JPH04501360A

JPH04501360A - 光学活性グリシド酸エステルの製法

Info

Publication number: JPH04501360A
Application number: JP1511470A
Authority: JP
Inventors: ドッドス，デイヴィッド，アール; ロペツ，ジョージ，エル．; ゼップ，チャールズ，エム．; ブランド，スティーヴン; ロッシ，リチャード，エフ．
Original assignee: セプラコア，インコーポレーテッド
Priority date: 1988-10-26
Filing date: 1989-10-26
Publication date: 1992-03-12
Anticipated expiration: 2012-12-24
Also published as: EP0440723B1; ATE161583T1; CA2001515A1; US6521445B1; WO1990004643A1; CA2001515C; JP2693248B2; DE68923883T2; EP0440723A1; DE68923883D1; IL92122A0; EP0657544B1; ATE126541T1; DE68928516D1; AU4497289A; IL92122A; EP0440723A4; EP0657544A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

光学活性グリシド酸エステルの製法本出願は、１９８９年２月ＩＯ日出願の先行の同時係属米国特許出願第０７／３０９．７６９号（この出願は１９８８年１０月２６日出願の“光学活性グリシド酸エステルの製法”と題する先行の同時係属米国特許出願第０７／２６５．１７１号の一部継続出願である）の一部継続出願である。これらの同時係属米国出願の開示全部が本明細書に参考として含まれる。１、序論トランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸のエステルは、ジルチアゼム（ｄｉ　ｌｔｉａｚｅｍ）の化学合成における前駆体としての用途を有する。更に、これらの化合物は、ジルチアゼムに至る全合成経路に於いて、ラセミ体のグリシド酸エステルの分割および正確な光学的に精製された前駆体エステルの使用により所望の立体化学をジルチアゼム前駆体に導入するためのＳ）−および（２３，３Ｒ）−鏡像異性体のエステルのラセミ混合物を分割するための新規な酵素法に関する。本発明はまたこの分割工程をとり込んだジルチアゼム製造方法およびこのジルチアゼム中間体の酵素的分割の効率を改良するための膜リアクタ一手段にも関する。また、水性反応相中に供給された薬剤との付加物形成による、反応過程の阻害性アルデヒド副生物の作用の改善も本発明の一局面である。更に、光学活性グリシド酸エステル中間体の選択された有機溶液が開発され、これらの溶液は溶液からの中間体の直接単離または更に化学的に変換するための新規な試薬を導入するための溶液の使用を伴なう後続工程において特に有用である。２、発明の背景２．１．ジルチアゼムおよびその類似体ジルチアゼム（その化学構造を図１に示す）は、光学活性医薬化合物である。更に詳しくは、ジルチアゼム（その化学名は（＋）−５−（２−（ジメチルアミノ）エチル〕−シスー２．３−ジヒドロ− ３−ヒドロキシ−２−（ｐ−メトキシフェニル）−１，５−ベンゾチアザビン− ４（５）−オンアセテート（エステル）である）は、二つのキラル炭素原子がＳ絶対立体配置を有する置換ベンゾチアザペンからなる（Ｈ，Ｉｎｏｕｅら、米国特許第３　、５６２．２５７号）。ジルチアゼムは、冠状動脈痙彎によるアンギナおよび労作性アンギナの治療に有用であることが判明している。ジルチアゼムにより得られる有益な治療効果は、心筋および平滑筋の両方における細胞膜の脱分極中のカルシウムイオン流入抑制に由来すると考えられる。ジルチアゼムは、自然発生性およびエルゴノビン誘発性の両方の冠状動脈痙彎を抑制し、そして末梢血管抵抗を減少させることが知られている。ジルチアゼムは、タナベおよび米国のＭａｒｉｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　（米国では商品名Ｃａｒｄｉｚｅｍの下に販売）により市販されている。また、ジルチアゼムの類似体が存在することも知られており、例えば、その類似体ではベンゾチアザペン部分は芳香環に一個の塩素置換基を有する。ジルチアゼムは、図２に示される方法と同様の方法により現在製造されている。合成順序の第一工程は、鏡像異性体混合物としてのメチルトランス−３−（４− メトキシフェニル）グリシデートに対する０−ニトロチオフェノールのルイス酸触媒求核攻撃による、４２１　；　Ｈ，Ｉｎｏｕｅら、米国特許第４　、４２０．６２８号）。次に、このトレオ化合物は、光学活性最終生成物（ジルチアゼム）に到達するために、合成経路に於ける後続工程で分割される必要がある。ジルチアゼムに至る代替製造経路は、オキシラン環の開環およびその環への付加を伴なう工程で０−ニトロチオフェノールに代えて０−アミノチオフェノールを利用するものである（Ｓ、　Ｎａｇａｏら、米国特許第４　、４１６．８１９号）。かかる代替法はまたメチルトランス−３−（４−メトキシフェニル）−グリシデートを中間体として利用し、従って本発明の方法による改良を受ける。２．２．ジルチアゼムおよびその前駆体の立体化学上記の薬理効果は、ジルチアゼムの二つの鏡像異性体の一方、即ちα−鏡像異性体のみに存在する（ＭｅｒｃｋＩｎｄｅｘ、第１０版、１９８６、４６６頁；　Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’　ｓ　ＤｅｓｋＲｅｆ　ｅｒｅｎｃｅ、第４１版、１９８７年、１１７３頁）。従って、ジルチアゼムを正確な立体化学で生成させ、そして光学的に精製され立体化学的に正確な中間体または前駆体の生成により、全合成中の効果的な時点でかかる正確な立体化学を導入する必要が存在する。先に論じたように、ジルチアゼムは３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸エステル中間体から製造し得る。現在、この中間体はそのラセミ形で使用される、即ち、それは光学活性ではない。図３に示される３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸エステルは、炭素原子２および３の位置で二つラル中心を有し、そして反射対称の要素をもたない分子は、２”個の立体異性体を有しよう。２個のキラル中心を有する分子中には、従って２２即ち４個の立体異性体が存在しよう。更に、わずかに２個のキラル中心を有する分子の場合、これらの４種の立体異性体は鏡像異性体のジアステレオマ一対として関係しよう、即ち２種のジアステレオマーそれぞれがその鏡像異性体の混合物として存在しよう。３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸エステルの特別な場合には、二つの炭素原子、即ち炭素原子２および３に結合された二個の水素原子が互に重なり、即ちその分子のオキシラン環サブ構造により特定される平面の同じ側にあるジアステレオマーとして定義される。トランス異性体は、炭素原子２および３に結合された水素原子がオキシラン環の平面の反対側にあるジアステレオマーとして定義される。従って、炭素原子２および３の相対配置はそれぞれのジアステレオマー中で固定されるが、それぞれのジアステレオマーは依然対の鏡像異性体として存在しよう。ジアステレオマー化合物は物理的に別々の実体であり、全分子について行なわれる対称操作に関係しないが、それらは物理的に区別でき、適当な慣用の化学方法により別々に生成し得る。所定の３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸エステルの熱力学的に有利なトランスジアステレオマーはダルツェンス（Ｄａｒｚｅｎ）グリシド酸エステル縮合により合成でき、慣用の精製方法によりシスジアステレ対配置Ｓを存する。この鏡像異性体は（２Ｒ，３Ｓ）異性体として記載される。トランスジアステレオマーの他の鏡像異性体は絶対配置（２Ｓ、３Ｒ）を存しよう。シスジアステレオマーの鏡像異性体は、絶対配置（２Ｓ、３Ｓ）および（２Ｒ，３Ｒ）を示す。絶対配置（２Ｒ，３Ｓ）を有する特定のグリシド酸エステル鏡像異性体が、ジルチアゼムの光学的に精製された合成前駆体として所望される化合物である。２．３．グリシデートエステルの分割に関する技術（２Ｒ，３Ｓ）−３−（４− メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルの製造は、二つの基本的に異なる方法により従来性なわれている。第一の操作は、キラル酸化試薬を使用する特定の反応中にアキラル性の前駆体からキラリティの形成を伴ったキラルグリシドれて所望のオキシラン環構造を生じ、正確な立体化学が炭素原子２および３で同時に形成される（Ｋ、　ｒｇａｒａｓｈｉら、米国特許第４．５５２．６９５号）。第二の操作（これは一般に更に古典的であると考えられる）は、化学量論量で使用される光学的に純粋な試薬の使用を必要とし、トランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸のラセミエステルまたは塩の鏡像異性体とのジアステレオマー付加物を生成する（Ｍ、　Ｈａｙａｓｈｉら、特開昭第６１−１４５１６０号（１９８６）　；　Ｍ。Ｈａｙａｓｈｉら、特開昭第６１−１４５１６０号（１９８６））。これらの付加物は物理的に区別でき、分別結晶化のような慣用の操作により分離し得る。次に、こうして分離された付加物を制御条件下で分解して分離された鏡像異性体および回収された分割試薬をもたらす。しかしながら、これらの操作の両方共に欠点を有する。特に、第一の操作は、独特の触媒、即ち、ジアルキルタートレートチタン（ＩＶ）イソプロポキシドの使用を必要とし、この触媒は無水条件および付随する取扱い操作を伴なう（Ｋ、　Ｂ、　５ｈａｒｐｌｅｓｓら、Ｊ、　Ａｍｅｒ。Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、１９８０、艮ム５９７４　；　Ｋ、　Ｂ、５ｈａｒｐｌｅｓｓら、Ｐｕｒｅ　Ａｐｐｌ、　Ｃｈｅｍ、、１９８３．５５．５８９）。更に重要なことに、所望の立体化学を生じる反応は、メチルエステルを直接に生成しない。グリシド酸そのものの生成（アルコールの酸化による）およびエステル化を伴なう二つの更なる反応がキラリティが導入される時点を越えて必要とされ、この酸は不安定な化合物であり特別な取扱いを要する。第二の操作は、化学量論量の前もって分割されたキラル物質またはα−メチルベンジルアミンのような分割剤を必要とする点が問題である（Ｓ。Ｎａｇａｏら、米国特許第４．４１６．８１９号）。かかる分割剤が出費となるゆえ、分割工程後にこれらの物質を定量的に回収するという必要がまた存在する。加えて、大規模な結晶化法はエネルギーおよび溶媒を必要とするため、それらが魅力のないものとなっている。２．４．ラセミ混合物の酵素的分解キラル化合物のラセミ混合物を分割する別の方法は、ラセミ化合物を種々の酵素の鏡像異性体選択的作用にかけることを包含する。酵素的分割はエステルを含む多くの光学的に純粋な化合物の実験規模、準備規模、および工業規模の生産に広く使用されているが、グリシデートエステルの製造にはこれまで使用されていない。多くの異なる種類の酵素が準備規模の立体異性体の分割に使用されており、それらにはヒドロラーゼ（特にリパーゼ、プロテアーゼ、およびキモトリプシンの如きエステラーゼ）、リアーゼおよびオキシドレダクターゼ（例えば、アミノ酸オキシダーゼおよびアルコールレダクターゼ）が包含される。一般的に云えば、分割用の酵素は理想的には広い基質特異性を示して広範囲の“自然でない”基質の反応を触媒できるべきであり、そしてそれらは一方の異性体の反応を触媒して他の異性体を排除するために高度の立体選択法を示すべきである。ヒドロラーゼ（例えばリパーゼ、プロテアーゼおよびエステラーゼ）は分割用に一層魅力的な酵素である。何となれば、それらは妥当な価格で市販されており、それらは高価なコファクターを必要とせず、しかもそれらの幾つかは有機溶媒に対してかなりの耐性を示すからである。更に、キラル化学はキラル炭素を有するアルコール、カルボン酸、エステル、アミドおよびアミンをしばしば伴ない、そしてカルボキシルヒドロラーゼがかかる種の反応の立体選択的触媒として好ましい選択である（Ｃａｍｂｏｕ、　Ｂ、およびＡ、　Ｍ、　Ｋ１１ｂａｎｏｖ。Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ　Ｂｉｏｅｎｇ、、１９８４、並、１４４９）　。多（の医薬品およびそれらの中間体が非常に低い水溶解度を示し、それ故酵素媒介光学分割の多数が多相反応条件下で行なわれている。酵素的処理がアミノ酸エステルのラセミ混合物の分割に応用されている。例えば、５ｔａｕｆｆｅｒ　（米国特許第３　、９６３．５７３号）は、Ｎ−アシル− Ｄ、Ｌ−メチオニンエステルを微生物プロテアーゼで処理し、生成物の酸を反応混合物から分離することにより光学的に純粋なＮ−アシル−し−メチオニンを製造した。同様に、Ｂａｕｅｒ　（米国特許第４　、２６２．０９２号）は、Ｎ− アシル−Ｄ、　Ｌ−フェニル−アラニンエステルの、ラセミ混合物シルーＤ−フェニルアラニンエステルを分離し、そしてＮ−アシル基およびエステル基を除去することにより光学的に純粋なり一フェニルアラニンエステルを調製した。Ｍａｔｔａら（Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、、１９７４．３９．２２９１）は、薬剤３−　（３，４−ジヒドロキシフェニル）アラニンまたはドーパの前駆体の分割にキモトリプシンを使用した。酵素はまた、時として二相反応系中において、農薬のような他の化合物の分割に研究されている。特に、ＣａｍｂｏｕおよびＫ１１ｂａｎｏｖ　（Ｂｉｏｔｅｃｈ、　Ｂｉｏｅｎｇ、、１９８４、輩、１４４９）は、（Ｒ，、旦）、−２−（ｐ−クロロ−フェノキシ）プロパン酸（その旦異性体は除草剤である）およびその種々のエステルの混合物の酵素的分割に関し多孔質ビーズ中に固定化されたリパーゼの使用を調べた。それらの研究に使用された酸およびエステルの溶解度が相異するので、固定化された固相酵素、水性緩衝剤、並びに溶媒および反応体を含有する水非混和性有機相を含有する混合物の分散および攪拌−比較的に効率の悪い方法−を必要とした。たとえジルチアゼム前駆体の酵素的分割ではなくとも、光学的に精製された医薬品の製造に適用されるものとして酵素媒介分割の現在の技術の付加的な例が提供され得る。Ｓｉｈ　（米国特許第４　、５８４．２７０号）は、Ｌ−カルニチン調製における枢要中間体である光学的に純粋な（Ｒ）−４−アミノ−３−ヒドロキシ−ブタン酸の製造に関する酵素的手段を開示している。更に、或種の光学的に純粋なり一アミノ酸（特に、フェニルグリシンおよび４−ヒドロキシフェニルグリシンのようなり一アリールグリシン）が、半合成ペニシリンおよびセファロスポリンの製造に於いて側鎖として使用される。５ｃｈｕｔｔら（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、　Ｂｉｏｅｎｇ、、１９８５．２７．４２０）は、光学的に精製されたＤ−アミノ酸を得る目的で、かかる非極性Ｎ−アシル−Ｄ、　Ｌ−アミノ酸エステルのラセミ混合物を二相系中においてズブチリシンの加水分解作用にかけている。更に別の文献では、微生物由来の酵素がナプロキセンおよびイブプロフェンのエステルの分割に利用された。Ｃ，Ｊ、　Ｓｉｈら（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ１１９８６．２７．１７６３）は、イブプロフェンおよびナプロキセンのエステルが微生物由来のリパーゼを使用して立体特異的に分割され得ることを記載している。要するに、光学的に精製されたジルチアゼムおよびその類似体の製造に一層効率的な方法、特にトランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸のエステルを含むラセミジルチアゼム前駆体の改良された光学分割方法が当業界で要求されている。更に、酵素的分割技術が任意の光学的に純粋な医薬品およびそれらの前駆体の製造に使用されているが、この技術はジルチアゼム製造におけるキラル中間体であるグリシデートエステルの分割には未だ開示されておらず、しかも成功裡に適用されていない。本発明は、かかる酵素的分割法を提供するものである。３、発明の要約本発明の分割方法は、所定のグリシド酸エステルの二つの鏡像異性体の一方の加水分解を優先的に触媒してもとのグリシド酸を生成させ、所望の絶対配置を有する鏡像異性体をグリシド酸エステルとして無傷で残す酵素の使用により行なわれる。本発明の詳細な実施態様は加水分解酵素に関するものであり、特に好ましい酵素はメチルメトキシフェニルグリシデートの相当−トの簡単なアルキルエステル（例えば、メチルエステル）を優先的に加水分解して、ジルチアゼムの製造に於いて光学分割された中間体として使用するための光学的に精製された形態の（２Ｒ，３Ｓ）鏡像異性体種の回収を可能にし得るリパーゼおよびプロテアーゼから選ばれる。また、酵素的分割工程を効率良〈実施する方法も本発明に包含され、かつ本明細書に記載され、この方法には生体触媒反応の効率を改良するための多相の抽出膜リアクターの使用、並びに、さもなければ阻害性のやっかいなアルデヒド副生物との付加物を生成させる目的で、水性反応相中における重亜硫酸アニオンの提供も包含される。本発明は、グリシド酸エステルの光学活性ジアステレオマーを含有する有機溶液を得る方法を提供するものであり、この方法は水非混和性有機溶媒中における、鏡像異性体の混合物として存在しうるジアステレオマーを含有する有機溶液の調製を包含する。次に、この溶液を水、および所望せざるグリシジルエステルの鏡像異性体選択的加水分解を触媒する酵素を含有する水性混合物と接触させ、こうして有機溶液に所望の鏡像異性体を富化させる。次に、生成物鏡像異性体は富化溶液から直接結晶化できるしあるいはこの同じ溶液中で後続の反応に使用することもできる。４、

【図面の簡単な説明】

本発明は、下記の発明の詳細な説明および図面を参照することにより更に容易に理解できよう。図１は、ジルチアゼム分子の化学構造を示す。図２は、ジルチアゼムの従来技術製法を示す模式図−３−（４−メトキシフェニル）グリシデートメチルエステルの使用に基づく医薬上活性なジルチアゼム立体異性体の製法を示す模式図であり、前記の前駆体は図示された方法の工程２でラセミｄ、ｌ−トランス混合物から分割される。図４は、３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸エステルの２五−およびトランス−異性体の化学構造を示し、ここでジルチアゼム製造に特に好ましいのは（２Ｒ，３３）−ｈランス立体異性体であり、図中、Ｒはエステル化アルコール部分を表わす。明瞭にする目的で、キラル炭素原子に関して特定の絶対配置を有する特定の立体異性体、およびジルチアゼム製造に一般に好ましい配置が上記の図面に示されている。しかしながら、図２に示された方法のような現行の従来技術のジルチアゼム法は、その方法の最初の工程でラセミ中間体（例えば、ｄ、！！−）ランス− ３−（４−メトキシフェニル）−グリシド酸メチルエステル）が使用されることに注目すべきである。図５は、本発明の酵素的分割工程を示す模式図であり、ここで３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸のエステルのｄ、Ｌ−１ランス鏡像異性体の二成分ラセミ混合物が立体選択的酵素の作用を受け、その結果、所望せざる（２Ｓ、３Ｒ） −鏡像異性体がそのもどの酸の相当する鏡像異性体に優先的に加水分解されて、図６は、本発明の方法による酵素的分割を受け易い置換グリシデートエステルを示す模式図である。図７は、ラセミメチル３−（４−メトキシフェニル）−グリシデートエステル（ＭＭＰＧ）の有機相供給路、（２旦、３旦）−３−（４−メトキシフェニル）グリシデート塩およびその分解生成物を含む水溶性酵素反応生成物の水相取出し口、および未反応の所望の（２Ｒ，３Ｓ）−３−（４−メトキシフェニル）グリシデートメチルエステルの有機相取出し口を備えた中空繊維多相／抽出酵素膜リアクターを示す模式図である。図８は、本発明の好ましい実施態様を示す模式図であり、ここで酵素は非対称、疎水性、微孔質の中空繊維膜中に可逆的に含有される。図９は、グリシド酸前駆体からのアルデヒド副生成物の形成に関与する化学、並びにアルデヒドの二つの後続反応、即ち重亜硫酸アニオンとの付加物形成および酸化の化学を要約する図である。図１０は、膜の一面で水非混和性有機溶媒中のメチル３−（４−メトキシ−フェニル）グリシデートエステル（ＭＭＰＧ）のラセミ供給混合物が供給され、膜の反対面に重亜硫酸アニオン含有水溶液が供給される中空繊維多相／抽出酵素膜を示す模式図である。水溶性反応生成物（特に、重亜硫酸塩と阻害性アルデヒド副生成物との反応により形成される付加物を含む）は、流出する水性プロセス流により取り出されることが示され、一方、未反応かつ所望の（２Ｒ，３Ｓ）−３− （４−メトキシフェニル）グリシデートメチルエステルは流出する有機プロセス流により取り出される。５、発明の詳細な説明本発明の目的は、光学的に純粋なジルチアゼムの合成に後程有用である、分割されたグリシド酸エステルの改良された製法を提供することである。詳しくは、本発明は、ｄ、ｆ−トランスエステルのラセミ混合物の酵素的分割による、光学的に純粋な中間体、即ち（２Ｒ，３Ｓ）−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルおよびその他の簡単なアルキルエステルの製造に関する。これはサブトラクティブ（ｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅ）分割法で行なわれ、この方法では所望像異性体から除去され、正味の結果として、所望の鏡像異性体化合物がその方法で光学的に精製される。生成するグリシド酸エステルそのものが光学的に精製される場合には、トリオ− ２−ヒドロキシ−３−（４−メトキシフェニル）−３−（２−ニトロフェニル− チオ）プロピオン酸メチルエステルの分割を回避できる。本発明の酵素的分割法により、所望の光学活性中間体、即ちトランス−（２Ｒ，３Ｓ）−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸エステルの鏡像異性体選択的調製手段が提供される。グリシド酸は或種の条件下以外では不安定であることが知られている。しかしながら、グリシド酸のエステルは（それらの加水分解不安定性は別にして）比較的安定であり、有用な合成中間体である。グリシド酸エステルをジルチアゼム合成の合成前駆体として使用し、そして最終生成物中に所望の立体化学を生成させ絶対配置を有する鏡像異性体の酵素触媒加水分解を生じ、絶対配置（２Ｒ，３Ｓ）を有する鏡像異性体を未加水分解グリシド酸エステルとして回収可能にする酵素とグリシド酸エステルの好適な組合せが必要とされる。５゜１．多相酵素反応法グリシド酸エステルの現在の分割方法は、ラセミグリシド酸エステル基質中に存在する所望せざる鏡像異性体がエステル官能基の加水分解により、既知の物理的方法で残りのグリシド酸エステル鏡像異性体から容易に分離される種類に選択的に変換される方法である。詳しくは、本発明の場合には、所望のエステル鏡像異性体は水非混和性である有機溶媒に可溶性であり、−方、所望せざるグリシド酸エステルの加水分解生成物の少なくとも一つはかなりの水溶性を有する。（本明細書で使用される“非混和性”なる用語は、水と完全に非混和性、実質的に非混和性、または部分的に非混和性である溶媒、即ち水と接触して置かれた場合に分離した有機相を形成する溶媒を包含することを意味する。）本明細書に記載される分割方法は、ラセミ基質混合物のそれぞれの鏡像異性体が酵素的加水分解に対して幾分かの感受性を示すが、前記の鏡像異性体の一方は適当な酵素触媒の存在下で他方よりも迅速に加水分解される動力学的分解法である。この状況下で、二つの競合反応性鏡像異性体の間を区別する酵素の能力は、Ｃ，Ｓ、　Ｃｈｅｎら　（Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓａｃ、、１９８２．１０４．７２９４）により記載されているように、鏡像異性体選択値Ｅにより量化し得る。サブトラクティブ動力学的分割法の場合のＥの計算式は、以下のように示される。Ｅ　＝　（１２、［（１−ＸＸ　１−ｅｅ（Ｓ　））］／１　、（（１−Ｘ）（１＋ｅｅ（Ｓ　））］）〔式中、Ｘは出発基質の全量の変換度（小数として表わされる）であり、そしてｅｅ（Ｓ）は残りの未加水分解基質鏡像異性体の鏡像異性体過剰量（これも小数として表わされる）である〕。この式は、異なる変換度まで進行した酵素反応の比較を可能にし、この場合、残りのグリシド酸エステル基質の鏡像異性体過剰量の直接の比較は可能ではない。また、このＥ値および相当する計算を使用して種々の条件下で操作した同じ酵素の見掛選択性を比較することも可能である（項目５、５．１を参照のこと）。酵素に及ぼすエポキシドの既知の不活性効果にもかかわらず、本発明により教示されるように、酵素を使用して一般にグリシド酸として知られているエポキシド含有化合物のカルボン酸エステルの加水分解を鏡像異性体選択的様式で触媒することが可能である。もとのグリシド酸のラセミカルボン酸エステルには、図６に示される一般構造を有するものが包含され、ここで式中Ｒ１はフェニルおよび置換フェニルの群から選ばれた置換基であり、モしてＲ２はアルコールから誘導された基である。置換フェニル基は、ヒドロキシ、メトキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アリールアルコキシ、およびハライドを含む種々の基で置換されてもよい。特に重要なＲＩ基は４−メトキシフェニルである。なぜならジルチアゼム製造に関係があるのはこの基だからである。フェニル基の置換基はグリシド酸エステル部分に対してオルト位、メタ位、またはパラ位の一つまたはそれ以上を占めてもよい。アルコール部分Ｒ２に関しては、この基は１〜８個の炭素原子を有する直鎖アルキル、３〜８個の炭素原子を有する分枝鎖アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、およびアルコキシアルキルより成る群から選ばれよう。好ましいアルキル置換基には、メチル、エチル、イソプロピル、およびイソブチルが包含され、一方、好ましいアルコキシアルキル置換基にはメトキシエチル基およびエトキシエチル基が包含される。本発明の好ましい実施態様は、Ｒ１がパラ−メトキシフェニル基であり、Ｒ２がメチル基であり、Ｒ１基およびＲ２基の相対配置がトランスであり、そして酵素的分割後の所望のグリシド酸エステル生成物の絶対配置が（２Ｒ，３Ｓ）である場合に相当する。Ｒ１基およびＲ２基がエポキシド環の平面の同じ側にある、相当するシスグリシド酸エステルジアステレオマーもまた分割でき、そして生成する（２Ｒ，３Ｒ）ｙｘ−３−（４−メトキシ−フェニル）グリシド酸エステルもまた後続のジルチアゼムの製造に使用し得ることに注目すべきである。本発明に於いて、酵素触媒は水相中に溶解または分散して存在する。本明細書に記載されたグリシド酸エステルは一般に水にほとんど不溶性であるが、エポキシド環は、酵素の非存在下でさえも、ヒドロキシトイオンおよび水分子のような種による核攻撃により開環を受け易い。有機溶媒または酵素製剤の非存在下、ｐＨ７，０の水性リン酸ナトリウム緩衝溶液に上記の本発明の好ましい基質を暴露（周囲温度で１８時間）すると、グリシド酸の損失、および水溶性化合物の形成がもたらされる。しかしながら、同じ水相とｌ対ｌの相比のトルエンの存在下では、同じ期間でグリシド酸の損失が全くなく、グリシド酸エステルの１００％が有機相の分離および蒸発により回収できた。それ故、水、。ヒドロキシトイオン、または水溶性緩衝系による望ましからぬ変換から基質を保護する方法としての有機相の使用が本発明の重要な一局面である。これらの実験上の観察によれば、本明細書に開示された酵素媒介分割法を効率良く行なうためには、二相系の必要性、そして好ましくは下記の多相／抽出膜リアクターの必要性が示される。本発明においては、加水分解酵素の多種の市販製剤およびその他の入手し得る製剤を直接用いて、図６における構造により表わされるグリシド酸に対して鏡像異性体選択的加水分解を行なうことができる。かかる製剤中に含まれる酵素は、エステラーゼ、リパーゼ、プロテアーゼ、ペプチダーゼ、およびアシラーゼとして記載される一般的な種類の加水分解酵素のいずれからのものであってもよい。加えて、かかる製剤は、真核細胞および原核細胞の両方から誘導でき、それらには下記の哺乳類供給源；ブタ肝臓、ブタ膵臓、ブタ腎臓、およびウシ膵臓；植物源小麦胚芽からの細胞；並びに下記の微生物属：アスベルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌ　１ｕｓ）、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）、ゲオトリクム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ）、フミコラ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）、ペニシリウム（Ｐｅｎｉ−ｃｉ　１１　ｉｕｍ）、リゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）　、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、クロモバクテリウム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、およびシュードモナス（Ｐｓｅｕｄａｍｏｎａｓ）からの細胞が包含されるが、それらに限定されない。本発明の好ましい実施態様に於いては、微生物ムコーム・ジャバニクス（Ｍｕｃｏｒ　Ｊａｖａｎｉｃｕｓ）、ムコール・ミーハイ（Ｍｕｃｏｒ　ｍ１ｅｈｅｉ）　、およびその他のムコーム種、カンジダ・シリンドラセア（Ｃａｎｄｉｄａ　ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）由来のリパーゼを含有する市販の製剤、並びにバチルス種からのプロテアーゼＢＰＮ’として知られるプロチーアゼを含有する市販の製剤が加水分解触媒として使用される。酵素的加水分解の反応条件には、酵素製剤が水相中に溶解または分散され、そしてグリシド酸エステルが水とかなり非混和性であると知られる有機溶媒から選ばれた有機相に溶解される二相系の使用が包含される。水相のｐＨは、使用中の酵素製剤のｐＨ最適値に応じて５〜９の範囲であり得るが、選ばれるｐＨがグリシド酸エステルに育害な作用をもたないことを条件とする。水相のｐＨを、緩衝系または自動滴定装置もしくはその他のｐＨ制御装置の使用により加水分解期間中所望の範囲内に維持することが望ましい。同様に、加水分解が行なわれる温度は広範囲にわたって変動できるが、水相および有機相の両方が液体のままであり、選ばれる酵素がその使用ができない程早い速度で変性を受けず、そしてグリシド酸エステルが安定のままであることを条件とする。水相と有機相の相対量は重要ではなく、広範囲にわたって変動しうる。同様に、水相中の酵素製剤の濃度、有機相中のグリシド酸エステルの濃度、およびこれらの濃度の比は重要ではなく、広範囲にわたって変動しうる。本発明の好ましい実施態様に於いては、育種相体水相の比、温度、水相のｐＨ，並びに水相中の酵素製剤の濃度および有機相中のグリシド酸の濃度は、加水分解の速度と鏡像異性体選択性の最適の組合せが実現されるように選ばれる。ラセミグリシド酸エステル基質は有機相に可溶であり、そして水相に殆ど不溶性であるので、それ程容易には加水分解されないラセミ基質混合の鏡像異性体は、それより容易に加水分解されるグリシド酸エステル鏡像異性体よりも高濃度で有機相中に存在し、こうして所望のグリシド酸エステル鏡像異性体の有機溶液が生成され、それが加水分解の程度および鏡像異性体選択度の値Ｅの関数として分割の程度（即ち、鏡像異性体過剰）を高める。全ラセミグリシド酸エステル基質の加水分解の程度は、任意の所望レベルの鏡像異性体過剰に於ける所望のグリシド酸エステルの回収を可能にするように調整し得る。より高い転化率は、より多量の光学純度を有する有機相生成物エステルを生じる。本発明のサブトラクティブ分割法の場合、最適の状況は酵素が限りなく大きいＥ値を示す状況である。この場合、全出発物質の５０％の加水分解で、未加水分解物質の１００％が反応後に１００％の鏡像異性体過剰の光学純度で有機相中に残存しよう。しかしながら、所定の酵素が比較的低いＥ値を示す場合、加水分解の全程度は、Ｃｈｅｎらにより誘導された式により測定され、そして上記のように再現される程度まで、５０％を越えて進行させる必要がある。好ましくは、酵素触媒は、できるだけ最大のＥ値を示すように選ばれ、従って所定の度合いの鏡像異性体過剰に関して最大値の所望のグリシド酸エステル鏡像異性体が回収できよう。次に、この物質は既知の方法で有機溶媒を除去することにより回収できよう。好ましい酵素分割法は、酵素の存在下に互いに激しく接触された非混和性の水相と有機相より成る分散相系中で行なわれる。これは攪拌タンクリアクターまたはミキサー沈降タンクのようなかかる慣用の液−液接触装置中で行なうことができる。反応経済性を改良するため、酵素の回収および再使用を容易にするために酵素を固相の高表面積支持体に固定化することが有利であろうし、そして酵素が粒状担体（例えば、微孔質粒子、ゲル型ビーズ、およびイオン交換樹脂）に固定化される方法は本発明の範囲内にある。かかる場合、固定化された酵素粒子は水相および有機相と一緒に分散されてもよく、あるいはそれらは水相および有機相が流されるカラム中に充填されてもよい。同様に、本発明は生体触媒としての分離酵素の使用に限定されず、そして固定化された全細胞およびその他の微生物製剤もまた本発明の範囲内にあることは当業者に明らかであろう。本発明の別の好ましい実施態様は、酵素的分割法を多相／抽出酵素膜リアクター中で行なうことに関する。かかる多相の抽出膜リアクターはＭａｔＳＯｎにより米国特許第４　、８００．１６２号明細書に記載されており、この特許は参考文献として本明細書に含まれる。多相酵素膜リアクターは、酵素の基質に関連する反応操作上の問題、例えばその不充分な水溶性および／または限られた加水分解安定性に対処するのに特に有利である。水中における低い溶解度および安定性は、本発明の実施により分割されるグリシド酸エステルの二つの特性である。同様に、抽出酵素膜リアクターは、酵素反応の生成物と関連する反応操作上の問題、例えば熱力学的に有利でないか、または可逆的である反応プロセス中の阻害性生成物による酵素阻害（不活化を含む）または転化率限定を処理するのに特に有用である。ここでもまた、項目５．２および５．４に記載される実施例に後で示されるように、生成物阻害は、ここに関係するグリシド酸エステルの酵素的分割により示される特徴である。従って、多相／抽出膜リアクターは酵素反応の効率を改良するのにかなりの実用性を有する。一般的に云えば、本発明の膜リアクター法に於ける酵素活性化膜は代表的には多孔質の親水性（即ち、水湿潤性）の膜より成っており、この膜は種々の手段によりその中に、またはその表面の一つ以上に適当な酵素を組込むことにより適当に活性化される。この酵素活性膜の一表面は、第一プロセス流、即ち供給流と接触して置かれ、この供給流は代表的には水難溶性（即ち、水非混和性の）酵素基質を含む。代表的には、この水非混和性（有機系）供給流は、担体液として役立てられる水非混和性有機溶媒中に溶解された反応体を含有する。同時に、酵素活性膜の第二表面は、水性プロセス流と接触している。このプロセス流は下記の目的、即ち、：反応の水を供給または除去するため；反応ｐＨの調節（そして、幾つかの場合には膜中に含まれる酵素への接近）のための手段を与えるため；および水溶性かつ阻害性の反応生成物の除去のための手段を与えるため：の一つ以上の目的に利用できる。適切に操作される場合、水相／有機相の境界は、水非混和性の有機供給流と接触している水湿潤性の酵素活性膜の表面に存在し、それにより実質的に水性の環境が親水性の水湿潤性の膜中の酵素の操作のために与えられる。こうして、二つの流入（即ち、供給）流および二つの流出（即ち、生成物）流が本発明の方法に於ける膜リアクターモジュールに供給され、そこから除去され、こうして膜リアクターモジュールは必ず二つの入口および二つの出口を備えた形状にされる。これらの一対の入口／出口は有機相プロセス流の供給および取出しにあてられ、別の対は水性プロセス流の供給および除去にあてられる。親水性もしくは水湿潤性の酵素活性膜を使用する場合、この有機プロセス流は、膜の反対の表面と接触する水性のプロセス流に対して小さい正圧のもとに置かれることが好ましい。膜中のこの得られる小さい有機相対水相の差圧により、膜を横断する水性プロセス流の一部の限外濾過的な流れを防止される。同時に、その方法をこの様に操作することにより、有機相は、それと接触する膜の表面に作用する毛管力により水湿潤性酵素膜の細孔中に侵入することから防止される。本発明の実施に際し、不充分な水溶性の加水分解不安定な反応体は水非混和性有機プロセス流中で膜リアクターに供給され、そこでそれは酵素活性膜の第一表面と接触させられる。その後、反応体の分子は、膜の第一表面に位置する有機相／水相界面に拡散し、そこでそれらは膜の水性領域中に分配し、生成物への酵素触媒による変換を受ける。反応生成物の少なくとも一つがかなりの水溶性を示す場合、特にそれが反応体よりも非常に水溶性である場合、この生成物種は膜から拡散して出て酵素活性膜の第二の表面と接触する水性プロセス流中に拡散し、その後、リアクターから除去される。要するに、この連続多相バイオリアクター法に於ける酵素活性膜は、三つの役割：即ち、高表面積の有機相／水相接触装置として、有機相／水相セパレーターとして、そして界面生体触媒として利用できる。親水性膜を、高い膜面積充填密度を特徴とする膜モジユール中で非混和性の水性プロセス流と有機プロセス流の界面に置くことにより、通常の実施の場合のように一つの非混和性相を別の相中に分散させるという必要なしに、大きな有機相／水相および液体／膜接触面積を与えることが可能である。更に詳しくは、３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸エステルのラセミｄ、 β−トランスメチルエステルを、図７の方法に示されたように水非混和性有機溶媒中の基質の溶液の形態で多相／抽出膜リアクターに供給することは、幾つかの理由で有利である。一方、多相膜リアクターは、膜に含まれる酵素と不充分な水溶性基質エステルとの有効な接触を促進し、このような反応の非膜分散相操作中に代表的に存在する正味の水相に関連する拡散抵抗を最小にする。更に、酵素と基質のこの有効な接触は基質の望ましくない非触媒副反応、例えばグリシド酸エステルのオキシラン環の加水分解（ジオール化合物を生成する）を最小にする。基質のこのような望ましくない加水分解副反応は、酵素的分割法の収率を低下させるので、それは最小にされるべきであり、そのことは、本発明の多相／抽出膜リアクターを用いることにより可能となる。多相／抽出膜リアクターは、有機相／水相界面に高濃度の酵素−グリシド酸エステルのオキシラン環の所望されない非触媒加水分解の速度の比を最大にし、そしてその方法に於ける所望の（２Ｒ，３Ｓ）−グリシド酸エステルの収率を最大にする。図７の多相／抽出膜リアクター中で酵素的分割法を行なうことの別の利点は、酵素触媒を不必要に希釈そして／または損失することなく、阻害性反応生成物を反応帯域から選択的に、そして効率良く除去または“抽出“する能力に関している。一種以上の水溶性エステル加水分解生成物〔即ち、アルコールまたはグリシド酸種（グリシド酸から生成されるアルデヒドの如き、その後の分解生成物を含む）のいずれかまたは両方〕を水性プロセス流によりリアクターから除去することより、酵素と接触する阻害性生成物の局所濃度が任意の低水準（水相からそれを回収し、モして／または廃棄する経済性により決定される）に維持し得る。本質的に、酵素活性膜中に生成される反応生成物は、それを通過して流れる水性プロセス流により低濃度に希釈される。こうして、阻害性生成物はりアクタ−から除去され、同時に酵素が膜中で高濃度に保たれる。この手法により、反応は、他の手法により得られるよりも高い転化率に“引き上げ”られる。一般的な膜リアクター操作パラメーターは、上述した米国特許第４　、８００．１６２号明細書に開示されており、また、メチル３−（４−メトキシフェニル）グリシデートエステルの酵素的分割に関する更に特別なパラメーターおよび反応条件は、その方法の操作についての実施例を詳述する下記の項目５．２および５．４に示される。可逆的な酵素閉込めの好ましい手段が、米国特許第４　、７９５．７０４号および１９８６年１０月１日に出願され、Ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　Ａｐｐａｒａｔｕｓ　ｆｏｒ　Ｃａｔａｌｙｓｔ　Ｃｏｎｔａｉｎｍｅｎｔｉｎ　Ｍｕｌｔｉｐｈａｓｅ　Ｍｅｍｂｒａｎｅ　Ｒｅａｃｔｏｒ　Ｓｙｓｔｅｍ″と題する米国特許願第９１２．５９５号明細書に於いてＭａｔＳＯｎにより記載されており、これらの特許が参考として本明細書に含まれる。しかしながら、当業界では公知の膜への、または膜内の酵素固定化の多くのその他の手段がまた使用し得る。図８は、酵素が多相／抽出膜リアクターの非対称の微孔質の親水性の中空繊維内に含まれる方法を示す。さらに他の詳細は以下の実施例に示される。５．２．多相酵素的分割の実施例本発明の幾つかの実施例およびその要素は、以下のとおりである。これらの実施例は本発明の性質を更に充分に説明することを意味し、本発明の範囲の限定として作用するものではない。５．２．１．実施例１〜６に関する操作下記の実施例１〜６の酵素的分割実験は、連続水相中の有機相基質の分散液より成る二相系中で行なった。更に詳細には、関係するトランスグリシド酸エステル鏡像異性体のラセミ混合物を適当な水非混和性有機相に溶解し、次に所定の酵素製剤を含む水相と接触させた。全反応混合物を激しく攪拌して相間に大きな界面表面積を得、相間で基質エステルおよび酸加水分解生成物の迅速な分配を可能にし、そして使用中の酵素の界面活性の増強を可能にした。その結果、酵素は活性の増強を示した。水相のｐＨを、緩衝系により使用中の酵素に応じた水準に保った。適当な時間の後、攪拌を停止し、有機相を除去し、水相を、有機相を生成するのに使用したのと同じ有機溶媒またはジエチルエーテルの多量で抽出した。有機相を合わせ、水洗し、乾燥し、そして蒸発させた。得られた物質を、次に、旋光分析により光学活性に関して調べた。ラセミトランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸の幾つかの簡単なアルキルエステルを、種々の酵素に関して基質としてスクリーニングした。特に、ラセミトランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸のメチルエステル、エチルエステル、イソプロピルエステル、ｎ−ブチルエステル、およびイソブチルエステルを、Ｄａｒｚｅｎのグリシド酸エステル縮合（Ａｎｎａｌｅｎ　ｄｅｒ　Ｃｈｅｍｉｅ、　５８３　（１９５３）　１１０　；　ＯｒｇａｎｉｃＲｅａｃｔｉｏｎｓ、５巻、　４１３頁、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓＳＮＹ、４１３頁、１９６８）により合成した。次に、それぞれのエステルを、以下の一般操作に従い、市販の酵素製剤による鏡像異性体特異的加水分解に対する感受性に関して分析した。ラセミグリシド酸エステル１０ミリモル（例えば、メチルエステルの場合には２．０８　ｇ　＞を有機溶媒、トルエンまたはｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル５０ｍ１に溶解し、ｐＨ７，０の２００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液５０ｍ１十分析される酵素１００ｍｇを含むフラスコに入れた。フラスコをしっかりと閉じ、リスト・アクション・シェーカーに周囲温度（２２〜２５°Ｃ）で１８時間入れた。次に、攪拌を停止し、フラスコの内容物を分析ロートに注入した。有機層を除去し、水層を多量の同有機溶媒またはジエチルエーテルで洗浄した。有機層を合わせ、水で逆洗し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。次に、有機溶媒を減圧下で除去し、残存物質の量を記録した。次に、この物質の試料を１００ｍ１当り１ｇの濃度（即ち、Ｃ＝　］、　Ｏ）でエタノールに溶解し、旋光分析で光学活性に関して調べた。二種の有機溶媒中において幾つかの酵素／エステル組合せに適用されたこの操作の結果を下記の実施例１〜６に示す。分離酵素および酵素製剤の市販源を、酵素名の他に示す。リシド酸メチルエステルの立体選択的加水分解表１は、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルに溶解したメチルエステル化合物の酵素的加水分解の結果を表わす。合計２０の異なる酸素製剤をこれらの実験に使用した。酵素的分割にかけたラセミメチルエステルの量は、これらの試験で２．０８ｇであった。使用した実験プロトコルは、項目５．２．１に記載されたものである。５　、２．３．実施例２−トルエン中のトランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルの立体選択的加水分解表２は、トルエンに溶解したメチルエステル化合物の酵素的加水分解の結果を示す。合計２５の異なる酵素および酵素製剤を、これらの実験に使用した。酵素的分割にかけたラセミメチルエステルの量は、これらの試験で２．０８　ｇであった。使用した実験プロトコルは、項目５．２．１に記載されたちのである。５　、２．４．実施例３−ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル中のトランス−３− （４−メトキシフェニル）グリシド酸エチルエステルの立体選択的加水分解表３は、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルに溶解したエチルエステル化合物の酵素的加水分解の結果を表わす。３種の異なる酵素製剤を、これらの実験に使用した。酵素的分割にかけたラセミエチルエステルの量は、これらの試験で２．２２ｇであり、これらの試験を項目５．２゜１に記載された操作に従って行なった。リシド酸ｎ−ブチルエステルの立体選択的加水分解表４は、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルに溶解したｎ−ブチルエステル化合物の酵素的加水分解の結果を表わす。３種の異なる酵素製剤を、これらの実験に使用した。酵素的分割にかけたｎ−ブチルエステルの量は、これらの試験で２．５０ｇであり、これらの試験を項目５゜２．１に記載された操作に従って行なった。リシド酸イソプロピルエステルの立体選択的加水分解表５は、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルに溶解したイソプロピルエステル化合物の酵素的加水分解の結果を表わす。４種の異なる酵素製剤を、これらの実験に使用した。酵素的分割にかけたラセミイソプロピルエステルの量は、これらの試験で２．３６ｇであり、これらの試験を項目５．Ｚｌに記載された操作に従って行なった。リシド酸イソブチルエステルの立体選択的加水分解表６は、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルに溶解したイソブチルエステル化合物の酵素的加水分解の結果を表わす。一種の酵素製剤を、これらの実験に使用した。酵素的分割にかけたラセミイソブチルエステルの量は、この試験で２．５０　ｇであり、この試験を項目５．２．１に記載された実験プロトコルに従って行なった。（本頁以下余白）表１ド酸メチルエステルカンジダ・リパーゼ−ＯＦ　（Ｍｅｉｔｏ　Ｓａｎｇｙｏ）　、９６０ｇ　−０，３６０リパーゼＡＫ　（Ａｍａｎｏ）　、９８０ｇ　−０，５００リパーゼＡＰ−１２（Ａｍａｎｏ）　１．ＯＯｇ　−０，２００リパーゼＤ　（Ａｍａｎｏ）　、９００ｇ　−０，３７０リパーゼＦＡＰ　（Ａｍａｎｏ）　、９００ｇ　 −０，４４５リパーゼＧＣ−２０（Ａｍａｎｏ）　、９８０ｇ　−０，０３１リパーゼＰ　（Ａｍａｎｏ）　、９８０ｇ　−０，５８２リパーゼＲＨ（Ｔａｎａｂｅ）　１．２４　ｇ　−０，１６５１０テ了−ゼＨＴ　（Ｍｉｌｅｓ）　、９００ｇ　−０，１４８１０テ了−ゼＮ　（Ａｍａｎｏ）　１．００　ｇ　−０，１３２プロテ了−ゼ８　（Ｓｉｇｍａ）　１．２２　ｇ　−０，２５５プロテ了 −ゼ１６　（Ｓｉｇｍａ）　８００ｇ　−０，７０８１０テ了−ゼ２４　（Ｓｉｇｍａ）　９４０ｇ　−０，６００プロテアーゼ２７　（Ｓｉｇｍａ）　８８０ｇ　−０，６９８アルカラーゼ　（Ｎｏｖａ）　１．２６　ｇ　−０，３６５７キサターゼ　（Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｄｅｓ）　１．０４　ｇ　−０，２０８ブロザイム６　（Ａｍａｎｏ）　１．００　ｇ　−０，０７７ＰＬＥ　（Ｓｉｇｍａ）　、７００ｇ　−０，１６８ＡＦＰ２０００　（Ｍｉｌｅｓ）　１．０４　ｇ　−０，０２７Ｃｈｒ、ビスフスム　（Ｔｏｙｏ　Ｊｏｚｏ）　１．１０　ｇ　−０，１３１（本頁以下余白）表２ド酸メチルエステル溶媒：トルエンＰＬＥ＝ブタ膵臓リパーゼ表３ド酸エチルエステルカンジダ・リパーゼ−ＯＦ　（Ｍｅｉｔｏ　Ｓａｎｇｙｏ）　１．０１　ｇ　− ０，４１６アルカラーゼ　（Ｎｏｖｏ）　１．５０　ｇ　−０，３７５ブ０テ了 −ゼ８　（Ｓｉｇｍａ）　１．４５　ｇ　−０，３３７カンジダ・リパーゼ−ＯＦ　（Ｍｅｉｔｏ　Ｓａｎｇｙｏ）　１．５９　ｇ　−０，００２ＬＰＬ２０Ｏ３（Ａｍａｎｏ）　１．３９　ｇ　−０，００４ＰＬＥ　（Ｓｉｇｍａ）　１．５７　ｇ　−０，００６ＬＰＬ＝リボプロテインリパーゼＰＬＥ＝ブタ肝臓エステラーゼ表５ド酸イソプロビルエステルカンジダ・リパーゼ−ＯＦ　（Ｍｅｉｔｏ　Ｓａｎｇｙｏ）　１．３３　ｇ　− ０，３９３プロテアーゼ１６　（Ｓｉｇｍａ）　１．８３　ｇ　−０，０６５１０テ了−ゼ２４　（Ｓｉｇｍａ）　、８５０ｇ　−０，０４４ブロテ了−ゼ２７　（Ｓｉｇｍａ）　、７８０ｇ　−０，０６４ド酸イソブチルエステルカンジダ・リパーゼ−ＯＦ　（Ｍｅｉｔｏ　Ｓａｎｇｙｏ）　１．０１　ｇ　− ０，５２１メチル３−（４−メトキシ−フェニル）グリシデートの（２Ｓ、３Ｒ）鏡像異性体の立体選択的加水分解に特に好ましい酵素は、Ａｍａｎｏから入手し得る“リパーゼＭＰ″と称されるリパーゼ、Ｍｅｉｔｏ　ＳａｎｇｙＯから入手し得る“カンジダ・リパーゼＯＦ”と称されるリパーゼ、及びＳｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、から入手し得る“プロテアーゼ２７″と称されるプロテアーゼを含む。これらの酵素は、それらが簡単なメチルエステル基質に対して良好な活性を有するという理由から魅力的である。す。リパーゼＭＡＰおよびプロテアーゼ２７の両方は、酵素的反応の完結後に有機相中に主として負に回転する種を残し、そのことは、有機相中において比較的非反応性の負に回転する（２Ｒ，３Ｓ）−グリシデートエステルが富化したことを意味する。メチルエステル化合物に対するプロテアーゼ２７、リパーゼＭＡＰ、およびリパーゼＯＦ酵素の比較的高い立体選択性は、表１および表２にそれぞれ示される比較的高い旋光度により実証される。表１〜表６に要約されるデータは、検討した５種の簡単な直鎖および分岐鎖のアルキルエステルの全てが、実際に、酵素的加水分解に対して少なくとも成る程度の感受性を示したことを示す。しかしながら、研究した幾つかの基質／酵素の組合せで得られる反応速度および旋光は、かなり巾があることがわかった。例えば、ｎ−ブチルエステルを用いる実験（表４参照）は、酵素作用および／または立体選択性が殆どないか、または全くないことを示す非常に小さい旋光を有する生成物を示し、一方、メチルエステルを用いる実験は幾つかの酵素に関して約−０，８°程度に高い旋光を示した（表２）。３−（４−メトキシフェニル）グリシデートのメチルエステルは特に好ましい基質エステルである。何となれば、メタノールは安価であり、しかも容易に入手し得るからである。また、ジルチアゼムの製造の既存の商業的方法は、その他のアルキルおよびアリールグリシデートエステルを使用することとは反対に、メチルグリシデートエステルを中間体として直接使用する。この理由から、ジルチアゼム製造法に於いて分割メチルグリシデートエステル中間体の製造および使用は、その他の分割グリシデートエステル前駆体で得られるよりも簡単かつ経済的な方法をもたらす。５．２．８．見掛鏡像異性体遺体性Ｅに関する補助溶媒の効果：実施例７本発明の別の特徴は、水相への少量の有機補助溶媒の添加による、そして水非混和性相として使用される有機溶媒の慎重な選択による、酵素鏡像異性体選択性の増強に関する。水混和性有機溶媒は、酵素の鏡像異性体選択性に関して有意ではあるが予測し得ない効果をもち得ることが一般に知られている。ある種の市販の酵素製剤の場合には、水相の５％としてのメタノールの存在は見掛Ｅ値を著しく増加した。この効果を調べるのに用いた操作を以下に記載し、かつ結果を表で示す。実施例７に於いて、トルエン５０ｍ１に溶解された１０ミリモルのラセミトランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステル＋ｐＨ７，０の０．２Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液の水相を存する二つのフラスコのそれぞれにＡｍａｎｏからのリパーゼＭＡＰ　１００ｍｇを添加した。一方のフラスコ中では、水相は全て緩衝液（５０ｍｌ）からなり、別のフラスコ中では水相は緩衝液４７、５ｍｌ＋メタノール２．５ｍｌから構成された。それぞれのフラスコを周囲温度で１８時間攪拌し、その後、有機相を分離し、乾燥し、蒸発させて固体物質を残した。この固体物質を計量し、加水分解の程度“Ｘ″を計算した。旋光（即ち、［α１）をｃ＝１の濃度でエタノール中で測定し、残存グリシド酸エステルの鏡像異性体過剰（即ち、ｅｅ（Ｓ））を計算した。これらの結果が表７に要約される。表７見掛鏡像異性体選択性Ｅに関するメタノールの効果ｘ　［αｌ　ｅｅ（Ｓ）　ＥＯ％　ＭｅＯＨ，３５−０，８０４’　４１％　１１５％　ＭｅＯＨ，２０−０，８１１°　４１％　〉２００５　、２．９．見掛鏡像異性体Ｅに関する水非混和性有機溶媒の効果Ｅ：実施例８ラセミエステル基質に対する水非混和性有機溶媒の選択は、また別の多様な反応を示す。比較の基準としてＥ値を用いて、所定の酵素の見掛鏡像異性体選択性に関する水非混和性溶媒の効果を定量化し得る。この効果を調べるのに従った操作を、以下に概説する。実施例８に於いて、酵素製剤１００＋＋＋ｇをｐＨ７，０の０．２Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液５０ｍ１に溶解または分散した。これに、ラセミトランス−３− （４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステル１０ミリモルを溶解した水非混和性有機溶媒５０ｍ１を添加した。反応フラスコに栓をし、周囲温度で１８時間攪拌した。次に、有機層を分離し、乾燥し、未加水分解グリシド酸エステルを回収するために蒸発させた。この残存物質を計量して全加水分解の程度を決定し、そしてその旋光をエタノール中で測定してその鏡像異性体過剰を決定した。３種の異なる水非混和性有機相の存在下で種々の酵素について計算した見掛Ｅ値を、表８に要約する。５、２．１０．酵素鏡像異性体選択性Ｅに関するｐＨの効果：実施例９酵素挙動に重要な別の因子は、その水性環境のｐＨである。酵素の活性は、太きく　ｐＨに依存しており、成るｐＨ範囲では触媒活性が増強し、その範囲外では活性が低下することが公知である。しかしながら、特に酵素活性が立体効果により生じると一般に考えられているから酵素が鏡像異性体選択性並びに活性に関してｐＨ最適値を示し得るという事実について、十分認識されておらず、また正しく理解されていない。ラセミトランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルの分割に関するこの効果を調べるため、反応系中の水相を種々のｐＨ値に調節した。行った操作を、以下に記載する。ラセミトランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステル１０ミリモルをトルエン５０ｍ１に溶解し、それをＡｍａｎｏから入手したリパーゼＭＡＰ１００ｍｇと共に種々のｐＨ値の２０ｍＭのリン３ナトリウム緩衝液５０ｍ１を含むフラスコに入れた。フラスコをきつく閉じ、周囲温度でリスト−アクション・シェーカーに１８時間入れた。次に、攪拌を止め、反応混合物を上記のように処理した。結果を表９に要約する。この表は、酵素鏡像異性体選択性に関する最適ｐＨが約８．０であることを示している。表８見掛鏡像異性体選択性Ｅに関する育種溶媒の効果リパーゼＭＡＰ　Ｎ／Ｄ　１１．４　２．５リパーゼＰ　２．４　２．７　’Ｎ／Ｄプロテアーゼ１６　２．２　３．２　Ｎ／Ｄプロテアーゼ２７　２．５　９．７　２．３ａメチルｔｅｒｔ −ブチルエーテルＮ／Ｄ＝測定せず鏡像異性体選択性に関するｐＨの効果６．０　１．１０　ｇ　−０，５９３゜６．５　１．４０　ｇ　−０，６８５゜７．０　１．４０　ｇ　−０，８７０゜７．５　１．５０　ｇ　−０，８９３゜８．０　１．６０　ｇ　−０，９２６゜８．５　１．７８　ｇ　−０，７８０″ ″従って、本発明の好ましい実施態様に、５容量％のメタノール（および、明らかに、その他の濃度）を含む水相の使用、水非混和性有機溶媒としてトルエンの使用、および水相ｐＨ約８での反応の実施が含まれる。５．２．１１．　リパーゼＭＡＰにより触媒作用されるメチルエステル加水分解一実施例１０および１１種々の反応パラメーターの効果を更に検討し、そして分割法を効率に関するそれらの影響を良（理解するために、好ましい基質（即ち、メチルエステル）および好ましい酵素の一つ（即ち、ＡｍａｎｏのリパーゼＭＡＲ）を用いて、別の実施例を行なった。実施例１Ｏ加水分解実験を、以下のようにして行なった。０．０１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，００）　５０ｍ１にリパーゼＭＡＰ　（Ａｍａｎｏ）　２７６ｍｇを溶解することにより酵素溶液を調製した。ラセミメチル３−（４−メトキシフェニル）グリシデート（ＭＭＰＧ）２．２３ｇ（１０，７４ミルモル）およびトルエン２５ｍ１を含む基質溶液を酵素溶液に添加した。ｐＨを、水酸化ナトリウム溶液（１モル／ｉ）の添加により“ｐＨスタット”中で７．００に調製した。合計０．９７ｍ１の塩基を添加した後にＮａＯＨの添加を停止した。これはエステルから酸への転化率９．０３％（即ち、１００Ｘ０．９７／１０．７４）に相当した。酵素的活性の損失が、この時点での反応の停止の理由であるか否かを試験するため、更に１２７ｍｇの酵素を添加した。酵素添加後、塩基の消費は観察されなかった。変換の程度に関する反応生成物の存在の効果を試験するために、更に５０ｍ１の水を反応混合物に導入して反応生成物の濃度を希釈した。その直後に、塩基の消費が始まり、ＮａＯＨの添加総量が１．３１ｍ１となった後に停止した。この合計の酸生成／塩基消費に相当する転化率は１２．２％（即ち、１００Ｘ１．３１／１０．７４）であった。実施例１１別の加水分解実験を、以下にようにして行なった。０、ＯＩＭ（７）リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，ＯＯ）　１０１００ＯニリパーゼＭＡ　Ｐ　（Ａｍａｎｏ）　５３７ｍｇを溶解することにより酵素溶液を調製した。ラセミメチル３−（４−メトキシフェニル）グリシデート（ＭＭＰＧ）　２．１８ｇ（１０，５１ミリモル）およびトルエン２５ｍ１を含む基質溶液を酵素溶液に添加した。ｐＨを、水酸化ナトリウム溶液（１モル／ｌ）の添加により“ｐＨスタット”中で７．００に調節した。合計３．３８ｍ１の塩基を添加した後に、ＮａＯＨの添加を停止した。これはエステル転化率３２．１６％（即ち、１００　Ｘ　３．３８／　１０．５１）に相当した。酵素活性の損失が、反応がこの時点で停止する理由であるか否かを試験するため、更に４９０ｍｇの酵素を添加した。酵素の添加後に、塩基の消費は観察されなかった。変換の程度に関する生成物種の濃度の効果を試験するために、トルエン２５ｍ１中の更に２．２５　ｇのＭＭＰＧ（１０，８１ミルモル）を反応混合物に導入した。その直後に、塩基消費が始まり、ＮａＯＨの添加総量が５．７１ｍ１となった後に停止した。この時点の最終転化率は２６．７８％（即ち、１００Ｘ５．７１／（１０，５１＋１０．８１））であった。有効な“擬似平衡”の概念が、反応方法、特に“平衡”変換に関する種濃度の抑制効果を説明するために本明細書に使用される。成る濃度の阻害生成物が系中に累積した時に酵素的加水分解反応が停止することが観察されたことから、反応生成物または副生物による反応阻害の特別な機構について限定される訳ではないとしても、この反応は、反応が熱力学的に“可逆的な”反応であるかのように説明し得る。即ち、その反応は、阻害性生成物または副生物の濃度に依存する成る“ 平衡”転化率まで進行すると考えることができる。５、２．１２．　リパーゼＯＦにより触媒作用されるメチルエステル加水分解一実施例１２リパーゼＯＦ酵素を用いる別の加水分解実験を、以下のように行なった。６４ｍｇのリパーゼＯＦ（カンジダ・シリンドラセアから誘導され、Ｍｅｉｔｏ　Ｓａｎｇｙｏ　Ｃｏ、により供給される）をｐＨ８，００の０．０５Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液１００ｍ１に溶解することにより酵素溶液を調製した。ラセミメチル３−（４−メトキシフェニル）グリシデート（ＭＭＰ　Ｇ）　２．６ｇ　（１２，５ミリモル）およびトルエン２５ｍ１を含む基質溶液を酵素溶液に添加した。ｐＨを、水酸化ナトリウム溶液（０，１モル／ｌ）の添加により“ｐＨスタット”中で８．０に調節した。合計４６．３ｍｌの塩基を添加した後（エステルの４０％の加水分解に相当する）、残存エステルを上記のように単離した。単離したエステル生成物の鏡像異性体過剰は、ＨＰＬＣにより測定して８７．３％であった。回収したエステルの量は１．３４　ｇであり、収率５２％に相当する。５、２．１３．　ｐＨ７に於ける膜リアクター中のラセミメチル３−（４−メトキシフェニル）グリシデートの分割一実施例１３この平衡制限される酵素的分割法のための多相／抽出膜リアクターを、以下の手法によりｐＨ７，０で操作できる。また、使用する膜に関する文献に報告された通常の方法のいずれか一つにより酵素を膜に固定しつる。好ましい実施態様に於いては、酵素は、Ｍａｔｓｏｎの米国特許第４　、７９５．７０４号および係属中の米国特許出願第９１２，５９５号に記載されているような非対称の親水性の微孔質の中空繊維膜の内部にその可逆的な閉込めにより固定されつる。更に詳細には、この分割法に使用される多相／抽出膜リアクターは、血液透過分野に使用される型のポリアクリロニトリル中空繊維で加工された０、　７５ｍ”の特注の耐溶媒性の膜モジュール（例えば、Ａｓａｈｉ　Ｃｏ、から入手し得る）より成りうる。Ａｍａｎ。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｅｎｚｙｍｅｓから購入した酵素、リパーゼＭＡＰは、酵素製剤１ｍｇ当り毎時６モルのＭＭＰＧが加水分解されるという活性をもつことを示した。また、この酵素は３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸の簡単なアルキルエステルを立体選択的に加水分解することを示した。膜を酵素で活性化するため、酵素５．０ｇを蒸留水１１に溶解する。次に、酵素溶液を、シェルからルーメンへ、そしてリザーバに戻して限外濾過方式で３０分間循環する。リザーバが空になるまで限外濾過液を集め、その後、トルエン２５０ｍ１をシェルにポンプ輸送し、５〜７ｐｓｉｇのシェル圧力で４００〜４５０ｍ１／分で循環してリアクター・モジュール中のシェル側の空間から残存酵素溶液を除去する。酵素をリアクターに充填した後、トルエンで前もって飽和させたｐＨ７，ｏｏの１０ｍＭのリン酸塩緩衝液を、４００〜５００ｍ１／分の流量でルーメン側で循環させる。上記のように、ｐＨ７に於ける分配／反応プロセスの“可逆性”を解決するためには、この大容量の緩衝水溶液が必要とされる。大容量の水溶液を与えることにより、阻害性生成物を低い水相濃度まで希釈することができ、こうして反応“平衡″を許容し得る程高い転化率まで変位させることができる。次に、ラセミメチル３−（４−メトキシフェニル）グリシデート（ＭＭＰＧ）２０゜８　ｇ　（０，１モル）をトルエンリザーバに添加する。水溶液リザーバのｐＨを１．０　ＭのＮａＯＨの添加により７．００に保つ。エステル加水分解の程度が６５％に達するまで、即ちＩＭのＮａＯＨ６５ｍ１を添加するまで、リアクターを連続運転する。この時点で、有機相を膜リアクターから排出し、残存ＭＭＰＧを上記のようにして有機相から単離する。３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸エステルのラセミｄ、！！−トランスメチルエステルを水不混和性有機溶媒中の基質の溶液の形態で多相／抽出膜リアクターに供給することは、幾つかの理由で有利である。一方、多相膜リアクターは、膜に含まれる酵素と不充分な水溶性基質エステルの有効な接触を促進し、このような反応の卵膜分散相操作中に代表的に存在する正味の水相に関連する拡散抵抗を最小にする。一方、酵素と基質のこの有効な接触は基質の望ましくない非触媒副反応、例えばグリシド酸エステルのオキシラン環の加水分解（ジオール化合物を生成する）を最小にする。基質のこのような望ましくない加水分解副反応は、酵素的分割法の収率を低下させることから、そのような反応は最小にされるべきである。そのことは本発明の多相／抽出膜リアクターを用いることにより可能となる。多相／抽出膜リアクターは、有機相／水相界面で高濃度の酵素を提供し、それにより（２Ｓ、３Ｒ）−グリシド酸エステルの所望の酵素加水分解の速度対（２Ｒ，３Ｓ）−グリシド酸エステルのオキシラン環の所望されない非触媒加水分解の速度の比を最大にし、そしてその方法に於ける所望の（２Ｒ，３Ｓ）−グリシド酸エステルの収率を最大にする。多相／抽出膜リアクター中で酵素的分割法を行なうことの別の利点は、酵素触媒を不必要に希釈そして／または損失することなく、阻害性反応生成物を反応帯域から選択的に、そして効率良く除去する能力にある。一方、これは、水溶性の阻害性生成物を水性プロセス流中の希釈により除去することにより、またはその中の化学反応（例えば、項目５．３および５．４に説明された重亜硫酸塩付加物生成）により行ない得る。また、有機溶媒にかなりの溶解性を示す阻害性反応生成物は、それらを通常の液液接触装置または膜溶媒抽出装置中で有機相から抽出することにより反応系から除去し得る。或種の阻害性生成物（例えば、項目５，３および５゜４に説明されるアルデヒド反応副生物）は水溶液および有機溶液の両方に成る程度可溶性であり、従っていずれかのアプローチによっても処理され易い。５、２．１４．　ｐＨ８に於ける膜リアクター中のラセミメチル３−（４−メトキシフェニル）グリシデートの分割一実施例１４〜１７４つの膜リアクター分割実験（実施例１４〜１７に相当）をｐＨ８（実施例１３に使用されるｐＨ値７とは異なる）で行なった。実施例１４この分割方法のための多相膜リアクターを、以下のようにして操作した。膜リアクターは、ポリアクリロニトリル限外濾過用中空繊維で加工された０、　７５ｍ ”の耐溶媒性の膜モジュールより成る。Ａｍａｎｏ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏ−ｎａｌ　Ｅｎｚｙｍｅｓから購入した酵素リパーゼＭＡＰは、１ｍｇ当り毎時６μ モルのＭＭＰＧを加水分解するという活性をもつことが示されている。また、この酵素は３−（４−メトキシフェニル）−グリシド酸のエステルを立体選択的に加水分解することが示されている。膜リアクターに、項目６．６および６．７に記載したようにして酸素を充填した。詳しくは、酵素５．０ｇを蒸留水ｌｌに溶解した。次に酵素溶液を、シェルからルーメンへ、そしてリザーバに還流する液体で限外濾過方式で３０分環循環させた。次に、リザーバが空になるまで限外濾過液を回収し、その後、トルエン２５０ｍ１をシェルにポンプ輸送し５〜７ｐｓｉｇのシェル圧力で４００〜４５０ｍ１／分で循環させて残存酵素溶液をシェルから除去した。こうして酵素をリアクターに充填した後、０．２Ｍのリン酸塩緩衝液（ｐＨ８，００）　Ｉ　Ｉ！をルーメン側で４００〜５００ｍ１／分の速度で循環させた。実験を開始するに当たり、メチル３−（４−メトキシフェニル）グリシデート（ＭＭＰＧ）２０．８ｇ（０，１モル）をトルエンリザーバに添加した。水溶液リザーバのｐＨを０．９ＭのＮａＯＨの添加により８．００に保った。エステル加水分解の程度が苛性ソーダの消費量を基準として５７．５％に達するまで、リアクターを連続運転した。この時点で、有機相を排出し、残存ＭＭＰＧを単離した。単離したエステル生成物の鏡像異性体過剰は、旋光分析により測定して９６％であった。回収したエステルの量は４ｇであり、１９％の収率に相当した。実施例１５実施例１４に記載した多相膜リアクターを以下の実験に再使用した。トルエン３７５ｍ１をシェルにポンプ輸送し、５〜７　ｐｓｉｇのシェル圧力下４００〜４５０ｍ１／分で循環させて残存酵素溶液をシェルから除去した。０．２Ｍのリン酸塩緩衝液（ｐＨ８，ｏｏ）の水溶液容量１．５７をルーメン側で４００〜５００ｍ１／分の速度で循環させた。実験を開始するに当たり、メチル３−（４−メトキシフェニル）グリシデー）　（ＭＭＰＧ）３１．２ｇ　（０，１５モル）をトルエンリザーバに添加した。水溶液リザーバのｐＨを０．９ＭのＮａＯＨの添加により８．００に保った。エステル加水分解の程度が苛性ソーダの消費量を基準として５３％に達するまで、リアクターを連続運転した。この時点で、有機相を排出し、残存ＭＭＰＧを単離した。単離したエステル生成物を鏡像異性体過剰は、旋光分析により測定して９９％であった。回収したエステルの量は５．９ｇであり、１９％の収率に相当だ。実施例１６実施例１４に記載した多相膜リアクターを以下の実験に再使用した。トルエン３７５ｍ１をシェルにポンプ輸送し、５〜７　ｐｓｉｇのシェル圧力下４００〜４５０ｍ１／分で循環させて残存酵素溶液をシェルから除去した。０．２Ｍのリン酸塩緩衝液（ｐＨ８，００）の水溶液容量１．５１をルーメン側で４００〜５００ｍ１／分の速度で循環させた。実験を開始するに当たり、メチル３−（４−メトキシフェニル）グリシデート（ＭＭＰＧ）３１．２ｇ　（０，１５モル）をトルエンリザーバに添加した。水溶液リザーバのｐＨを０．９ＭのＮａＯＨの添加により８．００に保った。エステル加水分解の程度が苛性ソーダの消費量を基準として５２．４％に達するまで、リアクターを連続運転した。この時点で、有機相を排出し、残存ＭＭＰＧを単離した。単離したエステル生成物の鏡像異性体過剰は、旋光分析により測定して９９％であった。回収したエステルの量は９．０ｇであり、２８．８％の収率に相当した。実施例１７実施例１４に記載した多相膜リアクターを以下に実験に再使用した。トルエン３７５ｍ１をシェルにポンプ輸送し、５〜７　ｐｓｉｇのシェル圧力下４００〜４５０ｍ１／分で循環させて残存酵素溶液をシェルから除去した。０．２Ｍのリン酸塩緩衝液（ｐＨ８，００）の水溶液容量１．５　Ｉ！をルーメン側で４００〜５００ｍ１／分の速度で循環させた。実験を開始するに当り、メチル３−（４− メトキシフェニル）グリシデー）　（ＭＭＰＧ）３１．２ｇ　（０，１５モル）をトルエンリザーバに添加した。水溶液リザーバのｐＨを０．９ＭのＮａＯＨの添加により８．００に保った。エステル加水分解の程度が苛性ソーダの消費量を基準として４１．２％に達するまで、リアクターを連続運転した。この時点で、有機相を排出し、残存ＭＭＰＧを単離した。単離したエステル生成物の鏡像異性体過剰は、旋光分析により測定して９２％であった。回収したエステルの量は７．７ｇであり、２４．８％の収率に相当した。５．３０重亜硫酸塩との付加物生成によるアルデヒド副生物の処理図９の基質化合物Ａ−トランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステル−のエステル官能基の酵素触媒加水分触は、苛性ソーダによる酵素的反応混合物の滴定、そしてその後にＨＰＬＣ法による基質の枯渇を行なうことにより観察し得る。しかしながら、相当するグリシド酸である図９の化合物Ｂは、反応混合物の処理中において小量しか単離することができない。反応性基質鏡像異性体を比較的高い値まで転化することが可能な酵素的反応の場合において、有機相反応生成物混合物から有機溶媒を除去することにより、所望の生成物、化合物Ａの（２Ｒ，３Ｓ）鏡像異性体の他に生成物が残存した。このような別の生成物の存在は所望の生成物の純度を低下させるとともに、所望の生成物の回収を更に難しくした。図９に示された化合物Ｂの如きグリシド酸は、容易に脱カルボキシル化を受け、続いて相当するアルデヒドに転位することが一般に知られている。この反応の２工程機構が提案されている（ＳｉｎｇｈおよびＫａｇａｎ、Ｊ、Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、　１９７０、挫、２２０３）。また、得られた化合物Ｃ１４−メトキシフェニルアセトアルデヒドは、大気酸素により成る程度の空気酸化を受け、相当するカルボン酸化合物Ｄ、４−メトキシフェニル酢酸を生じることが予想される。化合物Ａの酵素触媒加水分解後および化合物Ａの残存する所望の（２Ｒ，３Ｓ）鏡像異性体の除去後に残存する、有機相から回収された物質を分光分析した結果、４−メトキシフェニルアセトアルデヒド、および４−メトキシフェニル酢酸− 即ち、それぞれ、化合物ＣおよびＤ−の両方の存在が示された。化合物ＣおよびＤは、化合物Ａのメチルエステル官能基の酵素触媒または塩基触媒のいずれかによる加水分解により化合物Ａからのみ生成し得る。更に、アルデヒド化合物Ｃは更に反応し得る。このような更なる反応は、分光分析法により経験的に観察される対応するカルボン酸化合物りへの酸化の特別な例を含むだけでなく、付加物生成反応、ｇｅｍ−ジオールへの水和、オリゴマー化（例えば、ホルムアルデヒドにより生成される三量体に似た三量体化合物の生成）、酸性条件または塩基性条件下のアルドール縮合を含みうるちのであり、それにより多数の可能なオリゴマー生成物またはポリマー生成物をもたらす。更に、アルデヒドは、公知の化学反応であるシッフ塩基生成に関与し得る（Ｊ、　Ｍａｒｃｈ、　Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ　Ｃｏ、、第２版、１９７７　；　ＨｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎＳＣｒａｍｍ、およびＨａｍｍｏｎｄ、　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　ＭｃＧｒａｗ −Ｈｉｌｌ　Ｃｏ、、第３版、１９７０）。一般的に、殆どのシッフ塩基は中性ｐＨ付近で安定であり、酸性条件または塩基性条件下で加水分解する。しかしながら、生成の機構は当該カルボニル化合物、例えばアルデヒドの非プロトン化アミン窒素の核攻撃を伴ない、こうして、シッフ塩基生成はｐＨ７より高いｐＨで更に速く進行する。アルデヒドとりシン残基のε−アミノ基との間のシＣｏ、、１９８３）が故に、反応系中にアルデヒド化合物Ｃが存在することは、それが酵素反応に関係しているので、関心事である。酵素の得られる変性は、所定の反応を触媒作用する酵素の能力に関して可逆的および不可逆的の存寄な効果の両方を生じ得る。本明細書に使用されるように、　“阻害”および“阻害性“という用語は、化学化合物−更に詳細には反応生成物がまたは副生物”−が所定の反応を触媒作用する酵素の能力の低下をひき起こす何らかのプロセスまたは現象を表現することを意味する。例えば、この種の阻害には、酵素動力学の公知のＭｉＣｈａｅｌｉＳ −Ｍｅｎｔｅｎモデルにより記載される阻害も含まれる。酵素に関する化合物のこの阻害効果は、阻害化合物が反応中に酵素と接触している間に明らかに生じていることもあり、また、その阻害効果は、前記の阻害化合物が酵素と接触し、続いて除去された後にも持続し得るかも知れない。例えば、この種の阻害性としては、酸素タンパク質のアミノ酸残基の官能基を化学的に修飾する化合物に関連する阻害性を含み得る。こうして、可逆的形態および不可逆的形態の両方の阻害の軽減は、本発明の実施に含まれる。所定の組の反応条件下で短縮された酵素寿命をもたらす阻害効果は、その酵素を長い寿命を有する酵素の場合よりも更に頻繁に交換することを必要とする。酵素活性の目安として平均反応速度を採用することにより、表１０は、実施例１８および１９に記載された反応条件下で操作される市販の酵素製剤リパーゼＯＦが、アルデヒド副生物を重亜硫酸塩の添加により除去する場合に、長期間にわたってその活性を維持することを明示している。アルデヒド副生物の存在は、３−（４−メトキシフェニル）グリシデートのエステルの分割に使用される膜バイオリアクターの操作に重要な結果を有する。実施例１８に記載されたりアクタ−条件下に行なわれた二つの分割に於いて、仕込んだエステルの１５％が滴定された後に白色の懸濁液になった。限外濾過膜によるこの白色の懸濁液の濾過アリコートは、白色の沈澱を除去した。しかしながら、１時間放置後に、白色の懸濁液が透明な濾液中にもう一度現われた。限外濾過による沈澱が実際に保持されたことは、膜がこの物質により内部および外部の両方で汚損し得ることを示唆する。膜を酵素で活性化しない以外は実施例１８の条件と同じ条件下で行なわれた実験では、白色の懸濁液が２４時間後でさえも観察されなかった。如何なる特別な機構または説明に拘束されることを望まないが、白色沈澱の生成は、制限されるが有限の水溶性を有するアルデヒドが水不溶性の生成物に変換されることに一致する。実施例１８に記載された条件下で行なわれた別の実験では、水相中に存在する固体の沈澱が観察された。この固体は膜の内表面を汚損し、こうしてその酵素活性を低下し得る。実施例１８に記載された条件下で行なわれた一つの実験では、繊維ルーメン中の水相の流れ方向を反転することは、水性流中の黄色粒子の突然の出現そしてまた酵素活性の突然の増加（酸滴定率の増加により確かめられる）を生じた。また、アルデヒド副生物（化合物Ｃ）の存在は、最終生成物の単離操作に関して重要な意味を有する。アルデヒドはかなり有機可溶性であるので、それは所望の生成物、化合物Ａの（２Ｒ，３Ｓ）鏡像異性体の回収を妨害し得る。反応混合物の最終有機相中でのアルビテド（化合物Ｃ）の増加量は、アルデヒド不純物からの最終生成物の完全な分離を更に困難にし、不経済にする。グリシデートエステルの酵素的分割の特別な場合に関して、反応混合物中のアルデヒド副生物、化合物Ｃの存在は、酵素反応の最終の所望生成物の品質を改良する精製方法を示唆する。この方法は、重亜硫酸塩付加物の選択的生成による酵素反応混合物の有機相からのアルデヒド化合物Ｃの選択的除去を伴なう。この付加物は、酵素反応混合物の有機相を重亜硫酸塩の水溶液と接触させ、続いて重亜硫酸塩付加物を水相中に抽出することにより生成される。アルデヒド化合物への重亜硫酸塩の添加は公知であり、殆どの有機化学の本に記載されている。一般に、殆どのアルデヒド、および或種のケトンのカルボニル基は重亜硫酸アニオンによる核攻撃を受け、図９に示されたα−ヒドロキシスルホネート化合物Ｅをもたらす。このような化合物は一般に重亜硫酸塩付加物として知られている。このような付加物の安定性および生成の安易さは請求核攻撃を受けるカルボニル基の化学的性質により決定されると考えられる。立体効果はこのような付加物の生成の容易さを決定すると考えられ、それらはｐＨ５付近のわずかに酸性の条件下で一般に生成され（Ｆｉｅｓｅｒ　ａｎｄ　ＦｉｅｓｅｒＳＲｅａｇｅｎｔｓ　ｆｏｒ　Ｏｒｇａｎｉｃ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、１巻、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ、　１９６７）　、この場合、求核性ＨＳＯｓ−アニオンが水溶性中の主要な種であり、そしてカルボニル基がわずかにプロトン化されて請求核攻撃を促進する。しかしながら、このような付加物の生成および安定性の両方に最適な条件は一般に経験的なものと考えられており、また重亜硫酸塩付加物は温和な塩基性条件下で生成されることが知られている。それ故、エステル加水分解が所望の程度に達した後であって、所望の（２Ｒ，３Ｓ）鏡像異性体が富化された化合物Ａの回収のために正味の有機相を含む有機溶媒を除去する前に、重亜硫酸塩溶液を分散相酵素反応の有機相を洗浄する目的で使用し得る。所望のグリシデートエステル生成物から汚染アルデヒドを除去するこの方法は、実施例２０に記載される。しかしながら、１０％の重亜硫酸溶液はまた、その他の加水分解反応生成物の不在下でおそらく重亜硫酸イオンによるエポキシド官能基の攻撃により化合物Ａを分解し、それにより反応処理中に化合物Ａの両鏡像異性体の損失をもたらすことかわかった。この問題は、実施例２１に示されている。この実施例は、最終生成物の収率を悪化させることなしには越えることかできない反応プロセス中の重亜硫酸塩濃度の上限を示唆して実施例２２は、化合物Ｃの存在下に於いて化合物Ａの酵素触媒加水分解の速度が低下すること、および化合物りの存在下に於いてこのような阻害効果がかなり欠如することを示している。この実施例に示されるリパーゼＯＦによる加水分解の速度が化合物りにより見掛上促進されることは再現性があり、そして化合物りが阻害効果をもたないことは、注目されるべきである。加えて、重亜硫酸塩付加物、化合物Ｅは阻害性ではなく、これらの条件下の重亜硫酸塩付加物の安定性は、化合物Ｃがその阻害効果を発揮しないようにするのに充分であることを示している。上記の情報および実施例に鑑みて、阻害性化合物Ｃを、化合物Ａのエステル官能基の酵素加水分解物中にその重亜硫酸塩付加物を生成することによりその場で除去する可能性が存在する。基質（化合物Ａ）の安定性、所望の酵素活性および酵素安定性、並びに化合物Ｃの重亜硫酸塩付加物の生成の容易さおよび安定性が全て最高にされるように反応条件を選択するのには、幾つかの因子を考慮する必要がある。このような研究は必ず実験を必要とするが、一定の情報が公開された文献中に存在する。即ち、エステル官能基は一般に中性ｐＨ付近で最も安定であることが知られているが、エポキシドは一般にｐＨ８〜９．５の間で水溶液中で最も安定である（Ｙ、　Ｐｏｃｋｅｒ、　Ｂ、　Ｐ、　Ｒｏｎａｌｄ、およびＫ。Ｗ、　Ａｎｄｅｒｓｏｎ　、　Ｊ、　Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、、１９８８．１１０．６４９２）。アルデヒド−重亜硫酸塩付加物は一般にｐＨ５〜９の間で安定であることが知られている。表１１に示される実験結果は、重亜硫酸付加物、化合物ＥがｐＨ８で充分安定性であり化合物Ｃの抑制効果を軽減することを示す。適切な重亜硫酸塩濃度を選択することに関して、実施例２１からの結果は、約ｌＯ％Ｗ／Ｖが生成物収率を悪化させない上限であることを示唆する。別の極限では、重亜硫酸塩の不存在により化合物Ｃの抑制効果が現われるようになる。アルデヒド−重亜硫酸塩化学反応の化学量論量は１対１であるので、水相中に使用される重亜硫酸アニオンの好ましい量は、反応中に生成されると予想されるアルデヒド副生物の量と等モル量であり、但し、水相の容量は重亜硫酸塩濃度が上記の上限を越えないような容量であることを条件とする。中性ｐＨ付近で水溶液中に存在する重亜硫酸アニオンは、亜硫酸、即ちＨｔＳＯｓ　（それ自体は水中の二酸化硫黄の溶解および水和により生成し得る）から一つのプロトンの除去により生成し得ることが注目されるべきである。亜硫酸は、相当するカチオン種（例えば、Ｎａ”　）としてのアルカリ金属と塩を生成する。このような塩のアニオン種は、重亜硫酸根（ＩＳＯ，−）、亜硫酸根（ＳＯｌつ、およびメタ重亜硫酸根（Ｓ２０．−りを含む。更に、水溶液中では、全てのこのような形態の亜硫酸とその塩の混合物は平衡混合物として存在し、その組成ば溶液のｐＨに依存することが注目されるべきである。溶媒和された重亜硫酸アニオンと亜硫酸ジアニオンとの間の平衡は５〜９のｐＨ範囲にわたって水溶液中で存在し、重亜硫酸アニオンのｐｋａは約７である。この平衡の他に、１分子のメタ重亜硫酸塩が水和され、水中で不均化して２分子の重亜硫酸塩を生じる。全ての塩は種々の程度まで溶解して、溶媒和された重亜硫酸アオニン種、亜硫酸アニオン種、およびメタ重亜硫酸アニオン種と一緒に溶媒和されたアルカリ金属カチオン種を生じ、これらは全て、その後、平衡混和物の生成に関与する。重亜硫酸アニオンが関与し得る複雑な平衡に鑑みて、本明細書に使用される“重硫酸塩濃度“および“重亜硫酸アニオ濃度“という用語は、個々のアニオン性重亜硫酸根Ｈ３Ｏ，−そのものの濃度のみを云うのとは反対に、亜硫酸種、重亜硫酸根、およびメタ重亜硫酸根の平衡混合物−即ち、水溶液中の亜硫酸から誘導し得る全ての種々のプロトン化種およびイオン化種を含む、全ての塩および溶媒和された種−の全濃度を云うことを意味する。上記の種の全てが結局二酸化硫黄から誘導し得るので、水溶液中の重亜硫酸塩の濃度はまた溶液の“二酸化硫黄含量”という用語で記載し得る。有機相容量対水相容量の比は、重要ではなく、そしてあらゆる便利な値で設定でき、好ましい実施態様では反応中に加水分解される化合物Ａ（これは有機相中に供給される）１モル当り少なくとも１当量の重亜硫酸塩（水相中）を与えることと合致し、そして基質分解を生じる濃度−例えば、約１０％Ｗ／Ｖ−を越えない水相中の重亜硫酸塩の濃度と合致する。上記の考慮事項に鑑みて、重亜硫酸塩の濃度を実施例２３〜２６については水相の０．５％Ｗ／Ｗ　（０，０４８Ｍの重亜硫酸ナトリウム）に設定した。この値は、加水分解された化合物Ａのすべてが化合物Ｃに変換され、そして有機相中のラセミエステル各０．０９４モルに対して１１の水相が使用されるものと仮定して、ラセミ化合物Ａの５０％の加水分解でわずかにモル過剰の重亜硫酸塩を与える。分散相酵素反応に選択された、結果として生じた条件は、周囲温度で０．５％Ｗ／Ｗの重亜硫酸ナトリウムを含む５０ｍＭのｐＨ８，０のリン酸ナトリウム緩衝液より成る水相および約１：１０の有機相対水相の比より成るものであった。これらの条件は、化合物Ａの所望の（２Ｒ，３Ｓ）鏡像異性体の改良された収率を与え、そして化合物Ｃの抑制効果を最小にすることが示された。これらの実験からの結果が実施例２３〜２６および表１２に要約される。実施例１８〜１９、実施例２３〜２６、および表１０〜１２に示されたデータは、３−（４−メトキシフェニル）グリシデートのエステルの酵素的分割中に水相中に重亜硫酸塩が存在することがリパーゼＯＦの酵素活性に極めて有益な効果をもたらし、そして同様に生成物の収率並びに化学的な鏡像異性体純度に顕著な効果をもたらすことを示す。この分割法に使用し得る代表的な酵素の安定性に関して０．０９３Ｍの全濃度の重亜硫酸アニオンの効果を測定し、結果を以下に要約する。（本頁以下余白）バラターゼ　ＭＮ　７．０　４０．１　０．０バラターゼ　Ｍ　８．０　１０．４　０．０リパーゼ　ＭＡＰＡ　７．０　７９゜４　０．０リパーゼ　ＭＡＰ　８．０　４０．１　０．０リパーゼ　ＯＦ’　７．０　８５．１　３２．２リパーゼ　ＯＦ　８．０　７４．５　２８．９リパーゼ　ＰＡ　８，０　９８．１　９５．２Ａ　Ａｍａｎｏ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｅｎｚｙｍｅ　Ｃｏ。Ｍ　Ｍｅｉｔｏ　Ｓａｎｇｙ。Ｎ　Ｎｏｖｏ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ上記の結果は、全ての酵素が重亜硫酸アニオンの存在下でそれらの安定性に関して必ずしも同等ではないことを示唆する。別の根拠が表１３に示され、この表は実施例２７からの結果を要約している。重亜硫酸アニオンの存在下でのリパーゼＯＦについての表１Ｏに示された結果と比較することにより、重亜硫酸塩がバラターゼＭの触媒活性を増強しなかったことが明らかになる。重亜硫酸塩が或種の酵素に関してもち得る有害な影響を減少する目的から、重亜硫酸アニオンの全てを反応の開始時に水相に仕込まずに、重亜硫酸塩を反応したエステルの量の関数として水相に連続的に添加することが可能である。即ち、酵素的反応により生成される量のアルデヒドと反応するのに必要とされる量の重亜硫酸塩を徐々に添加することは本発明の範囲内にある。この形態の重亜硫酸塩の添加には、酵素と相互作用するのに有効な遊離重亜硫酸根の量および濃度を最小に保つという利点を有する。５．４１重亜硫酸塩の使用に関する実施例本発明の幾つかの実施例およびその要素は、以下のとおりである。これらの実施例は本発明の性質を更に説明することを意味し、本発明の範囲の限定として作用するものではない。５．４．１．多相酵素膜のりアクタ−中のトランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルの分割５．４．２．実施例１８−重亜硫酸塩の不存在下の多相酵素膜リアクター中のトランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルの分割実施例１８Ａの酵素的分割は、上記の型の多相／抽出酵素膜リアクター中で行なった。膜をリパーゼＯＦＩＯｇで活性化した。膜活性化操作は、米国特許第４．７９５゜７０４号および１９８６年１０月１日に出願され、”Ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄＡｐｐａｒａｔｕｓ　ｆｏｒ　Ｃａｔａｌｙｓｔ　Ｃｏｎｔａｉｎｍｅｎｔ　ｉｎ　ＭｕｌｔｉｐｈａｓｅＭｅｍｂｒａｎｅ　Ｒｅａｃｔｏｒ　Ｓｙｓｔｅｍ　’と題する米国特許願事９１２、５９５号明細書に於いてＭａｔＳＯｎにより記載されている。トランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステル（化合物Ａ）のラセミ混合物７８ｇ（０，３７５モル）をトルエン３７５ｍ１に溶解することにより有機相を調製した。次に、この有機溶液を中空繊維装置のシェル側で循環させた。ｐＨ８，０の５０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝水溶液４Ｉ！を膜装置のルーメン側で循環させた。ｐＨを、所定のｐＨを監視し維持する装置（“ｐＨスタット”として普通知られている）で水酸化ナトリウムを添加することにより、８．０に維持した。１１時間後に、有機液体を膜装置から排出した。損失を減少するため、膜装置を新しいトルエン５００ｍ１ですすぎ、次に二つのトルエン画分を合わせた。続いて、トルエンを６５°Ｃで減圧下に蒸発させた。残存固体に、固体濃度が２０％（Ｗ／Ｗ）となるように、メタノールを添加した。次に、この溶液を３時間にわたって一２０°Ｃに冷却した。沈澱した結晶を濾過し、乾燥し、そして光学純度に関して分析した。これらの最終結晶をリアクター生成物と称する。結晶化からの母液を減圧下で蒸発させてメタノールを除去した。次に、残液をエステル濃度に関して分析した。この液体の残部は阻害性アルデヒド副生物化合物Ｃを含む。実施例１８Ａに使用したのと同じ酵素を依然として含む同じ膜リアクター中で行なわれた第二の酵素的分割（実施例１８Ｂ）は、最初の分割の終了の１３時間後に開始した。２２時間後に、この第二反応を停止し、有機相を最初の分割の場合と同様にして処理した。これらの二回の分割からの結果を表１Ｏに要約する。５　、４．３．実施例１９−重亜硫酸ナトリウムを使用する多相酵素膜リアクター中のトランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルの分割実施例１９Ａの酵素分割は、上記と同じ型の多相／抽出酵素膜リアクター中で行なった。その膜をリパーゼＯＦ１０ｇで活性化した。膜活性化操作は、米国特許第４　、７９５．７０４号および１９８６年ｌＯ月１日に出願されたＭｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　Ａｐｐａｒａｔｕｓ　ｆｏｒ　Ｃａｔａｌｙｓｔ　Ｃｏｎｔａｉｎｍｅｎｔｉｎ　Ｍｕｌｔｉｐｈａｓｅ　Ｍｅｍｂｒａｎｅ　Ｒｅａｃｔｏｒ　Ｓｙｓｔｅｍ”と題する米国特許願事９１２．５９５号明細書に於いてＭａｔｓｏｎにより記載されている。トランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステル（化合物Ａ）のラセミ混合物７８　ｇ　（０，３７５モル）をトルエン３７５ｍ１に溶解することにより有機相を調製した。次に、この有機溶液を中空繊維装置のシェル側で循環させた。０．２ｍＭのリン酸ナトリウムおよび０．３７５モルの重亜硫酸ナトリウムを含むｐＨ８，０の緩衝水溶液４１を膜装置のルーメン側で循環させた。７．５時間後に、反応を止め、有機液体を膜装置から排出した。損失を減少するため、膜装置を新しいトルエン５００ｍ１ですすぎ、次に二つのトルエン画分を合わせた。続いて、トルエンを６５°Ｃで減圧下に蒸発させた。残存固体に、固体濃度が２０％（Ｗ／Ｗ）となるように、メタノールを添加した。次に、この溶液を３時間にわたって一２０°Ｃに冷却した。沈澱した結晶を濾過し、乾燥し、そして光学純度に関して分析した。これらの最終結晶をリアクター生成物と称する。結晶化からの母液を減圧下で蒸発させてメタノールを除去した。次に、残液をエステル濃度に関して分析した。この液体の残部は阻害性アルデヒド副生物化合物Ｃを含む。実施例１９Ａに使用され、依然として同酵素を含む同じ膜リアクター中で行なわれた第二の酵素的分割（実施例１９Ｂ）は、最初の分割の終了の１６時間後に開始した。７．５時間後に、この第二反応を停止し、有機相を最初の分割の場合と同様にして処理した。実施例１９Ａおよび１９Ｂに使用され、依然として同酵素を含む同じ膜リアクター中で行なわれた第三の酵素分割（実施例１９Ｃ）は、第二の分割の終了の１６時間後に開始した。７．５時間後に、この第三反応を止め、第一および第二の分割の場合と同様にして有機相を処理した。全ての３回の分割からの結果を表１０に要約する。表１０分割番号　１２１２３重亜硫酸塩の使用　無　無　有　有　有反応時間（時間）　１１，０　２２．０　７．５　７．５　７．５転化率（％’）　５７．１　５９．８　５４．５　５４．７　５４．０生成物収率（％）　３６．４　３５．０　３９．２　３８，５　３９．１鏡像異性体選択性Ｅ　１０．９　１４．８　２６．６　１９．４　２３．９転化率は、反応器に仕込まれたラセミエステルの初期量（７８ｇ、０．３７５モル）で割られた、反応したグリシデートエステルの量として定義される。平均反応速度は、全反応時間で割られた、反応したグリシド酸エステルの量である。生成物収率は、反応器に仕込まれたラセミエステルの量（７８ｇ　、０．３７５モル）で割られた、反応器から単離された（実施例１８に記載された操作に従う）分割物質の量である。抑制性アルデヒド生成物の重量は、反応器から単離された非エステル物質の量である。５　、４．４．実施例２〇−重亜硫酸ナトリウムを使用するトランス−３−（４ −メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルの酵素的分割から反応生成物の富化ラセミ化合物ＡｌＯミリモルを含むトルエン５０ｍ１を、リパーゼＭＡＰとして知られているＡｍａｎｏからの市販の酵素製剤１００ｍｇを含むｐＨ８，０の０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液５０ｍ１と共に周囲温度で１８時時間上うした。次に、反応混合物を水で４００ｍ１の容量に希釈し、ジエチルエーテル４００ｍ１で２回抽出した。次に、合わせた有機相を水４００ｍ１で２回逆抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させると、粗生成物１．５ｇ　（７，２ミリモル）が残った。ｃ　＝　１．０でエタノール中のこの物質の旋光は−６８，０度であり、３４．７％の鏡像異性体過剰を示準として使用した）。次に、粗生成物をジエチルエーテル３００ｍ１に再溶解し、有機溶液をｌＯ％重亜硫酸ナトリウム溶液１００ｍ１で２回洗浄した。次に、有機相を水で逆洗し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させると更に純粋な生成物１．４ｇ　（６，７ミリモル）が残った。ｃ　＝　１．０でエタノール中のこの物質の旋光は−１１７，５度の５９．９％の鏡像異性体過剰を示す。５　、４．５．実施例２１−製型亜硫酸ナトリウムを使用するトルエンからのトランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルの回収純粋なラセミ化合物Ａ２．０ｇをジエチルエーテル２００ｍ１に溶解した。次に、この有機溶液をｌＯ％重亜硫酸塩溶液２５０ｍ１で１回洗浄し、水２５０ｍ１で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させると、ラセミ化合物Ａ　１．８ｇ　（これは物質の１０％の損失を示す）が残った。重亜硫酸塩洗浄の不在下の物質の回収は殆ど定量的であった。５　、４．６．実施例２２−反応生成物による代表的な酵素に関する抑制の程度５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８，０）　１２ｍ１および純粋なラセミ化合物Ａの４００ｍＭ　）ルエン溶液８ｍｌを含む反応混合物を迅速に攪拌し、そして反応速度を“ｐＨスタット”として知られている装置により監視した。次に、所定量の所定の市販の酵素製剤を反応混合物に添加し、初期の加水分解速度を計算した。その反応を、化合物０１ミリモル（５０ｍＭ）の存在下、化合物Ｄ１ミリモル（５０ｍＭ）の存在下、そして化合物ＥＩミリモル（５０ｍＭ）の存在下で繰り返した。結果を表１１に示す。表１１化合物：　Ａ　Ａ＋ＣＡ十Ｄ　Ａ＋Ｅリパーゼ　ＯＦ　１．０　０．６３　１．１８　＞１．５０リパーゼ　ＭＡＰ　１．０　０．７３　０，９９　１．０３リパーゼ　Ｐ　Ｌ、０　１．００　１．０？　１．０６バラターゼ　Ｍ　１．０　０．３８　＞１．０　１．６９ネ註）：相対的初期速度は酵素間で規格化されない。５　、４．７．実施例２３−重亜硫酸ナトリウムを使用するトランス−３−（４ −メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルの分割０、５ｗ／ｖ％の重亜硫酸ナトリウムを含むｐＨ８，０の５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液の溶液４００ｍ１を、６００ｍ１ビーカー中で７．８ｇ　（３７，５ミリモル、約０．８８Ｍ）を含むトルエン４２．５ｍｌと一緒に攪拌し、そしてｐＨを８．０に保つために水酸化ナトリウムで反応を滴定するように装備されたｐＨスタットにより監視した。これに市販の製剤リパーゼＯＦ　１００ｍｇを添加し、反応を９０分間進行させた。次に、反応混合物を分液ロートに注ぎ、ジエチルエーテル４００ｍ１で２回抽出し、合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥した。エーテルを蒸発すると、Ａが残った。次に、この粗生成物を最小量の熱メタノールから常法で１回再結晶し、再結晶生成物を濾過により回収した。種々の粗生成物および再結晶生成物の鏡像異性体過剰を、（２Ｒ，３Ｓ）鏡像異性体の１００％鏡像異性体過剰として−１９６，２度の標準値を使用して、ｃ　＝　１．０でエタノール中で測定した。示された％収率は、基質の最初の量の％で表わされる生成物の収率である。（２Ｒ，３Ｓ）鏡像異性体の％収率は、ラセミ基質中に最初に存在するこの鏡像異性体量の％で表わされ、そして収率（％）　Ｘ　ｅ、　ｅ、　（％）の積である。結果を表１２に要約する。５　、４．８．実施例２４−重亜硫酸す）　ＩＪウムの不在下のトランス−３− （４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルの分割ｐＨ８，０の５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液の溶液４００ｍ１を、６００ｍ１ビーカー中で７．８　ｇ　（３７，５ミリモル、約０．８８Ｍ）を含むトルエン４２．５＋ｎｌと一緒に攪拌し、そしてｐＨを８．０に保つために水酸化ナトリウムで反応を滴定するように装備されたｐＨスタットにより監視した。これに市販の製剤リパーゼＯＦ　１００ｍｇを添加し、反応を９０分間進行させた。次に、反応混合物を分液ロートに注ぎ、ジエチルエーテル４００ｍ１で２回抽出し、合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥した。ニーが富化された化合物Ａが残った。次に、この粗生成物を最小量の熱メタノールから常法で１回再結晶し、再結晶生成物を濾過により回収した。種々の粗生成物および再結晶生成物の鏡像異性体過剰を、（２Ｒ，３Ｓ）鏡像異性体の１００％鏡像異性体過剰として−１９６，２度の標準値を使用して、ｃ　＝　１．０でエタノール中で測定した。示された％収率は、基質の最初の量の％で表わされる生成物の収率である。（２Ｒ，３Ｓ）鏡像異性体の％収率は、ラセミ基質中に最初に存在するこの鏡像異性体量の％で表わされ、そして収率（％）　Ｘ　ｅ、　ｅ、　（％）の積である。結果を表１２に要約する。５　、４．９．実施例２５−重亜硫酸ナトリウムおよび延長された反応時間を使用するトランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルニスデルの分割０．５ｗ／ｖ％の重亜硫酸ナトリウムを含むｐＨ８，０の５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液の溶液４００ｍ１を、６００ｍ１ビーカー中で７．８ｇ　（３７，５ミリモル、約０．８８Ｍ）を含むトルエン４２．５ｍｌと一緒に攪拌し、モしてｐＨを８．０に保つために水酸化ナトリウムで反応を滴定するように装備されたｐＨスタットにより監視した。これに市販の製剤リパーゼＯＦ　１００ｍｇを添加し、反応を４時間進行させた。次に、反応混合物を分液ロートに注ぎ、ジエチルエーテル４００ｍ１で２回抽出し、合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥した。エーテルを蒸発すると、所望の（２Ｒ，３Ｓ）鏡像異性体が富化された化合物Ａが残った。次に、この粗生成物を最小量の熱メタノールから常法で１回再結晶し、再結晶生成物を濾過により回収した。種々の粗生成物および再結晶生成物の鏡像異性体過剰を、（２Ｒ，３３）鏡像異性体の１００％鏡像異性体過剰として−１９６，２度の標準値を使用して、ｃ　＝　１．０でエタノール中で測定した。示された％収率は、基質の最初の量の％で表わされる生成物の収率である。（２Ｒ，３Ｓ）鏡像異性体の％収率は、ラセミ基質中に最初に存在するこの鏡像異性体量の％で表わされ、そして収率（％）　ｘ　ｅ、　ｅ、　（％）の積である。結果を表１２に要約する。５、４．１０．実施例２６−大規模で重亜硫酸ナトリウムを使用するトランス− ３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルの分割０、５ｗ／ｖ％の重亜硫酸ナトリウムを含むｐＨ８，０の５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液の溶液１２００ｍ１を、２０００ｍ１ビーカー中で２３．４　ｇ　（１１２，５ミリモル、約０．８８Ｍ）を含むトルエン１２７．５ｍｌ　と−緒に攪拌し、そしてｐＨを８．０に保つために水酸化ナトリウムで反応を滴定するように装備されたｐＨスタットにより監視した。これに市販の製剤リパーゼＯＦ　３００ｍｇを添加し、反応を９０分間進行させた。次に、反応混合物を分液ロートに注ぎ、ジエチルエーテル１２００ｍ１で２回抽出し、合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥した。エーテルを蒸発すると、所望の（２Ｒ，３Ｓ）鏡像異性体が富化された化合物Ａが残った。次に、この粗生成物を最小量の熱メタノールから常法で１回再結晶し、再結晶生成物を濾過により回収した。種々の粗生成物および再結晶生成物の鏡像異性体過剰を、（２Ｒ，３Ｓ）鏡像異性体の１００％鏡像異性体過剰として−１９６，２度の標準値を使用して、ｃ　＝　１．０でエタノール中で測定した。示された％収率は、基質の最初の量の％で表わされる生成物の収率である。（２Ｒ，３Ｓ）鏡像異性体の％収率は、ラセミ基質中に最初に存在するこの鏡像異性体量の％で表わされ、そして収率（％）　ｘ　ｅ、　ｅ、　（％）の積である。結果を表１２に要約する。２３　３．４ｇ　４３．６％　−１９３，０９８％　４２．７％２４　３．４ｇ　４３．０％　−１６２，０８２％　３５．２％２５　３．１ｇ　３９．７％　 −１８２，４９３％　３６．９％２６　１１．０ｇ　４７．０％　−１６１，７８２％　３８．５％５．４．１！、実施例２７−パラターゼＭを使用する多相酵素膜リアクター中でのトランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルの分割実施例２７Ａの酵素分割は、上記と同じ型の多相／抽出酵素膜リアクター中で行なった。膜をパラターゼＭ溶液（Ｎｏｖｏ）　１５０ｍ１で活性化した。膜活性化操作は、米国特許第４　、７５９．７０４号および１９８６年１０月１日に出願されたＭｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　Ａｐｐａｒａｔｕｓ　ｆｏｒ　Ｃａｔａｌｙｓｔ　Ｃｏｎｔａ−ｉｎｍｅｎｔ　ｉｎ　Ｍｕｌｔｉｐｈａｓｅ　Ｍｅｍｂｒａｎｅ　Ｒｅａｃｔｏｒ　Ｓｙｔｅｍ”と題する米国特許出願第９１２．５９５号明細書においてＭａｔＳＯｎにより記載されている。トランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルのラセミ混合物７８　ｇ　（０，３７５モル）をトルエン３７５ｍ１に溶解することにより有機相を調製した。次に、この有機溶液を中空繊維装置のシェル側で循環させた。０．２モルのリン酸ナトリウムおよび０．３７５モルの重亜硫酸ナトリウムを含むｐＨ８，０の緩衝液４ｊ７を膜装置のルーメン側で循環させた。７．５時間後に、有機液体を膜装置から排出した。損失を減少するため、膜装置を新しいトルエン５００ｍ１ですすぎ、次に二つのトルエン画分を合わせた。続いて、トルエンを６５°Ｃで減圧下に蒸発させた。残留固体にメタノールを添加して、固体濃度を２０％（Ｗ／Ｗ）となした。次に、この溶液を３時間−２０°Ｃに冷却した。沈澱した結晶を濾過し、乾燥し、そして光学純度に関して分析した。これらの最終結晶をリアクター生成物と称する。結晶化からの母液を減圧下で蒸発させてメタノールを除去した。次に、残留した液体をエステル濃度に関して分析した。この液体の残部は抑制性アルデヒド生成物であると推定される。実施例２７Ａと同じであって、同じ酵素を含む膜リアクター中で行なわれた第二の酵素分割（実施例２７Ｂ）は、最初の分割の終了の１６時間後に開始された。７．５時間後に、この第二反応を停止し、有機相を最初の分割の場合と同様にして処理した。実施例２７Ａおよび２７Ｂと同じであって同じ酵素を含む膜リアクター中で行なわれた第三の酵素分割（実施例２７Ｃ）は、第二の分割の終了の１６時間後に開始された。７．５時間後に、この第三反応を停止し、第一および第二の分割の場合と同様にして有機相を処理した。全ての３回の分割からの結果を表１３に要約する。（本頁以下余白）表１３重亜硫酸塩の使用　有　有　有反応時間（時間）　７．５　７．５　７．５転化率　５１．８　４７．７　４１．６生成物収率（％）　３９．２　４０，４　３５．１３鏡像異性体選択性Ｅ　２６，０　２７．８　１０．８５、４．１２．実施例２８−トルエン中のバッチ反応、それに続くトランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸エステル（ＧＬＯＰ）の直接結晶化ここに記載されるバッチ反応は、上記と同様の多相− 抽出酵素膜リアクター中で行なった。また、リアクターの形状および操作は、生成物結晶化（更に、以下を参照）からの母液が循環され、こうして本発明の酵素的鏡像異性体選択的分割法をよりいっそう経済的に魅力あるものにするように工夫された。しかしながら、この多相酵素分割はまた、攪拌、音波処理により、または分散剤もしくは乳化剤の存在下で誘導される分散条件下で、これらの付加の成分が基質（例えば、ラセミＧＬＯＰ）の分割を実質的な方法で妨害しない限り、行ない得ることはもち論である。膜をリパーゼＯＦ　１０ｇで活性化した。上記のように、米国特許第４　、７９５．７０４号および１９８６年１０月１日に出願された同時係属米国出願第９１２．５９５号明細書にＭａｔｓｏｎルエステル（化合物Ａ）のラセミ混合物２３９．６ｇ　（純度９７．５％、１．１２モル）をトルエン８１４．６ｇに溶解することによた有機相を調製した。次に、この有機溶液を中空繊維膜装置のシェル側で循環させた。カルボニル付加物生成剤としての重亜硫酸ナトリウム１．１４モルを含む緩衝液（ｐＨ８）約１２Ａ’を中空繊維のルーメン側で循環させた。２３時間後に反応を停止し、有機液体を膜装置から排出した。損失を減少するため、膜装置を新しいトルエン５００ｍ１ですすいだ。二つのトルエン画分をＨＰＬＣで別々に分析してそれぞれ中のＧＬＯＰの濃度および鏡像異性体過剰を測定した。（２Ｒ，３Ｓ）エステルおよびラセミエステルの合計量を、以下のようにして測定した。（本頁以下余白）最終有機液体　洗浄液１）全重量（ｇ　）　１０２７．７０　４２１．０５２）　ＧＬＯＰＸステル濃度（ｗ／ｗ）　０．１０２３　０．０１０４３）エステル重量＝全重量×濃度　１０５．１　４．４４）　ｅ、ｅ（％）８２．４　８６．３５）　（２Ｒ，３Ｓ）の量＝エステル重量×ｅ、ｅ８６、７　３．８（２Ｒ，３ジの合計量＝８６．６６＋３．７６＝９０．４２ｇラセミエステルの合計量＝　１８．４７＋０．６０＝　１９．０７ｇ全エステルの合計量＝１０５．１３＋４．３６＝１０９．４９ｇラセミエステルを４℃で溶解するのに必要なトルエンの量は、ラセミエステルの重量をこの温度におけるトルエンへのエステルの溶解度（トルエンＩｇ当り約０．１３ｇのラセミエステル）で割ることにより決定した。その場合、必要なトルエンの重量は１９．０７１０．１３＝　１４６．７ｇであった。二つの有機画分を合わせ、次に、トルエン＋エステルの合計重量が１４６．７＋　１０９．５即ち２５６、２ｇに等しくなるまでトルエンを蒸発させた。次いてエステルおよびトルエンを含む有機濃縮液を、エステルの（２Ｒ，３Ｓ）鏡像異性体を結晶化させるために、４°Ｃに１８時間冷却した。次に沈澱した結晶を濾過して分析する一方、母液を循環用に保存した。回収した固体の量は９１．９ｇであった。ＨＰＬＣ分析は、分割エステルが９９％の鏡像異性体過剰で少なくとも９９％の純度であることを示した。分割エステルの収率は３８．６％であった。トルエンおよび緩衝水溶液中のエステルの新しい溶液を循環させることにより新たな実験を開始した。こうして、合計７回の実験を行なった。表１４に要約される結果は、このバッチ法がラセミグリシド酸エステル１ｋｇ当り０．４１ｋｇのＧＬＯＰを製造することができ、分割ＧＬＯＰが９９％の化学純度および９９％のｅ、　ｅ、を有することを示す。（本頁以下余白）表１４７回の連続バッチ実験からの結果の要約１’　２３　１９．１　９０．４　９２．１　９９．２　９９．９２　２３　１６．５　９６．８　９１．３　９９．０　９３．４３　２３　１６．３　９３．６　８８．６　９８．９　９３．６４　２３　２０．４　９２．８　９１．２　９９．２　９７．５５　２３　２５．２　８７．３　８５．５　９９．０　９７．０６　２３　３５．１　９１．１　８５．６　９８．６　９２．６７″″　３０　４１．４　９４．６　８６．８　９９．０　９０．８合計　１６８１３２．６″６４６．６６２０．１９９．０’　９５．ＯＷ、＝結晶化母液からの循環画分の重量Ｗ、　＝生成物画分の重量Ｗｃ＝ＧＬＯＰ結晶の重量・バッチ７は、最初の６バツチから循環された物質中に一部含まれるラセミエステルを使用して行なった。ｂバッチ１〜６から回収したラセミ物質の量。この混合物は約８６重量％のラセミエステルを含んでし）だ。゛最終生成物は９９％の化学純度を有していた。５、４．１３．実施例２９−高い光学純度の溶液を与えるベンチスケールの分散相酵素的分割ラセミエステル（３１，２ｇ）のトルエン（１７０ｍｌ）溶液を、ＮａｚＳＯｓ　（９，４４ｇ、　０．０７５モル）およびリパーゼ０Ｆ３６０　（０，４ｇ、　Ｍｅｉｔｏ　Ｓａｎｇｙｏ）を含む水性混合物（ｐＨ８に調節）と合わせた。合わせた混合物を室温で１．５時間激しく攪拌した。分散液を遠心分離器中で分離し、トルエン相はキラルＨＰＬＣ分析により光学的に純粋な（２Ｒ，３Ｓ）エステル１４ｇを含むことがわかった。光学的に純粋なＧＬＯＰを含むこのトルエン溶液は、ＧＬＯＰおよび少なくとも一種の他の試薬を伴なう更なる化学変換に適する。図面に記載したように、これらの反応は、典型的には請求核性物質の付加に伴なわれる開環反応に関連する。下記の実施例（項目５．４．１４）から得られた溶液は、同様に、後続の反応に有用である。しかしながら、また、所望のＧＬＯＰの約８０％以上の鏡像異性体過剰を有する富化された溶液は後続の変換に適し得るが、そのｅ、　ｅ、値がわずかに約５０％以上である試料を結晶化し、単離したのち、その後続の反応に使用することが最良であることに注目することも重要である。このようにして、５０％ｅ、　ｅ、溶液を常法で結晶化して１００％ｅ、　ｅ、を有する（２Ｒ，３Ｓ）鏡像異性体が選択的に得られた。５、４．１４．実施例３０−高度に分割されたＧＬＯＰｔ７）有機溶液を与える大規模膜リアクター法項目５．４．２（実施例１９）に概説された操作により、１２イの表面積を有する膜、リパーゼＯＦ　（Ｍｅｉｔｏ　Ｓａｎｇｙｏ）１５０ｇ、ラセミエステル（純度９７．５％、　１０．９６モル）２３４０　ｇ　、およびトルエン約１Ｏｆを使用して酵素的分割条件ムを含んでいた。約１５時間の反応期間後に、有機層を分析し、有機層は９９．０％の鏡像異性体過剰を有する分割ＧＬＯＰ８２３ｇを含むことがわかった。５、４．１５．幾つかの代表的な型の溶媒中のＧＬＯＰの安定性周囲温度に数日間にわたり保たれた芳香族溶媒中の分割ＧＬＯＰの溶液は、物質または光学活性の損失に対して安定であることに注目するべきである。対照的に室温に数日間係たれたラセミエステルの飽和メタノール溶液は、経時的にエステル含量の著しい減少を示した。２日後に、ＨＰＬＣ分析は、最初の量の約９％のエステルが分解して、おそらく開環化合物になったことを明らかにした。この場合、メタノールはベンジル炭素に結合する。６日目には、エステルの最初の量の約半分しか残らなかった。別の実験では、膜リアクター系中で２種類の溶媒、トルエンおよびメチルイソブチルケトンを使用して、異なる濃度のグリシジルエステルにおいて測定した。これらの有機溶液を５０ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ８，０）と別々に接触させて酵素的分割条件を模擬した。有機溶液中に存在するエステルの量を数時間にわたって監視した。その結果は、ＭＩＢＫ溶液中のエステルがトルエン中のエステルの分解速度定数の値の約３倍である速度定数で分解することを示す。それ故、グリシジルエステルは核性溶媒、特にメタノールのような酸性プロトンを有する溶媒中ではあまり安定でないことが明らかである。ＭＩＢＫ、メチル− ｔ−ブチルエーテル、ジエチルエーテル、ブチルエーテル等のようなあまり核性でない官能基を有する他の型の溶媒は、酵素的反応および／または結晶化段階用の溶媒としていっそう望ましい。ジクロロメタン、クロロホルム、フレオン、ヘキサン、ヘプタン、イソオクタン、シクロヘキサン等のような比較的に非極性の溶媒も、グリシジルエステルの安定性および溶解性に関して好適であることがわかった。実用上の問題として、有機反応溶媒中の酵素基質の最低溶解度は少なくとも約５０ｇ／ｌであるべきである。より希薄な溶液が許容し得る場合には、有機溶媒中の基質の溶解度は殆ど問題にならない。最も好ましい溶媒は非求核性の芳香族溶媒であることが明らかである。これらの溶媒の例には、ベンゼン、トルエン、キシレン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼン、またはこれらの混合物が含まれるがこれらに限定されるものではない。トルエンが特に好ましい。メタノール中で行なわれた結晶化実験の予測不可能性（再現不可能性でさえも）の更なる証明として、下記の表１５中の結果が提示される。これらの結果により示されるように、メタノールからの所望の物質の回収は非常に良好であり得る。同時に、同じ操作は分割生成物を与えない。対照的に、トルエン中で行なった結晶化は、−貫して優れた結果を与えた。（本頁以下余白）表１５メタノール中の結晶化の試みの結果エステル重量　ｅ、　ｅ、　’　予　想　回　収　回収率（ｇ）（％）　Ｗ、　Ｗｃ　％１１３．０８　８５．２８　９６．４３　５７．２０　５９．３１１４．０１　８７．５０　２５．１０　２１．６７　８６．３２５．１０’　１８．０２　７１．８５０．２０　０．００　０．０１１３．５６　８４．４０　２３．９６　２１．４２　８９．４２３．９６　１５．５０　６４．７２３．９６　２１．８９　９１．４２３．９６　０．００　０，０１１３．３８　８４．３０　２３．８９　６．８８　２８．８２３．８９　２２，６９　９５．０２３．８９　２５．０９　１０５．０２３．８９　１９．３３　８０．９１０８．７３　８４．３６　２２，９３　２２．２９　９７．２２２．９３　１１．６３　５０．７２２．９３　２０．００　８７．２２２．９３　２０．６２　８９．９１１０．１８　８４．１５　２３．１７　２２．２５ｂ９６．０２３．１７　０，００　０．０２３．１７　０．００　０．０２３．１７　１８．７９１′８１．１１１７．１５　８０．４３　２３．５５　２１，１３ゝ　８９．７７０．６５　６１．３８’　８６．９１これらの値は溶液中の基質のｅ、　ｅ、を反映する。ｂこれらの結晶化はトルエン溶媒中で行なった。５．５．溶媒の選択に関する更なる考察有機相は、エステルおよびエポキシド官能基の両方の加水分解に対して基質分子にある程度の保護を与えることが既に示された。このような保護は、ラセミ基質だけでなく、３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルの全ての立体異性体におよぶ。しかしながら、多相反応における有機相としての溶媒の選択はまた、酵素触媒の反応速度および立体選択性の両方における活性に影響を与え得る。幾つかのモデル酵素の性能における幾つかの型の溶媒の効果を明らかにするため、追加の研究を行なった。５．５．１．酵素活性に及ぼす溶媒の効果有機相の組成が所定の酵素の活性に影響を与えるかどうかを決めるために、水混和性有機溶媒、１．４−ジオキサンを含む多くの有機溶媒を選択した。ｐＨの変化の効果もこれらの実験で考慮した。二種の酵素、リパーゼＭ　−Ａ　Ｐ　（Ａｍａｎｏ　Ｅｎｚｙｍｅ　Ｃｏｒｐ、　）およびリパーゼＯＦ３６０　（Ｍｅｉｔｏ　Ｓａｎｇｙｏ）を、この研究のために選択した。このデータを得るための一般的操作を、以下に記載する。ラセミ３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステル（１０，０ミリモル、２．０８ｇ）を、選択された有機溶媒５０ｍ１に溶解した。次いで、この溶液を２５０ｍ１の振どうフラスコ中の選択されたｐＨ１即ちｐＨ７，０またはｐＨ８，０の２００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液５０ｍ１に添加した。次に、選択された市販の酵素製剤（１００ｍｇ）　、リパーゼＭ−ＡＰまたはリパーゼ○ Ｆ３６０を添加した。フラスコを閉じ、周囲温度（２０〜２５℃）で１８時間攪拌した。次に、反応混合物を分液ロートに注ぎ、有機層を除去しく水と混和性である１、４−ジオキサンの場合は例外である）、そして水層をジエチルエーテルで洗浄した。次に、有機層を合わせ、水で逆洗し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。有機溶媒を減圧下で蒸発させた。次に、回収したエステルを計量し、更に精製しないで光学純度（鏡像異性体過剰、即ちｅ、　ｅ、　）に関して調べた。酵素的反応から回収されたエステル物質の光学活性をｃ　＝　！、　Ｏでエタノール中で測定し、このために、　［α］ｏ＝−１９６．２°の値を（２Ｒ，３Ｓ）異性体の１００％のｅ、　ｅ、とじて使用した。鏡像異性体選択性値Ｅ　ａｐｐは、基質の非酵素非特異的分解について未修正の計算Ｅ値である。５０を越えると計算された値は、　“大″として任意に表わされる。種々の酵素／　ｐＨ／有機溶媒の組合せに適用されるこの操作を使用して得られた結果を、下記の表に示す。（本頁以下余白）表１６ｐＨ７，０におけるリパーゼＯＦ　３６０による３−（４−メトキンフェニル）グリシド酸メチルエステルの立体特異的加水分解有機相　％加水分解　［α１ｏ　％ｅ、　ｅ、Ｅ　ａｐｐノクロヘキサン　６１．５　−１．１　０．６　］、、０１．４−ジオキサン　５６．３　−１０．３　５．２　１．１Ｍｅｔ−Ｂｕｏ　５４．８　−２８，５　１４．５　１．４ＣＨＣ１，２０，７−２１，１１０，８２，７ＣＣ１４３０，３−１０，０５，１１，３トルエン　４５．７　−５９．７　３０．４　２．８ＭＩＢＫ　２２．１ −６０．４３０．８大ベンゼン　７０．７　−１０５．３　５３．７　２．５ｐ −キシレン　４２．８　−３９．７　２０．２　２．１（本頁以下余白）表１７ｐＨ８，０におけるリパーゼＯＦ　３６０による３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルの立体特異的加水分解有機相　％加水分解　［α１．　％ｅ、　ｅ、Ｅ　ａｐｌ］シクロヘキサン　５６．７　−２．３　１．２　１．０１．４−ジオキサン　１６．８　−５．１　２．６　１．３Ｍｅｔ−Ｂｕｏ　４２．３　−４６．６　２３．８　２．４ＣＨＣ１，１１，１−１１，１５，７２，８ＣＣ１４４２，３−４１，９２１，４２，２トルエン　２７．９　−９４．５　４８．２　大ＭＩＢＫ　３８．５　−８３．６　４２．６　７．９ベンゼン　３７．７　−９９．５　５０．７　１８．７ｐ−キシレン　３５．１　−１０４．６　５３．３　大（本頁以下余白）表１８ｐＨ７，０におけるリパーゼＭ−ＡＰによる３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルの立体特異的加水分解有機相　％加水分解　［α１゜　％ｅ、　ｅ、Ｅ　ａｔ］りシクロヘキサン　６４．４　−１．３　０．７　１．０１．４−ジオキサン　３４．１　−０．３　 −０　１．ＯＭｅｔ−ＢｕＯ４７，１−４７，３２４，１２，２ＣＨＣ１３１６，８−３，２１，６１，０ＣＣ１，４７，１−５１，８２６，４２，３トルエン　３８．９　−８５．８　４３．７　８．２ＭＩＢＫ　２８．８−９１．１４６．４大ベンゼン　３４．６　−９３．７　４７．８　３１．６ｐ−キシレン　４１．８　−６５．４　３３．３　４．２（本質以下余白）表１９ｐＨ８，０におけるリパーゼＭ−ＡＰによる３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルの立体特異的加水分解有機相　％加水分解　［α］。　％ｅ、　ｅ、Ｅ　ａｌｌｌ）シクロヘキサン　６５．９　−１．４　０，７　１．０１．４−ジオキサン　１９．２　−０．４　−０　１．３Ｍｅｔ−Ｂｕｏ　４９．５　−４０．３　２０．５　１．８ＣＨＣ１，１９，２−０，４−０１，０ＣＣ１４４７，１−４９，０２５，０２，２トルエン　３０．３　−７８．５　４０．０　３５．６ＭＩＢＫ　１５．９−３８．７１９．７大ベンゼン　３７．５　−１０４．２　５３．１　２７．８ｐ− キシレン　４１．８　−６９．７　３５．５　３．７５．５．２、基質エステルの非酵素的分解の測定これらの実験の後に、別の因子を考察した。あらゆる化合物の界面活性は表面活性剤、例えばタンパク質により影響されるので、酵素の存在は基質化合物の非酵素的非特異的分解に影響を与えると予想し得る。この命題を試験するため、反応混合物中の加水分解酵素に代えてウシ血清アルブミン（Ｂ　Ｓ　Ａ）を使用する対照実験を行なった。便宜のため、塩素化炭素水素およびｐ−キシレンを省いた。このデータを得るための一般的方法を、以下に記載する。ラセミ３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステル（１０，０ミリモル、２．０８　ｇ　）を、選択された有機溶媒５０ｍ１に溶解し、２５０ｍ１振どうフラスコ中で選択されたｐＨ（７，０，８，０または８．５）の２００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液５０ｍ１に添加した。次に、ウシ血清アルブミン（Ｂ　Ｓ　ＡＳｌ　００ｍｇ）を添加した。フラスコを閉じ、周囲温度（２０〜２５ ℃）で１８時間攪拌した。次に、反応混合物を分液ロートに注ぎ、有機層を除去しく水と混和性である１、４−ジオキサンの場合は例外である）、水層をジエチルエーテルで洗浄した。次に、有機層を合わせ、水で逆洗し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。次に、有機溶媒を減圧下で除去し、回収したエステルを計量して非酵素的分解の程度を測定した。種々のＢＳＡ／　ｐＨ／有機溶媒の組合せに適用されたこれらの実験の結果を表２０に示す。（本質以下余白）表２０％分解ＢＳＡの存在下の３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルの非酵素的分解の測定有機相　ｐＨ７，０ｐＨ８，０ｐＨ８，５シクロヘキサン　７１．６　３８．５１．４−ジオキサン　４０．９　２１．６Ｍｅｔ−ＢｕＯ４１，８２２，１トルエン　ＮＤ　１４．３　１９．ＩＭＩＢＫ　ＮＤ　Ｉ５．０　１２．０ベンゼン　３８．５．　１４．４このデータを使用して、表１６〜１９に示されたデータを修正して基質の酵素触媒加水分解の速度および特異性のみを反映させることが可能である。この修正データを下記の表に示す。（本質以下余白）表２１リパーゼＯＦ　３６０に関する修正転化率および鏡像異性体選択性の値転化率　Ｅ　ｃｏｒ有機相　ｐＨ７，０ｐＨ８，０ｐＨ７，０ｐＨ８，０ンクロヘキサン　０　１８．２　１．９　１．０１．４−ジオキサ７１５，４　０　５．ＩＭｅｔ−Ｂｕｏ　１８．７　２０．２　４０．９トルエン　ＮＤ　１３．６　大ＭＩＢＫ　ＮＤ　２３．５大ベンゼン　３２．２　２３．３　大　大（本質以下余白）表２２リパーゼＭ−ＡＰに関する修正転化率および鏡像異性体選択性の値転化率　Ｅ　ｃｏｒ有機相　ｐＨ７，０ｐＨ８，０ｐＨ７，０ｐＨ８，０シクＤヘキサ７　０　２７．４　１．０１．４−ノオキサン　０　０　大Ｍｅｔ−ＢｕＯ５，３２７，４大　４．１トルエン　ＮＤ　１６．０　大ＭＩＢＫ　ＮＤ　１．０大ベンゼン　０　２３．１　大先のデータから、三つの有機溶媒、ＭＩＢＫ、ベンゼンおよびトルエンは、リパーゼＭ−ＡＰおよびリパーゼＯＦ　３６０の両方で観察された最高の鏡像異性体選択性を与える物理化学的特性を有する魅力的な水相／有機溶媒界面を与えることがわかる。そのデータは、ＭＩＢＫおよびトルエンが基質の非酵素触媒分解に対してほぼ同じ程度の保護を与えることを示す。５．６．カルボニル付加物生成剤を用いる抽出による粗反応生成物の酵素的分割後浄化ラセミ基質の有効な酵素的分割を行なう好ましい方法は、カルボニル付加物生成剤が水相中に既に存在する多相系を伴なうが、事状（例えば、付加物生成剤に対する酵素の極度の感受性）によってはこれらの好ましい条件下で分割を行なうことが不可能であることかある。驚くべきことに、化合物Ａ　（ＧＬＯＰ）の鏡像異性体選択的エステル加水分解の場合には、加水分解副生成物、ｐ−（メトキシ）フェニルアセトアルデヒドは粗有機溶液をカルボニル付加物生成剤の水溶液で抽出することにより簡単に首尾良く除去し得ることがわかった。このよう　“洗浄“工程が未処理の初期の粗有機層に対する洗浄された溶液の旋光により測定されるより高い光学活性を有する分割生成物（これは有機層中に残存する）を生じるという発見は、更に驚くべきことである。更に、カルボニル付加物生成剤の添加は通常可逆的であるので、カルボニル副生物は洗浄水溶液から回収して分離目的に利用し得る。重亜硫酸付加物およびシップ塩基は、例えば、酸性条件下で容易に分解でき、こうして有機溶媒可溶性カルボニル化合物を簡単な有機溶媒抽出工程により水層から回収し得る。本発明の上記の特色は、以下の実施例により良く説明される。５．６．１．実施例３４−・−水性重亜硫酸アニオンによる抽出による粗有機溶液の精製１０ミリモルのラセミ化合物Ａを含むトルエン（５０ｍｌ）を、リパーゼＭ−ＡＰとして知られるＡｍａｎｏからの市販酵素製剤１００ｍｇを含むｐＨ８，０の０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液５０ｍ１と共に周囲温度で１８時間振とうした。次に、反応混合物を水で４００ｍ１の容量まで希釈し、ジエチルエーテル４００ｍ１で２回抽出した。次に、合わせた有機相を水（２ｘ　４００ｍ１）で逆洗し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させると、粗生成物１．５　ｇ　（７，２ミリモル）が残った。ｃ＝１．０でエタノール中のこの物質の旋光は−６８，０° であり、３４．７％の鏡像異性体過剰を示した。旋光に関する−１．９６．２° の値は、エタノール中で測定された（２Ｒ，３Ｓ）異性体に等しい。次に、粗生成物をジエチルエーテル３００ｍ１に再溶解し、有機溶液を１０％重亜硫酸ナトリウム溶液１００ｍ１で２回洗浄した。次に、有機相を水で逆洗し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させると、洗浄生成物１．４　ｇ　（６，７ミＩＪモル）が残った。ｃ＝１゜０でエタノール中のこの物質の旋光は−１１７，５°であり、所望の化合物Ａの５９．９％の鏡像異性体過剰をした。しかしながら、１０％重亜硫酸塩溶液はまたその他の潜在的な電子試薬の不在下で化合物Ａのエポキシド官能基を攻撃し、したがって反応処理中の化合物Ａの損失を生じることがわかった。この潜在的な問題は、純粋なラセミ化合物２．、Ｏｇをジエチルエーテル（２００ｍｌ）に溶解し、１０％重亜硫酸塩水溶液２５０ｍ１で１回抽出する実験により説明された。次に、有機層を常法で処理してラセミ化合物Ａ　１．８ｇを得た。重亜硫酸塩の不在下の水洗は、出発ラセミ体のほぼ定量的な回収を与える。多数の他の試薬を有効なカルボニル付加物生成剤として利用し得ることにも注目すべきである。これらの化合物は水混和性であってよく、そしてイオン化できるかまたは電荷を支持できることが好ましい。重亜硫酸塩により生成される付加物の他に、シッフ塩基、オキシム、ヒドラゾン、カルバゾン、アセタール、チオアセタール、イミダシリン、ヒドロキシルイミン、ハロヒドリン、シアノヒドリン、アミノニトリル等の他の付加物を生成させてもよく、これらは水層に対して更に有利な溶媒相分配係数を有し得る。このような付加物は、電荷を支持し、したがって水層中のその溶解性を増大するように設計することが最も有利である。このような付加物生成剤の代表例には、数種をあげるとグリニヤール試薬、Ｎ−（カルボキシメチル）ピリジニウムクロリドヒドラジド、（カルボキシメチル）トリメチルアンモニウムクロリドヒドラジド、Ｎ、Ｎ−ジメチルヒドラジン、セミカルバジド、ヒドロキシルアミンおよびアミノ酸等が含まれるが、これらに限定されるものではない。５．７．オキシラン環の反応性グリシジルエステル基質中のエポキシド環の不安定性は、分割された高光学純度の生成物の良好な収率を確保するための多段階法の各段階に及ぶことが明らかである。この方法の各段階において、本発明では、熟慮された開環反応、好ましくは立体化学的に予測できる様式で進行する開環反応が意図される時点まで、エポキシド環が保存される条件が見出された。こうして、多相反応条件から始めて、好適な有機反応溶媒の同定、結晶化条件、粗混合物の精製、および後続のホモキラル中間体の利用という本発明の目的の全てを、本発明は越えた。加えて、本発明は、経済性および便宜の両方で前例のない光学活性のグリシジルエステル中間体の大規模な製造方法を提供する。先に検討したように、これらの中間体は、再結晶物質として、あるいはきわめて好都合には、分割法から得られる溶液中で使用することができる。これらのその後の変換の化学は、この論議において強調されていないが、それにもかかわらず非常に重要である。関心のあるキラル中間体を伴なうその後の化学変換の更に詳しい説明に関しては、例えば下記の既存の文献が参照される。Ｉｎｏｕｅらに付与された米国特許第４．４２０．６２８号明細書（特に、オキシランのルイス酸触媒開環にＴｒａｎｓ、　１１９８４．１７２５および同文献、１９８５．４２１（ＧＬＯＰとチオフェノールの反応における立体化学的考察およびレギオ化学的考察）。これらの文献のすべての開示は参考として本明細書に含まれる。本発明は、上記の実験により、または使用した反応関与体、溶媒、溶液、膜もしくは触媒により、その範囲を限定されない。何となれば、それぞれのものは本発明の説明としてのみ意図されるからである。加えて、請求の範囲に記載の方法に利用され、そして本明細書に記載された方法の機能上の均等物は本発明の範囲内にある。本明細書に示され、記載された変更の他に、本発明の種々の変更は、以上の説明および明細書から当業者に明らかになる。このような変更は請求の範囲の範囲内に入る。トランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸エステルＯシス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸エステル俳国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】

１．式Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）（式中Ｒ１はフェニルまたは置換フェニルであり、Ｒ２はアルコールから誘導された基である）を有するグリシド酸エステル化合物の光学活性ジアステレオマーを含有する有機溶液を得るに当たり、（ａ）水非混和性有機溶媒中に溶解した、第一および第２の鏡像異性体の混合物として存在する式Ｉの化合物のジアステレオマーを含有する有機溶液を調製し、そして、（ｂ）前記ジアステレオマーの有機溶液を、前記第２の鏡像異性体が富化された有機溶液を生成させるに有効な条件下に、前記第１の鏡像異性体の鏡像異性体選択的加水分解を触媒し得る酵素および水を含有する水性混合物と接触させる、ことを含んでなる方法。
２．前記第２の鏡像異性体が富化された有機溶液を該水性混合物から分離することをさらに含んでなる、請求の範囲１記載の方法。
３．前記第２の鏡像異性体が富化された有機溶液を、該有機溶液中に存在する可能性のあるすべての非エステルカルボニル含有副生物を除去するに有効な条件下に、カルボニル付加物形成剤の水性混合物と接触させることをさらに含んでなる、請求の範囲１記載の方法。
４．前記非エステルカルボニル含有副生物を回収することをさらに含んでなる、請求の範囲３記載の方法。
５．前記富化された有機溶液から、前記第２の鏡像異性体を単離することをさらに含んでなる、請求の範囲１記載の方法。
６．前記第２の鏡像異性体を、前記富化された有機溶液から結晶化により単離する、請求の範囲５記載の方法。
７．前記第２の鏡像異性体が、前記有機溶液中に約５０パーセントまたはそれ以上の鏡像異性体過剰率で存在する、請求の範囲６記載の方法。
８．前記第２の鏡像異性体が富化された有機溶液を、該第２の鏡像異性体および少なくとも一種の付加的反応試薬を包含するそれに続く化学的変換において利用することをさらに含んでなる、請求の範囲１記載の方法。
９．前記第２の鏡像異性体が、前記有機溶液中に約８０パーセントまたはそれ以上の鏡像異性体過剰率で存在する、請求の範囲８記載の方法。
１０．前記化学的変換が、前記第２の鏡像異性体の開環反応を含む、請求の範囲８記載の方法。
１１．前記開環反応が酸によって促進される、請求の範囲１０記載の方法。
１２．前記付加的試薬が求核性である、請求の範囲８記載の方法。
１３．前記付加的試薬がオルト−アミノチオフェノールである、請求の範囲８記載の方法。
１４．前記付加的試薬がオルト−ニトロチオフェノールである、請求の範囲８記載の方法。
１５．前記水非混和性有機溶媒が非求核性である、請求の範囲１記載の方法。
１６．前記水非混和性有機溶媒が非求核性芳香族溶媒である、請求の範囲１記載の方法。
１７．前記水非混和性有機溶媒がハロゲン化されている、請求の範囲１記載の方法。
１８．前記水非混和性有機溶媒がハロゲン化された非求核性溶媒である、請求の範囲１記載の方法。
１９．前記水非混和性有機溶媒が塩素化された非求核性芳香族溶媒である、請求の範囲１記載の方法。
２０．前記水非混和性有機溶媒が、ベンゼン、トルエン、キシレン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼン、メチルイソブチルケトン、メチルｔ−ブチルエステル、ジエチルエステル、ジクロロメタン、クロロホルム、ヘキサン、ヘプタン、イソオクタン、シクロヘキサン、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求の範囲１記載の方法。
２１．前記水非混和性有機溶媒がトルエンである、請求の範囲１記載の方法。
２２．前記水性混合物がカルボニル付加物形成剤をさらに含有する、請求の範囲１記載の方法。
２３．前記カルボニル付加物形成剤が水混和性である、請求の範囲３、４、または２２記載の方法。
２４．前記カルボニル付加物形成剤が電荷を支持し得るものである、請求の範囲３、４または２２記載の方法。
２５．前記カルボニル付加物形成剤が重亜硫酸アニオンである、請求の範囲３、４または２２記載の方法。
２６．前記カルボニル付加物形成剤がアミンである、請求の範囲３、４または２２記載の方法。
２７．前記カルボニル付加物形成剤がアミノ酸である、請求の範囲３、４または２２記載の方法。
２８．前記カルボニル付加物形成剤が、Ｎ−（カルボキシメチル）−ピリジニウムクロライドヒドラジド、（カルボキシメチル）トリメチルアンモニウムクロライドヒドラジド、Ｎ、Ｎ−ジメチルヒドラジン、セミカルバジド、およびヒドロキシルアミンからなる群から選択される、請求の範囲３、４または２２記載の方法。
２９．前記酵素が加水分解酵素である、請求の範囲１記載の方法。
３０．前記酵素がプロテアーゼ、エステラーゼ、およびリパーゼからなる群から選択される、請求の範囲１記載の方法。
３１．前記酵素がリパーゼである、請求の範囲１記載の方法。
３２．前記酵素が、精製酵素、部分精製酵素、細胞抽出物、細胞溶解物、および細胞全体からなる群から選択された形態で提供される加水分解酵素である、請求の範囲１記載の方法。
３３．前記酵素が微生物由来の加水分解酵素である、請求の範囲１記載の方法。
３４．前記微生物がムコール属、カンジダ属、シュードモナス属、バチルス属、およびアスペルギルス属からなる群から選択される、請求の範囲３３記載の方法。
３５．前記加水分解酵素がカンジダ属由来のリパーゼである、請求の範囲３３記載の方法。
３６．前記加水分解酵素がカンジダ・シリンドラセア由来のリパーゼである、請求の範囲３２記載の方法。
３７．前記酵素が哺乳動物由来の加水分解酵素である、請求の範囲３３記載の方法。
３８．前記加水分解酵素が、ブタ肝臓エステラーゼ、ブタ膵臓リパーゼ、トリプシン、キモトリプシン、パンクレアチン、およびコレステロールエステラーゼからなる群から選択される、請求の範囲３７記載の方法。
３９．前記ジアステレオマーが式Ｉのトランス−グリシド酸エステル化合物である、請求の範囲１記載の方法。
４０．Ｒ１が４−メトキシフェニル基である、請求の範囲１記載の方法。
４１．Ｒ２がメチル基である、請求の範囲１記載の方法。
４２．前記ジアステレオマーがトランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルである、請求の範囲１記載の方法。
４３．前記第１の鏡像異性体が（２Ｓ、３Ｒ）−トランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルである、請求の範囲４２記載の方法。
４４．前記第２の鏡像異性体が（２Ｒ、３Ｓ）−トランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルである、請求の範囲４２記載の方法。
４５．前記ジアステレオマーがシス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルである、請求の範囲１記載の方法。
４６．前記第１の鏡像異性体が（２Ｓ、３Ｓ）−シス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルである、請求の範囲４５記載の方法。
４７．前記第２の鏡像異性体が（２Ｒ、３Ｒ）−シス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルである、請求の範囲４６記載の方法。
４８．前記有機溶液および前記水性混合物が、工程（ｂ）において該有機溶液または該水性混合物の一方の他方中における分散物を形成させることにより接触される、請求の範囲１記載の方法。
４９．前記分散物が、撹拌タンク反応器、充填床反応器、および流動床反応器からなる群から選択される反応器内に含有される、請求の範囲４８記載の方法。
５０．前記分散物からの前記酵素の回収をさらに含んでなる、請求の範囲４８記載の方法。
５１．前記有機溶液および前記水性混合物が、膜反応器内の膜の両側に位置する状態において、工程（ｂ）で接触される、請求の範囲１記載の方法。
５２．前記酵素が前記反応器の前記膜内に固定化される、請求の範囲５１記載の方法。
５３．式Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）（式中Ｒ１はフェニルまたは置換フェニルであり、Ｒ２はアルコールから誘導された基である）を有する光学活性トランス−３−（アリール）グリシド酸エステル化合物を含有する有機溶液を得るに当たり、（ａ）非求核性水非混和性芳香族溶媒中に溶解した、第１および第２の鏡像異性体の混合物として存在する式Ｉのトランス−３−（アリール）グリシド酸エステル化合物を含有する有機溶液を調製し、そして、（ｂ）前記化合物の有機溶液を、前記第２の鏡像異性体が富化された有機溶液を生成させるに有効な条件下に、前記第一の鏡像異性体の鏡像異性体選択的加水分解を触媒し得る酵素および水を含有する水性混合物と接触させる、ことを含んでなる方法。
５４．式Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）（式中Ｒ１はフェニルまたは置換フェニルからなる群から選択され、そしてＲ２はアルコールから誘導された基である）を有するトランス−グリシド酸エステル化合物のラセミ混合物を分割するにあたり、（ａ）第１および第２の立体異性体を含有する式Ｉのラセミ化合物を水非混和性有機溶媒中に溶解させることにより、該ラセミ化合物の有機溶液を調製し、そして、（ｂ）前記第１および第２の立体異性体の有機溶液を、水、酵素、およびカルボニル付加物形成剤を含有する水性混合物と接触させ、ここで前記酵素は該第１の立体異性体の加水分解を立体選択的に触媒してをし、式Ｒ２ＯＨのアルコール化合物および下記式ＩＩＩ：Ｒ１−ＣＨ２−ＣＨＯ（ＩＩＩ）を有するアルデヒド副生物を形成させるものであり、ここで前記式ＩＩＩのアルデヒドは前記カルボニル付加物形成剤と反応して水溶性付加物を形成するものである、ことを含んでなり、それにより前記第１の立体異性体から奥質的に分割された前記第２の立体異性体の有機溶液を得るものである方法。
５５．式Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）（式中Ｒ１はフェニルまたは置換フェニルからなる群から選択され、そしてＲ２はアルコールから誘導された基である）を有するトランス−グリシド酸エステル化合物のラセミ混合物を分割するにあたり、（ａ）第１および第２の立体異性体を含有する式Ｉのラセミ化合物を水非混和性有機溶媒中に溶解させることにより、該ラセミ化合物の有機溶液を調製し、そして、（ｂ）前記第１および第２の立体異性体の有機溶液を、水、酵素、および重亜硫酸アニオンを含有する水性混合物と接触させ、ここで前記酵素は該第１の立体異性体の加水分解を立体選択的に触媒して、式Ｒ２ＯＨのアルコール化合物および下記式ＩＩＩ：Ｒ１−ＣＨ２−ＣＨＯ（ＩＩＩ）のアルデヒド副生物を形成させるものであり、また前記式ＩＩＩのアルデヒドは前記重亜硫酸アニオンと反応して下記式（ＩＶ）：Ｒ１−ＣＨ２−ＣＨＯＨ−ＳＯ−３（ＩＶ）の水溶性付加物を形成するものである、ことを含んでなり、それにより前記第１の立体異性体から実質的に分割された前記第２の立体異性体の有機溶液を得るものである方法。
５６．式Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）（式中Ｒ１はフェニルまたは置換フェニルからなる群から選択され、そしてＲ２はアルコールから誘導された基である）を有するトランス−グリシド酸エステル化合物のラセミ混合物を分割するにあたり、（ａ）水非混和性有機溶媒と、第１および第２の立体異性体を含有する式Ｉのうセミ化合物を含有する有機溶液を膜の第１の側面に供給し、そして、（ｂ）膜の第２の側面には、水、酵素、および重亜硫酸アニオン剤を含有する水性混合物を供給し、ここで前記酵素は該第１の立体異性体の加水分解を立体選択的に触媒して式Ｒ２ＯＨのアルコール化合物および下記式（ＩＩＩ）：Ｒ１−ＣＨ２−ＣＨＯ（ＩＩＩ）のアルデヒド副生物を形成するものであり、また前記式ＩＩ１のアルデヒドは前記重亜硫酸アニオンと反応して下記式（ＩＶ）：Ｒ１−ＣＨ２−ＣＨＯＨ−ＳＯ−３（ＩＶ）の水溶性付加物を形成するものである、ことを含んでなり、それにより前記第１の立体異性体から実質的に分割された前記第２の立体異性体の有機溶液を得るものである方法。
５７．式Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）（式中Ｒ１はフェニルまたは置換フェニルからなる群から選択されそして、Ｒ２はアルコールから誘導された基である）を有するトランス−グリシド酸エステル化合物のラセミ混合物を分割するにあたり、（ａ）水非混和性有機溶媒および第１および第２の立体異性体を含有する式Ｉのラセミ化合物を含有する有機溶液を、酵素活性化膜の一方の側面に供給し、ここで該膜を活性化する該酵素は該第１の立体異性体の加水分解を触媒して式Ｒ２ＯＨのアルコール化合物および下記式（ＩＩｌ）：Ｒ１−ＣＨ２−ＣＨＯ（ＩＩＩ）のアルデヒド副生物を形成するものであり、そして、（ｂ）同時に、重亜硫酸アニオンを含有する、前記有機溶液と実質的に非混和性である水溶液を前記酵素活性化膜の反対側に供給し、ここで該式ＩＩＩのアルデヒドが該重亜硫酸アニオンと反応して下記式（ＩＶ）：Ｒ１−ＣＨ２−ＣＨＯＨ−ＳＯ−３（ＩＶ）の水溶性付加物を形成する、ことを含んでなり、それにより該有機溶液の該ラセミ化合物が分割されて前記式Ｉの第２の立体異性体が主に該有機溶液中に残存するものである方法。
５８．立体選択的酵素触媒加水分解工程後に、実質的に分割された第２の立体異性体を、前記有機溶液から単離することをさらに含んでなる、請求の範囲５４、５５、５６、または５７記載の方法。
５９．立体選択的酵素触媒加水分解工程後に、光学的に純粋な形態で前記第２の立体異性体を前記有機溶液から単離することをさらに含んでなる、請求の範囲５４、５５、５６、または５７記載の方法。
６０．式Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）（式中Ｒ１はフェニルまたは置換フェニルからなる群から選択され、そしてＲ２はアルコールから誘導された基である）を有するグリシド酸エステル化合物のジアステレオマーの光学純度を高めるにあたり、（ａ）第１および第２の鏡像異性体の混合物として存在する前記式Ｉの化合物のジアステレオマーを水非混和性有機溶媒中に溶解させることにより、該ジアステレオマーの有機溶液を調製し、そして（ｂ）前記ジアステレオマーの有機溶液を、水、酵素、およびカルボニル付加物形成剤を含有する水性混合物と接触させ、ここで前記酵素は該第１の鏡像異性体の加水分解を鏡像異性体選択的に触媒して、式Ｒ２ＯＨのアルコール化合物および下記式ＩＩＩ：Ｒ１−ＣＨ２−ＣＨＯ（ＩＩＩ）のアルデヒド副生物を形成するものであり、また前記式ＩＩＩのアルデヒドは前記カルボニル付加物形成剤と反応して水溶性付加物を形成するものである、ことを含んでなり、それにより、より高い割合の前記第２の鏡像異性体および高まった光学純度を有する前記ジアステレオマーの有機溶液を得るものである方法。
６１．式Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）（式中Ｒ１はフェニルまたは置換フェニルからなる群から選択され、そしてＲ２はアルコールから誘導された基である）を有するグリシド酸エステル化合物のジアステレオマーの光学純度を高めるにあたり、（ａ）水非混和性有機溶媒および式Ｉの化合物のジアステレオマーを含有しており、該ジアステレオマーは膜の第１の面に第１および第２の鏡像異性体の混合物として存在するものである有機溶液を調製し、そして（ｂ）膜の第２の側面には、水、酵素、および重亜硫酸アニオン剤を含有する水性混合物を供給し、ここで前記酵素は該第１の鏡像異性体の加水分解を立体選択的に触媒して式Ｒ２ＯＨのアルコール化合物および下記式ＩＩＩ：Ｒ１−ＣＨ２−ＣＨＯ（ＩＩＩ）のアルデヒド副生物を形成するものであり、また、前記式ＩＩＩのアルデヒドは前記重亜硫酸アニオンと反応して下記式ＩＶ：Ｒ１−ＣＨ２−ＣＨＯＨ−ＳＯ３（ＩＶ）の水溶性付加物を形成するものである、ことを含んでなり、それにより前記有機溶液のラセミ化合物が分割され、前記式Ｉの第２の立体異性体が前記有機溶液中に残存するものである方法。
６２．式Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）（式中Ｒ１はフェニルまたは置換フェニルからなる群がら選択され、そしてＲ２はアルコールから誘導された基である）を有するグリシド酸エステル化合物のジアステレオマーの光学純度を高めるにあたり、（ａ）水非混和性有機溶媒および式Ｉの化合物のジアステレオマーを含有しており、該ジアステレオマーは酵素活性化膜の一方の面に第１および第２の鏡像異性体の混合物として存在するものである有機溶液、ここで該膜を活性化する該酵素は該第１の鏡像異性体の加水分解を触媒して式Ｒ２ＯＨのアルコール化合物および下記式（ＩＩＩ）：Ｒ１−ＣＨ２−ＣＨＯ（ＩＩＩ）のアルデヒド副生物を形成するものであり、（ｂ）同時に、重亜硫酸アニオンを含有し、前記有機溶液と実質的に非混和性である水溶液を、前記酵素活性化膜の他方の面に供給し、ここで該式ＩＩＩのアルデヒドは該重亜硫酸アニオンと反応して、下記式ＩＶ：Ｒ１−ＣＨ２−ＣＨＯＨ−ＳＯ３（ＩＶ）の水溶性付加物を形成するものである、ことを含んでなり、それにより該有機溶液の該ラセミ化合物が分割されて前記式Ｉの第２の鏡像異性体が主に該有機溶液中に残存するものである方法。
６３．鏡像異性体選択的酵素触媒加水分解工程の後に、より高い割合の第２の鏡像異性体を有する前記ジアステレオマーを前記有機溶液から単離することをさらに含んでなる、請求の範囲６０、６１、または６２記載の方法。
６４．鏡像異性体選択的酵素触媒加水分解工程後に、光学的に純粋な形態の前記第２の鏡像異性体を前記有機溶液から単離することをさらに含んでなる、請求の範囲６０、６１、または６２記載の方法。
６５．前記酵素を前記分散物から回収することをさらに含んでなる、請求の範囲５４、５５または６０記載の方法。
６６．Ｒ２がメチル基である、請求の範囲５４、５５、５６、５７、６０、６１または６２記載の方法。
６７．前記ジアステレオマーが、式Ｉのトランス−グリシド酸エステル化合物である、請求の範囲６０、６１または６２記載の方法。
６８．前記ジアステレオマーが、トランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルである、請求の範囲６０、６１または６２記載の方法。
６９．前記第１の鏡像異性体が（２Ｓ、３Ｒ）−トランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルである、請求の範囲６８記載の方法。
７０．前記第２の鏡像異性体がトランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルである、ジアステレオマーである、請求の範囲６８記載の方法。
７１．前記ジアステレオマーが、シス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルである、請求の範囲６０、６１、または６２記載の方法。
７２．前記第１の鏡像異性体が（２Ｓ、３Ｓ）−シス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルである、請求の範囲７１記載の方法。
７３．前記第２の鏡像異性体が（２Ｒ、３Ｒ）−シス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルである、請求の範囲７１記載の方法。
７４．前記第１および第２の立体異性体が式１のトランスーグリシド酸エステル化合物である、請求の範囲５４、５５、５６、または５７記載の方法。
７５．前記第１および第２の立体異性体がトランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルである、請求の範囲５４、５５、５６または５７記載の方法。
７６．前記第１の立体異性体がトランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルである、（２Ｓ、３Ｒ）ジアステレオマーである、請求の範囲７５記載の方法。
７７．前記第２の立体異性体がトランス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルである、（２Ｓ、３Ｒ）ジアステレオマーである、請求の範囲７５記載の方法。
７８．前記第１および第２の立体異性体がシス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルである、請求の範囲５４、５５、５６および５７記載の方法。
７９．前記第１の立体異性体が、（２Ｓ、３Ｒ）−シス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルである、請求の範囲７８記載の方法。
８０．前記第１の立体異性体が（２Ｓ、３Ｒ）−シス−３−（４−メトキシフェニル）グリシド酸メチルエステルである、請求の範囲７８記載の方法。
８１．前記カルボニル付加物形成剤が水混和性である、請求の範囲５４または６０記載の方法。
８２．前記カルボニル付加物形成剤がアミンである、請求の範囲５７または６０記載の方法。
８３．前記カルボニル付加物形成剤が重亜硫酸アニオンである、請求の範囲５９または６０記載の方法。
８４．前記カルボニル付加物形成剤がアミノ酸である、請求の範囲５４または６０記載の方法。
８５．前記酵素がエステラーゼである、請求の範囲５４、５５、５６、５７、６０、６１または６２記載の方法。
８６．前記水非混和性有機溶媒が水非混和性芳香族溶媒である、請求の範囲５４、５５、５６、５７、６０、６１または６２記載の方法。
８７．前記水非混和性有機溶媒がトルエンである、請求の範囲５４、５５、５６、５７、６０、６１または６２記載の方法。
８８．前記有機溶液および前記水性混合物が、工程（ｂ）において、該有機溶液または該水性混合物の一方の他方内における分散物を形成することにより接触されるものである請求の範囲５４、５５または６０記載の方法。
８９．前記水性混合物および有機溶液の分散物が、撹拌タンク反応器、充填床反応器、および流動床反応器からなる群から選択される反応器内に含有される、請求の範囲８８記載の方法。
９０．工程（ｂ）の酵素的加水分解反応終了後に、重力沈降、遠心分離、および膜ろ過からなる群から選択される方法により前記有機溶液および水性混合物を分離することをさらに含んでなる、請求の範囲８８記載の方法。
９１．前記分散物を、工程（ｂ）の酵素的加水分解反応の終了後に、該分散物から酵素を除去する目的で吸着剤と接触させ、それにより、有機溶液および水性混合物の酵素除去分散物の分離を促進するものである、請求の範囲８８記載の方法。
９２．前記酵素除去分散物を形成する前記有機溶液および水性混合物が、重力沈降、遠心分離、および膜ろ過からなる群から選択される方法により分離される、請求の範囲９１記載の方法。
９３．工程（ｂ）の酵素が、微粒子状の固相支持体上に固定化される、請求の範囲５４、５５、５６、６０または６１記載の方法。
９４．式ＩＩＩのアルデヒド副生物が酵素触媒されたエステル加水分解のインヒビターである、請求の範囲５４、５５、５６、５７、６０、６１または６２記載の方法。
９５．前記水性混合物のｐＨが約２から約１０の範囲である、請求の範囲５４、５５、５６、６０または６１記載の方法。
９６．前記水溶液のｐＨが約２から約１０の範囲に維持される、請求の範囲５７または６２記載の方法。
９７．ｐＨが好ましくは約７．０から約８．５の範囲に維持される、請求の範囲９５記載の方法。
９８．前記水性混合物中の前記重亜硫酸アニオンの濃度が、約０．１から約１０％Ｗ／Ｖである、請求の範囲５５、５６および６１記載の方法。
９９．前記水溶液中の前記重亜硫酸アニオンの濃度が、約０．１から約１０％Ｗ／Ｖである、請求の範囲５７または６２記載の方法。
１００．前記重亜硫酸アニオンの濃度が好ましくは約０．５から約５％Ｗ／Ｖである、請求の範囲９８記載の方法。
１０１．重亜硫酸アニオンが反応中に水性混合物に連続して加えられる、請求の範囲５５、５６、５７、６１または６２記載の方法。
１０２．重亜硫酸アニオンがアルカリ金属塩、亜硫酸、および二酸化硫黄からなる群から選択される形態で提供される、請求の範囲５５、５６、５７、６１または６２記載の方法。
１０３．重亜硫酸アニオンがアルカリ金属亜硫酸塩、アルカリ金屋重亜硫酸塩、およびアルカリ金属メタ重亜硫酸塩からなる群から選択される形態で提供される、請求の範囲１０２記載の方法。
１０４．アルカリ金属がナトリウムである、請求の範囲１０２記載の方法。
１０５．前記酵素が前記重亜硫酸アニオンの存在によって不都合に阻害されない、請求の範囲５５、５６、５７、６１または６２記載の方法。
１０６．提供される前記式Ｉの第１の立体異性体に対する前記重亜硫酸アニオンの化学量論量比が約０．１から約１０の範囲にある、請求の範囲５５、５６または５７記載の方法。
１０７．前記化学量論量比が好ましくは少なくとも約１から２の範囲である、請求の範囲１０６記載の方法。
１０８．前記有機溶液量に対する前記水溶液量の比が約０．５から約１０の範囲である、請求の範囲５４、５５、５６、６０または６１記載の方法。
１０９．前記有機溶液量に対する前記水溶液量の比が約０．５から約２０の範囲である、請求の範囲５７または６２記載の方法。
１１０．前記比が好ましくは約１から約１０の範囲である、請求の範囲１０８記載の方法。
１１１．前記置換フェニル基Ｒ１の置換基が、ヒドロキシ、メトキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アリールアルコキシ、およびハライドからなる群から選択される、請求の範囲５４、５５、５６、５７、６０、６１、または６２記載の方法。
１１２．前記フェニル置換基が、グリシドエステル部分に対してオルト、メタ、およびパラの１またはそれ以上の位置を占めている、請求項１１１記載の方法。
１１３．Ｒ１が４−メトキシフェニル基である、請求の範囲５４、５５、５６、５７、６０、６１、または６２記載の方法。
１１４．Ｂ２が１から８個の炭素原子を含有する直鎖アルキル、３から８個の炭素原子を含有する分枝アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、およびアルコキシアルキルからなる群から選択される、請求の範囲５４、５５、５６、５７、６０、６１、または６２記載の方法。
１１５．Ｂ２がメチル、エチル、イソプロピル、およびイソブチルからなる群から選択されるアルキルである、請求の範囲１１４記載の方法。
１１６．Ｒ２が、メタオキシエチルおよびエトキシエチルからなる群から選択されるアルコキシアルキルである、請求の範囲１１４記載の方法。
１１７．Ｒ２が、トリフルオロエチル、トリクロロエチル、クロロエチル、ベンジル、フェニルエチル、およびナフチルメチルからなる群から選択される置換アルキルである、請求の範囲１１４記載の方法。
１１８．Ｒ２が、フェニルおよびナフチルからなる群から選択されるアリールである、請求の範囲１１４記載の方法。
１１９．前記酵素が加水分解酵素である、請求の範囲５４、５５、５６、５７、６０、６１、または６２記載の方法。
１２０．前記加水分解酵素がプロテアーゼ、エステラーゼ、およびリパーゼからなる群から選択される、請求の範囲１１９記載の方法。
１２１．前記加水分解酵素が、精製酵素、細胞抽出物、細胞溶解物、部分精製酵素、および細胞全体からなる群から選択される形態で供給される請求の範囲５４、５５、５６、５７、６０、６１、または６２記載の方法。
１２２．前記加水分解酵素が微生物由来である、請求の範囲５４、５５、５６、５７、６０、６１、または６２記載の方法。
１２３．前記加水分解酵素が、ムコール属、カンジダ属、シュードモナス属、バチルス属、およびアスペルギルス属からなる群から選択される微生物に由来する、請求の範囲１２２記載の方法。
１２４．前記加水分解酵素がアスペルギルス・オリゼ由来のプロテアーゼである、請求の範囲１２３記載の方法。
１２５．前記加水分解酵素がシュードモナス・フルオレッセンス由来のリパーゼである、請求の範囲１２３記載の方法。
１２６．前記加水分解酵素が、アマノ国際酵素工業のプロザイム６である、請求の範囲１２４記載の方法。
１２７．前記加水分解酵素が哺乳動物由来のものである、請求の範囲５４、５５、５６、５７、６０、６１、または６２記載の方法。
１２８．前記加水分解酵素がブタ肝臓エステラーゼ、ブタ膵臓リパーゼ、トリプシン、キモトリプシン、パンクレアチン、およびコレステロールエステラーゼからなる群から選択される、請求の範囲１２７記載の方法。
１２９．前記酵素的加水分解が約１５℃から７０℃の温度で行われる、請求の範囲５４、５５、５６、５７、６０、６１、または６２記載の方法。
１３０．前記加水分解が好ましくは約２０℃から約４５℃の温度で行われる、請求の範囲１２９記載の方法。
１３１．前記水非混和性有機溶媒がトルエン、ｔ−ブチルメチルエーテル、ヘキサン、クロロヘキサン、メチルイソブチルケトン、およびエチルアセテートからなる群から選択される、請求の範囲５４、５５、５６、５７、６０、６１または６２記載の方法。
１３２．膜が親水性膜である、請求の範囲５６、５７、６１、または６２記載の方法。
１３３．膜が疎水性膜である、請求の範囲５６、５７、６１、または６２記載の方法。
１３４．膜がミクロ細孔性膜である、請求の範囲５６、５７、６１、または６２記載の方法。
１３５．前記膜を活性化する酵素が、該膜の表面上にゲル層として付置されている、請求の範囲５７または６２記載の方法。
１３６．前記膜を活性化する酵素が該膜の内部に位置している、請求の範囲５７または６２記載の方法。
１３７．前記膜を活性化する酵素が非対称のミクロ細孔性膜の細孔空間内に含有される、請求の範囲５７または６２記載の方法。
１３８．前記膜を活性化する酵素が該膜の細孔壁表面上において該膜に吸着されている、請求の範囲５７または６２記載の方法。
１３９．前記膜を活性化する酵素が該膜の細孔内の重合体ゲル内に捕捉されている、請求の範囲５７または６２記載の方法。
１４０．前記膜を活性化する酵素が該膜の細孔壁表面に共有結合されている、請求の範囲５７または６２記載の方法。
１４１．前記膜を活性化する酵素が該膜の細孔空間内で架橋されている、請求の範囲５７または６２記載の方法。
１４２．前記膜を活性化する酵素が該膜の細孔壁表面上で架橋されている、請求の範囲５７または６２記載の方法。
１４３．膜の形態が平板シート、中空繊維、および管からなる群から選択される、請求の範囲５６、５７、６１、または６２記載の方法。
１４４．膜が、スキンで覆われたミクロ細孔性膜である、請求の範囲６５記載の方法。
１４５．膜が、再生セルロース、セルロースのエステル、ポリアクリロニトリル、ポリアクリロニトリル共重合体、ポリウレタン含有共重合体、ポリアリールスルホン、ポリアリールエーテルスルホン、ポリアリールスルホンブレンド、ポリアリールエーテルスルホンブレンド、ポリビニリデンフルオライド、ポリテトラフルオロエチレン、ポリビニルアルコール、脂肪族ポリアミド、芳香族ポリアミド、ポリイミド、ポリエーテルイミド、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリオレフィン、ポリベンズイミダゾール、およびポリベンズイミダゾロンからなる群から選択される物質により構成される、請求の範囲５６、５７、６１、または６２記載の方法。
１４６．前記反応がバッチ様の様式により行われる、請求の範囲５４、５５、５６、５７、６０、６１、または６２記載の方法。
１４７．前記反応が連続的様式で行われる、請求の範囲５４、５５、５６、５７、６０、６１、または６２記載の方法。
１４８．ｐＨが好ましくは約７．０から約８．５の範囲に維持される、請求の範囲９６記載の方法。
１４９．前記重亜硫酸アニオンの濃度が好ましくは約０．５から約５％Ｗ／Ｖである、請求の範囲９９記載の方法。
１５０．アルカリ金属がナトリウムである、請求の範囲１０３記載の方法。
１５１．前記比率が好ましくは約１から約１０の範囲である、請求の範囲１０９記載の方法。
１５２．前記加水分解酵素がカンジダ属由来のリパーゼである、請求の範囲１２４記載の方法。
１５３．前記加水分解酵素がカンジダ・シリンドラセア由来のリパーゼである、請求の範囲１２３記載の方法。
１５４．前記加水分解酵素が、メイトウサンギョウ社のカンジダ・リパーゼーＯＦである、請求の範囲１５２記載の方法。
１５５．式Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）（式中Ｒ１はフェニルまたは置換フェニルであり、Ｒ２はアルコールから誘導された基である）を有するトランス−グリシド酸エステル化合物のラセミ混合物を分割するにあたり、（ａ）水非混和性有機溶媒中に溶解した、第１および第２の立体異性体の混合物として存在する式Ｉの化合物のラセミ混合物を含有する有機溶液を調製し、そして（ｂ）前記第１および第２の立体異性体の有機溶液を、前記第２の立体異性体が富化された有機溶液を生成させるに有効な条件下で、該第１の立体異性体の立体選択的加水分解を触媒しうる酵素および水を含有する水性混合物と接触させる方法。
１５６．ｐＨが好ましくは約７．０約８．５の間に維持される、請求の範囲９６記載の方法。
１５７．前記重亜硫酸アニオンの濃度が好ましくは約０．５から５％Ｗ／Ｖである、請求の範囲９９記載の方法。
１５８．前記加水分解が好ましくは約１５℃で行われる、請求の範囲１２９記載の方法。