ 1 Ро

І мой Мом х ЗМ м ту (МІ)

Й мо То

І? ІЗ в: в:

Мо МН МН ох т 9 АЖ

Км паз м (І-а4)

Мм-/ (аз) М--7

Схема реакції З с: реакція з карбондисульфідом та метилиодидом

Н, С: реакція з гідрохлоридом 1 Н-1,2,4-триазол-3-аміну

І: окиснення

У: реакція з МасМ

К: реакція з диметилацеталем М,М-диметилформаміду

Ї: метилювання р: відщеплення захисної групи

Проміжні сполуки формули (ІІ-а), де РА являє собою ціано, позначені у даному документі як (І-аз), або де КА являє собою водень, і К! являє собою метил, позначені у даному документі як (ПІ-а4), можна одержати згідно з низкою стадій синтезу з проміжних сполук формули (ІМ-Б), які або є комерційно доступними, або одержані згідно з процедурами, відомими в даній галузі техніки (наприклад, КЕ2-Н або метил, РО-ВОС).

Таким чином, реакція з карбондисульфідом, потім з метилйодидом у присутності основи, такої як Ман, та реакційно-інертного розчинника, такого як ТНЕ, при 0 "С забезпечує одержання сполуки (М-с), яку потім можна піддавати реакції з гідрохлоридом 1Н-1,2,4-триазол-5-аміну за умов, описаних у даному документі, таким чином забезпечуючи одержання (Мі-с, п-0) з наступним окисненням за допомогою відповідної пероксикислоти, такої як, наприклад, тсРВА, у присутності реакційно-інертного розчинника, такого як, наприклад, ОСМ або СНеСІ», з одержанням (МіІ-е, п-2). Витіснення метилсульфонової групи джерелом ціаніду, таким як, наприклад, МасМм у ОМ5О, забезпечує одержання сполуки (МІІ-с), яку можна піддавати відщепленню захисної групи за умов, описаних у даному документі.

Можна проводити реакцію чистої сполуки (ІМ-5) з диметилацеталем М,М-диметилформаміду за температурних умов, таких як нагрівання зі зворотним холодильником. Реакція з гідрохлоридом 1Н-1,2,4-триазол-З-аміну за умов, описаних у даному документі, забезпечує одержання сполуки (МІ-д), яку можна метилювати за умов, відомих у даній галузі техніки, таких як, наприклад, шляхом проведення її реакції з метилиодидом у присутності основи, такої як ман, у реакційно-інертному розчиннику, такому як ОМЕ. Наступне відщеплення захисної групи за умов, описаних у даному документі, забезпечує одержання проміжної сполуки (ІІ-а4).

Експериментальна процедура 4 в Ге! 09

Ро ра; ве о вно вно | вно - - - 2я -- | -- мм) м (ху Кох) МО (М-а/м-в)

РО РО РО РО

Ї» о, ,0 тв Ак о ввстсТОо о о Ху тон з осн --к

М

М (0 Бе ОЧІ)

РО

Схема реакції 4

М: фторування

М: метилювання та/або омилення

Х: відновлення

О: реакція за Судзукі (алкілювання) та омилення

Р: гідрогенізація

Зо 0: омилення

Е: утворення аміду Вайнреба 5: перетворення аміду на кетон (наприклад, реакція за Гріньяром)

Утворення проміжних сполук (ІМ-а) або (ІМ-Б) може бути здійснене за допомогою низки взаємоперетворень функціональних груп, починаючи з проміжних сполук (МІ), (ІХ) або (Х), які або є комерційно доступними, або одержані, наприклад, згідно з процедурами, такими як описані в даному документі.

Сполуки формули (МІ), де К22 являє собою водень або метил, та РО являє собою Вос або є комерційно доступними, або одержані згідно з низкою відомих процедур, таких як описані у даному документі. Їх можна фторувати або алкілювати згідно з процедурами, відомими у даній галузі техніки, такими як шляхом проведення реакції з М-фторбензолсульфонімідом у присутності основи, такої як ІА, у реакційно-інертному розчиннику, такому як ТНЕ, або шляхом алкілювання за допомогою алкілйодиду після обробки за допомогою основи, такої як ГІНМО5; при цьому необов'язково наступне омилення за умов, відомих у даній галузі техніки, забезпечує одержання сполуки (ХІ).

Сполуки формули (ІХ) також відомі у даній галузі техніки та їх можна алкілювати за допомогою процедур типу реакції за Судзукі із застосуванням умов, відомих фахівцю у даній галузі, таких як застосування боронових кислоти/естера, у присутності каталізатора, такого як

РДА(РРз)4«, у реакційно-інертному розчиннику, такому як 1,4-діоксан, за температурних умов, таких як нагрівання. Наступне омилення та гідрогенізація за умов, аналогічних описаним у даному документі, забезпечують одержання проміжної сполуки формули (ХІ).

Наступне утворення аміду Вайнреба та перетворення аміду на кетон за допомогою реакції за Гріньяром, описані у даному документі, забезпечують одержання необхідних проміжних сполук (ІМ-а) або (ІМ-Б).

Експериментальна процедура 5 осо От Но ит 7 зу 7 Н о у у в у й ! 7 У в Її 7 тра ше а у тва се а (хм о У а (ХУ о ХУ ім ще О и

НА Ж й ра 7 яд. ГалОГеН рр рр Шк Кі ше; ЧИ ком, в тр й (Ос) Й 000 М-й (ХЮ о хм

Схема реакції 5

Т: реакція з метилціаноформіатом

Іо: відновлення

У: дегідрування

УМ: гідрогенізація

Х: сполучення

У: декарбоксилювання та відщеплення захисної групи

Утворення проміжних сполук формули (ІІ-бс), де ---- являє собою СНо або СН.СН», можна здійснювати за допомогою низки стадій синтезу, починаючи з комерційно доступних вихідних речовин формули (ХІМ), таких як М-Вос-нортропінон (185099-67-6| або 6-Вос-3-оксо-6-

Зо азабіцикло|3.1.1|гептан (1246281-86-6)Ї. Реакція з метилціаноформіатом у присутності основи, такої як пВиїі та МНІРІ2, у реакційно-інертному розчиннику, такому як ТНЕ, за відповідної температури, такої як при -78 "С, забезпечує одержання кетоестеру (ХМ), який потім можна відновити за умов, відомих у даній галузі техніки, за допомогою Мавна»е, наприклад, у МеОнН за приблизно 0 "С та потім дегідрувати за допомогою, наприклад, трифтороцтового ангідриду у присутності основи, такої як триетиламін та ОМАР, у реакційно-інертному розчиннику, такому як

ОСМ, при цьому підтримуючи температуру нижче 60 "С. Гідрогенізація за умов, відомих у даній галузі техніки, таких як, наприклад, у присутності паладію на вугіллі як каталізатора у МЕеОН, забезпечує одержання проміжної сполуки (ХМІІЇ), яку потім можна піддавати реакції з проміжними сполуками формули (ХІХ), які або є комерційно доступними, або одержані згідно з процедурами, відомими в даній галузі техніки, у присутності основи, такої як наприклад ІОВА, у реакційно-інертному розчиннику, такому як ТНЕ, за температури від -78 до -60 "С. Реакція з концентрованою НСІ за температурних умов, таких як, наприклад, нагрівання при 150 "С, забезпечує одержання проміжної сполуки (1І-бс) з одночасним відщепленням захисної групи, якщо вона є нестійкою до дії кислот, такою як, наприклад, Вос. Альтернативний спосіб одержання проміжної сполуки формули (ІПІ-бс), де БА являє собою СНЕ», та --- являє собою

СНеСН», з комерційно доступної вихідної речовини описаний у даному документі у прикладах.

ФАРМАКОЛОГІЯ

Сполуки згідно з даним винаходом інгібують активність ферменту РОЕ2, зокрема РОЕЗА, та, як наслідок, підвищують рівні САМР або сОМР у клітинах, що експресують РОЕ2. Відповідно, інгібування активності ферменту РОЕ2 може бути застосовним у лікуванні захворювань, зумовлених недостатніми кількостями САМР або соОМР у клітинах. Інгібітори РОЕ2 також можуть бути корисні в тих випадках, коли підвищення кількості САМР або СМР вище нормальних рівнів приводить в результаті до терапевтичного ефекту. Інгібітори РОЕ2 можна застосовувати для лікування неврологічних та психічних розладів.

Таким чином, даний винахід стосується сполуки формули (І) або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату згідно з даним винаходом для застосування як лікарського препарату, а також застосування сполуки формули (І), або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату згідно з даним винаходом, або фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом для виготовлення лікарського препарату. Даний винахід також стосується сполуки формули (І), або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату згідно з даним винаходом, або фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом для застосування у лікуванні або попередженні, зокрема лікуванні, стану у ссавця, у тому числі у людини, лікування або попередження якого залежить від інгібування ферменту фосфодіестерази 2 або полегшується ним. Даний винахід також стосується застосування сполуки формули (І), або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату згідно з даним винаходом, або фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом для виготовлення лікарського препарату для лікування або попередження, зокрема лікування, стану у ссавця, у тому числі у людини, лікування або попередження якого залежить від інгібування ферменту фосфодіестерази 2 або полегшується ним.

Даний винахід також стосується сполуки формули (І), або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату згідно з даним винаходом, або фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом для застосування у лікуванні, попередженні, зменшенні інтенсивності вияву, контролі або зниженні ризику виникнення різних неврологічних та психічних розладів, асоційованих із порушенням функції фосфодіестерази 2, у ссавця, у тому числі у людини, лікування або попередження яких залежить від інгібування фосфодієестерази 2 або полегшується ним.

Окрім того, даний винахід стосується застосування сполуки формули (Ї), або її

Зо фармацевтично прийнятних солі або сольвату згідно з даним винаходом, або фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом для виготовлення лікарського препарату для лікування, попередження, зменшення інтенсивності вияву, контролю або зниження ризику розвитку різних неврологічних та психічних розладів, асоційованих із порушенням функції фосфодіестерази 2, у ссавця, у тому числі у людини, лікування або попередження яких залежить від інгібування фосфодіестерази 2 або полегшується ним.

Якщо зазначається, що даний винахід стосується застосування сполуки формули (І), або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату, або композиції згідно з даним винаходом для виготовлення лікарського препарату, наприклад, для лікування суб'єкта, наприклад, ссавця, то мається на увазі, що таке застосування необхідно розуміти в певних сферах як спосіб, наприклад, лікування суб'єкта, який передбачає введення суб'єкту, який потребує цього, наприклад, лікування, ефективної кількості сполуки формули (І), або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату, або композиції згідно з даним винаходом.

Зокрема, показання, які можна лікувати за допомогою інгібіторів РОЕ2 окремо або в комбінації з іншими лікарськими засобами, включають без обмеження такі захворювання, які, як вважають, частково опосередковані базальними гангліями, префронтальною корою та гіпокампом.

Ці показання включають неврологічні та психічні розлади, вибрані з психотичних розладів і станів; тривожних розладів; рухових розладів; наркотичної залежності; афективних розладів; нейродегенеративних розладів; розладів або станів, які включають як симптом синдром дефіциту уваги та/або порушення пізнавальної діяльності; розладів, пов'язаних із запам'ятовуванням і консолідацією пам'яті; інсульту й аутичного розладу або аутизму.

Зокрема, психотичні розлади та стани, асоційовані з порушенням функції РОЕ2, включають один або декілька із наступних станів або захворювань: шизофренія, наприклад, параноїдального, дезорганізованого, кататонічного, недиференційованого або резидуального типу; шизофреноформний розлад; шизоафективний розлад, як, наприклад, маніакального або депресивного типу; маніакальний розлад; психотичний розлад, викликаний вживанням певних речовин, такий як психоз, викликаний вживанням алкоголю, амфетаміну, марихуани, кокаїну, галюциногенних речовин, летких речовин наркотичної дії, опіоїдів або фенциклідину; розлади особистості параноїдального типу і розлад особистості шизоїдного типу.

Зокрема, тривожні розлади включають панічний розлад; агорафобію; специфічну фобію, соціофобію; обсесивно-компульсивний розлад; посттравматичний стресовий розлад, гострий стресовий розлад та генералізований тривожний розлад.

Зокрема, рухові розлади включають хворобу Хантінгтона та дискінезію; хворобу Паркінсона; синдром неспокійних ніг і есенціальний тремор. Окрім того, можуть бути включені синдром

Туретта й інші тикові розлади.

Зокрема, розлад центральної нервової системи являє собою розлад, пов'язаний із вживанням певних речовин, вибраний із групи зловживання алкоголем; алкогольної залежності; алкогольного абстинентного синдрому; алкогольного абстинентного синдрому з делірієм; психотичного розладу, викликаного вживанням алкоголю; амфетамінової залежності; амфетамінового абстинентного синдрому; кокаїнової залежності; кокаїнового абстинентного синдрому; нікотинової залежності; нікотинового абстинентного синдрому; опіоїдної залежності та опіоїдного абстинентного синдрому.

Зокрема, афективні розлади та афективні епізоди включають депресію, манію та біполярні розлади. Переважно афективний розлад вибраний із групи біполярних розладів (І і ІЇ типу); циклотимічного розладу; депресії; дистимічного розладу; значного депресивного розладу; терапевтично резистентної депресії та афективного розладу, викликаного вживанням певних речовин.

Зокрема, нейродегенеративні розлади включають хворобу Паркінсона; хворобу Хантінгтона; деменцію, таку як, наприклад, хвороба Альцгеймера; мультиінфарктну деменцію; СНІД- асоційовану деменцію або лобно-скроневу деменцію. Нейродегенеративний розлад або стан включає дисфункцію реакцій стріарних середніх шипикових нейронів.

Зокрема, розлади або стани, що включають як симптом синдром дефіциту уваги та/або порушення пізнавальної діяльності, включають деменцію, таку як хвороба Альцгеймера; мультиінфарктну деменцію; деменцію, зумовлену хворобою із тільцями Леві; алкогольну деменцію або стійку деменцію, викликану вживанням певних речовин; деменцію, асоційовану із внутрішньочерепними пухлинами або черепно-мозковою травмою; деменцію, асоційовану із хворобою Хантінгтона; деменцію, асоційовану із хворобою Паркінсона; СНІД-асоційовану деменцію; деменцію, зумовлену хворобою Піка; деменцію, зумовлену хворобою

Крейтцфельдта-Якоба; інші захворювання, що включають делірій; амнестичний розлад; посттравматичний стресовий розлад; інсульт; прогресуючий над'ядерний параліч; олігофренію; порушення здатності до навчання; синдром дефіциту уваги/гіперактивності (АОНО); помірний когнітивний розлад; синдром Аспергера; вікове когнітивне порушення та когнітивне порушення, пов'язане зі сприйняттям, увагою, навчанням або пам'яттю.

Зокрема, розлади, пов'язані із запам'ятовуванням і консолідацією пам'яті, включають розлади пам'яті, як, наприклад, вікова втрата пам'яті, амнезія.

Переважно психотичний розлад вибраний із групи шизофренії, маніакальних розладів, шизоафективних розладів, шизофреноформних розладів та психотичного розладу, викликаного вживанням певних речовин.

Переважно розлад центральної нервової системи являє собою розлад особистості, вибраний із групи обсесивно-компульсивного розладу особистості та шизоїдного, шизотипічного розладу.

Переважно розлад центральної нервової системи являє собою афективний розлад, вибраний із групи біполярних розладів (І та Ії типу), циклотимічного розладу, депресії, дистимічного розладу, значного депресивного розладу; терапевтично резистентної депресії та афективного розладу, викликаного вживанням певних речовин.

Переважно розлад центральної нервової системи являє собою синдром дефіциту уваги/гіперактивності.

Переважно розлад центральної нервової системи являє собою когнітивний розлад, вибраний із групи делірію, стійкого делірію, викликаного вживанням певних речовин, деменції, деменції, зумовленої ВіІЛ-захворюванням, деменції, зумовленої хворобою Хантінгтона, деменції, зумовленої хворобою Паркінсона, деменції альцгеймерівського типу, стійкої деменції, викликаної вживанням певних речовин, та помірного когнітивного порушення.

Переважно розлади, що підлягають лікуванню за допомогою сполук формули (І) або їхньої фармацевтично прийнятних солі або сольвату за даним винаходом, вибрані із шизофренії; обсесивно-компульсивного розладу; генералізованого тривожного розладу; хвороби

Хантінгтона; дискінезії; хвороби Паркінсона; депресії; біполярних розладів; деменції, такої як хвороба Альцгеймера; синдрому дефіциту уваги/гіперактивності; наркотичної залежності; інсульту й аутизму.

Переважно розлади, що підлягають лікуванню за допомогою сполук формули (І) або їхніх фармацевтично прийнятних солі або сольвату за даним винаходом, являють собою шизофренію, в тому числі її позитивні та негативні симптоми, а також порушення пізнавальних здібностей, таких як погіршення уваги або пам'яті.

Серед згаданих вище розладів особливе значення має лікування тривожності, обсесивно- компульсивного розладу, посттравматичного стресового розладу; генералізованого тривожного розладу, шизофренії, депресії, синдрому дефіциту уваги/гіперактивності, хвороби Альцгеймера, деменції, зумовленої хворобою Хантінгтона, деменції, зумовленої хворобою Паркінсона, деменції альцгеймерівського типу, стійкої деменції, викликаної вживанням певних речовин, та помірного когнітивного порушення.

Серед згаданих вище розладів особливе значення має лікування тривожності, обсесивно- компульсивного розладу, шизофренії, депресії, синдрому дефіциту уваги/гіперактивності та хвороби Альцгеймера.

Інші розлади центральної нервової системи включають тривожний розлад, асоційований із шизофренією, та коморбідну депресію і тривожність, зокрема значний депресивний розлад із коморбідним генералізованим тривожним розладом, соціальним тривожним розладом або панічним розладом; при цьому варто розуміти, що коморбідна депресія та тривожність також можуть позначатися термінами "депресія, що супроводжується тривожністю", "змішані тривожність та депресія", "змішаний тривожний та депресивний розлад" або "великий депресивний розлад із симптомами тривожності", які використовуються в даному документі без обмеження.

У даний час у четвертому виданні Посібника з діагностики та статистики психічних розладів (0О5М-ІМ) Американської психіатричної асоціації представлений спосіб діагностики для ідентифікації розладів, описаних у даному документі. Фахівцю у даній галузі буде зрозуміло, що для неврологічних і психічних розладів, описаних у даному документі, існують альтернативні системи номенклатури, нозологічні підходи та системи класифікації, і що вони видозмінюються разом із прогресом у галузі медицини та науковим прогресом. Наприклад, в "Атегісап

Рзусніайніс Авзосіайоп: Оіадповіїс апа сіаїйївіїса! Мапиаї ої Мепіаї Оізогаегтв, Бій Еайіоп. Апіпдіюп,

МА, Атегісап Рвзусніайіс Авзосіайоп, 2013" (05М-5'М) використовуються такі терміни, як депресивні розлади, зокрема значний депресивний розлад, стійкий депресивний розлад (дистимія), депресивний розлад, викликаний вживанням певних речовин/лікарських препаратів; нейрокогнітивні розлади (МСО) (як важкі, так і легкі), зокрема нейрокогнітивні розлади, зумовлені хворобою Альцгеймера, судинний МСО (такий як судинний МСО, що проявляється у вигляді множинних інфарктів), МСО, зумовлений ВІЛ-інфекцією, МСО, зумовлений травматичним пошкодженням головного мозку (ТВІ), МСО, зумовлений хворобою Паркінсона,

МСОСО, зумовлений хворобою Хантінгтона, лобно-скроневий МСО, МСО, зумовлений пріонною хворобою, та МСО, викликане вживанням певних речовин/лікарських препаратів; порушення нервово-психічного розвитку, зокрема інтелектуальне порушення, специфічне порушення здатності до навчання, порушення нервово-психічного розвитку рухових функцій, комунікативний розлад і синдром дефіциту уваги та гіперактивності (АОНО); розлади, пов'язані зі вживанням певних речовин, та адиктивні розлади, зокрема розлад, пов'язаний зі вживанням алкоголю, розлад, пов'язаний зі вживанням амфетаміну, розлад, пов'язаний зі вживанням марихуани, розлад, пов'язаний зі вживанням кокаїну, розлад, пов'язаний зі вживанням інших галюциногенних речовин, розлад, пов'язаний зі вживанням тютюну, розлад, пов'язаний зі вживанням опіоїдів, і розлад, пов'язаний зі вживанням фенциклідину; розлади шизофренічного спектра та інші психотичні розлади, зокрема шизофренія, шизофреноформний розлад, шизоафективний розлад, маніакальний розлад, короткочасний психотичний розлад, психотичний розлад, викликаний вживанням певних речовин/лікарських препаратів; та циклотимічний розлад (який згідно з О5М-5"М потрапляє під категорію біполярних і споріднених із ними розладів). Такі терміни можуть застосовуватися фахівцем у даній галузі як альтернативна номенклатура для деяких захворювань або станів, які згадуються в даному документі. Додаткове порушення нервово-психічного розвитку включає розлад аутистичного спектра (АБО), який згідно з О5М-5'"М, охоплює розлади, раніше відомі під термінами ранній дитячий аутизм, дитячий аутизм, аутизм Каннера, високофункціональний аутизм, атипічний аутизм, первазивний розлад розвитку без додаткових уточнень, дезінтегративний розлад дитячого віку та синдром Аспергера.

Таким чином, даний винахід також стосується сполуки формули (І) або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату згідно з даним винаходом для застосування у лікуванні будь- якого із вищезгаданих у даному документі захворювань.

Даний винахід також стосується сполуки формули (І) або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату згідно з даним винаходом для застосування у лікуванні будь-якого із вищезгаданих у даному документі захворювань.

Даний винахід також стосується сполуки формули (І) або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату згідно з даним винаходом для лікування або попередження, зокрема лікування, будь-якого із вищезгаданих у даному документі захворювань.

Даний винахід також стосується застосування сполуки формули (І) або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату згідно з даним винаходом для виготовлення лікарського препарату для лікування або попередження будь-якого із вищезгаданих у даному документі хворобливих станів.

Даний винахід також стосується застосування сполуки формули (І) або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату згідно з даним винаходом для виготовлення лікарського препарату для лікування будь-якого із вищезгаданих у даному документі хворобливих станів.

Сполуку формули (І) або її фармацевтично прийнятні сіль або сольват за даним винаходом можна вводити ссавцям, переважно людям, для лікування або попередження будь-якого із вищезгаданих у даному документі захворювань.

З огляду на користь сполук формули (І) та їх фармацевтично прийнятних солей та сольватів згідно з даним винаходом передбачений спосіб лікування вищезгаданого у даному документі розладу або захворювання, який передбачає введення суб'єкту, який потребує цього, терапевтично ефективної кількості сполуки формули (І), або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату, або фармацевтичних композицій, описаних у даному документі.

Указані способи передбачають введення, тобто системне або місцеве введення, переважно пероральне введення, терапевтично ефективної кількості сполуки формули (І) або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату згідно з даним винаходом теплокровним тваринам, у тому числі людям.

Таким чином, даний винахід також стосується способу попередження та/або лікування будь- якого із вищезгаданих у даному документі захворювань, що передбачає введення терапевтично ефективної кількості сполуки формули (І) або її фармацевтично прийнятних солі або сольвату згідно з даним винаходом пацієнту, який потребує цього.

Зо Описаний у даному документі інгібітор РОЕ2 можна застосовувати окремо, в комбінації або в комбінації з іншими фармацевтичними засобами, такими як інші засоби, що застосовуються у лікуванні психозів, таких як шизофренія та біполярний розлад, обсесивно-компульсивний розлад, хвороба Паркінсона, когнітивне порушення та/або втрата пам'яті, наприклад, агоністи нікотинових ацетилхолінових рецепторів а-7, інгібітори РОЕ4 (роліпрам, СЕВК-7р, 15К356278,

О5К256066, апреміласт, МК-0952, рофлуміласт, АМ2898, АМ2728, АгШо (циломіласт), дотраверин, рономіласт (елбіміласт), реваміласт, тетоміласт, Еб005, зОР-1116, НТО712, МК- 0873), інгібітори РОЕ5 (силденафіл, варденафіл, тадалафіл, уденафіл, аванафіл, міроденафіл, лоденафіл, дазантафіл, РЕ-00489791), РОЕЗ9 (РЕ-04447943), інші інгібітори РОЕ2 (Вау 60-7550,

РЕ-999, МО-7001), інгібітори РОЕ1О (РЕ-02545920, АМО579), інгібітори РОЕ2 та 10, блокатори кальцієвих каналів, модулятори мускаринових ацетилхолінових рецепторів ті та тее, модулятори аденозинових рецепторів, ампакіни, модулятори ММОА-К, модулятори ток, модулятори дофамінових рецепторів, модулятори серотонінових рецепторів, модулятори канабіноїдних рецепторів, інгібітори НОАС (вориностат (ЗАНА), панобіностат, квізиностат, вальпроєва кислота) та інгібітори холінестерази (наприклад, донепезил, ривастигмін та галантамін). У випадку таких комбінацій сполуку формули (І) або її фармацевтично прийнятні сіль або сольват за даним винаходом можна використовувати в комбінації з одним або декількома іншими лікарськими засобами у лікуванні, попередженні, контролі, зменшенні інтенсивності вияву або зниженні ризику розвитку захворювань або станів, щодо яких сполука формули (І) або інші лікарські засоби можуть бути корисними, при цьому комбінація лікарських засобів разом є більш безпечною або більш ефективною, ніж кожен із лікарських засобів окремо.

Фахівцю у даній галузі буде зрозуміло, що терапевтично ефективною кількістю інгібітора

РОЕ2 за даним винаходом є кількість, достатня для інгібування ферменту РОЕ2, і що ця кількість варіює, окрім іншого, залежно від типу захворювання, концентрації сполуки у терапевтичному складі та стану пацієнта. Зазвичай кількість інгібітора РОЕ2, що підлягає введенню як терапевтичний засіб для лікування захворювань, за яких інгібування ферменту

РОЕАЗ є доцільним, таких як розлади, описані у даному документі, буде визначатися у кожному конкретному випадку лікарем.

Придатною дозою зазвичай є доза, яка дає у результаті концентрацію інгібітора РОЕ2 у 60 ділянці, що оброблюється, в діапазоні від 0,5 нМ до 200 мкМ та в більш типовому випадку від 5

НМ до 50 мкМ. Для досягнення цих лікувальних концентрацій пацієнту, який потребує лікування, ймовірно будуть вводити від 0,001 мг/кг до 15 мг/кг ваги тіла, зокрема від 0,01 мг/кг до 2,50 мг/кг ваги тіла, зокрема від 0,01 до 1,5 мг/кг ваги тіла, зокрема від 0,1 мг/кг до 0,50 мг/кг ваги тіла.

Кількість сполуки згідно з даним винаходом, яка також називається у даному документі активним інгредієнтом, необхідна для досягнення терапевтичного ефекту, буде, звісно, змінюватися у кожному конкретному випадку, змінюватися залежно від конкретної сполуки, шляху введення, віку та стану пацієнта, який одержує лікування, та конкретного розладу або захворювання, що підлягає лікуванню. Спосіб лікування може також передбачати введення активного інгредієнта згідно зі схемою від одного до чотирьох уведень на добу. У таких способах лікування сполуку згідно з даним винаходом переважно складають перед уведенням.

Як описано в даному документі нижче, придатні фармацевтичні склади одержують за допомогою відомих процедур із застосуванням добре відомих і загальнодоступних інгредієнтів.

ФАРМАЦЕВТИЧНІ КОМПОЗИЦІЇ

У даному винаході також передбачені композиції для попередження або лікування захворювань, за яких інгібування РОЕ2 є доцільним, таких як неврологічні та психічні розлади.

Указані композиції містять терапевтично ефективну кількість сполуки формули (І) та фармацевтично прийнятні носій або розріджувач.

Хоча активний інгредієнт можна вводити окремо, переважно, щоб він був представлений у вигляді фармацевтичної композиції. Відповідно, в даному винаході додатково передбачена фармацевтична композиція, яка містить сполуку згідно з даним винаходом разом із фармацевтично прийнятними носієм або розріджувачем. Носій або розріджувач повинні бути "прийнятними" з погляду на сумісність із іншими інгредієнтами композиції і не повинні бути шкідливими для пацієнтів, які його одержують.

Фармацевтичні композиції за даним винаходом можуть бути одержані будь-якими способами, добре відомими в галузі фармацевтики. Терапевтично ефективна кількість конкретної сполуки, у формі основи або у формі солі приєднання, як активний інгредієнт об'єднують в однорідну суміш із фФфармацевтично прийнятним носієм, який може набувати ряд форм залежно від форми препарату, необхідної для введення. Бажано, щоб ці фармацевтичні композиції знаходилися в стандартній лікарській формі, переважно придатній для системного

Зо введення, такого як пероральне, підшкірне або парентеральне введення; або для місцевого введення, як, наприклад, за допомогою інгаляції, назального спрею, крапель для очей або за допомогою крему, гелю, шампуню тощо. Наприклад, під час одержання композицій у вигляді лікарської форми для перорального введення можна використовувати будь-які звичайні фармацевтичні середовища, такі як, наприклад, вода, гліколі, масла, спирти тощо, у випадку рідких препаратів для перорального введення, таких як суспензії, сиропи, настойки та розчини; або тверді носії, такі як крохмалі, цукри, каолін, змащувальні речовини, зв'язувальні речовини, розпушувачі тощо, у випадку порошків, пілюль, капсул і таблеток. Завдяки своїй простоті введення таблетки та капсули являють собою найбільш переважні стандартні лікарські форми для перорального введення, у випадку яких, безумовно, використовують тверді фармацевтичні носії. У випадку композицій для парентерального введення носій, як правило, щонайменше значною мірою буде містити стерильну воду, хоча може містити й інші інгредієнти, наприклад, для поліпшення розчинності. Наприклад, можна одержувати розчини для ін'єкцій, в яких носій містить фізіологічний розчин, розчин глюкози або суміш фізіологічного розчину та розчину глюкози. Також можна одержувати суспензії для ін'єкцій, у випадку яких можуть застосовуватися відповідні рідкі носії, суспендувальні засоби тощо. У композиціях, придатних для підшкірного введення, носій необов'язково містить засіб, який поліпшує проникнення, та/або придатний змочувальний засіб, необов'язково в комбінації з придатними добавками будь-якої природи в мінімальних пропорціях, при цьому добавки не чинять жодних суттєвих шкідливих впливів на шкіру. Указані добавки можуть полегшувати введення через шкіру та/або можуть бути корисними під час одержання необхідних композицій. Ці композиції можна вводити різними шляхами, наприклад, за допомогою трансдермального пластиру, шляхом точкового нанесення або у вигляді мазі.

Особливо переважно для простоти введення та однорідності дозування складати вищезгадані фармацевтичні композиції у вигляді стандартної лікарської форми. Стандартні лікарські форми в контексті даного опису та формули винаходу стосуються фізично дискретних одиниць, придатних як одиниці дозування, при цьому кожна одиниця містить попередньо визначену кількість активного інгредієнта, розраховану для одержання необхідного терапевтичного ефекту, в поєднанні з необхідним фармацевтичним носієм. Прикладами таких стандартних лікарських форм є таблетки (у тому числі подільні таблетки або таблетки, вкриті 60 оболонкою), капсули, пілюлі, пакети з порошкоподібним продуктом, пластинки, розчини або суспензії для ін'єкцій, чайні ложки з горою, столові ложки з горою тощо, а також їхні окремі кратні кількості.

Залежно від способу введення фармацевтична композиція буде містити від 0,0595 до 9995 за вагою, переважно від 0,195 до 7095 за вагою, більш переважно від 0,195 до 5095 за вагою активного інгредієнта та від 195 до 99,9595 за вагою, переважно від 3095 до 99,995 за вагою, більш переважно від 5095 до 99,995 за вагою фармацевтично прийнятного носія, при цьому всі значення відсоткового вмісту наводяться із розрахунку на загальну вагу композиції.

Сполуку за даним винаходом можна застосовувати для системного введення, такого як пероральне, підшкірне або парентеральне введення; або для місцевого введення, як, наприклад, за допомогою інгаляції, назального спрею, крапель для очей або за допомогою крему, гелю, шампуню тощо. Сполуку переважно вводять перорально.

Точне дозування та частота введення залежать від сполуки, конкретного стану, що підлягає лікуванню, тяжкості стану, що підлягає лікуванню, віку, ваги, статі, ступеня вираження розладу та загального фізичного стану конкретного пацієнта, а також від іншого медикаментозного лікування, яке індивідуум може одержувати, що добре відомо фахівцям у даній галузі. Окрім того, очевидно, що вказана ефективна добова кількість може бути знижена або збільшена залежно від реакції суб'єкта, що підлягає лікуванню, та/(або залежно від оцінки лікаря, що призначає сполуку за даним винаходом.

Кількість сполуки формули (І), яку можна об'єднувати з матеріалом носія для одержання лікарської форми з одноразовим дозуванням, буде змінюватися залежно від захворювання, лікування якого здійснюють, виду ссавця та конкретного способу введення. Однак як загальна вказівка придатні стандартні дози сполуки за даним винаходом можуть, наприклад, переважно містити від 0,1 мг до приблизно 1000 мг активної сполуки. Переважна стандартна доза становить від 1 мг до приблизно 500 мг. Більш переважна стандартна доза становить від 1 мг до приблизно 300 мг. Ще більш переважна стандартна доза становить від 1 мг до приблизно 100 мг. Такі стандартні дози можна вводити більше одного разу на добу, наприклад, 2, 3, 4, 5 або 6 разів на добу, але переважно 1 або 2 рази на добу з тим, щоб загальне дозування для дорослої людини вагою 70 кг перебувало в діапазоні від 0,001 до приблизно 15 мг на кг ваги суб'єкта із розрахунку на одне введення. Переважне дозування становить від 0,01 до приблизно

Зо 1,5 мг на кг ваги суб'єкта із розрахунку на одне введення, і така терапія може продовжуватися протягом декількох тижнів або місяців, а в деяких випадках протягом декількох років. Однак слід розуміти, що певний рівень дози для будь-якого конкретного пацієнта буде залежати від ряду факторів, у тому числі від активності певної використовуваної сполуки; віку, ваги тіла, загального стану здоров'я, статі та режиму харчування індивідуума, що підлягає лікуванню; часу та шляху введення; швидкості виведення; інших лікарських засобів, які були введені раніше; та тяжкості конкретного захворювання, яке піддається терапії, що добре зрозуміло фахівцям у даній галузі.

Типовим дозуванням може бути одна таблетка, яка містить від 1 мг до приблизно 100 мг або від 1 мг до приблизно 300 мг, яку вживають один раз на добу або декілька разів на добу, або одна капсула або таблетка з повільним вивільненням, яку вживають один раз на добу та яка характеризується пропорційно вищим вмістом активного інгредієнта. Ефекту сповільненого вивільнення можна досягти за допомогою матеріалів капсули, які розчиняються за різних значень рН, за допомогою капсул із повільним вивільненням за осмотичного тиску або за допомогою будь-яких інших відомих засобів, що забезпечують контрольоване вивільнення.

У деяких випадках може знадобитися застосування дозувань поза цими діапазонами, що буде очевидно фахівцям у даній галузі. Окрім того, слід відзначити, що клініцист або особистий лікар будуть знати, як і коли починати, переривати, коригувати або закінчувати терапію відповідно до реакції окремого пацієнта.

Щодо композицій, способів і наборів, наведених вище, фахівцю в даній галузі буде зрозуміло, що переважною сполукою для застосування в кожному із них є сполука, вказана в даному документі.

ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНА ЧАСТИНА

Використовуваний у даному документі термін "АСМ" означає ацетонітрил, "АСОН" або "ТЕА" означає оцтову кислоту, "Вос" означає трет-бутоксикарбоніл, "ВосгО" означає ди-трет- бутилдикарбонат, "д." означає день(дні), "ОМАР" 4-диметиламінопіридин, "050" означає диференційну сканувальну калориметрію, "/СМ5" означає рідинну хроматографію/мас- спектрометрію, "НРІ С" означає високоефективну рідинну хроматографію, "ВР НРІ С" означає високоефективну рідинну хроматографію з оберненою фазою, "водн." означає водний, "ОСМ" означає дихлорметан, "БІРЕ" означає /діїзопропіловий етер, "РІРЕА" означає 60 діізопропілетиламін, "ОМЕ" означає М,М-диметилформамід, "Мо" означає диметилсульфоксид, "ЕЮОСІ" означає 1-етил-3-(З-диметиламінопропіл)карбодіїмід, "ЕН" означає етанол, "ЕбО" означає дієтиловий етер, "ЕЮАс" означає етилацетат, "ЕвВМ" або "ТЕА" означає триетиламін, "НАТО" означає гексафторфосфат 1-(біс(диметиламіно)метилені|-ї Н-1,2,3- триазоло|4,5-б|піридиній-3-оксид, "НВТИО" означає гексафторфосфат О-(бензотриазол-1-іл)-

М,М,М'М,-тетраметилуронію, "ІНМО5" означає біс(триметилсиліл)амід літію, "ТНЕ" означає тетрагідрофуран, "хв." означає хвилини, "год." означає години, "пСРВА" означає 3- хлорпербензойну кислоту, "МеОнН" означає метанол, "МТВЕ" означає метил-трет-бутиловий етер, "ва/с" означає паладій на вугіллі, "РЯД(РР з)" означає тетракіс(трифенілфосфін)паладій(0), "ІРЕОН" означає 2-пропанол, "ВМ" або "реак. сум." означає реакційну суміш, "К. Т." або "к. т." означає кімнатну температуру, "ОЇ" означає органічний шар, "В; означає час утримування (у хвилинах), "кільк" означає кількісний, "насич." означає насичений, "ЗЕС" означає надкритичну рідинну хроматографію, "розч." означає розчин, "т. пл." означає точку плавлення, "д.5." означає достатню кількість.

Тонкошарову хроматографію (ТІ С) проводили на пластинках із шаром силікагелю 60 ЕБ254 (МегскК) із застосуванням розчинників із високим ступенем чистоти. Хроматографію на відкритих колонках проводили на силікагелі з розміром частинок 230-400 меш і розміром пор 60 А (Мегск) відповідно до стандартних методик. Автоматизовану колонкову флеш-хроматографію проводили із застосуванням готових до підключення картриджів від МегсК на силікагелі з частинками неправильної форми з розміром частинок 15-40 мкм (одноразові колонки для нормально-фазової флеш-хроматографії) у системі ЗРОТ або Г АЕГАЗН від Аппеп Іпзігитепі.

Якщо стереоцентр позначений "'К5, це означає, що одержали рацемічну суміш щодо вказаного центру, якщо не вказане інше. Стереохімічну конфігурацію центрів у деяких сполуках можна позначати як "К" або "5", якщо суміщ(суміші) розділяли; для деяких сполук стереохімічну конфігурацію у вказаних центрах позначали як "БК" або "5", якщо абсолютна стереохімічна конфігурація не визначена, хоча сама сполука була виділена у вигляді окремого стереоізомеру та є енантіомерно/діастереомерно чистою.

Абсолютну стереохімічну конфігурацію для деяких сполук визначали за допомогою коливального кругового дихроїзму (МСО). Їх вимірювали на Вгикег Едиїпох 55, обладнаному

РМА 37, в рідинній кюветі з вікном із КВг із використанням СО2Сі» як розчинника (РЕМ: 1350 см- 1, ША: 1 мВ, роздільна здатність: 4 см"). Опис застосування МСО для визначення абсолютної конфігурації можна знайти в РуаїКіп А.В. еї. аї, Спігайу, 14:215-219 (2002). Розрахунки аб іпйіо: ретельний пошук щодо конформації виконували на рівні молекулярної механіки із застосуванням Масготоавеї! для здійснення відбору зразків за змішаного торсійного/лизькочастотного режиму з силовим полем ОРІ 5-2005. Локалізовані мінімуми оптимізували із застосуванням дадиаг на рівні ВЗ УР/6-3107 у межах континуальної моделі сольватації Пуассона-Больцмана для імітації розчинника дихлорметану. Усі конформації всередині інтервалу 10 кДж/моль застосовували для моделювання спектра МСО та ІК-спектра.

Дипольні сили та сили обертання розраховували за того ж рівня ВЗІМР/6-310 із застосуванням Уадпцаг. Розраховані спектри МСО, одержані після масштабування частот у 0,97 разів, із перетворенням Лоренца на форму смуг та підсумовуванням внеску кожного конформера, враховуючи ансамбль Больцмана, візуально порівнювали з експериментальними спектрами для визначення точної стереохімії.

Як буде зрозуміло фахівцю у даній галузі, сполуки, синтезовані з використанням вказаних протоколів, можуть існувати у вигляді сольвату, наприклад гідрату, та/або містити залишковий розчинник або незначні домішки. Сполуки, виділені в сольовій формі, можуть характеризуватись цілочисельним стехіометричним індексом, тобто омоно- або дисолі, або проміжним стехіометричним індексом.

Наступні приклади призначені для ілюстрації, а не для обмеження обсягу даного винаходу.

Якщо не вказано інше, усі вихідні речовини одержували від комерційних постачальників і застосовували без додаткового очищення.

А. Синтез проміжних сполук

Проміжна сполука 1 в) с Й

М

Процедура а. Гідрохлорид 4-метил-З-піридинкарбонової кислоти (1:1) (40 г, 230,4 ммоль) додавали до суміші сірчаної кислоти (20 мл) і Меон (400 мл), яку нагрівали зі зворотним холодильником. Суміш нагрівали зі зворотним холодильником протягом ночі, потім її випарювали та одержану завись додавали до холодного розчину Мансоз (64 г) у воді (360 мл).

Продукт екстрагували за допомогою ОСМ і ОЇ висушували над Мо95О»54, фільтрували та випарювали з одержанням проміжної сполуки 1 (28,70 г, 8390).

Процедура Б. У металевий реактор завантажували 3-бром-4-метилпіридин (200 г, 0,116 моль) та суміш ОМЕ/МеонН (1 л/1 л). До одержаного додавали ЕМ (400 г, 0,395 моль), ацетат паладіюці!) (8 г, 0,036 моль) та 1,1"-бісідифенілфосфіно)фероцен (16 г, 0,029 моль). Реактор закривали та подавали газ СО (3 МПа) і реакційну суміш перемішували та нагрівали протягом ночі за 140 "С. Реак. сум. охолоджували, фільтрували та концентрували іп масо. Залишок очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі (градієнт елюента:

ЕОАс/петролейний етер від 1/1 до 1/0). Фракції з продуктом збирали та розчинник випарювали з одержанням необхідної проміжної сполуки 1 (90 г, 5195).

Проміжна сполука 2 в) о й

М

Н

Процедура а. У колбу для гідрогенізації завантажували АСОН (500 мл) і потім додавали РІО» (15,02 г, 66,2 ммоль). Додавали проміжну сполуку 1 (50 г, 330,8 ммоль) і суміш гідрогенізували за 509С протягом 7 днів. Реак. сум. фільтрували через дісаШет та фільтрат випарювали з одержанням проміжної сполуки 2 (52 г), яку застосовували на наступній стадії без додаткового очищення.

Процедура Б. До розчину проміжної сполуки 1 (90 г, 0,595 моль) та АСОН (1 л) додавали оксид платини (5 г, 0,022 моль). Реак. сум. перемішували та гідрогенізували протягом 5 днів за 50 "С за тиску 3,5 кПа. Охолоджену реак. сум. концентрували іп масо з одержанням проміжної сполуки 2 у вигляді солі оцтової кислоти (140 г, 9795, 9095 чистота, визначена за допомогою "ІН-

ЯМР).

Проміжна сполука З

Коо) 6) р ів) і)

Процедура а. До розчину проміжної сполуки 2 (52 г, 330,8 ммоль) у ОСМ (869 мл) додавали

ПІРЕА (85,5 г, 661,5 ммоль) та ОМАР (4,04 г, 33,08 ммоль). Потім до цього розчину маленькими порціями додавали ди-трет-бутилдикарбонат (72,19 г, 330,8 ммоль) і реакційну суміш перемішували за к. т. протягом 1 год. Реак. сум. промивали водою та сольовим розчином й органічний шар висушували над М9505, фільтрували та випарювали. Продукт очищували за допомогою колонкової хроматографії (силікагель, елюент: ОСМ, 190 МеоН в ОСМ, 295, 4965).

Необхідні фракції випарювали з одержанням проміжної сполуки З (64,1 г, 7590).

Процедура Б. До перемішаного й охолодженого (0 "С) розчину проміжної сполуки 2 (140 г, 0,595 моль) у ОСМ (1,5 л) послідовно додавали ди-трет-бутилдикарбонат (130 г, 0,596 моль),

ЕзЗМ (225 г, 1,74 моль) та ОМАР (10 г, 0,082 моль) і перемішування продовжували за к. т. протягом 2 год. Реакційну суміш виливали в НгО (500 мл) й екстрагували за допомогою ОСМ (2х100 мл). Органічні шари відділяли, висушували (Ма?»25О:) та розчинник випарювали з одержанням неочищеної проміжної сполуки З (150 г, 9095, 9095 чистота, визначена за допомогою "Н-ЯМР), яку застосовували як таку на наступній стадії.

Проміжна сполука 4

(е) р но ()

Процедура а. Проміжну сполуку З (64,1 г, 249,1 ммоль) перемішували в Меон (500 мл) за к. т. Додавали Маон (2 М, 747,3 мл) і суміш перемішували протягом 2 год. за к. т. Реак. сум. підкислювали за допомогою 1 н. НСІ і продукт екстрагували за допомогою ЕРО. ОЇ промивали сольовим розчином і висушували над Мо95О54, фільтрували та випарювали з одержанням проміжної сполуки 4 (59,70 г) у вигляді білої твердої речовини.

Процедура р. До перемішаного розчину проміжної сполуки З (150 г, 9095 чистота, 0,524 моль) у МеОнН (0,9 л) додавали 2 М розчин Маон (1,8 моль). Через 14 год. за к. т. реак. сум. екстрагували за допомогою МТВЕ (2х0,8 л). Водний шар підкислювали 1095 лимонною кислотою та потім екстрагували за допомогою ЕЮАс (4х1 л). Об'єднані органічні шари висушували над

Ма?5О», фільтрували та концентрували іп масцо з одержанням неочищеної проміжної сполуки 4 (142 г, 9095 чистота, визначена за допомогою "Н-ЯМР, 10095), яку застосовували як таку на наступній стадії.

Проміжна сполука 5

ГИ ро)

М о

М де

Процедура а. До розчину проміжної сполуки 4 (59,7 г, 0,25 моль) у ТНЕ (800 мл) додавали ді- 1Н-імідазол-1-ілметанон (54 г, 0,33 моль) і суміш перемішували за к. т. протягом 1 год. В іншій колбі до суспензії гідрохлориду М-метоксиметанаміну (1:1) (32,93 г, 0,34 моль) в АСМ (500 мл) додавали триметиламін (35,75 г, 0,35 моль). Обидві суміші об'єднували та перемішували за 502С, здійснюючи при цьому контроль. Проміжний продукт кристалізували із реак. сум. і він не вступав у реакцію з М-метоксиметанаміном для утворення необхідного продукту. Додавали

ОСМ допоки проміжна сполука не розчиниться. Реакційну суміш залишали перемішуватися протягом 1 тижня за 802С. Розчинники випарювали. Залишок розчиняли в ОСМ та промивали водою, 2095 розчином АСОН і врешті насиченим розчином Мансоз. ОЇ. висушували над Мд5бОа, фільтрували та випарювали. Продукт очищували за допомогою колонкової хроматографії (силікагель, елюент: 2956 МеОН в ОСМ, 495). Очищені фракції випарювали з одержанням

Зо проміжної сполуки 5 (70 г, кількісно).

Процедура Б. До перемішаного та охолодженого льодом розчину проміжної сполуки 4 (140 г, 0,518 моль) в ОСМ (2 л) додавали М,О-диметилгідроксиламін (113 г, 1,16 моль) та ЕЇЗМ (113 г, 1,79 моль). Потім додавали НАТИ (235 г, 0,618 моль) та перемішування продовжували протягом 14 год. Розчинник випарювали та додавали розчин МансСоОз (0,5 л) і потім екстрагували за допомогою ЮОСМ (3х1 л). Об'єднані органічні шари відділяли, висушували над Маг»5Ох, фільтрували та концентрували іп масио. Залишок очищували за допомогою флеш- хроматографії на силікагелі з елююванням за допомогою 1-1095 ЕІОАс у петролейному етері з одержанням проміжної сполуки 5 (152 г, 100965).

Проміжна сполука 6 ду»

М

З

Процедура а. Проміжну сполуку 5 (70 г, 244,4 ммоль) у ТНЕ (250 мл) завантажували у колбу в атмосфері М2 й охолоджували до -15 "С. Метилмагнійбромід (1,4 М у суміші толуол/ТНЕ 75/25, 206 мл) додавали по краплях, при цьому температура не перевищувала 0 "С. Після додавання реак. сум. перемішували за к. т. протягом 1 год. Потім реак. сум. виливали на лід з 20 мл АСОН.

Продукт екстрагували за допомогою ЕСО й ОЇ промивали за допомогою 595 розчину МансСоз.

ОЇ. висушували над Мд5О»5, фільтрували та випарювали з одержанням проміжної сполуки 6 (53,35 г, 90965).

Процедура Б. До перемішаного й охолодженого розчину (0 "С) проміжної сполуки 5 (150 г, 0,524 моль) в ТНЕ (2 л) по краплях додавали З М розчин метилмагнійброміду в ТНЕ (0,75 л, 2,25 моль) та перемішування продовжували за к. т. протягом 2 год. Реакційну суміш виливали у водний розчин МНАСІ й екстрагували за допомогою ЮОСМ. Об'єднані органічні шари висушували над Маг5О:, фільтрували та концентрували іп масио. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі з елююванням за допомогою 1-595 ЕОАс у петролейному етері з одержанням проміжної сполуки 6 (120 г, 95905).

Проміжна сполука 7 (о) 6) сур

Е

М де

Проміжну сполуку 6 (53,35 г, 0,22 моль) перемішували в толуолі (1500 мл) за 09С в атмосфері М». Додавали трет-бутоксид калію (34,14 г) за 0-59С і додавали по краплях етиловий естер 2,2-дифтороцтової кислоти (33,01 г, 0,27 моль) за 0-50. Реак. сум. перемішували за к. т. протягом 2 год, потім промивали за допомогою 1095 Н25Ох у воді й ОЇ. висушували над Мдбоха, фільтрували та випарювали з одержанням проміжної сполуки 7 (70,50 г, кількісно).

Проміжна сполука 8 () с но 5

ІЗ а тях

У

Е с-

Е

Проміжну сполуку 7 (70,5 г, 220,8 ммоль), гідрохлорид 1Н-1,2,4-триазол-5-аміну (1:1) (53,22

Зо г, 441,52 ммоль) і ОМЕ (1500 мл) перемішували за 802С протягом 24 год. Додавали ЕЇзМ (20 г) і ди-трет-бутилдикарбонат (20 г). Суміш перемішували протягом 30 хв., випарювали, а потім розчиняли в ЕОАс, промивали водою та сольовим розчином. ОЇ висушували над Мазох,

фільтрували та випарювали. Спостерігали чотири ізомери. Першу фракцію кристалізували з

ЕСО. Кристали відфільтровували та висушували з одержанням проміжної сполуки 8 (24,60 г, 30905). Із маточного розчину одержували другу фракцію сполуки. Кристали відфільтровували та висушували з одержанням проміжної сполуки 8 (2,53 г, 395).Примітка: "К5" означає, що проміжна сполука являє собою рацемічну суміш двох енантіомерів із відносною транс- конфігурацією.

Проміжна сполука 9, ЗА ТА 9В

Мн Мн МН 5 5 (Ек

ТА8 ІВ хОув х х Ь;

Е Е Е

Проміжна сполука 9 Проміжна сполука За Проміжна сполука 90

До розчину проміжної сполуки 8 (24,6 г, 67 ммоль) у Меон (350 мл) додавали НСІ-ІРТОН (350 мл) і реак. сум. перемішували протягом 2 год. за к. т. Реак. сум. випарювали та продукт кристалізували з ЕН. Кристали відфільтровували та висушували з одержанням 20,33 г неочищеної речовини, до якої додавали воду, МагбОз та ОСМ. ОЇ висушували над Ма5Ох5, фільтрували та випарювали з одержанням 12,80 г проміжної сполуки 9. Цю вільну основу розділяли на енантіомери За та 95 шляхом очищення за допомогою препаративної 5ЕС (нерухома фаза: СпігаІрак ОіасеІ АЮ 30 х 250 мм; рухома фаза: СО», (Меон - іІРГОН 50/50) з 0,495 ІРІМН») з одержанням проміжної сполуки а (5 г, 1995, Еч-7,57 хв.) та проміжної сполуки 96 (5,13 г, 19905, Еч-9,36 хв.).

Проміжні сполуки Уа та 9Б виділяли у вигляді вільних основ, або, альтернативно, їх розчиняли в МеОнН із наступним додаванням НСІ/Л-РГОН і випарюванням суміші. Гідрохлоридні солі (у кожному випадку -НСІ) кристалізували з АСМ, відфільтровували та висушували.

Проміжна сполука 10 (в) й га й

Перемішану суміш 1-6 (7,3 г, 0,03 моль) у диметилацеталі М,М-диметилацетаміду (20 мл, 0,91 г/мл, 0,14 моль) нагрівали за 100 "С протягом 4 год. Реак. сум. концентрували іп масио, випарювали спільно з толуолом (2х20 мл) з одержанням 1-7 у вигляді коричневого залишку (9,4 г, вихід 100,195), який застосовували як такий на наступній стадії.

Зо Проміжна сполука 11 (І-11) пр, ефе) ко ки СК

М-/

До суміші І-10 (9,4 г, 0,03 моль) в АСОН (50 мл, 1,05 г/мл, 1,75 моль) додавали суміш 3- аміно-1,2,4-триазолу (2,68 г, 0,03 моль) у НОАс (50 мл, 1,05 г/мл, 1,75 моль) й одержану в результаті реак. сум. нагрівали на металевому нагрівальному блоці ЮОгузупФ за 130 "С протягом 15 хв. Реак. сум. охолоджували, концентрували іп масио, розбавляли за допомогою ОСМ (0,2 л) й обробляли за допомогою 1 Маон до рН-8. Шари розділяли та водний шар екстрагували за допомогою ЮСМ (2х50 мл). Об'єднані органічні шари висушували (Мо95О»5), фільтрували та концентрували іп масо з одержанням темно-коричневого масла, яке очищували за допомогою хроматографії на силікагелі із застосуванням колонки для флеш-хроматографії Кедізер? 120 г з елююванням градієнтом 0-390 7 н. МНз/МеонН у ОСМ з одержанням проміжної сполуки 11 у вигляді жовтувато-коричневого масла, у вигляді суміші цис:транс-ізомерів--1:4 (2,15 г, вихід 21,4296).

Проміжна сполука 12

Мн зе

М им

Мей 7

М-Й «НС

Перемішану суміш 1-11 (2,15 г, 0,0065 моль) у МеонН (50 мл, 0,79 г/мл, 1,23 моль) обробляли за допомогою НСІ (6 М в іІРГОН) (50 мл, 6 М, 0,3 моль) і через 16 год. за к. т. реак. сум. концентрували іп масо з одержанням брудно-білої твердої речовини. Одержане розтирали з сумішшю ЕСО (200 мл) і АСМ (30 мл) протягом 16 год. Тверду речовину збирали за допомогою фільтрації та висушували з одержанням проміжної сполуки 12 у вигляді брудно-білої твердої речовини, у вигляді суміші цис/транс-ізомерів (1895/8296) (1,7 г, вихід 97,87905).

Проміжна сполука 12А і Проміжна сполука 128 зе ее

МН я чн

М "М

М-/ 0 ансї їі М гнсі

І12а І12р

Перемішану суміш 1-11 (23 г, 0,0694 моль) у МеОнН (165 мл) обробляли за допомогою НСІ (6

М в іІРГОН) (165 мл, 6 М, 0,986 моль) і через 16 год. за к. т. реак. сум. концентрували іп масио з одержанням брудно-білої твердої речовини. Одержане розбавляли водою та ОСМ та обробляли за допомогою МагСОз. ОЇ. висушували над Мд5О5», фільтрували та концентрували іп масцо з одержанням залишку, який очищували із застосуванням СЕ (нерухома фаза:

Спігаїрак? ОіасеІ АЮ 20 х 250 мм, рухома фаза: СО», Меон-іРІОН (50-50) - 0,495 ІРІМН») з одержанням проміжних сполук 12а і 126 та. Одержане розчиняли в Меон (100 мл) й обробляли за допомогою НС (6 М в ІРГОН) (100 мл) за 0 "С протягом 2 год. Леткі речовини випарювали за зниженого тиску й одержані залишки перемішували за 0 "С в ЕБО з одержанням проміжної сполуки 12а (9,25 г, 4395, Р-3,54 хв., (ФЧ"Оо--17,477 (с 0,54, ОМЕ)) та проміжної сполуки 125 (8,8

Зо г, 4295, Кі-3,24 хв., (ФЧОр-16,57 (с 0,52, ОМЕ)).

Проміжна сполука 13 9: в иа (в; (в)

До розчину І ВА (2 М в суміші ТНЕ/гептан/етилбензол, 42,7 мл, 2 М, 85,493 ммоль) в 100 мл

ТНЕ (245 мл) додавали по краплях розчин проміжної сполуки З (20 г, 77,721 ммоль) в ТНЕ (50 мл) за 09Сб. Розчин перемішували протягом 30 хв., а потім переносили в розчин М- фторбензолсульфоніміду (30,6 г, 97,1 ммоль) в 100 мл ТНЕ за 0"С. Реак. сум. перемішували протягом 15 хв. за 02С, а потім за к. т. протягом ночі. Реак. сум. випарювали, додавали Е(АсС і реак. сум. послідовно промивали водою, 0,1 н. розчином НСІ, насиченим розчином Мансоз і сольовим розчином. ОЇ висушували над Мао5О»:, фільтрували та випарювали. Продукт очищували на силікагелі, елюент: ОСМ-»1956 МеоН в ОСМ. Очищені фракції випарювали з одержанням проміжної сполуки 13 (21,4 г, кількісно).

Проміжна сполука 14

(в) ук «Хо

КВІСТЕ но Ге)

Розчин проміжної сполуки 13 (21,4 г, 77,728 ммоль) перемішували в Меон (500 мл) за к. т.

Додавали Маон (486 мл, 2 М, 973 ммоль) і суміш перемішували протягом 2 год. за к. т. Реак. 5 сум. підкислювали за допомогою 1 н. НСІ і продукт екстрагували за допомогою ЕТО. ОЇ. промивали сольовим розчином і висушували над Мд9505, фільтрували та випарювали. Продукт очищували на силікагелі, елюент: ЮОСМ-»596 Меон в ОСМ. Очищені фракції випарювали з одержанням 14 (15 г, 74965).

Проміжна сполука 15 (в) Іс «М

В о Е

КОМ (Ф)

Проміжну сполуку 14 (15 г, 57,407 ммоль) розчиняли в ОСМ (1000 мл). Потім додавали гідрохлорид М,.О-диметилгідроксиламіну (11,2 г, 114,8 ммоль) та ЕВ6ВМ (17,4 г, 172 ммоль).

Реакційну суміш охолоджували до 0 "С. Потім додавали НАТИ (24,0 г, 63,1 ммоль). Реакційну суміш перемішували за к. т. протягом 2 год. Реак. сум. виливали у водн. розчин МаНсСоО:з (100 мл). ОЇ відділяли, висушували за допомогою Моа5зО4 і розчинник випарювали. Залишок очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі, елюент: ОСМ-»195

МеонН в ОСМ. Фракції з продуктом збирали та розчинник випарювали з одержанням необхідного продукту 15 (8,49 г, 4990).

Проміжна сполука 16 (о) ук «о ве

Е

(в)

Проміжну сполуку 15 (8,49, 27,9 ммоль) в ТНЕ (60 мл) поміщали у колбу в атмосфері М2 й охолоджували до -15 "С. Додавали по краплях метилмагнійбромід (16,3 мл, З М, 48,8 ммоль), при цьому температура не перевищувала 0 "С. Після додавання реак. сум. перемішували протягом 1 год. за к. т. Потім реак. сум. виливали на лід з 20 мл АСОН. Продукт екстрагували за допомогою Е2О й ОЇ промивали за допомогою 595 розчину МансСОз. ОЇ висушували над

Зо Маз5ох, фільтрували, і випарювали, і очищували на силікагелі, елюент: ОСМ. Очищені фракції випарювали з одержанням проміжної сполуки 16 (3,20 г, 4490).

Проміжна сполука 17

(о) с «о

КІ де

Е

Ге;

Е

(е)

Е

Проміжну сполуку 16 (3,2 г, 0,0123 моль) перемішували у толуолі (150 мл) за 0С в атмосфері М». Додавали трет-бутоксид калію (1,94 г, 17,3 ммоль) за 0-52С, додавали по краплях етилдифторацетат (1,84 г, 0,0149 моль) за 0-52С. Реак. сум. перемішували за к. т. протягом 2 год. Реак. сум. промивали за допомогою 1095 Н25О4 у воді й ОЇ висушували над Мо5оО5, фільтрували та випарювали з одержанням проміжної сполуки 17 (4,16 г, 99965).

Проміжна сполука 18 (є) с «о

А)

ЕВ

М а іх

Ов,

Р

Проміжну сполуку 17 (4,16 г, 12,3 ммоль) і гідрохлорид 1Н-1,2,4-триазол-5-аміну (2,97 г, 24,7 ммоль) в ОМЕ (40 мл) перемішували за 802С протягом 16 год. Реак. сум. випарювали, додавали

ОСМ та додавали 2 г (Вос)2О і 2 мл ЕвВМ. Суміш перемішували протягом 30 хв., промивали водою, ОЇ. висушували над Ма5О5, фільтрували та випарювали. Продукт (4 ізомери) очищували на силікагелі, елюент: ОСМ-»295 МеоОН в ОСМ. Фракції випарювали з одержанням 3,55 г неочищеної речовини, яку очищували за допомогою препаративної НРІС (нерухома фаза:

ОріїзрпегеФ С18 ОВ - 10 мкм, 200 г, 5 см, рухома фаза: 0,2595 розчин МНАНСО: у воді, СНЗСМ) з одержанням проміжної сполуки 18 (730 мг, 15905).

Проміжна сполука 19

Мн «ІВ5

ЕН

М

2

М кА ль

Е

До проміжної сполуки 18 (0,73 г, 1,894 ммоль) у МеОнН (20 мл) додавали НСЇІ (6 М в ІРГОН) (20 мл, 6 М, 120 ммоль) й одержане перемішували за к. т. протягом ночі. Розчинники випарювали з одержанням проміжної сполуки 19 (600 мг, 99965).

Альтернативна процедура одержання проміжної сполуки 19 та розділення на проміжні сполуки 189а і 19р

Мн МН лАЇ мМ З ; З 7 в7в8 "ев в7їв

М М А М лаві а слі

М ХУ З а, в, а;

Е Е Й

Проміжна сполука 19 Проміжна сполука 19А Проміжна сполука 198

До проміжної сполуки 18 (4,5 г, 11,7 ммоль) в ОСМ (52 мл) додавали трифтороцтову кислоту (ТЕА) (6 М в ІРГОН) (5,4 мл, 6 М, 70 ммоль) й одержане перемішували за к. т. протягом 1 год.

Розчинники випарювали та одержаний залишок розчиняли в ОСМ та промивали насиченим водним розчином Мансаз. ОЇ. відділяли та водний шар повторно екстрагували за допомогою 2 х ОСМ. Об'єднані ОЇ висушували над Ма50», фільтрували та випарювали за зниженого тиску.

Одержаний залишок очищували за допомогою колонкової рфлеш-хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта ОСМ/МНз(Меон), від 99/1 до 93/7, з одержанням проміжної сполуки 19 (2,2 г, вихід 6695) у вигляді рацемічної суміші. Одержане розділяли на енантіомери за допомогою препаративної 5ЕС (нерухома фаза: СпігаІрак ОіасеІ АО 20 х 250 мм, рухома фаза: СО», ЕН 0,495 іІРІМНг) з одержанням проміжних сполук 19а (955 мг, 2995, ЕЧ-2,36 хв.) і 19606 (970 мг, 2995, К-2,99 хв.).

Проміжна сполука 20

НО, ус ле о о 8-(1,1-Диметилетил)-2-метиловий естер 8-азабіцикло(|3.2.1|октан-2,8-дикарбонової кислоти 1033820-28-8) (4,77 г, 17,71 ммоль) перемішували в Мен (41,608 мл) за к. т. Додавали МаОН (106 мл, 1 М, 106 ммоль) і суміш перемішували протягом ночі за к. т. МЕОН випарювали. Реак. сум. підкислювали за допомогою 1 н. НСІ і продукт екстрагували хлороформом. ОЇ. висушували над Мод5О»5, фільтрували та випарювали з одержанням проміжної сполуки 20 (4,52 г, 10090).

Проміжна сполука 21 тег Ж р й (в) (о)

Проміжну сполуку 20 (4,52 г, 17,704 ммоль) розчиняли в ОСМ (200 мл). Потім додавали гідрохлорид М,О-диметилгідроксиламіну (3,454 г, 35,407 ммоль) і Е6М (5,37 г, 53,1 ммоль).

Реакційну суміш охолоджували до 0 "С. Потім додавали НАТИ (7,41 г, 19,5 ммоль). Реакційну суміш перемішували за к. т. протягом 2 год. Реакційну суміш виливали у водн. розчин МансСоОз

Зо (100 мл). ОЇ. відділяли, висушували за допомогою Ма5О»5х і розчинник випарювали. Залишок очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі, елюент: ОСМ-»195

Меон в ОСМ. Фракції з продуктом збирали та розчинник випарювали з одержанням проміжної сполуки 21 (3,03 г, 5790).

Проміжна сполука 22 ве (Ф) о

Проміжну сполуку 21 (3,03 г, 10,2 ммоль) в ТНЕ (50 мл) поміщали у колбу в атмосфері М» та охолоджували до -15 "С. Додавали по краплях метилмагнійбромід (12,7 мл, 1,4 М, 17,8 ммоль),

Зо при цьому температура не перевищувала 0 "С. Після додавання реак. сум. перемішували протягом 1 год. за к. т. Потім реак. сум. виливали на лід з АСОН (20 мл). Продукт екстрагували за допомогою Еб2О й ОЇ промивали за допомогою 595 розчину МанСОз. ОЇ висушували над

Маз5ох, фільтрували, і випарювали, і очищували на силікагелі, елюент: ОСМ. Очищені фракції випарювали з одержанням проміжної сполуки 22 (2,57 г, 10090).

Проміжна сполука 23

Е і жк о о в)

Проміжну сполуку 22 (2,57 г, 0,0101 моль) перемішували у толуолі (150 мл) за 0 в атмосфері М». Додавали трет-бутоксид калію (1,59 г, 14,2 ммоль) за 0-52С, додавали по краплях етилдифторацетат (1,52 г, 0,0122 моль) за 0-520. Реак. сум. перемішували за к. т. протягом 2 год. Реак. сум. промивали за допомогою 1095 Н25О4 у воді й ОЇ висушували над Мо5оО5, фільтрували та випарювали з одержанням проміжної сполуки 23 (3,34 г, 99965).

Проміжна сполука 24

ДА

5 й

Р "Х 5

М М о) жи СК м-/

Проміжну сполуку 23 (3,34 г, 10,1 ммоль) і гідрохлорид 1Н-1,2,4-триазол-5-аміну (2,43 г, 20,2 ммоль) у ОМЕ (30 мл) перемішували за 802С протягом 16 год. Реак. сум. випарювали, додавали

ОСМ та додавали 2 г (Вос)20О і ЕВМ (2 мл). Суміш перемішували протягом 30 хв., промивали водою, ОЇ. висушували над Ма5О5, фільтрували та випарювали. Продукт (4 ізомери) очищували на силікагелі, елюент: ОСМ-»295 МеоОН в ОСМ. Фракції випарювали з одержанням 3,07 г неочищеної речовини, яку очищували за допомогою препаративної НРІС (нерухома фаза:

ОріїєрпегеФ С18 ОЮ0В - 10 мкм, 200 г, І.О. 5 см, рухома фаза: 0,2595 розчин МНАНСО: у воді,

Меон) з одержанням проміжної сполуки 24 (1,07 г, 2890).

Проміжна сполука 25 5

МН

Е І « ен ої і: в,

Коо)

До проміжної сполуки 24 (1,07 г, 2,82 ммоль) в Меон (30 мл) додавали НСІ (6 М в 30 мл

ІРОН, 6 М, 179 ммоль) і реакційну суміш перемішували за к. т. протягом ночі. Розчинники випарювали та продукт кристалізували з етеру. Кристали відфільтровували та висушували з одержанням проміжної сполуки 25 у вигляді солі хлористоводневої кислоти (1,12 г, 112965).

Альтернативна процедура одержання проміжної сполуки 25

Стадія 1. Проміжна сполука 43 о 85 А од Ф) 7 з б (Ф) (6)

Додавали н-бутиллітій (пВиї і, 106,5 мл, 266,3 ммоль, 2,5 М у гексанах) за ОС до розчину діізопропіламіну (26,95 г, 266,3 ммоль) у ТНЕ (500 мл). Реакційну суміш перемішували за ОС протягом 30 хв., потім її охолоджували до -782С й обробляли розчином М-Вос-нортропінону (50 г, 221,9 ммоль) в ТНЕ (75 мл). Одержану суміш перемішували за -782С протягом 90 хв., потім додавали метилціаноформіат (22,9 мл, 288,5 ммоль). Забезпечували нагрівання реак. сум. до к. т. та перемішували її протягом ночі. Реакційну суміш гасили насиченим водним розчином МНАСІ, потім її розбавляли за допомогою ЕЮАс. Органічний шар відділяли, потім промивали водою та сольовим розчином, висушували над Моа5О»:, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Одержаний залишок очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта: від 100956 ОСМ до 196 МеоН у ОСМ з одержанням проміжної сполуки 43 (60,25 г, 95,890).

Стадія 2. Проміжна сполука 44 нОоВ5 вв - в (Ф) 5 (6)

Додавали борогідрид натрію (16,02 г, 423,5 ммоль) до холодного (льодяна баня) розчину проміжної сполуки 43 (60 г, 211,8 ммоль) у метанолі (700 мл) та забезпечували перемішування реакційної суміші протягом 5 год. Завершену реакцію гасили насиченим водним розчином

МНА:СІ, потім розчинник випарювали до сухого стану за зниженого тиску. Одержаний залишок розчиняли у воді та екстрагували за допомогою ЗхОСМ. Об'єднані органічні шари висушували над Ма50О5, фільтрували та концентрували іп масио з одержанням проміжної сполуки 44 (59 г, 97,695), яку застосовували як таку без додаткового очищення.

Стадія 3. Проміжна сполука 45 0» (о) й ай - о 5Оо

По краплях дуже повільно додавали трифтороцтовий ангідрид (57,5 мл, 413,5 ммоль) (УВАГА! екзотермічна реакція) до розчину проміжної сполуки 44 (59 г, 206,8 ммоль), триетиламіну (115 мл, 827,1 ммоль) і 4-(диметиламіно)піридину (2,52 г, 20,7 ммоль) у ОСМ (800 мл), при цьому підтримуючи температуру нижче 602С. Реакційну суміш перемішували за к. т. протягом ночі, потім її охолоджували на льодяній бані та гасили водою. рН одержаного розчину

Зо регулювали до 8-8,5 із застосуванням насиченого водного розчину МанНсСоОз і забезпечували його перемішування за к. т. протягом 1 години. Потім водний шар екстрагували З х ОСМ, потім об'єднані органічні шари висушували над М950О.5, фільтрували та концентрували іп масицо.

Одержаний залишок очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта від 10095 ОСМ до 2956 МеоОН у ОСМ з одержанням проміжної сполуки 45 (33,7 г, 6190).

Стадія 4. Проміжна сполука 46 в в -о85 Сдо (в) (6)

У колбу, що містить проміжну сполуку 45 (2,44 г, 9,13 ммоль) і Ра/С (1095) (0,971 г, 0,913 ммоль), додавали МеоОН (59 мл) в атмосфері азоту. В одержаному створювали вакуум і заповнювали газоподібним воднем та перемішували його за к. т. протягом ночі. Реакційну суміш фільтрували через подушку із Сеїйеф), потім розчинник видаляли іп масио. Одержаний залишок очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта від 10096 ОСМ до 296 МеОН у ОСМ з одержанням проміжної сполуки 46 (2 г, 8195).

Стадія 5. Проміжна сполука 47

А З е;

Е ї-х й у 5 дв б ее УМ ві м-/

І ОА (54,3 мл, 108,7 ммоль, 2 М у суміші циклогексан/етилбензол/ТНЕ) додавали по краплях за температури від -78 "С до -60 "С до розчину проміжної сполуки 46 (24,4 г, 90,6 ммоль) у безводному ТНЕ (363 мл) в атмосфері азоту. Після додавання реакційну суміш нагрівали до -

З09Сб ії перемішували протягом 10 хв. перед охолодженням знову до -782С. 7-Хлор-5- (дифторметил)-(1,2,4)гриазоло|1,5-а|Іпіримідин (11340394-63-9|, 18,5 г, 90,6 ммоль) розчиняли в мінімальній кількості ТНЕ і додавали по краплях за допомогою шприца. Реакційну суміш перемішували за -60 "С протягом 1 год., потім температуру підвищували до к. т. і реакцію гасили насиченим водним розчином МН:СІ. Леткі речовини випарювали іп масо й одержаний залишок розділяли між ЕАс і водою. Шари розділяли, потім водний шар екстрагували за допомогою 2 х ЕІОАбс. Об'єднані ОЇ промивали сольовим розчином, висушували над Мда5оха, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Одержаний залишок кристалізували з діетилового етеру із одержанням проміжної сполуки 47 (23,8 г, 6095). Фільтрат випарювали та одержаний залишок очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта від 10095 ОСМ до 295 МеоН в ОСМ з одержанням проміжної сполуки 47 (2 г, 595) після перекристалізації з діетилового етеру.

Стадія 6. Проміжна сполука 25, проміжна сполука 25а і проміжна сполука 25р

Е йно Е 8 Е птн 5

Е -к Мн МН . /Ї МН

І 5 в Е ЗИ Но Е ок В

М-/ (М, в "М к-/ М--/

Проміжна сполука 25 Проміжна сполука 25А Проміжна сполука 258

Проміжну сполуку 47 (25,8 г, 58,9 ммоль) перемішували в концентрованому розчині НСІ (266 мл, 3,19 моль, 3795 в НгО) за 15022 протягом ночі. Леткі речовини випарювали іп масио й одержаний залишок двічі випарювали спільно з толуолом. Продукт обробляли насиченим водним розчином МансСОз до основного рН. Водний шар екстрагували за допомогою ОСМ, потім органічний шар висушували над Мо95О», фільтрували та випарювали за зниженого тиску.

Одержаний залишок очищували за допомогою колонкової рфлеш-хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта від 10095 ЮОСМ до 895 Меон/МНз у ОСМ з одержанням проміжної сполуки 25 у вигляді рацемічної суміш (13 г, 7995). Дану речовину очищували за допомогою препаративної ЕС (нерухома фаза: СпігаІрак Оіасе! АО 20 х 250 мм, рухома фаза: бО», БЕЮН - 04 іРІМН»). 15,45,55-Енантіомер перетворювали на його сіль НСІ і перекристалізовували з СНІ3СМ з одержанням проміжної сполуки 25а (5,58 г, 30905, К-2,91 хв.,

ІФеоо--66,6 (с-0,48, ОМЕ)).

Проміжна сполука 26 лой о о

Суміш 1-трет-бутил-3-метил 4-((трифторметил)сульфоніл)окси)-5,6-дигідропіридин-1,9У(2Н)- дикарбоксилату (161491-25-4) (15 г, 38,53 ммоль, одержаного згідно з Апдем/. Спет. Іпі. Ед. 2015, 54, 12942-12946), М-бутилборонової кислоти (4426-47-5| (5,89 г, 57,8 ммоль), Ра(РРАз)4 14221-01-3) (1,78 г, 1,54 ммоль) і Маг6СОз (497-19-81) (8,167 г, 77,052 ммоль) в 1,4-діоксані (123-

91-11 (300 мл) перемішували та нагрівали за 902С протягом ночі. Леткі речовини випарювали іп масцо й одержаний залишок обробляли 1 н. водним розчином НСІ. Водний шар екстрагували за допомогою ЮСМ, потім об'єднані ОЇ висушували над Мад5О»5, фільтрували та випарювали іп масцо. Одержаний залишок очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта ОСМ-Меон (9:1, об./06.3/ОСМ, від 0/100 до 30/70). Це забезпечувало одержання 3,65 г 1-трет-бутил-5-метил-4-бутил-3,6-дигідро-2Н- піридин-1,5-дикарбоксилату, який розчиняли в суміші метанолу та 1 н. водного розчину МАОН (171, об./06б., 200 мл) та перемішували протягом ночі за к. т. Леткі речовини випарювали за зниженого тиску й одержаний залишок поміщали на лід та підкислювали 1 н. водним розчином

НОСІ. Водний шар екстрагували хлороформом, потім об'єднані ОЇ висушували над Мда5ох, фільтрували та випарювали за зниженого тиску. Одержаний залишок очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта від 1905

МеонН в ОСМ до 295 МеОН в ОСМ з одержанням проміжної сполуки 26 (1,69 г, вихід 15,5905).

Проміжна сполука 27 лои (в) (в)

Проміжну сполуку 26 (1,47 г, 5,188 ммоль) додавали до суспензії Ра/С (1095) (668 мг, 0,63 ммоль) в Ммеон 167-56-1)| (134 мл). Потім суміш поміщали в атмосферу Нео та перемішували протягом 36 год. Після цього каталізатор фільтрували через подушку з Сеїйе і розчинник випарювали за зниженого тиску з одержанням проміжної сполуки 27 (1,45 г, 9890).

Проміжна сполука 28

У не;

МН и "З

І ж км у

М- . НОЇ

Відповідно до процедури, аналогічної процедурі, представленій для синтезу проміжної сполуки 8, синтезували проміжну сполуку 28, починаючи з проміжної сполуки 27 з одержанням проміжної сполуки 28 (200 мгГг).

Проміжні сполуки 29, 29А та 298

Коо) ке; о р (в) шип: нов іх Е вом Е воша

Ше Ше Ше м- м- м-

Проміжна сполука 29 Проміжна сполука 29А Проміжна сполука 298

Додавали Ман (6095 дисперсія в мінеральному маслі, 1,5 г, 39,05 ммоль) до розчину трет- бутил-3-(5-«дифторметил)-(1,2,4|гриазоло(1,5-а|піримідин-7-іл|Іпіперидин-1-карбоксилату, який одержували аналогічно до проміжної сполуки 8 і 11, починаючи з З-піридинкарбонової кислоти (11,5 г, 32,54 ммоль) в ОМЕ (500 мл) за к. т. та у потоці М». Реакційну суміш перемішували протягом 30 хв. за к. т., потім додавали по краплях метилйиодид (5,54 г, 39,05 ммоль) і суміш перемішували протягом ночі за к. т. Додавали воду та продукт екстрагували за допомогою

ЕТОАс. ОЇ промивали сольовим розчином, висушували над МоубзО».4, фільтрували та випарювали. Одержаний залишок очищували за допомогою препаративної НРІ С (нерухома фаза: ОріїзрпегеФ С18 ОВ - 10 мкм, 200 г, 1.0. 5 см, рухома фаза: 0,2595 розчин МНАНСО:» у воді, МеоОН) з одержанням проміжної сполуки 29 (4,32 г, 3695) у вигляді рацемічної суміші.

Одержане розділяли на енантіомери за допомогою препаративної 5ЕС (нерухома фаза:

СпПігаїсеї! Оіасе! 0) 20 х 250 мм, рухома фаза: СО», ІРГОН-О, 295 ІРІМН») з одержанням проміжних сполук 29а(2 г, 17905) і 295 (2 г, 1795).

Проміжна сполука ЗОА

Е р МН

Е і чХ

Я НС у /Й

М-/

До проміжної сполуки 29а (500 мг, 1,36 ммоль) в МеОнН (20 мл) додавали НС (6 М в 20 мл

ІРОН, 6 М, 120 ммоль) і реакційну суміш перемішували за к. т. протягом ночі. Розчинники випарювали з одержанням проміжної сполуки Зба у вигляді солі хлористоводневої кислоти (400 мг, 9790).

Проміжна сполука ЗОВ

Е

7 МН

Е і "З

М Неї ч кт М

М-/

Проміжну сполуку ЗОБ одержували так само, як описано для проміжної сполуки Здба, починаючи з 2956 (400 мг, 9790). Й

АЛЬТЕРНАТИВНА ПРОЦЕДУРА ОДЕРЖАННЯ ПРОМІЖНОЇ СПОЛУКИ 29

Стадія 1

Проміжна сполука 31 0) ХЕ од ото

Додавали К»бОз (33,15 г, 024 моль) до перемішаного розчину /1-(трет- бутоксикарбоніл)піперидин-3-карбонової кислоти І84358-12-3) (50,0 г, 0,22 моль) в ОМЕ (600 мл) за к. т. Через 30 хвилин додавали метилйодид (34,05 г, 0,24 моль) і реакційну суміш перемішували протягом ще 2,5 год. за к. т. Леткі речовини випарювали іп масо й одержаний

Зо залишок поміщали у воду й екстрагували за допомогою БІРЕ. Об'єднані ОЇ висушували над

Ма5О., фільтрували та випарювали з одержанням 54,75 г проміжної сполуки 31, яку застосовували як таку на наступній стадії.

Стадія 2

Проміжна сполука 32 се ра

Додавали по краплях ГІНМО5 (450 мл, 0,45 моль, 1 М) до розчину проміжної сполуки 31 (54,75 г, 0,22 ммоль) в ТНЕ (1 л) за -782С і в атмосфері М2. Розчин перемішували за -782С протягом 1 години, а потім додавали по краплях метилиодид (63,9 г, 0,45 ммоль) за даної температури. Після завершення додавання забезпечували нагрівання реакційної суміші до к. т.

Потім реак. сум. обробляли насиченим водним розчином МНАСІ. Водний шар екстрагували за допомогою Еб2О. Об'єднані ОЇ висушували над Мо5зО»:, фільтрували та випарювали.

Одержаний залишок очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії із застосуванням як елюента 2095 розчину ЕЮАсС в гептані з одержанням проміжної сполуки 32 (55,5 г, вихід 96965).

Проміжна сполука 29

Е

Ох Кк ет (е);

М-7

Відповідно до процедури, аналогічної процедурі, представленій для синтезу проміжної сполуки 8, починаючи з проміжної сполуки 32, одержували проміжну сполуку 29 (36,7 г, вихід

АЗ, БУ).

Проміжна сполука 33 ач

З Ф) 7 зо р; (Ф) (в;

Додавали Ман (6095 дисперсія в мінеральному маслі, 0,97 г, 24,2 ммоль) до проміжної сполуки 6 (5 г, 20,7 ммоль) в безводному ТНЕ (35 мл) в 250 мл чотирьохгорлій ВЕ за 09С в потоці М2. Через 10 хвилин додавали по краплях дисульфід вуглецю (1,46 мл, 24,1 ммоль), а потім додавали по краплях метилйиодид (2,71 мл, 43,5 ммоль). Суміш перемішували протягом ночі за к. т. Додавали воду та продукт екстрагували за допомогою ЕТОАс. ОЇ промивали сольовим розчином, висушували над М95зО»:, фільтрували та випарювали з одержанням проміжної сполуки 33 (8,2 г, 9295), яку застосовували як таку на наступній стадії.

Зо Проміжна сполука 34

З

5

І т вв й. м-/

Проміжну сполуку 33 (1 г, 2,89 ммоль) і гідрохлорид 1Н-1,2,4-триазол-5-аміну (0,35 г, 2,89 ммоль) перемішували за 15022 протягом З годин для проходження реакції плавлення. Реак.

сум. охолоджували до к. т. і розчиняли в СМ. ОЇ промивали насич. водн. розч. МаНсСоОз, водою, сольовим розчином, висушували над М950О54, фільтрували та випарювали. Продукт очищували на силікагелі, елюент ОСМ/МеонН, від 100/0 до 98/2, з одержанням проміжної сполуки 34 (200 мг, 26905).

Проміжна сполука 35 5 зе (Ф) изава

М в) м, и 0

М-/

До проміжної сполуки 34 (200 мг, 0,76 ммоль) в ОСМ (3,3 мл) додавали (Вос)20 (199 мг, 0,91 ммоль), ЕВМ (127 мкл, 0,91 ммоль) і реак. сум. перемішували за к. т. протягом ночі. Розчинник випарювали, потім залишок поміщали в ОСМ і промивали водою (3 х), потім сольовим розчином. ОЇ відділяли, висушували (М9505), фільтрували та випарювали з одержанням проміжної сполуки 35 (199 мг, 7295), яку застосовували без додаткового очищення на наступній стадії.

Проміжна сполука 36 5

Ї,о ог с я

І 5

ЩА о ми СЕ

М-/

До проміжної сполуки 35 (347 мг, 0,95 ммоль) в СсСіз (12 мл) додавали тсРВА (659 мг, 3,82 ммоль) і реак. сум. нагрівали зі зворотним холодильником протягом 2 годин. Реак. сум. розбавляли за допомогою СНСІз, промивали за допомогою 1 н. Маон, висушували над Ма5Ох5, фільтрували та випарювали з одержанням проміжної сполуки 36 (301 мг, 7995), яку застосовували як таку на наступній стадії.

Проміжна сполука 37 5 :З5

І 25 що А о ми

М-/

Проміжну сполуку 36 (799 мг, 2,02 ммоль) і ціанід натрію (202 мг, 4,04 ммоль) перемішували в 0ОМ5О (5 мл) за к. т. протягом 30 хвилин. Реак. сум. виливали у воду й екстрагували за

Зо допомогою ЕОАс. ОЇ промивали сольовим розчином, висушували над Ма5О», фільтрували та випарювали з одержанням проміжної сполуки 37 (550 мг, 8095), яку застосовували як таку на наступній стадії.

Проміжна сполука 38 5 ех МН

ОЗ вв т;

До проміжної сполуки 37 (520 мг, 1,52 ммоль) в ОСМ (3,0 мл) додавали ТЕА (6 мл) і реак. сум. перемішували протягом 1 години за 0 "С. Реак. сум. виливали в насичений розчин МагСОз, потім ОЇ знову промивали насиченим розчином МагбОз, сольовим розчином, висушували над

Маз5о»з, фільтрували та випарювали з одержанням проміжної сполуки 38 (273 мг, 73905).

Проміжна сполука 39 во «Су сф пт0щ- ро. о о А о о

Проміжну сполуку 6 (одержану з проміжної сполуки 31 відповідно до перетворень, аналогічних перетворенням для проміжних сполук 3-6) (50 г, 0,22) додавали до диметилацеталю М,М-диметилформаміду (110 мл) і суміш нагрівали зі зворотним холодильником протягом 4 днів. Реакційну суміш випарювали та додавали додаткову кількість диметилацеталю М,М-диметилформаміду та суміш нагрівали зі зворотним холодильником протягом додаткових 4 годин. Розчинник випарювали та продукт очищували на силікагелі, елюент: 196 МеОН в ОСМ, 2965. Очищені фракції випарювали з одержанням проміжної сполуки 39 (60 г, 97965).

Проміжна сполука 40 5 о й ва о б» ЖК

Розчин проміжної сполуки 39 (60 г, 0,21 моль) і гідрохлориду 1Н-1,2,4-триазол-5-аміну (22,3

Г, 0,27 моль) в оцтовій кислоті (53 мл) перемішували із нагріванням зі зворотним холодильником протягом 1 години. Додавали воду та продукт екстрагували етером. ОЇ промивали сольовим розчином та висушували над М95О54, фільтрували та випарювали з одержанням проміжної сполуки 40 (62 г, 96965).

Проміжна сполука 41

З і) й: й о б» ЖК м-/

Коо)

Проміжну сполуку 40 (500 мг, 1,65 ммоль) перемішували в ОМЕ (50 мл) за к. т. в потоці М».

Додавали Ман (6095 дисперсія в мінеральному маслі, 72 мг, 1,8 ммоль) і суміш перемішували протягом 30 хв. Додавали метилиодид (2,57 мг, 1,8 ммоль) і суміш перемішували протягом 2 годин за к. т. Реакційну суміш гасили водою та випарювали. Додавали воду та продукт екстрагували за допомогою ЕІОАс. ОЇ. промивали сольовим розчином, висушували над Ма5ох, фільтрували та випарювали. Одержане очищували за допомогою препаративної НРІ С на (КР

Мудас Оепаїї С18 - 10 мкм, 200 г, 5 см; рухома фаза (0,2595 розчин МНАНСО:» у воді, МеОнН) з одержанням проміжної сполуки 41 (250 мг, 48965).

Проміжна сполука 42

МН і "Х

Ме /Й

М-

Проміжну сполуку 41 (200 мг, 0,85 ммоль) перемішували в Меон (20 мл) і додавали 6 н. НОСІ в -РГОН (23 мл). Суміш перемішували протягом 1 години. Реак. сум. випарювали з одержанням 5 проміжної сполуки 42 (250 мг, 10090).

Проміжна сполука 48 до ооНн

Е Сай

АХА оо

Стадія 1.

Проміжна сполука 49 до

Е й

АХА

ТОМ

Додавали Ман (1,37 г, 34,4 ммоль, 6095 дисперсія в мінеральному маслі) до зависі метил-2- гідрокси-б-метилізонікотинату (2,3 г, 13,76 ммоль) в АСМ (150 мл) за 0 "С і в атмосфері М».

Забезпечували досягнення реак. сум. к. т. та її перемішували протягом 45 хв. Потім додавали по краплях 2,2-дифтор-2-(фторсульфоніл)оцтову кислоту (3,16 г, 17,76 ммоль) до реакційної суміші, яку додатково перемішували за к. т. протягом 15 годин. Після цього одержане гасили насиченим водним розчином МНАСІ й одержану суміш екстрагували за допомогою ОСМ (100 мл х 3). Об'єднані органічні екстракти висушували над Мд5О»5, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Одержаний залишок очищували за допомогою колонкової флеш- хроматографії із застосуванням як елюента градієнта гептан/Е(ОАс, від 100/0 до 50/50, з одержанням проміжної сполуки 49 (2,21 г, 73,990).

Стадія 2

Проміжна сполука 48

Водний розчин Маон (15 мл, 15 ммоль, 1 М) додавали до розчину проміжної сполуки 49 (2,11 г, 9,72 ммоль) в етанолі (15 мл). Одержану суміш перемішували протягом 1 год., потім її обробляли водним розчином НСІ (15 мл, 15 ммоль, 1 н.). Утворювався білий осад і його

Зо фільтрували, промивали холодною водою, потім висушували у вакуумній печі протягом ночі з одержанням проміжної сполуки 48 (1,75 г, 88,69).

Проміжна сполука 50 дД,он с

СІ

Стадія 1

Проміжна сполука 51 еле)

Е й сх (9) (Фі

Додавали концентровану Н25Ох (0,791 мл, 4,85 ммоль, 1,84 г/мл) до розчину 2,6-дихлор-3- фторізонікотинової кислоти (1149468-00-81, 5,5 г, 26,19 ммоль) в Меон (99 мл) й одержану суміш нагрівали до 852С протягом 12 год. Після цього додавали додаткову кількість Н25Ох (0,791 мл, 14,846 ммоль, 1,84 г/мл) і реак. сум. перемішували за 902С протягом 24 год. Реакційну суміш охолоджували до к. т., розчинник випарювали та додавали лід до одержаного залишку.

Утворювався осад і його фільтрували, промивали крижаною водою та висушували у вакуумній печі протягом 2 днів з одержанням проміжної сполуки 51 (4,35 г, 19,4 ммоль) у вигляді бежевої твердої речовини.

Стадія 2

Проміжні сполуки 52а і 5265

І еле) до

Е Е й У

СІ МОСС

Проміжна сполука Б2А Проміжна сполука 528

Розчин проміжної сполуки 51 (3,95 г, 17,6 ммоль) і триметилбороксин (1,66 мл, 5,82 ммоль, 3,5 М в ТНЕ) в безводному 1,4-діоксані (128 мл) дегазували протягом 15 хвилин. Послідовно додавали ацетат паладію!) (198 мг, 0,88 ммоль), трициклофенілфосфін (494 мг, 1,76 ммоль) і триосновний фосфат калію (11,23 г, 53,0 ммоль) й одержану суміш дегазували, потім перемішували та нагрівали за 1109С протягом 18 год. у пробірці для проведення реакцій під тиском. Реак. сум. охолоджували до к. т. і розчинник випарювали іп масо. Одержаний залишок розділяли між водою та ЕТАс. Одержану двофазну суміш розділяли та водний шар екстрагували за допомогою ЕТОАс (3 х). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином (1 х), висушували над М950О5, фільтрували та розчинник випарювали іп масио.

Одержаний залишок очищували за допомогою колонкової рфлеш-хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта гептан/Е(ОАс, від 100/0 до 90/10, з одержанням проміжної сполуки 52а (980 мг, 27905) і його регіоїзомеру 525 (460 мг, 12,8905).

Стадія З

Проміжна сполука 50

Розчин СПОН (277 мг, 11,5 ммоль) у воді (10 мл) додавали до перемішаного розчину

Зо проміжної сполуки 52а (785 мг, 3,85 ммоль) в ТНЕ (10 мл). Реак. сум. перемішували за к. т. протягом 1,5 год., потім леткі речовини випарювали іп масио. рН одержаного водного залишку доводили до 52 шляхом обробки водним розчином НСІ (1 М). Утворювався білий осад і його фільтрували, промивали крижаною водою та висушували у вакуумній печі протягом 2 днів з одержанням проміжної сполуки 50 (491 мг, 67905) у вигляді білої твердої речовини.

Проміжна сполука 53 доон с сі во ак

Стадія 1

Проміжна сполука 54

І омке; ре: і ьо зм б-

Однією порцією додавали метилтриоксореній(МІ!) (0,443 г, 1,78 ммоль) до холодного (0 "С) розчину метил-5-фтор-2-метоксиізонікотинату (4 г, 21,6 ммоль) у ОСМ (71 мл) з наступним додаванням по краплях пероксиду водню (64,3 мл, 0,735 моль, 3595 у воді). Реак. сум. залишали нагріватися до к. т., а потім нагрівали до 352С. Через 24 год. додавали додаткову кількість метилтриоксоренію(МІ!) (0,2 г, 0,80 ммоль) і реак. сум. залишали перемішуватись за 359 протягом 2 днів. Порціями З х додавали метилтриоксореній(МІ!) (0,2 г, 0,802 ммоль) і пероксид водню (30 мл, 0,343 моль, 3595 у воді) протягом 8 год. і реак. сум. перемішували за 27"Сб протягом 16 год. Реак. сум. охолоджували у льодяній бані, потім її гасили шляхом додавання порціями діоксиду мангану (УВАГА! Інтенсивне виділення газу та тепла) до припинення виділення газу з одержанням чорної суміші. Одержане об'єднували з іншою партією реакційної суміші, одержаною в результаті реакції починаючи 3 1 г метил-5-фтор-2- метоксиізонікотинату. Об'єднані реакційні суміші фільтрували через пробку з Сеїйеф, яку промивали за допомогою ОСМ. Двофазний фільтрат розділяли та водну фазу екстрагували за допомогою ЮСМ (3х20 мл). Об'єднані органічні шари висушували над Мд5О», фільтрували і випарювали іп масо. Одержаний залишок (4,9 г) очищували за допомогою колонкової флеш- хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта гептан/ЕЮюАс, від 100/0 до 0/100, з одержанням проміжної сполуки 54 (585 мг).

Стадія 2.

Проміжна сполука 55 до де вом лак

Суспензію проміжної сполуки 54 (585 мг, 2,91 ммоль) в оксихлориді фосфору (4,1 мл, 43,6 ммоль) перемішували та нагрівали до 1059С на масляній бані. Через 1,5 год. розчинник видаляли іп масио. До одержаного залишку додавали лід (10 мл) та водну суміш екстрагували за допомогою ОСМ (3х20 мл). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над Муд5О54 та випарювали іп масио. Одержаний залишок (580 мг) очищували за

Зо допомогою колонкової хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта гептан/осСМ, від 100/0 до 50/50, з одержанням проміжної сполуки 55 (522 мг, 72,7906)

СТАДІЯ 3. ПРОМІЖНА СПОЛУКА 53

Додавали розчин ПОН (152 мг мг, 6,35 ммоль) у воді (5,7 мл) до перемішаного розчину проміжної сполуки 55 (522 мг, 2,12 ммоль) в ТНЕ (5,7 мл). Реак. сум. перемішували за к. т. протягом 1,5 год., потім леткі речовини випарювали іп масцо. рН одержаного водного залишку доводили до х3 шляхом обробки водним розчином НСІ (1 М). Утворювався білий осад і його фільтрували, промивали крижаною водою та висушували у вакуумній печі з одержанням проміжної сполуки 53 (172 мг, 39905) у вигляді білої твердої речовини. Фільтрат випарювали до сухого стану за зниженого тиску з одержанням літієвої солі сполуки 53 (366 мг).

В. Синтез кінцевих сполук

Сполука Та і сполука 16

М - же -

М Ді (в) Кв Ге! "М

У, й п

Спол. Ме Та Спол. Мо 16

Суміш 1-12 (0,27 г, 0,001 моль) і 2,6-диметилізонікотинової кислоти (0,16 г, 0,001 моль) в

ОСМ (10 мл) обробляли ОІРЕА (0,69 мл, 0,75 г/мл, 0,004 моль) та НВТИ (0,38 г, 0,001 моль).

Перемішування продовжували протягом 16 год. Реак. сум. розбавляли водою (5 мл), підкислювали за допомогою 1 М НСІ до рН. і шари розділяли, і ОЇ промивали за допомогою 1

М Маон до рн--, води, потім висушували над Мо950О5, фільтрували та концентрували іп масцо з одержанням масла (0,8 г). Очищення проводили за допомогою препаративної НРІ С (нерухома фаза: ЕР ХВгідде? Ргер С18 ОВО-10 мкм, 50 х 150 мм, рухома фаза: 0,2595 розчин МНАНСО: у воді, МеОН) з одержанням двох фракцій. Очищення проводили із застосуванням препаративної

ЗЕС (нерухома фаза: СпігаІракфФф Оіасеї АО 20 х 250 мм, рухома фаза: СО»2, ЕН з 0,495 ІРІГМН») з одержанням 4 фракцій, з яких дві забезпечили одержання сполук 15 (64 мг, 18905) і 1а (70 мг, 1996).

Сполуки 2а-35 одержували аналогічним чином, що і сполуки Та і 16 з вказаної вихідної речовини.

Структура Вихід (96) т М зе і ч З га щи ї І-12а 82

ЧИ

М

Я ДЗ

2ь вл 5 во м (о)

М

- за ТЗ га 12 м Ге) ІВО2256-42-4

М хх его зр зи І12р ж м іо;

М

Сполука 4 в) пи. М 5 Е

М

2 /Уг, - їх -м Е м-

2-Метил-б-(трифторметил)ізонікотинову кислоту (101 мг, 0,493 ммоль) перемішували в ОСМ (20 мл). Додавали ОІРЕА (0,34 мл, 0,75 г/мл, 1,97 ммоль) і НВТИ (206 мг, 0,542 ммоль), перемішування продовжували протягом 20 хв. за к. т. Додавали 1І-13а (150 мг, 0,493 ммоль) та перемішування продовжували протягом ночі за к. т. Реак. сум. гасили водою, перемішували 20 хв., потім ОЇ відділяли. Водний шар повторно екстрагували за допомогою 2хОСМ. Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, потім відділлли та висушували над Мд5О», фільтрували та концентрували іп масо. Дану речовину очищували за допомогою флеш- хроматографії на силікагелі з елююванням 0-5956 МеОН в ОСМ з одержанням неочищеної сполуки 4 (120 мг, вихід 52,93195). Очищення проводили за допомогою препаративної НРІ С (нерухома фаза: КР Мудас Оепаїї С18-10 мкм, 200 г, І.О. 5 см, рухома фаза: 0,2595 розчин

МНАаАНСО: у воді, МеонН) з одержанням після випарювання спільно з МеоН та висушування у вакуумній печі протягом ночі сполуки 4 (74 мг, 36905).

Сполуки 5-23 одержували аналогічним чином, що і сполуку б, із застосуванням енантіомерно чистої проміжної сполуки І-1За.

Структура Вихід (96)

Ге)

А

І

5 Кк | 54

М пт фі а зе / й о й

МИ пк 3 7 па: 56

М (в)

В; пк 3 па: 48

М (в)

В; тт

Лі

М (9)

В;

Е. Е

Е н 10 зе щі і йез

М (в; в;

СІ по, Е Гн 11 зе - 10 (9) ех

М-/

т СІ с

І

12 Фзо9?о 57 й, о щу;

Е | -е ч-е 13 ж: - 55 ву; о / я ! М

М, о в;

Фі че, 11 у, о що 8 зе І 16 Я: 48

Мб 9

М

СІ

С г СІ 17 а: 2 7,8

М (9) т;

Фі 18 озеЗза 19 у, о зе 19 М її : її 55 у М

М-/ зок в З БО йо, ц во.

Е в, у; о

Структура Вихід (96) о т і ЗМ 22 й: с 58

М (о) в; пк с 23 зе - 52

М, (в)

В;

Сполука 24а і сполука 24р

Е «М Е во "СМ

А Ф ДЕ | д

Е й: й Е й:

М М (в; Мет» ()

В, /

М-/ М-/

Спол. Мо 24а Спол. Мо 242

До перемішаної суміші 2-циклопропіл-б6-метилпіридин-4-карбонової кислоти (0,16 г, 0,00075 моль) у ОСМ (20 мл, 1,33 г/мл, 0,31 моль) додавали НВТИ (0,28 г, 0,00075 моль) і ОІРЕА (0,54 мл, 0,75 г/мл, 0,0031 моль). Після перемішування суміші протягом 30 хв. додавали однією порцією 1-19 (0,2 г, 0,00062 моль). Реак. сум. залишали перемішуватись протягом 1 год., а потім додавали 1 М Маон (5 мл), шари розділяли і ОЇ промивали водою (10 мл), висушували над

Ма5о», фільтрували та концентрували іп масо з одержанням масла. Одержане очищували за допомогою флеш-хроматографії із застосуванням 24 г колонки для флеш-хроматографії

Кедізерж» з елююванням градієнтом 0-595 МеоОН в ОСМ з одержанням масла, яке кристалізували з СІРЕ (10 мл), з одержанням білої твердої речовини (0,23 г, вихід 83,29б5).

Очищення проводили за допомогою препаративної 5ЕС (нерухома фаза: СпігаїракФ ріасе! АЮ 30 х 250 мм, рухома фаза: СО», ІРОН з 0,295 ІРгМНг) з одержанням двох фракцій. Обидві фракції переносили в пробірки та висушували у вакуумній печі (45 "С, 16 год.) і це забезпечувало одержання аморфних твердих речовин спол. Мо 24а (0,11 г, вихід 39,7905) і спол.

Мо 245 (0,11 г, вихід 38,395).

Сполуки 25а і 25р (о) (в)

З в 5 5

М СМ

ССО 0 сгсо 5 ІВ -М ХедриМ ах! У М У - -е

Е Е

Спол. Мо 25а Спол. Мо 25р

Бензотіазол-б-карбонову кислоту (142 мг, 0,792 ммоль) перемішували в ОСМ (15 мл), додавали ОІРЕА (0,82 мл, 4,8 ммоль) і НВТИО (300 мг, 0,792 ммоль). Перемішування продовжували протягом 0,5 год. за к. т. До розчину додавали проміжну сполуку 25 (250 мг, 0,792 ммоль) і перемішування продовжували протягом 2 год. за к. т. Додавали розчин Маон (1 н., 1 мл) і перемішували протягом 5 хв. Продукт фільтрували на фільтрі Ехігеіше і фільтрат випарювали. Продукт очищували на силікагелі, елюент: ОСМ-5495 МеоОН в ОСМ. Очищені фракції випарювали з одержанням суміші сполук 25а і 2565 (340 мг). Одержане очищували за допомогою препаративної 5ЕС (нерухома фаза: Спігаісек» біасеІ ОО 20х250 мм, рухома фаза: ббО», ЕЮН-О.4 ІРІМН») з одержанням обох продуктів, які кристалізували з ЕБО та одержували спол. Мо 25а (121 мг, 3595) і спол. Мо 2556 (128 мг, 37965).

Сполуки 26ба і 26р

Ге) (о) - М Ш-з ей | Р «З | М 5 Ні: й мМ 4 м

ФО, раза; 4 й М М

М й

Спол. Мо 26ба Спол. Мо 2656 2,6-Диметилізонікотинову кислоту (154,845 мг, 1,0 ммоль) перемішували в ОСМ (10 мл).

Додавали ОІРЕА (0,53 мл, 3,1 ммоль) і НВТИи (427 мг, 1,1 ммоль), перемішування продовжували протягом 0,5 години за к. т. Проміжну сполуку 38 (273 мг, 1,1 ммоль) розчиняли в ОСМ (5 мл) і цю суміш додавали до розчину, при цьому перемішування продовжували протягом 3,5 години за кімнатної температури. Реак. сум. гасили водою, потім два шари розділяли та УМ повторно екстрагували за допомогою ЮОСМ. ОЇ висушували над Мо95О54, фільтрували та випарювали.

Продукт очищували на силікагелі, елюент: ЮСМ/МеонН, від 100/0 до 97/3 до 94/6б, що забезпечувало одержання двох пар діастереомерів у вигляді суміші. Очищення проводили за допомогою препаративної 5ЕС (нерухома фаза: Спігаісекю Оіасе! ОО 20 х 250 мм, рухома фаза: бо», ЕЮН-О,4 іРІМН:г), що забезпечувало одержання двох транс-енантіомерів. Очищення проводили за допомогою препаративної НРІ С (нерухома фаза: КР ХВгідде Ргер С18 О0В- 5 мкм, 30 х 250 мм, рухома фаза: 0,2595 розчин МНАНСО:» у воді, СНІЗ3СМ) з одержанням сполуки 26а (26 мг, вихід 6,761965) і 266 (20 мг, вихід 5,20190).

Сполука 321 и

І ОХ

5 - и ї ЗХ (в) у;

Проміжну сполуку 95 (. 2НСІ, 1,2 г, 3,527 ммоль), 2-(дифторметил)-6-метил-4- піридинкарбонову кислоту (660 мг, 3,527 ммоль), ЕОСІ (1,352 г, 7,053 ммоль) і ОІРЕА (1,823 г, 14,107 ммоль) в ОСМ (71,4 мл) перемішували за к. т. протягом 4 год. Реак. сум. промивали за

Зо допомогою 1 н. Маон, ОЇ висушували над М9505, фільтрували та випарювали. Продукт очищували на силікагелі, елюент МЕОН/ОСМ від 0/100 до 3/97. Очищені фракції випарювали та кристалізували з СІРЕ. Кристали відфільтровували та висушували з одержанням сполуки 321 (920 мг, 6095).

Сполука 333

СІ

Е 5 5 М

Е | -ЩУ (4 СІ

М (в) ет М

М-/

До перемішаного розчину проміжної сполуки 25а (100 мг, 0,317 ммоль) у сухому АСМ (5 мл) додавали 3,5-дихлорбензойну кислоту (72,593 мг, 0,38 ммоль). Додавали ТЕА (0,22 мл, 1,58 ммоль) з наступним додаванням 1-пропанфосфонового ангідриду (68957-94-81|, 0,28 мл, 0,48 ммоль) і суміш перемішували за к. т. протягом З год. з одержанням білого осаду в коричневому розчині. Розчинник видаляли іп масио і неочищену речовину розділяли між ОСМ (10 мл) і насиченим водним розчином МансСОз (10 мл). ОЇ промивали насиченим водним розчином

Маг2бОз (1х15 мл), висушували (М950:), фільтрували, розчинник видаляли іп масио і випаровували спільно з толуолом (1х20 мл) з одержанням білого осаду в коричневому розчині, який висушували протягом ночі з одержанням коричневих і білих кристалів. Перекристалізація з

ЕгО забезпечувала одержання брудно-білих кристалів, які висушували у печі протягом ночі у вакуумній печі за 402С з одержанням сполуки 333 (88 мг, 6195) у вигляді брудно-білих кристалів.

У таблиці 1 нижче перераховані додаткові сполуки, які одержували аналогічно до вищенаведених прикладів. У випадку, якщо не вказана форма солі, сполуку одержували у вигляді вільної основи. "Мо спол. означає номер сполуки. Реагенти, застосовані у синтезі сполук, або є комерційно доступними, або їх можна одержати за допомогою процедур, відомих фахівцю у даній галузі. Сполуки, одержані аналогічно до сполуки 321, вказані (примітка: сполучення за допомогою ЕЮОСІ); сполуки, одержані аналогічно до сполуки 333, вказані (примітка: ангідрид фосфонової кислоти) в колонці реагентів.

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

СІ

Е шо М 27 Е а: - 78

М (в)

Вф;

Е Ї М

28 в 4 І-25 35 ех о

М-/

Е ї М 29 в - І-25 39 ех о

М

Е р чем

ВІ

А и - І-25 38 м о

М

1 АФС -

Е Хе

З1 -Х З І-25 26 щи!

Мм-ї

Рацемічний, ендо-ізомер

Е те Гм 32 вх 4 55

М, (в) в;

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

Кк М

АХА ЛО

33 МВ р Щі З І19 44 у М

М-/

М

ХА Ло

Е Хе З 34 хо 5 І-19 41

М

Е Езо г хх

Шо о и о

Е "в, ! "ЗМ 36 вчить - 73 мм О ЕЕ

М

Гой б | "ЗМ 37 й: 4 іга Ре ву; о Е Е Е т МН»

А АД ЛХ

38 й і М 41

В; да сі

Е ше Гн 39 вах 4 21 о о св и

ЕХ во га 40 Аа - 78

М, о в;

Е та Гм ді шк : -4 38 ех о СЕЗ у ,М

М-

Таблиця 1

Структура Вихід (96) сі

Е ше й; 42 ме: -

М (є)

Вф; сі

Е я і кі 43 ше: 2 99

М» о сі

МИ

Е С лев; М ва | --

Е з ар:

ДА М Щ І-28 29 1 М м-/

Суміш транс-ізомерів

Е С лют -х!

ДАЛА е з

М І І-28 12 1 ,М м-/

Чистий транс-енантіомер

Е Ге - 46 у т І-28 12 й М м-

Чистий транс-енантіомер : - 47 и 44

Ше; о и

Е г 48 ше п: о 77

Ше о и

Е т; 49 в а в2

Км о

М еЕ "5 М щу» ЩІ 5-4

МИ

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

Е щ (я

Бі м: 2 31

М, ОО с ву;

СЕЗ

Е те Гн 52 Е ; с М й м о

М

ОМе

Е ще Гн 53 ву - 17

М, в) в; сі

Е ше й; 54 мн: -4 53

М (Ф) Е

Вф; сі

Е ще й Гм 55 Е а: - 63

М, о

В; и

Е г. 5в вух» ве що БІ 9

М

Е т

АХ и

Е м 7

М: М 61

М

/

Е як Ї М г 5В ше: чиї 75

М (в; в;

Е е Б, Й 59 па Й 72 чно й

У, 5О

Таблиця 1 о Меспол.| 0 Структурда./:/ З

Структура Вихід (95) кА п п: М зи . 64

Е т М ві деп: «лай ци

С ї 73

МИ

Е осо в М б2 А и со І-25 4 ї Її 42 м-/ зе 63 ше о ви я -й 40 сі

Е са 64 мит: о;

М, Ге)

В;

Е т ет о Ш

М

Е 5 о, ву Е 9 щ

М-/

Е те - 67 ота ин м о 653

М-ї

Е Гм ву 2 и п 48

Таблиця 1

Структура Вихід (95)

ХАОС м: 78 ох о

МИ

Е Гм 70 ва 4 58 о чн «

М- сі

Е М і 71 я: сі 73 о; О в 72 Ота 38 шу, о

Е і " о 73 ме: - 39 шу, о

І

Е ви о 74 во І19 Зо м о; у

М-/

І

Е мдф. щі 75 ву І19 32

М, о в;

Е СІ

76 мап 36 9

М-ї

І

Е ш о 77 чи 42

М о

ЧИ р

Е 2 78 оз 58

Мен 9

М-ї

Таблиця 1

Структура Вихід (96) й 5 79 Я еф 74

КУ м

Е те Гм в - 54

М ІФ) й. м

М АВС, 81 в І. - І19 30 км

М-

ХАОС, 82 ве 4 І19 31 км с;

М-

Е Ге 83 ї ге І. ак 81 о м

Е ш Гм 84 п: 4 30 оо чен

М зе 85 Е Сх й с о щ

М

З их 2 І-25 41 в) Е

Ше

М-/

Таблиця 1

Структура Вихід (95)

М ве

М М в ле 87 З і 65

М утро

Хм є Х вв АКА» І-9Ь 27

Ме (332898-48-3) й

Е т

Е М й А /фі; 46 о, о

Е й Х вчи щита І-96 73 сно (1533853-53-0)

М-ї

Е Е

91 оз о 33 (в)

В;

ХА у т о; вах І-96

Зг я І (501892-99-5) б1

М-/

Е що Ге 93 Рут» р 15

Мб 9 й г

Е Е

94 АХА па; Гео 25 ве Гн (327-20-81 і! и 95 й в її ; З І-25 36 с м

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

Е па: о і-90 ва бно (103203-84-5) і

М-

Е о 97 АКА І-96

Ол: (90721-27-0)

ЧИ хо

Е ут І-96 ат М (859851-00-6)

М

М

- зо - і-90

З (139022-25-6) 24

Ше

М-/ озЗоье,

Коль 2 і-90 100 ке 0 (1372924-05-4) 53

М

Е ам і-90

ШИ о

М-/

СІ

АХ дх і-90 102 дз ї 1427392-05-9) б1 се

М-

Е

103 пе: (1247451-23-5) 18 че, ц

ХА

104 ке о (154235-77-5) 2

ЧИ

Таблиця 1

Структура Вихід (96) її (ФВ і-90 105 з 9 о- й

ФМ: (4790-79-8)

Мч

М-

ХАЙ

Коль і-96 106 КК І Н (1670-82-2) 16 3 М

Мм-ї

А,

Е те М І-95 107 ААДОСХ 11011264-06-4) "

М, (0) о є зо

Е ть М і-96 108 оз М, 15855-06-8) 49 9

М то сі м фі і-96 109 о Щі (90649-78-8) 21 о м

Зо

Е т - і-96 по АКАД 1803602-19-8) з ко

М

СІ

Е о, й і-96

Що АХ (51-44-5) 9

М

Е че - І-9Ь чн 112 ков (23077-43-2) м кн

М

Зо

Е ще М і-96 113 59зе а П1256820-02-6) 42 се

М-7

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

Е

ТА 1 возе І-96

Ши С Іо 16136-58-6) ба 1 ,М

М- і-9р 115 Р в т (120512-59-6) ба

Мч

М-ї/ (о)

АХАЙЛЛІО І-9р

РИ - 116 А і 15112-41-1) 73 1 М

М- зе і ї у фі І1га 117 і р її (120512-59-6) 21 о

М-7 у і-9р 118 шваша: П1248462-73-8) 46 шу

Е

І" 52 возе в І-965

Ще Мох І (3133-78-6) 67 1 ,М м-/

Е т ууизм 120 АК ль Ї я 45

М в) ву;

Е ва

СІ є і-9р 121 АХА 1427355-37-0) 65

М о) че ц

Е "М і-9р 122 до, П1256790-25-6) 36 щу

Таблиця 1

Структура Вихід (95)

АХА г

І-9Ь 123 пас 38

М І (6613-44-1) 1 ,М

М-7 мо ! 5

І-9Ь

М

124 зе й (470702-35-3) кн 9

М зо і АЛО ДЮ хі І-95 125 оз т 15733-83-2) тА о

М-/

Е й,

Х

126 ХАОС І-9р 35

В: (14282-78-1)1

М-/

Е М

У-

А о І-965

М- 1

ХАЙ

І-9Ь 128 вуз й (319-60-8) 53 ке

М

АХА со

І-9Ь 129 й в І сі (1427392-05-9) м м

М-

ХАЙ, е хх 7 І-9р 130 Мох ї І(85740-98-3) 53

МИ

М

ТІЇ ше І-96 131 оз (78621-81-5) 16 ем 9

М

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

Е е-їЇ в

Е ть "М

І І-96 132 А 4 П1211590-99-6) 45 о в; !

А АДОВХ (9 753 Й в м (162401-65-2) 61 1 ,М

М

І

- І-96 т3А Й 8 її сі (884494-85-3) 59

М

М- 135 Код ве 53 т; (о)

Е 5 (о) І-96 136 А І (ББ311-39-8) 53

МИ

Е т, 7 І-956 137 вуз» хо 4,6-Диметилпіридин-2- ЗА

М, | карбонова кислота в, (18088-10-3) о) (ши; І19 е о/ 138 А Бензофуран-5-карбонова МА ой

М о кислота У '

М 40 95 ЕС)

Му (90721-27-0) оз «5 івЬ. 139 с єї 1-Метил-1Н-піразол-3- 67

А с) карбонова кислота

Х (25016-20-0) ту вя, з Метилоенофураноо й о -Метилбензофуран-2- 110 иа: карбонілхлорид 36 й, (2256-86-2)

ІА 2. 6-Диметилпіримідин-ї хо о-диметилпІРИМІДИН-4- 141 нм її карбонова кислота 14 у, (54198-74-2)

Таблиця 1

Структура Вихід (95) 142 ша: 2- З-Амінопіридин-4- Ба

Шо о карбонова кислота й (7529-20-6) п з І-9р

М Й . 143 ме: - 2,6-Диметилнікотинова 44

Ме ів; кислота 1 не (5860-71-9)

Х І-Я5 144 АХА оч 5-(Трет-бутил)ізоксазол-3- Бо

Е с карбонова кислота

А о (90607-21-9)

В,

Е о І-95

В; 4-Метил-2Н-1,3- 145 ши її бензодіоксол-5-карбонова й кислота -/ 162506-58-3 ; Сг і-д6 4-Гідроксихінолін-3- 156 з | й карбонова кислота 19

В; (34785-11-0) 147 аа: ї, З-Хлор-4-метилтіофен-2- Бо о (в) карбонова кислота

Й, (229342-86-3) й го

ХАЙ, а 2-Фтор- 3. 148 КО ПОТ (трифторметил)бензойна 63 - кислота м-/ (115029-22-6) є Й І 149 КАЛ 2,6-Дифторбензойна БА

Ше О в кислота

МИ (З85-00-2)

Е "

І й І-9р 150 РО МТ 2-Амінонікотинова кислота 67 у; : (5345-47-11 ц фі і-90

Й | 2-Метил-1,6-нафтиридин- 151 - 75

М п: З-карбонова кислота

Мф; о ІЗ87350-63-2І м-/ бо

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

Е пк І-9р 152 в ся о" З-Метилізоксазол-5- 63

І с 9 карбонова кислота

М, (4857-42-5)

Е 5Б-Бромпіридин-2-

Е хх 153 що (в) карбонова кислота 15 ч/ І30766-11-1) 4 Б-Хлорпіридин-2- ч 154 кое о карбонова кислота 65 й ІЗ6070-80-1) є Гн І-95 155 ме: -4 З-Фтор-4- й Ок піридинкарбонова кислота

М (131307-35-2)

Е с 4-метилоксазол-5- 156 що о карбонова кислота 65 пи (2510-32-9)

Е - І-9р - - І -3. 157 пн: 5-Метилізоксазол-3 65

М, д карбонова кислота

В; (3405-77-4)

МН

Е н- І-9Ь ху? 2-Амінотіазол-4-карбонова 158 ме: кислота у; (112539-08-9)

Е Зм І-9 ру 2-Хлор-3-

Е че СІ - - 159 | метилізонікотинова 54 й о кислота м-/ (133928-73-1) є Х І-9р е Сх ни 4-Метилізоксазол-5- 160 Ї 52 ета (в) карбонова кислота ни (261350-46-3)

І-9р

Й но 2-Метил-5- 161 ше п: че (трифторметил)оксазол-4-

Ше о в карбонова кислота

А у Е

М-7 18955-88-9 е хх МН» 6-Амінопіридин-2- 162 Ку (в; карбонова кислота 53

М // (2г3628-31-11

Таблиця 1

Структура Вихід (95)

М

ЦІЇ

І-9р є 4-Ціанопіридин-2- 163 ак карбонова кислота 67 9 (640296-19-1) йо, й ГУ І9Ь 164 мае: 1-Метил-1 Н-імідазол-5- я о карбонова кислота

Й // (41806-40-0)

І-9р

Й 5-Трет-бутил-2- 165 Арт метоксибензойна кислота б1 б (73469-54-2)

М- о г

Й - 8 2Н, ЗН-Піразоло|3,2- 166 п: М ВІЙ, З)оксазол-б-карбонова в2 ех о кислота /

М-/ 1239722-75-8 ї І-9р

Е ТЗ Е б- 167 ме: с (Трифторметил)нікотинова 48 оо в) кислота

Й (231291-22-8) ват ва І-96 168 вх й (350-29-81 25 1 М

Мм-

Е І-9р е Сх 169 й й ге (1737-36-6) 67 с /й

М-/ ща 2 І-96 179 Ваши: (99058-34-1) й п

М-7 х (9) є з І-9р 171 шо 40

ХАЙ (946-13-4) 9 м-/

Таблиця 1

Структура Вихід (96) ме

Е їх І-96 172 АХА у (59908-54-2) 58 и чи

РИ» ке І-9р 173 вх 0 (5Б4127-63-8) З 1 ,М

М-

І

ДАЙ сь

М - 174 й г т (180283-66-3) ба о

М-

Е -х І-96 175 хо: ЗМ (872091-00-4) 59

М зе чу з м і-96 78 хх о о-ї (208772-24-1) 59

ЧИ

/

М

2 і-96 177 РИ я 75 щ ці (5952-92-1) й хм

М-/

Ел 178 55 А І-96 шо о 00МБ/ (1187732-69-9

М

М ща і-96 179 км о (55365-04-3) 3 М

М-

СІ пе І-96 180 Й в її (24065-33-6) ее М м-/

АКАД

АК ль 2 і-96 181 щих (3167-49-5) 53 і М

М-

Таблиця 1 о Меспол.| 0 Структурда./:/ З і Структура - Вихід (95)

І ХУ-вг 182 КАТ І-96

Ол: (Б4045-76-0) 65

М-ї зе 183 м: о І-90 оо о 00Мм-/ (208772-23-01 78

М-ї

Е ше 9

Їм іва вчи і-96

Мб 17153-20-7) 67

М-/

Е те ГХ / 185 и й Зо

Ми (126909-38-4) 56

М-/ й Е 186 АХ у тй 4 он Зо : (Б1446-31-2) 24

М-/

І

187 Ми: З І-9о 9 (28691-47-6) 58

М-ї зе 188 е пе: ки. І-96 щу (90322-32-0) 58

Е

Е щ Е 189 Аа Го

В: п017778-60-7) 26 о

М-

Е

А АЙОКМ, 19 й о вт» з Зо в2

ФО: (327056-74-6) 1

Е щ й 191 АХА я

М 9) Е у ц

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

Еж ва

КАЛ, 192 Зо

Фа: ї (886496-49-7) 21 в і

Е те 193 тя т о ої 9 57 ї 1214383-15-9 у; І Ї

Е Ш й 194 АХ во, 9 и: і (67515-55-3) 25

М

Е щ й 195 оз у тй - о. Зо 76 м (в) ІВ2846-18-2І

М

І

Е чЗЦюх о 196 вч те Ї ок Зо 45

Ви Т (26218-80-4) ет "М

М-/

М я 97 Е і-96 2о ша 1877-72-11

М Ге) че м /

Е ш М

Кл и 198 | Гзь

Мб 9 1138100-61-1) 13

М-/

Не ї (Фе) 199 где І-42 8,7

М о) 0

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

Е

М М. Е с (9) 200 м І-30 БА "5

М щ- Де

Е

М Е

- ХХ Шо 201 С Й о І-30 30

М хх ге)

Ме

М- и 202 М І-42 31 вв М х

ІФ)

Е

Е

М- мк и

Б М

М

203 "в І-Зба 87

М я -

Е

Е вд

М- у

М

204 ї-к Хв І-30Б о М уд

Е Е

205 С Ії Іл12 22

ГК м в М ХХ

Х-к я З о

Таблиця 1

Структура Вихід (95)

М о У 206 М я Е І-3ЗОБ /"8

Є оп У-м Е 207 ру м . Е І-3ЗОБ 40 (хв

М о У-х Е

З МОХ

208 в м я Е І-3ЗОБ 75 їв о х

Мов 209 Ге! І-3ЗОБ 57 ах х

ОА

Е

Е

М М. чи Е 210 93-х І-З06 65 - М "В ж

М у, ої У-к Е

Ох міх 211 - м с Е І-3ЗОБ 25 хв щц чі! (в) У 212 м | К - І12 14

А

Х-м

Таблиця 1

М

-М Е

В- Е 213 (о) Я 61 о- щ- т

М Е под

У- Е (о) чі 214 с З- 55 лях

М г й Е

Е

215 М 5 тор т і

Е

М -М

ЛО Х У

216 ЧІ Б р 29 сх 9- (в

М М й тйт- ее; - М 217 Е ів 25

М

(в) о -Х

М Кк тк Ка

М- сі

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

Е

Оу

Х ше 219 мая І-28

М ІФ) ре ще

М є

У -Мм Е кад

У- Е (9) че 220 Ко 42

Х х й

Вільна основа або.НСІ

Е

М М щу Е

Мт п, Кк 221 З 58

М ІФ) /

Є

-М Е 1 9- Х - ж Е 222 (о) З 24

М Кулии

М-

Е х

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

М

У -м Е 9-5 - Е (в 5 223 М Еунни 37

М

Ми

Е

41,30 НС. НгО 224 ро І-12га 55 7 О Е й

М-/ 7 т | "М 225 ж: й іга БВ

О ЕЕ й

М-/

Є роУ-м Е

У- Е т 226 М 14 я

Таблиця 1 т ж) що в КК | Е 8 227 М й 49 ) 8

Х-к г

М

А юр 228 М й 5О до

М

М в є рОУ-м Е - Е 223 (в) г 83

М Були ль 5-5

М но Лем 230 4 зва ен (25 З лу о т

С зм

КД, 8

Е

231 й 29 ге) но

ЦІ

М

Таблиця 1

Меспол.| /// Струсураї/////////// | Одержаназ | Вихід (95)

М

-км Е

С- - Е 232 5 уд 65

Я Щ

М Ме (З

М Е кож щКМН-- Е

В з 233 у 57

М

ІФ)

М-

Х и мно

З

М Е

З

ЕВ- Е 5 к 234 м 63

ІФ) х/

Й г -м Е

З Е т- 235 62

М

2-5

СІ х л

Таблиця 1

М

-мМ Е

У- Е св

Кк 236 М 2 в)

М

Ук но

З

М Е й к- Е в Є 237 БА

М

(Ф)

М- сі чи (З

М Е

ОЗ

У- Е

Кк 238 М 49 ге)

М-

ЧУ сі

Й

То

М Е

Ох

У- Е

Кк 239 45

М в! - Е

Е

Иї

Таблиця 1

Структура Вихід (95)

М

--к Е шК- Е в е 240 59

М в

М- ин є фр ОУ-м Е

З ш- Е

М

241 о

Е

(є;

Е де

Е

Є

У- Е о - - Е

Кк 242 М 67

Ге сі

У

Е ве

Є

З- Е 0-х

У- Е

Кк с 243 44

М ек є)

ЗМ

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

М

То У- Е - Е (о) З 244 М вус 53

М у

Ми:

М. ЖК

М М з 245 М й в2

Ге

Е Е

Е

С

М Е

9-х -8- Е 246 (о) З 58

ХМ о М Кулни

С г ча се | Е 247 й 5З в ТО М Й

Е. море

М гай

М М ли 8 248 І 63

М су

М че

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

М бе

М

М М й ли 8 249 і 53

М

Мох (в)

Ще

М

Є"

І-й Е 0-х

У- Е 4 Зв 250

М

Ге)

Е М

М й г

Ку с ги 251 її 70

М

Е с а р О-м Е 9-5 - Е (в) 5 252 Ід я 62 -й

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

М гл

М Ж

М М

8

Е

253 м в2

М х Ге)

Е со ве "ве мМ « а 8 254 Е 50

М ду -

Е М ил

Ку би 255 | 64

М

«ро у щ

М

КМ

ЗИМ с леми 8 256 І 63

М а

М. лем

М зе

М М ї печу 8 257 І 5

М

І. жк

Таблиця 1

Структура Вихід (96) тл у м пи 258 й і 53

М

«р

О-М лі

Ку

В км | Е 8

Е

259 М 63 бог є

У-м Е -ж Е 260 (в) 5 40 - д е)

М

С

М ц- и 8 261 Р 64

М

М ї хо -

Мі Мне

М бе

М,

М М ід о | Е 8 262 і

М со -

М Е

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

М

У-м Е 9-5 - Е (в) 5 263 М Р 27

М в у- ве є фроОу-к Е ї9- Їх - Е 264 (о) 5 58

М чані в 8 уча хо

М є -М Е 1 - Е (о) 5 265 М В 62

МЕ

Ге) х

С

Мет

В УкЖК | Е 8

Е

266 М 72 х (о)

М 2

Е пе. | 07 267 зу о 57

М М о й;

Таблиця 1 ил "шк че о в 268 І ві сом

Хе о са с"

У-хй Е 0-х

КВИ- Е щу; еиЕ 269 61

М

А-А5 7 х. М "Ду: пе М

М З Е

270 -и ( Ух 45

МІ -м

М-- СІ о

Ів» еЕ М СІ

М з 271 -/ ( / х зо

Мі -М

М-- СІ

З м Е 9-х - Е 272 пк ЧИ 30 / х - 8о

Таблиця 1

Структура Вихід (96) «т

Н - 273 5 І-5 37 рон ів; Е

Е

Ід) І23 м

М 9яЯ ! і в щ-ї 274 4 М ж І-25 35

Я

Ге) н

Е

Е т, | "ЗМ Е 275 а: - о І-т2а 31

М (о) в;

Е т Гм 276 пає М а З

М О БЕ

В;

Е т Ї "ЗМ 277 Е ; с т ро І-19а 71 іо О в у ,М

М-/

Е те Гн

М О є т;

Е мо | "М 279 ву р і

М, О Б в;

Таблиця 1

Структура Вихід (96) оз бі 280 - З є в п -

Ку м

Е (я Е 281 м: а, 30

Мб 9

М-

Е щ м

Ї

282 ше п: о7 24

М О Б

Вт; че А 283 - І-їга 48 і у: (6) х ЕЕ ву; я от

Е мо | і 284 Е с до 62

М о у хм

М-/

Е яри

Е Пе "М 285 А ль ( Ф І-25 77

Р - й

М

Ме м-/

Е яр

Е 5 М 286 З |, і25 9,7 и з ( і о

Ме м-/

Таблиця 1

ЦИ

Е т» в | М) 287 в а: - о7 62

М (в ее М м--/ о що

Е й М 288 81" гео 76

М в) ет М

М-/

Фі М КО- 5 / хе 289 КОТ К!

М о ?

Ше М

М-// о7

Е 5 | М 5 290 Е х с - І--ба 40.

М |) ет? М

М-/

Е в й кт

Е ї- 7 хх / 291 | у 5 І-2Ба 65

Ше М

М-7

Ге)

Е 5

З М

292 А о І-25а 5З

М (6) ет М

М-/

Е 5 й її Е 5 се 293 ух с оч І-2Ба 65

М АК о ж М

М-/

Таблиця 1 о Меспол.| 0 Структурда./:/ З . с труктура

Е 5 АХ 294 Е щи ЗА " с І--ба его (в) Е г М

М-/

Е 5 - 295 Е с 7 с І--ба 94 его о г М /

Е 8 о7 296 5 | о

Е ; с с І--ба 39

М в) ето м

М-7

Ах 297 5 щу

Е ; сх с І--ба 61 йетх о у М

М-/ 298 АХ ню Ле

М

Е ; їх с - І--ба 56 ех о ( М

М-/ 299 ву с І-25а БА ет о ( М

М-/

Таблиця 1

Е

Уа 300 Е (з с І--5а 22

М (Ф) ет М

М-/ о

Е 5 | М

Зої й у 4 2 і-2Ба еф о в М м-/

Е 5

З

302 ме: с І--5а 61

ЩА о

ЯсЯ М м-/ 9-4

М

А ех 303 З М. С І--га 41

Е ї з (З )

Ше

М-/

Е й хо 304 м: є о І--5а 56 (9)

Ме

М-/

А ех

З

305 Кот 5 ЦД А, І-гва 64 ек М м-// -

Е З

306 З І--5а

Е і З 5

ЩА о

ВУ, М

Таблиця 1

Е З

307 ув; І-2Ба 55

Е ї чЗю (З

Ме ів; ї

М-/ і во 8 |, 308 ОТ 5 І-2Ба 48

М о 1

М-/

Е

У са ря 309 сан: с І-25а 65

ЩА (в) ет у

М-/

СІ шк р 310 ву с І-25а Б2

Я ів) 1

М-/ 5 5 311 КО 5 І-25а в2

М о 1,

М-/ 5 5 312 ми ее й І-25а 63

Ме ів;

Й м-//

З р 313 Код 5 І-25а 63

М А о ес у

М-/

Таблиця 1

Е 5 М - 314 ше 5 І-2Ба 64

Ше о 1 /

М

Е 5

З М

315 КО8 Ії і-2Ба 63

М М, м о чо

Мети ;

Е 5 5 316 КО 8 | і-2Ба 100 о хи

М-/

Е 5 | ТМ 5 - 317 ше З і-2Ба в1 о х /

М-/

Е 5 | й: 5 - 318 От 5 І-2Ба

Ше о хи

М-/

Е 5 319 у І-2Ба 57

Е ! З (с й о

І,

М-/

Е 5 (фі 5 320 ше 5 Ф І-2Ба БО

Ше о х

М-/

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

Е Е т,

Я А Шї і-9Ь 321 З М р (примітка: сполучення за

Е в: допомогою ЕЮОСІ)

І М 4 у; ті о М ї ТА і-д 322 (примітка: сполучення за

Е й: допомогою ЕОСІ) й М о в т,

Й чи | В І-90 323 - (примітка: сполучення за 59

ЕР М: допомогою ЕОСІ)

М Л в; т

Й ТА | і-9р 324 А (примітка: сполучення за 79

Е й: допомогою ЕОСІ)

М о

В;

Е шо д | чфе Е щети 325 сх 5 дл (примітка: сполучення за 62

Е т ї П допомогою ЕОСІ)

Кф М

М-/

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

АХ! т, й че І-96 326 (примітка: сполучення за

Е й: допомогою ЕОСІ)

М А о в

С М

Е м, 51 Й І-96 327 Е -к (примітка: сполучення за 73

І о допомогою ЕЮОСІ)

Ме

М-/ т

Й ТА З. і9Ь 328 Е х шо (примітка: сполучення за 56

І допомогою ЕОСІ)

ЩА о в

Я що рого 96 323 Е їх М дл (примітка: сполучення за 71

І д допомогою ЕОСІ) ех у

М т Ф е ЇЙ (фі І 331 (примітка: сполучення за й | Ме допомогою ЕОСІ)

М (в; в;

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

Е і

Е г М 332 чі, і 32

Е | рез

Кк о

М

СІ

Й в З І-25а 333 Е їх с СІ (примітка: ангідрид 61

І М о фосфонової кислоти) ет м

М-/ (о в ї ТА і-90 334 Е хо СІ (примітка: ангідрид

І і о фосфонової кислоти) ет ще м-/ ій

Е 5 М. | М що о ж М м-/

СІ

Е в З

М Л рі ра І-г5а 336 й І В: З о (примітка: ангідрид 52

М о фосфонової кислоти)

М

Е

Е м) м) 337 ме ЕВ : й І-25а в2

Ме о

І,

М-/

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

Е

Е 5 8 В 338 Е їх с Е І--5а ЗЗ

М М (о) с М м-/

Е 5

З

339 пане с і-оБа ск 1,

М-/

Е

Е 5 5 в 340 Е х с І--5а 38

М М о в М м-/

Е

Е 5

ЗА пане Е І-25а 72 й й

ЩІ,

М-/

Е ву (Ф)

Е З

342 З І--5а 42

Е | - с Е его о ( М м

Е

Е З

З

М. Л рі й І-25а 343 й р 5 о (примітка: ангідрид 58

Ме о фосфонової кислоти)

М

Таблиця 1

Е

Е З

З

344 ХАОС І--5а 64 о й

М-/

Е о

Е 8 і сге5а 345 5 (примітка: ангідрид 42

Е р с фосфонової кислоти) (в; й м-/

Е

Е З

З

346 КАС І-25а 4 о й

М-/

Е З

Уа 347 Ме є З І-Ба Б2 (в; й м-/

Е З

А ох 0 (в) 348 КО І-2Ба БІ

М (е) ект М м-/

Е З

А о О- 85 з49 КО І-25 46

М (6) ет М

М-/ о Є

Е 8

А дах Дон 35О ше 5 І-25а 55

М в) ее М

М-/

Таблиця 1

Е З

АХ о у

ЗБ Р Що 5 І-2Ба ет ч м-//

Е ве

Е 5 352 8 І-25а 67

Е й: с

М А ів)

Я М

М-// то

Е 5 8 353 сан: є І-25а (в;

Шо м-/

Е З

А ех - о 354 Р І 5 ПТ І-2Ба 5З ет М м-/ : ; ек

З І--5а 355 ХА (примітка: ангідрид 34

М о фосфонової кислоти) ет м м-/ сі

Е 5

АХ лю 356 ми Ше ї щ І-25а 78

Ме

М-/

Е

Е 5 357 ОО ре її їщк І-гба 65 ет М м-/

Таблиця 1

Е 5 йше 358 Е й: І--5а 17 о)

Ме

М-/ п

Ге)

Е 5

М

359 А ою Зв І--ха 58

І М Од ек м

М-/ 8

Ач зи

З - 360 ДЗ ки і-25а 43 о) й

М-/ он

Е т, 5 ак 361 5 чу 15

Е І чЗ« (в

Ме

М-/

Е Шин: їз 362 Е хх І--5а 47 (в

Ме

М-/

ЩА

Е й З 363 А -еЮ І--5а 49 (в й

М-/

Таблиця 1 за (в)

Е 8 364 ХДУ І-2Ба

Е "Є

М (Ф) ет М м-/

Е 5 хх 365 у І-25а 13 ефе о ох м-/

Е 5 В: 8 | м 366 мн: І-25а 59

ЩА о

Ох м-// т 367 ме по І-25а

М (в) ет м

М-/ 5-4

М

Е З

368 З М І-25а 5О

Е | ЗХ в)

Ме

М-/

СІ

Е 5 5 369 ДАТ І-25а 26

М (е) ет М м-/

Е

Е З

5 АЛ 370 А ою і-2Ба

М о ет м м-/

Таблиця 1

А ел з 371 КОТ Й І-2Ба ЗА

Ме м-/ щЩ-

Е 5 5 372 А ою І-25а 37 і) м-/ тк

Е З

373 во І-2Ба 63

Е і з її

Ше

М-/

М

Е З

З

374 А -еЮ Е І-25а 53 9)

ОК м-/

Е в СІ 5 М 375 КОТ її " І-гба 7 о

М-/ о

Е З щу: 376 и сі І-2Ба 57 о й м-/

Е 8 й щу: 377 МеВ! с І-25 4

Ме м-//

Таблиця 1

Е З В

З

378 м: с о І25 58 що А 9) еф м-/

М

Е в Х 379 ше: с М І-25а 63

М М (9) т УМ

М-/

М

Е 8 х 380 Е хх І-25а

І 5

М в; ее м м-/

Е 5 З

З "7 381 Кв | І-25а 5З

Ме

М-/ що

Е 5 ч е І 382 ву с М І-25а БА

ІФ)

Ме м--/ т,

Е в З

З83 А І-2Ба 55

Ф) й

М-/ оо їв: 384 мн: с 7 І--ба 22 (Ф)

Ме

М-/

Таблиця 1

Структура Вихід (96)

Е. Мо

Е 8 8 385 А че І--ба 72 (в) м-/ щ-о т

Е 5 доз А ою І--5а 57,7 ; 5 О в

Ме м-/

М--

Е 5 5 404 А І--5а 67 (о)

Ме м-/ щл-

Е 5 5 405 А че І-25 68,7 (в)

М-/

ХУ

Е 5 8 Ї 406 Е " с с І-25 71,5 (в) м-/

ПЕРЕТВОРЕННЯ ТА СИНТЕЗ КІНЦЕВИХ СПОЛУК ЗА ДОПОМОГОЮ ІНШИХ ШЛЯХІВ

Сполука 386 і сполука 282/387

Го

ІА / р і Фі

Б й І й: и і ч- -

М, оо в; ж о; (в;

Спол. Мо 386 Спол. Мо 387/282 5

Стадія 1. Сполука 388 і сполука 389

СІ СІ

Е т, ! М Е ! "М вд ке м: йо бу іно ЧИН

М-ї М-/

Спол. Мо 388 Спол. Мо 389

Додавали МаОМе (10,5 мл, 56,7 ммоль, 3095 в Меон) до розчину сполуки 71 (654 мг, 1,42 ммоль) в Меон (13 мл) й одержану суміш перемішували за 09С протягом 1 год. Реак. сум. гасили насиченим водним розчином МНАСІ. Леткі речовини видаляли під вакуумом і водний залишок, що залишився, розділяли за допомогою ЮОСМ. Водний шар екстрагували за допомогою

ОРСМ (2х10 мл). Об'єднані органічні шари висушували над Мд5О», фільтрували та випарювали іп масцо з одержанням суміші сполук 388 і 389 у вигляді білої піни (656 мг), яку застосовували як таку на наступній стадії

Стадія 2. Сполука 386 і сполука 282/387

Суміш із попередньої стадії розчиняли в 1,4-діоксані (10 мл) й одержаний розчин поміщали в пробірку для проведення реакцій із обробкою мікрохвильовим випромінюванням і дегазували протягом 5 хвилин. Потім додавали К»2СОз (668 мг, 4,83 ммоль) з наступним додаванням триметилбороксину (0,789 мл, 2,76 ммоль, 3,5 М в ТНЕ) і РД(РРІз)4 (159,5 мг, 0,14 ммоль). Потім реакційну суміш нагрівали за 1002С протягом 2,5 год. під дією мікрохвильового випромінювання.

Додавали додаткову кількість триметилбороксину (0,394 мл, 1,38 ммоль, 3,5 М в ТНЕ) та реакційну суміш нагрівали за 1002С під дією мікрохвильового випромінювання протягом ще години. Розчинник випарювали іп масио й одержаний залишок розчиняли в суміші ОСМ/вода 1:1 (40 мл). Двофазну суміш розділяли та водну фазу екстрагували за допомогою ОСМ (2Х10 мл).

Об'єднані органічні шари висушували над Ма50О», фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Одержаний залишок (843 мг) очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта ОСМ/Меон, від 100/0 до 97/3. Збирали фракції, що відповідають вказаним у заголовку сполукам. Одну фракцію перекристалізовували з

ОІРЕ з одержанням сполуки 282/387 (146 мг, 24965). Другу фракцію очищували за допомогою препаративної НРІ С із застосуванням як нерухомої фази: КР ХВгідде Ргер С18 ОВО-10 мкм, 30 х 150 мм їі як рухомої фази: 0,2595 розчин МНАНСО: у воді, СНІЗСМ з одержанням сполуки 386 у вигляді білої твердої речовини (82 мг, 13,895).

Сполука 390 і сполука 391 у : ух - - а | о о а (в; й й

М-/ М-/

Спол. Мо 390 Спол. Мо 391

Зо У пробірку для проведення реакцій під тиском завантажували сполуку 271 (150 мг, 0,37 ммоль), циклопропілборонову кислоту (127,2 мг, 1,48 ммоль) і толуол (3,0 мл) й одержане дегазували протягом 15 хв. перед послідовним додаванням ацетату паладію(І!) (4,1 мг, 0,0185 ммоль), трициклогексилфосфіну (10,4 мг, 0,037 ммоль), дистильованої води (0,734 мл, 40,65 ммоль) і триосновного фосфату калію (235,7 мг, 1,11 ммоль). Пробірку закривали й одержану в результаті реак. сум. поміщали на масляну баню за 100 "С і перемішували протягом 16 год.

Одержаний розчин охолоджували до к. т. і фільтрували через подушку з СеШеф, яку промивали толуолом та ЕАс. Фільтрат випарювали до сухого стану за зниженого тиску. Одержаний залишок розчиняли в ЕІОАс і промивали водою та сольовим розчином, потім висушували над

Ма5оО»з, фільтрували та випарювали іп масо. Одержаний залишок (155 мг) очищували за допомогою препаративної НРІ С із застосуванням як нерухомої фази: КР ХВгідде Ргер С18

ОВО-10 мкм, 30 х 150 мм і як рухомої фази: 0,595 розчин МНаАс у воді ї- 1095 СНЗСМ, Меон, з одержанням сполуки 390 (18 мг, 11,795) і сполуки 391 (66 мг, 43,495) після розтирання з гептаном.

Сполука 392 -в, М

Е д

М.

А у

О в

Ме

М-/

Стадія 1. Сполука 393 сі -В, "М

Е д

М. -

Аа .

М 9) Е ес М м-/

Фторид цезію (577 мг, 3,8 ммоль) додавали до розчину сполуки 71 (436 мг, 0,95 ммоль) в

ОМЕ (7,35 мл) і одержану суміш перемішували та дегазували протягом 15 хвилин. Додавали циклопропанол (0,072 мл, 1,14 ммоль) та реак. сум. нагрівали за 1102С протягом 2 год. під дією мікрохвильового випромінювання. Розчинник видаляли іп масо, потім одержаний залишок розчиняли в суміші ОСМ/вода 1:1 (20 мл). Одержану двофазну суміш розділяли, потім водний шар екстрагували за допомогою ЮСМ (2х10 мл). Об'єднані органічні шари висушували над

Ма5О., фільтрували та розчинник видаляли за зниженого тиску. Одержаний залишок очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта ОСМ/МеоНн, від 100/0 до 99/1, з одержанням сполуки 393 (308 мг) у вигляді речовини з домішками, яку застосовували як таку на наступній стадії.

Стадія 2. Сполука 392. Розчин сполуки 393 (308 мг, 0,64 ммоль) в 1,4-діоксані (4,6 мл) дегазували протягом 15 хвилин, потім послідовно додавали К»СОз (310 мг, 2,24 ммоль), триметилбороксин (0,550 мл, 1,92 ммоль, 3,5 М в ТНЕ) і РЯ(РРз)« (74,015 мг, 0,064 ммоль) й одержану суміш нагрівали за 1009 протягом 2,5 год. в пробірці для проведення реакцій під тиском. Розчинник видаляли іп масо й одержаний залишок розділяли між ОСМ (10 мл) і водою (10 мл). Одержану двофазну суміш розділяли і водний шар екстрагували за допомогою ОСМ (З х 10 мл). Об'єднані органічні шари висушували над Ма5О», фільтрували та розчинник видаляли за зниженого тиску. Одержаний залишок (340 мг) очищували за допомогою препаративної НРІ С із застосуванням як нерухомої фази: КР Мудасе Оепаїй!ж С18 - 10 мкм, 200 г, І.О 5 см 'ї як рухомої фази: Меон, з одержанням сполуки 392 (55 мг, 18,695) у вигляді білих кристалів після перекристалізації з СІРЕ.

Зо Сполука 394

Е

КЕ пов -

Е і "З 5

О в

М-/

Стадія 1. Сполука 395 сі вові

М -

Е і еча

М 9) Е

Ше м м-/

Послідовно додавали ЕОСІ (993 мг, 5,2 ммоль) і б-хлор-3-фтор-2-метилізонікотинову кислоту (проміжна сполука 50, 492 мг, 2,6 ммоль) до перемішаної суспензії проміжної сполуки 9-

Ь (750 мг, 2,47 ммоль) в ОСМ (20 мл). Потім до суміші додавали ОІРЕА (1,78 мл, 10,4 ммоль) й одержаний жовтий розчин перемішували за к. т. протягом 5 год. Реак. сум. гасили водним розчином Маон (20 мл, 1 М). Водний шар екстрагували за допомогою ЮОСМ (3х10 мл) й об'єднані органічні шари висушували над М950О.5, фільтрували та концентрували іп масицо.

Одержаний залишок (1,5 г) очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта ОСМ/Меон, від 1000 до 99/1, з одержанням сполуки 395 (720 мг, 6295) у вигляді білої піни.

Стадія 2. Проміжна сполука 56 вові

М -

Е Ї еча

М 9) Е

Ше м м-/

Додавали йодтриметилсилан (0,065 мл, 0,46 ммоль) до розчину сполуки 395 (200 мг, 0,46 ммоль) у пропіонітрилі (0,8 мл), в атмосфері азоту. Потім додавали йодид натрію (205 мг, 1,37 ммоль) й одержаний розчин нагрівали до 802С. Через 5 год. результати аналізу ЇСМ5 показали лише 1595 перетворення, відповідно додавали ще одну порцію йодтриметилсилану (0,065 мл, 0,456 ммоль) і реак. сум. перемішували за 802С протягом 22 год. Після цього додавали ще одну порцію йодтриметилсилану (0,065 мл, 0,456 ммоль) та йодиду натрію (205 мг, 1,37 ммоль) і реак. сум. перемішували протягом 12 год. Розчинник видаляли іп масио, потім одержаний залишок розділяли між водою і ОСМ. Одержану двофазну суміш розділяли і водний шар екстрагували за допомогою ОСМ (3х20 мл). Об'єднані органічні шари висушували над Ма5Оа, фільтрували та розчинник видаляли іп масио. Одержаний залишок (1,5 г) очищували за допомогою колонкової рлеш-хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта

ОСМ/Меон, від 100/0 до 97,5/2,5, з одержанням проміжної сполуки 56 (162 мг) у вигляді речовини з домішками, яку застосовували як таку на наступній стадії.

Стадія 3. Сполука 394.

Зо Метил-2,2-дифтор-2-(фторсульфоніл)ацетат (0,192 мл, 1,51 ммоль) додавали до суміші проміжної сполуки 56 (160 мг, 0,3 ммоль) та йодиду міді (75 мг, 0,39 ммоль) в безводному ОМЕ (0,958 мл) в пробірці для проведення реакцій під тиском. Одержану суміш нагрівали до 809 протягом 2 год. на масляній бані. Реак. сум. охолоджували до к. т., потім гасили насиченим водним розчином МНаАСІ. Одержану суміш екстрагували за допомогою ЕОАс (3х15 мл).

Об'єднані органічні шари висушували над Ма5О5, фільтрували та розчинник видаляли іп масцо.

Одержаний залишок очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії із застосуванням як елюента градієнта гептан/Е(Ас, від 100/0 до 60/40 з одержанням сполуки 394 (17,5 мг, 1296).

Сполука 396

І ОС, р Е от 5 КО й м-/

Стадія 1. Сполука 397 пн

Е ї -чз а ак

О в м-/

Додавали ЕОСІ (934 мг, 4,87 ммоль) і 2-хлор-3-фтор-6-метилізонікотинову кислоту (485 мг, 2,56 ммоль) до перемішаної суспензії проміжної сполуки 9-6 (740,1 мг, 2,44 ммоль) в ОСМ (18,5 мл). Додавали ОІРЕА (1,68 мл, 9,74 ммоль) і реак. сум. перемішували протягом 2 год. за к. т.

Реак. сум. гасили водним розчином Маон (30 мл, 1 М). Водний шар екстрагували за допомогою

ОСМ (3х15 мл) і об'єднані органічні шари висушували над Мо5О»:4, фільтрували та концентрували іп масо. Одержаний залишок (1,5 г) очищували за допомогою колонкової флеш- хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта ОСМ/Меон, від 100/0 до 99/11, з одержанням сполуки 397 (854 мг, 8095) у вигляді білого порошку.

Стадія 2. Проміжна сполука 57 ть -

Е Ї чи 5 І

О Б й м-/

Додавали йодтриметилсилан (0,26 мл, 1,82 ммоль) до розчину сполуки 397 (400 мг, 0,91 ммоль) у пропіонітрилі (1,6 мл), в атмосфері азоту. Потім додавали йодид натрію (410 мг, 2,73 ммоль) й одержаний розчин нагрівали до 802С протягом 1,5 год. Розчинник видаляли іп масио, потім одержаний залишок розділяли між водою та ЕЮАс. Одержану двофазну суміш розділяли і водний шар екстрагували за допомогою ЕОАс (3 х 20 мл). Об'єднані органічні шари висушували над Ма5О5, фільтрували та розчинник видаляли за зниженого тиску. Одержаний залишок очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта ОСМ/Меон, від 100/0 до 97,5/2,5 з одержанням проміжної сполуки 57 (197 мг) у вигляді речовини з домішками, яку застосовували як таку на наступній стадії.

Стадія 3. Сполука 396. Додавали йодид міді (92 мг, 0,48 ммоль) до розчину проміжної сполуки 57 (197 мг, 0,37 ммоль) в безводному ЮОМЕ (1,18 мл) й одержану суміш дегазували за допомогою азоту протягом 10 хвилин. Потім додавали метил-2,2-дифтор-2- (фторсульфоніл)ацетат (0,236 мл, 1,86 ммоль) і реак. сум. перемішували та нагрівали за 802С протягом 2 год., після чого її залишали для охолодження до к. т. протягом ночі. Реак. сум. гасили насиченим водним розчином МНАСІ. Одержану суміш екстрагували за допомогою ЕЮАсС (бх20 мл). Об'єднані органічні шари висушували над Ма5зО»:, фільтрували та розчинник видаляли іп масо. Одержаний залишок (550 мг) очищували за допомогою препаративної НРІ С із застосуванням як нерухомої фази: КР ХВгідде Ргер С18 ОВО-10 мкм, 50 х 150 мм і як рухомої фази: СНІСМ, з одержанням сполуки 396 (7,4 мг, 490).

Сполука 398 7 т

Е в | М

М -

Е і "5

М (9) Е у;

Стадія 1. Сполука 399 о7

Е ча о | М

Е | «М 5 2 СІ

М о Е кт М м-/

Додавали ЕОСІ (320,5 мг, 1,67 ммоль) з наступним додаванням ОІРЕА (0,57 мл, 3,34 ммоль) до перемішаного розчину проміжної сполуки 9-65 (242 мг, 0,8 ммоль) і 2 -хлор-3-фтор-6- метоксиізонікотинової кислоти (проміжна сполука 53, 172 мг, 0,84 ммоль) в ОСМ (6,35 мл). Реак. сум. перемішували за к. т. протягом ночі. Додавали ще одну порцію ЕОСІ (80 мг, 0,417 ммоль) і

ПІРЕА (0,1 мл, 0,75 г/мл, 0,58 ммоль) і реак. сум. перемішували протягом 12 год., потім її гасили водним розчином Масон (20 мл, 1 М). Водний шар екстрагували за допомогою ОСМ (3х20 мл) і об'єднані органічні шари висушували над М950О.5, фільтрували та концентрували іп масио.

Одержаний залишок (600 мг) очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта ЮОСМ/МеоОН, від 100/0 до 98,5/1,5, з одержанням сполуки 399 (136 мг, 8095) у вигляді білої піни.

Стадія 2. Сполука 398

Розчин сполуки 399 (136 мг, 0,299 ммоль) в 1,4-діоксані (2,17 мл) дегазували протягом 15 хвилин в пробірці для проведення реакцій під тиском. Послідовно додавали КгСОз (144,6 мг, 1,05 ммоль), триметилбороксин (0,256 мл, 0,897 ммоль, 3,5 М в ТНЕ) і РД(РРІз)4« (34,5 мг, 0,03 ммоль) й одержану суміш нагрівали за 1002 протягом 2 год. Розчинник видаляли іп масио й одержаний залишок розділяли між ОСМ їі водою. Одержану двофазну суміш розділяли і водний шар екстрагували за допомогою ЮСМ (3х15 мл). Об'єднані органічні шари висушували над

Ма5о», фільтрували та розчинник видаляли за зниженого тиску. Одержаний залишок (220 мг) очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта ОСМ/Меон, від 100/0 до 96/4, з одержанням сполуки 398 (88 мг, 68905).

Сполука 400

Е 5 Мо) ав е і - 5 | Її

М шо м-/

Стадія 1. Сполука 401

Коо)

СІ

Е 8 М

Е і ее с

М ІФ) Е ет м

М-/

Додавали ОІРЕА (0,65 мл, 3,77 ммоль) і НВТИ (300 мг, 0,79 ммоль) до розчину б-хлор-3- фтор-2-метилізонікотинової кислоти (проміжна сполука 50, 150 мг, 0,79 ммоль) в ОСМ (30 мл).

Потім додавали проміжну сполуку 25-а (238 мг, 0,75 ммоль) і реак. сум. перемішували протягом -1,5 год. за к. т. Реак. сум. гасили водним розчином Маон (1 мл, 1 М), а потім фільтрували через фільтр ЕхігеішеФ. Розчинник видаляли за зниженого тиску. Одержаний залишок очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта ОСМ/Меон, від 100/0 до 98/2, з одержанням сполуки 401 (320,5 мг, 83905) у вигляді безбарвного масла.

Стадія 2. Сполука 400

Розчин сполуки 401 (320 мг, 0,71 ммоль) в 1,4-діоксані (5,1 мл) дегазували протягом 15 хвилин. Послідовно додавали КгСОз (343,3 мг, 2,45 ммоль), триметилбороксин (0,608 мл, 2,129 ммоль, 3,5 М в ТНЕ) ії РД(РРПз)4 (82,0 мг, 0,071 ммоль) й одержану суміш нагрівали за 1009 протягом 2 год. у пробірці для проведення реакцій під тиском. Розчинник видаляли іп масцио й одержаний залишок розділяли між ОСМ (20 мл) і водою (20 мл). Двофазну суміш розділяли і водний шар екстрагували за допомогою ЮОСМ (З3х15 мл). Об'єднані органічні шари висушували над М9505, фільтрували та розчинник видаляли за зниженого тиску. Одержаний залишок очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта ЮСМ/МеоН, від 100/0) до 95/5. Це забезпечувало одержання суміші ендо/екзо-ізомерів (230 мг), яку розділяли за допомогою препаративної НРІ С із застосуванням як нерухомої фази: КР ХВгідде? Ргер С18 ОВО-10 мкм, 50х150 мм і як рухомої фази: Меон.

Фракції, що містять продукт, випарювали й одержаний залишок перекристалізовували з ЕСО з одержанням сполуки 400 (57 мг, 18,6905)

Сполука 402

Е та, В, дд м

Іру Мих

М М, (в)

В,

М

Додавали тсРВА (307,825 мг, 1,25 ммоль) до розчину сполуки 1 з УМО2017/076900 (250 мг, 0,624 ммоль) в ОСМ (1,6 мл) за 102С й одержану суміш перемішували в ЕазутахФ протягом З днів. Після цього реак. сум. гасили насиченим водним розчином МанНсоОз (1,5 мл). Двофазну суміш розділяли та водний шар екстрагували за допомогою ОСМ (З3х5 мл). Об'єднані органічні шари висушували над Мд5О»5, фільтрували та концентрували іп масо. Одержаний залишок очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі із застосуванням як елюента градієнта ОСМ/Меон, від 100/0 до 96/4, з одержанням сполуки 402 (250 мг, 96905) у вигляді білого порошку.

АНАЛІТИЧНА ЧАСТИНА

Значення температури плавлення

Значення являють собою або максимальні значення, або діапазони значень температури

Зо плавлення, і їх одержують із експериментальними похибками, які зазвичай пов'язані з цим аналітичним способом.

Температуру плавлення визначали за допомогою Ю5С823Зе (МешШег-ТоїІедо). Температуру плавлення вимірювали за температурного градієнту 10 "С/хв. Максимальна температура становила 300 "С.

Таблиця 2 о Меспол./ | МРС) | 77777777 | оМесполл/і | МРС) 22111111 21782177111111111111111111111111112о6 11114573 нини: ни НЕ ХЕ НИ ПО ПОТУ НЯ ПОН ТЯ: ПИ нини т ни ши ПЕ т з о ПО МЕС 1: ПОН ни и Ех т: п ПО Го ПО М: Я: ПО 02291711 7176652 17711111 111 281111171111лебМв 17777112 11116970 ни пи п ЕТ НЯ ПО ПО РУД ПОЛЕ Тк ХУ ДІ 77177491 2638171777111111111111111111111111122о 11111 15597..ЙШ:Ь 10521171 228589 17777111 11112257 771769 177111209973. 17777771 11111224 | 153407 72171111 177,6017771111111111111111111111111225 | 1786400 247111 17787 17111112 | 78 27971771 227л01777111111111111111111111111270 11111235 98 1112отмае 17771111 271 1111 ни ши Ех ЕХ и я ПОТ: х ПО ПО ЕЕ: ПОН

Таблиця 2 о Меспол./ | МРС) | 77777777 | оМесполл/ї | МРС) 111071067717711273,02 17777717 | 282/387 | 193,93 ЩЦ-(Є пи ГЕ: В ПО ТУ ЕТ ПОЯВА ПО: ТУДИ ПОН Б: Ж: НН ни ЕЕ ПО ЕТ: Я ТЯ ПО ПО ХГ УНН ПОЛЕ ТТ ЛЕ НОЯ ни Ен по УК о ПО ОН Ко ТОННИ ОНЕУ: ПО ши ЕЕ о п ЕТ: о ОО ПОЛЕ ПОЛОН ПОЛ Я У ДУ 120.77 1771117173,99,.477..17777717171717171717171717171717171171111322 | 180277 ни, и СТЕ ПО ПО У УДО ПОЛОН т: ВО 0212317711120387 17777771 111111325 | 22636 ни, пи ЕЕ Р и по ПОЛУ Я ПО ТЕ ТЯ: ОО ни, І ЕЕ: ХЕ ВИ ПО ПО У ЗВ ПО У Дт: ник ни ше Епи си По ПОЛ УС: ОО ПО А п ЕТ ПО СЯ: ТЯ ПООООООООООООООООООЯ ОННЕ: ХХ НООНННЯ ПОЛННЄ К ХЕ: У ДОН нити Тс ПО ПОЛ: ХУ Я ПОН ЕК Я 1 НЯ 01321711 1166571111111111111111111111111111933 11129155 ШЩГ-: и ЕХ ВИ ПО С НЯ ПО ПО: Х РУД ПО КУ ДО 02187177 22391717711111111111111111111111111936 11125 2189 17771 71520317771111111111111111111111111355.. | 14608 щЩ-УКГ 19111171 716207177771111111111111111111111111356 71118793 ШЩЦ/ ши С ПО БТ ТЯ ПОНЯТТЯ ПОТ У: ЗОН ши СТ ПО ТА: ПО ПОЕТ х УДО ПОЛ ПИ 201 111711лябмя 1 171111111111111111111111111353 11123066 202 1711117865 17777771 11111375.. | 17561 2203 17711204о3 17711111 11111376 | 175571 11204171 20547.7 17777771 11111377 | 183,67.ЙШЩГ- 11111111585. | гговошШ

Способи І С/М5

Вимірювання під час здійснення високоефективної рідинної хроматографії (НРІС) проводили за допомогою насоса для І С, детектора на діодній матриці (БАС) або УФ-детектора та колонки, як описано у відповідних способах. За необхідності включали додаткові детектори (див. наведену нижче таблицю способів).

Потік із колонки спрямовували до мас-спектрометра (М5), який був оснащений джерелом іонізації за атмосферного тиску. У компетенції фахівця в даній галузі є налаштування регульованих параметрів (наприклад, діапазону сканування, часу витримки тощо) з метою одержання іонів, які забезпечують визначення номінальної моноіїзотопної молекулярної маси (ММУ) сполуки. Збір і обробку даних виконували за допомогою відповідного програмного забезпечення. Сполуки описували за допомогою їхніх значень експериментального часу утримування (Ку) та іонів. Якщо не вказано інше, то в таблиці даних вказаний молекулярний іон відповідає МАНІ" (протонована молекула) та/або (М-НІ (депротонована молекула). У випадку, якщо сполука не була безпосередньо здатна до іонізації, вказують тип аддукту (тобто МАМНА,

ІМАНСООЇ тощо). Для молекул зі складними ізотопними розподілами (Вг, СІ тощо) описаним значенням є значення, одержане для найменшої маси ізотопу. Усі результати одержували з експериментальними похибками, які зазвичай пов'язані із застосовуваним способом.

Далі в даному документі "БОЮ" означає одиничний квадрупольний детектор, "МБО" означає мас-селективний детектор, "КТ" означає кімнатну температуру, "ВЕН" означає містковий гібрид етилсилоксану/діоксиду кремнію, "САЮ" означає детектор на діодній матриці, "Не" означає діоксид кремнію підвищеної міцності.

Таблиця За

Коди способів І! СМ5 (швидкість потоку виражена в мл/хв.; температура колонки (Т) в "С; час аналізу у хвилинах) со "стоку я д Прилад Колонка Рухома фаза Градієнт У аналізу способу тя (хв)

Т колонки 7"

А: 10 мМ . о Від 95.95 А до

Умаїегв: Асдийуєю | Мав: ВЕН | СНІСООМНа В вод захв, (9

А С18 (1,7 мкм, | 95 95 НгО-5 95 тятяня 2

ОРІ СФ - ОАБ/5ОЮ і утримування 2,1750 мм) СсніСМ протягом 0 7 хв 55 в: СНІСМ й "хв.

А:25 ММ ! о

Ммаїеге: Асдийує | Умаїєтє: ВЕН |. СНЗСООМН» в во Ка 0,8

ОРІ СФ - С18 (1,7 мкм, | 95 95 НгО-5 95 ? им вання ЩІ нення 2 рАО та 5О0 2,175О мм) сНУсМ п ав дув! 55 в: СНІСМ й "хв.

Від 100 95 А до , А: 10 мМ о

Умаїеге: Асдийує увів: З СНСООМНА заток 0,7 с ОРІ СФ - (ївмкм, 8 9556 НеОчБ Зо в -| 35 рАО та 5О0 є ' СНнзсМ б/к 55 2,17100 мм) в: СНіСМ до 5 ва за 0,5

Від 100 95 А до 195 А,4995Ві

А: 10 мМ бу

СНеСООМНав | 20 С зав хв., до1 ДА 95 95 Нго-5 о о

Колонка Хієїта СсніСМ 39 76 В за 0,5 умаїег5: АПапсеф- , , хв.,до 100 95 Ю 1,6

М5 С18 В: СНІСМ С: рАр - 20 та ЕІ 50 за 1 хв. з тя 11 2000 АІйесп (3,5 мкм, 4,6 х СНзоН А утримуванням 40 100 мм) 0: (40 96 СНЗСМ, і - протягом 1,0 хв. 96 СНЗОН, їі о 100 95 А за гозеНОз | вх 0,25 96 СНЗСООН ' ' утримуванням протягом 1,5 хв.

А: 019, Від 95 95 А до

УмМаїеге: АсдийуФ | Ууаїегв: ВЕН неон оу О 96 А за 2,50 0,7

Е ОРГСФ -ВАО-ЕЇІ 50) С18 (1,7 мкм, СОН в то ХВ., тт З ж о та БОЮ 2,1750 мм) в: СНУСМ до 5 ва за 0,5 55

Таблиця ЗБ

Дані аналізу СМ5 - Не означає час утримування (у хвилинах), МАНІ" означає масу протонованої сполуки, спосіб стосується способу, застосовуваного для аналізу (І С)М5

ВІ (хв.) 76 | 08 | юЮюжщ 36 | (Ж 374. |. .7.А

Таблиця ЗБ

Дані аналізу СМ5 - Не означає час утримування (у хвилинах), МАНІ" означає масу протонованої сполуки, спосіб стосується способу, застосовуваного для аналізу (І С)М5 78 ЇЇ 087 | щющКХ, 376 | о 3741777 А 778 ЇЇ 096 | (Б зв | 77777777777/с38071711117А 70 0899 | щющ ((: 443. | 77/41 А " МаАСНЗСООЇ 7714. | 066 | щющ(:Ц 339,77 | ..77777707337..|1777А 7715. | 069 | щ хБ З 7/1 77777777173698 11777 А 459 503 | 069 | щ(-х 42 | 40777171 А 743 | 09 | щБхБЯамй/ | 77439 Щ( | А 744 | 096 | щБМ 43 | 7777/4717 А 52 | 09 | 5 Ююжщ («455 6ЮЖЩ | 453 | А

Таблиця ЗБ

Дані аналізу СМ5 - Не означає час утримування (у хвилинах), МАНІ" означає масу протонованої сполуки, спосіб стосується способу, застосовуваного для аналізу (І С)М5 60 | 174 | .(о41 / 117777777711117491111с 66 | 153 | щКМ 403! 77777774 71с г 68 | 078 | -х 405... | ...ЙюЙюЙ/ 403... .ДШур.СА 769 | 096 | х( 42 | 40777771 А 71089 | ЮюЮюБф459.ЮюЮЙЄ|..ЮЙЮ7457. |. А 506 80 | 16 | щМБ 45 Й. | 77 4311111с г 783 1 09 | щ 41 9 Щ | щЩ(49 ( А 861115 | щ(: 47 | 77 4511 |1с 7789 | 091 | Юющ 457 2 Щ | 4562 (| А 780 ЇЇ 09 ЇЇ 5 ющ Я 7 9/7 409 9 Щ | А 796 | 177 | Б 428... | /////0/л4671111с 470 798 | 17 | щБвхщмще | - що / 1777 с 789 | 12 | щХ 376. | /////о/сл353741111с 101. | 099 | юЮющ429 | («Б 427.17 А

Таблиця ЗБ

Дані аналізу СМ5 - Не означає час утримування (у хвилинах), МАНІ" означає масу протонованої сполуки, спосіб стосується способу, застосовуваного для аналізу (І С)М5 474 143 | 077 | Бк 41... |1.7777177171717171717171711111111111111111171А

Таблиця ЗБ

Дані аналізу СМ5 - Не означає час утримування (у хвилинах), МАНІ" означає масу протонованої сполуки, спосіб стосується способу, застосовуваного для аналізу (І С)М5 192. | 096 | щБ 456 | --.-:(« 45 ' А 193 | 096 | щБж 456 | --:( 44 | А 198. | 069 | щ (390 5 ющ М | (КБ 388. ї|.ГССА 199, | 066 | (Б 405... | ...юЮюЙР 405......-.К( | В 7200. | 088 | щ(хЙГО457 | (((: | А 470 7202 | 076 | -(х 362. | /////7//7//777/777/777/7/7/7/71Є17141А 204 | 076 | -ХМх 45 | (| А

Таблиця ЗБ

Дані аналізу СМ5 - Не означає час утримування (у хвилинах), МАНІ" означає масу протонованої сполуки, спосіб стосується способу, застосовуваного для аналізу (І С)М5 7205 | 089 | (хм 42. | /////7777777777777771717171717171171717171А 7206, | 700 | -.(:(Й в. 177777771111111111111111111111111111А 448 7208. | 093 | ющ (399 9 юЩ | (| А 7209. | 091 | ща | 117 А 210 | 075 | ::Ї 41 Її. 77777771 А 21 | 1075 | Рай / Її.//777777777717171717171711111111111171А 212 | 069 | щ-МхБ 42. | (////77/777777777771711171717171171717171А 214 | 089 | щ (м 400 | 77/77/3981 А 215. | 0892 | щМ(:ЙфДЙ457...Й. | ЙЙЙЙЙЙ7//7/7/7/7/7/77/7/7/7/7/717Є1А 220 ве о | 11111111 222 | 090 | щБ 405... | ..юЙРК/жК 403..|777А

Таблиця ЗБ

Дані аналізу СМ5 - Не означає час утримування (у хвилинах), МАНІ" означає масу протонованої сполуки, спосіб стосується способу, застосовуваного для аналізу (І С)М5 269 | 090 | щ (М 431 | 777777777711742977717171717А " МаАСНЗСООЇ 295. | 09 | 5 ющ (437 | 485 | А

Таблиця ЗБ

Дані аналізу СМ5 - Не означає час утримування (у хвилинах), МАНІ" означає масу протонованої сполуки, спосіб стосується способу, застосовуваного для аналізу (І С)М5 307. | 099 | щ (437 Щ | 45 | А 33 | 08 | юЮющ 458552 щЩщ | 43 | А 7916 | 1708 | 77777771 4385......Й.ЙДЙ | 7777-1111

ЕТ ПО ТЕ Я ПО СОЯ ПО НО «І 481 9327. | 0092 2 ЮЇ 5БЮжюкю 425. | хг. 423 /|17777А

А8З3 515 480 499 7937, | щЦ09 2 2 ЮЇ 5БЮжкююмМЙБмрц6.яо |77777777111148777777171717717А 939, | .ю.099 | 5 ющ 432 2 | 43077777171717717А 984 | 09 | юЮющ (хБ 420 | 7777/7487 А 935 7947 | 09 | 5 Юющ 44 | 402 | А

Таблиця ЗБ

Дані аналізу СМ5 - Не означає час утримування (у хвилинах), МАНІ" означає масу протонованої сполуки, спосіб стосується способу, застосовуваного для аналізу (І С)М5 957. | 191 | щющЮщК 4 7/17777777771711с74687111 9364 | 08 | 5 щ 444 | щ2 А 371 | 096 | щМм 424. | ол л422/11117А 385. | 09 | щК 455 Щ | 453 | А" 990, .ю.099 | щ (47 2 Щ | 45 | ЕЕ 398. | 099 | щ (Б 45 | 433 | А 403 | 09 | 5 ющ 45 5 щ | 453 | А

Способи 5БЕС-М5

Вимірювання під час 5ЕС проводили із застосуванням аналітичної системи надкритичної рідинної хроматографії (ЕС), укомплектованої насосом для двокомпонентних сумішей для доставки діоксиду вуглецю (СОг) та модифікатором, автоматичним дозатором, термостатом для колонок, детектором на діодній матриці, оснащеним проточною кюветою для роботи під високим тиском, що витримує значення до 400 бар. За умови оснащення мас-спектрометром (М5) потік із колонки спрямовували до (М5). У компетенції фахівця в даній галузі є налаштування регульованих параметрів (наприклад, діапазону сканування, часу витримки тощо) з метою одержання іонів, які забезпечують визначення номінальної моноізотопної молекулярної маси (МУМ) сполуки. Збір і обробку даних виконували за допомогою відповідного програмного забезпечення.

Таблиця 4а

Аналітичні способи БЕС-М5 (швидкість потоку виражена у мл/хв.; температура колонки (Т) у "С; протитиск (ВРЕ) у барах).

Швидкість Час аналізу

Код способу Колонка Рухома фаза Градієнт потоку птн

ПОШИ ВвВРА

Т колонки

Колонка Оаїсеї 40 Фо В, (5,0 мкм, 250х4,6 т, "79 | до 50 95 за 1 хв.,

ІРТМН» 40 110

ММ римування 2 хв. сіпонка Ввісв А: СО» 1096-5096Взаб| 2,5 9,5 2 ігаїраке АО-3 В: ЕЮН-О 2 9; хв шу шу (3,0 мкм, 150х4,6 се ою " утримування " ММ ' іІРІМН2 3,5 хв. 40 110

Колонка Оаїсеї А: СО 35 95 В, 5 7

З Спігаїраке АБ-Н В: (ЕЮН- утримування 4 хв. 7 В (5,0 мкм, 250х4 6 ІРОН) 02 оо до 50 95 за 1 хв., 40 110

ММ ІРГІМН2 утримування 2 хв.

Колонка Оаїсеї 25 Фо В, (5,0 мкм, 250х4,6 ще "79 | до 50 95 за 1 хв.,

ІРТМН» 40 110

ММ утримування 2 хв.

Колонка Оаїсеї ЗО Фо В, (5,0 мкм, 250х4,6 ще "79 | до 50 95 за 1 хв.,

ІРТМН» 40 110

ММ римування 2 хв.

Колонка Оаїсеї , 40 Фо В,

ЕЕ У НЕ

(5,0 мкм, 250 х 4,6 ще "79 | до 50 95 за 1 хв.,

ІРТМН» 40 110

ММ утримування 2 хв. солонка вас, А: СО» 1095-5096Взав| 2,5 9,5 ігазраке АО-3 ще о 7 (3,0 мкм, 150х4,6 В: ІРГОНяЮ,2 ую | хв., утримування тт тт " ММ ' ІРТМН» 3,5 хв. 40 110

Колонка Оаїсеї А: СО 25 95 В, 5 7

Спігазраке АБ-Н В: (МеОнН- утримування 4 хв., (5,0 мкм, 250 х 4,6 ІРТОН)-О 2 96 до 50 95 за 1 хв., до о

ММ ІРТИМН» утримування 2 хв.

Колонка Оаїсеї А: СО ЗО 95 В, 5 7

Спігазраке АБ-Н В: (МеОнН- утримування 4 хв., (5,0 мкм, 250х4,6 ІРТОН)-О 2 96 до 50 95 за 1 хв., шт 10

ММ ІРТИМН» утримування 2 хв.

А: СО»

В: З різних 10 95 - 40 95 В за

Колонка Оаїсе! (АЮ, розчинники, що | 19,4 хв., 40-50 95 З 25

ОО, 03, АБ, )-Н (5,0Ї використовуються за 2,00 хв., тт тт мкм, 250х4,6 мм) для В: (МеОН, утримування 3,6 30 110

ЕН, ІРОН) ХВ. -0,2 95 ІРИМНг

Таблиця 4а

Аналітичні способи БЕС-М5 (швидкість потоку виражена у мл/хв.; температура колонки (Т) у "С; протитиск (ВРЕ) у барах).

Швидкість Час аналізу

Код способу Колонка Рухома фаза Градієнт потоку птн

ПОШИ ВвВРА

Т колонки

А: СО»

В: З різних 10 95 - 40 95 В за

Колонка Оаїсєї АБ-| розчинники, що | 19,4 хв., 40-50 95 З 25 13 Н (5,0 мкм, 500х4,6| використовуються за 2,00 хв., пяянн пяятняя

ММ) для В: (МеОН, утримування 3,6 50 110

ЕН, ІРОН) ХВ. -0,2 Фо ІРІМН:

А: Со» 20 96 В,

В: З різних имування 17,5

Колонка Оаїсєї АБ-| розчинники, що утр 20 о, ' З 25 12 Н (5,0 мкм, 500х4,6| використовуються я оо о за пяянн пяятняя , ,00 хв.,

ММ) для В: (МеОН, 41 50 110

ЕЮН,іРІОН) утримування т, 0,2 965 ІРМН» хв.

А: СО»

В: З різних

Колонка Оаїсе! 0.)-| розчинники, що 12958, З 10 13 Н (5,0 мкм, 250х4,6| використовуються | утримування 10 тт тт

ММ) для В: хв. 30 110

Меон-о 2 95

ІРиМН»

Колонка Оаїсеї 20 Фо В, (5,0 мкм, 250х4,6 ше "79 | до 50 95 за 1 хв.,

ІРТМН» 40 110

ММ утримування 2 хв.

Колонка Оаїсеї ЗО Фо В, (5,0 мкм, 250х4,6 т, 79 | до 50 95 за 1 хв.,

ІРТМН» 40 110

ММ) утримування 2 хв. слонка ве А: СО» 1095-5096Взав| 2,5 9,5 16 ігаїраке О0'3 В:ЕЮНО,2 9 | хв., утримування тяттння тяттння (3,0 мкм, 150х4,6 . " ' ' мм) ' ІРТМН» 3,5 хв. 40 110

Колонка Оаїсеї А: СО 10 95 - 50 95 В за 6 2,5 9,5 17 Спігазраке? АОЗ (3,00. В: ЕЮНО 2 96 | хв., утримування тт тт мкм, 150х4,6 мм ІРИМН»г 3,5 хв. 40 130

Колонка Оаїсеї А: СО2 10 95 - 50 95 В за 6 2,5 9,5 18 Спігаракф ІСЗ (3,0 В:ОЕЮН-О,2 95 | хв., утримування тт тт мкм, 150х4,6 мм) ІРИМН2 3,5 хв. 40 130

Таблиця 4р

Аналітичні дані 5ЕС - Ні означає час утримування (у хвилинах), МАНІ" означає масу протонованої сполуки, спосіб стосується способу, що застосовується для аналізу енантіомерно чистих сполук за допомогою (5ЕС)М5 за | (3 171771173656 | 2-8 юю | Енантомерї//: 96 | 2лі 1779366 | 8 | Енантомер2//:

Таблиця 4р

Аналітичні дані 5ЕС - Ні означає час утримування (у хвилинах), МАНІ" означає масу протонованої сполуки, спосіб стосується способу, що застосовується для аналізу енантіомерно чистих сполук за допомогою (5ЕС)М5 да | 705 17117445 | 2 -/|( (6 | Енантомерї //: 24ю | 52 17771445 | -/(6 | Енантомер2//: відповіді 62 | 342 1747 | 77771211 86 | ЮК 309..ЮБМ 47 | (27/11/1171 Енантомер2///: 95 | щКМм«68 щЩщ | 405 | (7 | Енантомер2/:Г 789 | юЮюЮКМ,ЛЩЗЩЗ 177376 | -: З | Енантомер2//: 116 | 77722177 38277179 Енантомер2///: 217. | ..юЮюж129 .17юрюрю 382 | 2. .ЮюЮюЮюЙИМм9 | Енантомерї//: 274 | 45 2 щЩ | 43 | 2 | «

Ядерний магнітний резонанс (ЯМР)

Спектр "Н ЯМР записували або на спектрометрі ВгиКкег ОРХ-400 зі стандартними послідовностями імпульсів, який функціонував за 400 МГц, або на ВгиКег ОРХ-360, який функціонував за 360 МГц, з використанням ОМ5О-йє (дейтерований ОМ50О, диметилсульфоксид-йб) як розчинників. Значення хімічного зсуву (б) наведені в частинах на мільйон (ррт) відносно тетраметилсилану (ТМ5), який використовували як внутрішній стандарт.

Спол. Мо 25а: "Н ЯМР (400 МГц, ОМ5О-йє при 100 ГРАДУСАХ ЦЕЛЬСІЯ) б ррт 1,74 - 1,93 (т, 4 Н) 1,97 - 2,11 (т, З Н) 2,91 - 2,45 (т, 1 Н) 4,06 - 4,23 (т, 1 Н) 4,61 (рг 5, 1 Н) 4,682 (рг 5, 1 Н) 7,02 й, 9-54,2 Гц, 1 Н) 7,50 (5, 1 Н) 7,78 (аа, 9У-8,4, 1,8 Гц, 1 Н) 8,17 (а, У-8,4 Гц, 1 Н) 8,44 (Бг 5, 1

Н) 8,47 (9, 91,1 Гу, 1 Н) 9,45 (5, 1 Н);

Спол. Мо 93: "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50-4дв при 100 ГРАДУСАХ ЦЕЛЬСІЯ) б ррт 0,84 (й, У-6,6

Гц, З Н) 0,88 - 0,98 (т, 4 Н) 1,45 (да, 9У-12,4, 4,4 Гу, 1 Н) 1,91 (рг аа, 9-13,4, 2,6 Гу, 1 Н) 2,06 -

2,14 (т, 1 Н) 2,42 (5, З Н) 2,45 - 2,49 (т, 1 Н) 3,13 (ргї, 9-11,6 Гу, 1 Н) 3,37 (ад, 9-12,9, 11,1 Гц, 1

Н) 3,60 (14, 9У-10,9, 4,0 Гц, 1 Н) 4,17 (Бг 5, 2 Н) 6,79 - 7,23 (т, З Н) 7,57 (5, 1 Н) 8,72 (5,1 Н);

Спол. Мо 108: "Н ЯМР (400 МГц, ОМ5О-ав) б ррт 0,77 (а, 9-6,4 Гц, З Н) 1,34 - 1,56 (т, 1 Н) 1,68 - 2,00 (т, 1 Н) 2,43 (рі 5, 1 Н) 2,76 - 3,28 (т, 2 Н) 3,49 - 3,74 (т, 2 Н) 3,67 (5, З Н) 4,46 - 4,76 (т, 1 Н) 6,81 - 7,33 (т, З Н) 7,65 (5, 1 Н) 8,80 (5, 1 Н);

Спол. Мо 110: "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50О-4дв при 100 ГРАДУСАХ ЦЕЛЬСІЯ) б ррт 0,83 (а, 9-6,6

Гц, З Н) 1,39 - 1,50 (т, 1 Н) 1,85 - 1,95 (т, 1 Н) 2,43 (5, З Н) 2,44 - 2,48 (т, 1 Н) 3,13 (р, 9У-12,3

Гц, 1 Н) 3,37 (ай, 9У-13,0, 11,2 Гу, 1 Н) 3,58 (4, 9У-10,9, 4,0 Гц, 1 Н) 3,88 (5, З Н) 4,13 (бБг 5,2 Н) 6,58 (5, 1 Н) 6,82 (5, 1 Н) 7,01 (І, 9-54,2 Гц, 1 Н) 7,56 (5, 1 Н) 8,71 (5,1 Н);

Спол. Ме 132: "Н ЯМР (360 МГц, ОМ50О-ав) б ррт 0,78 (а, 9-6,6 Гц, З Н) 1,38 - 1,61 (т, 1 Н) 1,67 - 2,01 (т, 1 Н) 2,60 (5, З Н) 2,86 - 3,30 (т, 2 Н) 3,49 (рг а, 9-14,6 Гу, 1 Н) 3,59 - 3,72 (т, 2 Н) 4,48 - 4,79 (т, 1 Н) 6,87 - 7,35 (т, 1 Н) 7,54 - 7,89 (т, З Н) 8,79 (5, 1 Н);

Спол. Мо 228: "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50О-а6 при 100 ГРАДУСАХ ЦЕЛЬСІЯ) б ррт 0,85 (й, У-6,6

Гу, 4 Н) 1,43 - 1,56 (т, 1 Н) 1,86 - 1,99 (т, 1 Н) 3,19 (4, У-12,9, 2,8 Гц, 1 Н) 3,42 (ад, 9-13,0, 11,2

Гу, 1 Н) 3,64 (9, У-10,9, 4,0 Гц, 1 Н) 4,15 - 4,26 (т, 1 Н) 4,28 - 4,38 (т, 1 Н) 7,01 (ї, 9-54,2 Гц, 1 Н) 7,58 (ріг 5, 1 Н) 7,61 (аа, 9-84, 1,5 Гц, 1 Н) 8,11 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 8,27 (а, 9-1,3 Гц, 1 Н) 8,70 (5, 1

Н) 9,40 (5, 1 Н);

Спол. Мо 281: "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50О-йдвє при 120 ГРАДУСАХ ЦЕЛЬСІЯ) б ррт 0,82 (а, 96,40 Гу, З Н) 1,46 (да, 9-12,47, 4,40 Гц, 1 Н) 1,84 - 1,93 (т, 1 Н) 2,41 - 2,53 (т, 1 Н) 2,84 (5, З Н) 203,07 - 3,18 (т, 1 Н) 3,35 (ай, 912,98, 11,22 Гц, 1 Н) 3,58 (Ід, У-10,95, 3,85 Гу, 1 Н) 3,88 - 4,33 (т, 2 Н) 6,85 (5, 1 Н) 6,98 (ї, 9У-54,36 Гц, 1 Н) 7,12 (5, 1 Н) 7,53 (5, 1 Н) 7,55 (І, 9-73,07 Гу, 1 Н) 7,74 (5, 1 Н) 8,67 (5, 1 Н);

Спол. Мо 295: "Н ЯМР (400 МГц, ОМ5О-дв при 100 ГРАДУСАХ ЦЕЛЬСІЯ) б ррт 1,67 - 1,87 (т, 4 Н) 1,89 - 2,10 (т, з Н) 2,26 - 2,38 (т, 1 Н) 3,82 (5, З Н) 4,13 (рг а, 9-12,10 Гц, 1 Н) 4,56 (Брг 5, 1 Н) 4,86 (ріг 5, 1 Н) 6,55 (й, 9-2,64 Гц, 1 Н) 7,02 (Ії, 9-55,00 Гц, 1 Н) 7,35 (а, 9-3,08 Гц, 1 Н) 7,41 - 7,49 (т, З Н) 7,90 (в, 1 Н) 8,59 (в, 1 Н);

Спол. Мо 321: "Н ЯМР (400 МГц, ОМ5О-дє при 100 ГРАДУСАХ ЦЕЛЬСІЯ) б ррт 0,81 (а, 96,60 Гу, З Н) 1,47 (да, 9-12,43, 4,29 Гц, 1 Н) 1,85 - 1,93 (т, 1 Н) 2,39 - 2,46 (т, 1 Н) 2,94 (5, З Н) 3,09 - 3,18 (т, 1 Н) 3,33 - 3,40 (т, 1 Н) 3,57 - 3,64 (т, 1 Н) 3,83-4,52 (т, 2 Н) 6,82 (т, 1 Н) 7,00 (т,

Зо 1 Н) 7,43 (5, 1 Н) 7,46 (5, 1 Н) 7,55 (в, 1 Н) 8,69 (в, 1 Н);

Спол. Мо 335: "Н ЯМР (400 МГц, ОМ5О-йє при 100 ГРАДУСАХ ЦЕЛЬСІЯ) б ррт 1,74 - 2,00 (т, 6 Н) 2,02 - 2,08 (т, 1 Н) 2,36 - 2,41 (т, 1 Н) 2,42 (5, З Н) 3,84 (5, З Н) 4,08 - 4,14 (т, 1 Н) 4,81 - 4,85 (т, 1 Н) 5,13 -5,17 (т, 1 Н) 7,05 (І, 9У-54,40 Гц, 1 Н) 7,56 (5, 1 Н) 7,89 (5, 1 Н) 8,69 (5, 1 Н);

Спол. Мо 356: "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50-дє при 100 ГРАДУСАХ ЦЕЛЬСІЯ) б ррт 1,68 - 1,89 (т, 4 Н) 1,92 - 2,04 (т, З Н) 2,30 - 2,45 (т, 1 Н) 4,01 - 4,07 (т, 1 Н) 4,39 - 4,84 (т, 2 Н) 7,01 (ї, у-52,80 Гц, 1 Н) 7,49 (в, 1 Н) 7,58 (ад, 9У-8,25, 1,87 Гц, 1 Н) 7,71 (а, У-8,14 Гц, 1 Н) 7,83 (а, 9-1,54

Гу, 1 Н) 8,58 (рег 5, 1 Н).

ФАРМАКОЛОГІЧНІ ПРИКЛАДИ

Сполуки, представлені у даному винаході, являють собою інгібітори РОЕ2, зокрема РОЕ2А.

Результати тестування сполук у декількох фармакологічних аналізах показані нижче.

АНАЛІЗ РОЕ2А ІМ МІТКО

Рекомбінантну РОЕ2А (ПпПРОЕ2А) людини експресували у клітинах 519 із застосуванням рекомбінантної конструкції ГРОЕТОА на основі бакуловірусу. Клітини збирали через 48 год. після інфікування та білок ПРОЕ2А очищували за допомогою метал-хелатної хроматографії на Мі- сефарозі Є6ЕРЕ. Сполуки, які тестуються, розчиняли та розбавляли у 10095 ОМ5О до 100-кратної концентрації порівняно з кінцевою концентрацією в аналізі. Розведення сполуки (0,4 мкл) додавали у 384-лункові планшети до 20 мкл буфера для інкубації (50 мМ Ттгі5, рН 7,8, 8,3 мМ

Масіг, 1,7 мМ ЕСТА). У буфер для інкубації додавали 10 мкл ферменту ПРОЕЗ2А та реакцію починали шляхом додавання 10 мкл субстрату до кінцевої концентрації, що становить 10 мкМ

СОМР та 0,01 мкКі ЗН-СОМР. Реакційну суміш інкубували протягом 45 хвилин за кімнатної температури. Після інкубації реакцію зупиняли за допомогою 20 мкл стоп-реагенту, який складається із гранул із РОЕ для 5РА (сцинтиляційного аналізу зближення) за концентрації 17,8 мг/мл, доповнених 200 мМ 2псі». Після осаджування гранул протягом 30 хвилин вимірювали радіоактивність за допомогою сцинтиляційного лічильника Регїкіп ЕІтег Торсошпі, та результати виражали в імп./хв. Для одержання значень для холостої проби фермент не включали у реакційну суміш, а заміняли буфером для інкубації. Контрольні значення одержували шляхом додавання ЮМ5О у кінцевій концентрації 195 замість сполуки. Криву найкращого наближення будували по точках за допомогою способу найменшої суми квадратів на графіку залежності 90 контрольного значення із віднятим значенням для холостої проби від концентрації сполуки, та 60 на підставі цієї кривої одержували значення концентрації напівмаксимального інгібування (ІСво).

АНАЛІЗ РОЕЗА ІМ МІТКО

Рекомбінантну РОЕЗА (ПРОЕЗА) людини придбали у вигляді частково очищеного лізату клітин комах від ЗсСойізПп Віотеаісаї, її клонували із головного мозку людини й експресували у клітинах 519. Сполуки, які тестуються, розчиняли та розбавляли у 10095 ЮМ5О до 100-кратної концентрації порівняно з кінцевою концентрацією в аналізі. Розведення сполуки (0,4 мкл) додавали у 384-лункові планшети до 20 мкл буфера для інкубації (50 мМ Тгі5, рН 7,8, 8,3 мМ

Масіг, 1,7 мМ ЕСТА). У буфер для інкубації додавали 10 мкл ферменту ЯРОЕЗА та реакцію починали шляхом додавання 10 мкл субстрату до кінцевої концентрації, що становить 0,4 мкМ

САМР та 2,4 мкКі/мл ІЗНІ|-САМР. Реакційну суміш інкубували протягом 60 хв. за кімнатної температури. Після інкубації реакцію зупиняли за допомогою 20 мкл стоп-реагенту, який складається із гранул із РОЕ для 5РА (сцинтиляційного аналізу зближення) за концентрації 17,8 мг/мл, доповнених 200 мМ 2пСіІ». Після осаджування гранул протягом 30 хв. вимірювали радіоактивність за допомогою сцинтиляційного лічильника РегкКкіп ЕІтег Торсошпі, та результати виражали в імп./хв. Для одержання значень для холостої проби фермент не включали у реакційну суміш, а заміняли буфером для інкубації. Контрольні значення одержували шляхом додавання ЮМ5О у кінцевій концентрації 195 замість сполуки. Криву найкращого наближення будували по точках за допомогою способу найменшої суми квадратів на графіку залежності 90 контрольного значення із віднятим значенням для холостої проби від концентрації сполуки, та на підставі цієї кривої одержували значення концентрації напівмаксимального інгібування (ІСво).

АНАЛІЗ РОЕТОА ІМ МІТО

Рекомбінантну РОЕТОА (ТРОЕТОА?2) щура експресували у клітинах 519 із застосуванням рекомбінантної конструкції ГРОЕТОА на основі бакуловірусу. Клітини збирали через 48 год. після інфікування та білок ГРОЕТОА очищували за допомогою метал-хелатної хроматографії на Мі- сефарозі 6ЕР. Сполуки, які тестуються, розчиняли та розбавляли у 10095 ЮОМ5О до 100-кратної концентрації порівняно з кінцевою концентрацією в аналізі. Рекомбінантну РОЕТОА (ПРОЕ2А) людини експресували у клітинах 519 із застосуванням рекомбінантної конструкції ПРОЕТОА на основі бакуловірусу, яку одержували й ампліфікували в лабораторії. Клітини збирали через 72 год. після інфікування та білок ПЙРОЕТОА оочищували за допомогою метал-хелатної хроматографії на Мі-сефарозі. Розведення сполуки (0,4 мкл) додавали у 384-лункові планшети до 20 мкл буфера для інкубації (50 мМ Ттгі5, рН 7,8, 8,3 мМ Масі», 1,7 мМ ЕСТА). У буфер для інкубації додавали 10 мкл ферменту ГРОЕТОА або ПРОЕТОА та реакцію починали шляхом додавання 10 мкл субстрату до кінцевої концентрації, що становить 60 нМ САМР та 0,008 мкКі

ЗН-САМР. Реакційну суміш інкубували протягом 60 хвилин за кімнатної температури. Після інкубації реакцію зупиняли за допомогою 20 мкл стоп-реагенту, який складається із гранул із

РОЕ для 5РА (сцинтиляційного аналізу зближення) за концентрації 17,8 мг/мл. Після осаджування гранул протягом 30 хвилин вимірювали радіоактивність за допомогою сцинтиляційного лічильника Регкіп ЕІтег Торсоипі, та результати виражали в імп./хв. Для одержання значень для холостої проби фермент не включали у реакційну суміш, а заміняли буфером для інкубації. Контрольні значення одержували шляхом додавання ЮОМ5О у кінцевій концентрації 195 замість сполуки. Криву найкращого наближення будували по точках за допомогою способу найменшої суми квадратів на графіку залежності 95 контрольного значення із віднятим значенням для холостої проби від концентрації сполуки, та на підставі цієї кривої одержували значення концентрації напівмаксимального інгібування (ІСво).

Таблиця 5

Дані іп міго для сполук за даним винаходом. За визначенням дані щодо інгібування РОЕТОА стосуються людського клону (також вказаного як (П)), якщо не вказані як (г), що стосується щурячого клону ріСво Етах

Ме споп ріСво Етах ріСво Етах ПРОЕТОАД2 ПРОЕТОАД2

Й | ПРОЕ2А ПРОЕ2А ПРОЕЗВ ПРОЕЗВ або або "РОЕТОд2 "РОЕТОд2 ла 1791 | ло | 568 | 65 | 789 | 98 га | 923 | 01 | 61 | 98 | ющ 814 | лм

Таблиця 5

Дані іп міго для сполук за даним винаходом. За визначенням дані щодо інгібування РОЕТОА стосуються людського клону (також вказаного як (П)), якщо не вказані як (г), що стосується щурячого клону ріСво Етах

Ме спол. ріСво Етах ріСво Етах ПРОЕТОА2 ПРОЕТОА2

ИРОЕ2А ИРОЕ2А ПРОЕЗВ ПРОЕЗВ або або "РОЕТОА2 "РОЕТОА2 4 | 884 | 7100 | 524 | 70 | 762 | 99 6 ЇЇ 879 |1юЮюьифШ99 | 617 | 97 | 775 | 00 8 ЇЇ 896 | юю л00 | 656 | 97 | 795 | 100 78 ЇЇ 786 | 7101 | 5837 | 74 | 713 | ло 71111764 1777100 | 532 | 69 | 643 95 ( 714 | 822 |ДЮюЮюЮюЄ99 | 5з | 70 | 705 | 99 716 | 821 |. 7100 | 578. | 88 | 72 | 98 ( 717 | 831 1 .Йрюрю99 | ю5ЗУ | 74 | 709 | 9 719 | 798 |ЮДЮрЮринин101 | 2 ющ5ББ5 | 79 | 689 | 96 | 792 |рЮюрьркякої | 537 | 74 | 688. ЩщЩ 98 ( 21 | 834 |1.ррю99 | 582 | 89 | 688 | 9 22 | 863 | 7100 | 582 | 87 | 78 1 9 23 | 933 | 101 | 598 2 | 90 | 815 100 іа | 55 | 80 | 2 .-фю«5 2 | 3 | «Б | 28 2456 | 819 | ЙЮ 98 | щЩ «5 | 28 | 5 | 6 га | 915 | 100 | 504 | 57 | би 96 о 2ва | «5 2 Щщ|( щі | «5 | 0 | «Б | 7 266 | 817 | ..юЮЙ98 | щ «5 | 4 | 663 | 95 ( 29 | 882 | рЮюЮюЮюДйлл1ої | «5 | 718 | біб | 545 | (77 | «5 | 8 | «Б | 32 31 | 86 | 7100 | «5 | 8 | 595 | 84 33 | 783 | .ЙюЮюЮЙ99 | щЩ «5 | 25 | 5 | 67 38 | 82117100 | 775 | 43 | 564 |..Д.ХАСТО 39 | 808 | ЮЙЮюИй98 | щ-«5 2 | 16 | 551 175 6,91 (п) 97 (п) 41 | 786 17ЙюЙюИюД99 | ющЩ «5 | 717 | 538 | 7/2 43 | 83 | .юЮЙй99 | щ «5 | 29 | 588 | 88 46 | 782 177 100 | «5 | 5 | 565 | 86 47 | 86 |ЙЮБ ю. 99 | ющ 547 | 80 | 65 92 48 | 976 | 7100 | 706 | 8995 | 736 | 100 49 | 868 | 99 | 524 | 42 | 62 | 95

Таблиця 5

Дані іп міго для сполук за даним винаходом. За визначенням дані щодо інгібування РОЕТОА стосуються людського клону (також вказаного як (П)), якщо не вказані як (г), що стосується щурячого клону ріСво Етах

Ме споп ріСво Етах ріСво Етах ПРОЕТОА2 ПРОЕТОА2

І ИРОЕ2А ИРОЕ2А ПРОЕЗВ ПРОЕЗВ або або "РОЕТОА2 "РОЕТОА2 51 | 826 | рЮюЮюЮюло1 | «5 | 44 | 59 | 86 53 | 825 | 100 | 5 | 62 | бл 189 | 838 | 7100 | 502 | 51 | 68 89 ( 58 | 761 | ЮЙЮюЮюЮК99 | щ«5 2 | 718 | 535 | 69 5 | 843 | 98 | 507 | 56 | бе3з | 95 ( 60 | 907 | 100 | 596 | 92 | 682 | 9 63 | 814 | 100 | 5 | 60 | 606 89 ( 64 | 88 | .ю99 | 5 | 62 | 645 | 96 65 | Ююхь 3859 | 100 | 5 | 7 | 66 | 95 ( 66 | 776 | щ Кк99 | «5 | 48 | 564 | 79 67 | 859 | 99 | «5 | 49 | 654 | 94 68 | 82 | 99 | 5 ющ 5 | 50 | 586 | 85 69 | 939 | 102 | 642 | 95 | 734 | 100 71 | 83 177798 | щ «6 | 32 | б4 194 73 | 81 1777101 | 558 | 83 | 666 98 ( 76 | 964 |ЙЮК(99 2 | 2 Юю Бк юо5Я | 9 | щ 75 | 1 77 | 934 | 101 | 617 | 96 | 708 1 98 ( 78 | 9 5 юЮющ| 102 | 58 | 87 | 698 | 98 ( 79 | 876 | ЮюЮР99 | 604 | 93 | 672 | 9 80 | 91 1 юфющл00 | 5зЗ8 | 7 | 709 | 98 ( 82 | 747 |. 101 | «5 | 9 | «Б | 18 83 | 903 | юф-юл00 | 51 | 58 | 701 1 98 ( 84 | 85 5 |Ю 101 | Біз | з0 | бі 89 87 | 667 | ЮЙЮК«(928 | ЮюЮюЮюйл«5 | 1 | 534 1 69 88 | 968 | 101 | 6бА 97 | 84 1 99 7,68 (п) 101 (й) вва лм) ве | 60 то | вв 980 | 945 | 101 | 667 | 98 | 771 | 102 982 | 94 | т100 | 588 | 88 | 761 | 98 ( 93 | ющ94 1рюЮюрю 101 | 56 | 84 | 744 | 9 984 | 93 | 101 | 698 | 899 | 793 1 9 95 | 929 | Юющ 100 | 5 | 55 | 732 | 98 96 | 926 | 100 | 64 | 73 | 748. | 95 ( 7,217 (п) 101 (й)

Таблиця 5

Дані іп міго для сполук за даним винаходом. За визначенням дані щодо інгібування РОЕТОА стосуються людського клону (також вказаного як (П)), якщо не вказані як (г), що стосується щурячого клону ріСво Етах

Ме споп ріСво Етах ріСво Етах ПРОЕТОА2 ПРОЕТОА2 й І ИРОЕ2А ИРОЕ2А ПРОЕЗВ ПРОЕЗВ або або "РОЕТОА2 "РОЕТОА2 98 | 922 | 100 | 622 | 94 | 74 | 98 ( 89 | 922 | 100 | 568 | 87 | 802 | 100 лою | 98 1777101 | 657. | 899 | щ 779 |ЮюЮро|еоо ло | 98 1777101 | 5832 | 70 | 724 198 ( лоз | 915 | .ЙюЮюи99 | 706 | 100 | 774 | 100 7104 | 909 | ю л00 | 629 | 92 | 713 | 98 ( 705 | 906 2 | юЮюЮфДюлої | 587 | 90 | щ 753 1 01 лоб | 905 | 100 | ба | 98 | 767 ЇЇ 7107 | 904 | Юр юл00 | 538 2 | 6 | 709 | 99 708 | 904 |. 100 | 557 | 80 | 728 | 99 7109 | 903 | 101 | 634 | 98 | 818 99 ( ло | 902 | р юЮюрфДюлої | 5582 | 78 | 714 1 98 ( 11 1 8901 |ДЮюЮюркюстлоо | 598 | 92 | 742 | 99 112 | 9 17. 7101 | 5 | 84 | 732 | 99 113 Її 19 17.юрюрю99 | ю5Б | 88 | 742 | 99 114 | 898 2 |ЮДЮюрюИтлоо|7.рДрДр7лов 98 | 754 | 101 115 | 898.4юЮю.ЮДЮюЮИл1о0 77587 | 71111199 7116 | 894 | 7100 | 607 | 97 | 801 1 99 7116 | 895 2 |ДЙрьоилої | 566 | 82 | 71 1 98 ( 118 | 878 1777101 | 602 | 92 | 713 199 119 | 876 177 7100 | 72 | 101 | 71777199 120 | 876 | 7100 | 615 | 95 | 67 | 96 121 | 875 | щ 99 | 629 | 95 | 723 | 96 122 | 83 | 100 | 574 | 86 | 713 | 100 123 | 81 17771799 | 5 | 87 | 704 1 99 124 | 869 | ЮюЮ99 | 638 | 98 | 744 | 98 ( 125 | 868 | 7100 | баз | 96 | без | 96 127 | 865 | ДЮ 99 | 636 | 94 | 759 | 99 128 | 864 | 7100 | 60 | 90 | 681 1 98 ( 129 | 864 |. 7101 | 5/ | 85 | 704 1 99 ( 130 | 861 | 7100 | 576 | 87 | 687 | 96 131 | 861 | ЮюЮюЮюЮЙй98 | 2 ющБ | 6 | 739 (99 132 | 86 | 7101 | «5 | 46 | 67 | 98 ( 133 | 853 | 7100 | 579. | 85 | 687 | 98 ( 134 | 85 | 701 | 565 | 84 | 68 | 100 139 | 754 | .Й.ЮЙ99 2 | щ «5 | 20 | 562 | 78 7144 | 746 | 100 | 562 | 86 | 633 | 96 7145 | 744 1 .Й.ЙюЙ99 | 5в9 | 86 | 68 9 147 | 742 | лоб | 565 | 81 | 606 | 9

Таблиця 5

Дані іп міго для сполук за даним винаходом. За визначенням дані щодо інгібування РОЕТОА стосуються людського клону (також вказаного як (П)), якщо не вказані як (г), що стосується щурячого клону ріСво Етах

Ме споп ріСво Етах ріСво Етах ПРОЕТОА2 ПРОЕТОА2 й І ИРОЕ2А ИРОЕ2А ПРОЕЗВ ПРОЕЗВ або або "РОЕТОА2 "РОЕТОА2 148 | 741 17 7101 | 525 | 67 | 604 189 7149 | 741 1.ЙюЮюЙй99 | 528 | 66 | 574 | 8 ( 152 | 738 |ЙЮюЮЙ99 | 2 ющ «5 | 30 | 569 | 80 153 | 736 | 7100 | 55 | 76 | 597 | 89 155 | 727 | ЙюЮЙмо8 | «5 2 | 37 | 553 | 72 157 | 722 |ЙЮ 99 | щ«5 2 | 33 | 559 | 75 160 | 714 1.ЙЮюЮюЙй99 | ющЩ «5 | 34 | 599 | 88 61 | 713 17771798. | 5 2 | 71 | 5 174 163 | 705 | ЙЮБ 98 | «5 | 72 | 549. | .-/КХК ТАС 166 | 703 | ЮюЮРеВ | 77/75 | 32 | 565 2 щЩ | 8 7168 | 84 |. .ю98 | 52 | 66 | 727 | 99 169 | 843 | 98 | 55 | 82 | 675 | 98 ( 171 | 793 |ДЙЮюКкю 99 | 594 | 93 | 645 | 9 172 | 834 | ло1 | 657. | 98 | 749 100 173 | 786 |рЮюЮюлої | «5 | з | 652 | 96 174 | 828 |ЙюЮюЮЙМ99 | 588 | 85 | 624 | 88 175 | 831 | 7100 | 522 | 71 | 685 щЩ | 98 ( 177 | 802 |1ДЙЮ0Ю99.4.Ю.| 2 Юющ(«5 | 21 | 634 | 9 ( 179 | 767 |рюЮюЮюл100 | «5 | 32 | бе/ | 9 180 | 83 | 100 | 529 | 66 | 676 2 Щ | 9 81 | 834 17798 | щ «5 | 52 | 651 | 94 7183 | 758 |ДЙЮК 99 | щ«5 | 36 | 564 | 79 7186 | 797 | рюЮюЮюл100 | 522 | 69 | 64 95 187 | 775 | щКР99 | 546 | 74 | 637 | 95 ( 7188 | 807 | (Р | 581 | 87 | 668 | 98 ( 189 | 829 | 100 | 556 | 80 | 673 | 96 190 | .юЮЯ99 | 100 | «5 | 39 | 68 1 96 192 | 803 | ЮюЮю 99 | 614 | 95 | 714 | 99 193 | 823 | 100 | 546 | 76 | 686 | 98 ( 194 | 773 | .ю99 | 5Зз4 | 57 | 658 | 9 195 | 835 | 98 | 525 | 70 | 643 | 9 ( 196 | 763 | щющЦ-(РХЯбЄ | 531 | 68 | бе5 | 92 197 | 799 | 98 | «5 | 42 | 668 | 96

Таблиця 5

Дані іп міго для сполук за даним винаходом. За визначенням дані щодо інгібування РОЕТОА стосуються людського клону (також вказаного як (П)), якщо не вказані як (г), що стосується щурячого клону ріСво Етах

Ме споп ріСво Етах ріСво Етах ПРОЕТОА2 ПРОЕТОА2

І ИРОЕ2А ИРОЕ2А НПРОЕЗВ НПРОЕЗВ або або "РОЕТОА2 "РОЕТОА2 198 | 825 | Ющ 98 | «5 | 35 | 638 | 9 5,23 (п) в2 (п) 199 7,27 92 5,08 62 5,32 (і) 21 (3 «5(І 4 (і 205 | 894 | -.юЙ0899 | 565 | 83 | 701 1 98 ( 212 | 62417761 | щ «5 | 7 | «Б 1 88 214 | 52 | Й.-ЗЖ 9 | «5 | 9 | «Б | 3 216 | 636 | .Й.ЮюЮЙ98 | щ «5 | 26 | 535 | 67 217 | 625 1777799. | 2 юЮюф-(|Рм «5 | 37 | 532 | 72 218 | 669 | рюрфюл100 | «5 | 51 | 565 | 85 Щ 222 | 655 | 98 | «5 | 13 | 517 | 59 223 | вл 177798. | 2 ющф-|«5 | 719 | 546 | 7л 226 | 906 | 100 | 689 | 100 | 709 | 100 227 | 866 | 101 | 642 | 95 | 734 | 98 ( 232 | 667 |ЙЮК( 99. | 2 ющЦМ «5 | 31 | «Б | 48 234 | 629 |17ЙЮюЮюЮюЮю96 7717175 | 22 | 506. Й|1ЙЄЮК Ф59ЩГ(Г 235 | 691 |ДЙЮБкиИЗВ | «5 | 32 | 596 | 67 239 | бла | 96 | щ «5 | 16 | «Б | З 240 | 58 |. .90 | «5 | 9 | 504 | 5 243 | 688 | 99 | «5 | тз | 54 | 7

Таблиця 5

Дані іп міго для сполук за даним винаходом. За визначенням дані щодо інгібування РОЕТОА стосуються людського клону (також вказаного як (П)), якщо не вказані як (г), що стосується щурячого клону ріСво Етах

Ме споп ріСво Етах ріСво Етах ПРОЕТОА2 ПРОЕТОА2 й І ИРОЕ2А ИРОЕ2А ПРОЕЗВ ПРОЕЗВ або або "РОЕТОА2 "РОЕТОА2 245 | 6891 |ДЙЮШ:99 ЮДЩ | Без | 62 | 566 | 79 246 | 69 | БЮКрИЙВ | «5 | 25 | «Б | 54 247 | 681 |1ЙЮЙЮД98 2 | 2 юЮющЦ5ве | 85 | 554 | 7/7 250 | 688 | ЮК 99 | 2 ющф-(М «5 | 28 | 53 | 64 251 | 655 | 98 | «5 | 717 | 506 | 5 252 | 615 17/96 | щ «5 | 717 | 517 | 66 254 | 697. |ДЙЮЄ99 2 | щ «5 | 25 | 542 | 77 258 | 682 | .Й.ЮюЮ99 | 58 | 89 | 6 щ 59 | 9 259 | 637 | .Й.юЮЙ99 2 | 55 | 82 | 577 | 92 263 | 689 2 |ЙЮБх"0/0/п99 2 | 5ЗІ | 65 | 529 | 64 265 | 862 | 102 | 52 | 55 | 743 | 98 ( 266 | 638 | 100 | 527 | 74 | 558.2щЮД | 89 267 | 94 |рюя102 | ща | 100 | 795 2 щЩ | 99 270 | 863 | 100 | «5 | 29 | 657 | 96 271 | 853 | .-.Йй99 2 | щ БіЗз | 6 | 679 | 95 ( 273 | 863 | 7100 | 609 | 96 | 601 1 96 та | 91 |1ДЮюруслоб | 568 | 65 | 789 2 Щ | 98 ( га | 923 | рЮюЮюЮюилот1 | бл | 98 | 814 1 ло 4 | 884 | 7100 | 524 | 70 | 762 | 99 6 ЇЇ 879 |1юЮюьифШ99 | 617 | 97 | 775 | 00 8 ЇЇ 896 | юю л00 | 656 | 97 | 795 | 100 78 ЇЇ 786 | 7101 | 5837 | 74 | 713 | ло 71111764 1777100 | 532 | 69 | 643 95 ( 714 | 822 | 2 щЮщЦ/99 | 5з | 70 | 705 | 99

Таблиця 5

Дані іп міго для сполук за даним винаходом. За визначенням дані щодо інгібування РОЕТОА стосуються людського клону (також вказаного як (П)), якщо не вказані як (г), що стосується щурячого клону ріСво Етах

Ме споп ріСво Етах ріСво Етах ПРОЕТОА2 ПРОЕТОА2 й І ИРОЕ2А ИРОЕ2А ПРОЕЗВ ПРОЕЗВ або або "РОЕТОА2 "РОЕТОА2 716 | 821 |. 7100 | 578. | 88 | 72 | 98 ( 717 | 831 1 .Йрюрю99 | ю5ЗУ | 74 | 709 | 9 719 | 798 |ЮДЮрЮринин101 | 2 ющ5ББ5 | 79 | 689 | 96 20 | 792 |рЮюрьркякої | 537 | 74 | 688. ЩщЩ 98 ( 21 | 834 |1.ррю99 | 582 | 89 | 688 | 9 22 | 863 | 7100 | 582 | 87 | 78 1 9 23 | 933 | 101 | 598 2 | 90 | 815 100 іа | 55 | 80 | 2 .-фю«5 2 | 3 | «Б | 28 2456 | 819 |ЙЮ(046й98 | ющЦМ «5 | 28 | 5 | 6 о 2ва | «5 2 Щщ|( щі | «5 | 0 | «Б | 7 266 | 817 | ..юЮЙ98 | щ «5 | 4 | 663 | 95 ( 29 | 882 | рЮюЮюЮюДйлл1ої | «5 | 718 | біб 30 | 545 | (77 | «5 | 8 | «Б | 32 31 | 86 | 7100 | «5 | 8 | 595 | 84 33 | 783 | .ЙюЮюЮЙ99 | щЩ «5 | 25 | 5 | 67 38 | 82117100 | 775 | 43 | 564 |..Д.ХАСТО 39 | 808 | ЮЙЮюИй98 | щ-«5 2 | 16 | 551 175 6,91 (п) 97 (п) 41 | 786 17ЙюЙюИюД99 | ющЩ «5 | 717 | 538 | 7/2 43 | 83 | .юЮЙй99 | щ «5 | 29 | 588 | 88 46 | 782 177 100 | «5 | 5 | 565 | 86 47 | 86 |ЙЮБ ю. 99 | ющ 547 | 80 | 65 92 48 | 976 | 7100 | 706 | 8995 | 736 | 100 49 | 868 | .ЙЮс99 | 2 щ52а | 42 | 6217795 ( 51 | 826 | рЮюЮюЮюло1 | «5 | 44 | 59 | 86 53 | 825 | 100 | 5 | 62 | бл 189 | 838 | 7100 | 502 | 51 | 68 89 ( 58 | 761 | щю.ь99 2 2 | «5 | 718 | 535 | 69

Таблиця 5

Дані іп міго для сполук за даним винаходом. За визначенням дані щодо інгібування РОЕТОА стосуються людського клону (також вказаного як (П)), якщо не вказані як (г), що стосується щурячого клону ріСво Етах

Ме споп ріСво Етах ріСво Етах ПРОЕТОА2 ПРОЕТОА2 й І ИРОЕ2А ИРОЕ2А ПРОЕЗВ ПРОЕЗВ або або "РОЕТОА2 "РОЕТОА2 | 843 | 98 | 507 | 56 | бе3з | 95 ( 60 | 907 | 100 | 596 | 92 | 682 | 9 62 | 552 | 77 | «5 | 8 | «Б | 36 63 | 814 | 100 | 5 | 60 | 606 89 ( 64 | 88 | .ю99 | 5 | 62 | 645 | 96 65 | Ююхь 3859 | 100 | 5 | 7 | 66 | 95 ( 66 | 776 | щ Кк99 | «5 | 48 | 564 | 79 67 | 859 | 99 | «5 | 49 | 654 | 94 68 | 82 | 99 | 5 ющ 5 | 50 | 586 | 85 69 | 939 | 102 | 642 | 95 | 734 | 100 70 | 81 177102 | 529 | 66 | 648 9 ( 71 | 83 177798 | щ «6 | 32 | б4 194 73 | 81 1777101 | 558 | 83 | 666 98 ( 76 | 964 |ЙЮК(99 2 | 2 Юю Бк юо5Я | 9 | щ 75 | 1 77 | 934 | 101 | 617 | 96 | 708 1 98 ( 78 | 9 5 юЮющ| 102 | 58 | 87 | 698 | 98 ( 79 | 876 | ЮюЮР99 | 604 | 93 | 672 | 9 80 | 91 1 юфющл00 | 5зЗ8 | 7 | 709 | 98 ( 82 | 747 |. 101 | «5 | 9 | «Б | 18 83 | 903 | юф-юл00 | 51 | 58 | 701 1 98 ( 84 | 85 5 |Ю 101 | Біз | з0 | бі 89 86 | .ю.73 | 100 | «5 | 34 | «Б | 40 87 | 667 | ЮЙЮК«(928 | ЮюЮюЮюйл«5 | 1 | 534 1 69 88 | 968 | 101 | 6бА 97 | 84 1 99 7,68 (п) 101 (й) вва лм) ве | 60 то | вв 980 | 945 | 101 | 667 | 98 | 771 | 102 982 | 94 | 100 | 588 | 88 | 761 | 98 ( 93 | 934 | 101 | 559 | 84 | 74 1 99 984 | 93 | 101 | 698 | 899 | 793 1 9 95 | 929 | Юющ 100 | 5 | 55 | 732 | 98 96 | 926 | 100 | 64 | 73 | 748. | 95 ( 7,217 (п) 101 (й) 98 | 922 | 100 | 622 | 94 | 74 | 98 ( 89 | 922 | 100 | 568 | 87 | 802 | 100 лою | 98 1777101 | 657. | 899 | щ 779 |ЮюЮро|еоо ло | 98 1777101 | 5832 | 70 | 724 198 ( лоз | 915 | .ЙюЮюи99 | 706 | 100 | 774 | 100

І 7104 | 909 | 100 | 629 | 92 | 713 | 98

Таблиця 5

Дані іп міго для сполук за даним винаходом. За визначенням дані щодо інгібування РОЕТОА стосуються людського клону (також вказаного як (П)), якщо не вказані як (г), що стосується щурячого клону ріСво Етах

Ме споп ріСво Етах ріСво Етах ПРОЕТОА2 ПРОЕТОА2 й І ИРОЕ2А ИРОЕ2А ПРОЕЗВ ПРОЕЗВ або або "РОЕТОА2 "РОЕТОА2 705 | 906 2 | юЮюЮфДюлої | 587 | 90 | щ 753 1 01 лоб | 905 | 100 | ба | 98 | 767 ЇЇ 7107 | 904 | Юр юл00 | 538 2 | 6 | 709 | 99 708 | 904 |. 100 | 557 | 80 | 728 | 99 7109 | 903 | 101 | 634 | 98 | 818 99 ( о | 888 | 7100 | 547 | 76 | 695 | 98 11 1 8901 |ДЮюЮюркюстлоо | 598 | 92 | 742 | 99 112 | 9 17. 7101 | 5 | 84 | 732 | 99 113 Її 19 17.юрюрю99 | ю5Б | 88 | 742 | 99 114 | 898 2 |ЮДЮюрюИтлоо|7.рДрДр7лов 98 | 754 | 101 115 | 898.4юЮю.ЮДЮюЮИло0 711587 71111199 117 | 894 |ДрюЮюрютл100 | 607 | 97 | 801 1 .ю.99 ( 7116 | 895 2 |ДЙрьоилої | 566 | 82 | 71 1 98 ( 118 | 878 1777101 | 602 | 92 | 713 199 119 | 876 177 7100 | 72 | 101 | 71777199 120 | 876 | 7100 | 615 | 95 | 67 | 96 121 | 875 | щ 99 | 629 | 95 | 723 | 96 122 | 83 | 100 | 574 | 86 | 713 | 100 123 | 81 17771799 | 5 | 87 | 704 1 99 124 | 869 | ЮюЮ99 | 638 | 98 | 744 | 98 ( 125 | 868 | 7100 | баз | 96 | без | 96 127 | 865 | ДЮ 99 | 636 | 94 | 759 | 99 128 | 864 | 7100 | 60 | 90 | 681 1 98 ( 129 | 864 |. 7101 | 5/ | 85 | 704 1 99 ( 130 | 861 | 7100 | 576 | 87 | 687 | 96 131 | 861 | ЮюЮюЮюЮЙй98 | 2 ющБ | 6 | 739 (99 132 | 86 | 7101 | «5 | 46 | 67 | 98 ( 133 | 853 | 7100 | 579. | 85 | 687 | 98 ( 134 | 85 | 701 | 565 | 84 | 68 | 100 139 | 754 | .Й.ЮЙ99 2 | щ «5 | 20 | 562 | 78 7144 | 746 | 100 | 562 | 86 | 633 | 96 7145 | 744 1 .Й.ЙюЙ99 | 5в9 | 86 | 6 9 147 | 742 | лоб | 565 | 81 | 606 | 9 148 | 741 17 7101 | 525 | 67 | 604 189 7149 | 741 1.ЙюЮюЙй99 | 528 | 66 | 574 | 8 ( 152 | 738 | 99 | «5 | з0 | 569 | 80

Таблиця 5

Дані іп міго для сполук за даним винаходом. За визначенням дані щодо інгібування РОЕТОА стосуються людського клону (також вказаного як (П)), якщо не вказані як (г), що стосується щурячого клону ріСво Етах

Ме споп ріСво Етах ріСво Етах ПРОЕТОА2 ПРОЕТОА2 й І ИРОЕ2А ИРОЕ2А ПРОЕЗВ ПРОЕЗВ або або "РОЕТОА2 "РОЕТОА2 153 | 736 | 7100 | 55 | 76 | 597 | 89 155 | 727 | ЙюЮЙмо8 | «5 2 | 37 | 553 | 72 157 | 722 |ЙЮ 99 | щ«5 2 | 33 | 559 | 75 160 | 714 1.ЙЮюЮюЙй99 | ющЩ «5 | 34 | 599 | 88 61 | 713 17771798. | 5 2 | 71 | 5 174 163 | 705 | ЙЮБ 98 | «5 | 72 | 549. | .-/КХК ТАС 166 | 703 | ЮюЮРеВ | 77/75 | 32 | 565 2 щЩ | 8 7168 | 84 |. .ю98 | 52 | 66 | 727 | 99 169 | 843 | 98 | 55 | 82 | 675 | 98 ( 171 | 793 |ДЙЮюКкю 99 | 594 | 93 | 645 | 9 172 | 834 | ло1 | 657. | 98 | 749 100 173 | 786 |рЮюЮюлої | «5 | з | 652 | 96 174 | 828 |ЙюЮюЮЙМ99 | 588 | 85 | 624 | 88 175 | 831 | 7100 | 522 | 71 | 685 щЩ | 98 ( 177 | 802 |1ДЙЮ0Ю99.4.Ю.| 2 Юющ(«5 | 21 | 634 | 9 ( 179 | 767 |рюЮюЮюл100 | «5 | 32 | бе/ | 9 180 | 83 | 100 | 529 | 66 | 676 2 Щ | 9 81 | 834 17798 | щ «5 | 52 | 651 | 94 7183 | 758 |ДЙЮК 99 | щ«5 | 36 | 564 | 79 185 | 766 | 98 | 548 | 79 | 592 | 87 7186 | 797 | рюЮюЮюл100 | 522 | 69 | 64 95 187 | 775 | щКР99 | 546 | 74 | 637 | 95 ( 7188 | 807 | (Р | 581 | 87 | 668 | 98 ( 189 | 829 | 100 | 556 | 80 | 673 | 96 190 | .юЮЯ99 | 100 | «5 | 39 | 68 1 96 192 | 803 | ЮюЮю 99 | 614 | 95 | 714 | 99 193 | 823 | 100 | 546 | 76 | 686 | 98 ( 194 | 773 | .ю99 | 5Зз4 | 57 | 658 | 9 195 | 835 | 98 | 525 | 70 | 643 | 9 ( 196 | 763 | щющЦ-(РХЯбЄ | 531 | 68 | бе5 | 92 197 | 799 |ЙЮюБ ф 98 | «5 | 42 | 668 | 96 198 | 825 | Ющ 98 | «5 | 35 | 638 | 9 5,23 (п) 62 (п)

Таблиця 5

Дані іп міго для сполук за даним винаходом. За визначенням дані щодо інгібування РОЕТОА стосуються людського клону (також вказаного як (П)), якщо не вказані як (г), що стосується щурячого клону ріСво Етах

Ме споп ріСво Етах ріСво Етах ПРОЕТОА2 ПРОЕТОА2

І ИРОЕ2А ИРОЕ2А НПРОЕЗВ НПРОЕЗВ або або "РОЕТОА2 "РОЕТОА2 «5(І 4 (і 205 | 894 | -.юЙ0899 | 565 | 83 | 701 1 98 ( 212 | 62417761 | щ «5 | 7 | «Б 1 88 214 | 52 | Й.-ЗЖ 9 | «5 | 9 | «Б | 3 216 | 636 | .Й.ЮюЮЙ98 | щ «5 | 26 | 535 | 67 217 | 625 1777799. | 2 юЮюф-(|Рм «5 | 37 | 532 | 72 218 | 669 | рюрфюл100 | «5 | 51 | 565 | 85 Щ 220 | 652 | 5 | «Б | 8 | «Б | "г пі» | 81815151 222 | 655 | 98 | «5 | 13 | 517 | 59 223 | бл 177798. | 2 ющф-|ММ«5 | 719 | 546 | л 224 | 852 | 100 | 598 | 87 | 715 | 99 225 | 794 |1ЙЮЙЮ99 | 55 | 83 | 703 1 98 ( 226 | 906 | 100 | 689 | 100 | 709 | 100 227 | 866 | 101 | 642 | 95 | 734 | 98 ( 232 | 667 |ЙЮК( 99. | 2 ющЦМ «5 | 31 | «Б | 48 234 | 629 |17ЙЮюЮюЮюЮю96 7717175 | 22 | 506. Й|1ЙЄЮК Ф59ЩГ(Г 235 | 691 |ДЙЮБкиИЗВ | «5 | 32 | 596 | 67 239 | бла | 96 | щ «5 | 16 | «Б | З 240 | 58 |. .90 | «5 | 9 | 504 | 5 243 | 688 |ДЙЮ09 | ол«х5 | 713 | 544 |:

Таблиця 5

Дані іп міго для сполук за даним винаходом. За визначенням дані щодо інгібування РОЕТОА стосуються людського клону (також вказаного як (П)), якщо не вказані як (г), що стосується щурячого клону ріСво Етах

Ме споп ріСво Етах ріСво Етах ПРОЕТОА2 ПРОЕТОА2 й І ИРОЕ2А ИРОЕ2А ПРОЕЗВ ПРОЕЗВ або або "РОЕТОА2 "РОЕТОА2 245 | 6891 |ДЙЮШ:99 ЮДЩ | Без | 62 | 566 | 79 246 | 69 | БЮКрИЙВ | «5 | 25 | «Б | 54 247 | 681 |1ЙЮЙЮД98 2 | 2 юЮющЦ5ве | 85 | 554 | 7/7 250 | 688 | ЮК 99 | 2 ющф-(М «5 | 28 | 53 | 64 251 | 655 | 98 | «5 | 717 | 506 | 5 252 | 615 17/96 | щ «5 | 717 | 517 | 66 254 | 697. |ДЙЮЄ99 2 | щ «5 | 25 | 542 | 77 258 | 682 | .Й.ЮюЮ99 | 58 | 89 | 6 щ 59 | 9 259 | 637 | .Й.юЮЙ99 2 | 55 | 82 | 577 | 92 263 | 689 2 |ЙЮБх"0/0/п99 2 | 5ЗІ | 65 | 529 | 64 265 | 862 | 102 | 52 | 55 | 743 | 98 ( 266 | 638 | 100 | 527 | 74 | 558.2щЮД | 89 267 | 94 |рюя102 | ща | 100 | 795 2 щЩ | 99 269 | 893 | щ 99 | Баз | 78 | бе | 9 270 | 834 |..рюД99 | щ «5 | 29 | 648 | 96 271 | 866 | ЮК 99 | БіЗз | 6 | 678 | 95 ( 273 | 863 | 7100 | 609 | 96 | 601 1 96 276 | 865 | 7100 | 589 | 93 | 678 | 98 ( 277 | 712 .1.ЙИЙИюД99.4 | 2 ющЩф «5 | 714 | «Б | 27 278 | 903 | .Й.ЮЙ99 | 6бль | 97 | 684 1.99 279 | 865 | 99 | 555 | 86 | 65 | 96 280 | 86 | 100 | 60 | 96 | 661 | 99 281 | 878 | 7100 | 565 | 87 | 696 | 99 282 | 8545 | 100 | 5/7 | 88 | 656 | 98 283 | 807 | 100 | «5 | 38 | 675 | 98 284 | 877 | 101 | 759 | 89 | 726 | 98 ( 287 | 842 | 100 | 52 2 | 6 | 6/6 | 98 ( 289 | 862 | 100 | 675 | 98 | 72 | 99 290 | 823 | 98 | 56 | 53 | 585 | 898 291 | 857 | 101 | 558 | 86 | 629 | 95 292 | 86 | 100 | 5Зз | 73 | 64 | 94

Таблиця 5

Дані іп міго для сполук за даним винаходом. За визначенням дані щодо інгібування РОЕТОА стосуються людського клону (також вказаного як (П)), якщо не вказані як (г), що стосується щурячого клону ріСво Етах

Ме споп ріСво Етах ріСво Етах ПРОЕТОА2 ПРОЕТОА2 й І ИРОЕ2А ИРОЕ2А ПРОЕЗВ ПРОЕЗВ або або "РОЕТОА2 "РОЕТОА2 293 | 795 | 100 | 546 | 80 | 599 | 9 294 | 797 |ЙЮКь 99. | «5 | 714 | 568. | 8 295 | 931 | 101 | 601 | 94 | 661 1 98 ( 296 | 934 | 99 | 61 | 93 | 692 | 100 297 | 863 | щЦ-Р9, | 5аз | 62 | баз | 96 298 | 773 | .ЮЙ99 | щ «5 | 25 | «Б | 4 299 | 8117799 | щ «5 | 40 | 567 | 84 300 | 819 | 100 | 57 | 88 | 554 | 80 301 | 809 | юЮюрМмМло0 | 52 | 62 | 59 | 89 303 | 815 17777799 | БВ | 57 | бе/ | 95 ( 307 | 804 | ЙюЮЙй99 | 583 | 88 | 6бг2 | 9 308 | 776 | щ-.98 | 5ЩЗ4 | 72 | 517 | 66 309 | 853 | 100 | 52 | 53 | 582 | 86

З | 896 | юЮюЮКРГ96 | Біз | 62 | 637 | 96 312 | 766 | щР;899 | «5 | 37 | б | 9 ( 33 | 887. |1ДЙЮюЮ97 | 522 | 6 | 581 1 86 315 | 695 |БЙЮБ 98 | «5 | 20 | 50 | 4 317 | 707 1ЙЮЙЮ99 2 | 2 ющЩ «5 | 15 | «Б | 34 318 | 582 |ДЙБК/ А ИЛ89 | «5 | 71 | «Б | З 319 | 895 | 7100 | 599 | 95 | 658 | 99 322 | 93 | 100 | 632 | 95 | 773 | 99 325 | 8,94 | 100 | 651 | 98 | 719 | 98 ( 326 | 867 | 100 | 659 2 | 97 | 722 | 99 327 | 938 | 101 | 7 7л1 | 9899 | 769 | 100 328 | 92 | 100 | 583 | 90 | 721 | 100 329 | 926 | 100 | 669 | 95 | 767 | 100 331 | 932 | --.Ю98 | ющ 73 | 899 | 784 | 100 332 | 832 | .ю99 2 | 5892 | 90 | 751 | 98 333 | 809 | БЮ 99 | 56 | 63 | 65 1779 9 / 334 | 861 | 7100 | 563 | 84 | 7 1 98 ( 335 | 902 | 102 | 5 | 52 | 706 | 98 ( 337 | 678 |77рД99 2 | щ «5 | 43 | 534 | 7л 338 | 704 17ЙюЮюЮЙй99 | 526 | 62 | 51 7 339 | 818 1777101 | 552 | 69 | б 95 340 | 715 | ЙрюЮюДл00 | 5937 | 69 | 548 | (ЗК?

Таблиця 5

Дані іп міго для сполук за даним винаходом. За визначенням дані щодо інгібування РОЕТОА стосуються людського клону (також вказаного як (П)), якщо не вказані як (г), що стосується щурячого клону ріСво Етах

Ме споп ріСво Етах ріСво Етах ПРОЕТОА2 ПРОЕТОА2 й І ИРОЕ2А ИРОЕ2А ПРОЕЗВ ПРОЕЗВ або або "РОЕТОА2 "РОЕТОА2 342 | 749 | 100 | 535 | 69 | 557 | 7 343 | 717. |17ЙюЮюЮюж102 | «5 | 44 | 534 | 68 344 | 753 17799 2 | 5 | 6 | 55 | 80 345 | 712 |1ЙЮЙЮ0 | 2 ЮющЦ5ОВ' | 48 | 543 | 72 346 | 828 | 100 | 522 | 68 | 614 92 347 | 827 177101 | 5л4 | 6 | 6 1 м" 348 | 747 |17ЙюЮюЮЙй99 2 | ющ5зБ | 70 | 589 | 92 349 | 765 | 102 | 532 | 64 | 575 | 86

ЗБ1 | 729 |ДЙЮюЮюЮЬ99 2 | щ52 | 69 | 567 | 8 352 | 82 17100 | 574 | 89 | 632 99 ( 353 | 847 | .юЮЙй99 | юю 5За | 69 | 601 1 94 355 | 903 / 99 | 614 | 98 | 663 | 98 ( 356 | 827 | .-.юЮ99 2 | Без | 65 | 603 92 357 | 711 1.ЙЮЙДЮД98 | 2 ющ «5 | 34 | 54 | З 359 | 792 | щЦР99 | 54 | 7 | 567 | 86 362 | 877 | --юЙ99 | 606 | 88 | 6 1 9 ( 363 | 956 | 99 | бе | 97 | 675 | 98 ( 365 | 72 | щ К99 | «5 | 24 | «Б | 3 366 | 799 2 юЮю|(ДЙБК г 99 | «5 | 22 | 524 | 64 368 | 82 1177л1ої | 5 | 6 | 66 | :еюєе 371 | 786 | 7101 | 6бАа 96 | би 198 372 | 899 | 100 | 587 | 90 | 66 96 373 | 857 | 100 | 62/ | 97 | 65 | 99 374 | 93 177100 | біз | 197 | 674 198 375 | 845 | 101 | 535 | 73 | 609 | 94 377 | 715 | .ЮюЮЙй99 | 50 | 47 | 589 898 378 | 877 | ..ррюД99 | 612 | 96 | 639 | 9 380 | 826 | 101 | 54 | 72 | 64 | 96

З81 | 812 1777799 2 | щ 5 | 48 | 588 | 88 382 | 799 |ДЙЮюБК 99 | «5 | 37 | 54 | 75 386 | 862 | 98 | 56 | 79 | баб 0 Щ | 9 387 | 8545 | 100 | 5// | 88 | 656 | 98 390 | 868 | 98 | 559 | 84 | 721 | 99 391 | 862 | Ц.Р |56Б5 | 81 | 6 щ 72 | 9 392 | 895 | 99 | 635 | 97 | 658 | 9 394 | 803 | щЙЮ.(РР99 | 77ол«5 | 27 | 565 2 Щ | 76 396 | 782 | 98 | «5 | 56 | 583 | 84

Таблиця 5

Дані іп міго для сполук за даним винаходом. За визначенням дані щодо інгібування РОЕТОА стосуються людського клону (також вказаного як (П)), якщо не вказані як (г), що стосується щурячого клону ріСво Етах

Ме споп ріСво Етах ріСво Етах ПРОЕТОАД2 ПРОЕТОАД2

Й І ПРОЕ2А ПРОЕ2А ПРОЕЗВ ПРОЕЗВ або або "РОЕТОд2 "РОЕТОд2 398 1 831 | 99 | 528 | 67 | 623 | 95 400 1 765 | 99 | «5 | 16 | «5 | 4

ЗАЙНЯТІСТЬ РОЕ2 ТЕСТОВИМИ СПОЛУКАМИ

Способи

Зайнятість РОЕ2А оцінювали за допомогою авторадіографії ех-мімо із застосуванням (НІВ- 17а (описаний у ММО2013/000924) як радіоліганду (сполука 12 у Виїпеег» еї аї., (2014). Зтистште-

Вазеєй Оевідп ої а Роїєпі, 5еїІесіїме, апа Вгаіп Репеїгаййпу РОЕ2 Іппібйог м/п ЮОетопзвігаїей Тагдеї

Епаадетепі. АС5 Мей Снет І ей. 5(9):1049-53.)

Самців щурів Умізіаг (200-250 г) обробляли шляхом перорального введення середовища- носія або зростаючих доз І"НІВ-17а та умертвляли через одну год. Головний мозок відразу видаляли з черепа та піддавали швидкому заморожуванню в охолодженому сухим льодом 2- метилбутані (-409С). Зрізи смугастого тіла товщиною двадцять мкм нарізали за допомогою кріостатного мікротома І еіса СМ 3050 (мап Норріупив, Бельгія), розміщували у розмороженому стані на предметні скельця (ЗирегЕгові РіІи5 Зіідев5, І ароМога, Франція) та зберігали за -20 "С до застосування.

Після розморожування зрізи висушували у холодному потоці повітря та інкубували протягом однієї хвилини із 30 НМ (ІЗНІВ-17а в Ттгіб-НСІ (50 мМ, рН 7,4), що містить 0,395 ВЗА. Зрізи головного мозку від оброблених лікарським засобом та оброблених середовищем-носієм тварин інкубували одночасно. Неспецифічне зв'язування вимірювали на зрізах мозочку, ділянці головного мозку, яка не містить ферменту РОЕЗ2А. Після інкубації надлишок ("НІВ-17а змивали крижаним буфером 2 рази по 10 хвилин із наступним швидким зануренням у дистильовану воду. Потім зрізи висушували у потоці холодного повітря.

Зрізи головного мозку поміщали у Вр--ітадег (Віозрасе, Париж) на 4 год. і радіоактивність, що виходила від зрізаних ділянок головного мозку, кількісно оцінювали із застосуванням програми

Вега мізіоп (Віозхрасе, Париж). Специфічне зв'язування визначали як різницю між загальним зв'язуванням у смугастому тілі та неспецифічним зв'язуванням у мозочку. Відсоток зайнятості рецептора лікарським засобом, який вводили тварині, відповідав 10095 мінус відсоток міченого рецептора у обробленої тварини. Для визначення значень ЕЮзхо значення відсотка зайнятості рецептора наносили на графік у залежності від дози та рівняння найбільш відповідної сигмоїдальної логарифмічної кривої доза-ефект розраховували за допомогою нелінійного

Зо регресивного аналізу із застосуванням програми Ргізт от ОСгарпРад. Значення ЕОбо (доза лікарського засобу, яка забезпечує 5095 зайнятість рецептора) за довірчих інтервалів із надійністю 9595 розраховували на підставі кривих доза-відповідь.

Таблиця 6

РО-перорально; ЗС-підшкірно

Шлях введення під час Шлях введення

Мо спол Зайнятість РОЕ2 за визначення зайнятості | Зайнятість РОЕ, під час й І 10 мг/кг РОЕ?2 за ЕОво визначення 10 мг/кг зайнятості ЕЮво ши ЕЛ т ДЯ ПО то ПО ПОЛОН ПО вв 11111781 Ї111111115861111111ї1 га Ї777711117701 11111111 8611111їг1 ши а о ПО о Я ПО ПО 774 .177711111718 17111111 РО 7 17111111 76 1Ї17777111717671 11111111 РО 11111111 С!

Таблиця 6

РО-перорально; ЗС-підшкірно

Шлях введення під час Шлях введення й І 10 мг/кг РОЕ2 за ЕОво визначення мг/кг зайнятості ЕЮво 13 Г7111111112811171Г11111111РО С 11112 18 77777114 РОЇ С 111112 18 РО с» юю 111 гав | 7777771717011777111171Г171111111185611 2гва | --.-// 6677777 |. 561117111171111111400 | РО ав | 77777779 Ї11111111РОЇ С |Ї771111Ї12 27 | 11777111717341Ї11111111РОЇ С 11112 728. | 497 | 7771777 85644ЮюЮюЮюЮ.|1.4.4ДрДИи25 | Р2 29111811 80177710 81 82 | 11171761 Г111111111РОЇ С 1111112 83111117 ГРО 1112 85 11111111181Г11111111РО С Ї111Г2 7736 | щЮ.К(АЩЙ8326Ю5.ММЙМЮЩД| Б «М РО | 452 | Ро 87 7771131 Г1111111РО С 11112 88 Ї1111111111111171Г111111РО С 1111112 89 Ї1177711117581Г11111111РО С 111112

А Г81111171Г11РО С 1111121 742 | 77717567 17777171 РОЇ С 111112 3 Ї11111111712111171Г111111111РО С 112 746 1177711171791171Г111111111РО С 1711112

Ат | 1111751111111171Г11111РО СЕ 748 | .Й7рДр96 2 ЮюЮ! ющ фв8в''ЇюЮ | ЇЇ 749 1777711171127 17711181 шити и т Я ПО с: Я ПОН ПО 611 Г7777111112017Г111111111РО С 11112 52 ЇЇ 1777711717172811171Г171111111РОС 1 Е2 53 1177711717171221Ї11111111РО |Ї11ГР2 54 777777171717891Ї11111111РО С Ї111Г2 598 Ї111111117177117Г11РОС 1 1ГЕ2 601 177771711717321 11111111 РО |Ї7777777711111Ї12 64 ЇЇ 1111111717711171Г11111РО С 112 -23 РО в | 980 ю 1 766 | («54 Ї777771117РО/ Ї112 68777713 11111181 69 117111171011111171Г111111111РОЇ С Ї777777771111112 770 | .ЮюЮБКУуу/лв65Б ЮюЮД..ЇБ16Южщж6864БжБ юКЩ( | 64 | Р нин шиншили шили пили нин нн"нН"ИшШшШшШшШши сн ПІ 3 Ї1111111110111111171Г11111111РО С 111112 74 77777711117141Г1во11 746 Ї1111111и111ГРОС С 54 РО я | 800000 8 11117711

РО в | 60101 80 | 771752. | ..ЙЮЙЮЙюь5с4ю7/ї|44 86 | Р 2 |/

Таблиця 6

РО-перорально; ЗС-підшкірно

Шлях введення під час Шлях введення й І 10 мг/кг РОЕ2 за ЕОво визначення 10 мг/кг зайнятості ЕЮво 82 17777117171281 11111111 РОЇ С |Ї7711111Г2 83 7777717171717821 11111111 РО С |Ї777777111Ї12 784 | 77777717145 | ...7ЮрЮ7рРО | лаз | 7 РО 865 77711111 ши ши ши: пи ПО о ПО ПО 90 11117111117173 17111186 1 Г11111и1Г11РОС ТЕ 7793 | ЮщБК 85. .ЮЙ.БмИГЄмРО КИ | «8 | - РО шини линннзжнншишшшшишиш 796 ЇЇ 111111711111171Г177111111РО С 17711112 787 117711117192 | 1111117РО С Ї7771111Г2 898 Ї111111111111171Г11111РО С 11112 пи ТС: ПО, Є ПОД ПОС То ОН КОНЯ КО 102 | 77777174 Ї71111111РОЇ С |!Ї1112 ших п У п п Те Я ПОООООООЯ ПОО 106 ЇЇ 7777771717173ю0117Г111111111РОЇ С |!Ї77777771111112 107 | 777171717291 17111117 РОЇ С |!Ї7777111111Г2 108. | -МЦЙЄв56Ю5.Бл0 | 5 БЮюжфящ» РО | 48 | Р 109. 43 | 777 РО | 7777111 ло | 77777771775.......Й. |... РО | 83 | Р

Ї71177711171231Ї11111111РОЇ С |Ї711111Г2 я Ї778111171Г1111РО 11112 ше ЕГп и ло ПО: Те Я ПОЛЯ ПО 120 ЇЇ 177771717171121 17771111 РОЇ С 111112 121 7111 Ї777111111РОЇ 11112 122 | 77717170 РОЇ 17771112 123 ЇЇ 17117174 РОЇ С 1111121 125 | ЄЙ0/56071/ Ї777771717117РОЇ С Ї77111112 71286 ЇЇ 77711731 11111111 РОЇ С |!Ї777777771111112 34 РО т | вв 11 7129 | 71171721 11111111 РОЇ С 111112 180 Ї11771111101111111171Г111111111РОЇ С Ї77777777711111127

ЕЕ В Я ПО с: Я ПОЛЯ ПО 132 | 76.7... | ....Й.Й.8564БЮжюкКЮю Щ( | 5 | Р

ЕЕ ШІ В: ОЛЯ ПО С: о Я ПОЛОН ПО 7184 | 77711721 11111111 РОЇ С 1111112 189 17711111 Г11111РО С 11112 7169. 111117311171Г111111111РО С Ї7771111Г2 470 Її 7777711111111171Г11111РО С 111121 184 ЇЇ 777771171721Ї11111111РО С 112 ше С: а: Я ПОЛО Сто Я ПОН ОО ши сХл и п То Я ПООООООЯ ПОО 88 ЇЇ 77777112 86111 ши сс: и: В ПО с: Я ПОЛЯ ПО 190 Ї117111111111171Г11111РО С 17111112 ше ЕТ В: Г: Я ПО сто ПОНЯ ПОООООООООООООННЯ О 192 77711131 Ї11111111РО С Ї77111112 -11 РО 9 |з |в 1111

Таблиця 6

РО-перорально; ЗС-підшкірно

Шлях введення під час Шлях введення й І 10 мг/кг РОЕ2 за ЕОво визначення мг/кг зайнятості ЕЮво -7 РО 511611 196 ЇЇ 11711110 РОЇ |Ї7777777711111Ї12 197 ЇЇ 1171111717811171Г111111111РОЇ С |Ї77711111Г2 220 | ...ЙЙЮЙИ7И7758777777717 77171717 РО | 5800 | в 2 223. | 77719777 17777771 РОЇ С |Ї7777711111Ї12 224 | 76117711 РОЇ С 111112 225 | 7671 Ї711111111РОЇ С |!Ї1111Г2 227 | 17111181 7228. | щ.ЙЙ92......Й.|.Й.Й.Й.Й.БМм. 57771411 | РО ни: ше ни а: с Я ПОЛО 267 | 57777177 РО | 11 | РОСС 7269, | 722... |... РО. |.ЮДЮДДл2420 | 2 Щ Р 270 | 77716717 РОЇ С |!Ї777777711111Г2 7 212 | 777117311171Ї777111111РОС 1 Е2 213. | 65... Ї.771786441111111111 215 | 723... |Ї77777717177РО С |!Ї111Г2 2 | 77117174 ГРО С 218 | 7307 Ї7777717171717РО С |Ї7777777711111Ї12

В 77711175 РО | 17142 | Р 47 РО а 283 | 777772 Ї711111111РО С |!Ї111Г2 7284 | 777716 | РО С |!Ї7777777771111112 286 | 77771757 17777171 РО |Ї7777777711111Ї12 287 | 7777711714317 17111111 РОЇ С 1111112 290 7111181 Ї11111111РО С Ї777111112 21 11777111788171Ї111111111РО С |Ї77777777711111Ї12 7292 | 77723... | ...7777РО |Ї7777771111112 7293 | 16 71111117 РО |!Ї777777711111Ї12 294 | 71717171 ГРО 112 7295. | Мк 7 щДщБХ( | щЩщРО | 56 | Ро 77296, | ..ЙИД88 5Ю5кюЮЮ | Ро | 7 297 | 71171721 Ї711111111РОС 112 7299. 73117111 РО Ї77777777111112 800 ЇЇ 77711711 ГРО Ї71111Г2 в 11111111 Г111111РО 112 802 | 77771777 РОЇ С 17771112 803 | 77711771 РОЇ С Ї77711111Г2 807 | 77717817 РОЇ С Ї777777711111Г2 7308. | 77718 Її РО |Ї77777777777171Ї177777 7809, 112. | 77777 РО |Ї7777771111112 310 | 752 2 ЮюЮДЩщ| щЩщ РО | 96 | Ро 81 11 т11171ГРОС 112 812 77771116 Ї11111111РО С 11112 813 Ї1177111171281 11111111 РОЇ С |Ї7777711111Г2 814 ЇЇ 77111751 РО С 1112 819 ЇЇ 1771117178371Ї11111111РО С Ї11Г2 821 1177171711717737 77717171 РО | 337 | Ро ши У: ши и: Г: ВО ПО с: Я ПООООООООООЯ ОО

Таблиця 6

РО-перорально; ЗС-підшкірно

Шлях введення під час Шлях введення

Мо спол Зайнятість РОЕ2 за визначення зайнятості | Зайнятість РОЕ, під час й І 10 мг/кг РОЕ?2 за ЕОво визначення 10 мг/кг зайнятості ЕЮво 832 | 71178111 РО7 17771111 ЇЇ 8394 | 11117117 Ї711111111РО7 17711111 7335. | Р .88.ЮЙ..БК | (БМ РО 17/77/0985. | Р

Ех є: ПОЯ ПО то ПОН ПОЛОН КО 7346 | 719.77 Ї7777717171717РО77 17711111 Її 847 | 11711111 Г1111РО7 17111111 ши СУ ГО ПО то ПО ПОЛОН ПО 853. | 7771117115 11111117 РО7 17111111 856, | 75177117 РО 7 17171717111555.ЙДЩДЩ | Р ше У и В ПО о Я ПО ОО 9363 ЇЇ 711111 Ї1111111РО7 17111111 Її 9364 | 77711751 ЇЇ РО7 17711111 Її 7966 | ..ЮюЮюЮюЮ77/7718 ЇЇ РО ЇЇ! 868 ЇЇ 77111111 Ї1111111РО7 17771111 11 869 117198 11111117 РО 17777711 Її 886 Її 7117123 ЇЇ РО7 17777711 111 47 РО е17220102200312228 0195 ши Ст є Я ПО то ПОН ПОЛОН ПО 892 | 146 | 77 РО 17777771 1 898 ..777171717129 ЇЇ РО 17111111 Її

ЕФЕКТ СПОЛУКИ 110 ЩОДО СИНАПТИЧНОЇ ПЕРЕДАЧІ

Важливі реагенти

Сахарозний буфер для препарування, що містить (у мМ) сахарозу (150), Масі (40), КСІ (4),

МаНеРО».НнгО (0,3), МасСІ.бНго (7), МансСоз (26), Сасі».2НгО (0,5), О-глюкозу (10), урівноважений газовою сумішшю 9595 О2 та 595 СО». Штучна цереброспінальна рідина (АСЗ5Е), яку застосовували під час урівноваження та реєстрації, містила "у мМ): масі (124), КСІ (2,7),

МанНгРО».НгО (1,25), Ма5О».7НгО (1,3), МансСо:з (26), СасСі».2НгО (2), О-глюкозу (10), аскорбінову кислоту (2), урівноважені газовою сумішшю 9595 О2 та 5965 СО». АС5Е одержували із СМОХ та кінуреновою кислотою в концентрації 50 мкМ та 1 мМ відповідно. Тестові сполуки одержували безпосередньо перед застосуванням із вихідного розчину (3 ОМ5О) в АС5Е та з кінцевою концентрацією ЮОМ5О, що не перевищувала 0,195. Усі реагенти були від бБідта-Аїагісй, якщо не вказано інше.

Тварини (вид, вага та стать)

Використовуваними тваринами були самці щурів Спраг-Доулі з вагою у діапазоні 145-200 г, придбані у Спагіез5 Кімег, Німеччина.

Одержання зрізів гіпокампа

Горизонтальні зрізи головного мозку (300 мкм) одержували із середньої-вентральної частини гіпокампа самців щурів Спраг-Доулі, яких анестезували ізофлураном згідно зі стандартним протоколом. Зрізи нарізали за допомогою вібраційного мікротому для тканин (І еіса

МТ12005) у холодному (42С) сахарозному буфері для препарування зі швидкістю 0,1 мм/с. Після нарізання зрізи залишали для урівноваження за 35 "С протягом 20 хв., а потім забезпечували відновлення за к. т. протягом щонайменше однієї години у штучній цереброспінальній рідині (АС5РЕ). Із одного головного мозку одержували від трьох до чотирьох зрізів.

Система тестування

Усі дані реєстрували за допомогою установки МЕА, комерційно доступної від МийСТаппеї зЗузет5 МСОС5 СОтрН (Ройтлінген, Німеччина), що складається із 4-канального генератора імпульсів та 60-канального основного модуля з підсилювачем, приєднаного до бО-канальної плати А/О. Програмне забезпечення для стимуляції, реєстрації даних та аналізу являло собою

Зо комерційно доступне від Мийі Спаппе! Зузіете5: МС 5і(йт (ІІ версія 2.0.0) та МС Каск (версія

3.8.1.0) відповідно. Усі експерименти проводили із застосуванням З-мірної МЕА (Ауапаа

Віозувієтв, 5.А., СН-1015, Лозанна, Швейцарія), яка складалася із 60 електродів із загостреною формою та висотою 60 мкм, відстань між якими становила 100 мкм. Електроди МЕА виготовлені із платини із опором у діапазоні 600 кОм - 900 кОм.

План експерименту

Ефект тестових сполук щодо синаптичної передачі досліджували шляхом реєстрації позаклітинних польових потенціалів у зрізах гіпокампа. Добре відомо, що синаптична передача може забезпечувати відхилення позаклітинного польового потенціалу, що відображає синхронну синаптичну активність у популяції нейронів, які оточують реєструвальний електрод.

Реєстрація даних позаклітинного польового потенціалу. Після відновлення зрізи головного мозку поміщали на чип МЕА під мікроскопом та розміщували 60 реєструвальних електродів у ділянці синапса моховитих волокон (зубчата звивина - САЗ) гіпокампа. Розчини АС5Е безперервно перфузували зі швидкістю потоку 2 мл/хв. Температуру в камері МЕА підтримували на рівні 3220,1 "С, при цьому елемент Пельтьє був розташований на основному модулі з підсилювачем МЕА. Усі дані реєстрували за допомогою установки МЕА, комерційно доступної від МийіСпаппеї! Зухтет5 МОЗ ОтрбнН (Ройтлінген, Німеччина). Два сусідніх електроди в чипі вибирали для стимуляції моховитих волокон у ділянці хілуса зубчатої звивини та ТЕРЗР реєстрували у термінальній зоні ділянки САЗ гіпокампа. Польові позаклітинні постсинаптичні потенціали (ТЕРЗР) викликали шляхом стимуляції входу моховитих волокон за допомогою двох послідовних електричних імпульсів з інтервалом 30 мс та повторювали кожні 60 с (тривалість імпульсу становила 100 мкс, та сила стимулювального струму (мкА) становила 4095 щодо максимальної амплітуди). Контрольні експерименти проводили одночасно зі зрізами, які довільним чином відносили до оброблюваних за допомогою середовища-носія (0М50). М позначає число зрізів, та, як правило, 3-4 зрізи використовували із розрахунку на кожну тварину.

Викликані відповіді на рівні пост-синаптичних нейронів (ТЕРОР) реєстрували, якщо вони задовольняли визначені критерії якості, у тому числі: правильне розташування, стабільний фон (відхилення у межах -/- 1095 протягом десяти послідовних хвилин, амплітуда 2100 мкВ). Дані

ТЕРБ5Р від вибраних електродів збирали за 5 кГц та записували на жорсткий диск ПК для здійснення аналізу в режимі офлайн. Одночасно значення амплітуди ТЕРОР від вибраних

Зо електродів збирали у режимі реального часу (за допомогою програми МС КасК) для контролю та відстеження якості експерименту. Дані наносили на графік у файлі електронної таблиці для здійснення аналізу в режимі офлайн.

Слабку довготривалу потенціацію (ТР) викликали за допомогою однократного високочастотного стимулу (НЕ5) із забезпеченням меншої, ніж максимальна потенціація ТЕР5Р.

Результати цього тесту показані на фігурі 1, що стосується ефекту сполуки 110, інгібітора

РОЕ2, щодо сприяння індукції ЇТР за допомогою протоколу слабкої довготривалої потенціації.

ЕФЕКТ СПОЛУК 70, 25а І 220 (ВІЛЬНА ОСНОВА) ЩОДО СИНАПТИЧНОЇ ПЕРЕДАЧІ

Важливі реагенти

Сахарозний буфер для препарування, що містить (у мМ) Масі (124), КСІ (4,4), МанНгРОх.Н2гО (1,2), МасСІ.бНгО (2), МансСоз (26), Сасбі»2НгО (2), О-глюкозу (10), урівноважений газовою сумішшю 9595 О2 та 595 СО2. Штучна цереброспінальна рідина (АС5Е), яку застосовували під час урівноваження та реєстрації, містила "у мМ): Масі (124), КСІ (4,4), МаНгРОз.НгО (1.2),

М95О»х.7Н2О (2), МанСОз (26), СасСі»2НгО (2), ЮО-глюкозу (10), аскорбінову кислоту (2), урівноважені газовою сумішшю 9595 О» та 595 СО». Сполуку 1, 2 і З одержували безпосередньо перед застосуванням із вихідного розчину (з ОМ5О) в АС5Е та з кінцевою концентрацією

РМ5О, що не перевищувала 0,195. Усі реагенти були від Зідта-Аїагіс!, якщо не вказано інше.

Тварини (вид, вага та стать)

Використовуваними тваринами були самці щурів Спраг-Доулі з вагою у діапазоні 145-200 г, придбані у Спагіез5 Кімег, Німеччина.

Одержання зрізів гіпокампа

Щурів анестезували за допомогою ізофлурану та піддавали швидкій декапітації. Мозок поміщали поруч із агарозним блоком і горизонтально розрізали за допомогою леза, що рухається у напрямку від передньої до задньої частини. Зрізи нарізали до товщини 350 мкм із використанням вібраційного мікротому для тканин (ІГеіса МТ12005) у холодній (42С) насиченій діоксидом вуглецю штучній цереброспінальній рідині (АСЗЕ) за швидкості 0,08 мм/с і амплітуди вібрації 0,75 мм. Після нарізання зрізи урівноважували за 35 "С протягом 20 хвилин, а потім забезпечували відновлення за кімнатної температури протягом щонайменше однієї години в

АСЗ5БЕ. Зазвичай, одержували від шести до восьми зрізів з кожного мозку і від трьох до чотирьох застосовували в одному експерименті. бо Система тестування

Усі дані записували за допомогою установки з5іїсетаві(ег, комерційно доступної від Зсіепійійса (Великобританія), що складалася з 4 реєструвальних станцій. Платиновий електрод для стимуляції, покритий Ібопеі, поміщали в ділянку САЗ гіпокампа щура. Реєструвальні мікроелектроди (опір приблизно 5 МОм) заповнювали за допомогою АС5Е та поміщали в СА1 гіплокампа щура. Положення стимулювальних і реєструвальних електродів підтверджували шляхом застосування стимуляції струмом кожні 20 с. Застосовували попередній запис протягом 20 хв. для підтвердження стабілізації відповідей зрізів. Застосовували стимуляцію струмом за допомогою роз'єднувача струму АЗб5 (Мпа Ргесізіоп Іпвігитепів). Дані одержували із застосуванням рСіатр 10, з'єднаного з платою збору даних Оідідага 1440А (МоїІесшіаг Ремісев,

Саннівейл, Каліфорнія, США), за частоти реєстрації сигналів від зразків 10 кГц, з фільтруванням низьких частот за 1 кГц і фільтруванням високим частот за З Гц. Застосовували стимули тривалістю сто мкс, що знаходилися в діапазоні 0-100 мкА, для виклику ТЕР5Р і визначали величину ТЕРЗР шляхом вимірювання амплітуди негативного піка або 20-8095 нахилу висхідної фази. Дані аналізували в режимі офлайн із застосуванням створених на замовлення алгоритмів у ІСоКрго (Уумаметеїгісв).

План експерименту

Ефект сполук 70, 25а і 220 (вільна основа) щодо синаптичної передачі досліджували шляхом реєстрації позаклітинних польових потенціалів у зрізах гіпокампа. Добре відомо, що синаптична передача може забезпечувати відхилення позаклітинного польового потенціалу, що відображає синхронну синаптичну активність у популяції нейронів, які оточують реєструвальний електрод.

Реєстрація даних позаклітинного польового потенціалу. Після відновлення зрізи неперервно перфузували збагаченою киснем АС5Е (2,5 мл/хв.). Розчин попередньо нагрівали на водяній бані перед подачею за допомогою насосу у реєструвальну камеру. Реєстрування здійснювали за 32 "С. Одночасно реєстрували ТЕРБ5Р з чотирьох незалежних зрізів мозку. М позначає число зрізів, та, як правило, 3-4 зрізи використовували із розрахунку на кожну тварину. Викликані відповіді на рівні пост-синаптичних нейронів ТЕРБР) реєстрували, якщо вони задовольняли визначені критерії якості, у тому числі: правильне розташування, стабільний фон (відхилення у межах -/- 1095 протягом десяти послідовних хвилин, амплітуда »100 мкВ). Дані ТЕРБР від

Зо вибраних електродів збирали за 5 кГц та записували на жорсткий диск ПК для здійснення аналізу в режимі офлайн. Одночасно значення амплітуди ТЕРОР збирали у режимі реального часу (за допомогою рсіатр) для контролю та відстеження якості експерименту. Дані наносили на графік у файлі електронної таблиці для здійснення аналізу в режимі офлайн.

Одержували криві даних вводу-виводу та силу стимулювання встановлювали на 5095 від діапазону між мінімальним і максимальним ТЕРБР (визначену або як силу стимулювання, достатню для забезпечення популяційного спайка, або плато в амплітуді ТЕР5Р). Потім для експериментів щодо ГТР зрізи стимулювали кожні 60 с протягом 20 хв. початкового періоду (середовище-носій зі сполукою або без неї) та відразу після цього стимулювали за допомогою тета-імпульсної стимуляції (як показано на фігурі 2). Після тета-імпульсної стимуляції потім зрізи стимулювали кожні 60 с протягом 60 хв. для вимірювання рівня І ТР.

Результати цього тесту показані на фігурі З, що стосується ефекту сполуки 70, фігурі 4, що стосується ефекту сполуки 25а, та фігурі 5, що стосується ефекту сполуки 220 (вільна основа), щодо сприяння індукції ЇТР за допомогою протоколу слабкої довготривалої потенціації.

ДОСЛІДЖЕННЯ РК/РО ОДНОКРАТНОЇ ДОЗИ РОЕ2і НА СОБАКАХ

У цих дослідженнях використовували самиць та самців собак породи Магейаї! Веадіеє (1-6 років): 2 самці та 2 самиці з розрахунку на кожну групу обробки. Цереброспінальну рідину (С5Е) відбирали за допомогою канюлі з направляючою голкою з бокового шлуночка головного мозку тварин, що знаходилися у свідомості, підключених до апарату.

Зразки С5Е та крові на початковому рівні відбирали за 2-5 днів перед уведенням дози.

Тваринам не давали їжі протягом ночі та на наступний ранок уводили дозу натщесерце (перорально за допомогою зонда). У попередньо визначені періоди часу після введення дози збирали кров і/або С5Е для вимірювання рівнів сполуки та СОМР. Аналіз СОМР виконували за допомогою І С-М5/М5: 25 мкл С5Е розбавляли за допомогою 125 мкл штучної С5Е (51ТІІ. (20 нг/мл)), центрифугували та вводили в колонку 25 мкл. Застосовувані системи являли собою: систему для ОРІ С Зпітайдли 51-30 (колонка Нурегсагр (50 мм х 1 мм (З мкм)), градієнт: водний розчин основи (10 мМ карбонату амонію)-ацетонітрил (від 595 до 9895 за 5,5 хвилин) за швидкості потоку 250 мкл/хв.) та систему АРІ бсіех 5500, обладнану джерелом ЕбБІ (селективний МКМ перехід (маса/заряд 346,1-2152,1 (час витримки 75 мс)). Результати цього досліду узагальнені на фігурах 6-15.

ПІДВИЩЕННЯ СИНАПТИЧНОЇ ПЛАСТИЧНОСТІ ЗА ДОПОМОГОЮ ІНГІБУВАННЯ РОЕ2 У

ЛАНЦЮГУ КОЛАТЕРАЛЕЙ ШАФФЕРА-САТ ГІПОКАМПА У АНЕСТЕЗОВАНИХ ЩУРІВ:

СИТУАЦІЙНИЙ ДОСЛІД ІЗ ЗАСТОСУВАННЯМ СПОЛУКИ 110

Введення

Синаптична пластичність є основоположним механізмом багатьох нейробіологічних функцій.

Довготривала потенціація (ТР), тривале строге локалізоване збільшення сили синаптичного зв'язку в гіпокампі, а також корі головного мозку, являє собою синаптичну основу пам'яті та навчання (Сооке апа Віїбх5, Си Оріп Іпмевіїд Огидв. 2005:6(1):25-34). Збільшення та зменшення сили синаптичного зв'язку залежить від активності пресинаптичних та постсинаптичних нейронів, від того, як нейронні сітки головного мозку функціонують під час створення чуттєвого уявлення великої кількості об'єктів у пам'яті та одержання рухової відповіді. Різні ознаки цих синаптичних змін, в інтактному головному мозку, є критично важливими у функціонуванні різних типів нейронних сіток і функціонуванні декількох різних нейронних ланцюгів головного мозку.

Таким чином, очікується, що ІТР буде послабленою у випадку вікових психічних та нейродегенеративних розладів, як, наприклад, хвороба Альцгеймера (Вегдадо апа АїІтадиег,

Мецгаї Ріаві. 2002:9(4):217-32; Вомап вї а!., Віоспет бос Тгапв. 200533: 563-7). Процедура, яка проводиться на тісно пов'язаних ділянках інтактного головного мозку тварин, що знаходяться під анестезією, є ефективним способом вивчення стійких змін щодо ефективної щільності та пластичності у ланцюгу гіпокамп-кора головного мозку після тетанічної електричної стимуляції із низькою та високою частотою, що доставляється одиничними або подвійними імпульсами (АІрепбі еї аї., Ехр Мешцтої. 2007; 204А:1-13). Досліди допомагають розширити розуміння нейронних ланцюгів, які лежать в основі розвитку порушення сили синаптичного зв'язку, тобто визначити прямий шлях у ланцюзі та роль конкретної біологічної мішені, охопленої конкретними ділянками, в опосередкуванні послаблення синаптичного зв'язку. Процедура дозволяє тестувати фармакологічні засоби, метою яких є відновлення патологічної нейропластичності, наприклад, обернення розвитку дефектів І ТР їі щільності нейронних сіток шляхом підвищення ефективності синаптичної передачі, що, як очікується, має сприятливі ефекти щодо пов'язаних когнітивних і навчальних здібностей (Сооке апа Віїб5, 2005; АІрепві єї а!., 2007).

Фосфодіестерази (РОЕ) являють собою клас ферментів, які відповідають за метаболічну

Зо інактивацію вторинних месенджерів, циклічного 3,5'-аденозинмонофосфату (САМР) та циклічного 3',5'-гуанозинмонофосфату (СОМР) (Егапсіз еї а. Рпузіо! Кем. 2011, 9: 651-900).

Класифікували 11 родин РОЕ включно на основі їхньої структури, ферментативної активності та розповсюдження (Отогі апа Коїега Сіго Ке5. 2007; 100:309-27). Роль РОЕ у підсиленні передачі сигналу за допомогою циклічних нуклеотидів робить ці ферменти привабливими мішенями для регуляції збуджуваності та підвищення ефектів взаємодії нейронів. У головному мозку РОЕ2 в основному експресується в корі головного мозку, гіпокампі та смугастому тілі, де він контролює гідроліз САМР. За останні декілька років дослідницькі групи зосередились на розробці інгібіторів

РОЕ2, націлених на зміну активності внутрішньоклітинних вторинних месенджерів, СОМР та

САМР, із впливом на пластичність та когнітивні процеси (ЮОпіпеп еї аїЇ.,, Сиг Рпагт Оев5. 2015; 21:3813-28; соте? апа Вгейеприснетг, Вісога Мед Снет І ейї. 2013; 23: 6522-7; Хи єї аї!., Меийигобіої

Адіпа. 2015; 36:955-70; Вагсо єї аіІ., Ехреп Оріп Тег Тагдвїв 2003; 7: 101-114).

У даному досліді вивчали те, чи приводить інгібування РОЕ2 за допомогою сполуки 110 до змін у збуджуваності або у здатності виявлення синаптичної потенціації у синапсах колатералей

Шаффера-СА! у анестезованих уретаном щурах Спраг-Доулі.

Матеріали та способи

Тварини

Дані експерименти проводили у суворій відповідності до інструкцій Міжнародної асоціації з атестації та акредитування утримання лабораторних тварин (АААГАС) та директиви Ради

Європейських Співтовариств (86/609/ЕЕС) від 24-го листопада 1986 р., та їх затверджував локальний етичний комітет. Щурів Спраг-Доулі з вагою 170-200 г на момент проведення хірургічного втручання утримували групою у клітках із вентиляцією зі встановленим 12-годинним циклом світла/темряви (увімкнення світла в 07:00 ранку) після їхньої доставки у віварії та утримували в контрольованих умовах навколишнього середовища.

Хірургічне втручання та електрофізіологія

Щурів анестезували за допомогою внутрішньочеревної ін'єкції уретану в дозі 1,5 г/кг ваги тіла. Тваринам надягали стереотаксичну раму для вживлення електродів, і температуру їхнього тіла постійно контролювали за допомогою ректального зонда та підтримували на рівні 37 "С за допомогою електричної грілки. Додаткове введення уретану (0,2-0,5 г/кг) проводили у разі необхідності забезпечення повної анестезії Два невеликих отвори (діаметром 1 мм) бо просвердлювали у черепі в місці розташування структур лівого гіпокампа для стимулювального та реєструвального електродів. Біполярний стимулювальний електрод; пару скручених вольфрамових ниток (75 мкм), наконечники яких знаходяться у горизонтальній площині на відстані 0,125 мкм один від одного, розміщували на шляху колатералей Шаффера- комісуральних нервових волокон (53) (АР -3,4, МІ -2,5, ОМ від -1,9 до 2.4), і вольфрамовий реєструвальний електрод розміщували в бігайшт Каайіашт ділянки Согпи Аттопів (СА1) дорсального відділу гіпокампа (АР -4,2, МІ. -4,0, ОМ від -2,5 до 3,4) (фіг. 1ба). Тверду оболонку головного мозку проколювали через обидва отвори та стимулювальний і реєструвальний електроди опускали дуже повільно (0,ю2 мм/хв.) через кору головного мозку та верхні шари гіпокампа в тРР та ОО дорсального відділу гіпокампа. Під час хірургічного втручання докладали всіх зусиль, щоб мінімізувати страждання тварини.

Нахил польового збуджувального постсинаптичного потенціалу (ТЕРЗР) використовували як міру збуджувальної синаптичної передачі. Одиничні монофазні прямокутні імпульси тривалістю 0,1 або 0,2 мс, які генеруються блоком живлення постійного струму (МС, Німеччина), застосовували, наприклад, щодо ЗС і викликані відповіді виникали у СА1. Сигнали внутрішньоклітинного польового потенціалу підсилювали; фільтрували за допомогою фільтру зі смугою пропускання від 1 Гц до 2 кГц, перетворювали на цифрову форму та здійснювали аналіз за допомогою замовленого програмного забезпечення. Електроди опускали доти, доки не спостерігали негативне відхилення ТЕРЗР із максимальною відповіддю. Для забезпечення стабілізації збуджуваності перед вимірами надавалось не менше 30 хв. Потім подавали монофазні імпульси постійного струму за значень інтенсивності стимулу в діапазоні від 1 до 12

Вольт для одержання кривих даних вводу/виводу (1/0) та визначення максимальних значень нахилу ТЕРБР, і потім інтенсивність стимулу, яка забезпечувала 5095 від максимальної відповіді (тобто контрольний імпульс), застосовували у наступних експериментах.

Індукція ГТР. Після визначення кривих даних 1/0 потім застосовували тестову стимуляцію кожні 30 с перед і після тетанічної стимуляції. Для кожного моменту часу, виміряного під час експериментів, усереднювали п'ять записів викликаних відповідей за частоти 0,033 Гц.

Початкову активність вимірювали кожні 5 хв. Протягом щонайменше 1 год. для забезпечення стабільного фону. Останні 30 хв. реєстрації початкового рівня (6 моментів часу), безпосередньо після застосування лікарського засобу усереднювали та застосовували як контроль для індукції

Зо І ТР. Тетанізацію викликали за допомогою застосування протоколу високочастотної стимуляції (НЕ5) 200 Гц, що складається з прямокутних імпульсів (тривалість стимулу 0,2 мс, 10 імпульсів для 20 стимулів, інтервал між імпульсами 2 с), з інтенсивністю стимулу, яка викликала нахил

ТЕРБ5Р, який становив приблизно 5095 від максимальної відповіді. ТЕРЗР реєстрували протягом 120 хв. після НЕЗ для визначення можливих змін в синаптичній відповіді нейронів 5С-СА1.

Вимірювання ГТР одержували зі співвідношень польового ЕР5Р нормалізованого середнього нахилу, одержаного через 120 хв. після НЕ5, діленого на нормалізований середній нахил, зібраний за 30 хв. перед НЕ5. Нахил передбачуваного ТЕРОР вимірювали між кінцем артефакту стимулу та локальним мінімумом негативного піку. У 8095 інтервалі між даними точками застосовували аналіз із застосуванням лінійного наближення за допомогою методу найменших квадратів для розрахунку нахилу ЕРБР.

Гістологія

Наприкінці електрофізіологічного досліду проводили електричну стимуляцію із силою струму 500 мкА протягом 30 с із одержанням осередку враження у зоні наконечників стимулювального та реєструвального електродів і зразки головного мозку збирали для гістологічного підтвердження правильності розміщення електродів. Зрізи головного мозку (20 мкм) вивчали за допомогою світлового мікроскопу. Тварин із неправильним розміщенням електродів виключали із досліду.

Сполуку 110 розчиняли в 2095 циклодекстрину (СО)-1НСІ. Для підшкірного введення сполуку 110 розчиняли в 2095 СО-1НСЇ для досягнення кінцевих концентрацій 2 і 4 мг/мл.

Статистичний аналіз

Для кожної тварини стабільні відповіді на початковому рівні (до тетанусу) протягом 30 хв. усереднювали та середнє значення нормалізували, приймаючи за 10095, і дані відповіді після тетанусу виражали щодо середнього значення на початковому рівні. Порівняння ефектів середовища-носія та сполуки 110 після тетанусу проводили за З30-хвилинні інтервали із застосуванням однофакторного дисперсійного аналізу (АМОМА) і застосовували апостеріорний аналіз із найменшою достовірною різницею (І 50) для порівнянь груп.

Результати

Не виявили відмінностей в нахилі ТЕРОР шляху 50-САТ1 між групами дослідження 1/0, що вказує на те, що збуджуваність клітин САТ була подібна у всіх тварин (фіг. 160, с). Базальна бо синаптична передача була посилена, оскільки виявили значні зміни між сполукою 110 (20 і 40 мг/кг) і контролем, обробленим середовищем-носієм, протягом початкового рівня до тетанусу (18 та 995, відповідно) (фіг. 164, е). У межах парадигми індукції СТР підшкірне введення сполуки 110 (20 ї 40 мг/кг) підвищувало стійку (22 год.) синаптичну потенціацію (137-895 та 142595 порівняно з рівнем для середовища-носія 1195495, відповідно) (фіг. 164, вставлений графік).

Через 0-30 хв. після завершення тетанізації нахили ТЕР5Р становили 153ж595 і 155:-490 порівняно з рівнем для середовища-носія, що становить 1392195, р«0,05. Щодо наступних 30 хв. інтервалів аналіз кривих стимул-відповідь виявив значуще стійке збільшення ТЕРОР з дозою 40 мг/кг (30-60 хв.: 1462695, 60-90 хв.: 137-595 і 90-120 хв.: 1292595 порівняно з рівнями для середовища-носія 125526, 11629 та 10621395, р«0,05, відповідно). Загалом, сполука 110 сприяє базальній синаптичній передачі і І ТР іп мімо

Припустимі варіанти не слід розглядати як відхилення від обсягу даного винаходу. Буде очевидно, що фахівці в даній галузі можуть змінювати описаний таким чином винахід різними способами.

Claims (15)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Сполука, що характеризується формулою (1): А Се Кк МАМ т 0 або її стереоїзомерна форма, де ВА вибраний із групи, яка складається з Н, СНз, СМ і СНЕ»; ВВ являє собою радикал, вибраний із групи, яка складається з (а), (Б) і (с): і, Кк чо; з ) и у) З ві ві (а) (Б) (с) де В' являє собою Н, Е або СН»з; В: являє собою Н або С.-залкіл, зокрема метил або н-бутил; за умови, що, якщо К? являє собою Н, то Е! являє собою Е або СН; Ко) ВЗ являє собою Аг, Неї або Аг-С2-лалкеніл; де Аг являє собою феніл або нафтил, кожен із яких необов'язково заміщений 1, 2 або З замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; СМ; МА2гАВ2В, де кожен із К2А і 28 незалежно вибраний із Н і СНз; ОН; С:-валкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; С1- валкілу, заміщеного СМ; Сз-єциклоалкілу; С:-валкілокси, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; та піразолілу; Неї являє собою: () 5-ч-ленний гетероарил, вибраний із групи, яка складається з 1Н-піролілу; тієнілу; фуранілу; 1Н-піразолілу; 1Н-імідазолілу; 1,2-оксазолілу; 1,3-оксазолілу та тіазолілу; кожен із яких може бути необов'язково заміщений 1, 2 або 3 замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; С:-залкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або 3 незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; МЕЗАНВЗВ, де кожен із КЗА ії ЗВ незалежно вибраний із Н і СНз; та фуран-2-ілу; або (ї) б-членний гетероарил, вибраний із групи, яка складається з піридилу, піримідинілу, піразинілу та піридазинілу; кожен із яких може бути необов'язково заміщений 1, 2 або З замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; ОН; СМ; МАЛАВЯВ, де кожен із КА і ВВ незалежно вибраний із Н і СНз; С:-алкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; С1- 4алкілу, заміщеного ОН; Сзециклоалкілу; Сз-єциклоалкілокси; Сі-4алкілокси, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; та С:-«алкілоксісС:-4залкілу; або (її) 8-10-членний біциклічний частково ненасичений гетероцикліл, вибраний із групи, яка складається з 2,3-дигідро-1-бензофуранілу; 2Н-хроменілу; 3,4-дигідро-2Н-хроменілу; 2,3- дигідро-1Н-індолілу, необов'язково заміщеного в положенні 1 С.:-залкілом, метилсульфонілом, 1- ацетилом або фторацетилом; 2,2-дифтор-1,3-бензодіоксолілу; 1,3-бензодіоксолілу, необов'язково заміщеного замісником, який являє собою метил; 3,4-дигідро-2Н-1,4- бензоксазинілу, необов'язково заміщеного Сі-4алкілом; 5,6,7,8-тетрагідроіїмідазо|1,2- а|Іпіридинілу; 5,6,7,8-тетрагідрохінолінілу, необов'язково заміщеного замісником, який являє собою атом галогену; та 2,3-дигідропіразолої5,1-5111,3|оксазолілу; або (ім) 9-10-членний біциклічний гетероарил, вибраний із групи, яка складається з 1-бензофуранілу; 1-бензотіофенілу; 1Н-індолілу; 1,3-бензоксазолілу; 1,3-бензотіазолілу; індолізинілу; 1Н- бензімідазолілу; імідазо(1,2-а|Іпіридинілу; піразоло(1,5-а|Іпіридинілу; 1Н-тієно|2,3-с|піразолілу; імідазо|2,1-бІгіазолілу; піроло|2,3-с|Іпіридинілу; тієно|З3,2-б|Іпіридинілу; хінолінілу; ізохінолінілу; хіноксалінілу; 1,8-нафтиридинілу та 1,6-нафтиридинілу; кожен із яких може бути необов'язково заміщений 1 або 2 замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; ОН; МЕЗАВ»В, де кожен із БРА і Б5В незалежно вибраний із Н і СН»; С.-лалкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або 3 незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; та Сі-алкілокси, необов'язково заміщеного 1, 2 або 3 незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; М Її У м о й А Е - й й за умови, що сполука не являє собою сполуку ; або її фармацевтично прийнятна сіль.

2. Сполука за п. 1, де ВЗ являє собою Аг або Неї; де Аг являє собою феніл, необов'язково заміщений 1, 2 або 3 замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; СМ; ОН; Сі-валкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; С1- Зо валкілу, заміщеного СМ; Сз-єциклоалкілу та С.:-валкілокси, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; Неї являє собою: () 5-ч-ленний гетероарил, вибраний із групи, яка складається з 1Н-піролілу; тієнілу; фуранілу; 1Н-піразолілу; 1Н-імідазолілу; 1,2-оксазолілу; 1,3-оксазолілу та тіазолілу; кожен із яких може бути необов'язково заміщений 1, 2 або 3 замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; С:-залкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або 3 незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; МЕ3аНЗЬ, де кожен із КЗа і дЗЬ незалежно вибраний із Н і СНз; та фуран-2-ілу; або (ї) б-членний гетероарил, вибраний із групи, яка складається з піридилу, піримідинілу, піразинілу та піридазинілу; кожен із яких може бути необов'язково заміщений 1, 2 або З замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; ОН; СМ; МАВ, де кожен із ла і Б" незалежно вибраний із Н і СН»з; С:-лалкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; Сз- вциклоалкілу; Сз-єциклоалкілокси та Сі-алкілокси, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; або (її) 8-10-членний біциклічний частково ненасичений гетероцикліл, вибраний із групи, яка складається з 2,3-дигідро-1-бензофуранілу; 2Н-хроменілу; 3,4-дигідро-2Н-хроменілу; 2,3- дигідро-1Н-індолілу, необов'язково заміщеного в положенні 1 С.:-залкілом, метилсульфонілом, 1- ацетилом або фторацетилом; 2,2,-дифтор-1,3-бензодіоксолілу; 1,3-бензодіоксолілу, необов'язково заміщеного замісником, який являє собою метил; 5,6,7,8-тетрагідроімідазо|1,2-

а|Іпіридинілу; 5,6,7,8-тетрагідрохінолінілу, необов'язково заміщеного замісником, який являє собою атом галогену; та 2,3-дигідропіразолої5,1-5111,3|оксазолілу; або (ім) 9-10-членний біциклічний гетероарил, вибраний із групи, яка складається з 1-бензофуранілу; 1-бензотіофенілу; 1Н-індолілу; 1,3-бензоксазолілу; 1,3-бензотіазолілу; індолізинілу; 1Н- бензімідазолілу; імідазо(1,2-а|Іпіридинілу; піразоло(1,5-а|Іпіридинілу; 1Н-тієно|2,3-с|піразолілу; тієноЇ3,2-В|піридинілу; хінолінілу; 1,8-нафтиридинілу та 1,6-нафтиридинілу; кожен із яких може бути необов'язково заміщений 1 або 2 замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; ОН; МЕЗадЗ»Ь, де кожен із 32 і З» незалежно вибраний із Н і СНз; Сч- 4алкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; та С:і-алкілокси, необов'язково заміщеного 1, 2 або 3 незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; або її фармацевтично прийнятна сіль.

3. Сполука за п. 1 або 2, де КА являє собою СНз або СНЕ».

4. Сполука за будь-яким із пп. 1-3, де ЕР являє собою (а) або (с).

5. Сполука за будь-яким із пп. 1-4, де ЕЗ являє собою Неї.

6. Сполука за будь-яким із пп. 1-5, де ЕЗ являє собою: (І) б-ч-ленний гетероарил, вибраний із групи, яка складається з піридилу, піримідинілу, піразинілу та піридазинілу; кожен із яких може бути необов'язково заміщений 1, 2 або З замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; ОН; СМ; МАЛА», де кожен із да і в? незалежно вибраний із Н і СН»з; С:і-лалкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; Сз-єциклоалкілу; Сз- вциклоалкілокси та Сі-залкілокси, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; або (ії) 9-10-членний біциклічний гетероарил, вибраний із групи, яка складається з 1-бензофуранілу; 1-бензотіофенілу; 1Н-індолілу; 1,3-бензоксазолілу; 1,3-бензотіазолілу; індолізинілу; 1Н- бензімідазолілу; імідазо|1,2-а|Іпіридинілу; піразоло(|1,5-а|Іпіридинілу; 1Н-тієно(|2,3-с|Іпіразолілу; тієноЇ3,2-В|піридинілу; хінолінілу; 1,8-нафтиридинілу та 1,6-нафтиридинілу; кожен із яких може бути необов'язково заміщений 1 або 2 замісниками, кожен із яких незалежно вибраний із групи, яка складається з галогену; ОН; МЕЗадЗ»Ь, де кожен із 32 і З» незалежно вибраний із Н і СНз; Сч- Зо 4алкілу, необов'язково заміщеного 1, 2 або З незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену; та С:і-алкілокси, необов'язково заміщеного 1, 2 або 3 незалежно вибраними замісниками, які являють собою атом галогену.

7. Сполука за будь-яким із пп. 1-6, яка характеризується формулою (І-а) або (І-Б): А М М Кк М М в ХА ря ХА р ЩІ Я з в або Кк , (а) (-5) де РА, Вг2 та ЕЗ визначені в будь-якому з пп. 1-6.

8. Фармацевтична композиція, яка містить терапевтично ефективну кількість сполуки за будь- яким із пп. 1-7 і фармацевтично прийнятний носій.

9. Сполука за будь-яким із пп. 1-7 фармацевтичної композиції за п. 8 для застосування як лікарського препарату.

10. Сполука за будь-яким із пп. 1-7 або фармацевтична композиція за п. 8 для застосування у лікуванні або попередженні розладу центральної нервової системи, вибраного із групи психотичних розладів і станів; тривожних розладів; рухових розладів; наркотичної залежності; афективних розладів; нейродегенеративних розладів; розладів або станів, які включають як симптом синдром дефіциту уваги та/або порушення пізнавальної діяльності; розладів, пов'язаних із запам'ятовуванням і консолідацією пам'яті; інсульту й аутичного розладу.

11. Сполука або фармацевтична композиція для застосування за п. 10, де психотичні розлади вибрані із групи шизофренії; шизофреноформного розладу; шизоафективного розладу; маніакального розладу; психотичного розладу, викликаного вживанням певних речовин; розладів особистості параноїдального типу та розладу особистості шизоїдного типу; тривожні розлади вибрані із групи панічного розладу; агарофобії; специфічної фобії; соціальної фобії; обсесивно-компульсивного розладу; посттравматичного стресового розладу; гострого стресового розладу та генералізованого тривожного розладу; рухові розлади вибрані із групи хвороби Хантінгтона та дискінезії; хвороби Паркінсона; синдрому неспокійних ніг та есенціального тремору; синдрому Туретта й інших тикових розладів; розлади, пов'язані зі вживанням певних речовин, вибрані із групи зловживання алкоголем; алкогольної залежності; алкогольного абстинентного синдрому; алкогольного абстинентного синдрому з делірієм, психотичного розладу, викликаного вживанням алкоголю; амфетамінової залежності; амфетамінового абстинентного синдрому; кокаїнової залежності; кокаїнового абстинентного синдрому; нікотинової залежності; нікотинового абстинентного синдрому; опіоїдної залежності та опіоїдного абстинентного синдрому; афективні розлади вибрані з депресії; манії; біполярного розладу І типу, біполярного розладу ЇЇ типу; циклотимічного розладу; дистимічного розладу; значного депресивного розладу; терапевтично резистентної депресії та афективного розладу, викликаного вживанням певних речовин; нейродегенеративні розлади вибрані із групи хвороби Паркінсона; хвороби Хантінгтона; деменції; хвороби Альцгеймера; мультиінфарктної деменції; СНІД-асоційованої деменції або лобно-скроневої деменції; розлади або стани, що включають як симптом синдром дефіциту уваги та/або порушення пізнавальної діяльності, вибрані із групи деменції, асоційованої із хворобою Альцгеймера; мультиінфарктної деменції; деменції, зумовленої хворобою із тільцями Леві; алкогольної деменції або стійкої деменції, викликаної вживанням певних речовин; деменції, асоційованої із внутрішньочерепними пухлинами або черепно-мозковою травмою; деменції, асоційованої із хворобою Хантінгтона; деменції, асоційованої із хворобою Паркінсона; СНІД-асоційованої деменції; деменції внаслідок хвороби Піка; деменції, зумовленої хворобою Крейтцфельдта- Якоба; делірію;х амнестичного розладу; посттравматичного стресового розладу; інсульту; Зо прогресуючого над'ядерного паралічу; олігофренії; порушення здатності до навчання; синдрому дефіциту уваги та гіперактивності (АОНО); помірного когнітивного порушення; синдрому Аспергера; вікового когнітивного порушення та когнітивного порушення, пов'язаного зі сприйняттям, увагою, навчанням або пам'яттю; розлади, пов'язані із запам'ятовуванням і консолідацією пам'яті, вибрані з розладів пам'яті.

12. Спосіб одержання фармацевтичної композиції за п. 8, який характеризується тим, що фармацевтично прийнятний носій ретельно змішують із терапевтично ефективною кількістю сполуки за будь-яким із пп. 1-7.

13. Сполука за будь-яким із пп. 1-7 у комбінації з додатковим фармацевтичним засобом для застосування у лікуванні або попередженні стану, наведеного в будь-якому із пп. 10-11.

14. Продукт, що містить: (а) сполуку за будь-яким із пп. 1-7 та (б) додатковий фармацевтичний засіб, у вигляді комбінованого препарату для одночасного, роздільного або послідовного застосування у лікуванні або попередженні стану, наведеного в будь-якому із пп. 10-11.

15. Спосіб лікування розладу, вибраного із групи психотичних розладів і станів; тривожних розладів; рухових розладів; наркотичної залежності; афективних розладів; нейродегенеративних розладів; розладів або станів, які включають як симптом синдром дефіциту уваги та/або порушення пізнавальної діяльності; розладів, пов'язаних (із запам'ятовуванням і консолідацією пам'яті; інсульту й аутичного розладу; який передбачає введення суб'єкту, який потребує цього, терапевтично ефективної кількості сполуки за будь- яким із пп. 1-7 або терапевтичної кількості фармацевтичної композиції за п. 8.