WO2012144754A2 - 바이러스 억제 효능을 갖는 오배자 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물 및 이의 용도 - Google Patents

바이러스 억제 효능을 갖는 오배자 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
WO2012144754A2
WO2012144754A2 PCT/KR2012/002450 KR2012002450W WO2012144754A2 WO 2012144754 A2 WO2012144754 A2 WO 2012144754A2 KR 2012002450 W KR2012002450 W KR 2012002450W WO 2012144754 A2 WO2012144754 A2 WO 2012144754A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
ethyl
virus
gallate
extract
influenza virus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/KR2012/002450
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
WO2012144754A3 (ko
Inventor
박현
김경민
송현옥
김성연
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Industry Academic Cooperation Foundation of Wonkwang University
Original Assignee
Industry Academic Cooperation Foundation of Wonkwang University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Industry Academic Cooperation Foundation of Wonkwang University filed Critical Industry Academic Cooperation Foundation of Wonkwang University
Publication of WO2012144754A2 publication Critical patent/WO2012144754A2/ko
Publication of WO2012144754A3 publication Critical patent/WO2012144754A3/ko
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/22—Anacardiaceae (Sumac family), e.g. smoketree, sumac or poison oak
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses

Definitions

  • the present invention relates to a composition and its use containing a gall extract or a compound isolated therefrom as an active ingredient having a virus inhibitory effect.
  • Influenza virus is an RNA virus belonging to the family Orthomyxoviridae, and serotypes are classified into three types, type A, type B and type C. Among them, hepatitis B and C have been identified only in humans, while hepatitis A has been identified in humans, horses, pigs, other mammals and various types of poultry and wild birds (Selmons et al., Avian Dis. , 18 (1), pp 119-124, 1974; Webster RG et al., Microbiol Rev., 56 (1), pp 152-179, 1992).
  • the serotypes of influenza A virus are classified according to the two types of proteins on the surface of the virus: hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA), and 144 types (HA protein) 16 species and 9 NA proteins).
  • HA acts as a virus to attach to somatic cells
  • NA allows the virus to germinate from infected cells and penetrate into other cells (Alexander DJ, Vet. Microbiol., 74 (1-2), pp3-13, 2000 ).
  • influenza A virus The normal natural host of influenza A virus is known as wild waterfowl such as ducks, seagulls, etc.As a result of epidemiological investigations of influenza virus infection in wild birds around the world, all 16 existing HA and 9 NA types Influenza viruses have been confirmed to infect wild birds (Selmons et al., Avian Dis., 18 (1), pp119-124, 1974).
  • Avian influenza virus, classified as type A is a common infectious disease virus, a non-pathogenic avian influenza virus that causes mild respiratory symptoms according to pathogenicity when infected with chickens, and causes mortality and spawning degradation of about 1-30%.
  • LPAI Low pathogenic avian influenza
  • HPAI high pathogenic avian influenza
  • OIE International Water Services Bureau
  • the first record of human influenza dates back to 412 B.C.E., but the first pandemic influenza record of civilization is estimated to have occurred throughout Europe from 1173 to 1174 (Grmek MD, Les Maladies a L '). aube de la Civilization Accidentale, Payot, Paris, 1893). Since the 20th century, the record of influenza has been more scientifically treated and based on data left, there have been three pandemic influenza virus outbreaks in humans since the 20th century. The first pandemic of the influenza pandemic (aka Spanish flu) since the 20th century, which was in pandemic between 1918 and 1920, has been recorded as the greatest damage to civilization, and between 20 and 50 million people died during that period. (Walter JH, Bull. NY Acad.
  • the Spanish influenza virus is still a major epidemic of pandemic flu, which is still spreading worldwide every year, and has been identified as A / H1N1, a serotype very similar to the swine flu virus, but the RNA polymerase (PAymerase) PA, PB1 of Spanish influenza virus.
  • the PB2 subunit is derived from algae and has been reported to be infected by humans during the adaptation of the virus (Taubenberger JK et al., Nature, 437, pp889-893, 2005). ).
  • the second pandemic of the influenza virus since the 20th century, which occurred between 1957 and 1958, began in China and rapidly spread along the coast to nearby Hong Kong, Singapore, Japan and Taiwan in six to seven months.
  • the causative virus is serotype A / H3N2, which differs from the previous serotype H2N2 virus and HA, which has been analyzed to be transmitted from birds, and is still the main epidemic of pandemic flu, which is still prevalent worldwide every year. (Oxford JS, Rev. Med. Virol., 10 (2), pp 119-133, 2000).
  • serotypes of avian influenza virus are infected by humans, causing flu and causing death.
  • avian-induced avian influenza viruses including serotype A / H5N1, which has been called “Hong Kong bird flu" to date, and serotype A / H7N7, and serotype A / H9N2, can infect humans. It is estimated that there is a possibility. Therefore, the present study on the mutant viruses derived from these three serotypes is being conducted worldwide (Suarez DL et al., J. Virol., 72 (8), pp6678-6688, 1998).
  • the mutant virus is an avian influenza virus belonging to serotype A / H5N1, which is also avian influenza virus that has been prevalent only in birds for the first time among humans.
  • Influenza viruses can infect the respiratory tract, cause systemic symptoms, change their appearance periodically, and move to other hosts without killing them before they die. Although it is the virus that causes the greatest economic loss to human beings and preventive vaccines have been developed, they have not caught up with the mutation of the virus, and there is no fundamental virus treatment yet.
  • Amantadine and rimantadine are substances that inhibit the function of M2 ion channel proteins of influenza viruses and are representative antiviral agents that inhibit the growth of influenza viruses in vivo. However, these two antiviral agents were found to be effective only against serotype A influenza virus and not against serotype B influenza virus without M2 protein. In addition, amantadine and rimantadine have been found to have the disadvantage that the emergence of a mutant virus that does not affect the ion channel function of influenza virus M2 protein when used.
  • influenza virus Since the influenza virus was resistant to amantadine and rimantadine during the flu season of 2005-2006, CDC recommended discontinuing amantadine and rimantadine at this time (MMWR Morb Mortal Wkly Rep., 55, pp 44-46). , 2006).
  • Zanamivir and oseltamivir which are developed to compensate for these drawbacks, inhibit the function of the neuraminidase protein of influenza viruses and are representative of the suppression of influenza virus proliferation in vivo.
  • Antiviral agents These two antiviral agents are known to be effective against all 16 serotype A influenza virus viruses and serotype B influenza virus viruses.
  • zanamivir has the disadvantage of inhalation and intravenous administration, while oseltamivir can be administered orally, but it has been pointed out as a disadvantage due to side effects such as recent reports of the emergence of resistant virus and vomiting and dizziness upon oral administration (Ward P et. al., J. antimicrob. Chemother., 55 (supp1), pp5-21, 2005). Therefore, the need for the development of new anti-influenza preparations continues to emerge.
  • Coronaviruses are single-stranded RNA viruses of 100-160 nm in diameter in various forms. Its name derives from what appears to be a crown because of the club-shaped spine that is expressed from the viral envelope. Coronaviruses are divided into three antigen groups.
  • the representative animal-type coronaviruses include MHV (serum group II), a species that infects the gastrointestinal, liver and nervous systems in rodents such as rats and causes pathologies.
  • MHV-JHM and MHV-A59 strains were studied the most because the infection of the nervous system causes encephalomyelitis and cerebral infarction. This pathology is very similar to human pathology.
  • HCoV-229E and HCoV-OC43 coronavirus strains which cause colds in humans, are human isolates belonging to serogroups I and II, respectively, and the nasopharyngeal cilia through the aminopeptidase N receptor or sialic acid receptor. Infect epithelial cells. Recently, coronaviruses HCoV-NL63 (Group I) and HCoV-HKUI (Group II) were further isolated from patients admitted for acute respiratory disease (van der Hoek et al., 2004 Nature Med., 10, pp68-373, 2004; Woo et al., J.
  • SARS coronavirus-related diseases known as SARS between 2002 and 2003. The epidemic, which began in southern China, spread to 28 countries in Asia, Europe and the Americas, with about 8,000 patients. These natural pathogens of SARS-CoV are presumed to be Horseshoe bats, and are believed to have begun when humans come into contact with infected animals such as the Palm civet. SARS coronavirus is a virus that can cause a common infectious disease.
  • SARS coronavirus infects the human respiratory tract through the angiotensin convertase 2 receptor, the propagation mechanism of which is not fully understood and there is no proven treatment.
  • Ribavirin has been frequently used but has little in vitro effect on SARS-CoV and no effect on disease progression (Fauci et al., Harrison's Principle of Internal Medicine, 17th Ed., Vol 1, pp1362-1364, 2009; Knipe DM and Howley PM, Fields Virology, 5th Ed., Vol 1, pp 1307-1323, 2007).
  • anti-coronavirus preparations for human-infected coronaviruses are required as well as anti-influenza preparations.
  • the present inventors considered natural ingredients as a novel substance which is completely different from existing compounds, is less toxic, and can be a new target in the current situation in which the necessity of the development of new anti-influenza and anti-coronavirus preparations is continuously required.
  • the development using natural ingredients is more likely to succeed at a lower cost than the development of organic compound-derived formulations using chemical compound discovery. It is economical.
  • natural products are preferred for the prevention of early diseases and infectious diseases, the market is growing rapidly and is expected to replace side effects and resistance problems caused by long-term administration of existing antiviral agents.
  • the gall bladder is a worm house in which aphid aphid ( Aphis chinensis J. Bell) is stabbed on the leaves of Rhus javanica L. belonging to the family Anacardiaceae.
  • the outer surface is grayish brown with light hairs, 3 ⁇ 7cm long, 2 ⁇ 5cm wide and 2mm thick, and hard and easily broken.
  • the inside is usually empty or grayish white with dead bugs and secretions, sometimes with a disgusting smell.
  • the harvested gall are used by drying, boiling or steaming in the sun. Its main ingredient is 50 ⁇ 70% of pyrogallol tannin, and it contains malic acid and gallic acid. It is used as astringent, branch, and hemostatic agent for diarrhea, sputum, diabetes, bleeding, and anemia (Information, et al.
  • the gall bladder extract or the compound isolated therefrom exhibited anti-influenza effect and the mechanism of action thereof.
  • the anti-germ extract and the compound isolated therefrom were subjected to antiviral experiments against influenza virus, avian influenza virus, and animal-infected coronavirus, confirming their excellent antiviral effect to complete the present invention.
  • the present invention is a new influenza virus, algae containing as an active ingredient Galla Rhois extract (TCM-33) or a compound isolated therefrom having low toxicity and resistance to living organisms and exhibiting antimicrobial activity.
  • TCM-33 Galla Rhois extract
  • the present invention is an RNA polymerase of a new influenza virus, avian influenza virus and human infectious or acquired common infectious coronavirus containing Galla Rhois extract (TCM-33) or a compound isolated therefrom as an active ingredient. (polymerase) and neuraminidase inhibitors are provided.
  • Seasonal flu or swine flu viruses as defined herein are A / H1N1, A / H2N2, A / H3N1, A / H3N2, A / H3N8 and the like and avian influenza viruses are A / H9N2 (A / Chicken / Korea / MS96 / 1996) , A / H1N1, A / H5N1, A / H7N7, A / H7N2, A / H7N3, etc.
  • the human infection-type coronavirus is HCoV-229E (Group I), HCoV-NL63 (Group II), HCoV-OC43 (Group II), HCoV-HKUI (Group II) And SARS-CoV (Group II).
  • Other animal-infected coronaviruses include MHV-A59, MHV-JHM, and stomatitis virus includes VSV.
  • influenza virus and human infectious coronavirus Diseases caused by influenza virus and human infectious coronavirus as defined herein include seasonal flu, swine flu, avian influenza, common cold or acute respiratory syndrome (SARS).
  • SARS common cold or acute respiratory syndrome
  • the disease is characterized by occurring in mammals including humans.
  • composition containing the Galla Rhois extract (TCM-33) or a compound separated therefrom of the present invention as an active ingredient comprises 0.1 to 50% by weight of the extract or a compound separated therefrom based on the total weight of the composition. .
  • gallic acid (1) paradigal acid and metadigal acid represented by the following structural formulas (1) to (5) A mixture of methyl p -digallic acid and methyl m -digallic acid (2), penta- O -galloyl glucose (3), ethyl gallate (4) or ethyl para A mixture of ethyl p -digallate and ethyl m -digallate; 5, preferably a mixture of p -digallic acid and m -digallic acid) or ethyl p-di-gallate and ethyl methacrylate complex of di-gallate (a mixture of ethyl p -digallate and ethyl -digallate m), more preferably those of 1 to 2: 1 by weight of the composite, and most preferably Preferably, a new influenza containing a 1:
  • the extract is a solvent selected from water, a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms or a mixed solvent thereof, preferably water, ethanol or a mixed solvent thereof, more preferably a 50 to 90% ethanol mixed solvent, even more preferred.
  • a solvent selected from water, a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms or a mixed solvent thereof, preferably water, ethanol or a mixed solvent thereof, more preferably a 50 to 90% ethanol mixed solvent, even more preferred.
  • the gall bladder extract of the present invention may be dried by cutting dried gall bladder into about 1 to 30 times water, preferably about 10 to 20 times dry weight, a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms or a mixed solvent thereof, preferably water. , Ethanol or a mixed solvent thereof, more preferably a 50 to 90% ethanol mixed solvent, even more preferably a 70 to 80% ethanol mixed solvent, at an extraction temperature of 20 to 100 ° C., preferably 80 to 100 ° C.
  • extraction method such as cold extraction, hot water extraction, ultrasonic extraction, reflux cooling extraction, preferably 1 to 5 times obtained using a reflux cooling extraction method, Preferably repeated extraction 2 to 3 times and then concentrated under reduced pressure to obtain the five gall extract of the present invention.
  • the present invention is obtained from the above production method and the above production method, gallic acid (1) as described in Fig. 1 (HPLC) herein, a complex of paradigal acid and metadigal acid (2), ethyl gallate (4) and a quinine 70% ethanol extract (hereinafter referred to as GR70E) consisting of a content ratio (4.3: 1: 7.2: 16.3) of the complex of ethyl paradigalate and ethyl metadigallate (5).
  • GR70E quinine 70% ethanol extract
  • the first step to obtain the gallastula extract A second step of dissolving the crude extract in distilled water and then eluting with distilled water, 50% aqueous ethanol and ethanol on an Amberlite XAD-2 resin column; A third step of subjecting the 50% aqueous ethanol eluting fraction obtained in the second step to chromatography and dividing into seven fractions; A fourth step of dividing the first fraction from the third fraction into three fractions by chromatography; A fifth step of separating the first fraction from the fourth step fraction by silica gel column chromatography to obtain gallic acid; A sixth step of subjecting the second fraction of the fourth step fraction to column chromatography to obtain a complex of paradigal acid and metadigal acid; A seventh step of subjecting the third fraction of the fourth fraction to column chromatography to obtain pentao-galloyl glucose; An eighth step of column chromatography of the fourth fraction of the fractions of the fourth step to obtain ethyl gallate; The sixth fraction of the fraction of the fraction of the fractions
  • the present invention relates to a novel influenza virus, avian influenza virus, and human infectious or acquired common infection-type coronavirus containing a Galla Rhois extract or a compound isolated therefrom as an active ingredient.
  • the gall bladder extract of the present invention and the compounds isolated therefrom have low toxicity and resistance, and also conducted antiviral experiments against swine flu virus, avian influenza virus, and animal infected corona virus, and confirmed their excellent antiviral effect. It was. Molecular modeling studies have also shown that compounds isolated from gall bladder extracts may exhibit intense inhibitory activity by acting as target molecules on RNA polymerase and neuraminidase of the H1N1 influenza virus, H1N1, avian influenza virus and human infectious agents. In addition, it has been found to be useful for the treatment and prevention of seasonal influenza, swine flu, avian influenza, common cold or severe respiratory syndrome (SARS) caused by acquired common infectious coronavirus.
  • SARS severe respiratory syndrome
  • the pharmaceutical composition of the present invention comprises 0.1 to 50% by weight of the extract or compound based on the total weight of the composition.
  • compositions containing extracts or compounds of the invention may further comprise suitable carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of pharmaceutical compositions containing extracts or compounds of the invention.
  • compositions or compounds of the present invention may be used in the form of their pharmaceutically acceptable salts, and may be used alone or in combination with other pharmaceutically active compounds, as well as in a suitable collection.
  • compositions containing extracts or compounds according to the invention are in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols and the like, oral preparations, suppositories, and sterile injectable solutions, respectively, according to conventional methods. Can be formulated and used.
  • Carriers, excipients and diluents which may be contained in the composition containing the compound include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium Silicates, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.
  • diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents, and surfactants are usually used.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and such solid preparations may contain at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose, or the like. ) Or lactose, gelatin and the like are mixed.
  • lubricants such as magnesium stearate and talc are also used.
  • Oral liquid preparations include suspensions, solvents, emulsions, and syrups, and may include various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories.
  • the non-aqueous solvent and suspending agent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate and the like can be used.
  • As the base of the suppository witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
  • Preferred dosages of the extracts or compounds of the present invention vary depending on the condition and weight of the patient, the extent of the disease, the form of the drug, the route of administration and the duration, and may be appropriately selected by those skilled in the art.
  • the extract or compound of the present invention is preferably administered at 0.0001 to 100 mg / kg, preferably at 0.001 to 10 mg / kg. Administration may be administered once a day or may be divided several times. The dosage does not limit the scope of the invention in any aspect.
  • the extracts or compounds of the present invention can be administered to mammals such as mice, mice, livestock, humans, etc. by various routes. All modes of administration can be expected, for example by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine dural or intracerebroventricular injection.
  • the present invention is for the prevention and improvement of diseases caused by the new influenza virus, avian influenza virus and human infectious or acquired common infection type coronavirus containing Galla Rhois extract or a compound isolated therefrom as an active ingredient.
  • Examples of the food to which the extract or compound of the present invention can be added include various foods, beverages, gums, teas, vitamin complexes, and health functional foods.
  • the amount of the extract or compound in the food or beverage may be added at 0.01 to 15% by weight of the total food weight, the health beverage composition is 0.02 to 5 g, preferably 0.3 to 1g based on 100 ml Can be added.
  • Health functional food of the present invention includes the form of tablets, capsules, pills, liquids and the like.
  • the health functional beverage composition of the present invention is not particularly limited to other ingredients except for containing the extract or compound as essential ingredients in the indicated ratios, and may contain various flavors or natural carbohydrates as additional ingredients, such as ordinary drinks.
  • natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose and the like; And conventional sugars such as polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • natural flavoring agents such as, tauumatin, stevia extract (for example, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be advantageously used.
  • the proportion of said natural carbohydrates is generally about 1-20 g, preferably about 5-12 g per 100 ml of the composition of the present invention.
  • the extracts or compounds of the present invention are various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavors such as synthetic flavors and natural flavors, coloring and neutralizing agents (such as cheese, chocolate), pectic acid and salts thereof, alginic acid And salts thereof, organic acids, protective colloid thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated drinks, and the like.
  • the extracts or compounds of the present invention may contain fruit flesh for the production of natural fruit juices and fruit juice beverages and vegetable beverages. These components can be used independently or in combination. The proportion of such additives is not so critical but is generally selected in the range of 0 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the extract or compound of the present invention.
  • the present invention includes an animal feed additive for preventing diseases caused by a new influenza virus, avian influenza virus and human infectious or acquired common infectious coronavirus containing a Galla Rhois extract or a compound isolated therefrom and the same Provide feed.
  • the animal feed additive composition may be 20 to 90% high concentrate or powder or granule form.
  • composition for animal feed additives of the present invention includes organic acids such as citric acid, fumaric acid, adipic acid, lactic acid, malic acid, phosphates such as sodium phosphate, potassium phosphate, acid pyrophosphate and polyphosphate (polymeric phosphate), polyphenols, and catechins (catechin) ), Alpha-tocopherol, rosemary extract (rosemary extract), vitamin C, green tea extract, licorice extract, chitosan, tannic acid, phytic acid and the like may further include any one or more than one.
  • organic acids such as citric acid, fumaric acid, adipic acid, lactic acid, malic acid, phosphates such as sodium phosphate, potassium phosphate, acid pyrophosphate and polyphosphate (polymeric phosphate), polyphenols, and catechins (catechin)
  • Alpha-tocopherol rosemary extract (rosemary extract), vitamin C, green tea extract, licorice extract, chitosan,
  • Animal feed additives containing the composition of the present invention and feed comprising the same as a secondary component various supplements such as amino acids, inorganic salts, vitamins, antibiotics, antibacterial substances, antioxidants, antifungal enzymes, live microbial preparations, grains, for example Milled or crushed wheat, oats, barley, corn and rice; Vegetable protein feed, such as rape, soybeans and sunflower; Animal protein feeds such as blood meal, meat meal, bone meal and fish meal; Sugars and dairy products, for example, dry powders consisting of various powdered milks and whey powders, and drying additives, and then liquid components and components which become liquids after heating, that is, lipids, for example, animals liquefied by heating, for example.
  • various supplements such as amino acids, inorganic salts, vitamins, antibiotics, antibacterial substances, antioxidants, antifungal enzymes, live microbial preparations, grains, for example Milled or crushed wheat, oats, barley, corn and rice; Vegetable protein feed
  • the animal feed additive composition may be administered to an animal in combination with other feed additives in an edible carrier alone.
  • composition for animal feed additives can be easily administered as a top dressing or directly mixed with the animal feed or separately from the feed, in a separate oral formulation, by injection or transdermal or in combination with other ingredients.
  • a single daily dose or divided daily doses can be used, as is well known in the art.
  • the dosage form of the composition may be prepared in an immediate release or sustained release formulation in combination with these composition-toxic pharmaceutically acceptable edible carriers.
  • edible carriers can be solid or liquid, for example corn starch, lactose, sucrose, soy flakes, peanut oil, olive oil, sesame oil and propylene glycol.
  • the dosage form of the extract may be tablets, capsules, powders, torokies or sugar-containing tablets or top dressings in microdisperse form.
  • a liquid carrier it may be in the form of soft gelatin capsules or syrups or liquid suspensions, emulsions or solutions.
  • the dosage form may contain auxiliaries such as preservatives, stabilizers, wetting or emulsifying agents, solution promoters and the like.
  • animal feed in which the extract / compound of the present invention is included as an animal feed additive may be any protein-containing organic cereal meal commonly used to meet the dietary needs of animals.
  • protein-containing flours typically consist mainly of corn, soy flour, or corn / bean flour mixtures.
  • the animal feed additive may be used by adding to the animal feed by dipping, spraying or mixing.
  • the invention is applicable to a number of animal diets, including mammals, poultry and fish. More specifically, the diet is commercially important mammals such as pigs, cows, sheep, goats, laboratory rodents (rats, mice, hamsters and gerbils), furry animals (eg mink and fox), and Zoo animals (eg monkeys and tailless monkeys), as well as livestock (eg cats and dogs).
  • Commercially important poultry typically include chickens, turkeys, ducks, geese, pheasants and quails.
  • Commercially raised fish, such as trout may also be included.
  • the composition is incorporated into the animal feed in an amount of about 1 g to 100 g per kg of feed on a dry weight basis.
  • the feed mixture is thoroughly mixed and then a viscous granulated or granular material is obtained depending on the degree of grinding of the components. It is fed as a mash or formed into the desired discrete shape for further processing and packaging. At this time, it is preferable to add water to the animal feed and then go through the usual pelletization, expansion, or extrusion process to prevent separation during storage. Excess water may be removed to dryness.
  • the gall bladder extract of the present invention and the compounds isolated therefrom exhibit excellent antiviral effects against diseases caused by the new influenza virus, avian influenza virus and human infectious or common infectious coronavirus. It can be provided as an additive or feed.
  • FIG. 1 is a diagram showing the anti-influenza virus effect of the five constituent compounds isolated from the gall bladder extract through RT-PCR and plaque assay
  • FIG. 2 is a diagram showing the results of inhibition of RNA synthesis and protein N and M of coronavirus
  • 3 to 5 is a diagram showing the anti-coronavirus effect of OB-34, OB-36, OB-3131 as seen through the Plaque assay,
  • 6 to 8 are antiviral synergistic effects of OB-36 and OB-3131 on coronaviruses MHV-A59 and MHV-JHM, stomatitis VSV,
  • FIG. 9 is a diagram showing the anti-coronavirus action mechanism of OB-34, OB-36, OB-3131.
  • the extract or compound of the present invention may be administered in the following formulations, and the following formulation examples are merely illustrative of the present invention, thereby not limiting the content of the present invention.
  • the above ingredients are mixed and filled in an airtight cloth to prepare a powder.
  • tablets are prepared by tableting according to a conventional method for preparing tablets.
  • the above ingredients are mixed and filled into gelatin capsules to prepare capsules.
  • the amount of the above ingredient is prepared per ampoule (2 ml).
  • each component is added and dissolved in purified water, lemon flavor is added, the above ingredients are mixed, and then, purified water is added to adjust the total amount to 100 ml, and then sterilized by filling into a brown bottle.
  • purified water is added to adjust the total amount to 100 ml, and then sterilized by filling into a brown bottle.
  • Vitamin B6 0.5 mg
  • composition ratio of the vitamin and mineral mixture is a composition suitable for a relatively healthy food in a preferred embodiment
  • the compounding ratio may be arbitrarily modified, and the above ingredients are mixed according to a conventional health food manufacturing method.
  • the granules may be prepared and used for preparing a health food composition according to a conventional method.
  • Example 2-1 Take 2.5 g of the 50% ethanol elution fraction obtained in Example 2-1, place it on a reversed phase YMC column and chromatograph using methanol: distilled water (3: 7 ⁇ 5: 5 ⁇ 10: 0, v / v) as the eluent.
  • the chromatography was combined, concentrated and divided into seven fractions (AG).
  • the first fraction, A (0.9 g), was placed on a Sephadex LH-20 column, followed by chloroform and methanol (6). Chromatography was carried out using: 1 ⁇ 3: 1 ⁇ 1: 1, v / v) as the elution solvent, and small fractions (A1 to A3) were separated into three secondary fractions.
  • the first fraction of the second fraction, A1 (30 mg), was subjected to silica gel column chromatography using chloroform: methanol: distilled water (6: 1: 0.1, v / v) using an eluting solvent to give compound 1 (7 mg). It was confirmed that the result of the instrumental analysis was gallic acid (gallic acid) having the following physical properties (Cha et al., Kor. J. Pharmacogn., 31, pp185-189, 2000).
  • A3 (460 mg), the third fraction of the second fraction obtained in Example 2-2, was placed on a Sephadex LH-20 column, and chromatographed using methanol as an elution solvent to give one fraction (A31). Purified. Chromatography using A31 on a reversed-phase YMC column with methanol: distilled water (4: 6, v / v) as the eluent, combining and concentrating those with the same behavior in thin layer chromatography (A311-A314). The third fraction A313 (146 mg) was subjected to Sephadex LH-20 column chromatography using methanol: distilled water (8: 2 ⁇ 9: 1 ⁇ 10: 0, v / v).
  • the gall bladder extract has a killing effect to the concentration of 6.25 mg / ml.
  • influenza virus A / human / korea / KUMC-33 / 2006 / H1N1, distribution institution: Pathogenic Viral Bank [Host, Korea University]
  • the virus was released for a certain time to collect polyethylene glycol (PEG; The virus was precipitated with Polyethylene glycol 8000, Usb corporation) and the viral RNA was extracted.
  • RT-PCR was performed by preparing primers specific to the NS segment, and the virus RNA of the NS segment was detected in the cells treated with only DMSO but untreated group (OB-34, OB-36).
  • OB-311, OB-312, and OB-3131 did not detect the viral RNA of the NS segment, demonstrating its antiviral efficacy against influenza A virus (H1N1) (see FIG. 1). .
  • Influenza virus (A / human / korea / KUMC-33 / 2006 / H1N1, Institution: Pathogenic Virus Bank [Host, Korea University]) after infecting cells with a compound isolated from the blastocyst ethanol extract (OB-34, OB -36, OB-311, OB-312, and OB-3131) were processed together. Cells infected with the virus were further cultured in the incubator for a certain period of time, and then the plaque assay was used to determine whether virus release was reduced by the drug.
  • OB-34, OB -36, OB-311, OB-312, and OB-3131 a compound isolated from the blastocyst ethanol extract
  • influenza A virus H1N1
  • DMSO dimethyl methyl sulfoxide
  • Northern blotting RNA is extracted from virus-infected cells and denatured, followed by electrophoresis on an agarose gel. Thereafter, RNA was detected using a 32 P-labeled random-primed probe specific to the MHV coronavirus strain.
  • Western blotting virus-infected cells are lysed to separate proteins and electrophoresed by SDS-PAGE. Transfer to the membrane to determine the presence or absence of the protein as an antibody to the S, M, N protein of the MHV coronavirus strain.
  • MHV-A59 and MHV-JHM coronavirus strains available from Dr. Shinji Makino, U of Texas Medical Branch, Galveston, TX, USA
  • VSV stomatitis virus strains available from Dr. Shinji Makino, U of Texas Medical Branch, Galveston, TX, USA
  • the compound OB-34, OB-36, OB-311, OB-312, OB-3131
  • Cells infected with the virus were further cultured in the incubator for a certain period of time, and then the plaque assay was used to determine whether virus release was reduced by the drug.
  • OB-34 Three compounds, OB-34, OB-36, and OB-3131, showed up to 1,000 times higher antiviral efficacy against coronavirus compared to the control ribavirin.
  • rhabodoviridae a stranded RNA virus
  • OB-3131 also inhibits the proliferation of VSV (negative strand RNA virus rhabodoviridae) stomatitis virus in addition to coronavirus, confirming its potential as a broad antiviral agent.
  • VSV negative strand RNA virus rhabodoviridae
  • the cells are infected with MHV-A59 and MHV-JHM coronavirus strains and VSV stomatitis virus strains.
  • OB-36 and OB-3131 alone or in half the concentration of the compound separated from the gall bladder extract and gall bladder extract was treated together.
  • Cells infected with the virus were further cultured in the incubator for a certain period of time, and then the plaque assay was used to determine whether virus release was reduced by the drug.
  • Northern blotting RNA is extracted from virus-infected cells and denatured, followed by electrophoresis on an agarose gel. Thereafter, RNA was detected using a 32 P-labeled random-primed probe specific to the MHV coronavirus strain.
  • Western blotting virus-infected cells are lysed to separate proteins and electrophoresed by SDS-PAGE. Transfer to the membrane to determine the presence or absence of the protein as an antibody to the S, M, N protein of the MHV coronavirus strain.
  • OB-34, OB-36, and OB-3131 which are compounds isolated from the gall bladder extract, inhibited the adsorption of the virus to the cells
  • the experimental and untreated controls treated with the compound when the virus was attached to the cells.
  • the degree of adhesion was observed.
  • the degree of adhesion was examined by Northern blotting after isolation of viral RNA in the cell. If the compound inhibits the adsorption of the virus to the cell, the amount of viral RNA will be reduced compared to the control without the compound.
  • OB-34 and OB-36 do not inhibit the RNA synthesis of coronavirus and the synthesis of N protein, a structural protein, and it is highly likely to inhibit the assembly or release of coronavirus, and OB-3131 is a coronavirus. Inhibition of the synthesis of RNA and the synthesis of N protein was likely to inhibit the early stages of coronavirus proliferation (entry, RNA synthesis or processing of nonstructural proteins) (see Fig. 9).
  • the gall bladder extract of the present invention and the compounds isolated therefrom exhibit excellent antiviral effects against diseases caused by the new influenza virus, avian influenza virus and human infectious or common infectious coronavirus. It can be used as an additive or feed.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Fodder In General (AREA)

Abstract

상기에 언급한 바와 같이, 본 발명의 오배자 추출물 및 이로부터 분리된 화합물은 신종인플루엔자바이러스, 조류인플루엔자 바이러스 및 인체 감염형 혹은 인수 공통 감염형 코로나바이러스에 기인한 질환에 대하여 뛰어난 항바이러스 효과를 나타내어 약학조성물, 건강기능식품, 사료 첨가제 또는 사료로 이용될 수 있다.

Description

바이러스 억제 효능을 갖는 오배자 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물 및 이의 용도
본 발명은 바이러스 억제 효능을 갖는 오배자 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물 및 이의 용도에 관한 것이다.
[문헌 1] 정보섭 외, 향약대사전, pp380-384, 영림사, 1998
[문헌 2] Harborne J.B., Phytochemical methods: A guide to modern techniques of plant analysis, 3rd Ed., pp6-7, 1998
[문헌 3] Fauci et al., Harrison's Principle of Internal Medicine, 17th Ed., Vol 1, pp1362-1364, 2009
[문헌 4] Knipe DM and Howley PM, Fields Virology, 5th Ed., Vol1, pp1307-1323, 2007
[문헌 5] Selmons et al., Avian Dis., 18(1), pp119-124, 1974
[문헌 6] Webster RG et al., Microbiol Rev., 56(1), pp152-179, 1992
[문헌 7] Alexander DJ, Vet. Microbiol., 74(1-2), pp3-13, 2000
[문헌 8] Grmek MD, Les Maladies a L'aube de la Civilization Accidentale, Payot, Paris, 1893
[문헌 9] Walter JH, Bull. NY Acad. Med., 54, pp855-864, 1978
[문헌 10] Potter CW, J. appl. Microbiol., 91, pp572-579, 2001
[문헌 11] Taubenberger JK et al., Nature, 437, pp889-893, 2005
[문헌 12] Oxford JS, Rev. Med. Virol., 10(2), pp119-133, 2000
[문헌 13] Suarez DL et al., J. Virol., 72(8), pp6678-6688, 1998
[문헌 14] MMWR. Morb. Mortal. Wkly. Rep., 55, pp44-46, 2006
[문헌 15] Ward P et al., J. antimicrob. Chemother., 55(supp1), pp5-21, 2005
[문헌 16] Clercq ED, Nature Rew; Drug Discovery, 5, pp1015-1025, 2006
[문헌 17] Obayashi E et al., Nature, 455, pp1127-1132, 2008
[문헌 18] van der Hoek et al., 2004 Nature Med., 10 pp68-373, 2004
[문헌 19] Woo et al., J. Virol., 79, pp884-895, 2005
[문헌 20] Fouchier et al., PNAS, 101, pp6212-6216, 2004
[문헌 21] Cha et al., Kor. J. Pharmacogn., 31, pp185-189, 2000
[문헌 22] Nishizawa et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, pp2963-2968, 1982
[문헌 23] Khanbabaee and Lotzerich, Tetrahedron, 53, pp10725-10732, 1997
[문헌 24] Redwane et al., J. Ethnopharmacol., 79, pp261-263, 2002
[문헌 25] Yang et al., Yaoxue Xuebao, 34, pp457-462, 1999
[문헌 26] Choi JQ et al., J. of Veterinary Science, 9(1), pp67-74, 2008
[문헌 27] Hoffmann et al., Arch. Virol., 146, pp2275-2289, 2001
[문헌 28] Kim et al., J. Clin. Virol., 41, pp112-118, 2008
[문헌 29] Kim et al., Antiviral therapy, 15, pp697-709, 2010
인플루엔자 바이러스 (Influenza virus)는 오르소믹소 계통(Family Orthomyxoviridae)에 속하는 RNA 바이러스로서 혈청형은 A형, B형, C형 등 3가지로 구분된다. 그 중 B형과 C형은 사람에서만 감염이 확인되고 있으며, A형은 사람, 말, 돼지, 기타 포유류 그리고 다양한 종류의 가금과 야생조류에서 감염이 확인되고 있다(Selmons et al., Avian Dis., 18(1), pp119-124, 1974; Webster RG et al., Microbiol Rev., 56(1), pp152-179, 1992).
A형 인플루엔자 바이러스의 혈청형은 바이러스 표면의 두 가지 단백질인 햄어글루티닌(Hemagglutinin: HA), 뉴라미니다제(Neuraminidase: NA)의 종류에 따라 구분되며, 혈청형에 따라 144종류(HA 단백질 16종과 NA 단백질 9종)로 분류할 수 있다. HA는 바이러스가 체세포에 부착하는 역할을 하며, NA는 바이러스가 감염된 세포로부터 발아해 다른 세포 내로 침투할 수 있도록 한다(Alexander DJ, Vet. Microbiol., 74(1-2), pp3-13, 2000). A형 인플루엔자 바이러스의 정상적인 자연숙주는 오리, 갈매기 등과 같은 야생 물새류로 알려져 있으며, 전 세계적으로 야생조류에 대한 인플루엔자 바이러스 감염 역학조사를 실시한 결과 현존하는 모든 16종의 HA형과 9종의 NA형 인플루엔자 바이러스가 야생조류에서 감염되고 있음이 확인되었다(Selmons et al., Avian Dis., 18(1), pp119-124, 1974). A형으로 분류되는 조류인플루엔자 바이러스는 인수(人獸) 공통 감염병 바이러스로, 닭에 감염 시 병원성에 따라 가벼운 호흡기 증상을 유발하는 비병원성 조류인플루엔자 바이러스, 1~30% 내외의 폐사와 산란 저하를 유발하는 저병원성 조류인플루엔자 바이러스(Low pathogenic avian influenza: LPAI) 그리고 95% 이상의 높은 치사성을 보이고 "조류독감(버드플루: Bird flu)"이라고도 불리는 고병원성 조류인플루엔자 바이러스(Highly pathogenic avian influenza: HPAI)등 크게 3가지 병형으로 구분하고 있다(Alexander DJ, Vet. Microbiol., 74(1-2), pp3-13, 2000). 이중 고병원성 조류인플루엔자 바이러스는 국제수역사무국(OIE)에서 A 등급으로, 그리고 국내에서는 제1종 가축전염병으로 분류하고 있다.
사람 인플루엔자에 대한 최초의 기록은 기원전 412년으로 거슬러 올라가나, 인류 최초의 인플루엔자 대유행(pandemic influenza) 기록은 1173년부터 1174년에 유럽 전역에서 발생한 것으로 추정하고 있다(Grmek MD, Les Maladies a L'aube de la Civilization Accidentale, Payot, Paris, 1893). 20세기에 접어들면서 인플루엔자에 대한 기록이 보다 과학적으로 다루어지면서 남겨진 자료를 근거해 보면 20세기 이후 지금까지 사람에서 3번의 인플루엔자 바이러스 대유행이 있었다. 1918년부터 1920년 사이에 전 세계적으로 유행한 20세기 이후의 1차 인플루엔자 대유행(일명 스페인 독감)은 인류가 겪은 가장 큰 피해로 기록되고 있으며 그 기간 중 2천만 명에서 5천만 명의 사람이 사망하였다(Walter JH, Bull. NY Acad. Med., 54, pp855-864, 1978). 스페인 독감의 원인 바이러스는 지금도 매년 전 세계적으로 유행하고 있는 유행성 독감의 주된 유행주로서 돼지인플루엔자 바이러스와 매우 유사한 혈청형인 A/H1N1으로 판명되었으나, 스페인 독감 원인 바이러스의 RNA 폴리머라제(poymerase) PA, PB1, PB2 서브유닛(subunit)은 조류에서 유래한 것으로 이 바이러스가 적응과정(Adaptation)을 거치는 동안 변이가 일어나서 사람에게 감염되었다는 것이 보고되었다(Taubenberger JK et al., Nature, 437, pp889-893, 2005). 1957년부터 1958년 사이에 발생한 20세기 이후의 2차 인플루엔자 바이러스 대유행은 중국에서 시작하여 6-7개월 사이에 해안을 따라 인근의 홍콩, 싱가포르, 일본, 대만 등지로 급속도로 전파되었다. 이 기간 중 전 세계 인구의 약 40-50% 정도가 감염되었으며, 그중 25% 정도가 임상증상을 보였고, 주로 유아층이나 중장년층들만이 감염되어 사망하였으며, 그 기간 중 약 1백만 명의 사람이 사망하였다(Potter CW, J. appl. Microbiol., 91, pp572-579, 2001). 원인 바이러스는 혈청형 A/H2N2 인플루엔자 바이러스로 확인되었다. 또한 1968부터 1969년 사이에 발생한 3차 인플루엔자 바이러스 대유행은 홍콩에서 유래된 것으로 확인되었으며 대만, 필리핀, 싱가포르, 베트남 등지로 급속히 전파되었다. 원인 바이러스는 혈청형 A/H3N2 바이러스로서 이전의 혈청형 H2N2 바이러스와 HA형이 다른데, 이 HA형은 조류로부터 전달된 것으로 분석되고 있으며, 지금도 매년 전 세계적으로 유행하고 있는 유행성 독감의 주된 유행주이다(Oxford JS, Rev. Med. Virol., 10(2), pp119-133, 2000).
조류에서 주로 문제시되고 있는 조류인플루엔자바이러스 중 일부 혈청형은 사람에 감염되어 독감증세를 보이다가 사망을 유발하기도 한다. 현재까지 "홍콩조류독감"이라 불리고 있는 혈청형 A/H5N1을 포함하여 혈청형 A/H7N7, 그리고 혈청형 A/H9N2 등 총 3종의 조류 유래 조류 독감 바이러스 중 일부의 변종 바이러스들이 인체에 감염될 가능성이 있는 것으로 추정되고 있다. 따라서 현재 이들 3종의 혈청형에서 유래된 변종 바이러스에 대한 연구가 전 세계적으로 진행되고 있는 실정이다(Suarez DL et al., J. Virol., 72(8), pp6678-6688, 1998).
최근 베트남에서 보고되고 있는 조류 독감 바이러스(혈청형 A/H5N1 조류 인플루엔자 바이러스 바이러스)의 종속간의 장벽을 뛰어넘는 인체감염 사례는 20세기 이후의 4차 사람 인플루엔자 대유행의 전주곡으로서 전 세계가 현재 이 인체감염이 가능한 변이 바이러스의 사람에서 사람으로의 직접전염 등 그 전파양상에 주목하고 있다. 이 변이 바이러스는 혈청형 A/H5N1이 속하는 조류 인플루엔자 바이러스이며, 이 바이러스 역시 인류가 처음으로 경험하는 지금까지 조류에서만 유행하던 조류 인플루엔자 바이러스이기 때문이다.
인플루엔자 바이러스는 호흡기에 감염되어 전신증상을 일으키고, 주기적으로 모습을 바꿀 뿐 아니라, 숙주를 죽이지 않고 숙주가 죽기 전에 다른 숙주로 이동하기 때문에 과학자들은 인플루엔자 바이러스는 인류의 종말까지 살아남는 바이러스일 것으로 추측한다. 인류에게 가장 큰 경제적 손실을 가져오는 바이러스이며 예방백신이 개발되어 있기는 하지만 바이러스의 변이를 따라 잡지는 못하고 있는 실정이며, 아직 근본적인 바이러스 치료는 이루어지지 않고 있다.
아만타딘(amantadine)과 리만타딘(rimantadine)은 인플루엔자 바이러스의 M2 이온채널 단백의 기능을 억제하는 물질로 생체 내 인플루엔자 바이러스의 증식을 억제하는 대표적인 항바이러스 제제들이다. 그러나 이들 두 가지 항바이러스 제제들은 혈청형 A형 인플루엔자 바이러스에만 효과적이며, M2 단백질이 없는 혈청형 B형 인플루엔자 바이러스에는 효과가 없는 것으로 확인되었다. 또한 아만타딘과 리만타딘은 사용 시 인플루엔자 바이러스 M2 단백의 이온채널기능에 영향을 미치지 못하는 변이 바이러스의 출현이 매우 쉽게 일어나는 단점이 있는 것으로 확인되고 있다. 2005-2006년의 독감시즌에 91%의 인플루엔자 바이러스가 아만타딘과 리만타딘에 내성이 있었으므로 CDC에서는 이 시기에 아만타딘과 리만타딘 사용중단을 권하였다(MMWR Morb Mortal Wkly Rep., 55, pp44-46, 2006). 이러한 단점을 보완하기 위하여 개발된 자나미비르(zanamivir)와 오셀타미비르(oseltamivir)는 인플루엔자 바이러스의 뉴라미니다제(neuraminidase) 단백의 기능을 억제하는 물질로 생체 내 인플루엔자 바이러스의 증식을 억제하는 대표적인 항바이러스 제제들이다. 이들 두 가지 항바이러스제제들은 16종의 모든 혈청형 A형 인플루엔자 바이러스 바이러스와 혈청형 B형 인플루엔자 바이러스 바이러스에도 효과적인 것으로 알려져 있다. 그러나 자나미비르는 흡입 및 정맥 투여해야 하는 단점이 있으며, 오셀타미비르는 경구투여가 가능하나 최근 내성 바이러스의 출현 보고와 경구투여 시 구토와 현기증 등의 부작용이 있어 단점으로 지적되고 있다(Ward P et al., J. antimicrob. Chemother., 55(supp1), pp5-21, 2005). 따라서 새로운 항인플루엔자 제제 개발의 필요성이 지속적으로 대두되고 있다.
코로나바이러스는 다양한 형태로 직경 100~160nm 크기의 단일 가닥 RNA 바이러스이다. 바이러스 외피로부터 표출되어있는 곤봉 모양의 돌기 때문에 왕관모양처럼 보이는 데에서 그 이름이 유래되었다. 코로나바이러스는 3가지 항원군으로 나누어지는데, 대표적인 동물 감염형 코로나바이러스로는 쥐와 같은 설치류에서 위장, 간, 신경계에 감염되어 병리현상을 일으키는 종인 MHV(혈청군 II)가 있다. 그 중 MHV-JHM과 MHV-A59 균주가 가장 많이 연구되었는데 그 이유는 신경계에 감염하여 뇌척수염이나 뇌경색 등을 일으키는데 이 병리현상이 사람의 병리현상과 매우 유사하기 때문이다. 사람에서 감기를 일으키는 HCoV-229E와 HCoV-OC43 코로나바이러스 균주는 각각 혈청군 I과 II에 속하는 사람분리주로서 아미노펩티다제(Aminopeptidase) N 수용체 또는 시알산(Sialic acid) 수용체를 통해 비인두의 섬모화 상피세포를 감염시킨다. 최근 코로나바이러스 HCoV-NL63(I군)와 HCoV-HKUI(II군)이 급성호흡기질환으로 입원한 환자에서 추가로 분리되었다(van der Hoek et al., 2004 Nature Med., 10, pp68-373, 2004; Woo et al., J. Virol., 79, pp884-895, 2005; Fouchier et al., PNAS, 101, pp6212-6216, 2004). 2002~2003년 사스(SARS)로 알려진 코로나바이러스 관련 질환의 유행이 있었다. 중국 남부에서 시작된 유행이 아시아, 유럽 및 아메리카의 28개국으로 펴져 약 8천 명의 환자가 발생되었다. 이러한 사스 코로나바이러스(SARS-CoV)의 자연계 병원소는 말굽박쥐(Horseshoe bat)로 추정되며 사향고양이(Palm civet)와 같은 감염된 동물과 사람이 접촉하면서 유행이 시작된 것으로 생각되고 있다. 즉 사스 코로나바이러스는 인수 공통 감염병을 일으킬 수 있는 바이러스이다. 사스 코로나바이러스는 엔지오텐신(angiotensin) 전환효소 2 수용체를 통하여 사람 호흡기를 감염시키는데 그 전파기전은 완전하게 밝혀져 있지 않고, 입증된 치료법 또한 없다. 리바비린(Ribavirin)이 자주 사용되어왔지만 SARS-CoV에 대한 시험관 내 효과가 거의 없고 질환의 경과에도 효과가 없었다(Fauci et al., Harrison's Principle of Internal Medicine, 17th Ed., Vol 1, pp1362-1364, 2009; Knipe DM and Howley PM, Fields Virology, 5th Ed., Vol1, pp1307-1323, 2007). 이렇듯 인체에 감염되어 감기 증상을 일으키는 코로나바이러스에 대한 뚜렷한 치료제가 없는 바, 항인플루엔자 제제와 마찬가지로 인체 감염형 코로나바이러스에 대한 항코로나바이러스 제제의 개발도 요구되고 있다.
본 발명자들은 새로운 항인플루엔자 및 항코로나바이러스 제제 개발의 필요성이 지속적으로 요구되는 현 상황에서 기존의 화합물과는 전혀 다르고 독성도 적으며 신규 타깃이 될 수 있는 신규 물질로 천연물 성분을 고려하였다. 천연물 성분을 이용한 개발은 화학 합성물 탐색을 이용한 유기 합성 물질 유래 제제 개발보다 상대적으로 적은 비용을 투입하고도 개발 성공 가능성이 높으며, 합성 신약의 개발에 비해 천연물 의약의 개발은 연구 개발비와 소요 기간에 있어서 경제적이다. 또한 천연물 신약이 초기질환 및 감염질환의 예방 목적으로 선호됨에 따라 시장이 급속히 성장하고 있으며 기존 항바이러스 제제의 장기 투여에 따른 부작용 및 내성 문제를 대체할 수 있을 것으로 기대된다.
이에 본 발명자들은 천연약품자원으로부터 항바이러스 효과를 갖는 물질을 확인하던 중 본 발명자들에 의해 특허등록된 바 있는 오배자 추출물 및 이로부터 분리된 화합물들의 효능에 대해 집중 연구하였다. 기존 특허에서 본 발명자들은 오배자 추출물 및 이로부터 분리된 화합물들이 돼지 호흡기 또는 소화기 질환에 뛰어난 항균 및 항바이러스 효과를 나타냄을 확인한 바가 있다(한국특허등록 제 10-1008463호). 오배자는 옻나무과(Anacardiaceae)에 속하는 붉나무(Rhus javanica L.)의 잎에 오배자진딧물(Aphis chinensis J. Bell)이 자상을 주어생긴 벌레집을 말하는데, 우리나라 각지에 분포한다. 오배자의 형태를 보면, 외면은 회갈색으로 연한 털이 있고, 길이는 3~7cm, 폭 2~5cm, 두께 2mm 정도이며 단단하면서도 쉽게 부숴 진다. 속은 대개 비어 있거나 회백색의 죽은 벌레와 분비물이 남아 있을 때도 있고, 역겨운 냄새가 나기도 한다. 채집한 오배자는 햇볕에 말리거나 삶거나 쪄서 사용된다. 주성분으로는 피로가롤 탄닌(pyrogallol tannin)이 50~70% 함유되어 있으며, 몰식자산, 갈산(gallic acid) 등이 있다. 약효로는 수렴, 지사, 지혈제로 설사, 가래, 당뇨, 하혈, 빈혈 등에 이용한다(정보섭 외, 향약대사전, pp. 380~384, 영림사, 1998).
따라서 본 발명에서는 오배자 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물이 항인플루엔자 효과를 나타내는지 연구하고 그 작용기전을 연구하였다. 본 발명에서는 오배자 추출물 및 이로부터 분리된 화합물이 신종인플루엔자바이러스, 조류인플루엔자바이러스 및 동물 감염형 코로나바이러스에 대한 항바이러스 실험을 수행한 바, 이들의 탁월한 항바이러스 효과를 확인하여 본 발명을 완성하였다.
상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 생체에 독성 및 내성이 적고 항균 활성을 나타내는 오배자(Galla Rhois) 추출물(TCM-33) 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 신종인플루엔자바이러스, 조류인플루엔자바이러스 및 인체 감염형 혹은 인수 공통 감염형 코로나바이러스에 기인한 질환의 예방 및 치료를 위한 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 오배자(Galla Rhois) 추출물(TCM-33) 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 신종인플루엔자바이러스, 조류인플루엔자바이러스 및 인체 감염형 혹은 인수 공통 감염형 코로나바이러스의 RNA 폴리머라제(polymerase)와 뉴라미니다제(neuraminidase) 저해제를 제공한다.
본원에서 정의되는 계절 독감 또는 신종인플루엔자바이러스는 A/H1N1, A/H2N2, A/H3N1, A/H3N2, A/H3N8 등이며 조류인플루엔자 바이러스는 A/H9N2 (A/Chicken/Korea/MS96/1996), A/H1N1, A/H5N1, A/H7N7, A/H7N2, A/H7N3 등(실제 조류인플루엔자 감염환자가 발생한 경우로서, 이론적으로는 16종류의 H와 9종류의 N의 조합을 통한 144종의 조류인플루엔자바이러스 subtype이 가능함)을 포함하며, 상기 인체 감염형 코로나바이러스는 HCoV-229E(I군), HCoV-NL63(II군), HCoV-OC43(II군), HCoV-HKUI(II군), SARS-CoV(II군)등을 포함한다. 이 외 동물 감염형 코로나바이러스는 MHV-A59, MHV-JHM을 포함하고 구내염바이러스는 VSV형을 포함한다.
본원에서 정의되는 인플루엔자바이러스 및 인체 감염형 코로나바이러스에 기인한 질환은 계절 독감, 신종인플루엔자, 조류인플루엔자, 일반 감기 또는 중증급성호흡기증후군(SARS)을 포함한다.
상기 질환은 사람을 포함한 포유동물에 발생하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 오배자(Galla Rhois) 추출물(TCM-33) 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 0.1 ~ 50 중량% 포함한다.
또한 본원에서 정의되는 "오배자(Galla Rhois) 추출물(TCM-33)로부터 분리된 화합물"은 하기 구조식 (1) 내지 (5)로 표기되는 갈산(gallic acid; 1), 파라 디 갈산과 메타 디 갈산의 복합물(a mixture of methyl p-digallic acid and methyl m-digallic acid; 2), 펜타 오-갈로일 글루코스(penta-O-galloyl glucose; 3), 에틸 갈레이트(ethyl gallate; 4) 또는 에틸 파라 디 갈레이트와 에틸 메타 디 갈레이트의 복합물(a mixture of ethyl p-digallate and ethyl m-digallate; 5), 바람직하게는 파라 디 갈산과 메타 디 갈산의 복합물(a mixture of p-digallic acid and m-digallic acid) 또는 에틸 파라 디 갈레이트와 에틸 메타 디 갈레이트의 복합물(a mixture of ethyl p-digallate and ethyl m-digallate), 보다 바람직하게는 이들의 1~2: 1 중량비의 복합물, 가장 바람직하게는 이들의 1: 1 중량비의 복합물을 유효성분으로 함유하는 신종인플루엔자바이러스, 조류인플루엔자바이러스 및 인체 감염형 혹은 인수 공통 감염형 코로나바이러스에 기인한 질환의 예방 및 치료를 위한 약학 조성물을 제공한다.
화학식 1
Figure PCTKR2012002450-appb-C000001
화학식 2
Figure PCTKR2012002450-appb-C000002
화학식 3
Figure PCTKR2012002450-appb-C000003
화학식 4
Figure PCTKR2012002450-appb-C000004
화학식 5
Figure PCTKR2012002450-appb-C000005
또한, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매, 바람직하게는 물, 에탄올 또는 이들의 혼합용매, 보다 바람직하게는 50 내지 90% 에탄올 혼합용매, 보다 더 바람직하게는 70 내지 80% 에탄올 혼합용매로 추출한 것을 포함한다.
이하, 본 발명의 추출물 및 화합물을 수득하는 방법을 상세히 설명한다.
본 발명의 오배자 추출물은, 건조된 오배자를 세절하여 건조 중량의 약 1 내지 30배, 바람직하게는 약 10 내지 20배의 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물, 에탄올 또는 이들의 혼합용매, 보다 바람직하게는 50 내지 90% 에탄올 혼합용매, 보다 더 바람직하게는 70 내지 80% 에탄올 혼합용매로, 20 내지 100℃, 바람직하게는 80 내지 100℃ 추출온도에서 약 1시간 내지 10일, 바람직하게는 약 2시간 내지 5시간동안 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출 등의 추출방법, 바람직하게는 환류냉각 추출방법을 이용하여 수득한 1 내지 5회, 바람직하게는 2 내지 3회 반복 추출한 후 감압 농축하여 본 발명의 오배자 추출물을 수득할 수 있다.
따라서, 본 발명은 상기 제조 방법 및 상기 제조방법으로부터 수득됨을 특징으로 하는 본원 도 1(HPLC)에 기재되는 바와 같은 갈산(1), 파라 디 갈산과 메타 디 갈산의 복합물(2), 에틸 갈레이트(4) 및 에틸 파라 디 갈레이트와 에틸 메타 디 갈레이트의 복합물(5)의 함유비(4.3:1:7.2:16.3)로 구성되는 오배자 70% 에탄올 추출물(이하 GR70E이라 함)을 제공한다.
본 발명의 화합물은, 상기 오배자 추출물을 수득하는 제 1단계; 상기 조추출물을 증류수에 녹인 후, 앰버라이트 XAD-2 수지 컬럼에 걸고 증류수, 50% 수성 에탄올 및 에탄올로 각각 용출하는 제 2단계; 제 2단계에서 수득한 50% 수성 에탄올 용출 분획물을 크로마토그래피를 수행하여 7개의 분획으로 나누는 제 3단계; 상기 제 3단계의 분획 중 첫 번째 분획을 크로마토그래피를 수행하여 3개의 분획으로 나누는 제 4단계; 상기 제 4단계의 분획물 중 첫 번째 분획을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 분리하여 갈산을 수득하는 제 5단계; 상기 제 4단계의 분획물 중 두 번째 분획을 컬럼 크로마토그래피를 실시하여 파라 디갈산과 메타 디갈산의 복합물을 수득하는 제 6단계; 상기 제 4단계의 분획물 중 세 번째 분획을 컬럼 크로마토그래피를 실시하여 펜타 오-갈로일 글루코스를 수득하는 제 7단계; 상기 제 4단계의 분획물 중 네 번째 분획을 컬럼 크로마토그래피를 실시하여 에틸 갈레이트를 수득하는 제 8단계; 상기 제 4단계의 분획물 중 여섯 번째 분획을 컬럼 크로마토그래피를 실시하여 에틸 파라 디 갈레이트와 에틸 메타 디 갈레이트의 복합물을 수득하는 제 9단계의 제조 공정을 통해 본 발명의 오배자 추출물로부터 순수 분리된 화합물을 수득할 수 있다.
또한, 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있다(Harborne J.B., Phytochemical methods: A guide to modern techniques of plant analysis, 3rd Ed., pp6-7, 1998).
본 발명은 상기의 제조방법으로 얻어진 오배자(Galla Rhois) 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 신종인플루엔자바이러스, 조류인플루엔자바이러스 및 인체 감염형 혹은 인수 공통 감염형 코로나바이러스에 기인한 질환의 예방 및 치료를 위한 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 오배자 추출물 및 이로부터 분리된 화합물은 독성 및 내성이 적으며 또한 신종인플루엔자바이러스, 조류인플루엔자바이러스 및 동물 감염형 코로나 바이러스에 대한 항바이러스 실험을 수행한 바, 이들의 탁월한 항바이러스 효과를 확인하였다. 또한 분자 모델링 연구는 오배자 추출물로부터 분리된 화합물들이 신종인플루엔자바이러스의 RNA 폴리머라제와 뉴라미니다제를 표적분자로 작용하여 강렬한 저해활성을 나타낼 것임을 보여주어, 신종인플루엔자바이러스, 조류인플루엔자바이러스 및 인체 감염형 혹은 인수 공통 감염형 코로나바이러스에 기인한 계절 독감, 신종인플루엔자, 조류인플루엔자, 일반 감기 또는 중증급성호흡기증후군(SARS)의 치료 및 예방에 유용함을 확인하였다.
본 발명의 약학 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물 또는 화합물을 0.1 내지 50 중량%로 포함한다.
본 발명의 추출물 또는 화합물을 함유하는 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 추출물 또는 화합물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 추출물 또는 화합물을 함유하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 화합물을 함유하는 조성물에 함유될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골(macrogol), 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 추출물 또는 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물 또는 화합물은 1일 0.0001 내지 100 ㎎/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 10 ㎎/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 추출물 또는 화합물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관 내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
또한, 본 발명은 오배자(Galla Rhois) 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 신종인플루엔자바이러스, 조류인플루엔자바이러스 및 인체 감염형 혹은 인수 공통 감염형 코로나바이러스에 기인한 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 추출물 또는 화합물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다.
또한, 코로나바이러스 및 인플루엔자 바이러스로 인한 질환의 예방 효과를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물 또는 화합물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 가할 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제, 액제 등의 형태를 포함한다.
본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물 또는 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.
상기 외에 본 발명의 추출물 또는 화합물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 추출물 또는 화합물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 추출물 또는 화합물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은 오배자(Galla Rhois) 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 함유하는 신종인플루엔자바이러스, 조류인플루엔자바이러스 및 인체 감염형 혹은 인수 공통 감염형 코로나바이러스에 기인한 질환 예방용 동물사료 첨가제 및 이를 포함하는 사료를 제공한다.
상기의 동물사료 첨가제용 조성물은 20 내지 90% 고농축액 이거나 분말 또는 과립형태일 수 있다.
본 발명의 동물사료 첨가제용 조성물은 구연산, 후말산, 아디픽산, 젖산, 사과산 등의 유기산이나 인산나트륨, 인산칼륨, 산성피로인산염, 폴리인산염(중합인산염) 등의 인산염이나 폴리페놀, 카테킨(catechin), 알파-토코페롤, 로즈마리 추출물(rosemary extract), 비타민 C, 녹차 추출물, 감초 추출물, 키토산, 탄닌산, 피틴산 등의 천연 항산화제 중 어느 하나 또는 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물을 함유하는 동물사료 첨가제 및 이를 포함하는 사료는 보조성분으로 아미노산, 무기염류, 비타민, 항생물질, 항균물질, 항산화, 항곰팡이 효소, 살아있는 미생물 제제 등과 같은 각종보조제가 곡물, 예를 들면 분쇄 또는 파쇄된 밀, 귀리, 보리, 옥수수 및 쌀; 식물성 단백질 사료, 예를 들면 평지, 콩 및 해바라기를 주성분으로 하는 것; 동물성 단백질 사료, 예를 들면 혈분, 육분, 골분 및 생선분; 당분 및 유제품, 예를 들면 각종 분유 및 유장 분말로 이루어지는 건조성분, 건조 첨가제를 모두 혼합한 후, 액체 성분과, 가열 후에 액체가 되는 성분, 즉, 지질, 예를 들면 가열에 의해 임의로 액화시킨 동물성 지방 및 식물성 지방 등과 같은 주성분 이외에 영양보충제, 소화 및 흡수향상제, 성장촉진제, 질병예방제 등과 같은 물질과 함께 사용될 수 있다.
상기 동물사료 첨가제용 조성물은 동물에게 단독으로 식용 담체 중에서 다른 사료 첨가제와 조합되어 투여될 수 있다.
또한, 상기 동물사료 첨가제용 조성물은 탑 드레싱으로서 또는 이들을 동물 사료에 직접 혼합하거나 또는 사료와 별도로, 별도의 경구 제형으로, 주사 또는 경피로 또는 다른 성분과 조합하여 쉽게 투여할 수 있다. 통상적으로, 당업계에 잘 알려진 바와 같이 단독 일일 투여량 또는 분할 일일 투여량을 사용할 수 있다.
상기 동물사료 첨가제용 조성물은 동물 사료와 별도로 투여할 경우, 당업계에 잘 알려진 바와 같이 조성물의 투여 형태는 이들 조성물-독성 제약상 허용 가능한 식용 담체와 조합하여 즉석 방출 또는 서방성 제형으로 제조할 수 있다. 이러한 식용 담체는 고체 또는 액체, 예를 들어 옥수수 전분, 락토오스, 수크로스, 콩 플레이크, 땅콩유, 올리브유, 참깨유 및 프로필렌 글리콜일 수 있다. 고체 담체가 사용될 경우, 추출물의 투여형은 정제, 캡슐제, 산제, 토로키제 또는 함당정제 또는 미분산성 형태의 탑 드레싱일 수 있다. 액체 담체가 사용될 경우, 연 젤라틴 캡슐제, 또는 시럽제 또는 액체 현탁액제, 에멀젼제 또는 용액제의 투여 형태일 수 있다. 또한, 투여 형태는 보조제, 예를 들어 보존제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 용액 촉진제 등을 함유할 수 있다.
또한, 본 발명의 추출물/화합물이 동물사료 첨가제로 포함되는 동물사료는 동물의 식이 요구를 충족시키는데 통상적으로 사용되는 임의의 단백질-함유 유기 곡분일 수 있다. 이러한 단백질-함유 곡분은 통상적으로 옥수수, 콩 곡분 또는 옥수수/콩 곡분 믹스로 주로 구성되어 있다.
상기의 동물사료 첨가제는 침지, 분무 또는 혼합하여 상기 동물사료에 첨가하여 이용될 수 있다.
본 발명은 포유류, 가금 및 어류를 포함하는 다수의 동물 식이에 적용할 수 있다. 보다 상세하게, 식이는 상업상 중요한 포유류, 예를 들어 돼지, 소, 양, 염소, 실험용 설치 동물(랫트, 마우스, 햄스터 및 게르빌루스쥐), 모피 소유 동물(예, 밍크 및 여우), 및 동물원 동물(예, 원숭이 및 꼬리 없는 원숭이), 뿐만 아니라 가축 (예, 고양이 및 개)에게 사용할 수 있다. 통상적으로 상업상 중요한 가금에는 닭, 터키, 오리, 거위, 꿩 및 메추라기가 포함된다. 송어와 같은 상업적으로 사육되는 어류도 포함될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물을 포함한 동물용 사료 배합 방법은, 상기 조성물을 동물 사료에 건조 중량 기준으로 사료 1 kg당 약 1 g 내지 100 g의 양으로 혼입한다.
또한, 사료 혼합물은 완전히 혼합한 후, 성분들의 분쇄 정도에 따라 경점성의 조립 또는 과립 물질이 얻어진다. 이것을 매시로서 공급하거나, 또는 추가 가공 및 포장을 위해 원하는 분리된 형상으로 형성한다. 이 때, 저장 중에 분리되는 것을 방지하기 위해, 동물 사료에 물을 첨가하고, 이어서 통상의 펠릿화, 팽창화, 또는 압출 공정을 거치는 것이 바람직하다. 과잉의 물은 건조 제거될 수 있다.
본 발명의 오배자 추출물 및 이로부터 분리된 화합물은 신종인플루엔자바이러스, 조류인플루엔자 바이러스 및 인체 감염형 혹은 인수 공통 감염형 코로나바이러스에 기인한 질환에 대하여 뛰어난 항바이러스 효과를 나타내어 약학조성물, 건강기능식품, 사료 첨가제 또는 사료로 제공할 수 있다.
도 1은 RT-PCR과 plaque assay 통해 본 오배자 추출물로부터 분리된 5종 구성화합물의 항인플루엔자 바이러스 효과를 나타낸 도이고,
도 2는 코로나바이러스의 RNA 합성 억제 및 단백질 N과 M에 대한 억제 결과를 나타낸 도이고,
도 3 내지 도 5은 Plaque assay 통해 본 OB-34, OB-36, OB-3131의 항코로나바이러스 효과를 나타낸 도이고,
도 6 내지 도 8는 코로나바이러스인 MHV-A59와 MHV-JHM, 구내염바이러스인 VSV에 대한 OB-36, OB-3131의 항바이러스 시너지 효과를 나타낸 도이고,
도 9는 OB-34, OB-36, OB-3131의 항코로나바이러스 작용기전을 나타낸 도이다.
본 발명의 추출물 또는 화합물을 아래와 같은 제형으로 투여할 수 있으며, 아래의 제제 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 이에 의해 본 발명의 내용이 제한되는 것은 아니다.
제제예 1. 산제의 제조
GR50E 추출물 20 mg
유당 100 mg
탈크 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
제제예 2. 정제의 제조
OB-36 화합물 10 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
제제예 3. 캡슐제의 제조
OB-3131 화합물 10 mg
결정성 셀룰로오스 3 mg
락토오스 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충진하여 캡슐제를 제조한다.
제제예 4. 주사제의 제조
OB-3131 화합물 10 mg
만니톨 180 mg
주사용 멸균 증류수 2974 mg
Na2HPO412H2O 26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
제제예 5. 액제의 제조
OB-34 화합물 10 mg
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 100 ㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
제제예 6. 건강 식품의 제조
GR70E 추출물 1000 ㎎
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 ㎍
비타민 E 1.0 ㎎
비타민 B1 0.13 ㎎
비타민 B2 0.15 ㎎
비타민 B6 0.5 ㎎
비타민 B12 0.2 ㎍
비타민 C 10 ㎎
비오틴 10 ㎍
니코틴산아미드 1.7 ㎎
엽산 50 ㎍
판토텐산 칼슘 0.5 ㎎
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 ㎎
산화아연 0.82 ㎎
탄산마그네슘 25.3 ㎎
제1인산칼륨 15 ㎎
제2인산칼슘 55 ㎎
구연산칼륨 90 ㎎
탄산칼슘 100 ㎎
염화마그네슘 24.8 ㎎
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
제제예 7. 건강 음료의 제조
GR100E 추출물 1000 ㎎
구연산 1000 ㎎
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900 ㎖
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
이하, 본 발명을 하기의 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 오배자 조추출물의 제조
1-1. 오배자 물 추출물의 제조
익산시 소재 대학한약국에서 구입한 건조된 오배자를 분쇄기를 이용하여 입자의 크기가 30메시(mesh) 이하가 되도록 분쇄하여 오배자 분말을 수득한 후, 상기에서 수득한 건조된 오배자(30 g) 질량의 10배에 해당하는 증류수를 가하여 100℃에서 2시간 동안 환류 냉각 추출하고 여과 및 동결건조하여 20.0 g의 오배자 물 추출물(이하 G"라 명명함; 추출율 66.7%)을 수득하였다.
1-2. 오배자 에탄올 추출물의 제조
1-2-1. 70% 에탄올 추출물의 제조 (TCM-33)
익산시 소재 대학한약국에서 구입한 건조된 오배자를 분쇄기를 이용하여 입자의 크기가 30메시 이하가 되도록 분쇄하여 분말을 수득한 후, 상기에서 수득한 건조된 오배자(30 g) 질량의 10배에 해당하는 70% 수성 에탄올을 가하여 100℃에서 2시간 동안 환류 냉각 추출하고 여과 및 감압 농축 (EYELA사, N-1000, 일본)하여 22.4 g의 오배자 에탄올 추출물(이하 GR70E"이라 명명함; 추출율 74.7%)을 수득하였다.
1-2-2. 30% 에탄올 추출물의 제조
추출용매로 30% 에탄올 추출용매를 사용하는 점만 달리하고 상기 제조공정과 동일하게 추출을 수행하여 오배자 30% 에탄올 추출물(이하 GR30E"이라 명명함;추출율 67.9%)을 수득하였다.
1-2-3. 50% 에탄올 추출물의 제조
추출용매로 50% 에탄올 추출용매를 사용하는 점만 달리하고 상기 제조공정과 동일하게 추출을 수행하여 오배자 50% 에탄올 추출물(이하 GR50E"이라 명명함;추출율 69.7%)을 수득하였다.
1-2-4. 100% 에탄올 추출물의 제조
추출용매로 100% 에탄올 추출용매를 사용하는 점만 달리하고 상기 제조공정과 동일하게 추출을 수행하여 오배자 100% 에탄올 추출물(이하 GR100E"이라 명명함;추출율 53.3%)을 수득하였다.
실시예 2. 오배자 추출물로부터 화합물의 분리
2-1. 수지에 의한 GR70E의 분획물 제조
상기 실시예 1-2-1 단계에서 얻은 GR70E 37.3 g을 앰버라이트 XAD-2 수지 컬럼에 걸고 각각 1 ℓ의 증류수, 50% 에탄올 및 100% 에탄올을 용출용매로 사용하여 크로마토그래피를 실시하여 증류수, 50% 에탄올 및 100% 에탄올의 용출 분획을 얻었다.
2-2. 갈산의 분리(화합물1(OB-311이라 함))
상기 실시예 2-1 단계에서 얻은 50% 에탄올 용출분획 2.5 g을 취하여 역상 YMC 컬럼에 걸고 메탄올:증류수(3:7→5:5→10:0,v/v)을 용출용매로 사용하여 크로마토그래피를 실시하여 박층 크로마토그래피에서 동일한 양상을 나타내는 것들을 합하고 농축하여 7개의 분획(A-G)으로 나누었으며, 이중 첫 번째 분획인 A(0.9 g)를 세파덱스 LH-20 컬럼에 걸고 클로로포름과 메탄올 (6:1→3:1→1:1,v/v)을 용출용매로 사용하여 크로마토그래피를 실시하여 3개의 이차 분획으로 소분획(A1~A3)하였다. 이차분획 중 첫 번째 분획인 A1 (30 mg)을 클로로포름:메탄올:증류수(6:1:0.1, v/v)를 용출용매를 사용하여 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 실시하여 화합물1(7 mg)을 수득하였고, 기기분석결과 하기 물성치를 갖는 갈산(gallic acid)임을 확인하였다(Cha et al., Kor. J. Pharmacogn., 31, pp185-189, 2000).
무색분말: (-)-ESI-MS m/z 169 [M-H]-;
1H-NMR(acetone-d 6, 500 MHz): 7.06(2H, s, galloyl-2, 6).
2-3. 파라 디 갈산과 메타 디 갈산의 분리(화합물2 (OB-312이라 함))
상기 실시예 2-2 단계에서 얻은 2차 분획 중 두 번째 분획인 A2(80 mg)를 클로로포름:메탄올:증류수(4.5:1:0.1, v/v)를 사용하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 실시하여 화합물2(50 mg)를 수득하였고, 기기분석결과 하기 물성치를 갖는 파라 다이 갈산과 이의 아이소머인(isomer) 메타 다이 갈산(p- and m-digallic acid) 복합물임을 확인하였다(Nishizawa et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, pp2963-2968, 1982).
무색분말: (-)-ESI-MS m/z 321 [M-H]-;
1H-NMR(acetone-d 6, 500 MHz): (p-digallic acid) 7.20(2H, s, galloyl-2', 6'), 7.11(2H, s, galloyl-2, 6); (m-digallic acid) 7.40(1H, d, J = 1.8 Hz, galloyl-2), 7.23(1H, d, J = 1.8 Hz, galloyl-6), 7.20 (2H, s, galloyl-2', 6');
13C-NMR(acetone-d 6, 125 MHz): (p-digallic acid) 128.5 (C-1), 108.8 (C-2, 6), 150.4(C-3,5), 131.3(C-4), 168.0(C=O), 119.4(C-1'), 109.7 (C-2', 6'), 145.3(C-3',5'), 138.8(C-4'), 164.7(C'=O); (m-digallic acid) 121.0(C-1), 114.0(C-2), 146.1(C-3), 142.7(C-4), 138.8(C-5), 116.4(C-6), 167.7(C=O), 119.5(C-1'), 109.8(C-2', 6'), 145.4(C-3',5'), 139.0(C-4'), 164.22 (C'=O).
2-4. 펜타 오-갈로일 글루코스의 분리(화합물3(OB-3131이라 함)
상기 실시예 2-2 단계에서 얻은 2차 분획 중 세 번째 분획인 A3(460 mg)를 세파덱스 LH-20 컬럼에 걸고 메탄올을 용출용매로 사용하여 크로마토그래피를 실시하여 1개의 분획(A31)으로 정제하였다. A31을 역상 YMC 컬럼에 걸고 메탄올:증류수(4:6, v/v)을 용출용매로 사용하여 크로마토그래피를 실시하여 박층 크로마토그래피에서 동일한 양상을 나타내는 것들을 합하고 농축하여 4개의 분획(A311-A314)으로 나누었으며, 이중 세 번째 분획 A313(146 mg)을 메탄올:증류수(8:2→9:1→10:0, v/v)를 사용하여 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피를 실시하여 화합물3(42 mg)를 수득하였고, 기기분석결과 하기 물성치를 갖는 펜타 오-갈오일 글루코스(penta-O-galloyl-beta-D-glucopyranose)임을 확인하였다(Khanbabaee and Lotzerich, Tetrahedron, 53, pp10725-10732, 1997).
무색분말: (-)-ESI-MS m/z 939 [M-H]-;
1H-NMR(CD3OD, 500 MHz): 7.10, 7.04, 6.97, 6.94, 6.89(each 2H, s, galloyl-2, 6), 6.23(1H, d, J = 8.2 Hz, H-1), 5.90(1H, t, J = 9.6 Hz, H-3), 5.61(1H, t, J = 9.6 Hz, H-4), 5.58(1H, t, J = 9.6 Hz, H-2), 4.35-4.51(3H, m, H-5, 6);
13C-NMR(CD3OD, 125 MHz): 92.5(C-1), 70.8(C-2), 72.7(C-3), 68.4(C-4), 73.1(C-5), 61.8(C-6), 118.4, 118.8, 118.9, 119.0, 119.6(galloyl-1), 109.0, 109.1, 109.3(galloy-2, 6), 144.8, 144.9, 145.0, 145.1, 145.2(galloy-3, 5), 138.7, 138.8, 139.0, 139.1, 139.4(galloy-4), 164.9, 165.6, 165.7, 165.9, 166.6(C=O).
2-5. 에틸 갈레이트의 분리(화합물4(OB-34이라 함)
상기 실시예 2-2 단계에서 얻은 분획 중 4 번째 분획인 D(430 mg)를 클로로포름:메탄올:증류수(9:1:0.1, v/v)를 사용하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 실시하여 화합물4(240 mg)를 수득하였고, 기기분석결과 하기 물성치를 갖는 에틸 갈레이트(ethyl gallate)임을 확인하였다(Redwane et al., J. Ethnopharmacol., 79, pp261-263, 2002).
무색분말: (-)-ESI-MS m/z 197 [M-H]-;
1H-NMR(acetone-d 6, 500 MHz): 7.11(2H, s, galloyl-2, 6), 4.23(2H, q, J = 7.3 Hz, OCH2), 1.30(3H, t, J = 7.3 Hz, CH3);
13C-NMR(acetone-d 6, 125 MHz): 121.3(C-1), 108.9(C-2, 6), 145.2(C-3, 5), 137.8(C-4), 60.0(OCH2), 13.8(CH3), 165.9(C=O).
2-6. 에틸 파라 디 갈레이트와 에틸 메타 디 갈레이트의 분리(화합물5(OB-36" 이라 함))
상기 실시예 2-2 단계에서 얻은 분획 중 6 번째 분획인 F(190 mg)를 역상 YMC 컬럼에 걸고 메탄올:증류수(4:6, v/v)을 용출용매로 사용하여 크로마토그래피를 반복 실시하여 화합물5(15.6 mg)를 수득하였고, 기기분석결과 하기 물성치를 갖는 에틸 파라 디 갈레이트와 이의 아이소머인(isomer) 에틸 메타 디 갈레이트(ethyl p- and m-digallate)혼합물임을 확인하였다(Nishizawa et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, pp2963-2968, 1982; Yang et al., Yaoxue Xuebao, 34, pp457-462, 1999).
무색분말: (-)-ESI-MS m/z 349 [M-H]-;
1H-NMR(acetone-d 6, 500 MHz): (ethyl p-digallate) 7.25(2H, s, galloyl-2', 6'), 7.17(2H, s, galloyl-2, 6), 4.29(2H, q, J = 7.3 Hz, OCH2), 1.33(3H, t, J = 7.3 Hz, CH3); (ethyl m-digallate) 7.44(1H, d, J = 1.8 Hz, galloyl-2), 7.33(1H, d, J = 1.8 Hz, galloyl-6), 7.26(2H, s, galloyl-2', 6'), 4.27(2H, q, J = 7.3 Hz, OCH2), 1.31(3H, t, J = 7.3 Hz, CH3);
13C-NMR(acetone-d 6, 125 MHz): (ethyl p-digallate) 128.3(C-1), 108.8(C-2, 6), 150.4(C-3,5), 131.5(C-4), 165.5(C=O), 119.9(C-1'), 109.8(C-2', 6'), 145.3(C-3',5'), 139.0(C-4'), 60.4(OCH2), 13.8(CH3), 164.1(C'=O); (ethyl m-digallate) 121.1(C-1), 113.6(C-2), 146.1(C-3), 142.5(C-4), 138.5(C-5), 116.4(C-6), 165.3(C=O), 120.0(C-1'), 109.9(C-2', 6'), 145.2(C-3',5'), 138.7(C-4'), 60.6(OCH2), 13.7(CH3), 163.4(C'=O).
실험예 1. 조류인플루엔자 바이러스 저해 활성 시험
상기 실시예에서 얻은 시료들의 조류인플루엔자 바이러스에 대한 억제활성을 확인하기 위하여 문헌에 개시된 방법을 응용하여 하기와 같이 실험하였다(Choi JQ et al., J. of Veterinary Science, 9(1), pp67-74, 2008).
국내에서 분리된 조류인플루엔자 바이러스(A/Chicken/Korea/MS96/1996(H9N2); Dr. Sun Joon Kim [서울대학교]로부터 분양받음)를 사용하여 2x106 EID50/0.2 ml 함량의 조류인플루엔자 바이러스와 동량을 혼합하고 실온에서 45분 동안 반응시킨 후 생존한 바이러스 함량을 종란에 접종하는 방법으로 진행되었다.
표 1
samples 시료농도에 따른 조류인플루엔자 사멸 효과 검색(mg/ml)
25 12.5 6.25 3.13 1.56 바이러스
TCM-33 - 0/5 0/5 5/5 5/5 5/5
[표 1] 오배자 추출물의 조류인플루엔자 사멸 효과
본 조류인플루엔자바이러스(AIV)의 사멸효능을 조사한 결과, 오배자 추출물이 6.25 mg/ml 농도까지 사멸효능이 있는 것으로 확인되었다.
실험예 2. 오배자 추출물로부터 얻은 화합물들의 항인플루엔자 바이러스 (A/H1N1) 효능 시험
상기 실시예에서 오배자 추출물로부터 얻은 화합물들의 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스 효능을 확인하기 위하여 문헌에 개시된 방법을 응용하여 하기와 같이 실험하였다(Hoffmann et al., Arch. Virol., 146, pp2275-2289, 2001).
인플루엔자바이러스(A/human/korea/KUMC-33/2006/H1N1, 분양기관: 병원성바이러스은행[주관기관,고려대학교])를 세포에 감염시킨 후 일정 시간 동안 방출된 바이러스를 모아서 폴리에틸렌 글리콜(PEG; Polyethylene glycol 8000, Usb corporation)로 바이러스를 침전시킨 후 바이러스 RNA (Viron RNA)를 추출하였다. NS segment에 특이적인 primer를 제조해 RT-PCR을 수행한 결과, 비처리군 세포 및 DMSO 만을 처리한 세포에서는 NS segment의 바이러스 RNA가 검출되었으나 오배자 추출물로부터 분리된 화합물(OB-34, OB-36, OB-311, OB-312, OB-3131)을 처리한 세포 샘플에서는 NS segment의 바이러스 RNA가 검출되지 않아, 인플루엔자 A 바이러스(H1N1)에 대해 항바이러스 효능이 있음을 입증하였다(도 1참조).
인플루엔자바이러스(A/human/korea/KUMC-33/2006/H1N1, 분양기관: 병원성바이러스은행[주관기관,고려대학교])를 세포에 감염시킨 후 오배자 에탄올 추출물로부터 분리된 화합물(OB-34, OB-36, OB-311, OB-312, OB-3131)을 함께 처리하였다. 바이러스를 감염시킨 세포는 배양기에서 일정 시간 동안 더 배양한 후, 약제에 의해 바이러스방출이 감소되었는지를 플라크분석법(Plaque assay)으로 조사하였다. 조사결과, 오배자 추출물로부터 분리된 화합물(OB-34, OB-36, OB-311, OB-312, OB-3131)을 처리하였을 때 인플루엔자 A 바이러스(H1N1)의 방출양이 대조군(DMSO)에 비해 현저히 감소해 인플루엔자 A 바이러스(H1N1)에 대해 항바이러스 효능이 있음을 입증하였다(도 1 참조).
실험예 3. 오배자 추출물의 항코로나바이러스 효과 시험
상기 실시예에서 얻은 오배자 추출물의 항코로나 바이러스 효과를 확인하기 위하여 문헌에 개시된 방법을 응용하여 하기와 같이 실험하였다(Kim et al., J. Clin. Virol., 41, pp112-118, 2008; Kim et al., Antiviral therapy, 15, pp697-709, 2010).
세포에 MHV-A59와 MHV-JHM 코로나바이러스 균주(Dr. Shinji Makino, U of Texas Medical Branch, Galveston, TX, USA]로부터 분양받음) 및 VSV 구내염바이러스 균주를 감염시킨다. 이때 오배자 추출물을 함께 처리하고 바이러스를 감염시킨 세포는 배양기에서 일정 시간 동안 배양한 후, 약제에 의해 바이러스방출이 감소되었는지를 플라크분석법(Plaque assay)으로 조사하였다. 조사 결과, 오배자 추출물이 대조물질인 리바비린(Ribavirn)보다 항코로나바이러스 효과가 더 우수함을 입증하였다(표 2 참조).
표 2
samples Relative titer of released virus
MHV-A59 MHV-JHM VSV
Virus only 100.0 100.0 100.0
DMSO 103.0± 7.9 91.1± 7.8 98.7± 21.0
TCM-33 (100 ug/ml) 0.003± 0.0008
Ribavirin (50 ug/ml) 16.0± 4.6 0.3131± 0.06 10.2± 0.9
[표 2] 오배자 추출물의 다양한 균주에 대한 항코로나바이러스 효과
실험예 4. 오배자 추출물의 항코로나바이러스 작용기전 시험
상기 실시예에서 얻은 오배자 추출물의 항 코로나바이러스에 대한 작용기전을 학인하기 위하여 문헌에 개시된 방법을 응용하여 하기와 같이 실험하였다(Kim et al., J. Clin. Virol., 41, pp112-118, 2008; Kim et al., Antiviral therapy, 15, pp697-709, 2010).
바이러스 RNA는 Northern blotting 방법으로, 바이러스 단백질은 Western blotting 방법을 시행하였다. Northern blotting을 위해 바이러스가 감염된 세포에서 RNA를 추출하고 변성시킨 후 아가로즈 겔(agarose gel)에 전기영동 한다. 이 후 나이론 멤브레인(nylon membrane)으로 옮겨 MHV 코로나바이러스 균주에 특이적인 32P-labeled random-primed probe를 사용하여 RNA를 검출하였다. Western blotting을 위해 바이러스가 감염된 세포를 용해시켜 단백질을 분리한 후 SDS-PAGE로 전기영동 한다. 멤브레인에 옮겨 MHV 코로나바이러스 균주의 S, M, N 단백질에 대한 항체로 해당 단백질의 유무를 판단하였다.
오배자 추출물이 코로나바이러스의 RNA 합성을 억제함을 Northern blotting을 통해 관찰하였으며, 결과적으로 구조 단백질인 N과 M 단백질 합성도 억제함을 Western blotting으로 확인하였다(도 2 참조).
실험예 5. 오배자 추출물로부터 분리된 화합물들의 항코로나바이러스 효과
상기 실시예에서 얻은 오배자 추출물로부터 분리된 화합물들의 항코로나바이러스 효과를 확인하기 위하여 문헌에 개시된 방법을 응용하여 하기와 같이 실험하였다(Kim et al., J. Clin. Virol., 41, pp112-118, 2008; Kim et al., Antiviral therapy, 15, pp697-709, 2010).
세포에 MHV-A59와 MHV-JHM 코로나바이러스 균주(Dr. Shinji Makino, U of Texas Medical Branch, Galveston, TX, USA]로부터 분양받음) 및 VSV 구내염바이러스 균주를 감염시킨다. 이때 오배자 추출물과 오배자 추출물로부터 분리된 화합물(OB-34, OB-36, OB-311, OB-312, OB-3131)을 함께 처리하였다. 바이러스를 감염시킨 세포는 배양기에서 일정 시간 동안 더 배양한 후, 약제에 의해 바이러스방출이 감소되었는지를 플라크분석법(Plaque assay)으로 조사하였다.
OB-34, OB-36, OB-3131의 세 가지 화합물은 대조물질인 리바비린과 비교해, 코로나바이러스에 대한 항바이러스 효능이 최대 1,000배까지 높음을 확인할 수 있었고, 또한 OB-3131은 코로나바이러스 외에도 VSV (음성가닥 RNA 바이러스인 rhabodoviridae과의 바이러스) 구내염바이러스 균주의 증식도 억제함을 확인할 수 있었다(도 3 내지 도 5 및 표 3참조).
표 3
samples Relative titer of released virus
MHV-A59 MHV-JHM VSV
Virus only 100.0 100.0 100.0
DMSO 103.0± 7.9 91.1± 7.8 98.7± 21.0
TCM-33 (100 ug/ml) 0.003± 0.0008
OB-311 (100 uM) 71.8± 6.7 6.3± 9.9 65.7± 11.6
OB-312 (100 uM) 95.8± 6.0 79.7± 12.0 33.3± 3.3
OB-34 (100 uM) 2.0± 0.3 12.3± 1.7 95.5± 10.2
OB-36 (100 uM) 0.4± 0.3 14.2± 3.3 36.7± 6.7
OB-3131 (100 uM) 0.01± 0.002 0.02± 0.02 0.04± 0.001
Ribavirin(50 ug/ml) 16.0± 4.6 0.3131± 0.06 10.2± 0.9
[표 3] 오배자 추출물로부터 분리된 화합물들의 다양한 균주에 대한 항코로나바이러스 효과
본 실험 결과, OB-3131은 코로나바이러스 외에도 VSV (음성가닥 RNA 바이러스인 rhabodoviridae과의 바이러스) 구내염바이러스의 증식도 억제하는 것으로 보여 광범위한 항바이러스 제제로서의 가능성 있음을 확인하였다.
실험예 6. 오배자 추출물로부터 분리된 화합물 세 가지(OB-34, OB36, OB-3131)의 항바이러스 시너지 효과 시험
상기 실시예에서 얻은 오배자 추출물로부터 분리된 세 가지 화합물의 항바이러스 시너지 효과를 확인하기 위하여 문헌에 개시된 방법을 응용하여 하기와 같이 실험하였다(Kim et al., J. Clin. Virol., 41, pp112-118, 2008; Kim et al., Antiviral therapy, 15, pp697-709, 2010).
세포에 MHV-A59와 MHV-JHM 코로나바이러스 균주 및 VSV 구내염바이러스 균주를 감염시킨다. 이때 오배자 추출물과 오배자 추출물로부터 분리된 화합물 중 OB-36과 OB-3131을 단독 혹은 농도를 반으로 줄인 후 함께 처리하였다. 바이러스를 감염시킨 세포는 배양기에서 일정 시간 동안 더 배양한 후, 약제에 의해 바이러스방출이 감소되었는지를 플라크분석법(Plaque assay)으로 조사하였다.
그 결과, MHV-JHM 균주(Dr. Shinji Makino [U of Texas Medical Branch, Galveston, TX, USA]로부터 분양받음)의 경우 OB-36과 OB-3131 각각을 단독으로 처리했을 때보다 함께 처리했을 때 항바이러스 효과가 우수함을 입증할 수 있었다(도 6 내지 8 참조).
실험예 7. 오배자 추출물 유효성분 세 가지(OB-34, OB36, OB-3131)의 항코로나바이러스 작용기전 실험
상기 실시예에서 얻은 오배자 추출물로부터 분리된 화합물들의 항코로나바이러스 작용기전을 확인하기 위하여 문헌에 개시된 방법을 응용하여 하기와 같이 실험하였다(Kim et al., J. Clin. Virol., 41, pp112-118, 2008; Kim et al., Antiviral therapy, 15, pp697-709, 2010).
바이러스 RNA는 Northern blotting 방법으로, 바이러스 단백질은 Western blotting 방법을 시행하였다. Northern blotting을 위해 바이러스가 감염된 세포에서 RNA를 추출하고 변성시킨 후 아가로즈 겔(agarose gel)에 전기영동 한다. 이 후 나이론 멤브레인(nylon membrane)으로 옮겨 MHV 코로나바이러스 균주에 특이적인 32P-labeled random-primed probe를 사용하여 RNA를 검출하였다. Western blotting을 위해 바이러스가 감염된 세포를 용해시켜 단백질을 분리한 후 SDS-PAGE로 전기영동 한다. 멤브레인에 옮겨 MHV 코로나바이러스 균주의 S, M, N 단백질에 대한 항체로 해당 단백질의 유무를 판단하였다.
이와 함께 흡착실험을 통해 화합물이 바이러스의 감염의 흡착단계(entry)를 억제하는지를 조사하였다. 오배자 추출물로부터 분리된 화합물인 OB-34, OB-36, OB-3131이 바이러스가 세포에 흡착되는 것을 억제시키는지를 알아보기 위해 바이러스를 세포에 부착시킬 때 화합물을 처리한 실험군과 처리하지 않은 대조군으로 나누어 부착 정도를 관찰하였다. 부착 정도는 세포 내 바이러스 RNA를 분리한 후, Northern blotting으로 조사하였다. 만약 화합물이 바이러스가 세포에 흡착되는 것을 저해한다면 화합물을 처리하지 않은 대조군에 비해 바이러스 RNA이 양이 감소될 것이다.
조사 결과, OB-34와 OB-36은 코로나바이러스의 RNA 합성과 구조단백질인 N 단백질의 합성을 저해하지 못하는 것으로 나타나 코로나바이러스의 조립이나 방출 단계를 억제할 가능성이 높고, OB-3131은 코로나바이러스의 RNA 합성 및 N 단백질의 합성을 저해해 코로나바이러스 증식의 초기 단계(entry, RNA 합성단계 또는 비구조단백질의 processing)를 억제할 가능성이 높았다(도 9 참조).
본 발명의 오배자 추출물 및 이로부터 분리된 화합물은 신종인플루엔자바이러스, 조류인플루엔자 바이러스 및 인체 감염형 혹은 인수 공통 감염형 코로나바이러스에 기인한 질환에 대하여 뛰어난 항바이러스 효과를 나타내어 약학조성물, 건강기능식품, 사료 첨가제 또는 사료로 사용될 수 있다.

Claims (11)

  1. 오배자(Galla Rhois) 추출물 또는 이로부터 분리된 갈산(gallic acid; 1), 파라 디 갈산과 메타 디 갈산의 복합물(a mixture of methyl p-digallic acid and methyl m-digallic acid; 2), 펜타 오-갈로일 글루코스(penta-O-galloyl glucose; 3), 에틸 갈레이트(ethyl gallate; 4) 또는 에틸 파라 디 갈레이트와 에틸 메타 디 갈레이트의 복합물(a mixture of ethyl p-digallate and ethyl m-digallate; 5) 화합물을 유효성분으로 함유하는 신종인플루엔자바이러스, 조류인플루엔자바이러스 및 인체 감염형 혹은 인수 공통 감염형 코로나바이러스에 기인한 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매로 추출한 것임을 특징으로 하는 약학 조성물.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 신종인플루엔자바이러스, 조류인플루엔자바이러스 및 인체 감염형 혹은 인수 공통 감염형 코로나바이러스에 기인한 질환은 계절 독감, 신종인플루엔자, 조류인플루엔자, 일반 감기 또는 중증급성호흡기증후군(SARS)인 약학 조성물.
  4. 제 1항에 있어서,
    조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물 또는 화합물을 0.1 내지 50 중량%로 포함함을 특징으로 하는 약학조성물.
  5. 오배자(Galla Rhois) 추출물 또는 이로부터 분리된 갈산(gallic acid; 1), 파라 디 갈산과 메타 디 갈산의 복합물(a mixture of methyl p-digallic acid and methyl m-digallic acid; 2), 펜타 오-갈로일 글루코스(penta-O-galloyl glucose; 3), 에틸 갈레이트(ethyl gallate; 4) 또는 에틸 파라 디 갈레이트와 에틸 메타 디 갈레이트의 복합물(a mixture of ethyl p-digallate and ethyl m-digallate; 5) 화합물을 유효성분으로 함유하는 신종인플루엔자바이러스, 조류인플루엔자바이러스 및 인체 감염형 혹은 인수 공통 감염형 코로나바이러스에 기인한 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품.
  6. 제 5항에 있어서,
    상기 건강기능 식품의 형태가 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 또는 환 형태인 건강기능식품.
  7. 오배자(Galla Rhois) 추출물 또는 이로부터 분리된 갈산(gallic acid; 1), 파라 디 갈산과 메타 디 갈산의 복합물(a mixture of methyl p-digallic acid and methyl m-digallic acid; 2), 펜타 오-갈로일 글루코스(penta-O-galloyl glucose; 3), 에틸 갈레이트(ethyl gallate; 4) 또는 에틸 파라 디 갈레이트와 에틸 메타 디 갈레이트의 복합물(a mixture of ethyl p-digallate and ethyl m-digallate; 5) 화합물을 신종인플루엔자바이러스, 조류인플루엔자바이러스 및 인체 감염형 혹은 인수 공통 감염형 코로나바이러스에 기인한 질환 환자에게 투여함을 포함하는, 신종인플루엔자바이러스, 조류인플루엔자바이러스 및 인체 감염형 혹은 인수 공통 감염형 코로나바이러스에 기인한 질환 환자를 치료하기 위한 치료방법.
  8. 신종인플루엔자바이러스, 조류인플루엔자바이러스 및 인체 감염형 혹은 인수 공통 감염형 코로나바이러스에 기인한 질환 치료용 약제를 제조하기 위한 오배자(Galla Rhois) 추출물 또는 이로부터 분리된 갈산(gallic acid; 1), 파라 디 갈산과 메타 디 갈산의 복합물(a mixture of methyl p-digallic acid and methyl m-digallic acid; 2), 펜타 오-갈로일 글루코스(penta-O-galloyl glucose; 3), 에틸 갈레이트(ethyl gallate; 4) 또는 에틸 파라 디 갈레이트와 에틸 메타 디 갈레이트의 복합물(a mixture of ethyl p-digallate and ethyl m-digallate; 5) 화합물의 용도.
  9. 오배자(Galla Rhois) 추출물 또는 이로부터 분리된 갈산(gallic acid; 1), 파라 디 갈산과 메타 디 갈산의 복합물(a mixture of methyl p-digallic acid and methyl m-digallic acid; 2), 펜타 오-갈로일 글루코스(penta-O-galloyl glucose; 3), 에틸 갈레이트(ethyl gallate; 4) 또는 에틸 파라 디 갈레이트와 에틸 메타 디 갈레이트의 복합물(a mixture of ethyl p-digallate and ethyl m-digallate; 5) 화합물을 유효성분으로 함유하는 신종인플루엔자바이러스, 조류인플루엔자바이러스 및 인체 감염형 혹은 인수 공통 감염형 코로나바이러스에 기인한 질환 예방용 동물사료 첨가제.
  10. 제 9항에 있어서, 상기의 동물사료 첨가제용 조성물은 20 내지 90% 고농축액이거나 분말 또는 과립형태인 동물사료 첨가제.
  11. 제 9항의 동물사료 첨가제를 포함하는 사료.
PCT/KR2012/002450 2011-04-19 2012-04-02 바이러스 억제 효능을 갖는 오배자 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물 및 이의 용도 Ceased WO2012144754A2 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020110036241A KR101317318B1 (ko) 2011-04-19 2011-04-19 신종인플루엔자, 조류인플루엔자, 일반 및 독감감기, ｓａｒｓ 바이러스 억제 효능을 갖는 오배자 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 약학 조성물
KR10-2011-0036241 2011-04-19

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2012144754A2 true WO2012144754A2 (ko) 2012-10-26
WO2012144754A3 WO2012144754A3 (ko) 2013-01-10

Family

ID=47042016

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2012/002450 Ceased WO2012144754A2 (ko) 2011-04-19 2012-04-02 바이러스 억제 효능을 갖는 오배자 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물 및 이의 용도

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR101317318B1 (ko)
WO (1) WO2012144754A2 (ko)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111574571A (zh) * 2020-06-11 2020-08-25 石河子大学 一种五倍子有效部位的分离方法及其用途
CN111658631A (zh) * 2020-06-11 2020-09-15 广东盛普生命科技有限公司 没食子酸及其衍生物和结构类似物在制备抗冠状病毒药物方面的应用
WO2021155864A1 (en) * 2020-02-08 2021-08-12 Syneurx International (Taiwan) Corp. Compounds and pharmaceutical uses thereof
WO2021207399A1 (en) * 2020-04-07 2021-10-14 Sytheon Limited Hydrolysable tannins for use in mitigating acute respiratory distress syndrome
TWI803858B (zh) * 2020-04-23 2023-06-01 心悅生醫股份有限公司 化合物及其醫藥用途
EP4253394A4 (en) * 2020-11-25 2024-12-11 Shenzhen Cell Inspire Pharmaceutical Development Co., Ltd. PRODUCTION PROCESS AND APPLICATION OF A CLASS OF BIFUNCTIONAL STELLATE COMPOUNDS FOR TARGETING SPIKE PROTEINS AGAINST RESPIRATORY INFECTION VIRUS AND SALT THEREOF

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102456749B1 (ko) 2020-04-28 2022-10-21 서울대학교산학협력단 울금 (Curcuma longa) 추출물 또는 이로부터 분리한 세스퀴테르페노이드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 돼지 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물
US20240041854A1 (en) * 2020-07-30 2024-02-08 Otsuka Pharmaceutical Factory, Inc. Cold medicine and antiviral medicine
KR102665503B1 (ko) * 2021-04-15 2024-05-17 에이피알지 주식회사 오배자 추출물을 유효성분으로 포함하는 코로나 바이러스(SARS-CoV-2) 감염의 예방 또는 치료용 조성물
WO2023038480A1 (ko) * 2021-09-08 2023-03-16 에이피알지 주식회사 선학초 추출물과 오배자 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 치료 또는 개선용 조성물
KR102420201B1 (ko) 2022-01-17 2022-07-13 주식회사 유이케미칼 인지질 외피 보유 바이러스 사멸기능을 가지는 친환경 방역 조성물
KR102679048B1 (ko) * 2022-04-18 2024-07-01 (주)유제이 유해 조류 기피제 조성물
KR20240045546A (ko) 2022-09-30 2024-04-08 (주)예스킨 항 인플루엔자 바이러스제

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2599163B2 (ja) * 1987-12-26 1997-04-09 日清製粉株式会社 家畜および家禽のサルモネラ・テイフィムリウム感染症の予防及び治療剤
US5411733A (en) * 1992-04-27 1995-05-02 Hozumi; Toyoharu Antiviral agent containing crude drug
KR101398426B1 (ko) * 2007-03-16 2014-06-18 원광대학교산학협력단 항균 및 항바이러스 활성을 갖는 오배자 및 목단피추출물을 함유하는 조성물
KR101008480B1 (ko) * 2007-12-28 2011-01-14 원광대학교산학협력단 항균 활성을 갖는 오배자 추출물 또는 이로부터 분리된화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물
KR101008463B1 (ko) * 2007-12-28 2011-01-14 원광대학교산학협력단 항균 및 항바이러스 활성을 갖는 오배자 추출물 또는이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 수의학적조성물

Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11154531B2 (en) 2020-02-08 2021-10-26 Syneurx International (Taiwan) Corp. Compounds and pharmaceutical uses thereof
US11382924B2 (en) 2020-02-08 2022-07-12 Syneurx International (Taiwan) Corp. Compounds and pharmaceutical uses thereof
EP4103539A4 (en) * 2020-02-08 2024-05-29 Syneurx International (Taiwan) Corp. COMPOUNDS AND PHARMACEUTICAL USES THEREOF
WO2021155864A1 (en) * 2020-02-08 2021-08-12 Syneurx International (Taiwan) Corp. Compounds and pharmaceutical uses thereof
CN115697962A (zh) * 2020-02-08 2023-02-03 心悦生医股份有限公司 化合物和其药学用途
US11779561B2 (en) 2020-02-08 2023-10-10 Syneurx International (Taiwan) Corp. Compounds and pharmaceutical uses thereof
WO2021207325A1 (en) * 2020-04-07 2021-10-14 Sytheon Limited Natural extract and their components for use in mitigating acute respiratory distress syndrome
WO2021207399A1 (en) * 2020-04-07 2021-10-14 Sytheon Limited Hydrolysable tannins for use in mitigating acute respiratory distress syndrome
TWI803858B (zh) * 2020-04-23 2023-06-01 心悅生醫股份有限公司 化合物及其醫藥用途
US11793823B2 (en) 2020-04-23 2023-10-24 Syneurx International (Taiwan) Corp. Compounds and pharmaceutical uses thereof
US12521410B2 (en) 2020-04-23 2026-01-13 Syneurx International (Taiwan) Corp. Compounds and pharmaceutical uses thereof
CN111658631A (zh) * 2020-06-11 2020-09-15 广东盛普生命科技有限公司 没食子酸及其衍生物和结构类似物在制备抗冠状病毒药物方面的应用
CN111574571A (zh) * 2020-06-11 2020-08-25 石河子大学 一种五倍子有效部位的分离方法及其用途
CN112336709A (zh) * 2020-06-11 2021-02-09 广东盛普生命科技有限公司 没食子酸及其衍生物和结构类似物在制备抗冠状病毒药物方面的应用
EP4253394A4 (en) * 2020-11-25 2024-12-11 Shenzhen Cell Inspire Pharmaceutical Development Co., Ltd. PRODUCTION PROCESS AND APPLICATION OF A CLASS OF BIFUNCTIONAL STELLATE COMPOUNDS FOR TARGETING SPIKE PROTEINS AGAINST RESPIRATORY INFECTION VIRUS AND SALT THEREOF

Also Published As

Publication number Publication date
WO2012144754A3 (ko) 2013-01-10
KR101317318B1 (ko) 2013-10-14
KR20120118707A (ko) 2012-10-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2012144754A2 (ko) 바이러스 억제 효능을 갖는 오배자 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물 및 이의 용도
WO2020235928A1 (ko) 흑삼 추출물을 포함하는 항인플루엔자 바이러스 조성물, 호흡기 질환 치료용 조성물 및 항노화 조성물
WO2018034522A1 (ko) 코어와 그의 표면에 결합된 시알산, 시알릴락토스 또는 이들의 유도체를 포함하는 결합체 및 그의 용도
WO2012148247A2 (ko) 올레아놀린산 아세테이트를 유효성분으로 포함하는 tlr 및 il-6 매개성 질환예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR100950445B1 (ko) 감초로부터 얻은 조류, 돼지 인플루엔자 및 신종플루에 대한 항바이러스제
WO2012023660A1 (ko) 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스로부터 얻은 조류, 돼지 인플루엔자 및 신종플루에 대한 항바이러스제
WO2022050516A1 (ko) 담팔수 추출물을 유효성분으로 포함하는 코로나 바이러스 치료제
WO2012043949A1 (ko) 화학식 1 내지 8로 표시되는 화합물 또는 고삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 조성물
WO2009148279A2 (ko) 바이러스 억제제로서 유용한 트리테르페노이드계 화합물
KR101612051B1 (ko) 단삼 추출물을 포함하는 코로나 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물
WO2015037778A1 (ko) 리그난 화합물을 유효 성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 조성물
WO2011099812A2 (ko) 감초 추출물을 포함하는 로타바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물
WO2019177428A1 (ko) 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 생약 조성물
WO2011055931A2 (ko) 인플루엔자 바이러스 유래 질병의 예방 또는 치료용 조성물
WO2017204547A1 (ko) 범용성 바이러스 포획 단백질 및 이의 제조방법
WO2022031151A1 (ko) 고사리 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항바이러스용 조성물
WO2018088777A1 (ko) 감태 추출물 또는 이로부터 분리한 플로로탄닌계 화합물을 유효성분으로 포함하는 인플루엔자의 예방 또는 치료용 조성물
WO2012173392A2 (ko) 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 커큐미노이드계 화합물/스테비오사이드 함유 복합체
WO2021080388A1 (ko) 커큐미노이드계 화합물, 및 감초 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 복합체를 포함하는 돼지 유행성 설사 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물
WO2023038480A1 (ko) 선학초 추출물과 오배자 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 치료 또는 개선용 조성물
WO2015111904A1 (ko) 커큐미노이드계 화합물, 및 감초 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물
WO2017188499A1 (ko) 글리시리진 및 리퀴리틴 함유 감초 추출물을 포함하는 간질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물
WO2021172755A1 (ko) 매실 추출물을 유효성분으로 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2015002430A1 (ko) 피스타시아 웨인마니폴리아 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 천식의 예방 또는 치료용 약학 조성물
WO2015105373A1 (ko) 화살나무 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 천식의 예방 또는 치료용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 12773514

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A2

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 12773514

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A2