UA45948C2 - Спосіб лікування та/або профілактики протозойної паразитарної інфекції та комбінація атовакуону та прогуанілу, що застосовується в ньому - Google Patents

Abstract

Винахід стосується комбінацій атовакуону і прогуанілу, їхнього застосування для лікування та профілактики паразитарних інфекцій, таких як малярія і токсоплазмоз, та інфекцій, що їх викликає P.carinii, а також їхньому застосуванню для виготовлення лікарських засобів для лікування та/або профілактики цих інфекцій. Комбінація цих препаратів може застосовуватись у вигляді лікарської форми, що містить обидві речовини. Атовакуон та прогуаніл найкраще застосовувати у потенціюючому співвідношенні, з тим, щоби ефект їхньої дії був синергичним.

Description

Опис винаходу

Данное изобретение касается синергических комбинаций 2 2-І(4-(4-хлорфенил)циклогексил|-З-гидрокси-1,4-нафтохинона (атовакуона) и прогуанила, которне имеют противопаразитарную активность. Более конкретно, изобретение касается фармацевтических композиций, содержащие такие комбинации, их применения в лечениий инфекций, вьізьіваемьїх протозойньіми паразитами, таких как малярия и токсоплазмоз, и их применения в лечений инфекций, вьізьіваемьх Рпешйтосузіїз сагіпії.

Соединение 2-І4-(4-хлорфенил)циклогексил|-3--гидрокси-1,4-нафтохинон (атовакуон) бьіло описано ранее, 70 например, в Европейском патенте Мо123238, которьій касаєтся 2-замещенньїх З3-гидрокси-1,4-нафтохинонов формуль (1): с - рі о

Й са. «СІ і он 0 в которой каждьй Б' опредставляєт собой водород и Б 2 вьбран из С.в-алкокси, аралкокси,

С. д-алкил-С, д-алкокси, фенила, замещенного одной ели двумя группами, вьібранньми из галогена и с Сів-алкила, галогена и пергало-Сі в-алкила, или БК! и КЕ? оба представляют собой С 16-алкил или фенил, п о обозначает 0 или 71, или их физиологически приемлемьх солей. Известно, что зти соединения обладают противопротозойной активностью. В частности считают, что соединения формульї (І), в которьїх п представляет собой 0, активньї против малярийного паразита человека Ріазтодішт ГТаісірагит и также против видов Еїітегіа, таких как Е. (епеЇа и Е. Асегуцііпа, которне являются организмами, вьізьиівающими кокцидиоз, а соединения с формуль! (І), в которьїх п представляет собой 1, активньі против простейших рода ТНеїйегіа, в частности Т. « аппицавйа или Т. рагуа. Среда соединений, названньїх конкретно и приведенньїх в качестве примера, находится соєдинение формуль! (І), в которой п представляєт собой 0, В! представляет собой водород и КЕ? представляет ме) собой 4-хлорфенил, т. е. атовакуон. ю

Прогуанил представляет собой хорошо известное лекарственное средство для профилактики, но не для 32 лечения малярии. Он является одним из самьїх безопасньїх противомалярийньїх лекарственньїх средств и его - можно давать маленьким детям и беременньм женщинам. Однако появилась устойчивость Р. Гаісірагит к прогуанилу, в частности в Юго-Западной Азии, и зта устойчивость к прогуанилу представляет собой все увеличивающуюся проблему. «

Для преодоления устойчивости к лекарственньім средствам стандартной практикой становится применение комбинаций более, чем одного противомалярийного средства, одновременно или последовательно. Однако З с многие такие комбинации являются антагонистичньіми, что приводит к менее зффективному лечению, и схемь! "» приема лекарственньїх средств часто усложняются, увеличивая вероятность того, что больнье, но смогут " завершить лечение, Позтому целью данного изобретения бьіло обеспечение комбинации противомалярийньх лекарственньїх средств, которая не бьла бь антагонистичной и не требовала сложной схемь! приема лекарственньх доз. те Неожиданно бьіло обнаружено, что путем комбинирования, либо одновременного, либо последовательного, с атовакуона, представленного в данной спецификации формулой (11): се) т (І)

У щі ! се

ІЧ е) сін о . іме) и прогуанила достигается усиление противопаразитарной и, в частности, противомалярийной активности. 60 Кроме того, комбинация соединения формульї! (ІІ) и прогуанила может бьіть легко представлена в виде одного фармацевтического препарата.

В первом аспекте данное изобретение обеспечивает способ лечения и (или) профилактики инфекции, вьізьіваемой протозойними паразитами, например, малярий или токсоплазмоза, или инфекции, вьізьіваемой Р.

Сатгіпі, у млекопитающих, в том числе у человека, предусматривающий введение зффективного количества бо атовакуона или его физиологически приемлемой соли и сопутствующее или последовательное введение зффективного количества прогуанила.

Во втором аспекте данное изобретение обеспечивает применение атовакуона при изготовлений лекарственного препарата для введения либо вместе, либо последовательно с прогуанилом для лечения и (или) профилактики инфекции протозойньїх паразитов, например малярии или токсоплазмоза, или инфекции, вьізьіваемой Р. сагіпії, у млекопитающих, в том числе у человека.

Предпочтительно соединение формульі (ІІ) и прогуанил вводят вместе. Более предпочтительно соединение формульі (ІІ) и прогуанил вводят в потенциирующем соотношении.

Таким образом, согласно следующему аспекту данного изобретения обеспечена комбинация атовакуона или его физиологически приемлемой соли и прогуанила, в которой атовакуон или его соль и прогуанил 7/0 присутствуют в потенциирующем соотношении.

Термин "потенциирующее соотношение" применяют здесь для указания, что атовакуон и прогуанил присутствуют в таком соотношений, что прротивопаразитная активность зтой комбинации вьіше, чем активность одного атовакуона или одного прогуанила или аддитивной активности, которая могла бьі бьіть прогнозирована для зтой комбинации на основе активностей отдельньїх компонентов. Таким образом, отдельнье компоненть! /5 действуют синергически в комбинации при условии, что они присутствуют в потенциирующем соотношении.

Потенциирующее соотношение, которое можно успешно применять для лечения малярии, в том числе для действия на устойчивье к гидроксинафтохинону штаммь! малярии, находится в диапазоне 1: 0,1 - 1: 100 (прогуанил : атовакуон). Удобно, чтобьї потенциирующее соотношение находилось в диапазоне 1:0,2 -1: 10.

Особенно предпочтительное потенциирующее соотношение находится в диапазоне 1:11 -1: 3.

Данное изобретение обеспечиваєт также в другом аспекте способ лечения и (или) профилактики малярии у млекопитающих, в том числе у человека, предусматривающий введение зффективного количества комбинации атовакуона или его физиологически приемлемой соли и прогуанила.

Гидроксильная группа атовакуона может образовать соли с подходящими основаниями и физиологически приемлемьми солями атовакуона являются соли неорганического основания, такие как соли щелочньх с ов Мметаллов (например, натрия и калия) и щелочно-земельньх металлов (например, соли кальция); соли органических оснований, например, фенилотилбензиламина, дибензилзтилендиамина, зтаноламина и і) дизтаноламина; и соли аминокислот, например, лизина и аргинина.

Должно бьїтть понятно, что соединение формульї (ІЇ) может существовать в виде цис- иди транс-изомера, т. е. кольцо циклогексила может бьть цис- или транс-замещенньм нафтохиноновьм ядром и карбофенильной со зо группой. В соответствий с данньім изобретением можно использовать как цис, так и трансо-изомерь и их смеси.

Вообще при использованиий зтого соединения в виде смеси изомеров транс-изомер будет присутствовать в - количества приблизительно 50956 или будет преобладающим изомером, но использование смесей, в которьїх ду преобладает цис-изомер, таюже включено в сферу действия изобретения. Конкретное отношение изомеров можно варьировать, если требуется; типичньми являются смеси, в которьіх отношение цис/транс изомеров о зв Давно приблизительно 1 : 1, 40: 60 и 5: 95. Для применения согласно данному изобретению предпочтительнь «Е транс-изомер соединения формуль! (Ії) или смесь его цис- и транс-изомеров. содержащая по меньшей море 9595, например, 9995 транс-изомеа.

Соединение формуль! (ІЇ) может также существовать в его таутмерной форме, в которой гидроксильная группа отдает ее протон одной из оксогрупп, и применение таких таутомерньїх форм включено в сферу « 0 действия данного изобретения. Однако считают, что стабильной формой является форма, представленная в в с формуле (І).

Й Количество комбинации атовакуона и прогуанила, необходимое для зффективного действия в качестве а противопаразитарного агента, будет, конечно, применяться и в конце концов определяется по усмотрению ветеринарного врача или медицинского работника. Факторами, которне должнь! учитьіваться, являются путь введения и природа препарата, вес тела млекопитающего, возраст и общее состояние ж природа и тяжесть ї5» заболевания. В основном подходящая зффективная доза для введения человеку при лечениий малярий находится в диапазоне 2,0мг - ЗОмг прогуанила на килограмм веса тела в день и 0,5мг - ЗОмг атовакуона на 1 килограмм веса тела в день, например, З - 20мг/кг/день прогуанила и 1 - 20мг/кг/день атовакуона, в частности,

Ге) 5 - 1бмг/кг/день прогуанила и З - 15мг/кг/день атовакуона.

Подходящая зффективная доза для введения человеку дан профилактики малярии находится в диапазоне пи от З до 20мг на кг веса тела в неделю для прогуанила и атовакуона, например, от бмг/кг в недолю до 1Омг/кг в с неделю для прогуанила и атовакуона.

Должно бьїтть понятно, что названньсе вьіше дозь! рассчитань! для лекарственньх средств рег зе.

Для применения согласно данному изобретению комбинация атовакуона и прогуанила предпочтительно представлена в виде фармацевтического препарата.

Фармацевтические препаратьі содержат зти активнье ингредиентьі (т. е. комбинацию атовакуона и (Ф, прогуанила) вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемьми носителями и иногда другими ка терапевтическими и (или) профилактическими ингредиентами. Носитель или носители должнь! бьть приемлемьми в смьксле их совместимости с другими ингредиентами зтой формуль и безвредньми для бор реципиента.

Позтому данное изобретение обеспечивает фармацевтический препарат, содержащий комбинацию атовакуона и прогуанила в ассоциации с одним или несколькими фармацевтически приемлемьми носителями.

Кроме того, данное изобретение обеспечивает способ получения фармацевтического препарата, предусматривающий соединение комбинации атовакуона и опрогуанила с одним или несколькими 65 фармацевтически приемлемьми носителями.

Комбинация атовакуона и прогуанила может бьіть для удобства представлена в виде фармацевтического препарата в форме стандартньїх (унифицированньмх) доз. Удобньїй препарат в виде стандартной дозьі! содержит активнье ингредиенть! в количествах от 1Омг до Зг каждого, например, 5Омг - Зг каждого. Типичнье стандартнье дозьі могут содержать, например, 500мг атовакуона и 20Омг прогуанила или 500мг атовакуона и 50Омг прогуанила.

Фармацевтические препарать! включают в себя препаратьї, пригоднье для перорального, топического (в том числе дермального, трансбуккальнго и подьязьічного), ректального и парентерального (в том числе подкожного, чрескожного, внутримьішечного и внутривенного) введения, а также для введения при помощи назогастрального зонда. Препарат может бьїть, если нужно, представлен дан удобства в виде отдельньїх дозированньїх единиц и 7/0 может бьть приготовлен любьм из способов, хорошо известньх в области фармации. Все способь предусматривают стадию соединения активньїх ингредиентов с жидкими носителями или мелко измельченньми твердьми носителями или теми и другими с последующим приданием формь! полученному продукту, если зто желательно.

Найиболее предпочтительно фармацевтические композиции для перорального введения, в которьїх носитель /5 является твердьім, представлять в виде препаратов со стандартной, рассчитанной на один прием дозой, таких как болюсь, капсуль! или таблетки, каждая содержащая заданное количество активньїх ингредиентов. Таблетка может бьіть приготовлена путем прессования или формования при помощи шаблона (формьї), иногда с одним или несколькими вспомогательньми ингредиентами. Прессованньюе таблетки могут бьіть приготовлень! путем прессования в пригодной для зтого машине активньїх соединений в свободно текучей форме, такой как порошок го мли грануль, иногда смешаннье со связьвающим веществом, смазьвающим веществом, инертньм разбавителем, смягчающим агентом, поверхностно-активньм веществом или диспергирующим агентом.

Формованньсе таблетки могут бьіть приготовленьії путем отливки в форме инертного жидкого разбавителя.

Иногда таблетки могут иметь покрьттие, а если они но покрьїтьІ, то могут иметь отметки на их поверхности.

Капсуль! могут бьіть приготовленьі путем помещения активньїх ингредиентов, либо одних, либо в смеси с одним с оре Мли несколькими вспомогательньми ингредиентами, в капсульнье оболочки с последующим загерметизированием их обьічньім образом. Крахмальнье облатки аналогичньі капсулам, в которьїх активнье і) ингредиенть! вместе с любьїм вспомогательньм ингредиентом (ингредиентами) загерметизированьії в оболочку из рисовой бумаги. Комбинация соединения формульї (ІІ) и прогуанила может бьіть также сформована в виде диспергируемьх гранул, которье, например, могут бьть суспендировань в воде перед введением или оду зо насьшань на пищевой продукт. Грануль! могут бьіть упакованьі, например, в небольшой пакет. Препарати, пригоднье для перорального введения, в которьїх носитель представляем собой жидкость, могут бьть - представлень в виде раствора или суспензий в водкой или неводной жидкости или в виде жидкой змульсий ду типа масло в воде.

Препарать! для прорального введения могут представлять собой лекарственньіе формь! с контролируемьм о вьісвобождением активньїх ингредиентов (формь! пролонгированного действия), например, таблетки, в которьх «г активнье ингредиентьі готовят в подходящем контролирующим вьісвобождение матриксе, или активнье ингредиенть! покрьітьї пленкой, контролирующей вьіделение. Такие препарать! могут бьіть особенно пригоднь дня профилактического применения.

Активнье ингредиенть! могут бьіть также приготовленьі в виде раствора иди суспензии, пригодньїх для « 70 введения при помощи назогастрального зонда. в с Фармацевтические препаратьь душ ректального введения, в которьїх носитель твердьй, наийболее предпочтительно готовят в виде суппозиториев, содержащих лекарственное средство для одного введения. ;» Пригодньіми носителями являются какао-масло и другие материаль, обьічно применяемьсе для суппозиториев в фармации. Суппозитории могут бьіть приготовленьї смешиванием активной комбинации с размягченньім или расплавленньм носителем (носителями) с последующие охлаждением и формованием в шаблонах. ї5» Фармацевтическими препаратами, пригодньіми для парентерального введения являются стерильнье растворьї ила суспензии активной комбинации в водньїх или маслянистьїх носителях. Иньецируемьсе препарать о могут бьіть приспособленьї для иньекции ударной дозь! или для непрерьівного вливания. Такие препарать! для со удобства помещают в контейнерьі дог упаковок на один прием и для многократного приема, которье 5о Ггерметизируют после введения препарата и хранят до момента использования. Альтернативно, активнье о ингредиенть! могут бьїть в виде порошка, которьій находится в подходящем носителе, таком как стерильная с апирогенная вода, перед применением.

Комбинация атовакуона и прогуанила может бьіть приготовлена в виде депо-препарата пролонгированного действия, которьій можно вводить при помощи внутримьішечной иньекции или имплантации, например, в поДдкожной или внутримьішечной. Депо-препаратьі могут содержать, например, пригоднье полимернье или гидрофобнье материаль! или ионообменнье смольі. Такие препаратьї пролонгированного действия особенно (Ф, удобнь! для профилактического применения. ка Должно бьїть понятно, что кроме упомянутьїх вьіше компонентов-носителей, фармацевтические препарать! для различньїх путей введения, описанньїх вьіше, могут содержать в случае необходимости один или несколько бор Ддополнительньїх компонентов-носителей, таких как растворители, буферьі, вкусовье вещества, связьівающие вещества, поверхностно-активнье агентьі, загустители, смазьивающие вещества, консерванть! (в том числе антиоксиданть!) и т. п., и вещества, включаемье для того, чтобьі сделать препарат изотоничньм с кровью будущего реципиента.

Для применения в ветеринарии могут бьіть использованьї композиции для перорального, парентерального и 65 интрарубцового введения (через рубец).

Способьї получения атовакуона описаньі в ЕР123238 и один конкретньій способ иллюстрирован в примере 1.

Пример 1. 2-І(транс-4-(4-хлорфенил)циклогексил|-3-гидрокси-1,4-нафтохинон а) 4-(4-хлорфенил)циклогексан-1-карбоновая кислота

Ацетилхлорид (30г) и мелко растертьій в порошок хлорид алюминия (б0г) перемешивали вместе в дисульфиде серь (120ми) и затем охлаждали до - 50"С в бане с СО5/окситолом. Циклогексен (ЗОгГ), предварительно охлажденньй до - 50"С, добавляли по каплям в течение 10 минут, поддерживая температуру реакционной смеси ниже - 20"С. Смесь перемешивали при - 50"С еще 60 минут и затем растворитель декантировали, оставляя клейкий оранжевьй комплекс. Добавляли немного хлорбензола при нагреваний /о материала до температурьь окружающей средь; затем добавляли остаток хлорбензола (всего ЗООмл), полученньій таким образом раствор нагревали при 40"С в течение З часов при перемешивании, вьіливали в смесь льда и концентрированной соляной кислоть! и отделяли органический слой. Его промьівали 2МІ соляной кислотой, 2М гидроксидом натрия и водой, сушили над безводньім сульфатом натрия и вьіпаривали досуха.

Продукт перегоняли в вакууме, фракцию, кипящую при 140 - 15472 (01мм На) собирали, растворяли в равном обьеме петролейного зфира (40 - бОомл), охлаждали до 6"С и пробулькивали через раствор азот в виде непрерьівного потока, после чего извлекали отделенное бесцветное твердое вещество.

К раствору гидроксида натрия (6,2г) в воде (42мл) при 0"С добавляли бром (2,вмл). Полученньй, как описано више, замещенньй гексагидроацетофенон (3,1г) растворяли в диоксане (15мл) и затем добавляли холодньй раствор гипобромита, поддерживая реакционную смесь ниже 20"С. Реакционную смесь перемешивали при 2о температуре окружающей среда в течение 6 часов, затем оставляли стоять в течение ночи. Для разрушения избьтка гипобромита добавляли метабисульфит натрия, смесь охлаждали и затем подкисляли, получая бесцветное твердое вещество. Его отфильтровьівали, промьівали водой, сушили и перекристаллизовьввали из зтанола, получая 4-(4-хлорфенил)циклогексан-1-карбоновую кислоту, т. пл. 254 - 25676. в). 2-І(4-(4-хлорфенил)циклогексил|-3-хлор-1,4-нафтохинон сч

Смесь 2-хлор-1,4-нафтохинона (3,95г, 0,02моля), 4-(4-хлорфенил)циклогексан-1-карбоновой кислоть (4,9Гг, 0,02моля) и порошкообразного нитрата серебра (1,05г, О0,0062моля) нагревали с обратньмм холодильником при і) сальном перемешиваний в 4О0мл ацетонитрила. Раствор персульфата аммония (12,0г, 0,0525моля) в 50мл водь! добавляли каплями в течение 1 часа. Смесь нагревали с обратньім холодильником в течение З часов, затем охлаждали на льду в течение ЗО минут, после чего фильтровали и оставшееся липкое твердое вещество со зо Зкстрагировали дваждь! кипящим хлороформом для удаления неорганического материала. Хлороформ удаляли вьіпариванием, получая в остатке желто-коричневое твердое вещество (приблизительно 2,7г). Его растворяли в - 40мл кипящего ацетонитрила; небольшое количество нерастворимого материала удаляли фильтрованием. Ге!

После охлаждения названное в заголовке соединение отдаляли в виде желтьїх кристаллов (550мгГг), т. пл, 172 - 17576. ЯМР, ан (5 - ДМЗО) 8.05 (2Н, мультиплет, р-нафт.), 7,85 (2Н, мультиплет, о-нафт.), 7,30 (4Н, с,, РАН), Щео,

З,30 (1Н, шир. т., СН), 2,67 (1Н, шир. т., СН), 1,2 - 2,4 (ВН, мультиплет, 4 х СН»5). «І 2-І(4-(4-хлорфенил)циклогексил|-З-гидрокси-1,4-нафтохинон

Продукт стадии в) суспендировали в їОмл кипящего метанола и добавляли по каплям 0,55г гидроксида калия в 5,5мл водьі в течение 15 минут. Смесь кипятили с обратньмм холодильником, пока не образовался темно-красньй раствор (после приблизительно б часов), затем добавляли осторожно по каплям 2мл « Концентрированной соляной кислотьі. Смесь охлаждали и фильтровали и твердьй остаток промьвали 8 с тщательно водой. Воднье промьівки снова подкисляли и фильтровали. Обьединенньве твердне остатки (500мгГ), й т. пл. 200 - 2097С, перекристаллизовьівали из ацетонитрила, получая названньій в заголовке продукт в виде «» транс-изомера (ЗООмг), т. пл. 216 - 21976.

Пример 2

Следующие примерь! иллюстрируют обьічнье фармацевтические препарать, которне могут применяться в «їз» соответствий с данньім изобретением: о А. Покрьїтая пленкой таблетка

Те) Кор (центральная часть):

Соединение примера 1 5БО0Омг ве Гидрохлорид прогуанила 200мг (Че Микрокристаллическая целлюлоза (Амісе! РНІОЇ) 1ЗОмг

Гидроксипропил-целлюлоза, І О-5ив, І НПС, І НІ) /99мг

Натрий-гликолат крахмала (Ехріоїай) /ЗОмг

Повидан КЗО / Збмг

Стеарат магния Бмг

Ф) Масса в прессованном виде 1000мг ко Покриьїтие:

Дисперсия полимера (Гидроксипропилметилцеллюлоза и диоксид титана и полизтиленгликоль 400 и краситель) 20мг 6бо Глянцевание:

Полизтиленгликоль 800 2мМг

Общая масса 1022мг

В. Диспергируемая покрьтая пленкой таблетка

Ядро: б5 Соединение примера 1 50Омг

Гидрохлорид прогуанила 200мг

Микрокристаллическая целлюлоза (Амісе! РНІОЇ) 100мг

Гидроксипропилцеллюлоза, І О-5ив, (І НРС, І НІ) /8Змг

Натрий-гликолат крахмала (Ехріоїав) 4Омг

Повидав КЗО /20мг

Стеарат магния Бмг

Докузат натрия 1мг

Силикат магния-алюминия (Меедит ЕР) /5Омг

Натрия сахарин 1мг

Масса в прессованном виде 1000мг

Покрьтие:

Дисперсия полимера (Гидроксипропилметилцеллюлоза и диоксид титана и полизтиленгликоль 400 и краситель) 1Омг

Глянцевание:

Полизтиленгликоль 8000 2мМг

Общая масса 1012мг

Результать! биологического испьітания

Пример З

Сравнение взаймодействия лекарственньїх средств в комбинациях соединения примера 1 с другими противомалярийньми препаратами

Мсследования іп омйго очувствительности Кк лекарственньм средствам проводили при помощи полуавтоматизированного способа Оезіагаіїпз (Оевзіагаіїп еї а). Апііїта|ага! Адепіз апа Спетоїпегару 1979; 16 (6): 710 - 718). Противомалярийную активность в зтой системе оценивают по ингибированию вклинения радисактивно меченого гипоксантина в паразитах градационньіми концентрациями лекарственньх средств. Га

Противомалярийнье лекарственнье средства для испьтания растворяли в воде, 9595 зтанола или диметилсульфоксиде (ДМ5О); лекарственньй средства, растворенньсе в воде, разводили 1 : 1 9895 зтанолом, а о лекарственнье средства, раствореннье в 9595 зтаноле, разведали 1 : 1 водой. Затем растворь! разводили культуральной средой, содержащей 1095 сьіворотку человека, до исходньїх концентраций, превьішающих в 20 - 50 раз ІСво. Испиьітаннье лекарственньсе средства и их растворители перечисленьї ниже: ее) ч

Ф ю зв « « 2 с з : з сл

Ф т

ІЧ е)

Для исследования комбинаций лекарственньх средств их растворь в исходньїх концентрациях комбинировали в различньїх соотношениях (1:5,1:2,2: 1 и 5: 1). Затем растворьі лекарственньїх средств и комбинации вносили в 9б-луночньій микротитрационньій планшет, получая двойнье рядь! соединения примера о 1, лекарственного сродства, комбинируемого с ним и четьіре комбинации двух лекарственньїх средств.

Серийнье разведения 1 : З лекарственньїх средств средой бьли сделаньї для заполнения 9б-луночного ко микротитрационного планшета при помощи 12-канального пипеттора. Для оценки лекарственньїх средств, классифицируемьх как ингибиторьі редуктазьь дигидрофолиевой кислотьь (ДНЕК), применяли бо модифицированную культуральную среду, содержащую только физиологические концентрации фолиевой кислотьі и РАВА.

Остальнье биологические процедурьі проводили согласно способу ЮОевіагайв, за исключением того, что использовали три штамма Р. Таісірашт (устойчивьій к множеству лекарственньїх средств МУ-2 клон, чувствительньій к лекарствам, но устойчивьій к мефлохину Д)-6 клон и С2В изолят, устойчивьій к соединению 65 примера 1), и инкубацию удлиняли до 72 часов.

Отдельнье ІСсо рассчитьвали при помощи программь! "МІМБО" из Місгтота(й Зсіепійійс Зоїмаге. Каждая серия парньїх данньїх хорошо соответствовала функции гиперболического тангенса, примененной Оевзіагаїпв.

ІСвко нормализовали путам принятия за 1 величиньй ІС со для соединения примера 1 и для других находящихся в комбинациях лекарственньїх средств с пропорциональньми нормализованньіми величинами для Ккаждого соотношения из двух лекарственньїх средств. Путем подставления зтих данньх в уравнение, представленное ниже, бьіла построена изоболограмма.

ХІІ -ЇжКихонещіІ-10))3 , где: У, - ІСвко для соединения примера 1 при комбинирований его с другим лекарственньім средством; то Х, - ІСво для другого лекарственного средства при комбинирований его с соединением примера 1;

І « параметр взаймодействия, свидетельствующий о степени обратимости.

Величинь! | рассчитьвали для каждой комбинации. Положительнье величинь! | свидетельствовали о синергической комбинации, отрицательньсе величинь! | свидетельствовали об антагонизме и І - 0 указьівали на аддитивное взаймодействие. т5 Результать! представлень в таблице 1.

Лекарственное сродство, комбинированноеє с соевединением примера п жд ов 2 пн У НЕ ННЯ НОЯ охороні яв лю пн не кс НОЯ паю вв см 2 01 отвоуовяяюют 00 солі о маля 1 рлююаю 1301 11110101 Ципрофлокаци! 121111 со зо пяютмн ов олв, 1 теме 1071 овв -

Ф ву маму ю зв 100 ваитоввтгоомо 000 - 0 жвю бю нини шин дян сою 11111111 клопидоп аавіоюв от ч - с Зти результать! показьівают, что комбинации 2-І4--4-хлорфенил)циклогексил|-3З-гидрокси-1,4-нафтохинона и прогуанила обнаружили найболее стойкое потенциирование по осравнению с другими испьтанньіми з комбинациями лекарственньїх средств, в частности по отношению к устойчивому к гидроксинафтохинону штамму С2В.

Оптимальное соотношение комбинации с прогуанилом определяли для каждого из трех штаммов ї» малярийного паразита путем определения отношения ІС во прогуанила к ІСвко соединения формульї! (І). Зти результать! представлень в таблице 2 ниже. 1 о

Прогуанил: соединение формуль! Фу оом2| до сві со рат

Пример 4

Сравнение активностей против Тохоріазта іп мімо соединения примера 1, прогуанила и их комбинаций 59 Активности соединений и комбинаций испьітьшали в мьішиной модели Т. допаїйї, используя увеличение

ГФ) времени до смерти и процент вьіживания мьішей как мерь! активности лекарственного средства. т Группь!ї 10, 20г СВА/СА мьішей инфицировали перорально путем введения через желудочньй зонд бцист штамма Свв Т. допаїй, и лечение лекарственньім средством начинали спустя З дня и продолжали в точение 10 дней. Все лекарственнье средства вводили перорально при помощи желудочного зонда. Исследовали бо следующие группь!:

Контроли

Атовакуон Ф 1Омг/кг

Атовакуон Ф 25Ммг/кг бо Прогуанил (Ф 25Ммг/кг

Атовакуон (Ф. 1Омг/кг - Прогуанил (Ф 25мг/кг

Атовакуон (Ф 25мг/кг - Прогуанил (Ф 25 мг/кг

Всех животньїх обследовали дваждьї! в день в течение 30 дней и все смерти регистрировали.

Зти результать! представлень в таблицах Зи 4.

Прогуанил (мою)! 00000000 Атовакусн. 7 | о томикг обои оо соло и

Бе вд ге і

Прогуанил (мок) 00000000 Атовакуон,

С оромпєремок олово ол оо, 2 Б ос! оо во

Среднее время до смерти контрольньїх мьішей бьіло равно 14 дням и вьїжило только одно животное (1090). (Зто животное, возможно, не бьіло инфицировано вследствие низкого количества инокулята). Один атовакуон увеличил время до смерти до 20,1 дней при 1Омг/кг и до 24,1 дней при 25мг/кг, в обоих случаях с одним с 29 Вьіжившим животньм (1095). Прогуанил, вопреки его превосходной надежности (безопасности) для человека, о является токсичньім для мьішей. При 25мг/кг прогуанил обнаруживает признаки токсичности, снижая среднее время до смерти до 9 дней, без вбіживших животньїх. Комбинация 25мг/кг атовкуона и 25мг/кг прогуанила дала увеличенное время до смерти, несмотря на токсичность прогуанила, и 8095 мьішей вьїжили по сравнению с минимальньм вьіживанием 1095 мьішей, которьім давали один атовакуон. со

Пример 5 «

Сравнение активностей против Тохоріазта іп міго соединений примера 1, прогуанила и их комбинаций

Мсследования чувствительности Кк лекарственньм средствам іп міо проводили при помощи (22) полуавтоматического способа, основанного на способе, примененном для малярии (Оевіагаів5 еї аї., ю

Апіійтісгоріаї Адепіз апа СПетоїйпегару 1979 16 (6) 710 - 718) но с применением избирательного вклинения З|НІ-урацила Т. допаїйї. Активность против Тохоріазта в зтой системе оценивали по ингибированию - поглощения радисактивно меченого урацила в паразитов градационньми концентрациями лекарственньх средств.

Лекарственнье средства растворяли в ДМ5О и разведения готовили при помощи культуральной средь, « содержащей 395 сьіворотку плода теленка. Для исследования комбинаций лекарственньїх средств растворь! их при исходньхх концентрациях комбинировали в различньх соотношениях: 1 : 1, 1 : 3, З : 1. Серийнье разведения но) с 1:2 растворов лекарственньїх средств и комбинаций готовили и использовали в парньїх лунках 9б-луночного з» планшета, засеянного предварительно клетками Неіл и штамма КН Т. допаїї . Лекарственнье средства добавляли через 2 часа после добавления паразита и планшет инкубировали при 377"С в течение 24 часов, после чего добавляли ЗІНІ-урацил и инкубирование продолжали еще 8 часов. Анализ завершали удалением ї» 75 супернатантной жидкости, разрушением содержащих Т. допаїйї клеток в додецилсульфате натрия и осаждением меченьїх белков при помощи ТХУ на фильтровальньх подложках. Включение метки измеряли в Веїа ріай(е 1 сцинтилляционном счетчике. Процент ингибирования включения урацила рассчитьівали для зтих соединений и комбинаций и ІСво рассчитьівали при помощи программь 51. ІСвко нормализовали путем принятия за І ІСсо для ї-о соединения примера 1 и прогуанила с нормализованньми величинами для каждого отношения двух т» 50 исследуемьїх лекарственньіїх средств. ЙИзоболограмму строили нанесением на график зтих нормализованньх

ІСво друг против друга. Потенциирование бьло в том случає, когда зти величиньї находились ниже линий со изоболограммь), величиньї на линии свидетельствовали об аддитивном действий и величинь! вьіше линии свидетельствовали об антагонизме.

Планшеть применяли в трех повторностях и для построения изоболограммь! использовали все величинь. 59 Зти результать! представлень в таблице 5. о з Нормализовання сю 00 Петотцийрованив 0 ваюнпродат 69 0 олввва своя да 11оигезві ов! //77да 7 озавозв ов да

С олзовві ов да б5 0,233333| 0,118182 Да

С ожоюввв одввя! дв) ово отв; да 1 отмавом осві ла ня

Зти результать! показьівают, что комбинации атовакуона и прогуанила проявляют потенциирование іп міго против Т. допаїї.

Пример 6

Сравнение активностей против Рпештосузіїв іп мімо соединения примера 1, прогуанила и их комбинаций 70 Активности зтих соединений и их комбинаций испьітьшали в модели зсідтоцзе тоцизе Рпешйтосузіїв пневмонии.

Уровень инфекции мьішей в каждой группе измеряли при помощи стандартньїх легочньїх мазков-отпечатков и иммунофлуоресцентньх тестов. Бьіл принят счет баллов для каждой мьіши, в котором 0 - нет инфекции и я 4 - очень тяжелая инфекция. Результать! представлень в таблице 6. й

Обработка Число инфицир./число испьітан. Средний балл - ЗЕ |95 от контроля орі, 00 епролеівоврювую оо 370710, злом 000 00101111 Мауонвомпровдньо 0 550,00, звотолву 65 00 овадоновміюровдено 0.1, 7,2.0710 0 злотомувя 00 Проувниловміюровденно 0.0, 2,8.0/10 зятя вв дено тон о вит еден 21000510 ото дтоваюонипрозанил о обмотро дей 01440879) гато 85 о

Атовакуон один давал уменьшение в балле инфекции. Прогуанил один при 25мг/кг в день бьіл незффективен в профилактике РСР у мьішей (зсід тоизе). Прогуанил в комбинации с атовакуоном обнаруживал синергию.

Claims (15)

Формула винаходу со «

1. Способ лечения и/или профилактики протозойной паразитарной инфекции или инфекции, вьізьіваемой Ф

Р.сагіпі у млекопитающих, отличающийся тем, что включаєт введение прогуанила и 2-І(4-(4-хлорфенил)циклогексил|-З-гидрокси-1,4-нафтохинона в соотношений от 1:1 до 1:3. о

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что соотношение прогуанила :ч 2-І4-(4-хлорфенил)циклогексил|-3-гидрокси-1,4-нафтохинона представляет собой 2:5.

3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что протозойная паразитарная инфекция представляет собой малярию.

4. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что протозойная паразитарная инфекция представляет собой « токсоплазмоз. шщ с 5.

Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что он предназначен для лечения и/или профилактики й инфекции, вьізьіваемой Р.сагіпії. и? б.

Способ по любому из пп. 1-5, отличающийся тем, что 2-І(4-(4-хлорфенил)циклогексил|-З-гидрокси-1,4-нафтохинон находится в форме транс-изомера или смеси цис- и транс-изомеров, в которой преобладаєт транс-изомер. «їз»

7. Комбинация 2-І4-(4-хлорфенил)циклогексил/|-3-гидрокси-1,4-нафтохинона и прогуанила, отличающаяся тем, что соотношение прогуанила : 2-І4-(4-хлорфенил)циклогексил|-З-гидрокси-1,4-нафтохинона находится в іні интервале 1:1-1:3. Те)

8. Комбинация по п. 7, отличающаяся тем, что соотношение прогуанила : 2-І4-(4-хлорфенил)циклогексил|-3-гидрокси-1,4-нафтохинона представляет собой 2:5. те

9. Комбинация по п. 7 или 8, отличающаяся тем, что со 2-І(4-(4-хлорфенил)циклогексил|-З-гидрокси-1,4-нафтохинон находится в форме транс-изомера или смеси цис- и транс-изомеров, в которой преобладает транс-изомер.

10. Комбинация по любому из пп. 7-9, отличающаяся тем, что предназначена для лечения и/или профилактики протозойной паразитарной инфекции или инфекции, вьізьіваемой Р.сагіпії, у млекопитающих.

11. Комбинация по п. 10, отличающаяся тем, что атовакуон и прогуанил находятся в форме для совместного іФ) введения. ко

12. Комбинация по п. 10, отличающаяся тем, что атовакуон и прогуанил находятся в форме для последовательного применения. во

13. Комбинация по любому из пп. 7-9 в форме фармацевтической композиции, отличающаяся тем, что находится вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемьми носителями.

14. Комбинация по п. 13, отличающаяся тем, что находится в виде стандартной дозьії, содержащей от 50 мг до З г каждого из 2-І4-(4-хлорфенил)циклогексил|-З-гидрокси-1,4-нафтохинона и прогуанила.

15. Комбинация по п. 13, отличающаяся тем, что находится в виде стандартной дозьі содержащей 500 мг бвб 0/2-ЇД-(4-хлорфенил)циклогексил)З-гидрокси-1,4-нафтохинона и 200 мг прогуанила.

Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2002, М 5, 15.05.2002. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України.

с о с

« (22) ІС) « ші с ;»

щ» 1 се) їз 50 ІЧ е)

Ф) іме) 60 б5