WO2016083646A1 - Amidas de ácidos grasos para la prevención y/o tratamiento de la esteatohepatitis - Google Patents

Amidas de ácidos grasos para la prevención y/o tratamiento de la esteatohepatitis Download PDF

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WO2016083646A1
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fatty liver
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formula
disease
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English (en)
French (fr)
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Fernando RODRÍGUEZ DE FONSECA
Francico Javier PAVÓN MORÓN
Antonia SERRANO CRIADO
Juan Manuel Decara Del Olmo
Jesús JOGLAR TAMARGO
Pedro CLAPÉS SABORIT
Rafael De La Torre Fornell
Magí FERRE ALBALADEJO
María Isabel COVAS PLANELLS
Montserrat Fito Colomer
Bruno Almeida Cotrim
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Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC
Instituto Mediterraneo para el Avance de la Biotecnologia y la Investigacion Sanitaria (Fundacion Imabis)
Fundacio Institut Hospital del Mar dInvestigacions Mediques IMIM
Original Assignee
Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC
Instituto Mediterraneo para el Avance de la Biotecnologia y la Investigacion Sanitaria (Fundacion Imabis)
Fundacio Institut Hospital del Mar dInvestigacions Mediques IMIM
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics

Definitions

  • Fatty acid amides for the prevention and / or treatment of steatohepatitis.
  • the present invention is within the field of medicine and pharmacy, and refers to a new series of fatty acid amides with phenylalkylamines and their pharmaceutically acceptable salts, solvates and hydrates, and more specifically, refers to the use of compound N - (1- (3,4-dihydroxyphenyl) propan-2-yl) oleamide (OLHHA) in the preparation of a medicament for the prevention and / or treatment of fatty liver disease, preferably non-alcoholic (NAFLD) and, in in particular, in the preparation of a medicament for the prevention and / or treatment of steatohepatitis, preferably non-alcoholic steatohepatitis (NASH).
  • OHPHA compound N - (1- (3,4-dihydroxyphenyl) propan-2-yl) oleamide
  • NASHHA non-alcoholic steatohepatitis
  • NASH non-alcoholic steatohepatitis
  • Steatohepatitis is a liver disease caused by the accumulation of lipids in hepatocytes, and is one of the leading causes of liver morbidity worldwide.
  • steatohepatitis differentiates etiologically into two groups, depending on the presence of the main single known factor that triggers it: alcohol abuse. Therefore we differentiate alcoholic and non-alcoholic steatohepatitis (non-alcoholic steatohepatitis, NASH).
  • NASH non-alcoholic steatohepatitis
  • the latter is a common liver disease. It is often "silent,” that is, it has no symptoms. NASH resembles liver diseases caused by alcohol consumption, but it occurs in people who drink little or no alcohol.
  • NASH liver fat with inflammation and damage. Most people with NASH feel good. They don't know they have a liver problem. NASH can be serious and lead to cirrhosis. With cirrhosis, the liver is damaged forever, scars and stops functioning properly.
  • NASH affects between 2 and 5% of people living in the United States. Another percentage, from 10 to 20%, of people, has fat in the liver without inflammation or damage. This medical condition is called "fatty liver.” It is not normal to have fat in the liver. However, having liver fat probably does not cause much damage, or permanent damage, alone. With a blood test, an ultrasound (ultrasound) of the liver or a similar test, the presence of fat can be observed. If the results of the blood test, ultrasound or other tests show the possibility of fat in the liver, the
  • NAFLD non-alcoholic fatty liver disease
  • NASH is increasingly common. This may be due to the higher prevalence of obesity among people living in the United States. In the last 10 years, the number of adults who have become obese doubled and tripled in children. Obesity also contributes to diabetes and a high level of cholesterol in the blood, which can complicate the health of someone with NASH. In Spain, the figures show prevalence above 20%, being especially prevalent in men, in those associated with metabolic syndrome, and in children with obesity. In children this prevalence has been increased by the growing epidemic of childhood overweight (Gelpi Méndez et al., 2014. Arch. Prev. Labor Risks. 17 (2), 84-90; Navarro-Jaraboef al., 2013 J. Gastroenterol. Hepatol. 28 (9): 1532-8; Caballer ⁇ a et al., 2012. Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 24 (9): 1007-11)
  • New medications for the treatment of diabetes are even used in people without diabetes. This is because most people with NASH have insulin resistance. This means that insulin normally present in the blood does not control glucose and fatty acids effectively. These new medications improve the body's sensitivity to insulin.
  • a first aspect of the present invention relates to the use of a compound of general formula (I) (also referred to as the compound of the invention):
  • X and Y can be the same or different independently and are selected from H, halogen and methyl; n is an integer from 1 to 4; and R 2 can be the same or different independently and are selected from H and CC 6 alkyl or can be linked by a simple bond between the two oxygen atoms, forming a new cycle;
  • R 3 is selected from H, CC 6 alkyl and CC 4 alkenyl
  • R 4 is selected from H, halogen and CC 4 alkyl
  • R 5 is a compound of general formula (II):
  • R 6 is selected from H and CC 4 alkyl
  • R 7 is selected from C 8 -C 30 alkyl and alkenyl C 8 -C 30; or any of its salts, preferably any pharmaceutically acceptable salt, esters, tautomers, polymorphs, pharmaceutically acceptable hydrates, or an isomer, prodrugs, derivatives, solvates or the like, or any combination thereof, in the preparation of a medicament for prevention, relief and / or treatment of fatty liver or a disease or pathological condition caused by fatty liver.
  • the compound of the invention refers to the compound of the invention or any of its salts, preferably any pharmaceutically acceptable salt, esters, tautomers, polymorphs, pharmaceutically acceptable hydrates, or an isomer, prodrugs, derivatives, solvates or the like, or any combination thereof, for its use in the prevention, relief and / or treatment of fatty liver or a disease or pathological condition caused by fatty liver.
  • the disease caused by fatty liver is steatohepatitis.
  • the compound is used in the preparation of a medicament for the prevention, relief and / or treatment of a disease. caused by non-alcoholic fatty liver (NAFLD), more preferably non-alcoholic steaotohepatitis (NASH).
  • NAFLD non-alcoholic fatty liver
  • NASH non-alcoholic steaotohepatitis
  • X and Y may be the same or different independently and are selected from H and CH 3 .
  • n is an integer selected from 1 or 3, more preferably 1.
  • F and R 2 may be the same or different independently and are selected from H and CH 3 or may be linked by a single bond between the two oxygen atoms, forming a new cycle.
  • R 3 is selected from H and C1-C3 alkyl, and more preferably it is H.
  • R 4 is selected from H and CH 3 , and more preferably is CH 3 .
  • R 5 is a compound of formula (II):
  • R 6 is selected from H and CH 3 and R 7 is a C15-C25 alkenyl group.
  • R 7 has a number of unsaturations between 1 and 6, more preferably between 1 and 4.
  • the compound of general formula (I) refers to a compound that is selected from the following group:
  • Formula (XV) or any of its salts preferably a pharmaceutically acceptable salt, esters, tautomers, polymorphs, pharmaceutically acceptable hydrates, or an isomer, prodrugs, derivatives, solvates or the like, or any combination thereof, or any combination thereof.
  • the compound is ⁇ / - (1- (3,4-dihydroxyphenyl) propan-2-yl) oleamide (OLHHA).
  • a second aspect of the invention relates to the use of a pharmaceutical composition comprising at least one compound of the invention, or a tautomer, a pharmaceutically acceptable salt, a derivative or a prodrug thereof, in the preparation of a medicament for prevention. , relief and / or treatment of a disease caused by fatty liver.
  • a pharmaceutical composition comprising at least one compound of the invention or any of its salts, preferably any pharmaceutically acceptable salt, esters, tautomers, polymorphs, pharmaceutically acceptable hydrates, or an isomer, prodrugs, derivatives, solvates or the like, is referred to, or any of its combinations, for use for the prevention, relief and / or treatment of a disease caused by fatty liver.
  • the composition of the invention further comprises a pharmaceutically acceptable carrier or carrier, an excipient and / or a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the disease caused by fatty liver is steatohepatitis.
  • the pharmaceutical composition of the invention is used to produce a medicament for the prevention, relief and / or treatment of a disease caused by non-alcoholic fatty liver (NAFLD), preferably non-alcoholic steatohepatitis (NASH)
  • the pharmaceutical composition of the invention is used for the prevention, relief or treatment of an alcoholic fatty liver disease (AFLD; Alcoholic Fatty Liver Disease), preferably alcoholic steatohepatitis (ASH; alcoholic steatohepatitis).
  • AFLD Alcoholic Fatty Liver Disease
  • ASH alcoholic steatohepatitis
  • the pharmaceutical composition further comprises another active ingredient.
  • a third aspect of the invention relates to a food composition or a nutraceutical composition or a "medical food” type composition, hereinafter food composition of the invention, comprising at least one of the compounds of formula (I ).
  • a fourth aspect of the invention relates to the use of the food composition of the invention for the prevention, relief or treatment of fatty liver or a disease or pathological condition caused by fatty liver, preferably steatohepatitis in mammals, and more preferably in humans. .
  • it refers to the use of the food composition of the invention, for the prevention and / or treatment of fatty liver or a disease or pathological condition caused by fatty liver, preferably steatohepatitis.
  • the food composition of the invention is used for the prevention, relief or treatment of a disease caused by non-alcoholic fatty liver (NAFLD; Non Alcoholic Fatty Liver Disease), preferably non-alcoholic steatohepatitis ( NASH; Non-alcoholic steatohepatitis).
  • NAFLD Non Alcoholic Fatty Liver Disease
  • NASH Non-alcoholic steatohepatitis
  • the food composition of the invention is used for the prevention, relief or treatment of an alcoholic fatty liver disease (AFLD; Alcoholic Fatty Liver Disease), preferably alcoholic steatohepatitis (ASH; alcoholic steatohepatitis).
  • AFLD Alcoholic Fatty Liver Disease
  • ASH alcoholic steatohepatitis
  • Another aspect of the invention relates to a method for the prevention, relief or treatment of a subject, preferably human, suffering from an alcoholic fatty liver disease (AFLD; Alcoholic Fatty Liver Disease), preferably alcoholic steatohepatitis
  • ASH alcoholic steatohepatitis
  • non-alcoholic fatty liver ASH; alcoholic steatohepatitis
  • a disease caused by non-alcoholic fatty liver ASH; alcoholic steatohepatitis
  • NAFLD Non Alcoholic Fatty Liver Disease
  • NASH Non-alcoholic steatohepatitis
  • Figure 1 Effects of chronic OLHHA treatment on body weight gain and intake in Zucker rats.
  • Figure 2. Effects of chronic OLHHA treatment on liver fat content and plasma triglyceride level in Zucker rats.
  • Figure 3. Effects of chronic treatment with OLHHA on the level of transaminases in obese rats.
  • Figure 4 Effects of chronic OLHHA treatment on the level of pro-inflammatory cytokines in obese rats.
  • Figure 5 Effects of chronic treatment with OLHHA on the level of plasma proteins related to renal function in obese rats.
  • Figure 6 Effects of chronic treatment with OLHHA on gene expression of enzymes involved in lipid metabolism in the liver of Zucker rats.
  • Figure 7 Effects of chronic treatment with OLHHA on gene expression of INSIG2 and NAPE-PLD in the liver of Zucker rats.
  • Figure 9 Histological evaluation of the effect of chronic OLHHA treatment on fatty liver in obese Zucker rats.
  • A, B Hematoxylin-eosin
  • C, D Oily red.
  • FIG. 10 Effect of chronic treatment with OLHHA on the expression of Caspase-3 in the liver of obese Zucker rats.
  • A, B, C Immunohistochemistry and quantification of cells positive for activated Caspase-3
  • D, E, F Immunohistochemistry and quantification of cells positive for total Caspase-3.
  • FIG. 12 Effect of chronic treatment with OLHHA on protein levels of enzymes involved in lipid metabolism in the liver of obese Zucker rats.
  • A FAS;
  • B HMG-CoAR;
  • C L-FABP;
  • D INSIG2.
  • the results presented in the invention show that the compound: ⁇ / - (1- (3,4 dihydroxyphenyl) propan-2-yl) oleamide (OLHHA), lowers the fatty liver in a genetic model of obesity such as rats Zucker, which suggests the hepato-protective role of this compound.
  • Obese Zucker rats showed high levels of serum triglycerides and fatty liver, which is confirmed as a significant elevation of circulating triglycerides and total liver fat content compared to thin animals.
  • OLHHA ⁇ / - (1- (3,4 dihydroxyphenyl) propan-2-yl) oleamide
  • OLHHA decreased the expression of lipogenic enzyme genes, including fatty acid synthase (FAS) and 3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA reductase (HMG-CoAR) and increased the expression of enzyme genes that promotes the oxidation of fatty acids, such as acyl-CoA oxidase (ACOX).
  • FAS fatty acid synthase
  • HMG-CoAR 3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA reductase
  • ACOX acyl-CoA oxidase
  • the decrease in mRNA level of HMG-CoAR was related to an increase in gene expression of insulin-induced gene 2 (INSIG2), which is involved in the regulation of cholesterol biosynthesis.
  • INSIG2 insulin-induced gene 2
  • OLHHA produced a decrease in the expression of the pro-lipogenic enzyme gene related to the endocannabinoid system A / -acrylic phosphatidylethanolamine phospholipase D (NAPE-PLD). Also, OLHHA showed a safe pharmacological profile because it does not interact with the related human ether-á-go-go (hERG) gene of cardiac potassium channels and did not have or had moderate effects on the activity of the different isoforms of hepatic cytochrome P450.
  • hERG human ether-á-go-go
  • the invention relates to the use of fatty acid amides conjugated to phenylalkylamines (amphetamines, dopamine, etc.) in the preparation of a medicament for the prevention and / or treatment of a disease caused by fatty liver, preferably steatohepatitis.
  • a first aspect of the present invention relates to the use of a compound of general formula (I) (also referred to as the compound of the invention):
  • X and Y can be the same or different independently and are selected from H, halogen and methyl; n is an integer from 1 to 4; and R 2 can be the same or different independently and are selected from H and CC 6 alkyl or can be linked by a simple bond between the two oxygen atoms, forming a new cycle; R 3 is selected from H, CC 6 alkyl and CC 4 alkenyl;
  • R 4 is selected from H, halogen and CC 4 alkyl
  • R 5 is a compound of general formula (II):
  • R 6 is selected from H and CC 4 alkyl
  • R 7 is selected from C 8 -C 30 alkyl and alkenyl C 8 -C 30; or any of its salts, preferably any pharmaceutically acceptable salt, esters, tautomers, polymorphs, pharmaceutically acceptable hydrates, or an isomer, prodrugs, derivatives, solvates or the like, or any combination thereof, in the preparation of a medicament for prevention, relief and / or treatment of fatty liver or a disease or pathological condition caused by fatty liver.
  • the disease caused by fatty liver is steatohepatitis.
  • the compound is used in the preparation of a medicament for the prevention, relief and / or treatment of a disease caused by non-alcoholic fatty liver (NAFLD), more preferably non-alcoholic steaotohepatitis (NASH )
  • NAFLD non-alcoholic fatty liver
  • NASH non-alcoholic steaotohepatitis
  • non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD)" describes a wide range of conditions caused by an excessive accumulation of fat in the form of triglycerides (steatosis) in the liver (histologically> 5% of hepatocytes).
  • steatosis triglycerides
  • a subgroup of patients with NAFLD has hepatocyte damage and inflammation. This last condition is called “non-alcoholic steatohepatitis (NASH)", it is virtually histologically indistinguishable from alcoholic steatohepatitis (ASH).
  • NASH non-alcoholic steatohepatitis
  • alkyl refers, in the present invention, to radicals of hydrocarbon chains, linear or branched, having 1 to 10 carbon atoms, preferably 1 to 4, and which are attached to the rest of the molecule by a single bond, for example, methyl, ethyl, n-propyl, / ' -propyl, n-butyl, tere-butyl, sec-butyl, n-pentyl, n-hexyl, etc.
  • the alkyl groups may optionally be substituted by one or more substituents such as halogen, hydroxyl, alkoxy, carboxyl, carbonyl, cyano, acyl, alkoxycarbonyl, amino, nitro, mercapto and alkylthio.
  • substituents such as halogen, hydroxyl, alkoxy, carboxyl, carbonyl, cyano, acyl, alkoxycarbonyl, amino, nitro, mercapto and alkylthio.
  • alkenyl refers to hydrocarbon chain radicals containing one or more double carbon-carbon bonds, for example, vinyl, 1-propenyl, allyl, isoprenyl, 2- butenyl, 1, 3-butadienyl, etc. Alkenyl radicals may be optionally substituted. by one or more substituents such as halo, hydroxyl, alkoxy, carboxyl, cyano, carbonyl, acyl, alkoxycarbonyl, amino, nitro, mercapto and alkylthio.
  • halogen refers to fluorine, chlorine, bromine or iodine.
  • X and Y may be the same or different independently and are selected from H and CH 3 .
  • n is an integer selected from 1 or 3, more preferably 1.
  • R 2 may be the same or different independently and are selected from H and CH 3 or may be linked by a single bond between the two oxygen atoms, forming a new cycle.
  • R 3 is selected from H and C 1 -C 3 alkyl, and more preferably is H.
  • R 4 is selected from H and CH 3 , and more preferably is CH 3 .
  • R 5 is a compound of formula
  • R 6 is selected from H and CH 3 and R 7 is a C15-C25 alkenyl group.
  • R 7 has a number of unsaturations between 1 and 6, more preferably between 1 and 4.
  • the compound of general formula (I) refers to a compound that is selected from the following group:
  • the compound is ⁇ / - (1- (3,4-dihydroxyphenyl) propan-2-yl) oleamide (OLHHA).
  • the compounds of the present invention represented by formula (I) may include isomers, depending on the presence of multiple bonds, including optical isomers or enantiomers, depending on the presence of chiral centers.
  • the individual isomers, enantiomers or diastereoisomers and mixtures thereof fall within the scope of the present invention, that is, the term isomer also refers to any mixture of isomers, such as diastereomers, racemic, etc., even their optically isomers. assets or mixtures in different proportions thereof.
  • the individual enantiomers or diastereoisomers, as well as mixtures thereof, can be separated by conventional techniques.
  • prodrugs of the compounds of formula (I) include any derivative of a compound of formula (I) - for example and not limited to: esters (including esters of carboxylic acids, amino acid esters, phosphate esters, esters of sulphonate of metal salts, etc.), carbamates, amides, etc. - which when administered to a The individual can be directly or indirectly transformed into said compound of formula (I) in said individual.
  • said derivative is a compound that increases the bioavailability of the compound of formula (I) when administered to an individual or that enhances the release of the compound of formula (I) in a biological compartment.
  • the nature of said derivative is not critical as long as it can be administered to an individual and provides the compound of formula (I) in a biological compartment of an individual.
  • the preparation of said prodrug can be carried out by conventional methods known to those skilled in the art.
  • derivative includes both pharmaceutically acceptable compounds, that is, derivatives of the compound of formula (I) that can be used in the manufacture of a medicament or food compositions, as pharmaceutically unacceptable derivatives, and that these may be useful in the preparation of pharmaceutically acceptable derivatives.
  • the compounds of the invention may be in crystalline form as free compounds or as solvates.
  • solvate includes both pharmaceutically acceptable solvates, that is, solvates of the compound of formula (I) that can be used in the manufacture of a medicament, as pharmaceutically acceptable solvates, which may be useful in the preparation of pharmaceutically acceptable solvates or salts.
  • the nature of the pharmaceutically acceptable solvate is not critical as long as it is pharmaceutically acceptable.
  • the solvate is a hydrate.
  • Solvates can be obtained by conventional solvation methods known to those skilled in the art.
  • the compounds of formula (I), their salts, prodrugs or solvates will preferably be found in a pharmaceutically acceptable or substantially pure form, that is, having a pharmaceutically acceptable level of purity excluding pharmaceutical additives. normal such as diluents and carriers, and not including material considered toxic at normal dosage levels.
  • the purity levels for the active ingredient are preferably greater than 50%, more preferably greater than 70%, and still more preferably greater than 90%. In a preferred embodiment, they are greater than 95% of the compound of formula (I), or of its salts, solvates or prodrugs.
  • a second aspect of the invention relates to the use of a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising at least one compound of the invention, or a tautomer, a pharmaceutically acceptable salt, a derivative or a prodrug thereof, together with a pharmaceutically acceptable carrier or carrier, an excipient or a vehicle, in the preparation of a medicament for the prevention, relief and / or treatment of fatty liver or a disease or pathological condition caused by fatty liver.
  • the disease caused by fatty liver is steatohepatitis.
  • the pharmaceutical composition of the invention is used to produce a medicament for the prevention, relief and / or treatment of a disease caused by non-alcoholic fatty liver (NAFLD), preferably non-alcoholic steatohepatitis (NASH)
  • NAFLD non-alcoholic fatty liver
  • NASH non-alcoholic steatohepatitis
  • the pharmaceutical composition of the invention is used for the prevention, relief or treatment of an alcoholic fatty liver disease (AFLD; Alcoholic Fatty Liver Disease), preferably alcoholic steatohepatitis (ASH; alcoholic steatohepatitis).
  • AFLD Alcoholic Fatty Liver Disease
  • ASH alcoholic steatohepatitis
  • the pharmaceutically acceptable adjuvants and vehicles that can be used in said compositions are the adjuvants and vehicles known to those skilled in the art and commonly used in the elaboration of therapeutic compositions.
  • the term "therapeutically effective amount” refers to the amount of the agent or compound capable of developing the therapeutic action determined by its pharmacological properties, calculated to produce the desired effect and, in general, will be determined, among other causes, due to the characteristics of the compounds, including the age, condition of the patient, the severity of the alteration or disorder, and the route and frequency of administration.
  • the compounds described in the present invention, their salts, prodrugs and / or solvates as well as the pharmaceutical compositions containing them can be used together with other drugs, or additional active ingredients, to provide a combination therapy.
  • Said additional drugs may be part of the same pharmaceutical composition or, alternatively, they may be provided in the form of a separate composition for simultaneous or non-simultaneous administration to the pharmaceutical composition comprising a compound of formula (I), or a salt, prodrug or solvate thereof.
  • the pharmaceutical composition further comprises another active ingredient.
  • the active ingredient is selected from the list consisting of: vitamin E, vitamin C, betaine, / V-acetylcysteine, ursodeoxycholic acid, and other antioxidants.
  • the term “active substance”, “active substance”, “pharmaceutically active substance”, “active ingredient” or “pharmaceutically active ingredient” means any component that potentially provides a pharmacological activity or other different effect on the diagnosis, cure, mitigation, treatment, or prevention of a disease, or that affects the structure or function of the body of man or other animals. The term includes those components that promote a chemical change in the preparation of the drug and are present therein in a modified form intended to provide the specific activity or effect.
  • Another aspect of the invention relates to a pharmaceutical form, hereinafter pharmaceutical form of the invention, comprising the compound of the invention or the composition of the invention.
  • compositions and pharmaceutical forms of the invention are suitable for oral administration, in solid or liquid form.
  • Possible forms for oral administration are tablets, capsules, syrups or solutions and may contain conventional excipients known in the pharmaceutical field, as aggregating agents (eg syrup, acacia, gelatin, sorbitol, tragacanth or polyvinyl pyrrolidone), fillers (eg lactose, sugar, corn starch, calcium phosphate, sorbitol or glycine), disintegrants (eg starch, polyvinyl pyrrolidone or microcrystalline cellulose) or a pharmaceutically acceptable surfactant such as sodium lauryl sulfate.
  • Other pharmaceutical forms may be colloidal systems, which include nanoemulsions, nanocapsules and polymeric nanoparticles.
  • Compositions for oral administration can be prepared by conventional methods of Galenic Pharmacy, as mixing and dispersion. The tablets can be coated following methods known in the pharmaceutical industry.
  • compositions and pharmaceutical forms can be adapted for parenteral administration, such as sterile solutions, suspensions, or lyophilisates of the products of the invention, using the appropriate dose.
  • Suitable excipients such as pH buffering agents or surfactants, can be used.
  • formulations can be prepared using conventional methods, such as those described in the Pharmacopoeias of different countries and in other reference texts.
  • the term "medication”, as used herein, refers to any substance used for prevention, diagnosis, relief, treatment or cure of diseases in man and animals.
  • the administration of the compounds, compositions or pharmaceutical forms of the present invention can be performed by any suitable method, such as intravenous infusion and oral, topical or parenteral routes. Oral administration is preferred for the convenience of patients and for the chronic nature of the diseases to be treated.
  • the amount administered of a compound of the present invention will depend on the relative efficacy of the compound chosen, the severity of the disease to be treated and the weight of the patient. However, the compounds of this invention will be administered one or more times a day, for example 1, 2, 3 or 4 times daily, with a total dose between 0.1 and 1000 mg / kg / day. It is important to keep in mind that it may be necessary to introduce variations in the dose, depending on the age and condition of the patient, as well as modifications in the route of administration.
  • the compounds and compositions of the present invention can be used together with other medicaments in combination therapies.
  • the other drugs may be part of the same composition or of a different composition, for administration at the same time or at different times.
  • a third aspect of the invention relates to a food composition such as a nutraceutical composition or a "medical food” type composition, hereinafter food composition of the invention, comprising at least one of the compounds of formula (I ).
  • the food composition of the invention comprises the compound of the invention in an amount effective for the prevention, relief and / or treatment of a disease caused by non-alcoholic fatty liver (NAFLD), and preferably for the prevention, relief and treatment of steatohepatitis non-alcoholic (NASH), in mammals, including a human being.
  • NAFLD non-alcoholic fatty liver
  • NASH steatohepatitis non-alcoholic
  • Preferred food compositions are selected from the list consisting of: a beverage, milk, yogurt, cheese, fermented milk, flavored milk beverage, soy milk, pre-cooked cereals, bread, cakes, butter, margarine, sauces, frying oils , vegetable oils, corn oil, olive oil, soybean oil, palm oil, sunflower oil, cottonseed oil, condiments, salad dressings, fruit juices, syrups, desserts, glazes and fillings, frozen products Soft, sweet, gum and intermediate foods.
  • the food composition of the invention can be a nutritional or dietary supplement.
  • the nutritional or dietary supplement comprises a Sterile composition containing the compound of the invention, preferably provided with a gastric acid resistant coating, being a delayed release composition.
  • suitable excipients include, but are not limited to starch, glucose, fructose, lactose, sucrose, gelatin, malt, rice, flour, calcium sulfate, silica gel, sodium stearate, glycerol monostearate, talc, sodium chloride, skim milk powder, glycerol, propylene, glycol, water, ethanol, and the like.
  • Such nutritional supplements can be used to combat liver problems, and help maintain health or a healthy lifestyle for the mammal, preferably a human being.
  • a fourth aspect of the invention relates to the use of the food composition of the invention for the prevention, relief or treatment of fatty liver or a disease or pathological condition caused by fatty liver, preferably steatohepatitis in mammals, preferably humans.
  • it refers to the use of the food composition of the invention, for the prevention and / or treatment of fatty liver or a disease or pathological condition caused by fatty liver, preferably steatohepatitis.
  • the food composition of the invention is used for the prevention, relief or treatment of a disease caused by non-alcoholic fatty liver (NAFLD), preferably non-alcoholic steatohepatitis (NASH).
  • NAFLD non-alcoholic fatty liver
  • NASH non-alcoholic steatohepatitis
  • the food composition of the invention is used for the prevention, relief or treatment of an alcoholic fatty liver disease (AFLD; Alcoholic Fatty Liver Disease), preferably alcoholic steatohepatitis (ASH; alcoholic steatohepatitis).
  • AFLD Alcoholic Fatty Liver Disease
  • ASH alcoholic steatohepatitis
  • treatment refers to combating the effects caused as a result of a disease or pathological condition of interest in a subject (preferably mammal, and more preferably a human) that includes:
  • prevention as understood in the present invention is to prevent the onset of the disease, that is, to prevent the disease or pathological condition from occurring in a subject (preferably mammal, and more preferably a human), in particularly, when said subject has a predisposition for the pathological condition.
  • the process for obtaining a compound of formula (I) could comprise the following steps: a) conjugation between a compound of general formula (III) and benzyl chloroformate to give rise to a new compound of general formula (IV), which comprises The following reaction:
  • R 7 is selected from C 8 -C 30 alkyl and alkenyl C 8 -C 30 and Rs is selected from NH3, NH2-CH3, NH2-CH2-CH3, -NH- (CH 3) 2 , N- (CH 3 ) 3 NH- (CH 2 -CH 3 ) 2 and N- (CH 2 -CH 3 ) 3 ;
  • R 3 can be selected from H, CC 6 alkyl and CC 4 alkenyl
  • R 4 can be selected from H, halogen and CC 4 alkyl
  • R 6 can be selected from H and CC 4 alkyl;
  • R 7 may be selected from C 8 -C 30 alkyl and alkenyl C 8 -C 30;
  • R 8 can be selected from NH 3 , NH 2 -CH 3 , NH 2 -CH 2 -CH 3 , NH- (CH 3 ) 2 , N- (CH 3 ) 3 NH- (CH 2 - CH 3 ) 2 and N- (CH 2 -CH 3 ) 3 ;
  • the animals were euthanized using sodium pentobarbital (50mg / kg, ip) and blood and liver samples were taken.
  • the blood was centrifuged at 2100x g for 8 min at 4 ° C and the plasma obtained was stored at -80 ° C for subsequent analysis. Liver samples were also stored at -80 ° C.
  • Example 1 Effects of chronic treatment with OLH HA on body weight gain and intake in Zucker rats.
  • Example 2 Effects of chronic OLH HA treatment on liver fat content and plasma triglyceride level in Zucker rats.
  • Total fat content in the liver and plasma triglyceride level were evaluated in thin and obese Zucker rats after a 15-day treatment with OLHHA (5 mg / kg, once daily). Samples for lipid analysis were obtained 2h after the last injection.
  • a commercial kit (Randox Laboratories) was used based on a colorimetric method that determines the triglyceride content after enzymatic hydrolysis with lipases.
  • Obese rats showed a threefold increase in total fat content in the liver compared to thin rats (Figure 2A), as well as a marked increase in circulating triglycerides (five times) ( Figure 2B). In both cases, treatment with OLHHA prevented these increases.
  • OLHHA reduces the levels of fat in the liver and plasma triglycerides in obese animals with fatty liver.
  • Example 3 Effects of chronic treatment with OLHHA on the level of liver transaminases in obese rats.
  • ALT and AST are enzymes in liver cells that permeate into the bloodstream when there is damage to the liver cell. It is believed that ALT is a more specific indicator of liver inflammation, while AST may appear elevated in diseases of other organs, such as the heart or muscle. ALT and AST are often used to assess the progression of chronic hepatitis.
  • GGt gammaglutamyltranspeptidase
  • Figure 3C we observed no effect with respect to the vehicle treated group.
  • GGt is an enzyme that indicates the obstruction of the biliary system, either in the liver or in the major bile channels outside this organ.
  • GGt is increased in a large number of disorders that affect the drainage of bile, such as when there is a liver disease caused by alcohol or drugs, which causes a blockage of bile flow in the smaller channels within the liver.
  • OLHHA improves the profile of liver transaminases in plasma with a fall in ALT and AST.
  • Example 4 Effects of chronic treatment with OLHHA on the level of pro-inflammatory cytokines in obese rats.
  • Circulating levels of IL-6 and TNF- ⁇ were measured by ELISAs using commercial kits (Abcam).
  • OLHHA improves the pro-inflammatory profile of obese animals with a reduction of plasma TNFa.
  • Example 5 Effects of chronic treatment with OLHHA on the level of plasma proteins related to renal function in obese rats.
  • Measuring creatinine is a simple test and is the most common indicator of renal function, its filtration capacity. As for urea, it is the end result of protein metabolism and is formed in the liver from the destruction of proteins. OLHHA improves renal function through a reduction in increased plasma urea levels. Effects of chronic OLHHA treatment on gene expression in rat liver
  • RNA from the liver were homogenized in Trizol and subsequently purified using the Qiagen RNeasy Minelute Cleanup Kit (selectively removes most of the molecules smaller than 200 nucleotides), which also included a DNase treatment.
  • the total mRNA concentration was quantified using a spectrophotometer. In all cases, the A260 / 280 ratio was between 1.8 and 2.
  • Complementary DNA synthesis was carried out by reverse transcription using the Transcriptor Reverse Transcriptase kit (RT Transcriptor, Roche Diagnostic).
  • RT-qPCR real-time PCR
  • ABI PRISM® 7300 Real-Time PCR System (Applied Biosystems) and TaqMan probes were used.
  • Example 6 Effects of chronic OLHHA treatment on gene expression of enzymes involved in lipid metabolism in the liver of Zucker rats.
  • the mRNA expression of the enzymes involved in the pathways for lipogenesis (FAS and HMG-CoAR) or fatty acid oxidation (ACOX) were analyzed by RT-qPCR in the liver of Zucker rats chronically treated with OLHHA ( Figure 6).
  • Gene expression levels of these enzymes showed significant changes as a result of the treatment.
  • OLHHA produced a significant decrease in the enzymes involved in the biosynthesis of fatty acids (Figure 6A) and cholesterol biosynthesis ( Figure 6B).
  • the compound induced a significant increase in ACOX ( Figure 6C), the enzyme involved in ⁇ -oxidation.
  • the data were analyzed by two-way ANOVA (genotype and treatment) and Bonferroni post-hoc analysis. * p ⁇ 0.05 and *** p ⁇ 0.001 denote significant differences compared to the group treated with corresponding vehicle. # p ⁇ 0.01 and # p ⁇ 0.001 denote significant differences compared to the thin group treated with the vehicle.
  • Example 7 Effects of chronic treatment with OLHHA on gene expression of INSIG2 and NAPE-PLD in the liver of Zucker rats.
  • the hERG channel test was used to identify if OLHHA may have potential to cause cardiotoxicity (Figure 8).
  • a functional test was used based on the use of a fluorescent probe (FluxORTM, Invitrogen) that emits fluorescence after binding to thallium ions (Beacham et al. 2010).
  • FluxORTM is protected by AM groups that prevent fluorescence outside the cell. When it enters the cell, the cytosol esterases remove the AM groups, and the FluxORTM will go into its active form in which it is able to bind the thallium, which passes into the cytoplasm through the hERG channel, resulting in the emission of fluorescence.
  • HEK293 cells expressing the hERG channel were seeded in black 96-well plates treated with poly-D-lysine and left to incubate for 24 h. After this time, the plates were washed with assay buffer (165 mM NaCI, 4.5 mM KCI, 2 mM CaCI2, 1 mM MgCl2, 10 mM Hepes and 10 mM glucose, pH 7.4). Then 20 ⁇ of FluxORTM dissolved in assay buffer was added. The fluorochrome was allowed to incubate with the cells for 1 h at room temperature.
  • assay buffer 165 mM NaCI, 4.5 mM KCI, 2 mM CaCI2, 1 mM MgCl2, 10 mM Hepes and 10 mM glucose, pH 7.4
  • the plates were then washed with 50 ⁇ of assay buffer and the OLHHA compound was added at a 1: 200 dilution (2 ⁇ of OLHHA / 400 ⁇ of test buffer) using an EP3 station. Of the mixture, 20 ⁇ were pipetted to 3 cell plates, being tested in triplicate in 12-point curves (1: 2 dilutions) at a maximum concentration of 150 ⁇ .
  • the plates were incubated with OLHHA 30 minutes and then read in a FLIPRTETRA, which added 5 ⁇ of stimulus buffer (TI2S04 + K2S04), and performed the fluorescence reading for 120 s, allowing to analyze the kinetics of the channel.
  • OLHHA In studies with HEK-293 cells expressing hERG, OLHHA showed no activity, finding an IC 50 greater than 150 ⁇ compared to standard control inhibitors (IC 50 values for amiodarone, 1.7 M; bepridil, 2.2 M ; haloperidol, 1.9 ⁇ ; terfenadine, 1.0 ⁇ ). Therefore, OLHHA is a drug with hERG inhibitory activity and can be considered a safe drug devoid of cardiotoxicity.
  • OLHHA has no cardiotoxic effects.
  • Cytochromes P450 are a family of enzymes that play an important role in drug metabolism. The evaluation of the potential of a compound to inhibit a specific CYP enzyme is important when knowing the co-administration of compounds, which can result in one or both inhibiting the metabolism of the other. This can affect plasma levels in vivo and potentially lead to adverse reactions or toxicity. In vitro cytochrome P450 inhibition data is useful in designing strategies to investigate clinical studies of drug-drug interaction.
  • OLHHA For the preparation of OLHHA, it was stored in optimal conditions (at 4 ° C, protected from light) until it was used. OLHHA in solid state (powder) was dissolved in DMSO at 30 mM. and it was serially diluted with a dilution factor of 2 to obtain 8 concentrations. It is known that CYPs are inhibited by a variety of organic solvents and the effects of this inhibition may vary depending on the type and concentration of the solvent. Therefore, when DMSO is used as a solvent, the recommended concentration is 0.35% or less. However, acetonitrile is tolerated by most human CYPs. With this in mind, serial dilutions of DMSO compound were diluted with acetonitrile.
  • OLHHA can therefore be considered a moderate / weak CYP inhibitor, indicating a good pharmacokinetic profile of no interaction with other drugs and adverse effects.
  • Example 10 Histological evaluation of the effect of chronic OLHHA treatment on fatty liver in obese Zucker rats.
  • treatment with OLHHA increased the level of mRNA of the hepatic fatty acid binding protein (L-FABP), involved in transport and metabolism. of lipids.
  • L-FABP hepatic fatty acid binding protein

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Abstract

Uso de amidas de ácidos grasos con fenilalquilaminas y de una composición farmacéutica que comprende al menos uno de estos compuestos en la prevención y/o tratamiento del hígado graso o de una enfermedad o condición patológica causada por hígado graso, alcohólico o no alcohólico y, en particular, para la prevención y/o tratamiento de la esteatohepatitis alcohólica o esteatohepatitis no alcohólica(NASH).

Description

Amidas de ácidos grasos para la prevención y/o tratamiento de la esteatohepatitis.
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se encuentra dentro del campo de la medicina y la farmacia, y se refiere a una nueva serie de amidas de ácidos grasos con fenilalquilaminas y sus sales, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables, y más concretamente, se refiere al uso del compuesto N-(1-(3,4-dihidroxifenil)propan-2-il)oleamida (OLHHA) en la elaboración de un medicamento para la prevención y/o tratamiento de la enfermedad por hígado graso, preferiblemente no alcohólica (NAFLD) y, en particular, en la elaboración de un medicamento para la prevención y/o tratamiento de la esteatohepatitis, preferiblemente esteatohepatitis no alcohólica (NASH). El tratamiento permite reducir la masa grasa hepática, lo que conduce a una mejoría en la salud del paciente.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La esteatohepatitis es una enfermedad hepática producida por la acumulación de lípidos en los hepatocitos, y es una de las principales causas de morbilidad hepática en todo el mundo. Generalmente, las esteatohepatitis se diferencian etiológicamente en dos grupos, en función de la presencia del principal factor único conocido que la desencadena: el consumo abusivo de alcohol. Por tanto diferenciamos las esteatohepatitis alcohólica y la no alcohólica (non alcoholic steatohepatitis, NASH por sus siglas en inglés). Esta última es una enfermedad común del hígado. A menudo es "silenciosa", es decir, no presenta síntomas. La NASH se parece a las enfermedades del hígado causadas por el consumo de alcohol, pero se presenta en personas que beben poco o nada de alcohol.
La característica principal de la NASH es grasa en el hígado con inflamación y daño. La mayoría de las personas que padece NASH se siente bien. No saben que tienen un problema en el hígado. La NASH puede ser grave y desembocar en cirrosis. Con la cirrosis, el hígado queda dañado para siempre, forma cicatrices y deja de funcionar correctamente.
La NASH afecta entre el 2 y el 5 % de las personas que viven en los Estados Unidos. Otro porcentaje, del 10 al 20 %, de personas, tiene grasa en el hígado sin presentar inflamación ni daño en el mismo. Esta afección médica se llama "hígado graso". No es normal tener grasa en el hígado. Sin embargo, tener grasa en el hígado probablemente no cause mucho daño, ni daño permanente, por sí sola. Con un análisis de sangre, un ultrasonido (ecografía) del hígado o una prueba similar se puede observar la presencia de grasa. Si los resultados del análisis de sangre, la ecografía u otras pruebas muestran la posibilidad de que haya grasa en el hígado, la
l enfermedad se llama "enfermedad de hígado graso no alcohólica" (non alcoholic fatty liver disease, NAFLD por sus siglas). Una biopsia del hígado detectará si alguien tiene NASH o NAFLD.
La NASH es cada vez más común. Esto puede deberse a la mayor prevalencia de obesidad entre la gente que vive en los Estados Unidos. En los últimos 10 años, se duplicó la cantidad de adultos que se han convertido en obesos y se triplicó en niños. La obesidad también contribuye a la diabetes y a un nivel alto de colesterol en la sangre, lo cual puede complicar la salud de alguien con NASH. En España, las cifras muestran prevalencias superiores al 20%, siendo especialmente prevalente en hombres, en los que se asocia a síndrome metabólico, y en niños con obesidad. En los niños esta prevalencia se ha visto incrementada por la creciente epidemia de sobrepeso en la infancia (Gelpi Méndez et al., 2014. Arch. Prev. Riesgos Labor. 17(2), 84-90; Navarro-Jaraboef al., 2013. J. Gastroenterol. Hepatol. 28(9): 1532-8; Caballería et al., 2012. Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 24(9): 1007-11)
Actualmente no hay un tratamiento específico para la NASH. Las recomendaciones más importantes para las personas que padecen esta enfermedad son:
1. bajar de peso (si son obesas o tienen sobrepeso).
2. consumir una dieta balanceada y saludable.
3. aumentar la actividad física.
4. evitar el consumo de alcohol. 5. evitar el consumo de medicinas innecesarias.
Seguir estas recomendaciones prevenir el daño hepático inicial o bien revertirlo en los estadios más iniciales. También son útiles para otras afecciones médicas, como enfermedades del corazón, diabetes y colesterol alto. Las personas deben hacer un gran esfuerzo por mantener un peso corporal saludable. La pérdida de peso puede mejorar los resultados de las pruebas del hígado en personas con NASH. Bajar de peso puede incluso revertir la enfermedad en alguna medida. Los investigadores están tratando de averiguar cuántos kilogramos debe bajar una persona con NASH para mejorar el hígado. También desean saber si bajar de peso tiene efectos a largo plazo.
Las personas con NASH a menudo padecen de otras enfermedades, como diabetes, presión arterial alta o dislipemia (niveles de triglicéridos y/o colesterol superiores a lo normal). Estas afecciones médicas deben tratarse con medicinas y controlarse adecuadamente. Las personas no deben dejar de tratar otras afecciones simplemente porque padecen NASH o tienen niveles altos de enzimas del hígado. Hay dos tratamientos experimentales para personas con NASH: a) Antioxidantes, como vitamina E, selenio y betaína: Se desconoce si estas sustancias ayudan a tratar la enfermedad, pero los resultados de los estudios estarán disponibles en los próximos años.
b) Nuevos medicamentos para el tratamiento de la diabetes: éstas incluso se utilizan en personas sin diabetes. Ello se debe a que la mayoría de las personas con NASH tiene resistencia a la insulina. Esto significa que la insulina normalmente presente en la sangre no controla la glucosa y los ácidos grasos de manera eficaz. Estos nuevos medicamentos mejoran la sensibilidad del organismo a la insulina.
Es necesario, por tanto, desarrollar un tratamiento específico para el NASH.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
Un primer aspecto de la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula general (I) (también referido como el compuesto de la invención):
Figure imgf000004_0001
(I) donde
X e Y pueden ser iguales o diferentes de forma independiente y se seleccionan entre H, halógeno y metilo; n es un número entero desde 1 a 4; y R2 pueden ser iguales o diferentes de forma independiente y se seleccionan entre H y alquilo C C6 o pueden estar unidos por un enlace simple entre los dos átomos de oxígeno, formando un nuevo ciclo;
R3 se selecciona entre H, alquilo C C6 y alquenilo C C4; R4 se selecciona entre H, halógeno y alquilo C C4;
R5 es un compuesto de fórmula general (II):
Figure imgf000005_0001
(II)
donde:
R6 se selecciona entre H y alquilo C C4; R7 se selecciona entre alquilo C8-C30 y alquenilo C8-C30; o cualquiera de sus sales, preferiblemente cualquier sal farmacéuticamente aceptable, ésteres, tautómeros, polimorfos, hidratos farmacéuticamente aceptables, o un isómero, profármacos, derivados, solvatos o análogos, o cualquiera de sus combinaciones, en la elaboración de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento del hígado graso o de una enfermedad o condición patológica causada por hígado graso. Alternativamente, se refiere al compuesto de la invención o cualquiera de sus sales, preferiblemente cualquier sal farmacéuticamente aceptable, ésteres, tautómeros, polimorfos, hidratos farmacéuticamente aceptables, o un isómero, profármacos, derivados, solvatos o análogos, o cualquiera de sus combinaciones, para su uso en la prevención, alivio y/o tratamiento del hígado graso o de una enfermedad o condición patológica causada por hígado graso.
En una realización preferida de este aspecto de la invención, la enfermedad causada por hígado graso es la esteatohepatitis. En una realización preferida de este aspecto de la invención, el compuesto se usa en la elaboración de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento de una enfermedad causada por hígado graso no alcohólico (NAFLD), más preferiblemente esteaotohepatitis no alcohólica (NASH).
En una realización preferida de este aspecto de la invención, X e Y pueden ser iguales o diferentes de forma independiente y se seleccionan entre H y CH3. En una realización preferida de este aspecto de la invención, n es un número entero seleccionado entre 1 ó 3, más preferiblemente 1.
En otra realización preferida de este aspecto de la invención, F y R2 pueden ser iguales o diferentes de forma independiente y se seleccionan entre H y CH3 o pueden estar unidos por un enlace simple entre los dos átomos de oxígeno, formando un nuevo ciclo. En otra realización preferida de este aspecto de la invención R3 se selecciona entre H y alquilo C1-C3, y más preferiblemente es H .
En otra realización preferida de este aspecto de invención, R4 se selecciona entre H y CH3, y más preferiblemente es CH3.
En otra realización preferida de este aspecto de la invención, R5 es un compuesto de fórmula (II):
Figure imgf000006_0001
(ll)
donde R6 se selecciona entre H y CH3 y R7 es un grupo alquenilo C15-C25.
En otra realización preferida de este aspecto de la invención, R7 tiene un número de insaturaciones entre 1 y 6, más preferiblemente entre 1 y 4.
En otra realización preferida de la invención, el compuesto de fórmula general (I) se refiere a un compuesto que se selecciona del siguiente grupo:
Figure imgf000007_0001
Figure imgf000007_0002
Figure imgf000007_0003
Fórmula (VI)
Figure imgf000008_0001
Fórmula (VII)
Figure imgf000008_0002
Fórmula (VIII)
Figure imgf000008_0003
Fórmula (IX)
Figure imgf000008_0004
Fórmula (X)
Figure imgf000009_0001
Figure imgf000010_0001
Fórmula (XV) o cualquiera de sus sales, preferiblemente una sal farmacéuticamente aceptable, ésteres, tautómeros, polimorfos, hidratos farmacéuticamente aceptables, o un isómero, profármacos, derivados, solvatos o análogos, o cualquiera de sus combinaciones, o cualquiera de sus combinaciones.
En una realización preferida de este aspecto de la invención, el compuesto es el Λ/-(1-(3,4- dihidroxifenil) propan-2-il) oleamida (OLHHA).
Figure imgf000010_0002
Un segundo aspecto de la invención se refiere al uso de una composición farmacéutica que comprenden al menos un compuesto de la invención, o un tautómero, una sal farmacéuticamente aceptable, un derivado o un profármaco del mismo, en la elaboración de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento de una enfermedad causada por hígado graso. Alternativamente, se refiere una composición farmacéutica que comprenden al menos un compuesto de la invención o cualquiera de sus sales, preferiblemente cualquier sal farmacéuticamente aceptable, ésteres, tautómeros, polimorfos, hidratos farmacéuticamente aceptables, o un isómero, profármacos, derivados, solvatos o análogos, o cualquiera de sus combinaciones, para su uso para la prevención, alivio y/o tratamiento de una enfermedad causada por hígado graso. En una realización preferida de este aspecto, la composición de la invención además comprende un transportador o carrier farmacéuticamente aceptable, un excipiente y/o un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En una realización preferida de este aspecto de la invención la enfermedad causada por hígado graso es la esteatohepatitis. En otra realización preferida de este aspecto de la invención, la composición farmacéutica de la invención se usa la elaboración de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento de una enfermedad causada por hígado graso no alcohólico (NAFLD), preferiblemente esteatohepatitis no alcohólica (NASH).
En otra realización preferida de este aspecto de la invención, la composición farmacéutica de la invención se usa para la prevención, alivio o tratamiento de una enfermedad causada por hígado graso alcohólico (AFLD; Alcoholic Fatty Liver Disease), preferiblemente esteatohepatitis alcohólica (ASH; alcoholic steatohepatitis).
En otra realización preferida, la composición farmacéutica además comprende otro principio activo.
Un tercer aspecto de la invención se refiere a una composición alimentaria o bien una composición nutracéutica o bien una composición del tipo "medical food", de ahora en adelante composición alimentaria de la invención, que comprende al menos uno de los compuestos de fórmula (I).
Un cuarto aspecto de la invención se refiere al uso de la composición alimentaria de la invención para la prevención, alivio o tratamiento del hígado graso o de una enfermedad o condición patológica causada por hígado graso, preferiblemente esteatohepatitis en mamíferos, y más preferiblemente en seres humanos. Alternativamente, se refiere al uso de la composición alimentaria de la invención, para la prevención y/o tratamiento del hígado graso o de una enfermedad o condición patológica causada por hígado graso, preferiblemente la esteatohepatitis. En una realización preferida de este aspecto de la invención, la composición alimentaria de la invención se usa para la prevención, alivio o tratamiento de una enfermedad causada por hígado graso no alcohólico (NAFLD; Non Alcoholic Fatty Liver Disease), preferiblemente esteatohepatitis no alcohólica (NASH; Non-alcoholic steatohepatitis). En otra realización preferida de este aspecto de la invención, la composición alimentaria de la invención se usa para la prevención, alivio o tratamiento de una enfermedad causada por hígado graso alcohólico (AFLD; Alcoholic Fatty Liver Disease), preferiblemente esteatohepatitis alcohólica (ASH; alcoholic steatohepatitis). Otro aspecto de la invención se refiere a un método para la prevención, alivio o tratamiento de un sujeto, preferiblemente humano, que padezca una enfermedad causada por hígado graso alcohólico (AFLD; Alcoholic Fatty Liver Disease), preferiblemente esteatohepatitis alcohólica
(ASH; alcoholic steatohepatitis), o una enfermedad causada por hígado graso no alcohólico
(NAFLD; Non Alcoholic Fatty Liver Disease), preferiblemente esteatohepatitis no alcohólica (NASH; Non-alcoholic steatohepatitis), que comprende la administración de la composición alimentaria de la invención o bien de la composición farmacéutica de la invención.
DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
Figura 1. Efectos del tratamiento crónico con OLHHA sobre la ganancia del peso corporal y la ingesta en ratas Zucker.
Figura 2. Efectos del tratamiento crónico con OLHHA sobre el contenido de grasa en hígado y el nivel de triglicéridos en plasma en ratas Zucker. Figura 3. Efectos del tratamiento crónico con OLHHA sobre el nivel de transaminasas en ratas obesas.
Figura 4. Efectos del tratamiento crónico con OLHHA sobre el nivel de citoquinas pro- inflamatorias en ratas obesas.
Figura 5. Efectos del tratamiento crónico con OLHHA sobre el nivel de proteínas plasmáticas relacionadas con la función renal en ratas obesas.
Figura 6. Efectos del tratamiento crónico con OLHHA sobre la expresión génica de enzimas implicadas en el metabolismo de lípidos en el hígado de ratas Zucker.
Figura 7. Efectos del tratamiento crónico con OLHHA sobre la expresión génica de INSIG2 y NAPE-PLD en el hígado de ratas Zucker. Figura 8. Cardiotoxicidad del OLHHA.
Figura 9. Evaluación histológica del efecto del tratamiento crónico con OLHHA sobre el hígado graso en ratas Zucker obesas. (A, B) Hematoxilina-eosina; (C, D) Rojo oleoso.
Figura 10. Efecto del tratamiento crónico con OLHHA sobre la expresión de Caspasa-3 en el hígado de ratas Zucker obesas. (A, B, C) Inmunohistoquímica y cuantificación de las células positivas para la Caspasa-3 activada; (D, E, F) Inmunohistoquímica y cuantificación de las células positivas para la Caspasa-3 total.
Figura 11. Efecto del tratamiento crónico con OLHHA sobre la expresión génica de la proteína L-FABP en el hígado de ratas Zucker (A).
Figura 12. Efecto del tratamiento crónico con OLHHA sobre los niveles de proteína de las enzimas implicadas en el metabolismo lipídico en el hígado de ratas Zucker obesas. (A) FAS; (B) HMG-CoAR; (C) L-FABP; (D) INSIG2. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
Los resultados que se presentan en la invención muestran que el compuesto: Λ/-(1-(3,4 dihidroxifenil)propan-2-il)oleamida (OLHHA), aminora el hígado graso en un modelo genético de obesidad tal como las ratas Zucker, lo que sugiere el papel hepato-protector de este compuesto. Las ratas Zucker obesas mostraron niveles altos de triglicéridos en suero e hígado graso, lo que se confirma como una elevación significativa de los triglicéridos circulantes y del contenido total de grasa del hígado en comparación con los animales delgados. Con la administración del compuesto de la presente invención, se generó una reducción tanto de los niveles de triglicéridos en el suero como de la acumulación de lípidos en el hígado de ratas Zucker obesas tratadas con OLHHA. Este efecto se ha asociado con cambios en la expresión de ARNm de los genes relacionados con el metabolismo de lípidos en el hígado. Es decir, OLHHA disminuyó la expresión de genes de enzimas lipogénicos, incluyendo la sintasa de ácidos grasos (FAS) y la reductasa 3-hidroxi-3-metil-glutaril-CoA (HMG-CoAR) y aumentó la expresión de genes de enzimas que promueve la oxidación de ácidos grasos, tales como acil- CoA oxidasa (ACOX). El descenso en el nivel de ARNm de la HMG-CoAR se relacionó con un aumento en la expresión génica del gen 2 inducido por la insulina (INSIG2), que está implicado en la regulación de la biosíntesis del colesterol. Finalmente, OLHHA produjo una disminución en la expresión del gen de la enzima pro-lipogénica relacionada con el sistema endocannabinoide A/-acil fosfatidiletanolamina fosfolipasa D (la NAPE-PLD). También, OLHHA mostró un perfil farmacológico seguro porque no interactúa con el gen humano relacionado ether-á-go-go (hERG) de canales de potasio cardiaco y no tenía o tuvo efectos moderados sobre la actividad de las distintas isoformas del citocromo P450 hepático.
Es decir, la invención se refiere al uso de amidas de ácidos grasos conjugadas con fenilalquilaminas (anfetaminas, dopamina, etc.) en la elaboración de un medicamento para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad causada por hígado graso, preferiblemente esteatohepatitis.
USO MÉDICO DEL COMPUESTO DE LA INVENCIÓN
Por lo tanto, un primer aspecto de la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula general (I) (también referido como el compuesto de la invención):
Figure imgf000014_0001
(l) donde
X e Y pueden ser iguales o diferentes de forma independiente y se seleccionan entre H, halógeno y metilo; n es un número entero desde 1 a 4; y R2 pueden ser iguales o diferentes de forma independiente y se seleccionan entre H y alquilo C C6 o pueden estar unidos por un enlace simple entre los dos átomos de oxígeno, formando un nuevo ciclo; R3 se selecciona entre H, alquilo C C6 y alquenilo C C4;
R4 se selecciona entre H, halógeno y alquilo C C4;
R5 es un compuesto de fórmula general (II):
Figure imgf000014_0002
(II)
donde:
R6 se selecciona entre H y alquilo C C4; R7 se selecciona entre alquilo C8-C30 y alquenilo C8-C30; o cualquiera de sus sales, preferiblemente cualquier sal farmacéuticamente aceptable, ésteres, tautómeros, polimorfos, hidratos farmacéuticamente aceptables, o un isómero, profármacos, derivados, solvatos o análogos, o cualquiera de sus combinaciones, en la elaboración de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento del hígado graso o de una enfermedad o condición patológica causada por hígado graso.
En una realización preferida de este aspecto de la invención, la enfermedad causada por hígado graso es la esteatohepatitis.
En una realización preferida de este aspecto de la invención, el compuesto se usa en la elaboración de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento de una enfermedad causada por hígado graso no alcohólico (NAFLD), más preferiblemente esteaotohepatitis no alcohólica (NASH)
En la presente invención "enfermedad causada por hígado graso no alcohólico (NAFLD)" describe una amplia gama de condiciones causadas por una acumulación excesiva de grasa en forma de triglicéridos (esteatosis) en el hígado (histológicamente > 5% de los hepatocitos). Además del exceso de grasa (esteatohepatitis), un subgrupo de pacientes con NAFLD presenta daño e inflamación de los hepatocitos. Esta última condición es denominada "esteatohepatitis no alcohólica (NASH)", es virtualmente indistinguible histológicamente de la esteatohepatitis alcohólica (ASH). Mientras que la esteatosis simple que se observa en NAFLD no entraña un aumento de la morbilidad o mortalidad a corto plazo, la progresión de esta condición a NASH aumenta drásticamente el riesgo de cirrosis, fallo hepático, y carcinoma hepatocelular (HCC). La cirrosis debida a NASH es una razón cada vez más frecuente de trasplante hepático. Si bien la morbilidad y la mortalidad por causa hepática están muy aumentadas en los pacientes con NASH, la correlación es aún mayor con la morbilidad y mortalidad por patología cardiovascular.
El término "alquilo" se refiere, en la presente invención, a radicales de cadenas hidrocarbonadas, lineales o ramificadas, que tienen de 1 a 10 átomos de carbono, preferiblemente de 1 a 4, y que se unen al resto de la molécula mediante un enlace sencillo, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, /'-propilo, n-butilo, tere-butilo, sec-butilo, n-pentilo, n-hexilo, etc. Los grupos alquilo pueden tener opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como halógeno, hidroxilo, alcoxilo, carboxilo, carbonilo, ciano, acilo, alcoxicarbonilo, amino, nitro, mercapto y alquiltio.
El término "alquenilo" se refiere a radicales de cadenas hidrocarbonadas que contienen uno o más enlaces carbono-carbono dobles, por ejemplo, vinilo, 1-propenilo, alilo, isoprenilo, 2- butenilo, 1 ,3-butadienilo, etc. Los radicales alquenilos pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como halo, hidroxilo, alcoxilo, carboxilo, ciano, carbonilo, acilo, alcoxicarbonilo, amino, nitro, mercapto y alquiltio.
El término "halógeno" se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo.
En una realización preferida de este aspecto de la invención, X e Y pueden ser iguales o diferentes de forma independiente y se seleccionan entre H y CH3.
En una realización preferida de este aspecto de la invención, n es un número entero seleccionado entre 1 ó 3, más preferiblemente 1.
En otra realización preferida de este aspecto de la invención, y R2 pueden ser iguales o diferentes de forma independiente y se seleccionan entre H y CH3 o pueden estar unidos por un enlace simple entre los dos átomos de oxígeno, formando un nuevo ciclo.
En otra realización preferida de este aspecto de la invención R3 se selecciona entre H y alquilo C1-C3, y más preferiblemente es H.
En otra realización preferida de este aspecto de invención, R4 se selecciona entre H y CH3, y más preferiblemente es CH3.
En otra realización preferida de este aspecto de la invención, R5 es un compuesto de fórmula
(II):
Figure imgf000016_0001
(ll)
donde R6 se selecciona entre H y CH3 y R7 es un grupo alquenilo C15-C25.
En otra realización preferida de este aspecto de la invención, R7 tiene un número de insaturaciones entre 1 y 6, más preferiblemente entre 1 y 4.
En otra realización preferida de la invención, el compuesto de fórmula general (I) se refiere a un compuesto que se selecciona del siguiente grupo:
Figure imgf000017_0001
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Figure imgf000017_0003

Figure imgf000018_0001
Fórmula (VII)
Figure imgf000018_0002
Fórmula (VIII)
Figure imgf000018_0003
Fórmula (IX)
Figure imgf000018_0004
Fórmula (X)
Figure imgf000019_0001
10
Figure imgf000020_0001
Fórmula (XV)
o cualquiera de sus sales, preferiblemente cualquier sal farmacéuticamente aceptable, ésteres, tautómeros, polimorfos, hidratos farmacéuticamente aceptables, o un isómero, profármacos, derivados, solvatos o análogos, o cualquiera de sus combinaciones, o cualquiera de sus combinaciones.
En una realización preferida de este aspecto de la invención, el compuesto es el Λ/-(1-(3,4- dihidroxifenil)propan-2-il)oleamida (OLHHA).
Figure imgf000020_0002
Fórmula (III)
Los compuestos de la presente invención representados por la fórmula (I) pueden incluir isómeros, dependiendo de la presencia de enlaces múltiples, incluyendo isómeros ópticos o enantiómeros, dependiendo de la presencia de centros quirales. Los isómeros, enantiómeros o diastereoisómeros individuales y las mezclas de los mismos caen dentro del alcance de la presente invención, es decir, el término isómero también se refiere a cualquier mezcla de isómeros, como diastereómeros, racémicos, etc., incluso a sus isómeros ópticamente activos o las mezclas en distintas proporciones de los mismos. Los enantiómeros o diastereoisómeros individuales, así como sus mezclas, pueden separarse mediante técnicas convencionales.
Asimismo, dentro del alcance de esta invención se encuentran los profármacos de los compuestos de fórmula (I). El término "prodroga" o "profármaco" tal como aquí se utiliza incluye cualquier derivado de un compuesto de fórmula (I) -por ejemplo y no limitativamente: ésteres (incluyendo ésteres de ácidos carboxílicos, ésteres de aminoácidos, ésteres de fosfato, ésteres de sulfonato de sales metálicas, etc.), carbamatos, amidas, etc.- que al ser administrado a un individuo puede ser transformado directa o indirectamente en dicho compuesto de fórmula (I) en el mencionado individuo. Ventajosamente, dicho derivado es un compuesto que aumenta la biodisponibilidad del compuesto de fórmula (I) cuando se administra a un individuo o que potencia la liberación del compuesto de fórmula (I) en un compartimento biológico. La naturaleza de dicho derivado no es crítica siempre y cuando pueda ser administrado a un individuo y proporcione el compuesto de fórmula (I) en un compartimento biológico de un individuo. La preparación de dicho profármaco puede llevarse a cabo mediante métodos convencionales conocidos por los expertos en la materia.
Tal como aquí se utiliza, el término "derivado" incluye tanto a compuestos farmacéuticamente aceptables, es decir, derivados del compuesto de fórmula (I) que pueden ser utilizados en la elaboración de un medicamento o composiciones alimentarias, como derivados farmacéuticamente no aceptables, ya que éstos pueden ser útiles en la preparación de derivados farmacéuticamente aceptables.
Los compuestos de la invención pueden estar en forma cristalina como compuestos libres o como solvatos. En este sentido, el término "solvato", tal como aquí se utiliza, incluye tanto solvatos farmacéuticamente aceptables, es decir, solvatos del compuesto de fórmula (I) que pueden ser utilizados en la elaboración de un medicamento, como solvatos farmacéuticamente no aceptables, los cuales pueden ser útiles en la preparación de solvatos o sales farmacéuticamente aceptables. La naturaleza del solvato farmacéuticamente aceptable no es crítica siempre y cuando sea farmacéuticamente aceptable. En una realización particular, el solvato es un hidrato. Los solvatos pueden obtenerse por métodos convencionales de solvatación conocidos por los expertos en la materia.
Para su aplicación en terapia, los compuestos de fórmula (I), sus sales, profármacos o solvatos, se encontrarán, preferentemente, en una forma farmacéuticamente aceptable o sustancialmente pura, es decir, que tiene un nivel de pureza farmacéuticamente aceptable excluyendo los aditivos farmacéuticos normales tales como diluyentes y portadores, y no incluyendo material considerado tóxico a niveles de dosificación normales. Los niveles de pureza para el principio activo son preferiblemente superiores al 50%, más preferiblemente superiores al 70%, y todavía más preferiblemente superiores al 90%. En una realización preferida, son superiores al 95% de compuesto de fórmula (I), o de sus sales, solvatos o profármacos.
COMPOSICIÓN FARMACÉUTICA Y FORMA FARMACÉUTICA DE LA INVENCIÓN
Un segundo aspecto de la invención se refiere al uso de una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de la invención, o un tautómero, una sal farmacéuticamente aceptable, un derivado o un profármaco del mismo, junto con un transportador o carrier farmacéuticamente aceptable, un excipiente o un vehículo, en la elaboración de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento del hígado graso o de una enfermedad o condición patológica causada por hígado graso.
En una realización preferida de este aspecto de la invención la enfermedad causada por hígado graso es la esteatohepatitis.
En otra realización preferida de este aspecto de la invención, la composición farmacéutica de la invención se usa la elaboración de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento de una enfermedad causada por hígado graso no alcohólico (NAFLD), preferiblemente esteatohepatitis no alcohólica (NASH). En otra realización preferida de este aspecto de la invención, la composición farmacéutica de la invención se usa para la prevención, alivio o tratamiento de una enfermedad causada por hígado graso alcohólico (AFLD; Alcoholic Fatty Liver Disease), preferiblemente esteatohepatitis alcohólica (ASH; alcoholic steatohepatitis). Los adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden ser utilizados en dichas composiciones son los adyuvantes y vehículos conocidos por los técnicos en la materia y utilizados habitualmente en la elaboración de composiciones terapéuticas.
En el sentido utilizado en esta descripción, la expresión "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a la cantidad del agente o compuesto capaz de desarrollar la acción terapéutica determinada por sus propiedades farmacológicas, calculada para producir el efecto deseado y, en general, vendrá determinada, entre otras causas, por las características propias de los compuestos, incluyendo la edad, estado del paciente, la severidad de la alteración o trastorno, y de la ruta y frecuencia de administración.
Los compuestos descritos en la presente invención, sus sales, profármacos y/o solvatos así como las composiciones farmacéuticas que los contienen pueden ser utilizados junto con otros fármacos, o principios activos, adicionales para proporcionar una terapia de combinación. Dichos fármacos adicionales pueden formar parte de la misma composición farmacéutica o, alternativamente, pueden ser proporcionados en forma de una composición separada para su administración simultánea o no a la de la composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal, profármaco o solvato del mismo.
Por tanto, en otra realización preferida, la composición farmacéutica además comprende otro principio activo. Más preferiblemente, el principio activo se selecciona de la lista que consiste en: vitamina E, vitamina C, betaína, /V-acetilcisteína, ácido ursodesoxicólico, y otros antioxidantes. Como se emplea aquí, el término "principio activo", "substancia activa", "substancia farmacéuticamente activa", "ingrediente activo" ó "ingrediente farmacéuticamente activo" significa cualquier componente que potencialmente proporcione una actividad farmacológica u otro efecto diferente en el diagnóstico, cura, mitigación, tratamiento, o prevención de una enfermedad, o que afecta a la estructura o función del cuerpo del hombre u otros animales. El término incluye aquellos componentes que promueven un cambio químico en la elaboración del fármaco y están presentes en el mismo de una forma modificada prevista que proporciona la actividad específica o el efecto.
Otro aspecto de la invención se refiere a una forma farmacéutica, de ahora en adelante forma farmacéutica de la invención, que comprende el compuesto de la invención o la composición de la invención.
En esta memoria se entiende por "forma farmacéutica" la mezcla de uno o más principios activos con o sin aditivos que presentan características físicas para su adecuada dosificación, conservación, administración y biodisponibilidad. En otra realización preferida de la presente invención, las composiciones y formas farmacéuticas de la invención son adecuadas para la administración oral, en forma sólida o líquida. Las posibles formas para la administración oral son tabletas, cápsulas, siropes o soluciones y pueden contener excipientes convencionales conocidos en el ámbito farmacéutico, como agentes agregantes (p.e. sirope, acacia, gelatina, sorbitol, tragacanto o polivinil pirrolidona), rellenos (p.e. lactosa, azúcar, almidón de maíz, fosfato de calcio, sorbitol o glicina), disgregantes (p.e. almidón, polivinil pirrolidona o celulosa microcristalina) o un surfactante farmacéuticamente aceptable como el lauril sulfato de sodio. Otras formas farmacéuticas pueden ser los sistemas coloidales, dentro de los cuales se incluyen nanoemulsiones, nanocápsulas y nanopartículas poliméricas. Las composiciones para administración oral pueden ser preparadas por métodos los convencionales de Farmacia Galénica, como mezcla y dispersión. Las tabletas se pueden recubrir siguiendo métodos conocidos en la industria farmacéutica.
Las composiciones y formas farmacéuticas se pueden adaptar para la administración parenteral, como soluciones estériles, suspensiones, o liofilizados de los productos de la invención, empleando la dosis adecuada. Se pueden emplear excipientes adecuados, como agentes tamponadores del pH o surfactantes.
Las formulaciones anteriormente mencionadas pueden ser preparadas usando métodos convencionales, como los descritos en las Farmacopeas de diferentes países y en otros textos de referencia. El término "medicamento", tal y como se usa en esta memoria, hace referencia a cualquier sustancia usada para prevención, diagnóstico, alivio, tratamiento o curación de enfermedades en el hombre y los animales.
La administración de los compuestos, composiciones o formas farmacéuticas de la presente invención puede ser realizada mediante cualquier método adecuado, como la infusión intravenosa y las vías oral, tópica o parenteral. La administración oral es la preferida por la conveniencia de los pacientes y por el carácter crónico de las enfermedades a tratar.
La cantidad administrada de un compuesto de la presente invención dependerá de la relativa eficacia del compuesto elegido, la severidad de la enfermedad a tratar y el peso del paciente. Sin embargo, los compuestos de esta invención serán administrados una o más veces al día, por ejemplo 1 , 2, 3 ó 4 veces diarias, con una dosis total entre 0.1 y 1000 mg/Kg/día. Es importante tener en cuenta que puede ser necesario introducir variaciones en la dosis, dependiendo de la edad y de la condición del paciente, así como modificaciones en la vía de administración. Los compuestos y composiciones de la presente invención pueden ser empleados junto con otros medicamentos en terapias combinadas. Los otros fármacos pueden formar parte de la misma composición o de otra composición diferente, para su administración al mismo tiempo o en tiempos diferentes.
COMPOSICIÓN ALIMENTARIA
Un tercer aspecto de la invención se refiere a una composición alimentaria tal y como una composición nutracéutica o una composición del tipo "medical food", de ahora en adelante composición alimentaria de la invención, que comprende al menos uno de los compuestos de fórmula (I).
La composición alimentaria de la invención comprende el compuesto de la invención en una cantidad eficaz para la prevención, alivio y/o tratamiento de una enfermedad causada por hígado graso no alcohólico (NAFLD), y preferiblemente para la prevención, alivio y tratamiento de la esteatohepatitis no alcohólica (NASH), en mamíferos, incluyendo un ser humano. Las composiciones alimentarias preferidas se seleccionan de la lista que consiste en: una bebida, leche, yogur, queso, leche fermentada , bebida de leche aromatizada, leche de soja, cereales precocinados, pan, pasteles, mantequilla, margarina, salsas, aceites para freír, aceites vegetales, aceite de maíz, aceite de oliva, aceite de soja, aceite de palma, aceite de girasol, aceite de semilla de algodón, condimentos, aderezos para ensaladas, zumos de frutas, jarabes, postres, glaseados y rellenos, productos congelados blandos, dulces, chicles y alimentos intermedios. La composición alimentaria de la invención puede ser un suplemento nutricional o dietético. En otra realización preferida, el suplemento nutricional o dietético comprende una composición estéril que contiene el compuesto de la invención, preferentemente provisto de un revestimiento resistente a los ácidos gástricos, siendo una composición de liberación retardada. En otra realización preferida, la composición alimentaria, incluyendo el compuesto de la invención y/o el suplemento nutricional o dietético comprende "portadores" apropiados tales como diluyentes, adyuvantes, excipientes o vehículos con los que se administra el compuesto de la invención. Excipientes apropiados adecuados incluyen, pero no se limitan a almidón, glucosa, fructosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, sulfato de calcio, gel de sílice , estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche descremada en polvo, glicerol, propileno, glicol, agua, etanol, y similares. Tales suplementos nutricionales se pueden utilizar para combatir problemas hepáticos, y ayudan a mantener la salud o un estilo de vida saludable al mamífero, preferiblemente un ser humano.
Un cuarto aspecto de la invención se refiere al uso de la composición alimentaria de la invención para la prevención, alivio o tratamiento del hígado graso o de una enfermedad o condición patológica causada por hígado graso, preferiblemente esteatohepatitis en mamíferos, preferiblemente seres humanos. Alternativamente, se refiere al uso de la composición alimentaria de la invención, para la prevención y/o tratamiento del hígado graso o de una enfermedad o condición patológica causada por hígado graso, preferiblemente la esteatohepatitis.
En una realización preferida de este aspecto de la invención, la composición alimentaria de la invención se usa para la prevención, alivio o tratamiento de una enfermedad causada por hígado graso no alcohólico (NAFLD), preferiblemente esteatohepatitis no alcohólica (NASH). En otra realización preferida de este aspecto de la invención, la composición alimentaria de la invención se usa para la prevención, alivio o tratamiento de una enfermedad causada por hígado graso alcohólico (AFLD; Alcoholic Fatty Liver Disease), preferiblemente esteatohepatitis alcohólica (ASH; alcoholic steatohepatitis). El término "tratamiento" tal como se entiende en la presente invención se refiere a combatir los efectos causados como consecuencia de una enfermedad o condición patológica de interés en un sujeto(preferiblemente mamífero, y más preferiblemente un humano) que incluye:
(i) inhibir la enfermedad o condición patológica, es decir, detener su desarrollo;
(ii) aliviar la enfermedad o la condición patológica, es decir, causar la regresión de la enfermedad o la condición patológica o su sintomatología;
(iii) estabilizar la enfermedad o la condición patológica. El término "prevención" tal como se entiende en la presente invención consiste en evitar la aparición de la enfermedad, es decir, evitar que se produzca la enfermedad o la condición patológica en un sujeto(preferiblemente mamífero, y más preferiblemente un humano), en particular, cuando dicho sujeto tiene predisposición por la condición patológica.
El procedimiento de obtención de un compuesto de fórmula (I) podría comprender las siguientes etapas: a) conjugación entre un compuesto de fórmula general (III) y cloroformiato de bencilo para dar lugar a un nuevo compuesto de fórmula general (IV), que comprende la siguiente reacción:
Figure imgf000026_0001
Temperatura ambiente
t = 1 hora evaporación
(III) (IV) donde R7 se selecciona entre alquilo C8-C30 y alquenilo C8-C30 y Rs se selecciona entre NH3, NH2-CH3, NH2-CH2-CH3, NH-(CH3)2, N-(CH3)3 NH-(CH2-CH3)2 y N-(CH2-CH3)3;
b) reacción del compuesto de fórmula general (IV) con un compuesto de fórmula general (V) para dar lugar al compuesto de fórmula general (I) usando dimetilformamida como disolvente:
Figure imgf000026_0002
(IV) (V) (I) donde X e Y pueden ser iguales o diferentes de forma independiente y se seleccionan entre H, halógeno y metilo; n es un número entero desde 1 a 4; y R2 pueden ser iguales o diferentes de forma independiente y se seleccionan entre H y alquilo C C6 o pueden estar unidos por un enlace simple entre los dos átomos de oxígeno, formando un nuevo ciclo;
R3 se puede seleccionar entre H, alquilo C C6 y alquenilo C C4;
R4 se puede seleccionar entre H, halógeno y alquilo C C4;
R6 se puede seleccionar entre H y alquilo C C4; R7 se puede seleccionar entre alquilo C8-C30 y alquenilo C8-C30;
R8 se puede seleccionar entre NH3, NH2-CH3, NH2-CH2-CH3, NH-(CH3)2, N-(CH3)3 NH-(CH2- CH3)2 y N-(CH2-CH3)3;
c) evaporación de la dimetilformamida y extracción con acetato de etilo y agua;
d) tratamiento de la fase orgánica con sulfato de sodio anhidro y evaporación del disolvente;
e) purificación del compuesto de fórmula (I) por cromatografía en columna de gel de sílice FLASH.
Los compuestos de fórmula general (I) fueron sintetizados de acuerdo con la metodología previamente descrita (C 7emMedC 7em.2010,5(10), 1781-1787).
A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.
EJEMPLOS DE LA INVENCIÓN Todos los experimentos se llevaron a cabo en ratas macho Zucker obesas (fa/fa) y delgadas (Fa/?) de 8-9 semanas de edad. Los animales se pusieron en jaulas individuales en una habitación con temperatura, humedad e iluminación (ciclos de 12 horas luz / oscuridad) controladas, y con acceso libre a comida y agua (dieta estándar de laboratorio). OLHHA se disolvió en un vehículo conteniendo un 5% de Tween80 en salino y se administró intraperitonealmente (i.p.) a una dosis de 5 mg/kg (volumen de 1 ml/kg peso corporal) al principio del ciclo de luz (09:00 h-10:00 h) durante 15 días consecutivos. Transcurridas 2h desde la última inyección, los animales fueron eutanizados usando pentobarbital sódico (50mg/kg, i.p.) y se extrajeron muestras de sangre e hígado. La sangre se centrifugó a 2100x g durante 8 min a 4°C y el plasma obtenido se guardó a -80°C para los posteriores análisis. Las muestras de hígado también se almacenaron a -80°C.
Ejemplo 1 . Efectos del tratamiento crónico con OLH HA sobre la ganancia del peso corporal y la ingesta en ratas Zucker.
Los animales recibieron diariamente una inyección (i.p.) de vehículo o de OLHHA (5 mg/kg) durante 15 días consecutivos. Para este experimento se usaron 8 ratas por grupo. La ganancia de peso corporal total (g) y la ingesta de alimentos acumulada (g/kg de peso corporal) se evaluaron diariamente.
En las ratas delgadas, el OLHHA produjo una inhibición significativa de la ganancia de peso corporal y una disminución significativa en la ingesta de alimentos acumulada que comenzó en el quinto día de tratamiento en comparación con ratas tratadas con vehículo (Figuras 1A, 1 B). En ratas obesas, el tratamiento no produjo ningún efecto sobre la ganancia de peso corporal y la ingesta de alimentos acumulada (Figuras 1 C, 1 D). Los resultados se expresan como medias ± SEM (n = 8 animales por grupo). Los datos se analizaron por ANOVA de dos vías (genotipo y el tratamiento) y análisis post-hoc de Bonferroni.*p<0.05, **p<0.01 y ***p<0.001 denotan diferencias significativas en comparación con el grupo tratado con vehículo.
Ejemplo 2. Efectos del tratamiento crónico con OLH HA sobre el contenido de grasa en hígado y el nivel de triglicéridos en plasma en ratas Zucker.
El contenido de grasa total en el hígado y el nivel de triglicéridos en plasma se evaluaron en ratas Zucker delgadas y obesas después de un tratamiento de 15 días con OLHHA (5 mg/kg, una vez al día). Las muestras para el análisis de lípidos se obtuvieron 2h después de la última inyección.
Para la cuantificación de la grasa hepática se siguió el método de Bligh & Dyer (Bligh and Dyer,
1959). Los lípidos totales fueron extraídos utilizando una mezcla extractiva compuesta por cloroformo: metanol en una proporción 2: 1 (v/v); además, como la mayoría de los lípidos contienen dobles enlaces sensibles a la oxidación, se añadió un 0.025% del antioxidante butilhidroxitolueno. Las muestras de hígado se homogeneizaron y se centrifugaron un par de veces a 2800x g durante 10 min a 4°C. Los lípidos, que estaban concentrados en la fase orgánica inferior, fueron extraídos y desecados en corriente de nitrógeno. El contenido de grasa se expresó como % del peso de tejido.
Para la determinación de triglicéridos circulantes se utilizó un kit comercial (Randox Laboratories) que se basa en un método colorimétrico que determina el contenido de triglicéridos tras una hidrólisis enzimática con lipasas.
Las ratas obesas mostraron un aumento de tres veces en el contenido total de grasa en el hígado en comparación con las ratas delgadas (Figura 2A), así como un marcado aumento en los triglicéridos (cinco veces) circulantes (Figura 2B). En ambos casos, el tratamiento con OLHHA previno de estos incrementos. Los resultados se expresan como medias ± SEM (n = 8 animales por grupo). Los datos se analizaron por ANOVA de dos vías (genotipo y el tratamiento) y análisis post-hoc de Bonferroni. *p<0.05 y ***p<0.001 denotan diferencias significativas en comparación con el grupo tratado con vehículo correspondiente. #p<0.001 denota diferencias significativas en comparación con el grupo delgado tratado con el vehículo.
OLHHA reduce los niveles de grasa en el hígado y de triglicéridos plasmáticos en animales obesos con hígado graso.
Ejemplo 3. Efectos del tratamiento crónico con OLHHA sobre el nivel de transaminasas hepáticas en ratas obesas.
Para la determinación de transaminasas hepáticas en suero se utilizaron kits comerciales y se analizaron en un analizador de bioquímica automático Hitachi 737.
La administración de 5 mg/kg (i.p.) de OLHHA durante 15 días produjo una disminución en los niveles de enzimas transaminasas: alaninoaminotransferasa (ALT) (Figura 3A) y la aspartatoaminotransferasa (AST) (Figura 3B) en animales obesos, resultando estadísticamente significativo en el caso de ALT (*p<0.05). Estas enzimas son indicadoras del daño a la célula hepática. Las ALT y AST son enzimas en las células hepáticas que permean hacia la circulación sanguínea cuando existe daño en la célula hepática. Se cree que la ALT es un indicador más específico de la inflamación hepática, mientras que la AST puede aparecer elevada en enfermedades de otros órganos, como el corazón o el músculo. La ALT y la AST son a menudo usadas para valorar el avance de la hepatitis crónica.
Respecto a la enzima gammaglutamiltranspeptidasa (GGt) (Figura 3C) no observamos efecto respecto al grupo tratado con vehículo. GGt es una enzima indicadora de obstrucción del sistema biliar, ya sea en el hígado o en los canales mayores de la bilis que se encuentran fuera de este órgano. La GGt se incrementa en una gran cantidad de trastornos que afectan el drenaje de la bilis, como cuando existe una enfermedad hepática causada por el alcohol o las drogas, que ocasiona un bloqueo del flujo de la bilis en los canales más pequeños dentro del hígado.
OLHHA mejora el perfil de transaminasas hepáticas en plasma con una caída de ALT y AST.
Ejemplo 4. Efectos del tratamiento crónico con OLHHA sobre el nivel de citoquinas pro- inflamatorias en ratas obesas.
Los niveles circulantes de IL-6 y TNF-α se midieron mediante ELISAs utilizando kits comerciales (Abcam).
La administración de 5 mg/kg (i.p.) de OLHHA durante 15 días indujo una caída de citoquinas pro-inflamatorias (Figura 4), concretamente sobre TNF alfa aunque no llegó a alcanzar un grado de significatividad. No obstante no se detectó cambios sobre los niveles plasmáticos de IL6. Numerosas patologías, incluida la obesidad y trastornos relacionados como la esteatosis hepáticas se caracterizan por presentar un perfil pro-inflamatorio a través de citoquinas y células inmunitarias.
OLHHA mejora el perfil pro-inflamatorio de animales obesos con una reducción de TNFa en plasma.
Ejemplo 5. Efectos del tratamiento crónico con OLHHA sobre el nivel de proteínas plasmáticas relacionadas con la función renal en ratas obesas.
Para la determinación de creatinina y urea en suero se utilizaron kits comerciales y se analizaron en un analizador de bioquímica automático Hitachi 737. La administración de 5 mg/kg (i.p.) de OLHHA durante 15 días no afectó a los niveles de creatinina (Figura 5A) pero provocó una importante disminución en los niveles de urea (***p<0.001) respecto a los animales tratados con vehículo (Figura 5B). Esta disminución en la concentración de urea se relaciona con una normalización de la actividad hepática y del catabolismo de proteínas. La creatinina y la urea son dos sustancias presentes en la sangre que suelen ser determinadas cuando se pretende hacer una evaluación de la función renal.
Medir la creatinina es una prueba simple y es el indicador más común de la función renal, de su capacidad de filtración. En cuanto a la urea, es el resultado final del metabolismo de las proteínas y se forma en el hígado a partir de la destrucción de las proteínas. OLHHA mejora la función renal a través de una reducción de los niveles plasmáticos incrementados de urea. Efectos del tratamiento crónico con OLHHA sobre la expresión de genes en el hígado de ratas
Zucker.
Para el aislamiento del ARN total del hígado, las muestras se homogeneizaron en Trizol y posteriormente se purificaron utilizando el RNeasy Minelute Cleanup Kit de Qiagen (elimina selectivamente la mayoría de las moléculas menores a 200 nucleótidos), que también incluyó un tratamiento con ADNasa. La concentración total de ARNm se cuantificó utilizando un espectrofotómetro. En todos los casos, la ratio A260/280 estaba entre 1.8 y 2. La síntesis del ADN complementario se llevó a cabo por transcripción reversa utilizando el kit Transcriptor Reverse Transcriptase (Transcriptor RT, Roche Diagnostic). Para la PCR a tiempo real (RT- qPCR) se utilizó un ABI PRISM® 7300 Real-Time PCR System (Applied Biosystems) y sondas TaqMan. La amplificación de un solo producto se confirmó mediante el análisis de las curvas de Melting. Los valores de cada muestra fueron normalizados respecto al gen constitutivo beta- actina. La cuantificación relativa fue calculada mediante el método AACt y normalizada al grupo control. Las sondas Taqman fueron obtenidas de la base de datos del genoma de la rata de Applied Biosystems (http://bioinfo.appliedbiosystems. com/genome-database/gene- expression.html):
Figure imgf000031_0001
Ejemplo 6. Efectos del tratamiento crónico con OLHHA sobre la expresión génica de enzimas implicadas en el metabolismo de lípidos en el hígado de ratas Zucker. La expresión del ARNm de las enzimas implicadas en las rutas para la lipogénesis (FAS y de la HMG-CoAR) o la oxidación de ácidos grasos (ACOX) se analizaron por RT-qPCR en el hígado de ratas Zucker tratadas crónicamente con OLHHA (Figura 6). Los niveles de expresión génica de estas enzimas mostraron cambios significativos como resultado del tratamiento. De hecho, OLHHA produjo una disminución significativa de las enzimas implicadas en la biosíntesis de ácidos grasos (Figura 6A) y en la biosíntesis de colesterol (Figura 6B). Por el contrario, el compuesto indujo un aumento significativo de la ACOX (Figura 6C), la enzima implicada en β- oxidación. Los resultados están expresados como medias ± SEM (n = 8 animales por grupo). Los datos se analizaron por ANOVA de dos vías (genotipo y el tratamiento) y análisis post-hoc de Bonferroni. *p<0.05 y ***p<0.001 denotan diferencias significativas en comparación con el grupo tratado con vehículo correspondiente. #p<0.01 y #p<0.001 denotan diferencias significativas en comparación con el grupo delgado tratado con el vehículo.
Ejemplo 7. Efectos del tratamiento crónico con OLHHA sobre la expresión génica de INSIG2 y NAPE-PLD en el hígado de ratas Zucker. La expresión del ARNm del factor regulador INSIG2 y de la enzima implicada en la biosíntesis de la anandamida, la NAPE-PLD, se analizaron por RT-qPCR en el hígado de ratas Zucker tratados crónicamente con OLHHA (figura 7). La expresión de INSIG2, un factor regulador de la biosíntesis de colesterol, se incrementó significativamente por OLHHA (Figura 7A), mientras que la expresión del gen de la NAPE-PLD, un factor pro-lipogénico relacionada con el sistema endocannabinoide, se redujo significativamente después del tratamiento OLHHA (Figura 7B). Los resultados se expresan como medias ± SEM (n = 8 animales por grupo). Los datos se analizaron por ANOVA de dos vías (genotipo y el tratamiento) y análisis post-hoc de Bonferroni. *p<0.05, **p<0.01 y ***p<0.001 denotan diferencias significativas en comparación con el grupo tratado con vehículo correspondiente. #p<0.001 denota diferencias significativas en comparación con el grupo delgado tratado con vehículo.
Ejemplo 8.Cardiotoxicidad del OLHHA.
El ensayo de canal de hERG se utilizó para identificar si OLHHA puede tener potencial para causar cardiotoxicidad (Figura 8). Para caracterizar mejor el comportamiento del canal de potasio hERG en presencia del compuesto se utilizó un ensayo funcional basado en la utilización de una sonda fluorescente (FluxORTM, Invitrogen) que emite fluorescencia tras su unión a iones talio (Beacham et al. 2010). El FluxORTM está protegido por grupos AM que impiden la fluorescencia fuera de la célula. Cuando entra en la célula, las esterasas del citosol eliminan los grupos AM, y el FluxORTM pasará a su forma activa en la que es capaz de unir el talio, que pasa al citoplasma a través del canal hERG, resultando en la emisión de fluorescencia. Las células HEK293 expresando el canal hERG se sembraron en placas negras de 96 pocilios tratadas con poli-D-lisina y se dejaron incubando durante 24 h. Después de este tiempo, las placas fueron lavadas con tampón de ensayo (NaCI 165 mM, KCI 4.5 mM, CaCI2 2 mM, MgCI2 1 mM, Hepes 10 mM y glucosa 10 mM, pH 7.4). A continuación se añadieron 20 μΙ de FluxORTM disuelto en tampón de ensayo. El fluorocromo se dejó incubando con las células durante 1 h a temperatura ambiente. A continuación se lavaron las placas con 50μΙ de tampón de ensayo y se añadió el compuesto OLHHA a una dilución 1 :200 (2 μΙ de OLHHA / 400μΙ de tampón de ensayo) utilizando una estación EP3. De la mezcla, 20 μΙ fueron pipeteados a 3 placas de células, siendo ensayado por triplicado en curvas de 12 puntos (diluciones 1 :2) a una concentración máxima de 150 μΜ. Las placas fueron incubadas con OLHHA 30 minutos y a continuación se leyeron en un FLIPRTETRA, el cual añadió 5 μΙ de tampón de estímulo (TI2S04 + K2S04), y realizó la lectura de la fluorescencia durante 120 s, permitiendo analizar la cinética del canal.
En los estudios con células HEK-293 que expresan hERG, OLHHA no mostró ninguna actividad, encontrándose una IC50 superior a 150 μΜ en comparación con los inhibidores estándar de control (valores de IC50 para la amiodarona, 1.7 M; bepridil, 2.2 M; haloperidol, 1.9μΜ; terfenadina, 1.0μΜ). Por lo tanto, OLHHA es un medicamento con actividad inhibidora de hERG y se puede considerar un fármaco seguro desprovisto de cardiotoxicidad.
OLHHA no presenta efectos cardiotóxicos.
Ejemplo 9. Farmacocinética del OLHHA.
Los citocromos P450 (CYP) son una familia de enzimas que juegan un papel importante en el metabolismo de fármacos. La evaluación del potencial de un compuesto para inhibir una enzima específica del CYP es importante a la hora de conocer la co-administración de compuestos, que puede dar lugar a que uno o ambos inhiban el metabolismo del otro. Esto puede afectar los niveles de plasma in vivo y potencialmente dar lugar a reacciones adversas o toxicidad. Los datos de inhibición de citocromo P450 in vitro son útiles en el diseño de estrategias para investigar estudios clínicos de interacción fármaco-fármaco (drug-drug interaction).
Para la preparación del OLHHA, éste fue guardado en condiciones óptimas (a 4°C, protegido de la luz) hasta su utilización. OLHHA en estado sólido (polvo) se disolvió en DMSO a 30 mM. y fue diluido de modo seriado con un factor de dilución de 2 para la obtención de 8 concentraciones. Se sabe que los CYPs son inhibidos por una variedad de solventes orgánicos y los efectos de esta inhibición pueden variar según el tipo y concentración del solvente. Por ello, cuando DMSO se utiliza como solvente la concentración recomendada es 0.35% o menos. Sin embargo, el acetonitrilo es tolerado por la mayoría de CYPs humanos. Teniendo en cuenta esto, las diluciones seriadas de compuesto DMSO se diluyeron con acetonitrilo. De este modo el contenido orgánico final y dosis máxima en el ensayo quedaron establecidos en 0.35% DMSO, 0.65% acetonitrilo y 105 μΜ respectivamente. OLHHA fue testado por triplicado. La interferencia fluorescente (Quenching) fue determinada con cada dilución de OLHHA. Las incubaciones se realizaron en el intervalo de tiempo lineal y la concentración de sustrato se acercó a la constante de Michaelis-Menten Km OLHHA no mostró fluorescencia o interferencias en quenching. OLHHA exhibió valores de IC50 mucho más altos que los inhibidores de control de las isoenzimas CYP (CYP3A4, CYP2C9 y CYP2D6).
Los resultados se muestran a continuación:
Tabla 1. Ensayo fluorométrico de inhibición del citocromo P450 usando como inhibidor control Cetoconazol.
Figure imgf000034_0001
CL: nivel de confianza
Tabla 2. Ensayo fluorométrico de inhibición del citocromo P450 usando como inhibidor control el Sulfafenazol.
Figure imgf000034_0002
CL: nivel de confianza
Tabla 3. Ensayo fluorométrico de inhibición del citocromo P450 usando como inhibidor control la Quinidina.
Figure imgf000034_0003
CL: nivel de confianza
Inhibidores fuertes ΙΟ50<1 μΜ Inhibidores moderados 1 μΜ <IC50<1 Inhibidores débiles ΙΟ50>10μΜ Tabla 4. Grado de inhibición del OLHHA. CYP2C9 CYP2D6
CYP3A4
Compuesto
Categoría Categoría
Categoría Inhibidor
Inhibidor Inhibidor
OLHHA Débil Moderado Débil
OLHHA por lo tanto puede ser considerado como un inhibidor de CYP moderado/débil, indicando un buen perfil farmacocinético de no interacción con otros fármacos y efectos adversos. Ejemplo 10. Evaluación histológica del efecto del tratamiento crónico con OLHHA sobre el hígado graso en ratas Zucker obesas.
El análisis histológico de los hígados de las ratas Zucker obesas tratadas con vehículo o con OLHHA confirmó los resultados bioquímicos de cuantificacion de la grasa total. Tal como se observa en la Figura 9, tanto la tinción de hematoxilina-eosina como la de rojo oleoso revelaron una disminución en el contenido de grasa hepática en los animales tratados con OLHHA. Además, se observó una reducción de la actividad apoptótica, la cual está muy incrementada en el hígado graso de las ratas obesas tratadas con vehículo. Como se puede observar en la Figura 10, el OLHHA redujo la expresión de Caspasa-3 (un mediador de los procesos de apoptosis), tanto la forma activada como total. Ejemplo 11. Efecto del tratamiento crónico con OLHHA sobre la expresión génica de la proteína L-FABP en el hígado de ratas Zucker.
Además de la reducción en la expresión de genes de enzimas lipogénicas, como se observa en la Figura 11 el tratamiento con OLHHA aumentó el nivel de ARNm de la proteína hepática de unión a ácidos grasos (L-FABP), implicada en el transporte y metabolismo de lípidos. Ejemplo 12. Efecto del tratamiento crónico con OLHHA sobre los niveles de proteína de las enzimas implicadas en el metabolismo lipídico en el hígado de ratas Zucker obesas.
Finalmente, los cambios observados en el nivel de ARNm de las enzimas lipogénicas FAS y HMG-CoAR tras el tratamiento con OLHHA en ratas obesas se confirmaron también a nivel de la expresión de proteína (Figura12).

Claims

REIVINDICACIONES
Uso del compuesto de fórmula general (I):
Figure imgf000036_0001
(i) donde
X e Y pueden ser iguales o diferentes de forma independiente y se seleccionan entre H, halógeno y metilo; n es un número entero desde 1 a 4; y R2 pueden ser iguales o diferentes de forma independiente y se seleccionan entre H y alquilo C C6 o pueden estar unidos por un enlace simple entre los dos átomos de oxígeno, formando un nuevo ciclo;
R3 se selecciona entre H, alquilo C C6 y alquenilo C C4;
R4 se selecciona entre H, halógeno y alquilo C C4;
R5 es un compuesto de fórmula general (II):
Figure imgf000036_0002
donde en el compuesto de formula general (II): R6 se selecciona entre H y alquilo C C4; y
R7 se selecciona entre alquilo C8-C30 y alquenilo C8-C30 o cualquiera de sus sales, ésteres, tautómeros, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables, o cualquiera de sus combinaciones, en la elaboración de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento del hígado graso o de una enfermedad o condición patológica causada por hígado graso.
2. El uso del compuesto según la reivindicación 1 , donde la enfermedad causada por hígado graso es la esteatohepatitis.
3. El uso del compuesto según la reivindicación 1 , en la elaboración de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento de una enfermedad causada por hígado graso no alcohólico (NAFLD).
4. El uso del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde la enfermedad causada por hígado graso no alcohólico (NAFLD) es la esteatohepatitis no alcohólica (NASH).
5. El uso del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde X e Y pueden ser iguales o diferentes de forma independiente y se seleccionan entre H y CH3.
6. El uso del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, donde n es 1.
7. El uso del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, donde y R2 pueden ser iguales o diferentes de forma independiente y se seleccionan entre H y metilo o pueden estar unidos por un enlace simple entre los dos átomos de oxígeno formando un nuevo ciclo.
8. El uso del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-7 donde R3 se selecciona entre H y alquilo C C3.
9. El uso del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-7 donde R3 es H.
10. El uso del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-9, donde R4 se selecciona entre H y CH3.
1 1. El uso del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-10, donde R4 es CH3.
12. El uso del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-11 , donde R5 es un compuesto de fórmula (II):
Figure imgf000038_0001
donde R6 se selecciona entre H y CH3 y R7 es un grupo alquenilo C15-C25.
13. El uso del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-12, donde R7 tiene un número de insaturaciones entre 1 y 6.
14. El uso del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-13, donde R7 tiene más preferiblemente un número de insaturaciones entre 1 y 4.
15. El uso del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde el compuesto se selecciona de entre cualquiera de los compuestos seleccionados de la lista que consiste en:
Figure imgf000038_0002
Fórmula (III)
Figure imgf000039_0001
Fórmula (IV)
Figure imgf000039_0002
Fórmula (V)
Figure imgf000039_0003
Fórmula (VII)
Figure imgf000040_0001
Figure imgf000040_0002
Figure imgf000040_0003
Figure imgf000040_0004
Figure imgf000041_0001
Figure imgf000041_0002
Fórmula (XV) o cualquiera de sus sales, ésteres, tautómeros, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables.
16. El uso del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-12, donde el compuesto es la A/-(1-(3,4-dihidroxifenil)propan-2-il)oleamida (OLHHA),
Figure imgf000042_0001
Fórmula (III) o cualquiera de sus sales, ésteres, tautómeros, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables.
17. El uso de una composición farmacéutica que comprende al menos uno de los compuestos de fórmula (I) como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-16, o cualquiera de sus sales, ésteres, tautómeros, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables, o cualquiera de sus combinaciones, en la elaboración de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento del hígado graso o de una enfermedad o condición patológica causada por hígado graso.
18. El uso de una composición según la reivindicación 17, donde la enfermedad causada por hígado graso es la esteatohepatitis.
19. El uso de una composición que comprende al menos uno de los compuestos de fórmula (I) como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 -16, o cualquiera de sus sales, ésteres, tautómeros, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables, o cualquiera de sus combinaciones, en la elaboración de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento de una enfermedad o condición patológica causada por hígado graso no alcohólico (NAFLD).
20. El uso de una composición según la reivindicación 19, donde la enfermedad causada por hígado graso no alcohólico (NAFLD) es la esteatohepatitis no alcohólica (NASH).
21. El uso de una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 17-20, donde la composición además comprende otro principio activo.
22. El uso de una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 17-20, donde la composición además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable.
23. Una composición alimentaria, nutracéutica o del tipo alimento médico (del inglés "medical food") que comprende al menos uno de los compuestos de fórmula (I) como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-16.
24. El uso de la composición alimentaria según la reivindicación anterior, para la prevención, alivio y/o tratamiento del hígado graso o de una enfermedad o condición patológica causada por hígado graso.
25. El uso de la composición alimentaria según la reivindicación 24, donde la enfermedad causada por hígado graso es la esteatohepatitis.
26. El uso de la composición alimentaria según cualquiera de las reivindicaciones 23-24, para la prevención, alivio y/o tratamiento una enfermedad o condición patológica causada por hígado graso no alcohólico (NAFLD).
27. El uso de la composición alimentaria según la reivindicación 26, donde la enfermedad causada por hígado graso no alcohólico (NAFLD) es la esteatohepatitis no alcohólica (NASH).
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3834888A4 (en) * 2018-08-10 2022-05-11 Servicio Andaluz De Salud MEANS OF TREATMENT OF ALCOHOL ABUSE

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2555790B1 (es) 2014-06-05 2016-10-13 Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) Método de obtención de un array de micropartículas planares con multiplexado molecular superficial, array obtenido y su uso

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011076966A1 (es) * 2009-12-24 2011-06-30 Fundació Imim Derivados de amida de acidos grasos con anfetaminas para el tratamiento de desordenes alimenticios

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1302264B1 (it) * 1998-09-24 2000-09-05 Innovet Italia Srl Derivati a struttura n-acil vanillinamidica in grado di attivare irecettori periferici dei cannabinoidi

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011076966A1 (es) * 2009-12-24 2011-06-30 Fundació Imim Derivados de amida de acidos grasos con anfetaminas para el tratamiento de desordenes alimenticios

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CARR T P ET AL.: "Endocannabinoids, metabolic regulation, and the role of diet.", NUTRITION RESEARCH, vol. 28, no. 10, 1 October 2008 (2008-10-01), pages 641 - 650, XP025507027, ISSN: 0271-5317, DOI: doi:10.1016/j.nutres.2008.08.003 *
FRANCISCO JAVIER PAVON ET AL.: "Oleoylethanolamide: a new player in peripheral control of energy metabolism. Therapeutic implications.", DRUG DISCOVERY TODAY: DISEASE MECHANISMS ELSEVIER, vol. 7, no. 3, AMSTERDAM, NL, pages e175 - e183, XP028368703, ISSN: 1740-6765, DOI: doi:10.1016/j.ddmec.2011.02.001 *
PILLARISETTI S ET AL.: "Pain and beyond: fatty acid amides and fatty acid amide hydrolase inhibitors in cardiovascular and metabolic diseases.", DRUG DISCOVERY TODAY, vol. 14, no. 23-24, 1 December 2009 (2009-12-01), RAHWAY, NJ, US, pages 1098 - 1111, XP026873522, ISSN: 1359-6446, DOI: doi:10.1016/j.drudis.2009.08.002 *
See also references of EP3225237A4 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3834888A4 (en) * 2018-08-10 2022-05-11 Servicio Andaluz De Salud MEANS OF TREATMENT OF ALCOHOL ABUSE
US20220142985A1 (en) * 2018-08-10 2022-05-12 Servicio Andaluz De Salud Agents for treatment of alcohol use disorder

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