WO1994004504A1 - Regulateur d'apoptose - Google Patents

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WO1994004504A1
WO1994004504A1 PCT/JP1993/001144 JP9301144W WO9404504A1 WO 1994004504 A1 WO1994004504 A1 WO 1994004504A1 JP 9301144 W JP9301144 W JP 9301144W WO 9404504 A1 WO9404504 A1 WO 9404504A1
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WO
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lower alkyl
alkyl group
benzoyl
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PCT/JP1993/001144
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English (en)
French (fr)
Inventor
Satoru Nakai
Koutoku Aihara
Hideo Tanaka
Hitomi Iba
Kazuyoshi Kawai
Hiroyuki Ichikawa
Seiji Akamatsu
Fumio Saito
Michiaki Tominaga
Masakazu Adachi
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/20—Oxygen atoms
    • C07D215/22—Oxygen atoms attached in position 2 or 4
    • C07D215/227—Oxygen atoms attached in position 2 or 4 only one oxygen atom which is attached in position 2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/38—Nitrogen atoms

Definitions

  • the present invention relates to new apoptotic regulators.
  • the apoptosis controlling agent of the present invention includes compounds represented by the following general formulas (1) to (6) (hereinafter, referred to as “compound (1)” to “compound (6)”) and (7) 6— [4— (3,4-Dimethoxybenzoyl) 1 1—1,2,3,4-tetrahydrobirazil] 1,3,4—Dihydrocarbostyril (hereinafter referred to as “compound”) (7) ”) and at least one selected from the group consisting of a carbostyril derivative and a salt thereof.
  • R is a group selected from the group consisting of a lower alkoxy group, a halogen atom, a lower alkyl group, a lower alkanoylamino group and a lower alkylthio group as a substituent on the phenyl group;
  • a benzoyl group or a benzyl group having a lower alkenyloxy group which may have 1 to 3 hydrogen atoms, a hydrogen atom, a pyridylcarbonyl group, a lower alkane sulfonyl group, a lower alkynyl group, or a phenyl group.
  • R 2 () represents a hydrogen atom, a lower alkyl group, a lower alkenyl group, a lower alkynyl group or a phenyl lower alkyl group.
  • R 2 i is a hydrogen atom or a lower alkoxy group.
  • R ⁇ and R 2 1 is DOO-out
  • R is shall not be there Benzoi Le group and this to have a lower alkoxy group as a substituent on Funiniru ring hydrogen atoms.
  • R i represents a group —N—R (R 3 represents a hydrogen atom or an benzyl group and R represents an oxo group).
  • R 3 represents a hydrogen atom or an benzyl group and R represents an oxo group.
  • R 3 is a lower alkanol group, a lower alkoxycarbonyl group, a lower alkoxycarbonyl lower alkyl group, or a phenyl lower group having a lower alkenyl group or a hydroxyl group on a phenyl ring.
  • An alkyl group, a benzoyl group or a naphthoyl group which may have a group selected from the group consisting of an amino group having a hydroxyl group and a lower alkyl group as a substituent on a phenyl ring; Represents a hydroxyl group.
  • RD represents a benzoyl group which may have a lower alkoxy group on the phenyl ring.
  • R 7 represents a piperazinyl group.
  • R 8 represents a hydrogen atom or a lower alkyl group.
  • R 9 represents a hydrogen atom or a phenyl lower alkyl group.
  • the bonds at the 3- and 4-positions of the carbostyril skeleton represent a single bond or a double bond.
  • R 2 2 is C i one C ⁇ 6 alkyl group, full Weniru lower alkoxide aryloxycarbonyl lower alkyl group, a is A mi de a lower alkyl group or a full Niniru lower Arukiru group and this to have a lower alkyl group Show.
  • R 2 3 represents a certain Pipera Jiniru group and this with a lower ⁇ alkyl group at the 4-position of Pipera di down ring.
  • R 24 has a hydrogen atom, a phenyl-lower alkyl group, a benzoyl-lower alkyl group, or 1 to 3 or lower alkyloxy groups on a phenyl ring. Shows a certain benzoyl group.
  • each compound has an apoptosis which is difficult to predict from the above-mentioned known effects possessed by the compounds. It has been found that it has a regulating action (suppression or promotion action). .
  • necrosis This is morphologically characterized by significant mitochondrial swelling, cytoplasmic swelling, nuclear degeneration followed by cell disruption and autolysis, and occurs both passively and accidentally. Tissue death is generally recognized by physical trauma to cells or chemical toxicants.
  • apoptosis programmed cell death
  • apoptosis programmed cell death
  • the wheel also reports that apoptosis of thymocytes induced by glucocorticoid is accompanied by activation of endonuclease in cells (WH 1 ie , AH, Nature, 284, 555-556 (1986)).
  • the DNA of cells undergoing apoptosis due to endonuclease activity is fragmented to the level of the oligonucleotide, which is facilitated by agarose gel electrophoresis. Can be confirmed.
  • the apoptosis is considered to be pre-programmed cell death observed in the process of development, differentiation and tissue turnover (Wy 11 ie, A. 11., eta I , Int. Rev. Cy tol., 61, 251-306 (1980)).
  • the apoptosis described above is based on the process of embryonic development and physiological cell death observed in cells with active cell rotation (eg, liver, adrenal cortex, prostate, etc.), darcocorticoid treatment, and cytotoxicity.
  • active cell rotation eg, liver, adrenal cortex, prostate, etc.
  • cytotoxicity e.g., IL-12, IL-12, etc.
  • TNF tumor necrosis factor
  • LT lymphotoxin
  • the apoptosis is inhibited by actinomycin D, an RNA synthesis inhibitor.
  • Cycloheximide induces apoptosis in acute leukemia cells
  • actinomycin D induces apoptosis in small intestinal crypt cells
  • both induce apoptosis in HL-60 cells MaMin, S.).
  • Eta 1. J. Immuno 1., 145, 1859-1867 (1990)
  • Cycloheximide is present before X-ray irradiation and suppresses apoptosis of lymphoid tumor cells, which has been increased by X-ray irradiation.
  • apoptosis is increased, and it has been suggested that the suppression or promotion of apoptosis may involve cell types and conditions and other mechanisms (Tadahiko Igarashi et al. Journal, H4 (19U)).
  • the differentiation, proliferation, and maturation of cells are closely related to apoptosis, and substances having an action related to the differentiation, proliferation, etc. of such cells are also related to apoptosis.
  • anti-Ap0-I antibodies have been used to treat cancer as a treatment associated with apoptosis.
  • MDS myelodysplastic syndromes
  • RA ⁇ refractory anemia
  • RARS sideroblastic anemia
  • a retinoid as a hematopoietic cell differentiation inducer.
  • Acid-activated vitamin D ⁇ and GM-CSF as an apoptotic regulator that suppresses excess apoptosis in platelet-producing cells. It is desirable to use a combination of IL-3 and RAEB in which blast proliferation is predominant.
  • the above-mentioned retinoic acid-activated vitamin D 3 As a differentiation-inducing agent that induces differentiation of hematopoietic cells into blasts, it is also useful as an etopoid (e10p0 side) or aclarubicin.
  • NGF nerve growth factor
  • Clark distinguishes spontaneous neuronal cell death into three types, in which the morphological characteristics of type I are consistent with apoptosis, and by the removal of growth factors In cell death, type I cell death occurs and DNA fragmentation occurs, so this is considered an apoptosis (Uark, PG1 and ARa a).
  • basal forebrain cortex which is known to be damaged by Alzheimer's disease when NGF is administered to aging and learning-impaired rats.
  • NGF acts on synergistic neurons to restore learning disability (Fischer, W., et a 1., ature, 329, 65 (1987): Barde YA, Neuron, 2_ ⁇ 1525) (1989): Hatanaka, H., Develop Brain Res., 30, 47 (1986): Hatanaka, H., e a 1., Develop Brain Res., 39, 85 (1988)).
  • liver injury due to drug-resistant viral hepatitis drugs or viral infections can be used either directly or through immunological mechanisms. Apoptosis is thought to be involved in liver damage (Bursh., Eta 1., TiPS, III, 245-251 (1992)).
  • hepatocytes are proliferated by mitogen, resulting in a hyperplastic state. This state is normal due to hepatocyte sloughing death, that is, apoptosis.
  • the apoptosis has been observed in the liver, such as in hyperplastic liver, hyperplastic nodules and liver cancer (ColumbaDo, et al., Lab. Invest., 670-675 (1985)).
  • the apoptosis-regulating agent of the present invention has an apoptosis-regulating ability, and is useful for treating and preventing various diseases as described above based on this action. More specifically, the modulator of the present invention includes, for example, cancer; AIDS, ARC
  • AIDS-related diseases ATL (Adult T-cell leukemia: Adult T-ce 11 1 eu cemi a), Hairy cell leukemia (Hairy cell 1 eucemi a), Myelopathy (HAMTSP), Respiratory disorders ( HAB ZH ABA), arthropathy (HAAP), Bud meningitis (HAU) and other HIV or HTLV-1 related diseases, and hepatitis C and other retroviral-related diseases; SLE (systemic lupus erythematosus) Disease such as rheumatoid arthritis (RA), ulcerative colitis, Siegren's syndrome, primary biliary cirrhosis, and sudden thrombocytopenic purpura O diop ⁇ hic Thrombocy to enic Purapura (ITP) Autoimmune hemolytic anemia, myasthenia gravis, Hashimoto's disease, autoimmune diseases such as insulin-dependent (type I) diabetes; myelodysplastic
  • Halogen atoms include fluorine, chlorine, bromine and iodine atoms.
  • lower alkylenedioxy group examples include straight-chain or branched groups having 1 to 4 carbon atoms, such as methylenedioxy, ethylenedioxy, trimethylenedioxy, and tetramethylenedioxy groups.
  • An example is a linear alkylenedioxy group.
  • One or three or lower alkyl groups selected from the group consisting of lower alkoxy groups, halogen atoms, lower alkyl groups, lower alkanoylamino groups and lower alkylthio groups as substituents on the phenyl ring.
  • Benzyl groups that may have a hydroxy group include benzoyl, 2—black mouth benzoyl, 3—black mouth benzoyl, and 41 black mouth benzoyl.
  • Benzyl® having an alkylene dioxy group of 4 to 4 can be exemplified.
  • Lower alkyl groups include methyl, ethyl, propyl, Examples thereof include linear or branched alkyl groups having 1 to 6 carbon atoms, such as isopropyl, butyl, tert-butyl, pentyl, and hexyl groups.
  • phenyl lower alkyl groups include benzyl, 2-phenylenyl, 1-phenylethyl, 3-phenylpropyl, 4-phenylbutyl, 1,1-dimethyl-2-phenylphenyl, 5-phenylpentyl, and 6-phenylpentyl.
  • phenylalkyl group which is a linear or branched alkyl group having 1 to 6 carbon atoms in the alkyl moiety such as phenylhexyl, 2-methyl-3-phenylphenyl group and the like.
  • Amino groups that may have a lower alkanol group include amino, honolemilamine, acetylamino, propionylamino, butyrinolemino, and isobutylinoleminino.
  • An amino group with a letter can be exemplified.
  • Lower alkylthio groups include methylthio, ethylthio, propylthio, isopropylthio, butylthio, ter! —
  • Examples of the lower alkanoyloxy group include those having 1 to 1 carbon atoms such as formyloxy, acetyloxy, propionyloxy, petityloxy, isobutylinoleoxy, pentanoinoleoxy, tert-butylcarbonyloxy, and hexanoyloxy.
  • 6 straight-chain or branched-chain alkanoyloxy groups can be exemplified. .
  • Examples of the lower alkanol group include straight-chain or branched-chain groups having 1 to 6 carbon atoms such as formyl, acetyl, propionyl, butyrinole, pentanol, and hexanol. Alkanol groups of the formula (1).
  • a phenyl lower alkyl group having a lower alkanoyloxy group or a hydroxyl group as a substituent on the phenyl ring 2—, 3— or 4-hydroxybenzyl, 2—
  • the lower alkoxy group for example, a methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, tert-butoxy, pentyloxy, hexyloxy group, etc. straight-chain or branched-chain having from! To 6 carbon atoms.
  • An alkoxy group can be exemplified.
  • the benzoyl group which may have a lower alkoxy group as a substituent on the phenyl ring include, for example, benzoyl, 2-methoxybenzoyl, and 3-methoxybenzene.
  • Examples of the lower alkyl group which may have a hydroxyl group include, in addition to the unsubstituted lower alkyl group, for example, hydroxymethyl, 2-hydroxyhydryl, 1-hydroxylethyl, and 3-hydroxypropyl.
  • a straight-chain or branched-chain alkyl group having 1 to 6 carbon atoms and having a hydroxyl group such as a tyl-13-hydroxypropyl group can be exemplified.
  • Examples of the lower alkenyl group include linear chains having 2 to 6 carbon atoms, such as vinyl, arylsole, 2-butenyl, 3-butenyl, 1-methylaryl, 2-pentenyl, and 2-hexenyl. Or a branched alkenyl group.
  • Examples of the lower alkane sulfonyl group include methansulfonyl, ether sulfonyl, and broha. N-sulfonyl, isopropane-sulfonyl, butanth-sulfonyl, (eri-butanesulfonyl, pentansulfonyl, hexansulfonyl, etc.). 6 straight or branched alkyl groups Sulfonyl group.
  • the lower alkoxycarbonyl group includes carbon atoms such as methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, propoxycarbonyl, isopropoxycarbonyl, butoxycarbonyl, tert-butoxycarbonyl, pentyloxycarbonyl, and hexyloxycarbonyl. Examples thereof include a carbonyl group having 1 to 6 linear or branched alkoxy groups.
  • the phenyl lower alkyl group which may have 1 to 3 groups selected from the group consisting of a lower alkoxy group, a lower alkyl group and a halogen atom as a substituent on the phenyl ring includes the above-mentioned phenyl lower alkyl group.
  • a benzoyl group which may have a substituent selected from the group consisting of an amino group and a hydroxyl group which may have a lower alkyl group;
  • Examples of the piperazinyl group which may have a lower alkyl group at the 4-position of the piperazine ring include, for example, piperazinyl, 4-methyltin-1-piperazinole, 4-ethynole-1 1-pidinazinole , 4 —Pro pinolei 1 —Piperazinyl, 4-butyl 1-piperazinyl, 410 ert—Butyl 1-piperazinyl, 4 1-pentyl 1-1-piperazinyl, 4-hexyl 1-1-piperazinyl Examples thereof include a piperazinyl group which may have a linear or branched alkyl group having 1 to 6 carbon atoms at the 4-position of the piperazin ring such as a group.
  • a lower alkoxy group on a phenyl ring A benzoyl group which may have up to 3 or lower alkylene dioxy groups is, for example, a substituent on the phenyl ring. Same as benzoyl group which may have lower alkoxy group In addition to the groups of 3,4 -methylenedioxybenzoyl, 3,4 -ethylenedioxybenzoyl, 2,3 -methylenedioxybenzoyl, 3,4 — Trimethylenedioxybenzoyl, 2, 3 — Is there possibly one to three alkoxy groups having 1 to 6 carbon atoms on a phenyl ring such as tetramethylenedioxybenzoyl group? Or a benzoyl group having an alkylenedioxy group having 1 to 4 carbon atoms.
  • Examples of the ci—c 16 alkyl group include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, tert-butyl, pentyl, hekinl, heptyl, octyl, nonyl, decyl, and decyl. And dodecyl, tridecyl, tetradecyl, pentadecyl, hexadecyl and the like, and linear or branched alkyl groups having 1 to 16 carbon atoms.
  • Examples of the lower alkynyl group include those having 2 to 2 carbon atoms such as ethynyl, propargyl, 2-butynyl, 1-methyl-2-propargyl, 2-pentynyl, and 2-hexynyl.
  • lower alkoxycarbonyl lower alkyl groups include methoxycarbonylmethyl, 3-methoxycarbonylpropyl, 4-ethoxycarbonylbutyl, 6-propoxycarbonylhexyl, and 5— I-Sopropoxy carbonyl, 5-sopropropoxycarbonyl Tyl, 1, 1-dimethyl 2-, butoxycarbylethyl, 2-methyl 3-, tert-butoxycarbonylpropyl, 2-pentyloxycarbonylethyl, hexyloxycarbonylmethyl
  • alkoxycarponylalkyl group having 1 to 6 carbon atoms in the alkoxy moiety such as a group and 1 to 6 carbon atoms in the alkyl moiety.
  • Examples of the lower alkanoylamino group include, for example, formylamino, acetylamino, propionylamino, butyrinolemino, isobutyflaremino, and pentanoisoleamino.
  • Examples thereof include straight-chain or branched-chain alkanoamino groups having 1 to 6 carbon atoms, such as tert-butylcarbonylamino and hexanoylamino groups.
  • amino group which may have a lower alkyl group examples include, for example, amino, methylamino, ethylamino, propylamino, isopropylamino, and n-butylamino. , Iert — butisorea mino, pentisolea mino, hexaflare mino, dimethinorea mino, getyla mino, dipropylamino, diisopropinorea mino, di-n-butinorea mino, dipentyla Mino, dihexylamino, methyl, ethylamino, methyl, propylamino, —methyl, n-butylamino, ethyl, pentylamino, propyl, hexylamino Number of carbon atoms in the alkyl portion of the group, etc.].
  • An amino group which may have one or two alkyl groups as a kill group can be exemplified.
  • phenyl-lower alkoxycarbonyl-lower alkyl group examples include phenylmethoxycarbonylmethyl, 2- (2-phenylethoxycarbonyl) ethyl, 1- (1-phenylethoxycarbonyl) ethyl, and 3- (3- Phenylpropoxycarbonyl) propyl, 4- (4-phenylbutoxycarbonyl) butyl, 1,1-dimethyl-2- (2-phenylethoxycarbonyl) ethyl, 5- (5-phenylopentyloxy)
  • the alkyl moiety such as carbonyl) pentyl, 6- (6-phenylhexyloxycarbonyl) hexyl, 2-methyl-3- (3-phenylpropoxylpropionyl) propyl, etc.
  • a phenylalkoxycarbocarboxy group having a branched chain alkyl group and 1 to 6 carbon atoms in the alkoxy moiety Ru can be exemplified
  • Benzoyl lower alkyl groups include, for example, benzoyl olemethyl, 2—benzoyl oleethyl, 2—benzoyl pill, 3—benzoyl propyl, 1-methyl propyl 2—benzoyl Echinole, 2-benzoylbutynole, 3-benzoylbutyl, 4-benzoinolebutyl, 1, 1-dimethyl-1-2-benzoinolebutinole, 2-benzoylopentyl, 3— Examples thereof include an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms and having a benzoyl group as a substituent, such as benzoylpentinole and 4-benzoinolehexynole.
  • Amido lower alkynyl groups which may have a lower alkyl group include, for example, amidomethyl, methinorea midethyl, .2-ethylamidoethyl, 1-propylamidoethyl , 3-isopropyl amidopropyl, 4-butylamidobutyl, 1, 1-dimethyl-2-tert-butylamidoethyl, 5-pentylamidopentyl, 6-hexyl amidohexyl, 2-dimethylila Midethyl, getylamidomethyl, 1—dipropylamidoethyl, 3—dibutylamidopropyl, 4-dipentylamidobutyl, 5-dihexylamidopentyl, 6— (N-methyl-N-ethylamido De) hexyl, (N—ethyl-1N—propyl amide) methyl, 2— (N—methyl-1-N—buty
  • each compound can be exemplified.
  • the above-mentioned active ingredient compounds can easily form pharmacologically acceptable salts using ordinary acids, and these salts can be used as the active ingredient compounds in the same manner as the free form compounds.
  • the above-mentioned acids include inorganic acids such as sulfuric acid, nitric acid, hydrochloric acid, and hydrobromic acid, and acetic acid, p-toluenesulfonic acid, ethanesulfonic acid, oxalic acid, maleic acid, and fumaric acid.
  • organic acids such as citric acid, succinic acid and benzoic acid.
  • the compounds (1) to (7) and salts thereof are usually used in the form of general pharmaceutical preparations.
  • a preparation is prepared using a commonly used diluent or excipient such as a filler, a bulking agent, a binder, a humectant, a disintegrant, a surface active agent and a lubricant.
  • a commonly used diluent or excipient such as a filler, a bulking agent, a binder, a humectant, a disintegrant, a surface active agent and a lubricant.
  • Various forms of this pharmaceutical preparation can be selected depending on the purpose of treatment. Representative examples are tablets, pills, powders, solutions, suspensions, emulsions, granules, capsules, Suppositories, Injections (solutions, suspensions, etc.), eye drops and the like.
  • carriers conventionally known in this field can be used as carriers, such as lactose, sucrose, sodium chloride, glucose, urea, starch, calcium carbonate, and kao.
  • Excipients such as phosphorus, microcrystalline cellulose, and caicic acid, water, ethanol, propanol, simple syrup, sugar syrup, starch solution, gelatin solution, carboxymethylcellulose, and cellulose.
  • Binders such as starch, methylcellulose, calcium phosphate, polyvinylpyridone, dried starch, sodium alginate, carpentine powder, laminarane powder, hydrogen carbonate Disintegration of lithium, calcium carbonate, polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters, sodium raurylsulfate, monoglyceride stearate, starch, lactose, etc.
  • tablets are necessary (according to this, tablets coated with a normal coating, such as sugar-coated tablets, gelatin-coated tablets, enteric-coated tablets, film-coated tablets or double tablets, and multi-tablets) Can O
  • carriers for molding into pill form, a wide variety of carriers conventionally known in this field can be used as carriers, such as glucose, lactose, starch, cocoa butter, hydrogenated vegetable oil, kaolin, and evening grease.
  • carriers such as glucose, lactose, starch, cocoa butter, hydrogenated vegetable oil, kaolin, and evening grease.
  • Excipients, binders of arabia gum powder, traganth powder, binders such as gelatin and ethanol, and disintegrants such as laminaran and cantan can be exemplified.
  • a wide variety of carriers known in the art can be used, such as polyethylene glycol, cocoa butter, higher alcohols, higher alcohol esters, gelatin, and half Synthetic glyceride and the like can be mentioned.
  • the solutions and suspensions are preferably sterilized and isotonic with blood.
  • the diluent any of those commonly used in this field can be used, for example, water, ethyl alcohol, propylene glycol, ethoxylate, polyester resin, polypropylene, and polyester. Oxidation, sodium stearyl alcohol, polyoxyshethylene sorbitan fatty acid esters, and the like.
  • salt (a) a sufficient amount of salt (a), glucose, or glycerin to prepare an isotonic solution is included in the pharmaceutical preparation.
  • Ordinary solubilizers, buffers, soothing agents and the like may be added.
  • the apoptosis regulator of the present invention may contain a coloring agent, a preservative, a flavor, a flavoring agent, a sweetening agent, and other pharmaceuticals as necessary.
  • the amount of the active ingredient compound contained in the pharmaceutical preparation is not particularly limited and may be appropriately selected over a wide range, but is usually 1 to 70% by weight, preferably 1 to 30% by weight in the whole composition. It is appropriate to set the amount.
  • the administration method of the above pharmaceutical preparation is not particularly limited, and is determined according to various preparation forms, patient age, gender and other conditions, degree of disease, and the like.
  • tablets, pills, solutions, suspensions, emulsions, granules and capsules are administered orally.Injections are used alone or with normal replacement fluids such as glucose and amino acids. Intramuscularly, intradermally, subcutaneously or intraperitoneally as needed, alone or as a mixture. In the case of suppositories, they are administered rectally. In the case of eye drops, it is applied to the eyes.
  • the dose of the above pharmaceutical preparation is appropriately selected depending on the usage, age of the patient, gender and other conditions, the degree of the disease, and the like.
  • 3 ⁇ 4 of the active ingredients (1) to (7) is 1 Approximately 0.01 to 1 kg / day; 30 mg No.
  • the active ingredient is contained in a dosage unit form of about 10 to
  • the apoptotic regulator of the present invention has, in addition to its ability to regulate apoptosis, a cell differentiation inducing effect, a cancer cell growth inhibiting effect, an anticancer effect, an anti-retroviral effect, It has an effect of prolonging the life of endotoxin and shock, inhibiting the production of cytokines, and inhibiting the activation of peripheral lymphocytes.
  • anticancer agents, cancer metastasis inhibitors, thrombocytopenia therapeutics It can be particularly preferably used as a therapeutic and prophylactic agent for Alzheimer's disease, a therapeutic and prophylactic agent for liver disease, an antiretrophil agent, a cytokine production inhibitor, an immunosuppressant, and the like. it can.
  • the apoptosis-regulating agent of the present invention When the apoptosis-regulating agent of the present invention is used, for example, as an anticancer agent, its administration promotes induction of apoptosis after or directly without differentiation of cancer cells by administration. Or it can be suppressed, thus exerting an anticancer effect.
  • the modulator of the present invention may be used in combination with various other anticancer agents and radiation therapy known as chemotherapeutic agents for cancer, regardless of the formulation form and administration route. it can.
  • the active ingredient compound of the present invention can exhibit an excellent anticancer effect, it can further promote the effect of other anticancer agents used in combination and exert a synergistic effect. Therefore, the amount of the combined anticancer drug is set to be much smaller than the amount usually used. Even in such cases, a sufficient cancer therapeutic effect can be obtained, which can reduce the side effects of the combined anticancer drug.
  • chemotherapeutic agents are 5 — Fluorouracil
  • the apoptosis-modulating agent of the present invention is used for the treatment of thrombocytopenia, for example, in an MDS patient such as RA or RARS, administration of the apoptosis-suppressing effect together with the cell differentiation-inducing promoting effect and the apoptosis suppressing effect. It can be exerted, thus stimulating the proliferation of hematopoietic cells and causing normal differentiation and maturation.
  • MDS patients such as RAEB and RAEB-t
  • administration of the preparation of the present invention induces blast differentiation, suppresses blast proliferation, and thus causes proliferation of mature cells. I can make it.
  • the agent of the present invention acts on megakaryocyte progenitor cells and megakaryocyte cells to promote their differentiation and maturation, and thus can be expected to have an effect of promoting platelet production.
  • the apoptosis-regulating agent of the present invention can be used in combination with other drugs such as conventionally known thrombocytopenic agents, This promotes the effects of these concomitant drugs, so that even if the amount of concomitant drugs is extremely small, a sufficient therapeutic effect can be achieved, and side effects can be reduced in some cases.
  • the modulator of the present invention is also useful as an agent for treating and preventing Alzheimer's disease.
  • the modulator of the present invention exhibits an N.GF-like effect by suppressing apoptosis, and thus has the above therapeutic and prophylactic effects. Demonstrate.
  • the preparation of the present invention can be used in combination with a conventionally known therapeutic agent for Alzheimer's disease such as a cerebral circulation improving agent or a cerebral metabolism improving agent, which promotes such an effect and reduces side effects caused by the agent. There is a platform.
  • the modulator of the present invention can treat hepatitis or prevent fibrosis of hepatocytes in patients with drug-induced and viral hepatitis, and thus can prevent cirrhosis. It can be used as
  • the modulator of the present invention has an antiretroviral effect, and is a useful antiretroviral-related disease such as the aforementioned various HIV or HTLV-I-related diseases and hepatitis C. It can be suitably used as a retroviral agent.
  • the agent of the present invention also has an effect of prolonging the life of endotoxin shock. It is also useful as a therapeutic agent for sepsis.
  • the modulator of the present invention has a peripheral lymphocyte activation inhibitory action, and as an immunosuppressant, the above-mentioned various diseases, particularly the autologous Treatment of immunological diseases, suppression of rejection in organ transplantation, treatment of blood diseases related to immunological mechanisms such as Behcet's disease, sympathetic blepharitis, psoriasis, and aplastic anemia.
  • immunological diseases particularly the autologous Treatment of immunological diseases, suppression of rejection in organ transplantation, treatment of blood diseases related to immunological mechanisms such as Behcet's disease, sympathetic blepharitis, psoriasis, and aplastic anemia.
  • the modulator of the present invention has an inhibitory effect on production of cytokines, and various diseases accompanied by abnormal production of cytokines, particularly infectious diseases of bacteria and parasites [Ayumi of Medicine, (8), 467- 470, 471-474, 1991], RA [Art ritic Rheum., 31, 1041, 1988; 34, 1125, 1991; J. Immuno!., ⁇ ,
  • modulator of the present invention in the use of the modulator of the present invention as an immunosuppressant, those containing the compounds of Nos. 16 and 31 as active ingredients are particularly preferred.
  • active ingredients for use as an antiretroviral agent, those containing any of the same ⁇ 2, 7, 8, 11, 11, 25, 32 and 39 as an active ingredient are particularly desirable. Illustrated as preferred.
  • the following are preparation examples of the apoptosis regulator of the present invention and pharmacological test results of the active ingredient compound of the apoptosis regulator.
  • Castor oil 40 g Methanol 40 g Mixed active ingredient compound, Avicel, Cornstarch and magnesium stearate, mixed and polished, and then compressed with sugar coated R10 mm kine I do.
  • the resulting tablets were treated with hydroquinone propyl methyl thylenorelose, polyethylene glycol, and finolene coating consisting of castor oil and methyl phenol.
  • Formulation Example 2 To produce film-coated tablets by coating with a pharmaceutical agent, Formulation Example 2
  • the above mixture is sieved with an N 0.60 screen, and wet granulated with an alcoholic solution containing polyvinylpyrrolidone, Carbo wax 150 and Carbo wax 600 It becomes. Add alcohol, if necessary, to make the powder into a pasty mass. Add corn starch and continue mixing until uniform particles are formed. Pass through a No. 10 screen, place in a tray, and dry in an oven at 100 ° C for 12 to 14 hours. Dry particles with N 0.16 screen The mixture is sieved, dried sodium lauryl sulfate and dried magnesium stearate are added, mixed, and compression-molded into a desired shape using a tableting machine.
  • Treat the core with a varnish and spray talc to prevent moisture absorption An undercoat layer is coated around the core. Apply a sufficient number of varnish coats for internal use. In order to make the tablet completely round and smooth, further apply a subbing layer and a smooth coating. Color coating is performed until the desired color is obtained. After drying, the coated tablets are polished to prepare tablets with uniform gloss.
  • test compounds shown below were used and subjected to the following pharmacological tests.
  • the PI fluorescence of each nucleus was measured using a ProfileIsole II (Cole-Yu) flow cytometer.
  • the nucleus used a 4888 nm argon laser at 1 W.
  • Residual cell debris has very low DNA red fluorescence emission, and apoptotic cells are easily distinguished from cell debris by high SSC values due to nuclear chromatin enrichment.
  • Flow rate ratio is about 2 0 0 nuclei Z sec, set so were also 1 0 4 nuclear analysis and rather less for each sample.
  • Histogram analysis was performed to determine the ratio of nuclei having a content of 2 N or more and nuclei having a content of 2 N or less excluding cell debris showing low fluorescence intensity.
  • Nuclei with a content of 2 N or less were defined as nuclei possessed by the apoptotic cells, and the proportion of nuclei with a combustibility of 2 N or less was defined as fragmented DNA, which was used as an index of apoptosis-inducing ability. .
  • Table 1 shows the results obtained using each test compound.
  • Tumor necrosis factor allegedly induces apoptosis
  • apoptosis-suppressing effect test was carried out using mouse LS cells as follows, using the test compound's cell growth-suppressing effect of (TNF) to suppress the cell growth.
  • -Mouse LS cells are a fibroblast cell line L-922 (Saniord, K .., eta 1.) derived from mouse connective tissue established by Sanford et al. , J. Natl. Cance r Inst., _9, 229 (1948): A derivative strain of ATCC CCL1).
  • the above-mentioned 129 cells and LS cells, which are derivatives thereof, are also used for measuring the biological activity of TNF because their proliferation is suppressed by TNF (Yan zak i, S., eta 1 , Japan. J. Med. Sci. Bio., 31, 105-118 (1986)).
  • the LS cells include cells established by Dainippon Pharmaceutical from L-929 cells as TNF hypersensitive strains.
  • TNF human TNF- ⁇ (specific activity: 2 ⁇ 10 ⁇ units Zmg, manufactured by Zenzym) obtained by expression in Escherichia coli was used.
  • Each well of a 6-well microplate contains the above TNF — 4 OU Zm1 per mouse and 1 fetal calf serum (FCS) Eagle's MEM medium 50/1 was added. Further, 50 izl of each test compound prepared in a two-fold dilution series (3.75-120 // g / ml) was added to each of the above-mentioned wells.
  • the mouse LS cells 7. 5 X 1 0 4 pieces Zm l to adjust the cell suspension (previously, 1 at 0% FCS containing Eagles ME M medium 3-4 days in culture 7.
  • MTT assy J. Immunol. Methods, 65, 55 (1983) was performed on each of the above-described cell cultures in the pinil, using only the medium as a solvent, as follows.
  • the% proliferation of the cells when each test compound was added was determined, and the obtained value was compared with the above-mentioned% proliferation value when 1 OU / m1 of TNF- ⁇ was added. —We examined how the cell growth inhibitory effect of the addition of g was suppressed.
  • the inhibition rate (%) in the table indicates (% growth when each test compound was added)-(% growth when only TNF- ⁇ was added). Therefore, it is understood that the larger the value, the more the test compound suppresses the cell growth inhibitory effect of TNF-cr.
  • the above-mentioned medium containing 30 ⁇ g / m 1 of each test compound was added to each well of a 6-well microplate (manufactured by Kor Yuichi Co., Ltd.).
  • the cells were cultured under% CO 2 for 3 days.
  • a control group a group was prepared in which only the above-mentioned medium was added and culture was performed in the same manner. After the culture, the suspension of each cultured cell was placed in an eppendorf tube, stained with a phosphate buffer containing 0.2% trypan blue, and the number of viable cells was counted using a hemocytometer.
  • the cells were prepared to 1 X 1 0 7 or Bruno ml, Part 1 0 0 1 Furuo reesei N'i Sochioshiane preparative (FITC) labeled anti-human CD 1 lb antibody (M o 1, manufactured by Beckman Coulter, Inc.) and 5 beta 1
  • FITC Furuo reesei N'i Sochioshiane preparative
  • the mixture was added and reacted on ice for 30 minutes in the dark. After the reaction, the plate was washed twice with PBS (phosphate buffer, Nissui Pharmaceutical) containing 0.1% BS ⁇ (bovine serum albumin, manufactured by Sigma), and finally suspended in 5001. After that, the fluorescence intensity was measured using Profile II (manufactured by Coulter, Inc.) by the flow cytometry method.
  • PBS phosphate buffer, Nissui Pharmaceutical
  • BS ⁇ bovine serum albumin
  • Test compound Growth inhibition rate (%) Test compound Growth inhibition rate (%)
  • SC-1 Femal mouse embryo cells obtained by subculture were washed twice with PBS,) solution, and detached with 0.05% trypsin (Nissui Pharmaceutical). Thereafter, the cells were suspended in a culture solution of Eagle-MEM medium (E-MEM, Flow, Inc.) + 5% fetal bovine serum (FBS) by pipetting. Cells that had been subjected to centrifugal washing (0 5 PR—type 22, manufactured by Hitachi, Ltd.) for 5 minutes at 25 T: 1,200 rotations were resuspended in the same culture solution. .
  • E-MEM Eagle-MEM medium
  • FBS fetal bovine serum
  • M indicates the incorporated dye in the test substance-treated group
  • C indicates the same dye S in the control group.
  • SC-1 cells obtained by subculturing are washed twice with PBS and a solution, and the cells are detached with 0.05% trypsin (manufactured by Flow), and then pipetted.
  • the cells were suspended in a culture solution of MEM medium (Nissui Pharmaceutical) + 5% FBS.
  • the cells that had been subjected to centrifugal washing at 25 ° C, 1200 rotations, and 5 minutes (05PR-22 type, manufactured by Hitachi, Ltd.) were suspended again in the same culture solution.
  • the number of viable cells was stained with a 0.2% trypable solution (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), and counted under an optical microscope (BH-2, manufactured by Olympus Optical Co., Ltd.). It was diluted with the culture solution to b cells / ml. ⁇ o
  • Virus suppression rate (%) [1 — (M / C)] X I 0 0
  • the virus inhibition strength was calculated according to the following formula, and used as an index of antiretroviral action.
  • Virus growth inhibition rate ZSC-1 cell growth inhibition rate The virus inhibition strength of each test cell obtained in this manner was decreased by nd 3 ⁇ 4 0 (this Five
  • Test compound virus suppression degree Test compound virus suppression degree
  • the sculptures on the site force released from peripheral blood of healthy humans when stimulated with lipopolysaccharide sulfide (LPS) were examined as follows.
  • the reagent was dissolved in DMSO and further diluted to a predetermined concentration with RPMI-164 medium before use.
  • As a control a dilution of DMSO only in the same manner was used.
  • test drug was ⁇ beauty LPS (E. co li 055: B5 , '1 / z gZm 1). was added, 5% C 0 2 Lee Nkyubeta one hour 8-2 4 under 3 7 ° C in the one After culturing, the culture supernatant was collected by centrifugation and used as a culture supernatant sample.
  • Each sitekine in the sample was measured by enzyme immunoassay (ELISA), and the amount of sitekine in the sample was determined from the standard curve of each sitekine.
  • ELISA enzyme immunoassay
  • Source 5 compounds ⁇ h 1 1 r 1 ⁇
  • peripheral blood mononuclear cells Peripheral lbl ood mononuclea
  • r cell PB C peripheral blood mononuclear cells
  • Test compounds 3 0 mu g / m 1 in the presence of (final concentration, the prepared solution each 2 5 1 Z ⁇ Weru) and PHA 1 g Z m 1 (final concentration), PBMC 1 0 5 cells Roh 1 0 0
  • the wells were grown in RPMI-164 medium containing 10% FCS. Three days later, sterile 2.5 mg / m 1 MT ⁇
  • Table 7 below shows the results of the absorbance at the time of addition of the solvent and the absorbance of the solvent alone.
  • Endotoxin's effect on life-span prolongation against shock Endotoxin action of the compound of the present invention on endotoxin-shock was tested in animals treated with D-galactosamine and LPS [Cris G a1 an0 seta 1., Proc, Natl. Acad. ScL., USA,, 5939-5943 (1979) 3.
  • mice BALBZc mouse, male, 7 weeks old, SLC
  • 50 mg / kg of the test compound experimental group
  • prednisolone predoni solone
  • test compound and prednisolone were each suspended in a solvent (0.5% CMC; manufactured by Daiichi Kogyo Seiyaku Co., Ltd.), and D-galactosamine and LPS were dissolved in physiological saline. Used.
  • Each number in the table indicates the survival rate ().
  • Pharmacological test example 5 Anticancer effect test mouse (C57BLZ6 mouse, female, 6-9 weeks old, charles river) 11 ⁇ cells (116 mouse) in right abdomen scan ra node on Ma cells: 5 or 5 0 mg / kg of 1 X 1 0 4 cells / Ma c scan) the KawanaiUtsuri ⁇ 3 ⁇ 4 the third day by Ri test compound after transplantation Oral administration was performed for 5 days, administration was suspended for 2 days (5 injections and 2 holidays), and this operation was repeated four times. A similar test was performed for the group administered with only the solvent (0.5% CMC : manufactured by Daiichi Kogyo Co., Ltd.). Tumor measurements and body weight were measured daily and compared with the vehicle group. The test was performed with 8 animals per group.
  • the anti-cancer effect of the test compound was evaluated by the tumor volume suppression rate (%) in comparison with the solvent group.
  • an apoptosis regulator can be provided.
  • the regulator can be effectively used as a cancer chemotherapeutic agent based on its unique apoptosis regulating ability and cell differentiation inducing ability. It also has an anti-retroviral effect, and as a therapeutic agent for various retroviral-related diseases such as the aforementioned HIV or HTLV-1 related diseases and hepatitis C, has an effect of inhibiting the production of cytodynamic proteins. It is effective as a therapeutic agent for HIV or HTLV-1 related diseases and infectious diseases, ARDS, CFS and various autoimmune diseases, and is also effective as an immunosuppressant due to its inhibitory effect on lymphocyte activity. is there.

Landscapes

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Description

明
アポ ト 一 シス調整剤
技 術 分 野
本発明は、 新しいアポ ト 一 シス調整剤に関する。
発 明 の 開 示
本発明のアポ ト一シス調整剤は、 下記一般式 （ 1 ) 〜 一般式 （ 6 ) で表わされる田化合物 （以下 「化合物 （ 1 ) 」 〜 「化合物 （ 6 ) 」 とい う） 及び （ 7 ) 6— 〔 4 — ( 3， 4ー ジメ ト キ シベンゾィ ル） 一 1 — 1 , 2 , 3 , 4 ーテ ト ラ ヒ ドロ ビラ ジル〕 一 3 , 4— ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル （以下 「化合物 （ 7 ) 」 という） からなるカルボスチ リ ル誘導体及び之等の塩から選ばれる少な く と も 1種を 有効成分とする ものである。
( 1 ) 一般式
Figure imgf000003_0001
〔式中 Rはフ ニニル環上に置換基と して低級アルコキ シ 基、 ハロゲン原子、 低級アルキル基、 低級アルカ ノ ィ ル ァ ミ ノ基及び低級ァルキルチオ基なる群から選ばれた基 を 1 〜 3個有する こ とのあるべンゾィル基又は低級ァル キ レ ンジォキシ基を有するベンゾィ ル基、 水素原子、 ピ リ ジルカルボニル基、 低級アルカ ンスルホニル基、 低級 アルキニル基、 フ ヱニル環上に低級アルコキシ基、 ノヽロ ゲン原子及び低級アルキル基なる群から選ばれた基を 1 〜 3個有する こ とのあるフ ヱニル低級アルキル基を示す < カルボスチ リ ル骨格の 3位と 4位との炭素間結合は一重 結合又は二重結合を示す。 R 2 ()は水素原子、 低級アルキ ル基、 低級アルケニル基、 低級アルキニル基又はフ ヱニ ル低級アルキル基を示す。 R 2 iは水素原子又は低級アル コキシ基を示す。 但し、 R ^及び R 2 1が水素原子のと き Rはフニニル環上に置換基と して低級アルコキシ基を有 する こ とのあるベンゾィ ル基であってはな らない。 〕 で表わされるカルボスチ リ ル誘導体及びその塩、，
( 2 ) —般式
Figure imgf000004_0001
. IT
〔式中 R i は基 - N - R ( R 3 は水素原子又は ンゾィ ル基及び R はォキ ソ基を示す） を示す。 カ ルホ スチ リ ル骨格の 3位と 4位との炭素結合は一重結合又は 二重結合を示す。 〕
で表わされるカルボスチ リ ル誘導体及びその塩、
( 3 ) 一般式
N N - R
Figure imgf000005_0001
〔式中 R 3 は低級アルカ ノ ィ ル基、 低級アルコキシカル ボニル基、 低級アルコキシカルボニル低級アルキル基、 フ ェニル環上に低級アル力 ノ ィ ルォキシ基も し く は水酸 基を有する フ ヱニル低級アルキル基、 フ ヱニル環上に置 換基と して水酸基及び低級アルキル基を有する この と あ るァ ミ ノ基なる群から選ばれた基を有していてもよいべ ンゾィル基又はナフ ト イ ル基を示す。 R D はフ ヱニル環 上に低級アルコキシ基を有する こ とのあるベンゾィ ル基 を示す。 〕
で表わされるカルボスチ リ ル誘導体及びその塩、
( 4 ) 一般式 ― R
Figure imgf000006_0001
〔式中 R 7 はピペラ ジニル基を示す。 R 8 は水素原子又 は低級アルキル基を示す。 R 9 は水素原子又はフ エニル 低級アルキル基を示す。 カルボスチ リ ル骨格の 3位と 4 位の結合は一重結合又は二重結合を示す。 〕
で表わされるカルボスチ リ ル誘導体及びその塩、
( 5 ) 一般式
Figure imgf000006_0002
〔式中 R 2 2は C i 一 C 丄 6アルキル基、 フ ヱニル低級アル コキシカルボニル低級アルキル基、 低級アルキル基を有 する こ とのあるア ミ ド低級アルキル基又はフ ニニル低級 ァルキル基を示す。 R 2 3は ピペラ ジ ン環の 4位に低級ァ ルキル基を有する こ とのある ピペラ ジニル基を示す。 〕 で表わされるカ ルボスチ リ ル誘導体及びその塩、
( 6 ) 一般式
Figure imgf000007_0001
〔式中 R 24は水素原子、 フ ニニル低級アルキル基、 ベン ゾィル低級アルキル基又はフ ヱニル環上に低級アルコキ シ基を 1〜 3個も し く は低級アルキ レ ンジォキシ基を有 する こ とのあるベンゾィ ル基を示す。 〕
で表わされるカルボスチ リ ル誘導体及びその塩、 及び
( 7 ) 6 — 〔 4 一 ( 3 , 4 — ジメ 卜キシベンゾィル） 一
1 — 1， 2 , 3 , 4 —テ ト ラ ヒ ドロ ビラ ジル〕 一 3 , 4 ー ジ ヒ ドロカルボスチ リ ル及びその塩。
上記化合物 （ 1 ) 〜化合物 （ 6 ) 及び化合物 （ 7 ) の カルボスチ リ ル誘導体及びその製法については、 特開昭 5 8 — 8 3 6 7 7号公報、 特開昭 6 1 — 2 6 7 5 5 6号 公報、 特開昭 6 3 - 2 3 0 6 8 7号公報、 特開平 1 一 3 4 9 6 3号公報、 日本薬学会第 1 1 1年会講演要旨集
2 9 T D 1 1 - 1 ( 1 9 9 1年 3月 5 日発行） 、 特開昭 6 3 - 2 2 5 3 5 7号公報、 特開昭 5 9 - 2 9 6 6 7号 公報等に記载されているか又は之等に記載されたプ J法に 従って製造する こ とができ る。 之等各力ルボスチ リ ル誘 導体が強心剤、 降圧剤、 消炎剤、 抗不整脈剤等と して有 用である こ と も公知である。
本発明者は、 上記化合物 （ 1 ) 〜化合物 （ 7 ) にっき、 更に研究を続けた結果、 之等各化合物が、 之等の有して いる上記公知の作用からは予想困難なアポ ト ー シス調整 作用 （抑制乃至促進作用） を有している こ とを見い出 し た。 .
しかして従来よ り、 細胞死は 2つのタイ プのメ カニズ ムによ り起こ る と されている。 そのひとつは壊死と呼ば れてきた古典的細胞死である。 これは形態学的には、 ミ ト コ ン ド リ アの著しい膨化、 細胞質の膨化、 核の変性と それに続く 細胞の崩壊及び自己融解によ り特徵付け られ、 受動的及び偶発的に生じる。 組織壌死は、 細胞に対する 物理的外傷や化学的毒物等によ り一般に認め られる。
も う ひとつのタイ プはアポ 卜一 シス （プロ グラムされ た細胞死） と呼ばれる （Ke r r, J. F. R. and Wy！ 1 i e, A. H. , Br. J. Cance r, 6_5^ 239 ( 1972 ) ) 。 これは生理学上の種 々 の条件下に起こ る と されている。 その形態学的特徵と しては、 周囲の細胞との接触の欠乏、 細胞質の濃縮化、 エ ン ドヌ ク レアーゼの活性に閲連 した ク ロマチ ンの凝縮 及び核凝縮、 核の分節化等を挙げる こ とができ、 更に細 胞表面の微絨毛の消失、 細胞表面の平滑化 （細胞表而の 水疱形成 ： membrance b 1 ebb i ng) 等も観察され、 またェ ン ドヌ ヌ ク レア一ゼ活性によ り、 D N Aのヌ ク レオソ一 ム単位が 1 8 0〜 2 0 0塩基長の D N Aに断片化する現 象も観察され、 アポティ ッ ク体の細胞の最終断片は隣接 する細胞によ り貧食される機構と して論じ られている ( Du V a 11 , E. a n d Wy ι ι i e, A. H. , Immunology Today, 7 ( 4 ), 115 - 119 ( 1986 ) ： Science, 245, 301 - 305
上記ウイ リ ーはまたグルコ コルチコィ ドによ り誘発され る胸腺細胞のアポ ト ー シスが、 細胞内のェン ドヌ ク レア —ゼの活性化を伴う こ とを報告している （WH 1 ie, A. H. , Nature, 284, 555 - 556 ( 1986 ) ) 。 エン ドヌ ク レアーゼ活 性によ り アポ ト 一シスを受ける細胞の D N Aは、 オ リ ゴ ヌ ク レオチ ドレベルまで断片化され、 これはァガロ ース ゲル電気泳動を行な う こ と によ り容易に確認でき る。
上記アポ ト ー シス と は、 発生や分化や組織のタ ー ンォ 一バーの過程でみ られる、 予めプロ グラムされた細胞死 である と考え られる （Wy 1 1 i e, A. 11. , e t a I. , I n t. Rev. Cy tol. , 61, 251 - 306 ( 1980) ) 。
また、 胸腺細胞ではカノレシゥムィ オ ノ フ ァ で力ノレシゥ ム濃度を上昇させた り 、 c A M P濃度を上昇させた り す る と、 上記アポ 卜 一 シスに特徴的な D N Aの断片化が促 進される （Wy 1 i i e, A. Π. , e t a i . , J . P a I h o ί . . l . , 6 ΐ - ？? ( 1984 ) ) こ とから、 アポ ト一シスのメ カニズムに、 力 ルシゥムイオ ンや c A M Pの関与が推測されている。 更 にレチノ ィ ン酸ゃ力ルシゥムィオノ フ ァ によ り分化誘導 される H L — 6 0細胞のアポ トーシスが、 上記の例と し て報告されている （Ma r ί i n, S. 】.， e t a 1. , J. Immuno I. , 145, 1859 - 1867 (1990) ： Mar t i n, S. J. , et a 1. , Cl in.Exp. Immunol. , U, 448 -453 ( 1990 ) ) 0
上記アポ ト—シスは、 胚発生過程や正常の細胞回転の 盛んな細胞 （例えば肝、 副腎皮質、 前立腺等） にみられ る生理的細胞死から、 ダルコ コルチコィ ド処理、 サイ ト トキシッ ク 一 T細胞による細胞障害、 ホルモ ン依存性組 織の萎縮、 放射線照射、 N K細胞、 キラ—細胞、 腫瘍壞 死因子 （ T N F ) 、 リ ンホ トキシ ン （ L T ) 等のサイ 卜 カイ ン類等によ っても誘導される と報告されている (Wy I I i e, A. H. , e t a 1. , I n [ . Rev. C y t o I . , 68, 2 δ ί
： Duva l 1 , E . and \Ϋ y 1 I ι e , A . Ή . , Immuno l ogy Today 115 - 119 ( 1986 ) ： S e I I i n s , K. S. , e t a 1. , J. lmmuno 1. 139, 3199 ( 1981) ： Yamada, T. , e 1 a 1. , I n t. J. Rad i a l Bi o l. , 53, 65 ( 1988 ) ： y I I i e, A. II. , Na tu r e, 284, 555 ( 1980 ) ： Schiiii d, D. S. , e ί a ί. , P r o c . Na t l. Acad. S c USA, 83, 1851 - 1885 ( 1986} ： J ohn, C. , e t a 1. , J.
lmmuno I. , 12S (4) , \lU-\ni ( 1982 ) ： Howe ! !, D. !,!. e t a 1. , J. Immuno 1. , HO, 689 - 692 (1988) ： Gi l lian, B. , e t a 1. , Eur, J. 1 minu n o 1 , Π, 689 - 693 (198 ?) ) 。 その 他に、 ある種の抗体、 例えば抗 C D 3抗体、 抗 A P 0— I 抗体、 抗 F a s抗体等 （Trau t h, B. ， e t a 1. ,
Science, 245, 301 - 305 ( 1989 ) ： Smi th, A. , e t a 1. , Nature, 337, 181 - 184 ( 1989 ) ： Tadakuma, T. , e t a 1. ,
Eur. J. Immuno 1. , 2_0, 779 ( 1990) ) でもアポ トーシスが 誘導され、 悪性腫瘍での自然退縮 （中村保夫他、 臨床皮 膚科， ϋ(4 ), .289 - 295 ( 1981 ) ) の所見においてもアポ ト — シスが確認されている。
—方、 上記アポ トー シ スを抑制する ものと しては、 R N A合成阻害剤であるァク チノ マイ シ ン D
(Ac t i nomy c i n D)、 蛋白合成阻害剤であるサイ ク ロへキ シ ミ ド （ C y c 10 h e X i Hi i d e ) 、 カ ノレ シ ゥ ム イ オ ン （ C a 2 + ) キ レー ト剤等が報告されており、 その他に免疫抑制剤で あるサイ ク ロスポ リ ン A、 造血系サイ ト カイ ン （ I L — 3、 G M— C S F、 G— C S F等） 、 I L— 2、 b e 1 一 2遺伝子産物等もアポ ト ー シ スを抑制する と報告され てい る （Cohen, J. J. J. Immuno I. , 132, 38 (1980 ：
y I 1 i e, A. l!. , e t a 1. , J. Paihol. , M2, 61 (1980 ： Sh i, Y. , e [ a I. , Nature, 339 , 625 ( 1989 ) ： i l l iams, G. T. , e i a !. , Nature, 3 Ί 3 , Ϊ 6 ( 19 i) 0 ) ： N i e ! o, . A. , j. Immunol.， 143, 4166 ( 1989 ) ： Yaux, D. L. , e t a 1. , Nature,
Figure imgf000012_0001
( 1988 ) ) 。 但し、 上記シク ロへキシ ミ ドは急性白血病細胞に、 ァクチノ マイ シ ン Dは小腸陰窩 細胞に、 両者が H L— 6 0細胞にそれぞれアポ ト — シス を誘導する報告 （MaMin, S. 】.， e t a 1. , J. Immuno 1. , 145, 1859 - 1867 ( 1990 ) ) がある。 逆にサイ ク ロへキシ ミ ドは、 X線照射前に存在し、 X線照射によ り増加した リ ンパ球系腫瘍細胞のアポ トーシスを抑制し、 ァ ク チノ マ イ シ ン Dが上記ァポ ト一シスを増加させる 旨の報告もあ り、 アポ ト ーシスの抑制又は促進には、 細胞の種類ゃ条 件、 その他の機序の関与も示唆されている （五十嵐忠彦 ら、 日本血液学会誌、 , H4 (19U) ) 。 いずれにせ よ、 細胞の分化、 増殖、 成熟がアポ ト 一 シス と密接な関 係にあ り、 之等細胞の分化、 増殖等に関与する作用を有 する物質がアポ ト ーシスに も関係する と考え られてい る また最近、 アポ ト ー シスに関連する治療法と して、 抗 A p 0 - I 抗体による癌の治療も試みられている。 骨髄 異形成症候群 （M D S ) の内で、 汎血球減少が主体であ る不応性貧血 （ R A λ及び鉄芽球性貧血 （ R A R S ) で は、 造血細胞の分化誘導剤と しての レチ ノ ィ ン酸ゃ活性 型ビタ ミ ン Dゥ と、 血小板産生細胞の過剰ァポ ト 一 シ ス を抑制するアポ 卜 一 シス調節剤と しての G M— C S Fや I L — 3 の併用が望ま し く 、 また同 M D S の内、 芽球の 増殖が優勢な R A E Bゃ該 R A E B の移行期 （ R A E B 一 t ) では、 上記レチノ ィ ン酸ゃ活性型ビタ ミ ン D 3 、 造血細胞の芽球への分化を誘導する分化誘導剤と して、 またエ トポジ ド （ e 10 p 0 s i d e ) やアク ラルビシ ン
( ac l arub i c i n ) が芽球の増殖を抑制 '（アポ ト 一 シス促 進）.するアポ'ト一シス調節剤と して、 ぞれぞれ働く と さ れている ( S h i b u y a, T. , J . C l i n i ca l and Expe r iment a l Med i c ine, 160 (5) , 319-323 (1992) ) 。
また、 ムラ力 ミ らは抗赤血球自己抗体を発現 している ト ラ ンス ジエニ ッ ク マウ スの約半数が自己の ト レラ ンス の消失によ り 自己免疫疾患を発症する と し、 正常マウ ス のよ う な自己抗原と 自己抗体産生細胞の反応によるアポ トー シス誘導による 自己抗体産生細胞の除去能の欠如に よる と報告している （Mu rakami, , e ί a 1. , Na t u r e, 357, Π- 80 ( 1992 ) ) 。
ワ タナベ一 フ ク ナガらは M R L 1 p r / 1 p r マウス においては、 アポ 卜 一 シスに関与する F a s 分子に異常 があ り、 胸腺における 自己反応性 T細胞のネガティ ブセ レク シ ヨ ン （アポ ト ー シス） 機構がう ま く 作動せず、 そ の結果自己免疫疾患が発症する と示唆 している
( W a 1 a n a b e - f u k u n a g a , R . , ε ί a I . , N a i u r e , 356, 3しト 31? ( 1992 ) ) 。
モンタニェらは、 H I V—感染患者からの T リ ンパ球 抽出物中には、 D N Aのアポプテ ツ ィ ッ クなバン ドが観 察され、 この現象は無症候群の H I V感染患者の 9 0 %、 A I D S と A R C患者の 1 0 0 %に観察され、 アポ ト ー シスの誘導が H I V感染患者においても亢進 している と 報告して.いる ( M 0 n t a g n i e r , L . , e t a I. , S i x i em e
Col 1 oqu e d e s Cent Gardes, 9-17 (1991)) 。
ニヮ ト リ発生期の細胞死において、 ニヮ ト リ 胚に
N G F (nerve growth f actor ： 神経細胞の神経節で細 胞の肥大と神経繊維の伸長を促進する蛋白質） を前投与 する と、 この発生過程の神経細胞死は完全に抑制され
(Hambur er, Y. , e t a！ . , J . Ν e u r ο s c i . , _ 1 , 60 ( 19 S 1 ) ) 、 逆に N G Fに対する抗体を投与する と、 幼若な交感神経 細胞の約 9 0 %が失われて しま う と報告されている
し evi - Monta ichini, R. and booker, β. , Ρ r ο c . Ν a ί i .
Acad. Sc i.， USA, £6, 38Ί ( 1960 ) ) 。
ク ラ ー ク は自然に起こ る神経細胞死を 3つのタイ プに 区別 し、 その中のタ イ プ I の形態学的特徵がアポ ト ー シ スと一致し、 更に成長因子除去によ る細胞死ではタ イ プ I の細胞死が起こ り 、 D N Aの断片化も起る こ とから、 これをアポ 卜 一 シスと考えている （ U a r k, P. G. 1し A R a ί Embryol.. 181, 195 ( 1990 ) ： J. Neurosci. , ^60 ( 1981 ) ： Proc. Nat 1. Acad. Sc i. , USA, 46, 384 ( 1960 ) ： Raws on, C. L. , et al. , J. Cel 1. Biol. , 113, 671 ( 1991 ) ) 。
エ ドワーズらは N G Fによ り交感神経細胞のプロ グラ ム死を抑制でき る と報告 しており、 アポ ト ー シス力く N.G Fによ り抑制でき る と考え られる （Edwards, S. N. , et al. , J. Neuroc emistry, H ( 6 ), 2140 - 2143 ( 1991 ) ) 。
フ ィ ッ シヤ ー らの報告によれば、 老化して学習障害を 持ったラ ッ ト に N G Fを投与する と、 アルツハイ マー病 で障害を受ける こ とが知られている前脳基底野コ リ ン作 動性神経細胞に該 N G Fが作用 して、 学習障害の回復が み られる （Fischer, W. , et a 1. , ature, 329, 65 ( 1987) ： Ba rde Y-A, Neuron, 2_^ 1525 ( 1989 ) ： H a t a n a k a , H. , Develop Brain Res. , 30, 47 ( 1986 ) ： H a t a n a k a , H. , e ί a 1. , Develop Brain Res. , 39, 85 ( 1988 ) ) 。 皇中 らは、 上記 N G Fが分化、 成熟、 生存維持、 老化の防止に有効 で、 神経細胞の障害に対する保護回復作用、 脳の老化に 伴う神経疾患、 特にアルツハイ マー病での神経細胞死の 防止作用を示す可能性を示唆 している （皇中寛、 代謝、 Π, 891-899 (1991) ) 0
更に薬剤耐性ゥ ィ ルス性肝炎の肝障害においては、 薬 剤又はウ ィ ルス感染によ り、 直接的又は免疫的機序を介 するアポ トー シス亢進が、 肝障害に関与している と考え られている （Bursh. , e t a 1. , TiPS, Π, 245 - 251 ( 1992)) 。
一方、 肝臓ではマイ ト ジヱ ンによつて肝細胞が增殖し、 過形成状態をもた らすこ とが知られており、 この状態は 肝細胞の脱落壌死、 即ちアポ トーシスによ り正常化され る （Kerr, J; F. et a 1. , Br. J. Cancer, 2_6, 239 - 257
( 1972 ) ) 。 該アポ トーシスは肝臓において、 過形成肝、 過形成性結節及び肝癌等で認め られており （Co l umbaDo, に et al. , Lab. Invest. , 670 - 675 ( 1985 ) ：
Co I umb a n o, A. e t a I . , Am. J . Pathol, , 116,_ 41- 46 ( 1984 ) ) 、 ケラー らはアポ ト ーシスは炎症や線維増殖を 伴わないと述べている （Kerr, J. F. , e t a 1. , Lancet, 2, 827- 828 ( 1979) ) 。 之等の こ とから、 急性及び慢性肝炎 に対してアポ トーシスを抑制する こ とができれば、 之等 肝炎の治療が可能と考え られる。 また慢性肝炎が肝硬変、 肝癌に移行してい く 過程では、 上記アポ ト ー シスは抑制 状態にあ り、 これがサイ ト トキシ ッ ク T細胞による肝細 胞の炎症に続く 線維化、 肝硬変へと進展する もの と考え られ、 該アポ ト ー シスを促進させる こ とができれば、 肝 炎の抑制及び肝硬変への進展が防止でき る と考え られる c 本発明によれば、 化合物 （ 1 ) 〜化合物 （ 7 ) 及びそ れらの塩から選ばれる少な く と も 1種を有効成分と して 含有するアポ ト ー シス調整剤が提供される。
本発明アポ トーシス調整剤は、 アポ トーシス調整能を 有しており、 この作用に基づいて、 前述したように各種 の疾患の治療及び予防に有用である。 より具体的には、 本発明調整剤は、 例えば、 癌 ； A I D S、 A R C
(A I D S関連疾患） 、 A T L (成人 T細胞白血病 ： Adult T-ce 11 1 eu c emi a ) 、 毛様細胞性白血病 （Hai ry cel l 1 eucemi a ) 、 脊髄症 （ H A M T S P ) 、 呼吸器 障害 （H A B ZH A B A) 、 関節症 （H A A P ) 、 ブ ド ゥ膜炎 （H A U) 等の H I V又は H T L V— 1関連疾患 や C型肝炎等のレ ト ロ ウ イ ルス関連疾患 ； S L E (全身 性エリテマ トーデス） や慢性関節リ ウマチ （R A) 等の 膠原病、 潰瘍性大腸炎、 シエ ーグレ ン症候群、 原発性胆 汁性肝硬変、 突発性血小板減少性紫斑病 O d i o p ^ h i c Thrombocy t o en i c P u r a p u r a ： I T P) 、 自己免疫性溶血性 貧血、 重症筋無力症、 橋本病、 イ ンス リ ン依存型 （ I 型） 糖尿病等の自己免疫疾患 ； 骨髄異形成症候群 （M D S ) 、 周期性血小板減少症、 再生不良性貧血、 突発性血小板減 少症、 汎発性血管内凝固症等の血小板減少を伴う各極疾 患 ； C型、 A型、 B型、 F型等のウ ィ ルス性や薬剤性の 肝炎及び肝硬変等の肝疾 ； アルツハイマー病及びァル ッハイマー型老年痴呆症 ； 心筋炎 ； 、 A R D S (成人呼 吸急迫症候群） ； 感染症 ； 前立腺肥大症 ； 子宮筋腫 ； 気 管支喘息 ； 動脈硬化症 ； 各種先天性奇形症 ； 腎炎 ； 老人 性白内障 ； 慢性疲労症候群 （Chronic Fatigue syndrome ： CFS)及び筋ジス ト ロ フ ィ ー （Myotonic dystrophy) 等 の各種疾患に好適に適用でき、 医薬品分野で有効である。
上記化合物 （ 1 ) 〜化合物 （ 6 ) を表わす各一般式に おいて示される各基は、 よ り具体的にはそれぞれ次の通 りである。
ハロゲン原子は、 弗素、 塩素、 臭素及び沃素原子を包 含する。
低級アルキ レ ンジォキシ基と しては、 メ チ レ ンジォキ シ、 エチ レ ン ジォキシ、 卜 リ メ チ レ ンジォキシ、 テ ト ラ メ チ レ ン ジォキシ基等の炭素数 1〜 4の直鎖又は分枝鎖 状アルキ レ ン ジォキシ基を例示でき る。
フ エニル環上に置換基と して低級アルコキシ基、 ハロ ゲン原子、 低級アルキル基、 低級アルカ ノ ィ ルァ ミ ノ基 及び低級アルキルチオ基なる群から選ばれた基を 1〜 3 個又は低級アルキ レ ン ジォキ シ基を有する こ とのあるべ ンゾィ ル基と しては、 ベ ンゾィ ル、 2 — ク ロ 口ベ ンゾィ ノレ、 3 — ク ロ 口 べ ン ゾィ ル、 4 一 ク ロ 口 べ ン ゾィ ノレ、 2 ー フ ノレオ口べン ゾィ ル、 3 — フ ルォ ロ ベ ン ゾィ ソレ、 4 一 フゾレオ 口べンゾィ ノレ、 2 — ブロムべンゾイ ソレ、 3 — ブ口 ムベンゾィ ル、 4 一 ブロ ムべンゾィ ル、 2 — ョ 一 ドベン ゾィ ル、 4 — ョ ー ドベンゾィ ル、 3， 5 — ジク ロ ロベン ゾィ ル、 2 , 6 — ジク ロ 口べンゾィ ル、 3， 4 ー ジク ロ 口べンゾィ ノレ、 3 , 4 — ジフノレオ 口べンゾィ ノレ、 3， . 5 — ジブロ ムベン.ゾィ ル、 3 , 4 , 5 — ト リ ク ロ 口べンゾ ィ ル、 2 — メ チルベンゾィ ル、 3 — メ チルベンゾィ ル、 4 — メ チルベンゾィ ル、 2 —ェチルベンゾィ ル、 3 — ェ チノレべンゾィ ノレ、 4 —ェチルベンゾィ ノレ、 3 — イ ソプロ ピルべンゾィ ル、 4 —へキ シルベンゾィ ノレ、 3， 4 ー ジ メ チルベンゾィ ル、 2， 5 — ジメ チルベンゾイ リレ、 3 , 4， 5 — ト リ メ チルベ ン ゾィ ル、 2 — メ ト キ シベ ンゾィ ノレ、 3 — メ ト キ シベンゾィ ル、 4 — メ ト キ シベ ンゾィ ル、 2 —エ ト キ シベ ンゾィ ノレ、 3 —エ ト キ シベ ンゾィ ノレ、 4 —エ ト キ シベンゾィ ノレ、 4 — イ ソプロ ポキ シベ ンゾィ ノレ、 4 —へキ シノレォキ シベ ン ゾィ ノレ、 3， 4 ー ジメ ト キ シべ ンゾィ ル、 3 , 4 — ジェ 卜 キ シベ ンゾィ ル、 3， 4 , 5 一 卜 リ メ ト キ シベン ゾィ ノレ、 2 , 5 — ジメ 卜 キ シベ ン ゾ ィ ノレ、 3 , 4 — メ チ レ ン ジォキ シベンゾィ ル、 3 , 4 - エチ レ ン ジォキ シベ ン ゾィ ル、 2， 3 — メ チ レ ン ジォキ シベ ン ゾィ ノレ、 3 — メ チノレ一 4 一 ク ロ 口べ ン ゾィ ノレ、 2 一 ク ロ 口 一 6 — メ チノレべ ン ゾィ ノレ、 2 — メ 卜 キ シ一 3 — ク ロ 口べンゾィ ル、 2 — メ チルチオべンゾィ ル、 3 — メ チルチオべンゾィル、 4 — メ チルチオべンゾィ ル、 2 — ェチルチオべ ンゾィ ル、 3 —ェチルチオべ ンゾィ ル、 4 —ェチルチオべンゾィ ル、 3 —ィ ソプロ ピルチオべンゾ ィ ノレ、 4 一へキ シルチオべンゾィ ル、 3， 4 — ジメ チル チォベンゾィル、 2 , . 5 — ジメ チルチオべンゾィ ル、 3 , 4 , 5 —小 リ メチルチオべンゾィ ル、 2 — ホル ミ ルア ミ ノ ベンゾィ ル、 3 — ァセチルァ ミ ノ べ ンゾィ ル、 4 — ァ セチルア ミ ノ ベンゾィ ノレ、 2 —ァセチルア ミ ノ ベ ンゾィ ノレ、 3 — プロ ピオニルァ ミ ノ べ ンゾィ ル、 4 — プチ リ ル ァ ミ ノ べンゾィ ル、 2 —イ ソ ブチ リ ルア ミ ノ ベンゾィ ル、 3 — ペ ンタ ノ イ ノレア ミ ノ べ ンゾィ ノレ、 3 — t e r t — ブ チルカルボニルア ミ ノ ベンゾィ ル、 4 一 へキサノ ィ ルァ ミ ノべンゾィル、 2 , 6 — ジァセチルァ ミ ノ ベンゾィル 基等のフ エニル環上に置換基と して炭素数 1 〜 6 の直鎖 又は分枝鎖状のアルコキ シ基、 ハロゲン原子、 炭素数 1 〜 6 の直鎖又は分枝鎖状のアルキル基、 炭素数 1 〜 6 の 直鎖又は分枝鎖状のアルカ ノ ィルア ミ ノ基及び炭素数 1 〜 6 の直鎖又は分枝状のアルキルチオ基なる？ から選ば れた基を 1 〜 3個又は炭素数 ]. 〜 4 のアルキ レ ン ジォキ シ基を有する こ とのあるベンゾィ ル ®を例示でき る。
低級アルキル基と しては、 メ チル、 ェチル、 プロ ピル、 イ ソプロ ピル、 ブチル、 t e r t —ブチル、 ペンチル、 へキ シル基等の炭素数 1 〜 6の直鎖又は分枝鎖状のアルキル 基を例示でき る。
フエニル低級アルキル基と しては、 ベンジル、 2 —フ ェニルェチル、 1 一フ エニルェチル、 3 —フ エニルプロ ピル、 4 —フ エニルブチル、 1 , 1 一 ジメ チルー 2 —フ ェニルェチル、 5 —フ ヱニルペンチル、 6 — フ エニルへ キシル、 2 —メ チル— 3 — フ エニルプロ ピル基等のアル キル部分の炭素数が 1 〜 6 の直鎖又は分枝鎖状のアルキ ル基であるフ ヱニルァルキル基を例示でき る。
低級アルカ ノ ィ ル基を有する こ とのあるア ミ ノ基と し ては、 ァ ミ ノ、 ホノレミ ルァ ミ ノ 、 ァセチルァ ミ ノ、 プロ ピオニルァ ミ ノ、 ブチ リ ノレア ミ ノ、 イ ソブチ リ ノレア ミ ノ、 ペンタ ノ イ ノレア ミ ノ 、 t e r ί —ブチノレ力ノレボニルア ミ ノ、 へキサノ ィ ルァ ミ ノ基等の炭素数 1 〜 6 の直鎖又は分枝 鎖状のアルカ ノ ィ ル基を有する こ とのあるア ミ ノ基を例 示でき る。
低級アルキルチオ基と しては、 メ チルチオ、 ェチルチ ォ、 プロ ピルチオ、 イ ソプロ ピルチオ、 プチルチオ、 t e r！— ブチノレチォ、 ペンチノレチォ、 へキ シルチオ基等の 炭素数 1 〜 6 の直鎖又は分枝鎖状のアルキルチオ基を例 示でさ る。 低級アルカ ノ ィルォキシ基と しては、 ホル ミ ルォキシ、 ァセチルォキシ、 プロ ピオニルォキシ、 プチ リ ルォキシ、 イ ソブチ リ ノレオキシ、 ペンタ ノ イノレオキシ、 t e r t—ブチ ルカルボニルォキシ、 へキサノ ィルォキシ基等の炭素数 1〜 6 の直鎖又は分枝鎖状のアルカノ ィルォキシ基を例 示でき る。 .
低級アルカ ノ ィル基と しては、 ホル ミ ル、 ァセチル、 プロ ピオニル、 ブチ リ ノレ、 ペ ンタ ノ ィル、 へキサノ ィ ル 基等の炭素数 1〜 6 の直鎖又は分枝鎖状のアルカ ノ ィ ル 基を例示でき る。
フ エニル環上に置換基と して低級アルカ ノ ィルォキシ 基も し く は水酸基を有する フ ニル低級アルキル基と し ては、 2 —， 3 —又は 4 ー ヒ ドロキシベン ジル、 2 —
( 3 , 4 — ジ ヒ ドロキ シフ エニル） ェチル、 1 — ( 3 , 4 — ジ ヒ ドロキ シフ エニル） ェチル、 2 — ( 3 — ヒ ドロ キ シフ エニル） ェチル、 3 _ ( 4 — ヒ ドロキ シフ エニル） プロ ピル、 6 — ( 3 , 4 — ジ ヒ ドロキ シフ エニル） へキ シル、 3 , 4 — ジ ヒ ドロ キ シベン ジル、 3 , 4 , 5 — 卜 リ ヒ ドロ キ シベ ン ジノレ、 2 — ホノレ ミ ノレオキ シベ ン ジノレ、 3 — ァセチルォキ シベ ン ジル、 3 — （ 2 — ァセチルォキ シフ ヱニル） プロ ピル、 4 _ ( 4 ー ァセチノレオキ シ フ エ ブチル、 2 — プロ ピオニルォキ シベ ン ジル、 3 — ( 3 —プチ リ ルォキシフ エニル） プロ ピル、 4 — ( 4 一 イ ソプチ リ ルォキシフ エニル） プチル、 5 — ( 2 - t e r t 一ブチルカルボニルォキシフ エニル） ペンチル、 6 — ( 3 —ペンタ ノ ィルォキシフ エニル） へキシル、 （ 2 , 4 一 ジァセチルォキシ） ベンジル等のフ ヱニル環上に置 換基と して炭素数 1 〜 6 の直鎖も し く は分枝鎮アルカ ノ ィルォキシ基又は水酸基.を 1 〜 3個有しており、 アルキ ル部分が炭素数 1 〜 6 の直鎖又は分枝鎖アルキル基であ るフ ヱニルアルキル基を例示でき る。
低級アルコキシ基と しては、 例えばメ トキシ、 ェ トキ シ、 プロボキシ、 イ ソプロボキシ、 ブ トキシ、 t e r t— ブ トキシ、 ペンチルォキシ、 へキシルォキシ基等の炭素数 ：! 〜 6 の直鎖又は分枝鎖状アルコキシ基を例示でき る。 フ エニル環上に置換基と して低級アルコキシ基を有す る こ とのあ るベンゾィ ル基と しては、 例えばベ ン ゾィ ル、 2 — メ トキ シベンゾィ ノレ、 3 — メ 卜 キ シベ ンゾィ ル、 4 ー メ トキ シベ ンゾィ ノレ、 2 —エ ト キ ンベ ンゾィ ル、 3 — エ ト キ シベ ン ゾィ ル、 4 一エ ト キ シベ ンゾィ ル、 3 — ィ ソプロ ポキ シベ ンゾィ ル、 4 一 ブ ト キ シベ ン ゾィ ル、 2 —ペ ンチノレオキ ジべ ン ゾィ ノレ、 3 —へキ シルォキ シベ ン ゾイ ソレ、 3， 4 — ジメ ト キ シベ ン ゾィ ノレ、 2， 5 — ジ メ 卜 キ ンべ ン ゾィ ノレ、 3 , 4 , 5 — 卜 リ メ 卜 キ ンべ ン ゾィ ル基等のフ ニニル環上に置換基と して炭素数 1 〜 6 の直 鎖又は分枝鎖状アルコキシ基を 1 〜 3個有する こ とのあ るベンゾィ ル基を例示でき る。
水酸基を有する こ とのある低級アルキル基と しては、 前記無置換の低級アルキル基に加えて、 例えばヒ ドロキ シメ チル、 2 — ヒ ドロキシェチル、 1 — ヒ ドロキシェチ ル、 3 — ヒ ドロキシプロ ピル、. 2 — ヒ ドロキシブチル、 1 ー ヒ ドロキシプロ ピル、 4 — ヒ ドロキシブチル、 1 , 1 — ジメ チノレー 2 — ヒ ドロキシェチル、 5 — ヒ ドロキシ ペンチル、 6 — ヒ ドロキシへキシル、 1 ー ヒ ドロキシィ ソプロ ピル、 2 —メ チル一 3 — ヒ ドロキシプロ ピル基等 の水酸基を有する炭素数 1 〜 6 の直鎖又は分枝鎖状アル キル基を例示でき る。
低級アルケニル基と しては、 例えば、 ビニル、 ァ リ ソレ、 2 — ブテニル、 3 — ブテニル、 1 ー メ チルァ リ ル、 2 — ペンテニル、 2 —へキセニル基等の炭素数 2 〜 6 の直鎖 又は分枝鎖状のアルケニル基を例示でき る。
低級ア ルカ ン スルホニル基と して は、 メ タ ン スルホ二 ル、 ェ 夕 ン ス ルホニル、 ブロ ハ。 ン ス ルホニル、 イ ソ プ ロ パ ン ス ノレホニノレ、 ブタ ン ス ノレホニノレ、 （ e r i — ブ タ ン ス ル ホニル、 ペ ン タ ン ス ルホニル、 へキサ ン ス ルホ二ル基等 の炭素数 ]. 〜 6 の直鎖又は分枝鎖状のアルキル基を有す るスルホ二ル基を例示でき る。
低級アルコキシカルボニル基と しては、 メ トキシカル ボニル、 エ トキシカルボニル、 プロポキシカルボニル、 イ ソプロポキシカルボニル、 ブ トキシカルボニル、 t e r t 一ブ トキシカルボニル、 ペンチルォキシカルボニル、 へ キシルォキシカルボニル基等の炭素数 1 〜 6 の直鎖又は 分枝鎖状のアルコキシ基を有する力ルポ二ル基を例示で き る。
フエニル環上に置換基と して低級アルコキシ基、 低級 アルキル基及びハロゲン原子なる群から選ばれた基を 1 〜 3個有する こ とのあるフ ヱニル低級アルキル基と して は、 前記フ ヱニル低級アルキル基に加えて、 2 — ク ロ 口 ベン ジル、 2 — （ 3 — ク ロ 口 フ エ二ノレ） ェチル、 1 —
( 4 一 ク ロ 口 フ エ二ノレ） ェチル、 3 — ( 2 — フ ノレオ ロ フ ヱニル） プロ ピル、 4 一 （ 3 — フルオ ロ フ ヱニル） ブチ ル、 1， 1 ー ジメ チル一 2 — （ 4 一 フ ルオ ロ フ ェニル） ェチル、 5 — ( 2 — ブロ ムフ エ二ノレ） ペ ンチル、 6 — ( 3 — ブロ ム フ エニル） へキ シル、 2 — メ チルー 3 — ( 4 — ブロ ム フ エニル） プロ ピノレ、 3 — ョ ー ドベ ン ジル - 2 - ( 4 一 ョ ー ドフ エニル） ェチル、 1 一 （ 3 , 5 — ジ ク ロ 口 フ エ二ノレ） ェチルヽ 2 — ( 3 ， 4 ー ジ ク ロ コ フ ェ ェチル、 3 — ( 2 , 6 — ジ ク ロ 口 フ エ 二ル '） ブロ ピル、 4 一 （ 3 , 4 — ジ ク ロ ロ フ ヱ二ル） ブチル、 1， 1 一 ジメ チルー 2 — （ 3 , 4 — ジフルオロ フ ェニル） ェ チル、 5 — ( 3， 5 — ジブロムフ エニル） ペンチル、 6 一 （ 3， 4， 5 — ト リ ク ロ ロ フ ヱニル） へキ シル、 4 — メ チルベン ジル、 2 — ( 2 — メ チノレフ ヱニル） ェチル、 1 — ( 3 —メ チルフ ヱニル） ェチル > 3 — ( 3 —ェチル フ エニル） プロ ピル、 4 一 （ 2 —ェチルフ ユニル） プチ ル、 5 — （ 4 ーェチルフ ヱニル） ペンチル、 6 — （ 3 — イ ソプロ ピルフ エニル） へキ シル、 2 —メ チル— 3 — ( 4一へキ シルフ ェニル） プロ ピル、 2 — （ 3， 4 — ジ メ チルフ ヱニル） ェチル、 2 — ( 2， 5 — ジメ チルフ エ ニル） ェチル、 2 — ( 3 , 4， 5 — ト リ メ チルフ ヱニル） ェチル、 4 — メ トキ シベン ジル、 3 , 4 — ジメ ト キ シべ ン ジル、 3 , 4 , 5 ト リ メ ト キ シベ ン ジル、 1 一 （ 3 ー メ ト キ シフ エニル） ェチル、 2 - ( 2 — メ ト キ シフ エ ニル） ェチル、 3 — （ 2 —エ ト キ シフ ヱニル） プロ ピル、 4 — ( 4 一エ ト キシフ エニル） プチル、 5 — （ 3 —エ ト キ シフ エニル） ペ ンチル、 6 — ( 4 — イ ソ プロ ボキ シフ ェ ル） へキ シノレ、 1 ジメ チルー 2 ( 4
シノレオキ シフェ ル） ェチル、 2 — メ チルー 3
4 ー ジメ ト キ シフ ニニル） プロ ピル、 2 — ( 3 , 4 ン メ ト キ シフ エ二 ェチル、 2 — （ 3 , 4 — ジェ 卜 キ シ フ エ ニル） ェチル、 2 — ( 3 , 4 — ジエ ト キ シ フ エ ニル） ェチル、 2 — （ 3 , 4， 5 — ト リ メ ト キ シ フ ヱ ニル） ェ チル、 1 — ( 2 , 5 — ジメ ト キ シ フ エ二ル） ェチル基等 の フ ヱニル環上に置換基と して炭素数 1 〜 6 の直鎖又は 分枝鎖状のアルコキシ基、 炭素数 1 ~ 6 の直鎖又は分枝 鎖状のァ レキル基及びハロゲン原子なる群から選ばれた 基を 1 〜 3個有するこ と のあるフ エ二ル基を有する炭素 数 1 〜 6 の直鎖又は分枝鎖状のアルキル基を例示でき る。
フ エニル環上に置換基と して、 低級アルキル基を有す る こ とのあるア ミ ノ基及び水酸基なる群から選ばれた置 換基を有していてもよいベ ンゾィル基と しては、 ベ ンゾ ィル、 2 —， 3 —又は 4 一ァ ミ ノ べンゾィ ル、 2， 4 — ジァ ミ ノ べ ン ゾィ ル、 2 —， 3 —又は 4 — ヒ ド ロ キ シべ ン ゾィ フレ、 3， 4 — ジ ヒ ド ロ キ シベ ン ゾィ ノレ、 2 , 3 - ジ ヒ ド ロ キ ジべ ン ゾィ ノレ、 2 , 4 — ジ ヒ ド ロ キ シベ ン ゾ ィ ノレ、 2 , 6 — ジ ヒ ド ロ キ シベ ン ゾィ ル、 3， 5 — ジ ヒ ド ロ キ シベ ン ゾィ ノレ、 2 , 5 — ジ ヒ ド ロ キ シベ ン ゾィ ノレ、 3 , 4 , 5 — ト リ ヒ ド ロ キ シベ ン ゾィ ル、 2 , 4 , 6 — 卜 リ ヒ ド ロ キ シベ ン ゾィ ル、 2 —， 3 — 又は 4 一 ジ メ チ ノレア ミ ノ べ ン ゾィ ノレ、 2 — メ チ ノレア ミ ノ べ ン ゾィ ノレ、 3 一 ェチ ルア ミ ノ ベ ン ゾィ ル、 4 一 プ ロ ピルァ ミ ノ ベ ン ゾ イ ソレ、 2 — イ ソ プ ロ ピルァ ミ ノ べ ン ゾィ ル、 3 — n — ブ チルア ミ ノ ベンゾィル、 4 一 t e r t—ブチルア ミ ノ ベンゾ ィル、 2 —ペンチルア ミ ノ ベンゾィル、 3 —へキシルァ ミ ノべンゾィル、 4 — ジペンチルァ ミ ノ べンゾィル、 2 —メ チルー n —プチルァ ミ ノ べンゾイソレ、 3 , 5 — ジ (ジメ チルア ミ ノ） ベンゾィル基等のフ ヱニル環上に置 換基と して、 炭素数 1 〜 6の直鎖又は分枝鎖アルキル基 を . 1 〜 2個有する こ とのあるア ミ ノ基及び水酸基なる群 から選ばれた置換基を 1 〜 3個有していてもよいべンゾ ィル基を例示でき る。
ピぺラ ジン環の 4位に低級アルキル基を有する こ との ある ピペラ ジニル基と しては、 例えば、 ピペラ ジニル、 4 —メ チノレ一 1 ー ピペラ ジニノレ、 4 ーェチノレ一 1 — ピぺ ラ ジニノレ、 4 —プロ ピノレー 1 — ピペラ ジニル、 4 ーブチ ルー 1 ー ピペラ ジニル、 4 一 ί e r t—ブチ ル一 1 ー ピペラ ジニル、 4 一ペンチル一 1 ー ピペラ ジニル、 4 一へキシ ル一 1 一 ピペラ ジニル基等の ピペラ ジ ン環の 4位に炭素 数 1 〜 6 の直鎖又は分枝鎖状アルキル基を有する こ との ある ピペラ ジニル基を例示でき る。
フ エ二ル環上に低級ァルコキ ン基を ]. 〜 3個又は低級 アルキ レン ジォキ シ基を有する こ とのあるベンゾィ ル基 と しては、 例えば、 前記フ ニル環上に置換基と して低 級アルコキ シ基を有する こ とのあるベンゾィ ル基と同様 の基に加えて、 3 ， 4 —メ チ レ ンジォキシベンゾィル、 3 ， 4 一エチ レ ンジォキシベンゾィル、 2 , 3 —メ チ レ ンジォキシベンゾィル、 3 , 4 — ト リ メ チ レ ンジォキシ ベンゾィル、 2 ， 3 —テ ト ラメ チ レ ンジォキシベンゾィ ル基等のフ ヱニル環上に炭素数 1 〜 6 のアルコキシ基を 1 〜 3個有することがあるか又は炭素数 1 〜 4のアルキ レンジォキシ基を有するベンゾィル基を例示でき る。
c i — c 1 6アルキル基と しては、 例えば、 メ チル、 ェ チル、 プロ ピル、 イ ソプロ ピル、 ブチル、 t e r t—プチル、 ペンチル、 へキンル、 ヘプチル、 ォクチル、 ノ ニル、 デ シル、 ゥ ンデシル、 ドデシル、 ト リ デシル、 テ ト ラデシ ル、 ペンタデシル、 へキサデシル基等の炭素数 1 〜 1 6 の直鎖又は分枝鎖状アルキル基を例示でき る。
低級アルキニル基と しては、 例えば、 ェチニル、 プロ パルギル、 2 —プチニル、 1 — メ チルー 2 —プロパルギ ル、 2 —ペンチニル、 2 —へキシニル基等の炭素数 2 〜
6 の直鎖も し く は分枝鎖状のアルキニル基を例示でき る。 低級アルコキ シカルボニル低級アルキル基と しては、 例えば、 メ トキシカルボニルメ チル、 3 —メ ト キ シカル ボニルプロ ピル、 4 ー ェ 卜キ シカルボニルブチル、 6 — プロポキ シカルボ二ルへキ シル、 5 —ィ ソプロポキ シ力 ルポ二ルへキ シル、 5 —ィ ソプロ ポキ シカルボ二ルペ ン チル、 1 , 1 一 ジメ チルー 2 — ブ トキシカルボ二ルェチ ル、 2 — メ チル一 3 — t e〖 t— ブ トキ シカルボニルプロ ピ ル、 2 —ペンチルォキシカルボニルェチル、 へキシルォ キシカルボニルメ チル基等のアルコキ シ部分の炭素数が 1 〜 6及びアルキル部分の炭素数が 1 〜 6 であ るアルコ キ シカルポニルアルキル基を例示でき る。
低級アルカ ノ ィ ルァ ミ ノ基と しては、 例えば、 ホル ミ ルァ ミ ノ 、 ァセチルァ ミ ノ 、 プロ ピオニルァ ミ ノ 、 ブチ リ ノレア ミ ノ 、 イ ソ ブチ リ フレア ミ ノ 、 ペンタ ノ イ ソレア ミ ノ 、 t e r t— ブチルカルボニルア ミ ノ 、 へキサノ ィ ルア ミ ノ基 等の炭素数 1 〜 6 の直鎖又は分枝鎖状のアルカ ノ ィ ルァ ミ ノ基を例示でき る。
低級アルキル基を有する こ と のあるア ミ ノ 基と しては、 例えば、 ァ ミ ノ 、 メ チルァ ミ ノ 、 ェチルァ ミ ノ 、 プロ ピ ルァ ミ ノ 、 イ ソプロ ピルァ ミ ノ 、 n — プチルァ ミ ノ 、 i e r t — ブチソレア ミ ノ 、 ペ ンチソレア ミ ノ 、 へキ シフレア ミ ノ 、 ジメ チノレア ミ ノ 、 ジェチルァ ミ ノ 、 ジプロ ピルァ ミ ノ 、 ジイ ソプロ ピノレア ミ ノ 、 ジ一 n — ブチノレア ミ ノ 、 ジペ ン チルァ ミ ノ 、 ジへキ シルァ ミ ノ 、 メ チル， ェチルァ ミ ノ 、 メ チル， プロ ピルァ ミ ノ 、— メ チル， n — プチルァ ミ ノ 、 ェチル， ペ ンチルァ ミ ノ 、 プロ ピル， へキ シルァ ミ ノ 基 等のアルキル部分の炭素数 ]. 〜 6 の直鎖又は分子鎖ア ル キル基であるアルキル基を 1 〜 2個有する こ とのあるァ ミ ノ基を例示でき る。
フ エニル低級アルコキシカルボニル低級アルキル基と しては、 例えば、 フヱニルメ トキシカルボニルメ チル、 2— （ 2 —フ エニルエ トキシカルボニル） ェチル、 1 — ( 1 ーフ ヱニルエ トキシカルボニル） ェチル、 3— ( 3 ーフ ヱニルプロポキシカルボニル） プロ ピル、 4 一 ( 4 —フヱニルブ トキシカルボニル） プチル、 1 , 1 —ジメ チルー 2— （ 2 —フ ヱニルエ トキシカルボニル） ェチル、 5— ( 5 —フ エ二ノレペンチルォキシカルボニル） ペンチ ル、 6— （ 6 —フ ヱニルへキシルォキシカルボニル） へ キシル、 2 —メ チルー 3 — ( 3 —フ ヱニルプロポキシ力 ルポニル） プロ ピル等のアルキル部分が炭素数 1 〜 6 の 直鎖又は分枝鎖アルキル基であ り且つアルコキ シ部分の 炭素数が 1 〜 6 である フ ヱニルアルコキシカルボニルァ ルキル基を例示でき る。
ベ ンゾィル低級アルキル基と しては、 例えば、 ベ ンゾ イ ノレメ チル、 2 — ベ ンゾイ ノレエチル、 2 — ベ ンゾィ ルプ 口 ピル、 3 —べンゾィ ノレプロ ピル、 1 ー メ チルー 2 —ベ ンゾイノレエチノレ、 2 —ベンゾィ ルブチノレ、 3 —ベンゾィ ルブチル、 4 一ベンゾイ ノレブチル、 1 , 1 — ジメ チル一 2 —ベンゾイ ノレブチノレ、 2 —べンゾィ ノレペンチル、 3 — ベンゾィ ルペンチノレ、 4 —ベンゾィノレへキシノレ等のベン ゾィル基を置換基と して有する炭素数 1 〜 6 のアルキル 基を例示でき る。
低級アルキル基を有する こ とのあるア ミ ド低級アルキ ノレ基と しては、 例えば、 ア ミ ドメ チル、 メ チノレア ミ ドメ チ.ル、. 2 —ェチルア ミ ドエチル、 1 —プロ ピルア ミ ドエ チル、 3 —イ ソプロ ピルア ミ ドプロ ピル、 4 一ブチルァ ミ ドブチル、 1 ， 1 — ジメ チルー 2 — t e r t —ブチルア ミ ドエチル、 5 —ペンチルア ミ ドペンチル、 6 —へキシル ア ミ ドへキシル、 2 — ジメ チルア ミ ドエチル、 ジェチル ア ミ ドメ チル、 1 — ジプロ ピルア ミ ドエチル、 3 — ジブ チルア ミ ドプロ ピル、 4 ー ジペンチルア ミ ドブチル、 5 ー ジへキシルア ミ ドペンチル、 6 — （ N —メ チル一 N— ェチルア ミ ド） へキシル、 （ N —ェチル一 N —プロ ピル ア ミ ド） メ チル、 2 — ( N —メ チル一 N — ブチルア ミ ド） ェチル、 3 — （ N —メ チルー N —へキシルア ミ ド） プロ ピル基等の炭素数 1 〜 6 の直鎖又は分枝鎖状アルキル基 を 1 〜 2個有する こ とのあるアルキル部分が炭素数 1 〜 6 の直鎖又は分枝鎖状アルキル基であるァ ミ ドアルキル 基を例示でき る。 ―
本発明において有効成分と して用いる上記化合物 （ 1 ) 〜 （ 7 ) 中、 特に好ま しい ものと しては、 例えば以下の 各化合物を例示できる。
• 1 —ベン ジルー 6— [ 4 一 （ 3 , 4 — ジメ ト キ シベ ン ゾィ ル） 一 1 — ピペラ ジニル] — 3 , 4 — ジ ヒ ドロ 力 ルボスチ リ ル及びその塩、
· 6— [ 4 一 ( 3 , 4 — ジメ ト キ シベンゾィ ル） 一 1 — ( 1， 2， 3， -4 —テ ト ラ ヒ ドロ ピラ ジル） ] 一 3， 4 — ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル及びその塩。
上記有効成分化合物は、 通常の酸を用いて容易に薬理 的に許容される塩を形成させ得、 之等の塩も遊離形態の 化合物と同様に有効成分化合物と して用いる こ とができ る。 上記酸と しては、 硫酸、 硝酸、 塩酸、 臭化水素酸等 の無機酸及び酢酸、 p — ト ルエ ンスルホ ン酸、 エタ ンス ルホ ン酸、 シユ ウ酸、 マ レイ ン酸、 フ マール酸、 ク ェ ン 酸、 コハク酸、 安息香酸等の有機酸を例示でき る。
本発明のアポ ト ーシス調整剤の有効成分である化合物
( 1 ) 〜化合物 （ 7 ) 及び之等の塩は、 通常、 一般的な 医薬製剤の形態で用い られる。 かかる製剤は通常使用さ れる充填剤、 増量剤、 結合剤、 付湿剤、 崩壊剤、 表面活 性剤、 滑沢剤等の希釈剤あるいは賦形剤を用いて調製さ れる。 この医薬製剤と しては各種の形態が治療目的に応 じて選択でき、 この代表的な もの と して錠剤、 丸剤、 散 剤、 液剤、 懸 剤、 乳剤、 顆粒剤、 カ プセル剤、 坐剤、 注射剤 （液剤、 懸濁剤等） 、 点眼剤等が挙げられる。
錠剤の形態に成形するに際しては、 担体と してこの分 野で従来公知のものを広く 使用でき、 例えば乳糖、 白糖、 塩化ナ ト リ ウム、 ブ ドウ糖、 尿素、 デンプン、 炭酸カル シゥム、 カオ リ ン、 結晶セルロース、 ケィ酸等の賦形剤、 水、 エタ ノ ール、.プロパノ ール、 単シロ ッ プ、 ブ ドゥ糖 液、 デンプン液、 ゼラチ ン溶液、 カルボキシメ チルセル ロース、 セラ ッ ク、 メ チルセルロース、 リ ン酸カ リ ウム、 ポ リ ビニルピ口 リ ドン等の結合剤、 乾燥デンプン、 アル ギン酸ナ ト リ ウム、 カ ンテン末、 ラ ミ ナラ ン末、 炭酸水 素ナ ト リ ウム、 炭酸カルシウム、 ポ リ オキシエチ レンソ ルビタ ン脂肪酸エステル類、 ラ ウ リ ル硫酸ナ ト リ ウム、 ステア リ ン酸モノ グ リ セ リ ド、 デンプン、 乳糖等の崩壊 剤、 白糖、 ステア リ ン、 カカオバタ ー、 水素添加油等の 崩壊抑制剤、 第 4級ア ンモニゥ ム塩基、 ラ ウ リ ル硫酸ナ ト リ ウム等の吸収促進剤、 グ リ セ リ ン、 デンプン等の保 湿剤、 デンプン、 乳糖、 カオ リ ン、 ベン トナイ ト、 コ ロ ィ ド状ケィ酸等の吸着剤、 精製タルク、 ステア リ ン酸塩、 ホウ酸末、 ポ リ エチ レ ング リ コール等の滑沢剤等が例示 でき る。 更に錠剤は必要（こ応じ通常の剤皮を施 した錠剤、 例えば糖衣錠、 ゼラ チ ン被包錠、 腸溶被錠、 フ ィ ルム コ 一ティ ング錠あるいは二重錠、 多履錠とする こ とができ る o
丸剤の形態に成形するに際しては、 担体と してこの分 野で従来公知なる ものを広く 使用でき、 例えばブ ドウ糖、 乳糖、 デンプン、 カカオ脂、 硬化植物油、 カオ リ ン、 夕 ルク等の賦形剤、 ァラ ビアゴム末、 ト ラガン 卜末、 ゼラ チン、 エタ ノ ール等の結合剤、 ラ ミ ナラ ン、 カ ンテ ン等 の崩壊剤等が例示でき る。
坐剤の形態に成形するに際しては、 担体と して従来公 知のものを広く 使用でき、 例えばポ リ エチ レ ングリ コー ル、 カカオ脂、 高級アルコール、 高級アルコールのエス テル類、 ゼラチ ン、 半合成グ リ セライ ド等を挙げる こ と ができ る。
注射剤と して調製される場合には、 液剤及び懸蜀剤は 殺菌され、 且つ血液と等張であるのが好ま し く 、 これら 液剤、 乳剤及び懸濁剤の形態に成形するに際しては、 希 釈剤と してこの分野において慣用されている ものを全て 使用でき、 例えば水、 エチルアルコ ール、 プロ ピ レ ング リ コ ール、 エ ト キ シィ匕イ ソ ステア リ ノレアノレコ ール、 ポ リ ォキ シィ匕ィ ソ ステア リ ノレアルコ ール、 ポ リ オキ シェチ レ ン ソルビタ ン脂肪酸エステル類等を挙げる こ とができ る。 尚、 こ の場合等張性の溶液を調製する に充分な aの食塩、 ブ ドウ糖あ る いはグ リ セ リ ンを医薬製剤中に含有せ しめ てもよ く 、 また通常の溶解補助剤、 緩衝剤、 無痛化剤等 を添加してもよい。
更に本発明アポ トーシス調整剤中には必要に応じて着 色剤、 保存剤、 香料、 風味剤、 甘味剤等や他の医薬品を 含有せ しめてもよい。
上記医薬製剤中に含まれる有効成分化合物の量は、 特 に限定されず広範囲に適宜選択されるが、 通常全組成物 中 1 〜 7 0重量％、 好ま し く は 1 〜 3 0重量％含まれる 量とするのが適当である。
上記医薬製剤の投与方法は特に制限はな く 、 各種製剤 形態、 患者の年齢、 性別その他の条件、 疾患の程度等に 応じて決定される。 例えば錠剤、 丸剤、 液剤、 懸濁剤、 乳剤、 顆粒剤及びカプセル剤の場合には経口投与される また注射剤の場合には単独であるいはブ ドウ糖、 ァ ミ ノ 酸等の通常の補液と混合 して静脈内投与され、 更には必 要に応じて単独で筋肉内、 皮内、 皮下も し く は腹腔内投 与される。 坐剤の場合には直腸内投与される。 点眼剤の 場合には目に適用される。
上記医薬製剤の投与量は用法、 患者の年齢、 性別その 他の条件、 疾患の程度等によ り適宜選択されるが、 通常 有効成分である化合物 （ 1 ) 〜化合物 （ 7 ) の ¾は 1 日 当 り体重 1 k g 当 り約 0 . 0 1 〜 ； 3 0 m g とするのがよ い。 また、 投与単位形態中に有効成分を約 1 0〜
1 0 0 O m g含有させるのがよい。
本発明アポ ト一シス調整剤は、 その有するアポ ト 一 シ ス調整能に加えて、 細胞の分化誘導作用、 癌細胞の增殖 抑制作用、 制癌作用、. 抗レ ト ロ ウ イ ルス作用、 エン ド ト キシ ン · シ ョ ッ クに対する延命効果作用、 サイ トカイ -ン 産生抑制作用、 末梢 リ ンパ球活性化抑制作用等を有して おり、 例えば制癌剤、 癌転移抑制剤、 血小板減少治療剤、 アルツハイマー病の治療及び予防剤、 肝疾患の治療及び 予防剤、 抗レ ト ロ フィ ルス剤、 サイ ト カイ ン産生抑制剤、 免疫抑制剤等と して、 殊に好適に使用する こ とができ る。
本発明アポ ト一シス調整剤は、 例えば制癌剤と して用 いる場合、 その投与によ り、 癌細胞を分化させた後又は 分化させる こ とな く 直接に、 アポ ト ー シスの誘導を促進 又は抑制でき、 かく して制癌作用を発揮する。 またこの 場合、 本発明調整剤は、 その製剤形態及び投与経路にか かわらず、 例えばこれを癌の化学療法剤と して知られて いる他の各種の制癌剤や放射線療法と併用する こ とがで き る。 かく して、 本発明の有効成分化合物は優れた制癌 効果を奏 し得るため、 併用する他の制癌剤の効果を一層 助長 し、 相乗効果を発揮させる こ とができ る。 従っ て、 併用する制癌剤を通常用い られる量よ り かな り少 Wとす る場合でも、 充分な癌治療効果が得られ、 これによ り併 用制癌剤の副作用の軽減化をはかる こ とができ る。 かか る化学療法剤と しては、 例えば 5 — フルォロウラ シル
( 5 — F U、 協和発酵工業株式会社製） 、 マイ トマイ シ ン （Mi t omyc in- C 、 同上社製） 、 フ ト ラ フール （F T— 2 0 7、 大鵬薬品工業株式会社製）—、 ン ドキサ ン
(Endoxan 、 塩野義製薬株式会社製） 、 ト ヨマイ シ ン
(Toyoinicin 、 武田薬品工業株式会社製） 等を例示でき る
本発明アポ トー シス調整剤は、 これを血小板減少症治 療に用いる場合、 例えば R Aや R A R S等の M D S患者 では、 その投与によ り細胞の分化誘導促進作用 と共にァ ポ ト一 シス抑制作用が発揮され、 かく して造血細胞の増 殖を剌激し、 正常な分化、 成熟を起こ させ得る。 また、 R A E Bや R A E B — t 等の M D S患者では、 本発明調 整剤の投与によ り芽球の分化が誘導される と共に、 芽球 の増殖が抑制され、 かく して成熟細胞の増殖を起こ させ 得る。 また本発明調整剤は、 巨核球前駆細胞や巨核球細 胞に作用 して、 その分化、 成熟を促進させる こ と によ り 、 血小板産生の促進作用 も期待でき る。 本発明アポ ト ー シ ス調整剤を上記血小板減少症治療に fflいる場合は、 これ は従来公知の血小板増加剤等の他の医薬品と併用でき、 これによ り之等併用薬剤の効果を助長し、 従って併用剤 量をかな り少量と しても充分な治療効果を奏し得、 副作 用の軽減化をはかり得る場合がある。
本発明調整剤は、 アルツハイマー病の治療及び予防剤 と しても有用である。 この場合、 例えば古典的なァルツ ハイマー病やアルツハイ マー型老年痴呆症患者において、 本発明調整剤はアポ ト一シスの抑制によ り N. G F様作用 を示し、 かく して上記治療及び予防効果を発揮する。 ま たこの場合、 本発明製剤は従来公知の脳循環改善剤や脳 代謝改善剤等のアルツハイマー病治療剤と併用する こ と ができ、 之等の効果を助長 し、 之等による副作用を軽減 でき る場台がある。
更に本発明調整剤は、 アポ ト ー シスを制御する こ と に よ り、 薬剤性及びゥ ィ ルス性肝炎患者における肝炎の治 療乃至肝細胞の線維化防止を行ない得、 従って肝硬変予 防剤と して利用する こ とができ る。
また本発明調整剤は、 抗レ ト ロ ウ イ ルス作用を有して おり、 前述 した各種の H I V又は H T L V— I 関連疾患 や C型肝炎等の レ ト ロ ウ ィ ルス関連疾患に有用な抗レ 卜 ロ ウィ ルス剤と して好適に利 ^でき る。
本発明調整剤は、 またェ ン ド ト キ シ ン シ ョ ッ ク に対す る延命効果作用を有 しており、 前述 した各種感染症、 特 に敗血症の治療剤と して有用である。
本発明調整剤は、 サイ ク ロスポ リ ン A (cyclosporin A)と同様に、 末梢リ ンパ球活性化抑制作用を有しており、 免疫抑制剤と して、 前述した各種疾患、 殊に前記自己免 疫疾患、 臓器移植における拒絶反応の抑制、 ベ一チェ ッ ト病、 交感性ブ ドウ膜炎、 乾癬 （psoriasis)、 再生不良 性貧血等の免疫学的機序が関与する血液疾患等の治療剤 と して有用である CMedical I mmu n o 1 o g y, U, 11- 83, 1990; 免疫薬理 ， 425 -429, 1990; 医学のあゆみ， 151, 4Π- 420, 425 - 428, 1989 ; Pharmacolo ical
Reviews, U, 259 - 371 等参照〕 。
また、 本発明調整剤は、 サイ トカイ ンの産生抑制作用 を有し、 サイ トカイ ンの異常産生を伴う各種疾患、 殊に 細菌や寄生虫の感染症 〔医学のあゆみ， (8), 467- 470, 471-474, 1991参照〕 、 R A [Art ri t ic Rheum. , 31, 1041, 1988； 同 34, 1125, 1991； J. Immuno !. , Πδ,
4154, 1990;, 同 22, 1907, 1992; Br i. J. Rheum. , 31,
293, 1992 ; Eur. J. I mm u n o i . , ]_8, Π57, 1989等参照〕 、 A R D S [Nature, 1 1986 〕 、 ウ イ ノレス性肝炎 の劇症化 〔Lancei, i i, ?2, 1986〕 、 C S F 〔日本臨床
50 ( 11 ), 51 - 55, 1992； inf ect ious Di seases, 1 b：〕，
99Ί- 1000, 1992 等参照 j 、 高？ 一グロブ リ ン血症、 急 性期蛋白質の増加を伴う心房内粘液腫やキ ャ ス トルマ ン (Cas t 1 eman ) 症候群 〔B l ood, J_, 1360, 1989； Eu r, J. Immuno l. , j_8, Π 97, 1989 ) 、 メサンギゥム増殖性 腎炎 （ P G N ) 〔治療学， 11 ( 1 ) , 49, 1990 ) 及び前述 した各種の自己免疫疾患や H I V又は H T L V — 1関連 疾患に、 サイ トカイ ン産生抑制剤と して、 好適に利用さ れる。 - 尚、 本発明調整剤の制癌剤と しての利用においては、 後述の供試化合物 No. 8の化合物を有効成分と して含むも のが特に好ま しく 例示される。 また、 本発明調整剤の免 疫抑制剤と しての利用においては、 同 No. 1 6及び 3 1の 化合物を有効成分と して含むものが特に好ま し く 、 更に、 本発明調整剤の抗レ ト ロウィルス剤と しての利用におい ては、 同 Να 2、 7、 8、 1 1、 2 5、 3 2及び 3 9 の化 合物のいずれかを有効成分と して含むものが特に好ま し いものと して例示される。
実 施 例
以下に、 本発明ァポ 卜ーシス調整剤の製剤例及び該ァ ポ ト一 シ ス調整剤の有効成分化合物の薬理試験結果を掲 げる。
製剤例 1
1 —ベ ン ジソレー 6 — 〔 4 一 ( 3 , 4 — ジメ ト キ シベ ン ゾ ィル） 一 1 — ピペラ ジニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ドロ カルボ スチ リ ル
アビセル （商標名， 旭化成 （株） 製）
コー ンスタ ーチ
ステア リ ン酸マグネ シウ ム
ヒ ドロキ シプロ ピルメ チルセノレロース
Figure imgf000042_0001
ポ リ エチ レ ング リ コ 一ルー 6 0 0 0
ヒマ シ油 4 0 g メ タ ノ ール 4 0 g 上記有効成分化合物、 ア ビセル、 コ ー ンスタ ーチ及び ステア リ ン酸マグネ シウ ムを混合研磨後、 糖衣 R 1 0 m m のキネで打錠する。 得 られた錠剤を ヒ ドロキ 1ンプロ ピル メ チルセノレロ ース、 ポ リ エチ レ ング リ コール一 6 2 o o o o 30 0 0 ヒマ シ油及びメ 夕 ノ ールか らな る フ ィ ノレム コ ーテ ィ ン グ 剤で被覆を行ない、 フ ィ ル厶 コ 一テ ィ ング錠を製造する , 製剤例 2
1 一べン ジルー 6 — 〔 4 一 （ 3 ， 4 ー ジメ ト キ シべ ンゾ ィ ル） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 _ 3 , 4 — ジ ヒ ドロ カ ルボ スチ リ ノレ 1 5 0 . 0 g ク ェ ン酸 1 . 0 g ラ ク ト ース 3 3 . 5 g リ ン酸ニカ ル シ ウ ム 7 0 . 0 g プル口ニッ ク F— 6 8 3 0 . 0 g ラウ リ ル硫酸ナ ト リ ウム 1 5 . 0 g ポ リ ビニルピロ リ ドン 1 5 . 0 g ポ リ エチレング リ コール （カルボワ ッ ク ス 1 5 0 0 )
4 . 5 g ポ リ エチ レング リ コール （カルボワ ッ ク ス 6 0 0 0 ) '
4 5 . 0 g
3 ンスターチ 3 0 . 0 g 乾燥ラ ゥ リ ル硫酸ナ ト リ ウム 3 . 0 g 乾燥ステア リ ン酸マグネ シウム 3 . 0 g エタ ノ ール
上記有効成分化合物、 ク ェ ン酸、 ラ ク ト ース、 リ ン酸 二カルシウム、 プル口ニ ッ ク F — 6 8及びラ ウ リ ル硫酸 ナ ト リ ゥムを混合する。
上記混合物を N 0 . 6 0 スク リ ー ンにて篩別 し、 ポ リ ビニルピロ リ ドン、 カルボワ ッ ク ス 1 5 0 0及びカルボ ワ ッ ク ス 6 0 0 0 を含むアルコール性溶液で湿式粒状化 する。 必要に応じてアルコ ールを添加 し、 粉末をペース ト状塊にする。 コー ンス タ ーチを添加 し、 均一な粒子が 形成されるまで混合を続ける。 N o . 1 0 ス ク リ ー ンを 通過させ、 卜 レイ に入れ、 1 0 0 °Cのオー ブ ンで 1 2 〜 1 4時間乾燥する。 乾燥粒子を N 0 . 1 6 ス ク リ ー ンで 篩別し、 乾燥ラゥ リル硫酸ナ ト リ ゥム及び乾燥ステア リ ン酸マグネシウムを加え、 混合し、 打錠機で所望の形状 に圧縮成形する。
上記芯部をワ ニスで処理し、 タルクを散布して湿気の 吸収を防止する。 芯部の周囲に下塗り層を被覆する。 内 服用のために充分な回数のワニス被覆を行なう。 錠剤を 完全に丸く且つ滑らかにするために、 更に下塗り層及び 平滑被覆を適用する。 所望の色合が得られるまで着色被 覆を行なう。 乾燥後、 被覆錠剤を磨いて均一な光沢の錠 剤を調製する。
以下に示す供試化合物を用い、 下記の薬理試験に供し た。
供試化合物 N o .
1 . 6 — 〔 4 — ( 4 — ェチルベ ン ゾィ ル） 一 1 — ピペラ ジニル〕 一 3 ， 4 ー ジ ヒ ド ロ 力 ノレボス チ リ ノレ
2 . 8 — メ チル一 6 — （ 1 ー ピペラ ジニル） 一 3 , 4 — ジ ヒ ド ロ 力 ノレボス チ リ ル
3 . 6 — 〔 4 — ( 3 ， 4 ー メ チ レ ン ジォ キ シベ ン ゾィ ル
— 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ド ロ 力 ノレボス チ リ ノレ ―
4 . 6 — ( 4 — ベ ン ゾィ ルー 2 — ォ キ ソ 一 1 — ピペラ ジ ニル） 一 3 ， 4 — ジ ヒ ド ロ 力 ノレボス チ リ ル 5. 6 — 〔 4 — ( 3 , 4 — ジメ ト キ シベンゾィ ル） 一 1
— 1 , 2 , 3 , 4 ーテ ト ラ ヒ ドロ ピラ ジ 一 3 ,
4 — ジ ヒ ドロカフレボスチ リ ル
6. 6 — ( 3 —ォキソ 一 1 ー ピペラ ジニル） 一 3， 4 一 ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル
7 · 6 〔 4 — ( 4 — メ チルチオべンゾィ ル） 一 1 ー ピ ペラ ジニ — 3 , 4 — ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル
8. 1 —ベン ジル一 6 — 〔 4 — ( 3， 4 ー ジメ トキ シべ ンゾィル） 一 1 — ピペラ ジニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ド ロ カノレボスチ リ ノレ
9. 6 — 〔 4 一 （ 4 — ク ロ 口べ ンゾィ ル） 一 1 — ピペラ ジ二 3， 4 — ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル
1 0. 6 — 〔 4 一 （ 3 — ク ロ 口べ ンゾィ ル） 一 1 — ピぺ ラ ジニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル
1 1. 1 一 （ 4 ー ヒ ドロキ ジベ ン ジル） 一 6 — 〔 4 一 ( 3， 4 ー ジメ ト キ シベンゾィ ル） 一 1 ー ピペラ ジ ニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ドロ カ ルボスチ リ ル
1 2. 1 — ( 4 —ァセチルォキ シベ ン ジル） — 6 — 〔 4 一 （ 3， 4 — ジメ ト キ シベ ン ゾィ ノレ） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3， 4 — ジ ヒ ドロ 力 ルボスチ リ ル
1 3. 1 —ベ ンゾィ ル一 6 — 〔 4 — ( 3 , 4 — ジメ ト キ シベ ン ゾィ ル） 一 1 — ピペラ ジニノレ〕 一 3， 4 — ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル
1 4. 1 —ナフ ト イ ルー 6— 〔 4— ( 3， 4— ジメ トキ シベンゾィ ル） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3 , 4— ジ ヒ ドロカルボスチ リ ル
1 5. 8—メ トキ シ一 6— 〔 4— ( 3 , 4— ジメ ト キ シ ベンゾィ ル） 一 1 — ピペラ ジニル〕 一 3， 4— ジ ヒ ドロカルボスチ リ ル
1 6. 6 - 〔 4— ( 4 —メ トキ シベン ジル） 一 1 ー ピぺ ラ ジニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル 1 7. 6 - 〔 4一 （ 4一 ク ロ 口ベン ジル） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3， 4 — ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル
1 8. 6 - 〔 4— (4 — メ チルベ ン ジル） 一 1 — ピペラ ジニル〕 一 3， 4 — ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ノレ · 2塩 酸塩
1 9. 6— 〔 4一 （ 3 _ ピ リ ジルカ ルボニル） _ 1 — ピ ペラ ジニル〕 カルボスチ リ ル
2 0. 8 - ( 1 —ピペラ ジニル） 一 3， 4ー ジ ヒ ドロ 力 ルボスチ リ ル ' 1臭酸塩
2 1. 4 — 〔 4 一 （ 3 , 4 — ジメ ト キ シベ ン ゾィ ル） 一
1 ー ピペラ ジニル〕 力 ノレボスチ リ ル
2 2. 3 — 〔 4 一 （ 3 , 4 — ジ メ ト キ シベ ン ゾィ
1 — ピペラ ジニル〕 力 ノレボスチ リ ル 3. 1—ァ リ ル一 5— 〔 4一 （ 3 , 4— ジメ ト キ ジべ ンゾィ ル） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ド 口カルボスチ リ ル
2 4. 1 —ァセチルー 6— 〔 4— ( 3 , 4— ジメ トキシ ベンゾィ ル） 一 1 — ピペラ ジニル〕 一 3 , 4— ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ノレ
2 5. 1 — ( 4— ヒ ドロキシベンゾィ ル） 一 6— 〔 4一 ( 3 , 4— ジメ トキシベンゾィ ノレ） 一 1 ー ピペラ ジ ニル〕 一 3 , 4— ジ ヒ ドロカルボスチ リ ル
2 6. 1 — ( 3—ァ ミ ノ べンゾィ ル） 一 6— 〔 4一 （ 3 , 4— ジメ トキシベンゾィ ル） 一 1 — ピペラ ジニル〕 — 3 , 4 — ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル
2 7. 1 —メ チルー 4 — ( 1 —ピペラ ジニル） カルボス チ リ ル ， 1塩酸塩
2 8. 1 —べ ン ジルー 4一 （ 1 ー ピペラ ジニル） カ ルボ スチ リ ル · 1塩酸塩
2 9. 1 —へキサデシルー 3— （ 4— メ チルー 1 ー ピぺ ラ ジニル） カ ルボスチ リ ル · 蓚酸塩
3 0. 1 —メ チル一 6 — 〔 4 — ( 3 , 4 — ジメ 卜 キ ンべ ン ゾィ ノレ） 一 1 — ピペラ ジニノレ〕 一 3， 4 一 ジ ヒ ド ロ カ ノレボスチ リ ル
3 1. 1 —ベ ン ジノレ一 3 — ( 4 — メ チル一 1 ー ピペラ ジ ニル） カルボスチ リ ル · 蓚酸塩
2. 5— ( 4—プロノ、。ルギルー 1 ー ピペラ ジニル） 一
3 , 4— ジ ヒ ドロ 力ノレボスチ リ ル
3. 5 — C 4 - ( 4—ァセチルァ ミ ノ べンゾィ ル） 一
1 — ピペラ ジニル〕 一 3， 4— ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル
4. 4— ( 1— ピペラ ジニル） カルボスチ リ ノレ · 1塩 酸塩 · 1 / 4水和物
5. 4— 〔 4一 （ 3 , 4—メ チ レ ン ジォキ シベンゾィ ル） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 カルボスチ リ ル
6. 3 — ( 4 —ベン ジル一 1 ー ピペラ ジニル） カノレボ スチ リ ル 1塩酸塩 · 1 Z 4水和物
7. 3 — 〔 4 — ( 2 —べンゾィ ルェチル） 一 1 — ピぺ ラ ジニル〕 カルボスチ リ ル
8. 1 —プロパルギル— 6 — 〔 4 一 （ 3 , 4 — ジメ ト キ シベン ゾィ ル） 一 1 — ピペラ ジニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ドロ 力ノレボスチ リ ノレ
9. 1 —エ ト キ シカルボニル— 6 — 〔 4 — ( 3 , 4 — ジメ ト キ シベ ン ゾィ ノレ） 一 1 — ピペラ ジニル〕 一 3 4 — ジ ヒ ドロ 力ノレボスチ リ ノレ
0. 1 —エ ト キ ンカ ノレポ二ルメ チノレ一 6 — 〔 4 — ( 3
4 — ジメ ト キ シベ ン ゾィ ル） 一 1 ー ピペラ ジニ — 3， 4— ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ノレ
4 1. 1 一 （ 4ー ジメ チルァ ミ ノ べンゾィ ル） 一 6— 〔 4一 ( 3 , 4— ジメ ト キ シベンゾィ ル） 一 1 ー ピ ペラ ジニル〕 _ 3， 4— ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル 4 2. 1 —ベン ジルォキ シカルボ二ルメ チルー 3 4
— メ チルー 1 —ピペラ ジニ カルボスチ リ ソレ · 蓚 酸塩
4 3. 1 — ジェチルア ミ ドメ チル一 3 — （ 4ー メ チル一 1 — ピペラ ジニル） カルボスチ リ ル
4 4. 1 —べン ジルー 5 - 〔 4 — ( 3 , 4— ジメ トキ シ ベンゾィ ル） 一 1 — ピペラ ジニル〕 一 3 , 4— ジ ヒ ド ロカノレボスチ リ ノレ
4 5. 1 —べ ン ジノレ一 6 _ ( 4 —べンゾィ ノレ一 1 — ピぺ ラ ジニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル
4 6. 1 —ベ ン ジル一 6 — 〔 4 — ( 2 — メ 卜 キ シベ ンゾ イ ソレ） 一 1 — ピペラ ジニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ドロ カル ボスチ リ ノレ
4 7. 1 —ベ ン ジル一 6 — ( 4 —ベン ジルー 1 —ピペラ ジニル） 一 3 , 4 — ジ ヒ ドロ カ ルボスチ リ ル · 2塩酸 塩
4 8. 1 —ベ ン ジル一 6 — 〔 4 一 （ 4 一 ク ロ 口べ ン ジ
1 ー ヒ へフ ジ , 4 ー ジ ヒ ドロ カ ルポスチ リ ル · 2塩酸塩
4 9. 1 一ベン ジル一 6 — 〔 4 一 （ 3 — メ トキ ンべンゾ ィ ル） 一 1 — ピペラ ジニ 一 3， 4 ー ジ ヒ ドロ カル ボスチ リ ノレ
5 0. 1 —ベン ジル一 6 — 〔 4 — ( 4 一ブロモベン ジル） — 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ドロカソレボスチ リ ル · 2塩酸塩
5 1. 1 —ベン ジルー 6 — 〔 4 — ( 4 —メ トキ シベンゾ ィ ル） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ドロ カル ボスチ リ ノレ
5 2. 1 —ベン ジルー 6 — 〔 4 一 （ 4 — フルォ ロベン ジ ル） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ドロ カルボ スチ リ ル · 2塩酸塩
5 3. 1 —ペ ン ジノレー 6 — 〔 4 — ( 2 — ク ロ 口べン ゾィ ル） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ドロ カ ルボ スチ リ ル
5 4. 1 —ベ ン ジル一 6 — 〔 4 — ( 4 一 n — ブ ト キ シべ ンゾィ ノレ） 一 1 — ピペラ ジニル〕 一 3， 4 ー ジ ヒ ドロ 力ルボスチ リ ル
5 5. 1 —ベ ン ジルー 6 — 〔 4 一 （ t 一 ブチルベ ン ゾィ ル） 一 1 ー ピペラ ジニノレ〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ド ロ カ ノレボ スチ リ ノレ 6. 1 —ベン ジル一 6 — 〔 4 — ( 3 , 4 — ジ ク ロ 口べ ンゾィ ル） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル
5 7. 1 —ベン ジル一 6 — 〔 4 一 （ 2， 4 ー ジク ロ 口べ ンゾィ ル） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ドロ カルボスチリ ル
5 8. 1 —ベン ジル一 6 — 〔 4 一 （ 4 — ク ロ 口べンゾィ ル） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ドロ カルボ スチ リ ノレ
5 9. 1 —ベン ジルー 6 — 〔 4 — ( 4 一 メ チルベン ジル） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル · 2塩酸塩
6 0. 1 —ベ ン ジルー 6 — 〔 4 — ( t — ブチルベン ジル） 一 1 — ピペラ ジニル〕 一 3， 4 ー ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル · フマール酸塩
6 1. 1 —ペ ン ジノレー 6 — 〔 4 — ( 4 ー メ ト キ シベ ン ジ ル） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3， 4 — ジ ヒ ドロ カルボ スチ リ ル · 2塩酸塩
6 2. 1 —ベ ン ジルー 6 — 〔 4 一 （ 4 ー フ ノレオ 口べ ンゾ ィ ル） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3， 4 — ジ ヒ ドロ カ ル ボスチ リ ノレ
6 3. 1 —ベ ン ジル一 6 — 〔 4 — ( 3 — ク ロ 口べン ゾィ ル） 一 1 — ピペラ ジニル〕 一 3， 4— ジ ヒ ドロ カルボ スチ リ ノレ
4. 1—ベン ジル一 6 — 〔 4— (4— メ チルベンゾィ ル） 一 1 — ピペラ ジニル〕 一 3， 4— ジ ヒ ドロ カルボ スチ リ ル
5： 1 —ベン ジル一 6— 〔 4 ^ ( 3， 4ー ジメ ト キシ ベン ジル） 一 1— ピペラ ジニル〕 一 3， 4— ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル · 2塩酸塩
6. 1 —ベン ジル一 6 — 〔 4— ( 2， 4 — ジフルォ ロ ベンゾィ ル） 一 1 — ピペラ ジニル〕 一 3 , 4— ジ ヒ ド 口 カルボスチ リ ル
7. 1 —ベン ジル一 6 — 〔 4— (4一ェチルベンゾィ ル） 一 1 — ピペラ ジニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ドロ カ ルボ スチ リ ノレ
8. 1 一べ ン ジノレ '一 6 — 〔 4 — ( 3 , 4— ジメ チルべ ン ジル） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3， 4 — ジ ヒ ドロ 力 ルボスチ リ ル · 2塩酸塩
9. 1 —ベ ン ジル一 6 — 〔 4 一 （ 3， 4 — ジメ チルべ ンゾィ ノレ） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3， 4 ー ジ ヒ ドロ カ ルボスチ リ ル
0. 1 —ベ ン ジル一 6 — 〔 4 _ ( 4 一 n — ブ ト キ シべ ン ジゾレ） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3， 4 ー ジ ヒ ドロ 力 ルボスチ リル · 2塩酸塩
1. 1 —ベン ジル一 6— 〔 4一 （ 3， 4— ジフノレオ 口 ベンジル） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3， 4— ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル · 2塩酸塩
7 2. 1 —べン ジルー 6— 〔 4— ( 3， 4— ジフノレオ 口 ベンゾィ ル） 一 1ー ピペラ ジニル〕 一 3， .4— ジ ヒ ド 口力ノレボスチ リ ゾレ
7 3 —ベン ジル一 6 — 〔 4— ( 4— ブロモベンゾィ ル） _ 1 — ピペラ ジニル〕 一 3 , 4— ジ ヒ ドロ カノレボ スチ リ ル
7 4 ベン ジル一 6 〔 4一 （ 4 n — ブチルベン ゾィ ル） 一 1— ピペラ ジニル〕 一 3， 4ー ジ ヒ ドロ 力 ルボスチ リ ル
7 5 1 一ベ ン ジル一 6— 〔 4一 （ 3 , 4， 5 — ト リ メ ト キ シベンゾィ ル） 一 1 — ピペラ ジニル〕 一 3 , 4 - ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル
7 6. 1 —べン ジルー 6 — 〔 4 — ( 3 , 4 — メ チ レ ン ジ ォキ シベンゾィ ル） 一 1 ー ピペラ ジニル〕 一 3 , 4 - ジ ヒ ドロ カ ルボスチ リ ノレ
7 7. 1 —ベ ン ジル一 6 — 〔 4 — ( 2 , 4 — ジ メ ト キ シ ベンゾィ ノレ） 一 1 — ピペラ ジニル〕 一 3 , 4 — ジ ヒ ド ロ カノレボスチ リ ノレ 7 8. 1 —ベンジルー 6— 〔 4— ( 3 , 4 , 5 — ト リ メ トキシベンジル） 一 1 — ピペラ ジニル〕 一 3， 4 ー ジ ヒ ドロカルボスチ リ ル · 2塩酸塩
薬理試験例 1
①アポ ト ーシス調整効果試験 1
この試験は文献記載の方法に従った （Ni col e 11 i, 1. , e t a 1. , J. Immuno 1 og i ca 1 Me thods, 139， 271 - 279
CMK細胞を 1 0 %牛胎児血清含有 R P M I —
1 6 4 0培地中にて 5 x 1 04 個ノ m 1 の濃度に調製し た後、 これに各供試化合物を 3 0 μ g Zm 1 の濃度で加 えて、 3 7 °Cで 4 日間、 6 ゥ ヱル培養プレー 卜 （コース 夕一社製） の各ゥ ヱルにて培養した。 なお、 コ ン ト 口一 ルと して溶媒のみを加えたものを同様に して培養 した。
培養後、 細胞を回収し、 1 X I 00 細胞をポ リ エチ レ ンチューブに移 し、 2 0 0 X g、 5分間遠心分離して細 胞のペ レ ツ 卜を得た。
上記で分離された細胞ペレ ッ ト に、 0. 2 5 m 1 の緩 衝液 〔 0. 1 %クェ ン酸ナ ト リ ウム （和光純薬社製） + 0. 1 % ト リ ト ン X— 1 0 0 (片山化学社製） Φに ヨ ウ ィ匕プロ ビジゥム （ P I 、 シグマ社製、 P B S中に 1 0 0 ； z g Z m 1 含有） 5 0 g Z m 1 ] を加え、 再懸 させ た。 チューブはフ ローサイ ト メ ト リ ー分析前に一晩暗室 中にて 4 °Cで放置 した。
個々の核の P I蛍光を、 プロ フ ア イゾレ I I (コール夕 —社製） フローサイ ト メ ータ一を使用 して測定した。 核 は 4 8 8 n mのアルゴン レーザ一を 1 Wで用いた。
5 6 0 η τηのタ イ ク ロニッ ヮ ミ ラー (dicliroic mi r ror) DM570 ) と 6 0 0 n mのバン ドパスフ ィ ルター
(bandwidth 35nm) を D N Aの P I 染色の赤の蛍光を集 めるために使用 した。 細胞の破片を F A C S閾値を適当 に上げる こ とによ り分析から排除した。 正しい閾値の値 は経験的に選択した。
残存細胞破片は、 非常に低い D N A赤色蛍光放射を有 していて、 ァポプティ ク細胞は、 核ク ロマチ ンの濃縮の ため、 高い S S C値によって細胞破片から容易に区別さ れる。 流速比は約 2 0 0核 Z秒にセ ッ ト し、 各サンプル を少な く と も 1 04 核分析した。
ヒス ト グラム分析によ り、 低い蛍光強度を示す細胞破 片を除いた 2 N以上の含量を示す核と 2 N以下の含量を 示す核の割合を求めた。 2 N以下の含量を示す核をアポ ブティ ッ ク細胞の有する核と し、 2 N以下の含燃を示す 核の割合を断片化 した D N Aと し、 アポ ト ー シ ス誘導能 の指標と した。 各供試化合物を用いて得られた結果を表 1 に示す ―
-— 表 1 生細胞数 隠た隠 生細胞数 片化した DNA (X106 /ゥエル) (¾) (XI 06 /ゥエル) (%)
- (コントロ-ル） 2. 00 12. 7 21 40. 1
1 . 0. 80 39. 9 22 80. 3
2 1. 45 17. 6 23 0. 65 64. 0
3 1. 20 28. 2 一 24 0. 70 45. 1
4 1. 92 15. 8 25 1. 62 24. 8
5 0. 15 81. 6 26 、 79. 9
6 2. 53 26. 1 27 67. 6
7 0. 47 33. 0 29 0. 08 73. 0
8 0. 10 71. 3 30 0. 40 73. 2
9 0. 77 34. 0 31 0. 32 57. 7
10 15. 2 32 2. 28 17. 5
11 0. 62 71. 4 33 1. 55 20. 3
12 0. 62 73. 2 34 1. 15 20. 2
13 0. 82 40. 3 35 0. 05 76. 6
14 0. 08 65. 2 36 0. 57 31. 1
15 0. 05 55. 7 37 0. 12 69. 4
16 0. 80 45. 9 38 0. 93 48. 7
17 0. 03 74. 2 39 1. 42 23. 9
18 0. 08 76. 8 40 1. 08 31. 8
19 2. 17 12. 9 41 0. 43 78. 8
20 1. 75 27. 6 42 0. 40 63. 4 ②アポ ト一シス調整効果試験 2
アポ トーシスを誘導するとされる腫瘍壊死因子
( T N F ) による細胞増殖抑制作用に対する各供試化合 物の細胞増殖抑制の抑制効果による、 アポ トーシス抑制 効果試験を、 マウ ス L S細胞を用いて、 以下の通り試験 した。 - マウス L S細胞は、 サ ンフ ー ド （ S a 0 r d ) らによ つ て樹立されたマウス結合組織由来フ ィ プロブラ ス ト細胞 株 L — 9 2 9 (Saniord, K. . , e t a 1. , J. Na t l. Cance r I ns t. , _9, 229 ( 1948 ) ： ATCC CCL1 ) の派生株である。 上記し一 9 2 9細胞乃至その派生株である L S細胞は、 T N Fによりその増殖が抑制されるこ とから、 T N Fの 生物活性測定にも用いられている （Yan zak i, S. , e t a 1. , J apan. J. Med. Sc i. B i o. , 31, 105-118 ( 1986 ) ) 。
該 L S細胞と しては、 T N F高感受性株と して、 L — 9 2 9細胞から、 大日本製薬社により樹立された細胞
( L S細胞、 大日本製薬社製、 カタログ N o . 0 3 — 4 4 9 ) を用いた。 また T N F と しては、 大腸菌に発現 させて得られた組換え体ヒ ト T N F — α (比活性 2 x 1 0 〖 単位 Z m g、 ゼンザィム社製） を用いた。
9 6穴マイ ク ロプレー トの各ゥエルに、 上記 T N F — ひ の 4 O U Zm 1 を含む 1 牛胎児血清 （ F C S ) 含 有イーグルス M E M培地 5 0 / 1 を添加した。 更に、 2 倍希釈系列 （ 3. 7 5〜 1 2 0 // g/m l ) を作製した 各供試化合物 5 0 iz l を上記各ゥェルに添加した。 こ こ にマウス L S細胞を 7. 5 X 1 04 個 Zm l に調整した 細胞懸濁液 （予め、 1 0 % F C S含有イーグルス ME M 培地にて 3〜 4 日間培養して 7. 5 X 1 04 個 Zm 1 に 調整したもの） 1 0 0 1 を加え、 3 7 °Cで 5 % C 02' 存在下でイ ンキュベー ト して 3日間培養した。 T N F— αの終濃度は 1 O U/m 1 、 各供試化合物の終濃度は 0. S S S S O /z g Zm l と した。
上記各ゥニル内細胞培養物につき、 培地のみを溶媒と して、 M T Tア ツ セィ （ J. Immunol. Me thods, 65, 55 ( 1983) ) を、 以下の通り行なった。
M T T ( 3 — ( 4 , 5 — ジメ チルー 2 —チア ゾィ ル） - 2 , 5 — ジフ エ二ノレ一 2 H · テラ ゾ リ ゥムブロマイ ド） 試薬 （同人化学社製） は 2. 5 m g Ζπι 1 となるように P B S (一） （日本製薬社製） に溶解し、 濾過滅菌して用 いた。
上記各ゥヱルに 2. 5 m g /m l M T T溶液を
0. 0 1 m 1 /ゥヱルずつ添加し、 3 7 °Cで 5 % C 〇 2 存在下に 3時間培養した。 次に、 1 0 % S D Sを含む 0. 0 1 N H C 1 溶液を各ゥ ヱ ルに 0. 1 m 1 ずつ加 え、 3 7 で 5 % (： 02 存在下で更に一晚培養した。 染 色した生細胞を吸光度 （0. D. = 5 8 0 n m) にて夕 イタ一テッ クマルチスキャ ン （タイ夕一テッ ク社製） を 用いて測定した。
上記試験において、 培地のみの細胞増殖を 1 0 0 %と した時、 T N F— なの l O UZm l 添加により、
8 6. 7 %の増殖が抑制された。
また各供試化合物を添加した時の細胞の％増殖を求め、 得られた値を T N F— αの 1 O U/m 1 添加時の上記％ 増殖の値と比較して、 各供試化合物によって T N F—ひ 添加による細胞増殖抑制作用がどれほど抑制されるかを 検討した。
その結果を、 表 2に示す。
なお、 該表における抑制率 （％) は、 （各供試化合物 添加時の％増殖） 一 （T N F— αのみ添加時の％増殖） を示す。 従ってこの値が大きい程、 その供試化合物は T N F— crの細胞増殖抑制作用をよ く抑制する ものであ るこ とが判る。 表 2
Figure imgf000060_0001
薬理試験例 2
ヒ ト前骨髄性白血病細胞 （ I-I L 一 6 0 ) に対する効 ¾
H L - 6 0 を 1 0 % F C S添加 R Ρ Μ I - 1 6 4 0培 地にて 3 7 °C 、 5 % C 〇？ 下で培接 し、 細胞濃度を 5 1 05 個 Ζπι 1 になるように調製した。
次に、 6穴のマイ ク ロプレー ト （コール夕一社製） の 各穴に各供試化合物を 3 0 β g /m 1 含む上記培地をそ れぞれ添加した後、 3 7で、 5 % C 02 下で 3 日間培養 した。 尚コ ン ト ロール群と して、 上記培地のみを添加し て同様に培養する群を設けた。 培養後、 各培養細胞浮遊 液をエツペン ドルフチューブに取り、 0. 2 % ト リ パン ブルー含有リ ン酸緩衝液で染色した後、 生細胞数を血球 計算盤にて計測した。
上記細胞を 1 X 1 07 個ノ m l に調製し、 その 1 0 0 1 にフルォ レセイ ンイ ソチオシァネー ト （ F I T C ) 標識抗ヒ ト C D 1 l b抗体 （M o 1 、 コールター社製） 5 β 1 を添加し、 氷上で 3 0分間暗所にて反応させた。 反応後、 0 . 1 % B S Α (牛血清アルブミ ン、 シグマ社 製） 含有 P B S (リ ン酸緩衝液、 日水製薬社製） で 2回 洗浄し、 最終的に 5 0 0 1 に懸濁させた後、 フローサ ィ トメ ト リ ー法により、 プロフ ァ イ ル I I (コールター 社製） にて蛍光強度を測定した。
その結果を表 3及び表 4 に示す。 表 3 供試化合物 分化誘導促進効果 供試化合物 分化誘導促進効果
1 594 46 7522
2 611 47 1618
5 3215 48 17848
7 274 49 983
8 31835 50 11704
9 231 51 12124
10 300 52 1697
11 2654 53 2951
12 1337 54 718
13 240 55 5463
14 2902 56 26943
15 11206 57 8138
17 1024 58 760
18 635 59 35950
21 21 60 37120
22 322 61 16750
23 1292 62 19242
24 227 63 6150
25 628 64 3260
26 371 65 13130
27 2995 66 2570
28 360 67 4240
29 3529 68 117680
30 1615 69 41520
31 527 70 84110
35 1968 71 31210
37 2206 72 1160
38 304 73 860
41 1994 74 7860
42 2221 75 38205
43 199 76 23475
44 2457 77 11335
45 5900 78 3670 4
供試化合物 増殖抑制率 （％) 供試化合物 増殖抑制率 （％)
1 71. 1 44 98. 9
3 12. 6 45 41. 8
4 27. 1 46 99. 1
5 62. 8 47 100. 0
6 10. 0 48 100. 0
7 11. 0 - 49 100. 0
8 66. 6 50 100. 0
9 11. 8 .51 99. 8
11 34. 3 52 100. 0
12 45. 3 53 100. 0
14 49. 3 54 100. 0
15 100. 0 55 100. 0
16 21. 6 56 99. 5
17 100. 0 57 99. 6
18 68. 5 58 99. 6
19 22. 0 59 99. 8
20 20. 6 60 99. 7
21 27. 9 61 99. 9
22 15. 4 62 99. 8
25 33. 0 63 100. 0
26 24. 2 64 100. 0
27 86. 5 65 100. 0
28 48. 9 66 100. 0
29 100. 0 67 100. 0
30 46. 1 68 99. 6
32 20. 1 69 99. 9
33 13. 6 70 99. 9
34 11. 8 71 100. 0
35 86. 2 72 100. 0
36 15. -5 73 99. 4
37 94. 9 74 99. 6
39 21. 5 75 99. 8
40 21. 5 76 99. 9
41 73. 9 77 99. 9
42 57. 4 78 100. 0 之等各表よ り各供試化合物を用いた群ではいずれも細 胞増殖抑制効果が認められ、 C D 1 1 b発現の増加によ り、 顆粒球、 単球 ' マク ロ フ ァ ージ系への分化誘導を促 進している こ とが認め られた。
薬理試験例 3
抗レ ト ロ ウイルス作用効果試験
( 1 ) 細胞障害性試験 （MTT Dye Upt ake As say)
継代培養によって得られた S C — 1 (Fe ra l mous e embryo) 細胞を P B S 、 ） 溶液で 2回洗浄し、 0 . 0 5 % ト リ プシン （日水製薬社製） で細胞を剥がした後、 ピ ベッ ティ ングによ り、 イ ーグル— M E M培地 （ E — M E M、 フ ロー社製） + 5 %牛胎児血清 （ F B S ) の培 養液に細胞を懸蜀させた。 2 5 T：、 1 2 0 0回転、 5分 間の遠心洗浄 （ 0 5 P R — 2 2型、 日立製作所社製を使 用） を行な っ た細胞を再度同培養液に懸濁させた。 生細 胞数を、 0. 2 % ト リ パンブルー （和光純薬社製） 溶液 にて染色後、 光学顕微鏡 （ B H — 2、 ォ リ ンパス光学ェ 業社製） 下で計測 して、 6 X 1 0 4 細胞/ m 1 に培養液 で希釈調製 した。
9 6 穴マイ ク ロプレー ト （コ一二ング社製） 上の各穴 に 6 0 g /m l の供試薬物を 0 . I m l Zゥ ヱルずつ 添加 し、 次いですベてのゥ ヱ ルに上記で調製 した S C — 1細胞浮遊液 （ 6 X 1 04 細胞 Zm 1 ) を 0. 1 m 1 ず つ加え、 このマイ ク ロプレー トを 3 7 °C、 5 %〇 02 条 件下で 3 日間 C 02 イ ンキュベータ一 （ナブコ社製） に て培養した。 培養後、 2. 5 m g /m l MT T (Dot i te MTT, 3 - ( 4， 5 — ジメ チル一 2 —チアゾリ ル） 一 2， -5 — ジフ ヱ二ルー 2 H—テ ト ラ ゾ リ ゥム、 和光純薬社製） を含む P B S 、つ 溶液 （-日水製薬社製） を、 各ゥェルに 0. 0 1 m 1 ずつ加え、 更に 3 7 °C、 5 % C 09 条件下 に 3時間培養した。 その後、 溶出液 [ 1 0 % S D S + 0. 0 1 N H C 1 、 和光純薬社製） を各ゥ ヱルに 0. 1 m 1 ずつ添加し、 5 % C 02 条件下に 3 7 °Cで更に一晚 培養し、 O D 58() n mの吸光度を夕イ タ一テッ クマルチ スキャ ン （MM C、 フ ロー社（Flow Laboratories) 製） を用いて測定した。
得られた吸光度から、 生細胞に取込まれた色素量を測 定し、 下式に従って細胞増殖抑制率 （％) を求めた。
細胞増殖抑制率 （％) = [ 1 一 （MZ C ) ] X I 0 0
[式中 Mは供試薬物処置群における取込まれた色素還を、 Cは対照群における同色素 Sを示す。 ]
( 2 ) ウィ ルス增殖抑制試験 （UV-K P l aque Reduc t i on As s a )
この試験は文献記載の方法 〔V i o rogy, 42, 1136- 113S (1970) ) に従い以下の通り行なわれた。
即ち、 継代培養によって得られた S C— 1細胞を、 P B S 、 溶液で 2回洗浄し、 0. 0 5 % ト リ プシン (フロー社製） で細胞を剥がした後、 ピベッティ ングに よ り E - M E M培地 （日水製薬社製） + 5 % F B Sの培 養液に細胞を懸濁させた。 2 5 °C、 1 2 0 0回転、 5分 間の遠心洗浄 （0 5 P R— 2 2型、 日立製作所社製を使 用） を行なった細胞を再度同培養液に懸翯させた。 生細 胞数を 0. 2 % ト リパンブル— （和光純薬社製） 溶液に て染色後、 光学顕微鏡 （ B H— 2、 ォ リ ンパス光学工業 社製） 下で計測して、 1 X 1 0 b 細胞/ m 1 に培養液で 希釈調製した。 \ o
C
6穴プレー ト （コースタ ー社製） に上記細胞浮遊 o液 1 m 1 を添加し、 次いで全てのゥヱルに培養液 1 . 5 m l ずつを添加した のプレー トを 3 7 °C、 5 件下で c o 2 イ ンキュベーター （ナブコ社製） にて培養 した。
培養 2 4時間後、 培獍上清.を取り除き L P - B M 5 M in 1 n e l eukemi a v i r us ) ウ イ ノレス ？夜 1 in 1 ずつを 、 加した。 更に、 各ゥエルに各供試薬物を最終濃度が 3 0 H g / m 1 となる よ う に 1 . 5 πι ί ずつ添力□ した。 こ の プレー トを 3 7 ° ( 、 5 % C 0 条件下で C 〇 , イ ンキ ュ ベタ一 （ナブコ社製） にて 3 日間培養した。 培養後、 培 養上清を取り除き紫外線ラ ンプ （ 1 5 W X 2 ) で 2 0秒 間照射した。 この照射したプレー トに継代培養して得ら れた X C細胞 （Rat sarcoma ) 1 x 1 05 細胞ノ m l を 2. 5 m l 添加し、 3 7 °C、 5 % C 02 条件下で C〇 2 イ ンキュベータ一にて更に 3曰間培養した。 培養終了後、 P B S (_) 溶液で 1回洗浄し、 メ タノールで固定した後、 1 0 m g /m 1 にメ タノ ールで希釈したメチレンブルー を用いて染色し、 各ゥヱルのプラーク数を数え、 下式に 従ってウ ィ ルス抑制率 （％ ) を算出した。
ウィ ルス抑制率 （％) = [ 1 — (M/ C ) ] X I 0 0
[式中 Mは供試薬物処置群のプラーク数を、 Cは対照群 の同ブラーク数を示す。 ]
( 3 ) 抗レ ト ロ ウ イ ルス効果
上記 （ 1 ) 及び （ 2 ) で求めた細胞増殖抑制率及びゥ ィ ルス増殖抑制率より、 下式に従ってウ ィ ルス抑制強度 を算出し、 抗レ ト ロ ウ イ ルス作用の指標と した。
ウ ィ ルス抑制強度 =
ウ ィ ルス増殖抑制率 Z S C— 1細胞増殖抑制率 かく して得られた各供試細胞のウ ィ ルス抑制強度を下 nd ¾ 0 (こ ヽす 5
洪試化合物 ウィルス抑制 度 供試化合物 ウィルス抑制 度
2 5 7 1 Q 4. 5
4 n 4 2 0 2. 9
7 A 1 2 2 1. 3
8 5 9 2 5 9 7. 5
.9 A A ？ 7 1. 6
1 0 1丄 ， Q o 9 q 1 4
1 l O Q 9
. Q n u 1 8
1 2 n Q q 1
丄 1 4
Λ 3 9 5 Q 9 A *-± . R u
1 4 1. 2 3 5 0 · 9
1 5 0. 9 3 7 1. 0
1 6 1. 9 4 0 4. 2
1 7 1. 5 4 1 2. 6
1 8 1. 2 4 2 1. 3 薬理試験例 4
① サイ ト 力イ ン産生抑制作用効果試験
健常人の末梢血を リ ポポ リ サ ッ カ ラ イ ド （ L P S ) で 刺激 した時に遊離されるサイ 卜 力イ ン に対する彫^を以 下の適り検討 した。 供試薬物は、 DM S 0に溶解し、 更に R P M I - 1 6 4 0培地で所定濃度に希釈して用いた。 対照と して は DM S 0のみを同様に希釈したものを用いた。
R P M I — 1 6 4 0培地 （ペニシ リ ン 1 0 0単位 Z m l及びス ト レプ ト マイ シ ン 0. l / gZm lを含む） に、 1 0 %健常人末梢血 （へパ リ ン添加） 、 供試薬物及 び L P S ( E. co l i 055:B5 、' 1 /z gZm 1 ) を加え、 5 . % C 02 イ ンキュベータ一内で 3 7 °C下に 1 8〜 2 4時 間培養し、 この培養上清を遠心操作にて回収し、 これを 培養上清サンプルと した。
上記サンプル中の各サイ トカイ ンを酵素免疫測定法 (E L I S A ) により測定し、 それぞれのサイ トカイ ン の標準曲線より、 サンプル中のサイ トカイ ン量を求めた。 尚、 測定したサイ 卜力イ ン及びそれ等の測定検出限界は 次の通りである。
N F ( Τ 0 m 0 r nec ros i s { a c t o r α ·■■ 2 0 p g / m 1 I L — 6 ( l n t e r l euk i n-6 ) ··· 2 0 p g / τη 1
I F N 7 ( I n t e r { e r o n 7 ) ■·· 2 0 p g / m 1
供試薬物の最終濃度を 3 0 g Zm 1 と した時の結果 より、 対照に対する遊離抑制率 （％) を求め、 これを下 S己 6 {こ "5 o 6
T T
供 5¾化合物 丄 h 一 1 r 一 Ί
(遊 I翻％) a )
1 3 8 1 9
2 1 2
A 8 2
4 A A 7 .
7 1 3 4 q
8 8 3 5 4 Q 4
9 4 2 4 8
1 0 4 3 9
1 I 9 6 7 ς 8
1 2 q 9 q Ό 7 ί 丄 リ 4 Q 丄 1 ϋ P Q
1 ^ 7 5 q 1丄
1 5 5 4 5 7 R 4
1 6 2 o
1 7 8 9
1 8 6 6
1 9 3 2 4 5 2 7
2 0 2 8 1 4
2 2 2 6 1 5 8 3 6 (続き） 供試化合物 T N F a I L 一 6 I F N - r ll« g議 、
仰 ）
0
乙 4 A 4 o Π Q
Δ ό
9 o
0 u 4 O
O Ό 0
n つ
Δ ' ( y 1 Ό 丄
o o
2 9 6 6 8 2 8
3 0 7 9 5 7 9 ί
3 1 7 4 3 9 8 7
o
3 2 9 丄 9 0
O
o o 9 / o o
O 0 1 4 O o y u ό b ( 0
S o n i 匚
2 0 5 5 7 ί
Q Q
9 7 Ω
y 0
U
4 0 4 4 1 2 8 3
4 1 9 5 1 8 9 8
4 2 3 1 6
4 3 2 0 2 8 1 3 但し表中、 一印は抑制が認め られなかっ たこ とを示す 末梢 リ ンパ球活性化抑制作 j†]効果試験 この試験は供試薬物の P B M Cに対する影響を M T T 法によ り検討したものであ り、 その方法はモスマ ン (T. Mosmann) が開発 した方法 [ J . i mm u n o 1. M e t h o d s . , 6^ 55- 63 ( 1983 ) ] に準じた。
即ち、 健常ボラ ンティ ァよ り採取した末梢血から、 フ イ コールパッ ク （フ アルマシア社製） を用いた密度勾配 遠心分離法にて末梢血単核球細胞 （Phe r i pe ra l b l ood mononu c l ea r ce l l PB C) を分離した。 供試化合物は用 時 1 0 m g Zm 1 に D M S 0に溶解後、 1 0 % F C S含 有 R P M I - 1 6 4 0培地で 1 2 0 β g /m 1 に希釈 し て用いた。 また溶媒と して D M S Oのみを同様に希釈 し たものを用いた。
また、 上記試験において、 精製フ ィ 卜へマグルチニ ン ( Phy t ohema π 1 u t i n i n： PIIA 、 ウ エルカム社製） は、 1 0 % F C S含有 R P M I — 1 6 4 0培地に溶解後、 濾 過滅菌 して使用 した。
供試化合物 3 0 μ g /m 1 (終濃度、 上記調製溶液各 2 5 1 Zゥ ヱル） 及び P H A 1 g Z m 1 (終濃度） の存在下に、 P B M C 1 0 5 細胞ノ 1 0 0 ゥ ェル を、 1 0 % F C S含有 R P M I — 1 6 4 0培地で培 し た。 3 日後に、 滤過滅菌 した 2 . 5 m g / m 1 の M T Τ
(同仁社製） P B S ： (一） 溶液を 2 0 ゥ エ ルずつ添 加し、 3 7 °Cで 4時間培養した。 その後、 1 0 % S D S — 0. 0 1 N H C 1 を 1 0 0 z l ノウヱルずつ添加して 細胞を溶解し、 波長 5 8 0 n mで各ゥエルの吸光度を測 定し、 得られた吸光度より細胞増殖阻害率を、 下式に従 つて求めた。 尚、 測定は n = 4で行なった。 細胞増殖阻害率 （％) =
- r 1 _ , 化合物添加時の吸光度—化合物単独の吸光度） 1 X 1 0 0
溶媒添加時の吸光度一溶媒単独の吸光度 結果を下記表 7に示す。
7
¾1LJ口切 ¾1□牛 供試化合物 議増殖 S害率 (%)
A 9 A o o o o 4 厶 . : 1 . 0
q -1
D 0 o . 丄 2 5 丄 9 . 1
o
ί 丄 Z . Ό 2 7 0 . 9
O o
O 4 y . o 2 9 1 0 0 . 0
9 z o . b 3 0 2 4 . 8
n n
1 ϋ 1 D . y 3 1 7 4 . 6
1 1 ό Ό . 1 3 2 1 5 . 9
o o
1 o 7 . 0 3 3 6 . 1
1 Z o
· y 3 4 1 . 8
ΕΓ 「
丄 4 0 U . U 3 5 4 1 . 2
c o
丄 ΰ 0 U . 丄 Ό 1 7 丄 0 A o . u 3 7 1 0 0 . 0
1 7 7 3 . 7 3 9 2 2 . 7
1 8 5 7 ， 6 4 0 7 . 9
1 9 4 . 8 4 1 4 8 . 2
2 0 5 0 . 7 4 2 8 8 . 5
ェ ン ド ト キ シ ン ' シ ョ ッ ク に対する延命効 ¾作用試 本発明化合物のエ ン ド トキ シ ン . シ ョ ッ ク に対する作 用を、 D—ガラク トサ ミ ン及び L P S投与動物で検討し た [C r i s G a 1 a n 0 s e t a 1. , Proc, Na t l. Acad. Sc i. , USA, ， 5939 - 5943 ( 1979) 3 。
即ち、 1群 1 0匹の各マウス （ B A L B Z c マウ ス、 雄、 7週齢、 S L C社） に、 供試化合物の 5 0 m g / k g (実験群） 又はプレ ドニゾロン (predoni solone ) '© 5 m g / k g (対照群） を経口投与し、 1時間後に、 . D—ガラク トサミ ン （和光純薬社製） の 2 0 m g Z
0. 2 5 m 1 体重を腹腔内投与し、 1分以内に L P S ( E . c o 1 i 0 5 5 ： B 5由来、 シグマ社製） の 1 0 g / 0. 3 m 1 Z体重を静脈内投与し、 その投与の 1. 2及び 3 日目に、 供試動物の生死観察を行なった。
尚、 供試化合物及びプレ ドニゾロ ンは、 それぞれ溶媒 ( 0. 5 % C M C . 第一工業製薬社製） に懸濁させて用 い、 また D—ガラク トサ ミ ン及び L P Sは生理食塩水に 溶解させて用いた。
得られた結果を表 8 に示す。 8
L P S投与後日数
供 試 化 合 物
1 曰 2 日 目 3 曰 B
9 4 0 4 0 4 U
〇 o 4 υ 4 u 6 U
1丄 R 7 υ 7 0 I u o q
. ° 8 0 7 0 ( u 7 4 υ 4 u 4 U
9 Ω 5 0 5 0 D U
4 0 4 0 4 0
3 7 6 0 5 0 5 0
4 1 5 0 5 0 5 0 一 （溶媒のみ） 1 0 1 0 1 0 プレ ドニゾ口 ン 1 0 0 1 0 0 1 0 0
尚、 表中の各数字は生存率 （ ） を示す。 薬理試験例 5 制癌作用効果試験 マ ウ ス （ C 5 7 B L Z 6 マ ウ ス、 雌、 6 〜 9週齢、 チ ヤ ールス リ バ一） の右腹部に 11癟細胞 （ 1 1 6 マ ウ ス メ ラ ノ ーマ細胞 ： 1 X 1 0 4 細胞/マ ウ ス） を皮内移 ϋ¾ し 移植後 3 日 目よ り供試化合物の 5 又は 5 0 m g / k g を 5 日間経口投与し、 2 日間投与休止し （ 5投 2休） 、 こ の操作を 4回繰り返した。 溶媒 （ 0. 5 % C M C : 第一 工業社製） のみの投与群についても同様の試験を行なつ た。 腫瘍測定及び体重は経日的に測定し、 溶媒群と比較 検討した。 試験は 1群 8匹で行なった。
尚、 腫瘍体積は、 腫瘍部位をノギスを使用 して短径と 長径を測定し、 腫瘍体積 = (長径 X短径 X短径） / 2を 算出して評価した。 また供試化合物の制癌作用は、 溶媒 群との比較における腫瘍体積の抑制率 （％) にて評価し た。
結果を表 9 に示す。
9
Figure imgf000078_0001
以上のように、 本発明によれば、 アポ ト一シス調整剤 が提供できる。 該調整剤は、 その特有のアポ トーシス調 整能、 細胞分化誘導能に基づいて、 癌の化学療法剤と し て有効利用できる。 また抗レ ト ロ ウイ ルス効果により、 前述した H I V又は H T L V— 1関連疾患や C型肝炎等 の各種レ ト ロ ウイ ルス関連疾患の治療剤と して、 サイ ト 力イ ン産生抑制効果によ り、 H I V又は H T L V— 1関 連疾患や感染症、 A R D S、 C F S及び各種自己免疫疾 患の治療剤と して、 更に リ ンパ球活性抑制効杲により、 免疫抑制剤と して、 それぞれ有効である。

Claims

請 求 の 範 囲
( 1 ) 一般式
N N - R
Figure imgf000080_0001
〔式中 Rはフ ニニル環上に置換基と して低級アルコキ シ 基、 ハロゲン原子、 低級アルキル基、 低級アルカノ ィ ル ァ ミ ノ基及び低級アルキルチオ基なる群から選ばれた基 を 1 〜 3個有する こ とのあるベンゾィル基又は低級アル キ レ ン ジォキシ基を有するベンゾィ ル基、 水素原子、 ピ リ ジルカルボニル基、 低級アルカ ンスルホニル基、 低級 アルキニル基、 フ ヱニル環上に低級アルコキ シ基、 ハロ ゲン原子及び低級アルキル基なる群から選ばれた基を 1 〜 3個有する こ とのある フ ユニル低級アルキル基を示す カルボスチ リ ル骨格の 3 位と 4位との炭素間結合は一重 結合又は二重結合を示す。 R 2 (]は水素原子、 低級アルキ ル基、 低級アルケニル基、 低級アルキニル基又はフ ヱ ニ ル低級アルキル基を示す。 R 2 1は水素原子又は低級了ル コキシ基を示す。 但 し、 R 2 ΰ及び R 2 1が水素原子の と き Rはフ ユニル環上に置換基と して低級アルコキ シ基を有 する こ とのあるベンゾィル基であってはな らない。 〕 で表わされるカルボスチ リ ル誘導体及びその塩、
( 2 ) 一般式
Figure imgf000081_0001
R
〔式中 R 1 は基 -N N-R3 (R 3 は水素原子又はべ ンゾィル基及び R 4 はォキソ基を示す） を示す。 カルボ スチ リ ル骨格の 3位と 4位との炭素結合は一重結合又は 二重結合を示す。 〕
で表わされるカルボスチ リ ル誘導体及びその塩、
( 3 ) 一般式
Figure imgf000081_0002
〔式中 R は低級アルカ ノ ィ ル基、 低級アルコ キ シ力 ル ボニル基、 低級アルコ キ シカ ルボニル低級ァルキル ®、 フ エニル環上に低級ア ルカ ノ ィ ルォキ シ基 も し く は水酸 基を有する フ ヱニル低級アルキル基、 フ ヱニル環上に置 換基と して水酸基及び低級アルキル基を有する このとあ るァ ミ ノ基なる群から選ばれた基を有していてもよいべ ンゾィル基又はナフ トイル基を示す。 R 6 はフ ヱニル環 上に低級アルコキシ基を有する こ とのあるべンゾィル基 を示す。 ；] .
で表わされるカルボスチ リ ル誘導体及びその塩、
( 4 ) 一般式
R
Figure imgf000082_0001
'〔式中 R 7 は ピペラ ジニル基を示す。 R 8 は水素原子又 は低級アルキル基を示す。 R 9 は水素原子又はフ エニル 低級アルキル基を示す。 カルボスチ リ ル骨格の 3位と 4 位の結合は一重結合又は二重結合を示す。 〕
で表わされるカルボスチ リ ル誘導体及びその塩、
( 5 ) 一般式
Figure imgf000082_0002
22
R 〔式中 R 2 2は — C 1 6アルキル基、 フ ヱニル低級アル コキシカルボニル低級アルキル基、 低級アルキル基を有 する こ とのあるア ミ ド低級アルキル基又はフ ヱニル低級 アルキル基を示す。 R 3は ピペラ ジ ン環の 4位に低級ァ ルキル基を有する こ とのある ピペラ ジニル基を示す。 〕 で表わされるカルボスチ リ ル誘導体及びその塩、
( 6 ) 一般式
Figure imgf000083_0001
〔式中 R 2 4は水素原子、 フ ニニル低級アルキル基、 ベ ン ゾィ ル低級アルキル基又はフ ヱニル環上に低級アルコキ シ基を 1 〜 3個も し く は低級アルキ レ ン ジォキ シ基を有 する こ とのあるベ ンゾィ ル基を示す。 〕
で表わされるカルボスチ リ ル誘導体及びその塩、 及び
( 7 ) 6 — 〔 4 — ( 3 , 4 — ジメ 卜 キ シベンゾィ ル） 一
1 一 1 2 4 — テ ト ラ ヒ ドロ ヒ ラ ジ - 3 , 4 ー ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル及びその塩
から選ばれる少な く と も 1 種の化合物を有効成分と して 薬理的に許容される担体と共に含有する こ とを特徴とォ るアポ トーシス調整剤。
2 . 制癌剤と して用いられる請求の範囲第 1項に記載の アポ ト一シス調整剤。
3 . 抗レ ト ロ ウ イ ルス治療剤と して用いられる請求の範 囲第 1項に記載のアポ ト ー シス調整剤。
4 . サイ ト力イ ン産生抑制剤と して用いられる請求の範 囲第 1項に記載のアポ ト一シス調整剤。
5 . 免疫抑制剤と して用いられる請求の範囲第 1項に記 載のアポ ト ー シス調整剤。
6 . 自己免疫疾患治療剤と して用いられる請求の範囲第 1項に記載のァポ ト ー シス調整剤。
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