WO2016190689A2 - 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 또는 근 기능 개선용 조성물 - Google Patents

근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 또는 근 기능 개선용 조성물 Download PDF

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    • A61K36/02—Algae
    • A61K36/03—Phaeophycota or phaeophyta (brown algae), e.g. Fucus

Definitions

  • the present invention relates to a composition for preventing, improving or treating muscle diseases or improving muscle function. More specifically, the present invention relates to fucosterol and sargassum. fulvellum), Sargassum pulverized Sargassum extract Chop (Sargassum fusiforme ), ⁇ pulverized powder or ⁇ extract, and relates to a composition for preventing, improving or treating muscle diseases or improving muscle function.
  • Muscle atrophy is caused by a gradual decrease in muscle mass and refers to muscle weakness and degeneration (Cell, 119 (7): 907-910, 2004). Muscular atrophy is promoted by inactivity, oxidative stress and chronic inflammation, weakening muscle function and motor capacity (Clinical Nutrition, 26 (5): 524-534, 2007). The most important factor in determining muscle function is muscle mass, which is maintained by the balance of protein synthesis and degradation. Muscular atrophy occurs when proteolysis occurs more than synthesis (The International Journal of Biochemistry and Cell Biology, 37 (10): 1985-1996, 2005).
  • Muscle size is controlled by intracellular signaling pathways that induce anabolism or catabolism in the muscle, and when there are more signaling reactions that induce synthesis than muscle protein degradation Muscle protein synthesis is increased, which is manifested as an increase in muscle size (hypertrophy) or muscle fiber number (hyperplasia) (The Korea Journal of Sports Science, 20 (3): 1551-1561, 2011).
  • PI3K phosphatidylinositol-3 kinase
  • mTOR mammalian target of rapamycin
  • mTOR induces muscle protein synthesis by activating two factors that initiate mRNA translation, 4E-binding protein (4E-BP1) and phosphorylated 70-kDa ribosomal S6 kinase (p70S6K), contributing to muscle mass gain (The Korea Journal of Sports) Science, 20 (3): 1551-1561, 2011; The International Journal of Biochemistry and Cell Biology, 43 (9): 1267-1276, 2011).
  • 4E-BP1 4E-binding protein
  • p70S6K phosphorylated 70-kDa ribosomal S6 kinase
  • the transfer of the transcription factor forhead box (FoxO) from the cytoplasm into the nucleus increases the expression of the E3 ubiquitin ligase factors atrogin-1 and MuRF-1, which are involved in proteolysis (Disease Models and Mechanisms, 6: 25). -39, 2013).
  • Increased expression of these proteins promotes protein breakdown in muscles, thereby reducing muscle mass. Therefore, promoting the
  • MyoD initiates the expression of muscle specific genes and induces the differentiation of muscle satellite cells into myoblasts. Induction of myogenin expression by the activity of MyoD is the most important factor in the fusion of myoblasts and is involved in the formation of myotubes. Muscle fibers formed through this process are bundled to form muscles finally (Cellular and Molecular Life Sciences, 70: 4117-4130, 2013).
  • Sargassum fulvellum is a marine algae belonging to the genus Sargassum (Sargassum).
  • the activities of mother-in-law include antimicrobial (Korean Journal of Food Science and Technology, 42 (2): 155-159, 2010), anti-inflammatory (Journal of Ethnopharmacology, 116 (1): 187-190, 2008), antioxidant of Food Science and Nutrition, 12 (2): 65-73, 2007), Chemotherapy (32 (12): 1004-1009, 1984), Evidence-based Complementary and Alternative Medicine, 2013: 747 846, 2013 ), Antidiabetic (Natural Product Sciences, 18 (2): 130-136, 2012) and the like have been reported.
  • Sargassum fusiforme is an algae belonging to Sargassum.
  • activity against ⁇ includes anti-acid and anti-inflammatory (Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 14 (3): 463-468, 2015), antidiabetic (Food Science and Biotechnology, 23 (3): 2037-2044, 2014), Antiviral (Natural Medicines, 48 (3): 173-179, 1994), Journal of Medicinal Food, 12 (4): 782-787, 2009), Journal of Medicinal Food, 15 (4): 384-390, 2012) and the like have been reported.
  • Fucosterol is a substance found in algae, including maban and mud, and is found in seaweeds in coastal areas of Asia such as Korea, China, and Japan. To date, the activity of fucosterol has been shown to be anticancer (Pharmacognosy Magazine, 8 (29): 60-64, 2012), antidiabetic (Archives of Pharmacal Research, 27 (11): 1120-1122, 2004), antioxidant (Bioorganic and Medicinal) Chemistry, 17 (5): 1963-1973, 2009), improving blood lipid content (Biochemical and Biophysical Research Communications, 369 (2): 363-368, 2008), improving cholesterol metabolism (New Phytologist, 183 (2): 291 -300, 2009), Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 51 (2): 450-4555, 2010), Antifungal (Natural Product Research, 24 (15): 1481-1487, 2010), Anti-aging (Photochemistry and Photobiology, 89 (4): 911-918, 2013).
  • the present inventors have searched for a natural substance having excellent muscle function control activity and can be safely applied.
  • the fucosterol, hatban, hatban mill, millban extract, ⁇ , ⁇ mill or ⁇ extract are used for preventing, improving or
  • the present invention was completed by confirming the therapeutic or muscle function improving activity.
  • Sargassum which formula fucose cholesterol (fucosterol) represented by the compound or it (Sargassum fulvellum ) extract or Sargassum fusiforme ) to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of muscle diseases containing the extract as an active ingredient:
  • Another object of the present invention is a sargassum fulvellum ), a pulverized product thereof or an extract thereof as an active ingredient to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating muscle diseases.
  • Another object of the present invention is Sar ( sum) fusiforme ), a pulverized product thereof or an extract thereof as an active ingredient to provide a preventive or therapeutic muscle disease or a pharmaceutical composition.
  • Yet another object of the present invention is a sargassum fulvellum ), to provide a health functional food composition for preventing or improving muscle diseases comprising a pulverized product or extract thereof as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is Sar ( sum) fusiforme ), to provide a health functional food composition for preventing or improving muscle diseases comprising a pulverized product or extract thereof as an active ingredient.
  • Another object is to include Sargassum which formula fucose cholesterol (fucosterol) represented by the compounds of the present invention or (Sargassum fulvellum ) extract or Sargassum fusiforme ) to provide a cosmetic composition for improving muscle function comprising the extract as an active ingredient:
  • Another object of the present invention is a sargassum fulvellum ), to provide a cosmetic composition for improving muscle function comprising a pulverized product or extract thereof as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is Sar ( sum) fusiforme ), a pulverized product thereof or an extract thereof to provide a cosmetic composition for improving muscle function comprising as an active ingredient.
  • Yet another object of the present invention is a sargassum fulvellum ), its pulverized product or extract thereof as an active ingredient to provide a feed additive for preventing or improving muscle diseases.
  • Another object of the present invention is Sar ( sum) fusiforme ), its pulverized product or extract thereof as an active ingredient to provide a feed additive for preventing or improving muscle diseases.
  • the present invention relates to fucose cholesterol (fucosterol) Sargassum (Sargassum fulvellum) a compound comprising the same or represented by the general formula (1) extracts or fusiforme (Sargassum fusiforme ) provides a pharmaceutical composition for preventing or treating muscle diseases comprising the extract as an active ingredient:
  • the invention also relates to Sargassum fulvellum), Sargassum pulverized Sargassum extract Chop (Sargassum fusiforme ), ⁇ pulverized powder or ⁇ extract provides a pharmaceutical composition for preventing or treating muscle diseases.
  • the invention also to include Sargassum which fucose cholesterol (fucosterol) compound, or it is represented by the following formula 1 (Sargassum Provided is a nutraceutical composition for preventing or improving muscle diseases comprising fulvellum ) extract or Sargassum fusiforme extract as an active ingredient:
  • the invention also relates to Sargassum fulvellum), Sargassum pulverized Sargassum extract Chop (Sargassum fusiforme ), ⁇ pulverized powder or ⁇ extract provides a health functional food composition for preventing or improving muscle diseases.
  • the invention also to include Sargassum which fucose cholesterol (fucosterol) compound, or it is represented by the following formula 1 (Sargassum Provided is a cosmetic composition for improving muscle function, comprising fulvellum ) extract or Sargassum fusiforme extract as an active ingredient:
  • the invention also relates to Sargassum fulvellum), Sargassum pulverized Sargassum extract Chop (Sargassum fusiforme ), ⁇ pulverized powder or ⁇ extract provides a cosmetic composition for improving muscle function comprising as an active ingredient.
  • the invention also to include Sargassum which fucose cholesterol (fucosterol) compound, or it is represented by the following formula 1 (Sargassum Provided are feed additives for preventing or improving muscle diseases, including fulvellum ) extract or Sargassum fusiforme extract as an active ingredient:
  • the invention also relates to Sargassum Provided is a feed additive for preventing or improving muscle diseases, including fulvellum ) extract or Sargassum fusiforme extract as an active ingredient.
  • the fucosterol represented by the formula (1) can be separated from the mother and child extract.
  • the extract may be obtained by extracting the maban or ⁇ with any one or more solvents selected from the group consisting of water, an organic solvent having 1 to 6 carbon atoms, a subcritical fluid and a supercritical fluid. have.
  • the organic solvent having 1 to 6 carbon atoms is 1 to 6 carbon atoms (alcohol), acetone (acetone), ether (ether), benzene (benzene), chloroform (chloroform), Ethyl acetate, methylene chloride, methylene chloride, hexane, hexane, cyclohexane, and any one selected from the group consisting of petroleum ether.
  • the extract may be obtained by extracting the mother board or ⁇ under ultra-high pressure conditions of 100 MPa to 1000 MPa.
  • the muscle disease is atony, muscular atrophy, muscular dystrophy, muscle degeneration, ataxia, cachexia and sarcopenia It may be any one or more selected from the group consisting of.
  • Fucosterol, moss, moss, moss extracts, moss, moss, or muss extracts according to the present invention are muRF-1 and the protein expression of p-mTOR involved in muscle protein synthesis, muRF-1 and Inhibiting mRNA expression of atrogin-1 and increasing the mRNA expression of MyoD and myogenin, which are involved in muscle differentiation, have an excellent effect on increasing muscle mass.
  • the composition of the present invention is a natural product and can be safely used without side effects, it can be used as a medicine, food, cosmetics or livestock feed or feed additives.
  • Figure 1 shows the results of measuring the protein expression of p-mTOR according to the treatment of Maban ethanol extract, ⁇ ethanol extract or fucosterol in L6 muscle cells.
  • Figure 2 shows the results of measuring the protein expression of p-4EBP1 and p-p70S6K following the treatment of fucosterol in L6 muscle cells.
  • Figure 3 shows the results of measuring the mRNA expression of myoD and myogenin in accordance with the treatment of fucosterol in L6 muscle cells.
  • Figure 4 shows the results of measuring the mRNA expression of MyoD and myogenin myognin according to the treatment of Maban hexane extract, ethyl acetate extract, ethanol extract, hot water extract in L6 muscle cells.
  • Figure 5 shows the results of measuring the mRNA expression of MyoD and myogenin according to the treatment of hexane extract, ethyl acetate extract, ethanol extract, hydrothermal extract in L6 muscle cells.
  • Figure 6 shows the results of measuring the mRNA expression of atrogin-1 and MuRF-1 according to the treatment of fucosterol in L6 muscle cells.
  • Figure 7 shows the results of measuring the mRNA expression of atrogin-1 and MuRF-1 according to the treatment of Maban hexane extract, ethyl acetate extract, ethanol extract, hydrothermal extract in L6 muscle cells.
  • Figure 8 shows the results of measuring the mRNA expression of atrogin-1 and MuRF-1 according to the treatment of hexane extract, ethyl acetate extract, ethanol extract, hydrothermal extract in L6 muscle cells.
  • the present invention is for the prevention, improvement or treatment of muscle diseases or muscle function improvement of the fucosterol, Maban extract or ⁇ extract represented by the formula (1);
  • it provides a method for preventing, improving or treating muscle diseases or muscle function improvement comprising applying to the mammal, including humans, the fucosterol, Maban extract or ⁇ extract represented by the following formula (1):
  • ' hatzaban fulvellum s is a seaweed belonging to Sargassum spp. of the Helotiaceae family.
  • Sargassum fusiforme is an algae belonging to Sargassum spp. Of Helotiaceae.
  • Sargassum pulverized “or" Chop pulverized “is the dried Sargassum (Sargassum fulvellum) or fusiforme (Sargassum fusiforme ) can be easily ingested by a person skilled in the art according to the present invention, so that the active ingredient is easily released from the dry ground in the intestine after ingestion while being easily ingested by mammals including humans. And as a result can be prepared and used in a form that can be readily absorbed into the mammalian body.
  • the shape and size of the dry pulverized particles for this purpose is not limited, but as the surface of the particles is maximized, the glass of the active ingredient described above is easier to be prepared, preferably in the form of fine powder. In one embodiment of the present invention by milling the dried mother board or pan with a mixer to prepare a pulverized product.
  • 'capillary extract' is a moth ( Salgassum) fulvellum ) is obtained by extracting with a suitable solvent, and includes both extracts, dilutions or concentrates of the extracts, dried products obtained by drying the extracts, or modifiers or purified products thereof.
  • the preparation method of the mother and child extract may be obtained by extracting from the mother and child with one or more solvents selected from the group consisting of water, an organic solvent having 1 to 6 carbon atoms, and a subcritical or supercritical fluid, but is not limited thereto.
  • ' ⁇ extract' is ⁇ ( Sargassum fusiforme ) obtained by extracting with a suitable solvent, and includes both extracts, dilutions or concentrates of the extracts, dried products obtained by drying the extracts, or modifiers or purified products thereof.
  • the method of preparing the extract may be obtained by extracting water from one or more solvents selected from the group consisting of water, an organic solvent having 1 to 6 carbon atoms, and a subcritical or supercritical fluid, but is not limited thereto.
  • Hatban extract or ⁇ extract of the present invention can be prepared using conventional extraction methods such as heat extraction, cold soak extraction ultrasonic extraction, filtration and reflux extraction method, and banban and ⁇ purchased commercially available or It may be used for harvesting or cultivation in nature.
  • the mother or child extract according to the present invention can be separated according to conventional methods known in the art for preparing extracts from natural products, i.e. using conventional solvents under the conditions of conventional temperature, pressure.
  • the term "fraction” means the result obtained by the fractionation method of separating a specific component or a specific group from a mixture comprising various components. In the present invention, it means a result obtained by the fractionation method for separating a specific component or a specific group from the mother or ⁇ extract prepared as described above.
  • polar solvents such as anhydrous or hydrous lower alcohols having 1 to 4 carbon atoms, such as water, ethanol and methanol, and hexane, butanol
  • Non-polar solvents such as ethyl acetate, chloroform, dichloromethane, or a mixed solvent thereof may be used, but are not limited thereto.
  • the mother or child fraction of the present invention may also include those obtained by further applying the purification process.
  • fractions obtained by passing a mother or worm extract according to the present invention through an ultrafiltration membrane having a constant molecular weight cut-off value and subjected to various chromatography (manufactured for separation according to size, charge, hydrophobicity or affinity).
  • Fractions obtained through various purification methods additionally carried out, such as by separation, are also included in the mother or son fraction of the present invention.
  • 'muscle' refers to tendons, muscles, and tendons in general, and 'muscle function' means the ability to exert strength by contraction of muscles, and the muscles exert maximum contraction force to overcome resistance.
  • Muscle endurance the ability to express how long or how many times a muscle can repeat contraction and relaxation at a given weight, and quickness, the ability to exert a strong force in a short time. This muscle function is dominated by the liver and is proportional to muscle mass. The term “improving muscle function” refers to improving muscle function better.
  • the composition for preventing, improving or treating muscle diseases of the present invention or for improving muscle function may contain only acupuncture, acupuncture millus, acupuncture extracts, or a millet, a millet millet or a millet extract alone, or It may contain a mixture of ⁇ , ⁇ pulverized product or ⁇ extract at a ratio of 1 to 100, or at least one active ingredient exhibiting a similar function thereof. Inclusion of additional components may further enhance the muscle function improving effect of the composition of the present invention. When the ingredient is added, skin safety, ease of formulation, and stability of the active ingredients may be considered.
  • the present invention is a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of muscle diseases, including mabanban, mabanban crushed, Mabanban extract, ⁇ , ⁇ crushed or ⁇ extract as an active ingredient; Health functional food composition for preventing or improving muscle diseases; Cosmetic composition for improving muscle function; And it provides a feed additive for preventing or improving muscle diseases.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing or treating muscle diseases, which comprises a compound represented by the formula (1), and a mother extract or ⁇ extract containing the same as an active ingredient; Health functional food composition for preventing or improving muscle diseases; Cosmetic composition for improving muscle function; And feed additives for preventing or ameliorating muscle diseases:
  • the compound of Formula 1 is called fucosterol.
  • the compound of Formula 1 may be used by separating or synthesizing from seaweeds and plant extracts or fractions thereof, or may use a commercially available compound.
  • the fucosterol represented by the formula (1) may be isolated from Maban extract or ⁇ extract.
  • the mother and child extract may be, but is not limited to, ethanol extract, hydrothermal extract, hexane extract, ethyl acetate extract, ultrahigh pressure extract, supercritical fluid extract or subcritical fluid extract.
  • the moss extract can be obtained by extracting the mop with one or more solvents selected from the group consisting of water, an organic solvent having 1 to 6 carbon atoms, a subcritical fluid and a supercritical fluid.
  • the mother board may be obtained by extracting under ultra-high pressure conditions of 100 MPa or more, preferably 100 MPa to 1000 MPa. If necessary, it may be prepared by additionally including filtration and concentration steps according to methods known in the art.
  • the organic solvent having 1 to 6 carbon atoms may be selected from alcohols having 1 to 6 carbon atoms, acetone, ether, benzene, chloroform, ethyl acetate, It may be at least one selected from the group consisting of methylene chloride, hexane, cyclohexane, and petroleum ether.
  • the mother and child extract of the present invention can be obtained by extracting and purifying the dried mother and child using purified water, ethanol and subcritical water or supercritical carbon dioxide suitable for food processing, or by extracting and purifying using an ultrahigh pressure extraction device.
  • it can be obtained by separating and purifying the oil obtained by directly compressing the mother board.
  • an extract may be obtained by extracting hatban under ultra-high pressure conditions of 100 MPa or more, preferably 100 MPa to 1000 MPa.
  • ⁇ extract may be, but is not limited to, ethanol extract, hydrothermal extract, hexane extract, ethyl acetate extract, ultrahigh pressure extract, supercritical fluid extract or subcritical fluid extract.
  • the murine extract can be obtained by extracting murine with at least one solvent selected from the group consisting of water, an organic solvent having 1 to 6 carbon atoms, a subcritical fluid and a supercritical fluid.
  • the char may be obtained by extraction under ultra-high pressure conditions of 100 MPa or more, preferably 100 MPa to 1000 MPa. If necessary, it may be prepared by additionally including filtration and concentration steps according to methods known in the art.
  • the organic solvent having 1 to 6 carbon atoms may be selected from alcohols having 1 to 6 carbon atoms, acetone, ether, benzene, chloroform, ethyl acetate, It may be at least one selected from the group consisting of methylene chloride, hexane, cyclohexane, and petroleum ether.
  • ⁇ extract of the present invention can be obtained by extracting and purifying dried ⁇ using purified water, ethanol and subcritical water or supercritical carbon dioxide suitable for food processing, or extracted and purified using an ultra-high pressure extraction device Alternatively, it can be obtained by separating and purifying oil from the oil obtained by directly compressing the char.
  • the extract may be obtained by extracting the charcoal under ultra-high pressure conditions of 100 MPa or more, preferably 100 MPa to 1000 MPa.
  • the present inventors are repeatedly extracted at room temperature with a dried mother board or millet pulverized product as methanol, ethanol, ethyl acetate and hexane as a solvent, hot water extraction, ultra-high pressure extraction, supercritical fluid extraction, Extract was prepared by subcritical fluid extraction.
  • mabanban, mabanban crushed, Mabanban extract, ⁇ , ⁇ crushed, ⁇ extract, or fucosterol isolated from the extract shows an excellent effect to increase muscle mass, preventing muscle disease Or therapeutic pharmaceutical compositions; Health functional food composition for preventing or improving muscle diseases; Feed additives for preventing or improving muscle diseases; Cosmetic composition for improving muscle function; And it can be usefully used as an active ingredient of a feed additive or a feed additive comprising the same.
  • the composition for preventing or treating muscle diseases of the present invention is a pharmaceutical composition
  • it may be used for the prevention or treatment of muscle diseases due to muscle wasting or degeneration.
  • Muscle depletion and degeneration occur due to genetic factors, acquired factors, aging, etc., muscle depletion is characterized by a gradual loss of muscle mass, weakening and degeneration of muscles, especially skeletal or veterinary and cardiac muscles.
  • related diseases include, but are not limited to, atony, muscular atrophy, muscular dystrophy, muscle degeneration, myasthenia, cachexia and sarcopenia.
  • the composition of the present invention has an effect of increasing muscle mass, the muscle does not limit its kind.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may include pharmaceutically acceptable salts of fucosterol, moth, moth, moth, moth extract, moth, moth moth, or moth extract.
  • pharmaceutically acceptable refers to a physiologically acceptable and typically does not cause an allergic or similar reaction when administered to a human, wherein the salt is a pharmaceutically acceptable free acid. Acid addition salts formed by acid) are preferred.
  • the pharmaceutically acceptable salt of the fucosterol, hatban, hatban mill, millban extract, ⁇ , ⁇ mill or ⁇ extract may be an acid addition salt formed using an organic acid or an inorganic acid, the organic acid may be, for example, formic acid , Acetic acid, propionic acid, lactic acid, butyric acid, isobutyric acid, trifluoroacetic acid, malic acid, maleic acid, malonic acid, fumaric acid, succinic acid, succinic acid monoamide, glutamic acid, tartaric acid, oxalic acid, citric acid, glycolic acid, glucuronic acid, ascorbic acid , Benzoic acid, phthalic acid, salicylic acid, anthranilic acid, dichloroacetic acid, aminooxy acetic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid or methanesulfonic acid.
  • the organic acid may be, for example, formic acid , Acetic
  • Inorganic acids include, for example, hydrochloric acid, bromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, nitric acid, carbonic acid or boric acid.
  • the acid addition salt may preferably be in the form of hydrochloride or acetate, more preferably in the form of hydrochloride.
  • the above-mentioned acid addition salts can be a) directly mixed with fucosterol, hatban, hatban mill, hattan extract, ⁇ , ⁇ mill or ⁇ extract and acid, or b) dissolving one of them in a solvent or hydrous solvent.
  • the fucosterols, moths, moths, moths, moths extracts, moths, moths, or moths extracts are prepared in the usual salt preparation process by placing them in an acid in a solvent or submerged solvent and mixing them.
  • salts that can be additionally salted are gabar salt, gabapentin salt, pregabalin salt, nicotinate, adipate salt, hemimalonate, cysteine salt, acetylcysteine salt, methionine salt, arginine salt, lysine salt, ornithine salt or Aspartate.
  • composition for preventing or treating muscle diseases of the present invention may further include a pharmaceutically acceptable carrier.
  • Pharmaceutically acceptable carriers may further include, for example, carriers for oral administration or carriers for parenteral administration.
  • Carriers for oral administration may include lactose, starch, cellulose derivatives, magnesium stearate, stearic acid and the like.
  • Carriers for parenteral administration may also include water, suitable oils, saline, aqueous glucose, glycols, and the like.
  • stabilizers and preservatives may be further included. Suitable stabilizers include antioxidants such as sodium hydrogen sulfite, sodium sulfite or ascorbic acid.
  • Suitable preservatives include benzalkonium chloride, methyl- or propyl-paraben and chlorobutanol.
  • Other pharmaceutically acceptable carriers may be referred to those described in the following documents (Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).
  • composition of the present invention can be administered to any mammal, including humans.
  • parenteral administration methods include, but are not limited to, intravenous, intramuscular, intraarterial, intramedullary, intradural, intracardiac, transdermal, subcutaneous, intraperitoneal , Intranasal, intestinal, topical, sublingual or rectal administration.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be formulated into a preparation for oral or parenteral administration according to the route of administration as described above.
  • one or more buffers e.g. saline or PBS
  • antioxidants e.g. saline or PBS
  • bacteriostatic agents e.g. EDTA or glutathione
  • fillers e.g., extenders, binders, adjuvants (e.g. aluminum hydroxide) Side)
  • suspending agents e.g. aluminum hydroxide
  • Solid form preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, solutions, gels, syrups, slurries, suspensions or capsules, and the like, and the solid form may include at least one excipient in the pharmaceutical composition of the present invention, for example , Starch (including corn starch, wheat starch, rice starch, potato starch, etc.), calcium carbonate, sucrose, lactose, dextrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol maltitol, cellulose , Methyl cellulose, sodium carboxymethylcellulose and hydroxypropylmethyl-cellulose or gelatin may be prepared by mixing.
  • tablets or dragees can be obtained by combining the active ingredients with solid excipients and then grinding them and adding suitable auxiliaries and then processing them into granule mixtures.
  • Liquid preparations for oral use include suspensions, solutions, emulsions, or syrups, and may include various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, or preservatives, in addition to water or liquid paraffin, which are commonly used simple diluents. .
  • crosslinked polyvinylpyrrolidone, agar, alginic acid or sodium alginate may be added as a disintegrant, and may further include an anticoagulant, a lubricant, a humectant, a perfume, an emulsifier, a preservative, and the like.
  • compositions of the present invention may be formulated according to methods known in the art in the form of injections, transdermal and nasal inhalants with suitable parenteral carriers.
  • suitable parenteral carriers include, but are not limited to, solvents or dispersion media comprising water, ethanol, polyols (e.g., glycerol, propylene glycol and liquid polyethylene glycols, etc.), mixtures thereof and / or vegetable oils Can be.
  • suitable carriers include Hanks solution, Ringer's solution, phosphate buffered saline (PBS) containing triethanol amine or sterile water for injection, 10% ethanol, 40% propylene glycol and 5% dextrose Etc. can be used.
  • PBS phosphate buffered saline
  • various antibacterial and antifungal agents such as parabens, chlorobutanol, phenol, sorbic acid, thimerosal, and the like may be further included.
  • the injection may in most cases further comprise an isotonic agent such as sugar or sodium chloride.
  • transdermal administration means that the pharmaceutical composition is locally administered to the skin so that an effective amount of the active ingredient contained in the pharmaceutical composition is delivered into the skin.
  • the compounds used according to the invention may be pressurized packs or by means of suitable propellants, for example dichlorofluoromethane, trichlorofluoromethane, dichlorotetrafluoroethane, carbon dioxide or other suitable gas. It can be delivered conveniently from the nebulizer in the form of an aerosol spray. In the case of a pressurized aerosol, the dosage unit can be determined by providing a valve to deliver a metered amount.
  • gelatin capsules and cartridges for use in inhalers or blowers can be formulated to contain a mixture of the compound and a suitable powder base such as lactose or starch. Formulations for parenteral administration are described in Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour, a prescription generally known in all pharmaceutical chemistries.
  • the pharmaceutical composition for preventing or treating muscle diseases of the present invention may provide a desirable muscle disease prevention or treatment effect when it contains an effective amount of fucosterol, moths, moths, moths, moths, moths, moths, or moths.
  • the 'effective amount' refers to an amount that exhibits a higher response than the negative control, and preferably refers to an amount sufficient to improve muscle function.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may contain 0.01% to 99.99% of the fucosterol, hatban, hatban mill, mill extract, ⁇ , ⁇ mill or ⁇ extract, the remaining amount may be occupied by a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the effective amount of fucosterol, moths, moths, moss extracts, moths, moths, or moths extracts included in the pharmaceutical compositions of the present invention will vary depending on the form in which the composition is formulated.
  • the total effective amount of the pharmaceutical composition of the present invention may be administered to a patient in a single dose, and may be administered by a fractionated treatment protocol that is administered in multiple doses for a long time.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may vary the content of the active ingredient depending on the extent of the disease. For parenteral administration, preferably from 0.01 to 50 mg per kg of body weight per day, more preferably from 0.1 to 30 mg per day, based on fucosterol, moth, moth, moth, moth extracts, moths, moths, or moth extracts.
  • the fucosterol, moth, moth, moth, moth, moth, moth, or moth extracts Preferably, it may be administered one to several times so as to be administered in an amount of 0.01 to 10 mg.
  • the doses of the fucosterol, mabanban, mabanban crushed, mabanban extract, ⁇ , ⁇ crushed or ⁇ extracts are determined by the age, weight, health condition, sex and disease of the patient as well as the route of administration and frequency of treatment of the pharmaceutical composition.
  • the effective dosage for the patient is determined in consideration of various factors such as severity, diet, and excretion rate, those having ordinary knowledge in the art, such as fucosterol, banban, banban crushed, banban extract
  • the effective dose may be determined according to the specific use for the prevention or treatment of muscle diseases.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention is not particularly limited to its formulation, route of administration and method of administration as long as the effect of the present invention is shown.
  • the pharmaceutical composition for preventing or treating muscle diseases of the present invention may be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy or biological response modifiers.
  • the pharmaceutical composition for preventing or treating muscle diseases of the present invention may also be provided in the form of an external preparation including fucosterol, moths, moths, moths, moths, moths, moths, moths, or moths as an active ingredient.
  • the pharmaceutical composition for preventing or treating muscle diseases of the present invention is used as an external preparation for skin, it is additionally used as a fatty substance, an organic solvent, a dissolving agent, a thickening agent and a gelling agent, an emollient, an antioxidant, a suspending agent, a stabilizer, and a foaming agent.
  • Fragrance surfactant, water, ionic emulsifier, nonionic emulsifier, filler, metal ion sequestrant, chelating agent, preservative, vitamin, blocking agent, wetting agent, essential oil, dye, pigment, hydrophilic active agent, lipophilic active agent Or any other ingredient commonly used in external preparations for skin, such as lipid vesicles.
  • the ingredients may also be introduced in amounts generally used in the field of dermatology.
  • the pharmaceutical composition for preventing or treating muscle diseases of the present invention may be a formulation such as, but not limited to, ointment, patch, gel, cream or spray.
  • the composition for preventing muscle diseases or improving muscle function of the present invention may also be a food composition.
  • the food composition for preventing or improving muscle function of the present invention is a food composition, it may be used for preventing or improving muscle disease due to muscle wasting or degeneration. Muscle depletion and degeneration occur due to genetic factors, acquired factors, aging, etc., muscle depletion is characterized by a gradual loss of muscle mass, weakening and degeneration of muscles, especially skeletal or veterinary and cardiac muscles. Examples of related diseases include atony, muscular atrophy, muscular dystrophy, muscle degeneration, myasthenia gravis, cachexia and sarcopenia.
  • the composition of the present invention has an effect of increasing muscle mass, the muscle does not limit its kind.
  • the food composition of the present invention includes all forms such as functional food, nutritional supplement, health food, food additives and feed, and includes animals such as humans or livestock. It is for eating. Food compositions of this type can be prepared in various forms according to conventional methods known in the art.
  • Food compositions of this type can be prepared in various forms according to conventional methods known in the art.
  • General foods include, but are not limited to, beverages (including alcoholic beverages), fruits and processed foods (e.g. canned fruit, canned foods, jams, marmalade, etc.), fish, meat and processed foods (e.g. hams, sausages) Cornbread, etc.), breads and noodles (e.g. udon, soba noodles, ramen, spagate, macaroni, etc.), fruit juices, various drinks, cookies, malts, dairy products (e.g.
  • the nutritional supplements are not limited thereto, and may be prepared by adding fucosterol, maban, maban flour, maban extract, Mabu, Mabu, or Mama extract to capsules, tablets and pills.
  • a health functional food but is not limited to, for example, the mother extract or ⁇ extract itself in the form of tea, juice and drinks to be liquefied, granulated, encapsulated and powdered to drink (health drink) Can be consumed.
  • mabanban, mabanban crushed, Mabanban extract, ⁇ , ⁇ crushed or ⁇ extract in the form of food additives can be prepared in powder or concentrate form.
  • it can be prepared in the form of a composition by mixing with fucosterol, mabanban, mabanban crushed, Mabanban extract, ⁇ , ⁇ pulverized or ⁇ extract with active ingredients known to prevent muscle disease or improve muscle function have.
  • the health beverage composition may contain various flavors or natural carbohydrates, etc. as additional components, as in general beverages.
  • the above-mentioned natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose and fructose; Disaccharides such as maltose and sucrose; Polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin; Sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • Sweeteners include natural sweeteners such as taumartin, stevia extract; Synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame;
  • the proportion of the natural carbohydrate is generally about 0.01 to 0.04 g, preferably about 0.02 to 0.03 g per 100 mL of the composition of the present invention.
  • Fucosterol, mabanban, mabanban crushed, Mabanban extract, ⁇ , ⁇ crushed or ⁇ extract may be contained as an active ingredient in the food composition for preventing or improving muscle diseases, the amount of which is to prevent muscle disease or improve muscle function It is not particularly limited to the amount effective to achieve the above, but preferably 0.01 to 100% by weight based on the total weight of the total composition.
  • the food composition of the present invention is mixed with fucosterol, mabanban, mabanban powder, Mabanban extract, ⁇ , ⁇ crushed or ⁇ extract with other active ingredients known to be effective in the composition for preventing muscle diseases or improving muscle function. Can be prepared.
  • the health food of the present invention is various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, coloring agents, pectic acid, salts of pectic acid, alginic acid, salts of alginic acid, organic acids, protective colloidal thickeners, pH regulators, stabilizers, preservatives, Glycerin, alcohol or carbonation agent, and the like.
  • the health food of the present invention may contain a flesh for preparing natural fruit juice, fruit juice beverage or vegetable beverage. These components can be used independently or in combination. The proportion of such additives is not critical but is generally selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.
  • the composition for improving muscle function of the present invention may also be a cosmetic composition.
  • the cosmetic composition of the present invention contains fucosterol, mabanban, mabanban mashed, Mabanban extract, Mabu, Mabu mamulma or Mama extract as an active ingredient, and with a dermatologically acceptable excipient, a basic cosmetic composition (cosmetic water, cream, essence)
  • a basic cosmetic composition cosmetic water, cream, essence
  • facial cleansing agents such as cleansing foams and cleansing water, packs, body oils, color cosmetic compositions (foundations, lipsticks, mascara, makeup bases), hair product compositions (shampoos, rinses, hair conditioners, hair gels) and soaps.
  • facial cleansing agents such as cleansing foams and cleansing water, packs, body oils, color cosmetic compositions (foundations, lipsticks, mascara, makeup bases), hair product compositions (shampoos, rinses, hair conditioners, hair gels) and soaps.
  • cosmetic cleansing agents such as cleansing foams and cleansing water, packs, body oils, color cosmetic compositions (foundations, lipsticks, mascara
  • the excipients include, but are not limited to, emollients, skin penetration enhancers, colorants, fragrances, emulsifiers, thickeners and solvents.
  • fragrances, pigments, fungicides, antioxidants, preservatives and moisturizing agents may be further included, and may include thickeners, inorganic salts, synthetic polymer materials and the like for the purpose of improving the properties.
  • thickeners inorganic salts, synthetic polymer materials and the like for the purpose of improving the properties.
  • the cream When the cream is prepared, it can be prepared by adding fucosterol, hatban, hatban mill, millban extract, ⁇ , ⁇ mill,, extract or salt thereof to the cream base of general oil-in-water type (O / W). .
  • fucosterol hatban, hatban mill, millban extract, ⁇ , ⁇ mill,, extract or salt thereof
  • synthetic or natural materials such as proteins, minerals, vitamins, etc., for the purpose of improving physical properties, such as flavors, chelating agents, pigments, antioxidants, and preservatives, may be added.
  • the content of the fucosterol, hatban, hatban mill, millban extract, ⁇ , ⁇ mill or ⁇ extract contained in the cosmetic composition of the present invention is not limited thereto, but is preferably 0.001 to 10% by weight based on the total weight of the composition. It is more preferable that it is 0.01 to 5 weight%. If the content is less than 0.001% by weight can not be expected to improve the desired muscle function, more than 10% by weight may be difficult to manufacture safety or formulation.
  • composition of the present invention may be added to a feed additive or a feed composition comprising the same for the purpose of preventing or improving muscle diseases.
  • the term "feed additive” is a substance added to the feed for the purpose of various effects, such as supplementation of nutrients and weight loss prevention, improving the digestive availability of the fiber in the feed, improving the quality, prevention of reproductive disorders and improving conception, prevention of high temperature stress in summer It includes.
  • the feed additive of the present invention corresponds to a feed supplement under the Feed Control Act, and includes mineral preparations such as sodium bicarbonate, bentonite, magnesium oxide, and composite minerals, mineral preparations such as trace minerals such as zinc, copper, cobalt, and selenium, and keratin.
  • Vitamins AD, E, nicotinic acid, vitamin B complexes, protective amino acids such as methionine, lysine, protective fatty acids such as fatty acid calcium salts, probiotics (lactic acid bacteria), yeast culture, fungi fermentation products, Yeasts and the like may further be included.
  • the term “feed” is any natural or artificial diet, one meal, or the like or a component of the one meal for the animal to eat, ingest, and digest, and to prevent or improve muscle diseases according to the present invention.
  • the feed containing the composition for the active ingredient can be prepared in various forms of feed known in the art, and preferably include, but is not limited to, rich feed, forage and / or special feed.
  • the rich feed includes seed fruits containing grains such as wheat, oats and corn, and by-products obtained by refining grains, bran, beans, fluids, sesame seeds, linseed, coco, etc., including rice bran, bran and barley bran.
  • Fish soluble which is a concentrate of fresh liquids obtained from fish residues, fish residues, and fish residues such as by-products such as seaweed, sweet potatoes, and potatoes, which are the remaining components of starch residue. soluble), meat meal, blood meal, milk powder, skim milk powder, milk from cheese, and whey, the balance of manufacturing casein from skim milk, dried foods such as dried whey, yeast, chlorella, and seaweed. This is not restrictive.
  • raw vegetables such as grasses, grasses, and green grass, fodder turnips, fodder beets, and root vegetables such as Lutherbearger, a type of turnip, raw grass, green grass crops, and grains Silage (silage), grasses, grasses, and dried hay, straws of breeders, and leaves of legumes, which are filled and fermented by lactic acid fermentation, are not limited thereto.
  • Special feeds are supplemented with mineral feeds such as oyster shells and rock salts, urea feeds such as urea and its derivatives such as diureide isobutane, and natural feed ingredients.
  • Feed additives and dietary supplements which are substances added in small amounts, are not limited thereto.
  • Feed additives for the prevention or improvement of the muscle diseases according to the present invention is fucosterol, maban, mabanban maize, mabanban extract, majapan, mashed maize or the like in an appropriate effective concentration range according to various feed preparation methods known in the art.
  • ⁇ can be prepared by adding the extract.
  • the feed additive according to the present invention can be applied without limitation as long as it is an individual for the purpose of preventing or improving muscle diseases.
  • it can be applied to any individual such as non-human animals such as monkeys, dogs, cats, rabbits, marmots, rats, mice, cows, sheep, pigs, goats, birds and fish.
  • the dried mother board was pulverized with a mixer, and 100 g of the milled mother board sample was put in 1 L of 100% methanol, and extracted three times at room temperature for 24 hours.
  • the extracted sample was filtered under reduced pressure with Whatman No. 2 filter paper, and the filtered extract was concentrated with a vacuum rotary concentrator to remove the solvent component, thereby obtaining Maban methanol extract.
  • the dried mother board was pulverized with a mixer, and 100 g of the milled mother board sample was put in 1 L of 100% ethanol, and extracted three times at room temperature for 24 hours.
  • the extracted sample was filtered under reduced pressure with Whatman No. 2 filter paper, and the filtered extract was concentrated with a vacuum rotary concentrator to remove the solvent component, thereby obtaining Maban ethanol extract.
  • the dried mother board was pulverized with a mixer, and 100 g of the milled mother board sample was put in 1 L of 100% ethyl acetate, and extracted three times at room temperature for 24 hours.
  • the extracted sample was filtered under reduced pressure with Whatman No. 2 filter paper, and the filtered extract was concentrated with a vacuum rotary concentrator to remove the solvent component, thereby obtaining Maban ethyl acetate extract.
  • the dried mother board was ground with a mixer, and 100 g of the milled mother board sample was put in 1 L of 100% hexane, and extracted three times at room temperature for 24 hours.
  • the extracted sample was filtered under reduced pressure with Whatman No. 2 filter paper, and the filtered extract was concentrated with a vacuum rotary concentrator to remove the solvent component, thereby obtaining Maban hexane extract.
  • the dried mother board was ground with a mixer, and then 100 g of the milled mother board sample was put in 1 L of water and extracted with stirring at 80 hours.
  • the extracted sample was filtered under reduced pressure with Whatman No. 2 filter paper, and the filtered extract was concentrated with a vacuum rotary concentrator to remove the solvent component, thereby obtaining a maban hot water extract.
  • the dried mother board was pulverized with a mixer, and then 1 g of the milled mother board and 76 mL of 18% ethanol were put in a polyethylene pack, sealed, and extracted using an ultra-high pressure extractor (Frescal MFP-7000; Mitsubishi Heavy Industries).
  • the ultrahigh pressure extraction conditions were 320 MPa extraction time and 5 min extraction time.
  • the extracted sample was filtered with Whatman No. 2 filter paper, and the filtered extract was concentrated with a vacuum rotary concentrator to remove the solvent component to obtain a Maban ultra-high pressure extract.
  • the dried mother board was pulverized with a mixer, and then 1 g of the milled mother board sample was filled into a sample cartridge and extracted using a supercritical fluid extraction device (SFX 3560, Isco Inc., Lincoln, NE, USA).
  • the supercritical fluid extraction conditions were 40 MPa extraction pressure, 50 extraction temperature, 60 mL / min flow rate of supercritical carbon dioxide, and 60 min extraction time.
  • the pressure of the extraction device was lowered to release the supercritical fluid state, thereby obtaining a mother and child supercritical fluid extract.
  • the dried mother board was pulverized with a mixer, and then 1 g of the ground mother board was put in 10 mL of distilled water and extracted using a subcritical fluid extraction device (DIONEX Accelerated Solvent Extractor 100, DIONEX co., USA). Subcritical fluid extraction conditions were carried out under the conditions of 2.5 MPa, extraction temperature 150, extraction time 15 minutes. The extracted sample was filtered through Whatman No. 2 filter paper, and the filtered extract was lyophilized at -40 to obtain a mother-ban subcritical fluid extract.
  • DIONEX Accelerated Solvent Extractor 100 DIONEX co.
  • the dried Soybean was pulverized with a mixer, and 100 g of the crushed Soybean sample was added to 1 L of 100% methanol, and extracted three times at room temperature for 24 hours.
  • the extracted sample was filtered under reduced pressure with Whatman No. 2 filter paper, and the filtered extract was concentrated with a vacuum rotary concentrator to remove the solvent component, thereby obtaining a methanol extract.
  • the dried Soybean was pulverized by a mixer, and 100 g of the Soybean pulverized sample was put into 1 L of 100% ethanol and extracted three times at room temperature for 24 hours.
  • the extracted sample was filtered under Whatman No. 2 filter paper, and the filtrate was concentrated with a vacuum rotary concentrator to remove the solvent component.
  • the dried Soybean was pulverized by a mixer, and 100 g of the Soybean pulverized sample was put into 1 L of 100% ethyl acetate and extracted three times at room temperature for 24 hours.
  • the extracted sample was filtered under reduced pressure with Whatman No. 2 filter paper, and the filtered extract was concentrated with a vacuum rotary concentrator to remove the solvent component, thereby obtaining ethyl acetate extract.
  • the dried Soybean was pulverized with a mixer, and 100 g of the crushed Soybean sample was added to 1 L of 100% hexane, and extracted three times at room temperature for 24 hours.
  • the extracted sample was filtered under reduced pressure with Whatman No. 2 filter paper, and the filtered extract was concentrated with a vacuum rotary concentrator to remove the solvent component, thereby obtaining a hexane extract.
  • the dried clay was pulverized with a mixer, and then 100 g of the ground char sample was put in 1 L of water and extracted with stirring at 80 hours for 2 hours.
  • the extracted sample was filtered under Whatman No. 2 filter paper, and the filtrate was concentrated with a vacuum rotary concentrator to remove the solvent component, thereby obtaining a hot water extract.
  • the dried mill was ground with a mixer, and then 1 g of the ground mill and 76 mL of 18% ethanol were put in a polyethylene pack, sealed, and extracted using an ultra-high pressure extractor (Frescal MFP-7000; Mitsubishi Heavy Industries). It was.
  • the ultrahigh pressure extraction conditions were 320 MPa extraction time and 5 min extraction time.
  • the extracted sample was filtered with Whatman No. 2 filter paper, and the filtered extract was concentrated with a vacuum rotary concentrator to remove the solvent component.
  • the dried char was ground with a mixer, and then 1 g of the ground char was charged into a sample cartridge and extracted using a supercritical fluid extraction device (SFX 3560, Isco Inc., Lincoln, NE, USA).
  • the supercritical fluid extraction conditions were 40 MPa extraction pressure, 50 extraction temperature, 60 mL / min flow rate of supercritical carbon dioxide, and 60 min extraction time.
  • the pressure of the extraction device was lowered to release the supercritical fluid state to obtain a supercritical fluid extract.
  • the dried mill was ground with a mixer, and then 1 g of the milled mill sample was placed in 10 mL of distilled water and extracted using a subcritical fluid extraction device (DIONEX Accelerated Solvent Extractor 100, DIONEX co., USA). Subcritical fluid extraction conditions were carried out under the conditions of 2.5 MPa, extraction temperature 150, extraction time 15 minutes. The extracted sample was filtered through Whatman No. 2 filter paper, and the filtered extract was lyophilized at -40 to obtain a subcritical fluid extract.
  • DIONEX Accelerated Solvent Extractor 100 DIONEX co.
  • DMEM Dulbecco's modified Eagle's media
  • FBS fetal bovine serum
  • the well plate was added to 2 X 10 5 cell / ml. When the cell density reached about 80-85%, the medium in the well was removed, and the ethanol extract (20) prepared in Example 1-2 in DMEM (Hyclone) containing 2% horse serum (HS; Hyclone) was used.
  • Example 3 ⁇ g / mL
  • ⁇ ethanol extract (20 ⁇ g / mL) prepared in Example 2-2 and fucosterol (10 ⁇ M) isolated and purified in Example 3 were dissolved, and then treated with cells to differentiate myotube differentiation. Induced. At this time, the group treated with 0.01% DMSO instead of the sample was used as a control. This process was carried out for 6 days for 2 days to differentiate and then dissolved in NP-40 buffer solution (ELPIS-Biotech, Daejeon, Korea) containing a proteinase inhibitor cocktail. The cells dissolved in the buffer solution were transferred to a 1.5 ml tube and centrifuged at 13,000 rpm for 10 minutes to obtain only the supernatant.
  • NP-40 buffer solution EPIS-Biotech, Daejeon, Korea
  • Example 3 The fucosterol isolated and purified in Example 3 was conducted in the same manner as in Example 4 at concentrations of 1 and 10 ⁇ M, respectively. Protein bands were identified by treatment with p-p70S6K and p-4EBP1 primary antibodies (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) involved in the mRNA translation process instead of the p-mTOR primary antibody.
  • the protein expression levels of p-p70S6K and p-4EBP1, which are involved in the mRNA translation process, in L6 muscle cells may be increased by treatment with fucosterol.
  • the fucosterol of the present invention promotes the mRNA translation process for muscle production in muscle cells.
  • L6 myoblast (ATCC), a muscle cell, was added to 2 ⁇ 10 5 cells / ml in a 6-well plate with DMEM (Hyclone) containing 10% FBS (Hyclone).
  • DMEM Hyclone
  • FBS Hyclone
  • the fucosterols isolated and purified in Example 3 in DMEM (Hyclone) containing 2% HS (Hyclone) were 1 and 10, respectively.
  • the cells were treated to induce myotube differentiation.
  • the group treated with 0.01% DMSO instead of the sample was used as a control.
  • Reverse primer 5'-CAGAGCCTGCAGACCTTCAA-3 '(SEQ ID NO: 2)
  • Reverse primer 5'-CTTTCTTGAGCCTGCGCTTC-3 '(SEQ ID NO: 4)
  • Reverse primer 5'-CTCTCAGCTGTGGTGCTGAA-3 '(SEQ ID NO: 6)
  • the amplified cDNA was isolated by electrophoresis with 1.5% agarose gel, and cDNA band was identified using G; BOX EF imaging system (Syngene). The results are shown in FIG.
  • Mabanban extract of the present invention has an excellent ability to promote muscle differentiation in muscle cells.
  • L6 myoblast (ATCC) in the same manner as in Example 6, ⁇ prepared in Examples 2-2 to 2-5 in DMEM (Hyclone) containing 2% HS (Hyclone) Ethanol extract, ethyl acetate extract, hexane extract and hot water extract were dissolved at a concentration of 10 ⁇ g / mL, and then treated with cells to induce myotube differentiation. At this time, the group treated with 0.01% DMSO instead of the sample was used as a control. This process was carried out for 2 days and 6 days to differentiate and RT-PCR was performed in the same manner as in Example 6.
  • L6 myoblast (ATCC), a muscle cell, was added to 2 ⁇ 10 5 cells / ml in a 6-well plate with DMEM (Hyclone) containing 10% FBS (Hyclone).
  • DMEM Hyclone
  • FBS Hyclone
  • the media in the wells were removed and myotube differentiation was induced by treating DMEM (Hyclone) containing 2% HS (Hyclone) to the cells. Once every two days, the cells were replaced with fresh medium for a total of six days of differentiation.
  • DMEM fetal calf serum
  • EPIS-Biotech Reverse Transcriptase Premix
  • Reverse primer 5'-AGGTCCCGCCCATCGCTCA-3 '(SEQ ID NO: 8)
  • Reverse primer 5'-ATTCCTGCTTGTAGATGTCG-3 '(SEQ ID NO: 10)
  • Reverse primer 5'-CTCTCAGCTGTGGTGCTGAA-3 '(SEQ ID NO: 6)
  • the amplified cDNA was isolated by electrophoresis with 1.5% agarose gel, and cDNA band was identified using G; BOX EF imaging system (Syngene). The results are shown in FIG.
  • Muscle cells were treated with DMEM (Hyclone) containing 2% HS (Hyclone) in the same manner as in Example 9, followed by myotube differentiation, and then in DMEM (Hyclone) containing 50 ng / mL TNF- ⁇ (PeproTech). After dissolving Maban ethanol extract, ethyl acetate extract, hexane extract and hot water extract prepared in Examples 1-2 to 1-5 at a concentration of 10 ⁇ g / mL, RT-PCR was performed in the same manner as in Example 9.
  • Mabanban extract of the present invention has an excellent ability to inhibit muscle protein degradation in muscle cells.
  • Muscle cells were treated with DMEM (Hyclone) containing 2% HS (Hyclone) in the same manner as in Example 9, followed by myotube differentiation, and then in DMEM (Hyclone) containing 50 ng / mL TNF- ⁇ (PeproTech).
  • DMEM Hexane extract
  • TNF- ⁇ TNF- ⁇
  • the p-mTOR protein band was developed using ECL western blotting detection reagents (Amersham, Tokyo, Japan) and the protein band developed using G; BOX EF imaging system (Syngene, Cambridge, UK). The density was measured. In this case, the density of the control protein band was 100%, and the density of the relative protein band of the experimental group treated with the sample was expressed as a percentage (%).
  • Table 1 The results are shown in Table 1 below.
  • Example 1-6 Increased p-mTOR Protein Expression by High Pressure Extracts Experimental group Relative density ( % ) Control 100
  • Example 1-6 131
  • Example 1-7 129
  • Example 1-8 143
  • Example 2-6 128 Example 2-7 140
  • Example 2-8 133
  • mice Five-week-old Wistar rats (Daehan Biolink, Korea) were acclimated for 1 week and TNF- ⁇ 100 ng / g was supplied for 2 weeks to induce muscular atrophy. Divided into six groups and used in the experiment. Experimental group 500 mg / kg body weight dry powder 500 mg / kg body weight, 500 mg / kg body weight ethanol extract prepared in Example 1-2, 500 mg / kg body weight dry powder ⁇ ethanol extract 500 prepared in Example 2-2 mg / kg body weight, suspended in 0.25% carboxymethylcellulose at a concentration of 300 mg / kg body weight of the fucosterol prepared in Example 3 and administered once a day for 8 weeks at a constant time. In this case, a control group was used to administer TNF- ⁇ to the same amount of 0.25% carboxymethyl cellulose ingested by the experimental group.
  • the powder of the present invention was prepared by mixing the fucosterol, mabanban pulverum, mabanban extract, ⁇ crushed or ⁇ extract 50 mg, and 2 g of crystalline cellulose in a hermetic bag according to a conventional powder preparation method.
  • the tablets were prepared by mixing the fucosterol, maban crushed, maban extract, ⁇ crushed or ⁇ extract 50 mg, 400 mg of crystal cellulose, 5 mg of magnesium stearate, and then tableting according to a conventional tablet preparation method of the present invention.
  • Gelatin according to the conventional method for preparing capsules after mixing the fucosterol, maban crushed, maban extract, ⁇ crushed or ⁇ extract 30 mg, whey protein 100 mg, crystalline cellulose 400 mg, magnesium stearate 6 mg of the present invention Capsules were prepared by filling the capsules.
  • the active ingredient is dissolved in distilled water for injection according to a conventional injection method, and the pH is adjusted to about 7.5. Then, 100 mg of fucosterol of Example 3, distilled water for injection, and a pH adjuster are mixed in a 2 ml ampoule. Injections were prepared by filling and sterilization.
  • Fucosterol, morus pulverum, morus pulverum, pulverulent pulverum or pulverulent extract of the present invention 1000 mg, vitamin A acetate 70 ug, vitamin E 1.0 mg, vitamin B1 0.13 mg, vitamin B2 0.15 mg, vitamin B6 0.5 mg, vitamin B12 0.2 ug, Vitamin C 10 mg, Biotin 10 ug, Nicotinamide 1.7 mg, Folic acid 50 ug, Calcium Pantothenate 0.5 mg, Ferrous Sulfate 1.75 mg, Zinc Oxide 0.82 mg, Magnesium Carbonate 25.3 mg, Potassium Phosphate 15 mg , 55 mg of dibasic calcium phosphate, 90 mg of potassium citrate, 100 mg of calcium carbonate, 24.8 mg of magnesium chloride may be prepared, and the compounding ratio may be arbitrarily modified, and according to the conventional health food manufacturing method. After mixing the components of the granules are prepared, it can be used for preparing a health food composition according to a conventional
  • Purified water is added to the fucosterol, maban crushed, maban extract, ⁇ crushed or ⁇ extract 1000 mg, citric acid 1000 mg, oligosaccharide 100 g, plum concentrate 2 g, 1 g of taurine of the present invention, the total 900 ml normal health drink
  • the resulting solution is filtered and obtained in a sterilized 2 L container, sealed and sterilized and stored in refrigerated and then used in the manufacture of a healthy beverage composition.
  • Candy was prepared in a conventional manner by combining 60% by weight of sugar, 39.8% by weight of starch syrup, and 0.1% by weight of fragrance, and 0.1% by weight of fucosterol, hatban powder, hatpan extract, beet flour or beet extract of the present invention.
  • the nutrient cosmetics according to the conventional method was prepared by the fucosterol, maban crushed mash, maban crushed extract, ⁇ crushed crushed extract or ⁇ extract according to the nutrient lotion formulation ratio of Table 3 below.
  • the fucosterol of the present invention was prepared according to the conventional method.
  • Nutrients cream was prepared according to a conventional method by the fucosterol, hatban grinds, hatban extracts, millet extracts or millet extracts of the present invention according to the nutrition cream formulation ratio of Table 5.
  • Massage cream was prepared according to a conventional method by the fucosterol, mabanban crushed, mabanban extract, ⁇ crushed or ⁇ extract of the present invention according to the massage cream formulation ratio of Table 6.
  • the pack was prepared according to a conventional method using the fucosterol, hatban grinds, hatban extracts, jam mills, or millet extracts of the present invention in the pack formulation ratios of Table 7 below.
  • the gel was prepared according to a conventional method according to the fucosterol, mabanban pulverized, mabanban extract, ⁇ crushed or ⁇ extract of the present invention according to the gel formulation ratio of Table 8.
  • the fucosterol of the present invention mash crushed mash, mash mash extract, mash crushed or mash extract was mixed with the ingredients of Table 9 to prepare a feed additive according to a conventional method.
  • the feed of the present invention was prepared according to a conventional method by mixing the fucosterol, mabanban crushed, Mabanban extract, ⁇ crushed or ⁇ extract the ingredients of the following Table 10.
  • the present invention provides a composition for preventing or treating muscle diseases or improving muscle function, including fucosterol, hatban, hatban grind, moth extract, ⁇ , ⁇ crush or ⁇ extract.
  • the fucosterol, hatban, hatban mill, millban extract, ⁇ , ⁇ mill or ⁇ extract of the present invention is involved in the increase in protein expression of the major gene p-mTOR involved in muscle protein synthesis, muscle protein degradation Inhibition of mRNA expression of MuRF-1 and atrogin-1 and increase of mRNA expression of MyoD and myogenin, which are involved in muscle differentiation, have an excellent effect on preventing, improving or treating muscle diseases or improving muscle function.
  • the composition of the present invention is a natural product, it can be safely used without side effects, and it is highly industrially available because it can provide a composition showing an excellent effect on preventing, improving or treating muscle diseases or improving muscle function.

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Abstract

본 발명은 퓨코스테롤(fucosterol), 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 포함하는 근육 질환 예방 또는 치료용 또는 근 기능 개선용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물은 근 단백질 합성에 관여하는 주요 유전자 p-mTOR의 단백질 발현 증가, 근 단백질 분해에 관여하는 MuRF-1과 atrogin-1의 mRNA 발현 억제, 근육 분화에 관여하는 MyoD와 myogenin의 mRNA 발현을 증가시킴에 따라, 근 기능을 탁월하게 증강하는 효과가 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 천연물이므로 부작용 없이 안전하게 사용될 수 있어, 의약품, 식품, 화장품 또는 가축 사료 또는 사료첨가제 등으로 사용될 수 있다.

Description

근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 또는 근 기능 개선용 조성물
본 출원은 2015년 05월 26일 출원된 대한민국 특허출원 제10-2015-0072740호 및 2016년 05월 26일 출원된 대한민국 특허출원 제10-2016-0064917호를 우선권으로 주장하고, 상기 명세서 전체는 본 출원의 참고문헌이다.
본 발명은 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 또는 근 기능 개선용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 퓨코스테롤, 모자반(Sargassum fulvellum), 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳(Sargassum fusiforme), 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 포함하는 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 또는 근 기능 개선용 조성물에 관한 것이다.
근위축(Muscle atrophy)이란 근육량의 점진적 감소에 의하여 발생하는 것으로, 근육의 약화 및 퇴행을 일컫는다(Cell, 119(7): 907-910, 2004). 근 위축은 비활동, 산화적 스트레스, 만성 염증에 의해 촉진되며 근육 기능과 운동 능력을 약화시킨다(Clinical Nutrition, 26(5): 524-534, 2007). 근육기능을 결정짓는 가장 중요한 요소는 근육량이며, 이는 단백질 합성과 분해의 균형에 의해 유지된다. 근 위축증은 단백질 분해가 합성보다 더 일어날 때 발생한다(The International Journal of Biochemistry and Cell Biology, 37(10): 1985-1996, 2005).
근육 크기는 근육 내에서 일어나는 동화작용(anabolism)이나 이화작용(catabolism)을 유도하는 세포 내 신호전달 과정(signaling pathways)에 의해 조절되며 근육 단백질의 분해보다 합성을 유도하는 신호전달 반응이 많이 일어날 경우 근육 단백질 합성이 증가 되는데, 이는 근육 단백질 증가에 따른 근육 크기 증가(hypertrophy, 근비대)나 근섬유 수 증가(hyperplasia)로 나타난다(The Korea Journal of Sports Science, 20(3): 1551-1561, 2011).
근 단백질 합성에 관여하는 인자들은 근 세포 내에서 phosphatidylinositol-3 kinase (PI3K)/Akt pathway의 자극을 기점으로 다운스트림 단백질(downstream proteins)을 인산화시킴으로써 단백질 합성을 유도한다. PI3K/Akt 신호전달에 의한 라파마이신의 포유동물 타겟(mammalian target of rapamycin, mTOR)의 활성은 세포 내에서 다양한 성장 신호를 통합하는 중심 성장 신호전달 인자로 인정되고 있다. mTOR는 mRNA 번역을 개시하는 두 인자, 4E-binding protein (4E-BP1)과 phosphorylated 70-kDa ribosomal S6 kinase (p70S6K)를 활성화시킴으로써 근 단백질 합성을 유도하여 근육량 증가에 기여한다 (The Korea Journal of Sports Science, 20(3): 1551-1561, 2011; The International Journal of Biochemistry and Cell Biology, 43(9): 1267-1276, 2011). 반대로 전사 인자(transcription factor)인 forhead box (FoxO)가 세포질에서 핵 내로 이동하면 단백질 분해에 관여하는 E3 ubiquitin ligase인자 atrogin-1과 MuRF-1의 발현을 증가시킨다(Disease Models and Mechanisms, 6: 25-39, 2013). 이들의 발현량이 증가하면 근육 내의 단백질 분해가 촉진되어 근육량이 줄어들게 된다. 따라서 mTOR의 활성 촉진과 atrogin-1과 MuRF-1 발현 억제는 근육 단백질의 양을 증가시켜 근육량을 증가시키게 된다.
근육세포의 분화와 근육 형성은 다양한 근육 조절 인자(muscle regulatory factors)에 의해 조절된다. 그 중, MyoD는 근육 특이 유전자의 발현을 개시하게 하고 근육위성세포(muscle satellite cells)가 근원세포(myoblast)로 분화하는 것을 유도한다. MyoD의 활성에 의한 myogenin 발현의 유도는 근원세포의 결합(fusion)에 가장 중요한 요소로, 근관세포(myotube)의 형성에 관여한다. 이와 같은 과정을 통해 형성된 근섬유는 다발을 이루어 최종적으로 근육을 형성하게 된다(Cellular and Molecular Life Sciences, 70: 4117-4130, 2013).
모자반(Sargassum fulvellum)은 모자반속(Sargassum)에 속하는 해조류이다. 지금까지 모자반의 활성으로는 항균(Korean Journal of Food Science and Technology, 42(2): 155-159, 2010), 항염(Journal of Ethnopharmacology, 116(1): 187-190, 2008), 항산(Journal of Food Science and Nutrition, 12(2): 65-73, 2007), 항암(Chemotherapy, 32(12): 1004-1009, 1984), 항광노화(Evidence-based Complementary and Alternative Medicine, 2013: 747846, 2013), 항당뇨(Natural Product Sciences, 18(2): 130-136, 2012) 등의 활성이 보고되어 있다.
톳(Sargassum fusiforme)은 모자반속(Sargassum)에 속하는 해조류이다. 지금까지 톳에 대한 활성으로는 항산과 항염(Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 14(3): 463-468, 2015), 항당뇨(Food Science and Biotechnology, 23(3): 2037-2044, 2014), 항바이러스(Natural Medicines, 48(3): 173-179, 1994), 항암(Journal of Medicinal Food, 12(4): 782-787, 2009), 항골다공증(Journal of Medicinal Food, 15(4): 384-390, 2012) 등의 활성이 보고되어 있다.
퓨코스테롤은 모자반과 톳을 포함한 해조류에 많이 함유되어 있는 물질로 한국, 중국, 일본 등 아시아 지역의 해안에 서식하는 해조류에서 많이 발견되고 있다. 지금까지 퓨코스테롤의 활성은 항암(Pharmacognosy Magazine, 8(29): 60-64, 2012), 항당뇨(Archives of Pharmacal Research, 27(11): 1120-1122, 2004), 항산화(Bioorganic and Medicinal Chemistry, 17(5): 1963-1973, 2009), 혈중 지질성분 개선(Biochemical and Biophysical Research Communications, 369(2): 363-368, 2008), 콜레스테롤 대사 개선(New Phytologist, 183(2): 291-300, 2009), 항균(Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 51(2): 450-4555, 2010), 항곰팡이(Natural Product Research, 24(15): 1481-1487, 2010), 항노화(Photochemistry and Photobiology, 89(4): 911-918, 2013) 등이 보고되어 있다.
그러나, 본 발명의 이전에는 퓨코스테롤, 모자반 또는 톳의 근육 질환 예방, 개선 또는 치료 또는 근 기능 개선에 관해서는 알려진바 없었다.
이에 본 발명자들은 우수한 근 기능 조절 활성을 가지며 안전하게 적용될 수 있는 천연물질을 탐색한 결과, 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물이 근육 질환 예방, 개선 또는 치료 또는 근 기능 개선 활성이 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 하기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤(fucosterol) 화합물 또는 이를 포함하는 모자반(Sargassum fulvellum) 추출물 또는 톳(Sargassum fusiforme) 추출물을 유효성분으로 함유하는 근육 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2016005597-appb-I000001
.
본 발명의 다른 목적은 모자반(Sargassum fulvellum), 이의 분쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 톳(Sargassum fusiforme), 이의 분쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 치료용 또는 약학적 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 하기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤 화합물 또는 이를 포함하는 모자반(Sargassum fulvellum) 추출물 또는 톳(Sargassum fusiforme) 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는데 있다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2016005597-appb-I000002
.
본 발명의 또 다른 목적은 모자반(Sargassum fulvellum), 이의 분쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 톳(Sargassum fusiforme), 이의 분쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 하기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤(fucosterol) 화합물 또는 이를 포함하는 모자반(Sargassum fulvellum) 추출물 또는 톳(Sargassum fusiforme) 추출물을 유효성분으로 포함하는 근 기능 개선용 화장료 조성물을 제공하는데 있다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2016005597-appb-I000003
.
본 발명의 다른 목적은 모자반(Sargassum fulvellum), 이의 분쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 근 기능 개선용 화장료 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 톳(Sargassum fusiforme), 이의 분쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 근 기능 개선용 화장료 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 하기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤(fucosterol) 화합물 또는 이를 포함하는 모자반(Sargassum fulvellum) 추출물 또는 톳(Sargassum fusiforme) 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 사료 첨가제를 제공하는데 있다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2016005597-appb-I000004
.
본 발명의 또 다른 목적은 모자반(Sargassum fulvellum), 이의 분쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 사료 첨가제를 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 톳(Sargassum fusiforme), 이의 분쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 사료 첨가제를 제공하는데 있다.
상기 과제를 해결하기 위한 수단으로서, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤(fucosterol) 화합물 또는 이를 포함하는 모자반(Sargassum fulvellum) 추출물 또는 톳(Sargassum fusiforme) 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2016005597-appb-I000005
.
본 발명은 또한, 모자반(Sargassum fulvellum), 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳(Sargassum fusiforme), 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 하기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤(fucosterol) 화합물 또는 이를 포함하는 모자반(Sargassum fulvellum) 추출물 또는 톳(Sargassum fusiforme) 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2016005597-appb-I000006
.
본 발명은 또한, 모자반(Sargassum fulvellum), 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳(Sargassum fusiforme), 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 하기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤(fucosterol) 화합물 또는 이를 포함하는 모자반(Sargassum fulvellum) 추출물 또는 톳(Sargassum fusiforme) 추출물을 유효성분으로 포함하는 근 기능 개선용 화장료 조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2016005597-appb-I000007
.
본 발명은 또한, 모자반(Sargassum fulvellum), 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳(Sargassum fusiforme), 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 유효성분으로 포함하는 근 기능 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 하기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤(fucosterol) 화합물 또는 이를 포함하는 모자반(Sargassum fulvellum) 추출물 또는 톳(Sargassum fusiforme) 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 사료 첨가제를 제공한다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2016005597-appb-I000008
.
본 발명은 또한, 모자반(Sargassum fulvellum) 추출물 또는 톳(Sargassum fusiforme) 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 사료 첨가제를 제공한다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤은 모자반 추출물 또는 톳 추출물로부터 분리될 수 있다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6의 유기용매, 아임계 유체 및 초임계 유체로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 용매로 모자반 또는 톳을 추출하여 수득할 수 있다.
본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 탄소수 1 내지 6의 유기용매는 탄소수 1 내지 6의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌 클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane) 및 석유에테르(petroleum ether)로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 추출물은 100 MPa 내지 1000 MPa의 초고압 조건 하에서 모자반 또는 톳을 추출하여 수득할 수 있다.
본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 근육 질환은 긴장감퇴증(atony), 근위축증(muscular atrophy), 근이영양증(muscular dystrophy), 근육 퇴화, 근무력증, 악액질(cachexia) 및 근육감소증(sarcopenia)으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.
본 발명에 따른 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물은 근 단백질 합성에 관여하는 p-mTOR의 단백질 발현 증가, 근 단백질 분해에 관여하는 MuRF-1과 atrogin-1의 mRNA 발현 억제, 근육 분화에 관여하는 MyoD와 미오게닌의 mRNA 발현을 증가시킴에 따라, 근육량을 증대시키는데 우수한 효과가 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 천연물이므로 부작용 없이 안전하게 사용될 수 있어, 의약품, 식품, 화장품 또는 가축 사료 또는 사료첨가제 등으로 사용될 수 있다.
도 1은 L6 근육세포에서, 모자반 에탄올 추출물, 톳 에탄올 추출물 또는 퓨코스테롤의 처리에 따른 p-mTOR의 단백질 발현을 측정한 결과를 보여준다.
도 2는 L6 근육세포에서, 퓨코스테롤 처리에 따른 p-4EBP1과 p-p70S6K의 단백질 발현을 측정한 결과를 보여준다.
도 3은 L6 근육세포에서, 퓨코스테롤의 처리에 따른 myoD와 myogenin의 mRNA 발현을 측정한 결과를 보여준다.
도 4는 L6 근육세포에서, 모자반 헥산 추출물, 에틸아세테이트 추출물, 에탄올 추출물, 열수 추출물의 처리에 따른 MyoD와 미오게닌myognin의 mRNA 발현을 측정한 결과를 보여준다.
도 5는 L6 근육세포에서, 톳 헥산 추출물, 에틸아세테이트 추출물, 에탄올 추출물, 열수 추출물의 처리에 따른 MyoD와 myogenin의 mRNA 발현을 측정한 결과를 보여준다.
도 6은 L6 근육세포에서, 퓨코스테롤의 처리에 따른 atrogin-1과 MuRF-1의 mRNA 발현을 측정한 결과를 보여준다.
도 7은 L6 근육세포에서, 모자반 헥산 추출물, 에틸아세테이트 추출물, 에탄올 추출물, 열수 추출물의 처리에 따른 atrogin-1과 MuRF-1의 mRNA 발현을 측정한 결과를 보여준다.
도 8은 L6 근육세포에서, 톳 헥산 추출물, 에틸아세테이트 추출물, 에탄올 추출물, 열수 추출물의 처리에 따른 atrogin-1과 MuRF-1의 mRNA 발현을 측정한 결과를 보여준다.
이하, 본 발명의 구성을 구체적으로 설명한다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤, 모자반 추출물 또는 톳 추출물의 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 또는 근 기능 개선 용도; 하기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 포함하는 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 또는 근 기능 개선용 조성물; 또는 하기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤, 모자반 추출물 또는 톳 추출물을 인간을 포함한 포유동물에 적용하는 것을 포함하는 근육 질환 예방, 개선 또는 치료 또는 근 기능 개선 방법을 제공한다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2016005597-appb-I000009
.
본 명세서에서 ‘모자반(Sargassum fulvellums)’은 물두건버섯과(Helotiaceae)의 모자반속 (Sargassum spp.)에 속하는 해조류이다.
본 명세서에서 ‘톳(Sargassum fusiforme)’는 물두건버섯과(Helotiaceae)의 모자반속 (Sargassum spp.)에 속하는 해조류이다.
본 명세서에서 ‘모자반 분쇄물’ 또는 ‘톳 분쇄물’은 건조된 모자반(Sargassum fulvellum) 또는 톳(Sargassum fusiforme)을 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 인간을 포함한 포유동물이 용이하게 섭취할 수 있으면서 섭취 후 장에서 유효성분이 건조 분쇄물로부터 쉽게 유리되어 결과적으로 포유동물 체내로 용이하게 흡수될 수 있는 형태로 준비되어 사용될 수 있다. 이를 위한 건조 분쇄물 입자의 모양이나 크기는 제한되지 않으나, 입자의 표면이 극대화 될수록 상기에 기재한 유효성분의 유리가 용이하므로 가급적 고운 가루형태로 제조함이 바람직하다. 본 발명의 일실시예에서는 건조된 모자반 또는 톳을 믹서로 분쇄하여 분쇄물을 제조하였다.
본 명세서에서 ‘모자반 추출물’은 모자반(Sargassum fulvellum)을 적합한 용매를 사용하여 추출하여 수득한 것으로, 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들의 조정제물 또는 정제물의 형태를 모두 포함한다. 모자반 추출물의 제조방법은 모자반으로부터 물, 탄소수 1 내지 6의 유기용매 및 아임계 또는 초임계 유체로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출하여 수득할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본 명세서에서 ‘톳 추출물’은 톳(Sargassum fusiforme)을 적합한 용매를 사용하여 추출하여 수득한 것으로, 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들의 조정제물 또는 정제물의 형태를 모두 포함한다. 톳 추출물의 제조방법은 톳으로부터 물, 탄소수 1 내지 6의 유기용매 및 아임계 또는 초임계 유체로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출하여 수득할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 모자반 추출물 또는 톳 추출물은 가열 추출, 냉침 추출 초음파 추출법, 여과법 및 환류추출법 등 당업계의 통상적인 추출방법을 사용하여 제조될 수 있으며, 모자반과 톳은 상업적으로 판매되는 것을 구입하여 사용하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 모자반 또는 톳 추출물은 천연물로부터 추출물을 제조하는 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라, 즉 통상적인 온도, 압력의 조건 하에서 통상적인 용매를 사용하여 분리할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 “분획물”은 다양한 구성성분을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 그룹을 분리하는 분획방법에 의하여 얻어진 결과물을 의미한다. 본 발명에서는 상기와 같이 제조된 모자반 또는 톳 추출물로부터 특정 성분 또는 특정 그룹을 분리하는 분획방법에 의하여 얻어진 결과물을 의미한다.
본 발명에 따른 모자반 또는 톳 분획물을 얻기 위하여 당업계에서 공지된 통상적인 분획 용매, 예를 들어, 물, 에탄올, 메탄올과 같은 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수 저급 알코올 등의 극성 용매 및 헥산, 부탄올, 에틸아세테이트, 클로로포름, 디클로로메탄 등의 비극성 용매, 또는 이들의 혼합 용매가 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 모자반 또는 톳 분획물은 정제과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것도 포함될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따른 모자반 또는 톳 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획물, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등으로 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획물도 본 발명의 모자반 또는 톳 분획물에 포함된다.
본 명세서에서, ‘근’은 심줄, 근육, 건을 포괄적으로 지칭하고, ‘근 기능’은 근육의 수축에 의해 힘을 발휘하는 능력을 의미하며, 근육이 저항을 이겨내기 위하여 최대한으로 수축력을 발휘할 수 있는 능력인 근력, 근육이 주어진 중량에 얼마나 오랫동안 또는 얼마나 여러 번 수축과 이완을 반복할 수 있는지를 나타내는 능력인 근지구력, 단시간 내에 강한 힘을 발휘하는 능력인 순발력을 포함한다. 이러한 근 기능은 간이 주관하며, 근육량에 비례한다. 용어‘근 기능 개선’은 근 기능을 더 좋게 향상시키는 것을 말한다.
본 발명의 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 또는 근 기능 개선용 조성물은 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물 또는 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 단독으로 함유하거나, 모자반, 모자반 분쇄물 또는 모자반 추출물과 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 1 내지 100의 비율로 섞어 함유하거나 또는 그의 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 추가적인 성분을 포함하게 되면 본 발명의 조성물의 근 기능 개선 효과가 더욱 증진될 수 있을 것이다. 상기 성분 추가 시에는 복합 사용에 따른 피부 안전성, 제형화의 용이성, 유효성분들의 안정성을 고려할 수 있다.
본 발명은 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물; 근육 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물; 근 기능 개선용 화장료 조성물; 및 근육 질환 예방 또는 개선용 사료 첨가제를 제공한다.
본 발명은 또한, 화학식 1로 표시되는 화합물 또한 이를 함유하는 모자반 추출물 또는 톳 추출물을 유효성분으로 함유하는 근육 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물; 근육 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물; 근 기능 개선용 화장료 조성물; 및 근육 질환 예방 또는 개선용 사료 첨가제를 제공한다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2016005597-appb-I000010
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상기 화학식 1의 화합물은 일명 퓨코스테롤(fucosterol)이라 한다.
상기 화학식 1의 화합물은 해조류 및 식물 추출물 또는 이들의 분획물로부터 분리 또는 합성하여 이용하거나, 시판되고 있는 화합물을 이용할 수 있다.
한 구체예에서, 상기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤은 모자반 추출물 또는 톳 추출물로부터 분리된 것일 수 있다.
한 구체예에서, 모자반 추출물은 에탄올 추출물, 열수 추출물, 헥산 추출물, 에틸아세테이트 추출물, 초고압 추출물, 초임계 유체 추출물 또는 아임계 유체 추출물일 수 있으나, 이로 한정되지 않는다.
한 구체예에서, 모자반 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6의 유기용매, 아임계 유체 및 초임계 유체로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 용매로 모자반을 추출하여 수득할 수 있다. 예를 들어, 모자반을 100 MPa 이상, 바람직하게는 100 MPa 내지 1000 MPa의 초고압 조건 하에서 추출하여 수득할 수도 있다. 필요한 경우에는 당업계에 공지된 방법에 따라 여과 및 농축 단계를 추가적으로 포함하여 제조할 수 있다.
한 구체예에서, 탄소수 1 내지 6의 유기용매는 탄소수 1 내지 6의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌 클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane) 및 석유에테르(petroleum ether)로 이루어진 군 중에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.
또한, 본 발명의 모자반 추출물은 건조시킨 모자반을 식품가공에 적합한 정제수, 에탄올 및 아임계수 또는 초임계 이산화탄소를 이용하여 추출, 정제하여 얻을 수 있거나, 초고압 추출 장치를 이용하여 추출, 정제하여 얻을 수 있으며 또는 모자반을 직접 압착하여 얻은 오일로부터 분리 정제하여 얻을 수 있다. 예를 들어, 100 MPa 이상, 바람직하게는 100 MPa 내지 1000 MPa의 초고압 조건 하에서 모자반을 추출하여 추출물을 수득할 수 있다.
한 구체예에서, 톳 추출물은 에탄올 추출물, 열수 추출물, 헥산 추출물, 에틸아세테이트 추출물, 초고압 추출물, 초임계 유체 추출물 또는 아임계 유체 추출물일 수 있으나, 이로 한정되지 않는다.
한 구체예에서, 톳 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6의 유기용매, 아임계 유체 및 초임계 유체로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 용매로 톳을 추출하여 수득할 수 있다. 예를 들어, 톳을 100 MPa 이상, 바람직하게는 100 MPa 내지 1000 MPa의 초고압 조건 하에서 추출하여 수득할 수도 있다. 필요한 경우에는 당업계에 공지된 방법에 따라 여과 및 농축 단계를 추가적으로 포함하여 제조할 수 있다.
한 구체예에서, 탄소수 1 내지 6의 유기용매는 탄소수 1 내지 6의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌 클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane) 및 석유에테르(petroleum ether)로 이루어진 군 중에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.
또한, 본 발명의 톳 추출물은 건조시킨 톳을 식품가공에 적합한 정제수, 에탄올 및 아임계수 또는 초임계 이산화탄소를 이용하여 추출, 정제하여 얻을 수 있거나, 초고압 추출 장치를 이용하여 추출, 정제하여 얻을 수 있으며 또는 톳을 직접 압착하여 얻은 오일로부터 분리 정제하여 얻을 수 있다. 예를 들어, 100 MPa 이상, 바람직하게는 100 MPa 내지 1000 MPa의 초고압 조건 하에서 톳을 추출하여 추출물을 수득할 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에 있어서, 본 발명자들은 건조된 모자반 또는 톳 분쇄물을 메탄올, 에탄올, 에틸아세테이트 및 헥산을 용매로 하여 각각 상온에서 반복 추출하거나, 열수 추출, 초고압 추출, 초임계 유체 추출, 아임계 유체 추출하여 추출물을 제조하였다.
제조된 모자반 에탄올 추출물, 톳 에탄올 추출물 및 퓨코스테롤을 각각 L6 근육세포에 처리하여 근육세포 내에서 나타내는 활성을 확인한 결과, 근 단백질 합성에 관여하는 p-mTOR의 단백질 발현을 증가시키는 것을 확인하였고(도 1), 퓨코스테롤 처리에 의해 L6 근육세포에서 mRNA 번역 과정에 관여하는 p-4EBP1과 p-p70S6K의 단백질 발현이 증가하는 것을 확인하였다(도 2). 또한, 퓨코스테롤, 모자반 또는 톳의 헥산 추출물, 에틸아세테이트 추출물, 에탄올 추출물 및 열수 추출물은 각각 L6 근육세포에서 근육 분화에 관여하는 MyoD와 미오게닌의 mRNA 발현을 증가시키고(도 3 내지 5), 근 단백질 분해에 관여하는 MuRF-1과 atrogin-1의 mRNA 발현을 억제시킨다는 것을 확인하였다(도 6 내지 8).
추가로, 모자반 또는 톳의 고압 추출물을 L6 근육세포에 처리하여 근육생성활성을 확인한 결과, 표 1에 나타낸 바와 같이 모자반 초고압 추출물, 모자반 초임계 유체 추출물, 모자반 아임계 유체 추출물, 톳 초고압 추출물, 톳 초임계 유체 추출물 및 톳 아임계 유체 추출물은 각각 근기능 개선에 관여하는 주요 유전자인 p-mTOR의 단백질 발현향을 증가시킨다는 것을 확인하였으며(표 1), TNF-α로 근위축을 유도한 랫트 동물 모델에서 본 발명의 모자반 건조분말, 모자반 에탄올 추출물, 톳 건조분말, 톳 에탄올 추출물 또는 퓨코스테롤 투여에 의한 근육 무게 변화량을 측정한 결과, 각각의 처리군에서 모두 대조군에 비해 유의적으로 근육량이 증가되는 것을 확인하였다(표 2).
상기와 같은 결과를 통해, 본 발명의 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물, 톳 추출물, 또는 상기 추출물로부터 분리된 퓨코스테롤은 근육량을 증대시키는데 탁월한 효과를 나타내므로 근육 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물; 근육 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물; 근육 질환 예방 또는 개선용 사료첨가제; 근 기능 개선용 화장료 조성물; 및 사료첨가제 또는 이를 포함하는 사료 첨가제의 유효성분으로 유용하게 사용할 수 있다.
본 발명의 근육 질환 예방 또는 치료용 조성물이 약학적 조성물인 경우, 근육 소모 또는 퇴화로 인한 근육 질환의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다. 근육 소모 및 퇴화는 유전적 요인, 후천적 요인, 노화 등을 원인으로 발생하며, 근육 소모는 근육량의 점진적 손실, 근육, 특히 골격근 또는 수의근 및 심장근육의 약화 및 퇴행을 특징으로 한다. 이와 관련된 질환의 예로는 긴장감퇴증(atony), 근위축증(muscular atrophy), 근이영양증(muscular dystrophy), 근육 퇴화, 근무력증, 악액질(cachexia) 및 근육감소증(sarcopenia) 등을 들 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 조성물은 근육량 증대 효과가 있으며, 근육은 그 종류를 제한하지 않는다.
본 발명의 약학적 조성물은 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함할 수 있다. 본 명세서에서 용어“약학적으로 허용 가능한”이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 것을 말하며, 상기 염으로는 약제학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의하여 형성된 산 부가염이 바람직하다.
상기 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물의 약제학적으로 허용 가능한 염은 유기산 또는 무기산을 이용하여 형성된 산 부가염일 수 있으며, 상기 유기산은 예를 들면 포름산, 아세트산, 프로피온산, 락트산, 부티르산, 이소부티르산, 트리플루오로아세트산, 말산, 말레산, 말론산, 푸마르산, 숙신산, 숙신산 모노아미드, 글루탐산, 타르타르산, 옥살산, 시트르산, 글리콜산, 글루쿠론산, 아스코르브산, 벤조산, 프탈산, 살리실산, 안트라닐산, 디클로로아세트산, 아미노옥시 아세트산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산 또는 메탄술폰산을 포함한다. 무기산은 예를 들면 염산, 브롬산, 황산, 인산, 질산, 탄산 또는 붕산을 포함한다. 산 부가염은 바람직하게는 염산염 또는 아세트산염 형태일 수 있으며, 보다 바람직하게는 염산염 형태일 수 있다.
상기 언급된 산 부가염은 a) 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물 및 산을 직접 혼합하거나, b) 이들 중 한 가지를 용매 또는 함수 용매 중에 용해시키고 혼합시키거나 또는 c) 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 용매 또는 수하 용매 중의 산에 위치시키고 이들을 혼합하는 일반적인 염 제조방법으로 제조된다.
위와는 별도로 추가적으로 염이 가능한 형태는 가바염, 가바펜틴염, 프레가발린염, 니코틴산염, 아디페이트염, 헤미말론산염, 시스테인염, 아세틸시스테인염, 메티오닌염, 아르기닌염, 라이신염, 오르니틴염 또는 아스파르트산염 등이 있다.
또한, 본 발명의 근육 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 더 포함할 수 있다.
약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여용 담체는 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함할 수 있다. 또한 비경구 투여용 담체는 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코스 및 글리콜 등을 포함할 수 있다. 또한, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).
본 발명의 약학 조성물은 인간을 비롯한 포유동물에 어떠한 방법으로도 투여할 수 있다. 예를 들어, 경구 또는 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구적인 투여방법으로는 이에 제한되는 것은 아니나, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장내 투여일 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 상술한 바와 같은 투여 경로에 따라 경구 투여용 또는 비경구 투여용 제제로 제형화 할 수 있다. 제형화할 경우에는 하나 이상의 완충제(예를 들어, 식염수 또는 PBS), 항산화제, 정균제, 킬레이트화제(예를 들어, EDTA 또는 글루타치온), 충진제, 증량제, 결합제, 아쥬반트(예를 들어, 알루미늄 하이드록사이드), 현탁제, 농후제 습윤제, 붕해제 또는 계면활성제, 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.
경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 액제, 겔제, 시럽제, 슬러리제, 현탁액 또는 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 약학 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분(옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분 등 포함), 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose), 덱스트로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 말티톨, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 예컨대, 활성성분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물로 가공함으로써 정제 또는 당의정제를 수득할 수 있다.
단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물 또는 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 또는 보존제 등이 포함될 수 있다.
또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있으며, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
비경구적으로 투여하는 경우 본 발명의 약학 조성물은 적합한 비경구용 담체와 함께 주사제, 경피 투여제 및 비강 흡입제의 형태로 당 업계에 공지된 방법에 따라 제형화될 수 있다. 상기 주사제의 경우에는 반드시 멸균되어야 하며 박테리아 및 진균과 같은 미생물의 오염으로부터 보호되어야 한다. 주사제의 경우 적합한 담체의 예로는 이에 한정되지는 않으나, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 이들의 혼합물 및/또는 식물유를 포함하는 용매 또는 분산매질일 수 있다. 보다 바람직하게는, 적합한 담체로는 행크스 용액, 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 PBS (phosphate buffered saline) 또는 주사용 멸균수, 10% 에탄올, 40% 프로필렌 글리콜 및 5% 덱스트로즈와 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 상기 주사제를 미생물 오염으로부터 보호하기 위해서는 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르빈산, 티메로살 등과 같은 다양한 항균제 및 항진균제를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 주사제는 대부분의 경우 당 또는 나트륨 클로라이드와 같은 등장화제를 추가로 포함할 수 있다.
경피 투여제의 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태가 포함된다. 상기에서 ‘경피 투여’는 약학 조성물을 국소적으로 피부에 투여하여 약학 조성물에 함유된 유효한 양의 활성성분이 피부 내로 전달되는 것을 의미한다.
흡입 투여제의 경우, 본 발명에 따라 사용되는 화합물은 적합한 추진제, 예를 들면, 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체를 사용하여, 가압 팩 또는 연무기로부터 에어로졸 스프레이 형태로 편리하게 전달 할 수 있다. 가압 에어로졸의 경우, 투약 단위는 계량된 양을 전달하는 밸브를 제공하여 결정할 수 있다. 예를 들면, 흡입기 또는 취입기에 사용되는 젤라틴 캡슐 및 카트리지는 화합물, 및 락토즈 또는 전분과 같은 적합한 분말 기제의 분말 혼합물을 함유하도록 제형화할 수 있다. 비경구 투여용 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour)에 기재되어 있다.
본 발명의 근육 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 유효량으로 포함 할 때 바람직한 근육 질환 예방 또는 치료 효과를 제공할 수 있다. 본 명세서에서, '유효량'이라 함은 음성 대조군에 비해 그 이상의 반응을 나타내는 양을 말하며 바람직하게는 근 기능을 향상시키기에 충분한 양을 말한다. 본 발명의 약학 조성물에 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물이 0.01 내지 99.99% 포함될 수 있으며, 잔량은 약학적으로 허용 가능한 담체가 차지할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물에 포함되는 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물의 유효량은 조성물이 제품화되는 형태 등에 따라 달라질 것이다.
본 발명의 약학 조성물의 총 유효량은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있다. 비경구 투여시는 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 기준으로 하루에 체중 1 kg당 바람직하게 0.01 내지 50 mg, 더 바람직하게는 0.1 내지 30 mg의 양으로 투여되도록, 그리고 경구 투여시는 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 기준으로 하루에 체중 1 kg당 바람직하게 0.01 내지 100 mg, 더 바람직하게는 0.01 내지 10 mg의 양으로 투여되도록 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다. 그러나 상기 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물의 용량은 약학적 조성물의 투여 경로 및 치료 횟수뿐만 아니라 환자의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 질환의 중증도, 식이 및 배설율 등 다양한 요인들을 고려하여 환자에 대한 유효 투여량이 결정되는 것이므로, 이러한 점을 고려할 때 당 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 상기 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 근육 질환 예방 또는 치료를 위한 특정한 용도에 따른 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다. 본 발명에 따른 약학 조성물은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형, 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제한되지 아니한다.
본 발명의 근육 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 단독으로 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 또는 생물학적 반응조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 근육 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 또한 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 유효성분으로 포함하는 외용제의 제형으로 제공할 수 있다.
본 발명의 근육 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 피부외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 유화제, 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 활성제, 친유성 활성제 또는 지질 소낭 등 피부 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
본 발명의 근육 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물이 피부 외용제로 제공될 경우, 이에 제한되는 것은 아니나, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제 등의 제형일 수 있다.
본 발명의 근육 질환 예방 또는 근 기능 개선용 조성물은 또한 식품 조성물일 수 있다. 본 발명의 근육 질환 예방 또는 근 기능 개선용이 식품 조성물인 경우, 근육 소모 또는 퇴화로 인한 근육 질환의 예방 또는 개선에 사용될 수 있다. 근육 소모 및 퇴화는 유전적 요인, 후천적 요인, 노화 등을 원인으로 발생하며, 근육 소모는 근육량의 점진적 손실, 근육, 특히 골격근 또는 수의근 및 심장근육의 약화 및 퇴행을 특징으로 한다. 이와 관련된 질환의 예로는 긴장감퇴증(atony), 근위축증(muscular atrophy), 근이영양증(muscular dystrophy), 근육 퇴화, 근무력증, 악액질(cachexia) 및 근육감소증(sarcopenia) 등을 들 수 있다. 본 발명의 조성물은 근육량 증대 효과가 있으며, 근육은 그 종류를 제한하지 않는다.
본 발명의 식품 조성물은 기능성 식품(functional food), 영양 보조제(nutritional supplement), 건강식품(health food), 식품 첨가제(food additives) 및 사료 등의 모든 형태를 포함하며, 인간 또는 가축을 비롯한 동물을 취식대상으로 한다. 상기 유형의 식품 조성물은 당 업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다.
상기 유형의 식품 조성물은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다. 일반 식품으로는 이에 한정되지 않지만 음료(알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품(예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(예: 햄, 소시지 콘비이프 등), 빵류 및 면류(예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게이트, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예: 버터, 치이즈 등), 식용식물 유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(예: 된장, 간장, 소스 등) 등에 상기 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 영양보조제로는 이에 한정되지 않지만 캡슐, 타블렛, 환 등에 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 건강기능식품으로는 이에 한정되지 않지만 예를 들면, 상기 모자반 추출물 또는 톳 추출물 자체를 차, 쥬스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용(건강음료)할 수 있도록 액상화, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한, 상기 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 식품 첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다. 또한, 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물과 근육 질환 예방 또는 근 기능 개선 효과가 있다고 알려진 공지의 활성 성분과 함께 혼합하여 조성물의 형태로 제조할 수 있다.
본 발명의 근육 질환 예방 또는 근 기능 개선용 조성물이 건강음료 조성물로 이용되는 경우, 상기 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드; 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드; 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드; 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜일 수 있다. 감미제는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제; 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL 당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.
퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물은 근육 질환 예방 또는 개선용 식품 조성물의 유효성분으로 함유될 수 있는데, 그 양은 근육 질환 예방 또는 근 기능 개선용 작용을 달성하기에 유효한 양으로 특별히 한정되는 것은 아니나, 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 100 중량%인 것이 바람직하다. 본 발명의 식품 조성물은 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물과 함께 근육 질환 예방 또는 근 기능 개선용 조성물에 효과가 있는 것으로 알려진 다른 활성 성분과 함께 혼합하여 제조될 수 있다.
상기 외에 본 발명의 건강식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산, 펙트산의 염, 알긴산, 알긴산의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 또는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강식품은 천연 과일주스, 과일주스 음료 또는 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명의 근 기능 개선용 조성물은 또한 화장료 조성물일 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물은 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 유효성분으로 함유하며 피부학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 기초 화장품 조성물(화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼 및 클렌징 워터와 같은 세안제, 팩, 보디오일), 색조 화장품 조성물(화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발 제품 조성물(샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어젤) 및 비누 등의 형태로 제조될 수 있다.
상기 부형제로는 이에 한정되지는 않으나 예를 들어, 피부연화제, 피부 침투 증강제, 착색제, 방향제, 유화제, 농화제 및 용매를 포함할 수 있다. 또한, 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제 및 보습제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 물성개선을 목적으로 점증제, 무기염류, 합성 고분자 물질 등을 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 화장료 조성물로 세안제 및 비누를 제조하는 경우에는 통상의 세안제 및 비누 베이스에 상기 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 첨가하여 용이하게 제조할 수 있다. 크림을 제조하는 경우에는 일반적인 수중유적형(O/W)의 크림베이스에 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물, 톳 추출물 또는 이의 염을 첨가하여 제조할 수 있다. 여기에 향료, 킬레이트제, 색소, 산화방지제, 방부제 등과 물성개선을 목적으로 한 단백질, 미네랄, 비타민 등 합성 또는 천연소재를 추가로 첨가할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 함유되는 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물의 함량은 이에 한정되지 않지만 전체 조성물 총중량에 대하여 0.001 내지 10 중량%인 것이 바람직하고, 0.01 내지 5중량%인 것이 더욱 바람직하다. 상기 함량이 0.001중량% 미만에서는 목적하는 근 기능 개선 효과를 기대할 수 없고, 10중량% 초과에서는 안전성 또는 제형상의 제조에 어려움이 있을 수 있다.
본 발명의 조성물은 근육 질환 예방 또는 개선을 목적으로 사료첨가제 또는 이를 포함하는 사료 조성물에 첨가할 수 있다.
본 발명에서 용어, “사료첨가제”는 영양소 보충 및 체중감소 예방, 사료 내 섬유소의 소화 이용성 증진, 유질 개선, 번식장애 예방 및 수태율 향상, 하절기 고온 스트레스 예방 등 다양한 효과를 목적으로 사료에 첨가하는 물질을 포함한다. 본 발명의 사료첨가제는 사료관리법상의 보조사료에 해당하며, 탄산수소나트륨, 벤토나이트(bentonite), 산화마그네슘, 복합광물질 등의 광물질제제, 아연, 구리, 코발트, 셀레늄 등의 미량 광물질인 미네랄제제, 케로틴, 비타민 A D, E, 니코틴산, 비타민 B 복합체 등의 비타민제, 메티오닌, 라이신 등의 보호아미노산제, 지방산 칼슘염 등의 보호지방산제, 생균제(유산균제), 효모배양물, 곰팡이 발효물 등의 생균, 효모제 등이 추가로 포함될 수 있다.
본 발명에서 용어 “사료”는, 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분으로, 본 발명에 따른 근육 질환 예방 또는 개선용 조성물을 유효성분으로 푸함하는 사료는 당업계에 공지된 다양한 형태의 사료로 제조가능하며, 바람직하게는 농후 사료, 조사료 및/또는 특수사료가 포함될 수 있으나, 이로 한정되지 않는다.
농후사료에는 밀, 귀리, 옥수수 등의 곡류를 포함하는 종자열매류, 곡물을 정제하고 얻는 부산물로서 쌀겨, 밀기울, 보릿겨 등을 포함하는 겨류, 콩, 유체, 깨, 아마인, 코코야자 등을 채유하고 얻는 부산물인 깻묵류와 고구마, 감자 등에서 녹말을 뺀 나머지인 녹말찌꺼기의 주성분인 잔존녹말질류 등의 찌꺼기류, 어분, 물고기찌꺼기, 어류에서 얻은 신선한 액상물을 농축시킨 것인 피시솔루블(fish soluble), 육분(肉粉), 혈분, 우모분, 탈지분유, 우유에서 치즈, 탈지유에서 카제인을 제조할 때의 잔액인 훼이(whey)를 건조한 건조훼이 등의 동물질사료, 효모, 클로렐라, 해조류가 있으나 이에 제한되지 않는다.
조사료에는 야초, 목초, 풋베기 등의 생초(生草)사료, 사료용 순무, 사료용 비트, 순무의 일종인 루터베어거 등의 뿌리채소류, 생초, 풋베기작물, 곡실(穀實) 등을 사일로에 채워 놓고 젖산발효시킨 저장사료인 사일리지(silage), 야초, 목초를 베어 건조시킨 건초, 종축용(種畜用) 작물의 짚, 콩과 식물의 나뭇잎이 있으며, 이에 제한되지 않는다. 특수사료에는 굴껍데기, 암염 등의 미네랄 사료, 요소나 그 유도체인 디우레이드이소부탄 등의 요소사료, 천연사료원료만을 배합했을 때 부족하기 쉬운 성분을 보충하거나, 사료의 저장성을 높이기 위해서 배합사료에 미량으로 첨가하는 물질인 사료첨가물, 식이보조제가 있으나 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 상기 근육 질환의 예방 또는 개선용 사료 첨가제는 당업계에 공지된 다양한 사료 제조방법에 따라 적절한 유효 농도 범위에서 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 첨가하여 제조 가능하다.
본 발명에 따른 사료 첨가제는 근육 질환의 예방 또는 개선을 목적으로 하는 개체이면 제한없이 적용가능하다. 예를 들면, 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 모르모트, 랫트, 마우스, 소, 양, 돼지, 염소 등과 같은 비인간동물, 조류 및 어류 등 어느 개체에도 적용이 가능하다.
이하 본 발명을 실시 예를 통하여 보다 상세하게 설명한다.
단, 하기 실시 예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시 예에 한정되는 것은 아니다.
참조예 1: 퓨코스테롤(fucosterol)의 물질 정보
Figure PCTKR2016005597-appb-I000011
명칭: Fucosterol; (24E)-24-N-Propylidenecholesterol; 24-Isoethylidenecholest-5-en-3beta-ol, delta(5)-avenasterol; 28-Isofucosterol; Stigmasta-5,24-dien-3beta-ol; Stigmasta-5,24(28)-dien-3-ol, (3beta,24E)-; (3beta,24Z)-stigmasta-5,24(28)-dien-3-ol; (3beta,24E)-stigmasta-5,24(28)-dien-3-ol; (24E)-stigmasta-5,24(28)-dien-3-ol
CAS No.: 17605-67-3
[ 실시예 1]
모자반 추출물의 제조
<1-1> 모자반 메탄올 추출물의 제조
건조된 모자반을 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 모자반 시료 100 g을 100% 메탄올 1 L에 넣고 24시간 상온에서 3회 반복하여 추출하였다. 추출된 시료는 와트만(Whatman) 2번 여과지로 감압여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매성분을 제거한 후 모자반 메탄올 추출물을 얻었다.
<1-2> 모자반 에탄올 추출물의 제조
건조된 모자반을 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 모자반 시료 100 g을 100% 에탄올 1 L에 넣고 24시간 상온에서 3회 반복하여 추출하였다. 추출된 시료는 와트만(Whatman) 2번 여과지로 감압여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매성분을 제거한 후 모자반 에탄올 추출물을 얻었다.
<1-3> 모자반 에틸아세테이트 추출물의 제조
건조된 모자반을 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 모자반 시료 100 g을 100% 에틸아세테이트 1 L에 넣고 24시간 상온에서 3회 반복하여 추출하였다. 추출된 시료는 와트만(Whatman) 2번 여과지로 감압여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매성분을 제거한 후 모자반 에틸아세테이트 추출물을 얻었다.
<1-4> 모자반 헥산 추출물의 제조
건조된 모자반을 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 모자반 시료 100 g을 100% 헥산 1 L에 넣고 24시간 상온에서 3회 반복하여 추출하였다. 추출된 시료는 와트만(Whatman) 2번 여과지로 감압여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매성분을 제거한 후 모자반 헥산 추출물을 얻었다.
<1-5> 모자반 열수 추출물의 제조
건조된 모자반을 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 모자반 시료 100 g을 물 1 L에 넣고 80 에서 2시간 교반하면서 추출하였다. 추출된 시료는 와트만(Whatman) 2번 여과지로 감압여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매성분을 제거한 후 모자반 열수 추출물을 얻었다.
<1-6> 모자반 초고압 추출물의 제조
건조된 모자반을 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 모자반 1g과 18% 에탄올 76 mL을 폴리에틸렌(polyethylene) 팩에 넣고 밀봉한 후 초고압 추출장치(Frescal MFP-7000; Mitsubishi Heavy Industries)를 이용하여 추출하였다. 초고압 추출 조건은 추출압력이 320 MPa, 추출시간은 5 min 이였다. 추출된 시료는 와트만(Whatman) 2번 여과지로 여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매성분을 제거함으로써 모자반 초고압 추출물을 얻었다.
<1-7> 모자반 초임계 유체 추출물의 제조
건조된 모자반을 믹서로 분쇄 한 다음, 분쇄한 모자반 시료 1 g을 시료 카트리지에 충전하고 초임계 유체 추출 장치(SFX 3560, Isco Inc., Lincoln, NE, USA)를 이용하여 추출하였다. 초임계 유체 추출 조건은 추출 압력이 40 MPa, 추출 온도는 50, 초임계 이산화탄소의 유속은 60 mL/min, 추출 시간은 60 min이었다. 초임계 유체 추출이 완료되면, 추출 장치의 압력을 낮춰 초임계 유체 상태를 해제하여 모자반 초임계 유체 추출물을 얻었다.
<1-8> 모자반 아임계 유체 추출물의 제조
건조된 모자반을 믹서로 분쇄 한 다음, 분쇄한 모자반 시료 1 g을 증류수 10 mL에 넣고 아임계 유체 추출 장치(DIONEX Accelerated Solvent Extractor 100, DIONEX co., USA)를 이용하여 추출하였다. 아임계 유체 추출 조건은 2.5 MPa, 추출 온도 150, 추출 시간 15분의 조건하에서 아임계 추출을 수행하였다. 추출된 시료는 와트만 2번 여과지로 여과하고, 여과된 추출액을 -40에서 동결 건조하여 모자반 아임계 유체 추출물을 얻었다.
[ 실시예 2]
톳 추출물의 제조
<2-1> 톳 메탄올 추출물의 제조
건조된 톳을 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 톳 시료 100 g을 100% 메탄올 1 L에 넣고 24시간 상온에서 3회 반복하여 추출하였다. 추출된 시료는 와트만(Whatman) 2번 여과지로 감압여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매성분을 제거한 후 톳 메탄올 추출물을 얻었다.
<2-2> 톳 에탄올 추출물의 제조
건조된 톳을 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 톳 시료 100 g을 100% 에탄올 1 L에 넣고 24시간 상온에서 3회 반복하여 추출하였다. 추출된 시료는 와트만(Whatman) 2번 여과지로 감압여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매성분을 제거한 후 톳 에탄올 추출물을 얻었다.
<2-3> 톳 에틸아세테이트 추출물의 제조
건조된 톳을 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 톳 시료 100 g을 100% 에틸아세테이트 1 L에 넣고 24시간 상온에서 3회 반복하여 추출하였다. 추출된 시료는 와트만(Whatman) 2번 여과지로 감압여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매성분을 제거한 후 톳 에틸아세테이트 추출물을 얻었다.
<2-4> 톳 헥산 추출물의 제조
건조된 톳을 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 톳 시료 100 g을 100% 헥산 1 L에 넣고 24시간 상온에서 3회 반복하여 추출하였다. 추출된 시료는 와트만(Whatman) 2번 여과지로 감압여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매성분을 제거한 후 톳 헥산 추출물을 얻었다.
<2-5> 톳 열수 추출물의 제조
건조된 톳을 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 톳 시료 100 g을 물 1 L에 넣고 80 에서 2시간 교반하면서 추출하였다. 추출된 시료는 와트만(Whatman) 2번 여과지로 감압여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매성분을 제거한 후 톳 열수 추출물을 얻었다.
<2-6> 톳 초고압 추출물의 제조
건조된 톳을 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 톳 시료 1 g과 18% 에탄올 76 mL을 폴리에틸렌(polyethylene) 팩에 넣고 밀봉한 후 초고압 추출장치(Frescal MFP-7000; Mitsubishi Heavy Industries)를 이용하여 추출하였다. 초고압 추출 조건은 추출압력이 320 MPa, 추출시간은 5 min 이였다. 추출된 시료는 와트만(Whatman) 2번 여과지로 여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매성분을 제거함으로써 톳 초고압 추출물을 얻었다.
<2-7> 톳 초임계 유체 추출물의 제조
건조된 톳을 믹서로 분쇄 한 다음, 분쇄한 톳 시료 1 g을 시료 카트리지에 충전하고 초임계 유체 추출 장치(SFX 3560, Isco Inc., Lincoln, NE, USA)를 이용하여 추출하였다. 초임계 유체 추출 조건은 추출 압력이 40 MPa, 추출 온도는 50, 초임계 이산화탄소의 유속은 60 mL/min, 추출 시간은 60 min이었다. 초임계 유체 추출이 완료되면, 추출 장치의 압력을 낮춰 초임계 유체 상태를 해제하여 톳 초임계 유체 추출물을 얻었다.
<2-8> 톳 아임계 유체 추출물의 제조
건조된 톳을 믹서로 분쇄 한 다음, 분쇄한 톳 시료 1 g을 증류수 10 mL에 넣고 아임계 유체 추출 장치(DIONEX Accelerated Solvent Extractor 100, DIONEX co., USA)를 이용하여 추출하였다. 아임계 유체 추출 조건은 2.5 MPa, 추출 온도 150, 추출 시간 15분의 조건하에서 아임계 추출을 수행하였다. 추출된 시료는 와트만 2번 여과지로 여과하고, 여과된 추출액을 -40에서 동결 건조하여 톳 아임계 유체 추출물을 얻었다.
[ 실시예 3]
퓨코스테롤의 분리
건조 모자반 또는 톳 500 g을 믹서로 분쇄한 다음, 5 L 헥산에 넣고 48시간 상온에서 냉침하여 추출하였다. 추출된 시료는 와트만(Whatman) 2번 여과지로 여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매성분을 제거한 후 약 15.0 g의 헥산 추출물을 얻었다. 헥산 가용 추출물 15 g을 실리카겔 오픈컬럼(70-230mesh, Merck&Co., Whitehouse Station, NJ, USA)에 적재하고 핵산 및 에틸 아세테이트의 혼합한 용매시스템을 이용하여 분취하였다. 상기 분취순서에 따라서 농도구배로 40 개의 하부 분획물로 나눈 후, 그 중 10 번과 30 번 사이의 분획물에서 하기 화학식 1의 화합물인 퓨코스테롤을 분리(210 mg)하였다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2016005597-appb-I000012
[ 실시예 4]
퓨코스테롤, 모자반 추출물 또는 톳 추출물에 의한 근육생성활성
근육세포인 L6 myoblast (ATCC CRL-1458, Manassas, VA, USA)를 10% fetal bovine serum (FBS; Hyclone, Logan, UT, USA)가 함유된 Dulbecco's modified Eagle's media (DMEM; Hyclone)와 함께 6-웰 플레이트에 2 X 105 cell/ml이 되도록 넣었다. 세포밀도가 약 80~85%가 되었을 때, 웰에 있는 배지를 제거하고 2% horse serum (HS; Hyclone)이 함유된 DMEM (Hyclone)에 상기 실시예 1-2에서 제조한 모자반 에탄올 추출물(20 ㎍/mL), 실시예 2-2에서 제조한 톳 에탄올 추출물(20 ㎍/mL)과 상기 실시예 3에서 분리 및 정제한 퓨코스테롤(10 μM)을 녹인 후, 세포에 처리하여 myotube 분화를 유도하였다. 이 때, 시료 대신 0.01% DMSO를 처리한 군을 대조군으로 하였다. 이 과정을 2일간 6일 동안 진행하여 분화시킨 후, proteinase inhibitor cocktail이 포함된 NP-40 완충용액(ELPIS-Biotech, Daejeon, Korea)으로 용해시켰다. 완충용액에 용해된 세포를 1.5 ml 튜브(tube)로 옮겨 13,000 rpm으로 10분간 원심분리하여 상등액만을 취하였다. 상등액을 브래드포드(Bradford, Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, USA)법을 이용하여 정량하였다. 정량된 단백질을 5분간 끓인 후 10% SDS-PAGE로 전기영동하여 분리하였으며, 분리된 단백질들을 니트로셀룰로스 막으로 전달하였다. p-mTOR 1차 항체(Cell signaling technology, Beverly, MA, USA)를 2.5% bovine serum albumin (BSA)에 1:1000의 비율로 희석하여 니트로셀룰로스 막에 전달된 단백질과 20시간 동안 상온에서 반응시켰다. 1차 항체를 반응시킨 다음 Tris-buffer Saline Tween20 (TBST)를 이용하여 니트로셀룰로스 막을 10분간 3회 세척하였다. 세척 후, 1차 항체를 인지하는 horseradish peroxidase가 접합된 anti-rabbit 2차 항체(Bethyl Laboratories, Inc., Montgomery, TA, USA)를 2.5% BSA에 1:5000이 되도록 희석하여 니트로셀룰로스 막과 2시간 동안 상온에서 반응시켰으며, TBST를 이용하여 10분씩 3회에 걸쳐 세척하였다. Protein band는 ECL western blotting detection reagents (Amersham, Tokyo, Japan)를 사용하여 발색하였으며, G;BOX EF imaging system (Syngene, Cambridge, UK)을 이용하여 발색된 Protein band를 확인하였다. 그 결과를 도 1에 나타내었다.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이 모자반 에탄올 추출물, 톳 에탄올 추출물, 퓨코스테롤의 처리에 의해 L6 근육세포에서 p-mTOR의 발현량이 증가한 것을 확인할 수 있었다. 이는 본 발명의 모자반 에탄올 추출물, 톳 에탄올 추출물, 퓨코스테롤이 근육세포 내에서 근육 생성을 증가시키는 능력이 우수하다는 것을 의미한다.
[ 실시예 5]
L6 근육세포에서 퓨코스테롤의 mRNA 번역 촉진 활성
상기 실시예 3에서 분리 및 정제한 퓨코스테롤을 각각 1과 10 μM의 농도로 상기 실시예 4와 동일한 방법으로 실험을 진행하였다. p-mTOR 1차 항체 대신 mRNA 번역 과정에 관여하는 p-p70S6K 및 p-4EBP1 1차 항체(Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA)를 처리하여 단백질 밴드를 확인하였다.
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이 퓨코스테롤을 처리함에 따라 L6 근육세포에서 mRNA 번역 과정에 관여하는 p-p70S6K 및 p-4EBP1의 단백질 발현량이 증가한 것을 확인할 수 있다. 이는 본 발명의 퓨코스테롤이 근육세포 내에서 근육 생성을 위한 mRNA 번역 과정을 촉진시키는 것을 의미한다.
[ 실시예 6]
퓨코스테롤에 의한 근육분화 활성
근육세포인 L6 myoblast (ATCC)를 10% FBS (Hyclone)가 함유된 DMEM (Hyclone)과 함께 6-웰 플레이트에 2 X 105 cell/ml이 되도록 넣었다. 세포밀도가 약 80~85%가 되었을 때, 웰에 있는 배지를 제거하고 2% HS (Hyclone)가 함유된 DMEM (Hyclone)에 상기 실시예 3에서 분리 및 정제한 퓨코스테롤을 각각 1과 10 μM의 농도로 녹인 후, 세포에 처리하여 myotube 분화를 유도하였다. 이때, 시료 대신 0.01% DMSO를 처리한 군을 대조군으로 하였다. 이 과정을 2일간 6일 동안 진행하여 분화시킨 후, TRIzol시약(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 총 RNA를 분리하였다. 분리한 총 RNA는 나노드랍(NanoDrop 1000; Thermo Fisher Scientific Inc., MA, USA)을 이용하여 정량하였다. 정량된 16 μL의 RNA를 Reverse Transcriptase Premix (ELPIS-Biotech)와 PCR 기계(Gene Amp PCR System 2700, Applied Biosystems, MA, USA)를 이용하여 42 55 분, 70 15 분의 조건에서 cDNA로 합성하였다. 16 μL의 생성된 cDNA 중 4 μL의 cDNA, 하기의 특정 프라이머(Bioneer, Daejeon, Korea) 그리고 PCR premix (ELPIS-Biotech)로 95에서 30 초, 60에서 1 분, 72에서 1 분을 30번 반복하여 PCR을 수행하였다.
MyoD
Forward primer: 5'-TTTCGACTCACCAGACCTGC-3'(서열번호 1)
Reverse primer: 5'-CAGAGCCTGCAGACCTTCAA-3'(서열번호 2)
미오게닌(Myogenin)
Forward primer: 5'-TTTCGCACCTGATGGACCTG-3'(서열번호 3)
Reverse primer: 5'-CTTTCTTGAGCCTGCGCTTC-3'(서열번호 4)
β-Actin:
Forward primer: 5'-AGCCATGTACGTAGCCATCC-3’(서열번호 5)
Reverse primer: 5'-CTCTCAGCTGTGGTGCTGAA-3’(서열번호 6)
PCR 결과 증폭된 cDNA를 1.5% agarose gel로 전기영동하여 분리하였으며, G;BOX EF imaging system (Syngene)을 이용하여 cDNA 밴드를 확인하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이 퓨코스테롤을 처리함에 따라 L6 근육세포에서 MyoD 및 미오게닌의 mRNA 발현이 증가함을 알 수 있었다. 이는 본 발명의 퓨코스테롤이 근육세포 내에서 근육 분화를 촉진하는 능력이 우수하다는 것을 의미한다.
[ 실시예 7]
모자반 추출물에 의한 근육분화 활성
상기 실시예 6에서와 동일한 방법으로 근육세포인 L6 myoblast (ATCC)를 배양한 후, 2% HS (Hyclone)가 함유된 DMEM (Hyclone)에 상기 실시예 1-2 내지 1-5에서 제조한 모자반 에탄올 추출물, 에틸아세테이트 추출물, 헥산 추출물 및 열수 추출물을 10 ㎍/mL의 농도로 녹인 후, 세포에 처리하여 myotube 분화를 유도하였다. 이 때, 시료 대신 0.01% DMSO를 처리한 군을 대조군으로 하였다. 이 과정을 2일간 6일 동안 진행하여 분화시킨 후 실시예 6과 동일한 방법으로 RT-PCR을 수행하였다.
그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이 모자반 추출물을 처리함에 따라 L6 근육세포에서 MyoD 및 myogenin의 mRNA 발현이 증가함을 알 수 있었다. 이는 본 발명의 모자반 추출물이 근육세포 내에서 근육 분화를 촉진하는 능력이 우수하다는 것을 의미한다.
[ 실시예 8]
톳 추출물에 의한 근육분화 활성
상기 실시예 6에서와 동일한 방법으로 근육세포인 L6 myoblast (ATCC)를 배양한 후, 2% HS (Hyclone)가 함유된 DMEM (Hyclone)에 상기 실시예 2-2 내지 2-5에서 제조한 톳 에탄올 추출물, 에틸아세테이트 추출물, 헥산 추출물 및 열수 추출물을 10 ㎍/mL의 농도로 녹인 후, 세포에 처리하여 myotube 분화를 유도하였다. 이 때, 시료 대신 0.01% DMSO를 처리한 군을 대조군으로 하였다. 이 과정을 2일간 6일 동안 진행하여 분화시킨 후 실시예 6과 동일한 방법으로 RT-PCR을 수행하였다.
그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이 톳 추출물을 처리함에 따라 L6 근육세포에서 MyoD 및 myogenin의 mRNA 발현이 증가함을 알 수 있었다. 이는 본 발명의 톳 추출물이 근육세포 내에서 근육 분화를 촉진하는 능력이 우수하다는 것을 의미한다.
[ 실시예 9]
퓨코스테롤의 근 단백질 분해 억제 활성
근육세포인 L6 myoblast (ATCC)를 10% FBS (Hyclone)가 함유된 DMEM (Hyclone)과 함께 6-웰 플레이트에 2 X 105 cell/ml이 되도록 넣었다. 세포밀도가 약 80~85%가 되었을 때, 웰에 있는 배지를 제거하고 2% HS (Hyclone)가 함유된 DMEM (Hyclone)를 세포에 처리하여 myotube 분화를 유도하였다. 2일에 한 번씩 새로운 배지로 교체하여 총 6일 동안 분화를 진행하였다. 분화 후, 50 ng/mL tumor necrosis factor alph (TNF-α; PeproTech, Rocky Hills, NJ, USA)가 함유된 DMEM (Hyclone)에 상기 실시예 3에서 분리 및 정제한 퓨코스테롤을 각각 1과 10 μM의 농도로 녹인 후, 세포에 처리하였다. 6시간 후, TRIzol시약(Invitrogen)을 사용하여 총 RNA를 분리하였다. 분리한 총 RNA는 나노드랍(NanoDrop 1000; Thermo Fisher Scientific Inc.)을 이용하여 정량하였다. 정량된 16 μL의 RNA를 Reverse Transcriptase Premix (ELPIS-Biotech)와 PCR 기계(Gene Amp PCR System 2700; Applied Biosystems)를 이용하여 42 55 분, 70 15 분의 조건에서 cDNA로 합성하였다. 16 μL의 생성된 cDNA 중 4 μL의 cDNA, 하기의 특정 프라이머(Bioneer) 그리고 PCR premix (ELPIS-Biotech)로 95에서 30 초, 60에서 1 분, 72에서 1 분을 30번 반복하여 PCR을 수행하였다.
Atrogin-1
Forward primer: 5'-CCCTGAGTGGCATCGCCCAA-3'(서열번호 7)
Reverse primer: 5'-AGGTCCCGCCCATCGCTCA-3'(서열번호 8)
MuRF-1
Forward primer: 5'-GAAATGCTATGCAGAACCTG-3'(서열번호 9)
Reverse primer: 5'-ATTCCTGCTTGTAGATGTCG-3'(서열번호 10)
β-Actin:
Forward primer: 5'-AGCCATGTACGTAGCCATCC-3’(서열번호 5)
Reverse primer: 5'-CTCTCAGCTGTGGTGCTGAA-3’(서열번호 6)
PCR 결과 증폭된 cDNA를 1.5% agarose gel로 전기영동하여 분리하였으며, G;BOX EF imaging system (Syngene)을 이용하여 cDNA 밴드를 확인하였다. 그 결과를 도 6에 나타내었다.
그 결과, 도 6에 나타낸 바와 같이 퓨코스테롤을 처리함에 따라 L6 근육세포에서 atrogin-1 및 MuRF-1의 mRNA 발현이 감소함을 알 수 있었다. 이는 본 발명의 퓨코스테롤이 근육세포 내에서 근 단백질 분해를 억제하는 능력이 우수하다는 것을 의미한다.
[ 실시예 10]
모자반 추출물의 근 단백질 분해 억제 활성
상기 실시예 9에서와 동일한 방법으로 근육세포를 2% HS (Hyclone)가 함유된 DMEM (Hyclone)을 처리하여 myotube 분화 후, 50 ng/mL TNF-α (PeproTech)가 함유된 DMEM (Hyclone)에 실시예 1-2 내지 1-5에서 제조한 모자반 에탄올 추출물, 에틸아세테이트 추출물, 헥산 추출물 및 열수 추출물을 10 ㎍/mL의 농도로 녹인 후, 실시예 9과 동일한 방법으로 RT-PCR을 수행하였다.
그 결과, 도 7에 나타낸 바와 같이 모자반 추출물을 처리함에 따라 L6 근육세포에서 atrogin-1 및 MuRF-1의 mRNA 발현이 감소함을 알 수 있었다. 이는 본 발명의 모자반 추출물이 근육세포 내에서 근 단백질 분해를 억제하는 능력이 우수하다는 것을 의미한다.
[ 실시예 11]
톳 추출물의 근 단백질 분해 억제 활성
상기 실시예 9에서와 동일한 방법으로 근육세포를 2% HS (Hyclone)가 함유된 DMEM (Hyclone)을 처리하여 myotube 분화 후, 50 ng/mL TNF-α (PeproTech)가 함유된 DMEM (Hyclone)에 상기 상기 실시예 2-2 내지 2-5에서 제조한 톳 에탄올 추출물, 에틸아세테이트 추출물, 헥산 추출물 및 열수 추출물을 10 ㎍/mL의 농도로 녹인 후, 실시예 9과 동일한 방법으로 RT-PCR을 수행하였다.
그 결과, 도 8에 나타낸 바와 같이 톳 에탄올 추출물, 에틸아세테이트 추출물, 헥산 추출물 및 열수 추출물을 처리함에 따라 L6 근육세포에서 atrogin-1 및 MuRF-1의 mRNA 발현이 감소함을 알 수 있었다. 이는 본 발명의 톳 추출물이 근육세포 내에서 근 단백질 분해를 억제하는 능력이 우수하다는 것을 의미한다.
[ 실시예 12]
모자반과 톳 고압 추출물에 의한 근육생성활성
상기 실시예 1-6에서 제조한 모자반 초고압 추출물, 실시예 1-7에서 제조한 모자반 초임계 유체 추출물, 실시예 1-8에서 제조한 모자반 아임계 유체 추출물, 실시예 2-6에서 제조한 톳 초고압 추출물, 실시예 2-7에서 제조한 톳 초임계 유체 추출물, 실시예 2-8에서 제조한 톳 아임계 유체 추출물을 20 ppm 농도로 상기 실시예 4와 동일한 방법으로 근육 세포에 처리하였다. ECL 웨스턴 블롯 검출 시약(western blotting detection reagents; Amersham, Tokyo, Japan)을 사용하여 p-mTOR 단백질 밴드를 발색하였으며, G;BOX EF imaging system (Syngene, Cambridge, UK)을 이용하여 발색된 단백질 밴드의 density를 측정하였다. 이때 대조군 단백질 밴드의 density를 100%로 하여, 시료를 처리한 실험군의 상대적인 단백질 밴드의 density를 백분율(%)로 나타내었다. 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
모자반과 톳의 고압 추출물의 p-mTOR 단백질 발현량 증가 효과
실험군 상대 density ( % )
대조군 100
실시예 1-6 131
실시예 1-7 129
실시예 1-8 143
실시예 2-6 128
실시예 2-7 140
실시예 2-8 133
상기 표 1에 나타낸 바와 같이 모자반과 톳의 초고압 추출물, 초임계 유체 추출물, 아임계유체 추출물은 근기능 개선에 관여하는 주요 유전자 p-mTOR의 단백질 발현량을 증가시킴을 알 수 있었다.
[ 실시예 13]
동물 모델에서 근육량 증가 효과 확인
5 주령된 Wistar rat(Daehan Biolink, Korea)을 1주간 적응시키고 TNF-α 100 ng/g을 2주간 공급하여 근위축을 유도시킨 다음, 체중을 기초로 무작위적으로 군을 배치하여 각각 8마리씩 총 6군으로 나누어 실험에 이용하였다. 실험군으로는 모자반 건조분말 500 mg/kg체중, 실시예 1-2에서 제조한 모자반 에탄올 추출물 500 mg/kg체중, 톳 건조분말 500 mg/kg체중, 실시예 2-2에서 제조한 톳 에탄올 추출물 500 mg/kg체중, 실시예 3에서 제조한 퓨코스테롤 300 mg/kg체중의 농도로 0.25% 카르복시메틸셀룰로오스(carboxymethylcellulose)에 현탁하여 1일 1회씩 8주간 일정한 시간에 투여하였다. 이때, 대조군으로는 실험군이 섭취하는 동일한 양의 0.25% 카르복시메틸셀룰로오스에 TNF-α를 투여한 군을 사용하였다.
8주간 시료를 투여한 후 오른쪽 종아리 아래 근육을 절제하여 microbalance (Mettler PE160, USA)로 무게를 측정하였다. 그 결과, 표 2에 나타난 바와 같이, 모자반 건조분말, 모자반 에탄올 추출물, 톳 건조분말, 톳 에탄올 추출물, 퓨코스테롤을 각각 투여한 군에서 근육의 무게가 대조군과 비교하여 각각 유의적 (p<0.01)으로 14.94%, 24.82%, 16.14%, 22.65%, 25.78% 증가하였다. 이와 같은 결과는 본 발명의 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물, 톳 추출물 또는 상기 추출물로부터 분리된 퓨코스테롤이 근육량 증대에 효율적으로 작용하고 있음을 의미한다.
처리물질 별 종아리 근육 무게
실험군 평균 종아리 근육 무게 (mg)
대조군 414.9±20.3
모자반 건조 분말 477.0±19.8
모자반 에탄올 추출물 518.2±23.6
톳 건조 분말 481.6±31.1
톳 에탄올 추출물 508.5±22.8
퓨코스테롤 522.1±30.6
이하, 본 발명에 따른 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물. 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 유효성분으로 함유하는 식품류 및 의약품의 제조예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다. 상기 근육 질환 예방 또는 치료 또는 근 기능 개선 효과가 우수한 퓨코스테롤 또는 상기 실시예 1 내지 2의 모자반 추출물 또는 톳 추출물을 가지고 하기와 같은 조성성분 및 조성비에 따라 제조예 1 내지 4의 의약품, 식품, 화장품 및 사료첨가제 조성물을 통상적인 방법에 따라서 제조하였다.
[제조예 1] 의약품
<1-1> 산제
본 발명의 퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물 50 mg, 결정셀룰로오즈 2 g을 혼합한 후 통상의 산제 제조방법에 따라서 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<1-2> 정제
본 발명의 퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물 50 mg, 결정셀룰로오즈 400 mg, 스테아린산 마그네슘 5 mg을 혼합한 후 통상의 정제 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<1-3> 캡슐제
본 발명의 퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물 30 mg, 유청단백질 100 mg, 결정셀룰로오즈 400 mg, 스테아린산 마그네슘 6 mg을 혼합한 후 통상의 캡슐제 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<1-4> 주사제
통상의 주사제 제조방법에 따라 활성성분을 주사용 증류수에 용해하고 pH를 약 7.5로 조절한 다음 상기 실시예 3의 퓨코스테롤 100 mg, 주사용 증류수, pH 조절제를 혼합하여 2 ml 용량의 앰플에 충진하고 멸균시켜서 주사제를 제조하였다.
[제조예 2] 식품
<2-1> 건강식품의 제조
본 발명의 퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물 1000 mg, 비타민 A 아세테이트 70 ug, 비타민 E 1.0 mg, 비타민 B1 0.13 mg, 비타민 B2 0.15 mg, 비타민 B6 0.5 mg, 비타민 B12 0.2 ug, 비타민 C 10 mg, 비오틴 10 ug, 니코틴산아미드 1.7 mg, 엽산 50 ug, 판토텐산 칼슘 0.5 mg, 황산제1철 1.75 mg, 산화아연 0.82 mg, 탄산마그네슘 25.3 mg, 제1인산칼륨 15 mg, 제2인산칼슘 55 mg, 구연산칼륨 90 mg, 탄산칼슘 100 mg, 염화마그네슘 24.8 mg를 혼합하여 제조할 수 있으며, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
<2-2> 건강음료의 제조
본 발명의 퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물 1000 mg, 구연산 1000 mg, 올리고당 100 g, 매실농축액 2 g, 타우린 1 g에 정제수를 가하여 전체 900 ml 통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강음료 조성물 제조에 사용할 수 있다.
<2-3> 츄잉껌
껌 베이스 20 중량%, 설탕 76.9 중량%, 향료 1 중량% 및 물 2 중량% 와 본 발명의 퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물 0.1 중량%를 배합하여 통상의 방법으로 츄잉껌을 제조하였다.
<2-4> 캔디
설탕 60 중량%, 물엿 39.8 중량% 및 향료 0.1 중량%와 본 발명의 퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물 0.1 중량%를 배합하여 통상의 방법으로 캔디를 제조하였다.
<2-5> 비스켓
박력 1급 25.59 중량%, 중력 1급 22.22 중량%, 정백당 4.80 중량%, 식염 0.73 중량%, 포도당 0.78 중량%, 팜쇼트닝 11.78 중량%, 암모늄 1.54 중량%, 중조 0.17 중량%, 중아황산나트륨 0.16 중량%, 쌀가루 1.45 중량%, 비타민 B 0.0001 중량%, 밀크향 0.04 중량%, 물 20.6998 중량%, 전지분유 1.16 중량%, 대용분유 0.29 중량%, 제1인산칼슘 0.03 중량%, 살포염 0.29 중량% 및 분무유 7.27 중량%와 본 발명의 퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물 0.8301 중량%를 배합하여 통상의 방법으로 비스켓을 제조하였다.
[제조예 3] 화장품
<3-1> 영양화장수(밀크로션)
본 발명의 퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 하기 표 3의 영양화장수 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 영양화장수를 제조하였다.
배합성분 제조예3-1(중량%)
퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물 2.0
스쿠알란 5.0
밀납 4.0
폴리솔베이트 60 1.5
솔비탄세스퀴올레이트 1.5
유동파라핀 0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
카르복시비닐폴리머 0.1
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100
<3-2> 유연화장수(스킨로션)
본 발명의 퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 하기 표 4의 유연화장수 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 유연화장수를 제조하였다.
배합성분 제조예3-2(중량%)
퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물,톳 분쇄물 또는 톳 추출물 2.0
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 2.0
프로필렌글리콜 2.0
카르복시비닐폴리머 0.1
PEG 12 노닐페닐에테르 0.2
폴리솔베이트 80 0.4
에탄올 10.0
트리에탄올아민 0.1
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100
<3-3> 영양크림
본 발명의 퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 하기 표 5의 영양크림 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 영양크림을 제조하였다.
배합성분 제조예3-3(중량%)
퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물,톳 분쇄물 또는 톳 추출물 2.0
폴리솔베이트 60 1.5
솔비탄세스퀴올레이트 0.5
PEG60 경화피마자유 2.0
유동파라핀 10
스쿠알란 5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0
글리세린 5.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
트리에탄올아민 0.2
방부제 적량
색소 적량
향료 적량
정제수 to 100
<3-4> 마사지크림
본 발명의 퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 하기 표 6의 마사지크림 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 마사지크림을 제조하였다.
배합성분 제조예3-4(중량%)
퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물 1.0
밀납 10.0
폴리솔베이트 60 1.5
PEG 60 경화피마자유 2.0
솔비탄세스퀴올레이트 0.8
유동파라핀 40.0
스쿠알란 5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 4.0
글리세린 5.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100
<3-5> 팩
본 발명의 퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 하기 표 7의 팩 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 팩을 제조하였다.
배합성분 제조예3-5(중량%)
퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물 1.0
폴리비닐알콜 13.0
소듐카르복시메틸셀룰로오스 0.2
글리세린 5.0
알란토인 0.1
에탄올 6.0
PEG 12 노닐페닐에테르 0.3
폴리솔베이트 60 0.3
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100
<3-6> 젤
본 발명의 퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 하기 표 8의 젤 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 젤을 제조하였다.
배합성분 제조예3-6(중량%)
퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물 0.5
에틸렌디아민초산나트륨 0.05
글리세린 5.0
카르복시비닐폴리머 0.3
에탄올 5.0
PEG 60 경화피마자유 0.5
트리에탄올아민 0.3
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100
[ 제조예 4] 사료
<4-1> 사료첨가제의 제조
본 발명의 퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 하기 표 9의 배합성분을 혼합하여 통상적인 방법에 따라 사료첨가제를 제조하였다.
배합성분 제조예4-1(중량 g)
퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물 100 g
부형제 적량
<4-2> 사료의 제조
본 발명의 퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 하기 표 10의 배합성분을 혼합하여 통상적인 방법에 따라 사료를 제조하였다.
배합성분 제조예4-2(중량 g)
퓨코스테롤, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물 50 g
버섯배지 200 g
소맥피 30 g
비트펄프 50g
쌀주정박 220g
옥수수후레이크 200 g
전지대두 40 g
전분박 100 g
콘싸일리지 200 g
옥수수속대 180 g
비지 400 g
라이그라스 323 g
지오라이트 14 g
타피오카 40 g
이상 살펴본 바와 같이, 본 발명은 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 함유하는 근육 질환 예방 또는 치료용 또는 근 기능 개선용 조성물을 제공한다. 보다 상세하게는 본 발명의 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물은 근 단백질 합성에 관여하는 주요 유전자 p-mTOR의 단백질 발현 증가, 근 단백질 분해에 관여하는 MuRF-1과 atrogin-1의 mRNA 발현 억제, 근육 분화에 관여하는 MyoD와 myogenin의 mRNA 발현을 증가시켜 근육 질환 예방, 개선 또는 치료 또는 근 기능 개선에 우수한 효과를 보인다. 또한, 본 발명의 조성물은 천연물이므로 부작용 없이 안전하게 사용될 수 있으며, 근육 질환 예방, 개선 또는 치료 또는 근 기능 개선에 탁월한 효과를 보이는 조성물을 제공할 수 있으므로 산업상 이용가능성이 높다.

Claims (31)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤(fucosterol) 화합물 또는 이를 포함하는 모자반(Sargassum fulvellum) 추출물 또는 톳(Sargassum fusiforme) 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2016005597-appb-I000013
    .
  2. 제1항에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤은 모자반 추출물 또는 톳 추출물로부터 분리된 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  3. 모자반(Sargassum fulvellum), 이의 분쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 톳(Sargassum fusiforme), 이의 분쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6의 유기용매, 아임계 유체 및 초임계 유체로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 용매로 모자반 또는 톳을 추출하여 수득한 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  6. 제 5 항에 있어서, 상기 탄소수 1 내지 6의 유기용매는 탄소수 1 내지 6의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌 클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane) 및 석유에테르(petroleum ether)로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 용매인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  7. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 100 MPa 내지 1000 MPa의 초고압 조건 하에서 모자반 또는 톳을 추출하여 수득한 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  8. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 근육 질환은 긴장감퇴증(atony), 근위축증(muscular atrophy), 근이영양증(muscular dystrophy), 근육 퇴화, 근무력증, 악액질(cachexia) 및 근육감소증(sarcopenia)으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  9. 하기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤(fucosterol) 화합물 또는 이를 포함하는 모자반(Sargassum fulvellum) 추출물 또는 톳(Sargassum fusiforme) 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2016005597-appb-I000014
    .
  10. 제 9 항에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤은 모자반 추출물 또는 톳 추출물로부터 분리된 것을 특징으로 하는 건강기능식품 조성물.
  11. 모자반(Sargassum fulvellum), 이의 분쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  12. 톳(Sargassum fusiforme), 이의 분쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  13. 제 9 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6의 유기용매, 아임계 유체 및 초임계 유체로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 용매로 모자반 또는 톳을 추출하여 수득한 것을 특징으로 하는 건강기능식품 조성물.
  14. 제 13 에 있어서, 상기 탄소수 1 내지 6의 유기용매는 탄소수 1 내지 6의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌 클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane) 및 석유에테르(petroleum ether)로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 건강기능식품 조성물.
  15. 제 9 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 100 MPa 내지 1000 MPa의 초고압 조건 하에서 모자반 또는 톳을 추출하여 수득한 것을 특징으로 하는 건강기능식품 조성물.
  16. 제 9 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 근육 질환은 긴장감퇴증(atony), 근위축증(muscular atrophy), 근이영양증(muscular dystrophy), 근육 퇴화, 근무력증, 악액질(cachexia) 및 근육감소증(sarcopenia)으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 건강기능식품 조성물.
  17. 하기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤(fucosterol) 화합물 또는 이를 포함하는 모자반(Sargassum fulvellum) 추출물 또는 톳(Sargassum fusiforme) 추출물을 유효성분으로 포함하는 근 기능 개선용 화장료 조성물:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2016005597-appb-I000015
    .
  18. 제 17 항에 있어서, 상기 화학식 1 로 표시되는 퓨코스테롤은 모자반 추출물 또는 톳 추출물로부터 분리된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  19. 모자반(Sargassum fulvellum), 이의 분쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 근 기능 개선용 화장료 조성물.
  20. 톳(Sargassum fusiforme), 이의 분쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 근 기능 개선용 화장료 조성물.
  21. 제 17 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6의 유기용매, 아임계 유체 및 초임계 유체로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 용매로 모자반 또는 톳을 추출하여 수득한 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  22. 제 21 항에 있어서, 상기 탄소수 1 내지 6의 유기용매는 탄소수 1 내지 6의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌 클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane) 및 석유에테르(petroleum ether)로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 용매인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  23. 제 17 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 100 MPa 내지 1000 MPa의 초고압 조건 하에서 모자반 또는 톳을 추출하여 수득한 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  24. 하기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤(fucosterol) 화합물 또는 이를 포함하는 모자반(Sargassum fulvellum) 추출물 또는 톳(Sargassum fusiforme) 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 사료 첨가제:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2016005597-appb-I000016
    .
  25. 제 24 항에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 퓨코스테롤은 모자반 추출물 또는 톳 추출물로부터 분리된 것을 특징으로 하는 사료 첨가제.
  26. 모자반(Sargassum fulvellum), 이의 분쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 사료 첨가제.
  27. 톳(Sargassum fusiforme), 이의 분쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 사료 첨가제.
  28. 제 24 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6의 유기용매, 아임계 유체 및 초임계 유체로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 용매로 모자반 또는 톳을 추출하여 수득한 것을 특징으로 하는 사료 첨가제.
  29. 제 28 에 있어서, 상기 탄소수 1 내지 6의 유기용매는 탄소수 1 내지 6의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌 클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane) 및 석유에테르(petroleum ether)로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 사료 첨가제.
  30. 제 24 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 100 MPa 내지 1000 MPa의 초고압 조건 하에서 모자반 또는 톳을 추출하여 수득한 것을 특징으로 하는 사료 첨가제.
  31. 제 24 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 근육 질환은 긴장감퇴증(atony), 근위축증(muscular atrophy), 근이영양증(muscular dystrophy), 근육 퇴화, 근무력증, 악액질(cachexia) 및 근육감소증(sarcopenia)으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 사료 첨가제.
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