WO2008053055A1 - Vacuna profiláctica contra la tuberculosis - Google Patents

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    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers

Definitions

  • the current vaccine used in the preventive treatment against tuberculosis is based on bacteria of the strain called BCG (Bacillus Calmette-Guerin), an attenuated variant of M. bovis.
  • the vials obtained after the lyophilization process contain the immunotherapeutic agent comprising the cell wall fragments of MTB-C, and are generally stored at very low temperatures, for example at -70 ° C.
  • the object of The invention is the use of the immunotherapeutic agent comprising cell wall fragments of a virulent strain of MTB-C for the preparation of a medicament for the prophylactic treatment of tuberculosis, that is, for the preparation of a prophylactic vaccine against tuberculosis.
  • the medicament for the prophylactic treatment of tuberculosis comprises the immunotherapeutic agent based on cell wall fragments and, optionally, pharmaceutically acceptable diluents, adjuvants and / or excipients.
  • the medicament may be in the form of phosphate buffer saline, aqueous solution, emulsion, or in the form of liposomes.
  • the sterols that are used in the preparation of liposomes can be, among others, cholesterol and bile salts.
  • mice were divided into three groups of 12 animals each, and underwent the following vaccination protocol: 1) Without vaccination (Control group),
  • mice were infected by aerosol with said virulent strain at the ninth week of the experiment by placing it in a Middelbrook aerosol infection apparatus that provided an approximate inoculum of 10-50 viable bacilli in the lungs of the mice.
  • the number of viable bacilli in the lungs was determined at 3 weeks after the aerosol infection of the animals (week 12 of the experiment) by incubating serial dilutions of lung homogenates in Middelbrook 7H11 agar for 4 weeks at 37 ° C. Homogenization of the lung was carried out in the presence of 1 ml of double distilled water.
  • Table I express the logarithm of the Colony Forming Units (CFU) by me that have been identified in the lung:
  • the supernatants were frozen and after remaining in that state for a minimum of 24 hours, the interferon- ⁇ content was analyzed by applying the double sandwich ELISA technique and using a specific monoclonal antibody for murine interferon- ⁇ (Diaclone).
  • mice inoculated with the virulent strain was able to induce a response against the ESAT-6 antigen.

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Abstract

La invención concierne al uso de un agente inmunoterápico que comprende fragmentos de pared celular de una cepa virulenta de Mycobacteríum tuberculosis- complex (MTB-C) para la preparación de un medicamento para el tratamiento profiláctico de la tuberculosis, en donde dicho agente es obtenible por un procedimiento que comprende las siguientes etapas: cultivar la cepa virulenta MTB-C durante un período de tiempo igual o superior a tres semanas; y, posteriormente, homogeneizar el cultivo de células en presencia de un tensioactivo no iónico.

Description

VACUNA PROFILÁCTICA CONTRA LA TUBERCULOSIS
Campo de Ia técnica
La presente invención se refiere al uso de un agente inmunoterápico basado en fragmentos de pared celular de una cepa virulenta de Mycobacteríum tuberculosis-complex para Ia preparación de un medicamento para el tratamiento profiláctico de Ia tuberculosis.
Estado de Ia técnica anterior La tuberculosis es una enfermedad infecciosa crónica ocasionada por los bacilos
Mycobacteríum tuberculos¡s-comp\ex (MTB-C), que incluyen actualmente a las especies
M. tuberculosis, M. bovis, M. microti y M. africanum.
Según Ia Organización Mundial de Ia Salud, en el mundo se registran anualmente 8.000.000 de nuevos casos de personas que manifiestan Ia enfermedad y mueren unos 3.000.000 de personas. Se considera que en el mundo existen más de
2.000.000.000 de personas infectadas y que cada año se generan otros 90-100 millones de infectados nuevos.
La vacuna actual que se emplea en el tratamiento preventivo contra Ia tuberculosis está basada en bacterias de Ia cepa denominada BCG (Bacilo de Calmette-Guerin), una variante atenuada de M. bovis.
En el estado de Ia técnica se describen diversas vacunas contra Ia tuberculosis basadas en fragmentos de Ia pared celular de cepas virulentas o avirulentas de
Mycobacteríum. Se describe también que el adyuvante que entra en Ia composición de
Ia vacuna ejerce una gran influencia sobre Ia efectividad de Ia misma. En E. Ribi et al, Nature 1963, 198, páginas 1214 a 1215 se describen los ensayos de inmunización efectuados con una composición que comprende fragmentos de pared celular de ia cepa avirulenta BCG y aceite mineral. Dichos fragmentos se obtienen por homogeneización de un cultivo de Ia mencionada cepa en aceite mineral.
La composición resulta ser más efectiva que Ia vacuna convencional (BCG). No obstante, en el mismo artículo se describe que los fragmentos de pared celular no inducen ninguna respuesta inmunológica cuando se obtienen por homogeneización en agua y en ausencia del aceite mineral.
En D. P. Pal ef al, lndian J. Med. Res. 1977, 65, páginas 340 a 345 se describe una vacuna preparada con fragmentos de pared celular de Ia cepa virulenta H37Rv y aceite mineral. En este caso los fragmentos de pared celular se obtienen mediante homogeneización de las células muertas en fase acuosa, y el aceite mineral se añade posteriormente a la composición. También se describe que los fragmentos de pared celular homogeneizados en fase acuosa no son inmunogénicos, y que es necesaria Ia presencia del aceite mineral para que Ia vacuna sea eficaz.
En G. K. Khuller et al, Folia Microbiol., 1992, 37, páginas 407 a 412, se describe Ia eficacia protectora de diferentes fracciones de la pared celular de Ia cepa avirulenta H37Ra de M. tuberculosis formuladas con el adyuvante incompleto de Freund, que también incluye aceite mineral.
En E.M. Agger et al, Scand. J. Immunol., 2002, 56, páginas 443 a 447 se describen vacunas que comprenden fragmentos de Ia pared celular de Ia cepa virulenta H37Rv, y que son eficaces cuando incluyen el tensioactivo catiónico bromuro de dimetildioctadecilamonio como adyuvante. Se describe también que los ensayos realizados con bacilos de M. tuberculosis homogeneizados y que no contienen el adyuvante mencionado, no generan niveles de resistencia frente a Ia tuberculosis en el modelo murino. En I. M. Orme Vaccine, 2006, 24, páginas 2 a 19, que es un artículo de revisión reciente sobre nuevas vacunas contra Ia tuberculosis, se describe que Ia vacuna convencional BCG es esencialmente ineficaz para proteger a personas adultas frente a la tuberculosis. En el mismo artículo se indica que están en fase de ensayo varios candidatos de distintos tipos de vacuna (vacunas por subunidades con proteínas, vacunas con ADN, vacunas combinadas con virus, vacunas con cepas recombinantes), y que se está a Ia espera de nuevos desarrollos.
Existe pues Ia necesidad de disponer de una vacuna profiláctica para prevenir las infecciones causadas por M. tuberculosis, que sea más efectiva que Ia vacuna actual basada en la cepa atenuada BCG.
Objeto de la invención
El objeto de Ia presente invención es el uso de un agente inmunoterápico que comprende fragmentos de pared celular de una cepa virulenta de MTB-C para Ia preparación de un medicamento para el tratamiento profiláctico de las infecciones causadas por M. tuberculosis.
Descripción detallada de Ia invención
En Ia solicitud de patente ES2231037-A1 se describe un procedimiento para Ia preparación de un agente inmunoterápico que comprende fragmentos de pared celular de una cepa virulenta de Mycobacteríum tuberculosis-comp\ex (MTB-C). También se describen composiciones que Io contienen, y su aplicación terapéutica para el tratamiento combinado de Ia tuberculosis en asociación con otros fármacos.
Los autores de Ia presente invención han descubierto el uso de dicho agente inmunoterápico para Ia preparación de un medicamento para el tratamiento profiláctico de Ia tuberculosis.
El objeto de Ia presente invención es pues el uso de un agente inmunoterápico que comprende fragmentos de pared celular de una cepa virulenta de Mycobacteríum tuberculosis-comp\ex (MTB-C) para Ia preparación de un medicamento para el tratamiento profiláctico de Ia tuberculosis, en donde dicho agente es obtenible por un procedimiento que comprende las siguientes etapas:
- cultivar Ia cepa virulenta MTB-C durante un período de tiempo igual o superior a tres semanas y, posteriormente,
- homogeneizar el cultivo de células en presencia de un tensioactivo no iónico.
La cepa virulenta puede ser cualquier cepa virulenta de MTB-C. Una de las cepas mas utilizadas por los investigadores en este campo es Ia denominada H37Rv que, por ejemplo, puede ser libremente adquirida en Ia National Collection of Type Cultures (NCTC), Londres, Gran Bretaña (número de depósito NC007416).
La cepa virulenta se puede cultivar por inoculación en medios de cultivo bien conocidos por el experto en Ia materia, por ejemplo el agar Middlebrook tipo 7H10 o tipo 7H11 , el medio de cultivo Sauton o el medio de cultivo Proskauer-Beck.
El cultivo de Ia cepa virulenta se efectúa durante un período de tiempo igual o superior a tres semanas, preferiblemente comprendido entre 3 y 4 semanas. La temperatura del cultivo se mantiene, preferiblemente, entre 34° C y 38° C.
Una vez finalizado el cultivo, se procede al aislamiento de las células empleando técnicas como las descritas, por ejemplo, en Ia solicitud de patente ES2231037-A1.
La homogeneización de las células vivas se lleva a cabo en presencia de un tensioactivo no iónico, y preferiblemente en un medio tamponado a un pH neutro, por ejemplo a un pH comprendido entre 6 y 8, como el proporcionado por el tampón PBS (solución salina de tampón fosfato). La homogeneización puede llevarse a cabo mediante sonicación por ultrasonidos, o mediante Ia utilización de pequeñas bolas de aproximadamente 1 mm de diámetro, por ejemplo, de sílice o de sílice-zirconio, conjuntamente con un homogeneizador mecánico. Un homogeneizador mecánico que se puede utilizar, por ejemplo, es el modelo Beadbeater® de Ia compañía Biospec. Mediante este proceso de homogeneización se rompen las células de MTB-C y se obtienen fragmentos pequeños de pared celular. Preferiblemente el tipo de tensioactivo no iónico utilizado en el proceso de homogeneizaciόn se selecciona entre el grupo formado por los alquilfenoles etoxilados, los esteres de sorbitán etoxilados, y mezclas de los mismos.
De manera más preferible el tensioactivo no iónico se selecciona entre el grupo de los octilfenoles etoxilados. Más preferiblemente se emplean octilfenoles etoxilados con un contenido de óxido de etileno comprendido entre 7 y 8 moles, que se pueden encontrar en el mercado bajo el nombre de Tritón X-114®.
El contenido en tensioactivo no iónico en Ia etapa de homogeneización está comprendido preferiblemente entre el 1% y el 10 % en peso con respecto del peso total del homogeneizado. Más preferiblemente entre el 3% y el 6% en peso.
La masa homogeneizada, que contiene los fragmentos de pared celular, se somete a un tratamiento convencional para separar y rechazar las células no fragmentadas y los componentes solubilizados. Por ejemplo se puede emplear Ia centrifugación a diferentes velocidades y los lavados con solución tampón como se describe en Ia solicitud de patente ES2231027-A1. Después de efectuar los procedimientos de purificación mencionados se obtiene un sedimento, que contiene los fragmentos de pared celular. Dicho sedimento se dispersa en tampón PBS y se somete a un tratamiento convencional para asegurar Ia inactivación total de las células de MTB- C que hubieran podido permanecer viables tras el proceso de fragmentación y de purificación. El mencionado tratamiento puede ser un proceso químico, por ejemplo mediante tratamiento con formol, o físico, por ejemplo mediante tratamiento en autoclave o pasteurización.
La dispersión de fragmentos de pared celular en tampón PBS obtenida tras el tratamiento de inactivación se puede liofilizar para facilitar su conservación. Para ello se puede distribuir Ia dispersión en viales y liofilizar a una temperatura comprendida entre - 15° C y -25° C y con un vacío comprendido entre 0,1 y 0,5 mbar.
Los viales obtenidos tras el proceso de liofilización contienen el agente inmunoterápico que comprende los fragmentos de pared celular de MTB-C, y se conservan generalmente a temperaturas muy bajas, por ejemplo a -70° C. Como ya se ha indicado, el objeto de Ia invención es el uso del agente inmunoterápico que comprende fragmentos de pared celular de una cepa virulenta de MTB-C para Ia preparación de un medicamento para el tratamiento profiláctico de Ia tuberculosis, es decir, para Ia preparación de una vacuna profiláctica contra Ia tuberculosis. El medicamento para el tratamiento profiláctico de Ia tuberculosis comprende el agente inmunoterápico basado en fragmentos de pared celular y, opcionalmente, diluyentes, adyuvantes y/o excipientes farmacéuticamente aceptables. El medicamento puede estar en forma de solución salina de tampón fosfato, solución acuosa, emulsión, o en forma de liposomas.
Preferiblemente el medicamento está en forma de liposomas. La formación de liposomas puede efectuarse empleando técnicas y lípidos auxiliares convencionales, bien conocidas por el experto, como las descritas en Ia solicitud de patente ES2231037-A1.
En general, los liposomas incluyen fosfolípidos, con carga neta neutra y/o negativa, y esteróles. Los fosfolípidos empleados pueden ser, por ejemplo: Ia fosfatidilcolina, Ia fosfatidilserina y el fosfatidilinositol.
Habitualmente, el componente mayoritario de los liposomas es Ia fosfatidilcolina, que puede ser sintetizada o aislada de fuentes naturales. Un producto comercial frecuentemente usado es Ia lecitina de soja, que es una mezcla compleja de fosfolípidos entre los cuales se encuentra la fosfatidilcolina.
Los esteróles que se emplean en Ia preparación de liposomas pueden ser, entre otros, el colesterol y las sales biliares.
Preferiblemente, los liposomas se forman empleando una mezcla de lecitina de soja y colato sódico. Opcionalmente los liposomas pueden contener aditivos que mejoren su estabilidad, por ejemplo: Ia vitamina E, que actúa de antioxidante de los lípidos.
Los liposomas obtenidos presentan habitualmente una distribución de tamaño en Ia que el 99,9 % son más pequeños que 1 miera.
Los liposomas se pueden someter a liofilización para obtener de este modo el agente ¡nmunoterápico en forma de liposomas liofilizados.
La administración del medicamento puede realizarse en forma de una dosis única o de varias dosis, mediante Ia repetición a intervalos de tiempo determinados. Preferiblemente se administran dos dosis separadas por un período de tiempo comprendido entre 2 y 5 semanas, preferiblemente entre 3 y 4 semanas. El medicamento se puede administrar a una mucosa, por ejemplo, ocular, intranasal, oral, gástrica, intestinal, vaginal, o el tracto urinario, o, por vía parenteral, por ejemplo, subcutánea, intradermal, intramuscular, intravenosa, o intraperitoneal. Resulta preferida Ia administración por vía parenteral.
La dosis apropiada depende de varios parámetros, entre ellos Ia vía de administración y el sujeto a ser tratado, pero de forma preferible Ia dosis se encuentra comprendida entre 1 μg y 1000 μg, más preferiblemente entre 25 y 700, y aún más preferiblemente entre 50 μg y 200 μg.
El medicamento que comprende fragmentos de pared celular de una cepa virulenta de MTB-C se puede administrar en combinación con otras vacunas profilácticas contra Ia tuberculosis, como las mencionadas en S. H. E. Kaufmann, Nature
Rev. Immunol. 2006, 6, 699-704, como por ejemplo la vacuna BCG, las vacunas por subunidades o las vacunas BCG recombinantes.
La combinación de las vacunas puede ser simultánea o bien se puede llevar a cabo en dos inoculaciones separadas en el tiempo. El período entre las inoculaciones incluso puede llegar a ser de varios años.
En el caso de inoculaciones separadas en el tiempo, en primer lugar se administra preferiblemente una vacuna profiláctica contra Ia tuberculosis, y posteriormente el medicamento que comprende los fragmentos de pared celular de una cepa virulenta de MTB-C, que actúa como agente reestimulador (boost) de Ia vacuna inoculada inicialmente.
Sorprendentemente, se ha encontrado que Ia administración del medicamento que comprende el agente inmunoterápico basado en fragmentos de pared celular de una cepa virulenta de MTB-C es capaz de inducir una respuesta de tipo Th 1 generadora de interferón-γ contra antígenos específicos de M. tuberculosis. Entre dichos antígenos se encuentran el Ag85B y Ag85A, que forman parte del complejo Ag85, que consiste en una familia de proteínas de bajo peso molecular, que juegan un papel decisivo en Ia biosíntesis de Ia pared celular, y que son producidas en cantidades considerables cuando el cultivo bacteriano se encuentra en Ia fase logarítmica.
Se ha observado que Ia vacuna convencional BCG no genera respuesta ¡nmunoprotectora frente a los antígenos del complejo Ag85, Io que podría representar una capacidad de protección inferior.
También se ha comprobado que el número de bacilos viables presentes en los pulmones de los ratones vacunados con dicho agente inmunoterápico infectados posteriormente con Ia cepa virulenta H37Rv, es inferior al número de bacilos viables presentes en el grupo de ratones control, y dicho número es comparable al de los ratones vacunados con Ia vacuna convencional BCG.
Los ejemplos que siguen a continuación se expone a efectos de proporcionar al experto en Ia materia una explicación detallada de realizaciones concretas dentro de Ia invención. Ejemplo 1.- Efectividad del agente inmunoterápico como vacuna profiláctica contra Ia infección por M. tuberculosis
El agente inmunoterápico empleado en este Ejemplo fue preparado de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 2 de Ia solicitud de patente ES2231037-A1. La efectividad del agente inmunoterápico basado en fragmentos de pared celular de una cepa virulenta de MTB-C se ensayó en ratones hembra de 6 a 8 semanas de edad del tipo C57BL/6, libres de patógenos específicos.
Los ratones se dividieron en tres grupos de 12 animales cada uno de ellos, y se sometieron al siguiente protocolo de vacunación: 1) Sin vacunación (grupo Control),
2) Inoculados por vía subcutánea con dos dosis de 285 μg del agente inmunoterápico obtenido en el Ejemplo 2 de la solicitud de patente ES2231037- A1 a las semanas 3 y 6 del experimento.
3) Inoculados por vía subcutánea con una dosis de 2 x 106 Unidades Formadoras de Colonias de Ia cepa BCG Danish (Statens Serum Institute, Dinamarca) Ia semana 0 del experimento.
Para Ia infección se empleó Ia cepa virulenta de Mycobacterium tuberculosis (H37Rv Pasteur), que se cultivó en medio Proskauer-Beck hasta una fase media logarítmica, y se conservó en alícuotas de 1 mi a una temperatura de -70° C hasta su utilización.
Los ratones se infectaron por aerosol con dicha cepa virulenta a Ia novena semana del experimento mediante su ubicación en un aparato Middelbrook de infección por aerosol que proporcionó un inoculo aproximado de 10-50 bacilos viables en los pulmones de los ratones. El número de bacilos viables en los pulmones se determinó a las 3 semanas después de Ia infección por aerosol de los animales (semana 12 del experimento) incubando diluciones seriadas de homogeneizados de pulmón en agar Middelbrook 7H11 durante 4 semanas a 37° C. La homogeneización del pulmón se llevó a cabo en presencia de 1 mi de agua bidestilada. Los resultados de Ia Tabla I expresan el logaritmo de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC) por mi que se han identificado en el pulmón:
Tabla I
Figure imgf000008_0001
Figure imgf000009_0001
Las diferencias entre el resultado del grupo de ratones que no ha sido vacunado y los resultados de los grupos vacunados son estadísticamente significativas.
Se puede observar que en el pulmón del grupo de ratones vacunado con el agente inmunoterápico liposomado se detecta un menor número de bacilos viables que en el pulmón de los ratones no vacunados, y un número substancialmente idéntico al de los ratones vacunados con Ia vacuna convencional BCG.
Por tanto; Ia vacunación con el agente inmunoterápico basado en fragmentos de pared celular de una cepa virulenta de MTB-C consigue proteger frente a las infecciones causadas por M. tuberculosis.
Ejemplo 2.- Efectividad del agente inmunoterápico como generador de una respuesta
Th 1 específica contra Ia infección por M. tuberculosis
El agente inmunoterápico empleado en este Ejemplo fue preparado de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 2 de Ia solicitud de patente
ES2231037-A1.
La efectividad del agente inmunoterápico basado en fragmentos de pared celular de una cepa virulenta de MTB-C se ensayó en ratones hembra de 6 a 8 semanas de edad del tipo C57BL/6, libres de patógenos específicos, en un experimento ex vivo. Los ratones se dividieron en cuatro grupos de 4 animales cada uno de ellos, y se sometieron al siguiente programa de inoculaciones:
1) Inoculados por vía subcutánea con suero fisiológico a las semanas 3 y 6 del experimento (grupo Control),
2) Inoculados por vía subcutánea con dos dosis de 285 μg del agente inmunoterápico obtenido en el Ejemplo 2 de Ia solicitud de patente ES2231037-
A1 a las semanas 3 y 6 del experimento.
3) Inoculados por vía subcutánea con una dosis de 2 x 106 Unidades Formadoras de Colonias de Ia cepa BCG Danish (Statens Serum Institute, Dinamarca) Ia semana 0 del experimento, y con suero fisiológico las semanas 3 y 6 del experimento.
4) Inoculados por vía subcutánea con 2 x 106 Unidades Formadoras de Colonias de Ia cepa virulenta de Mycobacterium tuberculosis (H37Rv Pasteur) Ia semana 3 del experimento, y con suero fisiológico Ia semana 6 del experimento.
Los ratones fueron sacrificados la semana 7, y se extrajeron los bazos, que se sumergieron en tubos que contenían 5 mi de L-glutamina-RPMl (Gibco). Los tubos se mantuvieron en hielo hasta el final del experimento. Los bazos fueron disgregados mecánicamente y Ia suspensión se filtró a través de una malla de nylon de 70 μm de diámetro. A continuación se centrifugó durante 10 minutos a 30Og. Los pellets fueron reconstituidos con 15 mi de una solución formada por Tris y cloruro amónico en agua bidestilada para proceder a Ia lisis de las células. Después de 8 minutos se procedió al lavado con 20 mi de L-glutamina-RPMI y al centrifugado durante 10 minutos a 30Og.
Los pellets obtenidos se resuspendieron con 5 mi de L-glutamina-RPMI, y se filtró Ia suspensión a través de una malla de nylon de 70 μm de diámetro. Las células fueron contabilizadas con Ia cámara de Newbauer.
Las células del bazo de los ratones se sembraron en placas a razón de 1 x 105 células/pocilio, y fueron cultivadas con 200 μl del medio de cultivo completo (MCC) formado por L-glutamina-RPMI complementado con suero fetal vacuno inactivado, penicilina, estreptomicina, piruvato sódico, y 2-mercaptoetanol, o bien con 200 μl del medio de cultivo completo (MCC) complementado con antígenos de M. tuberculosis: 10 μg/ml del antígeno PPD (Statens Serum Instituí, Dinamarca) y 5 μg/ml de ESAT-6, Ag85A y Ag85B (Lionex Diagnostics and Therapeutics GmbH, República Federal de Alemania).
Las células se incubaron a 37° C en una atmósfera con un 5% de CO2. Después de 96 horas, las placas se centrifugaron durante 10 minutos a 30Og, y se recogió el sobrenadante de cada una de ellas.
Los sobrenadantes se congelaron y después de permanecer en dicho estado un mínimo de 24 horas se analizó el contenido en ¡nterferón-γ aplicando Ia técnica ELISA de doble sandwich y empleando un anticuerpo monoclonal específico para interferón-γ murino (Diaclone).
En Ia Tabla Il se presenta el promedio de Ia concentración de interferón-γ expresada como log10 pg/ml que se indujo en cada uno de los grupos de ratones frente a los antígenos de M. tuberculosis:
TABLA Il
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Figure imgf000011_0001
(1) Diferencias entre el Grupo 2 y el Grupo 3 estadísticamente significativas
(2) Diferencias entre el Grupo 2 y el Grupo 4 estadísticamente significativas
(3) Diferencias entre el Grupo 3 y el Grupo 4 estadísticamente significativas
Los resultados de Ia Tabla Il muestran que las dos inoculaciones efectuadas con el agente inmunoterápico liposomado basado en fragmentos.de pared celular de una cepa virulenta de M. tuberculosis son capaces de inducir Ia producción de ¡nterferón-γ contra antígenos específicos de M. tuberculosis. Esto significa que inducen una respuesta protectora del tipo Th 1. En particular, Ia respuesta inducida por el grupo de ratones inoculado con el agente inmunoterápico liposomado frente a los antígenos PPD, Ag85B y Ag85A no presenta diferencias significativas con Ia respuesta del grupo de ratones inoculado con Ia cepa virulenta H37Rv de M. tuberculosis. Dicha respuesta es mejor que Ia respuesta del grupo de ratones inoculado con Ia cepa BCG, que constituye Ia vacuna convencional, ya que Ia misma solamente induce una respuesta frente a PPD, y no frente a Ag85B y Ag85A.
Solamente el grupo de ratones inoculado con Ia cepa virulenta fue capaz de inducir una respuesta frente al antígeno ESAT-6.
Por tanto, el agente inmunoterápico basado en fragmentos de pared celular de una cepa virulenta de M. tuberculosis es capaz de inducir una respuesta protectora del tipo Th 1 contra antígenos específicos de M. tuberculosis, Io que es un indicador de que se puede emplear eficazmente para prevenir las infecciones causadas por M. tuberculosis.

Claims

REIVINDICACIONES
1.- El uso de un agente inmunoterápico que comprende fragmentos de pared celular de una cepa virulenta de Mycobacterium tuberculosis-comp\ex (MTB-C) para Ia preparación de un medicamento para el tratamiento profiláctico de la tuberculosis, en donde dicho agente es obtenible por un procedimiento que comprende las siguientes etapas:
- cultivar Ia cepa virulenta MTB-C durante un período de tiempo igual o superior a tres semanas y, posteriormente, - homogeneizar el cultivo de células en presencia de un tensioactivo no iónico.
2.- El uso según Ia reivindicación 1 caracterizado porque el período de tiempo de cultivo está comprendido entre 3 y 4 semanas.
3.- El uso según las reivindicaciones 1 ó 2 caracterizado porque el tensioactivo no iónico se selecciona entre el grupo formado por los alquilfenoles etoxilados, los esteres de sorbitán etoxilados, y mezclas de los mismos.
4.- El uso según Ia reivindicación 3 caracterizado porque el tensioactivo no iónico se selecciona entre el grupo de los octilfenoles etoxilados.
5.- El uso según Ia reivindicación 4 caracterizado porque el tensioactivo no iónico se selecciona entre los octilfenoles etoxilados con un contenido de óxido de etileno comprendido entre.7 y 8 moles.
6.- El uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 caracterizado porque Ia homogeneización se efectúa en un medio tamponado a pH neutro.
7.- El uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 caracterizado porque el procedimiento comprende además las siguientes etapas: - separar mediante centrifugación las células no fragmentadas y los componentes solubilizados,
- someter a tratamiento químico o físico Ia fracción de fragmentos de pared celular para inactivar las eventuales células de cepa virulenta que eventualmente contenga, y - desecar el agente inmunoterápico obtenido mediante liofilización.
8.- El uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 caracterizado porque el medicamento está en forma de liposomas.
9.- El uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 caracterizado porque el medicamento se administra en forma de dosis única o de varias dosis.
10.- El uso según Ia reivindicación 9 caracterizado porque el medicamento se administra en dos dosis.
11.- El uso según Ia reivindicación 10 caracterizado porque las dosis se administran separadas por un período de tiempo comprendido entre 2 y 5 semanas.
12.- El uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 caracterizado porque el medicamento se administra en combinación con otras vacunas profilácticas contra Ia tuberculosis.
13.- El uso según Ia reivindicación 12 caracterizado porque Ia combinación de las vacunas se lleva a cabo en dos inoculaciones separadas en el tiempo.
14.- El uso según Ia reivindicación 13 caracterizado porque en primer lugar se administra una vacuna profiláctica contra Ia tuberculosis, y posteriormente el medicamento que comprende los fragmentos de pared celular de una cepa virulenta de MTB-C.
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CN2007800405684A CN101600455B (zh) 2006-10-30 2007-10-17 预防性结核疫苗
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CA2667965A CA2667965C (en) 2006-10-30 2007-10-17 Prophylactic tuberculosis vaccine
IL198357A IL198357A (en) 2006-10-30 2009-04-23 Vaccine to prevent tuberculosis
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2335177A1 (es) * 2008-09-19 2010-03-22 Archivel Farma, S.L. Agente inmunoterapeutico apropiado para la profilaxis primaria de la tuberculosis.
WO2013104943A1 (en) 2012-01-12 2013-07-18 Archivel Farma, S.L. Mtb-c vaccine against asthma

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA021293B1 (ru) 2008-12-08 2015-05-29 Джилид Коннектикут, Инк. ИМИДАЗОПИРАЗИНОВЫЕ ИНГИБИТОРЫ Syk, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ИМИДАЗОПИРАЗИНОВЫЕ ИНГИБИТОРЫ Syk, И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
CN102307474B (zh) 2008-12-08 2015-04-01 吉利德康涅狄格股份有限公司 咪唑并吡嗪syk抑制剂
EP2661253B1 (en) 2011-01-04 2017-04-19 Archivel Farma, SL Liposome formulation suitable for treating or preventing tuberculosis
EP2471511A1 (en) 2011-01-04 2012-07-04 Archivel Farma, SL Liposome formulation suitable for treating or preventing tuberculosis
CN113950479A (zh) 2019-02-22 2022-01-18 克洛诺斯生物股份有限公司 作为syk抑制剂的缩合吡嗪的固体形式
WO2023062066A1 (en) 2021-10-14 2023-04-20 Archivel Farma, S.L. Liposome formulations for treatment of active tuberculosis
WO2025191183A1 (en) 2024-03-15 2025-09-18 Archivel Farma S.L. Liposome formulations for the treatment of cancer

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000021983A2 (en) * 1998-10-08 2000-04-20 Statens Serum Institut Tuberculosis vaccine and diagnostic reagents based on antigens from the mycobacterium tuberculosis cell
RU2153354C1 (ru) * 1999-03-31 2000-07-27 Московский городской научно-практический центр борьбы с туберкулезом Вакцина против туберкулеза
US20020127700A1 (en) * 2000-12-08 2002-09-12 Ying Zhang Methods for improved diagnosis and treatment of mycobacterial infections
WO2003063897A1 (en) * 2002-01-29 2003-08-07 Modi, Rajiv, Indravadan Method of providing prophylaxis for tuberculosis in hiv positive individuals
ES2231037A1 (es) 2003-10-31 2005-05-01 Archivel Technologies, Sl Agente inmunoterapico util para el tratamiento combinado de la tuberculosis en asociacion con otros farmacos.

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6641814B1 (en) * 1997-04-02 2003-11-04 Statens Serum Institut Nucleic acids fragments and polypeptide fragments derived from M. tuberculosis
RU2093046C1 (ru) * 1996-05-06 1997-10-20 Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного отделения РАН Лечебно-профилактическая пищевая композиция "гербамарин"
US6284255B1 (en) * 1996-08-29 2001-09-04 Genesis Research & Development Corporation Limited Compounds and methods for treatment and diagnosis of mycobacterial infections
AP9901670A0 (en) * 1997-03-03 1999-12-31 Adcock Ingram Ltd A composition comprising a carrier and a purified mycobacterial lipid cell-wall component and its use in the prevention, treatment and diagnosis of disease.
US7037510B2 (en) * 1997-04-18 2006-05-02 Statens Serum Institut Hybrids of M. tuberculosis antigens
US6420342B1 (en) * 2000-05-08 2002-07-16 N.V. Nutricia Nutritional preparation comprising ribose and medical use thereof
EP2196473A1 (en) 2001-07-04 2010-06-16 Health Protection Agency Mycobacterial antigens expressed during latency
EP1463526A4 (en) * 2001-08-02 2006-08-30 Univ New York EARLY DETECTION OF MYCOBACTERIAL DISEASES USING PEPTIDES
WO2003018053A1 (en) 2001-08-22 2003-03-06 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Vaccine against mycobacterial-induced diseases
CN1467221A (zh) * 2002-07-14 2004-01-14 虹 王 结核杆菌cfp-10、esat-6与cd40l融合疫苗的制备及应用
ES2335177B1 (es) * 2008-09-19 2011-02-28 Archivel Farma, S.L. Agente inmunoterapeutico apropiado para la profilaxis primaria de la tuberculosis.

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000021983A2 (en) * 1998-10-08 2000-04-20 Statens Serum Institut Tuberculosis vaccine and diagnostic reagents based on antigens from the mycobacterium tuberculosis cell
RU2153354C1 (ru) * 1999-03-31 2000-07-27 Московский городской научно-практический центр борьбы с туберкулезом Вакцина против туберкулеза
US20020127700A1 (en) * 2000-12-08 2002-09-12 Ying Zhang Methods for improved diagnosis and treatment of mycobacterial infections
WO2003063897A1 (en) * 2002-01-29 2003-08-07 Modi, Rajiv, Indravadan Method of providing prophylaxis for tuberculosis in hiv positive individuals
ES2231037A1 (es) 2003-10-31 2005-05-01 Archivel Technologies, Sl Agente inmunoterapico util para el tratamiento combinado de la tuberculosis en asociacion con otros farmacos.

Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
D.P. PAL ET AL., INDIAN J. MED. RES., vol. 65, 1977, pages 340 - 345
DATABASE WPI Week 200102, Derwent World Patents Index; AN 2001-014156, XP003022729 *
E. RIBI ET AL., NATURE, vol. 198, 1963, pages 1214 - 1215
E.M. AGGER ET AL., SCAND. J. IMMUNOL., vol. 56, 2002, pages 443 - 447
G.K. KHULLER ET AL., FOLIA MICROBIOL., vol. 37, 1992, pages 407 - 412
I.M. ORME, VACCINE, vol. 24, 2006, pages 2 - 19
S.H.E. KAUFMANN, NATURE REV. IMMUNOL., vol. 6, 2006, pages 699 - 704
See also references of EP2090318A4
SINHA S. ET AL.: "Proteome Analysis of the Plasma Membrane of Mycobacterium tuberculosis", COMPARATIVE AND FUNCTIONAL GENOMICS, vol. 3, 2002, pages 470 - 483, XP002998683 *

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2335177A1 (es) * 2008-09-19 2010-03-22 Archivel Farma, S.L. Agente inmunoterapeutico apropiado para la profilaxis primaria de la tuberculosis.
WO2010031883A1 (es) 2008-09-19 2010-03-25 Archivel Farma, S.L. Agente inmunoterapéutico apropiado para la profilaxis primaria de la tuberculosis
ES2335177B1 (es) * 2008-09-19 2011-02-28 Archivel Farma, S.L. Agente inmunoterapeutico apropiado para la profilaxis primaria de la tuberculosis.
US20110268788A1 (en) * 2008-09-19 2011-11-03 Archivel Farma, S.L. Immunotherapeutic agent suitable for the primary prophylaxis of tuberculosis
CN102264389A (zh) * 2008-09-19 2011-11-30 阿尔西维尔法尔玛公司 适用于结核病初级预防的免疫治疗剂
US8795719B2 (en) 2008-09-19 2014-08-05 Archivel Farma, S.L. Immunotherapeutic agent suitable for the primary prophylaxis of tuberculosis
RU2544125C2 (ru) * 2008-09-19 2015-03-10 Арчивель Фарма, С.Л. Иммунотерапевтическое средство, предназначенное для первичной профилактики туберкулеза
CN102264389B (zh) * 2008-09-19 2015-05-20 阿尔西维尔法尔玛公司 适用于结核病初级预防的免疫治疗剂
WO2013104943A1 (en) 2012-01-12 2013-07-18 Archivel Farma, S.L. Mtb-c vaccine against asthma
RU2602771C2 (ru) * 2012-01-12 2016-11-20 Арчивель Фарма, С.Л. Вакцина мбтк против астмы

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