WO2006095798A1

WO2006095798A1 - フィトステロールを含んだリポソームを含有する抗癌用経口組成物、該リポソームによる癌の予防又は治療

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Publication number: WO2006095798A1
Application number: PCT/JP2006/304555
Authority: WO
Inventors: Hiromichi Imanaka; Atsushi Ishikado; Naoto Oku
Original assignee: Sunstar Inc
Current assignee: Sunstar Inc
Priority date: 2005-03-09
Filing date: 2006-03-09
Publication date: 2006-09-14
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Abstract

フィトステロール（β－シトステロール、カンペステロール、スティグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール、エルゴスタディエノールなど）を含んだリポソームの新規な用途。フィトステロールを含んだリポソームが癌転移抑制作用を有することが新たに見出された。フィトステロールを含んだリポソームを経口投与することによって、癌転移が抑制され、癌の予防又は治療に有用である。

Description

明細書

フィトステロールを含んだリボソームを含有する抗癌用経口組成物、該リポソームによる癌の予防又は治療

技術分野

[0001] 本発明は、フィトステロールを含んだリボソームを含有する、癌を抑制するための経口組成物、及び該リボソームによる癌の予防又は治療に関する。

背景技術

[0002] 近年、剤型修飾を施す方法の一つとして微粒子製剤を薬物キャリア一として利用する研究が精力的になされている。そのような研究の一つとして、リボソームを経口投与の薬物キャリア一として利用する検討がなされている。そして、リボソームは水溶性薬物をその内水層に、脂溶性薬物を脂質二重層へ取り込むことができるため、薬物のターゲテイング、徐放化、副作用の軽減などを目的とした DDS製剤の薬物運搬体としてその応用が試みられている。また、リボソームは生体膜の成分から構成されているため生体に対する安全性が高いことも知られている。また、通常、経口投与では薬効をほとんど示さな力つたインスリンを、修飾したリボソームに封入することによって、経口投与時のインスリンの薬効が向上することが認められている（非特許文献 1〜3) 。また、エリスロポエチンをリボソームに封入することによりそのバイオアベイラビリティ一が上昇することも報告されている（非特許文献 4)。し力しながら、これらの技術において、薬効はリボソームに内包される成分によるものであり、リボソームは単にキャリア一として利用されているだけであった。したがって、リボソームそのものの薬効についてはあまり注目されていなかった。

[0003] また、ステロールは動植物細胞の構成成分の一つであり、動物植物に含まれるものを動物ステロール、植物細胞に含まれるものをフィトステロール (植物ステロールとも称される）という。コレステロールは動物ステロールの代表的な例であり、過剰に摂取すると健康に悪影響を与えることが知られている。一方、最近になって、フィトステロールについての研究が盛んになり、血漿コレステロール低下作用、大腸癌の発生を抑制する作用などが報告されている。非特言午文献 1 : Hirofumi Takeuchi et al.， "Enteral Absorption of Insulin in Rats from Mucoadhesive Chitosan- Coated Liposomes， Pharmaceutical Research, 13(6), 896 -901, 1996

非特言午文献 2 : Muramatsu K et al., "Dipalmitoylphosphatidylcholine Liposomes with Soybean-Derived Sterols and Cholesterol as a Carrier for the Oral Administration of Insulin in Rats", Biological & Pharmaceutical Bulletin, 19(8)， 1055—1058， 1996 非特許文献 3 : Kazunori Iwanaga et al., Application of surface-coated liposomes fo r oral delivery of peptide: Effects of coating the liposome's surface on the GI transit of insulin", Journal of Pharmaceutical Sciences, 88， 248-252, 1999

非特言午文献 4 :Yoshie Maitani et al"，， Oral administration of recombinant human ery thropoietin in liposomes in rats: Influence of lipid composition and size of liposomes on bioavailability", Journal of Pharmaceutical sciences, 85， 440-445, 1996 発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0004] し力しながら、フィトステロールは水に不溶性又は難溶性であることから投与方法やキャリアーの開発が困難であった。そこで、本発明は、フィトステロールを含んだ癌を抑制する経口組成物、及び該リボソームによる癌の予防又は治療方法などの提供を目的とする。

課題を解決するための手段

[0005] 本発明者は、上記課題を解決するため鋭意検討を行った結果、リボソーム膜構成成分としてフィトステロールを利用したリボソームが癌の転移を抑制する作用を有すること、特にレシチン及び j8—シトステロールをリボソーム膜構成成分として含有するリポソームのその作用が強いことを見出した。したがって、本発明はフィトステロールを含んだリボソームの癌の予防又は治療の用途に関する。

[0006] 即ち、本発明は、下記の各項に係る組成物、予防又は治療方法及び使用を提供するものである。

項 1.フィトステロールを含んだリボソームを含有する抗癌用経口組成物。

項 2.フィトステロールが、 βーシトステロール、カンペステロール、スティグマステロ一ル、ブラシカステロール、エルゴステロール及びエルゴスタディェノールからなる群から選択される少なくとも 1種である項 1に記載の経口組成物。

項 3.リボソームにおけるフィトステロール含有量が 1〜33重量％である項 1に記載の経口組成物。

項 4.抗癌作用が癌転移抑制である項 1〜3のいずれかに記載の経口組成物。項 5.経口組成物が食品組成物である項 1〜4の、ずれかに記載の組成物。

項 6.経口組成物が医薬組成物である項 1〜4の、ずれかに記載の経口組成物。項 7.フィトステロールを含んだリボソームの癌転移抑制に有効な量を対象者に経口投与することを特徴とする癌を予防又は治療する方法。

項 8.フィトステロールが、 /3ーシトステロール、カンペステロール、スティグマステロ一ル、ブラシカステロール、エルゴステロール及びエルゴスタディェノールからなる群から選択される少なくとも 1種である項 7に記載の癌を予防又は治療する方法。

項 9.経口投与されるリボソームの量力成人一人 1日あたり、 lOmg〜： LOOOOmgである項 7又は 8に記載の癌を予防又は治療する方法。

項 10.癌を予防又は治療するための、フィトステロールを含んだリボソームの使用。項 11.フィトステロールが、 /3—シトステロール、カンペステロール、スティグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール及びエルゴスタディェノールからなる群力選択される少なくとも 1種である項 10に記載の使用。

本発明の経口組成物は癌の転移を抑制する作用を有し、膜構成成分としてフィトステロールを含んだリボソームを有効成分として含有する。なお、本発明において、癌転移抑制とは、発生した癌が他の組織や器官に転移することを抑制することを包含する。また、本発明の癌を予防又は治療する方法は、フィトステロールを含んだリポソ一ムの癌転移抑制に有効な量を対象者に経口投与することを特徴とする。さらに、本発明は、癌を予防又は治療するための、フィトステロールを含んだリボソームの使用に関する。ここで、癌の種類に制限はなぐ例としては、頭頸部癌、胃癌、結腸癌、直腸癌、大腸癌、肝臓癌、胆のう，胆管癌、脾臓癌、肺癌、乳癌、膀胱癌、前立腺癌、子宮癌、口腔癌、咽頭癌、咽喉癌、舌癌、食道癌、腎癌、卵巣癌等が挙げられる。特に粘膜部位の癌に対して有効であり、大腸癌、口腔癌、舌癌、咽喉癌、肺癌、に対して高い効果が期待できる。

[0008] リボソームはリン脂質を主体とした脂質を十分量の水で水和することにより形成される二分子膜を有する脂質小胞体である。現在、リボソームは脂質二重層の数に基づいて分類され、多重膜リボソーム (MLV)と一枚膜リボソームに分類される。一枚膜リポソームは、そのサイズに応じて、更に SUV (small unilamella vesicle)、 LUV(large u nilamella vesicle), GUV(giant unilamella vesicle)に分類される。本発明のリボソームは、これらのいずれであってもよい。好ましいのは ML Vである。本発明では、リポソ一ムの大きさは、通常 30〜： LOOOnm、好ましくは 30〜600nm、より好ましくは 50〜40 Onm、より一層好ましくは 50〜200nmである。

[0009] リボソームは、従来の方法により製造することができる。例えば、所定量のレシチン及びステロールを、例えばエタノールなどの適当な有機溶媒で可溶ィ匕し、減圧下に溶媒を除去し、膜脂質を作成後、これに種々の緩衝液などを含む水溶液を添加して、例えば、 1000〜3000rpm程度で 2〜5分間程度撹拌して、リボソーム懸濁液を調製すること〖こより得ることができる。

[0010] 得られた懸濁液に対しては、必要に応じて、リボソーム外液中の生理活性物質を除去する操作、例えば懸濁液を濾過後得られた濾液を透析する操作を行ってもょヽ。

[0011] 本発明では、ステロールとしてフィトステロールを使用する。フィトステロールは主として植物細胞の構成成分として存在することが知られてヽる。フィトステロールとしては、 /3ーシトステロール、カンペステロール、スティグマステロール、ブラシカステロ一ル、エルゴステロール、ェルゴスタディェノールなどが例示され、 1種単独又は 2種以上組み合わせて使用することができる。好ましくは、 13—シトステロールである。リポソームにおけるフィトステロールの含有量は、通常 1〜33重量⁰ /₀、好ましくは 10〜33重量％、より好ましくは 10〜25重量％である。

[0012] また、本発明では、レシチンとして、例えば、卵黄レシチン、大豆レシチン、ナタネレシチン、コーンレシチン、ひまわりレシチン、ピーナッツレシチンなどを 1種単独で又は 2種以上組み合わせて使用することができるがこれらに限定されない。本発明では、これらの水素添加物を用いることもできる。レシチンはホスファチジルコリン又は 1, 2 ージァシルグリセロール 3—ホスホコリンとも称され、一般的に、グリセロールの 1位及び 2位に脂肪酸が結合している。本発明では、上記例示のレシチンに加えて、 1位及び 2位の両方又は片方に炭素数 12〜24の不飽和脂肪酸が結合しているレシチンを使用することが好ましぐ 1位に炭素数 12〜24の飽和脂肪酸、 2位に炭素数 12〜24 の不飽和脂肪酸が結合しているレシチンを使用することが特に好ましい。ここで、飽和脂肪酸及び不飽和脂肪酸は直鎖状及び分枝状の、ずれでもよ、。このようなレシチンを使用することにより、リボソームに封入された生理活性物質の腸吸収性が向上する。好ましい不飽和脂肪酸としては、炭素数 16〜18の不飽和脂肪酸を使用でき、特に 2位にォレイン酸、リノール酸が多く結合したレシチンを使用することにより、より腸吸収性の向上が期待できる。本発明では、卵黄レシチン、大豆レシチン、ひまわりレシチン、ナタネレシチンが好ましい。リボソームにおけるレシチンの含有量は、通常 67〜99重量⁰ /₀、好ましくは 67〜90重量⁰ /₀、より好ましくは 75〜90重量⁰ /₀である。

[0013] さらに、本発明では、リボソーム中のレシチンとフィトステロールのモル比は、 50 : 50 〜90 : 10程度カ好ましく、 55 :45〜85 : 15カり好ましく、 60 :40〜70： 30力 S最ち好ましい。モル比がこれらの範囲にあるとリボソーム膜の安定性が向上する。

[0014] レシチン又はステロールの含有量は既知の方法で測定できる。例えば、レシチンの含有量は Fiske-Subbarow法など、ステロールの含有量は HPLC、比色法などによって定量できる。

[0015] さらに、リボソームの表面をコーティングすることができ、このコーティング物も有効成分として利用できる。好ましいコーティングとしては、硫酸基を含有する多糖類によるコーティングがあげられる。硫酸基含有多糖類としては、フコィダン、カラギーナン、寒天、へノリンなどが挙げられる。また、該硫酸基含有多糖類としては、硫酸基を含まない多糖を硫酸ィ匕したものも包含され、例えば、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸などであってもよい。

[0016] 硫酸基含有多糖類としては、分子量が 5000〜300000程度のものが好ましく用いられる。これらの硫酸基含有多糖類の中でもフコィダン及びカラギーナンを好ましく用いることができ、特にフコィダンが好ましい。

[0017] 硫酸基含有多糖類の使用量は、例えば、リボソームに含有されるレシチン 100重量部に対して、 10〜500重量部程度が好ましぐ 20〜200重量部程度がより好ましい。 [0018] コーティングは、例えば、フィトステロールを含んだリボソームの懸濁液に、硫酸基含有多糖類を加え、 1000〜3000rpm程度で 2〜5分間程度撹拌することにより行うことができる。なお、 1つのコーティング膜の中に複数のリボソームが含まれていてもよい

[0019] リボソームが硫酸基含有多糖類でコーティングされていることは、例えば、リポソ一ム溶液のゼータ電位が、硫酸基含有多糖類を添加して撹拌することにより変化することにより確認できる。

[0020] リボソームにはレシチン、フィトステロール以外にも必要に応じて、ひ一トコフェロール、ァスコルビン酸などの抗酸化剤、乳酸、クェン酸などの有機酸、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルエタノールァミンなどの脂質、キトサン、フコィダン、ヒアルロン酸などの天然高分子、ポリエチレングリコール、カルボキシビ二ルポリマーなどの合成高分子、トレハロース、ラクチュロース、マルチトールなどの糖質、グリセリンなどのポリオール等を加えることができる。

[0021] 本発明において利用されるリボソームには必要に応じて様々な物質を内容物として封入することができる。例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、タキソールなどの薬効成分、 βーグルカン、多糖類などの制癌効果を有する成分などである。内容物を封入したリボソームは、従来の方法により製造することができる。例えば、所定量のレシチン及びフィトステロールを、例えばエタノールなどの適当な有機溶媒で可溶化し、減圧下に溶媒を除去し、膜脂質を作成後、これに内容物を含む水溶液を添カ卩して、例えば、 1000〜3000rpm程度で 2〜5分間程度撹拌して、リポソ一ム懸濁液を調製することにより得ることができる。リボソームに包含される内容物の量は、リボソーム中の脂質に対して通常 1〜： LOOO重量⁰ /₀、好ましくは 10〜500重量％である。

[0022] 得られた懸濁液に対しては、必要に応じて、リボソーム外液中の内容物を除去する操作、例えば懸濁液を濾過後、得られた濾液を透析する操作を行ってもよい。

[0023] 本発明の経口組成物を食品組成物として利用する場合には、リボソームを必要に応じてその食品の形態に応じた可食性担体、食品素材、食品添加物などと組み合わせて、通常の方法により調製することができる。食品の形態としては、飲料などの液状の食品、錠剤、顆粒、チユアブルタブレットなどの固形の食品等として利用することができる。また、ヨーグルトなどの半固形の食品としても利用することができる。具体的な食品の形態としては、ジュース、清涼飲料水、ティー等の液体飲料;粉末ジュース、粉末スープ等の粉末飲料;チョコレート、キャンディー、チューインガム、アイスタリーム、ゼリー、クッキー、ビスケット、コーンフレーク、チユアブルタブレット、フィノレムシ一ト、ウエハース、グミ、煎餅、饅頭等の菓子類;ドレッシング、ソース等の調味料;パン類、麵類、こんにやぐ練り製品（かまぼこ等）、ふりかけ、口腔用スプレー、トローチ等が挙げられる。また、添加物として、乳酸菌などの生菌又は死菌、その他のプロバイォテイクス素材、ビタミン、生薬、ハーブ等の植物そのものまたは抽出物を配合しても良い。

[0024] 食品組成物の担体として例えば、マルチトール、キシリトール、ソルビトール、エリスリトール等の糖アルコール類、結晶セルロース、乳糖、白糖、ブドウ糖、デンプン、炭酸塩類、リン酸塩類等の賦形剤、ゼラチン、アルギン酸、キサンタンガム、セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチノレセノレロース、カラギーナン、プノレラン、ぺクチン等の粘結剤、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、酵素処理レシチン、酵素分解レシチン、サポニン等の乳ィ匕剤、ァスコルビン酸、トコフエロール等の抗酸化剤、乳酸、クェン酸、ダルコン酸、グルタミン酸等の酸味料、ビタミン類、アミノ酸類、乳酸塩、クェン酸塩、ダルコン酸塩などの強化剤、二酸ィ匕ケィ素等の流動化剤、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸塩類等の滑沢剤、ラクチュロース、ラフイノース、フルクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、大豆オリゴ糖等のオリゴ糖、難消化性デキストリン、サイリウム、ビートファイバ一等の食物繊維、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、グリシルリチン等の甘味料、ハツ力油、ユーカリ油、ケィヒ油、ウイキヨゥ油、チヨウジ油、オレンジ油、レモン油、ローズ油、フノレーッフレ一バー、ミントフレーバー、ペパーミントパウダー、 dl—メントール、 1—メントール等の香料を使用することができる。また、添加物として、乳酸菌などの生菌又は死菌、その他のプロバイオテイクス素材、プレバイオテイクス素材、ビタミン、生薬、ハーブ等の植物そのものまたは抽出物を配合しても良い。

[0025] 本発明の経口食品組成物は、癌の転移を抑制する作用、癌の予防作用、癌の治療作用などを有する健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養機能食品、病者用食品等の用途に用いることができる。

[0026] 本発明の経口食品組成物にお、て経口食品組成物全量に対するリボソーム含有量は組成物の剤型等に応じて適宜設定されるが、通常 0. 5〜95重量％、好ましくは 0. 8〜80重量％、より好ましくは 1〜50重量％である。また、本発明の組成物が飲料の場合、リボソーム含有量のより一層好ましい範囲は 1〜4重量％である。

[0027] また、本発明の経口組成物は、フィトステロールを含んだリボソーム及び必要に応じて薬学的に許容される担体を含有し、液剤、錠剤、顆粒剤、細粒剤、粉剤などの固形剤或いは当該液剤又は固形剤を封入したカプセル剤等の経口投与可能な医薬組成物として使用できる。薬学的に許容される担体としては、賦形剤、希釈剤等が挙げられる。また、経口医薬組成物は香料等の各種添加剤を含むこともできる。

[0028] 担体及び添加剤としては、例えば、糖アルコール類 (マルチトール、キシリトール、ソルビトール、エリスリトールなど）、乳糖、白糖、塩ィ匕ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸塩類 (炭酸カルシウムなど）、カオリン、結晶セルロース、ケィ酸、メチルセルロース、グリセリン、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム、タルク、リン酸塩類 (リン酸一水素力ルシゥム、リン酸水素カルシウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸二カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二水素カルシウム、リン酸二水素ナトリウムなど）、硫酸カルシウム、乳酸カルシウム、カカオ脂等の賦形剤、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、ポリビュルアルコール、ポリビュルエーテル、ポリビュルピロリドン、クロスポリビュルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセル口ース、ヒドロキシプロピノレメチノレセノレロース、ヒドロキシェチノレセノレロース、カノレボキシビ-ルポリマー、結晶セルロース、粉末セルロース、結晶セルロース 'カルメロースナトリウム、カノレボキシメチノレセノレロース、セラック、メチノレセノレロース、ェチノレセノレロース、リン酸カリウム、アラビアゴム末、プルラン、ぺクチン、デキストリン、トウモロコシデンプン、アルファ一化デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、ゼラチン、キサンタンガム、カラギーナン、トラガント、トラガント末、マクロゴール等の結合剤、乾燥デンプン、ァルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン酸、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤、第 4級アンモニゥム塩、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケィ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレンダリコール等の滑沢剤、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、酵素処理レシチン、酵素分解レシチン、サポニン等の乳化剤、ァスコルビン酸、トコフエロール等の抗酸化剤、乳酸、クェン酸、ダルコン酸、グルタミン酸等の酸味料、ビタミン類、アミノ酸類、乳酸塩、クェン酸塩、ダルコン酸塩などの強化剤、二酸化ケイ素等の流動化剤、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、グリシルリチン等の甘味料、ハツ力油、ユーカリ油、ケィヒ油、ウイキヨゥ油、チヨウジ油、オレンジ油、レモン油、ローズ油、フルーツフレーバー、ミントフレーバー、ペパーミントパウダー、 dl—メントール、 1 メントール等の香料等が挙げられる。

[0029] 更に錠剤等の固形剤には必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠、二重錠、多層錠等とすることができる。また、硬質ゼラチンカプセル、軟質カプセル等にリボソームを充填してカプセル剤とすることちでさる。

[0030] 液体製剤は水性又は油性の懸濁液、溶液、シロップ、エリキシル剤であってもよく、通常の担体、添加剤等を用いて常法に従い、調製することができる。

[0031] また、医薬組成物は抗癌剤、癌転移抑制剤、癌予防剤として用いることができる。

[0032] 本発明の経口医薬組成物にぉ、て経口医薬組成物全量に対するリボソーム含有量は、組成物の剤型等に応じて適宜設定されるが、通常 0. 5〜95重量％、好ましくは 0. 8〜80重量％、より好ましくは 1〜50重量％である。また、本発明の組成物が液体製剤の場合、リボソーム含有量のより一層好ましい範囲は 1〜4重量％である。

[0033] 本発明の経口組成物の摂取量は、成人一人 1日あたり、摂取されるリボソームの重量力通常 lOmg〜： LOOOOmg、好ましくは 20mg〜2000mg、より好ましくは 50mg 〜2000mgとなる量である。

発明の効果

[0034] フィトステロールを含んだリボソームは癌の転移を有意に抑制する効果を有する。本発明は、癌の転移の抑制、癌の予防又は治療に有用である。本発明の経口組成物は、特に食品組成物、医薬組成物として有用である。

図面の簡単な説明

[0035] [図 1]NK活性の試験結果を示すグラフである。縦軸は NK活性 (%)を示し、横軸はェフエクタ一細胞：ターゲット細胞の比（E/T比 50 : 1、 25 : 1)を示し、參はコントロール群、▲はコレステロール群、國はフィトステロール群を示す。

発明を実施するための最良の形態

[0036] 以下に実施例及び試験例を示して、本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。

実施例

[0037] 実施例 1

—シトステロール及び卵レシチン蹲構成成 ^するリボソームの調製薄膜水和法によりリボソームを調製した。卵黄レシチンと |8—シトステロールのモル比が 2 : 1となるように、クロ口ホルムで 500mMの濃度に溶解した卵黄レシチンを 160 1、 250mMの濃度に溶解した |8—シトステロールを 160 1量りとり、両溶液を混合し、クロ口ホルムを加えた。ロータリーエバポレーターにてクロ口ホルムを減圧下留去し、真空乾燥させて薄膜を作成した。この薄膜に卵黄レシチン濃度が 20mMとなるようにリン酸緩衝生理食塩水（PBS)を 4mlカ卩え、ボルテックスミキサーで処理し、液体窒素による凍結融解を 3回行うことによりリボソーム懸濁液を得た。この懸濁液をプロ一ブ型ソニケーターで 10分間処理し、リボソーム組成物を得た。

[0038] 比較例 1

コレステロール及び卵昔レシチンを膜構成成分するリボソームの調製

βーシトステロールをコレステロールに代えた以外は実施例 1と同様にしてリポソ一ム組成物を得た。

[0039] 試験例 1

リボソーム組成物による B16BL6メラノーマ細胞の転移抑制作用

5週齢の C57BL6/Jマウス 20匹を 4群に分けた。コントロール群には 1日 1回 0.2mLのリン酸緩衝生理食塩水（PBS)を飼育 6日目まで強制的に経口投与した。同様に、リポソーム化 j8—シトステロール群には PBSに代えて実施例 1のリボソーム組成物を経口投与し、 β—シトステロール群には PBSに代えてリボソーム化されていない通常の |8 ーシトステロールの水懸濁液（リボソーム化 /3ーシトステロール群に投与されたリポソーム化 j8—シトステロールと同重量の j8—シトステロールを含有する）を経口投与し、リボソーム化コレステロール群には PBSに代えて比較例 1のリボソーム組成物を経口投与した。飼育 7日目に無血清培地に懸濁した B16BL6メラノーマ細胞 (3 X 10⁴個 Ζθ .2mLZ匹)を静脈内投与した。飼育 21日目にマウスを解剖して肺を摘出し、肺表面を観察してコロニーの数を数えた。各群マウスのコロニー数の平均値を表 1に示す。

[0040] [表 1]

[0041] βーシトステロールを膜構成成分とするリボソームは、リボソーム化されていない j8 ーシトステロール、コレステロールを膜構成成分とするリボソームと比較して腫瘍細胞の転移を有意に抑制した。これにより、フィトステロールを含んだリボソームが大腸癌、口腔癌、胃癌、咽頭癌、肺癌等の固形癌に対して有効であることが示された。したがって、フィトステロールを含んだリボソームは抗癌用経口組成物の有効成分として有用である。

[0042] 試験例 2

リボソーム成による NK細胞に針する作用

5週齢の C57BL6/Jマウス 3匹を 3群に分けた。コントロール群には 1日 1回 0.2mLのリン酸緩衝生理食塩水（PBS)を飼育 6日目まで強制的に経口投与した。同様に、フイトステロール群には PBSに代えて実施例 1のリボソーム組成物を投与し、コレステロ一ル群には PBSに代えて比較例 1のリボソーム組成物を経口投与した。飼育 7日目にマウスを解剖して無菌状態で脾臓を摘出し、単一の脾臓細胞懸濁液を作成した。 YAC -1細胞（ターゲット細胞）を Na ⁵¹CrOで標識した（3.7MBq/10⁶個）。 96ウェルタイタ

2 4

一プレートに 100 μ Lの標識された YAC-1細胞（1 X lo well)を入れ、このゥエルに脾臓細胞（エフェクター細胞、 NK細胞）と YAC-1細胞の比（E/T比）が 50： 1、 25： 1となるように 100 Lの NK細胞をカ卩えた（NK細胞添カ卩ゥエル）。また、 NK細胞をカ卩えないゥエル (NK細胞非添カ卩ゥエル)も用意した。さらに、 NK細胞添カ卩ゥエルと同じ細胞種、細胞量及び細胞比であるゥエルにトリトン X-100を添カ卩した（トリトン添カ卩ゥエル)。このプレートを 5%CO雰囲気中 37°Cで 4時間インキュベートした後、 200gで 5分間遠心分

2

離した。遠心分離により得られた上清において遊離された放射能をガンマカウンターで計測した。 ⁵¹Crの遊離比 (NK活性）は下記の式で算出した。

[0043] [化 1]

(NK細胞添加ゥエル計測値— NK細胞非添加ゥエル計測値）遊離比（％) = X 1 0 0

(トリトン添加ゥエル計測値—NK細胞非添加ゥエル計測値）

[0044] なお、トリトン添カ卩ゥエル計測値は、ターゲット細胞 (YAC-1細胞）及びエフェクター細胞 (NK細胞）にトリトン X-100を添加することで得られた最大遊離値で、全ての癌細胞が破壊された時に遊離する Cr標識の量であり、総癌細胞数に相当する。また、 NK 細胞添加ゥエル計測値は、 NK細胞をカ卩えることで遊離した Cr標識の量であり、 NK細胞によって殺された癌細胞数に相当する。 NK細胞非添加ゥエル計測値は、コント口ールであり、 YAC-1細胞単独の状態で遊離した Cr標識の量である。

[0045] 結果を図 1に示す。コレステロール群はコントロール群より高い NK活性を示したが、フィトステロール群はそのコレステロール群よりさらに有意に高、NK活性を示した。

[0046] ifmi -.

卵黄レシチンとフィトステロールを用いてリボソームを調製し、該リボソームとその他の成分を用い、常法により下記の組成の錠剤を製造した。

[0047] 卵黄レシチン 4.0里

フィトステロール 1.0重舅 5

マルチトール 42.0重， %0/ 乳糖 25.0重， 0/

ラクチュロース 20.0重， I

ショ糖脂肪酸エステル 8.0重 I 処方例 2 :顆粒

卵黄レシチンとフィトステロールを用いてリボソームを調製し、該リボソームとその他の成分を用い、常法により下記の組成の顆粒を製造した。

[0048] 卵黄レシチン 5.0重量％

フィトステロール 1.0重量％

乳糖 41.3重量％

デンプン 50.0重量％

キサンタンガム 2 o.0重量％

トコフエ口一ル 0.1重 |l||m瞬量％

ダルコン酸 0.1重量％

香料 0.5重量％ 13 :籠

卵黄 I -ルを用いてリボソームを調製し、該リボソームとその他の成分を用い、常法により下記の組成の飲料を製造した。

[0049]

卵黄レシチン 1.0重量％

フィトステロール 0.2重量％

クェン酸

クェン酸ナトリウム 0.5重量％

果糖 .ぶどう糖液糖 10.0重量％

ビタミン C 0.5重量％

香料 0.15重量％

精製水残部

Claims

請求の範囲

[I] フィトステロールを含んだリボソームを含有する抗癌用経口組成物。

[2] フィトステロールが、 /3ーシトステロール、カンペステロール、スティグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール及びエルゴスタディェノールからなる群から選択される少なくとも 1種である請求項 1に記載の経口組成物。

[3] リボソームにおけるフィトステロール含有量が 1〜33重量％である請求項 1に記載の経口組成物。

[4] 抗癌作用が癌転移抑制である請求項 1〜3のいずれかに記載の経口組成物。

[5] 経口組成物が食品組成物である請求項 1〜4の、ずれかに記載の組成物。

[6] 経口組成物が医薬組成物である請求項 1〜4の、ずれかに記載の経口組成物。

[7] フィトステロールを含んだリボソームの癌転移抑制に有効な量を対象者に経口投与することを特徴とする癌を予防又は治療する方法。

[8] フィトステロールが、 /3ーシトステロール、カンペステロール、スティグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール及びエルゴスタディェノールからなる群から選択される少なくとも 1種である請求項 7に記載の癌を予防又は治療する方法。

[9] 経口投与されるリボソームの量力成人一人 1日あたり、 lOmg〜： LOOOOmgである請求項 7又は 8に記載の癌を予防又は治療する方法。

[10] 癌を予防又は治療するための、フィトステロールを含んだリボソームの使用。

[II] フィトステロールが、 /3ーシトステロール、カンペステロール、スティグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール及びエルゴスタディェノールからなる群から選択される少なくとも 1種である請求項 10に記載の使用。