WO2001004121A1 - Verfahren zur herstellung reiner stereoisomeren von tetrahydrofolsäureestersalzen und tetrahydrofolsäure durch fraktionierte kristallisation von tetrahydrofolsäureestersalzen - Google Patents

Verfahren zur herstellung reiner stereoisomeren von tetrahydrofolsäureestersalzen und tetrahydrofolsäure durch fraktionierte kristallisation von tetrahydrofolsäureestersalzen Download PDF

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tetrahydrofolic acid
acid
tetrahydrofolic
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diastereomers
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Hans Rudolf MÜLLER
Rudolf Moser
Viola Groehn
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D475/00—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems
    • C07D475/02—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems with an oxygen atom directly attached in position 4
    • C07D475/04—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems with an oxygen atom directly attached in position 4 with a nitrogen atom directly attached in position 2

Definitions

  • the present invention relates to a process for the preparation and enrichment of (6S, ⁇ S) or (6S, ⁇ R) tetrahydrofolic acid ester salts and tetrahydrofolic acid by mixing, in an organic solvent, equimolar or enriched mixtures of diastereomers of addition salts of tetrahydrofolic acid esters with aromatic sulfonic acids produces or dissolves, then crystallizes at least once, and if appropriate hydrolyzes them to (6S, ⁇ S) - or (6S, ⁇ R) -tetrahydrofolic acid and crystallizes them as free acid or isolates them in the form of their salts.
  • the addition salts of the (6R, ⁇ S) or (6R, ⁇ R) tetrahydrofolic acid esters with the corresponding sulfonic acids can be isolated from the mother liquors and the corresponding tetrahydrofolic acids or their salts can be obtained by hydrolysis.
  • the asymmetric ⁇ -C atom in the glutamic acid residue can be in the S configuration ( ⁇ S) or in the R configuration ( ⁇ R).
  • the enantiomers of folic acid are referred to below as ( ⁇ S) -folic acid and ( ⁇ R) -folic acid.
  • the naturally occurring folic acid corresponds to ( ⁇ S) -folic acid.
  • Tetrahydrofolic acid corresponds to formula II
  • the asymmetric ⁇ -C atom in the glutamic acid residue can be in the S configuration ( ⁇ S) or in the R configuration ( ⁇ R) and the asymmetric C atom 6 in the tetrahydropterin residue in the S configuration (6S) or R configuration (6R) may be present.
  • the diastereomers of tetrahydrofolic acid are referred to below as (6S, ⁇ S) -, (6S, ⁇ R) -, (6R, ⁇ S) - and (6R, ⁇ R) - tetrahydrofolic acid. The same applies to the tetrahydrofolic acid esters and their derivatives.
  • (6S, ⁇ S) - 6S, ⁇ R) -, (6R, ⁇ S) - and (6R, ⁇ R) - tetrahydrofolic acid esters.
  • the naturally occurring tetrahydrofolic acid corresponds to (6S, ⁇ S) -tetrahydrofolic acid.
  • folic acid, folic acid ester and folic acid ester salt always includes the two enantiomers ( ⁇ S) and ( ⁇ R) and the term tetrahydrofolic acid, tetrahydrofolic acid ester and tetrahydrofolic acid ester salts all possible diastereomers.
  • Tetrahydrofolic acid has found widespread therapeutic use in the form of 5-formyl or 5-methyl derivatives and their physiologically tolerable salts. It has long been known that the biological activity of the naturally occurring diastereomers of reduced folates, e.g. B. the (6S, ⁇ S) - tetrahydrofolic acid, is by far the strongest. It is therefore expedient to provide therapeutic preparations which contain only the most active form or which is at least highly enriched.
  • Tetrahydrofolic acid is generally produced industrially by heterogeneous hydrogenation of the two imine groups in the pterine skeleton of ( ⁇ S) -folic acid, usually giving an equimolar mixture of (6S, ⁇ S) - and (6R, ⁇ S) -tetrahydrofolic acid.
  • the equimolar mixture can be used for pharmaceutical preparations. But you can also do the desired one beforehand Enrich (6S, ⁇ S) -diastereomers of tetrahydrofolic acid by fractional crystallization or obtain it in pure form, for which various processes are known, see for example EP-0495204.
  • this process cannot convince from an economic point of view insofar as the sulfonic acids used for salt formation can only be separated from aqueous mother liquors at great expense, and therefore large volumes of mother liquors containing sulfonic acid have to be disposed of, which is economically unfavorable.
  • EP-0682 026 describes the preparation of stable crystalline (6S, ⁇ S) and (6R, ⁇ S) tetrahydrofolic acid by crystallization from an aqueous medium at certain pH values.
  • the enrichments in the fractional crystallizations are so low that several steps are necessary for an enrichment of the desired diastereomer to over 99.5%. This is associated with large substance losses and the risk of the formation of chemical degradation products.
  • the enrichment of unnatural isomers is particularly complex according to this process.
  • aromatic sulfonic acid salts (addition salts) of tetrahydrofolic acid esters are outstandingly suitable for the preparation of optically pure diastereomers of tetrahydrofolic acid, since only the addition salts of (6S, ⁇ S) or (6S, ⁇ R) diastereomers crystallize out from organic solvents.
  • the invention relates to a process for the preparation and enrichment of (6S, ⁇ S) - or (6S, ⁇ R) -tetrahydrofolic acid ester salts and -tetrahydrofolic acid, which is characterized in that equimolar or enriched mixtures of diastereomers of addition salts of tetrahydrofolic acid esters with in organic solvents produces or dissolves aromatic sulfonic acids, then crystallizes at least once, and then hydrolyzes the crystals to (6S, ⁇ S) - or (6S, ⁇ R) -tetrahydrofolic acid, crystallizes them as free acid or isolates them in the form of a salt.
  • Crystallization at least once in the context of the invention means fractional crystallization to the desired purity.
  • the number of crystallization steps depends mainly on the content of the desired diastereoisomer (s) in the starting product.
  • the addition salts of the tetrahydrofolic acid esters can correspond to the formula III and comprise the (6S, ⁇ S), (6S, ⁇ R), (6R, ⁇ S) and (6R, ⁇ R) diastereomers,
  • R is T or RH, and one of ⁇ or R 2 , or both Ri and R 2 independently of one another are a monovalent hydrocarbon radical or a heterocarbon radical bonded via a C atom and having heteroatoms selected from the group -O-, -S- and - N- represent, HA stands for an aromatic sulfonic acid, and x denotes an integer from 1 to 6 or a fractional number between 0 to 6.
  • R! and R 2 can be selected independently of one another, but they are preferably identical.
  • R 1 and R 2 preferably represent a hydrocarbon radical.
  • R T and R 2 as the hydrocarbon radical can be aliphatic radicals having 1 to 20, preferably 1 to 12, particularly preferably 1 to 8 and particularly preferably 1 to 4 carbon atoms to cycloaliphatic or cycloaliphatic-aliphatic radicals having 3 to 8 ring carbon atoms and 1 to 6 carbon atoms in the aliphatic radical, to aromatic hydrocarbon radicals having 6 to 14 carbon atoms, particularly preferably 6 to 10 carbon atoms, or to aromatic-aliphatic Leftovers with 7 to
  • the heterohydrocarbon residue can be heteroalkyl with 2 to
  • the hydrocarbon radicals can, for example, be selected from the group consisting of linear and branched C 1 -C 20 -alkyl, C 3 -C 8 - and preferably C -C 7 -cycloalkyl, Cs-C ⁇ -cycloalkyl-d-Ce-alkyl and preferably C -C 7 cycloalkyl -CC 4 alkyl, C 6 -C 10 aryl or C 7 -C 2 aralkyl.
  • the heterocarbon residues can be selected from, for example
  • heteroaryl and C 5 -C ⁇ 2 - and preferably C 5 -C 10 heteroaralkyl, the hetero radicals
  • R 1 and R 2 can be linear or branched alkyl, which preferably contains 1 to 12, more preferably 1 to 8, and particularly preferably 1 to 4 carbon atoms. Examples are methyl, ethyl, and the isomers of propyl, butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, decyl, dodecyl, tetradecyl, hexadecyl, octadecyl and eicosyl.
  • the alkyl is preferably linear and the alkyl is preferably methyl, ethyl, n-propyl and n-butyl. Alkyl very particularly preferably represents methyl.
  • R 1 and R 2 preferably contain 4 to 7 and particularly preferably 5 or 6 ring carbon atoms.
  • Examples of cycloalkyl are cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl and cyclooctyl. Cyclohexyl is particularly preferred.
  • R T and R 2 preferably contain 4 to 7 and particularly preferably 5 or 6 ring carbon atoms as cycloalkyl-alkyl, and preferably 1 to 4 and particularly preferably 1 or 2 carbon atoms in the aliphatic radical.
  • Examples of cycloalkyl-alkyl are
  • R, and R 2 can be, for example, CrC 4 alkyl-X1-C 2 -C 4 -alkyl as heteroalkyl, where X is O or NC-C 4 alkyl. Examples are methoxyethyl and ethoxyethyl.
  • Ri and R 2 may be, for example, pyrrolidinyl, piperidinyl, morpholinyl, tetrahydropyranyl or piperazinyl as heterocycloalkyl.
  • R T and R 2 can be, for example, pyrrolidinylmethyl or ethyl, piperidinylmethyl or -ethyl, morpholinylmethyl or -ethyl, tetrahydropyranylmethyl or -ethyl or piperazinylmethyl or -ethyl as heterocycloalkyl-alkyl.
  • R and R 2 can be, for example, thiophenyl, furanyl, pyranyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, indolyl, quinoiinyl, oxazolyl or isooxazolyl as heteroaryl.
  • Ri and R 2 can be, for example, furanylmethyl or ethyl,
  • a preferred group of compounds of formula III are those in which R ⁇ and R 2 are independently dC 4 alkyl, C 5 - or C 6 cycloalkyl, phenyl, CrC 4 alkylphenyl, benzyl or C 1 -C 4 -alkylbenzyl.
  • R and R 2 are preferably identical radicals.
  • R and R 2 very particularly preferably represent CC 4 alkyl, for example methyl or ethyl.
  • x is preferably an integer or fraction from 0.5 to 4, particularly preferably an integer or fraction from 0.5 to 3, and very particularly preferably an integer or fraction from 0.5 to 2.
  • the aromatic sulfonic acids can contain one to three, preferably one or two, and particularly preferably one sulfonic acid group. Sulfonic acids of hydrocarbon aromatics are preferred.
  • the aromatic sulfonic acids can be unsubstituted or with halogen, linear or branched C 1 -C 8 alkyl, preferably dC 4 alkyl, linear or branched C 1 -C 8 alkoxy, preferably CC alkoxy, and linear or branched CrC 8 haloalkyl, preferably -C-C 4 - Halogenalkyl be substituted.
  • substituents are methyl, ethyl, propyl, butyl, methoxy, ethoxy, trifluoromethyl or trichloromethyl, fluorine and chlorine.
  • the aromatic radical preferably contains a substituent. Among the aromatic groups, phenyl and naphthyl are preferred.
  • aromatic sulfonic acids particularly preferably correspond to the formula IV,
  • R 3 is phenyl, methylphenyl, fluorophenyl, chlorophenyl, trichloromethylphenyl and c trifluoromethylphenyl.
  • Particularly preferred compounds of the formula III are those in which R and R 2 are each methyl, x is 1 or 2 or a fractional number between 0.5 and 2, and HA is phenyl, toluyl, fluorine, chlorine or trifluoromethylphenyl - means sulfonic acid.
  • Substituted radicals are preferably p-tolyl, p-fluoro-, 10 p-chloro- or p-trifluoromethylphenyl.
  • Very particularly preferred compounds of the formula III are those in which R 1 and R 2 are each methyl, x is 1 or 2 or a fractional number between 0.5 and 2, and HA is phenyl- or p-toluenesulfonic acid.
  • the addition salts of the tetrahydrofolic acid esters used according to the invention are new and can be prepared, for example, by esterifying tetrahydrofolic acid in the presence of sulfonic acids, or by esterifying tetrahydrofolic acid salts in a polar organic solvent.
  • 10 tetrahydrofolic acid esters can then be converted into addition salts with sulfonic acids.
  • the hydrogenation can be carried out as described above with alcohol-soluble metal complexes of Ir, Rh or Ru and ditertiary diphosphines as hydrogenation catalysts.
  • the hydrogenation is carried out in an alcohol as a solvent and in the presence of a sulfonic acid
  • Mixtures understood that either contain equal amounts of diastereomers with (6S) and (6R) configuration or an excess of a diastereomer with (6S) or (6R) configuration. It is also possible to use mixtures of diastereomers (6S) and (6R) configurations which have either ( ⁇ S) or ( ⁇ R) configurations, or mixtures of diasteromer pairs 25 with (6S) and (6R) configurations and different ones Configuration on the ⁇ -C atom.
  • the mixtures can contain the (6S, ⁇ S) or (6S, ⁇ R) diastereomer in a proportion of at least 5, preferably at least 20, and particularly preferably at least 30 percent and up to about 75 percent or more.
  • Suitable organic solvents are polar organic solvents, preferably at least 1 g addition salt of a teterahydrofolic acid ester per liter Can dissolve solvents at boiling temperature.
  • solvents are halogenated hydrocarbon (methylene chloride, chloroform, tetrachloroethane, chlorobenzene); Ether (diethyl ether, dibutyl ether, tetrahydrofuran, dioxane, ethylene glycol dimethyl or diethyl ether); Carboxylic acid esters and lactones (methyl acetate, ethyl acetate, methyl propionate,
  • Valerolactone N, N-substituted carboxamides and lactams (dimethylformamide, dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone); Ketones (acetone, methyl isobutyl ketone, cyclohexanone); Sulfoxides and sulfones (dimethyl sulfoxide, dimethyl sulfone, tetramethylene sulfone); and alcohols (methanol, ethanol, n- or i-propanol, n-, i- or t-butanol, pentanol, hexanol, cyclohexanol, cyclohexanediol, hydroxymethyl- or dihydroxymethylcyclohexane, benzyl alcohol, ethylene glycol, diethylene glycol,
  • the process can be carried out, for example, by mixing equimolar or enriched mixtures of diastereomers from addition salts of tetrahydrofolic acid esters with aromatic sulfonic acids with a solvent and then heating the mixture to dissolve the addition salts of tetrahydrofolic acid esters and aromatic sulfonic acids.
  • the heating can be carried out up to the boiling point of the solvent.
  • the solution is then cooled to at most the fixed point of a solvent, the (6S, ⁇ S) or (6S, ⁇ R) diastereoisomer or both diastereomers either spontaneously or by inoculation with the desired diastereomer or by concentrating the solution crystallize out, and then can be separated in the usual way by filtration. It has proven to be a particular advantage that the reaction solutions of hydrogenating folate esters or hydrogenating addition salts of folate esters and aromatic sulfonic acids can also be used directly to prepare or enrich the addition salts of tetrahydrofolic acid esters with aromatic sulfonic acids.
  • the observed enrichment of the (6S, ⁇ S) or (6S, ⁇ R) diastereomers in the crystals is so high and the crystallizability of these isomers is so excellent that the process according to the invention can even be used to isolate (6S, ⁇ S) - or ( 6S, ⁇ R) -diastereomers from mother liquors, which predominantly contain (6R, ⁇ S) - or (6R, ⁇ R) -diastereomers.
  • the method according to the invention is outstandingly suitable for separation processes on an industrial scale.
  • the addition salts of (6S, ⁇ S) - or (6S, ⁇ R) - tetrahydrofolic acid esters with sulfonic acids obtained after the separation can then be hydrolyzed in a manner known per se, for example with bases such as NaOH or KOH.
  • bases such as NaOH or KOH.
  • the corresponding (6S, ⁇ S) or (6S, ⁇ R) tetrahydrofolic acids are accordingly obtained.
  • These tetrahydrofolic acids can be isolated in stable form as free acids by crystallization, as described for example in EP-A-0682 026.
  • acids for example sulfonic acids
  • the salts of tetrahydrofolic acids can also be crystallized and, if desired, further enriched (EP-0495204).
  • COD stands for cyclooctadiene.
  • Example A1 a Preparation of ( ⁇ S) -folic acid dimethyl ester benzenesulfonate 5,800 g of ( ⁇ S) -folic acid dihydrate (1.68 mmol) are dissolved in a solution at 40 ° C.
  • the substance decomposes above 150 ° C.
  • Example A2 The clear solution from Example A2 is cooled to room temperature and stirred overnight. The separated solid is filtered off, washed with methanol and tert-butyl methyl ether and dried at 30 ° C and 10 mbar. 9.62 g of colorless crystalline tetrahydrofolic acid dimethyl ester benzenesulfonate (15.24 mmol) are obtained with a (6S, ⁇ S) diastereomer fraction of 99.1%.
  • the mother liquor B1c can be used to prepare the (6R, ⁇ S) dimethyl tetrahydrofolic acid benzene sulfonate as described in Example B5.
  • 4 g (6.34 mmol) of the dimethyl tetrahydrofolic acid benzene sulfonate obtained with a proportion of the (6S, ⁇ S) diastereomer of 99.1% are dissolved in 220 ml of boiling methanol. The mixture is allowed to cool to room temperature, left to stand overnight and the solid which has separated off is filtered off with suction. It is washed with methanol and tert-butyl methyl ether and dried at 35 ° C. and 10 mbar.
  • Example A3 The solution obtained according to Example A3 is allowed to cool to room temperature and the solution is inoculated at 60 ° C. with diastereomerically pure (6S, ⁇ S) tetrahydrofluoric acid dimethyl ester benzenesulfonate. After standing overnight, the solid which has separated out is filtered off with suction, washed with methanol and tert-butyl methyl ether and dried at 35 ° C. and 10 mbar. 3.46 g (5.48 mmol) of dimethyl tetrahydrofolic acid benzenesulfonate are obtained with a (6S, ⁇ S) -diastereomer fraction of 99.9%.

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Abstract

Verfahren zur Herstellung und Anreicherung von (6S, alpha S)- oder (6S, alpha R)-Tetrahydrofolsäureestersalzen und -Tetrahydrofolsäure, dadurch gekennzeichnet, dass man in organischen Lösungsmitteln äquimolare oder angereicherte Mischungen von Diastereomeren von Additionssalze von Tetrahydrofolsäureestern mit aromatischen Sulfonsäuren herstellt oder löst, anschliessend wenigstens einmal kristallisiert, und dann das Kristallisat gegebenenfalls zu (6S, alpha S)- oder (6S, alpha R)-Tetrahydrofolsäure hydrolysiert, diese als freie Säure kristallisiert oder in Form eines Salzes isoliert.

Description

Verfahren zur Herstellung reiner Stereoisomeren von Tetrahydrofolsäure- estersalzen und Tetrahydrofolsaure durch fraktionierte Kristallisation von Tetrahydrofolsäureestersalzen
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung und Anreicherung von (6S,αS)- oder (6S,αR)-Tetrahydrofolsäureestersalzen und -Tetrahydrofolsaure, indem man in einem organischen Lösungsmittel äquimolare oder angereicherte Mischungen von Diastereomeren von Additionssalzen von Tetra- hydrofolsäureestern mit aromatischen Sulfonsäuren herstellt oder löst, an- schliessend wenigstens einmal kristallisiert, und diese gegebenenfalls zu (6S,αS)- beziehungsweise (6S,αR)-Tetrahydrofolsäure hydrolysiert und diese als frei Säure kristallisiert oder in Form ihrer Salze isoliert. Aus den Mutterlaugen können die Additionssalze der (6R,αS)- beziehungsweise (6R,αR)-Tetrahydrofolsäureester mit den entsprechenden Sulfonsäuren isoliert und durch Hydrolyse die entsprechenden Tetrahydrofolsäuren oder deren Salze erhalten werden.
Folsäure entspricht der Formel I,
Figure imgf000002_0001
wobei das asymmetrische α-C-Atom im Glutamiπsäurerest in der S-Konfiguration (αS) oder in der R-Konfiguration (αR) vorliegen kann. Die Enantiomeren der Folsäure wer- den nachfolgend als (αS)-Folsäure und (αR)-Folsäure bezeichnet. Das Gleiche gilt für die Folsäureester und ihre Derivate. Sie werden als (αS)-Folsäureester und (αR)-Folsäureester bezeichnet. Die natürlich vorkommende Folsäure entspricht der (αS)-Folsäure.
Tetrahydrofolsaure entspricht der Formel II,
Figure imgf000003_0001
wobei das asymmetrische α-C-Atom im Glutamiπsäurerest in der S-Konfiguration (αS) oder in der R-Konfiguration (αR) vorliegen kann und das asymmetrische C-Atom 6 im Tetrahydropterinrest in der S-Konfiguration (6S) oder R-Konfiguration (6R) vorliegen kann. Die Diastereomeren der Tetrahydrofolsaure werden nachfolgend als (6S,αS)-, (6S,αR)-, (6R,αS)- und (6R,αR)- Tetrahydrofolsäure bezeichnet. Das Gleiche gilt für die Tetrahydrofolsäureester und ihre Derivate. Sie werden als (6S,αS)-, (6S,αR)-, (6R,αS)- und (6R,αR)- Tetrahydrofolsäureester bezeichnet. Die natürlich vorkommende Tetrahydrofolsaure entspricht der (6S,αS)-Tetrahydrofolsäure.
Im Folgenden beinhaltet die Bezeichnung Folsäure, Folsäureester und Fol- säureestersalze, falls nicht anderweitig bezeichnet, immer die beiden Enantio- meren (αS) und (αR) und die Bezeichnung Tetrahydrofolsaure, Tetrahydrofolsäureester und Tetrahydrofolsäureestersalze alle möglichen Diastereomeren.
Tetrahydrofolsaure hat in Form von 5-Formyl- oder 5-Methylderivaten und ihren physiologisch verträglichen Salzen eine breite therapeutische Anwendung gefunden. Es ist seit langem bekannt, dass die biologische Aktivität der natürlich vorkommenden Diastereomeren der reduzierten Folate, z. B. der (6S,αS)- Tetrahydrofolsäure, bei weitem am Stärksten ist. Es ist daher zweckmässig, therapeutische Präparate bereitzustellen, in dem nur die aktivste Form enthalten oder diese zumindest hoch angereichert ist.
Tetrahydrofolsaure wird industriell im allgemeinen durch heterogene Hydrierung der beiden Imingruppen im Pteringerüst von (αS)-Folsäure hergestellt, wobei man üblicherweise ein äquimolares Gemisch aus (6S,αS)- und (6R,αS)-Tetra- hydrofolsäure erhält. Das äquimolare Gemisch kann für pharmazeutische Zubereitungen verwendet werden. Man kann aber auch zuvor das gewünschte (6S,αS)-Diastereomere der Tetrahydrofolsaure durch fraktionierte Kristallisation anreichern oder in reiner Form gewinnen, wofür verschiedene Verfahren bekannt sind, siehe zum Beispiel EP-0495204.
Das in der EP-0495204 beschriebene Verfahren verwendet die äquimolaren Mischungen von (6S,αS)- und (6R,αS)-Diastereomereπ der Tetrahydrofolsäuresul- fonsäuresalze, die in Wasser gelöst und dann kristallisiert werden. Dieses Verfahren führt zur Anreicherung des gewünschten (6S,αS)-Diastereomeren, wobei man bereits im ersten Kristallisationsschritt sehr hohe Anreicherungen erzielen (bis etwa 95%) und durch eine weitere fraktionierte Kristallisation reine (6S,αS)- Tetrahydrofolsäure erhalten kann. Dieses Verfahren kann unter anderem aus ökonomischer Sicht insofern nicht überzeugen, als die zur Salzbildung verwendeten Sulfonsäuren nur mit hohem Aufwand aus wässrigen Mutterlaugen abtrennbar sind, und daher die Entsorgung grosser Volumina sulfonsäurehaltiger Mutterlaugen vorgenommen werden muss, was wirtschaftlich ungünstig ist.
In der EP-0682 026 wird die Herstellung von stabiler kristalliner (6S,αS)- und (6R,αS)-Tetrahydrofolsäure durch Kristallisation aus einem wässrigen Medium bei bestimmten pH-Werten beschrieben. Die Anreicherungen bei den fraktionierten Kristallisationen sind jedoch so niedrig, dass mehrere Schritte für eine Anreicherung des gewünschten Diastereomeren auf über 99.5% nötig sind. Damit verbunden sind grosse Substanzverluste und die Gefahr der Bildung chemischer Abbauprodukte. Speziell aufwändig nach diesem Verfahren ist die Anreicherung von unnatürlichen Isomeren.
Es wurde nun überraschend gefunden, dass sich aromatische Sulfonsäuresalze (Additionssalze) der Tetrahydrofolsäureester hervorragend zur Herstellung von optisch reinen Diastereomeren der Tetrahydrofolsaure eignen, da nur die Additionssalze des (6S,αS)- oder (6S,αR)-Diastereomeren aus organischen Lösungsmitteln auskristallisieren. Ausgehend von einem 70:30 Isomerengemisch wird schon bei einer ersten Kristallisation eine ungewöhnlich hohe Anreicherung des (6S,αS)- beziehungsweise (6S,αR)-Diastereomeren oder deren Mischungen im Kristallisat, und des (6R,αS)- beziehungsweise (6R,αR)-Diastereomeren oder deren Mischungen in der Mutterlauge erzielt, die über 99% liegen kann. Mit einer weiteren Kristallisation kann man dann meistens die optisch reinen Diastereomeren erhalten.
Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung und Anreicherung von (6S,αS)- oder (6S,αR)-Tetrahydrofolsäureestersalzen und -Tetrahydrofolsaure, das dadurch gekennzeichnet ist, dass man in organischen Lösungsmitteln äquimolare oder angereicherte Mischungen von Diastereomeren von Additionssalze von Tetrahydrofolsäureestern mit aromatischen Sulfonsäuren herstellt oder löst, anschliessend wenigstens einmal kristallisiert, und dann das Kristallisat gegebenenfalls zu (6S,αS)- oder (6S,αR)-Tetrahydrofolsäure hydroly- siert, diese als freie Säure kristallisiert oder in Form eines Salzes isoliert.
Wenigstens einmal Kristallisieren bedeutet im Rahmen der Erfindung eine fraktionierte Kristallisation bis zur gewünschten Reinheit. Die Anzahl der Kristallisationsschritte richtet sich hierbei hauptsächlich nach dem Gehalt des oder der ge- wünschten Diastereomeren im Ausgangsprodukt.
Die Additionssalze der Tetrahydrofolsäureester können der Formel III entsprechen und umfassen die (6S,αS)-, (6S,αR)-, (6R,αS)- und (6R,αR)-Diastereomeren,
Figure imgf000005_0001
worin RT oder R H sind, und eines von ^ oder R2, oder beide Ri und R2 unabhängig voneinander einen monovalenten Kohlenwasserstoffrest oder einen über ein C-Atom gebundenen Heterokohlenwasserstoffrest mit Heteroatomen ausgewählt aus der Gruppe -O-, -S- und -N- darstellen, HA für eine aromatische Sulfonsäure steht, und x eine ganze Zahl von 1 bis 6 oder eine gebrochene Zahl zwischen 0 bis 6 bedeutet. R! und R2 können unabhängig voneinander gewählt werden, bevorzugt sind sie aber identisch. Bevorzugt stellen R^ und R2 einen Kohlenwasserstoffrest dar. Bei RT und R2 als Kohlenwasserstoffrest kann es sich um aliphatische Reste mit 1 bis 20, bevorzugt 1 bis 12, besonders bevorzugt 1 bis 8, und insbesondere bevorzugt 1 bis 4 C-Atome, um cycloaliphatische oder cycloaliphatisch-aliphatische Reste mit 3 bis 8 Ringkohlenstoffatomen und 1 bis 6 C-Atomen im aliphatischen Rest, um aromatische Kohlenwasserstoff reste mit 6 bis 14 C-Atomen, besonders bevorzugt 6 bis 10 C-Atomen, oder um aromatisch-aliphatische Reste mit 7 bis
15 C-Atomen, besonders bevorzugt 7 bis 10 C-Atomen handeln.
Bei dem Heterokohlenwasserstoffrest kann es sich um Heteroalkyl mit 2 bis
16 C-Atomen, bevorzugt 2 bis 10 C-Atomen, und besonders bevorzugt 2 bis 6 C-Atomen, um heterocycloaliphatische Reste mit 3 bis 8, bevorzugt 5 oder 6 Ringgliedern, um heterocycloaliphatisch-aliphatische Reste mit 3 bis 8, bevorzugt 5 oder 6 Ringgliedern, und 1 bis 6, bevorzugt 1 bis 4 C-Atomen im ali- phatischen Rest, um heteroaromatische Reste mit bevorzugt 4 bis 13 C-Atomen, und besonders bevorzugt 4 bis 9 C-Atomen und wenigstens einem Heteroatom, und um heteroaromatisch-aliphatische Reste mit bevorzugt 4 bis 13 C-Atomen, und besonders bevorzugt 4 bis 9 C-Atomen und wenigstens einem Heteroatom, und 1 bis 6, bevorzugt 1 bis 4 C-Atomen im aliphatischen Rest handeln, wobei die Heteroreste wenigstens ein Heteroatom ausgewählt aus der Gruppe -O-, -S- und -N- und bevorzugt -O- und -N- enthalten.
Die Kohlenwasserstoff reste können zum Beispiel ausgewählt sein aus der Gruppe lineares und verzweigtes Cι-C20-Alkyl, C3-C8- und bevorzugt C -C7-Cycloalkyl, Cs-Cβ-Cycloalkyl-d-Ce-Alkyl und bevorzugt C -C7-Cycloalkyl-Cι-C4-Alkyl, C6-C10- Aryl oder C7-Cι2-Aralkyl.
Die Heterokohlenwasserstoffreste können zum Beispiel ausgewählt sein aus der
Gruppe C2-Cι6-Heteroalkyl, C2-C7- und bevorzugt C4-C5-Heterocycloalkyl, C4-C7- und bevorzugt C4-C5-Heterocycloalkyl-C1-C6-Alkyl , C4-C9- und bevorzugt C -C5-
Heteroaryl, und C5-Cι2- und bevorzugt C5-C10-Heteroaralkyl, wobei die Heteroreste
1 bis 3 und bevorzugt 1 oder 2 Heteroatome aus der Gruppe -O- und -N- enthalten. Ri und R2 können lineares oder verzweigtes Alkyl sein, das bevorzugt 1 bis 12, bevorzugter 1 bis 8, und besonders bevorzugt 1 bis 4 C-Atome enthält. Beispiele sind Methyl, Ethyl, und die Isomeren von Propyl, Butyl, Pentyl, Hexyl, Heptyl, Octyl, Decyl, Dodecyl, Tetradecyl, Hexadecyl, Octadecyl und Eicosyl. Bevorzugt ist das Alkyl linear und bevorzugt ist das Alkyl Methyl, Ethyl, n-Propyl und n-Butyl. Ganz besonders bevorzugt steht Alkyl für Methyl.
Ri und R2 enthalten als Cycloalkyl bevorzugt 4 bis 7 und besonders bevorzugt 5 oder 6 Ringkohlenstoffatome. Beispiele für Cycloalkyl sind Cyclopropyl, Cyclo- butyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl, Cycloheptyl und Cyclooctyl. Besonders bevorzugt ist Cyclohexyl.
RT und R2 enthalten als Cycloalkyl-alkyl bevorzugt 4 bis 7 und besonders bevorzugt 5 oder 6 Ringkohlenstoffatome, und bevorzugt 1 bis 4 und besonders bevor- zugt 1 oder 2 C-Atome im aliphatischen Rest. Beispiele für Cycloalkyl-alkyl sind
Cyclopropylmethyl oder -ethyl, Cyclobutylmethyl oder -propyl, Cyclopentylmethyl oder -ethyl, Cyclohexylmethyl oder -ethyl, Cycloheptylmethyl und Cyclooctyl- methyl. Besonders bevorzugt ist Cyclohexylmethyl oder -ethyl.
R-, und R2 können als Aryl für Naphthyl und bevorzugt für Phenyl stehen. R und R2 sind als Aralkyl bevorzugt Phenylalkyl mit bevorzugt 1 bis 4 C-Atomen im Alkyl. Beispiele sind Benzyl und ß-Phenylethyl.
R, und R2 können als Heteroalkyl zum Beispiel CrC4-Alkyl-X1-C2-C4-alkyl sein, worin X für O oder NCι-C4-Alkyl steht. Beispiele sind Methoxyethyl und Ethoxy- ethyl.
Ri und R2 können als Heterocycloalkyl zum Beispiel Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Morpholinyl, Tetrahydropyranyl oder Piperazinyl sein.
RT und R2 können als Heterocycloalkyl-alkyl zum Beispiel Pyrrolidinylmethyl oder - ethyl, Piperidinylmethyl oder -ethyl, Morpholinylmethyl oder -ethyl, Tetrahydro- pyranylmethyl oder -ethyl oder Piperazinylmethyl oder -ethyl sein. R-, und R2 können als Heteroaryl zum Beispiel Thiophenyl, Furanyl, Pyranyl, Pyrrolyl, Imidazolyl, Pyridinyl, Pyrimidinyl, Pyrazinyl, Indolyl, Chinoiinyl, Oxazolyl oder Isooxazolyl sein.
Ri und R2 können als Heteroaralkyl zum Beispiel Furanylmethyl oder -ethyl,
Pyranylmethyl oder -ethyl, Pyrrolylmethyl oder -ethyl, Imidazolylmethyl oder -ethyl,
Pyridinylmethyl oder -ethyl, Pyrimidinylmethyl oder -ethyl, Pyrazinylm ethyl oder
-ethyl, Indolylmethyl oder -ethyl, Chinolinylmethyl oder -ethyl sein.
Eine bevorzugte Gruppe von Verbindungen der Formel III sind solche, worin R^ und R2 unabhängig voneinander d-C4-Alkyl, C5- oder C6-Cycloalkyl, Phenyl, CrC4-Alkylphenyl, Benzyl oder Cι-C -Alkylbenzyl darstellen. Bevorzugt sind R und R2 gleiche Reste. Ganz besonders bevorzugt stellen R und R2 C C4-Alkyl dar, zum Beispiel Methyl oder Ethyl.
In Formel III bedeutet x bevorzugt eine ganze oder gebrochene Zahl von 0.5 bis 4, besonders bevorzugt eine ganze oder gebrochene Zahl von 0.5 bis 3, und ganz besonders bevorzugt eine ganze oder gebrochene Zahl von 0.5 bis 2.
Die aromatischen Sulfonsäuren können eine bis drei, bevorzugt ein oder zwei, und besonders bevorzugt eine Sulfonsäuregruppe enthalten. Bevorzugt sind Sulfonsäuren von Kohlenwasserstoffaromaten. Die aromatischen Sulfonsäuren können unsubstituiert oder mit Halogen, linearem oder verzweigten Cι-C8-Alkyl, bevorzugt d-C4-Alkyl, linearem oder verzweigten Cι-C8-Alkoxy, bevorzugt C C - Alkoxy, und linearem oder verzweigten CrC8-Halogenalkyl, bevorzugt Cι-C4- Halogenalkyl substituiert sein. Einige Beispiele für Substituenten sind Methyl, Ethyl, Propyl, Butyl, Methoxy, Ethoxy, Trifluor- oder Trichlormethyl, Fluor und Chlor. Bevorzugt enthält der aromatische Rest einen Substituenten. Unter den aromatischen Gruppen sind Phenyl und Naphthyl bevorzugt.
Die aromatischen Sulfonsäuren entsprechen besonders bevorzugt der Formel IV,
R3-SO3H (IV), worin R3 unsubstituiertes oder mit F, Cl, Br, CrC -Alkyl, d-C -Halogenalkyl oder d-C -Alkoxy substituiertes Phenyl darstellt. Einige spezifische Beispiele für R3 sind Phenyl, Methylphenyl, Fluorphenyl, Chlorphenyl, Trichlormethylphenyl und c Trifluormethylphenyl. o
Besonders bevorzugte Verbindungen der Formel III sind solche, worin R, und R2 je Methyl darstellen, x für 1 oder 2 oder für eine gebrochene Zahl zwischen 0.5 und 2 steht, und HA Phenyl-, Toluyl-, Fluor-, Chlor- oder Trifluormethylphenyl- sulfonsäure bedeutet. Substituierte Reste sind bevorzugt p-Toluyl-, p-Fluor-, 10 p-Chlor- oder p-Trifluormethylphenyl.
Ganz besonders bevorzugte Verbindungen der Formel III sind solche, worin R^ und R2 je Methyl darstellen, x für 1 oder 2 oder für eine gebrochene Zahl zwischen 0.5 und 2 steht, und HA Phenyl- oder p-Toluylsulfonsäure bedeutet.
15
Die erfindungsgemass verwendeten Additionssalze der Tetrahydrofolsäureester sind neu und können zum Beispiel durch Veresterung von Tetrahydrofolsaure in Gegenwart von Sulfonsäuren, oder durch Veresterung von Tetrahydrofol- säuresalzen in einem polaren organischen Lösungsmittel hergestellt werden.
20 Man kann auch von Folsäure ausgehen, und diese in an sich bekannter Weise in Gegenwart von heterogenen oder homogenen Hydrierkatalysatoren mit Wasserstoff hydrieren. Die Hydrierung kann auch diastereoselektiv geführt werden, wenn man in einem polaren Reaktionsmedium, zum Beispiel einem wässrigen oder alkoholischen Reaktionsmedium, in Gegenwart von im Reaktionsmedium lös- 25 liehen chiralen Hydrierkatalysatoren mit Wasserstoff hydriert. Geeignete Hydrierkatalysatoren sind bekannt. Es handelt sich insbesondere um Metallkomplexe von Rh, Ir oder Ru mit ditertiären Diphosphinen, wie sie zum Beispiel von H. Brunner und W. Zettlmeier, Handbook of Enantioselective Catalysis, Vol. II: Ligand References, VCH Verlagsgesellschaft mbH Weinheim (1993), beschrieben werden. Die erhaltene Tetrahydrofolsaure kann in an sich bekannter Weise an¬
30 schliessend verestert werden. Wenn die Hydrierung in einem Alkohol als Lösungsmittel und in Gegenwart einer Sulfonsäure unter Reaktionsbedingungen erfolgt, die zu einer Veresterung der Folsäure führen, gelangt man direkt zu den Additionssalzen aus den entsprechenden Tetrahydrofolsäureestern und Sulfonsäuren.
_. Man kann aber auch von Folsäureestem ausgehen, und diese in an sich be- o kannter Weise in Gegenwart von heterogenen oder homogenen Hydrierkatalysatoren mit Wasserstoff hydrieren. Die Hydrierung kann auch diastereoselektiv geführt werden, wenn man in einem polaren Reaktionsmedium, zum Beispiel einem alkoholischen Reaktionsmedium, in Gegenwart von im Reaktionsmedium löslichen chiralen Hydrierkatalysatoren mit Wasserstoff hydriert. Die erhaltenen
10 Tetrahydrofolsäureester können anschliessend mit Sulfonsäuren in Additionssalze übergeführt werden. Die Hydrierung kann wie zuvor beschrieben mit in Alkoholen löslichen Metallkomplexen aus Ir, Rh oder Ru und ditertiären Diphosphinen als Hydrierkatalysatoren durchgeführt werden. Wenn die Hydrierung in einem Alkohol als Lösungsmittel und in Gegenwart einer Sulfonsäure durchgeführt wird, gelangt
-J5 man direkt zu den Additionssalzen aus den entsprechenden Tetrahydrofolsäureestern und Sulfonsäuren. Verwendet man für die Hydrierung Additionssalze aus Folsäureestem mit Sulfonsäuren, so gelangt man ebenfalls direkt zu den Additionssalzen von Tetrahydrofolsäureestern und Sulfonsäuren.
Unter äquimolaren oder angereicherten Mischungen werden im Rahmen der Er¬
20 findung Mischungen verstanden, die entweder gleiche Mengen von Diastereomeren mit (6S)- und (6R)-Konfiguration oder einen Überschuss eines Diastereomeren mit (6S)- oder (6R)-Konfiguration enthalten. Man kann auch Mischungen von Diastereomeren (6S)- und (6R)-Konfiguration einsetzen, die entweder (αS)- oder (αR)-Koπfiguration aufweisen, oder Mischungen von Diasteromerenpaaren 25 mit (6S)- und (6R)-Konfiguration und unterschiedlicher Konfiguration am α-C-Atom. Die Mischungen können das (6S,αS)- beziehungsweise (6S,αR)-Dia- stereomere in einem Anteil von wenigstens 5, bevorzugt wenigstens 20, und besonders bevorzugt wenigstens 30 Prozent und bis zu etwa 75 Prozent oder mehr enthalten.
30
Geeignete organische Lösungsmittel sind polare organische Lösungsmittel, die bevorzugt wenigstens 1 g Additionssalz eines Teterahydrofolsäureesters pro Liter Lösungsmittel bei Siedetemperatur zu lösen vermögen. Beispiele für Lösungsmittel sind Halogenkohlenwasserstoff (Methylenchlorid, Chloroform, Tetra- chlorethan, Chlorbenzol); Ether (Diethylether, Dibutylether, Tetrahydrofuran, Dioxan, Ethylenglykoldimethyl- oder -diethylether); Carbonsäureester und Lactone (Essigsäuremethylester, Essigsäureethylester, Propionsäuremethylester,
Valerolacton); N,N-substituierte Carbonsäureamide und Lactame (Dimethylform- amid, Dimethylacetamid, N-Methylpyrrolidon); Ketone (Aceton, Methylisobutyl- keton, Cyclohexanon); Sulfoxide und Sulfone (Dimethylsulfoxid, Dimethylsulfon, Tetramethylensulfon); und Alkohole (Methanol, Ethanol, n- oder i-Propanol, n-, i- oder t-Butanol, Pentanol, Hexanol, Cyclohexanol, Cyclohexandiol, Hydroxymethyl- oder Dihydroxymethylcyclohexan, Benzylalkohol, Ethylenglykol, Diethylenglykol,
Propandiol, Butandiol, Ethylenglykolmonomethyl- oder -monoethylether, und Diethylenglykolmonomethyl- oder -monoethylether. Bevorzugt sind Ethanol und besonders Methanol. Es können auch Gemische von wenigstens zwei Lösungsmitteln verwendet werden.
Besonders bevorzugt werden Alkohole oder Mischungen aus Alkoholen mit wenigstens einem weiteren Lösungsmittel verwendet. Der Anteil an einem Alkohol beträgt bevorzugt wenigstens 30, besonders bevorzugt wenigstens 50 und insbesondere wenigstens 70 Volumenprozent. Ganz besonders bevorzugt wird nur Alkohol, zum Beispiel Methanol, oder Mischungen von Alkohol mit alkoholmischbaren Lösungsmitteln, zum Beispiel Methanol mit Ethern verwendet.
Im Einzelnen kann das Verfahren zum Beispiel so durchgeführt werden, dass man äquimolare oder angereicherte Mischungen von Diastereomeren aus Additionssalzen von Tetrahydrofolsäureestern mit aromatischen Sulfonsäuren mit einem Lösungsmittel mischt und anschliessend das Gemisch zur Lösung der Additionssalze von Tetrahydrofolsäureestern und aromatischen Sulfonsäuren erwärmt. Die Erwärmung kann bis zur Siedetemperatur des Lösungsmittels vorgenommen werden. Danach kühlt man die Lösung bis höchstens zum Festpunkt eines Lösungsmittels ab, wobei das (6S,αS)- oder (6S,αR)-Diastereomere oder beide Diastereomeren entweder spontan, oder durch Animpfen mit dem oder den gewünschten Diastereomeren, oder durch Einengen der Lösung auskristallisieren, und dann in üblicher Weise mittels Filtration abgetrennt werden können. Es hat sich als besonderer Vorteil erwiesen, dass man zur Herstellung oder Anreicherung der Additionssalze von Tetrahydrofolsäureestern mit aromatischen Sulfonsäuren auch direkt die Reaktionslösungen der Hydrierung von Folsäure- estern, oder der Hydrierung von Additionssalzen von Folsäureestem und aromatischen Sulfonsäuren verwenden kann.
Ausgehend von einem 70:30 Isomerengemisch wird bei der ersten Kristallisation bereits eine ausserordentlich hohe Anreicherung beobachtet, die zum Beispiel völlig überraschend bis zu über 99% betragen kann. Um die reinen (6S,αS)- oder (6S,αR)-Diastereomeren herzustellen, bedarf es in der Folge nur noch weniger, zum Beispiel bis zu drei, überraschend oft nur noch eines einzigen Kristallisationsschrittes.
Die beobachtete Anreicherung der (6S,αS)- beziehungsweise (6S,αR)-Dia- stereomeren im Kristallisat ist so hoch und die Kristallisationsfähigkeit dieser Isomeren so ausgezeichnet, dass man das erfindungsgemässe Verfahren sogar zur Isolierung von (6S,αS)- oder (6S,αR)-Diastereomeren aus Mutterlaugen einsetzen kann, die überwiegend (6R,αS)- oder (6R,αR)-Diastereomere enthalten. Die erfindungsgemässe Methode eignet sich hervorragend für Trennverfahren im industriellen Massstab.
Die nach der Trennung erhaltenen Additionssalze von (6S,αS)- oder (6S,αR)- Tetrahydrofolsäureester mit Sulfonsäuren können anschliessend in an sich bekannter Weise hydrolysiert werden, zum Beispiel mit Basen wie NaOH oder KOH. Man erhält demnach die entsprechenden (6S,αS)- oder (6S,αR)-Tetra- hydrofolsäuren. Diese Tetrahydrofolsäuren können in stabiler Form als freie Säuren durch Kristallisation isoliert werden, wie es zum Beispiel in der EP-A-0682 026 beschrieben ist. Durch Zugabe von Säuren, zum Beispiel Sulfonsäuren, können die Salze der Tetrahydrofolsäuren ebenfalls kristallisiert und gewünschtenfalls weiter angereichert werden (EP-0495204).
Die folgenden Beispiele können mit ähnlichem Erfolg durchgeführt werden durch Ersetzen der generisch oder spezifisch beschriebenen Reaktanden und/oder Verfahrensbedingungen dieser Erfindung durch solche die in den folgenden Beispielen aufgeführt sind. Ebenso sind die folgenden spezifischen Ausführungsformen rein beispielhaft und in keiner Art und Weise limitierend auf den Rest der Offenbarung zu sehen. c Die gesamte Offenbarung aller Anmeldungen, Patente und Publikationen, die in o diesem Text zitiert sind, sind durch Referenz miteingeschlossen. Auf Basis der vorangehenden Beschreibung kann ein Fachmann auf dem Gebiet ohne Weiteres die entscheidenden Elemente der Erfindung entnehmen und ohne vom Grundgedanken und vom Umfang der Erfindung abzuweichen, Änderungen und Ergänzungen anbringen und dadurch die Erfindung an unterschiedliche 10 Bedürfnisse und Bedingungen anpassen.
Die folgenden Abkürzungen werden verwendet:
Figure imgf000013_0001
(R-BINAP) (2S.4S-BPPM)
20 und COD steht für Cyclooctadien.
Die optische Ausbeute beziehungsweise das Verhältnis von (6S,αS)- zum (6R,αS)-Diastereomeren bzw. des (6S,αR)- zum (6R,αR)-Diastereomeren wird folgendermassen mittels Hochdruckflüssigkeitschromatographie direkt im Kristalli- 25 sat oder in der Mutterlauge bestimmt:
0.5 mg des Kristallisates oder 15 mg der Mutterlauge werden in 1 ml Lösungsmittel gelöst, welches aus 6.8 g ß-Cyclodextrin und 270 ml 37% Formaldehyd in 1000 ml Wasser hergestellt wird. Die Trennung erfolgt mittels einer Säule Nucleosil C-8, 5 mm, 240 x 4 mm der Firma Macherey-Nagel und einem Fliessmittel, das folgendermassen hergestellt wird: 6.8 g ß-Cyclodextrin werden in
30 einer Mischung aus 8.5 ml Triethylamin, 850 ml Wasser und 150 ml Acetonitril gelöst. Der pH-Wert der Lösung wird durch Zugabe von Essigsäure auf pH = 7.5 eingestellt, und es werden noch 270 ml 37% Formaldehyd zugegeben. Die Detek- tion der Diastereomeren erfolgt bei einer Wellenlänge von 300 nm.
Die Herstellung und Anreicherung sowie der Transfer von Lösungen und Suspensionen erfolgt unter Ausschluss von Sauerstoff unter Verwendung von Schutzgasen wie zum Beispiel Stickstoff oder Edelgasen.
Beispiele
0 A Herstellung von Lösungen von Additionssalzen aus Tetrahydrofolsäureestern und Sulfonsäuren
Beispiel A1 a Herstellung von (αS)-Folsäuredimethylester-benzolsulfonat 5 800 g (αS)-Folsäure-dihydrat (1.68 mmol) werden bei 40°C in eine Lösung aus
530 g Benzolsulfonsäure (3.35 mmol) und 20 Litern wasserfreiem Methanol unter einer Stickstoffatmosphäre eingetragen. Das Gemisch wird eine halbe Stunde unter Rückfluss erhitzt, abgekühlt und auf ein Volumen von 5 Litern eingeengt. Das abgeschiedene Produkt wird abgenutscht, mit 1 Liter Methanol gewaschen und im Trockenschrank bei 40°C und 20 mbar getrocknet. Man erhält 966 g (αS)- 0 Folsäuredimethylester-benzolsulfonat (1.45 mmol, 86% der theoretischen Ausbeute) Das Produkt enthält 26.2% Benzolsulfonsäure, 1.67% Wasser und 2.26% Methanol.
Die Substanz zersetzt sich oberhalb von 150°C. 1H-NMR in DMSO-d6: 8.78 (1 H, s), 8.46 (2H, bs), 8.32 (1H, d), 7.64-7.68 (m), 5 7.35-7.40 (m), 6.66 (2H, d), 0.8 (2H, s), 4.39 (1H, m), 3.62 (3H, s), 3.57 (3H, s),
2.42 (2H, m), 1.98-2.11 (2H, m).
b Herstellung einer Lösung eines (6S,oS)/(6R,αS)-Diastereomerenge- misches von Tetrahydrofolsäuredimethylester-benzolsulfonat durch Hydrie- o rung von (αS)-Folsäuredimethylester-benzolsulfonat
6.72 mg [lr(COD)CI]2 (10 μmol) und 15.57 mg (25 μmol) R-BINAP werden eingewogen, entgast und in Dichlormethan gelöst. Dichlormethan wird im Hochvakuum abkondensiert und der Rückstand in 5 ml Methanol aufgenommen. 1.25 g (αS)- Folsäuredimethylester-benzolsulfonat gemäss Beispiel A1 a (2 mmol) werden in 25 ml Methanol suspendiert und zum Katalysator gegeben. Die Suspension wird im Stickstoffgegenstrom in einen 100 ml Autoklaven gegeben und so lange hydriert, bis keine Wasserstoffaufnahme mehr erfolgt. COD steht für Cyclo- octadien. Man erhält Tetrahydrofolsäuredimethylester-benzolsulfonat. Das Verhältnis der Diastereomeren (6S,αS):(6R,αS) beträgt 74:26.
c Herstellung einer Lösung eines (6S,αS)/(6R,αS)-Diastereomerenge- misches von Tetrahydrofolsäuredimethylester-benzolsulfonat mit einem Überschuss des (6R,αS)-Diastereomers durch Hydrierung von (αS)-Folsäuredimethylester-benzolsulfonat
6.72 mg [lr(COD)CI]2 (10 μmol) und 13.84 mg (25 μmol) (2S,4S)-BPPM werden eingewogen, entgast und in Dichlormethan gelöst. Dichlormethan wird im Hochvakuum abkondensiert und der Rückstand in 5 ml Methanol aufgenommen. 1.25 g (αS)-Folsäuredimethylester-benzolsulfonat gemäss Beispiel A1a (2 mmol) werden in 25 ml Methanol suspendiert und zum Katalysator gegeben. Die Suspension wird im Stickstoffgegenstrom in einen 100 ml Autoklaven gegeben und während 17 Stunden hydriert. Man erhält Tetrahydrofolsäuredimethylester-benzolsulfonat. Das Verhältnis der Diastereomeren (6S,αS):(6R,αS) beträgt 34:66.
Beispiel A2
Herstellung einer Lösung eines äquimolaren (6S,αS)/(6R,αS)-Diastereo- merengemisches von Tetrahydrofolsäuredimethylester-benzolsulfonat durch Veresterung von Tetrahydrofolsaure 20 g einer äquimolaren Mischung von (6S,αS)- und (6R,αS)-Tetrahydrofolsäure (44.9 mmol) werden in 900 ml Methanol mit 10.65 g Benzolsulfonsäure (67.35 mmol) versetzt und 7 Stunden unter Rückfluss erhitzt. Es entsteht eine Lösung von (6S,αS)- und (6R,αS)-Tetrahydrofolsäuredimethylester-benzol- sulfonat. Beispiel A3
Herstellung einer Lösung eines (6S,αS)/(6R,αS)-Diastereomerengemisches von 70:30 von Tetrahydrofolsäuredimethylester-benzolsulfonat durch Veresterung von Tetrahydrofolsaure mit einem (6S,αS)/(6R,αS)-Diastereo- merenverhältnis von 70:30
5.31 g Tetrahydrofolsaure (11.92 mmol) mit einem Diastereomerenverhältnis von (6S,αS):(6R,αS) = 70:30 (hergestellt nach EP 0 495 204 B1) werden in 230 ml Methanol mit 2.83 g Benzolsulfonsäure (17.88 mmol) 7 Stunden unter Rückfluss erhitzt. Man erhält eine Lösung von Tetrahydrofolsäuredimethylester-benzol- sulfonat mit einem Diastereomerenverhältnis von (6S,αS):(6R,αS) = 70:30.
Beispiel A4
Herstellung einer äquimolaren Lösung der Diastereomeren von (6S,αS)- und
(6R,αS)-Tetrahydrofolsäuredimethylester-toluolsulfonat 10 g einer äquimolaren Mischung von (6S,αS)- und (6R,αS)-Tetrahydrofolsäure
(22.45 mmol) werden in 450 ml Methanol mit 6.41 g Toluolsulfonsäure-mono- hydrat (33.67 mmol) versetzt und 7 Stunden unter Rückfluss erhitzt. Man erhält eine Lösung von Tetrahydrofolsäuredimethylester-toluolsulfonat mit einem Diastereomerenverhältnis von (6S,αS):(6R,αS) = 1 :1.
Beispiel A5
Herstellung einer äquimolaren Lösung von Diastereomeren des (6S,αS)- und
(6R,αS)-Tetrahydrofolsäuredimethylester-naphthalin-1-sulfonates
3 g einer äquimolaren Mischung von (6S,αS)- und (6R,αS)-Tetrahydrofolsäure (6.73 mmol) werden in 130 ml Methanol mit 2.33 g Naphthalin- 1-sulfonsäurenathumsalz (10.1 mmol) und 4.7 ml 2 M HCI versetzt und 7 Stunden unter Rückfluss erhitzt. Man erhält eine Lösung von Tetrahydrofolsäuredimethyl- ester-naphthalin-1-sulfonat mit einem Diastereomerenverhältnis von (6S,αS):(6R,αS) = 1:1. B Isolierungs- und Anreicherungsverfahren
Beispiel B1
Isolierung und Anreicherung von (6S,αS)-Tetrahydrofolsäuredimethylester- benzolsulfonat
a Die gemäss Beispiel A1b erhaltene Lösung von Tetrahydrofolsäuredimethyl- ester-benzolsulfonat mit einem Diastereomerenanteil des (6S,αS)-Diastereomeren von 74% wird unter Ausschluss von Sauerstoff auf 1/6 des Volumens eingeengt. Die so erhaltene Suspension wird unter Stickstoffatmosphäre für 2 Stunden bei 4°C gelagert, das abgeschiedene Produkt wird abgesaugt, mit wenig kaltem Methanol gewaschen und bei 40°C und 20 mbar getrocknet. Man erhält 0.55 g Tetrahydrofolsäuredimethylester-benzolsulfonat (0.87 mmol, 44% der theoretischen Ausbeute). Das Verhältnis der Diastereomeren des Tetra- hydrofolsäuredimethylester-benzolsulfonates (6S,αS):(6R,αS) beträgt 99:1. [α]589 = -69.8° (c = 1 in Dimethylsulfoxid).
Die Substanz zersetzt sich oberhalb von 150°C.
1 H-NMR in DMSO-d6: 10.61 (1 H, bs), 8.35 (1 H, d), 7.6-7.74 (m), 7.51 (1 H, bs), 7.30-7.37 (m), 6.70 (2H, d, 2H, bs), 4.42 (2H, m), 3.63 (3H, s), 3.58 (3H, s), 3.50 (1 H, m), 3.38 (1 H, m), 3.28 (1 H, m), 2.44 (2H, m), 2.01-2.13 (2H, m)
b Isolierung und Anreicherung von (6S,αS)-Tetrahydrofolsäuredimethyl- ester-benzolsulfonat aus der Lösung gemäss Beispiel A1c
Die gemäss Beispiel A1 c erhaltene Lösung von Tetrahydrofolsäuredimethylester- benzolsulfonat mit einem Anteil des (6S,αS)-Diastereomeren von 34% wird unter Ausschluss von Sauerstoff unter Stickstoffatmosphäre für 2 Stunden bei 4°C ge- lagert. Danach wird das abgeschiedene Produkt abgesaugt, mit wenig kaltem Methanol gewaschen und dann bei 40°C und 20 mbar getrocknet. Man erhält 0.2 g Tetrahydrofolsäuredimethylester-benzolsulfonat mit einem Anteil des (6S,αS)-Diastereomeren von 96.6%. c Isolierung und Anreicherung von (6S,αS)-Tetrahydrofolsäuredimethyl- ester-benzolsulfonat aus der Lösung gemäss Beispiel A2
Die klare Lösung aus Beispiel A2 wird auf Raumtemperatur abgekühlt und über Nacht gerührt. Der abgeschiedene Feststoff wird abgesaugt, mit Methanol und tert.-Butylmethylether gewaschen und bei 30°C und 10 mbar getrocknet. Man erhält 9.62 g farbloses kristallines Tetrahydrofolsäuredimethylester-benzolsulfonat (15.24 mmol) mit einem Anteil des (6S,αS)-Diastereomeren von 99.1%. (Aus der Mutterlauge B1c kann das (6R,αS)-Tetrahydrofolsäuredimethylester-benzol- sulfonat wie unter Beispiel B5 beschrieben hergestellt werden.) 4 g (6.34 mmol) des erhaltenen Tetrahydrofolsäuredimethylester-benzolsulfonates mit einem Anteil des (6S,αS)-Diastereomeren von 99.1% werden in 220 ml siedendem Methanol gelöst. Man lässt auf Raumtemperatur abkühlen, lässt über Nacht stehen und saugt den abgeschiedenen Feststoff ab. Man wäscht mit Methanol und tert.-Butylmethylether und trocknet bei 35°C und 10 mbar. Man erhält 3.08 g (4.88 mmol) farbloses kristallines Tetrahydrofolsäuredimethylester- benzolsulfonat mit einem Anteil des (6S,αS)-Diastereomeren von 99.5%.
d Isolierung und Anreicherung von (6S,αS)-Tetrahydrofolsäuredimethyl- ester-benzolsulfonat aus der Lösung gemäss Beispiel A3
Man lässt die nach Beispiel A3 erhaltene Lösung auf Raumtemperatur abkühlen und impft die Lösung bei 60°C mit diastereomerenreinem (6S,αS)-Tetrahydro- folsäuredimethylester-benzolsulfonat an. Nach Stehen über Nacht saugt man den abgeschiedenen Feststoff ab, wäscht mit Methanol und tert.-Butylmethylether und trocknet bei 35°C und 10 mbar. Man erhält 3.46 g (5.48 mmol) Tetrahydrofol- säuredimethylester-benzolsulfonat mit einem Anteil des (6S,αS)-Diastereomeren von 99.9%.
Beispiel B2
Isolierung und Anreicherung von (6S,αS)-Tetrahydrofolsäuredimethylester-
Toluolsulfonat
Die unter Beispiel A4 erhaltene äquimolare Mischung von Tetrahydrofolsäure- dimethylester-toluolsulfonat wird auf Raumtemperatur abgekühlt und über Nacht gerührt. Der abgeschiedene Feststoff wird abgesaugt, mit Methanol und tert.- Butylmethylether gewaschen und bei 30°C und 10 mbar getrocknet. Man erhält 5.53 g farbloses kristallines Tetrahydrofolsäuredimethylester-toluolsulfonat (9.54 mmol) mit einem Anteil des (6S,αS)-Diastereomeren von 99.1%. 5.2 g (8.97 mmol) des so erhaltenen Tetrahydrofolsäuredimethylester-toluolsul- fonates mit einem Anteil des (6S,αS)-Diastereomeren von 99.1% werden in 182 ml siedendem Methanol gelöst. Man lässt auf Raumtemperatur abkühlen, rührt drei Stunden bei Raumtemperatur und saugt den abgeschiedenen Feststoff ab. Man wäscht mit Methanol und tert.-Butylmethylether und trocknet bei 35CC und 10 mbar. Man erhält 4.43 g (7.64 mmol) farbloses kristallines Tetrahydro- folsäuredimethylester-toluolsulfonat mit einem Anteil des (6S,αS)-Diastereomeren von 99.8%. 0
Beispiel B3
Isolierung und Anreicherung von (6S,αS)-Tetrahydrofolsäuredimethylester- naphthalin-1 -sulf onat
Die unter Beispiel A5 erhaltene Lösung wird auf Raumtemperatur abgekühlt und 5 über Nacht gerührt. Der abgeschiedene Feststoff wird abgesaugt und bei 30°C und 10 mbar getrocknet. Man erhält 0.34 g farbloses Tetrahydrofolsäure- dimethylester-naphthalin-1-sulfonat (0.55 mmol) mit einem Anteil des (6S,αS)-Dia- stereomeren von 62.7%.
Beispiel B4 0
Herstellung von (6S,αS)-Tetrahydrofolsäure-benzolsulfonat durch Hydrolyse von Tetrahydrofolsäuredimethylester-benzolsulfonat
0.55 g Tetrahydrofolsäuredimethylester-benzolsulfonat (0.95 mmol) gemäss Beispiel B1a und 0.32 g Natriumcarbonat (3.02 mmol) werden unter Ausschluss von Sauerstoff in 4 ml Wasser gelöst. Man erhitzt auf 85°C und stellt nach 30 Minuten 5 den pH-Wert mit 37%iger Salzsäure auf pH = 7.5 ein. Bei 75°C werden 0.2 g Benzolsulfonsäure in 0.6 ml Wasser zugegeben und anschliessend wird der pH- Wert mit 37%iger Salzsäure auf pH = 0.8 eingestellt. Man lässt die Lösung auf Raumtemperatur abkühlen und rührt noch drei Stunden. Das Produkt wird abge- nutscht und im Trockenschrank bei 30°C und 20 mbar 4 Tage lang getrocknet. Q Man erhält 8.4 g Tetrahydrofolsäure-benzolsulfonat (13.92 mmol, 88% der theoretischen Ausbeute). Das Diastereomerenverhältnis des Tetrahydrofolsäure-benzolsulfonates (6S,αS):(6R,αS) beträgt 99:1.
Die Eigenschaften des Tetrahydrofolsäure-benzolsulfonates sind mit denen des in EP 0495204 B1 beschriebenen Produktes identisch.
Beispiel B5
Isolierung von angereichertem (6R,αS)-Tetrahydrofolsäuredimethylester- benzolsulfonat
Die Mutterlauge aus Beispiel B1c wird auf ein Viertel des Volumens eingeengt. Man kühlt auf 0°C ab, impft mit diastereomerenreinem (6S,αS)-Tetrahydrofol- säuredimethylester-benzolsulfonat an und saugt 1.5 g Tetrahydrofolsäure- dimethylester-benzolsulfonat mit einem Diastereomerenverhältnis von (6S,αS):(6R,αS)= 97:3 ab. Die Mutterlauge wird bis zur Trockene eingeengt. Der ölige Rückstand wird mit 200 ml Diethylether versetzt und 2 Stunden bei 0°C gerührt. Der abgeschiedene Feststoff wird abgesaugt, mit Diethylether gewaschen und bei 30°C und 20 mbar getrocknet. Man erhält 14.8 g Tetrahydrofolsäure- dimethylester-benzolsulfonat mit einem (6R,αS)/ (6S,αS)-Diastereomerenver- hältnis von 80:20.

Claims

Patentansprüche
1 Verfahren zur Herstellung und Anreicherung von (6S,αS)- oder (6S,αR)- Tetrahydrofolsäureestersalzen und -Tetrahydrofolsaure, dadurch gekennzeichnet, dass man in organischen Lösungsmitteln äquimolare oder angereicherte Mischungen von Diastereomeren von Additionssalze von Tetrahydrofolsäureestern mit aromatischen Sulfonsäuren herstellt oder löst, anschliessend wenigstens einmal kristallisiert, und dann das Kristallisat gegebenenfalls zu (6S,αS)- oder (6S,αR)-Tetrahydrofolsäure hydrolysiert, diese als freie Säure kristallisiert oder in Form eines Salzes isoliert.
2 Verfahren gemäss Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die Additionssalze der Tetrahydrofolsäureester der Formel III entsprechen, die die (6S,αS)-, (6S,αR)-, (6R,αS)- und (6R,αR)-Diastereomeren umfasst,
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worin Ri oder R2 H sind, und eines von Ri oder R2, oder beide Ri und R2 unabhängig voneinander einen monovalenten Kohlenwasserstoffrest oder einen über ein C-Atom gebundenen Heterokohlenwasserstoffrest mit Heteroatomen ausgewählt aus der Gruppe -O-, -S- und -N- darstellen, HA für eine aromatische Sulfonsäure steht, und x eine ganze Zahl von 1 bis 6 oder eine gebrochene Zahl zwischen 0 bis 6 bedeutet
3 Verfahren gemäss Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass Ri und R2 C C4-Alkyl bedeutet.
4 Verfahren gemäss Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass R1 und R2 für Methyl stehen. 5 Verfahren gemäss Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass x in Formel III für die Zahlen 1 oder 2, oder eine gebrochene Zahl zwischen 0.5 und 2 steht.
6 Verfahren gemäss Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die aromatischen Sulfonsäuren der Formel IV entsprechen,
R3-SO3H (IV),
worin R3 unsubstituiertes oder mit Cι-C -Alkyl, Cι-C4-Halogenalkyl oder Cι-C - Alkoxy substituiertes Phenyl darstellt.
7 Verfahren gemäss Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass die aromatische Sulfonsäure Benzol- oder -p-Toluolsulfonsäure ist.
8 Verfahren gemäss Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass in den Verbindungen der Formel III Ri und R2 je Methyl darstellen, x für 1 oder 2 oder für eine gebrochene Zahl zwischen 0.5 und 2 steht, und HA Phenyl-, Toluyl-, Fluor-, Chloroder Trif luormethylphenyl-sulfonsäure bedeutet.
9 Verfahren gemäss Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass in den Verbindungen der Formel III Ri und R2 je Methyl darstellen, x für 1 oder 2 oder für eine gebrochene Zahl zwischen 0.5 und 2 steht, und HA Phenyl- oder p-Toluylsulfonsäure bedeutet.
10 Verfahren gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Mischun- gen das (6S,αS)- beziehungsweise (6S,αR)-Diastereomere in einem Anteil von wenigstens 5 Gewichtsprozent oder mehr enthalten.
11 Verfahren gemäss Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei den organischen Lösungsmitteln um polare organische Lösungsmittel handelt, die wenigstens 1 g Additionssalz eines Tetrahydrofolsäureesters pro Liter Lö- sungsmittel bei Siedetemperatur lösen. 12 Verfahren gemäss Anspruch 11 , dadurch gekennzeichnet, dass man Alkohole oder Mischungen aus Alkoholen mit wenigstens einem weiteren Lösungsmittel verwendet.
_ 13 Verfahren gemäss Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass man äquimolare oder angereicherte Mischungen von Diastereomeren von Additionssalzen aus Tetrahydrofolsäureestern mit aromatischen Sulfonsäuren in einem Lösungsmittel mischt und anschliessend das Gemisch zur Lösung der Additionssalze von Tetrahydrofolsäureestern und aromatischen Sulfonsäuren erwärmt, danach die Lösung abkühlt, wobei das (6S,αS)- oder (6S,αR)-Diastereomere auskristallisiert 0 oder beide Diastereomeren auskristallisieren, und diese dann mittels Filtration abtrennt.
14 Verfahren gemäss Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass man Reaktionslösungen aus der Hydrierung von Folsäureestem, oder aus der Hydrierung •j e von Additionssalzen von Folsäureestem und aromatischen Sulfonsäuren, oder aus der Hydrierung von Folsäure in Gegenwart von Sulfonsäuren unter ver- estemden Bedingungen verwendet.
15 Verfahren gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man (6S,αS)- oder (6S,αR)-Tetrahydrofoläureester-Sulfonate oder deren Gemische zu (6S,αS)-
20 oder (6S,αR)-Tetrahydrofolsäure oder deren Gemische basisch hydrolysiert.
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