UA9574U - Method for manufacturing viral vaccines - Google Patents
Method for manufacturing viral vaccines Download PDFInfo
- Publication number
- UA9574U UA9574U UA20041210763U UA20041210763U UA9574U UA 9574 U UA9574 U UA 9574U UA 20041210763 U UA20041210763 U UA 20041210763U UA 20041210763 U UA20041210763 U UA 20041210763U UA 9574 U UA9574 U UA 9574U
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- vaccine
- virus
- stabilizer
- vaccines
- rabies
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 14
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 23
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims abstract description 23
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 19
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims abstract description 9
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 79
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims 1
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 16
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 11
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 11
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 10
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 10
- ISLJZDYAPAUORR-UHFFFAOYSA-N ethyl n-[2-[(5-nitrothiophene-2-carbonyl)amino]thiophene-3-carbonyl]carbamate Chemical compound C1=CSC(NC(=O)C=2SC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=C1C(=O)NC(=O)OCC ISLJZDYAPAUORR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 9
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 7
- 229960003127 rabies vaccine Drugs 0.000 description 7
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 5
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 5
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 4
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 4
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 3
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 description 2
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 2
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 241000371980 Influenza B virus (B/Shanghai/361/2002) Species 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 description 2
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 2
- 230000003602 anti-herpes Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- WNWBIDPJHFYYLM-UHFFFAOYSA-K iron(3+);prop-2-enoate Chemical group [Fe+3].[O-]C(=O)C=C.[O-]C(=O)C=C.[O-]C(=O)C=C WNWBIDPJHFYYLM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 2
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 2
- HNLXNOZHXNSSPN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=C(OCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO)C=C1 HNLXNOZHXNSSPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 1
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical class C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 description 1
- 102100040607 Lysophosphatidic acid receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 101150115489 MPK7 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000966781 Mus musculus Lysophosphatidic acid receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000700665 Sheeppox virus Species 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 201000005332 contagious pustular dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229940098514 octoxynol-9 Drugs 0.000 description 1
- 229920002114 octoxynol-9 Polymers 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- WBHQBSYUUJJSRZ-UHFFFAOYSA-M sodium bisulfate Chemical compound [Na+].OS([O-])(=O)=O WBHQBSYUUJJSRZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000342 sodium bisulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Опис винаходуDescription of the invention
Запропонована корисна модель відноситься до галузі медицини, біотехнології та ветеринарії, зокрема, до 2 вірусології, конкретно, до способів виготовлення різних вакцин, які можуть бути використані для специфічної профілактики сказу у людей та тварин, грипу, герпесу у людей т.ін.The proposed useful model refers to the field of medicine, biotechnology and veterinary medicine, in particular, to 2 virology, specifically, to methods of manufacturing various vaccines that can be used for the specific prevention of rabies in humans and animals, influenza, herpes in humans, etc.
Пошук нових ефективних засобів проти масових (грип, герпес) та особливо небезпечних інфекцій (сказ) є актуальною проблемою для медичної науки та закладів охорони здоров'я усього світу. Розробка нових способів виготовлення вакцинних препаратів, які можуть ефективно захищати організм, не ушкоджуючи його, а також 70 дозволяють використовувати вакцини з метою як профілактики, так і для лікування, дозволить успішно вирішувати цю задачу.The search for new effective means against mass (influenza, herpes) and especially dangerous infections (rabies) is an urgent problem for medical science and health care institutions around the world. The development of new methods of manufacturing vaccine preparations, which can effectively protect the body without harming it, and also allow the use of vaccines for the purpose of both prevention and treatment, will allow to successfully solve this problem.
У сучасній вакцинології використовують різноманітні засоби для стабілізації вакцин (патенти РФ МоМо2157700, 2191003, 2149022, 2144369, 2127604). Проблема стабілізації у запатентованих винаходах вирішується різними способами, залежно від виду вакцини, методу її аплікації та вимог, щодо строків зберігання вакцинних 12 препаратів.In modern vaccinology, various means are used to stabilize vaccines (patents of the Russian Federation MoMo2157700, 2191003, 2149022, 2144369, 2127604). The problem of stabilization in patented inventions is solved in different ways, depending on the type of vaccine, the method of its application and the requirements for storage periods of vaccine 12 preparations.
Для отримання високоїмунних вакцин з пролонгованим строком зберігання антигенів використовували, наприклад, в одному випадку лактозопептонний стабілізатор (патент РФ Мо2181296), в іншому - сорбіт-желатозний (патент РФ Мо2194530).To obtain high-immune vaccines with a prolonged shelf life of antigens, for example, in one case, a lactose peptone stabilizer (RF patent Mo2181296), in another - sorbitol-gelatose (RF patent Mo2194530) was used.
У патенті РФ Мо2181296 |МПК7 Аб1КЗ39/295, Аб1К39/07, Аб1К39/275)| заявлена асоційована вакцина проти сибірки та віспи овець, стабільність якої було забезпечено додаванням лактозопептонного стабілізатору.In the patent of the Russian Federation Mo2181296 |MPK7 Ab1KZ39/295, Ab1K39/07, Ab1K39/275)| the claimed associated vaccine against anthrax and sheep pox, the stability of which was ensured by the addition of a lactose peptone stabilizer.
Вакцину характеризують як ареактогенну, нешкідливу та стабільну при зберіганні. Однак, враховуючи високі первинні концентрації як спор сибірки (180-3бОмлн.спор/см У), так і вірусу віспи овець (не менше 5,019The vaccine is characterized as areactogenic, harmless and stable during storage. However, taking into account the high primary concentrations of both anthrax spores (180-3 bOmln. spores/cm U) and sheep pox virus (at least 5.019
ТД рру/сму), слід відмітити, що висока імуногенність вакцини (імунітет високої напруги) обумовлений скоріше ов За рахунок високої активності інфікуючих доз збудників, а не складом використаного стабілізатору.TD pru/smu), it should be noted that the high immunogenicity of the vaccine (high voltage immunity) is rather due to the high activity of the infecting doses of pathogens, and not to the composition of the used stabilizer.
Відома також інша асоційована вакцина для профілактики захворювань хутряних звірів (патент РФ шіAnother associated vaccine for the prevention of fur-bearing animal diseases is also known (RF patent no
Мо2134530)Ї. Вакцина діє водночас проти трьох збудників (чуми, аденовірусу та сальмонельозу). До складу вакцини входять декілька активних компонентів: живі атенуйовані штами збудників чуми та сальмонельозу, а також вірусна суспензія інактивованого аденовірусного штаму. У даному технічному рішенні стабілізація вакцини «Е зо здійснюється сорбіт-желатозним стабілізатором. Його роль скоріше полягає в асоціюванні окремих компонентів і антигенів різних збудників у комплекс, ніж у підвищенні імуногенності. -Mo2134530)Yi. The vaccine acts simultaneously against three pathogens (plague, adenovirus and salmonellosis). The vaccine includes several active components: live attenuated strains of the causative agents of plague and salmonellosis, as well as a viral suspension of an inactivated adenovirus strain. In this technical solution, the stabilization of the Ezo vaccine is carried out with a sorbitol-gelatose stabilizer. Its role rather consists in associating individual components and antigens of various pathogens into a complex than in increasing immunogenicity. -
Найбільш близьким аналогом (прототипом) запропонованої корисної моделі за суттю технічного рішення та ю результату, який може бути отриманий, є патент РФ Мо2134590 - Способ изготовления инактивированной вакциньї против бешенства животньїх ІМПК7 АбЄ1КЗ39/295, Аб1К39/112, Аб1К39/235, Аб1КЗ39/1751І. Ме)The closest analogue (prototype) of the proposed useful model in terms of the technical solution and the result that can be obtained is the patent of the Russian Federation Mo2134590 - Method of production of inactivated vaccine against rabies of animals IMPK7 AbЕ1КЗ39/295, Аб1К39/112, Аб1К39/235, Аб1КЗ39/1751И . Me)
Винахід підвищує імуногенність вакцини і може бути використаний для специфічної профілактики сказу усіх видів сільськогосподарських та свійських тварин. Фіксований вірус сказу культивують у суспензійній культурі клітин ВНК-21 при 35-37 впродовж 96-144 годин. Після закінчення репродукції вірусу, до суспензії вносять, « як стабілізатор, поліакрилову кислоту або феракрил до кінцевої концентрації 0,7-1,0905. Потім, як інактиватор, додають димер етиленіміну до концентрації 0,1-0,395. Суміш інкубують при 35-372С на протязі 20-24 годин. не)The invention increases the immunogenicity of the vaccine and can be used for the specific prevention of rabies in all types of farm and domestic animals. The fixed rabies virus is cultivated in a suspension culture of VNK-21 cells at 35-37 for 96-144 hours. After the end of virus reproduction, polyacrylic acid or ferracryl is added to the suspension as a stabilizer to a final concentration of 0.7-1.0905. Then, as an inactivator, ethyleneimine dimer is added to a concentration of 0.1-0.395. The mixture is incubated at 35-372C for 20-24 hours. not)
До недоліків прототипу можна віднести використання препарату феракрил стабілізатором, який зазвичай в с медичній практиці рекомендують для місцевого зовнішнього використання, як кровоспинного фактору; рН цього ц препарату знаходиться у дуже кислій зоні рН-3,0-4,0. Відомо, що вірус сказу з дуже чутливим до низьких "» значень рН, а з другого боку відомо, що феракрил утворює згусток з білками крові та нерозчинні у воді полікомплекси з білками різного походження. Такими чином, використання вакцин зі стабілізатором феракрилом для парентерального введення може викликати ускладнення у вигляді тромбозів судин. (Се) Задача корисної моделі полягає у стабілізації вірусної вакцини шляхом застосування у якості стабілізатору такої сполуки, що є нешкідливою для організму тварин та людей, сприяє збереженню вірусних антигенів та і-й одночасно має забезпечити підвищення імуногенності вакцин впродовж усього терміну їх придатності. -І Задача вирішується тим, що при виготовленні вірусних вакцин за відомим способом, в якості стабілізатора використовують епсилон-амінокапронову кислоту - ЕАКК в кінцевій концентрації 7,0-10,095, яку додають доThe shortcomings of the prototype include the use of feracryl as a stabilizer, which is usually recommended in medical practice for local external use as a hemostatic factor; The pH of this drug is in the very acidic zone of pH-3.0-4.0. It is known that the rabies virus is very sensitive to low "" pH values, and on the other hand, it is known that feracryl forms a clot with blood proteins and water-insoluble polycomplexes with proteins of various origins. Thus, the use of ferracryl-stabilized vaccines for parenteral administration can cause complications in the form of blood vessel thrombosis. -I The task is solved by the fact that during the production of viral vaccines by a known method, epsilon-aminocaproic acid - EAKK in a final concentration of 7.0-10.095 is used as a stabilizer, which is added to
Т» вакцини після її інактивації.T" vaccine after its inactivation.
Новим у винаході є те, що як стабілізатор пропонується використання епсилон-амінокапронової кислоти, яка раніше таким чином не використовувалась.What is new in the invention is that the use of epsilon-aminocaproic acid, which was not previously used in this way, is proposed as a stabilizer.
Стабілізуючі властивості ЕАКК забезпечуються у разі використання 7,0-10,095 розчину інгібітора протеолізу.Stabilizing properties of EAKK are provided in the case of using 7.0-10.095 proteolysis inhibitor solution.
СХ 55 ЕАКК здатна попереджувати аутоліз (природне розщеплення вірусних антигенів протеолітичними ферментами, які присутні у вірусовмісному вакцинному матеріалі). рН розчинів ЕАКК складає 7,2-7,4, що є близьким до фізіологічного значення. Збереження цілісних вірусних антигенів у процесі зберігання вакцин сприяє підвищенню імуногенності таких вакцин. Крім того, такі вакцини мають бути менш алергенними, тому що стабілізатор ЕАКК здатен перешкоджати розщепленню та деструкції білкових молекул вірусного антигену, тобто додавання його до бо вакцини сприяє зберіганню непошкодженими вірусних антигенів у вакцині подовжуючи термін придатності препарату.СХ 55 EAKK is able to prevent autolysis (natural cleavage of viral antigens by proteolytic enzymes, which are present in the virus-containing vaccine material). The pH of EAKK solutions is 7.2-7.4, which is close to the physiological value. Preservation of intact viral antigens during vaccine storage helps to increase the immunogenicity of such vaccines. In addition, such vaccines should be less allergenic, because the EAKK stabilizer is able to prevent the splitting and destruction of the protein molecules of the viral antigen, that is, adding it to the vaccine helps to keep the viral antigens in the vaccine intact, extending the shelf life of the drug.
Стабілізатор ЕАКК може бути використаний для стабілізації різноманітних інактивованих вакцин, наприклад, проти сказу, грипу, герпесу та ін. (Табл.1). При виготовленні цих вакцин, інфіковані матеріали інкубують певний час для кожної вакцини у термостаті при визначеній температурі. Стабілізатор вносять до вакцини на 65 технологічній стадії, що є наступною після інактивації вірусовмісного вакцинного матеріалу. Спосіб реалізують наступним чином:EAKK stabilizer can be used to stabilize various inactivated vaccines, for example, against rabies, influenza, herpes, etc. (Table 1). In the manufacture of these vaccines, the infected materials are incubated for a specified time for each vaccine in a thermostat at a specified temperature. The stabilizer is added to the vaccine at the 65th technological stage, which follows the inactivation of the virus-containing vaccine material. The method is implemented as follows:
1. Визначають матеріал для їх виготовлення.1. Determine the material for their manufacture.
Вакцини проти сказу (антирабічна) та герпесу є культуральними вакцинами. Матеріалом для їхнього виготовлення є первинно-трипсинізовані культури клітин. - Для виробництва антирабічної вакцини сформований моношар первиннотрипсинізованої культури клітин нирок сирійського хом'яків (НСХ) інфікують вірусом сказу, штам Внуково-32. - При виготовленні культуральної інактивованої вакцини проти герпесу, яку виготовляють з двох штамів вірусів звичайного герпесу (ВЗ3Г), ВЗГ-1 (штам УС) та ВЗГ-2 (штам ВН) шляхом інфікування 24-48 годинного моношару життєздатних первинно-трипсинізованих клітин курячих фібробластів (ККФ) 10-11-добових курячих 7/о ембріонів. - Вакцина проти грипу, на відміну від двох попередніх, є ембріональною. При виготовленні інактивованої вакцини проти грипу інфікують безлейкозні курячі ембріони (БЛКЕ) епідемічне актуальними штамами вірусів грипу. 2. Інкубування інфікованих матеріалів здійснюється: - у відношенні вірусу сказу на клітинах НСХ при 322С впродовж 96-168 годин. - для штамів вірусу звичайного герпесу на клітинах ККФ - при 372С--12С до моменту розвитку цитопатичного ефекту (ЦПЕ), який полягає в ураженні клітин на 70-90965. - для штамів вірусів грипу на БЛКЕ - при температурі 32-3 82С протягом З днів.Vaccines against rabies (rabies) and herpes are cultural vaccines. The material for their production is primary trypsinized cell cultures. - For the production of anti-rabies vaccine, the formed monolayer of the primary trypsinized culture of Syrian hamster kidney cells (NSH) is infected with the rabies virus, Vnukovo-32 strain. - In the production of a cultural inactivated vaccine against herpes, which is made from two strains of common herpes viruses (VZ3G), VZG-1 (US strain) and VZG-2 (VN strain) by infecting a 24-48-hour monolayer of viable primary trypsinized cells of chicken fibroblasts (CCF) 10-11-day-old chicken 7/o embryos. - The flu vaccine, unlike the previous two, is embryonic. In the production of an inactivated vaccine against influenza, leukemia-free chicken embryos (BLKE) are infected with epidemic current strains of influenza viruses. 2. Incubation of infected materials is carried out: - in relation to the rabies virus on HSC cells at 322C for 96-168 hours. - for strains of herpes simplex virus on CCF cells - at 372С--12С until the development of the cytopathic effect (CPE), which consists in damaging the cells by 70-90965. - for strains of influenza viruses on the BLKE - at a temperature of 32-382C for 3 days.
По закінченні строків інкубації вірусовмісні матеріали збирають у вигляді клітинних суспензій, згідно з правилами техніки безпеки та технології виготовлення культуральних (антирабічної і протигерпетичної) вакцин, та алантоїсної рідини - для отримання вакцини проти грипу.At the end of the incubation period, virus-containing materials are collected in the form of cell suspensions, in accordance with the rules of safety technology and the technology of production of cultural (rabies and herpes) vaccines, and allantoic fluid - to obtain an influenza vaccine.
З. Етап інактивації вакцин також має свої особливості для різних вакцин: - вакцинний матеріал антирабічної вакцини інактивують ультрафіолетовим опромінюванням (УФО); - вірусовмісну рідину протигрипозної вакцини інактивують УФО після додаткового очищення за допомогою диференціального й градієнтного центрифугування; - - вірусовмісний матеріал герпетичної вакцини (після розщеплення вірусів на складові антигени за допомогою октоксинол-9 або твін-ефіру) також інактивують формаліном. 4. Стабілізація вакцин здійснюється додаванням ЕАКК у всі вакцини після інактивації вірусів. До антирабічної та герпетичної вакцин ЕАКК додають до кінцевої концентрації її у вакцині 10,095, до грипозної ч«ф вакцини достатньо було внести цей стабілізатор до його вмісту в вакцині 7,095 (Табл.1). Підбір концентрації стабілізатору ЕАКК здійснювався емпірично. Було встановлено, що ЕАКК у концентрації меньше 7,095 не - приводила до вираженого стабілізуючого ефекту; в інтервалі концентрацій 7,0-1095 мав місце оптимальний стабілізуючий вплив, а збільшення концентрації понад 10,095 - цей ефект вже не підвищувало. б» зв «C. The stage of inactivation of vaccines also has its own characteristics for different vaccines: - the vaccine material of the rabies vaccine is inactivated by ultraviolet irradiation (UFO); - the virus-containing liquid of the influenza vaccine is inactivated by UFO after additional purification using differential and gradient centrifugation; - - the virus-containing material of the herpes vaccine (after splitting the viruses into component antigens with the help of octoxynol-9 or twin ether) is also inactivated with formalin. 4. Stabilization of vaccines is carried out by adding EAKK to all vaccines after virus inactivation. EAKK is added to the anti-rabies and herpes vaccines to a final concentration of 10.095 in the vaccine, to the flu vaccine it was enough to add this stabilizer to its content in the vaccine 7.095 (Table 1). Selection of the EAKK stabilizer concentration was carried out empirically. It was established that EAKK in a concentration of less than 7.095 did not lead to a pronounced stabilizing effect; in the concentration range of 7.0-1095 there was an optimal stabilizing effect, and an increase in concentration above 10.095 did not increase this effect. b" zv "
ЗWITH
- Контроль якості усіх вакцин проводять на кожній стадії виробництва. Перевіряють активність вірусів після "» інфікування культур клітин (ембріонів), концентрацію вірусу у зібраному матеріалі. Після завершення усіх процедур очищення перевіряють якість очищеного препарату. Після інактивації вакцина перевіряють на наявність залишкової активності нативного вірусу. Фінальна перевірка якості вакцини полягає у визначенні (Се) відсутності вірусів людини та птахів, якими можуть бути контаміновані використані біологічні матеріали. Кожна виробнича серія вакцини має власний паспорт якості. і-й Використання запропонованого способу дає можливість водночас стабілізувати отриманий вакцинний -І матеріал, захищаючи через інгібування процесу аутолізу антигенні білкові структури від природного розщеплення, та подовжувати строки зберігання як матеріалу. Окрім того, інгібування протеолітичних процесів- Quality control of all vaccines is carried out at each stage of production. The activity of viruses after infection of cell cultures (embryos) is checked, the concentration of the virus in the collected material. After the completion of all purification procedures, the quality of the purified drug is checked. After inactivation, the vaccine is checked for the presence of residual activity of the native virus. The final check of the quality of the vaccine consists in determining (Se) the absence of human and bird viruses that can contaminate the used biological materials. Each production batch of the vaccine has its own quality passport. The use of the proposed method makes it possible to simultaneously stabilize the obtained vaccine -I material, protecting antigenic protein structures from natural cleavage through the inhibition of the autolysis process , and extend the shelf life of the material.In addition, inhibition of proteolytic processes
Т» дозволяє підвищити імуногенність вакцин та зменшити їх алергенність.T" allows to increase the immunogenicity of vaccines and reduce their allergenicity.
Приклад 1Example 1
Виготовлення антирабічної вакциниProduction of anti-rabies vaccine
Була вивчена можливість стабілізувати її та підвищити імуногенність антирабічної вакцини за допомогоюThe possibility of stabilizing it and increasing the immunogenicity of the rabies vaccine with the help of
СХ 55 ЕАКК, яку додавали до інактивованої вакцини. Вакцину готували шляхом інфікування вірусом сказу (штам "Внуково-32") культури первинно-трипсинізованих клітин нирок сирійського хом'яка. Інфекційний титр вакцинного матеріалу дорівнював 5,59 ТІДОО, Імунізацію контрольних та дослідних тварин (білих мишей) проводили внутрішньочеревне, двічі з інтервалом у тиждень, інактивованою антирабічною вакциною. Контрольних тварин імунізували вакциною без стабілізатора, а дослідних мишей - вакциною, яка вміщувала як стабілізатор ЕАКК в бо кінцевій концентрації 1095. Через 7 днів після другої імунізації тварин інфікували інтрацеребрально патогенним для мишей вірусом сказу, штам СУ5. Ефективність вакцинації підраховували за загибеллю тварин на протязі 14 діб після зараження. Результати, наведені у таблиці 2, свідчать, що тварини, які були проімунізовані вакциною з ЕАКК мали на 2195 більший ступінь захисту проти летальної інфекції, яка викликана вірусом сказу штаму СУ5. 5CX 55 EAKK, which was added to the inactivated vaccine. The vaccine was prepared by infecting a culture of primary trypsinized Syrian hamster kidney cells with the rabies virus (strain "Vnukovo-32"). The infectious titer of the vaccine material was equal to 5.59 TIDOO. Immunization of control and experimental animals (white mice) was carried out intraperitoneally, twice with an interval of a week, with an inactivated anti-rabies vaccine. Control animals were immunized with a vaccine without a stabilizer, and experimental mice with a vaccine that contained EAKK as a stabilizer in a final concentration of 1095. 7 days after the second immunization, the animals were infected intracerebral with the rabies virus, strain SU5, which is pathogenic for mice. The effectiveness of vaccination was calculated by the death of animals within 14 days after infection. The results shown in Table 2 indicate that the animals that were immunized with the EACC vaccine had a 2195 greater degree of protection against lethal infection caused by the SU5 rabies virus. 5
Вплив ЕАКК на захист білих мишей при їх імунізації антирабічною вакциною но й йThe influence of EAKK on the protection of white mice during their immunization with anti-rabies vaccine
Отже, можна дійти висновку, що антирабічна вакцина, за умов додавання ЕАКК, сприяє утворенню більш високого рівня віруснейтралізуючих антитіл проти сказу. Ці антитіла забезпечують більш надійний захист тварин від загибелі при моделюванні у них летальної інфекції. Таким чином, ЕАКК проявляє у вакцині нову якість - імуномодулюючу дію. 70 Приклад 2So, it can be concluded that the anti-rabies vaccine, under the conditions of adding EAKK, contributes to the formation of a higher level of virus-neutralizing antibodies against rabies. These antibodies provide more reliable protection of animals from death when simulating a lethal infection in them. Thus, EAKK exhibits a new quality in the vaccine - an immunomodulatory effect. 70 Example 2
Виготовлення грипозної вакцини. Була вивчена властивість ЕАКК щодо стабілізації та імуностимуляції при введенні її до інактивованої грипозної хроматографічної вакцини (ІГХВ), виготовленої із штаму вірусу грипу А /Ленінград/3 35/8 (НЗМ2). Вакцинний матеріал отримували шляхом інфікування курячих ембріонів вірусом грипу штаму А /Ленінград/3 З 5/8 (НЗМ2) з очищенням вірусовмісної алантоїсної рідини методом диференційного 75 центрифугування і подальшою фільтраційною хроматографією на макропористому силохромі. Цей вірусний матеріал інактивували ультрафіолетовим опромінюванням. Потім до вакцинного матеріалу додавали ЕАКК до кінцевої концентрації 7,095. Проводили вакцинацію білих безпородних мишей, імунізуючи їх внутрішньочеревне два рази з інтервалом 14 діб вакцинним матеріалом з додаванням ЕАКК (дослід) або без додавання стабілізатору (контроль). Кров забирали проводили через 14 днів після повторної імунізації і в сироватках крові визначали титри антитіл в реакції гальмування гемагглютінації. Дослідження показали, що після імунізації тварин вакциной з 7,095 Е-АКК титри антитіл після дворазової імунізації були у 1,86 раз вище, ніж у тварин, вакцинованих без додавання у вакцину ЕАКК. Рівень антитіл у імунізованих тварин визначали після імунізації їх аналогічними вакцинними матеріалами Через З та 12 місяців зберігання вакцини. По трьох місяцях зберігання препаратів було показано, що за умов дворазової імунізації мишей вакциною з ЕАКК титри віруснейтралізуючих антитіл у крові імунізованих тварин підвищились у 2,2 рази, а через рік зберігання вакцини зі стабілізатором титри віруснейтралізуючих антитіл підвищились в 1,31 раза у порівнянні з - результатами імунізації тварин вакциною, яка зберігалося без стабілізатора (Табл.3). зProduction of influenza vaccine. The stabilizing and immunostimulating property of EACC was studied when it was added to the inactivated influenza chromatographic vaccine (IHCV) made from the strain of influenza virus A/Leningrad/3 35/8 (НЗМ2). The vaccine material was obtained by infecting chicken embryos with influenza virus strain A/Leningrad/3 Z 5/8 (НЗМ2) with purification of virus-containing allantoic fluid by the method of differential 75 centrifugation and subsequent filtration chromatography on macroporous silochrome. This viral material was inactivated by ultraviolet irradiation. EACC was then added to the vaccine material to a final concentration of 7.095. White outbred mice were vaccinated by immunizing them intraperitoneally twice with an interval of 14 days with vaccine material with the addition of EAKK (experiment) or without the addition of a stabilizer (control). Blood was collected 14 days after re-immunization, and titers of antibodies in the hemagglutination inhibition reaction were determined in blood sera. Studies have shown that after immunization of animals with a vaccine containing 7.095 E-ACC, antibody titers after a two-time immunization were 1.86 times higher than in animals vaccinated without adding EACC to the vaccine. The level of antibodies in immunized animals was determined after their immunization with similar vaccine materials. After 3 and 12 months of vaccine storage. After three months of storage of the preparations, it was shown that under the conditions of two-time immunization of mice with the EAKK vaccine, the titers of virus-neutralizing antibodies in the blood of immunized animals increased by 2.2 times, and after a year of storage of the vaccine with a stabilizer, the titers of virus-neutralizing antibodies increased by 1.31 times compared to - the results of immunization of animals with a vaccine that was stored without a stabilizer (Table 3). with
Умови експерименту / Кількість тварин по групах у ійConditions of the experiment / Number of animals by group in iy
ФF
Зо Приклад ЗFrom Example Z
Вакцину проти герпесу отримували шляхом інфікування культури клітин ККФ двома штамами вірусу « звичайного герпесу: ВЗГ-1 (штам УС) та ВЗГ-2 (штам ВН), за стандартною методикою культуральних вакцин.The vaccine against herpes was obtained by infecting the culture of CCF cells with two strains of the common herpes virus: VZH-1 (US strain) and VZH-2 (VN strain), according to the standard method of cultured vaccines.
Інактивацію вірусів проводили формаліном, який додавали до кінцевої концентрації 1:2000. Через 10 діб для - нейтралізації формаліну до вакцини додавали 2,295 розчин бісульфату натрію з розрахунку 22мл на 1 літр т0 вакцини і доводили рН до 7,2-7,4. Далі завісь центрифугували на 2500об/хв впродовж 30-2 хвилин при с температурі 44-20. Вірусовмісну надосадову рідину витримували при 42С на протязі 7 днів при періодичному :з» помішуванні. Після проведення контролей на стерильність (відсутність бактерій та мікоплазми) і імуногенність, напівфабрикати вакцини кожного штаму ВЗГ поєднували в серію мультивалентної вакцини у співвідношенні об'ємів 1:1. На наступній стадії до вакцини додавали ЕАКК у кінцевій концентрації 1095. Вакцину розміщували у с но холодильнику на 2 тижні при температурі 3-13, фильтрували і стерильно розливали в ампули. Для вивчення можливості ЕАКК стабілізувати вакцину та підвищувати її імуногенність, білих щурів масою 100-150г імунізували 1 вакцинними матеріалами, що містили ЕАКК (дослід), та вакциною без додавання ЕАКК (контроль). Імунізацію як - дослідних, так і контрольних тварин проводили тричі, послідовно через З дні, вводячи вірус внутрішньочеревне вро 1,О0мл. Забор крови проводили з хвостової вени щурів на 10 и 32 день після останньої імунізації. Сироватки ї» крови прогрівали при 6б0еС на протязі ЗО хвилин. У цих сироватках визначали титри протигерпетичних антитіл, використовуючи реакцію нейтралізації цитопатичної дії, що спричиняється вірусовмісними матеріалами, на культурі тканини ККФ (Табл.4).Inactivation of viruses was carried out with formalin, which was added to a final concentration of 1:2000. After 10 days, to neutralize the formalin, a 2.295 sodium bisulfate solution was added to the vaccine at the rate of 22 ml per 1 liter of vaccine and the pH was adjusted to 7.2-7.4. Next, the suspension was centrifuged at 2500 rpm for 30-2 minutes at a temperature of 44-20 °C. The virus-containing supernatant was kept at 42C for 7 days with occasional stirring. After checking for sterility (absence of bacteria and mycoplasma) and immunogenicity, the semi-finished vaccine of each strain of VZH was combined into a series of multivalent vaccines in a volume ratio of 1:1. At the next stage, EAKK was added to the vaccine in a final concentration of 1095. The vaccine was placed in a refrigerator for 2 weeks at a temperature of 3-13, filtered and sterilely poured into ampoules. To study the ability of EACC to stabilize the vaccine and increase its immunogenicity, white rats weighing 100-150 g were immunized with 1 vaccine materials containing EACC (experiment) and a vaccine without the addition of EACC (control). Immunization of both experimental and control animals was carried out three times, successively every 3 days, by injecting the virus intraperitoneally in 1.00 ml. Blood was collected from the tail vein of rats on the 10th and 32nd day after the last immunization. Blood sera were warmed at 6°C for 30 minutes. In these sera, titers of antiherpetic antibodies were determined using the reaction of neutralization of the cytopathic effect caused by virus-containing materials on the CCF tissue culture (Table 4).
Су; 60 : : й .Su; 60 :: and .
Аналіз отриманих результатів титрування показав, що при додаванні до протигерпетичної вакцини для стабілізації ЕАКК, забезпечує підвищення титрів антитіл до герпесу у 10 разів у порівнянні з вакцинним матеріалом, що не містив ЕАКК.The analysis of the obtained titration results showed that when added to the antiherpetic vaccine to stabilize EACC, it provides a 10-fold increase in the titers of antibodies to herpes compared to the vaccine material that did not contain EACC.
Наведені приклади ілюструють здійсненність способу на 3-х вакцинах. Але, враховуючи ту властивість ЕАКК, що її використано для стабілізації, а саме, інгібування протеолітичного процесу, цей засіб може бути бо використаний так само і для інших інактивованих вакцин.The given examples illustrate the feasibility of the method on 3 vaccines. But, taking into account the property of EAKK that it is used for stabilization, namely, inhibition of the proteolytic process, this agent can be used in the same way for other inactivated vaccines.
Таким чином, на відміну від прототипу, запропонований стабілізатор для вакцин є не тільки нешкідливим для організму людини та тварини, але й здійснює імуностимулюючий вплив при введенні вакцини, підвищуючи антителоутворення, що підтверджує підвищення імуногенності самої вакцини.Thus, unlike the prototype, the proposed stabilizer for vaccines is not only harmless to the human and animal body, but also has an immunostimulating effect when the vaccine is administered, increasing antibody formation, which confirms the increase in the immunogenicity of the vaccine itself.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA20041210763U UA9574U (en) | 2004-12-27 | 2004-12-27 | Method for manufacturing viral vaccines |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA20041210763U UA9574U (en) | 2004-12-27 | 2004-12-27 | Method for manufacturing viral vaccines |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA9574U true UA9574U (en) | 2005-10-17 |
Family
ID=35519003
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA20041210763U UA9574U (en) | 2004-12-27 | 2004-12-27 | Method for manufacturing viral vaccines |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA9574U (en) |
-
2004
- 2004-12-27 UA UA20041210763U patent/UA9574U/en unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sikes et al. | Effective protection of monkeys against death from street virus by post-exposure administration of tissue-culture rabies vaccine | |
| ES2350109T3 (en) | PROCEDURE FOR THE INACTIVATION OF VIRUSES WITH LIPID WRAP. | |
| EP2172543B1 (en) | Process for the replication of influenza viruses in cell culture, and the influenza viruses obtainable by the process | |
| US6048537A (en) | Method for preparing an influenza virus, antigens obtained and applications thereof | |
| RU2710239C1 (en) | Method of producing antigen or antigens for production of influenza vaccine and a vaccine based on it | |
| CN102406930A (en) | Method for preparing seasonal influenza virus split vaccine | |
| AU2008272428B2 (en) | Adaptation of Pitman Moore strain of rabies virus to Primary chick embryo fibroblast cell cultures | |
| Klockmann et al. | Preclinical investigations of the safety, immunogenicity and efficacy of a purified, inactivated tick-borne encephalitis vaccine | |
| RU2603003C1 (en) | Inactivated sorptive vaccine to fmd types a, o, asia-1 | |
| Tabynov et al. | Immunogenic and protective properties of the first Kazakhstan vaccine against pandemic influenza A (H1N1) pdm09 in ferrets | |
| RU2143921C1 (en) | Vaccine against foot and mouth of type a and method of its preparing | |
| CN101732716B (en) | Antigen-antibody complex for preventing and/or treating avian influenza | |
| RU2754398C1 (en) | Method for obtaining a tetravalent vaccine for the prevention of influenza | |
| CN109134646A (en) | The preparation method and its product of I group of 4 type aviadenovirus Yolk antibody of serum | |
| UA9574U (en) | Method for manufacturing viral vaccines | |
| CN100393358C (en) | Preparation of horse family animal anti human, pultry grippe immune globulin and its medicinal preparation | |
| RU2220744C1 (en) | Vaccine against foot-and-mouth asia-1 type and method for it preparing | |
| RU2212895C2 (en) | Vaccine against o-type foot-and-mouth disease and method for its preparing | |
| RU2294760C2 (en) | Sorbed inactivated vaccine against foot-and-mouth disease of type a | |
| Pöri | Development of vaccines | |
| RU2526570C2 (en) | Inactivated sorbent type a foot-and-mouth disease vaccine | |
| CN117882727B (en) | Virus inactivating agent and preparation method and application thereof | |
| RU2563345C1 (en) | Inactivated sorbed vaccine against fmd of type a | |
| RU2056861C1 (en) | Mixed vaccine against anthrax and foot-and-mouth and a method of anthrax and foot-and-mouth prophylaxis | |
| RU2604414C2 (en) | Live vaccine for preventing influenza and preparation method thereof |