WO2014154927A1 - Uso del inhibidor de sulfatasas esteroideas stx64 para el tratamiento del envejecimiento - Google Patents

Uso del inhibidor de sulfatasas esteroideas stx64 para el tratamiento del envejecimiento Download PDF

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Definitions

  • the present invention falls within the field of medicine, veterinary medicine and cosmetics, specifically within the compounds and compositions useful for treating or delaying the undesirable effects associated with aging and increasing the longevity of people or animals.
  • resveratrol a phytoalexin present in a wide variety of foods, such as grapes and their derivatives, has beneficial effects against diseases such as type II diabetes, cardiovascular diseases and cancer. Due to its antioxidant properties, it has been proposed as a compound against aging. However, in humans trials with this compound have failed to show the expected anti-aging effect (Chung et al., 2012, Trends Cell Biol., 22 (10): 546-554).
  • Tirasol is a phenolic compound present in wines, whites and reds, virgin olive oil, vermouth and beer. Its antioxidant activity has been demonstrated in vitro, in humans and in the model organism Caenorhabditis elegans (Ca ⁇ uelo et al., 2012, Mech Ageing Dev., 133 (8): 563-74).
  • steroid sulfatase regulates the formation of estrone and dehydroepiandrosterone (DHEA), capable of promoting tumor growth, by desulphating their corresponding sulfated conjugates.
  • DHEA dehydroepiandrosterone
  • STS steroid sulfatase
  • DHEA dehydroepiandrosterone
  • the use of steroid sulfatase inhibitors is a booming procedure because of its potential therapeutic effect as an antitumor drug for various types of hormone-dependent cancer, such as breast, prostate, uterus, endometrium or thyroid (EP1568381 A1).
  • the irreversible steroid sulfatase inhibitor known under the names 667 COLIMATE, STX 64, BN83495 or Irosustat has been the first compound of this type that went into the clinical trials phase as therapy for steroid hormone-dependent cancers (Purohit & Foster, 2012, J Endoc ⁇ nol., 212 (2): 99-1 10).
  • the present invention proposes the use of inhibitors of steroid sulfatase enzyme (STS) activity for the treatment of aging.
  • STS steroid sulfatase enzyme
  • the present invention provides a solution to the problem of treating aging by using inhibitors of steroid sulfatase enzyme activity.
  • a first aspect of the invention relates to the use of at least one inhibitor of the activity of the steroid sulfatase enzyme for the treatment of aging or associated effects in humans and / or animals, or alternatively, to the use of at least one Sulfatase steroid enzyme activity inhibitor for the preparation of a composition for the treatment of aging or associated effects in humans and / or animals.
  • the term "use of the present invention” or “use of the invention” will be used to refer to the use described in this paragraph.
  • the "steroid sulfatase enzyme”, “STS”, “steryl sulfatase”, “arylsulfatase”, “ASC” or “steryl sulfatase sulfohydrolase” is the microsomal enzyme that cleaves sulfate groups from the inactive (sulfated) forms of various steroid hormones . This desulphation of spheroids plays an important role in various physiological processes such as epidermal cell maturation, pregnancy and immune response.
  • This enzyme is present in a variety of organisms such as Homo sapiens, Pongo abelii, Nomascus leucogenys, Pan troglodytes, Macaca mulatta, Macaca fascicularis, Callithrix jacchus, C. elegans, Loxodonta africana, Ailuropoda melanoleuca, Canis lupus familiaris, Equus caballus, Felis catus, Cavia porcellus, etc.
  • the steroid sulfatase enzyme referred to in the present invention is the amino acid sequence enzyme SEQ ID NO: 3, or Sul-2 enzyme of C.
  • the steroid sulfatase enzyme referred to in the present invention is the human enzyme EC 3.1 .6.2, of 583 amino acids and SEQ ID NO: 1.
  • the present invention clearly and unambiguously demonstrates that by specifically inhibiting the activity of the STS enzyme it is possible to increase the life expectancy of individuals who have been given inhibitors of said activity.
  • chemical antagonists specific to the STS enzyme, as well as loss-of-function mutations in the gene encoding the enzyme solve the technical problem of the present invention, assuming these examples a clear demonstration that inhibitors of very different nature have the same technical effect, therefore the present invention should not be limited to the use of the specific inhibitors tested, but should refer to other known inhibitors to partially or totally inhibit the activity of the enzyme on the date of presentation of the present invention.
  • the present invention contributes to the state of the art that the inhibition of said enzymatic activity, by any means or product, is useful in the treatment of aging.
  • steroid sulfatase enzyme activity inhibitor refers to a molecule that binds to any of the following elements: gene encoding the steroid sulfatase enzyme, transcription factors of that gene, any of the expression products of said gene, for example, but not limited to, messenger RNA or steroid sulfatase enzyme, and decreases or inhibits the expression and activity of the molecule to which it binds, and / or its intracellular signaling, thus leading to a total or partial inhibition of the activity of the enzyme steroid sulfatase.
  • said inhibitor is selected from the list consisting, but not limited to, of: steroid sulfatase enzyme antagonists (preferably chemicals), silencing RNA or specific antibody against the steroid sulfatase enzyme (preferably the antibody is monoclonal), in the present invention this antibody may be referred to as a neutralizing antibody to the effect of the enzyme steroid sulfatase.
  • Examples of chemical inhibitors of steroid sulfatase enzyme activity are, but not limited to, alternative substrates such as those in the 2- (hydroxyphenyl) indole sulfate series, synthetic or natural spheroids with STS inhibitory activity such as 5- androstene- 3, 17 -diol-3 sulfate, competitive inhibitors such as Ei-MTP or EMATE, non-estrogenic inhibitors such as COLIMATE or STX64, or others such as KW-2581 or STX213, whose IC50 on the STS enzyme has been determined in different studies ( Purohit & Foster, 2012, J Endocrinol., 212 (2): 99-1 10).
  • alternative substrates such as those in the 2- (hydroxyphenyl) indole sulfate series, synthetic or natural spheroids with STS inhibitory activity such as 5- androstene- 3, 17 -diol-3 sulfate, competitive inhibitors such as Ei-MTP or EMATE
  • the steroid sulfatase enzyme activity inhibitor is selected from the list consisting of: 2- (hydroxyphenyl) indole sulfate, 5-androstene-3, 17 -diol-3 sulfate, Ei- MTP, EMATE, COUMATE or STX64, KW-2581 and STX213, morpholino, silencing RNA and specific antibody against the enzyme sulfatase steroid.
  • the steroid sulfatase enzyme activity inhibitor to which the present invention relates is STX 64.
  • the inhibitor "STX 64" or “667 COUMATE”, "BN83495" or “Irosustat” is the compound of CAS number 288628-05-7, formula CuH 5 NO 5 S and formula (I):
  • the inhibitors of the present invention may exist in the form of enantiomers or diastereomers.
  • the present invention also contemplates the use of antagonist solvates (such as, but not limited to, hydrates), prodrugs (synonymous with prodrugs), or clathrates.
  • Pharmaceutically acceptable salts are selected from chloride, iodide bromide or any other pharmaceutically acceptable salt.
  • Antagonists of the activity of the steroid sulfatase enzyme of the present invention may include isomers, depending on the presence of multiple bonds (eg, Z, E), including optical or enantiomeric isomers, depending on the presence of chiral centers.
  • the individual isomers, enantiomers or diastereoisomers and mixtures thereof fall within the scope of the present invention.
  • the individual enantiomers or diastereoisomers, as well as mixtures thereof, can be separated by conventional techniques.
  • the term "pharmaceutically acceptable salts" of the antagonist compounds refers to salts prepared of pharmaceutically acceptable non-toxic acids, including organic or inorganic acids.
  • Non-toxic organic or inorganic acids are selected from the list comprising, but not limited to: acetic, alginic, anthranilic, benzenesulfonic, benzoic, camforsulfonic, citric, ethanesulfonic, formic, fumaric, furoic, gluconic, glutamic, glucorhenic, galacturonic, glycidic , hydrobromic, hydrochloric, isethionic, lactic, maleic, malic, mandelic, methanesulfonic, mucic, nitric, pamoic, pantothenic, phenylacetic, propionic, phosphoric, salicylic, stearic, succinic, sulfanyl, sulfuric, tartaric or p-toluenesulfonic.
  • solvate includes both pharmaceutically and pharmacologically acceptable solvates, that is, solvates of the antagonist of the activity of the steroid sulfatase enzyme, which can be used in the preparation of a composition, preferably of a medicament, such as pharmaceutically acceptable solvates, which may be useful in the preparation of pharmaceutically acceptable pharmaceutically acceptable solvates or salts.
  • pharmaceutically acceptable solvate is not critical as long as it is pharmaceutically acceptable.
  • the solvate is a hydrate.
  • Solvates can be obtained by conventional solvation methods known to those skilled in the art.
  • prodrugs or prodrugs of antagonists of the activity of the enzyme steroid sulfatase include any compound derived from the antagonist, for example and not limited to: esters (including carboxylic acid esters, amino acid esters, phosphate esters, salt sulphonate esters metal, etc.), carbamates, amides, biohydrolysable amides, biohydrolysable esters, biohydrolysable carbamates, biohydrolysable ureides, biohydrolysable phosphates.
  • prodrugs include compounds comprising groups - NO, -NO 2 , -ONO, or -ONO 2 - which when administered to an individual can be transformed directly or indirectly into said antagonist in said individual.
  • said derivative is a compound that increases the bioavailability of the antagonist when administered to an individual or that enhances the release of the antagonist in a biological compartment.
  • the nature of that derivative is not critical, as long as it can be administered to an individual and provide the antagonist of the activity of the enzyme steroid sulfatase in a biological compartment thereof.
  • the preparation of said prodrug can be carried out by conventional methods known to those skilled in the art.
  • biohydrolyzable amides refer to carbamate, carbonate, ureido and phosphate, respectively, of a compound that: 1) does not interfere with the biological activity of the complex but which gives the compound advantageous properties in vivo, such as absorption, duration of effect, or onset of effect; or 2) it is biologically inactive, but it is converted in vivo to a biologically active compound.
  • inhibitors referred to in the invention are those that prevent or inhibit the production of the steroid sulfatase enzyme by affecting, expression, or / and translation or / and RNA stability, such as morpholines or antisense or silencing RNA.
  • silencing RNAs to improve their function, the nucleotides (tt) or (tg) can be added at the 3 ' end of the sense chain or at the 5 ' end of the siRNA antisense chain that acts as an inhibitor of Steroid sulfatase enzyme activity. In this way these nucleotides are outgoing, not hybridizing with any other nucleotide of the complementary chain. The addition of these nucleotides at the 3 ' or 5 ' ends does not affect the recognition of the corresponding messenger RNA.
  • treatment refers to combating the adverse effects caused as a result of aging in a subject (animal, and preferably human) that includes: (i) delaying the development of aging; I
  • aging or “senescence” refers to the set of morphological and physiological modifications that appear as a consequence of the action of time on living beings, preferably on humans, which implies a decrease in the adaptive capacity of each of the organs, devices and systems, as well as in the capacity to respond to external stimuli and agents that they indicate in the individual.
  • the main symptoms or effects associated with aging are, but not limited to, progressive loss of visual ability, such as presbyopia, myopia, cataracts, etc., progressive hearing loss, loss of muscle elasticity, sleep disturbance, loss of agility and reaction capacity reflects, degeneration of bone structures, which usually leads to the appearance of deformations due to acromegaly, osteoporosis, rheumatoid arthritis, etc., senile dementia, such as Alzheimer's disease, muscle support tissue distension, progressive loss of muscle strength, increased hypertension, impaired prostate, loss of immune capacity against infectious agents, decreased skin collagen and protein absorption capacity, progressive loss of sense of taste and progressive loss of libido, decreased spermatogenesis in men and menopause in m wow
  • the inhibitors of the activity of the enzyme sulfatase steroid proposed in the present invention are useful for mitigating and / or delaying these effects associated with aging.
  • composition refers to any cosmetic or drug preparation.
  • the composition referred to in the present invention may comprise one or more inhibitors of the activity of the steroid sulfatase enzyme, preferably those described in the present invention, in any of its mixtures.
  • composition to which the present invention relates is a cosmetic composition.
  • the composition to which the present invention relates is a medicament.
  • the medicament referred to in the present invention can be for human or veterinary use.
  • the "medicine for human use” is any substance or combination of substances that is presented as possessing properties for the treatment of aging or the effects associated with it in humans or that can be used in humans or administered to humans in order to restore, correct or modify physiological functions by exercising a pharmacological, immunological or metabolic action .
  • the "veterinary medicinal product” is any substance or combination of substances that is presented as having properties for the treatment of aging or the effects associated with it in non-human animals or that can be administered to the animal in order to restore, correct or modify its physiological functions by exerting a pharmacological, immunological or metabolic action. "Premixes for medicated feed” prepared to be incorporated into a feed will also be considered “veterinary medicinal products”.
  • composition referred to in the present invention further comprises a pharmaceutically acceptable carrier and / or other active ingredient.
  • Said composition may further comprise an excipient.
  • excipient refers to a substance that helps the absorption of any of the components of the composition to which the present invention refers, stabilizes said components or aids in the preparation of the composition in the sense of giving it consistency or provide flavors that make it more pleasant.
  • the excipients could have the function of keeping the components together such as starches, sugars or cellulose, sweetening function, dye function, drug protection function such as to isolate it from air and / or moisture, function filling a tablet, capsule or any other form of presentation, such as dibasic calcium phosphate, a disintegrating function to facilitate the dissolution of the components and their absorption in the intestine, without excluding other types of excipients not mentioned in this paragraph .
  • the term "excipient” is defined as that matter which, included in the “galenic forms", is added to the active principles or their associations to enable its preparation and stability, modify its organoleptic properties or determine the physicochemical properties of the composition and its bioavailability.
  • the "galenic form or pharmaceutical form” is the provision to which the active ingredients and excipients are adapted to constitute a medicament. It is defined by the combination of the way in which the composition is presented by the manufacturer and the way in which it is administered.
  • the "pharmaceutically acceptable carrier” or “carrier” is preferably an inert substance. The function of the vehicle is to facilitate the incorporation of other compounds, allow a better dosage and administration or give consistency and form to the composition.
  • the vehicle is a substance that is used in the composition to dilute any of the components thereof to a certain volume or weight; or that even without diluting said components it is capable of allowing a better dosage and administration or giving consistency and form to the composition.
  • the pharmaceutically acceptable carrier is the diluent.
  • the excipient and the vehicle must be pharmacologically acceptable, that is, the excipient and the vehicle must be allowed and evaluated so as not to cause damage to the organisms to which they are administered.
  • the described composition may optionally further comprise another active substance.
  • another active substance In addition to the requirement of therapeutic efficacy, where such a composition may require the use of other therapeutic agents, there may be additional fundamental reasons that compel or strongly recommend the use of a combination of at least one inhibitor of steroid sulfatase enzyme activity. and other therapeutic agent.
  • active principle is any matter, whatever its origin, human, animal, plant, chemical or other, to which an appropriate activity is attributed to constitute a medicine.
  • the other active ingredient included in the composition is a compound for the treatment of aging. Examples of compounds for the treatment of aging are, but not limited to, polyphenols, such as resveratrol, or in general any compound with antioxidant properties.
  • the composition of the invention comprises a steroid sulfatase inhibitor, in a therapeutically effective amount, "therapeutically effective amount” being understood as the level, amount or concentration of said inhibitor, which produces the desired effect without causing adverse effects.
  • therapeutically effective amount being understood as the level, amount or concentration of said inhibitor, which produces the desired effect without causing adverse effects.
  • the dosage to obtain a therapeutically effective amount depends on a variety of factors, such as the age, weight, sex or tolerance of the individual to whom the pharmaceutical composition of the invention is to be administered.
  • composition of the present invention can be formulated for administration in a variety of ways known in the state of the art.
  • preparations include any solid composition (tablets, pills, capsules, granules, etc.) or liquid (solutions, suspensions or emulsions) for oral, topical or parenteral administration.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may also be in the form of sustained release formulations of drugs or any other conventional release system, so it may be contained, but not limited to, in nanoparticles, liposomes or nanospheres, in a polymeric material, in a biodegradable or non-biodegradable implant or in biodegradable microparticles, such as biodegradable microspheres.
  • compositions and / or its formulations can be administered to an animal, including a mammal and, therefore, to man, in a variety of ways, including, but not limited to, parenteral, intraperitoneal, intravenous, intradermal, epidural, intraspinal, intrastromal, intraarticular, intrasynovial, intrathecal, intralesional, intraarterial, intracardiac, intramuscular, intranasal, intracranial, subcutaneous, intraorbital, intracapsular, topical, through transdermal patches, vaginal or rectal, through the administration of a suppository, percutaneous, nasal spray, surgical implant, internal surgical paint , infusion pump or catheter.
  • the composition referred to in the present invention can be presented in the form of solutions or any other form of clinically permitted administration and in a therapeutically effective amount.
  • the composition can be formulated in solid, semi-solid, liquid or gaseous forms, such as tablet, capsule, powder, granule, ointment, solution, suppository, injection, inhalant, gel, microsphere or aerosol.
  • the composition may be presented in a form adapted to, for example, but not limited to, oral, sublingual, nasal, intrathecal, bronchial, lymphatic, rectal, vaginal, transdermal, inhaled, topical or parenteral administration.
  • the composition is formulated for oral, topical or parenteral administration.
  • the steroid sulfatase enzyme activity inhibitor can be associated, for example, but not limited to liposomes or micelles.
  • Another aspect of the invention relates to a cosmetic composition
  • a cosmetic composition comprising an inhibitor of the activity of the steroid sulfatase enzyme selected from the list consisting of: 2- (hydroxyphenyl) indole sulfate, 5- androstene-3, 17 -diol- 3 sulfate, Ei-MTP, EMATE, COUMATE or STX64, KW-2581, STX213, morpholino, silencing RNA, and specific antibody against the enzyme sulfatase steroid.
  • an inhibitor of the activity of the steroid sulfatase enzyme selected from the list consisting of: 2- (hydroxyphenyl) indole sulfate, 5- androstene-3, 17 -diol- 3 sulfate, Ei-MTP, EMATE, COUMATE or STX64, KW-2581, STX213, morpholino, silencing RNA, and specific antibody against the enzyme sulfata
  • Fig. 1 Represents the longevity curve at 25 ° C.
  • the graph shows the half-life of a population of wild C. elegans and a sul-2 sul-2 population (gk187), which shows a significant difference with p ⁇ 0.0001, n> 100.
  • Fig. 2. Represents the longevity curve at 25 ° C.
  • the graph shows the half-life of a population of C. elegans muiante sul-2 (pv17) and a population of C. elegans silves ⁇ re, which shows a significant difference with p ⁇ 0.0001, n> 100.
  • Fig. 3 Represents the longevity curves of a wild animal supplemented with 0.5 ⁇ 9 / ⁇ or 1 ⁇ 9 / ⁇ of STX64 at 25 ° C.
  • Example 1 Reduction of the activity of the enzyme steroid sulfatase delays aging.
  • the study strains and their relevant controls were first subjected to an egg preparation in order to avoid contamination and synchronize in the embryo stage, and incubated at 16 ° C. To avoid interference by physiological stresses by this process, they were allowed to grow until the next generation. Then 5 or 6 L4 were transferred per plate on 4 plates, which were re-incubated at 16 ° C to L4, the stage selected to initiate longevity curves. On day zero, 120 L4 of each strain were transferred to new plates, 20 worms per plate, and incubated at the temperature at which the test was subsequently performed, that is, 25 ° C.
  • the nematodes were changed plaque every 2 days, to avoid confusion with possible descendants. Subsequently, they were reviewed every 2 or 3 days, eliminating lost or killed specimens from non-physiological causes from the study. Individuals changed plaques every five days to maintain optimal plaque growth conditions. Those individuals who stopped responding when touched gently with the platinum handle were considered dead. Longevity was studied in the presence of the STX64 steroid sulfatase inhibitor (SIGMA, S1950-5MG) diluted in DMSO at ⁇ / ⁇ .
  • SIGMA STX64 steroid sulfatase inhibitor
  • the plates used were 35mm in diameter with a constant volume of NGM medium of 2ml, the inhibitor was added a couple of hours before placing the nematodes, with a concentration of ⁇ g / ml final volume.
  • the GraphPad Prism 5 program (Version 5.0a, for Mac OS X. 1992-2008 GraphPad Software, Inc.) was used in the survival curve mode and the Kaplan method was used. Meier for their statistical analysis.
  • the standard error of the mean, SEM, of each point by means of error bars is represented in the figures of the present invention and to check if there were differences between the curves, the Log-rank Test was applied.
  • mutants of the sul-2 gene of C. elegans were generated.
  • the native nucleotide sequence of said gene is SEQ ID NO: 2.
  • Said gene encodes a protein of SEQ ID NO: 3 homologous to mammalian steroid sulfatase.
  • the organisms that expressed the mutant protein showed a significant increase in longevity with respect to the wild. It was found that both the deletion of the sul-2 gene (gk187), resulting in a protein of SEQ ID NO: 5, and the isolated allele pv17, resulting in a protein of SEQ ID NO: 4, a function reducing mutant, they led to an increase in longevity ( Figures 1 and 2).

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Abstract

La presente invención se refiere al uso del inhibidor de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea STX64 para el tratamiento del envejecimiento y, por tanto, para incrementar la longevidad de los individuos o mejorar la calidad de vida de éstos. También se refiere a una composición cosmética que comprenda dicho inhibidor con ese fin.

Description

USO DEL INHIBIDOR DE SULFATASAS ESTEROIDEAS STX64 PARA EL TRATAMIENTO DEL ENVEJECIMIENTO
DESCRIPCIÓN
La presente invención se encuadra en el campo de la medicina, veterinaria y la cosmética, específicamente dentro de los compuestos y composiciones útiles para tratar o retrasar los efectos indeseables asociados al envejecimiento e incrementar la longevidad de personas o animales.
ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR
El envejecimiento es un problema que afecta a toda la humanidad y en una sociedad con una esperanza de vida cada vez mayor la incidencia de enfermedades relacionas con el envejecimiento es creciente. Por tanto, retrasar los efectos de éste se ha convertido durante muchos años en un objetivo muy interesante para la industria farmacéutica.
Actualmente, existe un creciente interés en la búsqueda de compuestos que retrasen el envejecimiento y algunos de los compuestos más prometedores son el resveratrol, los extractos de bayas o el tirasol.
Numerosos estudios en organismos modelo han mostrado que el resveratrol, una fitoalexina presente en una gran variedad de alimentos, como las uvas y sus derivados, tiene efectos beneficiosos contra enfermedades como la diabetes tipo II, enfermedades cardiovasculares y cáncer. Por sus propiedades antioxidantes se ha propuesto como compuesto contra el envejecimiento. Sin embargo, en humanos los ensayos con este compuesto no han conseguido mostrar el efecto antienvejecimiento esperado (Chung et al., 2012, Trends Cell Biol., 22(10):546-554). Existe un interés creciente por los beneficios nutricionales de frutas y verduras y su papel en la prevención de enfermedades degenerativas, en especial los constituyentes de algunas bayas como los arándanos, los cuales están ya siendo distribuidos como suplementos alimenticios en zumos concentrados y extractos (Krenn et al., 2007, Pharmazie, 62(1 1 ):803-812).
El tirasol es un compuesto fenólico presente en vinos, blancos y tintos, el aceite de oliva virgen, el vermut y la cerveza. Su actividad antioxidante se ha demostrado in vitro, en humanos y en el organismo modelo Caenorhabditis elegans (Cañuelo et al., 2012, Mech Ageing Dev., 133(8):563-74).
Por otro lado, la sulfatasa esteroidea (STS) regula la formación de estrona y dehidroepiandrosterona (DHEA), capaces de promover el crecimiento tumoral, mediante la desulfatación de sus correspondientes conjugados sulfatados. El uso de inhibidores de sulfatasas esteroideas es un procedimiento en auge por su potencial efecto terapéutico como droga antitumoral para diversos tipos de cáncer dependientes de hormonas, como el de mama, próstata, útero, endometrio o tiroides (EP1568381 A1 ). El inhibidor irreversible de sulfatasas esteroideas conocido con los nombres 667 COLIMATE, STX 64, BN83495 o Irosustat ha sido el primer compuesto de este tipo que pasó a la fase de ensayos clínicos como terapia para cánceres dependientes de hormonas esteroideas (Purohit & Foster, 2012, J Endocñnol., 212(2):99-1 10).
Además, distintos inhibidores de sulfatasas esteroideas también están en el punto de mira por su posible efecto terapéutico en el tratamiento de la endometriosis, la infertilidad, enfermedades autoinmunes, demencia o enfermedad de Alzheimer (EP1 193250A1 ). También se han propuesto para controlar las respuestas inmunológica e inflamatoria (EP0758230B1 ). Por tanto, en la actualidad no existe ningún compuesto para el tratamiento efectivo del envejecimiento. Como consecuencia, es necesaria la búsqueda de nuevos blancos farmacológicos con relevancia clínica o cosmética que permitan desarrollar compuestos que puedan usarse para el tratamiento de los efectos adversos asociados al envejecimiento y así retrasar el mismo.
DESCRIPCION DE LA INVENCIÓN
La presente invención propone el uso de inhibidores de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea (STS) para el tratamiento del envejecimiento. Los ejemplos mostrados más adelante demuestran que la inhibición, total o parcial, de la actividad de esta enzima supone un retraso en el envejecimiento y, por tanto, un incremento significativo en la longevidad de los individuos tratados en comparación con los sujetos control.
Ante la falta de estrategias terapéuticas o cosméticas efectivas para el tratamiento farmacológico del envejecimiento y de sus efectos asociados, la presente invención proporciona una solución al problema de tratar el envejecimiento mediante el uso de inhibidores de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea.
Por ello, un primer aspecto de la invención se refiere al uso de al menos un inhibidor de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea para el tratamiento del envejecimiento o efectos asociados en humanos y/o animales, o alternativamente, al uso de al menos un inhibidor de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea para la elaboración de una composición para el tratamiento del envejecimiento o efectos asociados en humanos y/o animales. En adelante, para referirnos al uso descrito en este párrafo se empleará el término "uso de la presente invención" o "uso de la invención".
La "enzima sulfatasa esteroidea", "STS", "esteril-sulfatasa", "arilsulfatasa", "ASC" o "esteril-sulfatasa sulfohidrolasa" es la enzima microsomal que escinde grupos sulfato de las formas inactivas (sulfatadas) de varias hormonas esteroideas. Esta desulfatación de esferoides juega un papel importante en varios procesos fisiológicos tales como la maduración de células epidérmicas, la gestación y la respuesta inmune. Esta enzima se encuentra presente en una diversidad de organismos como por ejemplo en Homo sapiens, Pongo abelii, Nomascus leucogenys, Pan troglodytes, Macaca mulatta, Macaca fascicularis, Callithrix jacchus, C. elegans, Loxodonta africana, Ailuropoda melanoleuca, Canis lupus familiaris, Equus caballus, Felis catus, Cavia porcellus, etc. En una realización preferida, la enzima sulfatasa esteroidea a la que se refiere la presente invención es la enzima de secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 3, o enzima Sul-2 de C. elegans, la cual está codificada por la secuencia nucleotídica SEQ ID NO: 2. En otra realización preferida, la enzima sulfatasa esteroidea a la que se refiere la presente invención es la enzima de humano EC 3.1 .6.2, de 583 aminoácidos y SEQ ID NO: 1 .
En la presente invención se demuestra de forma clara y no ambigua que mediante la inhibición específica de la actividad de la enzima STS se consigue aumentar la esperanza de vida de individuos a los que se les han administrado inhibidores de dicha actividad. En los ejemplos de la presente invención se demuestra, por tanto, que los antagonistas químicos específicos para la enzima STS, así como mutaciones de pérdida de función en el gen que codifica para la enzima, solucionan el problema técnico de la presente invención, suponiendo estos ejemplos una demostración clara de que inhibidores de muy diferente naturaleza tienen el mismo efecto técnico, por tanto la presente invención no debe limitarse al uso de los inhibidores concretos ensayados, sino que debe referirse a otros inhibidores conocidos para inhibir parcial o totalmente la actividad de la enzima en la fecha de presentación de la presente invención. En definitiva, la presente invención aporta al estado de la técnica que la inhibición de dicha actividad enzimática, mediante cualquier medio o producto, es útil en el tratamiento del envejecimiento.
El término "inhibidor de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea", tal como se utiliza en la presente invención, se refiere a una molécula que se une a cualquiera de los siguientes elementos: gen que codifica para la enzima sulfatasa esteroidea, factores de transcripción de dicho gen, cualquiera de los productos de expresión de dicho gen, por ejemplo, aunque sin limitarnos, al RNA mensajero o a la enzima sulfatasa esteroidea, y disminuye o inhibe la expresión y actividad de la molécula a la que se une, y/o su señalización intracelular, conduciendo así a una inhibición total o parcial de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea. En otra realización preferida, dicho inhibidor se selecciona de la lista que consiste, pero sin que sirva de limitación, en: antagonistas de la enzima sulfatasa esteroidea (preferiblemente químicos), ARN de silenciam iento o anticuerpo específico frente a la enzima sulfatasa esteroidea (preferiblemente el anticuerpo es monoclonal), en la presente invención este anticuerpo puede denominarse anticuerpo neutralizante del efecto de la enzima sulfatasa esteroidea. Ejemplos de inhibidores químicos de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea son, aunque sin limitarnos, los sustratos alternativos como los de la serie 2-(hidroxifenil) indol sulfato, los esferoides sintéticos o naturales con actividad inhibitoria del STS como el 5- androsteno-3 , 17 -diol-3 sulfato, los inhibidores competitivos como E-i-MTP o EMATE, los inhibidores no estrogénicos como COLIMATE o STX64, u otros como KW-2581 o STX213, cuyas IC50 sobre la enzima STS ha sido determinada en distintos trabajos (Purohit & Foster, 2012, J Endocrinol., 212(2):99-1 10). Por ello, en una realización preferida, el inhibidor de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea se selecciona de la lista que consiste en: 2-(hidroxifenil) indol sulfato, 5-androsteno-3 , 17 -diol-3 sulfato, Ei-MTP, EMATE, COUMATE o STX64, KW-2581 y STX213, morfolino, ARN de silenciamiento y anticuerpo específico frente a la enzima sulfatasa esteroidea. En una realización más preferida, el inhibidor de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea al que se refiere la presente invención es STX 64.
El inhibidor "STX 64" o "667 COUMATE", "BN83495" o "Irosustat" es el compuesto de número CAS 288628-05-7, fórmula CuH 5NO5S y fórmula (I):
Figure imgf000007_0001
Los inhibidores de la presente invención, puede existir en forma de enantiomeros o diastereómeros. En la presente invención también se contempla el uso de solvatos del antagonista (como por ejemplo, pero sin limitarse, hidratos), prodrogas (sinónimo de profármacos), o clatratos. Las sales farmacéuticamente aceptables se seleccionan de entre cloruro, bromuro ioduro o cualquier otra sal farmacéuticamente aceptable.
Los antagonistas de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea de la presente invención, pueden incluir isómeros, dependiendo de la presencia de enlaces múltiples (por ejemplo, Z, E), incluyendo isómeros ópticos o enantiomeros, dependiendo de la presencia de centros quirales. Los isómeros, enantiomeros o diastereoisómeros individuales y las mezclas de los mismos caen dentro del alcance de la presente invención. Los enantiomeros o diastereoisómeros individuales, así como sus mezclas, pueden separarse mediante técnicas convencionales. En la presente invención, el término "sales farmacéuticamente aceptables" de los compuestos antagonistas, se refiere a sales preparadas de ácidos no tóxicos farmacéuticamente aceptables, incluyendo ácidos orgánicos o inorgánicos. Los ácidos orgánicos o inorgánicos no tóxicos se seleccionan de la lista que comprende, pero sin limitarse: acético, algínico, antranílico, bencenosulfónico, benzoico, camforsulfónico, cítrico, etanosulfónico, fórmico, fumárico, furoico, glucónico, glutámico, glucorénico, galacturónico, glicídico, hidrobrómico, hidroclórico, isetiónico, láctico, maleico, málico, mandélico, metanesulfónico, múcico, nítrico, pamoico, pantoténico, fenilacético, propiónico, fosfórico, salicílico, esteárico, succínico, sulfanílico, sulfúrico, tartárico o p- toluenosulfónico. Los inhibidores a los que se refiere la invención pueden estar en forma cristalina como compuestos libres o como solvatos. En este sentido, el término "solvato", tal como aquí se utiliza, incluye tanto solvatos farmacéuticamente y farmacológicamente aceptables, es decir, solvatos del antagonista de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea, que pueden ser utilizados en la elaboración de una composición, preferiblemente de un medicamento, como solvatos farmacéuticamente no aceptables, los cuales pueden ser útiles en la preparación de solvatos o sales farmacéuticamente y farmacológicamente aceptables. La naturaleza del solvato farmacéuticamente aceptable no es crítica siempre y cuando sea farmacéuticamente aceptable. En una realización particular, el solvato es un hidrato. Los solvatos pueden obtenerse por métodos convencionales de solvatación conocidos por los expertos en la materia.
Asimismo, dentro del alcance de esta invención se encuentran las prodrogas o profármacos de los antagonistas de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea. El término "profármaco" o "prodroga" tal como aquí se utiliza incluye cualquier compuesto derivado del antagonista, por ejemplo y no de forma limitativa: ésteres (incluyendo ésteres de ácidos carboxílicos, ésteres de aminoácidos, ésteres de fosfato, ésteres de sulfonato de sales metálicas, etc.), carbamatos, amidas, amidas biohidrolizables, ésteres biohidrolizables, carbamatos biohidrolizables, ureidos biohidrolizables, fosfatos biohidrolizables. Otros ejemplos de prodrogas incluyen compuestos que comprenden grupos - NO, -NO2, -ONO, o -ONO2- que al ser administrado a un individuo puede ser transformado directa o indirectamente en dicho antagonista en el mencionado individuo. Ventajosamente, dicho derivado es un compuesto que aumenta la biodisponibilidad del antagonista cuando se administra a un individuo o que potencia la liberación del antagonista en un compartimento biológico. La naturaleza de dicho derivado no es crítica, siempre y cuando pueda ser administrado a un individuo y proporcione el antagonista de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea en un compartimento biológico del mismo. La preparación de dicho profármaco puede llevarse a cabo mediante métodos convencionales conocidos por los expertos en la materia. Los términos "amidas biohidrolizables", "ésteres biohidrolizables", "carbamatos biohidrolizables", "ureidos biohidrolizables", "fosfatos biohidrolizables", se refieren a carbamato, carbonato, ureido y fosfato, respectivamente, de un compuesto que: 1 ) no interfiera con la actividad biológica del complejo pero que confiere al compuesto propiedades ventajosas in vivo, como absorción, duración del efecto, o del inicio del efecto; o 2) es biológicamente inactivo, pero se convierte in vivo a compuesto biológicamente activo.
Otros inhibidores a los que se refiere la invención son aquellos que impidan o inhiban la producción de la enzima sulfatasa esteroidea afectando, la expresión, o/y la traducción o/y la estabilidad del ARN, como morfolinos o ARN antisentidos o de silenciamento. En cuanto a los ARN de silenciamiento, para mejorar su función se pueden añadir los nucleótidos (tt) o (tg) en el extremo 3' de la cadena sentido o en el extremo 5' de la cadena antisentido del siRNA que actúa como inhibidor de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea. De esta forma estos nucleótidos son salientes, no hibridando con ningún otro nucleótido de la cadena complementaria. La adición de estos nucleótidos en los extremos 3' o 5' no afecta al reconocimiento del ARN mensajero correspondiente.
El término "tratamiento", tal como se entiende en la presente invención, se refiere a combatir los efectos adversos causados como consecuencia del envejecimiento en un sujeto (animal, y preferiblemente humano) que incluye: (i) retrasar el desarrollo del envejecimiento; y/o
(¡i) aliviar los efectos asociados al envejecimiento; El término "envejecimiento" o "senescencia" se refiere al conjunto de modificaciones morfológicas y fisiológicas que aparecen como consecuencia de la acción del tiempo sobre los seres vivos, preferiblemente sobre el humano, que supone una disminución de la capacidad de adaptación de cada uno de los órganos, aparatos y sistemas, así como de la capacidad de respuesta a los estímulos y agentes externos que indicen en el individuo. Los principales síntomas o efectos asociados al envejecimiento son, aunque sin limitarnos, pérdida progresiva de capacidad visual, como presbicia, miopía, cataratas, etc., hipoacusia progresiva, pérdida de elasticidad muscular, alteración del sueño, pérdida de la agilidad y capacidad de reacción refleja, degeneración de estructuras óseas, lo que generalmente lleva asociada la aparición de deformaciones debidas a acromegalias, osteoporosis, artritis reumatoides, etc., demencia senil, como por ejemplo, enfermedad de Alzheimer, distensión de los tejidos de sostén muscular, pérdida progresiva de la fuerza muscular, aumento de la hipertensión arterial, alteración de la próstata, pérdida de la capacidad inmunitaria frente a agentes infecciosos, disminución del colágeno de la piel y de la capacidad de absorción de proteínas, pérdida progresiva del sentido del gusto y pérdida progresiva de la libido, disminución de la espermatogénesis en el hombre y menopausia en la mujer. Los inhibidores de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea propuestos en la presente invención son de utilidad para mitigar y/o retrasar estos efectos asociados al envejecimiento. El término "composición" se refiere a cualquier preparación cosmética o medicamentosa. La composición a la que se refiere la presente invención puede comprender uno o varios inhibidores de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea, preferiblemente de los descritos en la presente invención, en cualquiera de sus mezclas.
En otra realización preferida, la composición a la que se refiere la presente invención es una composición cosmética.
En otra realización preferida, la composición a la que se refiere la presente invención es un medicamento. El medicamento al que se refiere la presente invención puede ser de uso humano o veterinario. El "medicamento de uso humano" es toda sustancia o combinación de sustancias que se presente como poseedora de propiedades para el tratamiento del envejecimiento o de los efectos asociados al mismo en seres humanos o que pueda usarse en seres humanos o administrarse a seres humanos con el fin de restaurar, corregir o modificar las funciones fisiológicas ejerciendo una acción farmacológica, inmunológica o metabólica. El "medicamento de uso veterinario" es toda sustancia o combinación de sustancias que se presente como poseedora de propiedades para el tratamiento del envejecimiento o de los efectos asociados al mismo en animales no humanos o que pueda administrarse al animal con el fin de restablecer, corregir o modificar sus funciones fisiológicas ejerciendo una acción farmacológica, inmunológica o metabólica. También se considerarán "medicamentos veterinarios" las "premezclas para piensos medicamentosos" elaboradas para ser incorporadas a un pienso.
En una realización más preferida, la composición a la que se refiere la presente invención además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y/u otro principio activo. Dicha composición puede comprender además un excipiente.
El término "excipiente" hace referencia a una sustancia que ayuda a la absorción de cualquiera de los componentes de la composición a la que se refiere la presente invención, estabiliza dichos componentes o ayuda a la preparación de la composición en el sentido de darle consistencia o aportar sabores que lo hagan más agradable. Así pues, los excipientes podrían tener la función de mantener los componentes unidos como por ejemplo almidones, azúcares o celulosas, función de endulzar, función de colorante, función de protección del medicamento como por ejemplo para aislarlo del aire y/o la humedad, función de relleno de una pastilla, cápsula o cualquier otra forma de presentación, como por ejemplo el fosfato de calcio dibásico, función desintegradora para facilitar la disolución de los componentes y su absorción en el intestino, sin excluir otro tipo de excipientes no mencionados en este párrafo. Por tanto, el término "excipiente" se define como aquella materia que, incluida en las "formas galénicas", se añade a los principios activos o a sus asociaciones para posibilitar su preparación y estabilidad, modificar sus propiedades organolépticas o determinar las propiedades físico-químicas de la composición y su biodisponibilidad. La "forma galénica o forma farmacéutica" es la disposición a que se adaptan los principios activos y excipientes para constituir un medicamento. Se define por la combinación de la forma en la que la composición es presentada por el fabricante y la forma en la que es administrada. El "vehículo farmacéuticamente aceptable" o "portador", es preferiblemente una sustancia inerte. La función del vehículo es facilitar la incorporación de otros compuestos, permitir una mejor dosificación y administración o dar consistencia y forma a la composición. Por tanto, el vehículo es una sustancia que se emplea en la composición para diluir cualquiera de los componentes de la misma hasta un volumen o peso determinado; o bien que aún sin diluir dichos componentes es capaz de permitir una mejor dosificación y administración o dar consistencia y forma a la compoisición. Cuando la forma de presentación es líquida, el vehículo farmacéuticamente aceptable es el diluyente. Además, el excipiente y el vehículo deben ser farmacológicamente aceptables, es decir, el excipiente y el vehículo deben estar permitidos y evaluados de modo que no causen daño a los organismos a los que se les administra.
Por otra parte, la composición descrita puede comprender además opcionalmente otra sustancia activa. Además del requerimiento de la eficacia terapéutica, donde dicha composición puede necesitar el uso de otros agentes terapéuticos, pueden existir razones fundamentales adicionales que obligan o recomiendan en gran medida el uso de una combinación de al menos un inhibidor de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea y otro agente terapéutico. El término "principio activo" es toda materia, cualquiera que sea su origen, humano, animal, vegetal, químico o de otro tipo, a la que se atribuye una actividad apropiada para constituir un medicamento. En una realización más preferida, el otro principio activo incluido en la composición es un compuesto para el tratamiento del envejecimiento. Ejemplos de compuestos para el tratamiento del envejecimiento son, aunque sin limitarnos, los polifenoles, tales como el resveratrol, o en general cualquier compuesto con propiedades antioxidantes.
Preferiblemente, la composición de la invención comprende un inhibidor de la sulfatasa esteroidea, en una cantidad terapéuticamente efectiva, entendiéndose por "cantidad terapéuticamente efectiva" el nivel, cantidad o concentración de dicho inhibidor, que produzca el efecto deseado sin causar efectos adversos. La dosificación para obtener una cantidad terapéuticamente efectiva depende de una variedad de factores, como por ejemplo, la edad, peso, sexo o tolerancia del individuo al que le va a ser administrada la composición farmacéutica de la invención.
La composición de la presente invención puede formularse para su administración en una variedad de formas conocidas en el estado de la técnica. Como ejemplos de preparaciones se incluye cualquier composición sólida (comprimidos, pildoras, cápsulas, gránulos, etc.) o líquida (soluciones, suspensiones o emulsiones) para administración oral, tópica o parenteral. La composición farmacéutica de la presente invención también puede estar en forma de formulaciones de liberación sostenida de drogas o de cualquier otro sistema convencional de liberación, así puede estar contenida, aunque sin limitarnos, en nanopartículas, liposomas o nanosferas, en un material polimérico, en un implante biodegradable o no biodegradable o en micropartículas biodegradables, como por ejemplo, microesferas biodegradables.
Tal composición y/o sus formulaciones pueden administrarse a un animal, incluyendo un mamífero y, por tanto, al hombre, en una variedad de formas, incluyendo, pero sin limitarse, parenteral, intraperitoneal, intravenosa, intradérmica, epidural, intraespinal, intraestromal, intraarticular, intrasinovial, intratecal, intralesional, intraarterial, intracardíaca, intramuscular, intranasal, intracraneal, subcutánea, intraorbital, intracapsular, tópica, mediante parches transdérmicos, vía vaginal o vía rectal, mediante la administración de un supositorio, percutánea, espray nasal, implante quirúrgico, pintura quirúrgica interna, bomba de infusión o vía catéter.
En cada caso la forma de presentación de la composición se adaptará al tipo de administración utilizada, por ello, la composición a la que se refiere la presente invención se puede presentar bajo la forma de soluciones o cualquier otra forma de administración clínicamente permitida y en una cantidad terapéuticamente efectiva. La composición se puede formular en formas sólidas, semisólidas, líquidas o gaseosas, tales como comprimido, cápsula, polvo, gránulo, ungüento, solución, supositorio, inyección, inhalante, gel, microesfera o aerosol. La composición se puede presentar en una forma adaptada a, por ejemplo aunque sin limitarnos, la administración oral, sublingual, nasal, intratecal, bronquial, linfática, rectal, vaginal, transdérmica, inhalada, tópica o parenteral. Preferiblemente, la composición está formulada para su administración oral, tópica o parenteral. Por otra parte, el inhibidor de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea puede ir asociado, por ejemplo, pero sin limitarse, a liposomas o micelas.
Otro aspecto de la invención, se refiere a una composición cosmética que comprende un inhibidor de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea seleccionado de la lista que consiste en: 2-(hidroxifenil) indol sulfato, 5- androsteno-3 , 17 -diol-3 sulfato, E-i-MTP, EMATE, COUMATE o STX64, KW- 2581 , STX213, morfolino, ARN de silenciamiento, y anticuerpo específico frente a la enzima sulfatasa esteroidea.
A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención. DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
Fig. 1. Representa la curva de longevidad a 25°C. En la gráfica se observa la vida media de una población de C. elegans silvestre y de una población muíante sul-2(gk187), que muestra una diferencia significativa con p<0,0001 , n>100.
Fig. 2. Representa la curva de longevidad a 25°C. En la gráfica se observa la vida media de una población de C. elegans muíante sul-2(pv17) y de una población de C. elegans silvesíre, que muesíra una diferencia significaíiva con p<0,0001 , n>100.
Fig. 3. Representa las curvas de longevidad de un silvestre suplementado con 0,5 μ9/ηιΙ o 1 μ9/ηιΙ de STX64 a 25°C. La población en presencia del inhibidor de sulfaíasas esíeroideas STX64 es significafivamenfe más longeva en ambos casos que la población control expuesta al disolvente del inhibidor (DMSO), p=0,0139, n>100.
EJEMPLOS A continuación se ¡lustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que demuestran la eficacia del uso de inhibidores de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea para el tratamiento y/o prevención del envejecimiento y, por tanto, para el incremento en la longevidad de los individuos tratados. Estos ejemplos específicos que se proporcionan sirven para ¡lustrar la naturaleza de la presente invención y se incluyen solamente con fines ilustrativos, por lo que no han de ser interpretados como limitaciones a la invención que aquí se reivindica. Por tanto, los ejemplos descritos más adelante muestran la invención sin limitar el campo de aplicación de la misma.
Ejemplo 1. La reducción de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea retrasa el envejecimiento.
En el organismo modelo C. elegans se observó, como se verá en este ejemplo, que la reducción de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea mediante mutación genética retrasaba el envejecimiento.
Para la realización de las curvas de longevidad, las cepas de estudio y sus controles pertinentes fueron en primera instancia sometidos a una preparación de huevos con objeto de evitar contaminaciones y sincronizar en estadio embrión, e incubados a 16°C. Para evitar interferencias por estreses fisiológicos por este proceso, se dejaron crecer hasta la siguiente generación. Entonces se transfirieron 5 ó 6 L4 por placa en 4 placas, que se volvieron a incubar a 16°C hasta L4, estadio seleccionado para iniciar las curvas de longevidad. En el día cero se transfirieron 120 L4 de cada cepa a placas nuevas, 20 gusanos por placa, y se incubaron a la temperatura a la que se realizó posteriormente el ensayo, es decir, 25 °C.
Durante la primera semana de las curvas, los nematodos fueron cambiados de placa cada 2 días, para evitar confusiones con posibles descendientes. Posteriormente, fueron revisados cada 2 ó 3 días, eliminándose del estudio aquellos ejemplares extraviados o muertos por causas no fisiológicas. Los individuos se cambiaron de placa cada cinco días para mantener las condiciones óptimas de crecimiento en placa. Se consideraron muertos aquellos ejemplares que dejaron de responder al ser tocados suavemente con el asa de platino. Se estudió la longevidad en presencia del inhibidor de sulfatasa esteroidea STX64 (SIGMA, S1950-5MG) diluido en DMSO a δμς/μΙ. Las placas utilizadas fueron de 35mm de diámetro con un volumen de medio NGM constante de 2ml, la adición del inhibidor se realizó un par de horas antes de poner los nematodos, con una concentración de ^g/ml volumen final. La preparación y sincronización de los nematodos hasta el día=0 fue igual que en el caso anterior, la única diferencia fue que los nematodos fueron cambiados a placas frescas cada dos o tres días hasta el final de la curva. Para la representación de las curvas de longevidad se utilizó el programa GraphPad Prism 5 (Versión 5.0a, para Mac OS X. 1992-2008 GraphPad Software, Inc.), en el modo de curva de supervivencia y se usó el método de Kaplan-Meier para el análisis estadístico de las mismas. En las figuras de la presente invención se representa el error estándar de la media, SEM, de cada punto mediante barras de error y para comprobar si había diferencias entre las curvas se aplicó el Test Log-rank.
Se generaron en primer lugar m ufantes del gen sul-2 de C. elegans. La secuencia nucleotídica nativa de dicho gen es la SEQ ID NO: 2. Dicho gen codifica una proteína de SEQ ID NO: 3 homologa a la sulfatasa esteroidea de mamíferos. Los organismos que expresaban la proteína muíante mostraron un incremento de longevidad significativo respecto al silvestre. Se comprobó que tanto la deleción del gen sul-2(gk187), resultante en una proteína de SEQ ID NO: 5, como el alelo aislado pv17, resultante en una proteína de SEQ ID NO: 4, un muíante de reducción de función, conducían a un incremento de la longevidad (Figuras 1 y 2). Y no sólo eso, sino que además esíos muíanles maníenían las funciones mofrices incluso después de que gran parte de la población silvesíre hubiera muerto. Esío indicó que la inhibición de la función de las sulfaíasas esíeroideas, puede usarse como frafamienfo antienvejecimiento. Por ello, posteriormente se realizó un ensayo en C. elegans con el inhibidor de sulfatasas esteroideas STX 64, y se observó que el tratamiento retrasaba el envejecimiento (Figura 3).

Claims

REIVINDICACIONES
1 . Uso del inhibidor de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea STX64 para la elaboración de una composición para el tratamiento del envejecimiento.
2. Uso según la reivindicación 1 , donde la enzima sulfatasa esteroidea es la enzima de SEQ ID NO: 1 .
3. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, donde la composición es una composición cosmética.
4. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, donde la composición es un medicamento.
5. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde la composición además comprende otro principio activo.
6. Uso según la reivindicación 5, donde el otro principio activo es un compuesto para el tratamiento del envejecimiento.
7. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde la composición está formulada para su administración oral, tópica o parenteral.
8. Composición cosmética que comprende el inhibidor de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea STX64.
9. Composición cosmética que comprende un inhibidor de la actividad de la enzima sulfatasa esteroidea seleccionado de la lista que consiste en: 2- (hidroxifenil) indol sulfato, 5-androsteno-3 , 17β-οΙϊοΙ-3 sulfato, E-i-MTP, EMATE, STX64, KW-2581 , STX213, morfolino, ARN de silenciamiento, y anticuerpo específico frente a la enzima sulfatasa esteroidea.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4094754A1 (en) 2018-06-19 2022-11-30 Universidad Pablo de Olavide Compositions for treating and/or preventing protein-aggregation diseases

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110809473A (zh) * 2017-06-01 2020-02-18 延世大学校产学协力团 用于预防或治疗骨相关疾病的药物组合物
KR102162633B1 (ko) * 2019-03-13 2020-10-07 연세대학교 산학협력단 비만 또는 지질 관련 대사성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
EP3988095A1 (en) * 2020-10-26 2022-04-27 Universidad Pablo de Olavide Sulfated c19 steroid hormones to extend lifespan and protect against aging-associated proteotoxicity
WO2022149929A1 (ko) * 2021-01-08 2022-07-14 연세대학교 산학협력단 스테로이드 설파타제 억제제를 포함하는 항바이러스성 약학적 조성물

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1193250A1 (en) 1999-07-06 2002-04-03 Teikoku Hormone Mfg. Co., Ltd. Phenyl sulfamate derivatives
EP0758230B1 (en) 1994-04-05 2003-06-11 Celltech Therapeutics Limited Use of steroid sulphatase inhibitors
EP1568381A1 (en) 2002-10-09 2005-08-31 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Remedy for hormone-dependent cancer
WO2008065428A2 (en) * 2006-12-01 2008-06-05 Sterix Limited Steroid sulphatase inhibitors for treating hormone dependent cancer

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5556847A (en) * 1994-10-27 1996-09-17 Duquesne University Of The Holy Ghost Methods of effecting memory enhancement mediated by steroid sulfatase inhibitors
GB0020498D0 (en) * 2000-08-18 2000-10-11 Sterix Ltd Compound
US8030298B2 (en) * 2005-05-26 2011-10-04 Abbott Products Gmbh 17β-HSD1 and STS inhibitors
GB0511190D0 (en) * 2005-06-01 2005-07-06 Sterix Ltd Use
WO2008143928A1 (en) * 2007-05-15 2008-11-27 Puretech Ventures Methods and compositions for treating skin conditions
US20110190244A1 (en) * 2010-02-01 2011-08-04 Peter Maccallum Cancer Institute Method of treatment of egfr inhibitor toxicity

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0758230B1 (en) 1994-04-05 2003-06-11 Celltech Therapeutics Limited Use of steroid sulphatase inhibitors
EP1193250A1 (en) 1999-07-06 2002-04-03 Teikoku Hormone Mfg. Co., Ltd. Phenyl sulfamate derivatives
EP1568381A1 (en) 2002-10-09 2005-08-31 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Remedy for hormone-dependent cancer
WO2008065428A2 (en) * 2006-12-01 2008-06-05 Sterix Limited Steroid sulphatase inhibitors for treating hormone dependent cancer

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CANUELO ET AL., MECH. AGEING DEV., vol. 133, no. 8, 2012, pages 563 - 74
CHUNG ET AL., TRENDS CELL BIOL., vol. 22, no. 10, 2012, pages 546 - 554
KRENN ET AL., PHARMAZIE, vol. 62, no. 11, 2007, pages 803 - 812
PEREZ JIMENEZ, M.M.: "Regulación from longevidad by the sulfatasa sul-2 in Caenorhabditis elegans''.", TESIS DOCTORAL., 2012, SEVILLA., Retrieved from the Internet <URL:HTTP://ATHENEA.UPO.ES:2082/SEARCH~S1*SPI?/CT-0523/CT++05231-3%2C-1%2C0%2CE/FRAMESET&FF=CT++0557&1%2C%2C2#> *
PUROHIT, A. ET AL.: "Steroid sulfatase inhibitors for estrogen- and androgen-dependent cancers''.", JOURNAL OF ENDOCRINOLOGY., vol. 212, no. 2, 1 February 2012 (2012-02-01), pages 99 - 110, XP055293386, DOI: 10.1530/JOE-11-0266 *
PUROHIT; FOSTER, J. ENDOCRINOL., vol. 212, no. 2, 2012, pages 99 - 110

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4094754A1 (en) 2018-06-19 2022-11-30 Universidad Pablo de Olavide Compositions for treating and/or preventing protein-aggregation diseases

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