WO2013012302A2 - Elaboration d'un sirop anti-inflammatoire/anti-œdemateux naturel a base d'extraits aqueux de plantes originaires du sud-est du maroc - Google Patents

Elaboration d'un sirop anti-inflammatoire/anti-œdemateux naturel a base d'extraits aqueux de plantes originaires du sud-est du maroc Download PDF

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Latifa EL MANSOURI
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Universite Sidi Mohammed Ben Abdellah
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    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]

Definitions

  • This invention relates to the design and development of improved traditional phytomedicine based on five medicinal plants from South-East Morocco, selected from ethnopharmacological surveys.
  • anti-inflammatory steroids also called AIS
  • NSAIDs nonsteroidal anti-inflammatory drugs
  • AIS are derivatives of natural corticosteroid hormones manufactured by the
  • corticosteroids have an anti-oedematous action, and most importantly, a general anti-inflammatory action by preventing the release from the vessels of cells responsible for triggering inflammation and to reduce the influx. They are very powerful, widely used in stomatology, ENT and rheumatology. They have the disadvantages of corticosteroids (aggressiveness vis-à-vis the stomach, thinning
  • the present invention relates to the field of health and particularly to that of the improved traditional phthalomedicine or dietary supplement. This invention brings an originality to the existing in terms of inflammation by the development of a phthtomedicine with a non-steroidal anti-inflammatory profile 100% natural.
  • Herbal medicine offers many plants with anti-inflammatory properties, whose safety is recognized for the most part, and to use in their natural state in the form of infusion or decoction for some. For others, laboratories offer them in different forms: powder, extracts, mother tinctures (Cassis, Queen of the Near, Willow, Turmeric ).
  • Rosmarinus officinalis is known as an antioxidant and hepatoprotective in rats [3].
  • the hydroalcoholic extract of this species has an anti-ulcerogenic capacity by decreasing the index of indomethacin-induced ulcer [4].
  • Other studies have shown that the methanolic extract of R. officinalis is known for its antioxidant and antibacterial effect [6].
  • the essential oil of the species Artemisia herba-alba has been studied phytochemically and biologically. It has been shown that the essential oil of white wormwood is endowed with a set of activities such as anti-oxidant, anti-venous, antifungal, anti-bacterial, anti-spasmodic and hypoglycemic activities [7].
  • the essential oil of Mentha pulegium has also been studied phytochemically, and 28 chemical compounds have been identified by GC-FID and GC-MS [8].
  • the essential oil of Mentha suaveolens has also been shown to be more than 50% inhibitory of acetylcholinesterase [9]. - Detailed description of the invention
  • This syrup is the result of a synergy of effects of five plant species (Rosmarinus officinalis L., Phoenix dactylifera L., Artemisict herba-alba Asso, Menthq pulegium L. and Mentha suaveolens Ehrh.), Selected for their inflammatory diseases in the traditional therapeutic arsenal of the Rissani-Errachidia area (South-East Morocco).
  • the five species were harvested in October 2010 in the region of Rissani-ER-Rachidia, identified and herborized at the herbarium of the National Institute of Medicinal and Aromatic Plants (INPMA) of Taounate: exsiccata No. INP216 ( R. officinalis), ⁇ 215 (P. dactylifera), ⁇ ⁇ 218 (A. herba-alba), ⁇ 221 (M. pulegium) and ⁇ 220 (M. suaveolens).
  • INP216 R. officinalis
  • ⁇ 215 P. dactylifera
  • ⁇ ⁇ 218 A. herba-alba
  • ⁇ 221 M. pulegium
  • ⁇ 220 M. suaveolens
  • Example 2 Aqueous extraction of the five species The five plants were dried and crushed. They were macerated in equal parts in distilled water for 3 hours with continuous stirring. Then, the macerate was filtered with Whatman No. 1 filter paper. The resulting filtrate was rotavaporized (B ⁇ CHI Rotavapor R-205), and a dry residue was recovered with a yield of 31.92%.
  • Flavonoids cyanidine reaction
  • tannins ferrric chloride test
  • coumarins ammonia test
  • anthraquinones and anfhocyanates potassium hydroxide test
  • saponins fluorescence index
  • steroidal sapogenins sulfuric acid test
  • cardiac glycosides sulfuric acid test
  • free quinones sodium hydroxide test
  • Mucilages absolute alcohol test
  • oses and holosides test with sulfuric acid and thymol
  • Macerate contains a number of chemical families such as flavonoids, tannins, mucilages, anthraquinones, coumarins, oses and holosides, generally known by their anti-inflammatory effect (Table 1).
  • Example 4 Spectrophotometric determination of flavonoids compounds known by their anti-inflammatory power
  • the level of flavonoids was evaluated by spectrophotometry by measuring the absorbance of quercetin in the macerate of the plants studied. The more this species is rich in flavonoids, the higher the optical density of the macerate is important.
  • the spectrophotometer is previously calibrated on the absorption wavelength of quercetin (430 nm).
  • the syrup made from the plant macerate is rich in flavonoids (16.934 mg quercetin equivalent / g dry extract) ( Figure 1).
  • the procedure for evaluating the tannin content consists in carrying out macerations at 10%, repeated 3 times in acetone at 70%; then the macerates were filtered and evaporated under pressure (B ⁇ CHI Rotavapor R-205). Finally, the dry residue is recovered with a yield of 21.68%.
  • mice were randomized into control groups and treated and divided into 5 groups of 1 to 9 animals each.
  • Group 1 animals were administered with normal saline (0.9% NaCl).
  • Groups 2, 3 and 4 animals were administered with the aqueous macerate of the five species studied at doses of 200, 1000 and 5000 mg / kg, bw Animals in group 5 were administered with indomethacin at a dose of 10 mg / kg, pc All treatments were administered orally between 13:00 120 until 14:00 h.
  • the macerate administered orally at different doses (0.2, 1 and 5 g / kg, p.c.) has a significant anti-inflammatory / anti-edematous effect (Table 2).
  • n 9, *: p ⁇ 0.05 at 6 o'clock.
  • Treaty 1 1 11.33 ⁇ 16.16 38.69 ⁇ 0.51 12.43 ⁇ 0.22 3.40 ⁇ 0.01 3.02 ⁇ 0.03

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Abstract

La présente invention, concerne l'élaboration d'un phytomédicament anti- inflammatoire traditionnel amélioré sous forme de sirop 100% naturel à base de cinq plantes médicinales récoltées dans la région de Rissani-Errachidia (Sud-est du Maroc). Ce phytomédicament est obtenu par macération aqueuse à froid de cinq plantes (Rosmarinus officinalis L., Phoenix dactylifera L., Artemisia herba-alba Asso, Mentha pulegium L., Mentha suaveolens Ehrh.) sélectionnées soigneusement à la base d'enquêtes ethnopharmacologiques dans la région susmentionnée, et formulées sous forme de sirop. Dans un premier temps, le macérât aqueux des plantes sélectionnées, dosé à lg/kg de poids corporel (p.c) du rat Wistar est évalué par voie orale; le pourcentage d'inhibition de l'inflammation est de l'ordre de 82.98 %, en comparaison avec l'indométacine 61.7%, 5 heures après l'induction de l'inflammation à la carragénine 0.5 %. Le pouvoir anti- inflammatoire du sirop formulé à lg/kg p.c. a été également évalué par voie orale chez les rats Wistar. Nous avons noté un important pouvoir anti-inflammatoire de l'ordre de 84.04 %, en comparaison avec l'indométacine, 5 heures après l'induction de l'inflammation. Ce sirop est un anti-inflammatoire 100 % naturel, plus puissant que l'indométacine; il est élaboré à partir de plantes à usage traditionnel reconnu. A ce titre, il participe à l'amélioration de la qualité de vie et au bien être dans le cas d'inflammation.

Description

DESCRIPTION
Contexte
Cette invention concerne la conception et l'élaboration de phytomédicament traditionnel amélioré à base de cinq plantes médicinales du Sud-est marocain, sélectionnées à partir d'enquêtes ethnopharmacologiques.
Il est important de rappeler que dans la majorité des cas, le traitement de l'inflammation 5 fait appel aux anti-inflammatoires, médicaments largement répandus et très utilisés en rhumatologie et en traumatologie, ainsi que dans les traitements antalgiques.
Il existe deux types : les anti-inflammatoires stéroïdiens appelés aussi AIS, et les anti- inflammatoires non stéroïdiens (AINS).
Les AIS sont des dérivés des hormones corticoïdes naturelles fabriquées par la
10 cortico surrénale. En effet, les corticoïdes ont une action anti-œdémateuse, et surtout, une action anti-inflammatoire générale en empêchant la sortie hors des vaisseaux des cellules chargées de déclencher l'inflammation et d'en diminuer l'afflux. Ils sont très puissants, utilisés de façon très large en stomatologie, en ORL et en rhumatologie. Ils ont les inconvénients des corticoïdes (agressivité vis-à-vis de l'estomac, amincissement
15 de la peau, fragilisation des os, aggravation des infections si un traitement antibiotique n'y est pas associé, diminution des défenses immunitaires, en particulier face aux virus, et modification de la répartition des graisses). Un autre problème majeur est celui de la cortico-dépendance qui est la reprise des manifestations pathologiques à l'arrêt du traitement si celui-ci n'est pas interrompu selon un protocole précis et correct. Les AIS,
20 très efficaces aussi, ne sont toutefois pas dépourvus d'effets : brûlures d'estomac et interactions médicamenteuses avec d'autres médicaments comme les anticoagulants. D'une manière générale, l'utilisation de ces médicaments de synthèse entraine dans l'organisme humain des effets secondaires incontrôlables (complications digestives, risque infectieux, manifestations neuropsychiques, complications oculaires,
25 complications tendineuses, cancer, etc.) ; d'où l'objet de notre présente invention, ayant pour finalité de développer un anti-inflammatoire non stéroïdien naturel, dépourvu de conservateurs et autre adjonction chimique qui pourraient être nuisibles à la santé. La présente invention se rapporte au domaine de la santé et particulièrement à celui du phvtomédicament traditionnel amélioré ou du complément alimentaire. Cette invention apporte une originalité à l'existant en matière de Pinflammation par l'élaboration d'un phvtomédicament à profil anti-inflammatoire non stéroïdien 100 % naturel.
- Etat de la technique antérieure
La phytothérapie offre de nombreuses plantes aux propriétés anti-inflammatoires, dont l'innocuité est reconnue pour la plupart, et à utiliser dans leur état naturel sous forme d'infusion ou de décoction pour certaines. Pour d'autres, les laboratoires les proposent sous différentes formes : poudre, extraits, teintures-mères (Cassis, Reine des Près, le Saule, le Curcuma ...).
Les études scientifiques, et particulièrement à visée anti-inflammatoire, des plantes sélectionnées dans cette invention, n'ont fait l'objet d'aucun travail scientifique.
Les cinq espèces étudiées ont été démontrées actives pour d'autres effets pharmacologiques ou biologiques. Ainsi, l'effet anti-arthrite de Phoenix dactylifera chez le rat a été prouvé [1]. La partie volatile des autres espèces du sirop élaboré a été testée essentiellement pour d'autres activités biologiques telle l'activité antifongique [2].
L'espèce Rosmarinus officinalis est connue comme antioxydante et hépatoprotectrice chez le rat [3]. En outre, l'extrait hydroalcoolique de cette espèce possède un pouvoir anti-ulcérogène en diminuant l'indice de lésion ulcéreuse induite par l'indométacine [4]. Des travaux sur l'activité anti-inflammatoire et anti-oxydante de composés purs, obtenus à partir de plantes issues de la culture in vitro de R. officinalis, ont été réalisés sur des cellules isolées in vitro [5]. D'autres études ont montré que l'extrait méthanolique de R. officinalis est connu par son effet antioxydant et antibactérien [6]. L'huile essentielle de l'espèce Artemisia herba-alba a été étudiée sur les plans phytochimique et biologique. Il s'est avéré que l'huile essentielle de l'armoise blanche est douée d'un ensemble d'activités telles les activités anti-oxydante, anti-veineuse, antifongique, anti-bactérienne, anti-spasmodique et hypoglycémique [7].
L'huile essentielle de Mentha pulegium a été également étudiée sur le plan phytochimique, et 28 composés chimiques ont été identifiés par GC-FID et GC-MS [8]. Il a été démontré également que l'huile essentielle de Mentha suaveolens est inhibitrice, à plus de 50 %, de l'acétylcholinestérase [9]. - Description détaillée de l'invention
Ce sirop est le résultat d'une synergie d'effets de cinq espèces végétales (Rosmarinus officinalis L., Phoenix dactylifera L., Artemisict herba-alba Asso, Menthq pulegium L. et Mentha suaveolens Ehrh.), sélectionnées pour leurs pouvoirs anti-inflammatoires dans l'arsenal thérapeutique traditionnel de la zone de Rissani-Errachidia (Sud-est du Maroc).
Design expérimental
Exemple 1 : Récolte et identification des cinq espèces étudiées
Les cinq espèces ont été récoltées le mois d'octobre 2010 dans la région de Rissani-ER- Rachidia, identifiées et herborisées à l'herbier de l'Institut National des Plantes Médicinales et Aromatiques (INPMA) de Taounate : exsiccata n° INP216 (R. officinalis), ΓΝΡ215 (P. dactylifera), Γ Ρ218 (A. herba-alba), ΓΝΡ221 (M pulegium) et ΓΝΡ220 (M suaveolens).
Exemple 2 : Extraction aqueuse des cinq espèces Les cinq plantes ont été séchées et broyées. Elles ont été macérées à parts égales dans de l'eau distillée pendant 3 heures avec agitation continue. Ensuite, le macérât a été filtré avec un papier filtre Whatman N°l. Le filtrat obtenu a subi une rota-évaporation (BÛCHI Rotavapor R-205), et un résidu sec a été récupéré avec un rendement de 31.92 %.
Exemple 3 : Criblage phytochimique de l'extrait sec
Un criblage phytochimique de l'extrait sec a été réalisé par le biais des techniques décrites par [10, 11, 12, 13, 14, 15]. Ces essais consistent à mettre en évidence la présence d'un certain nombre de groupes chimiques de l'extrait sec des cinq espèces étudiées. Les réactifs de caractérisation utilisés nous ont permis de mettre en évidence les groupes chimiques suivants :
Les flavonoïdes (réaction à la cyanidine), tanins (test au chlorure ferrique), coumarines (test à l'ammoniac), anthraquinones et anfhocyanes (test à l'hydroxyde de potassium), saponines (indice de mousse), sapogénines stéroïdiques (test à l'acide sulfurique), glycosides cardiaques (test à l'acide sulfurique), quinones libres (test à l'hydroxyde de sodium), Mucilages (test à l'alcool absolu), oses et holosides (test à l'acide sulfurique et au thymol).
Le macérât contient un certain nombre de familles chimiques telles les flavonoïdes, les tanins, les mucilages, les anthraquinones, les coumarines, les oses et les holosides, connus généralement par leur effet anti-inflammatoire (Tableau 1).
Tableau. 1 : Criblage phvtochimique du macérât des cinq plantes étudiées.
Constituants chimiques Extrait des cinq
plantes
Flavonoïdes +
Sa onosides -
Tanins
galliques +
catéchiques +
Coumarines +
Anthraquinones +
Sapogénines stéroïdiques -
Glycosides cardiaques +
Quinones libres +
Mucilages +
Oses et holosides +
NB : (+) : présence, (-) : absence.
Exemple 4 : Dosage spectrophotométrique des flavonoïdes. composés connus par leur pouvoir anti-inflammatoire
Le taux des flavonoïdes, principaux composés chimiques responsables de l'effet anti inflammatoire, a été évalué par spectrophotométrie en mesurant l'absorbance de la quercétine dans le macérât de plantes étudiées. Plus cette espèce est riche en flavonoïdes, plus la densité optique du macérât est importante. Le spectrophotomètre est préalablement étalonné sur la longueur d'onde d'absorption de la quercétine (430 nm). Le sirop élaboré à partir du macérât des plantes est riche en flavonoïdes (16.934 mg équivalent en quercétine/g d'extrait sec) (Figure 1).
Courbe d'étalonnage (dosage de là quercetme)
Figure imgf000007_0001
0 20 40 eo
Concnvtxntion delà <pi<f «« inecning
Figure 1. Courbe d'étalonnage de la quercétine en mg/1, un flavonoïde de type flavonol.
Exemple 5 : Extractions des tanins, composés connus par leur pouvoir anti- inflammatoire
La procédure d'évaluation du taux des tanins consiste à réaliser des macérations à 10 %, répétée 3 fois dans l'acétone à 70 % ; ensuite, les macérâts ont été filtrés et évaporés sous pression (BÛCHI Rotavapor R-205). Enfin, le résidu sec est récupéré avec un rendement de 21,68%.
Exemple 6 : Evaluation anti-inflammatoire du macérât aqueux
Les animaux ont été randomisés en groupes témoins et traités et divisés en 5 groupes de 1 15 9 animaux chacun. Les animaux du groupe 1 ont été administrés avec une solution saline normale (0,9% de NaCl). Les animaux des groupes 2, 3 et 4 ont été administrés avec le macérât aqueux des cinq espèces étudiées aux doses de 200, 1000 et 5000 mg/kg, p.c. Les animaux du groupe 5 ont été administrés avec l'indométacine à la dose de 10 mg/kg, p.c. Tous les traitements ont été administrés par voie orale entre 13:00 120 jusqu'à 14:00 h.
Le macérât administré par voie orale à différentes doses (0.2, 1 et 5 g/kg, p.c.) exerce un effet anti-inflammatoire/ anti-œdémateux important (Tableau 2).
Le macérât à lg/kg, p.c. possède le meilleur pouvoir anti-inflammatoire/anti-œdémateux de l'ordre de 82.98%, comparé à celui de l'indométacine (Figure 2). 125 La synergie thérapeutique des espèces sélectionnées dans ce travail n'a jamais été étudiée, et selon nos résultats et en comparaison avec d'autres travaux antérieurs, la synergie favorise l'effet pharmacologique de ces plantes.
Tableau 2 : Pouvoir anti-inflammatoire du macérât des cinq plantes étudiées en fonction du temps et de la dose administrée, n= 9.
Traitement Dose Pourcentage d'inhibition de l'œdème en fonction du tem ps et de la dose
(mg/kg) administrée (en %).
3h 4h 5h 6h
Indométacine 10 2.34 ± 0.081 2.34 ± 0.099 2.28 ± 0.093 2.28 ± 0.093
Recette 200 2.56 ± 0.107 2.44 ± 0.081 2.4 ± 0.104 2.52 ± 0.177
1000 2.72 ± 0.203 2.58 ± 0.124 2.48 ±0.101 2.54 ± 0.169
5000 2.48 ± 0.124 2.4 ± 0.130 2.38 ± 0.115 2.36 ± 0.102
Figure imgf000008_0001
T anps de mesure (en. h)
130 Figure 2 : Pouvoir anti-inflammatoire du macérât par rapport à l'indométacine.
n=9, * : p<0.05 à 6h.
Exemple 7 : Contrôle toxicologie aigu in vivo du macérât aqueux
Le suivi toxicologique des trois doses, en administration unique, a montré que la dose 5 g/kg, p.c. présente un certain nombre d'effets indésirables à savoir une légère
135 diminution du poids relatif du foie et l'apparition d'ulcérations au niveau de la muqueuse gastrique (Tableau 3). Nous n'avons noté aucun effet indésirable sur les paramètres étudiés après traitement avec la dose du macérât à 1 g/kg, p.c. (poids et comportement général de l'animal) en comparaison avec le lot témoin.
Tableau 3 : Effet du macérât à la dose 5g/kg p.c. sur le poids relatif du foie, de la rate, de l'estomac et des reins. n= 4
Groupes Dose (g/kg Poids corporel (g) Poids relatif des organes (g)
p.c.)
Foie Estomac Reins Rate
Contrôle 0 148±7.21 38.27±0.48 10.58±0.09 3.20±0.09 2.83±0.07
Traité 5 158±23.59 36.43±0.61 9.90±0.06 3.73±0.09 2.70±0.10
Suite à ces résultats, nous avons opté pour la formulation d'un sirop dosé à lg/kg, p.c; ensuite, il a été administré aux animaux. Le sirop formulé présente une activité anti- inflammatoire importante en comparaison à celle de l'indométacine, soit 84.04%
145 (Figure 3).
"Sirtp
■a méiacine
Figure imgf000009_0001
Temps de mesure (en h)
Figure 3 : Profil anti-inflammatoire du sirop élaboré, n=9, p<0.05.
Aucun signe de toxicité aiguë n'a été noté chez les animaux traités avec le sirop formulé (lg/kg, p.c.) (Tableau 4). Tableau 4 : Effet du sirop formulé sur le poids relatif du foie, de la rate, de l'estomac et des reins. N= 6
Groupes Dose (g/kg Poids corporel (g) Poids relatif des organes (g)
P-c)
Foie Estomac Reins Rate
Contrôle 0 I 48±7.21 38.27±0.48 U).58±0.09 3.20±0.09 2.83±0.07
Traité 1 1 11.33±16.16 38.69±0.51 12.43±0.22 3.40±0.01 3.02±0.03

Claims

Revendications
1. Une enquête ethno-pharmacologique a été menée dans la région de Rissani Errachidia (Sud-est du Maroc).
2. Les plantes récoltées, selon la revendication 1, sont préconisées dans le traitement des maladies accompagnées de symptômes inflammatoires, représentant 26 % de
5 l'ensemble des 50 pathologies traitées par la médecine traditionnelle.
3. Les Lamiaceae (15.21 %) et les Astéraceae (1 1.5 %), suivant les revendications 1 et 2, sont les familles les plus utilisées dans la zone d'étude.
4. Utilisation selon les revendications 1 à.3, caractérisée en ce que Artemisia herba- alba, Rosmarinus officinalis, Mentha pulegium, Phoenix dactylifera et Mentha
10 suaveolens sont les espèces les plus utilisées sur le plan thérapeutique dans la zone d'étude, avec des taux respectifs de 5.1 %, 3.05 %, 1.69 %, 3.72 % et 1.36 %.
5. Utilisation selon les revendications 1 à 4, caractérisée en ce que les espèces constituant la présente invention sont au nombre de cinq : Artemisia herba-alba Asso, Mentha pulegium L., Mentha suaveolens Ehrh., Phoenix dactylifera L. et
15 Rosmarinus officinalis L.
6. Utilisation selon les revendications 1 à 5, caractérisée en ce que les feuilles de Artemisia herba-alba, Mentha pulegium, Mentha suaveolens et Rosmarinus officinalis, et les fruits de Phoenix dactylifera ont été récoltés ; les feuilles des quatre premières espèces ont été séchées et broyées, et les fruits de P. dactylifera ont été
20 utilisés à l'état frais.
7. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le macérât aqueux est constitué à parts égales de chaque espèce.
8. Utilisation selon la revendication 7, caractérisé en ce que l'extraction des principes actifs a été réalisée par macération aqueuse à froid avec une agitation continue
25 pendant 3 heures.
9. Le macérât, selon les revendications 1 à 8, est filtré et évaporé sous pression (BUCHI Rotavapor R-205).
10. Utilisation selon les revendications 1 à 9, caractérisée en ce que le résidu sec est récupéré avec un rendement de 31.92 %.
11. Utilisation selon la revendication 10, caractérisée en ce que le résidu sec a subi un ensemble de tests phytochimiques (Tableau 1).
12. Utilisation selon la revendication 1 1 , caractérisée en ce qu'une macération à 10 %, répétée 3 fois dans l'acétone à 70 %, a été réalisée pour l'extraction des tanins dans le mélange des plantes étudiées.
13. Utilisation selon la revendication 12, caractérisée en ce que les trois macérâts sont filtrés.
14. Utilisation selon la revendication 13, caractérisée en ce que les 3 filtrats sont récupérés et évaporés sous pression (BÛCHI Rotavapor R-205).
15. Le résidu sec, selon la revendication 14, est récupéré avec un rendement de
21.68 %.
16. Le résidu sec, selon la revendication 10, est mis dans l'eau à une concentration de lg/1.
17. Utilisation selon la revendication 16, caractérisée en ce que 1 ml de la solution est mélangé à 1 ml d'une solution méthanolique d'AlC13 (2 %).
18. Utilisation selon les revendications 16 et 17, caractérisée en ce que le mélange est incubé pendant 20 min à l'obscurité ; l'absorbance est mesurée au spectrophotomètre sous UV à 430 nm (JENWAY 6505 UV/Vis Spectrophotometer) [16], et le taux des flavonoïdes a été évalué (16.934 mg/g d'extrait).
19. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le macérât est récupéré dans une solution de NaCl (0.9 %) pour les tests toxico-pharmacologiques.
20. Utilisation selon la revendication 19, caractérisée en ce que le macérât est administré par voie orale à une dose de lg /kg, p.c. une heure avant l'induction de l'inflammation.
21. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'inflammation a été induite par injection de la carragénine 0.5 % sous l'aponévrose plantaire de la patte postérieure droite du rat Wistar [17].
22. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'effet anti-inflammatoire du macérât est évalué par la mesure de la circonférence de la patte avant et après l'injection de la carragénine à 3, 4, 5 et 6 heures à l'aide d'un fil de coton enroulé sur la patte [18].
23. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le pourcentage d'inhibition de l'inflammation est calculé selon la formule suivante :
% inhibition= [(St -So) contrôle ~ (St -S0) traité]^ (St -So) contrôle
24. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le pourcentage d'inhibition de l'inflammation du macérât est de l'ordre de 82.72 %, 5 heures après l'induction de l'oedème.
25. Utilisation selon l'une quelconque dès revendications précédentes,
caractérisée en ce qu'un contrôle toxicologique de la dose 5g/kg, p.c. a été réalisé dans le but de déterminer le seuil toxique du macérât.
26. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'une administration unique de la dose 5g/kg, p.c, a été évaluée en contrôlant le poids, le comportement général et le poids des organes
des animaux.
27. Utilisation selon la revendication 26, caractérisée en ce que l'étude morphologique et le poids relatif des organes ont été réalisés selon la formule suivante :
ROW = (poids d'organe/poids corporel) x 1000 [19].
28. Le macérât, selon les revendications 1 à 10, est formulé avec le saccharose.
29. Cinquante grammes de saccharose sont mis dans 27 ml d'eau purifiée
30. Le mélange, selon la revendication 29, est mis au bain-marie à une température de 80°C.
31. Le mélange, selon les revendications 29 et 30, a été filtré.
32. Dans 11 ml d'eau purifiée, nous avons dissous 3.8 g du macérât.
33. Selon les revendications 28 à 32, le sirop est élaboré par mélange des différentes parties par agitation magnétique.
34. Le sirop élaboré, selon la revendication 33, est administré par voie orale aux rats Wistar, 1 heure avant l'induction de l'inflammation.
35. Utilisation selon la revendication 34, caractérisée en ce que l'effet anti- inflammatoire du sirop est évalué.
36. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que des contrôles toxicologiques aigus du sirop formulé ont été réalisés après une administration unique ; les rats ont été suivis pendant 72 heures.
37. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les études de sécurité préclinique du sirop, objet de cette invention, ne montrent aucune modification significative des paramètres suivis [comportement général, aspect morphologique et poids relatif des organes (foie, estomac, reins et rate)], en comparaison avec les animaux témoins.
38. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le sirop formulé est visqueux, limpide et caractérisé par une couleur brune et un goût légèrement amer. Il peut être conservé pendant un mois à 4°c.
39. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le sirop, objet de l'invention, est dosé à lg/kg p.c. chez l'animal ; théoriquement, il peut être utilisé chez un homme de 60 kg à une dose journalière admissible (DJA) de l'ordre de 10 mg/kg p.c ou 600 mg par jour sans risque pour la santé.
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