WO2003046157A1 - Bacillus sp. d747 strain, plant disease controllring agents and insect pest controlling agents using the same and control method using the agents - Google Patents

Bacillus sp. d747 strain, plant disease controllring agents and insect pest controlling agents using the same and control method using the agents Download PDF

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    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus

Definitions

  • the present invention relates to a Bacillus sp. D 747 strain and its use, and more particularly, to a plant containing the Bacillus sp. D 747 strain as an effective bacterium having an inhibitory effect on plant disease and an effect of controlling insect pests.
  • the present invention relates to a disease control agent and a nox or pest control agent, and a control method using these control agents.
  • Methods for controlling plant diseases and pests include cultivation or physical control using crop rotation or solar heat, chemical control using chemical pesticides, control using disease resistant varieties, and antagonistic microorganisms against attenuated viruses and pathogens.
  • the biological control used and the like can be mentioned.
  • chemical pesticides especially organic synthetic fungicides
  • a large number of drugs having high potency and various actions have been developed one after another.
  • Chemical control methods using these have greatly contributed to the control of plant diseases and labor saving in control work, and are widely used.
  • the phenomenon of the so-called drug-resistant bacteria that reduces the control effect by chemical control methods has been observed in some crops and diseases, and has become a problem.
  • An object of the present invention is to isolate a novel strain having an effect of suppressing the onset of a plurality of plant diseases and controlling pests or pests.
  • a further object of the present invention is to provide a plant disease control agent and a Z or pest control agent which contain the above strain as an effective bacterium and can be effectively used as a biological pesticide.
  • a further object of the present invention is to provide a method for controlling plant diseases and / or pests using the above-mentioned plant disease control agent and / or pest control agent.
  • the present inventors have found that a novel strain belonging to the genus Bacillus isolated from the natural world has an effect of suppressing the onset of several plant diseases and an effect of controlling insect pests without affecting the growth of plants.
  • the present invention has been completed.
  • the present invention provides the following strains, a plant disease controlling agent and / or a pest controlling agent, and a plant disease controlling and / or pest controlling method.
  • a plant disease control agent comprising a Bacillus) sp. D747 strain as an effective bacterium.
  • a pest control agent comprising a Bacillus sp. D747 strain as an effective bacterium.
  • the Bacillus sp. D747 strain of the present invention is a strain isolated from the air in Kikugawa-cho, Ogasa-gun, Shizuoka Prefecture. Based on the bacteriological properties described below, these strains were identified as new strains belonging to the genus Bacillus according to the Bergeys Manual of Systematic Bacteriology, volume 1 (1984). It seems to belong to B. cereus, and on January 28, 2000, “Bacillus cereus D747” was named “Bacillus cereus D747” by the Agency of Industrial Science and Technology. science and iechnology, National Institute of Bioscience and Human-Technology).
  • strain D 747 Bacillus sp. Strain D 747 of the present invention (hereinafter, simply referred to as“ strain D 747 ”) was The National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, International Patent Organism Depositary (National Institute of Advanced Industrial Science and Technology) has been deposited as Bacillus sp. D747 (F ERM P-1 8 1 2 8). 2002 (Heisei 14) 1 Transferred to the International Depositary on January 8, and at the Patent Organism Depositary Center as "Baci] .lus sp. D747J (F ERM BP—82 34) Has been deposited.
  • the bacteriological properties of the D747 strain of the present invention are as follows.
  • a test of mycological illness was carried out in Bergeys Manual of Systematic Bacteriology.
  • Gravy agar plate culture forms white to cream-colored colonies, wrinkles on the surface
  • any type can be appropriately selected, such as the type of culture medium and the culture conditions.
  • a general medium such as a meat extract medium
  • a medium containing glucose, peptone, and yeast extract may be used.
  • a solid medium such as a slope medium containing agar and a plate medium may be used.
  • the desired strain can be obtained by growing the D747 strain by culturing.
  • the medium carbon source the c specific anything above strain assimilable is available Gunorekosu, galactose, Lac bets - scan, sucrose, Manore toast, malt extract, sugars such as starch hydrolysates Besides, there are various synthetic or natural carbon sources that can be used by the strain D747.
  • various synthetic or natural products that can be used by the strain including organic nitrogen-containing substances such as peptone, meat extract, and yeast extract, can also be used.
  • organic nitrogen-containing substances such as peptone, meat extract, and yeast extract
  • Inorganic salts such as salt and phosphate, salts of metals such as calcium, magnesium, and iron, and trace nutrients such as vitamins and amino acids can also be added as needed.
  • the culture can be performed under aerobic conditions such as shaking culture and aeration culture.
  • the culture temperature is 20 to 30 ° C., preferably 25 to 30 ° C.
  • the pH is 5 to 8, preferably 6 to 7, and the culture period is 1 to 4 days, preferably 2 to 3 The day is appropriate.
  • the Bacillus sp. D747 strain of the present invention may be a culture (including cells) or a processed product thereof (such as a mixture of a culture and other components), or a culture-isolated cell (such as a culture).
  • When present on plants such as roots, stems, leaves, and seeds, or in soil for cultivation, it has the property of suppressing various plant diseases and controlling pests.
  • the D747 strain of the present invention belongs to algal fungi (Oomycetes), ascomycetes (Ascomycetes), basidiomycetes (Basi di omyc etes), and incomplete fungi (Deuteromycetes), depending on the application form. It can control plant diseases caused by fungi and bacteria.
  • pathogens examples include, for example, Pseudoperonospora spp.
  • ⁇ Botrytis) genus for example Kiyuuri gray mosquito ⁇ fine Fungus Bo tiytis cinerea
  • lyso click Nea Rhizoc tonia) genus for example, rice sheath blight fungus Rhizoc tonia solani
  • Park Senior p ucc i n i a
  • Puccinia recondita Puccinia recondita
  • Septoria Septoria
  • Sclerotinia Sclerotinia
  • ⁇ Burkholderia For example, rice seedling blight bacterial disease Burkholderia plan tarii) can be mentioned, but the present invention is not limited to these examples.
  • the D744 strain of the present invention is capable of controlling pests such as Hemiptera pests, Lepidoptera pests, Coleoptera pests, Diptera pests, Orthoptera pests, Termite pests, Azamizuma pests, and Naked pests. Can be controlled.
  • Examples of the pests that can be controlled by the strain D 747 include, specifically, Hemiptera pests such as stink bugs (Heteroptera; HETEROPTERA) such as Rip tortus cla va tus, and Nepho te t leafhoppers such as tix cinc ticeps), flying mosquitoes such as flying brown mosquitoes, Nilaparv3 ta lugens), white lice such as Psylla, whiteflies such as silver leaf whitefly Bemisia tabaci), aphids such as white aphids Myzus persicae) Larva
  • Hemiptera pests such as stink bugs (Heteroptera; HETEROPTERA) such as Rip tortus cla va tus, and Nepho te t leafhoppers such as tix cinc ticeps
  • flying mosquitoes such as flying brown mosquitoes, Nilaparv3 ta lugens
  • white lice
  • Novels such as (Heliothis virescens), Coleopteran pests, for example,
  • Beetles such as (Anomala cuprea), beetles such as Epilachna vigin tioc topunc ta ta, etc .; Diptera, e.g. Culex pipiens), Anopheles sinensis), Culex tri taeniorhynchus), Orthoptera, e.g.
  • thistle pests such as Thrips palmi (Sirtothrips dorsal is), mites, and
  • the plant disease control agent and the insect pest control agent of the present invention are, as described above, plant diseases and pests.
  • the D747 strain can be used alone, but a mutant of the D747 strain can be used together with the D747 strain. .
  • the mutant has the bacteriological properties of the above-mentioned D744 strain, has a plant disease controlling action and a pest controlling action, and is a spontaneous mutant, a mutant using ultraviolet light or a chemical mutagen.
  • cell fusion strains and genetically modified strains can be used.
  • the D747 strain contained in the plant disease control agent and the insect pest control agent includes a mutant of the D747 strain.
  • control is used to mean not only the prevention and repelling of diseases and pests but also the elimination and death. Therefore, even in plants already infected with pathogens, by applying the plant disease controlling agent of the present invention, it is possible to remove the pathogens from the plant, it is possible to prevent deterioration of the disease or diseases caused by pathogenic bacteria c Pests can also be controlled by repellent and insecticidal effects.
  • D 7 4 7 strain is applied as live bacteria at a concentration of 1 0 5 ⁇ 1 0 1Q number Z m 1, to be added to the plant preferable.
  • the timing and amount of application may be appropriately determined according to the case of the viable bacteria described above.
  • the D747 strain may be used alone or by diluting with an inert liquid or solid carrier. It may be used as a drug to which an active agent and other auxiliary agents are added. Specific preparation examples include dosage forms such as granules, powders, wettable powders, suspension preparations, and emulsions.
  • Examples of preferred carriers include talc, bentonite, clay, kaolin, diatomaceous earth, white carbon, vermiculite, slaked lime, silica sand, ammonium sulfate, urea, porous solid carriers, water, isopropyl alcohol, xylene, cyclohexanone, Liquid carriers such as methylnaphthalene and alkyl glycol are exemplified.
  • surfactants and dispersants include dinaphthyl methansulfonate, alcohol sulfate, alkylaryl sulfonate, Lignin sulfonate, polyoxyethylene glycol ether, polyoxyethylene alkyl aryl ether, polyoxyethylene sorbitan monoalkylate, and the like.
  • the adjuvant include carboxymethylcellulose, polyethylene glycol, propylene glycol, gum arabic and xanthan gum.
  • the protective agent include skim milk, pH buffer and the like. In this case, the amount of viable cells of the D747 strain, the amount of Z or its culture, and the timing and amount of application can be appropriately determined according to the case of the viable cells described above.
  • the plant disease controlling agent and the insect controlling agent of the present invention can contain other components such as insecticides, other fungicides, herbicides, plant growth regulators, and fertilizers as active ingredients, if necessary.
  • the plant disease control agent and the insect pest control agent of the present invention may contain other types of strains in addition to the D747 strain.
  • the agent for controlling plant diseases and insect pests of the present invention can be applied directly as it is, or can be applied after being diluted with water or the like.
  • the method of applying the plant disease controlling agent and the insect controlling agent is not particularly limited.For example, a method of directly spraying on plants or pests, a method of spraying on soil, a method of adding to water or fertilizer added to plants or soil, etc. Can be exacerbated.
  • the application rate of the preparation varies depending on the target disease, target pest, target crop, application method, occurrence tendency, degree of damage, environmental conditions, dosage form to be used, and the like.
  • the Bacillus sp. ⁇ Bacillus sp.) D747 strain of the present invention has a broad spectrum of diseases and pests, and can control a plurality of plant diseases and pests.
  • the plant disease control agent and pest control agent of the present invention containing the strain D747 of the present invention can control plant diseases and pests, and thus can be used as a biological pesticide. Therefore, the agent for controlling plant diseases and pests of the present invention is highly safe for the environment and has an effect of controlling a plurality of diseases and pests. However, it can widely prevent diseases and pests.
  • BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The present invention will be specifically described with reference to the following examples, but the present invention is not limited to these examples.
  • Example 1 Cultivation of D747 strain
  • a strain D 747 was isolated from the air in Kikugawa-cho, Ogasa-gun, Shizuoka Prefecture. Specifically, in order to isolate microorganisms floating in the air in Kamo, Kikugawa-cho, Ogasa-gun, Shizuoka Prefecture, remove the lid from the plate medium containing potato dextrose agar medium, leave it for 10 minutes, and let it contact the air. Was. This was cultured at 27 ° C for 3 days, and the formed colony was separated. The isolated colonies were subjected to shaking culture in a potato-dextrose liquid medium, and a strain effective against plant disease bacteria was found. D747 strain was isolated.
  • Example 2 Ten rice seeds (variety: Asahi Aichi) were sown in 7.5-cm diameter unglazed pots and grown in a greenhouse. The suspension of the D747 strain obtained as described in Example 1 was sprayed on the rice in which the fourth leaf had spread, at a rate of 10 m1 per pot, and air-dried. Then, the rice blast fungus yricularia oryzae was sprayed. ) Spore suspension was spray-inoculated and maintained in a moist chamber. Five days after the inoculation, the number of lesions on the fourth leaf was examined, and the number of lesions was evaluated based on the criteria shown in Table 1 below. Table 2 shows the test results. Evaluation
  • Example 4 Wheat blight control effect test
  • Example 5 Wheat powdery mildew control effect test
  • Example 6 Test of control effect of cucumber gray mold
  • Example 7 Cucumber and disease control effect test
  • Example 8 Insecticidal test of rice weevil
  • Example 2 30 ml of the suspension of the D747 strain obtained as in Example 1 was placed in a plastic cup having a capacity of 60 ml, and three pieces of rice leaf having a length of 3 cm were floated. After releasing 10 adults of IAssorhop trus oryzophilus), they were capped and left in a constant temperature room at 25 ° C. After 3 days, the number of surviving insects was counted. The test was performed three times, and the mortality was calculated by the following formula (1). Determined by taking the average. Table 3 shows the test results.
  • the present invention is characterized by the discovery of a new strain, Bacillus sp. D 747 (FERM BP-8234), and the bacillus sp. )
  • Bacillus sp. D 747 (FERM BP-8234)
  • the bacillus sp. Alternatively, by virtue of the presence of the viable cells of the culture on plants such as roots, stems, leaves, seeds, or in the cultivation soil, the occurrence of various plant diseases can be controlled in an extremely wide range and the pests can be controlled.
  • the plant that has been sprayed with the plant disease controlling agent and the insect controlling agent containing the D747 strain of the present invention has a high controlling effect against various plant diseases and pests.

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Description

明細書 バシルス s p . D 7 4 7菌株、 それを用いた植物病害防除剤および害虫防除剤、 並びにこれらを用いた防除方法 技術分野
本発明は、 バシルス Bacillus) s p . D 7 4 7菌株およびその利用に関し、 さらに詳しくは、 植物病害の発病抑制効果および害虫防除効果を有するバシルス s p . D 7 4 7菌株を有効菌として含有する植物病害防除剤及びノ又は害虫防除 剤、 並びにこれら防除剤を用いた防除方法に関するものである。
背景技術
植物病害および害虫の防除法としては、 輪作や太陽熱を利用した耕種的あるい は物理的防除、 化学農薬を用いる化学的防除、 病害抵抗性品種の利用による防除、 弱毒ウィルスや病原菌に対する拮抗微生物を用いた生物的防除等が挙げられる。 これらのうち、 化学農薬、 特に有機合成殺菌剤の開発研究は、 近年に至るまで目 覚ましく発達し、 効力が高く様々な作用を有する多数の薬剤が次々と開発され、 更には様々な施用法も開発された。 これらを用いた化学的防除法は、 植物の病害 防除並びに防除作業の省力化等に大きく貢献し、 広く普及している。 しかしなが ら、 近年、 いわゆる薬剤耐性菌の出現により、 化学的防除法による防除効果が低 下するという現象が、 一部作物、 病害で認められ、 問題となってきている。 また、 作物の指定産地化が進むにつれて連作を余儀なくされる結果、 化学農薬では難防 除とされる土壌伝染性病害の発生も各地で深刻な問題となっている。 さらに、 化 学農薬を大量に何度も繰り返して用いる方法は、 自然界に存在しない化学物質を 環境中に放出するため、 動植物に直接毒性を有する薬剤はもちろん、 そうでない 薬剤であっても、 環境へ悪影響を引き起こすことが心配されている。
以上のように、 化学農薬による病害防除は、 耐性菌の出現によって防除効果が 低下する可能性が高く、 その場合、 新たなる殺菌剤の開発が必要となってしまう。 また、 化学農薬では難防除とされる病害防除に対しては、 代替手段あるいは他の 方法を併用する手段を講じなくてはならない。 さらに、 環境に対してより安全性 の高い防除技術の確立も望まれている。
近年、 このような背景のもと、 化学農薬の使用に偏った防除方法を見直し、 化 学農薬からより環境への安全性が高いと想定される微生物を利用した生物防除 (いわゆる生物農薬) 方法が提案され、 その一部は実用化されている。
植物病害の生物防除に関する研究として、 弱毒ウィルスの利用、 病原菌の弱病 原性あるいは非病原性系統微生物の利用、 拮抗微生物の利用等が試みられている。 その中でも、 拮抗微生物の利用に関する研究事例は多数あり、 また、 拮抗微生物 のうち、 バシルス属菌を用いた病害防除研究についても多数の報告はあるが、 広 い病害防除スぺク トラムを有するバシルス属菌は見いだされていなかった。
発明の開示
本発明の課題は、 複数種の植物病害の発病抑制及びノ又は害虫防除の効果を有 する新規な菌株を分離することにある。
本発明の更なる課題は、 上記菌株を有効菌として含有し、 生物農薬として有効 に使用できる植物病害防除剤及び Z又は害虫防除剤を提供することにある。
本発明の更なる課題は、 上記植物病害防除剤及び 又は害虫防除剤を用いた、 植物病害及び/又は害虫の防除方法を提供することにある。
本発明者らは、 自然界から分離したバシルス属に属する一新菌株が、 植物体の 成長には悪影響をおよぼすことなく、 数種の植物病害の発病抑制効果および害虫 防除効果を有することを見出し、 本発明を完成するに至った。
本発明は、 以下の菌株、 および植物病害防除剤及び 又は害虫防除剤、 並びに、 植物病害防除及び/又は害虫防除方法である。
( 1 ) バシノレス Bacillus) s p . D 7 4 7菌株。
( 2 ) バシルス Bacillus) s p . D 7 4 7菌株を有効菌として含有すること を特徴とする植物病害防除剤。
( 3 ) バシルス Bacillu s p . D 7 4 7菌株を有効菌として含有すること を特徴とする害虫防除剤。
( 4 ) 上記 (2 ) に記載の植物病害防除剤及び/又は上記 (3 ) に記載の害虫 防除剤を用いることを特徴とする、 植物病害及び/又は害虫の防除方法。
〔バシルス s p . D 7 4 7菌株の単離と寄託〕
本発明のバシルス s p . D 74 7菌株は、 静岡県小笠郡菊川町の空気中から分 離された菌株である。 これらの菌株は、 後記する細菌学的性質をもとに、 Bergey s Manual of Systematic Bacteriology, volume 1 (1984) を参 に I l 定したところ、 バシルス属に属する新菌株であり、 最初、 バシルス 'セレウスに 属するのではないかと思われ、 2 0 0 0年 (平成 1 2年) 1 1月 2 8 日に Γ Bacillus cereus D747」 と して、 工業技術院生命工学工業技術研究所 ( Agency of Industrial science and iechnology, National institute of Bioscience and Human-Technology) に した。
しかしながら、 後日、 バシルス ·セレウスに属することに疑問をもち、 詳細に 検討し、 バシルス属に属するまでの確信に至るのみであったので、 2 0 0 2年 (平成 1 4年) 4月 1 日に 「BacilluS sp. D747J への記載変更届を提出した。 従って、 本発明のバシルス s p. D 7 4 7菌株 (以後、 単に 「D 7 4 7菌株」 と称する) は、 独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター ( National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, International Patent Organism Depositary) ίこおレヽて、 「Bacillus sp. D747」 (F ERM P— 1 8 1 2 8) として寄託され、 2 0 0 2年 (平成 1 4年) 1 1 月 8日に、 国際寄託に移管され、 同特許生物寄託センターにおいて、 「Baci].lus sp. D747J (F ERM B P— 8 2 3 4) として寄託されている。
(D 74 7菌株の細菌学的性質〕
本発明の D 7 4 7株の細菌学的性質は、 以下に示す通りである。 なお、 菌学的 †生貧の 験 ίま、 Bergey s Manual of Systematic Bacteriology tこ ¾づレヽ飞 行った。
(A) 形態学的性質
形態: 桿菌
大きさ : 幅 1. 0〜; 1. 2 //m、 長さ 3〜5 /im 運動性: +
鞭毛の着生状態: 周鞭毛
内生胞子: +
胞子の位置: 中央
胞子の膨張: 一
(B) 培養的性質
コロニーの色: 白色〜薄い茶色
肉汁寒天平板培養: 白色〜クリーム色のコロニーを形成し、 表面はしわ状
(C) 生理学的性質
グラム染色性: +
硝酸塩の還元: +
MR試験: 一
VP試験: +
ィンドールの生成: 一
澱粉の加水分解: +
クェン酸の資化性: +
無機窒素源: +
ォキシダーゼ
カラターゼ: +
生育 p H 6 8、 肉エキス培地: +
生育 p H 5 7、 肉エキス培地: +
生育温度 30 °C: +
生育温度 50 °C: —
生育 N a C l濃度 2% +
生育 N a C 1濃度 5 % +
生育 N a C l濃度 7% +
好気的生育: +
嫌気的生育: 一
O— Fテス ト : O 卵黄反応: 一
グルコースからの酸生成: +
マンニトールからの酸生成: 一
L—ァラビノースからの酸生成:
D—キシロースからの酸生成:
グノレコース力 らのガス生成: - β —ガラク トシダーゼ: ―
N a C 1及び K C 1要求性: 一
[ D 7 4 7菌株の培養〕
本発明に用いられる D 7 4 7菌株の培養方法においては、 培地の種類および培 養条件等、 適宜任意なものを選択できる。 例えば、 肉エキス培地など一般的な培 地の他、 グルコース、 ペプトン、 イース トエキスを含む培地などが挙げられる。 また、 液体培地以外に寒天入りの斜面培地および平板培地等の固体培地を用いて もよい。 培養によって D 7 4 7菌株を増殖させて、 所望の菌体量を得ることがで きる。
培地の炭素源としては、 上記菌株が同化しうるあらゆるものが利用可能である c 具体的にはグノレコース、 ガラク トース、 ラク ト—ス、 スクロース、 マノレ トース、 麦芽エキス、 澱粉加水分解物などの糖の外に、 D 7 4 7菌株が利用し得る各種の 合成または天然炭素源をあげることができる。
培地の窒素源として、 同様に、 ペプトン、 肉エキス、 酵母エキスなどの有機窒 素含有物をはじめ、 該菌株が利用し得る各種の合成又は天然物も利用可能である 微生物培養の常法に従って、 食塩、 リン酸塩などの無機塩類、 カルシウム、 マ グネシゥム、 鉄などの金属の塩類、 ビタミン、 アミノ酸などの微量栄養源も必要 に応じて添加することができる。
培養は、 振盪培養、 通気培養などの好気的条件下で行なうことができる。 培養 温度は、 2 0〜 3 0 °C、 好ましくは 2 5〜 3 0 °C、 p Hは、 5〜 8、 好ましくは 6〜 7、 培養期間は、 1 〜 4日、 好ましくは 2〜 3日が適当である。 本発明のバシルス s p . D 7 4 7菌株は、 その培養物 (菌体を含む) またはそ の処理物 (培養物と他の成分との混合物など)、 又は培養分離菌体 (培養物を遠 心分離処理した菌体もしくはその洗浄菌体など) またはその処理物 (培養分離菌 体と他成分の混合物など)、 更にまたは、 これらの処理物 (これらの液体や固体 による希釈物など) を、 根、 茎、 葉、 種子などの植物体上、 あるいはその栽培土 壌中に存在させることで、 各種の植物病害を抑止し、 また害虫を防除する性質を 有する。
本発明の D 7 4 7菌株は、 施用形態により、 藻菌類 Oomycetes)、 子嚢菌類 ( Ascomyce tes ) 、 担 子 ¾ 類 ( Ba s i di omyc etes ) 、 及 び不完全菌 類 {Deuteromycetes) に属する菌類、 および細菌類に起因する植物の病害を防除 することができる。
D 7 4 7菌株が防除することができる病気の原因菌として、 具体的には、 シ ユウ ドぺロノスポラ ( Pseudoperonospora) 属菌、 例えばキュウリベと病菌
( Pseudoperonospora cuoensi s) ヘンテユリア ^ Ven t un a) ¾困、 例 リ ンゴ'黒星病菌 Ven turis inaequalis) エリシフェ { Erysiphe) 属菌、 X. ίΐ コムギっ とんこ;丙菌 Erysiphe graminis) ^ ヒ リキユラリア Pyricularia) 属菌、 例えばイ ネレ、 も ち病菌 ( Pyricularia oryzae ) , ボ ト リ チス
{ Botrytis) 属菌、 例えばキユウリ灰色カゝび病菌 Bo tiytis cinerea)、 リゾ ク トニア Rhizoc tonia) 属菌、 例えばイネ紋枯病菌 Rhizoc tonia solani)、 パク シニア ( puccinia ) 属菌、 例えばコ ムギ赤 さ び病菌 ( Puccinia recondi ta) セプトリア Septoria) 属菌、 例えばコムギふ枯病菌 Sep toria nodorum)、 スク レロティニァ ( Sclerotinia) 属菌、 例えばキユウリ菌核病菌
{ Sclero tinia sclerotiorum) , ピシゥム Pythiuni) 属菌、 例えばキユウリ苗 立枯病菌 Pythium debaryanum Hesse) また細菌と して、 バークホルデリア
{Burkholderia) 例えばイネ苗立枯細菌病 Burkholderia plan tarii) など をあげることができるが、 本発明はこれらの例に限定されるものではない。 また、 本発明の D 7 4 7菌株は、 半翅目害虫、 鱗翅目害虫、 鞘翅目害虫、 双 翅目害虫、 直翅目害虫、 シロアリ 目害虫、 ァザミゥマ目害虫、 ハダ二害虫など の害虫を防除することができる。 D 7 4 7菌株が防除することができる害虫として、 具体的には、 半翅目害虫、 例えばホソヘリカメムシ Rip tortus cla va tus) 等のカメムシ類 (異翅類 ; HETEROPTERA)、 ツマグロョコバイ ( Nepho te t tix cinc ticeps) 等のョコバイ類、 トビイロゥンカ 、Nilaparv3 ta lugens) 等のゥンカ類、 Psylla 等のキジラ ミ類、 シルバーリーフコナジラミ Bemisia tabaci) 等のコナジラミ類、 モモ ァカアブラムシ Myzus persicae) 等のアブラムシ類、 クヮコナカィガラムシ
{Pseudococcus corns tocki) 等のカイガラムシ類、 鱗翅目害虫、 例えばチヤハ マキ (Homona Magnanima) のノヽマキガ 、 フ、- 卜、クホソノヽマキ ( Eupoecillia ambiguella ) 等のホソハマキガ類、 Bambalina sp.等のミ ノガ類、 コクガ
{ Nemapogon granellus) のホソガ H、 ミ ; *ンノ、モグリガ { Phyllocnistis ci trella) 等のコハモグリガ類、 コナガ Plutella xylostella) 等のスガ類、 二カメィガ ( Chilo suppressalis) 等のメイガ類、 タノくコバッ ドワーム
{Heliothis virescens) 等のャガ類、 鞘翅目害虫、 例えばドゥガネブイブイ
{Anomala cuprea) 等のコガネムシ類、 ニジユウャホシテン トウ ( Epilachna vigin tioc topunc ta ta ) 等 の テ ン ト ウ ム シ類 、 イ ネ ミ ズ ゾ ゥ ム シ issorhop trus oryzophilus) 等のゾゥムシ類、 双翅目害虫、 例えばァカイ ェカ Culex pipiens)、 シナハマダラ力 Anopheles sinensis)、 コダタァカ イエ力 Culex tri taeniorhynchus)、 直翅目害虫、 例えばチヤバネゴキブリ
( Blatella germanica ) 、 シ ロ ア リ 目 害虫、 例えばャマ ト シ ロ ア リ
(Re ticuli termes spera tus)、 ァザミゥマ目害虫、 例えばチヤノキイロアザミ ゥ マ ( Scirtothrips dorsal is ) 、 ノヽ ダニ類、 た と え は *ナ ミ ノヽ ダ二
{ Tetranychus urticae) N また、 その他有害動物、 不快動物、 衛生害虫、 寄生 虫、 ίΐスクミ リ ンゴ'ガイ ( Pomacea canalicula ta) ナメクジ { Incilaria sp. ) 等の腹足網類 Gastropoda 、 ダンゴムシ Arn dillidium sp. ") 等の脚 目類などをあげることができるが、 本発明はこれらの例により限定されるもの ではない。
(植物病害防除剤および害虫防除剤)
本発明の植物病害防除剤および害虫防除剤は、 上記のように植物病害や害虫 を防除できる D 7 4 7菌株を有効菌として含有するものである。 本発明の植物 病害防除剤および害虫防除剤においては、 D 7 4 7菌株を単体で使用すること もできるが、 D 7 4 7菌株とともに D 7 4 7菌株の変異体も使用することがで きる。 変異体は、 上記 D 7 4 7菌株の細菌学的特性を有し、 植物病害防除作用 および害虫防除作用を有するものであり、 自然突然変異株、 紫外線や化学変異 剤を用いての突然変異株、 また細胞融合株および遺伝子組み換え株も利用が可 能である。 本発明では、 植物病害防除剤および害虫防除剤に含有される D 7 4 7菌株には、 D 7 4 7菌株の変異体が含まれる。 本明細書中において 「防除」 とは、 病気や害虫の予防、 忌避のみならず、 除去、 死滅をも含む意味で用いるものとする。 したがって、 病原菌に既に感染した植物 であっても、 本発明の植物病害防除剤を適用することによって、 植物から病原菌 を除去することができ、 病原菌による発病や病気の悪化を防止することができる c また、 害虫についても、 忌避および殺虫効果により防除することができる。
本発明による植物病害防除剤および害虫防除剤において、 D 7 4 7菌株が生 菌として適用される場合、 1 0 5 〜 1 0 1Q個 Z m 1 の濃度で、 植物体に添加さ れることが好ましい。
また、 D 7 4 7菌株の培養物を使用する場合、 その適用時期および適用量は、 上記生菌の場合に準じて、 適宜決定されてよい。
さらに、 本発明による植物病害防除剤および害虫防除剤において D 7 4 7菌 株は、 菌体または培養物を単独で用いるほか、 不活性な液体または固体の担体 で希釈し、 必要に応じて界面活性剤、 その他の補助剤を加えた薬剤として用い てもよい。 具体的な製剤例としては、 粒剤、 粉剤、 水和剤、 懸濁製剤、 乳剤等 の剤型等があげられる。 好ましい担体の例としては、 タルク、 ベントナイ ト、 クレー、 カオリン、 珪藻土、 ホワイ トカーボン、 バーミキユライ ト、 消石灰、 珪砂、 硫安、 尿素、 多孔質な固体担体、 水、 イソプロピルアルコール、 キシレ ン、 シクロへキサノン、 メチルナフタレン、 アルキルグリ コールなどの液体担 体等があげられる。 界面活性剤および分散剤としては、 例えばジナフチルメタ ンスルホン酸塩、 アルコール硫酸エステル塩、 アルキルァ リ一ルスルホン酸塩、 リ グニンスルホン酸塩、 ポリオキシエチレングリ コールエーテル、 ポリオキシ エチレンアルキルァリ一ルェ一テル、 ポリォキシエチレンソルビタンモノアル キレー ト等があげられる。 補助剤としては、 カルボキシメチルセルロース、 ポ リエチレングリコール、 プロピレングリ コール、 アラビアゴムィ、 キサンタン ガム等、 保護剤と しては、 スキムミルク、 p H緩衝剤等があげられる。 この場 合、 D 7 4 7菌株の生菌体の量および Zまたはその培養物の量、 さらには適用 時期および適用量は、 上記生菌の場合に準じて適宜決定することができる。 さらに、 本発明の植物病害防除剤および害虫防除剤は、 有効成分として必要 に応じて、 殺虫剤、 他の殺菌剤、 除草剤、 植物生長調節剤、 肥料などのその他 の成分を含むことができる。 また、 本発明の植物病害防除剤および害虫防除剤 は、 D 7 4 7菌株とともに、 他の種類の菌株を含有してもよい。
本発明の植物病害防除剤および害虫防除剤は、 そのまま直接施用するか、 あ るいは水などで希釈して施用することができる。 植物病害防除剤および害虫防 除剤の施用方法は、 特に限定されず、 例えば、 直接植物や害虫に散布する方法、 土壌に散布する方法、 植物や土壌に添加する水や肥料に添加する方法などがあ げられる。 その他、 製剤の施用量は、 対象病害、 対象害虫、 対象作物、 施用方 法、 発生傾向、 被害の程度、 環境条件、 使用する剤型などによって変動するの で、 適宜調整されることが好ましい。 以上のように、 本発明のバシルス s p . { Bacillus sp. ) D 7 4 7菌株は、 広い病害および害虫防除スぺク トラムを有し、 複数種の植物病害や害虫を防除 することができる。
本発明の D 7 4 7菌株を含有する本発明の植物病害防除剤および害虫防除剤 は、 植物病害や害虫を防除できるので、 生物農薬として使用できる。 したがつ て、 本発明の植物病害および害虫防除剤は、 環境に対して安全性が高く、 また 複数種の病害や害虫に対して防除効果を有するので、 他の併用手段を用いなく ても、 広く病害や害虫を防止することができる。 発明を実施するための最良の形態 本発明を以下の実施例によって具体的に説明するが、 本発明はこれらの実施例 に限定されるものではない。 実施例 1 : D 74 7菌株の培養
D 7 4 7菌株を、 静岡県小笠郡菊川町の空気中から分離した。 詳細に述べると、 静岡県小笠郡菊川町加茂の空気中に漂う微生物を分離するため、 ポテトーデキス トロース寒天培地が入った平板培地を、 蓋を取って、 1 0分間放置し、 空気に接 触させた。 これを 2 7°Cで 3日間培養し、 形成したコロニーを分離した。 分離し たコロニーを、 ポテト—デキス トロース液体培地で振とう培養を行い、 植物病害 菌に対して効果のある菌株を見出して、 D 74 7菌株を分離した。
分離した D 7 4 7菌株を、 グルコース 1 %、 可溶性澱粉 2 %、 ポリペプトン 0. 5 %、 乾燥酵母 1 %、 脱脂大豆 1 %、 KH 2 P O 4 0. 2 %、 N a C 1 0. 2 %、 炭酸カルシウム 0. 3 %を含む、 p H 6. 0の培地で、 2 7°C、 1 2 0 r p m、 3 日間振盪培養した後、 遠心集菌 ( 1 0, 0 0 0 X g、 1 5分間) し、 滅菌 水中に懸濁し、 培地成分を洗浄した。 この操作を 2回行い、 再び滅菌水中に約 1 09 /m 1 の濃度で懸濁した。 実施例 2 : イネいもち病防除効果試験
直径 7. 5 c mの素焼鉢各々に、 イネ種子 (品種 : 愛知旭) を 1 0粒ずっ播 種し、 温室内で育成した。 第 4葉が展開したイネに、 実施例 1のようにして得 られた D 7 4 7菌株の懸濁液を、 1ポッ ト当たり 1 0 m 1散布し、 風乾した後、 イネいもち病菌 yricularia oryzae) の胞子懸濁液を噴霧接種し、 湿室内で 管理した。 接種 5 日後に、 第 4葉の病斑数を調査し、 これを発病度として以下 の表 1の基準により評価した。 試験結果を表 2に示す。 評価
A 発病を認めず
B 無処理の発病度の 2 0 %未満
C 無処理の発病度の 2 0 %以上 5 0 %未満
D 無処理の発病度の 5 0 %以上 実施例 3 : イネ紋枯病防除効果試験
直径 6 . O c mの素焼鉢各々に、 イネ種子 (品種 :金南風) を 1 0粒ずっ播 種し、 温室内で育成した。 2〜 3葉期のイネに、 実施例 1のようにして得られ た D 7 4 7菌株の懸濁液を、 1ポッ ト当たり 1 0 m 1散布し、 風乾した後、 ィ ネ紋枯病菌 Thana tephor uscucumeris) を接種し、 湿室内で管理した。 接種 5日後に病斑高を調査し、 これを発病度として上記表 1の基準により評価した c 試験結果を表 2に示す。 実施例 4 : コムギふ枯病防除効果試験
直径 6 . 0 c mのプラスチックポッ ト各々に、 コムギ種子 (品種:農林 6 1 号) を 1 0粒ずつ播種し、 温室内で育成した。 第 2葉が展開したコムギに、 実 施例 1のようにして得られた D 7 4 7菌株の懸濁液を、 1ポッ ト当たり 1 O m 1散布した。 風乾後、 コムギふ枯病菌 Septoria nodorum) の柄胞子を接種し. 温室内で管理した。 接種 1 0日後にポッ ト全体の第 1葉の発病面積を調査し、 これを発病度として上記表 1の基準により評価した。 試験結果を表 2に示す。 実施例 5 : コムギうどんこ病防除効果試験
直径 6 . 0 c mのプラスチックポッ ト各々に、 コムギ種子 (品種:農林 6 1 号) を 1 0粒ずつ播種し、 温室内で育成した。 1 . 5〜 2葉期のコムギに、 実 施例 1のようにして得られた D 7 4 7菌株の懸濁液を、 1ポッ ト当たり 1 O m 1散布した。 風乾後、 コムギうどんこ病菌 Erysiphe graminis) 分生胞子を 接種し、 温室内のベンチ上に調査まで置いて、 温室内で管理した。 接種 1 0ョ 後にポッ 卜全体の第 1葉の発病面積を調査し、 これを発病度として上記表 1の 基準により評価した。 試験結果を表 2に示す。 実施例 6 : キユウリ灰色かび病防除効果試験
直径 6 . 0 c mのプラスチックポッ ト各々に、 キユウリ種子 (品種 :相模半 白) を 4粒ずつ播種し、 温室内で育成した。 子葉が展開したキユウリ幼苗に、 実施例 1のようにして得られた D 7 4 7菌株の懸濁液を、 1ポッ ト当たり 1 0 m l散布した。 風乾後、 キユウリ灰色かび病菌 Bo tryt is cinerea) の胞子懸 濁液を浸したペーパーディスクを、 キユウリ子葉表面に置床接種し、 2 0 °C湿 室で管理した。 接種 3 日後に子葉の発病面積を調査し、 これを発病度として上 記表 1の基準により評価した。 試験結果を表 2に示す。 実施例 7 : キュウリベと病防除効果試験
直径 6 . 0 c mのプラスチックポッ ト各々に、 キユウリ種子 (品種 :相模半 白) を 4粒ずつ播種し、 温室内で育成した。 子葉が展開したキユウリ幼苗に、 実施例 1のようにして得られた D 7 4 7菌株の懸濁液を、 1ポッ ト当たり 1 0 m l散布した。 風乾後、 キュウリベと病菌 ( Pseudoperonospora cubensis) の 遊走子嚢懸濁液を噴霧接種し、 2 2 °C湿室で 2 4時間放置後、 温室内で管理し た。 接種 8 日後に子葉の発病面積を調査し、 これを発病度として上記表 1の基 準により評価した。 試験結果を表 2に示す。 表 2
Figure imgf000014_0001
実施例 8 : イネミズゾゥムシ殺虫試験
実施例 1のようにして得られた D 7 4 7菌株の懸濁液 3 0 m 1 を、 容量 6 0 m 1のプラスチックカップに入れ、 長さ 3 c mのイネ葉片を 3枚浮かべた。 こ れに、 イネミズゾゥムシ IAssorhop trus oryzophilus) 成虫を 1 0頭放つた 後、 蓋をして 2 5 °Cの恒温室に放置した。 3 日後に生存虫数を数えた。 試験は 3回行い、 下記の式 ( 1 ) により死虫率を求め、 最終的な死虫率を、 3回の平 均値をとることにより決定した。 試験結果を表 3に示す。 死虫率 (%) = {[ 1 0 - (生存虫の数)] / 1 0 } X 1 00 表 3
Figure imgf000015_0001
上記の表 2および表 3の結果からわかるように、 本発明の D 74 7菌株を含 んだ植物病害防除剤および害虫防除剤を散布した植物は、 各種植物病および害 虫に対して、 高い防除効果を有していた。
産業上の利用可能性
本発明は、 新菌株、 バシルス s p. D 74 7 (F ERM B P— 8 2 34) を見出したところに特色を有し、 バシルス s p . D 74 7は、 その培養物 (生 菌体を含む) またはその培養分離生菌体を、 根、 茎、 葉、 種子などの植物体上、 あるいはその栽培土壌中に存在させることによって、 きわめて広範囲に各種の 植物病害の発生を抑止し、 害虫を防除することができ、 かつ、 本発明の D 74 7菌株を含んだ植物病害防除剤および害虫防除剤を散布した植物は、 各種植物 病および害虫に対して高い防除効果を有することとなる。

Claims

請求の範囲
1. バシルス s p. D 747菌株。
2. バシルス s p. D 747菌株を有効菌として含有することを特徴とす る植物病害防除剤。
3. バシルス s p. D 747菌株を有効菌として含有することを特徴とす る害虫防除剤。
4. 請求項 2に記載の植物病害防除剤及び/又は請求項 3に記載の害虫防 除剤を用いることを特徴とする、 植物病害及び Z又は害虫の防除方法。
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