WO2012096596A1 - Противовирусное средство - Google Patents

Противовирусное средство Download PDF

Info

Publication number
WO2012096596A1
WO2012096596A1 PCT/RU2011/001056 RU2011001056W WO2012096596A1 WO 2012096596 A1 WO2012096596 A1 WO 2012096596A1 RU 2011001056 W RU2011001056 W RU 2011001056W WO 2012096596 A1 WO2012096596 A1 WO 2012096596A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
cysteinyl
glutamyl
glycine
copper
palladium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/RU2011/001056
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Марк Борисович БАЛАЗОВСКИЙ
Виктор Георгиевич АНТОНОВ
Александр Николаевич БЕЛЯЕВ
Алексей Владимирович ЕРЕМИН
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ivy Pharm LLC
Original Assignee
Ivy Pharm LLC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ivy Pharm LLC filed Critical Ivy Pharm LLC
Priority to CN201180069029.XA priority Critical patent/CN103582646A/zh
Priority to KR1020137021117A priority patent/KR20140047576A/ko
Priority to BR112013017709A priority patent/BR112013017709A2/pt
Priority to JP2013549383A priority patent/JP2014502633A/ja
Priority to AU2011354772A priority patent/AU2011354772A1/en
Priority to US13/978,836 priority patent/US20130281362A1/en
Priority to EP11855892.3A priority patent/EP2664621A4/en
Publication of WO2012096596A1 publication Critical patent/WO2012096596A1/ru
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
    • A61K31/708—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid having oxo groups directly attached to the purine ring system, e.g. guanosine, guanylic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F1/00—Compounds containing elements of Groups 1 or 11 of the Periodic Table
    • C07F1/08—Copper compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/28—Compounds containing heavy metals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/7056—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing five-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/34—Copper; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/06—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J31/00—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds
    • B01J31/16—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds containing coordination complexes
    • B01J31/22—Organic complexes
    • B01J31/2204—Organic complexes the ligands containing oxygen or sulfur as complexing atoms
    • B01J31/226—Sulfur, e.g. thiocarbamates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C319/00—Preparation of thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides
    • C07C319/22—Preparation of thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides of hydropolysulfides or polysulfides
    • C07C319/24—Preparation of thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides of hydropolysulfides or polysulfides by reactions involving the formation of sulfur-to-sulfur bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F15/00—Compounds containing elements of Groups 8, 9, 10 or 18 of the Periodic Table
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2231/00—Catalytic reactions performed with catalysts classified in B01J31/00
    • B01J2231/70—Oxidation reactions, e.g. epoxidation, (di)hydroxylation, dehydrogenation and analogues
    • B01J2231/76—Dehydrogenation
    • B01J2231/763—Dehydrogenation of -CH-XH (X= O, NH/N, S) to -C=X or -CX triple bond species
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2531/00—Additional information regarding catalytic systems classified in B01J31/00
    • B01J2531/02—Compositional aspects of complexes used, e.g. polynuclearity
    • B01J2531/0213—Complexes without C-metal linkages
    • B01J2531/0216—Bi- or polynuclear complexes, i.e. comprising two or more metal coordination centres, without metal-metal bonds, e.g. Cp(Lx)Zr-imidazole-Zr(Lx)Cp
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2531/00—Additional information regarding catalytic systems classified in B01J31/00
    • B01J2531/10—Complexes comprising metals of Group I (IA or IB) as the central metal
    • B01J2531/16—Copper
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2531/00—Additional information regarding catalytic systems classified in B01J31/00
    • B01J2531/80—Complexes comprising metals of Group VIII as the central metal
    • B01J2531/82—Metals of the platinum group
    • B01J2531/824—Palladium

Definitions

  • This invention relates to bio-inorganic chemistry and medicine, namely to the field of obtaining antiviral drugs, and can be used in medicine and veterinary medicine for the treatment of viral diseases.
  • Interferons, interleukins, and nucleosides are commonly used to treat viral diseases. Such therapy is effective in the acute phase of the disease, but is often insufficient in the chronic course of the disease.
  • Interferon therapy is associated with the development of side effects.
  • the most common flu-like syndrome the most common flu-like syndrome, symptoms of gastrointestinal and psychogenic disorders, signs of myelosuppression, disorders of the thyroid and parathyroid glands.
  • Many negative reactions of interferons are potentiated by synthetic modified nucleoside analogues (ribaverine, vidarabine, ribomidyl, etc.), which are widely used in the treatment of viral diseases.
  • Patents RU2153350, RU2153351 discusses a pharmacological solution for potentiating the antiviral activity of inosine, preferably using a coordination compound of cisplatin and oxidized glutathione.
  • cisplatin is a complex compound of platinum (Pt), the use of which is associated with the danger of toxic and mutagenic effects, therefore, the use of the drug containing it is limited.
  • the objective of the invention is the creation of an antiviral agent with a wide spectrum of action, which is effective in the chronic course of diseases, and has minimal side effects.
  • the indicated combination is hereinafter referred to as the “agent of the invention”.
  • bis- (y-1-glutamyl) -1_-cysteinyl-glycine is presented as the disodium salt.
  • the combination may contain a catalyst based on cis-diaminodichloride palladium, copper dichloride and ( ⁇ -1_-glutamyl) -1_-cysteinyl-glycine, prepared in situ.
  • such a catalyst may be prepared in advance.
  • the proposed combination has antiviral activity, it can be used in the treatment of infectious, in particular viral, diseases.
  • a pharmaceutical composition comprising the combination and a pharmaceutically acceptable excipient.
  • Such a pharmaceutical composition has antiviral activity and can be used in the treatment of infectious, in particular viral, diseases.
  • An antiviral agent is also provided, which is a 'solution of this combination in acetate buffer.
  • Such an agent can be used to treat a virus selected from the group consisting of influenza virus, hepatitis C virus, hepatitis B virus tick-borne encephalitis virus, Rift Valley fever virus and Venezuelan encephalitis virus horses.
  • a viral disease can be selected from the group consisting of influenza, hepatitis C, hepatitis B, tick-borne encephalitis, Rift Valley fever, Venezuelan horse encephalitis.
  • Figure 1 presents a typical profile of changes in the dynamics of IFNa in the blood serum of experimental animals after a single injection of the agent according to the invention.
  • the ordinate indicates the level of IFNa in serum (U / ml).
  • Asterisk indicates significant differences compared with control at p ⁇ 0.05.
  • the agent according to the invention has a pronounced antiviral effect, as well as an interferonogenic effect.
  • Inosine is 1, 9-dihydro-9-beta-0-ribofuranosyl-6H-purin-6-one (ribofuranosylhypoxanthine).
  • Inosine is an anabolic agent, a stimulator of metabolic processes, a precursor of ATP. Increases energy balance, improves coronary circulation and metabolic processes in the myocardium. It has an antihypoxic effect. It is used for IHD (myocardial infarction, angina pectoris), cardiomyopathy, cardiac arrhythmias, myocarditis, myocardial dystrophy, liver diseases (hepatitis, cirrhosis of the liver, fatty liver), gastric ulcer and duodenal ulcer, open-angle form of glaucoma.
  • IHD myocardial infarction, angina pectoris
  • cardiomyopathy cardiac arrhythmias
  • myocarditis myocardial dystrophy
  • liver diseases hepatitis, cirrhosis of the liver, fatty liver
  • gastric ulcer and duodenal ulcer open-angle form of glaucoma.
  • Glutathione gamma-glutaminyl-cysteinyl-glycine
  • glutamic acid cysteine and glycine
  • Glutathione is found in all living organisms and is important for redox reactions due to the ability of the sulfhydryl group (SH-) of cysteine to enter a reversible reaction: - 2H
  • Reduced glutathione is referred to herein as ( ⁇ -L-glutamyl) -1_-cysteinyl-glycine.
  • the oxidized form of glutathione is designated as bis- (y-1_-glutamyl) -1_-cysteinyl-glycine.
  • glutathione in this description means reduced glutathione.
  • Glutathione is able to form salts with cations, in particular Na.
  • the combination of the invention contains d-metals.
  • Sources of d-metals, palladium and copper can serve as their various salts, which when dissolved in water lead to the formation of complex compounds.
  • simple copper (H) salts, such as CuCI 2 or CuBr 2 are introduced into the aqueous solution, they are subjected to aquotation, followed by subsequent hydrolysis and the formation of copper (P) oligonuclear aquahydroxo complexes in the solution.
  • Palladium can also be added in the form of its suitable salts, in particular cis-diaminodichloropalladium,
  • One of the options for implementing the process of obtaining the funds according to the invention is the preliminary preparation of a palladium-copper catalyst (coordination compounds of palladium and copper and y-1.-glutamyl-1-- cysteinyl-glycine) (stage 1, example 1), followed by the introduction of the resulting solution catalyst into the reaction mass, by oxidation,
  • a palladium-copper catalyst coordination compounds of palladium and copper and y-1.-glutamyl-1-- cysteinyl-glycine
  • an embodiment is proposed for the production of a palladium-copper catalyst in situ (Example 2), followed by oxidation, mixing the resulting solution with an inosine solution, filtration and lyophilization.
  • a separate production option is proposed, with the introduction of an additional step of vacuum freeze-drying (lyophilization) of a solution of bis- (y-1_-glutamyl) -1_-cysteinyl-glycine disodium salt (containing coordination compounds of palladium and copper) , subsequent dissolution of the obtained lyophilisate, mixing with a solution of inosine, filtration and lyophilization of a solution of the agent according to the invention.
  • the Pd: Cu ratios optimally range from 1: 0.2 to 1: 2.
  • binuclear thiolabridge palladium (I) complexes fulfill the main function of oxidation catalysts, and thiolate copper complexes (1) should be attributed to chemical sites that change their catalytic activity or, in other words controlling their catalytic activity.
  • SR site type control
  • pharmaceutically acceptable excipients are used.
  • these are inorganic or organic carriers. Lactose, corn starch or its derivatives, talc, stearic acid or its salts and the like. can be used, for example, as such carriers for tablets, coated tablets, dragees and hard gelatine capsules.
  • Suitable carriers for soft gelatin capsules are, for example, vegetable oils, waxes, fats, semi-solid and liquid polyols and the like.
  • Suitable carriers for solutions and syrups are, for example, water, polyols, sucrose, invert sugar, glucose and the like.
  • Suitable carriers for suppositories are, for example, natural or hardened oils, waxes, fats, semi-liquid or liquid polyols and the like.
  • compositions may contain preservatives, solubilizers, stabilizers, wetting agents, emulsifiers, sweeteners, colorants, flavoring agents, salts for regulating the osmotic pressure, buffers, masking agents or antioxidants and other necessary components.
  • Example 1 Obtaining funds according to the invention
  • the previously prepared catalyst solution is poured into the obtained reaction system, the beaker is transferred to an ice bath (5-10 ° ⁇ ) and in small portions, 100-102 ml ( ⁇ 0.1 mol) of 1 M freshly prepared hydrogen peroxide solution are poured over an intensive period of 45-60 minutes stirring. The completeness of the reaction is monitored by HPLC.
  • ribofuranosylhypoxanthine inosine
  • 150 ml of hot distilled water 60-70 ° C.
  • the solution is cooled to room temperature and poured into the reaction mixture.
  • the solution is frozen and subjected to vacuum freeze-drying (lyophilic) drying.
  • the molar ratio of GSSG - inosine - palladium - copper is 1000-1000-1-0.9.
  • ZZOg (1.074 mol) of reduced glutathione is suspended in 3100 ml of water.
  • To the resulting suspension was added 42.96 g (1.074 mol) of sodium hydroxide in the form of a 16% aqueous solution with constant stirring and cooling.
  • To the resulting solution were added 0.1135 g (0.537 mmol) of cis-diaminodichloropalladium and 0.0915 g (0.537 mmol) of 2-aqueous copper chloride and By thoroughly mixing, add 304.5 g of a 6% solution (0.537 mol) of hydrogen lorexide, controlling the temperature (not more than 15 ° C). After adding peroxide, the resulting solution was kept at room temperature for 1, 5 hours.
  • the lyophilized disodium salt of bis- (y-1_-glutamyl) -1_-cysteinyl-glycine from the previous step is dissolved in a minimum amount of water and added to a solution of inosine (144 g, 0.537 mol) in water.
  • the resulting solution was filtered through a 0.22 ⁇ filter and lyophilized. The output for 2 stages is 98%.
  • Example 5 The therapeutic effect of in vivo means according to the invention, in the treatment of diseases caused by pathogenic DNA and RNA viruses
  • Inosine characterizes a wide range of pharmacological activity, including the antiviral effect, which can be enhanced by its combination with other biologically active molecules.
  • Patents RU2153350, RU2153351 discusses a pharmacological solution for potentiating the antiviral activity of inosine, preferably using a coordination compound of cisplatin and oxidized glutathione. The potentiation effect is achieved due to the ability of the coordination compound of cisplatin and oxidized glutathione to catalyze the complex of reactions of the oxidative modification of the target, increasing its affinity for the effects of inosine.
  • the agent according to the invention should have a similar, more pronounced effect, since it contains a coordination compound with higher catalytic activity in comparison with the coordination compound of cisplatin and oxidized glutathione.
  • Test compounds bis- (y-1_-glutamyl) -1_-cysteinyl-glycine ribofuranosylhypoxanthine disodium: cis-diaminodichloropalladium: copper dichloride (in a ratio of 1000: 1: 1) (agent according to the invention)
  • VEL Venezuelan horse encephalitis virus
  • VEL Venezuelan horse encephalitis virus
  • the accumulation of virus-containing material for subsequent infection of laboratory animals was carried out using 9-1 1 day-old developing chicken embryos - 30-50 pcs. Five consecutive ten-fold dilutions of the virus-containing suspension were initially prepared. 0.2 ml of each dilution of the virus-containing suspension was introduced into the allantoic cavity of developing chicken embryos. The injection site of the virus-containing suspension was coated with molten paraffin. Then, developing chicken embryos are placed in a thermostat at a temperature of (37 ⁇ 0.5) ° C for 18 hours, periodically assessing their viability using an ovoscope.
  • LDR Rift Valley fever virus
  • the accumulation of virus-containing material for infection of laboratory animals is carried out using 3-5-day-old sucker mice - 10-15 goals. Initially, five consecutive tenfold dilutions of virus-containing material were prepared. 0.02 ml of each dilution was injected into the brain of sucker mice, which was monitored for 24-48 hours, after which the animals were killed with ether, the brain was removed and three samples were deposited in penicillin vials, which were stored in a freezer at a temperature of minus (20 ⁇ 0.5) ° ⁇ . Subsequently, a 10% suspension of the brain was used as a virus-containing material. The initial titer of the virus 10 5 - 10 6 LD 50 / ml;
  • TBE tick-borne encephalitis virus
  • the accumulation of virus-containing material for infection of laboratory animals was carried out on sucker mice. Initially prepared five consecutive ten-fold dilutions of the virus-containing material, which was a centrifugate of a 10% suspension of the brain of previously infected mice or the virus-containing material rehydrated from the lyophilic state. 0.02 ml of each dilution was injected into the brain of sucker mice, which was monitored for 24-48 hours, after which the animals were killed with ether, the brain was removed and three samples were deposited in penicillin vials, which were stored in a freezer at a temperature of minus (20 ⁇ 0.5) ° ⁇ . Subsequently, a 10% suspension of the brain was used as a virus-containing material. The initial titer of the virus is 10 2 - 10 3 LD 50 / ml.
  • virus-containing material was carried out on 9-1 1-day-old developing chicken embryos. Subsequent accumulation of virus-containing material for infection of laboratory animals was carried out using 5 mice that were infected with a virus-containing allantoic fluid containing pathogenic strains A / Aichi / 02/68 (H 3 N 2 ). On the 3rd day after infection, their lungs were isolated, homogenized in a 10-fold volume of sterile physiological saline, after which the infectious activity of the virus in the homogenate was determined in a separate experiment using titration by lethality t in animals. The virus titer was calculated according to the method of Reed and Mench (Am.J. Nood., 1938.27: 493-497).
  • the LD 50 value was determined on white non-inbred mice with the calculation of this criterion according to the Kerber method in the modification of I.P. Ashmarin and A.A. Vorobyov.
  • the effectiveness of the studied drugs was determined by comparing the survival rates of animals in the experimental " (receiving the appropriate drugs) and control groups. The percentage of surviving animals in the experimental and control groups was determined according to the Genesa BC tables. In addition, the monitoring of infected animals was carried out for 21 days, daily recording the number living and fallen in experimental and control groups. Methods of statistical processing of results
  • the agent of the invention and reference 1 were administered subcutaneously in a volume of 0.5 ml in a single dose of 30 mg / kg body weight (10 ⁇ g / mouse). ''
  • Arbidol dosage form series 970609 (reference 2), which was administered 1 hour after infection and then orally for five days once a day at a dose of 60 mg / kg, was used as a reference drug in the treatment of influenza infection.
  • the protective effect was at the level of 100% (when infected with the pathogen at a dose of 12 LD 50 ) and 100% (when infected with a pathogen in a dose of 2 LD 50 ).
  • the protection indices depending on the infecting dose of the pathogen, were 40-60% lower than when using the agent according to the invention.
  • the agent according to the invention turned out to be the most effective in relation to experimental VEL infection.
  • the tool according to the invention used according to the emergency prevention scheme, provided protection for 100% of infected animals against a background of 100% mortality in the control.
  • the effectiveness of the agent according to the invention for experimental viral infection is Rift Valley Fever.
  • influenza pathogenic strain A / Aichi / 02/68.
  • influenza pathogenic strain A / Aichi / 02/68.
  • the therapeutic efficacy of the agent according to the invention in relation to various viral diseases caused by both DNA and RNA viruses may be due to its ability to increase endogenous production of interferon, a biologically active substance with pronounced antiviral activity.
  • Test compound - bis- ( ⁇ -L-glutamyl) - L - cysteinyl-glycine ribofuranosylhypoxanthine-disodium cis-diaminodichloropalladium copper dichloride (in a ratio of 1000: 1: 1) (agent according to the invention)
  • the interferonogenic properties of the agent according to the invention were evaluated by titration of interferon alpha (IFNa) in the blood serum of experimental animals receiving the agent according to the invention at a dose of 30 mg / kg, effective according to the results of experiments (see example 3).
  • the drug was administered once subcutaneously.
  • subcutaneous placebo (0.85% sodium chloride solution) was used.
  • Blood sampling in experimental mice (received one of the evaluated drugs) and the control group was performed under sterile conditions from the retroorbital sinus 2, 4, 8, 16, 24, 32, 36, 40, and 48 hours after injection of the drug. In one sample, blood from five mice was pooled. The dynamics of the accumulation of interferon was studied in sera prepared according to the standard method.
  • L-929 cell culture a transplantable murine fibroblast cell culture
  • passage 153 obtained from the Institute of Cytology RAS (St. Russia).
  • IFN titration in the obtained samples was carried out by a micromethod.
  • the growth medium is removed from the panel and a support medium is introduced, in which successive two-fold dilutions of the tested samples (in paired wells) are performed.
  • the test samples are removed and the EMC test virus is added in working dilution (100 CPD 50 ). After a day, the results are recorded using an inverted microscope. IFN titer is the reciprocal of the last dilution of serum, in which there is 50% protection against the test-virus CPD.
  • the level of IFNa began to increase after two hours from the moment of administration of the agent according to the invention 5-6 times, reached a maximum within 16-24 hours, exceeding background values by 45-50 times, returning to normal values by 48 hours after exposure to the agent according to the invention.
  • the dynamics of the level of IFNa indicates the presence of interferonogenic activity in the means according to the invention.
  • Endogenous IFNa has a certain advantage over exogenous interferon preparations: when interferonogens are introduced into the body, interferon is produced that does not have antigenicity; there are no negative effects inherent in exogenous IFNa preparations; the synthesis of induced IFN in the body is balanced and undergoes regulatory and regulatory mechanisms (repressor translation) that protect the body from interferon oversaturation; a single administration of interferonogens provides a relatively long circulation of endogenous IFNa.
  • the action of the agent according to the invention corresponds to the listed effects of interferonogens.
  • the agent according to the invention characterizes the ability to enhance the production of interferon alpha.
  • Example 7 The therapeutic efficacy of the agent according to the invention - GSSGNag / Inosine / RoOSi in chronic viral hepatitis C (HVHS)
  • ALP (U / L) Up to 240 302 298 246 180
  • the dosage form of the agent according to the invention is well tolerated. After the injection, the patient notes a surge of strength, improved mood.
  • An objective criterion for the response to therapy is the dynamics of the change in viral load, which decreased three times in a month, 6 times in three months and more than four logarithms after six months of therapy.
  • a decrease in viral load was combined with a decrease in the intensity of cytolysis reactions (normalization of transaminases by the end of therapy), restoration physiologically optimal functional activity of hepatocytes (normalization of protein levels, values of indicators of pigment and other types of metabolism).
  • the therapeutic effect of the drug led to the normalization of the cellular composition of the blood, the activity of the coagulation system.
  • the liver protrudes 0.5 cm from under the costal arch.
  • the edge of the liver is soft, painless.
  • the use of the dosage form of the agent according to the invention made it possible to treat chronic viral hepatitis C with intolerance to specific antiviral agents, which is one of the evidence of the antiviral activity of the agent according to the invention.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Catalysts (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Согласно данному изобретению предложена комбинация бис-(гамма-L-глутамил)-L-цистеинил-глицина или его соли, инозина и координационных соединений, образованных палладием, медью и (гамма-L-глутамил)-L-цистеинил-глицином; фармацевтическая композиция и противовирусное средство на её основе, а также способ лечения вирусного заболевания.

Description

Противовирусное средство
Область техники, к которой относится изобретение
Данное изобретение относится к бионеорганической химии и медицине, а именно к области получения противовирусных лекарственных препаратов, и может быть использовано в медицине и ветеринарии для лечения вирусных заболеваний.
Предшествующий уровень техники
Для лечения вирусных заболеваний обычно применяются интерфероны, интерлейкины и нуклеозиды. Такая терапия бывает эффективна в острой фазе заболевания, но часто является недостаточной при хроническом течении заболеваний.
Интерферонотерапия сопряжена с развитием побочных эффектов. Среди негативных проявлений проводимой терапии наиболее часто встречается гриппоподобный синдром, симптомы гастроинтестинальных и психогенных нарушений, признаки миелосупрессии, расстройства функций щитовидной и паращитовидной желез. Многие негативные реакции интерферонов потенцируются синтетическими модифицированными аналогами нуклеозидов (рибаверин, видарабин, рибомидил и др.), широко используемыми в терапии вирусных заболеваний.
Перечисленные осложнения терапии отмечаются в 10-42% клинических случаев хронического гепатита, что позволяет считать подобную терапию достаточно опасной по риску осложнений даже в условиях специализированных стационаров, и на текущий момент отсутствуют эффективные, малотоксичные средства лечения, в частности, хронических вирусных гепатитов, создание которых является одной из актуальных задач современной фармакологической и медицинской науки.
В патентах RU2153350, RU2153351 рассматривается фармакологическое решение по потенцированию противовирусной активности инозина предпочтительно с использованием координационного соединения цисплатина и окисленного глутатиона. Однако цисплатин представляет собой комплексное соединение платины (Pt), применение которой сопряжено с опасностью токсического и мутагенного действия, следовательно и применение содержащего его лекарственного средства ограничено. Сущность изобретения
Задачей данного изобретения является создание противовирусного средства широкого спектра действия, которое эффективно при хроническом течении заболеваний, и обладает минимальными побочными эффектами.
Данная задача решена тем, что предложена комбинация бис-(у-1_-глутамил)-
L-цистеинил-глицина или его соли, инозина и координационных соединений, образованных палладием, медью и (у-1_-глутамил)-1_-цистеинил-глицином. Указанная комбинация далее обозначается как «средство по изобретению».
Предпочтительно, когда в этой комбинации бис-(у-1--глутамил)-1_-цистеинил- глицин представлен в виде динатриевой соли.
Целесообразно, когда мольное соотношение бис-(у-1_-глутамил)-Ь цистеинил-глицина динатриевая соль : инозин : палладий : медь находится в диапазоне 100-10000 : 100-10000 : 1-10 : 1-10, например 1000:1000:1 :1.
Целесообразно в качестве источника палладия выбирать цис- диаминодихлорпалладий, а в качестве источника меди - медь двухлористую.
В одном из воплощений изобретения комбинация может содержать катализатор на основе цис-диаминодихлорида палладия, меди двухлористой и (γ- 1_-глутамил)-1_-цистеинил-глицина, приготовленный in situ.
В альтернативном воплощении такой катализатор может быть приготовлен заранее.
Предложенная комбинация обладает противовирусной активностью, она может быть использована в терапии инфекционных, в частности вирусных, заболеваний.
Предложена также фармацевтическая композиция, включающая в себя указанную комбинацию и фармацевтически приемлемый эксципиент.
Такая фармацевтическая композиция обладает противовирусной активностью и может быть использована в терапии инфекционных, в частности вирусных, заболеваний.
Предложено также противовирусное средство, представляющее собой 'раствор указанной комбинации в ацетатном буфере.
Целесообразно, когда в указанном средстве мольное соотношение 6nc-(y-L- глутамил)-1_-цистеинил-глицина динатриевая соль : инозин : палладий : медь находится в диапазоне 100-10000 : 100-10000 : 1-10 : 1-10, например 1000:1000:1 :1.
Такое средство может быть использовано для лечения вируса, выбранного из группы, включающей в себя вирус гриппа, вирус гепатита С, вирус гепатита В вирус клещевого энцефалита, вирус лихорадки долины Рифт и вирус венесуэльского энцефалита лошадей.
Предложен также способ лечения вирусного заболевания у пациента, нуждающегося в этом, при котором пациенту вводят эффективное количество указанной комбинации, композиции или средства. Вирусное заболевание может быть выбрано из группы, включающей в себя грипп, гепатит С, гепатит В, клещевой энцефалит, лихорадку долины Рифт, венесуэльский энцефалит лошадей.
Описание графических материалов
На Фиг.1 представлен типовой профиль изменения динамики ИФНа в сыворотке крови экспериментальных животных после однократного введения средства по изобретению. По оси ординат указан уровень ИФНа в сыворотке крови (ЕД/мл). Звездочкой отмечены достоверные различия по сравнению с контролем при р<0,05.
Подробное описание изобретения
Средство по изобретению оказывает выраженный противовирусный эффект, а также интерфероногенный эффект.
Инозин представляет собой 1 ,9-Дигидро-9-бета-0-рибофуранозил-6Н-пурин- 6-он (рибофуранозилгипоксантин).
Инозин представляет собой анаболическое средство, стимулятор метаболических процессов, предшественник АТФ. Повышает энергетический баланс, улучшает коронарное кровообращение и обменные процессы в миокарде. Обладает антигипоксическим действием. Применяется при ИБС (инфаркт миокарда, стенокардия), кардиомиопатии, нарушениях ритма сердца, миокардите, миокардиодистрофии, заболеваниях печени (гепатит, цирроз печени, жировая дистрофия печени), язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, открытоугольной форме глаукомы.
Глутатион, гамма-глутаминил-цистеинил-глицин, представляет собой трипептид, образованный остатками трёх аминокислот: глутаминовой кислоты, цистеина и глицина.
Глутатион содержится во всех живых организмах и имеет важное значение для окислительно-восстановительных реакций в связи со способностью сульфгидрильной группы (SH-) цистеина вступать в обратимую реакцию: - 2H
2GSH ^ GS - SG
+ 2H
Восстановленный глутатион (GSH) в данном описании обозначен как (γ-L- глутамил)-1_-цистеинил-глицин. Окисленная форма глутатиона (GSSG) обозначена как бис-(у-1_-глутамил)-1_-цистеинил-глицин.
Если не указано иное, под глутатионом в данном описании подразумевается восстановленный глутатион.
Глутатион способен образовывать соли с катионами, в частности Na.
Комбинация по изобретению содержит d-металлы. Источниками d-металлов, палладия и меди, могут служить их различные соли, которые при растворении в воде приводят к образованию комплексных соединений. В частности, при внесении в водный раствор простых солей меди(Н), таких как CuCI2 или CuBr2, происходит их аквотация, сопровождающаяся последующим гидролизом и образованием в растворе олигоядерных аквагидроксокомплексов меди(П). Палладий также может быть добавлен в виде его подходящих солей, в частности цис- диаминодихлорпалладия,
Реакция получения средства по изобретению GSSGNa2/nH03HH/Pd/Cu = ответствует уравнению:
Figure imgf000005_0001
* Pd(NH3)2CI2 CuCI2
Получение средства по изобретению может быть реализовано несколькими способами.
Один из вариантов реализации процесса получения средства по изобретению заключается в предварительном получении палладиево-медного катализатора (координационных соединений палладия и меди и у-1.-глутамил-1-- цистеинил-глицина) (стадия 1 , пример 1) с последующим внесением полученного раствора катализатора в реакционную массу, проведением окисления,
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) смешиванием полученного раствора с раствором инозина, фильтрации и лиофилизации.
В другом варианте реализации предложен вариант получения палладиево- медного катализатора in situ (пример 2), с последующим проведением окисления, смешиванием полученного раствора с раствором инозина, фильтрации и лиофилизации.
В третьем варианте реализации (пример 3) предложен вариант раздельного получения, с введением дополнительной стадии вакуумно-сублимационной сушки (лиофилизации) раствора динатриевой соли бис-(у-1_-глутамил)-1_-цистеинил- глицина (содержащем коордиинационные соединения палладия и меди) , последующим растворением полученного лиофилизата, смешиванием с раствором инозиина, фильтрацией и лиофилизацией раствора средства по изобретению.
Последний вариант реализации, хоть и является более энерго- и материально-затратным обладает преимуществом связанным с отсутствием побочных процессов, а именно - процессов окисления инозина.
При каталитическом окислении тиолов RSH одной из наиболее важных функций палладия является образование координационных соединений - продуктов присоединения к иону палладия тиолат-ионов RS-, с последующим их окислением и разрушением координационного полиэдра.
Экспериментальные исследования каталитических систем с применением медно-палладиевых катализаторов показывает их значительно большую каталитическую эффективность по сравнению с биядерными тиолатмостиковыми соединениями палладия(М). В отличие от водных растворов окисленного глутатиона GSSG, содержащих тиолатные комплексы меди Cu'k(SR)m, водные растворы, содержащие Pd-Cu катализаторы, по данным 1Н ЯМР, ИК спектроскопии и ВЭЖХ устойчивы к процессам разложения.
Исследования показывают, что в Pd-Cu катализаторах соотношения Pd:Cu оптимально лежат в пределах от 1 :0.2 до 1 :2.
Для процессов мягкого селективного окисления GSH до GSSG, можно сделать вывод о том, что биядерные тиолатмостиковые комплексы палладия(И) выполняют основную функцию катализаторов окисления, а тиолатные комплексы меди(1) следует отнести к химическим сайтам, меняющим их каталитическую активность или, говоря иначе, управляющим их каталитической активностью.
Таким образом, сочетание функциональных биядерных палладиевых координационных соединений, например формулы
Figure imgf000006_0001
с бидентатномостиковой координацией глутатиона с управляющим сайтом типа {Cu k(SR)m}, образующимся из солей меди СиХ2 (где Х= СГ или Вг"), превращающихся в среде тиолов в соответствующие тиолатные производные комплексов меди(1), показывает один из наиболее эффективных подходов к управлению активностью каталитических систем на основе комплексов палладия Pd2" и Си1.
Образование комплексного соединения, включающего Си, Pd и GSH в сопоставимых количествах, обеспечивает биологический эффект предложенной комбинации.
Для получения фармацевтических композиций по изобретению используют фармацевтически приемлемые эксципиенты. В частности, это неорганические или органические носители. Лактоза, кукурузный крахмал или его производные, тальк, стеариновая кислота или ее соли и т.п. могут быть использованы, например, в качестве таких носителей для таблеток, таблеток, покрытых оболочкой, драже и твердых желатиновых капсул. Подходящими носителями для мягких желатиновых капсул являются, например, растительные масла, воски, жиры, полутвердые и жидкие полиолы и т.п. Подходящими носителями для получения растворов и сиропов являются, например, вода, полиолы, сахароза, инвертный сахар, глюкоза и т.п. Подходящими носителями для суппозиториев являются, например, природные или отвержденные масла, воски, жиры, полужидкие или жидкие полиолы и т.п.
Кроме того, фармацевтические композиции могут содержать консерванты, солюбилизаторы, стабилизаторы, смачивающие вещества, эмульгаторы, подсластители, красители, корригенты, соли для регулирования осмотического давления, буферы, маскирующие агенты или антиоксиданты и другие, необходимые компоненты.
В общем, все продукты и способы по изобретению альтернативно могут включать в себя, состоять или по существу состоять из любых подходящих компонентов и стадий, раскрытых в данном описании или известных специалисту из уровня техники, и такие продукты или способы по изобретению могут дополнительно или альтернативно исключать какой-либо компонент, или стадию, или объект, который использован в продукте или способе, известном из уровня техники, или который не является необходимым для достижения технического результата данного изобретения. ПРИМЕРЫ
Далее изобретение поясняется конкретными примерами. Пример 1. Получение средства по изобретению
Стадия 1. 20 мг (94.6 мкмоль) L HC-[Pd(NH3)2CI2] на холоду диспергируют в 20 мл дистиллированной воды, в полученную суспензию вносят 30 мг GSH (97.6 мкмоль) и перемешивают до образования светло-желтого гомогенного раствора.
Стадия 2. В ранее полученную реакционную смесь приливают 5 мл раствора, содержащего 14.52 мг (85.2 мкмоль) дигидрата хлорида меди(Н). рН полученного желто-зеленого раствора катализатора доводят до значения 5.5 - 6.0 0.01 М раствором гидроксида натрия.
Стадия 3.
В стеклянный стакан отвешивают 58.19 г (0.189 моль) GSH, приливают при перемешивании 200 мл дистиллированной воды, охлаждают до 10-15°С. Отдельно растворяют в 50-60 мл дистиллированной воды 7.57 г NaOH (0.189 моль) и полученный раствор приливают к суспензии GSH при интенсивном перемешивании и не позволяя реакционной массе разогреваться выше 15-20°С и перемешивают до образования прозрачного гомогенного раствора. Если необходимо рН реакционной смеси корректируют до 5.5-6.0 0.01 М раствором гидроксида натрия. В полученную реакционную систему приливают ранее приготовленный раствор катализатора, стакан переносят на ледяную баню (5-10°С) и небольшими порциями, в течении 45- 60 мин приливают 100-102 мл (~ 0.1 моля) 1 М свежеприготовленного раствора пероксида водорода при интенсивном перемешивании. Полноту протекания реакции контролируют методом ВЭЖХ.
Отдельно в 150 мл горячей дистиллированной воды (60-70 °С) растворяют 25.38 г (0.095 моль) рибофуранозилгипоксантина (инозин). После полного растворения раствор охлаждают до комнатной температуры и приливают к реакционной смеси. После стерилизующей фильтрации раствор замораживают и подвергают вакуумно-сублимационной (лиофильной) сушке.
В полученном препарате мольное соотношение GSSG - инозин - палладий - медь составляет 1000-1000-1-0.9.
,
Пример 2. Получение средства по изобретению
ЗЗОг (1 ,074 моль) восстановленного глутатиона суспендируют в 3100 мл воды. К полученной суспензии добавляют 42,96 г (1 ,074 моль) гидрооксида натрия в виде 16% водного раствора при постоянном перемешивании и охлаждении. К полученному раствору добавляют 0,1135 г (0,537 ммоль) цис- диаминодихлорпалладия и 0,0915 г (0,537 ммоль) хлорида меди 2-водного и тщательно перемешивая добавляют 304,5г 6% раствора (0,537 моль) лерекиси водорода, контролируя температуру (не более 15°С). После добавления перекиси полученный раствор выдерживают при комнатной температуре 1 ,5 часа. 144 г (0,537моль) инозина растворенного в минимальном количестве воды добавляют к полученному раствору окисленного глутатиона, фильтруют через фильтр 0,22μ и лиофилизируют. Выход бис-(у-1_-глутамил)-1_-цистеинил-глицина рибофуранозил- гипоксантина-динатрия : цис-диаминодихлорпалладий : медь двухлористая (в соотношении 10ОО: 1 :1) составляет 99%. Пример 3. Получение средства по изобретению
Стадия 1
ЗЗОг (1 ,074моль) восстановленного глутатиона суспендируют в 3100мл воды. К полученной суспензии добавляют 42,96г (1 ,074моль) гидрооксида натрия в виде 16% водного раствора. Затем реакционную массу охлаждают и добавляют 0,1 35г (0,537ммоль) цис-диаминодихлорпалладия и 0,0915г (0,537ммоль) хлорида меди 2-водного. К полученному раствору добавляют 304, 5г 6% р-ра (0,537моль) перекиси водорода, контролируя температуру (не более 15°С). Полученный раствор выдерживают при комнатной температуре 1 ,5 часа. Фильтруют через фильтр 0,22 μ и лиофилизируют. Получают 365г динатриевой соли 6nc-(v-L- глутамил)-1_-цистеинил-глицина (содержание воды 4%, Pd - 57мг, Си - 34 мг).
Стадия 2
Лиофилизированную динатриевую соль бис-(у-1_-глутамил)-1_-цистеинил- глицина с предыдущей стадии растворяют в минимальном количестве воды и добавляют к раствору инозина (144г, 0,537 моль) в воде. Полученный раствор фильтруют через фильтр 0,22μ и лиофилизируют. Выход для 2-х стадий 98%.
Пример 4. Получение лекарственной формы средства по изобретению
В емкости для приготовления раствора вместимостью 1 ,0 л к 0,8 л воды для инъекций добавляют 13,6 г ацетата натрия 3-водного, 60 г субстанции средства по изобретению и перемешивают до растворения с последующим доведением общего объема до 1 ,0 л. Определяют значение рН с помощью рН-метра и доводят 20% уксусной кислотой до рН 6,0±0,2. Проводят стерилизующую фильтрацию с использование стерилизующего фильтра с размером пор 0,22 мкм и проводят розлив (1 мл - 1 ампула) стеклянные ампулы. В результате получают 970 ампул (с учетом потерь), содержащих композицию для внутривенного или внутримышечного введения, соответствующую требованиям нормативной документации в течение 3 лет и имеющей следующий состав:
Средство по изобретению 60 г
Ацетат натрия, 3-водный 13,6 г
Уксусная кислота ДО рН 6,0
Вода до 1000 мл
Пример 5. Терапевтическое действие in vivo средства по изобретению, при лечении заболеваний, вызванных патогенными ДНК и РНК вирусами
Инозин характеризует широкий спектр фармакологической активности, включая противовирусное действие, которое может быть усилено его сочетанием с другими биологически активными молекулами. В патентах RU2153350, RU2153351 рассматривается фармакологическое решение по потенцированию противовирусной активности инозина предпочтительно с использованием координационного соединения цисплатина и окисленного глутатиона. Эффект потенцирования достигается за счет способности координационного соединения цисплатина и окисленного глутатиона катализировать комплекс реакций окислительной модификации мишени, повышая ее сродство к воздействию инозина. Если механизм потенцирования противовирусного эффекта инозина связан с каталитической активностью координационных соединений, то средство по изобретению должно оказывать подобное, более выраженное действие, так как в его составе присутствует координационное соединение с более высокой каталитической активностью в сравнении с координационным соединением цисплатина и окисленного глутатиона.
Цель исследования: определение терапевтической эффективности средства по изобретению в лечении различных вирусных инфекций. Исследуемые соединения бис-(у-1_-глутамил)-1_-цистеинил-глицина рибофуранозилгипоксантина- динатрия : цис-диаминодихлорпалладий : медь двухлористая (в соотношении 1000: 1 :1 ) (средство по изобретению)
бис-(у-1_-глутамил)-1.-цистеинил-глицина рибофуранозилгипоксантина- динатрия: цис-диаминодихлорплатина (референс 1) Арбидол лекарственная форма, серия 970609 (референс 2) Экспериментальная модель
- вирус венесуэльского энцефалита лошадей (ВЭЛ) - патогенный штамм Тринидад. Накопление вируссодержащего материала для последующего заражения лабораторных животных осуществляли с использованием 9-1 1 дневных развивающихся куриных эмбрионов - 30-50 шт. Первоначально готовили пять последовательных десятикратных разведений вируссодержащей суспензии. По 0,2 мл каждого разведения вируссодержащей суспензии вносили в аллантоисную полость развивающихся куриных эмбрионов. Место инъекции вируссодержащей суспензии покрывали расплавленным парафином. Затем развивающиеся куриные эмбрионы помещают в термостат при температуре (37±0,5)°С на 18 ч, периодически оценивая их жизнеспособность с помощью овоскопа. По истечении времени инкубации в термостате оценивали жизнеспособность развивающихся куриных эмбрионов и из «тушек» живых эмбрионов готовили 10 % суспензию вируссодержащего материала с использованием физиологического раствора с добавлением антибиотиков (пенициллин из расчета 100 ЕД на 1 , мл, стрептомицин - 200 ЕД на 1 мл). Полученную суспензию центрифугировали в течение 10 мин при 1 ,5-2,0 тыс. об. /мин и температуре плюс (3±0,5) °С. Надосадочную жидкость разливали во флаконы объемом 1 ,0 мл и использовали для дальнейшего заражения экспериментальных животных мышей. Исходный титр вируса 107-108 ЛД5о/мл
- вирус лихорадки долины Рифт (ЛДР) - патогенный штамм 8-87. Накопление вируссодержащего материала для заражения лабораторных животных осуществляют с использование 3-5-дневных мышей-сосунков - 10-15 гол. Первоначально готовили пять последовательных десятикратных разведений вируссодержащего материала. По 0,02 мл каждого разведения вводили в мозг мышам-сосункам, за которыми устанавливали наблюдение в течение 24-48 ч, по окончании которого животных забивали эфиром, извлекали головной мозг и депонировали его по три образца в пенициллиновые флаконы, которые хранили в морозильной камере при температуре минус (20±0,5) °С. В дальнейшем, 10 % суспензию головного мозга использовали в качестве вируссодержащего материала. Исходный титр вируса 105- 106 ЛД50/мл;
- вирус клещевого энцефалита (КЭ), - патогенный штамм Абсетаров. Накопление вируссодержащего материала для заражения лабораторных животных проводили на мышах-сосунках. Первоначально готовили пять последовательных десятикратных разведений вируссодержащего материала, которым служил центрифугат 10 % суспензии мозга зараженных ранее мышей или регидратированный из лиофильного состояния вируссодержащий материал. По 0,02 мл каждого разведения вводили в мозг мышам-сосункам, за которыми устанавливали наблюдение в течение 24-48 ч, по окончании которого животных забивали эфиром, извлекали головной мозг и депонировали его по три образца в пенициллиновые флаконы, которые хранили в морозильной камере при температуре минус (20±0,5) °С. В дальнейшем, 10 % суспензию головного мозга использовали в качестве вируссодержащего материала. Исходный титр вируса 102- 103ЛД50/мл.
- вирус гриппа А штамм A/Aichi/02/68 (H3N2). Получение вируссодержащего материала проводили на 9-1 1 -суточных развивающихся куриных эмбрионах. Последующее накопление вируссодержащего материала для заражения лабораторных животных осуществляли с использованием 5 мышей, которые были заражены вирус-содержащей аллантоисной жидкостью, содержащей патогенные штаммы A/Aichi/02/68 (H3N2). На 3 сутки после заражения их легкие были изолированы, гомогенизированы в 10-кратном объеме стерильного физиологического раствора, после чего инфекционная активность вируса в гомогенате была определена в отдельном эксперименте при помощи титрования по летальности t на животных. Титр вируса рассчитывали по методу Рида и Менча (Am.J. Нуд. ,1938,27:493-497).
Исследования по оценке эффективности средства по изобретению выполнены на белых неинбредных мышах-самцах массой 16-18 г (360 голов).
Применительно к каждому возбудителю величину ЛД50 определяли на белых неинбредных мышах с расчетом этого критерия по методу Кербера в модификации И.П.Ашмарина и А.А.Воробьева.
Эффективность изучаемых препаратов определяли по сопоставлению величин показателей выживаемости животных в подопытных " (получавших соответствующие препараты) и контрольных группах. Процент выживших животных в подопытных и контрольных группах определяли по таблицам Генеса B.C. При этом наблюдение за инфицированными животными проводили в течение 21 суток, ежедневно регистрируя число живых и павших в подопытных и контрольных группах. Методы статистической обработки результатов
Статистическую обработку результатов экспериментов проводили на персональном компьютере, используя специальные программы, реализующие традиционные статистические методы.
Результаты изучения противовирусной активности средства по изобретению
На всех экспериментальных моделях особо опасных вирусных инфекций (ООВИ) и гриппа эффективность средства по изобретению и препаратов сравнения оценивали при их применении по двум схемам:
- за 24 ч до заражения, одновременно с заражением, через 24 ч, 48 ч и 72 ч после заражения (схема N° 1 - экстренной профилактики);
- одновременно с заражением, через 24 ч, 48 ч и 72 ч после заражения (схема 2 - раннего этиотропного лечения). "
Средство по изобретению и референс 1 вводили подкожно в объеме 0,5 мл в разовой дозе 30 мг/кг массы тела (10 мкг/мышь). '
В качестве референс-препарата при лечении гриппозной инфекции использовали арбидол лекарственная форма, серия 970609 (референс 2) который вводили через 1 ч после заражения и далее перорально в течение пяти суток 1 раз в сутки в дозе 60 мг/кг.
Эффективность средства по изобретению при экспериментальной вирусной инфекции венесуэльском энцефаломиелите.
Результаты проведенных исследований приведены в таблице 1.
Таблица 1
Эффективность средства по изобретению в качестве препарата экстренной профилактики и этиотропного лечения экспериментальной вирусной инфекции - венесуэльского энцефаломиелита
Figure imgf000013_0001
2 10 0 100* референс 1 1 12 10 60 40
2 10 40 60
2 12 10 50 50
2 10 40 60
Контроль Не 12 10 100 0 заражения вводили
Не 2 10 100 0 вводили
* - различия с показателями в контроле достоверны при р<0,05.
Представленные в таблице 1 данные свидетельствуют о том, что оцениваемые препараты оказывали протективное действие в отношении экспериментального ВЭЛ. Наиболее эффективным в данных условиях оказалось средство по изобретению. При этом, если препарат применяли по схеме 1 (за 24 ч до заражения, одновременно с заражением, через 24 ч, 48 ч и 72 ч после заражения), то вне зависимости от заражающей дозы вируса ВЭЛ выживаемость инфицированных мышей находилась на уровне 100 % на фоне 100 % летальности в контроле. Если же препарат применяли по схеме 2 (одновременно с заражением, через 24 ч, 48 ч и 72 ч после заражения), то в этих условиях в зависимости от заражающей дозы возбудителя протективный эффект находился на уровне 100 % (при заражении возбудителем в дозе 12 ЛД50) и 100 % (при заражении возбудителем в дозе 2 ЛД50). При применении референса 1 показатели защиты в зависимости от заражающей дозы возбудителя были на 40-60 % ниже, чем при применении средства по изобретению.
Таким образом, на основании проведенных исследований можно заключить, что среди оцененных препаратов наиболее эффективной в отношении экспериментальной инфекции ВЭЛ оказалось средство по изобретению. Средство по изобретению, применяемое по схеме экстренной профилактики, обеспечивало защиту 100 % инфицированных животных на фоне 100 % летальности в контроле.
Эффективность средства по изобретению при экспериментальной вирусной инфекции - лихорадки долины Рифт.
Результаты проведенных исследований приведены в таблице 2. Таблица 2
Эффективность средства по изобретению в качестве препарата экстренной профилактики и этиотропного лечения экспериментальной вирусной инфекции - лихорадки долины Рифт
Figure imgf000015_0001
Представленные в таблице 2 данные свидетельствуют о том, что наилучший протективный и терапевтический эффект в отношении ЛДР был получен при применении средства по изобретению. Вне зависимости от схемы применения препарат обеспечивал 100 % защиту инфицированных мышей на фоне 100 % летальности в контроле. Референс 1 в данных условиях был малоэффективен.
Эффективность средства по изобретению при экспериментальной вирусной инфекции - экспериментальном клещевом энцефалите.
Результаты исследований приведены в таблице 3. Таблица 3
Эффективность средства по изобретению в качестве препарата экстренной профилактики и этиотропного лечения экспериментальной вирусной инфекции - экспериментального клещевого энцефалита
Figure imgf000016_0001
Как следует из представленных данных, все оцененные препараты при применении у животных, инфицированных возбудителем в дозе 2 ЛД50, проявляли практически одинаковую защитную эффективность, обеспечивая выживаемость 80-100 % инфицированных мышей на фоне их 100 % летальности в контроле. В то же время, если препараты применяли у животных, инфицированных возбудителем в дозе 12 ЛД5о, то в этих условиях средство по изобретению оказало более выраженное действие.
Эффективность средства по изобретению при экспериментальной вирусной инфекции - грипп (патогенный штамм A/Aichi/02/68).
Результаты исследований приведены в таблице 4. Таблица 4
Эффективность средства по изобретению в качестве препарата экстренной профилактики и этиотропного лечения экспериментальной вирусной инфекции - грипп (патогенный штамм A/Aichi/02/68).
Figure imgf000017_0001
Полученные результаты свидетельствуют о том, что средство по изобретению по выраженности специфической активности в отношении гриппозной инфекции у белых мышей, интраназально инфицированных вирусом гриппа, штамм A/Aichi/02/68 (H3N2), выше чем у Арбидола.
Заключение
Совокупность результатов проведенных исследований позволяет сделать заключение о том, что средство по изобретению характеризует профилактическое и терапевтическое действие в отношении различных вирусных заболеваний, вызываемых как ДНК, так и РНК вирусами.
Пример 6. Определение способности средства по изобретению индуцировать продукцию интерферона
Терапевтическая эффективность средства по изобретению в отношении различных вирусных заболеваний, вызываемых как ДНК, так и РНК вирусами в числе прочего может быть обусловлена его способностью увеличивать эндогенную продукцию интерферона, биологически активного вещества, обладающего выраженной противовирусной активностью.
Цель исследования: Определение способности средства по изобретению стимулировать продукцию интерферона.
Исследуемое соединение: - бис-( γ- L-глутамил)- L - цистеинил-глицина рибофуранозилгипоксантина-динатрия цис-диаминодихлорпалладий медь двухлористая (в соотношении 1000:1 :1) (средство по изобретению)
Методика эксперимента
Оценку интерфероногенных свойств средства по изобретению проводили методом титрования интерферона альфа (ИФНа) в сыворотке крови подопытных животных, получавших средство по изобретению в дозе 30 мг/кг, эффективной по результатам опытов (см. пример 3). Препарат вводили однократно подкожно. В контрольной группе мышей применяли подкожное введение плацебо (0,85 % раствор хлорида натрия). Забор крови у мышей подопытных (получали один из оцениваемых препаратов) и контрольной групп производили в стерильных условиях из ретроорбитального синуса через 2, 4, 8, 16, 24, 32, 36, 40 и 48 ч после инъекции препарата. В одной пробе объединяли кровь от пяти мышей. Динамику накопления интерферона исследовали в сыворотках, приготовленных по стандартной методике. Для титрования активности ИФНа в сыворотке крови экспериментальных животных была использована культура клеток L-929 (перевиваемая культура клеток мышиных фибробластов), 153-й пассаж, полученная из Института цитологии РАН (г. Санкт-Петербург). Титрование ИФНа в полученных пробах проводили микрометодом. Культуру клеток L-929, разведенную ростовой средой до необходимой концентрации (3-4 105 клеток/мл), вносили в лунки 96-луночных пластиковых панелей и инкубировали в термостате в течение 24 ч. На протяжении всего процесса титрования инкубация клеточных культур проходит при одинаковых условиях: температуре плюс 37 °С в атмосфере с 5% С02 и 98 % влажности. После образования на дне лунок клеточного монослоя ростовую среду из панели удаляют и вносят поддерживающую среду, в которой производят последовательные двукратные разведения тестируемых проб (в парных лунках). По окончании суточной инкубации тестируемые пробы удаляют и вносят тест-вирус ЕМС в рабочем разведении (100 ЦПД50). Через сутки производят учет результатов с помощью инвертированного микроскопа. Титр ИФН - величина, обратная последнему разведению сыворотки, в котором наблюдается 50 % защита от ЦПД тест-вируса. Результаты исследования
Динамика изменений ИФНав сыворотке крови экспериментальных животных после однократного введения средства по изобретению представлена на Фиг.1.
Как следует из полученных данных уровень ИФНа начинал увеличиваться через два часа с момента введения средства по изобретению в 5-6 раз, достигал максимума в течении 16-24 часов, превышая фоновые значения в 45 - 50 раз, возвращаясь к нормальным величинам к 48 часам после воздействия средства по изобретению. Динамика изменения уровня ИФНа свидетельствует о наличии интерфероногенной активности у средства по изобретению. Эндогенный ИФНа обладает определенным преимуществом перед препаратами экзогенного интерферона: при введении в организм интерфероногенов вырабатывается интерферон, не обладающий антигенностью; не возникает негативных эффектов, присущих препаратам экзогенного ИФНа; синтез индуцированного ИФНа в организме сбалансирован и подвергается контрольно-регуляторным механизмам (репрессор-трансляции), обеспечивающим защиту организма от перенасыщения интерфероном; однократное введение интерфероногенов обеспечивает относительно длительную циркуляцию эндогенного ИФНа. Действие средства по изобретению соответствует перечисленным эффектам интерфероногенов.
Таким образом, средство по изобретению характеризует способность усиливать продукцию интерферона альфа.
Пример 7. Терапевтическая эффективность средства по изобретению - GSSGNag/инозин/РоУСи при хроническом вирусном гепатите С (ХВГС)
Пациентка N1 : 48 лет.
Диагноз: ХВГС, фаза репликации (PCR HCV+ - 3,60x107копий/мл = 9,00x106
IU/мл), умеренно выраженная степень активности. Хронический аутоиммунный тиреоидит. Гипотиреоз.
Больна на протяжении 20 лет.
В анамнезе непереносимость специфической противовирусной терапии, включая пегилированный интерферон, рибавирин и другие противовирусные препараты, индукторы интерферона. Постоянно принимает L-Тироксин 150 мг - утром, раз в сутки.
Жалобы: слабость, ощущение тяжести в правом подреберье, привкус во рту, отсутствие аппетита, плохой сон, раздражительность.
Последние пять лет часто отмечала появление ноющих болей в правом подреберье, слабость, периодическое изменение цвета мочи. После обследования (результаты табл.5, 3 столбик), проведено лечение в дневном стационаре, лекарственная форма средства по изобретению, 60 мг - внутримышечно, 3 раза в неделю, с двухдневным перерывом (суббота, воскресенье).
Таблица 5.
Динамика изменения значений лабораторно диагностических показателей на фоне терапии лекарственной формой средства по изобретению
Показатель Рефферентное До Через 4 Через 12 Через значение лечения недели недель 24
недели
1 2 3 4 5 6
Вирусная нагрузка 9,60x10' 3.03 х10ь 1.42 x10й 2.65 PCR HCV хЮ3 (копий/мл)
Биохимический анализ крови
АЛТ (U/L) 0-45 194 156 95 64
ACT (U/L) 5-34 206 198 112 83
ГГТП (U/L) 9 - 36 216,75 186,24 164,65 96,20
ALP(U/L) До 240 302 298 246 180
Билирубин общий 0,2-1 ,2 6,45 3,31 1 ,45 0,96 (мг/дл)
Билирубин прямой 0-0,5 4,45 1 ,52 1 ,02 0.44 (мг/дл)
Общий белок (г/дл) 6,4-8,3 6,0 6,3 6,7 7,4
Альбумин (г/дл) 3,2-5,0 3,2 3,5 3,7 4,2
Глобулины (г/дл) 2,7-3,3 2,8 2,7 3,0 3,0
Алб./Глоб. 1 ,2-2,0 1 ,14 1 ,3 1 ,23 1 ,4
Ферритин (нг/мл) 6-223 446,73 394,66 356,07 256,21
Железо крови 25 - 156 201 ,2 200,07 184,27 159,87 мкг/дл
Анализ крови
Эритроциты 4,0-5,6 3,58 3,67 4,98 4,82 х1012/Л Гемоглобин (г/дл) 12-16 8,7 9,3 10.1 11 ,8
Гематокрит(%) 27-31 21 27 27 31
Лейкоциты х109/Л 4-11 3,6 3,62 4,8 5,2
Нейтрофилы (%) 45-70 40 44,9 50 56 базофилы (%) 0,5-1 0 0,6 0,8 1
Эозинофилы (%) 1-5 1 2,4 2,2 2
Моноциты (%) 1-8 4 4,3 4 3
Лимфоциты (%) 25-40 55 48,1 43 38
Тромбоциты 180-320 90,2 133 159 212 (х109/л)
Свертывающая система крови
Протромбиновое 10-12,5 17,3 15,3 14,1 11 ,1 время (сек)
Активированное 20-36 42 40 36 30 парциальное
протромбиновое
время(сек)
Тромбиновое 10-13,5 17,6 16,0 13,9 12,8 время(сек)
Парциальное 10-12 17,4 16,1 12,7 11 ,9 тромбиновое
время(сек)
Длительность менее 4 минут 8 8 6 4 кровотечения (мин)
Время 5-10 мин 9 9 8,3 8 свертывания крови
(мин)
Лекарственная форма средства по изобретению хорошо переносится. После инъекции пациентка отмечает прилив сил, улучшение настроения. Объективным критерием ответа на терапию является динамика изменения вирусной нагрузки, которая через месяц уменьшилась в три раза, через три месяца в 6о раз и более чем на четыре логарифма через шесть месяцев терапии. Снижение вирусной нагрузки сочеталось со снижением интенсивности реакций цитолиза (нормализация трансаминаз к завершению терапии), восстановлением физиологически оптимальной функциональной активности гепатоцитов (нормализация уровня белка, значений показателей Пигментного и других видов обмена). Терапевтическое действие препарата привело к нормализации клеточного состава крови, активности состояния свертывающей системы.
При обследовании печень выступает на 0,5 см из-под реберной дуги. Край печени мягкий, безболезненный.
Из особенностей восприятия терапии следует отметить то, что через каждые три недели требовалось уменьшения дозы L-Тироксина. К завершению терапии доза L-Тироксина была снижена в два раза.
Таким образом, использование лекарственной формы средства по изобретению позволило провести терапию хронического вирусного гепатита С при непереносимости средств специфической противовирусной терапии, что является одним из доказательств противовирусной активности средства по изобретению.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Комбинация бис-(у-1_-глутамил)-1_-цистеинил-глицина или его соли, инозина и координационных соединений, образованных палладием, медью и (γ-L- глутамил)-1_-цистеинил-глицином.
2. Комбинация по п.1 , в которой бис-(у-1_-глутамил)-1_-цистеинил-глицин представлен в виде динатриевой соли.
3. Комбинация по п.1 , где мольное соотношение бис-(у-1_-глутамил)-..- цистеинил-глицина динатриевая соль : инозин : палладий : медь находится в диапазоне 100-10000 : 100-10000 : 1 -10 : 1 -10.
4. Комбинация по п.1 где мольное соотношение бис-(у-1_-глутамил)-..- цистеинил-глицина динатриевая соль : инозин : палладий : медь составляет 1000:1000:1 :1. "
5. Комбинация по п.1 , где в качестве источника палладия выбран цис- диаминодихлорпалладий.
6. Комбинация по п.1 , где в качестве источника меди выбрана медь двухлористая.
7. Комбинация по пп. 1-6, содержащая катализатор на основе цис- диаминодихлорида палладия, меди двухлористой и (у-1_-глутамил)-1_-цистеинил- глицина, приготовленный in situ.
8. Комбинация по пп. 1-6, содержащая катализатор на основе цис- диаминодихлорида палладия, меди двухлористой и у-1_-глутамил)-1_-цистеинил- глицина, приготовленный заранее.
9. Комбинация по п.1 , обладающая противовирусной активностью.
10. Комбинация по п.1 , для применения в терапии инфекционных, в частности вирусных, заболеваний.
11. Фармацевтическая композиция, включающая в себя комбинацию по любому из п.п.1-12 и фармацевтически приемлемый эксципиент.
12. Фармацевтическая композиция по п.11 , обладающая противовирусной активностью.
13. Фармацевтическая композиция по п.12, для применения в терапии инфекционных, в частности вирусных, заболеваний.
14. Противовирусное средство, представляющее собой раствор комбинации по п.1 в ацетатном буфере.
15. Средство по п.14, где мольное соотношение бис-(у-1_-глутамил)-Ь- цистеинил-глицина динатриевая соль : инозин : палладий : медь находится в диапазоне 100-10000 : 100-10000 : 1-10 : 1-10.
16. Средство по п.15, где соотношение бис-(у-1_-глутамил)-1_-цистеинил- глицина динатриевая соль : инозин : палладий : медь составляет 1000:1000:1 :1.
17. Средство по п.14, для лечения вируса, выбранного из группы, включающей в себя вирус гриппа, вирус гепатита С, вирус гепатита В вирус клещевого энцефалита, вирус лихорадки долины Рифт и вирус венесуэльского энцефалита лошадей.
18. Способ лечения вирусного заболевания у пациента, нуждающегося в этом, при котором пациенту вводят эффективное количество комбинации по любому из пп.1 -10, композиции по любому из пп. 11 -13 ил и средства по пп.14-17.
19. Способ по п.18, где вирусное заболевание выбрано из группы, включающей в себя грипп, гепатит С, гепатит В, клещевой энцефалит, лихорадку долины Рифт, венесуэльский энцефалит лошадей.
PCT/RU2011/001056 2011-01-11 2011-12-30 Противовирусное средство Ceased WO2012096596A1 (ru)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201180069029.XA CN103582646A (zh) 2011-01-11 2011-12-30 一种抗病毒药剂
KR1020137021117A KR20140047576A (ko) 2011-01-11 2011-12-30 항 바이러스제
BR112013017709A BR112013017709A2 (pt) 2011-01-11 2011-12-30 agente antiviral
JP2013549383A JP2014502633A (ja) 2011-01-11 2011-12-30 抗ウイルス剤
AU2011354772A AU2011354772A1 (en) 2011-01-11 2011-12-30 Antiviral agent
US13/978,836 US20130281362A1 (en) 2011-01-11 2011-12-30 Antiviral agent
EP11855892.3A EP2664621A4 (en) 2011-01-11 2011-12-30 virucidal

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2011101479/04A RU2451010C1 (ru) 2011-01-11 2011-01-11 Палладиево-медные катализаторы гомогенного селективного окисления тиольных групп, комбинация и композиция на их основе и способ терапевтического воздействия
RU2011101479 2011-01-11

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2012096596A1 true WO2012096596A1 (ru) 2012-07-19

Family

ID=46230722

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2011/001055 Ceased WO2012096595A1 (ru) 2011-01-11 2011-12-30 Палладиево-медные катализаторы гомогенного селективного окисления тиольных групп
PCT/RU2011/001056 Ceased WO2012096596A1 (ru) 2011-01-11 2011-12-30 Противовирусное средство

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2011/001055 Ceased WO2012096595A1 (ru) 2011-01-11 2011-12-30 Палладиево-медные катализаторы гомогенного селективного окисления тиольных групп

Country Status (9)

Country Link
US (2) US20130289108A1 (ru)
EP (2) EP2664614A4 (ru)
JP (2) JP2014510618A (ru)
KR (2) KR20140016251A (ru)
CN (2) CN103380108A (ru)
AU (2) AU2011354771A1 (ru)
BR (1) BR112013017709A2 (ru)
RU (1) RU2451010C1 (ru)
WO (2) WO2012096595A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4233857A1 (en) 2022-02-28 2023-08-30 CIIMAR - Centro Interdisciplinar de Investigação Marinha e Ambiental Bioactive compounds obtained from cyanobactera leptothoe sp. lege 181152

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2659161C1 (ru) * 2017-11-17 2018-06-28 Общество С Ограниченной Ответственностью "Ива Фарм" Фармацевтическая композиция, включающая дисульфид глутатиона и глутатион дисульфид s-оксид
CN111774096B (zh) * 2020-07-14 2021-12-03 厦门大学 一种用硫醇类配体修饰的催化剂及其制备方法与应用
CN116116448B (zh) * 2023-01-28 2024-08-13 青岛农业大学 一种Cu(I)-N-C纳米酶、制备方法及其在甲基硫菌灵检测中的应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2153351C2 (ru) 1995-12-14 2000-07-27 Закрытое акционерное общество "ВАМ" Средство для регулирования эндогенной продукции цитокинов и гемопоэтических факторов (варианты) и способ его использования
RU2153350C1 (ru) 1998-11-23 2000-07-27 Закрытое акционерное общество "ВАМ" Композит гексапептида со стабилизированной дисульфидной связью с веществом металлом, фармацевтические композиции на его основе, способы их получения и применения для лечения заболеваний на основе регуляции метаболизма, пролиферации, дифференцировки и механизмов апоптоза в нормальных и патологически измененных тканях
RU2245340C2 (ru) * 1999-04-13 2005-01-27 Анормед, Инк. Цисплатиновый комплекс и способ его получения

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3224981A (en) * 1961-12-29 1965-12-21 Ethyl Corp Supported copper oxide and palladium catalyst composition
FR1596449A (ru) * 1968-10-12 1970-06-15
US4226785A (en) * 1979-10-04 1980-10-07 Eastman Kodak Company Process for dehydrogenation of sterols to produce Δ4-3-ketosteroids
US4521530A (en) * 1983-06-15 1985-06-04 Teledyne Industries, Inc., Teledyne Water Pik Catalyst of palladium, copper and nickel on a substrate
DE3411385A1 (de) * 1984-03-28 1985-10-10 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen Verfahren zur herstellung von o,o'-dithiobenzamiden
RU2089179C1 (ru) * 1995-12-14 1997-09-10 Закрытое акционерное общество "ВАМ" Стимулятор эндогенной продукции цитокинов и гепопоэтических факторов и способ его использования
US6544923B1 (en) * 1999-08-25 2003-04-08 Massachusetts Institute Of Technology Surface-confined catalytic compositions
EP1208238B1 (en) * 1999-08-27 2008-11-12 Matrix Technologies Corporation Methods of immobilizing ligands on solid supports
US20030073618A1 (en) * 2001-02-08 2003-04-17 Kozhemyakin Leonid A. Compounds comprising disulfide-containing peptides and nitrogenous bases, and medical uses thereof
US20030078232A1 (en) * 2001-08-08 2003-04-24 Elfatih Elzein Adenosine receptor A3 agonists
TWI228051B (en) * 2003-05-19 2005-02-21 Well Being Biochemical Corp Anti-bacterial, anti-viral, and anti-fungus composition, its preparation and use
PL3524611T3 (pl) * 2003-05-20 2021-06-14 Immunogen, Inc. Udoskonalone czynniki cytotoksyczne zawierające nowe maitansynoidy
DE10323839B3 (de) * 2003-05-23 2004-10-21 Thioplast Chemicals Gmbh & Co.Kg Oxidation von Mercaptoethanol
US7381683B1 (en) * 2004-10-28 2008-06-03 Nanostellar, Inc. Method of producing multi-component catalysts
UY29198A1 (es) * 2004-11-09 2006-05-31 Cancer Rec Tech Ltd Derivados sustituidos de quinazolinona y derivados sustituidos de quinazolina-2, 4-diona, composiciones conteniéndolos, procedimientos de preparación y aplicaciones
RU2008106419A (ru) * 2008-02-21 2009-08-27 Закрытое акционерное общество "Ива фарм" (RU) Лекарственные средства на основе олигоядерных координационных соединений d-металлов, способ терапевтического воздействия на организм пациента и способ повышения терапевтической эффективности фармакологически активного вещества

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2153351C2 (ru) 1995-12-14 2000-07-27 Закрытое акционерное общество "ВАМ" Средство для регулирования эндогенной продукции цитокинов и гемопоэтических факторов (варианты) и способ его использования
RU2153350C1 (ru) 1998-11-23 2000-07-27 Закрытое акционерное общество "ВАМ" Композит гексапептида со стабилизированной дисульфидной связью с веществом металлом, фармацевтические композиции на его основе, способы их получения и применения для лечения заболеваний на основе регуляции метаболизма, пролиферации, дифференцировки и механизмов апоптоза в нормальных и патологически измененных тканях
EP1131340B1 (en) * 1998-11-23 2004-10-13 Novelos Therapeutics, Inc. Hexapeptide with the stabilized disulfide bond and derivatives thereof regulating metabolism, proliferation, differentiation and apoptosis
RU2245340C2 (ru) * 1999-04-13 2005-01-27 Анормед, Инк. Цисплатиновый комплекс и способ его получения

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
REED; MUENCH, AM.J.HYG., vol. 27, 1938, pages 493 - 497
See also references of EP2664621A4 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4233857A1 (en) 2022-02-28 2023-08-30 CIIMAR - Centro Interdisciplinar de Investigação Marinha e Ambiental Bioactive compounds obtained from cyanobactera leptothoe sp. lege 181152

Also Published As

Publication number Publication date
EP2664614A1 (en) 2013-11-20
EP2664621A1 (en) 2013-11-20
AU2011354772A1 (en) 2013-08-29
AU2011354771A1 (en) 2013-07-11
KR20140016251A (ko) 2014-02-07
KR20140047576A (ko) 2014-04-22
CN103582646A (zh) 2014-02-12
EP2664621A4 (en) 2014-11-26
US20130289108A1 (en) 2013-10-31
JP2014502633A (ja) 2014-02-03
JP2014510618A (ja) 2014-05-01
BR112013017709A2 (pt) 2019-01-15
WO2012096595A1 (ru) 2012-07-19
CN103380108A (zh) 2013-10-30
RU2451010C1 (ru) 2012-05-20
EP2664614A4 (en) 2014-11-26
US20130281362A1 (en) 2013-10-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2849214B2 (ja) インターフェロンを含有する治療用組合せ
HK74697A (en) Pharmaceutical therapeutic use of glutathione derivatives
ES2312884T3 (es) Composiciones antivirales que comprenden derivados de acido fenilacetico.
TWI584805B (zh) Prevention and treatment of influenza virus infectious diseases
EP0604433A1 (en) Composition and method for disease treatment
JPH0717510B2 (ja) Ａｉｄｓの予防及び治療剤
CA1209037A (en) Medicament comprising the product of the reaction of a c.sub.1 to c.sub.6 carboxylic acid on a basic amino acid
US5248697A (en) Enhancement of glutathione levels with glutamine
WO2012096596A1 (ru) Противовирусное средство
JPH11504000A (ja) 造血前駆細胞の増殖を促進するチオール類
NO174834B (no) Fremgangsmåte til fremstilling av farmasöytisk kombinasjonspreparat
CN1090506C (zh) 溶菌酶二聚体的新应用
RU2738719C1 (ru) Средство для лечения коронавирусных, ретровирусных инфекций и гепатита с
BR112017015340B1 (pt) Uso de taurina na prevenção e/ou tratamento de doenças induzidas por vírus do gênero coronavírus e/ou gênero rotavírus
EP0255420B1 (en) Antiviral agent for inhibiting growth of virus of acquired immune deficiency syndrome (aids)
JPH02145527A (ja) エイズ治療および阻害剤
CN104415023A (zh) 预防或/和治疗胰岛素抵抗及相关病症的组合物
RU2096034C1 (ru) Фармацевтическая композиция, индуцирующая биосинтез глутатиона, активность глутатионтрансферазы и оказывающая антитоксическое, радиопротекторное и антигипоксическое действие, и способы лечения, профилактики и защиты с ее использованием
EP3017816B1 (en) Diindolylmethane-based medicinal agent and use thereof to treat influenza and viral respiratory infections
JPH03135918A (ja) 免疫賦活剤
RU2172631C2 (ru) Индуктор интерферона пролонгированного действия
WO2022019742A1 (es) Paquete farmaceutico para prevención y/o tratamiento de enfermedad por covid-19 y uso del mismo
CN1798553A (zh) 冠状病毒灭活剂
RU2482868C1 (ru) Средство для лечения диабета, фармацевтическая композиция и способ лечения заболеваний
NL2025294B1 (en) Antimicrobial peptide for treatment and controlling virus infections

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 11855892

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 13978836

Country of ref document: US

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2013549383

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2011855892

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20137021117

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2011354772

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20111230

Kind code of ref document: A

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01A

Ref document number: 112013017709

Country of ref document: BR

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 112013017709

Country of ref document: BR

Kind code of ref document: A2

Effective date: 20130710