WO2008087340A2 - UTILISATION D' OLIGO-β-(1,3)-GLUCANES MODIFIES POUR LE TRAITEMENT DE MALADIES DU SYSTEME IMMUNITAIRE, OLIGO-β-(1,3)-GLUCANE-(1,3)- MANNOSE, OLIGO-β-(1.3)-GLUCANE-(1,3)- MANNITOL ET LEURS DERIVES, LEURS PROCEDES DE PREPARATION ET MEDICAMENTS LES CONTENANT - Google Patents

UTILISATION D' OLIGO-β-(1,3)-GLUCANES MODIFIES POUR LE TRAITEMENT DE MALADIES DU SYSTEME IMMUNITAIRE, OLIGO-β-(1,3)-GLUCANE-(1,3)- MANNOSE, OLIGO-β-(1.3)-GLUCANE-(1,3)- MANNITOL ET LEURS DERIVES, LEURS PROCEDES DE PREPARATION ET MEDICAMENTS LES CONTENANT Download PDF

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    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Definitions

  • the present invention relates to the use of modified "oligo- ⁇ - (1,3) -glucans of formula (I) or (II) below for the preparation of medicaments useful in treatments based on stimulation of the immune system. .
  • Glucans which are natural products, have been studied for a long time and the immunostimulatory properties of certain glucans are known. However, not all natural glucans are active.
  • the Applicant Company has shown, in particular in WO03 / 045414, that the
  • Laminarin a polysaccharide extracted from the brown alga Laminaria digitata, exhibited immunostimulation activities.
  • Laminarin is a low molecular weight polysaccharide consisting of a linear ⁇ - (1,3) -glucan linear chain, from 20 to 30 glucose units weakly branched in position 6, which at the terminal end or a glucose entity (G-chain) or a mannitol entity (M-chain).
  • Laminarin Although the immunostimulatory activity of Laminarin has been recognized, a major disadvantage of its use for therapeutic purposes is its natural origin. Indeed, the composition of Laminarin is not constant and depends in particular on its place of collection, the time of collection, etc. There is therefore a real need for synthetic products having the therapeutic properties of Laminarin.
  • the present inventors have more particularly turned to the oligosaccharides of the M group present in Laminarin.
  • these oligosaccharides have a ⁇ -configuration bond between the carbon 1 of the terminal glucan entity and a primary carbon of the mannitol residue, and can be represented as follows:
  • a first subject of the invention thus relates to the use of at least one modified oligo- ⁇ - (1,3) -glucan of formula (I) or (II)
  • R 1 represents H or OH and n is an integer from 2 to 10, preferably from 2 to 7, and even more preferably equal to 3, 4 or 5, for the preparation of a composition intended for the treatment of diseases chosen from group consisting of tumor, cancer, viral disease, bacterial disease, fungal disease, immune system disease, autoimmune disease or immunostimulation deficiency-related disease in humans and warm-blooded animals.
  • diseases chosen from group consisting of tumor, cancer, viral disease, bacterial disease, fungal disease, immune system disease, autoimmune disease or immunostimulation deficiency-related disease in humans and warm-blooded animals.
  • the action of the compounds of formula (I) or (II) is related to the presence of specific receptors for these compounds on the surface of macrophages and more generally different leukocyte populations. This activity is attributed to the stimulation of immunocompetent cells of the body and is measured through:
  • NK cells activation of NK cells, T lymphocytes, and nuclear factor ⁇ B (NF-KB); - phagoeytary activity;
  • cytokines such as interleukins (IL), TNF- ⁇ , or interferon ⁇ ;
  • R 1 represents OH
  • the terminal group is a mannitol
  • composition used according to the invention can be administered to the patient intravenously, intraperitoneally or orally.
  • the doses of compounds of formula (F), (IF) depend on the pathology to be treated and the mode of administration chosen. They are generally from 25 to 70 IU / kg of body weight per day, more preferably from 35 to 45 IU / kg of body weight per day.
  • composition used according to the invention may also comprise a chemotherapeutic agent.
  • the chemotherapeutic agent is chosen from the group comprising cisplatin, vinblastine, paclitaxel, taxol and its derivatives, monoclonal antibodies such as in particular Rituximab and Cituximab.
  • the composition comprises a chemotherapeutic agent and / or a potentiator according to the invention, it can be used sequentially, that is to say that the compound of formula (I) or (II) is administered to a certain time and the chemotherapeutic agent is administered at another time possibly with the potentiator.
  • the present invention also relates to some of the derivatives of formula (I) and
  • novel compounds which are novel compounds. These novel compounds are oligo- ⁇ - (1,3) -glucan (1,3) -mannose and oligo- ⁇ - (1,3) -glucan- (1,3) -mannitol and their deoxy derivatives in position. 4, which respectively have the general formula (F) or the general formula (H '):
  • R 1 is H or OH and n is an integer of 2 to 10, preferably 2 to
  • such compounds are the following compounds: ⁇ -D-glucopyranosyl- (1 ⁇ 3) - ⁇ -D-glucopyranosyl- (1 ⁇ 3) - ( ⁇ , ⁇ ) -D-mannopyranose; ⁇ -D-glucopyranosyl- (l ⁇ -3) - ⁇ -D-glucopyranosyl (l- ⁇ 3) - ⁇ -D-glucopyranosyl (l- ⁇ 3) - ⁇ -D-glucopyranosyl (l- ⁇ 3) - ⁇ - ⁇ -
  • novel compounds are useful as pharmaceutical compounds.
  • the invention therefore also relates to medicaments comprising these novel compounds with at least one excipient chosen according to the mode of administration chosen and the assay.
  • These drugs may be drugs for oral, intravenous or intraperitoneal administration.
  • the doses of compounds of formula (V), (IP) depend on the pathology to be treated and the mode of administration chosen. They are generally from 25 to 70 IU / kg of body weight per day, more preferably from 35 to 45 IU / kg of body weight per day.
  • Useful oral medications are tablets, granules, syrup, capsules, gel.
  • These medicaments may also comprise at least one chemotherapeutic agent chosen from the group comprising cisplatin, vinblastine, paclitaxel, taxol and its derivatives, monoclonal antibodies such as in particular Rituximab and Cituximab.
  • chemotherapeutic agent chosen from the group comprising cisplatin, vinblastine, paclitaxel, taxol and its derivatives, monoclonal antibodies such as in particular Rituximab and Cituximab.
  • Another subject of the invention relates to the use of at least one compound of formula (F) or (H ') for the treatment of a disease selected from the group consisting of tumor, cancer, viral disease, disease bacterial, fungal disease, immune system disease, autoimmune disease, or immunostimulation deficiency-related disease in warm-blooded animals and humans.
  • a disease selected from the group consisting of tumor, cancer, viral disease, disease bacterial, fungal disease, immune system disease, autoimmune disease, or immunostimulation deficiency-related disease in warm-blooded animals and humans.
  • the chemical preparation of the novel compounds of formula (F) or (IF) is mainly based on an epimerization of the terminal reducing entity of the D-glucose type into a D-mannose type residue. This implies the singularization of the reducing entity with respect to the other glucose units of the oligosaccharide and the singling of the hydroxyl 2 of this entity with respect to the other functions of the reducing unit. Two different synthetic routes are envisaged, an iterative synthesis and an epimerization synthesis of the terminal entity.
  • the process for preparing the novel compounds comprises a reaction between a glycosyl donor of formula (D) below and a glycosyl acceptor of formula (A) below:
  • n is an integer of 1 to 9, preferably 1 to 6, and more preferably still equal to
  • p is an integer from 0 to 9, preferably from 0 to 6, and more preferably still equal to
  • R represents alkyl such as ethyl, methyl, propyl or butyl, or aryl such as phenyl or tolyl;
  • R 2 represents allyl, methylnaphthyl, benzyl, paramethoxybenzyl, haloacetyl
  • R 3 and R 4 on the one hand and R 3 'and R 4 ' on the other hand together form an ethylidyl, isopropylidyl, hexafluoroisopropylidyl, cyclopentylidyl, cyclohexylidyl, cycloheptylidyl, butylidyl, 1-tert-butylethylidyl, benzylidyl, methoxybenzylidyl radical,
  • R 3 , R 4 , R 3 'and R 4 ' are each independently of one another benzyl, chlorobenzyl, nitrobenzyl, allyl, triarylmethyl, trialkylsilyl such as triethylsilyl, tri-isopropylsilyl, tert-butyldimethylsilyl, ester such as acetyl, chloroacetyl, benzoyl, pivaloyl;
  • R 5 represents H, levulinoyl, acetyl, chloroacetyl, fluorenylmethyloxycarbonyl, trialkylsilyl such as triethylsilyl, tri-isopropylsilyl, tert-butyldimethylsilyl, preferably a levuiinoyl group, with the proviso that none of R 3 , R 4 , R 3 ', R 4 'is identical to R 5.
  • Bn benzyl
  • NAP 2-methylnaphthyl
  • Bz benzoyl
  • X halogen
  • SEt.thylthio-
  • This step of the process can be included in an iterative synthesis which differs from that described in FR2804684 by the necessary use of a first acceptor having in position 2 an orthogonal protective group of all the other groups present on the oligomers synthesized after elongation of the chain, which makes regioselective epimerization possible.
  • reaction scheme 1 This iterative synthesis can be described according to the reaction scheme (reaction scheme 1) as given below:
  • the reaction scheme 1 above comprises in the following order: the preparation [a '] from a compound 1 as obtained in FR2804694, of a compound 2 whose group -SEt has been replaced by a grouping -OBn; the substitution [a] in position 2 of -OBz by -OR 5 , R 5 being preferably levulinoyl, and the selective deprotection [b] of hydroxyl in position 3; the reaction between donor 1 and acceptor 4 [c], or glycosylation; optionally the selective deprotection at position 3 of the hydroxyl and the glycosylation between compound 1 and compound 6, these two steps being able to be repeated until the desired number n of glucose units is obtained;
  • reaction scheme 2 it is also possible to envisage the synthesis by implementing a more convergent reaction scheme, as defined below (reaction scheme 2).
  • the donor D is a disaccharide, or a higher oligosaccharide, which is reacted with an acceptor A which is also a disaccharide or which is a higher oligosaccharide: tri-, tetra-, penta-, such as obtained as compound 6 according to reaction scheme 1.
  • This second reaction scheme comprises in the following order: the reaction [a "] between a glycosyl donor disaccharide (20) as obtained in FR2804694, and a glycosyl acceptor as prepared according to the first reaction scheme, advantageously in the presence of TMSOTf (trifluoromethanesulfonic acid), selective cleavage of the levulinoyl group (Lev), advantageously with NH 2 NH 2 in AcOH;
  • TMSOTf trifluoromethanesulfonic acid
  • the process for preparing the new compounds comprises a stage 2 epimerization step of the terminal chain.
  • This synthetic route also makes it possible to obtain the deoxygenated compounds in position 4.
  • the reaction scheme 3 below illustrates this embodiment:
  • R 7 is an ester, especially acetyl, benzoyl, pivaloyl, preferably Bz, and Rg, a moiety orthogonal to all other protecting groups, may be Bn, NAP, p-methoxybenzyl, p-methoxyphenyl, allyl, and preferably Bn, X is preferably bromine.
  • This third reaction scheme comprises in the following order: the protection reaction [A] of all the OH groups, preferably the protecting group is Bz and the reaction is then carried out with BzCl in pyridine,
  • p is an integer from 0 to 9, preferably from 0 to 6, and more preferably still equal to
  • R 2 represents hydrogen, allyl, methylnaphthyl, benzyl, paramethoxybenzyl, haloacetyl (chloroacetyl, bromoacetyl, iodoacetyl);
  • Rs is H, levulinoyl, acetyl, chloroacetyl, fluorenylmethyloxycarbonyl, trialkylsilyl such as triethylsilyl, triisopropylsilyl, tert-butyldimethylsilyl, preferably levulinoyl, with the proviso that none of R 3 , R 4 , R 3 ', R 4 ' is identical to R 5; R 7 represents an ester, especially acetyl, benzoyl, pivaloyl, preferably Bz;
  • Rg a group orthogonal to all the other protecting groups, which may be chosen from Bn, NAP, p-methoxybenzyl, p-methoxyphenyl, allyl, and preferably Ra represents Bn, R 9 represents ORg or X.
  • the compounds of formula ( III) are the acceptor compounds A as defined above.
  • Examples 1 to 7 illustrate the methods of synthesis of the products of the invention, and Examples 8 to 11 show the biological activity of the compounds of the invention.
  • a DMSO / acetic acid mixture (2: 1, v / v).
  • 2,3-Dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone (176 mg, 0.774 mmol) is added to a solution of the trisaccharide compound 7 (337 mg, 0.258 mmol) in a dichloromethane / methanol mixture (4: 1; v / v). After stirring for 16 hours at room temperature, the reaction is complete and the medium is diluted with dichloromethane, washed with a saturated solution of sodium hydrogencarbonate and then with water.
  • the desired product was prepared according to a protocol comparable to that described for the product Al by applying to the product 9 the successive steps [d], [c], [d], [c] and then [e] to
  • H2 f 8.0 HZ
  • JH2f-H3f 9.3HZ
  • the tetrasaccharide 22 (430 mg, 0.301 mmol) is dissolved in 6 ml of pyridine and then 6 ml of an IM solution of hydrazine in a pyridine / acetic acid mixture (3: 2, v / v) are added dropwise. v). After stirring for 3 hours, the reaction is stopped by adding 1.7 mL of 2,4-pentane-dione and concentrated under reduced pressure. The medium is taken up in 50 ml of dichloromethane and washed with a 10% hydrochloric acid solution, with a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate and with a saturated aqueous solution of sodium chloride.
  • L-Selectride (1M solution in THF, 150 ⁇ L, 0.150 mmol).
  • the medium is neutralized by addition of acetic acid, diluted with 20 ml of dichloromethane and washed with a saturated aqueous solution of hydrochloric acid, a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate and by some water.
  • the medium is purified by chromatography on silica gel [dichloromethane / methanol (98: 2, v / v)] to yield the desired reduced product (66 mg, 0.050 mmol) in a yield. quantitative.
  • Oligosaccharide la (150 mg, 0.181 mmol) is dissolved in pyridine (15 mL). The reaction medium is then cooled to 0 ° C. and then added with benzoyl chloride (4.2 mL, 36 mmol). After stirring for 2 days at ambient temperature, the medium is evaporated, dissolved in dichloromethane and then washed with a 10% aqueous solution of hydrochloric acid, with a saturated solution of sodium hydrogencarbonate and with a saturated solution of chloride. from sodium to neutrality. The organic phase is then dried over MgSO 4 and evaporated. The residue is purified by chromatography on silica gel [petroleum ether / ethyl acetate (3; 2; v / v)] to give the perbenzoyl derivative.
  • Target compound 4a (343 mg) is then isolated in 81% yield.
  • Product 4a white solid; Rf (EPZAcOEt, 3: 2) 0.4.
  • the product Ib is prepared according to the procedure described in the patent application FR2804684, according to the procedure of Example 6.
  • reaction medium is then cooled to 0 ° C. and then added with benzoyl chloride (5.2 mL, 44.4 mmol). After stirring for 2 days at ambient temperature, the medium is evaporated, dissolved in dichloromethane and then washed with a 10% aqueous solution of hydrochloric acid, with a saturated solution of sodium hydrogencarbonate and with a saturated solution of sodium chloride. sodium until neutral. The organic phase is then dried over MgSO 4 and evaporated.
  • 164.3, 163.8, 163.6 (18C, OCOPh); 133.6, 133.3, 133.2, 133.1, 133.0, 132.9, 132.6, 130.0, 129.8, 129.7, 129.6, 129.5, 129, 4, 129.3, 129.2, 129.1, 129.0, 128.8, 128.6,
  • Examples 8 to 11 show the biological activities of compounds of the invention.
  • AML5 laminaripentaose
  • AML7 laminariheptaose
  • A2 is the compound prepared according to Example 3
  • AO represents the following compound:
  • mice The control used is PBS. The dosages used are 100 ⁇ g / mouse.
  • EXAMPLE 8 Effect of LAM5, LAM7, A2 and AO on phagocytosis of peripheral blood cells
  • a group of Balb / c mice (Jackson laboratory, Bar Harbor, ME, USA) were injected peritoneally with either a control, LAM5, LAM7, AO or A2. 24 hours after the injection, the mice were sacrificed. Peripheral blood was recovered from the orbital plexus in heparin (5 IU / ml) (Sigma).
  • HEMA particles synthetic microspheres prepared from 2-hydroxyethylmethacrylate copolymer
  • a phagocytosis assay of HEMA particles was performed as described in: Rembaum et al. , 1976, Vetvicka et al. 1982, Bilej et al. , 1989.
  • 0.1 ml of heparin fresh blood was added to 0.05 ml of diluted HEMA particles (5x108 / ml) and incubated for 60 minutes at 37 ° C with occasional moderate shaking.
  • the cell suspension was rubbed on microscope slides.
  • the smears were evaluated under light microscopy after Giemsa staining.
  • mice One group of Balb / c mice (Jackson laboratory, Bar Harbor, ME, USA) was injected intraperitoneally with either of a control, LAM7, LAM5, AO or A2. After 24 h, the mice were sacrificed, the peritoneal cells were collected in Hanks medium (Sigma).
  • the peritoneal cells were diluted 10 ⁇ l 7 in RPMI 1640 medium (Sigma) with 5% fetal calf serum (Hyclone, Logan, UT, USA). 2x10 6 cells in 0.2 ml of RPMI 1640 medium supplemented with 5% fetal calf serum were mixed with the same volume of HEMA particles (5x10 8 / ml).
  • the suspension was incubated for 60 minutes at 37 ° C with occasional gentle shaking. The incubation was terminated by centrifugation (150 g for 5 minutes) and the pellet was resuspended. Macrophages with ingested particles were counted under light microscopy in Accustain stained smears (modified Wright dye, Sigma).
  • EXAMPLE 10 Effect of AO and A2 on Differential Enumeration in Blood Using the same experimental groups as in Example 8, two additional microscopic slides from each experimental sample were prepared. After Giemsa staining, the presence of individual cell types was assessed by optical microscopy, for each lamella, i. e. monocytes, lymphocytes and granulocytes. The average results are shown graphically in Figure 3. They show that both AO and A2 increase the number of monocytes and granulocytes in the peripheral blood.
  • Example 8 Using the same experimental groups as in Example 8, two additional microscope slides from each experimental sample were prepared. After Giemsa staining, the presence of individual cell types was assessed by optical microscopy, for each lamella, i. e. macrophages, lymphocytes and mast cells.
  • lamella i. e. macrophages, lymphocytes and mast cells.

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Abstract

La présente invention porte sur l'utilisation d'au moins un composé de formule (I) ou (II) dans lesquelles R<SUB>1</SUB> représente H et n est un entier de 2 à 10, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de maladies choisies dans le groupe consistant en tumeur, cancer, maladie virale, maladie bactérienne, maladie fongique, maladie du système immunitaire, maladie auto-immune ou maladie liée à une déficience de Pimmunostimulation, chez des êtres humains et animaux à sang chaud, elle porte également sur des produits nouveaux à terminaison mannose ou mannitol ainsi que sur leur procédé de préparation.

Description

UTILISATION D' OLIGO-B-(1.3VGLUC ANES MODIFIES POUR LE TRAITEMENT PE MALADIES DU SYSTEME IMMUNITAIRE. OLIGO-B- q.3VGLUCANE-fUy MANNOSE. OLIGO-B-(1,3)-GLUCANE-(1.3>
MANNITOL ET LEURS DERIVES. LEURS PROCEDES DE PREPARATION ET MEDICAMENTS LES CONTENANT,
La présente invention porte sur l'utilisation ά"oligo-β-(l,3)-glucanes modifiés de formule (I) ou (II) ci-dessous pour la préparation de médicaments utiles dans les traitements basés sur la stimulation du système immunitaire.
Les glucanes, qui sont des produits naturels, ont été longuement étudiés et les propriétés immunostimulantes de certains glucanes sont connues. Cependant, tous les glucanes naturels ne sont pas actifs. La Société Demanderesse a montré, notamment dans WO03/045414 que la
Laminarine, qui est un polysaccharide extrait de l'algue brune Laminaria digitata présentait des activités d'immunostimulation. La Laminarine est un polysaccharide de faible poids moléculaire constitué d'une chaîne principale linéaire β-(l,3)-glucane, de 20 à 30 unités glucose faiblement ramifié en position 6, qui présente à l'extrémité terminale ou bien une entité glucose (chaîne G) ou bien une entité mannitol (chaîne M).
Bien que l'activité immunostimulante de la Laminarine ait été reconnue, un inconvénient majeur de son utilisation à des fins thérapeutiques est son origine naturelle. En effet, la composition de la Laminarine n'est pas constante et dépend notamment de son lieu de ramassage, de l'époque de ramassage, etc. II existe donc un réel besoin en des produits de synthèse présentant les propriétés thérapeutiques de la Laminarine.
Les présents inventeurs se sont plus particulièrement tournés vers les oligosaccharides du groupe M présents dans la Laminarine. Dans la littérature, il est mentionné que ces oligosaccharides présentent une liaison de configuration β entre le carbone 1 de l'entité terminale du glucane et un carbone primaire du résidu mannitol, et peuvent être représentés de la façon suivante :
Figure imgf000004_0001
Ils ont cherché à synthétiser ces molécules de façon à mettre à la disposition notamment de l'industrie pharmaceutiques, des molécules dont la earactérisation est complète et la structure tout à fait élucider, évitant ainsi les difficultés inhérentes à l'utilisation de produits naturels en tant que produits pharmaceutiques.
De façon inattendue et surprenante, les présents inventeurs ont trouvé que les oligosaccharides de formule (I) ou (II) ci-dessous, qui eux présentent une liaison β entre le carbone 1 de l'entité terminale glucose et un carbone secondaire de l'entité terminale mannose ou mannitol, présentaient des activités immunostimulantes. Un premier objet de l'invention porte donc sur l'utilisation d'au moins un oligo- β-(l,3)-glucane modifié de formule (I) ou (II)
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dans lesquelles Ri représente H ou OH et n est un entier de 2 à 10, de préférence de 2 à 7, et plus préférentiellement encore égal à 3, 4 ou 5, pour la préparation d'une composition destinée au traitement de maladies choisies dans le groupe consistant en tumeur, cancer, maladie virale, maladie bactérienne, maladie fongique, maladie du système immunitaire, maladie auto-immune ou maladie liée à une déficience de Pimmunostimulation, chez des êtres humains et animaux à sang chaud. L'action des composés de formule (I) ou (II) est liée à la présence de récepteurs spécifiques de ces composés à la surface des macrophages et plus généralement des différentes populations de leucocytes. Cette activité est attribuée à la stimulation de cellules immunocompétentes de l'organisme et est mesurée à travers :
- l'activation des cellules NK, des lymphocytes T, et du facteur nucléaire κB(NF- KB) ; - l'activité phagoeytaire ;
- la sécrétion de cytokines telles que les interleukines (IL), le TNF-α, ou encore l'interféron γ ;
- la production d'espèces oxydantes réactives comme l'anion superoxyde ou le peroxyde d'hydrogène.
Avantageusement, lorsque dans le composé de formule (II), R1 représente OH, le groupe terminal est un mannitol.
Les mécanismes d'interaction de nombreux glucanes ont été largement décrits, mais ont montré des résultats souvent contradictoires, empêchant de prédire quel glucane est le meilleur immunomodulateur. Les effets liés à des modifications fonctionelles ou structurelles sont quant à eux totalement imprévisibles.
Conformément à l'invention, la composition utilisée conformément à l'invention peut être administrée au patient par voie intraveineuse, intrapéritonéale ou orale.
Les doses de composés de formule (F), (IF) sont fonction de la pathologie à traiter et du mode d'administration retenu. Elles sont de façon générale de 25 à 70 Ul/kg de poids corporel par jour, plus préférentiellement de 35 à 45 Ul/kg de poids corporel par jour.
Des médicaments utiles par voie orale sont des comprimés, granules, sirop, gélules, gel. Selon un autre mode de réalisation, la composition utilisée conformément à l'invention, peut également comprendre un agent chimiothérapeutique.
L'agent chimiothérapeutique est choisi dans le groupe comprenant le cisplatine, vinblastine, paclitaxel, le taxol et ses dérivés, les anticorps monoclonaux tels que notamment Rituximab et Cituximab. Lorsque la composition comprend un agent chimiothérapeutique et /ou un potentiateur, conformément à l'invention, elle peut être utilisée de façon séquencée, c'est-à-dire que le composé de formule (I) ou (II) est administré à un certain moment et l'agent chimiothérapeutique est administré à un autre moment éventuellement avec le potentiateur. La présente invention porte également sur certains des dérivés de formule (I) et
(II) ci-dessus qui sont des composés nouveaux. Ces nouveaux composés sont des oligo- β-(l,3) -glucane-(l,3)-mannose et oligo-β-(l,3) -glucane-(l,3)-mannitol et leurs dérivés désoxy en position 4, qui présentent respectivement la formule générale (F) ou la formule générale (H') :
Figure imgf000006_0001
Figure imgf000006_0002
dans lesquelles Ri représente H ou OH et n est un entier de 2 à 10, de préférence de 2 à
7, et plus préférentiellement encore égal à 3, 4 ou 5.
Plus particulièrement, de tels composés sont les composés suivants : β-D-glucopyranosyl-(l→3)-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-(α,β)-D-mannopyranose ; β-D-glucopyranosyl-(l→-3)-β-D-glucopyranosyl-(l-→3)-β-D-glucopyranosyl-(l-→3)-β-
D-glucopyranosyl-(l— »3)-β-D-glucopyranosyl-(l— »3)-β-D-mannopyranose ; β-D-glueopyranosyl-(l→3)-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-4-désoxy-(α,β)-D-désoxy- mannopyranose ; β-D-glucopyranosyl-(l— »3)-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-manmtol ; β-D-glucopyranosyl-(l→3)-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-4-désoxy-mannitol ; β-D-glucopyranosyl-( 1 -→3)-β-D-glucopyranosyl-( 1 →3)-β-D-glucopyranosyl-( 1 →3)-β-
D-glucopyranosyl-( 1 -→3)-β-D-glucopyranosyl-( 1 -→3)-mannitol ; β-D-glucopyranosyl-( 1 -→3)-β-D-glucopyranosyl-( 1 — »3)-β-D-glucopyranosyl-( 1 →3)-β- D-glucopyranosyl-( 1 →3)-β-D-glucoρyranosyl-(l →3)-4-désoxy-(α,β)-D- mannopyranose ; β-D-glucopyranosyl-( 1 -→3)-β-D-glucopyranosyl-( 1 — >3)-β-D-glucopyranosyl-( 1 →3)-β-
D-glucopyranosyl-(l -→3)-β-D-glucopyranosyl-( 1 →3)-4-désoxy-mannitol.
Ces nouveaux composés sont utiles en tant que composés pharmaceutiques. L'invention a donc également pour objet des médicaments comprenant ces composés nouveaux avec au moins un excipient choisi en fonction du mode d'administration retenu et du dosage.
Ces médicaments peuvent être des médicaments destinés à une administration par voie orale, par voir intraveineuse ou par voie intrapéritonéale. Les doses de composés de formule (V), (IP) sont fonction de la pathologie à traiter et du mode d'administration retenu. Elles sont de façon générale de 25 à 70 Ul/kg de poids corporel par jour, plus préférentiellement de 35 à 45 Ul/kg de poids corporel par jour. Des médicaments utiles par voie orale sont des comprimés, granules, sirop, gélules, gel.
Ces médicaments peuvent également comprendre au moins un agent chimiothérapeutique choisi dans le groupe comprenant le cisplatine, vinblastine, paclitaxel, le taxol et ses dérivés, les anticorps monoclonaux tels que notamment Rituximab et Cituximab.
En particulier, ces composés sont utiles en tant qu'agents immunomodulateurs. Un autre objet de l'invention est relatif à l'utilisation d'au moins un composé de formule (F) ou (H') pour le traitement d'une maladie choisie dans le groupe consistant en tumeur, cancer, maladie virale, maladie bactérienne, maladie fongique, maladie du système immunitaire, maladie auto-immune ou maladie liée à une déficience de l'immunostimulation, chez des animaux à sang chaud et des êtres humains.
Ces composés présentent une structure originale puisque la partie glucanique est reliée au résidu mannitol par l'un de ces hydroxyles secondaires par l'intermédiaire d'une liaison de configuration β. La présence des molécules de formule (F) et (IF) dans lesquelles Ri représente -OH a été mise en évidence dans la Laminaria digita. Aucune méthode de préparation n'a été décrite.
La préparation par voie chimique des nouveaux composés de formule (F) ou (IF) repose principalement sur une épimérisation de l'entité réductrice terminale de type D-glucose en résidu de type D-mannose. Ceci implique la singularisation de l'entité réductrice par rapport aux autres unités glucose de l'oligossaccharide et la singularisation de Phydroxyle 2 de cette entité par rapport aux autres fonctions de l'unité réductrice. Deux voies de synthèse différentes sont envisagées, une synthèse itérative et une synthèse par épimérisation de l'entité terminale.
Selon le premier mode de réalisation, le procédé de préparation des nouveaux composés comprend une réaction entre un donneur de glycosyle de formule (D) ci- dessous et un accepteur de glycosyle de formule (A) ci-dessous :
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dans lesquelles m est un entier de 1 à 9, de préférence de 1 à 6, et plus préférentiellement encore égal à
2, 3 ou 4 ; p est un entier de O à 9, de préférence de O à 6, et plus préférentiellement encore égal à
2, 3 ou 4 ;
R représente alkyle tel que éthyle, méthyle, propyle ou butyle, ou aryle tel que phényle ou tolyle ;
R2 représente allyle, méthylnaphtyle, benzyle, paraméthoxybenzyle, halogénoacétyle
(chioroacétyle, bromoacétyle, iodoacétyle) ;
R3 et R4 d'une part et R3' et R4' d'autre part forment ensemble un radical éthylidyle, isopropylidyle, hexafluoroisopropylidyle, cyclopentylidyle, cyclohexylidyle, cycloheptylidyle, butylidyle, 1 -tertiobutyléthylidyle, benzylidyle, méthoxybenzylidyle,
1-phénylbenzylidyle ou R3, R4, R3' et R4' représentent chacun indépendamment l'un de l'autre un benzyle, chlorobenzyle, nitrobenzyle, allyle, triarylméthyle, trialkylsilyle tel que triéthylsilyle, tri-isopropylsilyle, tertiobutyldiméthylsilyle, ester tel que acétyle, chioroacétyle, benzoyle, pivaloyle ; R5 représente H, un groupe lévulinoyle, acétyle, chioroacétyle, fluorénylméthyloxycarbonyle, trialkylsilyle tel que triéthylsilyle, tri-isopropylsilyle, tertiobutyldiméthylsilyle, de préférence un groupe lévuiinoyle, à la condition que aucun de R3, R4, R3', R4' ne soit identique à R5.
Dans la présente demande les abréviations suivantes sont utilisées : Bn : benzyle, NAP : 2-méthylnaphtyle, Bz : benzoyle, X : halogène, SEt .Εthylthio-,
Ac : acétyle, Lev : lévulinoyle.
De façon avantageuse, le composé de formule (A) est
Figure imgf000008_0002
De façon avantageuse, le composé de formule (D) est
Figure imgf000009_0001
Cette étape du procédé peut s'inclure dans une synthèse itérative qui diffère de celle décrite dans FR2804684 par la nécessaire utilisation d'un premier accepteur comportant en position 2 un groupement protecteur orthogonal de tous les autres groupements présents sur les oligomères synthétisés après élongation de la chaîne, ce qui rend possible l'épimérisation régiosélective.
Cette synthèse itérative peut être décrite selon le schéma réactionnel (schéma réactionnel 1 ) tel que donné ci-après :
Figure imgf000010_0001
Le schéma réactionnel 1 ci-dessus comprend dans l'ordre suivant : la préparation [a'] à partir d'un composé 1 tel qu'obtenu dans FR2804694, d'un composé 2 dont le groupement -SEt a été remplacé par un groupement -OBn ; la substitution [a] en position 2 de -OBz par -OR5, R5 étant de préférence lévulinoyle, et la déprotection [b] sélective de l'hydroxyle en position 3 ; la réaction entre le donneur 1 et l'accepteur 4 [c] , ou glycosylation; - éventuellement la déprotection [d] sélective en position 3 de l'hydroxyle et la glycosylation entre le composé 1 et le composé 6, ces deux étapes pouvant être réitérées jusqu'à l'obtention du nombre n d'unités glucose souhaité ;
- clivage [e] sélectif du groupe levulinoyle (Lev) ; de façon avantageuse ce clivage se fait avec NH2NH2 dans AcOH.
- oxydation [fj, de préférence avec le periodinane de Dess-Martin;
- réduction épimérisante [g] ; avantageusement avec le L-sélectride ;
- déprotection [h] de tous les groupements ester, avantageuse avec MeONa/MeOH;
- clivage [i] de tous les groupes hydrogénolysables, avantageuse avec H2, Pd(OAc)2 ; - éventuellement réduction [j] du mannose en mannitol correspondant, avantageusement avec NaBH4 dans MeOH.
Il est également possible d'envisager la synthèse en mettant en œuvre un schéma réactionnel plus convergent, tel que défini ci-après (schéma réactionnel 2). Dans ce schéma réactionnel, le donneur D est un disaccharide, ou un oligosaccharide supérieur, que l'on fait réagir avec un accepteur A qui est également un disaccharide ou qui est un oligosaccharide supérieur : tri-, tétra-, penta-, tel qu'obtenu en tant que composé 6 selon le schéma réactionnel 1.
Figure imgf000012_0001
Dans ce second schéma réactionnel, de préférence R' est Ac, Bz ou pivaloyle et st Lev.
Ce second schéma réactionnel comprend dans l'ordre suivant : la réaction [a"] entre un disaccharide donneur de glycosyle (20) tel qu'obtenu dans FR2804694, et un accepteur de glycosyle tel que préparé selon le premier schéma réactionnel, avantageusement en présence de TMSOTf (acide trifluorométhanesulfonique); clivage [b"] sélectif du groupe levulinoyle (Lev), avantageusement avec NH2NH2 dans AcOH ;
Oxydation [c"], avantageusement avec le peridionane de Dess-Martin; réduction épimérisante [d"j, avantageusement avec le L-selectride ; déprotection [e"] complète, avantageusement par MeONa/MeOH, réaction suivie de H2, Pd(OAc)2.
Selon un second mode de réalisation, le procédé de préparation des nouveaux composés comprend une étape d'épimérisation en position 2 du chaînon terminal. Cette voie de synthèse permet également d'obtenir les composés désoxygénés en position 4. Le schéma réactionnel 3 ci-dessous illustre ce mode de réalisation :
Figure imgf000013_0001
Dans le schéma réactionnel 3, R7 est un ester, notamment acétyîe, benzoyle, pivaloyle, de préférence Bz, et Rg, un groupement orthogonal à tous les autres groupements protecteurs, peut être Bn, NAP, p-méthoxybenzyle, p-méthoxyphényle, allyle, et de préférence Bn, X est de préférence un brome.
Ce troisième schéma réactionnel comprend dans l'ordre suivant : la réaction [A] de protection de tous les groupes OH, de préférence le groupe protecteur est Bz et la réaction est alors conduite avec du BzCl dans la pyridine,
- halogénation sélective [B], avantageusement bromation par HBr dans AcOH; élimination [C], avantageusement avec DBU diazabicylcoundécène; addition [D], avantageusement avec N-bromosuccinimide dans MeOH - substitution en position anomérique et élimination du groupe hydroxy protégé en position 4 de l'entité terminale [E], avantageusement avec Ph3PO ou un acide de Lewis tel que le triflate d'argent dans l'alcool benzylique ou tout autre alcool parmi lesquels le naphthalèneméthanol, l'alcool p-méthoxybenzylique, le p- méthoxyphénol, l'alcool allylique;
- réduction épimérisante [F], avantageusement avec le L-sélectride ;
- déprotection [G] sélective des groupes protecteurs R7, avantageusement dans MeONa/MeOH ;
- déprotection [H] sélective du groupe protecteur R8, avantageusement avec H2 Pd(OAc)2 lorsque le groupement est hydrogénolysable;
- réduction [I] du désoxy-mannose en désoxy-mannitol, avantageusement avec NaBH4 dans EtOH/H2O.
Les intermédiaires de synthèse utilisés dans les procédés décrits ci-dessus sont des produits nouveaux. L'invention a donc également pour objet, les composés de formules (III), (IV) , (V) et (VI) :
Figure imgf000014_0001
dans lesquelles : p est un entier de 0 à 9, de préférence de 0 à 6, et plus préférentiellement encore égal à
2, 3 ou 4 ; R2 représente hydrogène, allyle, méthylnaphtyle, benzyle, paraméthoxybenzyle, halogénoacétyle (chloroacétyle, bromoacétyle, iodoacétyle) ;
R3 et R4 d'une part et R'3 et R'4 d'autre part, forment ensemble un radical éthylidyle, isopropylidyle, hexafluoroisopropylidyle, cyclopentylidyle, cyclohexylidyle, cycloheptylidyle, butylidyle, 1-tertiobutyl éthylidyle, benzylidyle, méthoxybenzylidyle, 1 -phénylbenzylidyle, ou R3, R4, R3' et R4' représentent chacun indépendamment l'un de l'autre un benzyle, chlorobenzyle, nitrobenzyle, allyle, triarylméthyle, trialkylsilyle tel que triéthylsilyle, tri-isopropylsilyle, tertiobutyldiméthylsilyle, ester tel que acétyle, chloroacétyle, benzoyle, pivaloyle ;
Rs représente H, un groupe lévulinoyle, acétyle, chloroacétyle, fluorénylméthyloxycarbonyle, trialkylsilyle tel que triéthylsilyle, tri-isopropylsilyle, tertiobutyldiméthylsilyle, de préférence un groupe lévulinoyle, à la condition que aucun de R3, R4, R3', R4' ne soit identique à R5 ; R7 représente un ester, notamment acétyle, benzoyle, pivaloyle, de préférence Bz ;
Rg, un groupement orthogonal à tous les autres groupements protecteurs, qui peut être choisi parmi Bn, NAP, p-méthoxybenzyle, p-méthoxyphényle, allyle, et de préférence Ra représente Bn, R9 représente ORg ou X. Les composés de formule (III) sont les composés accepteurs A tels que définis précédemment.
L'invention sera encore mieux comprise à l'aide du complément de description qui suit et des exemples qui ne sont nullement limitatifs mais correspondent à des modes de réalisation avantageux. EXEMPLES
Les Exemples 1 à 7 illustrent les procédés de synthèse des produits de l'invention, et les exemples 8 à 11 montrent l'activité biologique des composés de l'invention.
EXEMPLE 1 : Préparation de selon le schéma réactionnel 1 du β-D- glucopyranosyl-(l→3)-p-D-glucopyranosyl-(l→3)-(α,p)-D-mannopyranose (produit Al) Les produits 1 et 2 sont préparés selon le procédé décrits dans FR 2 804 684 et Jamois,
F.; Ferrières, V.; Guégan, J.-P.; Yvin, J.-C; Plusquellec, D.; Vetvicka, V. Glycobiology 2005, 15, 393-407.
[a]- Préparation de 4,6-0-benzylidène-3-0-(2-méthylnaphtyl)-2-0-levulinoyl-β-D- glucopyranoside de benzyle (produit 3)
Figure imgf000016_0001
Le composé 2 (1 g, 2,006 mmol) est mis en solution dans 50 mL de dichlorométhane puis additionné de DMAP (50 mg, 4,093 mmol), d'acide levulinoïque (250 μL, 2,441 mmol) et de DCC (500 mg, 2,423 mmol). Après 5 heures d'agitation à température ambiante, la DCU est éliminée par filtration, puis le milieu est repris par 50 mL de dichlorométhane et lavé par une solution aqueuse à 10% d'acide chlorhydrique, par une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. Après séchage sur MgSO4 de la phase organique et concentration, le composé est purifié sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:1 ; v/v)] pour conduire de manière quantitative à 1,2 g du composé recherché 3.
Produit 3 : solide blanc ; Pf (0C) 133 ; Rf (EP/AcOEt, 3:1) 0,4 ; ^ -37,4 (c=l,0, CH2Cl2).
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 7,83-7,74 (m, 4H, H arom.) ; 7,53-7,28 (m, 13H, H arom.) ; 5,61 (s, IH, H7) ; 5,01 (d, IH, H9, J119-H9- ≈ 12,4 Hz) ; 4,87 (d, IH, H9') ; 4,86 (d, IH, H8, JH8-H8- ≈ 12,4 Hz) ; 4,60 (d, IH, H8') ; 2,58 (t, 2H, H12, /HU-H»2 = 6,6 Hz) ; 2,44 (t, 2H, Hl 1) ; 2,09 (s, 3H, H14) et tableau la.
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 206,2 (C 13) ; 171,3 (ClO) ; 137,1, 136,9, 135,6, 133,1, 132,9 (5C, C quai arom.) ; 129,0, 128,4, 128,3, 128,2, 128,0, 127,9,
127,8, 127,7, 127,6, 126,8, 126,1, 126,0, 125,8 (C arom.) ; 101,3 (CT) ; 74,1 (C9) ; 70,7
(C8) ; 37,7 (C 12) ; 29,8 (C14) ; 27,8 (Cl 1) et tableau Ib.
Analyse élémentaire (C36H36O8) : Théorique : C = 72,47 %, H = 6,08 % ; Mesurée : C
= 72,05 %, H = 6,12 %, HRMS (ESI+) : [M+Naf C36H36NaO8 : m/z théorique : 619,2308, m/z mesurée :
619,2308 ; [M+Kf C36H36KO8 : m/z théorique: 635,2047, m/z mesurée: 635,2050. [b] Préparation de 4,6-0-benzylidène-2-0~levulinoyl-β-D-glucopyranoside de benzyle (Produit 4)
Figure imgf000017_0001
4
Dans 50 mL d'un mélange dichlorométhane/méthanol (4:1 ; v/v) sont introduits le monosaccharide 3 (1,1 g, 1,844 mmol) et la 2,3-dichloro-5,6-dicyano-l,4-benzoquinone (DDQ) (810 mg, 3,568 mmol) à température ambiante. Après 5 heures de réaction, le milieu est dilué avec 50 mL de dichlorométhane et lavé 2 fois avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium. Après séchage (MgSO4) et concentration de la phase organique, le résidu est purifié sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:1 ; v/v)]. On obtient ainsi 690 mg du produit recherché 4 avec un rendement de 82%.
F I20
Produit 4 : solide blanc ; Pf (0C) 122 ; Rf (EP/AcOEt, 3:1) 0,2 ; la io -62,2 (c=l,0, CH2Cl2).
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 7,50-7,48 (m, 2H, H arom.) ; 7,38-7,28 (m, 8H,
H arom.) ; 5,55 (s, IH, H7) ; 4,89 (d, IH, H8, JH8-H8' ≈ 12,3Hz) ; 4,62 (d, IH, H8') ;
3,05 (s, IH, OH3) ; 2,79-2,73 (m, 2H, HI l) ; 2,59-2,51 (m, 2H, HlO) ; 2,09 (s, 3H,
H14) ; 2,16 (s, 3H, H13) et tableau la. RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 207,1 (C 12) ; 172,0 (C9) ; 136,9 (2C, C quat. arom.) ; 129,2, 128,4, 128,3, 127,9, 127,7, 126,3 (C arom.) ; 101,9 (CT) ; 70,8 (CS) ;
38,1 (Cl 1) ; 29,8 (C13) ; 28,0 (ClO) et tableau Ib.
Analyse élémentaire (C2SH2SO8) : Théorique : C = 65,78 %, H ≈ 6,18 % ; Mesurée : C
≈ 66,04 %, H = 6,23 %. HRMS (ESI4) : [M+Naf C25H28NaO8 : m/z théorique: 479,1682, m/z mesurée :
479,1682 ; [M+Kf C25H28KO8 :m/z théorique : 495,1421, m/z mesurée : 495,1395.
[c] Préparation de 2-0-benzoyl-4,6-0-benzylidène-3-0-(2-méthylnaphtyl)-β-D- glucopyranosyl~(l→3)-4,6-0-benzylidène-2-0-levulinoyl-β-D-glueopyranoside de benzyle (Produit 5)
Figure imgf000018_0001
Dans un ballon sont introduits le donneur 1 (1,73 g, 3,108 mmol) et l'accepteur 4 (1,29 g, 2,826 mmol) dans le dichlυrométhane anhydre à -60 0C, en présence de tamis moléculaire 4Â. Le milieu est alors additionné de iV-iodosuccinimide (NIS) (763 mg, 3,390 mmol) et de triflate de triméthylsilyle (50 μL, 0,283 mmol). Après 3 heures de réaction, le milieu est neutralisé par de la triéthyl aminé, filtré puis concentré. Après purification par chromatographie sur gel de silice [toluène/acétate d'éthyle (9:1 ; v/v)], 2,51 g du produit recherché 5 est obtenu avec un rendement de 94%.
Produit 5 : solide blanc ; Pf (0C) 178-179 ; Rf (EP/AcOEt, 3:1) 0,2 ; Ho - 21,0 (c=l,0, CH2Cl2).
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 7,90-7,86 (m, 2H, H arom.) ; 7,70-7,67 (m, IH, H arom.) ; 7,60-7,21 (m, 24H, H arom.) ; 5,53 (s, IH, H7b) ; 5,28 (s, IH, H7a) ; 4,94 (d, IH, H8b, JH8b-H8-b = 12,1 Hz) ; 4,84 (d, IH, H8'b) ; 4,80 (d, IH, H8a, JH8a-H8'a = 12,2 Hz) ; 4,52 (d, IH, H8'a) ; 2,66-2,46 (m, 2H, HlOa) ; 2,40-2,27 (m, 2H, Hl la) ; 2,08 (s, 3H, H 13 a) et tableau 2a.
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 206,4 (C 12a) ; 171,1 (C9a) ; 165,0 (OCOPh) ; 137,3, 137,0, 136,7, 135,3, 133,1, 133,0 (7C, C quat. arom.) ; 132,8, 129,7, 129,4, 128,9, 128,3, 128,2, 127,9, 127,8, 127,7, 127,5, 126,7, 126,1, 126,0, 125,8, 125,6 (C arom.) ; 101,7 (C7b) ; 100,9 (C7a) ; 73,4 (C8b) ; 70,6 (C8a) ; 37,8 (Cl Ia) ; 29,7 (C 13a) ; 27,5 (C 10a) et tableau 2b.
Analyse élémentaire (C56H54Oi4) : Théorique : C - 70,72%, H = 5,72% ; Mesurée : C
= 70,89%, H - 5,72%.
HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C56H54NaO14, m/z théorique : 973,3411 ; tn/z mesurée :
973,3412. [d]- Préparation de 2-0-benzoyl-4,6-0-benzylidène-β-D-glucopyranosyl-(l— >3)-4,6-
0-benzylidène-2-0-levulinoyl-β-D-gIucopyranoside de benzyle (Produit 6)
La 2,3-diehloro-5,6-dicyano-l,4-benzoquinone (820 mg, 3,600 mmol) est ajoutée à une solution du composé S (1,71 g, 1,800 mmol) dans un mélange dichîorométhane/méthanol (4:1 ; v/v). Après 16 heures de réaction, le milieu est dilué au dichlorométhane, lavé par une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et à l'eau. La phase organique est séchée (MgSO4), évaporée et le produit recherché 6 est obtenu après purification sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (2:1 ; v/v)] (l,325 g, Rdt = 91%).
Produit 6 : solide blanc ; Pf (°C) 214 ; Rf (EP/AcOEt, 2:1) 0,3 ; L«L> - 43,0 (c=l,0,
CH2Cl2).
RMN 1H (CDCI3, 400 MHz) δ (ppm) : 8,06-8,01 (m, 2H, H arom.) ; 7,63-7,23 (m,
19H, H arom.) ; 5,57 (s, IH, H7b) ; 5,31 (s, IH, H7a) ; 4,83 (d, IH, H8a, JH8a-H8 a = 12,2 Hz) ; 4,55 (d, IH, H8'a) ; 2,72 (s, IH, OH3b) ; 2,65-2,49 (m, 2H, HlOa) ; 2,37-2,25 (m,
2H, Hl la) ; 2,12 (s, 3H, H13a) et tableau 2a.
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 206,4 (C 12a) ; 171,1 (C9a) ; 165,7 (OCOPh) ;
137,0, 136,9, 136,7 (3C, C quat. arom.) ; 133,3, 129,8 (C arom.) ; 129,5 (C quat. arom.) ; 129,3, 129,1, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 127,8, 127,6, 126,2, 126,0 (C arom.) ; 101,6 (C7b) ; 101,5 (C7a) ; 70,6 (CSa) ; 37,7 (Cl Ia) ; 29,7 (C13a) ; 27,5 (ClOa) et tableau 2b.
Analyse élémentaire (C45H46Oi4) "• Théorique : C = 66,66%, H = 5,72% ; Mesurée : C
= 66,53%, H ≈ 5,80%.
HRMS (ESI+) ; [M+Na]+ C45H46NaO14 : m/z théorique : 833,2785 ; m/z mesurée : 833,2785 ; [M+K]+ C45H46KOi4 : m/z théorique : 849,2525, m/z mesurée : 849,2530.
[c]- Préparation de 2-0-benzoyl-4,6~0-benzylidène-3-0-(2-méthylnaphtyl)-β-D- glueopyranosyl-(l→3)-2-0-benzoyl-4,6-0-benzylidène-β-D-glucopyranosyï-(l→3)- 4,6-0-benzylidène-2-0-levulinoyl-β-D-glucopyranoside de benzyle (Produit 7)
Dans un ballon sont introduits le donneur 1 (226 mg, 0,406 mmol) et l'accepteur 6 (300 mg, 0,370 mmol) dans le dichlorométhane anhydre à -80 0C, en présence de tamis moléculaire 4Â. Le milieu est ensuite additionné de iV-iodosuccinimide (100 mg, 0,444 mmol) et de triflate de triméthylsilyle (6,7 μL, 0,037 mmol). Après 2 heures d'agitation, la réaction est terminée et le milieu est neutralisé par de la triéthylamine, filtré puis concentré. Après purification par chromatographie sur gel de silice [toluène/acétate d'éthyle (9:1 ; v/v)], 328 mg trisaccharide attendu 7 sont obtenus avec un rendement de 68%.
Produit 7 : solide blanc ; Pf (0C) 115 ; Rf (EP/AcOEt, 2:1) 0,5; V*™ +4,7 (c=l,0, CH2Cl2).
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) ô (ppm) : 7,95-7,86 (m, 4H, H arom.) ; 7,70-7,13 (m, 33H, H arom.) ; 5,51 (s, IH, H7) ; 5,43 (s, IH, H7) ; 4,94 (d, IH, H8c, JH8c-H8>c ≈ 12,2 Hz) ; 4,83 (d, IH, II8'c) ; 4,78 (d, IH, H8a, JH8a-H8'a = 12,4 Hz) ; 4,50 (s, IH, H7) ; 4,49 (d, IH, H8'a) ; 2,69-2,47 (m, 2H, HlOa) ; 2,40-2,21 (m, 2H, Hl Ia) ; 1,95 (s, 3H, H13a) et tableau 3 a.
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 206,6 (C 12a) ; 171,1 (C9a) ; 165,0, 164,8 (2C, OCOPh) ; 137,3, 137,1, 137,0, 135,4 (C quat. arom.) ; 133,3, 133,1 (C arom.) ; 133,0, 132,8 (C quat. arom.) ; 129,8, 129,7 (C arom.) ; 129,4 (C quat. arom.) ; 129,4, 128,9, 128,7, 128,6, 128,3, 128,2, 128,1, 127,9, 127,8, 127,7, 127,6, 127,5, 126,6, 126,4, 126,1, 126,0, 125,7, 125,6 (C arom.) ; 102,1 (C7) ; 101,1 (C7) ; 100,9 (Cl) ; 73,8 (C8c) ; 70,4 (C8a) ; 37,7 (Cl l a) ; 29,3 (C 13a) ; 27,6 (ClOa) et tableau 3b. Analyse élémentaire (C76H72O20) : Théorique : C ≈ 69,93 %, H = 5,56 % ; Mesurée : C = 69,89 %, H = 5,63 %. HRMS (ESI4) : [M+Na]+ C76H72NaO20 : m/z théorique : 1327,4515, m/z mesurée : 1327,4522 ; [M+K]+ C76H72KO20 : m/z théorique : 1343,4254, m/z mesurée : 1343,4206.
[e]- Préparation de 2-0-benzoyI-4,6-0-benzyIidène-3-0-(2-méthylnaphtyl)-β-D- glucopyranosyl-(l— >3)-2-0-benzoyl-4,6-0-benzylidène-β-D-glucopyranosyI-(l→3)- 4,6-0-benzylidène-β-D-glucopyranoside de benzyle (Produit 12)
7,6 mL d'une solution IM d'hydrazine dans un mélange pyridine/acide acétique (3:2, v/v) sont additionnés goutte à goutte à une solution du trisaccharide 7 (500 mg, 0,383 mmol) dans la pyridine (7,6 mL). Après 3 heures d'agitation, la réaction est stoppée par ajout de 2,1 mL de 2,4-pentane-dione et le milieu est concentré sous pression réduite. Le résidu est ensuite repris par 50 mL de dichlorométhane et lavé par une solution d'acide chlorhydrique à 10%, par une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. Après séchage (MgSO4) et concentration, le produit est purifié par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (2:1 ; v/v)] pour conduire à 377 mg du composé 12 avec un rendement de 82%.
Produit 12 : solide blanc ; Pf (0C) 136 ; Rf (EP/AcOEt, 2:1) 0,5 ; H? +13,4 (o=l,0, CH2Cl2). RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 7,94-7,90 (m, 4H, H arom.) ; 7,68-7,66 (m, IH, H arom.) ; 7,58-7,19 (m, 32H, H arom.) ; 5,54 (s, IH, H7) ; 5,52 (s, IH, H7) ; 4,95 (d, IH, H8c, JH8c-H8'c = 12,4 Hz) ; 4,88 (d, IH, H8a, JH8a-H8'a = 11,6 Hz) ; 4,83 (d, IH, H8'c) ; 4,77 (s, IH, H7) ; 4,53 (d, IH, H8'a) et tableau 3a. RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 165,1, 164,7 (2C, OCOPh) ; 137,3, 137,2, 136,9, 135,3, 133,0, 132,8, 129,2 (8C, C quat. arom.) ; 133,4, 133,0, 129,8, 129,7, 129,3 (C arom.) ; 129,2 (C quat. arom.) ; 129,0, 128,7, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,0, 127,9, 127,8, 127,5, 126,7, 126,4, 126,1, 126,0, 125,7, 125,6 (C arom.) ; 102,0 (CT) ; 101,2 (CT) ; 100,5 (CT) ; 73,8 (C8c) ; 71,2 (C8a) et tableau 3b. Analyse élémentaire (C7iH66Oi8) : Théorique : C = 70,64 %, H = 5,51 % ; Mesurée : C = 70,49 %, H = 5,54 %.
HRMS (ESI4) : [M+Naf C7iH66NaO18 : m/z théorique ; 1229,4147 ; m/z mesurée: 1229,4149 ; [M+K]+ C1x H66KOi 8 : m/z théorique : 1245,3886 : m/z mesurée : 1245,3944 ; [M-H+2Na]+ C71H65Na2Oi8 : m/z théorique : 1251,3966 ; m/z mesurée: 1251,4040. [f\- Préparation de 2-0-benzoyl-4,6-0-benzylidène-3-0-(2-méthylnaphtyl)-β-D- glucopyranosyl-(l— »3)-2-0-benzoyl-4,6-0-benzylidène-β-D-glueopyranosyl-(l→3)- 4,6-0-benzylidène-β-D-glucopyranos-2~uloside de benzyle (Produit 15a) 2-0-benzoyl-4,6-0-benzylidène-3-0-(2-méthylnaphryI)-β-D-glucopyranosyl-(l-→3)- 2-6^benzoyl-4,6-0-benzyIidène-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-4,6-0-benzylidène-2-C'- hydroxyl-β-D-glucopyranoside de benzyle (Produit 15b)
Le composé déprotégé 12 (330 mg, 0,273 mmol) est additionné de 9 mL d'un mélange DMSO/acide acétique (2:1, v/v). Après 48 heures d'agitation à température ambiante, le milieu est dilué par 50 mL de dichlorométhane et lavé par une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par de l'eau. Après concentration et plusieurs co- évaporation au toluène, le milieu est purifié par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3: 1 ; v/v)], pour conduire à 180 mg du produit oxydé 15a (Rdt=55%) en mélange 2:1 avec sa forme hydratée 15b. Produit 15a : solide blanc ; Rf (EP/AcOEt, 2:1) 0,3. RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 7,95-7,91 (m, 4H, H arora.) ; 7,67-7,60 (m, IH, H arom.) ; 7,57-7,10 (m, 32H, H arom.) ; 5,53 (s, IH, H7) ; 5,41 (s, IH, H7) ; 5,40 (dd, IH, H2c, JHk-Hic = 7,8 Hz, JH2c-H3c = 8,4 Hz) ; 5,32 (d, IH, HIc) ; 5,27 (dd, IH, H2b, JHib-H2b = 2,4 Hz, JH2b-H3b = 1,6 Hz) ; 5,19 (d, IH, HIb) ; 4,94 (d, IH, H8c, JHSc-HSO = 11,7 Hz) ; 4,82 (d, IH, H8'c) ; 4,82 (d, IH, H8a, JHga-H8'a = 12,0 Hz) ; 4,64 (s, IH, HIa) ; 4,61 (d, IH, H8'a) ; 4,42 (s, IH, H7) ; 4,35 (d, IH, H3a, JH3a-H4a ≈ 10,4 Hz) ; 4,35
(t, IH, H6a, JH5a-H6a = -/H6a-H6'a = 5,5 Hz) ; 4,28 (dd, IH, H6C, JH5c-H6c == 4,9 HZ, JH6c-H6'c
≈ 10,4 Hz) ; 4,24 (dd, IH, H4b, JH3b-H4b = 7,5 Hz, JH4b-H5b = 10,6 Hz) ; 4,11 (dd, IH, H6b, JH5b-H6b = 4,8 Hz, JH6b-H6'b ≈ 10,2 Hz) ; 4,01 (dd, IH, H3b) ; 3,95 (t, IH, H3c, JH3c- H4c = 8,4 Hz) ; 3,91 (t, IH, H4c, JH4C-H5c ≈ 8,4 Hz) ; 3,77 (t, IH, H6'c, JH5c-H6'c = 10,4 Hz) ; 3,72 (ddd, IH, H5b, JH5b-H6 b = 10,2 Hz) ; 3,63 (ddd, IH, H5c) ; 3,56 (t, IH, H6'a, JH5a-H6'a ≈ 5,5 Hz) ; 3,55 (dt, IH, H5a, JH4a-H5a = 9,0 Hz) ; 3,41 (t, IH, H6'b) ; 2,98 (dd, lH, H4a). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 165,2, 165,0 (2C, OCOPh) ; 137,3, 137,2, 136,8, 135,9, 135,4 (C quat arom.) ; 133,5, 133,3 (C arom.) ; 133,0, 132,8 (C quat. arom.) ; 129,8, 129,7, 129,3, 129,2 (C arom.) ; 129,0 (C quat. arom.) ; 129,0, 128,9, 128,7, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9, 127,8, 127,5, 126,7, 126,4, 126,2, 126,1, 126,0, 125,7, 125,6 (C arom.) ; 101,6 (C7) ; 101,2 (C7) ; 100,6 (C7) ; 98,6 (CIa) ; 97,6 (CIc) ; 96,1 (CIb) ; 81,6 (C4c) ; 79,9 (C4a) ; 78,1 (C3c) ; 77,4 (C4b) ; 75,9 (C3a) ; 75,8 (C3b) ; 73,9 (C8c) ; 73,1 (C2c) ; 71,8 (C2b) ; 70,3 (C8a) ; 68,9 (C6b) ; 68,7 (C6c) ; 68,3 (C6a) ; 66,4 (C5a) ; 66,2 (C5c) ; 64,9 (C5b).
HRMS (ESI+) : [M+Naf Cz1H64NaO18 : m/z théorique : 1227,3990 ; m/z mesurée : 1227,3988 ; [M+Na+CH3OH]+ C72H68NaOi9 : m/z théorique : 1259,4252, m/z mesurée ; 1259,4245. Produit 15b :
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques à 5,24 (d, IH, H3a,
JH3a-H4a = 2,9 Hz) ; 4,30 (s, IH, HIa).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques à 100,4 (CIa) ; 93,4
(C2a). (g]- Préparation de 2-0-beiïzoyl-4,6-0-beMylidène~3-0-(2-méthyInaphtyl)-β-D- glucopyranosyl-(l→3)-2-0-benzoyl-4,6-0-benzylidène-β-D~glucopyranosyl-(l— *3)- 4,6-0-benzylidène-β-D-mannopyranoside de benzyle (Produit 18) Le composé oxydé 15a/15b (180 mg, 0,149 mmol) est solubilisé dans un mélange dichlorométhane / THF (1:1, v/v) puis additionné à - 78 0C de L-Sélectride (IM dans THF ; 150 μL, 0,150 mmol). Après 45 minutes à - 78 0C, la réaction est supposée terminée et neutralisée par ajout de quelques gouttes d'acide acétique. Une fois le milieu revenu à température ambiante, 30 mL de dichlorométhane sont ajoutés et la phase organique est lavée par une solution aqueuse d'acide ehlorhydrique à 10%, par une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et pour finir par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. 180 mg du composé réduit mannoside souhaité 18 sont ainsi obtenus après séchage (MgSO4) et concentration de la phase organique.
Produit 18 : solide blanc ; Pf (0C) 180 ; Rf (EP/AcOEt, 2:1) 0,2 ; M -4,4 (c=l,0, CH2Cl2).
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 7,85-7,83 (m, 2H, H arom.) ; 7,73-7,67 (m, 3H, H arom.) ; 7,62-7,17 (m, 32H, H arom.) ; 5,50 (s, IH, H7) ; 5,42 (s, IH, H7) ; 5,21 (s, IH, H7) ; 4,90 (d, IH, H8c, JHSc-HS'c ≈ 12,4 Hz) ; 4,87 (d, IH, H8a, JHSa-ro-a = 12,2 Hz) ; 4,80 (d, IH, H8'c) ; 4,59 (d, IH, H8'a) et tableau 3'a.
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 164,8, 164,8 (2C, OCOPh) ; 137,2, 137,1, 136,5, 135,2 (C quat. arom.) ; 133,2 (C arom.) ; 132,9, 132,8 (C quat. arom.) ; 132,8, 129,7, 129,6 (C arom.) ; 129,4, 129,1 (C quat. arom.) ; 129,0, 128,9, 128,7, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,8, 127,5, 126,7, 126,4, 126,3, 126,1, 126,0, 125,7, 125,6 (C arom.) ; 101,5 (Cl) ; 101,1 (2 C, CT) ; 73,5 (C8c) ; 70,4 (C8a) et tableau 3 'b.
[h]- Préparation de 4,6-0-benzylidène-3-0-(2-méthylnaphtyl)-β-D-glueopyranosyl- (l-→3)-4,6-0-benzylidène-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-4,6-0-benzylidène-β-D- mannopyranoside de benzyle (Produit 19)
Le composé 18 (170 mg, 0,141 mmol) est dissous dans 15 mL d'un mélange méthanol/dichlorométhane (2:1, v/v) puis additionné de 2 équivalents de méthylate de sodium (0,1 M dans MeOH, 3 mL, 0,300 mmol). Après 6 heures d'agitation à température ambiante, le milieu est neutralisé par ajout de résine Amberlite IR 120-H+, filtré puis concentré sous pression réduite. Après ehromatographie [dichlorométhane/méthanol (99: 1 ; v/v)], le composé 19 est obtenu avec un rendement de 72% (126 mg). r 120 Produit 19 : solide blanc ; Pf (0C) >230 ; Rf (CH2Cl2/MeOH, 97:3) 0,4 ; L≈Jfl - 43.5
Figure imgf000024_0001
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 7,70-7,19 (m, 27H, H arom.) ; 5,47 (s, IH, H7) ; 5,44 (s, IH, H7) ; 5,42 (s, IH, H7) ; 4,96 (d, IH, H8c, JHSc-HS'c = 12,0 Hz) ; 4,88 (d, IH, H8'c) ; 4,84 (d, IH, H8a, JHga-HS'a = 11,9 Hz) ; 4,56 (d, IH, H8'a) et tableau 3'a.
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 137,1, 137,0, 136,9, 136,2, 135,8, 133,1, 132,8 (7C, C quat. arom.) ; 129,0, 128,9, 128,8, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9, 127,8, 127,6, 127,5, 127,4, 126,8, 126,5, 126,2, 126,1, 126,0, 125,9, 125,8, 125,7 (C arom.) ; 101,6 (C7) ; 101,2 (C7) ; 100,7 (C7) ; 74,4 (C8c) ; 70,7 (C8a) et tableau 3'b. HRMS (ESI4) : [M+Na]+ C57H58NaOi6 : m/z théorique : 1021,3623, m/z mesurée : 1021,3624 ; [M+K]+ C57H58KOi6 : m/z théorique : 1037,3362, m/z mesurée : 1037,3370 ; [M-H+2Na]+ C57H57Na2Oi6 : m/z théorique : 1043,3442, m/z mesurée : 1043,3463.
[i]- β-D-glucopyranosyl-(l— »3)-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-(α,β)-D- mannopyranose (Produit Al)
Dans 10 mL d'un mélange acétate d'éthyle/méthanol/dichlorométhane (2:2:1 ; v/v/v) sont introduits le trisaccharide 18 (90 mg, 0,090 mmol), puis l'acétate de palladium (60 mg, 0,267 mmol). Le milieu est alors agité vigoureusement à température ambiante sous atmosphère d'hydrogène pendant 7 jours. Après filtration sur célite, la phase hydroorganique est extraite au dichlorométhane, puis est mise à sec par coévaporation azéotropique avec de l'éthanol absolu pour conduire de manière quantitative au composé déprotégé (45 mg, 0,090 mmol). 25 mg du composé formé sont ensuite purifiés par chromatographie d'exclusion sur gel Sephadex G- 10 (éluant : eau) et les fractions recueillies sont lyophilisées afin d'obtenir le produit recherché qui se présente sous la forme d'une mousse blanche.
RMN 1U (D20, 400 MHz) δ (ppm) : 5,13 (d, IH, Hlaα, JHia-H2a =1,8 Hz) ; 4,67 (d, IH, HIc, JH,c-H2c =7,7 Hz) ; 4,53 (d, IH, HIb, JHib-H2b= 8,0 Hz) ; 4,03 (dd, IH, H2a, JH2a-H3a - 3,1 Hz) ; 3,96 (dd, IH, H3a, JH3a-H4a = 9,5 Hz) ; 3,90-3,80 (m, 3H, H6a, H6b, H6c) ; 3,80-3,73 (m, IH, H4a) ; 3,72-3,55 (m, 5H, H5a, H6'a, H3b, H6'b, Hό'c) ; 3,53-3,36 (m, 5H, H2b, H64b, H5b, H3c, H5c) ; 3,32 (t, IH, H4c, JH3c-H4c = -ΛMC-HSC = 9,7 Hz) ; 3,27 (dd, IH, H2c, JH2c-H3c = 9,3 Hz).
RMN 13C (D2O, 100 MHz) δ (ppm) : 103,1 (CIc) ; 100,5 (CIb) ; 94,1 (Claα) ; 84,5 (C3b) ; 78,5 (C3a) ; 76,3 (C5c) ; 75,9 (2C, C3c, C5b) ; 75,8 (C2c) ; 73,1 (C2b) ; 72,7 (C4a) ; 69,9 (C4c) ; 68,6 (C2a) ; 68,4 (C4b) ; 65,5 (C5a) ; 61,2, 61,0 (3C, C6a, C6b,
C6c).
HRMS (ESI4) : [M+Na]+ Ci8H32NaOi6 : m/z théorique : 527,1588, m/z mesurée:
527,1587 ; [M+K]+ Ci8H32KOi6 : m/z théorique : 543,1327, m/z mesurée : 543,1343.
EXEMPLE 2: Synthèse de différents intermédiaires:
Figure imgf000025_0001
2.1/ 2-0-benzoyl-4,6-0-benzyIidène-β-D-glueopyranosyl-(l— +3)-2-6>-benzoyl-4,6- 0-benzylidène-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-4,6-0-benzylidène-2-0-levulinoyl-β-D- glucopyranoside de benzyle (Produit 8)
Figure imgf000026_0001
La 2,3-dichloro-5,6-dicyano-l,4-benzoquinone (176 mg, 0,774 mmol) est ajoutée à une solution du composé trisaccharidique 7 (337 mg, 0,258 mmol) dans un mélange dichlorométhane/méthanol (4:1 ; v/v). Après 16 heures d'agitation à température ambiante, la réaction est terminée et le milieu est dilué au dichlorométhane, lavé par une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium puis à l'eau. La phase organique est séchée sur MgSO4, concentrée et le produit recherché 8 est obtenu après purification sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (2:1 ; v/v)] (185 mg, Rdt ≈ 72%). Produit 8 : solide blanc ; Rf (EP/ AcOEt, 2: 1) 0,2.
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 8,01-7,95 (m, 2H, H arom.) ; 7,90-7,84 (m, 2H, H arom.) ; 7,53-7,18 (m, 24H, H arom.) ; 7,15-7,09 (m, 2H, H arom.) ; 5,39 (s, IH, H7) ; 5,37 (s, IH, H7) ; 4,74 (d, IH, H8a, JH8a-H8'a = 12,2 Hz) ; 4,47 (s, IH, H7) ; 4,45 (d, IH, H8'a) ; 2,66 (s, IH, OH3c) ; 2,66-2,44 (m, 2H, HlOa) ; 2,36-2,20 (m, 2H, Hl Ia) ; 1,91 (s, 3H, H13a) et tableau 3a.
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 206,1 (C 12a) ; 171,1 (C9a) ; 165,7, 164,8 (2C, OCOPh) ; 137,3, 137,0, 136,9, 133,5, 133,2 (6C, C quat. arom.) ; 129,9, 129,7, 129,5, 129,4, 129,2, 128,7, 128,4, 128,3, 128,2, 127,9, 127,8, 127,7, 127,6, 126,4, 126,2, 126,0 (C arom.) ; 102,1, 101,7, 100,4 (3C, C7) ; 70,4 (C8a) ; 37,7 (Cl Ia) ; 29,3 (C13a) ; 27,7 (ClOa) et tableau 3b.
2.2/ 2-0-benzoyl-4,6-0-benzylidène-3-0-(2-méthylnaphtyl)-β-D-glucopyranosyl- (l→3)-2-0-benzoyl-4,6-0-benzylidène-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-2-0-benzoyl-4,6- 0-benzylidène-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-4,6-0-benzylidène-2-0-IevuIinoyl-β-D- glucopyranoside de benzyle (Produit 9)
Figure imgf000026_0002
Dans un ballon sont introduits le donneur 1 (26 mg, 0,047 mmol) et l'accepteur trisaccharidique 8 (50 mg, 0,043 mmol) dans le dichlorométhane anhydre à 0 0C, en présence de tamis moléculaire 4Â. Après addition de iV-iodosuccinimide (NIS) (50 mg, 0,051 mmol) et de triflate de triméthylsilyle (0,65 μL, 0,004 mmol), le mélange est laissé sous forte agitation pendant 30 minutes. La réaction terminée, le milieu est neutralisé par de la triéthylamine, filtré puis concentré. Après purification par chromatographie sur gel de silice [toluène/acétate d'éthyle (2:1 ; v/v)], 24 mg de tétrasaccharide souhaité 9 sont obtenus avec un rendement de 34%.
. w 120
Produit 9 : solide blanc ; Pf (0C) 138 ; Rf (EP/AcOEt, 2: 1) 0,3 ; V* ID +8,4 (c=l,0,
CH2Cl2).
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 7,94-7,74 (m, 6H, H arom.) ; 7,58-7,17 (m, 41H, H arom.) ; 5,48 (s, IH, H7) ; 5,44 (s, IH, H7) ; 5,33 (dd, IH, H2d, JHid-H2d ≈ 6,9 Hz, Jmd-md = 8,2 Hz) ; 5,21 (t, IH, H2c, JHic-H2o = JH2c-H3c = 5,8 Hz) ; 5,06 (d, IH, HIc) ; 4,97 (d, IH, HIb, JHib-H2b ≈ 5,8 Hz) ; 4,96 (d, IH5 HId) ; 4,96 (s, IH, H7) ; 4,90 (d, IH, H8d, J,,8d-ii8'd = 12,4 Hz) ; 4,82 (t, IH, H2b, JH2b-H3b = 5,8 Hz) ; 4,80 (d, IH, H8'd) ; 4,79 (d, IH, H8a, JHSa-Hs-a ≈ 12,4 Hz) ; 4,68 (dd, IH, H2a, JHia-H2a = 8,0 Hz, JH2a-H3a = 8,6 Hz) ; 4,63 (s, IH, H7) ; 4,51 (d, IH, H8'a) ; 4,35 (d, IH, HIa) ; 4,31 (dd, IH, H6a, JHSa-H6a = 4,9 Hz, JH6a-H6-a = 10,6 Hz) ; 4,21 (dd, IH, H6d, JH5d-H6d ≈ 4,9 Hz, JH6d-H6<d = 10,4 Hz) ; 4,16 (dd, IH, H6c, JH5o HÔC = 5,6 Hz, JU6c-H6-c = 10,4 Hz) ; 4,11 (dd, IH, H6b, JH5b-H6b = 5,3 Hz, JH6b-H6'b = 9,1 Hz) ; 4,08 (dd, IH, H3c, JH3o-H4c = 8,8 Hz) ; 4,01 (dd, IH, H3b, JH3b-H4b ≈ 8,4 Hz) ; 3,98 (t, IH, H4c, JH4o-HSc = 8,8 Hz) ; 3,90 (dd, IH, H4d, JH3d-H4d ≈ 8,2 Hz, JH4d-H5d = 9,1 Hz) ; 3,90 (dd, IH, H3a, JH3a-H4a ≈ 9,1 Hz) ; 3,82 (t, IH, H3d) ; 3,73 (t, IH, H6'd, JH5d-H6'd = 10,4 Hz) ; 3,67 (t, IH, H6'a, JHSa-m-a ≈ 10,6 Hz) ; 3,62-3,58 (m, 2H, H5c, H6'c) ; 3,61 (dd, IH, H4b, JH4b-H5b = 9,1 Hz) ; 3,50 (t, IH, H6'b, JH5b-H6 b ≈ 9,1 Hz) ; 3,48 (dt, IH, H5b) ; 3,44 (ddd, IH, H5d) ; 3,34 (ddd, IH, H5a, JH4a-H5a = 9,1 Hz) ; 3,16 (t, IH, H4a) ; 2,64-2,50 (m, 2H, HlOa) ; 2,36-2,21 (m, 2H, Hl la) ; 2,00 (s, 3H, H13a).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 206,0 (C12a) ; 171,1 (C9a) ; 164,9, 164,8, 164,5 (3C, OCOPh) ; 137,3, 137,1, 136,9, 135,3 (C quat. arom.) ; 133,3, 133,2 (C arom.) ; 133,0, 132,8 (C quat. arom.) ; 129,7 (C arom.) ; 129,4 (C quat, arom.) ; 129,4, 128,9, 128,8, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,0, 127,9, 127,8, 127,7, 127,5, 126,6, 126,4, 126,2, 126,0, 125,9, 125,7, 125,6 (C arom.) ; 102,0 (C7) ; 101,1 (Cl) ; 100,8 (2C, C7) ; 99,7 (CIa) ; 99,3 (CId) ; 97,8 (CIb) ; 96,8 (CIc) ; 81,1 (C4d) ; 78,8 (C4a) ; 78,5 (C4c) ; 78,1 (C3d) ; 77,4 (C4b) ; 77,2 (C3c) ; 74,3 (2C, C3a, C3b) ; 73,6 (2C, C8d, C2a) ; 73,4 (C2d) ; 73,2 (C2b) ; 72,8 (C2c) ; 70,5 (C8a) ; 68,7 (3C, C6b, C6c, C6d) ; 68,5 (C6a) ; 66,3 (C5a) ; 65,9 (C5d) ; 65,7 (C5c) ; 65,3 (C5b) ; 37,7 (Cl Ia) ; 29,5
(C13a) ; 27,6 (ClOa).
Analyse élémentaire (C96H90O26) : Théorique : C ≈ 69,47 %, H = 5,47 % ; Mesurée : C = 69,57 %, H ≈ 5,58 %. HRMS (ESI+) : [M+Naf C96H90NaO26 : m/z théoriqu e: 1681,5618, m/z mesurée : 1681,5619 ; [M+K]+ C96H90KO26 : m/z théorique : 1697,5357, m/z mesurée : 1697,5398.
2.3/ 4,6-0-benzylidène-3-0-(2-méthylnaphtyl)-β-D-glucopyranoside de benzyle (Produit 10)
Figure imgf000028_0001
A une solution de 3 (5 g, 8,296 mmol) dans le méthanol anhydre (150 mL) est ajouté le sodium (0,7 g, 30,435 mmol). Le mélange est agité à 50 0C jusqu'à complète consommation du produit de départ. Le milieu est alors refroidi, neutralisé par addition d'une quantité stoechiométrique d'acide acétique et concentré. Le résidu est ensuite dissous dans le dichlorométhane (250 mL), extrait 3 fois par 50 mL d'eau. La phase organique est séchée sur MgSO4 puis concentrée. La purification sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:1 ; v/v)] permet d'obtenir 3,7 g du composé débenzoylé 10 avec un rendement de 83%.
Produit 10 : solide blanc ; Pf (0C) 148 ; Rf (EP/AcOEt, 3:1) 0,7 ; lαio - 48,1 (o=l,0, CH2Cl2).
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 7,86-7,80 (m, 2H, H arom.) ; 7,78-7,72 (m, IH, H arom.) ; 7,52-7,30 (m, 14H, H arom.) ; 5,60 (s, IH, H7) ; 5,10 (d, IH, H9, JH9.H9' = 12,0 Hz) ; 4,98 (d, IH, H9') ; 4,94 (d, IH, H8, JH8-H8' = 11,8 Hz) ; 4,65 (d, IH, H8') ; 2,46 (s, 1 H, OH) et tableau 1 a.
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 137,2, 136,8, 135,7, 133,2, 133,0 (5C, C quat. arom.) ; 129,0, 128,5, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9, 127,6, 126,8, 126,2, 126,1, 126,0, 125,9, 125,8, 125,4, 125,1 (C arom.) ; 101,4 (CJ) ; 74,6 (C9) ; 71,4 (C8) et tableau Ib. Analyse élémentaire (C3 IH30O6) : Théorique : C = 74,68 %, H = 6,07 % ; Mesurée : C - 74,76 %, H = 6,04 %. HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C31H30NaO6 : m/z théorique : 521,1940, m/z mesurée 521,1948 ; [M+K]+ C31H30KO6 : m/z théorique: 537,1679, m/z mesurée : 521,1999.
2.4/ 2-0-benzoyl-4,6-0-benzylidène-3-0-(2-méthyInaphtyl)-β-D-glueopyranosyl- (l→3)-4,6-0-benzylidène-β-D-glucopyranoside de benzyle (Produit 11)
Figure imgf000029_0001
200 μL d'une solution IM d'hydrazine dans un mélange pyridine/acide acétique (3:2, v/v) sont additionnés goutte à goutte à une solution du disaccharide 5 (11 mg, 0,011 mmol) dans la pyridine (0,2 mL). Après 1 heure d'agitation, la réaction est stoppée par ajout de 50 μL de 2,4-pentane-dione et le milieu est concentré sous pression réduite. Le résidu est ensuite repris par 20 mL de dichlorométhane et lavé par une solution d'acide chlorhydrique à 10%, par une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. Après séchage de la phase organique sur MgSO4 et évaporation du solvant, le produit est purifié par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (2:1 ; v/v)] pour conduire à 6 mg du composé 11 avec un rendement de 61%. Produit 10 : solide blanc ; Rf (EP/AcOEt, 2:1) 0,6.
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 7,93-7,89 (m, 2H, H arom.) ; 7,70-7,23 (m, 25H, H arom.) ; 5,54 (s, IH, H7b) ; 5,45 (s, IH, H7a) ; 4,95 (d, IH, H8b, JH8b-H8'b = 12,9 Hz) ; 4,86 (d, IH, H8'b) ; 4,85 (d, IH, H8a, JH8a-H8'a = 11,7 Hz) ; 4,56 (d, IH, H8'a) et tableaux 2a et 2b. RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 165,5 (OCOPh) ; 137,2, 137,1, 136,7, 135,2,
133.1, 132,8 (7C, C quat. arom.) ; 133,0, 129,8, 129,7, 129,1, 129,0, 128,5, 128,4,
128.2, 128,0, 127,9, 127,8, 127,6, 126,9, 126,1, 126,0, 125,8, 125,7 (C arom.) ; 102,0 (C7b) ; 101,3 (C7a) ; 74,0 (C8b) ; 71,3 (C8a) et tableau 2c.
HRMS (ESI^) : [M+Na]+ C5iH48NaOi2 : m/z théorique : 875,3044, m/z mesurée : 875,3040 ; [M+K]+ CSiH48KOi2 : m/z théorique : 891,2783, m/z mesurée : 891,2748 2.5/ 4,6-O-benzylidène-3-O-(2-méthylnaphtyl)-β-D-glucopyranos-2-uloside de benzyle (13a) 4,6-(?-benzylidène-2-C-hydroxyl-3-O-(2-ιnéthylnaphtyl)-β-D-glucopyranoside de benzyle (13 b)
Figure imgf000030_0001
Le composé 10 (43,5 mg, 0,087 mmol) est mis en solution dans 1 mL d'un mélange DMSO/anhydride acétique (2:1 ; v/v). Après 20 heures d'agitation à température ambiante, le milieu est repris par 50 mL d'acétate d'éthyle et lavé par une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. Après séchage (MgSO4) et concentration de la phase organique, le composé est purifié par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:1 ; v/v)] pour conduire à l'obtention de 33 mg d'un mélange 5:1 du composé recherché 13a et du composé hydraté 13b, avec un rendement de 76%. Solide blanc ; Rf (EP/AcOEt, 3 : 1 ) 0,3. Produit 13a :
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 7,75-7,66 (m, 3H, H arom.) ; 7,57-7,54 (m, IH, H arom.) ; 7,43-7,20 (m, 13H, H arom.) ; 5,49 (s, IH, H7) ; 5,03 (d, IH, H9, JH9.H9' = 12,7 Hz) ; 4,84 (d, III, H8, JH8-H8' = 12,0 Hz) ; 4,80 (d, IH, H9') ; 4,72 (s, IH, Hl) ; 4,62 (d, IH, H8') ; 4,35 (dd, IH, H6, JH5-H6 = 4,8 Hz, JH5-H6' = 10,4 Hz) ; 4,13 (d, IH, H3, /H3-H4 = 10,2 Hz) ; 3,90 (t, III, H4, JH4-H5 = 10,2 Hz) ; 3,77 (t, IH, H6', JH5-H6' = 10,4 Hz) ; 3,58 (ddd, IH, H5).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 196,7 (C2) ; 136,8, 135,9, 134,6, 133,1, 133,0 (5C, C quat. arom.) ; 129,2, 128,6, 128,3, 128,2, 128,1, 127,9, 127,6, 127,1, 126,7, 126,1, 126,0, 125,9, 125,7 (C arom.) ; 101,2 (C7) ; 99,0 (Cl) ; 82,0 (C4) ; 81,8 (C3) ; 73,1 (C9) ; 70,5 (C8) ; 68,5 (C6) ; 66,4 (C5). Produit 13b :
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 7,75-7,66 (m, 3H, H arom.) ; 7,63-7,59 (m, IH, H arom.) ; 7,43-7,20 (m, 13H, H arom.) ; 5,49 (s, IH, H7) ; 4,97 (d, III, H9, JH9-H9' = 11,9 Hz) ; 4,94 (d, IH, H9') ; 4,84 (d, IH, H8, JH8.H8' = 11,7 Hz) ; 4,58 (d, IH, H8') ; 4,38 (s, IH, Hl) ; 4,28 (dd, IH, H6, JHs-H6 ≈ 4,8 Hz, JΗβ-iw = 10,4 Hz) ; 3,84 (t, IH, H4, Jw-tu ≈ Jm-H5 = 9,9 Hz) ; 3,80 (dd, IH, H6\ JH5-H6- ≈ 9,7 Hz) ; 3,62 (d, IH, H3) ; 3,34 (ddd, IH, H5) ; 1,97, 1,95 (2s, 2H, OH2). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 136,9, 136,1, 134,8, 133,1, 133,0 (5C, C quat. arom.) ; 129,0, 128,6, 128,3, 128,2, 128,1, 127,9, 127,6, 127,1, 126,7, 126,2, 126,0, 125,9, 125,7 (C arom.) ; 101,4 (C7) ; 100,5 (Cl) ; 93,9 (C2) ; 79,9 (C4) ; 79,8 (C3) ; 74,9 (C9) ; 71,5 (C8) ; 68,5 (C6) ; 66,5 (C5). 2.6/ 2-0-benzoyl-4,6-0-benzylidène-3-0-(2-méthylnaphtyl)-β-D-glucopyraiiosyl- (l→3)-4,6-0-benzylidène-β-D-glucopyranos-2-uloside de benzyle (Produit 14a) 2-0-benzoyl-4,6-0-benzyUdène-3-0-(2-méthylnaphtyl)-β-D-glueopyranosyl-(l-→3)- 4,6-0-benzylidène-2-C-hydroxyl-β-D-glucopyranoside de benzyle (Produit 14b)
Figure imgf000031_0001
Le composé 11 (6 mg, 0,007 mmol) est mis en solution dans 1 mL d'un mélange DMSO/anhydride acétique (2:1 ; v/v). Après 20 heures d'agitation à température ambiante, le milieu est repris par 50 mL d'acétate d'éthyle et lavé par une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. Après séchage (MgSO4) et concentration de la phase organique, le composé est purifié par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (2:1 ; v/v)] pour conduire à l'obtention de 6 mg d'un mélange 1:5 du composé recherché 14a et du composé hydraté 14b, avec un rendement quantitatif. Solide blanc ; Rf (EP/ AcOEt, 2:1) 0,3. Produit 14a :
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : Signal caractéristique à 192,2 (C2a). HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C5IH46NaOj2 : m/z théorique : 873,2887 ; m/z mesurée : 873,2886 ; [M'+Na]+ C51H48NaO13 : m/z théorique : 891,2993, m/z mesurée: 891,2982. Produit 14b :
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 7,92-7,88 (m, 2H, H arom.) ; 7,73-7,22 (m, 25H, H arom.) ; 5,56 (s, IH, H7) ; 5,50 (s, III, 117) ; 5,38 (t, IH, H2b, JHib-H2b = JH2b-H3b = 8,0 Hz) ; 4,96 (d, IH, H8b, JHgb-H8'b ≈ 12,4 Hz) ; 4,90 (d, IH, H8a, JH8a-H8'a = 12,0 Hz) ; 4,89 (d, IH, H8'b) ; 4,86 (d, IH, HIb) ; 4,58 (d, III, H8'a) ; 4,34 (dd, IH, Hόb, JH5b-H6b = 4,9 Hz, JH6b-H6'b = 10,6 Hz) ; 4,30 (s, IH, HIa) ; 4,27 (dd, IH, H6a, JH5a-H6a = 5,1 Hz, JH6a-H6'a = 10,6 Hz) ; 3,99-3,76 (m, 5H, H4a, H6'a, H3b, II4b, H6'b) ; 3,75 (d, IH, H3a, JH3a-H4a = 9,5 Hz) ; 3,48 (dt, IH, H5b, JH4b-H5b = JH5b-H6'b ≈ 9,5 Hz) ; 3,36 (dt,
I H, H5a, JH4α HSa = JH5a-H6'a = 10,0 Hz).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 166,3 (OCOPh) ; 137,2, 137,1, 136,1, 135,1, 132,9 (C quat. arom.) ; 133,3, 133,0, 129,9, 129,5, 129,1, 129,0, 128,6, 128,5, 128,4,
128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9, 127,6, 127,0, 126,3, 126,2, 126,1, 125,9, 125,8 (C arom.) ; 103,0 (CIb) ; 101,2, 101,0 (C7) ; 100,4 (CIa) ; 93,4 (C2a) ; 81,9 (C3a) ; 81,0 (C4b) ; 78,1 (C4a) ; 77,6 (C3b) ; 74,4 (C2b) ; 73,9 (C8b) ; 71,4 (C8a) ; 68,6 (C6a) ; 68,4 (C6b) ; 66,8 (C5a) ; 65,9 (C5b).
2.7/ 4,6-O-benzyUdène-3-0-(2-méthylnaphtyl)-β-D-maimopyranoside de benzyle (Produit 16)
Figure imgf000032_0001
A une solution du mélange 13a/13b (33 mg, 0,067 mmol) dans le THF (0,5 rnL) est additionné, à -80 °C, un équivalent de L-Sélectride (IM dans THF ; 70 μL, 0,070 mmol). Après 15 minutes d'agitation à -80 0C, le milieu est dilué par 10 mL de diehlorométhane et lavé par une solution aqueuse d'acide chlorhydrique à 10%, par une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. Après séchage sur MgSO4 et évaporation du solvant, le composé est purifié par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:1 ; v/v)] pour conduire à l'obtention de 28 mg du composé mannosidique recherché 16 avec un rendement de 85%. Produit 16 : solide blanc ; Rf (EP/AcOEt, 3: 1) 0,3.
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 7,85-7,79 (m, 3H, H arom.) ; 7,73-7,71 (m, IH, H arom.) ; 7,55-7,30 (m, 13H, H arom.) ; 5,65 (s, IH, H7) ; 4,99 (d, IH, H9, JH9-H9' = 12,7 Hz) ; 4,96 (d, IH, H9') ; 4,94 (d, IH, H8, JH8-H8' = 12,0 Hz) ; 4,65 (d, IH, H8') ; 4,52 (d, IH, Hl, JHi-H2 = 1,0 Hz) ; 4,37 (dd, IH, H6, JH5-H6 = 5,1 Hz, JH6-H6' = 10,4 Hz) ; 4,21 (t, IH, H4, JH3-H4 = JH4-H5 = 9,4 Hz) ; 4,14 (dd, IH, H2, JH2-H3 = 3,3 Hz) ; 3,94 (t, IH, 116', JH5-H6' - 1O'4 Hz) ; 3,66 (dd, IH, H3) ; 3,33 (ddd, IH, H5). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 137,4, 136,5, 135,3, 133,1, 133,0 (5C, C quat. arom.) ; 129,2, 129,0, 128,6, 128,5, 128,3, 128,2, 128,1, 127,9, 127,6, 126,7, 126,2, 126,1, 125,9, 125,7 (C arom.) ; 101,6 (C7) ; 98,6 (Cl; 1Jd-Hi =158 Hz) ; 78,4 (C4) ; 76,4 (C3) ; 72,4 (C9) ; 70,7 (C8) ; 70,0 (C2) ; 68,6 (C6) ; 66,9 (C5).
2.8/ 2-0-benzoyl-4,6-0-benzylidène-3-0-(2-méthylnapfatyl)-β-D-glueopyranosyl- (l-→3)-4,6-<?-benzylidène-β-D-mannpyranoside de benzyle (Produit 17)
Figure imgf000032_0002
Le composé 14a/14b (5 mg, 0,006 mmol) en solution dans 1 mL de THF est additionné à -90 0C de L-Sélectride (solution 1 M dans THF ; 6 μL, 0,006 mmol). Après 1 heure d'agitation à basse température, le milieu est neutralisé par de l'acide acétique, dilué par 20 mL de dichlorométhane et lavé par une solution aqueuse à 10% d'acide ehlorhydrique, par une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. Après séchage (MgSO4) et concentration de la phase organique, 5 mg du composé recherché 17 (0,006 mmol) sont obtenus avec un rendement quantitatif.
Produit 17 : solide blanc ; Rf (EP/AcOEt, 2:1) 0,3.
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 7,90-7,20 (m, 2OH, H arom.) ; 5,55 (s, IH, H7) ; 5,48 (s, IH, H7) ; 5,35 (t, IH, H2b, JHib-H2b = Jmb-mb = 7,5 Hz) ; 4,94 (d, IH, H8b, JH8b- Hg-b = 12,2 Hz) ; 4,86 (d, IH, H8'b) ; 4,81 (d, IH, H8a, JH8a-H8'a = 11,9 Hz) ; 4,79 (d, IH, HIb) ; 4,56 (d, IH, H8'a) ; 4,37 (d, IH, HIa, JHia-H2 = 0,9 Hz) ; 4,35-4,17 (m, 2H, H6a, H6b) ; 4,07 (t, IH, H4b, JH3b-H4b = JH4b-H5b = 9,3 Hz) ; 3,94 (t, IH, H3a, JH2a-H3a = Jm*. H4a = 9,0 Hz) ; 3,90-3,68 (m, 5H, H2a, H4a, H3b, H6'a, H6'b) ; 3,56-3,24 (m, 2H, H5a, H5b). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 166,3 (OCOPh) ; 137,2, 135,1, 133,2 (C quat. arom.); 129,9, 129,8, 129,7, 129,0, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9, 127,8, 127,5, 127,0, 126,3, 126,1, 126,0, 125,9, 125,8, 125,7 (C arom.); 101,2, 101,0 (C7) ; 100,4 (CIb) ; 98,3 (CIa) ; 81,8 (C3a) ; 80,9 (C4b) ; 78,4 (C4a) ; 77,7 (C3b) ; 74,0 (C2b) ; 73,7 (C8b) ; 70,5 (C8a) ; 69,4 (C2a) ; 68,6, 68,5 (C6a, C6b) ; 67,0 (C5a) ; 66,3 (C5b).
EXEMPLE 3: Préparation de β-D-glueopyranosyl-(l→3)-β-D-glucopyranosyl- (1— >3)-β-D-glucopyranosyl-(l-→3)-β-D-glucopyranosyl-(l— >3)-β-D-glueopyranosyl- (l→3)-β-D-maimopyranose (Produit A2)
Figure imgf000033_0001
Le produit souhaité a été préparé selon un protocole comparable à celui décrit pour le produit Al en appliquant au produit 9 les étapes successives [d], [c], [d], [c], puis [e] à
W-
On a ainsi obtenu le produit A2 qui se présente sous la forme d'une mousse blanche ; Rf
(AcOEt//PrOH/H2O, 3:2:2) 0,2. RMN 1H (D2O, 400 MHz) δ (ppm) : 5,19 (d, IH, Hlaα, JHia-H2a = 2,2 Hz).
Autres signaux : RxMN 1H (D20, 400 MHz) δ (ppm) : 4,75 (d, 3H, 3 Hl, JHi-H2 = 8,0 Hz) ; 4,71 (d, 2H, 2
Hl, JHI-H2 = 7,8 Hz) ; 3,93-3,81 (m, 8H, H3a, H4a, H6a, H6b, H6c, H6d, H6e, H6f) ;
3,80-3,63 (m, HH, H2a, H3b, H3c, H3d, H3e, H6'a, H6'b, H6'c, H6'd, H6'e, H6'f) ;
3,55-3,40 (m, HH, H2b, H2c, H2d, H2e, H3f, H4b, H4c, H4d, H4e, H5a, H5b, H5c, H5d, H5e, H5f) ; 3,36 (t, IH, H4f, JH3f-H4f = JH4f-H5f = 9,3 Hz) ; 3,31 (dd, IH, H2f, JHιf.
H2f = 8,0 HZ, JH2f-H3f = 9,3 HZ).
HRMS (ESI+) : [M+Naf C36H62NaO31 : m/z théorique : 1013,3173, m/z mesurée : 1013,3172 ; [M+K]+ C36H62KO31 : m/z théorique : 1029,2912, m/z mesurée : 1029,2920.
EXEMPLE 4 : Préparation du β-D-glucopyranosyl-(l→3)-β-D-glueopyranosyl- (l→3)-mannitol (produit Bl) selon le schéma réactionnel 1
Figure imgf000034_0001
Dans 10 mL d'un mélange méthanol/eau (4:1 ; v/v) est introduit le trisaccharide déprotégé Al (25 mg, 0,049 mmol). Le borohydrure de sodium (19 mg, mmol) est ajouté à température ambiante et le milieu est laissé sous agitation pendant 10 jours. Le milieu est alors neutralisé par ajout de quelques gouttes d'acide acétique puis mis à sec par coévaporation avec un mélange méthanol/acide acétique (9:1, v/v), puis par coévaporation avec du méthanol. Après lyophilisation, le composé est purifié par chromatographie de perméation de gel Sephadex G-10 (éluant : eau) et les fractions recueillies sont lyophilisées afin d'obtenir le produit recherché Bl qui se présente sous la forme d'une mousse blanche.
RMN 1H (D2O, 400 MHz) δ (ppm) : 4,82 (d, IH, HIc, JHlc-H2c =8,0 Hz) ; 4,65 (d, IH, HIb, JHib-H2b= 8,1 Hz) ; 4,09-3,90 (m, 7H, HIa, H2a, H3a, H5a, H6a, H6b, H6c) ; 3,86- 3,66 (m, 6H, Hl 'a, H4a, H6'a, H3b, H6'b, H6'c) ; 3,64-3,38 (m, 7H, H2b, H4b, H5b, H2c, H3c, H4c, H5c).
RMN 13C (D2O, 100 MHz) δ (ppm) : 103,1 (CIc) ; 102,5 (CIb) ; 84,4 (C3b) ; 77,3 (C3a) ; 76,3 (C5c) ; 75,8 (C3c) ; 75,5 (C5b) ; 73,7 (C2c) ; 73,4 (C2b) ; 70,9, 70,8 (2C, C2a, C5a) ; 69,9 (C4c) ; 69,6 (C4a) ; 68,8 (C4b) ; 63,4 (C6a) ; 62,6 (CIa) ; 61,2, 61,0 (2C, C6b, C6c). Exemple 5: Préparation du produit At selon le schéma réactionnel 2.
Figure imgf000035_0001
5.1/ Préparation de 2,3,4,6-tétra-O-acétyl-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri- 0-acétyl-β-D-glucopyranosyl-(l-→3)-4,6-0-benzylidène-2-0-levulinoyl-β-D- glucopyranoside de benzyle (Produit 21)
Dans un ballon sont introduits le donneur 20 [Blattner, R.; Furneaux, R. H.; Pakulski, Z. Carbohydr. Res. 2006, 341, 2115-2125.] (50 mg, 0,064 mmol) et l'accepteur 4 (27 mg, 0,058 mmol) dans le dichlorométhane anhydre à -50 0C, en présence de tamis moléculaire 4Â. Le trifîate de triméthylsilyle (0,53 μL, mmol) est alors additionné et le mélange est agité vigoureusement pendant 2 heures. La réaction terminée, le milieu est neutralisé par de la triéthylamine, filtré puis concentré. Après purification par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (2:1 ; v/v)], 22 mg du trisaccharide attendu 21 sont obtenus avec un rendement de 35%. Produit 21 : solide blanc amorphe ; Rf (EP/ AcOEt, 1 :1) 0,2.
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 7,46-7,43 (m, 2H, H arom.) ; 7,37-7,27 (m, 8H, H arom.) ; 5,53 (s, IH, H7a) ; 5,10 (t, IH, H3c, JH2c-H3c = Jm.-mc = 9,3 Hz) ; 5,04 (t, IH, H4c, JH4c-H5c = 9,3 Hz) ; 5,02 (t, IH, H2a, JHia-H2a ≈ 7,7 Hz, JH2a-H3a = 9,5 Hz) ; 4,95 (dd, IH, H2b, JHib-H2b = 8,2 Hz, JH2b-H3b ≈ 6,0 Hz) ; 4,93 (dd, IH, H4b, JH3b-H4b = 7,3 Hz, JH4b-H5b = 9,7 Hz) ; 4,87 (dd, IH, H2c, JHic-H2c = 8,2 Hz) ; 4,86 (d, IH, H8a, JH8a-H8'a = 12,2 Hz) ; 4,62 (d, IH, HIc) ; 4,57 (d, IH, H8'a) ; 4,55 (d, IH, HIb) ; 4,50 (d, IH, HIa) ; 4,34 (dd, IH, H6c, JH5c-H6o = 2,0 Hz, JH6c-H6O ≈ 12,4 Hz) ; 4,33 (dd, IH, H6a, JH5a-H6a = 4,6 Hz, JH6a-H6'a = 10,4 Hz) ; 4,15-4,01 (m, 3H, H6b, H6'b, H6'c) ; 3,93 (t, IH, H3a, JH3a-H4a ≈ 9,5 Hz) ; 3,91 (dd, IH, H3b) ; 3,79 (t, IH, H6'a, JH5a-H6'a ≈ 10,4 Hz) ; 3,69 (t, IH, H4a, JH4a-H5a ≈ 9,5 Hz) ; 3,69 (ddd, IH, H5c, JH5c~H6-c = 4,0 Hz) ; 3,54 (ddd, IH, H5b, JH5b-H6b = 2,4 Hz, JHSb-H6'b = 4,0 Hz) ; 3,40 (ddd, IH, H5a) ; 2,87-2,80 (m, IH, HlOa) ; 2,70-2,62 (m, 2H, HlO'a, Hl Ia) ; 2,50-2,42 (m, IH, Hl l 'a) ; 2,20 (s, 3H, H13a) ; 2,04, 1,99, 1,97, 1,96, 1,94 (6 s, 21H, OCOCH3). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 206,1 (C12a) ; 171,0 (C9a) ; 170,8, 170,5,
170.4, 169,3, 169,2, 169,1 (7C, OCOCH3) ; 137,0, 136,8 (2C, C quat. arom.) ; 129,0,
128.5, 128,4, 128,3, 128,1, 128,0, 127,9, 127,8, 125,9 (C arom.) ; 100,9 (C7a) ; 100,7 (CIc) ; 100,1 (CIb) ; 99,8 (CIa) ; 78,7 (C3b) ; 78,6 (C4a) ; 77,7 (C3a) ; 73,8 (C2a) ;
73.0 (C3c) ; 72,6 (C2b) ; 71,5 (C5b) ; 71,4 (C5c) ; 70,9 (C2c) ; 70,7 (C8a) ; 68,5 (C6a) ;
68.1 (C4c) ; 68,0 (C4b) ; 66,5 (C5a) ; 62,2 (C6b) ; 61,6 (C6c) ; 37,6 (Cl Ia) ; 30,1 (Cl 3a) ; 27,6 (ClOa) ; 21,0, 20,9, 20,7, 20,6, 20,5, 20,4 (7C, OCOCH3).
5.2/ Préparation de 2,3,4,6-tétra-0-acétyl-p-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri- O-acétyl-β-D-gIucopyranosyl-(l→3)-2-£J-benzoyï-4,6-0-benzylidène-β-D- glucopyranosyl-(l-→3)-4,6-0-benzylidène-2-C>-levulinoyl-p-D-gIucopyranoside de benzyle (Produit 22)
Dans un ballon sont introduits le donneur disaccharidique 37 (106 mg, 0,136 mmol) et l'accepteur 71 (100 mg, 0,123 mmol) dans le dichlorométhane anhydre à -50 13C, en présence de tamis moléculaire 4Â. Le triflate de triméthylsilyle (1,1 μL, 0,006 mmol) est additionné et la réaction est agitée pendant 60 minutes. Le milieu est neutralisé par de la triéthylamine, filtré puis concentré. Après purification par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (1 :1 ; v/v)], 146 mg de l'orthoester tétrasaccharidique sont obtenus avec un rendement de 83%. Le composé ainsi obtenu est directement engagé dans une réaction de réarrangement intrarnoléculaire en présence de triflate de triméthylsilyle (2,5 μL, 0,014 mmol) dans le diehlorométhane à 0 0C. Après 3 heures d'agitation, le milieu est neutralisé par de la triéthylamine, puis concentré. Après purification par chromatographie sur gel de silice
[éther de pétrole/acétate d'éthyle (1 :1 ; v/v)], 101 mg du produit attendu 22 sont obtenus avec un rendement de 69%.
Produit 22 : solide blanc ; Pf(0C) 119 ; Rf (EP/AcOEt, 1:1) 0,3.
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 8,02-7,99 (m, 2H, H arom.) ; 7,61-7,12 (m, 18H, H arom.) ; 5,59 (s, IH, H7b) ; 4,83 (d, IH, H8a, JH8a-H8'a ≈ 12,2 Hz) ; 4,57 (s, IH, H7a) ;
4,56 (d, IH, H8'a) ; 2,73-2,65 (m, IH, HlOa) ; 2,63-2,51 (m, IH, HlO'a) ; 2,48-2,40 (m,
IH, Hl la) ; 2,35-2,26 (m, IH, Hl Ib) ; 2,08 (s, 3H, H13a) ; 2,08, 2,04, 2,01, 2,00, 1,97,
1,94 (7s, 2 IH, OCOCH3) et tableau 4a.
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 206,0 (C12a) ; 171,2 (C9a) ; 170,8, 170,5, 170,3, 169,4, 169,3, 169,1, 168,7 (6C, OCOCH3) ; 165,0 (OCOPh) ; 137,3, 136,9, 136,7
(3C, C quat. arom.); 133,3, 129,8, 129,7 (C arom.); 129,6 (C quat. arom.); 129,5,
128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 127,9, 127,8, 126,5, 126,0, 125,8 (C arom.) ; 102,2 (CIb) ;
99,7 (C7a) ; 70,7 (C8a) ; 37,6 (ClIa) ; 29,4 (C13a) ; 27,7 (ClOa) ; 21,0, 20,9, 20,6,
20,5, 20,4, 20,3 (7C, OCOCH3) et tableau 4b. HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C7iH80NaO31 : m/z théorique : 1451,4581, m/z mesurée :
1451,4579 ; [M+K]+ C7 , H80KO31 : m/z théorique : 1467,4321, m/z mesurée :
1467,4346.
5.3/ 2,3,4,6-tétra-0-acétyl-p-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri-6>-acétyl-β-D- glucopyranosyI-(l→3)-2-0-benzoyl-4,6-0-benzylidène-β-D-glucopyranosyl-(l— >3)- 4,6-0-benzyIidène-β-D-glucopyranoside de benzyle (Produit 23)
Le tétrasaccharide 22 (430 mg, 0,301 mmol) est mis en solution dans 6 mL de pyridine puis est additionné goutte à goutte de 6 mL d'une solution IM d'hydrazine dans un mélange pyridine/acide acétique (3:2, v/v). Après 3 heures d'agitation, la réaction est stoppée par ajout de 1,7 mL de 2,4-pentane-dione et concentrée sous pression réduite. Le milieu est repris par 50 mL de diehlorométhane et lavé par une solution d'acide chlorhydrique à 10%, par une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. Après séchage (MgSO4) et concentration, le produit est purifié par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (1 : 1 ; v/v)] pour conduire à 260 mg du composé déprotégé 23 avec un rendement de 65%.
Produit 23 : solide blanc ; Pf (0C) 136 ; Rf (EP/ AcOEt, 1 :1) 0,3 ; W -29,6 (c=l,0,
CH2Cl2). RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm): 8,11-8,09 (dd, 2H, H arom.) ; 7,67-7,17 (m, 18H,
H arom.) ; 5,61 (s, IH, H7) ; 5,08 (s, IH, H7) ; 4,92 (d, IH, H8a, JHSa-Hs-a = 11,7 Hz) ;
4,61 (d, IH, H8'a) ; 2,09, 2,03, 2,01, 2,00, 1,99 (7s, 21H5 OCOCH3) et tableau 4a.
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 170,8, 170,5, 170,2, 169,3, 169,2, 169,0, 168,6
(7C, OCOCH3) ; 165,1 (OCOPh) ; 137,1, 137,0, 136,5 (3C, C quat. arom.) ; 133,3 (C arom.) ; 129,5 (C quat. arom.) ; 129,7, 129,1, 128,9, 128,8, 128,7, 128,5, 128,4, 128,2,
128,1, 128,0, 127,9, 127,8, 126,0, 125,8, 125,2 (C arom.) ; 101,4 (C7) ; 100,4 (C7) ;
71,3 (C8a) ; 20,6, 20,5, 20,4, 20,3, 20,2 (7C, OCOCH3) et tableau 4b.
5.4/ Préparation de 2,3,4,6-tétra-0-acéryl-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri- 0-aeétyl-β-D-glueopyranosyl-(l→3)-2-0-benzoyl-4,6-0-benzylidène-β-D- glucopy r anosyl-(l →3)-4,6-0-benzylidène-β~D-gIucopyranos-2~uloside de benzyle (Produit 24a) et de 2,3,4,6-tétra-0-aeétyl-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri-0- acétyl-β-D-glueopyranosyl-(l→3)-2-0-benzoyl-4,6-0-benzylidène-β-D- glucopyranosyi-(l— »3)-4,6-0-benzylidène-2-C-hydroxyl-β-D-glueopyranoside de benzyle (Produit 24b)
A une solution du produit 23 (260 mg, 0,195 mmol) dans 5 mL de dichlorométhane anhydre sont ajoutés la pyridine (0,5 mL) et le périodinane de Dess- Martin (2,6 mL d'une solution à 15%). Après 24 h à température ambiante, le milieu est additionné d' éther éthylique. Le précipité résultant est filtré sur célite et le filtrat concentré sous pression réduite. Le résidu est enfin purifié par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (1:1 ; v/v)], pour conduire à 208 mg du produit oxydé 24a (Rdt=80%) en mélange (1:1) avec sa forme hydratée 24b. 24a/24b : solide blanc ; Rf(EPZAcOEt, 1 :1) 0,2. Produit 24a : RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 5,25 (s, IH5 HIa).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 196,6 (C2a) ; 96,8 (CIa) ; 70,6 (C8a).
Produit 24b : RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 4,87 (s, IH, HIa). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 98,8 (CIa) ; 93,7
(C2a) ; 71,4 (C8a). Autres signaux (24a/24b) :
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 8,08-8,03 (m, 2H5 H arom.) ; 7,67-7,45 (m, 8H, H arom.) ; 7,40-7,10 (m, 3OH, H arom.) ; 5,65 (s, IH, H7) ; 5,59 (s, IH, H7) ; 5,26-5,18 (m, 2H, 2 H2b) ; 5,14-4,80 (m, 14H, H2c, 2 H2d, 2 H3d, 2 H4a, 2 H4b, 2 H8a, 2 Hl) ; 4,73 (d, IH, H8a, JH8a-H8>a ≈ 11,9 Hz) ; 4,66-4,48 (m, 6H, H3a, H8'a, 2 Hl, H6, H7) ; 4,42-4,26 (m, 6H, H3a, Hl, H7, 3 H6) ; 4,20-3,40 (m, 28H, 2 H3b, 2 H3c, 2 H4c, 2 H4d, 2 H5a, 2 H5b, 2 H5c, 2 H5d, 2 H6'a, 2 H6'b, 2 H6'c, 2 H6'd, 4 H6) ; 2,08, 2,06, 2,04, 2,01, 2,00, 1,99, 1,98, 1,97, 1,96, 1,95(14 s, 42H, OCOCH3).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 170,8, 170,5, 170,3, 169,4, 169,3, 169,2, 169,1, 168,8 (10C, OCOCH3) ; 165,3 (2C, OCOPh) ; 137,1, 137,0, 136,6, 136,0, 135,6 (6C, C quat. arom.) ; 133,7, 133,6, 129,9, 129,4, 129,3, 129,2, 129,1, 128,8, 128,7, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 127,9, 127,7, 126,4, 126,2, 125,9, 125,8 (C arom., 2 C quat. arom.) ; 101,8, 101,6, 100,4, 100,2 (4C, CT) ; 100,9, 100,8, 100,6, 99,2, 98,8, 96,8 (8C, Cl) ; 80,6, 79,8, 79,3, 79,0, 78,7, 78,1, 77,8, 77,4, 77,2, 77,1 (1OC, C3a, C3b, C3c, C4a, C4b) ; 74,8 (2C, C2b) ; 73,3, 73,0, 72,8, 72,3 (4C, C2c, C3d) ; 71,6, 71,5 (4C, C5c, C5d) ; 71,0, 70,8 (2C, C2d) ; 68,7, 68,6, 68,4 (4C, C6a, C6b) ; 68,0, 67,9 (4C, C4c, C4d) ; 67,0, 66,8 (2C, C5a) ; 65,6, 65,1 (2C, C5b) ; 62,0 (2C, C6d) ; 61,6 (2C, C6c); 21,1, 20,7, 20,6, 20,5, 20,4, 20,3 (14C, OCOCH3).
5.5/ 2,3,4,6-tétra-0-acétyl-p-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri-0-acétyl-β-D- glucopyranosyl-(l→3)-2-O-benxoyl-4,6-0-benzyHdène-β-D-glueopyranosyl-(l→3)- 4,6-O-benzylidène-p-D-mannopyranoside de benzyle (Produit 25) Le produit 24a/24b (66 mg, 0,050 mmol) en solution dans un mélange dichiorométhane/THF est additionné à -90 0C de L-Sélectride (solution 1 M dans THF ; 150 μL, 0,150 mmol). Après 2 heures d'agitation à basse température, le milieu est neutralisé par ajout d'acide acétique, dilué par 20 mL de dichlorométhane et lavé par une solution aqueuse saturée d'acide chlorhydrique, une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par de l'eau. Après séchage sur MgSO4 et concentration, le milieu est purifié par chromatographie sur gel de silice [dichlorométhanc/méthanol (98:2 ; v/v)], pour conduire au produit réduit souhaité 25 (66 mg, 0,050 mmol) avec un rendement quantitatif. Produit 25 : solide blanc ; Rf (CH2Cl2/MeOH, 98:2) 0,2. RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 8,08-8,03 (m, 2H, H arom.) ; 7,67-7,10 (m, 18H, H arom.) ; 5,62 (s, IH, H7) ; 5,22 (m, IH, H2b, JHib-H2b = Jreb-rob = 5,1 Hz) ; 5,04 (t, IH, H3d, JH2d-H3d = ^H3d-H4d = 8,0 Hz) ; 5,03-4,91 (m, 5H, HIb, H2c, H4c, H4d, H7) ;4,90 (d, IH, H8a, JH8a-H8'a = 11,9 Hz) ; 4,84 (dd, IH, H2d, JHid-H2d = 8,2 Hz) ; 4,67 (d, IH, HIc, JHtc-H2o = 8,0 Hz) ; 4,63 (d, IH, H8'a) ; 4,47 (d, IH5 HIa, JHIa-H28 < 1,0 Hz) ; 4,44 (d, IH, HId) ; 4,39-4,31 (m, 2H, H6a, H6c) ; 4,18-3,94 (m, 8H, H2a, H3b, H4a, H4b, H6b, H6d, H6'c, H6'd) ; 3,93-3,84 (m, 2H, H3a, H6'a) ; 3,75 (t, IH, H3c, JH2O-H3C = JH3C-H4O = 9,3 Hz) ; 3,64 (t, IH, H6'b, JH5b-H6-b = JH6b-H6-b = 10,0 Hz) ; 3,62- 3,52 (m, 3H, H5b, H5c, H5d) ; 3,34 (dt, IH, H5a, JH4a-H5a = JHSa-Hβ-a = 9,8 Hz, JH3a-H6a = 4,6 Hz) ; 2,05, 2,00, 1 ,97, 1 ,95, 1 ,94 (7s, 21 H, OCOCH3).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 170,8, 170,4, 170,3, 169,3, 169,2, 169,1, 168,9 (7C, OCOCH3) ; 165,0 (OCOPh) ; 137,2, 137,1, 136,4, 129,2 (4C, C quat. arom.) ; 133,6, 129,7, 129,0, 128,8, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,0, 127,8, 126,1, 125,8 (C arom.) ; 101,7, (C7) ; 100,7 (CId) ; 100,5 (C7) ; 99,7 (CIc) ; 98,3 (CIa) ; 97,3 (CIb) ; 78,7 (C3c) ; 78,4 (C3b) ; 77,5 (C4b) ; 76,3 (C4a) ; 75,7 (C3a) ; 74,2 (C2b) ; 72,9 (C3d) ; 72,4 (C2c) ; 71,5 (2C, C5c, C5d) ; 70,8 (C2d) ; 70,6 (C7a) ; 68,7 (C2a) ; 68,6 (C6b) ; 68,5 (C6a) ; 68,1 (C4c) ; 67,9 (C4d) ; 67,2 (C5a) ; 65,9 (C5b) ; 61,9 (C6d) ; 61,5 (C6c) ; 20,7, 20,6, 20,5, 20,4 (7C, OCOCH3). 5.6/ Préparation du produit Al Le composé 25 (60 mg, 0,045 mmol) est dissous dans un mélange dichlorométhane/méthanol (2:1, v/v ; 10 mL) puis additionné de 2 équivalents de méthylate de sodium (0,1 M dans MeOH, 0,9 mL, 0,090 mmol). Après 6 heures d'agitation à température ambiante, le milieu est neutralisé par ajout de résine Amberiite IRl 20-H+, filtré puis concentré sous pression réduite. Le résidu ainsi obtenu est ensuite dissous dans 10 mL d'un mélange acétate d'éthyle/méthanol/dichlorométhane (2:2:1 ; v/v/v). Après ajout d'acétate de palladium (60 mg, 0,267 rnmol), le milieu est agité vigoureusement à température ambiante sous atmosphère d'hydrogène pendant 7 jours. Après filtration sur célite, la phase hydroorganique est extraite au dichlorométhane, puis est mise à sec par coévaporation azéotropique avec de l'éthanol absolu. Le produit Al (30 mg) est alors isolé avec un rendement quantitatif sur les trois dernières étapes.
EXEMPLE 6 :
Figure imgf000041_0001
Le produit la est obtenu comme décrit dans la demande de brevet FR2804684
6.1/ Préparation de 2,3,4,6-tétra-0-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l— »3)-2,4,6-tri-
0-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-
(l→3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-l,2,4,6-tétra-£J-benzoyl-
(α,β)-D-glucopyranose (Produit 2a)
L'oligosaccharide la (150 mg, 0,181 mmol) est dissous dans la pyridine (15 mL). Le milieu réactionnel est alors refroidi à 0 0C puis additionné de chlorure de benzoyle (4,2 mL, 36 mmol). Après 2 jours d'agitation à température ambiante, le milieu est évaporé, dissous dans du dichl orométhane puis lavé avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique à 10%, avec une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution saturée de chlorure de sodium jusqu'à neutralité. La phase organique est alors séchée sur MgSO4 et évaporée. Le résidu est purifié par chromatogiaphie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3 ;2 ; v/v)] pour donner le dérivé perbenzoylé
2a sous la forme d'un mélange d'anomères α/β :1/1 avec un rendement de 94% (444 mg, 0,170 mmol).
Produit 2a : huile incolore ; Rf (EP/ AcOEt, 1:1) 0,4. RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques pour 2aG 6,65 (d, IH, HIa5 JHia-H2a = 3,6 Hz) ; 5,47 (t, IH, H4a, JH3a-H4a = Λwa-HSa = 9,4 Hz) ; 4,64 (t, IH, H3a, JH2a-H3a = 9,4 Hz). Signaux caractéristiques pour 2aQ6,07 (d, IH, HIa, Juu-ma ~ 7,1 Hz) ; 5,57 (t, IH, H4a, JH3a-H4a ≈ «Λwa-HSa = 8,9 Hz) ; 4,25 (dt, IH, H5a, JH5a-H6a = 4,3 Hz, JH5a-H6'a = 8,9 Hz).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques pour 2aO 87,7 (CIa) ; 76,3 (C3a) ; 72,4 (C2a) ; 70,3 (C5a) ; 67,6 (C4a). Signaux caractéristiques pour 2aD 89,7 (CIa) ; 78,4 (C3a) ; 72,4 (2C, C2a, C5a) ; 67,6 (C4a) ; 62,0 (C6a). Autres signaux : RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 8,08-7,92 (m, 68H, H arom.) ; 7,61-7,09 (m, 102H, H arom.) ; 5,45-5,37 (m, 3H, H2aβ, H3e) ; 5,26-5,18 (m, 5H, H2aα, H2e, H4e) ; 5,11-4,83 (m, 14H, HIb, H2b, H4b, H2c, H4c, H2d, H4d) ; 4,61-4,35 (m, 10H, H3aβ, H5aα, H6aβ, H6'aβ, HIc, HId, HIe) ; 4,20-3,86 (m, 26H, H6aα, H6'aα, H3b, H6b, H6'b, H3c, H6c, H6'c, H3d, H6d, H6'd, H5e, H6e, H6'e) ; 3,80-3,65 (m, 6H, H5b, H5c, H5d).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 166,0, 165,9, 165,8, 165,7, 165,6, 165,4, 164,9, 164,8, 164,7, 164,6, 164,5, 164,3, 164,1, 163,8, 163,6, 163,5 (OCOPh) ; 133,3, 132,7, 130,0, 129,3, 129,2, 129,1, 129,0, 128,9, 128,7 (C quat. arom.) ; 133,8, 133,6, 133,4, 133,2, 133,1, 133,0, 132,9, 132,8, 132,6, 129,9, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9 (C arom.) ; 101,4, 101,3, 101,0, 100,8, 100,7 (8C, CIb, CIc, CId, CIe) ; 78,1, 77,5, 77,4, 77,2 (6C, C3b, C3c, C3d) ; 73,4, 73,3, 73,2 (4C, 2 C2) ; 72,7, 72,6, 72,5, 72,4 (4C, C3e, C2) ; 71,8, 71,7, 71,6, 71,5 (8C, C5b, C5c, C5d, C5e) ; 71,3 (2C, C2e) ; 70,3, 70,2 (6C, C4b, C4c, C4d) ; 69,8 (2C, C4c) ; 63,5, 63,4, 63,1, 62,7 (9C, C6aα, C6b, C6c).
6.2/ Préparation du bromure de 2,3,4,6-tétra-C-benzoyl-p-D-glucopyranosyl- (l→3)-2,4,6-tri-<?-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-p-D- glueopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l— »3)-2,4,6-tri-0- benzoyl-α-D-glucopyranosyle (Produit 3a) L'oligosaccharide pcrbenzoylé 2a (444 mg, 0,170 mmol) est mis en solution dans le dichlorométhane (10 mL), puis additionné, à 0 0C, d'acide bromhydrique à 33% wt dans l'acide acétique (0,6 mL, 3,417 mmol). Après 3,5 heures d'agitation, le milieu est dilué avec du dichlorométhane puis lavé avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium. La phase organique est ensuite séchée sur MgSO4 et concentrée sous pression réduite pour conduire de manière quantitative à 435 mg de composé brome 3a. Produit 3a : huile incolore.
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 6,55 (d, IH, HIa, JHia- H2a = 4,1 Hz) ; 5,35 (t, IH, H4a, JH3a-H4a = JHA*-HS* = 9,9 Hz) ; 4,24 (dd, IH, H6'a, JH3a.
H6'a = 4,6 HZ, JH6a-H6'a = 12,4 Hz).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 87,7 (CIa) ; 76,3 (C3a) ; 73,4 (C2a) ; 72,6 (C5a) ; 67,6 (C4a) ; 62,0 (C6a). Autres signaux : RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 8,92-7,61 (m, 22H, H arom.) ; 7,48-6,93 (m, 58H, H arom.) ; 5,27 (t, IH, H3e, Jœe-roe = Jme-me = 9,7 Hz) ; 5,09 (dd, IH, H2e, JHie- H2e ≈ 7,9 Hz) ; 5,08 (t, IH, H4e, JH4e-H5e = 9,7 Hz) ; 4,93-4,86 (m, 3H, 2 H2, H4) ; 4,80- 4,70 (m, 4H, H2a, Hl, 2 H4) ; 4,50-4,33 (m, 6H, H3a, H5a, H6a, HIe, 2 Hl) ; 4,08-3,94 (m, 3H, H5e, H3, H6) ; 3,87-3,70 (m, 9H, 2 H3, 7 H6) ; 3,65-3,53 (m, 3H, H5b, H5c, H5d).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 165,9, 165,8, 165,7, 165,4, 164,9, 164,8, 164,7, 164,6, 164,5, 164,3, 163,8, 163,5 (16C, OCOPh) ; 133,8, 133,4, 133,2, 133,1, 133,0, 132,9, 132,8, 132,6, 129,9, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 129,3, 129,2, 129,0, 128,7, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9 (C arom.) ; 101,3, 101,0, 100,8, 100,7 (4C, CIb, CIc, CId, CIe) ; 78,4, 78,1, 77,4 (3C, C3b, C3c, C3d) ; 73,3, 73,2, 72,7 (3C, C2b, C2c, C2d) ; 72,5 (C3e) ; 71,8, 71,7, 71,6, 71,5 (4C, C5b, C5c, C5d, C5e) ; 71,3 (C2e) ; 70,2 (3C, C4b, C4c, C4d) ; 69,8 (C4e) ; 63,4, 63,1 (4C, C6b, C6c, C6d, C6e).
6-3/ Préparation du 2,3,4,6-tétra-0-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l— »3)-2,4,6-tri-0- benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri-6>-benzoyl-β-D-glucopyranosyl- (l→3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l-→3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-2-D-glu- hcx-1-enopyranose (Produit 4a)
Le brut précédemment obtenu (3a : 435 mg, 0,170 mmol) est dissous dans le dichlorométhanc (10 mL) puis additionné de l,8-diazabicyclo[5,4,0]undec-7-ène (40 μL, 0,270 mmol). Après 5,5 heures d'agitation à température ambiante, le milieu est dilué avec du dichlorométhane, lavé avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique à 10%, avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, puis avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. La phase organique est séchée (MgSO4), évaporée et le produit recherché est obtenu après purification sur gel de silice
[éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:2 ; v/v)]. Le composé cible 4a (343 mg) est alors isolé avec un rendement de 81%. Produit 4a : solide blanc ; Rf (EPZAcOEt, 3:2) 0,4. RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 6,63 (s, IH, HIa) ; 5,77 (d, IH, H3a, JH3a-H4a = 3,3 Hz) ; 4,73 (dd, IH, H6a, JHSa-H6a = 9,0 Hz, JH6a-H6'a ≈ 12,6 Hz) ; 4,40 (dd, IH, H6'a, JH5a-H6'a ≈ 3,1 Hz).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 138,2 (CIa) ; 74,1 (C5a) ; 72,3 (C4a) ; 68,7 (C3a) ; 61,6 (C6a). Autres signaux :
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 8,14-7,70 (m, 26H, H arom.) ; 7,63-7,03 (m, 54H, H arom.) ; 5,38 (t, IH, H3e, JH2e-H3e = JH3e-H4e = 9,5 Hz) ; 5,21 (dd, IH, H2e, JHie- H2e = 8,0 Hz) ; 5,20 (t, IH, H4e, JH4e-H5e = 9,5 Hz) ; 5,17 (t, IH, H2b, JHib-H2b = Jmb-mb = 8,8 Hz) ; 5,12 (t, IH, H4b, Jmb-mb = JH4b-H5b ≈ 10,5 Hz) ; 5,05-4,97 (m, 2H, H4c, H2d) ; 4,94 (d, IH, HIb) ; 4,94-4,88 (m, 2H, H2c, H4d) ; 4,71 (d, IH, HIc, JHic-H2c = 6,7 Hz) ; 4,59 (d, IH, HIe, JHie-H2e = 8,0 Hz) ; 4,58-4,53 (m, 3H, H4a, H5a, HId) ; 4,46 (dd, IH, H6b, JH5b-H6b = 3,1 Hz, JH6b-H6'b ≈ 12,2 Hz) ; 4,31 (dd, IH, H3b) ; 4,25 (dd, IH, H6'b, JH5b-H6 b = 6,6 Hz) ; 4,15-3,87 (m, 9H, H5b, H3c, H6c, H6'c, H3d, H6d, H6'd, H6e, H6'e) ; 3,80 (dt, IH, H5d, JH5d-H6d ≈ 4,9 Hz, JH5d-H6'd = 9,3 Hz) ; 3,76-3,68 (m, 2H, H5c, H5e).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 165,9, 165,8, 165,7, 165,4, 165,3, 165,1, 165,0, 164,8, 164,7, 164,6, 163,9, 163,7 (16C, OCOPh) ; 133,3, 133,2, 133,0, 132,9, 132,7, 130,1, 130,0, 129,9, 129,7, 129,6, 129,5, 129,3, 129,2, 129,1, 128,9, 128,7, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,8 (C2a, C arom.) ; 101,2 (CIb) ; 100,9 (CIc) ; 100,8 (CIe) ; 100,7 (CId) ; 78,2, 78,0, 77,7 (3C, C3b, C3c, C3d) ; 73,5 (C2c) ;
73.2 (C2b) ; 72,8 (C2d) ; 72,7 (C5b) ; 72,6 (C3e) ; 72,1 (C5d) ; 71,6 (2C, C5c, C5e) ;
71.3 (C2e) ; 70,3 (C4c) ; 70,0 (C4d) ; 69,9, 69,8 (2C, C4b, C4e) ; 63,5, 63,4, 63,2 (3C5 C6c, C6d, C6e) ; 63,1 (C6b).
6.5/ Préparation du bromure de 2,3,4,6-tétra-<?-beπzoyl-β-D-glucopyranosyl- (l→3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-β-D- glucopyranosyl-(l >3)-2,4,6-tri-0-beiizoyl~β-D-glueopyranosyl-(l— »3)-4,6-di-0- benzoyl-α-D-glucopyranos-2-ulosyle (Produit 5a) Le composé 5a précédemment décrit (48 mg, 0,019 mmol) en solution dans le dichlorométhane (0,5 mL) est additionné de méthanol (1,6 μL, 0,040 mmol). Après 10 minutes d'agitation à température ambiante, le iV-bromosuccinimide (10,8 mg, 0,060 mmol) est ajouté à 0 0C. Une fois la réaction terminée, le milieu est dilué avec du dichlorométhane puis lavé avec une solution aqueuse saturée glacée de thiosulfate de sodium et avec de l'eau glacée. La phase organique est ensuite séchée sur MgSO4 et concentrée sous pression réduite pour conduire à 5a avec un rendement quantitatif (47 mg, 0,019 mmol).. Produit 5a : huile incolore. RMN 1H (CDCI3, 400 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 6,25 (s, IH, HIa) ; 5,44 (t, lH, H4a, JH3a-H4a = JH4a-H5a = 10,1 Hz) ; 5,17 (d, lH, H3a). RMN 13C (CDCI3, 100 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 191,5 (C2a) ; 83,8 (CIa) ; 76,3 (C3a) ; 72,6 (C5a) ; 69,0 (C4a) ; 61,7 (C6a). Autres signaux : RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 8,06-7,71 (m, 2OH, H arom.) ; 7,61-7,12 (m, 55H, H arom.) ; 5,39 (t, IH, H3e, JH2e-H3e = Jtu+M* = 9,5 Hz) ; 5,22 (dd, IH, H2e, JHie- H2e = 8,0 Hz) ; 5,21 (t, IH, H4e, JH4e-H5e = 9,5 Hz) ; 5,10 (dd, IH, H2b, JHib-H2b = 8,2 Hz, JH2b-H3b ≈ 9,3 Hz) ; 5,06-4,98 (m, 4H, HIb, H4b, H4c, H2d) ; 4,89 (t, IH, H4d, JH3d-H4d = JH4d-HSd = 9,5 Hz) ; 4,88 (dd, IH, H2c, Jmc-H2c = 7,7 Hz, JH2c-H3c = 8,6 Hz) ; 4,74 (d, IH, HIc, JHic-H2c = 8,2 Hz) ; 4,69 (d, IH, HIe) ; 4,66-4,55 (m, 3H, H5a, H6a, HId) ; 4,39-4,26 (m, 2H, H3b, H6) ; 4,24-4,10 (m, 3H, 3 H6) ; 4,05-3,86 (m, 8H, H5b, H3c, H3d, 5 H6) ; 3,82-3,70 (m, 3H, H5c, H5d, HSe).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 167,1, 165,9, 165,8, 165,7, 165,4, 164,9, 164,7, 164,6, 164,3, 164,1, 163,9, 163,6 (15C, OCOPh) ; 133,6, 133,3, 133,2, 133,1, 133,0, 132,9, 132,8, 132,7, 130,3, 130,0, 129,8, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 129,3, 129,2, 129,1, 129,0, 128,8, 128,7, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,8, 127,6 (C arom.) ; 101,0, 100,9, 100,7, 100,6 (4C, CIb, CIc, CId, CIe) ; 78,2, 78,0, 77,7 (3C, C3b, C3c, C3d) ; 73,6, 73,1, 72,8 (3C, C2b, C2c, C2d) ; 72,6 (C3e) ; 71,9, 71,6 (4C, C5b, C5c, C5d, C5e) ; 71,3 (C2e) ; 70,1, 69,9, 69,8 (4C, C4b, C4c, C4d, C4e) ; 63,5, 63,4, 63,1 (4C, C6b, C6c, C6d, C6e).
6.6/ Préparation de 2,3,4,6-tétra-0-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri- 0-benzoyl-β-D-glueopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-β-D-glucopyranosyl- (l-→3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l— *3)-6-0-benzoyl-4-désoxy-β-D- gluco-hex-3-enopyranos-2-uloside de benzyle (Produit 6a)
Mode opératoire 1 :
L'alcool benzylique (7 μL, 0,068 mmol) et le bromure d'ulosyle 5a (82 mg, 0,034 mmol) sont mis en solution dans le dichlorométhane (1,5 mL) en présence de tamis moléculaire. Après 5 minutes d'agitation vigoureuse, l'oxyde de triphénylphosphine (19 mg, 0,068 mmol) est additionné rapidement au mélange. Après 4 jours d'agitation à température ambiante, le milieu est filtré sur célite et concentré sous pression réduite. Le produit recherché 6a (69 mg ; 0,029 mmol) est obtenu après purification sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:2 ; v/v)] avec un rendement de 85% en mélange avec sa forme hydratée. Produit 6a : huile incolore ; Rf (EP/AcOEt, 1:1) 0,5.
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 6,26 (d, IH, H4a, JH4a- H5a = 3,6 Hz) ; 4,87 (s, IH, HIa) ; 4,83 (d, IH, H7a, JH7a-H7-a ≈ 11,7 Hz) ; 4,68-4,61 (m, IH, H5a) ; 4,60 (d, IH, HTa).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 183,5 (C2a) ; 144,9 (C3a) ; 126,2 (C4a) ; 97,7 (CIa) ; 71,0 (C5a) ; 70,6 (C7a) ; 66,1 (C6a). Mode opératoire 2 :
A une solution du donneur 5a (50 mg, 0,020 mmol) et d'alcool benzylique (4,4 μL, 0,040 mmol) dans le dichlorométhane (0,75 mL) est ajouté à 0 0C le triflate d'argent (5,2 mg, 0,020 mmol). Après 3 heures d'agitation, le milieu réactionnel est neutralisé par ajout de triéthylamine, les sels d'argent sont filtrés sur célite et le filtrat est concentré sous vide. La purification sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:2 ; v/v)] permet d'obtenir 38 mg (0,016 mmol) du composé désoxy 6a avec un rendement de 75%. Autres signaux :
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 8,10-7,70 (m, 2OH, H arom.) ; 7,60-7,12 (m, 55H, H arom.) ; 5,39 (t, IH, H3e, JH2e-H3e = JH3e-H4e = 9,7 Hz) ; 5,28-5,17 (m, 5H, HIb, H2b, H4b, H2e, H4e) ; 5,09-5,02 (m, 4H, H2c, H4c, H2d, H4d) ; 4,95 (d, IH, HIc, JHic- π2c = 8,0 Hz) ; 4,63 (d, IH, HId, JHid-H2d = 7,9 Hz) ; 4,61 (d, IH, HIe, JHie-H2e = 8,0 Hz) ; 4,53-4,40 (m, 3H, H6a, 2 H6) ; 4,38-4,32 (m, 2H, H3b, H6) ; 4,25-4,18 (m, 2H, H6'a, H3) ; 4,15-3,90 (m, 8H, H5b, H3, H5, 5 H6) ; 3,80-3,70 (m, 2H, H5e, H5). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 165,8, 165,7, 165,4, 164,9, 164,6, 164,5, 163,9, 163,8 (14C, OCOPh) ; 136,1 (C quat. arom. OCE2Ph) ; 133,3, 133,2, 133,1, 133,0, 132,9, 132,7, 129,9, 129,8, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 129,3, 129,2, 129,0, 128,8, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,8 (C arom.) ; 100,9 (2C, CId, CIe) ; 100,1 (CIc) ; 98,3 (CIb) ; 78,3, 78,0 (2C5 C3c, C3d) ; 76,8 (C3b) ; 73,7 (2C, C2c, C2d) ; 73,0 (C2b) ; 72,8 (C5b) ; 72,6 (C3e) ; 72,1 (IC, C5) ; 71,6 (C2e) ; 71,3 (2C, C5e, C5) ; 69,9, 69,8 (3C, C4c, C4d, C4e) ; 69,3 (C4b) ; 63,4 (2C, C6e, C6) ; 63,1 (2C, C6b, C6).
HRMS (ESI4) : [M+Naf Ci35Hi iNaO39 m/z théorique: 2377,6522 m/z mesurée: 2377,6516 6.7/ Préparation de 2,3,4,6-tétra-0-benzoyl-β-D-glueopyranosyl-(l— >3)-2,4,6-tri- <?-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-β-D-glucopyranosyl- (l-→3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyI-(l— >3)-6-O-benzoyl-4-désoxy-β-D- manno-hex-3-enopyranosyle de benzyle (Produit 7a)
Le composé 6a (69 mg, 0,029 mmol) est solubilisé dans le THF (0,7 mL) puis additionné à -78 °C de L-Sélectride (solution à IM dans THF ; 28 μL, 0,028 mmol). Après 90 minutes à -78 0C, la réaction est supposée terminée et neutralisée par ajout de quelques gouttes d'acide acétique. Une fois le milieu revenu à température ambiante, du dichlorométhane est ajouté et la phase organique est lavée par une solution aqueuse d'acide chlorhydrique à 10%, par une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. Le composé 7a souhaité est ainsi obtenu après séchage (MgSO4) et concentration de la phase organique (68 mg ; 0,029 mmol ; 100%). Produit 7a : huile incolore ; Rf (EP/AcOEt, 1:1) 0,5.
RMN 1H (CDCl3, 500 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 4,94 (d, IH, H4a, JH4a- H5a = 1,1 Hz) ; 4,86 (d, IH, H7a, JH7a-Hra = 12,0 Hz) ; 4,59 (d, IH, H7'a) ; 4,44 (d, IH, HIa, JHia-H2a ≈ 2,2 Hz) ; 4,25-4,20 (m, 2H, H5a, H6a).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 151,4 (C3a) ; 104,1
(C4a) ; 97,1 (CIa) ; 70,4 (C5a) ; 70,1 (C7a) ; 66,2 (C6a) ; 65,1 (C2a).
Autres signaux :
RMN 1H (CDCl3, 500 MHz) δ (ppm) : 8,03-7,70 (m, 20H, H arom.) ; 7,61-7,13 (m, 55H, H arom.) ; 5,39 (t, 1 H, H3e, JH2e-H3e = JH3e-H4e = 9,6 Hz) ; 5,30 (t, 1 H, H4b, JH3b-H4b = JH4b-H5b = 8,3 Hz) ; 5,22 (dd, IH, H2e, JHie-H2e = 7,9 Hz) ; 5,20 (t, IH, H4e, JH4c-H5e = 9,6 Hz) ; 5,18-5,16 (m, 2H, HIb, H2b) ; 5,07-4,98 (m, 4H, H2c, H4c, H2d, H4d) ; 4,85 (d, IH, HIc, JHlc-H2c = 7,9 Hz) ; 4,62 (d, 2H, HId, HIe, JHid-H2d = 7,9 Hz) ; 4,51 (dd, IH, H6, JH5-H6 = 3,8 Hz, JH6-H6- = 12,3 Hz) ; 4,36-4,30 (m, 2H, H3b, H6) ; 4,20-4,14 (m, 2H, H6'a, H3) ; 4,12-3,90 (m, 1OH, H2a, H5b, H3, H5, 6 H6) ; 3,77-3,70 (m, 2H, H5e,
H5).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 166,1, 165,9, 165,8, 165,7, 165,4, 164,9, 164,7, 164,3, 163,9, 163,8 (14C5 OCOPh) ; 136,6 (C quat. arom. OCH2PZi) ; 133,4, 133,2, 133,1, 133,0, 132,9, 132,7, 129,9, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 129,3, 129,2, 129,0, 128,8, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,8 (C arom.) ; 100,9 (2C, CId, CIe) ; 100,6 (CIc) ; 97,3 (CIb) ; 78,3, 77,9 (2C, C3c, C3d) ; 77,4 (C3b) ; 73,5 (IC, C2) ; 72,9 (2C, C2b, C2) ; 72,6 (C3e) ; 72,0 (C5b) ; 71,6 (3C, C5e, 2 C5) ; 71,3 (C2e) ; 70,4 (2C, C4c, C4d) ; 69,8 (C4e) ; 69,3 (C4b) ; 63,5, 63,3, 63,1 (4C, C6b, C6c, C6d, C6e).
HRMS (ESI4) : [N^Na]+ Cj35HmNaO39 m/z théorique: 2379,6678 m/z mesurée: 2379,6667
[M+K]+ C135H112KO39 m/z théorique: 2395,6418 m/z mesurée: 2395,6542 6.8/ Préparation de β-D-glucopyranosyl-(l— »3)-β-D-glueopyranosyl-(l— »3)-β-D- glucop yranosy l-( 1 →3)-β-D-glucopy ranosyl-( 1 →3)-4-désoxy- β-D- manno-hex-3- enopyranosyle de benzyle (Produit 8a)
Dans un ballon sont introduits successivement le composé 7a (65 mg, 0,028 mmoi) dans un mélange méthanol/dichlorométhane (2:1, v/v) puis le méthylate de sodium (solution à IM dans THF ; 0,56 mL, 0,056 mmol). Après 6 heures d'agitation à température ambiante, le milieu est neutralisé par ajout de résine Amberlite IR 120-H+, filtré puis concentré sous pression réduite. Le composé débenzoylé 8a est obtenu après chromatographie [dichlorométhane/méthanol (99:1 ; v/v)] avec un rendement quantitatif (25 mg ; 0,028 mmol). Produit 8a : huile incolore.
RMN 1H (CD3OD, 400 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 5,06 (d, IH, H4a, JH4a-H5a = 1,5 Hz) ; 4,82 (d, IH, H7a, JH7a-H7'a = 12,2 Hz) ; 4,60 (d, IH, H7'a) ; 4,49 (d, IH, HIa, JH!a-H2a = 1,8 Hz) ; 4,12-4,08 (m, IH, H5a) ; 3,87 (d, IH, H2a). RMN 13C (CD3OD, 100 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 153,5 (C3a) ; 103,8 (C4a) ; 99,8 (CIa) ; 71,2 (C7a) ; 67,2 (C2a) ; 65,6 (C6a). Autres signaux :
RMN 1H (CD3OD, 400 MHz) δ (ppm) ; 7,35-7,16 (m, 5H, H arom.) ; 4,71 (d, IH, HIb, JHtb-H2b = 7,5 Hz) ; 4,54 (d IH, Hl, JHi-H2 = 8,0 Hz) ; 4,53 (d, IH, Hl, JHi-H2 = 7,8 Hz) ; 4,46 (d, I H, HIe, JHie-H2e = 7,8 Hz) ; 3,80-3,73 (m, 4H, 4 H6) ; 3,60-3,43 (m, 1OH, H6a, H6'a, H2b, 3 H3, 4 H6) ; 3,40-3,32 (m, 2H, H2c, H2d) ; 3,30-3,17 (m, 8H, H3e, 3 H4, 4 H5) ; 3,16 (dd, IH, H2e, JH2e-H3e = 9,3 Hz) ; 3,15 (t, IH, H4e, JH3e-H4e = JH4e-H5e = 9,8 Hz).
RMN 13C (CD3OD, 100 MHz) δ (ppm) : 138,9 (C quat. arom. OCH2PZJ) ; 129,6, 129,4, 128,9 (C arom.) ; 105,1, 104,6 (3C, CIc, CId, CIe) ; 100,5 (CIb) ; 87,4, 87,2, 87,1 (3C, C3b, C3c, C3d) ; 78,1, 77,8, 77,7 (5C, C3e, C5b, C5c, C5d, C5e) ; 75,5 (C2e) ; 75,0, 74,9 (3C, C5a, C2c, C2d) ; 74,0 (C2b) ; 71,5 (C4e) ; 70,0, 69,9 (3C, C4b, C4c, C4d) ; 62,6, 62,5 (4C, C6b, C6c, C6d, C6e).
6.9/ Préparation de β-D-glueopyranosyl-(l— >3)-β-D-glueopyranosyl-(l→3)-β-D- gIucopyranosyl-(l→3)-β-D-gIucopyranosyl-(l—»3)-4-désoχy-(α,β)-D- mannopyranose (Produit Ca)
Après dissolution du composé 8a (24 tng, 0,027 mmol) dans le méthanol, de l'acétate de palladium (25 mg, 0,111 mmol) est additionné au milieu. Après 7 jours d'agitation sous atmosphère d'hydrogène à température ambiante, le milieu est filtré puis concentré sous pression réduite. Le composé Ca est obtenu après purification par exclusion stérique Sephadex G- 10 (éluant : eau) et lyophilisation des fractions récoltées (21 mg ; 0,027 mmol ; 100%). Ca : mousse blanche ; Rf (AcOEt//PrOH/H2O, 3:2:2) 0,2. RMN 1H (D2O, 400 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 5,12 (m, IH, Hlaα) ; 1,72-1,60 (m, 2H, H4a, H4'a).
RMN 13C (D20, 100 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 96,0 (CIa) ; 67,2 (C2a) ; 61,0 (C6a) ; 28,8 (C4a). Autres signaux t RMN 1H (D20, 400 MHz) δ (ppm) : 4,68 (d, 2H, 2 Hl , JHi-H2 = 8,2 Hz) ; 4,64 (d, 2H, 2 Hl, JHi-H2 = 8,0 Hz) ; 3,86-3,73 (m, 5H, H6a, H6b, H6c, H6d, H6e) ; 3,71-3,56 (m, 10H, H2a, H5a, H6'a, H3b, H6'b, H3c, H6'c, H3d, H6'd, H6'e) ; 3,55-3,33 (m, 13H, H3a, HSa, H2b, H4b, H5b, H2c, H4c, H5c, H2d, H4d, H5d, H3e, H5e) ; 3,31 (t, IH,
H4e, JH3e-H4e = JH4e-H5e = 9,3 Hz) ; 3,24 (dd, I H, H2e, JHle-H2e = 8,0 HZ, JH2e-H3e = 9,3 Hz). RMN 13C (D2O, 100 MHz) δ (ppm) : 103,1, 102,8 (4C, CIb, CIc, CId, CIe) ; 84,5, 84,4 (4C, C3a, C3b, C3c, C3d) ; 76,3, 75,9, 75,8 (6C, C5a,C5b, C5c, C5d, C3e, C5e) ; 73,8, 73,6 (5C, C2a, C2b, C2c, C2d, C2e) ; 69,9 (C4c) ; 64,4 (3C, C4b, C4c, C4d) ; 61,0 (4C, C6b, C6c, C6d, C6e). HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C30H52NaO25 m/z théorique: 835,2695 m/z mesurée: 835,2694
EXEMPLE 7:
Le produit Ib est préparé selon le mode opératoire décrit dans la demande de brevet FR2804684, selon le mode opératoire de l'exemple 6.
7.1/ Préparation de 2,3,4,6-tétra-0-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l-→3)-2,4,6- tri-0-benzoyl-β-D-glueopyranosyl-(l— *3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-β-D-glueopyranosyl- (l→3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-β-D- glucopyranosyl-(l— >3)-l,2,4,6-tétra-O-benzoyl-(α,β)-D-glueopyranose (Produit 2b) L'oligosaccharide 2a (200 mg, 0,202 mmol) est dissous dans la pyridine (20 mL). Le milieu réactionnel est alors refroidi à 0 0C puis additionné de chlorure de benzoyle (5,2 mL, 44,4 mmol). Après 2 jours d'agitation à température ambiante, le milieu est évaporé, dissous dans du dichlorométhane puis lavé avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique à 10%, avec une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution saturée de chlorure de sodium jusqu'à neutralité. La phase organique est alors séchée sur MgSO4 et évaporée. Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (1:1 ; v/v)] pour donner le dérivé perbenzoylé 2a sous la forme d'un mélange d'anomères α/β :1/1 avec un rendement de 85% (545 mg, 0,178 mmol). Produit 2b : huile incolore ; Rf (EP/AcOEt, 1 :1) 0,4.
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques pour 2bα 6,60 (d, IH, HIa, JHia-H2a = 3,8 Hz) ; 5,42 (t, IH, H4a, JH3a-H4a = JH4a-H5a = 9,8 Hz) ; Signaux caractéristiques pour 2bβ 6,02 (d, IH, HIa, JHia-H2a = 7,1 Hz) ; 5,52 (t, IH, H4a, JH3a-H4a = JH4a-H5a = 9,0 Hz) ; 4,23-4,18 (m, IH, H5a). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques pour 2bα 89,7 (CIa) ; 76,3 (C3a) ; 72,7 (C2a) ; 70,2 (C5a) ; 68,8 (C4a) ; Signaux caractéristiques pour 2bβ 92,0 (CIa) ; 78,3 (C3a) ; 72,9 (C5a) ; 72,5 (C2a) ; 68,8 (C4a) ; 62,7 (C6a). Autres signaux : RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 8,01-7,65 (m, 60H, H arom.) ; 7,55-7,01 (m, 140H, H arom.) ; 5,36-5,30 (m, 3H, H2aβ, H3f) ; 5,20-5,12 (m, 5H, H2aα, H2f, H4f) ; 5,07-4,89 (m, 8H, 2 H2, 2 H4) ; 4,88-4,72 (m, 10H, HIb, 2 H2, 2 H4) ; 4,61-4,30 (m, 13H, H3aα, H3aβ, H5aα, H6aβ, H6'aβ, HIc, HId, HIe, HIf) ; 4,12-3,78 (m, 32H, H6aα, Hό'aα, H3b, H6b, H6'b, H3c, H6c, H6'c, H3d, H6d, H6'd, H3e, H6e, H6'e, H5f, H6f, H6'f) ; 3,73-3,56 (m, 8H, H5b, H5c, H5d, H5e).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 166,0, 165,9, 165,8, 165,7, 165,4, 164,9, 164,7, 164,6, 164,4, 164,3, 164,1, 163,8, 163,6, 163,5 (OCOPh) ; 133,5, 133,2, 133,1, 133,0, 132,8, 132,6, 130,0, 129,9, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 129,3, 129,2, 129,1, 129,0, 128,9, 128,7; 128,6, 128,5, 128,4, 128,2, 128,0, 127,9 (C arom.) ; 101,4, 101,0, 100,9, 100,8, 100,7 (10C, CIb, CIc, CId, CIe, CIf) ; 78,3, 78,2, 78,1, 77,9 (8C, C3b, C3c, C3d, C3e) ; 73,3, 73,2, 73,1 (6C, 3 C2) ; 72,9 (2C, C2) ; 72,5 (C3f) ; 72,1 (C5f) ; 71,7, 71,6 (8C, C5b, C5c, C5d, C5e) ; 71,3 (2C, C2f) ; 70,2 (4C, 2 C4) ; 70,0 (4C, 2C4) ; 69,8 (2C, C4f) ; 63,7, 63,4, 63,1 (1 IC, C6aα, C6b, C6c, C6d, C6e, C6f). HRMS (ESI+) : [M+Na]+ Ci76Hi42NaO51 m/z théorique: 3093,8416 m/z mesurée: 3093,8418
[M+Kf Ci76Hi42K05i m/z théorique: 3109,8155 m/z mesurée: 3109,8119 7.2/ Préparation du bromure de 2,3,4,6-tétra-0-benzoyl-β-D-glucopyranosyl- (l→3)-2,4,6-tri-0-benzoyi-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri-£^benzoyl-β-D- glucopyranosyl-(l— »3)-2,4,6-tri-<?-benzoyl-β-D-glueopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri-0- benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l-→3)-2,4,6-tri-(?-benzoyl-α-D-glucopyranosyle (Produit 3b)
La bromation du composé 2b (643 mg, 0,209 mmol) est réalisée comme décrit pour 3a dans le dichlorométhane (15 mL) en présence d'acide bromhydrique (1,1 mL, 6,364 mmol) pour donner de manière quantitative 633 mg de composé brome 3b. Produit 3b : huile incolore.
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 6,68 (d, IH, HIa, JHia~ H2a = 3,8 Hz) ; 5,48 (t, IH, H4a, JH3a-H4a = JH4a-H5a ≈ 9,7 Hz) ; 4,82 (dd, IH, H2a, JH2a-H3a - 9,7 Hz) ; 4,61 (t, IH, H3a) ; 4,60 (dd, IH, H6a, JH5a-H6a ≈ 3,8 Hz, JH6a-H6'a = 12,2 Hz) ; 4,55-4,51 (m, IH, H5a) ; 4,37 (dd, IH, H6'a, JH5a-Hό'a ≈ 4,2 Hz).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 87,7 (CIa) ; 76,3 (C3a) ; 73,4 (C2a) ; 72,7 (C5a) ; 67,6 (C4a) ; 62,0 (C6a). Autres signaux : RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 8,00-7,71 (m, 26H, H arom.) ; 7,61-7,03 (m,
69H, H arom.) ; 5,39 (t, IH, H3f, JH2f-H3f = Jmt-tw = 9,7 Hz) ; 5,22 (dd, IH, H2f, JHlf-H2f ≈ 7,8 Hz) ; 5,21 (t, IH, H4f, JH4f-H5f = 9,7 Hz) ; 5,05-4,97 (m, 4H, 3 H2, H4) ; 4,94 (t, IH, H4, JH4-H5 ≈ 9,3 Hz) ; 4,88 (d, IH, Hl, JHi-H2 ≈ 8,2 Hz) ; 4,87-4,77 (m, 3H, H2, 2 H4) ; 4,55 (d, IH, HIf) ; 4,49 (d, IH, Hl, JHi-H2 = 7,7 Hz) ; 4,42 (d, IH, Hl, Jm-H2 ≈ 7,5 Hz) ; 4,40 (d, IH, Hl, JHi-H2 = 7,5 Hz) ; 4,19-4,12 (m, 2H, H3, H6) ; 4,08-3,81 (m, 12H, 3 H3, 9 H6) ; 3,77-3,71 (m, IH, H5f) ; 3,71-3,60 (m, 4H, H5b, H5c, H5d, H5e). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 165,9, 165,8, 165,7, 165,4, 164,9, 164,8, 164,7,
164.6, 164,5, 164,3, 163,8, 163,5 (19C, OCOPh) ; 133,8, 133,4, 133,2, 133,1, 133,0, 132,8, 132,6, 129,9, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 129,3, 129,2, 129,1, 129,0, 128,9,
128.7, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9 (C arom.) ; 101,3, 101,0,
100.8, 100,7 (5C, CIb, CIc, CId, CIe, CIf) ; 78,4, 78,1, 77,8, 77,4 (4C, C3b, C3c, C3d, C3e) ; 73,3, 73,2, 72,9 (4C, C2b, C2c, C2d, C2e) ; 72,5 (C3f) ; 71,8, 71,6 (5C, C5b, C5c, C5d, C5e, C5f) ; 71,3 (C2f) ; 70,2 (4C, C4b, C4c, C4d, C4e) ; 69,8 (C4f) ; 63,5, 63,4, 63,1 (5C, C6b, C6c, C6d, C6e, C6f).
7.3/ Préparation de 2,3,4,6-tétra-0-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri- O-benzoyl-p-D-glucopyranosyl-(i-→3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-β-D-glιιcopyranosyl- (l→3)-2,4,6-tri-{?-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l-→3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-β-D- glucopyranosyl-(l— >3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-2-D-glu-hex-l-enopyranose (Produit 4b)
Le composé 3b (550 mg, 0,181 mmol) est engagé dans une réaction d'élimination suivant le même mode opératoire que celui décrit pour 4a dans le dichlorométhane (10 mL) en présence de DBU (35 μL, 0,235 mmol). La purification sur colonne de gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:2 ; v/v)] permet d'obtenir 458 mg du produit souhaité 4b avec un rendement de 85%. 4b : solide blanc ; Rf (EPZAcOEt, 1 :1) 0,5.
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 6,54 (s, IH, HIa) ; 5,69 (d, IH, H3a, Λoa-ma "= 1,6 Hz) ; 4,64 (dd, IH, H6a, JH5a-H6a = 8,8 Hz, JH6a-Hό'a = 12,4 Hz) ; 4,32 (dd, IH, H6'a, JH5a-H6'a = 2,4 Hz). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 138,2 (Cia) ; 74,1 (C5a) ; 72,3 (C4a) ; 68,6 (C3a) ; 61,6 (C6a). Autres signaux :
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 7,95-7,62 (m, 25H, H arom.) ; 7,51-6,93 (m, 7OH, H arom.) ; 5,29 (t, IH, H3f, JH2t-H3f = Jœww = 9,7 Hz) ; 5,12 (dd, IH, H2f, Jm ï.mf = 8,0 Hz) ; 5,11 (t, IH, H4f, JH4f-Hsf = 9,7 Hz) ; 5,10-5,12 (m, IH, H2b, H4b) ; 4,96-4,80 (m, 4H, Hl, 2 H2, H4) ; 4,78-4,71 (m, 3H, H2, 2 H4) ; 4,60 (d, IH, Hl, JHt-H2 = 8,0 Hz) ; 4,52-4,44 (m, 3H, H4a, H5a, Hl) ; 4,42-4,35 (m, 3H, 2 Hl, H6, Jm.H2 ≈ 8,0 Hz) ; 4,07-4,01 (m, IH, H5b) ; 3,98 (dd, IH, H6, JHS-H6 ≈ 3,5 Hz, JH6-H6- = 11,9 Hz) ; 3,93- 3,75 (m, IH, 3 H3c, 8 H6) ; 3,74-3,55 (m, 4H, H5c, H5d, H5e, HSf).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 165,8, 165,7, 165,4, 165,2, 165,1, 164,9, 164,7,
164.6, 163,8, 163,7, 163,6 (19C, OCOPh) ; 133,3, 133,2, 133,1, 133,0, 132,9, 132,8,
132.7, 132,6, 129,9, 129,8, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 129,3, 129,2, 129,1, 129,0,
128.8, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9, 127,7 (C2a, C arom.) ; 101,2 (CIb) ; 100,9, 100,8 100,7 (4C, CIc, CId, CIe, CIf) ; 78,2, 78,0 (4C, C3b, C3c,
C3d, C3e) ; 73,3 (IC, C2) ; 73,1 (C2b) ; 73,0 (C2) ; 72,7 (C5b) ; 72,6 (2C, C3f, C2) ; 72,0, 71,8, 71,6 (4C, C5c, C5d, C5e, C5f) ; 71,3 (C2f) ; 70,2, 70,1, 69,8, 69,7 (5C, C4b, C4c, C4d, C4e, C4f) ; 63,5, 63,3, 63,1 (5C, C6b, C6c, C6d, C6e, C6f). HRMS (ESI+) : [M+Na]+ Ci69Hi36NaO49 m/z théorique: 2971,8048 m/z mesurée: 2971,8034
[M+K]+ Ci69H136KO49 m/z théorique: 2987,7787 m/z mesurée: 2987,7811
7.4/ Préparation de bromure de 2,3,4,6-tétra-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl- (l→3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-β-D-glueopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-β-D- ghιcopyranosyl-(l— >3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-β-D-glueopyranosyl-(l— »3)-2,4,6-tri-0- benzoyl-β-D-glucopyranosyI-(l→3)-4,6-di-<?-benzoyl-α-D-glucopyranos-2-ulosyle
(Produit 5b)
Le composé 5b a été obtenu suivant le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation de 5a à partir de 4b (124 mg, 0,042 mmol) dans 1,5 mL de dichlorométhane, de NBS (22,4 mg, 0,126 mmol) et de méthanol (3,4 μL, 0,084 mmol) avec un rendement quantitatif (123 mg, 0,042 mmol).
Produit 5b : huile incolore.
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 6,25 (s, IH, HIa) ; 5,44 (t, IH, H4a, JH3a-H4a ≈ JH4a-H5a = 10,2 Hz) ; 5,16 (d, IH, H3a).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 1 Signaux caractéristiques 91,5 (C2a) ; 83,9
(CIa) ; 76,3 (C3a) ; 72,6 (C5a) ; 69,0 (C4a) ; 61,7 (C6a).
Autres signaux : RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 8,09-7,70 (m, 25H, H arom.) ; 7,60-6,84 (m,
65H, H arom.) ; 5,37 (t, IH, H3f, JH2f-H3f = Jm-mt = 9,7 Hz) ; 5,20 (dd, IH, H2f, JHif-H2f
= 8,0 Hz) ; 5,19 (t, IH, H4f, JH4f-H5f = 9,7 Hz) ; 5,10 (dd, IH, H2b, JH,b-H2b ≈ 8,1 Hz,
/H2b-H3b = 9,1 Hz) ; 5,07-4,96 (m, 4H, HIb, H2, 2 H4) ; 4,92-4,78 (m, 4H, 2 H2, 2 H4) ; 4,73 (d, IH, Hl, JHl-H2 = 8,0 Hz) ; 4,66 (d, IH, Hl, JHi-H2 = 8,0 Hz) ; 4,65-4,57 (m, 2H,
H5a, H6) ; 4,54 (d, IH, Hl, JHi-H2 = 8,0 Hz) ; 4,49 (d, IH, Hl, JHi-H2 = 7,7 Hz) ; 4,47-
4,41 (m, IH, H6) ; 4,35 (dd, IH, H6, JH5-H6 = 4,9 Hz, JH6-H6- ≈ 12,4 Hz) ; 4,28 (t, IH,
H3b, JH3b-H4b = 9,1 Hz) ; 4,19 (dd, IH, H6, JH5-H6 = 3,5 Hz, JH6-H6' = 12,2 Hz) ; 4,12 (dd,
IH, H6, JH5-H6 = 6,2 Hz, JH6-H6' = 12,2 Hz) ; 4,05-3,81 (m, 1 IH, H5b, H3c, H3d, H3e, 7 H6) ; 3,80-3,62 (m, 4H, H5c, H5d, H5e, H5f).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 165,9, 165,8, 165,7, 165,4, 164,9, 164,7, 164,6,
164.3, 163,8, 163,6 (18C, OCOPh) ; 133,6, 133,3, 133,2, 133,1, 133,0, 132,9, 132,6, 130,0, 129,8, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 129,3, 129,2, 129,1, 129,0, 128,8, 128,6,
128.4, 128,3, 128,2, 128,1, 127,9 (C arom.) ; 101,0, 100,9, 100,7, 100,6 (5C, CIb, CIc, CId, CIe, CIf) ; 78,3, 78,2, 78,1, 78,0 (4C, C3b, C3c, C3d, C3e) ; 73,5, 73,1, 73,0, 72,8
(4C, C2b, C2c, C2d, C2e) ; 72,6 (C3f) ; 71,9, 71,8, 71,6 (5C, C5b, C5c, C5d, C5e, C5f) ; 71,3 (C2f) ; 70,2, 70,1, 70,0, 69,8 (5C, C4b, C4c, C4d, C4e, C4f) ; 63,6, 63,5, 63,4, 63,3, 63,2 (5C, C6b, C6c, C6d, C6e, C6f).
7.5/ Préparation de 2,3,4,6-tétra-0-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri-0- benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-β-D-glιicopyranosyl- (l→3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-β-D- glucopyranosyl-(l→3)-6-0-benzoyl-4-désoxy-β-D-gluco-hex-3-enopyranos-2- uloside de benzyle (Produit 6b) L'alcool benzylique (7 μL, 0,068 mmol) et le bromure d'ulosyle 5b (183 mg,
0,063 mmol) sυnt mis en solution dans le dichlorométhane (1,5 mL) en présence de tamis moléculaire. Après 5 minutes d'agitation vigoureuse, l'oxyde de triphcnylphosphine (19 mg, 0,068 mmol) est additionné rapidement au mélange. Après 4 jours d'agitation à température ambiante, le milieu est filtré sur célite, concentré sous pression réduite et purifié par chromatographie sur silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:2 ; v/v)]. Après évaporation des solvants, le brut ainsi obtenu est dissous dans le benzène (8 mL), puis additionné d'eau (200 μL, 11,1 mol) et d'hydrogénocarbonate de sodium (200 mg, 2,381 mmol). Le milieu est ensuite porté à 80 0C pendant 1,5 heure. Après retour à température ambiante, la suspension est séchée sur MgSO4, filtrée et concentrée sous vide pour conduire au produit 6b (120 mg ; 0,029 mmol) avec un rendement global de 67%. Produit 6b : huile incolore ; Rf (EP/AcOEt, 1 :1) 0,5.
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 6,26 (d, IH, H4a, JH4a- HSa = 3,5 Hz) ; 4,87 (s, IH, HIa) ; 4,83 (d, IH, H7a, JH7a-H7-a = 11,7 Hz) ; 4,71-4,65 (m, IH5 HSa) ; 4,60 (d, IH, H7'a).
RMN 13C (CDCI3, 100 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 183,6 (C2a) ; 144,9 (C3a) ; 126,3 (C4a) ; 97,7 (CIa) ; 71,0 (C5a) ; 70,6 (C7a) ; 66,1 (C6a). Autres signaux : RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 8,06-7,71 (m, 25H, H arom.) ; 7,60-7,12 (m, 65H, H arom.) ; 5,37 (t, IH, H3f, JH2f-H3f = JH3f-H4f = 9,5 Hz) ; 5,30-5,16 (m, 5H, HIb, H2b, H2f, H4b, H4f) ; 5,07-4,94 (m, 6H, H2c, H2d, H2e, H4c, H4d, H4e) ; 4,90 (d, IH, HIc, JHic-H2c = 8,0 Hz) ; 4,57 (d, IH, Hl, Jm.m ≈ 8,2 Hz) ; 4,55 (d, 2H, Hl, Jm-H2 = 8,0 Hz) ; 4,54-4,43 (m, 3H, H6a, 2 H6) ; 4,38-4,32 (m, 2H, H3b, H6) ; 4,24-4,20 (m, 2H, H3, H6'a) ; 4,16-4,04 (m, 4H, H6'a, H3, H5, H6) ; 4,02-3,82 (m, 8H, H3, 2 H5, 5 H6) ; 3,76-3,64 (m, 3H, H5f, 2 H5).
RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : 165,9, 165,8, 165,7, 165,4, 164,9, 164,7, 164,6, 164,4, 163,8, 163,6 (15C, OCOPh) ; 136,1 (C quat. arom. OCH2PZz) ; 133,3, 133,1, 133,0, 132,9, 132,6, 130,0, 129,8, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 129,3, 129,2, 129,1, 129,0, 128,8, 128,7, 128,6, 128,5, 128,4, 128,2, 128,1, 128,0 (C arom.) ; 101,0, 100,9, 100,8 (3C, CId, CIe, CIf) ; 100,2 (CIc) ; 98,4 (CIb) ; 78,3, 78,2, 78,1 (3C, C3c, C3d, C3e) ; 77,6 (C3b) ; 73,3, 73,0, 72,9 (5C, C2b, C5b, C2c, C2d, C2e) ; 72,6 (C3f) ; 72,1, 72,0, 71,8 (3C, C5) ; 71,6 (C2f) ; 71,3 (2C, C5f, C5) ; 70,1, 70,0 (3C, C4c, C4d, C4e) ; 69,8 (C4f) ; 69,3 (C4b) ; 63,5, 63,4 (3C, C6f, 2 C6) ; 63,2, 63,1 (2C, C6b, C6). HRMS (ESI^) : 01+Na]+ Ci62Hi32NaO47 m/z théorique: 2851,7837 m/z mesurée: 2852,7830
[M+K]+ Ci62Hi32KO47 m/z théorique: 2867,7576 m/z mesurée: 2867,7508 7.6/ Préparation de 2,3,4,6-tétra-0-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri-0- beπ/υyl-β-D-glucopyranosyl-(l— >3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl- (l→3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-2,4,6-tri-0-benzoyl-β-D- giucopyranosyl-(l→3)-6-0-benzoyl-4-désoxy-β-D-manno-hex-3-enopyranosyIe de benzyle (Produit 7b) La réduction du composé 6b (104 mg, 0,036 mmol) est réalisée suivant le même mode opératoire que celui décrit pour 7 a en présence de L-Sélectride (solution à IM dans THF ; 50 μL, 0,050 mmol) dans le THF (1 mL). Le composés 7b (105 mg ;0,036 mmol) est ainsi obtenu après traitements de manière quantitative. Produit 7b : huile incolore ; Rf (EP/AcOEt, 1 :1) 0,5.
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 4,96 (d, IH, H4a, JH4a- H5a < 1,0 Hz) ; 4,60 (d, IH, H7'a, JH7a-H7-a = 1 1,7 Hz) ; 4,45 (d, IH, HIa, JHla ma = 2,2 Hz) ; 4,28-4,22 (m, 2H, H5a, H6a). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 151,4 (C3a) ; 104,1 (C4a) ; 97,0 (CIa) ; 70,3 (C5a) ; 70,0 (C7a) ; 66,2 (C6a) ; 65,1 (C2a). Autres signaux :
RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) : 8,04-7,73 (m, 25H, H arom.) ; 7,60-7,10 (m, 65H, H arom.) ; 5,39 (t, IH, H3f, JH2f-H3f = JmMt = 9,7 Hz) ; 5,34 (t, IH, H4b, JH3b-H4b ≈ ^H4b-H5b = 8,6 Hz) ; 5,22 (dd, IH, H2f, 7Hif-H2f = 7,7 Hz) ; 5,21 (t, IH, H4f, JH4f-H5f = 9,7 Hz) ; 5,19 (dd, IH, H2b, JHib-H2b = 7,1 Hz, JH2b-H3b = 9,5 Hz) ; 5,18 (d, IH, HIb) ; 5,06-4,97 (m, 3H, H2, 2 H4) ; 4,90-4,81 (m, 4H, H7a, 2 H2, H4) ; 4,58 (d, 3H, 3Hl, Jm- H2 = 7,7 Hz) ; 4,53 (dd, IH, H6, JH5-H6 = 3,3 Hz, JH6-H6' = 12,2 Hz) ; 4,49 (d, IH, Hl, JH1-H2 = 8,0 Hz) ; 4,39-4,32 (m, 2H, H3b, H6) ; 4,20-4,06 (m, 4H, H6'a, H3, H5, H6) ; 4,00-3,83 (m, 12H, H2a, H5f, 3 H3, 7 H6) ; 3,76-3,71 (m, 4H, 4 H5). RMN 13C (CDO3, 100 MHz) δ (ppm) : 166,1, 165,9, 165,8, 165,7, 165,4, 164,9, 164,7, 164,6, 164,5, 164,4, 164,2, 163,8, 163,6 (17C, OCOPh) ; 136,5 (C quat. arom. OCB2Ph) ; 133,4, 133,2, 133,1, 133,0, 132,9, 132,6, 129,9, 129,8, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 129,3, 129,2, 129,1, 129,0, 128,9, 128,7, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9 (C arom.) ; 101,0, 100,9, 100,7, 100,6 (4C, CIc, CId, CIe, CIf) ; 97,3 (CIb) ; 78,2 (3C, C3c, C3d, C3e) ; 77,5 (C3b) ; 73,4, 73,1 (3C, C2c, C2d, C2e) ; 72,9 (C2b) ; 72,5 (C3f) ; 71,9 (C5b) ; 71,7 (IC, C5) ; 71,6 (3C, C5f, 2 C5) ; 71,2 (C2f) ; 70,1 (2C, C4) ; 69,7 (C4f) ; 69,3, 69,2 (2C, C4b, C2) ; 63,4, 63,3, 63,1 (5C, C6b, C6c, C6d, C6e, C6f). HRMS (ESI+) : [M+Naf Ci62Hi34NaO47 m/z théorique: 2853,7993 m/z mesurée: 2853,7994
[M+K]+ Ci62H134KO47 m/z théorique: 2869,7732 m/z mesurée: 2869,7650 7.7/ Préparation de β-D-glucopyranosyl-(l— >3)-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-β-D- glucopyranosyl-(l — >3)-β-D-glucopyranosyl-(l — »3)-β-D-glucopyranosyl-(l — »3)-4- désoxy-β-D-manno-hex-3-enopyranosyle de benzyle (Produit 8b)
Le composé 7b (105 mg, 0,036 mmol) est engagé dans une réaction de débenzoylation suivant le même mode opératoire que celui décrit pour 8a dans un mélange dichlorométhane / méthanol (3:2 ; v/v) (2,5 mL) en présence MeONa (solution à 0,1 M dans MeOH ; 0,71 mL, 0,71 mmol). La purification sur colonne de gel de silice [acétate d'éthyle/méthanol (3:2 ; v/v)] permet d'obtenir 8b (38 mg) avec un rendement quantitatif. Produit 8b : huile incolore.
RMN 1H (CD3OD, 400 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 5,06 (d, IH, H4a, JH43-HSa = 1,6 Hz) ; 4,82 (d, IH, H7a, JH7a-H7'a = 11,9 Hz) ; 4,60 (d, IH, H7'a) ; 4,49 (d, IH, HIa, JHia-H2a = 1,8 Hz) ; 4,12-4,08 (m, IH, H5a) ; 3,88 (d, IH, H2a). RMN 13C (CD3OD, 100 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 153,5 (C3a) ; 103,9 (C4a) ; 99,8 (CIa) ; 71,2 (C7a) ; 67,2 (C2a) ; 65,6 (C6a). Autres signaux :
RMN 1H (CD3OD, 400 MHz) δ (ppm) : 7,30-7,17 (m, 5H, H arom.) ; 4,71 (d, IH, HIb, JHib-H2b = 7,7 Hz) ; 4,55 (d, 3H, HIc, HId, HIe, Jm.m ≈ 7,8 Hz) ; 4,47 (d, IH, HIf, JHlf- H2f = 8,0 Hz) ; 3,81-3,72 (m, 5H, 5 H6) ; 3,62-3,44 (m, 12H, H6a, H6'a, H2b, 3 H3, 5 H6) ; 3,40-3,34 (m, 3H, H2c, H2d, H2e) ; 3,32-3,14 (m, 12H, H2f, H3f, H4f, 4 H4, 5 H5).
RMN 13C (CD3OD, 100 MHz) δ (ppm) : 138,9 (C quat. arom. OCE2Ph) ; 129,4, 129,3, 128,9, 128,7 (C arom.) ; 105,2, 104,7 (4C, CIc, CId, CIe, CIf) ; 100,5 (CIb) ; 87,4, 87,3, 87,1 (4C, C3b, C3c, C3d, C3e) ; 78,1, 77,8 (6C, C3f, C5b, C5c, C5d, C5e, C5f) ; 75,5 (C2f) ; 75,0, 74,9 (4C, C2c, C2d, C2e, C5a) ; 74,0 (C2b) ; 71,5 (C4f) ; 70,0, 69,9 (4C, C4b, C4c, C4d, C4e) : 62,6, 62,5 (5C, C6b, C6c, C6d, C6e, C6f).
7.8/ Préparation de β-D-glucopyranosyl-(l→3)-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-β-D- glucopyranosyl-(l→3)-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-4- désoxy-(α,β)-D-mannopyranose (Produit Cb)
Le composé 8b (60 mg, 0,056 mmol) est réduit et débenzylé suivant le même mode opératoire que celui décrit pour Ca, à savoir par hydrogénolyse en présence d'acétate de palladium (60 mg, 0,267 mmol). La purification sur colonne Sephadex G- 10 conduit de manière quantitative au produit souhaité Cb en mélange α/β où le composé α est très largement majoritaire. Produit Cb : mousse blanche.
RMN 1H (D2O, 400 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 5,14 (d, IH, Hlaα, JHU. H2a = 3,3 Hz) ; 1 ,75- 1 ,60 (m, 2H, H4a).
RMN '3C (D2O, 100 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 96,0 (Claα) ; 61,0 (C6a) ; 26,0 (C4a). Autres signaux :
RMN 1H (D2O, 400 MHz) δ (ppm) : 4,70 (d, 3H, Hl, Jm-m = 8,0 Hz) ; 4,66 (d, 2H, Hl, JHL-H2 ≈ 8,2 Hz) ; 3,86-3,78 (m, 6H, H6a, H6b, H6c, H6d, H6e, H6f) ; 3,73-3,60 (m, HH, H3a, H3b, H3c, H3d, H3e, H6'a, H6'b, H6'c, H6'd, H6'e, H6'f) ; 3,50-3,36 (m, 16H, H2a, H2b, H2c, H2d, H2e, H3f, H4b, H4c, H4d, H4e, H5a, H5b, H5c, H5d, H5e, H5f) ; 3,31 (t, lH, H4f, JH3f-H4f = JH4f-H5f = 9,3 Hz) ; 3,26 (dd, IH, H2f, JHιf-H2f = 8,0 Hz,
JH2f-H3f = 9,0 Hz). RMN 13C (D2O, 100 MHz) δ (ppm) : 103,1, 102,8 (5C, CIb, CIc, CId, CIe, CIf) ;
84,5, 84,3 (5C, C3a, C3b, C3c, C3d, C3e) ; 76,3, 75,9 (6C, C3f, C5a, C5b, C5c, C5d,
C5e, C5f) ; 73,8, 73,6 (6C, C2a, C2b, C2c, C2d, C2e, C2f) ; 69,9 (C4f) ; 68,4 (4C, C4b,
C4c, C4d, C4e) ; 61,0 (5C, C6b, C6c, C6d, C6e, C6f).
HRMS (ESI+) : [M+Naf C36H62NaO30 m/z théorique: 997,3224 m/z mesurée: 997,3201
7.9/ Préparation de β-D-glucopyranosyl-(l→3)-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-β-D- glucopyranosyl-(l— »θ)-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-β-D-glueopyranosyl-(l→3)-4- désoxy-D-mannitoI (Produit Db) Le composé Cb (40 mg, 0,041 mmol) est dissous dans un mélange méthanol/eau
(4:1, v/v) puis additionné de 10 équivalents de borohydrure de sodium (15,5 mg, 0,411 mmol). Après une semaine d'agitation à température ambiante, le milieu est neutralisé par ajout de quelques gouttes d'acide acétique, concentré sous pression réduite, coévaporé 3 fois avec 10 mL d'un mélange méthanol/acide acétique (9:1, v/v) et pour finir avec 3 fois 10 mL de méthanol. Le composé Db est obtenu après purification sur colonne de perméation de gel (Sephadex G- 10, éluant : eau) et lyophilisation des fractions récoltées. Produit Db : mousse blanche. RMN 1H (D2O, 400 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 3,97-3,90 (m, IH, H3a) ; 1,70-1,40 (m, 2H, H4a).
RMN 13C (D2O, 100 MHz) δ (ppm) : Signaux caractéristiques 76,3 (C3a) ; 71,0 (C2a, C5a) ; 66,1 (C6a) ; 63,0 (CIa) ; 25,3 (C4a). Autres signaux ;
RMN 1H (D2O, 400 MHz) δ (ppm) : 4,70 (d, 3H, Hl, Jm-œ = 8,0 Hz) ; 4,66 (d, 2H, Hl, JH1-H2 = 8,0 Hz) ; 3,87-3,76 (m, 9H, HI a, H2a, H5a, H6a, H6b, H6c, H6d, H6e, H6f) ; 3,72-3,51 (m, 12H, Hl'a, H3a, H3b, H3c, H3d, H3e, H6'a, H6'b, H6'c, H6'd, H6'e, H6'f) ; 3,50-3,36 (m, 14H, H2b, H2c, H2d, H2e, H3f, H4b, H4c, H4d, H4e, H5b, H5c, H5d, H5e, H5f) ; 3,31 (t, IH, H4f, JH3f-H4f = JH4f-H5f ≈ 9,3 Hz) ; 3,26 (dd, IH, H2f,
JHIMOf = 8,0 HZ, JH2f-H3f = 9,3 Hz).
RMN 13C (D2O, 100 MHz) δ (ppm) : 103,1, 102,8 (5C, CIb, CIc, CId, CIe, CIf) ; 84,5, 84,3 (4C, C3b, C3c, C3d, C3e) ; 76,3 (C5f) ; 75,9 (5C, C3f, C5a, C5b, C5c, C5d, C5e) ; 73,8, 73,6 (5C, C2b, C2c, C2d, C2e, C2f) ; 69,9 (C4f) ; 68,4, 68,2 (4C, C4b, C4c, C4d, C4e) ; 61 ,0 (5C, C6b, C6c, C6d, C6e, C6f).
HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C36H64NaO30 m/z théorique: 999,3380 m/z mesurée: 999,3411
Les exemples 8 à 11 montrent les activités biologiques de composés de l'invention.
Dans ces exemples, les composés testés sont :
LAM5 : laminaripentaose,
LAM7 : laminariheptaose, A2 est le composé préparé selon l'exemple 3,
AO représente le composé suivant:
Figure imgf000059_0001
Le témoin utilisé est le PBS. Les dosages utilisés sont de lOOμg/souris. EXEMPLE 8: Effet de LAM5, LAM7, A2 et AO sur la phagocytose de cellules de sang périphérique: On a injecté, par voie péritonéale, chez un groupe de souris Balb/c (Jackson laboratory, Bar Harbor, ME, USA) l'un ou l'autre de un témoin, LAM5, LAM7, AO ou A2. 24 heures après l'injection les souris ont été sacrifiées. On a récupéré le sang périphérique à partir du plexus orbital dans de l'héparine (5 IU/ml) (Sigma). Après comptage, un essai de phagocytose de particles de HEMA (microsphères synthétiques préparées à partir de copolymère de 2-hydroxyéthylméthacrylate) a été réalisé comme décrit dans: Rembaum et al. , 1976, Vetvicka et al. 1982, Bilej et al. , 1989. 0,1 ml of sang frais héparine a été ajouté à 0,05 ml de particules de HEMA diluées (5xl08/ml) et incubé pendant 60 minutes à 37° C sous agitation modérée occasionnelle.
A la fin de l'incubation, la suspension de cellules a été frottée sur des lamelles de microscope. Les frottis ont été évalués sous microscope optique après coloration Giemsa.
Les cellules englobant au moins trois particules ont été considérées comme positives.
Les résultats moyens sont représentés graphiquement sur la figure 1. Ils montrent clairement que aussi bien AO que A2 stimulent fortement la phagocytose dans les monocytes et les granulocytes.
EXEMPLE 9: Effet des oligosaccharides sur la phagocytose de cellules issues de la cavité péritonéale:
On a injecté par voie intrapéritonéale un groupe de souris Balb/c (Jackson laboratory, Bar Harbor, ME, USA) avec l'un ou l'autre de un témoin, LAM7, LAM5, AO ou A2. Après 24 h, les souris ont été sacrifiées, les cellules péritonéales ont été recueillies dans un milieu Hanks (Sigma).
Après comptage des cellules dans un hémocytomètre, les cellules péritonéales ont été diluées tυlxlO7 dans un milieu RPMI 1640 (Sigma) avec 5% de sérum de veau foetal (Hyclone, Logan, UT, USA). 2x106 cellules dans 0,2 ml de milieu RPMI 1640 additionné de 5% de sérum de veau foetal ont été mélangées avec le même volume de particules HEMA (5xlO8/ml).
La suspension a été incubée pendant 60 minutes at 37° C sous agitation modérée occasionnelle. L'incubation a été terminée par centrifugation (150 g pendant 5 minutes) et la boulette a été remise en suspension. Les macrophages avec des particules ingérées ont été comptés sous microscope optique dans des frottis colorés par Accustain (colorant Wright modifié, Sigma).
Les cellules englobant au moins six particules ont été considérées comme étant positives. Les résultats moyens sont représentés graphiquement sur la Figure 2.11s montrent qu'aussi bien AO que A2 stimulent fortement la phagocytose à la fois dans les monocytes et les granulocytes de macrophages péritonéaux.
EXEMPLE 10: Effet de AO et A2 sur un dénombrement différentiel dans le sang En utilisant les mêmes groupes expérimentaux que dans l'exemple 8, deux lamelles microscopiques supplémentaires à partir de chaque échantillon expérimental ont été préparées. Après coloration Giemsa, on a évalué au microscope optique, pour chaque lamelle la présence de types individuels de cellules, i. e. monocytes, lymphocytes et granulocytes. Les résultats moyens sont représentés graphiquement sur la Figure 3. Ils montrent que à la fois AO et A2 augmentent le nombre de monocytes et de granulocytes dans le sang périphérique.
EXEMPLE 11: Effet de AO et A2 sur un dénombrement différentiel dans les cellules péritonéales
En utilisant les mêmes groupes expérimentaux que dans l'exemple 8, deux lamelles microscopiques supplémentaires à partir de chaque échantillon expérimental ont été préparées. Après coloration Giemsa, on a évalué au microscope optique, pour chaque lamelle la présence de types individuels de cellules, i. e. macrophages, lymphocytes et mastocytes.
Les résultats moyens sont représentés graphiquement sur la Figure 4. Ils montrent que à la fois AO et A2 augmentent le nombre de monocytes et de granulocytes dans la cavité péritonéale. Tableau 1a: Déplacements chimiques et multiplicité en RMN 1H des monosaccharides répondant à la formule :
Figure imgf000062_0001
Figure imgf000062_0003
Tableau 1b: Déplacements chimiques et multiplicité en RMN 13C des monosaccharides répondant à la formule
Figure imgf000062_0002
Figure imgf000062_0004
61 /
4,35/10,4 3,81/10,4
4,39/10,6 3,82/10,6
4,32/10,6 3,78/10,6
Figure imgf000063_0001
Tableau 2b: Déplacements chimiques et multiplicité en RMN 13C des monosaccharides répondant à la formule
Figure imgf000063_0002
Figure imgf000063_0003
Figure imgf000064_0001
Figure imgf000064_0002
ableau 3b: Déplacements chimiques et multiplicité en RMN 13C des monosaccharides répondant à la formule
Figure imgf000065_0001
Figure imgf000065_0002
Figure imgf000066_0001
Figure imgf000066_0002
10
ableau 3'b: Déplacements chimiques et multiplicité en RMN 13C des monosaccharides répondant à la formule :
Figure imgf000067_0001
Figure imgf000067_0002

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation d'au moins un composé de formule (I) ou (II)
Figure imgf000068_0001
Figure imgf000068_0002
dans lesquelles Ri représente H et n est un entier de 2 à 10, de préférence de 2 à 7, et plus préférentiellement encore égal à 3, 4 ou 5, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de maladies choisies dans le groupe consistant en tumeur, cancer, maladie virale, maladie bactérienne, maladie fongique, maladie du système immunitaire, maladie auto-immune ou maladie liée à une déficience de l'immunostimulation, chez des êtres humains et animaux à sang chaud.
2. Oligo-β-(l,3)-glucane-(l,3)-mannose et oligo-β-(l,3) — glucane-(l,3)-mannitol et leurs dérivés désoxy en position 4 de formule générale (F) ou de formule générale (IF) :
Figure imgf000068_0003
Figure imgf000068_0004
dans lesquelles R] représente H ou OH et n est un entier de 2 à 10, de préférence de 2 à 7, et plus préférentiellement encore égal à 3, 4 ou 5.
3. β-D-glucoρyranosyl-(l >3)-β-D-glucopyranosyl-(l→3)-(α,β)-D-mannopyranose ; β-D-glucopyranosyl-(l-→3} •β-D-glucopyranosyl-(l — >3)-β-D-glucopyranosyl-(l →3)-β- D-glucopyranosyl-(l -→3)-β> -D-glucopyranosyl-(l -→3)-β-D-mannopyranose ; β-D-glucopyranosyl-( 1 →3} •β-D-glucopyranosyl-(l→3)-4-désoxy-(α,β)-D-désoxy- mannopyranose ; β-D-glucopyranosyl-(l→3)- •β-D-glucopyranosyl-(l →3)-mannitol ; β-D-glucopyranosyl-(l →3)- •β-D-glucopyranosyl-( 1 -→3)-4-désoxy-mannitol ; β-D-glucopyranosyl-(l→3)- β-D-glucopyranosyl-(l →3)-β-D-glucopyranosyl-(l →3)-β- D-glucopyranosyl-(l -→3)-β- D-glucopyranosyl-(l -→3)-mannitol ; β-D-glucopyranosyl-(l →3)- β-D-glucopyranosyl-(l →3)-β-D-glucopyranosyl-(l -→θ)-β- D-glucopyranosyl-(l— >3)-β- D-glucopyranosyl-(l→3)-4-désoxy-(α,β)-D- mannopyranose ; β-D-glucopyranosyl-(l →3)- β-D-glucopyranosyl-(l-→3)-β-D-glucopyranosyl-(l-→3)-β- D-glucopyranosyl-(l →3)-β- D-glucopyranosyl-(l—>3)-4-désoxy-mannitol.
4. Procédé de préparation de composés selon la revendication 2 ou la revendication 3, comprenant une réaction entre un donneur de glycosyle de formule (D) ci-dessous et un accepteur de glycosyle de formule (A) ci-dessous :
Figure imgf000069_0001
Figure imgf000069_0002
dans lesquelles m est un entier de 1 à 9, de préférence de 1 à 6, et plus préférentiellement encore égal à
2, 3 ou 4 ; p est un entier de O à 9, de préférence de O à 6, et plus préférentiellement encore égal à 2, 3 ou 4 ;
R représente alkyle tel que éthyle, méthyle, propyle ou butyle, ou aryle tel que phényle ou tolyle ;
R.2 représente allyle, méthymaphtyle, benzyle, paraméthoxybenzyle, halogénoacétyle
(chloroacétyle, bromoacétyle, iodoacétyle) ; R3 et R4 d'une part et R3' et R4' d'autre part forment ensemble un radical éthylidyle, isopropylidyle, hexafluoroisopropylidyle, cyclopentylidyle, cyclohexylidyle, cycloheptylidyle, butylidyle, 1-tertiobutyléthylidyle, benzylidyle, méthoxybenzylidyle, 1-phénylbenzylidyle ou R3, R4 R3' et R4' représentent chacun indépendamment l'un de l'autre un benzyle, chlorobenzyle, nitrobenzyle, allyle, triarylméthyle, trialkylsilyle tel que triéthylsilyle, tri-isopropylsilyle, tertiobutyldiméthylsilyle, ester tel que acétyle, chloroacétyle, benzoyle, pivaloyle ;
R5 représente H, un groupe lévulinoyle, acétyle, chloroacétyle, fluorénylméthyloxycarbonyle, trialkylsilyle tel que triéthylsilyle, tri-isopropylsilyle, tertiobutyldiméthylsilyle, de préférence un groupe lévulinoyle, à la condition que aucun de R3, R4, R3', R4' ne soit identique à R5
5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé par le fait que le composé de formule (A) est
Figure imgf000070_0001
6. Procédé selon la revendication 4, caractérisé par le fait que le composé de formule
(D) est
Figure imgf000070_0002
7. Procédé de préparation de composés selon la revendication 2 ou la revendication 3, comprenant une étape d'épimérisation en position 2 de l'entité terminale.
8. Composés de formule les composés de formules (III), (IV), (V) et (VI)
Figure imgf000070_0003
Figure imgf000071_0001
p est un entier de 0 à 9, de préférence de 0 à 6, et plus préférentiellement encore égal à
2, 3 ou 4 ;
R2 représente hydrogène, allyle, méthylnaphtyle, benzyle, paraméthoxybenzyle, halogénoacétyle (chloroacétyle, bromoacétyle, iodoacétyle) ;
R3 et R4 d'une part et R'3 et R'4 d'autre part, forment ensemble un radical éthylidyle, isopropylidyle, hexafluoroisopropylidyle, cyclopentylidyle, cyclohexylidyle, cycloheptylidyle, butylidyle, 1 -tertiobutyléthylidyle, benzylidyle, méthoxybenzylidyle,
1 -phénylbcnzylidyle, ou R3, R4, R3' et R4' représentent chacun indépendamment l'un de l'autre un benzyle, chlorobenzyle, nitrobcnzyle, allyle, triarylméthyle, trialkylsilyle tel que triéthylsilyle, tri-isopropylsilyle, tertiobutyldiméthylsilyle, ester tel que acétyle, chloroacétyle, benzoyle, pivaloyle ;
R5 représente H, un groupe lévulinoyle, acétyle, chloroacétyle, fluorénylméthyloxycarbonyle, trialkylsilyle tel que triéthylsilyle, tri-isopropylsilyle, tertiobutyldiméthylsilyle, de préférence un groupe lévulinoyle, à la condition que aucun de R3, R4, R3', R4' ne soit identique à R5 ;
R7 représente un ester, notamment acétyle, benzoyle, pivaloyle, de préférence Bz ;
Rg, un groupement orthogonal à tous les autres groupements protecteurs, qui peut être choisi parmi Bn, NAP, p-méthoxybenzyle, p-méthoxyphényle, allyle, et de préférence
Rg représente Bn, R9 représente OR8 ou X.
9. Médicaments comprenant les composés tels que définis à la revendication 2 ou 3.
10. Composé tel que défini à la revendication 2 ou 3 pour la mise en œuvre d'une méthode de traitement d'une maladie choisie dans le groupe consistant en tumeur, cancer, maladie virale, maladie bactérienne, maladie fongique, maladie du système immunitaire, maladie auto-immune ou maladie liée à une déficience de l'immunostimulation, chez des animaux à sang chaud et des êtres humains.
PCT/FR2007/052595 2006-12-22 2007-12-20 UTILISATION D' OLIGO-β-(1,3)-GLUCANES MODIFIES POUR LE TRAITEMENT DE MALADIES DU SYSTEME IMMUNITAIRE, OLIGO-β-(1,3)-GLUCANE-(1,3)- MANNOSE, OLIGO-β-(1.3)-GLUCANE-(1,3)- MANNITOL ET LEURS DERIVES, LEURS PROCEDES DE PREPARATION ET MEDICAMENTS LES CONTENANT Ceased WO2008087340A2 (fr)

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CA002674539A CA2674539A1 (fr) 2006-12-22 2007-12-20 Utilisation d'oligo-.beta.-(1,3)-glucanes modifies pour le traitement de maladies du systeme immunitaire, oligo-.beta.-(1,3)-glucane-(1,3)- mannose, oligo-.beta.-(1,3)-glucane-(1,3)- mannitol et leurs derives, leurs procedes de preparation et medicaments les contenant
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