WO2004075811A2 - Composiciones vacunales a base de gangliósidos para administración subcutánea - Google Patents

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Definitions

  • the present invention relates to subcutaneous vaccine compositions containing gangliosides, useful for the immunological treatment of autoimmune, infectious and tumor diseases, and which do not contain other adjuvants.
  • vaccine compositions are described to stimulate or increase the antibody response against gangliosides consisting of an immunogen and an immunological adjuvant.
  • the immunogens described are VSSP (very small proteoliposomes) constituted by the association of gangliosides GM3 (N-acetylated), and N-GlycolylGM3, hereinafter (N-AcGM3) and (N-GcGM3), with the protein complex of the outer membrane (OP or CPME) of the Neisseria meningitidis bacteria.
  • VSSP very small proteoliposomes
  • GM3 N-acetylated
  • N-GlycolylGM3 hereinafter
  • OP or CPME protein complex of the outer membrane
  • These immunogens which will be referred to as N-AcGM3 / VSSP and N-GcGM3 / VSSP, are very small in size, virtually invisible to the electron microscope, water soluble and highly buoyant.
  • the vaccine compositions described in EP-A-661061 and US-A-6149921 require the use of an adjuvant, such as the known incomplete Freund's adjuvant.
  • vaccine compositions which contain: (A) one or more low immunogenic antigens; (B) VSSP with incorporated gangliosides, mainly N-AcGM3 / VSSP and N-GcGM3 / VSSP; and (C) possibly one or more adjuvants.
  • N-AcGM3 / VSSP without immunological adjuvant was not immunogenic "(page 223, right column).
  • VSSP with conjugated gangliosides should be formulated together with immunological adjuvants, mainly of the complete or incomplete types of Freund and
  • adjuvants especially Freund's complete adjuvant
  • drawbacks such as the production of chronic inflammation at the injection site, which can cause the formation of chronic granulomas, sterile abscesses and / or ulcerative tissue necrosis.
  • the adjuvant Montanide ISA 51 is somewhat less aggressive, but it also causes annoying inflammatory disorders for patients.
  • ganglioside-based vaccines included in VSSP when administered subcutaneously, may be completely devoid of any immune adjuvant without reducing their immunological effectiveness.
  • the subject of the present invention are new ganglioside vaccine compositions included in VSSP, preferably N-AcGM3 / VSSP and N-GcGM3 ⁇ SSP, which do not contain immunological adjuvants and are administered subcutaneously.
  • the object of the present invention is also a method for the treatment of a patient that requires a boost in their immune response, which comprises the administration of a ganglioside vaccine composition included in VSSP, preferably N-AcGM3 / VSSP and N-, subcutaneously.
  • a ganglioside vaccine composition included in VSSP preferably N-AcGM3 / VSSP and N-, subcutaneously.
  • GcGM3 / VSSP which does not contain immunological adjuvants.
  • vaccine compositions of N-AcGM3 / VSSP and / or N-GcGM3 / VSSP that do not contain antigenic components other than gangliosides or immunological adjuvants and are administered subcutaneously.
  • the vaccine compositions object of the present invention comprise an aqueous solution or dispersion of one or more gangliosides included in the CPME of N. meningitidis (VSSP), capable of stimulating the immune response, and are characterized in that they are intended for subcutaneous administration (SC ) and because they lack immunological adjuvants.
  • VSSP N. meningitidis
  • VSSPs are hydrophobic associations of gangliosides with the outer membrane protein complex (CPME) of the highly stable Neisseria meningitidis bacteria, without the need to create covalent bonds.
  • CPME outer membrane protein complex
  • conjugated gangliosides are described in detail in patent application EP-A-661061 and in US-A-6149921, mentioned above, and also in various scientific publications, for example in Estévez et al. Vaccine, 1999; Vol. 18 (1-2): pp 190-197. These documents also describe in detail the procedures for obtaining them.
  • N-AcGM3 and N-GcGM3 are preferred for the purpose of the present invention, with N-AcGM3 / VSSP being especially preferred.
  • compositions object of the invention that do not contain any other antigenic components other than gangliosides, with compositions containing only N-AcGM3 (N-AcGM3 / VSSP) and / or N-GcGM3 (N-GcGM3 (N-GcGM3) immunogenic components being especially preferred.
  • compositions containing N-AcGM3 / VSSP being especially preferred.
  • the vaccine compositions object of the invention are aqueous solutions or dispersions of the VSSPs which, if any, may contain other water-miscible, non-toxic and non-irritating co-solvents, commonly used in injectable pharmaceutical compositions, for example polyethylene glycol.
  • the concentration of conjugated ganglioside in the aqueous solution or dispersion is not critical and, for example, can be between 0.03% and 3% (w / v), preferably between 0.04% and 2.5 % (p / v).
  • the dose range used for the vaccines referred to in the present invention, by the SC route, is between 50 ⁇ g and 2.4 mg, preferably between 200 ⁇ g and 2 mg.
  • An essential feature of the vaccine compositions object of the invention is that they are intended for administration subcutaneously and that they lack immunological adjuvants.
  • Immune adjuvants are commonly used in vaccine formulation. These adjuvants favor the immunogenic action in different ways: forming a deposit of the antigen at the injection site that regularly and sustainably releases said antigen, helping to reach the antigen to the spleen and lymph nodes by the formation of easily trapped oil droplets by macrophages, - directly or indirectly activating the cells involved in the immune response, etc.
  • the present invention represents undeniable advantages, especially in regard to avoiding local inflammatory problems arising from the use of adjuvants, and provides an effective, simple and much less annoying and aggressive ganglioside vaccination method for patients.
  • the following example includes comparative experimental details that allow contrasting the immunological efficacy of the vaccine compositions object of the invention with respect to other compositions containing immunological adjuvants.
  • aqueous vaccine composition (Tris-HCI buffer) containing 2.4 mg / mL of the N-AcGM3 / VSSP immunogen was prepared.
  • An aliquot of said vaccine composition was added an equal volume (1: 1) of the Montanide ISA 51 adjuvant, manufactured and marketed by Seppic (Paris, France), while an aliquot part was added an equal volume of buffer Tris-HCI.
  • two vaccine compositions were obtained:
  • Vaccine composition A Aqueous solution containing 1.2 mg / mL N-AcGM3 / VSSP.
  • Vaccine composition B W / O emulsion containing 1.2 mg / mL N-AcGM3 / VSSP.
  • mice 50 C57BL / 6 mice with a body weight between 18-20 g were selected, and separated into 5 test groups of 10 animals each.
  • Group 1 (control) was inoculated intramuscularly, on days 0, 14, 28 and 42, with 0.1 mL of phosphate buffered saline (PBS).
  • PBS phosphate buffered saline
  • Group 2 was inoculated intramuscularly, on days 0, 14, 28 and 42, with 0.1 mL of the vaccine composition B (equivalent to 120 ⁇ g of N-AcGM3 / VSSP).
  • Group 3 (control) was inoculated subcutaneously, on days 0, 14, 28 and 42, with 0.1 mL of phosphate buffered saline (PBS).
  • Group 4 was inoculated subcutaneously, on days 0, 14, 28 and 42, with 0.1 mL of the vaccine composition B (equivalent to 120 ⁇ g of N-AcGM3 ⁇ SSP).
  • Group 5 was inoculated subcutaneously, on days 0, 14, 28 and 42, with 0.1 mL of vaccine composition A (equivalent to 120 ⁇ g of N-AcGM3 / VSSP).
  • Tumor Volume The parameters were determined twice a week: tumor volume, survival, and time to progression. The results obtained were the following: Tumor Volume
  • Figure 1 shows the tumor growth kinetics of each experimental group.
  • the Mann-Whitney U method two-tailed
  • the tumor volumes of the individualized animals were used on day 33 after the tumor challenge.
  • the statistical method of Mann-Whitney U (two-tailed) is especially appropriate for the evaluation of this type of experiments in which there is a natural dispersion of the data associated with the biological event.
  • the value of p represents the probability associated with the practical value calculated from the sample, and allows to define the proximity or distance of the alpha value (significance) calculated with the statistic and the real data that allow validating the nullity hypothesis (p> 0.05) or nullity (p ⁇ 0.05).
  • mice of group 5 vaccinated subcutaneously with a composition object of the invention, show a markedly significant decrease in tumor volumes with respect to the other test groups and the corresponding controls.
  • This parameter evaluates the ability of vaccination to increase the time that immunized animals live.
  • the parameter is measured in days and has a relative character, since it is compared with the survival of untreated animals.
  • the test of choice to see the statistical significance of survival comparisons is the Log-Rank.
  • mice in group 5 vaccinated subcutaneously with a composition object of the invention, are the ones that survive the longest after inoculation of the tumor.
  • the time to progression is a parameter that assesses the time it takes for the tumor to appear in each individual animal, measured from the moment of inoculum. Table 3 shows the results obtained. Table 3. Statistics of the time to progression according to the Log-Rank test
  • mice that had not developed a tumor at the close of the experiment the time to progression was considered to be 60 days.
  • compositions object of the invention showed superior results compared to those obtained with intramuscular administration of vaccine compositions containing an immunological adjuvant of the Montanide type, which is the form of vaccination suggested so far by the prior art. .
  • Figure 1 shows a graph on the evolution of tumor volume in five groups of experimental animals subjected to different vaccine treatments and challenged with a malignant tumor.
  • Figure 2 shows a graph that allows us to see, in the five groups mentioned, the survival parameter after inoculation of a malignant tumor.

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Abstract

Se describen composiciones vacunales donde se combinan gangliósidos y el complejo de proteínas de membrana externa (CPME) de N. meningitidis para formar proteoliposomas de muy pequeño tamaño (VSSP) que están destinadas a la administración subcutánea. Estas composiciones no requieren del empleo adicional de adyuvantes. Las composiciones descritas permiten tratamientos inmunológicos con gangliósidos, especialmente N-AcGM3/VSSP y N-GcGM3/VSSP, que presentan ventajas debido a que son menos agresivas en el lugar de la inyección, y pueden ser utilizadas de manera más simple y con menos molestias para los pacientes.

Description

COMPOSICIONES VACUNALES A BASE DE GANGLIOSIDOS PARA ADMINISTRACIÓN SUBCUTÁNEA.
Sector Técnico:
La presente invención se refiere a composiciones vacunales subcutáneas conteniendo gangliósidos, útiles para el tratamiento inmunológico de enfermedades autoinmunes, infecciosas y tumorales, y que no contienen otros adyuvantes.
Estado de la técnica anterior
Se conoce desde hace tiempo la intención de utilizar gangliósidos en el tratamiento inmunológico de enfermedades autoinmunes y del cáncer. Por ejemplo, en la patente US-A-4965198 se describe el uso del gangliósido GM2 en la prevención y terapia de dichas enfermedades.
En la solicitud de patente EP-A-661061 y en la patente US-A-6149921 , se describen composiciones vacunales para estimular o incrementar la respuesta de anticuerpos frente a los gangliósidos consistentes en un inmunógeno y un adyuvante inmunológico. Los inmunógenos descritos son VSSP (proteoliposomas de muy pequeño tamaño) constituidos por la asociación de los gangliósidos GM3 (N- acetilado), y N-GlicolilGM3, en lo sucesivo (N-AcGM3) y (N-GcGM3), con el complejo proteico de la membrana externa (O P o CPME) de la bacteria Neisseria meningitidis. Dichos inmunógenos, a los que en adelante se denominará N-AcGM3/VSSP y N- GcGM3/VSSP, son de tamaño muy pequeño, prácticamente invisibles al microscopio electrónico, solubles en agua y de gran flotabilidad.
Las composiciones vacunales descritas en EP-A-661061 y US-A- 6149921 requieren de la utilización de un adyuvante, tal como el conocido adyuvante incompleto de Freund.
En la solicitud de patente WO-A-02145746 se describen composiciones vacunales que contienen: (A) uno o más antígenos poco inmunogénicos; (B) VSSP con gangliósidos incorporados, principalmente N-AcGM3/VSSP y N-GcGM3/VSSP; y (C) eventualmente uno o más adyuvantes.
En el artículo de Carr A. et al. publicado en Melanoma Research, 2001 , Vol. 11 , pp 219-227, se describe la actividad antitumoral sobre el melanoma del ratón B16 de vacunas que contienen N-AcGM3/VSSP y N-GcGM3/VSSP. En dicho artículo se estudia también la influencia de la presencia en las vacunas de un adyuvante inmunológico de los tipos adyuvante completo o incompleto de Freund y Montanide
ISA 51. Las vacunas se administran por vía intramuscular, y en el citado artículo se llega a la siguiente conclusión: "Los ratones inmunizados con N-AcGM3Λ SSP, sea en presencia del adyuvante de Freund o bien en la de Montanide ISA 51 , mostraron respuestas IgM e IgG anti-GM3 a las ocho semanas (tabla 1). En contraste, la vacuna
N-AcGM3/VSSP sin adyuvante inmunológico no resultó inmunogénica" (página 223, columna derecha).
Así pues, el estado de la técnica enseña que las vacunas que contienen
VSSP con gangliósidos conjugados deben ser formuladas junto con adyuvantes inmunológicos, principalmente de los tipos completo o incompleto de Freund y
Montanide.
Sin embargo, resulta bien conocido también que, cuando son administrados por vía parenteral, dichos adyuvantes, especialmente el adyuvante completo de Freund, presentan inconvenientes tales como la producción de inflamación crónica en el lugar de la inyección, que puede llegar a causar la formación de granulomas crónicos, abscesos estériles y/o necrosis tisular ulcerativa. El adyuvante Montanide ISA 51 resulta algo menos agresivo, pero también llega a causar trastornos inflamatorios molestos para los pacientes.
Desde el punto de vista de sus aplicaciones en el tratamiento inmunológico de enfermedades autoinmunes, infecciosas y tumorales, resulta deseable disponer de nuevas composiciones vacunales de gangliósidos que sean menos agresivas en el lugar de la inyección, y que puedan ser utilizadas de manera más simple y con menos molestias para los pacientes.
Los autores de la presente invención han descubierto que las vacunas basadas en gangliósidos incluidos en VSSP, cuando se administran por vía subcutánea, pueden carecer completamente de cualquier adyuvante inmunológico sin merma de su efectividad inmunológica.
Son objeto de la presente invención nuevas composiciones vacunales de gangliósidos incluidos en VSSP, preferiblemente N-AcGM3/VSSP y N- GcGM3Λ SSP, que no contienen adyuvantes inmunológicos y se administran por vía subcutánea.
Es también objeto de la presente invención un método para el tratamiento de un paciente que requiera un refuerzo de su respuesta inmunológica, que comprende la administración por vía subcutánea de una composición vacunal de gangliósidos incluidos en VSSP, preferiblemente N-AcGM3/VSSP y N-GcGM3/VSSP, que no contiene adyuvantes inmunológicos. También forman parte del objeto de la presente invención las composiciones vacunales de N-AcGM3/VSSP y/o N-GcGM3/VSSP que no contienen otros componentes antigénicos diferentes de gangliósidos ni adyuvantes inmunológicos y se administran por vía subcutánea.
Descripción detallada de la invención
Las composiciones vacunales objeto de la presente invención comprenden una disolución o dispersión acuosa de uno o más gangliósidos incluidos en el CPME de N. meningitidis (VSSP), capaces de estimular la respuesta inmunológica, y se caracterizan porque están destinadas a la administración subcutánea (SC) y porque carecen de adyuvantes inmunológicos.
Los VSSP son asociaciones hidrofóbicas de gangliósidos con el complejo proteico de la membrana externa (CPME) de la bacteria Neisseria meningitidis de gran estabilidad, sin necesidad de crear enlaces covalentes. Dichos gangliósidos conjugados se describen con todo detalle en la solicitud de patente EP-A- 661061 y en la patente US-A-6149921 , antes mencionadas, y también en diversas publicaciones científicas, por ejemplo en Estévez et al. Vaccine, 1999; Vol. 18(1-2): pp 190-197. En dichos documentos se describen también con todo detalle procedimientos para su obtención. De entre los gangliósidos incluidos en VSSP resultan preferidos al objeto de la presente invención N-AcGM3 y N-GcGM3, siendo especialmente preferido N-AcGM3/VSSP. Una descripción detallada de la inmunogenicidad de los dos gangliósidos conjugados preferidos, así como de su aplicabilidad como agentes anticancerosos y estimuladores de la inmunidad adquirida, se encuentra, además de en los documentos ya citados en esta descripción, en el artículo de revisión Bitton R. Et al., Oncology Reports (2002), Vol 9, pp 267-276, y en recientes comunicaciones y congresos científicos, como por ejemplo el Sexto Congreso Latinoamericano de Inmunología, celebrado en La Habana (Cuba) entre el 9 y el 13 de diciembre de 2002, comunicación de Suárez G. et al. "Phase I clinical tria! of the ganglioside cáncer vaccine N-Acetil-GM3/VSSP/Montanide ISA 51 in advanced breast cáncer patients", presentada el 10 de diciembre de 2002.
Resultan preferidas las composiciones vacunales objeto de la invención que no contienen otros componentes antigénicos diferentes de gangliósidos, siendo especialmente preferidas las composiciones que contienen como únicos componentes inmunogénicos N-AcGM3 (N-AcGM3/VSSP) y/o N-GcGM3 (N-GcGM3/VSSP), siendo especialmente preferidas las composiciones que contienen N-AcGM3/VSSP. Las composiciones vacunales objeto de la invención son soluciones o dispersiones acuosas de los VSSP que, eventualmente, pueden contener otros codisolventes miscibles con el agua, no tóxicos y no irritantes, de los habitualmente empleados en composiciones farmacéuticas inyectables, por ejemplo polietilenglicol. La concentración de gangliósido conjugado en la disolución o dispersión acuosa no resulta crítica y, por ejemplo, puede estar comprendida entre el 0,03 % y el 3 % (p/v), preferiblemente entre el 0,04 % y el 2,5 % (p/v). El rango de dosis empleado para las vacunas referidas en la presente invención, por la vía SC, es de entre 50 μg y 2,4 mg, preferiblemente entre 200 μg y 2 mg. Una característica esencial de las composiciones vacunales objeto de la invención es que están destinadas a su administración por la vía subcutánea y que carecen de adyuvantes inmunológicos.
Los adyuvantes inmunológicos son muy empleados habitualmente en la formulación de vacunas. Dichos adyuvantes favorecen la acción inmunogénica de diferentes maneras: formando un depósito del antígeno en el lugar de la inyección que libera de forma regular y sostenida dicho antígeno, ayudando a llegar al antígeno al bazo y a los nodulos linfáticos mediante la formación de microgotas oleosas fácilmente atrapadas por los macrófagos, - activando directa o indirectamente las células implicadas en la respuesta inmune, etc.
Entre los adyuvantes inmunológicos más conocidos y utilizados por el experto se pueden citar el adyuvante de Freund, completo e incompleto, Montanide ISA, los adyuvantes de Ribi, el TiterMax de Hunter, las sales de aluminio, el adyuvante Gerbu, QS-21 , etc.
De manera sorprendente e inesperada, los autores de la presente invención han encontrado que, cuando los antígenos gangliósidos incluidos en VSSP se administran por vía subcutánea, puede prescindirse completamente del empleo de adyuvantes inmunológicos. Ello a pesar de que el estado de la técnica anterior expresamente excluía dicha posibilidad en el caso de la administración por vía intramuscular.
Así pues, la presente invención representa innegables ventajas, sobre todo en lo que se refiere a evitar los problemas inflamatorios locales derivados del empleo de los adyuvantes, y proporciona un método de vacunación con gangliósidos eficaz, sencillo y mucho menos molesto y agresivo para los pacientes. En el siguiente ejemplo se incluyen los detalles experimentales comparativos que permiten contrastar la eficacia inmunológica de las composiciones vacunales objeto de la invención respecto de otras composiciones que contienen adyuvantes inmunológicos.
Ejemplo 1 :
Utilizando el método descrito en el ejemplo 3 de la patente US-A-6149921 se preparó una composición vacunal acuosa (tampón Tris-HCI) que contenía 2,4 mg/mL del inmunógeno N-AcGM3/VSSP. A una parte alícuota de dicha composición vacunal se le añadió un volumen igual (1 :1) del adyuvante Montanide ISA 51 , fabricado y comercializado por Seppic (París, Francia), mientras que a otra parte alícuota se le añadió un volumen igual de tampón Tris-HCI . De esta manera se obtuvieron dos composiciones vacunales:
Composición vacunal A: Solución acuosa que contiene 1 ,2 mg/mL N-AcGM3/VSSP. Composición vacunal B: Emulsión W/O que contiene 1 ,2 mg/mL N-AcGM3/VSSP.
Se seleccionaron 50 ratonas C57BL/6 con un peso corporal comprendido entre 18-20 g, y se separaron en 5 grupos de ensayo de 10 animales cada uno.
El Grupo 1 (control) fue inoculado por vía intramuscular, a los días 0, 14, 28 y 42, con 0,1 mL de tampón fosfato salino (PBS).
El Grupo 2 fue inoculado por vía intramuscular, a los días 0, 14, 28 y 42, con 0,1 mL de la composición vacunal B (equivalente a 120 μg de N-AcGM3/VSSP).
El Grupo 3 (control) fue inoculado por vía subcutánea, a los días 0, 14, 28 y 42, con 0,1 mL de tampón fosfato salino (PBS). El Grupo 4 fue inoculado por vía subcutánea, a los días 0, 14, 28 y 42, con 0,1 mL de la composición vacunal B (equivalente a 120 μg de N-AcGM3Λ SSP).
El Grupo 5 fue inoculado por vía subcutánea, a los días 0, 14, 28 y 42, con 0,1 mL de la composición vacunal A (equivalente a 120 μg de N-AcGM3/VSSP).
Todos los Grupos 1 a 5 fueron retados el día 63 con 5x103 células del melanoma MB16F10 por vía subcutánea (0,2 mL).
Los animales se individualizaron a partir del día 0 y se determinaron dos veces por semana los siguientes parámetros: volumen tumoral, sobrevida, y tiempo a la progresión. Los resultados obtenidos fueron los siguientes: Volumen Tumoral
En la figura 1 se muestra la cinética de crecimiento tumoral de cada grupo experimental. Para la evaluación de la significación estadística de las comparaciones pareadas entre grupos se utilizó el método de la U de Mann-Whitney (two-tailed) y los volúmenes tumorales de los animales individualizados en el día 33 después del reto tumoral.
El método estadístico de la U de Mann-Whitney (two-tailed) resulta especialmente apropiado para la valoración de este tipo de experimentos en los que se produce una natural dispersión de los datos asociados al evento biológico. El valor de p representa la probabilidad asociada con el valor práctico calculado a partir de la muestra, y permite definir la cercanía o lejanía del valor alfa (significación) calculado con el estadígrafo y los datos reales que permiten validar la hipótesis de nulidad (p> 0,05) o no nulidad (p< 0,05).
Los valores obtenidos se muestran en la figura 1 y la tabla 1.
Tabla 1.- Efecto de la vacunación sobre el aumento de volumen tumoral
Figure imgf000007_0001
valor de p resultante de la comparación de Grupo 2 vs Grupo 1 valor de p resultante de la comparación de Grupo 4 vs Grupo 3 valor de p resultante de la comparación de Grupo 5 vs Grupo 3
De la observación de la figura 1 y la tabla 1 se desprende claramente que los ratones del grupo 5, vacunados por vía subcutánea con una composición objeto de la invención, muestran una disminución notablemente significativa de los volúmenes tumorales respecto de los otros grupos de ensayo y los correspondientes controles. Sobrevida
Este parámetro evalúa la capacidad de la vacunación para aumentar el tiempo que viven los animales inmunizados. Para un tumor tan letal como el MB16 el parámetro se mide en días y tiene carácter relativo, ya que se compara con la sobrevida de los animales no tratados. El test de elección para ver la significación estadística de las comparaciones de sobrevida es el Log-Rank.
Los valores obtenidos se muestran en la figura 2 y en la tabla 2. En esta última, la frase "referencia grupo X" significa el grupo con el que se compara en cada columna.
Tabla 2. Estadística del tiempo de sobrevida según el test de Log-Rank
Figure imgf000008_0001
Los resultados obtenidos muestran con claridad que los ratones del grupo 5, vacunados por vía subcutánea con una composición objeto de la invención, son los que más tiempo sobreviven después de la inoculación del tumor.
Tiempo a la progresión
El tiempo a la progresión es un parámetro que valora el tiempo que tarda en aparecer el tumor en cada animal individual, medido a partir del momento del inoculo. En la tabla 3 se exponen los resultados obtenidos. Tabla 3. Estadística del tiempo a la progresión según test de Log-Rank
Figure imgf000008_0002
Para los ratones que no habían desarrollado tumor al cierre del experimento se consideró que el tiempo a la progresión era de 60 días.
El impacto en la prolongación del tiempo a la progresión es obviamente un parámetro muy deseable para una vacuna contra el cáncer, y según se observa en los datos de la tabla 3 los animales del grupo 5, vacunados por vía subcutánea con una composición objeto de la invención, son los que más destacan en sentido positivo.
Regresión tumoral
En los Grupos 4 y 5, correspondientes a la vacunación subcutánea con y sin adyuvante, se observó un animal donde el tumor tuvo regresión. En el animal del Grupo 4 el tumor se hizo medible a los 19 días de la inoculación, manteniéndose prácticamente sin crecimiento hasta que fue encontrado negativo 35 días después. El ratón del grupo 5, por su parte, mostró presencia tumoral por palpación a los 26 días de la inoculación, reportándose como negativo hacia el día 29.
Valoración global
Los resultados obtenidos en los ensayos anteriores muestran que las composiciones vacunales objeto de la invención aumentan el tiempo de sobrevida de los animales y el tiempo a la progresión tumoral, mientras que disminuye la velocidad de crecimiento íumoral, de forma significativa, con respecto al grupo control tratado con PBS.
Por el contrario, la administración de una composición vacunal que contenía el adyuvante Montanide ISA 51 solo provocó protección por vía intramuscular, mostrándose totalmente ineficaz por vía subcutánea.
De manera global, la vacunación subcutánea con las composiciones objeto de la invención mostró resultados superiores respecto de los obtenidos con la administración intramuscular de composiciones vacunales que contienen un adyuvante inmunológico del tipo Montanide, que es la forma de vacunación sugerida hasta ahora por la técnica anterior.
Breve descripción de los dibujos
En la figura 1 se representa una gráfica sobre la evolución del volumen tumoral en cinco grupos de animales de experimentación sometidos a diferentes tratamientos vacunales y retados con un tumor maligno. En la figura 2 se representa una gráfica que permite apreciar, en los cinco grupos mencionados, el parámetro de sobrevida después de la inoculación de un tumor maligno.

Claims

COMPOSICIONES VACUNALES A BASE DE GANGLIÓSIDOS PARA ADMINISTRACIÓN SUBCUTÁNEA.
REIVINDICACIONES: 1.- Una composición vacunal que comprende una disolución o dispersión acuosa de uno o más gangliósidos incluidos en VSSP, capaces de estimular la respuesta inmunológica, y se caracteriza porque está destinada a la administración subcutánea y porque carece de adyuvantes inmunológicos.
2.- Una composición vacunal según la reivindicación 1 caracterizada porque los gangliósidos incluidos en VSSP se seleccionan entre N-AcGM3 y N- GcGM3.
3.- Una composición vacunal según la reivindicación 2 caracterizada porque el gangliósido incluido en VSSP es N-AcGM3.
4.- Una composición vacunal según la reivindicación 1 caracterizada porque no contiene otros componentes antigénicos diferentes de gangliósidos.
5.- Una composición vacunal según las reivindicaciones 2 y 4 caracterizada porque contiene como únicos componentes inmunogénicos N- AcGM3/VSSP y/o N-GcGM3/VSSP.
6.- Una composición vacunal según la reivindicación 5 caracterizada porque como único componente inmunogénico contiene N-AcGM3/VSSP.
7.- Un método para el tratamiento de un paciente que requiere un refuerzo de su respuesta inmunológica, que comprende la administración por vía subcutánea de una composición vacunal según las reivindicaciones 1 a 6.
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