WO2012138076A2 - 생약재 혼합 추출물을 포함하는 위장질환의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

생약재 혼합 추출물을 포함하는 위장질환의 예방 또는 치료용 조성물 Download PDF

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    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants

Definitions

  • the present invention relates to a composition for the prevention or treatment of gastrointestinal diseases, comprising a mixed extract of forget-me-not and North Sea lake as an active ingredient.
  • the stomach is a long-term organ that stores food from the esophagus and breaks it down easily for digestion, and regulates the sending of food to the duodenum in harmony with the secretion of pancreatic enzymes for efficient digestion and absorption.
  • the stomach secretes gastric acid, a strong acid, to digest food when it comes in.
  • the mucosal protective layer acts to prevent damage to the gastric mucosa by gastric acid.
  • gastrointestinal disorders Factors that adversely affect the functioning of the gastrointestinal system of humans are extremely diverse. Such disorders can occur in the upper gastrointestinal tract, lower gastrointestinal tract, or both, and there are a wide range of gastrointestinal disorders, including genetic, physiological, environmental, and mental factors.
  • Chronic diseases of the upper gastrointestinal tract include gastritis and gastric ulcers, and inflammation occurs when gastric acid secretion is increased or gastric mucosal protective layer is damaged by various causes.
  • gastric ulcers Ulcers in the duodenum are also called duodenal ulcers, and stomach and duodenal ulcers are collectively called peptic ulcers.
  • abdominal pain which is the upper part of the abdomen, the heart and the right upper abdomen.
  • gastrointestinal diseases are diverse, largely due to the imbalance of physical and chemical attackers that cause damage to the gastric mucosa and in vivo defenses that act to defend the gastric mucosa from them and maintain homeostasis of gastric function.
  • Representative attackers include stress, alcohol, gastric acid, tobacco, painkillers such as aspirin, steroid preparations, irritating foods, malnutrition, and infection with Helicobacter pylori, and defense mechanisms include reactive oxygen species, It is closely related to the etiology of weakening antioxidant capacity against increase of ROS), mucus protecting gastric mucosa, decreased production of prostaglandin and reduced tissue regeneration and blood circulation.
  • the gastric mucosa when the gastric mucosa is damaged, inflammation, accompanied by erosion, redness, bleeding, and edema occurs, and when the damage is severe and penetrates the gastric mucosa, and the damage is extended to the lower mucosa and the muscle layer, the gastric ulcer develops.
  • the duodenal mucosa is damaged and dug deeper than the mucosal layer on the surface, and the duodenal ulcer occurs when the damage progresses beyond the mucosal muscle layer.
  • Nonsteroidal anti-inflammatory agents such as aspirin
  • gastric ulcers, gastritis and gastric bleeding by continuously applying oxidative stress to the gastric mucosa or forming oxidative radicals by metabolism in vivo.
  • antioxidant enzymes in gastric epithelial cells inhibit alcohol-induced damage to mucosal cells (Hiraishi et al., 1991). Hiraishi et al., 1999).
  • Prostaglandins which make up the gastric mucosal tissue, are synthesized by the COX (cyclooxygenase) enzyme factor, which plays a role in maintaining gastrointestinal homeostasis by inhibiting gastric acid secretion and promoting gastric mucus secretion and gastric mucosal cell growth.
  • COX cyclooxygenase
  • representative gastritis and gastric ulcer therapeutic agents include H2 antagonists and proton pump inhibitors, which have an effect of inhibiting gastric acid secretion, and these have proven excellent anti-ulcer effects in clinical practice.
  • these fast-acting gastric acid secretion inhibitors have a high recurrence rate after the end of the administration (Drug Intell Clin Pharm 21: 493, 1987, Gut 30: 449, 1989 Yale J Biol Med 65: 649, 1992)
  • Side effects such as diarrhea, metabolic alkalosis, and urolithiasis have been reported.
  • mucosal protective agents which have the effect of normalizing mucosal tissue function and promoting regeneration to resist re-attack of gastritis-inducing factors, are an important part of the treatment of gastritis.
  • Such protection of the gastric mucosa can be achieved through the strengthening of protective factors such as improved resistance to ischemic stress in the gastrointestinal tract and increased prostaglandin production as mentioned above.
  • drugs such as rebamipide and sofalcone have been developed and used as gastric mucosa protective agents, but generally, there is a short-acting effect, a high dose, and a relatively long-term need for improved drug development. .
  • the forget-me-not is the scientific name " Erigeron Canadensis.L” and is a perennial herb of the Asteraceae family, also called a small flower. Flowers bloom in July-September, and the leaves and stems are used for medicinal or edible foods.
  • all the leaves collected before flowering can be used.
  • Forget-me-not including leaves and stems
  • Forget-me-not including leaves and stems
  • outposts (flowers) cannot be used because they cause allergic respiratory diseases. .
  • North Sea Lake is the scientific name “ Buppleurum chinense DC ” and is a perennial herbaceous plant of the Apiaceae family.
  • the roots of the North Sea contain saponin and fatty oil, so they are used as herbal medicine. The effect is somewhat different depending on the place of origin, which is thought to be due to the growing environment of herbal medicines such as soil and climate.
  • the forget-me-not and the North Sea lake are widely used as herbal medicines in herbal medicine, but the prevention or treatment effect of gastrointestinal diseases such as gastritis and peptic ulcer of the mixed herbal medicine of the forget-me-not and North Sea lake is not known yet. There is no research on this.
  • the present inventors can use for a long time because there is no side effect in vivo, and as a result of continuing research to find a new herbal medicine that has the effect of preventing or treating gastrointestinal diseases, the mixed extract of forget-me-not and Hoshiho lake protects the gastric mucosa and stomach The present invention was completed by confirming that the ulcer inhibiting effect is excellent.
  • An object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of gastrointestinal diseases, including a mixed extract of forget-me-not and North Sea Lake as an active ingredient.
  • Still another object of the present invention is to provide a food composition for preventing or improving gastrointestinal diseases, including a mixed extract of forget-me-not and Hoshiho lake as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of gastrointestinal diseases comprising a mixed extract of forget-me-not and North Sea as an active ingredient.
  • the present invention provides a food composition for the prevention or improvement of gastrointestinal diseases comprising a mixed extract of forget-me-not and North Lake as an active ingredient.
  • Mixed extract of the forget-me-not and North Sea lake according to the present invention is excellent in the protective effect and gastric ulcer suppression effect of the gastric mucosa, it can be usefully used for the prevention or treatment of gastrointestinal diseases.
  • 1 is a diagram comparing the forget-me-not and forget-me-not of the present invention (left: forget-me-not, right: forget-me-not).
  • Figure 2 is a diagram showing the cytotoxicity of the mixed extract of the forget-me-not and North Sea lake of the present invention.
  • Figure 3 is a diagram showing the DPPH scavenging ability of the mixed extract of the forget-me-not and North Lake of the present invention.
  • 4 and 5 are diagrams showing the inhibitory activity of ROS generation in cells of the mixed extract of the forget-me-not and Hoshiho of the present invention.
  • Figure 6 is a diagram showing the effect of the mixed extract of the forget-me-not and North Lake of the present invention on IL-6 production.
  • Figure 7 is a diagram showing the effect of the mixed extract of the forget-me-not and North Sea lake of the present invention on the production of MCP-1.
  • TNF-alpha TNF- ⁇
  • Figure 9 is a diagram showing the stomach of the mouse used in the animal experiments to determine the gastrointestinal disease therapeutic effect of the mixed extract of the forget-me-not and North Sea lake of the present invention.
  • Figure 10 is a diagram showing the H & E staining of the stomach of the mouse in the animal experiment to confirm the gastrointestinal disease treatment effect of the mixed extract of the forget-me-not and North Sea lake of the present invention.
  • the present invention provides a composition for the prevention or treatment of gastrointestinal diseases, including a mixed extract of forget-me-not and North Sea lake as an active ingredient.
  • the composition may be provided in the form of a pharmaceutical composition or a food composition.
  • the mixed extract of the forget-me-not and the North Sea lake of the present invention can be obtained as follows.
  • the forget-me-not and the North Lake are washed with water to remove foreign substances, then dried in the shade and crushed.
  • the forget-me-not and the North Sea lake can be cultivated or commercially available without limitation.
  • an appropriate amount of solvent is added so as to be completely immersed.
  • the mixed powder of forget-me-not and North Lake is extracted using a solvent selected from water, an alcohol having 1 to 4 carbon atoms, or a mixed solvent thereof, preferably extracted with ethanol.
  • the extraction can be impregnated or warmed at room temperature.
  • the extract is filtered and concentrated to give the final extract.
  • the forget-me-not and North Sea lake is preferably mixed with 5 to 15 parts by weight of the North Sea lake with respect to 100 parts by weight of forget-me-not.
  • the mixing ratio When it is out of the range of the mixing ratio, there is no significant difference in terms of the treatment effect of gastrointestinal diseases when compared to the case of using only the forget-me-not or Hoshiho extract alone, the drug efficacy is lowered, there is a fear of side effects.
  • Erigeron Canadensis.L is a different species from Erigeron annuus (L.) PERS.
  • L. Erigeron annuus
  • the north lake ( Bupleurum chinense DC ) means a Chinese lake , and is a species different from the domestic lake ( Bupleurum falcatum L. ). If Shiho is used instead of the North Sea, the treatment effect of gastrointestinal diseases is low and not suitable.
  • gastrointestinal disease is used herein in a broad sense, including all diseases and conditions that are associated with, or are likely to cause, damage to the gastric mucosa, regardless of their cause and mechanism.
  • the gastrointestinal diseases include acute gastritis, chronic active gastritis, chronic gastritis such as chronic atrophic gastritis, duodenitis, gastric ulcer, duodenal ulcer, gastric perforation, gastric bleeding, digestive disorders associated with nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs), non-ulcers sexual dyspepsia, gastroesophageal reflux disease (Reflux esophagitis), acute upper gastrointestinal bleeding, stress ulceration, Helicobacter pylori infection, Zolinger-Ellison syndrome (ZES), Werner's syndrome, and systemic obesity Symptoms such as but not limited to cytopathy and erosion, bleeding, redness and edema of the gastric mucosa due to the diseases.
  • Efficacy of the composition comprising a mixed extract of the forget-me-not and North Sea lake of the present invention is based on the protective effect of the gastric mucosa, and is not limited to gastrointestinal diseases due to specific causes or mechanisms. Accordingly, the disease can be caused by a variety of causes and mechanisms, including, for example, infections of alcohol, physical and mental stress, oxidative stress, gastric acid, nonsteroidal anti-inflammatory drugs, steroid preparations, tobacco, irritating foods, Helicobacter pylori. It may be caused by.
  • composition of the present invention may be used alone or in the form of a combination or aggregate with other pharmaceutically active compounds.
  • the active ingredients of the composition of the present invention can be administered in the form of a combination formulation mixed with other useful gastrointestinal diseases treatment drugs.
  • composition of the present invention can be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy and biological response modifiers for the prevention or treatment of gastrointestinal diseases.
  • composition of the present invention may further comprise suitable carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of pharmaceutical compositions.
  • suitable carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of pharmaceutical compositions may be used in the form of oral dosage forms, external preparations, suppositories, and sterile injectable solutions, such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc., according to conventional methods, respectively.
  • Suitable formulations known in the art are preferably those disclosed in Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA.
  • Carriers, excipients and diluents that may be included in the pharmaceutical compositions of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, Cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and the solid preparations are prepared by mixing at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, gelatin, etc., in the extract. It is prepared. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, liquid solutions, emulsions, and syrups.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories.
  • non-aqueous solvent and suspending agent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, injectable esters such as ethyl oleate and the like can be used.
  • base of the suppository witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
  • the term "administration" means providing a subject with any of the compositions of the present invention in any suitable manner.
  • composition of the present invention can be administered to a subject by various routes. All modes of administration can be expected, for example by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine dural or intracerebroventricular injection.
  • compositions of the present invention vary depending on the condition and weight of the patient, the extent of the disease, the form of the drug, the route of administration and the like, but may be appropriately selected by those skilled in the art. However, for the desired effect, for adults, the compositions of the present invention may comprise from 1 to 1000 mg / kg body weight in a single dose. Administration may be administered once a day or may be divided several times. The dosage does not limit the scope of the invention in any aspect.
  • health functional food refers to a food prepared and processed using raw materials or ingredients having functional properties useful for the human body
  • functionality refers to nutrients or physiological effects on the structure and function of the human body. It means to consume for the purpose of obtaining a useful effect for health use such as.
  • the composition of the present invention When the composition of the present invention is used as a food composition, the composition may be added as it is or used with other food or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method.
  • the mixed amount of the active ingredient may be appropriately determined depending on the purpose of use (prevention, health or therapeutic treatment).
  • the compositions of the present invention are added in an amount of up to 15% by weight, preferably up to 10% by weight relative to the raw materials.
  • the active ingredient may be used in an amount above the above range because there is no problem in terms of safety.
  • the food composition of the present invention may be formulated in the formulation of conventional health functional foods known in the art.
  • the health functional food composition may be prepared, for example, as a powder, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, liquids, extracts, teas, jelly, or beverages.
  • any carrier or additive known to be usable in the art may be used to prepare a formulation to be prepared.
  • the sculptural extract of the present invention has various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), colorants and enhancers, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH regulators, stabilizers, preservatives, glycerin , Alcohols, carbonating agents used in carbonated drinks, and the like.
  • the health functional beverage composition of the present invention is not particularly limited in addition to the mixed extract of the forget-me-not and Hoshiho as essential components, and may contain various flavors or natural carbohydrates as additional ingredients, such as ordinary drinks.
  • natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose and the like; And polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin and the like; Sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, erythritol and the like.
  • As the flavoring agent natural flavoring agents such as taumarin, stevia extract (rebaudioside A, glycyrzin, etc.); And synthetic flavoring agents such as saccharin, aspartame and the like.
  • the mixed extract of the forget-me-not and the North Sea lake of the present invention has a DPPH scavenging activity in proportion to the concentration, it was confirmed that the excellent antioxidant efficacy.
  • ROS reactive oxygen speies
  • the mixed extract of the forget-me-not and North Lake of the present invention has the activity of inhibiting the production of ROS in the cell, it was confirmed that there is excellent antioxidant efficacy.
  • EOL-1 cells were dispensed into 24 well plates at a concentration of 5 ⁇ 10 5 cells / ml and incubated for 24 hours. The cells were treated with varying concentrations of mixed forget-me-not and Hoshiho lakes (1 or 10 ⁇ g / ml). After 4 hours, PMA (Phorbol myristate acetage) and calcium ionophore (calcium ionophore) A23187 were each treated at a concentration of 50 ng / ml and incubated for 24 hours.
  • PMA Phorbol myristate acetage
  • calcium ionophore calcium ionophore
  • IL-6 Interleukin 6
  • MCP-1 monocyte chemoattractant protein-1
  • TNF-alpha Tumor Necrosis Factor- ⁇
  • the mixed extract of the forget-me-not and North Sea lake of the present invention has the activity of reducing the production of increased cytokines by LPS, it was confirmed that there is excellent anti-inflammatory effect.
  • mice experiments were performed.
  • 4 weeks old male ICR mouse (Coatech Co., Ltd.) was used, and the experiment was performed after a stabilization period of one week.
  • the average weight of the mice was 25 g, fasting from 6 pm the day before the experiment to 9 am on the day of the experiment.
  • mice were administered one hour before gastric ulcer induction, in the case of normal group (A) and gastric ulcer-induced control group (B), water was used instead of the sample, and in the positive control group (C), sucralate (Sigma, USA) Oral administration at a concentration of 100 mg / kg.
  • Experimental group D to F group were orally administered mixed extracts of forget-me-not and Hoshiho at a concentration of 1, 10 or 100 mg / kg, respectively.
  • Sucralate was used by suspending in a 0.25% sodium carboxymethyl cellulose (Samchun Chemicals, Korea) solution, and the mixed extract of forget-me-not and North Sea lake was suspended in water.
  • gastric ulceration was induced by oral administration of 150 mL of hydrochloric acid / ethanol at 0.2 mL per mouse. An hour later, asphyxiated with carbon dioxide and dissected.
  • the stomach of the mouse was incised in the direction of the greater curvature, the inside of the stomach was washed with saline, and soaked in 10% formalin (neutral buffered formalin, Sigma, USA) solution and fixed for 12 hours. After fixing the fixed stomach tissue with paraffin, it was cut to 8 ⁇ m thickness to prepare a longitudinal section of the stomach. After removing paraffin from the sections, H & E staining was performed using hematoxylin and eosin and observed under a microscope. The area of gastric injury was measured using the Isolution lite program. The results are shown in Table 3, FIG. 9 and FIG.
  • the mixed extract of the forget-me-not and North Sea lake of the present invention is similar to the case of the administration of 100 mg / kg sucralate used as a positive control even at a low concentration of 1 mg / kg
  • gastric ulcer protection was observed about 96%.
  • the gastric ulcer induction control group (B) was severe bleeding of the gastric mucosa, damage to the submucosa, but the group administered the mixed extract of the forget-me-not and North Sea lake of the present invention (D In the case of ⁇ F), it was confirmed that bleeding and damage of the gastric mucosa were greatly alleviated.
  • the mixed extract of the forget-me-not and North Sea lake of the present invention was excellent in the protective effect and gastric ulcer inhibiting effect of the gastric mucosa area, it was confirmed that the excellent therapeutic efficacy of gastrointestinal diseases.
  • tablets were prepared by tableting according to a conventional method for producing tablets.
  • the capsule was prepared by filling in gelatin capsules according to the conventional method for producing a capsule.
  • Vitamin B6 0.5 mg
  • composition ratio of the vitamin and mineral mixture is a composition suitable for a relatively healthy food in a preferred embodiment
  • the compounding ratio may be arbitrarily modified, and the above ingredients are mixed according to a conventional health food manufacturing method.
  • the granules may be prepared and used for preparing a health food composition according to a conventional method.
  • the resulting solution is filtered and obtained in a sterilized 2 l container, sealed sterilization and refrigerated and then Used to prepare the healthy beverage composition of the invention.
  • composition ratio is mixed with a component suitable for a favorite beverage in a preferred embodiment, the composition ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences such as demand hierarchy, demand country, and usage.
  • Mixed extract of the forget-me-not and North Sea lake according to the present invention is excellent in the protective effect and gastric ulcer suppression effect of the gastric mucosa, it can be usefully used for the prevention or treatment of gastrointestinal diseases.

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Abstract

본 발명은 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 위장질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 위 점막 부위의 보호 효과 및 위 궤양 억제 효과가 우수하여, 위장질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

생약재 혼합 추출물을 포함하는 위장질환의 예방 또는 치료용 조성물
본 발명은 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 위장질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
위는 식도를 통하여 들어온 음식물을 저장하고 소화되기 쉽게 잘게 부수며, 십이지장으로 음식물을 보내는 것을 조절하여 췌장효소의 분비와 조화를 이루어 효율적인 소화와 흡수가 되도록 하는 장기이다. 위는 음식물이 들어오면 이를 소화시키기 위해 강한 산인 위산을 분비하는데, 이때 점막보호층이 위산에 의해 위 점막이 손상 받지 않도록 작용한다.
사람의 위장관계 기능에 악영향을 미치는 요인은 그 성질이 극히 다양하다. 이와 같은 장해는 상부 위장관, 하부 위장관 또는 두 부분 모두에서 발생할 수 있으며, 유전적, 생리학적, 환경적 및 정신적 요인을 포함하여 광범위한 위장 장애 요인이 있다. 상부 위 장관의 만성 질환 중에는 위염 및 위궤양이 포함되어 있으며, 여러 종류의 원인에 의해 위산의 분비가 항진되거나 위 점막 보호층이 손상되었을 때 염증이 생기게 된다. 이 염증성 병변이 위 점막에 한정되어 있을 때를 위염 (gastritis), 위 점막을 뚫고 점막하 조직과 근육층까지 궤양을 형성했을 때를 위궤양(gastric ulcer)이라 한다. 또한 십이지장에서의 궤양을 십이지장궤양(duodenal ulcer)이라고 하며, 위궤양과 십이지장궤양을 소화성 궤양(peptic ulcer)으로 통칭하고 있다.
위염 및 소화성 궤양의 주요 증상으로는 복통, 속쓰림, 더부룩함, 소화불량, 트림, 오심, 구토, 출혈 등이 있다. 이 중 가장 고통스러운 것은 복통으로 그 부위가 명치부위, 심와부와 우측 상복부이다.
위장질환의 원인은 다양하며, 이는 크게 위 점막층의 손상을 야기하는 물리적 및 화학적 공격인자와 이들로부터 위 점막 보호층을 방어하고 위 기능의 항상성을 유지하도록 작용하는 생체 내 방어인자의 불균형에 기인한다. 대표적인 공격인자로는 스트레스, 알코올, 위산, 담배, 아스피린과 같은 진통소염제, 스테로이드 제제, 자극적인 음식, 영양결핍, 헬리코박터 파일로리균의 감염 등이 있으며, 방어기전으로는 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)의 증가에 대한 항산화력의 약화, 위 점막을 보호하는 점액, 프로스타글란딘(prostaglandin)의 생성 저하 및 조직 재생능력, 혈행 개선능력의 감소가 병인과 밀접하게 관련된다. 상기 요인으로 인해 위 점막층이 손상되었을 때 미란, 발적, 출혈, 부종을 동반한 염증이 발생하게 되며, 손상이 심하여 위 점막을 뚫고 점막 하단 및 근육층까지 손상이 확대된 경우 위궤양으로 발전하게 된다. 또한 상기 요인에 의해 십이지장 점막이 손상되어 가장 표면에 있는 점막층보다 깊이 패이면서 점막근층 이상으로 손상이 진행되면 십이지장 궤양이 발생한다.
위염 또는 위궤양을 유발하는 인자들 중 특히 육체적 및 정신적 스트레스에 의한 위 점막의 급성 손상은 주로 시상 하부에 변화를 일으켜 위 점막의 미세순환 장애(microcirculary disturbance), 혈류량 감소 및 그로 인한 저혈압을 야기함으로써 유발된다. 허혈 부위에 혈액이 재공급되는 허혈성 재관류(ischemia reperfusion)에 의한 손상 및 이에 동반한 호중구의 침윤은 위 점막 조직 및 호중구 내에서 활성 산소종의 생성 및 잔틴-잔틴 옥시다아제(xanthine-xanthine oxidase) 시스템을 유도한다(Microcirc. Endothelium Lymphatics, 1991. 7:133-158). 결과적으로, 다량으로 생성된 활성산소 및 하이드록시 활성기가 위 조직 내 산소 장애를 일으킴으로써, 위 점막의 방어체계를 약화시키고, 위 상피세포에 침윤된 호중구가 위 조직에 미란, 궤양 등을 유발하는 위험인자로 작용한다.
아스피린 등과 같은 비스테로이드성 항염증제 또한 위 점막에 산화적 스트레스를 지속적으로 가하거나 생체 내 대사에 의해 산화적 라디칼을 형성하여 위궤양, 위염 및 위출혈을 유발시킨다. 또한, 생체실험에서 알코올에 의한 위 점막 세포의 손상은 산화적 스트레스가 주범이며(Hiraishi 등, 1991), 위 상피세포 내의 항산화 효소가 알코올에 의한 점막세포의 손상을 억제한다는 것이 보고된 바 있다 (Hiraishi 등, 1999). 헬리코박터 파일로리균에 기인한 위궤양의 경우에도, 세균의 점착에 대한 반응으로 분비된 인터루킨-8이 호중구를 활성화시켜 활성 산소 및 탈과립을 유발함으로써 활성 산소에 의한 점막 장애가 유발된다. 이와 같이, 다양한 공격 인자에 의한 위 점막 손상이 산화성 스트레스와 관련되며, 위 점막 세포의 항산화능 증대는 이러한 손상에 대한 주된 방어 기전으로 작용한다.
위 점막 조직을 구성하는 프로스타글란딘은 COX(cyclooxygenase) 효소 인자에 의해 합성되는 물질로서, 위산 분비를 억제하고 위 점액 분비와 위장 점막 세포의 성장을 촉진함으로써 위장의 항상성을 유지하는 역할을 한다. 스트레스나 알코올, 아스피린과 같은 비스테로이드성 소염제(NSAIDs)에 의한 프로스타글란딘의 합성 또는 분비의 감소는 위 점액질의 분비를 감소시키고, 상피세포의 재생을 둔화시키는 등 점막의 항염증 기능을 약화시킴으로써 위장관 내 독성을 유발하는 기전 중 하나로 알려져 있다 (J. Physiol. Pharmacol. 2005. 56 Suppl 5:33-55).
현재 대표적인 위염 및 위궤양 치료제는 위산 분비 억제의 효능을 지닌 H2 안타고니스트 및 프로톤 펌프 저해제(proton pump inhibitor)가 있으며, 이들은 임상에서 우수한 항궤양 효과가 입증되었다. 하지만 이러한 속효성의 위산분비 억제제들은 투약 종료 후 높은 재발률이 문제되며 (Drug Intell Clin Pharm 21: 493, 1987, Gut 30: 449, 1989 Yale J Biol Med 65: 649, 1992), 무기물질 투여에 의한 변비, 설사, 대사성 알칼로시스, 요로 결석증과 같은 부작용이 보고되고 있다. 따라서 위염 유발 인자의 재공격에 저항할 수 있도록 점막 조직의 기능을 정상화하고 재생을 촉진하는 효능을 지닌 점막 보호제는 위염 치료제의 중요한 부분이다. 이와 같은 위 점막의 보호는 상기 언급한 바와 같이 위장관내 허혈성 스트레스에 대한 저항능력의 향상 및 프로스타글란딘 생성 증가와 같은 방어인자의 강화를 통해 달성될 수 있다. 현재 위 점막 보호제로서 레바미파이드(rebamipide), 소팔콘(sofalcone) 등의 약물이 개발되어 사용되고 있으나, 일반적으로 속효성이 적고 복용량이 많으며, 비교적 장기간 복용해야 하는 단점이 있어 개선된 약물 개발이 필요하다.
한편, 망초는 학명이 "Erigeron Canadensis.L" 이며, 국화과의 두해살이풀로 잔꽃풀이라고도 한다. 꽃은 7~9월에 피며, 잎 및 줄기를 약재나 식용으로 사용하는데, 약재로는 꽃이 피기 전 (6월 중순 이전) 채취한 잎이 모두 사용 가능하며, 식용으로는 꽃이 피기 전의 어린 망초(잎 및 줄기 포함)를 사용하고 있다. 6월 중순 이후에 채취한 망초 (잎 및 줄기 포함)를 복용 시에는 위부팽만감, 트림 등의 부작용이 있어 사용 불가하다 또한, 망초의 전초 (꽃)는 호흡기 질환의 알레르기를 유발하여 사용이 불가하다.
또한, 북시호는 학명이 “Bupleurum chinense DC”이며, 미나리과의 여러해살이풀로, 중국산 시호이다. 북시호의 뿌리에 사포닌과 지방유 등이 들어 있어 한방에서 약재로 쓴다. 산지에 따라 효과에 다소 차이가 있는데, 이는 토양, 기후 등 생약의 재배환경에 따른 차이로 생각된다.
상기한 바와 같이, 망초 및 북시호는 안전한 생약재로서 한방에서 약재로 많이 사용되고 있으나, 망초 및 북시호의 혼합 생약재의 위염, 소화성 궤양 등의 위장질환의 예방 또는 치료 효과에 대해서는 아직까지 알려져 있지 않으며, 이에 대한 연구도 전무한 상태이다.
이에 본 발명자들은 생체 내 부작용이 없어 장기간 사용할 수 있으며, 위장 질환의 예방 또는 치료 효과가 있는 새로운 생약재를 찾기 위하여 연구를 계속한 결과, 망초 및 북시호의 혼합 추출물이 위 점막 부위의 보호 효과 및 위 궤양 억제 효과가 우수함을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 위장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 위장질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 위장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 위장질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 위 점막 부위의 보호 효과 및 위 궤양 억제 효과가 우수하여, 위장질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 망초와 개망초를 비교한 도이다 (좌 : 망초, 우 : 개망초).
도 2는 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 세포 독성을 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 DPPH 소거능을 나타낸 도이다.
도 4 및 도 5는 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 세포 내 ROS 생성 억제 활성을 나타낸 도이다.
도 6은 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물이 IL-6 생성에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 7은 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물이 MCP-1 생성에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 8은 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물이 TNF-알파(TNF-α) 생성에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 9는 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 위장질환 치료 효과를 확인하기 위한 동물실험에 이용된 마우스의 위를 나타낸 도이다.
도 10은 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 위장질환 치료 효과를 확인하기 위한 동물실험에서 마우스의 위를 H&E 염색하여 나타낸 도이다.
이하 본 발명에 대하여 보다 상세히 설명한다.
본 발명은 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 위장질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 약학적 조성물 또는 식품 조성물의 형태로 제공될 수 있다.
본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 하기와 같이 수득될 수 있다.
먼저, 망초 및 북시호를 물로 세척하여 이물질을 제거한 후 그늘에서 건조하고 분쇄한다. 망초 및 북시호는 재배한 것 또는 시판되는 것 등을 제한 없이 사용할 수 있다. 분쇄된 망초 분말 100 중량부에 대하여 북시호 분말 5 내지 15 중량부를 혼합한 후, 적당한 양의 용매를 첨가하여 완전히 침지되도록 한다. 망초 및 북시호의 혼합 분말은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매를 이용하여 추출하며, 바람직하게는 에탄올로 추출한다. 추출 시 실온에서 함침하거나 가온할 수 있다. 상기 추출액을 여과하고, 농축하여 최종 추출물을 수득한다.
본 발명의 조성물에서, 상기 망초 및 북시호는 망초 100 중량부에 대하여 북시호 5 내지 15 중량부로 혼합하는 것이 바람직하다. 상기 혼합비율의 범위를 벗어나는 경우에는 망초 또는 북시호 추출물을 단독으로 사용한 경우와 비교할 때 위장질환의 치료 효과 면에서 큰 차이가 없으며, 약효 효능이 떨어지고, 부작용의 우려가 있다.
본 발명에서 망초 (Erigeron Canadensis.L)는 개망초 (Erigeron annuus (L.) PERS.)와는 상이한 종으로, 망초 대신 개망초를 이용할 경우 위장질환의 치료 효과가 낮아 부적합하다. 망초와 개망초의 외관 비교를 도 1에 나타내었다.
본 발명에서 북시호 (Bupleurum chinense DC)는 중국산 시호를 의미하는 것으로, 국내산 시호(Bupleurum falcatum L.)와는 상이한 종이다. 북시호 대신 시호를 이용할 경우 위장질환의 치료 효과가 낮아 부적합하다.
본 명세서에서 용어 "위장질환"은 그 발생 원인 및 기전과 무관하게 위 점막의 손상을 동반하거나, 손상을 야기할 가능성이 있는 모든 질환 및 병태를 포함하는 광범위한 의미로 사용된다. 상기 위장관 질환은 급성 위염, 만성 활동성 위염, 만성 위축성 위염과 같은 만성 위염, 십이지장염, 위 궤양, 십이지장 궤양, 위 천공, 위 출혈, 비스테로이드성 항염증 약물(NSAID)과 연관된 소화 장애, 비궤양성 소화불량증, 위 식도 역류 질환 (역류성 식도염), 급성 상부 위장 출혈, 스트레스 궤양화, 헬리코박터 파일로리 감염, 조린거-엘리슨 증후군 (Zollinger-Ellison syndrome, ZES), 베르너 증후군 (Werner's syndrome), 및 전신 비만세포증 및 상기 질환들로 인한 위 점막의 미란, 출혈, 발적 및 부종과 같은 증상을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 포함하는 조성물의 효능은 위 점막의 보호 효과에 기초하므로, 특정한 원인 또는 기전으로 인한 위장질환에 국한되지 않는다. 이에 따라 상기 질환은 예를 들면, 알코올, 육체적 및 정신적 스트레스, 산화적 스트레스, 위산, 비스테로이드성 항염증 약물, 스테로이드 제제, 담배, 자극적인 음식, 헬리코박터 파일로리의 감염을 포함한, 다양한 원인 및 기전에 의해 발병한 것일 수 있다.
또한 본 발명의 조성물은 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 단독으로 사용하거나 또는 다른 약학적 활성 화합물과의 결합체나 집합체의 형태로도 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물의 유효성분인 망초 및 북시호의 혼합 추출물 외에, 다른 유용한 위장질환치료 약물과 혼합된 복합제제 형태로 제형화하여 투여할 수 있다.
본 발명의 조성물은 위장질환의 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제는 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 것을 사용하는 것이 바람직하다. 본 발명의 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글라이콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글라이콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 성인의 경우, 본 발명의 조성물은 1회 투여량으로 1 내지 1000 mg/kg(체중)로 포함할 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용되는 "건강 기능성 식품"은 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"은 인체의 구조 및 기능에 대해 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
본 발명의 조성물을 식품 조성물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15중량 % 이하, 바람직하게는 10 중량 % 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 당해 기술분야에 공지되어 있는 통상적인 건강기능성 식품의 제형으로 제제화될 수 있다. 상기 건강 기능성 식품 조성물은 예를 들어 산제, 과립제, 정제, 캅셀제, 현탁액, 에멀젼, 시럽제, 액제, 엑스제, 차, 젤리, 또는 음료 등으로 제조될 수 있다. 상기 식품학적으로 허용 가능한 보조첨가제로는 제조하고자 하는 제형의 제조에 당해 기술분야에서 사용 가능한 것으로 공지되어 있는 임의의 담체 또는 첨가제가 이용될 수 있다. 상기 외에 본 발명의 조각자 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 착색제 및 증진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.
본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 필수 성분으로서 상기 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어 글루코오스, 프럭토오스 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토오스, 수크로오스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등; 당알코올, 예를 들면 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등을 포함한다. 향미제로서, 천연 향미제, 예를 들어 타우마린, 스테비아 추출물(레바우디오시드A, 글리시르히진 등); 및 합성 향미제, 예를 들어 사카린, 아스파르탐 등을 유리하게 사용할 수 있다.
이하 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예, 실험예 및 제조예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 제조
5월 중순에 채취하여 말린 망초 (잎 및 줄기 포함) 100g과, 북시호 8 ~ 13g을 각각 분말화한 후 혼합하였다. 상기 망초 및 북시호의 혼합 분말 3g에 70% 에탄올 100 mL를 넣은 후, 60분간 3회 초음파 추출하였다. 상기 추출물을 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하고, 상층액을 분리하여 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하였다. 상기 여과액을 동결 건조하여 망초 (잎 및 줄기 포함) 및 북시호의 혼합 추출물을 제조하였다.
실험예 1. 세포 독성 확인
상기 실시예 1에서 제조한 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 세포 독성을 확인하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다. 보다 구체적으로는, Raw 264.7 세포를 이용하였으며, 상기 세포를 96 웰 플레이트에 104 cells/웰의 농도로 분주하고, 24시간 동안 배양(37℃, 5% CO2)하였다. 상기 세포에 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 각각 100, 200, 300, 400㎍/㎖의 농도로 처리하고, 24시간 동안 배양(37℃, 5% CO2)하였다. 이후, 각 웰에 10㎕의 WST-1 (2-[4-iodophenyl]-3-[4-nitrophenyl]-5-[2,4-disulfophenyl]-2H-tetrazolium, monosodium salt) 용액을 첨가한 후 배양기 (37℃, 5% CO2)에서 30분간 반응시킨 후, 450nm에서 흡광도의 변화를 측정하였다. 시료를 처리하지 않은 정상군에 대한 세포 생존율을 백분율로 표시하였다. 그 결과를 표 1 및 도 2에 나타내었다.
표 1
실험군 백분율 (%)
정상군 100
실험군 1 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 100㎍/㎖) 95
실험군 2 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 200㎍/㎖) 91
실험군 3 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 300㎍/㎖) 95
실험군 4 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 400㎍/㎖) 87
상기 표 1 및 도 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 유의한 세포 독성이 없음을 확인하였다.
실험예 2. DPPH 소거능 측정
상기 실시예 1에서 제조한 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 항산화 효능을 확인하기 위하여, DPPH 소거능을 확인하기 위한 실험을 수행하였다. 보다 구체적으로는, 에탄올에 용해시킨 0.2mM의 DPPH 용액 150㎕와 다양한 농도의 망초 및 북시호의 혼합 추출물 (25, 50, 100, 200, 400 또는 800㎍/㎖) 100㎕ 를 각각 혼합하고, 37℃에서 30분간 반응시켰다. 이 후, 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시료 대신 증류수를 처리하였으며, DPPH 용액 대신 에탄올을 처리하여 보정값을 얻었다. 자유라디칼 소거율은 하기 수학식 1에 따라 계산하였으며, 자유라디칼을 50% 소거할 수 있는 농도(IC50)로 나타내었다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.
[수학식 1]
Figure PCTKR2012002281-appb-I000001
도 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 농도에 비례하는 DPPH 소거 활성을 가지고 있어, 우수한 항산화 효능이 있음을 확인하였다.
실험예 3. 세포 내 ROS 생성 측정
상기 실시예 1에서 제조한 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 항산화 효능을 확인하기 위하여, 세포 내 ROS(reactive oxygen speies)의 생성을 확인하기 위한 실험을 수행하였다. 보다 구체적으로는, 48 웰 플레이트에 Raw 264.7 세포를 2×105/웰의 농도가 되게 분주하고, 24시간 동안 배양하였다. 상기 세포에 LPS(Lipopolysaccharide) 및 다양한 농도의 망초 및 북시호 혼합 추출물 (100, 200 또는 400 ㎍/㎖)을 첨가한 후, 24시간 동안 배양하고, 1,200 rpm에서 5분간 원심분리 하였다. 원심분리 후 모은 세포를 차가운 PBS로 2회 세척한 후 DCF-DA(2′,7′-dichlorofluorescin diacetate) 10 μM을 첨가하고, 15분 동안 빛이 차단된 상온에서 염색하였다. 염색 후 차가운 PBS를 넣고 1,200 rpm에서 5분간 원심분리한 후, 상층액을 제거하고 다시 PBS 400㎕를 첨가하였다. 이를 유세포 분석기 (Flow cytometer, BECTON Dickinson, Franklin Lakes, NJ USA)를 이용하여 형광강도의 세기를 측정하였다. 그 결과를 표 2, 도 4및 도 5에 나타내었다.
표 2
실험군 백분율 (%)
정상군 13
대조군 (LPS 만 처리) 100
실험군 1 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 100㎍/㎖) 76
실험군 2 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 200㎍/㎖) 66
실험군 3 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 400㎍/㎖) 57
표 2, 도 4 및 도 5에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 세포 내 ROS의 생성을 억제하는 활성을 가지고 있어, 우수한 항산화 효능이 있음을 확인하였다.
실험예 4. 사이토카인 생성 측정
상기 실시예 1에서 제조한 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 항염증 효능을 확인하기 위하여, 염증 관련 사이토카인의 생성을 확인하기 위한 실험을 수행하였다. 보다 구체적으로는, EOL-1세포를 5X105cell/㎖의 농도로 24 웰 플레이트에 분주하고, 24시간 동안 배양하였다. 상기 세포에 다양한 농도의 망초 및 북시호 혼합 추출물 (1 또는 10 ㎍/㎖)을 처리하였다. 4시간 후 PMA(Phorbol myristate acetage) 및 칼슘 이오노포어 (calcium ionophore) A23187을 각각 50ng/㎖의 농도로 처리하고, 24시간 동안 배양하였다. 이후, 배양액에 함유된 염증관련 사이토카인인 IL-6(Interleukin 6), MCP-1(monocyte chemoattractant protein-1), TNF-알파(Tumor Necrosis Factor-α)의 농도를 주문 제작한 3-plex cytokine Milliplex panel을 이용하여 측정하였다. 분석은 Milliplex analyst를 통해 이루어졌다. IL-6, MCP-1 및 TNF-알파의 농도를 각각 도 6 내지 8에 나타내었다.
도 6 내지 도 8에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 LPS에 의해 증가된 사이토카인의 생성을 감소시키는 활성을 가지고 있어, 우수한 항염증 효능이 있음을 확인하였다.
실험예 5. 위장질환 치료 효과 검증
상기 실시예 1에서 제조한 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 위장질환 치료 효능을 확인하기 위하여, 동물 실험을 수행하였다. 실험 동물로는4주령의 수컷 ICR 마우스 ((주)코아텍)를 이용하였으며, 일주일 간의 안정화기간을 거친 다음 실험을 수행하였다. 상기 마우스의 평균 몸무게는 25 g이었으며, 실험 전날 오후 6시부터 실험 당일 오전 9시까지 절식시켰다.
실험은 각 군별로 5마리씩의 마우스를 사용하였으며, 총 6가지 군으로 나누어 실시하였다. 각 시료는 위궤양 유발 한 시간 전에 투여하였으며, 정상군(A)과 위궤양 유발 대조군(B)의 경우에는 시료 대신 물을, 양성대조군(C)에는 위 점막 보호제인 수크랄페이트(Sigma, USA)를 100 mg/kg의 농도로 경구 투여하였다. 실험군인 D내지 F군에는 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 1, 10 또는 100 mg/kg의 농도로 각각 경구 투여하였다. 수크랄페이트는 0.25% 카복시메틸셀룰로오스나트륨 (sodium carboxymethyl cellulose, Samchun Chemicals, Korea) 용액에 현탁시켜 사용하였으며, 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 물에 현탁시켜 사용하였다. 시료 투여 한 시간 뒤, 150 mM 염산/에탄올을 각 마우스 당 0.2 mL씩 경구 투여하여 위궤양을 유발하였다. 한 시간 뒤 이산화탄소로 질식사시킨 다음 해부하였다.
마우스의 위를 대만곡(greater curvature) 방향으로 절개하고, 위 내부를 식염수로 씻어낸 후, 10% 포르말린 (neutral buffered formalin, Sigma, USA)용액에 담가 12시간 동안 고정시켰다. 고정된 위 조직을 파라핀으로 고정시킨 후, 8 μm 두께로 절단하여 위의 종단면 절편을 제작하였다. 절편에서 파라핀을 제거한 후 헤마톡실린 (heamatoxylin)과 에오신(eosin)을 사용하여 H&E 염색을 수행하고, 이를 현미경 하에서 관찰하였다. Isolution lite 프로그램을 사용하여 위 손상 부위의 면적을 측정하였다. 그 결과를 표 3, 도 9 및 도 10에 나타내었다.
표 3
실험군 위궤양발현면적(mm2) 보호효과(%)
정상군 (A) - -
위궤양 유발 대조군(B) 384.3 ± 13.7 -`
양성대조군 (수크랄페이트 100 mg/kg) (C) 60.3 ± 5.5 84.3 ± 8.6
실험군 1 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 1 mg/kg) (D) 54.6 ± 10.2 85.8 ± 8.
실험군 2 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 10 mg/kg) (E) 50.7 ± 2.0 86.8 ± 3.0
실험군 3 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 100 mg/kg) (F) 14.6 ± 1.5 96.2 ± 2.7
표 3, 도 9 및 도 10에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 1 mg/kg의 낮은 농도에서도 양성대조군으로 사용한 수크랄페이트 100 mg/kg을 투여한 경우와 유사한 위궤양보호효과를 보였으며, 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 100 mg/kg의 농도로 투여한 군에서는 약 96%의 위 궤양 보호 효과가 관찰되었다. 특히, 도 10에 나타낸 바와 같이, 위궤양 유발 대조군(B)의 경우 위 점막층의 출혈 정도가 심했으며, 점막하층까지 손상이 발생하였으나, 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 투여한 군(D~F)의 경우, 이러한 위 점막층의 출혈 및 손상이 크게 완화되었음을 확인하였다. 따라서, 상기 실험 결과를 통하여 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 위 점막 부위의 보호 효과 및 위 궤양 억제 효과가 우수하여, 위장질환의 우수한 치료 효능이 있음을 확인하였다.
이하 본 발명의 상기 조성물을 함유하는 약학적 조성물 및 식품 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1 : 약학적 조성물의 제조
1. 산제의 제조
망초 및 북시호의 혼합 추출물 2g
유당 1g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
2. 정제의 제조
망초 및 북시호의 혼합 추출물100mg
옥수수전분 100mg
유당 100mg
스테아린산 마그네슘 2mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
3. 캡슐제의 제조
망초 및 북시호의 혼합 추출물 100mg
옥수수전분 100mg
유당 100mg
스테아린산 마그네슘 2mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
제제예 2 ; 식품 조성물의 제조
1. 건강기능식품의 제조
망초 및 북시호의 혼합 추출물 100 mg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 μg
비타민 E 1.0 mg
비타민 B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2 μg
비타민 C 10 mg
비오틴 10 μg
니코틴산아미드 1.7 mg
엽산 50 μg
판토텐산 칼슘 0.5 mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 mg
산화아연 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mg
제1인산칼륨 15 mg
제2인산칼슘 55 mg
구연산칼륨 90 mg
탄산칼슘 100 mg
염화마그네슘 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
2. 건강음료의 제조
망초 및 북시호의 혼합 추출물 100 mg
비타민 C 15 g
비타민 E(분말) 100 g
젖산철 19.75 g
산화아연 3.5 g
니코틴산아미드 3.5 g
비타민 A 0.2 g
비타민 B1 0.25 g
비타민 B2 0.3g
물 정량
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 l 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
본 발명에 따른 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 위 점막 부위의 보호 효과 및 위 궤양 억제 효과가 우수하여, 위장질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Claims (8)

  1. 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 위장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 망초는 잎 및 줄기를 포함하는 것을 특징으로 하는, 위장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 망초 100 중량부에 대하여 북시호 5 ~ 15 중량부가 혼합되는 것을 특징으로 하는, 위장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 망초 및 북시호의 혼합 분말을 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 용매로 추출된 것을 특징으로 하는, 위장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 위장질환은 알코올, 육체적 스트레스, 정신적 스트레스, 산화적 스트레스, 위산, 비스테로이드성 항염증 약물, 스테로이드 제제, 담배 및 헬리코박터 파일로리균 감염으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 원인에 의해 유발되는 것을 특징으로 하는, 위장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  6. 제 1항에 있어서, 상기 위장질환은 급성 위염, 만성 위염, 만성 활동성 위염, 만성 위축성 위염, 십이지장염, 위 궤양, 십이지장 궤양, 위 천공, 위 출혈, 비스테로이드성 항염증 약물(NSAID)과 연관된 소화 장애, 비궤양성 소화불량증, 위 식도 역류 질환 (역류성 식도염), 급성 상부 위장 출혈, 스트레스 궤양화, 헬리코박터 파일로리균 감염, 조린거-엘리슨 증후군 (Zollinger-Ellison syndrome, ZES), 베르너 증후군 (Werner's syndrome), 및 전신 비만세포증으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 위장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 위장질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  8. 제 7항에 있어서, 상기 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 망초 100 중량부에 대하여 북시호 5 ~ 15 중량부가 혼합되는 것을 특징으로 하는, 위장질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
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