JPH02145527A - エイズ治療および阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明はエイズ（ＡＩＤＳ、後天性免疫不全症）の治療
剤およびエイズ・ウィルスの感染と感染後の発症を阻害
する薬剤に関する。

（従来の技術） エイズはＨＩＶ（ヒト免疫不全ヴイルス；エイズ・ウィ
ルス）により発症する予後不良の免疫不全症として注目
を集めている疾病である。

これは、Ｉ（ＩＶにより、おもに、ヘルツｆ　−Ｔ細胞
が感染破壊されることにより、免疫防禦不全のため、重
い日和見感染、カリニ肺炎、カポジ肉腫及びＡＩＤＳ−
脳障害などの臨床像を特徴とし、非常な高率で死に至る
。

又、ＨＩＶ感染に関連した状態として、無症状のキャリ
ヤー状態、進行性一般すンノに腺症（ＰＯＬ）、リンフ
ォアデノパシー症候群（ＬＡＳ　）、エイズ関連コンプ
レックス（Ａ　ＢＣ）及びエイズも（ＡＩＤＳ）がある
。現在までに、有効な抗エイズ療法は、見い出されてい
ない。わずか番こ、３′−アジドチミジン（ＡＺＴ）が
、カリニ肺炎のＡＩＤＳ患者に明らかな延命効果を与え
てＧする１こすぎない。

ＡＺＴは、ＨＩＶの逆転写酵素阻害物質であり、この効
果は、臨床症状、神経症状の改善並び；こ特定の免疫学
的機能の一時的な回復を伴っている。

（三屋等Ｎａｔｕｒｅ　３２５　７７３　１９８７　）
　シかし、骨湖に対する毒性が強く、治療をうけた患者
の約５０％で輸血を必要としているのが現状である。

（発明が解決しようとする課題） 人体に重篤な副作用を与えずに、ＨＩＶを特異的に殺す
殺ウイルス剤は、現在のところ発見されていない。

又、ＡＺＴのような逆転写酵素の阻害剤も副作用等の問
題や延命効果を示すにすぎない点で、有力な薬剤と考え
られない。

本発明はエイズを治療し、ＨＩ　Ｖの感染および感染後
の工・イズ発症を阻害する薬剤を提供することを意図す
るものである。

（課題を解決するための手段） 本発明者らは、エイズウィルスとＴ−細胞の相互作用、
即ち、感染部位に着目して研究を行なった。

エイズウィルスは、外被糖たんば＜（ｆｐ−１２０）を
もっている。このｇｐ−１２０とＴ細胞のレセプター（
ＣＤ−４）との結合部位についでは、種々研究され、ｌ
ｐ−１２０のＮ末端より３９７番目より４３９番目のア
ミノ酸配列部位の中に、ＣＤ−４との結合部位があるこ
とが、わかっている。（、ｌ、ａｕｒｅｎＣｅ、　Ａ、
　Ｌ、　ｅｔ　ａｌ　Ｃｅ１ｌ？ 又、最近、ｆｐ−１２０のＮ末端より３０８番目より、
３３２番目の２４個のアミノ酸（エピトープβという）
が、ＨＩＶ感染に重要な役割をになっていることが判明
した。（Ｔ、　Ｊ、ＰａｃｋｅｒＰｒｏｃ、　Ｎａｔｔ
！、　Ａｃａｄ、　８ｃｉ、　ＵＳＡ　　８５　１９３
２１９８８　；　Ｓ、Ｍａｔｓｕｓｈｉｔａ、　Ｊ、　
Ｖｉｒｏｌ、　６２　（６）２１０７　１９８Ｂ）即ち
、ｊＦｐ−１２０のエピトープβのモノクローナル抗体
が、ＨＩＶ感染を阻害することが、本発明者らを含む研
究者により開明された。

そこで、本発明者らは、エピトープβと相同性のあるア
ミノ酸配列をもつ蛋白質をＮａ　ｔ　ｉｏｎａｊ２Ｂｉ
ｏｍｅｄｉｃａｌｌｅｓｅａｒｃｈ　Ｆｏｕｎｄａｔｉ
ｏｎのデーターヘースを用いて検策した結果、９０個の
蛋白質がリストアツブされ、そのうちの１１個はプロテ
アーゼ及びプロテアーゼインヒビターであった。

その中でも、最も相同性の高い物質は、■ｎｔｅｒ−ａ
　Ｔｒｙｐｓｉｎ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　（Ｉ　Ｔ　Ｉ
　）　テアリ、ヒトのみならず、種々の動物のＩＴＩが
、エピトープβと相同性を有していた。

また、相同性のある部位のｋｒｆ（アルギニン）はＩＴ
Ｉのプロテアーゼ活性阻害部位であった。

エピトープβはｌｐ−１２０の可変部であるが、ｈｒｙ
を中心とした、数個のアミノ酸配列は、種々のＨＩ　Ｖ
　−１ストレインで保存されていた。そこで、我々は、
エピトープβの２４個のアミノ酸を含む３３個のアミノ
酸配列のペプチドを合成し、トリプシン活性阻害を検討
した結果、ＢＯＣｐｈｅ−８ｅｒ−Ａｒｅ　−Ｍ　ＣＡ
を合成基質とした、Ｔｒｙ−ｐＳ１ｎ活性を３０％阻害
することが判明した。

即ち、エピトープβは、プロテアーゼインヒビター活性
をもつか、又は、プロテアーゼの極めてよい基質である
ことが、示唆された。

ＩＴＩは、ヒト血清中に存在する糖蛋白質である。即ち
、５ＤＳ−ＰＡＧＥによる見かけの分子量は、約１８０
，０ｆ）０であり、−本鎖の糖を約８％含む酸及び熱に
不安定な糖蛋白質である。

一方、ヒト尿中より精製されたヒト尿トリプシンインヒ
ビター（以下口ＴＩという）は、８ＤＳ−ＰＡＧＥによ
る見かけの分子量は、約４５，０００であり、熱及び酸
に安定な一本鎖の糖蛋白質である。

両者のＮ末端よりのアミノ酸配列が一致していることよ
り、ＩＴＩは、ＵＴＩの前駆体であると考えられる。（
ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｐａｆｅ
　３８９−３９８　）　ＵＴＩは、その分子内に２つの
よく似たｋｕｎｉｔｚ　ｔｙｐｅのドメインをもってい
る。しかしながら、ＩＴＩもＵＴＩもエイズ・ウィルス
に対してどのような作用を示すのか全く知られていない
。

又、ＵＴＩは一般名ウリナスタチンと呼ばれ、医薬品と
して、臨床面において、急性膵炎及び急性循環不全（出
血性ショック、細菌性ショック、外傷性ショック、熱傷
性ショック）の治療に日本において広く用いられている
。

ＵＴＩは、ヒト尿由来の糖蛋白質であるので、ヒトに対
する抗原性及び毒性等の問題も少なく、非常に安全性の
高い薬剤である。

そこで、本発明者らは、ＵＴＩを実際にエイズ感染に有
効であるかどうか、Ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　　にお０て感染
中和実験を行なった。

ＨＩＶ感染阻害の指標として、合胞体形成（Ｓｙｎｃｙ
ｔｉｕｍ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ）を阻害する方法、即ち
、ＬＡＶ−１感染したＣＣＲＦ−ＯＥＭ細胞とＡＩＤＳ
非感染ＭＯＬＴ−４クローン８細肥の細胞混合培養系に
よる合胞体形成阻害の方法により観察した。

この方法により、ＵＴＩは、ｓｅｒｕｍ　ｆｒｅｅ　（
７）培養系において、３００μＭ以上の濃度では完全に
、１００μＭの濃度では、中程度に、３０μＭの濃度で
も弱いながら、合胞体形成の阻害活性を示した。又、エ
ピトープβは、５ｏｙｂｅａｎ　Ｔｒｙ　−ｐｓｉｎ　
Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（Ｓ　Ｂ　Ｔ　Ｉ　）の活性部位と
も弱い相同性を示すので５ＢＴＩについても実験を行な
ったが、ＵＴＩよりも弱いが、３ｍＭ〜３００μＭの濃
度で濃度依存的に合胞体の形成を抑制した。

さらに、ウシ肺臓由来のトリプシンインヒビターである
アプロチニンは、合胞体形成の阻害を示さなかった。

但し、５ＢＴＩ及びアプロチニンは、ヒト以外の異種蛋
白質であるので、くり返して、ヒトに投与する場合には
、抗原性の問題が生ずる。これに比して、ＵＴＩは、毒
性の面においても、マウス。

ラット、イヌにおける急性毒性試験において、静脈内投
与番こより、１５０ＸＩ　Ｏ’　１．Ｕ、／＆ｇ（即ち
、約６００Ｗ／ｋ（ｊ体重）与えても、死亡例はみられ
ず、非常に毒性の低い薬剤と考えられる。

又、ラットにおける亜急性毒性試験において、最高６０
　Ｘ　１０’ｌＵ　／ｋｇ体重（即ち、約２４０Ｍｇ１
ｋｇ体重）及びイヌ亜急性毒性試験において、最高３０
　Ｘ　１０’ＩＵ　／ｋｇ体重（即ち約１２０り／に９
体重）、毎日、静脈内に投与し、４週間連続投与しても
、重篤な副作用は認められなかった。

本発明はこれらの知見に基づくもので、ヒト尿トリプシ
ン・インヒビター（ＵＴＩ）を含有してなるエイズ治療
、またはエイズ・ウィルス（Ｉ（ＩＶ）の感染もしくは
感染後の発症阻害剤である。

エイズの治療またはＨＩＶ感染後の発症を阻害するには
、静脈内投与の方法、たとえば静脈内注射、静脈内点滴
などによりＵＴＩを投与するのが好ましい。これらの注
射剤はそれ自体既知の方法で調製することができる。静
脈内１回の好ましい投与量は１００ないし１，０００ｊ
ｌ＆である。

ＩＩＩＶの感染を阻害するには、ＨＩＶに侵襲されうる
皮膚もしくは粘膜上に局所的に適用するに適した剤形に
調製されたＯＴＩ含有剤を適用するのがよい。

ＨＩＶに侵襲されうる皮膚もしくは粘膜の位置は口腔、
咽喉、鼻腔、耳孔、眼瞼、肛門、直腸、尿道もしくは膣
のような人体の開孔部または外傷部ならびにそれらの周
辺である。

感染阻害剤は通常外用剤であり、必要に応じて、座剤、
ゼリー　クリーム、パップ剤、軟膏、硬膏、擦剤、液剤
、噴霧剤、エアゾル剤、外用粉剤などの剤形で投与され
うる。

これらの外用剤はそれ自体既知の方法で調製することが
できる。水溶液の形態におけるＵＴＩの保存中の分解を
防ぐためｌこは、たとえば凍結乾燥したＵＴＩを用に臨
んで水溶液とするのが望ましい。

感染阻害剤中のＵＴＩの濃度はそれぞれの剤形に応じて
１回量１ないし１００ｑを投与できるように調整するの
がよい。

（作用） 本発明ｌこおいて、ヒト尿トリプシン・インビターはエ
イズ・ウィルスとＴ細胞の結合を阻害し、それによって
該ウィルスの感染、発症が抑制され、また患者体内にお
ける該ウィルスの増殖が妨げられる。

実施例１ 本試験に用いたＵ’ｌＩは、日本ケミカルリサーチ■に
おいて、ヒト正常男子尿より精製純化されたものであり
、その物理化学的性状は表−１に示すごとくである。

（以下余白） なお、その精製工程中には、６０℃１０時間の溶液状態
での、加熱処理工程が含まれているので、各種のウィル
スが完全に不活性化されている。

又、純度試験の項目中にもあるように、電気泳動等によ
り、ＵＴＩ以外の蛋白質は認められないきわめて純度の
高いＵＴＩを実験に用いた。

上記口ＴＩを用いて、以下の実験を行なった。

即ち、ＨＩＶ感染細胞としては、ＬＡＶ−１感染ＯＥＭ
細胞（ＯＥＭ／ＬＡＶ−１）２Ｘ１０４ｃｅｌｌｓ　　
を、又非感染細胞としては、ＭＯＬＴ４クローン８細胞
Ｉ　Ｘ　１０’ｃｅ（ｌｌｓを用いた。

この２種類の細胞を無血清培地（Ａ８Ｆ１０４）を用い
て、３７°Ｃ５％ＣＯ，インキュベーター中で混合培養
すると、１８時間後には、著明な合胞体が形成されるが
、［Ｊ　’Ｉ’　Ｉを３０μＭ、ＩＱＱμＭ、３００μ
Ｍ、１ｍＭ培養中に添加すると濃度依存的に合胞体の形
成が抑制された。第１図の写真に結果を示す。

第１図において、ａは非感染細胞（ＭＯＬＴ−４クロー
ン８）のみを培養した陰性対照で合胞体形成は見られず
、ｂは非感染細胞（ＭＯＬＴ−４クローン８）と感染細
胞（ＯＥＭ／ＬＡＶ−１）を混合培養した陽性対照で著
しい合胞体形成が見られる。ＣとｄはそれぞれＵＴｌｌ
ｍＭと１００μＭ添加の下に上記の非感染細胞と感染細
胞を混合培養したもので、ＵＴＩの濃度に比例して合胞
体形成が抑制されている。

実施例２ ０．９％（Ｗ／Ｖ）の塩化ナトリウムを含む０．０２５
Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ６，６）に溶解した精製ヒト尿トリ
プシンインヒビター液５０００　ｗｔｔ（１５０，００
０単位／　ｇ／　、蛋白質濃度５４ｑ／屑ｔ）を除菌濾
過したのち、Ｚ　ｔｔｔｌずつ分注し、凍結乾燥するこ
とにより注射用製剤を得た。

実施例３ 精製ヒト尿トリプシンインヒビター粉末（凍結乾燥粉末
）１ｙに生理食塩液１０ｍ１を加えて溶かした後、親水
軟膏を少量ずつ加え練合して全量１００ｇの軟膏を得た
。

（発明の効果） 本発明によれば、エイズ・ウィルスの感染、発症を阻害
し、エイズ患者の治療に用いうる薬剤が提供される。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１の実験における合胞体形成阻害の状況
を示す写真で、同図ａはヒト免疫不全ウィルス非感染細
胞のみを培養した陰性対照、ｂは非感染細胞と感染細胞
を混合培養した陽性対照、Ｃとｄはヒト尿トリプシンイ
ンヒビターをそれぞれ１　ｍＭと１００μＭ　ｇ加の下
に非感染細胞と感染細胞を混合培養したものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　ヒト尿トリプシン・インヒビターを含有してなるエ
   イズ治療、またはエイズ・ウィルスの感染もしくは感染
   後の発症阻害剤。 ２　非経口的投与に適する剤形に調製された請求項１記
   載の治療または阻害剤。 ３　ヒト尿トリプシン・インビターの量が１ないし１，
   ０００ｍｇ、好ましくは１０ないし５００ｍｇの用量単
   位に分割された請求項１記載の治療または阻害剤。 ４　注射剤の形に調製された請求項１、２または３記載
   の治療またはエイズ・ウィルス感染後の発症阻害剤。 ５　皮膚もしくは粘膜上に局所的に適用するに適した剤
   形に調製された請求項１、２または３記載の感染阻害剤
   。 ６　人体の開孔部もしくは外傷部またはその付近に適用
   するに適した剤形に調製された請求項５記載の感染阻害
   剤。 ７　剤形が口腔、咽喉、鼻腔、眼瞼、肛門、直腸、尿道
   、膣もしくは外傷部に局所的に適用するのに適している
   請求項５または６記載の感染阻害剤。 ８　外用剤である請求項５、６または７記載の感染阻害
   剤。 ９　座剤、ゼリー、クリーム、パップ剤、軟膏、硬膏、
   擦剤、液剤、噴霧剤、エアゾル剤または外用粉剤である
   請求項５、６、７または８記載の感染阻害剤。 １０　ヒト尿トリプシン・インヒビターが１回量１ない
   し１００ｍｇ適用されるようにその濃度を調整した請求
   項５、６、７、８または９記載の感染阻害剤。