UA80692C2 - Nutrient pharmaceutical formulation comprising polyphenols and use in treatment of cancer and inflammatory diseases - Google Patents

Description

Опис винаходу

Дана заявка заявляє пріоритет 35 ).5.С. 5 119 (є) США попередньої заявки серійний Мо 60/348,143 поданої 911 січня 2002, зміст якої повністю тут включений.

Представлений винахід стосується харчової фармацевтичної рецептури і її використання при лікуванні раку.

Більш специфічно, представлений винахід стосується поліфенолу, що містить фармацевтичні рецептури, які мають ефективну кількість поліфенолів при лікуванні раку. Рецептура представленого винаходу використовується як агент для попередження та лікування раку, включаючи аскорбінову кислоту, лізин, пролін і 70 принаймні одну поліфенольну сполуку вибрану із групи, що складається з галату епігалокатехіну, галату епікатехіну, епігалокатехіну, епікатехіну і катехіну.

Рак є однією з провідних причин смерті в індустріальному світі. Не існує специфічного каузального лікування раку і смертність від раку є однією з найвищих серед усіх захворювань. Лікування, що найбільш широко використовується - хіміотерапія і променева терапія, не розрізняє здорову тканину і рак і пов'язана із 12 серйозними побічними ефектами. Таким чином, існує потреба у вибірковому лікуванні раку.

Один із ключових механізмів що використовується раковими клітинами для розповсюдження і метастазування в організмі призводить до ферментативної деструкції навколишньої з'єднувальної тканини.

Терапевтичні підходи до контролю цього процесу за допомогою специфічних ліків не були успішними і в даний час не існує ніяких засобів, здатних контролювати метастаз раку. Поточні протоколи лікування хіміотерапією і променевою терапією сфокусовані на руйнування ракової клітини в організмі і вони не спрямовані на метастаз.

Крім того, ці лікування токсичні, не специфічні і пов'язані з серйозними побічними ефектами. Хіміотерапія і променева терапія несуть ризик розвитку нових ракових утворень і через деструкцію ними з'єднувальної тканини в організмі можуть сприяти інвазії раку.

Для росту і розповсюдження до інших частин організму, ракові клітини руйнують екстрацелюлярний матрикс с через різноманітні матричні металопротеїнази (ММР»5) і плазмін, активності яких були скорельовані з Ге) агресивністю росту пухлини. Рат і Паулінг (1992) -припустили, що харчові добавки, такі як амінокислота, лізин та аскорбінова кислота можуть діяти як природні інгібітори протеолізу екстрацелюлярного матриксу і по суті мають потенціал для модулювання росту і розповсюдження пухлини. Ці харчові добавки можуть здійснювати їх протипухлинну дію через декілька механізмів, серед них інгібування ММР: і укріплення з'єднувальної тканини сч навколо ракових клітин (ефект "капсулювання" пухлини). Ге»! (Патент США Мо 5,962, 517| розкриває фармацевтичну композицію для різноманітних медичних показань (лікування акне). Розкрита композиція містить компонент пригнічення акне, принаймні, один з коріння реп'яха ее, великого, коріння щавлю жовтого, або композицію основану на катехіні; і відновлюючий клітини шкіри компонент, Га») що містить перехідний метал. Розкрита композиція не показує, що має якесь цінне значення для попередження уабо лікування раку. со

ІРСТ УМО 00/764921 розкриває харчову рецептуру для лікування захворювання, яка містить сполуку катехіну.

Однак, було показано, що біозасвоювання сполук катехіну є низьким |Снеп І, І ее М. 9., Мапа С. 5. Огид Мегаб.

Оівровз. 25: 1045-1050 (1997); Мапд С 5., Спеп І, ее М. у., ВаІепіпе О. А., Ко М. С, Зспапі: 5. Сапсег «

Ерідетої. Віотагк. Ргем. 7: 351-35 (1998); Вей У. К., ЮОопомап 9. Її, МУопд К., УУаїекнтоцвзе Н., Сегтап .). В., З

Муагет В. Ї, Кавіт К. Ат. 9. Сііп. Миїг. 71: 103-108 (2000); Зпету Спож Н. Н., Саї У., АЇІрегів О. 5., НаКіт с І, бот К., Зпапі Р., СтОмеїІ У. А., Мапд 5. С, Нага Н. Сапсег Ерідетої. Віотагк. Ргем. 10: 53-58 (2001)) і

Із» РСТ УМО 00/764921 не приводять до розкриття засобів для підвищення біозасвоювання, як вимагається при лікуванні і/або попередженні раку.

Оетешце і інші розкриває, що катехіни зеленого чаю, можуть мати інгібувапьні впливи на матриксну металопротеїназу. Не існує ніякої пропозиції або вчення щодо того, як використовувати катехіни при лікуванні бо і або попередженні раку. З огляду на факт, що біозасвоювання поліфенолів людьми є надзвичайно низьким, ав | низька концентрація катехінів в тканині значно зменшує терапевтичне значення поліфенолів, включаючи галат егігалокатехіну (ЕССО). Існує постійна необхідність в знаходженні кращої харчової фармацевтичної композиції, б яка містить поліфеноли, що є ефективним при лікуванні пухлинних захворювань і інших захворювань, включаючи

Те) 20 запальні захворювання.

Існує потреба в безпечних й ефективних природних підходах, що можуть бути використані для контролю о процесу розповсюдження раку в організмі. Існує також потреба в превентивному заході проти розвинення ракових утворень або доброякісних пухлин у людини і такий засіб міг би застосовуватися до пацієнтів без ризику побічних впливів, пов'язаних з лікуванням. Харчові фармацевтичні композиції стали широко 29 застосовуватися, так як кількість випадків раку в останній час збільшилась. Потреба в такій композиції буде

ГФ) тривати і ймовірно збільшиться. юю В одному об'єкті, представлений винахід забезпечує харчову фармацевтичну композицію, корисну для лікування раку, що включає: а) аскорбінову сполуку; б) сполуку І-лізину; в) сполуку І-проліну; і г принаймні, одну поліфенольну сполуку, вибрану з групи, що складається з галату епігалокатехіну, галату 60 епікатехіну, епігалокатехіну, епікатехіну | катехіну. Сполуки а-в) розширюють дію поліфенольної сполуки в блокуванні проліферації та метастазу раку.

Переважно, аскорбінову сполуку вибирають з групи, що складається з аскорбінової кислоти, фармацевтично прийнятних аскорбатів, естерів аскорбатів і/або їх суміші. Переважно, фармацевтично прийнятним аскорбатом є аскорбат кальцію або аскорбат магнію. Більш переважно, естером аскорбату є аскорбілпальмітат. Переважно, бо сполуку лізину вибирають з групи, що складається з фармацевтично прийнятних солей гідрохлориду лізину і лізину. Переважно, сполуку проліну вибирають з групи, що складається з фармацевтично прийнятних солей гідрохлориду проліну і проліну.

В іншому об'єкті, представлена харчова фармацевтична композиція додатково містить мікроелемент, що вибирають з групи, що складається з селену, міді, марганцю, кальцію і магнію.

В іншому об'єкті, представлена харчова фармацевтична композиція додатково містить амінокислоту.

Переважно, амінокислотою є аргінін. Більш переважно, харчова фармацевтична композиція додатково містить

М-ацетилцистеїн.

В іншому об'єкті, представлений винахід забезпечує харчову фармацевтичну композицію, корисну при /о лікуванні раку, що включає: а) аскорбінову сполуку; б) сполуку І-лізину; в) сполуку І-проліну; г)

М-ацетилцистеїн; і д) принаймні, одну поліфенольну сполуку, що вибирають з групи, що складається з галату епігалокатехіну, галату епікатехіну, епігалокатехіну, епікатехіну і катехіну, а-г) Сполуки розширюють дію поліфенольної сполуки в блокуванні проліферації та метастазу раку.

В іншому об'єкті, представлений винахід забезпечує харчову фармацевтичну композицію, що містить 250мг аскорбінової кислоти, 250мг аскорбату кальцію, 250мг аскорбату магнію, 25О0мг аскорбілпальмітату, 1,000мг поліфенолів, 200мг М-ацетилцистеїну, 1,000мг лізину, 75О0мг проліну, 50Омг аргініну, ЗОмкг селену, 2мг міді і 1мг марганцю.

В іншому об'єкті, представлений винахід забезпечує харчову фармацевтичну композицію, що містить 25мМг аскорбінової кислоти, 25мг аскорбату кальцію, 25мг аскорбату магнію, 25мг аскорбілпальмітату, 200мг 2о поліфенолів, ТОмг М-ацетилцистеїну, 50мг лізину, 25мг проліну, 50мг аргініну, їмкг селену, 20мкг міді ї 5Омкг марганцю.

В іншому об'єкті, представлений винахід забезпечує харчову фармацевтичну композицію, що містить 5,000мг аскорбінової кислоти, 5,000мг аскорбату кальцію, 5,000мг аскорбату магнію, 5,00О0мг аскорбілпальмітату, 5,00О0мг поліфенолів, 1,500мг М-ацетилцистеїну, 5,000мг лізину, З,00Омг проліну, З,00Омг аргініну, 20Омкг сч ов селену, Змг міді і 1Омг марганцю.

В іншому об'єкті, представлений винахід забезпечує харчову фармацевтичну композицію, що містить 250мг і) аскорбінової кислоти, 250мг аскорбату кальцію, 250мг аскорбату магнію, 25О0мг аскорбілпальмітату, 1,000мг поліфенолів, 200мг М-ацетилцистеїну, 1,000мг лізину, 75Омг проліну, 50Омг аргініну, ТООмкг селену, 2мг міді, 1мг марганцю, 50Омг кальцію і 40Омг магнію. с зо В іншому об'єкті, представлений винахід забезпечує харчову фармацевтичну композицію, що містить 250мг аскорбінової кислоти, 250мг аскорбату кальцію, 250мг аскорбату магнію, 25О0мг аскорбілпальмітату, 1,000мг Ме поліфенолів, 200мг М-ацетилцистеїну, 1,000мг лізину, 750мг проліну, 500мг аргініну, Т0Омкг селену, 2мг міді, «о 1мг марганцю, 50Омг кальцію, 400 магнію і 200 біофлавоноїдів цитрусових.

Ще в одному об'єкті, представлений винахід забезпечує харчову фармацевтичну композицію, корисну при о лікуванні раку, що містить: І-лізин, І-пролін, І-аргінін, аскорбінову кислоту, кальцій, магній, поліфеноли, со

М-ацетилцистеїн, селен, мідь і марганець.

В іншому об'єкті, представлений винахід забезпечує харчову фармацевтичну композицію, що містить 1,000мг

Ї-лізину, 75Омг І-проліну, 50Омг І -аргініну, 71О0мг аскорбінової кислоти, 22мг кальцію, 5Омг магнію, 1,00О0мг поліфенолів, 200мг М-ацетилцистеїну, ЗОмкг селену, 2мг міді і їмг марганцю. «

В іншому об'єкті, представлений винахід забезпечує спосіб лікування раку у індивідуума, включає етап з с призначення індивідуумові харчових фармацевтичних композицій як описано. Переважно, рак вибирають з групи, що включає меланому, рак молочної залози, рак товстого кишечнику, рак легень і рак мозку. ;» В іншому об'єкті представлений винахід забезпечує спосіб лікування запального захворювання у індивідуума, що включає етап призначення індивідуумові харчової фармацевтичної композиції як описано.

Переважно, запальним захворюванням є остеоартрит.

Го! Короткий опис малюнків

Фіг.1 зображує інгібувальні впливи поліфенолів, аскорбату, проліну і лізину на міграційне -поводження о ракових клітин молочної залози людини.

Ге» Фіг2 зображує інгібувальні впливи поліфенолів, аскорбату, проліну і лізину на міграційне поводження ракових клітин товстого кишечнику людини. ік Фіг.З3 зображує інгібувальні впливи поліфенолів, аскорбату, проліну і лізину на міграційне поводження

Із клітин меланоми людини.

Фіг.А4 зображує інгібувальні впливи поліфенолу, аскорбату, проліну і лізину на апоптоз клітин меланоми людини.

Фіг.5 зображує інгібувальні впливи аскорбінової кислоти, проліну, лізину і різних кількостей ЕССО на клітинну проліферацію меланоми людини (А 2058).

Ф) Фіг.6 зображує інгібувальні впливи ЕССО на проліферацію ракових клітин молочної залози людини (МОА-МВ ка 231).

Фіг.7 зображує впливи додавання до основного середовища аскорбінової кислоти, проліну, лізину і різних во кількостей ЕССО на проліферацію ракових клітин молочної залози людини (МОА-МВ 231).

Фіг.8 зображує впливи додавання до основного середовища аскорбінової кислоти, проліну, лізину і різних кількостей ЕССО на проліферацію ракових клітин товстого кишечнику людини (НСТ116).

Фіг.9 зображує впливи додавання до основного середовища аскорбінової кислоти, проліну, лізину і різних кількостей ЕССО на експресію матриксних металопротеїназ (ММР) у клітинах меланоми людини. 65 Фіг.10 зображує впливи додавання до основного середовища аскорбінової кислоти, проліну, лізину і різних кількостей ЕССО на інвазію Матригелю раковими клітинами молочної залози людини (МОА-МВ 231).

Фіг.11 зображує впливи додавання до основного середовища аскорбінової кислоти, проліну, лізину і різних кількостей ЕССО на інвазію Матригелю раковими клітинами товстого кишечнику людини (НТ 116).

Фіг.12 зображує впливи додавання до основного середовища аскорбінової кислоти, проліну, лізину і різних кількостей ЕОСО на зменшення кількості клітин, що піддалися інвазії, на клітинах меланоми людини (А 2058).

Як використовується тут, "лізин" використовується взаємозамінно з І-лізином, "пролін" використовується взаємозамінно з І-проліном, "аргінін' використовується взаємозамінно з "І -аргініном"; "вітамін С" використовується взаємозамінно з аскорбіновою кислотою і може включати аскорбати або естери аскорбатів. "ММР з" відноситься до матриксних металопротеїназ; наприклад, ММР-1, ММР-2, ММР-3, ММР-4, ММР-5, ММР-6, 70 ММР-7, ММР-8, ММР-8, ММР-9, ММР-10, ММР-11 і т.д. "ЕбСО" відноситься до (-) -епігалокатехін-3-галату, що є головною поліфенольною складовою, що присутня у зеленому чаї. "МНОЕ" відноситься до нормального дермального фібробласту людини, включаючи хондроцити людини та стромальні клітини людини.

Представлений винахід забезпечує харчову фармацевтичну композицію, аскорбінову кислоту, лізин, пролін і, принаймні, одну поліфенольну сполуку. Переважно, сполуку аскорбату вибирають з групи, що складається з аскорбінової кислоти, аскорбату та естерів аскорбатів. Переважно, лізин є гідрохлоридом лізину або фармацевтично прийнятними солями лізину. Переважно, пролін є гідрохлоридом проліну або його фармацевтично прийнятними солями.

Поліфенольні сполуки є екстрактами зеленого чаю. Вони також відомі як катехіни. Поліфеноли присутні в зеленому чаї і були запропоновані для забезпечення захисту проти широкого спектра захворювань, включаючи 2о рак (Микпїаг Н., Аптей М. Ат. У. Сп. Ми. 71: 16985-17025 (2000)). Пероральний прийом зеленого чаю підсилив ефекти доксорубіцину при інгібуванні розвинення пухлини у мишей. Потенційна протиракова активність катехінів може -стосуватися їх впливів на декілька факторів, залучених у проліферацію ракових клітин і їх метастаз. Катехіни, як відомо, викликають зупинення клітинного циклу у людських клітинах карциноми (Аптаа М.,

Реуез 0. К., Міетіпеп А. Її, Адапгма! К., Микнїаг Н. У. Май. Сапсег Іпві. 89: 1881-1886 (1997)). Для захисту сч

Від запалення і цитокинів, викликаних пухлинами також залучається поліфенольна фракція зеленого чаю.

Поліфенольні сполуки представлені як ЗО сухої маси у зеленому чаї. Вони включають флаваноли, і) флавандіоли, флавоноїди та фенольні кислоти. Флаваноли є найбільш переважними серед поліфенолів у зеленому чаї і зазвичай відомі як катехіни. Існує чотири головних катехіни в зеленому чаї: 1) (-) -епікатехін, 2) (-) епікатехін-З-гапат, З) (-) епігапокатехін і 4) (-) -епігалокатехін-З-галат (ЕБ5Сб). су зо Серед катехінв ЕбсСоб є основною поліфенольною складовою у зеленому чаї. ЕОСоО є сильною антиоксидантною сполукою і може придавати зеленому чаю властивості протиракової дії. Було описано, що Ме сполуки катехіну здійснювали свою протиметастатичну дію через попередження процесу ангіогенезу тканинІСао (о

М. Сао МК. Маїште 398: 381 (1999). Також було показано, що ЕСсСо противодіє дії урокінази (активатор ц-плазміногену) МапКип 3)., Зеітап 5. Н., Зуіегс» К., ЗКггурсгак 9. Е. Майте: 387-567 (1997)), одного з о ферментів, що найчастіше експресуються у клітинах раку у людини. ЕЗСО є переважною поліфенольною со сполукою.

Переважно, поліфенольну сполуку вибирають з групи, що складається з палату епігалокатехіну, галату епікатехіну, епігалокатехіну, епікатехіну, катехіну і інших фармацевтично прийнятних солей поліфенолу і/або їх сумішей. «

Однією з основних терапевтичних цілей даної патентної заявки є попередження перетравлення з с екстрацелюлярного матриксу і його відновлення. Аскорбінова кислота або її сіль (тобто, аскорбат) необхідна для синтезу колагену, еластину й інших ключових молекул екстрацелюлярного матриксу. ;» Для підсилення протиракової дії поліфенольних сполук, переважним чином, використовується комбінація аскорбінової кислоти, проліну і лізину. Більш переважно, комбінація підсилює поліфенольні сполуки, що

Включають галат епігалокатехіну, галат епікатехіну, епігалокатехін, епікатехін, катехін таким чином, що

Го! поліфенольна сполука є ефективною при зменшенні інвазії ракових клітин або повного блокування інвазії.

Без зв'язку з будь-якою теорією, представлена харчова фармацевтична рецептура містить суміш о компонентів, що включають поліфеноли і виявлено, що суміш ефективно функціонує при блокуванні

Ге» проліферації і процесів метастазу. Виявлено, що представлена харчова рецептура композиції значно зменшує

Інвазію ракових клітин або повністю блокує метастаз ракових клітин. Таким чином, дана композиція ефективно і, попереджує поширення цих ракових клітин. Терапевтичне використання заявленої сполуки є ефективним,

Ге селективним і безпечним лікуванням раку молочної залози, товстого кишечнику й інших органів. Переважно, розкрита харчова фармацевтична композиція може містити два з компонентів, що ковалентно зв'язані.

Переважно, ефективність харчової композиції підсилюється включенням сполук, відомих цінною дією на ріст і ов інвазію раку й інших пухлин, включаючи І -аргінін і/або аргінінвмісні сполуки. Більш переважно, використовується М-ацетилцистеїн. Більш переважно, використовуються сіль селену, сіль міді і сіль марганцю,

Ф) що є ефективними при попередженні і лікуванні раку та інших пухлин. Дана композиція може також включати ка одну або більшу кількість сполук, необхідних як кофермент у циклі Кребса, дихальному ланцюгу, або для інших метаболічних функцій клітин у кількості, що ефективна для попередження і лікування раку та інших пухлин. во Представлена харчова фармацевтична композиція може призначатися пацієнтові у формі капсул, таблеток, порошків, пілюль, ін'єкцій, вливань, інгаляцій, супозиторіїв або інших фармацевтично прийнятних носіїв і/або засобів доставки для попередження й лікування раку й інших пухлин. Переважно, харчова фармацевтична композиція призначається у вигляді капсул, таблеток або порошків. Більш переважно, вона призначається у вигляді капсул. 65 Представлена харчова фармацевтична композиція може використовуватися для попередження і лікування раку та інших пухлин у конкретного пацієнта, в якого пухлина або рак знаходиться в молочній залозі, яєчниках,

шийці матки або інших органах репродуктивної системи, легенях, печінці, шкірі, шлунково-кишковій системі, мозку, кістках або інших органах організму. Переважно, композиція використовується при раку легень і раку мозку.

Представлена харчова фармацевтична композиція може також використовуватися для попередження і лікування інфекційних захворювань, атеросклерозу, рестенозу, інших серцево-судинних захворювань та запальних захворювань. Переважно, запальним захворюванням є остеоартрит.

Активація Плазміну Опосередкована ММР: Припускається, що на ММР:» активність можна впливати лізином за допомогою плазмін-опосередкованих механізмів, хоча не виключаються інші механізми. ММР» виділяються як 7/0 проферменти і їх активація опосередковується частково за допомогою плазміну і її завершення вимагає активної форми ММР-3. Механізм активації різноманітних ММР», детально описаний |Мадазе (1997)| вказує, що ММР-З3 також вимагає перетворення плазміногену на його активну форму, плазмін. Плазміногеновий активний зв'язувальний центр має сайти, в яких специфічно приєднується лізин. Тому лізин може перешкоджати активації плазміногену в плазмін за допомогою активатора плазміногену |Рат і Паулінг, 1992| шляхом приєднання до /5 активних сайтів плазміногену. Транекзамова кислота, синтетичний аналог лізину використовувалася для інгібування протеолізу, викликаного плазміном через цей механізм.

Так як активність плазміну є необхідною для стимуляції деяких ММР» тканини, лізин може перешкоджати перетворенню плазміногену на плазмін і таким чином він може інгібувати активацію майже всіх ММР». Крім того,

ЕССО може здійснювати інгібувальний вплив на деградацію екстрацелюлярного матриксу через інгібування ММР-2.

Ракова Інвазія і Роль Матриксу: Можливо також пригнічувати інвазію ракових клітин матриксу, збільшуючи стійкість і міцність з'єднувальної тканини навколо ракових клітин і сприяючи "капсулюванню" пухлини. Це вимагає оптимізації синтезу і структури колагенових фибрилів, для яких є суттєвим гідроксилювання гідроксипроліну і залишків гідроксилізину у волокнах колагену. Аскорбінова кислота може бути необхідною для сч ов Підроксилювання цих амінокислот. Аскорбінова кислота і І-лізин, як правило, в людському організмі не виробляються; тому, субоптимальний рівень цих харчових добавок є можливим на різних патологічних стадіях, і) також як і через незбалансовані дієти. Хоча пролін може одержуватися з аргініну, на його одержання й або гідроксилювання можна впливати при патологічних станах. Також показано, що вміст гідроксипроліну метастатичної тканини пухлини є набагато нижчим ніж неметастатичної тканини пухлини |Спибваїп:Каїа і інші, с зо 1989). Широкий спектр ліків, що зменшують метастаз також підвищують вміст гідроксипроліну тканин

ІСпибіпеКаїа і інші, 1989). Було виявлено, що вміст гідроксипроліну в сечовині пацієнтів хворих на рак буде Ме вище, ніж у здорових людей або пацієнтів не хворих на рак (ОКазгакі і інші, 1992). Всі ці результати показують Ге несприятливі впливи ракових клітин на метаболізм проліну Її можливо обумовлює дефіцит проліну у пацієнтів хворих на рак. о

Пацієнти хворі на рак можуть мати недостатні рівні аскорбінової кислоти. Аскорбінова кислота може бути со цитотоксичною до лінії злоякісних клітин і виявляє протиметастатичну дію. Представлений винахід розкриває, що комбінація аскорбінової кислоти, проліну, лізину і, принаймні, однієї поліфенольної сполуки сприяє сильному протипроліферативному і протиметастатичному впливу на лінії ракових клітин. Переважно, що представлена харчова фармацевтична рецептура є ефективною проти меланоми, раку молочної залози і ракових клітин « товстого кишечнику. Найбільше переважно, що представлена фармацевтична рецептура є ефективною проти 7-3 с ракових клітин товстого кишечнику людини.

Поліфенольні сполуки (Катехіни); ЕССО представляє один з катехінів у екстракті зеленого чаю і може мати ;» інгібувальні впливи на ріст ракових клітин у людини. Точний основний механізм є неясним. Представлений винахід розкриває неочікуваний синергізм харчової фармацевтичної рецептури, що включає аскорбінову

Кислоту, пролін і лізин і, принаймні, одну поліфенольну сполуку при ефективному блокуванні проліферації і о метастазу ракових клітин.

Харчова фармацевтична композиція представленого винаходу ефективно блокує інвазію раку молочної о залози, товстого кишечнику, шкіри (меланому) і інших форм раку. Компоненти представлені в харчовій рецептурі б є сполуками, що зустрічаються в природі; і коли використовується в заявленому діапазоні, як розкрито в Заявці, вони показують, що не мають ніяких токсичних побічних впливів. Таким чином, ця композиція може також ік використовуватися з профілактичною ціллю, тобто ефективного попередження раку й інших пухлин у організмі.

Ге Через те, що вірусні клітини та інші агресивні мікроорганізми використовують протеази подібні тим, що і ракові клітини для поширення інфекції в організмі, композиція, заявлена в даній заявці може використовуватися для ефективного попередження й лікування вірусних захворювань і інших інфекційних захворювань.

Подібний механізм активації матриксних металопротеїназ, який використовують ракові клітини для інвазії матриксу також сприяє дестабілізації атеросклеротичних бляшок, що призводять до інфарктів міокарду і удару. (Ф, Тому, композиція, заявлена в даній заявці може також використовуватися в ефективному попередження й ка лікування атеросклерозу, рестенозу й інших серцево-судинних ускладнень.

Активація матриксних металопротеїназ, яку використовують ракові клітини для інвазії матриксу є ключовим бо Компонентом при різноманітних запальних станах. Тому, композиція, заявлена в даній заявці може також використовуватися в ефективному попередженні й лікуванні захворювань, таких як ревматоїдний артрит, емфізема, алергії, остеоартрит та інші стани, що включають запальні аспекти.

Харчова фармацевтична композиція представленого винаходу може призначатися пацієнтові у формі, таблеток, пілюль, ін'єкцій, вливань, інгаляцій, супозиторіїв або інших фармацевтично прийнятних носіїв і/або 65 засобів доставки.

Приклади

Впливи аскорбінової кислоти, лізину, проліну, і принаймні, однієї поліфенольної сполуки досліджувалися з точки зору їх потенціалу проти проліферації і проти інвазії в лініях ракових клітин людини широкого спектра.

Більш детально був досліджений один з компонентів екстракту зеленого чаю (тобто, галат епігалокатехіну (ЕбСО)),.

Матеріали і Способи

Ракові клітини молочної залози людини МОА-МВ-231, ракові клітини товстого кишечнику людини НСТ 116, лінія клітин меланоми людини А2058 були отримані з АТОСС.

Нормальні фібробласти шкіри людини були отримані з БІСВО. Де не визначено, використовувалося 7/0 Культуральне середовище, отримане з АТСС.

При проліферації ракових клітин досліджували кожне лікування, що замінювалося вісім разів. При дослідженнях інвазії, кожне лікування здійснювалося повторно три або чотири рази.

Дослідження Клітинної Проліферації

В цих дослідженнях 5х10 7 ракових клітин молочної залози вирощували в середовищі Лєбовіца з 10965 75 фетальної сироватки великої рогатої худоби (ЕВ5) в планшетах на 24-комірки. Середовище використовувалося як (основне) або з певними додаваннями. Планшети інкубували в термостаті циркулюючого повітря (без додаткового СО5) протягом чотирьох днів. Ракові клітини товстого кишечнику НСТ116 вирощували в середовищі

МакКоя 5А і витримували в термостаті з 596 СО 5 циркулюючого повітря. Наприкінці інкубаційного періоду, середовище вилучали і клітини в комірках промивали РВ5 з наступною інкубацією протягом З годин з забарвленням МІГ. Диметилсульфоксид (0М5О, мл) додавали до кожної комірки. Планшети з ЮОМ5О витримували при кімнатній температурі протягом 15 хвилин при обережному перемішуванні і потім ОО розчину в кожній комірці вимірювали при 550 нм. Було виявлено, що ОО 5бо ОМ5БО розчину в комірці була прямо пропорційна кількості клітин. ООвво лікування, що не містило ніякого додавання (основне) приймалася як 100.

Дослідження Інвазії Матригелю Га

Дослідження проводили, використовуючи Матригель (Весіоп Біскіпвоп) прокладки в сумісних планшетах на 24-комірки. Фібробласти засівали та вирощували у комірках планшету, використовуючи ОМЕМ. Коли і) фібробласти досягли конфлуентності, середовище вилучали і замінювали 75О0мкл середовища, визначеного для лікування. Ракові клітини (5 Х 107) суспендували у 250мкл середовища, доповненого харчовими добавками, як визначено в проекті експерименту, які були засіяні на прокладці в комірці. Таким чином середовище і на Ге прокладці й у комірці містило ті ж самі додавання. Планшети із прокладками інкубували (у термостаті циркулюючого повітря для МОА-МВ-231 клітин і 5965 СО 5 термостаті для ракових клітин товстого кишечнику й Ф клітин меланоми) протягом 18-20 годин. Після інкубації вилучали середовище з комірок. Клітини на верхній (Се) поверхні прокладок обережно зішкрібали ватяним тампоном. Клітини, що проникнули через Матригель мембрану і мігрували на більш низьку поверхню Матригель, забарвлювали ,Мгемаколор" барвником (ЕМ Зсіепсев) та о візуально підраховували під мікроскопом. Результати піддавали АМОМА і всі можливі пари тестували на о значення при Р « 0,05.

Середовище в різних дослідження було доповнено аскорбіновою кислотою, проліном, лізином і ЕССО в концентраціях, як визначено. «

Желатиназна Зимографія

Желатиназну Зимографію здійснювали в 1095 Момех рге-саві поліакриламідному гелі (Іпмігодеп) в присутності - с 0,195 желатину. Завантажували (20мкл) культурального середовища і здійснювали ЗО5-РАСЕ з трис-гліциновим и ОЗ буфером. Після електрофорезу гелі промивали 595 Тритоном Х-100 протягом ЗО хвилин і забарвлювали. "» Одночасно здійснювали білкові стандарти і визначали приблизні молекулярні маси.

Приклад 1

МОА-МВ 231 (АТСС) ракові клітини молочної залози засівали на Матригель прокладки в камері для (ее) поліпшеної Матригель інвазії (ВО). Кондиційне середовище з стандартного дермального фібробласту людини о (Сіопейісв), доповнене різноманітними агентами (як позначено на Фіг.1) додавали до комірки. Камеру інкубували протягом 24 годин і клітини, що проникли в Матригель мембрану та мігрували на нижню поверхню (о) мембрани, підраховували. Ці дані демонструють інгібувальний вплив гапату епігалокатехіну і комбінації со 50 аскорбінової кислоти, проліну і лізину на Матригель інвазію і міграцію за допомогою МОА-МВ 231 ракових клітин людини. до) Приклад 2

НТСТ116 (АТСС) ракові клітини товстого кишечнику людини засівали на Матригель прокладки в камері для поліпшеної Матригель інвазії (ВО). Кондиційне середовище з стандартного дермального фібробласту людини (Сіопейісв), доповнене різноманітними агентами (як позначено на Фіг.2) додавали до комірки. Камеру інкубували протягом 24 годин і клітини, що проникли в Матригель мембрану та мігрували на нижню поверхню мембрани, о підраховували. Ці дані демонструють інгібувальний вплив галату епігалокатехіну і комбінації аскорбінової іме) кислоти, проліну і лізину на Матригель інвазію і міграцію НСТ116 ракових клітин товстого кишечнику людини.

Приклад З 60 А2058 (АТСС) людські клітини меланоми засівали на Матригель прокладки в камері для поліпшеної

Матригель інвазії (ВО). Кондиційне середовище з стандартного дермального фібробласту людини (Сіопеїйісв), доповнене різноманітними агентами додавали до комірки. Камеру інкубували протягом 24 годин і клітини, що проникли в Матригель мембрану та мігрували в нижню поверхню мембрани, підраховували. Ці дані демонструють інгібувальний вплив галату епігалокатехіну і комбінації аскорбінової кислоти, проліну і лізину 65 на Матригель інвазію і міграцію А20О58 клітин меланоми людини.

Приклад 4

В цьому експерименті А2О58 (АТСС) клітини меланоми людини засівали на Матригель прокладки в камері для поліпшеної Матригель інвазії (ВО) в присутності:

А: кондиційного середовища з стандартного дермального фібробласту людини (Сіопеїйісв) і

В: те ж саме середовище доповнювали різними харчовими добавками, як позначено на Фіг4А4 умовними позначками. Через 24 годин інкубування клітини, що проникли в Матригель мембрану і мігрували на нижню поверхню мембрани, досліджували під мікроскопом і підраховували.

Ці дані демонструють апоптичний ефект галату епігалокатехіну і комбінації аскорбінової кислоти ж пролін ж лізин на А2О58. А: Клітини Меланоми Людини в тканині культурального середовища. В: Клітини Меланоми 7/0 Людини в тканині культурального середовища, що містить аскорбінову кислоту (100мкМ), пролін (14О0мкМ), лізин (400мМкМ) і ЕССО (20мкг/мл). Зверніть увагу: клітини були зруйновані.

Приклад 5

Дослідження проліферації Ракових клітин Клітини Меланоми А2О58

Фігура 5 показує вплив 10, 20 і ХОмкг/мл ЕССО без і з лізином, проліном і додаванням аскорбінової кислоти /5 на проліферацію клітин меланоми.

Ні лізин, ні пролін і ні аскорбінова кислота, ні ЕС при 10 і 20мкг/мл не мали ніякого значного впливу на проліферацію клітин. Однак, ЕОСО при 5Омкг/мл значно знижував кількість клітин до ЗО9о. Подібний вплив спостерігався з лізином, проліном й аскорбіновою кислотою.

Ракові Клітини молочної залози МОА-МВ-231

В цих експериментах, основне середовище доповнювали 0, 10, 20, 50, 100 або 200мкг/мл ЕОСО (Фігура 6).

Результати показують, що доповнення основного середовища 50, 100 і 200мкг/мл ЕССО значно знижувало кількість клітин до 66,1-5,3, 33,6-42 і 29,6-0,895, порівняно з контрольними середовищами без додавань відповідно. ЕС концентрації в клітинному середовищі до 20мкг/мл не мали ніякого значного інгібувального впливу на клітинну проліферацію. с

Були також досліджені впливи аскорбінової кислоти, лізину, проліну і різних концентрацій ЕССО на проліферацію ракових клітин. Фігура 7 показує незначне зменшення кількості клітин до 86,1 - 1,9395 з о аскорбіновою кислотою, лізином і проліном. Подальше додавання 20, 50 і 100мкг ЕС до цієї комбінації значно зменшувало кількість клітин до 74-5,8, 64,8--1,6 і 222-595, порівняно з контрольною групою відповідно.

Ракові клітини товстого кишечнику НС116 Ге

В той час, як інгібувальний вплив аскорбінової кислоти, проліну і лізину на проліферації ракових клітин товстого кишечнику був неясний, комбінація аскорбінової кислоти, проліну і лізину з 2о0мкг/мл ЕССО значно Ф зменшив кількість клітин до 69-0,595 (Фігура 8). Вищий рівень ЕССО в цій комбінації (5Омкг/мл) радикально «0 зменшив кількість клітин до 4,6-0,3905. о

Протипроліферативна дія харчових комбінацій, використовуваних у цих дослідженнях відрізняється в залежності від типу ракових клітин. В ракових клітинах молочної залози комбінація аскорбінової кислоти, г) проліну і лізису з ЕСбСо мала вищі протипроліферативні впливи, ніж тоді, коли ці харчові добавки використовувалися окремо. В меланомі і ракових клітинах товстого кишечнику, що піддавали дії комбінації аскорбінової кислоти, проліну, лізину не спостерігалося дії на їх проліферацію. Однак, комбінування цих « харчових добавок з 20мкг/мл ЕССо призвело до значного зменшення кількості ракових клітин товстого кишечнику, але не клітин меланоми. Виявлено, що ракові клітини товстого кишечнику більш чутливі до комбінації т с аскорбінової кислоти, проліну, лізину і ЕССО, ніж ракові клітини молочної залози та особливо ніж клітини ч меланоми. Проліферація ракових клітин товстого кишечнику була майже повністю знижена (4,695), коли » аскорбінову кислоту, пролін і лізин давали з бХОмкг/мл ЕССО.

Приклад 6

Дослідження Желатиназної Зимографії (ее) Вплив ЕОСО на клітини меланоми з основним середовищем й додаванням аскорбінової кислоти, проліну і о лізину на експресію ММР», зображується на Фігурі 9 желатиназної зимографії. Клітини меланоми показали дві смуги, що відповідають ММР-2 і ММР-9. Комбінація аскорбінової кислоти, лізину і проліну не має ніякого впливу б» на експресію ММР:з» смуг у порівнянні з основним середовищем. Однак, ЕССО інгібує експресію і ММР-2 і о 20 ММР-9 в залежності від дози. Інтенсивність смуг для основного середовища й комбінації аскорбінової кислоти, лізину і проліну була такою ж самою.

Ко) Приклад 7

Дослідження Інвазії Екстраиелюлярного Матриксу і Міграції

Були досліджені інгібувальні впливи комбінації аскорбінової кислоти, проліну і лізину, використовувані окремо і разом з різними концентраціями ЕССО. Вивчалися впливи цих комбінацій на екстрацелюлярний о матрикс, використовуючи попередньо сформовані Матригель матрикси, що звичайно використовують для оцінки потенціалу інвазії різноманітних ліній ракових клітин. ко Ракові Клітини Молочної залози МОА-МВ-231

Фігура 10 показує результати Матригель інвазії ракових клітин молочної залози, інкубованих у присутності 60 аскорбінової кислоти, проліну і лізину. Інвазія ракових клітин, інкубованих у комбінації аскорбінової кислоти, проліну і лізину було зменшена до 48,1--22,1965, порівняно з клітинами, інкубованими в середовищі без додавань. В середовищі доповненому тільки 20мкг/мл ЕССО, кількість клітин, що проникли зменшилася до 69,5-27,496. Було досягнуто повне інгібування інвазії матриксу раковими клітинами молочної залози в присутності ЕБСО концентрації вище (5Омкг/мл і 10Омкг/мл). бо В іншому ряді досліджень, додавання до середовища 100мкМ аскорбінової кислоти "зменшувало інвазію на

3695. Додавання аскорбінової кислоти і 140мкМ проліну надалі зменшувало інвазію на 4795. Використання 400мМкМ лізину на додаток до аскорбінової кислоти і проліну в додаванні надалі зменшувало інвазію до 6790; лізин показує лінійну відповідь при підвищенні впливів аскорбінової кислоти і проліну до рівня 8В00мкМ.

Фігура 10 також показує, що комбінація аскорбінової кислоти, проліну і лізину також як 20мкг/мл ЕОСО була ефективною для повного припинення інвазії ракових клітин через екстрацелюлярний матрикс. Ця комбінація зробила можливим досягти максимального інгібувального результату на інвазію ракових клітин без необхідності використання високих концентрацій окремих харчових добавок. Також, аскорбінова кислота, пролін і лізин поряд з Е6СО уможливили припинити матричну інвазію ракових клітин молочної залози повністю при нижчому рівні /0 ЕвсСо (20мкг/мл).

Ракові Клітини Товстого Кишечнику НСТ116

Фігура 11 показує, що комбінація аскорбінової кислоти, проліну і лізину значно зменшувала інвазію ракових клітин товстого кишечнику до 67,2-3,7906. Використання 20мкг/мл тільки одного ЕССО зменшувало інвазію до 44,9--3,3906, в той час як комбінація аскорбінової кислоти, проліну, лізину і 2о0мкг/мл ЕССО мала синергічний 75 вплив, зменшуючи інвазію ракових клітин товстого кишечнику до 24,9-4,6905. Клітини Меланоми А2058

Фігура 12 показує, що комбінація аскорбінової кислоти, проліну і лізину була ефективна при зниженні кількості клітин, що проникли до 88,2-4905, однак це зменшення не було статистично значимим. Комбінація цих харчових добавок з тільки до 20мкг/мл ЕССО було ефективною в зменшенні кількості клітин, що проникли, до нуля.

Результати показують, що використання аскорбінової кислоти, проліну і лізину з ЕЄСО дозволяють одержати радикальне зменшення кількості клітин, що проникають і мігрують через Матригель мембрану при нижчих рівнях

ЕССО. Інвазія була знижена до нуля, використовуючи настільки низький рівень, як 2О0мкг/мл ЕССО з аскорбіновою кислотою, проліном і лізином у ракових клітинах молочної залози і клітинах меланоми. Переваги комбінованих результатів з раковими клітинами товстого кишечнику не були настільки вражаючими, якотриманіз «М раковими клітинами молочної залози. Рівень ЕЗСО повинен бути 5Омкг/мл для одержання 9095 зменшення (5) інвазії цими клітинами. В цьому дослідженні, ніяких зрушень в ММРзе експресії в клітинах меланоми не спостерігалось, хоча ЕССО має інгібувальний вплив на їх експресію в залежності від дози.

Ця серія досліджень остаточно демонструє, що представлена харчова фармацевтична рецептура, що включає аскорбінову кислоту, пролін, лізин і, принаймні, одну поліфенольну сполуку викликає ефективні СМ протипроліферативний і протиінвазійний ефекти ракових клітин. Ф

Приклад 8

Наступні харчові фармацевтичні рецептури (Таблиці 1-5) і ЕПІКАН ФОРТЕ м (Таблиця 6) ілюструють їх (Се) приготування. Виявлено, що ці рецептури, що включають аскорбінову кислоту, пролін, лізин і, принаймні, одну о поліфенольну сполуку є ефективними в блокуванні інвазії ракових клітин і метастазу ракових клітин. г)

Таблиця 1 Рецептура 1 о

Біохімічні речовини Кількість

Аскорбінова кислота 250мг 5,6 «

Аскорбат кальцію 250мг 5,6

Аскорбат магнію 2БОМг 5,6 - с Аскорбілпальмітат 250мг 5,6 ч Поліфеноли 1,000мг 22,5 " » М-Ацетилцистеїн 200мг 4,5

Лізин 1,000мг 22,5

Пролін 75ОМг 16,8 (ее) -Аргінін БООмг 11,2 ав! Селен ЗОмкг «0,01

Мідь 2мМг 0,04

Ме Марганець 1мг 0,02 («е) 20 мг - міліграми мкг - мікрограми їз "у" стосуєтьсядо маси окремого компонента від загальної маси рецептури

Таблиця 2 Рецептура 2 оо

Ге) Біохімічні речовини Кількість

Аскорбінова кислота 2БмМг 57 ко Аскорбат кальцію 25Мг 5,7

Аскорбат магнію 2БмМг 57 60 Аскорбілпальмітат 2БмМг 57

Поліфеноли - 5095 200мг 46,0

М-Ацетил цистеїн 1Омг 2,3

Лізин Бомг 11,5

Пролін 2БмМг 57 бо Аргінін Бомг 11,5

Селен 1мкг «0,001

Мідь 2Омкг «0,001

Марганець Б5Омкг «0,001 мг - міліграми мкг - мікрограми "у" стосуєтьсядо окремого компонента від загальної маси рецептури

Таблиця З Рецептура З до 70 "Біохімічні речовини Кількість

Аскорбінова кислота 5,00Омг 13,3

Аскорбат кальцію Б,ОбОмг 13,3

Аскорбат магнію 5,00Омг 13,3

Аскорбілпальмітат 5,00Омг 13,3

Поліфеноли-10095 5,000мг 13,3

М-Ацетилцистеїн 1,500мг 4,0

Лізин Б,ОбОмг 13,3

Пролін З,б0б0Омг 8,0

Аргінін 3З,0бОмг 80

Селен 200Омкг «0,001

Мідь мг 0,02

Марганець 1Омг 0,002 мг - міліграми Ге мкг - мікрограми "фо" стосується 96 окремого компонента від загальної маси рецептури о

Таблиця 4 Рецептура 4 до с зо Біохімічні речовини Кількість

Аскорбінова кислота 250мг Ат Ге)

Аскорбат кальцію 250мг 4 «я

Аскорбат магнію 250мг Ат

Аскорбілпальмітат 250мг Ат (ав)

Поліфеноли - 98965 1,000мг 18,7 ее)

М-Ацетилцистеїн 200мг 37

Лізин 1,000мг 18,7

Пролін 750мг 14,0

Аргінін БООмг 9,3 «

Селен 1оОМмкг «0,002 - с Мідь 2мМг 0,04 и Марганець 1мг 0,02 п » Кальцій БООмг 9,3

Магній АдбОмг 7,5 мг - міліграми (ее) мкг - мікрограми о "фо" стосується 96 окремого компонента від загальної маси рецептури (о)

Таблиця 5 Рецептура 5 до со Біохімічні речовини Кількість

Кз Аскорбінова кислота 250мг 4,5

Аскорбат кальцію 250мг 4,5

Аскорбат магнію 250мг 4,5

Аскорбілпальмітат 250мг 4,5

Поліфеноли - 9895 1,000мг 18 іФ) М-Ацетил цистеїн 200мг 3,6 ко Лізин 1,000мг 18

Пролін 750мг 13,5 6бо Аргінін БООмг 9

Селен 1б0Омкг «0,002

Мідь 2мМг «0,04

Марганець 1мг «0,02

Кальцій БбОмг 9 65 Магній дбОмг 72

Біофлавоноїди цитрусових 200мг 3,6 мг - міліграми мкг - мікрограми "фо" стосується 96 маси окремого компонента від загальної маси рецептури

Рецептура для ЕПІКАН ФОРТЕ м

Дозовий режим: б Капсул (Запропоноване використання: дві капсули три рази щодня переважно з їжою) з сте 01777711 сб 00001000 ж бно 10000001 зальцію Лекореат магнію Аскорбательмтя) 00000010 і

Стандартний Екстракт Зеленого чаю ля 00001000 лою вою поліфенолувосм що зе мстить 00000001 фа

Метт 00001101 с мг - міліграми й

ЕПІКАН ФОРТЕ м є найменуванням товарного знаку в заявці США, що розглядається. Інші компоненти: рослинні капсули (гідроксипропілметилцелюлоза), діоксид кремнію, целюлоза і стеарат магнію.

Приклад 9 см

Впливи ЕПІКАН ФОРТЕ: м на Ракові Клітини Людини Ге»)

Були досліджені впливи ЕПІКАН ФОРТЕтм на ракові клітини людини. Вивчалися метастатичні параметри, со такі як експресія матриксних металопротеїназ (ММРз») за допомогою желатиназної зимографії, потенціал інвазії через Матригель і проліферація/ріст за допомогою МТТ досліджень. Протоколи цих досліджень докладно (ав) описані вище. Використовувалися декілька ліній ракових клітин людини: раку шкіри - клітини меланоми 2058, со раку печінки -Нерб2 клітини, фібросаркоми - НТ 1080 клітини, раку товстого кишечнику - НСТ 116, раку молочної залози ЕК-/-МСОЕ-7 і раку молочної залози ЕК-/-МОА-МВ-231.

Наступні таблиці (Таблиці 7 і 8) підсумовують результати:

Впливи ЕПІКАН ФОРТЕ:м на Проліферацію/Ріст Ракових Клітинних Ліній Людини: « -

Таблиця 7 с Дози Лікування ЕПІКАН ФОРТЕ (мкг/мл): Відсоток від Контролю з Ракові клітини (о) 10 5О0 100 50 7000

Меланома 10096 98 - 105 - 50

Нерс2 10096....92 - 138.- 85 нт-т080 10096. 100 - 97 во 63 (ее) .

Товстий кишечник (ав) (нСТт 116) б» МСЕ-7 10096 119 125 141 120 106

МОА-МВ-231 100956,.93 88 Дщ92 97 77 (Се) 50 10096103 82 25 о Впливи ЕПІКАН ФОРТЕ:м на Матригель Інвазію і Міграцію Ракових Клітин Людини:

Таблиця 8

Дози лікування ЕПІКАН ФОРТЕ"м (мкг/мл): Відсоток Інгібування

Ф! Ракова клітина 9) 10 50 100 50 1000

Меланома ооо во 98 100 - - о Нерс2 09615 25. 50 95 100 нт-т080 09690 - БО 70 100 бо Товстий кишечник (нНСт116)

МОА-МВ-231 09620 50 80 100 -

МСЕ-7 096 5О - 98 - -

Інвазія відсутня б5

Впливи ЕПІКАН ФОРТЕтм на Експресію Матриксних Металопротеїназ (ММРз) Лініями

Ракових Клітин Людини:

Клітини Меланоми: Клітини Меланоми показали дві смуги на желатиназній зимографії, що стосуються ММР-2 і ММР-9. ЕПІКАН ФОРТЕ м інгібує експресію ММР-2 і -9 в залежності від дози. Експресія ММР-2 і -9 була інгібована в значній мірі концентрацією 10О0мкг/мл ЕПІКАН ФОРТЕм і її фактично неможливо було виявити при концентрації 100Омкг/мл.

Необ2 Клітини: Подібно клітині меланоми, Нерб2 клітина також виражалася двома смугами, що стосуються

ММР-2 ії ММР-9. ЕПІКАН ФОРТЕ?м інгібував експресію ММР-2 і -9 при концентраціях 500 і 100Омкг/мл.

Фібросаркома НТ-1080: НТ-1080 клітини показані двома смугами для ММР-2 і -9. ЕПІКАН ФОРТЕ м також інгібував експресію обох смуг в залежності від дози. Дуже слабкі смуги були замічені при концентраціях 500 і 100Омкг/мл.

Рак товстого кишечника НСТ 116: Ракові клітини товстого кишечника показали тільки -одну смугу на зимограмі, що стосується ММР-2, яка повністю зникла при концентрації 10Омкг/мл.

МСЕ-7 ії МОА-МВ-231: Ці лінії ракових клітин не створювали ніяких ММР:» смуг при нашій експериментальній концентрації, яки б були подібні іншим лініям ракових клітин.

Інвазія МОА-МВ-231 через Матригель була інгібована на 50, 60 і 9595 за допомогою 10, 50 і 100мкг/мл ЕПІКАН

ФОРТЕ:тм відповідно. ЕПІКАН ФОРТЕтм був нетоксичним до МОА-МВ-231 при тОмкг/мл, показав невелику токсичність при 100мкг/мл. Однак, він продемонстрував значну токсичність при 100Омкг/мл. Ні ММР-2, ні ММР-9 не були виражені за допомогою зимографії. Навпроти, ЕПІКАН ФОРТЕтм був нетоксичним до МСЕ-7 навіть при 5б0Омкг/мл і показав невелику токсичність при 100О0мкг/мл. МСЕ-7 не інвазували і не виявляли експресивної ММР5 дії.

ЕПІКАН ФОРТЕ: м інгібує експресію ММР-2 і ММР-9 в залежності від дози. Експресія ММР-2 і ММР-9 була значно інгібована при концентрації 10Омкг/мл ЕПІКАН ФОРТЕ: м і її фактично неможливо було виявити при с 29 концентрації 100мкг/мл. ЕПІКАН ФОРТЕ: м, використовуваний при концентрації 10 і 100мкг/мл значною мірою не (У впливав на життєздатність клітин і при 7ООмкг/мл він продемонстрував цитотоксичність в діапазоні 10-40 відсотків, у залежності від типу клітин. Інвазія клітин меланоми, МОА-МВ-231 клітин і клітин меланоми, суміснокультивованих МНОРЕ, через Матригель була значно зменшена в залежності від дози. Інвазія НТ-1080 клітин через Матригель була інгібована на 1095, 5095, 7095 і 10095 при 10, 100, 200 і 100Омкг/мл відповідно. см 3о Цікаво, ЕПІКАН ФОРТЕ тм був нетоксичним до НТ-1080 клітин при 10Омкг/мл. Ці результати демонструють, що о)

ЕПІКАН ФОРТЕтм є дуже ефективним для ліній деяких ракових клітин і також для співкультур. Ці с спостереження показують, що ЕПІКАН ФОРТЕ:тм може забезпечувати природну терапевтичну основу, що робить його цінним і багатообіцяючим засобом для лікування раку у людини. о

Приклад 10 со

Впливи ЕПІКАН ФОРТЕтм на Лінії Нормальних Клітин Людини Впливи ЕПІКАН ФОРТЕтм вивчалися на нормальних клітинах людини.

Використовувалися параметри, подібні таким лініям ракових клітин; а саме зимографія для ММР: експресії, інвазія через Матригель і проліферація/ріст за допомогою МТ досліджень. «

Використовувалася деяка кількість нормального дермального фібробласту людини (МНОБ), включаючи: шщ с хондроцити людини і стромальні клітини людини. й Наступні таблиці (Таблиці 9, 10 ії 11) підсумовують впливи ЕПІКАН ФОРТЕтм на проліферацію/ ріст, інвазію "» метастазу і ММР продукцію в нормальних клітинах людини:

Таблиця 9 о Впливи ЕПІКАН ФОРТЕ м на ПроліФерацію/Ріст Нормальних Клітин Людини. Лікувальні Дози ЕПІКАН ФОРТЕ (мкг/мл): Відсоток від контролю

Нормальні клітини 9) 10 50 100 50 100 (ав) МНОє 10095 11896 - 13596 - 90

Ф Хондроцити 10096 11396 - 14896 7690 82

Стромальні клітини 10096 10096 116 11596 9890 64 се) г» Таблиця 710

Впливи ЕПІКАН ФОРТЕтм на Матригель Інвазію Нормальними Клітинами. Лікувальні Дози ЕПІКАН ФОРТЕ"м (мкг/мл): Відсоток інгібування

Нормальні клітини 9) 10 50 100 200 1000

МНОЄ 09 6796 8996 10096 - -

ГФ) Хондроцити бо 4590 8590 9590 10096 - т Стромальні клітини бо бо 9590 10096

Впливи ЕПІКАН ФОРТЕтмМ на експресію матриксних металопротеїнази (ММР»5) нормальними клітинами 60 людини підсумовуються наступним чином:

МНОРЕ: МНОЕ відображує тільки одну смугу на зимограмі, що стосується ММР- 2, яка фактично зникла при концентрації 100Омкг/мл ЕПІКАН ФОРТЕ м,

Хондроцити: Хондроцити також показали тільки одну смугу, що стосується ММР- 2. ЕПІКАН ФОРТЕ м інгібував експресію ММР-2 в залежності від дози. Експресія ММР-2 була значно інгібована при концентрації бо 100мкг/мл ЕПІКАН ФОРТЕ м і повністю зникла при концентрації 200мкг/мл ЕПІКАН ФОРТЕ м,

Стромальні Клітини: Стромальні клітини також показали тільки одну смугу, що відповідає ММР-2. ЕПІКАН

ФОРТЕ м інгібував експресію ММР-2 в залежності від дози. Дуже слабка смуга була помічена при концентрації 50 і 100мкг/мл, яка не була виявлена при концентрації 200 і 50Омкг/мл.

В підсумку, результати показали, що ЕПІКАН ФОРТЕтм інгібує експресію ММР-2 в залежності від дози.

Експресія ММР-2 була значно інгібована при концентрації 10Омкг/мл ЕПІКАН ФОРТЕ м і фактично не виявлена при концентрації 20Омкг/мл. Крім того, також було виявлено, що інвазія хондроцитів через Матригель була інгібована на 5095, 8595 і 9595 при 1Омкг/мл, 10Омкг/мл і 200мкг/мл. При 50Омкг/мл інвазія була повністю зменшена до 095.

ЕПІКАН ФОРТЕтм є нетоксичним до хондроцитів навіть при концентрації 20Омкг/мл. Фактично, ЕПІКАН

ФОРТЕ тм викликав ефект клітинної проліферації, 7095 збільшення клітинної проліферації при 200мкг/мл, 7090 більше від контролю. Невеликий токсичний ефект був помічений тільки при БООмкг/мл. Ці результати демонструють, що ЕПІКАН ФОРТЕтм є ефективним при інгібуванні ММР-2 експресії і що ЕПІКАН ФОРТЕ тм представляє нову протизапальну харчову рецептуру, як природний засіб для інгібування ММР продукції і 75 деградації екстрацелюлярного матриксу при остеоартриті й інших подібних розладах, включаючи надмірну деградацію хряща.

Хоча іп мімо тестування ліній ЕПІКАН ФОРТЕ тм тільки почали проводити, були описані два випадки, що доводять обгрунтованість ЕПІКАН ФОРТЕ м, як медикаменту для лікування раку.

Пацієнта жіночої статі, з діагностованою пухлиною мозку лікували хіміо- та променевою терапією без успіху, наприкінці квітня 2002 від її лікування відмовились. -Випадково вона почала лікуватися рекомендованими дозами ЕПІКАН ФОРТЕ м . Наприкінці серпня 2002 МКТ5 показала, що пухлина зникла.

Пацієнт чоловічої статі віку 64 років, який мав помітно підвищений рівень маркерного гена пухлини РБЗА, у травні 2002 (59,9мкг/л) був діагностований на метастаз карциноми простати лімфатичних судин аорти. Він почав лікування ЕПІКАН ФОРТЕ м в рекомендованій дозі. Трьома місяцями пізніше рівень РЗА впав до 0,Омкг/л. СТ с перевірка наприкінці жовтня 2002 показала, що виявлений попередньо метастаз лімфатичних судини не був о більше очевидний і простата мала нормальний розмір.

Був описаний широкий спектр втілень винаходу. Однак, зрозуміло, що можуть бути зроблені різні модифікації без відходу від духу й рамок винаходу. сч | гани ше ИЙ і і о ва. її 1. ав! втеа. 5 і со в НН « зе В'ЕБІОВЯ вхловвмоюь нйскорбно еремницеф ОО знтннх в деки: ю | ШИ -в и «й и» Фіг 1 450 | ЖЕ султан ! со ! шо КИ вн

Ге После тювв пев

Ми я нин ШИ. ри ея кв Вбіопсвоів тисролювючн ті рис ще є Зуйнкя ін вно йо ро дже ЕЕ ЧК,

Фів іме) 60 б5

ЩЕ кино нн отісннтентнттеня вшщ03 с юю! 1!

Фіг т СІВ поря пот тв ЗВ 20 Шшйнишишнішаннн

А В

Фіг. 4 нн

УНН і пишини см ши а ишишии Ф ще ж Бі У жене ше ть ЖИ ше

Пебанкх о

Фів, 5 й 35 ім і вка огренеях сного веревови цер БО не М зекорбісовс нетети (АК) (ге)

Кл сан 7 в'я шишшшни 5 є ОНА А Я

НИ Ше в шк жк ШИ ЧЕ 45 т жрени биник інн вен ень (ее) крос ани о єр. В інв діву ТЕО ту нів інн вінірів

І в о нич сени Я Я. НН ження Еш ув. ша 60 Й Добавки: нн ге ВОМ Бек є ВК стен пні Й б5

Я невуси незнаю опинитеся. с, г В ж с шиї: В ї В

ЩЕ Шин нн и і о ви з й В ше ас

Фвваввне: ВЖЕОСВОВ: вхледовінова Веежекорб; й «ее -е БОШ КОВО рел ГОЛИМ епін я Я

Фіг. ї

С ин анти тннн т

Її я НИКА ЛО ИН «ЛАНОК

Ї я нн нення нн інн ор о ВЖК нн

Ї 5 яв; ів, поет й со як. шу ї що нед ее В М інн г щі нний НК НК щі м ВА як і

Й Жеяею 0 ЗнеювхєривнеВктавк ость є Жйбюескютю ен с я сення 0 евнеюлья 0 Киввш мл рн її ша й п

Фі? ниви пп сю тцятю чежтютт тв ост ст тт тт с ші с "чн, шк і. б 7 с и г ї-о

Еш ' що 0 й

Ії В со вв ан

Її Зооеечя оновретсрюневюце З БЕнсінесіредійніря ЗАСН ВВ НВНЯ о ВКА ч нн ши и НН З с Фіз . ще си я той НЯ НН КА Б пок

ПН Я с о а

А В о 50 Фіг. 4 60 65 яд їа й, Пестель не ви ви нен: ни яні Як яті трун ши ше Р шк й шви . «вве. ек Ще Ве ве Не ипшини шишшиши - шини

Я «А В М Я

Фів, 5 Й нта об неки ле реквіененочверецовиче ОП не НЕ охоронне кита АХ поміи оову о М вину тв йно вену,

Кк ДЕ -А--- 20 . І а жш Ц Мі ші с. зі х ї ай пе М В щ я

Е шк. о

ШНМ о о ва ще й «В о Ши ШО В НЯ с вес й о ріг. 8 "ВНІ фан век е ев ПЕК мій ато) рів вас вив жів с то 2 ОО ' нен. о

Кф М дн еенянннненнннненненс вн «де сн НН шен зання

Добавки:

Віелів дова де онов бго-бе БедвИЦЬ, ТОВ НМ оскороніввої Джо лаки ире нн нт З7З ше, и У шй олеревяцн ракових кан; . и? Ф ормула винаходу со 45 1. Харчова композиція, що містить: а) аскорбінову сполуку; ав) б) сполуку лізину; о в) сполуку проліну; г) принаймні одну поліфенольну сполуку, що вибирають з групи, яка складається з галату епігалокатехіну, (Се) 20 галату епікатехіну, епігалокатехіну, епікатехіну і катехіну та з д) М-ацетилцистеїн. 2. Харчова композиція за п. 1, в якій аскорбінову сполуку вибирають з групи, що складається з аскорбінової кислоти, фармацевтично прийнятних аскорбатів, естерів аскорбатів і/або їх сумішей. 3. Харчова композиція за п. 2, в якій фармацевтично прийнятною сіллю аскорбату є аскорбат кальцію або 25 аскорбат магнію.

ГФ) 4. Харчова композиція за п. 2 або 3, в якій естер аскорбату є аскорбілпальмітатом. юю 5. Харчова композиція за п. 1, в якій сполуку лізину вибирають з групи, що складається з гідрохлориду лізину і фармацевтично прийнятних солей лізину. 6. Харчова композиція за будь-яким з пп. 1-5, в якій сполуку проліну вибирають з групи, що складається з 60 гідрохлориду проліну і фармацевтично прийнятних солей проліну. 7. Харчова композиція за будь-яким з пп. 1-6, яка додатково містить мікроелемент, що вибирають з групи, яка складається з селену, міді, марганцю, кальцію і магнію. 8. Харчова композиція за будь-яким з пп. 1-7, яка додатково містить іншу амінокислоту, переважно аргінін. 9. Харчова композиція, що містить: аскорбінову кислоту, аскорбат кальцію, аскорбат магнію, бо аскорбілпальмітат, принаймні одну поліфенольну сполуку, що вибирають з групи, яка складається з галату

Claims (1)

1. епігалокатехіну, галату епікатехіну, епігалокатехіну, епікатехіну і катехіну, М-ацетилцистеїн, лізин, пролін, аргінін, селен, мідь і марганець.

   10. Харчова фармацевтична композиція за п. 9, яка містить 250 мг аскорбінової кислоти, 250 мг аскорбату кальцію, 250 мг аскорбату магнію, 250 мг аскорбілпальмітату, 1000 мг поліфенолів, 200 мг М-ацетилцистеїну, 1000 мг лізину, 750 мг проліну, 500 мг аргініну, ЗО мкг селену, 2 мг міді і 1 мг марганцю.

   11. Харчова композиція за п. 9, яка містить 25 мг аскорбінової кислоти, 25 мг аскорбату кальцію, 25 мг аскорбату магнію, 25 мг аскорбілпальмітату, 200 мг поліфенолів, 10 мг М-ацетилцистеїну, 50 мг лізину, 25 мг проліну, 50 мг аргініну, 1 мкг селену, 20 мкг міді і 50 мкг марганцю. 70 12. Харчова композиція за п. 9, яка містить 5000 мг аскорбінової кислоти, 5000 мг аскорбату кальцію, 5000 мг аскорбату магнію, 5000 мг аскорбілпальмітату, 5000 мг поліфенолів, 1500 мг М-ацетилцистеїну, 5000 мг лізину, 3000 мг проліну, З000 мг аргініну, 200 мкг селену, 9 мг міді і 10 мг марганцю.

   13. Харчова композиція за п. 9, яка містить 250 мг аскорбінової кислоти, 250 мг аскорбату кальцію, 250 мг аскорбату магнію, 250 мг аскорбілпальмітату, 1000 мг поліфенолів, 200 мг М-ацетилцистеїну, 1000 мг лізину, 75750 мг проліну, 500 мг аргініну, 100 мкг селену, 2 мг міді, 1 мг марганцю, 500 мг кальцію і 400 мг магнію.

   14. Харчова композиція за п. 9, яка містить 250 мг аскорбінової кислоти, 250 мг аскорбату кальцію, 250 мг аскорбату магнію, 250 мг аскорбілпальмітату, 1000 мг поліфенолів, 200 мг М-ацетилцистеїну, 1000 мг лізину, 750 мг проліну, 500 мг аргініну, 100 мкг селену, 2 мг міді, 1 мг марганцю, 500 мг кальцію, 400 мг магнію і 200 мг біофлавоноїдів цитрусових.

   15. Харчова композиція, яка містить І1-лізин, І-пролін, І-аргінін, аскорбінову кислоту, кальцій, магній, принаймні одну поліфенольну сполуку, що вибирають з групи, яка складається з галату епігалокатехіну, галату епікатехіну, епігалокатехіну, епікатехіну і катехіну, М-ацетилцистеїн, селен, мідь і марганець.

   16. Харчова композиція за п. 15, яка містить 1000 мг І-лізину, 750 мг І-проліну, 500 мг І -аргініну, 710 мг аскорбінової кислоти, 22 мг кальцію, 50 мг магнію, 1000 мг поліфенолів, 200 мг М-ацетилцистеїну, ЗО мкг сч ов селену, 2 мг міді і 1 мг марганцю.

   17. Харчова композиція за п. 15 або 16, в якій аскорбінову кислоту вибирають з групи, що складається з і) аскорбінової кислоти, аскорбату кальцію, аскорбату магнію і аскорбілпальмітату.

   18. Харчова композиція за будь-яким з пп. 15-17, в якій поліфенол вибирають з групи, що складається з галату епігалокатехіну, галату епікатехіну, епігалокатехіну, епікатехіну, катехіну і інших фармацевтично су зо прийнятних солей поліфенолу і/або їх суміші.

   19. Застосування харчової композиції за будь-яким з пп. 1-18 для виготовлення фармацевтичної композиції Ме для лікування раку. «о

   20. Застосування за п. 19, в якому рак вибирають з групи, що складається з меланоми, раку молочної залози, раку товстого кишечнику, раку легень і раку мозку. о

   21. Застосування харчової композиції за будь-яким з пп. 1-18 для виготовлення фармацевтичної композиції со для лікування запального захворювання.

   22. Застосування за п. 21, в якому запальне захворювання є остеоартритом. Офіційний бюлетень "Промислова власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних « Мікросхем", 2007, М 17, 25.10.2007. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і п) с науки України. ;» (ее) («в) (22) о 50 Ко) Ф) іме) 60 б5