WO1994007498A1

WO1994007498A1 - Composition pharmaceutique utilisee pour inhiber la production des facteurs de necrose tumorale

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Publication number: WO1994007498A1
Application number: PCT/JP1993/001443
Authority: WO
Inventors: Kenji Irie; Yataka Ueda; Norio Fujiwara
Original assignee: Sumitomo Pharmaceuticals Co Ltd
Current assignee: Sumitomo Pharma Co Ltd
Priority date: 1992-10-07
Filing date: 1993-10-07
Publication date: 1994-04-14
Anticipated expiration: 1995-04-07
Also published as: EP0664128A4; CA2146126A1; US5646154A; EP0664128A1

Description

明細書腫瘍壊死因子産生阻害医薬組成物技術分野

本発明は、腫瘍壊死因子産生もしくは分泌阻害医薬組成物に関する。更に詳細には、キナゾリン化合物またはそれらの塩を有効成分として含有し、腫瘍壊死因子が発症に関与すると考えられる疾患、例えば悪液質、敗血症多臓器不全などの治療薬として有効な腫瘍壊死因子産生もしくは分泌阻害医薬組成物に関する。背景技術

腫瘍壊死因子（ tumor necrosis factor 、以下 T N F と略す）はアミノ酸 1 5 7個からなる分子量約 1 7 ， 0 0 0 のペプチドであり、マクロファージをはじめとする各種細胞から産生されるサイトカインの一つである。

T N F は当初腫瘍傷害作用を示すサイトカインとして見い出されたが、その後の研究によりその作用は腫瘍細胞以外にも多くの正常細胞にも及んでおり多彩な活性を示すことが明らかとなっている。例えば脂肪球のリポ蛋白質リパーゼ活性の阻害、血管内皮細胞および線維芽細胞の H L A抗原の発現、線維芽細胞またはマクロファージのインターロイキン— 1 産生、腫瘍傷害性マクロファージの活性化、 C F Uの抑制、線維芽細胞、内皮細胞、ある種の腫瘍細胞のコロニー刺激因子の産生、軟骨のプ口テオグリカンの合成抑制と吸収、好中球の活性化とス一パーォキシドの発生、血管内皮細胞のプロ凝固因子の産生、線維芽細胞の増殖、骨格筋の膜電位の変化、線維芽細胞のインタ一フロン — /5 ₂ の産生、血管内皮細胞の障害などがそれであり、最近では広く炎症、免疫反応を通し、生体防御に係わっているサイト力インとして理角早されつつある（Ann. Rev. Immunol. , 1 0、 4 1 1 ( 1 9 9 2 ) ) ο

一方、 T N F の持続的または過剰産生は逆に、正常細胞に激しい作用をきたし、種々の病態を引き起こすことも明らかとなってきている。例えば、 T N F は癌や感染症における悪液質（全身の代謝を異化亢進し、極度の消耗をもたらす）の誘発因子であるカケクチンと同一物質であることが報告されている（ B. Beutler, D. Greenwa Id, JD. Hulmes et al. Nature, 3 1 6、 5 5 2 - 5 5 4 ( 1 9 8 5 ) 、川上正舒、生化学、 J_、 1 2 4 4 - 1 2 4 7 ( 1 9 8 7 ) ) o

また、敗血症に.対しても抗 T N F抗体を用いることで抑制効果が認められている（ Starnes, H. F. Jr. , Pearce, . K. , Tewari , に Yim, J. H. , Zou, J - ， Abrams, J. S. , J. Immunol. 丄 4 5、 4 1 8 5 - 4 1 9 1 ( 1 9 9 0 ) 、 Beutler, B. , Mi 1 sark, I. W. , Cerami , A. ， Science, 2 2 9、 8 6 9 - 8 7 1 ( 1 9 8 5 ) 、

Hinshaw, L. B. , Tekamp-01 son, P. , Chang, A. C. K. et al, Circ. Shock, 3 0 、 2 7 9 - 2 9 2

( 1 9 9 0 ) ) o

さらに、慢性関節リウマチについても、患者関節滑液中や血中で T N Fの増加が認められている（Tetta, ， Camuss i , G.， Modena, V.， Vi ttorio, C. D. , Bag 1 i on i , ， Ann. Rheum. Dis.， 4 9 、 6 6 5 — 6 6 7 、（ 1 9 9 0 ) ) o

その他、川崎病 ( atsubara, T.， Furukawa, S. , Yabuta, K.， Clin. Immunol. Immunopathol. , 5 6 ^ 2 9 — 3 6 ( 1 9 9 0 ) ) 、潰瘍性大腸炎（Murch, S.，

Walker-Smith, J. A. , Arch. Dis. Chi Id, 6 6 、 5 6 1 ( 1 9 9 1 ) ) 、ベーチエツト病（ Akoglu, T. '

D i reskene 1 i , H. , Yazici, H.， Lawrence, R.，

J. Rheumatol . , 1 7 , 1 1 0 7 - 1 1 0 8 ( 1 9 9 0 ) ) 、全身性紅斑性狼瘡（ S L E ) (Maury, P. J.， Teppo, A-M. , Arthritis Rheum. , 3 2 、 1 4 6 - 1 5 0 ( 1 9 8 9 ) ) 、骨髄移植時の拒絶反応（ G v H D ) ( J. Exp. Med. , 1 7 5 、 4 0 5 - 4 1 3 ( 1 9 9 2 ) ) 、多臓器不全（川上正舒、早田邦康、 Medical Immunology, 2 0 , 6 1 5 — 6 2 0 ( 1 9 9 0 ) ) 、マラリア（ Grau G. E. , Fa jardo L. F.， Piguet P. F. et al. , Science, 2 3 7 、 1 2 1 0 — 1 2 1 2 ( 1 9 8 7 ) ) 、後天性免疫不全症候群（ A I D S ) (川上正舒、早田邦康、

Medical Immunology, 2 0 、 6 1 5 - 6 2 0 ( 1 9 9 0 ) ) 、髄膜炎（Waage A.， Halstensen A. , Espevik T. , Lancet I, 3 3 5 - 3 5 7 ( 1 9 8 7 ) ) 、劇症肝炎（菅野幸三、肝臓、 ϋ、 2 1 3 - 2 1 8 ( 1 9 9

2 ) ) 、ボウル病（前田征洋、消化器と免疫、、 1 1 1 — 1 1 4 ( 1 9 8 9 ) ) などに血中 T N F レベルの上昇が報告されている。

以上のように過剰の T N F産生は、ときとして生体に悪影響を及ぼすことがわかり、そうした病態の治療剤となりうる T N F阻害剤の研究開発が望まれている。

T N F阻害作用を示す化合物として、例えばメチルキサンチン骨格を有するペントキシフィリンが知られている。この化合物は、エンドトキシンショックモデルマウスにおいて致死防御活性をもつこと、重症肺結核患者において気分の改善、体重減少抑制を示すこと、癌患者においても気分の改善、体重減少抑制効果を示すことなどが報告されている（ Zabel, P.， Schade, F. U. , Schlaak, M. , Immunobiol. , 1 8 7 、 4 4 7 - 4 6 3 ( 1 9 9

3 ) 、 Dezube, B. J. , Pardee, A. B. e t a 1. , Cancer Immunol. Immunother. , 3 6 、 5 7 - 6 0 ( 1 9 9

3 ) ) 。

その他 T N F阻害作用を示す化合物、因子としては、従来よりグルココルチコィド、プロテアーゼ阻害剤、フォスホリパーゼ A ₂ 阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、 P A F (血小板凝集因子）拮抗剤、ラジカルス力べンジヤー、プロスタグランジン F ₂ または I ₂ 、抗 T N F抗体などが知られている。今後 T N F と病態の関連についてこうした低分子化合物あるいは抗体などを用いてますます明確にされていくものと思われる。しかし、これらの化合物は、多岐にわたる薬理作用のため副作用を伴う。従って新しい作用機序によるより安全性の高い低分子化合物の開発が望まれている。

本発明は T N F産生もしくは分泌阻害作用を通じて、上記のような T N Fが発症に関与すると考えられる疾患、例えば、悪液質、敗血症、多臓器不全、慢性関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、ベーチェット病、全身性紅斑性狼瘡 ( S L E ) 、骨髄移植時の拒絶反応（ G v H D ) 、多臓器不全、マラリア、後天性免疫不全症候群（ A I D S ) 、髄膜炎、劇症肝炎、ボウル病等の治療薬を提供するものである。

本発明において有効成分として用いる化合物は公知化合物であり、例えば文献 Chem. Pharm. Bull. , 2 9

( 8 ) 、 2 1 3 5 - 2 1 5 6 ( 1 9 8 1 ) 、 Synthetic Communications, 1 0 ( 1 1 ) 8 0 5 - 8 1 1 ( 1 9 8 0 ) 、 Chem. Pharm. Bull. , 2 6 ( 6 ) 1 6 3 3 - 1 6 5 1 ( 1 9 7 8 ) 、特開昭 5 3 — 2 3 9 9 7 号公報、同 5 3 — 1 2 8 9 3 号公報、同 5 2 — 7 1 4 8 3 号公報、同 5 2 — 5 1 3 7 9 号公報、同 5 1 - 8 2 8 7 号公報、同 5 1 — 1 0 0 0 9 8 号公報、同 4 7 — 1 4 1 8 3 号公幸 g、 Arzneim— Forsch、 2 2 ( 1 1 ) 、 1 9 5 8 - 1 9 6 2 ( 1 9 7 2 ) 、米国特許第 3 3 0 5 5 5 3 号明細書などに合成法及び消炎、鎮痛作用としての用途が記載されている。しかし、本発明に係る T N F産生もしくは分泌阻害作用については、何ら報告はない。発明の開示

本発明者らは、キナゾリン化合物に強い T N F産生もしくは分泌阻害活性があることを見い出し、本発明を完成するに至った。

即ち、本発明の目的は、一般式（ 1 )

(式中、 R ¹ は水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基アミノ基、置換アミノ基、ニトロ基、シァノ基、アルキル基、アルコキシ基、アルキルチオ基、ァシル基、カルボキシル基またはアルコキシカルボ二ル基を表わし、

R ² はフヱニル基、置換フヱニル基、チェニル基、フリル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アルキル基、アミノ基または置換アミノ基を表わし、 R ³ は水素原子、 R ⁴ は水素原子もしくはアルキル基を表すか、または R ³ 、 R ⁴ は一緒になつて結合を表わす。 R ⁵ 、 R ⁶ R ⁷ は、 R ⁵ と R ⁶ が一緒になつてォキソ基もしくはチォキソ基を表わし、 R ⁷ が水素原子、アルキル基、ヽロアルキル基、フヱニル基、置換フヱニル基又は式— X - Y (式中、 X はアルキレン基を表わし、 Yはシクロアルキル基、フヱニル基、置換フヱニル基、カルボキシル基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァミノカルボニル基、置換アミノカルボニル基、アルコキシカルボニル基、ァミノ基または置換ァミノ基を表わす。）を表わすか、または R ⁶ と R ⁷ が一緒になつて結合を表わし、 R .⁵ 力水素原子、アルキル基、アミノ基、ロゲン原子、ハロアルキル基、ヒドロキシァミノ基、ヒドラジノ基、アルキルヒドラジノ基、ァシルヒドラジノ基またはァシルァミノ基を表わす。）もしくは一般式（2)

(式中、 R ¹ R ² R R ⁴ は前記と同じ意味を表わし、式

は窒素原子を 2 個から 4 個含む複素環構造を表わす。 ) で表わされる化合物またはその塩を有効成分として含有する腫瘍壊死因子産生もしくは分泌阻害医薬組成物を提供することにある。

本発明の他の目的は、上記一般式（ 1 ) もしくは上記一般式（2 ) で表わされる化合物またはその塩の有効量をヒ卜に投与することからなる、腫瘍壊死因子産生もしくは分泌を阻害する方法を提供することにある。

更に本発明の他の目的は、上記一般式（1 ) もしくは上記一般式（2 ) で表わされる化合物またはその塩を有効成分として含有する腫瘍壊死因子産生もしくは分泌阻害医薬組成物を製造するためのそれら化合物またはそれらの塩の使用を提供することにある。図面の簡単な説明

第 1 図は、本発明の実施例 2 におけるガラクトサミン負荷マウスェンドトキシンショックモデル致死抑制試験結果を示すグラフである。

第 2 図は、本発明の実施例 3 におけるガラクトサミン負荷マウスェンドトキシンショックモデルにおける T N F 産生阻害試験結果を示すグラフである。

横軸は L P S、 D - g a 1 Nおよび 5 % ジメチルスルホキシドー 1 0 %ニッコール溶液（対照群）もしくは L P S、 D— g a 1 Nおよび 3 種類の濃度の実施例 1 化合物番号 3 3 の化合物の溶液を投与した後の経過時間を示している。また縦軸は各経過時間において採取したマウス（それぞれ 3 匹）の血清中の T N F活性を示している T N F 活性（ U/m l ) は 3 匹のマウス血清の測定値の平均値および標準偏差（ s . d . ) で表した。発明を実施するための最良の形態

本発明の一般式（1 ) もしくは一般式（2) で表わされる化合物における官能基を以下に説明する。

アルキル基としては例えば低級アルキル基が、アルコキシ基としては例えば低級アルコキシ基が、アルキルチォ基としては例えば低級アルキルチオ基が、ァシル基としては例えば低級アルカノィル基もしくはァロイル基がアルコキシカルボニル基としては例えば低級アルコキシカルボニル基が、シクロアルキル基としては例えば低級シクロアルキル基が、シクロアルケニル基としては例えば低級シクロアルケニル基が、ハロアルキル基としては例えばハロ低級アルキル基が、アルキレン基としては例えば低級アルキレン基が、アルキルヒドラジノ基としては例えば低級アルキルヒドラジノ基が、ァシルヒドラジノ基としては例えば低級アルカノィルヒドラジノ基が、ァシルァミノ基としては例えば低級アルカノィルァミノ基が挙げられる。

ハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。

低級アルキル基としては、例えばメチル基、ェチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、へキシル基、 1 一メチルェチル基、 1 _ メチルプロピル基、 2 — メチルプ口ピル基、 1 一ェチルプロピル基、 2 —ェチルプロピル基、 1 — メチルブチル基、 2 — メチルブチル基、 3 — メチルブチル基、 1 一ェチルブチル基、 2 —ェチルブチル基、 3 _ ェチルブチル基、 1 — メチルペンチル基、 2 — メチルペンチル基、 3 — メチルペンチル基、 4 一メチルペンチル基等の炭素数 1 〜 6 個のアルキル基が挙げられる。

低級アルコキシ基としては、例えばメトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基などの炭素数 1 〜 6 個のアルコキシ基が挙げられる。

低級アルキルチオ基としては、例えばメチルチオ基、ェチルチオ基、プロピルチオ基、プチルチオ基などの炭素数 1 〜 6 個のアルキルチオ基が挙げられる。

低級アルカノィル基としては、例えばホルミル基、ァセチル基、プロパノィル基、ブ夕ノィル基等の炭素数 1 〜 6 のアルカノィル基が挙げられる。

ァロイル基としては、例えば炭素数 1 1 個以下のァロィル基が挙げられ、さらに具体的には例えばベンゾィル基、 1 一ナフトイル基、 2 — ナフトイル基が挙げられる低級アルコキシカルボニル基としては、例えばメトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシ力ルポ二ル基、ブトキシカルボニル基などの炭素数 1 〜 6 個のアルコキシカルボニル基が挙げられる。

低級シクロアルキル基としては、例えばシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロへキシル基等の炭素数 3 〜 6 のシクロアルキル基が挙げられ >。

低級シクロアルケニル基としては、例えば 1 — シクロへキセニル基、 2 — シクロへキセニル基、 3 — シクロへキセニル基等の炭素数 3 〜 6 のシクロアルケニル基が挙げられる。

ハロ低級アルキル基としては、例えばトリフルォロメチル基、 1 , 1 ， 1 — トリフルォロェチル基、 1 , 1 ， 1 , 2 , 2 —ペン夕フルォロェチル基等の前記ノ、ロゲン原子で置換された炭素数 1 〜 6 のハロアルキル基が挙げられる。

置換フエニル基としては、例えばアルキル基、アルコキシ基、ハロゲン原子、アルキルチオ基、ァシル基で置換されたフェニル基が挙げられ、さらに具体的には例えば 4 一クロ口フエニル基、 3 — クロ口フエニル基、 2 — クロ口フエ二ル基、 4 ーメトキシフエ二ル基、 2 — フルオロフェニル基力挙げられる。チェニル基としては、例えば 2 — チェニル基、 3 — チェニル基が挙げられる。

フリル基としては、例えば 2 — フリル基、 3 — フリル基が挙げられる。

低級アルキレン基としては、例えばメチレン、ェチレン、トリメチレン、テトラメチレン、 1 — メチルェチレン、 2 — メチルエチレン、 1 , 2 — ジメチルエチレン、 1 一ェチルエチレン、 2 _ ェチルエチレン、 1 — メチルトリメチレン、 2 — メチルトリメチレン、 3 — メチルトリメチレン等の炭素数 1 〜 4 個のアルキレン基が挙げられる。

低級アルキルヒドラジノ基としては、例えば N — メチルヒドラジノ基、 N — ェチルヒドラジノ基、 N — プロピルヒドラジノ基、 N — ブチルヒドラジノ基、 N — ペンチルヒドラジノ基、 N — へキシルヒドラジノ基、 N ' — メチルヒドラジノ基、 N ' — ェチルヒドラジノ基、 N ' - プロピルヒドラジノ基、 N ' — ブチルヒドラジノ基、 N ' — ペンチノレヒドラジノ基、 N ' — へキシルヒドラジソ基等の炭素数 1 〜 6 のアルキルヒドラジノ基が挙げられる。

低級アルカノィルヒドラジノ基としては例えば N — ホルミルヒドラジノ基、 N — ァセチルヒドラジノ基、 N— プロノ、。ノィルヒドラジノ基、 N — ブ夕ノィルヒドラジノ基、 N ' — ホルミルヒドラジノ基、 N ' — ァセチルヒドラジノ基、 N ' — プロパノィノレヒドラジノ基、 N ' — ブタノィルヒドラジノ基等の炭素数 1 〜 6 の低級アルカノィル基を有するアルカノィルヒドラジノ基が挙げられる。

置換アミノカルボニル基としては、例えばアルキル基が 1 個若しくは 2 個置換したァミノカルボニル基が挙げられ、置換するアルキル基としては低級アルキル基が举げられる。さらに具体的には例えばメチルァミノカルボニル基、ェチルアミノカルボニル基などの炭素数 1 〜 6 個のアルキル基を有するアルキルァミノカルボニル基や、ジメチルァミノカルボニル基、ジェチルァミノカルボ二ル基、ェチルメチルァミノカルボニル基などの炭素数 1 〜 6 個の同じでも互いに異なっていてもよい 2 個のアルキル基を有するジアルキルァミノカルボニル基が挙げられる。さらに、置換アミノカルボニル基として環状アミノカルボニル基が挙げられ、環状ァミノカルボニル基としては例えば窒素原子を含む環が 5 員環または 6 員環である炭素数 5 〜 6 個の環状ァミノカルボニル基が挙げられる。さらに具体的には例えば 1 _ ピロリジノカルボ二ル基、 1 ― ピペリジノカルボニル基等が挙げられる。

置換アミノ基としては、例えばアルキル基が 1 個若しくは 2 個置換したァミノ基が挙げられ、置換するアルキル基としては低級アルキル基が挙げられる。さらに具体的には例えばメチルァミノ基、ェチルァミノ基などの炭素数 1 〜 6 個のアルキル基を有するアルキルァミノ基や、ジメチルァミノ基、ジェチルァミノ基、ェチルメチルァミノ基などの炭素数 1 〜 6 個の同じでも互いに異なっていてもよい 2 個のアルキル基を有するジアルキルァミノ基が挙げられる。さらに、置換アミノ基として環状アミノ基が挙げられ、環状ァミノ基としては例えば窒素原子を含む環が 5 員環または 6 員環である炭素数 4 〜 5 個の環状アミノ基が挙げられる。さらに具体的には例えば 1 一ピロリジノ基、 1 — ピペリジノ基等が挙げられる。低級アルカノィルァミノ基としては、例えばホルミルアミノ基、ァセチルァミノ基、プロノ、。ノィルァミノ基、ブ夕ノィルァミノ基等の炭素数 1 〜 6 個のアルカノィルァミノ基が挙げられる。

窒素原子を 2 個〜 4 個含む複素環構造としては、例えば環上にォキソ基もしくはアルキル基を有する 5 員環が挙げられ、例えば式

(式中、 R ⁸ は水素原子またはアルキル基を表わす）などが挙げられる。

本発明においては、一般式（1 ) あるいは（2 ) において R ³ と R ⁴ が一緒になつて結合を表わし、 R ² がフエ二ル基、置換フエニル基、チェニル基、フリル基、シクロアルキル基もしくはシクロアルケニル基である化合物またはその塩あるいは、一般式（1 ) において R ⁶ と R ⁷ が一緒になつて結合を表わし、 R ⁵ がァミノ基、ヒドロキシァミノ基、ヒドラジノ基、アルキルヒドラジノ基、ァシルヒドラジノ基もしくはァシルァミノ基である化合物またはその塩が好ましい。

特に、 2 — ァミノ一 6 — クロ口 — 4 — フエニルキナゾリンまたはその塩が好ましい。

本発明に含まれるキナゾリン化合物の塩としては、たとえば塩酸、臭化水素酸、硫酸もしくはリン酸などの鉱酸との塩、ギ酸、酢酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、酒石酸、ァスパラギン酸もしくはグルタミン酸などの有機カルボン酸との塩、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、 p — トルエンスノレホン酸、ヒドロキシベンゼンスルホン酸もしくはジヒドロキシベンゼンスルホン酸などのスルホン酸との塩、ナトリウムもしくは力リウムなどのアルカリ金属との塩、カノレシゥ厶もしくはマグネシゥ厶などのアル力リ土類金属との塩、トリメチルァミン、トリェチルァミンもしくはピリジンなどの有機塩基との塩またはアンモニゥ厶塩などが挙げられる。

本発明化合.物は光学活性体及び互変異性体を包含するものであり、さらにすベての水和物および結晶形を包含するものである。

本発明の化合物は、公知化合物であり、例えば以下の方法により合成することができる。

(A ) 3 , 4 — ジヒドロー 2 ( 1 H ) ーキナゾリノン誘導体は、例えば以下の方法で合成できる。下記一般式（5) で表わされる化合物は、例えば下記一般式（3) で表わされる化合物と下記一般式（4) で表わされるアルデヒドとを不活性溶媒中、酸存在下、脱水縮合することにより合成できる（特開昭 5 2 - 5 1 3 7 9 号公報、特公昭 4 9 一 4 7 7 5 9 号公報、同 4 8 — 3 4 5 9 8 号公報、同 4 7 - 7 2 6 8 号公報、同 4 7 — 3 2 9 9 5 号公報）。一般式（3) で表わされる化合物は、例えば上記刊行物に記載の方法で合成できる。

(式中、 R ¹ 、 R ⁷ は前記と同じ意味を表わし、 R ¹ 'はフエニル基、置換フヱニル基、チェニル基、フリル基、シクロアノレキル基、シクロアルケニル基またはアルキル基を表わし、 X ¹ は酸素原子またはィォゥ原子を表わす。）

下記一般式（ 17)で表わされる化合物は例えば下記一般式（16)で表わされる化合物を還元することによって合成できる（特開昭 4 7 - 1 4 1 8 3 号公報、 Chem. P arm. Bui 1. , _2_9_ ( 8 ) 2 1 3 5 - 2 1 5 6 ( 1 9 8 1 ) ) 。一般式（ 16)で表される化合物は、例えば上記刊行物に記載の方法で合成できる。

(式中、 R ¹ 、 R ⁷ 、 R ^{1 1}は前記と同じ意味を表わし、 R ¹ °は水素原子またはアルキル基を、 X ² はハロゲン原子を表わす。） .

(B) 2 ( 1 H ) ーキナゾリノン誘導体は、例えば以下の方法で合成できる。

下記一般式（6) で表わされる化合物は、例えば下記一般式（5) で表わされる化合物を不活性溶媒中、酸化剤を用いて酸化する方法により合成することができる（特開昭 5 1 - 8 2 8 7 号公報、同 5 2 - 7 1 4 8 3 号公報、特公昭 4 7 - 4 8 3 9 6 号公報）。

(式中、 R ¹ 、 R ⁷ 、尺 ^{1 1}、 X ¹ は前記と同じ意味を表わす。）

下記一般式（8) で表わされる化合物は、例えば下記一般式（7) で表わされる化合物を不活性溶媒中、クロロスルホニルイソシァネート、ゥレアまたはチォゥレアと反応させる方法により合成することができる（ Synthetic Communications, 1 0 ( 1 0 ) 、 7 9 9 - 8 0 4 ( 1 9 8 0 ) 、米国特許第 3 3 0 5 5 5 3 号明細書）。一般式 (7) で表わされる化合物は、例えば上記刊行物に記載の方法で合成できる。

(式中、 R ¹ 、 R ⁷ 、 R ¹ \ X ¹ は前記と同じ意味を表わす。）

下記一般式（ 19)で表わされる化合物は、例えば下記一般式（ 18)で表わされる化合物を不活性溶媒中、フエニルリチウム、フエニルマグネシウムノヽライド、メチルリチゥム、メチルマグネシウムハライド等の有機金属試薬またはアンモニア、ヒドロキシァミン、ヒドラジン等のァミン試薬等の求核剤と反応させる方法により合成することができる（特公昭 4 8 - 2 1 9 5 6 号公報）。一般式 (18)で表わされる化合物は、例えば上記刊行物に記載の方法で合成できる。

(式中、 R ¹ 、 R ² 、 R ⁷ . X ¹ 、 X ² は前記と同じ意味を表わす。）

(C) 2 -置換キナゾリン誘導体は、例えば以下の方法で合成することができる。

下記一般式（10)で表わされる化合物は、例えば、下記一般式（9) で表わされる化合物を、不活性溶媒中、アンモニァ、ヒドロキシァミン、ヒドラジン等の求核剤と反応させることにより合成することができる（米国特許第 3 3 0 5 5 5 3 号明細書、特開昭 5 1 - 1 0 0 0 9 8 号公報、特公昭 4 5 — 2 2 1 3 5 号公報）。一般式（9) で表わされる化合物は、例えば上記刊行物に記載の方法で合成できる。

(9) (10) (式中、 R ' 、 R ² は前記と同じ意味を表わし、 X ² はノヽロゲン原子、 X ³ はァミノ基、ヒドラジノ基、アルキルヒドラジノ基、ァシルヒドラジノ基、ヒドロキシアミソ基またはァシルアミノ基を表わす。）

下記一般式（ 21) で表わされる化合物は、下記一般式

( 20) で表わされる化合物を不活性溶媒中、アンモニアと反応させることにより合成することができる（ Ber. Deut. Chem. Ges. , 26， 1384-1399(1893) 、 C em. Ber. 98， 1049-1059(1965) 、 Chem. P arm. Bull. 26 (6) 16 33-1651 (1978))。一般式（ 20) で表わされる化合物は、例えば上記刊行物に記載の方法で合成できる。

(式中、 R ¹ , R ^{1 1}は前記と同じ意味を表わし、 X ⁴ は水素原子、アルキル基またはトリフルォロメチル基を表わす。）

(D) 下記一般式（ 11 )で表わされるテトラゾキナゾリン誘導体は、下記一般式（9) で表わされる化合物を不活性溶媒中、アジ化ナトリウムと反応させることにより合成することができる（特開昭 5 3 - 1 2 8 9 3 号公報）。

(9) (11)

(式中、 R ¹ 、 R ² 、 X ² は前記と同じ意味を表わす。）

(E) 下記一般式（12)で表わされるィミダゾキナゾリン誘導体（12)は、下記一般式（22)で表わされる化合物を不活性溶媒中、酸存在下反応させることにより合成することができる（特開昭 5 3 — 2 3 9 9 7 号公報）。一般式 (22)で表わされる化合物は、例えば上記刊行物に記載の方法で合成できる。

(22) (12)

(式中、 R ' 、 R ² は前記と同じ意味を表わし、 R ⁹ はアルキル基を表わす。） ( F ) 下記一般式（1 4 )で表わされるトリアゾキナゾリン誘導体は、下記一般式（1 3 )で表わされる化合物を不活性溶媒中、酸存在下または非存在下において加熱反応させることにより合成することができる（特開昭 5 1 - 1 0 0 0 9 8 号公報）。一般式（1 3 )で表わされる化合物は、例えば上記刊行物に記載の方法で合成できる。

(式中、 R ¹ 、 R ² 、 R ⁸ は前記と同じ意味を表わす。）

以上の反応を行うに際し、置換基 R ¹ または R ⁷ がァミノ基、置換アミノ基、ヒドロキシ基などの官能基を有する場合、それらをあらかじめ保護した後上記反応を行い、その後に脱保護をして目的化合物を合成することができる。用い得る保護基としては、アミノ基、置換アミノ基については例えばァセチル基、ベンゾィル基などのアルカノィル基もしくはァロイル基が挙げられ、ヒドロキシ基については例えばァセチル基、ベンゾィル基などのアルカノィル基もしくはァロイル基、ベンジル基、メチル基、メトキシメチル基またはトリメチルシリル基など力挙げられる ( T. W. Greene, " Protective Groups in Organ i c Synthesis 、 John Wiley & Sons Inc. , 1 9 8 1 ) o

本発明の有効成分は経口的または非経口的に投与することができる。すなわち通常用いられる投与形態、例えば錠剤、カプセル剤、シロップ剤、懸濁液等の型で経口的に投与することができ、あるいは溶液、乳剤、懸濁液等の液剤の型にしたものを注射剤として投与することができる。坐剤の型で直腸投与することもできる。このような投与剤型は通常の担体、賦型剤、結合剤、安定剤などと有効成分を配合することにより一般的方法に従って製造することができる。注射剤型で用いる場合には緩衝剤、溶解補助剤、等張剤等を添加することもできる。

投与量、投与回数は症状、年令、体重、投与形態等によって異なるが、経口投与する場合には、通常は成人に対し 1 日あたり有効成分 1 0 〜 5 0 0 mg、非経口投与する場合には有効成分 1 〜 1 0 0 mgを 1 回または数回に分けて投与することができる。

以下、本発明を製剤例及び試験例により更に詳細に説明する。

製剤例 1

錠剤は例えば以下の方法により製造できる。量（mgZ錠剤）後述する試験例 1 化合物番号 1 0

3 3 の化合物の塩酸塩

乳糖 7 2 5 コーンスターチ 3 0 カルボキシメチル'セルロースカルシウム 5 ヒドロキシプロピルセルロース（HPC- L) 2 ステアリン酸マグネシウム 0 5 合計 1 2 0 m g 各成分を混合し、打錠して 1 2 O m gの錠剤に成形することができる。

製剤例 2

注射剤は例えば次のようにして製造できる。

後述する試験例 1 化合物番号 1 m g

3 6 の化合物の塩酸塩

生理食塩液 1 0 m l 上記成分の溶液を濾過滅菌し、洗浄、滅菌したバイァルビンに充塡し、洗浄、滅菌したゴ厶拴で密封し、フリッブオフキヤップで巻締して注射剤を製造することがでる。

試験例 1

マウス腹腔マク口ファージに対する T N F産生阻害試

B A L B Z c マウス（ 5 週齢、雌、チャールズリノく一社）に 3 %チォグリコレート培地 1 を腹腔内投与し、 4 日間飼育後 4 のへパリン（最終濃度 5 U Z ） —牛胎児血清（ F B S、 GIBC0 社製、最終濃度 1 % ) を添加した最少栄養培地（Minimum Essential Medium. 以下 M E Mと略す、阪大微生物病研究会製）にて腹腔内を洗浄し、腹腔内浸潤細胞（ P E C ) を回収した。 P E Cは M E Mで 3 回洗浄後、 F B S (最終濃度 1 0 % ) を添加した M E Mに懸濁し、トリパンブル一染色で生細胞数を計測した後、 1 当たり 2 X 1 0 ⁶ 個になるように F B S (最終濃度 1 0 %) を添加した M E Mで希釈し、 9 6 ゥエルマイクロプレート（コース夕一社製）に 1 ゥエル当たり 2 X 1 0 ⁵ 個になるように 1 0 0 1 ずつ加えた。このマイクロプレートに分注された P E Cを 5 % C 〇 ₂ 存在下 3 7 °Cで 1 時間培養し、 3 7 °Cに加温した M E M で 2回洗浄して浮遊細胞を除去したものをマウス腹腔内マクロファージとして使用した。なお、上記洗浄操作の後は F B S (最終濃度 1 0 % ) を添加した M E Mを各ゥエル当たり 5 0 a 1 ずつ加え以下の試験に用いた。次に、本発明 T N F産生阻害剤の粉末を 3 0 mMの濃度になるようにジメチルスルホキシドに溶解し、最終濃度 3 0 M または 3 〃 Mになるよう F B S (最終濃度 1 0 % ) を添加した M E Mで希釈調整し、上記腹腔内マクロファージ中に各ゥヱル 5 0 1 ずつ加え総量 1 0 0 〃 1 とした。更に、最終濃度 1 0 ^ g Z になるようにリポポリサッカライド（以下 L P S と略す、 E . C o l i 0 1 1 1 B 4 、 D I F C O U S A社製）を各ウエノレに 1 0 0 〃 1 ずつ加え、 3 7 ° ( 、 5 % C 0 ₂ 存在下、 1 8 時間培養後、各ゥエル中の上清 2 5 a 1 を採取した。

採取した上清中の T N F活性は、 T N F感受性マウス線維芽細胞株 L 9 2 9 細胞を用いたバイオアツセィにて測定した。即ち、 9 6 ウェルマイク口プレートに F B S (最終濃度 1 0 % ) を添加した M E Mを各ゥル 1 0 0 1 ずつ加え、これを用いて採取した上清 2 5 pi 1 を 5 倍系列で希釈し最終濃度（次の L 9 2 9 細胞液添加後の濃度）力 1 0 %、 2 % . 0 . 4 % , 0 . 0 8 %になるようにした。次に L 9 2 9 細胞を 1 当たり 4 X 1 0 ⁵ 個になるように F B S (最終濃度 1 0 % ) およびァクチノマイシン D ( Sigma 社製、最終濃度 1 / gノ）を添加した M E Mに懸濁し、上記マイクロプレートに 1 ゥエル当たり 4 X 1 0 個になるように 1 0 0 〃 1 ずつ加えた。 5 % C 0 2 存在下 3 7 °Cで 1 8 時間培養後、 Monosannらの開発した M T T法 ( onosann, T. , J. Immunol. Method, 6 5、 5 5 - 6 3、 1 9 8 3 ) を一部改変した方法によつて生細胞数を測定した。即ち、 3 — （ 4 , 5 — ジメチルチアゾールー 2 — ィノレ）一 2， 5 — ジフエニルテトラゾリゥ厶ブロマイド（以下 M T T と略す、 S i gma 社製）を 1 mgZ になるように M E Mで溶解し上記マイクロプレ一卜の各ゥエルに 5 0 1 ずつ加える。更に 6 時間培養した後、上清を捨て 0 . 0 0 4 N H C 1 —イソプロピルァノレコールを各ゥエルに 1 0 0 〃 1 加え、次に、 0 . 0 1 % ラウリル硫酸ナトリウム水溶液を 1 0 〃 1 力 U えた。 9 6 ゥヱルプレートを数分間振盪した後、各ゥェルの吸光度をマイクロプレートリーダ（コロナ社製）により測定した（吸収波長 5 5 0 nm) 。吸光度は、 L 9 2 9細胞の生細胞数と相関し培養上清中の T N F活性を表している。 T N F活性は、マウスリコンビナント

T N F a ( T N F — M、 Genzyme 社製）を標準物質として得られた T N F活性に対する吸光度の検量線よりュニット（ U ) / 7 ^として求めた。各化合物の T N F産生阻害活性は、以下の式に従って求めた。

T N F産生阻害活性（％ ) = ( 1 -化合物添加群の培養上清中の T N F活性化合物非添加群の培養上清中の T N F活性） X 1 0 0

結果を表 1 に示す。

1 マウス腹腔マクロファージに対する TNF産生阻害試験結果

-*

CO

、

O

〇リ

1

1— *

00

to CD cn

. -

17 81

18 59

〇

19 87

CH₃

20 84

8 Z

8 Z f ε Z Z zdD^zB.D

09 ' I Z が HD

s s

£t^lO/£6dr/JDd

9 S

86fZ.0/f6 OW

£WI0/£6df/JOd

L 8

£PPlO/€6dC/∑Dd 86 0 6 OAV

T N F産生阻害活性のうち、 *印付きの数字は T N F産生阻害剤濃度 3 / Mでの結果を示し、 *印なしの数字は T N F産生阻害剤濃度 3 0 Mでの結果を示す。試験例 2

ガラクトサミン負荷マウスエンドトキシンショ _ッ _クモデル致死抑制試験

D — ガラクトサミン塩酸塩（ナカライテスク社製、以下 D — g a I N と略す）及び L P S を最終濃度がそれぞれ 7 5 mg/ 、 0 . 1 または 0 . 2 ji g /i となるうに水に溶解した。また実施例 1 の化合物番号 3 3 の化合物の塩酸塩を 5 % ジメチルスルホキシドー 1 0 %ニッコール（日本サ一ファクタント工業社製）水溶液に最終濃度 0 、 0 . 2 5 、 0 . 5 、 1 mgZ になるように溶解した。

次に、 1 0 匹群の B A L B Z c マウス（ 5 週齢、雌、チャールズリバ一社）に上記 D _ g a 1 N と L P S を含有する水溶液を体重 2 0 g 当り 2 0 0 1 静脈内投与し、その直後、上記の各濃度に調製した試験例 1 化合物番号 3 3 の化合物の塩酸塩溶液を体重 2 0 g 当たり 2 0 0

II 1 静脈内投与した。

化合物のガラクトサミン負荷エンドトキシンショック致死抑制活性は、マウスの 7 日後の生残率によって示した（ 3 回の実験の平均値）。

第 1 図に示すように試験例 1 化合物番号 3 3 の化合物の塩酸塩は、 5 mgZ kg以上の投与量でガラクトサミン負荷マウスのェンドトキシンショック致死を有意に抑制した（有意差検定（ Student t test) は、化合物非投与群と化合物投与群との間で実施した）。試験例 3

ガラク—トサミン負荷マウスェンドトキシンショックモデルにおける T N F産生阻害試験

D - g a 1 N及び L P S を最終濃度がそれぞれ 7 5 mg Ζ τηβ、 0 . 2 〃 g Z となるように水に溶解した。また試験例 1 の化合物番号 3 3 の化合物の塩酸塩を 5 % ジメチルスルホキシド— 1 0 %二ッコール水溶液に最終濃度 0 . 5 、 1 、 2 . 5 mg/ τηβになるよう溶解した。

B A L B Z c マウス、 6 3 匹を 1 8 、 1 5 、 1 5 、 1 5 匹の 4 群（順に A、 B、 C、 D群とする）に分け、全群に上記 D _ g a I N と L P S を含有する水溶液を体重 2 0 g 当たり 2 0 0 / 1 静脈内に投与し、その直後 A群には対照として 5 % ジメチルスルホキシド一 1 0 %二ッコール溶液を、 B、 C , D群にはそれぞれ上記の試験例 1 の化合物番号 3 3 の化合物の塩酸塩 0 . 5 、 1 、

2 . 5 mg/rnS溶液を体重 2 0 g 当たり 2 0 0 1 静脈内に投与した。

次に A群は 5 % ジメチルスルホキシド— 1 0 %ニッコ —ル溶液投与直後、および 0 . 5 、 1 、 1 . 5 、 3 、 5 時間後の各時点で、それぞれ 3 匹のマウスから心臓採血により血液を採取し血清を分離した。 B、 C、 D群についても A群と同様に化合物投与後 0 . 5 、 1 、 1 . 5 、

3 、 5 時間後の各時点で血液を採取し血清を得た。全ての血清は濾過滅菌後、以下の操作を行うまで - 2 0 °Cに保存した。採取した血清中の T N F活性は、実施例 1 と同様の方法により L 9 2 9 細胞を用いたバイオアツセィにて測定した。即ち、試験管内にて F B S (最終濃度 1 0 % ) を添加した M E Mを用いて、上記血清を 3 倍希釈系列で希釈し最終濃度（次の L 9 2 9 細胞液添加後の濃度）が 5 1 . 7、 0 . 6、 0 . 2 %になるようにした。希釈した血清は、 9 6 ウェルマイク口プレートに 1 ゥエル当たり 1 0 0 1 ずつ加えた。次に L 9 2 9 細胞を 1 当たり 4 X 1 0 ⁵ 個になるように F B S (最終濃度 1 0 % ) およびァクチノマイシン D (最終濃度 1 g Z ) を添加した M E Mに懸濁し、上記マイクロプレートに 1 ゥエル当たり 4 X 1 0 ⁴ 個になるよう 1 0 0 〃 1 ずつ加えた。 5 % C 02 存在下 3 7 でで 1 8 時間培養後、前記の M T T法を一部改変した方法により生細胞数を測定し、マウスリコンビナント T N F ひを標準物質として T N F活性を定量した。

第 2 図に示すように対照群では、 D _ g a 1 N Z L P S投与後一過性の血中 T N F活性の上昇が認められた。試験例 1 化合物番.号 3 3 の化合物の塩酸塩は、 1 mgZ kg 以上の投与量で投与量依存的に、上記血中 T N F レベルの上昇を有意に阻害した（有意差検定（ Sutudent t test) は、同一経過時間における、対照群と化合物投与群の T N F活性の間で実施した）。産業上の利用可能性一般式（1) または一般式（2) で表わされる化合物は、 T N Fの産生もしくは分泌を有意に阻害する作用を有する。従って、これらの化合物は、 T N Fが発症に関与すると考えられる疾患、例えば悪液質、敗血症、多臓器不全などの疾患の治療薬として有効である。

Claims

一般式（1 )

青

章

(式中、 R ¹ は水素原子、ノヽロゲン原子、ヒドロキシ基アミノ基、置換アミノ基、ニトロ基、シァノ基、アルキル基、アルコキシ基、アルキルチオ基、ァシル基、カルボキシル基またはアルコキシカルボ二ル基を表わし、 R ² はフエニル基、置換フエニル基、チェニル基、フリル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アルキル基、アミノ基または置換アミノ基を表わし、 R ³ は水素原子、 R ⁴ は水素原子もしくはアルキル基を表すか、または R ³ 、 R ⁴ は一緒になつて結合を表わす。 R ⁵ 、 R ⁶ 、 R ⁷ は、 R ⁵ と R ⁶ がー緖になってォキソ基もしくはチォキソ基を表わし、 R ⁷ が水素原子、アルキル基ハロアルキル基、フヱニル基、置換フヱニル基又は式—

X — Y (式中、 X はアルキレン基を表わし、 Yはシクロアルキル基、フヱニル基、置換フヱニル基、カルボキシル基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァミノカルボニル基、置換アミノカルボニル基、アルコキシカルボニル基アミノ基または置換アミノ基を表わす。）を表わすか、または R ⁶ と R ⁷ が一緒になつて結合を表わし、 R ⁵ が水素原子、アルキル基、アミノ基、ロゲン原子、ヽロアルキル基、ヒドロキシァミノ基、ヒドラジノ基、アルキノレヒドラジノ基、ァシルヒドラジノ基またはァシルァミノ基を表わす。）もしくは一般式（2 )

(式中、 R ¹ R ² R ³ R ⁴ は前記と同じ意味を表わし、式

は窒素原子を 2 個から 4 個含む複素環構造を表わす。）で表わされる化合物またはその塩を有効成分として含有する腫瘍壊死因子産生もしくは分泌阻害医薬組成物。

2. —般式（1 ) あるいは（2 ) において R ³ と R ⁴ が一緒になつて結合を表わし、 R ² がフエニル基、置換フェニル基、チェニル基、フリル基、シクロアルキル基もしくはシクロアルケニル基である化合物またその塩を有効成分として含有する請求の範囲第 1 項記載の腫瘍壊死因子産生もしくは分泌阻害医薬組成物。

3. R ⁶ と R ⁷ が一緒になつて結合を表わし、 R ⁵ がァミノ基、ヒドロキシァミノ基、ヒドラジノ基、アルキルヒドラジノ基、ァシルヒドラジノ基もしくはァ.シルアミノ基である一般式（1 ) の化合物またはその塩を有効成分として含有する請求の範囲第 1 項記載の腫瘍壊死因子産生もしくは分泌阻害医薬組成物。

4. 2 —ァミノ一 6 — クロ口一 4 — フエ二ルキナゾリンまたはその塩を有効成分として含有する請求の範囲第 1 項記載の腫瘍壊死因子産生もしくは分泌阻害医薬組成物。

5. 請求の範囲第 1 項から第 4 項に記載のいずれかの化合物またはその塩の有効量をヒトに投与することからなる、腫瘍壊死因子産生もしくは分泌を阻害する方法。

6. 請求の範囲第 1 項から第 4 項に記載のいずれかの化合物またはその塩を有効成分として含有する腫瘍壊死因子産生もしくは分泌阻害医薬組成物を製造するための該化合物またはその塩の使用。