WO2014103704A1 - Ｐ１，ｐ４－ジ（ウリジン５'－）テトラホスフェートの製造法 - Google Patents

Ｐ１，ｐ４－ジ（ウリジン５'－）テトラホスフェートの製造法 Download PDF

Info

Publication number
WO2014103704A1
WO2014103704A1 PCT/JP2013/083100 JP2013083100W WO2014103704A1 WO 2014103704 A1 WO2014103704 A1 WO 2014103704A1 JP 2013083100 W JP2013083100 W JP 2013083100W WO 2014103704 A1 WO2014103704 A1 WO 2014103704A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
ump
utp
phosphoric acid
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2013/083100
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
山田　浩平
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yamasa Corp
Original Assignee
Yamasa Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to CA2896455A priority Critical patent/CA2896455C/en
Priority to DK13869663.8T priority patent/DK2940030T3/en
Priority to JP2014554298A priority patent/JP6049760B2/ja
Priority to EP13869663.8A priority patent/EP2940030B1/en
Priority to CN201380074088.5A priority patent/CN105026414B/zh
Priority to US14/758,102 priority patent/US10179799B2/en
Priority to KR1020157017372A priority patent/KR102024700B1/ko
Priority to RS20170824A priority patent/RS56227B1/sr
Priority to ES13869663.8T priority patent/ES2629743T3/es
Application filed by Yamasa Corp filed Critical Yamasa Corp
Priority to SM20170405T priority patent/SMT201700405T1/it
Priority to HRP20171333TT priority patent/HRP20171333T1/hr
Priority to SI201330744T priority patent/SI2940030T1/sl
Priority to LTEP13869663.8T priority patent/LT2940030T/lt
Publication of WO2014103704A1 publication Critical patent/WO2014103704A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Priority to CY20171100946T priority patent/CY1119372T1/el
Priority to US16/206,380 priority patent/US11208428B2/en
Ceased legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A61K31/7072—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid having two oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. uridine, uridylic acid, thymidine, zidovudine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/10—Expectorants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6558—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system
    • C07F9/65586—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system at least one of the hetero rings does not contain nitrogen as ring hetero atom

Definitions

  • the present invention relates to an efficient new process for the production of P 1 , P 4 -di (uridine 5 ′-) tetraphosphate.
  • P 1 , P 4 -di (uridine 5 ′-) tetraphosphate represented by the following formula [I] (hereinafter referred to as “UP 4 U”) or a salt thereof is a treatment for keratoconjunctival epithelial disorder associated with dry eye. It is used as a medicine. In addition, it is a compound that has an action of inducing excretion and is expected to be developed as an expectorant or a pneumonia therapeutic agent.
  • Non-patent document 1 a method of reacting uridine 5′-cyclic triphosphate prepared by dehydration condensation reaction of uridine 5′-triphosphate (UTP) with uridine 5′-monophosphate (UMP) ( Non-patent document 1) and its improved method (patent document 1) have been reported.
  • UP 4 U can be synthesized at a high yield of 80% or more at the laboratory level, but there is a problem in mass-producing the method on an industrial scale.
  • UTP as a raw material is converted into a form of a tertiary amine salt such as tri-n-butylamine. It is necessary to use in. For this reason, a process of forming a salt with a tertiary amine after making UTP trisodium salt into free UTP (UTP free) by ion exchange column chromatography in advance is necessary.
  • UTP-free is a very unstable substance, and it is very difficult to use UTP-free as a raw material in mass production on an industrial scale.
  • the method of Patent Document 1 using UTP as a starting material is not an optimal method for industrial mass production of UP 4 U. Therefore, the present invention can avoid a decrease in synthesis efficiency due to decomposition of raw materials by not using UTP free and avoiding the dehydration operation of UTP salt for synthesizing uridine 5′-cyclic triphosphate.
  • the purpose is to develop a new manufacturing method.
  • the one-pot synthesis method and the old pyrophosphoric acid diimidazolide method were both carried out in an anhydrous environment using an organic solvent such as dimethylformamide (DMF) as a solvent for the UP 4 U synthesis reaction.
  • an organic solvent such as dimethylformamide (DMF)
  • UMP, UTP, pyrophosphoric acid, and the like used as reaction raw materials are all highly hydrophilic compounds, and in order to use these raw materials for the reaction, a dehydration step has to be performed in each step.
  • pyrophosphate has poor solubility in organic solvents, and there is a problem that it needs to be handled with care.
  • the inventor further examined the above two improved synthesis methods.
  • the one-pot synthesis method was examined in detail, as shown in the examples described later, the synthesis yield of the target product UP 4 U was greatly reduced to about 40%.
  • the method of patent document 1 was implemented as a one-pot synthesis method, since various by-products were produced, it turned out that the refinement
  • the present inventor has (a) uridine 5′-diphosphate (UDP), UMP or pyrophosphate. And a phosphate active compound synthesized by condensing a compound selected from the group consisting of imidazole, benzimidazole or 1,2,4-triazole, which may have a substituent, and (b) UMP , UDP, UTP, and a phosphate compound selected from the group consisting of pyrophosphate or a salt thereof (excluding UTP-free), and as a catalyst, iron (II) ion, iron (III) ion, trivalent aluminum ion Simple reaction in water or a hydrophilic organic solvent in the presence of a metal ion selected from the group consisting of trivalent lanthanum ion and trivalent cerium ion By the way, you can avoid dehydration of UTP-free use and UTP salts, addition-
  • the present invention relates to a phosphoric acid active compound represented by the following formula [II] or [III] and a phosphoric acid compound selected from the group consisting of UMP, UDP, UTP and pyrophosphoric acid or a salt thereof (however, UTP-free).
  • a metal ion selected from the group consisting of iron (II) ion, iron (III) ion, trivalent aluminum ion, trivalent lanthanum ion and trivalent cerium ion in water or a hydrophilic organic solvent
  • the present invention provides a process for producing P 1 , P 4 -di (uridine 5 ′-) tetraphosphate, which comprises a step of reacting with
  • R 1 represents a uridyl group bonded at the 5′-position;
  • X represents one heterocyclic group selected from the group consisting of an imidazolyl group, a benzimidazolyl group and a 1,2,4-triazolyl group
  • N represents an integer of 1 or 2.
  • X represents one heterocyclic group selected from the group consisting of an imidazolyl group, a benzimidazolyl group and a 1,2,4-triazolyl group
  • UP 4 U can be synthesized in a high yield while avoiding UTP-free use and UTP salt dehydration which are not suitable for industrial mass production. Further, in the production method of the present invention, almost no by-products are produced, so that the synthesized UP 4 U can be easily purified. Furthermore, a complicated dehydration step can be omitted by carrying out the reaction under hydrophilic conditions. That is, the production method of the present invention is a very suitable method for industrial mass synthesis of UP 4 U.
  • the HPLC chart of the analysis of products in a reaction mixture shown.
  • the peak No. 10 indicates UP 4 U which is the target product
  • the peak No. 6 indicates UDP which is the raw material.
  • the peak No. 19 indicates UP 4 U which is the target product
  • the peak No. 5 indicates UMP which is the raw material.
  • the peak No. 16 shows the target product UP 4 U, and the peak No. 6 shows the raw material UMP.
  • Pyrophosphate imidazolide method former law (without catalyst) at the time of synthesizing the UP 4 U, shows the HPLC chart of the analysis of the products in the reaction mixture.
  • the peak No. 17 indicates the target product UP 4 U
  • the No. 5 peak indicates the raw material UMP.
  • pyrophosphate diimidazolide method former law catalogalyst ZnCl 2
  • it shows the HPLC chart of the analysis of the products in the reaction mixture.
  • the peak No. 16 shows UP 4 U which is a target organism, and the peak No.
  • UMP which is a raw material.
  • Pyrophosphate diimidazolide method former law catalyst tetrazole
  • the peak No. 20 indicates the target product UP 4 U
  • the No. 5 peak indicates the raw material UMP.
  • the phosphoric acid active compound used in the present invention is a compound represented by the formula [II] or [III], which may have UMP, UDP or pyrophosphoric acid and a substituent, imidazole, benzimidazole or 1 , 2,4-triazole is synthesized by condensation.
  • R 1 represents a uridyl group bonded at the 5′-position;
  • X represents one heterocyclic group selected from the group consisting of an imidazolyl group, a benzimidazolyl group and a 1,2,4-triazolyl group
  • N represents an integer of 1 or 2.
  • X represents one heterocyclic substituent selected from the group consisting of an imidazolyl group, a benzimidazolyl group, and a 1,2,4-triazoyl group
  • heterocyclic substituent represented by X examples include an imidazolyl group, a benzimidazolyl group, and a 1,2,4-triazoyl group.
  • these heterocyclic groups may have a substituent in the heterocyclic group, and examples of the substituent include a C 1-6 alkyl group, a nitro group, and a cyano group.
  • Such a phosphoric acid active compound examples include UDP-phosphate imidazolide, UDP-phosphate triazolide, UMP-phosphate imidazolide, and pyrophosphate diimidazolide. These compounds are known methods (Nucleic Acids Research). 4, 2843 (1977), Journal of American Chemical Society, vol. 126, 9548 (2004)).
  • a synthetic solution of a phosphoric acid active compound such as UDP-phosphate imidazolide, UDP-phosphate triazolide, UMP-phosphate imidazolide, or pyrophosphate diimidazolide, or a concentrated solution thereof is used as it is or as necessary. It can be purified and used.
  • the phosphoric acid compound used in the present invention is a compound represented by the following formula (IV) or a salt thereof, specifically, UMP, UDP, UTP, pyrophosphoric acid or a salt thereof excluding UTP free. Can be mentioned.
  • R 2 represents a hydrogen atom or a uridyl group bonded at the 5 ′ position; m represents an integer of 1 to 3)
  • the phosphoric acid compound can be used in the form of an alkali metal salt such as sodium or potassium, a tertiary ammonium salt such as triethylammonium or tributylammonium, or a quaternary ammonium salt such as tetraethylammonium salt or tetrabutylammonium.
  • an alkali metal salt such as sodium or potassium
  • a tertiary ammonium salt such as triethylammonium or tributylammonium
  • quaternary ammonium salt such as tetraethylammonium salt or tetrabutylammonium.
  • Such a combination of the raw material compounds of the phosphoric acid active compound and the phosphoric acid compound may be determined appropriately, and preferably used in the following combinations.
  • this molar ratio is, for example, (1) When the above combination 1 is used, the molar ratio is 3: 8, 4: 7, 5: 6, 6: 5, 7: 4, 8: 3, 9: 2, 10: 1, (2) In the case of Combination 2, the molar ratio is 1:10, 2: 9, 3: 8, 4: 7, 5: 6, 6: 5, 7: 4, or 8: 3, (3) In combination 3, any of 4: 7, 5: 6, 6: 5, 7: 4, 8: 3, 9: 2, 10: 1, (4) For combination 4, any of 4: 7, 5: 6, 6: 5, 7: 4, 8: 3, 9: 2, 10: 1, It may be within the range of any two numerical values exemplified here.
  • the metal ion used in the present invention can be supplied to the reaction system by being added to the solution in the form of a metal salt containing the target metal ion to form a metal ion in water or a hydrophilic organic solvent.
  • a metal salt containing the target metal ion to form a metal ion in water or a hydrophilic organic solvent.
  • metal salts metal halides, metal inorganic acid salts, metal organic acid salts and the like can be presented. Further specific examples include (i) ferrous chloride, ferric chloride, ferric bromide, aluminum trichloride, cerium trichloride, lanthanum trichloride, etc.
  • metal halides examples include metal inorganic and acid salts include inorganic acid salts such as sulfuric acid, nitric acid, perchloric acid, etc. selected from the group consisting of iron (divalent), iron (trivalent), aluminum, cerium, and lanthanum, (iii) metal organic Examples of acid salts include trifluoromethanesulfonate, acetate, trifluoroacetate, citrate and the like of metals selected from the group consisting of iron (divalent), iron (trivalent), aluminum, cerium, and lanthanum Is preferable because the yield of UP 4 U is improved.
  • inorganic acid salts such as sulfuric acid, nitric acid, perchloric acid, etc. selected from the group consisting of iron (divalent), iron (trivalent), aluminum, cerium, and lanthanum
  • metal organic Examples of acid salts include trifluoromethanesulfonate, acetate, trifluoroacetate, citrate and the like of metals
  • ferric salts are preferable and ferric chloride is particularly preferable in terms of synthesis yield and ease of handling.
  • the metal salt used may be an anhydride or a hydrate.
  • iron (III) ion is particularly preferable to use in the case of the combination 4, it is particularly preferable to use iron (III) ion, trivalent aluminum ion, or the like.
  • the metal salt as the metal ion source is preferably 0.001 to 10 times the molar amount relative to the total number of moles of the phosphoric acid compound used in the reaction.
  • a 0.001 to 1-fold molar amount can be used.
  • the amount of this metal salt is, for example, 0.001, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1-fold mole relative to the total number of moles of the phosphoric acid compound used in the reaction. It may be any of the quantities and may be within the range of any two numerical values exemplified here.
  • the condensation reaction between the phosphoric acid active compound and the phosphoric acid compound is carried out using water or a hydrophilic organic solvent as a solvent.
  • hydrophilic organic solvents include alcohols having 6 or less carbon atoms such as methanol and ethanol, ketones such as acetone, ethers such as dioxane, nitriles such as acetonitrile, and dimethyl. Amides such as formamide can be used.
  • the reaction pH is preferably 7 or less, particularly preferably around pH 1 to 4.
  • the reaction temperature is preferably 0 ° C. to 60 ° C. in order to improve the yield of UP 4 U.
  • the reaction temperature is particularly preferably 20 to 30 ° C.
  • the reaction temperature is particularly preferably 0 to 20 ° C.
  • the condensation reaction time is preferably about 1 to 36 hours, particularly preferably 2 to 20 hours, in order to perform a necessary and sufficient condensation reaction.
  • the UP produced by appropriately combining methods used for isolation and purification of general nucleotides for example, crystallization method, ion exchange column chromatography, adsorption column chromatography, activated carbon column chromatography, etc. 4 U can be separated and purified and, if necessary, can be converted into a salt form.
  • general nucleotides for example, crystallization method, ion exchange column chromatography, adsorption column chromatography, activated carbon column chromatography, etc.
  • ion exchange resins used in ion exchange column chromatography include strongly basic anion exchange resins (for example, Amberlite IRA402 (Rohm & Haas), Diaion PA-312, Diaion SA-11A [Mitsubishi Chemical Corporation). )], Weakly basic anion exchange resin (for example, Amberlite IRA67 (Rohm & Haas), Diaion WA-30 (Mitsubishi Chemical)), strongly acidic cation exchange resin (for example, Diaion PK) -216 (Mitsubishi Chemical Corporation)) or weakly acidic cation exchange resin (Diaion WK-30 (Mitsubishi Chemical Corporation)) or the like can be used.
  • strongly basic anion exchange resins for example, Amberlite IRA402 (Rohm & Haas), Diaion PA-312, Diaion SA-11A [Mitsubishi Chemical Corporation).
  • Weakly basic anion exchange resin for example, Amberlite IRA67 (Rohm & Haas), Diai
  • activated carbon As the activated carbon, activated carbon for chromatography formed in a crushed or granular form may be used.
  • commercially available products such as those manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Nimura Chemical Co., Ltd., etc. can be used.
  • a known method may be used for crystallization, and for example, it is obtained by adding a hydrophilic organic solvent to the obtained UP 4 U or a salt thereof to precipitate crystals.
  • a hydrophilic organic solvent to be used include alcohols having 6 or less carbon atoms such as methanol and ethanol, ketones such as acetone, ethers such as dioxane, nitriles such as acetonitrile, and amides such as dimethylformamide. Alcohols are preferable, and ethanol is particularly preferable.
  • uridine 5′-diphosphate UDP
  • UMP uridine 5′-diphosphate
  • imidazole imidazole
  • benzimidazole 1,2,4-triazole which may have a substituent
  • a phosphate compound selected from the group consisting of UMP, UDP, UTP and pyrophosphate, or a salt thereof (provided that UTP)
  • a metal ion selected from the group consisting of iron (II) ion, iron (III) ion, trivalent aluminum ion, trivalent lanthanum ion, and trivalent cerium ion.
  • the conventionally known method of Patent Document 1 can synthesize UP 4 U at a high yield of 80% or more at the laboratory level, but the method is mass-produced on an industrial scale.
  • UTP as a raw material is used in the form of a tertiary amine salt such as tri-n-butylamine. Need to use. For this reason, a process of forming a salt with a tertiary amine after making UTP trisodium salt into free UTP (UTP free) by ion exchange column chromatography in advance is necessary.
  • UTP-free is a very unstable substance, and it is very difficult to use UTP-free as a raw material in mass production on an industrial scale. Further, in order to efficiently synthesize the 5′-cyclic triphosphorylation reaction of UTP, it is necessary to dehydrate the UTP tri-n-butylamine salt immediately before the reaction. However, as shown in the comparative test examples to be described later, when UTP tri-n-butylamine salt is azeotropically dehydrated in mass production on an industrial scale, a UTP thermal decomposition reaction occurs, so UTP As a result, the synthesis efficiency was lowered.
  • Patent Document 2 it was possible to synthesize UP 4 U without using the UTP-free process, but as shown in the comparative test described later, The yield to UMP was significantly reduced. Moreover, it produces a lot of by-products, and it cannot be said that the production method is suitable for industrial large-scale production.
  • the production method of the present invention is a very suitable method for industrial mass synthesis of UP 4 U.
  • the phosphoric acid active compound is preferably UDP-phosphoric acid imidazolide, and the phosphoric acid compound is preferably UDP or a UDP salt.
  • the phosphoric acid compound is preferably UDP or a UDP salt.
  • the phosphate active compound is UMP-phosphate imidazolide and the phosphate compound is UTP or UTP salt. Also in this case, it is demonstrated in the examples described later that UP 4 U can be synthesized with good yield while avoiding UTP-free use and UTP salt dehydration which are not suitable for industrial mass production. Because it is.
  • the phosphoric acid active compound is preferably UMP-phosphoric acid imidazolide, and the phosphoric acid compound is preferably pyrophosphoric acid or pyrophosphate. Also in this case, it is demonstrated in the examples described later that UP 4 U can be synthesized with good yield while avoiding UTP-free use and UTP salt dehydration which are not suitable for industrial mass production. Because it is.
  • a phosphoric acid active compound is pyrophosphate diimidazolide, and a phosphoric acid compound is UMP or a UMP salt. Also in this case, it is demonstrated in the examples described later that UP 4 U can be synthesized with good yield while avoiding UTP-free use and UTP salt dehydration which are not suitable for industrial mass production. Because it is.
  • the metal ions are preferably selected from the group consisting of iron (II) ions, iron (III) ions, or aluminum ions.
  • the phosphate active compound is pyroimidazole diimidazolide and the phosphate compound is UMP-free or UMP salt, it is preferably selected from the group consisting of iron (III) ions or aluminum ions. This is because, in these cases, it has been proved by a comparative test described later that UP 4 U can be synthesized more efficiently than in the case of using other metal ions.
  • the metal ions are preferably supplied in the form of a salt selected from the group consisting of metal chlorides, bromides, nitrates, sulfates and acetates. This is also because UP 4 U can be synthesized efficiently in this case.
  • the synthetic solution was concentrated to 10 ml and dissolved by adding sodium monohydrogen phosphate (4.2 mmol) to precipitate iron phosphate.
  • the suspension was allowed to stand at 4 ° C. overnight, and then the precipitate was removed by centrifugation.
  • the supernatant was adjusted to pH 2.5 and then used as a column adsorbent as a 30 ml solution.
  • the column adsorbed solution was desalted by activated carbon column chromatography (resin amount: 20 ml), and the obtained recovered solution was adjusted to pH 7 and concentrated, followed by membrane filtration. Further concentration was performed, ethanol was added dropwise to the residue, and crystallization was performed overnight at room temperature. The crystals were collected by filtration and vacuum dried at 50 ° C. for 3 hours to obtain 2.12 g (yield 75% as a tetrahydrate) of the desired product UP 4 U.
  • UDP-2 sodium (0.53 g, 1.0 mmol) was added to the UDP-phosphate imidazolide solution, and the mixture was adjusted to pH 3.9 with a 6 M aqueous hydrochloric acid solution. Further, 1M aqueous ferric chloride solution (15 ⁇ l, 0.02 mmol) was added, and the mixture was stirred at 10 ° C. for 27 hours. The reaction solution was adjusted to pH 10 by adding 7.5M aqueous sodium hydroxide solution, and stirred for 1 hour under ice cooling. Under ice cooling, 10 ml of ethanol was added to the reaction solution, and the mixture was allowed to stand at 4 ° C. overnight.
  • the precipitate was collected, prepared in a 20 ml aqueous solution having a pH of 7.5, and quantified by HPLC analysis to calculate a synthetic yield of UP 4 U of 94%. That is, it was found that the reaction proceeds well even when the amount of iron chloride catalyst used is greatly reduced.
  • UMP-tributylamine salt solution was dissolved in dimethylacetamide (1.5 ml), carbonyldiimidazole (486 mg, 3.0 mmol) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. Water (0.2 ml) was added to the reaction solution under ice-cooling, and 0.5 M aqueous hydrochloric acid solution (4.0 ml) was further added dropwise (pH 7.2). The reaction solution was concentrated under reduced pressure to prepare a UMP-phosphate imidazolide solution.
  • the obtained UMP-tributylamine salt solution was dissolved in dimethylacetamide (1.5 ml), carbonyldiimidazole (486 mg, 3.0 mmol) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. Water (0.2 ml) was added to the reaction solution under ice-cooling, and 0.5 M aqueous hydrochloric acid solution (4.0 ml) was further added dropwise (pH 7.2). The reaction solution was concentrated under reduced pressure to prepare a UMP-phosphate imidazolide solution (this operation was performed twice).
  • Test Example 1 Measurement of Stability of UTP and Related Compounds
  • UTP-free an aqueous solution of UTP sodium salt (UTP-Na) and dimethyl of UTP-tributylamine salt (UTP-TBA)
  • UTP-TBA dimethyl of UTP-tributylamine salt
  • the stability of the acetamide solution was investigated.
  • As a comparative control the stability of aqueous solutions of UDP-free and UDP-Na was also measured.
  • the solution of each substance was allowed to stand at ⁇ 20 ° C., 25 ° C. or 50 ° C. for a fixed time, the concentration of each substance was measured by HPLC, and the decomposition rate was calculated.
  • the decomposition rate was defined as [Formula 1] below.
  • UTP-free and UTP-TBA have clearer stability during storage than other compounds such as UTP sodium salt, UDP-free and UDP sodium salt. It became clear that it was low.
  • the method of the present invention produces less impurities than the one-pot synthesis method, and the yield is remarkably improved, and is extremely suitable as an industrial mass production method of UP 4 U. It was shown that.
  • anhydrous UMP-tributylamine solution was prepared. This was added to a pyrophosphoric anhydride-diimidazolide solution, concentrated under reduced pressure, and stirred at 25 ° C. for 48 hours. Water was added to the reaction solution to prepare a 50 ml aqueous solution, which was quantified by HPLC analysis to calculate a synthetic yield of UP 4 U of 10%.
  • anhydrous UMP-tributylamine solution was prepared. This was added to an anhydrous pyrophosphoric acid-diimidazolide solution, and further zinc chloride (1.34 g, 9.8 mmol) was added, followed by concentration under reduced pressure and stirring at 25 ° C. for 5 hours. Water was added to the reaction solution to prepare a 50 ml aqueous solution, which was quantified by HPLC analysis to calculate a UP 4 U synthesis yield of 17%.
  • Tributylamine (0.95 ml, 4.0 mmol) and formamide (2.0 ml) were added to an aqueous solution (1.86 ml, 2.0 mmol) of 1.09 M pyrophosphate-triethylamine salt. Azeotropic dehydration was performed 4 times with dimethylformamide. The obtained residue was dissolved in dimethylformamide (8.0 ml), carbonyldiimidazole (0.97 g, 6.0 mmol) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour.
  • anhydrous UMP-tributylamine solution was prepared. This was added to a pyrophosphoric anhydride-diimidazolide solution, 1H-tetrazole (0.5 g, 7.2 mmol) was further added, and the mixture was concentrated under reduced pressure and stirred at 25 ° C. for 19 hours. Water was added to the reaction solution to prepare a 50 ml aqueous solution, which was quantified by HPLC analysis to calculate a synthetic yield of UP 4 U of 9%.
  • the method of the present invention produces less impurities than the old method of pyrophosphoric acid imidazolide method, and the yield is remarkably improved, and is an industrial mass production method of UP 4 U. It was shown to be very suitable.
  • an aqueous ferric chloride solution was used as an aqueous solution containing metal ions, but there is no particular limitation.
  • metal halides include ferrous chloride, ferric chloride, odor Ferric chloride, aluminum trichloride, cerium trichloride, lanthanum trichloride, etc.
  • metal inorganic acid salts from the group consisting of iron (divalent), iron (trivalent), aluminum, cerium, lanthanum Inorganic acid salts of selected metals such as sulfuric acid, nitric acid, perchloric acid, etc.
  • examples of metal organic acid salts the group consisting of iron (divalent), iron (trivalent), aluminum, cerium, lanthanum
  • An aqueous solution in which a trifluoromethanesulfonate, acetate, trifluoroacetate, citrate, or the like of a selected metal is dissolved can be suitably used. It can be easily understood by those skilled in the art that the yield of UP 4 U is improved in the same manner as in the above examples even when an aqueous solution containing these metal ions is used.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

ＵＴＰフリーを使用せず、合成効率の低下を避けることができるＰ１，Ｐ４－ジ（ウリジン５'－）テトラホスフェート（ＵＰ４Ｕ）の製造法を開発する。式[II]または[III]で示されるリン酸活性化合物と、ＵＭＰ、ＵＤＰ、ＵＴＰおよびピロリン酸から成る群より選択されるリン酸化合物またはその塩（ＵＴＰフリーを除く）とを、鉄(II)イオン、鉄(III)イオン、３価アルミニウムイオン、３価ランタンイオンおよび３価セリウムイオンからなる群より選択される金属イオンの存在下、水または親水性有機溶媒中で反応させることを特徴とする、ＵＰ４Ｕの製造法。[II][III]（式[II]中の、Ｒ１、Ｘ、ｎ、式[III]中のＸは、各々、請求項１に記載の意味を表す。）

Description

Ｐ１，Ｐ４－ジ（ウリジン５’－）テトラホスフェートの製造法
　本発明はＰ１，Ｐ４－ジ（ウリジン５’－）テトラホスフェートの効率的な新規製造法に関する。
　下記式［Ｉ］で表されるＰ１，Ｐ４－ジ（ウリジン５’－）テトラホスフェート（以下「ＵＰ４Ｕ」と表記する）またはその塩は、ドライアイに伴う角結膜上皮障害の治療薬として用いられている。また、痰排出誘導作用を有し、去痰剤または肺炎治療薬としての開発が期待されている化合物である。
　従来、ＵＰ４Ｕの合成法として、ウリジン５’－トリリン酸（ＵＴＰ）の脱水縮合反応により調製されるウリジン５’－環状トリリン酸とウリジン５’－モノリン酸（ＵＭＰ）とを反応させる方法（非特許文献１）及びその改良法（特許文献１）が報告されている。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
国際公開第２００８／０１２９４９号 国際公開第２００８／０２４１６９号
Ｂｉｏｏｒｇ．＆　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，ｖｏｌ．１１，１５７－１６０（２００１） Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０１１，Ｎｏ．９，７３０－７３８（２０１１）
　しかしながら、上記文献記載の従来技術は、以下の点で改善の余地を有していた。
　第一に、特許文献１の方法では、実験室レベルでは８０％以上という高い収率でＵＰ４Ｕを合成できるが、該方法を工業的な規模で大量製造するには問題点があった。
　具体的には、特許文献１の方法では、５’－ＵＴＰの５’－環状トリリン酸化反応を行うために、原料となるＵＴＰを、トリ－ｎ－ブチルアミンのような三級アミンの塩の形態で使用する必要がある。このため、ＵＴＰの３ナトリウム塩を事前にイオン交換カラムクロマトグラフィーにより遊離型のＵＴＰ（ＵＴＰフリー）とした後、三級アミンとの塩形成を行うという工程が必要であった。しかしながら後述する試験例でも検証しているように、ＵＴＰフリーは非常に不安定な物質であり、工業的な規模の大量製造においてＵＴＰフリーを原料として使用することは非常に困難である。
　第二に、ＵＴＰの５’－環状トリリン酸化反応を効率的に合成するためには、反応直前にＵＴＰのトリ－ｎ－ブチルアミン塩を脱水状態にしておく必要がある。しかしながら後述する比較試験でも検証しているように、工業的規模の大量製造において、ＵＴＰのトリ－ｎ－ブチルアミン塩を共沸により脱水する場合、ＵＴＰの熱的な分解反応が起こるためにＵＴＰの純度が低下してしまい、結果として合成効率が低下してしまう。
　このように、ＵＴＰを出発原料とする特許文献１の方法は、ＵＰ４Ｕの工業的な大量製造に最適の方法と言えるものではない。そこで、本発明は、ＵＴＰフリーを使用しないことや、ウリジン５’－環状トリリン酸を合成するためのＵＴＰ塩の脱水操作を回避することにより、原料の分解による合成効率の低下を避けることができる新たな製造法の開発を目的とする。
　特許文献１記載の合成法における問題点を回避する方法として、下記Ａ、Ｂに示す２つの方法が考えられるか、すでに知られている。
（Ａ）出発原料としてＵＴＰではなくＵＭＰを用い、反応系内でＵＭＰからＵＴＰを調製した後、これを精製することなく、特許文献１の方法に適用してＵＰ４Ｕを合成する方法（以下「ワンポット合成法」）。
（Ｂ）ピロリン酸をイミダゾールによって活性化してピロリン酸ジイミダゾリドを合成し、これをＵＭＰと縮合させることによってＵＰ４Ｕを合成する方法（以下「ピロリン酸ジイミダゾリド法旧法」、特許文献２、非特許文献２）。
　しかしながら、上記ワンポット合成法、ピロリン酸ジイミダゾリド法旧法は、いずれもＵＰ４Ｕの合成反応の溶媒としてジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）などの有機溶媒を用い、無水環境下で行うものであった。一方、反応の原料に用いるＵＭＰ、ＵＴＰ、ピロリン酸等はいずれも親水性の高い化合物であり、これら原料を反応に供するためには各工程で脱水工程を経なければならなかった。特に、ピロリン酸塩は有機溶剤に対する溶解性も悪く、その取り扱いには注意が必要となるなどの問題があった。
　また本発明者は、上記２つの改良合成法についてさらに検討を行った。まず、ワンポット合成法について詳細に検討したところ、後述する実施例に示すように、目的産物であるＵＰ４Ｕの合成収率はおよそ４０％と、大きく低下してしまった。また、特許文献１の方法をワンポット合成法として実施した場合、様々な副生成物が生じることから、その分離のために複雑なカラムクロマトグラフィーによる精製が必要であることが判明した。
　次に、ピロリン酸ジイミダゾリド法旧法についても、詳細な検討を行った。その結果、後述する実施例に示すように、ピロリン酸ジイミダゾリド法旧法においても副生成物を多く生じてしまうこと、最終産物であるＵＰ４Ｕの対ＵＭＰ収率が十分に高いものとは到底言えないことを新たに見出した。すなわち、ワンポット合成法、ピロリン酸ジイミダゾリド法旧法のいずれも、工業規模でのＵＰ４Ｕ大量生産に適した合成法とは言えないものであることが、明らかになった。
　そこで本発明者は、工業的な大量製造に適したＵＰ４Ｕの効率的合成法を確立すべく鋭意検討を重ねた結果、（ａ）ウリジン５’－ジリン酸（ＵＤＰ）、ＵＭＰまたはピロリン酸と、置換基を有しても良い、イミダゾール、ベンズイミダゾールまたは１，２，４－トリアゾールから成る群より選択される化合物とを縮合させることで合成されるリン酸活性化合物と、（ｂ）ＵＭＰ、ＵＤＰ、ＵＴＰおよびピロリン酸から成る群より選択されるリン酸化合物またはその塩（ただしＵＴＰフリーを除く）とを組み合わせ、触媒として、鉄（ＩＩ）イオン、鉄（ＩＩＩ）イオン、３価アルミニウムイオン、３価ランタンイオン、３価セリウムイオンからなる群より選択される金属イオンの存在下、水または親水性有機溶媒中で反応させるという簡便な方法によって、ＵＴＰフリーの利用およびＵＴＰ塩の脱水操作を回避でき、しかも副生成物が少なく、高い収率でもってＵＰ４Ｕを合成できることを見出し、本発明を完成させた。
　すなわち、本発明は、下記式［ＩＩ］または［ＩＩＩ］で示されるリン酸活性化合物と、ＵＭＰ、ＵＤＰ、ＵＴＰおよびピロリン酸から成る群より選択されるリン酸化合物またはその塩（ただしＵＴＰフリーを除く）とを鉄（ＩＩ）イオン、鉄（ＩＩＩ）イオン、３価アルミニウムイオン、３価ランタンイオンおよび３価セリウムイオンからなる群より選択される金属イオンの存在下、水または親水性有機溶媒中で反応させる工程を含むことを特徴とする、Ｐ１，Ｐ４－ジ（ウリジン５’－）テトラホスフェートの製造法を提供するものである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
（式中、Ｒ１は５’位で結合したウリジル基を示し；Ｘはイミダゾリル基、ベンズイミダゾリル基および１，２，４－トリアゾリル基から成る群より選択される１つの複素環式基を示し；ｎは１または２の整数を示す。）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
（式中、Ｘはイミダゾリル基、ベンズイミダゾリル基および１，２，４－トリアゾリル基から成る群より選択される１つの複素環式基を示す）
　本発明の製造方法では、ＵＰ４Ｕの合成を、工業的な大量製造に適さないＵＴＰフリーの利用およびＵＴＰ塩の脱水操作を回避しつつ、しかも収率よく行うことができる。また、本発明の製造方法では、副生成物がほとんど生成しないことから、合成したＵＰ４Ｕの精製が容易である。さらに、親水性条件下で反応を行うことにより、煩雑な脱水工程を省略できる。すなわち、本発明の製造方法は、ＵＰ４Ｕの工業的な大量合成にきわめて好適な方法である。
本発明の方法でＵＰ４Ｕを合成した際の、反応液中の生成物を分析したＨＰＬＣチャートを示す。図中、１０番のピークは目的生成物であるＵＰ４Ｕ、６番のピークは原料であるＵＤＰを示す。 ワンポット合成法でＵＰ４Ｕを合成した際の、反応液中の生成物を分析したＨＰＬＣチャートを示す。図中、１９番のピークは目的生成物であるＵＰ４Ｕ、５番のピークは原料であるＵＭＰを示す。 本発明の方法でＵＰ４Ｕを合成した際の、反応液中の生成物を分析したＨＰＬＣチャートを示す。図中、１６番のピークは目的生成物であるＵＰ４Ｕ、６番のピークは原料であるＵＭＰを示す。 ピロリン酸イミダゾリド法旧法（触媒なし）でＵＰ４Ｕを合成した際の、反応液中の生成物を分析したＨＰＬＣチャートを示す。図中、１７番のピークは目的生成物であるＵＰ４Ｕ、５番のピークは原料であるＵＭＰを示す。 ピロリン酸ジイミダゾリド法旧法（触媒ＺｎＣｌ２）でＵＰ４Ｕを合成した際の、反応液中の生成物を分析したＨＰＬＣチャートを示す。図中、１６番のピークは目的性生物であるＵＰ４Ｕ、５番のピークは原料であるＵＭＰを示す。 ピロリン酸ジイミダゾリド法旧法（触媒テトラゾール）でＵＰ４Ｕを合成した際の、反応液中の生成物を分析したＨＰＬＣチャートを示す。図中、２０番のピークは目的生成物であるＵＰ４Ｕ、５番のピークは原料であるＵＭＰを示す。
　以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。
　＜リン酸活性化合物＞
本発明で使用するリン酸活性化合物は、式［ＩＩ］または［ＩＩＩ］で表される化合物であり、ＵＭＰ、ＵＤＰまたはピロリン酸と、置換基を有しても良い、イミダゾール、ベンズイミダゾールまたは１，２，４－トリアゾールとを縮合させることで合成される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
（式中、Ｒ１は５’位で結合したウリジル基を示し；Ｘはイミダゾリル基、ベンズイミダゾリル基および１，２，４－トリアゾリル基から成る群より選択される一つの複素環式基を示し；ｎは１または２の整数を示す。）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
（式中、Ｘはイミダゾリル基、ベンズイミダゾリル基および１，２，４－トリアゾイル基から成る群より選択される１つの複素環置換基を示す）
　Ｘで表される複素環置換基としては、イミダゾイル基、ベンズイミダゾイル基または１，２，４－トリアゾイル基等が挙げられる。また、これら複素環式基は、当該複素環式基中に置換基を有していてもよく、当該置換基としてはたとえばＣ1-6アルキル基、ニトロ基、シアノ基等が挙げられる。
　このようなリン酸活性化合物として、具体的にはＵＤＰ－リン酸イミダゾリド、ＵＤＰ－リン酸トリアゾリド、ＵＭＰ－リン酸イミダゾリドまたはピロリン酸ジイミダゾリド等が挙げられ、これらの化合物は既知の方法（Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｖｏｌ．４，２８４３（１９７７）、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｓｏｃｉｅｔｙ，ｖｏｌ．１２６，９５４８（２００４））に従って調製することができる。
　ＵＰ４Ｕの合成に当たっては、ＵＤＰ－リン酸イミダゾリド、ＵＤＰ－リン酸トリアゾリド、ＵＭＰ－リン酸イミダゾリドまたはピロリン酸ジイミダゾリド等のリン酸活性化合物の合成液あるいはその濃縮液をそのまま、あるいは必要に応じて精製し、使用することができる。
　＜リン酸化合物＞
　本発明で使用するリン酸化合物は、下記式（ＩＶ）で表される化合物またはその塩であり、具体的には、ＵＴＰフリーを除く、ＵＭＰ、ＵＤＰ、ＵＴＰ、ピロリン酸、またはそれらの塩を挙げることができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
（式中、Ｒ２は、水素原子または５’位で結合したウリジル基を示し；ｍは１～３の整数を示す。）
　当該リン酸化合物は、ナトリウムやカリウムなどのアルカリ金属塩、トリエチルアンモニウム、トリブチルアンモニウムなどの３級アンモニウム塩、テトラエチルアンモニウム塩やテトラブチルアンモニウムのような４級アンモニウム塩の形態で用いることができる。
　＜原料化合物の組合せ＞
　このようなリン酸活性化合物とリン酸化合物との原料化合物の組み合わせとしては、合目的的に決定すればよく、好ましくは以下の組み合わせで用いるのが好適である。
　組み合わせ１：ＵＤＰ活性化合物とＵＤＰまたはＵＤＰ塩の組み合わせ
　組み合わせ２：ＵＭＰ活性化合物とＵＴＰ塩の組み合わせ
　組み合わせ３：ＵＭＰ活性化合物とピロリン酸またはピロリン酸塩の組み合わせ
　組み合わせ４：ピロリン酸活性化合物と、ＵＭＰまたはＵＭＰ塩の組み合わせ。
　いずれの組み合わせにおいても、縮合反応における、リン酸活性化合物とリン酸化合物とのモル比は、１：１０～１０：１の範囲に設定すれば、ＵＰ４Ｕの収率が向上するため好ましい。もっとも、このモル比は、例えば、
　（１）上記組み合わせ１のとき、モル比３：８、４：７、５：６、６：５、７：４、８：３、９：２、１０：１のいずれか、
　（２）組み合わせ２のときにはモル比１：１０、２：９、３：８、４：７、５：６、６：５、７：４、８：３のいずれか、
　（３）組み合わせ３のときには４：７、５：６、６：５、７：４、８：３、９：２、１０：１のいずれか、さらに、
　（４）組み合わせ４のときには４：７、５：６、６：５、７：４、８：３、９：２、１０：１のいずれか、
であり、ここで例示した何れか２つの数値の範囲内であってもよい。
　＜金属イオン＞
　本発明に使用する金属イオンは、目的の金属イオンを含む金属塩の形態で溶液に添加することによって、水または親水性有機溶媒中で金属イオンとなり、反応系に供給することができる。金属塩の種類としては、金属ハロゲン化物、金属無機酸塩、金属有機酸塩等を提示することができる。さらなる具体例としては、（ｉ）金属ハロゲン化物の例として塩化第一鉄、塩化第二鉄、臭化第二鉄、三塩化アルミニウム、三塩化セリウム、三塩化ランタニウム等を、（ｉｉ）金属無機酸塩の例として鉄（２価）、鉄（３価）、アルミニウム、セリウム、ランタンから成る群より選択される金属の硫酸、硝酸、過塩素酸等の無機酸塩を、（ｉｉｉ）金属有機酸塩の例として、鉄（２価）、鉄（３価）、アルミニウム、セリウム、ランタンから成る群より選択される金属のトリフルオロメタンスルホン酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩等を用いることが、ＵＰ４Ｕの収率が向上するため好ましい。中でも、合成収率および取り扱い易さの点で、第二鉄塩が好ましく、塩化第二鉄が特に好ましい。なお、用いる金属塩は、無水物であっても水和物であっても良い。ただし、上記リン酸活性化合物とリン酸化合物の組み合わせのうち、特に組み合わせ４の場合は、鉄（ＩＩＩ）イオン、３価アルミニウムイオン等を用いることが特に好ましい。
　金属イオン源である金属塩は、ＵＰ４Ｕの収率を向上させるためには、反応に用いるリン酸化合物の総モル数に対して０．００１～１０倍モル量とすることが好ましく、特に好ましくは０．００１～１倍モル量を使用できる。もっとも、この金属塩の量は、例えば反応に用いるリン酸化合物の総モル数に対して０．００１、０．００５、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１倍モル量のいずれかであり、ここで例示した何れか２つの数値の範囲内であってもよい。
　＜縮合反応・精製の条件＞
　本発明におけるリン酸活性化合物とリン酸化合物との縮合反応は、水または親水性有機溶剤を溶媒として実施する。合成収率および取り扱い易さの点から、親水性有機溶剤としては、メタノール、エタノール等の炭素数６以下のアルコール類、アセトン等のケトン類、ジオキサン等のエーテル類、アセトニトリル等のニトリル類、ジメチルホルムアミド等のアミド類等を使用することができる。
　この縮合反応においては、ＵＰ４Ｕの収率を向上させるために、反応ｐＨは７以下であることが好ましく、特に好ましくはｐＨ１～４付近である。また、この縮合反応では、ＵＰ４Ｕの収率を向上させるためには、反応温度は０℃～６０℃であることが好ましい。上記原料化合物の組み合わせにおいて、組み合わせ１～組み合わせ３の場合は、反応温度２０～３０℃であることが特に好ましく、組み合わせ４の場合は、反応温度０～２０℃であることが特に好ましい。この縮合反応の時間は、必要十分な縮合反応を行うためには、１～３６時間程度であることが好ましく、特に好ましくは２～２０時間である。
　縮合反応終了後は、一般のヌクレオチドの単離精製に使用される方法（たとえば、結晶法、イオン交換カラムクロマトグラフィー、吸着カラムクロマトグラフィー、活性炭カラムクロマトグラフィーなど）を適宜組み合わせることで、生成したＵＰ４Ｕを分離精製することができ、必要に応じて塩型とすることもできる。
　イオン交換カラムクロマトグラフィーで使用するイオン交換樹脂としては、強塩基性陰イオン交換樹脂（例えば、アンバーライトＩＲＡ４０２〔ローム＆ハース社製〕、ダイアイオンＰＡ－３１２、ダイアイオンＳＡ－１１Ａ〔三菱化学社製〕）、弱塩基性陰イオン交換樹脂（例えば、アンバーライトＩＲＡ６７〔ローム＆ハース社製〕、ダイアイオンＷＡ－３０〔三菱化学社製〕）、強酸性陽イオン交換樹脂（例えば、ダイアイオンＰＫ－２１６〔三菱化学社製〕）又は弱酸性陽イオン交換樹脂（ダイアイオンＷＫ－３０〔三菱化学社製〕）等を使用することができる。
　活性炭としては、破砕状あるいは粒状に形成されたクロマト用活性炭を使用すればよく、例えば和光純薬工業社、二村化学工業社製等の市販品を使用できる。
　また、結晶化には既知の方法を用いればよく、例えば、得られたＵＰ４Ｕ又はその塩に親水性有機溶媒を加えて、結晶を析出させることにより得られる。使用する親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール等の炭素数６以下のアルコール類、アセトン等のケトン類、ジオキサン等のエーテル類、アセトニトリル等のニトリル類、ジメチルホルムアミド等のアミド類を例示することができ、アルコール類が好ましく、さらにエタノールが特に好ましい。
　＜本発明の作用効果＞
　これまで説明したとおり、本発明では、（ａ）ウリジン５’－ジリン酸（ＵＤＰ）、ＵＭＰまたはピロリン酸と、置換基を有しても良い、イミダゾール、ベンズイミダゾールまたは１，２，４－トリアゾールから成る群より選択される化合物とを縮合させることで合成されるリン酸活性化合物と、（ｂ）ＵＭＰ、ＵＤＰ、ＵＴＰおよびピロリン酸から成る群より選択されるリン酸化合物またはその塩（ただしＵＴＰフリーを除く）とを組み合わせ、触媒として、鉄（ＩＩ）イオン、鉄（ＩＩＩ）イオン、３価アルミニウムイオン、３価ランタンイオン、３価セリウムイオンからなる群より選択される金属イオンの存在下、水または親水性有機溶媒中で反応させるという方法を用いることによって、後述の実施例に示すように、簡便な工程でＵＰ４Ｕの工業的な大量製造を行うことができる。
　一方で、既に説明したように、従来公知の特許文献１の方法では、実験室レベルでは８０％以上という高い収率でＵＰ４Ｕを合成できるが、該方法を工業的な規模で大量製造するには問題点があった。具体的には、特許文献１の方法では、５’－ＵＴＰの５’－環状トリリン酸化反応を行うために、原料となるＵＴＰをトリ－ｎ－ブチルアミンのような三級アミンの塩の形態で使用する必要がある。このため、ＵＴＰの３ナトリウム塩を事前にイオン交換カラムクロマトグラフィーにより遊離型のＵＴＰ（ＵＴＰフリー）とした後、三級アミンとの塩形成を行うという工程が必要であった。しかしながら、後述する試験例に示したように、ＵＴＰフリーは非常に不安定な物質であり、工業的な規模の大量製造においてＵＴＰフリーを原料として使用することは非常に困難なことであった。また、ＵＴＰの５’－環状トリリン酸化反応を効率的に合成するためには、反応直前にＵＴＰのトリ－ｎ－ブチルアミン塩を脱水状態にしておく必要がある。しかしながら、後述する比較試験例に示したように、工業的な規模な大量製造において、ＵＴＰのトリ－ｎ－ブチルアミン塩を共沸により脱水する場合、ＵＴＰの熱的な分解反応が起こるためにＵＴＰの純度が低下してしまい、結果として合成効率を低下させる原因となっていた。
　また、特許文献２および非特許文献２の方法では、上記ＵＴＰフリーを使用した工程を用いることなくＵＰ４Ｕを合成することが可能であったが、後述する比較試験にも示したように、対ＵＭＰ収率が著しく低下してしまうものであった。また、副生成物を多く生成せしめるものであり、やはり工業的な大規模製造に適した製法であるとは言えなかった。
　これに対して、本発明方法では、ＵＤＰまたはＵＭＰを出発原料としているので、ＵＴＰフリーを使用する必要もなく、さらにウリジン５’－環状トリリン酸を合成するためのＵＴＰ塩の脱水操作を回避することもできるため、後述する実施例で示すように、原料の分解による合成効率の低下を避けることができる。また、ＵＴＰのトリ－ｎ－ブチルアミン塩を共沸により脱水する必要もないので、ＵＴＰの熱的な分解反応が起こることもなく、後述する実施例で示すように、余計な副産物が発生してＵＴＰの純度が低下してしまうこともない。そのため、本発明の製造方法は、ＵＰ４Ｕの工業的な大量合成にきわめて好適な方法である。
　本発明では、リン酸活性化合物がＵＤＰ－リン酸イミダゾリドであり、リン酸化合物がＵＤＰまたはＵＤＰ塩であることが好ましい。この場合、ＵＰ４Ｕの合成を、工業的な大量製造に適さないＵＴＰフリーの利用およびＵＴＰ塩の脱水操作を回避しつつ、しかも収率よく行うことができることが後述する実施例で実証されているからである。
　また、本発明では、リン酸活性化合物がＵＭＰ－リン酸イミダゾリドであり、リン酸化合物がＵＴＰまたはＵＴＰ塩であることが好ましい。この場合にも、ＵＰ４Ｕの合成を、工業的な大量製造に適さないＵＴＰフリーの利用およびＵＴＰ塩の脱水操作を回避しつつ、しかも収率よく行うことができることが後述する実施例で実証されているからである。
　また、本発明では、リン酸活性化合物がＵＭＰ－リン酸イミダゾリドであり、リン酸化合物がピロリン酸またはピロリン酸塩であることが好ましい。この場合にも、ＵＰ４Ｕの合成を、工業的な大量製造に適さないＵＴＰフリーの利用およびＵＴＰ塩の脱水操作を回避しつつ、しかも収率よく行うことができることが後述する実施例で実証されているからである。
　また、本発明では、リン酸活性化合物がピロリン酸ジイミダゾリドであり、リン酸化合物がＵＭＰまたはＵＭＰ塩であることが好ましい。この場合にも、ＵＰ４Ｕの合成を、工業的な大量製造に適さないＵＴＰフリーの利用およびＵＴＰ塩の脱水操作を回避しつつ、しかも収率よく行うことができることが後述する実施例で実証されているからである。
　また、本発明では、金属イオンが鉄（ＩＩ）イオン、鉄（ＩＩＩ）イオンまたはアルミニウムイオンから成る群より選ばれることが好ましい。とくに、リン酸活性化合物がピロリン酸ジイミダゾリドであり、リン酸化合物がＵＭＰフリーまたはＵＭＰ塩である場合には、鉄（ＩＩＩ）イオンまたはアルミニウムイオンから成る群より選ばれることが好ましい。これらの場合、他の金属イオンを用いる場合に比べて、ＵＰ４Ｕの合成を効率よく行うことができることが後述する比較試験で実証されているからである。
　また、本発明では、金属イオンが、金属の塩化物、臭化物、硝酸化物、硫酸化物、酢酸化物から成る群より選択される塩の形態で供給されることが好ましい。この場合にも、ＵＰ４Ｕの合成を効率よく行うことができるからである。
　以上、本発明の実施形態について述べたが、これらは本発明の例示であり、上記以外の様々な構成を採用することもできる。
　以下、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
（実施例１）組み合わせ１（その１）：ＵＤＰ－リン酸イミダゾリド（式ＩＩ中、Ｒ１＝５’－ウリジル、Ｘ＝イミダゾイル、ｎ＝２）とＵＤＰナトリウム塩（式ＩＶ中、Ｒ２＝５’－ウリジル、ｍ＝２）との反応
　０．３２Ｍ　ＵＤＰ－トリブチルアミン塩の水溶液（１．２６ｍｌ，４．０ｍｍｏｌ）にジメチルアセトアミド（６．０ｍｌ）を加え、共沸脱水を４回行った。得られた残渣をジメチルアセトアミド（６．０ｍｌ）で溶解し、カルボニルジイミダゾール（１．９５ｇ，１２．０ｍｍｏｌ）を加え室温で１時間攪拌した。氷冷下で反応液に水（０．２ｍｌ）を加え、さらに０．５Ｍ塩酸水溶液（１２．０ｍｌ）を滴下した（ｐＨ７．０）。反応液を減圧下で濃縮し、ＵＤＰ－リン酸イミダゾリド溶液を調製した。
　氷冷下でＵＤＰ－リン酸イミダゾリド溶液にＵＤＰナトリウム水溶液（２．０ｍｍｏｌ，２．１ｍｌ）を加え、さらに２Ｍ塩酸水溶液を加えてｐＨ４．９の混合溶液とした。氷冷下で１Ｍ塩化第二鉄水溶液（１．５ｍｍｏｌ，１．５ｍｌ）を加え、さらに２Ｍ塩酸水溶液を加えてｐＨ１．６の混合溶液とし、２５℃で３時間攪拌した。反応液に６Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を加えｐＨ１２とし、室温で３０分間攪拌した。２Ｍ塩酸を加えてｐＨ７．６とした。ＨＰＬＣ分析で定量し、ＵＰ４Ｕの合成収率８７％を算出した。
　合成液を１０ｍｌに濃縮し、リン酸一水素ナトリウム（４．２ｍｍｏｌ）を加えて溶解し、リン酸鉄を析出させた。懸濁液を４℃で一晩静置した後、遠心分離で沈殿物を除去した。上澄み液をｐＨ２．５に調整後、３０ｍｌ溶液としてカラム吸着液とした。
　上記カラム吸着液について、活性炭カラムクロマトグラフィー（樹脂量２０ｍｌ）で脱塩を行い、得られた回収液をｐＨ７に調整し濃縮後、メンブランろ過を行った。さらに濃縮を行い、残渣にエタノールを滴下し、室温で一晩結晶化を行った。結晶をろ取し、５０℃で３時間、真空乾燥し、目的物ＵＰ４Ｕを２．１２ｇ（４水和物として収率７５％）得た。
（実施例２）組み合わせ１（その２）：ＵＤＰ－リン酸イミダゾリド（式ＩＩ中、Ｒ１＝５’－ウリジル、Ｘ＝イミダゾイル、ｎ＝２）とＵＤＰナトリウム塩（式ＩＶ中、Ｒ２＝５’－ウリジル、ｍ＝２）との反応
　０．９４Ｍ　ＵＤＰナトリウム水溶液（１．０ｍｌ）に５．６４Ｍ　イミダゾール－ジメチルアセトアミド溶液（０．５ｍｌ）を加え、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（０．７３ｍｌ，４．７ｍｍｏｌ）を加え室温で５時間、５０℃で２時間攪拌し、ＵＤＰとＵＤＰ－リン酸イミダゾリド溶液の混合液を調製した。
　氷冷下で２Ｍ塩酸水溶液を加えｐＨ５．３の混合溶液とした後、１Ｍ塩化第二鉄水溶液（０．２４ｍｍｏｌ，０．２４ｍｌ）を加え、さらに２Ｍ塩酸水溶液を加えｐＨ１．９の混合溶液として、２５℃で１６時間攪拌した。ＨＰＬＣ分析で定量し、ＵＰ４Ｕの合成収率６３％を算出した。
（実施例３）組み合わせ１（その３）：ＵＤＰ－リン酸イミダゾリド（式ＩＩ中、Ｒ１＝５’－ウリジル、Ｘ＝イミダゾイル、ｎ＝２）とＵＤＰナトリウム塩（式ＩＶ中、Ｒ２＝５’－ウリジル、ｍ＝２）との反応
　０．１７Ｍ　ＵＤＰ－トリブチルアミン塩の水溶液　（１１．８ｍｌ，２．０ｍｍｏｌ）にプロピオニトリル（３．０ｍｌ）を加え共沸脱水を４回行った。得られた残渣をプロピオニトリル（３．０ｍｌ）で溶解した。これを１，１’－カルボニルジイミダゾール（０．９７ｇ，６．０ｍｍｏｌ）のプロピオニトリル（２．０ｍｌ）懸濁液に滴下した。室温で３０分間攪拌した後、反応液を減圧下で濃縮し、ＵＤＰ－リン酸イミダゾリド溶液を調製した。
　氷冷下でＵＤＰ－リン酸イミダゾリド溶液にＵＤＰ－２ナトリウム（０．５３ｇ，１．０ｍｍｏｌ）を加え、６Ｍ塩酸水溶液でｐＨ３．９に調製した。さらに１Ｍ塩化第二鉄水溶液（１５μｌ，０．０２ｍｍｏｌ）を加え、１０℃で２７時間攪拌した。反応液に７．５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を加えｐＨ１０とし、氷冷下で１時間攪拌した。氷冷下で反応液に１０ｍｌのエタノールを添加し、４℃で一晩静置した。沈殿物を回収しｐＨ７．５の２０ｍｌ水溶液に調製し、ＨＰＬＣ分析で定量してＵＰ４Ｕの合成収率９４％を算出した。すなわち、塩化鉄触媒の使用量を大幅に減らした場合でも、反応は良好に進むことが明らかになった。
（実施例４）組み合わせ１（その４）：ＵＤＰ－リン酸ベンズイミダゾリド（式ＩＩ中、Ｒ１＝５’－ウリジル、Ｘ＝ベンズイミダゾイル、ｎ＝２）とＵＤＰナトリウム塩（式ＩＶ中、Ｒ２＝５’－ウリジル、ｍ＝２）との反応
　ＵＤＰ－２ナトリウム塩（０．５ｇ，０．９４ｍｍｏｌ）を水２．７ｍｌに溶解し、ベンズイミダゾール（０．３３ｇ，２．８２ｍｍｏｌ）のジメチルアセトアミド溶液（１．８ｍｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（０．４４ｍｌ，２．８２ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩攪拌した。減圧下で溶媒を留去し、ＵＤＰ－２ナトリウムとＵＤＰ－リン酸ベンズイミダゾリドの混合物を調製した。
　これに水１ｍｌを添加した後、氷冷下で２Ｍ塩酸水溶液を加えてｐＨを４．６に調製した。氷冷下で１Ｍ塩化第二鉄水溶液（９４μｌ，０．０９ｍｍｏｌ）を加え、さらに２Ｍ塩酸水溶液を加えｐＨ３．０の混合溶液として、室温で１０時間攪拌した。反応液に６Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を加えｐＨ１２とし、室温で1時間攪拌した。２Ｍ塩酸を加えてｐＨ７．３とした。ＨＰＬＣ分析で定量し、ＵＰ４Ｕの合成収率８３％を算出した。
（実施例５）組み合わせ１（その５）：ＵＤＰ－リン酸トリアゾリド（式ＩＩ中、Ｒ１＝５’－ウリジル、Ｘ＝１，２，４－トリアゾイル、ｎ＝２）とＵＤＰナトリウム塩（式ＩＶ中、Ｒ２＝５’－ウリジル、ｍ＝２）との反応
　０．３７Ｍ　ＵＤＰ－トリブチルアミン塩の水溶液　（１．６ｍｌ，０．６ｍｍｏｌ）にジメチルアセトアミド（２．０ｍｌ）を加え共沸脱水を４回行った。得られた残渣をジメチルアセトアミド（２．０ｍｌ）で溶解し、１，１’－カルボニルジ－（１，２，４－トリアゾール）（０．２５ｇ，１．５ｍｍｏｌ）を加え室温で１時間攪拌した。氷冷下で反応液に水　（０．２ｍｌ）を加え、さらに０．５Ｍ塩酸水溶液を加えてｐＨ７．４とした。反応液を減圧下で濃縮し、ＵＤＰ－リン酸トリアゾリド溶液を調製した。
　氷冷下でＵＤＰ－リン酸トリアゾリド溶液にＵＤＰナトリウム水溶液（０．２５ｍｍｏｌ，０．９ｍｌ）を加え、さらに１Ｍ塩化第二鉄水溶液（０．１９ｍｍｏｌ，０．１９ｍｌ）を加え（ｐＨ６．３）、２５℃で５時間攪拌した。反応液に６Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を加えｐＨ１２とし、室温で３０分間攪拌した。２Ｍ塩酸を加えてｐＨ７．０とした。ＨＰＬＣ分析で定量し、ＵＰ４Ｕの合成収率４８％を算出した。
（実施例６）組み合わせ２：ＵＭＰ－リン酸イミダゾリド（式ＩＩ中、Ｒ１＝５’－ウリジル、Ｘ＝イミダゾイル、ｎ＝１）とＵＴＰナトリウム塩（式ＩＶ中、Ｒ２＝５’－ウリジル、ｍ＝３）との反応
　２．０５Ｍ　ＵＭＰフリー水溶液（０．４９ｍｌ，１．０ｍｍｏｌ）にトリブチルアミン（０．２５ｍｌ，１．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で２０分間攪拌した後、ジメチルアセトアミド（１．５ｍｌ）をさらに加え共沸脱水を３回行った。得られたＵＭＰ－トリブチルアミン塩溶液をジメチルアセトアミド（１．５ｍｌ）で溶解し、カルボニルジイミダゾール（４８６ｍｇ，３．０ｍｍｏｌ）を加え室温で１時間攪拌した。氷冷下で反応液に水（０．２ｍｌ）を加え、さらに０．５Ｍ塩酸水溶液（４．０ｍｌ）を滴下した（ｐＨ７．２）。反応液を減圧下で濃縮し、ＵＭＰ－リン酸イミダゾリド溶液を調製した。
　氷冷下、１６５ｍＭ　ＵＴＰナトリウム水溶液（８．０ｍｌ，１．３ｍｍｏｌ）に上記ＵＭＰ－リン酸イミダゾリド溶液および２Ｍ塩酸水溶液を加え、ｐＨ５．１の混合溶液とした。氷冷下で塩化第二鉄水溶液（０．５ｍｍｏｌ，０．２ｍｌ）を添加し、２５℃で４時間攪拌した。反応液をメンブランろ過した後、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１１ｍｌ）を加えてｐＨ１０．４とし、室温で４０分間攪拌した。その後、２Ｍ塩酸（３．５ｍｌ）を加えてｐＨ６．９とした。ＨＰＬＣ分析で定量し、ＵＰ４Ｕの合成収率６７％を算出した。
　以下、実施例１と同様に精製を行った結果、目的物ＵＰ４Ｕを４７１ｍｇ（４水和物として５０％）得た。
（実施例７）組み合わせ３：ＵＭＰ－リン酸イミダゾリド（式ＩＩ中、Ｒ１＝５’－ウリジル、Ｘ＝イミダゾイル、ｎ＝１）とピロリン酸トリエチルアミン塩（式ＩＶ中、Ｒ２は水素原子、ｍ＝２）との反応
　２．０５Ｍ　ＵＭＰフリー水溶液（０．４９ｍｌ，１．０ｍｍｏｌ）にトリブチルアミン（０．２５ｍｌ，１．１ｍｍｏｌ）を加え室温で２０分間攪拌した後、ジメチルアセトアミド（１．５ｍｌ）を加え共沸脱水を３回行った。得られたＵＭＰ－トリブチルアミン塩溶液をジメチルアセトアミド（１．５ｍｌ）で溶解し、カルボニルジイミダゾール（４８６ｍｇ，３．０ｍｍｏｌ）を加え室温で１時間攪拌した。氷冷下で反応液に水　（０．２ｍｌ）を加え、さらに０．５Ｍ塩酸水溶液（４．０ｍｌ）を滴下した（ｐＨ７．２）。反応液を減圧下で濃縮し、ＵＭＰ－リン酸イミダゾリド溶液を調製した（本操作を２回行った）。
　氷冷下でＵＭＰ－リン酸イミダゾリド溶液に０．９５Ｍ　ピロリン酸トリエチルアミン水溶液（１．１ｍｌ，１．０ｍｍｏｌ）に加え、さらに１Ｍ塩化第二鉄水溶液（０．５ｍｍｏｌ，０．５ｍｌ）を加えた。反応液を２Ｍ塩酸水溶液でｐＨ５．１に調整後、２５℃で５時間攪拌した。攪拌後、氷冷下で、別途調製したＵＭＰ－リン酸イミダゾリド溶液（１．０ｍｍｏｌ）を加え、さらに２Ｍ塩酸水溶液でｐＨ２．１に調整し、２５℃で６時間攪拌した。６Ｍ　水酸化ナトリウム水溶液を加えｐＨ１１とし、室温で３０分間攪拌した。さらに２Ｍ塩酸を加えてｐＨ７．６とし、ＨＰＬＣ分析で定量してＵＰ４Ｕの合成収率４５％を算出した。
（実施例８）組み合わせ４：ピロリン酸ジイミダゾリド（式ＩＩＩ中、Ｘ＝イミダゾイル）とＵＭＰ（式ＩＶ中、Ｒ２は５’－ウリジル、ｍ＝１）との反応
　１．０９Ｍ　ピロリン酸－トリエチルアミン塩の水溶液（１．８６ｍｌ，２．０ｍｍｏｌ）にトリブチルアミン（０．９５ml，４．０ｍｍｏｌ）、ホルムアミド（２．０ｍｌ）を加え、ジメチルホルムアミドで共沸脱水を４回行った。得られた残渣をジメチルホルムアミド（８．０ｍｌ）で溶解し、カルボニルジイミダゾール（０．９７ｇ，６．０ｍｍｏｌ）を加え室温で１時間攪拌した。氷冷下で反応液に水（０．２ｍｌ）を加え、さらに２．０Ｍ塩酸水溶液（１．５ｍｌ）を滴下した（ｐＨ７）。反応液を減圧下で濃縮し、ピロリン酸－ジイミダゾリド溶液を調製した。
　氷冷下でピロリン酸－ジイミダゾリド溶液にＵＭＰ－フリー水溶液（２．０３Ｍ，２．４７ｍｌ，５．０ｍｍｏｌ）を加えた。さらに１Ｍ塩化第二鉄水溶液（２ｍｌ，２．０ｍｍｏｌ）を加え、２Ｍ塩酸水溶液を加えてｐＨを２．４に調整し、０℃で５時間攪拌した。反応液に６．０Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を加え、ｐＨ６．３とした。これに水を加えて５０ｍｌ水溶液に調製し、ＨＰＬＣ分析で定量してＵＰ４Ｕの合成収率５１％を算出した。
（試験例１）ＵＴＰおよび関連化合物の安定性の測定
　ＵＴＰフリーの安定性を評価するため、ＵＴＰフリー、ＵＴＰナトリウム塩（ＵＴＰ－Ｎａ）の水溶液およびＵＴＰ－トリブチルアミン塩（ＵＴＰ－ＴＢＡ）のジメチルアセトアミド溶液の安定性を調べた。また、比較対照としてＵＤＰ－フリーおよびＵＤＰ－Ｎａの水溶液の安定性も測定した。各物質の溶液を－２０℃、２５℃または５０℃で一定時間静置し、それぞれの物質の濃度をＨＰＬＣで測定し、分解率を算出した。なお、分解率は以下［数１］のように定義した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000009
　結果、下記［表１］［表２］に示したように、ＵＴＰフリーおよびＵＴＰ－ＴＢＡは、ＵＴＰナトリウム塩、ＵＤＰフリー、ＵＤＰナトリウム塩といった他の化合物に比べて溶液保存時の安定性が明確に低いことが明らかになった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
（比較試験１）ＵＤＰ－リン酸イミダゾリド（式ＩＩ中、Ｒ１＝５’－ウリジル、Ｘ＝イミダゾイル、ｎ＝２）とＵＤＰナトリウム塩（式ＩＶ中、Ｒ２＝５’－ウリジル、ｍ＝２）との反応における金属触媒効果
　実施例１の方法で調製されたＵＤＰ－リン酸イミダゾリドとＵＤＰナトリウム塩とのモル比１：１の混合水溶液（各０．１５Ｍ）に各種金属触媒（０．０６Ｍ）を添加し、２Ｍ塩酸水溶液でｐＨ２±０．３として、２５℃で６時間後のＵＰ４Ｕの生成量をＨＰＬＣで定量した。結果を表３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
　結果、金属塩として塩化第一鉄、塩化第二鉄、硝酸第二鉄、塩化アルミニウム、塩化ランタン、塩化セリウムを触媒として用いたとき、ＵＰ４Ｕを特に高い収率でもって得られることが明らかになった。
（比較試験２）ピロリン酸ジイミダゾリド（式ＩＩＩ中、Ｘ＝イミダゾイル）とＵＭＰフリー（式ＩＶ中、Ｒ２＝５’－ウリジル、ｍ＝１）との反応における金属触媒効果
　実施例８の方法で調製されたピロリン酸－ジイミダゾリドとＵＭＰフリーとのモル比２：５の混合水溶液（ピロリン酸－ジイミダゾリドとして０．４ｍｍｏｌ）に各種金属触媒（０．４ｍｍｏｌ）を添加し、２Ｍ塩酸水溶液でｐＨ２．５±０．５として、０℃で５時間後のＵＰ４Ｕの生成量をＨＰＬＣで定量した。結果を［表４］に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
　結果、原料としてピロリン酸活性化合物とＵＭＰの組み合わせを用いる場合、金属塩として塩化第二鉄、塩化アルミニウムを触媒として用いたときにおいて、ＵＰ４Ｕを特に高い収率でもって得られることが明らかになった。
（比較試験３）ワンポット合成法と本発明方法を用いた際のＵＰ４Ｕ収率および不純物の生成度合の比較
　従来法を改善し、ＵＴＰフリーを使う工程を回避した合成法であるワンポット合成法と、本実施例の方法を用いてそれぞれＵＰ４Ｕを合成した際の、最終産物の収率をそれぞれ比較した。本実施例の方法としては、上記実施例１の方法に従った。従来の方法を変更したワンポット合成法での合成は、以下の工程によって行った。
（１）合成液１の調製
　２．０５ＭのＵＭＰフリー水溶液（２．１ｍｌ，４．３ｍｍｏｌ）にトリ－ｎ－ブチルアミン（２．２ｍｌ，９．２ｍｍｏｌ）を加え２０分間攪拌した後、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）で４回共沸脱水した。残渣をＤＭＡＣ（５．５ｍｌ）に溶解し、１０℃でクロロリン酸ジフェニル（ＤＰＣ）（１．１ｍｌ，５．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。トリ－ｎ－ブチルアミン（４．１ｍｌ，１７．２ｍｍｏｌ）を加え室温で１０分間攪拌し、これを合成液１とした。
（２）合成液２の調製
　０．９５Ｍピロリン酸－トリエチルアミン塩水溶液（９．０ｍｌ，８．５ｍｍｏｌ）にトリ－ｎ－ブチルアミン（２．２ｍｌ，９．２ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＣ（３．０ｍｌ）を加えた後、ピリジンで３回共沸脱水した。残渣にトリ－ｎ－ブチルアミン（０．４ｍｌ，２．８ｍｍｏｌ）、ピリジン（４．０ｍｌ）を加えて、これを合成液２とした。
（３）ＵＭＰ－ＴＢＡ溶液の調製
　２．０５ＭのＵＭＰフリー水溶液（３．１ｍｌ，６．４ｍｍｏｌ）にトリ－ｎ－ブチルアミン（１．７ｍｌ，６．９ｍｍｏｌ）を加え２０分間攪拌した後、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）で４回共沸脱水した。残渣をＤＭＡＣ（３．５ｍｌ）に溶解し、ＵＭＰ－ＴＢＡ溶液を調製した。
（４）ＵＰ４Ｕ合成液の調製
　室温下で合成液２に合成液１を滴下し、室温で１時間攪拌した（ＨＰＬＣ分析でＵＴＰが約６０％生成していることを確認した）。Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（２．３ｍｌ，１７．０ｍｍｏｌ）を加え室温で３時間攪拌した後、０℃でＵＭＰ－ＴＢＡ溶液および塩化マグネシウム－６水和物（１．７ｇ，８．４ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間、室温で１９時間攪拌した。０℃で水（２０ｍｌ）を加えた後、室温で１時間攪拌した。反応液を減圧濃縮した後、水（５０ｍｌ）を加え室温で２時間静置した。沈殿物をろ過して除きＵＰ４Ｕ合成液を調製した。ＨＰＬＣによりＵＰ４Ｕを定量し、ＵＭＰからの合成収率を４２％と算出した。
（結果の考察・収率）
　その結果、本実施例の方法でＵＰ４Ｕを合成した際には、上述の実施例１で示したように、ＵＤＰからの合成収率８７％であるのに対し、ワンポット合成法ではＵＭＰからの合成収率は４２％に過ぎず、本発明の方法はワンポット合成法に比較して、著しく高い収率を達成するものであることが判明した。
（結果の考察・副生成物）
　さらに、本実施例の方法とワンポット合成法での不純物の生成度合の差を比較するため、それぞれの方法でＵＰ４Ｕを合成後の反応液中の生成物をＨＰＬＣで分析した。ＨＰＬＣチャートを［図１］［図２］に示す。図１及び２から明らかなように、ワンポット合成法では、産物であるＵＰ４Ｕおよび原料のＵＭＰ以外の副生成物がＨＰＬＣチャートの面積の割合で約４８％生じていた上に、副生成物の種類数も多いのに対して、本発明の方法では、ＵＰ４Ｕおよび原料であるＵＤＰ以外の副生成物の割合は４．８％と明らかに低下しており、副生成物の種類も極めて少なくなっていることから、本発明の方法では副生成物の発生を著しく低下させることができ、もって収率よく合成できるとともに、単離精製も容易である。
　以上のような比較から、本発明の方法は、ワンポット合成法に比べて不純物の生成が少なく、しかも収率が著しく向上したものであって、ＵＰ４Ｕの工業的な大量製造法として極めて適していることが示された。
（比較試験４）ピロリン酸ジイミダゾリド法旧法と本発明方法を用いた際のＵＰ４Ｕ収率および不純物の生成度合の比較
　イミダゾリド法旧法と本実施例の方法を用いてそれぞれＵＰ４Ｕを合成した際の、最終産物の収率をおよび副生成物の生成をそれぞれ比較した。本実施例の方法としては、上記実施例８の方法に従った。イミダゾリド法旧法での合成は以下の工程によって行った。また反応時に用いる触媒に関しては、公知の方法（特許文献２および非特許文献２参照）を参考に、（１）反応時に触媒を添加しなかった場合、触媒として（２）塩化亜鉛または（３）テトラゾールを使用した場合について検討を行った。
（１）触媒なしの場合
　１．０９Ｍ　ピロリン酸－トリエチルアミン塩の水溶液（１．８６ｍｌ，２．０ｍｍｏｌ）にトリブチルアミン（０．９５ｍｌ，４．０ｍｍｏｌ）、ホルムアミド（２．０ｍｌ）を加え、ジメチルホルムアミドで共沸脱水を４回行った。得られた残渣をジメチルホルムアミド（８．０ｍｌ）で溶解し、カルボニルジイミダゾール（０．９７ｇ，６．０ｍｍｏｌ）を加え室温で１時間攪拌した。氷冷下で反応液に水（０．２ｍｌ）を加え、さらに２．０Ｍ塩酸水溶液（１．５ｍｌ）を滴下した（ｐＨ７）。反応液を減圧下で濃縮し、さらにジメチルホルムアミドで２回共沸脱水して、無水ピロリン酸－ジイミダゾリド溶液を調製した。
　ＵＭＰ－フリー水溶液（２．０３Ｍ，２．４７ｍｌ，５．０ｍｍｏｌ）にトリブチルアミン（３．５６ｍｌ，１５．０ｍｍｏｌ）を加え、ジメチルホルムアミドで４回共沸脱水し、ジメチルホルムアミド（２．０ｍｌ）を加えて、無水ＵＭＰ－トリブチルアミン溶液を調製した。これを無水ピロリン酸－ジイミダゾリド溶液に加え、減圧下で濃縮し、２５℃で４８時間攪拌した。反応液に水を加えて５０ｍｌ水溶液に調製し、ＨＰＬＣ分析で定量してＵＰ４Ｕの合成収率１０％を算出した。
（２）塩化亜鉛を触媒に用いた場合
　１．０９Ｍ　ピロリン酸－トリエチルアミン塩の水溶液（１．８６ｍｌ，２．０ｍｍｏｌ）にトリブチルアミン（０．９５ml，４．０ｍｍｏｌ）、ホルムアミド（２．０ｍｌ）を加え、ジメチルホルムアミドで共沸脱水を４回行った。得られた残渣をジメチルホルムアミド（８．０ｍｌ）で溶解し、カルボニルジイミダゾール（０．９７ｇ，６．０ｍｍｏｌ）を加え室温で１時間攪拌した。氷冷下で反応液に水（０．２ｍｌ）を加え、さらに２．０Ｍ塩酸水溶液（１．５ｍｌ）を滴下した（ｐＨ７）。反応液を減圧下で濃縮し、さらにジメチルホルムアミドで２回共沸脱水して、無水ピロリン酸－ジイミダゾリド溶液を調製した。
　ＵＭＰ－フリー水溶液（２．０３Ｍ，２．４７ｍｌ，５．０ｍｍｏｌ）にトリブチルアミン（３．５６ｍｌ，１５．０ｍｍｏｌ）を加え、ジメチルホルムアミドで４回共沸脱水し、ジメチルホルムアミド（２．０ｍｌ）を加えて、無水ＵＭＰ－トリブチルアミン溶液を調製した。これを無水ピロリン酸－ジイミダゾリド溶液に加え、さらに塩化亜鉛（１．３４ｇ，９．８ｍｍｏｌ）を加えた後、減圧下で濃縮し、２５℃で５時間攪拌した。反応液に水を加えて５０ｍｌ水溶液に調製し、ＨＰＬＣ分析で定量してＵＰ４Ｕの合成収率１７％を算出した。
（３）テトラゾールを触媒に用いた場合
　１．０９Ｍ　ピロリン酸－トリエチルアミン塩の水溶液（１．８６ｍｌ，２．０ｍｍｏｌ）にトリブチルアミン（０．９５ml，４．０ｍｍｏｌ）、ホルムアミド（２．０ｍｌ）を加え、ジメチルホルムアミドで共沸脱水を４回行った。得られた残渣をジメチルホルムアミド（８．０ｍｌ）で溶解し、カルボニルジイミダゾール（０．９７ｇ，６．０ｍｍｏｌ）を加え室温で１時間攪拌した。氷冷下で反応液に水（０．２ｍｌ）を加え、さらに２．０Ｍ塩酸水溶液（１．５ｍｌ）を滴下した（ｐＨ７）。反応液を減圧下で濃縮し、さらにジメチルホルムアミドで２回共沸脱水して、無水ピロリン酸－ジイミダゾリド溶液を調製した。
　ＵＭＰ－フリー水溶液（２．０３Ｍ，２．４７ｍｌ，５．０ｍｍｏｌ）にトリブチルアミン（３．５６ｍｌ，１５．０ｍｍｏｌ）を加え、ジメチルホルムアミドで４回共沸脱水し、ジメチルホルムアミド（２．０ｍｌ）を加えて、無水ＵＭＰ－トリブチルアミン溶液を調製した。これを無水ピロリン酸－ジイミダゾリド溶液に加え、さらに１Ｈ－テトラゾール（０．５ｇ，７．２ｍｍｏｌ）を加えた後、減圧下で濃縮し、２５℃で１９時間攪拌した。反応液に水を加えて５０ｍｌ水溶液に調製し、ＨＰＬＣ分析で定量してＵＰ４Ｕの合成収率９％を算出した。
（４）結果の考察・収率
　ピロリン酸ジイミダゾリド法旧法と本発明の方法におけるＵＰ４Ｕの合成収率をまとめると、下記［表５］のようになった。すなわち、公知の方法であるリン酸イミダゾリド法旧法と比較して、本発明の方法は著しく高い収率を達成するものであることが判明した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000014
（５）結果の考察・副生成物
　さらに、本発明の方法とピロリン酸ジイミダゾリド法旧法での不純物の生成度合の差を比較するため、それぞれの方法におけるＵＰ４Ｕを合成後の反応液中の生成物をＨＰＬＣで分析した。得られたＨＰＬＣチャートを［図３］～［図６］に示す。また、ピロリン酸ジイミダゾリド法旧法と本実施例の方法において、ＨＰＬＣチャートの面積における産物であるＵＰ４Ｕおよび原料のＵＭＰ以外の副生成物の割合をまとめると、下記［表６］のようになった。
　図３～６および表６より明らかなように、ピロリン酸ジイミダゾリド法旧法では、産物であるＵＰ４Ｕおよび原料のＵＭＰ以外の副生成物がＨＰＬＣチャートの面積の割合で約４０％も生じていた上に、副生成物の種類数も多かったのに対して、本発明の方法では、ＵＰ４Ｕおよび原料であるＵＭＰ以外の副生成物の割合は１６％と明らかに低下しており、副生成物の種数も極めて少なくなっていることから、本発明の方法では副生成物の発生を著しく低下させることができ、もって収率よく合成できるとともに、単離精製も容易であることが判明した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000015
　以上のような比較から、本発明の方法は、ピロリン酸ジイミダゾリド法旧法に比べて不純物の生成が少なく、しかも収率が著しく向上したものであって、ＵＰ４Ｕの工業的な大量製造法としてきわめて適していることが示された。
　以上、本発明を実施例に基づいて説明した。この実施例はあくまで例示であり、種々の変形例が可能なこと、またそうした変形例も本発明の範囲にあることは当業者に理解されるところである。
　たとえば、上記実施例では、金属イオンを含む水溶液として塩化第二鉄水溶液を用いたが、特に限定する趣旨ではなく、（ｉ）金属ハロゲン化物の例として塩化第一鉄、塩化第二鉄、臭化第二鉄、三塩化アルミニウム、三塩化セリウム、三塩化ランタニウム等を、（ｉｉ）金属無機酸塩の例として鉄（２価）、鉄（３価）、アルミニウム、セリウム、ランタンから成る群より選択される金属の硫酸、硝酸、過塩素酸等の無機酸塩を、（ｉｉｉ）金属有機酸塩の例として、鉄（２価）、鉄（３価）、アルミニウム、セリウム、ランタンから成る群より選択される金属のトリフルオロメタンスルホン酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩等を溶解した水溶液を好適に用いることができる。これらの金属イオンを含む水溶液を用いた場合にも上記実施例と同様にＵＰ４Ｕの収率が向上することは当業者であれば容易に理解可能である。

Claims (8)

  1. 　下記式［ＩＩ］または［ＩＩＩ］で示されるリン酸活性化合物と、ＵＭＰ、ＵＤＰ、ＵＴＰおよびピロリン酸から成る群より選択されるリン酸化合物またはその塩（ただしＵＴＰフリーを除く）とを、鉄（ＩＩ）イオン、鉄（ＩＩＩ）イオン、３価アルミニウムイオン、３価ランタンイオンおよび３価セリウムイオンからなる群より選択される金属イオンの存在下、水または親水性有機溶媒中で反応させる工程を含むことを特徴とする、Ｐ１，Ｐ４－ジ（ウリジン５’－）テトラホスフェートの製造法。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     （式中、Ｒ１は５’位で結合したウリジル基を示し；Ｘはイミダゾリル基、ベンズイミダゾリル基および１，２，４－トリアゾリル基から成る群より選択される１つの複素環式基を示し；ｎは１または２の整数を示す。）
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     （式中、Ｘはイミダゾリル基、ベンズイミダゾリル基および１，２，４－トリアゾイル基から成る群より選択される１つの複素環式基を示す）
  2. 　リン酸活性化合物がＵＤＰ－リン酸イミダゾリドであり、リン酸化合物がＵＤＰまたはＵＤＰ塩である、請求項１記載の製造法。
  3. 　リン酸活性化合物がＵＭＰ－リン酸イミダゾリドであり、リン酸化合物がＵＴＰ塩である、請求項１記載の製造法。
  4. 　リン酸活性化合物がＵＭＰ－リン酸イミダゾリドであり、リン酸化合物がピロリン酸またはピロリン酸塩である、請求項１記載の製造法。
  5. 　リン酸活性化合物がピロリン酸ジイミダゾリドであり、リン酸化合物がＵＭＰまたはＵＭＰ塩である、請求項１記載の製造法。
  6. 　金属イオンが鉄（ＩＩ）イオン、鉄（ＩＩＩ）イオンおよびアルミニウムイオンから成る群より選ばれる、請求項１～４のいずれか１項に記載の製造法。
  7. 　金属イオンが鉄（ＩＩＩ）イオンまたはアルミニウムイオンである、請求項５記載の製造法。
  8. 　金属イオンが、金属の塩化物、臭化物、硝酸化物、硫酸化物または酢酸化物の形態で供給される請求項１記載の製造法。
PCT/JP2013/083100 2012-12-28 2013-12-10 Ｐ１，ｐ４－ジ（ウリジン５'－）テトラホスフェートの製造法 Ceased WO2014103704A1 (ja)

Priority Applications (15)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES13869663.8T ES2629743T3 (es) 2012-12-28 2013-12-10 Procedimiento para producir P1,P4-di(uridina 5'-)tetrafosfato
JP2014554298A JP6049760B2 (ja) 2012-12-28 2013-12-10 Ｐ１，ｐ４−ジ（ウリジン５’−）テトラホスフェートの製造法
SM20170405T SMT201700405T1 (it) 2012-12-28 2013-12-10 Metodo per produrre p1,p4-di(uridina 5'-)tetrafosfato
CN201380074088.5A CN105026414B (zh) 2012-12-28 2013-12-10 P1,p4‑二（尿苷5’‑）四磷酸酯的制造方法
US14/758,102 US10179799B2 (en) 2012-12-28 2013-12-10 Method for producing P1,P4-di(uridine 5′-) tetraphosphate
KR1020157017372A KR102024700B1 (ko) 2012-12-28 2013-12-10 P1,p4-디(우리딘 5'-)테트라포스페이트의 제조법
RS20170824A RS56227B1 (sr) 2012-12-28 2013-12-10 Postupak proizvodnje p1,p4-di(uridin 5'-)tetrafosfata
CA2896455A CA2896455C (en) 2012-12-28 2013-12-10 Method for producing p1,p4-di(uridine 5'-)tetraphosphate
EP13869663.8A EP2940030B1 (en) 2012-12-28 2013-12-10 Method for producing p1,p4-di(uridine 5'-)tetraphosphate
DK13869663.8T DK2940030T3 (en) 2012-12-28 2013-12-10 METHOD OF PREPARING P1, P4-DI (URIDIN 5 '-) TETRAPHOSPHATE
HRP20171333TT HRP20171333T1 (hr) 2012-12-28 2013-12-10 Postupak za proizvodnju p1, p4-di(uridin 5'-) tetrafosfata
SI201330744T SI2940030T1 (sl) 2012-12-28 2013-12-10 Postopek za izdelavo P1, P4-di(uridin 5'-)tetrafosfata
LTEP13869663.8T LT2940030T (lt) 2012-12-28 2013-12-10 P1,p4-di (uridino 5`-) tetrafosfato gamybos būdas
CY20171100946T CY1119372T1 (el) 2012-12-28 2017-09-07 Μεθοδος παραγωγης p1, p4-δι(ουριδινο 5'-) τετραφωσφορικης ενωσης
US16/206,380 US11208428B2 (en) 2012-12-28 2018-11-30 Method for producing P1,P4-di(uridine 5′-) tetraphosphate

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2012287578 2012-12-28
JP2012-287578 2012-12-28

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US14/758,102 A-371-Of-International US10179799B2 (en) 2012-12-28 2013-12-10 Method for producing P1,P4-di(uridine 5′-) tetraphosphate
US16/206,380 Continuation US11208428B2 (en) 2012-12-28 2018-11-30 Method for producing P1,P4-di(uridine 5′-) tetraphosphate

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2014103704A1 true WO2014103704A1 (ja) 2014-07-03

Family

ID=51020794

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2013/083100 Ceased WO2014103704A1 (ja) 2012-12-28 2013-12-10 Ｐ１，ｐ４－ジ（ウリジン５'－）テトラホスフェートの製造法

Country Status (18)

Country Link
US (2) US10179799B2 (ja)
EP (1) EP2940030B1 (ja)
JP (1) JP6049760B2 (ja)
KR (1) KR102024700B1 (ja)
CN (1) CN105026414B (ja)
CA (1) CA2896455C (ja)
CY (1) CY1119372T1 (ja)
DK (1) DK2940030T3 (ja)
ES (1) ES2629743T3 (ja)
HR (1) HRP20171333T1 (ja)
HU (1) HUE035675T2 (ja)
LT (1) LT2940030T (ja)
PL (1) PL2940030T3 (ja)
PT (1) PT2940030T (ja)
RS (1) RS56227B1 (ja)
SI (1) SI2940030T1 (ja)
SM (1) SMT201700405T1 (ja)
WO (1) WO2014103704A1 (ja)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018079503A1 (ja) 2016-10-25 2018-05-03 ヤマサ醤油株式会社 Ｐ１，ｐ４－ジ（ウリジン５'－）テトラホスフェートの精製方法
CN108164577A (zh) * 2017-04-28 2018-06-15 广东众生药业股份有限公司 一种p1，p4-二（尿苷-5’-四磷酸）钠盐的工业化制备方法
KR20180091672A (ko) 2017-06-21 2018-08-16 주식회사 종근당 디뉴클레오사이드 폴리포스페이트 화합물의 제조방법
KR20200106738A (ko) 2019-03-05 2020-09-15 주식회사 파마코스텍 P1,p4-디(우리딘 5'-)테트라포스페이트, 이의 염 또는 이의 수화물의 신규한 제조방법
CN111662350A (zh) * 2020-07-07 2020-09-15 南京宸翔医药研究有限责任公司 一种绿色化智能化高纯度地夸磷索四钠的制备方法
WO2022212442A1 (en) 2021-03-31 2022-10-06 Modernatx, Inc. Synthesis of trinucleotide and tetranucleotide caps for mrna production
JP2023511656A (ja) * 2019-12-18 2023-03-22 チョングンダン ファーマスーティカル株式会社 ウリジン５’－二リン酸（ｕｄｐ）、その塩またはその水和物の製造方法
WO2024185734A1 (ja) 2023-03-03 2024-09-12 株式会社ナティアス ポリリン酸化ヌクレオシド、ポリリン酸化ヌクレオシドの合成に用いられるリン酸部活性化ヌクレオチド及びその合成方法、ならびにリン酸部活性化ヌクレオチドを用いたポリリン酸化ヌクレオシドの合成方法

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107056859A (zh) * 2017-04-28 2017-08-18 广东众生药业股份有限公司 一种高纯度p1，p4‑二（尿苷‑5’‑四磷酸）盐的制备方法
CN110218233B (zh) * 2018-03-01 2023-11-14 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种p1,p4-二（尿苷5`-）四磷酸盐的制备方法
CN109021049B (zh) * 2018-06-14 2020-12-08 扬子江药业集团北京海燕药业有限公司 一种尿苷5′-二磷酸-苯并咪唑二钠的合成方法
CN110655545B (zh) * 2018-06-28 2022-09-09 上海致根医药科技有限公司 P1，p4-二(尿苷5’-)四磷酸酯的制备方法
CN110590887B (zh) * 2019-09-04 2020-12-15 江苏金殳医药科技有限公司 一种磷酸酯的制备方法
CN111040245B (zh) * 2019-12-18 2022-05-31 江苏集萃先进高分子材料研究所有限公司 一种焦聚磷酸咪唑阻燃剂及其制备方法
CN113527394A (zh) * 2020-04-18 2021-10-22 上海键合医药科技有限公司 一种地夸磷索的纯化方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008012949A1 (en) 2006-07-26 2008-01-31 Yamasa Corporation Process for producing di(pyrimidine nucleoside 5'-)polyphosphate
WO2008024169A1 (en) 2006-07-21 2008-02-28 Glsynthesis, Inc. Reactive pyrophosphoric and bisphosphonic acid derivatives and methods of their use

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5051422B2 (ja) 2006-07-21 2012-10-17 アイシン精機株式会社 タイヤ空気圧監視システム

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008024169A1 (en) 2006-07-21 2008-02-28 Glsynthesis, Inc. Reactive pyrophosphoric and bisphosphonic acid derivatives and methods of their use
WO2008012949A1 (en) 2006-07-26 2008-01-31 Yamasa Corporation Process for producing di(pyrimidine nucleoside 5'-)polyphosphate

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BIOORG. & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, vol. 11, 2001, pages 157 - 160
HUANG, KAISHENG ET AL.: "Engineering Human Fhit, a Diadenosine Triphosphate Hydrolase, into an Efficient Dinucleoside Polyphosphate Synthase", JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 126, no. 31, 2004, pages 9548 - 9549, XP055261676 *
JOURNAL OF AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 126, 2004, pages 9548
NUCLEIC ACIDS RESEARCH, vol. 4, 1977, pages 2843
ORG. BIOMOL. CHEM., vol. 2011, no. 9, 2011, pages 730 - 738
See also references of EP2940030A4
SHIMAZU, MASAMITSU ET AL.: "Facile synthesis of nucleotides containing polyphosphates by manganese(II) and cadmium(II) ion-catalyzed pyrophosphate bond formation in aqueous solution", TETRAHEDRON LETTERS, vol. 31, no. 2, 1990, pages 235 - 238, XP002636622 *

Cited By (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10815263B2 (en) 2016-10-25 2020-10-27 Yamasa Corporation Method for purifying P1,P4-di(uridine 5′-)tetraphosphate
WO2018079503A1 (ja) 2016-10-25 2018-05-03 ヤマサ醤油株式会社 Ｐ１，ｐ４－ジ（ウリジン５'－）テトラホスフェートの精製方法
KR102259309B1 (ko) 2016-10-25 2021-06-01 야마사 쇼유 가부시키가이샤 P1, p4-디(우리딘 5'-)테트라포스페이트의 정제 방법
KR20190067162A (ko) * 2016-10-25 2019-06-14 야마사 쇼유 가부시키가이샤 P1, p4-디(우리딘 5'-)테트라포스페이트의 정제 방법
JPWO2018079503A1 (ja) * 2016-10-25 2019-09-19 ヤマサ醤油株式会社 Ｐ１，ｐ４−ジ（ウリジン５’−）テトラホスフェートの精製方法
CN108164577A (zh) * 2017-04-28 2018-06-15 广东众生药业股份有限公司 一种p1，p4-二（尿苷-5’-四磷酸）钠盐的工业化制备方法
JP7028727B2 (ja) 2017-06-21 2022-03-02 チョン クン ダン ファーマシューティカル コーポレーション ジヌクレオシドポリリン酸化合物の製造方法｛Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｐｒｅｐａｒｉｎｇ ａ Ｄｉｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ Ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ｝
JP7373598B2 (ja) 2017-06-21 2023-11-02 チョン クン ダン ファーマシューティカル コーポレーション ジヌクレオシドポリリン酸化合物の製造方法
JP2022065110A (ja) * 2017-06-21 2022-04-26 チョン クン ダン ファーマシューティカル コーポレーション ジヌクレオシドポリリン酸化合物の製造方法
JP2019006771A (ja) * 2017-06-21 2019-01-17 チョン クン ダン ファーマシューティカル コーポレーション ジヌクレオシドポリリン酸化合物の製造方法｛Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｐｒｅｐａｒｉｎｇ ａ Ｄｉｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ Ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ｝
KR20180091672A (ko) 2017-06-21 2018-08-16 주식회사 종근당 디뉴클레오사이드 폴리포스페이트 화합물의 제조방법
JP7028727B6 (ja) 2017-06-21 2022-03-14 チョン クン ダン ファーマシューティカル コーポレーション ジヌクレオシドポリリン酸化合物の製造方法｛Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｐｒｅｐａｒｉｎｇ ａ Ｄｉｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ Ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ｝
KR20200106738A (ko) 2019-03-05 2020-09-15 주식회사 파마코스텍 P1,p4-디(우리딘 5'-)테트라포스페이트, 이의 염 또는 이의 수화물의 신규한 제조방법
JP2023511656A (ja) * 2019-12-18 2023-03-22 チョングンダン ファーマスーティカル株式会社 ウリジン５’－二リン酸（ｕｄｐ）、その塩またはその水和物の製造方法
JP7405991B2 (ja) 2019-12-18 2023-12-26 チョングンダン ファーマスーティカル株式会社 ウリジン５’－二リン酸（ｕｄｐ）、その塩またはその水和物の製造方法
CN111662350B (zh) * 2020-07-07 2022-06-07 南京宸翔医药研究有限责任公司 一种绿色化智能化高纯度地夸磷索四钠的制备方法
CN111662350A (zh) * 2020-07-07 2020-09-15 南京宸翔医药研究有限责任公司 一种绿色化智能化高纯度地夸磷索四钠的制备方法
WO2022212442A1 (en) 2021-03-31 2022-10-06 Modernatx, Inc. Synthesis of trinucleotide and tetranucleotide caps for mrna production
WO2024185734A1 (ja) 2023-03-03 2024-09-12 株式会社ナティアス ポリリン酸化ヌクレオシド、ポリリン酸化ヌクレオシドの合成に用いられるリン酸部活性化ヌクレオチド及びその合成方法、ならびにリン酸部活性化ヌクレオチドを用いたポリリン酸化ヌクレオシドの合成方法
KR20250157528A (ko) 2023-03-03 2025-11-04 나티아스 인크. 폴리인산화 뉴클레오시드, 폴리인산화 뉴클레오시드의 합성에 사용되는 인산부 활성화 뉴클레오티드 및 그 합성 방법, 및 인산부 활성화 뉴클레오티드를 사용한 폴리인산화 뉴클레오시드의 합성 방법
EP4667479A1 (en) 2023-03-03 2025-12-24 Natias Inc. Polyphosphorylated nucleoside, phosphate-activated nucleotide used for synthesis of polyphosphorylated nucleoside and method for synthesis of same, and method for synthesis of polyphosphorylated nucleoside using phosphate-activated nucleotide

Also Published As

Publication number Publication date
US20160194347A1 (en) 2016-07-07
HUE035675T2 (hu) 2018-05-28
DK2940030T3 (en) 2017-07-24
US10179799B2 (en) 2019-01-15
US20190092803A1 (en) 2019-03-28
JP6049760B2 (ja) 2016-12-21
RS56227B1 (sr) 2017-11-30
ES2629743T3 (es) 2017-08-14
SMT201700405T1 (it) 2017-09-07
CN105026414A (zh) 2015-11-04
JPWO2014103704A1 (ja) 2017-01-12
PT2940030T (pt) 2017-09-11
CA2896455C (en) 2021-04-20
LT2940030T (lt) 2017-07-10
CN105026414B (zh) 2017-06-23
KR102024700B1 (ko) 2019-09-24
HRP20171333T1 (hr) 2017-11-03
SI2940030T1 (sl) 2017-09-29
KR20150100708A (ko) 2015-09-02
PL2940030T3 (pl) 2017-11-30
EP2940030A1 (en) 2015-11-04
US11208428B2 (en) 2021-12-28
EP2940030A4 (en) 2016-09-14
CY1119372T1 (el) 2018-02-14
CA2896455A1 (en) 2014-07-03
EP2940030B1 (en) 2017-06-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6049760B2 (ja) Ｐ１，ｐ４−ジ（ウリジン５’−）テトラホスフェートの製造法
JP5193040B2 (ja) ジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートの製造法
JP7373598B2 (ja) ジヌクレオシドポリリン酸化合物の製造方法
JP3247685B2 (ja) ジウリジンテトラホスフェート又はその塩の結晶及びその製造法、並びに該化合物の製造法
US10815263B2 (en) Method for purifying P1,P4-di(uridine 5′-)tetraphosphate
CN101896496B (zh) 4-脱氧-4-氟-d-葡萄糖衍生物的制造方法
AU2010288524A1 (en) Method for producing pyrazole glycoside derivatives
JP2023511656A (ja) ウリジン５’－二リン酸（ｕｄｐ）、その塩またはその水和物の製造方法
KR20210110055A (ko) P1, p4-디(우리딘 5'-)테트라포스페이트 나트륨염 4 수화물 결정형 a의 제조방법
JPS591719B2 (ja) チミン誘導体の製造法
JP2005112807A (ja) アミノアルコキシカルボスチリル誘導体の製造方法。

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 201380074088.5

Country of ref document: CN

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 13869663

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2014554298

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2896455

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 14758102

Country of ref document: US

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20157017372

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

REEP Request for entry into the european phase

Ref document number: 2013869663

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2013869663

Country of ref document: EP