WO1997045112A1 - Remedy or preventive for hyperlipemia - Google Patents

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WO1997045112A1
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taurine
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Hideaki Kitajima
Kenji Tsunoda
Teruyoshi Yanagita
Shigeru Murakami
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Taisho Pharmaceutical Co Ltd
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Definitions

  • the present invention relates to a therapeutic or prophylactic agent for hyperlipidemia.
  • Lipid components such as cholesterol, neutral fats, phospholipids and free fatty acids in blood are in the form of water-soluble lipoproteins in blood, and lipoproteins are ultra-low-density lipoproteins due to their specific gravity.
  • VLDL low-density lipoprotein
  • HDL high-density lipoprotein
  • arteriosclerotic diseases such as myocardial infarction, angina, and cerebral infarction develop and progress. Therefore, it is important to lower the blood levels of these lipid components to normal levels for the treatment of hyperlipidemia, and to maintain the normal levels to prevent hyperlipidemia. is important.
  • Taurine (aminoethyl sulfonic acid) is a sulfur-containing amino acid with a very simple chemical structure with a molecular weight of 125.14, and its pharmacological action is known to be widespread in the cerebral nervous system, circulatory system, hepatobiliary system, and others. Have been. The effects of taurine on cholesterol metabolism are known to lower serum cholesterol via a bile effect and to suppress cholesterol gallstone formation.
  • 7-Oryzanol is known to have an effect of inhibiting cholesterol absorption and improving lipoprotein metabolism.
  • diet is the first treatment for hyperlipidemia, but when sufficient effects cannot be obtained, drug treatment is required.
  • An object of the present invention is to provide a therapeutic and prophylactic agent for hyperlipidemia that is safe even if taken for a long period of time. It is to be. Disclosure of the invention
  • the present inventors have found that, in order to improve the metabolism of lipid components such as excessive cholesterol in the body, a metabolic improving effect is obtained by simultaneously administering phosphorus and 7-oryzanol, rather than administering taurine or aorizanol alone.
  • the inventors have found that they are further enhanced, and based on the findings, completed the present invention.
  • the present invention is a therapeutic or prophylactic agent for hyperlipidemia, which comprises taurine and a-oryzanol as active ingredients.
  • the therapeutic or prophylactic agent for hyperlipidemia of the present invention reduces the blood concentration of lipid components such as excess cholesterol, neutral fat, phospholipids and free fatty acids in the body, and further improves lipoprotein metabolism. Therefore, the therapeutic drug for hyperlipidemia, ⁇ , is useful as a preventive drug. In particular, it has no side effects and can be taken safely for a long period of time, so it is extremely useful as a preventive for hyperlipidemia.
  • the effective dose of taurine is 100 mg to 6000 nig per FU for a healthy adult, and preferably 1000 mg to 3000 mg.
  • the effective dose of ⁇ -oryzanol is 1 mg to 6000 nig / day for healthy adults, preferably 5 mg to 500 nig.
  • the therapeutic or prophylactic agent for hyperlipidemia of the present invention may contain other known additives as necessary, for example, excipients, disintegrants, binders, lubricants, antioxidants, coating agents, Coloring agents, flavoring agents, surfactants, plasticizers, and the like can be mixed to produce granules, powders, capsules, tablets, dry syrups, liquids, and other preparations in the usual manner.
  • the preparation containing taurine and a-oryzanol according to the present invention as active ingredients can be made into a more effective preparation for treating and preventing hyperlipidemia by blending pantethine dinicotinic acid.
  • the preparation according to the present invention containing taurine and a-oryzanol as active ingredients has an effect of lowering blood levels of cholesterol and triglyceride, and further has an effect of improving lipoprotein metabolism, and is a therapeutic drug for hyperlipidemia. Or it is useful as a prophylactic. In particular, it has no side effects and can be taken safely for a long period of time, so it is extremely useful as a preventive for hyperlipidemia.
  • Example 1 Example 1
  • Vitamin E 100 mg Powdered sugar 600 mg Ethanol 600 mg Aspartame 9 mg Low-substituted hydroxypropylcellulose 54 4 mg Magnesium stearate 24 4 mg Dye
  • a granule having the above composition was prepared according to the flavor method.
  • Vitamin B 10 mg
  • Test Example 1 Effect of high fat load diet on SHRSP (stroke-prone rat)
  • Example 1 group to which the granules of Example 1 are administered per day Taurine group to which 3000 mg of taurine is administered, aorizanol group to which 300 mg of aorizanol is administered, and a high fat load group to which no drug is administered.
  • a high fat load diet is a normal diet loaded with 5% cholesterol, 2% cholic acid and 20% tallow.
  • the normal diet here has the composition shown below. Vitamin and mineral mixtures are available from Harper (J.
  • Each group was fed and maintained for 45 days. After feeding, blood was collected from the tail vein and serum cholesterol levels were measured. After breeding, the liver was removed and cholesterol levels were measured.
  • the mesenteric artery was excised, the surrounding fat was removed, stained with Sudan II, and the number of fat deposits was measured under S shellfish microscopy to determine the rate of inhibition of fat deposition in the mesenteric artery.
  • Example 1 The administration group maintained a low serum cholesterol level as compared to each group. From the liver cholesterol concentration value, the cholesterol suppression rate of the liver was determined by the following formula. Cholesterol 1 (Control group score 1) 1 — (Each group score 1)
  • Table 2 shows the liver cholesterol concentration and the liver cholesterol inhibition rate. As compared with each group, the administration group of Example 1 kept the cholesterol concentration in the liver low and showed a high rate of suppressing fat deposition.
  • the fat deposition judgment is divided into four stages: score 1 from 0 to 20, score 2 from 20 to 100, score 3 from 100 to 200, and score 4 from 200 or more.
  • score 1 from 0 to 20
  • score 2 from 20 to 100
  • score 3 from 100 to 200
  • score 4 from 200 or more.
  • the score was determined, the average of the scores of each group was calculated, and the rate of inhibition of mesenteric artery fat deposition in each group was calculated by the following formula.
  • Table 3 shows the average of the fat deposition judgment scores of each group and the fat deposition inhibition rate in the mesenteric artery.
  • Example 1 The administration group showed a higher fat deposition inhibition rate as compared with each group. table 1
  • Test Example 2 Effect of lipid secretion of Hep G 2 cells
  • Taurine 2 T + a group to which OmM and 0.05 mM of ⁇ -oryzanol were added, T group to which only 2.0 mM of taurine was added, and C group to which no drug was added as a control.
  • test method of Test Example 2 As the test method of Test Example 2, the test method shown in CURRENT THERAPEUTIC RESEARCH, Vol. 58, No. 8 787-795 (1995) was used.
  • DMEM Duibeccos Modined Eagle's medium
  • LPDS lipoprotein depleted serum
  • DMEM glucose concentration, 4500 mg / ml
  • LPDS lipoprotein depleted serum
  • Taurine was dissolved in phosphate buffered saline (PBS), sterilized by filtration, and added to a basic medium to a concentration of 2. 2. ⁇ to prepare a test medium.
  • ⁇ - Lyrizanol was dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) to a concentration of 0.05 mM and added to the basic medium.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • Hep G2 cells (manufactured by Wistar Laboratories) are pre-cultured in DMEM (low glucose, 1500 mg / L) containing 10% FCS, penicillin (100,000 units of 8) and streptomycin (100 mg / l). did. Culture of Hep G 2 cells at 37 ° C, 95% air, 5% dioxide Performed on carbon and the medium was changed every 2-3 days. After HepG2 cells reached confluence, they were subcultured by the following method. The medium of the dish was removed, and HepG2 cells were quickly washed with 0.25% trypsin solution (containing 0.1% EDTA). Then, an appropriate amount of tribcine solution was added, and the mixture was incubated at 37 for about 5 minutes.
  • DMEM low glucose, 1500 mg / L
  • FCS penicillin
  • streptomycin 100 mg / l
  • the trypsin reaction was stopped by adding an appropriate amount of a medium containing 10% FCS, and the HepG2 cells were well suspended and centrifuged (100 rpm, 5 min) to collect HepG2 cells. .
  • the cells were cultured using DMEM (containing 1090FCS) medium. The cell number was counted using a sight meter, and Hep G 2 cells (85-10 solid Z dishes) were spread on a 3.5 cm dish, with 1 ml of DM MEM containing 1 ml of high glucose (4500 nig / iiil) per dish. Was used for culturing.
  • the lipid in the cells and in the medium was extracted according to the Bligh & Dyer method.
  • the extracted lipids were subjected to fractionation of free cholesterol, ester cholesterol, diglyceride, triglyceride, etc. by silica gel G-thin layer chromatography (TLC) with a thickness of 0.25 dragon.
  • TLC silica gel G-thin layer chromatography
  • the color was developed with chloride vapor to detect each lipid fraction.
  • the radioactivity of each fraction was determined by TLC, taking the silica gel of each fraction on the plate in a measurement vial, dissolving it in Scintisol EX-H (manufactured by Dojindo Co., Ltd.), and dissolving it in a liquid scintillation counter.
  • WALLAC 1410 manufactured by Pharamacia). Background values and quenching with silica gel were corrected. 5.
  • a portion of the cell homogenate was used for protein quantification. Evening protein was quantified according to the Lowry method.
  • the data obtained from the tests were statistically processed using Duncan's multiple test.
  • Table 4 shows the effect of [ 14 C] acetic acid on the secretion of labeled lipids (ester cholesterol, free cholesterol, triglyceride) into Hep G2 cell lipid medium after 24 hours.
  • the T + 7 group suppressed the secretion of labeled lipid compared to the other groups.
  • Table 5 shows the effect of [ 3 H] glycerol on the secretion of labeled lipids (total lipids, triglycerides, ciglycerides) in Hep G2 cell lipid medium after 24 hours.
  • the T + a group suppressed the secretion of labeled lipid compared to the other groups.

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Description

明細書 高脂血症の治療薬又は予防薬
技術分野
本発明は、 高脂血症の治療薬又は予防薬に関する。 背景技術
血中のコレステロール、 中性脂肪、 リン脂質及び遊離脂肪酸などの脂質成分は- 血中で水溶性のリポタンパクの形をとつており、 リポタンパクは、 その比重の違 いにより超低比重リポタンパク （V L D L ) 、 低比重リポタンパク （L D L ) 、 高比重リポタンパク （H D L ) などに分類されている。 生体内のリポタンパク代 謝に異常が生じ、 これら脂質成分の血中濃度が正常値以上に高濃度になつた状態 を高脂血症という。 この高脂血症の状態が長期間銃くと動脈壁にコレステロール などが沈若しやすくなる。 そして、 心筋梗塞、 狭心症、 脳梗塞などの動脈硬化性 疾患を発症し、 進展させるということが、 数多くの研究や疫学調査によって明ら かにされてきた。 したがって、 これら脂質成分の血中濃度を正常な濃度まで低下 させることが高脂血症の治療のために重要であり、 また、 正常な濃度を保持する ことが高脂血症の予防のために重要である。
タウリン （アミノエチルスルホン酸） は、 分子量 125. 14の極めて単純な化学構 造をもつ含硫アミノ酸であり、 その薬理作用については脳神経系、 循環系、 肝胆 系をはじめとして広きに渡ることが知られている。 タウリンのコレステロール代 謝に関する作用については、 利胆作用を介した血清コレステロールの低下作用や コレステロ一ル性の胆石形成を抑制する作用などが知られている。
7 —オリザノールは、 コレステロールの吸収阻害、 リポタンパク代謝を改善す る作用があることが知られている。
現在、 高脂血症の治療には、 まず最初に食事療法が行われるが、 十分な効果が 得られないときには薬剤による治療が必要とされている。
高脂血症の治療薬は、 今日では作用機序の異なる （吸収阻害、 排泄促進及び合 成阻害など） いくつかの薬剤があるが、 副作用の問題がある。 その主な副作用と しては、 白血球減少、 肝腫大、 胃腸障害、 性欲減退などの諸症状がある。 したが つて、 副作用のない高脂血症の治療薬が望まれている。
また、 予防医学の観点から高脂血症の発症予防するため、 コレステロール、 中 性脂肪、 リン脂質及び遊離脂肪酸などの脂質成分の血中の濃度を低く保ち、 しか も副作用のなく長期間、 安全に服用できる高脂血症の予防薬が望まれている。 本発明の目的は、 長期間服用しても安全な高脂血症の治療薬及び予防薬を提供 することである。 発明の開示
本発明者らは、 体内における過剰なコレステロールなど脂質成分の代謝改善の ためには、 タウリン又はァーオリザノールをそれぞれ単独に投与するよりも、 夕 ゥリンと 7—オリザノールを同時に投与することにより代謝改善作用がより増強 されることを見いだし、 その知見に基づき本発明を完成した。
即ち、 本発明は、 タウリン及びァ—オリザノールを有効成分として含有するこ とを特徴とする高脂血症の治療薬又は予防薬である。
本発明の高脂血症の治療薬又は予防薬は、 体内における過剰なコレステロール、 中性脂肪、 リン脂質及び遊離脂肪酸などの脂質成分の血中濃度を低下させ、 さら に、 リポタンパク代謝を改善する作用を示し、 高脂血症の治療薬乂は予防薬とし て有用である。 特に、 副作用がなく、 長期間でも安全に服用できるので高脂血症 の予防薬として極めて有用である。
本発明において、 タウリンの有効投与量は、 健康成人で一 FU 00mg〜6000nigであ り、 好ましくは 1000mg〜3000mgである。 ァ一オリザノールの有効投与量は、 健康 成人で-一日 1 mg〜6000nigであり、 好ましくは 5mg〜500nigである。 タウリンとァ一 オリザノールの配合比率はタウリン： ァ—オリザノール = 300 : 1〜30である。 本発明の高脂血症の治療薬又は予防薬には、 必要に応じて他の公知の添加剤、 例えば、 賦形剤、 崩壊剤、 結合剤、 滑沢剤、 抗酸化剤、 コーティング剤、 着色剤、 矯味矯臭剤、 界面活性剤、 可塑剤などを混合して常法により、 顆粒剤、 散剤、 力 プセル剤、 錠剤、 ドライシロップ剂、 液剤などの製剤とすることができる。
本発明に係るタウリン及びァ -オリザノールを有効成分として含有する製剤は、 パンテチンゃニコチン酸を配合することにより、 高脂血症の治療及び予防により 有効な製剤とすることができる。
さらに、 必要に応じ、 1種類もしくは 2種類以上のビタミン類、 他の生理活性 成分、 ホルモン、 栄養成分、 香料等を加えることができる。 産業上の利用可能性
本発明に係るタウリン及びァ—オリザノールを有効成分として含有する製剤は、 コレステロール、 中性脂肪の血中濃度を低下させ、 さらに、 リポタンパク代謝を 改善する作用を示し、 高脂血症の治療薬又は予防薬として有用である。 特に、 副 作用がなく、 長期間でも安全に服用できるので高脂血症の予防薬として極めて有 用である。 本発明を実施するための最良の形態
以下に実施例及び試験例をあげ、 本発明を具体的に説明する。 例 1
タウリ ン 3 0 0 0 m g
7—オリザノ一ル 1 0 m g 粉糖 6 0 0 m g エロジーノレ 3 6 m g アスパルテーム 9 m g 低置換ヒ ドロキシプロピルセルロース 5 4 m g 常法により、 上記組成からなる顆粒剤を作成した。 例 2
タウリ ン 3 0 0 0 m g
7—オリザノール 1 0 m g ビタミ ン E 1 0 0 m g 粉糖 6 0 0 m g ェ口ジ一ノレ 6 0 0 m g アスパルテーム 9 m g 低置換ヒ ドロキシプロピルセルロース 5 4 m g ステアリン酸マグネシゥム 2 4 m g 色素
香料 微 常法により、 上記組成からなる顆粒剤を作成した。 例 3
タウリン 3 0 0 0 m g パンテチン 5 0 m g 7ーォリザノ一ル 1 0 m g 粉糖 6 0 0 m g ェ口 ジーノレ 3 6 m g アスパルテーム 9 m g 低置換ヒドロキシプロピルセルロース 5 4 m g 常法により、 上記組成からなる顆粒剤を作成した, タウリ ン 3000 m g
7—オリザノ一ル 1 0 m g
ビタミ ン E 1 00 m g
ビタミ ン B , 1 0 m g
ビタミ ン B 2 20 m g
ビ夕ミ ン B 6 1 0 m g
ビタミ ン C 600 m g
二 iチン酸 1 0 m g
パンテチン 50 m g
デンプン 6 00 m g
低置換ヒ ドロキシプロピルセルロース 1 2 m g
ァスハ °ルテーム 1 2 mg
ステアリン酸マグネシゥム 24 m g
常法により、 上記組成からなる顆粒剤を作成した。 試験例 1 ： S HR S P (脳卒中易発症ラッ 卜） の高脂肪負荷食による影響
[試験動物]
3力月齢 S HR S Pの雄：各群 6匹
[試験群]
1 日当たり、 例 1の顆粒剤を投与する例 1投与群、 タウリンを 3000mg投与する タウリン投与群、 ァーオリザノールを 300mg投与するァーオリザノール投与群、 薬 剤を投与しない高脂肪負荷食群。
[食餌]
それぞれの群に高脂肪負荷食を与えた。 高脂肪負荷食とは、 正常食に 5%コレ ステロール、 2 %コール酸及び 20%牛脂を負荷したものである。 ここでいう正常 食は、 下記に示す組成である。 ビタ ミン混合物及びミネラル混合物は Harper(J.
Nutr.,67, 109(1959))にしたがった。
正常食の組成
カゼイン 18.0%
脂肪 5.0%
ビタミ ン混合物 1.0%
ミネラル混合物 4.0%
塩化コリン 0.2%
セルロース 9.6%
スクロース 62.2%
計 100.0% [試験方法]
それぞれ群に食餌を与えて 45日間飼育した。 食餌後、 尾静脈から採血し、 血清 コレステロールの濃度を計測した。 飼育終了後、 肝臓を摘出し、 コレステロール 濃度を測定した。
また、 腸間膜動脈は摘出し、 まわりの脂肪を取り除き Sudan I I Iで染色し、 、S貝微 鏡下に脂肪沈着数を測定し、 腸間膜動脈における脂肪沈着抑制率を求めた。
[結果]
血清コレステロール濃度を表 1に示した。 例 1投与群は各群に比較すると、 血 清コレステロール濃度を低く保った。 肝臓のコレステロール濃度値から肝臓のコ レステロールの抑制率を下記の式により求めた。 コレステロ一ノレ (対照群スコア一） 一 — (各群スコア一）
X 1 0 0 の抑制率 (対照群スコア一） 肝臓のコレステロール濃度及び肝臓のコレステロールの抑制率を表 2に示した。 例 1投与群は各群に比較すると、 肝臓のコレステロール濃度を低く保ち、 高い脂 肪沈着抑制率を示した。
また、 脂肪沈着判定は、 沈着数が 0〜20までをスコア一 1、 20〜100までをスコ ァー 2、 100〜200までをスコア一 3、 200以上をスコア一 4の 4段階に分けてスコ ァ一を決定して各群のスコア一平均を求め、 各群の腸間膜動脈の脂肪沈着抑制率 を下記の式により求めた。
(対照群スコア一）二 (各群スコア一）
脂肪沈着抑制率 X 1 0 0
(対照群スコア一） 各群の脂肪沈着判定のスコア一平均及び腸間膜動脈における脂肪沈着抑制率を 表 3に示す。 例 1投与群は各群に比較すると、 高い脂肪沈着抑制率を示した。 表 1
試験群 直後 25日後 45日後
例 1投与群 54. 6 115. 8 188. 1
タウリ ン投与群 55. 2 225. 5 365. 6
7 -才リサ' -ル投与群 53. 7 399, 4 553. 2 高脂肪負荷食群 57. 8 427. 7 767. 5 表 2
Figure imgf000008_0001
試験例 2 ： H e p G 2細胞の脂質分泌の影響
[試験群]
タウリ ン 2. OmM及びァ一オリザノール 0.05mMを添加する T +ァ群、 タウリン 2.0 mMのみを添加する T群、 コントロールとして薬剤を添加しない C群。
[試験方法]
試験例 2の試験方法は、 CURRENT THERAPEUTIC RESEARCH, Vol.58, No.8 787-795 (1995)で示されている試験方法を用いた。
1. 試験培地の調製及び薬剤の添加方法
10% lipoprotein depleted serum ( L P D S ) を含 、 Duibecco s Modined Eagle' s medium (DM EM (グルコース濃度， 4500mg/ml) ) 培地を基本培地とし て用いた。 タウリンはリン酸緩衝生理食塩水 （P B S) に溶解してろ過滅菌し、 濃度 2. ΟπιΜになるように基本培地に添加して試験培地とした。 Ί -才リザノールは ジメチルスルフォキシ ド （DMSO) に濃度 0.05mMになるように溶解し、 基本培 地に添加した。 コン トロールとして、 P B S (濃度 1 %) を含む培地で培養した 細胞を用いた。
2. 細胞の培養方法と細胞及び培地の回収方法
H e p G 2細胞 （ウィスター研究所製） を 10%F C S、 ペニシリ ン （10万単 位八） 及びス トレプトマイシン （100mg/l) を含有する DMEM (low glucose, 1500mg/L) で前培養した。 H e p G 2細胞の培養は 37°C、 95%空気、 5 %二酸化 炭素で行い、 培地は 2〜 3日ごとに交換した。 H e p G 2細胞がコンフルェント な状態に達した後、 次の方法で継代培養した。 ディッシュの培地を除き、 H e p G 2細胞を 0.25%トリプシン液 （0.1%EDT Aを含む） で素早く洗净後、 適当量 の卜リブシン液を加えて、 約 5分間、 37 でインキュベートした。 その後 10%の F C Sを含む培地を適当量添加してトリプシンの反応を停止させ、 H e p G 2細 胞をよく懸濁させて遠心分離し （lOOOrpm, 5 min) H e p G 2細胞を回収した。 細胞は、 1/2〜1/3に分けた後、 DMEM (1090FCS含有） 培地を用いて培養し た。 細胞数をサイ トメ一夕一を用いて計測し、 H e p G 2細胞 （85Χ10Ί固 Zディ ッシュ） を 3.5cmディッシュにまき、 1ディッシュ当たりに 1 mlの高グルコース (4500nig/iiil) 含有 DM EMを用いて培養した。 H e p G 2細胞がコンフルェン卜 な状態 （約 lOOxlO4個ノディッシュ） になったとき、 培地を試験培地に交換して H e p G 2細胞を 24時間培養した。 H e p G 2細胞は P B Sで 1回洗浄後、 1 の PB Sを加えポリスマンで回収した。 なお、 放射性脂質前駆体として各デイツ シュあたり 0.5 zC i [3H] グリセロール又は ['4C] 酢酸を試験開始時に添加 した。
3. H e p G 2細胞内及び培地中の脂質の抽出方法
細胞内及び培地中の脂質は Bligh & Dyer法に従い抽出した。 回収した H e p G 2細胞は融解後、 超音波発生機 （Soniiier 250, Bronson社製） を用いて破砕し、 細胞ホモジネートを調製した。 細胞ホモジネ一卜の一部をスクリューキャップ付 きスピッツにとり、 メタノール 3mlクロ口ホルム 1.5mlを加えてよく撹拌し、 37 、 40分間加熱し、 続いて、 クロ口ホルム 1.5mlと水 1.6mlを加えて、 クロ口ホルム： メタノール：水 = 1 ： 1 : 0.8の混合液とし、 遠心分離 （3000rpm, 15min. ) した。 下層のクロ口ホルムを回収し、 窒素ガス下で濃縮した後、 一定量の石油エーテル に溶解し、 細胞内の脂質を抽出した。 また、 培地中の脂質も同様な操作で抽出し た。
4. 脂質の分析方法
抽出した脂質を厚さ 0.25龍のシリカゲル G-薄層ク口マトグラフィー （T L C) で遊離型コレステロール、 エステル型コレステロール、 ジグリセリ ド及び卜リグ リセリ ド等の分画を行った。 展開溶液として、 石油エーテル： ジエスチルェ一テ ル：酢酸 =82： 18： 1を用いた。 展開終了後、 ョ一ド蒸気で発色させて各脂質画 分を検出した。 各分画の放射能活性は、 TLCで分画後、 プレー卜上の各フラク シヨンのシリカゲルを計測バイアル中にとり、 シンチゾール EX— H (同仁化学 社製） に溶解し液体シンチレ一シヨンカウンタ一 （WALLAC 1410, Pharamacia社製） で測定した。 バックグランド値及びシリカゲルによるクェンチングは補正した。 5. 細胞タンパク質の定量
細胞ホモジネ一トの一部をタンパク質の定量に用いた。 夕ンパク質の定量は、 Lowry法に準じて行った。
6. 統計分析
試験によって得られたデータは Duncan's multiple testを用いて統計処理し た。
[結果]
[14C] 酢酸の H e p G 2細胞脂質培地へのラベル脂質 （エステル型コレステ ロール、 遊離型コレステロール、 卜リグリセリ ド） の 24時間後における分泌に及 ぼす影響を表 4に示した。 T+ 7群は他の群に比較してラベル脂質の分泌を抑制 した。
また、 [3H] グリセロールの H e p G 2細胞脂質培地へのラベル脂質 （総脂質、 トリグリセリ ド、 シグリセリ ド） の 24時間後における分泌に及ぼす影響を表 5に 示した。 T+ァ群は他の群に比較してラベル脂質の分泌を抑制した。 表 4
ラベル脂質 [ !4C]dpm lO mg protein
エステル型コレステロール
c 群 2.33
τ 群 1.36
T+ァ群 0.93
遊離型コレステロール
c 群 9. 65
τ 群 6.43
T+ァ群 4.60
トリグリセリ ド
c 群 5.86
τ 群 4.26
T+ 7群 3.78
表 5
ラベル脂質 [3H]dpm lOVmg protein 総脂質
C 群 7.90 τ 群 6.34 τ +ァ群 4. 30 トリグリセリ ド
C 群 2. 34
T 群 1. 84
T+ァ群 1.22 ジグリセリ ド
c 群 0. 1 7
T 群 0.05
T+ァ群 0. 05

Claims

請求の範囲
1 . タウリン及びァ一オリザノールを有効成分として含有することを特徴とする 高脂血症の治療薬又は予防薬。
2 . 高脂血症の治療薬又は予防薬を製造するための夕ゥリン及びァ一オリザノー ルの使用。
3 . タウリン及びァ _オリザノールを有効成分として含有する製剤を用いること を特徴とする高脂血症の治療方法又は予防方法。
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