WO2003092760A1 - Strukturierte komposite als matrix (scaffold) für das tissue engineering von knochen - Google Patents

Strukturierte komposite als matrix (scaffold) für das tissue engineering von knochen Download PDF

Info

Publication number
WO2003092760A1
WO2003092760A1 PCT/EP2003/003582 EP0303582W WO03092760A1 WO 2003092760 A1 WO2003092760 A1 WO 2003092760A1 EP 0303582 W EP0303582 W EP 0303582W WO 03092760 A1 WO03092760 A1 WO 03092760A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
composite according
binder
composite
collagen
macro
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/EP2003/003582
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Berthold Nies
Brigitte Jeschke
Patricia Schaffner
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Merck Patent GmbH
Biomet Deutschland GmbH
Original Assignee
Merck Patent GmbH
Biomet Deutschland GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merck Patent GmbH, Biomet Deutschland GmbH filed Critical Merck Patent GmbH
Priority to CA2484956A priority Critical patent/CA2484956C/en
Priority to EP03747406A priority patent/EP1523342B1/de
Priority to DE50311735T priority patent/DE50311735D1/de
Priority to AU2003226788A priority patent/AU2003226788A1/en
Priority to DK03747406T priority patent/DK1523342T3/da
Priority to JP2004500942A priority patent/JP2005528144A/ja
Priority to US10/512,763 priority patent/US7578845B2/en
Publication of WO2003092760A1 publication Critical patent/WO2003092760A1/de
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L31/00—Materials for other surgical articles, e.g. stents, stent-grafts, shunts, surgical drapes, guide wires, materials for adhesion prevention, occluding devices, surgical gloves, tissue fixation devices
    • A61L31/14—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L31/146—Porous materials, e.g. foams or sponges
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/40—Composite materials, i.e. containing one material dispersed in a matrix of the same or different material
    • A61L27/44—Composite materials, i.e. containing one material dispersed in a matrix of the same or different material having a macromolecular matrix
    • A61L27/46—Composite materials, i.e. containing one material dispersed in a matrix of the same or different material having a macromolecular matrix with phosphorus-containing inorganic fillers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/56—Porous materials, e.g. foams or sponges
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L31/00—Materials for other surgical articles, e.g. stents, stent-grafts, shunts, surgical drapes, guide wires, materials for adhesion prevention, occluding devices, surgical gloves, tissue fixation devices
    • A61L31/12—Composite materials, i.e. containing one material dispersed in a matrix of the same or different material
    • A61L31/125—Composite materials, i.e. containing one material dispersed in a matrix of the same or different material having a macromolecular matrix
    • A61L31/127—Composite materials, i.e. containing one material dispersed in a matrix of the same or different material having a macromolecular matrix containing fillers of phosphorus-containing inorganic materials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
    • A61F2/02—Prostheses implantable into the body
    • A61F2/28—Bones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
    • A61F2/02—Prostheses implantable into the body
    • A61F2/28—Bones
    • A61F2002/2817—Bone stimulation by chemical reactions or by osteogenic or biological products for enhancing ossification, e.g. by bone morphogenetic or morphogenic proteins [BMP] or by transforming growth factors [TGF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
    • A61F2/02—Prostheses implantable into the body
    • A61F2/30—Joints
    • A61F2002/30001—Additional features of subject-matter classified in A61F2/28, A61F2/30 and subgroups thereof
    • A61F2002/30667—Features concerning an interaction with the environment or a particular use of the prosthesis
    • A61F2002/30677—Means for introducing or releasing pharmaceutical products, e.g. antibiotics, into the body
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F2310/00—Prostheses classified in A61F2/28 or A61F2/30 - A61F2/44 being constructed from or coated with a particular material
    • A61F2310/00005—The prosthesis being constructed from a particular material
    • A61F2310/00179—Ceramics or ceramic-like structures
    • A61F2310/00293—Ceramics or ceramic-like structures containing a phosphorus-containing compound, e.g. apatite

Definitions

  • the invention describes a structured composite as a carrier for tissue engineering and implant material of bones (in situ and in vitro) consisting of a bed of porous calcium phosphate granules with a grain size of 0.5 to 10 mm with macro and micro pores, the macro pores being one have an average diameter of 50 to 500 ⁇ m and are bound by a biocompatible binder.
  • Synthetic replacements for autologous bones or donor bones are becoming increasingly important because, on the one hand, the quality of the developed materials increasingly meets customer requirements and, on the other hand, the disadvantages associated with biological materials are avoided, such as, in particular, limited availability, removal problems with autologous bones, risk of disease transmission in donor bones ,
  • An ideal carrier for many areas of application for materials that promote bone regeneration has the following main properties:
  • All components are biocompatible • All components are osteoconductive, i.e. they form a guide rail for the new bone to be formed.
  • All components are biodegradable, preferably through cellular processes that are also responsible for bone remodeling.
  • WO 97/14376 (Orquest Inc.) a porous biodegradable matrix as bone replacement is known which lasts 7 to 14 days after the implantation.
  • the composite forms a network of insoluble biopolymer fibrils, calcium phosphate minerals and others. 30 to 80% by weight mineralized collagen.
  • the particle size of the calcium phosphate mineral is 5 ⁇ m or less.
  • EP-197 693 and EP-270 254 (Collagen Corp.) describe a biologically compatible collagen / calcium phosphate mixture consisting essentially of 60 to 98% by weight of calcium phosphate mineral with the addition of 2 to 40% by weight of a reconstituted atelopeptide fibrillar collagen consists.
  • the particle size of the calcium phosphate is 100 to 2000 ⁇ m.
  • the object of the present invention was to implement a material with the above-mentioned properties on the basis of known and proven components.
  • porous granules of calcium phosphates can be mixed with biocompatible binders, preferably collagen suspensions, and that freeze-drying can be used to produce composites from these suspensions that meet the requirements.
  • the present invention thus relates to a structured composite as a carrier for tissue engineering and bone implant material consisting of a bed of porous calcium phosphate granules, characterized in that the granulate has a grain size of 0.5 to 10 mm with macro and micro pores, wherein the macropores have an average diameter of 50 to 500 ⁇ m and are bound by a biocompatible binder.
  • the micropores preferably have an average diameter of 0.5 to 5 ⁇ m.
  • the binder preferably consists of collagen or hyaloronic acid and can also be crosslinked.
  • the individual granules are evenly distributed, for example in a collagen fleece.
  • the pore system is implemented both in the granules and in the collagen fleece. Due to the compressive strength of the granulate, the composite cannot be compressed, which is particularly important in applications in which the material is placed on a bone bed and borders on the soft tissue with one side, so that it is exposed to the soft tissue pressure. Such cases are very common, especially in the area of spinal surgery.
  • the composite consists of a porous calcium phosphate granulate with a granule size of 0.5 to 10 mm, preferably 1 to 4 mm. Also preferred is a uniform size distribution of the granules in the respective composite, for example 2.0 to 3.2 mm grain size.
  • the granulate consists of one of the calcium phosphates commonly used for bone replacement. Endobon ® or Caicibon ® granules are preferably used. However, glass ceramics can also be used. In the case of coarse-grained granules in particular, ie with a grain size of 2 mm or more, the porosity of the individual grains should be interconnecting, ie the existing pores within the individual grains must be connected to one another.
  • the composite preferably consists of 0.2 to 10% by weight, more preferably 0.2 to 2% by weight, of binder, based on the composite.
  • the primary function of the binder is to bond the granules together and to absorb the autologous factors like a sponge so that they can be optimally localized for use. There is no strong swelling, so that handling is easier. It also serves to simplify the handling of the granular material by preventing dislocalization of the individual grains during the operation and in the first few days afterwards.
  • collagens are used as binders which are already used in the prior art in or as medical devices, in particular type I collagens and mixtures of type I and IM.
  • the origin can be animal, human or recombinant. Fibrillar collagen is preferred, not bovine, but of animal origin.
  • the composites can be loaded with autologous factors such as growth factors, platelet preparations and / or autologous cell preparations and / or cell extracts / protein preparations and these can then also be released to the bones. It is also preferred that the composite is loaded with recombinant factors or their parts such as growth factors, adhesion proteins and / or adhesion peptides. Loading with antibiotics is also preferred.
  • the present invention also relates to a method for producing a structured composite as a carrier for tissue engineering and implant material for bones, characterized by the following features:
  • the present invention also relates to the use of the structured composite according to the invention as a filling material in the area of
  • the composite can be made in different sizes.
  • a composite with the size 8 x 2 cm with a thickness of 0.7 cm is produced from a mixture of 30 g collagen suspension with 7 g calcium phosphate granules. The mixture is frozen overnight, then briefly thawed. The mixture is then freeze-dried under standard conditions. Standard conditions means: freezing phase (-40 ° C, 1-3 hours), heating phase (0 ° C, 1-3 hours), drying phase (20 ° C, 12-18 hours)
  • the product obtained contains 98 to 99% by weight calcium phosphate and 1 to 2% by weight collagen.
  • the composite obtained shows excellent properties when wetted with blood. It sucks up the blood completely. There is no swelling or deformation of the composite.
  • Stability in buffer can be demonstrated over twelve days. Within these twelve days, the composite remains compact and the granules are held together.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Composite Materials (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Prostheses (AREA)

Abstract

Gegenstand der Erfindung ist ein strukturiertest Komposit als Träger für das Tissue Engineering und Implantatmaterial von Knochen bestehend aus einer Schüttung von porösen Calciumphosphat-Granulaten, wobei das Granulat eine Korngrösse von 0.5 bis 10 mm mit Makro- und Mikroporen besitzt, die Makroporen einen mittleren Durchmesser von 50 bis 500 μm haben und durch ein bioverträgliches Bindemittel gebunden sind.

Description

Strukturierte Komposite als Matrix (Scaffoid) für das Tissue Engineering von Knochen
Die Erfindung beschreibt ein strukturiertes Komposit als Träger für das Tissue Engineering und Implantatmaterial von Knochen (in situ und in vitro) bestehend aus einer Schüttung von porösen Calciumphosphat-Granulaten mit einer Korngröße von 0.5 bis 10 mm mit Makro- und Mikroporen, wobei die Makroporen einen mittleren Durchmesser von 50 bis 500 μm haben und durch ein bioverträgliches Bindemittel gebunden sind.
Synthetischer Ersatz für Eigenknochen oder Spenderknochen gewinnt zunehmend an Bedeutung, weil einerseits die Qualität der entwickelten Materialien zunehmend die Anforderungen der Kunden erfüllt und andererseits die mit den biologischen Materialien verbundenen Nachteile vermieden werden, wie insbesondere eingeschränkte Verfügbarkeit, Entnahmeprobleme beim Eigenknochen, Risiko der Krankheitsübertragung beim Spenderknochen.
Um die biologische Wertigkeit der synthetischen Materialien zu erhöhen, gibt es die Ansätze, den Knochenersatz mit rekombinanten Wachstumsfaktoren, autologen Wachstumsfaktoren (Thrombozyten-Präparationen), Adhäsionsfaktoren (RGD-Peptide) und/oder autologen Zellpräparationen (Knochen- markaspirat) aufzuwerten.
Um die gewünschten Eigenschaften von optimierten Knochenersatzmaterialien zu erhalten, gibt es vor allem zwei Entwicklungsschwerpunkte, einmal die mechanische Optimierung für lasttragende Anwendungen bzw. strukturelle Implantate und zum anderen die biologische Optimierung mit dem Ziel einer möglichst schnellen und vollständigen Regeneration von vollwertigen Knochengewebe (während dabei die mechanische Funktion von Metallimplantaten übernommen wird). Die Zielrichtung für biologisch optimierte Knochen-Regenerationsprodukte war lange Zeit auf die Entwicklung rekombinanter Knochenwachstumsfaktoren (insbesondere BMP2 und OP1/BMP7) und deren Kombination mit verschiedenen Trägermaterialien und funktionellen Implantaten konzentriert, wobei in den meisten Fällen allerdings die Entwicklung geeigneter Trägerstrukturen mit geringerer Priorität verfolgt wurde als die des rekombinanten Proteins.
In letzter Zeit hat sich die Zielrichtung mehr und mehr verschoben, u.a. auch deshalb, weil die rekombinanten Wachstumsfaktoren die hohen Erwartungen in klinischen Studien nicht erfüllen konnten.
Attraktive Alternativen sind vor allem in der Verwendung autologer Faktoren wie insbesondere Thrombozyten-Präparationen und den osteogen wirkenden Knochenmarksaspiranten zu sehen. Die Gewinnung dieser Komponenten ist im Vergleich zur Entnahme von eigenem Knochen relativ unaufwendig und in der Menge kaum begrenzt. Zudem werden diese Faktoren anders als Beckenkamm-Spongiosa relativ schnell regeneriert und stehen damit für spätere Eingriffe wieder zur Verfügung.
Bei der Verwendung dieser autologen Faktoren kommt der Auswahl der Trägermaterialien eine entscheidende Bedeutung zu. Ein idealer Träger für viele Einsatzgebiete von Materialien, die die Knochenregeneration fördern, hat vor allem folgende Eigenschaften:
• Alle Komponenten sind biokompatibel • Alle Komponenten sind osteokonduktiv, d.h. sie bilden eine Leitschiene für den neu zu bildenden Knochen.
• Alle Komponenten sind biodegradierbar, vorzugsweise durch zelluläre Prozesse, die auch für den Knochenumbau verantwortlich sind.
• Falls nicht oder nur eingeschränkt biodegradierbar, sollten die Komponenten fest in die gebildete Knochensubstanz eingebaut werden. • Poröse Struktur mit interkonnektierenden Makroporensystem zum Einwachsen von Kapillaren in die Matrix
• Hohe Gesamtporosität zur Aufnahme der autologen Faktoren
• Ausreichende mechanische Eigenschaften, so dass das Porensystem auch bei Druckbelastung durch anliegendes Bindegewebe erhalten bleibt und für das Einwachsen von ortständigen Gewebe verfügbar ist.
• Flexibilität des Trägermaterials zur guten Anpassung an die Implantatkontur und allgemein gute Handhabbarkeit.
• Geringe Immunogenität.
Ein solches ideales Trägermaterial ist trotz des vielfältigen Angebots an Knochenersatzmaterialien derzeit nicht verfügbar. Vor allem die Kombination von hoher Porosität und Flexibilität bei gleichzeitiger Druckfestigkeit ist bisher nicht realisiert.
Aus der WO 97/14376 (Orquest Inc.) ist eine poröse biodegradierbare Matrix als Knochenersatz bekannt, die 7 bis 14 Tage nach der Implantation anhält. Das Komposit bildet ein Netzwerk aus unlöslichen biopolymeren Fibrillen, Calciumphosphatmineralien und u.a. 30 bis 80 Gew. % mineralisiertes Kollagen. Die Partikelgröße des Calciumphosphatminerals beträgt 5 μm oder weniger.
Die EP-197 693 und EP-270 254 (Collagen Corp.) beschreiben eine biologisch verträgliche Collagen/Calciumphosphat-Mischung, die im wesentlichen aus 60 bis 98 Gew.% Caiciumphosphatmineral unter Beimengung von 2 bis 40 Gew. % eines rekonstituierten Atelopeptid- fibrillärkollagens besteht. Die Partikelgröße des Caiciumphosphats beträgt 100 bis 2000 μm. Aufgabe der vorliegenden Erfindung war es, auf der Basis bekannter und bewährter Komponenten ein Material mit den oben genannten Eigenschaften zu realisieren.
Es wurde nun überraschend gefunden, dass sich poröse Granulate aus Calciumphosphaten mit bioverträglichen Bindemitteln, vorzugsweise Kollagensuspensionen, mischen lassen und dass durch Gefriertrocknung aus diesen Suspensionen Komposite hergestellt werden können, die den Anforderungen entsprechen.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist somit ein strukturiertes Komposit als Träger für das Tissue Engineering und Implantatmaterial von Knochen bestehend aus einer Schüttung von porösen Calciumphosphat-Granulaten, dadurch gekennzeichnet, dass das Granulat eine Korngröße von 0.5 bis 10 mm mit Makro- und Mikroporen besitzt, wobei die Makroporen einen mittleren Durchmesser von 50 bis 500 μm haben und durch ein bioverträgliches Bindemittel gebunden sind.
Bevorzugt besitzen die Mikroporen einen mittleren Durchmesser von 0.5 bis 5 μm.
Das Bindemittel besteht vorzugsweise aus Kollagen oder Hyaloronsäure und kann auch vernetzt vorliegen.
In diesem Komposit sind die einzelnen Granula gleichmäßig z.B. in einem Kollagenvlies verteilt. Das Porensystem ist sowohl in den Granula als auch im Kollagenvlies realisiert. Durch die Druckfestigkeit des Granulats lässt sich das Komposit nicht komprimieren, dies ist vor allem in Anwendungen entscheidend, in denen das Material auf ein Knochenlager aufgelegt wird und mit einer Seite an das Weichgewebe grenzt, damit also dem Weichgewebedruck ausgesetzt ist. Solche Fälle sind vor allem im Bereich der Wirbelsäulenchirurgie sehr häufig. Erfindungsgemäß besteht das Komposit aus einem porösen Calciumphosphat-Granulat mit einer Größe der Granulatkörner von 0.5 bis 10 mm, vorzugsweise 1 bis 4 mm. Bevorzugt ist weiterhin eine gleichmäßige Größenverteilung des Granulats im jeweiligen Komposit z.B. 2.0 bis 3.2 mm Korngröße.
Das Granulat besteht aus einem der für Knochenersatz gebräuchlichen Caiciumphosphate. Vorzugsweise wird Endobon® oder Caicibon® Granulat verwendet. Es können aber auch Glaskeramiken eingesetzt werden. Insbesondere bei grobkörnigen Granulaten, d.h. mit einer Korngröße ab 2 mm aufwärts, sollte die Porosität der Einzelkörner interkonnektierend sein, d.h. die bestehenden Poren innerhalb der Einzelkörner müssen miteinander in Verbindung stehen.
Das Komposit besteht vorzugsweise aus 0.2 bis 10 Gew. %., noch bevorzugter aus 0.2 bis 2 Gew.% Bindemittel, bezogen auf das Komposit.
Das Bindemittel hat vor allem die Funktion, die Granulatkörner miteinander zu verbinden und wie ein Schwamm die autologen Faktoren aufzunehmen, so dass sie für die Anwendung optimal lokalisiert werden können. Es findet keine starke Aufquellung statt, so dass die Handhabbarkeit erleichtert wird. Es dient weiterhin für die Vereinfachung der Handhabung des Granulatmaterials indem es eine Dislokalisation der Einzelkörner während der Operation und in den ersten Tagen danach verhindert.
Als Bindemittel werden vor allem solche Kollagene verwendet, die auch schon im Stand der Technik in oder als Medizinprodukte eingesetzt werden, insbesondere Typ-I-Kollagene und Mischungen aus Typ I und IM. Die Herkunft kann sowohl tierisch, human oder rekombinant sein. Bevorzugt ist fibrilläres Kollagen nicht boviner, aber tierischer Herkunft. Die Komposite können mit autologen Faktoren wie Wachstumsfakoren, Thrombozytenpräparationen und/oder autologe Zellpräparationen und/oder Zellextrakte/Proteinpräparationen beladen werden und diese dann auch an den Knochen abgeben werden. Bevorzugt ist auch, dass das Komposit mit rekombinanten Faktoren oder deren Teilstücke wie Wachstumsfaktoren, Adhäsionsproteine und/oder Adhäsionspeptiden beladen ist. Weiterhin bevorzugt ist die Beladung mit Antibiotika.
Denkbar ist ebenfalls der Einsatz von vernetzter Gelatine anstelle von Kollagen.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist auch ein Verfahren zur Herstellung eines strukturierten Komposits als Träger für das Tissue Engineering und Implantatmaterial von Knochen, gekennzeichnet durch folgende Merkmale:
- Mischen einer Lösung oder Suspension von Bindemittel mit Calciumphosphat-Granulat mit einer Korngröße von 0.5 bis 10 mm mit Makro- und Mikroporen, wobei die Makroporen einen mittleren Durchmesser von 50 bis 500 μm haben; - anschließend tiefgefrieren und auftauen sowie Gefriertrocknung des
Gemisches unter Standardbedingungen.
Bevorzugt ist auch eine nachfolgende chemische Vernetzung.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist auch die Verwendung des erfindungsgemäßen strukturierten Komposits als Füllmaterial im Bereich der
Wirbelsäulen-, Kiefern- oder Gesichtschirurgie
Die Erfindung wird nachfolgend anhand von einem Ausführungsbeispiel näher beschrieben und erläutert. Ausführungsbeispiel:
1. Herstellung
Das Komposit kann in unterschiedlichen Größen hergestellt werden. Aus einem Gemisch von 30 g Collagen-Suspension mit 7g Calciumphosphat- Granulat wird ein Komposit mit der Größe 8 x 2 cm mit 0.7 cm Dicke hergestellt. Das Gemisch wird über Nacht tiefgefroren, dann kurzzeitig aufgetaut. Im Anschluss findet die Gefriertrocknung des Gemisches unter Standardbedingungen statt. Standardbedingungen bedeutet: Einfrierphase (-40° C, 1-3 Std.), Erwärmungsphase (0° C, 1-3 Std.), Trocknungsphase (20° C, 12-18 Std.)
Das erhaltene Produkt enthält 98 bis 99 Gew. % Calciumphosphat und 1 bis 2 Gew. % Collagen.
2. Mischung mit Blut:
Das erhaltene Komposit zeigt hervorragende Eigenschaften bei der Benetzung mit Blut. Es saugt das Blut vollständig auf. Es zeigt sich keine Quellung oder Verformung des Komposits.
3. Stabilität
Eine Stabilität in Puffer kann über zwölf Tage nachgewiesen werden. Innerhalb dieser zwölf Tage bleibt das Komposit kompakt und die Granula werden zusammengehalten.

Claims

Patentansprüche
1. Strukturiertes Komposit als Träger für das Tissue Engineering und Implantatmaterial von Knochen bestehend aus einer Schüttung von porösen Calciumphosphat-Granulaten, dadurch gekennzeichnet, dass das Granulat eine Korngröße von 0.5 bis 10 mm mit Makro- und Mikroporen besitzt, wobei die Makroporen einen mittleren Durchmesser von 50 bis 500 μm haben, gebunden durch ein bioverträgliches Bindemittel.
2. Komposit nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die Mikroporen einen mittleren Durchmesser von 0.5 bis 5 μm besitzen.
3. Komposit nach den Ansprüchen 1 und/oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Größe der Granulatkörner 1 bis 4 mm beträgt.
4. Komposit nach einen der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Bindemittel Kollagen, vernetzte Gelatine oder Hyaloronsäure ist.
5. Komposit nach einen der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass es aus 0.2 bis 10 Gew. % Bindemittel, bezogen auf das Komposit, besteht.
6. Komposit nach einen der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass es aus 0.2 bis 2 Gew. % Bindemittel, bezogen auf das Komposit, besteht.
7. Komposit nach einen der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass das Bindemittel Kollagen aus Typ I -Kollagen oder Mischungen aus
Typ I und III besteht.
8. Komposit nach einen der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, dass das Bindemittel vernetzt wird.
9. Komposit nach einen der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass es mit autologen Faktoren wie Wachstumsfaktoren,
Thrombozytenpräparationen und/oder autologe Zellpräparationen und/oder Zellextrakte/Proteinpräparationen beladen ist.
10. Komposit nach einen der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass es mit rekombinanten Faktoren oder deren Teilstücke wie
Wachstumsfaktoren, Adhäsionsproteine und/oder Adhäsionspeptiden beladen ist.
11. Komposit nach einen der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass es mit Antibiotika beladen ist.
12. Verfahren zur Herstellung eines strukturierten Komposits als Träger für das Tissue Engineering und Implantatmaterial von Knochen, gekennzeichnet durch folgende Merkmale:
Mischen einer Lösung oder Suspension von Bindemittel mit Calciumphosphat-Granulat mit einer Korngröße von 0.5 bis 10 mm mit Makro- und Mikroporen, wobei die Makroporen einen mittleren Durchmesser von 50 bis 500 μm haben; anschließend tiefgefrieren und auftauen sowie Gefriertrocknung des
Gemisches unter Standardbedingungen.
13. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass das Bindemittel nachfolgend chemisch vernetzt wird.
4. Verwendung eines strukturierten Komposits nach einen der Ansprüche 1 bis 11 als Füllmaterial im Bereich der Wirbelsäulen-, Kiefern- oder Gesichtschirurgie.
PCT/EP2003/003582 2002-04-29 2003-04-07 Strukturierte komposite als matrix (scaffold) für das tissue engineering von knochen Ceased WO2003092760A1 (de)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CA2484956A CA2484956C (en) 2002-04-29 2003-04-07 Structured composites as a matrix (scaffold) for the tissue engineering of bones
EP03747406A EP1523342B1 (de) 2002-04-29 2003-04-07 Strukturierte komposite als matrix (scaffold) fur das tissue engineering von knochen
DE50311735T DE50311735D1 (de) 2002-04-29 2003-04-07 Das tissue engineering von knochen
AU2003226788A AU2003226788A1 (en) 2002-04-29 2003-04-07 Structured composites as a matrix (scaffold) for the tissue engineering of bones
DK03747406T DK1523342T3 (da) 2002-04-29 2003-04-07 Struktureret komposit som matrix (Schaffold) for vævs- konstruktion af knogler
JP2004500942A JP2005528144A (ja) 2002-04-29 2003-04-07 骨の組織工学用マトリックス（足場）としての構造複合体
US10/512,763 US7578845B2 (en) 2002-04-29 2003-04-07 Structured composites as a matrix (scaffold) for the tissue engineering of bones

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE10219183 2002-04-29
DE10219183.2 2002-04-29

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2003092760A1 true WO2003092760A1 (de) 2003-11-13

Family

ID=29285040

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/EP2003/003582 Ceased WO2003092760A1 (de) 2002-04-29 2003-04-07 Strukturierte komposite als matrix (scaffold) für das tissue engineering von knochen

Country Status (10)

Country Link
US (1) US7578845B2 (de)
EP (1) EP1523342B1 (de)
JP (1) JP2005528144A (de)
AU (1) AU2003226788A1 (de)
CA (1) CA2484956C (de)
DE (1) DE50311735D1 (de)
DK (1) DK1523342T3 (de)
ES (1) ES2327832T3 (de)
PT (1) PT1523342E (de)
WO (1) WO2003092760A1 (de)

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006031196A1 (en) * 2004-09-14 2006-03-23 Agency For Science, Technology And Research Porous biomaterial-filler composite and a method for making the same
WO2006095154A2 (en) 2005-03-07 2006-09-14 Cambridge Enterprise Limited Biomaterial
WO2007032390A1 (ja) 2005-09-13 2007-03-22 Takiron Co., Ltd. 複合多孔体
EP1820522A1 (de) * 2006-02-20 2007-08-22 Straumann Holding AG Granulatematrix
US7910124B2 (en) 2004-02-06 2011-03-22 Georgia Tech Research Corporation Load bearing biocompatible device
US8002830B2 (en) 2004-02-06 2011-08-23 Georgia Tech Research Corporation Surface directed cellular attachment
US9155543B2 (en) 2011-05-26 2015-10-13 Cartiva, Inc. Tapered joint implant and related tools
US9907663B2 (en) 2015-03-31 2018-03-06 Cartiva, Inc. Hydrogel implants with porous materials and methods
US10350072B2 (en) 2012-05-24 2019-07-16 Cartiva, Inc. Tooling for creating tapered opening in tissue and related methods
US10758374B2 (en) 2015-03-31 2020-09-01 Cartiva, Inc. Carpometacarpal (CMC) implants and methods

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW200400062A (en) * 2002-04-03 2004-01-01 Mathys Medizinaltechnik Ag Kneadable, pliable bone replacement material
US20050278025A1 (en) * 2004-06-10 2005-12-15 Salumedica Llc Meniscus prosthesis
GB2436067A (en) * 2006-03-17 2007-09-19 Apatech Ltd A flowable biomedical filler resisiting flow at higher shear stress or compressive force
FR2911508B1 (fr) * 2007-01-19 2012-11-09 Kasios Substitut osseux a base de ciment phosphocalcique
EP2231210A4 (de) * 2007-12-12 2013-01-23 Warsaw Orthopedic Inc Knochen/kollagen-komposite und ihre anwendungen
US9144629B2 (en) 2010-03-03 2015-09-29 Novabone Products, Llc Ionically crosslinked materials and methods for production
US8795702B2 (en) * 2010-03-03 2014-08-05 Novabone Products, Llc Devices and methods for the regeneration of bony defects
WO2015147923A1 (en) 2010-03-03 2015-10-01 Novabone Products, Llc Kit for delivering bone grafting materials
US8551525B2 (en) 2010-12-23 2013-10-08 Biostructures, Llc Bone graft materials and methods
US9358122B2 (en) 2011-01-07 2016-06-07 K2M, Inc. Interbody spacer
KR101628677B1 (ko) * 2013-04-02 2016-06-09 주식회사 나이벡 세포외기질 단백질-골미네랄 복합체를 함유하는 조직 구조 모사체 및 그 제조방법
JP5899376B2 (ja) * 2013-09-24 2016-04-06 日本特殊陶業株式会社 生体インプラント及びその製造方法
US9463264B2 (en) * 2014-02-11 2016-10-11 Globus Medical, Inc. Bone grafts and methods of making and using bone grafts
US20210244857A1 (en) * 2016-07-25 2021-08-12 Cerapedics, Inc. Peptide-coated calcium phosphate particles
WO2025117313A1 (en) * 2023-11-27 2025-06-05 KYOCERA Medical Technologies, Inc. Biocompatible granule structures

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0197693A2 (de) * 1985-03-28 1986-10-15 COLLAGEN CORPORATION (a Delaware corporation) Xenogene Kollagen/Mineralzubereitungen zur Knochenreparatur
EP0519293A2 (de) * 1991-06-20 1992-12-23 MERCK PATENT GmbH Implantatwerkstoff
DE29922585U1 (de) * 1999-12-22 2000-07-20 Biovision GmbH, 98693 Ilmenau Temporärer Knochendefektfüller

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5246457A (en) 1985-03-28 1993-09-21 Collagen Corporation Xenogeneic collagen/mineral preparations in bone repair
US4774227A (en) 1986-02-14 1988-09-27 Collagen Corporation Collagen compositions for bone repair containing autogeneic marrow
US4865602A (en) 1986-11-06 1989-09-12 Collagen Corporation Gamma irradiation of collagen/mineral mixtures
US5231169A (en) 1990-10-17 1993-07-27 Norian Corporation Mineralized collagen
US5426028A (en) 1991-07-05 1995-06-20 Rush-Presbyterian-St. Lukes Medical Center Screening method for chronic immune dysfunction syndrome
US5356629A (en) 1991-07-12 1994-10-18 United States Surgical Corporation Composition for effecting bone repair
US5320844A (en) 1992-03-12 1994-06-14 Liu Sung Tsuen Composite materials for hard tissue replacement
US5776193A (en) 1995-10-16 1998-07-07 Orquest, Inc. Bone grafting matrix
JP3679570B2 (ja) 1997-03-14 2005-08-03 ペンタックス株式会社 骨補填材及びその製造方法
SE514908C2 (sv) 1998-07-13 2001-05-14 Gs Dev Ab Medel för benrekonstruktion
WO2000007639A1 (en) 1998-08-07 2000-02-17 Tissue Engineering, Inc. Bone precursor compositions
AU766735B2 (en) 1998-09-15 2003-10-23 Isotis N.V. Osteoinduction
JP2001287282A (ja) 2000-04-07 2001-10-16 Bridgestone Corp タイヤの製造方法及びタイヤ
US6949251B2 (en) 2001-03-02 2005-09-27 Stryker Corporation Porous β-tricalcium phosphate granules for regeneration of bone tissue
JP2002325831A (ja) 2001-05-02 2002-11-12 Asahi Optical Co Ltd 生体用充填材、および生体用充填材の製造方法
TW200400062A (en) 2002-04-03 2004-01-01 Mathys Medizinaltechnik Ag Kneadable, pliable bone replacement material

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0197693A2 (de) * 1985-03-28 1986-10-15 COLLAGEN CORPORATION (a Delaware corporation) Xenogene Kollagen/Mineralzubereitungen zur Knochenreparatur
EP0519293A2 (de) * 1991-06-20 1992-12-23 MERCK PATENT GmbH Implantatwerkstoff
DE29922585U1 (de) * 1999-12-22 2000-07-20 Biovision GmbH, 98693 Ilmenau Temporärer Knochendefektfüller

Cited By (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8895073B2 (en) 2004-02-06 2014-11-25 Georgia Tech Research Corporation Hydrogel implant with superficial pores
US8486436B2 (en) 2004-02-06 2013-07-16 Georgia Tech Research Corporation Articular joint implant
US7910124B2 (en) 2004-02-06 2011-03-22 Georgia Tech Research Corporation Load bearing biocompatible device
US8002830B2 (en) 2004-02-06 2011-08-23 Georgia Tech Research Corporation Surface directed cellular attachment
WO2006031196A1 (en) * 2004-09-14 2006-03-23 Agency For Science, Technology And Research Porous biomaterial-filler composite and a method for making the same
AU2006221849B2 (en) * 2005-03-07 2011-08-25 Cambridge Enterprise Limited Biomaterial
WO2006095154A2 (en) 2005-03-07 2006-09-14 Cambridge Enterprise Limited Biomaterial
WO2006095154A3 (en) * 2005-03-07 2007-03-22 Cambridge Entpr Ltd Biomaterial
CN101175513A (zh) * 2005-03-07 2008-05-07 剑桥有限公司 生物材料
JP2008531230A (ja) * 2005-03-07 2008-08-14 ケンブリッジ エンタープライズ リミティド 生体材料
CN101175513B (zh) * 2005-03-07 2012-11-07 剑桥有限公司 生物材料及其制备方法
EP1932550A4 (de) * 2005-09-13 2010-04-14 Takiron Co Zusammengesetztes poröses material
AU2006289855B2 (en) * 2005-09-13 2011-07-28 Teijin Medical Technologies Co., Ltd Composite porous material
KR101269936B1 (ko) 2005-09-13 2013-05-31 타키론 가부시기가이샤 복합 다공체
WO2007032390A1 (ja) 2005-09-13 2007-03-22 Takiron Co., Ltd. 複合多孔体
EP1820522A1 (de) * 2006-02-20 2007-08-22 Straumann Holding AG Granulatematrix
US10376368B2 (en) 2011-05-26 2019-08-13 Cartiva, Inc. Devices and methods for creating wedge-shaped recesses
US9526632B2 (en) 2011-05-26 2016-12-27 Cartiva, Inc. Methods of repairing a joint using a wedge-shaped implant
US11944545B2 (en) 2011-05-26 2024-04-02 Cartiva, Inc. Implant introducer
US9155543B2 (en) 2011-05-26 2015-10-13 Cartiva, Inc. Tapered joint implant and related tools
US11278411B2 (en) 2011-05-26 2022-03-22 Cartiva, Inc. Devices and methods for creating wedge-shaped recesses
US10350072B2 (en) 2012-05-24 2019-07-16 Cartiva, Inc. Tooling for creating tapered opening in tissue and related methods
US10973644B2 (en) 2015-03-31 2021-04-13 Cartiva, Inc. Hydrogel implants with porous materials and methods
US10758374B2 (en) 2015-03-31 2020-09-01 Cartiva, Inc. Carpometacarpal (CMC) implants and methods
US11717411B2 (en) 2015-03-31 2023-08-08 Cartiva, Inc. Hydrogel implants with porous materials and methods
US11839552B2 (en) 2015-03-31 2023-12-12 Cartiva, Inc. Carpometacarpal (CMC) implants and methods
US9907663B2 (en) 2015-03-31 2018-03-06 Cartiva, Inc. Hydrogel implants with porous materials and methods
US10952858B2 (en) 2015-04-14 2021-03-23 Cartiva, Inc. Tooling for creating tapered opening in tissue and related methods
US11020231B2 (en) 2015-04-14 2021-06-01 Cartiva, Inc. Tooling for creating tapered opening in tissue and related methods
US11701231B2 (en) 2015-04-14 2023-07-18 Cartiva, Inc. Tooling for creating tapered opening in tissue and related methods

Also Published As

Publication number Publication date
CA2484956A1 (en) 2003-11-13
ES2327832T3 (es) 2009-11-04
JP2005528144A (ja) 2005-09-22
AU2003226788A1 (en) 2003-11-17
US7578845B2 (en) 2009-08-25
EP1523342A1 (de) 2005-04-20
CA2484956C (en) 2010-08-24
EP1523342B1 (de) 2009-07-22
PT1523342E (pt) 2009-09-22
DK1523342T3 (da) 2009-10-19
US20050233454A1 (en) 2005-10-20
DE50311735D1 (de) 2009-09-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1523342B1 (de) Strukturierte komposite als matrix (scaffold) fur das tissue engineering von knochen
DE69534038T2 (de) Vorrichtung und verfahren zum in-vivo-züchten von verschiedenen gewebezellen
DE60006356T2 (de) Hochmineralisierte osteogene schwammzusammensetzungen und ihre verwendung
DE69735625T2 (de) Verfahren zur herstellung flexibler schichten aus deminaralisierten,länglichen knochenpartikeln
EP0030583B1 (de) Knochenersatzmaterial und Verfahren zur Herstellung eines Knochenersatzmaterials
DE69430069T2 (de) Förmige materialien auf der basis von länglichen knochenteilchen und verfahren zu ihrer herstellung
DE60302820T2 (de) Autologes knochenersatzmaterial
US7534451B2 (en) Bone restorative carrier mediums
EP1883377B1 (de) Synthetische lasttragende collagen-mineral-verbundstoffe für wirbelsäulenimplantate
DE602004008361T2 (de) Zwischenwirbelfusionsimplantat
DE60318613T2 (de) Apatit/collagen-vernetztes poröses material mit selbstorganisiertem apatit/collagen-verbundstoff und herstellungsverfahren dafür
EP1227851B1 (de) Resorbierbares knochen-implantatmaterial sowie verfahren zur herstellung desselben
CH667394A5 (de) Kuenstliches knochenbildendes biomaterial und dieses enthaltendes implantationsmaterial.
US8524253B2 (en) Bone regeneration device
JP2002536076A (ja) 骨形成ペースト組成物およびその用途
CN1290182A (zh) 骨移植体及其制造方法
CN1204245A (zh) 骨移植基质
DE2502884A1 (de) Mittel zur biologischen implantation von knochen- und gelenkersatz
WO2001059068A2 (de) Künstliche knochenchips, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
US7381224B1 (en) Bone implant composite
DE112016001386B4 (de) Kohlenstoffpartikel und Komposite derselben für die Regeneration von Skelettmuskelgewebe und Weichgewebe
WO2010050935A1 (en) Devices containing demineralized bone matrix particles
EP1518569A1 (de) Implantatmaterial für den Knochen-Knorpel-Ersatz
WO2006010507A2 (de) Bioresorbierbares material zur füllung von knochendefekten
WO2006010547A2 (de) Bioresorbierbares material zur füllung von knochendefekten

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MA MD MG MK MN MW MX MZ NO NZ OM PH PL PT RO RU SC SD SE SG SK SL TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): GH GM KE LS MW MZ SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IT LU MC NL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2484956

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2004500942

Country of ref document: JP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2003747406

Country of ref document: EP

REG Reference to national code

Ref country code: DE

Ref legal event code: 8642

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 2003747406

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 10512763

Country of ref document: US