WO2001032212A1 - Drugs, drinks or foods - Google Patents

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WO2001032212A1
WO2001032212A1 PCT/JP2000/007372 JP0007372W WO0132212A1 WO 2001032212 A1 WO2001032212 A1 WO 2001032212A1 JP 0007372 W JP0007372 W JP 0007372W WO 0132212 A1 WO0132212 A1 WO 0132212A1
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gallate
tea
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estrogen receptor
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Eiji Nishiyama
Hiromu Ohnogi
Akihiro Kondo
Haruo Oyashiki
Hiroaki Sagawa
Shigetoshi Mizutani
Ikunoshin Kato
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Takara Shuzo Co Ltd
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Takara Shuzo Co Ltd
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Definitions

  • the present invention relates to a medicament, beverage or food for treating or preventing a disease caused by estrogen receptor.
  • Estrogens are endogenous hormones that have broad and important functions in human physiology. Primarily, this hormone affects the reproductive system in both men and women. For example, in women, estrogen is essential during pregnancy and lactation. It also reduces the risk of heart attack and osteoporosis. In addition, the ratio of estrogen to androgen prenatally and early postpartum regulates sexual differentiation and proper formation of appropriate reproductive organs. Estrogens are also? Estrogen-dependent breast cancer is known as one of the symptoms associated with proliferation of the acinar and uterine cells, that is, cancer. Further, as other estrogen-dependent symptoms, fibrosis (uterine fibroid disease), endometritis, smooth muscle cell proliferation and the like are known.
  • estrogen regulates sperm production, resulting in abnormally lower estrogen numbers per unit concentration (spermia). It is known that androgen is involved in prostatic gland hypertrophy.Treatment by administration of antiandrogens has been studied, but in recent years, some prostate cells in which estrogen receptor is present have been identified. However, mepartricin, a substance that suppresses estrogen receptor expression, has been studied as an inhibitor of prostatic hypertrophy (The Prostate 38: 17-27. 1999) 0 However, substances that compete with estrogen for estrogen receptor There are no reports of suppressing hypertrophy.
  • estrogen has many other homeostatic functions in addition to those associated with female reproductive and sexual tissue functions.
  • estrogen receptors in males It has been found that it has a common site and has the ability to form many tissues involved in estrogen and the cardiovascular system.
  • the exact nature of the effects of estrogen in both men and women, except for the aspects of their formation, has only recently been studied and little is known at present.
  • Estrogen as a biologically active molecule exerts its properties by binding to intracellular receptors. After translocating to the nucleus of the cell, the receptor and the bound ligand exert their effects by binding to a specific recognition site on DNA and expressing a specific gene. However, little is known about the binding and regulation of this receptor.
  • endocrine disrupting effects As a general animal test for substances suspected of having endocrine disrupting effects, so-called endocrine disrupting effects, there is a uterine hypertrophy test using immature rats. This test takes advantage of the fact that uterine growth is controlled by estrogen. That is, in prepubertal juveniles, the endogenous estrogen, 17 ⁇ -estradiol, is kept at a low blood level, and offspring are dose-dependent with respect to exogenous estrogen. Enlarges (Supervised by Tatsumi Inoue, Biological Testing and Research Methods for Endocrine Disrupting Chemicals (20 0 0) Springer-Fairlark Tokyo Co., Ltd.).
  • test period of this test method is limited to 18 days after birth when rats can be separated and 25 days after birth before reaching puberty.
  • the OECD also recommends this test method because it does not require technology and has good reproducibility.
  • Using this test method it has been reported that the administration of bisphenol A or 4-nonylphenol, which is suspected of disrupting ⁇ secretion, to young rats increases uterine weight (Environ Health Perspect, 106: 719). -720, 1998; Toxicological Sciences, 54: 154-167, 2000).
  • Japanese Patent Application Laid-Open No. 11-507072 states that gallic acid groups of gallic acid derivatives and catechins are not gallic acid groups of catechins regardless of inhibition of 5 ⁇ -reductase.
  • the structure of the part is important.
  • Liao et al. The structure of the catechins other than the gallic acid group is important for the inhibitory effect of gallic acid derivatives catechins on the 5 ⁇ -reductase.
  • No reductase inhibitory activity US Pat. No. 5,605,929
  • no inhibition of 5 ⁇ -reductase activity under the conditions of whole cell assay (W099 / 22728). ing.
  • An object of the present invention is to provide a highly safe drug, beverage or food for preventing the effects of endocrine disrupting substances.
  • the present inventors have established a screening system for a substance that antagonizes an endocrine disruptor in a living body by oral ingestion and blocks the endocrine disrupting substance, and as a result of earnest efforts, surprisingly, The present inventors have found that some substances that bind to the estrogen receptor do not show an estrogen-like effect, and completed the present invention. That is, to summarize the present invention, the first invention of the present invention is characterized by containing, as an active ingredient, a substance having an antagonistic action with an estrogen receptor agonist.
  • the present invention relates to a therapeutic or preventive agent for a disease caused by binding of an agonist to an estrogen receptor.
  • the second invention of the present invention relates to a disease caused by binding of an agonist to an estrogen receptor, which comprises, is added, diluted, or diluted with a substance having an antagonistic effect on an agonist of an estrogen receptor.
  • the present invention relates to a beverage or food for improving or preventing symptoms of the disease.
  • the substance having an antagonistic action with an estrogen receptor agonist is an agonist having no estrogen-like action, and has the following general formula I:
  • R 2 represents 1 H, 1 OH or 1 O—R 4.
  • R 3 represents 1 H or 1 OH.
  • R 4 represents the following formula II:
  • a compound selected from gallic acid, a derivative thereof and a pharmacologically acceptable salt thereof can be preferably used.
  • catechins are exemplified, and for example, epicatechin, epigallocatechin, epigallocatechin gallate, epicatechin gallate, galocatechin gallate, force techin gallate, catechin, gallocatechin and the like can be preferably used.
  • the gallic acid derivative include gallic acid ester, and particularly, an ester of an alcohol having 8 or more carbon atoms and gallic acid is suitable for the present invention.
  • Examples of the agonist of the present invention include endocrine disruptors, for example, dioxins, organic chlorine compounds, phenols, phthalates, aromatic hydrocarbons, pesticides, organic tin compounds, estrogens, Alternatively, Milex, Toxaphene, Aldicarb or Carbon is mentioned. More specifically, xenoral, genistein, cumestrol, o, p-DDT, keeper, methoxycyclonole, zearalenone, dioxin, p-octinolephenore, noninolephenore, denoredrin, butylbenzyl phthalate, and Z or Bisphenol A is mentioned.
  • endocrine disruptors for example, dioxins, organic chlorine compounds, phenols, phthalates, aromatic hydrocarbons, pesticides, organic tin compounds, estrogens, Alternatively, Milex, Toxaphene, Aldicarb or Carbon is mentioned. More specifically, xenoral, genistein, cumestrol
  • the third invention of the present invention relates to a catechin-containing alcoholic beverage obtained by adding catechins.
  • the catechins are preferably epigallocatechin gallate, and the epigallocatechin gallate content is preferably in the range of 0.02 to 0.75% wZw
  • the alcoholic beverage of the present invention may contain a tea extract in addition to the catechins.
  • the ratio of epigallocatechin gallate to caffeine in the alcoholic li: material of the present invention is 0.9 or more, and according to the present invention, alcohol in which epigallocatechin gallate is increased and caffeine is reduced Beverage can be provided.
  • the alcoholic beverage of the present invention has a rich sense of tea, a good taste depth and balance due to the synergistic action of catechins, tea extract, and alcohol, emphasizes the sweetness of alcohol, and tightens and stimulates the taste due to bitterness It is an alcoholic flavor with a typical sensation.
  • the ratio of epigallocatechin gallate to caffeine is 0.9 or more, and the epigallocatechin gallate content is 0.01 to 0.5% wZw.
  • a tea beverage obtained through a sterilization process is, for example, a canned or bottled tea beverage obtained through a sterilization step, such as a green tea beverage, a black tea beverage, an oolong tea beverage, a barley tea beverage, and a banaba tea beverage.
  • FIG. 1 shows the binding activity of gallic acid derivatives to estrogen receptors.
  • an agonist refers to a substance that binds to an estrogen receptor and has an estrogenic effect.
  • the substance having an estrogenic effect include endocrine disrupting substances and estrogens.
  • the endocrine disruptor is also called an exogenous endocrine disruptor or an environmental hormone, but when taken up in an animal body, a normal hormone that is originally operated in the body.
  • An exogenous substance that affects the action including those that maintain, promote and suppress normal hormonal action. It also includes substances that can affect normal hormonal effects.
  • estrogens refers to endogenous estrogens usually produced in vivo or synthetically produced estrogens.
  • the estrogen receptor to which the agonist binds may be either of the type and the type 3), but is preferably the ⁇ -type estrogen receptor.
  • Category 2 phenols (eg, phenols in general, bisphenol II, 2,4-dichlorophenol, pentachlorophenol), (3) Category 3: phthalates (eg, phthalates) Acid esters in general), (4) Category 4: aromatic hydrocarbons (eg, benzo (a) pyrene, di-2-ethylhexyl adipate (DEH A), benzophenone, 4-nitrotoluene, styrene dimer and trimer, 1,2-dibromo-3-chloropropane, styrene, n-butylbenzene), (5) Category 1-5: broad chemicals ( For example, Yin medicines in general, 2,4,5-T (trichlorophenoxyacetic acid), 2,4-D (dichlorophenoxyacetic acid), benomyl, amitrol, mesomil), (6) Power category 6: Organotin compounds, (7) Category 1 7: 6 categories of estrogen, dioxins that do not belong to the above
  • HAB Hexaclo mouth benzene
  • Endocrine disruptors are not limited to those listed above, and include, for example, xenoral, genistein, cumestrol, o, p-DDT, keeper, methoxychloronaire, zearalenone, dioxin, p-octinolephenol. Nore, noninolephenol, denoredrin, butylbenzyl phthalate, and / or bisphenol A are exemplified.
  • a substance having an antagonistic action with an estrogen receptor agonist is a substance that binds to an estrogen receptor but does not show an estrogen-like action. Any substance having an antagonistic action can be suitably used. Although not particularly limited, for example, catechins, gallic acid and Z or a derivative thereof can be suitably used.
  • the screening method for agonists and antagonists is not particularly limited.
  • an in vitro screening method first, as a first step, the binding activity between these candidate substances and estrogen receptor is known.
  • the method e.g. as described in Example 7, i.e. for the estrogen receptor, Screening can be performed by measuring the antagonistic activity between the fluorescently labeled ligand and the candidate substance.
  • Screening can be performed by measuring the antagonistic activity between the fluorescently labeled ligand and the candidate substance.
  • the method of screening for an effective antagonist in vivo is not particularly limited.
  • the method described in Example 1 that is, administration of an estrogen receptor agonist and further oral administration of a candidate substance can reduce the change in uterine weight. It can be screened by examining it. At this time, by dissolving the candidate substance in ethanol and administering it, the absorption efficiency can be increased and examined.
  • catechins examples include epicatechin, epigallocatechin, epiga mouth catechin gallate, epicatechin gallete, gallocatechin gallate, force techin gallate, catechin, gallocatechin and / or derivatives thereof.
  • the catechin derivative is not particularly limited as long as it is a substance having an antagonistic action with an estrogen receptor agonist.
  • the gallic acid derivative used in the present invention is not particularly limited, but a compound having a gallic acid structure in the molecule can be used.
  • compounds such as esters, ethers, and amides formed by reacting a hydroxyl group and a carboxyl group of gallic acid with a functional group of another molecule are exemplified.
  • an ester of a carboxyl group of gallic acid and a compound having a hydroxyl group is suitably used in the present invention.
  • ester examples include an ester of a compound having an alcoholic, phenolic 1 "hydroxyl group and gallic acid.
  • Examples include decyl gallate, tetradecyl gallate, pentadecyl gallate, cetyl gallate, heptadecyl gallate, octadecyl gallate, etc., and particularly preferably an ester of an aliphatic alcohol having 8 or more carbon atoms with gallic acid, for example, octyl Alcohol, dodecyl alcohol, cetyl alcohol Esters of gallic acid and glycerol are particularly suitable for the present invention.
  • the aliphatic alcohol may have a side chain or an unsaturated hydrocarbon chain as long as the action of antagonizing the binding of the agonist to the estrogen receptor is maintained.
  • a hydrogen atom on the chain may be substituted with a halogen or a functional group, for example, a hydroxyl group, a carboxyl group, an amino group, an oxo group, or the like.
  • diseases caused by binding of agonist to estrogen receptor include decreased sperm count, estrogen-dependent cancer, uterine fibroid disease, endometritis, and smooth muscle cell proliferation and sperm reduction.
  • Diseases reported as a cause of an abnormal response to estrogen such as a disease are exemplified.
  • prostatic hypertrophy which is expected to have a therapeutic effect by suppressing estrogen action, is also included in the diseases targeted by the therapeutic or prophylactic agent of the present invention.
  • a substance having an antagonistic action with an estrogen receptor agonist refers to a substance that binds to an estrogen receptor, thereby antagonizing the binding to an estrogen receptor by an agonist such as an endocrine disrupting substance or an estrogen. Refers to a substance that shows
  • Examples of the estrogen described in the present specification include, for example, 17 ⁇ -estradione, estrone, conjugated estrogen (Premarin (registered trademark)), maestrogen, and 17-ethynylestradione.
  • steroid compounds having estrogenic activity such as
  • Examples of the substance having an antagonistic action with the estrogen receptor agonist in the present invention include compounds selected from the compounds represented by the formula I, gallic acid, derivatives thereof and pharmacologically acceptable salts thereof. Polymers and oligomers having I as the basic skeleton are also included in the substance having an antagonistic action with the estrogen receptor agonist of the present invention.
  • Theaflavin, theaflavingale, theaflavingale B, theaf Rabindigalate may be used as an active ingredient of the present invention.
  • the catechins that can be used in the present invention include tea catechins.
  • Force techin is a kind of pigment component collectively called flavonoids, and there are eight kinds of catechins known in tea.
  • catechins commercially available products can be used, and they can also be prepared by known methods. For example, it can be prepared from green tea and used.
  • the method for preparing the catechins of the present invention is not particularly limited, and can be prepared, for example, by chemical synthesis or by extracting and purifying from natural products.
  • the catechins used as the active ingredient in the present invention are mainly tea techins, and when extracted and purified from natural products, there is no particular limitation, for example, fermented tea such as black tea, oolong tea, etc. It can be extracted from unfermented tea such as semi-fermented tea and green tea.
  • the tea extract can be suitably used as a substance having an antagonistic action with the estrogen receptor agonist of the present invention.
  • the extract of epigallocatechin gallet (hereinafter also referred to as EGCG) is not particularly limited, but may be any extract from edible substances, and a EGCG-rich extract is preferred.
  • the tea extract include EGCG extract using water and an organic solvent. Examples thereof include Sanphenone 100S, Sanfenone DCF-1, Sanfenone LA-50 and Sanfenone BG (all manufactured by Taiyo Kagaku Co., Ltd.). is there. These EGCG contents are 50, 53, 18, and 50% wZw, respectively.
  • the caffeine content is 10% w / w, below the detection limit, 5% wZw and 3% wZw, respectively.
  • Caffeine is known to cause toxicity, carcinogenicity, cholesterol-elevating effects, calciuria, etc. by overdose, so it is preferable to use a tea extract with reduced contaminants such as power phene It can be used in food products, and by reducing caffeine, it can be made suitable also on the sensory surface (taste).
  • tea refers to tea (C amme Iliasinensiis,
  • (L) O. Kuntze means whole or part of raw or dry fermented or whole fermented or whole or dried raw or dried products such as leaves, xylem, roots, fruits and the like. , Or can be used in any combination.
  • tea leaves are used as an extraction raw material, there are various forms, for example, finishing from fresh tea leaves Up to tea (dried tea), it can be at any stage of the normal tea making process, and regardless of the degree of fermentation, for example, cereal teas include barley tea, roasted rice tea, buckwheat tea, and leaf tea are green tea, Black tea, roasted tea, matcha tea, oolong tea, banaba tea and the like.
  • the tea extract which is a substance having an antagonistic effect on agonist in the estrogen receptor of the present invention, may contain the aforementioned tea techins, and thus a crude tea extract can be used.
  • the crude tea extract can be obtained by extracting tea with hot water (preferably hot water) or using an organic solvent.
  • organic solvent examples include lower alcohols such as methyl alcohol, ethyl alcohol, n -propyl alcohol, isopropyl alcohol, and butyl alcohol; lower esters such as methyl acetate, ethyl acetate, propyl acetate, and butyl acetate; or acetone, or Ketones such as methyl isobutyl ketone can be used, and these organic solvents can be used in the form of a worm or a suitable insect, and further, water-free or, preferably, water-containing.
  • lower alcohols such as methyl alcohol, ethyl alcohol, n -propyl alcohol, isopropyl alcohol, and butyl alcohol
  • lower esters such as methyl acetate, ethyl acetate, propyl acetate, and butyl acetate
  • acetone, or Ketones such as methyl isobutyl ketone can be used, and these organic solvents can be used in the form of a
  • the methods used for ordinary crude drug extraction can be suitably used.
  • the extraction step is usually carried out for 5 minutes to 7 days, preferably for 10 minutes to 24 hours, and the extraction time can be shortened by adding auxiliary means such as stirring if necessary.
  • the insolubles can be separated from the water or organic solvent extract by a suitable method such as filtration or centrifugation.
  • tea extracts In addition to the hot water extract or organic solvent extract obtained by a conventional method, products obtained by further treating these extracts with various organic solvents or adsorbents may be used as the active ingredient of the synthesis inhibitor of the present invention. It is included in tea extracts that can be made. These tea extracts can be concentrated and dried to be powdered as needed, or further purified by crystallization from cold water.
  • the tea extract thus obtained can be used for catechins contained in tea (especially tea leaves), that is, tea catechins (for example, epicatechin, epigallocatechin, epigallocatechin gallate, epipicatechin gallate, gallocatechin gallate, catechin gallate, (Catechin, gallocatechin) as a mixture, and may also contain impurities derived from raw tea.
  • tea catechins for example, epicatechin, epigallocatechin, epigallocatechin gallate, epipicatechin gallate, gallocatechin gallate, catechin gallate, (Catechin, gallocatechin) as a mixture, and may also contain impurities derived from raw tea.
  • the therapeutic or preventive agent for diseases caused by the binding of the agonist to the estrogen receptor of the present invention can be produced using a substance having an antagonistic action with the agonist of the estrogen receptor as an active ingredient.
  • the therapeutic or prophylactic agent of the present invention may be prepared by combining a substance having an antagonistic action with the estrogen receptor agonist used in the present invention as an active ingredient and combining it with a known pharmaceutical carrier.
  • the preparation of the preparation is generally prepared by mixing a substance having an antagonistic action with the agonist of the estrogen receptor used in the present invention with a pharmaceutically acceptable liquid or solid carrier, and, if necessary, a solvent,
  • a pharmaceutically acceptable liquid or solid carrier In addition to dispersants, emulsifiers, buffers, stabilizers, excipients, binders, disintegrants, lubricants, etc., tablets, granules, powders, powders, solids such as capsules, normal liquids, Liquid preparations such as suspensions and emulsions can be prepared.
  • it can be a dried product which can be made into a liquid form by adding an appropriate carrier before use.
  • Pharmaceutical carriers can be selected according to the above administration forms and dosage forms.
  • oral preparations for example, starch,? L sugar, sucrose, mannitol, carboxymethyl cellulose, corn starch, inorganic salts, etc. are used.
  • a binder, a disintegrant, a surfactant, a lubricant, a fluidity promoter, a flavoring agent, a coloring agent, a fragrance, and the like can be further added.
  • a liquid oral preparation containing catechins for example, by containing 0.2 to 40% wZw of ethanol, it is possible to prepare a preparation having excellent absorbability of force technics.
  • a substance selected from active substance of the present invention a substance having an antagonistic effect with agonists of estrogen receptor, its derivatives and their salts, is used as a diluent according to a conventional method. Dissolve or suspend in distilled water for injection, physiological saline, aqueous dextrose solution, vegetable oil for injection, sesame oil, laccase oil, soybean oil, corn oil, propylene glycol, polyethylene glycol, etc., and if necessary, bactericide, stabilizer It is prepared by adding a tonicity agent, a soothing agent and the like.
  • the therapeutic or prophylactic agent of the present invention is administered by an appropriate administration route according to the formulation.
  • the administration method is also not particularly limited, and can be internal, external, or by injection. Injectables can be administered, for example, intravenously, intramuscularly, subcutaneously, intradermally, etc., and external preparations also include suppositories and the like.
  • the dose of the therapeutic or prophylactic agent of the present invention is appropriately determined depending on the form, administration method, purpose of use, and the age, weight, and symptoms of the patient to which it is applied.
  • the contained amount of the substance having an antagonistic effect with the estrogen receptor agonist used in the present invention is not particularly limited, but is a nontoxic administration level of about 0.001 g to about 1 ° C.
  • the agent of the present invention can be orally administered as it is, or can be added to any food or drink, for example, an alcoholic beverage or tea beverage, and taken daily.
  • the substance having an antagonistic effect on the estrogen receptor agonist used in the present invention may be used as a raw material of food or drink for improving or preventing the symptoms of diseases caused by the binding of the agonist to the estrogen receptor. .
  • the substance having an antagonistic effect on the agonist of the estrogen receptor of the present invention may be in any form such as liquid, paste, powder, flake, and condyle.
  • the drying method can be a usual drying method, for example, spray drying, drum drying, shelf drying, vacuum drying, freeze drying and the like.
  • the beverage or food of the present invention may contain a substance having an antagonistic action with an estrogen receptor agonist.
  • Food The amount of the substance having an antagonistic effect on the estrogen receptor agonist contained in the beverage or food of the present invention is not particularly limited, but the amount of the substance having an antagonistic effect on the estrogen receptor agonist is 0.0. Beverages or foods containing from 0.05% w "w to 90% w // w are exemplified.
  • the beverage or tolerable article of the present invention is not particularly limited, but may be, for example, a processed grain product (flour-processed product, processed starch product, premix processed product, rice, macaroni, bread, bean, buckwheat, etc.).
  • the method for producing the beverage or food of the present invention is not particularly limited, and examples thereof include cooking, processing, and production by a commonly used beverage or food production method, and estrogen is added to the produced beverage or food. It suffices if a substance having an antagonistic effect on the receptor agonist is contained, added and Z- or diluted as an active ingredient.
  • EGCG-containing powder can be mixed with tea at an appropriate concentration to obtain a functional beverage or food with a high EGCG content and a new flavor.
  • the tea concentration is usually from 0.05 to 4 times, preferably from 0.1 to 2 times from the viewpoint of flavor, based on the drinking concentration as a standard 1.
  • a sweetener, an acidulant, a flavor, or the like may be added as necessary, or a reducing agent may be added after addition.
  • the beverage is added with 0.5 to 2 Qo / owZw of ethanol, and EGC It may be a G-containing alcoholic beverage.
  • carbon dioxide gas can be added to make an EGC G-containing alcoholic beverage containing carbon dioxide gas.
  • a beverage or food having an enhanced EGCG content is provided.
  • the EGCG content in these foods and drinks is preferably from 0.002 to 5% wZw, more preferably from 0.01 to 0.5% wZw.
  • EGCG may be added as a tea extract, or may be added as an extract of potato techins. Further, a purified product of EGCG may be added.
  • an ECGCG-containing beverage or food free of caffeine and reduced or eliminated in caffeine is provided.
  • alcoholic beverages prepared by adding mashed chickens.
  • alcoholic beverages refer to beverages containing ethanol.
  • the amount of ethanol in alcoholic beverages is, for example, 0.2-4 Oo / owZw.
  • Alcoholic beverages may contain catechins, and are not particularly limited, but include sake, Chinese liquor, wine, whiskey, shochu, shochu, brandy, gin, rum, beer, refreshing alcohol to which catechins are added. Examples include drinks, fruit wine, and recycle.
  • the content of catechins in these alcoholic ingredients may be enhanced as compared with each alcoholic beverage containing the tea extract, and the caffeine content may be reduced relative to the catechin content.
  • the absorption of catechins is enhanced in the presence of alcohol, the absorption of catechins in the alcoholic beverage of the present invention is extremely high. In this way, it is possible to fortify only catechins, so that selective intake of catechins becomes possible. Ingestion of catechins in the alcoholic beverages of the present invention does not consume as much caffeine as ingestion of tea extract. Therefore, the alcoholic beverages of the present invention are excellent in safety and are useful for enhancing health for the selective ingestion of catechins.
  • the content of catechins in the alcoholic beverage of the present invention is preferably 0.004 to 1.5% wZw, and more preferably 0.0 Zlo / owZw from the functional aspect.
  • the content of EGCG in the anorecono 1 1 material of the present invention is preferably from 0.002 to 0.75% wZw, more preferably from 0.01 to 0.5% wZw from the functional aspect.
  • tea beverages with a ratio of EGCG to caffeine of 0.9 or more and an EGCG content of 0.1 to 0.5% wZw such as tea beverages, green tea beverages, oolong tea beverages, and barley tea beverages, have a tea extract flavor. Is a new flavored tea beverage with enhanced caffeine content.
  • a tea beverage refers to a beverage produced using tea as a main raw material. The manufacture of tea beverages involves a sterilization process. Tea beverages are killed, for example, by heating.
  • a substance having an antagonistic effect on the estrogen receptor agonist may be added before cooking and processing, during cooking and processing, and even after cooking and processing. It may be added to a substance having an antagonistic action with the estrogen receptor agonist to dilute the substance having an antagonistic action with the estrogen receptor agonist.
  • a substance having an antagonistic action with an estrogen receptor agonist may be added at an optional step, or a beverage or food, or a substance having an antagonistic action with an estrogen receptor agonist may be used as a raw material thereof.
  • To dilute a substance having an antagonistic effect with the estrogen receptor agonist and may be contained in a beverage or food. The addition may be carried out once or several times.
  • a novel beverage or food that is, a beverage or food containing an effective amount of a substance having an antagonistic action with an estrogen receptor agonist can be easily produced.
  • beverages or foods containing, adding and / or diluting a substance having an antagonistic effect with the agonist of the estrogen receptor are defined as the beverages and foods of the present invention.
  • the beverage or food of the present invention is a beverage or food containing, adding and / or diluting a substance having an antagonistic action with an estrogen receptor agonist. Such beverages or foods may be concentrated. There is no particular limitation on the shape of the beverage or food as long as it contains a substance having an antagonistic action with the estrogen receptor agonist required to express its physiological function.
  • the shape of the beverage or food of the present invention is tab-shaped. Orally ingestible forms such as lett, granule and capsule are also included.
  • concentrated foods or concentrated beverages which are provided as a concentrate and are appropriately diluted to a suitable range before ingestion are also included in the food or beverage of the present invention (including alcoholic beverages and tea beverages). is there.
  • the therapeutic agent of the present invention By administering a prophylactic agent, the therapeutic agent of the present invention, the antagonist contained in the therapeutic agent or prophylactic agent antagonizes a substance having an endocrine disrupting effect, thereby treating the adverse effect of the substance on the living body. Or it can be prevented.
  • the therapeutic or prophylactic agent of the present invention can improve or prevent the symptoms by antagonizing estrogen.
  • the present invention can prevent uterine hypertrophy caused by, for example, having endocrine disrupting effects. That is, the therapeutic or prophylactic agent of the present invention is useful for the treatment or prevention of various disorders and diseases caused by abnormalities in estrogen-related biological control actions.
  • the antagonist contained in the beverage or food can antagonize a substance having an endocrine disrupting effect, and the adverse effect of the substance on the living body can be treated or prevented. Furthermore, with regard to inappropriate physiological symptoms caused by estrogen, the beverage or food of the present invention can improve or prevent the symptoms by antagonizing estrogen.
  • Example 1 the present invention will be described specifically with reference to Examples, but these do not limit the scope of the present invention.
  • Example 1
  • ECGCG SIGMA
  • Bisphenol A Bisphenol A
  • SmlZkg body weight
  • the child weight increased to 133% compared to the control group (100%), to 109% with EGCG lOOmg / kg, and 92% with 20 OmgZkg. Was suppressed to.
  • the BisA4Omg / kg group it increased to 149% as compared with the control group (100%), but it was suppressed to 95% when EGCG10OmgZkg was administered.
  • EGCG did not show an estrogenic effect when administered orally, that is, did not act as an agonist, but acted as an antagonist to BisA.
  • EGCG is an estrogen antagonist, not only inappropriate physiological symptoms caused by endocrine disruptors such as decreased sperm count and benign prostatic hyperplasia, but also abnormal estrogen action such as tumor deterioration, perimenitis, uterine fibrosis, etc. It is possible to provide a medicine, beverage or food for improving or preventing the symptoms of a human suffering from the above.
  • a 16-day-old female SD rat (Japan SLC) was purchased together with the mother animal, weaned at the age of 19 days, and used for experiments from the next day.
  • Nonylphenol hereinafter referred to as NP
  • NP Nonylphenol
  • a 16-day-old female SD rat (Nippon SLC) was purchased together with the mother animal, weaned at the age of 19 days, and used for the experiment from the next day.
  • the child weight increased to 186% compared to the control group (100%), whereas when EG CG 20 OmgZkg was administered without ethanol, it was only up to 161%. It was not suppressed, but it was suppressed to 140% with ethanol 5% and 138% with ethanol 10%, and significantly suppressed the increase in uterine weight compared to the case without ethanol.
  • a 16-day-old female SD rat (Nippon S.L.C.) was purchased together with the mother animal, weaned at the age of 19 days, and subjected to the experiment from the next S.
  • a 16-day-old female SD rat (this SLC) was purchased together with the mother animal, weaned at the age of 19 days, and used for the experiment from the next day. That is, to be 40mgZkg
  • the weighed Bis A is dissolved in a small amount of ethanol, diluted with peanut oil to a final ethanol concentration of 5%, and administered subcutaneously or orally for three consecutive days, and the uterus the next day on the third day
  • the excised weight was measured.
  • EGCG was prepared by adding ethanol to a final concentration of 10% aqueous ethanol solution, then adding water, and orally administering 30 minutes before administering BisA. The results are shown in Table 10.
  • Bis A 4 OmgZkg oral administration increased the child weight to 140% compared to the control group (100%), whereas EGCG solution using 10% ethanol did not increase the uterine weight even when 4 OmgZkg was administered. The increase was suppressed to 106%. In the group of subcutaneous administration of BisA 4 OmgZkg, it was increased to 160%, whereas it was suppressed to 136% by administration of 40 mg kg of EGCG solution.
  • n-octyl gallate, n-dodecyl gallate, n-cetyl gallate were found to have binding activity to the estrogen receptor, although the binding strength was weak or strong.
  • the growth test of the cultured cells was performed according to a method called E-SCREEN assay by Ana. Soto et al. (Environ. Health Perspect. 103: 113-122 (1995)). That is, human breast cancer-derived cells (MCF-7) were converted to 4.0 ⁇ 10 3 cells / “100 L After inoculating a 96-well plate and culturing once, the medium was added with BisA, BisA and n-octyl gallate, and without control as a control medium. The cells were cultured for 4 days using a non-supplemented Dulbecco's modified Eagle's medium supplemented with 5% of activated carbon-dextran-treated FCS. The number of cells was measured by the MTT method.
  • a 16-day-old female SD rat (Japan SLC) was purchased together with the mother animal, weaned at the age of 19 days, and used for experiments from the next day. After dissolving n-year-old octyl gallate (Tokyo Kasei Kogyo) in a small amount of ethanol, add peanut oil to dilute the ethanol concentration to 5%, and orally administer it to a 20-day-old female SD rat for 3 days a day Then, on the day after the final administration, pups were excised and weighed. Peanut oil supplemented with 5% ethanol was used for the vehicle-administered group.
  • Tokyo Kasei Kogyo octyl gallate
  • n-octyl gallate indicates n-octyl gallate.
  • a 16-day-old female SD rat (Nippon S. L.) was purchased together with the mother animal, weaned at the age of 19 days, and used for the experiment from the next day. That is, after dissolving n-octyl gallate (Tokyo Kasei Kogyo) in a small amount of ethanol, add peanut oil to dilute the ethanol to a concentration of 5%, and orally in a 20-day-old female SD rat for 3 days a day. The uterus was excised and weighed the day after the last administration. Peanut oil with 5% ethanol was used for the vehicle-administered group. NP was diluted by adding peanut oil to a concentration of 5 Omg / kg, and orally administered one and a half hours after the administration of n-octyl gallate. Table 14 shows the results.
  • BIS A was dissolved in a small amount of ethanol, and then diluted with peanut oil to a concentration of 5% and administered subcutaneously.
  • the results are shown in Table 15.
  • n-0ctyl gallate indicates n-octyl gallate
  • n-Cetyl Gallate indicates n-cetyl gallate.
  • Example 12 The barley tea beverage prepared in Example 12 (containing EGCG-containing extract San-Ephenone DCF-1 containing 0.1 ⁇ / ⁇ ⁇ ) was mixed with ethanol at 1, 2, 4, 8, 16, 20, and 35% vZv. It was added to prepare tea containing the EGCG-containing composition containing ethanol. Sensory evaluation was performed in the same manner as in Example 12. Table 17 shows the results.
  • a highly alcoholic beverage having a high EGCG content and having a synergistic effect of improving flavor by a combination of EGCG and alcohol is provided.
  • tea containing the EGCG-containing extract in the formulation shown in Table 18 was prepared.
  • tea commercially available banapa tea, green tea, oolong tea, and buckwheat tea prepared by an ordinary method were used. No control was added, and the product of the present invention contained an EGCG-containing extract at 0.1% WZV. Sensory evaluation was performed in the same manner as in Example 12. Table 19 shows the results.
  • the present invention 2. 9 2. 7 3. 4 3.1 Banaba tea
  • Control product 3.4.3.6.8.3.6 Product of the present invention 2.7.3.13.2.3.0 Green tea
  • Product of the present invention 3.0 3.0 3.1 3.0 Oolong tea
  • the amount of EGCG in the banaba tea beverage of the present invention is 0.05% wZv
  • the amount of caffeine is below the detection limit
  • the amount of EGCG in the green tea beverage of the present invention is 0.06% wZv and the amount of caffeine is 0.0.
  • the EGCG content of the oolong tea beverage of the present invention is 0.05% w / v
  • the caffeine content is 0.004% wZv
  • the EGCG content of the buckwheat tea beverage of the present invention is 0.05% wZv. V and caffeine levels were below the detection limit.
  • Ethanol was added to these tea beverages of the present invention at a concentration of 4% v / v to produce alcoholic beverages. These alcoholic beverages exhibited good flavor.
  • Vitamin C 0.02 0.02 Sugar (cane) 4.5.5 San Fenone BG 0. 05 0. 05 Vanorecol capacity (v v) 4.00
  • green tea, oolong tea, barley tea, and black tea are used to prepare various tea beverages with a ratio of EGCG to caffeine of 0.9 or more and a content of 0.01 to 0.2% wZv, and sterilization.
  • the tea drink was prepared.
  • This tea beverage was a green tea beverage, oolong tea beverage, barley tea beverage, and black tea beverage with a moderately stimulating sensation in which the flavor of the tea extract was added with the flavor of ECGCG.
  • the commercially available sterilized green tea beverage had a ratio of EGCG to force phain of 0.7 to 0.8, and all EGCG contents were less than 0.01% wZw.
  • the commercial sterilized black tea beverage had a ratio of EGCG to force phain of 0.6 and EGCG of 0.004% wZw.
  • a soup using the extract containing EGC G was prepared.
  • the extract containing EGCG used was Sanfenon LA-10, and the product of the present invention was prepared by adding this extract, and the control was obtained by adding no extract.
  • Table 22 shows the composition of the soup containing the extract containing EGCG. This According to the composition, soup was prepared, packed in 200 ml cans, and subjected to heat sterilization at 120 ° C for 15 minutes to obtain canned products. The sensory evaluation was performed in the same manner as in Example 12. Pa
  • the average number of flannel members was determined using a five-point scale (1 good to 5 bad). Table 23 shows the results.
  • Example 17 Sprinkle 2.4 kg of fish meal, 0.5 kg of salt, and 0.3 kg of sodium glutamate (3.2 kg in total), and sprinkle 1 kg of the freeze-dried product of the present invention and the extract containing EGCG as a control as described above. Per 3 g, and granulated according to a conventional method. 0.4 kg of laver and 1.2 kg of sesame were well mixed with about 3.2 kg of each of these granulated products. These sprinkles were sprinkled on cooked rice and the sensory evaluation was performed in the same manner as in Example 12. As a result, it was revealed that the product of the present invention suppressed the fish odor of fish meal as compared with the control, had a deeper taste as a whole, and had a spice-like function as a secret taste. It was found that the product of the present invention generally improves the quality of sprinkling.
  • Example 17 Example 17
  • Contrast of the present invention Contrast of the present invention Contrast of taste 2.9 3. 0 2. 9 3.2
  • substances that antagonize the estrogen receptor agonist, and foods or beverages containing the same, may cause inappropriate physiological symptoms caused by excessive estrogen or endocrine disrupting substances, that is, estrogen receptor.
  • Malignant tumors, uterine fibrosis, endometritis, hypospermia, and enlarged prostate can be effectively improved or prevented.
  • the present invention provides a food or beverage in which catechins are fortified, exhibit an irritating sensation of bitterness, have a taste, and are well-balanced in taste.

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Description

明 細 書 医薬、 飲料又は食品 技術分野
本発明は、 エストロゲンレセプターを介して起こる疾病を治療又は予防するた めの医薬、 飲料又は食品に関する。 背景技術
エス トロゲンは、 ヒ 卜の生理学において、 広い、 重要な機能を有する内因性ホ ルモンである。 主として、 このホルモンは、 男性女性両方の生殖系に影響を及ぼ す。 例えば、 成人女性においては、 妊娠及び授乳の過程においてエストロゲンは 欠くことができない。 また、 心臓発作及び骨粗鬆症の危険性を低減する。 さらに、 出産前及び出産後早期におけるアンドロゲンに対するエストロゲンの比率は、 性 的分化及び適当な生殖器官の適切な形成を調節する。 エストロゲンはまた、 ？し房 及び子宮細胞の増殖、 即ち癌に関連し、 その症状の一つとしてエス トロゲン依存 性の乳癌が知られている。 また、 エストロゲン依存性の別の症状としては、 子宫 線維症 （子宮類線維腫疾患） 、 子宮内膜炎及び平滑筋細胞増殖等が知られている。 男性においては、 エストロゲンは、 精子産生を調節しており、 エス トロゲンの異 常により単位濃度あたりの精子数の減少 （精子減少症） をもたらす。 また、 前立 腺肥大についてはアンドロゲンが関与することが知られており、 抗アンドロゲン 剤の投与による治療が検討されているが、 近年、 前立腺細胞のうちエストロゲン レセプターが存在する細胞も確認されており、 エストロゲンレセプターの発現を 抑制する物質 mepartricinが前立腺肥大の抑制剤として検討されてきている（The Prostate 38： 17-27. 1999) 0 しかし、 エストロゲンレセプタ一に対してエストロ ゲンと競合する物質が前立腺肥大を抑制するという報告はない。
また、 近年の研究によりエストロゲンが、 女性の生殖及び性組織の機能に関連 した恒常性機能の他にも、 他の多くの恒常性機能を有することが示されてきてい る。 実際、 男性においてエストロゲンレセプターは、 レセプター部位と D N A認 識部位を有すること、 そして、 エストロゲン及び心臓血管系に関わる多くの組織 を形成する能力を有することが分かっている。 しかしながら、 男性及び女性両方 におけるエストロゲンの作用の正確な本質は、 形成の局面を除いて、 研究が始ま つたばかりであり、 現在のところほとんど分かっていない。
生物学的に活性な分子としてのエストロゲンは、 細胞内レセプターへの結合に よってその特性を発揮する。 レセプター及び結合したリガンドは、 細胞の核に移 動した後、 その複合体が D N A上のある特定の認識部位に結合し、 ある特定の遺 伝子を発現させることによって、 その作用を発揮する。 しかしながら、 このレセ プタ一^ ·の結合と調節にっレ、ては、 ほとんど分かっていない。
一方、 最近、 環境中に放出された化学物質のなかにホルモン類似作用あるいは 抗ホルモン作用が見出されたものがあり、 これらを総称して内分泌かく乱物質
(あるいは環境ホルモン） と呼んでいる。 例えば、 塩素系の殺虫剤、 動物の健康 製品、 プラスチック、 燃焼副産物、 抗菌剤、 除草剤やビスフニノール A、 ノニル フユノ一ルに代表される工業用化学物質などは、 生物に対して影響を与えること が知られている。 該物質の野生動物の生態系への影響としては、 生殖能の変化、 特に雄の雌化、 生殖能の低下、 ふ化率の低下、 子の生存率の低下、 生殖行動の異 常等が報告されている。 また、 ヒ 卜の健康への影響としては、 精子数の減少、 子 宫内膜症、 不妊、 卵巣ガン、 子宮ガン、 前立腺がん等が疑われている。
これらの環境中に存在する内分泌かく乱ィヒ学物質の幾つかは、 性ホルモンであ るエストロゲンに対するレセプターに結合し、 エストロゲン様作用を引き起こす (ァゴ二ストとして作用する） ことが報告されている。 例えば、 ヒ ト精液の質の 低下を含めた生殖能力の低下について、 過去 5 0年間に精子数がほぼ半減してい ることが報告されている (BMJ 305： 609-613. 1992)。
内分泌撹乱作用、 いわゆる環境ホルモン作用が疑われる物質についての一般的 な動物実験として幼若ラットを用いた子宮肥大試験がある。 この試験は、 子宮の 増殖がエストロゲンによって制御されていることを利用した試験法である。 すな わち思春期前の幼若動物では、 内因性のエストロゲンである 1 7 β -エストラジ オールの血中濃度が低く保たれており、 子宫は外因性のエストロゲンに対して用 量依存的に肥大する （井上達監修、 内分泌撹乱化学物質の生物試験研究法 （2 0 0 0 ) シュプリンガ一 ·フエアラーク東京 （株） ） 。 したがつてこの試験法の試 験期問は、 ラットが離轧可能な生後 1 8日から思春期に達する前の生後 2 5日ま でに限定されるが、 試験期間が短いこと、 特殊な技術を必要としないこと、 再現 性がよいことなどの理由から O E C Dでもこの試験法を奨励している （0ECD VALIDATION WORK ON IN- VIVO UTEROTROPHIC SCREENING ASSAY, Protocol for demonstrat ion of dose-response of the uterotrophic assay using the reference oestrogen ethinyl oestradiol (1999) ) 。 この試験法を用いて、 幼 若ラットに內分泌撹乱作用が疑われているビスフエノール Aや 4 -ノニルフエノ ールを投与すると子宮重量が増加することが報告されている （Environ Health Perspect, 106： 719-720, 1998； Toxicological Sciences, 54 : 154—167， 2000)。
—方、 このようなエストロゲンレセプターに結合して内分泌かく乱作用を引き 起こす物質に対して、 エストロゲンレセプターに拮抗的に結合する物質が内分泌 かく乱物質の影響を避けるのに効果的であると考えられてきた。 例えば、 大豆の イソフラボンは、 内分泌かく乱物質と同程度の強さでエストロゲンレセプターに 結合することが知られている。 し力 し、 イソフラボンは経口摂取することにより 生体内の内分泌かく乱物質と競合し、 エストロゲン様作用を示すことにより、 該 内分泌かく乱物質の影響と同類の影響が出る （Environ Health Perspect, 106： 369-373, 1998) 。
脂肪酸、 力テキン類ゃ没食子酸誘導体類などが 5 α—レダクターゼ （5α - reductase) の活性を阻害するため、 前立腺癌や前立腺肥大の治療に効果的であ るとレヽぅ特許力 米国 Arch Development Corp.社の Shutsung Liaoらによって出 願されている （US 5605929、 W099/22728号公報、 特表平 1 1—5 0 7 0 2 2号） 。 これらの公報には、 動物モデルを含めて治療例の記載はなく、 過去の論文 （例え ば、 P. K. Si iteriら（1970) J. Cl in. Invest. 49 : 1737 - 1745、 P. C. Walshら (1983) J. Cl in. Invest. 72 : 1772-1777、 E. Stonerら（1992) J. Urol.
147 : 1298—1302、 G. J. Gormleyら（1992) N. Eng. J. Med. 327 : 1185—1191、 N. Bruchovskyら（1988) J. Cl in. Endocrinol. etab. 67 : 806- 816など） に基づい てその効果を推定したものでしかない。
また、 5ひ一レダクタ一ゼのァイソザィムは 2種類あり、 動物種や組織によつ てその分布は全く異なっている （Λ. E. Thigpenら （1993) J. Cl in. Invest. 92 :903-910、 David W. Russel l & Jean D. Wi lson ( 1994) Annu. Rev. Biochem. 63 : 25-61) 。 ヒ トにおいて前立腺癌や前立腺肥大に関与しているのは 2型の 5 a —レダクターゼである。 ところが、 Liaoらがカテキン類ゃ没食子酸誘導体類によ る阻害を確認しているのは 1型の 5 ひ一レダクターゼである。 したがって、 Liao らのデータからはヒ トの前立腺癌や前立腺肥大に対する力テキン類ゃ没食子酸誘 導体類の有効性は何ら明らかではない。 また、 上記の特表平 1 1一 5 0 7 0 2 2 号には、 没食子酸誘導体やカテキン類の没食子酸基は 5 α—レダクタ一ゼの阻害 に関係なく、 カテキン類の没食子酸基以外の部分の構造が重要であるとしている。 さらに、 Liaoらは没食子酸誘導体類ゃカテキン類の 5 α—レダクタ一ゼの阻害 作用にはカテキン類の没食子酸基以外の部分の構造が重要であり、 没食子酸誘導 体類には 5 α—レダクタ一ゼ阻害活性がないこと （US 5605929号） 、 また、 whole cel l assayの条件下においては 5 α—レダクタ一ゼの活性を全く阻害しな いこと （W099/22728号公報） を報告している。
以上のように、 力テキン類ゃ没食子酸誘導体類に関して、 エストロゲンレセプ タ一を選択的にブロックすることにより、 エストロゲンレセプタ一を介するシグ ナルを制御することはこれまで知られていない。 発明の目的
本発明の目的は、 内分泌かく乱物質の影響を防止するための安全性に優れた医 薬、 飲料又は食品を提供することにある。 発明の概要
本発明者らは、 経口摂取することにより、 生体内の内分泌かく乱物質と拮抗し、 該内分泌かく乱物質を遮断する物質のスクリーニング系を確立し、 鋭意努力の結 果、 驚くべきことに生体内においてエストロゲンレセプターに結合する物質にも エストロゲン様作用を示さない物質があることを見出し本発明を完成した。 すな わち、 本発明を概説すれば、 本発明の第 1の発明は、 エストロゲンレセプターの ァゴニストと拮抗作用を有する物質を有効成分として含有することを特徴とする、 ァゴニストがエストロゲンレセプターに結合することにより起こる疾病の治療剤 または予防剤に関する。
本発明の第 2の発明は、 エストロゲンレセプターのァゴニス卜と拮抗作用を有 する物質を含有、 添加及びノ又は希釈してなることを特徴とする、 ァゴニス トが エストロゲンレセプターに結合することにより起こる疾病の症状改善用又は予防 用飲料又は食品に関する。
本発明の第 1、 2の発明において、 エス トロゲンレセプターのァゴニストと拮 抗作用を有する物質としては、 エストロゲン様作用を示さないアンタゴニス卜で あって、 下記一般式 I ：
Figure imgf000006_0001
(式中、 、 R2は一 H、 一 O H又は一 O— R4を示す。 R3は一 H又は一 O Hを 示す。 このとき、 R4は下記式 I I ：
Figure imgf000006_0002
I I に示す化合物、 その誘導体またはそれらの塩を示す） に示す化合物、 没食子酸、 それらの誘導体および薬理学的に許容されるそれらの塩から選択される化合物が 好適に使用できる。
式 Iに示す化合物としては、 カテキン類が例示され、 例えば、 ェピカテキン、 ェピガロカテキン、 ェピガロカテキンガレ一ト、 ェピカテキンガレート、 ガロカ テキンガレート、 力テキンガレート、 カテキン、 ガロカテキン等が好適に使用で きる。 また、 没食子酸の誘導体としては、 没食子酸エステルが例示され、 特に炭 素数 8以上のアルコールと没食子酸とのエステルが本発明に好適である。
また、 本発明のァゴニストとしては、 内分泌かく乱物質が例示され、 例えば、 ダイォキシン類、 有機塩素系化合物、 フエノール類、 フタル酸エステル類、 芳香 族炭化水素類、 農薬類、 有機スズ化合物、 エストロゲン類、 あるいはマイレック ス、 トキサフェン、 アルディカーブ又はキ一ボンが挙げられる。 更に具体的には、 ゼノラール、 ゲニスティン、 クメストロール、 o, p- DDT、 キーポン、 メ トキシク ローノレ、 ゼァラレノン、 ダイォキシン、 p-ォクチノレフエノーノレ、 ノニノレフエノー ノレ、 デノレドリン、 ブチルベンジルフタレート、 及び Z又はビスフエノール Aが挙 げられる。
本発明の第 3の発明は、 力テキン類を添加してなるカテキン類含有アルコール 飲料に関する。 本発明の第 3の発明において、 カテキン類としてはェピガロカテ キンガレ一トが好適であり、 ェピガロカテキンガレート含有量としては 0 . 0 0 2〜 0 . 7 5 % wZwの範囲が好適であり、 本発明のアルコール飲料はカテキン 類の他に茶抽出物を含有してもよレ、。 本発明のアルコーノ li:料においてカフエイ ンに対するェピガロカテキンガレートの比は 0 . 9以上であるのが好ましく、 本 発明により、 ェピガロカテキンガレートが増量され、 カフェインが低減されたァ ルコール飲料の提供が可能になる。 本発明のアルコール飲料はカテキン類、 茶抽 出物、 アルコールの相乗作用により、 茶の濃厚感があり、 味の奥行き及びバラン スがよく、 アルコールの甘みが強調され、 苦味による味の引き締めと刺激的な感 覚の味のアルコーノ 料である。
本発明の第 4の発明は、 カフェインに対するェピガロカテキンガレー卜の比が 0 . 9以上で、 ェピガロカテキンガレ一ト含量が 0 . 0 1〜 0 . 5 %wZwであ り、 殺菌工程を経て得られる茶飲料に関する。 本発明の第 4の発明の茶飲料とは、 殺菌工程を経て得られる例えば缶入り又はビン入り茶飲料であり、 例えば緑茶飲 料、 紅茶飲料、 ウーロン茶飲料、 麦茶飲料、 バナバ茶飲料である。 図面の簡単な説明
図 1 ：没食子酸誘導体のエストロゲンレセプターに対する結合活性を示す図で ある。 発明の詳細な説明
本明細書においてァゴニストとは、 エストロゲンレセプターに結合し、 ェス ト ロゲン様作用を示す物質のことを言う。 該エストロゲン様作用を有する物質とし ては、 内分泌かく乱物質あるいはエス トロゲン等が挙げられる。
本明細書において内分泌かく乱物質とは、 外因性内分泌かく乱物質もしくは環 境ホルモンとも称されるが、 動物の生体内に取込まれた場合に、 本来、 その生体 内で営まれている正常なホルモン作用に影響を与える外因性の物質を意味し、 正 常なホルモン作用を維持するもの、 促進するもの及び抑制するものも含まれる。 また、 正常なホルモン作用に影響を与える可能性のある物質も含まれる。 さらに、 本明細書においてエストロゲンとは、 通常生体内で生産される内因性エストロゲ ンまたは合成により生成されたエストロゲンのことを言う。 また、 ァゴニストが 結合するエストロゲンレセプターはひ型、 ）3型のいずれでもよいが α型のエスト ロゲンレセプターであることが好ましい。
現在、 内分泌かく乱作用を持つと疑われている物質 （群） は、 約 7 0である。 更にこれらの物質は、 日本環境化学会、 第 2 4回日本環境化学会講演会資料集 ( 1 9 9 8 ) において、 該当物質の分析方法から、 （1 ) カテゴリー 1 ：有機塩 素系化合物 （例、 有機塩素系化合物一般、 ポリ塩化ビフユニール （P C B ) ) 、
( 2 ) カテゴリー 2 ： フエノール類 （例、 フエノール類一般、 ビスフエノール Α、 2, 4-ジクロロフエノーノレ、 ペンタクロロフエノ一ル） 、 ( 3 ) カテゴリー 3 ： フ タル酸エステル類 （例、 フタル酸エステル類一般） 、 （4 ) カテゴリー 4 ：芳香 族炭化水素類 （例、 ベンゾ（a)ピレン、 アジピン酸ジ- 2-ェチルへキシル （D E H A) 、 ベンゾフエノン、 4-ニトロトルエン、 スチレン 2量体及び 3量体、 1，2-ジ ブロモ -3-クロ口プロパン、 スチレン、 n—ブチルベンゼン） 、 （5 ) カテゴリ 一 5 ：廣薬類 （例、 殷薬類一般、 2, 4, 5-T (トリクロ口フユノキシ酢酸） 、 2，4- D (ジクロロフエノキシ酢酸）、 べノ ミル、 アミ トロール、 メ ソミル） 、 （6 ) 力 テゴリー 6 ：有機スズ化合物、 （7 ) カテゴリ一 7 ： エス トロゲンの 6つのカテ ゴリ一、 上記力テゴリーに属さないダイォキシン類及び上記力テゴリ一対象外で あるマイレックス、 トキサフェン、 アルディカーブ及びキーボンに分類されてい る。 それらについて表 1、 表 2および表 3に示す。
P .
表 1 カテゴリー分類 z物質名
カテゴリ一 1 メ トキシク口ノレ
ポリ塩化ビフエニール類 (PC 才クタク口ロスチレン
B)
ポリ臭化ビフヱニール類 （PB
B)
へキサクロ口ベンゼン （HCB) カテゴリ一 2
へキサクロロシク口へキサン ペンタクロロフエノー/レ （pc
P)
クロノレデン ァノレキルフエノーノレ （C 5〜C
9)
才キシクロノレデン ビスフエノール A
trans -ノナクロノレ 2， 4ージクロロフエノーノレ
DDT
DDE, DDD カテゴリ一 3
ゲノレセン フタル酸ジ -2-ェチルへキシル アルドリン フタル酸ブチルベンジル エンドリン フタル酸ジ -n—ブチル ディノレドリ ン フタノレ酸ジシク口へキシノレ エン ドスノレファン （ベンゾェピ フタノレ酸ジェチノレ
ン）
ヘプタクロノレ フタノレ酸ジペンチノレ ヘプタクロルェポキサイ ド フタル酸ジへキシノレ
(表右上に続く） フタル酸ジプロピル 表 2
カテゴリー分類 z物質名
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スナレンの 2及ひ 3量体 マノセノ (マノコゼノ) マノィ 7
n ノナノレへノゼノ メテフム
メ 卜 リ ノンノ 力アコ リー 5 ンへノレ 卜 リ ノ
2 4 ΰ 卜 リク口ロノエノキン 6ΐ エスノエノ 、レレ一 卜
Δ, ノン ノ エノ ン ノエ ヽ ノレ1 ~ト ァミ トロール ペルメ ト リ ン アトラジン ピンクロゾリン ァラクローノレ ジネブ
ジラム
ェチノレハ°ラチオン
(表右上に続く） 表 3
Figure imgf000012_0001
内分泌かく乱物質は、 上記で列挙したものに限定されるものではなく、 例えば、 ゼノラール、 ゲニスティン、 クメストロール、 o, p- DDT、 キーポン、 メ トキシク ローノレ、 ゼァラレノン、 ダイォキシン、 p -ォクチノレフエノーノレ、 ノニノレフエノー ル、 デノレドリン、 ブチルベンジルフタレート、 及び 又はビスフエノール Aが例 示される。
本明細書においてエストロゲンレセプターのァゴニストと拮抗作用を有する物 質 （本明細書中、 アンタゴニストとも称す） とは、 エストロゲンレセプターに結 合するがエストロゲン様作用を示さない物質であって、 ァゴニストと生体内で拮 抗作用を有している物質であれば、 いずれもが好適に使用できる。 特に限定はな いが、 例えば、 カテキン類、 没食子酸及び Z又はそれらの誘導体が好適に使用す ることができる。
また、 ァゴニスト、 アンタゴニス トのスクリーニング方法としては、 特に限定 はないが、 例えば、 インビトロのスクリーニング方法としては、 まず第 1段階と してこれらの候補物質とエストロゲンレセプタ一との結合活性について、 公知の 方法、 例えば実施例 7記載の方法、 すなわちエストロゲンレセプターに対する、 蛍光標識されたリガンドと候補物質との拮抗作用を測定することによりスクリ一 ユングすることができる。 次に、 第 2段階としてそれらのエストロゲンレセプタ 一に結合活性を有することが認められた候補物質にエスト口ゲン様活性が存在す るかどうかを、 公知の方法、 例えば Environ. Health Perspect. 103： 113-122 (1995)に記載の E— S C R E E Nアツセィ、 すなわちヒ ト乳癌由来細胞 （MC F
- 7 ) の培養時に候補物質を添カ卩し、 M C F— 7の増殖活性を調べることにより ァゴニス卜であるか、 アンタゴニストであるかを判別することができる。
さらにインビボの有効なアンタゴニス卜のスクリーニング方法としては、 特に 限定はないが、 例えば実施例 1記載の方法、 すなわちエストロゲンレセプターの ァゴニストを投与し、 さらに候補物質を経口投与することで子宮重量の変化を調 ベることによりスクリーニングすることができる。 また、 この際候補物質をエタ ノールに溶解して投与することで、 吸収効率を上げて調べることもできる。
該カテキン類としては、 例えば、 ェピカテキン、 ェピガロカテキン、 ェピガ口 カテキンガレ一卜、 ェピカテキンガレ一卜、 ガロカテキンガレート、 力テキンガ レート、 カテキン、 ガロカテキン及び/又はそれらの誘導体が例示される。
また、 本発明においてカテキン類の誘導体とは、 エストロゲンレセプターのァ ゴニストと拮抗作用を有する物質であれば特に限定はない。
本発明に使用される没食子酸の誘導体としては特に限定はないが、 分子内に没 食子酸の構造を有する化合物を使用することができる。 例えば、 没食子酸の水酸 基、 カルボキシル基が他の分子の官能基と反応して生成するエステル、 エーテル、 アミ ド等の化合物が例示される。 特に、 没食子酸のカルボキシル基と水酸基を有 する化合物とのエステルが本発明に好適に使用される。
当該エステルとしてはアルコール性、 フエノール 1"生水酸基を有する化合物と没 食子酸とのエステルが挙げられ、 ペンチルガレート、 へキシルガレート、 へプチ ルガレート、 ォクチルガレート、 ノニルガレート、 デシルガレート、 ゥンデシル ガレート、 ドデシルガレート、 トリデシルガレート、 テトラデシルガレート、 ぺ ンタデシルガレート、 セチルガレート、 ヘプタデシルガレート、 ォクタデシルガ レ一ト等が例示され、 特に好適には炭素数 8以上の脂肪族アルコールと没食子酸 とのエステル、 例えばォクチルアルコール、 ドデシルアルコール、 セチルアルコ —ル等と没食子酸のエステルが本発明に特に好適である。 また、 上記の脂肪族ァ ルコールは、 エストロゲンレセプタ一へのァゴニス 卜の結合に拮抗する作用を保 持する範囲で側鎖や不飽和の炭化水素鎖を有していてもよく、 また、 炭化水素鎖 上の水素原子がハロゲンや官能基、 例えば水酸基、 カルボキシル基、 アミノ基、 ォキソ基等で置換されていてもよい。
本明細書においてァゴニス卜がエストロゲンレセプターに結合することにより 起こる疾病としては、 精子数の減少、 エストロゲン依存性の癌、 子宮類線維腫疾 患、 子宮内膜炎、 及び平滑筋細胞増殖、 精子減少症等のエス トロゲンに対する異 常な応答が原因として報告されている疾患などが例示される。 また、 エストロゲ ン作用抑制により治療効果が期待されている前立腺肥大についても、 本発明の治 療剤又は予防剤の対象となる疾患に包含される。
本明細書において、 エストロゲンレセプターのァゴニス卜と拮抗作用を有する 物質とは、 エス トロゲンレセプターに結合することにより、 内分泌かく乱物質や エス トロゲン等のァゴニス トによるエス トロゲンレセプターへの結合との拮抗作 用を示す物質のことをいう。
本明細書中に記載のエストロゲンとしては、 例えば、 1 7 β一エストラジオ一 ノレ、 エス トロン、 結合型エス トロゲン （プレマリン （登録商標） ) 、 ゥマエス ト ロゲン、 1 7 —ェチニルエストラジオ一ル等のエストロゲン活性を有するステ ロイド化合物が挙げられる。
本発明におけるエストロゲンレセプターのァゴニストと拮抗作用を有する物質 としては、 式 Iに示す化合物、 没食子酸、 それらの誘導体および薬理学的に許容 されるそれらの塩から選択される化合物が例示され、 また式 Iを基本骨格とする ポリマー、 オリゴマーも本発明のエストロゲンレセプターのァゴニス卜と拮抗作 用を有する物質に包含される。
これらの誘導体としては、 例えばプロシア二ジン Β— 2 3， 3 ' —ジガレー ト、 プロシア二ジン Β— 3、 プロデルフィ二ジン Β— 4 3 ' 一ガレ一ト、 ゥ —ロンホモビスフラバン Α、 アツサミカイン Α、 テオガリン、 ス トリクチン等が 例示される。
またテアフラビン、 テアフラビンガレート、 テアフラビンガレー B、 テアフ ラビンジガレートを本発明の有効成分として使用してもよい。
本発明で使用することができるカテキン類は、 茶カテキン類が例示される。 力 テキンとはフラボノィドと総称される色素成分の一種であり、 茶には 8種のカテ キンの存在が知られている。 カテキン類としては市販品を使用することができ、 また公知の方法でも調製することができる。 例えば緑茶より調製し、 使用するこ とができる。 本発明のカテキン類の調製法としては、 特に限定はないが、 例えば、 化学合成によって、 又は天然物から抽出し精製することによって、 調製すること ができる。 また、 本発明において有効成分として用いるカテキン類は、 主に茶力 テキン類が挙げられ、 天然物から抽出して精製する場合、 特に限定はないが、 例 えば、 紅茶などの発酵茶、 ウーロン茶などの半発酵茶、 緑茶などの不発酵茶から 抽出することができる。 また、 茶抽出物を本発明のエストロゲンレセプターのァ ゴニストと拮抗作用を有する物質として好適に使用することもできる。
例えば、 ェピガロカテキンガレ一ト （以下、 EGCGとも称す） 抽出物は、 特 に限定はないが、 可食できるものからの抽出物であればよく、 EGCGの含量が 多いものが好適である。 例えば、 茶抽出物で、 水及び有機溶剤を用いた EGCG 抽出物が挙げられ、 サンフエノン 100 S、 サンフエノン DCF— 1、 サンフエ ノン LA— 50及びサンフエノン BG (いずれも太陽化学 （株） 社製） がある。 なお、 これらの EGCG含量はそれぞれ 50、 53、 18、 50%wZwである。 またカフェイン含量はそれぞれ 10%w/w、 検出限界以下、 5%wZw、 3% wZwである。 カフェインは過剰摂取により毒性、 発癌性、 コレステロール上昇 作用、 カルシウム尿症等を引き起こすことが知られていることから、 好適には力 フェイン等の共雑物を減少させた茶抽出物を、 飲食品に使用することができ、 さ らにカフェインを減少させることにより、 官能面 （味覚） においても好適にする ことができる。
本明細書において 「茶』 とは、 茶 〔C a mme I l i a s i n e n s i s,
(L) O. Ku n t z e] の全草若しくはその一部分、 例えば葉、 木部、 根、 実 等の生若しくは乾燥物のそのまま若しくは部分発酵物又は完全発酵物を意味し、 それらの部分を単独で、 又は任意に組み合わせて使用することができる。 抽出原 料として茶葉を用いる場合、 各種形態のものがあり、 たとえば茶生葉から仕上げ 茶 （乾燥茶） まで、 通常の製茶工程のいずれの段階のものでもよく、 かつ発酵の 程度に関係なく、 例えば穀物茶では麦茶、 炒り米茶、 そば茶等が挙げられ、 葉茶 では緑茶、 紅茶、 ほうじ茶、 抹茶、 ウーロン茶、 バナバ茶等が挙げられる。
本発明のエストロゲンレセプタ一においてァゴニス卜と拮抗作用を有する物質 である茶抽出物は、 前記の茶力テキン類を含有していればよく、 従って、 茶の粗 抽出物を用いることができる。 この茶粗抽出物は、 茶を温水 （好ましくは熱湯） によって抽出する力 \ 又は有機溶媒を用いて抽出することにより、 得ることがで きる。 有機溶媒としては、 例えば、 メチルアルコール、 エチルアルコール、 n— プロピルアルコール、 イソプロピルアルコール、 若しくはブチルアルコール等の 低級アルコール、 酢酸メチル、 酢酸ェチル、 酢酸プロピル、 若しくは酢酸ブチル 等の低級エステル、 又はアセトン、 若しくはメチルイソブチルケトン等のケトン 類を用いることができ、 これらの有機溶媒を駒虫又は適: Ώ且み合わせ、 更には無 水又は好ましくは含水状態で用いることができる。
上記の水抽出及び有機溶媒抽出の方法としては、 通常の生薬抽出に用いられる 方法が好適に使用できる。 例えば、 （乾燥） 茶葉 1重量部に対し、 水又は有機溶 媒 5〜2 0重量部を用いて、 攪拌しながら、 その沸点以下の温度で加熱還流する ことが望ましい。 抽出工程は、 通常は 5分〜 7日間、 好ましくは 1 0分〜 2 4時 間実施し、 必要に応じて、 攪拌等の補助的手段を加えることにより、 抽出時間を 短縮することができる。 水又は有機溶媒抽出液は、 濾過又は遠心分離等の適当な 方法により、 不溶物を分離することができる。 常法による熱水抽出物又は有機溶 媒抽出物の他に、 これらの抽出液を各種有機溶媒又は吸着剤等により、 更に処理 した生成物も、 本発明の合成抑制剤の有効成分として用いることができる茶抽出 物に含まれる。 これらの茶抽出物は、 必要に応じて、 濃縮や乾燥して粉末化した り、 更には冷水より結晶化して精製することができる。
こうして得られた茶抽出物は、 茶 （特に茶葉） に含まれるカテキン類、 すなわ ち、 茶カテキン類 （例えば、 ェピカテキン、 ェピガロカテキン、 ェピガロカテキ ンガレート、 ェピカテキンガレート、 ガロカテキンガレート、 カテキンガレ一ト、 カテキン、 ガロカテキン） を混合物として含み、 同時に原料茶に由来する不純物 を含んでいてもよい。 本発明のァゴニス卜がエストロゲンレセプターに結合することにより起こる疾 病の治療剤又は予防剤は、 エストロゲンレセプターのァゴニス卜と拮抗作用を有 する物質を有効成分として製造することができる。
本発明の治療剤又び予防剤は、 本発明で使用するエストロゲンレセプターのァ ゴニス トと拮抗作用を有する物質を有効成分とし、 これを公知の医薬用担体と組 合せ製剤化すれば良い。 当該製剤の製造は、 一般的には本発明で使用するエスト ロゲンレセプターのァゴニストと拮抗作用を有する物質を薬学的に許容できる液 状又は固体状の担体と配合し、 かつ必要に応じて溶剤、 分散剤、 乳化剤、 緩衝剤、 安定剤、 賦形剤、 結合剤、 崩壊剤、 滑沢剤等を加えて、 錠剤、 顆粒剤、 散剤、 粉 末剤、 カプセル剤等の固形剤、 通常液剤、 懸濁剤、 乳剤等の液剤とすることがで きる。 またこれを使用前に適当な担体の添加によって液状となし得る乾燥品とす ることができる。
医薬用担体は、 上記投与形態及び剤型に応じて選択することができ、 経口剤の 場合は、 例えばデンプン、 ？ L糖、 白糖、 マンニット、 カルボキシメチルセルロー ス、 コーンスターチ、 無機塩等が利用される。 また経口剤の調製に当っては、 更 に結合剤、 崩壊剤、 界面活性剤、 潤沢剤、 流動性促進剤、 矯味剤、 着色剤、 香料 等を配合することもできる。 さらにカテキン類を含有する液状の経口剤において は、 例えば 0 . 2〜4 0 %wZwのエタノールを含有させることにより、 力テキ ン類の吸収性に優れた製剤とすることができる。
—方、 非経口剤の場合は、 常法に従い本発明の有効成分である、 エス トロゲン レセプターのァゴニストと拮抗作用を有する物質、 その誘導体及びそれらの塩か ら選択されるものを希釈剤としての注射用蒸留水、 生理食塩水、 ブドウ糖水溶液、 注射用植物油、 ゴマ油、 ラッカセィ油、 ダイズ油、 トウモロコシ油、 プロピレン グリコール、 ポリエチレングリコール等に溶解ないし懸濁させ、 必要に応じ、 殺 菌剤、 安定剤、 等張化剤、 無痛化剤等を加えることにより調製される。
本発明の治療剤又は予防剤は、 製剤形態に応じた適当な投与経路で投与される。 投与方法も特に限定はなく、 内用、 外用及び注射によることができる。 注射剤は、 例えば静脈內、 筋肉内、 皮下、 皮内等に投与し得、 外用剤には坐剤等も包含され る。 本発明の治療剤又は予防剤としての投与量は、 その製剤形態、 投与方法、 使用 目的及びこれに適用される患者の年齢、 体重、 症状によって適宜設定され、 一定 ではないが一般には製剤中に含有される本発明で使用されるエス トロゲンレセプ ターのァゴニストと拮抗作用を有する物質の摂取量は、 特に限定はないが、 非毒 性投与レベルである約 0 . 0 0 1 g〜約 1 ◦ 0 g Z日、 好ましくは約 0 . 0 0 1 g〜約 1 0 g /日、 更に好適には約 0 . 0 0 1〜約 5 gである。 もちろん投与量 は、 種々の条件によって変動するので、 上記投与量より少ない量で十分な場合も あるし、 あるいは範囲を超えて必要な場合もある。 本発明の薬剤はそのまま経口 投与するほか、 任意の飲食品、 例えばアルコール飲料又は茶飲料に添加して日常 的に摂取させることもできる。 また本発明で使用されるエストロゲンレセプター のァゴニストと拮抗作用を有する物質をァゴニス卜がエストロゲンレセプターに 結合することにより起こる疾病の症状を改善又は予防するための飲食品の原料と して用いても良い。
飲料又は食品に添加する場合の本発明のエストロゲンレセプターのァゴニスト と拮抗作用を有する物質の形状は、 液状、 ペースト状、 粉末状、 フレーク状、 顆 粒状等いずれの形状でも良い。 取り扱いやすさや、 他の添加物と混合して使用す ることも考えれば、 乾燥して粉末状、 フレーク状、 顆粒状にすることが好ましい。 乾燥方法としては、 通常の乾燥方法、 例えばスプレー乾燥、 ドラム乾燥、 棚式乾 燥、 真空乾燥、 凍結乾燥などで行うことができる。
本発明の飲料又は食品としてはエストロゲンレセプターのァゴニストと拮抗作 用を有する物質を含有すれば良く、 エストロゲンレセプターのァゴニストと拮抗 作用を有する物質を含有、 希釈及び Z又は添カ卩してなる飲料又は食品である。 本発明の飲料又は食品に含有されるエストロゲンレセプターのァゴニストと拮 抗作用を有する物質の量には特に限定はないが、 エス トロゲンレセプターのァゴ 二ス トと拮抗作用を有する物質を 0 . 0 0 0 5 % w "wから 9 0 %w//w含有す る飲料又は食品が例示される。
本発明の飲料又は責品とは、 特に限定はないが、 例えば穀物加工品 （小麦粉加 ェ品、 デンプン類加工品、 プレミックス加工品、 麵類、 マカロニ類、 パン類、 あ ん類、 そば類、 麩、 ビーフン、 はるさめ、 包装餅等） 、 油脂加工品 （可塑性油脂、 てんぷら油、 サラダ油、 マヨネーズ類、 ドレッシング等） 、 大豆加工品 （豆腐類、 味噌、 納豆等） 、 食肉加工品 （ハム、 ベーコン、 プレスハム、 ソーセージ等） 、 水産製品 （冷凍すりみ、 かまぼこ、 ちくわ、 はんぺん、 さつま揚げ、 つみれ、 す じ、 魚肉ハム、 ソーセージ、 かつお節、 魚卵加工品、 水産缶詰、 つくだ煮等） 、 乳製品 （原料乳、 クリーム、 ヨーグルト、 バター、 チーズ、 練乳、 粉乳、 アイス クリーム等) 、 野菜'果実加工品 （ペース ト類、 ジャム類、 漬け物類、 果実飲料、 野菜飲料、 ミックス飲料等） 、 菓子類 （チョコレート、 ビスケッ ト類、 菓子パン 類、 ケーキ、 餅菓子、 米菓類等） 、 アルコール飲料 （日本酒、 中国酒、 ワイン、 ウイスキー、 焼酎、 ウォッカ、 ブランデー、 ジン、 ラム酒、 ビール、 清涼アルコ ール飲料、 果実酒、 リキュール等） 、 嗜好飲料 （緑茶、 紅茶、 ウーロン茶、 コー ヒー、 清涼飲料、 乳酸飲料等） 、 調味料 （しょうゆ、 ソース、 酢、 みりん等） 、 缶詰 ·瓶詰め '袋詰め食品 （牛飯、 釜飯、 赤飯、 カレー、 その他の各種調理済み 食品） 、 半乾燥又は濃縮食品 （レバーペースト、 その他のスプレッド、 そば' う どんの汁、 濃縮スープ類） 、 乾燥食品 （即席麵類、 即席カレー、 インスタントコ —ヒー、 粉末ジュース、 粉末スープ、 即席味噌汁、 調理済み食品、 調理済み飲料、 調理済みスープ等） 、 冷凍食品 （すき焼き、 茶碗蒸し、 うなぎかば焼き、 ハンバ ーグステーキ、 シユウマイ、 餃子、 各種スティック、 フルーツカクテル等） 、 固 形食品、 液体食品 （スープ等） 、 香辛料類等の農産 ·林産加工品、 畜産加工品、 水産加工品等が挙げられる。
本発明の飲料又は食品の製造法は、 特に限定はないが、 調理、 加工及び一般に 用いられてレ、る飲料又は食品の製造法による製造を挙げることができ、 製造され た飲料又は食品にエストロゲンレセプターのァゴニス卜と拮抗作用を有する物質 を有効成分として含有、 添加及び Z又は希釈されていれば良い。 例えば E G C G 含有粉末 （サンフエノン 1 0 O S ) をお茶と適当な濃度で混合し、 E G C G高含 有で新しい香味の機能性飲料又は食品とすることができる。 茶濃度は通常、 飲用 する濃度を基準 1とすると、 0 . 0 5から 4倍、 好ましくは香味面から 0 . 1力 ら 2倍が好ましい。 得られた E G C Gを含有する飲料又は食品は、 必要に応じ、 甘味料、 酸味料、 香料等を添加しても良く、 還元剤を追カ卩して添加しても良い。 また、 例えば当該飲料にはエタノール 0 . 5〜2 Q o/o wZwを添加し、 E G C G含有アルコール飲料としても良い。 更に炭酸ガスを入れて炭酸ガス入り EGC G含有アルコール飲料とすることもできる。
本発明により、 EG CG含量を増強した飲料又は食品が提供される。 これらの 飲食品中の EG CG含量は 0. 002〜5%wZwが好ましく、 0. 01〜0. 5%wZwが更に好適である。 EGCGは、 茶抽出物として添加しても良く、 力 テキン類抽出物として添力卩してもよい。 また EG CGの精製物を添加してもよい。 飲料又は食品中に EG CGを添加、 増強することにより、 カフヱインの過剰摂 取のない、 カフエインが低減又は除去された E G C G含有飲料又は食品が提供さ れる。
本発明により、 力テキン類を添カ卩してなるアルコール飲料が提供される。 本明 細書においてアルコール飲料とはェタノールを含有する飲料をいう。 アルコール 飲料中のエタノーノ 1^·量は、 例えば 0. 2〜4 Oo/owZwである。
アルコール飲料としてはカテキン類が添加されていればよく、 特に限定はない がカテキン類が添加された日本酒、 中国酒、 ワイン、 ウィスキー、 焼酎、 ゥォッ 力、 ブランデー、 ジン、 ラム酒、 ビール、 清涼アルコール飲料、 果実酒、 リキュ ール等が例示される。 これらのアルコー 料においてカテキン類含有量は、 茶 抽出物を含有する各アルコール飲料と比較し強化されておればよく、 カテキン類 量に対し、 カフェイン量が低減されておればよい。
アルコールの存在下でカテキン類の吸収性は増強されるので、 本発明のアルコ —ル飲料中のカテキン類の吸収性は極めて高い。 このように、 カテキン類のみを 強化することが可能になったため、 カテキン類の選択的摂取が可能になる。 本発 明のアルコール飲料中で力テキン類を摂取する場合には、 茶抽出物を大量に摂取 する場合のようにカフェインを大量に摂取することはない。 従って、 本発明のァ ルコ一ル飲料は安全性に優れたカテキン類の選択的摂取用の健康増強に有用な了 ノレコーノ 料である。
本発明のアルコール飲料中のカテキン類含量は 0. 004〜1. 5%wZwが 好ましく、 官能面より 0. 0 Z lo/owZwが更に好適である。 また本発明のァ ノレコーノ 1^料中の EGCG含有量は 0. 002〜0. 75%wZwが好ましく、 官能面より 0. 01〜0. 5%wZwが更に好適である。 またカフェインに対する E G C Gの比が 0 . 9以上で、 E G C G含量が 0 . 0 1〜0 . 5 %wZwの茶飲料、 例えば紅茶飲料、 緑茶飲料、 ウーロン茶飲料、 麦 茶飲料は茶抽出物の風味が増強され、 カフユイン含量が低減された新しい風味の 茶飲料である。 本明細書において茶飲料とは茶を主原料として製造された飲料を いう。 茶飲料の製造には殺菌工程が含まれる。 茶飲料は、 例えば、 加熱により殺 菌される。
調理及び加工においては、 調理 ·加工前、 調理 ·加工時、 更には調理 ·加工後 にエストロゲンレセプターのァゴニス卜と拮抗作用を有する物質を添加しても良 いし、 調理及び加工品やその材料をエストロゲンレセプターのァゴニス卜と拮抗 作用を有する物質へ添加し、 エス トロゲンレセプターのァゴニス トと拮抗作用を 有する物質を希釈しても良い。 飲料又は食品の製造においては、 任意の工程で、 エストロゲンレセプターのァゴニストと拮抗作用を有する物質を添加しても良い し、 飲料又は食品、 並びにその原料をエストロゲンレセプターのァゴニストと拮 抗作用を有する物質へ添加し、 エストロゲンレセプターのァゴニス トと拮抗作用 を有する物質を希釈し、 飲料又は食品に含有させても良い。 また、 添加は 1回又 は数回に渡って行っても良い。 従って、 簡便に新規な飲料又は食品、 即ち有効量 のエストロゲンレセプターのァゴニストと拮抗作用を有する物質を含有する飲料 又は食品を製造することができる。 いずれの工程を経た場合も、 エス トロゲンレ セプターのァゴニストと拮抗作用を有する物質を含有、 添加及び Z又は希釈して なる飲料又は食品は、 本発明の飲料及び食品と定義される。
本発明の飲料又は食品は、 エストロゲンレセプターのァゴニストと拮抗作用を 有する物質を含有、 添加及び Z又は希釈してなる飲料又は食品である。 またこの ような飲料又は食品を濃縮してもよい。 その生理機能を発現するための必要量の エストロゲンレセプターのァゴニス卜と拮抗作用を有する物質が含有されていれ ば特に飲料又は食品の形状に限定は無く、 本発明の飲料又は食品の形状は、 タブ レッ ト状、 顆粒状、 カプセル状等の経口的に摂取可能な形状も包含する。
また濃縮物として提供され、 摂取前に好適な範囲に適宜希釈されて使用される 濃縮型食品又は濃縮型飲料も本発明の食品又は飲料 （アルコール飲料、 茶飲料を 含む） に包含される物である。 本発明の治療剤あるレ、は予防剤を投与することによって、 該治療剤あるいは予 防剤中に含まれるアンタゴニス卜が内分泌かく乱作用を有する物質と拮抗し、 該 物質の生体への悪影響を治療又は予防することができる。 更に、 エス トロゲンに よる不適当な生理学的症状についても、 本発明の治療剤あるいは予防剤は、 エス トロゲンと拮抗することにより症状を改善又は予防することができる。 さらに、 下記実施例にも示されるように、 本発明により、 例えば内分泌かく乱作用を有す るにより引き起こされる子宮の肥大を予防することができる。 すなわち、 本発明 の治療剤または予防剤はエストロゲンの関与する生体制御作用の異常に起因する 種々の障害、 疾病の治療または予防に有用である。
本発明の飲料又は食品を摂取することによって、 該飲料又は食品中に含まれる アンタゴニス卜が内分泌かく乱作用を有する物質と拮抗し、 該物質の生体への悪 影響を治療又は予防することができる。 更に、 エス トロゲンによる不適当な生理 学的症状についても、 本発明の飲料又は食品は、 エス トロゲンと拮抗することに より症状を改善又は予防することができる。 実施例
以下、 実施例によって本発明を具体的に説明するが、 これらは本発明の範囲を 限定するものではない。 実施例 1
E G C Gのビスフエノール Aに対する抗エスト口ゲン様作用の検討
( 1 ) E G C Gの未成熟ラット子宮重量におよぼす影響
1 7日齢の雌性 S D系ラット （日本エスエルシーより購入） を母獣とともに入 荷し、 2 0 0齢で離乳させ、 翌日より実験に供した。 E G C G ( S I GMA社） 、 ビスフエノール A (以下、 B i s Aと称す） （東京化成工業） は落花生油 （ナカ ライテスタ社） に懸濁し、 S m l Z k g (体重） で強制経口投与した。 コント口 ール群には落花生油を同様に投与した。 1日 1回 3日間連日投与し、 最終投与の 2 4時間後に子宮を摘出し重量を測定した。
( 2 ) ァゴニス ト （エス トロゲン様） 作用の検討 B i s A、 EGCGをそれぞれ 80あるいは S O OmgZk g投与した。 その 結果を表 4に示した。 B i sA 80 OmgZk g群において子宫重量はコント ロール群に対し 137%に増加した。 一方、 EGCGは子宫重量の増加を示さな かつ†。
表 4
群 (n) 子宮重量 相対比
(m g ) (%)
コント口- -ル 7 40.4±2.8 100
B i s A 80 Omg/k g 7 55.2 ±2.3" 137
EGCG 8 Omg/k g 7 42.2±1.7 104
80 Omg/k g 6 39.3±3.2 97
平均値土標準誤差
* * ： p < 0. 0 V S ン卜ロ一ル
(3) アンタゴニス ト （抗エス トロゲン様） 作用の検討
B i sA 800mg/k g投与と同時に EGCG 80 Omg/k gを投与し た。 その結果を表 5に示した。
B i sA 80 Omg/k g群において子宮重量がコント口ール群 （ 10 0%) に比較し 147%に増加したのに対し EGCG投与により 1 16%にまで 抑制された。
表 5
群 (n) 子宮重量 相対比
(m g ) (%) コント口ール 5 37.2±2.4 100
B i s A 80 Omg/k g 4 54.7 ±5.5* 147
B i s A+EGCG 80 Omg/k g 6 43.0±2.7 1 16 平均値土標準誤差
* ： p < 0. 05 V s コントローノレ 実施例 2
E G C Gのェタノール溶解液のビスフエノール Aに対する抗エスト口ゲン様作用 の検討
1 7日齢の雌性 SD系ラット （日本エスエルシーより購入） を母獣とともに入 荷し、 20日齢で離乳させ、 翌日より実験に供した。 20 OmgZk gあるレ、は 4 OmgZk gとなるように秤量した B i s Aを少量のエタノールに溶解し、 ェ タノールの終濃度が 5%となるように落花生油を加え、 連日 3日間経口投与し、 翌日子宫を摘出し重量を測定した。 E G C Gは、 終濃度 10 %エタノ一ル水溶液 となるようにエタノールを加えた後、 水を加えて溶解し、 B i s Aを投与する 1 日前と、 連日の B i s Aを投与する 30分前に経口投与した。 その結果を表 6に 示した。
表 6
群 (n) 子宮重量 相対比
(m g ) (%) コン卜ロール 5 43.4±2.7 100
BisA 200mg/kg 6 57.7 ±5.2* 1 33
BisA 200mg/kg + EGCG lOOmg/kg 5 47.4±2.6 109
BisA 200mg/kg + EGCG 200mg/kg 5 39.8±4.5 92
BisA 40mg/kg 4 64.5 ±9.2' 149
BisA 40mg/kg + EGCG lOOmg/kg 5 41.2±2.2 95 平均値土標準誤差
* ： p < 0. 05 V s コント口一ノレ
B i sA 20 Om g/k g群において子宫重量がコントロール群 （10 0%) に比較し 133%に増加したのに対し EGCG l OOmg/k g投与で 109%にまで、 20 OmgZk g投与により 92%にまで抑制された。 また、 B i s A 4 Omg/k g群においてはコントロール群 ( 100%) に対し 14 9%まで増加したが、 EGCG 10 OmgZk g投与においては 95%にまで 抑制した。
EGCGは、 経口投与した場合にエストロゲン様作用を示さず、すなわちァゴ 二ストとしては作用せず、 B i s Aに対するアンタゴニストとして作用すること が分かった。 しかも EGCGを適量のエタノールを加えて溶解することにより、 比較的少ない投与量においても子宮重量の増加を抑制することが明らかになった。 EGCGはエストロゲンのアンタゴニストとして、 精子数の減少や前立腺肥大症 など、 内分泌かく乱物質によって生ずる不適当な生理学的症状だけでなく、 異常 なエストロゲン作用による腫瘍の悪化や子宫內膜炎、 子宮繊維症等に悩まされて いるヒ 卜の症状を改善又は予防する医薬、 飲料又は食品を提供することができる。 実施例 3 E G C Gのエタノール溶解液の 4ーノニルフエノールに対する抗エストロゲン様 作用の検討
16日齢の雌性 SDラット （日本エスエルシー） を母獣とともに購入し、 19 日齢で離乳させ翌日より実験に供した。
5 OmgZk gとなるように秤量した 4—ノニルフエノール （以下、 NPと称 す） を落花生油を加えて希釈し、 連日 3日間経口投与し、 3日目投与の翌日子宮 を摘出し重量を測定した。 EGCGは、 終濃度 10%エタノール水溶液となるよ うにエタノールを加えた後、 水を加えて溶解し、 NPを投与する 90分前に経口 投与した。 結果を表 7に示した。
群 (n) 相対比
(m g) (%)
:πン卜ロール 7 30.9 ±2.1 100
NP 50mg/kg 7 44.4 ±3.2* 144
NP 50mg/kg + EGCG 200mg/kg 7 33.7±1.9 109 平均 標準誤差
* ： p < 0. 05 V s コント口一ノレ その結果、 NP 5 OmgZk g群において子宫重量がコントロール群 （10 0%) に比較し 144%に增加したのに対し、 EGCG 200mgZk g投与 によって 109%にまで抑制された。 実施例 4
E G C Gの抗エスト口ゲン様作用におけるェタノ一ル濃度の検討
16日齢の雌性 SDラット （日本エスエルシー） を母獣とともに購入し、 19 日齢で離乳させ翌 より実験に供した。
4 Omg/k gとなるように秤量した B i s Aを少量のエタノールに溶解し、 エタノールの終濃度が 5%となるように落花生油を加えて希釈し、 連日 3日間皮 下投与し、 3日目の翌日子宮を摘出し重量を測定した。 EGCG 20 Omg/ k gは、 終濃度 10%、 5 %、 1 %、 0. 5 %あるいは 0 %ェタノ一ル水溶液と なるようにまずエタノールを加えて溶解した後、 水を加えて調整し、 B i sAを 投与する 90分前に経口投与した。 結果を表 8に示した。
B i s A 4 Omg/k g群において子宫重量がコントロール群 （100%) に比較し 186%に増加したのに対し EG CG 20 OmgZk g投与でェタノ ールを含まない場合には 1 61 %までしか抑制しなかったが、 エタノール 5%で は 140%、 エタノール 10%では 1 38%まで抑制し、 エタノールを含まない 場合に比べて子宮重量の増加を有意に抑制した。
表 8
群 (n) 相対比
(m g ) (%) iン卜ロール 7 26.9 ± 2.3 100
B i s A 4 Omg/k g 7 49.9 土 2.1* 186
B i s A+EGCG ェタノ —ル 10% 7 37.0 土 1.3* 138**
B i s A+EGCG ェタノール 5% 7 37.6 土 1.8* 140**
B i s A+EGCG ェタノ一ノレ 1% 7 40.1 土 2.0* 149
B i s A+EGCG ェタノール 0.5% 7 40.9 土 1.8* 152
B i s A+EGCG ェタノ —ル 0% 7 43.3 土 1.8* 161 平均値土標準誤差
氺 ： p<0. 05 V s コント口一ノレ
* * ： p < 0. 05 V s エタノーノレ 0% すなわち、 B i s Aを皮下投与した場合にも、 EGCGをエタノール濃度 5% 以上の濃度で投与すると、 ェタノールを含まない E G C Gを投与した場合に比べ てさらに強い抗エストロゲン様作用が期待できる。 実施例 5 EG CGエタノール溶解液の抗エス トロゲン様作用の検討
16日齢の雌性 SDラット （日本エスエルシ一） を母獣とともに購入し、 19 日齢で離乳させ翌 Sより実験に供した。
4 Omg/k gとなるように秤量した B i s Aを少量のエタノールに溶解し、 エタノールの終濃度が 5%となるように落花生油を加えて希釈し、 連日 3日問皮 下投与し、 3日目の翌日子宮を摘出し重量を測定した。 EGCG 20 Omg/ k gは、 終濃度 10%あるいは 0%エタノール水溶液となるようにエタノールを 加えた後、 水を加えて調整し、 B i s Aを投与する 30分前に経口投与した。 結 果を表 9に示した。
B i s A 4 Omg/k g群において子宮重量がコントロール群 （ 100%) に比較し 162%に増加したのに対し EGCG 20 Omg/k g投与でェタノ ールを含まない場合には子宫重量の増加を抑制しなかったが、 エタノール 10% 溶液では 1 18%まで抑制した。
表 9
群 (n) 相対比
(m g ) (%) コン トロール 6 30.8 ± 3.1 100
B i s A 4 OmgZk g 6 50.0 土 2.7* 162
B i sA+EGCG エタノーノレ 10% 7 36.4 土 1.4* 1 18**
B i sA+EGCG ェタノ一ノレ 0% 7 50.9 土 2.2* 165 平均値 ±標準誤差
* ： p < 0. 05 V s コン ト口一ノレ
* * ： p < 0. 05 V s エタノーノレ 0% 実施例 6
E G C Gェタノール溶解液の抗エスト口ゲン様作用における用量依存性
16日齢の雌性 SDラット （ 本エスエルシー） を母獣とともに購入し、 19 日齢で離乳させ翌日より実験に供した。 すなわち、 40mgZk gとなるように 秤量した B i s Aを少量のエタノールに溶解し、 エタノールの終濃度が 5%とな るように落花生油を加えて希釈し、 連日 3日間皮下投与または経口投与し、 3日 目の翌日子宮を摘出し重量を測定した。 EGCGは、 終濃度 10%エタノール水 溶液となるようにエタノールを加えた後、 水を加えて調整し、 B i s Aを投与す る 30分前に経口投与した。 結果を表 10に示した。
B i s A 4 OmgZk g経口投与群において子宫重量がコントロール群 （1 00%) に比較し 140%に増加したのに対し 10%エタノールを用いた EG C G溶液では、 4 OmgZk g投与でも子宮重量の増加を 106%にまで抑制した。 また、 B i sA 4 OmgZk g皮下投与群においても 160%にまで増加した のに対し、 EGCG溶液40mg k g投与で 136%にまで抑制した。
表 10
群 (n) 子宮重量 相対比
(mg) (%) コント口一ル 6 32.7 士 1.0 1 00
B i s A 4 Omg/k g、 経口投与 6 45.7 土 2.3* 1 40
B i sA+EGCG 4 Omg/k g 6 34.8 土 2.8 1 06**
B i sA + EGCG 10 Omg/k g 5 33.0 ± 4.4 1 01**
B i s A 4 Omg/k g、 皮下投与 5 52.2 土 2.9* 1 60
B i sA+EGCG 4 Omg/k g 5 44.4 土 1.5* 1 Q p * * *
B i sA+EGCG 10 Omg/k g 5 39.6 土 1.0* 1 1 # * # 平均値土標準誤差
* ： p < 0. 05 V s コント口一ノレ
* * ： p < 0. 05 V s B i s A 4 OmgZk g、 経口投与
*** : p<0. 05 v s B i s A 4 Omg/k 皮下投与 実施例 7
FP Screen - for - Competitors kit、 ER -ひ、 high sensitivityキッ卜 (V2577： PanVera社製） を用い、 種々の没食子酸誘導体のエス トロゲンレセプタ ■の結 合を試験した。 試験手順は基本的に付属のマニュアルに従った。 種々の没食子酸 誘導体 （n—ォクチルガレート （没食子酸 n—ォクチルエステル） 、 n—ドデシ ルガレート （没食子酸 n—ドデシルエステル） 、 n—セチルガレート （没食子酸 n—へキサデシルエステル） ） を DM S〇に溶解し段階希釈し希釈サンプルを作 つた （0.5 M〜0.0000000005 M) 。 この希釈サンプノレ 1 /x Lにキッ卜に添付の Screening buffer 4 9 μ Lを加えよく撹拌した。 そこに、 キットに添付の 10 nM-15 nM： ESl-ER(a) complex (ESI (ERに結合する蛍光リガンド) と ER(a)
(エストロゲンレセプター a) との複合体） 50 μ Lを加え全容 1 00 Lとし た。 室温で 1時間放置した後、 Full-Range BEACON 2000 (PanVera社製） を用い て励起波長： 360 nm、 蛍光波長： 5 3 5 n mで蛍光偏光度を測定した。 結果は、 図 1及び表 1 1に示すようになった。 図中、 四角 （國） 、 三角 （T) 及び菱形 （♦) は、 それぞれ n—セチルガレート、 n—ォクチルガレート及び n -ドデシルガレートについての結果を表す。 それぞれの没食子酸誘導体のエスト ロゲンレセプターに対する結合の強さは、 ES1-ER (ひ） complexの ES1と競合しそ の結合を 50%阻害する活性を有する濃度で表した （ICso) 。 没食子酸誘導体
(n—ォクチルガレート、 n—ドデシルガレート、 n—セチルガレート） は、 結 合の強さに強弱はあるもののエストロゲンレセプターに対して結合活性を有する ことが判った。
サンプル名 IC50 ( )
n—ォクチルガレート 3.38 X 10一6
n—ドデシルガレート 3.11 X If)-7 n—セチルガレート 4.76 _X -10—8 実施例 8
培養細胞の増殖試験は、 Ana . Sotoらの E- SCREEN assayと呼ばれる方法 (Environ. Health Perspect. 103:113-122(1995)) に準拠して行った。 すなわ ち、 ヒ ト乳癌由来細胞 （MCF— 7) を 4. 0 X 103細胞/ "100 L ゥヱ ルとなるように 96穴プレートに播種し一晚培蓥したのち、 B i sA、 B i s A と n—ォクチルガレートを加えたもの、 およびコントロールとしての無添加のも のとし、 培地はフヱノ一ルレッド非添加ダルベッコ改変イーグル培地に活性炭一 デキストラン処理した F C Sを 5 %添加したものを用い 4日間培養した。 細胞数 の測定は M T T法を用 、た。
結果は表 1 2に示した。 コントロールに対して B i s Aを添カ卩した場合の細胞 数は 1. 8倍に増殖しているのに対し、 B i s Aに n—ォクチルガレ一トを加え ると、 ほぼコントロールと同程度にまで細胞増殖を抑えていることが判った。
表 1 2
添力。物 相対細胞増加率 （％)
無添加 （コントロール） 100
B i s A 180
B i s A+ n—ォクチルガレ一ト 91 実施例 9
n—ォクチルガレートの B i s Aに対する抗エス トロゲン様作用
16日齢の雌性 SDラット （日本エスエルシー） を母獣とともに購入し、 19 日齢で離乳させ翌日より実験に供した。 n—才クチルガレー卜 （東京化成工業） を少量のェタノールに溶解した後、 ェタノール濃度が 5 %となるように落花生油 を加えて希釈し、 20日齢の雌の SDラットに連日 3日間経口投与し、 最終投与 の翌日に子宫を摘出し重量を測定した。 ビヒクル （Vehicle) 投与群には 5%ェ タノールを加えた落花生油を用いた。 B i s Aは少量のエタノールに溶解した後、 落花生油を加えてエタノール濃度が 5%となるように希釈し、 n—ォクチルガレ 一トを投与の 1時間半後に経口投与した。 結果を表 13に示す。 ここで n- Octyl Gallateは n—ォクチルガレ一トを示す。
B i s A 4 Omg/k g群において子宫重量が、 コントロール群 （ 10 0%) に比較し 161 %に増加したのに対し、 n—ォクチルガレート 126m gZk gあるレ、は 25mg k g投与において 108%と子宫重量の増加が有意 ：抑制され、 コントロールと同程度になった c
表 1 3
群 (n) 子宮重量 相対比
(m g) (%)
コン卜口一ル 5 30.4 ± 0.7 1 00
BisA 40mg/kg + Vehicle 7 48.9 ± 2. Γ 1 6 1
BisA + n-Octyl Gallate 25 mg/kg 6 32.7 ± 3.5 1 08"
BisA + n-Octyl Gallate 126 mg/kg 7 32.9 ± 3.6 1 08" 平均値土標準誤差
* ： p < 0. 05 V s コント口一ノレ
* * ： p < 0. 05 V s Vehicle n—ォクチルガレートは、 B i s Aに対して抗エストロゲン様作用を示した。 その効果は投与量を比較すると、 E G C Gと同程度かそれ以上の強さを示した。 実施例 1 0
n—ォクチルガレートの NPに対する抗エストロゲン様作用
1 6日齢の雌性 SDラット （日本エスエルシ一） を母獣とともに購入し、 1 9 日齢で離乳させ翌日より実験に供した。 すなわち、 n—ォクチルガレート （東京 化成工業） を少量のェタノールに溶解した後、 ェタノール濃度が 5 %となるよう に落花生油を加えて希釈し、 20日齢の雌の SDラッ卜に連日 3日間経口投与し、 最終投与の翌日に子宮を摘出し重量を測定した。 ビヒクル （Vehicle) 投与群に は 5%エタノールを加えた落花生油を用いた。 NPは 5 Omgノ k gとなるように 落花生油を加えて希釈し、 n—ォクチルガレ一トを投与した 1時間半後に経口投 与した。 結果を表 14に示す。
NP 5 OmgZk g群において子宮重量が、 コントロール群 （100%) に 比較し 1 44%に増加したのに対し、 n—ォクチルガレート l S SmgZk g 投与において 1 1 7%と子宮重量の増加が有意に抑制された。 表 1 4
群 (n) 相対比
(m g ) (%) コン ト口一ノレ 7 33.1 ± 1.2 1 00 P 50mg/kg + Vehicle 7 47.6 ± 2.3* 1 44 P + n-0ctyl Gallate 25 mg/kg 5 40.4 ± 3.6 1 22
NP + n-Octyl Gallate 126 mg/kg 5 38.6 ± 2.4 1 1 7** 平均値土標準誤差
* ： p < 0. 0 5 V s コン トローノレ
* * ： p < 0. 05 V s Vehicle n一才クチルガレートは、 N Pに対しても用量を比較すると E G C Gと同等力 それ以上の強さの抗エスト口ゲン様作用を示した。 実施例 1 1
n—ォクチルガレートあるいは n—セチルガレートの B i s A皮下投与に対する 抗エストロゲン様作用
1 7日齢の雌性 SDラット （日本エスエルシー） を母獣とともに購入し、 20 日齢で離乳させ翌日より実験に供した。 すなわち、 n—ォクチルガレートまたは n—セチルガレート （ともに東京化成工業社製） を少量のエタノールに溶解した 後、 エタノール濃度が 5%となるように落花生油を加えて希釈し、 2 1日齢の雌 の SDラットに連日 3日間経口投与し、 最終投与の翌日に子宮を摘出し重量を測 定した。 ビヒクノレ （Vehicle) 投与群には 5%エタノールを加えた落花生油を用 いた。 B i s Aは少量のエタノールに溶解した後、 落花生油を加えてエタノール 濃度が 5%となるように希釈し、 皮下に投与した。 結果を表 1 5に示す。 ここで n-0ctyl Gallateは n-ォクチルガレートを n-Cetyl Gallateは n—セチルガレート を示す。
B i s A 4 Omg/k g群において子宮重量が、 コントロール群 （ 10 0%) に比較し 145%に増加したのに対し、 n—ォクチルガレート 5mgZ k gあるいは 25mg/k g投与において 1 1 7%あるいは 1 02 %と子宫重量 の増加が有意に抑制された。 また、 n—セチルガレート l mgZk gあるレ、は 5mgZk g投与においても 1 09%あるいは 1 04%と有意に抑制され、 いず れの場合もコントロールと同程度になった。
表 1 5
群 (n) 子宮重量 相対比
(m g ) (%)
コン ト口一ノレ 7 41.3 ± 3.7 1 00
BisA 40mg/kg + Vehicle 7 59.7 ± 2.7· 1 45
BisA + n-Octyl Gallate 5 mg/kg 7 48.3 ± 1.5 1 1 7**
BisA + n-Octyl Gallate 25 mg/kg 7 42.1 ± 1.9 1 02**
BisA + n-Cetyl Gallate 1 mg/kg 7 45.1 ± 2.3 1 09**
BisA + n-Cetyl Gallate 5 mg/kg 7 43.1 ± 2.0 1 04** 平均値土標準誤差
* ： p < 0. 05 V s コント口一ノレ
* * ： p < 0. 05 V s Vehicle すなわち、 n—ォクチルガレートおよび n—セチルガレートは、 B i sAに対 して抗エスト口ゲン様作用を示した。 実施例 1 2
市販の麦茶へ EG CG含有抽出物としてサンフエノン DC F— 1をそれぞれ 0. 00 1、 0. 0 1、 0. 05、 0. 1、 0. 5、 1. 0及び 1. 5%添加して官 能評価を行った。 即ち、 1 0名のパネルメンバーで、 味、 香り、 色調、 総合につ いて、 本発明品の EG CG含有抽出物添加麦茶及び対照の無添加麦茶を比べ、 官 能評価した。 官能評価は 5段階 （1良〜 5悪） で評価し、 平均値で表示した。 そ の結果を表 1 6に示す。 表 16 EGCG含有抽 11物の添加効果
EGCG含有 官能評価
総合 評 価 油出物 （％) 味 香り 色調
ϋ (対照） 4. 0 3. 5 2. 8 3. 8 普通
0. 00 3. 6 3. 3 2. 8 3. 5 味のバランスやや良好 味のひきしめ効果弱い
0. 004 3. 3 3. 2 2. 8 3. 3 味の奥行きあり
味のひきしめ効果あり 味のバランスあり
0. 0 > 3. 2 3. 0 2. 8 3. 1 味の奥行きあり
味のひきしめ効果あり 味のバランス良好
0. 05 3. 2 3. 0 2. 8 3. 1 刺激味ややあり
濃厚感あり
0. 3. 0 3. 0 2. 8 3. 0 刺激味あり
濃厚感あり
0. 5 3. 3. 0 2. 8 3. 0 刺激味あり
濃厚感あり
0 3. 2 3. 0 2. 8 3, 刺激味強い
奥行きバランス良好 濃厚感あり
3. 4 3. 0 2. 8 3. 3 刺激味強い
奥行きバランス良好 濃厚感あり
2. 0 3. 6 3. 2 2. 8 3. 5 刺激味が味
ずす
濃厚感あり 表 16から EG CG含有抽出物の添加量は 0. 02〜1. 0%wZwが濃厚感 と奥行き、 味のバランスともに良好で好ましかった。 総合評価の評価値で 3. 3 以下を示す範囲は 0. 004〜1. 5 o/ow/wであり好適であった。 実施例 13
実施例 12で調製した麦茶飲料 （EGCG含有抽出物サンエフェノン DCF— 1を 0. Ο δο/ον Ζν含有） にエタノールを 1、 2、 4、 8、 16、 20、 3 5 %vZvとなるように添加してエタノール入り EGCG含有組成物含有お茶を 調製した。 実施例 12と同様にして官能評価を行った。 その結果を表 1 7に示す。
表 1 7 EG CG含有抽出物の添加効果
アルコール 官能評価 総合 評価
(%v/v) 味 香り 色調
3.2 3.0 3.0 3.1 奥行あり、 味バランス良好
2 2.8 2.7 2.6 2.7 香味マイルド、 渋味が引き立
つ
4 2.5 2.6 2.5 2.5 香味マイルド、 香りがひきた
つ、 渋味が引き立つ
8 2.2 2.6 2.5 2.4 同上
16 2.6 2.7 2.6 2.6 同上
20 3.0 2.7 2.7 2.7 ややアルコール臭が前面にで
る、 味に深みを増す
35 3.0 2.8 2.7 2.8 アルコール臭が前面に出る、
味に深みを増す 表 1 7より、 エタノール入り EG CG含有お茶はアルコール無しに比べ、 2% 〜35% vZvまでは全体に香味がマイルドになり、 口当たりがよく、 渋味が引 き立つ傾向にあり、 茶の香りが際立つことで評価され、 EGCGとアルコールの 組み合わせによる香味の向上の相乗効果が見出された。 従って、 エタノール濃度 2〜35% vZvの範囲で総合評価の 2. 8以下を示し、 好適であった。
本発明により EGCG高含有で EGCGとアルコールの組み合わせによる香味 の向上の相乗効果を有する呈味性のよレヽアルコール飲料が提供された。 実施例 14
(1) EGCG含有抽出物 （サンフエノン DCF— 1) を用いて、 表 18に示 す配合表の EGCG含有抽出物入りのお茶を調製した。 お茶としては、 市販のバ ナパ茶、 緑茶、 ウーロン茶、 そば茶を通常の方法で調製したものを用いた。 対照 は無添加、 本発明品は EGCG含有抽出物を 0. 1%WZV含有させた。 実施例 12と同様にして官能評価を行った。 その結果を表 19に示す。
表 18
バナバ茶 緑茶 ウーロン茶 そば茶 本発明品 対照 本発明品 対照 本発明品 対照 本発明品 対照
EGCG添加量 0.1 0 0.1 0 0.1 0 0.1 0
(%w/v)
表 1 9 官能評価
項目
EG CG含有飲料 ^έ、口
味 香り 色調
本発明品 2 . 9 2. 7 3. 4 3. 1 バナバ茶
対照品 3 . 4 3. 6 3. 8 3. 6 本発明品 2 . 7 3. 1 3. 2 3. 0 緑茶
対照品 3 . 5 3. 7 3. 4 3. 6 本発明品 3 . 0 3. 0 3. 1 3. 0 ウーロン茶
対照品 3 . 5 3. 7 3. 5 3. 6 本発明品 3 . 1 3. 2 3. 2 3. 1 そば茶
対照品 3 • 7 3. 6 3. 6 3. 6 表 1 9より、 本発明の EG CG含有抽出物とお茶を組み合わせた飲料は、 お茶 の香味がバランス良く調和し、 お茶単独では出せない新規な奥行きがあり、 香味 バランスが充実し、 かつ刺激的な感覚の苦味を呈する新規な飲料であった。 なお、 本発明のバナバ茶飲料の EG CG量は 0. 05%wZv、 カフェイン量 は検出限界以下、 本発明の緑茶飲料の EG CG量は 0. 06%wZv、 カフエイ ン量は 0. 0 1 5%wZv、 本発明のウーロン茶飲料の EGCG量は 0. 0 5% w/v, カフェイン量は 0. 004%wZv、 本発明のそば茶飲料の EG CG量 は 0. 0 5%wン V、 カフェイン量は検出限界以下であった。
これらの本発明の茶飲料にエタノールを 4% v/vとなるように添加し、 アル コ一ル飲料を製造した。 これらのアルコ一ル飲料は良好な風味を呈した。
なお市販のウーロン茶入りアルコース！^料の EG CG含量は 0. 00 1%WZ Vであった。
(2) EGCG含有抽出物 （サンフエノン BG) を用いて、 表 20に示す酉己合 表の EG CG含有抽出物 0. 05% 含有のェタノール4。 のァルコ ール飲料及びアルコールを含有させない茶飲料を調製した。 すなわち、 市販の紅 茶を通常の 2倍澳度に抽出し、 500m lを得た。 これに表 20に示す配合に従 つて、 アルコール含有レモンティーまたはアルコールを含有しないレモンティー をそれぞれ 1000m l調製した。 本発明品は EG CG含有抽出物のサンフエノ ン BGを添加し、 対照は無添加とした。 これをそれぞれ 20 Om 1缶に充填し、 83でで 1分間殺菌を行い、 缶詰品とした。 官能検査は実施例 12と同様にして 実施した。 パネルメンバ一は 10名で、 5段階評価 （1良〜 5悪） を用い、 平均 値を求めた。 その結果を表 21に示す。
表 20
アルコール含有（％) アルコール無し （o/0) 紅茶 50 50
1 Z 5レモン果汁 0. 1 0. 1 クェン酸又はクェン酸 N a 適量 適量
ビタミン C 0. 02 0. 02 砂糖 （ケーン） 4. 5 4. 5 サンフエノン BG 0. 05 0. 05 ァノレコール容量 （v v) 4. 0 0
PH 3. 7 3. 7
表 2 1
項目 総合 味 香り 色調
アルコ一ゾ 有レモンティ一
本発明品 2. 8 2. 9 3. 2 2. 9 対照品 3. 3 3. 6 3. 5 3. 4 アルコール非含有レモンティ
本発明品 2. 9 3 3. 2 3. 0 対照品 3. 5 3. 3. 5 3. 6 表 21より、 本発明の EG CG含有抽出物を入れたアルコール含有レモンティ 一及びアルコールを含有しないレモンティーは適度に刺激的な感覚の味があり、 味のしまりがよく、 対照品に比べ味、 香り、 色調の全体のバランスも良く、 新規 な飲料であると評価された。
さらに緑茶、 ウーロン茶、 麦茶、 紅茶を用い、 カフェインに対する EGCGの 比が 0. 9以上で、 £0。0含量が0. 01〜0. 2%wZvの各種茶飲料を調 製し、 殺菌を行って茶飲料を作製した。
この茶飲料は茶抽出物の風味に E G C Gの風味が加味された適度に刺激的な感 覚の緑茶飲料、 ウーロン茶飲料、 麦茶飲料、 紅茶飲料であった。
なお市販の殺菌された緑茶飲料は力フェインに対する E G C Gの比が 0. 7〜 0. 8で、 EGCG含量はいずれも 0. 01 %wZw未満であった。
また市販の殺菌された紅茶飲料は力フェインに対する E G C Gの比が 0. 6で、 EGCGは 0. 004%wZwであった。 実施例 15
EGC G含有抽出物を用いたスープを調製した。 E G C G含有抽出物はサンフ ェノン LA— 10を用い、 本発明品はこの抽出物を添加したもの、 対照には無添 加のものを用いた。 表 22に EGCG含有抽出物入りスープの配合を示す。 この 配合に従って、 スープを調製し、 200m l缶に充塊して 1 20°C、 1 5分問加 熱殺菌を行へい、 缶詰品とした。 官能評価は実施例 12と同様にして実施した。 パ
Λ
ネルメンバーは 10名で、 5段階評価 （1良〜 5悪） を用い、 平均値を求めた。 その結果を表 23に示す。
表 22 EGC G含有抽出物入りスープの配合
本発明品 （％w/v) J wow/
EG CG含有抽出物 0 • 15 0
低強度寒天 * 0 . 25 0. 25
0 . 60 0. 60
――力グェ- ス 0 . 13 π 丄 *J
砂糖 0 . 10 o . 10
胡椒 0, . 0005 0. 0005 ビタミン c 0. . 02 0. 02
ρΗ 5. 0
プリックス度 1. 1
酸度 （クェン酸換算） 0. 025
* ：伊那食品工業社製
ρΗはクェン酸又はタエン酸ナトリゥムで調整 表 23 官能評価
項目
スープ 総口
味 香り 色調
本発明品 2. 6 2. 8 3. 1 2. 8 対照品 3. 2 3. 6 3. 5 3. 4 表 23より、 本発明品は対照に比べて奥行き、 濃厚感共にある味に仕上がり、 EGC G含有抽出物の香味がポークエキスと良く馴染み、 ポークエキス単独では 味わえない新規な味となり、 香りもマイノレドで野菜と肉の香りが調和しており、 EGCG含有抽出物は隠し味として香味を調製する効果があった。 対照は香味バ ランスを崩す傾向にあった。 このように、 調理の面から見て、 本発明品の EGC G含有抽出物は、 その香味の特性から調味料として優れていることが明らかとな つた。 実施例 16
ふりかけとして魚粉 2. 4 k g、 食塩 0. 5 k g、 グルタミン酸ソーダ 0. 3 k gを混合 （計 3. 2 k g) し、 本発明品及び対照として E G C G含有抽出物の 凍結乾燥品を上記ふりかけ 1 k g当たり 3 gを添加し、 常法に従って造粒した。 これらそれぞれの造粒品約 3. 2 k gに対して海苔 0. 4 k g及びごま 1. 2 k gをよく混合して調製した。 これらのふりかけを米飯にふりかけ、 官能評価を実 施例 12と同様にして行った。 その結果、 本発明品は対照に比べ、 魚粉のもつ魚 臭を抑制し、 全体に味に奥行きが出て引き締まり、 隠し味としてスパイス的な機 能を有することが明らかとなった。 本発明品は総合して、 ふりかけの品質を向上 させることが分かった。 実施例 17
常法により調製された清酒を用い、 本発明品である EGCG含有抽出物 （サン フエノン 100 S) を用い、 製品 10 Om 1当たり 0. 02 gを添カ卩した。 対照 は EGCG無添加のものを用いた。 官能評価は実施例 12と同様にして行った。 その結果を表 24に示す。
表 24 官能評価
本発明品 対照
味
味のバランス 2. 8 3. 5 味の奥行き 2. 7 3. 6 味切れ 3. 0 3. 6 香り 2. 9 3. 2
Figure imgf000043_0001
表 24より本発明品は対照に比べて香味が改善され、 味のバランスが良く、 味 がよくひきしまり、 奥行きに優れた嗜好品であった。 実施例 18
常法により調製されたみりん及び発酵調味料を用い、 本発明品 E G C G含有抽 出物 （サンフエノン 10 O S) を用い製品 100m 1当たり 0. 05 gを添加し た。 対照は EGCG無添加ものを用いた。 官能評価は実施例 12と同様にして行 つた。 その結果を表 25に示す。
表 25 官能評価
みりん 発酵調味料 本発明品 対照 本発明品 対照 味のバランス 2. 9 3. 0 2. 9 3. 2
2. 7 3. 0 3. 0 3. 4 色調 2. 7 3. 0 3. 1 3. 5 総合 2. 8 3. 0 2. 9 3. 3 表 25より、 本発明品は対照に比べ刺激感がぁり、 全体の味バランスの向上に 寄与しており、 特に甘みが引き立って、 香味の改善された新規なみりん及び発酵 調味液となった。 産業上の利用の可能性
以上詳述したように、 エストロゲンレセプターのァゴニス トと拮抗作用を有す る物質、 それを含有する食品又は飲料は、 過剰なエストロゲンや内分泌かく乱物 質によって生ずる不適当な生理学的症状、 すなわちエストロゲンレセプターを有 する悪性腫瘍、 子宮繊維症、 子宮内膜炎、 精子減少症、 前立腺肥大などを効果的 に改善又は予防することができる。
また本発明によりカテキン類が強化され、 刺激的な感覚の苦味を呈し、 味のひ きしまった、 味のバランスのよい、 食品又は飲料が提供される。

Claims

請 求 の 範 囲
1 . エストロゲンレセプターのァゴニストと拮抗作用を有する物質を有効成分 として含有することを特徴とする、 ァゴニストがエストロゲンレセプターに結合 することにより起こる疾病の治療剤又は予防剤。
2 . エストロゲンレセプターのァゴニストと拮抗作用を有する物質が、 下記一 般式 I ：
Figure imgf000045_0001
I
(式中、 R ,、 R2は一 H、 一 OH又は一 0— R4を示す。 R3は一 H又は一 O Hを 示す。 このとき、 Rは下記式 I I ：
Figure imgf000045_0002
I I に示す化合物、 その誘導体またはそれらの塩を示す） で表される化合物、 没食子 酸、 それらの誘導体および薬理学的に許容されるそれらの塩から選択される 1種 以上の化合物である請求項 1記載の治療剤又は予防剤。
3. エス トロゲンレセプターのァゴニス卜と拮抗作用を有する物質がカテキン 類である請求項 1又は 2記載の治療剤又は予防剤。
4. カテキン類が下記 （a ) 〜 （h) のカテキン類、 それら誘導体およびそれ らの塩から選択される 1種以上である請求項 3記載の治療剤又は予防剤：
(a ) ェピカテキン、
(b) ェピガロカテキン、
(c) ェピガロカテキンガレート、
(d) ェピカテキンガレ一ト、
(e) ガロカテキンガレート、
( f ) カテキンガレート、
(g) カテキン、 及び
(h) ガロカテキン。
5. 没食子酸の誘導体が没食子酸エステルである請求項 2記載の治療剤または 予防剤。
6. 没食子酸エステルが炭素数 8以上のアルコールと没食子酸とのエステルで ある請求項 5記載の治療剤または予防剤。
7. 没食子酸エステルがォクチルガレート、 ドデシルガレート、 セチルガレ一 トである請求項 5記載の治療剤または予防剤。
8. ァゴニストが内分泌かく乱物質である請求項 1〜 7記載の治療剤又は予防 剤。
9. 内分泌かく乱物質が下記の分類 (1) 〜 （9) に分類される化合物から選 択される 1種以上である請求項 8記載の治療剤又は予防剤：
(1 ) ダイォキシン類、
(2) 有機塩素系化合物類、
(3) フエノール類、
(4) フタル酸エステノレ類、
(5) 芳香族炭化水素類、
(6) 農薬類、 (7) 有機スズ化合物、
(8) エストロゲン類、 又は
(9) マイレックス、 トキサフェン、 ァ /レディカーブ又はキーポン。
10. 内分泌かく乱物質がゼノラール、 ゲニスティン、 クメストロール、 0,p- DD丁、 キーポン、 メ トキシクロール、 ゼァラレノン、 ダイォキシン、 ρ-ォクチル フエノール、 ノユルフェノール、 デルドリン、 ブチルベンジルフタレート、 及び ビスフエノール Αから選択される 1種以上である請求項 9記載の治療剤又は予防 剤。
1 1. エストロゲンレセプターのァゴニストと拮抗作用を有する物質を含有、 添加及び Z又は希釈してなることを特徴とする、 ァゴニストがエストロゲンレセ プターに結合することにより起こる疾病の症状改善用又は予防用飲料又は食品。
12. エストロゲンレセプターのァゴニストと拮抗作用を有する物質が、 下記 一般式 I ：
Figure imgf000047_0001
I
(式中、 Rl R2は一 H、 一OH又は一 O— R4を示す。 このとき、 R4は下記式
I I ：
Figure imgf000048_0001
I I に示す化合物、 その誘導体またはそれらの塩を示す） で表される化合物、 没食子 酸、 それらの誘導体およびそれらの塩から選択される 1種以上である請求項 1 1 記載の飲料又は食品。
1 3. エストロゲンレセプターのァゴニストと^作用を有する物質が力テキ ン類である請求項 1 1又は 1 2記載の飲料又は食品。
14. カテキン類が下記 （a) 〜 （h) のカテキン類、 それらの誘導体または それらの塩から選択される 1種以上である請求項 1 3記載の飲料又は食品：
(a) ェピカテキン、
(b) ェピガロカテキン、
(c) ェピガロカテキンガレート、
(d) ェピカテキンガレート、
(e) ガロカテキンガレート、
(f ) 力テキンガレート、
(g) カテキン、 及び
(h) ガロカテキン。
1 5. 没食子酸の誘導体が没食子酸エステルである請求項 1 2記載の飲料又は 食 ΠΒ0
16. 没食子酸エステルが炭素数 8以上のアルコールと没食子酸とのエステル である請求項 1 5記載の飲料又は食品。
1 7. 没食子酸エステルがォクチルガレート、 ドデシルガレート、 セチルガレ ートである請求項 1 6記載の飲料又は食品。
18. ァゴニス卜が内分泌かく乱物質である請求項 1 1〜16記載の飲料又は 口
19. 内分泌かく乱物質が下記の （1) 〜 （9) に分類される化合物から選択 される 1種以上である請求項 18記載の飲料又は食品：
(1) ダイォキシン類、
(2) 有機塩素系化合物類、
(3) フエノール類、
(4) フタル酸エステル類、
(5) 芳香族炭化水素類、
(6) 農薬類、
(7) 有機スズ化合物、
(8) エストロゲン類、 又は
(9) マイレックス、 トキサフェン、 ァ /レディカーブ又はキーポン。
20. 内分泌かく乱物質がゼノラール、 ゲニスティン、 クメストロール、 c^p- DDT、 キーポン、 メ トキシクロール、 ゼァラレノン、 ダイォキシン、 P-ォクチル フエノール、 ノニルフエノール、 デノレドリン、 ブチルベンジルフタレート、 及び ビスフエノール Aから選択される 1種以上である請求項 19記載の飲料又は食品。
21. 力テキン類を添カ卩してなるカテキン類含有アルコール飲料。
22. カテキン類がェピガロカテキンガレートである請求項 21記載のアルコ ール飲料。
23. 茶抽出物を含有する請求項 21記載のアルコール飲料。
24. カフェインを含有し、 カフェインに対するェピガロカテキンガレートの 比が 0. 9以上である請求項 22または 23に記載のアルコール飲料。
25. ェピガロカテキンガレ一ト含量が 0. 002〜0. 75%wZwである 請求項 21 ~ 24のいずれか 1項に記載のアルコーノ 料。
26. 茶の濃厚感があり、 味の奥行き及びバランスがよい請求項 21〜25の いずれか 1項に記載のアルコール飲料。
27. カフェインに対するェピガロカテキンガレートの比が 0. 9以上で、 ェ ピガロカテキンガレ一ト含量が 0. 01〜0. 5%wZwであり、 殺菌工程を経 て得られる茶飲料。
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