WO2003078418A1 - 3-hydroxy-3-(2-thienyl)propionamide compound, process for producing the same, and process for producing 3-amino-1-(2-thienyl)-1-propanol compound therefrom - Google Patents

3-hydroxy-3-(2-thienyl)propionamide compound, process for producing the same, and process for producing 3-amino-1-(2-thienyl)-1-propanol compound therefrom Download PDF

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Jingping Qu
Kazuaki Kanno
Hiroshi Kawabata
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Makoto Ueda
Kyoko Endo
Takeshi Murakami
Tomoko Sasaki
Hisatoshi Uehara
Youichi Matsumoto
Shihomi Suzuki
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    • C07B2200/07—Optical isomers

Definitions

  • the present invention relates to an optically active V-hydroxyalkylamine having a thiophene ring, specifically, 3-hydroxy-3-(-) which is useful as an intermediate for producing 3_amino-1- (2-Chenyl) -11-propanol.
  • the present invention relates to 2-phenyl) propionamides and a method for producing the same, and a method for producing optically active 3-amino-11- (2-thenyl) -11-propanol using the same.
  • An optically active ⁇ -hydroxyalkylamine derivative having a thiophene ring is a useful substance as a physiologically active or pharmacologically active ingredient used in pharmaceuticals and agricultural chemicals. Background technology>
  • the optically active ligand is expensive and the optical yield is as low as about 85%.
  • the method 2) half of the substrate is wasted due to optical resolution.
  • both 1) and 2) require the use of active zinc in the demethylation step, which makes the preparation of reagents complicated and requires removal of metal residues after the reaction.
  • the free hydroxy group at the ⁇ -position of the There are difficulties in the process, such as the need to protect the hydroxy group, and the emergence of a cheaper and simpler production method has been desired.
  • methods for asymmetrically reducing a carbonyl group present at a position adjacent to the thiophene ring include: A method of bombarding 5-diacetylthiophene with baker's yeast ⁇ T etrahedron Asymm etry 1 997) 8, 3467) and triphnoleolomethinolee (2-ceninole) ketone with Geotric um
  • the only known method of reducing Candidum (. T etrahedron (1 98 98) 54, 83 93) is known.
  • only production by a chemical synthesis method using an asymmetric catalyst has been performed.
  • the cyclic imid as shown in (1) is reduced with sodium bis (2-methoxetoxy) aluminum hydride (RedA 1 (registered trademark)), and after the reaction is completed, the aluminum-based reducing agent is deactivated with aqueous sodium hydroxide. After that, a method is known in which the desired product is obtained by extracting with toluene (see Japanese Patent Application Laid-Open No. 10-168858).
  • An example of using a borane-based reducing agent is to reduce a cyclic amide with a poran-dimethyl sulfide complex, and to decompose the boron-amine complex present in the reaction system after the reaction is completed.
  • An object of the present invention is to provide a method for industrially convenient and efficient production of optically active ⁇ -hydroxyalkylamines, specifically, 3-amino-11- (2-Chenyl) -11-propanols. To provide.
  • the present inventors have conducted intensive studies to solve the above-mentioned problems, and as a result, a novel compound, 3-hydroxy-3- (2-phenyl) propionamides, has been produced by using a metal catalyst using a specific ligand. It can be easily produced by asymmetric reduction or asymmetric reduction of a carbonyl group using a cell of a microorganism, a treated cell of the microorganism and a cell or a culture solution, and a carbonyl group is further converted from the amide. It has been found that by subjecting the compound to a reduction reaction, optically active 3-amino-11- (2-chenyl) -11-propanols can be industrially obtained, and the present invention has been completed.
  • the gist of the present invention is as follows.
  • ⁇ and 1 ′ each independently represent a hydrogen atom, an alkyl group, an aryl group or an aralkyl group, and R 3 and R 4 each independently represent a hydrogen atom or an alkyl group (here R 3 and R 4 may be combined to form a carbocyclic ring (R), and R 5 is a halogen atom, an ethoxy group, a hydroxyl group, an optionally substituted alkyl group, or a substituted Represents an aryl group or an alkoxy group which may be substituted, and ⁇ represents an integer of 0 to 3.) 3-hydroxy-3- (2-thenyl) propionamide.
  • a ketocarbonyl compound is a metal compound of Group 8 or 9 of the periodic table and a compound represented by the following general formula: Equation (2)
  • R 6 and R 7 each independently represent a hydrogen atom, an alkyl group, an acyl group, a carbamoyl group, a thioacyl group, a thiocarbamoyl group, an alkylsulfonyl group or an arylsulfonyl group;
  • the scales 8 and 19 are each independently an alkyl group optionally having a substituent, an aryl group optionally having a substituent, or an aromatic heterocyclic group optionally having a substituent.
  • R 8 and R 9 may combine with each other to form a ring, and * indicates an asymmetric carbon.
  • R 6 and R 7 each independently represent a hydrogen atom, an alkyl group, an acyl group, a carbamoyl group, a thioacyl group, a thiocanolebamoinole group, an alkylsulfonyl group or an arylsulfonyl group.
  • And 18 and 19 are each independently an alkyl group which may have a substituent, an aryl group which may have a substituent, or an aromatic which may have a substituent Wherein R 8 and R 9 may be bonded to each other to form a ring, and * represents an asymmetric carbon.)
  • 1 'NH R 1 and R 1 ' are as defined above
  • the content of impurity aluminum is 0.001 p pn! 3-amino-11-propanols, characterized by being within the range of ⁇ 500 ppm.
  • Figure 1 shows the results of HP LC analysis of the racemate of 3-hydroxy_3- (2-phenyl) ethyl propionate.
  • the horizontal axis shows the retention time (min), and the vertical axis shows the signal strength (mV).
  • Figure 2 shows the results of another HPLC analysis of the (S) -form of 3-hydroxy-1- (2-chel) propionate ethyl ester produced by the bacterial reaction, which was collected by HP LC. is there.
  • the horizontal axis indicates the retention time (minutes), and the vertical axis indicates the signal intensity (mV).
  • Figure 3 shows the results of NMR analysis of the (S) -form of 3-hydroxy-1- (2-phenyl) propionate ethyl ester obtained by the bacterial cell reaction, obtained by HP LC. is there.
  • Figure 4 shows the results of HP LC analysis of the racemic 3-hydroxy N-methyl-3- (2-phenyl) propionamide.
  • the horizontal axis shows the retention time (minutes).
  • Figure 5 shows the (S) -form 3- (hydroxy) -3- (2-phenyl) propionate obtained by amidating the (S) -form of the (S) -form obtained by the asymmetric reduction reaction. This is the result of analyzing the N-methyl-3- (2-Chenyl) propionamide with a closed mouth by HP LC.
  • Fig. 6 shows the (S) -form 3-hydroxy obtained by amidating the (S) -form 3-hydroxy (2-phenyl) propionate ethyl ester formed by the asymmetric reduction reaction. This is the result of analyzing N-methyl-3- (2-phenyl) propionamide by NMR. BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION>
  • 3-Hydroxy_3- (2-Chenyl) propionamide of the present invention is a novel compound, and a substance useful as a physiologically active or pharmacologically active ingredient such as a pharmaceutical or agrochemical from the compound.
  • the optically active 3-amino-11- (2-cell) -11-propanol derivative can be easily produced.
  • the 3-hydroxy-1- (2-phenyl) propionamide of the present invention include those having a molecular weight of usually 100 or less, preferably 7500 or less, more preferably 500 or less.
  • ⁇ And 1 are each independently a hydrogen atom; methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, cyclopropyl, n-butyl, isoptyl, tertiary butyl, n-pentyl Group, isopentyl group, neopentynole group, tertiary pentynole group, isoamyl group, n-hexynole group, etc., linear, branched, cyclic alkyl groups having 1 to 8 carbon atoms; phenyl group, mesityl group, naphthyl group, etc.
  • an aryl group; or an aralkyl group such as a benzyl group, a phenethyl group, a naphthylmethyl group, or a diphenylmethyl group.
  • an alkyl group is preferably an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, more preferably an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, further preferably a methyl group or an ethyl group, and an aryl group is preferably an aryl group having 6 to 10 carbon atoms.
  • one of (e) and ( 1) is a hydrogen atom, and the other is preferably an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, a phenyl group or a benzyl group, and more preferably!
  • One of ⁇ and! ⁇ 1 ' is a hydrogen atom and the other is an alkyl having 1 to 4 carbon atoms It is based.
  • R 3 and R 4 each independently represent a hydrogen atom or an alkyl group.
  • alkyl group examples include the same as those described in the description of R 1 and R 1 ′ above.
  • R 3 and R 4 are in the form of an ethylene group or a propylene group, a 1,3-dimethylpropylene group, a tetramethylene group, a pentamethylene group, etc., and a carbon atom to which these groups are bonded. To form a carbon ring.
  • a hydrogen atom or an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms is preferable, and more preferably, when either R 3 or R 4 is a hydrogen atom, particularly preferably, R 3 and R 4 are Both are hydrogen atoms.
  • R 5 is a halogen atom such as a fluorine atom, a chlorine atom, and a bromine atom; a nitro group; a hydroxyyl group; an optionally substituted alkyl group; an optionally substituted aryl group; or an optionally substituted It is an alkoxy group.
  • examples of the alkyl group and aryl group include the same as those described in the description of R 1 and R above.
  • Examples of the alkoxy group include a methoxy group and an ethoxy group. Linear or branched alkoxy groups such as n-propoxy group, isopropoxy group, n-butoxy group, isobutoxy group and tertiary butoxy group, preferably having 1 to 6 carbon atoms, more preferably having 1 to 4 carbon atoms.
  • an alkoxy group of The substituent of the alkyl group, aryl group and alkoxy group is not particularly limited as long as it does not adversely affect the reaction. Specific examples include an alkyl group, aryl group, alkoxy group, and halogen group. And a cyano group, an amino group, a nitro group and a hydroxyl group.
  • R 5 is preferably a halogen atom, an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted aryl group or an optionally substituted alkoxy group, and more preferably a halogen atom, carbon atom It is an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms or an alkoxy group having 1 to 4 carbon atoms, and more preferably a halogen atom or an alkanol group having 1 to 4 carbon atoms.
  • n an integer of 0 to 3, preferably 0 or 1;
  • the compound represented by the general formula (1) is a compound in which the group bonded to the thiophene ring is a carbonyl group, and the compound represented by the general formula (1) is obtained by asymmetric reduction of the carbonyl group. It is derivatized to the compound of (1).
  • the compound represented by the above (3) is a compound in which the group bonded to the thiophene ring is a carboxyl group and the terminal is a carboxylate group. After asymmetric reduction of the carbonyl group, it is reacted with an amine to convert the terminal carboxylic acid ester group to an amide group, thereby derivatizing the compound of the general formula (1).
  • R 2 represents an alkyl group, an aryl group or an aralkyl group. Indicates a group.
  • examples of the alkyl group, aryl group and aralkyl group of R 2 include the same groups as those described in the description of R 1 and R 1 ′.
  • the compound represented by the general formula (1 ′) can be produced by amidating the compound represented by the general formula (3).
  • the compound represented by the general formula (3) can be produced by a known method such as reacting acetylthiophenes with carbonates. And beforehand at a temperature of about 35 ° C or less, preferably in the range of 0 ° C to 35 ° C, and then, if necessary, raise the temperature to 40 ° C or more, preferably 50 ° C or more. Then, a method of adding acetylthiophenes is used.
  • Method for producing compound represented by general formula (3) will be described in detail.
  • the carbonic ester used in the above reaction may be arbitrarily used in accordance with the compound represented by the above general formula (3), and is preferably a dialkyl carbonate having 1 to 6 carbon atoms. Is generally used in the range of 2 to 10 times, preferably 2.5 to 8 times the molar amount of acetylthiophenes.
  • the base used in the above reaction is not particularly limited as long as it has an ability to generate anion at the position of the carbonyl group.
  • Specific examples thereof include alkali metals such as metal sodium and metal hydroxide; sodium hydroxide; Alkali metal hydroxides such as sodium hydroxide and potassium amide; Alkali metal amides such as sodium amide and potassium amide; Alkali metal hydrides such as lithium hydride, hydrogen hydride and sodium hydride; sodium methoxy And alkali metal alkoxides such as sodium ethoxylate, tert-butoxy sodium and potassium tert-butoxide.
  • alkali metal hydrides and alkali metal alkoxides preferred are alkali metal hydrides and alkali metal alkoxides, and more preferred are sodium hydride, tert-butoxynadium or tert-butoxypotassium.
  • alkali metal hydride those containing an oil component, which are generally commercially available, can be used as they are.
  • the amount of the base to be used is usually at least equimolar to the amount of acetylthiophene in theory, and an excess amount thereof is more preferable. However, it is not preferable that the amount of the base is excessive in view of its effects and cost, so that it is usually used in an amount of about 5 times or less, preferably about 3 times or less.
  • the reaction temperature is generally 40 ° C. or higher, preferably 50 ° C. or higher as described above, and may be performed under reflux conditions, depending on the solvent used.
  • the reaction temperature rises In general, the reaction is performed within the range of 11 o ° c or less because of the difficulty of decomposition of the target substance.
  • a solvent is usually used from the viewpoint of stirring efficiency and the like.
  • the solvent to be used is not particularly limited as long as it does not inactivate the base.
  • Specific examples include ether solvents such as getyl ether and tetrahydrofuran; and aromatic solvents such as toluene and xylene. Of these, ether solvents are preferred, and tetrahydrofuran is particularly preferred.
  • the amount of the solvent depends on the reaction scale with respect to the substrate, it is usually used in an amount of 1 volume or more, preferably 2 volumes or more, more preferably 3 volumes or more. However, if the amount of the solvent is too large, there is a problem in the efficiency of the kettle. Therefore, usually, the volume is 100 times or less, preferably 20 times or less, more preferably 10 times or less. Used in range.
  • the acetylthiophenes may be dissolved in a solvent, depending on the reaction scale and the addition rate, depending on the balance.
  • the amount of the solvent is usually about 0.2 to 5 times, and preferably about 0.5 to 3 times the volume of acetylthiophenes.
  • the reaction is carried out by stirring for 30 minutes or more after completion of the addition of acetylthiophene, and usually completes in about several hours depending on the reaction scale.
  • the reaction solution is added to water to treat the unreacted base, thereby terminating the reaction.
  • the compound represented by the general formula (3) may be isolated by a general isolation and purification method. Specifically, the treated solution after terminating the reaction is dissolved in toluene or the like. After extraction with an organic solvent, the obtained organic layer is concentrated, and then purified using a general purification method such as distillation or column chromatography, and then isolated.
  • the compound represented by the general formula (3) obtained by the above method is represented by R 1 ! ⁇ 1 'NH (R 1 And R 1 ′ are as defined above.
  • the compound can be derivatized to the compound represented by the general formula (1 ′) by reacting with an amine represented by the formula (1) and amidating it.
  • the above-mentioned amidation reaction may be performed according to a general and known amidation method of an ester and an amine. Specifically, an amidation reaction can be performed by reacting an ester with an amine.
  • the amount of the amine to be used may be 1 equivalent or more, preferably 2 equivalent or more, based on the ester. If the amount used is too large, it may be difficult to remove excess amines after completion of the reaction. Therefore, it is usually 30 equivalents or less, preferably 15 equivalents or less, particularly preferably 10 equivalents to the esters. It is used in the range of not more than the equivalent, more preferably not more than 5 equivalents.
  • the reaction can be performed in the absence of a solvent when the substrate or the substrate mixture is liquid, but if necessary, a liquid solvent may be used.
  • the solvent used is one that does not inactivate the reaction substrate.
  • the solvent is not particularly limited, but specifically, ether solvents such as getyl ether and tetrahydrofuran; aromatic solvents such as toluene and xylene; aliphatic hydrocarbons such as pentane, hexane and heptane; Halogen solvents such as methylene and octaform; alcoholic solvents such as methanol and ethanol; aprotic polar solvents such as N, N-dimethylformamide ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ dimethylsulfoxide and N-methylpyrrolidone.
  • the reaction temperature is usually arbitrarily set at a temperature of at least 120 ° C, preferably at least 0 ° C, more preferably at least 10 ° C, but is usually at most 200 ° C, preferably It is preferable to carry out in the following range.
  • the by-product alcohol and excess amines are removed by a concentration operation such as distillation, and the resulting amide represented by the general formula (1 ′) can be obtained.
  • the obtained amides can be purified by a combination of general purification methods such as chromatographic purification and crystallization.
  • the compound represented by the general formula (3) or the compound represented by the general formula (1 ′) obtained by the above-described method The asymmetric reduction method using an asymmetric catalyst and the asymmetric reduction method using a microorganism are described below as methods for asymmetric reduction of the compound to be obtained.
  • the asymmetric catalyst used in the asymmetric reduction method of the present invention is a catalyst formed by a metal compound of Group 8 or 9 of the periodic table and a compound represented by the above general formula (2).
  • Examples of the metal compound of Group 8 or Group 9 of the periodic table include a halide such as ruthenium, rhodium, iridium, and covanolate, an olefin complex, an arene complex, and a carbonyl complex, with a ruthenium compound being preferred.
  • the preferred have specific examples of the compound, R u C 1 3 - 3 H 2 0, [RuC l 2 (p - c yme ne)] 2, [R u C 12 (benzene Li ",
  • R 6 and R 7 are each independently a hydrogen atom; a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an i-propyl group, an n-butyl group, etc.
  • the alkyl group, the acyl group, the carbamoyl group, the thioacyl group and the thiocarbamoyl group preferably have 8 or less carbon atoms, more preferably 4 or less carbon atoms. Those having 20 or less carbon atoms are preferred.
  • the compound represented by the general formula (2 ′) that is, one of R 6 and R 7 is preferably an alkylsulfonyl group or an arylsulfonyl group, and more preferably 6 either one of ⁇ Pi R 7 is when Ru ⁇ Li one Rusuruhoniru group der, particularly preferably either one of R 6 and R 7 is tolyl sulfonyl group.
  • R 1 Q in the compound represented by the general formula (2 ′) is an alkyl group which may have a substituent or an aryl group which may have a substituent.
  • the alkyl group include those having 1 to 20 carbon atoms such as a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an i-propyl group, an n-butyl group, an n-pentyl group, and an n-hexyl group.
  • the aryl group include those having 6 to 20 carbon atoms, such as a phenyl group and a naphthyl group.
  • substituent of the alkyl group and the aryl group include lower alkyl groups having 1 to 4 carbon atoms, such as a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an i-propyl group, and an n-butyl group; A halogen atom such as an atom, a chlorine atom and a bromine atom; and a lower alkoxy group having 1 to 4 carbon atoms such as a methoxy group, an ethoxy group, an n-propoxy group and an i-propoxy group.
  • 18 and 19 are each independently an alkyl group which may have a substituent, an aryl group which may have a substituent or It is an aromatic heterocyclic group which may have a group.
  • alkyl group include those having 1 to 6 carbon atoms such as a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, and an i-propyl group.
  • Examples include those having 6 to 12 carbon atoms such as 5-dimethylphenyl and naphthyl groups, and aromatic heterocyclic groups include nitrogen atoms such as furyl and pyridyl groups, oxygen atoms, and zeolite atoms.
  • aromatic heterocyclic groups include nitrogen atoms such as furyl and pyridyl groups, oxygen atoms, and zeolite atoms.
  • Those having a 5- to 6-membered ring are exemplified.
  • R 8 and R 9 are taken together with the carbon atom to which they are attached to the carbon atom such as a cyclohexane ring and a cyclopentane ring.
  • a heterocyclic ring containing a heteroatom such as oxygen, nitrogen, sulfur or the like in the ring such as an elementary ring or a tetrahydrofuran ring, a pyrrolidine ring, or a tetrahydrothiophene ring, can be formed.
  • These groups may further have a substituent.
  • the substituent include a lower alkyl group having 1 to 4 carbon atoms such as a methyl group, an ethyl group and a propyl group; a carbon atom such as a methoxy group and an ethoxy group.
  • R 8 and R 9 are preferably a phenyl group which may be substituted.
  • asymmetric ligand represented by the above general formula (2) examples include 1,2-diphenylinoleethylenediamine, N-methinole-1,2-diphenylinoleethylenediamine, N-Tosyl 1,2-dipheninoleethylene diamine, N-methizole N '_ Tosinole 1,2-Dipheninole ethylene diamine, N_ p _Methoxy phenylinolenes 1,2- Dipheninoleethylene diamine, N-p-cloth pheninolenoleshoninole 1, 2, 2-dipheninoleethylene diamine, N-p-mesitinoresnolehoninole 1, 1, 2-dipheninoleethylene Diamine, N- (2,4,6-tree i-propynole) phenylsulfoninole-1,2, diphenyl / ethylenediamine and the like.
  • the solvent used in this case is not particularly limited as long as it does not affect the reaction, but ethers such as getyl ether and tetrahydrofuran; alcohols such as methanol, ethanol and 2-propanol; and aromatics such as benzene and toluene. Hydrocarbons; aprotic polar solvents such as acetonitrile and N, N-dimethylformamide are preferred, and 2-propanol is particularly preferred.
  • the reaction between the asymmetric ligand and the metal compound is theoretically an equimolar reaction, but it is preferable to use the asymmetric ligand in an equimolar amount or more with respect to the metal compound from the viewpoint of catalyst preparation speed.
  • [RuCl 2 (p-cymene)] 2 is used as the ruthenium compound, and compound (2) (where R 6 and R 7 are each independently hydrogen, Represents an atom, an alkyl group, an alkylsulfonyl group or an arylsulfonyl group, and scales 8 and 19 each independently represent an aryl group which may have a substituent.
  • the use of carbon is preferred since the catalyst preparation proceeds quickly in equimolar amounts.
  • a base coexist at the time of adjustment.
  • Torimechiruamin Toryechiruamin, tertiary organic Amin such as Application Benefits isopropyl ⁇ Min
  • L i OH, N a OH , KOH an inorganic base such as K 2 CO 3
  • sodium main Tokishido And metal alkoxides such as potassium methoxide.
  • tertiary organic amines are preferable, and triethylamine is particularly preferable.
  • the amount of the base added is at least equimolar to the metal atom.
  • the reaction is usually carried out at a temperature of not less than o ° C and not more than the reflux temperature of the solvent. However, if the temperature is too high, the catalyst may be decomposed in some cases. Therefore, the reaction is usually performed at 120 ° C or lower, preferably 100 ° C or lower. Also, when a metal compound and an asymmetric ligand are mixed in the presence of a solvent, they usually take a slurry state, and the state changes to a solution state as the formation of a catalyst progresses. The end of the reaction can also be confirmed.
  • the target catalyst can be separated by a general crystallization technique such as concentrating the reaction solution or adding a poor solvent.
  • a washing operation may be performed if necessary.
  • the catalyst is simultaneously prepared in an asymmetric reduction reaction system, a method in which the above-mentioned ruthenium compound and the asymmetric ligand are brought into contact with each other in the presence of a hydrogen donor and then a reducing substrate is added, or a ruthenium compound And a method of simultaneously adding an asymmetric ligand and a reducing substrate. In any of these cases, the ratio of the metal compound and the asymmetric ligand used is the same as described above. .
  • reaction conditions such as the reaction solvent and the temperature may be in accordance with the asymmetric reduction reaction conditions described later.
  • a catalyst represented by the above general formula (4) is particularly preferably used as the catalyst generated from the asymmetric ligand and the metal compound as described above.
  • R 6 , R 7 , 18 and 19 have the same meanings as described above, Y represents a hydrogen atom or a halogen atom, and Ar represents an aryl which may have a substituent. Represents a group.
  • examples of the aryl group which may have a substituent of Ar include those having 6 to 20 carbon atoms such as a phenyl group and a naphthyl group, and a methyl group, an ethyl group, Alkyl groups having 1 to 4 carbon atoms, such as n-propyl group, i-propyl group, n-butyl group; halogen atoms such as fluorine atom, chlorine atom, bromine atom; methoxy group, ethoxy group, n-propoxy group And an alkoxy group having 1 to 4 carbon atoms such as an i-propoxy group.
  • the compound represented by the above general formula (4) can be easily converted to a hydrogen atom by contacting the compound with a hydrogen donor under basic conditions.
  • a hydrogen donor those commonly used as hydrogen donors in hydrogen transfer type reduction reactions such as metal hydrides such as borohydride compounds and formic acid and 2-propanol are similarly used.
  • the amount of the catalyst used may be an equimolar amount or more in terms of hydride with respect to the catalyst.
  • Torimechiruamin, Toryechiruamin, tertiary organic amines such as triisopropyl ⁇ Min; L i OH, N a OH , KO ⁇ , K 2 C_ ⁇ 3 etc.
  • Inorganic bases or metal alkoxides such as sodium methoxide and potassium methoxide.
  • the conversion from the case where Y is a halogen atom to the case where Y is a hydrogen atom may be carried out before subjecting to the asymmetric reduction reaction, or may be carried out in an asymmetric reduction reaction system.
  • a catalyst obtained by the above-described method is reacted with a 3 ketocarpoel compound represented by the above general formula (1 ′) or (3) in the presence of a hydrogen donor.
  • the hydrogen donor is not particularly limited as long as it is used for a general hydrogen transfer type reduction reaction such as formic acid or 2-propanol.
  • the asymmetric reduction reaction is preferably performed in the presence of a base. The presence of a base stabilizes the catalyst and prevents a decrease in activity due to impurities. As the base,
  • a preferred base is triethylamine.
  • the base is used in an excess amount, for example, 1 to 10,000 times in molar ratio with respect to the catalyst. When using triethylamine, it is preferable to use 1 to 1000 times the amount of the catalyst.
  • the hydrogen donor when the hydrogen donor is formic acid, it is preferable to use amine as the base.
  • formic acid and amine may be separately added to the reaction system. It is preferable to use an azeotropic mixture of formic acid and amine beforehand because the influence of impurities in these raw materials can be suppressed.
  • the reaction usually uses formic acid or 2-propanol as a hydrogen donor as a reaction solvent, but non-hydrogen donors such as toluene, tetrahydrofuran, acetate nitrile, dimethylformamide, and dimethylsulfoxide are used to dissolve the raw materials. It is also possible to use a neutral solvent alone or as a mixture as a co-solvent. In particular, it is preferable to use acetonitrile or dimethylformamide as a solvent because the reaction rate increases.
  • the amount of the catalyst used is selected from the range of a molar ratio (SZC) of the substrate (3 ketocarbonyl compound represented by the formula (1)) to the metal atom of the catalyst (SZC) of 10 to 1,000,000, preferably 100 to 5000.
  • the amount of the hydrogen donor relative to the i3 ketocarbonyl compound represented by the general formula (1) or (3)) is usually used in an equimolar amount or more, and when the hydrogen donor is formic acid, The molar amount is preferably 1.5 times or more, more preferably 20 times or less, preferably 10 times or less.
  • the hydrogen donor is isopropanol, it is used in a large excess amount with respect to the substrate from the viewpoint of reaction equilibrium, and is usually used in a range of 1,000 mole times or less.
  • the reaction temperature is selected from the range of 170 to 100 ° C, preferably 0 to 70 ° C.
  • the reaction pressure is not particularly limited, and is usually 0.5 to 2 atm, preferably at normal pressure. Will be
  • the reaction time is 1 to: L00 hours, usually 2 to 50 hours.
  • the optically active alcohol generated from the reaction solution can be separated and purified by general operations such as distillation, extraction, chromatography, and recrystallization.
  • the 3-ketocarbon compound represented by the above general formula (3)] can be obtained by using cells of a microorganism having the ability to stereoselectively reduce a carboxy group, a treated product of the cells, and / or a culture solution. Asymmetric reduction is also possible.
  • Microorganisms that can be used in the present invention include the ability to stereoselectively reduce the carboxyl group of a 3-oxo-13_ (2-cell) propionate derivative (hereinafter referred to as “stereoselective”). It may be abbreviated as "reducing activity”.). As a method for confirming the stereoselective reducing activity,
  • the target microorganism, its treated product or culture solution is allowed to act on the aqueous solution containing the 3-ketocarbonyl compound, and the reaction solution is subjected to thin-layer chromatography, gas chromatography, or liquid chromatography. It is only necessary to qualitatively and quantitatively determine the above-mentioned substrate and the optically active 3-hydroxy_3_ (2-phenyl) propionate derivative, which is the substrate and the product, using oral chromatography.
  • Microorganisms that can be used in the present invention are subjected to the above-described method for confirming stereoselective reducing activity, and those capable of confirming a decrease in the raw material substrate when reacted for several hours or more, preferably for one day or more, specifically
  • the raw material substrate is reduced by 1% or more, preferably 5% or more when reacted for several hours or more, preferably for one day or more.
  • microorganisms having the ability to stereoselectively reduce the ketocarponyl compound represented by the above general formula (3) to produce an R-form 3-hydroxy-1- (2-thenyl) propionate derivative include, for example, , Genus Arthrobacter, genus Candida, genus Cryptococcus, genus Kloeckela, genus Kodamaea, Loy Cospolidium (Leucosporidium), microorganisms belonging to the genus Metschnikowia, the genus Noenino Chinoles (Paenibacillus), the genus Pichia or the genus Saccharorayces.
  • Preferred examples of the microorganism belonging to the genus Arthrobacter include Arthrobacter atrocyaneus, such as Arthrobacter atrocyaneus JCM1329; and the like.
  • Arthrobacter atrocyaneus such as Arthrobacter atrocyaneus JCM1329
  • Candida albicans Candida albicans (Candida albicans) IF00759 or the like
  • Candida holmiii Candida holmiii
  • Candida holmiii Candida parapsilosis IF01396, Candida parapsilosis (Candida parapsilosis) CBS604, etc.
  • Candida parapsilosis (Candida vaccini)
  • Candida valida such as Candida vaccini i, Candida val i da IF010318 and the like.
  • Preferred microorganisms belonging to the genus Cryptococcus include Cryptococcus humicolus, such as Cryptococcus humicolus IF010250.
  • the microorganism belonging to the genus Kloeckera preferably includes Kloeckera coroneticis S such as Kloeckera corticis IF00631 and Kloeckera corticis IF010318.
  • Preferred microorganisms belonging to the genus Kodamaea include Kodamaea ohmeri, such as Kodamaea ohmeri IF00158.
  • Preferred examples of the microorganism belonging to the genus Leucosporidium include Leucosporidium scottii, such as Leucosporidium scottii IF01212, and the like.
  • microorganism belonging to the genus Metschnikowia preferably a microorganism such as Metschnikowia bicuspidata var. Reformia (Metschnikowia bicuspidata var. Cal ifornia) IF010787 etc.
  • Preferred microorganisms belonging to the genus Paenibacilus include Paenibacillus alvei, such as Paenibacilus alvei IF03343, and Paenibacillus alvei.
  • Pichia angophore such as Pichia angophore IF010016
  • Pichia bovis such as Pichia bovis IF00872
  • Kia 'Kaku Tofuira (Pichia cactophila) JCM1830 such as Pichia ⁇ Kaku Tofuira (Pichia cactophila)
  • Pichia' Shan Baldi Pichia chambardii) IF01274 such as Pichia ⁇ Shan Baldi (Pichia charabardii), Pichia Furakusumu (Pichia fluxuum) JCM
  • Pichia lynf erdii Pichia manshurica IF00181, Pichia-manshurika (ica IF64), etc. Pichia manshurica, Pichia ⁇ Pichia misumaiensis IF010221, etc. ⁇ Pichia misumaiensis, Pichia naganishii IF01670, etc. ⁇ Pichia nishigan igan ⁇ Pichia nakasei (Pichia nakasei) JCM1699 etc., Pichia nakasei (Pichia nakae var.
  • Pichia Pichia such as chia philogaea) JCM10739 ⁇ Pichia philogaea, Pichia ⁇ Pichia rhodanensis Pichia rhodanensis such as JCM3649, Pichia silvicola (Pichia silvicola) JCM Pola, etc.
  • Pichia such as Pichia subpel liculosa IF00808 ⁇ Pichia subpelliculosa, Pichia toletana IF01275, etc. Pichia toletana, Pichia toletana, etc.
  • the microorganism belonging to the genus Saccharomyces preferably includes Saccharomyces exiguus S, such as Saccharomyces exiguus IF01170.
  • the i3 ketocarbonyl compound represented by the above general formula (3) is stereoselectively reduced to give an S-form of 3-hydroxy-3_ (2-phenyl) propionate.
  • Microorganisms capable of producing the body include, for example,
  • the genus (Ambroziozyma), the genus Brettanomyces, the genus Brevibacterium, the genus Bull era, the genus Candida, the genus Citeromyces, the genus Corynebacterium , Genus Qryptococcus, genus Cystof ilobasidium, genus Debaryomyces, genus Dekkera, genus Endomyces, genus Exophiala, Fellomyces F Genus Filobasidium, Genus Nosense: Genus 7 Spora (Hanseniaspora), Genus Holtermannia, Genus Issatchenkia, Genus Kloeckera, Genus Kluyveromyta (Kluyveromomata) la), lipomyces, mouth telomyces (Lodderomyces, Genus Metschnikowia, Genus Ogataea, Genus Rhodotorula, Genus Sacchar
  • the microorganism belonging to the genus Ampbroziozyma preferably, the microorganisms belonging to the genus Ambroziozyma ambrosiae IF010835, such as Ambroziozyma ambrosiae IF010835; Ambroziozyma cicatricosa (7598), Ambroziozyma cicatricosa, Ambroziozyma-Monospora (Ambroziozyma monospora) IF01965, Ambroziozyma monospora, etc.Ambroziozyma monospora, etc.
  • Ambroziozyma platypodis such as Ambroziozyma philentoma, Ambroziozyma platypodis IF01471, and the like.
  • Microorganisms belonging to the genus Brettanomyces are preferably Brettanomyces anomalus ⁇ Brettanomyces anomalus IF00627, etc.
  • Brettanomyces anomalus ⁇ Brettanomyces anomalus, Brettanomyces IFN Brettanomyces bruxellensis (Brettanomyces bruxellensis) IF00797, etc.-Brettanomyces bruxellensis (Brettanomyces bruxellensis) ⁇ Brettanomyces nasxensis (Brettanomyces naardenensis), such as IF01588 S.
  • microorganism belonging to the genus Brevibacterium preferably, a microorganism belonging to the genus Brevibacterium sacchrolyticum ATCC14066, such as Flevipa, bacterium sacchrolyticum ATCC14066, or the like, is preferably used.
  • microorganisms belonging to the genus Bullera preferably, mention may be made of Burera pseudoalba (Bullera pseudoalba) JCM5290 and the like, and Burella unica (Bullera unica) such as Bullera unica JCM8932 and the like.
  • the microorganism belonging to the genus Candida is preferably Candida.
  • Candida lambica such as Candida lambica JCM9557 'Candida lambica JCM9557, Candida' Candida boidinii IF010035, Candida boidinii IF010240, Candida boidinii Candida b.
  • Candida deserticola IF010232, etc. Candida deserticola, Candida famata ATCC20850, Candida 'Famata Variant Famata (Candida famata var.
  • Candida glaebosa such as IF01353 and Candida globosa IF00953 such as Candida globosa and Candida gropengiesseri such as Candida gropengiesseri IF00659 and Candida gropengiesseri IF00659.
  • Candida such as JCM2341.
  • Candida krusei Candida magnoliae IF00705, etc.
  • Candida mel inii Candida mel ini i) IF00747, Candida melinii JCM2276, etc.
  • Candida mel inii and candy Candida molischina (Candida molischiana) IF010296, etc .
  • Candida molischiana Candida Ida
  • Candida norvegensis Candida norvegensis JCM2307, etc.
  • Candida ; Candida parapsilosis such as Candida parapsilosis IF00585 and Candida pini such as Candida parapsilosis and Candida pini IF01327 and Candida quercuum IF01576 such as Candida pini.
  • Candida' salmon Candida sake
  • Candida solani Candida solani IF00762 etc.
  • Microorganisms belonging to the genus Citeromyces preferably Citeromyces matritensis IF00954, matritensis) IFTEC, such as IF00651 ⁇ Matri (Citeromyces matritensis) » D
  • a microorganism belonging to the genus Corynebacterium preferably a corynebacterium such as Corynebacterium acetoacidophylura ATCC13870 is preferably used.
  • Corynebacterium ammonia (genes) such as Corynebacterium acetoacidophilum, Corynebacterium aramoniagenes JCM1305, and Corynebacterium ammoniagenes (F.
  • Corynebacterium flavescens (Corynebacterium flavescens), Corynenocterium-glutamicum (Corynebacterium glutaraicum) ATCC13032, Linenocterikumuku, -Noretamicum (Corynebacterium glutaraicum) ATCC13826 glutamicum of Corynebacterium ⁇ Corynebacterium glutamicum and Corynebacterium variabile, such as Corynebacterium variabile JCM2154.
  • Preferred microorganisms belonging to the genus Cryptococcus are Cryptococcus aerius IF00377, Cryptococcus aerius IF01322, and the like.
  • Cryptococcus albidus IF00612 Cryptococcus anorebidas (Cryptococcus alubidus) IF00378, Taliptococcus ⁇ Cryptococcus alubidus (Cryptococcus alubidus) albicidas Cryptococcus cellulolyticus (Cryptococcus cellulolyticus) JCM9707, etc., or Cryptococcus cellulolyticus (Cryptococcus cellulolyticus), and Cryptococcus Cryptococcus curvatus, such as IF01159.
  • Cystofilobasidium bisporidii and Cystofilobasidium bisporidii such as Cystofilobasidium bisporidii JCM9050 and the like.
  • Cystofilobasidium capitatum (Cystofilobasidium capitatura) JCM3793, etc., Cystofilobasidium capitatum (Cystofilobasidium capitatum), and Cystofilobasidium inf irmominiatum (JCM3797) Cystofilobasidium inf irmominiatum Cytof ilobasidium inf irmotniniatum (X), such as JCM8159, and the like.
  • X ilobasidium inf irmotniniatum
  • Debaryomyces maramus (Debaryomyces maramus; Debaryomyces mel issophi lus JCM1707, etc.) Debaryomyces pseudopolymorphus (Debaryomyces pseudopolymorphus) JCM3652, etc .; Debaryomyces pseudopolymorphus (Debaryomyces pseudopolymorphus); Mouth vertoche (Debaryomyces robertsiae) and Debaryomyces vanrij var. Lowy (Debaryomyces vanrij iae var. Yarrowii) Debaryomyces vanrij iae such as JCM6190.
  • Preferred microorganisms belonging to the genus Dekkera include Dekkera bruxellensis, such as Dekkera bruxelensis CBS2796.
  • the microorganism belonging to the genus Endomyces preferably includes Endomyces decipiens, such as Endomyces decipiens IF00102.
  • As a microorganism belonging to the genus Exophiala preferably, Ethosophylla dermatitidis (Exophiala dermatitidis IF06421, Exophiala dermatitidis (Exophiala dermatit idis) IF08193, etc.) No.
  • microorganism belonging to the genus Fellorayces preferably, Feromyces fuzhouensis such as Hue mouth Myces and Fuzogensis IF010374 are exemplified.
  • microorganisms belonging to the genus Filobasidium preferably, Fibacasidium capsuligenum, such as Filobasidium capsuligenum IF01119, and Filobasidium capsuligenum IF01185, are preferred.
  • Filobasidium elegans such as Filobasidium elegans IF010881, etc., and Filobasidium 'Florifium', Oralum (Filobasidium floriforme) IF010886, Filobasidium 'Florif onolem lobasidium floriforme) IFO1603 etc.
  • Filobasidium 'Filobasidium floriforme and Filobasidium globisporum (Filobasidium globisporum) Filobasidium globisporum such as IF010887, and Filobasidium uniguttaratam (Filobasidium uniguttulatum) IF00699 and the like.
  • microorganisms belonging to the genus Hanseniaspora preferably, Hanseniaspora guillierraondii (Hanseniaspora guillierraondii) IF01411 and the like, and Hanseniaspora guilliermondii ( N.
  • the microorganisms belonging to the genus Holtermamiia are preferably firefly mania-Holtermannia corniformis, as the microorganisms belonging to the genus Holtermamiia (Hanseniaspora uvarum) IF01755. JCM1743 etc.
  • Hotaruma Yua-Holtermannia corniformis As a microorganism belonging to the genus Issatchenkia, preferably Isachienki or s. , Isachenkia scutulata var. Excigua (Issatchenkia scutulata var. Exigua) JCM1829, Isa chenkia ⁇ Scratchata var. Scutulata var. Isachenkia (Issatchenkia terricola) IF00933, Isachenkia 'Terichola (Issatchenkia terricola) IF01907, etc.
  • Lactis IF01267 and the like; Kluyveromyces marxianus, Kluyveromyces thermotolerance IF01674, Kluyverorayces thermotolerans IF01779, Taliberomyces IFS2L , Kluyveromyces thermotolerans IF01050, Kluyveromyces thermotolerans IF01780, K U belomyces-Thermotolerance (Kluyveromy) ces thermotolerans) Kluyveromyces thermotolerans such as IF01985.
  • Komagataella As a microorganism belonging to the Komagataella (Komagataella) genus, preferably, Komaga Taera - pastoris ( Komagataella pastoris) ATCC28485, Komagataella-Nono 0 scan Bok re-scan ( Komagataella pastoris) IF00948, Komagataella ⁇ Roh be sampled re-scan (Komagatael la pastoris) IF01013 Komagataera-no ⁇ 0s V ⁇ (Komagatael la pastoris).
  • Preferred microorganisms belonging to the genus Lipomyces include lipomyces' Lipomyces tetrasporus, such as Lipomyces tetrasporus IF010391.
  • the microorganism belonging to the genus Lodderomyces is preferably Romaisesu - Erongisuporasu (Lodderomyces elongisporus) IF01676 like mouth Deromaisesu 'Erongisuporasu (Lodderomyces elongisporus) force like s.
  • Metschnikowia agaves such as Metschnikowia agaves IF010860 and Metschnikowia agaves, and Metschnikowia a783 Metschnikowia bicuspidata var. Bicuspidata (Metschnikowia bicuspidata var. Bicuspidata var. Bicuspidata) ) And Metschnikowia gruessi i (Metschnikowia gruessi i) IF010788 etc.
  • Metschnikowia gruessii and Metnikowia-Nowaiensis (Metschnikowia hawai iensis) IF010791 Metschnikowia hawaiiensis (Metschnikowia hawaiiensis), etc.
  • Metschnikowia lunata (Metschnikowia lunata) IF01605, etc.
  • Metschnikowia lunata (Metschnikowia lunata); Metschnikowia reuêtii) IF01679, Metschnikowia leuêtii (Metschnikowia reuêtii) JCM2279, etc.
  • Metschkoowie (Metschnikowia reuêtii), Menkoniowa 'Zoweri (Metschnikowia zobell ii) IF010800, etc.
  • Ogataea minuta var. Minuta IF00975 Ogataea minuta Nonfermentans (Ogataea rainuta var.
  • Nonf ermentans IF01473 and the like-Ogataea polymorpha (Ogataea polymorpha) such as Ogataea rainuta and Ogataea polymorpha IF01475.
  • Pichia such as Pichia amylophila JCM1702 ⁇ Pichia amylophi la or Pichia anomala IF00118 or the like.
  • Pichia canadens (Pichia canadens is) such as Pichia bispora) and Pichia canadensis (Pichia canadensis) JCM3597 Pichia castillae (Pichia castillae) JCM10733, etc .
  • Pichia delftens is (IFO10715); Pichia delftensis (Pichia delftensis); Pichia deserticola such as IF010716 and Pichia dryadoides IF01820 such as Pichia deserticola and Pichia dryadoides IF01820; la), Pichia fabianii (Pichia fabianii) JCM3601, etc.
  • Pichia fermentans (Pichi
  • Pichia hampshirensis IF010719 etc. Shirenshisu and (Pichia hampshirensi s), Pichia 'Hidi (Pichia heedii) JCM1833 such as Pichia Hidi (Pichia heedii) and, Pichia heimii (Pichia heimii) IF01686 and other Pichia heimii, Pichia inositovora (Pichia inositovora) JCM10736 etc. Pichia jadini i, Pichia kluyveri var. Cephalocereana IF010722, Pichia kunoyveri var.
  • Pichia kluyveri IF01165 etc.
  • Pichia kluyveri Pichia media (Pichia media) JCM10737, etc.
  • Pichia media Pichia methanolica
  • Pichia mexicana Pichia mexicana (Pichia mexicana) JCM1835, etc., Pichia meyerae (Pichia meyerae) IF010727, etc. ⁇ Pichia meyerae, Pichia mississippiensis) JCM1703 etc.
  • Pichia such as Pichia mississippiensis and Pichia norvegensis IF01694.
  • .Pichia petersonii (Pichia petersonii) IF01372 and other Pichia petersonii, Pichia pi jperi IF01290 and other Pichia pi jperi (Pichia pi jperi) and Pichia populi (Pichia populi) IF010729 Pichia populi, Pichia pseudocactophila IF010730, etc.
  • Pichia pseudocactophila Pichia quercuura JCM3659 cucum, etc.
  • Pichia rabaulensis (Pichia rabaulensis) IF01643 .
  • Cis (Pichia rabaulensis) and Pichia Sarikaria (Pichia salicaria) JCM3653 like Pichia 'Sarikaria (Pichia sal icaria) and Pichia' Sukoruti (Pichia scolyti) JCM3654 like Pichia - Pichia scolyti, Pichia segobiensis (Pichia segobiensis) JCM10740, etc.
  • Pichia segobiensis Pulchia segobiensis
  • Pichia spartinae Pichia spartinae
  • Pichia spartiae Pichia spartiae
  • Pichia spartiae Pichia spartiae
  • Pichia spartiae Pichia spartiae
  • Pichia spartiae Pichia spartiae
  • Spanile Pichia sydowiorum
  • Piichia sydowiorum JCM9455
  • Pichia sydowiorum Pichia sydowiorum
  • Pichia sydowiorum Pichia sydowiorum
  • Pichia tannicola such as JCM8120 and Pichia wickerhamii IF01278 ⁇ Pichia wickerhamii etc.
  • the microorganism belonging to the genus Rhodotorula is preferably a microorganism belonging to the genus Rhodotorula.
  • Rhodotorula aurantiaca Rhodotorula aurantiaca, such as IF00754, Rhodotorula aurantiaca, Rhodotorula fragaria, Rhodotorula fragaria, JCM3930, etc., Rhodotorula fragaria, ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ® ® ⁇ ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ® ⁇
  • Rhodotorula hordea Rhodotorula hino, Rhodotorula hylophila JCM1805 etc. hylophila) ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ INGENIOSA (Rhodotorula ingeniosa) JCM9031, etc.
  • Mouth dotorulas such as genosa (Rhodotorula ingeniosa) and Mouth Dotoruraja javanica JCM9032 ⁇ Rhodotorula javanica, Mouth Dotoronella nuta (Rhodotorula minuta) IF00715, Mouth Dotonorella dota minuta) IF00920, mouth Dotonorella minuta (Rhodotorula minuta) JCM3776, rho tonorella minuta (Rhodotorula minuta) IF00387 etc.
  • Saccharomycopsis (Saccharomycopsis fibuligera) IF00105, Saccharomycopsis fibuligera IF00105, Saccharomycopsis fibuligera (Saccharomycopsis fibuligera) IF01744, Saccharomycopsis fibuligera, such as IF00105, Saccharomycopsis malangaj, and Saccharomycopsis malanga, such as IF01710, and Saccharomycopsis malanga.
  • Saccharomycopsis schoeniii Saccharomycopsis schoeni i
  • Saccharomycopsis schoenii Saccharomycopsis synnaedendra
  • Power S is raised.
  • Preferred examples of the microorganism belonging to the genus Saitoel la include the ability of Saitoella complicata such as Saitoel la complicata IAM12963.
  • a microorganism belonging to the genus Schizoblastosporion is preferably a schizoblastosporion chiloense such as Schizoblastosporion chiloense IF010841 ⁇ Scnizoblastosporion chiloense.
  • a schizoblastosporion chiloense such as Schizoblastosporion chiloense IF010841 ⁇ Scnizoblastosporion chiloense.
  • Shizosaccharomyces is preferably used as Schizosaccharorayces octosporus IF010373 etc.
  • the force of ihizosaccharomyces pomoe such as IF00344.
  • the microorganism belonging to the genus Sirobasidiutn preferably includes Sirobasidiutn magnum S, such as Sirobasidiutn magnum JCM6876.
  • Microorganisms belonging to the genus Sporidiobolus preferably include Sporidiobolus johnsonii, such as Sporidiobolus johnsonii IF06903.
  • microorganism belonging to the genus Sterigmatomyces examples include Sterigmatomyces noperophilus (Sterigraatomyces halophilus) IF01488 and the like, and Sterigmatomyces peroperophilus (Sterigmatomyces halophilus).
  • Sterigmatomyces noperophilus Sterigmatomyces halophilus
  • Sterigmatomyces peroperophilus Sterigmatomyces halophilus
  • microbes belonging to the genus Sterigmatosporidium preferably, Sterigmatosporidium polymorphum (Sterigmatosporidium polymorphum) JCM6902 and the like can be used.
  • Torulaspora As a microorganism belonging to the Torulaspora (Torulaspora) genus, preferably, Torurasu polaritons ⁇ Derupureki (Torulaspora delbrueckii) cited Torulaspora de Norepureki (Torulaspora delbruecki i) force s such as CBS 1146, is.
  • Torulaspora Torulaspora
  • Tremella preferably, Tremella aurantia such as Tremella aurantia JCM11327 and Tremella aure-antia such as Tremella encephala JCM11329.
  • Tremelella foliacea such as Tremel la encephala and Tremella foliacea JCM11330.
  • Trichosporon-domesticum Trichosporon domesticura
  • Trichosporon montevideense Trichosporon montevideense
  • Trichosporon montevideense Trichosporon montevideense JCM9937
  • Trichosporon montevideense Trichosporon mucoides, Trichosporon mucoides And Trichosporon sp.
  • Trichosporon sp. Trichosporon domesticura
  • Trichosporonoides megachileensis Trichosporonoides megachileensis
  • Trichosporonoides raegachil iensis s CBS567.85, etc.
  • Trichosporonoides oedocephalis Trichosporonoides oedocephalis
  • Trichosporonoides oedocephalis Trichosporonoides oedocephalis
  • a microorganism belonging to the genus Trigonopsis preferably, a microorganism belonging to the genus Trigonopsis' Variabilis (Trigonopsis variabilis) CBS4095, Tri gonopsis Abilis (Trigonopsis variabilis) power is raised.
  • the microorganism belonging to the genus Waltomyces preferably includes Walnutrays 1 lipofer (Waltomyces l ipofer) IF01288 and the like.
  • Preferred microorganisms belonging to the genus Wickerharaiella include the power of Wickerhamiella domercqiae, such as Wickerharaiella domercqiae IF01857.
  • microorganisms belonging to the genus Williopsis preferably, the microorganisms of the genus Willipsis californica (Williopsis californica) JCM3600, Williopsis-California (Will iopsis californica): TCM3605 and the like, such as Williopsis-California and California Liliopsis mucosa (Williopsis mucosa) JCM6809 and other illiopsis-mucosa (Williopsis mucosa) and Williopsis-Satanus var. rarakii) JCM3614, Williopsis' Matter var.
  • JCM9398 Williopsis-Satanus var. suaveolens IF010698, Uigiopsis-Satanas var. . as subsuff iciens
  • JCM3626 like in Huy Riopushisu-Satanasu (like Williopsis saturnus) force s Yamadajima (Yamadazyma) microorganism belonging to the genus, preferably, Yamadajima -.
  • Yamadazyma farinosa IF00193
  • Yamadajima 'farinosa Yamadazyma farinosa
  • Yamadazyma farinosa such as Yamadazyma haplophila IF00947.
  • Yarowia a microorganism belonging to the genus, preferably, Yarowia - Li Politi force (Yarrowia lipolytics) ATCC8661, Yarowia ⁇ Riporiti force (Yarrowia lipolytica) IF01209 Ya Yarowia - Ripojitika (Yarrowia lipolytics) Yarowia 'Riporiti force such IF01548 (Yarrowia lipolytica).
  • IFO Fermentation Research Institute
  • Microorganisms with ATCC numbers are described in the Internet Catalog of the American Type Culture Collection (ATCC) (http: @www. Atcc. Org) and can be obtained from the ATCC.
  • ATCC American Type Culture Collection
  • IAM IAM Culture Collection
  • the microorganisms may be any of mutants obtained by ordinary mutation treatment such as UV irradiation or nitrosogazine treatment, and recombinant strains induced by genetic techniques such as cell fusion or gene recombination. It may be a strain.
  • bacteria such as Escherichia coli and yeast may be used in addition to the original strain, and these recombinant strains are also included in the concept of the microorganism.
  • one or more of the above-mentioned microorganisms are used as cells, processed cells, and / or a culture solution.
  • the cells obtained by culturing the microorganisms or the culture solution thereof may be used as they are, or the cells obtained by culturing may be treated by a known method, that is, treated with acetone. , Air-dried or freeze-dried, physical, chemical A treated bacterial cell such as one that has been crushed enzymatically or enzymatically can be used.
  • these cells or the treated cells act on the 3-oxo-3- (2-phenyl) propionate derivative of the formula (I) to act on the optically active compound of the formula (II) or (III). It is also possible to extract and use a crude or purified enzyme fraction that has the ability to convert into a hydroxy-3- (2-phenyl) propionate derivative. Furthermore, the cells, the treated cells, and the enzyme fraction obtained in this manner are immobilized on a carrier such as polyacrylamide, carrageenan gel, or the like using a usual immobilization technique. Can also be used.
  • the term “cells and Z or processed cells thereof” is used as a concept including all of the above-mentioned cells, processed cells, enzyme fractions, and immobilized products thereof.
  • the above-mentioned microorganisms are usually used after being cultured, and this culture can be performed according to a standard method.
  • the medium used for culturing the present microorganism contains a carbon source, a nitrogen source, inorganic ions, and the like that can be used by the present microorganism.
  • the carbon source carbohydrates such as dulose, funolectose and saccharose, polyalcohols such as glycerol, mannitol, xylitol and ribitol, organic acids and the like are appropriately used.
  • an organic nitrogen source such as NZamine, tryptose, yeast extract, polypeptide, meat extract, and soybean extract, or an inorganic nitrogen source such as ammonium sulfate salt, ammonium nitrate salt, etc.
  • an inorganic nitrogen source such as ammonium sulfate salt, ammonium nitrate salt, etc.
  • the inorganic ion a phosphate ion, a magnesium ion, an iron ion, a manganese ion, a molybdenum ion and others are appropriately used as needed.
  • the pH is about 3 to: L 0, preferably pH 6 to 8, temperature 4 to 50. C, preferably for a period of 1 to 100 hours while controlling to an appropriate range of 25 to 40 ° C.
  • a 3-oxo-1- (2-phenyl) propionate derivative represented by the above general formula (3) is used as a raw material, and the microorganism cells of the microorganism are added thereto in an aqueous medium.
  • An optically active 3-hydroxy-3- (2-phenyl) propionate derivative is produced by treating a treated bacterial cell and / or a culture solution.
  • the reaction method includes the following steps: a) the cells of the above-mentioned cultured microorganism, the treated cells and / or the culture solution, and 3-oxo-13- (2-phenyl) propionate represented by the general formula (3).
  • a method in which a derivative is brought into contact with an aqueous medium in an aqueous medium b) a method in which culturing and reaction are performed simultaneously using a medium containing a 3-oxo-1- (2-phenyl) propionate derivative represented by the above general formula (3).
  • a method in which culturing and reaction are performed simultaneously using a medium containing a 3-oxo-1- (2-phenyl) propionate derivative represented by the above general formula (3) can be used as appropriate.
  • industrially it is preferable that there is no energy loss diverted to the growth of microorganisms, and thus the above-mentioned method a) is preferable.
  • the concentration of the 3-oxo-3- (2-phenyl) propionic acid ester derivative represented by the above general formula (3) in the reaction system is preferably 0.001 to 50% (wZv). Is preferably in the range of 0.01% to 5% (w / v;), and if necessary, during the reaction, the 3-oxo-3- (2-chyl) propionate derivative may be added successively. Good.
  • aqueous medium an aqueous solution having a buffering capacity containing potassium phosphate tris monohydrochloride or the like is generally used.
  • the pH is monitored, and an acid such as hydrochloric acid or sodium hydroxide is used.
  • the buffer component can be omitted if the pH change is controlled by the force.
  • a hydrophilic solvent such as methanol, ethanol, isopropyl alcohol, acetone, dioxane, acetonitrile, tetrahydrofuran, dimethylformamide, and dimethylsulfoxide may be added.
  • a surfactant such as Tween80 or sugar ester may be added for the same purpose.
  • a hydrophobic solvent such as ethyl acetate, butyl sulphate, hexane, isopropyl ether, carbon tetrachloride, 1-octanol, etc. of about 0.1 to 10 times the volume of the reaction solution Can also be added.
  • the reaction solution preferably contains glucose, ethanol, isopropyl alcohol, formic acid, etc. in an amount of 1 to 20 times the molar equivalent of the substrate as an energy source for the reduction reaction.
  • NAD nicotinamide adenine dinucleotide
  • NADP reotide phosphate
  • glucose dehydrogenase is also effective to add glucose dehydrogenase, alcohol dehydrogenase, formate dehydrogenase, etc., in order to promote the regeneration of coenzyme to the reduced form.
  • reaction conditions vary depending on the type of microorganism, but are usually in the range of 4 to 70 ° C, preferably 20 to 50 ° C, more preferably 28 to 42 ° C, and ⁇ 1 is usually 3 to 10 and preferably Is carried out in the range of 5 to 9, more preferably 6 to 8.
  • the reaction method may be either a batch method or a continuous method.
  • the 3-oxo-1- (2-phenyl) propionate derivative of the formula (I) or the culture of microorganisms is used.
  • the liquid, the cells, and / or the treated cells are added as necessary, if necessary, and the cells separated from the target product may be recycled.
  • the method for collecting the optically active 3-hydroxy-1- (2-phenyl) propionic acid ester derivative obtained by the above reaction can be obtained by a conventional separation apparatus such as centrifugal separation of microorganisms and other solids, filter press, ultrafiltration, etc.
  • the reaction solution can be separated by subjecting it to separation and purification means such as extraction with an organic solvent, crystallization, column chromatography, concentration, distillation, etc., and the separation and purification means can be used alone or in combination. Available.
  • organic solvent used for the extraction examples include alcohols such as butanol, hydrocarbons such as hexane, cyclohexane, and toluene, halogenated hydrocarbons such as chloroform, methylene chloride, ethyl acetate, and normal butyl acetate. Esters, ketones, ethers, and a mixed solvent thereof can be used.
  • optically active 3-hydroxy-13- (2-chyl) propioic acid ester compound represented by the general formula (3 ′) obtained by the above B-1) or B-2) is a novel compound.
  • the above optically active 3-hydroxy-3- (2-Chenyl) .propionate Preferred specific examples of the stele compound include (S) -3-hydroxy-3- (2-chloro) propionic acid methyl ester and (S) -3-hydroxy-13- (2-cheninole).
  • optically active 3_hydroxy-3- (2-chenyl) propionate compound represented by the general formula (3 ') obtained by the above B-1) or B-2) can be obtained by the general method described in the above B).
  • R 1! ⁇ 1 'NH (and! ⁇ 1' is as defined above.
  • the compound represented by the above general formula (1) can be derivatized by reacting with an amine represented by the above formula and amidating the compound.
  • the above optical activity I 1 of raw 3-hydroxy-3_ (2-chenyl) propionamides examples include a known amide group reduction method.
  • the reduction reaction can be performed using a borane-based reducing agent or an aluminum-based reducing agent.
  • porane-based reducing agent examples include diporane (B 2 H 6 ); or tetrahydrofuran complex of borane (BH 3 ), getyl ether complex, dimethylamine complex, pyridine complex, dimethylsulfide complex, and trimethyl. And borane complexes such as amine complexes.
  • BH 3 tetrahydrofuran complex of borane
  • borane complexes such as amine complexes.
  • sodium borohydride is reacted with dimethyl sulfate, iodine, or the like, borane is prepared in a system, and used in the reaction.
  • a dimethyl sulfide complex of borane or a tetrahydrofuran complex is preferable, and a tetrahydrofuran complex is particularly preferable.
  • the aluminum-based reducing agent examples include aluminum hydride, sodium aluminum hydride, lithium aluminum hydride, and sodium bis (2-methoxyethoxy) aluminum hydride.
  • lithium aluminum hydride or sodium bis (2-methoxetoxy) aluminum hydride is preferable, and particularly preferably, industrially available sodium bis (2-methoxetoxy) aluminum hydride (Red— A 1 (registered trademark)).
  • the amount of the reducing agent used depends on the type of amide group, and the required number of moles of the hydride changes.Therefore, the reducing agent may be used in an amount equivalent to or more than the necessary equivalent in accordance with the substrate.
  • the hydride In the case of an amide group of a primary amine, the hydride is at least 7 equivalents, and in the case of an amide group of a secondary amine, the hydride is at least 6 equivalents. It is said that it is better to use 5 equivalents or more as a metal.
  • the amount of the reducing agent used is too large, side reactions such as hydrogenolysis of the substrate occur, which is not preferable.
  • the amount of hydride to the substrate is 30 equivalents or less, preferably 15 equivalents or less, particularly Preferably, it is used in a range of 13.5 equivalents or less.
  • Examples of the method of contacting the substrate with the reducing agent include a method of adding a reducing agent solution to the substrate solution, a method of adding the substrate solution to the reducing agent solution, and the like. Is also good.
  • the solvent to be used is not particularly limited as long as it does not inactivate the reducing agent. Specific examples thereof include ether solvents such as getyl ether and tetrahydrofuran; aromatic solvents such as toluene and xylene; methylene chloride and chloroform. And other halogen-based solvents. When a borane-based reducing agent is used, an ether-based solvent is preferable, particularly preferably tetrahydrofuran.
  • reaction time tends to be longer at a lower temperature, so that the reaction temperature is usually in a range from a temperature of room temperature or higher to the boiling point of the solvent used.
  • the temperature is usually in the range of 0 to 100 ° C, preferably 20 to 60 ° C.
  • the reaction After performing the reaction for a predetermined time, while cooling with ice or the like as necessary, add water (usually 0.5 to 10 times the volume of the substrate, preferably 1 And the reaction is terminated. At this time, it is preferable that the pH of the treatment liquid is controlled to be at least 4, preferably at least 4.5, particularly preferably at least 4.6.
  • a porane-based reducing agent when used, it is usually less than pH 7, more preferably pH 6 or less, and still more preferably pH 5.5, in terms of removal efficiency of the inactivated reducing agent.
  • the acid used in the acid treatment is not particularly limited as long as the pH of the reaction solution can be controlled within an appropriate range.
  • a mineral acid such as dilute hydrochloric acid or dilute sulfuric acid; or a mineral acid such as formic acid or acetic acid
  • organic acids such as carboxylic acids, sulfonic acids such as methanesulfonic acid and p-toluenesulfonic acid, preferably dilute hydrochloric acid or the carboxylic acids of the following formula, and particularly preferably acetic acid.
  • an inorganic base that can be easily separated during purification after the reaction is usually used.
  • the inorganic base is not particularly limited as long as it is soluble in water. Specifically, ammonia; alkali metal hydroxides such as lithium hydroxide, sodium hydroxide, and sodium hydroxide; calcium hydroxide; water Alkaline earth metal hydroxides such as sodium oxide carbonate; sodium bicarbonate, bicarbonate alkali metal bicarbonates such as lime; alkaline earth metal bicarbonates such as calcium bicarbonate and bicarbonate barrier; sodium carbonate, potassium carbonate And alkaline earth carbonates such as calcium carbonate and barium carbonate.
  • the amount used may be any amount necessary for inactivating the aluminum-based reducing agent.
  • the inorganic base may be used as a solid or gas, or may be used in the form of an aqueous solution.
  • the desired amines can be extracted with an organic solvent and then isolated by a combination of general purification methods such as concentration, chromatographic purification and crystallization.However, maintaining optical purity and taking care From the viewpoint of improving the yield and the like, it is preferable to perform the following post-treatment methods.
  • the obtained boron-containing compound is hydrolyzed under acidic or basic conditions in the presence of ketones.
  • the reaction solution after the completion of the above reduction reaction may be used as it is, or the target product, 3-amino-1- (2-phenyl)-, may be obtained from the reaction solution.
  • the remaining organic layer containing a boron-containing compound may be used.
  • Ketones and water, and further a base or an acid are added to the above-mentioned organic layer containing a boron-containing compound, and hydrolysis is performed by heating.
  • the reaction substrate is an optically active substance, it is preferable to carry out hydrolysis under basic conditions in order to prevent racemization of asymmetric carbon.
  • the ketone to be used is not particularly limited, but ketones having a boiling point of 120 ° C. or less, which are easy to remove after hydrolysis, are preferable, among which 2-pentanone, 3-pentanone, methylethylketone or Acetone is more preferred, particularly preferably methyl ethyl ketone or acetone.
  • the amount of ketone used is usually 0.1 to 100 with respect to 3-hydroxy 3- (2-chal) propionamides. It is used in a volume volume, preferably 1 to 10 volume volumes.
  • the amount of water used in the reaction may be any amount as long as it is sufficient to dissolve the base or acid and hydrolyze the boron-containing compound, but usually, the formed 3-amino-1-1 (2-phenyl) is formed. It is used in an amount of 1 to 100 times the volume of 11-propanols, preferably 5 to 30 times the volume.
  • an inorganic base that can be easily separated at the time of purification after completion of the reaction is usually used.
  • the inorganic base is not particularly limited as long as it is soluble in water. Specific examples thereof include alkali metal hydroxides such as lithium hydroxide, sodium hydroxide, and potassium hydroxide; calcium hydroxide, and potassium hydroxide.
  • Alkaline metal bicarbonates such as sodium bicarbonate and hydrogen bicarbonate; alkaline earth metal bicarbonates such as calcium hydrogen carbonate and bicarbonate; sodium carbonate Metal carbonates such as calcium carbonate and potassium carbonate; and alkaline earth carbonates such as calcium carbonate and barium carbonate.
  • the amount to be used may be any amount as long as it can sufficiently hydrolyze the boron-containing compound, but usually it is preferably used at least 3 times the molar amount of the boron-based reducing agent used.
  • the acid to be used is not particularly limited as long as the pH can be appropriately controlled, but specifically, mineral acids such as hydrochloric acid and sulfuric acid; sulfonic acids such as methanesulfonic acid and p-toluenesulfonic acid; or Examples include carboxylic acids such as formic acid, acetic acid, butyric acid, and benzoic acid.
  • mineral acids such as hydrochloric acid and sulfuric acid
  • sulfonic acids such as methanesulfonic acid and p-toluenesulfonic acid
  • carboxylic acids such as formic acid, acetic acid, butyric acid, and benzoic acid.
  • it is hydrochloric acid or a carboxylic acid having 2 to 4 carbon atoms, and particularly preferably, acetic acid which can be obtained at low cost.
  • the pH in the reaction system at the time of the treatment is preferably 3 or more.
  • the above acid treatment is performed at a pH of 4 or more, preferably at a pH of 4.5 or more, particularly preferably at a pH of 4 to prevent racemization of asymmetric carbon. It is preferable that the control be performed in a range of 6 or more. .
  • the reaction temperature during the hydrolysis is usually in the range of 0 ° C to 80 ° C, preferably 20 ° C to 60 ° C, and the reaction time is usually in the range of 30 minutes to 12 hours. Yes, and the reaction pressure is usually normal pressure, but may be increased or decreased as necessary.
  • extraction and concentration are performed, and the produced 3-amino-1_ (2-cell) 111-propanols can be isolated.
  • further purification and high-purity 3-amino-11- (2-Chenyl) 1-111 can be performed by using ordinary purification methods such as distillation, recrystallization, reprecipitation, and column chromatography. Propanols can also be obtained.
  • the organic solvent is not particularly limited as long as it can dissolve 3-amino-11- (2-cell) -11-propanol and separates it from water.
  • -Ethers such as propyl ether, isopropyl ether, and tert-butyl methyl ether; aliphatic hydrocarbons such as hexane, heptane, and octane; aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, and xylene; Esters such as propyl acetate and butyl acetate; halogenated hydrocarbons such as methylene chloride and chloroform, and the like.
  • hydroxyalkylamines have a high solubility and can be obtained at low cost by using ethyl acetate or Toluene is particularly preferred.
  • the above solvents may be used alone or as a mixture of two or more.
  • the amount of solvent used should be sufficient to dissolve the hydroxyalkylamine formed. Just do it. Usually, it is used in an amount of 1 to 100 times the volume of hydroxyalkylamine, preferably 5 to 30 times the volume.
  • the water-soluble chelating agent is not particularly limited as long as it forms a water-soluble complex of aluminum.
  • Specific examples thereof include oxalic acid; hydroxycarboxylic acids such as tartaric acid, malic acid, lactic acid, citric acid, and mandelic acid.
  • Sodium, potassium, and ammonium salts of the above hydroxycarboxylic acids such as diammonium tartrate, dipotassium tartrate, disodium tartrate, potassium sodium tartrate, monopotassium tartrate, and monosodium tartrate; (EDTA) and the like; sodium, potassium, ammonium salts and the like of the above aminopolycarboxylic acids such as sodium ethylenediaminetetraacetate.
  • hydroxycarboxylic acids and aminopolycarboxylic acids are preferred from the viewpoint of availability, and tartaric acid and EDTA are particularly preferred from the standpoint of cost and other factors.
  • the chelating agent is used in an amount of at least 0.001 mol, preferably at least 0.01 mol, more preferably at least 0.1 mol, per mol of the aluminum-based reducing agent used in the above reduction reaction. 0 Used in an amount of 1 mol or more.
  • the upper limit is sufficient to be 50 mol or less, preferably 10 mol or less, more preferably 5 mol or less, more preferably 1 mol or less, and further preferably 0.5 mol or less.
  • an acidic water-soluble chelating agent such as hydroxycarponic acid
  • an inorganic base which can be easily separated at the time of purification after completion of the reaction is preferable.
  • the inorganic base is not particularly limited as long as it dissolves in water. Specific examples thereof include alkali metal hydroxides such as lithium hydroxide, sodium hydroxide, and potassium hydroxide; calcium hydroxide, and water.
  • Alkaline earth metal hydroxides such as sodium oxide; sodium bicarbonate; alkali metal bicarbonates such as bicarbonate; aluminum bicarbonate; lithium earth bicarbonate such as sodium bicarbonate; sodium carbonate And alkyl carbonates such as carbonated carbonates; and alkaline earth carbonates such as calcium carbonate and barium carbonate.
  • the amount used may be any amount necessary for neutralizing the carboxylic acid sites in the chelating agent.
  • the inorganic base may be used as a solid or in an aqueous solution.
  • 3-amino-1- (2-phenyl) _1-propanol itself is highly water-soluble, neutral inorganic reagents such as sodium chloride and sodium sulfate must be added to the aqueous solution for efficient extraction with organic solvents. Is preferably added.
  • the aqueous solution may be used in such an amount that the resulting water-soluble chelate complex of aluminum can be sufficiently dissolved. Usually, it is used in an amount of 1 to 100 times by volume, preferably 5 to 30 times by volume, based on 3-amino-11 (2-chel) 11-propanols.
  • the contact temperature is not particularly limited, but is usually in the range of 0 to 100 ° C, preferably 5 to 70 ° C.
  • an organic solvent is further added, if necessary, to concentrate the organic layer from which 3-amino-11- (2-chenyl) -11-propanols have been extracted, and then recrystallization, reprecipitation, column chromatography, etc.
  • a purification method isolation and purification can be performed.
  • Optically active 3-amino-11- (2-Chenyl) 1-111pro obtained by the above method Despite the fact that panols are reduced using an aluminum-based reducing agent, the aluminum content derived from the aluminum-based reducing agent contained as an impurity is usually
  • 500 ppm or less preferably 300 ppm or less, more preferably 100 ppm or less, still more preferably 50 ppm or less, particularly preferably 30 ppm or less. It is easy to remove in the process, and is a preferable compound as an intermediate for medical and agricultural chemicals.
  • optical purity of the optically active 3_amino_1- (2-phenyl) -11-propanols obtained by the above method depends on the optical purity of the optically active amide of the raw material, but is usually 80% ee or more.
  • the target product can be obtained efficiently without impairing the optical purity of the raw material, preferably 90% ee or more, particularly preferably 95% ee or more.
  • optically active 3-amino-1- (2-phenyl) -1 propanols obtained above can be used as intermediates for medicinal and agricultural chemicals by further protecting their hydroxyl groups.
  • (2-Chenyl) 11-propanol derivative can be produced.
  • any general method for protecting a hydroxyl group such as etherification, silylation, carbonate, or sulfonation, can be used arbitrarily.
  • a protection method under basic conditions is used. Is good.
  • a halide such as 1-fluoronaphthalene is dissolved in a polar solvent such as dimethylacetamide, and 60% hydrogenated sodium or the like is used.
  • a polar solvent such as dimethylacetamide
  • 60% hydrogenated sodium or the like is used.
  • a method of protecting the hydroxyl group by heating, if necessary, may be mentioned.
  • the solution was dropped over 20 minutes. Thereafter, the mixture was stirred at the same temperature for 1 hour, and cooled with ice when the reaction was completed.
  • the reaction solution was analyzed by liquid chromatography under the same conditions as in Production Example 1 above, and the reaction yield was 99%.
  • a 3 Oml flask was charged with 3.34 g (23.11 mmo1) of triethynoleamine and dried 3 ml of N, N-dimethylformamide (hereinafter abbreviated as DMF), and then cooled on ice.
  • DMF N, N-dimethylformamide
  • RuC 1 (p-cymene) [(S, S) _N-p-tonoreensenorehoninore 1 1,2-dipheninoleethylenediamine] (hereinafter RuC 1 (p-cymene) (abbreviated as SS—TsDPEN) 6.6 mg (0.01 mmo 1) was added, and the mixture was stirred at 50 ° C. for 42 hours.
  • optical purity was determined by high performance liquid chromatography under the following conditions, and was determined to be 97.5% e e.
  • the cells were treated with glucose 10 OmM, 3-oxo-3- (2-1-enyl) ethyl ethyl ester of propionate 0.24%, NADH 0.01%, NAD PH 0.01%, Tris-HCl buffer 100 mM (pH7 .5)
  • the suspension was suspended in 200 ⁇ L of a reaction solution consisting of force and shaken at 30 ° C. Eighteen hours after the start of the reaction, 800 L of 2-propanol was added, the bacteria were removed by centrifugation, and the supernatant sample was analyzed by HPLC.
  • the HP LC column was analyzed under the following conditions using Chiralpak AD-RH (manufactured by Daicel).
  • the absolute configuration was determined to be the (S) form by a new Mosher method using NMR (Journal of the Society of Synthetic Organic Chemistry, Japan, Vol. 51, pp. 462-470, 1993). From the above, the substance formed by the above reaction was identified as (S) -3-hydroxy-13- (2-phenyl) ethyl propionate.
  • Bacterial bovine Product concentration Optical purity mg / (% e.e.)
  • Kluyveromyces thermotolerans IF01674 2320 40.5 s
  • Metschnikowia austral is s IF010783 301 94.9 s
  • the chemical purity was determined by high performance liquid chromatography under the following conditions.
  • optical purity was determined by high performance liquid chromatography under the following conditions, and was 99.9% ee.
  • Example 3 the racemic 3-hydroxy N-methyl compound obtained by amidating racemic 3-hydroxy-3- (2-phenyl) propionate ethyl ester obtained as a standard was obtained.
  • 3- (2-Chenole) Propionamide was used as a standard, and analyzed under the above conditions.
  • ) Body (retention time 32 min in Figure 4)
  • S body 3-hydroxy N-methyl-3- (2-phenyl) propionamide (retention time 28 min in Figure 4) Identified. Analysis of the crystals obtained in Example 4 showed that (3S) _3-hydroxy-1-N-methyl-
  • Example 4 was analyzed by NMR to be 3-hydroxy-1-N-methyl-3- (2-phenyl) propionamide (FIG. 6).
  • Example 7 Reduction of amide using aluminum-based reducing agent
  • optical purity was determined by high performance liquid chromatography under the following conditions, and was 100% ee.
  • the chemical purity and the optical purity were determined in the same manner as in Example 6, and were respectively 100% in chemical purity and 99.5% e e in optical purity.
  • aqueous layer after extraction is adjusted to about pH 11 by adding 28% aqueous ammonia, and then the target product is extracted using ethyl acetate, dried and concentrated to give (1S) —3-methylamino 1-11 (2-Chenyl) 1-11 propanone (> 99.9% ee) was obtained in an amount of 17.4 g.
  • a thiophene ring-containing optically active alcohol useful as a synthetic intermediate for a drug or the like can be obtained in a high yield and a high optical yield.

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Description

明 細 書
3—ヒ ドロキシ— 3— （2—チェニル） プロピオンアミ ド類及びその製造方法、 並びに、 それを用いた 3—ァミノ一 1一 （2—チェ-ル） 一 1一プロパノール類 の製造方法
<技術分野 >
本発明は、チォフェン環を有する光学活性な V—ヒドロキシアルキルアミン類、 具体的には 3 _アミノー 1— (2—チェニル） 一 1一プロパノール類の製造中間 体として有用な 3—ヒドロキシー 3— (2—チェニル） プロピオンアミ ド類及び その製造方法、並びにそれを用いた光学活性な 3—アミノー 1一 (2—チェニル) 一 1一プロパノール類の製造方法に関する。 チォフェン環を有する光学活性な γ —ヒドロキシアルキルアミン誘導体は、 医薬品や農薬に用いられるような生理活 性又は薬理活性成分として有用な物質である。 ぐ背景技術 >
光学活性 3—メチルァミノー 1一 (2—チェニル) 一 1—プロパノール誘導体 の製造方法としては 1) T e t r a h e d o r o n L e t t e r s , p . 7 1 0 1 (1 9 90) または特開平 4一 226 948号公報記載の下記反応式 （A) のように N, N—ジメチルアミノケトン誘導体を不斉還元した後ヒドロキシ基を 保護してから脱メチル化する方法、 (、A)
Figure imgf000003_0001
2)特許登録第 254968 1号公報記載の下記反応式 （B) のように N, N— ジメチルァミノアルコーノレ誘導体を光学分割した後にヒドロキシ基を保護して脱 メチル化する方法が知られている。 | 、割
Ν、一
Figure imgf000004_0001
しかしながら、 1 )の方法では光学活性配位子が高価でかつ光学収率が約 85 % と低いものであり、 2) の方法では光学分割するため基質の半分を無駄にするも のであった。 さらに 1) 及び 2) ともに脱メチル化工程において活性亜鉛を使用 するため試薬調製が煩雑で、 反応後の金属残さの除去などが必要な上、 チォフエ ン環の α位にあるフリーヒドロキシ基はラセミ化しゃすくヒドロキシ基の保護が 必要であるなどプロセス上煩雑であること等の難点があり、 より安価で簡便な製 造法の出現が望まれていた。
また、 チオフ ン環を有する 3ケトカルポニル化合物を不斉還元する別の方法 としては、 Ru—光学活性ホスフィン錯体を触媒とする方法 （J. O r g a n o me t a l 1 i c C h e m. 567, 1 63 (1 99 8)、 T e t r a h e d r o n L e t t ., 36， 4801 (1 99 5)、 C. R. Ac a d. S c i . P a r i s , t . 2, S e r i e l i e, 1 75 (1 9 99), T e t r a h e d r o n, 5 7, 256 3 (200 1 ) が知られているが、 これらは光学収率が不 十分であり、 工業的製造においては多くの問題が残されていた。
さらに、 微生物を用いてカルボ二ル基を不斉還元する方法については、 各種研 究がなされているものの、 チォフェン環に隣接する位置に存在するカルボニル基 を不斉還元する方法としては、 2， 5—ジァセチルチオフェンをパン酵母を用い て¾兀する方法 ^T e t r a h e d r o n A s y mm e t r y 1 9 97 ) 8, 3467) やトリフノレオロメチノレー （2—チェ二ノレ） ケトンを G e o t r i c um c a n d i d u mを用レヽて還元する方法 (. T e t r a h e d r o n (1 9 98) 54， 83 93) が知られているのみであり、 光学活性 3—ヒ ドロキシ一 3— (2—チェニル） プロピオン酸エステル誘導体については従来は 不斉触媒を用いた化学合成法による製造が行われているのみであった。
加えて、 ヒドロキシアルキルアミド類のカルボ二ル基を還元してヒドロキシァ ルキルアミン類へ変換するに当たって、 アルミニウム系還元剤を用いた例として は、 反応式 （A)
（A)
Figure imgf000005_0001
に示すような環状ィミ ドをナトリゥムビス (2—メ トキシェトキシ) アルミニゥ ムハイドライド （R e d-A 1 (登録商標）） により還元し、 反応終了後、 水酸化 ナトリゥム水溶液でアルミニウム系還元剤を不活性化した後にトルエンで抽出を 行い目的物を得る方法が知られている （特開平 10— 1 680 58号公報参照）。 また、 ボラン系の還元剤を用いた例としては、 環状アミ ドをポラン一ジメチル スルフイド錯体を用いて還元し、 反応終了後、 反応系中に存在しているホウ素一 アミン錯体を分解するために、 5 M塩酸水溶液を加えて加熱還流し、 錯体を分解 して目的のヒドロキシアルキルアミンを単離する方法が知られている （T e t r a h e d r o n A s ymme t r y Vo l . o， No. 丄, 1 1 9， ^ 1 9 94))。
し力 しながら、 前者の方法では、 本発明者らが同様の操作でヒドロキシアルキ ルァミン類を単離したところ、 生成物であるヒドロキシアルキルァミンにアルミ ェゥム系還元剤由来のアルミニウムが多量に混入することが分かった。 アルミ二 ゥムは、 アルツハイマー病の原因の恐れがあると言う説もあり、 医農薬中間体と して用いられる化合物には、 できるだけその混入量を減らすのが好ましいと考え られる。
また、 後者の方法では、 高濃度のハロゲン化水素酸を用いて、 加熱還流してい るため、 酸性条件下でラセミ化や脱水反応が起こる恐れのある基質には適用でき ないという難点がある上、 反応器の腐食を引き起こす可能性あるため、 工業的に 好ましくない。 そのため、 より穏やかな反応条件を用いた工業的に有用な製造方 法が望まれる。 本発明の目的は、 光学活性な γ—ヒドロキシアルキルアミン類、 具体的には 3 一アミノー 1一 （2—チェニル） 一 1一プロパノール類を工業的に簡便、 且つ、 効率的に製造する方法を提供することにある。
<発明の開示 >
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討した結果、 新規化合物である 3—ヒドロキシー 3— （2—チェニル） プロピオンアミ ド類が、 特定の配位子を 用いた金属触媒を用いた不斉還元又は微生物の菌体、 該菌体処理物及び Ζ又は培 養液を用いたカルボニル基の不斉還元反応により容易に製造することができ、 且 つ、 該アミ ド類からさらにカルボニル基の還元反応に処すことにより、 光学活性 な 3—アミノー 1一 （2—チェニル） 一 1一プロパノール類を工業的に得られる ことを見出し、 本発明を完成するに至った。
すなわち本発明の要旨は、 以下の通りである。
1， 下記一般式 （1 )
Figure imgf000006_0001
(式中、 ェ及び 1 ' は、 それぞれ独立して、 水素原子、 アルキル基、 ァリール 基又はァラルキル基を示し、 R 3及び R4は、 それぞれ独立して、 水素原子または アルキル基を示し （ここで、 R3と R4が一体となって炭素環を形成していても良 レヽ）、 R5は、 ハロゲン原子、 エトロ基、 ヒ ドロキシル基、 置換されていてもよい アルキル基、 置換されていてもよいァリール基または置換されていてもよいアル コキシ基を示し、 ηは 0〜3の整数を示す。）で表される 3—ヒドロキシー 3—（2 一チェニル） プロピオンアミド。 2, 下記一般式 （1 ')
Figure imgf000007_0001
(式中、 R R1', R3、 R R5及び nは、 前記と同義である。） で表される ] 3 ケトカルボニル化合物を、 周期律表第 8族又は第 9族金属化合物及び下記一般式 (2)
Figure imgf000007_0002
(式中、 R6及び R7は、 それぞれ独立して、 水素原子、 アルキル基、 ァシル基、 力ルバモイル基、 チオアシル基、 チォカルバモイル基、 アルキルスルホ二ル基又 はァリールスルホニル基を示し、 尺8及び1 9は、 それぞれ独立して、 置換基を有 していても良いアルキル基、 置換基を有していてもよいァリール基又は置換基を 有していてもよい芳香族複素環基を示す。 ここで、 R8と R9は互いに結合し環を 形成しても良い。 また、 *は不斉炭素を示す。） で表される不斉配位子より構成さ れる触媒の存在下で不斉還元するか、 若しくは、 下記一般式 （3)
Figure imgf000007_0003
(式中、 R2は、 アルキル基、 ァリール基又はァラルキル基を示し、 R3、 R\ R 5及ぴ nは、 前記と同義である。） で表される |3ケトカルポニル化合物を、 周期律 表第 8族又は第 9族金属化合物及ぴ下記一般式 （2)
Figure imgf000008_0001
(式中、 R6及ぴ R7は、 それぞれ独立して、 水素原子、 アルキル基、 ァシル基、 力ルバモイル基、 チオアシル基、 チォカノレバモイノレ基、 アルキルスルホ二ル基又 はァリールスルホニル基を示し、 1 8及び1 9は、 それぞれ独立して、 置換基を有 していても良いアルキル基、 置換基を有していてもよいァリール基又は置換基を 有していてもよい芳香族複素環基を示す。 ここで、 R8と R9は互いに結合し環を 形成しても良い。 また、 *は不斉炭素を示す。） で表される不斉配位子より構成さ れる触媒の存在下、 もしくは、 カルボ二ル基を立体選択的に還元する能力を有す る微生物の菌体、 該菌体処理物及び/又は培養液を用いて、 不斉還元した後に、 RiR1' NH (R1及び R1' は前記と同義である。） で表されるァミン類と反応 させ、アミ ド化することを特徴とする上記 3—ヒドロキシ一 3― (2—チェニル) プロピオンアミ ドの製造方法。
3， 下記一般式 （3')
Figure imgf000008_0002
(式中、 R2、 R3、 R4、 R5及ぴ nは前記と同義である。 また、 *は不斉炭素を示 す。）で表される光学活性な 3—ヒドロキシー 3— （2—チェニル） プロピオン酸 エステル化合物。
4, 上記 3—ヒ ドロキシー 3 - (2—チェ二ノレ） プロピオンアミ ドのカノレポ二ノレ 基を還元し、 光学活性 3—アミノー 1_ (2—チェニル） 一 1一プロパノール類 を製造する方法であって、 還元反応終了後の処理を r>H 4以上で行うことを特徴 とする光学活性 3_アミノー 1 _ (2—チェニル） 一 1—プロパノール類の製造 方法。
5， 不純物アルミニウム含有量が、 0. 001 p pn！〜 500 p pmの範囲内で あることを特徴とする 3—ァミノ一 1一（2—チェ二ル）一 1一プロパノール類。
6, 光学活性 3—ァミノー 1一 (2—チェニル) ― 1一プロパノール類をさらに 水酸基の保護反応に供することを特徴とする光学活性 3—アミノー 1一 （2—チ ェニル） _ ι—プロパノール誘導体の製造方法。
<図面の簡単な説明 >
図 1は、 3—ヒ ドロキシ _3— （2—チェニル） プロピオン酸ェチルエステル のラセミ体を HP LCで分析した結果である。 横軸は保持時間 （分）、縦軸は信号 強度 （mV) を示す。
図 2は、 菌体反応により生成した（S) -体の 3—ヒ ドロキシ一 3— (2—チェェ ル） プロピオン酸ェチルエステルを HP L Cで分取したものを、 再度 HPLCに より分析した結果である。横軸は保持時間（分）、縦軸は信号強度（mV)を示す。 図 3は、 菌体反応により生成した（S)-体の 3—ヒ ドロキシ一 3— (2—チェ二 ル） プロピオン酸ェチルエステルを HP L Cで分取したものを、 NMRにより分 析した結果である。
図 4は、 3—ヒ ドロキシー N—メチルー 3— ( 2—チェニル) プロピオンアミ ドのラセミ体を HP LCで分析した結果である。 横軸は保持時間 （分） を示す。 図 5は、 不斉還元反応により生成した（S) -体の 3—ヒ ドロキシ一 3— （2—チ ェニル) プロピオン酸ェチルエステルをァミ ド化して得られた（S) -体の 3—ヒ ド 口キシー N—メチルー 3— (2—チェニル) プロピオンアミ ドを H P LCで分析 した結果である。
図 6は不斉還元反応により生成した（S)-体の 3—ヒドロシキ一 3— （2—チェ ニル） プロピオン酸ェチルエステルをアミ ド化して得られた（S) -体の 3—ヒ ドロ キシ _ N—メチルー 3— ( 2—チェニル） プロピオンアミ ドを、 NM Rにより分 析した結果である。 く発明を実施するための最良の形態 >
以下本発明につき、 詳細に説明する。
A) 3—ヒ ドロキシー 3— （2—チェニル） プロピオンアミ ド
本発明の 3—ヒ ドロキシ _ 3— （2—チェニル） プロピオンアミ ドは、 新規化 合物であり、 且つ、 該化合物から医薬品や農薬に用いられるような生理活性又は 薬理活性成分として有用な物質である光学活性な 3—アミノー 1一 （2—チェ二 ル） 一 1一プロパノール誘導体を簡便に製造することができるものである。 本発明の 3—ヒ ドロキシ一 3— （2—チェニル） プロピオンアミ ドとしては、 分子量が通常 1 0 0 0以下、 好ましくは 7 5 0以下、 より好ましくは 5 0 0以下 のものが挙げられる。
上記一般式 （1 ) 中、 ！^及ぴ 1 ' は、 それぞれ独立して、 水素原子； メチル 基、 ェチル基、 n—プロピル基、 イソプロピル基、 シクロプロピル基、 n—ブチ ル基、イソプチル基、 ターシャリーブチル基、 n—ペンチル基、イソペンチル基、 ネオペンチノレ基、 ターシャリーペンチノレ基、 イソアミル基、 n—へキシノレ基等の 炭素数 1〜8の直鎖、 分岐鎮、 環状アルキル基；フエニル基、 メシチル基、 ナフ チル基等ァリール基；又は、 ベンジル基、 フエネチル基、 ナフチルメチル基、 ジ フエニルメチル基等のァラルキル基を示す。 このうちアルキル基として好ましく は炭素数 1〜6、 より好ましくは炭素数 1 ~ 4のアルキル基、 さらに好ましくは メチル基又はェチル基であり、 ァリール基として好ましくは炭素数 6〜 1 0のァ リール基、 より好ましくはフエエル基であり、 ァラルキル基として好ましくは炭 素数 7〜1 6のものであり、 より好ましくはべンジル基である。
特には、 ェ及び!^ 1 ' のいずれか一方が水素原子であり、 他方が、 炭素数 1〜 4のアルキル基、 フヱニル基又はべンジル基のものが好ましく、 より好ましくは ！^ 及び!^ 1 ' のいずれか一方が水素原子であり、 他方が炭素数 1〜4のアルキル 基のものである。
R 3及び R4は、 それぞれ独立して、 水素原子またはアルキル基を示す。 上記ァ ルキル基としては、 上述の R 1及び R 1 ' の説明の項であげたのと同様のものが挙 げられる。 また、 R3と R4がー体となって、 エチレン基又はプロピレン基、 1 , 3—ジメチルプロピレン基、 テトラメチレン基、 ペンタメチレン基等を形成し、 これらの基が結合している炭素原子と一緒になつて炭素環を形成していても良い。 このうち好ましくは水素原子又は炭素数 1〜 4のアルキル基であり、 より好まし くは R3及び R 4のいすれかが水素原子の場合であり、 特に好ましくは R3及ぴ R4 が共に水素原子の場合である。
R 5は、 フッ素原子、 塩素原子、 臭素原子等のハロゲン原子；ニトロ基；ヒ ドロ キシル基；置換されていてもよいアルキル基；置換されていてもよいァリール基； 又は置換されていてもよいアルコキシ基である。
ここで、 上記アルキル基及びァリール基はとしては、 上述の R 1及び Rい の説 明の項であげたのと同様のものが挙げられ、 上記アルコキシ基としては、 メ トキ シ基、 エトキシ基、 n—プロポキシ基、 イソプロポキシ基、 n—ブトキシ基、 ィ ソブトキシ基、 ターシャリーブトキシ基等の直鎖又は分岐のアルコキシ基、 好ま しくは炭素数 1〜 6、より好ましくは炭素数 1〜 4のアルコキシ基が挙げられる。 また、 上記アルキル基、 ァリール基及びアルコキシ基の置換基としては、 反応 に悪影響を与えない基であれば特に限定はないが、 具体的には、 アルキル基、 ァ リール基、 アルコキシ基、 ハロゲン基、 シァノ基、 アミノ基、 ニトロ基及ぴヒ ド 口キシル基等が挙げられる。
このうち、 上記 R 5として好ましくは、 ハロゲン原子、 置換されていてもよい アルキル基、 置換されていてもよいァリール基又は置換されていてもよいアルコ キシ基であり、 より好ましくはハロゲン原子、 炭素数 1〜4のアルキル基又は炭 素数 1〜 4のアルコキシ基であり、 更に好ましくはハロゲン原子又は炭素数 1〜 4のァノレキノレ基である。
nは 0〜3の整数を示し、 このうち好ましくは 0または 1であり、 また、 その 置換位置としてはチオフェン環の硫黄原子のひ位が好ましく、 特に好ましくは 0 である,
B) 3—ヒ ドロキシ _3— (2—チェニル） プロピオンアミ ドの製造方法 上記 3—ヒ ドロキシー 3— (2—チェニル） プロピオンアミ ドは、 1) 上記一 般式（1 ') で表される ]3ケトカルボニル化合物を、周期律表第 8族又は第 9族金 属化合物及び上記一般式 （2) で表される不斉配位子より構成される触媒の存在 下、 不斉還元する方法、 又は、 2) 上記一般式 （3) で表される ;3ケトカルボ二 ル化合物を、 周期律表第 8族又は第 9族金属化合物及び上記一般式 （2) で表さ れる不斉配位子より構成される触媒の存在下、 もしくは、 力ルポ二ル基を立体選 択的に還元する能力を有する微生物の菌体、 該菌体処理物及び/又は培養液を用 いて、 不斉還元した後に、 R1!^1' NH (尺 及び！^ぃ は前記と同義である。） で表されるァミン類と反応させる方法のいずれかの方法により製造することがで きる。
ここで、 上記一般式 (1，) で表される化合物は、 チォフェン環に結合している 基がカルボニル基である化合物であり、 該カルボ二ル基を不斉還元することによ り一般式 （1) の化合物へと誘導化される。
また、 上記 （3) で表される化合物は、 チォフェン環に結合している基がカル ボ-ル基であり、 且つ、 末端がカルボン酸エステル基である化合物である。 該カ ルポ二ル基を不斉還元した上で、 ァミン類と反応させ、 末端のカルボン酸エステ ル基をアミド基にすることにより一般式 （1) の化合物へと誘導化される。
上記一般式 （1 ') 及ぴ一般式 （3) において、 I 1、 Rx\ R3、 R4、 R5及び nは、 前記と同義であり、 R 2はアルキル基、 ァリール基又はァラルキル基を示 す。 ここで、 R 2のアルキル基、 ァリール基及びァラルキル基としては、 上述の R 1及ぴ R 1 ' の説明の項で挙げたのと同様の基が挙げられる。
加えて、 上記一般式 （1 ') で表される化合物は、 上記一般式 （3) で表される 化合物をアミド化することにより製造することができる。 一方、上記一般式（3) で表される化合物は、 ァセチルチオフェン類と炭酸エステル類とを反応させると 言った公知の方法で製造することができるが、 好ましくは炭酸エステル類と塩基 とを予め 3 5 °C程度以下の温度、好ましくは 0 °C〜 3 5 °Cの範囲で接触させた後、 必要に応じて 4 0 °C以上、 好ましくは 5 0 °C以上に昇温してから、 ァセチルチオ フェン類を添加する方法が取られる。 以下に、一般式（3 )で表される化合物の好ましい製造方法について詳述する。 (一般式 （3 ) で表される化合物の製造方法）
上記反応で用いられる炭酸エステル類としては、 上記一般式 （3 ) で表される 化合物にあわせて任意に用いればよいが、 好ましくは炭素数 1〜6のジアルキル カーボネート類が挙げられ、 その使用量は、 ァセチルチオフェン類に対して、 通 常、 2倍モル量から 1 0倍モル量の範囲、 好ましくは 2 . 5倍モル量から 8倍モ ル量の範囲で用いられる。
上記反応に使用する塩基としては、 カルボニル基のひ位にァニオンを発生させ る能力を有するものであれば特に限定されないが、 具体的には金属ナトリゥム、 金属力リゥム等のアルカリ金属；水酸化ナトリウム、 水酸化力リゥム等のアル力 リ金属水酸化物；ナトリウムアミ ド、 カリウムアミド等のアルカリ金属アミド； 水素化リチウム、水素化力リゥム、水素化ナトリゥム等のアル力リ金属水素化物； メトキシナトリウム、 ェトキシナトリウム、 t e r t—ブトキシナトリゥム又は t e r t一ブトキシカリウム等のアルカリ金属アルコキシドなどが挙げられる。 このうち好ましくはアル力リ金属水素化物又はアル力リ金属アルコキシドであり、 さらに好ましくは水素化ナトリウム、 t e r tーブトキシナトリゥム又は t e r t一ブトキシカリウムである。 ここで、 上記アルカリ金属水素化物は、 通常市販 されているようなオイル成分を含んだものをそのまま用いることもできる。 該塩 基の使用量は、 ァセチルチオフェン類に対して、 通常、 理論上、 等モル量以上用 いられ、 このうち過剰量の方が好ましい。 但し、 その効果及びコスト面から塩基 の量が過剰すぎても好ましくないため、 通常、 5倍モル量程度以下、 好ましくは 3倍モル量程度以下の範囲で用いられる。
反応温度は、上述のように通常、 4 0 °C以上、好ましくは 5 0 °C以上で行われ、 用いる溶媒にもよるが、 還流条件下で行うこともできる。 伹し、 反応温度が高す ぎると目的物の分解という難点があるため、 通常、 1 1 o °c以下の範囲で反応は 行われる。
本反応においては、 通常、 攪拌効率等の観点から溶媒が用いられる。 用いられ る溶媒としては、 塩基を不活化させない物であれば特に限定されないが、 具体的 にはジェチルエーテル、 テトラヒドロフランなどのエーテル系溶媒；又はトルェ ン、 キシレンなどの芳香族系溶媒が挙げられ、 このうち好ましくはエーテル系溶 媒であり、 特に好ましくはテトラヒ ドロフランである。
溶媒量は基質に対して、 反応スケールにもよるが、 通常、 1倍体積量以上、 好 ましくは 2倍体積量以上、 更に好ましくは 3倍体積量以上の範囲で用いられる。 但し、 あまり溶媒量が多すぎると、 釜効率の点で問題があるため、 通常、 1 0 0 倍体積量以下、 好ましくは 2 0倍体積量以下、 さらに好ましくは 1 0倍体積量以 下の範囲で用いられる。
また、 ァセチルチオフェン類の添加に際しては、 反応スケール及び添加速度と の兼ね合いにもよるが、 溶媒に溶解させておいてもよい。 その溶媒量としては、 通常、 ァセチルチオフェン類に対して 0 . 2〜 5倍体積量程度であり、 好ましく は 0 . 5〜 3倍体積量程度である。
反応は、ァセチルチオフェン添加終了後 3 0分以上攪拌することにより行われ、 反応スケールにもよるが、 通常、 数時間程度で完了する。
反応終了後、 未反応の塩基を処理するために反応液を水に添加して反応を終了 させる。 この際、 生成物の加水分解等を防止するために、 処理液の p Hを 5 ~ 8 程度の範囲内に制御しておくのが好ましく、 より好ましくは 6〜 7程度である。 上記反応停止後、 一般式 （3 ) で表される化合物を単離するに当たっては、 一 般的な単離精製法を行えばよく、 具体的には、 反応停止後の処理液をトルエン等 の有機溶媒で抽出し、 得られた有機層を濃縮した後、 蒸留、 カラムクロマトダラ フィ一等の一般的な精製法を用いて精製してから単離することができる。
(一般式 （3 ) で表される化合物のアミ ド化）
上述の方法で得られる一般式 （3 ) で表される化合物は、 R 1 !^ 1 ' N H ( R 1 及び R 1 ' は前記と同義である。） で表されるァミン類と反応させ、 アミド化する ことにより、 上記一般式 （1 ' ) で表される化合物へ誘導化することができる。 上記アミド化反応は、 エステル類とアミン類との一般的な公知のアミド化方法 に従って行えばよい。 具体的には、 エステル類とアミン類とを反応させることに より、 アミド化反応を行うことができる。
ァミン類の使用量としては、 エステル類に対して 1当量以上であればよく、 好 ましくは 2当量以上である。 使用量が多すぎると反応終了後の過剰ァミン類の除 去が困難になる場合があるので、 通常、 エステル類に対して 3 0当量以下、 好ま しくは 1 5当量以下、 特に好ましくは 1 0当量以下、 より好ましくは 5当量以下 の範囲で用いられる。
反応は、基質又は基質混合物が液体の場合には無溶媒下で行うこともできるが、 必要に応じて、 液体溶媒を用いてもよく、 用いられる溶媒としては、 反応基質を 不活性化させないものであれば特に限定されないが、 具体的にはジェチルェ一テ ル、 テトラヒ ドロフラン等のエーテル系溶媒； トルエン、 キシレン等の芳香族系 溶媒；ペンタンやへキサン、 ヘプタン等の脂肪族炭化水素類；塩化メチレン、 ク 口口ホルム等のハロゲン系溶媒；メタノール、ェタノール等のアルコール系溶媒； N , N—ジメチルホルムアミ ドゃジメチルスルホキシド、 N—メチルピロリ ドン 等の非プロトン性極性溶媒が挙げられる。
反応温度は、通常は一 2 0 °C以上、好ましくは 0 °C以上、より好ましくは 1 0 °C 以上の範囲で任意に設定されるが、 通常、 2 0 0 °C以下、 好ましくは溶媒の沸点 以下の範囲で行うことが好ましい。
反応速度を向上させるためには、 副生するアルコールを系中から除去する方が 好ましい。
所定時間反応を行った後、 副生したアルコール及び過剰のァミン類を蒸留等の 濃縮操作により除去し、生成する一般式（1 ' ) で表されるアミ ド類を取得するこ とができる。 取得したアミド類は、 クロマト精製 ·晶析等の一般的な精製法を組 み合わせることにより精製ができる。
上述の方法で得られる一般式 （3 ) で表される化合物又は一般式（1 ' ) で表さ れる化合物を不斉還元する方法として、 以下に不斉触媒を用いた不斉還元方法及 び微生物を用いた不斉還元方法についてそれぞれ記載する。
B- 1 ) 不斉触媒を用いた不斉還元方法
(不斉触媒）
本発明の不斉還元方法に用いられる不斉触媒は、 周期律表第 8族又は第 9族金 属化合物と上記一般式 （2) で表される化合物とで形成される触媒である。
周期律表第 8族又は第 9族金属化合物としては、 ルテニウム、 ロジウム、 イリ ジゥム、 コバノレト等のハロゲン化物、 ォレフィン錯体、 ァレーン錯体又はカルボ ニル錯体が挙げられ、 このうちルテニウム化合物が好ましい。 該化合物の好まし い具体例としては、 R u C 13— 3 H20、 [RuC l2 (p - c yme n e)] 2, [R u C 12 (b e n z e n eリ」 。、 |_RuC l 、m e s y t i 1 e n e 」 r；、 LR U C 1 ( h e x a m e t h y 1 b e n z e n e ) ] 2、 R u C 12 、P P h3) 3、 [RuC 12 (c o d)] n、 [Ru C l 2 (CO) 3] 2、 [R h (c o d) C l ] 2、 [R h C l2 (p e n t ame t h y 1 e y e 1 o p e n t a. d i e n y 1 )] 2 [ I r ( c o d) C 1] 2、 C o C 12などが例示され、特に [Ru C l 2 (p— c yme n e)] 2が好ましい。 なお、 上記化合物の P hはフエニル基、 c o dはシクロォクタジ ェンを示す。
上記一般式 （2) で表される化合物において、 R6及び R7は、 それぞれ独立し て、 水素原子； メチル基、 ェチル基、 n—プロピル基、 i一プロピル基、 n—ブ チル基等のアルキル基；ァセチル基、 プロピオニル基、 ベンゾィル基等のァシル 基； N—メチルカルバモイル基、 N—フエ二ルカルバモイル基等の力ルバモイル 基；チオアセチル基、チォプロピオ-ル基、チォベンゾィル基等のチオアシル基； N—メチルチオ力ルバモイル基、 N—フエ二ルチオ力ルバモイノレ基等のチォカル バモイノレ基； メチノレスノレホニノレ基、 ェチノレスノレホニノレ基、 クロロメチノレスノレホニ ル基、 メ トキシメチルスルホニル基等のアルキルスルホニル基又はァリ一ルスル ホニル基としては、 フエニルスルホニル基、 トリルスルホニル基、 4ーメ トキシ フエニルスノレホニノレ基、 4一クロ口フエニノレスノレホニノレ基、 2—ナフチルスノレホ ニル基等のァリールスルホニル基である。 上記アルキル基、 ァシル基、 カルバモ ィル基、 チオアシル基及びチォカルバモイル基として好ましくは炭素数 8以下、 より好ましくは炭素数 4以下のものであり、 アルキルスルホエル基及ぴァリール スルホニル基としては、 炭素数 2 0以下のものが好ましい。
このうち好ましくは、 一般式 （2 ' ) で表される化合物、 すなわち R 6及び R 7 のいずれか片方がアルキルスルホニル基又はァリ一ルスルホニル基であるのが好 ましく、 より好ましくは R6及ぴ R 7のいずれか片方がァリ一ルスルホニル基であ る場合であり、 特には R6及び R7のいずれか片方がトリルスルホニル基であるの が好ましい。
ここで、 一般式 （2 ' ) で表される化合物における R 1 Qは、 置換基を有してい ても良いアルキル基又は置換基を有していても良いァリール基である。 上記アル キル基としては、 メチル基、 ェチル基、 n—プロピル基、 i 一プロピル基、 n— プチル基、 n一ペンチル基、 n—へキシル基等の炭素数 1〜 2 0のものが挙げら れ、 ァリール基としてはフエニル基、 ナフチル基等の炭素数 6〜 2 0のものが挙 げられる。 かかるアルキル基及びァリール基の置換基としては、 具体的にはメチ ル基、 ェチル基、 n—プロピル基、 i 一プロピル基、 n—プチル基等の炭素数 1 〜 4の低級アルキル基； フッ素原子、 塩素原子、 臭素原子等のハロゲン原子； メ トキシ基、 エトキシ基、 n—プロポキシ基、 i—プロポキシ基等の炭素数 1〜4 の低級アルコキシ基等が挙げられる。
上記一般式 （2 ) で表される化合物において、 1 8及び1 9は、 それぞれ独立し て、 置換基を有していても良いアルキル基、 置換基を有していてもよいァリール 基又は置換基を有していてもよい芳香族複素環基である。 上記アルキル基として は、 メチル基、 ェチル基、 n—プロピル基、 i—プロピル基等の炭素数 1〜6の ものが挙げられ、 了リール基としてはフエニル基、 4一メチルフエニル基、 3 ,
5—ジメチルフエ-ル基、 ナフチル基等の炭素数 6〜1 2のものが挙げられ、 芳 香族複素環基としてはフリル基、 ピリジル基等の窒素原子、 酸素原子、 ィォゥ原 子等を含む 5〜6員環のものが挙げられる。 また、 R 8と R 9は一緒になってこれ らが結合している炭素原子と共に、 シクロへキサン環、 シクロペンタン環等の炭 素環又はテトラヒドロフラン環、 ピロリジン環、 テトラヒドロチォフェン環等の 酸素、窒素、硫黄等のへテロ原子を環内に含んだ複素環を形成することもできる。 これらの基はさらに置換基を有していてもよく、かかる置換基としてはメチル基、 ェチル基、 プロピル基等の炭素数 1〜 4の低級アルキル基；メ トキシ基、 ェトキ シ基等の炭素数 1〜4の低級アルコキシ基；及び塩素原子、 臭素原子、 フッ素原 子等のハロゲン原子から選ばれる 1個もしくは 2個以上の基である。 このうち、 R8及び R9としては、 置換されていても良いフエニル基が好ましい。
上述の一般式 （2) で表される不斉配位子の具体例としては、 1， 2—ジフエ ニノレエチレンジァミ ン、 N—メチノレ一 1， 2—ジフエニノレエチレンジァミン、 N ― トシルー 1， 2—ジフエニノレエチレンジァミン、 N—メチゾレー N' _トシノレ一 1， 2—ジフエニノレエチレンジァミン、 N_ p _メ トキシフエニノレスノレホニノレ一 1， 2—ジフエニノレエチレンジァミン、 N— p—クロ口フエニノレスノレホニノレ一 1， 2 ージフエニノレエチレンジァミン、 N— p—メシチノレスノレホニノレ一 1 , 2—ジフエ ニノレエチレンジァミン、 N— (2， 4， 6— トリー i—プロピノレ) フエニルスル ホニノレ一 1 , 2—ジフヱ二/レエチレンジァミン等が挙げられる。
一般式 （2) で表される不斉配位子と金属化合物とからの触媒生成は、 J. A m. C h e m. S o c.， 1 9 9 5, 1 1 7， p 756 2などにおいて開示されて いる公知の方法や、 A n g e w. C h e m. I n t . E d. En g l .， 1 9 9 7, 36, p 28 5に記載のように錯体を結晶として単離して用いる方法が使用できる。 予め触媒を調製単離する方法の場合には、 不斉還元反応前に溶媒中で上述の金 属化合物と不斉配位子を反応させ、 得られる触媒を単離する。
この場合用いられる溶媒としては反応に影響を与えない限り特に限定されない が、 ジェチルエーテルゃテトラヒ ドロフラン等のエーテル類； メタノールやエタ ノール、 2一プロパノール等のアルコール類；ベンゼンやトルエン等の芳香族炭 化水素類；ァセトニトリルや N， N—ジメチルホルムアミド等の非プロトン性極 性溶媒等が好ましく、 特に 2—プロパノールが好ましい。
不斉配位子と金属化合物との反応は、 理論的には等モル量反応であるが、 触媒 調製速度の点から不斉配位子を金属化合物に対して等モル量以上用いるのが好ま しい。 特に、 ルテニウム化合物として [RuC l 2 (p- c yme n e)] 2を用 い、 不斉配位子としては化合物 （2) (式中、 R6及び R7は、 それぞれ独立して、 水素原子、アルキル基、アルキルスルホニル基又はァリ一ルスルホニル基を示し、 尺8及び1 9は、それぞれ独立して、置換基を有していてもよいァリール基を示す。 また、 *は不斉炭素を示す。） を用いた場合には、等モル量で触媒調製が速やかに 進行するので好ましい。
また、 Yがハロゲン原子である触媒の場合には、 調整時に塩基を共存させるの が好ましい。 この場合の塩基としてはトリメチルァミン、 トリェチルァミン、 ト リイソプロピルァミンなどの第 3級有機ァミン類； L i OH、 N a OH、 KOH、 K2CO3などの無機塩基；又は、 ナトリウムメ トキシド、 カリウムメ トキシド等 の金属アルコキシドが挙げられ、 このうち第 3級有機アミン類が好ましく、 特に トリェチルァミンが好適である。 塩基の添加量は金属原子に対して等モル以上で ある。
反応は、 通常、 o°c以上溶媒の還流温度以下で行われ、 反応温度が高い方が触 媒の調製速度は早くなり好ましい。 伹し、 あまり高温すぎると触媒の分解が起こ る場合もあるため、 通常、 1 20°C以下、 好ましくは 100°C以下で行われる。 また、 金属化合物と不斉配位子を溶媒存在下で混合した時点では、 通常、 スラ リ一状態を採ることが多く、 触媒の形成が進行するに伴い溶液状態へと変化する ので、 それにより反応の終了を確認することもできる。
反応終了後、 反応液を濃縮する又は貧溶媒を添加する等の一般的な晶析手法に より、 目的とする触媒を分離することができる。 また、 上記調製において、 ハロ ゲン化水素塩が副生する場合には、 必要に応じて水洗の操作を行っても良い。 また、不斉還元反応系中で触媒調製を同時に行う場合は、水素供与体共存下で、 上述のルテニウム化合物および不斉配位子を接触させてから還元基質を加える方 法、 又は、 ルテニウム化合物、 不斉配位子及ぴ還元基質を同時に加える方法を挙 げることができ、 これらのいずれの場合においても、 金属化合物と不斉配位子の 使用量比等は、 前述と同様である。 また、 反応溶媒や温度等の反応条件は後述の 不斉還元反応条件に準ずればよい。 このように上述の不斉配位子と金属化合物から生成させる触媒としては、 特に 上記一般式 （4 ) で表されるものが好適に使用される。
上記一般式 （4 ) において、 R6、 R7、 1 8及び1 9は、 前記と同義であり、 Y は水素原子又はハロゲン原子を示し、 A rは置換基を有していても良いァリール 基を示す。 ここで、 A rの置換基を有していても良いァリール基としては、 フエ ニル基、 ナフチル基等の炭素数 6〜 2 0のものが挙げられ、 環上にメチル基、 ェ チル基、 n—プロピル基、 i—プロピル基、 n—ブチル基等の炭素数 1〜4のァ ルキル基；フッ素原子、 塩素原子、 臭素原子等のハロゲン原子；メ トキシ基、 ェ トキシ基、 n—プロポキシ基、 i—プロポキシ基等の炭素数 1〜4のアルコキシ 基を有していてもよい。
ここで Yがハロゲン原子の場合には、 上記一般式 ( 4 ) で表される化合物を、 塩基性条件下で、 水素供与体と接触させることにより容易に Yが水素原子のもの に変換することができる。 ここで、 水素供与体としては、 水素化ホウ素化合物等 の金属水素化物ゃギ酸、 2—プロパノール等の水素移動型還元反応において、 水 素供与体として一般的に用いられるようなものが同様に用いられ、 その使用量と しては、 ヒドリ ド換算で触媒に対して等モル量以上であればよい。 また、 塩基性 条件とするために用いる塩基としては、 トリメチルァミン、 トリェチルァミン、 トリイソプロピルァミンなどの第 3級有機アミン類； L i O H、 N a O H、 K O Η、 K2 C〇3などの無機塩基；又は、 ナトリウムメ トキシド、 カリウムメ トキシ ド等の金属アルコキシドが挙げられる。 また、 Yがハロゲン原子のものから水素 原子のものへの変換は、 不斉還元反応に供する前に予め行っておいても良いし、 不斉還元反応系中で行っても良い。
(不斉還元反応）
本発明の不斉還元反応は、 上記一般式 （1 ' ) 又は （3 ) で表される ]3ケトカル ポエル化合物に水素供与体の共存下、 上述の方法で得られる触媒を反応させる。 該水素供与体としては、 ギ酸、 2—プロパノール等の一般的な水素移動型還元反 応に用いられるようなものであれば特に限定ない。 また、 不斉還元反応は塩基存在下で実施されることが好ましい。 塩基が存在す ると触媒が安定化し、また不純物による活性低下等が防止できる。塩基としては、
1、リメチルァミン、 トリエチルァミン、 トリイソプロピルアミンなどの第 3級有 機アミン類ゃ L i OH、 NaOH、 KOH、 K2C 03などの無機塩基が挙げられ る。 好適な塩基はトリエチルァミンである。 塩基は、 触媒に対して過剰量、 例え ばモル比で 1 ~ 10000倍用される。 トリェチルァミンを使用する場合は触媒 に対して、 1〜1000倍用いるのが好ましい。
上記水素供与体と塩基との組み合わせの中で、 水素供与体がギ酸の場合にはァ ミンを塩基として用いるのが好ましく、 この場合、 ギ酸とアミンは別々に反応系 に添加しても良いが、あらかじめギ酸とァミンの共沸混合物を調整して用いると、 これらの原料中の不純物による影響が抑制できるので好ましい。
反応は、 通常、 水素供与体であるギ酸又は 2—プロパノールを反応溶媒として 利用するが、 原料を溶解させるために、 トルエン、 テトラヒドロフラン、 ァセト 二トリル、 ジメチルホルムアミ ド、 ジメチルスルホキシド等の非水素供与性溶媒 を単独又は混合して助溶媒として使用することも可能である。 特にァセトニトリ ル又はジメチルホルムアミ ドを溶媒として用いると反応速度が増大するので好ま しい。
触媒の使用量は、 触媒の金属原子に対する基質 （前記 （1) 式で表される ]3ケ トカルポニル化合物） のモル比 （SZC) が 10〜 1000000、 好ましくは 100〜5000の範囲から選ばれる。
上記一般式 (1，) 又は (3) で表される i3ケトカルボニル化合物） に対する水 素供与体の量としては、 通常等モル量以上用いられ、 このうち水素供与体がギ酸 である場合には、 1. 5倍モル量以上が好ましく、 また、 20倍モル量以下、 好 ましくは 10倍モル量以下の範囲で用いられる。 一方、 水素供与体がィソプロパ ノールの場合には、 反応平衡の観点から基質に対して大過剰量用いられ、 通常 1 000モル倍以下の範囲で用いられる。
反応温度は一 70〜100°C、 好ましくは 0〜 70°Cの範囲から選ばれる。 反応圧力は特に限定されず、 通常 0. 5〜2気圧、 好ましくは常圧のもとで行 われる。
反応時間は 1〜： L 0 0時間、 通常は 2〜 5 0時間である。
反応後は、蒸留、抽出、クロマトグラフィー、再結晶などの一般的操作により、 反応液から生成した光学活性なアルコールを分離、 精製することができる。
B - 2 ) 微生物を用いた不斉還元方法
上記一般式 ( 3 ) で表される ] 3ケトカルポ-ル化合物は、 カルボ二ル基を立体 選択的に還元する能力を有する微生物の菌体、 該菌体処理物及び/又は培養液を 用いて不斉還元することもできる。
(微生物）
本発明に用いることの出来る微生物としては、 3 —ォキソ一 3 _ ( 2—チェ二 ル）プロピオン酸エステル誘導体のカルボ二ル基を立体選択的に還元する能力（以 下これを「立体選択的還元活性」 と略称することがある。） を有するものであれば 特に限定されない。 立体選択的還元活性の確認方法としては、 通常、 上記一般紙
( 3 ) で表される ] 3ケトカルボニル化合物を含む水溶液に対象となる微生物、 そ の菌体処理物又は培養液を作用させ、 その反応液を薄層クロマトグラフィー、 ガ スクロマトグラフィ一や液体ク口マトグラフィーを用い、 上記基質およぴ生成物 である光学活性 3—ヒドロキシ _ 3 _ ( 2—チェニル）プロピオン酸エステル誘導 体を定性 ·定量すればよい。
本発明に用いることのできる微生物は、 上記立体選択的還元活性の確認方法に 供し、 数時間以上、 好ましくは 1日以上反応させたときに原料基質の減少が確認 しうるもの、 具体的には、 数時間以上、 好ましくは 1日以上反応させたときに原 料基質が 1 %以上、 好ましくは 5 %以上減少するものである。
上記一般式 （3 ) で表される ケトカルポニル化合物を立体選択的に還元し、 R体の 3 —ヒ ドロキシ一 3—（2 —チェニル）プロピオン酸エステル誘導体を製造 する能力を有する微生物としては、例えば、ァルスロパクター（Arthrobact er)属、 キャンディダ（Candida)属、 タリプトコッカス（Cryptococcus)属、 クロエケラ ( Kloeckela ) 属、 コダマエア （ Kodamaea ) 属、 ロイ コスポリディ ウム ( Leucosporidium) 属、 メ y二： =iウイァ（Metschnikowia)属、 ノ ェニノ チノレス (Paenibacillus)属、 ピキア（Pichia)属またはサッカロマイセス (Saccharorayces) 属に属する微生物が挙げられる。 ァルスロパクター（Arthrobacter)属に属する微生物として、 好ましくは、 アル スロバクタ一. アトロシアネウス（Arthrobacter atrocyaneus) JCM1329 等のァ ノレスロノ クタ一 -了卜ロシアネゥス（Arthrobacter atrocyaneus)； ^挙げ、られる。 キャンディダ（Candida)属に属する微生物として、好ましくは、 キャンディダ ' アルビカンス（Candida albicans) IF00759 等のキャンディダ · アルビカンス (Candida albicans)、 キャンディダ■ ホノレミイ（Candida holmi i) IF01629 等の キヤンディダ■ ホルミィ (Candida holmi i)、 キヤンディダ ·パラプシロシス (Candida parapsilosis) IF01396、 キャンディダ■ パラプシロシス（Candida parapsilosis) CBS604 等のキャ ンディ ダ · パラ プシロ シス （Candida parapsilosis)ヽ キャンディダ -バクチ二 (Candida vaccini i) JCM9446 等のキ ャンディグ■ノ クチ二 (Candida vaccini i)、キャソ丁ィグ ·ノ リダ (Candida val i da) IF010318等のキャンディダ ·バリダ （Candida valida) が挙げられる。 タリプトコッカス（Cryptococcus)属に属する微生物として、 好ましくは、 タリ プトコッカス · フミコラス (Cryptococcus humicolus) IF010250等のタリプトコ ッカス - フミコラス (Cryptococcus humicolus)力挙げられる。
クロエケラ （Kloeckera) 属に属する微生物として、 好ましくは、 クロエケラ · コノレティ シス ( Kloeckera corticis ) IF00631、 ク ロエケラ · コノレティ シス (Kloeckera corticis) IF010318 等のクロエケラ · コノレティシス (Kloeckera corticis) 力 S挙げられる。 コダマエア （Kodamaea) 属に属する微生物として、 好ましくは、 コダマエア - ォウメ リ （Kodamaea ohmeri) IF00158 等のコダマエア ■ォゥメリ （Kodamaea ohmeri) が挙げられる。 ロイコスポリディウム （Leucosporidium) 属に属する微生物として、 好ましく は、 ロイコスポリディウム . スコッティ （Leucosporidium scottii) IF01212等 のロイコスポリディウム .スコッティ （Leucosporidium scottii) が挙げ、ら； る。 メッニコウイァ（Metschnikowia)属に属する微生物として、好ましくはメッニコ ウイァ · ビクスピダタ 変種力リフォルニァ（Metschnikowia bicuspidata var. Cal ifornia) IF010787 等のメ ッニコウイァ ■ ビクスピダタ （Metschnikowia bicuspidata)、 メッニコウイァ · クリシィ（Metschnikowia krissii) IF01677 等 のメッニコウイァ 'タリシィ（Metschnikowia krissi i)、 メッニコウイァ■プルケ リマ (Metschnikowia pulcherrima) IAM12196、 メ ッニコウイァ - プ /レケリマ (Metschnikowia pulcherrima) IAM12197、 メ ッニコ ウ イ ァ · プルケ リ マ (Metschnikowia pulcherrima) IF00863、 メ ッニ コ ウ イ ァ ' プルケ リ マ (Metschnikowia pulcherrima) IF010796、 メ ッニコ ウ イ ァ · プルケ リ マ (Metschnikowia pulcherrima) IF01407 またはメッニコウイァ - プノレケジマ (Metschnikowia pulcherrima) IF01678 等のメ ッニコ ウイァ · プルケリ マ (Metschnikowia pulcherrima)力、爭けられ 。 パェニバチルス（Paenibaci l lus)属に属する微生物として、好ましくは、パェニ バチルス ■ アルべィ (Paenibaci l lus alvei) IF03343等のパェニバチノレス ■ アル べィ (Paenibacillus alvei)力 S挙けられる。 ピキア（Pichia)属に属する微生物として、 好ましくは、 ピキア ' アンゴフォレ (Pichia angophorae) IF010016等のピキア - アンゴフォレ（Pichia angophorae)、 ピキア .ボビス（Pichia bovis) IF00872等のピキア ·ボビス（Pichia bovis)、 ピ キア ' カク トフイラ（Pichia cactophila) JCM1830 等のピキア ■ カク トフイラ (Pichia cactophila) , ピキア ' シャンバルディ （Pichia chambardii) IF01274等 のピキア ■ シャンバルディ（Pichia charabardii) , ピキア · フラクスーム（Pichia fluxuum) JCM3646S ピキア ·ジャポニカ（Pichia japonica) IF010721 等のピキ ァ . ジャポニカ（Pichia japonica)、 ピキア · リンフェルディ（Pichia lynf erdi i) IF010724等のピキア ■ リンフエノレディ（Pichia lynf erdii)、 ピキア■マンシュリ 力 (Pichia manshurica) IF00181、 ピキア - マンシュリカ (Pichia manshurica) IF00864等のピキア ·マンシュリカ（Pichia manshurica)、 ピキア ■ ミスマイエン シス（Pichia misumaiensis) IF010221 等のピキア ■ ミスマイエンシス（Pichia misumaiensis) , ピキア ·ナガニシ（Pichia naganishii) IF01670等のピキア ■ナ ガニシ（Pichia naganishi i) , ピキア ■ナカセィ（Pichia nakasei) JCM1699 等の ピキア ·ナカセィ（Pichia nakasei)、 ピキア ·ナカザヮェ 変種アキテンシス (Pichia nakazawae var. akitaensis) JCM10738, ピキア 'ナカザヮェ 変種ナカ ザヮェ（Pichia nakazawae var. nakazawae) JCM7529 等のピキア ·ナカザヮェ (Pichia nakazawae)、 ピキア■ フイロガエァ（Pichia philogaea) JCM10739 等の ピキア ■ フィロガエア（Pichia philogaea)、 ピキア ■ ローダネンシス（Pichia rhodanensis) JCM3649等のピキア · ローダネンシス（Pichia rhodanensis)、 ピキ ァ■ シルビコラ（Pichia silvicola) JCM3627 等のピキア ■ シルビコラ（Pichia silvicola)、 ピキア 'サブペリクロサ（Pichia subpel liculosa) IF00808 等のピ キア ■ サブペリクロサ（Pichia subpelliculosa) , ピキア ' トレタナ（Pichia toletana) IF01275等のピキア ' トレタナ（Pichia toletana)、 ピキア ' トレハロ フイラ（Pichia trehalophi la) JCM3651 等のピキア · トレハロフイラ（Pichia trehalophila) N ピキア■ トリアングラリス（Pichia triangularis) JCM2379等の ピキア ■ トリアングラリス（Pichia triangularis) , ピキア 'ベロナェ（Pichia veronae) IF01667等のピキア ·ベロナェ（Pichia veronae)が挙げられる。 サッカロマイセス（Saccharomyces)属に属する微生物として、好ましくは、サッ カロマイセス ■ェクシグース（Saccharomyces exiguus) IF01170等のサッカロマ イセス -ェクシグース (Saccharomyces exiguus)力 S挙げられる。 また、 上記一般式 （3 ) で表される i3ケトカルポニル化合物を立体選択的に 還元し、 S体の 3—ヒドロキシー 3 _ ( 2—チェニル）プロピオン酸エステル誘導 体を製造する能力を有する微生物と しては、 例えばアンプ口ジォザイマ
(Ambroziozyma)属、ブレツタノマイセス（Brettanomyces)属、ブレビバタテリゥム (Brevibacterium)属、 プレラ （Bull era) 属、 キャンディダ（Candida)属、 シテロ マイセス（Citeromyces)属、 コジネノ クテリゥム（Corynebacterium)属、 クジプ卜 コッカス (Qryptococcus)属、シス卜フィロノ ンディゥム (Cystof ilobasidium)属、 デバリオマイセス （Debaryomyces) 属、 デッケラ（Dekkera)属、 エンドマイセス (Endomyces)属、 ェクソフィアラ （Exophiala) 属、 フヱロマイセス （Fellomyces) 属、 フィ ノ シディクム（Filobasidium)属、 ノヽンセ二: 7スポラ (Hanseniaspora) 属、 ホノレタマニア （Holtermannia) 属、 ィサチェンキア（Issatchenkia)属、 タレ ッケラ (Kloeckera) 属、 クリべロマイセス (Kluyveromyces)属、 コマ刀タエラ (Komagatael la)属、リポマイセス (Lipomyces)属、口テロマイセス (Lodderomyces 属、 メッニコウイァ（Metschnikowia)属、 ォガタエア（Ogataea)属、 ロドトノレラ (Rhodotorula)属、 サッカロマイセス (Saccharomyces)属、 サッカロマイコプシス (Saccharomycopsis)属、 サイ トエラ（Saitoella)属、 シゾサッカロマイセス (Shizosaccharotnyces)属、 シロノ シディウム (Sirobasidium) 禹、 スポリアィォ ボラス（Sporidiobolus)属、 ステリグマ卜マイセス (Sterigmatomyces) 属、 ステ リグマトスポリティゥム (Sterigmatosporidium)属、 卜ノレラス:^ラ (Torulaspora) 属、 トレメラ （Tremella) 属、 トリコスポロン（Trichosporon)属、 トリコスポロ ノイデス （Trichosporonoides) 属、 トリゴノプシス（Trigonopsi s)属、 ワルトマ イセス（Waltomyces)属、 ウイケラミエラ （Wickerhamiella) 属、 ウイリオプシス 属 （Williops is)、 ヤマダジマ （Yamadazyma) 属及びャロウィァ（Yarrowia)属に属 する微生物が挙げられる。 アンプ口ジォザイマ（Ambroziozyma)属に属する微生物として、 好ましくは、 ァ ンプロジォザイマ ·アンブロジェ（Ambroziozyma ambrosiae) IF010835 等のアン プロジォザイマ ·アンプロジェ（Ambroziozyma ambrosiae)、アンブロジォザィマ · シカトリコサ（Ambroziozyma cicatricosa) JC 7598等のアンブロジォザィマ · シ 力 卜リコザ (Ambroziozyma cicatricosa)、 アンブロジォザイマ -モノスポラ (Ambroziozyma monospora) IF01965、 ア ンブロ ジォザイ マ - モ ノ ス ポラ (Ambroziozyma monospora) JCM7599 等のアンブロジォザイマ ■ モノスポラ (Ambroziozyma monospora) アンブロシ ケイマ - フィ レン rマ (Ambroziozyma philentoma) JCM7600 等のアンプ口ジォザイマ - フィ レン 卜マ（Ambroziozyma philentoma)、ァンプロジォザィマ，プラティポディス (Ambroziozyma platypodis) IF01471等のアンブロジォザイマ ·プラティポデイス（Ambroziozyma platypodis) が挙げらる。 ' ブレツタノマイセス（Brettanomyces)属に属する微生物として、好ましくは、ブ レツタノマイセス ■ ァノマルス（Brettanomyces anomalus) IF00627等のブレツタ ノマイセス ■ァノマノレス (Brettanomyces anomalus)、 フレッタノマイセス - プノレ クセレンシス（Brettanomyces bruxellensis) IF00629 ゃブレツタノマイセス · ブノレクセレンシス（Brettanomyces bruxellensis) IF00797 等のブレツタノマイ セス - プノレクセレンシス (Brettanomyces bruxellensis)ゃブレツタノマイセス ■ ナーデネンシス（Brettanomyces naardenensis) IF01588 等のブレツタノマイセ ス -ナーテネンシス (Brettanomyces naardenensis)力 S挙げられる。 ブレビバタテリゥム（Brevibacterium)属に属する微生物として、 好ましくは、 フレビパ、クテジ ゥム - サックロ リティカム (Brevibacterium sacchrolyticum) ATCC14066 等のブレビパクテリ ゥム · サック口 リティカム（Brevibacterium sacchrolyticum カ S罕げ、られ 。 ブレラ （Bullera) 属に属する微生物として、 好ましくは、 ブレラ■シユードア ノレバ （Bullera pseudoalba) JCM5290 等のブレラ ' シユードァノレバ （Bullera pseudoalba)、 ブレラ ■ ウニカ （Bullera unica) JCM8932 等のブレラ · ウニカ (Bullera unica) 力 S挙げられる。 ダ（Candida)属に属する微生物として、好ましくは、 キャンディダ ランピ力（Candida lambica) JCM9557 等のキャンディダ ' ランピ力（Candida lambica) JCM9557や、キャンディダ 'ポィディ二（Candida boidinii) IF010035、 キャンディダ■ボイディ二（Candida boidinii) IF010240、 キヤンディダ ·ボイ ディ二（Candida boidinii) IF010329 やキャンディダ■ボイディ二（Candida boidinii) IF010574 等のキャンディダ 'ボイディ- (Candida boidinii)や、 キ ヤンディダ ' シリンドラセァ（Candida cylindracea) ATCC14830 等のキャンディ ダ · シリンドラセァ (Candida cyl indracea)や、 キヤンディダ ·デセルチコラ (Candida deserticola) IF010232 等のキャンディダ ■ デセルチコラ（Candida deserticola)や、 キャンディダ■ファマタ（Candida famata) ATCC20850、 キャン デイダ 'ファマタ 変種ファマタ（Candida famata var. famata) IF00856 等の キャンディダ ·ファマタ (Candida famata)や、キヤンディダ ·グラブラタ (Candida glabrata) ATCC15126、 キャンディダ'グラブラタ（Candida glabrata) IF00005 やキャンディダ · グラブラタ (Candida glabrata) IF00622 等のキヤンディダ · グラブラタ（Candida glabrata)や、キヤンディダ'グラエボザ（Candida glaebosa)
IF01353等のキヤンディダ ·グラエボザ (Candida glaebosa) や、 キャンディダ - グロポザ （Candida globosa) IF00953等のキャンディダ ' グロポザ （Candida globosa) や、 キャンティグ · クロペンギ工セリ (Candida gropengiesseri ) IF00659 等のキャンデイダ - グロペンギェセジ （Candida gropengiesseri) ゃヽ キャンディダ■ィンタメディ了 (Candida intermedia) IF00761等のキャンディ ダ-インタメディア (Candida intermedia)や、キャンディダ-クノレセィ (Candida krusei) IF00201、 キャンディダ . クルセィ （Candida krusei) IF01162、 キヤ ンディダ -クルセィ (Candida krusei ) IF01664、キャンディダ'クルセィ (Candida krusei) JCM1608、 キャンディダ ' クノレセィ （Candida krusei) JCM1609、 キヤ ンディダ 'クルセィ (Candida krusei) JCM1712Nキャンディダ 'クルセィ (Candida krusei) JCM2284、 キャンデイダ - クルセィ (Candida krusei)
JCM2341等のキャンディダ . クルセィ (Candida krusei) や、 キャンディダ · マ グノリエ（Candida magnoliae) IF00705等のキャンディダ'マグノリエ（Candida magnol iae) や、 キャンディダ 'マイ トサ （Candida raaitosa) IF01977等のキヤ ンデイダ-マイ 卜サ（Candida tnaitosa)や、キャンディダ-メ ]) ^ (Candida mel ini i) IF00747、 キャンディダ■メリ二 （Candida melinii) JCM2276等のキヤンディダ · メジ ^ (Candida mel inii) や、 キャンディダ-モジスキナ (Candida molischiana) IF010296 等のキャンディダ ' モリスキナ （Candida molischiana) や、 キャンデ イダ ' ノノレベジエンシス （Candida norvegensis) JCM2307 等のキャンディダ ' ノルベジエンシス (Candi da norvegensi s) や、 キャンディダ - ノ ラプシ口シス (Candida parapsilosis) IF00585等のキャンディダ 'パラプシロシス （Candida parapsilosis) や、 キャンディダ ' ピニ（Candida pini) IF01327 等のキャンデ イダ - ピニ (Candida pini)や、 キャンディダ - クェルカム (Candida quercuum) IF01576等のキャンディダ 'クエルカム （Candida quercuum) や、 キャンディダ - ノレゴサ (Candida rugosa) IF00591 のキャンディダ -ノレゴサ (Candida rugosa) や、キャンディダ 'サケ（Candida sake) IF00435等のキャンディダ 'サケ（Candida sake) や、 キャンディダ.ソラニ (Candida solani) IF00762等のキャンディダ . ソラニ (Candida solani) や、 キャンデイダ- 卜ロピカジス (Candida tropicalis) IF00006, キャンデイダ - 卜ロピカリス (Candida tropicalis) IF00199、 キャン ディダ ' トロピカリス （Candida tropicalis) IF00618、 キャンディダ■ トロピ カリス（Candida tropicalis) IF01647等のキャンディ ヽ ' トロピカリス（Candida tropical is) や、 キャンディダ 'ュティリス （Candida utilis) IAM4961、 キヤ ンデイダ .ュティリス （Candida ut i lis) IF00396等のキャンディダ■ュティリ ス (Candida utilis)や、 キャンディ夕 -ノ ノレティ才ノ レ (Candida vartiovaarae) JCM3759 等のキャンディタ、、 · ノ ノレティ才/ レ (Candida vartiovaarae) や、 キヤ ンディダ .ゼィラノイデス （Candida zeylanoides) CBS6408、 キャンディダ -ゼ イラノィデス （Candida zeylanoides) IF010325、 キャンディダ■ゼイラノイデ ス （Candida zeylanoides) JCM1627等のキャンディダ 'ゼイラノイデス （Candida zeylanoides) カ挙げられる。 シテロマイセス（Citeromyces)属に属する微生物として、好ましくはシテロマイ セス · マ卜ジテンシス (Citeromyces matritensis) IF00954、 シテロマイセス · マ matritensis) IF00651 等のシテロマイセス ■マトリ (Citeromyces matritensis) »、挙けられ。 D コリネバクテリゥム（Corynebacterium)属に属する微生物として、 好ましくは、 コ リ ネ ノ ク テ リ ゥ ム · ァ セ ト ァ シ ド フ ィ ラ ム （Corynebacterium acetoacidophi lura) ATCC13870等のコリネバタテリゥム 'ァセトァシドフィラム (Corynebacterium acetoacidophilum)や、 コジネノ クテジゥム - アンモニアケ不 ス（Corynebacterium aramoniagenes) JCM1305 等のコリネノ クテリゥム - アンモ ニァゲネス (Corynebacterium ammoniagenes)や、 コリ ノ クテリゥム ' フラべセ ンス (Corynebacterium flavescens) JCM1317 等のコリネパクテリゥム · フラベ センス (Corynebacterium flavescens)や、 コリネノ クテリゥム - グルタミカム (Corynebacterium glutaraicum) ATCC13032、 リネノ クテリクム ·ク、-ノレタミカム (Corynebacterium glutaraicum) ATCC13826 ゃコリネバクテリウム - グルタミ力 ム（Corynebacterium glutaraicum) ATCC13869 等のコリネバクテリゥム ■グルタ ミカム (Corynebacterium glutamicum)や、 コリ ネノ クテジ ゥム - バリアビノレ (Corynebacterium variabile) JCM2154 等のコリネバタテリゥム 'バリアビル (Corynebacterium variabile)力、挙げられる。 タリプトコッカス（Cryptococcus)属に属する微生物として、 好ましくは、 タリ プトッコッ力ス · ァェリウス (Cryptococcus aerius) IF00377、 タリプ卜ッ nッ カス .ァェリウス （Cryptococcus aerius) IF01322 等のクリプトッコッカス - ァェリ ウス ( Cryptococcus aerius ) や、 ク リ プ トコッカス · ァゾレビダス (Cryptococcus albidus) IF00612、クジプ卜コッカス-ァノレビダス (Cryptococcus alubidus) IF00378、 タリプトコッカス ■ ァノレビダス （Cryptococcus alubidus) IF00612等のタリプトコッカス ■アルビダス（Cryptococcus albidus)や、 クリプ トコッカス 'セノレロ リティカス （Cryptococcus cellulolyticus) JCM9707 等の タリプトコッカス -セルロリティカス (Cryptococcus cellulolyticus) や、 タリ プトコッカス 'カーバタス（Cryptococcus curvatus) IF01159等のタリプトコッ カス ■ カーノ タス (Cryptococcus curvatus)や、 クジプ卜コッカス -へベネシス (Cryptococcus heveanensis) JCM3693 等のクジプ卜コッカス ■へべネシス (し ryptococcus heveanensis)や、クリプトコッカス-ローレンアイ (Cryptococcus laurentii ) DSM70766、 タ リ プトコ ッカス - ローレンティ ( Cryptococcus laurentii) IF01898、 クリプトコッカス ' ローレンティ 変種ローレンティ (し: ryptococcus laurentii var. laurentii) CBS2174、 クリプトコッカス · ロー レンティ 変種ローレンティ (Cryptococcus laurentii var. laurentii) CBS5297、 クリプ卜コッカス - ローレンティ 変種ローレンティ (Cryptococcus laurentii var. laurentii) CBS5746、 クリプトコッカス ' ローレンティ 変種ローレンテ ィ（Cryptococcus laurentii var. laurentii) CBS7140等のクジプトコッカス ■ ローレンティ (Cryptococcus laurentii)や、 ク リプトコッカス ' ノレテ才ラス (Cryptococcus luteolus) IF00411 等のク リ プ ト コ ッカス ' ノレテオラス (Cryptococcus luteolus)や、クリプトコッカス-マクァス (Cryptococcus magnus) JCM9038等のクリプトコッカス ·マグナス (Cryptococcus magnus) や、 タリプト コッカス ·テレウス (Cryptococcus terreus) IF00727、 クリプトコッカス .テ レウス （Cryptococcus terreus) JCM8975 等のク リプトコッカス - テレウス (Cryptococcus terreus ) や、 クジプトコッカス · てロウィ (Cryptococcus yarro ii) JCM8232等のクリプ卜コッカス -ャロウィ (Cryptococcus yarrowii) が挙げられる。 シストフィロバシディゥム （Cystofilobasidium) 属に属する微生物として、好 ましくは、 シス トフイロバシディ ウム · ビスポリディ （Cystofilobasidium bisporidii ) JCM9050 等のシス ト フ イ ロバシディ ウム · ビスポリ ディ (Cystofilobasidium bisporidii) や、 シストフィロバシディゥム · キヤピタタ ム （Cystofilobasidium capitatura) JCM3793等のシストフィロバシディゥム ' キ ャピタタム （Cystofilobasidium capitatum) や、 シストフィロバシディゥム 'ィ ンファモミニァタム （Cystofilobasidium inf irmominiatum) JCM3797、 シス トフ ィ口ノ シディゥム-ィンファモミニァタム (Cystofilobasidium inf irmominiatum) JCM8159 等の シス ト フ ィ ロ ノくシディ ゥ ム · イ ンフ ァモ ミ ニァ タ ム (Cystof ilobasidium inf irmotniniatum) X)、挙げ、られる。 デバリオマイセス （Debaryomyces) 属に属する微生物として、 好ましくは、 デ ノ"^リオマイセス -ノヽンセ二 変種フアブ (Debaryomyces hansenii var. fabryi) JGM1441ヽデノ リ才マイセス -ノヽンセ二 変 ffiファプリ（Debaryomyces hansenii var. fabryi JCM2104, デノ リ ^マイセス ■ ノヽンセ ^ ffiノヽンセニ (Debaryomyces hansenii var. hansenii) IF00032、 デバリオマイセス 'ハンセニ 変種ハンセ 二 (Debaryomyces hansenii var. hansenii) IF00034、 テ/、 ォマイセス · ノヽン セニ 変種ノヽンセ二 (Debaryomyces hanseni i var. hanseni i) IF00060、 "7"ノくリ 才マィセス ·ノヽンセ二 変種ノヽンセニ (Debaryomyces hanseni i var. hansenii) IF00855、デノ リ才マイセス ·ノヽンセ ^ ノヽンセ二 (Debaryomyces hansenii var. hanseni i) JCM1521、 デノ リ ^"マイセス · ノヽンセ二 ¾ ノヽンセ二 （Debaryomyces hanseni i var. hansenii) JCM2192、 デノ リ才マイセス -ノヽンセニ 変種ノヽンセ 二 (Debaryomyces hanseni i var. hansenii; JTCM2194、 ァ/ リオマ セス ■ ノ、ン セ- 変種ノヽンセニ (Debaryomyces hansenii var. hansenii) JCM2196 等のァ バリォマイセス · ノヽンセニ (Debaryomyces hanseni i) や、 デバリォマイセス ·マ ラマス （Debaryomyces maramus ) JCM1528 等のデバリオマイセス ' マラマス
(Debaryomyces maramus; や、 テハリォマづセス -メリソフィフス (Debaryomyces mel issophi lus) JCM1707等のデバリオマイセス■メリソフィラス (Debaryomyces melissophilus)や、デノ リォマィセス'ホリモファス (Debaryomyces polyraorphus) JCM3647等のデノ リォマイセス ·ポリモファス (Debaryomyces polymorphus) や、 テノ リォマィセス · シュ ドポリモファス (Debaryomyces pseudopolymorphus) JCM3652 等のデバリ オマイ セス · シュ ドポリ モフ ァ ス （ Debaryomyces pseudopolymorphus ) や、 ァノ、リオマイセス · 口べノレ トシエ ( Debaryomyces robertsiae ) IF01277 等のデノ"ォマイセス · 口ベル卜シェ (Debaryomyces robertsiae)や、デバリォマイセス■バンリジェ 変種バンリジェ（Debaryomyces vanrij iae var. vanrijiae) JCM3657、 デバリオマイセス ' バンリジェ 変種ャ ロウィ (Debaryomyces vanrij iae var. yarrowii) JCM6190等のデバリオマイセ ス · ノ ンリンェ (Debaryomyces vanrij iae) カ挙げられ 。 デッケラ（Dekkera)属に属する微生物として、好ましくは、 デッケラ 'ブルクセ レンシス (Dekkera bruxel l ensis) CBS2796 等のデッケラ · ブルクセレンシス (Dekkera bruxellensis)力挙 られる。 ェンドマイセス（Endomyces)属に属する微生物として、好ましくは、ェンドマイ セス ■デシピエンス（Endomyces decipiens) IF00102等のェンドマイセス ·デシ ピエンス (Endomyces decipiens)カ挙げられる。 ェクソフィアラ （Exophiala) 属に属する微生物として、 好ましくは、 エタソフ イラ ·デノレマティディス (Exophiala dermatiti dis) IF06421、 ェクソフイラ · デルマティディス (Exophiala dermatit idi s) IF08193等のエタソフイラ ■デノレ マティテイス (Exophiala dermatitidis) 力 S挙げられる。
フエロマイセス （Fellorayces) 属に属する微生物として、 好ましくは、 フエ口 マイセス , フゾゥェンシス (Fel lomyces fuzhouensi s) IF010374 等のフエロマ イセス · フゾゥェンシス (Fel lomyces fuzhouensis) が挙げられる。 フイロバシディウム（Filobasidium)属に属する微生物として、 好ましくは、 フ ィ口バシディゥム '力プスリゲナム（Filobasidium capsuligenum) IF01119、 フィ ロバシディゥム ·カプスリゲナム（Filobasidium capsuligenum) IF01185 等のフ ィ ノ シディゥム ·カプスリゲナム（Filobasidium capsuligenum)や、 フィロノ シ ディゥム ·エレガンス （Filobasidium elegans) IF010881 等のフィロバシディ ゥム ·エレガンス （Fi lobasidium elegans) や、 フィロバシディゥム ' フロリフ オルム （Filobasidium floriforme) IF010886、 フィロバシディゥム ' フロリフ オノレム （Fi lobasidium floriforme) IFO1603 等のフィロバシディゥム ' フロリ フオノレム （Filobasidium floriforme) や、 フイロバシディウム■グロビスポラム (Filobasidium globisporum) IF010887 等のフィロバシディゥム ' グロビスポ ラム （Filobasidium globisporum) や、 フィロノくシディゥム 'ュニグッタラタム (Filobasidium uniguttulatum) IF00699等のフィロバシディゥム ■ュニグッタラ タム (Filobasidium uniguttulatum;力挙げ、られる。 ハンセニァスポラ （Hanseniaspora) 属に属する微生物として、 好ましくは、 ハ ンセニァスポラ ·グイリエノレモンティ (Hanseniaspora guillierraondii) IF01411 等のノヽンセニァスポラ · ク、、イリエノレモンティ (Hanseniaspora guilliermondii) N ノ、ンセ二: fスポラ · クノ ラム (Hanseniaspora uvarura) IF01755 のノヽンセ二ァ スポラ - ウノ ラム (Hanseniaspora uvarum) 力挙げ、ら る。 ホルタマニア （Holtermamiia) 属に属する微生物として、 好ましくは、 ホタル マニア - コノレニフォノレミス （Holtermannia corniformis) JCM1743等のホタルマ ユア - コノレニフォノレミス (Holtermannia corniformis) カ挙げ、られる。 ィサチェンキア（Issatchenkia)属に属する微生物として、 好ましくは、 ィサチ エンキァ 'オリエンタリス (Issatchenkia orientalis) IF01279等のィサチェ ンキア ·オリエンタリス （Issatchenkia orientalis) や、 ィサチェンキア 'スク ッラタ 変種ェクシグァ （Issatchenkia scutulata var. exigua) JCM1829、 ィサ チェンキア ■ スク ッラ タ 変種スク ッラ タ （ Issatchenkia scutulata var. scutulata) JCM1828 等のィサチェンキア · スクッラタ 変種スクッラタ ( Issatchenkia scutulata ) や、 ィサチェンゃァ - テリ コラ ( Issatchenkia terricola) IF00933、 ィサチェンキア 'テリコラ （Issatchenkia terricola) IF01907 等のィサチェンキア ■テリコラ （Issatchenkia terricola) が挙げられ る。 クレツケラ （Kloeckera) 属に属する微生物として、 好ましくは、 クレツケラ · ァピクラタ （Kloeckera apiculata) IF00865 等のクレツケラ ■ ァピクラタ (Kloeckera apiculata) や、 クレッケラ - ジャポニカ (Kloeckera japonica) IF00151等のクレツケラ ·ジャポニカ （Kloeckera japonica) が挙げられる。 クリベロマイセス（Kluyverorayces)属に属する微生物として、好ましくは、 クリ ベロマイセス 'ラクテイス 変種ラクテイス (Kluyveromyces lactis var. lactis) IF01267 等のクリベロャイセス ■ ラクテイス (Kluyverorayces lacti s) や、 タリ ベロマイセス -マーキシァナス（Kluyveromyces marxianus) CBS834 等のクジベ ロマイセス ·マーキシァナス (Kluyveromyces marxianus)や、 クリべロマイセス ■ サーモトレランス (Kluyveromyces thermotolerans) IF01674 や、 クリベロマイ セス■サーモ卜レランス (Kluyverorayces thermotolerans) IF01779、 タリべロマ イセス 'サ一モ卜レランス (Kluyveromyces thermotolerans) IF00662、 クリべ ロマイセス ·サーモトレランス (Kluyveromyces thermotolerans) IF01050、 ク リベロマイセス■サ一モ卜レランス (Kluyveromyces thermotolerans) IF01780、 ク Uベロマイセス -サ一モ卜レランス (Kluyveromyces thermotolerans) IF01985 等のクリベロマイセス -サーモ卜レランス (Kluyveromyces thermotolerans)力 S挙 げられる。 コマガタエラ （Komagataella) 属に属する微生物として、 好ましくは、 コマガ タエラ -パストリス （Komagataella pastoris) ATCC28485、 コマガタエラ · ノヽ0ス 卜 リ ス ( Komagataella pastoris ) IF00948、 コマガタエラ ■ ノ ス ト リ ス (Komagatael la pastoris) IF01013等のコマガタエラ-ノヽ0ス V ^ (Komagatael la pastoris) 力挙げられる。 リボマイセス（Lipomyces)属に属する微生物として、 好ましくはリポマイセス テトラスポラス（Lipomyces tetrasporus) IF010391 等のリポマイセス 'テトラ スポフス (Lipomyces tetrasporus)力挙けられる。 ロデロマイセス （Lodderomyces) 属に属する微生物として、 好ましくは、 ロデ ロマイセス - ェロンギスポラス (Lodderomyces elongisporus) IF01676 等の口 デロマイセス 'ェロンギスポラス (Lodderomyces elongisporus) 力 s挙げられる。 メッニコウイァ（Metschnikowia)属に属する微生物として、好ましくは、 メツユ コウイァ ·ァガベス（Metschnikowia agaves) IF010860 等のメッニコウイァ -ァ ガベス （Metschnikowia agaves)や、 メ ッニコ ウ イ ァ ' オース ト ラ リ ス (Metschnikowia australis) IF010783 等のメッニコウイァ ■オース トラリス (Metschnikowia australis) IF010783や、 メッニコウイァ · ビカスピダタ 変 種ビカスピグタ (Metschnikowia bicuspidata var. bicuspidata) IF01408、 メ ッニコウイァ · ビカスピダタ 変種カタミア （Metschnikowia bicuspidata var. chatharaia) IF010785 等のメッニコウイァ ■ ビカスピダタ （Metschnikowia bicuspidata) や、 メッニコウイァ · グルエツシ (Metschnikowia gruessi i ) IF010788等のメッニコウイァ ' グルエツシ （Metschnikowia gruessii) や、 メッ ニコウイァ - ノヽワイェンシス （Metschnikowia hawai iensis) IF010791等のメッ ニコゥィァ 'ノヽワイェンシス (Metschnikowia hawaiiensis)や、 メッニコウイァ · ノレナタ （Metschnikowia lunata) IF01605 等のメ ッニコ ウイ ァ ' ノレナタ (Metschnikowia lunata)や、 メッニコウイァ ■ ロイコーフィー (Metschnikowia reukaufii) IF010798、 メッニコウイァ · ロイコーフィー （Metschnikowia reukaufii ) IF01679、 メッニコウイァ · ロイコーフィー ( Metschnikowia reukaufii ) JCM2279 等のメツエコウイァ ■ ロイコーフィー（Metschnikowia reukaufii)や、 メッニコウイァ ' ゾベリ （Metschnikowia zobell ii) IF010800、 メツエコウイァ . ゾベリ （Metschnikowia zobell i i) IF01680等のメッニコウイ ァ . ゾべリ （Metschnikowia zobel li i ) や、 メ ッニコ ウイ ァ ' エス ピー (Metschnikowia sp. ) IF01406等のメッニコウイァ -エスピー （Metschnikowia sp. ) が挙げられる。 ォガタエア（Ogataea)属に属する微生物として、好ましくは、 ォガタエア■ミヌ タ 変種ミヌタ （Ogataea minuta var. minuta) IF00975、ォガタエア'ミヌタ 変 種ノンファーメンタンス（Ogataea rainuta var. nonf ermentans) IF01473等のォ ガタエア - ミヌタ（Ogataea rainuta)やォガタエア ·ポリモーファ（Ogataea polymorpha) IF01475 等のォガタエア -ポリモーファ (Ogataea polymorpha)カ 挙げられる。 ピキア （Pichia) 属に属する微生物としては、 好ましくは、 ピキア ·アミロフ ィ ラ （Pichia amylophila ) JCM1702 等のピキア ■ アミ ロフイ ラ （Pichia amylophi la) や、 ピキア .ァノマラ （Pichia anomala) IF00118 等のピキア ·ァ ノマラ （Pichia anomala) や、 ピキア 'オーガスタ （Pichia augusta) ATCC26012 等のピキア'オーガスタ （Pichia augusta)や、ピキア'バーケリ （Pichia barkeri) IFO10714等のピキア 'バーケリ （Pichia barkeri) や、 ピキア■ベッセィ （Pichia besseyi) JCM1706 等のピキア .ベッセィ （Pichia besseyi) や、 ピキア■ ビマ ンダリス (Pichia bimundalis) JCM3591 等のピキア . ビマンダリス (Pichia bimundalis) や、 ピキア · ビスポラ （Pichia bispora) JCM3590等のピキア ■ ビ スポラ （Pichia bispora)や、ピキァ -カナデンシス (Pichia canadensis) JCM3597 等のピキア 'カナデンシス（Pichia canadens is)や、ピキア'カスティラエ（Pichia castillae) JCM10733等のピキア 'カスティラエ （Pichia casti llae) や、 ピキ ァ ·デルフテンシス (Pichia delftens is) IFO10715等のピキア ·デルフテンシ ス (Pichia delftensis) や、 ピキア -テセルティコラ (Pichia deserticola) IF010716等のピキア 'デセルティコラ （Pichia deserticola) や、 ピキア · ドラ ャドイデス （Pichia dryadoides) IF01820等のピキア ' ドラャドイデス （Pichia dryadoides) や、 ピキァ ·ユーホビフイラ (Pichia euphorbi iphila) IF010717 等のピキア 'ユーホビフイラ （Pichia euphorbiiphi la) や、 ピキア 'ファビア二 (Pichia fabiani i) JCM3601 等のピキア · ファビア二 (Pichia fabianii) や、 ピキア ·フアーメンタス （Pichia fermentans) JCM2189 等のピキア ' ファーメ ンタス (Pichia fermentans)や、ピキァ ヽンプシレンシス (Pichia hampshirensis) IF010719等のピキア 'ハンプシレンシス （Pichia hampshirensi s) や、 ピキア ' ヒーディ （Pichia heedii) JCM1833等のピキア ·ヒーディ （Pichia heedii) や、 ピキア.ヘイミィ（Pichia heimii) IF01686等のピキア'ヘイミィ（Pichia heimii) や、 ピキア 'イノシトボラ （Pichia inositovora) JCM10736 等のピキア ■ィノ シトボラ (Pichia inositovora)や、ピキア■ジャディ二 (Pichia jadinii) JCM3617 等のピキア ■ジャディ二 (Pichia jadini i) や、 ピキア■ クルイベリ 変種セフ ァロセレナ (Pichia kluyveri var. cephalocereana) IF010722、 ピキァ - クノレ ィベリ 変種エレモフイラ （Pichia kluyveri var. eremophi la) IF010723、 ピ キア -クルィベリ 変種タノレイベリ （Pichia kluyveri var. kluyveri) IF01165 等のピキア.クルイベリ （Pichia kluyveri)や、 ピキア'メディア （Pichia media) JCM10737等のピキア .メディア （Pichia media) や、 ピキア 'メタノリ力 （Pichia methanolica) ATCC58403 等のピキア · メタノリ力 （Pichia methanolica) や、 ピキア ·メチリボラ （Pichia methylivora) IF010705 等のピキア · メチリボラ
(Pichia methyl ivora) や、 ピキア · メキシカナ （Pichia mexicana) JCM1835 等のピキア■メキシカナ（Pichia mexicana)や、ピキア ·メイエレ（Pichia meyerae) IF010727等のピキア ■ メイエレ （Pichia meyerae) や、 ピキア · ミシシッピェン シス （Pichia mississippiensis) JCM1703 等のピキア · ミシシッピェンシス
(Pichia mississippiensisリや、ピキア -ノノレベジエンシス (Pichia norvegensis) IF01694 等のピキア ■ ノルベジエンシス （Pichia norvegensi s) や、 ピキア■ォ ニチス （Pichia onychis) IF01682等のピキア■ォニチス （Pichia onychis) や、 ピキア.ぺテノレソニ（pichia petersonii) IF01372等のピキア 'ぺテルソニ（Pichia petersonii) や、 ピキア ' ビジペリ （Pichia pi jperi) IF01290等のピキア ' ピ ジペリ （Pichia pi jperi) や、 ピキア 'ポプリ （Pichia populi) IF010729等の ピキア 'ポプリ （Pichia popul i) や、 ピキア ' シユードカク トフイラ （Pichia pseudocactophila) IF010730 等のピキア ■ シユードカク トフイラ （Pichia pseudocactophila) や、 ピキァ - タエノレカム (Pichia quercuura) JCM3659 等の ピキア . クエルカム （Pichia quercuum) や、 ピキア ■ ラボーレンシス （Pichia rabaulensis) IF01643等のピキア 'ラボーレンシス （Pichia rabaulensis) や、 ピキア.サリカリア（Pichia salicaria) JCM3653等のピキア 'サリカリア（Pichia sal icaria) や、 ピキア 'スコルティ （Pichia scolyti) JCM3654等のピキア - スコルティ (Pichia scolyti)や、 ピキア -セゴビエンシス (Pichia segobiensis) JCM10740等のピキア ■セゴビエンシス （Pichia segobiensis) や、 ピキア ·スパ ノレティネ （Pichia spartinae) JCM10741 等のピキア 'スパノレテイネ （Pichia spartinaej や、 ピキァ · ス トラスブスレシェンシス (Pichia strasburgensis) JCM3660等のピキア · ス トラスプルジェンシス （Pichia strasburgensis) や、 ピ キア 'シドウイオラム （Pichia sydowiorum) JCM9455 等のピキア ·シドウィォ ラム （Pichia sydowiorum) や、 ピキア 'タニコーラ （Pichia tannicola) JCM8120 等のピキア 'タニコーラ （Pichia tannicola)や、 ピキア'ウィッカーミィ （Pichia wickerhamii) IF01278 等のピキア ■ ウイッカーミィ （Pichia wickerhamii) が 挙げられる。 口ドトルラ（Rhodotorula)属に属する微生物として、好ましくは、 口 ドトルラ · オーランティア力 （Rhodotorula aurantiaca) IF00754等のロ ドトルラ 'オーラ ンティア力 (Rhodotorula aurantiaca)や、 口ド卜ルラ ·フラガリエ (Rhodotorula fragaria) JCM3930 等の口ド卜ノレラ -フラガリエ (Rhodotorula fragaria) や、 π ド、トノレラ · ク、、ノレティ：^ス ®夕、、ィレネンシス (Rhodotorula glutinis var. dairenensis) IF00415等のロ ド卜ノレラ - グルティニス (Rhodotorula glutinis) や、 口ドトルラ■グラミニス （Rhodotorula graminis) JCM3775等の口 ドトルラ · グラミニス (Rhodotorula graminis) や、 ロ ド トルラ -ホノレアイァ (Rhodotorula hordea) JCM3932等のロ ド トノレラ . ホルディア （Rhodotorula hordea) や、 ロ ド トノレラ ·ノ、ィロフイラ （Rhodotorula hylophila) JCM1805 等の口 ドトルラ ·ハ イ ロフイラ (Rhodotorula hylophila)ゃヽ口 ド卜ノレラ■インゲニォサ (Rhodotorula ingeniosa) JCM9031等の口ド卜ノレラ -ィンゲニォサ (Rhodotorula ingeniosa) や、 口ドトルラ■ジャワ二力 （Rhodotorula javanica) JCM9032等の口 ドトルラ ■ シャヮ-カ (Rhodotorula javanica)や、口 ド卜ノレラ · ヌタ (Rhodotorula minuta) IF00715、 口ドトノレラ · ミヌタ （Rhodotorula minuta) IF00920、 口 ドトノレラ · ミ ヌタ （Rhodotorula minuta) JCM3776、 ロ ド トノレラ ミヌタ（Rhodotorula minuta) IF00387 等の口ド卜ルラ - ミヌタ（Rhodotorula minuta)や、 口 ド卜ルラ -ムシラ ギノサ (Rhodotorula raucilaginosa) IF00870 等の口 ド卜ノレラ ■ ムシラギノサ (Rhoaotorula raucilaginosajや、口 r 卜ノレフ -ムスコフム (Rhoaotorula muscorura) JCM1697等の口ドトルラ ·ムスコラム （Rhodotorula muscorum) や、 口 ドトルラ ■ フイリァ（Rhodotorula philyla) JCM3933等の口ドトルラ'フィリァ（Rhodotorula philyla) や、 ロ ドトノレラ 'パスツーラ （Rhodotorula pustula) JCM3934等の口 ドトルラ ' ノヽ0スツーラ （Rhodotorula pustula) が挙げられる。 サッカロマイセス（Saccharomyces)属に属する微生物として、好ましくは、サッ カロマイセス ·セレビジァェ（Saccharomyces cerevisiae) IF00305、 サッカロマ イセス -セレビジァ工（Saccharomyces cerevisiae) IF00565 またはサッカロマ イセス ■セレビジァェ（Saccharomyces cerevisiae) JCM1818 等のサッカロマイ セス - セレビジァェ (Saccharomyces cerevi siae)や、 サッカロマイセス - ノレドウ イジ（Saccharomycodes lud igi i) IF00798 等のサッカロマイセス ' ノレドウイジ
(Saccharomycoaes 丄 udwigii)力、挙けられる。 サッカロマイコプシス（Saccharomycopsis)属に属する微生物として、 好ましく は、 サッカロマイコプシス - フイブジゲラ (Saccharomycopsis fibuligera) IF00105、 サッカロマイコプシス ■ フイブリゲラ（Saccharomycopsis fibuligera) IF01744、 サッカロマィコプシス · フイブリゲラ (Saccharomycopsis fibuligera) IF00105 等のサッカ ロマイ コプシス · フ イ ブリ ゲラ （Saccharomycopsis fibuligera)や、 サッカロマイコプシス ·マラン力 (Saccharomycopsis malangaj IF01710等のサッカロマイコプシス ·マランガ (Saccharomycopsis malanga) や、 サッカロマイコプシス .シ工一二 (Saccharomycopsis schoeni i) IF01579 等の サッカロマイコプンス ·シエー二 (Saccharomycopsis schoenii) や、 サッカロマ ィコプシス ·シナエデンドラ (Saccharomycopsis synnaedendra) IF01604 等の サッカロマイコプンス ■ シナェテンドラ (Saccharomycopsis synnaedendra) 力 S挙 げられる。 サイ トエラ（Saitoel la)属に属する微生物として、好ましくは、 サイ トエラ■コ ンプリカータ（Saitoel la complicata) IAM12963等のサイ トエラ · コンプリカ一 タ (Saitoella complicata)力 S挙げられる。 シゾブラストスポリオン （Schizoblastosporion) 属に属する微生物として、 好 ま しく は、 シゾプラス トスポリオン · キロエンス （ Schizoblastosporion chiloense ) IF010841 等のシゾブラ ス ト ス ポ リ オン ■ キ ロ エ ンス (Scnizoblastosporion chiloense) 力 つ られる。 シゾサッカロマイセス（Shizosaccharorayces)属に属する微生物として、 好まし く fま、 シゾサッカロマイセス ' シャ 二カス (Schizosaccharorayces japonicus) JCM8263 等のシゾサッカロマイセス ■ ジャポニカス ( Schizosaccharomyces japonicus) や、 シンサッカロマイセス '才ク トスホラス (Schizosaccharorayces octosporus ) IF010373 等のシゾサッカ ロマイセス · オタ トスポラス
( Schizosaccharomyces octosporus や、 ンン サッカ ロマ セス - ヽノへ (Shizosaccharomyces pombe) IF01628、 シゾサッカ ロマイ セス · ボンべ
( Schizosaccharomycs pombe ) IF00344 等のシゾサッカロマイセス · ボンべ (ihizosaccharomyces pomoe)力、挙げられる。 シロバシディウム （Sirobasidiutn) 属に属する微生物として、 好ましくは、 シ ロバシディゥム■マグナム （Sirobasidiutn magnum) JCM6876 等のシロバシディ ゥム -マグナム (Sirobasidiutn magnum) 力 S挙げられる。 スポリディオボラス（Sporidiobolus)属に属する微生物として、好ましくはスポ リディオボラス 'ジョンソニ（Sporidiobolus johnsonii) IF06903等のスポリデ ィオボラス -ジョンソニ (Sporidiobolus johnsonii)力挙げられる。 ステリグマトマイセス （Sterigmatomyces) 属に属する微生物として、好ましく は、ステリグマ卜マイセス ·ノヽロフィラス (Sterigraatomyces halophilus) IF01488 等のステリグマトマイセス · /ヽロフィラス （Sterigmatomyces halophilus) が挙 げられる。 ステリグマ トスポリディウム （Sterigmatosporidium) 属に属する微生 物と して、 好ま しく は、 ステリ グマ トスポリディ ウム . ポリモルフアム (Sterigmatosporidium polymorphum) JCM6902 等のステリグマトスポリディゥ ム ·ポジモノレフアム (bterigmatosporidium polymorphura) 力孕 ίフられる。 トルラスポラ （Torulaspora) 属に属する微生物として、 好ましくは、 トルラス ポラ ■デルプレキ （Torulaspora delbrueckii) CBS 1146 等のトルラスポラ ·デ ノレプレキ (Torulaspora delbruecki i) 力 s挙げ、られる。 トレメラ （Tremella) 属に属する微生物として、 好ましくは、 トレメラ ·ォ一 ランティア (Tremella aurantia) JCM11327 等のトレメラ · オーランティ了 (Tremella aui-antia)や、卜レメラ-ェンセファラ（Tremella encephala) JCM11329 等のトレメラ 'ェンセファラ (Tremel la encephala) や、 トレメラ · フォリアシ ァ （Tremella foliacea) JCM11330 等のトレメラ · フオリァシァ （Treraella foliacea) が挙げられる。 トリコスポロン（Trichosporon)属に属する微生物として、 好ましくは、 トリコ スポロン - ドメスティカム (Trichosporon doraesticum) JCM9580 等の卜ジコス ポロン - ドメスティカム (Trichosporon domesticura) や、 卜ジコスポロン - レイ ノ キイ （Trichosporon laibachii) JCM9934 等のトリコスポロン ' レイバキイ (Trichosporon laibachii)や、 卜ジコスポロン-モンテビアィース (Trichosporon montevideense) JCM9937等の卜リコスポロン-モンテビディース (Trichosporon montevideense; や、 トリ コス； ロン - ムコイデス (Trichosporon mucoides) JCM9939等のトリコスポロン■ ムコイデス （Trichosporon mucoides) や、 トリコ スポロン（Trichosporon) sp. IF0116 等の卜リコスポロン（Trichosporon) sp. が挙げられる。 トリコスポロノイデス （Trichosporonoides) 属に属する微生物として、好まし く は、 ト リ コスポロ ノイデス ' メ ガチリ ェンシス （ Trichosporonoides raegachil iensi s ) CBS567. 85 等のトリコスポロノイデス · メガチリェンシス (Trichosporonoides megachi l iens is) や、 卜リコス ロノづ テス - エドセファ リス（Trichosporonoides oedocephalis) CBS568. 85等のトリコスポロノィデス■ エドセファリス (Trichosporonoides oedocephal is) 力、挙げられる。 トリゴノプシス（Trigonopsis)属に属する微生物として、好ましくはトリゴノプ シス 'バリアビリス（Trigonopsis variabil is) CBS4095、 トリ ゴノプシス ■バリ アビリス （Trigonopsis variabilis) CBS4069、 トリゴノプシス 'バリアビリス ( Trigonopsis variabill is ) IF00671 等の ト リ ゴノプシス ' バリ アビリ ス (Trigonopsis variabilis)力、挙けられる。 ワルトマイセス（Waltomyces)属に属する微生物として、 好ましくは、 ワルトマ イセス ■ リポファー（Waltomyces l ipofer) IF01288 等のヮノレトマイセス ■ リポ ファー (Waltorayces 1 ipofer)力 S挙げられる。 ウイケラミエラ （Wickerharaiel la) 属に属する微生物として、 好ましくは、 ゥ ィケラミエラ · ドメノレキエ （Wickerharaiella domercqiae) IF01857 等のウイケ ラミエラ - ドメノレキエ (Wickerhamiella domercqiae) 力挙げ、られる。 ウイリオプシス （Williopsis) 属に属する微生物として、 好ましくは、 ゥイリ ォプシス 'カリフオルエア （Wil liopsis californica) JCM3600, ウイリオプシ ス - カリフォルニア （Wi ll iopsis californica) ： TCM3605等のウイリオプシス - カリ フォルニア （Wi lliopsis californica ) や、 ウイ リオプシス ' ムコサ (Williopsis mucosa) JCM6809等のゥイリォプシス -ムコサ (Wi lliopsis mucosa) や、 ウイリオプシス -サターナス 変種ムラキイ （Wil liopsis saturnus var. rarakii ) JCM3614、 ウイ リオプシス ' サターナス 変種サルジェンテンシス (Williopsis saturnus var. sargentensis IF01826、 ウイリオプンス ·サター ナス 変種サターナス (Williopsis saturnus var. saturnus) IF010697、 ウイ リォプシス ·サターナス 変種サターナス (Williopsis saturnus var. saturnus) JCM1826、ウイリオプシス-サターナス 変種サターナス（Williopsis saturnus var. saturnus) JCM3594、 ウイリオプシス 'サターナス 変種サターナス （Williopsis saturnus var. saturnus) JCM3595, ウイリオプシス -サターナス 変種サター ナス (Williopsis saturnus var. saturnus) JCM3596、 ウイリオプシス -サター ナス 変種サターナス (Williopsis saturnus var. saturnus) JCM3623、 ゥイジ ォプシス ·サターナス 変種サターナス (Williopsis saturnus var. saturnus) JCM3624、ウイリオプシス 'サターナス 変種サターナス（Williopsis saturnus var. saturnus ) JCM9398、 ウイ リオプシス - サターナス 変種スアベロ レンス (Williopsis saturnus var. suaveolens) IF010698、 ウイジォプシス -サター ナス 変種サプサフィンヤンス (Williopsis saturnus var. subsuff iciens) JCM3625、 ウイリオプシス 'サターナス 変種サブサフイシヤンス （Williopsis saturnus var. subsuff iciens ) JCM3626 等のウイ リォプシス · サターナス (Williopsis saturnus) 力 s挙げられる。 ヤマダジマ （Yamadazyma) 属に属する微生物として、好ましくは、 ヤマダジマ - ファリノサ（Yamadazyma farinosa) IF00193、ヤマダジマ 'ファリノサ（Yamadazyma farinosa) IF010061、ャマダジマ 'ファリノサ（Yamadazyma haplophila) IF00947 等のヤマダジマ■ ファリノサ （Yamadazyma farinosa) が挙げられる。 ャロウィァ（Yarrowia)属に属する微生物として、 好ましくは、 ャロウィァ - リ ポリティ力（Yarrowia lipolytics) ATCC8661、 ャロウィァ ■ リポリティ力 ( Yarrowia lipolytica) IF01209 ゃャロウィァ - リポジティカ (Yarrowia lipolytics) IF01548 等のャロウィァ ' リポリティ力（Yarrowia lipolytica)が 挙げられる。 尚、上記微生物のうち、 I F O番号の付された微生物は (財)発酵研究所（I F O) 発酵のィンターネットカタログ（http：〃 www. ifo. or. jp)に記载されており、 該 I F Oから入手することができる。
C B S番号の付された微生物は The Centraalbureau voor Schimmelcultures ( C B S )のィンターネットカタ口グ（http：〃 www. cbs. knaw. nl)に記載されており、 該 C B Sから入手することができる。
ATCC番号の付された微生物は American Type Culture Collection (ATCC)のィン ターネットカタログ（http：〃 www. atcc. org)に記載されており、 該 ATCCから入手 することができる。
I AM番号の付された微生物は、 IAM Culture Collection (IAM)のインターネッ トカタログ
(http : //www. iam. u-tokyo. ac. jp/misyst/ColleBOX/IAMcol lection, ntml) に記載されており、 該 IAMから入手することができる。
JCM番号の付された微生物は Japan Collection of Microorganism (JCM)のイン ターネットカタログ（http：〃 www. jcm. riken. go. jp)に記載されており、 該 JCMか ら入手することができる。
また、 上記微生物は、 U V照射やニトロソグァ-ジン処理等の通常の変異処理 により得られる変異株、 細胞融合もしくは遺伝子組換え法などの遺伝学的手法に より誘導される組換え株などのいずれの株であってもよい。
また、 組換え株の発現株としては、 もとの菌株の他、 大腸菌等のバクテリアや 酵母などを用いてもよく、これらの組換え株も上記微生物という概念に含まれる。 本発明の製造方法においては、 上記微生物の 1種あるいは 2種以上が菌体、 菌 体処理物及びノ又は培養液として用いられる。
具体的には、 上記微生物を培養して得られた菌体又はその培養液をそのまま用 いることや、あるいは培養して得られた菌体を公知の手法で処理したもの、即ち、 アセトン処理したもの、 風乾または凍結乾燥処理したもの、 菌体を物理的、 化学 的または酵素的に破碎したもの等の菌体処理物を用いることができる。
また、 これらの菌体または菌体処理物から、 式（I ) の 3—ォキソ一 3— ( 2— チェニル）プロピオン酸エステル誘導体に作用し式（I I ) 又は式（I I I ) の光 学活性 3—ヒ ドロキシー 3—（ 2—チェニル）プロピオン酸エステル誘導体に変換 するする能力を有する酵素画分を粗製物あるいは精製物として取り出して用いる ことも可能である。 さらには、 このようにして得られた菌体、 菌体処理物、 酵素 画分等を通常の固定化技術を用いて、 すなわち、 ポリアクリルアミ ド、 カラギー ナンゲル等の担体に固定化したもの等を用いることも可能である。 そこで本明細 書において、 「菌体及び Zまたは該菌体処理物」 の用語は、 上述の菌体、菌体処理 物、 酵素画分、 及びそれらの固定化物全てを含有する概念として用いられる。 また、 上記微生物は、 通常、 培養して用いられるが、 この培養については定法 通り行うことができる。 本微生物の培養の為に用いられる培地には本微生物が資 化しうる炭素源、 窒素源、 及び無機イオン等が含まれる。 炭素源としては、 ダル コース、 フノレク トース、 サッカロース等の炭水化物、 グリセロール、 マンニトー ル、 キシリ トール、 リビトール等のポリアルコール類、 有機酸その他が適宜使用 される。 窒素源としては、 N Zァミン、 トリプトース、 酵母エキス、 ポリぺプト ン、 肉エキス、 大豆抽出物などの有機窒素源、 あるいは硫酸アンモニゥム塩、 硝 酸アンモニゥム塩などの無機窒素源、 その他などが適宜使用される。 無機イオン としては、 リン酸イオン、 マグネシウムイオン、 鉄イオン、 マンガンイオン、 モ リブデンイオンその他が必要に応じ適宜使用される。 好気的条件下に、 p H約 3 〜： L 0、 好ましくは p H 6〜8、 温度 4〜 5 0。C、 好ましくは 2 5〜 4 0 °Cの適 当な範囲に制御しつつ 1〜 1 0 0時間行う。
(不斉還元方法）
本発明の製造方法は、 原料として上記一般式 （3 ) で表される 3—ォキソ一 3 一 ( 2一チェニル）プロピオン酸エステル誘導体を用い、 これに水性媒体中で上記 微生物の菌体、 該菌体処理物及び/又は培養液を作用させて、 光学活性 3—ヒ ド 口キシ— 3— ( 2 _チェニル）プロピオン酸エステル誘導体を製造するものである。 反応の方法としては、 a )上記培養微生物の菌体、該菌体処理物及び/又は培養 液と上記一般式 （3 ) で表される 3—ォキソ一 3—（2—チェニル）プロピオン酸 エステル誘導体とを水性媒体中で接触させる方法、 b ) 上記一般式 （3 ) で表さ れる 3—ォキソ一 3— ( 2—チェニル）プロピオン酸エステル誘導体含有培地用い、 培養と反応を同時に行う方法等が挙げられ、これらは適宜用いることができるが、 工業的には、 微生物増殖に転用されるエネルギーロスが無い方が好ましいため、 上記 a )の方法が好ましい。
反応系中での上記一般式 （3 ) で表される 3—ォキソ一 3—（2—チェニル）プ ロピオン酸エステル誘導体の濃度は 0 . 0 0 0 1〜 5 0 % (wZ v )、 好ましくは 0 . 0 1〜5 % (w/ v；)、 の範囲が望ましく、 必要ならば反応の間、 3—ォキソ 一 3—（2—チェ-ル）プロピオン酸エステル誘導体は逐次添加してもよい。
上記水性媒体としては、 リン酸カリゥムゃトリス一塩酸塩等を含有する緩衝能 力を有する水溶液が一般的には用いられるが、 反応中、 p Hをモニターし、 塩酸 や水酸化ナトリゥム等の酸■アル力リにより p H変化を制御するのであれば緩衝 成分を省略することもできる。
また、 基質の溶解度を増加させるためメタノール、 エタノール、 イソプロピル アルコール、 アセトン、 ジォキサン、 ァセ トニトリル、 テ トラヒ ドロフラン、 ジ メチルホルムアミ ド、 ジメチルスルフォキシド等の親水性溶媒を添加してもよい し、 同じ目的で Tween80やシュガーエステルのような界面活性剤を添加してもよ い。
さらに、 基質や生成物による反応阻害を抑えるために反応液の 0 . 1〜1 0倍 容量程度の酢酸ェチル、 醉酸ブチル、 へキサン、 イソプロピルエーテル、 四塩化 炭素、 1ーォクタノール等の疎水性溶媒を添加することもできる。
反応液中には還元反応のエネルギー源としてグルコース、 エタノール、 イソプ 口ピルアルコール、 蟻酸等が基質の 1 ~ 2 0倍モル等量含まれていることが好ま しい。
また、 還元反応において補酵素として利用される酸化型または還元型のニコチ ンアミドアデニンジヌクレオチド（N A D )またはニコチンァミ ドアデニンジヌク レオチドリン酸（NADP)を 0. 001〜0. l%(w/v)、 添加すると効果的 である。
さらに、 補酵素の還元型への再生を促進するために、 グルコース脱水素酵素、 アルコール脱水素酵素、 蟻酸脱水素酵素等を添加することも効果的である。
反応条件は、 微生物の種類によっても異なるが、 通常 4〜70°C、 好ましくは 20〜50°C、 さらに好ましくは 28〜42°Cの範囲で行い、 ^1は通常3〜1 0、 好ましくは 5〜 9、 さらに好ましくは 6〜 8の範囲で行う。
反応形態としては、 バッチ法でも連続法でも何れでも構わないが、 連続法の場 合には、 式 （I) の 3 _ォキソ一 3—(2—チェニル）プロピオン酸エステル誘導 体、 微生物の培養液、 菌体及び/または該菌体処理物を、 必要に応じて、 適宜添 加して行われ、 また、 目的生成物から分離された菌体をリサイクル使用しても良 い。
上記反応で得られた光学活性 3—ヒドロキシ一 3—（2—チェニル）プロピオン 酸エステル誘導体の採取方法としては、 微生物などの固形分を遠心分離、 フィル タープレス、 限外濾過などの通常の分離装置によりを除去した後に反応液を有機 溶媒による抽出、 晶析、 カラムクロマトグラフィー、 濃縮、 蒸留などの分離精製 手段に供することにより分離することができ、 分離精製手段は単独でまたは複数 の手段を組み合わせて利用できる。
抽出に用いる有機溶媒としては、 例えばプタノールなどのアルコール類、 へキ サン、 シクロへキサン、 トルエン等の炭化水素類、 クロ口ホルム、 塩化メチレン などのハロゲン化炭化水素類、 酢酸ェチル、 酢酸ノルマルブチルなどのエステル 類、 ケトン類、 エーテル類、 これらの混合溶媒などが利用できる。
B— 3) 光学活性な 3—ヒドロキシー 3— (2—チェニル） プロピオン酸エス テル化合物
上記 B— 1) 又は B— 2) で得られる一般式 （3 ') で表される光学活性な 3— ヒドロキシ一 3— （2—チェ-ル） プロピオシ酸エステル化合物は、 新規化合物 である。 上記光学活性な 3—ヒドロキシー 3— （2—チェ二ル） .プロピオン酸ェ ステル化合物の、好ましい具体例としては、 （S)-3—ヒ ドロキシー 3—（2—チェ -ル）プロピオン酸メチルエステル、 （S)- 3—ヒ ドロキシ一 3—（2—チェ二ノレ） プロピオン酸ェチノレエステル、 (S)-3ーヒ ドロキシ一 3— (2—チェ二ノレ）プロピ オン酸プロピノレエステル、 （s)-3—ヒ ドロキシー 3 _ (2—チェニル）プロピオン 酸イソプロピノレエステル、 （s)- 3—ヒ ドロキシ一 3—（2—チェニル）プロピオン 酸シクロプロピノレエステノレ、 （s)— 3—ヒ ドロキシ一 3—（2 _チェ二ノレ）プロピオ ン酸ブチルエステル、 （S)- 3—ヒ ドロキシ _ 3— (2—チェニル）プロピオン酸ィ ソプチルエステル、 （S)_3—ヒ ドロキシ一 3—（2—チェ二ノレ）プロピオン酸ター シャリ一プチ/レエステル、 （R)- 3 -ヒ ドロキシー 3—（2 _チェニル）プロピオン 酸メチルエステル、 （R)_3—ヒ ドロキシ一 3— (2—チェニル）プロピオン酸ェチ ノレエステノレ、 (R)-3—ヒ ドロキシ一 3 - ( 2—チェ-ノレ）プロピオン酸プロピノレエ ステル、 （R)_3—ヒ ドロキシー 3— (2 _チェニル）プロピオン酸ィソプロピルェ ステル、 （R)- 3—ヒ ドロキシー 3— (2—チェニル）プロピオン酸シクロプロピル エステル、 (R) - 3—ヒ ドロキシ一 3一（2—チェニル）プロピオン酸ブチルエステ ノレ、 (R)- 3—ヒ ドロキシー 3—（ 2一チェェノレ）プロピオン酸ィソブチルエステノレ、 (R)- 3—ヒ ドロキシ一 3— (2—チェニル）プロピオン酸ターシャリ一ブチルエス テル等が挙げられる。
B— 4 ) アミ ド化
上記 B— 1 ) 又は B— 2) で得られる一般式 （3 ') で表される光学活性な 3 _ ヒ ドロキシー 3— (2—チェニル） プロピオン酸エステル化合物は、 上記 B) 項 にける一般式 （3) で表される化合物のアミ ド化反応の説明の部分に記載したの と同様の方法で、 R1!^1' NH ( 及び!^1' は前記と同義である。） で表され るァミン類と反応させ、 アミ ド化することにより、 上記一般式 （1) で表される 化合物へ誘導化することができる。
C) アミ ド基の還元反応
上記光学活 I1生な 3—ヒ ドロキシ— 3 _ ( 2—チェニル） プロピオンァミ ド類の アミ ド基の還元方法としては、 公知のアミ ド基の還元方法を挙げることができ、 具体的には、 ボラン系還元剤又はアルミニウム系還元剤を用いて還元反応を行う ことができる。
上記ポラン系還元剤として具体的には、 ジポラン （B 2H6) ;又は、 ボラン （B H3) のテトラヒ ドロフラン錯体、 ジェチルエーテル錯体、 ジメチルアミン錯体、 ピリジン錯体、 ジメチルスルフィ ド錯体、 トリメチルァミン錯体等のボランの錯 体が挙げられる。 また、 水素化ホウ素ナトリウムと硫酸ジメチル、 ヨウ素等とを 反応させ、 系中で、 ボランを調製し、 反応に用いる方法も挙げられる。 このうち ボランのジメチルスルフィ ド錯体又はテトラヒ ドロフラン錯体が好ましく、 特に 好ましくはテトラヒ ドロフラン錯体である。
上記アルミニウム系還元剤としては、具体的には、アルミニウムハイ ドライ ド、 ナトリゥムアルミニウムハイドライ ド、 リチウムアルミニウムハイ ドライド又は ナトリウムビス （2—メ トキシエトキシ） アルミニウムハイドライ ドが挙げられ る。 このうち好ましくはリチウムアルミニウムハイ ドライ ド又はナトリゥムビス ( 2—メ トキシェトキシ) アルミニウムハイ ドライ ドであり、 特に好ましくはェ 業的に入手可能なナトリゥムビス ( 2—メ トキシェトキシ) アルミニウムハイ ド ライ ド （R e d— A 1 (登録商標）） である。
用いる還元剤の使用量としては、 アミ ド基の種類に応じて必要なヒ ドリ ドのモ ル数が変わるため、 基質に合わせて必要当量数以上となるよう用いればよいが、 一般的には、 1級ァミンのアミ ド基の場合ヒ ドリ ドとしては 7当量以上、 2級ァ ミンのアミ ド基の場合ヒ ドリ ドとしては 6当量以上、 3級ァミンのアミ ド基の場 合ヒ ドリ ドとしては 5当量以上用いるのがよいとされている。
但し、 還元剤の使用量が多すぎると基質の水素化分解等の副反応が起こり好ま しくないので、 通常、 基質に対するヒ ドリ ドの量として 3 0当量以下、 好ましく は 1 5当量以下、 特に好ましくは 1 3 . 5当量以下の範囲で用いられる。
基質と還元剤との接触方法としては、 基質溶液に還元剤溶液を添加する方法、 還元剤溶液に基質溶液を添加する方法等が挙げられ、 これらは必要に応じ液を冷 却して行っても良い。 用いる溶媒は、 還元剤を不活化させないものであれば特に限定されないが、 具 体的にはジェチルエーテル、 テトラヒドロフランなどのエーテル系溶媒； トルェ ン、 キシレンなどの芳香族系溶媒；塩化メチレン、 クロロホルムなどのハロゲン 系溶媒が挙げられる。 このうちボラン系還元剤を用いる場合にエーテル系溶媒が 好ましく、 特に好ましくはテトラヒドロフランであり、 アルミニウム系還元剤を 用いる場合には、 芳香族系溶媒が好ましく、 特に好ましくはトルエンである。 反応温度は、 ボラン系還元剤を用いる場合には、 低温だと反応時間が長くなる 傾向が高いので、 通常、 室温以上の温度〜用いる溶媒の沸点までの範囲となり、 アルミニウム系還元剤を用いる場合には、 通常、 0〜1 0 0 °C、 好ましくは 2 0 〜 6 0 °Cの範囲である。
所定時間反応を行った後、 必要に応じて氷等を用いて冷却しながら、 反応液に 水 （通常、 基質に対して 0 . 5倍体積量以上 1 0倍体積量以下、 好ましくは 1倍 体積量以上 5倍体積量以下） を添加し反応を終了させる。 このとき、 処理液の p Hが 4以上、 好ましくは p H 4 . 5以上、 特に好ましくは p H 4 . 6以上の範囲 に制御して行うとなるようにするのが好ましい。
ここで、 ポラン系の還元剤を用いた場合には、 不活性化した還元剤の除去効率 の点で、通常、 P H 7未満、 より好ましくは p H 6以下、更に好ましくは p H 5 . 5以下、 特に好ましくは p H 5以下で酸処理を行うのが好ましく、 ァノレミニゥム 系還元剤を用いた場合には塩基性条件下で処理を行うのが好ましい。
上記酸処理に用いられる酸としては、 反応液の p Hが適正な範囲に制御できる 限りにおいて特に限定されないが、 具体的には希塩酸、 希硫酸などの鉱酸；また は、 蟻酸、 酢酸等のカルボン酸類、 メタンスルホン酸、 p —トルエンスルホン酸 等のスルホン酸類などの有機酸が挙げられ、 好ましくは希塩酸または 〜 の カルボン酸類であり、 特に好ましくは酢酸である。
上記塩基処理に用いられる塩基としては、 通常、 反応終了後の精製時に容易に 分離できる無機塩基が用いられる。 上記無機塩基としては、 水に溶解するもので あれば特に限定されないが、 具体的には、 アンモニア ；水酸化リチウム、 水酸化 ナトリゥム、 水酸化力リゥム等のアルカリ金属水酸化物；水酸化カルシウム、 水 酸化バリゥム等のアルカリ土類金属水酸化物；炭酸水素ナトリウム、 炭酸水素力 リゥム等のアルカリ金属重炭酸塩；炭酸水素カルシウム、 炭酸水素バリゥム等の アルカリ土類金属重炭酸塩；炭酸ナトリゥム、 炭酸カリゥム等のアルキル金属炭 酸塩；炭酸カルシウム、 炭酸バリゥム等のアルカリ土類炭酸塩類が挙げられる。 使用量は、アルミニウム系還元剤を不活性化させるのに必要な分あれば構わない。 また無機塩基は、 固体や気体のまま使用しても、 水溶液の状態で用いても構わな い。
上記処理後、 目的のアミン類を有機溶媒で抽出してから、濃縮 ·クロマト精製 - 晶析等の一般的な精製法を組み合わせることにより単離することができるが、 光 学純度の維持及び手取り収率の向上等の観点からそれぞれ以下のような後処理方 法を行う方が好ましい。
C - 1 ) ポラン系還元剤を用いた還元反応の後処理
ポラン系還元剤を用いた場合、 還元反応終了後、 得られる含ホウ素化合物をケ トン類共存下、 酸性又は塩基性条件下で加水分解するのが好ましい。
含ホウ素化合物を加水分解するにあたっては、 上記還元反応終了後の反応液そ のまま用いてもよいし、 上記反応液から目的生成物である 3—ァミノ一 1一 （2 —チェ二ル）— 1一プロパノール類の単離を一般的な単離操作により行った後に、 残った含ホウ素化合物含有有機層を用いてもよい。
上記含ホウ素化合物含有有機層にケトン類と水、 さらには塩基又は酸を添加し 加熱することにより加水分解を行う。 ここで、 反応基質が光学活性体である場合 には、 不斉炭素のラセミ化を防ぐために、 塩基性条件下での加水分解を行うのが 好ましい。
使用するケトンに関しては特に限定されないが、 加水分解後の除去操作が容易 である沸点が 1 2 0 °C以下のケトン類が好ましく、 このうち、 2—ペンタノン、 3—ペンタノン、 メチルェチルケトン又はアセトンがより好ましく、 特に好まし くはメチルェチルケトン又はアセトンである。 ケトンの使用量は、 通常、 3—ヒ ドロキシー 3— ( 2〜チェ-ル） プロピオンアミ ド類に対して、 0 . 1〜1 0 0 体積倍量用いられ、 好ましくは 1〜 1 0体積倍量である。
反応に使用する水の量は、 塩基又は酸を溶解させ、 含ホウ素化合物を加水分解 するのに充分なだけあれば、構わないが、通常は、生成する 3—アミノー 1一 （2 一チェニル） 一 1一プロパノール類に対して、 1〜1 0 0倍体積量用いられ、 好 ましくは、 5〜3 0倍体積量である。
塩基としては、 通常、 反応終了後の精製時に容易に分離できる無機塩基が用い られる。上記無機塩基としては、水に溶解するものであれば特に限定されないが、 具体的には、 水酸化リチウム、 水酸化ナトリウム、 水酸化カリウム等のアルカリ 金属水酸化物；水酸化カルシウム、 水酸化バリゥム等のアル力リ土類金属水酸化 物；炭酸水素ナトリゥム、 炭酸水素力リゥム等のアルカリ金属重炭酸塩；炭酸水 素カルシウム、 炭酸水素バリゥム等のアル力リ土類金属重炭酸塩；炭酸ナトリウ ム、 炭酸カリゥム等のアルキル金属炭酸塩；炭酸カルシウム、 炭酸バリゥム等の アルカリ土類炭酸塩類が挙げられる。 使用量は、 含ホウ素化合物を充分に加水分 解できる量があれば、 構わないが、 通常は、 使用するホウ素系還元剤に対して、 3倍モル量以上用いるのが好ましい。
使用する酸としては、 p Hが適正に制御できる限りは特に限定されないが、 具 体的には、 塩酸、 硫酸などの鉱酸類；メタンスルホン酸、 p—トルエンスルホン 酸等のスルホン酸類；又は、 蟻酸、 酢酸、 酪酸、 安息香酸等のカルボン酸類が挙 げられる。 好ましくは、 塩酸または炭素数 2〜4のカルボン酸類であり、 特に好 ましくは、 安価に入手可能である酢酸である。 また酸性条件下での加水分解にお いては、 処理時の反応系中の p Hが 3以上であることが好ましい。 特には、 反応 基質が光学活性体である場合には、 不斉炭素のラセミ化を防ぐために、 上記酸処 理を p H 4以上、 好ましくは p H 4 . 5以上、 特に好ましくは p H 4 . 6以上の 範囲に制御して行うとなるようにするのが好ましい。。
加水分解の際の反応温度は、 通常 0 °C〜8 0 °C、 好ましくは 2 0 °C〜6 0 °Cの 範囲であり、 反応時間については通常 3 0分〜 1 2時間の間であり、 また反応圧 力に関しては、 通常、 常圧であるが、 必要に応じて加圧下でも減圧下でも差し支 えない。 上記加水分解後、 抽出 '濃縮を行い、 生成した 3—アミノー 1 _ ( 2—チェ二 ル） 一 1一プロパノール類を単離することができる。 このときさらに必要に応じ て、 蒸留、 再結晶、 再沈殿、 カラムクロマトグラフィー等の通常の精製方法を用 いることにより、 さらに精製し高純度の 3—アミノー 1一 （2—チェニル） 一 1 一プロパノ一ル類を得ることもできる。
C - 2 ) アルミニウム系還元剤を用いた還元反応の後処理
アルミニウム系還元剤を用いた還元反応終了後、得られる 3一アミノー丄一（2 一チェニル） ― 1—プロパノール類と水溶性キレート剤と接触させるのが好まし い。
3—ァミノ— 1一 （2—チェニル） 一 1一プロパノール類を水溶性キレート剤 と接触させるにあたっては、 アルミニウム系還元剤を不活性化した反応液に必要 に応じて有機溶媒を加え、 分取した有機層をそのまま用いてもよいし、 アルミ二 ゥム系還元剤を不活性化した反応液から抽出 ·濃縮した粗 3—アミノー 1一 （2 一チェ-ル） _ 1—プロパノール類を有機溶媒に再溶解させたもの、 あるいは、 上記粗 3—ァミノ— 1一 （2—チェニル） 一 1 _プロパノール類を晶析、再沈殿、 カラムクロマトグラフィ一等の通常の精製操作を経て単離した後に再度有機溶媒 に溶解させたものであってもよい。
上記有機溶媒としては、 3—アミノー 1一 （2—チェ-ル） 一 1一プロパノー ル類を溶解し、 水と分離するものであれば特に限定されないが、 具体的には、 ジ ェチノレエーテル、 n—プロピルエーテノレ、 イソプロピルエーテノレ、 t e r t—ブ チルメチルエーテル等のエーテル類；へキサン、 ヘプタン、 オクタン等の脂肪族 炭化水素類；ベンゼン、 トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類；酢酸ェチル、 酢酸プロピル、 酢酸ブチル等のエステル類；塩化メチレン、 クロ口ホルム等のハ ロゲン化炭化水素類等が挙げられ、 このうち、 ヒドロキシアルキルアミン類の溶 解性が高く、 安価で入手できる酢酸ェチル又はトルエンが特に好ましい。 上記の 溶媒は、 単独でも 2つ以上の混合物として使用しても良い。
溶媒の使用量は、 生成するヒドロキシアルキルァミンが充分に溶解できる量あ れば良い。 通常は、 ヒドロキシアルキルァミンに対して、 1〜 1 0 0倍体積量用 いられ、 好ましくは、 5〜3 0倍体積量である。
(キレート剤）
水溶性キレート剤は、 アルミニウムの水溶性錯体を形成するものであれば、 特 に限定されないが、具体的には、シユウ酸；酒石酸、 リンゴ酸、乳酸、 クェン酸、 マンデル酸等のヒドロキシカルボン酸類；酒石酸ジアンモニゥム、 酒石酸ジカリ ゥム、 酒石酸ジナトリウム、 酒石酸カリウムナトリウム、 酒石酸モノカリウム、 酒石酸モノナトリゥム等の上記ヒ ドロキシカルボン酸類のナトリウム、カリウム、 アンモニゥム塩類；ェトリ 口三酢酸 （N T A)、 エチレンジァミン四酢酸 （E D T A) 等のァミノポリカルボン酸類；エチレンジァミン四酢酸ニナトリゥム等の上 記ァミノポリカルボン酸のナトリウム、 カリウム、 アンモニゥム塩類等が挙げら れる。 このうち入手のし易さの点からヒドロキシカルボン酸類又はアミノポリカ ルボン酸類が好ましく、 その他コスト等総合的に判断すると酒石酸及び E D T A が特に好ましい。
キレート剤の使用量としては、 上記還元反応で使用したアルミニウム系還元剤 1モルにに対して、 0 . 0 0 0 1モル以上、 好ましくは 0 . 0 0 1モル以上、 よ り好ましくは 0 . 0 1モル以上の範囲で用いられる。 一方、 上限としては 5 0モ ル以下、 好ましくは 1 0モル以下、 より好ましくは 5モル以下、 より好ましくは 1モル以下、 更には好ましくは 0 . 5モル以下で十分である。
(接触方法）
水溶性キレート剤を 3—ァミノ _ 1一 （2—チェエル） 一 1一プロパノール類 と接触させるに当たっては、 通常、 水溶液として接触させる。
ここで、 キレート剤としてヒドロキシカルポン酸などの酸性水溶性キレート剤 を用いる場合には、 水溶液中に塩基を加え P Hが 7以上に調整しておくのが好ま しい。
上記塩基としては、 反応終了後の精製時に容易に分離できる無機塩基が好まし い。 上記無機塩基としては、 水に溶解するものであれば特に限定されないが、 具 体的には、 水酸化リチウム、 水酸化ナトリウム、 水酸化カリウム等のアルカリ金 属水酸化物；水酸化カルシウム、水酸化バリゥム等のアルカリ土類金属水酸化物； 炭酸水素ナトリゥム、 炭酸水素力リゥム等のアルカリ金属重炭酸塩；炭酸水素力 ルシゥム、 炭酸水素バリゥム等のアル力リ土類金属重炭酸塩；炭酸ナトリゥム、 炭酸力リゥム等のアルキル金属炭酸塩；炭酸カルシウム、 炭酸バリゥム等のアル カリ土類炭酸塩類が挙げられる。
使用量は、 キレート剤中のカルボン酸部位に対する中和に必要な分あれば構わ ない。 また無機塩基は、 固体のまま使用しても、 水溶液に状態で用いても構わな い。
また、 3—アミノー 1 _ ( 2—チェニル） _ 1 _プロパノール類自体水溶性が 高いため、 有機溶媒による抽出を効率よく行うために、 水溶液中に塩化ナトリウ ム、 硫酸ナトリゥム等の中性無機試薬を加えておくことが好ましい。
水溶液の使用量は、 生成するアルミニウムの水溶性キレート錯体が充分に溶解 できる量あれば良い。 通常は、 3—アミノー 1一 （2—チェエル） 一 1一プロパ ノール類に対して、 1〜 1 0 0倍体積量用いられ、 好ましくは、 5〜3 0倍体積 量である。
接触温度は、特に限定されないが、通常 0〜1 0 0 °C、好ましくは、 5〜7 0 °C の範囲である。
またキレート剤によるアルミ二ゥム除去が有効に行われるように、 水溶性キレ ート剤水溶液と 3 _アミノー 1— ( 2—チェニル） 一 1 _プロパノール類含有有 機層と接触させるに当たっては、 2層系になるため充分に攪拌を行うことが好ま しい。
上記処理後、必要に応じ更に有機溶媒を加え 3—アミノー 1一（2—チェニル） 一 1—プロパノール類を抽出した有機層を濃縮した後、 再結晶、 再沈殿、 カラム クロマトグラフィ一等の通常の精製方法を用いることにより、 単離 ·精製するこ とができる。
上記の方法で得られる光学活性 3—アミノー 1一 ( 2—チェニル) 一 1一プロ パノール類は、アルミニウム系還元剤を用いて還元を行っているにもかかわらず、 不純物として含有されるアルミニウム系還元剤由来のアルミニウム含量は、通常、
500 p p m以下、 好ましくは 300 p p m以下、 より好ましくは l O O p pm 以下、 更に好ましくは 50 p pm以下、 特に好ましくは 30 p pm以下であり、 この程度のアルミニウム含量であれば、 さらなる誘導化の過程において除去が簡 便であり、 医農薬中間体として好ましい化合物である。
以上の方法で得られる光学活性 3 _アミノ _ 1一 (2—チェニル) 一 1一プロ パノール類の光学純度は原料の光学活性なアミドの光学純度に依存するが、通常、 80 % e e以上、 好ましくは 90 % e e以上、 特に好ましくは 95 % e e以上と 原料の光学純度を損なうことなく目的物を効率よく得ることができる。
D) 水酸基の保護
また、 上記で得られた該光学活性 3—ァミノ— 1— (2—チェニル) — 1ープ ロパノール類は、 さらにその水酸基を保護することで医農薬中間体として有用な 3—ァミノ一 1— (2—チェニル） 一 1—プロパノール誘導体を製造することが できる。
上記水酸基の保護法としては、 エーテル化、 シリル化、 カーボネート化、 スル ホネート化等、 一般的な水酸基の保護方法を任意に用いることができ、 好ましく は、 塩基性条件下での保護方法を用いるのがよい。
例えば、 具体的には、 特許登録第 254968 1号公報記載のように、 1ーフ ルォロナフタレンのようなハロゲン化物をジメチルァセトアミ ドのような極性'溶 媒中、 60%水素化ナトリゥム等の塩基の存在下で、 必要に応じて加熱して水酸 基の保護を行う方法が挙げられる。
特に ( 1 S) 一 3—メチルァミノ _ 1— ( 2—チェニル) 一 1—プロパノール のナフチノレイ匕物ま、 J o u r n a l o f l a b e l e d c omp o u n d s a n d r a d i o p h a r ma c e u t i c a l s v o l .36, N o . 3 , . 21 3 - 223 ( 1 9 95) に記载のように抗うつ薬として有用である ことが知られている。 ぐ実施例 >
以下、 実施例を示し、 さらに詳しく本発明について説明するが、 本発明はその 要旨を超えない限り、 以下の実施例に制約されるものではない。 実施例中、 e e はェナンチォマー過剰率を示す。
(製造例 1 ) 3—ォキソ一 3— ( 2—チェニル） プロピオン酸ェチルエステル の合成
2 4°Cで 6 0 %水素化ナトリウム 1 0. 1 6 gと炭酸ジェチル 7 8 gとをテト ラヒドロフラン 6 0 m lで仕込んで昇温、 還流させた。 該温度 （ 7 9 °C) で、 2 —ァセチルチオフェン 2 0 gをテトラヒドロフラン 2 Om 1に溶解させた溶液を 5 0分かけて滴下した。 その後 1時間、 該温度で攪拌し、 反応が終了したところ で氷冷した。 反応液を液体ク口マトグラフィ一で分析したところ、 反応収率は 9 4%であった。
あらかじめ 4 N塩酸水 6 3 m 1を氷冷しておき、 そこへ氷冷しておいた反応液 を内温が 1 0°Cぐらいに保たれるように滴下した。 滴下後 p H= 6であった。 次 に分液をして水層をさらにトルエン 4 Om 1で 3回抽出し、 先ほどの有機層を合 わせて飽和食塩水 2 0 m lで洗浄した。 次に一部濃縮した後にビグリユー管をつ けて精留を行い、 1 2 8〜 1 3 0°Cの画分 （4mmH gで蒸留） で水素化ナトリ ゥム由来のオイル分を含む 3—ォキソ一 （2—チェニル） プロピオン酸ェチルェ ステル 2 6. 9 g (純度 8 7 %、 収率 7 4 %) を得た。
iH— NMR (CD C 13) δ 1. 2 7 ( t , 3 H、 J = 8 H z ), 3. 9 2 ( s , 2 H), 4. 2 1 (q , 2 H、 J = 8 H z ), 7. 1 5 (d d , 1 H、 J = 5 H z , 1 H z ), 7. 7 0 ( d， 1 H、 J = 5 H z ), 7. 7 4 ( d， 1 H、 J = 1 H z ) 尚、 液体クロマトグラフィーの条件は以下の通り。
MC I — G e l OD S 1 5 c m (三菱化学社製） 4 0 °C
ァセト-トリル： 5 OmM酢酸アンモユウム水溶液 = 5 0 ： 5 0 (0. 7m 1 /m i n ) 検出波長 UV 2 54 nm (製造例 2) 3—ォキソ一 （2—チェニル） プロピオン酸ェチルエステルの合 成
24 °Cで 60 %水素化ナトリウム 1 3. 3 1 gと炭酸ジェチル 56. 1 gとを テトラヒ ドロフラン 105m lで仕込んで 60 °Cまで昇温した。 該温度で、 2 - ァセチルチオフェン 3 O gをテトラヒ ドロフラン 1 5m lに溶解させた溶液を 1
20分かけて滴下した。 その後 1時間、 該温度で攪拌し、 反応が終了したところ で氷冷した。 反応液を上記製造例 1と同様の条件により液体クロマトグラフィー で分析したところ、 反応収率は 9 9%であった。
あらかじめ 4N塩酸水 87. 4m lを水冷しておき、 そこへ氷冷しておいた反 応液を内温が 1 0°Cぐらいに保たれるように滴下した。 滴下後 pH=l . 5であつ たため、 25 %水酸化ナトリゥム水溶液で p H == 7に調整した。 分液をして水層 をさらにトルエン 3 Om 1で 1回抽出し、 先ほどの有機層を合わせて 25%食塩 水 3 Om 1で洗浄した。得られた有機層を圧力 5 OmmH gになるまで濃縮した。 次に N a H由来のオイル分を分離するため、 ァセトニトリル 30m l、 ヘプタン
3 Om 1を 25°Cで加え、 30分攪拌した後、 ヘプタン層を分液することでオイ ル分を除いた。 ァセトニトリル層を濃縮 （圧力 5mmHg) することにより、 3 —ォキソ一 3— (2—チェニル） プロピオン酸ェチルエステル 46. 3 g (純 度 9 2%、 収率 90%) を得た。
(製造例 3) 3—ォキソ一 3— （2—チェ-ル） プロピオン酸ェチルエステル の合成
24 °Cで 60%水素化ナトリウム 0. 254 gと炭酸ジェチル 1. 95 gとを テトラヒ ドロフラン 1. 5m lで仕込んで昇温、 還流させた。 該温度 （79°C) で、 2—ァセチルチオフェン 0. 5 gをテトラヒ ドロフラン lm 1に溶解させた 溶液を 1 5分かけて滴下した。 その後 1時間、 該温度で攪拌し、 反応が終了した ところで、 反応液を上記製造例 1と同様の条件により液体クロマトグラフィーで 分析したところ、 反応収率は 89 %であつた。 (参考例 1 )
24 °Cで 60%水素化ナトリウム 0. 254 gをテトラヒ ドロフラン 1. 5m 1で仕込んで昇温、 還流させた。 該温度 （79°C) で炭酸ジェチル 1. 95 gと 2—ァセチルチオフェン 0. 5 gをテトラヒ ドロフラン lm lに溶解させた溶液 を 1 5分かけて滴下した。 その後 1時間、 該温度で攪拌し、 反応が終了したとこ ろで、 反応液を上記製造例 1と同様の条件により液体クロマトグラフィ一で分析 したところ、 反応収率は 83 %であった。
(製造例 4) 3—ォキソ一 3— （2—チェニル） プロピオン酸ェチルエステル の合成
炭酸ジェチノレ 1 94. 7 g (1. 65 m o 1 ) に、 t e r t—ブトキシカリゥ ム 71. 1 g (0. 63 m o 1 ) を 60〜 65 °Cにて添加し、 60〜65°Cにて 1時間攪拌後、 2—ァセチルチオフェン 50 g (0. 4 Om o 1 ) のトルエン 1 8 Om 1溶液を 70〜75°Cにて滴下し、 75〜 80 °Cにて 2時間攪拌した。 反 応液を室温に冷却し、 水 725 gを加えて酢酸ェチル 600m lで抽出し、 飽和 食塩水で洗浄後濃縮し、 減圧蒸留して 65. 2 gの 3—ォキソ一 3— （2—チェ ニル） プロピオン酸ェチルエステルを得た （収率 83%)。
(製造例 5) N—メチルー 3—ォキソ _ 3 _ (2—チェニル） プロピオンアミ ドの合成
参考例 1で得られた 3 _ォキソ一 3— (2—チェエル） プロピオン酸ェチルェ ステル 5 g (25. 25mmo 1 ) のメタノール 2 Om 1溶液に 40%メチル ァミン/メタノール溶液 9. 8 g (1 26. 26mmo 1 ) を加えて室温にて 1 9時間攪拌した。 反応後、 溶媒および過剰のメチルァミンを減圧留去し、 N—メ チルー 3—ォキソ一 3— （2—チェニル） プロピオンアミ ドの結晶 4. 6 gを得 た。 iH— NMR (CD C 13) 5 2. 8 5、 2. 8 7 ( s、 3 H, メチルアミ ド基 由来の回転異性体）、 3. 9 0 ( s、 2 H)、 7. 1 5 (m、 1 H)、 7. 1 7 (d d、 1 H, J = 4. 8 H z、 3， 8 H z )ヽ 7. 7 4 ( d d、 1 H， J = 4. 8 H z、 1. 0 H z )ヽ 7. 8 3 (d d、 1 H, J = 3. 8 H z、 1. 0 H z ) 実施例 1 (S) — 3—ヒ ドロキシ一 3— （2—チェニル） プロピオン酸ェチ ルエステルの合成
3 Om lのフラスコにトリエチノレアミン 2. 3 4 g (2 3. 1 1 mm o 1 ) お ょぴ乾燥 N, N—ジメチルホルムアミド （以下 DMFと略す） 3 m lを仕込み、 次いで氷冷下にギ酸 1. 0 1 g ( 2 1. 9 Omm o 1 ) および製造例 4で得られ た 3—ォキソ一 3 _ ( 2—チェエル） プロピオン酸ェチルエステル 4. 0 2 g ( 2 0. 2 8mm o 1 ) を加え、 最後に R u C 1 (p—シメン） [ (S , S) _N - p - トノレエンスノレホニノレ一 1， 2—ジフエニノレエチレンジァミン] (以下 R u C 1 (p - c ym e n e ) (S S— T s D P EN) と略す） 6. 6 m g (0. 0 1 m m o 1 ) を加え、 5 0°Cにて 4 2時間攪拌した。 反応後、 氷冷下に水 2 m lを加 え、 1 0 %塩酸を加えて p H 2として酢酸ェチルで抽出し、 飽和食塩水、 飽和重 曹水、 飽和食塩水で順次洗浄し、 溶媒を減圧濃縮して、 シリカゲル力ラムクロマ トグラフィ一にて精製して 3. 8 3 gの （S) — 3—ヒ ドロキシー 3— （2—チ ェニル） プロピオン酸ェチルエステルを得た （収率 9 4 %)
また、 光学純度は、 以下の条件による高速液体クロマトグラフィーにより決定 し、 9 7. 5 % e e。
であった。
C h i r a l c e l OD (ダイセル社製） 3 5 °C
n一へキサン： 2—プロパノーノレ = 9 0 : 1 0 ( l m l /m i n)
検出波長 UV 2 3 0 nm 実施例 2 (S) — 3—ヒ ドロキシー 3— ( 2—チェニル） プロピオン酸ェチ ルエステルの合成 20 Om 1のフラスコにトリェチルァミン 1 6. 7 1 g (1 65 mm o 1 ) お よび乾燥 DMF 2 Om 1を仕込み、 次いで氷冷下にギ酸 7. 20 g (1 56mm o 1 ) および製造例 4で得られた 3—ォキソ一 3 _ (2—チェニル） プロピオン 酸ェチルエステル 28. 57 g (144mm o 1 ) を力 Πえ、最後に R u C 1 (p 一 c yme n e) (S S— T s DPEN) 45. 8 m g (0. 072 mm o 1 ) を 加え、 50°Cにて 40時間攪拌した。反応後、氷冷下に水 14m lを加え、 10 % 塩酸を加えて pH2として酢酸ェチルで抽出し、 飽和食塩水、 飽和重曹水、 飽和 食塩水で順次洗浄し、 溶媒を減圧濃縮し、 減圧蒸留して 26. 53 gの （S) — 3—ヒ ドロキシ一 3— (2—チェニル） プロピオン酸ェチルエステルを得た （収 率 9 2%)0
また、 光学純度は、 実施例 1と同様にして決定し、 97. 5%e eであった。 実施例 3 微生物を用いた光学活性な 3—ヒ ドロキシー 3 _ (2—チェ-ル） プロピオン酸ェチルエステルの合成
グルコース 2 %、 酵母エキス 1 %、 ポリぺプトン 1 %、 麦芽エキス 0. 6 %の 組成からなる水溶液を培地とし、 これにフィロバシディウム ュニグッタラタム (F i l o b a s i d i um u n i g u t t u l a t um) I F O 069 9 株を接種し， 28 °Cで 24時間好気的に培養した。 培養終了後， 培養液 （lmL) を集め、 遠心分離し菌体を単離した。 基質となる 3—ォキソ一 3— (2—チェ二 ル） プロピオン酸ェチルエステルは、 欧州特許出願公開 75 1427号に記載の 方法に従って合成した。該菌体をグルコース 1 0 OmM、 3一ォキソ一 3— (2 一チェニル）プロピオン酸ェチルエステノレ 0. 24 %, NADH 0. 0 1 %、 NAD PH 0. 0 1%、 トリス塩酸バッファー 100 mM (pH7. 5) 力、 らなる反応液 200 μ Lに懸濁し、 30°Cで振とう反応させた。 反応開始 18時 間後 2—プロパノール 800 Lを添加し、 遠心分離にて除菌後、 上清サンプル を HP L Cにて分析した。 HP LCカラムは C h i r a l p a k AD— RH (ダ イセル製） を使用し、 以下の条件で分析した。
温度： 35 °C 検出器： UV検出器 （245 nm)
溶離液： 70% 1 0 mMリン酸緩衝液 （ p H 6. 0 )、 30 %ァセトニトリル ： 1 m 1 / m ί η
Β i e b e rらの方法 （J. O r g a n i c. Ch em.、 62卷、 26号、 9 06 1— 9064頁、 1 99 7年） により合成した 3—ヒドロキシ一 3— （2— チェニル） プロピオン酸ェチルエステルのラセミ体を標準として上記条件で分析 し、得られた 2つのピーク （図 1の保持時間 9. 3分および 1 0. 5分のピーク） の旋光性を分析することにより、（R)—体（図 1の保持時間 9. 3分）および（S) —体の 3—ヒ ドロキシー 3— (2—チェ-ル） プロピオン酸ェチルエステル （図 1の保持時間 1 0. 5分） のピークを同定した。 反応液を分析したところ、 （S) 一 3—ヒドロキシ一 3— （2—チェニル） プロピオン酸ェチルエステルと同じ検 出時間にピークが生じていることが確認された。
また、上記 HP LC条件により分離されたピークを分取 '精製して得られた（3 S) — 3—ヒ ドロキシー 3 _ (2—チェュル） プロピオン酸ェチルエステルと推 定される物質 （図 2) を NMRにより解析した （図 3)。
'H-NMR (CD C 13) δ 1. 27 (t、 3H：、 J = 7Hz)、 2. 86 (d、 1 H、 J = 2Hz)、 2. 87 (d、 1 H、 J = 5Hz)、 4. 20 ( q、 2 H、 J = 7Hz)、 5. 38 (m、 1 H)、 6. 98 (m、 2H)、 7. 26 (d、 1 H、 J = 5 H z)
m/ z : 200
また、 NMRを用いた新 Mo s h e r法（有機合成化学協会誌 51卷 462-470 頁、 1993年） により、 絶対配置は（S)体であると決定した。 以上により、 上記反 応により生成している物質は（S)— 3—ヒドロキシ一 3—（2—チェニル）プロピ オン酸ェチルエステルと同定された。
生成した ）一 3—ヒドロキシー 3— （ 2—チェニ^/)プロピオン酸ェチルエス テルの濃度は 729mg/L、 この光学純度は 9 9. 5%e eであった。
その他各種微生物について同様の実験を行った結果を表 1に示す。（R)— 3—ヒ ドロキシー 3— （2—チェニル） プロピオン酸ェチルエステルについても、 上記 と同様に NMR解析することにより同定することができた,
菌株 生成物 生成物 濃度 光学純度
Figure imgf000065_0001
Arthrobacter atrocyaneus JCM1329 9.77 4.53 R
Candida albicans IF00759 1580 56.2 R
Candida holmii IF01629 1250 55.2 R
Candida parapsilosis CBS604 2.63 〉99.8 R
Candida parapsilosis IF01396 5.91 79.4 R
Candida vaccinii JCM9446 2190 39.2 R
Candida valida IF010318 406 87.2 R
Cryptococcus humicolus IF010250 389 58.1 R
Kloeckera corticis IF00631 446 49.4 R
Kloeckera corticis IF01097 40.3 5.31 R
Kodamaea ohmeri IF00158 839 1.10 R
Leucosporidium scottii IF01212 723 20.7 R
Metschnikowia bicuspidata var. 1680 42.6 R californica IF010787
Metschnikowia krissii IF01677 300 22.9 R
Metschnikowia pulcherrima IAM12196 626 44.5 R
Metschnikowia pulcherrima IAM12197 247 59.2 R
Metschnikowia pulcherrima IF00863 393 96.6 R
Metschnikowia pulcherrima IF010796 684 64.8 R
Metschnikowia pulcherrima IF01407 833 32.4 R
Metschnikowia pulcherrima IF01678 1810 46.4 R
Paenibacillus alvei IF03343 438 〉99.8 R
Pichia angophorae IF010016 781 88.5 R
Pichia bovis IF00872 922 98.6 R
Pichia cactophila JCM1830 889 48.7 R
Pichia chambardii IF01274 259 21.2 R
Pichia flu雇 m JCM3646 323 19.9 R
Pichia japonica IF010721 1370 51.4 R
Pichia lynferdii IF010724 1310 73.4 R
Pichia manshurica IF00181 628 22.2 R
63 紙 m 上つづき)
菌株 生成物 生成物
Figure imgf000066_0001
光学純度
(mg/L) (% e. e. )
Pichia manshurica IF00864 1110 76. 5 R
Pichia misumaiensis IF010221 296 1. 37 R
Pichia nagani shii IF01670 1120 94. 5 R
Pichia nakasei JCM1699 285 42. 3 R
Pichia nakazawae var. akitaensis JCM10738 96. 6 12. 0 R
Pichia nakazawae var. nakazawae JCM7529 402 6. 48 R
Pichia phi logaea JCM10739 580 50. 6 R
Pichia rhodanensis JCM3649 72. 8 78. 9 R r lcnia si vico MJO ι Q Q
O. Δ 1
D
Pichia subpell iculosa IF00808 352 33. 5 R
Pichia toletana IF01275 188 28. 0 R
Pichia trehalophila JCM3651 120 41. 8 R
Pichia triangularis JCM2379 192 97. 7 R
Pichia veronae IF01667 390 14. 3 R
Saccharomycs exiguus IF01170 1930 79. 2 R
Ambrosiozyma ambros iae IFO10835 179 87. 1 S
Ambrosiozyma cicatricosa JCM7598 481 75. 0 S
Ambrosiozyma monospora IF01965 318 >99. 8 S
Ambrosiozyma monospora JCM7599 492 66. 5 S
Ambrosiozyma phi lentoma JCM7600 193 >99. 8 S
Arabroziozyma platypodis IF01471 1330 11. 8 S
Brettanomyces anomalus IF00627 344 >99. 8 S
Brettanomyces bruxel lensis IF00629 739 99. 3 S
Brettanomyces bruxellensis IF00797 305 98. 9 S
Brettanomyces naardenensis IF01588 2360 92. 5 S
Brevibacterium sacchrolyticum ATCC14066 1120 >99. 8 s
Bul lera pseudoalba JCM5290 280 >99. 8 s
Bullera unica JCM8932 178 >99. 8 s
64 差眷ぇ 紙 m ) 1 —(つづき）
困 ¾ 生成物 生成物
濃度 光学純度 .
Figure imgf000067_0001
n
Candia lambica JCM9557 50.6 /yy. o
Candida boidinii IFO10035 731 yb, o c
Q
Candida boidinii IF010240 1670 ΌΟ. Δ
Candida boidinii IF010329 1270 yu. L o n o
Candida boidinii IF010574 1610 4. U o
Candida cylindracea ATCC14830 101 ob. o o
Candida deserticola IF010232 276 o o
Candida famata ATCC20850 26.3 ί . o
Candida famata IF00856 \nn o
73.6 o o
Candida glabrata ATCC15126 278
c
Candida glabrata IF00005 2. 16 o
Candida glabrata IF00622 560 b / .
Candida glaebosa IF01353 152 \nyny. o o o o
Candida globosa IFO0953 160
Candida gropengiesseri IF00659 131 1ϋ. 0 O
o
Candida intermedia IF00761 1020 1. 11
Candida krusei IF00201 496 \ /πyπy. o o
Candida krusei IF01162 440 /yy. o o c
Candida krusei IF01664 258 qi ¾ Q
Candida krusei JCM1608 384 >99.8 s
Candida krusei JCM1609 329 >99.8 s
Candida krusei JCM1712 408 >99.8 s
Candida krusei JCM2284 379 >99.8 s
Candida krusei JCM2341 356 〉99.8 s
Candida magnoliae IF00705 2070 31.4 s
Candida maitosa IF01977 384 70.3 s
Candida melinii IF00747 507 84.7 s
Candida melinii JCM2276 57.7 28.2 s
Candida molischiana IF010296 61.7 86.8 s
65 用弒 (mm 1 (つづき）
困你 生成物 生成物 濃/ 光学純度
Figure imgf000068_0001
Candida norvegensis JCM2307 349 90.7 o
Candida parapsilosis IF00585 24.8 〉99.8
Candida pini IF01327 370 99.2
Candida quercuum IF01576 146 〉99.8
Candida rugosa IF00591 3.27
Candida sake IF00435 484 55.3
Candida solani IF00762 660 91.3 c
Candida tropicalis IF00006 423 89.6
Candida tropicalis IF00199 279 91.3 s
Candida tropicalis IF00618 261 95.3
Candida tropicalis IF01647 62.6 70.3
Candida utilis IAM4961 181 94.1
Candida utilis IF00396 238 95.1
Candida vartiovaarae JCM3759 o
20.4 76.3
Candida zeylanoides CBS6408 111 91.3
Candida zeylanoides IF010325 162 72.8
Candida zeylanoides JCM1627 169 62.6
Citeromyces matritensis IF00651 165 94.1
Citeromyces matritensis IF00954 67.3 >99.8 o
Corynebacterium acetoacidophilum ATCC13870 1460 >99.8 s
Corynebacterium ammoniagenes JCM1305 1190 〉99.8 s
Corynebacterium flavescens JCM1305 889 >99.8 s
Corynebacterium glutamicum ATCC13032 1260 〉99.8 s
Corynebacterium glutamicum ATCC13826 1350 >99.8 s
Corynebacterium glutamicum ATCC13869 1060 〉99.8 s
Corynebacterium variabile JCM2154 637 〉99.8 s
Cryptococcus aerius IF00377 1210 >99.8 s
Cryptococcus aerius IF01322 311 〉99.8 s
Cryptococcus alubidus IF00378 619 99.1 s
66 用紙 (M Q)
Figure imgf000069_0001
¾ (つづき）
生成物 生成物 濃度 光学純度
(mg/L) (% e. e. )
Debaryomyces maramus JCM1528 85.8
Debaryomyces raelissophilus JCM1707 24.2 Q Q
Q
Debaryomyces polymorphus JCM3647 Q
88.9 uU
Debaryomyces pseudopolymorphus JCM3652 131 7 7 Q
Debaryomyces robertsiae IF01277 180 Π Q
-
Debaryomyces vanri jiae var. vanri jiae JCM3657 295 o
Debaryomyces vanri jiae var. yarrowii JCM6190 132 A o
Dekkera bruxellensis CBS2796 o
562 yy. Δ
Endomyces decipiens IF00102 o
347 yb. y
Exophiala dermatitidis IF06421 77
119
Q
Exophiala dermatitidis IF08193 169 00. 0
Fellomyces fuzhouensis IF010374 36.3
Filobasidiura capsuligenum IF01119 88.3 QQ a. o
Q
Filobasidium capsuligenum IF01185 1040 o yny. c o
Filobasidium elegans IF010881 672
Q7 Q
Filobasidium f loriforme IF010886 804 o c filobasidium f loriforme IF01603 Q
702 yo.0 o
Filobasidium globisporum IF010887 Q
627 Q7
に y o
Q
Filobasidium uniguttulatum IF00699 729 yy. o
Hanseniaspora guilliermondii IF01411 26.7 83.5 s
Hanseniaspora uvarum IF01755 20. 1 52.8 s
Holtermannia corniformis JCM1743 725 〉99.8 s
Issatchenkia orientalis IF01279 410 98.6 s
Issatchenkia scutulata var. exigua JCM1829 210 〉99.8 s
Issatchenkia scutulata var. scutulata JCM1828 132 〉99.8 s
Issatchenkia terrico丄 a IF00933 249 〉99, 8 s
Issatchenkia terrico丄 a IF01907 466 〉99.8 s
Kloeckera apiculata IF00865 10.6 41' 9 s
Kloeckera japonica IF00151 59.6 91.2 s
68 え用鉞 («lj26) (つづき）
菌株 牛 物 生成物 濃度 光学純度 mg/ (% e. e. )
Kluyveromyces lacti s var. lacti s IF01267 878 77. 0 s
Kluyveromyces marxi anus CBS834 611 94. 1 s
Kluyveromyces thermotolerans IF00662 3120 2. 94 s
Kluyveromyces thermotolerans IF01050 1240 98. 2 s
Kluyveromyces thermotolerans IF01674 2320 40. 5 s
Kluyveromyces thennotolerans IF01779 1560 86. 7 s
Kluyveromyces thermotolerans IF01780 1690 94. 6 s
Kluyveromyces thermotolerans IF01985 2040 15. 3 s
Komagatael la pastori s ATCC28485 221 85. 5 s
Komagatael la pastori s IF00948 111
Komagatael la pastori s IF01013 454 Q
Lipomyces tetrasporus IF010391 47. 5 89. 0 s
Lodderomyces elongi sporus IF01676 32. 3 64. 9 s
Metschnikowia agaves IF010860 331 97. 6 s
Metschnikowia austral i s IF010783 301 94. 9 s
Metschnikowia bicuspidata var. 1200 15. 8 s bicuspidata IF01408
Metschnikowia bicuspidata var. chathamia IF010785 888 4. 66 s
Metschnikowia grues si i IF010788 672 31. 0 s
Metschnikowia hawai iensis IF010791 175 96. 7 s
Metschnikowia lunata IF01605 1020 92. 5 s
Metschnikowia reukaufi i IF010798 84. 6 35. 1 s
Metschnikowia reukaufi i IF01679 87. 0 44. 0 s
Metschnikowia reukaufi i JCM2279 1370 54. 9 s
Metschnikowia sp. IF01406 142 75. 2 s
Metschnikowia zobel l i i IF010800 1030 33. 8 s
Metschnikowia zobel l i i IF01680 2070 19. 0 s
Ogataea minuta var. minuta IF00975 654 41. 2 s
Ogataea minuta var. nonfermentans IF01473 267 81. 1 s
Ogataea polymorpha IF01475 359 83. 7 s
69
差眷ぇ甩鉞 (删 26》 上つづき）
mW 生成物 生成物
' 濃度 光学純度
(mg/L) (% e. e. )
Pichia amylophila JCM1702 62.0 ς
Pichia anomala IF00118 419 1 1 o Q Q
Pichia augusta ATCC26012 373 UvJ..U ς
Pichia barkeri IF010714 636 \QQ O
O ς
Pichia besseyi JCM1706 455 〉99.8 ς
Pichia biraundalis JCM3591 62.4 2.71 ς
Pichia bispora JCM3590 8.65 9.57 ς
c
Pichia canadensis JCM3597 183 52. 1 o
Pichia castillae JCM10733 412 〉99· 8 c
Pichia delftensis IFO10715 591 88.8 ς
Pichia deserticola IF010716 950 〉99· 8 o ς
Pichia dryadoides IF01820 441 98.7 ς
Pichia euphorbiiphila IF010717 572 75. 1 ς
c
Pichia fabianii JCM3601 123 93.9 o
Pichia fermentans JCM2189 100
Figure imgf000072_0001
o c
Pichia hampshirensis IF010719 332 〉99' 8
Pichia heedii JCM1833 30.9 〉99· 8 ς
Pichia heimii IF01686 39.5 A 〉99· 8 ς
Pichia inositovora JCM10736 92.8 90.0 s
Pichia jadinii JCM3617 91.8 >99.8 s
Pichia kluyveri var. cephalocereana IF010722 526 〉99· 8 s
Pichia kluyveri var. eremophila IF010723 286 〉99.8 s
Pichia kluyveri var. kluyveri IF01165 282 98.4 s
Pichia media JCM10737 40.6 60.3 s
Pichia methanolica ATCC58403 431 67.4 s
Pichia methylivora IF010705 55.6 79.7 s
Pichia raexicana JCM1835 272 97, 6 s
Pichia meyerae IF010727 337 94.8 s
Pichia mississippiensis JCM1703 75.3 〉99· 8 s
70 紙 < ) 1—(つづき）
mW 生成物 生成物 濃度 光学純度 f /τ
(mR/Lヽ) (% e. e. )
Pichia norvegensis IF01694 352 Qi丄， u ς
Pichia onychis IF01682 147 Qώ. 1丄 ς
Pichia petersonii IF01372 495 ¾ ί c ， 丄 o
Pichia pijperi IF01290 300 QO A Q
Pichia populi IF010729 184 1 1
¾丄. 丄
Pichia pseudocactophila IFO10730 997
Pichia quercuum JCM3659 an Q
89. 2
Pichia rabaulensis IF01643 135 QQ Q Q
Pichia salicaria JCM3653 65.5 y Q 丄.わ
Pichia scolyti JCM3654 16.8 Q o
Pichia segobiensis JCM10740 105 Q
Pichia spartinae JCM10741 198 \QQ Q c o
Pichia strasburgensis JCM3660 \QQ Q Q
240
Pichia sydowiorum JCM9455 197 c r Q
ΌΌ,
Pichia tannicola JCM8120 804 ou.4
Pichia wickerhamii IF01278 867 Q
Rhodotorula aurantiaca IF00754 142 Q
Rhodotorula fragaria JCM3930 48.9 \QQ
Rhodotorula glutinis var. dairenensis IF00415 38.2 >gg.8 s
Rhodotorula graminis JCM3775 27.4 >99· 8 s
Rhodotorula hordea JCM3932 154 87.8 s
Rhodotorula hylophila JCM1805 223 95.0 s
Rhodotorula ingeniosa JCM9031 257 〉99.8 s
Rhodotorula javanica JCM9032 149 〉99.8 s
Rhodotorula minuta IF00387 1380 99.5 s
Rhodotorula minuta IF00715 458 〉99.8 s
Rhodotorula minuta IF00920 1040 97.5 s
Rhodotorula minuta JCM3776 77.4 〉99' 8 s
Rhodotorula mucilaginosa IF00870 327 〉99.8 s
71 差替え用紙 (m ) 1 (つづき）
生成物 濃度 光学純度 T
(ms/L) (% e. e. )
Rhodotorula muscorum JCM1697 126 Q
Rhodotorula philyla JCM3933 471 Q
Rhodotorula pustula JCM3934 39.5 NQQ O Q ς
Saccharomyces cerevisiae IFO0305 185 o QA¾. 7 ς
Saccharomyces cerevisiae IF00565 996 so 0 Q
Saccharomyces cerevisiae JCM1818 450 Q
Saccharomycodes ludwigii IF00798 588 74 > ς
Saccharomycopsis f ibuligera IF00105 885 71 5
*J Q
Saccharomycopsis fibuligera IF01744 2300 99.8 ς
Saccharomycopsis malanga IF01710 287 95.0 Q
Saccharomycopsis schoenii IF01579 697 〉99.8 Q
Saccharomycopsis synnaedendra IF01604 253 >99.8 Q
Saitoella complicate IAM12963 61.4 >99.8 ς
Schizoblastosporion chiloense IF010841 348 54.3 ς
Schizosaccharomyces japonicus JCM8263 323 95. 1 Q
Schizosaccharomyces octosporus IF010373 121 99.8 ς
Schizosaccharomyces pombe IF01628 425 96.4 ς
Schizosaccharomycs pombe IF00344 639 A A 99.2 ς
Sirobasidium magnum JCM6876 207 s
Sporidiobolus johnsonii IF06903 738 97· 020 s
Sterigmatomyces halophilus IF01488 506 s
Sterigmatosporidium polymorphum JCM6902 10.8 〉99. s
Torulaspora delbrueckii CBS 1146 561 52. s
Tremella aurantia JCM11327 436 98. s
Tremella encephala JC 11329 97.7 〉99. s
Tremella foliacea JCM11330 427 86. s rrichosporon domesticum JCM9580 414 〉99. s
Trichosporon laibachii JCM9934 511 99. s
Trichosporon raontevideense JCM9937 562
Figure imgf000074_0001
s
72 差替え用紙（MJ26》 (つづき）
菌株 Φι#物 生成物 濃度 光学純度 „_ /τ λ
(% e. e. )
Trichosporon mucoides JCM9939 178 〉99.8 ς
Trichosporon sp. IF0116 208 83.9 c o
Trichosporonoides megachiliensis CBS567.85 1090 92.9 Q
O
Trichosporonoides oedocephalis CBS568.85 1060 89.6 C o
Trigonopsis variabilis CBS1040 37.8 70.2 c o
Trigonopsis variabilis CBS4069 120 88.4 c
Trigonopsis variabillis IF00671 6.75 〉99.8 Q
Waltomyces lipofer ： [F01288 188 71.4 C
Wickerhamiella domercqiae IF01857 9.59 >99.8 c
Williopsis californica JCM3600 91.6 >99.8 c
Williopsis californica JCM3605 70.9
Figure imgf000075_0001
Williopsis mucosa JCM6809 100 97.5 c o
Williopsis saturnus var. mrakii JCM3614 329 96.1 Q o
Williopsis saturnus var. sargentensis IF01826 319 99.1 c
Williopsis saturnus var. saturnus IF010697 326 97.9 Q o
Williopsis saturnus var. saturnus JCM1826 339 98* 0 Q o
Williopsis saturnus var. saturnus JCM3594 150 97.6 Q
Williopsis saturnus var. saturnus JCM3595 131 A 96.2 Q
Williopsis saturnus var. saturnus JCM3596 68.0 67.0 s
Williopsis saturnus var. saturnus JCM3623 182 98, 6O C s
Williopsis saturnus var. saturnus JCM3624 206 98.4 s
Williopsis saturnus var. saturnus JCM9398 644 98.1 s
Williopsis saturnus var. suaveolens IF010698 153 97.7 s
Williopsis saturnus var. subsufficiens JCM3625 489 91.1 s
Williopsis saturnus var. subsufficiens JCM3626 363 91.4 s
Yamadazyma farinosa IF00193 25.3 24· 6 s
Yamadazyma farinosa IF010061 82.1 60.0 s
Yaraadazyma haplophila IF00947 573 94.8 s
Yarrowia lipolytica ATCC8661 52.8 s
73 差替え用紘麵 1126》 (つづき)一
菌株 生成物 生成物
濃度 光学純度 (mg/L) (% e. e. )
Yarrowia lipolytics IF01209 87.5 〉99.8 S Yarrowia lipolytics IF01548 41.2 94.9 S 実施例 4 (3 S) 一 3—ヒ ドロキシ一N_メチル _ 3— (2—チェニル） プ 口ピオンアミ ドの合成
1 Lのフラスコに実施例 3の手法で得られた （3 S) — 3—ヒ ドロキシ一 3— ( 2一チェニル）プロピオン酸ェチルエステル 50 g (純度 95 %)および 40 % メチルァミン一メタノール溶液 3 1 2. 5 m 1を仕込み、 室温にて 3. 5時間反 応した。 次に減圧下で濃縮し、 45. 96 gの粗 （3 S) — 3—ヒドロキシ一 N 一メチル一 3— (2—チェニル） プロピオンアミ ドの結晶を得た （収率 9 3%、 純度 89 %)。粗結晶のうち 9. 1 6 gをトルェン Zメタノール混合溶媒にて再結 晶を行い、 6. 69 gの精製 （3 S) — 3—ヒ ドロキシ一 N—メチル一 3— （2 一チェニル） プロピオンァミ ドを得た （純度 99 %)o
この化学純度は、 以下の条件による高速液体クロマトグラフィーにより決定し た。
MC I— G e l ODS 1 5 c m (三菱化学社製） 40 °C
ァセトニトリル： 5 OmM酢酸アンモニゥム水溶液 = 50 ： 50 (0. 4m 1 / m i n )
検出波長 UV 230 nm
また、 光学純度は、 以下の条件による高速液体クロマトグラフィーにより決定 し、 99. 9 % e eであった。
Ch i r a l じ0—？11 (資生堂社製） 30 °C
ァセトニトリル： 0. 1M N a C 104水溶液 = 20 : 80 (0. 3m 1 /m i n)
検出波長 UV 230 nm
74 差替え用紙 また、 上記実施例 3において、 標品として得られたラセミ体の 3—ヒ ドロキシ —3— (2—チェニル） プロピオン酸ェチルエステルをアミ ド化して得られるラ セミ体の 3—ヒ ドロキシー N—メチルー 3— （2—チェェノレ） プロピオンアミ ド を標準として上記条件で分析し、 得られた 2つのピーク （図 4の保持時間 28分 および 32分のピーク） の旋光性を分析することにより、 （R) —体 （図 4の保持 時間 3 2分） および （S) —体の 3—ヒ ドロキシー N—メチル一 3— (2—チェ ニル） プロピオンァミ ド （図 4の保持時間 28分） のピークを同定した。 本実施 例 4で得られた結晶を分析したところ、 （3 S) _ 3—ヒ ドロキシ一 N—メチルー
3— （2—チェニル） プロピオンアミ ドと同じ検出時間にピークが生じているこ とが確認された。
また、 本実施例 4により得られた結晶は、 NMRより 3—ヒ ドロキシ一 N—メ チルー 3— （2—チェニル） プロピオンアミ ドであると解析した （図 6)。
Ή— NMR (CDC 13) δ 2. 67 ( d、 2 H、 J = 6Hz)、 2. 82、 2. 83 (s、 3H、 メチルアミ ド基由来の回転異性体）、 4. 40 (b r、 1 H)、 5. 36 (t、 1H、 J = 6Hz)、 5. 7 5 - 5. 90 (b r、 1 H)、 6. 9 2— 6. 98 (m、 1 H)、 7. 22 - 7. 26 (m、 2 PI) 実施例 5 ( 3 S) _ 3—ヒ ドロキシー N—メチルー 3— ( 2—チェニル) プ ロピオンアミ ドの合成
1 Om 1のフラスコにトリエチノレアミン 1. 10 g (1 0. 9 mm o 1 ) およ び乾燥 DMF O. 2 m 1を仕込み、 次いで氷冷下にギ酸 0. 5 0 g (10. 9m m o 1 )および R uC l (p- c yme n e) (S S-T s DPEN) 7mg (0. 01 mmo 1 ) を加え、 最後に製造例 5で得られた N—メチルー 3—ォキソ一 3 - ( 2—チェニル） プロピオンァミ ド 0. 20 g (l. 09 mm o 1 ) を加え て、 40°Cにて 10時間攪拌した。 反応後、 5 °/0塩酸を加えて p H 1として酢酸 ェチルで抽出し、 飽和食塩水で洗浄後、 溶媒を減圧濃縮し、 シリカゲルカラムク 口マトグラフィ一にて精製して 0. 1 6 gの （3 S) _ 3—ヒ ドロキシー N—メ チルー 3— （2—チェニル） プロピオンアミ ドを得た （収率 8 0%)。 また、 光学純度は、 上記実施例 4と同様の方法により決定し、 97. 0 % e e であった。 実施例 6 (3 S) 一 3—ヒドロキシ一 N—メチルー 3— （2—チェニル） プ 口ピオンアミ ドの合成
クロマト精製を行わない以外は実施例 1に準じて得られた粗 （3 S) — 3—ヒ ドロキシ _ 3— (2—チェ二ノレ） プロピオン酸ェチノレエステノレ 24. 2 g (純 度 97. 7重量0 /0、 97. 5 % e e ) をメタノール 48 m 1に溶解し、 これに室 温下、 40%メチルァミン一メタノール溶液 27. 5 gを加え、 室温にて一晚攪 拌した。 次に減圧下に内容物を 5 7 gにまで濃縮後、 トルエン 22 Om 1を加え て減圧下、 内温 70°Cにて内容物を 1 9 7 gにまで濃縮した。 次にこの溶液を 2 5°Cまで徐冷晶析させ、 結晶を濾過し、 トルエン 3 Om 1で洗浄した後、 減圧乾 燥させて、 1 9. 5 gの (3 S) 一 3—ヒ ドロキシ一 N—メチル一 3— (2—チ ェニル） プロピオンアミ ドを得た （収率 88%)。
また、 光学純度は、 実施例 4と同様の方法により決定し、 1 00%e eであつ た。 実施例 7 (アルミニウム系還元剤を用いたアミ ドの還元）
500m lのフラスコに実施例 6で得られた （3 S) — 3—ヒ ドロキシ一 N— メチルー 3— (2—チェニル） プロピオンアミド 1 3 g ( 1 00 % e e ) およ びトルエン 6 5 m 1を仕込み、 内温 45〜60°Cにて、 49%に調製した R e d _A 1 トルエン溶液 60. 8 gを滴下した。 さらに内温 50~ 55°Cにて 4時間 攪拌し、 同温にて飽和食塩水 63m 1を滴下後、 不溶物をセライ 1、 (商品名） 濾 過し、 濾液を分液して有機相を 6 2. 5 gまで減圧濃縮した。 次に析出無機塩を 濾去し、 濾液を 36 gまで減圧濃縮したものを 20°Cに冷却し晶析させ、 さらに n—ヘプタン 7 Om 1を加えて 5°Cにて 0. 5時間熟成後、 濾過、 n—ヘプタン およぴジイソプロピルエーテルで洗浄し、 減圧乾燥して、 8. 4 gの （3 S) - 3—メチルァミノー 1一（2一チェニル）一 1一プロパノールを得た (収率 70 %)c この化学純度は、以下の条件による高速液体ク口マトグラフィ一により決定し、
1 0 0%であった。
L_カラム （杉山商事） 40°C
ァセトニトリル： 5 OmM酢酸アンモニゥム水溶液 = 3 0 ： 70 (0. 6m 1 /m 1 n )
検出波長 UV 2 3 0 nm
また、 光学純度は、 以下の条件による高速液体クロマトグラフィーにより決定 し、 1 00 % e eであった。
C h i r a 1 CD— P h (資生堂社製） 3 5 °C
ァセトニ ト リノレ ： 0. 1M N a C l 04水溶液 = 40 : 6 0 (0. 5m l /m i n)
検出波長 UV 2 3 0 nm
XH-NMR (CD C 1 a, 40 OMH z ) S i . 9 3 (m， 2H), 2. 44 ( s , 3 H), 2. 8 0 (m, 2 H), 5. 1 5 ( t d， 1 H、 J = 3 H z , 8 H z), 6. 9 5 (m, 2H), 7. 2 1 (d, 1 H、 J = 6. 2 H z ) 実施例 8 (アルミニウム系還元剤を用いたアミ ドの還元）
2 0 Om 1のナス型フラスコに室温で （3 S) — 3—ヒ ドロキシ一 N—メチル 一 3— （2—チェニル） プロピオンアミ ド （光学純度〉 9 9. 5 % e e ) 5. 0 0 gおよびトルェン 2 6 m 1を仕込んだ。 7 5 w t %ナトリゥムビス ( 2—メ ト キシェトキシ) アルミニウムハイ ドライ ドのトルエン溶液 1 8 · 3 gをトルエン で希釈して 5 0 w t %としたものを、 反応液に 5 0°Cで 1 0分かけて滴下し、 2 時間攪拌した。 反応液を室温まで冷却したのち、 1 1 %水酸化ナトリゥム水溶液 3 Om lを添加し、 有機層と水層を分離した。 水層を 1 Om 1のトルエンで 2度 抽出した後、 有機層を一つにまとめ、 そこに L一 （ + ) —酒石酸 4 04m gおよ ぴ飽和食塩水 1 Om 1を添加し、 2 0分間攪拌した。 混合液を分液後、 有機層を 濃縮し、 褐色の油状物質 4. 2 7 gを得た。 この油状物質に含まれるアルミニゥ ムの量を I C P—AE S定量方により測定したところ、 5 p 以下であった。 トルエン 3 Om 1にこの油状物質を溶解させ、 活性炭 0. 3 gを加えて 30分間 攪拌、 その後活性炭を濾別した。 溶液を濃縮後、 トルエン 7m 1を加え室温で攪 拌し、生じた淡黄色結晶を濾過、 トルエン 4m 1で洗浄、減圧下で乾燥し、 （1 S) —3—メチルアミノー 1— (2—チェニル） 一 1一プロパノール 1. 88 g (収 率 41%) を得た。
この化学純度及び光学純度は実施例 6と同様にして決定し、 それぞれ、 化学純 度 100 %、 光学純度 > 99. 5 % e eであった。
さらに、 この結晶に含まれるアルミニウムの量を測定したところ、 5 p pm以 下であった。 精製例 1
アルミニウム含有量が 230 p p mである （1 S) — 3—メチルァミノ一 1— (2—チェニル） _ 1一プロパノール （光学純度〉 99. 5 % e e ) の淡黄色結 晶 10 Omgを水 3 m 1に溶解させ、 そこにし— （+ ) —酒石酸 1 8 mgを加え 室温で攒拌した。 反応液に 25 %水酸化ナトリゥム水溶液数滴および塩化ナトリ ゥムを加え、 トルエン 1 Om 1で 2度抽出した。 有機層を濃縮し、 97mgの淡 黄色結晶 （光学純度 > 99. 5 % e e ) を回収した。 この結晶に含まれるアルミ 二ゥムの量を実施例 8と同様に測定したところ、 5 p pm以下であった。 精製例 2
アルミニウム含有量が 230 p pmである （1 S) — 3—メチルァミノ一 1— (2—チェニル） 一 1一プロパノール （光学純度 > 9 9. 5 % e e ) の淡黄色結 晶 10 Omgを水 3 m lに溶解させ、 そこにエチレンジァミン四酢酸二水素ニナ トリゥムニ水和物 22 m gを加え室温で攪拌した。 反応液に 25 %水酸化ナトリ ゥム水溶液数滴おょぴ塩化ナトリゥムを加え、トルエン 1 Om 1で 2度抽出した。 有機層を濃縮し、 98 m gの淡黄色結晶 （光学純度 > 9 9. 5 % e e ) を回収し た。 この結晶に含まれるアルミニウムの量を実施例 8と同様に測定したところ、 5 p p m以下であった。 実施例 9 (ホウ素系還元剤を用いたアミ ドの還元）
冷却管を付けたナスフラスコに、 （3 S)— 3—ヒドロキシ一N—メチルー 3— (2—チェ-ル） プロピオンアミ ド （光学純度 > 9 9. 5%e e、 1. 50 g , 8. 1 mm o 1 )、 9 7%水素化ホウ素ナトリウム （0. 73 5 g, 1 9. 4m mo 1 )、 テトラヒドロフラン （9. 9m l ) を仕込み、 室温にてヨウ素 （2. 0 6 g , 8. lmmo 1 ) のテトラヒ ドロフラン （5. 1m l ) 溶液を 20分か けてゆつく りと滴下し、 滴下終了後、 加熱環流を 4時間行った。 反応終了後、 反 応液を氷冷し、 2—ブタノン （ 7. 5m l ), 1 N水酸化ナトリゥム水溶液 （ 30 m 1 ) を加え、 内温 64°Cで、 20分加熱後に実施例 Ίと同様の条件で液体ク口 マトグラフィ一にて分析を行った結果、原料の転化率は 9 9%、 目的物である（1 S) 一 3—メチノレアミノ _ 1一 （2—チェニル） 一 1一プロパノールの収率は 9 1 % (光学純度 > 9 9. 5 % e e ) であった。 実施例 1 0 (ホウ素系還元剤を用いたアミドの還元）
2 Lコルベンに 1. 03Mの BH3テトラヒ ドロフラン溶液を 3 1 6. 2 m L (基質の 2倍モル量） を添加し氷冷した。 次に （3 S) — 3—ヒドロキシー N— メチル一 3— ( 2—チェニル） プロピオンァミ ド 3 1. 44 g (純度 9 5. 9 %、 > 99. 9%e e) をテトラヒドロフラン 235. 8 m Lに溶解させ、 内温が 2 〜5°Cとなるようゆっくり滴下した。 次に、 昇温して加熱還流を 3時間行った。 反応は実施例 7と同様の条件で液体ク口マトグラフィ一で追跡し、 反応終了後、 氷冷をして、 水 628. 8111しを内温15 °C以下となるようゆつくり滴下した。 この時の反応液の p Hは 9であった。 さらに続けて、 酢酸 9. 8 l gを氷冷下添 加した。 添加終了後の pHは 5であった。
1 5分ほど攪拌してから、 副生成物を除去するために: Hを 25%Na OH 水で 8付近に調整した後に、 トルエン 55 lmLで溶媒置換してから水層をトル ェン 551 mLで 2回抽出をした。
尚、 この時の pHは高すぎると副生成物と一緒に目的物まで多量に抽出されて くるので、 通常、 p H6. 5〜9、 好ましくは pH7〜8. 5の範囲に調整して から抽出を行うのがよい。
さらに抽出後の水層に 28%アンモニア水を加えて pH 1 1程度に調整してか ら酢酸ヱチルを用いて目的生成物を抽出し、 乾燥、 濃縮して （1 S) — 3—メチ ルァミノ一 1一 （2—チェニル） 一 1一プロパノーノレ （〉 99. 9 % e e ) を 1 7. 4 g得た。
このように副生物を除去した後は、 目的生成物を効率よく抽出するために液の pHを高くした方が良く、 通常、 p HI 1程度以上で行うのがよい。
— NMR (CDC 13， 40 OMH ζ) δ 1. 9 3 (m, 2 H)， 2. 44 ( s， 3 H), 2. 80 (m, 2H)， 5. 1 5 ( t d, 1 H、 J = 3 H z , 8Hz), 6.' 9 5 (m, 2 H), 7. 2 1 (d， 1 H、 J = 6. 2 H z ) 参考例 2
(1 S) _ 3—メチルアミノー 1— (2—チェ二ル）一 1一プロパノール（9 7 % e e) 0. 05 gを 20°Cで 35%塩酸を加えたテトラヒ ドロフラン lm 1に溶 解させ（系内の pH =約 1)、 30分攪拌すると、光学純度が 75 % e eであった。 参考例 3
( 1 S) 一 3—メチルァミノ一 1— (2—チェ-ル） 一 1一プロパノール （9 7 % e e ) 0. 05 gを 20 °Cで酢酸を加えたテトラヒドロフラン 1m lに溶解 させ（系内の1>«[=約3)、48時間攪拌すると、光学純度が 95%e eであった。 参考例 4
( 1 S) 一 3—メチルァミノ _ 1一 （2—チェニル） 一 1一プロパノール （9 6. 6 % e e ) 0. 05 gを 20 °Cで p H = 4. 0の緩衝液を加えたテトラヒド 口フラン 1 m 1に溶解させ、 48時間攪拌すると、 光学純度が 96. 6 % e eで あつ 7こ。 本発明を詳細にまた特定の実施態様を参照して説明したが、 本発明の精神と範 囲を逸脱することなく様々な変更や修正を加えることができることは当業者にと つて明らかである。
本出願は、
2002年 3月 1 9日出願の日本特許出願 （特願 2002— 0761 6 8)、 2002年 4月 30日出願の日本特許出願 （特願 2002— 1 2 9140)、 2002年 5月 1 6日出願の日本特許出願 （特願 2002— 141 145)、 2002年 8月 5日出願の日本特許出願 （特願 2002— 22 740 1)、 2002年 8月 5日出願の日本特許出願 （特願 2002— 22 7402)、 2002年 8月 6日出願の日本特許出願 （特願 2002— 22849 5)、 2002年 9月 1 3日出願の日本特許出願 （特願 2002— 26 76 1 7)、 2002年 10月 3 1日出願の日本特許出願 （特願 2002— 3 1 7857)、 に基づくものであり、 その内容はここに参照として取り込まれる。 ぐ産業上の利用可能性 >
本発明方法により、 医薬等の合成中間体として有用なチォフ ン環含有光学活 性アルコールを、 高収率、 高光学収率で得ることができる。

Claims

請 求 の 範 囲
1. 下記一般式 （ 1 )
Figure imgf000084_0001
(式中、 ！^及び 1' は、 それぞれ独立して、 水素原子、 アルキル基、 ァリール 基又はァラルキル基を示し、 R3及び R4は、 それぞれ独立して、 水素原子または アルキル基を示し （ここで、 R3と R4が一体となって炭素環を形成していても良 レヽ）、 R5は、 ハロゲン原子、 ニトロ基、 ヒ ドロキシノレ基、 置換されていてもょレヽ アルキル基、 置換されていてもよいァリール基または置換されていてもよいアル コキシ基を示し、 nは 0〜 3の整数を示す。）で表される 3—ヒ ドロキシー 3_(2 —チェエル） プロピオンアミ ド。
2. 下記一般式 （1 ')
Figure imgf000084_0002
(式中、 R 1'、 R3、 R R5及ぴ nは、 前記と同義である。） で表される i3 ケトカルボニル化合物を、 周期律表第 8族又は第 9族金属化合物及び下記一般式 (2)
Figure imgf000084_0003
(式中、 R6及ぴ R7は、 それぞれ独立して、 水素原子、 アルキル基、 ァシル基、 力ルバモイル基、 チオアシル基、 チォカルバモイル基、 アルキルスルホ二ル基又 はァリールスルホニル基を示し、 1 8及び1 9は、 それぞれ独立して、 置換基を有 していても良いアルキル基、 置換基を有していてもよいァリール基又は置換基を 有していてもよい芳香族複素環基を示す。 ここで、 R8と R9は互いに結合し環を 形成しても良い。 また、 *は不斉炭素を示す。） で表される不斉配位子より構成さ れる触媒の存在下、 不斉還元することを特徴とする請求の範囲第 1項に記載の化 合物の製造方法。
3. 下記一般式 （3)
Figure imgf000085_0001
(式中、 R2は、 アルキル基、 ァリール基又はァラルキル基を示し、 R3、 R\ R 5及び nは、 前記と同義である。） で表される ケトカルポニル化合物を、 周期律 表第 8族又は第 9族金属化合物及び下記一般式 （2)
Figure imgf000085_0002
(式中、 R6及び R7は、 それぞれ独立して、 水素原子、 アルキル基、 ァシル基、 力ルバモイル基、 チオアシル基、 チォカルバモイル基、 アルキルスルホ二ル基又 はァリールスルホニル基を示し、 1 8及び1 9は、 それぞれ独立して、 置換基を有 していても良いアルキル基、 置換基を有していてもよいァリール基又は置換基を 有していてもよい芳香族複素環基を示す。 ここで、 R8と R9は互いに結合し環を 形成しても良い。 また、 *は不斉炭素を示す。） で表される不斉配位子より構成さ れる触媒の存在下、 もしくは、 カルボ二ル基を立体選択的に還元する能力を有す る微生物の菌体、 該菌体処理物及び/又は培養液を用いて、 不斉還元した後に、
RiR1' NH (R1及び R1' は前記と同義である。） で表されるァミン類と反応 させ、 アミド化することを特徴とする請求の範囲第 1項に記載の化合物の製造方 法。
4. 不斉配位子が、 下記一般式 （2')
Figure imgf000086_0001
(式中、 R7' は、 水素原子又は炭素数 1〜4のアルキル基を示し、 R10は、 置 換基を有していても良いアルキル基又は置換基を有していても良いァリール基を 示し、 R8及び R9は、 前記と同義である。 *は不斉炭素を示す。） で表される化 合物であることを特徴とする請求の範囲第 2項又は第 3項に記載の製造方法。
5. 周期律表第 8族又は第 9族金属化合物がルテニウム化合物であること を特徴とする請求の範囲第 2項又は第 3項に記載の製造方法。
6. 不斉触媒が下記一般式 （4) ）
Figure imgf000086_0002
(式中、 R6、 R7、 R8及び R9は、 前記と同義であり、 Yは水素原子又はハロゲ ン原子を示し、 A rは置換基を有していても良いァリール基を示す。 また、 *は 不斉炭素を示す。）で表される化合物であることを特徴とする請求の範囲第 2項又 は第 3項に記載の製造方法。
7 . 周期律表第 8族又は第 9族金属化合物及び不斉配位子より構成される 触媒の存在下、 不斉還元するに当たり、 水素供与体の共存下で行うことを特徴と する請求の範囲第 2項又は第 3項に記載の製造方法。
8 . カルボ二ル基を立体選択的に還元する能力を有する微生物が、 アンプ 口ジォザィマ (Ambroziozyma)属、 アルス口バクター（Artkrobacter)属、 ブレッタ ノマイセス（Brettanomyces)属、ブレビノ クテリゥム (Brevibacterium)属、プレラ
(Bullera) 属、 キャンディダ（Candida)属、 シテロマイセス（Citeromyces)属、 コ リネバクテリゥム（Coirnebacterium)属、 クリプトコッカス（Cryptococcus)属、シ ス ト フ イ ロバシディ ウム （Cystofilobasidium ) 属、 デバリ オマイセス
(Debaryomyces) 属、 テツケラ (Dekkera)属、 エンドマイセス (Endomyces) ！、 ェ クソフィアラ （Exophiala) 属、 フエロマイセス （Fellotnyces) 属、 フイロバシデ ィゥム（Filobasidium)属、 ノヽンセ； ^ァスポラ (Hanseniaspora) 属、 ホノレタマ：=：ァ
(Holtermannia)属、ィサチェンキア (Issatchenkia)属、 クロエケラ (Kloeckera) 属、 ク！；ベロマイセス (Kluyveromyces)属、 コダマエア (Kodamaea) 属、 コマガタ エラ (Komagataella) 属、 ロイコスポリディウム (Leucosporidium) 属、 リポマ イセス（Lipomyces)属、 ロデロマイセス （Lodderomyces ) 属、 メッニコウイァ (Metschnikowia)属、 才ガタエア（Ogataea)属、 ノヽ。ェニノ チノレス（Paenibacil lus) 属、 ピキア（Pichia)属、 ロ ド トルラ （Rhodotorula)属、 サッカロマイセス (Saccharo町 ces)属、 サッカロマづ コプシス (Saccharomycopsis) 禹、 サイ 卜エラ (Saitoella)属、シゾサッカロマイセス（Shizosaccharomyces)属、シロ ノくシディゥ ム (Sirobasidium) 属、 スポリディオボラス (Sporidiobolus)属、 ステジグマ卜マ イ セ ス （ Sterigmatotnyces ) 属 、 ス テ リ グ マ ト ス ポ リ デ ィ ウ ム
(Sterigmatosporidium) j¾ トノレラスポフ (Torulaspora) トレメ (Treme丄丄 aリ 属 、 ト リ コ ス ポ ロ ン （Trichosporon) 属、 ト リ コ ス ポ ロ ノ イ デス
(Trichosporonoides ) 厲、 ト リ ゴノプシス (Trigonopsi s) ¾、 ヮノレ卜マイセス (Waltomyces)属、 ウイケラミエラ （Wickerhamiel la ) 属、 ウイ リオプシス属
(Will iopsis)、 ヤマダジマ (Yamadazyma) 属及びャロウイァ（Yari ia)属カ らな る群より選ばれる微生物であることと特徴とする請求の範囲第 3項に記載の製造 方法。
9 . 力ルポ二ル基を立体選択的に還元する能力を有する微生物が、 ァルス ロバクタ一（Arthrobacter)属、 キャンディダ（Candida)属、 タリプトコッカス (Cryptococcus)属、 クロエケラ (Kloeckela) 属、 コダマエア (Kodamaea) 属、 口 ィコスポリディウム (Leucosporidiura) 属、 メッニコゥィァ (Metschnikowia)属、 パェニバチルス（Paenibacillus)属、 ピキア（Pichia)属及ぴサッカロマイセス (Saccharomyces)属からなる群より選ばれる微生物であることと特徴とする請求 の範囲第 8項に記載の製造方法。
1 0 . カルボ二ル基を立体選択的に還元する能力を有する微生物が、 アン ブロジォザイマ（Arabroziozyma)属、ブレッタノマイセス (Brett動 myces)属、プレ ビバクテリゥム（Brevibacterium)属、プレラ（Bullera)属、キヤンディダ（Candida) 属、シテロマイセス (Citeromyces)属、コ Uネバクテリウム (Corynebacteriutn)属、 ク リ プ ト コ ッ カ ス （Cryptococcus) 属、 シス ト フ ィ ロ ノくシディ ウ ム
(Cystof ilobasidium 、 テノ リオマイセス (Debaryorayces ) 、 アツケラ (Dekkera)属、 エンドマイセス（Endomyces)属、 ェクソフィアラ (Exophiala) 属、 フエロマイセス (Fel lorayces) 属、 フィロノ シディゥム (Fi lobasidium)属、 ノヽン セ-ァスポラ (Hanseniaspora) 属、 ホノレタマニァ (Holtermannia) 属、 ィサチェ ンキア（Issatchenkia)属、 ク レッケラ (Kloeckera ) 属、 ク リべロマイセス (Kluyveromyces)属、 コマ刀タエラ (Komagatael laリ属、 リホマイセス (Lipomyces) 属、 ロデロマイセス (Lodderomyces) 属、 メッニコウイァ (Metschnikowia)属、 ォ ガタエア (Ogataea)属、 ロ ド 卜ノレラ (Rhodotorula)属、 サッカ ロマイセス (Saccharomyces)厲、 サッカロマイコプシス (Saccharomycopsis)属、 サイ トエラ (Saitoella)属、シゾサッカロマイセス（Shizosaccharomyces)属、シロバシディゥ ム (Sirobasidium) 属、 スポリディオボラス (Sporidiobolus)属、 ステリグマ卜マ イ セ ス （ Sterigmatomyces ) 属 、 ス テ リ グ マ ト ス ポ リ デ ィ ウ ム (Sterigmatosporidiutn)属、卜ノレラスポラ (Torulaspora)属、 卜レメラ (Tremella) 属 、 ト リ コ ス ポ ロ ン （Trichosporon) 属 、 ト リ コ ス ポ ロ ノ イ デ ス
、 I'ricnosporonoidesリ 晨、 卜 リゴノプシス (Trigonopsis) fe、 ヮノレ卜マイセス (Waltomyces)属、 ウイケラミエラ ( ickerhamiella) 属、 ウイ リオプシス属
(Williopsis)、 ヤマダジマ (Yaraadazyraa) 属及びャロウィァ（Yar ia)属カ な る群より選ばれる微生物であることと特徴とする請求の範囲第 8項に記載の製造 方法。
1 1 . 下記一般式 （3 ' )
Figure imgf000089_0001
(式中、 R 2 R3 R\ R 5及び nは前記と同義である。 また、 *は不斉炭素を示 す。）で表される光学活性な 3—ヒドロキシー 3— （2—チェニル） プロピオン酸 エステル化合物。
1 2 . 下記一般式 （ 3 )
Figure imgf000089_0002
(式中、 R 2 R 3 R R 5及び nは、 前記と同義である。） で表される ]3ケトカ ルポ-ル化合物を、 周期律表第 8族又は第 9族金属化合物及び下記一般式 （2 )
Figure imgf000089_0003
(式中、 R6、 R R8及び R9は、 前記と同義である。 また、 *は不斉炭素を示 す。） で示される不斉配位子より構成される触媒の存在下、 もしくは、 カルボニル 基を立体選択的に還元する能力を有する微生物の菌体、 該菌体処理物及び/又は 培養液を用いて、 不斉還元することを特徴とする請求の範囲第 1 1項に記載の化 合物の製造方法。
1 3. 請求の範囲第 1項に記載の化合物のカルボ二ル基を還元し、 光学活 性 3—ァミノ一 1一 （2—チェニル） — 1 _プロパノール類を製造する方法であ つて、 還元反応終了後の処理を p H4以上で行うことを特徴とする光学活性 3— アミノー 1一 （2—チェニル） 一 1一プロパノール類の製造方法。
1 4. 請求の範囲第 1 3項に記載の製造方法において、 カルボニル基の還 元反応をアルミニウム系還元剤で行い、 得られる光学活性 3—アミノー 1一 （2 一チェニル） 一 1一プロパノール類含有液を水溶性キレート剤と接触させる工程 を有することを特徴とする光学活性 3—アミノー 1— (2—チェニル） _ 1ープ 口パノール類の製造方法。
1 5. 水溶性キレート剤が、 ヒ ドロキシカルボン酸類又はアミノポリカル ボン酸類であることを特徴とする請求の範囲第 1 4項に記載の製造方法。
1 6. 不純物アルミニウム含有量が、 0. 0 0 1 p pm〜5 0 0 p pmの 範囲内であることを特徴とする 3—ァミノ _ 1— (2—チェニル) — 1一プロパ ノール類。
1 7. 請求の範囲第 1 3項に記載の製造方法において、 カルボニル基の還 元反応をボラン系還元剤で行い、 該還元反応で生成する含ホウ素化合物を、 ケト ン類の存在下、 加水分解する工程を有することを特徴とする光学活性 3—ァミノ — 1— (2—チェ-ル） 一 1一プロパノール類の製造方法。
1 8 . ケトン類が、 沸点が 1 2 0以下のものであることを特徴とする請求 の範囲第 1 7項に記載の製造方法。
1 9 . 請求の範囲第 1 3項〜第 1 8項に記載の方法で得られる光学活性 3 —アミノー 1一 （2—チェニル） _ 1—プロパノール類をさらに水酸基の保護反 応に供することを特徴とする光学活性 3—ァミノ _ 1一 （2—チェニル） 一 1一 プロパノール誘導体の製造方法。
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