WO2006032477A1 - Pullulanasen aus psychrophilen organismen - Google Patents

Pullulanasen aus psychrophilen organismen Download PDF

Info

Publication number
WO2006032477A1
WO2006032477A1 PCT/EP2005/010202 EP2005010202W WO2006032477A1 WO 2006032477 A1 WO2006032477 A1 WO 2006032477A1 EP 2005010202 W EP2005010202 W EP 2005010202W WO 2006032477 A1 WO2006032477 A1 WO 2006032477A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
acid
polypeptide
polypeptides
polynucleotide
enzyme preparation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/EP2005/010202
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Roland Breves
Frank Janssen
Garabed Antranikian
Farah Mitry Qoura
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Henkel AG and Co KGaA
Original Assignee
Henkel AG and Co KGaA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henkel AG and Co KGaA filed Critical Henkel AG and Co KGaA
Publication of WO2006032477A1 publication Critical patent/WO2006032477A1/de
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2451—Glucanases acting on alpha-1,6-glucosidic bonds
    • C12N9/2457—Pullulanase (3.2.1.41)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C11D3/38636—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase containing enzymes other than protease, amylase, lipase, cellulase, oxidase or reductase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2451—Glucanases acting on alpha-1,6-glucosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01041—Pullulanase (3.2.1.41)

Definitions

  • the present invention relates to novel hydrolases, in particular glycosidases, especially pullulanases, from psychrophilic organisms and their use.
  • Pullulanases are a class of enzymes able to cleave ⁇ -glycosidically linked polysaccharides, in particular ⁇ - (1, 4) or ⁇ - (1, 6) -glycosides.
  • the prototype of such a polymer is the so-called pullulan, which is e.g. from the yeast-like fungus Pullularia pullulans (Aureobasisium pullulans).
  • Pullulan consists of ⁇ - (1,6) -glycosidically linked maltotriose units.
  • Pullulan degradation is mediated by a number of different enzyme specificities, which are referred to as pullulanases, neo-penululases, isopullulanases, or glucoamylases, depending on the site of the attack and the resulting end products.
  • pullulanases neo-penululases
  • isopullulanases or glucoamylases
  • thermostable enzymes from mesophilic, thermophilic or hyperthermophilic microorganisms are used for this purpose.
  • the use of only moderately thermostable or psychrophilic enzymes or of enzymes from such organisms has scarcely been investigated, in particular not for the purpose of cleaning surfaces and removing biofilms.
  • Biofilms are microbially induced deposits on different surfaces.
  • the formation of biofilms is a sequential process that begins with the attachment of cells to a surface.
  • the cells multiply and produce "extracellular polymeric substances" (EPS), which protect the cells from external influences, such as antibiotics or disinfectants EPS consists of proteins and polysaccharides In this polymer matrix, other suspended matter and ingredients (dirt, skin residues , Limescale, dead cells, etc.) from the medium surrounding the cell, ultimately leading to the formation of dirt and deposits on surfaces, whereby the dirt often becomes very solid with the surface connected is.
  • An essential component of the EPS are polysaccharides, which can be composed very differently depending on the type of biofilm.
  • ⁇ -glycosidically linked polysaccharides eg ⁇ - (1, 4) or ⁇ - (1, 6) -glycosides containing the structural elements of the pullulan, also in combination with other building blocks, and by enzymes, the Pullulanabbau are capable of being attacked.
  • European Patent EP 946 207 B1 (corresponding to WO 98/26807) teaches the enzymatic treatment of biofilms with combinations of hydrolases which serve to detach and remove the biofilms from the surface, and oxidoreductases which kill the bacteria contained therein.
  • hydrolases which serve to detach and remove the biofilms from the surface
  • oxidoreductases which kill the bacteria contained therein.
  • EP 388 115 is concerned with the destruction and removal of slime on industrial, water-washed surfaces.
  • glucanases, cellulases, amylases and / or proteases are used which specifically decompose the polysaccharides of the mucus matrix; Subsequently, the now accessible microorganisms should be exposed to the action of biocides.
  • WO 01/09295 claims enzymes having a ⁇ - (1,6) -endoglucanase activity and corresponding DNA sequences, furthermore an enzyme preparation for degrading ⁇ -1, 6-glucan-containing materials and their use.
  • the ⁇ - (1,6) endoglucanases also serve to remove biofilms from various surfaces.
  • this Spanish paper mainly deals with the degradation of the ⁇ -1, 6-glucan-rich cell wall of certain fungi.
  • WO 96/36569 also describes an enzymatic method for removing biofilms.
  • a mannanase optionally in combination with at least one other enzyme, is used to prevent slime formation in industrial water-bearing systems and to remove existing mucus.
  • this object can also be achieved with combinations of short-chain glycol components with at least one enzyme from the group of polysaccharidases, proteases, lipases and glycoproteases.
  • International application WO 01/53010 also teaches an enzymatic process for removing biofilms from various surfaces washed with water or aqueous solutions in industrial systems and in the medical field, the biofilms being located above the surface of the water, ie solid / liquid / air. Interfaces, as well as under water, at solid / liquid interfaces.
  • the enzymes used are carbohydrases or proteases, combinations of these two enzymes are also possible.
  • the cleaning solution in addition to the enzymes mentioned other active ingredients such as corrosion inhibitors, surfactants, biocides, etc. included.
  • compositions for preventing plaque starch hydrolyzing enzymes, e.g. an ⁇ -amylase or a pullulanase, and / or starch-modifying enzymes such as transglucosidases.
  • starch hydrolyzing enzymes e.g. an ⁇ -amylase or a pullulanase
  • starch-modifying enzymes such as transglucosidases.
  • the object of the present invention was therefore to provide hydrolases which have a high activity at low temperatures, in particular ⁇ -1, 4- and / or ⁇ -1, 6-glycosidic activity, and thereby biofilm degradation and / or especially suitable for the removal of dirt from surfaces, especially at low temperatures, preferably better than the hydrolases described in the prior art.
  • a new psychrophilic bacterium - that is, a bacterium that grows preferentially at low temperatures - has now been discovered for the species Shewanella, which contains such an enzyme.
  • the enzyme could be isolated and its sequence determined (SEQ ID NO: 1). It is believed that the first 23 amino acids of the polypeptide of SEQ ID NO: 1 represent a signal peptide that mediates the transport of the protein through the cell wall and is subsequently cleaved off.
  • the bacterium was classified as Shewanella sp. 40-3 deposited with the DMSZ in Brunswick (Germany) (deposit number DSM 16509).
  • a first subject of the present invention is therefore the bacterium Shewanella sp. 40-3 and its use for the isolation of enzymes, in particular hydrolases, especially pullulanases, and its use for the degradation of polysaccharides, in particular for the degradation of pullulan, its use for the cleavage of ⁇ -1, 4- and / or ⁇ -1, 6-bonds, preferably ⁇ -1, 6 bonds between D-monosaccharides, in particular between D-glucose units, as well as its use for the degradation of biofilms and for the removal of soil residues from surfaces.
  • Another object of the present invention is a process for the isolation of hydrolases, preferably glycosylases, more preferably glycosidases, in particular glycosyl hydrolases after the classification of henrissat, especially pullulanases, from psychrophilic bacteria and / or gram-negative proteobacteria, in particular Shewanella sp., Especially from Shewanella sp. 40-3.
  • hydrolases preferably glycosylases, more preferably glycosidases, in particular glycosyl hydrolases after the classification of henrissat, especially pullulanases, from psychrophilic bacteria and / or gram-negative proteobacteria, in particular Shewanella sp., Especially from Shewanella sp. 40-3.
  • the present invention therefore also enzymes, in particular hydrolases, preferably glycosylases, particularly preferably glycosidases, in particular glycosyl hydrolases after the classification of henrissat, especially pullulanases, from psychrophilic bacteria and / or gram-negative proteobacteria, in particular from Shewanella sp. Ago all Shewanella sp. 40-3, are available.
  • hydrolases preferably glycosylases, particularly preferably glycosidases, in particular glycosyl hydrolases after the classification of henrissat, especially pullulanases, from psychrophilic bacteria and / or gram-negative proteobacteria, in particular from Shewanella sp. Ago all Shewanella sp. 40-3, are available.
  • the method for isolating and / or identifying such enzymes may comprise in particular the following steps: a) Isolation of genomic DNA from a psychrophilic bacterium and / or gram-negative proteobacterium, in particular from Shewanella sp., Especially from Shewanella sp. 40-3, b) digesting the genomic DNA by means of suitable restriction endonucleases, c) incorporating the DNA bands, in particular those with a size between 2 and 15 kbp, preferably between 5 and 10 kbp, into a transfection vector, d) constructing a gene bank Transfection of a host, in particular E.
  • coli with the transfection vector, e) Screening of the gene bank for cells containing enzymes with desired activity, in particular hydrolase activity, preferably glycosylase activity, particularly preferably glycosidase activity, especially pullulanase activity , f) optionally isolating the plasmid with the clone having the desired activity, and g) optionally sequencing the isolated clone.
  • desired activity in particular hydrolase activity, preferably glycosylase activity, particularly preferably glycosidase activity, especially pullulanase activity
  • f) optionally isolating the plasmid with the clone having the desired activity and g) optionally sequencing the isolated clone.
  • nucleic acids according to SEQ ID NO: 1 or polypeptides according to SEQ ID NO: 2 it can obtain nucleic acids and polypeptides of similar structure and identical or similar function.
  • enzymes with improved properties can also be obtained, for example by evolution experiments.
  • a further subject of the present invention is therefore a polynucleotide selected from the group consisting of: a) polynucleotide having a nucleic acid sequence according to SEQ ID NO: 1 or having a nucleic acid sequence from position 70 to position 4323 according to SEQ ID NO: 1, b) polynucleotide coding for a polypeptide having an amino acid sequence according to SEQ ID NO: 2 or for a polypeptide with an amino acid sequence from position 24 to position 1440 according to SEQ ID NO: 2, c) naturally occurring or artificially produced mutants or polymorphic forms or alleles of a polynucleotide according to (a) or (b), in particular those having up to 50 or 40, in particular up to 30 or 20, in particular up to 10, 5, 3 or 2 punk mutations or exactly one point mutation with respect to a polynucleotide according to (a) or (b), d) to a polynucleotide according to (a), (b) or (c)
  • the nucleic acids according to the invention comprise one or more non-coding sequences, wherein the non-coding sequences are, for example, naturally occurring intron sequences or regulatory sequences, such as promoter or enhancer sequences, in particular those for the control of expression of hydrolases, preferably of glycosylases, more preferably glycosidases, in particular of glycosyl hydrolases after the classification of henrissat, especially pullulanases, and / or for controlling the expression of enzymes from psychrophilic bacteria and / or gram-negative proteobacteria, preferably Shewanella, especially Shewanella sp. 40-3, act.
  • the non-coding sequences are, for example, naturally occurring intron sequences or regulatory sequences, such as promoter or enhancer sequences, in particular those for the control of expression of hydrolases, preferably of glycosylases, more preferably glycosidases, in particular of glycosyl hydrolases after the classification of henrissat, especially pullulanases,
  • the nucleic acids according to the invention are preferably ribonucleic acids (RNAs) or deoxyribonucleic acids (DNAs), the nucleic acids preferably being present as double-stranded nucleic acids.
  • the nucleic acids according to the invention are preferably nucleic acids which code for a protein with hydrolase activity or for parts thereof, wherein the parts are in particular domains or epitopes which can be used, for example, for antibody production.
  • domains are in particular also those parts of the enzyme which do not themselves have to be directly involved in the hydrolysis, but can also exert or participate in other partial or auxiliary functions within the enzyme, whereby the partial or auxiliary functions for example, the binding of a substrate, intermediate or end product, a carrier function, the mediation of a regulatory influence on the hydrolytic activity or, further, about the enzyme anchoring can act.
  • the protein with hydrolase activity is preferably a glycosylase, more preferably glycosidase (EC3.2.1), in particular glycosylhydrolase according to the classification of henrissat given below, especially pullulanase (EC3.2.1.41), and / or an enzyme which is capable of, ⁇ -1, 4 and / or ⁇ -1, 6 bonds, more preferably ⁇ -1, 6 bonds, between D-monosaccharides, in particular between D-glucose units to split.
  • cleavage according to the invention is meant above all hydrolytic cleavage, ie cleavage to release the respective sugar residues.
  • the hydrolase or pullulanase is a hydrolase with ( ⁇ / ⁇ ) ⁇ -folding (( ⁇ / ⁇ ) 8 -Barrel structure) and / or a hydrolase comprising such a structural element.
  • a polypeptide of the invention be temperature optimum, especially in relation to the biofilm degradation, at a temperature between 4 and 4O 0 C, more preferably between 10 and 35 0 C, especially 15 to 30 0 C.
  • the pH Optimum of a polypeptide according to the invention is preferably between pH 5 and pH 9, more preferably between pH 6 and pH 8, especially between pH 6.5 and pH 7.5.
  • the nucleic acids according to the invention are preferably nucleic acids which are suitable for a pullulanase, particularly preferably for a microbial pullulanase, especially a bacterial pullulanase, in particular for a pullulanase from a psychrophilic bacterium and / or a gram-negative proteobacterium, preferably from Shewanella sp., especially from Shewanella sp. 40-3 and / or for a pullulanase according to SEQ ID no. 2 encode.
  • the present invention furthermore relates to the use of the nucleic acids according to the invention, on the one hand for the production or isolation of nucleic acids according to the invention, on the other hand for the preparation or isolation of novel nucleic acids homologous to the nucleic acids according to the invention, in particular those with structural and similar properties which are similar with respect to the nucleic acids according to the invention , similar and / or improved functional properties, wherein among functional properties in particular hydrolase activity, preferably glycosylase activity, particularly preferably glycosidase activity, especially pullulanase activity and improved functional properties, for example, higher specificity and / or higher conversion and / or higher stability of the enzyme at the desired reaction conditions, in particular with respect to the pH, the temperature and with respect to the optionally added detergents and proteases, to ve stand up.
  • functional properties in particular hydrolase activity preferably glycosylase activity, particularly preferably glycosidase activity, especially pullulanase activity and improved functional properties, for example, higher specificity and / or higher
  • nucleic acids according to the invention can thus be used, for example, as probes for the identification and / or isolation of homologous nucleic acids from an artificial, cDNA or genomic gene bank, in this case preferably for the identification of nucleic acids which are suitable for hydrolases, in particular glycosylases, particularly preferably glycosidases, in particular glycosylhydrolases according to US Pat Classification of Henrissat, especially pullulanases and / or encode parts thereof, or as antisense nucleic acids or as a primer in the polymerase chain reaction (PCR), in particular for the amplification of nucleic acids comprising nucleic acids encoding hydrolases, preferably glycosylases, more preferably glycosidases ago glycosyl hydrolases after the classification of Henrissat, in particular for pullulanases or for parts thereof.
  • hydrolases in particular glycosylases, particularly preferably glycosidases, in particular glycosylhydrolases according to US
  • nucleic acids according to the invention or homologous to the nucleic acids according to the invention can also be obtained by random mutagenesis or targeted mutagenesis, in a manner known to the person skilled in the art.
  • nucleic acids according to the invention can be used, for example, for the targeted production of individual domains or epitopes of the protein according to the invention or for the preparation of fusion proteins which comprise the polypeptides according to the invention.
  • the present invention therefore also provides a process for obtaining a nucleic acid which codes for a hydrolase, preferably glycosylase, particularly preferably glycosidase, in particular pullulanases or parts thereof, comprising the following steps: a) a nucleic acid library is contacted with a nucleic acid according to the invention , b) a nucleic acid which hybridizes with the nucleic acid according to the invention according to (a) is identified, c) the nucleic acid identified in step (b) is sequenced.
  • a nucleic acid library is contacted with a nucleic acid according to the invention
  • b) a nucleic acid which hybridizes with the nucleic acid according to the invention according to (a) is identified
  • c) the nucleic acid identified in step (b) is sequenced.
  • a further subject of the present invention is therefore likewise a process for isolating a nucleic acid coding for a hydrolase, preferably glycosylase, more preferably glycosidase, in particular pullulanase or for parts thereof, comprising the following steps: a) primers are prepared starting from a nucleic acid according to the invention, b) the primers according to (a) are used to amplify in the PCR nucleic acids, especially cDNAs, of unknown nucleic acid sequence, c) the nucleic acids obtained according to (b) by amplification are sequenced.
  • a further subject of the present invention is therefore also a process for isolating a nucleic acid coding for a hydrolase, preferably glycosylase, more preferably glycosidase, in particular pullulanase or for parts thereof, comprising the following steps: a) nucleic acids of a library are incorporated into suitable vectors and these are incorporated in b) The host organisms obtained according to (a) are plated on a solid support, preferably an agar plate, and incubated on the solid Carrier is assayed, for example, a color reaction involving the reaction of a hydrolase substrate, c) hydrolase-positive clones are identified, for example, by visual observation, by automated image analysis or by photometric measurement, and purified, d) the nucleic acidsthe clones identified in step (c) are sequenced.
  • Another object of the present invention is therefore likewise a process for isolating a nucleic acid coding for a hydrolase, preferably glycosylase, particularly preferably glycosidase, in particular pullulanase or for parts thereof, comprising the following steps: a) a nucleic acid according to the invention is subjected to mutagenesis experiments, b) the resulting mutants are incorporated into a suitable vector and expressed in a suitable host organism, c) the expression products are examined for hydrolytic activity, in particular pullulanase activity, d) the nucleic acids whose expression products in step (c) show the desired hydrolytic activity are sequenced.
  • a nucleic acid according to the invention is subjected to mutagenesis experiments
  • the resulting mutants are incorporated into a suitable vector and expressed in a suitable host organism
  • the expression products are examined for hydrolytic activity, in particular pullulanase activity
  • the nucleic acids whose expression products in step (c) show the desired hydrolytic activity
  • the mutagenesis experiments can be carried out, for example, using the polymerase chain reaction (PCR).
  • the experiments can be carried out in this case, for example, in particular when using a Taq polymerase, so that reaction parameters such as the Mg 2+ concentration, the pH, the reaction temperature or the substrate concentrations are varied, or it can be used for error-prone PCR Techniques, for example, based on the addition of Mn2 + or on the addition of unequal nucleotide concentrations.
  • the nucleic acid library to be used according to the invention may be, for example, a cDNA library, a genomic library or an artificial library. It is preferably a microbial, particularly preferably a bacterial library, in particular of psychrophilic bacteria, in particular of Shewanella, in particular of Shewanella sp. 40-3.
  • the invention further provides a nucleic acid obtainable by one of the aforementioned methods.
  • Another object of the present invention is a process for the preparation of a nucleic acid according to the invention, characterized in that the nucleic acid is chemically synthesized.
  • the nucleic acids according to the invention can be used, for example, chemically based on the amino acid sequences shown in SEQ ID NO. 1 or based on the genetic code shown in SEQ ID NO: 2 synthesized on the basis of the genetic code, for example by the Phosphotriester method or in another manner known in the art.
  • the present invention furthermore relates to vectors, in particular cloning and / or expression vectors, comprising one of the abovementioned nucleic acids according to the invention.
  • the vector may be, for example, a prokaryotic or eukaryotic vector.
  • the prokaryotic vectors for incorporation of the nucleic acids according to the invention are, for example, the plasmid pBK-CMV, the plasmid pBR322, plasmids of the pUC series, derivatives of pUB 110 or other plasmids suitable for expression in gram-negative or Gram-positive bacteria are suitable.
  • the expression vectors for expression in E. coli can also be, for example, other commercially available vectors, such as the T7 expression vector pGM10 or pGEX-4T-1 GST (Pharmacia Biotech), which are suitable for an N-terminal metabolic vector. Ala-His6 tag, which allows purification of the expressed protein via a Ni2 + -NTA column.
  • eukaryotic expression vectors for expression in Saccharomyces cerevisiae e.g. the vectors p426Met25 or p426GAL1
  • Baculovirus vectors as disclosed in EP-B1-0127839 or EP-B1-0549721 for expression in mammalian cells e.g. SV40 vectors.
  • the nucleic acids according to the invention can be incorporated with flanking nucleic acids into a vector such that the expression of the vector encodes the polypeptides encoded by the nucleic acids according to the invention as fusion proteins or carries a tag, a tagging amino acid sequence, for example purification and / or detection can facilitate the polypeptides.
  • the tag may be, for example, the strep, flag, myc or his tag.
  • the expression vectors preferably contain the requlatory sequences suitable for the host cell, in this case preferably the lac or the tac promoter for expression in E. coli, the ADH-2, GAL1 or AOX promoter for expression in yeasts, the baculovirus Polyhedrin promoter for the
  • a further subject of the present invention is a host cell comprising a vector according to the invention, wherein the host cell is preferably Shewanella, in particular Shewanella sp. 40-3, or E. coli, in particular E. coli strain BL21 (DE3), or Bacillus, in particular Bacillus licheniformis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtilis or Bacillus alcalophilus.
  • the nucleic acids according to the invention are preferably introduced into the host cells by the methods of transfection, transformation or electroporation known to the person skilled in the art.
  • polypeptide selected from the group consisting of: a) polypeptide having an amino acid sequence according to SEQ ID NO: 2 or from position 24 to position 1440 according to SEQ ID NO: 2, b) naturally occurring mutants, polymorphic forms or Alleles of a polypeptide according to (a), especially those having up to 50, 20, 15 or 10 point mutations, in particular up to 5, 3 or 2 point mutations or exactly one point mutation, with respect to a polypeptide according to (a), c ) Polypeptides having a sequence homology or identity of at least 50 or 55%, preferably at least 60, 65 or 70%, very particularly preferably at least 75, 80, 85 or 90%, in particular at least 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 or 99% with respect to a polypeptide according to (a) or (b), d) polypeptides which are encoded by the aforementioned nucleic acids according to the invention, e) polypeptides consisting of
  • polypeptides which catalyze a hydrolysis reaction, in particular the hydrolysis of ⁇ -1, 4- and / or ⁇ -1, 6 bonds, more preferably of ⁇ -1, 6 bonds, between D and Monosaccharides, in particular between D-glucose units, or are parts, in particular epitopes or domains, of such polypeptides, which according to the invention include domains according to the invention, in particular those parts of the enzyme, which need not be directly involved in the hydrolysis themselves but may also perform or participate in other partial or auxiliary functions within the enzyme, the partial or auxiliary functions being, for example, the binding of a substrate, an intermediate or end product, a carrier function, mediation a regulating influence on the hydrolytic activity or about the enzyme anchoring can act.
  • the epitopes and / or domains can be present both isolated and as part of a chimeric protein and / or as part of a fusion protein.
  • the protein with hydrolase activity is preferably a glycolase, more preferably glycosidase (EC3.2.1), especially pullulanase (EC3.2.1.41) and / or it is a hydrolase with ( ⁇ / ⁇ ) s-folding (( ⁇ / ⁇ ) s-barrel structure) and / or it is a hydrolase which belongs to the family of glycosyl hydrolases according to the classification of henrissat given below or is homologous to these enzymes and / or it is an enzyme that is suitable for biofilm degradation.
  • glycosidase EC3.2.1
  • pullulanase EC3.2.1.41
  • hydrolase with ( ⁇ / ⁇ ) s-folding ( ⁇ / ⁇ ) s-barrel structure)
  • hydrolase which belongs to the family of glycosyl hydrolases according to the classification of henrissat given below or is homologous to these enzymes and / or it is an enzyme that is suitable for biofilm degradation.
  • glycosyl hydrolases The classification of glycosyl hydrolases is based on the classification of Henrissat (Henrissat B., Bairoch A. Updating the Sequence-based Classification of glycosyl hydrolases, Biochem J. 316: 695-696 (1996)).
  • the current version of the mapping is in the CAZY database (Coutinho, PM & Henrissat, B. (1999) Carbohydrate-Active Enzymes server at URL: http://afmb.cnrs-mrs.fr/ ⁇ cazy/CAZY/index. html). Thereafter, pullulanases and related enzymes are found in the glycosyl hydrolase (GHF) family 13.
  • these enzymes are characterized by the ability to hydrolyze ⁇ -linked glycosidic bonds.
  • amylases EC 3.2.1.1
  • cyclomaltodextrin glucanotransferase EC 2.4.1.19
  • Cyclomaltodextrinase EC 3.2.1.54
  • trehalose-6-phosphate hydrolase EC 3.2.1.93
  • oligoglucosidase EC 3.2.1.10
  • maltogenic amylase EC 3.2.1.133
  • alpha-glucosidase EC 3.2.1.20
  • maltotetraose forming amylase EC 3.2.1.60
  • isoamylase EC 3.2.1.68
  • glucodextranase EC 3.2.1.70
  • maltohexaose-forming amylase EC 3.2.1.
  • the polypeptides of the invention preferably comprise four highly conserved regions typical of pullulan degrading enzymes. These form the reaction center and are involved in substrate binding. These conserved regions are characterized, for example, by Doman-Pytka and Bardowski (Critical Reviews in Microbiology, 30, 107-121, 2004).
  • polypeptides of the invention may also be post-translationally and / or chemically modified.
  • the compounds which can be cleaved by the polypeptides according to the invention are, in particular, compounds which contain D monosaccharides, in particular D-glucose units, which have ⁇ -1, 4- and / or ⁇ -1, 6 Bonds are linked together. These are preferably pullulan, but they may also be other oligo- or polysaccharides containing such bonds, for example amylopectin, amylose, dextrins and glycogen.
  • the present invention therefore also provides a process for the cleavage of the aforementioned compounds, characterized in that these compounds are incubated with at least one polypeptide of the invention.
  • Another object of the invention is therefore also the use of a polypeptide according to the invention for the hydrolytic cleavage of ⁇ -1, 4- and / or ⁇ -1, 6 bonds, more preferably of ⁇ -1, 6 bonds, between D-monosaccharides, in particular between D-glucose units, and the use of a polypeptide according to the invention for the degradation of biofilms and / or for the prevention of the formation of biofilms and the removal of soil residues from surfaces.
  • the hydrolases according to the invention are microbial, in particular bacterial, hydrolases.
  • a hydrolase in particular pullulanase, from a psychrophilic bacterium and / or from a gram-negative proteobacterium, in particular from Shewanella sp., More preferably from Shewanella sp. 40-3, especially the pullulanase with a sequence according to SEQ ID NO: 2.
  • the polypeptide according to the invention is a water-soluble pullulanase.
  • the polypeptide can be produced in the cytosol, in the periplasm or in the form bound to the cytosolic or outer membrane or into the surrounding Medium are discharged, the latter being preferred.
  • the present invention furthermore relates to mixtures and preparations, in particular bacterial preparations, which contain nucleic acids and / or polypeptides according to the invention.
  • the mixtures or preparations can in this case be prepared in a manner known to the person skilled in the art.
  • the polypeptides of the invention may further be used, for example, as epitopes for the production of monoclonal or polyclonal antibodies by coupling to a carrier, for example bovine serum albumin, followed by a mammal, preferably a mouse, rabbit or rabbit the epitope, preferably using adjuvants.
  • a carrier for example bovine serum albumin
  • Preferred for this are polypeptides with a length of 5-12, in particular 8, amino acids.
  • Polypeptides longer than 60 amino acids, especially greater than 75 amino acids, can also be used without carriers to produce antibodies.
  • the resulting antibodies may then optionally be isolated, and optionally antibody fragments, for example Fab or scFv fragments, can be prepared starting from the antibodies or the nucleic acids coding for them.
  • peptides which bind to a polypeptide according to the invention can also be obtained by a method known to those skilled in the art, such as phage display, yeast display, bacterial display or the so-called fusagene technology, in which the nucleic acid and the polypeptide encoded by it are Puromycin are covalently linked together.
  • the antisera, antibodies and antibody fragments obtainable by immunization with the polypeptides according to the invention and the peptides obtainable by one of the mentioned in vitro methods are suitable, for example, for the investigation of gene expression libraries, to proteins homologous to the polypeptides according to the invention, in particular those with hydrolytic activity, especially esterolytic and / or lipolytic activity.
  • the present invention therefore also provides antisera, antibodies and antibody fragments against a polypeptide according to the invention and other peptides which bind to a peptide according to the invention, in particular obtainable by one of the abovementioned methods.
  • the present invention further provides a process for producing a polypeptide according to the invention, characterized in that a nucleic acid according to the invention in a suitable host cell, more preferably in E. coli or Shewanella, in particular in Shewanella sp. 40-3, or expressed in Bacillus, in particular in Bacillus iformis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtilis or Bacillus alcalophilus. Subsequently, if necessary, a protein purification can take place.
  • Cultivation of E. coli is preferably carried out between 20 and 37 ° C, more preferably at about 30 0 C or at about 37 ° C.
  • Harvest and digestion of the cells are carried out by methods known to those skilled in the art. The digestion can be done for example by French Press, ultrasound, ball mill, but more preferably by using a Sonifikators.
  • the cells may also be chemically permeabilized, for example by EDTA or polymyxin B.
  • the optionally carried out purification of the protein is preferably carried out by chromatography.
  • the chromatographic purification of the protein may include, for example, cation and / or anion exchange chromatography, hydrophobic interaction chromatography and / or gel filtration.
  • short-chain polypeptides according to the invention can also be synthesized by means of classical peptide synthesis (Merrifield technique).
  • one or more nucleotides of the nucleic acid or one or more amino acids of the polypeptides or antibodies can also be modified.
  • the modification may, for example, be a radioactive, fluorogenic or chromogenic group or a post-translational modification.
  • the present invention furthermore relates to aqueous preparations (enzyme preparations) which contain the polypeptides according to the invention in dissolved form.
  • enzyme preparations according to the invention are described in more detail below.
  • Another object of the present invention is any type of composition containing a polypeptide of the invention. It can vary depending on Intended use of a solid mixture, for example, a powder with freeze-dried or encapsulated polypeptides, or to act a gelatinous, pasty or liquid composition. As an application form in particular extrudates, granules, tablets and pouches in question.
  • the encapsulated form lends itself to protecting the enzymes or other ingredients from other ingredients, such as bleaches, or to allow for controlled release. Depending on the size of these capsules, a distinction is made to MiIIi-, micro- and nanocapsules, with microcapsules for enzymes being particularly preferred.
  • the proteins can be used, for example, in dried, granulated and / or encapsulated form. They may be added separately, ie as a separate phase, or with other ingredients together in the same phase, with or without compaction.
  • the water can be removed by methods known from the prior art from the aqueous solutions resulting from the workup, such as spray drying, centrifuging or by solubilization.
  • the particles obtained in this way usually have a particle size between 50 and 200 microns.
  • the enzymes, and also the protein according to the invention can be added to liquid, gelatinous or pasty agents according to the invention starting from a protein recovery and preparation carried out in concentrated aqueous or non-aqueous solution, suspension or emulsion, but also in gel form or encapsulated or as dried Powder.
  • Such detergents or cleaners according to the invention are generally prepared by simple mixing of the ingredients which can be added in bulk or as a solution in an automatic mixer.
  • polypeptides according to the invention With regard to possible fields of use of the polypeptides according to the invention, reference is made to the manual "Industrial Enzymes and their Applications" by H. UhMg, Wiley-Verlag, New York, 1998.
  • Possible industrial applications of the polypeptides according to the invention and / or of the enzyme preparations according to the invention are, for example, the production or selective enrichment of flavor components in the food industry, fine chemicals, in particular sugar, in the chemical industry or therapeutically or diagnostically usable substances in the pharmaceutical industry, and further processing from starch to amylose, glucose syrup, maltose syrup, dextrins, maltose or high purity glucose or fructose, the degradation of pullulan to panose, which can be used to prevent tooth decay (Kuriki et al., J.
  • Bacteriol 170, 1554, 1988 the treatment of foods and the cleavage of cereals and cereal products in the brewing industry, in particular for the production of "light" beer
  • the use can also be used in combination with other hydrolases, in particular glycosidases, for example in combination with ⁇ -amylases or Glucoamyla sen, done.
  • the present invention furthermore relates to the use of the polypeptides according to the invention and / or the enzyme preparations according to the invention, in particular in sterilization, disinfection, washing, dishwashing and cleaning agents, in particular in cleaners for removing biofilms and / or for removing organic Dirt from hard surfaces.
  • the use may in particular in the household or in the field of pharmaceutical, food, brewery, medical technology, paint, wood, textile, cosmetics, leather, tobacco, fur, rope, paper , Pulp, plastics, fuel, oil, rubber or machinery industry or in dairies.
  • polypeptides according to the invention can be used in particular for the removal of biofilms from household and / or sanitary articles as well as in pulp and paper mills, in circulation cooling towers and in other systems which lead flowing and / or circulating water.
  • the polypeptides according to the invention are, for example, also suitable for use in detergents for cleaning textiles, in particular for stain removal.
  • the present invention therefore furthermore also includes sterilization, disinfecting, washing, dishwashing and cleaning agents which contain polypeptides according to the invention and / or enzyme preparations according to the invention.
  • Means can basically be a means for any type of surface.
  • the surface may be a biotic or abiotic, artificially synthesized or natural, soft or hard surface.
  • the surface may be, for example, a textile, ceramic, metal and / or plastic surface.
  • the article may be, for example, laundry, dishes, sanitary equipment, floor coverings, shoes, leather, rubber articles, ship hulls, prostheses, teeth, dentures or catheters.
  • the cleaning agent may in particular be a household cleaner or a cleaner for industrial installations, in particular those mentioned above.
  • the cleaner is one for cleaning hard surfaces, such as floors, tiles, dishes, tiles, plastics, and other hard surfaces in the home, industrial, public sanitation, swimming pools, Saunas, sports facilities or in doctor or massage practices.
  • biofilms that can be removed with poypeptides according to the invention are, for example, biofilms from chronic lung infections, e.g. in cystic fibrosis patients. Furthermore, it may be plaque or biofilms that must be removed from contact lenses, implants or medical devices, instruments or equipment such as catheters or endoscopes.
  • the present invention therefore also relates to the use of the polypeptides according to the invention and / or the enzyme preparations according to the invention in cosmetic and / or pharmaceutical products as well as cosmetic and / or pharmaceutical products which contain the polypeptides and / or enzyme preparations according to the invention as well as the use of the polypeptides according to the invention and / or enzyme preparations for the production of cosmetic and / or pharmaceutical products.
  • the product may be a dental plaque removal product or a biofilm removal product caused by or associated with chronic lung infections, such as in the art Cystic fibrosis case, act.
  • the present invention therefore, especially oral, dental and dental prosthesis care agents containing the polypeptides of the invention.
  • the abovementioned agents and products according to the invention may comprise further components as are known to the person skilled in the art.
  • the sterilization, disinfection, washing, dishwashing, textile treatment and cleaning agents depending on the intended use, for example, one or more components selected from the group consisting of surfactants, builders, acids, alkaline substances, hydrotropes, solvents, thickeners, bleaching agents, Dyes, perfumes, corrosion inhibitors, sequestering agents, electrolytes, optical brighteners, grayness inhibitors, silver corrosion inhibitors, color transfer inhibitors, foam inhibitors, abrasives, UV absorbers and skin protection agents.
  • enzyme stabilizers may also be added. If the detergent is to be sprayed, it may also be possible for a propellant to be present.
  • the cleaning agent is preferably a liquid aqueous agent, a gel, a paste or a powder.
  • Polypeptides or enzyme preparations according to the invention are preferably present in agents and / or compositions according to the invention in an amount of up to 20% by weight, more preferably in an amount of 0.01-10% by weight.
  • the enzyme preparation according to the invention is a system, in particular an aqueous concentrate, containing one or more of the polypeptides according to the invention.
  • other enzymes in particular selected from polysaccharidases, proteases and nucleases, may also be present in the enzyme preparation.
  • the polysaccharidase may in particular be a ⁇ -glucanase, cellulase, hemicellulase, arabinase, xylanase, amylase, dextranase, glucosidase, galactosidase, pectinase, chitinase, lysozyme, alginate lyase or any mixtures thereof.
  • the protease may be subtilisin, thermolysin, pepsin, a carboxypeptidase, an acidic protease, a Serine proteinase or mixtures thereof.
  • the nucleases may be any DNAse or RNAse.
  • the enzymes which can additionally be used in the enzyme preparations for the purposes of this invention can be obtained by conventional biochemical methods from the corresponding organisms. But they are also commercially available, for example from the companies Novozymes, Genencor International, Sigma, AB Enzymes or ASA enzymes.
  • the enzyme preparations may also be of technical quality and consist of several different enzyme activities. The presence of side activities, some of which are not further characterized, can also have a favorable influence on the hydrolysis of the complex biofilm polymers.
  • enzymes it should be noted in principle, regardless of whether they are polypeptides according to the invention or other enzymes, that they could be attacked in liquid agents by components contained in the cleaner, such as surfactants or organic acids, or else by non-specifically acting proteases , which would reduce the effectiveness of the enzymes. To ensure the activity and stability of such detergents over a longer period of time, it is therefore useful to keep sensitive enzymes separate from denaturing components and in particular also proteases from other enzymes, so that these components only meet one another immediately before or during the purification process.
  • This separation of the different enzymes can be done in different ways.
  • One possibility is to introduce the enzymes in microcapsules, the immediately before or during the cleaning process, for example by mechanical action during cleaning or washing, by sudden change in osmotic conditions, for example when diluting with water or by cutting the capsules during dosing out of the storage bottle, to be opened and release their contents.
  • the capsule wall in turn must not be attacked by the enzymes.
  • Capsule materials based on proteins or polysaccharides should therefore be excluded.
  • the Enzymes are also each immobilized on a solid support, which is suspended in the detergent and can additionally serve as abrasive in the application of the agent. The immobilization is carried out in a manner known to those skilled in the art; as support materials, it is also possible to use polymers in addition to inorganic substances, for example silicates or porous glass.
  • Another conceivable possibility could also be the incorporation into a multiphase agent, so that the protease would be predominantly located in one phase and the remaining enzymes predominantly exist in a further phase.
  • Such an agent would be shaken shortly before use and the resulting emulsion applied to the area to be cleaned; the agent remaining in the storage bottle would then undergo a rapid phase separation so that the enzymes only come in contact for a short time and possibly at the phase interface.
  • the case would be stored if an enzyme were incorporated into a phase which would be stably dispersed in the form of droplets in the second phase containing the other enzyme; In this case, the agent would not shaken, but dosed directly from the storage bottle, possibly also sprayed.
  • a multi-phase means would be a technically complex and difficult to implement solution. In addition, consumer acceptance would probably be low.
  • the surfactants which can be used according to the invention are selected from the groups of anionic, nonionic, amphoteric and cationic surfactants and mixtures thereof, the anionic, nonionic and amphoteric surfactants and mixtures thereof being preferred and the anionic and nonionic surfactants and mixtures of which are particularly preferred.
  • the nonionic surfactants used are preferably alkoxylated, advantageously ethoxylated, in particular primary, alcohols having preferably 8 to 18 carbon atoms and on average 1 to 12 moles of ethylene oxide (EO) per mole of alcohol, in which the alcohol radical can be linear or preferably methyl-branched in the 2-position , or may contain linear and methyl-branched radicals in the mixture, as they are usually present in Oxoalkoholresten.
  • EO ethylene oxide
  • alcohol ethoxylates with linear radicals of alcohols of natural origin having 12 to 18 carbon atoms, for example from coconut, palm, tallow or oleyl alcohol, and on average 2 to 8 EO per mole of alcohol are preferred.
  • Preferred ethoxylated alcohols include, for example, Ci 2 -i 4 alcohols containing 3 EO or 4 EO, n-alcohol with 7 EO, C 3- I 5 alcohols containing 3 EO, 5 EO, 7 EO or 8 EO, C 12 -i 8 -alcohols with 3 EO, 5 EO or 7 EO and mixtures of these, such as mixtures of Ci 2- i 4 -alcohol with 3 EO and Ci 2- i 8 -alcohol with 5 EO.
  • the degrees of ethoxylation given represent statistical means which, for a particular product, may be an integer or a fractional number.
  • Preferred alcohol ethoxylates have a narrow homolog distribution (narrow rank ethoxylates, NRE).
  • NRE narrow rank ethoxylates
  • fatty alcohols with more than 12 EO can also be used. Examples of these are tallow fatty alcohol with 14 EO, 25 EO, 30 EO or 40 EO.
  • nonionic surfactants used either as the sole nonionic surfactant or in combination with other nonionic surfactants are alkoxylated, preferably ethoxylated or ethoxylated and propoxylated fatty acid alkyl esters, preferably having from 1 to 4 carbon atoms in the alkyl chain, especially fatty acid methyl esters.
  • alkyl polyglycosides Another class of nonionic surfactants that can be used to advantage are the alkyl polyglycosides (APG).
  • APG alkyl polyglycosides
  • Usable Alkypolyglycosides satisfy the general formula RO (G) Z in which R is a linear or branched, especially in the 2-position methyl-branched, saturated or unsaturated, aliphatic radical having 8 to 22, preferably 12 to 18 carbon atoms and G is the symbol, which represents a glycose unit having 5 or 6 C atoms, preferably glucose.
  • the degree of glycosylation z is between 1, 0 and 4.0, preferably between 1, 0 and 2.0 and in particular between 1, 1 and 1, 4.
  • Preference is given to using linear alkyl polyglucosides that is to say alkyl polyglycosides in which the polyglycosyl radical is a glucose radical and the alkyl radical is an n-alkyl radical.
  • Nonionic surfactants of the amine oxide type for example N-cocoalkyl-N, N-dimethylamine oxide and N-tallowalkyl-N, N-dihydroxyethylamine oxide, and the fatty acid alkanolamides may also be suitable.
  • the proportion of these nonionic surfactants is preferably not higher than that of the ethoxylated fatty alcohols, especially not more than half of them.
  • surfactants are polyhydroxy fatty acid amides of the formula (II)
  • R 1 is hydrogen, an alkyl or hydroxyalkyl radical having 1 to 4 carbon atoms and [Z] for a linear or branched polyhydroxyalkyl radical having 3 to 10 carbon atoms and 3 to 10 hydroxyl groups stands.
  • the polyhydroxy fatty acid amides are known substances which can usually be obtained by reductive amination of a reducing sugar with ammonia, an alkylamine or an alkanolamine and subsequent acylation with a fatty acid, a fatty acid alkyl ester or a fatty acid chloride.
  • the group of polyhydroxy fatty acid amides also includes compounds of the formula
  • R-CO-N- [Z] (III) in the R is a linear or branched alkyl or alkenyl radical having 7 to 12 carbon atoms
  • R 1 is a linear, branched or cyclic alkyl radical or an aryl radical having 2 to 8 carbon atoms
  • R 2 is a linear, branched or cyclic alkyl radical or an aryl radical is or an oxyalkyl group having 1 to 8 carbon atoms
  • Ci -4 alkyl or phenyl groups being preferred
  • [Z] is a linear polyhydroxyalkyl residue, whose alkyl chain is substituted with at least two hydroxyl groups, or alkoxylated, preferably ethoxylated or propoxylated derivatives this rest.
  • [Z] is preferably obtained by reductive amination of a reducing sugar, for example glucose, fructose, maltose, lactose, galactose, mannose or xylose.
  • a reducing sugar for example glucose, fructose, maltose, lactose, galactose, mannose or xylose.
  • the N-alkoxy- or N-aryloxy-substituted compounds can be converted into the desired polyhydroxy fatty acid amides, for example, by reaction with fatty acid methyl esters in the presence of an alkoxide as catalyst.
  • anionic surfactants for example, those of the sulfonate type and sulfates are used.
  • the surfactants of the sulfonate type are preferably C 9 . 13 - alkyl benzene sulfonates, olefin sulfonates, ie mixtures of alkene and hydroxyalkane sulfonates, and the disulfonates obtained, for example, from C 12 - receives monoolefins with terminal or internal double bond by sulfonation with gas ⁇ shaped sulfur trioxide and subsequent alkaline or acidic hydrolysis of the sulfonation - 18 , considering.
  • alkanesulfonates from C 2 - 18 are obtained alkanes, for example by sulfochlorination or sulfoxidation and an ⁇ subsequent hydrolysis or neutralization.
  • esters of .alpha.-sulfo fatty acids esters of .alpha.-sulfo fatty acids (ester sulfonates), for example the .alpha.-sulfonated methyl esters of hydrogenated coconut, palm kernel or tallow fatty acids.
  • sulfated fatty acid glycerol esters are to be understood as meaning the mono-, di- and triesters and mixtures thereof, as obtained in the preparation by esterification of a monoglycerol with 1 to 3 moles of fatty acid or in the transesterification of triglycerides with 0.3 to 2 moles of glycerol.
  • Preferred sulfated fatty acid glycerol esters are the Sulfier excursi of saturated fatty acids having 6 to 22 carbon atoms, spielnem of caproic acid, caprylic acid, capric acid, myristic acid, lauric acid, palmitic acid, stearic acid or behenic acid.
  • Alk (en) yl sulfates are the alkali and especially the sodium salts of the Schwefelhoffreraumester Ci2 -Ci8 fatty alcohols, for example, from coconut fatty alcohol, tallow fatty alcohol, lauryl, myristyl, cetyl or stearyl alcohol, or C 10 -C 2 0 - oxo alcohols, and those half-esters of secondary alcohols of these chain lengths are preferred. Also preferred are alk (en) ylsulfates of said chain length, which contain a synthetic, produced on a petrochemical basis straight-chain alkyl radical, which have an analogous degradation behavior as the adequate compounds based on oleochemical raw materials.
  • Ci 2 -Ci 6 alkyl sulfates and C 12 -Ci 5 alkyl sulfates and C 14 -C 15 - alkyl sulfates are preferred.
  • 2,3-alkyl sulfates are also suitable anionic surfactants.
  • sulfuric monoesters of ethoxylated with 1 to 6 moles of ethylene oxide straight or branched Cz ⁇ i alcohols such as 2-methyl-branched Cg-n-alcohols having an average of 3.5 moles of ethylene oxide (EO) or C 12-18 fatty alcohols 1 to 4 EO, are suitable. Due to their high foaming behavior, they are only used in detergents in relatively small amounts, for example in amounts of up to 5% by weight, usually from 1 to 5% by weight.
  • Suitable anionic surfactants are also the salts of alkylsulfosuccinic acid, which are also referred to as sulfosuccinates or as sulfosuccinic acid esters and the monoesters and / or diesters of sulfosuccinic acid with alcohols, preferably fatty alcohols and in particular ethoxylated fatty alcohols.
  • alcohols preferably fatty alcohols and in particular ethoxylated fatty alcohols.
  • Preferred sulfosuccinates contain Cs-i ⁇ fatty alcohol residues or mixtures of these.
  • Particularly preferred sulfosuccinates contain a fatty alcohol radical which is derived from ethoxylated fatty alcohols, which in themselves constitute nonionic surfactants (description see above).
  • Sulfosuccinates whose fatty alcohol residues are derived from ethoxylated fatty alcohols with a narrow homolog distribution are again particularly preferred.
  • alk (en) ylsuccinic acid having preferably 8 to 18 carbon atoms in the alk (en) yl chain or salts thereof.
  • anionic surfactants are particularly soaps into consideration. Suitable are saturated fatty acid soaps, such as the salts of lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, hydrogenated erucic acid and behenic acid and, in particular, soap mixtures derived from natural fatty acids, for example coconut, palm kernel or tallow fatty acids.
  • the anionic surfactants including the soaps, may be present in the form of their sodium, potassium or ammonium salts and as soluble salts of organic bases, such as mono-, di- or triethanolamine.
  • the anionic surfactants are preferably present in the form of their sodium or potassium salts, in particular in the form of the sodium salts.
  • the surfactants may be contained in the detergents or detergents according to the invention overall in an amount of preferably from 5% by weight to 50% by weight, in particular from 8% by weight to 30% by weight, based on the finished composition ,
  • Detergents or cleaners according to the invention may contain bleaches.
  • bleaches include the compounds which serve as bleaches and deliver H 2 O 2 in water, the sodium percarbonate, the sodium perborate tetrahydrate and the
  • Sodium perborate monohydrate particular importance.
  • Other useful bleaching agents are, for example, peroxopyrophosphates, citrate perhydrates and H 2 O 2 -producing peracidic salts or peracids, such as persulfates or persulfuric acid.
  • the urea peroxohydrate percarbamide which can be described by the formula H 2 N-CO-NH 2 H 2 O 2 .
  • they may, if desired, also contain bleaching agents from the group of organic bleaches, although their use is also possible in principle for laundry detergents.
  • Typical organic bleaches are the diacyl peroxides, such as dibenzoyl peroxide.
  • peroxyacids examples of which include the alkyl peroxyacids and the aryl peroxyacids.
  • Preferred representatives are the peroxybenzoic acid and its ring-substituted derivatives, such as alkylperoxybenzoic acids, but also peroxy- ⁇ -naphthoic acid and magnesium monoperphthalate, the aliphatic or substituted aliphatic peroxyacids, such as peroxylauric acid, peroxystearic acid, ⁇ -phthalimido- peroxycaproic acid (phthalimidoperoxyhexanoic acid, PAP), o-carboxybenzamidoperoxycaproic acid, N-nonenylamidoperadipic acid and N-nonylamidopersuccinates; and aliphatic and araliphatic peroxydicarboxylic acids such as 1,12-diperoxycarboxylic acid, 1,9-diperoxyazelaic acid, diperoxysebac
  • the content of bleach detergent or cleaning agent may be from 1 to 40% by weight and in particular from 10 to 20% by weight, with perborate monohydrate or percarbonate being advantageously used.
  • the agents may also contain bleach activators.
  • bleach activators it is possible to use compounds which, under perhydrolysis conditions, give aliphatic peroxycarboxylic acids having preferably 1 to 10 C atoms, in particular 2 to 4 C atoms, and / or optionally substituted perbenzoic acid. Suitable substances are those which carry O- and / or N-acyl groups of the stated C atom number and / or optionally substituted benzoyl groups.
  • polyacylated alkylenediamines in particular tetraacetylethylenediamine (TAED), acylated triazine derivatives, in particular 1,5-diacetyl-2,4-dioxohexahydro-1,3,5-triazine (DADHT), acylated glycolurils, in particular 1, 3,4 , 6-tetraacetylglycoluril (TAGU), N-acylimides, in particular N-nonanoyl-succinimide (NOSI), acylated phenolsulfonates, especially n-nonanoyl or isononanoyloxybenzenesulfonate (n- or iso-NOBS), acylated hydroxycarboxylic acids, such as triethyl-O-acetyl citrate (TEOC), carboxylic anhydrides, in particular phthalic anhydride, isoic anhydride and / or succinic an
  • hydrophilic substituted acyl acetals known from German patent application DE 19616769 and the acyllactams described in German patent application DE 19616770 and international patent application WO 95/14075 are likewise preferably used.
  • the combinations of conventional bleach activators known from German patent application DE 4443177 can also be used.
  • nitrile derivatives such as cyanopyridines, nitrile quats, for example N-alkylammonium acetonitriles, and / or cyanamide derivatives can be used.
  • Preferred bleach activators are sodium 4- (octanoyloxy) benzenesulfonate, ⁇ -nonanoyl or isononanoyloxybenzenesulfonate (n- or iso-NOBS), undecenoyloxybenzenesulfonate (UDOBS), sodium dodecanoyloxybenzenesulfonate (DOBS), decanoyloxybenzoic acid (DOBA, OBC 10) and / or Dodecanoyloxybenzenesulfonate (OBS 12), as well as N-methylmorpholinum acetonitrile (MMA).
  • Such bleach activators can be used in the customary amount range of from 0.01 to 20% by weight, preferably in amounts of from 0.1 to 15% by weight, in particular from 1% to 10% by weight, based on the total composition, be included.
  • bleach catalysts may also be included.
  • These substances are bleach-enhancing transition metal salts or transition metal complexes such as, for example, Mn, Fe, Co, Ru or Mo salt complexes or carbonyl complexes.
  • Mn, Fe, Co, Ru, Mo, Ti, V and Cu complexes with N-containing tripod ligands and Co, Fe, Cu and Ru ammine complexes are also suitable as bleach catalysts, wherein such compounds are preferably used, which are described in DE 19709284 A1.
  • Detergents or cleaners according to the invention generally comprise one or more builders, in particular zeolites, silicates, carbonates, organic cobuilders and, where there are no ecological reasons against their use, also the phosphates.
  • builders in particular zeolites, silicates, carbonates, organic cobuilders and, where there are no ecological reasons against their use, also the phosphates.
  • the latter are particularly preferred builders to be used in automatic dishwashing detergents.
  • NaMSi x O 2x + 1 yH 2 O where M is sodium or hydrogen, x is a number from 1.6 to 4, preferably 1.9 to 4.0 and y is a number from 0 to 20 and preferred values for x 2 , 3 or 4 are.
  • Such crystalline layered silicates are described, for example, in European Patent Application EP 164514.
  • Preferred crystalline layered silicates of the formula given are those in which M is sodium and x assumes the values 2 or 3.
  • Na 2 Si 2 O 5 YH 2 O is preferred.
  • Such compounds are commercially available, for example, under the name SKS® (Clariant company). That is how it is
  • SKS-6 ® mainly to a ⁇ -sodium disilicate with the formula Na 2 Si 2 O 5 -VH 2 O
  • SKS-7 ® mainly to the ß-sodium disilicate.
  • acids for example citric acid or carbonic acid
  • NaHSi 2 O 5 -VH 2 O commercially available under the names SKS- 9® or SKS- 10® (Clariant). It may also be advantageous to use chemical modifications of these phyllosilicates.
  • the alkalinity of the layered silicates can be suitably influenced.
  • Phyllosilicates doped with phosphate or with carbonate have altered crystal morphologies in comparison with the ⁇ -sodium disilicate, dissolve more rapidly and show an increased calcium binding capacity in comparison to ⁇ -sodium disilicate.
  • phyllosilicates of the general empirical formula x Na 2 O • y SiO 2 • z P 2 O 5 in which the ratio x to y is a number 0.35 to 0.6, the ratio x to z a number from 1, 75 to 1200 and the ratio y to z correspond to a number from 4 to 2800, described in the patent application DE 19601063.
  • the solubility of the layered silicates can also be increased by using particularly finely divided layered silicates. Also compounds from the crystalline layer silicates with other ingredients can be used.
  • amorphous sodium silicates with a Na 2 O: SiO 2 modulus of from 1: 2 to 1: 3.3, preferably from 1: 2 to 1: 2.8 and in particular from 1: 2 to 1: 2.6, which Delayed and have secondary washing properties.
  • the dissolution delay compared with conventional amorphous sodium silicates may have been caused in various ways, for example by surface treatment, compounding, compaction / densification or by overdrying.
  • amorphous is also understood to mean “X-ray amorphous”. This means that in X-ray diffraction experiments the silicates do not give sharp X-ray reflexes typical of crystalline substances, but at best one or more maxima of the scattered X-rays having a width of several degrees of diffraction angle. However, it may well even lead to particularly good builder properties if the silicate particles provide blurred or even sharp diffraction maxima in electron diffraction experiments. This is to be interpreted as meaning that the products have microcrystalline regions of size 10 to a few hundred nm, values of up to max. 50 nm and in particular up to max. 20 nm are preferred. Particularly preferred are compacted / compacted amorphous silicates, compounded amorphous silicates and overdried X-ray amorphous silicates.
  • An optionally usable, finely crystalline, synthetic and bound water-containing zeolite is preferably zeolite A and / or P.
  • zeolite P zeolite MAP ® (commercial product from Crosfield) is particularly preferred.
  • zeolite X and mixtures of A, X and / or P are particularly preferred.
  • Commercially available and preferably usable in the context of the present invention is, for example, a cocrystal of zeolite X and zeolite A (about 80% by weight of zeolite X) ), which is sold by the company CONDEA Augusta SpA under the brand name VEGOBOND AX ® and by the formula
  • Suitable zeolites have an average particle size of less than 10 ⁇ m (volume distribution, measuring method: Coulter Counter) and preferably contain 18 to 22% by weight, in particular 20 to 22% by weight, of bound water.
  • phosphates as builders is possible, unless such use should not be avoided for environmental reasons.
  • alkali metal phosphates with particular preference for pentasodium or pentapotassium triphosphate (sodium or potassium tripolyphosphate), are of greatest importance in the washing and cleaning agent industry.
  • Alkali metal phosphates is the summary term for the alkali metal (especially sodium and potassium) salts of various phosphoric acids, in which one can distinguish metaphosphoric acids (HPOs) n and orthophosphoric H 3 PO 4 in addition to high molecular weight representatives.
  • the phosphates combine several advantages: they act as alkali carriers, prevent lime deposits on machine parts or lime incrustations in fabrics and also contribute to the cleaning performance.
  • NaHaPO 4 Sodium dihydrogen phosphate, NaHaPO 4 , exists as a dihydrate (density 1, 91 like “3 , melting point 60 °) and as a monohydrate (density 2.04 like “ 3 ). Both salts are white, very soluble in water powders that lose the water of crystallization on heating and at 200 0 C in the weak acid diphosphate (disodium hydrogenated diphosphate, Na 2 H 2 P 2 O 7 ), at higher temperature in Natiumtrimetaphosphat (Na 3 PsOg ) and Maddrell's salt (see below).
  • NaH 2 PO 4 is acidic; It arises when phosphoric acid is adjusted to a pH of 4.5 with sodium hydroxide solution and the mash is sprayed.
  • Potassium dihydrogen phosphate (potassium phosphate primary or monobasic phosphate, potassium biphosphate, KDP), KH 2 PO 4 , is a white salt of density 2.33 "3 , has a melting point of 253 0 C [decomposition to form potassium polyphosphate (KPO 3 ) X ] and is easily soluble in water.
  • Disodium hydrogen phosphate (secondary sodium phosphate), Na 2 HPO 4 , is a colorless, very slightly water-soluble crystalline salt. It exists anhydrous and with 2 mol. (Density 2.066 like '3 , loss of water at 95 °), 7 mol. (Density 1, 68 like “3 , melting point 48 0 C with loss of 5 H 2 O) and 12 mol (Density 1, 52 like "3 , melting point 35 ° C with loss of 5 H 2 O), becomes anhydrous at 100 0 C and goes stronger heating in the diphosphate Na 4 P 2 O 7 over. Disodium hydrogen phosphate is prepared by neutralization of phosphoric acid with soda solution using phenolphthalein as an indicator. Dipotassium hydrogen phosphate (secondary or dibasic potassium phosphate), K 2 HPO 4 , is an amorphous, white salt that is readily soluble in water.
  • Tripotassium phosphate is readily soluble in water with an alkaline reaction and is prepared by evaporating a solution of exactly 1 mole of Tripotassium phosphate and 1 mole NaOH Tripotassium phosphate (tertiary or tribasic potassium phosphate), K 3 PO 4 , is a white, deliquescent, granular powder of density 2.56 "3 , has a melting point of 1340 ° and is in water with alkaline reaction easily soluble. It is produced, for example, by heating Thomasschlacke with coal and potassium sulfate. Despite the higher price, the more soluble, therefore highly effective, potassium phosphates are often preferred over the corresponding sodium compounds in the detergent industry.
  • Tetrasodium diphosphate (sodium pyrophosphate), Na 4 P 2 O 7 , exists in anhydrous form (density 2.534 '3 , melting point 988 ° C, also indicated 88O 0 C) and as decahydrate (density 1, 815-1, 836 like "3 , Melting point 94 ° C. with loss of water.) Both substances are colorless crystals which are soluble in water with an alkaline reaction Na 4 P 2 O 7 is formed on heating disodium phosphate to> 200 ° C.
  • Kali diphosphate potassium pyrophosphate
  • K 4 P 2 O 7 exists in the form of the trihydrate and produces a colorless, hygroscopic powder with a density of 2.33 like "3 , which is soluble in water, wherein the pH of the 1% solution at 25 ° C is 10.4.
  • Condensation of NaH 2 PO 4 or KH 2 PO 4 gives rise to higher molecular weight sodium and potassium phosphates in which cyclic representatives, the sodium or potassium metaphosphates and chain types that can distinguish sodium and potassium polyphosphates, respectively.
  • cyclic representatives, the sodium or potassium metaphosphates and chain types that can distinguish sodium and potassium polyphosphates respectively.
  • hot or cold phosphates Graham's salt, Kurrolsches and Maddrell's salt. All higher sodium and potassium phosphates are collectively referred to as condensed phosphates.
  • NaO- [P (O) (ONa) -O] n 3.
  • Na with n 3.
  • 100 g of water at room temperature dissolve about 17 g, at 6O 0 C about 20 g, at 100 0 C, about 32 g of the salt water-free salt; after two hours of heating the solution to 100 0 C caused by hydrolysis about 8% orthophosphate and 15% diphosphate.
  • pentasodium triphosphate In the preparation of pentasodium triphosphate, phosphoric acid is reacted with soda solution or sodium hydroxide solution in a stoichiometric ratio and the solution is dehydrated by spraying. Similar to Graham's salt and sodium diphosphate, pentasodium triphosphate dissolves many insoluble metal compounds (including lime soaps, etc.). Pentakalium triphosphate, K5P 3 O 10 (potassium tripolyphosphate), is commercially available, for example, in the form of a 50% by weight solution (> 23% P 2 O 5 , 25% K 2 O). The potassium polyphosphates are widely used in the washing and cleaning industry. There are also sodium potassium tripolyphosphates which can also be used in the context of the present invention. These arise, for example, when hydrolyzed sodium trimetaphosphate with KOH:
  • Useful organic builder substances are, for example, the polycarboxylic acids which can be used in the form of their sodium salts, polycarboxylic acids meaning those carboxylic acids which carry more than one acid function. These are, for example, citric acid, adipic acid, succinic acid, glutaric acid, malic acid, tartaric acid, maleic acid, fumaric acid, sugar acids, aminocarboxylic acids, nitrilotriacetic acid (NTA), if such use can not be avoided for ecological reasons, and mixtures of these.
  • Preferred salts are the salts of polycarboxylic acids such as citric acid, adipic acid, succinic acid, glutaric acid, tartaric acid, sugar acids and mixtures thereof.
  • the acids themselves can also be used. In addition to their builder effect, they also typically have the property of an acidifying component and thus also serve to set a lower and milder pH of detergents or cleaners, unless the pH resulting from the mixture of the other components is desired.
  • environmentally friendly acids such as citric acid, acetic acid, tartaric acid, malic acid, lactic acid, glycolic acid, succinic acid, glutaric acid, adipic acid, gluconic acid and any mixtures of these are to be mentioned here.
  • mineral acids, in particular sulfuric acid or bases, in particular ammonium or alkali hydroxides can serve as pH regulators.
  • Such regulators are contained in the agents according to the invention in amounts of preferably not more than 20% by weight, in particular from 1.2% by weight to 17% by weight.
  • polymeric polycarboxylates for example the alkali metal salts of polyacrylic acid or polymethacrylic acid, for example those having a relative molecular mass of from 500 to 70,000 g / mol.
  • the molecular weights stated for polymeric polycarboxylates are weight-average molar masses M w of the particular acid form, which were determined in principle by means of gel permeation chromatography (GPC), a UV detector being used. The measurement was carried out against an external polyacrylic acid standard, which provides realistic molecular weight values due to its structural relationship with the polymers investigated. These data differ significantly from the molecular weight data, in which polystyrene sulfonic acids are used as standard. The molar masses measured against polystyrenesulfonic acids are generally significantly higher than the molecular weights specified in this document.
  • Suitable polymers are, in particular, polyacrylates which preferably have a molecular weight of 2,000 to 20,000 g / mol. Because of their superior solubility, the short-chain polyacrylates, which have molar masses of from 2000 to 10000 g / mol, and particularly preferably from 3000 to 5000 g / mol, may again be preferred from this group.
  • copolymeric polycarboxylates in particular those of acrylic acid with methacrylic acid and of acrylic acid or methacrylic acid with maleic acid.
  • Copolymers of acrylic acid with maleic acid which contain 50 to 90% by weight of acrylic acid and 50 to 10% by weight of maleic acid have proven to be particularly suitable.
  • Their relative molecular weight, based on free acids, is generally from 2000 to 70000 g / mol, preferably from 20,000 to 50,000 g / mol and in particular from 30,000 to 40,000 g / mol.
  • the (co) polymeric polycarboxylates can be used either as a powder or as an aqueous solution.
  • the content of the (co) polymeric polycarboxylates may be from 0.5 to 20% by weight, in particular from 1 to 10% by weight.
  • the polymers may also contain allylsulfonic acids such as allyloxybenzenesulfonic acid and methallylsulfonic acid as a monomer.
  • biodegradable polymers of more than two different monomer units for example those which are salts of the monomers Acrylic acid and maleic acid and vinyl alcohol or vinyl alcohol derivatives or containing as monomers salts of acrylic acid and 2-alkylallylsulfonic acid and sugar derivatives.
  • copolymers are those which have as monomers preferably acrolein and acrylic acid / acrylic acid salts or acrolein and vinyl acetate.
  • polymeric aminodicarboxylic acids their salts or their precursors.
  • polyaspartic acids or their salts and derivatives are particularly preferred.
  • polyacetals which can be obtained by reacting dialdehydes with polyolcarboxylic acids which have 5 to 7 C atoms and at least 3 hydroxyl groups.
  • Preferred polyacetals are obtained from dialdehydes such as glyoxal, glutaraldehyde, terephthalaldehyde and mixtures thereof and from polyol carboxylic acids such as gluconic acid and / or glucoheptonic acid.
  • dextrins for example oligomers or polymers of carbohydrates, which can be obtained by partial hydrolysis of starches.
  • the hydrolysis can be carried out by customary, for example acid or enzyme catalyzed processes.
  • it is hydrolysis products having average molecular weights in the range of 400 to 500,000 g / mol.
  • a polysaccharide with a dextrose equivalent (DE) in the range from 0.5 to 40, in particular from 2 to 30 is preferred, DE being a customary measure of the reducing action of a polysaccharide compared to dextrose, which is a DE of 100 has.
  • DE dextrose equivalent
  • oxidized derivatives of such dextrins are their reaction products with oxidizing agents which are capable of oxidizing at least one alcohol function of the saccharide ring to the carboxylic acid function.
  • oxidizing agents which are capable of oxidizing at least one alcohol function of the saccharide ring to the carboxylic acid function.
  • Preferred organic builders for agents according to the invention are oxidized starches or their derivatives from the applications EP 472042, WO 97/25399, and EP 755944.
  • Oxydisuccinates and other derivatives of disuccinates are other suitable co-builders.
  • ethylenediamine-N, N'-disuccinate (EDDS) is preferably in the form of its sodium or magnesium salts.
  • glycerol disuccinates and glycerol trisuccinates are also preferred in this context. Suitable amounts are in zeolith-, carbonate and / or silicate-containing formulations between 3 and 15 wt .-%.
  • organic cobuilders are, for example, acetylated hydroxycarboxylic acids or their salts, which may optionally also be present in lactone form and which contain at least 4 carbon atoms and at least one hydroxyl group and a maximum of two acid groups.
  • phosphonates are, in particular, hydroxyalkane or aminoalkanephosphonates.
  • hydroxyalkane phosphonates the 1-hydroxyethane-1, 1-diphosphonate (HEDP) is of particular importance as a cobuilder. It is preferably used as the sodium salt, the disodium salt neutral and the tetrasodium salt alkaline (pH 9).
  • Preferred aminoalkanephosphonates are ethylenediamine tetramethylenephosphonate (EDTMP), diethylenetriaminepentamethylenephosphonate (DTPMP) and their higher homologs.
  • the builder used here is preferably HEDP from the class of phosphonates.
  • the aminoalkanephosphonates also have a pronounced heavy metal binding capacity. Accordingly, in particular if the agents also contain bleach, it may be preferable to use aminoalkanephosphonates, in particular DTPMP, or to use mixtures of the phosphonates mentioned.
  • all compounds capable of forming complexes with alkaline earth ions can be used as co-builders.
  • Builder substances may optionally be present in the detergents or cleaners according to the invention in amounts of up to 90% by weight. They are preferably contained in amounts of up to 75% by weight. Detergents according to the invention have builder contents of, in particular, from 5% by weight to 50% by weight. In agents according to the invention for the cleaning of hard surfaces, in particular for the automated cleaning of dishes, the content of builder substances is in particular from 5% by weight to 88% by weight, wherein preferably no water-insoluble builder materials are used in such agents.
  • means for the particular automatic cleaning of dishes are 20 wt .-% to 40 wt .-% of water-soluble organic builder, in particular alkali, 5 wt .-% to 15 wt .-% alkali carbonate and 20 wt .-% bis 40 wt .-% Alkalidisilikat included.
  • Solvents that can be used in the liquid to gelatinous compositions of detergents and cleaners for example, from the group of monohydric or polyhydric alcohols, alkanolamines or glycol ethers, provided that they are miscible in the specified concentration range with water.
  • the solvents are preferably selected from ethanol, n- or i-propanol, butanols, ethylene glycol methyl ether, ethylene glycol ethyl ether, ethylene glycol propyl ether,
  • Ethylene glycol mono-n-butyl ether diethylene glycol methyl ether, diethylene glycol ethyl ether, propylene glycol methyl, ethyl or propyl ether, dipropylene glycol monomethyl, or ethyl ether, di-isopropylene glycol monomethyl, or ethyl ether, methoxy, ethoxy or butoxy triglycol, 1 Butoxyethoxy-2-propanol, 3-methyl-3-methoxybutanol, propylene glycol t-butyl ether and mixtures of these solvents.
  • Solvents may be used in the liquid to gelled detergents and cleaners according to the invention in amounts of between 0.1 and 20% by weight, but preferably below 15% by weight and in particular below 10% by weight.
  • one or more thickeners or thickening systems can be added to the composition according to the invention.
  • These high-molecular substances which are also called swelling agents, usually absorb the liquids and swell up to finally pass into viscous true or colloidal solutions.
  • Suitable thickeners are inorganic or polymeric organic compounds.
  • the inorganic thickeners include, for example, polysilicic acids, clay minerals such as montmorillonites, zeolites, silicas and bentonites.
  • the organic thickeners are derived from the groups of natural polymers, modified natural polymers and fully synthetic polymers.
  • Such naturally derived polymers include, for example, agar-agar, carrageenan, tragacanth, gum arabic, alginates, pectins, polyoses, guar gum, locust bean gum, starch, dextrins, gelatin and casein.
  • Modified natural products, which are used as thickeners come mainly from the group of modified starches and celluloses.
  • Fully synthetic thickeners are polymers such as polyacrylic and polymethacrylic compounds, vinyl polymers, polycarboxylic acids, polyethers, polyimines, polyamides and polyurethanes.
  • the thickeners may be present in an amount of up to 5% by weight, preferably from 0.05 to 2% by weight, and more preferably from 0.1 to 1.5% by weight, based on the finished composition ,
  • Detergents according to the invention may contain, as optical brighteners, derivatives of diaminostilbenedisulfonic acid or their alkali metal salts.
  • derivatives of diaminostilbenedisulfonic acid or their alkali metal salts for example, salts of 4,4'-bis (2-anilino-4-morpholino-1, 3,5-triazinyl-6-amino) stilbene-2,2'-disulphonic acid or similarly constructed compounds which replace the morpholino Group carry a diethanolamino group, a methylamino group, an anilino group or a 2-methoxyethylamino group.
  • brighteners of the substituted diphenylstyrene type may be present, for example, the alkali salts of 4,4'-bis (2-sulfostyryl) -diphenyl, 4,4'-bis (4-chloro-3-sulfostyryl) -diphenyl, or 4 - (4-chlorostyryl) -4 '- (2-sulfostyryl).
  • Mixtures of the aforementioned optical brightener can be used.
  • Graying inhibitors have the task of being detached from the textile fiber Keep dirt suspended in the fleet.
  • Water-soluble colloids of mostly organic nature are suitable for this purpose, for example starch, glue, gelatin, salts of ether carboxylic acids or ether sulfonic acids of starch or of cellulose or salts of acidic sulfuric acid esters of cellulose or starch.
  • water-soluble polyamides containing acidic groups are suitable for this purpose.
  • starch derivatives can be used, for example aldehyde starches.
  • cellulose ethers such as carboxymethylcellulose (Na salt), methylcellulose, hydroxyalkylcellulose and mixed ethers, such as methylhydroxyethylcellulose, methylhydroxypropylcellulose, methylcarboxymethylcellulose and mixtures thereof, for example in amounts of from 0.1 to 5% by weight, based on the compositions ,
  • silver corrosion inhibitors can be used in dishwashing detergents according to the invention.
  • dishwashing detergents Such are known from the prior art, for example benzotriazoles, iron (III) chloride or CoSO 4 .
  • benzotriazoles iron (III) chloride
  • CoSO 4 a silver corrosion inhibitor for use in conjunction with enzymes
  • particularly suitable silver corrosion inhibitors for use in conjunction with enzymes are manganese, titanium, zirconium, hafnium, vanadium, cobalt or cerium salts and / or complexes where the said metals are present in one of the oxidation states II, III, IV, V or VI.
  • Examples of such compounds are MnSO 4 , V 2 O 5 , V 2 O 4 , VO 2 , TiOSO 4 , K 2 TiF 6 , K 2 ZrF 6 , Co (NO 3 ) 2 , Co (NO 3 ) 3 , and the like mixtures.
  • Soil-release or “soil repellents” are mostly polymers which impart soil repellency when used in a laundry detergent detergent and / or aid in the soil release performance of the other detergent ingredients. A similar effect can also be observed in their use in hard surface cleaners.
  • Particularly effective and long-known soil release agents are copolyesters with dicarboxylic acid, alkylene glycol and polyalkylene glycol units.
  • Examples thereof are copolymers or copolymers of polyethylene terephthalate and polyoxyethylene glycol (DT 16 17 141, or DT 22 OO 911).
  • DT 22 53 063 acidic agents are mentioned, including a Copolymer of a dibasic carboxylic acid and an alkylene or cycloalkylene polyglycol.
  • Polymers of ethylene terephthalate and polyethylene oxide terephthalate and their use in detergents are described in German patents DE 28 57 292 and DE 33 24 258 and European patent EP 0 253 567.
  • European patent EP 066 944 relates to compositions containing a copolyester of ethylene glycol, polyethylene glycol, aromatic dicarboxylic acid and sulfonated aromatic dicarboxylic acid in certain molar ratios.
  • European Patent EP 0 185 427 discloses methyl or ethyl group-end capped polyesters having ethylene and / or propylene terephthalate and polyethylene oxide terephthalate units and laundry detergents containing such soil release polymer.
  • European patent EP 0 241 984 relates to a polyester which, besides oxyethylene groups and terephthalic acid units, also contains substituted ethylene units and also glycerine units.
  • European Patent EP 0 241 985 discloses polyesters which, in addition to oxyethylene groups and terephthalic acid units, contain 1, 2-propylene, 1, 2-butylene and / or 3-methoxy-1, 2-propylene groups and also glycerol units and with C 1 - Are capped to C 4 alkyl groups.
  • -4 alkyl or acyl groups end-capped polyesters with polypropylene terephthalate and polyoxyethylene terephthalate units are at least in part by C from the European patent application EP 0 272 033..
  • European Patent EP 0 274 907 describes sulfoethyl end-capped terephthalate-containing soil release polyesters.
  • sulfonation of unsaturated end groups produces soil release polyesters with terephthalate, alkylene glycol and poly-C 2-4 glycol units.
  • International Patent Application WO 95/32232 relates to acidic, aromatic soil release polymers.
  • International Patent Application WO 97/31085 discloses non-polymeric soil repellent active ingredients for multi-functional cotton materials: a first entity, which may be cationic, for example, is capable of adsorption to the cotton surface by electrostatic interaction, and a second Unit that is hydrophobic is responsible for the retention of the drug at the water / cotton interface.
  • the color transfer inhibitors which are suitable for use in textile detergents according to the invention include, in particular, polyvinylpyrrolidones, polyvinyl imidazoles, polymeric N-oxides such as poly (vinylpyridine N-oxide) and copolymers of vinylpyrrolidone with vinylimidazole.
  • foam inhibitors When used in automated cleaning processes, it may be advantageous to add foam inhibitors to the agents concerned.
  • foam inhibitors are, for example, soaps of natural or synthetic origin, which have a high proportion of Ci 8 -C24 fatty acids.
  • Suitable non-surfactant foam inhibitors are, for example, organopolysiloxanes and mixtures thereof with microfine, optionally signed silica and paraffins, waxes, microcrystalline waxes and mixtures thereof with signed silica or bistearylethylenediamide. It is also advantageous to use mixtures of various foam inhibitors, for example those of silicones, paraffins or waxes.
  • the foam inhibitors in particular silicone and / or paraffin-containing foam inhibitors, are bound to a granular, water-soluble, or dispersible carrier substance.
  • a granular, water-soluble, or dispersible carrier substance In particular, mixtures of paraffins and bistearylethylene diamides are preferred.
  • a hard surface cleaning agent according to the invention may contain abrasive constituents, in particular from the group comprising quartz flours, wood flours, plastic flours, chalks and glass microspheres and mixtures thereof.
  • Abrasive substances are preferably not more than 20% by weight, in particular from 5% by weight to 15% by weight, in the cleaning agents according to the invention.
  • Dyes and fragrances are added to detergents and cleaners in order to improve the aesthetic appearance of the products and to provide the consumer with a visually and sensory "typical and unmistakable" product in addition to the washing and cleaning performance.
  • perfume oils or fragrances individual perfume compounds, for example the synthetic products of the ester type, ethers, aldehydes, ketones, alcohols and hydrocarbons can be used.
  • Fragrance compounds of the ester type are, for example, benzyl acetate, phenoxyethyl isobutyrate, p-tert-butylcyclohexyl acetate, linalyl acetate, dimethylbenzylcarbinyl acetate, phenylethyl acetate, linalyl benzoate, benzyl formate, ethylmethylphenyl glycinate, allylcyclohexyl propionate, styrallyl propionate and benzyl salicylate.
  • the ethers include, for example, benzyl ethyl ethers, to the Aldehydes, for example, the linear alkanals having 8-18 C atoms, citral, citronellal, citronellyloxyacetaldehyde, cyclamen aldehyde, hydroxycitronellal, lilial and bourgeonal, to the ketones for example the ionone, ⁇ -isomethylionone and methyl cedrylketone, to the alcohols anethole, citronellol , Eugenol, geraniol, linalool, phenylethyl alcohol and terpineol, the hydrocarbons mainly include the terpenes such as limonene and pinene.
  • fragrance oils may also contain natural fragrance mixtures such as are available from vegetable sources, for example, pine, citrus, jasmine, patchouly, rose or ylang-ylang oil. Also suitable are muscatel, sage, chamomile, clove, lemon balm, mint, cinnamon, lime, juniper, vetiver, olibanum, galbanum and labdanum, and orange blossom, neroliol, orange peel and sandalwood.
  • the content of detergents and cleaners to dyes is less than 0.01 wt .-%, while perfumes can account for up to 2% by weight of the total formulation.
  • the fragrances can be incorporated directly into the detergents or cleaners, but it can also be advantageous to apply the fragrances to carriers, which enhance the adhesion of the perfume to the items to be cleaned and provide a slower release of fragrance for long-lasting fragrance, especially of treated textiles.
  • carrier materials for example, cyclodextrins have been proven, the cyclodextrin-perfume complexes can be additionally coated with other excipients.
  • a further preferred carrier for fragrances is the described zeolite X, which can also absorb fragrances instead of or in mixture with surfactants. Preference is therefore given to washing and cleaning agents containing the described zeolite X and fragrances, which are preferably at least partially absorbed on the zeolite.
  • Preferred dyes the selection of which presents no difficulty to the skilled person, have a high storage stability and insensitivity to the other ingredients of the agents and to light and no pronounced substantivity to textile fibers so as not to stain them.
  • Detergents or cleaners may contain antimicrobial agents to combat microorganisms. Depending on the antimicrobial spectrum and mechanism of action, a distinction is made between bacteriostatic agents and bactericides, fungistatics and fungicides, etc. Important substances from these groups are, for example, benzalkonium chlorides, alkylarylsulfonates, halophenols and phenolmercuric acetate.
  • antimicrobial action and antimicrobial active substance have the usual meaning within the scope of the teaching according to the invention, which is described, for example, by KH Wall conferenceußer in "Praxis der Sterilisation, Disinfection - Conservation: Germ Identification - Company Hygiene” (5th edition - Stuttgart, New York: Thieme, 1995 ), wherein all the substances described there can be used with antimicrobial activity.
  • Suitable antimicrobial agents are preferably selected from the groups of alcohols, amines, aldehydes, antimicrobial acids or their salts, carboxylic esters, acid amides, phenols, phenol derivatives, diphenyls, diphenylalkanes, urea derivatives, oxygen, nitrogen acetals and formals, benzamidines, isothiazolines, Phthalimide derivatives, pyridine derivatives, antimicrobial surface active compounds, guanidines, antimicrobial amphoteric compounds, quinolines, 1, 2-dibromo-2,4-dicyanobutane, iodo-2-propyl-butyl-carbamate, iodine, iodophores, peroxo compounds, halogen compounds and any mixtures of the foregoing ,
  • the antimicrobial agent may be selected from ethanol, n-propanol, i-propanol, 1,3-butanediol, phenoxyethanol, 1,2-propylene glycol, glycerol, undecylenic acid, benzoic acid, salicylic acid, dihydracetic acid, o-phenylphenol, N-methylmorpholine.
  • acetonitrile MMA
  • 2-benzyl-4-chlorophenol 2,2'-methylenebis (6-bromo-4-chlorophenol), 4,4'-dichloro-2'-hydroxydiphenyl ether (dichlosan), 2,4 , 4'-trichloro-2'-hydroxydiphenyl ether (trichlosan), chlorhexidine, N- (4-chlorophenyl) -N- (3,4-dichlorophenyl) -urea, N, N '- (1, 10-decanediyldi- 1-pyridinyl-4-ylidene) bis- (1-octanamine) dihydrochloride, N, N'-bis (4-chlorophenyl) -3,12-diimino-2,4,11,13-tetraaza-tetradecane diimidamide, glucoprotamines, antimicrobial quaternary surface active compounds, guanidines including the bi- and polyguanidine
  • halogenated xylene and cresol derivatives such as p-chloromethacresol or p-chloro-meta-xylene, and natural antimicrobial agents of plant origin (for example, from spices or herbs), of animal and microbial origin.
  • antimicrobial surface active quaternary compounds a natural antimicrobial agent of plant origin and / or a natural antimicrobial agent of animal origin, most preferably at least one natural antimicrobial agent of plant origin from the group comprising caffeine, theobromine and theophylline and essential oils such Eugenol, thymol and geraniol, and / or at least one natural antimicrobial agent of animal origin from the group, comprising enzymes such as protein from milk, lysozyme and lactoperoxidase, and / or at least one antimicrobial surface active quaternary compound having an ammonium, sulfonium, phosphonium -, iodonium or Arsonium distr, peroxo compounds and Chlorver ⁇ compounds are used. Also substances of microbial origin, so-called bacteriocins, can be used.
  • the suitable as antimicrobial agents quaternary ammonium compounds have the general formula (R 1 ) (R 2 ) (R 3 ) (R 4 ) N + X " , in the R 1 to R 4 identical or different CtC 22 alkyl radicals , C 7 -C 28 -Aralkylreste or heterocyclic radicals, wherein two or in the case of an aromatic inclusion as in pyridine even three radicals together with the nitrogen atom, the heterocycle, for example a pyridinium or imidazolinium compound, form, and X " halide ions, sulfate ions , Hydroxide ions or similar anions.
  • at least one of the radicals has a chain length of 8 to 18, in particular 12 to 16, carbon atoms.
  • QACs can be prepared by reacting tertiary amines with alkylating agents, such as, for example, methyl chloride, benzyl chloride, dimethyl sulfate, dodecyl bromide, but also ethylene oxide.
  • alkylating agents such as, for example, methyl chloride, benzyl chloride, dimethyl sulfate, dodecyl bromide, but also ethylene oxide.
  • alkylating agents such as, for example, methyl chloride, benzyl chloride, dimethyl sulfate, dodecyl bromide, but also ethylene oxide.
  • alkylating agents such as, for example, methyl chloride, benzyl chloride, dimethyl sulfate, dodecyl bromide, but also ethylene oxide.
  • the alkylation of tertiary amines with a long alkyl radical and two methyl groups succeeds particularly easily, and the quaternization of tertiary
  • Suitable QACs are, for example, benzalkonium chloride (N-alkyl-N, N-dimethylbenzylammonium chloride, CAS No. 8001-54-5), benzalkone B (m, p-dichlorobenzyl-dimethyl-C 12 -alkylammonium chloride, CAS No. 58390- 78-6), benzoxonium chloride (benzyldodecyl bis (2-hydroxyethyl) ammonium chloride), cetrimonium bromide (N-hexadecyl-N, N-trimethylammonium bromide, CAS No.
  • benzetonium chloride N, N-dimethyl-N- [2- [2- [p- (1, 1, 3,3-tetramethylbutyl) phenoxy] ethoxy] ethyl] benzyl ammonium chloride, CAS No. 121-54-0
  • Dialkyldimethylammonium chlorides such as di-A7-decyl-dimethyl ammonium chloride (CAS No. 7173-51-5-5), didecyldi-methylammonium bromide (CAS No. 2390-68-3), dioctyl-dimethyl-ammonium chloride, 1-cetylpyridinium chloride (CAS No.
  • QUATS are the benzalkonium chlorides 8 alkyl radicals with C 8 -C, especially Cia-C ⁇ -Aklyl-benzyl-dimethyl-ammonium chloride.
  • Benzalkonium halides and / or substituted benzalkonium halides are for example commercially available as Barquat ® ex Lonza, Marquat® ® ex Mason, Variquat ® ex Witco / Sherex and Hyamine ® ex Lonza and as Bardac ® ex Lonza.
  • antimicrobial agents are N- (3-chloroallyl) - hexaminiumchlorid as Dowicide and Dowicil ® ® ex Dow, benzethonium chloride such as Hyamine ® 1622 ex Rohm & Haas, methylbenzethonium as Hyamine ® 1ox ex Rohm & Haas, cetylpyridinium chloride such as Cepacol ex Merrell Labs ,
  • the antimicrobial agents are used in amounts of 0.0001 wt .-% to 1 wt .-%, preferably from 0.001 wt .-% to 0.8 wt .-%, particularly preferably from 0.005 wt .-% to 0.3 wt .-% and in particular from 0.01 to 0.2 wt .-% used.
  • the detergents or cleaners according to the invention may contain UV absorbents (UV absorbers) which are applied to the treated textiles and improve the lightfastness of the fibers and / or the lightfastness of other formulation components.
  • UV absorbents UV absorbers
  • organic substances unsunscreen
  • Compounds having these desired properties include, for example, the non-radiative deactivating compounds and derivatives of benzophenone having substituents in the 2- and / or 4-position.
  • substituted benzotriazoles in the 3-position phenyl-substituted acrylates (cinnamic acid derivatives, optionally with cyano groups in the 2-position), salicylates, organic Ni complexes and natural products such as Umbeiliferon and the body's own Urocanklad.
  • biphenyl and especially Stilbenderivate as described for example in EP 0728749 A and are commercially available as Tinosorb ® FD or Tinosorb ® FR ex Ciba.
  • UV-B absorbers may be mentioned: 3-Benzylidencampher or 3-Benzylidennorcampher and its derivatives, for example 3- (4-Methylbenzy- liden) camphor, as described in EP 0693471 B1; 4-aminobenzoic acid derivatives, preferably 2-ethylhexyl 4- (dimethylamino) benzoate, A-
  • 2-phenylbenzimidazole-5-sulfonic acid and its alkali metal, alkaline earth metal, ammonium, alkylammonium, alkanolammonium and glucammonium salts Sulfonic acid derivatives of benzophenones, preferably 2-hydroxy-4-methoxybenzophenone-5-sulfonic acid and its salts
  • Sulfonic acid derivatives of 3-Benzylidencamphers such as 4- (2-oxo-3-bomylidenemethyl) benzenesulfonic acid and 2-methyl-5- (2-oxo-3-bomylidene) sulfonic acid and salts thereof.
  • UV-A filter in particular derivatives of benzoylmethane come into question, such as 1- (4'-tert-butylphenyl) -3- (4'-methoxyphenyl) propane-1, 3-dione, 4-tert-butyl 4'-methoxydibenzoylmethane (Parsol 1789), 1-phenyl-3- (4'-isopropylphenyl) propane-1, 3-dione and also enamine compounds, as described in DE 19712033 A1 (BASF).
  • the UV-A and UV-B filters can also be used in mixtures.
  • insoluble photoprotective pigments namely finely dispersed, preferably nano-metal oxides or salts
  • suitable metal oxides are in particular zinc oxide and titanium dioxide and, in addition, oxides of iron, zirconium, silicon, manganese, aluminum and cerium, and mixtures thereof.
  • salts silicates (talc), barium sulfate or zinc stearate can be used.
  • the oxides and salts are already used in the form of the pigments for skin-care and skin-protecting emulsions and decorative cosmetics.
  • the particles should have an average diameter of less than 100 nm, preferably between 5 and 50 nm and in particular between 15 and 30 nm.
  • the pigments may have a spherical shape, but it is also possible to use those particles which have an ellipsoidal or otherwise deviating shape from the spherical shape.
  • the pigments may also be surface-treated, that is to say hydrophilized or hydrophobicized.
  • Typical examples are coated titanium dioxides, for example titanium dioxide T 805 (Degussa) or Eusolex® T2000 (Merck; preferred hydrophilic coating agents are silicones and particularly preferably trialkoxyoctylsilanes or simethicones.)
  • Micronized zinc oxide is preferably used see the review by P. Finkel in S ⁇ FW Journal 122 (1996), p. 543.
  • the UV absorbents are usually used in amounts of from 0.01% by weight to 5% by weight, preferably from 0.03% by weight to 1% by weight.
  • a polypeptide according to the invention and / or other proteins contained can be protected especially during storage by stabilizers, for example from denaturation, disintegration or inactivation, for example by physical influences, oxidation or proteolytic cleavage. This applies to all agents according to the invention, in particular washing and cleaning agents.
  • One group of stabilizers are reversible protease inhibitors.
  • Benzamidine hydrochloride, borax, boric acids, boronic acids or their salts or esters are frequently used for this purpose, including, in particular, derivatives with aromatic groups, for example ortho, meta or para-substituted phenylboronic acids, in particular A-formyl-biphenyl-boronic acid, or the salts or Esters of the compounds mentioned.
  • peptide aldehydes that is, oligopeptides with reduced C-terminus, in particular those of 2 to 50 monomers are used for this purpose.
  • the peptidic reversible protease inhibitors include, among others Ovomucoid and Leupeptin.
  • specific, reversible peptide inhibitors for the protease subtilisin and fusion proteins from proteases and specific peptide inhibitors are suitable.
  • enzyme stabilizers are amino alcohols such as mono-, di-, triethanol- and - propanolamine and mixtures thereof, aliphatic carboxylic acids up to C 12 , such as succinic acid, other dicarboxylic acids or salts of said acids. End-capped fatty acid amide alkoxylates are also suitable for this purpose. Certain organic acids used as builders are capable, as disclosed in WO 97/18287, of additionally stabilizing a contained enzyme.
  • Lower aliphatic alcohols but especially polyols such as glycerol, ethylene glycol, propylene glycol or sorbitol are other frequently used enzyme stabilizers.
  • Di-glycerol phosphate also protects against denaturation due to physical influences.
  • calcium and / or magnesium salts are used, such as calcium acetate or calcium formate.
  • Polyamide oligomers or polymeric compounds such as lignin, water-soluble vinyl copolymers or cellulose ethers, acrylic polymers and / or polyamides stabilize the enzyme preparation, inter alia, against physical influences or pH fluctuations.
  • Polyamine N-oxide containing polymers act simultaneously as enzyme stabilizers and as dye transfer inhibitors.
  • Other polymeric stabilizing agents are linear C 8 -C- I s polyoxyalkylenes.
  • alkylpolyglycosides can stabilize the enzymatic components of the agent according to the invention and, preferably, are capable of additionally increasing their performance.
  • Crosslinked N-containing compounds preferably perform a dual function as soil release agents and as enzyme stabilizers. Hydrophobic, nonionic polymer stabilizes in particular an optionally contained cellulase.
  • Reducing agents and antioxidants increase the stability of the enzymes to oxidative degradation;
  • sulfur-containing reducing agents are familiar.
  • Other examples are sodium sulfite and reducing sugars.
  • Particular preference is given to using combinatons of stabilizers, for example of polyols, boric acid and / or borax, the combination of boric acid or borate, reducing salts and succinic acid or other dicarboxylic acids or the combination of boric acid or borate with polyols or polyamino compounds and with reducing salts.
  • the effect of peptide-aldehyde stabilizers is favorably enhanced by the combination with boric acid and / or boric acid derivatives and polyols, and still further by the additional action of divalent cations, such as calcium ions.
  • Stabilized enzyme activity agents are preferred embodiments of the present invention. Particularly preferred are those with enzymes that are stabilized in several of the ways illustrated.
  • the subject matter of the present invention is a hard surface cleaning composition which contains a polypeptide according to the invention and / or an enzyme preparation according to the invention.
  • the cleaning agent may contain the enzyme preparation, for example, in amounts of from 0.1 to 10.0% by weight, preferably from 0.5 to 3% by weight.
  • the cleaning agent may optionally additionally contain biocides, in particular one of the abovementioned, but may also be biocide-free.
  • the hard surface cleaner is preferably a liquid, gel or pasty aqueous detergent.
  • the hard surface cleaner may contain any of a variety of the components listed above.
  • the cleaning agent contains, in addition to the polypeptide according to the invention one or more components selected from the group consisting of surfactants, builders, acids, alkalis, hydrotropes, solvents, thickeners, abrasives and other auxiliaries and additives such as dyes, perfumes, corrosion inhibitors and skin care agents , These groups will be exemplified below or have been exemplified above. The components listed below may be included in any other agent of the invention besides a hard surface cleaner.
  • the surfactants optionally used in a hard surface cleaner are preferably selected from the group of anionic, nonionic and / or amphoteric surfactants. In this case, preference is given to using anionic and / or nonionic surfactants. If used, anionic surfactants are preferably used in amounts of from 0.1 to 15% by weight, nonionic surfactants preferably in amounts of from 0.1 to 10% by weight, and amphoteric surfactants preferably in amounts of from 0.1 to 4% by weight .-% for use, in each case based on the total composition. In a less preferred embodiment, it is also possible to use amphoteric surfactants in amounts of up to 2% by weight, based on the total composition. Likewise, cationic surfactants can also be used. In a preferred embodiment, however, the cleaning agent is free of these due to the biocidal effect emanating from cationic surfactants.
  • the surfactants are in particular selected from the groups of the surfactants listed above.
  • the anionic surfactants which can be used according to the invention, in particular in hard surface cleaners include aliphatic sulfates such as fatty alcohol sulfates, fatty alcohol ether sulfates, dialkyl ether sulfates, monoglyceride sulfates and aliphatic sulfonates such as alkanesulfonates, ⁇ -olefinsulfonates, ether sulfonates, n-alkyl ether sulfonates, sulfonated fatty acids, ester sulfonates and lignosulfonates.
  • aliphatic sulfates such as fatty alcohol sulfates, fatty alcohol ether sulfates, dialkyl ether sulfates, monoglyceride sulfates and aliphatic sulfonates such as alkanesulfonates, ⁇ -olefinsulfonates, ether sulfonates
  • alkylbenzenesulfonates fatty acid salts (soaps), fatty acid cyanamides, sulfosuccinates (sulfosuccinic acid mono- and dialkyl esters), sulfosuccinamates, sulfosuccinamides, carboxylic acid amide ether sulfates, alkylpolyglycol ether carboxylates, fatty acid isethionates, acylaminoalkanesulfonates
  • fatty acids or fatty alcohols or their derivatives are-unless stated otherwise-particularly representative of branched or unbranched carboxylic acids or alcohols or their derivatives having preferably 6 to 22 carbon atoms, in particular 8 to 20 carbon atoms 10 to 18 carbon atoms, more preferably 12 to 16 carbon atoms, for example 12 to 14 carbon atoms.
  • the fatty acids / alcohols or their derivatives with an even number of carbon atoms are particularly preferred on account of their vegetable base as based on renewable raw materials for ecological reasons, but without limiting the teaching of the invention to them.
  • the oxo alcohols or derivatives thereof which are obtainable, for example, by Roelen's oxo synthesis and preferably have 7 to 19 carbon atoms, in particular 9 to 19 carbon atoms, more preferably 9 to 17 carbon atoms, most preferably 11 to 15 carbon atoms, for example 9 to 11 carbon atoms , 12 to 15 or 13 to 15 carbon atoms, can be used accordingly.
  • compositions according to the invention may also comprise soaps, ie alkali or ammonium salts of saturated or unsaturated C 6 -C 22 -fatty acids.
  • the anionic surfactants are preferably selected from the group comprising fatty alcohol sulfates in amounts of up to 5 wt .-%, alkylbenzenesulfonates in amounts of up to 7.5 wt .-% and soaps in amounts of up to 2 wt .-%, each based on the overall composition, as well as mixtures thereof.
  • Suitable nonionic surfactants are, for example, C 8 -C 8 - alkyl alcohol polyglycol ethers, alkyl polyglycosides and nitrogen-containing surfactants or mixtures thereof, in particular the first two.
  • C 8 -C 8 - Alkylalkoholpolypropylenglykol / polyethylene may by the formula
  • Hard surface cleaners according to the present invention may contain alkyl alcohol polyglycol ethers in amounts of from 0.1% to 4% by weight, based on the total composition.
  • Preferred nonionic surfactants for a hard surface cleaner according to the invention are also alkylpolyglycosides (APG) of the formula
  • R 2 is a linear or branched, saturated or unsaturated alkyl radical having 8 to 22 carbon atoms
  • [G] is a glycosidically linked sugar radical and x is a number from 1 to 10.
  • alkyl glycosides are preferred whose degree of oligomerization is less than 1.7, and in particular between
  • the glycosidic sugar used is preferably xylose, but especially glucose.
  • the alkyl or alkenyl radical R 2 can be derived from primary alcohols having 8 to 18, preferably 8 to 14 carbon atoms. Typical examples are caproic alcohol, caprylic alcohol, capric alcohol and undecyl alcohol, and technical mixtures thereof, such as those obtained in the course of the hydrogenation of technical fatty acid methyl esters or in the course of the hydrogenation of aldehydes from Roelene's oxosynthesis.
  • the alkyl or alkenyl radical R 2 is derived from lauryl alcohol, myristyl alcohol, cetyl alcohol, palmoleyl alcohol, Stearyl alcohol, isostearyl alcohol or oleyl alcohol from. Also to be mentioned are elaidyl alcohol, petroselinyl alcohol, arachidyl alcohol, gadoleyl alcohol, behenyl alcohol, erucyl alcohol and technical mixtures thereof.
  • Alkyl polyglycosides can be contained in cleaners according to the invention in amounts of from 0.1 to 6% by weight, based on the total composition.
  • nitrogen-containing surfactants may be contained, e.g. Fatty acid polyhydroxyamides, for example glucamides, and ethoxylates of alkylamines, vicinal diols and / or carboxylic acid amides which have alkyl groups with 10 to 22 C atoms, preferably 12 to 18 C atoms.
  • the degree of ethoxylation of these compounds is generally between 1 and 20, preferably between 3 and 10.
  • Particularly useful compounds include the lauric, myristic and palmitic monoethanolamides.
  • amphoteric surfactants (amphoteric surfactants, zwitterionic surfactants) which can be used according to the invention include, inter alia, Betaines, amine oxides, alkylamido alkylamines, alkyl-substituted amino acids and acylated amino acids.
  • Preferred amphoteric surfactants are, for example, betaines of the formula
  • R 3 is an optionally interrupted by hetero atoms or heteroatom groups alkyl radical having 8 to 25, preferably 10 to 21 carbon atoms and R 4 and R 5 are identical or different alkyl radicals having 1 to 3 carbon atoms, in particular C T oC-is-alkyl-dimethylcarboxymethylbetain and C 11 -C 17 Alkyamidopropyl dimethylcarboxymethyl betaine.
  • cationic surfactants are included in the composition, these are preferably the quaternary ammonium compounds of the formula
  • R 6 to R 9 are four identical or different, in particular two long and two short-chain, alkyl radicals and X "is an anion, in particular a halide ion, for example didecyl-dimethyl-ammonium chloride, alkyl-benzyl-didecyl-ammonium chloride and mixtures thereof, but preferably the detergent composition is free of cationic surfactants.)
  • the enzyme activity is lowered by not more than 50% during a typical 15 minute median exposure time, more preferably not more than 30%.
  • SDS denaturing sodium dodecyl sulfate
  • the surface-active cleaners according to the invention may contain builders, in particular those selected from the group of builders listed above. Suitable builders are preferably alkali metal gluconates, citrates, nitrilotriacetates, carbonates and bicarbonates, in particular sodium gluconate, citrate and nitrilotriacetate and sodium and potassium carbonate and bicarbonate, and alkali metal and alkaline earth metal hydroxides, in particular sodium and potassium hydroxide, ammonia and amines , in particular mono- and triethanolamine, or mixtures thereof. These include the salts of glutaric acid, succinic acid, adipic acid, tartaric acid and Benzolhexacarbonklare and phosphonates and Phosphates.
  • the agents may contain builders in amounts, based on the composition, of from 0.1 to 5% by weight.
  • agents according to the invention may contain acids and / or alkalis. These serve on the one hand as pH regulators, on the other hand, however, the acids can also contribute to the removal of limescale from the surfaces to be cleaned.
  • the acids which can be used according to the invention may be inorganic mineral acids, for example hydrochloric acid, and / or C 1-6 -mono-, di-, tri- or polycarboxylic acids or -hydroxycarboxylic acids such as, for example, formic acid, acetic acid, lactic acid, citric acid, gluconic acid, glutaric acid , Succinic acid, adipic acid, tartaric acid or else malic acid, as well as other organic acids such as salicylic acid or amidosulfonic acid.
  • the citric acid is particularly preferably used; also mixtures of several acids can be used. Acids can be present in the inventive detergent in amounts of up to 6 wt .-%, based on the total composition.
  • Suitable bases include alkanolamines, for example mono- or diethanolamine, and ammonium or alkali metal hydroxides, especially sodium hydroxide.
  • the hard surface cleaner of the present invention may contain bases in amounts of up to 2.5% by weight based on the total composition.
  • the hard surface cleaner of the invention may further contain one or more thickeners for viscosity control.
  • Suitable thickeners are natural and synthetic polymers and inorganic thickeners.
  • the polymers which can be used include polysaccharides or heteropolysaccharides and other organic natural thickeners, including the polysaccharide gums such as gum arabic, agar, alginates, carrageenans and their salts, guar, guar gum, tragacanth, gellan, Ramzan, dextran or xanthan and their derivatives, eg propoxylated Guar, and their mixtures, as well as pectins, polyoses, carob seed flour, starch, dextrins, gelatin, casein.
  • organic modified natural substances such as carboxymethyl cellulose and - cellulose ethers, hydroxyethyl and propyl cellulose and the like. Or cellulose acetate and Kemmehlether be used.
  • Homogeneous and copolymeric polycarboxylates, especially polyacrylic and polymethacrylic compounds, as well as vinyl polymers, polycarboxylic acids, polyethers, polyimines or else polyamides can serve as organic fully synthetic thickeners.
  • the inorganic thickeners which can be used include polysilicic acids, clay minerals such as montmorillonites, zeolites, silicic acid and various nanoparticulate inorganic compounds such as nanoparticulate metal oxides, oxide hydrates, hydroxides, carbonates and phosphates, and silicates having an average particle size of from 1 to 200 nm to the particle diameter in the longitudinal direction, that is, in the direction of maximum expansion of the particles.
  • These nanoparticulate substances may optionally be treated in one further embodiment of the invention with one or more surface modifiers.
  • the hard surface cleaner according to the invention may contain electrolyte salts. These can also contribute to an increase in viscosity.
  • Electrolyte salts in the context of the present invention are salts which decompose into their ionic constituents in the aqueous agent according to the invention. Preference is given to the salts, in particular alkali metal and / or alkaline earth metal salts, of an inorganic acid, preferably of an inorganic acid from the group comprising the hydrohalic acids, nitric acid and sulfuric acid, in particular the chlorides and sulfates.
  • an electrolyte salt can also be used in the form of its corresponding acid / base pair, for example hydrochloric acid and sodium hydroxide instead of sodium chloride.
  • the hard surface cleaner of the invention may advantageously additionally contain one or more water-soluble organic solvents, usually in an amount of up to 6% by weight, based on the total composition.
  • the solvent is used in the context of the teaching according to the invention as needed in particular as a hydrotrope, Viskosticians ⁇ regulator and / or cold stabilizer. It acts solubilizing in particular for surfactants and electrolyte as well as perfume and dye and thus contributes to their incorporation, prevents the formation of liquid-crystalline phases and has a share in the formation of clear products.
  • the viscosity of the agent according to the invention decreases with increasing amount of solvent. However, too much solvent can cause excessive viscosity drop. Finally, as the amount of solvent increases, the clouding and clearing point of the composition according to the invention decreases.
  • Suitable solvents are for example, saturated or unsaturated, preferably saturated, branched or unbranched Ci -2 o-hydrocarbons, preferably C 2 i 5 hydrocarbons, with at least one hydroxy group and optionally one or more ether functions COC, the carbon atom chain that is interrupting oxygen atoms.
  • Preferred solvents are, however, - if appropriate on one side with a Ci -6 etherified alkanol - C 2-6 - alkylene glycols and poly-C 2-3 -alkylene same or on average 1 to 9 different, preferably identical, alkylene glycol per molecule, for example ethylene glycol , Propylene glycol, butylene glycol, diethylene glycol, dimethoxy diglycol, dipropylene glycol, propylene glycol butyl ether, propylene glycol propyl ether,
  • Dipropylene glycol monomethyl ether and PEG are further preferred solvents, such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, t-butanol, etc., more preferably ethanol and / or isopropanol is used.
  • C 1-6 -alcohols such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, t-butanol, etc., more preferably ethanol and / or isopropanol is used.
  • solubilizer in addition to the solvents described above, for example, alkanolamines and alkylbenzenesulfonates having 1 to 3 carbon atoms in the alkyl radical, for example xylene or cumene sulfonate can be used.
  • Further usable hydrotropes are, for example, octyl sulfate or butyl glucoside.
  • the agent of the invention may contain up to 4% by weight of these hydrotropes in amounts of, based on the total composition.
  • the hard surface cleaner of the present invention may contain abrasives.
  • the abrasive component used may be solid water-soluble and water-insoluble, preferably inorganic compounds and mixtures thereof.
  • alkali metal carbonates include, for example, alkali metal carbonates, alkali metal bicarbonates and alkali metal sulfates, alkali metal borates, alkali metal phosphates, silicon dioxide, crystalline or amorphous alkali metal silicates and phyllosilicates, finely crystalline sodium aluminum silicates and calcium carbonate.
  • abrasives obtained from animate nature, for example ground nut shells or woods, as well as abrasion-resistant plastics, for example polyethylene beads, or even ceramic or glass beads.
  • the cleaning agent according to the invention may contain abrasives in amounts of up to 2% by weight, based on the total composition.
  • compositions according to the invention may contain one or more further auxiliaries and additives, as are customary, above all, in hard surface cleaners.
  • auxiliaries and additives include in particular UV stabilizers, corrosion inhibitors, cleaning enhancers, antistatic agents, preservatives (eg 2-bromo-2-nitropropane-1, 3-diol or an isothiazolinone Bromnitropropandiol preparation), perfume, dyes, pearlescing agents (for example, glycol distearate) and opacifiers or also skin protection agents, as described for example in EP 522 506.
  • the amount of such additives is usually not more than 12 wt .-% in the detergent.
  • the lower limit of the use depends on the nature of the additive and can be up to 0.001 wt .-% and below, for example, in the case of dyes.
  • the amount of auxiliaries is preferably between 0.01 and 7% by weight, in particular 0.1 and 4% by weight.
  • dyes it is possible to use all dyes customarily used in household cleaners. Even with the fragrances all common perfumes can be used. Preference is given to fruity scents, such as citrus, further Pine (spruce) and mint and floral fragrances. Preservatives have a biocidal effect, so it is desirable to use in Cleaning agents according to the invention only low concentrations, but preferably to use no preservatives.
  • the agent contains no complexing agents; the addition of a bleach to the hard surface cleaner of the invention is not essential.
  • the pH of the cleaners according to the invention is in a preferred embodiment, in particular for hard surface cleaners, preferably between 1 and 8, more preferably between 2 and 5 or between 5 and 8, in particular between 2.5 and 4.5 or between 5 , 5 and 7.5.
  • the pH of the composition is understood to mean the pH of the temporary emulsion formed after the agitation; in the case of compositions offered in multi-chambered bottles, the pH of the composition is the pH the solution obtained from the common intended dosage of the components stored in the different chambers. Thus, it is meant in each case the pH of the ready-to-use cleaning solution.
  • this preferably has a viscosity of up to 1000 mPas.
  • gelatinous or pasty cleaning agents can have viscosities of up to 150,000 mPas.
  • the viscosity measurements are carried out at 20 ° C. in the Brookfield viscometer LVDV II with a rotor frequency of 20 rpm (spindle No. 31, conc. 100%).
  • the cleaning agent may contain one or more propellants (INCI propellants), usually in an amount of from 1 to 80% by weight, preferably from 1 to 5% by weight, in particular from 2 to 10% by weight, particularly preferably 2.5 to 8% by weight, most preferably 3 to 6% by weight.
  • ICI propellants usually in an amount of from 1 to 80% by weight, preferably from 1 to 5% by weight, in particular from 2 to 10% by weight, particularly preferably 2.5 to 8% by weight, most preferably 3 to 6% by weight.
  • Propellants are inventively usually propellants, especially liquefied or compressed gases.
  • the choice depends on the product to be sprayed and the field of application.
  • compressed gases such as nitrogen, carbon dioxide or nitrous oxide, which are generally insoluble in the liquid detergent
  • the operating pressure decreases with each valve actuation.
  • soluble or even acting as a solvent liquefied gases (liquefied gases) as a propellant offer the advantage of constant operating pressure and uniform distribution, because in the air, the propellant evaporates, taking a multi-hundred-fold volume.
  • suitable propellants are accordingly: butanes, carbon dioxides, dimethyl carbonates, dimethyl ether, ethanes, Hydrochlorofluorocarbon 22, hydrochlorofluorocarbon 142b, hydrofluorocarbon 152a, hydrofluorocarbon 134a, hydrofluorocarbon 227ea, isobutanes, isopentanes, nitrogen, nitrous oxides, pentanes, propanes.
  • Chlorofluorocarbons (chlorofluorocarbons, CFCs) as propellant are, however, preferably largely and in particular completely dispensed with because of their harmful effect on the ozone shield of the atmosphere, which protects against hard UV radiation, the so-called ozone layer.
  • blowing agents are liquefied gases.
  • Liquefied gases are gases that can be converted from the gaseous to the liquid state at usually already low pressures and 20 ° C.
  • under liquefied gases are the - hydrocarbons propane, propene, butane, butene, isobutane (2-methylpropane), isobutene (2-methylpropene), which are obtained in oil refineries as by-products in the distillation and cracking of crude oil and in natural gas treatment during gasoline separation. Isobutylene) and mixtures thereof.
  • the cleaning agent particularly preferably contains propane, butane and / or isobutane as one or more blowing agents, in particular propane and butane, very preferably propane, butane and isobutane.
  • the invention further provides a product comprising an enzyme preparation according to the invention or a composition according to the invention, in particular a hard surface cleaner according to the invention, and a spray dispenser.
  • the product may be both a single-chamber and a multi-chamber container, in particular a two-chamber container.
  • the spray dispenser is preferably a manually activated spray dispenser, in particular selected from the group comprising aerosol spray dispensers (pressurized gas containers; also known as spray can), even pressure-building spray dispenser, pump spray dispenser and trigger spray dispenser, in particular pump spray dispenser and trigger spray dispenser with a container made of transparent polyethylene or polyethylene terephthalate.
  • Spray dispensers are described in more detail in WO 96/04940 (Procter & Gamble) and the US patents cited therein about spray dispensers, to which reference is made in this regard and the contents of which are hereby incorporated by reference.
  • Triggersprühspender and pump sprayer have over compressed gas tanks the advantage that no propellant must be used.
  • the agent containing the enzyme preparation is not aerosolized as an aerosol, since in this case possibly small amounts of the enzyme preparation can get into the respiratory tract and under certain circumstances trigger allergic reactions there.
  • the enzyme can be added to the agent in a form immobilized on particles and dosed as a cleaning foam. In producing these compact foams, no respirable particles are formed so that the danger of inhaling allergens is substantially eliminated.
  • Yet another object of the invention is a method for the hydrolysis of biofilms on hard surfaces, in which the vitality of the microbial cells is preferably not damaged.
  • the enzyme preparation according to the invention or the cleaning agent according to the invention is applied to the biofilm-coated surface and, if appropriate, after an exposure time of 1 to 30 minutes, in the case of heavy infestation also for a few hours or overnight , rinsed with clean water.
  • the preparation or the agent may also be blurred or rubbed on the surface affected by biofilm before rinsing with a cloth, a sponge, a brush or other suitable for cleaning utensil, which improves the cleaning performance, for example in the presence of abrasives in the detergent.
  • the surface is dried with a dry cloth. If the biofilm surface is very heavily attacked, the cleaning process can then be repeated.
  • Oral, dental and / or dental prosthesis care products are also be blurred or rubbed on the surface affected by biofilm before rinsing with a cloth, a sponge,
  • the oral, dental and / or dental prosthesis care agents according to the invention can be present, for example, as a mouthwash, gel, liquid toothbrush lotion, stiff toothpaste, chewing gum, denture cleaner or denture adhesive cream.
  • pulverulent preparations or aqueous-alcoholic solutions serve as mouthwash 0 to 15 wt .-% ethanol, 1 to 1, 5 wt .-% flavor oils and 0.01 to 0.5 wt .-% sweeteners or as mouthwash concentrates 15 to 60 wt .-% ethanol, 0.05 to 5 wt .-% aroma oils, 0.1 to 3 wt .-% sweeteners and optionally other excipients may be included and diluted with water before use.
  • the concentration of the components must be so high that, after dilution, the specified lower concentration limits are not undershot during use.
  • gels and more or less flowable pastes which are expressed from flexible plastic containers or tubes and applied to the teeth with the aid of a toothbrush, can also serve as the carrier.
  • Such products contain higher levels of humectants and binders or consistency regulators and polishing components.
  • aromatic oils, sweeteners and water are also contained in these preparations.
  • humectants e.g. Glycerol, sorbitol, xylitol, propylene glycols, Polyethenylenglycole or mixtures of these polyols, in particular those Polyethenylenglycole be used with molecular weights of 200 to 800 (from 400 to 2000).
  • sorbitol is contained as humectant in an amount of 25-40 wt .-%.
  • condensed phosphates may be present in the form of their alkali metal salts, preferably in the form of their sodium or potassium salts.
  • the aqueous solutions of these phosphates react alkaline due to hydrolytic effects.
  • the pH of the The oral, dental and / or dental prosthesis care agents according to the invention are adjusted to the preferred values of 7.5-9.
  • the condensed phosphate is a sodium or potassium tripolyphosphate in an amount of 5-10% by weight of the composition.
  • a preferred active ingredient is a caries-inhibiting fluorine compound, preferably from the group of fluorides or monofluorophosphates in an amount of 0.1 to 0.5 wt .-% fluorine.
  • Suitable fluoro compounds are e.g. Sodium monofluorophosphate (NaaPOsF), potassium monofluorophosphate, sodium or potassium fluoride, stannous fluoride or the fluoride of an organic amino compound.
  • Suitable binders and consistency regulators are, for example, natural and synthetic water-soluble polymers such as carrageenan, tragacanth, guar, starch and their non-ionic derivatives such as hydroxypropyl guar, hydroxyethyl starch, cellulose ethers such as hydroxyethyl cellulose or methylhydroxypropyl cellulose.
  • agar-agar, xanthan gum, pectins water-soluble carboxyvinyl polymers (for example Carbopol ® types), polyvinyl alcohol, polyvinyl pyrrolidone, high molecular weight polyethylene glycols (molecular weight 10 3 to 10 ⁇ D).
  • Further substances which are suitable for viscosity control are phyllosilicates such as montmorillonite clays, colloidal thickening silicas, eg airgel silica or fumed silicas.
  • polishing components may all heretofore known polishing agent, but preferably precipitated and gel silicas, aluminum hydroxide, aluminum silicate, alumina, alumina trihydrate, insoluble sodium metaphosphate, calcium pyrophosphate, calcium hydrogen phosphate, dicalcium phosphate, chalk, hydroxyapatite, hydrotalcites, talc, magnesium aluminum silicate (Veegum ®), calcium sulfate, magnesium carbonate, Magnesium oxide, sodium aluminum silicates, such as zeolite A or organic polymers, such as polymethacrylate, are used.
  • the polishing agents are preferably used in smaller amounts of eg 1-10% by weight.
  • Aromatic oils are all natural and synthetic flavors which are customary for oral, dental and / or dental care products. Natural flavors can be used both in the form of the essential oils isolated from the drugs and the individual components isolated from them. Preferably, at least one aromatic oil from the group Pfeffemninzöl, spearmint oil, aniseed oil, caraway oil, eucalyptus oil, fennel oil, cinnamon oil, geranium oil, sage oil, thyme oil, marjoram oil, basil oil, citrus oil, Gaultheria oil or one or more synthetic components of these oils isolated therefrom should be present.
  • oils mentioned are, for example, menthol, carvone, anethole, cineole, eugenol, cinnamaldehyde, geraniol, citronellol, linalool, salvos, thymol, terpinene, terpinol, methylchavicol and methyl salicylate.
  • suitable flavors are, for example, menthyl acetate, vanillin, ionone, linalyl acetate, rhodinol and piperitone.
  • Suitable sweeteners are either natural sugars such as sucrose, maltose, lactose and fructose or synthetic sweeteners such as saccharin sodium salt, sodium cyclamate or aspartame.
  • alkyl and / or alkenyl (oligo) glycosides can be used as surfactants.
  • Their preparation and use as surfactants are described, for example, in US Pat. No. 3,839,318, US Pat. No. 3,707,535, US Pat. No. 3,547,828 DE-A-19 43 689, DE-A-20 36 472 and DE -A-30 01 064 and EP-A-77 167 known.
  • the degree of oligomerization is a statistical mean, which is based on a homolog distribution typical for such technical products.
  • alkyl and / or alkenyl (oligo) glycoside As alkyl and / or alkenyl (oligo) glycoside, an alkyl and / or alkenyl (oligo) glucoside of the formula RO (C 6 Hi 0 O) x -H in which R is an alkyl radical and is preferably suitable / or alkenyl group having 8 to 14 carbon atoms and x has an average of 1 to 4. Particular preference is given to alkyl oligoglucosides based on hydrogenated C 12/14 coconut oil having a DP of 1 to 3.
  • the alkyl and / or alkenyl glycoside surfactant can be very can be used sparingly, already amounts of 0.005 to 1 wt .-% are sufficient.
  • nonionic, ampholytic and cationic surfactants may also be present, for example: fatty alcohol polyglycol ether sulfates, monoglyceride sulfates, monoglyceride ether sulfates, mono- and / or dialkyl sulfosuccinates, fatty acid isethionates, fatty acid sarcosinates, fatty acid taurides, fatty acid glutamates, ether carboxylic acids, fatty acid glucamides, kylamido betaine and / or protein fatty acid condensates, the latter preferably based on wheat proteins.
  • a non-ionic solubilizer from the group of surface-active compounds may be required.
  • Particularly suitable for this purpose are, for example, ethoxylated fatty acid glycerides, ethoxylated fatty acid sorbitan partial esters or fatty acid partial esters of glycerol or sorbitan ethoxylates.
  • Solubilizers from the group of ethoxylated Fettklareglyceride include especially addition products of 20 to 60 moles of ethylene oxide with mono- and diglycerides of linear fatty acids having 12 to 18 carbon atoms or triglycerides of hydroxy fatty acids such as oxystearic acid or ricinoleic acid.
  • solubilizers are ethoxylated fatty acid sorbitan partial esters; these are preferably addition products of 20 to 60 moles of ethylene oxide with sorbitan monoesters and sorbitan diesters of fatty acids with 12 to 18 carbon atoms.
  • fatty acid partial esters of glycerol or sorbitan ethoxylates are preferably mono- and diesters of Ci 2 -Ci 8 fatty acids and adducts of 20 to 60 moles of ethylene oxide with 1 mole of glycerol or 1 mole of sorbitol.
  • the oral, dental and / or dental prosthesis care agents according to the invention preferably contain as solubilizer for optionally contained aroma oils addition products of 20 to 60 moles of ethylene oxide to hardened or uncured castor oil (ie to Oxystearinklare- or ricinoleic acid triglyceride), to glycerol mono- and / or distearate or sorbitan mono- and / or distearate.
  • aroma oils addition products of 20 to 60 moles of ethylene oxide to hardened or uncured castor oil (ie to Oxystearinklare- or ricinoleic acid triglyceride), to glycerol mono- and / or distearate or sorbitan mono- and / or distearate.
  • Pigments for example titanium dioxide, and / or dyes, pH stabilizers and buffer substances, for example sodium bicarbonate, sodium citrate,
  • Panthenol, azulene or chamomile extract further anti-calculus substances such.
  • Organophosphonates e.g.
  • Preservatives such as e.g. Sorbic acid salts, p-hydroxybenzoic acid esters.
  • Plaque inhibitors e.g. Hexachlorophene, chlorhexidine, hexetidine, triclosan,
  • the composition is a mouthwash, a mouthwash, a denture cleanser or a denture adhesive.
  • prosthesis cleaners in particular prosthesis cleansing tablets and powders, in addition to the already mentioned ingredients for oral, dental and / or dental prosthesis care, per compounds such as peroxoborate, peroxomonosulfate or percarbonate are additionally suitable. They have the advantage that, in addition to the bleaching effect, they simultaneously have a deodorizing and / or disinfecting effect.
  • per-compounds in " denture cleaners is between 0.01 and 10 wt .-%, in particular between 0.5 and 5 wt .-%.
  • ingredients are also enzymes, e.g. Proteases and carbohydrase, suitable for the breakdown of proteins and carbohydrates.
  • the pH can be between pH 4 and pH 12, in particular between pH 5 and pH 11.
  • auxiliaries are additionally necessary, such as, for example, agents which give off a bubbling effect, for example CO 2 releasing substances such as sodium bicarbonate, fillers, for example sodium sulfate or dextrose, lubricants, for example magnesium stearate, flow regulators, for example colloidal silica and granulating agents, such as the already mentioned high molecular weight polyethylene glycols or polyvinylpyrrolidone.
  • Denture adhesives can be offered as powders, creams, foils or liquids and support the adhesion of the prostheses.
  • natural and synthetic swelling substances are suitable.
  • natural swelling agents besides alginates, plant gums, such as e.g. Gum arabic, tragacanth and karaya gum as well as natural rubber.
  • alginates and synthetic bulking agents e.g. Sodium carboxymethyl cellulose, high molecular weight ethylene oxide copolymers, salts of poly (vinyl ether-co-maleic acid) and polyacrylamides.
  • hydrophobic bases in particular hydrocarbons, such as white Vaseline (DAB) or paraffin oil.
  • DAB white Vaseline
  • paraffin oil paraffin oil
  • Shewanella sp. was isolated from Spitsbergen at 4 0 C and examined for the ability to produce cold-reactive enzymes.
  • the psychrophilic strain Shewanella sp. is a Gram-negative proteobacterium. The closest relative is Shewanella putrefaciens (51.7%), which could be demonstrated by DNA-DNA hybridization. It grows in a temperature range between 4 ° and 3O 0 C (optimum 10 0 C) and a pH range of pH 6-10 (optimum pH 8).
  • Genomic DNA was isolated from Shewanella sp. isolated by standard methods (Qiagen) and digested with the restriction endonuclease Sau3A for 6 to 8 min at 37 ° C. The digested DNA was gel electrophoresed (70V, 0.8%, 45 minutes) and the bands cut out between 6 and 10 kbp and eluted from the gel piece (Nucleospin extraction kit, Macherey-Nagel).
  • a gene library was prepared according to the manufacturer's instructions using the isolated DNA fragments.
  • the ZAP vector pBK-CMV (4.5 kbp) has 12 cloning sites and encodes neomycin / kanamycin resistance.
  • the fragments were ligated into lambda ZAP vector, packaged into phage proteins and transfected with these phage E. coli XLOLR cells.
  • E. coli XLOLR clones were screened for pullulan-containing LB kanamycin agar plates (50 ⁇ g / ml kanamycin, 1 mM IPTG, 0.1% red pullulanan) for pullulanase activity. For this purpose, the plates were incubated for 3 days at 30 0 C. Active clones showed the formation of colorless courts around the colonies.
  • the plasmid was isolated. A portion of the plasmid, along with the 6 kbp insert, was sequenced via primer-walking. Four primer pairs were needed to obtain the complete insert sequence. The primers used are listed in Table 1. The sequence is shown in the sequence listing. Table 1: Forward and reverse primers used in primer walking
  • Example 2 Temperature Dependence of the Pullulanase Enzyme Activity
  • the crude extract was incubated with 1% pullulan (pH 7) for 1 h at different temperatures.
  • the pullulanase had activities between 4 ° C and 65 0 C with a temperature optimum at 45 0 C (Table 2).
  • the biofilm test system is composed of four representatives who are considered good
  • Biofilmsentner are known. Model biofilms were grown on a mixed population consisting of:
  • D. nishinomiyaensis, B. japonicum and X. campestris g tryptone, 5 g yeast extract, 5 g NaCl per liter of 10.
  • optical density (600 nm) of the cultures after 16 h was: Dermacoccus nishinomiyaensis 7,4 Bradyrhizobium japonicum 5,4
  • the cultures were then combined, mixed and 50% sterile glycerol added so that the final concentration was 10% glycerol.
  • the cultural mix was portioned and frozen at -20 0 C.
  • the biofilm was grown in 48 well microtiter plates. Each 750 .mu.l of TBY medium was mixed with 75 .mu.l per well prepared as described above mixture of biofilm-producing cultures per well, the plates were sealed with Airpore Sheets (Qiagen) and plastic lid. The mixture was then incubated at 30 ° C. and 60 rpm for 66 h, the supernatant was carefully filtered off with suction and the plates were dried at room temperature for at least 24 h. These plates served as a substrate for the study of enzymatic hydrolysis. The plates were incubated for 16 h at different temperatures with 1 ml of the enzyme extract. Depending on the temperature, the enzyme was able to break down up to 28% of the biofilm, with the strongest activity being observed at 30 ° C. At higher temperatures, little or no biofilm degradation was measurable (Table 2).

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft neue Hydrolysen, insbesondere Pullulanasen, aus psychrophilen Organismen sowie deren Verwendung.

Description

Pullulanasen aus psychrophilen Organismen
Die vorliegende Erfindung betrifft neue Hydrolasen, insbesondere Glycosidasen, vor allem Pullulanasen, aus psychrophilen Organismen sowie deren Verwendung.
Pullulanasen sind eine Klasse von Enzymen die in der Lage sind, α-glycosidisch verknüpfte Polysaccharide, insbesondere α-(1 ,4) bzw α-(1 ,6)-Glycoside zu spalten. Der Prototyp eines solchen Polymers ist das sogenannte Pullulan, das z.B. von dem hefeähnlichen Pilz Pullularia pullulans (Aureobasisium pullulans) gebildet wird. Pullulan besteht aus α-(1 ,6)-glycosidisch verknüpften Maltotrioseeinheiten. Zm Abbau von Pullulan sind eine Reihe verschiedener Enzymspezifitäten befähigt, die je nach Angriffsort und resultierenden Endprodukten als Pullulanasen, als Neopullulanasen, Isopullulanasen oder auch als Glucoamylasen bezeichnet werden. Eine Übersicht wird von Doman-Pytka und Bardowski, (Grit Rev Microbiol, 2004, Bd. 30, 107-121) gegeben.
Die Verwendung von biotechnologisch hergestellten Pullulanasen in technischen Prozessen zum Stärkeabbau, in der Lebensmitteltechnologie oder Bierbrauerei ist bekannt. Da diese Prozesse meist bei erhöhter Temperatur ablaufen, werden hierzu üblicherweise thermostabile Enzyme aus mesophilen, thermophilen oder hyperthermophilen Mikroorganismen verwendet. Die Verwendung von nur mäßig thermostabilen oder psychrophilen Enzymen bzw. von Enzymen aus solchen Organismen ist dagegen kaum untersucht worden, insbesondere nicht zum Zwecke der Reinigung von Oberflächen und der Entfernung von Biofilmen.
Bei Biofilmen handelt es sich um mikrobiell verursachte Beläge auf unterschiedlichen Oberflächen. Die Bildung der Biofilme ist ein sequenzieller Prozess, der mit der Anheftung von Zellen auf einer Oberfläche beginnt. Die Zellen vermehren sich und produzieren „extrazelluläre polymere Substanzen" (EPS). Diese schützen die Zellen vor äußeren Einwirkungen, wie z.B. Antibiotika oder Desinfektionsmitteln. EPS besteht aus Proteinen und Polysacchariden. In diese Polymermatrix können noch weitere Schweb- und Inhaltsstoffe (Schmutz, Hautreste, Kalk, abgestorbene Zellen, etc.) aus dem zeilumgebenden Medium eingelagert werden. Letztendlich führt dies zur Schmutz- und Belagsbildung auf Oberflächen, wobei der Schmutz oftmals sehr fest mit der Oberfläche verbunden ist. Ein wesentlicher Bestandteil der EPS sind dabei Polysaccharide, die je nach Art des Biofilms stark unterschiedlich zusammengesetzt sein können. Darunter sind auch oft α-glycosidisch verknüpfte Polysaccharide zu finden, z.B. α-(1 ,4) bzw α- (1 ,6)-Glycoside, die Strukturelemente des Pullulans, auch in Kombination mit anderen Bausteinen, enthalten und durch Enzyme, die zum Pullulanabbau befähigt sind, angegriffen werden.
Der Einsatz von Enzymen zur Entfernung bzw. zur Erleichterung der mechanischen Entfernung von Biofilmen ist ebenso wie der Einsatz zur Entfernung von Schmutzresten von Oberflächen in der Literatur bereits beschrieben.
So lehrt die europäische Patentschrift EP 946 207 B1 (entspr. WO 98/26807) die enzymatische Behandlung von Biofilmen mit Kombinationen aus Hydrolasen, die zur Ablösung und Entfernung der Biofilme von der Oberfläche dienen, und Oxidoreductasen, die die enthaltenen Bakterien abtöten. Mit diesen Systemen werden harte Oberflächen aus den unterschiedlichsten Materialien in verschiedenen industriellen Bereichen, beispielsweise Kühltürmen, Molkereibetrieben oder Chemieanlagen, gereinigt und desinfiziert, aber auch weiche Oberflächen wie Haut, Haare oder Textilien.
EP 388 115 befaßt sich mit der Zerstörung und Entfernung von Schleim auf industriellen, wasserumspülten Oberflächen. Hierzu werden Glucanasen, Cellulasen, Amylasen und/oder Proteasen eingesetzt, die gezielt die Polysaccharide der Schleimmatrix zersetzen; anschließend sollen die nunmehr zugänglichen Mikroorganismen der Wirkung von Bioziden ausgesetzt werden.
In der WO 01/09295 werden Enzyme mit einer ß-(1 ,6)-Endoglucanaseaktivität sowie entsprechende DNA-Sequenzen beansprucht, weiterhin eine Enzymzubereitung zum Abbau ß-1 ,6-glucanhaltiger Materialien und ihre Verwendung. Die ß-(1 ,6)- Endoglucanasen dienen auch zur Entfernung von Biofilmen von verschiedenen Oberflächen. Hauptsächlich befaßt sich diese spanische Schrift jedoch mit dem Abbau der ß-1 ,6-glucanreichen Zellwand bestimmter Pilze. Auch die WO-Schrift 96/36569 beschreibt eine enzymatische Methode zur Entfernung von Biofilmen. Hierbei wird eine Mannanase, gegebenenfalls in Kombination mit mindestens einem weiteren Enzym, eingesetzt, um in industriellen wasserführenden Systemen die Schleimbildung zu vermeiden und bestehenden Schleim zu entfernen. Gemäß WO 96/17632 kann diese Aufgabe auch mit Kombinationen kurzkettiger Glykolkomponenten mit mindestens einem Enzym aus der Gruppe Polysaccharidasen, Proteasen, Lipasen und Glycoproteasen gelöst werden.
Die internationale Anmeldung WO 01/53010 lehrt ebenfalls einen enzymatischen Prozeß zur Entfernung von Biofilmen von verschiedenen mit Wasser oder wäßrigen Lösungen umspülten Oberflächen in industriellen Systemen sowie im medizinischen Bereich, wobei sich die Biofilme sowohl oberhalb der Wasseroberfläche, also an fest/flüssig/Luft-Grenzflächen, als auch unter Wasser, an fest/flüssig- Grenzflächen, befinden. Bei den eingesetzten Enzymen handelt es sich um Carbohydrasen oder Proteasen, Kombinationen aus diesen beiden Enzymen sind ebenfalls möglich. Gegebenenfalls kann die Reinigungslösung neben den genannten Enzymen weitere Aktivstoffe wie Korrosionsinhibitoren, Tenside, Biozide etc. enthalten.
WO 99/20239 beschreibt die Verwendung von Zusammensetzungen zur Verhinderung von Plaque, die Stärke hydrolysierende Enzyme, z.B. eine α-Amylase oder eine Pullulanase, und/oder Stärke modifizierende Enzyme wie Transglucosidasen enthalten können.
Ein Problem der im Stand der Technik beschriebenen Hydrolasen ist jedoch ihr Temperaturoptimum. Hydrolasen für technische Anwendungen werden in der Regel aus Organismen gewonnen, deren Temperaturoptimum bei 37 0C oder höher liegt. Entsprechend findet man bei den aus diesen Organismen isolierten Enzymen die höchste Aktivität im Bereich von > 30 °C, das Temperaturoptimum der bekannten Pullulanasen liegt sogar zwischen 50 und 950C (Doman-Pytka und Bardowski, Critical Reviews in Microbiology, 30, 107-121 , 2004). Bei der Entfernung von Biofilmen beispielsweise im Haushaltsbereich liegt die Einwirktemperatur jedoch bei niedrigeren Temperaturen (15-20 0C), sodass die Effizienz der eingesetzten Enzyme bei ihrem Einsatz erniedrigt ist. Man trifft auf das gleiche Problem, wenn man Enzyme zum Reinigen temperaturempfindlicher Wäsche einsetzen will, die nur bei niedriger Temperatur gewaschen werden kann.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung war es daher, Hydrolasen zur Verfügung zu stellen, die bei niedrigen Temperaturen eine hohe Aktivität, insbesondere α-1 ,4- und/oder α-1 ,6-glykosidische Aktivität, besitzen, und dadurch zum Biofilmabbau und/oder zur Schmutzentfernung von Oberflächen insbesondere bei niedrigen Temperaturen besonders gut geeignet sind, vorzugsweise besser als die im Stand der Technik beschriebenen Hydrolasen.
Überraschenderweise konnte nun durch Screening auf hydrolytische Aktivität ein neues psychrophiles Bakterium - also ein Bakterium, das bevorzugt bei niedrigen Temperaturen wächst - der Spezies Shewanella entdeckt werden, das ein solches Enzym enthält. Das Enzym konnte isoliert und seine Sequenz ermittelt werden (SEQ ID NO: 1). Es wird davon ausgegangen, dass die ersten 23 Aminosäuren des Polypeptids gemäß SEQ ID NO: 1 ein Signalpeptid darstellen, das den Transport des Proteins durch die Zellwand vermittelt und anschließend abgespalten wird. Das Bakterium wurde gemäß dem Budapester Übereinkommen als Shewanella sp. 40-3 bei der DMSZ in Braunschweig (Deutschland) hinterlegt (Hinterlegungsnummer DSM 16509).
Ein erster Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher das Bakterium Shewanella sp. 40-3 sowie dessen Verwendung zur Isolation von Enzymen, insbesondere Hydrolasen, vor allem Pullulanasen, und dessen Verwendung zum Abbau von Polysacchariden, insbesondere zum Abbau von Pullulan, dessen Verwendung zur Spaltung von α-1 ,4- und /oder α-1 ,6-Bindungen, vorzugsweise α-1 ,6-Bindungen zwischen D-Monosacchariden, insbesondere zwischen D-Glucose-Einheiten, sowie dessen Verwendung zum Abbau von Biofilmen und zur Entfernung von Schmutzresten von Oberflächen.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Isolation von Hydrolasen, bevorzugt Glycosylasen, besonders bevorzugt Glycosidasen, insbesondere Glycosylhydrolasen nach der Klassifizierung von Henrissat, vor allem Pullulanasen, aus psychrophilen Bakterien und/oder gram-negativen Proteobakterien, insbesondere aus Shewanella sp., vor allem aus Shewanella sp. 40-3. Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind daher auch Enzyme, insbesondere Hydrolasen, bevorzugt Glycosylasen, besonders bevorzugt Glycosidasen, insbesondere Glycosylhydrolasen nach der Klassifizierung von Henrissat, vor allem Pullulanasen, die aus psychrophilen Bakterien und/oder gram-negativen Proteobakterien, insbesondere aus Shewanella sp., vor allem Shewanella sp. 40-3, erhältlich sind.
Das Verfahren zur Isolation und/oder Identifizierung solcher Enzyme kann hierbei insbesondere folgende Schritte umfassen: a) Isolation von genomischer DNA aus einem psychrophilen Bakterium und/oder gram-negativen Proteobakterium, insbesondere aus Shewanella sp., vor allem aus Shewanella sp. 40-3, b) Verdau der genomischen DNA mittels geeigneter Restriktionsendonukleasen, c) Einbau der DNA-Banden, insbesondere solcher mit einer Größe zwischen 2 und 15 kbp, vorzugsweise zwischen 5 und 10 kbp, in einen Transfektionsvektor, d) Erstellen einer Genbank durch Transfektion eines Wirts, insbesondere E. coli, mit dem Transfektionsvektor, e) Screening der Genbank nach Zellen, die Enzyme mit gewünschter Aktivität, insbesondere Hydrolase-Aktivität, bevorzugt Glycosylase-Aktivität, besonders bevorzugt Glycosidase-Aktivität, vor allem Pullulanase-Aktivität, enthalten, f) gegebenenfalls Isolation des Plasmids mit dem Klon mit der gewünschten Aktivität, und g) gegebenenfalls Sequenzierung des isolierten Klons.
Für den Fachmann ist naheliegend, wie er ausgehend von Nukleinsäuren gemäß SEQ ID NO: 1 oder Polypeptiden gemäß SEQ ID NO: 2 Nukleinsäuren und Polypeptide ähnlicher Struktur und gleicher oder ähnlicher Funktion erhalten kann. Insbesondere können auch, beispielsweise durch Evolutionsexperimente, Enzyme mit verbesserten Eigenschaften erhalten werden.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher ein Polynukleotid ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus: a) Polynukleotid mit einer Nukleinsäuresequenz gemäß SEQ ID NO: 1 oder mit einer Nukleinsäuresequenz von Position 70 bis Position 4323 gemäß SEQ ID NO: 1 , b) Polynukleotid kodierend für ein Polypeptid mit einer Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO: 2 oder für ein Polypeptid mit einer Aminosäuresequenz von Position 24 bis Position 1440 gemäß SEQ ID NO: 2, c) natürlicherweise vorkommende oder künstlich erzeugte Mutanten oder polymorphe Formen oder Allele eines Polynukleotids gemäß (a) oder (b), insbesondere solche, die bis zu 50 oder 40, insbesondere bis zu 30 oder 20, vor allem bis zu 10, 5, 3 oder 2 Punkmutationen oder genau eine Punktmutation in Bezug auf ein Polynukleotid gemäß (a) oder (b) besitzen, d) zu einem Polynukleotid gemäß (a), (b) oder (c) komplementäre Polynukleotide, e) unter stringenten Bedingungen mit einem Polynukleotid gemäß (a), (b), (c) oder (d) hybridisierende Polynukleotide, wobei unter stringenten Bedingungen vorzugsweise zu verstehen ist Inkubation bei 6O0C in einer Lösung, enthaltend 0, IxSSC und 0,1 % Natriumdodecylsulfst (SDS), wobei 2OxSSC eine Lösung enthaltend 3 M Natriumchlorid und 0,3 M Natriumeitrat (pH 7.0) bezeichnet, f) Polynukleotide mit einer Sequenzhomologie oder -Identität von mindestens 50 %, bevorzugt mindestens 60 % oder 70 %, besonders bevorzugt mindestens 80 %, ganz besonders bevorzugt mindestens 90 % oder 95 %, insbesondere mindestens 98 % in Bezug auf ein Polynukleotid gemäß (a),(b), (c) oder (d), g) Polynukleotide, bestehend aus mindestens 10, 15 oder 20, bevorzugt mindestens 25, 30 oder 40, besonders bevorzugt mindestens 50, 80 oder 100, ganz besonders bevorzugt mindestens 150 oder 500 oder 1000, insbesondere mindestens 1500, 2000 oder 2500 aufeinanderfolgenden Nukleinsäuren eines Polynukleotids gemäß (a), (b), (c), (d) oder (e), h) Polynukleotide mit Deletionen und/oder Insertionen und/oder Inversionen von bis zu 50 oder 40, insbesondere bis zu 30, 20 oder 10 Nukleotiden gegenüber einem Polynukleotid gemäß (a), (b), (c), (d) oder (e), i) Polynukleotide, umfassend mindestens eines der unter (a) bis (h) genannten Polynukleotide. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform umfassen die erfindungsgemäßen Nukleinsäuren eine oder mehrere nicht-kodierende Sequenzen, wobei es sich bei den nicht-kodierenden Sequenzen beispielsweise um natürlicherweise vorkommende Intronsequenzen oder regulatorische Sequenzen, wie Promotor- oder Enhancer- Sequenzen, insbesondere um solche zur Kontrolle der Expression von Hydrolasen, bevorzugt von Glycosylasen, besonders bevorzugt Glycosidasen, insbesondere von Glycosylhydrolasen nach der Klassifizierung von Henrissat, vor allem Pullulanasen, und/oder zur Kontrolle der Expression von Enzymen aus psychrophilen Bakterien und/oder gram-negativen Proteobakterien, bevorzugt Shewanella, vor allem Shewanella sp. 40-3, handelt.
Bei den erfindungsgemäßen Nukleinsäuren handelt es sich bevorzugt um Ribonukleinsäuren (RNAs) oder Desoxyribonukleinsäuren (DNAs), wobei die Nukleinsäuren vorzugsweise als doppelsträngige Nukleinsäuren vorliegen. Vorzugsweise handelt es sich bei den erfindungsgemäßen Nukleinsäuren um Nukleinsäuren, die für ein Protein mit Hydrolase-Aktivität oder für Teile davon kodieren, wobei es sich bei den Teilen insbesondere um Domänen oder als Epitope verwendbare Sequenzen handelt, die beispielsweise für die Antikörperproduktion eingesetzt werden können. Unter Domänen sind erfindungsgemäß insbesondere auch solche Teile des Enzyms zu verstehen, die selbst nicht unmittelbar an der Hydrolyse beteiligt sein müssen, sondern auch andere Teil- oder Hilfsfunktionen innerhalb des Enzyms ausüben oder daran beteiligt sein können, wobei es sich bei den Teil- oder Hilfsfunktionen beispielsweise um die Bindung eines Substrats, Zwischen- oder Endprodukts, um eine Carrier-Funktion, um die Vermittlung eines regulierenden Einflusses auf die hydrolytische Aktivität oder des weiteren etwa auch um die Enzymverankerung handeln kann. Bei dem Protein mit Hydrolase-Aktivität handelt es sich hierbei vorzugsweise um eine Glycosylase, besonders bevorzugt Glycosidase (E.C.3.2.1), insbesondere Glycosylhydrolase nach der wieter unten angegebenen Klassifizierung von Henrissat, vor allem Pullulanase (E. C.3.2.1.41), und/oder um ein Enzym, das dazu in der Lage ist, α-1 ,4- und /oder α-1 ,6-Bindungen, besonders bevorzugt α-1 ,6-Bindungen, zwischen D-Monosacchariden, insbesondere zwischen D- Glucose-Einheiten, zu spalten. Mit Spaltung ist erfindungsgemäß vor allem hydrolytische Spaltung, also Spaltung unter Freisetzung der jeweiligen Zuckerreste gemeint. Ganz besonders bevorzugt handelt es sich bei der Hydrolase bzw. Pullulanase um eine Hydrolase mit (ß/α)δ-Faltung ((ß/α)8-Barrel-Struktur) und/oder um eine Hydrolase, die ein solches Strukturelement umfasst.
In einer bevorzugten Ausführungsform hat ein erfindungsgemäßes Polypeptid sein Temperaturoptimum, vor allem in Bezug auf den Biofilmabbau, bei einer Temperatur zwischen 4 und 4O0C, besonders bevorzugt zwischen 10 und 350C, vor allem zwischen 15 und 300C. Das pH-Optimum eines erfindungsgemäßen Polypeptids liegt vorzugsweise zwischen pH 5 und pH 9, besonders bevorzugt zwischen pH 6 und pH 8, vor allem zwischen pH 6,5 und pH 7,5.
Bei den erfindungsgemäßen Nukleinsäuren handelt es sich bevorzugt um Nukleinsäuren, die für eine Pullulanase, besonders bevorzugt für eine mikrobielle Pullulanase, vor allem eine bakterielle Pullulanase, insbesondere für eine Pullulanase aus einem psychrophilen Bakterium und/oder aus einem gram-negativen Proteobakterium, bevorzugt aus Shewanella sp., vor allem aus Shewanella sp. 40-3 und/oder für eine Pullulanase gemäß SEQ ID No. 2 kodieren.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ferner die Verwendung der erfindungsgemäßen Nukleinsäuren, zum einen zur Herstellung oder Isolierung von erfindungsgemäßen Nukleinsäuren, zum anderen zur Herstellung oder Isolierung neuer, zu den erfindungsgemäßen Nukleinsäuren homologen Nukleinsäuren, insbesondere solchen mit in Bezug auf die erfindungsgemäßen Nukleinsäuren ähnlichen strukturellen und gleichen, ähnlichen und/oder verbesserten funktionellen Eigenschaften, wobei unter funktionellen Eigenschaften insbesondere Hydrolase-Aktivität, bevorzugt Glycosylase-Aktivität, besonders bevorzugt Glycosidase-Aktivität, vor allem Pullulanase-Aktivität und unter verbesserten funktionellen Eigenschaften beispielsweise höhere Spezifität und/oder höherer Umsatz und/oder höhere Stabilität des Enzyms bei den gewünschten Reaktionsbedingungen, insbesondere in Bezug auf den pH-Wert, die Temperatur sowie in Bezug auf die gegebenenfalls zugesetzten Detergentien und Proteasen, zu verstehen ist. Die erfindungsgemäßen Nukleinsäuren können so beispielsweise als Sonden zur Identifzierung und/oder Isolierung von homologen Nukleinsäuren aus einer artifiziellen, einer cDNA- oder genomischen Genbank, hierbei vorzugsweise zur Identifizierung von Nukleinsäuren, die für Hydrolasen, insbesondere Glycosylasen, besonders bevorzugt Glycosidasen, insbesondere Glycosylhydrolasen nach der Klassifizierung von Henrissat, vor allem Pullulanasen und/oder für Teile davon kodieren, oder als Antisense-Nukleinsäuren oder als Primer in der Polymerasekettenreaktion (PCR), hierbei insbesondere zur Amplifikation von Nukleinsäuren umfassend Nukleinsäuren kodierend für Hydrolasen, bevorzugt Glycosylasen, besonders bevorzugt Glycosidasen, vor allem Glycosylhydrolasen nach der Klassifizierung von Henrissat, insbesondere für Pullulanasen oder für Teile davon, verwendet werden.
Die erfindungsgemäßen oder zu den erfindungsgemäßen Nukleinsäuren homologe Nukleinsäuren können aber auch durch Zufallsmutagenese oder zielgerichtete Mutagenese, in einer dem Fachmann bekannten Weise, erhalten werden.
Nach Einbau in einen Expressionsvektor können die erfindungsgemäßen Nukleinsäuren beispielsweise zur gezielten Herstellung einzelner Domänen oder Epitope des erfindungsgemäßen Proteins oder zur Herstellung von Fusionsproteinen, die die erfindungsgemäßen Polypeptide umfassen, verwendet werden.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher auch ein Verfahren, um eine Nukleinäure zu erhalten, die für eine Hydrolase, bevorzugt Glycosylase, besonders bevorzugt Glycosidase, insbesondere Pullulanasen oder für Teile davon kodiert, folgende Schritte umfassend: a) eine Nukleinsäurebibliothek wird mit einer erfindungsgemäßen Nukleinsäure kontaktiert, b) eine Nukleinsäure, die mit der erfindungsgemäßen Nukleinsäure gemäß (a) hybridisiert, wird identifiziert, c) die in Schritt (b) identifizierte Nukleinsäure wird sequenziert. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher ebenso ein Verfahren zur Isolierung einer für eine Hydrolase, bevorzugt Glycosylase, besonders bevorzugt Glycosidase, insbesondere Pullulanase oder für Teile davon kodierenden Nukleinsäure, folgende Schritte umfassend: a) ausgehend von einer erfindungsgemäßen Nukleinsäure werden Primer hergestellt, b) die Primer gemäß (a) werden verwendet, um in der PCR Nukleinsäuren, vor allem cDNAs, unbekannter Nukleinsäuresequenz zu amplifizieren, c) die gemäß (b) durch Amplifikation erhaltenen Nukleinsäuren werden sequenziert.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher ebenfalls ein Verfahren zur Isolierung einer für eine Hydrolase, bevorzugt Glycosylase, besonders bevorzugt Glycosidase, insbesondere Pullulanase oder für Teile davon kodierenden Nukleinsäure, folgende Schritte umfassend: a) Nukleinsäuren einer Bibliothek werden in geeignete Vektoren eingebaut und diese in passende Wirtsorganismen, vorzugsweise Bakterien, insbesondere E. coli, eingebracht, so daß die Expression der Nukleinsäuren erfolgen kann, b) Die gemäß (a) erhaltenen Wirtsorganismen werden auf einem festen Träger, vorzugsweise einer Agar-Platte, ausplattiert und inkubiert, auf dem festen Träger wird ein Assay, beispielsweise eine Farbreaktion, durchgeführt, der die Umsetzung eines Hydrolase-Substrats involviert, c) Hydrolase-positive Klone werden identifiziert, beispielsweise durch visuelle Beobachtung, durch automatisierte Imageanalyse oder mittels photometrischer Messung, und gereinigt, d) die Nukleinsäuren aus den in Schritt (c) identifizierten Klone werden sequenziert.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher ebenfalls ein Verfahren zur Isolierung einer für eine Hydrolase, bevorzugt Glycosylase, besonders bevorzugt Glycosidase, insbesondere Pullulanase oder für Teile davon kodierenden Nukleinsäure, folgende Schritte umfassend: a) eine erfindungsgemäße Nukleinsäure wird Mutagenese-Experimenten unterworfen, b) die erhaltenen Mutanten werden in einen geeigneten Vektor eingebaut und in einem geeigneten Wirtsorganismus exprimiert, c) die Expressionsprodukte werden auf hydrolytische Aktivität, insbesondere Pullulanase-Aktivität, hin untersucht, d) die Nukleinsäuren, deren Expressionsprodukte in Schritt (c) die gewünschte hydrolytische Aktivität zeigen, werden sequenziert.
Die Mutagenese-Experimente können beispielsweise unter Verwendung der Polymerasekettenreaktion (PCR) durchgeführt werden. Die Experimente können hierbei beispielsweise, insbesondere bei Verwendung einer Taq- Polymerase, so durchgeführt werden, dass Reaktionsparameter wie die Mg2+-Konzentration, der pH-Wert, die Reaktionstemperatur oder die Substratkonzentrationen variiert werden, oder es kann zum Einsatz von Error-prone-PCR-Techniken kommen, die beispielsweise auf der Zugabe von Mn2+ oder auf der Zugabe ungleicher Nukleotidkonzentrationen beruhen.
Bei der erfindungsgemäß zu verwendenden Nukleinsäure-Bibliothek kann es sich beispielsweise um eine cDNA-, um eine genomische oder um eine artifizielle Bibliothek handeln. Bevorzugt handelt es sich um eine mikrobielle, besonders bevorzugt um eine bakterielle Bibliothek, vor allem aus psychrophilen Bakterien, insbesondere um eine solche aus Shewanella, vor allem aus Shewanella sp. 40-3.
Gegenstand der Erfindung ist ferner eine Nukleinsäure, die nach einem der vorher genannten Verfahren erhältlich ist.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung einer erfindungsgemäßen Nukleinsäure, dadurch gekennzeichnet, dass die Nukleinsäure chemisch synthetisiert wird. Die erfindungsgemäßen Nukleinsäuren können beispielsweise chemisch anhand der in SEQ ID NO; 1 angegebenen Nukleinsäuresequenz oder anhand der in SEQ ID NO: 2 angegebenen Aminosäuresequenz auf Grundlage des genetischen Codes z.B. nach der Phosphotriester-Methode oder auf eine andere dem Fachmann bekannten Weise synthetisiert werden. Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind ferner Vektoren, insbesondere Klonierungs- und/oder Expressionsvektoren, umfassend eine der zuvor genannten erfindungsgemäßen Nukleinsäuren. Der Vektor kann beispielsweise ein prokaryotischer oder eukaryotischer Vektor sein. Bei den prokaryotischen Vektoren zum Einbau der erfindungsgemäßen Nukleinsäuren handelt es sich beispielsweise um das Plasmid pBK-CMV, um das Plasmid pBR322, um Plasmide der pUC-Serie, um Derivate von pUB 110 oder um andere Plasmide die für die Expression in gram-negativen oder gram-positiven Bakterien geeignet sind.
Bei den Expressionsvektoren für die Expression in E. coli kann es sich beispielsweise aber auch um andere kommerziell erhältliche Vektoren handeln, wie etwa den T7- Expressionsvektor pGM10 oder pGEX-4T-1 GST (Pharmacia Biotech), welche für einen N-terminalen Met-Ala-His6-Tag kodieren, der die Reinigung des exprimierten Proteins über ein Ni2+-NTA-Säule ermöglicht. Als eukaryotische Expressionsvektoren für die Expression in Saccharomyces cerevisiae eignen sich z.B. die Vektoren p426Met25 oder p426GAL1 , für die Expression in Insektenzellen z.B. Baculovirusvektoren wie in EP-B1- 0127839 oder EP-B1 -0549721 offenbart, und für die Expression in Säugerzellen z.B. SV40-Vektoren.
Die erfindungsgemäßen Nukleinsäuren können in einer Ausführungsform so mit flankierenden Nukleinsäuren in einen Vektor eingebaut werden, dass bei Expression des Vektors die von den erfindungsgemäßen Nukleinsäuren kodierten Polypeptide als Fusionsproteine vorliegen oder einen tag, eine markierende Aminosäuresequenz, tragen, die beispielsweise die Reinigung und/oder Detektion der Polypeptide erleichtern kann. Bei dem tag kann es sich beispielsweise um das strep-, flag-, myc- oder his-tag handeln.
Die Expressionsvektoren enthalten bevorzugt die für die Wirtszelle geeigneten requlatorischen Sequenzen, hierbei vorzugsweise den lac- oder den tac-Promotor für die Expression in E. coli, den ADH-2-, GAL1- oder AOX-Promotor für die Expression in Hefen, den Baculovirus-Polyhedrin-Promotor für die
Expression in Insektenzellen oder den frühen SV40-Promotor oder einen LTR-Promotor für die Expression in Säugerzellen. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist eine Wirtszelle umfassend einen erfindunsgemäßen Vektor, wobei es sich bei der Wirtszelle bevorzugt um Shewanella, insbesondere um Shewanella sp. 40-3, oder E. coli, insbesondere um den E. coli- Stamm BL21 (DE3), oder um Bacillus, insbesondere um Bacillus licheniformis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtilis oder Bacillus alcalophilus, handelt.
Die erfindungsgemäßen Nukleinsäuren werden bevorzugt nach Einbau in einen geeigneten Vektor durch die dem Fachmann bekannten Methoden der Transfektion, Transformation oder Elektroporation in die Wirtszellen eingebracht.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Polypeptid ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus: a) Polypeptid mit einer Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO: 2 oder von Position 24 bis Position 1440 gemäß SEQ ID NO: 2, b) natürlicherweise vorkommende Mutanten, polymorphe Formen oder Allele eines Polypeptids gemäß (a), vor allem solche, die bis zu 50, 20, 15 oder 10 Punktmutationen, insbesondere bis zu 5, 3 oder 2 Punktmutationen oder genau eine Punktmutation, in Bezug auf ein Polypeptid gemäß (a) besitzen, c) Polypeptide, die eine Sequenzhomologie oder -identität von mindestens 50 oder 55 %, bevorzugt mindestens 60, 65 oder 70 %, ganz besonders bevorzugt mindestens 75, 80, 85 oder 90 %, insbesondere mindestens 91 , 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 oder 99 % in Bezug auf ein Polypeptid gemäß (a) oder (b) besitzen, d) Polypeptide, die von den zuvor genannten erfindungsgemäßen Nukleinsäuren kodiert werden, e) Polypeptide bestehend aus mindestens 5 oder 6, bevorzugt mindestens 8, 10, 12 oder 15, besonders bevorzugt mindestens 20, 25 oder 50, insbesondere mindestens 100, 200 oder 500, vor allem mindestens 800, 1000 oder 1200 aufeinanderfolgenden Aminosäuren eines Polypeptids gemäß (a) oder (b), f) Polypeptide mit Insertionen und/oder Deletionen und/oder Inversionen von bis zu 60, 50 oder 40, insbesondere von bis zu 30, 20 oder 10, vor allem von ein, zwei oder drei Aminosäuren in Bezug auf ein Polypeptid gemäß (a), (b) oder (c), g) Polypeptide, umfassend mindestens eines der unter (a) bis (f) genannten Polypeptide. Bevorzugt handelt es sich hierbei um Polypeptide, die eine Hydrolyse-Reaktion katalysieren, insbesondere die Hydrolyse von α-1 ,4- und/oder α-1 ,6-Bindungen, besonders bevorzugt von α-1 ,6-Bindungen, zwischen D-Monosacchariden, insbesondere zwischen D-Glucose-Einheiten, oder es handelt sich um Teile, insbesondere Epitope oder Domänen, von solchen Polypeptiden, wobei unter Domänen erfindungsgemäß insbesondere auch solche Teile des Enzyms zu verstehen sind, die selbst nicht unmittelbar an der Hydrolyse beteiligt sein müssen, sondern auch andere Teil- oder Hilfsfunktionen innerhalb des Enzyms ausüben oder an solchen beteiligt sein können, wobei es sich bei den Teil- oder Hilfsfunktionen beispielsweise um die Bindung eines Substrats, eines Zwischen- oder Endprodukts, um eine Carrier-Funktion, um die Vermittlung eines regulierenden Einflusses auf die hydrolytische Aktivität oder etwa auch um die Enzymverankerung handeln kann. Die Epitope und/oder Domänen können hierbei sowohl isoliert als auch als Teil eines Chimären Proteins und/oder als Teil eines Fusionsproteins vorliegen.
Bei dem Protein mit Hydrolase-Aktivität handelt es sich hierbei vorzugsweise um eine Glycolase, besonders bevorzugt Glycosidase (E. C.3.2.1), vor allem Pullulanase (E. C.3.2.1.41) und/oder es handelt sich um eine Hydrolase mit (ß/α)s-Faltung ((ß/α)s- Barrel-Struktur) und/oder es handelt sich um eine Hydrolase, die zur Familie der Glycosylhydrolasen nach der unten angegebenen Klassifizierung von Henrissat gehört oder zu diesen Enzymen homolog ist und/oder es handelt sich um ein Enzym, das für den Biofilmabbau geeignet ist.
Die Einteilung der Glycosylhydrolasen erfolgt nach der Klassifizierung von Henrissat (Henrissat B., Bairoch A. Updating the sequence-based Classification of glycosyl hydrolases. Biochem. J. 316:695-696(1996)). Die aktuelle Version der Zuordnung ist in der CAZY-Datenbank (Coutinho, P.M. & Henrissat, B. (1999) Carbohydrate-Active Enzymes server at URL: http://afmb.cnrs-mrs.fr/~cazy/CAZY/index.html) dokumentiert. Danach sind Pullulanasen und verwandte Enzyme in der Glycosylhydrolase-Familie (GHF) 13 zu finden. Diese Enzyme zeichnen sich neben der gemeinsamen (ß/α)s- Barrel-Struktur durch die Fähigkeit der Hydrolyse α-ständiger Glycosidbindungen aus. Neben Pullulanasen (EC 3.2.1.41) und Neopullulanasen (EC 3.2.1.135) sind dort auch Amylasen (EC 3.2.1.1), Cyclomaltodextrin Glucanotransferase (EC 2.4.1.19), Cyclomaltodextrinase (EC 3.2.1.54), Trehalose-6-phosphate Hydrolase (EC 3.2.1.93), Oligoglucosidase (EC 3.2.1.10), Maltogenic Amylase (EC 3.2.1.133), Alpha-glucosidase (EC 3.2.1.20), Maltotetraose-forming Amylase (EC 3.2.1.60), Isoamylase (EC 3.2.1.68), Glucodextranase (EC 3.2.1.70), Maltohexaose-forming Amylase (EC 3.2.1.98), Branching Enzyme (EC 2.4.1.18), Trehalose Synthase (EC 5.4.99.16), 4- Glucanotransferase (EC 2.4.1.25), Maltopentaose-forming Amylase (EC 3.2.1.-), Amylosucrase (EC 2.4.1.4), Sucrose Phosphorylase (EC 2.4.1.7), Malto- oligosyltrehalose Trehalohydrolase (EC 2.4.1.141) sowie Isomaltulose Synthase (EC 5.4.99.11) eingeordnet.
Die erfindungsgemäßen Polypeptide umfassen vorzugsweise vier hochkonservierte Bereiche, wie sie für Pullulan abbauende Enzyme typisch sind. Diese bilden das Reaktionszentrum und sind in die Substratbindung involviert. Diese konservierten Bereiche werden beispielsweise durch Doman-Pytka und Bardowski (Critical Reviews in Microbiology, 30, 107-121 , 2004) charakterisiert.
Die erfindungsgemäßen Polypeptide können auch posttranslational und/oder chemisch modifiziert sein.
Bei den Verbindungen, die durch die erfindungsgemäßen Polypeptide gespalten werden können, handelt es sich insbesondere um Verbindungen, die D- Monosaccharide, insbesondere D-Glucose-Einheiten, enthalten, die über α-1 ,4- und/oder α-1 ,6-Bindungen miteinander verknüpft sind. Es handelt sich hierbei vorzugsweise um Pullulan, es kann sich jedoch auch um andere Oligo- oder Polysaccharide handeln, die solche Bindungen enthalten, beispielsweise Amylopektin, Amylose, Dextrine und Glykogen.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher ebenfalls ein Verfahren zur Spaltung der zuvor erwähnten Verbindungen, dadurch gekennzeichnet, dass diese Verbindungen mit mindestens einem erfindungsgemäßen Polypeptid inkubiert werden. Weiterer Gegenstand der Erfindung ist daher ebenfalls die Verwendung eines erfindungsgemäßen Polypeptids zur hydrolytischen Spaltung von α-1 ,4- und/oder α-1 ,6- Bindungen, besonders bevorzugt von α-1 ,6-Bindungen, zwischen D-Monosacchariden, insbesondere zwischen D-Glucose-Einheiten, sowie die Verwendung eines erfindungsgemäßen Polypeptids zum Abbau von Biofilmen und/oder zur Verhinderung der Ausbildung von Biofilmen sowie die Entfernung von Schmutzresten von Oberflächen.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform handelt es sich bei den erfindungsgemäßen Hydrolasen um mikrobielle, insbesondere bakterielle Hydrolasen. Ganz besonders bevorzugt handelt es sich um eine Hydrolase, insbesondere Pullulanase, aus einem psychrophilen Bakterium und/oder aus einem gram-negativen Proteobakterium, insbesondere aus Shewanella sp., besonders bevorzugt aus Shewanella sp. 40-3, vor allem um die Pullulanase mit einer Sequenz gemäß SEQ ID NO: 2.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform handelt es sich bei dem erfindungsgemäßen Polypeptid um eine wasserlösliche Pullulanase. Das Polypeptid kann bei der Expression in Abhängigkeit von der Herstellungsweise, insbesondere in Abhängigkeit von den verwendeten Wirtszellen und Vektoren und in Abhängigkeit von gegebenenfalls verwendeten Signalsequenzen, im Cytosol, im Periplasma oder in an die cytosolische oder äußere Membran gebundener Form anfallen oder aber in das umgebende Medium abgegeben werden, wobei letzteres bevorzugt ist.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind ferner Mischungen und Präparationen, vor allem bakterielle Präparationen, die erfindungsgemäße Nukleinsäuren und/oder Polypeptide enthalten. Die Mischungen oder Präparationen können hierbei in einer dem Fachmann bekannten Weise hergestellt werden. Die erfindungsgemäßen Polypeptide können des weiteren beispielsweise als Epitope zur Herstellung von mono- oder polyklonalen Antikörpern verwendet werden, indem sie an einen Träger, bspw. Rinder-Serumalbumin, gekoppelt werden und anschließend ein Säuger, bevorzugt eine Maus, ein Hase oder ein Kaninchen, mit dem Epitop, bevorzugt unter Verwendung von Adjuvanten, immunisiert wird. Hierzu eignen sich bevorzugt Polypeptide mit einer Länge von 5-12, insbesondere 8, Aminosäuren. Polypeptide mit einer Länge von mehr als 60, insbesondere mehr als 75 Aminosäuren, können auch ohne Träger zur Herstellung von Antikörpern verwendet werden. Die entstandenen Antikörper können anschließend gegebenenfalls isoliert werden, und ausgehend von den Antikörpern oder der für sie kodierenden Nukleinsäuren können gegebenenfalls Antikörperfragmente, beispielsweise Fab- oder scFv-Fragmente hergestellt werden.
An ein erfindungsgemäßes Polypeptid bindende Peptide können alternativ auch durch ein dem Fachmann bekanntes in wϊro-Verfahren wie beispielsweise Phage Display, Yeast Display, Bacterial Display oder etwa die sogenannte Fusagen-Technologie erhalten werden, bei der die Nukleinsäure und das von dieser kodierte Polypeptid über ein Puromycin kovalent miteinander verknüpft sind.
Die durch Immunisierung mit den erfindungsgemäßen Polypeptiden erhältlichen Antiseren, Antikörper und Antikörperfragmente sowie die durch eines der genannten in vitro-Verfahren erhältlichen Peptide eignen sich beispielsweise zur Untersuchung von Genexpressionsbanken, um zu den erfindungsgemäßen Polypeptiden homologe Proteine, insbesondere solche mit hydrolytischer Aktivität, vor allem esterolytischer und/oder lipolytischer Aktivität, ausfindig zu machen.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind daher auch Antiseren, Antikörper und Antikörperfragmente gegen ein erfindungsgemäßes Polypeptid sowie andere an ein erfindungsgemäßes Peptid bindende Peptide, insbesondere erhältlich durch eines der zuvor genannten Verfahren.
Antiserum, Antikörper und Antikörperfragment sowie sonstige an ein erfindungsgemäßes Peptid bindende Peptide werden im folgenden der Einfachheit halber "Antikörper" genannt. Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ferner ein Verfahren zur Herstellung eines erfindungsgemäßen Polypeptids, dadurch gekennzeichnet, dass eine erfindungsgemäße Nukleinsäure in einer geeigneten Wirtszelle, besonders bevorzugt in E. coli oder in Shewanella, insbesondere in Shewanella sp. 40-3, oder in Bacillus, insbesondere in Bacillus liehen iformis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtilis oder Bacillus alcalophilus, exprimiert wird. Anschließend kann gegebenenfalls eine Proteinreinigung erfolgen.
Kultivierung von E. coli erfolgt hierbei vorzugsweise zwischen 20 und 37°C, besonders bevorzugt bei etwa 30 0C oder bei etwa 37°C. Ernte und Aufschluß der Zellen erfolgen durch dem Fachmann bekannte Methoden. Der Aufschluß kann so beispielsweise durch French Press, Ultraschall, Kugelmühle, besonders bevorzugt jedoch durch Einsatz eines Sonifikators erfolgen. Alternativ können die Zellen auch chemisch, beispielsweise durch EDTA oder Polymyxin B permeabilisiert werden. Die gegebenenfalls durchzuführende Reinigung des Proteins erfolgt vorzugsweise chromatographisch. Die chromatographische Reinigung des Proteins kann beispielsweise die Kationen- und/oder Anionenaustauschchromatographie, die hydrophobe Wechselwirkungschromatographie und/oder die Gelfiltration umfassen.
Vor allem die kurzkettigen erfindungsgemäßen Polypeptide können auch mit Hilfe der klassischen Peptidsynthese (Merrifleld-Technik) synthetisiert werden.
Erfindungsgemäß können auch ein oder mehrere Nukleotide der Nukleinsäure oder eine oder mehrere Aminosäuren der Polypeptide oder Antikörper modifiziert sein. Bei der Modifikation kann es sich beispielsweise um eine radioaktive, fluorogene oder chromogene Gruppe oder um eine posttranslationale Modifikation handeln.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind des weiteren wässrige Zubereitungen (Enzymzubereitungen), die die erfindungsgemäßen Polypeptide in gelöster Form enthalten. Die erfindungsgemäßen Enzymzubereitungen werden weiter unten genauer beschrieben.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist jede Art von Zusammensetzung, die ein erfindungsgemäßes Polypeptid enthält. Es kann sich hierbei je nach Verwendungszweck um ein festes Gemisch, beispielsweise um ein Pulver mit gefriergetrockneten oder verkapselten Polypeptiden, oder um eine gelförmige, pastöse oder flüssige Zusammensetzung handeln. Als Applikationsform kommen insbesondere Extrudate, Granulate, Tabletten und Pouches in Frage.
Die verkapselte Form bietet sich an, um die Enzyme oder andere Inhaltsstoffe vor anderen Bestandteilen, wie beispielsweise Bleichmitteln, zu schützen oder um eine kontrollierte Freisetzung (controlled release) zu ermöglichen. Je nach der Größe dieser Kapseln wird nach MiIIi-, Mikro- und Nanokapseln unterschieden, wobei Mikrokapseln für Enzyme besonders bevorzugt sind.
Im Fall fester Mittel können die Proteine beispielsweise in getrockneter, granulierter und/oder verkapselter Form eingesetzt werden. Sie können separat, das heißt als eigene Phase, oder mit anderen Bestandteilen zusammen in derselben Phase, mit oder ohne Kompaktierung zugesetzt werden. Sollen mikroverkapselte Enzyme in fester Form verarbeitet werden, so kann das Wasser mit aus dem Stand der Technik bekannten Verfahren aus den sich aus der Aufarbeitung ergebenden wäßrigen Lösungen entfernt werden, wie Sprühtrocknung, Abzentrifugieren oder durch Umsolubilisieren. Die auf diese Weise erhaltenen Teilchen haben üblicherweise eine Teilchengröße zwischen 50 und 200 μm.
Flüssigen, gelförmigen oder pastösen erfindungsgemäßen Mitteln können die Enzyme, und auch das erfindungsgemäße Protein ausgehend von einer nach dem Stand der Technik durchgeführten Proteingewinnung und Präparation in konzentrierter wäßriger oder nichtwäßriger Lösung, Suspension oder Emulsion zugesetzt werden, aber auch in Gelform oder verkapselt oder als getrocknetes Pulver. Derartige erfindungsgemäße Wasch- oder Reinigungsmittel werden in der Regel durch einfaches Mischen der Inhaltsstoffe hergestellt, die in Substanz oder als Lösung in einen automatischen Mischer gegeben werden können.
Hinsichtlich möglicher Einsatzgebiete der erfindungsgemäßen Polypeptide wird auf das Handbuch „Industrial enzymes and their applications" von H. UhMg, Wiley-Verlag, New York, 1998 verwiesen. Mögliche industrielle Anwendungen der erfindungsgemäßen Polypeptide und/oder der erfindungsgemäßen Enzymzubereitungen sind beispielsweise die Herstellung oder selektive Anreicherung von Geschmackskomponenten in der Lebensmittelindustrie, von Feinchemikalien, insbesondere Zucker, in der chemischen Industrie oder von therapeutisch oder diagnostisch einsetzbaren Substanzen in der Pharmaindustrie, des weiteren die Prozessierung von Stärke zu Amylose, Glucosesirup, Maltosesirup, Dextrinen, Maltose oder zu hochreiner Glucose oder Fructose, der Abbau von Pullulan zu Panose, das zur Vorbeugung von Karies eingesetzt werden kann (Kuriki et al., J. Bacteriol. 170, 1554, 1988), die Behandlung von Lebensmitteln sowie die Spaltung von Getreide und Getreideprodukten in der Brauereiindustrie, insbesondere zur Herstellung von „Iight"-Bier. Der Einsatz kann hierbei auch in Kombination mit anderen Hydrolasen, insbesondere Glycosidasen, beispielsweise in Kombination mit α-Amylasen oder Glucoamylasen, erfolgen.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist des weiteren die Verwendung der erfindungsgemäßen Polypeptide und/oder der erfindungsgemäßen Enzymzubereitungen, insbesondere in Sterilisations-, Desinfektions-, Wasch-, Geschirrspül- und Reinigungsmitteln, vor allem in Reinigern zur Entfernung von Biofilmen und/oder zur Entfernung von organischen Schmutz von harten Oberflächen. Der Einsatz kann hierbei insbesondere im Haushalt oder auf dem Gebiet der Arzneimittel-, Lebensmittel-, Brauerei-, Medizintechnik-, Farben-, Holz-, Textil-, Kosmetik-, Leder-, Tabak-, Pelz-, Seil-, Papier-, Zellstoff-, Kunststoff-, Treibstoff-, Öl-, Kautschuk- oder Maschinenindustrie oder in Molkereibetrieben erfolgen. Die erfindungsgemäßen Polypeptide können hierbei insbesondere zur Entfernung von Biofilmen von Haushalts- und/oder Sanitärgegenständen sowie in Zellstoff- und Papiermühlen, in Umlaufkühltürmen sowie in anderen Systemen, die fließendes und/oder umlaufendes Wasser führen, eingesetzt werden. Neben der Entfernung von Biofilmen sind die erfindungsgemäßen Polypeptide beispielsweise auch geeignet zum Einsatz in Waschmitteln zur Reinigung von Textilien, insbesondere zur Fleckentfernung.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind daher des weiteren auch Sterilisations-, Desinfektions-, Wasch-, Geschirrspül- und Reinigungsmittel, die erfindungsgemäße Polypeptide und/oder erfindungsgemäße Enzymzubereitungen enthalten. Bei dem Mittel kann es sich grundsätzlich um ein Mittel für jede beliebige Art von Oberfläche handeln. Es kann sich also bei der Oberfläche um eine biotische oder abiotische, künstlich synthetisierte oder natürliche, weiche oder harte Oberfläche handeln. Bei der Oberfläche kann es sich etwa um eine Textil-, Keramik-, Metall- und/oder Kunststoffoberfläche handeln. Bei dem Gegenstand kann es sich beispielsweise um Wäsche, Geschirr, Sanitäreinrichtungen, Bodenbeläge, Schuhe, Leder, aus Gummi hergestellte Gebrauchsgegenstände, Schiffsrümpfe, Prothesen, Zähne, Zahnersatz oder Katheter handeln.
Bei dem Reinigungsmittel kann es sich insbesondere um einen Haushaltsreiniger oder einen Reiniger für industrielle Anlagen, insbesondere der zuvor genannten, handeln. In einer bevorzugten Ausführungsform handelt es sich bei dem Reiniger um einen solchen zum Säubern harter Oberflächen, wie zum Beispiel von Böden, Kacheln, Geschirr, Fliesen, Kunststoffen sowie anderen harten Oberflächen im Haushalt, in industriellen Anlagen, in öffentlichen sanitären Anlagen, in Schwimmbädern, Saunen, Sportanlagen oder in Arzt- oder Massagepraxen.
Medizinisch relevante Biofilme, die mit erfindungsgemäßen Poypeptiden entfernt werden können, sind beispielsweise Biofilme durch chronische Lungeninfektionen, die z.B. bei Mukoviszidose-Patienten auftreten können. Des weiteren kann es sich um Zahnbelag handeln oder um Biofilme, die von Kontaktlinsen, Implantaten oder von medizinischen Geräten, Instrumenten oder Apparaturen, wie Kathetern oder Endoskopen, entfernt werden müssen.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher auch die Verwendung der erfindungsgemäßen Polypeptide und/oder der erfindungsgemäßen Enzymzubereitungen in kosmetischen und/oder pharmazeutischen Produkten sowie kosmetische und/oder pharmazeutische Produkte, die die erfindungsgemäßen Polypeptide und/oder Enzymzubereitungen enthalten sowie des weiteren die Verwendung der erfindungsgemäßen Polypeptide und/oder Enzymzubereitungen zur Herstellung von kosmetischen und/oder pharmazeutischen Produkten. Bei dem Produkt kann es sich beispielsweise um ein Produkt zur Entfernung von Zahnbelag von Zahnoberlächen oder um ein Produkt zur Entfernung von Biofilmen, die durch chronische Lungeninfektionen verursacht bzw. mit diesen verbunden sind, wie z.B. im Falle der Mukoviszidose, handeln. Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind daher vor allem auch Mund-, Zahn- und Zahnprothesenpflegemittel, die die erfindungsgemäßen Polypeptide enthalten.
Die genannten erfindungsgemäßen Mittel und Produkte können weitere Komponenten enthalten wie sie dem Fachmann bekannt sind. Hierbei können die Sterilisations-, Desinfektions-, Wasch-, Geschirrspül-, Textilbehandlungs- und Reinigungsmittel je nach Verwendungszweck beispielsweise eine oder mehrere Komponenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Tensiden, Buildern, Säuren, alkalischen Substanzen, Hydrotropen, Lösungsmitteln, Verdickungsmitteln, Bleichmitteln, Farbstoffen, Parfüms, Korrosionsinhibitoren, Sequestriermitteln, Elektrolyten, optischen Aufhellern, Vergrauungsinhibitoren, Silberkorrosionsinhibitoren, Farbübertragungsinhibitoren, Schauminhibitoren, Abrasivstoffen, UV-Absorbenzien und Hautschutzmitteln enthalten. Zur Stabilisierung des Polypeptids können ferner Enzymstabilisatoren hinzugegeben werden. Soll das Reinigungsmittel versprüht werden, kann gegebenenfalls auch ein Treibmittel enthalten sein. Das Reinigungsmittel ist vorzugsweise ein flüssiges wässriges Mittel, ein Gel, eine Paste oder ein Pulver.
Erfindungsgemäße Polypeptide oder Enzymzubereitungen sind in erfindungsgemäßen Mitteln und/oder Zusammensetzungen vorzugsweise in einer Menge bis zu 20 Gew.-%, besonders bevorzugt in einer Menge von 0,01 - 10 Gew.-%, enthalten.
Enzymzubereitung
Die erfindungsgemäße Enzymzubereitung ist ein System, insbesondere ein wässriges Konzentrat, enthaltend eines oder mehrere der erfindungsgemäßen Polypeptide. Gegebenenfalls können auch weitere Enzyme, insbesondere ausgewählt aus Polysaccharidasen, Proteasen und Nukleasen, in der Enzymzubereitung enthalten sein.
Bei der Polysaccharidase kann es sich insbesondere um eine ß-Glucanase, Cellulase, Hemicellulase, Arabinase, Xylanase, Amylase, Dextranase, Glucosidase, Galactosidase, Pectinase, Chitinase, Lysozym, Alginat-Lyase oder beliebige Mischungen davon handeln. Bei der Protease kann es sich insbesondere um Subtilisin, Thermolysin, Pepsin, um eine Carboxypeptidase, um eine saure Protease, um eine Serin-Proteinase oder um Mischungen davon handeln. Bei den Nukleasen kann es sich um jede beliebige DNAse oder RNAse handeln.
Die im Sinne dieser Erfindung zusätzlich in den Enzymzubereitungen einsetzbaren Enzyme können durch übliche biochemische Methoden aus den entsprechenden Organismen gewonnen werden. Sie sind aber auch kommerziell erhältlich, beispielsweise von den Firmen Novozymes, Genencor International, Sigma, AB Enzymes oder ASA Enzyme. Dabei können die Enzympräparationen auch von technischer Qualität sein und aus mehreren verschiedenen Enzymaktivitäten bestehen. Die Gegenwart von teilweise nicht näher charakterisierten Nebenaktivitäten kann auf die Hydrolyse der komplex zusammengesetzten Biofilm-Polymere ebenfalls einen günstigen Einfluß haben.
Bei dem Einsatz von Enzymen ist grundsätzlich zu beachten, unabhängig davon, ob es sich um erfindungsgemäße Polypeptide oder um andere Enzyme handelt, dass diese in flüssigen Mitteln durch im Reiniger enthaltene Komponenten wie Tenside oder organische Säuren oder aber auch durch unspezifisch agierende Proteasen angegriffen werden könnten, wodurch sich die Wirksamkeit der Enzyme verringern würde. Um die Aktivität und Stabilität solcher Reinigungsmittel über einen längeren Zeitraum zu gewährleisten, ist es daher sinnvoll, empfindliche Enzyme von denaturierenden Komponenten und insbesondere auch Proteasen von anderen Enzymen getrennt zu halten, so daß diese Komponenten erst unmittelbar vor oder während des Reinigungsvorgangs aufeinander treffen.
Diese Trennung der verschiedenen Enzyme kann auf verschiedenen Wegen erfolgen. Eine Möglichkeit ist es, die Enzyme in Mikrokapseln einzubringen, die erst unmittelbar vor oder während des Reinigungsvorgangs, beispielsweise durch mechanische Einwirkung beim Putz- oder Waschvorgang, durch plötzliche Veränderung der osmotischen Verhältnisse z.B. beim Verdünnen mit Wasser oder durch ein Zerschneiden der Kapseln beim Dosieren aus der Vorratsflasche, geöffnet werden und ihren Inhalt freisetzen. Hierbei ist jedoch zu beachten, dass die Kapselwand ihrerseits nicht durch die Enzyme angegriffen werden darf. Kapselmaterialien auf der Basis von Proteinen oder Polysacchariden sind daher auszuschließen. Alternativ können die Enzyme auch jeweils auf einem festen Träger immobilisiert werden, der im Reinigungsmittel suspendiert wird und bei der Anwendung des Mittels zusätzlich als Abrasivstoff dienen kann. Die Immobilisierung erfolgt auf dem Fachmann bekanntem Wege; als Trägermaterialien können neben anorganischen Stoffen, beispielsweise Silicaten oder porösem Glas, auch Polymere eingesetzt werden.
Eine weitere denkbare Möglichkeit könnte auch das Einarbeiten in ein mehrphasiges Mittel sein, so dass die Protease vorwiegend in einer Phase angesiedelt wäre und die übrigen Enzyme vorwiegend in einer weiteren Phase vorlägen. Ein solches Mittel würde kurz vor der Verwendung aufgeschüttelt und die entstehende Emulsion auf die zu reinigende Fläche aufgetragen; das in der Vorratsflasche verbleibende Mittel würde anschließend eine rasche Phasentrennung erfahren, so dass die Enzyme nur für kurze Zeit sowie ggf. an der Phasengrenzfläche in Kontakt kämen. Ähnlich wäre der Fall gelagert, wenn ein Enzym in eine Phase eingearbeitet würde, die in Form von Tröpfchen in der zweiten, das andere Enzym enthaltenden Phase stabil dispergiert wäre; hierbei würde das Mittel nicht geschüttelt, sondern direkt aus der Vorratsflasche dosiert, gegebenenfalls auch versprüht. Ein solches mehrphasiges Mittel wäre jedoch eine technisch aufwendige und schwierig zu realisierende Lösung. Zudem wäre die Verbraucherakzeptanz voraussichtlich gering.
Sinnvoller ist es daher, die beiden Enzyme bzw. Enzymgruppen in räumlich getrennten Lösungen aufzubewahren. Dabei ist die Lagerung in zwei völlig getrennten Flaschen die weniger bevorzugte Lösung, da dies für den Verbraucher einen größeren Aufwand bedeutet. Besonders bevorzugt ist daher die Bereitstellung in einer Zweikammerflasche, aus der dann gleichzeitig beide Reinigungslösungen dosiert werden können. Solche Zweikammerflaschen sind bereits aus dem Stand der Technik bekannt. Neben der Möglichkeit der getrennten Lagerung miteinander nicht kompatibler Enzyme bietet eine Zwei- oder Mehrkammerflasche weitere Vorteile. So ist es möglich, in einer Kammer unter anderem ein Enzym in einer Lösung mit optimalem pH bezüglich der Lagerstabilität aufzubewahren und in einer weiteren Kammer eine Lösung zu bevorraten, deren pH-Wert dazu führt, daß beim Mischen dieser mit der Enzymaufbewahrungslösung eine Reinigungslösung entsteht, deren pH-Wert ein Optimum an Enzymaktivität bewirkt. Komponenten für erfindungsgemäße Wasch- und Reinigungsmittel Die erfindungsgemäß einsetzbaren Tenside sind ausgewählt aus den Gruppen der anionischen, nichtionischen, amphoteren und kationischen Tenside und Mischungen davon, wobei die anionischen, nichtionischen und amphoteren Tenside und Mischungen davon bevorzugt sind und die anionischen und nichtionischen Tenside und Mischungen davon besonderes bevorzugt sind.
Als nichtionische Tenside werden vorzugsweise alkoxylierte, vorteilhafterweise ethoxylierte, insbesondere primäre Alkohole mit vorzugsweise 8 bis 18 C-Atomen und durchschnittlich 1 bis 12 Mol Ethylenoxid (EO) pro Mol Alkohol eingesetzt, in denen der Alkoholrest linear oder bevorzugt in 2-Stellung methylverzweigt sein kann, beziehungsweise lineare und methylverzweigte Reste im Gemisch enthalten kann, so wie sie üblicherweise in Oxoalkoholresten vorliegen. Insbesondere sind jedoch Alkoholethoxylate mit linearen Resten aus Alkoholen nativen Ursprungs mit 12 bis 18 C- Atomen, zum Beispiel aus Kokos-, Palm-, Taigfett- oder Oleylalkohol, und durch¬ schnittlich 2 bis 8 EO pro Mol Alkohol bevorzugt. Zu den bevorzugten ethoxylierten Alkoholen gehören beispielsweise C-i2-i4-Alkohole mit 3 EO oder 4 EO, Cg-n-Alkohol mit 7 EO, Ci3-i5-Alkohole mit 3 EO, 5 EO, 7 EO oder 8 EO, C12-i8-Alkohole mit 3 EO, 5 EO oder 7 EO und Mischungen aus diesen, wie Mischungen aus Ci2-i4-Alkohol mit 3 EO und Ci2-i8-Alkohol mit 5 EO. Die angegebenen Ethoxylierungsgrade stellen statistische Mittelwerte dar, die für ein spezielles Produkt eine ganze oder eine gebrochene Zahl sein können. Bevorzugte Alkoholethoxylate weisen eine eingeengte Homologenvertei¬ lung auf (narrow ränge ethoxylates, NRE). Zusätzlich zu diesen nichtionischen Ten- siden können auch Fettalkohole mit mehr als 12 EO eingesetzt werden. Beispiele hierfür sind Taigfettalkohol mit 14 EO, 25 EO, 30 EO oder 40 EO.
Eine weitere Klasse bevorzugt eingesetzter nichtionischer Tenside, die entweder als alleiniges nichtionisches Tensid oder in Kombination mit anderen nichtionischen Tensiden eingesetzt werden, sind alkoxylierte, vorzugsweise ethoxylierte oder ethoxylierte und propoxylierte Fettsäurealkylester, vorzugsweise mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen in der Alkylkette, insbesondere Fettsäuremethylester.
Eine weitere Klasse von nichtionischen Tensiden, die vorteilhafterweise eingesetzt werden kann, sind die Alkylpolyglycoside (APG). Einsetzbare Alkypolyglycoside genügen der allgemeinen Formel RO(G)Z, in der R einen linearen oder verzweigten, insbesondere in 2-Stellung methylverzweigten, gesättigten oder ungesättigten, aliphatischen Rest mit 8 bis 22, vorzugsweise 12 bis 18 C-Atomen bedeutet und G das Symbol ist, das für eine Glykoseeinheit mit 5 oder 6 C-Atomen, vorzugsweise für Glucose, steht. Der Glycosylierungsgrad z liegt dabei zwischen 1 ,0 und 4,0, vorzugsweise zwischen 1 ,0 und 2,0 und insbesondere zwischen 1 ,1 und 1 ,4. Bevorzugt eingesetzt werden lineare Alkylpolyglucoside, also Alkylpolyglycoside, in denen der Polyglycosylrest ein Glucoserest und der Alkylrest ein n-Alkylrest ist.
Auch nichtionische Tenside vom Typ der Aminoxide, beispielsweise N-Kokosalkyl-N,N- dimethylaminoxid und N-Talgalkyl-N,N-dihydroxyethylaminoxid, und der Fettsäurealkanolamide können geeignet sein. Der Anteil dieser nichtionischen Tenside liegt vorzugsweise nicht über dem der ethoxylierten Fettalkohole, insbesondere bei nicht mehr als der Hälfte davon.
Weitere geeignete Tenside sind Polyhydroxyfettsäureamide der Formel (II),
R1
I
R-CO-N-[Z] (II)
in der RCO für einen aliphatischen Acylrest mit 6 bis 22 Kohlenstoffatomen, R1 für Wasserstoff, einen Alkyl- oder Hydroxyalkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und [Z] für einen linearen oder verzweigten Polyhydroxyalkylrest mit 3 bis 10 Kohlen¬ stoffatomen und 3 bis 10 Hydroxylgruppen steht. Bei den Polyhydroxyfettsäureamiden handelt es sich um bekannte Stoffe, die üblicherweise durch reduktive Aminierung eines reduzierenden Zuckers mit Ammoniak, einem Alkylamin oder einem Alkanolamin und nachfolgende Acylierung mit einer Fettsäure, einem Fettsäurealkylester oder einem Fettsäurechlorid erhalten werden können.
Zur Gruppe der Polyhydroxyfettsäureamide gehören auch Verbindungen der Formel
(III).
Figure imgf000027_0001
I
R-CO-N-[Z] (III) in der R für einen linearen oder verzweigten Alkyl- oder Alkenylrest mit 7 bis 12 Kohlenstoffatomen, R1 für einen linearen, verzweigten oder cyclischen Alkylrest oder einen Arylrest mit 2 bis 8 Kohlenstoffatomen und R2 für einen linearen, verzweigten oder cyclischen Alkylrest oder einen Arylrest oder einen Oxy-Alkylrest mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen steht, wobei Ci-4-Alkyl- oder Phenylreste bevorzugt sind und [Z] für einen linearen Polyhydroxyalkylrest steht, dessen Alkylkette mit mindestens zwei Hydroxylgruppen substituiert ist, oder alkoxylierte, vorzugsweise ethoxylierte oder propoxylierte Derivate dieses Restes.
[Z] wird vorzugsweise durch reduktive Aminierung eines reduzierenden Zuckers erhalten, beispielsweise Glucose, Fructose, Maltose, Lactose, Galactose, Mannose oder Xylose. Die N-Alkoxy- oder N-Aryloxy-substituierten Verbindungen können beispielsweise durch Umsetzung mit Fettsäuremethylestern in Gegenwart eines Alkoxids als Katalysator in die gewünschten Polyhydroxyfettsäureamide überführt werden.
Als anionische Tenside werden beispielsweise solche vom Typ der Sulfonate und Sulfate eingesetzt. Als Tenside vom Sulfonat-Typ kommen dabei vorzugsweise C9.13- Alkylbenzolsulfonate, Olefinsulfonate, das heißt Gemische aus Alken- und Hydroxyalkansulfonaten sowie Disulfonaten, wie man sie beispielsweise aus C12-18- Monoolefinen mit end- oder innenständiger Doppelbindung durch Sulfonieren mit gas¬ förmigem Schwefeltrioxid und anschließende Alkalische oder saure Hydrolyse der Sulfonierungsprodukte erhält, in Betracht. Geeignet sind auch Alkansulfonate, die aus Ci2-18-Alkanen beispielsweise durch Sulfochlorierung oder Sulfoxidation mit an¬ schließender Hydrolyse beziehungsweise Neutralisation gewonnen werden. Ebenso sind auch die Ester von α-Sulfofettsäuren (Estersulfonate), zum Beispiel die α- sulfonierten Methylester der hydrierten Kokos-, Palmkern- oder Taigfettsäuren geeignet.
Weitere geeignete Aniontenside sind sulfierte Fettsäureglycerinester. Unter Fettsäureglycerinestern sind die Mono-, Di- und Triester sowie deren Gemische zu verstehen, wie sie bei der Herstellung durch Veresterung von einem Monoglycerin mit 1 bis 3 Mol Fettsäure oder bei der Umesterung von Triglyceriden mit 0,3 bis 2 Mol Glycerin erhalten werden. Bevorzugte sulfierte Fettsäureglycerinester sind dabei die Sulfierprodukte von gesättigten Fettsäuren mit 6 bis 22 Kohlenstoffatomen, bei¬ spielsweise der Capronsäure, Caprylsäure, Caprinsäure, Myristinsäure, Laurinsäure, Palmitinsäure, Stearinsäure oder Behensäure.
Als Alk(en)ylsulfate werden die Alkali- und insbesondere die Natriumsalze der Schwefelsäurehalbester der Ci2-Ci8-Fettalkohole, beispielsweise aus Kokosfettalkohol, Taigfettalkohol, Lauryl-, Myristyl-, Cetyl- oder Stearylalkohol oder der C10-C20- Oxoalkohole und diejenigen Halbester sekundärer Alkohole dieser Kettenlängen bevorzugt. Weiterhin bevorzugt sind Alk(en)ylsulfate der genannten Kettenlänge, welche einen synthetischen, auf petrochemischer Basis hergestellten geradkettigen Alkylrest enthalten, die ein analoges Abbauverhalten besitzen wie die adäquaten Verbindungen auf der Basis von fettchemischen Rohstoffen. Aus waschtechnischem Interesse sind die Ci2-Ci6-Alkylsulfate und C12-Ci5-Alkylsulfate sowie C14-C15- Alkylsulfate bevorzugt. Auch 2,3-Alkylsulfate sind geeignete Aniontenside.
Auch die Schwefelsäuremonoester der mit 1 bis 6 Mol Ethylenoxid ethoxylierten geradkettigen oder verzweigten Cz^i-Alkohole, wie 2-Methyl-verzweigte Cg-n-Alkohole mit im Durchschnitt 3,5 Mol Ethylenoxid (EO) oder C12-18-Fettalkohole mit 1 bis 4 EO, sind geeignet. Sie werden in Reinigungsmitteln aufgrund ihres hohen Schaumverhaltens nur in relativ geringen Mengen, beispielsweise in Mengen bis 5 Gew.-%, üblicherweise von 1 bis 5 Gew.-%, eingesetzt.
Weitere geeignete Aniontenside sind auch die Salze der Alkylsulfobernsteinsäure, die auch als Sulfosuccinate oder als Sulfobernsteinsäureester bezeichnet werden und die Monoester und/oder Diester der Sulfobernsteinsäure mit Alkoholen, vorzugsweise Fettalkoholen und insbesondere ethoxylierten Fettalkoholen darstellen. Bevorzugte Sulfosuccinate enthalten Cs-iβ-Fettalkoholreste oder Mischungen aus diesen. Insbesondere bevorzugte Sulfosuccinate enthalten einen Fettalkoholrest, der sich von ethoxylierten Fettalkoholen ableitet, die für sich betrachtet nichtionische Tenside dar¬ stellen (Beschreibung siehe oben). Dabei sind wiederum Sulfosuccinate, deren Fettal¬ kohol-Reste sich von ethoxylierten Fettalkoholen mit eingeengter Homologenverteilung ableiten, besonders bevorzugt. Ebenso ist es auch möglich, Alk(en)ylbernsteinsäure mit vorzugsweise 8 bis 18 Kohlenstoffatomen in der Alk(en)ylkette oder deren Salze einzu¬ setzen. Als weitere anionische Tenside kommen insbesondere Seifen in Betracht. Geeignet sind gesättigte Fettsäureseifen, wie die Salze der Laurinsäure, Myristinsäure, Palmitinsäure, Stearinsäure, hydrierte Erucasäure und Behensäure sowie insbesondere aus natürlichen Fettsäuren, zum Beispiel Kokos-, Palmkern- oder Taigfettsäuren, abgeleitete Seifengemische.
Die anionischen Tenside einschließlich der Seifen können in Form ihrer Natrium-, Ka¬ lium- oder Ammoniumsalze sowie als lösliche Salze organischer Basen, wie Mono-, Di¬ oder Triethanolamin, vorliegen. Vorzugsweise liegen die anionischen Tenside in Form ihrer Natrium- oder Kaliumsalze, insbesondere in Form der Natriumsalze vor.
Die Tenside können in den erfindungsgemäßen Reinigungs- oder Waschmitteln insgesamt in einer Menge von vorzugsweise 5 Gew.-% bis 50 Gew.-%, insbesondere von 8 Gew.-% bis 30 Gew.-%, bezogen auf das fertige Mittel, enthalten sein.
Erfindungsgemäße Wasch- oder Reinigungsmittel können Bleichmittel enthalten. Unter den als Bleichmittel dienenden, in Wasser H2O2 liefernden Verbindungen haben das Natriumpercarbonat, das Natriumperborattetrahydrat und das
Natriumperboratmonohydrat besondere Bedeutung. Weitere brauchbare Bleichmittel sind beispielsweise Peroxopyrophosphate, Citratperhydrate sowie H2O2 liefernde persaure Salze oder Persäuren, wie Persulfate beziehungsweise Perschwefelsäure. Brauchbar ist auch das Harnstoffperoxohydrat Percarbamid, das durch die Formel H2N- CO-NH2 H2O2 beschrieben werden kann. Insbesondere beim Einsatz der Mittel für das Reinigen harter Oberflächen, zum Beispiel beim maschinellen Geschirrspülen, können sie gewünschtenfalls auch Bleichmittel aus der Gruppe der organischen Bleichmittel enthalten, obwohl deren Einsatz prinzipiell auch bei Mitteln für die Textilwäsche möglich ist. Typische organische Bleichmittel sind die Diacylperoxide, wie zum Beispiel Dibenzoylperoxid. Weitere typische organische Bleichmittel sind die Peroxysäuren, wobei als Beispiele besonders die Alkylperoxysäuren und die Arylperoxysäuren genannt werden. Bevorzugte Vertreter sind die Peroxybenzoesäure und ihre ringsubstituierten Derivate, wie Alkylperoxybenzoesäuren, aber auch Peroxy-α- Naphthoesäure und Magnesium-monoperphthalat, die aliphatischen oder substituiert aliphatischen Peroxysäuren, wie Peroxylaurinsäure, Peroxystearinsäure, ε-Phthalimido- peroxycapronsäure (Phthalimidoperoxyhexansäure, PAP), o-Carboxybenzamidoperoxy- capronsäure, N-Nonenylamidoperadipinsäure und N-Nonenylamidopersuccinate, und aliphatische und araliphatische Peroxydicarbonsäuren, wie 1 ,12-Diperoxycarbonsäure, 1 ,9-Diperoxyazelainsäure, Diperoxysebacinsäure, Diperoxybrassylsäure, die Diperoxy- phthalsäuren, 2-Decyldiperoxybutan-1 ,4-disäure, N,N-Terephthaloyl-di(6- aminopercapronsäure) können eingesetzt werden.
Der Gehalt der Wasch- oder Reinigungsmittel an Bleichmittel kann 1 bis 40 Gew.-% und insbesondere 10 bis 20 Gew.-%, betragen, wobei vorteilhafterweise Perboratmonohydrat oder Percarbonat eingesetzt wird.
Um beim Waschen bei Temperaturen von 60 0C und darunter, und insbesondere bei der Wäschevorbehandlung eine verbesserte Bleichwirkung zu erreichen, können die Mittel auch Bleichaktivatoren enthalten. Als Bleichaktivatoren können Verbindungen, die unter Perhydrolysebedingungen aliphatische Peroxocarbonsäuren mit vorzugsweise 1 bis 10 C-Atomen, insbesondere 2 bis 4 C-Atomen, und/oder gegebenenfalls substituierte Perbenzoesäure ergeben, eingesetzt werden. Geeignet sind Substanzen, die O- und/oder N-Acylgruppen der genannten C-Atomzahl und/oder gegebenenfalls substituierte Benzoylgruppen tragen. Bevorzugt sind mehrfach acylierte Alkylendiamine, insbesondere Tetraacetylethylendiamin (TAED), acylierte Triazinderivate, insbesondere 1 ,5-Diacetyl-2,4-dioxohexahydro-1 ,3,5-triazin (DADHT), acylierte Glycolurile, insbe¬ sondere 1 ,3,4,6-Tetraacetylglycoluril (TAGU), N-Acylimide, insbesondere N-Nonanoyl- succinimid (NOSI), acylierte Phenolsulfonate, insbesondere n-Nonanoyl- oder Isononanoyloxybenzolsulfonat (n- beziehungsweise iso-NOBS), acylierte Hydroxycarbonsäuren, wie Triethyl-O-acetylcitrat (TEOC), Carbonsäureanhydride, insbesondere Phthalsäureanhydrid, lsatosäureanhydrid und/oder Bernsteinsäurean¬ hydrid, Carbonsäureamide, wie N-Methyldiacetamid, Glycolid, acylierte mehrwertige Alkohole, insbesondere Triacetin, Ethylenglycoldiacetat, Isopropenylacetat, 2,5- Diacetoxy-2,5-dihydrofuran und die aus den deutschen Patentanmeldungen DE 19616693 und DE 19616767 bekannten Enolester sowie acetyliertes Sorbitol und Mannitol beziehungsweise deren in der europäischen Patentanmeldung EP 0525239 beschriebene Mischungen (SORMAN), acylierte Zuckerderivate, insbesondere Pentaacetylglucose (PAG), Pentaacetylfructose, Tetraacetylxylose und Octaacetyllactose sowie acetyliertes, gegebenenfalls N-alkyliertes Glucamin beziehungsweise Gluconolacton, Triazol beziehungsweise Triazolderivate und/oder teilchenförmige Caprolactame und/oder Caprolactamderivate, bevorzugt N-acylierte Lactame, beispielsweise N-Benzoylcaprolactam und N-Acetylcaprolactam, die aus den internationalen Patentanmeldungen WO 94/27970, WO 94/28102, WO 94/28103, WO 95/00626, WO 95/14759 und WO 95/17498 bekannt sind. Die aus der deutschen Pa¬ tentanmeldung DE 19616769 bekannten hydrophil substituierten Acylacetale und die in der deutschen Patentanmeldung DE 19616770 sowie der internationalen Patentanmel¬ dung WO 95/14075 beschriebenen Acyllactame werden ebenfalls bevorzugt eingesetzt. Auch die aus der deutschen Patentanmeldung DE 4443177 bekannten Kombinationen konventioneller Bleichaktivatoren können eingesetzt werden. Ebenso können Nitrilderivate wie Cyanopyridine, Nitrilquats, zum Beispiel N-Alkylammoniumacetonitrile, und/oder Cyanamidderivate eingesetzt werden. Bevorzugte Bleichaktivatoren sind Natrium-4-(octanoyloxy)-benzolsulfonat, π-Nonanoyl- oder Isononanoyloxybenzolsul- fonat (n- beziehungsweise iso-NOBS), Undecenoyloxybenzolsulfonat (UDOBS), Natriumdodecanoyloxybenzolsulfonat (DOBS), Decanoyloxybenzoesäure (DOBA, OBC 10) und/oder Dodecanoyloxybenzolsulfonat (OBS 12), sowie N-Methylmorpholinum- acetonitril (MMA). Derartige Bleichaktivatoren können im üblichen Mengenbereich von 0,01 bis 20 Gew.-%, vorzugsweise in Mengen von 0,1 bis 15 Gew.-%, insbesondere 1 Gew.-% bis 10 Gew.-%, bezogen auf die gesamte Zusammensetzung, enthalten sein.
Zusätzlich zu den konventionellen Bleichaktivatoren oder an deren Stelle können auch sogenannte Bleichkatalysatoren enthalten sein. Bei diesen Stoffen handelt es sich um bleichverstärkende Übergangsmetallsalze beziehungsweise Übergangsmetallkomplexe wie beispielsweise Mn-, Fe-, Co-, Ru - oder Mo-Salenkomplexe oder -carbonylkom- plexe. Auch Mn-, Fe-, Co-, Ru-, Mo-, Ti-, V- und Cu-Komplexe mit N-haltigen Tripod- Liganden sowie Co-, Fe-, Cu- und Ru-Amminkomplexe sind als Bleichkatalysatoren geeignet, wobei solche Verbindungen bevorzugt eingesetzt werden, die in der DE 19709284 A1 beschrieben sind.
Erfindungsgemäße Wasch- oder Reinigungsmittel enthalten in der Regel einen oder mehrere Builder, insbesondere Zeolithe, Silikate, Carbonate, organische Cobuilder und - wo keine ökologischen Gründe gegen ihren Einsatz sprechen - auch die Phosphate. Letztere sind insbesondere in Reinigungsmitteln für das maschinelle Geschirrspülen bevorzugt einzusetzende Gerüststoffe. Zu nennen sind hier kristalline, schichtförmige Natriumsilicate der allgemeinen Formel
NaMSixO2x+1 yH2O, wobei M Natrium oder Wasserstoff bedeutet, x eine Zahl von 1 ,6 bis 4, vorzugsweise 1 ,9 bis 4,0 und y eine Zahl von 0 bis 20 ist und bevorzugte Werte für x 2, 3 oder 4 sind. Derartige kristalline Schichtsilicate werden beispielsweise in der europäischen Patentanmeldung EP 164514 beschrieben. Bevorzugte kristalline Schichtsilicate der angegebenen Formel sind solche, in denen M für Natrium steht und x die Werte 2 oder 3 annimmt. Insbesondere sind sowohl ß- als auch δ-Natriumdisilicate
Na2Si2O5 YH2O bevorzugt. Im Handel befinden sich derartige Verbindungen beispielsweise unter der Bezeichnung SKS® (Firma Clariant). So handelt es sich bei
SKS-6® vorwiegend um ein δ-Natriumdisilicat mit der Formel Na2Si2O5-VH2O, bei SKS- 7® vorwiegend um das ß-Natriumdisilicat. Durch Reaktion mit Säuren (zum Beispiel Citronensäure oder Kohlensäure) entsteht aus dem δ-Natriumdisilicat Kanemit
NaHSi2O5-VH2O, im Handel unter den Bezeichnungen SKS-9® beziehungsweise SKS- 10® (Firma Clariant). Von Vorteil kann es auch sein, chemische Modifikationen dieser Schichtsilicate einzusetzen. So kann beispielsweise die Alkalität der Schichtsilicate geeignet beeinflußt werden. Mit Phosphat beziehungsweise mit Carbonat dotierte Schichtsilicate weisen im Vergleich zu dem δ-Natriumdisilicat veränderte Kristallmorphologien auf, lösen sich schneller und zeigen im Vergleich zu δ- Natriumdisilicat ein erhöhtes Calciumbindevermögen. So sind Schichtsilicate der allgemeinen Summenformel x Na2O • y SiO2 • z P2O5, in der das Verhältnis x zu y einer Zahl 0,35 bis 0,6, das Verhältnis x zu z einer Zahl von 1 ,75 bis 1200 und das Verhältnis y zu z einer Zahl von 4 bis 2800 entsprechen, in der Patentanmeldung DE 19601063 beschrieben. Die Löslichkeit der Schichtsilicate kann auch erhöht werden, indem besonders feinteilige Schichtsilicate eingesetzt werden. Auch Compounds aus den kristallinen Schichtsilicaten mit anderen Inhaltsstoffen können eingesetzt werden. Dabei sind insbesondere Compounds mit Cellulosederivaten, die Vorteile in der desintegrierenden Wirkung aufweisen und insbesondere in Waschmitteltabletten eingesetzt werden, sowie Compounds mit Polycarboxylaten, zum Beispiel Citronensäure, beziehungsweise polymeren Polycarboxylaten, zum Beispiel Copolymeren der Acrylsäure, zu nennen. Einsetzbar sind auch amorphe Natriumsilikate mit einem Modul Na2O : SiO2 von 1 :2 bis 1 :3,3, vorzugsweise von 1 :2 bis 1 :2,8 und insbesondere von 1 :2 bis 1 :2,6, welche löseverzögert sind und Sekundärwascheigenschaften aufweisen. Die Löseverzögerung gegenüber herkömmlichen amorphen Natriumsilikaten kann dabei auf verschiedene Weise, beispielsweise durch Oberflächenbehandlung, Compoundierung, Kompaktierung/ Verdichtung oder durch Übertrocknung hervorgerufen worden sein. Im Rahmen dieser Erfindung wird unter dem Begriff "amorph" auch "röntgenamorph" verstanden. Dies heißt, daß die Silikate bei Röntgenbeugungsexperimenten keine scharfen Röntgen reflexe liefern, wie sie für kristalline Substanzen typisch sind, sondern allenfalls ein oder mehrere Maxima der gestreuten Röntgenstrahlung, die eine Breite von mehreren Gradeinheiten des Beugungswinkels aufweisen. Es kann jedoch sehr wohl sogar zu besonders guten Buildereigenschaften führen, wenn die Silikatpartikel bei Elektronenbeugungsexperimenten verwaschene oder sogar scharfe Beugungsmaxima liefern. Dies ist so zu interpretieren, daß die Produkte mikrokristalline Bereiche der Größe 10 bis einige Hundert nm aufweisen, wobei Werte bis max. 50 nm und insbesondere bis max. 20 nm bevorzugt sind. Insbesondere bevorzugt sind verdichtete/kompaktierte amorphe Silikate, compoundierte amorphe Silikate und übertrocknete röntgenamorphe Silikate.
Ein gegebenenfalls einsetzbarer, feinkristalliner, synthetischer und gebundenes Wasser enthaltender Zeolith ist vorzugsweise Zeolith A und/oder P. Als Zeolith P wird Zeolith MAP® (Handelsprodukt der Firma Crosfield) besonders bevorzugt. Geeignet sind jedoch auch Zeolith X sowie Mischungen aus A, X und/oder P. Kommerziell erhältlich und im Rahmen der vorliegenden Erfindung bevorzugt einsetzbar ist beispielsweise auch ein Co-Kristallisat aus Zeolith X und Zeolith A (ca. 80 Gew.-% Zeolith X), das von der Firma CONDEA Augusta S.p.A. unter dem Markennamen VEGOBOND AX® vertrieben wird und durch die Formel
nNa2O • (1-H)K2O ■ AI2O3 ' (2 - 2,5)SiO2 ■ (3,5 - 5,5) H2O
beschrieben werden kann. Geeignete Zeolithe weisen eine mittlere Teilchengröße von weniger als 10 μm (Volumenverteilung; Meßmethode: Coulter Counter) auf und enthalten vorzugsweise 18 bis 22 Gew.-%, insbesondere 20 bis 22 Gew.-% an gebundenem Wasser. Selbstverständlich ist auch ein Einsatz der allgemein bekannten Phosphate als Buildersubstanzen möglich, sofern ein derartiger Einsatz nicht aus ökologischen Gründen vermieden werden sollte. Unter der Vielzahl der kommerziell erhältlichen Phosphate haben die Alkalimetallphosphate unter besonderer Bevorzugung von Pentanatrium- beziehungsweise Pentakaliumtriphosphat (Natrium- beziehungsweise Kaliumtripolyphosphat) in der Wasch- und Reinigungsmittel-Industrie die größte Bedeutung.
Alkalimetallphosphate ist dabei die summarische Bezeichnung für die Alkalimetall- (insbesondere Natrium- und Kalium-) -Salze der verschiedenen Phosphorsäuren, bei denen man Metaphosphorsäuren (HPOs)n und Orthophosphorsäure H3PO4 neben höhermolekularen Vertretern unterscheiden kann. Die Phosphate vereinen dabei mehrere Vorteile in sich: Sie wirken als Alkaliträger, verhindern Kalkbeläge auf Maschinenteilen beziehungsweise Kalkinkrustationen in Geweben und tragen überdies zur Reinigungsleistung bei.
Natriumdihydrogenphosphat, NaHaPO4, existiert als Dihydrat (Dichte 1 ,91 gern"3, Schmelzpunkt 60°) und als Monohydrat (Dichte 2,04 gern"3). Beide Salze sind weiße, in Wasser sehr leicht lösliche Pulver, die beim Erhitzen das Kristallwasser verlieren und bei 2000C in das schwach saure Diphosphat (Dinatriumhydrogendiphosphat, Na2H2P2O7), bei höherer Temperatur in Natiumtrimetaphosphat (Na3PsOg) und Maddrellsches Salz (siehe unten), übergehen. NaH2PO4 reagiert sauer; es entsteht, wenn Phosphorsäure mit Natronlauge auf einen pH-Wert von 4,5 eingestellt und die Maische versprüht wird. Kaliumdihydrogenphosphat (primäres oder einbasiges Kaliumphosphat, Kaliumbiphosphat, KDP), KH2PO4, ist ein weißes Salz der Dichte 2,33 gern"3, hat einen Schmelzpunkt von 2530C [Zersetzung unter Bildung von Kaliumpolyphosphat (KPO3)X] und ist leicht löslich in Wasser.
Dinatriumhydrogenphosphat (sekundäres Natriumphosphat), Na2HPO4, ist ein farbloses, sehr leicht wasserlösliches kristallines Salz. Es existiert wasserfrei und mit 2 Mol. (Dichte 2,066 gern'3, Wasserverlust bei 95°), 7 Mol. (Dichte 1 ,68 gern"3, Schmelzpunkt 480C unter Verlust von 5 H2O) und 12 Mol. Wasser (Dichte 1 ,52 gern"3, Schmelzpunkt 35°C unter Verlust von 5 H2O), wird bei 1000C wasserfrei und geht bei stärkerem Erhitzen in das Diphosphat Na4P2O7 über. Dinatriumhydrogenphosphat wird durch Neutralisation von Phosphorsäure mit Sodalösung unter Verwendung von Phenolphthalein als Indikator hergestellt. Dikaliumhydrogenphosphat (sekundäres od. zweibasiges Kaliumphosphat), K2HPO4, ist ein amorphes, weißes Salz, das in Wasser leicht löslich ist.
Trinatriumphosphat, tertiäres Natriumphosphat, Na3PO4, sind farblose Kristalle, die als Dodecahydrat eine Dichte von 1 ,62 gern"3 und einen Schmelzpunkt von 73-760C (Zersetzung), als Decahydrat (entsprechend 19-20% P2Os) einen Schmelzpunkt von 1000C und in wasserfreier Form (entsprechend 39-40% P2O5) eine Dichte von 2,536 gern'3 aufweisen. Trinatriumphosphat ist in Wasser unter Alkalischer Reaktion leicht löslich und wird durch Eindampfen einer Lösung aus genau 1 Mol Dinatriumphosphat und 1 Mol NaOH hergestellt. Trikaliumphosphat (tertiäres oder dreibasiges Kaliumphosphat), K3PO4, ist ein weißes, zerfließliches, körniges Pulver der Dichte 2,56 gern"3, hat einen Schmelzpunkt von 1340° und ist in Wasser mit Alkalischer Reaktion leicht löslich. Es entsteht zum Beispiel beim Erhitzen von Thomasschlacke mit Kohle und Kaliumsulfat. Trotz des höheren Preises werden in der Reinigungsmittel-Industrie die leichter löslichen, daher hochwirksamen, Kaliumphosphate gegenüber entsprechenden Natrium-Verbindungen vielfach bevorzugt.
Tetranatriumdiphosphat (Natriumpyrophosphat), Na4P2O7, existiert in wasserfreier Form (Dichte 2,534 gern'3, Schmelzpunkt 988°C, auch 88O0C angegeben) und als Decahydrat (Dichte 1 ,815-1 ,836 gern"3, Schmelzpunkt 94°C unter Wasserverlust). Beide Substanzen sind farblose, in Wasser mit Alkalischer Reaktion lösliche Kristalle. Na4P2O7 entsteht beim Erhitzen von Dinatriumphosphat auf >200°C oder indem man Phosphorsäure mit Soda im stöchiometrischem Verhältnis umsetzt und die Lösung durch Versprühen entwässert. Das Decahydrat komplexiert Schwermetall-Salze und Härtebildner und verringert daher die Härte des Wassers. Kaliumdiphosphat (Kaliumpyrophosphat), K4P2O7, existiert in Form des Trihydrats und stellt ein farbloses, hygroskopisches Pulver mit der Dichte 2,33 gern"3 dar, das in Wasser löslich ist, wobei der pH-Wert der 1 %igen Lösung bei 25°C 10,4 beträgt.
Durch Kondensation des NaH2PO4 beziehungsweise des KH2PO4 entstehen höhermolekulare Natrium- und Kaliumphosphate, bei denen man cyclische Vertreter, die Natrium- beziehungsweise Kaliummetaphosphate und kettenförmige Typen, die Natrium- beziehungsweise Kaliumpolyphosphate, unterscheiden kann. Insbesondere für letztere sind eine Vielzahl von Bezeichnungen in Gebrauch: Schmelz- oder Glühphosphate, Grahamsches Salz, Kurrolsches und Maddrellsches Salz. Alle höheren Natrium- und Kaliumphosphate werden gemeinsam als kondensierte Phosphate bezeichnet.
Das technisch wichtige Pentanatriumtriphosphat (Na5P3O10; Natriumtripolyphosphat) ist ein wasserfrei oder mit 6 H2O kristallisierendes, nicht hygroskopisches, weißes, wasserlösliches Salz der allgemeinen Formel NaO-[P(O)(ONa)-O]n-Na mit n=3. In 100 g Wasser lösen sich bei Zimmertemperatur etwa 17 g, bei 6O0C ca. 20 g, bei 1000C rund 32 g des kristallwasserfreien Salzes; nach zweistündigem Erhitzen der Lösung auf 1000C entstehen durch Hydrolyse etwa 8% Orthophosphat und 15% Diphosphat. Bei der Herstellung von Pentanatriumtriphosphat wird Phosphorsäure mit Sodalösung oder Natronlauge im stöchiometrischen Verhältnis zur Reaktion gebracht und die Lösung durch Versprühen entwässert. Ähnlich wie Grahamsches Salz und Natriumdiphosphat löst Pentanatriumtriphosphat viele unlösliche Metall-Verbindungen (auch Kalkseifen usw.). Pentakaliumtriphosphat, K5P3O10 (Kaliumtripolyphosphat), kommt beispielsweise iri Form einer 50 Gew.-%-igen Lösung (> 23% P2O5, 25% K2O) in den Handel. Die Kaliumpolyphosphate finden in der Wasch- und Reinigungsmittel-Industrie breite Verwendung. Weiter existieren auch Natriumkaliumtripolyphosphate, welche ebenfalls im Rahmen der vorliegenden Erfindung einsetzbar sind. Diese entstehen beispielsweise, wenn man Natriumtrimetaphosphat mit KOH hydrolysiert:
(NaPOs)3 + 2 KOH -> Na3K2P3Oi0 + H2O
Diese sind erfindungsgemäß genau wie Natriumtripolyphosphat, Kaliumtripolyphosphat oder Mischungen aus diesen beiden einsetzbar; auch Mischungen aus Natriumtripolyphosphat und Natriumkaliumtripolyphosphat oder Mischungen aus Kaliumtripolyphosphat und Natriumkaliumtripolyphosphat oder Gemische aus Natriumtripolyphosphat und Kaliumtripolyphosphat und Natriumkaliumtripolyphosphat sind erfindungsgemäß einsetzbar. Als organische Cobuilder können in den erfindungsgemäßen Wasch- und Reinigungsmitteln insbesondere Polycarboxylate oder Polycarbonsäuren, polymere Polycarboxylate, Polyasparaginsäure, Polyacetale, gegebenenfalls oxidierte Dextrine, weitere organische Cobuilder (siehe unten) sowie Phosphonate eingesetzt werden. Diese Stoffklassen werden nachfolgend beschrieben.
Brauchbare organische Gerüstsubstanzen sind beispielsweise die in Form ihrer Natriumsalze einsetzbaren Polycarbonsäuren, wobei unter Polycarbonsäuren solche Carbonsäuren verstanden werden, die mehr als eine Säurefunktion tragen. Beispielsweise sind dies Citronensäure, Adipinsäure, Bernsteinsäure, Glutarsäure, Äpfelsäure, Weinsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Zuckersäuren, Aminocarbonsäuren, Nitrilotriessigsäure (NTA), sofern ein derartiger Einsatz aus ökologischen Gründen nicht zu vermeiden ist, sowie Mischungen aus diesen. Bevorzugte Salze sind die Salze der Polycarbonsäuren wie Citronensäure, Adipinsäure, Bernsteinsäure, Glutarsäure, Weinsäure, Zuckersäuren und Mischungen aus diesen.
Auch die Säuren an sich können eingesetzt werden. Sie besitzen neben ihrer Builderwirkung typischerweise auch die Eigenschaft einer Säuerungskomponente und dienen somit auch zur Einstellung eines niedrigeren und milderen pH-Wertes von Wasch- oder Reinigungsmitteln, sofern nicht der sich durch die Mischung der übrigen Komponenten ergebende pH-Wert gewünscht ist. Insbesondere sind hierbei system- unbd umweltverträgliche Säuren wie Citronensäure, Essigsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Milchsäure, Glykolsäure, Bernsteinsäure, Glutarsäure, Adipinsäure, Gluconsäure und beliebige Mischungen aus diesen zu nennen. Aber auch Mineralsäuren, insbesondere Schwefelsäure oder Basen, insbesondere Ammonium¬ oder Alkalihydroxide können als pH-Regulatoren dienen. Derartige Regulatoren sind in den erfindungemäßen Mitteln in Mengen von vorzugsweise nicht über 20 Gew.-%, insbesondere von 1 ,2 Gew.-% bis 17 Gew.-%, enthalten.
Als Builder sind weiter polymere Polycarboxylate geeignet, dies sind beispielsweise die Alkalimetallsalze der Polyacrylsäure oder der Polymethacrylsäure, beispielsweise solche mit einer relativen Molekülmasse von 500 bis 70000 g/mol. Bei den für polymere Polycarboxylate angegebenen Molmassen handelt es sich im Sinne dieser Schrift um gewichtsmittlere Molmassen Mw der jeweiligen Säureform, die grundsätzlich mittels Gelpermeationschromatographie (GPC) bestimmt wurden, wobei ein UV-Detektor eingesetzt wurde. Die Messung erfolgte dabei gegen einen externen Polyacrylsäure-Standard, der aufgrund seiner strukturellen Verwandtschaft mit den untersuchten Polymeren realistische Molgewichtswerte liefert. Diese Angaben weichen deutlich von den Molgewichtsangaben ab, bei denen Polystyrolsulfonsäuren als Standard eingesetzt werden. Die gegen Polystyrolsulfonsäuren gemessenen Molmassen sind in der Regel deutlich höher als die in dieser Schrift angegebenen Molmassen.
Geeignete Polymere sind insbesondere Polyacrylate, die bevorzugt eine Molekülmasse von 2000 bis 20000 g/mol aufweisen. Aufgrund ihrer überlegenen Löslichkeit können aus dieser Gruppe wiederum die kurzkettigen Polyacrylate, die Molmassen von 2000 bis 10000 g/mol, und besonders bevorzugt von 3000 bis 5000 g/mol, aufweisen, bevorzugt sein.
Geeignet sind weiterhin copolymere Polycarboxylate, insbesondere solche der Acrylsäure mit Methacrylsäure und der Acrylsäure oder Methacrylsäure mit Maleinsäure. Als besonders geeignet haben sich Copolymere der Acrylsäure mit Maleinsäure erwiesen, die 50 bis 90 Gew.-% Acrylsäure und 50 bis 10 Gew.-% Maleinsäure enthalten. Ihre relative Molekülmasse, bezogen auf freie Säuren, beträgt im allgemeinen 2000 bis 70000 g/mol, vorzugsweise 20000 bis 50000 g/mol und insbe¬ sondere 30000 bis 40000 g/mol. Die (co-) polymeren Polycarboxylate können entweder als Pulver oder als wässerige Lösung eingesetzt werden. Der Gehalt der Mittel an (co- )polymeren Polycarboxylaten kann von 0,5 bis 20 Gew.-%, insbesondere 1 bis 10 Gew.- %, betragen.
Zur Verbesserung der Wasserlöslichkeit können die Polymere auch Allylsulfonsäuren, wie beispielsweise Allyloxybenzolsulfonsäure und Methallylsulfonsäure, als Monomer enthalten.
Insbesondere bevorzugt sind auch biologisch abbaubare Polymere aus mehr als zwei verschiedenen Monomereinheiten, beispielsweise solche, die als Monomere Salze der Acrylsäure und der Maleinsäure sowie Vinylalkohol beziehungsweise Vinylalkohol- Derivate oder die als Monomere Salze der Acrylsäure und der 2-Alkylallylsulfonsäure sowie Zucker-Derivate enthalten.
Weitere bevorzugte Copolymere sind solche, die als Monomere vorzugsweise Acrolein und Acrylsäure/Acrylsäuresalze beziehungsweise Acrolein und Vinylacetat aufweisen.
Ebenso sind als weitere bevorzugte Buildersubstanzen polymere Aminodicarbonsäuren, deren Salze oder deren Vorläufersubstanzen zu nennen. Besonders bevorzugt sind Polyasparaginsäuren beziehungsweise deren Salze und Derivate.
Weitere geeignete Buildersubstanzen sind Polyacetale, welche durch Umsetzung von Dialdehyden mit Polyolcarbonsäuren, welche 5 bis 7 C-Atome und mindestens 3 Hydroxylgruppen aufweisen, erhalten werden können. Bevorzugte Polyacetale werden aus Dialdehyden wie Glyoxal, Glutaraldehyd, Terephthalaldehyd sowie deren Gemischen und aus Polyolcarbonsäuren wie Gluconsäure und/oder Glucoheptonsäure erhalten.
Weitere geeignete organische Buildersubstanzen sind Dextrine, beispielsweise Oligomere beziehungsweise Polymere von Kohlenhydraten, die durch partielle Hydrolyse von Stärken erhalten werden können. Die Hydrolyse kann nach üblichen, beispielsweise säure- oder enzymkatalysierten Verfahren durchgeführt werden. Vorzugsweise handelt es sich um Hydrolyseprodukte mit mittleren Molmassen im Bereich von 400 bis 500000 g/mol. Dabei ist ein Polysaccharid mit einem Dextrose- Äquivalent (DE) im Bereich von 0,5 bis 40, insbesondere von 2 bis 30 bevorzugt, wobei DE ein gebräuchliches Maß für die reduzierende Wirkung eines Polysaccharids im Vergleich zu Dextrose ist, welche ein DE von 100 besitzt. Brauchbar sind sowohl Maltodextrine mit einem DE zwischen 3 und 20 und Trockenglucosesirupe mit einem DE zwischen 20 und 37 als auch sogenannte Gelbdextrine und Weißdextrine mit höheren Molmassen im Bereich von 2000 bis 30000 g/mol.
Bei den oxidierten Derivaten derartiger Dextrine handelt es sich um deren Umsetzungsprodukte mit Oxidationsmitteln, welche in der Lage sind, mindestens eine Alkoholfunktion des Saccharidrings zur Carbonsäurefunktion zu oxidieren. Besonders bevorzugte organische Builder für erfindungsgemäße Mittel sind oxidierte Stärken, beziehungsweise deren Derivate aus den Anmeldungen EP 472042, WO 97/25399, und EP 755944.
Auch Oxydisuccinate und andere Derivate von Disuccinaten, vorzugsweise Ethylendiamindisuccinat, sind weitere geeignete Cobuilder. Dabei wird Ethylendiamin- N,N'-disuccinat (EDDS) bevorzugt in Form seiner Natrium- oder Magnesiumsalze verwendet. Weiterhin bevorzugt sind in diesem Zusammenhang auch Glycerindisuccinate und Glycerintrisuccinate. Geeignete Einsatzmengen liegen in zeolith-, carbonat- und/oder silicathaltigen Formulierungen zwischen 3 und 15 Gew.-%.
Weitere brauchbare organische Cobuilder sind beispielsweise acetylierte Hydroxycarbonsäuren beziehungsweise deren Salze, welche gegebenenfalls auch in Lactonform vorliegen können und welche mindestens 4 Kohlenstoffatome und mindestens eine Hydroxygruppe sowie maximal zwei Säuregruppen enthalten.
Eine weitere Substanzklasse mit Cobuildereigenschaften stellen die Phosphonate dar. Dabei handelt es sich insbesondere um Hydroxyalkan- beziehungsweise Aminoalkanphosphonate. Unter den Hydroxyalkanphosphonaten ist das 1- Hydroxyethan-1 ,1-diphosphonat (HEDP) von besonderer Bedeutung als Cobuilder. Es wird vorzugsweise als Natriumsalz eingesetzt, wobei das Dinatriumsalz neutral und das Tetranatriumsalz alkalisch (pH 9) reagiert. Als Aminoalkanphosphonate kommen vorzugsweise Ethylendiamintetramethylenphosphonat (EDTMP), Diethylentriamin- pentamethylenphosphonat (DTPMP) sowie deren höhere Homologe in Frage. Sie werden vorzugsweise in Form der neutral reagierenden Natriumsalze, z.B. als Hexanatriumsalz der EDTMP beziehungsweise als Hepta- und Octa-Natriumsalz der DTPMP, eingesetzt. Als Builder wird dabei aus der Klasse der Phosphonate bevorzugt HEDP verwendet. Die Aminoalkanphosphonate besitzen zudem ein ausgeprägtes Schwermetallbindevermögen. Dementsprechend kann es, insbesondere wenn die Mittel auch Bleiche enthalten, bevorzugt sein, Aminoalkanphosphonate, insbesondere DTPMP, einzusetzen, oder Mischungen aus den genannten Phosphonaten zu verwenden. Darüberhinaus können alle Verbindungen, die in der Lage sind, Komplexe mit Erdalkaliionen auszubilden, als Cobuilder eingesetzt werden.
Buildersubstanzen können in den erfindungsgemäßen Wasch- oder Reinigungsmitteln gegebenenfalls in Mengen bis zu 90 Gew.-% enthalten sein. Sie sind vorzugsweise in Mengen bis zu 75 Gew.-% enthalten. Erfindungsgemäße Waschmittel weisen Buildergehalte von insbesondere 5 Gew.-% bis 50 Gew.-% auf. In erfindungsgemäßen Mitteln für die Reinigung harter Oberflächen, insbesondere zur maschinellen Reinigung von Geschirr, beträgt der Gehalt an Buildersubstanzen insbesondere 5 Gew.-% bis 88 Gew.-%, wobei in derartigen Mitteln vorzugsweise keine wasserunlöslichen Buildermaterialien eingesetzt werden. In einer bevorzugten Ausführungsform erfindungsgemäßer Mittel zur insbesondere maschinellen Reinigung von Geschirr sind 20 Gew.-% bis 40 Gew.-% wasserlöslicher organischer Builder, insbesondere Alkalicitrat, 5 Gew.-% bis 15 Gew.-% Alkalicarbonat und 20 Gew.-% bis 40 Gew.-% Alkalidisilikat enthalten.
Lösungsmittel, die in den flüssigen bis gelförmigen Zusammensetzungen von Wasch- und Reinigungsmitteln eingesetzt werden können, stammen beispielsweise aus der Gruppe ein- oder mehrwertigen Alkohole, Alkanolamine oder Glycolether, sofern sie im angegebenen Konzentrationsbereich mit Wasser mischbar sind. Vorzugsweise werden die Lösungsmittel ausgewählt aus Ethanol, n- oder i-Propanol, Butanolen, Ethylenglykolmethylether, Ethylenglykolethylether, Ethylenglykolpropylether,
Ethylenglykolmono-n-butylether, Diethylenglykol-methylether, Diethylenglykolethylether, Propylenglykolmethyl-, -ethyl- oder -propyl-ether, Dipropylenglykolmonomethyl-, oder -ethylether, Di-isopropylenglykolmonomethyl-, oder -ethylether, Methoxy-, Ethoxy- oder Butoxytriglykol, 1-Butoxyethoxy-2-propanol, 3-Methyl-3-methoxybutanol, Propylen- g!ykol-t-butylether sowie Mischungen dieser Lösungsmittel.
Lösungsmittel können in den erfindungsgemäßen flüssigen bis gelförmigen Wasch- und Reinigungsmitteln in Mengen zwischen 0,1 und 20 Gew.-%, bevorzugt aber unter 15 Gew.-% und insbesondere unterhalb von 10 Gew.-% eingesetzt werden.
Zur Einstellung der Viskosität können der erfindungsgemäßen Zusammensetzung ein oder mehrere Verdicker, beziehungsweise Verdickungssysteme zugesetzt werden. Diese hochmolekularen Stoffe, die auch Quell(ungs)mittel genannt werden, saugen meist die Flüssigkeiten auf und quellen dabei auf, um schließlich in zähflüssige echte oder kolloide Lösungen überzugehen.
Geeignete Verdicker sind anorganische oder polymere organische Verbindungen. Zu den anorganischen Verdickem zählen beispielsweise Polykieselsäuren, Tonmineralien wie Montmorillonite, Zeolithe, Kieselsäuern und Bentonite. Die organischen Verdicker stammen aus den Gruppen der natürlichen Polymere, der abgewandelten natürlichen Polymere und der vollsynthetischen Polymere. Solche aus der Natur stammenden Polymere sind beispielsweise Agar-Agar, Carrageen, Tragant, Gummi arabicum, Alginate, Pektine, Polyosen, Guar-Mehl, Johannisbrotbaumkernmehl, Stärke, Dextrine, Gelatine und Casein. Abgewandelte Naturstoffe, die als Verdicker verwendet werden, stammen vor allem aus der Gruppe der modifizierten Stärken und Cellulosen. Beispielhaft seien hier Carboxymethylcellulose und andere Celluloseether, Hydroxyethyl- und -propylcellulose sowie Kernmehlether genannt. Vollsynthetische Verdicker sind Polymere wie Polyacryl- und Polymethacryl-Verbindungen, Vinylpolymere, Polycarbonsäuren, Polyether, Polyimine, Polyamide und Polyurethane.
Die Verdicker können in einer Menge bis zu 5 Gew.-%, vorzugsweise von 0,05 bis 2 Gew.-%, und besonders bevorzugt von 0,1 bis 1 ,5 Gew.-%, bezogen auf die fertige Zusammensetzung, enthalten sein.
Erfindungsgemäße Textilwaschmittel können als optische Aufheller Derivate der Diaminostilbendisulfonsäure beziehungsweise deren Alkalimetallsalze enthalten. Geeignet sind zum Beispiel Salze der 4,4'-Bis(2-anilino-4-morpholino-1 ,3,5-triazinyl-6- amino)stilben-2,2'-disulfonsäure oder gleichartig aufgebaute Verbindungen, die anstelle der Morpholino-Gruppe eine Diethanolaminogruppe, eine Methylaminogruppe, eine Anilinogruppe oder eine 2-Methoxyethylaminogruppe tragen. Weiterhin können Aufheller vom Typ der substituierten Diphenylstyryle anwesend sein, zum Beispiel die Alkalisalze des 4,4'-Bis(2-sulfostyryl)-diphenyls, 4,4'-Bis(4-chlor-3-sulfostyryl)-diphenyls, oder 4-(4-Chlorstyryl)-4'-(2-sulfostyryl)-diphenyls. Auch Gemische der vorgenannten optischen Aufheller können verwendet werden.
Vergrauungsinhibitoren haben die Aufgabe, den von der Textilfaser abgelösten Schmutz in der Flotte suspendiert zu halten. Hierzu sind wasserlösliche Kolloide meist organischer Natur geeignet, beispielsweise Stärke, Leim, Gelatine, Salze von Ethercarbonsäuren oder Ethersulfonsäuren der Stärke oder der Cellulose oder Salze von sauren Schwefelsäureestern der Cellulose oder der Stärke. Auch wasserlösliche, saure Gruppen enthaltende Polyamide sind für diesen Zweck geeignet. Weiterhin lassen sich andere als die obengenannten Stärkederivate verwenden, zum Beispiel Aldehydstärken. Bevorzugt werden Celluloseether, wie Carboxymethylcellulose (Na- SaIz), Methylcellulose, Hydroxyalkylcellulose und Mischether, wie Methylhydroxyethylcellulose, Methylhydroxypropylcellulose, Methylcarboxymethylcellu- lose und deren Gemische, beispielsweise in Mengen von 0,1 bis 5 Gew.-%, bezogen auf die Mittel, eingesetzt.
Um einen Silberkorrosionsschutz zu bewirken, können in erfindungsgemäßen Reinigungsmitteln für Geschirr Silberkorrosionsinhibitoren eingesetzt werden. Solche sind aus dem Stand der Technik bekannt, beispielsweise Benzotriazole, Eisen(lll)- chlorid oder CoSO4. Wie beispielsweise aus der europäischen Patentschrift EP 0 736 084 B1 bekannt ist, sind für die gemeinsame Verwendung mit Enzymen besonders geeignete Silberkorrosionsinhibitoren Mangan-, Titan-, Zirkonium-, Hafnium-, Vanadium-, Cobalt- oder Cersalze und/oder -komplexe, in denen die genannten Metalle in einer der Oxidationsstufen II, III, IV, V oder VI vorliegen. Beispiele für derartige Verbindungen sind MnSO4, V2O5, V2O4, VO2, TiOSO4, K2TiF6, K2ZrF6, Co(NO3)2, Co(NO3)3, sowie deren Gemische.
"Soil-Release"-Wirkstoffe oder "Soil-Repellents" sind zumeist Polymere, die bei der Verwendung in einem Waschmittel der Wäschefaser schmutzabstoßende Eigenschaften verleihen und/oder das Schmutzablösevermögen der übrigen Waschmittelbestandteile unterstützen. Ein vergleichbarer Effekt kann auch bei deren Einsatz in Reinigungsmitteln für harte Oberflächen beobachtet werden.
Besonders wirksame und seit langer Zeit bekannte Soil-Release-Wirkstoffe sind Copolyester mit Dicarbonsäure-, Alkylenglykol- und Polyalkylenglykoleinheiten. Beispiele dafür sind Copolymere oder Mischpolymere aus Polyethylenterephthalat und Polyoxyethylenglykol (DT 16 17 141 , beziehungsweise DT 22 OO 911). In der deutschen Offenlegungsschrift DT 22 53 063 sind saure Mittel genannt, die unter anderem ein Copolymer aus einer dibasigen Carbonsäure und einem Alkylen- oder Cycloalkylenpolyglykol enthalten. Polymere aus Ethylenterephthalat und Polyethylenoxid-terephthalat und deren Einsatz in Waschmitteln sind in den deutschen Schriften DE 28 57 292 und DE 33 24 258 und der Europäischen Patentschrift EP 0 253 567 beschrieben. Das europäische Patent EP 066 944 betrifft Mittel, die einen Copolyester aus Ethylenglykol, Polyethylenglykol, aromatischer Dicarbonsäure und sulfonierter aromatischer Dicarbonsäure in bestimmten Molverhältnissen enthalten. Aus dem europäischen Patent EP 0 185 427 sind Methyl- oder Ethylgruppen- endverschlossene Polyester mit Ethylen- und/oder Propylen-terephthalat- und Polyethylenoxid-terephthalat-Einheiten und Waschmitel, die derartiges Soil-release- Polymer enthalten, bekannt. Das europäische Patent EP 0 241 984 betrifft einen Polyester, der neben Oxyethylen-Gruppen und Terephthalsäureeinheiten auch substituierte Ethyleneinheiten sowie Glycerineinheiten enthält. Aus dem europäischen Patent EP 0 241 985 sind Polyester bekannt, die neben Oxyethylen-Gruppen und Terephthalsäureeinheiten 1 ,2-Propylen-, 1 ,2-Butylen- und/oder 3-Methoxy-1 ,2- propylengruppen sowie Glycerineinheiten enthalten und mit C-i- bis C4-Alkylgruppen endgruppenverschlossen sind. Aus der europäischen Patentanmeldung EP 0 272 033 sind zumindest anteilig durch Ci-4-Alkyl- oder Acylreste endgruppenverschlossene Polyester mit Poly-propylenterephthalat- und Polyoxyethylenterephthalat-Einheiten bekannt. Das europäische Patent EP 0 274 907 beschreibt sulfoethyl- endgruppenverschlossene terephthalathaltige Soil-release-Polyester. Gemäß der europäischen Patentanmeldung EP 0 357 280 werden durch Sulfonierung ungesättigter Endgruppen Soil-Release-Polyester mit Terephthalat-, Alkylenglykol- und PoIy-C2-4- Glykol-Einheiten hergestellt. Die internationale Patentanmeldung WO 95/32232 betrifft saure, aromatische schmutzablösevermögende Polyester. Aus der internationalen Patentanmeldung WO 97/31085 sind nicht polymere soil-repellent-Wirkstoffe für Materialien aus Baumwolle mit mehreren funktionellen Einheiten bekannt: Eine erste Einheit, die beispielsweise kationisch sein kann, ist zur Adsorption auf die Baumwolloberfläche durch elektrostatische Wechselwirkung befähigt, und eine zweite Einheit, die hydrophob ausgebildet ist, ist verantwortlich für das Verbleiben des Wirkstoffs an der Wasser/ Baumwolle-Grenzfläche.
Zu den für den Einsatz in erfindungsgemäßen Textilwaschmitteln in Frage kommenden Farbübertragungsinhibitoren gehören insbesondere Polyvinylpyrrolidone, Polyvinyl- imidazole, polymere N-Oxide wie Poly-(vinylpyridin-N-oxid) und Copolymere von Vinyl- pyrrolidon mit Vinylimidazol.
Beim Einsatz in maschinellen Reinigungsverfahren kann es von Vorteil sein, den betreffenden Mitteln Schauminhibitoren zuzusetzen. Als Schauminhibitoren eignen sich beispielsweise Seifen natürlicher oder synthetischer Herkunft, die einen hohen Anteil an Ci8-C24-Fettsäuren aufweisen. Geeignete nichttensidartige Schauminhibitoren sind beispielsweise Organopolysiloxane und deren Gemische mit mikrofeiner, gegebenenfalls signierter Kieselsäure sowie Paraffine, Wachse, Mikrokristallinwachse und deren Gemische mit signierter Kieselsäure oder Bistearylethylendiamid. Mit Vorteilen werden auch Gemische aus verschiedenen Schauminhibitoren verwendet, zum Beispiel solche aus Silikonen, Paraffinen oder Wachsen. Vorzugsweise sind die Schauminhibitoren, insbesondere Silikon- und/oder Paraffin-haltige Schauminhibitoren, an eine granuläre, in Wasser lösliche, beziehungsweise dispergierbare Trägersubstanz gebunden. Insbesondere sind dabei Mischungen aus Paraffinen und Bistearylethylen- diamiden bevorzugt.
Ein erfindungsgemäßes Reinigungsmittel für harte Oberflächen kann darüber hinaus abrasiv wirkende Bestandteile, insbesondere aus der Gruppe umfassend Quarzmehle, Holzmehle, Kunststoffmehle, Kreiden und Mikroglaskugeln sowie deren Gemische, enthalten. Abrasivstoffe sind in den erfindungsgemäßen Reinigungsmitteln vorzugs¬ weise nicht über 20 Gew.-%, insbesondere von 5 Gew.-% bis 15 Gew.-%, enthalten.
Färb- und Duftstoffe werden Wasch- und Reinigungsmitteln zugesetzt, um den ästhetischen Eindruck der Produkte zu verbessern und dem Verbraucher neben der Wasch- und Reinigungsleistung ein visuell und sensorisch "typisches und unverwechselbares" Produkt zur Verfügung zu stellen. Als Parfümöle beziehungsweise Duftstoffe können einzelne Riechstoffverbindungen, zum Beispiel die synthetischen Produkte vom Typ der Ester, Ether, Aldehyde, Ketone, Alkohole und Kohlenwasserstoffe verwendet werden. Riechstoffverbindungen vom Typ der Ester sind zum Beispiel Benzylacetat, Phenoxyethylisobutyrat, p-tert.-Butylcyclohexylacetat, Linalylacetat, Dimethylbenzyl-carbinylacetat, Phenylethylacetat, Linalylbenzoat, Benzylformiat, Ethylmethylphenyl-glycinat, Allylcyclohexylpropionat, Styrallylpropionat und Benzylsalicylat. Zu den Ethern zählen beispielsweise Benzylethylether, zu den Aldehyden zum Beispiel die linearen Alkanale mit 8-18 C-Atomen, Citral, Citronellal, Citronellyloxyacetaldehyd, Cyclamenaldehyd, Hydroxycitronellal, Lilial und Bourgeonal, zu den Ketonen zum Beispiel die Jonone, α-lsomethylionon und Methyl-cedrylketon, zu den Alkoholen Anethol, Citronellol, Eugenol, Geraniol, Linalool, Phenylethylalkohol und Terpineol, zu den Kohlenwasserstoffen gehören hauptsächlich die Terpene wie Limonen und Pinen. Bevorzugt werden jedoch Mischungen verschiedener Riechstoffe verwendet, die gemeinsam eine ansprechende Duftnote erzeugen. Solche Parfümöle können auch natürliche Riechstoffgemische enthalten, wie sie aus pflanzlichen Quellen zugänglich sind, zum Beispiel Pine-, Citrus-, Jasmin-, Patchouly-, Rosen- oder Ylang- Ylang-Öl. Ebenfalls geeignet sind Muskateller, Salbeiöl, Kamillenöl, Nelkenöl, Melissenöl, Minzöl, Zimtblätteröl, Lindenblütenöl, Wacholderbeeröl, Vetiveröl, Olibanumöl, Galbanumöl und Labdanumöl sowie Orangenblütenöl, Neroliol, Orangenschalenöl und Sandelholzöl. Üblicherweise liegt der Gehalt von Wasch- und Reinigungsmitteln an Farbstoffen unter 0,01 Gew.-%, während Duftstoffe bis zu 2 Gew.- % der gesamten Formulierung ausmachen können.
Die Duftstoffe können direkt in die Wasch- oder Reinigungsmittel eingearbeitet werden, es kann aber auch vorteilhaft sein, die Duftstoffe auf Träger aufzubringen, die die Haftung des Parfüms auf dem Reinigungsgut verstärken und durch eine langsamere Duftfreisetzung für langanhaltenden Duft, insbesondere von behandelten Textilien sorgen. Als solche Trägermaterialien haben sich beispielsweise Cyclodextrine bewährt, wobei die Cyclodextrin-Parfüm-Komplexe zusätzlich noch mit weiteren Hilfsstoffen beschichtet werden können. Ein weiter bevorzugter Träger für Duftstoffe ist der beschriebene Zeolith X, der anstelle von oder in Mischung mit Tensiden auch Duftstoffe aufnehmen kann. Bevorzugt sind daher Wasch- und Reinigungsmittel, die den beschriebenen Zeolith X und Duftstoffe, die vorzugsweise zumindest teilweise an dem Zeolithen absorbiert sind, enthalten.
Bevorzugte Farbstoffe, deren Auswahl dem Fachmann keinerlei Schwierigkeit bereitet, besitzen eine hohe Lagerstabilität und Unempfindlichkeit gegenüber den übrigen Inhaltsstoffen der Mittel und gegen Licht sowie keine ausgeprägte Substantivität gegenüber Textilfasern, um diese nicht anzufärben. Zur Bekämpfung von Mikroorganismen können Wasch- oder Reinigungsmittel antimikrobielle Wirkstoffe enthalten. Hierbei unterscheidet man je nach antimikrobiellem Spektrum und Wirkungsmechanismus zwischen Bakteriostatika und Bakteriziden, Fungistatika und Fungiziden usw. Wichtige Stoffe aus diesen Gruppen sind beispielsweise Benzalkoniumchloride, Alkylarylsulfonate, Halogenphenole und Phenolmercuriacetat. Die Begriffe antimikrobielle Wirkung und antimikrobieller Wirkstoff haben im Rahmen der erfindungsgemäßen Lehre die fachübliche Bedeutung, die beispielsweise von K. H. Wallhäußer in "Praxis der Sterilisation, Desinfektion - Konservierung : Keimidentifizierung - Betriebshygiene" (5. Aufl. - Stuttgart; New York : Thieme, 1995) wiedergegeben wird, wobei alle dort beschriebenen Substanzen mit antimikrobieller Wirkung eingesetzt werden können. Geeignete antimikrobielle Wirkstoffe sind vorzugsweise ausgewählt aus den Gruppen der Alkohole, Amine, Aldehyde, antimikrobiellen Säuren beziehungsweise deren Salze, Carbonsäureester, Säureamide, Phenole, Phenolderivate, Diphenyle, Diphenylalkane, Harnstoffderivate, Sauerstoff-, Stickstoff-acetale sowie -formale, Benzamidine, Isothiazoline, Phthalimidderivate, Pyridinderivate, antimikrobiellen oberflächenaktiven Verbindungen, Guanidine, antimikrobiellen amphoteren Verbindungen, Chinoline, 1 ,2-Dibrom-2,4- dicyanobutan, lodo-2-propyl-butyl-carbamat, lod, lodophore, Peroxoverbindungen, Halogenverbindungen sowie beliebigen Gemischen der voranstehenden.
Der antimikrobielle Wirkstoff kann dabei ausgewählt sein aus Ethanol, n-Propanol, i- Propanol, 1,3-Butandiol, Phenoxyethanol, 1 ,2-Propylenglykol, Glycerin, Undecylensäure, Benzoesäure, Salicylsäure, Dihydracetsäure, o-Phenylphenol, N- Methylmorpholin-acetonitril (MMA), 2-Benzyl-4-chlorphenol, 2,2'-Methylen-bis-(6-brom- 4-chlorphenol), 4,4'-Dichlor-2'-hydroxydiphenylether (Dichlosan), 2,4,4'-Trichlor-2'- hydroxydiphenylether (Trichlosan), Chlorhexidin, N-(4-Chlorphenyl)-N-(3,4- dichlorphenyl)-hamstoff, N,N'-(1 ,10-decan-diyldi-1-pyridinyl-4-yliden)-bis-(1-octanamin)- dihydrochlorid, N,N'-Bis-(4-chlorphenyl)-3,12-diimino-2,4,11 , 13-tetraaza-tetradecan- diimidamid, Glucoprotaminen, antimikrobiellen oberflächenaktiven quatemären Verbindungen, Guanidinen einschl. den Bi- und Polyguanidinen, wie beispielsweise 1 ,6- Bis-(2-ethylhexyl-biguanido-hexan)~dihydrochIorid, 1 ,6-Di-(Ni ,Ni '-phenyldiguanido- N5,N5')-hexan-tetrahydochlorid, 1, 6-Di-(Ni, Ni'-phenyl-Ni.Ni-methyldiguanido-Nδ.Ns')- hexan-dihydrochlorid, 1 , 6-Di-(Ni, Ni'-o-chlorophenyldiguanido- N5,N5')-hexan- dihydrochlorid, 1 , 6-Di-(Ni, Ni'-2,6-dichlorophenyldiguanido-N5,N5')hexan-dihydrochlorid, 1 , 6-Di-[N1, Ni'-beta-(p-methoxyphenyl) diguanido-N5,N5']-hexane-clihyclrochlorid, 1 ,6-Di- (N^Ni'-alpha-methyl-.beta.-phenyldiguanido-Ns.Ns'J-hexan-dihydrochlorid, 1 ,6-Di-
(N-i,Ni'-p-nitrophenyldiguanido-N5,N5')hexan-dihydrochlorid, omega:omega-Di-( Ni,Ni'- phenyldiguanido-N5,N5')-di-n-propylether-dihydrochlorid, omega:omega'-Di-(Ni,Ni'-p- chlorophenyldiguanido-N5,N5 ;-di-n-propylether-tetrahydrochlorid, 1 , 6-Di-(Ni, Ni'-2,4- dichlorophenyldiguanido-N5,N5')hexan-tetrahydrochlorid, 1 , 6-Di-(Ni, N-i'-p- methylphenyldiguanido- N5,N5')hexan-dihydrochlorid, 1 ,6-Di-(Ni, Ni'-2,4, 5- trichlorophenyldiguanido-N5,N5')hexan-tetrahydrochlorid, 1 ,6-Di-[Ni, Ni'-alpha-(p- chlorophenyl) ethyldiguanido-N5,N5'] hexan-dihydrochlorid, omega:omega-Di-(Ni,Ni'-p- chlorophenyldiguanido-N5,N5')m-xylene-dihydrochlorid, 1 ,12-Di-(Ni, Ni'-p- chlorophenyldiguanido-N5,N5') dodecan-dihydrochlorid, 1 , 10-Di-(Ni, NV- phenyldiguanido- N5,N5')-decan~tetrahydrochlorid, 1 ,12-Di-(Ni, Ni'-phenyldiguanido- N51N5') dodecan-tetrahydrochlorid, 1 , 6-Di-(Ni, Ni'-o-chlorophenyldiguanido- N51N5') hexan-dihydrochlorid, 1 , 6-Di-(Ni, Ni'-o-chlorophenyldiguanido- N5, N5') hexan- tetrahydrochlorid, Ethylen-bis-(1 -tolyl biguanid), Ethylen-bis-(p-tolyl biguanide), Ethylen- bis-(3,5-dimethylphenylbiguanid), Ethylen-bis-(p-tert-amylphenylbiguanid), Ethylen-bis- (nonylphenylbiguanid), Ethylen-bis-(phenylbiguanid), Ethylen-bis-(N- butylphenylbiguanid), Ethylen-bis (2,5-diethoxyphenylbiguanid), Ethylen-bis (2,4- dimethylphenyl biguanid), Ethylen-bis (o-diphenylbiguanid), Ethylen-bis (mixed amyl naphthylbiguanid), N-Butyl-ethylen-bis-(phenylbiguanid), Trimethylen bis (o- tolylbiguanid), N-Butyl-trimethyle- bis-(phenyl biguanide) und die entsprechenden Salze wie Acetate, Gluconate, Hydrochloride, Hydrobromide, Citrate, Bisulfite, Fluoride, Polymaleate, N-Cocosalkylsarcosinate, Phosphite, Hypophosphite, Perfluorooctanoate, Silicate, Sorbate, Salicylate, Maleate, Tartrate, Fumarate, Ethylendiamintetraacetate, Iminodiacetate, Cinnamate, Thiocyanate, Arginate, Pyromellitate, Tetracarboxybutyrate, Benzoate, Glutarate, Monofluorphosphate, Perfluorpropionate sowie beliebige Mischungen davon. Weiterhin eignen sich halogenierte XyIoI- und Kresolderivate, wie p- Chlormetakresol oder p-Chlor-meta-xylol, sowie natürliche antimikrobielle Wirkstoffe pflanzlicher Herkunft (zum Beispiel aus Gewürzen oder Kräutern), tierischer sowie mikrobieller Herkunft. Vorzugsweise können antimikrobiell wirkende oberflächenaktive quatemäre Verbindungen, ein natürlicher antimikrobieller Wirkstoff pflanzlicher Herkunft und/oder ein natürlicher antimikrobieller Wirkstoff tierischer Herkunft, äußerst bevorzugt mindestens ein natürlicher antimikrobieller Wirkstoff pflanzlicher Herkunft aus der Gruppe, umfassend Coffein, Theobromin und Theophyllin sowie etherische Öle wie Eugenol, Thymol und Geraniol, und/oder mindestens ein natürlicher antimikrobieller Wirkstoff tierischer Herkunft aus der Gruppe, umfassend Enzyme wie Eiweiß aus Milch, Lysozym und Lactoperoxidase, und/oder mindestens eine antimikrobiell wirkende oberflächenaktive quatemäre Verbindung mit einer Ammonium-, Sulfonium-, Phosphonium-, lodonium- oder Arsoniumgruppe, Peroxoverbindungen und Chlorver¬ bindungen eingesetzt werden. Auch Stoffe mikrobieller Herkunft, sogenannte Bakteriozine, können eingesetzt werden.
Die als antimikrobielle Wirkstoffe geeigneten quaternären Ammoniumverbindungen (QAV) weisen die allgemeine Formel (R1)(R2)(R3)(R4) N+ X" auf, in der R1 bis R4 gleiche oder verschiedene C-t-C22-Alkylreste, C7-C28-Aralkylreste oder heterozyklische Reste, wobei zwei oder im Falle einer aromatischen Einbindung wie im Pyridin sogar drei Reste gemeinsam mit dem Stickstoffatom den Heterozyklus, zum Beispiel eine Pyridinium- oder Imidazoliniumverbindung, bilden, darstellen und X" Halogenidionen, Sulfationen, Hydroxidionen oder ähnliche Anionen sind. Für eine optimale antimikrobielle Wirkung weist vorzugsweise wenigstens einer der Reste eine Kettenlänge von 8 bis 18, insbesondere12 bis 16, C-Atomen auf.
QAV sind durch Umsetzung tertiärer Amine mit Alkylierungsmitteln, wie zum Beispiel Methylchlorid, Benzylchlorid, Dimethylsulfat, Dodecylbromid, aber auch Ethylenoxid herstellbar. Die Alkylierung von tertiären Aminen mit einem langen Alkyl-Rest und zwei Methyl-Gruppen gelingt besonders leicht, auch die Quaternierung von tertiären Aminen mit zwei langen Resten und einer Methyl-Gruppe kann mit Hilfe von Methylchlorid unter milden Bedingungen durchgeführt werden. Amine, die über drei lange Alkyl-Reste oder Hydroxy-substituierte Alkyl-Reste verfügen, sind wenig reaktiv und werden bevorzugt mit Dimethylsulfat quatemiert.
Geeignete QAV sind beispielweise Benzalkoniumchlorid (N-Alkyl-N,N-dimethyl-benzyl- ammoniumchlorid, CAS No. 8001-54-5), Benzalkon B (m,p-Dichlorbenzyl-dimethyl-C12- alkylammoniumchlorid, CAS No. 58390-78-6), Benzoxoniumchlorid (Benzyl-dodecyl-bis- (2-hydroxyethyl)-ammonium-chlorid), Cetrimoniumbromid (N-Hexadecyl-N,N-trimethyl- ammoniumbromid, CAS No. 57-09-0), Benzetoniumchlorid (N,N-Dimethyl-N-[2-[2-[p- (1 ,1 ,3,3-tetramethylbutyl)-pheno-xy]ethoxy]ethyl]-benzylammoniumchlorid, CAS No. 121-54-0), Dialkyldimethylammonium-chloride wie Di-A7-decyl-dimethyl- ammoniumchlorid (CAS No. 7173-51-5-5), Didecyldi-methylammoniumbromid (CAS No. 2390-68-3), Dioctyl-dimethyl-ammoniumchloric, 1-Cetylpyridiniumchlorid (CAS No. 123- 03-5) und Thiazoliniodid (CAS No. 15764-48-1) sowie deren Mischungen. Besonders bevorzugte QAV sind die Benzalkoniumchloride mit C8-Ci8-Alkylresten, insbesondere Cia-C^-Aklyl-benzyl-dimethyl-ammoniumchlorid.
Benzalkoniumhalogenide und/oder substituierte Benzalkoniumhalogenide sind beispielsweise kommerziell erhältlich als Barquat® ex Lonza, Marquat® ex Mason, Variquat® ex Witco/ Sherex und Hyamine® ex Lonza, sowie Bardac® ex Lonza. Weitere kommerziell erhältliche antimikrobielle Wirkstoffe sind N-(3-Chlorallyl)- hexaminiumchlorid wie Dowicide® und Dowicil® ex Dow, Benzethoniumchlorid wie Hyamine® 1622 ex Rohm & Haas, Methylbenzethoniumchlorid wie Hyamine® 1OX ex Rohm & Haas, Cetylpyridiniumchlorid wie Cepacolchlorid ex Merrell Labs.
Die antimikrobiellen Wirkstoffe werden in Mengen von 0,0001 Gew.-% bis 1 Gew.-%, bevorzugt von 0,001 Gew.-% bis 0,8 Gew.-%, besonders bevorzugt von 0,005 Gew.-% bis 0,3 Gew.-% und insbesondere von 0,01 bis 0,2 Gew.-% eingesetzt.
Die erfindungsgemäßen Wasch- oder Reinigungsmittel können UV-Absorbenzien (UV- Absorber) enthalten, die auf die behandelten Textilien aufziehen und die Lichtbeständigkeit der Fasern und/oder die Lichtbeständigkeit sonstiger Rezepturbestandteile verbessern. Unter UV-Absorber sind organische Substanzen (Lichtschutzfilter) zu verstehen, die in der Lage sind, ultraviolette Strahlen zu absorbieren und die aufgenommene Energie in Form längerwelliger Strahlung, zum Beispiel Wärme wieder abzugeben.
Verbindungen, die diese gewünschten Eigenschaften aufweisen, sind beispielsweise die durch strahlungslose Desaktivierung wirksamen Verbindungen und Derivate des Benzophenons mit Substituenten in 2- und/oder 4-Stellung. Weiterhin sind auch substituierte Benzotriazole, in 3-Stellung Phenylsubstituierte Acrylate (Zimtsäurederivate, gegebenenfalls mit Cyanogruppen in 2-Stellung), Salicylate, organische Ni-Komplexe sowie Naturstoffe wie Umbeiliferon und die körpereigene Urocansäure geeignet. Besondere Bedeutung haben Biphenyl- und vor allem Stilbenderivate wie sie beispielsweise in der EP 0728749 A beschrieben werden und kommerziell als Tinosorb® FD oder Tinosorb® FR ex Ciba erhältlich sind. Als UV-B- Absorber sind zu nennen: 3-Benzylidencampher beziehungsweise 3- Benzylidennorcampher und dessen Derivate, zum Beispiel 3-(4-Methylbenzy- liden)campher, wie in der EP 0693471 B1 beschrieben; 4-Aminobenzoesäurederivate, vorzugsweise 4-(Dimethylamino)benzoesäure-2-ethylhexylester, A-
(Dimethylamino)benzoesäure-2-octylester und A-
(Dimethylamino)benzoesäureamylester; Ester der Zimtsäure, vorzugsweise A- Methoxyzimtsäure-2-ethylhexylester, 4-Methoxyzimtsäurepropylester, 4-Methoxyzimt- säureisoamylester, 2-Cyano-3,3-phenylzimtsäure-2-ethylhexyIester (Octocrylene); Ester der Salicylsäure, vorzugsweise Salicylsäure-2-ethylhexylester, Salicylsäure-4- isopropylbenzylester, Salicylsäurehomomenthylester; Derivate des Benzophenons, vorzugsweise 2-Hydroxy-4-methoxybenzophenon, 2-Hydroxy-4-methoxy-4'- methylbenzophenon, 2,2'-Dihydroxy-4-methoxybenzophenon; Ester der Benzalmalonsäure, vorzugsweise 4-Methoxybenzmalonsäuredi-2-ethylhexylester; Triazinderivate, wie zum Beispiel 2,4,6-Trianilino-(p-carbo-2'-ethyl-1 '-hexyloxy)-1 ,3,5- triazin und Octyl Triazon, wie in der EP 0818450 A1 beschrieben oder Dioctyl Butamido Triazone (Uvasorb® HEB); Propan-1 ,3-dione, wie zum Beispiel 1-(4-tert.Butylphenyl)-3- (4'methoxyphenyl)propan-1 ,3-dion; Ketotricyclo(5.2.1.0)decan-Derivate, wie in der EP 0694521 B1 beschrieben. Weiterhin geeignet sind 2-Phenylbenzimidazol-5-sulfonsäure und deren Alkali-, Erdalkali-, Ammonium-, Alkylammonium-, Alkanolammonium- und Glucammoniumsalze; Sulfonsäurederivate von Benzophenonen, vorzugsweise 2- Hydroxy-4-methoxybenzophenon-5-sulfonsäure und ihre Salze; Sulfonsäurederivate des 3-Benzylidencamphers, wie zum Beispiel 4-(2-Oxo-3-bornylidenmethyl)benzol- sulfonsäure und 2-Methyl-5-(2-oxo-3-bornyliden)sulfonsäure und deren Salze.
Als typische UV-A-Filter kommen insbesondere Derivate des Benzoylmethans in Frage, wie beispielsweise 1-(4'-tert.Butylphenyl)-3-(4'-methoxyphenyl)propan-1 ,3-dion, 4-tert- Butyl-4'-methoxydibenzoylmethan (Parsol 1789), 1-Phenyl-3-(4'-isopropylphenyl)- propan-1 ,3-dion sowie Enaminverbindungen, wie beschrieben in der DE 19712033 A1 (BASF). Die UV-A und UV-B-Filter können selbstverständlich auch in Mischungen eingesetzt werden. Neben den genannten löslichen Stoffen kommen für diesen Zweck auch unlösliche Lichtschutzpigmente, nämlich feindisperse, vorzugsweise nanoisierte Metalloxide beziehungsweise Salze in Frage. Beispiele für geeignete Metalloxide sind insbesondere Zinkoxid und Titandioxid und daneben Oxide des Eisens, Zirkoniums, Siliciums, Mangans, Aluminiums und Cers sowie deren Gemische. Als Salze können Silicate (Talk), Bariumsulfat oder Zinkstearat eingesetzt werden. Die Oxide und Salze werden in Form der Pigmente bereits für hautpflegende und hautschützende Emulsionen und dekorative Kosmetik verwendet. Die Partikel sollten dabei einen mittleren Durchmesser von weniger als 100 nm, vorzugsweise zwischen 5 und 50 nm und insbesondere zwischen 15 und 30 nm aufweisen. Sie können eine sphärische Form aufweisen, es können jedoch auch solche Partikel zum Einsatz kommen, die eine ellipsoide oder in sonstiger Weise von der sphärischen Gestalt abweichende Form besitzen. Die Pigmente können auch oberflächenbehandelt, das heißt hydrophilisiert oder hydrophobiert vorliegen. Typische Beispiele sind ummantelte Titandioxide, wie zum Beispiel Titandioxid T 805 (Degussa) oder Eusolex® T2000 (Merck; als hydrophobe Coatingmittel kommen dafür bevorzugt Silicone und besonders bevorzugt Trialkoxyoctylsilane oder Simethicone in Frage. Vorzugsweise wird mikronisiertes Zinkoxid verwendet. Weitere geeignete UV-Lichtschutzfilter sind der Übersicht von P. Finkel in SÖFW-Journal 122 (1996), S. 543 zu entnehmen.
Die UV-Absorbenzien werden üblicherweise in Mengen von 0,01 Gew.-% bis 5 Gew.-%, vorzugsweise von 0,03 Gew.-% bis 1 Gew.-%, eingesetzt.
Ein erfindungsgemäßes Polypeptid und/oder andere enthaltene Proteine können besonders während der Lagerung durch Stabilisatoren beispielsweise vor Denaturierung, Zerfall oder Inaktivierung, etwa durch physikalische Einflüsse, Oxidation oder proteolytische Spaltung geschützt werden. Dies gilt für alle erfindungsgemäßen Mittel, insbesondere Wasch- und Reinigungsmittel.
Eine Gruppe von Stabilisatoren sind reversible Proteaseinhibitoren. Häufig werden hierfür Benzamidin-Hydrochlorid, Borax, Borsäuren, Boronsäuren oder deren Salze oder Ester eingesetzt, darunter vor allem Derivate mit aromatischen Gruppen, etwa ortho-, meta- oder para-substituierte Phenylboronsäuren, insbesondere A- Formyiphenyl-Boronsäure, beziehungsweise die Salze oder Ester der genannten Verbindungen. Auch Peptidaldehyde, das heißt Oligopeptide mit reduziertem C- Terminus, insbesondere solche aus 2 bis 50 Monomeren werden zu diesem Zweck eingesetzt. Zu den peptidischen reversiblen Proteaseinhibitoren gehören unter anderem Ovomucoid und Leupeptin. Auch spezifische, reversible Peptid-Inhibitoren für die Protease Subtilisin sowie Fusionsproteine aus Proteasen und spezifischen Peptid- Inhibitoren sind hierfür geeignet.
Weitere Enzymstabilisatoren sind Aminoalkohole wie Mono-, Di-, Triethanol- und - Propanolamin und deren Mischungen, aliphatische Carbonsäuren bis zu C12, wie beispielsweise Bernsteinsäure, andere Dicarbonsäuren oder Salze der genannten Säuren. Auch endgruppenverschlossene Fettsäureamidalkoxylate sind für diesen Zweck geeignet. Bestimmte als Builder eingesetzte organische Säuren vermögen, wie in WO 97/18287 offenbart, zusätzlich ein enthaltenes Enzym zu stabilisieren.
Niedere aliphatische Alkohole, vor allem aber Polyole, wie beispielsweise Glycerin, Ethylenglykol, Propylenglykol oder Sorbit sind weitere häufig eingesetzte Enzymstabilisatoren. Auch Di-Glycerinphosphat schützt gegen Denaturierung durch physikalische Einflüsse. Ebenso werden Calcium- und/oder Magnesiumsalze eingesetzt, wie beispielsweise Calciumacetat oder Calcium-Formiat.
Polyamid-Oligomere oder polymere Verbindungen wie Lignin, wasserlösliche Vinyl- Copolymere oder Cellulose-Ether, Acryl-Polymere und/oder Polyamide stabilisieren die Enzym-Präparation unter anderem gegenüber physikalischen Einflüssen oder pH-Wert- Schwankungen. Polyamin-N-Oxid-enthaltende Polymere wirken gleichzeitig als Enzymstabilisatoren und als Farbübertragungsinhibitoren. Andere polymere Stabilisatoren sind lineare C8-C-Is Polyoxyalkylene. Auch Alkylpolyglycoside können die enzymatischen Komponenten des erfindungsgemäßen Mittels stabilisieren und vermögen vorzugsweise, diese zusätzlich in ihrer Leistung zu steigern. Vernetzte N- haltige Verbindungen erfüllen vorzugsweise eine Doppelfunktion als Soil-release- Agentien und als Enzym-Stabilisatoren. Hydrophobes, nichtionisches Polymer stabilisiert insbesondere eine gegebenenfalls enthaltene Cellulase.
Reduktionsmittel und Antioxidantien erhöhen die Stabilität der Enzyme gegenüber oxidativem Zerfall; hierfür sind beispielsweise schwefelhaltige Reduktionsmittel geläufig. Andere Beispiele sind Natrium-Sulfit und reduzierende Zucker. Besonders bevorzugt werden Kombinatonen von Stabilisatoren eingesetzt, beispielsweise aus Polyolen, Borsäure und/oder Borax, die Kombination von Borsäure oder Borat, reduzierenden Salzen und Bernsteinsäure oder anderen Dicarbonsäuren oder die Kombination von Borsäure oder Borat mit Polyolen oder Polyaminoverbindungen und mit reduzierenden Salzen. Die Wirkung von Peptid- Aldehyd-Stabilisatoren wird günstigerweise durch die Kombination mit Borsäure und/oder Borsäurederivaten und Polyolen gesteigert und noch weiter durch die zusätzliche Wirkung von zweiwertigen Kationen, wie zum Beispiel Calcium-Ionen.
Mittel mit stabilisierten Enzymaktivitäten stellen bevorzugte Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung dar. Besonders bevorzugt sind solche mit Enzymen, die auf mehrere der dargestellten Weisen stabilisiert sind.
Reinigungsmittel für harte Oberflächen
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist wie bereits erwähnt in einer bevorzugten Ausführungsform ein Reinigungsmittel für harte Oberflächen, das ein erfindungsgemäßes Polypeptid und/oder eine erfindungsgemäße Enzymzubereitung enthält. Das Reinigungsmittel kann die Enzymzubereitung beispielsweise in Mengen von 0,1 bis 10,0 Gew.-%, vorzugsweise von 0,5 bis 3 Gew.-%, enthalten. Das Reinigungsmittel kann hierbei gegebenenfalls zusätzlich Biozide, insbesondere eines der zuvor genannten, enthalten, kann jedoch auch biozidfrei sein.
Bei dem Reinigungsmittel für harte Oberflächen handelt es sich vorzugsweise um ein flüssiges, gelförmiges oder pastöses wäßriges Reinigungsmittel. Das Reinigungsmittel für harte Oberflächen kann jede beliebige Auswahl der zuvor aufgeführten Komponenten enthalten. In einer bevorzugten Ausführungsform enthält das Reinigungsmittel neben dem erfindungsgemäßen Polypeptid eine oder mehrere Komponenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Tensiden, Builder, Säuren, Alkalien, Hydrotrope, Lösungsmittel, Verdickungsmittel, Abrasivstoffen sowie weitere Hilfs- und Zusatzstoffe wie Farbstoffe, Parfüms, Korrosionsinhibitoren und Hautpflegemittel. Diese Gruppen werden im folgenden beispielhaft erläutert oder wurden bereits zuvor beispielhaft erläutert. Die im folgenden aufgezählten Komponenten können außer in einem Reinigungsmittel für harte Oberflächen auch in jedem anderen erfindungsgemäßen Mittel enthalten sein. Die in einem Reinigungsmittel für harte Oberflächen gegebenenfalls eingesetzten Tenside werden vorzugsweise ausgewählt aus der Gruppe der anionischen, nichtionischen und/oder amphoteren Tenside. Bevorzugt werden dabei anionische und/oder nichtionische Tenside eingesetzt. Sofern sie eingesetzt werden, kommen anionische Tenside vorzugsweise in Mengen von 0,1 bis 15 Gew.-%, nichtionische Tenside vorzugsweise in Mengen von 0,1 bis 10 Gew.-% und amphotere Tenside vorzugsweise in Mengen von 0,1 bis 4 Gew.-% zur Anwendung, jeweils bezogen auf die Gesamtzusammensetzung. In einer weniger bevorzugten Ausführungsform können daneben auch noch amphotere Tenside in Mengen von bis zu 2 Gew.-% eingesetzt werden, bezogen auf die Gesamtzusammensetzung. Ebenso können auch kationische Tenside eingesetzt werden. In einer bevorzugten Ausführungsform ist das Reinigungsmittel aufgrund der von kationischen Tensiden ausgehenden bioziden Wirkung jedoch frei von diesen. Die Tenside sind insbesondere ausgewählt aus den Gruppen der weiter oben aufgeführten Tenside.
Zu den erfindungsgemäß insbesondere in Reinigern für harte Oberflächen einsetzbaren anionischen Tensiden zählen aliphatische Sulfate wie Fettalkoholsulfate, Fettalkoholethersulfate, Dialkylethersulfate, Monoglyceridsulfate und aliphatische Sulfonate wie Alkansulfonate, α-Olefinsulfonate, Ethersulfonate, n-Alkylethersulfonate, sulfonierte Fettsäuren, Estersulfonate und Ligninsulfonate. Ebenfalls im Rahmen der vorliegenden Erfindung verwendbar sind Alkylbenzolsulfonate, Fettsäuresalze (Seifen), Fettsäurecyanamide, Sulfosuccinate (Sulfobernsteinsäuremono- und -dialkylester), Sulfosuccinamate, Sulfosuccinamide, Carbonsäureamidethersulfate, Alkylpoly- glykolethercarboxylate, Fettsäureisethionate, Acylaminoalkansulfonate
(Fettsäuretauride, N-Acyltauride), Fettsäuresarcosinate, Ethercarbonsäuren und Alkyl(ether)phosphate sowie α-Sulfofettsäuresalze, Acylglutamate,
Monoglyceriddisulfate und Alkylether des Glycerindisulfats, und schließlich deren Mischungen.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung stehen Fettsäuren bzw. Fettalkohole bzw. deren Derivate - soweit nicht anders angegeben - stellvertretend für verzweigte oder unverzweigte Carbonsäuren bzw. Alkohole bzw. deren Derivate mit vorzugsweise 6 bis 22 Kohlenstoffatomen, insbesondere 8 bis 20 Kohlenstoffatomen, besonders bevorzugt 10 bis 18 Kohlenstoffatomen, äußerst bevorzugt 12 bis 16 Kohlenstoffatomen, beispielsweise 12 bis 14 Kohlenstoffatomen. Die Fettsäuren/-alkohole bzw. ihre Derivate mit gerader Anzahl Kohlenstoffatome sind insbesondere wegen ihrer pflanzlicher Basis als auf nachwachsenden Rohstoffen basierend aus ökologischen Gründen bevorzugt, ohne jedoch die erfindungsgemäße Lehre auf sie zu beschränken. Insbesondere sind auch die beispielsweise nach der RoELENschen Oxo-Synthese erhältlichen Oxo-Alkohole bzw. deren Derivate mit vorzugsweise 7 bis 19 Kohlenstoffatomen, insbesondere 9 bis 19 Kohlenstoffatomen, besonders bevorzugt 9 bis 17 Kohlenstoffatomen, äußerst bevorzugt 11 bis 15 Kohlenstoffatomen, beispielsweise 9 bis 11 , 12 bis 15 oder 13 bis 15 Kohlenstoffatomen, entsprechend einsetzbar.
Sie werden in Form ihrer Alkalimetall- und Erdalkalimetallsalze, insbesondere Natrium-, Kalium- und Magnesiumsalze, wie auch Ammonium- und Mono-, Di-, Tri- bzw. Tetraalkylammoniumsalze sowie im Falle der Sulfonate auch in Form ihrer korrespondierenden Säure, z.B. Dodecylbenzolsulfonsäure, eingesetzt. Die Alkylethersulfate enthalten herstellungsbedingt vor allem bei niederen Ethoxylierungsgraden immer auch Restgehalte nichtalkoxylierter Fettalkoholsulfate. Weiterhin können die erfindungsgemäßen Mittel auch Seifen, d.h. Alkali- oder Ammoniumsalze gesättigter oder ungesättigter C6-C22-Fettsäuren, enthalten.
Bevorzugt werden die anionischen Tenside ausgewählt aus der Gruppe umfassend Fettalkoholsulfate in Mengen von bis zu 5 Gew.-%, Alkylbenzolsulfonate in Mengen von bis zu 7,5 Gew.-% und Seifen in Mengen von bis zu 2 Gew.-%, jeweils bezogen auf die Gesamtzusammensetzung, sowie Gemische derselben.
Geeignete nichtionische Tenside sind beispielsweise C8-Ci8- Alkylalkoholpolyglykolether, Alkylpolyglykoside sowie stickstoffhaltige Tenside bzw. Mischungen davon, insbesondere der ersten beiden. C8-Ci8- Alkylalkoholpolypropylenglykol/polyethylenglykolether können durch die Formel
R1O-(CH2CH(CH3)O)P(CH2CH2O)6-H beschrieben werden, in der R1 für einen linearen oder verzweigten, aliphatischen Alkyl- und/oder Alkenylrest mit 8 bis 18 Kohlenstoffatomen, p für 0 oder Zahlen von 1 bis 3 und e für Zahlen von 1 bis 20 steht. Sie werden durch Anlagerung von Propylenoxid und/oder Ethylenoxid an Alkylalkohole, vorzugsweise an Fettalkohole, erhalten. Weiterhin können auch endgruppenverschlossene C8-Ci8-Alkylalkoholpolyglykolether eingesetzt werden, d.h. Alkylalkoholpolyalkylenglykolether gemäß obiger Formel, in denen die freie OH-Gruppe verethert ist.
Erfindungsgemäße Reiniger für harte Oberflächen können Alkylalkoholpolyglykolether in Mengen von 0,1 bis 4 Gew.-% enthalten, bezogen auf die Gesamtzusammensetzung.
Bevorzugte nichtionische Tenside für einen erfindungsgemäßen Reiniger für harte Oberflächen sind weiterhin Alkylpolyglykoside (APG) der Formel
R2O[G]x,
in der R2 für einen linearen oder verzweigten, gesättigten oder ungesättigten Alkylrest mit 8 bis 22 Kohlenstoffatomen, [G] für einen glykosidisch verknüpften Zuckerrest und x für eine Zahl von 1 bis 10 stehen. Die Indexzahl x gibt den Oligomerisierungsgrad (DP- Grad) an, d.h. die Verteilung von Mono- und Oligoglykosiden. Während x in einer gegebenen Verbindung stets ganzzahlig sein muß und hier vor allem die Werte x = 1 bis 6 annehmen kann, ist der Wert x für ein bestimmtes Alkylglykosid eine analytisch ermittelte rechnerische Größe, die meistens eine gebrochene Zahl darstellt. Vorzugsweise werden Alkylglykoside mit einem mittleren Oligomerisierungsgrad x von
1.1 bis 3,0 eingesetzt. Aus anwendungstechnischer Sicht sind solche Alkylglykoside bevorzugt, deren Oligomerisierungsgrad kleiner als 1 ,7 ist und insbesondere zwischen
1.2 und 1 ,6 liegt. Als glykosidischer Zucker wird vorzugsweise Xylose, insbesondere aber Glucose verwendet. Der Alkyl- bzw. Alkenylrest R2 kann sich von primären Alkoholen mit 8 bis 18, vorzugsweise 8 bis 14 Kohlenstoffatomen ableiten. Typische Beispiele sind Capronalkohol, Caprylalkohol, Caprinalkohol und Undecylalkohol sowie deren technische Gemische, wie sie beispielsweise im Verlauf der Hydrierung von technischen Fettsäuremethylestern oder im Verlauf der Hydrierung von Aldehyden aus der RoELENschen Oxosynthese anfallen. Vorzugsweise leitet sich der Alkyl- bzw. Alkenylrest R2 aber von Laurylalkohol, Myristylalkohol, Cetylalkohol, Palmoleylalkohol, Stearylalkohol, Isostearylalkohol oder Oleylalkohol ab. Weiterhin sind Elaidylalkohol, Petroselinylalkohol, Arachidylalkohol, Gadoleylalkohol, Behenylalkohol, Erucylalkohol sowie deren technische Gemische zu nennen.
Alkylpolyglykoside können in erfindungsgemäßen Reinigern in Mengen von 0,1 bis 6 Gew.-% enthalten sein, bezogen auf die Gesamtzusammensetzung.
Als weitere nichtionische Tenside können stickstoffenthaltende Tenside enthalten sein, z.B. Fettsäurepolyhydroxyamide, beispielsweise Glucamide, und Ethoxylate von Alkyl- aminen, vicinalen Diolen und/oder Carbonsäureamiden, die Alkylgruppen mit 10 bis 22 C-Atomen, vorzugsweise 12 bis 18 C-Atomen, besitzen. Der Ethoxylierungsgrad dieser Verbindungen liegt dabei in der Regel zwischen 1 und 20, vorzugsweise zwischen 3 und 10. Bevorzugt sind Ethanolamid-Derivate von Alkansäuren mit 8 bis 22 C-Atomen, vorzugsweise 12 bis 16 C-Atomen. Zu den besonders geeigneten Verbindungen gehören die Laurinsäure-, Myristinsäure- und Palmitinsäuremonoethanolamide.
Zu den Amphotensiden (amphoteren Tensiden, zwitterionischen Tensiden), die erfin¬ dungsgemäß eingesetzt werden können, zählen u.a. Betaine, Aminoxide, Alkylamido- alkylamine, alkylsubstituierte Aminosäuren sowie acylierte Aminosäuren. Bevorzugte Amphotenside sind dabei beispielsweise Betaine der Formel
(R3)(R4)(Rδ)N+CH2C00;
in der R3 einen gegebenenfalls durch Heteroatome oder Heteroatomgruppen unterbrochenen Alkylrest mit 8 bis 25, vorzugsweise 10 bis 21 Kohlenstoffatomen und R4 sowie R5 gleichartige oder verschiedene Alkylreste mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen bedeuten, insbesondere CTo-C-is-Alkyl-dimethylcarboxymethylbetain und C11-C17- Alkyamidopropyl-dimethylcarboxymethylbetain.
Sollten Kationtenside in der Zusammensetzung enthalten sein, so sind dies bevorzugt die quartären Ammoniumverbindungen der Formel
(R6)(R7)(R8)(R9)N+ X", in der R6 bis R9 für vier gleich- oder verschiedenartige, insbesondere zwei lang- und zwei kurzkettige, Alkylreste und X" für ein Anion, insbesondere ein Halogenidion, stehen, beispielsweise Didecyl-dimethyl-ammoniumchlorid, Alkyl-benzyl-didecyl- ammoniumchlorid und deren Mischungen. Vorzugsweise ist die Reinigungsmittelzusammensetzung jedoch frei von kationischen Tensiden. ))
Bei der Wahl der geeigneten Tenside ist darauf zu achten, daß sie mit den eingesetzten Enzymen kompatibel sind. Bevorzugt wird die Enzymaktivität während einer typischen mittleren Einwirkzeit von 15 Minuten um nicht mehr als 50% gesenkt, insbesondere um nicht mehr als 30%. So haben Versuche ergeben, daß das als denaturierend bekannte Natriumdodecylsulfat (SDS) die Aktivität der Corolase bereits in einer Konzentration von 1 % innerhalb von 15 Minuten auf unter 30% absenkt, während die Aktivität der Xylanase schon mit nur 0,1 % SDS auf weniger als 40% sinkt, so daß dieses Tensid für den Einsatz in erfindungsgemäßen Reinigungsmittel nicht bevorzugt ist. Soll dieses oder ein ähnlich wirkendes Tensid dennoch eingesetzt werden, so ist vorzugsweise auf eine räumliche Trennung während der Lagerung zu achten, beispielsweise durch Verkapselung der Enzyme oder durch den Einsatz einer Mehrkammerflasche, so daß Enzyme und Tenside erst unmittelbar vor bzw. während der Anwendung miteinander in Kontakt kommen. Alkylpolyglykoside sind dagegen gut für den Einsatz in enzymhaltigen Mitteln gemäß dieser Erfindung geeignet. So bleibt die Aktivität der Corolase auch mit 3% APG 600 noch deutlich über 50%, die Xylanase erfährt durch den Zusatz von APG 600 sogar zunächst eine Aktivitätssteigerung (über 150% Aktivität mit 0,1 % Tensid) und weist mit 3% APG immer noch über 80% Aktivität auf.
Weiterhin können die erfindungsgemäßen Reiniger für harte Oberflächen Builder, insbesondere ausgewählt aus der Gruppe der weiter oben aufgeführten Builder, enthalten. Geeignete Builder sind vorzugsweise Alkalimetallgluconate, -citrate, -nitrilotriacetate, -carbonate und -bicarbonate, insbesondere Natriumgluconat, -citrat und -nitrilotriacetat sowie Natrium- und Kaliumcarbonat und -bicarbonat, sowie Alkalimetall- und Erdalkalimetallhydroxide, insbesondere Natrium- und Kaliumhydroxid, Ammoniak und Amine, insbesondere Mono- und Triethanolamin, bzw. deren Mischungen. Hierzu zählen auch die Salze der Glutarsäure, Bernsteinsäure, Adipinsäure, Weinsäure und Benzolhexacarbonsäure sowie Phosphonate und Phosphate. Die Mittel können Builder in Mengen, bezogen auf die Zusammensetzung, von 0,1 bis 5 Gew.-% enthalten.
Des weiteren können erfindungsgemäße Mittel, und insbesondere ein erfindungsgemäßer Reiniger für harte Oberflächen, Säuren und/ oder Alkalien enthalten. Diese dienen einerseits als pH-Regulatoren, andererseits können die Säuren aber auch zur Entfernung von Kalkflecken von den zu reinigenden Oberflächen beitragen. Bei den erfindungsgemäß einsetzbaren Säuren kann es sich um anorganische Mineralsäuren, beispielsweise Salzsäure, und/oder um C1-6- Mono-, Di-, Tri- oder Polycarbonsäuren oder -hydroxycarbonsäuren wie beispielsweise Ameisensäure, Essigsäure, Milchsäure, Citronensäure, Gluconsäure, Glutarsäure, Bernsteinsäure, Adipinsäure, Weinsäure oder auch Äpfelsäure sowie um weitere organische Säuren wie etwa Salicylsäure oder Amidosulfonsäure handeln. Besonders bevorzugt wird jedoch die Citronensäure eingesetzt; auch Mischungen aus mehreren Säuren können verwendet werden. Säuren können im erfindungsgemäßen Reinigungsmittel in Mengen von bis zu 6 Gew.-% enthalten sein, bezogen auf die Gesamtzusammensetzung.
Zu den gegebenenfalls einsetzbaren Basen zählen Alkanolamine, beispielsweise Mono- oder Diethanolamin, sowie Ammonium- oder Alkalimetallhydroxide, vor allem Natrium¬ hydroxid. Das erfindungsgemäße Reinigungsmittel für harte Oberflächen kann Basen in Mengen von bis zu 2,5 Gew.-% enthalten, bezogen auf die Gesamtzusammensetzung.
Der erfindungsgemäße Reiniger für harte Oberflächen kann weiterhin zur Viskositätsregulierung einen oder mehrere Verdicker enthalten. Als Verdickungsmittel geeignet sind dabei natürliche und synthetische Polymere sowie anorganische Verdickungsmittel. Zu den einsetzbaren Polymeren zählen Polysaccharide bzw. Heteropolysaccharide und andere organische natürliche Verdickungsmittel, darunter die Polysaccharidgummen wie Gummi arabicum, Agar, Alginate, Carrageene und ihre Salze, Guar, Guaran, Tragant, Gellan, Ramsan, Dextran oder Xanthan und ihre Derivate, z.B. propoxyliertes Guar, sowie ihre Mischungen, weiterhin auch Pektine, Polyosen, Johannisbrotbaumkernmehl, Stärke, Dextrine, Gelatine, Casein. Weiterhin können organische abgewandelte Naturstoffe wie Carboxymethylcellulose und - Celluloseether, Hydroxyethyl- und -propylcellulose und dgl. oder Celluloseacetat sowie Kemmehlether eingesetzt werden. Als organische vollsynthetische Verdickungsmittel können homo- und copolymere Polycarboxylate, vor allem Polyacryl- und Polymethacryl-Verbindungen sowie Vinylpolymere, Polycarbonsäuren, Polyether, PoIy- imine oder auch Polyamide dienen. Zu den einsetzbaren anorganischen Verdickungs- mitteln zählen Polykieselsäuren, Tonmineralien wie Montmorillonite, Zeolithe, Kieselsäure sowie verschiedene nanopartikuläre anorganische Verbindungen wie nanopartikuläre Metalloxide, -oxidhydrate, -hydroxide, -carbonate und -phosphate sowie Silicate mit einer mittleren Teilchengröße von 1 bis 200 nm, bezogen auf den Teilchendurchmesser in der Längsrichtung, d.h. in der Richtung der größten Ausdehnung der Teilchen. Diese nanopartikulären Stoffen können optional in einer weiteren Ausführungsform der Erfindung mit einem oder mehreren Oberflächenmodifikationsmitteln behandelt sein. Die Oberflächenmodifikation erfolgt in dem Fachmann bekannter Weise mit ein- und mehrbasischen C2-8-Carbonsäuren oder - Hydroxycarbonsäuren, funktionellen Silanen des Typs (OR)4-0SiRn (R = org. Reste mit funktionellen Gruppen wie Hydroxy, Carboxy, Ester, Amin, Epoxy, etc.), quartären Ammoniumverbindungen oder Aminosäuren sowie weiteren hierzu einsetzbaren Stoffen.
Neben den bisher genannten Verdickungsmitteln kann der erfindungsgemäße Reiniger für harte Oberflächen Elektrolytsalze enthalten. Diese können ebenfalls zu einer Viskositätserhöhung beitragen. Elektrolytsalze im Sinne der vorliegenden Erfindung sind Salze, die in dem erfindungsgemäßen wäßrigen Mittel in ihre ionischen Bestandteile zerfallen. Bevorzugt sind die Salze, insbesondere Alkalimetall- und/oder Erdalkalimetallsalze, einer anorganischen Säure, vorzugsweise einer anorganischen Säure aus der Gruppe, umfassend die Halogenwasserstoffsäuren, Salpetersäure und Schwefelsäure, insbesondere die Chloride und Sulfate. Im Rahmen der erfindungsgemäßen Lehre kann ein Elektrolytsalz auch in Form seines korrespondierenden Säure/Base-Paares eingesetzt werden, beispielsweise Salzsäure und Natriumhydroxid anstatt Natriumchlorid.
Im erfindungsgemäßen Mittel können organische und/oder anorganische Verdicker in Mengen von insgesamt bis zu 2 Gew.-%, eingesetzt werden, bezogen auf die Gesamtzusammensetzung. Der erfindungsgemäße Reiniger für harte Oberflächen, kann vorteilhafterweise zusätzlich ein oder mehrere wasserlösliche organische Lösungsmittel enthalten, üblicherweise in einer Menge von bis zu 6 Gew.-%, bezogen auf die Gesamtzusammensetzung. Das Lösungsmittel wird im Rahmen der erfindungsgemäßen Lehre nach Bedarf insbesondere als Hydrotropikum, Viskositäts¬ regulator und/oder Kältestabilisator eingesetzt. Es wirkt lösungsvermittelnd insbesondere für Tenside und Elektrolyt sowie Parfüm und Farbstoff und trägt so zu deren Einarbeitung bei, verhindert die Ausbildung flüssigkristalliner Phasen und hat Anteil an der Bildung klarer Produkte. Die Viskosität des erfindungsgemäßen Mittels verringert sich mit zunehmender Lösungsmittelmenge. Zuviel Lösungsmittel kann jedoch einen zu starken Viskositätsabfall bewirken. Schließlich sinkt mit zunehmender Lösungsmittelmenge der Kältetrübungs- und Klarpunkt des erfindungsgemäßen Mittels.
Geeignete Lösungsmittel sind beispielsweise gesättigte oder ungesättigte, vorzugsweise gesättigte, verzweigte oder unverzweigte Ci-2o-Kohlenwasserstoffe, bevorzugt C2-i5-Kohlenwasserstoffe, mit mindestens einer Hydroxygruppe und gegebenenfalls einer oder mehreren Etherfunktionen C-O-C, d.h. die Kohlenstoffatomkette unterbrechenden Sauerstoffatomen. Bevorzugte Lösungsmittel sind jedoch die - gegebenenfalls einseitig mit einem C-i-6-Alkanol veretherten - C2-6- Alkylenglykole und Poly-C2-3-alkylenglykolether mit durchschnittlich 1 bis 9 gleichen oder verschiedenen, vorzugsweise gleichen, Alkylenglykolgruppen pro Molekül, z.B. Ethylenglykol, Propylenglykol, Butylenglycol, Diethylenglycol, Dimethoxydiglycol, Dipropylenglycol, Propylenglycolbutylether, Propylenglycolpropylether,
Dipropylenglykolmonomethylether sowie PEG. Weitere bevorzugte Lösungsmittel sind die C1-6-Alkohole, wie Methanol, Ethanol, n-Propanol, Isopropanol, n-Butanol, t-Butanol usw., besonders bevorzugt wird Ethanol und/oder Isopropanol eingesetzt.
Als Lösungsvermittler können außer den zuvor beschriebenen Lösungsmitteln beispielsweise auch Alkanolamine sowie Alkylbenzolsulfonate mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen im Alkylrest, z.B. XyIoI- oder Cumolsulfonat eingesetzt werden. Weitere einsetzbare Hydrotrope sind z.B. Octylsulfat oder Butylglucosid. Das erfindungsgemäße Mittel kann diese Hydrotrope in Mengen von, bezogen auf die Gesamtzusammensetzung, bis zu 4 Gew.-% enthalten. In einer Ausführungsform kann der erfindungsgemäße Reiniger für harte Oberflächen Abrasivstoffe enthalten. Als Abrasivkomponente können hierbei feste wasserlösliche und wasserunlösliche, vorzugsweise anorganische Verbindungen und Gemische derselben dienen. Hierzu gehören beispielsweise Alkalicarbonate, Alkalibicarbonate und Alkalisulfate, Alkaliborate, Alkaliphosphate, Siliciumdioxid, kristalline oder amorphe Alkalisilikate und Schichtsilikate, feinkristalline Natriumaluminiumsilikate und Calciumcarbonat. Der Vorteil wasserlöslicher Abrasivkomponenten besteht in einer praktisch rückstandsfreien Abspülbarkeit des Mittels. Neben diesen anorganischen Stoffen können auch aus der belebten Natur gewonnene Abrasiva, beispielsweise zerkleinerte Nußschalen oder Hölzer, sowie abriebfeste Kunststoffe, beispielsweise Polyethylenperlen, oder auch Keramik- oder Glaskügelchen Verwendung finden. Das erfindungsgemäße Reinigungsmittel kann Abrasivstoffe in Mengen von bis zu 2 Gew.-% enthalten, bezogen auf die Gesamtzusammensetzung.
Neben den genannten Komponenten können die erfindungsgemäßen Mittel, insbesondere der erfindungsgemäße Reiniger für harte Oberflächen, einen oder mehrere weitere Hilfs- und Zusatzstoffe enthalten, wie sie vor allem in Reinigungsmitteln für harte Oberflächen üblich sind. Hierzu zählen insbesondere UV- Stabilisatoren, Korrosionsinhibitoren, Reinigungsverstärker, Antistatika, Konservierungsmittel (z.B. 2-Brom-2-nitropropan-1 ,3-diol oder eine Isothiazolinon- Bromnitropropandiol-Zubereitung), Parfüm, Farbstoffe, Perlglanzmittel (beispielsweise Glykoldistearat) sowie Trübungsmittel oder auch Hautschutzmittel, wie sie beispielsweise in EP 522 506 beschrieben sind. Die Menge an derartigen Zusätzen liegt üblicherweise nicht über 12 Gew.-% im Reinigungsmittel. Die Untergrenze des Einsatzes hängt von der Art des Zusatzstoffes ab und kann beispielsweise bei Farbstoffen bis zu 0,001 Gew.-% und darunter betragen. Vorzugsweise liegt die Menge an Hilfsstoffen zwischen 0,01 und 7 Gew.-%, insbesondere 0,1 und 4 Gew.-%.
Als Farbstoffe können sämtliche in Haushaltsreinigungsmitteln üblicherweise eingesetzten Farbstoffe verwendet werden. Auch bei den Duftstoffen können sämtliche übliche Parfüms zum Einsatz kommen. Bevorzugt sind dabei fruchtige Düfte, beispielsweise Citrus, femer Pine (Fichte) und Minze sowie blumige Düfte. Konservierungsmittel besitzen eine biozide Wirkung, so daß es wünschenswert ist, in erfindungsgemäßen Reinigungsmitteln nur geringe Konzentrationen, vorzugsweise aber gar keine Konservierungsmittel einzusetzen.
Es ist von Vorteil, wenn das Mittel keine Komplexbildner enthält; der Zusatz eines Bleichmittels zum erfindungsgemäßen Reinigungsmittel für harte Oberflächen ist nicht unbedingt erforderlich.
Der pH-Wert der erfindungsgemäßen Reiniger liegt in einer bevorzugten Ausführungsform, insbesondere bei Reinigern für harte Oberflächen, vorzugsweise zwischen 1 und 8, besonders bevorzugt zwischen 2 und 5 oder zwischen 5 und 8, insbesondere zwischen 2,5 und 4,5 oder zwischen 5,5 und 7,5. Dabei ist bei mehrphasigen Mitteln unter dem pH-Wert des Mittels der pH-Wert der nach dem Auf¬ schütteln entstandenen temporären Emulsion zu verstehen, bei Mitteln, die in Mehrkam¬ merflaschen angeboten werden, ist der pH-Wert des Mittels der pH-Wert der aus der gemeinsamen bestimmungsgemäßen Dosierung der in den verschiedenen Kammern gelagerten Komponenten erhaltenen Lösung. Es ist also jeweils der pH-Wert der gebrauchsfertigen Reinigungslösung gemeint.
Sofern es sich um ein flüssiges Mittel handelt, besitzt dieses vorzugsweise eine Viskosität von bis zu 1000 mPas. Gelförmige oder pastöse Reinigungsmittel können demgegenüber Viskositäten von bis zu 150000 mPas haben. Die Viskositätsmessungen erfolgen bei 20°C im Brookfield-Viskosimeter LVDV Il mit einer Rotorfrequenz von 20 U/min (Spindel Nr. 31 , Konz. 100%).
Das Reinigungsmittel kann ein oder mehrere Treibmittel (INCI Propellants), üblicherweise in einer Menge von 1 bis 80 Gew.-%, vorzugsweise 1 ,5 bis 30 Gew.-%, insbesondere 2 bis 10 Gew.-%, besonders bevorzugt 2,5 bis 8 Gew.-%, äußerst bevorzugt 3 bis 6 Gew.-%, enthalten.
Treibmittel sind erfindungsgemäß üblicherweise Treibgase, insbesondere verflüssigte oder komprimierte Gase. Die Wahl richtet sich nach dem zu versprühenden Produkt und dem Einsatzgebiet. Bei der Verwendung von komprimierten Gasen wie Stickstoff, Kohlendioxid oder Distickstoffoxid, die im allgemeinen in dem flüssigen Reinigungsmittel unlöslich sind, sinkt der Betriebsdruck mit jeder Ventilbetätigung. Im Reinigungsmittel lösliche oder selbst als Lösungsmittel wirkende verflüssigte Gase (Flüssiggase) als Treibmittel bieten den Vorteil gleichbleibenden Betriebsdrucks und gleichmäßiger Verteilung, denn an der Luft verdampft das Treibmittel und nimmt dabei ein mehrhundertfaches Volumen ein.
Geeignet sind demgemäß folgende gemäß INCI bezeichnete Treibmittel: Butane, Carbon Dioxide, Dimethyl Carbonate, Dimethyl Ether, Ethane, Hydrochlorofluorocarbon 22, Hydrochlorofluorocarbon 142b, Hydrofluorocarbon 152a, Hydrofluorocarbon 134a, Hydrofluorocarbon 227ea, Isobutane, Isopentane, Nitrogen, Nitrous Oxide, Pentane, Propane. Auf Chlorfluorkohlenstoffe (Fluorchlorkohlenwasserstoffe, FCKW) als Treibmittel wird jedoch wegen ihrer schädlichen Wirkung auf den - vor harter UV- Strahlung schützenden - Ozon-Schild der Atmosphäre, die sogenannte Ozon-Schicht, vorzugsweise weitgehend und insbesondere vollständig verzichtet.
Bevorzugte Treibmittel sind Flüssiggase. Flüssiggase sind Gase, die bei meist schon geringen Drücken und 200C vom gasförmigen in den flüssigen Zustand übergeführt werden können. Insbesondere werden unter Flüssiggasen jedoch die - in Ölraffinerien als Nebenprodukte bei Destillation und Kracken von Erdöl sowie in der Erdgas- Aufbereitung bei der Benzinabscheidung anfallenden - Kohlenwasserstoffe Propan, Propen, Butan, Buten, Isobutan (2-Methylpropan), Isobuten (2-Methylpropen, Isobutylen) und deren Gemische verstanden.
Besonders bevorzugt enthält das Reinigungsmittel als ein oder mehrere Treibmittel Pro¬ pan, Butan und/oder Isobutan, insbesondere Propan und Butan, äußerst bevorzugt Pro¬ pan, Butan und Isobutan.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Erzeugnis, enthaltend eine erfindungsge¬ mäße Enzymzubereitung oder ein erfindungsgemäße Zusammensetzung, insbesondere einen erfindungsgemäßen Reiniger für harte Oberflächen, und einen Sprühspender. Bei dem Erzeugnis kann es sich hierbei sowohl um ein Einkammer- als auch um ein Mehrkammerbehältnis, insbesondere ein Zweikammerbehältnis handeln.
Bevorzugt ist der Sprühspender ein manuell aktivierter Sprühspender, insbesondere ausgewählt aus der Gruppe umfassend Aerosolsprühspender (Druckgasbehälter; auch u.a. als Spraydose bezeichnet), selbst Druck aufbauende Sprühspender, Pumpsprühspender und Triggersprühspender, insbesondere Pumpsprühspender und Triggersprühspender mit einem Behälter aus transparentem Polyethylen oder Polyethylenterephthalat. Sprühspender werden ausführlicher in der WO 96/04940 (Procter & Gamble) und den darin zu Sprühspendern zitierten US-Patenten, auf die in dieser Hinsicht sämtlich Bezug genommen und deren Inhalt hiermit in diese Anmeldung aufgenommen wird, beschrieben. Triggersprühspender und Pumpzerstäuber besitzen gegenüber Druckgasbehältern den Vorteil, daß kein Treibmittel eingesetzt werden muß.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform wird das die Enzymzubereitung enthal¬ tende Mittel jedoch nicht als Aerosol zerstäubt, da hierbei gegebenenfalls geringe Mengen der Enzymzubereitung in die Atemwege geraten können und unter Umständen dort allergische Reaktionen auslösen könnten. Durch geeignete, partikelgängige Aufsätze, Düsen etc. (sog. "nozzle-Ventile") auf dem Sprühspender kann das Enzym in auf Partikeln immobilisierter Form dem Mittel beigefügt werden und als Reinigungsschaum dosiert werden. Bei der Erzeugung dieser kompakten Schäume entstehen keine lungengängigen Teilchen, so daß die Gefahr der Inhalation von Allergenen im wesentlichen gebannt wird.
Noch ein weiterer Erfindungsgegenstand ist ein Verfahren zur Hydrolyse von Biofilmen auf harten Oberflächen, bei dem die Vitalität der mikrobiellen Zellen vorzugsweise nicht geschädigt wird. Hierzu wird die erfindungsgemäße Enzymzubereitung oder das erfin¬ dungsgemäße Reinigungsmittel, gegebenenfalls unter Benutzung eines erfindungsge¬ mäßen Erzeugnisses, auf die mit Biofilm überzogene Fläche aufgebracht und gegebe¬ nenfalls nach einer Einwirkzeit von 1 bis 30 Minuten, bei stärkerem Befall auch einige Stunden oder über Nacht, mit klarem Wasser abgespült. Die Zubereitung oder das Mittel kann auch vor dem Abspülen mit einem Tuch, einem Schwamm, einer Bürste oder einem sonstigen zur Reinigung geeigneten Utensil auf der von Biofilm befallenen Oberfläche verwischt oder verrieben werden, was z.B. bei Anwesenheit von Abrasivstoffen im Reinigungsmittel die Reinigungsleistung verbessert. Schließlich wird die Oberfläche mit einem trockenen Tuch abgetrocknet. Bei sehr starkem Befall der Oberfläche mit Biofilm kann der Reinigungsvorgang anschließend wiederholt werden. Mund-, Zahn- und/oder Zahnprothesenpflegemittel
Die erfindungsgemäßen Mund-, Zahn- und/oder Zahnprothesenpflegemittel können beispielsweise als Mundwasser, Gel, flüssige Zahnputzlotion, steife Zahnpaste, Kaugummi, Gebissreiniger oder Prothesenhaftcreme vorliegen.
Hierzu ist es erforderlich, die erfindungsgemäßen Hybridenzyme in einen geeigneten Träger einzuarbeiten.
Als Träger können z.B. auch pulverförmige Zubereitungen oder wässrig-alkoholische Lösungen dienen, die als Mundwässer 0 bis 15 Gew.-% Ethanol, 1 bis 1 ,5 Gew.-% Aromaöle und 0,01 bis 0,5 Gew.-% Süßstoffe oder als Mundwasser-Konzentrate 15 bis 60 Gew.-% Ethanol, 0,05 bis 5 Gew.-% Aromaöle, 0,1 bis 3 Gew.-% Süßstoffe sowie ggf. weitere Hilfsstoffe enthalten können und vor Gebrauch mit Wasser verdünnt werden. Die Konzentration der Komponenten muss dabei so hoch gewählt werden, dass nach Verdünnung die genannten Konzentrationsuntergrenzen bei der Anwendung nicht unterschritten werden.
Als Träger können aber auch Gele sowie mehr oder weniger fließfähige Pasten dienen, die aus flexiblen Kunststoffbehältern oder Tuben ausgedrückt und mit Hilfe einer Zahnbürste auf die Zähne aufgetragen werden. Solche Produkte enthalten höhere Mengen an Feuchthaltemitteln und Bindemitteln oder Konsistenzreglern und Polierkomponenten. Darüber hinaus sind auch in diesen Zubereitungen Aromaöle, Süßstoffe und Wasser enthalten.
Als Feuchthaltemittel können dabei z.B. Glycerin, Sorbit, Xylit, Propylenglykole, Polyethenylenglycole oder Gemische dieser Polyole, insbesondere solche Polyethenylenglycole mit Molekulargewichten von 200 bis 800 (von 400 - 2000 ) verwendet werden enthalten sein. Bevorzugt ist als Feuchthaltemittel Sorbit in einer Menge von 25 - 40 Gew.-% enthalten.
Als Antizahnstein-Wirkstoffe und als Demineralisierungs-Inhibitoren können kondensierten Phosphate in Form ihrer Alkalisalze, bevorzugt in Form ihrer Natrium¬ oder Kaliumsalze enthalten sein. Die wäßrigen Lösungen dieser Phosphate reagieren aufgrund hydrolytischer Effekte alkalisch. Durch Säurezusatz wird der pH-Wert der erfindungsgemäßen Mund-, Zahn- und/oder Zahnprothesenpflegemittel auf die bevorzugten Werte von 7,5 - 9 eingestellt.
Es können auch Gemische verschiedener kondensierter Phosphate oder auch hydratisierte Salze der kondensierten Phosphate eingesetzt werden. Die spezifizierten Mengen von 2 - 12 Gew.-% beziehen sich jedoch auf die wasserfreien Salze. Bevorzugt ist als kondensiertes Phosphat ein Natrium- oder Kalium-tripolyphosphat in einer Menge von 5 - 10 Gew.-% der Zusammensetzung enthalten.
Ein bevorzugt enthaltener Wirkstoff ist eine karieshemmende Fluorverbindung, bevorzugt aus der Gruppe der Fluoride oder Monofluorophosphate in einer Menge von 0,1 - 0,5 Gew.-% Fluor. Geeignete Fluorverbindungen sind z.B. Natriummonofluorophosphat (NaaPOsF), Kaliummonofluorophosphat, Natrium- oder Kaliumfluorid, Zinnfluorid oder das Fluorid einer organischen Aminoverbindung.
Als Bindemittel und Konsistenzregler dienen z.B. natürliche und synthetische wasserlösliche Polymere wie Carragheen, Traganth, Guar, Stärke und deren nichtionogene Derivate wie z.B. Hydroxypropylguar, Hydroxyethylstärke, Celluloseether wie z.B. Hydroxyethylcellulose oder Methylhydroxypropylcellulose. Auch Agar-Agar, Xanthan-Gum, Pektine, wasserlösliche Carboxyvinylpolymere (z.B. Carbopol®-Typen), Polyvinylalkohol, Polyvinylpyrrolidon, höhermolekulare Polyethylenglykole (Molekulargewicht 103 bis 10δ D). Weitere Stoffe, die sich zur Viskositätskontrolle eignen, sind Schichtsilikare wie z.B. Montmorillonit-Tone, kolloidale Verdickungskieselsäuren, z.B. Aerogel-Kieselsäure oder pyrogene Kieselsäuren.
Als Polierkomponenten können alle hierfür bekannten Poliermittel, bevorzugt aber Fällungs- und Gelkieselsäuren, Aluminiumhydroxid, Aluminiumsilicat, Aluminiumoxid, Aluminiumoxidtrihydrat, unlösliches Natriummetaphosphat, Calciumpyrophosphat, Calciumhydrogenphosphat, Dicalciumphosphat, Kreide, Hydroxylapatit, Hydrotalcite, Talkum, Magnesiumaluminiumsilicat (Veegum®), Calciumsulfat, Magnesiumcarbonat, Magnesiumoxid, Natriumaluminiumsilikate, z.B. Zeolith A oder organische Polymere, z.B. Polymethacrylat, eingesetzt werden. Die Poliermittel werden vorzugsweise in kleineren Mengen von z.B. 1 - 10 Gew.-% verwendet. Die erfindungsgemäßen Zahn- und/oder Mundpflegeprodukte können durch Zugabe von Aromaölen und Süßungsmitteln in ihren organoleptischen Eigenschaften verbessert werden. Als Aromaöle kommen alle für Mund-, Zahn- und/oder Zahnprothesenpflegemittel gebräuchlichen natürlichen und synthetischen Aromen in Frage. Natürliche Aromen können sowohl in Form der aus den Drogen isolierten etherischen Öle als auch der aus diesen isolierten Einzelkomponenten verwendet werden. Bevorzugt sollte wenigstens ein Aromaöl aus der Gruppe Pfeffemninzöl, Krauseminzöl, Anisöl, Kümmelöl, Eukalyptusöl, Fenchelöl, Zimtöl, Geraniumöl, Salbeiöl, Thymianöl, Majoranöl, Basilikumöl, Citrusöl, Gaultheriaöl oder eine oder mehrere daraus isolierte synthetisch erzeugten Komponenten dieser Öle enthalten sein. Die wichtigsten Komponenten der genannten Öle sind z.B. Menthol, Carvon, Anethol, Cineol, Eugenol, Zimtaldehyd, Geraniol, Citronellol, Linalool, Salven, Thymol, Terpinen, Terpinol, Methylchavicol und Methylsalicylat. Weitere geeignete Aromen sind z.B. Menthylacetat, Vanillin, Jonone, Linalylacetat, Rhodinol und Piperiton. Als Süßungsmittel eignen sich entweder natürliche Zucker wie Sucrose, Maltose, Lactose und Fructose oder synthetische Süßstoffe wie z.B. Saccharin-Natriumsalz, Na- triumcyclamat oder Aspartam.
Als Tenside sind dabei insbesondere Alkyl- und/oder Alkenyl-(oligo)-glycoside einsetzbar. Ihre Herstellung und Verwendung als oberflächenaktive Stoffe sind beispielsweise aus US-A-3 839 318, US-A-3 707 535, US-A-3 547 828 DE-A- 19 43 689, DE-A-20 36 472 und DE-A-30 01 064 sowie EP-A-77 167 bekannt. Bezüglich des Glycosidrestes gilt, daß sowohl Monoglycoside (x = 1), bei denen ein Pentose- oder Hexoserest glycosidisch an einen primären Alkohol mit 4 bis 16 C- Atomen gebunden ist, als auch oligomere Glycoside mit einem Oligomerisationsgrad x bis 10 geeignet sind. Der Oligomerisationsgrad ist dabei ein statistischer Mittelwert, dem eine für solche technischen Produkte übliche Homologenverteilung zugrunde liegt.
Bevorzugt eignet sich als Alkyl- und/oder Alkenyl-(oligo)-glycosid ein Alkyl- und/oder Alkenyl-(oligo)-glucosid der Formel RO(C6Hi0O)x-H, in der R eine Alkyl- und/oder Alkenyl-gruppe mit 8 bis 14 C-Atomen ist und x einen Mittelwert von 1 bis 4 hat. Besonders bevorzugt sind Alkyloligoglucoside auf Basis von gehärtetem C-12/14-Kokosal- kohol mit einem DP von 1 bis 3. Das Alkyl- und/oder Alkenyl-glycosid-Tensid kann sehr sparsam verwendet werden, wobei bereits Mengen von 0,005 bis 1 Gew.-% ausreichend sind.
Außer den genannten Alkylglucosid-Tensiden können auch andere nichtionische, ampholytische und kationische Tenside enthalten sein, als da beispielsweise sind: Fettalkoholpolyglycolethersulfate, Monoglyceridsulfate, Monoglyceridethersulfate, Mono- und/oder Dialkylsulfosuccinate, Fettsäureisethionate, Fettsäuresarcosinate, Fettsäuretauride, Fettsäureglutamate, Ethercarbonsäuren, Fettsäureglucamide, Al- kylamido-betaine und/oder Proteinfettsäurekondensate, letztere vorzugsweise auf Basis von Weizenproteinen. Insbesondere zur Solubilisierung der meist wasserunlöslichen Aromaöle kann ein nichtionogener Lösungsvermittler aus der Gruppe der oberflächenaktiven Verbindungen erforderlich sein. Besonders geeignet für diesen Zweck sind z.B. oxethylierte Fettsäureglyceride, oxethylierte Fettsäuresorbitanpartialester oder Fettsäurepartialester von Glycerin- oder Sorbitan- Oxethylaten. Lösungsvermittler aus der Gruppe der oxethylierten Fettsäureglyceride umfassen vor allem Anlagerungsprodukte von 20 bis 60 Mol Ethylenoxid an Mono- und Diglyceride von linearen Fettsäuren mit 12 bis 18 C-Atomen oder an Triglyceride von Hydroxyfettsäuren wie Oxystearinsäure oder Ricinolsäure. Weitere geeignete Lösungsvermittler sind oxethylierte Fettsäuresorbitanpartialester; das sind bevorzugt Anlagerungsprodukte von 20 bis 60 Mol Ethylenoxid an Sorbitanmonoester und Sorbitandiester von Fettsäuren mit 12 bis 18 C-Atomen. Ebenfalls geeignete Lösungsvermittler sind Fettsäurepartialester von Glycerin- oder Sorbitan-Oxethylaten; das sind bevorzugt Mono- und Diester von Ci2-Ci8-Fettsäuren und Anlagerungsprodukten von 20 bis 60 Mol Ethylenoxid an 1 Mol Glycerin oder an 1 Mol Sorbit.
Die erfindungsgemäßen Mund-, Zahn- und/oder Zahnprothesenpflegemittel enthalten bevorzugt als Lösungsvermittler für gegebenenfalls enthaltene Aromaöle Anlagerungsprodukte von 20 bis 60 Mol Ethylenoxid an gehärtetes oder ungehärtetes Rizinusöl (d.h. an Oxystearinsäure- oder Ricinolsäure-triglycerid), an Glyzerin-mono- und/oder -distearat oder an Sorbitanmono- und/oder -distearat.
Weitere übliche Zusätze für die Mund-, Zahn- und/oder Zahnprothesenpflege mittel sind z.B. Pigmente, z.B. Titandioxid, und/oder Farbstoffe pH-Stellmittel und Puffersubstanzen wie z.B. Natriumbicarbonat, Natriumeitrat,
Natriumbenzoat, Zitronensäure, Phosphorsäure oder saure Salze, z.B. NaH2PO4 wundheilende und entzündungshemmende Stoffe wie z.B. Allantoin, Harnstoff,
Panthenol, Azulen bzw. Kamillenextrakt weitere gegen Zahnstein wirksame Stoffe wie z.B. Organophosphonate, z.B.
Hydroxyethandiphosphonate oder Azacycloheptandiphosphonat
Konservierungsstoffe wie z.B. Sorbinsäure-Salze, p-Hydroxybenzoesäure-Ester.
Plaque-Inhibitoren wie z.B. Hexachlorophen, Chlorhexidin, Hexetidin, Triclosan,
Bromchlorophen, Phenylsalicylsäureester.
In einer besonderen Ausführungsform ist die Zusammensetzung eine Mundspülung, ein Mundwasser, ein Prothesenreiniger oder ein Prothesenhaftmittel.
Für erfindungsgemäß bevorzugten Prothesenreiniger, insbesondere Prothesenreinigungstabletten und -pulver, eignen sich neben den schon genannten Inhaltsstoffen für die Mund-, Zahn- und/oder Zahnprothesenpflege zusätzlich noch Per¬ Verbindungen wie beispielsweise Peroxoborat, Peroxomonosulfat oder Percarbonat. Sie haben den Vorteil, dass sie neben der Bleichwirkung gleichzeitig auch desodorierend und/oder desinfizierend wirken. Der Einsatz solcher Per-Verbindungen in "Prothesenreinigern beträgt zwischen 0,01 und 10 Gew.-%, insbesondere zwischen 0,5 und 5 Gew.-%.
Als weitere Inhaltsstoffe sind auch Enzyme, wie z.B. Proteasen und Carbohydrase, zum Abbau von Proteinen und Kohlenhydraten geeignet. Der pH-Wert kann zwischen pH 4 und pH 12, insbesondere zwischen pH 5 und pH 11 liegen.
Für die Prothesenreinigungstabletten sind zusätzlich noch weitere Hilfsstoffe notwendig, wie beispielsweise Mittel, die einen sprudelnden Effekt hervorrufen, wie z.B. CO2 freisetzende Stoffe wie Natriumhydrogencarbonat, Füllstoffe, z.B. Natriumsulfat oder Dextrose, Gleitmittel, z.B. Magnesiumstearat, Fließregulierungsmittel, wie beispielsweise kolloidales Siliziumdioxid und Granuliermittel, wie die bereits erwähnten hochmolekularen Polyethylenglykole oder Polyvinylpyrrolidon. Prothesenhaftmittel können als Pulver, Cremes, Folien oder Flüssigkeiten angeboten werden und unterstützen die Haftung der Prothesen.
Als Wirkstoffe sind natürliche und synthetische Quellstoffe geeignet. Als natürliche Quellstoffe sind neben Alginaten auch Pflanzengummen, wie z.B. Gummi arabicum, Traganth und Karaya-Gummi sowie natürlicher Kautschuk aufzufassen. Insbesondere haben sich Alginate und synthetische Quellstoffe, wie z.B. Natriumcarboxymethylcellulose, hochmolekulare Ethylenoxid-Copolymere, Salze der Poly(vinyl-ether-co-maleinsäure) und Polyacrylamide.
Als Hilfsstoffe für pastöse und flüssige Produkte eignen sich besonders hydrophobe Grundlagen, insbesondere Kohlenwasserstoffe, wie beispielsweise Weißes Vaselin (DAB) oder Paraffinöl.
Ausführungsbeispiele:
Beispiel 1 : Klonierung der Pullulanase
Shewanella sp. wurde von Spitzbergen bei 4 0C isoliert und auf die Fähgkeit untersucht, kälteaktive Enzyme zu produzieren. Der psychrophile Stamm Shewanella sp. ist ein Gram-negatives Proteobakterium. Der nächste Verwandte ist Shewanella putrefaciens (51 ,7%), was durch DNA-DNA-Hybridisierung gezeigt werden konnte. Er wächst in einem Temperaturbereich zwischen 4° und 3O0C (Optimum 100C) und einem pH- Bereich von pH 6-10 (Optimum pH 8).
Genomische DNA wurde aus Shewanella sp. mittels Standardmethoden (Qiagen) isoliert und mit der Restriktionsendonuklease Sau3A für 6 bis 8 min bei 37°C verdaut. Die verdaute DNA wurde gelelektrophoretisch aufgetrennt (70 V; 0,8 %; 45 Minuten) und die Banden zwischen 6 und 10 kbp ausgeschnitten und aus dem Gelstücken eluiert (Nucleospin extraction kit, Macherey-Nagel).
Mit den isolierten DNA-Fragmenten wurde unter Nutzung des ZAP-Expressionsvektors und Klonierungskits (Stratagene) nach Herstellerangaben eine Genbank erstellt. Der ZAP-Vektor pBK-CMV (4,5 kbp) besitzt 12 Klonierungsstellen und kodiert für eine Neomycin/Kanamycin- Resistenz. Zur Herstellung der Bank wurden die Fragmente in den Lambda-ZAP-Vektor ligiert, in Phagenproteine verpackt und mit diesen Phagen E. coli XLOLR- Zellen transfiziert.
100.000 E. coli XLOLR-Klone wurden auf pullulanhaltigen LB-Kanamycin-Agarplatten (50 μg/ml Kanamycin, 1 mM IPTG, 0.1 % red pullulanan) auf Pullulanase-Aktivität gescreent. Hierzu wurden die Platten für 3 Tage bei 300C inkubiert. Aktive Klone zeigten die Bildung farbloser Höfe um die Kolonien.
Aus einem ausgewählten, aktiven Klon wurde das Plasmid isoliert. Ein Teil des Plasmids, mitsamt des 6 kbp großen Inserts, wurde über Primer-walking sequenziert. Vier Primerpaare waren nötig, um die komplette Insertsequenz zu erhalten. Die verwendeten Primer sind in Tabelle 1 aufgelistet. Die Sequenz ist im Sequenzprotokoll dargestellt. Tabelle 1 : Forward und reverse Primer, die beim Primer-Walking verwendet wurden
Figure imgf000075_0001
Beispiel 2: Temperaturabhängigkeit der Enzymaktivität der Pullulanase Zur Bestimmung der Temperaturabhängigkeit wurde der Rohextrakt mit 1% Pullulan (pH 7) für 1 h bei verschiedenen Temperaturen inkubiert. Die Pullulanase wies Aktivitäten zwischen 4°C und 650C auf mit einem Temperaturoptimum bei 45 0C (Tabelle 2).
Tabelle 2: Aktivität (U/ml) und Biofilmabbau (%) der Monierten Pullulanase in Abhängigkeit von der Zeit
Figure imgf000075_0002
Beispiel 3: Biofilmabbau durch die Pullulanase
Die Fähigkeit des rekombinanten Enzyms, mikrobielle Biofilme abzubauen, wurde mit einem in Mikrotiterplatten gewachsenen Modellbiofilm untersucht.
Das Biofilmtestsystem setzt sich aus vier Vertretern zusammen, die als gute
Biofilmbildner bekannt sind. Modellbiofilme wurden mit einer Mischpopulation angezogen, bestehend aus:
Dermacoccus nishinomiyaensis DSM Nr. 20448 (Actinobacterium)
Bradyrhizobium japonicum DSM Nr. 1982 (α-Proteobacterium)
Xanthomonas campestris DSM Nr. 1526 (γ-Proteobacterium)
(DSM: Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen)
Anzucht der Stämme:
D. nishinomiyaensis, B. japonicum und X. campestris wurden in 50 ml Flüssigkultur (pro Liter 10 g Trypton, 5 g Hefeextrakt, 5 g NaCI) bei 30 0C und 150 rpm für 16 h inkubiert. Angeimpft wurde mit einer Einzelkolonie von einer Agarplatte (pro Liter 10 g Trypton, 5 g Hefeextrakt, 5 g NaCI, 10 g Agarose).
Die optische Dichte (600 nm) der Kulturen nach 16 h betrug: Dermacoccus nishinomiyaensis 7,4 Bradyrhizobium japonicum 5,4
Xanthomonas campestris 3,3
Anschließend wurden die Kulturen zusammengegeben, gemischt und mit 50% sterilem Glycerin versetzt, so dass die Endkonzentration 10% Glycerin betrug. Der Kultur-Mix wurde portioniert und bei -200C eingefroren.
Die Anzucht des Biofilms erfolgte in 48 well-Mikrotiterplatten. Je 750 μl TBY-Medium wurden mit je 75 μl der wie oben zubereiteten Mischung aus Biofilm produzierenden Kulturen pro well versetzt, die Platten wurden mit Airpore-Sheets (Qiagen) und Kunststoffdeckel verschlossen. Anschließend wurde bei 30 0C und 60 rpm für 66 h inkubiert, der Überstand vorsichtig abgesaugt und die Platten bei Raumtemperatur mindestens 24 h getrocknet. Diese Platten dienten als Substrat für die Untersuchung der enzymatischen Hydrolyse. Die Platten wurden für 16 h bei unterschiedlichen Temperaturen mit 1 ml des Enzymextraktes inkubiert. Das Enzym war in Abhängigkeit von der Temperatur in der Lage bis zu 28 % des Biofilms abzubauen, wobei das stärkste Aktivität bei 30 0C beobachtet wurde. Bei höheren Temperaturen war ein geringer oder gar kein Biofilmabbau messbar (Tabelle 2).

Claims

Patentansprüche
1. Polynukleotid ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus: a) Polynukleotid mit einer Nukleinsäuresequenz gemäß SEQ ID NO: 1 oder mit einer Nukleinsäuresequenz von Position 70 bis Position 4323 gemäß SEQ ID NO: 1 , b) Polynukleotid kodierend für ein Polypeptid mit einer Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO: 2 oder für ein Polypeptid mit einer Aminosäuresequenz von Position 24 bis Position 1440 gemäß SEQ ID NO: 2, c) natürlicherweise vorkommende oder künstlich erzeugte Mutanten oder polymorphe Formen oder Allele eines Polynukleotids gemäß (a) oder (b), die bis zu 50 Punktmutationen in Bezug auf ein Polynukleotid gemäß (a) oder (b) besitzen, d) zu einem Polynukleotid gemäß (a), (b) oder (c) komplementäre Polynukleotide, e) unter stringenten Bedingungen mit einem Polynukleotid gemäß (a), (b), (c) oder (d) hybridisierende Polynukleotide, f) Polynukleotide mit einer Sequenzhomologie oder -identität von mindestens 60 % in Bezug auf ein Polynukleotid gemäß (a), (b), (c) oder (d), g) Polynukleotide, bestehend aus mindestens 25 aufeinanderfolgenden Nukleinsäuren eines Polynukleotids gemäß (a), (b), (c), (d) oder (e), h) Polynukleotide mit Deletionen und/oder Insertionen und/oder Inversionen von bis zu 50 Nukleotiden gegenüber einem Polynukleotid gemäß (a), (b), (c), (d) oder (e), i) Polynukleotide, umfassend mindestens eines der unter (a) bis (h) genannten Polynukleotide.
2. Polynukleotid nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass es für eine Hydrolase kodiert.
3. Polynukleotid nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei der Hydrolase um eine Glycosylase handelt.
4. Polynukleotid nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei der Glycosylase um eine Pullulanase handelt.
5. Polynukleotid nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass das kodierte Polypeptid dazu in der Lage ist, die Bindungen zwischen α-1 ,6- verknüßpften D-Glucose-Einheiten zu spalten.
6. Verfahren zur Herstellung und/oder identifzierung eines Polynukleotids gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass das Polynukleotid chemisch synthetisiert, anhand einer Sonde aus einer Genbank isoliert oder durch Polymeraseketten-Reaktion erhalten wird.
7. Vektor umfassend eine Nukleinsäure gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5.
8. Wirtszelle umfassend einen Vektor gemäß Anspruch 7.
9. Polypeptid ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus: a) Polypeptid mit einer Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO: 2 oder mit einer Aminosäuresequenz von Position 24 bis Position 1440 gemäß SEQ ID NO: 2, b) natürlicherweise vorkommende Mutanten, polymorphe Formen oder Allele eines Polypeptids gemäß (a), die bis zu 50 Punktmutationen in Bezug auf ein Polypeptid gemäß (a) besitzen, c) Polypeptide, die eine Sequenzhomologie oder-identität von mindestens 60 % in Bezug auf ein Polypeptid gemäß (a) oder (b) besitzen, d) Polypeptide, die von einem Polynukleotid gemäß Anspruch 1 kodiert werden, e) Polypeptide bestehend aus mindestens 8 aufeinanderfolgenden Aminosäuren eines Polypeptids gemäß (a) oder (b), f) Polypeptide mit Insertionen und/oder Deletionen und/oder Inversionen von bis zu 60 Aminosäuren in Bezug auf ein Polypeptid gemäß (a), (b) oder (c), g) Polypeptide, umfassend mindestens eines der unter (a) bis (f) genannten Polypeptide.
10. Polypeptid nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass es sich um eine Hydrolase handelt.
11. Polypeptid nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei der Hydrolase um eine Glycosylase handelt.
12. Polypeptid nach Anspruch 11 , dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei der Hydrolase um eine Pullulanase handelt.
13. Polypeptid nach einem der Ansprüche 9 bis 12, dadurch gekennzeichnet, dass das Polypeptid dazu in der Lage ist, Bindungen zwischen α-1 ,6-verknüßpften D- Glucose-Einheiten zu spalten.
14. Enzymzubereitung, umfassend ein Polypeptid nach einem der Ansprüche 9 bis 13.
15. Enzymzubereitung nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass sie zusätzlich Enzyme ausgewählt aus Polysaccharidasen, Proteasen und Nukleasen enthält.
16. Zusammensetzung, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Sterilisations-, Desinfektions-, Wasch-, Geschirrspül- und Reinigungsmittel, dadurch gekennzeichnet, dass sie ein Polypeptid nach einem der Ansprüche 9 bis 13 oder eine Enzymzubereitung nach Anspruch 14 oder 15 enthält.
17. Zusammensetzung nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass das Polypeptid und/oder die Enzymzubereitung in Mengen bis zu 10 Gew.-% in der Zubereitung enthalten sind.
18. Zusammensetzung nach Anspruch 16 oder 17, dadurch gekennzeichnet, dass sie mindestens eine weitere Komponente enthält, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Tensiden, Buildem, Säuren, alkalischen Substanzen, Hydrotropen, Lösungsmitteln, Verdickungsmitteln, Bleichmitteln, Farbstoffen, Parfüms, Korrosionsinhibitoren, Sequestriermitteln, Elektrolyten, optischen Aufhellern, Vergrauungsinhibitoren, Silberkorrosionsinhibitoren,
Farbübertragungsinhibitoren, Schauminhibitoren, Abrasivstoffen, UV- Absorbenzien, Lösungsmitteln, Abrasivstoffen, Antistatika, Perlglanzmitteln und Hautschutzmitteln.
19. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 16 bis 18, dadurch gekennzeichnet, dass es sich um eine feste, gelförmige, pastöse oder flüssige Zusammensetzung handelt.
20. Erzeugnis enthaltend ein Polypeptid nach einem der Ansprüche 9 bis 13, eine Enzymzubereitung nach Anspruch 14 oder 15 oder eine Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 16 bis 19 und einen Sprühspender zur Dosierung der Enzymzubereitung oder des Reinigungsmittels als Aerosol und/oder als Schaum.
21. Verfahren zur Hydrolyse von Biofilmen auf Oberflächen oder zur Entfernung von Schmutzresten auf Oberflächen durch Inkubation mit einem Polypeptid nach einem der Ansprüche 9 bis 13, einer Enzymzubereitung nach Anspruch 14 oder 15 oder einer Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 16 bis 19, gegebenenfalls unter Verwendung eines Erzeugnisses nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, dass die Vitalität der mikrobiellen Zellen nicht nachhaltig geschädigt wird.
22. Verfahren zur Hydrolyse von Biofilmen auf Oberflächen, dadurch gekennzeichnet, dass das Polypeptid, die Enzymzubereitung oder das Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, gegebenenfalls unter Benutzung eines erfindungsgemäßen Erzeugnisses nach Anspruch 20, auf die mit Biofilm überzogene Fläche aufgebracht wird, gegebenenfalls mit einem Tuch, einem Schwamm, einer Bürste oder einem sonstigen zur Reinigung geeigneten Utensil auf der von Biofilm befallenen Oberfläche verwischt wird oder verrieben wird und, gegebenenfalls nach einer Einwirkzeit von 1 bis 30 Minuten, einigen Stunden oder über Nacht, mit klarem Wasser abgespült wird, worauf die Oberfläche mit einem trockenen Tuch abgewischt wird.
23. Verwendung von Polypeptiden nach einem der Ansprüche 9 bis 13, einer Enzymzubereitung nach Anspruch 14 oder 15 oder einer Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 16 bis 19 zur Zerstörung und/oder Entfernung von Biofilmen und/oder zur Entfernung von Schmutzresten auf Oberflächen.
24. Verwendung von Polypeptiden nach einem der Ansprüche 9 bis 13, einer Enzymzubereitung nach Anspruch 14 oder 15 oder einer Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 16 bis 19 zum Abbau von Pullulan.
25. Verwendung von Polypeptiden nach einem der Ansprüche 9 bis 13, einer Enzymzubereitung nach Anspruch 14 oder 15 oder einer Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 16 bis 19 zur hydrolytischen Spaltung von α-1 ,4- und/oder α-1 ,6-Bindungen zwischen D-Monosacchariden.
26. Verwendung von Polypeptiden nach einem der Ansprüche 9 bis 13, einer Enzymzubereitung nach Anspruch 14 oder 15 oder einer Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 16 bis 19 zur Reinigung von Textilien.
27. Erzeugnis aus einer Enzymzubereitung oder einem Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche und einer Mehrkammerflasche.
28. Kosmetische und/oder pharmazeutische Zubereitung enthaltend Polypeptide nach einem der Ansprüche 9 bis 13 oder eine Enzymzubereitung nach Anspruch 14 oder 15.
29. Kosmetische und/oder pharmazeutische Zubereitung nach Anspruch 28, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei der Zubereitung um Mund-, Zahn- oder Zahnprothesenpflegemittel handelt.
30. Verwendung von Polypeptiden nach einem der Ansprüche 9 bis 13 oder einer Enzymzubereitung nach Anspruch 14 oder 15 zur Herstellung einer kosmetischen Zubereitung.
31. Verwendung von Polypeptiden nach einem der Ansprüche 9 bis 13 oder einer Enzymzubereitung nach Anspruch 14 oder 15 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Verhinderung oder zum Abbau von Zahnbelag.
32. Bakterium Shewanella sp. 40-3 gemäß DSM 16509.
33. Hydrolasen erhältlich aus Shewanella sp. 40-3 gemäß DSM 16509.
34. Verwendung von Shewanella sp. 40-3 zum Abbau von Biofilmen oder zur Entfernung von Schmutzresten von Oberflächen.
35. Verwendung von Shewanella sp. 40-3 zum Abbau von Pullulan.
36. Verwendung von Shewanella sp. 40-3 zur hydrolytischen Spaltung von α-1 ,4- und/oder α-1 ,6-Bindungen zwischen D-Monosacchariden.
37. Verfahren zur Isolation und/oder Identifizierung von Hydrolasen aus psychrophilen Bakterien, folgende Schritte umfassend: a) Isolation von genomischer DNA aus einem psychrophilen Bakterium, b) Verdau der genomischen DNA mittels geeigneter Restriktionsendonukleasen, c) Einbau der DNA-Banden mit einer Größe zwischen 5 und 10 kbp in einen Transfektionsvektor, d) Erstellen einer Genbank durch Transfektion eines Wirts mit dem Transfektionsvektor, e) Screening der Genbank nach Zellen, die Enzyme mit gewünschter Aktivität enthalten, f) gegebenenfalls Isolation des Plasmids mit dem Klon mit der gewünschten Aktivität, und g) gegebenenfalls Sequenzierung des isolierten Klons.
PCT/EP2005/010202 2004-09-23 2005-09-21 Pullulanasen aus psychrophilen organismen Ceased WO2006032477A1 (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE102004046116.3 2004-09-23
DE200410046116 DE102004046116A1 (de) 2004-09-23 2004-09-23 Pullulanasen aus psychrophilen Organismen

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2006032477A1 true WO2006032477A1 (de) 2006-03-30

Family

ID=35502588

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/EP2005/010202 Ceased WO2006032477A1 (de) 2004-09-23 2005-09-21 Pullulanasen aus psychrophilen organismen

Country Status (2)

Country Link
DE (1) DE102004046116A1 (de)
WO (1) WO2006032477A1 (de)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9675736B2 (en) 2010-02-12 2017-06-13 University Of Newcastle Upon Tyne Compounds and methods for biofilm disruption and prevention
CN107828904A (zh) * 2017-12-08 2018-03-23 江汉大学 一种小麦条斑病菌小种分离鉴定方法

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102006038448A1 (de) 2005-12-28 2008-02-21 Henkel Kgaa Enzym-haltiges Reinigungsmittel
DE102022127017A1 (de) * 2022-10-14 2024-04-25 Rudolf Gmbh Biostoning

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999020239A1 (en) * 1997-10-17 1999-04-29 Novo Nordisk A/S Plaque-inhibiting oral compositions
US20040082028A1 (en) * 2000-01-12 2004-04-29 Novozymes A/S Pullulanase variants and methods for preparing such variants with predetermined properties

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5958672A (en) * 1995-07-18 1999-09-28 Diversa Corporation Protein activity screening of clones having DNA from uncultivated microorganisms
US6100080A (en) * 1996-12-18 2000-08-08 Novo Nordisk A/S Method for enzymatic treatment of biofilm

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999020239A1 (en) * 1997-10-17 1999-04-29 Novo Nordisk A/S Plaque-inhibiting oral compositions
US20040082028A1 (en) * 2000-01-12 2004-04-29 Novozymes A/S Pullulanase variants and methods for preparing such variants with predetermined properties

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AOKI HIROYOSHI ET AL: "Molecular cloning and heterologous expression of the isopullulanase gene from Aspergillus niger A.T.C.C. 9642", BIOCHEMICAL JOURNAL, PORTLAND PRESS, LONDON, GB, vol. 323, no. 3, 1997, pages 757 - 764, XP002174978, ISSN: 0264-6021 *
DATABASE EMBL [online] 21 December 2002 (2002-12-21), "Chloroflexus aurantiacus pullulanase (pulA), chlo p980 protein, and chlorosome basal plate protein (csmO) genes, complete cds.", XP002362510, retrieved from EBI accession no. EM_PRO:AY178438 Database accession no. AY178438 *
DATABASE EMBL [online] 25 October 2004 (2004-10-25), "Vibrio parahaemolyticus RIMD 2210633 DNA, chromosome 2, complete sequence.", XP002362512, retrieved from EBI accession no. EM_PRO:BA000032 Database accession no. BA000032 *
DATABASE UniProt [online] 1 June 2003 (2003-06-01), "Putative pullulanase. KVEKPVVSVT KSADAPTFGE TALYLRGTIT SWDTPAQDSA AKFSYVANDV YSLDIDLAAG", XP002362511, retrieved from EBI accession no. UNIPROT:Q87FP0 Database accession no. Q87FP0 *
DATABASE UniProt [online] 1 March 2003 (2003-03-01), "Pullulanase.", retrieved from EBI accession no. UNIPROT:Q8GCD1 Database accession no. Q8GCD1 *
DATABASE UniProt [online] 13 September 2005 (2005-09-13), "Putative pullulanase.", XP002362509, retrieved from EBI accession no. UNIPROT:Q484T3 Database accession no. Q484T3 *
DOMAN-PYTKA MONIKA ET AL: "Pullulan degrading enzymes of bacterial origin", CRITICAL REVIEWS IN MICROBIOLOGY, vol. 30, no. 2, 2004, pages 107 - 121, XP008058274, ISSN: 1040-841X *
FEEDERLE REGINA ET AL: "Metabolism of cyclodextrins by Klebsiella oxytoca M5a1: Purification and characterization of a cytoplasmically located cyclodextrinase", ARCHIVES OF MICROBIOLOGY, vol. 165, no. 3, 1996, pages 206 - 212, XP008058235, ISSN: 0302-8933 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9675736B2 (en) 2010-02-12 2017-06-13 University Of Newcastle Upon Tyne Compounds and methods for biofilm disruption and prevention
US10300173B2 (en) 2010-02-12 2019-05-28 University Of Newcastle Upon Tyne Compounds and methods for biofilm disruption and prevention
CN107828904A (zh) * 2017-12-08 2018-03-23 江汉大学 一种小麦条斑病菌小种分离鉴定方法
CN107828904B (zh) * 2017-12-08 2021-07-02 江汉大学 一种小麦条斑病菌小种分离鉴定方法

Also Published As

Publication number Publication date
DE102004046116A1 (de) 2006-04-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1307547B1 (de) Neues amylolytisches enzym aus bacillus sp. a 7-7 (dsm 12368) sowie wasch- und reinigungsmittel mit diesem neuen amylolytischen enzym
EP1337648B1 (de) Cyclodextrin -glucanotransferase(cg tase) aus bacillus agaradherens(dsm 9948)sowie wasch-und reinigungsmittel mit dieser neuen cyclodextrin-glucanotransferase
DE10138753B4 (de) Wasch- und Reinigungsmittel mit Hybrid-Alpha-Amylasen
EP1737952B1 (de) Neue alkalische proteasen und wasch- und reinigungsmittel, enthaltend diese neuen alkalischen proteasen
DE102005028295A1 (de) Proteasen aus psychrophilen Organismen
DE102007003143A1 (de) Neue Alkalische Protease aus Bacillus gibsonii und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend diese neue Alkalische Protease
DE102006022216A1 (de) Neue Alkalische Protease aus Bacillus gibsonii und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend diese neue Alkalische Protease
DE102006022224A1 (de) Subtilisin aus Bacillus pumilus und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend dieses neue Subtilisin
DE10304331B4 (de) Enzymatische Entfernung von Biofilmen auf Haushaltsoberflächen
DE10064983A1 (de) Neue Alkalische Protease aus Bacillus alcalophilus (DSM 11233)
WO2003054184A9 (de) Neue alkalische protease aus bacillus gibsonii (dsm 14393) und wasch- und reinigungsmittel enthaltend diese neue alkalische protease
EP1385943A2 (de) Alkalische protease-varianten und wasch- und reinigungsmittel enthaltend diese alkalischen protease-varianten
EP1456367A1 (de) Neue alkalische protease aus bacillus gibsonii (dsm 14391) und wasch- und reinigungsmittel enthaltend diese neue alkalische protease
WO2003038082A2 (de) Alkalische protease-varianten und wash- und reinigungsmittel enthaltend diese alkalischen protease-varianten
EP1456368A2 (de) Neue alkalische protease aus bacillus sp. (dsm 14392) und wasch- und reinigungsmittel enthaltend diese neue alkalische protease
EP1945784B1 (de) System zur enzymatischen generierung von wasserstoffperoxid
DE102005037659A1 (de) Verwendung von Esterasen zur Spaltung von Kunststoffen
DE102004027091A1 (de) Leistungsverbesserte Alkalische Protease-Varianten und Wasch- und Reinigungsmittel, enthaltend diese leistungsverbesserten Alkalische Protease-Varianten
DE10358535A1 (de) Hybridenzyme mit kationischer Bindedomäne
DE102007049830A1 (de) Neue Proteinvarianten durch zirkulare Permutation
DE10309803B4 (de) α-Amylase-Varianten mit verbesserter Alkaliaktivität
WO2006032477A1 (de) Pullulanasen aus psychrophilen organismen
DE102007051092A1 (de) Subtilisin aus Becillus pumilus und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend dieses neue Subtilisin
DE10036752C2 (de) Wasch- und Reinigungsmittel mit einem neuen amylolytischen Enzym aus Bacillus sp. A 7-7(DSM 12368)
DE10059108A1 (de) Wasch- und Reinigungsmittel mit einer neuen Cyclodextrin-Glucanotransferase (CG Tase) aus Bacillus agaradherens (DSM 9948)

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BW BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KM KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV LY MA MD MG MK MN MW MX MZ NA NG NI NO NZ OM PG PH PL PT RO RU SC SD SE SG SK SL SM SY TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): BW GH GM KE LS MW MZ NA SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IS IT LT LU LV MC NL PL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase